diff --git "a/test_labelstudio.conll" "b/test_labelstudio.conll"
new file mode 100644--- /dev/null
+++ "b/test_labelstudio.conll"
@@ -0,0 +1,28833 @@
+-DOCSTART- -X- O
+Introduction -X- _ O
+The -X- _ O
+persistence -X- _ O
+of -X- _ O
+replication-competent -X- _ O
+, -X- _ O
+but -X- _ O
+transcriptionally -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+proviral -X- _ O
+DNA -X- _ O
+in -X- _ O
+long-lived -X- _ O
+, -X- _ O
+latent -X- _ O
+cellular -X- _ O
+reservoirs -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+significant -X- _ O
+barrier -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+development -X- _ O
+of -X- _ O
+a -X- _ O
+functional -X- _ O
+cure -X- _ O
+[ -X- _ O
+1,2 -X- _ O
+] -X- _ O
+Even -X- _ O
+after -X- _ O
+long-term -X- _ O
+, -X- _ O
+suppressive -X- _ O
+antiretroviral -X- _ O
+therapy -X- _ O
+( -X- _ O
+ART -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+spontaneous -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+of -X- _ O
+proviral -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+from -X- _ O
+the -X- _ O
+latent -X- _ O
+reservoir -X- _ O
+is -X- _ O
+sufficient -X- _ O
+to -X- _ O
+initiate -X- _ O
+viral -X- _ O
+rebound -X- _ O
+shortly -X- _ O
+after -X- _ O
+ART -X- _ O
+cessation -X- _ O
+, -X- _ O
+thus -X- _ O
+requiring -X- _ O
+life-long -X- _ O
+adherence -X- _ O
+[ -X- _ O
+3–5 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Multifaceted -X- _ O
+and -X- _ O
+heterogenous -X- _ O
+blocks -X- _ O
+to -X- _ O
+viral -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+establish -X- _ O
+and -X- _ O
+maintain -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+latency -X- _ O
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+epigenetic -X- _ O
+, -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+post-transcriptional -X- _ O
+levels -X- _ O
+[ -X- _ O
+2 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Several -X- _ O
+strategies -X- _ O
+to -X- _ O
+either -X- _ O
+reactivate -X- _ O
+latent -X- _ O
+proviruses -X- _ O
+and -X- _ O
+clear -X- _ O
+infected -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+( -X- _ O
+i.e. -X- _ O
+, -X- _ O
+“shock -X- _ O
+and -X- _ O
+kill” -X- _ O
+) -X- _ O
+or -X- _ O
+reinforce -X- _ O
+latency -X- _ O
+to -X- _ O
+prevent -X- _ O
+spontaneous -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+( -X- _ O
+i.e. -X- _ O
+, -X- _ O
+“block -X- _ O
+and -X- _ O
+lock” -X- _ O
+) -X- _ O
+are -X- _ O
+currently -X- _ O
+under -X- _ O
+investigation -X- _ O
+[ -X- _ O
+6,7 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+While -X- _ O
+many -X- _ O
+small -X- _ O
+molecule -X- _ O
+latency -X- _ O
+reversing -X- _ O
+agents -X- _ O
+( -X- _ O
+LRAs -X- _ O
+) -X- _ O
+have -X- _ O
+been -X- _ O
+described -X- _ O
+that -X- _ O
+reactivate -X- _ O
+latent -X- _ O
+proviruses -X- _ O
+ex -X- _ O
+vivo -X- _ O
+, -X- _ O
+they -X- _ O
+have -X- _ O
+had -X- _ O
+little -X- _ O
+success -X- _ O
+in -X- _ O
+clinical -X- _ O
+trials -X- _ O
+[ -X- _ O
+8,9 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+This -X- _ O
+failure -X- _ O
+is -X- _ O
+partly -X- _ O
+due -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+latent -X- _ O
+reservoir’s -X- _ O
+heterogenous -X- _ O
+nature -X- _ O
+, -X- _ O
+such -X- _ O
+that -X- _ O
+treatment -X- _ O
+by -X- _ O
+a -X- _ O
+single -X- _ O
+agent -X- _ O
+that -X- _ O
+acts -X- _ O
+to -X- _ O
+target -X- _ O
+a -X- _ O
+specific -X- _ O
+block -X- _ O
+may -X- _ O
+only -X- _ O
+ever -X- _ O
+reactivate -X- _ O
+a -X- _ O
+small -X- _ O
+fraction -X- _ O
+of -X- _ O
+proviruses -X- _ O
+in -X- _ O
+vivo -X- _ O
+[ -X- _ O
+10 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Even -X- _ O
+if -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+is -X- _ O
+achieved -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+is -X- _ O
+unlikely -X- _ O
+this -X- _ O
+is -X- _ O
+sufficient -X- _ O
+to -X- _ O
+result -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+clearance -X- _ O
+of -X- _ O
+these -X- _ O
+infected -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+without -X- _ O
+additional -X- _ O
+immune -X- _ O
+augmentation -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+the -X- _ O
+administration -X- _ O
+of -X- _ O
+antibodies -X- _ O
+, -X- _ O
+vaccines -X- _ O
+, -X- _ O
+or -X- _ O
+immunotherapies -X- _ O
+to -X- _ O
+prime -X- _ O
+the -X- _ O
+immune -X- _ B-TISSUE
+system -X- _ I-TISSUE
+[ -X- _ O
+6 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Given -X- _ O
+these -X- _ O
+limitations -X- _ O
+, -X- _ O
+much -X- _ O
+research -X- _ O
+is -X- _ O
+now -X- _ O
+focused -X- _ O
+on -X- _ O
+combinatorial -X- _ O
+approaches -X- _ O
+to -X- _ O
+trigger -X- _ O
+more -X- _ O
+widespread -X- _ O
+and -X- _ O
+robust -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+[ -X- _ O
+11 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+For -X- _ O
+example -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+recent -X- _ O
+study -X- _ O
+reported -X- _ O
+synergistic -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+potential -X- _ O
+between -X- _ O
+an -X- _ O
+activator -X- _ O
+of -X- _ O
+non-canonical -X- _ O
+NF-kB -X- _ O
+signaling -X- _ O
+( -X- _ O
+AZD5582 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+BET -X- _ O
+bromodomain -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+that -X- _ O
+act -X- _ O
+to -X- _ O
+lift -X- _ O
+blocks -X- _ O
+to -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+initiation -X- _ O
+and -X- _ O
+elongation -X- _ O
+, -X- _ O
+respectively -X- _ O
+[ -X- _ O
+12 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Blocks -X- _ O
+to -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+elongation -X- _ O
+are -X- _ O
+major -X- _ O
+contributors -X- _ O
+to -X- _ O
+establishing -X- _ O
+and -X- _ O
+maintaining -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+latency -X- _ O
+[ -X- _ O
+13,14 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+After -X- _ O
+integration -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+proviral -X- _ O
+DNA -X- _ O
+, -X- _ O
+RNA -X- _ O
+Polymerase -X- _ O
+II -X- _ O
+( -X- _ O
+RNA -X- _ O
+Pol -X- _ O
+II -X- _ O
+) -X- _ O
+is -X- _ O
+recruited -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+transcription -X- _ O
+start -X- _ O
+site -X- _ O
+by -X- _ O
+transcription -X- _ O
+factors -X- _ O
+that -X- _ O
+bind -X- _ O
+cis-elements -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+promoter -X- _ O
+region. -X- _ O
+After -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+initiation -X- _ O
+, -X- _ O
+RNA -X- _ O
+Pol -X- _ O
+II -X- _ O
+synthesizes -X- _ O
+20–60 -X- _ O
+nucleotides -X- _ O
+before -X- _ O
+stalling -X- _ O
+through -X- _ O
+a -X- _ O
+well-conserved -X- _ O
+process -X- _ O
+known -X- _ O
+as -X- _ O
+promoter-proximal -X- _ O
+pausing -X- _ O
+[ -X- _ O
+15 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Pausing -X- _ O
+is -X- _ O
+enforced -X- _ O
+by -X- _ O
+several -X- _ O
+negative -X- _ O
+elongation -X- _ O
+factors -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+negative -X- _ O
+elongation -X- _ O
+factor -X- _ O
+( -X- _ O
+NELF -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+DRB -X- _ O
+Sensitivity -X- _ O
+Inducing -X- _ O
+Factor -X- _ O
+( -X- _ O
+DSIF -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+RNA -X- _ O
+Polymerase -X- _ O
+II -X- _ O
+Associated -X- _ O
+Factor -X- _ O
+1 -X- _ O
+( -X- _ O
+PAF1 -X- _ O
+) -X- _ O
+complex -X- _ O
+[ -X- _ O
+16–18 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Pause -X- _ O
+release -X- _ O
+is -X- _ O
+regulated -X- _ O
+by -X- _ O
+positive -X- _ O
+transcription -X- _ O
+elongation -X- _ O
+factor-b -X- _ O
+( -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+heterodimeric -X- _ O
+protein -X- _ O
+complex -X- _ O
+composed -X- _ O
+of -X- _ O
+cyclin-dependent -X- _ O
+kinase -X- _ O
+9 -X- _ O
+( -X- _ O
+CDK9 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+cyclin -X- _ O
+T1 -X- _ O
+( -X- _ O
+CCNT1 -X- _ O
+) -X- _ O
+[ -X- _ O
+19–21 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+phosphorylates -X- _ O
+the -X- _ O
+C-terminal -X- _ O
+tail -X- _ O
+of -X- _ O
+RNA -X- _ O
+Pol -X- _ O
+II -X- _ O
+and -X- _ O
+several -X- _ O
+negative -X- _ O
+elongation -X- _ O
+factors -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+collectively -X- _ O
+license -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+elongation -X- _ O
+[ -X- _ O
+22–24 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Recruitment -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+to -X- _ O
+sites -X- _ O
+of -X- _ O
+nascent -X- _ O
+transcription -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+highly -X- _ O
+regulated -X- _ O
+process -X- _ O
+mediated -X- _ O
+by -X- _ O
+several -X- _ O
+cellular -X- _ O
+complexes. -X- _ O
+The -X- _ O
+majority -X- _ O
+of -X- _ O
+cellular -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+is -X- _ O
+sequestered -X- _ O
+in -X- _ O
+an -X- _ O
+inactive -X- _ O
+state -X- _ O
+by -X- _ O
+the -X- _ O
+7SK -X- _ O
+ribonucleoprotein -X- _ O
+( -X- _ O
+RNP -X- _ O
+) -X- _ O
+complex -X- _ O
+[ -X- _ O
+25,26 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Diverse -X- _ O
+extracellular -X- _ O
+stimuli -X- _ O
+and -X- _ O
+intracellular -X- _ O
+signals -X- _ O
+can -X- _ O
+induce -X- _ O
+the -X- _ O
+release -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+from -X- _ O
+the -X- _ O
+7SK -X- _ O
+complex -X- _ O
+[ -X- _ O
+27–29 -X- _ O
+] -X- _ O
+where -X- _ O
+it -X- _ O
+can -X- _ O
+be -X- _ O
+recruited -X- _ O
+to -X- _ O
+sites -X- _ O
+of -X- _ O
+nascent -X- _ O
+transcription -X- _ O
+by -X- _ O
+transcription -X- _ O
+factors -X- _ O
+( -X- _ O
+i.e. -X- _ O
+, -X- _ O
+NF-kB -X- _ O
+and -X- _ O
+c-MYC -X- _ O
+) -X- _ O
+[ -X- _ O
+30–32 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+epigenetic -X- _ O
+regulators -X- _ O
+( -X- _ O
+i.e. -X- _ O
+, -X- _ O
+BRD4 -X- _ O
+) -X- _ O
+[ -X- _ O
+33,34 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+or -X- _ O
+super -X- _ O
+elongation -X- _ O
+complexes -X- _ O
+( -X- _ O
+SECs -X- _ O
+) -X- _ O
+composed -X- _ O
+of -X- _ O
+an -X- _ O
+ARF4 -X- _ O
+/ -X- _ O
+FMR2 -X- _ O
+( -X- _ O
+AFF -X- _ O
+) -X- _ O
+family -X- _ O
+scaffold -X- _ O
+protein -X- _ O
+in -X- _ O
+complex -X- _ O
+with -X- _ O
+AF9 -X- _ O
+, -X- _ O
+ENL -X- _ O
+, -X- _ O
+an -X- _ O
+eleven-nineteen -X- _ O
+Lys-rich -X- _ O
+leukemia -X- _ O
+( -X- _ O
+ELL -X- _ O
+) -X- _ O
+family -X- _ O
+protein -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+an -X- _ O
+ELL-associated -X- _ O
+factor -X- _ O
+( -X- _ O
+EAF -X- _ O
+) -X- _ O
+protein -X- _ O
+[ -X- _ O
+35 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+To -X- _ O
+circumvent -X- _ O
+this -X- _ O
+regulatory -X- _ O
+step -X- _ O
+, -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+encodes -X- _ O
+a -X- _ O
+trans-activator -X- _ O
+protein -X- _ O
+( -X- _ O
+Tat -X- _ O
+) -X- _ O
+that -X- _ O
+binds -X- _ O
+to -X- _ O
+and -X- _ O
+recruits -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+specifically -X- _ O
+to -X- _ O
+sites -X- _ O
+of -X- _ O
+nascent -X- _ O
+proviral -X- _ O
+transcription -X- _ O
+through -X- _ O
+recognition -X- _ O
+of -X- _ O
+a -X- _ O
+transactivation -X- _ O
+response -X- _ O
+( -X- _ O
+TAR -X- _ O
+) -X- _ O
+RNA -X- _ O
+stem -X- _ O
+loop -X- _ O
+produced -X- _ O
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+immediate -X- _ O
+3’ -X- _ O
+end -X- _ O
+of -X- _ O
+all -X- _ O
+viral -X- _ O
+RNA -X- _ O
+transcripts -X- _ O
+[ -X- _ O
+36–38 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+distribution -X- _ O
+of -X- _ O
+and -X- _ O
+competition -X- _ O
+for -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+binding -X- _ O
+among -X- _ O
+different -X- _ O
+complexes -X- _ O
+is -X- _ O
+an -X- _ O
+area -X- _ O
+of -X- _ O
+active -X- _ O
+investigation -X- _ O
+, -X- _ O
+with -X- _ O
+several -X- _ O
+strategies -X- _ O
+to -X- _ O
+enhance -X- _ O
+the -X- _ O
+biogenesis -X- _ O
+or -X- _ O
+availability -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+showing -X- _ O
+promise -X- _ O
+for -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+latency -X- _ O
+reversal. -X- _ O
+For -X- _ O
+example -X- _ O
+, -X- _ O
+BET -X- _ O
+bromodomain -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+( -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+JQ1 -X- _ O
+) -X- _ O
+have -X- _ O
+been -X- _ O
+shown -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+potent -X- _ O
+LRAs -X- _ O
+in -X- _ O
+ex -X- _ O
+vivo -X- _ O
+models -X- _ O
+by -X- _ O
+releasing -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+from -X- _ O
+BRD4 -X- _ O
+[ -X- _ O
+12 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Likewise -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+release -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+from -X- _ O
+the -X- _ O
+7SK -X- _ O
+RNP -X- _ O
+complex -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+shown -X- _ O
+to -X- _ O
+reactivate -X- _ O
+latent -X- _ O
+proviruses -X- _ O
+in -X- _ O
+ex -X- _ O
+vivo -X- _ O
+models -X- _ O
+[ -X- _ O
+39 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+That -X- _ O
+being -X- _ O
+said -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+release -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+from -X- _ O
+the -X- _ O
+7SK -X- _ O
+RNP -X- _ O
+complex -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+shown -X- _ O
+to -X- _ O
+directly -X- _ O
+correlate -X- _ O
+with -X- _ O
+increased -X- _ O
+BRD4 -X- _ O
+binding -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+that -X- _ O
+release -X- _ O
+from -X- _ O
+any -X- _ O
+one -X- _ O
+complex -X- _ O
+will -X- _ O
+not -X- _ O
+necessarily -X- _ O
+increase -X- _ O
+the -X- _ O
+amount -X- _ O
+of -X- _ O
+unbound -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+or -X- _ O
+the -X- _ O
+amount -X- _ O
+recruited -X- _ O
+to -X- _ O
+specific -X- _ O
+sites -X- _ O
+of -X- _ O
+transcription -X- _ O
+[ -X- _ O
+33 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Furthermore -X- _ O
+, -X- _ O
+post-translational -X- _ O
+modification -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+( -X- _ O
+i.e. -X- _ O
+, -X- _ O
+through -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+of -X- _ O
+CDK9 -X- _ O
+at -X- _ O
+Serine -X- _ O
+175 -X- _ O
+) -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+shown -X- _ O
+to -X- _ O
+influence -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+distribution -X- _ O
+in -X- _ O
+certain -X- _ O
+regulatory -X- _ O
+complexes -X- _ O
+, -X- _ O
+again -X- _ O
+highlighting -X- _ O
+the -X- _ O
+unique -X- _ O
+properties -X- _ O
+of -X- _ O
+release -X- _ O
+from -X- _ O
+each -X- _ O
+complex -X- _ O
+[ -X- _ O
+40 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+While -X- _ O
+the -X- _ O
+release -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+from -X- _ O
+the -X- _ O
+7SK -X- _ O
+RNP -X- _ O
+complex -X- _ O
+and -X- _ O
+BET -X- _ O
+proteins -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+BRD4 -X- _ O
+have -X- _ O
+been -X- _ O
+explored -X- _ O
+as -X- _ O
+strategies -X- _ O
+for -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+latency -X- _ O
+reversal -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+release -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+from -X- _ O
+SECs -X- _ O
+has -X- _ O
+not -X- _ O
+been -X- _ O
+explored. -X- _ O
+Previous -X- _ O
+work -X- _ O
+has -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+that -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+Tat -X- _ O
+biochemically -X- _ O
+co-purifies -X- _ O
+with -X- _ O
+several -X- _ O
+SEC -X- _ O
+proteins -X- _ O
+[ -X- _ O
+41,42 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+though -X- _ O
+the -X- _ O
+reason -X- _ O
+for -X- _ O
+this -X- _ O
+is -X- _ O
+unclear -X- _ O
+as -X- _ O
+they -X- _ O
+seemingly -X- _ O
+have -X- _ O
+functionally -X- _ O
+redundant -X- _ O
+purposes -X- _ O
+in -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+recruitment. -X- _ O
+In -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+test -X- _ O
+the -X- _ O
+hypothesis -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+SEC -X- _ O
+is -X- _ O
+not -X- _ O
+necessary -X- _ O
+for -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+viral -X- _ O
+transcription -X- _ O
+and -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+release -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+from -X- _ O
+cellular -X- _ O
+SEC -X- _ O
+complexes -X- _ O
+can -X- _ O
+serve -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+novel -X- _ O
+strategy -X- _ O
+to -X- _ O
+reactivate -X- _ O
+latent -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+proviruses. -X- _ O
+Results -X- _ O
+Discussion -X- _ O
+In -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+demonstrate -X- _ O
+a -X- _ O
+potential -X- _ O
+new -X- _ O
+strategy -X- _ O
+for -X- _ O
+enhancing -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+latency -X- _ O
+reversal -X- _ O
+through -X- _ O
+the -X- _ O
+release -X- _ O
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+P-TEFb -X- _ O
+from -X- _ O
+the -X- _ O
+cellular -X- _ O
+pool -X- _ O
+of -X- _ O
+SECs. -X- _ O
+We -X- _ O
+show -X- _ O
+that -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+small -X- _ O
+molecule -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+interaction -X- _ O
+between -X- _ O
+the -X- _ O
+SEC -X- _ O
+and -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+, -X- _ O
+is -X- _ O
+sufficient -X- _ O
+to -X- _ O
+enhance -X- _ O
+viral -X- _ O
+transcription -X- _ O
+in -X- _ O
+primary -X- _ B-CELL
+CD4+ -X- _ I-CELL
+T -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+and -X- _ O
+can -X- _ O
+synergistically -X- _ O
+enhance -X- _ O
+the -X- _ O
+activity -X- _ O
+of -X- _ O
+other -X- _ O
+LRAs -X- _ O
+in -X- _ O
+certain -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL_LINE
+line -X- _ I-CELL_LINE
+models -X- _ O
+of -X- _ O
+latency. -X- _ O
+Finally -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+demonstrate -X- _ O
+that -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+can -X- _ O
+increase -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+gag -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+PBMCs -X- _ B-CELL
+from -X- _ O
+PLWH -X- _ O
+on -X- _ O
+suppressive -X- _ O
+ART -X- _ O
+, -X- _ O
+most -X- _ O
+notably -X- _ O
+in -X- _ O
+combination -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+non-canonical -X- _ O
+NF-kB -X- _ O
+agonist -X- _ O
+, -X- _ O
+AZD5582. -X- _ O
+We -X- _ O
+propose -X- _ O
+a -X- _ O
+model -X- _ O
+in -X- _ O
+which -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+release -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+from -X- _ O
+the -X- _ O
+cellular -X- _ O
+pool -X- _ O
+of -X- _ O
+SECs -X- _ O
+enhances -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+elongation -X- _ O
+of -X- _ O
+integrated -X- _ O
+proviruses -X- _ O
+, -X- _ O
+akin -X- _ O
+to -X- _ O
+BET -X- _ O
+bromodomain -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+and -X- _ O
+7SK -X- _ O
+RNP -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+( -X- _ O
+Fig -X- _ O
+6D -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+These -X- _ O
+results -X- _ O
+have -X- _ O
+several -X- _ O
+implications -X- _ O
+for -X- _ O
+our -X- _ O
+understanding -X- _ O
+of -X- _ O
+viral -X- _ O
+transcription -X- _ O
+and -X- _ O
+future -X- _ O
+directions. -X- _ O
+Latency -X- _ O
+reversal -X- _ O
+through -X- _ O
+the -X- _ O
+release -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+from -X- _ O
+cellular -X- _ O
+SECs -X- _ O
+had -X- _ O
+not -X- _ O
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+previously -X- _ O
+explored -X- _ O
+, -X- _ O
+likely -X- _ O
+due -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+perceived -X- _ O
+dependency -X- _ O
+of -X- _ O
+viral -X- _ O
+transcription -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+SEC. -X- _ O
+This -X- _ O
+effect -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+supported -X- _ O
+by -X- _ O
+biochemical -X- _ O
+purifications -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+Tat -X- _ O
+from -X- _ O
+human -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL_LINE
+lines -X- _ I-CELL_LINE
+that -X- _ O
+revealed -X- _ O
+interactions -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+larger -X- _ O
+SEC -X- _ O
+[ -X- _ O
+41,42 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+as -X- _ O
+well -X- _ O
+as -X- _ O
+by -X- _ O
+genetic -X- _ O
+knock-down -X- _ O
+experiments -X- _ O
+in -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL_LINE
+lines -X- _ I-CELL_LINE
+showing -X- _ O
+a -X- _ O
+decrease -X- _ O
+in -X- _ O
+Tat-dependent -X- _ O
+transcription -X- _ O
+upon -X- _ O
+SEC -X- _ O
+component -X- _ O
+depletion -X- _ O
+[ -X- _ O
+64,65 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+given -X- _ O
+that -X- _ O
+both -X- _ O
+the -X- _ O
+SEC -X- _ O
+and -X- _ O
+Tat -X- _ O
+recruit -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+to -X- _ O
+sites -X- _ O
+of -X- _ O
+nascent -X- _ O
+transcription -X- _ O
+, -X- _ O
+they -X- _ O
+share -X- _ O
+some -X- _ O
+functional -X- _ O
+redundancy. -X- _ O
+We -X- _ O
+found -X- _ O
+that -X- _ O
+knock-out -X- _ O
+of -X- _ O
+SEC -X- _ O
+components -X- _ O
+from -X- _ O
+activated -X- _ O
+, -X- _ O
+primary -X- _ B-CELL
+CD4+ -X- _ I-CELL
+T -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+from -X- _ O
+12 -X- _ O
+independent -X- _ O
+donors -X- _ O
+did -X- _ O
+not -X- _ O
+inhibit -X- _ O
+viral -X- _ O
+replication -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+SEC -X- _ O
+is -X- _ O
+not -X- _ O
+required -X- _ O
+in -X- _ O
+this -X- _ O
+cellular -X- _ O
+context. -X- _ O
+This -X- _ O
+result -X- _ O
+was -X- _ O
+independently -X- _ O
+verified -X- _ O
+using -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+inhibits -X- _ O
+the -X- _ O
+interaction -X- _ O
+between -X- _ O
+CCNT1 -X- _ O
+( -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+AFF1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+4 -X- _ O
+( -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+larger -X- _ O
+SEC -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Notably -X- _ O
+, -X- _ O
+disruption -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+SEC -X- _ O
+using -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+resulted -X- _ O
+in -X- _ O
+significant -X- _ O
+increases -X- _ O
+in -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+replication -X- _ O
+in -X- _ O
+primary -X- _ B-CELL
+CD4+ -X- _ I-CELL
+T -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+whereas -X- _ O
+genetic -X- _ O
+knockout -X- _ O
+of -X- _ O
+most -X- _ O
+SEC -X- _ O
+members -X- _ O
+had -X- _ O
+minimal -X- _ O
+to -X- _ O
+no -X- _ O
+impact -X- _ O
+on -X- _ O
+replication. -X- _ O
+One -X- _ O
+potential -X- _ O
+explanation -X- _ O
+for -X- _ O
+this -X- _ O
+difference -X- _ O
+is -X- _ O
+that -X- _ O
+genetic -X- _ O
+knockout -X- _ O
+results -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+ablation -X- _ O
+of -X- _ O
+SEC -X- _ O
+assembly -X- _ O
+and -X- _ O
+relocalization -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+into -X- _ O
+other -X- _ O
+complexes -X- _ O
+at -X- _ O
+steady-state -X- _ O
+whereas -X- _ O
+chemical -X- _ O
+perturbation -X- _ O
+by -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+results -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+release -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+from -X- _ O
+SECs -X- _ O
+that -X- _ O
+are -X- _ O
+continually -X- _ O
+being -X- _ O
+formed. -X- _ O
+Understanding -X- _ O
+the -X- _ O
+dynamics -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+distribution -X- _ O
+and -X- _ O
+relocalization -X- _ O
+upon -X- _ O
+different -X- _ O
+types -X- _ O
+of -X- _ O
+perturbation -X- _ O
+is -X- _ O
+an -X- _ O
+ongoing -X- _ O
+area -X- _ O
+of -X- _ O
+investigation. -X- _ O
+While -X- _ O
+we -X- _ O
+expected -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+to -X- _ O
+enhance -X- _ O
+the -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+elongation -X- _ O
+of -X- _ O
+integrated -X- _ O
+proviruses -X- _ O
+due -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+release -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+from -X- _ O
+cellular -X- _ O
+SECs -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+also -X- _ O
+saw -X- _ O
+increases -X- _ O
+in -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+initiation -X- _ O
+as -X- _ O
+measured -X- _ O
+by -X- _ O
+qRT-PCR -X- _ O
+for -X- _ O
+TAR -X- _ O
+transcript -X- _ O
+levels. -X- _ O
+Likewise -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+J-Lat -X- _ B-CELL_LINE
+5A8 -X- _ I-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+saw -X- _ O
+increases -X- _ O
+in -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+elongation -X- _ O
+, -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+initiation -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+in -X- _ O
+RNA -X- _ O
+Pol -X- _ O
+II -X- _ O
+recruitment -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+proviral -X- _ O
+promoter -X- _ O
+when -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+was -X- _ O
+added -X- _ O
+, -X- _ O
+even -X- _ O
+though -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+addition -X- _ O
+alone -X- _ O
+was -X- _ O
+not -X- _ O
+sufficient -X- _ O
+for -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+as -X- _ O
+measured -X- _ O
+by -X- _ O
+GFP -X- _ O
+positivity -X- _ O
+in -X- _ O
+this -X- _ O
+model. -X- _ O
+This -X- _ O
+finding -X- _ O
+suggests -X- _ O
+that -X- _ O
+either -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+has -X- _ O
+secondary -X- _ O
+effects -X- _ O
+not -X- _ O
+mediated -X- _ O
+by -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+or -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+redistribution -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+away -X- _ O
+from -X- _ O
+SECs -X- _ O
+has -X- _ O
+secondary -X- _ O
+effects -X- _ O
+that -X- _ O
+could -X- _ O
+impact -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+initiation -X- _ O
+at -X- _ O
+proviral -X- _ O
+integration -X- _ O
+sites. -X- _ O
+BET -X- _ O
+bromodomain -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+have -X- _ O
+also -X- _ O
+been -X- _ O
+reported -X- _ O
+to -X- _ O
+increase -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+initiation -X- _ O
+[ -X- _ O
+12,13 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+though -X- _ O
+these -X- _ O
+effects -X- _ O
+have -X- _ O
+been -X- _ O
+suggested -X- _ O
+to -X- _ O
+occur -X- _ O
+through -X- _ O
+modulation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+epigenetic -X- _ O
+regulatory -X- _ O
+functions -X- _ O
+of -X- _ O
+these -X- _ O
+proteins -X- _ O
+[ -X- _ O
+66 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Other -X- _ O
+reports -X- _ O
+have -X- _ O
+indicated -X- _ O
+that -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+mediated -X- _ O
+release -X- _ O
+of -X- _ O
+paused -X- _ O
+RNA -X- _ O
+Pol -X- _ O
+II -X- _ O
+can -X- _ O
+result -X- _ O
+in -X- _ O
+enhanced -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+initiation -X- _ O
+and -X- _ O
+even -X- _ O
+RNA -X- _ O
+Pol -X- _ O
+II -X- _ O
+recruitment -X- _ O
+simply -X- _ O
+by -X- _ O
+increasing -X- _ O
+the -X- _ O
+number -X- _ O
+of -X- _ O
+transcribing -X- _ O
+polymerases -X- _ O
+[ -X- _ O
+67 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Still -X- _ O
+, -X- _ O
+this -X- _ O
+connection -X- _ O
+between -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+elongation -X- _ O
+and -X- _ O
+initiation -X- _ O
+has -X- _ O
+yet -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+fully -X- _ O
+understood -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+context -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+transcription. -X- _ O
+While -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+was -X- _ O
+sufficient -X- _ O
+to -X- _ O
+boost -X- _ O
+viral -X- _ O
+replication -X- _ O
+in -X- _ O
+activated -X- _ O
+, -X- _ O
+primary -X- _ B-CELL
+CD4+ -X- _ I-CELL
+T -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+and -X- _ O
+of -X- _ O
+itself -X- _ O
+it -X- _ O
+displayed -X- _ O
+minimal -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+potential -X- _ O
+in -X- _ O
+both -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL_LINE
+line -X- _ I-CELL_LINE
+models -X- _ O
+of -X- _ O
+latency -X- _ O
+and -X- _ O
+in -X- _ O
+PBMCs -X- _ B-CELL
+from -X- _ O
+PLWH -X- _ O
+on -X- _ O
+suppressive -X- _ O
+ART. -X- _ O
+This -X- _ O
+finding -X- _ O
+is -X- _ O
+similar -X- _ O
+to -X- _ O
+our -X- _ O
+recent -X- _ O
+report -X- _ O
+of -X- _ O
+a -X- _ O
+novel -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+PAF1 -X- _ O
+complex -X- _ O
+( -X- _ O
+iPAF1C -X- _ O
+) -X- _ O
+that -X- _ O
+had -X- _ O
+minimal -X- _ O
+activity -X- _ O
+on -X- _ O
+its -X- _ O
+own -X- _ O
+, -X- _ O
+but -X- _ O
+greatly -X- _ O
+enhanced -X- _ O
+the -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+other -X- _ O
+LRAs -X- _ O
+[ -X- _ O
+16 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Both -X- _ O
+cases -X- _ O
+highlight -X- _ O
+the -X- _ O
+multifaceted -X- _ O
+nature -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+blocks -X- _ O
+to -X- _ O
+viral -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+that -X- _ O
+underlie -X- _ O
+the -X- _ O
+latent -X- _ O
+state -X- _ O
+as -X- _ O
+well -X- _ O
+as -X- _ O
+the -X- _ O
+limitations -X- _ O
+to -X- _ O
+single -X- _ O
+agent -X- _ O
+drug -X- _ O
+screening -X- _ O
+to -X- _ O
+identify -X- _ O
+promising -X- _ O
+, -X- _ O
+next-generation -X- _ O
+LRAs. -X- _ O
+Combinatorial -X- _ O
+approaches -X- _ O
+to -X- _ O
+dissect -X- _ O
+the -X- _ O
+genetic -X- _ O
+underpinnings -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+latency -X- _ O
+and -X- _ O
+discover -X- _ O
+new -X- _ O
+, -X- _ O
+synergistic -X- _ O
+drug -X- _ O
+interactions -X- _ O
+should -X- _ O
+be -X- _ O
+prioritized. -X- _ O
+While -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+alone -X- _ O
+failed -X- _ O
+to -X- _ O
+significantly -X- _ O
+increase -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+gag -X- _ O
+transcript -X- _ O
+levels -X- _ O
+in -X- _ O
+patient -X- _ O
+PBMCs -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+combination -X- _ O
+with -X- _ O
+AZD5582 -X- _ O
+it -X- _ O
+resulted -X- _ O
+in -X- _ O
+a -X- _ O
+16-fold -X- _ O
+increase -X- _ O
+over -X- _ O
+AZD5582 -X- _ O
+treatment -X- _ O
+alone -X- _ O
+and -X- _ O
+a -X- _ O
+53-fold -X- _ O
+increase -X- _ O
+over -X- _ O
+the -X- _ O
+DMSO -X- _ O
+control. -X- _ O
+Crosswise -X- _ O
+dose -X- _ O
+titrations -X- _ O
+in -X- _ O
+J-Lat -X- _ B-CELL_LINE
+5A8 -X- _ I-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+showed -X- _ O
+a -X- _ O
+strong -X- _ O
+synergistic -X- _ O
+potential -X- _ O
+between -X- _ O
+AZD5582 -X- _ O
+and -X- _ O
+KL-2. -X- _ O
+This -X- _ O
+is -X- _ O
+consistent -X- _ O
+with -X- _ O
+reports -X- _ O
+of -X- _ O
+robust -X- _ O
+synergy -X- _ O
+between -X- _ O
+AZD5582 -X- _ O
+and -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+release -X- _ O
+through -X- _ O
+BET -X- _ O
+bromodomain -X- _ O
+inhibition -X- _ O
+[ -X- _ O
+12 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Notably -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+BET -X- _ O
+bromodomain -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
+JQ1 -X- _ O
+showed -X- _ O
+minimal -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+activity -X- _ O
+in -X- _ O
+our -X- _ O
+patient -X- _ O
+PBMCs -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+even -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+presence -X- _ O
+of -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+contrast -X- _ O
+to -X- _ O
+our -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL_LINE
+line -X- _ I-CELL_LINE
+data. -X- _ O
+This -X- _ O
+finding -X- _ O
+could -X- _ O
+reflect -X- _ O
+stochastic -X- _ O
+differences -X- _ O
+driven -X- _ O
+by -X- _ O
+variations -X- _ O
+in -X- _ O
+patient -X- _ O
+characteristics -X- _ O
+, -X- _ O
+integration -X- _ O
+site -X- _ O
+, -X- _ O
+chromatin -X- _ O
+state -X- _ O
+, -X- _ O
+transcription -X- _ O
+factor -X- _ O
+availability -X- _ O
+, -X- _ O
+etc. -X- _ O
+[ -X- _ O
+13 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Future -X- _ O
+work -X- _ O
+will -X- _ O
+compare -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+release -X- _ O
+from -X- _ O
+SECs -X- _ O
+to -X- _ O
+release -X- _ O
+from -X- _ O
+other -X- _ O
+cellular -X- _ O
+reservoirs -X- _ O
+, -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+BRD4 -X- _ O
+or -X- _ O
+the -X- _ O
+7SK -X- _ O
+RNP. -X- _ O
+Recent -X- _ O
+studies -X- _ O
+have -X- _ O
+shown -X- _ O
+that -X- _ O
+post-translational -X- _ O
+modifications -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+, -X- _ O
+most -X- _ O
+notably -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+of -X- _ O
+CDK9 -X- _ O
+Serine -X- _ O
+175 -X- _ O
+and -X- _ O
+Threonine -X- _ O
+186 -X- _ O
+, -X- _ O
+can -X- _ O
+drive -X- _ O
+inclusion -X- _ O
+into -X- _ O
+different -X- _ O
+complexes -X- _ O
+and -X- _ O
+may -X- _ O
+strongly -X- _ O
+influence -X- _ O
+bioavailability -X- _ O
+and -X- _ O
+activity -X- _ O
+[ -X- _ O
+40 -X- _ O
+, -X- _ O
+68–70 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Therefore -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+is -X- _ O
+possible -X- _ O
+that -X- _ O
+disruption -X- _ O
+of -X- _ O
+complexes -X- _ O
+housing -X- _ O
+‘active’ -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+more -X- _ O
+direct -X- _ O
+route -X- _ O
+to -X- _ O
+redirecting -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+activity. -X- _ O
+This -X- _ O
+is -X- _ O
+not -X- _ O
+to -X- _ O
+say -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+SEC -X- _ O
+is -X- _ O
+never -X- _ O
+required -X- _ O
+for -X- _ O
+viral -X- _ O
+transcription. -X- _ O
+In -X- _ O
+latency -X- _ O
+model -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL_LINE
+lines -X- _ I-CELL_LINE
+that -X- _ O
+lacked -X- _ O
+a -X- _ O
+functional -X- _ O
+Tat -X- _ O
+( -X- _ O
+U1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+) -X- _ O
+or -X- _ O
+TAR -X- _ O
+stem -X- _ O
+loop -X- _ O
+( -X- _ O
+ACH-2 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+the -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+several -X- _ O
+LRAs -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+that -X- _ O
+viral -X- _ O
+transcription -X- _ O
+may -X- _ O
+be -X- _ O
+more -X- _ O
+dependent -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+SEC -X- _ O
+when -X- _ O
+Tat -X- _ O
+is -X- _ O
+either -X- _ O
+defective -X- _ O
+or -X- _ O
+not -X- _ O
+expressed. -X- _ O
+We -X- _ O
+attempted -X- _ O
+to -X- _ O
+test -X- _ O
+this -X- _ O
+by -X- _ O
+inhibiting -X- _ O
+Tat -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+J-Lat -X- _ B-CELL_LINE
+5A8 -X- _ I-CELL_LINE
+model -X- _ I-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+line -X- _ I-CELL_LINE
+using -X- _ O
+two -X- _ O
+previously -X- _ O
+described -X- _ O
+Tat-dependent -X- _ O
+transcription -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+, -X- _ O
+Triptolide -X- _ O
+and -X- _ O
+Spironolactone. -X- _ O
+While -X- _ O
+both -X- _ O
+compounds -X- _ O
+reduced -X- _ O
+LRA -X- _ O
+efficacy -X- _ O
+, -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+still -X- _ O
+boosted -X- _ O
+the -X- _ O
+activity -X- _ O
+of -X- _ O
+JQ1 -X- _ O
+and -X- _ O
+PMA -X- _ O
+, -X- _ O
+but -X- _ O
+not -X- _ O
+AZD5582. -X- _ O
+This -X- _ O
+suggests -X- _ O
+that -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+can -X- _ O
+be -X- _ O
+recruited -X- _ O
+to -X- _ O
+proviral -X- _ O
+integration -X- _ O
+sites -X- _ O
+in -X- _ O
+a -X- _ O
+Tat -X- _ O
+and -X- _ O
+SEC-independent -X- _ O
+manner -X- _ O
+upon -X- _ O
+PMA -X- _ O
+or -X- _ O
+JQ1 -X- _ O
+treatment -X- _ O
+, -X- _ O
+potentially -X- _ O
+through -X- _ O
+a -X- _ O
+transcription -X- _ O
+factor -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+NF-kB. -X- _ O
+The -X- _ O
+inability -X- _ O
+of -X- _ O
+AZD5582 -X- _ O
+to -X- _ O
+do -X- _ O
+so -X- _ O
+suggests -X- _ O
+that -X- _ O
+non-canonical -X- _ O
+NF-kB -X- _ O
+activation -X- _ O
+does -X- _ O
+not -X- _ O
+recruit -X- _ O
+the -X- _ O
+same -X- _ O
+milieu -X- _ O
+of -X- _ O
+transcription -X- _ O
+factors -X- _ O
+, -X- _ O
+making -X- _ O
+it -X- _ O
+uniquely -X- _ O
+Tat -X- _ O
+or -X- _ O
+SEC -X- _ O
+dependent. -X- _ O
+This -X- _ O
+is -X- _ O
+consistent -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+complete -X- _ O
+lack -X- _ O
+of -X- _ O
+activity -X- _ O
+of -X- _ O
+AZD5582 -X- _ O
+in -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL_LINE
+line -X- _ I-CELL_LINE
+models -X- _ O
+lacking -X- _ O
+functional -X- _ O
+Tat -X- _ O
+/ -X- _ O
+TAR -X- _ O
+activity -X- _ O
+and -X- _ O
+may -X- _ O
+underlie -X- _ O
+the -X- _ O
+remarkable -X- _ O
+synergy -X- _ O
+between -X- _ O
+non-canonical -X- _ O
+NF-kB -X- _ O
+agonists -X- _ O
+and -X- _ O
+agents -X- _ O
+that -X- _ O
+release -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+[ -X- _ O
+12 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Additionally -X- _ O
+, -X- _ O
+triptolide -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+characterized -X- _ O
+outside -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+transcription -X- _ O
+in -X- _ O
+its -X- _ O
+ability -X- _ O
+to -X- _ O
+prevent -X- _ O
+RNA -X- _ O
+Pol -X- _ O
+II -X- _ O
+reinitiation -X- _ O
+following -X- _ O
+pausing -X- _ O
+through -X- _ O
+inhibition -X- _ O
+of -X- _ O
+xeoderma -X- _ O
+pigmentosum -X- _ O
+group -X- _ O
+B-complementing -X- _ O
+protein -X- _ O
+( -X- _ O
+XPB -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+is -X- _ O
+often -X- _ O
+used -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+tool -X- _ O
+compound -X- _ O
+for -X- _ O
+measuring -X- _ O
+the -X- _ O
+fate -X- _ O
+of -X- _ O
+paused -X- _ O
+RNA -X- _ O
+Pol -X- _ O
+II -X- _ O
+at -X- _ O
+different -X- _ O
+time -X- _ O
+points -X- _ O
+[ -X- _ O
+51,71 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+With -X- _ O
+this -X- _ O
+in -X- _ O
+mind -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+is -X- _ O
+possible -X- _ O
+that -X- _ O
+compounds -X- _ O
+JQ1 -X- _ O
+and -X- _ O
+PMA -X- _ O
+result -X- _ O
+in -X- _ O
+de -X- _ O
+novo -X- _ O
+recruitment -X- _ O
+of -X- _ O
+RNA -X- _ O
+Pol -X- _ O
+II -X- _ O
+thereby -X- _ O
+increasing -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+initiation -X- _ O
+whereas -X- _ O
+AZD5582 -X- _ O
+may -X- _ O
+be -X- _ O
+more -X- _ O
+reliant -X- _ O
+on -X- _ O
+RNA -X- _ O
+Pol -X- _ O
+II -X- _ O
+pause-release. -X- _ O
+To -X- _ O
+further -X- _ O
+explore -X- _ O
+the -X- _ O
+Tat -X- _ O
+dependency -X- _ O
+of -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+tried -X- _ O
+to -X- _ O
+rescue -X- _ O
+Tat -X- _ O
+function -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+U1 -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+line -X- _ I-CELL
+using -X- _ O
+a -X- _ O
+Dox-inducible -X- _ O
+system. -X- _ O
+We -X- _ O
+hypothesized -X- _ O
+that -X- _ O
+by -X- _ O
+providing -X- _ O
+Tat -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+SEC -X- _ O
+would -X- _ O
+no -X- _ O
+longer -X- _ O
+be -X- _ O
+required -X- _ O
+for -X- _ O
+viral -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+such -X- _ O
+that -X- _ O
+SEC -X- _ O
+disruption -X- _ O
+by -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+would -X- _ O
+enhance -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+as -X- _ O
+seen -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+J-Lat -X- _ O
+models. -X- _ O
+While -X- _ O
+Tat -X- _ O
+induction -X- _ O
+itself -X- _ O
+was -X- _ O
+sufficient -X- _ O
+for -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+, -X- _ O
+this -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+was -X- _ O
+completely -X- _ O
+abolished -X- _ O
+by -X- _ O
+the -X- _ O
+addition -X- _ O
+of -X- _ O
+KL-2. -X- _ O
+Even -X- _ O
+when -X- _ O
+Tat -X- _ O
+was -X- _ O
+minimally -X- _ O
+induced -X- _ O
+and -X- _ O
+other -X- _ O
+LRAs -X- _ O
+were -X- _ O
+added -X- _ O
+, -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+still -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+that -X- _ O
+additional -X- _ O
+factors—such -X- _ O
+as -X- _ O
+steady-state -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+, -X- _ O
+integration -X- _ O
+site -X- _ O
+, -X- _ O
+epigenetic -X- _ O
+factors -X- _ O
+, -X- _ O
+or -X- _ O
+transcription -X- _ O
+factor -X- _ O
+availability—may -X- _ O
+drive -X- _ O
+SEC -X- _ O
+dependency -X- _ O
+besides -X- _ O
+just -X- _ O
+the -X- _ O
+presence -X- _ O
+or -X- _ O
+absence -X- _ O
+of -X- _ O
+Tat. -X- _ O
+Indeed -X- _ O
+, -X- _ O
+SEC -X- _ O
+disruption -X- _ O
+by -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+original -X- _ O
+report -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+an -X- _ O
+outsized -X- _ O
+impact -X- _ O
+on -X- _ O
+Myc-dependent -X- _ O
+transcription -X- _ O
+[ -X- _ O
+32 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+that -X- _ O
+additional -X- _ O
+factors -X- _ O
+driving -X- _ O
+the -X- _ O
+SEC -X- _ O
+dependency -X- _ O
+of -X- _ O
+proviral -X- _ O
+transcription -X- _ O
+have -X- _ O
+yet -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+described. -X- _ O
+Regardless -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+dual-acting -X- _ O
+nature -X- _ O
+of -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+in -X- _ O
+enhancing -X- _ O
+latency -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+in -X- _ O
+some -X- _ O
+circumstances -X- _ O
+( -X- _ O
+i.e. -X- _ O
+, -X- _ O
+if -X- _ O
+Tat -X- _ O
+is -X- _ O
+present -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+inhibiting -X- _ O
+latency -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+in -X- _ O
+others -X- _ O
+( -X- _ O
+i.e. -X- _ O
+, -X- _ O
+when -X- _ O
+the -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+state -X- _ O
+dictates -X- _ O
+SEC -X- _ O
+dependency -X- _ O
+) -X- _ O
+presents -X- _ O
+a -X- _ O
+unique -X- _ O
+opportunity -X- _ O
+to -X- _ O
+leverage -X- _ O
+the -X- _ O
+heterogenous -X- _ O
+nature -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+latent -X- _ O
+reservoir -X- _ O
+to -X- _ O
+both -X- _ O
+reverse -X- _ O
+and -X- _ O
+promote -X- _ O
+latency. -X- _ O
+Taken -X- _ O
+together -X- _ O
+, -X- _ O
+our -X- _ O
+results -X- _ O
+indicate -X- _ O
+that -X- _ O
+release -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+from -X- _ O
+cellular -X- _ O
+SECs -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+novel -X- _ O
+mechanism -X- _ O
+for -X- _ O
+promoting -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+viral -X- _ O
+transcription -X- _ O
+during -X- _ O
+both -X- _ O
+active -X- _ O
+and -X- _ O
+latent -X- _ O
+infection. -X- _ O
+We -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+the -X- _ O
+enhancement -X- _ O
+of -X- _ O
+latency -X- _ O
+reversal -X- _ O
+in -X- _ O
+multiple -X- _ O
+latent -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+line -X- _ I-CELL
+models -X- _ O
+and -X- _ O
+in -X- _ O
+primary -X- _ O
+PBMCs -X- _ B-CELL
+from -X- _ O
+PLWH -X- _ O
+on -X- _ O
+suppressive -X- _ O
+ART. -X- _ O
+This -X- _ O
+work -X- _ O
+demonstrates -X- _ O
+the -X- _ O
+importance -X- _ O
+of -X- _ O
+increasing -X- _ O
+the -X- _ O
+production -X- _ O
+or -X- _ O
+availability -X- _ O
+of -X- _ O
+free -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+for -X- _ O
+recruitment -X- _ O
+to -X- _ O
+viral -X- _ O
+loci -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+powerful -X- _ O
+strategy -X- _ O
+for -X- _ O
+bolstering -X- _ O
+current -X- _ O
+LRAs -X- _ O
+, -X- _ O
+most -X- _ O
+notably -X- _ O
+non-canonical -X- _ O
+NF-kB -X- _ O
+agonists. -X- _ O
+Due -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+heterogeneity -X- _ O
+of -X- _ O
+blocks -X- _ O
+to -X- _ O
+viral -X- _ O
+replication -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+latent -X- _ O
+reservoir -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+is -X- _ O
+likely -X- _ O
+that -X- _ O
+combinatorial -X- _ O
+LRA -X- _ O
+treatments -X- _ O
+will -X- _ O
+be -X- _ O
+the -X- _ O
+best -X- _ O
+strategy -X- _ O
+for -X- _ O
+potent -X- _ O
+latency -X- _ O
+reversal -X- _ O
+moving -X- _ O
+forward. -X- _ O
+Further -X- _ O
+efforts -X- _ O
+are -X- _ O
+needed -X- _ O
+to -X- _ O
+understand -X- _ O
+the -X- _ O
+intracellular -X- _ O
+distribution -X- _ O
+of -X- _ O
+active -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+to -X- _ O
+characterize -X- _ O
+the -X- _ O
+most -X- _ O
+critical -X- _ O
+reservoir -X- _ O
+to -X- _ O
+target -X- _ O
+to -X- _ O
+enhance -X- _ O
+transcription. -X- _ O
+Additionally -X- _ O
+, -X- _ O
+our -X- _ O
+work -X- _ O
+demonstrates -X- _ O
+that -X- _ O
+disruption -X- _ O
+of -X- _ O
+SECs -X- _ O
+could -X- _ O
+enhance -X- _ O
+latency -X- _ O
+reversal -X- _ O
+or -X- _ O
+promote -X- _ O
+the -X- _ O
+maintenance -X- _ O
+of -X- _ O
+latency -X- _ O
+depending -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+cellular -X- _ O
+context. -X- _ O
+Understanding -X- _ O
+the -X- _ O
+mechanism -X- _ O
+that -X- _ O
+controls -X- _ O
+this -X- _ O
+molecular -X- _ O
+switch -X- _ O
+would -X- _ O
+aid -X- _ O
+in -X- _ O
+understanding -X- _ O
+whether -X- _ O
+SEC -X- _ O
+disruptors -X- _ O
+could -X- _ O
+be -X- _ O
+a -X- _ O
+viable -X- _ O
+dual-acting -X- _ O
+molecule -X- _ O
+to -X- _ O
+aid -X- _ O
+in -X- _ O
+finding -X- _ O
+a -X- _ O
+functional -X- _ O
+cure -X- _ O
+for -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+infection. -X- _ O
+Methods -X- _ O
+Flow -X- _ O
+cytometry -X- _ O
+and -X- _ O
+analysis -X- _ O
+of -X- _ O
+viability -X- _ O
+/ -X- _ O
+infection -X- _ O
+/ -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+data -X- _ O
+Flow -X- _ O
+cytometry -X- _ O
+analysis -X- _ O
+was -X- _ O
+performed -X- _ O
+on -X- _ O
+an -X- _ O
+Attune -X- _ O
+NxT -X- _ O
+acoustic -X- _ O
+focusing -X- _ O
+cytometer -X- _ O
+( -X- _ O
+Thermo -X- _ O
+Fisher -X- _ O
+Scientific -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+recording -X- _ O
+all -X- _ O
+events -X- _ O
+in -X- _ O
+a -X- _ O
+40-μL -X- _ O
+sample -X- _ O
+volume -X- _ O
+after -X- _ O
+one -X- _ O
+150 -X- _ O
+μL -X- _ O
+of -X- _ O
+mixing -X- _ O
+cycle. -X- _ O
+Data -X- _ O
+were -X- _ O
+exported -X- _ O
+as -X- _ O
+FCS3.0 -X- _ O
+files -X- _ O
+using -X- _ O
+Attune -X- _ O
+NxT -X- _ O
+Software -X- _ O
+v3.2.0 -X- _ O
+and -X- _ O
+analyzed -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+consistent -X- _ O
+template -X- _ O
+on -X- _ O
+FlowJo. -X- _ O
+Briefly -X- _ O
+, -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+gated -X- _ O
+for -X- _ O
+lymphocytes -X- _ B-CELL
+by -X- _ O
+light -X- _ O
+scatter -X- _ O
+followed -X- _ O
+by -X- _ O
+doublet -X- _ O
+discrimination -X- _ O
+in -X- _ O
+both -X- _ O
+side -X- _ O
+and -X- _ O
+forward -X- _ O
+scatter. -X- _ O
+Cells -X- _ B-CELL
+with -X- _ O
+equal -X- _ O
+fluorescence -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+BL-1 -X- _ O
+( -X- _ O
+GFP -X- _ O
+) -X- _ O
+channel -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+VL-2 -X- _ O
+( -X- _ O
+AmCyan -X- _ O
+) -X- _ O
+channel -X- _ O
+were -X- _ O
+identified -X- _ O
+as -X- _ O
+autofluorescent -X- _ O
+and -X- _ O
+excluded -X- _ O
+from -X- _ O
+the -X- _ O
+analysis. -X- _ O
+A -X- _ O
+consistent -X- _ O
+gate -X- _ O
+was -X- _ O
+then -X- _ O
+used -X- _ O
+to -X- _ O
+quantify -X- _ O
+the -X- _ O
+fraction -X- _ O
+of -X- _ O
+remaining -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+that -X- _ O
+expressed -X- _ O
+the -X- _ O
+target -X- _ O
+of -X- _ O
+interest. -X- _ O
+Analysis -X- _ O
+of -X- _ O
+hiv-specific -X- _ O
+rna -X- _ O
+transcripts -X- _ O
+Following -X- _ O
+cDNA -X- _ O
+synthesis -X- _ O
+, -X- _ O
+viral -X- _ O
+transcripts -X- _ O
+were -X- _ O
+assessed -X- _ O
+by -X- _ O
+qRT-PCR -X- _ O
+as -X- _ O
+described -X- _ O
+previously -X- _ O
+[ -X- _ O
+13 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+For -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+TAR -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+following -X- _ O
+primers -X- _ O
+were -X- _ O
+used -X- _ O
+: -X- _ O
+PF -X- _ O
+: -X- _ O
+5′-GTCTCTCTGGTTAGACCAG-3′ -X- _ O
+; -X- _ O
+PR -X- _ O
+: -X- _ O
+5′-TGGGTTCCCTAGYTAGCC-3′ -X- _ O
+; -X- _ O
+and -X- _ O
+probe -X- _ O
+: -X- _ O
+5′-AGCCTGGGAGCTC-3′. -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+Long -X- _ O
+LTR -X- _ O
+levels -X- _ O
+were -X- _ O
+assessed -X- _ O
+using -X- _ O
+the -X- _ O
+following -X- _ O
+primers -X- _ O
+: -X- _ O
+PF -X- _ O
+: -X- _ O
+5′-GCCTCAATAAAGCTTGCCTTGA-3′ -X- _ O
+; -X- _ O
+PR -X- _ O
+: -X- _ O
+5′-GGGCGCCACTGCTAGAGA-3′ -X- _ O
+; -X- _ O
+and -X- _ O
+probe -X- _ O
+: -X- _ O
+5′-CCAGAGTCACACAACAGACGGGCACA-3. -X- _ O
+For -X- _ O
+expression -X- _ O
+level -X- _ O
+normalization -X- _ O
+, -X- _ O
+β-Actin -X- _ O
+was -X- _ O
+used -X- _ O
+( -X- _ O
+Thermo -X- _ O
+Fisher -X- _ O
+Scientific -X- _ O
+, -X- _ O
+catalog -X- _ O
+no. -X- _ O
+4331182 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Notably -X- _ O
+, -X- _ O
+β-Actin -X- _ O
+is -X- _ O
+an -X- _ O
+RNA -X- _ O
+Pol -X- _ O
+II -X- _ O
+controlled -X- _ O
+gene. -X- _ O
+To -X- _ O
+ensure -X- _ O
+that -X- _ O
+β-Actin -X- _ O
+levels -X- _ O
+were -X- _ O
+not -X- _ O
+being -X- _ O
+altered -X- _ O
+by -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+induced -X- _ O
+SEC -X- _ O
+disruption -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+compared -X- _ O
+β-Actin -X- _ O
+expression -X- _ O
+to -X- _ O
+that -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+18S -X- _ O
+ribosomal -X- _ O
+subunit -X- _ O
+, -X- _ O
+an -X- _ O
+RNA -X- _ O
+Pol -X- _ O
+I -X- _ O
+controlled -X- _ O
+gene -X- _ O
+( -X- _ O
+Thermo -X- _ O
+Fisher -X- _ O
+Scientific -X- _ O
+, -X- _ O
+catalog -X- _ O
+no. -X- _ O
+4331182 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+No -X- _ O
+statistically -X- _ O
+significant -X- _ O
+changes -X- _ O
+were -X- _ O
+noted -X- _ O
+between -X- _ O
+the -X- _ O
+two -X- _ O
+housekeeping -X- _ O
+genes -X- _ O
+upon -X- _ O
+KL-2 -X- _ O
+treatment -X- _ O
+, -X- _ O
+so -X- _ O
+β-Actin -X- _ O
+was -X- _ O
+used -X- _ O
+as -X- _ O
+the -X- _ O
+normalization -X- _ O
+gene -X- _ O
+for -X- _ O
+subsequent -X- _ O
+qPCR -X- _ O
+analyses. -X- _ O
+The -X- _ O
+reaction -X- _ O
+was -X- _ O
+performed -X- _ O
+using -X- _ O
+TaqMan -X- _ O
+Fast -X- _ O
+Advanced -X- _ O
+Master -X- _ O
+Mix -X- _ O
+( -X- _ O
+Thermo -X- _ O
+Fisher -X- _ O
+Scientific -X- _ O
+, -X- _ O
+catalog -X- _ O
+no. -X- _ O
+4444553 -X- _ O
+) -X- _ O
+according -X- _ O
+to -X- _ O
+manufacturer’s -X- _ O
+instructions. -X- _ O
+Briefly -X- _ O
+, -X- _ O
+10 -X- _ O
+μL -X- _ O
+of -X- _ O
+reaction -X- _ O
+was -X- _ O
+mixed -X- _ O
+using -X- _ O
+5 -X- _ O
+μL -X- _ O
+of -X- _ O
+Taqman -X- _ O
+Master -X- _ O
+Mix -X- _ O
+, -X- _ O
+0.5 -X- _ O
+μL -X- _ O
+of -X- _ O
+20x -X- _ O
+primer -X- _ O
+probe -X- _ O
+mix -X- _ O
+( -X- _ O
+18 -X- _ O
+μM -X- _ O
+of -X- _ O
+primers -X- _ O
+and -X- _ O
+5 -X- _ O
+μM -X- _ O
+probe -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+2.5 -X- _ O
+μL -X- _ O
+water -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+2 -X- _ O
+μL -X- _ O
+of -X- _ O
+template -X- _ O
+cDNA. -X- _ O
+The -X- _ O
+PCR -X- _ O
+cycles -X- _ O
+were -X- _ O
+as -X- _ O
+follows -X- _ O
+: -X- _ O
+50 -X- _ O
+°C -X- _ O
+for -X- _ O
+2 -X- _ O
+minutes -X- _ O
+, -X- _ O
+95 -X- _ O
+°C -X- _ O
+for -X- _ O
+20 -X- _ O
+seconds -X- _ O
+, -X- _ O
+followed -X- _ O
+by -X- _ O
+40 -X- _ O
+cycles -X- _ O
+of -X- _ O
+95 -X- _ O
+°C -X- _ O
+for -X- _ O
+1 -X- _ O
+second -X- _ O
+and -X- _ O
+60 -X- _ O
+°C -X- _ O
+for -X- _ O
+20 -X- _ O
+seconds. -X- _ O
+Rna -X- _ O
+sequencing -X- _ O
+analysis -X- _ O
+Sequencing -X- _ O
+data -X- _ O
+was -X- _ O
+demultiplexed -X- _ O
+and -X- _ O
+trimmed -X- _ O
+using -X- _ O
+Trimmomatic -X- _ O
+v0.36 -X- _ O
+to -X- _ O
+remove -X- _ O
+adapters -X- _ O
+and -X- _ O
+low-quality -X- _ O
+reads. -X- _ O
+Trimmed -X- _ O
+reads -X- _ O
+were -X- _ O
+aligned -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+Homo -X- _ O
+sapiens -X- _ O
+reference -X- _ O
+genome -X- _ O
+GRCh38 -X- _ O
+and -X- _ O
+transcripts -X- _ O
+quantified -X- _ O
+using -X- _ O
+the -X- _ O
+Hisat2-StringTie -X- _ O
+pipeline -X- _ O
+[ -X- _ O
+76 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Differential -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+analysis -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+quantified -X- _ O
+gene -X- _ O
+transcripts -X- _ O
+was -X- _ O
+performed -X- _ O
+with -X- _ O
+DESeq2 -X- _ O
+v.1.42.0 -X- _ O
+R -X- _ O
+package -X- _ O
+using -X- _ O
+R -X- _ O
+v.4.3.2. -X- _ O
+After -X- _ O
+retaining -X- _ O
+genes -X- _ O
+with -X- _ O
+nonzero -X- _ O
+total -X- _ O
+read -X- _ O
+count -X- _ O
+and -X- _ O
+with -X- _ O
+more -X- _ O
+than -X- _ O
+10 -X- _ O
+reads -X- _ O
+in -X- _ O
+total -X- _ O
+between -X- _ O
+all -X- _ O
+samples -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+fitted -X- _ O
+a -X- _ O
+model -X- _ O
+that -X- _ O
+included -X- _ O
+all -X- _ O
+treatments -X- _ O
+to -X- _ O
+account -X- _ O
+for -X- _ O
+overall -X- _ O
+variability -X- _ O
+and -X- _ O
+identified -X- _ O
+differentially -X- _ O
+expressed -X- _ O
+genes -X- _ O
+( -X- _ O
+DEGs -X- _ O
+) -X- _ O
+within -X- _ O
+that -X- _ O
+model -X- _ O
+between -X- _ O
+all -X- _ O
+tested -X- _ O
+conditions -X- _ O
+against -X- _ O
+DMSO-treated -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+( -X- _ O
+i.e. -X- _ O
+KL2 -X- _ O
+vs -X- _ O
+DMSO -X- _ O
+, -X- _ O
+AZD5582 -X- _ O
+vs -X- _ O
+DMSO -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+AZD5582+KL2 -X- _ O
+vs -X- _ O
+DMSO -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+To -X- _ O
+define -X- _ O
+DEGs -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+used -X- _ O
+as -X- _ O
+cut-offs -X- _ O
+an -X- _ O
+absolute -X- _ O
+log2 -X- _ O
+fold -X- _ O
+change -X- _ O
+> -X- _ O
+1 -X- _ O
+and -X- _ O
+a -X- _ O
+false -X- _ O
+discovery -X- _ O
+rate -X- _ O
+( -X- _ O
+FDR -X- _ O
+) -X- _ O
+compareCluster -X- _ O
+function. -X- _ O
+For -X- _ O
+these -X- _ O
+analyses -X- _ O
+all -X- _ O
+genes -X- _ O
+whose -X- _ O
+gene -X- _ O
+symbols -X- _ O
+could -X- _ O
+be -X- _ O
+mapped -X- _ O
+to -X- _ O
+ENTREZ -X- _ O
+Ids -X- _ O
+using -X- _ O
+the -X- _ O
+org.Hs.eg.db -X- _ O
+v.3.18.0 -X- _ O
+Bioconductor -X- _ O
+annotation -X- _ O
+package -X- _ O
+were -X- _ O
+included. -X- _ O
+Statistical -X- _ O
+analysis -X- _ O
+All -X- _ O
+statistical -X- _ O
+analysis -X- _ O
+was -X- _ O
+performed -X- _ O
+using -X- _ O
+GraphPad -X- _ O
+Prism -X- _ O
+version -X- _ O
+10.2.0 -X- _ O
+( -X- _ O
+392 -X- _ O
+) -X- _ O
+for -X- _ O
+Windows -X- _ O
+64-bit -X- _ O
+, -X- _ O
+GraphPad -X- _ O
+Software -X- _ O
+, -X- _ O
+Boston -X- _ O
+, -X- _ O
+Massachusetts -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+( -X- _ O
+www.graphpad.com -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Source -X- _ O
+paper -X- _ O
+: -X- _ O
+PMC11419360 -X- _ O
+
+2. -X- _ O
+results -X- _ O
+3. -X- _ O
+discussion -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+glial -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+play -X- _ O
+fundamental -X- _ O
+roles -X- _ O
+in -X- _ O
+retinal -X- _ B-TISSUE
+tissue -X- _ I-TISSUE
+functions. -X- _ O
+Therefore -X- _ O
+, -X- _ O
+studies -X- _ O
+into -X- _ O
+their -X- _ O
+biology -X- _ O
+and -X- _ O
+functions -X- _ O
+may -X- _ O
+contribute -X- _ O
+to -X- _ O
+understanding -X- _ O
+the -X- _ O
+causes -X- _ O
+of -X- _ O
+retinal -X- _ O
+pathologies -X- _ O
+and -X- _ O
+to -X- _ O
+develop -X- _ O
+strategies -X- _ O
+to -X- _ O
+alleviate -X- _ O
+their -X- _ O
+outcomes. -X- _ O
+The -X- _ O
+aim -X- _ O
+of -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+was -X- _ O
+to -X- _ O
+investigate -X- _ O
+the -X- _ O
+impact -X- _ O
+of -X- _ O
+high -X- _ O
+glucose -X- _ O
+and -X- _ O
+glucose -X- _ O
+fluctuations -X- _ O
+on -X- _ O
+critical -X- _ O
+cellular -X- _ O
+processes -X- _ O
+, -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+gliosis -X- _ O
+and -X- _ O
+reprogramming -X- _ O
+in -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ I-CELL
+These -X- _ O
+processes -X- _ O
+are -X- _ O
+of -X- _ O
+pivotal -X- _ O
+importance -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+onset -X- _ O
+and -X- _ O
+progression -X- _ O
+of -X- _ O
+retinal -X- _ O
+neurodegeneration -X- _ O
+and -X- _ O
+diabetic -X- _ O
+retinopathy. -X- _ O
+In -X- _ O
+the -X- _ O
+present -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+observed -X- _ O
+a -X- _ O
+significant -X- _ O
+increase -X- _ O
+in -X- _ O
+GFAP -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+NG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+exposed -X- _ O
+to -X- _ O
+sustained -X- _ O
+high-glucose -X- _ O
+and -X- _ O
+GF -X- _ O
+treatments -X- _ O
+, -X- _ O
+indicating -X- _ O
+a -X- _ O
+glucose -X- _ O
+stress-induced -X- _ O
+gliotic -X- _ O
+response. -X- _ O
+This -X- _ O
+response -X- _ O
+was -X- _ O
+associated -X- _ O
+with -X- _ O
+other -X- _ O
+markers -X- _ O
+of -X- _ O
+reactive -X- _ O
+gliosis -X- _ O
+, -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+the -X- _ O
+morphological -X- _ O
+changes -X- _ O
+associated -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+transition -X- _ O
+from -X- _ O
+a -X- _ O
+bipolar -X- _ O
+to -X- _ O
+a -X- _ O
+radial -X- _ O
+morphology -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+overexpression -X- _ O
+/ -X- _ O
+reorganization -X- _ O
+of -X- _ O
+vimentin -X- _ O
+intermediate -X- _ B-TISSUE
+filament. -X- _ I-TISSUE
+These -X- _ O
+findings -X- _ O
+indicate -X- _ O
+that -X- _ O
+NG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+are -X- _ O
+sensitive -X- _ O
+to -X- _ O
+glucose -X- _ O
+changes -X- _ O
+in -X- _ O
+their -X- _ O
+surrounding -X- _ O
+environment -X- _ O
+, -X- _ O
+potentially -X- _ O
+functioning -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+protective -X- _ O
+or -X- _ O
+reactive -X- _ O
+mechanism -X- _ O
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+metabolic -X- _ O
+stress. -X- _ O
+The -X- _ O
+remarkable -X- _ O
+sensitivity -X- _ O
+to -X- _ O
+glucose -X- _ O
+stress -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+prompt -X- _ O
+reactive -X- _ O
+gliosis -X- _ O
+observed -X- _ O
+in -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+were -X- _ O
+found -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+similar -X- _ O
+to -X- _ O
+those -X- _ O
+observed -X- _ O
+in -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+of -X- _ O
+diabetic -X- _ O
+subjects -X- _ O
+[ -X- _ O
+8 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+This -X- _ O
+finding -X- _ O
+confirms -X- _ O
+the -X- _ O
+suitability -X- _ O
+of -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+as -X- _ O
+an -X- _ O
+in -X- _ O
+vitro -X- _ O
+model -X- _ O
+to -X- _ O
+study -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+response. -X- _ O
+In -X- _ O
+contrast -X- _ O
+, -X- _ O
+HG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+maintain -X- _ O
+a -X- _ O
+basal -X- _ O
+high -X- _ O
+level -X- _ O
+of -X- _ O
+both -X- _ O
+GFAP -X- _ O
+and -X- _ O
+Vimentin -X- _ O
+together -X- _ O
+to -X- _ O
+less -X- _ O
+organized -X- _ O
+intermediate -X- _ B-TISSUE
+filaments -X- _ I-TISSUE
+across -X- _ O
+the -X- _ O
+different -X- _ O
+glucose -X- _ O
+treatments -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+a -X- _ O
+limited -X- _ O
+and -X- _ O
+static -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+sustained -X- _ O
+high-glucose -X- _ O
+and -X- _ O
+GF -X- _ O
+treatments. -X- _ O
+These -X- _ O
+findings -X- _ O
+highlight -X- _ O
+that -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+in -X- _ O
+chronic -X- _ O
+hyperglycemic -X- _ O
+conditions -X- _ O
+may -X- _ O
+adapt -X- _ O
+or -X- _ O
+develop -X- _ O
+enhanced -X- _ O
+tolerance -X- _ O
+over -X- _ O
+time -X- _ O
+due -X- _ O
+to -X- _ O
+constant -X- _ O
+and -X- _ O
+prolonged -X- _ O
+exposure -X- _ O
+to -X- _ O
+high -X- _ O
+glucose -X- _ O
+levels. -X- _ O
+The -X- _ O
+adaptation -X- _ O
+or -X- _ O
+desensitization -X- _ O
+of -X- _ O
+HG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+to -X- _ O
+sustained -X- _ O
+high-glucose -X- _ O
+and -X- _ O
+GFs -X- _ O
+may -X- _ O
+indicate -X- _ O
+a -X- _ O
+saturation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+gliotic -X- _ O
+response -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+is -X- _ O
+characteristic -X- _ O
+of -X- _ O
+prolonged -X- _ O
+hyperglycemic -X- _ O
+states -X- _ O
+, -X- _ O
+as -X- _ O
+observed -X- _ O
+in -X- _ O
+uncontrolled -X- _ O
+diabetes -X- _ O
+[ -X- _ O
+34 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+This -X- _ O
+adaptation -X- _ O
+or -X- _ O
+desensitization -X- _ O
+may -X- _ O
+result -X- _ O
+in -X- _ O
+a -X- _ O
+reduction -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+cellular -X- _ O
+capacity -X- _ O
+to -X- _ O
+respond -X- _ O
+to -X- _ O
+additional -X- _ O
+metabolic -X- _ O
+challenges -X- _ O
+or -X- _ O
+stress. -X- _ O
+To -X- _ O
+understand -X- _ O
+the -X- _ O
+clinical -X- _ O
+consequences -X- _ O
+of -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+gliosis -X- _ O
+it -X- _ O
+is -X- _ O
+essential -X- _ O
+to -X- _ O
+also -X- _ O
+consider -X- _ O
+the -X- _ O
+reprogramming -X- _ O
+process -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+may -X- _ O
+include -X- _ O
+dedifferentiation -X- _ O
+of -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+and -X- _ O
+regeneration -X- _ O
+of -X- _ O
+various -X- _ O
+retinal -X- _ O
+neurons -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+contributing -X- _ O
+to -X- _ O
+retinal -X- _ B-TISSUE
+tissues -X- _ I-TISSUE
+repair -X- _ O
+under -X- _ O
+certain -X- _ O
+conditions. -X- _ O
+In -X- _ O
+species -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+birds -X- _ O
+[ -X- _ O
+35 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+zebrafish -X- _ O
+[ -X- _ O
+36,37 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+rodents -X- _ O
+[ -X- _ O
+38 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+glia -X- _ I-CELL
+contribute -X- _ O
+as -X- _ O
+the -X- _ O
+primary -X- _ O
+source -X- _ O
+of -X- _ O
+retinal -X- _ O
+regeneration. -X- _ O
+When -X- _ O
+the -X- _ O
+retina -X- _ B-TISSUE
+is -X- _ O
+damaged -X- _ O
+, -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+glia -X- _ I-CELL
+can -X- _ O
+dedifferentiate -X- _ O
+into -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+glia-derived -X- _ I-CELL
+progenitor -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+( -X- _ O
+MGPCs -X- _ B-CELL
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+acquiring -X- _ O
+a -X- _ O
+progenitor-like -X- _ O
+phenotype -X- _ O
+and -X- _ O
+starting -X- _ O
+to -X- _ O
+proliferate -X- _ O
+, -X- _ O
+thus -X- _ O
+contributing -X- _ O
+to -X- _ O
+retinal -X- _ O
+repair -X- _ O
+[ -X- _ O
+39,40 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Notably -X- _ O
+, -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+glia -X- _ I-CELL
+in -X- _ O
+lower -X- _ O
+vertebrates -X- _ O
+exhibit -X- _ O
+a -X- _ O
+remarkable -X- _ O
+ability -X- _ O
+to -X- _ O
+regenerate -X- _ O
+retinal -X- _ B-CELL
+neurons -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+contrasting -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+limited -X- _ O
+regenerative -X- _ O
+capacity -X- _ O
+seen -X- _ O
+in -X- _ O
+mammals -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+humans -X- _ O
+[ -X- _ O
+40 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+where -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+typically -X- _ O
+respond -X- _ O
+to -X- _ O
+injury -X- _ O
+with -X- _ O
+reactive -X- _ O
+gliosis -X- _ O
+, -X- _ O
+leading -X- _ O
+to -X- _ O
+scarring -X- _ O
+rather -X- _ O
+than -X- _ O
+regeneration -X- _ O
+[ -X- _ O
+11,20 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+SHH -X- _ O
+signaling -X- _ O
+pathway -X- _ O
+is -X- _ O
+essential -X- _ O
+for -X- _ O
+the -X- _ O
+proper -X- _ O
+development -X- _ O
+of -X- _ O
+all -X- _ O
+vertebrate -X- _ O
+retinas -X- _ B-TISSUE
+[ -X- _ O
+41,42,43,44,45,46,47 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+several -X- _ O
+studies -X- _ O
+have -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+the -X- _ O
+involvement -X- _ O
+of -X- _ O
+SHH -X- _ O
+signaling -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+and -X- _ O
+differentiation -X- _ O
+of -X- _ O
+MGPCs -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+contributing -X- _ O
+to -X- _ O
+retinal -X- _ O
+regeneration -X- _ O
+in -X- _ O
+lower -X- _ O
+vertebrate -X- _ O
+[ -X- _ O
+18,19,31,32,34 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+mammals -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+SHH -X- _ O
+pathway -X- _ O
+alone -X- _ O
+may -X- _ O
+not -X- _ O
+be -X- _ O
+sufficient -X- _ O
+to -X- _ O
+overcome -X- _ O
+the -X- _ O
+intrinsic -X- _ O
+limitations -X- _ O
+of -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+to -X- _ O
+regenerate -X- _ O
+neuronal -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ I-CELL
+In -X- _ O
+our -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+observed -X- _ O
+an -X- _ O
+increase -X- _ O
+in -X- _ O
+SHH -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+NG -X- _ O
+MIO-M1cells -X- _ B-CELL_LINE
+exposed -X- _ O
+to -X- _ O
+sustained -X- _ O
+high-glucose -X- _ O
+and -X- _ O
+GF -X- _ O
+treatments. -X- _ O
+This -X- _ O
+suggests -X- _ O
+that -X- _ O
+these -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+are -X- _ O
+engaging -X- _ O
+in -X- _ O
+pathways -X- _ O
+associated -X- _ O
+with -X- _ O
+cellular -X- _ O
+dedifferentiation -X- _ O
+and -X- _ O
+potential -X- _ O
+reprogramming -X- _ O
+towards -X- _ O
+a -X- _ O
+progenitor -X- _ O
+state. -X- _ O
+The -X- _ O
+increased -X- _ O
+SHH -X- _ O
+protein -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+NG -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+was -X- _ O
+accompanied -X- _ O
+by -X- _ O
+significant -X- _ O
+changes -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+intracellular -X- _ O
+localization -X- _ O
+of -X- _ O
+SHH -X- _ O
+, -X- _ O
+exhibiting -X- _ O
+a -X- _ O
+more -X- _ O
+spotted -X- _ O
+/ -X- _ O
+punctate -X- _ O
+pattern -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+cytoplasm -X- _ B-CELL_COMPONENT
+and -X- _ O
+in -X- _ O
+close -X- _ O
+proximity -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+plasma -X- _ B-CELL_COMPONENT
+membrane. -X- _ I-CELL_COMPONENT
+These -X- _ O
+findings -X- _ O
+suggest -X- _ O
+an -X- _ O
+enhanced -X- _ O
+state -X- _ O
+of -X- _ O
+cellular -X- _ O
+activity -X- _ O
+with -X- _ O
+increased -X- _ O
+synthesis -X- _ O
+and -X- _ O
+potential -X- _ O
+accumulation -X- _ O
+of -X- _ O
+SHH -X- _ O
+, -X- _ O
+aligning -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+findings -X- _ O
+in -X- _ O
+lower -X- _ O
+vertebrates -X- _ O
+and -X- _ O
+rodents -X- _ O
+, -X- _ O
+where -X- _ O
+increased -X- _ O
+SHH -X- _ O
+signaling -X- _ O
+plays -X- _ O
+a -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+reprogramming -X- _ O
+and -X- _ O
+retinal -X- _ O
+regeneration -X- _ O
+[ -X- _ O
+18,48,49 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Furthermore -X- _ O
+, -X- _ O
+significantly -X- _ O
+higher -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+SHH -X- _ O
+were -X- _ O
+observed -X- _ O
+in -X- _ O
+HG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+compared -X- _ O
+to -X- _ O
+NG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells. -X- _ I-CELL_LINE
+Conversely -X- _ O
+, -X- _ O
+HG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+exposed -X- _ O
+to -X- _ O
+GF -X- _ O
+treatments -X- _ O
+showed -X- _ O
+a -X- _ O
+decrease -X- _ O
+in -X- _ O
+SHH -X- _ O
+protein -X- _ O
+expression -X- _ O
+levels. -X- _ O
+A -X- _ O
+trend -X- _ O
+toward -X- _ O
+a -X- _ O
+decrease -X- _ O
+was -X- _ O
+also -X- _ O
+observed -X- _ O
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+sustained -X- _ O
+high-glucose. -X- _ O
+This -X- _ O
+finding -X- _ O
+is -X- _ O
+consistent -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+previous -X- _ O
+study -X- _ O
+in -X- _ O
+which -X- _ O
+the -X- _ O
+authors -X- _ O
+observed -X- _ O
+a -X- _ O
+decrease -X- _ O
+in -X- _ O
+SHH -X- _ O
+signaling -X- _ O
+in -X- _ O
+reactive -X- _ O
+astrocytes -X- _ B-CELL
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+cerebral -X- _ B-TISSUE
+cortex -X- _ I-TISSUE
+after -X- _ O
+acute -X- _ O
+, -X- _ O
+focal -X- _ O
+injury -X- _ O
+, -X- _ O
+particularly -X- _ O
+in -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+proximal -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+lesion -X- _ O
+site -X- _ O
+[ -X- _ O
+50 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+This -X- _ O
+highlights -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+negative -X- _ O
+regulation -X- _ O
+of -X- _ O
+SHH -X- _ O
+activity -X- _ O
+in -X- _ O
+astrocytes -X- _ B-CELL
+is -X- _ O
+context-dependent -X- _ O
+and -X- _ O
+varies -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+degree -X- _ O
+of -X- _ O
+cellular -X- _ O
+damage. -X- _ O
+In -X- _ O
+our -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+decreased -X- _ O
+SHH -X- _ O
+levels -X- _ O
+observed -X- _ O
+in -X- _ O
+HG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+exposed -X- _ O
+to -X- _ O
+GFs -X- _ O
+indicate -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+severity -X- _ O
+of -X- _ O
+metabolic -X- _ O
+stress -X- _ O
+may -X- _ O
+influence -X- _ O
+SHH -X- _ O
+signaling -X- _ O
+pathways -X- _ O
+through -X- _ O
+a -X- _ O
+similar -X- _ O
+mechanism. -X- _ O
+These -X- _ O
+observations -X- _ O
+underscore -X- _ O
+the -X- _ O
+notion -X- _ O
+that -X- _ O
+glial -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+and -X- _ O
+astrocytes -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+exhibit -X- _ O
+differential -X- _ O
+SHH -X- _ O
+responses -X- _ O
+depending -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+extent -X- _ O
+of -X- _ O
+glucose -X- _ O
+stress -X- _ O
+, -X- _ O
+highlighting -X- _ O
+the -X- _ O
+dynamic -X- _ O
+regulation -X- _ O
+of -X- _ O
+SHH -X- _ O
+signaling -X- _ O
+in -X- _ O
+glial -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ I-CELL
+Although -X- _ O
+the -X- _ O
+SHH -X- _ O
+level -X- _ O
+has -X- _ O
+decreased -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+that -X- _ O
+express -X- _ O
+it -X- _ O
+maintain -X- _ O
+a -X- _ O
+dot-like -X- _ O
+distribution -X- _ O
+of -X- _ O
+SHH -X- _ O
+inside -X- _ O
+the -X- _ O
+cells. -X- _ B-CELL
+Our -X- _ O
+findings -X- _ O
+suggest -X- _ O
+that -X- _ O
+, -X- _ O
+under -X- _ O
+NG -X- _ O
+condition -X- _ O
+, -X- _ O
+exposure -X- _ O
+to -X- _ O
+sustained -X- _ O
+high-glucose -X- _ O
+and -X- _ O
+GFs -X- _ O
+stimulates -X- _ O
+SHH -X- _ O
+expression -X- _ O
+, -X- _ O
+potentially -X- _ O
+promoting -X- _ O
+the -X- _ O
+dedifferentiation -X- _ O
+and -X- _ O
+reprogramming -X- _ O
+of -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ I-CELL
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+HG-adapted -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+additional -X- _ O
+metabolic -X- _ O
+stress -X- _ O
+from -X- _ O
+GF -X- _ O
+treatments -X- _ O
+leads -X- _ O
+to -X- _ O
+decreased -X- _ O
+SHH -X- _ O
+expression -X- _ O
+, -X- _ O
+possibly -X- _ O
+impairing -X- _ O
+regenerative -X- _ O
+capacity -X- _ O
+and -X- _ O
+enhancing -X- _ O
+gliotic -X- _ O
+responses. -X- _ O
+These -X- _ O
+observations -X- _ O
+indicate -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+severity -X- _ O
+and -X- _ O
+fluctuation -X- _ O
+of -X- _ O
+glucose -X- _ O
+stress -X- _ O
+influence -X- _ O
+SHH -X- _ O
+signaling -X- _ O
+pathways -X- _ O
+, -X- _ O
+affecting -X- _ O
+the -X- _ O
+balance -X- _ O
+between -X- _ O
+neuroprotection -X- _ O
+and -X- _ O
+gliosis -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+retina. -X- _ B-TISSUE
+A -X- _ O
+previous -X- _ O
+study -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+that -X- _ O
+high-glucose -X- _ O
+conditions -X- _ O
+have -X- _ O
+been -X- _ O
+associated -X- _ O
+with -X- _ O
+increased -X- _ O
+SOX2 -X- _ O
+levels -X- _ O
+in -X- _ O
+human -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+glial -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+may -X- _ O
+support -X- _ O
+cell -X- _ O
+survival -X- _ O
+and -X- _ O
+regeneration -X- _ O
+under -X- _ O
+stress -X- _ O
+conditions -X- _ O
+[ -X- _ O
+51 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+our -X- _ O
+experiments -X- _ O
+, -X- _ O
+SOX2 -X- _ O
+was -X- _ O
+significantly -X- _ O
+upregulated -X- _ O
+in -X- _ O
+HG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+compared -X- _ O
+to -X- _ O
+NG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells. -X- _ I-CELL_LINE
+Furthermore -X- _ O
+, -X- _ O
+NG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+have -X- _ O
+the -X- _ O
+capacity -X- _ O
+to -X- _ O
+modulate -X- _ O
+this -X- _ O
+gene -X- _ O
+when -X- _ O
+exposed -X- _ O
+to -X- _ O
+sustained -X- _ O
+high-glucose -X- _ O
+and -X- _ O
+GF -X- _ O
+treatments -X- _ O
+, -X- _ O
+exhibiting -X- _ O
+a -X- _ O
+consistent -X- _ O
+upregulation -X- _ O
+of -X- _ O
+SOX2. -X- _ O
+These -X- _ O
+findings -X- _ O
+are -X- _ O
+consistent -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+observed -X- _ O
+upregulation -X- _ O
+of -X- _ O
+SHH -X- _ O
+in -X- _ O
+NG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+exposed -X- _ O
+to -X- _ O
+different -X- _ O
+glucose -X- _ O
+treatments. -X- _ O
+Unlike -X- _ O
+NG -X- _ O
+MIO-M1cells -X- _ B-CELL_LINE
+, -X- _ O
+HG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+exposed -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+same -X- _ O
+glucose -X- _ O
+treatments -X- _ O
+do -X- _ O
+not -X- _ O
+show -X- _ O
+variations -X- _ O
+in -X- _ O
+SOX2 -X- _ O
+expression. -X- _ O
+This -X- _ O
+different -X- _ O
+behavior -X- _ O
+of -X- _ O
+HG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+with -X- _ O
+regards -X- _ O
+to -X- _ O
+SOX2 -X- _ O
+and -X- _ O
+SHH -X- _ O
+expression -X- _ O
+, -X- _ O
+may -X- _ O
+be -X- _ O
+due -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+different -X- _ O
+roles -X- _ O
+and -X- _ O
+regulatory -X- _ O
+mechanisms -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+glial -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+of -X- _ O
+these -X- _ O
+two -X- _ O
+genes. -X- _ O
+SOX2 -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+transcription -X- _ O
+factor -X- _ O
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+for -X- _ O
+maintaining -X- _ O
+stemness -X- _ O
+and -X- _ O
+promoting -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+progenitor -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+its -X- _ O
+upregulation -X- _ O
+could -X- _ O
+be -X- _ O
+a -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+cellular -X- _ O
+stress -X- _ O
+in -X- _ O
+order -X- _ O
+to -X- _ O
+maintain -X- _ O
+or -X- _ O
+enhance -X- _ O
+regenerative -X- _ O
+capacity. -X- _ O
+In -X- _ O
+contrast -X- _ O
+, -X- _ O
+SHH -X- _ O
+signaling -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+is -X- _ O
+involved -X- _ O
+in -X- _ O
+cell -X- _ O
+differentiation -X- _ O
+and -X- _ O
+tissue -X- _ O
+patterning -X- _ O
+, -X- _ O
+may -X- _ O
+be -X- _ O
+more -X- _ O
+sensitive -X- _ O
+to -X- _ O
+metabolic -X- _ O
+perturbations -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+more -X- _ O
+dynamic -X- _ O
+regulation -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+can -X- _ O
+lead -X- _ O
+to -X- _ O
+its -X- _ O
+downregulation -X- _ O
+under -X- _ O
+glucose -X- _ O
+fluctuations -X- _ O
+treatments. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+despite -X- _ O
+the -X- _ O
+observed -X- _ O
+upregulation -X- _ O
+of -X- _ O
+SHH -X- _ O
+and -X- _ O
+SOX2 -X- _ O
+in -X- _ O
+NG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+rhodopsin -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+marker -X- _ O
+of -X- _ O
+mature -X- _ O
+neuronal -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+was -X- _ O
+not -X- _ O
+detected. -X- _ O
+This -X- _ O
+indicates -X- _ O
+that -X- _ O
+, -X- _ O
+although -X- _ O
+the -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+possess -X- _ O
+the -X- _ O
+potential -X- _ O
+to -X- _ O
+differentiate -X- _ O
+into -X- _ O
+neuronal -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+conditions -X- _ O
+employed -X- _ O
+in -X- _ O
+our -X- _ O
+protocol -X- _ O
+were -X- _ O
+not -X- _ O
+sufficient -X- _ O
+to -X- _ O
+fully -X- _ O
+induce -X- _ O
+this -X- _ O
+differentiation. -X- _ O
+The -X- _ O
+lack -X- _ O
+of -X- _ O
+mature -X- _ O
+neuronal -X- _ O
+marker -X- _ O
+expression -X- _ O
+is -X- _ O
+likely -X- _ O
+due -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+timing -X- _ O
+and -X- _ O
+duration -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+experimental -X- _ O
+conditions. -X- _ O
+It -X- _ O
+may -X- _ O
+therefore -X- _ O
+be -X- _ O
+worthwhile -X- _ O
+to -X- _ O
+optimize -X- _ O
+the -X- _ O
+protocol -X- _ O
+in -X- _ O
+order -X- _ O
+to -X- _ O
+more -X- _ O
+accurately -X- _ O
+reflect -X- _ O
+the -X- _ O
+diabetic -X- _ O
+conditions -X- _ O
+in -X- _ O
+humans -X- _ O
+, -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+view -X- _ O
+to -X- _ O
+promoting -X- _ O
+full -X- _ O
+neuronal -X- _ O
+differentiation. -X- _ O
+Given -X- _ O
+the -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+SHH -X- _ O
+in -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+reprogramming -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+observed -X- _ O
+upregulation -X- _ O
+under -X- _ O
+sustained -X- _ O
+high-glucose -X- _ O
+and -X- _ O
+GF -X- _ O
+treatments -X- _ O
+, -X- _ O
+future -X- _ O
+experiments -X- _ O
+could -X- _ O
+investigate -X- _ O
+the -X- _ O
+effect -X- _ O
+of -X- _ O
+exogenous -X- _ O
+SHH -X- _ O
+treatment -X- _ O
+on -X- _ O
+human -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ I-CELL
+This -X- _ O
+approach -X- _ O
+would -X- _ O
+provide -X- _ O
+insights -X- _ O
+into -X- _ O
+the -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+modulating -X- _ O
+SHH -X- _ O
+signaling -X- _ O
+to -X- _ O
+mitigate -X- _ O
+the -X- _ O
+adverse -X- _ O
+effects -X- _ O
+of -X- _ O
+reactive -X- _ O
+gliosis -X- _ O
+and -X- _ O
+enhance -X- _ O
+regenerative -X- _ O
+processes -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+diabetic -X- _ O
+retina. -X- _ B-TISSUE
+Although -X- _ O
+the -X- _ O
+current -X- _ O
+study -X- _ O
+provides -X- _ O
+important -X- _ O
+insights -X- _ O
+into -X- _ O
+the -X- _ O
+gliotic -X- _ O
+and -X- _ O
+reprogramming -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+under -X- _ O
+different -X- _ O
+glucose -X- _ O
+treatments -X- _ O
+, -X- _ O
+some -X- _ O
+limitations -X- _ O
+should -X- _ O
+be -X- _ O
+considered. -X- _ O
+The -X- _ O
+study -X- _ O
+employed -X- _ O
+the -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+line -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+, -X- _ O
+although -X- _ O
+well -X- _ O
+established -X- _ O
+in -X- _ O
+human -X- _ O
+retinal -X- _ O
+research -X- _ O
+, -X- _ O
+may -X- _ O
+not -X- _ O
+fully -X- _ O
+capture -X- _ O
+the -X- _ O
+physiological -X- _ O
+complexity -X- _ O
+of -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+found -X- _ O
+in -X- _ O
+human -X- _ O
+retina. -X- _ B-TISSUE
+Future -X- _ O
+research -X- _ O
+could -X- _ O
+benefit -X- _ O
+from -X- _ O
+using -X- _ O
+primary -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+to -X- _ O
+better -X- _ O
+reflect -X- _ O
+the -X- _ O
+in -X- _ O
+vivo -X- _ O
+context -X- _ O
+of -X- _ O
+human -X- _ O
+diabetic -X- _ O
+retinopathy. -X- _ O
+In -X- _ O
+addition -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+effects -X- _ O
+of -X- _ O
+other -X- _ O
+stressors -X- _ O
+, -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+oxidative -X- _ O
+stress -X- _ O
+or -X- _ O
+hypoxia -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+also -X- _ O
+play -X- _ O
+a -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+diabetic -X- _ O
+retinal -X- _ O
+damage -X- _ O
+, -X- _ O
+were -X- _ O
+not -X- _ O
+included -X- _ O
+in -X- _ O
+our -X- _ O
+model. -X- _ O
+Inclusion -X- _ O
+of -X- _ O
+these -X- _ O
+factors -X- _ O
+could -X- _ O
+provide -X- _ O
+a -X- _ O
+more -X- _ O
+comprehensive -X- _ O
+understanding -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+cellular -X- _ O
+mechanisms -X- _ O
+involved. -X- _ O
+Despite -X- _ O
+these -X- _ O
+limitations -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+current -X- _ O
+study -X- _ O
+contributes -X- _ O
+important -X- _ O
+insights -X- _ O
+into -X- _ O
+the -X- _ O
+gliotic -X- _ O
+and -X- _ O
+reprogramming -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+Müller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+under -X- _ O
+varying -X- _ O
+glucose -X- _ O
+conditions. -X- _ O
+4. -X- _ O
+materials -X- _ O
+and -X- _ O
+methods -X- _ O
+4.5. -X- _ O
+statistical -X- _ O
+analysis -X- _ O
+All -X- _ O
+the -X- _ O
+results -X- _ O
+are -X- _ O
+expressed -X- _ O
+as -X- _ O
+the -X- _ O
+mean -X- _ O
+± -X- _ O
+SEM -X- _ O
+( -X- _ O
+standard -X- _ O
+error -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+mean -X- _ O
+) -X- _ O
+of -X- _ O
+at -X- _ O
+least -X- _ O
+three -X- _ O
+independent -X- _ O
+experiments. -X- _ O
+Statistically -X- _ O
+significant -X- _ O
+differences -X- _ O
+were -X- _ O
+assessed -X- _ O
+using -X- _ O
+Prism -X- _ O
+6.05 -X- _ O
+( -X- _ O
+GraphPad -X- _ O
+PRISM -X- _ O
+Software -X- _ O
+, -X- _ O
+Inc. -X- _ O
+, -X- _ O
+La -X- _ O
+Jolla -X- _ O
+, -X- _ O
+CA -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+with -X- _ O
+Student’s -X- _ O
+t-test -X- _ O
+for -X- _ O
+statistical -X- _ O
+comparison -X- _ O
+between -X- _ O
+groups. -X- _ O
+Differences -X- _ O
+between -X- _ O
+means -X- _ O
+were -X- _ O
+considered -X- _ O
+statistically -X- _ O
+significant -X- _ O
+when -X- _ O
+p-values -X- _ O
+were -X- _ O
+at -X- _ O
+least -X- _ O
+***5. -X- _ O
+Conclusions*** -X- _ O
+The -X- _ O
+results -X- _ O
+showed -X- _ O
+that -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+Müller -X- _ I-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+exhibit -X- _ O
+distinct -X- _ O
+responses -X- _ O
+to -X- _ O
+different -X- _ O
+glucose -X- _ O
+treatments -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+are -X- _ O
+strongly -X- _ O
+dependent -X- _ O
+on -X- _ O
+their -X- _ O
+metabolic -X- _ O
+environment. -X- _ O
+This -X- _ O
+differential -X- _ O
+response -X- _ O
+could -X- _ O
+have -X- _ O
+implications -X- _ O
+for -X- _ O
+the -X- _ O
+onset -X- _ O
+and -X- _ O
+progression -X- _ O
+of -X- _ O
+diabetic -X- _ O
+retinopathy. -X- _ O
+The -X- _ O
+increased -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+activation -X- _ O
+and -X- _ O
+dedifferentiation -X- _ O
+markers -X- _ O
+observed -X- _ O
+in -X- _ O
+NG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+different -X- _ O
+glucose -X- _ O
+treatments -X- _ O
+suggest -X- _ O
+a -X- _ O
+protective -X- _ O
+response -X- _ O
+that -X- _ O
+may -X- _ O
+occur -X- _ O
+in -X- _ O
+early -X- _ O
+or -X- _ O
+well-controlled -X- _ O
+diabetes. -X- _ O
+In -X- _ O
+contrast -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+lack -X- _ O
+of -X- _ O
+response -X- _ O
+observed -X- _ O
+in -X- _ O
+HG -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+exposed -X- _ O
+to -X- _ O
+different -X- _ O
+glucose -X- _ O
+treatments -X- _ O
+may -X- _ O
+reflect -X- _ O
+an -X- _ O
+exhausted -X- _ O
+gliotic -X- _ O
+and -X- _ O
+reprogramming -X- _ O
+capacity -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+could -X- _ O
+contribute -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+development -X- _ O
+and -X- _ O
+progression -X- _ O
+of -X- _ O
+diabetic -X- _ O
+complications -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+retinal -X- _ O
+neurodegeneration -X- _ O
+and -X- _ O
+diabetic -X- _ O
+retinopathy -X- _ O
+observed -X- _ O
+in -X- _ O
+uncontrolled -X- _ O
+diabetic -X- _ O
+patients -X- _ O
+exposed -X- _ O
+to -X- _ O
+prolonged -X- _ O
+metabolic -X- _ O
+glucose -X- _ O
+stress. -X- _ O
+Although -X- _ O
+our -X- _ O
+results -X- _ O
+provide -X- _ O
+valuable -X- _ O
+insights -X- _ O
+, -X- _ O
+further -X- _ O
+in-depth -X- _ O
+studies -X- _ O
+are -X- _ O
+needed -X- _ O
+to -X- _ O
+elucidate -X- _ O
+the -X- _ O
+mechanisms -X- _ O
+involved -X- _ O
+and -X- _ O
+to -X- _ O
+explore -X- _ O
+the -X- _ O
+potential -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+implications -X- _ O
+for -X- _ O
+mitigating -X- _ O
+retinal -X- _ O
+neurodegeneration -X- _ O
+associated -X- _ O
+with -X- _ O
+diabetes. -X- _ O
+Extending -X- _ O
+these -X- _ O
+studies -X- _ O
+to -X- _ O
+primary -X- _ B-CELL
+Müller -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+in -X- _ O
+future -X- _ O
+research -X- _ O
+would -X- _ O
+provide -X- _ O
+a -X- _ O
+more -X- _ O
+physiologically -X- _ O
+relevant -X- _ O
+system -X- _ O
+, -X- _ O
+helping -X- _ O
+to -X- _ O
+validate -X- _ O
+and -X- _ O
+refine -X- _ O
+our -X- _ O
+findings. -X- _ O
+This -X- _ O
+approach -X- _ O
+would -X- _ O
+provide -X- _ O
+a -X- _ O
+deeper -X- _ O
+understanding -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+cellular -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+sustained -X- _ O
+high-glucose -X- _ O
+and -X- _ O
+glucose -X- _ O
+fluctuations -X- _ O
+and -X- _ O
+could -X- _ O
+improve -X- _ O
+the -X- _ O
+development -X- _ O
+of -X- _ O
+targeted -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+strategies -X- _ O
+for -X- _ O
+retinal -X- _ O
+pathologies -X- _ O
+in -X- _ O
+human -X- _ O
+patients. -X- _ O
+Source -X- _ O
+paper -X- _ O
+: -X- _ O
+PMC11641291 -X- _ O
+
+Introduction -X- _ O
+Antiretroviral -X- _ O
+therapy -X- _ O
+( -X- _ O
+ART -X- _ O
+) -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+highly -X- _ O
+effective -X- _ O
+at -X- _ O
+suppressing -X- _ O
+human -X- _ O
+immunodeficiency -X- _ O
+virus -X- _ O
+( -X- _ O
+HIV -X- _ O
+) -X- _ O
+replication -X- _ O
+, -X- _ O
+thus -X- _ O
+significantly -X- _ O
+reducing -X- _ O
+disease -X- _ O
+progression -X- _ O
+and -X- _ O
+mortality -X- _ O
+in -X- _ O
+infected -X- _ O
+individuals. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+ART -X- _ O
+is -X- _ O
+not -X- _ O
+curative -X- _ O
+and -X- _ O
+does -X- _ O
+not -X- _ O
+meaningfully -X- _ O
+impact -X- _ O
+persistent -X- _ O
+viral -X- _ O
+reservoirs -X- _ O
+( -X- _ O
+VRs -X- _ O
+) -X- _ O
+of -X- _ O
+latently -X- _ O
+infected -X- _ B-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+that -X- _ O
+comprise -X- _ O
+CD4+ -X- _ B-CELL
+T -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+and -X- _ O
+myeloid -X- _ B-CELL
+cells.1,2,3 -X- _ I-CELL
+Indeed -X- _ O
+, -X- _ O
+upon -X- _ O
+antiviral -X- _ O
+treatment -X- _ O
+interruption -X- _ O
+( -X- _ O
+ATI -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+virus -X- _ O
+quickly -X- _ O
+rebounds -X- _ O
+after -X- _ O
+several -X- _ O
+weeks -X- _ O
+, -X- _ O
+highlighting -X- _ O
+how -X- _ O
+the -X- _ O
+presence -X- _ O
+of -X- _ O
+VRs -X- _ O
+obviates -X- _ O
+an -X- _ O
+HIV -X- _ O
+cure.4,5,6 -X- _ O
+Therefore -X- _ O
+, -X- _ O
+eliminating -X- _ O
+or -X- _ O
+controlling -X- _ O
+VRs -X- _ O
+remains -X- _ O
+an -X- _ O
+unwavering -X- _ O
+priority -X- _ O
+for -X- _ O
+HIV -X- _ O
+cure -X- _ O
+research. -X- _ O
+In -X- _ O
+this -X- _ O
+context -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+aim -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+“shock-and-kill” -X- _ O
+strategy -X- _ O
+is -X- _ O
+to -X- _ O
+reactivate -X- _ O
+latently -X- _ O
+infected -X- _ B-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+with -X- _ O
+latency -X- _ O
+reversal -X- _ O
+agents -X- _ O
+( -X- _ O
+LRAs -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+render -X- _ O
+them -X- _ O
+vulnerable -X- _ O
+to -X- _ O
+cell -X- _ O
+death -X- _ O
+or -X- _ O
+clearance -X- _ O
+by -X- _ O
+the -X- _ O
+immune -X- _ O
+system.7,8 -X- _ O
+Previously -X- _ O
+reported -X- _ O
+approaches -X- _ O
+to -X- _ O
+HIV -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+protein -X- _ O
+kinase -X- _ O
+C -X- _ O
+( -X- _ O
+PRKC -X- _ O
+) -X- _ O
+agonists -X- _ O
+, -X- _ O
+histone -X- _ O
+deacetylase -X- _ O
+( -X- _ O
+HDAC -X- _ O
+) -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+( -X- _ O
+HDACi -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+toll-like -X- _ O
+receptor -X- _ O
+( -X- _ O
+TLR -X- _ O
+) -X- _ O
+agonists,9 -X- _ O
+have -X- _ O
+been -X- _ O
+highly -X- _ O
+effective -X- _ O
+in -X- _ O
+in -X- _ O
+vitro -X- _ O
+models -X- _ O
+of -X- _ O
+latency -X- _ O
+, -X- _ O
+but -X- _ O
+their -X- _ O
+efficacy -X- _ O
+is -X- _ O
+only -X- _ O
+moderate -X- _ O
+when -X- _ O
+tested -X- _ O
+in -X- _ O
+vivo.10,11,12,13 -X- _ O
+Moreover -X- _ O
+, -X- _ O
+by -X- _ O
+broadly -X- _ O
+activating -X- _ O
+cellular -X- _ O
+pathways -X- _ O
+, -X- _ O
+these -X- _ O
+compounds -X- _ O
+elicit -X- _ O
+significant -X- _ O
+proinflammatory -X- _ O
+effects -X- _ O
+or -X- _ O
+alter -X- _ O
+the -X- _ O
+function -X- _ O
+and -X- _ O
+fate -X- _ O
+of -X- _ O
+specific -X- _ O
+immune -X- _ O
+effector -X- _ O
+cells,14,15 -X- _ O
+hence -X- _ O
+limiting -X- _ O
+their -X- _ O
+use -X- _ O
+in -X- _ O
+clinical -X- _ O
+settings.16,17,18,19 -X- _ O
+Similarly -X- _ O
+, -X- _ O
+promising -X- _ O
+candidates -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+bryostatin-1 -X- _ O
+and -X- _ O
+analogs -X- _ O
+, -X- _ O
+phorbol -X- _ O
+esters -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+phosphatidylethanolamine -X- _ O
+binding -X- _ O
+protein -X- _ O
+1 -X- _ O
+( -X- _ O
+PEBP1 -X- _ O
+) -X- _ O
+agonists -X- _ O
+reactivate -X- _ O
+HIV -X- _ O
+via -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+canonical -X- _ O
+nuclear -X- _ O
+factor -X- _ O
+kappa -X- _ O
+B -X- _ O
+( -X- _ O
+NFKB -X- _ O
+) -X- _ O
+pathway,13,20 -X- _ O
+inadvertently -X- _ O
+leading -X- _ O
+to -X- _ O
+uncontrolled -X- _ O
+cytokine -X- _ O
+release -X- _ O
+and -X- _ O
+overt -X- _ O
+T -X- _ O
+cell -X- _ O
+activation.21,22 -X- _ O
+Consequently -X- _ O
+, -X- _ O
+there -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+need -X- _ O
+to -X- _ O
+develop -X- _ O
+alternative -X- _ O
+approach -X- _ O
+( -X- _ O
+es -X- _ O
+) -X- _ O
+that -X- _ O
+can -X- _ O
+reactivate -X- _ O
+latent -X- _ O
+reservoirs -X- _ O
+and -X- _ O
+eliminate -X- _ O
+infected -X- _ B-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+without -X- _ O
+triggering -X- _ O
+systemic -X- _ O
+activation -X- _ O
+, -X- _ O
+inflammation -X- _ O
+, -X- _ O
+or -X- _ O
+impairment -X- _ O
+of -X- _ O
+immune -X- _ O
+clearance -X- _ O
+mechanisms. -X- _ O
+In -X- _ O
+this -X- _ O
+regard -X- _ O
+, -X- _ O
+small -X- _ O
+molecules -X- _ O
+known -X- _ O
+as -X- _ O
+mimetics -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+second -X- _ O
+mitochondrial -X- _ O
+activator -X- _ O
+of -X- _ O
+caspases -X- _ O
+( -X- _ O
+SMAC -X- _ O
+mimetics -X- _ O
+[ -X- _ O
+SMs -X- _ O
+] -X- _ O
+) -X- _ O
+were -X- _ O
+originally -X- _ O
+developed -X- _ O
+as -X- _ O
+cancer -X- _ O
+therapeutics. -X- _ O
+They -X- _ O
+have -X- _ O
+received -X- _ O
+increasing -X- _ O
+recognition -X- _ O
+because -X- _ O
+they -X- _ O
+specifically -X- _ O
+activate -X- _ O
+the -X- _ O
+non-canonical -X- _ O
+NFKB -X- _ O
+pathway,23,24,25 -X- _ O
+which -X- _ O
+naturally -X- _ O
+exhibits -X- _ O
+higher -X- _ O
+functional -X- _ O
+selectivity -X- _ O
+and -X- _ O
+more -X- _ O
+confined -X- _ O
+proinflammatory -X- _ O
+effects -X- _ O
+compared -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+canonical -X- _ O
+NFKB -X- _ O
+pathway.24,26 -X- _ O
+Engagement -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+non-canonical -X- _ O
+NFKB -X- _ O
+pathway -X- _ O
+by -X- _ O
+SMAC -X- _ O
+leads -X- _ O
+to -X- _ O
+degradation -X- _ O
+of -X- _ O
+cellular -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
+of -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+( -X- _ O
+cIAP -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+accumulation -X- _ O
+of -X- _ O
+NFKB-inducing -X- _ O
+kinase -X- _ O
+( -X- _ O
+NIK -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+component -X- _ O
+of -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
+of -X- _ O
+NFKB -X- _ O
+kinase -X- _ O
+complex -X- _ O
+( -X- _ O
+CHUK -X- _ O
+) -X- _ O
+homodimer -X- _ O
+, -X- _ O
+culminating -X- _ O
+in -X- _ O
+cleavage -X- _ O
+of -X- _ O
+inactive -X- _ O
+NFKB2 -X- _ O
+p100 -X- _ O
+to -X- _ O
+active -X- _ O
+p52.26 -X- _ O
+An -X- _ O
+association -X- _ O
+between -X- _ O
+RELB -X- _ O
+and -X- _ O
+p52 -X- _ O
+induces -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+target -X- _ O
+genes27 -X- _ O
+and -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+context -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+pathway -X- _ O
+reactivates -X- _ O
+latently -X- _ O
+infected -X- _ O
+VRs.20 -X- _ O
+The -X- _ O
+non-canonical -X- _ O
+NFKB -X- _ O
+pathway -X- _ O
+can -X- _ O
+also -X- _ O
+be -X- _ O
+triggered -X- _ O
+by -X- _ O
+signaling -X- _ O
+intermediates -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+cascade. -X- _ O
+In -X- _ O
+fact -X- _ O
+, -X- _ O
+cleavage -X- _ O
+of -X- _ O
+SMAC -X- _ O
+/ -X- _ O
+DIABLO -X- _ O
+exposes -X- _ O
+the -X- _ O
+N-terminal -X- _ O
+motif -X- _ O
+Ala-Val-Pro-Ile -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+binds -X- _ O
+specifically -X- _ O
+to -X- _ O
+baculovirus -X- _ O
+intermediate -X- _ O
+repeat -X- _ O
+domains -X- _ O
+2 -X- _ O
+and -X- _ O
+3 -X- _ O
+of -X- _ O
+IAP -X- _ O
+proteins. -X- _ O
+These -X- _ O
+proteins -X- _ O
+in -X- _ O
+turn -X- _ O
+trigger -X- _ O
+downstream -X- _ O
+events -X- _ O
+that -X- _ O
+ultimately -X- _ O
+lead -X- _ O
+to -X- _ O
+degradation -X- _ O
+of -X- _ O
+baculoviral -X- _ O
+IAP -X- _ O
+repeat -X- _ O
+containing -X- _ O
+2 -X- _ O
+( -X- _ O
+BIRC2 -X- _ O
+, -X- _ O
+also -X- _ O
+known -X- _ O
+as -X- _ O
+cIAP1 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+baculoviral -X- _ O
+IAP -X- _ O
+repeat -X- _ O
+containing -X- _ O
+3 -X- _ O
+( -X- _ O
+BIRC3 -X- _ O
+, -X- _ O
+also -X- _ O
+known -X- _ O
+as -X- _ O
+cIAP2 -X- _ O
+) -X- _ O
+28 -X- _ O
+and -X- _ O
+potentiation -X- _ O
+of -X- _ O
+apoptosis.29 -X- _ O
+The -X- _ O
+unique -X- _ O
+ability -X- _ O
+of -X- _ O
+SMAC -X- _ O
+to -X- _ O
+degrade -X- _ O
+IAPs -X- _ O
+and -X- _ O
+activate -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+pathway -X- _ O
+( -X- _ O
+s -X- _ O
+) -X- _ O
+makes -X- _ O
+SMs -X- _ O
+interesting -X- _ O
+candidates -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+field -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV -X- _ O
+cure -X- _ O
+research30,31 -X- _ O
+because -X- _ O
+latently -X- _ B-CELL_CONTEXT
+infected -X- _ I-CELL_CONTEXT
+CD4+ -X- _ B-CELL
+T -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+display -X- _ O
+aberrant -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+cell -X- _ O
+survival -X- _ O
+factors -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+XIAP -X- _ O
+, -X- _ O
+BIRC2 -X- _ O
+and -X- _ O
+BCL2.8,32 -X- _ O
+Pharmacological -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+non-canonical -X- _ O
+NFKB -X- _ O
+pathway -X- _ O
+by -X- _ O
+SMs -X- _ O
+was -X- _ O
+recently -X- _ O
+found -X- _ O
+to -X- _ O
+induce -X- _ O
+on-ART -X- _ O
+plasma -X- _ B-TISSUE
+viremia -X- _ O
+in -X- _ O
+animal -X- _ O
+models -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV -X- _ O
+latency,24,25 -X- _ O
+underscoring -X- _ O
+the -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+this -X- _ O
+class -X- _ O
+of -X- _ O
+molecules -X- _ O
+as -X- _ O
+LRAs. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+remains -X- _ O
+unclear -X- _ O
+whether -X- _ O
+induction -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV -X- _ O
+expression -X- _ O
+by -X- _ O
+SMs -X- _ O
+leads -X- _ O
+to -X- _ O
+a -X- _ O
+reduction -X- _ O
+of -X- _ O
+VRs -X- _ O
+in -X- _ O
+lymphoid -X- _ B-TISSUE
+and -X- _ O
+non-lymphoid -X- _ B-TISSUE
+tissues -X- _ I-TISSUE
+of -X- _ O
+animal -X- _ O
+models. -X- _ O
+In -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+show -X- _ O
+that -X- _ O
+bivalent -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+, -X- _ O
+currently -X- _ O
+in -X- _ O
+clinical -X- _ O
+development -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+oncology -X- _ O
+field -X- _ O
+, -X- _ O
+activates -X- _ O
+the -X- _ O
+non-canonical -X- _ O
+NFKB -X- _ O
+pathway -X- _ O
+and -X- _ O
+hence -X- _ O
+, -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+potent -X- _ O
+LRA. -X- _ O
+By -X- _ O
+degrading -X- _ O
+IAPs -X- _ O
+, -X- _ O
+this -X- _ O
+compound -X- _ O
+also -X- _ O
+induces -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+active -X- _ O
+caspase -X- _ O
+3 -X- _ O
+( -X- _ O
+CASP3 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+key -X- _ O
+component -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+execution -X- _ O
+phase -X- _ O
+of -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+latently -X- _ B-CELL_CONTEXT
+infected -X- _ I-CELL_CONTEXT
+cells. -X- _ B-CELL
+Likewise -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+primary -X- _ B-CELL
+CD4+ -X- _ I-CELL
+T -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+infected -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+dual -X- _ O
+reporter-encoded -X- _ O
+HIV -X- _ O
+, -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+reduces -X- _ O
+the -X- _ O
+level -X- _ O
+of -X- _ O
+latent -X- _ B-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+without -X- _ O
+notably -X- _ O
+affecting -X- _ O
+the -X- _ O
+productively -X- _ O
+infected -X- _ O
+pool. -X- _ O
+Accordingly -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+vivo -X- _ O
+treatment -X- _ O
+with -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+could -X- _ O
+reactivate -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+latent -X- _ O
+viruses -X- _ O
+and -X- _ O
+was -X- _ O
+found -X- _ O
+to -X- _ O
+meaningfully -X- _ O
+reduce -X- _ O
+the -X- _ O
+integrated -X- _ O
+HIV-DNA -X- _ O
+level -X- _ O
+in -X- _ O
+tissues -X- _ B-TISSUE
+of -X- _ O
+ART-suppressed -X- _ O
+humanized -X- _ O
+bone -X- _ B-TISSUE
+marrow -X- _ I-TISSUE
+liver -X- _ B-TISSUE
+thymus -X- _ B-TISSUE
+( -X- _ O
+BLT -X- _ O
+) -X- _ O
+mice -X- _ O
+, -X- _ O
+without -X- _ O
+assessable -X- _ O
+immunotoxicity. -X- _ O
+Upon -X- _ O
+ART -X- _ O
+interruption -X- _ O
+, -X- _ O
+APG-1387-treated -X- _ O
+mice -X- _ O
+rebounded -X- _ O
+more -X- _ O
+slowly -X- _ O
+and -X- _ O
+to -X- _ O
+a -X- _ O
+lower -X- _ O
+set -X- _ O
+point. -X- _ O
+Overall -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+study -X- _ O
+demonstrates -X- _ O
+that -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+has -X- _ O
+the -X- _ O
+capacity -X- _ O
+to -X- _ O
+not -X- _ O
+only -X- _ O
+reverse -X- _ O
+HIV -X- _ O
+latency -X- _ O
+but -X- _ O
+also -X- _ O
+potentiate -X- _ O
+cell -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+, -X- _ O
+thus -X- _ O
+supporting -X- _ O
+the -X- _ O
+notion -X- _ O
+that -X- _ O
+bivalent -X- _ O
+SMs -X- _ O
+could -X- _ O
+be -X- _ O
+harnessed -X- _ O
+to -X- _ O
+reduce -X- _ O
+VRs -X- _ O
+without -X- _ O
+causing -X- _ O
+generalized -X- _ O
+T -X- _ O
+cell -X- _ O
+activation. -X- _ O
+Results -X- _ O
+Discussion -X- _ O
+Several -X- _ O
+LRAs -X- _ O
+have -X- _ O
+shown -X- _ O
+their -X- _ O
+biological -X- _ O
+activity -X- _ O
+both -X- _ O
+in -X- _ O
+vitro -X- _ O
+and -X- _ O
+in -X- _ O
+vivo -X- _ O
+but -X- _ O
+are -X- _ O
+clinically -X- _ O
+unsafe -X- _ O
+for -X- _ O
+further -X- _ O
+evaluations.46,47 -X- _ O
+The -X- _ O
+most -X- _ O
+potent -X- _ O
+LRAs -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+HDACi -X- _ O
+and -X- _ O
+protein -X- _ O
+kinase -X- _ O
+C -X- _ O
+( -X- _ O
+PRKC -X- _ O
+) -X- _ O
+agonist -X- _ O
+bryostatin-1 -X- _ O
+, -X- _ O
+activate -X- _ O
+the -X- _ O
+canonical -X- _ O
+NFKB -X- _ O
+pathway,46 -X- _ O
+causing -X- _ O
+explicit -X- _ O
+T -X- _ O
+cell -X- _ O
+activation -X- _ O
+and -X- _ O
+broad -X- _ O
+cytotoxicity -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+hence -X- _ O
+eliciting -X- _ O
+significant -X- _ O
+collateral -X- _ O
+damage -X- _ O
+on -X- _ O
+host -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ I-CELL
+Reactivation -X- _ O
+of -X- _ O
+latent -X- _ O
+HIV -X- _ O
+by -X- _ O
+PRKC -X- _ O
+agonists -X- _ O
+has -X- _ O
+recently -X- _ O
+been -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+to -X- _ O
+induce -X- _ O
+resistance -X- _ O
+to -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+phenomenon -X- _ O
+often -X- _ O
+associated -X- _ O
+with -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+and -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+antiapoptotic -X- _ O
+protein -X- _ O
+BCL2.48 -X- _ O
+Thus -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+failure -X- _ O
+of -X- _ O
+common -X- _ O
+LRAs -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+PRKC -X- _ O
+agonists -X- _ O
+and -X- _ O
+HDACi -X- _ O
+to -X- _ O
+safely -X- _ O
+purge -X- _ O
+HIV -X- _ O
+and -X- _ O
+effectively -X- _ O
+reduce -X- _ O
+VRs -X- _ O
+in -X- _ O
+people -X- _ O
+living -X- _ O
+with -X- _ O
+HIV -X- _ O
+necessitates -X- _ O
+the -X- _ O
+development -X- _ O
+of -X- _ O
+clinical -X- _ O
+approaches -X- _ O
+to -X- _ O
+achieve -X- _ O
+an -X- _ O
+HIV -X- _ O
+cure. -X- _ O
+In -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+demonstrate -X- _ O
+that -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+bivalent -X- _ O
+SM -X- _ O
+initially -X- _ O
+developed -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+cancer -X- _ O
+therapy -X- _ O
+, -X- _ O
+can -X- _ O
+efficiently -X- _ O
+reactivate -X- _ O
+HIV -X- _ O
+in -X- _ O
+CD4+ -X- _ B-CELL_LINE
+T -X- _ I-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+line -X- _ I-CELL_LINE
+models -X- _ I-CELL_LINE
+of -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+latency -X- _ O
+via -X- _ O
+a -X- _ O
+process -X- _ O
+that -X- _ O
+involves -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+noncanonical -X- _ O
+NFKB -X- _ O
+pathway. -X- _ O
+Although -X- _ O
+this -X- _ O
+IAP -X- _ O
+antagonist -X- _ O
+modestly -X- _ O
+increases -X- _ O
+HIV -X- _ O
+RNA -X- _ O
+detection -X- _ O
+in -X- _ O
+virally -X- _ O
+suppressed -X- _ O
+hu-mice -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+has -X- _ O
+the -X- _ O
+capability -X- _ O
+to -X- _ O
+reduce -X- _ O
+both -X- _ O
+the -X- _ O
+frequency -X- _ O
+of -X- _ O
+latently -X- _ B-CELL_CONTEXT
+infected -X- _ I-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+level -X- _ O
+of -X- _ O
+viral -X- _ O
+rebound -X- _ O
+upon -X- _ O
+ART -X- _ O
+treatment -X- _ O
+interruption. -X- _ O
+Indeed -X- _ O
+, -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+treatment -X- _ O
+enhances -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+caspase-3 -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+marker -X- _ O
+of -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+latently -X- _ B-CELL_CONTEXT
+infected -X- _ I-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+from -X- _ O
+T -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+lines -X- _ I-CELL_LINE
+or -X- _ O
+in -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+from -X- _ O
+certain -X- _ O
+tissues -X- _ B-TISSUE
+of -X- _ O
+virally -X- _ O
+suppressed -X- _ O
+hu-mice. -X- _ O
+In -X- _ O
+the -X- _ O
+context -X- _ O
+of -X- _ O
+productive -X- _ O
+infection -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+vitro -X- _ O
+stimulation -X- _ O
+with -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+also -X- _ O
+enhanced -X- _ O
+cleavage -X- _ O
+of -X- _ O
+CASP3. -X- _ O
+IAPs -X- _ O
+are -X- _ O
+overly -X- _ O
+expressed -X- _ O
+in -X- _ O
+various -X- _ O
+cancers -X- _ O
+, -X- _ O
+enabling -X- _ O
+prolonged -X- _ O
+survival -X- _ O
+of -X- _ O
+cancerous -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+[ -X- _ O
+as -X- _ O
+reviewed -X- _ O
+by49 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Consequently -X- _ O
+, -X- _ O
+their -X- _ O
+antagonists -X- _ O
+are -X- _ O
+thought -X- _ O
+to -X- _ O
+either -X- _ O
+directly -X- _ O
+induce -X- _ O
+or -X- _ O
+sensitize -X- _ O
+cancerous -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+to -X- _ O
+death -X- _ O
+by -X- _ O
+triggering -X- _ O
+proapoptotic -X- _ O
+pathways.50,51 -X- _ O
+Interestingly -X- _ O
+, -X- _ O
+IAPs -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+BIRC2 -X- _ O
+have -X- _ O
+recently -X- _ O
+been -X- _ O
+shown -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+negative -X- _ O
+regulators -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV -X- _ O
+transcription -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+their -X- _ O
+expression -X- _ O
+is -X- _ O
+found -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+correlated -X- _ O
+with -X- _ O
+viral -X- _ O
+latency.23,31,32 -X- _ O
+Indeed -X- _ O
+, -X- _ O
+both -X- _ O
+BIRC2 -X- _ O
+/ -X- _ O
+3 -X- _ O
+and -X- _ O
+XIAP -X- _ O
+are -X- _ O
+overexpressed -X- _ O
+in -X- _ O
+HIV -X- _ O
+latently -X- _ B-CELL_CONTEXT
+infected -X- _ I-CELL_CONTEXT
+CD4+ -X- _ B-CELL
+T -X- _ I-CELL
+and -X- _ O
+myeloid -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+SMs -X- _ O
+which -X- _ O
+induce -X- _ O
+the -X- _ O
+degradation -X- _ O
+of -X- _ O
+these -X- _ O
+IAPs -X- _ O
+can -X- _ O
+reactivate -X- _ O
+HIV. -X- _ O
+We -X- _ O
+demonstrate -X- _ O
+herein -X- _ O
+that -X- _ O
+various -X- _ O
+monovalent -X- _ O
+and -X- _ O
+bivalent -X- _ O
+SMs -X- _ O
+can -X- _ O
+induce -X- _ O
+efficient -X- _ O
+viral -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+in -X- _ O
+different -X- _ O
+T -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+models -X- _ I-CELL_LINE
+of -X- _ O
+latency -X- _ O
+and -X- _ O
+that -X- _ O
+some -X- _ O
+are -X- _ O
+more -X- _ O
+potent -X- _ O
+than -X- _ O
+others. -X- _ O
+Bivalent -X- _ O
+SMs -X- _ O
+are -X- _ O
+more -X- _ O
+effective -X- _ O
+than -X- _ O
+their -X- _ O
+monovalent -X- _ O
+counterparts -X- _ O
+, -X- _ O
+probably -X- _ O
+because -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+presence -X- _ O
+of -X- _ O
+dimers -X- _ O
+that -X- _ O
+may -X- _ O
+contribute -X- _ O
+to -X- _ O
+a -X- _ O
+more -X- _ O
+stable -X- _ O
+and -X- _ O
+enhanced -X- _ O
+activation -X- _ O
+via -X- _ O
+interactions -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+two -X- _ O
+adjacent -X- _ O
+binding -X- _ O
+domains -X- _ O
+of -X- _ O
+IAPs.52 -X- _ O
+Among -X- _ O
+the -X- _ O
+bivalent -X- _ O
+SMs -X- _ O
+we -X- _ O
+examined -X- _ O
+, -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+is -X- _ O
+most -X- _ O
+effective -X- _ O
+at -X- _ O
+degrading -X- _ O
+IAPs -X- _ O
+, -X- _ O
+facilitating -X- _ O
+a -X- _ O
+conversion -X- _ O
+of -X- _ O
+NFKB -X- _ O
+p100 -X- _ O
+to -X- _ O
+p52 -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+reactivating -X- _ O
+HIV -X- _ O
+expression -X- _ O
+through -X- _ O
+an -X- _ O
+NIK-dependent -X- _ O
+process -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+hallmark -X- _ O
+of -X- _ O
+an -X- _ O
+activated -X- _ O
+non-canonical -X- _ O
+NFKB -X- _ O
+pathway.23,24 -X- _ O
+In -X- _ O
+CD4+ -X- _ B-CELL_LINE
+T -X- _ I-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+models -X- _ I-CELL_LINE
+of -X- _ O
+HIV -X- _ O
+latency -X- _ O
+, -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+treatment -X- _ O
+is -X- _ O
+associated -X- _ O
+with -X- _ O
+remarkable -X- _ O
+viral -X- _ O
+reactivation. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+primary -X- _ B-CELL
+CD4+ -X- _ I-CELL
+T -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+infected -X- _ O
+with -X- _ O
+HI.fate.E -X- _ O
+dual -X- _ O
+reporter -X- _ O
+virus -X- _ O
+, -X- _ O
+exposure -X- _ O
+to -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+is -X- _ O
+accompanied -X- _ O
+by -X- _ O
+a -X- _ O
+reduction -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+frequency -X- _ O
+of -X- _ O
+latently -X- _ B-CELL_CONTEXT
+infected -X- _ I-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+without -X- _ O
+a -X- _ O
+detectable -X- _ O
+change -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+level -X- _ O
+of -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+supporting -X- _ O
+LTR-directed -X- _ O
+transcription. -X- _ O
+The -X- _ O
+data -X- _ O
+suggest -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+latent -X- _ B-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+might -X- _ O
+be -X- _ O
+preferentially -X- _ O
+targeted -X- _ O
+for -X- _ O
+elimination -X- _ O
+without -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+in -X- _ O
+contrast -X- _ O
+to -X- _ O
+PMA -X- _ O
+and -X- _ O
+ionomycin -X- _ O
+stimulation. -X- _ O
+This -X- _ O
+said -X- _ O
+, -X- _ O
+given -X- _ O
+the -X- _ O
+intrinsic -X- _ O
+properties -X- _ O
+of -X- _ O
+SMs -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+can -X- _ O
+not -X- _ O
+completely -X- _ O
+exclude -X- _ O
+the -X- _ O
+possibility -X- _ O
+that -X- _ O
+there -X- _ O
+was -X- _ O
+no -X- _ O
+change -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+frequency -X- _ O
+of -X- _ O
+reactivated -X- _ B-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+because -X- _ O
+latently -X- _ B-CELL_CONTEXT
+infected -X- _ I-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+rapidly -X- _ O
+die -X- _ O
+after -X- _ O
+reactivation. -X- _ O
+Consistent -X- _ O
+with -X- _ O
+previous -X- _ O
+works -X- _ O
+with -X- _ O
+other -X- _ O
+SMs -X- _ O
+including -X- _ O
+AZD5582 -X- _ O
+24 -X- _ O
+and -X- _ O
+ciapavir,25 -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+induces -X- _ O
+detection -X- _ O
+of -X- _ O
+viremia -X- _ O
+, -X- _ O
+albeit -X- _ O
+modestly -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+ART-suppressed -X- _ O
+hu-mice -X- _ O
+as -X- _ O
+early -X- _ O
+as -X- _ O
+48 -X- _ O
+h -X- _ O
+after -X- _ O
+treatment. -X- _ O
+Importantly -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+mice -X- _ O
+treated -X- _ O
+with -X- _ O
+multiple -X- _ O
+doses -X- _ O
+of -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+proportion -X- _ O
+of -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+carrying -X- _ O
+the -X- _ O
+integrated -X- _ O
+HIV -X- _ O
+DNA -X- _ O
+was -X- _ O
+meaningfully -X- _ O
+reduced -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+bivalent -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+might -X- _ O
+preferentially -X- _ O
+target -X- _ O
+latently -X- _ B-CELL_CONTEXT
+infected -X- _ I-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+directly -X- _ O
+or -X- _ O
+indirectly -X- _ O
+for -X- _ O
+death -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+4 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+addition -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+APG-1387-treated -X- _ O
+mice -X- _ O
+the -X- _ O
+fact -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+viral -X- _ O
+rebound -X- _ O
+was -X- _ O
+consistently -X- _ O
+lower -X- _ O
+throughout -X- _ O
+the -X- _ O
+ATI -X- _ O
+and -X- _ O
+plateaued -X- _ O
+at -X- _ O
+a -X- _ O
+level -X- _ O
+below -X- _ O
+pre-ART -X- _ O
+further -X- _ O
+strengthens -X- _ O
+the -X- _ O
+notion -X- _ O
+that -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+impacts -X- _ O
+negatively -X- _ O
+the -X- _ O
+pool -X- _ O
+of -X- _ O
+VRs -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+6 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+It -X- _ O
+is -X- _ O
+conceivable -X- _ O
+that -X- _ O
+such -X- _ O
+an -X- _ O
+impact -X- _ O
+is -X- _ O
+significant -X- _ O
+considering -X- _ O
+the -X- _ O
+modest -X- _ O
+effect -X- _ O
+of -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+on -X- _ O
+latency -X- _ O
+reversal -X- _ O
+in -X- _ O
+this -X- _ O
+experimental -X- _ O
+condition -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+limited -X- _ O
+functional -X- _ O
+immune -X- _ O
+clearance -X- _ O
+mechanisms -X- _ O
+present -X- _ O
+in -X- _ O
+hu-BLT -X- _ O
+mice. -X- _ O
+This -X- _ O
+said -X- _ O
+, -X- _ O
+further -X- _ O
+experimentation -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+larger -X- _ O
+group -X- _ O
+of -X- _ O
+animals -X- _ O
+analyzed -X- _ O
+at -X- _ O
+endpoint -X- _ O
+is -X- _ O
+needed -X- _ O
+to -X- _ O
+confirm -X- _ O
+the -X- _ O
+modulatory -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+on -X- _ O
+VRs. -X- _ O
+A -X- _ O
+more -X- _ O
+detailed -X- _ O
+analysis -X- _ O
+gauging -X- _ O
+the -X- _ O
+effect -X- _ O
+of -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+on -X- _ O
+different -X- _ O
+CD4+ -X- _ B-CELL
+T -X- _ I-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+subsets -X- _ O
+revealed -X- _ O
+a -X- _ O
+potential -X- _ O
+modulation -X- _ O
+of -X- _ O
+splenic -X- _ B-CELL
+Th17-like -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+and -X- _ O
+FOXP3-expressing -X- _ B-CELL
+CD4+ -X- _ I-CELL
+T -X- _ I-CELL
+cells. -X- _ I-CELL
+We -X- _ O
+observe -X- _ O
+a -X- _ O
+trend -X- _ O
+toward -X- _ O
+a -X- _ O
+reduction -X- _ O
+in -X- _ O
+Th17-cell -X- _ B-CELL
+frequency -X- _ O
+in -X- _ O
+both -X- _ O
+ART-suppressed -X- _ O
+mice -X- _ O
+treated -X- _ O
+in -X- _ O
+vivo -X- _ O
+with -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+and -X- _ O
+in -X- _ O
+ART-naïve -X- _ O
+infected -X- _ O
+mice -X- _ O
+whose -X- _ O
+splenocytes -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+stimulated -X- _ O
+ex -X- _ O
+vivo -X- _ O
+with -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+5 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Since -X- _ O
+Th17 -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+have -X- _ O
+been -X- _ O
+proposed -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+an -X- _ O
+important -X- _ O
+source -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV -X- _ O
+latent -X- _ O
+reservoirs -X- _ O
+[ -X- _ O
+reviewed -X- _ O
+in53 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+decrease -X- _ O
+in -X- _ O
+Th17 -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+might -X- _ O
+suggest -X- _ O
+a -X- _ O
+reduction -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+level -X- _ O
+of -X- _ O
+integrated -X- _ O
+HIV -X- _ B-CELL_CONTEXT
+DNA-harboring -X- _ I-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+an -X- _ O
+observation -X- _ O
+that -X- _ O
+was -X- _ O
+made -X- _ O
+with -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+treated -X- _ O
+mice -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+4 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Regarding -X- _ O
+FOXP3-expressing -X- _ B-CELL_CONTEXT
+CD4+ -X- _ B-CELL
+T -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+spleen -X- _ B-TISSUE
+, -X- _ O
+there -X- _ O
+was -X- _ O
+no -X- _ O
+significant -X- _ O
+difference -X- _ O
+between -X- _ O
+ART-suppressed -X- _ O
+mice -X- _ O
+treated -X- _ O
+with -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+or -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+vehicle -X- _ O
+control. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+ex -X- _ O
+vivo -X- _ O
+stimulation -X- _ O
+of -X- _ O
+splenocytes -X- _ B-CELL
+from -X- _ O
+ART-naïve -X- _ O
+, -X- _ O
+HIV-infected -X- _ O
+mice -X- _ O
+with -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+modestly -X- _ O
+decreased -X- _ O
+the -X- _ O
+number -X- _ O
+of -X- _ O
+p24-expressing -X- _ B-CELL_CONTEXT
+FOXP3+ -X- _ B-CELL
+CD4+ -X- _ I-CELL
+T -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+although -X- _ O
+the -X- _ O
+difference -X- _ O
+was -X- _ O
+not -X- _ O
+statistically -X- _ O
+significant. -X- _ O
+Whether -X- _ O
+the -X- _ O
+non-canonical -X- _ O
+NFKB -X- _ O
+pathway -X- _ O
+is -X- _ O
+more -X- _ O
+functional -X- _ O
+in -X- _ O
+certain -X- _ O
+memory -X- _ B-CELL
+CD4+ -X- _ I-CELL
+T -X- _ I-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+subsets -X- _ O
+remains -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+fully -X- _ O
+elucidated. -X- _ O
+The -X- _ O
+fact -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+central -X- _ O
+memory -X- _ O
+subset -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+shown -X- _ O
+to -X- _ O
+require -X- _ O
+strong -X- _ O
+TCR-mediated -X- _ O
+signaling -X- _ O
+for -X- _ O
+maintenance -X- _ O
+suggests -X- _ O
+a -X- _ O
+more -X- _ O
+important -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+canonical -X- _ O
+NFKB -X- _ O
+pathway -X- _ O
+in -X- _ O
+this -X- _ O
+context -X- _ O
+[ -X- _ O
+reviewed -X- _ O
+in26,54,55 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Taken -X- _ O
+together -X- _ O
+, -X- _ O
+these -X- _ O
+results -X- _ O
+highlight -X- _ O
+the -X- _ O
+importance -X- _ O
+of -X- _ O
+evaluating -X- _ O
+the -X- _ O
+potential -X- _ O
+effects -X- _ O
+of -X- _ O
+SMs -X- _ O
+on -X- _ O
+various -X- _ O
+immune -X- _ O
+subsets -X- _ O
+known -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+susceptible -X- _ O
+to -X- _ O
+HIV. -X- _ O
+Our -X- _ O
+study -X- _ O
+shows -X- _ O
+that -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+has -X- _ O
+the -X- _ O
+capability -X- _ O
+to -X- _ O
+reactivate -X- _ O
+HIV -X- _ O
+, -X- _ O
+activate -X- _ O
+markers -X- _ O
+of -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+in -X- _ O
+latently -X- _ B-CELL_CONTEXT
+infected -X- _ I-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+reduce -X- _ O
+VRs -X- _ O
+without -X- _ O
+causing -X- _ O
+global -X- _ O
+T -X- _ O
+cell -X- _ O
+activation. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+findings -X- _ O
+also -X- _ O
+underscore -X- _ O
+the -X- _ O
+need -X- _ O
+to -X- _ O
+combine -X- _ O
+bivalent -X- _ O
+SMs -X- _ O
+with -X- _ O
+other -X- _ O
+therapeutics -X- _ O
+to -X- _ O
+improve -X- _ O
+the -X- _ O
+reactivation -X- _ O
+and -X- _ O
+elimination -X- _ O
+of -X- _ O
+VRs. -X- _ O
+Indeed -X- _ O
+, -X- _ O
+recent -X- _ O
+findings -X- _ O
+have -X- _ O
+shown -X- _ O
+that -X- _ O
+combined -X- _ O
+panobinostat -X- _ O
+and -X- _ O
+pegylated -X- _ O
+interferon -X- _ O
+alpha -X- _ O
+2 -X- _ O
+can -X- _ O
+transform -X- _ O
+the -X- _ O
+VR -X- _ O
+landscape -X- _ O
+through -X- _ O
+latency -X- _ O
+reversal -X- _ O
+and -X- _ O
+innate -X- _ O
+immune -X- _ O
+activation.56 -X- _ O
+Star★methods -X- _ O
+Experimental -X- _ O
+model -X- _ O
+and -X- _ O
+study -X- _ O
+participant -X- _ O
+details -X- _ O
+Experimental -X- _ O
+design -X- _ O
+No -X- _ O
+randomization -X- _ O
+and -X- _ O
+/ -X- _ O
+or -X- _ O
+stratification -X- _ O
+was -X- _ O
+performed. -X- _ O
+Hu-mice -X- _ O
+with -X- _ O
+variable -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+human -X- _ O
+CD45+ -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+were -X- _ O
+equally -X- _ O
+distributed -X- _ O
+among -X- _ O
+experimental -X- _ O
+groups. -X- _ O
+All -X- _ O
+efforts -X- _ O
+were -X- _ O
+made -X- _ O
+to -X- _ O
+have -X- _ O
+equal -X- _ O
+or -X- _ O
+comparable -X- _ O
+number -X- _ O
+of -X- _ O
+mice -X- _ O
+or -X- _ O
+samples -X- _ O
+( -X- _ O
+i.e. -X- _ O
+, -X- _ O
+number -X- _ O
+of -X- _ O
+n -X- _ O
+) -X- _ O
+per -X- _ O
+experimental -X- _ O
+group -X- _ O
+or -X- _ O
+condition. -X- _ O
+The -X- _ O
+exact -X- _ O
+number -X- _ O
+of -X- _ O
+n -X- _ O
+was -X- _ O
+provided -X- _ O
+in -X- _ O
+relevant -X- _ O
+Figure -X- _ O
+legends. -X- _ O
+Experimenters -X- _ O
+were -X- _ O
+blinded -X- _ O
+during -X- _ O
+processing -X- _ O
+biological -X- _ O
+samples -X- _ O
+, -X- _ O
+conducting -X- _ O
+experiments -X- _ O
+and -X- _ O
+analyzing -X- _ O
+samples -X- _ O
+in -X- _ O
+different -X- _ O
+assays. -X- _ O
+No -X- _ O
+inclusion -X- _ O
+or -X- _ O
+exclusion -X- _ O
+criteria -X- _ O
+were -X- _ O
+applied -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+study. -X- _ O
+No -X- _ O
+statistical -X- _ O
+methods -X- _ O
+were -X- _ O
+used -X- _ O
+to -X- _ O
+pre-determine -X- _ O
+strategies -X- _ O
+for -X- _ O
+randomization -X- _ O
+and -X- _ O
+/ -X- _ O
+or -X- _ O
+stratification -X- _ O
+, -X- _ O
+population -X- _ O
+size -X- _ O
+, -X- _ O
+inclusion -X- _ O
+and -X- _ O
+exclusion -X- _ O
+of -X- _ O
+any -X- _ O
+data -X- _ O
+or -X- _ O
+subjects -X- _ O
+, -X- _ O
+or -X- _ O
+whether -X- _ O
+the -X- _ O
+data -X- _ O
+met -X- _ O
+assumptions -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+statistical -X- _ O
+approach. -X- _ O
+Pharmacological -X- _ O
+and -X- _ O
+toxicity -X- _ O
+analysis -X- _ O
+Hu-BLT -X- _ O
+mice -X- _ O
+were -X- _ O
+left -X- _ O
+untreated -X- _ O
+or -X- _ O
+treated -X- _ O
+via -X- _ O
+intraperitoneal -X- _ O
+route -X- _ O
+( -X- _ O
+IP -X- _ O
+) -X- _ O
+with -X- _ O
+either -X- _ O
+vehicle- -X- _ O
+( -X- _ O
+10 -X- _ O
+% -X- _ O
+sterile -X- _ O
+Cremophor -X- _ O
+dissolved -X- _ O
+in -X- _ O
+5 -X- _ O
+% -X- _ O
+polyethylene -X- _ O
+glycol-400 -X- _ O
+and -X- _ O
+85 -X- _ O
+% -X- _ O
+PBS -X- _ O
+) -X- _ O
+or -X- _ O
+20 -X- _ O
+mg -X- _ O
+/ -X- _ O
+kg -X- _ O
+( -X- _ O
+100 -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+( -X- _ O
+Ascentage -X- _ O
+Pharma -X- _ O
+, -X- _ O
+China -X- _ O
+) -X- _ O
+every -X- _ O
+third -X- _ O
+day -X- _ O
+( -X- _ O
+maximum -X- _ O
+100 -X- _ O
+μL -X- _ O
+injection -X- _ O
+volume -X- _ O
+) -X- _ O
+for -X- _ O
+up -X- _ O
+to -X- _ O
+4 -X- _ O
+weeks. -X- _ O
+Plasma -X- _ B-TISSUE
+was -X- _ O
+collected -X- _ O
+at -X- _ O
+different -X- _ O
+intervals -X- _ O
+and -X- _ O
+white -X- _ B-CELL
+blood -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+isolated -X- _ O
+by -X- _ O
+treating -X- _ O
+whole -X- _ B-TISSUE
+blood -X- _ I-TISSUE
+with -X- _ O
+red -X- _ O
+blood -X- _ O
+cell -X- _ O
+lysis -X- _ O
+buffer -X- _ O
+( -X- _ O
+Invitrogen -X- _ O
+, -X- _ O
+U.S.A -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Cells -X- _ B-CELL
+from -X- _ O
+blood -X- _ B-TISSUE
+and -X- _ O
+tissues -X- _ B-TISSUE
+were -X- _ O
+analyzed -X- _ O
+by -X- _ O
+flow -X- _ O
+cytometry -X- _ O
+as -X- _ O
+described -X- _ O
+in -X- _ O
+Section -X- _ O
+‘flow -X- _ O
+cytometry’ -X- _ O
+below -X- _ O
+for -X- _ O
+the -X- _ O
+effect -X- _ O
+of -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+on -X- _ O
+cell -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+and -X- _ O
+activation. -X- _ O
+Proinflammatory -X- _ B-CELL
+cytokines -X- _ I-CELL
+were -X- _ O
+evaluated -X- _ O
+in -X- _ O
+plasma -X- _ B-TISSUE
+of -X- _ O
+healthy -X- _ O
+untreated -X- _ O
+, -X- _ O
+APG-1387- -X- _ O
+and -X- _ O
+vehicle-treated -X- _ O
+hu-BLT -X- _ O
+mice -X- _ O
+using -X- _ O
+Legend -X- _ O
+Max -X- _ O
+enzyme-linked -X- _ O
+immunosorbent -X- _ O
+assay -X- _ O
+( -X- _ O
+ELISA -X- _ O
+) -X- _ O
+kits -X- _ O
+for -X- _ O
+human -X- _ O
+TNF -X- _ O
+and -X- _ O
+IL6 -X- _ O
+( -X- _ O
+both -X- _ O
+from -X- _ O
+BioLegend -X- _ O
+, -X- _ O
+U.S.A -X- _ O
+) -X- _ O
+as -X- _ O
+per -X- _ O
+the -X- _ O
+manufacturer’s -X- _ O
+protocol. -X- _ O
+Data -X- _ O
+analysis -X- _ O
+was -X- _ O
+performed -X- _ O
+using -X- _ O
+GraphPad -X- _ O
+Prism -X- _ O
+software -X- _ O
+( -X- _ O
+Version -X- _ O
+8.0 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Quantification -X- _ O
+and -X- _ O
+statistical -X- _ O
+analysis -X- _ O
+Flow -X- _ O
+cytometry -X- _ O
+data -X- _ O
+were -X- _ O
+analyzed -X- _ O
+using -X- _ O
+FlowJo -X- _ O
+( -X- _ O
+Versions -X- _ O
+9.9.3 -X- _ O
+and -X- _ O
+10.1 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Quantification -X- _ O
+of -X- _ O
+Western -X- _ O
+blots -X- _ O
+was -X- _ O
+performed -X- _ O
+using -X- _ O
+ImageJ -X- _ O
+software. -X- _ O
+Data -X- _ O
+analysis -X- _ O
+and -X- _ O
+presentation -X- _ O
+was -X- _ O
+done -X- _ O
+using -X- _ O
+GraphPad -X- _ O
+Prism -X- _ O
+( -X- _ O
+Version -X- _ O
+8.0 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Experimenters -X- _ O
+were -X- _ O
+blinded -X- _ O
+during -X- _ O
+data -X- _ O
+analysis -X- _ O
+of -X- _ O
+samples. -X- _ O
+Descriptive -X- _ O
+measures -X- _ O
+( -X- _ O
+mean -X- _ O
+, -X- _ O
+median -X- _ O
+, -X- _ O
+minimum -X- _ O
+/ -X- _ O
+maximum -X- _ O
+range -X- _ O
+, -X- _ O
+95 -X- _ O
+% -X- _ O
+confidence -X- _ O
+intervals -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+percent -X- _ O
+) -X- _ O
+were -X- _ O
+used -X- _ O
+to -X- _ O
+summarize -X- _ O
+the -X- _ O
+data -X- _ O
+and -X- _ O
+illustrate -X- _ O
+in -X- _ O
+graphical -X- _ O
+presentations. -X- _ O
+All -X- _ O
+statistical -X- _ O
+analysis -X- _ O
+was -X- _ O
+done -X- _ O
+using -X- _ O
+GraphPad -X- _ O
+Prism -X- _ O
+( -X- _ O
+Version -X- _ O
+8.0 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Nonparametric -X- _ O
+( -X- _ O
+unpaired -X- _ O
+) -X- _ O
+Mann-Whitney’s -X- _ O
+U-test -X- _ O
+( -X- _ O
+two-tailed -X- _ O
+) -X- _ O
+was -X- _ O
+conducted -X- _ O
+to -X- _ O
+compare -X- _ O
+ranks -X- _ O
+between -X- _ O
+two -X- _ O
+experimental -X- _ O
+groups -X- _ O
+( -X- _ O
+e.g. -X- _ O
+, -X- _ O
+treated -X- _ O
+with -X- _ O
+vehicle -X- _ O
+or -X- _ O
+with -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Nonparametric -X- _ O
+( -X- _ O
+paired -X- _ O
+) -X- _ O
+Wilcoxon -X- _ O
+test -X- _ O
+was -X- _ O
+performed -X- _ O
+to -X- _ O
+compare -X- _ O
+the -X- _ O
+ranks -X- _ O
+of -X- _ O
+two -X- _ O
+matched -X- _ O
+samples -X- _ O
+( -X- _ O
+e.g. -X- _ O
+, -X- _ O
+before -X- _ O
+and -X- _ O
+after -X- _ O
+treatment -X- _ O
+with -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+When -X- _ O
+comparing -X- _ O
+multiple -X- _ O
+groups -X- _ O
+, -X- _ O
+non-parametric -X- _ O
+tests -X- _ O
+Kruskal-Wallis -X- _ O
+or -X- _ O
+Friedman -X- _ O
+were -X- _ O
+performed -X- _ O
+and -X- _ O
+followed -X- _ O
+by -X- _ O
+Dunn’s -X- _ O
+multiple -X- _ O
+comparison -X- _ O
+test -X- _ O
+( -X- _ O
+e.g. -X- _ O
+, -X- _ O
+vehicle-treated -X- _ O
+group -X- _ O
+compared -X- _ O
+to -X- _ O
+those -X- _ O
+treated -X- _ O
+with -X- _ O
+different -X- _ O
+concentrations -X- _ O
+of -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+or -X- _ O
+combined -X- _ O
+PMA -X- _ O
+and -X- _ O
+ionomycin -X- _ O
+; -X- _ O
+effect -X- _ O
+of -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+on -X- _ O
+viral -X- _ O
+rebound -X- _ O
+at -X- _ O
+different -X- _ O
+time -X- _ O
+points -X- _ O
+post -X- _ O
+treatment -X- _ O
+interruption -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+A -X- _ O
+p -X- _ O
+value -X- _ O
+of -X- _ O
+less -X- _ O
+than -X- _ O
+0.05 -X- _ O
+was -X- _ O
+considered -X- _ O
+statistically -X- _ O
+significant. -X- _ O
+ns -X- _ O
+, -X- _ O
+∗ -X- _ O
+, -X- _ O
+∗∗ -X- _ O
+, -X- _ O
+∗∗∗ -X- _ O
+, -X- _ O
+signify -X- _ O
+not -X- _ O
+significant -X- _ O
+, -X- _ O
+Figure -X- _ O
+2 -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+exact -X- _ O
+p -X- _ O
+values -X- _ O
+were -X- _ O
+∗p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.026 -X- _ O
+, -X- _ O
+∗∗p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.007 -X- _ O
+, -X- _ O
+∗∗∗p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.0004. -X- _ O
+In -X- _ O
+the -X- _ O
+two-tailed -X- _ O
+Mann-Whitney -X- _ O
+unpaired -X- _ O
+rank -X- _ O
+test -X- _ O
+shown -X- _ O
+in -X- _ O
+Figure -X- _ O
+3 -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+∗p -X- _ O
+value -X- _ O
+was -X- _ O
+0.0286 -X- _ O
+while -X- _ O
+in -X- _ O
+Figure -X- _ O
+4 -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+p -X- _ O
+values -X- _ O
+were -X- _ O
+as -X- _ O
+follows -X- _ O
+: -X- _ O
+∗p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.0317 -X- _ O
+and -X- _ O
+∗∗p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.0043. -X- _ O
+For -X- _ O
+Figure -X- _ O
+S6 -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+∗p -X- _ O
+value -X- _ O
+was -X- _ O
+No -X- _ O
+statistical -X- _ O
+methods -X- _ O
+were -X- _ O
+used -X- _ O
+to -X- _ O
+pre-determine -X- _ O
+strategies -X- _ O
+for -X- _ O
+randomization -X- _ O
+and -X- _ O
+/ -X- _ O
+or -X- _ O
+stratification -X- _ O
+, -X- _ O
+population -X- _ O
+size -X- _ O
+, -X- _ O
+inclusion -X- _ O
+and -X- _ O
+exclusion -X- _ O
+of -X- _ O
+any -X- _ O
+data -X- _ O
+or -X- _ O
+subjects -X- _ O
+, -X- _ O
+or -X- _ O
+whether -X- _ O
+the -X- _ O
+data -X- _ O
+met -X- _ O
+assumptions -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+statistical -X- _ O
+approach. -X- _ O
+All -X- _ O
+software -X- _ O
+used -X- _ O
+in -X- _ O
+data -X- _ O
+analysis -X- _ O
+along -X- _ O
+with -X- _ O
+statistical -X- _ O
+parameters -X- _ O
+were -X- _ O
+mentioned -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+appropriate -X- _ O
+Figure -X- _ O
+legends. -X- _ O
+Details -X- _ O
+about -X- _ O
+the -X- _ O
+statistical -X- _ O
+tests -X- _ O
+, -X- _ O
+exact -X- _ O
+values -X- _ O
+of -X- _ O
+n -X- _ O
+and -X- _ O
+definitions -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+n -X- _ O
+were -X- _ O
+as -X- _ O
+indicated -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+legend -X- _ O
+for -X- _ O
+each -X- _ O
+relevant -X- _ O
+Figure. -X- _ O
+When -X- _ O
+applicable -X- _ O
+, -X- _ O
+definition -X- _ O
+of -X- _ O
+asterisks -X- _ O
+and -X- _ O
+descriptive -X- _ O
+measures -X- _ O
+were -X- _ O
+indicated -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+Figure -X- _ O
+legends -X- _ O
+or -X- _ O
+Results. -X- _ O
+Drawing -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+chemical -X- _ O
+structure -X- _ O
+of -X- _ O
+APG-1387 -X- _ O
+shown -X- _ O
+in -X- _ O
+Figure -X- _ O
+1 -X- _ O
+was -X- _ O
+done -X- _ O
+using -X- _ O
+the -X- _ O
+ChemDraw -X- _ O
+software. -X- _ O
+Source -X- _ O
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+: -X- _ O
+PMC11699618 -X- _ O
+
+2. -X- _ O
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+signaling -X- _ O
+pathways -X- _ O
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+Due -X- _ O
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+the -X- _ O
+critical -X- _ O
+feature -X- _ O
+of -X- _ O
+these -X- _ O
+receptor-mediated -X- _ O
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+and -X- _ O
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+, -X- _ O
+a -X- _ O
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+therapeutic -X- _ O
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+This -X- _ O
+study -X- _ O
+reveals -X- _ O
+a -X- _ O
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+feedback -X- _ O
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+/ -X- _ O
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+proliferative -X- _ O
+signaling -X- _ O
+loop -X- _ O
+that -X- _ O
+contributes -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+progression -X- _ O
+of -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-TISSUE
+via -X- _ O
+the -X- _ O
+ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+pathway -X- _ O
+and -X- _ O
+provides -X- _ O
+a -X- _ O
+novel -X- _ O
+insight -X- _ O
+into -X- _ O
+the -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+MYT1L-mediated -X- _ O
+transactivation -X- _ O
+of -X- _ O
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+MYT1L -X- _ O
+is -X- _ O
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+in -X- _ O
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+brains -X- _ B-TISSUE
+[ -X- _ O
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+studies -X- _ O
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+the -X- _ O
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+MYT1L -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+direct -X- _ O
+conversion -X- _ O
+of -X- _ O
+human -X- _ O
+non-neuronal -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+to -X- _ O
+neurons -X- _ B-CELL
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+the -X- _ O
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+MYT1L -X- _ O
+in -X- _ O
+carcinogenesis -X- _ O
+remains -X- _ O
+poorly -X- _ O
+understood. -X- _ O
+Our -X- _ O
+previous -X- _ O
+studies -X- _ O
+have -X- _ O
+uncovered -X- _ O
+that -X- _ O
+miR-141 -X- _ O
+was -X- _ O
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+in -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-TISSUE
+and -X- _ O
+was -X- _ O
+able -X- _ O
+to -X- _ O
+suppress -X- _ O
+cell -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+by -X- _ O
+directly -X- _ O
+targeting -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+, -X- _ O
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+role -X- _ O
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+MYT1L -X- _ O
+in -X- _ O
+glioblastoma. -X- _ B-TISSUE
+In -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+found -X- _ O
+that -X- _ O
+in -X- _ O
+normal -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-TISSUE
+M059K -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+lines -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
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+of -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+attenuated -X- _ O
+cell -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+and -X- _ O
+induced -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+and -X- _ O
+S-phase -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+arrest -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
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+In -X- _ O
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+, -X- _ O
+the -X- _ O
+ectopic -X- _ O
+expression -X- _ O
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+MYT1L -X- _ O
+promoted -X- _ O
+cell -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+, -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+shortened -X- _ O
+the -X- _ O
+S -X- _ O
+phase -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+1E -X- _ O
+, -X- _ O
+F -X- _ O
+, -X- _ O
+H -X- _ O
+, -X- _ O
+J -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Similar -X- _ O
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+Figure -X- _ O
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+These -X- _ O
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+Figure -X- _ O
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+apoptosis -X- _ O
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+Figure -X- _ O
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+) -X- _ O
+. -X- _ O
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+, -X- _ O
+the -X- _ O
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+and -X- _ O
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+cells -X- _ I-CELL_LINE
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+Figure -X- _ O
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+may -X- _ O
+contribute -X- _ O
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+cell -X- _ O
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+However -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
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+inhibition -X- _ O
+mediated -X- _ O
+by -X- _ O
+ectopic -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+in -X- _ O
+M059J -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+may -X- _ O
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+attributed -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+these -X- _ O
+two -X- _ O
+pathways -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+2I -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+A -X- _ O
+total -X- _ O
+of -X- _ O
+13 -X- _ O
+% -X- _ O
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+cells -X- _ B-CELL
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+also -X- _ O
+found -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+negative -X- _ O
+control -X- _ O
+siRNA -X- _ O
+group -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+1C -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+may -X- _ O
+reflect -X- _ O
+the -X- _ O
+cytotoxic -X- _ O
+effect -X- _ O
+of -X- _ O
+either -X- _ O
+transfection -X- _ O
+reagent -X- _ O
+( -X- _ O
+Lipofectamine -X- _ O
+3000 -X- _ O
+) -X- _ O
+or -X- _ O
+negative -X- _ O
+control -X- _ O
+siRNA. -X- _ O
+The -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+is -X- _ O
+tightly -X- _ O
+regulated -X- _ O
+by -X- _ O
+cyclins -X- _ O
+, -X- _ O
+CDKs -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+CDK -X- _ O
+inhibitors. -X- _ O
+Although -X- _ O
+cyclin -X- _ O
+E1 -X- _ O
+was -X- _ O
+down-regulated -X- _ O
+in -X- _ O
+HEK293 -X- _ B-CELL_LINE
+, -X- _ O
+while -X- _ O
+it -X- _ O
+was -X- _ O
+up-regulated -X- _ O
+in -X- _ O
+M059K -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+expression -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+1K -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+that -X- _ O
+may -X- _ O
+play -X- _ O
+a -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+shortening -X- _ O
+the -X- _ O
+S -X- _ O
+phase -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+1G -X- _ O
+, -X- _ O
+H -X- _ O
+) -X- _ O
+because -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+critical -X- _ O
+requirement -X- _ O
+of -X- _ O
+cyclin -X- _ O
+E -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+S -X- _ O
+phase -X- _ O
+progression -X- _ O
+[ -X- _ O
+37,38 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Furthermore -X- _ O
+, -X- _ O
+p21 -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+well-known -X- _ O
+CDK -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
+, -X- _ O
+was -X- _ O
+down-regulated -X- _ O
+in -X- _ O
+HEK293 -X- _ B-CELL_LINE
+and -X- _ O
+M059K -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+1K -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+may -X- _ O
+also -X- _ O
+contribute -X- _ O
+to -X- _ O
+shortening -X- _ O
+the -X- _ O
+S -X- _ O
+phase. -X- _ O
+Moreover -X- _ O
+, -X- _ O
+p21 -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+shown -X- _ O
+to -X- _ O
+promote -X- _ O
+cell -X- _ O
+death -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+via -X- _ O
+the -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+autophagy -X- _ O
+[ -X- _ O
+39,40,41 -X- _ O
+] -X- _ O
+; -X- _ O
+the -X- _ O
+down-regulated -X- _ O
+p21 -X- _ O
+may -X- _ O
+be -X- _ O
+a -X- _ O
+causal -X- _ O
+player -X- _ O
+in -X- _ O
+attenuating -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+in -X- _ O
+HEK293 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+that -X- _ O
+express -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+1I -X- _ O
+, -X- _ O
+J -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Interestingly -X- _ O
+, -X- _ O
+CDK6 -X- _ O
+was -X- _ O
+down-regulated -X- _ O
+in -X- _ O
+M059J -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+2I -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+may -X- _ O
+play -X- _ O
+a -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+a -X- _ O
+G1 -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+arrest -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+2G -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Ectopic -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+induced -X- _ O
+down-regulation -X- _ O
+of -X- _ O
+caspase -X- _ O
+3 -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+1K -X- _ O
+, -X- _ O
+Supplementary -X- _ O
+Figure -X- _ O
+S1 -X- _ O
+) -X- _ O
+in -X- _ O
+both -X- _ O
+HEK293 -X- _ B-CELL_LINE
+and -X- _ O
+M509K -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+may -X- _ O
+play -X- _ O
+a -X- _ O
+contributing -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+apoptotic -X- _ O
+inhibition -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+1I -X- _ O
+, -X- _ O
+J -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+this -X- _ O
+is -X- _ O
+not -X- _ O
+the -X- _ O
+case -X- _ O
+in -X- _ O
+M059J -X- _ B-CELL_LINE
+due -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+absence -X- _ O
+of -X- _ O
+caspase -X- _ O
+3 -X- _ O
+in -X- _ O
+both -X- _ O
+GFP- -X- _ B-CELL_STATE
+and -X- _ O
+MYT1L-M059J -X- _ B-CELL_STATE
+cells -X- _ B-CELL_LINE
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+2I -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+As -X- _ O
+a -X- _ O
+transcription -X- _ O
+factor -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+targets -X- _ O
+of -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+, -X- _ O
+unfortunately -X- _ O
+, -X- _ O
+remain -X- _ O
+largely -X- _ O
+unknown. -X- _ O
+Here -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+discovered -X- _ O
+that -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+could -X- _ O
+directly -X- _ O
+regulate -X- _ O
+the -X- _ O
+transcription -X- _ O
+of -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+through -X- _ O
+a -X- _ O
+novel -X- _ O
+cis-acting -X- _ O
+element -X- _ O
+( -X- _ O
+−2114 -X- _ O
+/ -X- _ O
+−2103 -X- _ O
+) -X- _ O
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+promoter. -X- _ O
+We -X- _ O
+noted -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+overexpression -X- _ O
+of -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+correlated -X- _ O
+with -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+mRNA -X- _ O
+levels -X- _ O
+in -X- _ O
+4 -X- _ O
+out -X- _ O
+of -X- _ O
+6 -X- _ O
+brain -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+lines -X- _ I-CELL
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+3A -X- _ O
+, -X- _ O
+B -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+induction -X- _ O
+of -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+normal -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+HEK293 -X- _ B-CELL_LINE
+and -X- _ O
+M059K -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+ectopically -X- _ O
+expressed -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+3C -X- _ O
+, -X- _ O
+D -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+supporting -X- _ O
+the -X- _ O
+opinion -X- _ O
+that -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+target -X- _ O
+of -X- _ O
+MYT1L. -X- _ O
+Surprisingly -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+M059J -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+with -X- _ O
+loss -X- _ O
+of -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+function -X- _ O
+( -X- _ O
+Supplementary -X- _ O
+Figure -X- _ O
+S4 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+enforced -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+failed -X- _ O
+to -X- _ O
+induce -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+transcription -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+3C -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+although -X- _ O
+the -X- _ O
+protein -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+were -X- _ O
+not -X- _ O
+consistent -X- _ O
+with -X- _ O
+its -X- _ O
+mRNA -X- _ O
+levels -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+3C -X- _ O
+, -X- _ O
+D -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Taken -X- _ O
+together -X- _ O
+, -X- _ O
+our -X- _ O
+results -X- _ O
+demonstrate -X- _ O
+that -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+functionality -X- _ O
+depends -X- _ O
+on -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+activity. -X- _ O
+Furthermore -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+ectopically -X- _ O
+expressed -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+increased -X- _ O
+the -X- _ O
+luciferase -X- _ O
+activity -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+wild-type -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+promoter -X- _ O
+/ -X- _ O
+luciferase -X- _ O
+reporter -X- _ O
+in -X- _ O
+HEK-293 -X- _ B-CELL_LINE
+and -X- _ O
+M059K -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+normal -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+was -X- _ O
+abolished -X- _ O
+when -X- _ O
+the -X- _ O
+mutant -X- _ O
+construct -X- _ O
+was -X- _ O
+used -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+3G -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+ectopic -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+suppressed -X- _ O
+the -X- _ O
+luciferase -X- _ O
+activity -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+DNA-PK-deficient -X- _ O
+M059J -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+3G -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Moreover -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+enforced -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+resulted -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+sustained -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+AKT -X- _ O
+pathway -X- _ O
+in -X- _ O
+all -X- _ O
+three -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL_LINE
+lines -X- _ I-CELL_LINE
+examined -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+1K -X- _ O
+and -X- _ O
+Figure -X- _ O
+2I -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+pathway -X- _ O
+was -X- _ O
+activated -X- _ O
+in -X- _ O
+M059K -X- _ B-CELL_LINE
+and -X- _ O
+M059J -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+while -X- _ O
+it -X- _ O
+was -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+in -X- _ O
+HEK293 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+1K -X- _ O
+and -X- _ O
+Figure -X- _ O
+2I -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+pathway -X- _ O
+was -X- _ O
+CXCR1-dependent -X- _ O
+, -X- _ O
+whereas -X- _ O
+the -X- _ O
+AKT -X- _ O
+pathway -X- _ O
+was -X- _ O
+not -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+4J -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Based -X- _ O
+on -X- _ O
+these -X- _ O
+findings -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+may -X- _ O
+propose -X- _ O
+that -X- _ O
+under -X- _ O
+non-stimulated -X- _ O
+conditions -X- _ O
+, -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+may -X- _ O
+act -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+repressor -X- _ O
+suppressing -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+transcription -X- _ O
+; -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+may -X- _ O
+function -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+coactivator -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+once -X- _ O
+it -X- _ O
+is -X- _ O
+phosphorylated -X- _ O
+by -X- _ O
+the -X- _ O
+CXCR1-dependent -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+kinase -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+turn -X- _ O
+, -X- _ O
+phosphorylates -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+; -X- _ O
+the -X- _ O
+phosphorylated -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+recruits -X- _ O
+histone -X- _ O
+acetyltransferases -X- _ O
+( -X- _ O
+HATs -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+transcription -X- _ O
+factors -X- _ O
+( -X- _ O
+TFs -X- _ O
+) -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+promoter -X- _ O
+and -X- _ O
+promotes -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+transcription -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+5 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+( -X- _ O
+also -X- _ O
+known -X- _ O
+as -X- _ O
+PRKDC -X- _ O
+and -X- _ O
+p350 -X- _ O
+) -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+nuclear -X- _ O
+serine -X- _ O
+/ -X- _ O
+threonine -X- _ O
+protein -X- _ O
+kinase -X- _ O
+complex -X- _ O
+that -X- _ O
+is -X- _ O
+composed -X- _ O
+of -X- _ O
+a -X- _ O
+catalytic -X- _ O
+subunit -X- _ O
+of -X- _ O
+DNA-PKcs -X- _ O
+and -X- _ O
+a -X- _ O
+heterodimer -X- _ O
+of -X- _ O
+Ku -X- _ O
+proteins -X- _ O
+( -X- _ O
+Ku70 -X- _ O
+/ -X- _ O
+Ku80 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Although -X- _ O
+one -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+most -X- _ O
+well-defined -X- _ O
+functions -X- _ O
+of -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+is -X- _ O
+to -X- _ O
+govern -X- _ O
+the -X- _ O
+repair -X- _ O
+of -X- _ O
+DNA -X- _ O
+double-strand -X- _ O
+breaks -X- _ O
+through -X- _ O
+both -X- _ O
+non-homologous -X- _ O
+end-joining -X- _ O
+( -X- _ O
+NHEJ -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+homologous -X- _ O
+recombination -X- _ O
+( -X- _ O
+HR -X- _ O
+) -X- _ O
+[ -X- _ O
+42 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+was -X- _ O
+originally -X- _ O
+identified -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+component -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+Sp1 -X- _ O
+transcription -X- _ O
+complex -X- _ O
+in -X- _ O
+which -X- _ O
+it -X- _ O
+may -X- _ O
+modulate -X- _ O
+the -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+activity -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+complex -X- _ O
+by -X- _ O
+phosphorylating -X- _ O
+Sp1 -X- _ O
+[ -X- _ O
+43 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+For -X- _ O
+the -X- _ O
+first -X- _ O
+time -X- _ O
+, -X- _ O
+our -X- _ O
+findings -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+that -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+may -X- _ O
+functionally -X- _ O
+modulate -X- _ O
+the -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+activity -X- _ O
+of -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+by -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+, -X- _ O
+eventually -X- _ O
+leading -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+, -X- _ O
+although -X- _ O
+this -X- _ O
+requires -X- _ O
+further -X- _ O
+validation -X- _ O
+using -X- _ O
+chromatin -X- _ O
+immunoprecipitation -X- _ O
+quantitative -X- _ O
+PCR -X- _ O
+( -X- _ O
+ChIP-qPCR -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+electrophoretic -X- _ O
+mobility -X- _ O
+shift -X- _ O
+assay -X- _ O
+( -X- _ O
+EMSA -X- _ O
+) -X- _ O
+when -X- _ O
+a -X- _ O
+ChIP-grade -X- _ O
+antibody -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+phosphorylated -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+is -X- _ O
+commercially -X- _ O
+available. -X- _ O
+Our -X- _ O
+previous -X- _ O
+work -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+that -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+may -X- _ O
+also -X- _ O
+function -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+repressor -X- _ O
+of -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+, -X- _ O
+resulting -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+inhibition -X- _ O
+of -X- _ O
+tumor -X- _ O
+suppressor -X- _ O
+p21 -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+target -X- _ O
+of -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+[ -X- _ O
+29 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Several -X- _ O
+publications -X- _ O
+support -X- _ O
+the -X- _ O
+dual -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+control -X- _ O
+of -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression. -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+the -X- _ O
+transcription -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+xanthine -X- _ O
+oxidoreductase -X- _ O
+gene -X- _ O
+via -X- _ O
+E-box -X- _ O
+/ -X- _ O
+TATA-like -X- _ O
+elements -X- _ O
+[ -X- _ O
+44 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Simultaneously -X- _ O
+, -X- _ O
+Ku -X- _ O
+proteins -X- _ O
+may -X- _ O
+also -X- _ O
+act -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+recycling -X- _ O
+coactivator -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+androgen -X- _ O
+receptor -X- _ O
+[ -X- _ O
+45 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Chemokines -X- _ O
+are -X- _ O
+a -X- _ O
+superfamily -X- _ O
+of -X- _ O
+small -X- _ O
+( -X- _ O
+about -X- _ O
+8 -X- _ O
+to -X- _ O
+14 -X- _ O
+kDa -X- _ O
+) -X- _ O
+cytokine-like -X- _ O
+proteins -X- _ O
+that -X- _ O
+selectively -X- _ O
+regulate -X- _ O
+the -X- _ O
+recruitment -X- _ O
+and -X- _ O
+trafficking -X- _ O
+of -X- _ O
+leukocytes -X- _ B-CELL
+to -X- _ O
+inflammatory -X- _ O
+sites -X- _ O
+through -X- _ O
+chemoattraction -X- _ O
+[ -X- _ O
+46 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Members -X- _ O
+of -X- _ O
+this -X- _ O
+family -X- _ O
+have -X- _ O
+been -X- _ O
+divided -X- _ O
+into -X- _ O
+four -X- _ O
+subfamilies -X- _ O
+, -X- _ O
+CXC -X- _ O
+, -X- _ O
+CC -X- _ O
+, -X- _ O
+C -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+CX3C -X- _ O
+, -X- _ O
+based -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+arrangement -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+first -X- _ O
+two -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+four -X- _ O
+conserved -X- _ O
+cysteine -X- _ O
+residues -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+amino -X- _ O
+terminus -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+proteins -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+can -X- _ O
+bind -X- _ O
+CXCR -X- _ O
+, -X- _ O
+CCR -X- _ O
+, -X- _ O
+XCR1 -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+CX3CR1 -X- _ O
+, -X- _ O
+respectively. -X- _ O
+Chemokines -X- _ O
+play -X- _ O
+a -X- _ O
+critical -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+inflammatory -X- _ O
+reactions. -X- _ O
+IL-8 -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+well-characterized -X- _ O
+ELR+ -X- _ O
+CXC -X- _ O
+chemokine -X- _ O
+that -X- _ O
+attracts -X- _ O
+neutrophils -X- _ B-CELL
+through -X- _ O
+binding -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+and -X- _ O
+CXCR2 -X- _ O
+receptors -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL_COMPONENT
+surface -X- _ I-CELL_COMPONENT
+[ -X- _ O
+47 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+It -X- _ O
+is -X- _ O
+suspected -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+signature -X- _ O
+of -X- _ O
+chemokines -X- _ O
+that -X- _ O
+persist -X- _ O
+at -X- _ O
+inflammatory -X- _ O
+sites -X- _ O
+may -X- _ O
+be -X- _ O
+important -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+development -X- _ O
+of -X- _ O
+chronic -X- _ O
+diseases -X- _ O
+and -X- _ O
+can -X- _ O
+contribute -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+development -X- _ O
+of -X- _ O
+malignancies -X- _ O
+[ -X- _ O
+48 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+There -X- _ O
+is -X- _ O
+sufficient -X- _ O
+evidence -X- _ O
+to -X- _ O
+show -X- _ O
+that -X- _ O
+chemokines -X- _ O
+also -X- _ O
+play -X- _ O
+a -X- _ O
+significant -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+melanoma -X- _ O
+[ -X- _ O
+49 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+breast -X- _ O
+[ -X- _ O
+50 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+colon -X- _ O
+[ -X- _ O
+51 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+esophageal -X- _ O
+[ -X- _ O
+52 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+prostate -X- _ O
+[ -X- _ O
+53 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+non-small -X- _ O
+cell -X- _ O
+lung -X- _ O
+[ -X- _ O
+54 -X- _ O
+] -X- _ O
+cancers -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+addition -X- _ O
+to -X- _ O
+its -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+development -X- _ O
+of -X- _ O
+inflammatory -X- _ O
+responses. -X- _ O
+Here -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+showed -X- _ O
+that -X- _ O
+IL-8 -X- _ O
+was -X- _ O
+significantly -X- _ O
+up-regulated -X- _ O
+in -X- _ O
+HEK293 -X- _ B-CELL_LINE
+and -X- _ O
+M059J -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+while -X- _ O
+it -X- _ O
+was -X- _ O
+only -X- _ O
+slightly -X- _ O
+increased -X- _ O
+in -X- _ O
+M059K -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+ectopically -X- _ O
+expressed -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+4A -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Unlike -X- _ O
+IL-8 -X- _ O
+, -X- _ O
+GROα -X- _ O
+more -X- _ O
+selectively -X- _ O
+binds -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+CXCR2 -X- _ O
+receptor -X- _ O
+, -X- _ O
+while -X- _ O
+the -X- _ O
+affinity -X- _ O
+to -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+is -X- _ O
+significantly -X- _ O
+lower -X- _ O
+[ -X- _ O
+55 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Since -X- _ O
+the -X- _ O
+CXCR2 -X- _ O
+receptor -X- _ O
+was -X- _ O
+undetectable -X- _ O
+in -X- _ O
+HEK293 -X- _ B-CELL_LINE
+and -X- _ O
+M059K -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+3E -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+GROα -X- _ O
+in -X- _ O
+these -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+could -X- _ O
+only -X- _ O
+function -X- _ O
+through -X- _ O
+CXCR1. -X- _ O
+The -X- _ O
+enforced -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+caused -X- _ O
+an -X- _ O
+elevation -X- _ O
+of -X- _ O
+GROα -X- _ O
+in -X- _ O
+HEK293 -X- _ B-CELL_LINE
+and -X- _ O
+M059J -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+4B–E -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Although -X- _ O
+GROα -X- _ O
+mRNA -X- _ O
+was -X- _ O
+down-regulated -X- _ O
+, -X- _ O
+its -X- _ O
+protein -X- _ O
+level -X- _ O
+was -X- _ O
+unaffected -X- _ O
+in -X- _ O
+M059K -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+ectopically -X- _ O
+expressed -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+4F -X- _ O
+, -X- _ O
+G -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+IL-8 -X- _ O
+and -X- _ O
+/ -X- _ O
+or -X- _ O
+GROα -X- _ O
+bind -X- _ O
+to -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+, -X- _ O
+eventually -X- _ O
+promoting -X- _ O
+glioblastoma -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+via -X- _ O
+the -X- _ O
+ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+pathway -X- _ O
+that -X- _ O
+can -X- _ O
+be -X- _ O
+blocked -X- _ O
+by -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+siRNA -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+4J -X- _ O
+, -X- _ O
+K -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+proliferative -X- _ O
+ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+pathway -X- _ O
+in -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-TISSUE
+is -X- _ O
+, -X- _ O
+at -X- _ O
+least -X- _ O
+in -X- _ O
+part -X- _ O
+, -X- _ O
+CXCR1-dependent. -X- _ O
+Although -X- _ O
+this -X- _ O
+is -X- _ O
+the -X- _ O
+first -X- _ O
+report -X- _ O
+regarding -X- _ O
+the -X- _ O
+critical -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+/ -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+proliferative -X- _ O
+IL-8 -X- _ O
+/ -X- _ O
+GROα-CXCR1 -X- _ O
+signaling -X- _ O
+loop -X- _ O
+in -X- _ O
+glioblastoma -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+significant -X- _ O
+contributing -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+IL-8-CXCR1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+axes -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+and -X- _ O
+angiogenesis -X- _ O
+of -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+before -X- _ O
+[ -X- _ O
+28 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Taken -X- _ O
+together -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+propose -X- _ O
+a -X- _ O
+potential -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+/ -X- _ O
+MYT1L-CXCR1 -X- _ O
+signaling -X- _ O
+loop -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+progression -X- _ O
+of -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-TISSUE
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+5 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+We -X- _ O
+speculate -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+/ -X- _ O
+MYT1L-CXCR1-ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+might -X- _ O
+be -X- _ O
+up-regulated -X- _ O
+at -X- _ O
+WHO -X- _ O
+grade -X- _ O
+IV -X- _ O
+and -X- _ O
+/ -X- _ O
+or -X- _ O
+recurrent -X- _ O
+glioblastomas -X- _ O
+due -X- _ O
+to -X- _ O
+chemo- -X- _ O
+or -X- _ O
+radio-resistance. -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+key -X- _ O
+player -X- _ O
+in -X- _ O
+DNA -X- _ O
+damage -X- _ O
+response -X- _ O
+on -X- _ O
+double-strand -X- _ O
+breaks. -X- _ O
+Activation -X- _ O
+of -X- _ O
+DNA -X- _ O
+damage -X- _ O
+response -X- _ O
+facilitates -X- _ O
+glioma -X- _ B-CELL
+stem -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+to -X- _ O
+develop -X- _ O
+radio-resistance -X- _ O
+[ -X- _ O
+56 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Furthermore -X- _ O
+, -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+master -X- _ O
+kinase -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+proliferative -X- _ O
+/ -X- _ O
+progenitor -X- _ O
+subtype -X- _ O
+of -X- _ O
+glioblastoma -X- _ O
+, -X- _ O
+guiding -X- _ O
+targeted -X- _ O
+cancer -X- _ O
+therapy -X- _ O
+[ -X- _ O
+57 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Immunohistochemical -X- _ O
+staining -X- _ O
+has -X- _ O
+indicated -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+IL-8 -X- _ O
+in -X- _ O
+66.7–67.3 -X- _ O
+% -X- _ O
+of -X- _ O
+WHO -X- _ O
+grade -X- _ O
+IV -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-TISSUE
+tissues -X- _ I-TISSUE
+, -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+its -X- _ O
+receptor -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+found -X- _ O
+primarily -X- _ O
+in -X- _ O
+both -X- _ O
+tumor-associated -X- _ O
+vessels -X- _ B-TISSUE
+and -X- _ O
+grade -X- _ O
+IV -X- _ O
+glioblastomas -X- _ B-TISSUE
+[ -X- _ O
+28 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+supporting -X- _ O
+the -X- _ O
+previous -X- _ O
+report -X- _ O
+showing -X- _ O
+a -X- _ O
+crucial -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+IL-8 -X- _ O
+/ -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+signaling -X- _ O
+in -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-CELL
+stem -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+[ -X- _ O
+58 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Moreover -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+IL-8 -X- _ O
+/ -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+STAT3 -X- _ O
+pathway -X- _ O
+is -X- _ O
+crucial -X- _ O
+for -X- _ O
+the -X- _ O
+maintenance -X- _ O
+of -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-CELL
+stem -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+[ -X- _ O
+59 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Glioblastoma -X- _ B-TISSUE
+and -X- _ O
+neuroblastoma -X- _ B-TISSUE
+are -X- _ O
+two -X- _ O
+common -X- _ O
+types -X- _ O
+of -X- _ O
+brain -X- _ B-TISSUE
+tumors -X- _ I-TISSUE
+that -X- _ O
+occur -X- _ O
+in -X- _ O
+different -X- _ O
+aged -X- _ O
+populations. -X- _ O
+Our -X- _ O
+previous -X- _ O
+studies -X- _ O
+indicated -X- _ O
+that -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+was -X- _ O
+overexpressed -X- _ O
+in -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+lines -X- _ I-CELL
+and -X- _ O
+46.9 -X- _ O
+% -X- _ O
+of -X- _ O
+malignant -X- _ O
+glioma -X- _ B-TISSUE
+tissue -X- _ I-TISSUE
+samples -X- _ O
+( -X- _ O
+n -X- _ O
+= -X- _ O
+32 -X- _ O
+) -X- _ O
+[ -X- _ O
+29 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+functioning -X- _ O
+as -X- _ O
+an -X- _ O
+oncogene -X- _ O
+in -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+with -X- _ O
+normal -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+activity. -X- _ O
+To -X- _ O
+see -X- _ O
+whether -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+is -X- _ O
+also -X- _ O
+up-regulated -X- _ O
+in -X- _ O
+neuroblastoma -X- _ B-TISSUE
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+compared -X- _ O
+its -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+both -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-CELL_LINE
+and -X- _ O
+neuroblastoma -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+lines. -X- _ I-CELL_LINE
+It -X- _ O
+was -X- _ O
+found -X- _ O
+that -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+was -X- _ O
+overexpressed -X- _ O
+in -X- _ O
+3 -X- _ O
+out -X- _ O
+of -X- _ O
+7 -X- _ O
+neuroblastoma -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+lines -X- _ I-CELL_LINE
+examined -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+3A -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+that -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+up-regulation -X- _ O
+may -X- _ O
+be -X- _ O
+a -X- _ O
+common -X- _ O
+event -X- _ O
+in -X- _ O
+both -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-TISSUE
+and -X- _ O
+neuroblastoma. -X- _ B-TISSUE
+Although -X- _ O
+the -X- _ O
+SH-SY5Y -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+line -X- _ I-CELL_LINE
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+subclone -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+SK-N-SH -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+line -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+global -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+microarray -X- _ O
+showed -X- _ O
+a -X- _ O
+profound -X- _ O
+differential -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+genes -X- _ O
+in -X- _ O
+these -X- _ O
+two -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+lines -X- _ I-CELL
+[ -X- _ O
+60 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+mechanism -X- _ O
+involved -X- _ O
+is -X- _ O
+unclear. -X- _ O
+In -X- _ O
+the -X- _ O
+present -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+noted -X- _ O
+that -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+was -X- _ O
+up-regulated -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+SH-SY5Y -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+line -X- _ I-CELL_LINE
+at -X- _ O
+both -X- _ O
+mRNA -X- _ O
+and -X- _ O
+protein -X- _ O
+levels -X- _ O
+( -X- _ O
+Figure -X- _ O
+3A -X- _ O
+, -X- _ O
+B -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+while -X- _ O
+in -X- _ O
+its -X- _ O
+parental -X- _ O
+line -X- _ O
+, -X- _ O
+SK-N-SH -X- _ B-CELL_LINE
+, -X- _ O
+only -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+mRNA -X- _ O
+was -X- _ O
+up-regulated. -X- _ O
+The -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+protein -X- _ O
+was -X- _ O
+undetectable -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+may -X- _ O
+implicate -X- _ O
+the -X- _ O
+involvement -X- _ O
+of -X- _ O
+post-transcriptional -X- _ O
+regulation -X- _ O
+, -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+miRNA -X- _ O
+( -X- _ O
+s -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+expression. -X- _ O
+Some -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+molecules -X- _ O
+analyzed -X- _ O
+in -X- _ O
+this -X- _ O
+manuscript -X- _ O
+can -X- _ O
+be -X- _ O
+molecular -X- _ O
+targets -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ O
+therapy. -X- _ O
+The -X- _ O
+IL-8-CXCR1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+axis -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+proposed -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+potential -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+target -X- _ O
+for -X- _ O
+numerous -X- _ O
+cancers -X- _ O
+due -X- _ O
+to -X- _ O
+its -X- _ O
+contributing -X- _ O
+roles -X- _ O
+in -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+, -X- _ O
+migration -X- _ O
+/ -X- _ O
+invasion -X- _ O
+, -X- _ O
+angiogenesis -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+tumor -X- _ B-TISSUE
+immunosuppression -X- _ O
+[ -X- _ O
+61,62 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+tumor-produced -X- _ O
+IL-8 -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+potent -X- _ O
+chemoattractant -X- _ O
+that -X- _ O
+recruits -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2-expressing -X- _ O
+human -X- _ O
+myeloid-derived -X- _ B-CELL
+suppressor -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+to -X- _ O
+tumor -X- _ B-TISSUE
+foci -X- _ O
+, -X- _ O
+playing -X- _ O
+a -X- _ O
+crucial -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+immune -X- _ O
+resistance -X- _ O
+[ -X- _ O
+63 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+IL-8 -X- _ O
+receptor -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+may -X- _ O
+be -X- _ O
+a -X- _ O
+biomarker -X- _ O
+for -X- _ O
+cancer -X- _ B-CELL
+stem -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+[ -X- _ O
+64 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-CELL
+stem -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+[ -X- _ O
+58 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Targeting -X- _ O
+myeloid -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+CXCR1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+enhances -X- _ O
+antitumor -X- _ O
+immunity -X- _ O
+in -X- _ O
+pancreatic -X- _ O
+cancer -X- _ O
+[ -X- _ O
+65 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Neutralizing -X- _ O
+IL-8 -X- _ O
+or -X- _ O
+inhibiting -X- _ O
+its -X- _ O
+receptor -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+potentiates -X- _ O
+anti-PD-1-mediated -X- _ O
+antitumor -X- _ O
+immunotherapy -X- _ O
+for -X- _ O
+glioma -X- _ O
+[ -X- _ O
+66 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+These -X- _ O
+findings -X- _ O
+highlight -X- _ O
+IL-8 -X- _ O
+and -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+as -X- _ O
+potential -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+targets -X- _ O
+for -X- _ O
+cancer. -X- _ O
+McClelland -X- _ O
+and -X- _ O
+colleagues -X- _ O
+have -X- _ O
+summarized -X- _ O
+numerous -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+developed -X- _ O
+to -X- _ O
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+IL-8 -X- _ O
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+receptor -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+for -X- _ O
+the -X- _ O
+treatment -X- _ O
+of -X- _ O
+chronic -X- _ O
+obstructive -X- _ O
+pulmonary -X- _ O
+disease -X- _ O
+( -X- _ O
+COPD -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+asthma -X- _ O
+, -X- _ O
+diabetes -X- _ O
+, -X- _ O
+pneumonia -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+solid -X- _ B-TISSUE
+tumors -X- _ I-TISSUE
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+prostate -X- _ O
+cancer -X- _ O
+[ -X- _ O
+62 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Phase -X- _ O
+1 -X- _ O
+and -X- _ O
+2 -X- _ O
+clinical -X- _ O
+trials -X- _ O
+in -X- _ O
+prostate -X- _ O
+cancer -X- _ O
+with -X- _ O
+Navarixin -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+small-molecule -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
+of -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+, -X- _ O
+have -X- _ O
+been -X- _ O
+completed. -X- _ O
+Phase -X- _ O
+1 -X- _ O
+and -X- _ O
+2 -X- _ O
+clinical -X- _ O
+trials -X- _ O
+in -X- _ O
+prostate -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ O
+with -X- _ O
+BMS-986253 -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+monoclonal -X- _ O
+antibody -X- _ O
+against -X- _ O
+IL-8 -X- _ O
+, -X- _ O
+are -X- _ O
+still -X- _ O
+active. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+none -X- _ O
+of -X- _ O
+these -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+have -X- _ O
+yet -X- _ O
+been -X- _ O
+approved -X- _ O
+to -X- _ O
+treat -X- _ O
+cancer. -X- _ O
+The -X- _ O
+ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+signaling -X- _ O
+pathway -X- _ O
+contributes -X- _ O
+to -X- _ O
+numerous -X- _ O
+biological -X- _ O
+and -X- _ O
+pathological -X- _ O
+processes. -X- _ O
+Excessive -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+pathway -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+hallmark -X- _ O
+of -X- _ O
+human -X- _ O
+malignancies -X- _ O
+[ -X- _ O
+67,68,69,70,71,72,73 -X- _ O
+] -X- _ O
+due -X- _ O
+to -X- _ O
+its -X- _ O
+crucial -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+maintaining -X- _ O
+sustained -X- _ O
+cellular -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+, -X- _ O
+resistance -X- _ O
+to -X- _ O
+cell -X- _ O
+death -X- _ O
+, -X- _ O
+angiogenesis -X- _ O
+, -X- _ O
+invasion -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+metastasis. -X- _ O
+Many -X- _ O
+FDA-approved -X- _ O
+drugs -X- _ O
+target -X- _ O
+upstream -X- _ O
+regulators -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+pathway -X- _ O
+, -X- _ O
+resulting -X- _ O
+in -X- _ O
+an -X- _ O
+indirect -X- _ O
+inhibition -X- _ O
+of -X- _ O
+ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+kinase -X- _ O
+[ -X- _ O
+74 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+signaling -X- _ O
+may -X- _ O
+be -X- _ O
+reactivated -X- _ O
+upon -X- _ O
+the -X- _ O
+development -X- _ O
+of -X- _ O
+drug -X- _ O
+resistance. -X- _ O
+Liu -X- _ O
+and -X- _ O
+colleagues -X- _ O
+have -X- _ O
+described -X- _ O
+10 -X- _ O
+small-molecule -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+of -X- _ O
+ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+which -X- _ O
+were -X- _ O
+developed -X- _ O
+recently -X- _ O
+and -X- _ O
+have -X- _ O
+undergone -X- _ O
+clinical -X- _ O
+trials -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ O
+patients -X- _ O
+[ -X- _ O
+75 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Some -X- _ O
+of -X- _ O
+them -X- _ O
+have -X- _ O
+shown -X- _ O
+promising -X- _ O
+results -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+treatment -X- _ O
+of -X- _ O
+cancers. -X- _ O
+Surprisingly -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+large -X- _ O
+body -X- _ O
+of -X- _ O
+evidence -X- _ O
+also -X- _ O
+indicates -X- _ O
+a -X- _ O
+contributing -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+activation -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cell -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+primarily -X- _ O
+induced -X- _ O
+by -X- _ O
+chemical -X- _ O
+compounds -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-TISSUE
+, -X- _ O
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+, -X- _ O
+breast -X- _ B-TISSUE
+, -X- _ O
+colon -X- _ B-TISSUE
+, -X- _ O
+endometrial -X- _ O
+, -X- _ O
+head -X- _ B-TISSUE
+and -X- _ O
+neck -X- _ B-TISSUE
+, -X- _ O
+lung -X- _ B-TISSUE
+, -X- _ O
+renal -X- _ B-CELL
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+, -X- _ O
+and -X- _ O
+testicular -X- _ B-CELL
+germ -X- _ I-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+carcinomas -X- _ O
+[ -X- _ O
+76,77,78,79,80,81,82,83,84,85 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+mechanically -X- _ O
+, -X- _ O
+through -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+caspase -X- _ O
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+and -X- _ O
+induction -X- _ O
+of -X- _ O
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+species. -X- _ O
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+and -X- _ O
+non-oncogene -X- _ O
+addiction -X- _ O
+have -X- _ O
+been -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+as -X- _ O
+fantastic -X- _ O
+targets -X- _ O
+for -X- _ O
+cancer -X- _ O
+therapy -X- _ B-CELL_LINE
+due -X- _ I-CELL_LINE
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+their -X- _ I-CELL_LINE
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+progression -X- _ I-CELL_LINE
+[ -X- _ I-CELL_LINE
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+] -X- _ I-CELL_LINE
+. -X- _ I-CELL_LINE
+Using -X- _ I-CELL_LINE
+a -X- _ I-CELL_LINE
+unique -X- _ I-CELL_LINE
+glioblastoma -X- _ I-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+model -X- _ I-CELL_LINE
+system -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+M059J -X- _ B-CELL_LINE
+with -X- _ O
+deficient -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+, -X- _ O
+while -X- _ O
+M059K -X- _ B-CELL_LINE
+with -X- _ O
+normal -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+demonstrate -X- _ O
+in -X- _ O
+vitro -X- _ O
+that -X- _ O
+MYT1L-overexpressing -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+show -X- _ O
+non-oncogene -X- _ O
+addiction -X- _ O
+to -X- _ O
+DNA-PK. -X- _ O
+Genomic -X- _ O
+instability -X- _ O
+due -X- _ O
+to -X- _ O
+defects -X- _ O
+in -X- _ O
+DNA -X- _ O
+repair -X- _ O
+genes -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+key -X- _ O
+hallmark -X- _ O
+of -X- _ O
+cancer -X- _ O
+that -X- _ O
+drives -X- _ O
+the -X- _ O
+development -X- _ O
+of -X- _ O
+human -X- _ O
+malignancies -X- _ O
+[ -X- _ O
+87 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+these -X- _ O
+defects -X- _ O
+may -X- _ O
+also -X- _ O
+offer -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+opportunities -X- _ O
+to -X- _ O
+evolve -X- _ O
+a -X- _ O
+dependency -X- _ O
+on -X- _ O
+a -X- _ O
+non-oncogene -X- _ O
+addiction -X- _ O
+gene. -X- _ O
+For -X- _ O
+instance -X- _ O
+, -X- _ O
+BRCA2-deficient -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+are -X- _ O
+more -X- _ O
+dependent -X- _ O
+on -X- _ O
+PARP1 -X- _ O
+to -X- _ O
+repair -X- _ O
+DNA -X- _ O
+for -X- _ O
+survival -X- _ O
+, -X- _ O
+resulting -X- _ O
+in -X- _ O
+an -X- _ O
+increased -X- _ O
+sensitivity -X- _ O
+to -X- _ O
+PARP1 -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+[ -X- _ O
+88 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+kill -X- _ O
+the -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+through -X- _ O
+the -X- _ O
+genetic -X- _ O
+concept -X- _ O
+of -X- _ O
+synthetic -X- _ O
+lethality -X- _ O
+[ -X- _ O
+89 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Targeting -X- _ O
+mediators -X- _ O
+of -X- _ O
+DNA -X- _ O
+repair -X- _ O
+has -X- _ O
+become -X- _ O
+a -X- _ O
+state-of-the-art -X- _ O
+strategy -X- _ O
+for -X- _ O
+cancer -X- _ O
+[ -X- _ O
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+, -X- _ O
+leading -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+development -X- _ O
+of -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+of -X- _ O
+key -X- _ O
+mediators -X- _ O
+of -X- _ O
+DNA -X- _ O
+repair -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+DNA-PK. -X- _ O
+Interestingly -X- _ O
+, -X- _ O
+genetic -X- _ O
+and -X- _ O
+pharmacological -X- _ O
+targeting -X- _ O
+of -X- _ O
+a -X- _ O
+strong -X- _ O
+non-oncogene -X- _ O
+addiction -X- _ O
+to -X- _ O
+DNA-PKcs -X- _ O
+( -X- _ O
+DNA-dependent -X- _ O
+protein -X- _ O
+kinase -X- _ O
+catalytic -X- _ O
+subunit -X- _ O
+) -X- _ O
+leads -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+accumulation -X- _ O
+of -X- _ O
+DNA -X- _ O
+double-strand -X- _ O
+breaks -X- _ O
+in -X- _ O
+ATM-defective -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+triggers -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+apoptosis -X- _ O
+via -X- _ O
+the -X- _ O
+proapoptotic -X- _ O
+signaling -X- _ O
+pathway -X- _ O
+[ -X- _ O
+91 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+These -X- _ O
+results -X- _ O
+are -X- _ O
+supported -X- _ O
+by -X- _ O
+our -X- _ O
+findings -X- _ O
+showing -X- _ O
+the -X- _ O
+dependence -X- _ O
+of -X- _ O
+MYT1L-overexpressing -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+on -X- _ O
+DNA-PK. -X- _ O
+VX-984 -X- _ O
+and -X- _ O
+M3814 -X- _ O
+are -X- _ O
+two -X- _ O
+selective -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+[ -X- _ O
+92,93 -X- _ O
+] -X- _ O
+that -X- _ O
+profoundly -X- _ O
+inhibit -X- _ O
+tumor -X- _ O
+growth -X- _ O
+in -X- _ O
+tumor -X- _ O
+xenograft -X- _ O
+models -X- _ O
+by -X- _ O
+enhancing -X- _ O
+radiotherapy. -X- _ O
+These -X- _ O
+two -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+are -X- _ O
+currently -X- _ O
+in -X- _ O
+ongoing -X- _ O
+clinical -X- _ O
+trials. -X- _ O
+The -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+/ -X- _ O
+MYT1L-CXCR1-ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+proliferative -X- _ O
+signaling -X- _ O
+loop -X- _ O
+we -X- _ O
+proposed -X- _ O
+here -X- _ O
+was -X- _ O
+primarily -X- _ O
+based -X- _ O
+on -X- _ O
+data -X- _ O
+obtained -X- _ O
+from -X- _ O
+glioblastoma -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+lines. -X- _ I-CELL
+It -X- _ O
+is -X- _ O
+interesting -X- _ O
+to -X- _ O
+look -X- _ O
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+DNA-PK -X- _ O
+, -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+phosphorylated -X- _ O
+ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
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+a -X- _ O
+large -X- _ O
+cohort -X- _ O
+of -X- _ O
+glioblastoma -X- _ O
+tissue -X- _ B-TISSUE
+samples -X- _ O
+and -X- _ O
+correlate -X- _ O
+the -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+these -X- _ O
+molecules -X- _ O
+to -X- _ O
+clinicopathological -X- _ O
+parameters -X- _ O
+of -X- _ O
+this -X- _ O
+disease. -X- _ O
+It -X- _ O
+is -X- _ O
+also -X- _ O
+interesting -X- _ O
+to -X- _ O
+look -X- _ O
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+effect -X- _ O
+of -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
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+growth -X- _ O
+in -X- _ O
+an -X- _ O
+in -X- _ O
+vivo -X- _ O
+tumor -X- _ O
+xenograft -X- _ O
+animal -X- _ O
+model -X- _ O
+using -X- _ O
+GFP- -X- _ O
+/ -X- _ O
+MYT1L-M059J -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+GFP- -X- _ O
+/ -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+M059K -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+further -X- _ O
+confirming -X- _ O
+our -X- _ O
+in -X- _ O
+vitro -X- _ O
+findings. -X- _ O
+4. -X- _ O
+materials -X- _ O
+and -X- _ O
+methods -X- _ O
+4.5. -X- _ O
+western -X- _ O
+blot -X- _ O
+analysis -X- _ O
+The -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+rinsed -X- _ O
+twice -X- _ O
+with -X- _ O
+ice-cold -X- _ O
+PBS -X- _ O
+and -X- _ O
+scraped -X- _ O
+off -X- _ O
+the -X- _ O
+plate -X- _ O
+in -X- _ O
+radioimmunoprecipitation -X- _ O
+assay -X- _ O
+buffer -X- _ O
+( -X- _ O
+RIPA -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+total -X- _ O
+protein -X- _ O
+lysate -X- _ O
+prepared -X- _ O
+from -X- _ O
+human -X- _ O
+adult -X- _ O
+brain -X- _ B-TISSUE
+normal -X- _ O
+tissues -X- _ B-TISSUE
+was -X- _ O
+purchased -X- _ O
+from -X- _ O
+BioChain -X- _ O
+( -X- _ O
+Newark -X- _ O
+, -X- _ O
+CA -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+served -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+normal -X- _ O
+control -X- _ O
+for -X- _ O
+human -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+lines. -X- _ I-CELL
+The -X- _ O
+whole -X- _ O
+cellular -X- _ O
+lysates -X- _ O
+( -X- _ O
+30–100 -X- _ O
+µg -X- _ O
+per -X- _ O
+sample -X- _ O
+) -X- _ O
+were -X- _ O
+electrophoresed -X- _ O
+via -X- _ O
+10 -X- _ O
+% -X- _ O
+SDS-PAGE -X- _ O
+and -X- _ O
+electrophoretically -X- _ O
+transferred -X- _ O
+to -X- _ O
+PVDF -X- _ O
+membranes -X- _ O
+( -X- _ O
+Amersham -X- _ O
+HybondTM-P -X- _ O
+, -X- _ O
+GE -X- _ O
+Healthcare -X- _ O
+, -X- _ O
+Chicago -X- _ O
+, -X- _ O
+IL -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+at -X- _ O
+4 -X- _ O
+°C -X- _ O
+for -X- _ O
+1.5 -X- _ O
+h. -X- _ O
+The -X- _ O
+blots -X- _ O
+were -X- _ O
+incubated -X- _ O
+for -X- _ O
+1 -X- _ O
+h -X- _ O
+with -X- _ O
+5 -X- _ O
+% -X- _ O
+nonfat -X- _ O
+dry -X- _ O
+milk -X- _ B-TISSUE
+to -X- _ O
+block -X- _ O
+the -X- _ O
+nonspecific -X- _ O
+binding -X- _ O
+sites -X- _ O
+and -X- _ O
+subsequently -X- _ O
+incubated -X- _ O
+with -X- _ O
+polyclonal -X- _ O
+/ -X- _ O
+monoclonal -X- _ O
+antibodies -X- _ O
+specific -X- _ O
+to -X- _ O
+MYT1L -X- _ O
+( -X- _ O
+Abnova -X- _ O
+, -X- _ O
+Taipei -X- _ O
+, -X- _ O
+China -X- _ O
+) -X- _ O
+or -X- _ O
+AKT1 -X- _ O
+( -X- _ O
+Abcam -X- _ O
+, -X- _ O
+Cambridge -X- _ O
+, -X- _ O
+GH -X- _ O
+, -X- _ O
+UK -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+CDK2 -X- _ O
+( -X- _ O
+Abcam -X- _ O
+, -X- _ O
+Cambridge -X- _ O
+, -X- _ O
+GH -X- _ O
+, -X- _ O
+UK -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+DNA-PKcs -X- _ O
+( -X- _ O
+Abcam -X- _ O
+, -X- _ O
+Cambridge -X- _ O
+, -X- _ O
+GH -X- _ O
+, -X- _ O
+UK -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+p21 -X- _ O
+( -X- _ O
+Abcam -X- _ O
+, -X- _ O
+Cambridge -X- _ O
+, -X- _ O
+GH -X- _ O
+, -X- _ O
+UK -X- _ O
+) -X- _ O
+or -X- _ O
+CDK4 -X- _ O
+( -X- _ O
+Cell -X- _ B-CELL
+Signaling -X- _ O
+Technology -X- _ O
+, -X- _ O
+Danvers -X- _ O
+, -X- _ O
+MA -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+CDK6 -X- _ O
+( -X- _ O
+Cell -X- _ B-CELL
+Signaling -X- _ O
+Technology -X- _ O
+, -X- _ O
+Danvers -X- _ O
+, -X- _ O
+MA -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+cyclin -X- _ O
+A2 -X- _ O
+( -X- _ O
+Cell -X- _ B-CELL
+Signaling -X- _ O
+Technology -X- _ O
+, -X- _ O
+Danvers -X- _ O
+, -X- _ O
+MA -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+cyclin -X- _ O
+D1 -X- _ O
+( -X- _ O
+Cell -X- _ B-CELL
+Signaling -X- _ O
+Technology -X- _ O
+, -X- _ O
+Danvers -X- _ O
+, -X- _ O
+MA -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+cyclin -X- _ O
+E1 -X- _ O
+( -X- _ O
+Cell -X- _ B-CELL
+Signaling -X- _ O
+Technology -X- _ O
+, -X- _ O
+Danvers -X- _ O
+, -X- _ O
+MA -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+( -X- _ O
+Cell -X- _ B-CELL
+Signaling -X- _ O
+Technology -X- _ O
+, -X- _ O
+Danvers -X- _ O
+, -X- _ O
+MA -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+p27 -X- _ O
+( -X- _ O
+Cell -X- _ B-CELL
+Signaling -X- _ O
+Technology -X- _ O
+, -X- _ O
+Danvers -X- _ O
+, -X- _ O
+MA -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+pERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+( -X- _ O
+Cell -X- _ B-CELL
+Signaling -X- _ O
+Technology -X- _ O
+, -X- _ O
+Danvers -X- _ O
+, -X- _ O
+MA -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+or -X- _ O
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+( -X- _ O
+Santa -X- _ O
+Cruz -X- _ O
+Biotechnology -X- _ O
+, -X- _ O
+Dallas -X- _ O
+, -X- _ O
+TX -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+BCL2 -X- _ O
+( -X- _ O
+Santa -X- _ O
+Cruz -X- _ O
+Biotechnology -X- _ O
+, -X- _ O
+Dallas -X- _ O
+, -X- _ O
+TX -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
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+( -X- _ O
+Santa -X- _ O
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+Biotechnology -X- _ O
+, -X- _ O
+Dallas -X- _ O
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+TX -X- _ O
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+) -X- _ O
+, -X- _ O
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+( -X- _ O
+Santa -X- _ O
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+Biotechnology -X- _ O
+, -X- _ O
+Dallas -X- _ O
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+TX -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
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+( -X- _ O
+Santa -X- _ O
+Cruz -X- _ O
+Biotechnology -X- _ O
+, -X- _ O
+Dallas -X- _ O
+, -X- _ O
+TX -X- _ O
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+USA -X- _ O
+) -X- _ O
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+or -X- _ O
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+) -X- _ O
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+Detection -X- _ O
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+Santa -X- _ O
+Cruz -X- _ O
+Biotechnology -X- _ O
+, -X- _ O
+Dallas -X- _ O
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+TX -X- _ O
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+USA -X- _ O
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+analysis -X- _ O
+The -X- _ O
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+t-test -X- _ O
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+to -X- _ O
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+was -X- _ O
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+, -X- _ O
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+other -X- _ O
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+in -X- _ O
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+A -X- _ O
+value -X- _ O
+of -X- _ O
+p -X- _ O
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+Conclusions*** -X- _ O
+This -X- _ O
+work -X- _ O
+, -X- _ O
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+the -X- _ O
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+, -X- _ O
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+CXCR1 -X- _ O
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+promotes -X- _ O
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+apoptosis -X- _ O
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+and -X- _ O
+shortens -X- _ O
+the -X- _ O
+S -X- _ O
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+in -X- _ O
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+a -X- _ O
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+MYT1L-CXCR1-ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
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+glioblastoma -X- _ B-CELL
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+and -X- _ O
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+have -X- _ O
+significant -X- _ O
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+can -X- _ O
+be -X- _ O
+extended -X- _ O
+by -X- _ O
+analyzing -X- _ O
+the -X- _ O
+effect -X- _ O
+of -X- _ O
+CXCR1 -X- _ O
+knockdown -X- _ O
+in -X- _ O
+M059J -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+with -X- _ O
+impaired -X- _ O
+DNA-PK. -X- _ O
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+to -X- _ O
+understand -X- _ O
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+between -X- _ O
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+Source -X- _ O
+paper -X- _ O
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+PMC12072392 -X- _ O
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+Methods -X- _ O
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+cells -X- _ I-CELL_LINE
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+µg -X- _ O
+/ -X- _ O
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+and -X- _ O
+a -X- _ O
+selectivity -X- _ O
+index -X- _ O
+( -X- _ O
+SI -X- _ O
+) -X- _ O
+of -X- _ O
+2.72 -X- _ O
+relative -X- _ O
+to -X- _ O
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+cells. -X- _ B-CELL
+Flow -X- _ O
+cytometry -X- _ O
+analysis -X- _ O
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+/ -X- _ O
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+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+arrest -X- _ O
+, -X- _ O
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+progression -X- _ O
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+S -X- _ O
+and -X- _ O
+G2 -X- _ O
+/ -X- _ O
+M -X- _ O
+phases. -X- _ O
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+, -X- _ O
+there -X- _ O
+was -X- _ O
+a -X- _ O
+significant -X- _ O
+increase -X- _ O
+in -X- _ O
+both -X- _ O
+early -X- _ O
+and -X- _ O
+late -X- _ O
+apoptotic -X- _ B-CELL_CONTEXT
+cell -X- _ B-CELL
+populations -X- _ O
+, -X- _ O
+correlating -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+upregulation -X- _ O
+of -X- _ O
+pro-apoptotic -X- _ O
+genes -X- _ O
+( -X- _ O
+Bax -X- _ O
+and -X- _ O
+p53 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+downregulation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
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+gene -X- _ O
+Bcl-2. -X- _ O
+The -X- _ O
+chemical -X- _ O
+analysis -X- _ O
+identified -X- _ O
+22 -X- _ O
+compounds -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+unsaponifiable -X- _ O
+fraction -X- _ O
+, -X- _ O
+chiefly -X- _ O
+terpenoids -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+phytol -X- _ O
+( -X- _ O
+65.74 -X- _ O
+% -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+saponifiable -X- _ O
+fraction -X- _ O
+presented -X- _ O
+a -X- _ O
+balanced -X- _ O
+composition -X- _ O
+of -X- _ O
+saturated -X- _ O
+( -X- _ O
+48.69 -X- _ O
+% -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+unsaturated -X- _ O
+( -X- _ O
+51.29 -X- _ O
+% -X- _ O
+) -X- _ O
+fatty -X- _ O
+acids -X- _ O
+, -X- _ O
+with -X- _ O
+palmitic -X- _ O
+acid -X- _ O
+, -X- _ O
+linolenic -X- _ O
+acid -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+linoleic -X- _ O
+acid -X- _ O
+as -X- _ O
+the -X- _ O
+predominant -X- _ O
+compounds. -X- _ O
+Conclusion -X- _ O
+While -X- _ O
+the -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction’s -X- _ O
+relatively -X- _ O
+high -X- _ O
+IC50 -X- _ O
+value -X- _ O
+may -X- _ O
+limit -X- _ O
+its -X- _ O
+utility -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+standalone -X- _ O
+treatment -X- _ O
+, -X- _ O
+its -X- _ O
+ability -X- _ O
+to -X- _ O
+induce -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+arrest -X- _ O
+and -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+demonstrates -X- _ O
+its -X- _ O
+promise -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+co-therapeutic -X- _ O
+agent -X- _ O
+with -X- _ O
+conventional -X- _ O
+anticancer -X- _ O
+drugs. -X- _ O
+Further -X- _ O
+research -X- _ O
+is -X- _ O
+essential -X- _ O
+to -X- _ O
+elucidate -X- _ O
+its -X- _ O
+precise -X- _ O
+mechanisms -X- _ O
+of -X- _ O
+action -X- _ O
+and -X- _ O
+to -X- _ O
+evaluate -X- _ O
+its -X- _ O
+efficacy -X- _ O
+in -X- _ O
+combination -X- _ O
+therapies -X- _ O
+, -X- _ O
+potentially -X- _ O
+advancing -X- _ O
+its -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+cervical -X- _ O
+cancer -X- _ O
+treatment. -X- _ O
+Methods -X- _ O
+Cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+analysis -X- _ O
+To -X- _ O
+assess -X- _ O
+the -X- _ O
+impact -X- _ O
+of -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+on -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+progression -X- _ O
+, -X- _ O
+propidium -X- _ O
+iodide -X- _ O
+( -X- _ O
+PI -X- _ O
+) -X- _ O
+staining -X- _ O
+followed -X- _ O
+by -X- _ O
+flow -X- _ O
+cytometry -X- _ O
+was -X- _ O
+employed -X- _ O
+as -X- _ O
+outlined -X- _ O
+previously -X- _ O
+[ -X- _ O
+17 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+PI -X- _ O
+( -X- _ O
+Company -X- _ O
+) -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+fluorescent -X- _ O
+dye -X- _ O
+that -X- _ O
+binds -X- _ O
+to -X- _ O
+DNA -X- _ O
+allowing -X- _ O
+differentiation -X- _ O
+of -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+phases -X- _ O
+( -X- _ O
+G0 -X- _ O
+/ -X- _ O
+G1 -X- _ O
+, -X- _ O
+S -X- _ O
+, -X- _ O
+G2 -X- _ O
+/ -X- _ O
+M -X- _ O
+) -X- _ O
+based -X- _ O
+on -X- _ O
+their -X- _ O
+DNA -X- _ O
+content. -X- _ O
+Briefly -X- _ O
+, -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+( -X- _ O
+2 -X- _ O
+× -X- _ O
+105 -X- _ O
+cells -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+) -X- _ O
+were -X- _ O
+cultured -X- _ O
+overnight -X- _ O
+and -X- _ O
+then -X- _ O
+treated -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+at -X- _ O
+its -X- _ O
+IC50 -X- _ O
+concentration -X- _ O
+( -X- _ O
+135.6 -X- _ O
+µg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+) -X- _ O
+for -X- _ O
+24 -X- _ O
+h. -X- _ O
+After -X- _ O
+treatment -X- _ O
+, -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+fixed -X- _ O
+, -X- _ O
+stained -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+PI -X- _ O
+/ -X- _ O
+RNase -X- _ O
+solution -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+analyzed -X- _ O
+using -X- _ O
+a -X- _ O
+FACSCalibur -X- _ O
+Scan -X- _ O
+flow -X- _ O
+cytometer -X- _ O
+( -X- _ O
+BD -X- _ O
+Biosciences -X- _ O
+) -X- _ O
+to -X- _ O
+determine -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+distribution. -X- _ O
+Apoptosis -X- _ O
+analysis -X- _ O
+using -X- _ O
+annexin -X- _ O
+v-fitc -X- _ O
+/ -X- _ O
+pi -X- _ O
+assay -X- _ O
+To -X- _ O
+determine -X- _ O
+the -X- _ O
+mode -X- _ O
+of -X- _ O
+cell -X- _ O
+death -X- _ O
+induced -X- _ O
+by -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+Annexin -X- _ O
+V-FITC -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+detection -X- _ O
+kit -X- _ O
+( -X- _ O
+BioVision -X- _ O
+Inc. -X- _ O
+, -X- _ O
+CA -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+, -X- _ O
+K101-25 -X- _ O
+) -X- _ O
+was -X- _ O
+used -X- _ O
+following -X- _ O
+the -X- _ O
+manufacturer’s -X- _ O
+protocol. -X- _ O
+This -X- _ O
+assay -X- _ O
+detects -X- _ O
+phosphatidylserine -X- _ O
+translocation -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+hallmark -X- _ O
+of -X- _ O
+early -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+, -X- _ O
+by -X- _ O
+Annexin -X- _ O
+V-FITC -X- _ O
+staining. -X- _ O
+PI -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+viability -X- _ O
+dye -X- _ O
+excluded -X- _ O
+by -X- _ O
+healthy -X- _ O
+and -X- _ O
+early -X- _ B-CELL_CONTEXT
+apoptotic -X- _ I-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+with -X- _ O
+intact -X- _ O
+membranes -X- _ O
+, -X- _ O
+stains -X- _ O
+the -X- _ O
+DNA -X- _ O
+of -X- _ O
+late -X- _ B-CELL_CONTEXT
+apoptotic -X- _ I-CELL_CONTEXT
+and -X- _ O
+necrotic -X- _ B-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+with -X- _ O
+compromised -X- _ O
+membranes -X- _ O
+, -X- _ O
+allowing -X- _ O
+for -X- _ O
+their -X- _ O
+identification. -X- _ O
+Briefly -X- _ O
+, -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+( -X- _ O
+2 -X- _ O
+× -X- _ O
+105 -X- _ O
+cells -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+) -X- _ O
+were -X- _ O
+cultured -X- _ O
+for -X- _ O
+24 -X- _ O
+h -X- _ O
+and -X- _ O
+treated -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+extract -X- _ O
+at -X- _ O
+its -X- _ O
+IC50 -X- _ O
+concentration -X- _ O
+( -X- _ O
+135.6 -X- _ O
+µg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+) -X- _ O
+for -X- _ O
+an -X- _ O
+additional -X- _ O
+48 -X- _ O
+h. -X- _ O
+Following -X- _ O
+treatment -X- _ O
+, -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+stained -X- _ O
+with -X- _ O
+Annexin -X- _ O
+V-FITC -X- _ O
+and -X- _ O
+PI. -X- _ O
+Apoptosis -X- _ O
+was -X- _ O
+quantified -X- _ O
+by -X- _ O
+flow -X- _ O
+cytometry -X- _ O
+using -X- _ O
+a -X- _ O
+BD -X- _ O
+FACSCalibur -X- _ O
+Scan -X- _ O
+system -X- _ O
+( -X- _ O
+BD -X- _ O
+Biosciences -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+For -X- _ O
+accurate -X- _ O
+quantification -X- _ O
+of -X- _ O
+apoptotic -X- _ O
+populations -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+specific -X- _ O
+gating -X- _ O
+strategy -X- _ O
+was -X- _ O
+applied. -X- _ O
+Cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+initially -X- _ O
+gated -X- _ O
+based -X- _ O
+on -X- _ O
+forward -X- _ O
+scatter -X- _ O
+( -X- _ O
+FSC -X- _ O
+) -X- _ O
+versus -X- _ O
+side -X- _ O
+scatter -X- _ O
+( -X- _ O
+SSC -X- _ O
+) -X- _ O
+to -X- _ O
+exclude -X- _ O
+debris -X- _ O
+, -X- _ O
+followed -X- _ O
+by -X- _ O
+gating -X- _ O
+on -X- _ O
+FSC-Height -X- _ O
+( -X- _ O
+FSC-H -X- _ O
+) -X- _ O
+versus -X- _ O
+FSC-Area -X- _ O
+( -X- _ O
+FSC-A -X- _ O
+) -X- _ O
+to -X- _ O
+exclude -X- _ O
+doublets. -X- _ O
+Apoptotic -X- _ O
+populations -X- _ O
+were -X- _ O
+classified -X- _ O
+by -X- _ O
+gating -X- _ O
+on -X- _ O
+Annexin -X- _ O
+V-FITC -X- _ O
+versus -X- _ O
+PI -X- _ O
+as -X- _ O
+follows -X- _ O
+: -X- _ O
+live -X- _ B-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+( -X- _ O
+Q4 -X- _ O
+) -X- _ O
+were -X- _ O
+Annexin -X- _ O
+V- -X- _ O
+/ -X- _ O
+PI- -X- _ O
+, -X- _ O
+early -X- _ B-CELL_CONTEXT
+apoptotic -X- _ I-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+( -X- _ O
+Q3 -X- _ O
+) -X- _ O
+were -X- _ O
+Annexin -X- _ O
+V+ -X- _ O
+/ -X- _ O
+PI- -X- _ O
+, -X- _ O
+late -X- _ B-CELL_CONTEXT
+apoptotic -X- _ I-CELL_CONTEXT
+/ -X- _ I-CELL_CONTEXT
+necrotic -X- _ I-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+( -X- _ O
+Q2 -X- _ O
+) -X- _ O
+were -X- _ O
+Annexin -X- _ O
+V+ -X- _ O
+/ -X- _ O
+PI+ -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+dead -X- _ B-CELL_CONTEXT
+/ -X- _ I-CELL_CONTEXT
+necrotic -X- _ I-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+( -X- _ O
+Q1 -X- _ O
+) -X- _ O
+were -X- _ O
+Annexin -X- _ O
+V- -X- _ O
+/ -X- _ O
+PI+. -X- _ O
+The -X- _ O
+percentage -X- _ O
+of -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+in -X- _ O
+each -X- _ O
+quadrant -X- _ O
+was -X- _ O
+calculated -X- _ O
+to -X- _ O
+assess -X- _ O
+the -X- _ O
+extent -X- _ O
+of -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+and -X- _ O
+necrosis. -X- _ O
+Statistical -X- _ O
+analysis -X- _ O
+Statistical -X- _ O
+analysis -X- _ O
+was -X- _ O
+performed -X- _ O
+using -X- _ O
+SPSS -X- _ O
+version -X- _ O
+24.0. -X- _ O
+Differences -X- _ O
+between -X- _ O
+the -X- _ O
+means -X- _ O
+of -X- _ O
+two -X- _ O
+independent -X- _ O
+groups -X- _ O
+were -X- _ O
+analyzed -X- _ O
+using -X- _ O
+an -X- _ O
+independent -X- _ O
+t-test -X- _ O
+, -X- _ O
+with -X- _ O
+p -X- _ O
+***Results*** -X- _ O
+Effect -X- _ O
+of -X- _ O
+a. -X- _ O
+incana -X- _ O
+dcm -X- _ O
+fraction -X- _ O
+on -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+analysis -X- _ O
+To -X- _ O
+investigate -X- _ O
+the -X- _ O
+effect -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+on -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+progression -X- _ O
+, -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+were -X- _ O
+treated -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+IC50 -X- _ O
+concentration -X- _ O
+( -X- _ O
+135.6 -X- _ O
+µg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+) -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+fraction -X- _ O
+for -X- _ O
+48 -X- _ O
+h. -X- _ O
+Cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+distribution -X- _ O
+was -X- _ O
+assessed -X- _ O
+by -X- _ O
+flow -X- _ O
+cytometry -X- _ O
+using -X- _ O
+Propidium -X- _ O
+Iodide -X- _ O
+( -X- _ O
+PI -X- _ O
+) -X- _ O
+staining -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+binds -X- _ O
+to -X- _ O
+DNA -X- _ O
+and -X- _ O
+allows -X- _ O
+differentiation -X- _ O
+of -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+phases -X- _ O
+( -X- _ O
+G0 -X- _ O
+/ -X- _ O
+G1 -X- _ O
+, -X- _ O
+S -X- _ O
+, -X- _ O
+G2 -X- _ O
+/ -X- _ O
+M -X- _ O
+) -X- _ O
+based -X- _ O
+on -X- _ O
+DNA -X- _ O
+content. -X- _ O
+As -X- _ O
+illustrated -X- _ O
+in -X- _ O
+Fig. -X- _ O
+2 -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+significant -X- _ O
+increase -X- _ O
+( -X- _ O
+p -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+exerts -X- _ O
+cytostatic -X- _ O
+effects -X- _ O
+on -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+by -X- _ O
+inducing -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+arrest. -X- _ O
+Fig. -X- _ O
+2Flow -X- _ O
+cytometric -X- _ O
+analysis -X- _ O
+of -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+distribution -X- _ O
+in -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+treated -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction. -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+were -X- _ O
+treated -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+IC50 -X- _ O
+concentration -X- _ O
+( -X- _ O
+135.6 -X- _ O
+µg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+) -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+for -X- _ O
+48 -X- _ O
+h -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+phase -X- _ O
+distribution -X- _ O
+was -X- _ O
+analyzed -X- _ O
+via -X- _ O
+flow -X- _ O
+cytometry. -X- _ O
+Panels -X- _ O
+: -X- _ O
+( -X- _ O
+a -X- _ O
+) -X- _ O
+Control -X- _ O
+( -X- _ O
+untreated -X- _ O
+) -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+( -X- _ O
+b -X- _ O
+) -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+treated -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+( -X- _ O
+c -X- _ O
+) -X- _ O
+A -X- _ O
+graphical -X- _ O
+comparison -X- _ O
+of -X- _ O
+cell -X- _ O
+percentages -X- _ O
+across -X- _ O
+each -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+phase -X- _ O
+between -X- _ O
+treated -X- _ O
+and -X- _ O
+untreated -X- _ O
+groups -X- _ O
+Discussion -X- _ O
+This -X- _ O
+study -X- _ O
+investigated -X- _ O
+the -X- _ O
+cytotoxic -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+from -X- _ O
+the -X- _ O
+leaves -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+medicinal -X- _ O
+plant -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana. -X- _ O
+Given -X- _ O
+the -X- _ O
+documented -X- _ O
+cytotoxic -X- _ O
+activity -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+DCM -X- _ O
+extract -X- _ O
+from -X- _ O
+the -X- _ O
+related -X- _ O
+subspecies -X- _ O
+A. -X- _ O
+rugosa -X- _ O
+[ -X- _ O
+8 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+hypothesized -X- _ O
+that -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+might -X- _ O
+exhibit -X- _ O
+similar -X- _ O
+effects. -X- _ O
+Although -X- _ O
+previous -X- _ O
+studies -X- _ O
+confirmed -X- _ O
+the -X- _ O
+cytotoxic -X- _ O
+properties -X- _ O
+of -X- _ O
+its -X- _ O
+methanol -X- _ O
+extract -X- _ O
+[ -X- _ O
+10 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+effects -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+remain -X- _ O
+unexamined. -X- _ O
+To -X- _ O
+address -X- _ O
+this -X- _ O
+gap -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+fraction’s -X- _ O
+cytotoxicity -X- _ O
+was -X- _ O
+evaluated -X- _ O
+against -X- _ O
+four -X- _ O
+human -X- _ O
+cancer -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+lines -X- _ I-CELL_LINE
+: -X- _ O
+HepG2 -X- _ B-CELL_LINE
+, -X- _ O
+HCT116 -X- _ B-CELL_LINE
+, -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+MCF-7 -X- _ B-CELL_LINE
+, -X- _ O
+representing -X- _ O
+diverse -X- _ O
+cancer -X- _ O
+types. -X- _ O
+The -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+IC50 -X- _ O
+values -X- _ O
+ranging -X- _ O
+from -X- _ O
+135.6 -X- _ O
+to -X- _ O
+273.1 -X- _ O
+µg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+, -X- _ O
+with -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+( -X- _ O
+a -X- _ O
+cervical -X- _ O
+cancer -X- _ O
+model -X- _ O
+) -X- _ O
+showing -X- _ O
+the -X- _ O
+highest -X- _ O
+sensitivity -X- _ O
+( -X- _ O
+IC50 -X- _ O
+= -X- _ O
+135.6 -X- _ O
+µg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Significantly -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+exhibited -X- _ O
+a -X- _ O
+selectivity -X- _ O
+index -X- _ O
+( -X- _ O
+SI -X- _ O
+) -X- _ O
+of -X- _ O
+2.72 -X- _ O
+against -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+indicating -X- _ O
+preferential -X- _ O
+cytotoxicity -X- _ O
+toward -X- _ O
+cancer -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+over -X- _ O
+normal -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+and -X- _ O
+highlighting -X- _ O
+its -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+potential. -X- _ O
+Although -X- _ O
+the -X- _ O
+IC50 -X- _ O
+values -X- _ O
+for -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+were -X- _ O
+higher -X- _ O
+than -X- _ O
+those -X- _ O
+reported -X- _ O
+for -X- _ O
+the -X- _ O
+DCM -X- _ O
+extract -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+related -X- _ O
+subspecies -X- _ O
+A. -X- _ O
+rugosa -X- _ O
+[ -X- _ O
+8 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+this -X- _ O
+difference -X- _ O
+may -X- _ O
+be -X- _ O
+attributed -X- _ O
+to -X- _ O
+variations -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+concentration -X- _ O
+or -X- _ O
+composition -X- _ O
+of -X- _ O
+active -X- _ O
+compounds -X- _ O
+in -X- _ O
+each -X- _ O
+extract. -X- _ O
+Despite -X- _ O
+this -X- _ O
+, -X- _ O
+both -X- _ O
+species -X- _ O
+showed -X- _ O
+their -X- _ O
+most -X- _ O
+potent -X- _ O
+cytotoxic -X- _ O
+effects -X- _ O
+against -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+a -X- _ O
+potential -X- _ O
+shared -X- _ O
+mechanism -X- _ O
+targeting -X- _ O
+cervical -X- _ B-CELL
+cancer -X- _ I-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+specifically. -X- _ O
+Additionally -X- _ O
+, -X- _ O
+prior -X- _ O
+studies -X- _ O
+have -X- _ O
+reported -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+methanol -X- _ O
+extract -X- _ O
+of -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+leaves -X- _ O
+has -X- _ O
+a -X- _ O
+pronounced -X- _ O
+effect -X- _ O
+on -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+( -X- _ O
+IC50 -X- _ O
+of -X- _ O
+68.5 -X- _ O
+µg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+) -X- _ O
+[ -X- _ O
+10 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+selective -X- _ O
+cytotoxicity -X- _ O
+observed -X- _ O
+in -X- _ O
+both -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+and -X- _ O
+A. -X- _ O
+rugosa -X- _ O
+DCM -X- _ O
+extracts -X- _ O
+, -X- _ O
+alongside -X- _ O
+the -X- _ O
+methanol -X- _ O
+extract’s -X- _ O
+activity -X- _ O
+, -X- _ O
+indicates -X- _ O
+the -X- _ O
+presence -X- _ O
+of -X- _ O
+bioactive -X- _ O
+compounds -X- _ O
+within -X- _ O
+these -X- _ O
+species -X- _ O
+that -X- _ O
+may -X- _ O
+preferentially -X- _ O
+disrupt -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+function. -X- _ O
+This -X- _ O
+selective -X- _ O
+activity -X- _ O
+underscores -X- _ O
+the -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+Alnus -X- _ O
+species -X- _ O
+as -X- _ O
+promising -X- _ O
+candidates -X- _ O
+for -X- _ O
+developing -X- _ O
+targeted -X- _ O
+therapies -X- _ O
+against -X- _ O
+gynecological -X- _ O
+cancers -X- _ O
+, -X- _ O
+particularly -X- _ O
+cervical -X- _ O
+cancer. -X- _ O
+Given -X- _ O
+the -X- _ O
+substantial -X- _ O
+cytotoxic -X- _ O
+response -X- _ O
+observed -X- _ O
+, -X- _ O
+further -X- _ O
+investigation -X- _ O
+into -X- _ O
+the -X- _ O
+active -X- _ O
+compounds -X- _ O
+and -X- _ O
+mechanisms -X- _ O
+of -X- _ O
+action -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+of -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+leaves -X- _ O
+is -X- _ O
+warranted. -X- _ O
+To -X- _ O
+explore -X- _ O
+the -X- _ O
+mechanisms -X- _ O
+underlying -X- _ O
+this -X- _ O
+cytotoxicity -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+investigated -X- _ O
+the -X- _ O
+effects -X- _ O
+of -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+DCM -X- _ O
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+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
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+and -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
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+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cells. -X- _ I-CELL_LINE
+The -X- _ O
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+significant -X- _ O
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+the -X- _ O
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+cycle -X- _ O
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+This -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
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+finding -X- _ O
+science -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+arrest -X- _ O
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+key -X- _ O
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+is -X- _ O
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+cancer -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+proliferation. -X- _ O
+The -X- _ O
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+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+comprises -X- _ O
+four -X- _ O
+distinct -X- _ O
+phases -X- _ O
+: -X- _ O
+G1 -X- _ O
+, -X- _ O
+S -X- _ O
+, -X- _ O
+G2 -X- _ O
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+and -X- _ O
+M -X- _ O
+, -X- _ O
+where -X- _ O
+RNA -X- _ O
+and -X- _ O
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+G1 -X- _ O
+and -X- _ O
+G2 -X- _ O
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+in -X- _ O
+S -X- _ O
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+and -X- _ O
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+in -X- _ O
+M -X- _ O
+[ -X- _ O
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+By -X- _ O
+halting -X- _ O
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+the -X- _ O
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+the -X- _ O
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+synthesis -X- _ O
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+cell -X- _ O
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+agents -X- _ O
+, -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+taxanes -X- _ O
+and -X- _ O
+vinca -X- _ O
+alkaloids -X- _ O
+, -X- _ O
+function -X- _ O
+by -X- _ O
+disrupting -X- _ O
+key -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+regulators -X- _ O
+[ -X- _ O
+19 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+addition -X- _ O
+to -X- _ O
+inducing -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+arrest -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+significantly -X- _ O
+promoted -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
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+mechanism -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ O
+treatment. -X- _ O
+Apoptosis -X- _ O
+, -X- _ O
+or -X- _ O
+programmed -X- _ O
+cell -X- _ O
+death -X- _ O
+, -X- _ O
+is -X- _ O
+triggered -X- _ O
+by -X- _ O
+many -X- _ O
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+cytotoxic -X- _ O
+agents -X- _ O
+, -X- _ O
+both -X- _ O
+clinically -X- _ O
+approved -X- _ O
+and -X- _ O
+experimental -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+is -X- _ O
+essential -X- _ O
+for -X- _ O
+eliminating -X- _ O
+cancer -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+[ -X- _ O
+20 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Flow -X- _ O
+cytometric -X- _ O
+analysis -X- _ O
+using -X- _ O
+Annexin -X- _ O
+V -X- _ O
+and -X- _ O
+propidium -X- _ O
+iodide -X- _ O
+staining -X- _ O
+revealed -X- _ O
+a -X- _ O
+marked -X- _ O
+increase -X- _ O
+in -X- _ O
+apoptotic -X- _ O
+cell -X- _ O
+death -X- _ O
+( -X- _ O
+40.67-fold -X- _ O
+increase -X- _ O
+, -X- _ O
+18.71 -X- _ O
+% -X- _ O
+vs. -X- _ O
+0.46 -X- _ O
+% -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+control -X- _ O
+) -X- _ O
+induced -X- _ O
+by -X- _ O
+the -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction. -X- _ O
+Early -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+rose -X- _ O
+to -X- _ O
+14.32 -X- _ O
+% -X- _ O
+from -X- _ O
+0.37 -X- _ O
+% -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+late -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+increased -X- _ O
+to -X- _ O
+4.39 -X- _ O
+% -X- _ O
+from -X- _ O
+0.09 -X- _ O
+% -X- _ O
+. -X- _ O
+Necrosis -X- _ O
+also -X- _ O
+increased -X- _ O
+by -X- _ O
+2.5-fold -X- _ O
+( -X- _ O
+2.84 -X- _ O
+% -X- _ O
+vs. -X- _ O
+1.15 -X- _ O
+% -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+control -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+indicating -X- _ O
+a -X- _ O
+broad -X- _ O
+cytotoxic -X- _ O
+effect -X- _ O
+on -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ B-CELL
+These -X- _ O
+findings -X- _ O
+reinforce -X- _ O
+the -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+as -X- _ O
+an -X- _ O
+effective -X- _ O
+anticancer -X- _ O
+agent -X- _ O
+by -X- _ O
+simultaneously -X- _ O
+inducing -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+arrest -X- _ O
+and -X- _ O
+apoptosis. -X- _ O
+To -X- _ O
+elucidate -X- _ O
+the -X- _ O
+molecular -X- _ O
+mechanisms -X- _ O
+behind -X- _ O
+these -X- _ O
+effects -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+evaluated -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+apoptotic -X- _ O
+regulators -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+p53 -X- _ O
+, -X- _ O
+Bcl-2 -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+Bax -X- _ O
+, -X- _ O
+through -X- _ O
+RT-PCR. -X- _ O
+The -X- _ O
+intrinsic -X- _ O
+apoptotic -X- _ O
+pathway -X- _ O
+is -X- _ O
+regulated -X- _ O
+by -X- _ O
+the -X- _ O
+balance -X- _ O
+between -X- _ O
+pro-apoptotic -X- _ O
+Bax -X- _ O
+and -X- _ O
+anti-apoptotic -X- _ O
+Bcl-2 -X- _ O
+, -X- _ O
+where -X- _ O
+Bcl-2 -X- _ O
+stabilizes -X- _ O
+the -X- _ O
+mitochondrial -X- _ O
+membrane -X- _ O
+and -X- _ O
+prevents -X- _ O
+cytochrome -X- _ O
+c -X- _ O
+release -X- _ O
+, -X- _ O
+whereas -X- _ O
+Bax -X- _ O
+promotes -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+by -X- _ O
+facilitating -X- _ O
+cytochrome -X- _ O
+c -X- _ O
+release -X- _ O
+[ -X- _ O
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+] -X- _ O
+. -X- _ O
+p53 -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+critical -X- _ O
+tumor -X- _ O
+suppressor -X- _ O
+, -X- _ O
+enhances -X- _ O
+Bax -X- _ O
+expression -X- _ O
+, -X- _ O
+thus -X- _ O
+its -X- _ O
+stimulation -X- _ O
+tipping -X- _ O
+the -X- _ O
+balance -X- _ O
+towards -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+[ -X- _ O
+22 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+our -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+significantly -X- _ O
+upregulated -X- _ O
+Bax -X- _ O
+and -X- _ O
+p53 -X- _ O
+while -X- _ O
+downregulating -X- _ O
+Bcl-2 -X- _ O
+, -X- _ O
+resulting -X- _ O
+in -X- _ O
+an -X- _ O
+elevated -X- _ O
+Bax -X- _ O
+/ -X- _ O
+Bcl-2 -X- _ O
+ratio -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+key -X- _ O
+indicator -X- _ O
+of -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+activation. -X- _ O
+Previous -X- _ O
+research -X- _ O
+reported -X- _ O
+that -X- _ O
+elevated -X- _ O
+p53 -X- _ O
+expression -X- _ O
+and -X- _ O
+a -X- _ O
+higher -X- _ O
+Bax -X- _ O
+/ -X- _ O
+Bcl-2 -X- _ O
+ratio -X- _ O
+correlate -X- _ O
+with -X- _ O
+increased -X- _ O
+tumor -X- _ O
+sensitivity -X- _ O
+to -X- _ O
+anticancer -X- _ O
+therapies -X- _ O
+[ -X- _ O
+23 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+further -X- _ O
+supporting -X- _ O
+the -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+agent. -X- _ O
+Given -X- _ O
+these -X- _ O
+findings -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+is -X- _ O
+essential -X- _ O
+to -X- _ O
+contextualize -X- _ O
+the -X- _ O
+anticancer -X- _ O
+activity -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+by -X- _ O
+comparing -X- _ O
+it -X- _ O
+to -X- _ O
+established -X- _ O
+cervical -X- _ O
+cancer -X- _ O
+treatments -X- _ O
+, -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+cisplatin -X- _ O
+and -X- _ O
+paclitaxel. -X- _ O
+Cisplatin -X- _ O
+exerts -X- _ O
+its -X- _ O
+cytotoxic -X- _ O
+effects -X- _ O
+primarily -X- _ O
+through -X- _ O
+DNA -X- _ O
+cross-linking -X- _ O
+, -X- _ O
+causing -X- _ O
+extensive -X- _ O
+DNA -X- _ O
+damage -X- _ O
+that -X- _ O
+leads -X- _ O
+predominantly -X- _ O
+to -X- _ O
+G2 -X- _ O
+/ -X- _ O
+M -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+arrest -X- _ O
+and -X- _ O
+subsequent -X- _ O
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+induction -X- _ O
+mainly -X- _ O
+via -X- _ O
+p53-dependent -X- _ O
+pathways -X- _ O
+[ -X- _ O
+24 -X- _ O
+, -X- _ O
+25 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Despite -X- _ O
+its -X- _ O
+efficacy -X- _ O
+, -X- _ O
+cisplatin -X- _ O
+is -X- _ O
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+by -X- _ O
+severe -X- _ O
+adverse -X- _ O
+effects -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+nephrotoxicity -X- _ O
+, -X- _ O
+neurotoxicity -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+drug -X- _ O
+resistance -X- _ O
+[ -X- _ O
+25 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Paclitaxel -X- _ O
+, -X- _ O
+another -X- _ O
+cornerstone -X- _ O
+treatment -X- _ O
+, -X- _ O
+acts -X- _ O
+by -X- _ O
+stabilizing -X- _ O
+microtubules -X- _ O
+, -X- _ O
+causing -X- _ O
+prolonged -X- _ O
+G2 -X- _ O
+/ -X- _ O
+M -X- _ O
+mitotic -X- _ O
+arrest -X- _ O
+and -X- _ O
+promoting -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+through -X- _ O
+a -X- _ O
+p53-independent -X- _ O
+pathway -X- _ O
+involving -X- _ O
+cyclin -X- _ O
+B1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+CDC2 -X- _ O
+activation -X- _ O
+and -X- _ O
+Bcl-2 -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+[ -X- _ O
+24 -X- _ O
+, -X- _ O
+26 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+paclitaxel -X- _ O
+similarly -X- _ O
+has -X- _ O
+clinical -X- _ O
+limitations -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+dose-dependent -X- _ O
+toxicities -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+peripheral -X- _ O
+neuropathy -X- _ O
+and -X- _ O
+myelosuppression -X- _ O
+[ -X- _ O
+27 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+contrast -X- _ O
+, -X- _ O
+our -X- _ O
+findings -X- _ O
+demonstrate -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+distinctly -X- _ O
+arrests -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+G0 -X- _ O
+/ -X- _ O
+G1 -X- _ O
+phase -X- _ O
+and -X- _ O
+promotes -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+via -X- _ O
+a -X- _ O
+p53-dependent -X- _ O
+pathway. -X- _ O
+These -X- _ O
+unique -X- _ O
+molecular -X- _ O
+characteristics -X- _ O
+suggest -X- _ O
+a -X- _ O
+complementary -X- _ O
+role -X- _ O
+alongside -X- _ O
+traditional -X- _ O
+chemotherapeutics -X- _ O
+, -X- _ O
+potentially -X- _ O
+reducing -X- _ O
+toxicities -X- _ O
+and -X- _ O
+overcoming -X- _ O
+drug -X- _ O
+resistance -X- _ O
+, -X- _ O
+despite -X- _ O
+its -X- _ O
+relatively -X- _ O
+high -X- _ O
+IC50. -X- _ O
+The -X- _ O
+chemical -X- _ O
+profile -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+, -X- _ O
+analyzed -X- _ O
+via -X- _ O
+GC-MS -X- _ O
+/ -X- _ O
+FID -X- _ O
+detection -X- _ O
+, -X- _ O
+revealed -X- _ O
+a -X- _ O
+high -X- _ O
+content -X- _ O
+of -X- _ O
+phytol -X- _ O
+( -X- _ O
+65.74 -X- _ O
+% -X- _ O
+) -X- _ O
+in -X- _ O
+unsaponifiable -X- _ O
+matter -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+compound -X- _ O
+known -X- _ O
+for -X- _ O
+its -X- _ O
+broad-spectrum -X- _ O
+biological -X- _ O
+activities -X- _ O
+, -X- _ O
+particularly -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ O
+therapy. -X- _ O
+Phytol -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+diterpenoid -X- _ O
+derived -X- _ O
+from -X- _ O
+chlorophyll -X- _ O
+, -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+widely -X- _ O
+recognized -X- _ O
+for -X- _ O
+its -X- _ O
+anti-inflammatory -X- _ O
+and -X- _ O
+anticancer -X- _ O
+properties -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+the -X- _ O
+modulation -X- _ O
+of -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+and -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+pathways -X- _ O
+[ -X- _ O
+28 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Previous -X- _ O
+studies -X- _ O
+have -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+its -X- _ O
+ability -X- _ O
+to -X- _ O
+induce -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+across -X- _ O
+various -X- _ O
+cancer -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+lines -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+lung -X- _ B-TISSUE
+, -X- _ O
+colon -X- _ B-TISSUE
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+breast -X- _ B-TISSUE
+cancers -X- _ O
+, -X- _ O
+primarily -X- _ O
+through -X- _ O
+the -X- _ O
+disruption -X- _ O
+of -X- _ O
+mitochondrial -X- _ O
+membrane -X- _ O
+potential -X- _ O
+and -X- _ O
+subsequent -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+intrinsic -X- _ O
+apoptotic -X- _ O
+pathway -X- _ O
+[ -X- _ O
+28 -X- _ O
+, -X- _ O
+29 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Our -X- _ O
+findings -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+show -X- _ O
+significant -X- _ O
+G0 -X- _ O
+/ -X- _ O
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+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
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+and -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+in -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+align -X- _ O
+with -X- _ O
+these -X- _ O
+established -X- _ O
+mechanisms -X- _ O
+of -X- _ O
+action -X- _ O
+, -X- _ O
+further -X- _ O
+validating -X- _ O
+phytol’s -X- _ O
+role -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+potent -X- _ O
+anticancer -X- _ O
+agent. -X- _ O
+In -X- _ O
+addition -X- _ O
+to -X- _ O
+phytol -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+saponifiable -X- _ O
+matter -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+contained -X- _ O
+palmitic -X- _ O
+acid -X- _ O
+( -X- _ O
+31.27 -X- _ O
+% -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+linolenic -X- _ O
+acid -X- _ O
+( -X- _ O
+26.98 -X- _ O
+% -X- _ O
+) -X- _ O
+as -X- _ O
+the -X- _ O
+major -X- _ O
+components. -X- _ O
+Both -X- _ O
+fatty -X- _ O
+acids -X- _ O
+are -X- _ O
+well-documented -X- _ O
+for -X- _ O
+their -X- _ O
+apoptosis-inducing -X- _ O
+capabilities. -X- _ O
+Palmitic -X- _ O
+acid -X- _ O
+, -X- _ O
+for -X- _ O
+instance -X- _ O
+, -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+reported -X- _ O
+to -X- _ O
+upregulate -X- _ O
+pro-apoptotic -X- _ O
+proteins -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+Bax -X- _ O
+and -X- _ O
+p53 -X- _ O
+, -X- _ O
+while -X- _ O
+downregulating -X- _ O
+anti-apoptotic -X- _ O
+Bcl-2 -X- _ O
+, -X- _ O
+leading -X- _ O
+to -X- _ O
+enhanced -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+via -X- _ O
+caspase -X- _ O
+activation -X- _ O
+in -X- _ O
+colorectal -X- _ B-TISSUE
+and -X- _ O
+breast -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ O
+models -X- _ O
+[ -X- _ O
+30 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Similarly -X- _ O
+, -X- _ O
+linolenic -X- _ O
+acid -X- _ O
+exerts -X- _ O
+anticancer -X- _ O
+effects -X- _ O
+by -X- _ O
+modulating -X- _ O
+the -X- _ O
+Bcl-2 -X- _ O
+family -X- _ O
+proteins -X- _ O
+, -X- _ O
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+pro-apoptotic -X- _ O
+Bax -X- _ O
+expression -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+inducing -X- _ O
+endoplasmic -X- _ O
+reticulum -X- _ O
+( -X- _ O
+ER -X- _ O
+) -X- _ O
+stress -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+contributes -X- _ O
+to -X- _ O
+cancer -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+death. -X- _ O
+Linolenic -X- _ O
+acid -X- _ O
+has -X- _ O
+also -X- _ O
+been -X- _ O
+shown -X- _ O
+to -X- _ O
+inhibit -X- _ O
+the -X- _ O
+PI3K -X- _ O
+/ -X- _ O
+Akt -X- _ O
+signaling -X- _ O
+pathway -X- _ O
+and -X- _ O
+suppress -X- _ O
+fatty -X- _ O
+acid -X- _ O
+synthase -X- _ O
+( -X- _ O
+FASN -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+an -X- _ O
+enzyme -X- _ O
+overexpressed -X- _ O
+in -X- _ O
+many -X- _ O
+cancers -X- _ O
+[ -X- _ O
+31 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Our -X- _ O
+study’s -X- _ O
+findings -X- _ O
+of -X- _ O
+increased -X- _ O
+Bax -X- _ O
+expression -X- _ O
+and -X- _ O
+a -X- _ O
+heightened -X- _ O
+Bax -X- _ O
+/ -X- _ O
+Bcl-2 -X- _ O
+ratio -X- _ O
+in -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+are -X- _ O
+consistent -X- _ O
+with -X- _ O
+these -X- _ O
+mechanisms -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+that -X- _ O
+palmitic -X- _ O
+and -X- _ O
+linolenic -X- _ O
+acids -X- _ O
+likely -X- _ O
+contribute -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+cytotoxic -X- _ O
+effects -X- _ O
+observed. -X- _ O
+Despite -X- _ O
+these -X- _ O
+promising -X- _ O
+results -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+study -X- _ O
+possesses -X- _ O
+limitations -X- _ O
+typical -X- _ O
+of -X- _ O
+in -X- _ O
+vitro -X- _ O
+investigations. -X- _ O
+Notably -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+biological -X- _ O
+complexity -X- _ O
+of -X- _ O
+tumor -X- _ O
+microenvironments -X- _ O
+, -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+variability -X- _ O
+, -X- _ O
+signaling -X- _ O
+heterogeneity -X- _ O
+, -X- _ O
+immune -X- _ O
+interactions -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+stromal -X- _ O
+influences -X- _ O
+, -X- _ O
+can -X- _ O
+not -X- _ O
+be -X- _ O
+adequately -X- _ O
+mimicked -X- _ O
+using -X- _ O
+isolated -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL_LINE
+lines -X- _ I-CELL_LINE
+like -X- _ O
+HeLa. -X- _ B-CELL_LINE
+Additionally -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+relatively -X- _ O
+high -X- _ O
+IC50 -X- _ O
+necessitates -X- _ O
+exploration -X- _ O
+of -X- _ O
+advanced -X- _ O
+drug -X- _ O
+delivery -X- _ O
+systems -X- _ O
+or -X- _ O
+combination -X- _ O
+therapies. -X- _ O
+Future -X- _ O
+research -X- _ O
+should -X- _ O
+incorporate -X- _ O
+additional -X- _ O
+cancer -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+lines -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+normal -X- _ O
+cell -X- _ O
+toxicity -X- _ O
+assessments -X- _ O
+, -X- _ O
+patient-derived -X- _ O
+xenografts -X- _ O
+( -X- _ O
+PDX -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+innovative -X- _ O
+delivery -X- _ O
+strategies -X- _ O
+, -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+nanoparticle -X- _ O
+encapsulation -X- _ O
+, -X- _ O
+to -X- _ O
+enhance -X- _ O
+efficacy -X- _ O
+, -X- _ O
+reduce -X- _ O
+toxicity -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+facilitate -X- _ O
+clinical -X- _ O
+translation. -X- _ O
+These -X- _ O
+steps -X- _ O
+are -X- _ O
+crucial -X- _ O
+for -X- _ O
+validating -X- _ O
+the -X- _ O
+preclinical -X- _ O
+promise -X- _ O
+and -X- _ O
+advancing -X- _ O
+the -X- _ O
+clinical -X- _ O
+applicability -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+Alnus -X- _ O
+incana -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction. -X- _ O
+Conclusion -X- _ O
+This -X- _ O
+study -X- _ O
+demonstrates -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+A. -X- _ O
+incana -X- _ O
+DCM -X- _ O
+fraction -X- _ O
+, -X- _ O
+rich -X- _ O
+in -X- _ O
+bioactive -X- _ O
+compounds -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+phytol -X- _ O
+, -X- _ O
+palmitic -X- _ O
+acid -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+linolenic -X- _ O
+acid -X- _ O
+, -X- _ O
+exerts -X- _ O
+notable -X- _ O
+cytotoxic -X- _ O
+effects -X- _ O
+on -X- _ O
+various -X- _ O
+cancer -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+lines -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+particularly -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cells. -X- _ I-CELL_LINE
+These -X- _ O
+effects -X- _ O
+are -X- _ O
+mediated -X- _ O
+through -X- _ O
+inducing -X- _ O
+G0 -X- _ O
+/ -X- _ O
+G1 -X- _ O
+cell -X- _ O
+cycle -X- _ O
+arrest -X- _ O
+and -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+via -X- _ O
+modulation -X- _ O
+of -X- _ O
+Bax -X- _ O
+, -X- _ O
+Bcl-2 -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+p53 -X- _ O
+pathways. -X- _ O
+Although -X- _ O
+the -X- _ O
+relatively -X- _ O
+high -X- _ O
+IC50 -X- _ O
+value -X- _ O
+( -X- _ O
+135.6 -X- _ O
+µg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+) -X- _ O
+limits -X- _ O
+its -X- _ O
+potential -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+standalone -X- _ O
+therapy -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+fraction’s -X- _ O
+selective -X- _ O
+cytotoxicity -X- _ O
+toward -X- _ O
+cancer -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+suggests -X- _ O
+a -X- _ O
+potentially -X- _ O
+favorable -X- _ O
+safety -X- _ O
+profile. -X- _ O
+Its -X- _ O
+unique -X- _ O
+ability -X- _ O
+to -X- _ O
+activate -X- _ O
+apoptotic -X- _ O
+and -X- _ O
+cell-cycle -X- _ O
+arrest -X- _ O
+pathways -X- _ O
+supports -X- _ O
+its -X- _ O
+promise -X- _ O
+as -X- _ O
+an -X- _ O
+adjunctive -X- _ O
+therapy -X- _ O
+, -X- _ O
+particularly -X- _ O
+in -X- _ O
+combination -X- _ O
+with -X- _ O
+conventional -X- _ O
+chemotherapeutic -X- _ O
+agents -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+may -X- _ O
+improve -X- _ O
+treatment -X- _ O
+outcomes -X- _ O
+by -X- _ O
+reducing -X- _ O
+associated -X- _ O
+toxicities -X- _ O
+or -X- _ O
+overcoming -X- _ O
+resistance. -X- _ O
+Further -X- _ O
+in-depth -X- _ O
+mechanistic -X- _ O
+studies -X- _ O
+, -X- _ O
+along -X- _ O
+with -X- _ O
+rigorous -X- _ O
+in -X- _ O
+vivo -X- _ O
+evaluations -X- _ O
+using -X- _ O
+clinically -X- _ O
+relevant -X- _ O
+models -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+patient-derived -X- _ O
+xenografts -X- _ O
+, -X- _ O
+are -X- _ O
+essential -X- _ O
+to -X- _ O
+validate -X- _ O
+these -X- _ O
+promising -X- _ O
+findings -X- _ O
+and -X- _ O
+fully -X- _ O
+realize -X- _ O
+the -X- _ O
+clinical -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+this -X- _ O
+natural -X- _ O
+fraction. -X- _ O
+Source -X- _ O
+paper -X- _ O
+: -X- _ O
+PMC12105127 -X- _ O
+
+Introduction -X- _ O
+Hepatocellular -X- _ O
+carcinoma -X- _ O
+( -X- _ O
+HCC -X- _ O
+) -X- _ O
+is -X- _ O
+an -X- _ O
+exceedingly -X- _ O
+fatal -X- _ O
+malignancies -X- _ O
+, -X- _ O
+with -X- _ O
+mortalities -X- _ O
+that -X- _ O
+approximate -X- _ O
+the -X- _ O
+incidence -X- _ O
+rates -X- _ O
+worldwide -X- _ O
+[ -X- _ O
+1 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+HCC -X- _ O
+is -X- _ O
+usually -X- _ O
+diagnosed -X- _ O
+at -X- _ O
+advanced -X- _ O
+stages -X- _ O
+owing -X- _ O
+to -X- _ O
+late -X- _ O
+symptom -X- _ O
+manifestations -X- _ O
+with -X- _ O
+limited -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+options -X- _ O
+, -X- _ O
+leading -X- _ O
+to -X- _ O
+ineffective -X- _ O
+intervention -X- _ O
+and -X- _ O
+poor -X- _ O
+prognosis -X- _ O
+[ -X- _ O
+2 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+An -X- _ O
+increasing -X- _ O
+number -X- _ O
+of -X- _ O
+studies -X- _ O
+have -X- _ O
+focused -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+progression -X- _ O
+, -X- _ O
+pathological -X- _ O
+features -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+prognosis -X- _ O
+of -X- _ O
+liver -X- _ O
+cancer -X- _ O
+[ -X- _ O
+3–5 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+HCC -X- _ O
+epidemiology -X- _ O
+is -X- _ O
+rapidly -X- _ O
+evolving -X- _ O
+, -X- _ O
+one -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+most -X- _ O
+common -X- _ O
+causes -X- _ O
+is -X- _ O
+non-alcoholic -X- _ O
+fatty -X- _ O
+liver -X- _ O
+disease -X- _ O
+[ -X- _ O
+6 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+further -X- _ O
+proving -X- _ O
+that -X- _ O
+lipid -X- _ O
+metabolism -X- _ O
+plays -X- _ O
+a -X- _ O
+crucial -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+HCC -X- _ O
+occurrence. -X- _ O
+Therefore -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+identification -X- _ O
+of -X- _ O
+novel -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+targets -X- _ O
+is -X- _ O
+urgently -X- _ O
+needed -X- _ O
+to -X- _ O
+improve -X- _ O
+the -X- _ O
+treatment -X- _ O
+of -X- _ O
+patients -X- _ O
+with -X- _ O
+HCC -X- _ O
+[ -X- _ O
+7 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Phosphatidylethanolamine -X- _ O
+( -X- _ O
+PE -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+also -X- _ O
+known -X- _ O
+as -X- _ O
+cephalin -X- _ O
+, -X- _ O
+is -X- _ O
+the -X- _ O
+most -X- _ O
+abundant -X- _ O
+lipid -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+cytoplasmic -X- _ O
+layer -X- _ O
+of -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL_COMPONENT
+membranes -X- _ I-CELL_COMPONENT
+and -X- _ O
+is -X- _ O
+involved -X- _ O
+in -X- _ O
+cellular -X- _ O
+processes -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+membrane -X- _ O
+fusion -X- _ O
+[ -X- _ O
+8 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+autophagy -X- _ O
+and -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+[ -X- _ O
+9–11 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+For -X- _ O
+eukaryotic -X- _ O
+PE -X- _ O
+in -X- _ O
+vivo -X- _ O
+, -X- _ O
+two -X- _ O
+main -X- _ O
+synthetic -X- _ O
+pathways -X- _ O
+exist -X- _ O
+[ -X- _ O
+12 -X- _ O
+] -X- _ O
+: -X- _ O
+including -X- _ O
+the -X- _ O
+Kennedy -X- _ O
+pathway -X- _ O
+of -X- _ O
+CDP-ethanolamine -X- _ O
+( -X- _ O
+CDP-Etn -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+mitochondrial -X- _ O
+phosphatidylserine -X- _ O
+decarboxylation -X- _ O
+pathway -X- _ O
+[ -X- _ O
+13 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Phosphatidylethanolamine -X- _ O
+cytidyltransferase -X- _ O
+2 -X- _ O
+( -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+) -X- _ O
+is -X- _ O
+the -X- _ O
+rate-limiting -X- _ O
+enzyme -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+CDP-Etn -X- _ O
+pathway. -X- _ O
+Previous -X- _ O
+studies -X- _ O
+have -X- _ O
+shown -X- _ O
+that -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+is -X- _ O
+highly -X- _ O
+specific -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+is -X- _ O
+present -X- _ O
+only -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+rough -X- _ B-CELL_COMPONENT
+endoplasmic -X- _ I-CELL_COMPONENT
+reticulum -X- _ I-CELL_COMPONENT
+of -X- _ O
+eukaryotes -X- _ O
+[ -X- _ O
+14 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+P-Eth -X- _ O
+is -X- _ O
+then -X- _ O
+catalyzed -X- _ O
+by -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+to -X- _ O
+form -X- _ O
+CDP-Etn -X- _ O
+, -X- _ O
+leading -X- _ O
+to -X- _ O
+PE -X- _ O
+synthesis -X- _ O
+[ -X- _ O
+15 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Generally -X- _ O
+, -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+expression -X- _ O
+is -X- _ O
+reduced -X- _ O
+in -X- _ O
+various -X- _ O
+epithelial-derived -X- _ O
+cancer -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+lines -X- _ I-CELL_LINE
+compared -X- _ O
+to -X- _ O
+normal -X- _ B-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+[ -X- _ O
+16,17 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Compared -X- _ O
+epithelial-derived -X- _ O
+cancer -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+lines -X- _ I-CELL_LINE
+PCYT2 -X- _ O
+activity -X- _ O
+with -X- _ O
+that -X- _ O
+of -X- _ O
+breast -X- _ B-CELL_LINE
+epithelial -X- _ I-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+MCF-10A -X- _ B-CELL_LINE
+showed -X- _ O
+that -X- _ O
+its -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+activity -X- _ O
+was -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+in -X- _ O
+breast -X- _ B-CELL_LINE
+cancer -X- _ I-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+( -X- _ O
+MCF-7 -X- _ B-CELL_LINE
+) -X- _ O
+[ -X- _ O
+16 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+expression -X- _ O
+was -X- _ O
+significantly -X- _ O
+reduced -X- _ O
+in -X- _ O
+invasive -X- _ O
+human -X- _ O
+metastatic -X- _ O
+colon -X- _ B-CELL_LINE
+cancer -X- _ I-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+compared -X- _ O
+to -X- _ O
+that -X- _ O
+in -X- _ O
+primary -X- _ B-CELL_LINE
+tumor -X- _ I-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+[ -X- _ O
+17 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+previous -X- _ O
+studies -X- _ O
+have -X- _ O
+shown -X- _ O
+that -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+knockdown -X- _ O
+under -X- _ O
+nutrient-rich -X- _ O
+conditions -X- _ O
+significantly -X- _ O
+facilitated -X- _ O
+the -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+of -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+and -X- _ O
+T98G -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+and -X- _ O
+promoted -X- _ O
+in -X- _ O
+vivo -X- _ O
+tumor -X- _ O
+growth. -X- _ O
+The -X- _ O
+inhibition -X- _ O
+of -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+increases -X- _ O
+P-Etn -X- _ O
+levels -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+and -X- _ O
+stimulates -X- _ O
+tumor -X- _ O
+growth -X- _ O
+[ -X- _ O
+18 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+organoid -X- _ O
+models -X- _ O
+, -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+knockdown -X- _ O
+inhibits -X- _ O
+cell -X- _ O
+growth -X- _ O
+[ -X- _ O
+19 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Despite -X- _ O
+these -X- _ O
+findings -X- _ O
+, -X- _ O
+no -X- _ O
+evidence -X- _ O
+exists -X- _ O
+that -X- _ O
+suggests -X- _ O
+that -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+expression -X- _ O
+is -X- _ O
+associated -X- _ O
+with -X- _ O
+HCC -X- _ O
+occurrence -X- _ O
+and -X- _ O
+development. -X- _ O
+This -X- _ O
+study -X- _ O
+aimed -X- _ O
+to -X- _ O
+investigate -X- _ O
+the -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+in -X- _ O
+human -X- _ O
+hepatocellular -X- _ B-CELL_LINE
+carcinoma -X- _ I-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+( -X- _ O
+HepG2 -X- _ B-CELL_LINE
+) -X- _ O
+by -X- _ O
+inhibiting -X- _ O
+their -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+, -X- _ O
+invasion -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+migration -X- _ O
+abilities -X- _ O
+and -X- _ O
+promoting -X- _ O
+cell -X- _ O
+apoptosis. -X- _ O
+Materials -X- _ O
+and -X- _ O
+methods -X- _ O
+Cell -X- _ O
+viability -X- _ O
+analysis -X- _ O
+HepG2 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+were -X- _ O
+seeded -X- _ O
+into -X- _ O
+96-well -X- _ O
+plates -X- _ O
+and -X- _ O
+incubated -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+Cell -X- _ O
+Counting -X- _ O
+kit -X- _ O
+( -X- _ O
+CCK-8 -X- _ O
+) -X- _ O
+solution -X- _ O
+for -X- _ O
+40 -X- _ O
+min -X- _ O
+at -X- _ O
+37°C. -X- _ O
+Absorbance -X- _ O
+was -X- _ O
+measured -X- _ O
+at -X- _ O
+450 -X- _ O
+nm -X- _ O
+using -X- _ O
+a -X- _ O
+Spectra -X- _ O
+MAX -X- _ O
+M5 -X- _ O
+microplate -X- _ O
+spectrophotometer -X- _ O
+to -X- _ O
+detect -X- _ O
+cell -X- _ O
+viability. -X- _ O
+Invasion -X- _ O
+experiment -X- _ O
+Dilute -X- _ O
+the -X- _ O
+Matrigel -X- _ O
+with -X- _ O
+basal -X- _ O
+medium -X- _ O
+( -X- _ O
+1:8 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+lay -X- _ O
+it -X- _ O
+flat -X- _ O
+on -X- _ O
+a -X- _ O
+Transwell -X- _ O
+membrane -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+incubate -X- _ O
+at -X- _ O
+37°C -X- _ O
+for -X- _ O
+4 -X- _ O
+h. -X- _ O
+The -X- _ O
+subsequent -X- _ O
+experimental -X- _ O
+steps -X- _ O
+were -X- _ O
+identical -X- _ O
+to -X- _ O
+those -X- _ O
+used -X- _ O
+for -X- _ O
+the -X- _ O
+migration -X- _ O
+assay -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+cell -X- _ O
+culture -X- _ O
+, -X- _ O
+paraformaldehyde -X- _ O
+fixation -X- _ O
+and -X- _ O
+0.1 -X- _ O
+% -X- _ O
+crystal -X- _ O
+violet -X- _ O
+staining. -X- _ O
+Animal -X- _ O
+experiments -X- _ O
+Five-week-old -X- _ O
+BALB -X- _ O
+/ -X- _ O
+c -X- _ O
+female -X- _ O
+nude -X- _ O
+mice -X- _ O
+were -X- _ O
+purchased -X- _ O
+from -X- _ O
+Jiangsu -X- _ O
+Jicui -X- _ O
+Pharmaceutical -X- _ O
+Biotechnology -X- _ O
+Co -X- _ O
+, -X- _ O
+passed -X- _ O
+SPF -X- _ O
+level -X- _ O
+training -X- _ O
+and -X- _ O
+assessment -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+were -X- _ O
+routinely -X- _ O
+reared -X- _ O
+using -X- _ O
+standard -X- _ O
+SPF -X- _ O
+conditions. -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+overexpressed -X- _ O
+HepG2 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+and -X- _ O
+control -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+were -X- _ O
+subcutaneously -X- _ O
+injected -X- _ O
+into -X- _ O
+the -X- _ O
+left -X- _ O
+and -X- _ O
+right -X- _ O
+sides -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+nude -X- _ O
+mice -X- _ O
+( -X- _ O
+approximately -X- _ O
+1 -X- _ O
+× -X- _ O
+107 -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+on -X- _ O
+each -X- _ O
+side -X- _ O
+, -X- _ O
+n -X- _ O
+= -X- _ O
+6 -X- _ O
+tumors -X- _ O
+in -X- _ O
+each -X- _ O
+group -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Following -X- _ O
+20–25 -X- _ O
+d -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+tumors -X- _ O
+achieved -X- _ O
+a -X- _ O
+certain -X- _ O
+size -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+micewere -X- _ O
+anesthetized -X- _ O
+with -X- _ O
+isopentane -X- _ O
+and -X- _ O
+sacrificed -X- _ O
+; -X- _ O
+the -X- _ O
+tumors -X- _ O
+were -X- _ O
+collected -X- _ O
+for -X- _ O
+follow-up -X- _ O
+evaluation. -X- _ O
+The -X- _ O
+animal -X- _ O
+experiments -X- _ O
+were -X- _ O
+approved -X- _ O
+by -X- _ O
+the -X- _ O
+Animal -X- _ O
+Ethics -X- _ O
+Committee -X- _ O
+of -X- _ O
+Anhui -X- _ O
+Medical -X- _ O
+University -X- _ O
+and -X- _ O
+conducted -X- _ O
+in -X- _ O
+accordance -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+guidelines -X- _ O
+for -X- _ O
+the -X- _ O
+care -X- _ O
+and -X- _ O
+use -X- _ O
+of -X- _ O
+laboratory -X- _ O
+animals. -X- _ O
+Statistical -X- _ O
+analysis -X- _ O
+Data -X- _ O
+were -X- _ O
+analyzed -X- _ O
+using -X- _ O
+GraphPad -X- _ O
+Prism -X- _ O
+software -X- _ O
+( -X- _ O
+version -X- _ O
+8.0 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+results -X- _ O
+were -X- _ O
+expressed -X- _ O
+as -X- _ O
+mean -X- _ O
+± -X- _ O
+standard -X- _ O
+deviation -X- _ O
+( -X- _ O
+SD -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+T-test -X- _ O
+was -X- _ O
+performed -X- _ O
+to -X- _ O
+determine -X- _ O
+the -X- _ O
+significant -X- _ O
+of -X- _ O
+differences -X- _ O
+between -X- _ O
+two -X- _ O
+groups. -X- _ O
+A -X- _ O
+one-way -X- _ O
+analysis -X- _ O
+of -X- _ O
+variance -X- _ O
+was -X- _ O
+used -X- _ O
+for -X- _ O
+comparison -X- _ O
+across -X- _ O
+groups. -X- _ O
+Statistical -X- _ O
+significance -X- _ O
+was -X- _ O
+set -X- _ O
+at -X- _ O
+P -X- _ O
+***Results*** -X- _ O
+Discussion -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+rate-limiting -X- _ O
+enzyme -X- _ O
+in -X- _ O
+PE -X- _ O
+synthesis -X- _ O
+that -X- _ O
+is -X- _ O
+commonly -X- _ O
+used -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+study -X- _ O
+of -X- _ O
+obesity-related -X- _ O
+diseases -X- _ O
+, -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+non-alcoholic -X- _ O
+fatty -X- _ O
+liver -X- _ O
+disease -X- _ O
+and -X- _ O
+type -X- _ O
+2 -X- _ O
+diabetes -X- _ O
+[ -X- _ O
+12,20–22 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Recently -X- _ O
+, -X- _ O
+interest -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+growing -X- _ O
+[ -X- _ O
+18,23,24 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Previous -X- _ O
+studies -X- _ O
+show -X- _ O
+that -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+has -X- _ O
+different -X- _ O
+roles -X- _ O
+in -X- _ O
+various -X- _ O
+cancers -X- _ O
+and -X- _ O
+cancer -X- _ O
+settings. -X- _ O
+For -X- _ O
+instance -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+metastatic -X- _ O
+colorectal -X- _ O
+cancer -X- _ O
+( -X- _ O
+CRC -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+is -X- _ O
+significantly -X- _ O
+downregulated -X- _ O
+and -X- _ O
+functions -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+tumor -X- _ O
+metastasis -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
+[ -X- _ O
+25 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+human -X- _ O
+breast -X- _ B-CELL_LINE
+cancer -X- _ I-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+( -X- _ O
+MCF-7 -X- _ B-CELL_LINE
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+level -X- _ O
+of -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+is -X- _ O
+elevated -X- _ O
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+stressful -X- _ O
+environment -X- _ O
+[ -X- _ O
+26 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Our -X- _ O
+findings -X- _ O
+show -X- _ O
+that -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+expression -X- _ O
+is -X- _ O
+abnormally -X- _ O
+downregulated -X- _ O
+in -X- _ O
+HepG2 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+is -X- _ O
+consistent -X- _ O
+with -X- _ O
+that -X- _ O
+of -X- _ O
+previous -X- _ O
+studies -X- _ O
+where -X- _ O
+in -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+expression -X- _ O
+was -X- _ O
+downregulated -X- _ O
+in -X- _ O
+MCF-7 -X- _ B-CELL_LINE
+and -X- _ O
+invasive -X- _ O
+human -X- _ O
+metastatic -X- _ O
+CRC -X- _ O
+[ -X- _ O
+16,17 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Although -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+regulates -X- _ O
+several -X- _ O
+human -X- _ O
+cancers -X- _ O
+[ -X- _ O
+18,19,23 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+its -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+HCC -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+remains -X- _ O
+unknown. -X- _ O
+Based -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+literature -X- _ O
+and -X- _ O
+our -X- _ O
+findings -X- _ O
+, -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+in -X- _ O
+human -X- _ O
+cancers -X- _ O
+appears -X- _ O
+to -X- _ O
+have -X- _ O
+a -X- _ O
+consistent -X- _ O
+expression -X- _ O
+profile -X- _ O
+in -X- _ O
+human -X- _ O
+cancers -X- _ O
+, -X- _ O
+irrespective -X- _ O
+of -X- _ O
+tumor -X- _ O
+origin -X- _ O
+or -X- _ O
+location -X- _ O
+[ -X- _ O
+27 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Regarding -X- _ O
+the -X- _ O
+mechanism -X- _ O
+whereby -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+influences -X- _ O
+cancer -X- _ O
+development -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+previous -X- _ O
+report -X- _ O
+showed -X- _ O
+that -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+downregulation-induced -X- _ O
+phosphoethanolamine -X- _ O
+( -X- _ O
+PEtn -X- _ O
+) -X- _ O
+accumulation -X- _ O
+correlated -X- _ O
+with -X- _ O
+tumor -X- _ O
+growth -X- _ O
+under -X- _ O
+nutrient -X- _ O
+starvation -X- _ O
+, -X- _ O
+thereby -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+overexpression -X- _ O
+reduced -X- _ O
+PEtn -X- _ O
+levels -X- _ O
+and -X- _ O
+tumor -X- _ O
+growth -X- _ O
+[ -X- _ O
+18 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+present -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+found -X- _ O
+that -X- _ O
+CDP-Etn -X- _ O
+supplementation -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+HCC -X- _ O
+migration -X- _ O
+, -X- _ O
+invasion -X- _ O
+and -X- _ O
+proliferation. -X- _ O
+In -X- _ O
+our -X- _ O
+previous -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+showed -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+BAX -X- _ O
+and -X- _ O
+cleaved -X- _ O
+caspase-3 -X- _ O
+were -X- _ O
+significantly -X- _ O
+increased -X- _ O
+whereas -X- _ O
+Bcl-2 -X- _ O
+was -X- _ O
+significantly -X- _ O
+reduced -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+livers -X- _ O
+of -X- _ O
+type -X- _ O
+2 -X- _ O
+diabetic -X- _ O
+mice -X- _ O
+and -X- _ O
+L02 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+after -X- _ O
+stimulation -X- _ O
+with -X- _ O
+high -X- _ O
+glucose -X- _ O
+and -X- _ O
+free -X- _ O
+fatty -X- _ O
+acids -X- _ O
+( -X- _ O
+HG -X- _ O
+& -X- _ O
+FFA -X- _ O
+) -X- _ O
+( -X- _ O
+12 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+CDP-Etn -X- _ O
+( -X- _ O
+100 -X- _ O
+μM -X- _ O
+) -X- _ O
+protected -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+from -X- _ O
+HG -X- _ O
+& -X- _ O
+FFA-induced -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+by -X- _ O
+reducing -X- _ O
+BAX -X- _ O
+and -X- _ O
+cleaved -X- _ O
+caspase-3 -X- _ O
+levels -X- _ O
+as -X- _ O
+well -X- _ O
+as -X- _ O
+and -X- _ O
+increasing -X- _ O
+Bcl-2 -X- _ O
+levels -X- _ O
+[ -X- _ O
+12 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Whether -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+downregulation -X- _ O
+induced -X- _ O
+PEtn -X- _ O
+accumulation -X- _ O
+contributes -X- _ O
+to -X- _ O
+HCC -X- _ O
+development -X- _ O
+further -X- _ O
+study. -X- _ O
+Increasing -X- _ O
+evidence -X- _ O
+suggests -X- _ O
+that -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+is -X- _ O
+aberrantly -X- _ O
+expressed -X- _ O
+in -X- _ O
+various -X- _ O
+models -X- _ O
+of -X- _ O
+liver -X- _ O
+disease -X- _ O
+and -X- _ O
+may -X- _ O
+predict -X- _ O
+clinical -X- _ O
+outcomes -X- _ O
+in -X- _ O
+patients. -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+is -X- _ O
+instrumental -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+deregulation -X- _ O
+of -X- _ O
+these -X- _ O
+processes -X- _ O
+leading -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+development -X- _ O
+of -X- _ O
+obesity -X- _ O
+, -X- _ O
+insulin -X- _ O
+resistance -X- _ O
+, -X- _ O
+liver -X- _ O
+steatosis -X- _ O
+and -X- _ O
+dyslipidemia -X- _ O
+[ -X- _ O
+28 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+CDP-Etn -X- _ O
+supplementation -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+reported -X- _ O
+to -X- _ O
+alleviate -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+deficiency -X- _ O
+engendering -X- _ O
+age-dependent -X- _ O
+and -X- _ O
+insulin-resistant -X- _ O
+non-alcoholic -X- _ O
+steatohepatitis -X- _ O
+to -X- _ O
+improve -X- _ O
+patient -X- _ O
+prognosis -X- _ O
+[ -X- _ O
+20,29–31 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Chronic -X- _ O
+administration -X- _ O
+of -X- _ O
+peroxisome -X- _ O
+proliferators -X- _ O
+can -X- _ O
+increase -X- _ O
+the -X- _ O
+content -X- _ O
+of -X- _ O
+hepatic -X- _ O
+PC -X- _ O
+and -X- _ O
+PE -X- _ O
+for -X- _ O
+hepatomegaly -X- _ O
+and -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+as -X- _ O
+well -X- _ O
+as -X- _ O
+cause -X- _ O
+liver -X- _ O
+cancer -X- _ O
+in -X- _ O
+rodents -X- _ O
+[ -X- _ O
+32,33 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Based -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+current -X- _ O
+studies -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+hypothesized -X- _ O
+that -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+may -X- _ O
+be -X- _ O
+involved -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+regulation -X- _ O
+of -X- _ O
+cellular -X- _ O
+processes -X- _ O
+in -X- _ O
+HCC. -X- _ O
+Therefore -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+utilized -X- _ O
+in -X- _ O
+vivo -X- _ O
+and -X- _ O
+in -X- _ O
+vitro -X- _ O
+validation -X- _ O
+methods -X- _ O
+to -X- _ O
+assess -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+and -X- _ O
+mechanistic -X- _ O
+roles -X- _ O
+of -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+in -X- _ O
+liver -X- _ B-CELL
+cancer -X- _ I-CELL
+cells. -X- _ I-CELL
+Herein -X- _ O
+, -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+overexpression -X- _ O
+was -X- _ O
+determined -X- _ O
+to -X- _ O
+inhibit -X- _ O
+HCC -X- _ O
+cell -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+, -X- _ O
+migration -X- _ O
+and -X- _ O
+invasion -X- _ O
+both -X- _ O
+in -X- _ O
+vitro -X- _ O
+and -X- _ O
+in -X- _ O
+vivo. -X- _ O
+And -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+number -X- _ O
+and -X- _ O
+morphology -X- _ O
+of -X- _ O
+mitochondria -X- _ B-CELL_COMPONENT
+in -X- _ O
+HCC -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+overexpressing -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+were -X- _ O
+significantly -X- _ O
+different -X- _ O
+from -X- _ O
+those -X- _ O
+in -X- _ O
+HCC -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+without -X- _ O
+any -X- _ O
+treatment -X- _ O
+, -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+decrease -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+number -X- _ O
+of -X- _ O
+mitochondria -X- _ B-CELL_COMPONENT
+and -X- _ O
+swelling -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+mitochondria. -X- _ B-CELL_COMPONENT
+These -X- _ O
+changes -X- _ O
+suggest -X- _ O
+that -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+affects -X- _ O
+the -X- _ O
+mitochondrial -X- _ O
+function -X- _ O
+of -X- _ O
+cells. -X- _ B-CELL
+Notably -X- _ O
+, -X- _ O
+when -X- _ O
+the -X- _ O
+HepG2 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+received -X- _ O
+CDP-Etn -X- _ O
+supplementation -X- _ O
+, -X- _ O
+their -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+, -X- _ O
+migration -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+invasion -X- _ O
+were -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+in -X- _ O
+vitro. -X- _ O
+Notably -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+ATP -X- _ O
+level -X- _ O
+decreased -X- _ O
+in -X- _ O
+HCC -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+following -X- _ O
+the -X- _ O
+overexpression -X- _ O
+of -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+found -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+accompanied -X- _ O
+by -X- _ O
+mitochondrial -X- _ O
+damage -X- _ O
+using -X- _ O
+transmission -X- _ O
+electron -X- _ O
+microscopy. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+previous -X- _ O
+reports -X- _ O
+have -X- _ O
+indicated -X- _ O
+that -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+is -X- _ O
+present -X- _ O
+only -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+endoplasmic -X- _ B-CELL_COMPONENT
+reticulum -X- _ I-CELL_COMPONENT
+of -X- _ O
+hepatocytes -X- _ B-CELL
+[ -X- _ O
+14,34 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Additionally -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+phenotype -X- _ O
+of -X- _ O
+liver -X- _ O
+PCYT2- -X- _ O
+/ -X- _ O
+- -X- _ O
+knockout -X- _ O
+mice -X- _ O
+showed -X- _ O
+no -X- _ O
+signs -X- _ O
+of -X- _ O
+liver -X- _ O
+injury -X- _ O
+, -X- _ O
+however -X- _ O
+, -X- _ O
+they -X- _ O
+experienced -X- _ O
+massive -X- _ O
+accumulation -X- _ O
+of -X- _ O
+liver -X- _ O
+triglycerides -X- _ O
+( -X- _ O
+TAG -X- _ O
+) -X- _ O
+[ -X- _ O
+35 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Therefore -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+hypothesized -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+influence -X- _ O
+of -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+on -X- _ O
+mitochondrial -X- _ O
+function -X- _ O
+is -X- _ O
+mediated -X- _ O
+by -X- _ O
+metabolites -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+TAG -X- _ O
+, -X- _ O
+DAG -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+PE. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+further -X- _ O
+studies -X- _ O
+are -X- _ O
+needed -X- _ O
+to -X- _ O
+clarify -X- _ O
+whether -X- _ O
+the -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+exerted -X- _ O
+inhibition -X- _ O
+of -X- _ O
+HCC -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+alleviates -X- _ O
+mitochondrial -X- _ O
+damage. -X- _ O
+As -X- _ O
+understanding -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+mechanism -X- _ O
+whereby -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+overexpression -X- _ O
+causes -X- _ O
+mitochondrial -X- _ O
+damage -X- _ O
+will -X- _ O
+deepen -X- _ O
+our -X- _ O
+understanding -X- _ O
+of -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+regulation -X- _ O
+in -X- _ O
+HCC -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ I-CELL
+In -X- _ O
+conclusion -X- _ O
+, -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+provided -X- _ O
+compelling -X- _ O
+data -X- _ O
+demonstrating -X- _ O
+the -X- _ O
+aberrant -X- _ O
+expression -X- _ O
+and -X- _ O
+functional -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+in -X- _ O
+HepG2 -X- _ B-CELL_LINE
+cells. -X- _ I-CELL_LINE
+PCYT2 -X- _ O
+expression -X- _ O
+levels -X- _ O
+were -X- _ O
+lower -X- _ O
+in -X- _ O
+HepG2 -X- _ B-CELL_LINE
+than -X- _ O
+in -X- _ O
+L02. -X- _ B-CELL_LINE
+Furthermore -X- _ O
+, -X- _ O
+PCYT2 -X- _ O
+overexpression -X- _ O
+in -X- _ O
+HepG2 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+induced -X- _ O
+mitochondrial -X- _ O
+damage -X- _ O
+; -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+, -X- _ O
+invasion -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+migration -X- _ O
+; -X- _ O
+and -X- _ O
+promoted -X- _ O
+cell -X- _ O
+apoptosis. -X- _ O
+Source -X- _ O
+paper -X- _ O
+: -X- _ O
+PMC12118871 -X- _ O
+
+Results -X- _ O
+IFN-γ -X- _ O
+significantly -X- _ O
+induced -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+, -X- _ O
+leading -X- _ O
+to -X- _ O
+a -X- _ O
+time-dependent -X- _ O
+upregulation -X- _ O
+of -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+expression. -X- _ O
+Immunofluorescence -X- _ O
+confirmed -X- _ O
+that -X- _ O
+p-STAT1 -X- _ O
+is -X- _ O
+translocated -X- _ O
+to -X- _ O
+nucleus. -X- _ O
+Curcumin -X- _ O
+treatment -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+by -X- _ O
+68 -X- _ O
+% -X- _ O
+( -X- _ O
+p -X- _ O
+p -X- _ O
+***Conclusion*** -X- _ O
+Curcumin -X- _ O
+effectively -X- _ O
+inhibits -X- _ O
+IFN-γ-induced -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+and -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+expression -X- _ O
+, -X- _ O
+downregulates -X- _ O
+ISGs -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+enhances -X- _ O
+IFN-γ-mediated -X- _ O
+tumor -X- _ O
+suppression. -X- _ O
+These -X- _ O
+findings -X- _ O
+suggest -X- _ O
+that -X- _ O
+curcumin -X- _ O
+may -X- _ O
+serve -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+adjuvant -X- _ O
+in -X- _ O
+NSCLC -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+potentially -X- _ O
+improving -X- _ O
+immune -X- _ O
+checkpoint -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
+( -X- _ O
+ICI -X- _ O
+) -X- _ O
+efficacy. -X- _ O
+Material -X- _ O
+and -X- _ O
+methods -X- _ O
+Western -X- _ O
+blot -X- _ O
+analysis -X- _ O
+Total -X- _ O
+protein -X- _ O
+lysates -X- _ O
+were -X- _ O
+extracted -X- _ O
+from -X- _ O
+treated -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+using -X- _ O
+ice-cold -X- _ O
+radioimmunoprecipitation -X- _ O
+assay -X- _ O
+( -X- _ O
+RIPA -X- _ O
+) -X- _ O
+buffer -X- _ O
+supplemented -X- _ O
+with -X- _ O
+protease -X- _ O
+and -X- _ O
+phosphatase -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+and -X- _ O
+centrifuged -X- _ O
+at -X- _ O
+10,000 -X- _ O
+× -X- _ O
+g -X- _ O
+for -X- _ O
+10 -X- _ O
+min -X- _ O
+at -X- _ O
+4◦C. -X- _ O
+The -X- _ O
+total -X- _ O
+protein -X- _ O
+concentrations -X- _ O
+were -X- _ O
+measured -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+bicinchoninic -X- _ O
+acid -X- _ O
+( -X- _ O
+BCA -X- _ O
+) -X- _ O
+protein -X- _ O
+assay -X- _ O
+kit -X- _ O
+( -X- _ O
+Pierce -X- _ O
+, -X- _ O
+Thermo -X- _ O
+Fisher -X- _ O
+Scientific -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Equal -X- _ O
+amounts -X- _ O
+of -X- _ O
+protein -X- _ O
+( -X- _ O
+20 -X- _ O
+μg -X- _ O
+per -X- _ O
+sample -X- _ O
+) -X- _ O
+were -X- _ O
+separated -X- _ O
+on -X- _ O
+10 -X- _ O
+% -X- _ O
+sodium -X- _ O
+dodecyl -X- _ O
+sulfate–polyacrylamide -X- _ O
+gels -X- _ O
+( -X- _ O
+SDS-PAGE -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+transferred -X- _ O
+onto -X- _ O
+0.45 -X- _ O
+μM -X- _ O
+nitrocellulose -X- _ O
+membranes -X- _ O
+( -X- _ O
+Merck -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Membranes -X- _ O
+were -X- _ O
+blocked -X- _ O
+with -X- _ O
+5 -X- _ O
+% -X- _ O
+BSA -X- _ O
+in -X- _ O
+Tris-buffered -X- _ O
+saline -X- _ O
+with -X- _ O
+0.1 -X- _ O
+% -X- _ O
+Tween- -X- _ O
+20 -X- _ O
+( -X- _ O
+TBST -X- _ O
+) -X- _ O
+for -X- _ O
+1 -X- _ O
+h -X- _ O
+at -X- _ O
+room -X- _ O
+temperature -X- _ O
+to -X- _ O
+prevent -X- _ O
+non-specific -X- _ O
+binding -X- _ O
+and -X- _ O
+incubated -X- _ O
+overnight -X- _ O
+at -X- _ O
+4 -X- _ O
+°C -X- _ O
+with -X- _ O
+primary -X- _ O
+antibodies -X- _ O
+against -X- _ O
+phospho-STAT1 -X- _ O
+( -X- _ O
+Tyr701 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+total -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+, -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+β-actin -X- _ O
+( -X- _ O
+Santa -X- _ O
+Cruz -X- _ O
+Biotechnology -X- _ O
+, -X- _ O
+Dallas -X- _ O
+, -X- _ O
+TX -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+After -X- _ O
+washing -X- _ O
+with -X- _ O
+TBST -X- _ O
+, -X- _ O
+membranes -X- _ O
+were -X- _ O
+incubated -X- _ O
+with -X- _ O
+horseradish -X- _ O
+peroxidase -X- _ O
+( -X- _ O
+HRP -X- _ O
+) -X- _ O
+-conjugated -X- _ O
+secondary -X- _ O
+anti-mouse -X- _ O
+IgG -X- _ O
+antibody -X- _ O
+or -X- _ O
+anti-rabbit -X- _ O
+IgG -X- _ O
+, -X- _ O
+HRP-linked -X- _ O
+antibody -X- _ O
+, -X- _ O
+for -X- _ O
+1 -X- _ O
+h -X- _ O
+at -X- _ O
+room -X- _ O
+temperature. -X- _ O
+Protein -X- _ O
+bands -X- _ O
+were -X- _ O
+detected -X- _ O
+using -X- _ O
+enhanced -X- _ O
+chemiluminescence -X- _ O
+( -X- _ O
+ECL -X- _ O
+) -X- _ O
+reagent -X- _ O
+( -X- _ O
+GE -X- _ O
+Healthcare -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+visualized -X- _ O
+using -X- _ O
+a -X- _ O
+ChemiDoc -X- _ O
+imaging -X- _ O
+system -X- _ O
+( -X- _ O
+Bio-Rad -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Analysis -X- _ O
+of -X- _ O
+protein -X- _ O
+bands -X- _ O
+was -X- _ O
+performed -X- _ O
+using -X- _ O
+ImageJ -X- _ O
+software -X- _ O
+( -X- _ O
+NIH -X- _ O
+, -X- _ O
+Bethesda -X- _ O
+, -X- _ O
+MD -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+primary -X- _ O
+and -X- _ O
+secondary -X- _ O
+antibodies -X- _ O
+are -X- _ O
+listed -X- _ O
+in -X- _ O
+Table -X- _ O
+1.Table -X- _ O
+1The -X- _ O
+description -X- _ O
+of -X- _ O
+primary -X- _ O
+and -X- _ O
+secondary -X- _ O
+antibodies -X- _ O
+AntibodySpeciesCloneDilutionCa -X- _ O
+# -X- _ O
+SourcePD-L1RabbitMonoclonal1:1000ab213524AbcamSTAT1MouseMonoclonal1:10009176Cell -X- _ O
+Signaling -X- _ O
+TechnologypSTAT1RabbitMonoclonal1:10009177SCell -X- _ O
+Signaling -X- _ O
+Technologyβ-actinMouseMonoclonal1:500047,778Santa -X- _ O
+Cruz -X- _ O
+Biotechnology -X- _ O
+, -X- _ O
+Dallas -X- _ O
+, -X- _ O
+TX -X- _ O
+, -X- _ O
+USAAnti-mouseHorse-1:10,0007076Cell -X- _ O
+Signaling -X- _ O
+, -X- _ O
+Danvers -X- _ O
+, -X- _ O
+MA -X- _ O
+, -X- _ O
+USAAnti-RabbitGoat-1:10,0007074Cell -X- _ O
+Signaling -X- _ O
+, -X- _ O
+Danvers -X- _ O
+, -X- _ O
+MA -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+Quantitative -X- _ O
+real-time -X- _ O
+pcr -X- _ O
+( -X- _ O
+qrt-pcr -X- _ O
+) -X- _ O
+analysis -X- _ O
+Total -X- _ O
+RNA -X- _ O
+was -X- _ O
+extracted -X- _ O
+from -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+using -X- _ O
+the -X- _ O
+RNeasy -X- _ O
+Mini-Kit -X- _ O
+( -X- _ O
+Qiagen -X- _ O
+, -X- _ O
+# -X- _ O
+74,104 -X- _ O
+) -X- _ O
+according -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+manufacturer’s -X- _ O
+instructions -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+eluted -X- _ O
+RNA -X- _ O
+purity -X- _ O
+and -X- _ O
+concentration -X- _ O
+were -X- _ O
+assessed -X- _ O
+using -X- _ O
+a -X- _ O
+NanoDrop -X- _ O
+One -X- _ O
+spectrophotometer -X- _ O
+( -X- _ O
+Thermo -X- _ O
+Scientific -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+For -X- _ O
+cDNA -X- _ O
+synthesis -X- _ O
+, -X- _ O
+500 -X- _ O
+ng -X- _ O
+of -X- _ O
+RNA -X- _ O
+was -X- _ O
+reverse -X- _ O
+transcribed -X- _ O
+using -X- _ O
+the -X- _ O
+RevertAid -X- _ O
+First -X- _ O
+Strand -X- _ O
+cDNA -X- _ O
+Synthesis -X- _ O
+Kit -X- _ O
+to -X- _ O
+cDNA -X- _ O
+as -X- _ O
+per -X- _ O
+the -X- _ O
+manufacturer’s -X- _ O
+instructions. -X- _ O
+Quantitative -X- _ O
+real-time -X- _ O
+PCR -X- _ O
+( -X- _ O
+qRT-PCR -X- _ O
+) -X- _ O
+was -X- _ O
+conducted -X- _ O
+using -X- _ O
+the -X- _ O
+SYBR -X- _ O
+Green -X- _ O
+PCR -X- _ O
+Master -X- _ O
+Mix -X- _ O
+( -X- _ O
+Applied -X- _ O
+Biosystems™ -X- _ O
+) -X- _ O
+on -X- _ O
+a -X- _ O
+QuantStudio -X- _ O
+5 -X- _ O
+Machine -X- _ O
+( -X- _ O
+Thermo -X- _ O
+Fisher -X- _ O
+Scientific -X- _ O
+, -X- _ O
+Inc. -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+relative -X- _ O
+expression -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+, -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+ISGs -X- _ O
+( -X- _ O
+ISG15 -X- _ O
+and -X- _ O
+SOCS1 -X- _ O
+) -X- _ O
+were -X- _ O
+normalized -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+housekeeping -X- _ O
+gene -X- _ O
+GAPDH -X- _ O
+and -X- _ O
+analyzed -X- _ O
+using -X- _ O
+the -X- _ O
+2^ -X- _ O
+− -X- _ O
+ΔΔCt -X- _ O
+method. -X- _ O
+The -X- _ O
+PCR -X- _ O
+reactions -X- _ O
+were -X- _ O
+carried -X- _ O
+out -X- _ O
+in -X- _ O
+duplicate -X- _ O
+with -X- _ O
+40 -X- _ O
+cycles -X- _ O
+of -X- _ O
+denaturation -X- _ O
+( -X- _ O
+15 -X- _ O
+s -X- _ O
+at -X- _ O
+95 -X- _ O
+°C -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+annealing -X- _ O
+( -X- _ O
+20 -X- _ O
+s -X- _ O
+at -X- _ O
+65 -X- _ O
+°C -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+elongation -X- _ O
+( -X- _ O
+20 -X- _ O
+s -X- _ O
+at -X- _ O
+72 -X- _ O
+°C -X- _ O
+) -X- _ O
+after -X- _ O
+an -X- _ O
+initial -X- _ O
+enzyme -X- _ O
+activation -X- _ O
+( -X- _ O
+15 -X- _ O
+min -X- _ O
+at -X- _ O
+95 -X- _ O
+°C -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+primer -X- _ O
+sequences -X- _ O
+used -X- _ O
+are -X- _ O
+presented -X- _ O
+in -X- _ O
+Table -X- _ O
+2.Table -X- _ O
+2List -X- _ O
+of -X- _ O
+PCR -X- _ O
+primers -X- _ O
+designed -X- _ O
+using -X- _ O
+NCBI -X- _ O
+/ -X- _ O
+Primer-BLAST -X- _ O
+program -X- _ O
+PrimerPrimer -X- _ O
+sequencesForwardReverseCD274 -X- _ O
+( -X- _ O
+PD−L1 -X- _ O
+) -X- _ O
+5′-TGGCATTTGCTGAACGCATTT- -X- _ O
+3′5′-AGTGCAGCCAGGTCTAATTGT- -X- _ O
+3′ISG155′-ATCACCCAGAAGATCGGCGT- -X- _ O
+3′5′-TCGCATTTGTCCACCACCAG- -X- _ O
+3′SOCS15’- -X- _ O
+TTCGCCCTTAGCGTGAAGATGG- -X- _ O
+3′5’- -X- _ O
+TAGTGCTCCAGCAGCTCGAAGA- -X- _ O
+3′GAPDH5′-GGAAGGTGAAGGTCGGAGTC- -X- _ O
+3′5′-TGAAGGGGTCATTGATGGCA- -X- _ O
+3′ -X- _ O
+Statistical -X- _ O
+analysis -X- _ O
+All -X- _ O
+experiments -X- _ O
+were -X- _ O
+performed -X- _ O
+in -X- _ O
+triplicate -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+data -X- _ O
+are -X- _ O
+presented -X- _ O
+as -X- _ O
+mean -X- _ O
+± -X- _ O
+standard -X- _ O
+deviation -X- _ O
+( -X- _ O
+SD -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Statistical -X- _ O
+analyses -X- _ O
+were -X- _ O
+conducted -X- _ O
+using -X- _ O
+GraphPad -X- _ O
+Prism -X- _ O
+10 -X- _ O
+( -X- _ O
+GraphPad -X- _ O
+Software -X- _ O
+, -X- _ O
+USA -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+One-way -X- _ O
+analysis -X- _ O
+of -X- _ O
+variance -X- _ O
+( -X- _ O
+ANOVA -X- _ O
+) -X- _ O
+followed -X- _ O
+by -X- _ O
+Tukey’s -X- _ O
+post-hoc -X- _ O
+test -X- _ O
+was -X- _ O
+used -X- _ O
+to -X- _ O
+compare -X- _ O
+multiple -X- _ O
+groups -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+an -X- _ O
+unpaired -X- _ O
+Student’s -X- _ O
+t-test -X- _ O
+was -X- _ O
+used -X- _ O
+for -X- _ O
+pairwise -X- _ O
+comparisons. -X- _ O
+Differences -X- _ O
+were -X- _ O
+considered -X- _ O
+statistically -X- _ O
+significant -X- _ O
+at -X- _ O
+p -X- _ O
+***Results*** -X- _ O
+Discussion -X- _ O
+Immune -X- _ O
+evasion -X- _ O
+remains -X- _ O
+a -X- _ O
+significant -X- _ O
+challenge -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+treatment -X- _ O
+of -X- _ O
+NSCLC -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+with -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+upregulation -X- _ O
+being -X- _ O
+one -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+primary -X- _ O
+mechanisms -X- _ O
+by -X- _ O
+which -X- _ O
+tumors -X- _ O
+escape -X- _ O
+immune -X- _ O
+surveillance -X- _ O
+( -X- _ O
+Cui -X- _ O
+et -X- _ O
+al. -X- _ O
+2024 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+IFN-γ -X- _ O
+/ -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+signaling -X- _ O
+pathway -X- _ O
+plays -X- _ O
+a -X- _ O
+crucial -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+regulation -X- _ O
+, -X- _ O
+enabling -X- _ O
+tumor -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+to -X- _ O
+suppress -X- _ O
+T-cell-mediated -X- _ B-CELL
+immune -X- _ O
+responses -X- _ O
+and -X- _ O
+resist -X- _ O
+immune -X- _ O
+checkpoint -X- _ O
+blockade -X- _ O
+therapy -X- _ O
+( -X- _ O
+Padmanabhan -X- _ O
+et -X- _ O
+al. -X- _ O
+2022 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+investigated -X- _ O
+how -X- _ O
+IFN-γ-induced -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+leads -X- _ O
+to -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+upregulation -X- _ O
+in -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+explored -X- _ O
+the -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+curcumin -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+bioactive -X- _ O
+polyphenol -X- _ O
+with -X- _ O
+known -X- _ O
+anti-inflammatory -X- _ O
+and -X- _ O
+anti-cancer -X- _ O
+properties -X- _ O
+, -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+agent -X- _ O
+capable -X- _ O
+of -X- _ O
+modulating -X- _ O
+this -X- _ O
+pathway. -X- _ O
+Our -X- _ O
+findings -X- _ O
+provide -X- _ O
+strong -X- _ O
+evidence -X- _ O
+that -X- _ O
+curcumin -X- _ O
+inhibits -X- _ O
+IFN-γ-induced -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+activation -X- _ O
+, -X- _ O
+thereby -X- _ O
+reducing -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+expression -X- _ O
+and -X- _ O
+enhancing -X- _ O
+the -X- _ O
+anti-proliferative -X- _ O
+effects -X- _ O
+of -X- _ O
+IFN-γ -X- _ O
+in -X- _ O
+NSCLC. -X- _ B-CELL
+Consistent -X- _ O
+with -X- _ O
+previous -X- _ O
+studies -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+observed -X- _ O
+that -X- _ O
+IFN-γ -X- _ O
+induces -X- _ O
+a -X- _ O
+robust -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+of -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+at -X- _ O
+Tyr701 -X- _ O
+in -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+leading -X- _ O
+to -X- _ O
+its -X- _ O
+nuclear -X- _ O
+translocation -X- _ O
+and -X- _ O
+subsequent -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+target -X- _ O
+genes -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+PD-L1. -X- _ O
+The -X- _ O
+kinetics -X- _ O
+of -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+followed -X- _ O
+a -X- _ O
+time-dependent -X- _ O
+pattern -X- _ O
+, -X- _ O
+with -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+detected -X- _ O
+as -X- _ O
+early -X- _ O
+as -X- _ O
+2 -X- _ O
+h -X- _ O
+, -X- _ O
+peaking -X- _ O
+at -X- _ O
+6 -X- _ O
+h -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+remaining -X- _ O
+elevated -X- _ O
+up -X- _ O
+to -X- _ O
+24 -X- _ O
+h. -X- _ O
+These -X- _ O
+results -X- _ O
+are -X- _ O
+in -X- _ O
+agreement -X- _ O
+with -X- _ O
+earlier -X- _ O
+reports -X- _ O
+that -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+a -X- _ O
+similar -X- _ O
+pattern -X- _ O
+of -X- _ O
+IFN-γ-induced -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+activation -X- _ O
+in -X- _ O
+various -X- _ O
+cancer -X- _ O
+models -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+melanoma -X- _ O
+( -X- _ O
+Schmitt -X- _ O
+et -X- _ O
+al. -X- _ O
+2012 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+colorectal -X- _ O
+cancer -X- _ O
+( -X- _ O
+Zhao -X- _ O
+et -X- _ O
+al. -X- _ O
+2020 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+lung -X- _ B-TISSUE
+adenocarcinoma -X- _ O
+( -X- _ O
+Gao -X- _ O
+et -X- _ O
+al. -X- _ O
+2018 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+prerequisite -X- _ O
+for -X- _ O
+its -X- _ O
+dimerization -X- _ O
+and -X- _ O
+nuclear -X- _ O
+translocation -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+is -X- _ O
+required -X- _ O
+for -X- _ O
+the -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+ISGs -X- _ O
+( -X- _ O
+Wang -X- _ O
+et -X- _ O
+al. -X- _ O
+2017 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Immunofluorescence -X- _ O
+analysis -X- _ O
+confirmed -X- _ O
+that -X- _ O
+IFN-γ -X- _ O
+treatment -X- _ O
+led -X- _ O
+to -X- _ O
+a -X- _ O
+marked -X- _ O
+accumulation -X- _ O
+of -X- _ O
+p-STAT1 -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+nucleus -X- _ O
+, -X- _ O
+reinforcing -X- _ O
+the -X- _ O
+notion -X- _ O
+that -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+plays -X- _ O
+a -X- _ O
+crucial -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+IFN-γ-mediated -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+regulation. -X- _ O
+These -X- _ O
+findings -X- _ O
+align -X- _ O
+with -X- _ O
+studies -X- _ O
+showing -X- _ O
+that -X- _ O
+sustained -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+activation -X- _ O
+promotes -X- _ O
+an -X- _ O
+immunosuppressive -X- _ O
+tumor -X- _ O
+microenvironment -X- _ O
+by -X- _ O
+inducing -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+expression -X- _ O
+and -X- _ O
+other -X- _ O
+immune-regulatory -X- _ O
+genes. -X- _ O
+The -X- _ O
+upregulation -X- _ O
+of -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+IFN-γ -X- _ O
+was -X- _ O
+confirmed -X- _ O
+at -X- _ O
+both -X- _ O
+the -X- _ O
+mRNA -X- _ O
+and -X- _ O
+protein -X- _ O
+levels -X- _ O
+, -X- _ O
+as -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+by -X- _ O
+qRT-PCR -X- _ O
+and -X- _ O
+Western -X- _ O
+blotting. -X- _ O
+The -X- _ O
+increased -X- _ O
+surface -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+following -X- _ O
+IFN-γ -X- _ O
+treatment -X- _ O
+highlights -X- _ O
+the -X- _ O
+functional -X- _ O
+significance -X- _ O
+of -X- _ O
+this -X- _ O
+regulation -X- _ O
+, -X- _ O
+as -X- _ O
+surface -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+interacts -X- _ O
+with -X- _ O
+PD- -X- _ O
+1 -X- _ O
+on -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+to -X- _ O
+inhibit -X- _ O
+anti-tumor -X- _ O
+immune -X- _ O
+responses -X- _ O
+( -X- _ O
+Arak -X- _ O
+et -X- _ O
+al. -X- _ O
+2021 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+These -X- _ O
+results -X- _ O
+are -X- _ O
+in -X- _ O
+accordance -X- _ O
+with -X- _ O
+previous -X- _ O
+reports -X- _ O
+showing -X- _ O
+that -X- _ O
+IFN-γ -X- _ O
+is -X- _ O
+one -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+most -X- _ O
+potent -X- _ O
+inducers -X- _ O
+of -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+in -X- _ O
+NSCLC -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+facilitating -X- _ O
+immune -X- _ O
+escape -X- _ O
+and -X- _ O
+tumor -X- _ O
+progression -X- _ O
+( -X- _ O
+Pawelczyk -X- _ O
+et -X- _ O
+al. -X- _ O
+2019 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Additionally -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+use -X- _ O
+of -X- _ O
+fludarabine -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
+, -X- _ O
+significantly -X- _ O
+attenuated -X- _ O
+IFN-γ-induced -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+expression -X- _ O
+, -X- _ O
+confirming -X- _ O
+that -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+is -X- _ O
+the -X- _ O
+primary -X- _ O
+mediator -X- _ O
+of -X- _ O
+this -X- _ O
+regulatory -X- _ O
+axis. -X- _ O
+This -X- _ O
+finding -X- _ O
+corroborates -X- _ O
+prior -X- _ O
+studies -X- _ O
+demonstrating -X- _ O
+that -X- _ O
+STAT1-deficient -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+fail -X- _ O
+to -X- _ O
+upregulate -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+IFN-γ -X- _ O
+, -X- _ O
+emphasizing -X- _ O
+the -X- _ O
+centrality -X- _ O
+of -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+in -X- _ O
+this -X- _ O
+pathway. -X- _ O
+One -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+most -X- _ O
+significant -X- _ O
+findings -X- _ O
+of -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+is -X- _ O
+the -X- _ O
+ability -X- _ O
+of -X- _ O
+curcumin -X- _ O
+to -X- _ O
+inhibit -X- _ O
+IFN-γ-induced -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+activation -X- _ O
+and -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ B-CELL
+Western -X- _ O
+blot -X- _ O
+analysis -X- _ O
+revealed -X- _ O
+that -X- _ O
+curcumin -X- _ O
+suppressed -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+in -X- _ O
+a -X- _ O
+dose-dependent -X- _ O
+manner -X- _ O
+, -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+highest -X- _ O
+concentration -X- _ O
+( -X- _ O
+50 -X- _ O
+µM -X- _ O
+) -X- _ O
+reducing -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+by -X- _ O
+68 -X- _ O
+% -X- _ O
+. -X- _ O
+This -X- _ O
+effect -X- _ O
+was -X- _ O
+not -X- _ O
+due -X- _ O
+to -X- _ O
+a -X- _ O
+decrease -X- _ O
+in -X- _ O
+total -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+protein -X- _ O
+levels -X- _ O
+, -X- _ O
+indicating -X- _ O
+that -X- _ O
+curcumin -X- _ O
+selectively -X- _ O
+inhibits -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+activation -X- _ O
+rather -X- _ O
+than -X- _ O
+its -X- _ O
+expression. -X- _ O
+Previous -X- _ O
+studies -X- _ O
+have -X- _ O
+reported -X- _ O
+that -X- _ O
+curcumin -X- _ O
+can -X- _ O
+interfere -X- _ O
+with -X- _ O
+JAK-STAT -X- _ O
+signaling -X- _ O
+in -X- _ O
+other -X- _ O
+cancer -X- _ O
+types. -X- _ O
+Curcumin -X- _ O
+directly -X- _ O
+inhibits -X- _ O
+the -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+of -X- _ O
+STAT3 -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+key -X- _ O
+component -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+JAK-STAT -X- _ O
+signaling -X- _ O
+pathway -X- _ O
+in -X- _ O
+breast -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ O
+( -X- _ O
+Golmohammadi -X- _ O
+et -X- _ O
+al. -X- _ O
+2024 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+prostate -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ O
+( -X- _ O
+Li -X- _ O
+et -X- _ O
+al. -X- _ O
+2024 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+as -X- _ O
+well -X- _ O
+as -X- _ O
+the -X- _ O
+downregulation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+in -X- _ O
+melanoma -X- _ O
+( -X- _ O
+Xu -X- _ O
+et -X- _ O
+al. -X- _ O
+2018 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+but -X- _ O
+its -X- _ O
+specific -X- _ O
+effect -X- _ O
+on -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+in -X- _ O
+IFN-γ-stimulated -X- _ O
+NSCLC -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+had -X- _ O
+not -X- _ O
+been -X- _ O
+previously -X- _ O
+explored. -X- _ O
+Our -X- _ O
+findings -X- _ O
+extend -X- _ O
+these -X- _ O
+observations -X- _ O
+by -X- _ O
+demonstrating -X- _ O
+that -X- _ O
+curcumin -X- _ O
+effectively -X- _ O
+blocks -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+activation -X- _ O
+in -X- _ O
+lung -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+preventing -X- _ O
+the -X- _ O
+downstream -X- _ O
+induction -X- _ O
+of -X- _ O
+PD-L1. -X- _ O
+The -X- _ O
+suppression -X- _ O
+of -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+expression -X- _ O
+by -X- _ O
+curcumin -X- _ O
+was -X- _ O
+observed -X- _ O
+at -X- _ O
+both -X- _ O
+the -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+and -X- _ O
+translational -X- _ O
+levels -X- _ O
+, -X- _ O
+as -X- _ O
+evidenced -X- _ O
+by -X- _ O
+qRT-PCR -X- _ O
+and -X- _ O
+Western -X- _ O
+blotting. -X- _ O
+This -X- _ O
+finding -X- _ O
+is -X- _ O
+particularly -X- _ O
+relevant -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+context -X- _ O
+of -X- _ O
+NSCLC -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+where -X- _ O
+high -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+expression -X- _ O
+correlates -X- _ O
+with -X- _ O
+poor -X- _ O
+prognosis -X- _ O
+and -X- _ O
+resistance -X- _ O
+to -X- _ O
+immunotherapy. -X- _ O
+Previous -X- _ O
+studies -X- _ O
+have -X- _ O
+reported -X- _ O
+that -X- _ O
+curcumin -X- _ O
+downregulates -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+in -X- _ O
+other -X- _ O
+cancer -X- _ O
+models -X- _ O
+, -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+melanoma -X- _ O
+( -X- _ O
+Xu -X- _ O
+et -X- _ O
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+and -X- _ O
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+, -X- _ O
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+the -X- _ O
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+SOCS1 -X- _ O
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+as -X- _ O
+a -X- _ O
+feedback -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
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+signaling -X- _ O
+( -X- _ O
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+) -X- _ O
+, -X- _ O
+but -X- _ O
+paradoxically -X- _ O
+, -X- _ O
+its -X- _ O
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+in -X- _ O
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+immune -X- _ O
+escape -X- _ O
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+enhance -X- _ O
+the -X- _ O
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+to -X- _ O
+immune-mediated -X- _ O
+clearance. -X- _ O
+Similarly -X- _ O
+, -X- _ O
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+to -X- _ O
+therapy -X- _ O
+( -X- _ O
+Meng -X- _ O
+et -X- _ O
+al. -X- _ O
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+) -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+that -X- _ O
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+by -X- _ O
+curcumin -X- _ O
+may -X- _ O
+have -X- _ O
+additional -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+benefits. -X- _ O
+Finally -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+observed -X- _ O
+that -X- _ O
+curcumin -X- _ O
+enhances -X- _ O
+the -X- _ O
+anti-proliferative -X- _ O
+effect -X- _ O
+of -X- _ O
+IFN-γ -X- _ O
+in -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ B-CELL
+While -X- _ O
+IFN-γ -X- _ O
+alone -X- _ O
+resulted -X- _ O
+in -X- _ O
+a -X- _ O
+modest -X- _ O
+reduction -X- _ O
+in -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+viability -X- _ O
+( -X- _ O
+21 -X- _ O
+% -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+combination -X- _ O
+of -X- _ O
+IFN-γ -X- _ O
+and -X- _ O
+curcumin -X- _ O
+led -X- _ O
+to -X- _ O
+a -X- _ O
+significantly -X- _ O
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+reduction -X- _ O
+( -X- _ O
+47 -X- _ O
+% -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+a -X- _ O
+synergistic -X- _ O
+effect. -X- _ O
+These -X- _ O
+findings -X- _ O
+align -X- _ O
+with -X- _ O
+previous -X- _ O
+reports -X- _ O
+that -X- _ O
+curcumin -X- _ O
+enhances -X- _ O
+the -X- _ O
+anti-tumor -X- _ O
+activity -X- _ O
+of -X- _ O
+cytokines -X- _ O
+by -X- _ O
+modulating -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+cycle -X- _ O
+regulators -X- _ O
+and -X- _ O
+apoptotic -X- _ O
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+( -X- _ O
+Hu -X- _ O
+et -X- _ O
+al. -X- _ O
+2018 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+precise -X- _ O
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+by -X- _ O
+which -X- _ O
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+NSCLC -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
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+survival -X- _ O
+pathways -X- _ O
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+Given -X- _ O
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+STAT1 -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+implicated -X- _ O
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+and -X- _ O
+pro-survival -X- _ O
+signaling -X- _ O
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+the -X- _ O
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+effect -X- _ O
+of -X- _ O
+its -X- _ O
+inhibition -X- _ O
+may -X- _ O
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+PD-L1 -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+NSCLC -X- _ B-CELL
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+activation -X- _ O
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+STAT1 -X- _ O
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+curcumin -X- _ O
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+IFN-γ-induced -X- _ O
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+enhances -X- _ O
+IFN-γ-mediated -X- _ O
+tumor -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+growth -X- _ O
+suppression -X- _ O
+, -X- _ O
+highlighting -X- _ O
+its -X- _ O
+potential -X- _ O
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+a -X- _ O
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+These -X- _ O
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+immune -X- _ O
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+immune -X- _ O
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+studies -X- _ O
+should -X- _ O
+focus -X- _ O
+on -X- _ O
+elucidating -X- _ O
+the -X- _ O
+precise -X- _ O
+molecular -X- _ O
+mechanisms -X- _ O
+underlying -X- _ O
+curcumin’s -X- _ O
+effects -X- _ O
+on -X- _ O
+STAT1 -X- _ O
+signaling -X- _ O
+and -X- _ O
+investigating -X- _ O
+its -X- _ O
+potential -X- _ O
+synergistic -X- _ O
+effects -X- _ O
+with -X- _ O
+existing -X- _ O
+immunotherapies -X- _ O
+in -X- _ O
+preclinical -X- _ O
+and -X- _ O
+clinical -X- _ O
+settings. -X- _ O
+Source -X- _ O
+paper -X- _ O
+: -X- _ O
+PMC12141184 -X- _ O
+
+Materials -X- _ O
+and -X- _ O
+methods -X- _ O
+Statistical -X- _ O
+analysis -X- _ O
+All -X- _ O
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+were -X- _ O
+performed -X- _ O
+at -X- _ O
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+three -X- _ O
+times. -X- _ O
+A -X- _ O
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+ANOVA -X- _ O
+followed -X- _ O
+by -X- _ O
+a -X- _ O
+Tukey -X- _ O
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+post-hoc -X- _ O
+test -X- _ O
+was -X- _ O
+used -X- _ O
+to -X- _ O
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+RT-qPCR -X- _ O
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+the -X- _ O
+treated -X- _ B-CELL_CONTEXT
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+and -X- _ O
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+ELISA -X- _ O
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+of -X- _ O
+RT-qPCR -X- _ O
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+from -X- _ O
+treated -X- _ B-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
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+the -X- _ O
+hypothetical -X- _ O
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+1 -X- _ O
+( -X- _ O
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+, -X- _ O
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+as -X- _ O
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+this -X- _ O
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+, -X- _ O
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+into -X- _ O
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+appear -X- _ O
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+# -X- _ O
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+was -X- _ O
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+a -X- _ O
+statistically -X- _ O
+significant -X- _ O
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+All -X- _ O
+statistical -X- _ O
+analyses -X- _ O
+were -X- _ O
+performed -X- _ O
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+GraphPad -X- _ O
+Prism -X- _ O
+version -X- _ O
+9 -X- _ O
+( -X- _ O
+GraphPad -X- _ O
+Software -X- _ O
+, -X- _ O
+Inc. -X- _ O
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+; -X- _ O
+means -X- _ O
+and -X- _ O
+standard -X- _ O
+deviations -X- _ O
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+provided -X- _ O
+as -X- _ O
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+or -X- _ O
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+Results -X- _ O
+Discussion -X- _ O
+Confirming -X- _ O
+previously -X- _ O
+published -X- _ O
+data -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+was -X- _ O
+shown -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+human -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL_LINE
+line -X- _ I-CELL_LINE
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+, -X- _ O
+an -X- _ O
+accepted -X- _ O
+model -X- _ O
+of -X- _ O
+human -X- _ O
+Mueller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+expresses -X- _ O
+AGT -X- _ O
+, -X- _ O
+ACE -X- _ O
+, -X- _ O
+ACE2 -X- _ O
+, -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II -X- _ O
+receptors -X- _ O
+AT1 -X- _ O
+and -X- _ O
+AT2 -X- _ O
+, -X- _ O
+as -X- _ O
+well -X- _ O
+as -X- _ O
+the -X- _ O
+receptor -X- _ O
+of -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+( -X- _ O
+1-7 -X- _ O
+) -X- _ O
+MAS1 -X- _ O
+( -X- _ O
+17-19,21-24,28 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+mRNA -X- _ O
+expression -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+these -X- _ O
+were -X- _ O
+largely -X- _ O
+unchanged -X- _ O
+when -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+exposed -X- _ O
+to -X- _ O
+hyperglycemic -X- _ O
+or -X- _ O
+hypoxic -X- _ O
+conditions -X- _ O
+or -X- _ O
+both. -X- _ O
+Exposure -X- _ O
+of -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+to -X- _ O
+these -X- _ O
+conditions -X- _ O
+seemed -X- _ O
+to -X- _ O
+not -X- _ O
+result -X- _ O
+in -X- _ O
+induction -X- _ O
+of -X- _ O
+cellular -X- _ O
+stress -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+may -X- _ O
+adversely -X- _ O
+affect -X- _ O
+the -X- _ O
+outcome -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+investigations -X- _ O
+, -X- _ O
+since -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+IL-6 -X- _ O
+mRNA -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+marker -X- _ O
+of -X- _ O
+cellular -X- _ O
+stress -X- _ O
+, -X- _ O
+remained -X- _ O
+stable. -X- _ O
+It -X- _ O
+could -X- _ O
+be -X- _ O
+suggested -X- _ O
+that -X- _ O
+an -X- _ O
+incubation -X- _ O
+time -X- _ O
+of -X- _ O
+6 -X- _ O
+h -X- _ O
+is -X- _ O
+too -X- _ O
+short -X- _ O
+, -X- _ O
+but -X- _ O
+due -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+short -X- _ O
+half-life -X- _ O
+of -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II -X- _ O
+, -X- _ O
+longer -X- _ O
+exposure -X- _ O
+times -X- _ O
+would -X- _ O
+likely -X- _ O
+not -X- _ O
+result -X- _ O
+in -X- _ O
+more -X- _ O
+relevant -X- _ O
+data. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+expression -X- _ O
+and -X- _ O
+secretion -X- _ O
+of -X- _ O
+VEGF-A -X- _ O
+were -X- _ O
+substantially -X- _ O
+increased -X- _ O
+by -X- _ O
+hypoxia -X- _ O
+alone -X- _ O
+or -X- _ O
+in -X- _ O
+combination -X- _ O
+with -X- _ O
+hyperglycemia -X- _ O
+confirming -X- _ O
+the -X- _ O
+expected -X- _ O
+strong -X- _ O
+response -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+to -X- _ O
+their -X- _ O
+altered -X- _ O
+environment -X- _ O
+within -X- _ O
+the -X- _ O
+studied -X- _ O
+time -X- _ O
+span. -X- _ O
+Angiotensin -X- _ O
+II -X- _ O
+and -X- _ O
+aldosterone -X- _ O
+did -X- _ O
+not -X- _ O
+modulate -X- _ O
+VEGF-A -X- _ O
+levels -X- _ O
+, -X- _ O
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+the -X- _ O
+dominant -X- _ O
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+hypoxia -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+regulation -X- _ O
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+the -X- _ O
+growth -X- _ O
+factors -X- _ O
+' -X- _ O
+expression -X- _ O
+and -X- _ O
+secretion. -X- _ O
+It -X- _ O
+was -X- _ O
+to -X- _ O
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+expected -X- _ O
+that -X- _ O
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+did -X- _ O
+not -X- _ O
+modulate -X- _ O
+VEGF-A -X- _ O
+expression -X- _ O
+and -X- _ O
+secretion -X- _ O
+within -X- _ O
+6 -X- _ O
+h -X- _ O
+, -X- _ O
+as -X- _ O
+possible -X- _ O
+changes -X- _ O
+likely -X- _ O
+manifest -X- _ O
+only -X- _ O
+after -X- _ O
+extended -X- _ O
+exposure -X- _ O
+( -X- _ O
+32 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+VEGF -X- _ O
+receptors -X- _ O
+are -X- _ O
+expressed -X- _ O
+in -X- _ O
+various -X- _ O
+retinal -X- _ B-TISSUE
+tissues -X- _ I-TISSUE
+including -X- _ O
+the -X- _ O
+retinal -X- _ B-TISSUE
+vasculature -X- _ I-TISSUE
+, -X- _ O
+Mueller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+retinal -X- _ B-TISSUE
+pigment -X- _ I-TISSUE
+epithelium -X- _ I-TISSUE
+( -X- _ O
+33,34 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Upregulation -X- _ O
+of -X- _ O
+VEGFR2 -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+retinal -X- _ B-TISSUE
+vasculature -X- _ I-TISSUE
+is -X- _ O
+associated -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+development -X- _ O
+of -X- _ O
+DR -X- _ O
+and -X- _ O
+its -X- _ O
+activation -X- _ O
+by -X- _ O
+the -X- _ O
+ligand -X- _ O
+VEGF-A165 -X- _ O
+results -X- _ O
+in -X- _ O
+elevated -X- _ O
+permeability -X- _ O
+of -X- _ O
+retinal -X- _ B-CELL_CONTEXT
+endothelial -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+or -X- _ O
+increased -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+pro-inflammatory -X- _ O
+mediators -X- _ O
+in -X- _ O
+Mueller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+in -X- _ O
+vitro -X- _ O
+( -X- _ O
+29,34,35 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Inhibitors -X- _ O
+of -X- _ O
+ACE -X- _ O
+and -X- _ O
+/ -X- _ O
+or -X- _ O
+AT1 -X- _ O
+, -X- _ O
+at -X- _ O
+least -X- _ O
+in -X- _ O
+part -X- _ O
+, -X- _ O
+prevent -X- _ O
+VEGF-A165-induced -X- _ O
+permeability -X- _ O
+of -X- _ O
+retinal -X- _ B-CELL_CONTEXT
+endothelial -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+in -X- _ O
+vitro -X- _ O
+and -X- _ O
+in -X- _ O
+vivo -X- _ O
+as -X- _ O
+well -X- _ O
+as -X- _ O
+retinal -X- _ O
+neovascularization -X- _ O
+, -X- _ O
+thereby -X- _ O
+proving -X- _ O
+an -X- _ O
+interaction -X- _ O
+between -X- _ O
+both -X- _ O
+signaling -X- _ O
+pathways -X- _ O
+( -X- _ O
+36-39 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+expression -X- _ O
+and -X- _ O
+secretion -X- _ O
+of -X- _ O
+VEGF-A -X- _ O
+by -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+were -X- _ O
+not -X- _ O
+altered -X- _ O
+by -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II -X- _ O
+likely -X- _ O
+reflecting -X- _ O
+the -X- _ O
+different -X- _ O
+behaviors -X- _ O
+of -X- _ O
+both -X- _ O
+cell -X- _ O
+types. -X- _ O
+mRNAs -X- _ O
+coding -X- _ O
+for -X- _ O
+proteins -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+RAAS -X- _ O
+indeed -X- _ O
+exhibited -X- _ O
+differential -X- _ O
+expression -X- _ O
+patterns -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+presence -X- _ O
+of -X- _ O
+either -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II -X- _ O
+or -X- _ O
+aldosterone -X- _ O
+when -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+cultured -X- _ O
+under -X- _ O
+hyperglycemic -X- _ O
+and -X- _ O
+/ -X- _ O
+or -X- _ O
+hypoxic -X- _ O
+conditions. -X- _ O
+It -X- _ O
+is -X- _ O
+of -X- _ O
+interest -X- _ O
+, -X- _ O
+that -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II -X- _ O
+did -X- _ O
+not -X- _ O
+alter -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+its -X- _ O
+precursor -X- _ O
+AGT -X- _ O
+under -X- _ O
+any -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+tested -X- _ O
+conditions -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+may -X- _ O
+indicate -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+peptide -X- _ O
+hormone -X- _ O
+can -X- _ O
+not -X- _ O
+, -X- _ O
+directly -X- _ O
+or -X- _ O
+indirectly -X- _ O
+, -X- _ O
+induce -X- _ O
+its -X- _ O
+own -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+Mueller -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ I-CELL
+To -X- _ O
+assess -X- _ O
+a -X- _ O
+possible -X- _ O
+pro-inflammatory -X- _ O
+response -X- _ O
+of -X- _ O
+Mueller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+changes -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+mRNA -X- _ O
+as -X- _ O
+well -X- _ O
+as -X- _ O
+secretion -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+pro-inflammatory -X- _ O
+cytokine -X- _ O
+IL-6 -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+is -X- _ O
+constitutively -X- _ O
+expressed -X- _ O
+by -X- _ O
+this -X- _ O
+cell -X- _ O
+type -X- _ O
+( -X- _ O
+including -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+was -X- _ O
+assessed -X- _ O
+( -X- _ O
+31 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+under -X- _ O
+normoxic -X- _ O
+or -X- _ O
+hypoxic -X- _ O
+conditions -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+amounts -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+secreted -X- _ O
+cytokine -X- _ O
+and -X- _ O
+its -X- _ O
+mRNA -X- _ O
+expression -X- _ O
+levels -X- _ O
+were -X- _ O
+not -X- _ O
+significantly -X- _ O
+altered -X- _ O
+by -X- _ O
+the -X- _ O
+treatment -X- _ O
+with -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II -X- _ O
+or -X- _ O
+aldosterone -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+hormones -X- _ O
+do -X- _ O
+not -X- _ O
+induce -X- _ O
+a -X- _ O
+pro-inflammatory -X- _ O
+response -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+under -X- _ O
+these -X- _ O
+circumstances. -X- _ O
+Interestingly -X- _ O
+, -X- _ O
+aldosterone -X- _ O
+significantly -X- _ O
+enhanced -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+ACE -X- _ O
+mRNA -X- _ O
+under -X- _ O
+hypoxic -X- _ O
+conditions -X- _ O
+, -X- _ O
+thus -X- _ O
+not -X- _ O
+resulting -X- _ O
+in -X- _ O
+an -X- _ O
+inflammatory -X- _ O
+response -X- _ O
+, -X- _ O
+that -X- _ O
+is -X- _ O
+enhanced -X- _ O
+expression -X- _ O
+or -X- _ O
+secretion -X- _ O
+of -X- _ O
+IL-6 -X- _ O
+via -X- _ O
+the -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II -X- _ O
+/ -X- _ O
+AT1-axis. -X- _ O
+Angiotensin -X- _ O
+II -X- _ O
+, -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+other -X- _ O
+hand -X- _ O
+, -X- _ O
+increased -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+ACE2 -X- _ O
+, -X- _ O
+resulting -X- _ O
+in -X- _ O
+its -X- _ O
+own -X- _ O
+inactivation -X- _ O
+by -X- _ O
+the -X- _ O
+formation -X- _ O
+of -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+( -X- _ O
+1-7 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+does -X- _ O
+not -X- _ O
+activate -X- _ O
+AT1. -X- _ O
+Similar -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+behavior -X- _ O
+of -X- _ O
+endothelial -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+from -X- _ O
+the -X- _ O
+human -X- _ O
+umbilical -X- _ B-TISSUE
+cord -X- _ I-TISSUE
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+mRNA -X- _ O
+expression -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+IL-6 -X- _ O
+were -X- _ O
+increased -X- _ O
+in -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+exposed -X- _ O
+to -X- _ O
+hyperglycemia -X- _ O
+and -X- _ O
+aldosterone -X- _ O
+, -X- _ O
+although -X- _ O
+the -X- _ O
+amount -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+secreted -X- _ O
+cytokine -X- _ O
+remained -X- _ O
+unchanged -X- _ O
+from -X- _ O
+control -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+( -X- _ O
+40 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+increased -X- _ O
+IL-6 -X- _ O
+expression -X- _ O
+is -X- _ O
+likely -X- _ O
+independent -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II -X- _ O
+/ -X- _ O
+AT1-axis -X- _ O
+, -X- _ O
+as -X- _ O
+possibly -X- _ O
+endogenously -X- _ O
+produced -X- _ O
+peptide -X- _ O
+hormone -X- _ O
+is -X- _ O
+inactivated -X- _ O
+by -X- _ O
+high -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+ACE2. -X- _ O
+Although -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II -X- _ O
+did -X- _ O
+not -X- _ O
+significantly -X- _ O
+increase -X- _ O
+IL-6 -X- _ O
+mRNA -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+cultured -X- _ O
+under -X- _ O
+hyperglycemic -X- _ O
+conditions -X- _ O
+, -X- _ O
+more -X- _ O
+IL-6 -X- _ O
+was -X- _ O
+secreted -X- _ O
+under -X- _ O
+these -X- _ O
+conditions. -X- _ O
+Higher -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+AT1 -X- _ O
+mRNA -X- _ O
+could -X- _ O
+lead -X- _ O
+to -X- _ O
+stronger -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+pro-inflammatory -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II -X- _ O
+/ -X- _ O
+AT1 -X- _ O
+signaling -X- _ O
+cascade -X- _ O
+, -X- _ O
+similar -X- _ O
+to -X- _ O
+that -X- _ O
+observed -X- _ O
+for -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II-activated -X- _ O
+retinal -X- _ B-CELL_CONTEXT
+microglia -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+express -X- _ O
+higher -X- _ O
+quantities -X- _ O
+of -X- _ O
+various -X- _ O
+pro-inflammatory -X- _ O
+cytokines -X- _ O
+and -X- _ O
+chemokines -X- _ O
+including -X- _ O
+IL-6 -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+process -X- _ O
+that -X- _ O
+is -X- _ O
+mediated -X- _ O
+by -X- _ O
+AT1 -X- _ O
+( -X- _ O
+41 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Elevated -X- _ O
+permeability -X- _ O
+of -X- _ O
+retinal -X- _ B-CELL_CONTEXT
+endothelial -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+due -X- _ O
+to -X- _ O
+IL-6-mediated -X- _ O
+trans-signaling -X- _ O
+in -X- _ O
+vitro -X- _ O
+likely -X- _ O
+contributes -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+breakdown -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+inner -X- _ O
+blood-retina -X- _ B-TISSUE
+barrier -X- _ O
+in -X- _ O
+vivo -X- _ O
+( -X- _ O
+42 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+protective -X- _ O
+ACE2 -X- _ O
+/ -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+( -X- _ O
+1-7 -X- _ O
+) -X- _ O
+/ -X- _ O
+MAS1 -X- _ O
+signaling -X- _ O
+cascade -X- _ O
+is -X- _ O
+upregulated -X- _ O
+during -X- _ O
+acute -X- _ O
+and -X- _ O
+chronic -X- _ O
+diseases -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+heart -X- _ B-TISSUE
+or -X- _ O
+kidney -X- _ B-TISSUE
+to -X- _ O
+counteract -X- _ O
+detrimental -X- _ O
+processes -X- _ O
+( -X- _ O
+43,44 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+This -X- _ O
+signaling -X- _ O
+cascade -X- _ O
+seems -X- _ O
+to -X- _ O
+also -X- _ O
+be -X- _ O
+activated -X- _ O
+by -X- _ O
+Mueller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+exposed -X- _ O
+to -X- _ O
+hyperglycemia -X- _ O
+and -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II -X- _ O
+, -X- _ O
+as -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+ACE2 -X- _ O
+and -X- _ O
+MAS1 -X- _ O
+RNA -X- _ O
+was -X- _ O
+elevated. -X- _ O
+Thus -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+concentrations -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+vasodilator -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+( -X- _ O
+1-7 -X- _ O
+) -X- _ O
+formed -X- _ O
+by -X- _ O
+protease -X- _ O
+ACE2 -X- _ O
+may -X- _ O
+be -X- _ O
+higher -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+through -X- _ O
+its -X- _ O
+interaction -X- _ O
+with -X- _ O
+receptor -X- _ O
+MAS1 -X- _ O
+, -X- _ O
+anti-angiogenic -X- _ O
+and -X- _ O
+anti-inflammatory -X- _ O
+processes -X- _ O
+can -X- _ O
+be -X- _ O
+induced -X- _ O
+( -X- _ O
+24-27 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+as -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+secreted -X- _ O
+increased -X- _ O
+quantities -X- _ O
+of -X- _ O
+IL-6 -X- _ O
+when -X- _ O
+exposed -X- _ O
+to -X- _ O
+hyperglycemia -X- _ O
+and -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+pro-inflammatory -X- _ O
+axis -X- _ O
+seems -X- _ O
+to -X- _ O
+exceed -X- _ O
+the -X- _ O
+anti-inflammatory -X- _ O
+response. -X- _ O
+A -X- _ O
+similar -X- _ O
+inflammatory -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II -X- _ O
+was -X- _ O
+also -X- _ O
+observed -X- _ O
+after -X- _ O
+additional -X- _ O
+exposure -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+to -X- _ O
+hyperglycemia -X- _ O
+plus -X- _ O
+hypoxia -X- _ O
+, -X- _ O
+as -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+IL-6 -X- _ O
+mRNA -X- _ O
+was -X- _ O
+substantially -X- _ O
+upregulated. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+observed -X- _ O
+lower -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+ACE -X- _ O
+mRNA -X- _ O
+is -X- _ O
+in -X- _ O
+line -X- _ O
+with -X- _ O
+an -X- _ O
+assumed -X- _ O
+capacity -X- _ O
+of -X- _ O
+MIO-M1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+to -X- _ O
+counteract -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II-induced -X- _ O
+pro-inflammatory -X- _ O
+signaling. -X- _ O
+In -X- _ O
+vivo -X- _ O
+, -X- _ O
+Mueller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+retinal -X- _ O
+endothelial -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+retinal -X- _ B-CELL_CONTEXT
+pericytes -X- _ B-CELL
+form -X- _ O
+the -X- _ O
+so-called -X- _ O
+neurovascular -X- _ O
+unit -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+tightly -X- _ O
+regulates -X- _ O
+vascular -X- _ O
+homeostasis -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+retina -X- _ B-TISSUE
+( -X- _ O
+45 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Whether -X- _ O
+the -X- _ O
+cellular -X- _ O
+interactions -X- _ O
+change -X- _ O
+their -X- _ O
+individual -X- _ O
+responses -X- _ O
+to -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II -X- _ O
+could -X- _ O
+not -X- _ O
+be -X- _ O
+evaluated -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+present -X- _ O
+study. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+of -X- _ O
+ACE -X- _ O
+or -X- _ O
+AT1 -X- _ O
+were -X- _ O
+found -X- _ O
+to -X- _ O
+, -X- _ O
+at -X- _ O
+least -X- _ O
+in -X- _ O
+part -X- _ O
+, -X- _ O
+improve -X- _ O
+the -X- _ O
+outcomes -X- _ O
+of -X- _ O
+DME -X- _ O
+in -X- _ O
+diabetic -X- _ O
+patients -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+supports -X- _ O
+the -X- _ O
+findings -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+present -X- _ O
+study -X- _ O
+that -X- _ O
+Mueller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+likely -X- _ O
+contribute -X- _ O
+to -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II-mediated -X- _ O
+inflammatory -X- _ O
+responses -X- _ O
+present -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+early -X- _ O
+development -X- _ O
+of -X- _ O
+this -X- _ O
+disease -X- _ O
+( -X- _ O
+46,47 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+contrast -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+impact -X- _ O
+of -X- _ O
+Mueller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+on -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II-mediated -X- _ O
+inflammatory -X- _ O
+responses -X- _ O
+observed -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+early -X- _ O
+development -X- _ O
+of -X- _ O
+RVO -X- _ O
+is -X- _ O
+likely -X- _ O
+low -X- _ O
+when -X- _ O
+hypoxia -X- _ O
+plays -X- _ O
+a -X- _ O
+dominant -X- _ O
+role -X- _ O
+accompanied -X- _ O
+by -X- _ O
+induction -X- _ O
+of -X- _ O
+expression -X- _ O
+and -X- _ O
+secretion -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+angiogenic -X- _ O
+and -X- _ O
+permeability-inducing -X- _ O
+growth -X- _ O
+factor -X- _ O
+VEGF-A -X- _ O
+( -X- _ O
+9 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+conclusion -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+results -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+present -X- _ O
+in -X- _ O
+vitro -X- _ O
+study -X- _ O
+provide -X- _ O
+evidence -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+responses -X- _ O
+of -X- _ O
+Mueller -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+to -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
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+angiotensin -X- _ O
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+the -X- _ O
+environment -X- _ O
+: -X- _ O
+A -X- _ O
+pro-inflammatory -X- _ O
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+is -X- _ O
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+( -X- _ O
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+whereas -X- _ O
+changes -X- _ O
+induced -X- _ O
+by -X- _ O
+hypoxia -X- _ O
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+not -X- _ O
+modulated -X- _ O
+by -X- _ O
+angiotensin -X- _ O
+II. -X- _ O
+Source -X- _ O
+paper -X- _ O
+: -X- _ O
+PMC10442740 -X- _ O
+
+Introduction -X- _ O
+The -X- _ O
+introduction -X- _ O
+of -X- _ O
+antiretroviral -X- _ O
+therapy -X- _ O
+( -X- _ O
+ART -X- _ O
+) -X- _ O
+has -X- _ O
+successfully -X- _ O
+limited -X- _ O
+the -X- _ O
+spread -X- _ O
+of -X- _ O
+Human -X- _ O
+Immunodeficiency -X- _ O
+Virus -X- _ O
+( -X- _ O
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+patient -X- _ O
+clinical -X- _ O
+outcomes. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+complete -X- _ O
+cure -X- _ O
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+HIV -X- _ O
+infection -X- _ O
+remains -X- _ O
+out -X- _ O
+of -X- _ O
+reach -X- _ O
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+the -X- _ O
+transcriptionally -X- _ O
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+replication-competent -X- _ O
+provirus -X- _ O
+that -X- _ O
+is -X- _ O
+integrated -X- _ O
+into -X- _ O
+the -X- _ O
+host -X- _ O
+genome -X- _ O
+persists -X- _ O
+in -X- _ O
+long-lived -X- _ O
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+, -X- _ O
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+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
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+well -X- _ O
+as -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
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+] -X- _ O
+. -X- _ O
+These -X- _ O
+reservoirs -X- _ O
+are -X- _ O
+highly -X- _ O
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+are -X- _ O
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+and -X- _ O
+the -X- _ O
+effects -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+host -X- _ O
+immune -X- _ O
+surveillance -X- _ O
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+thus -X- _ O
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+significant -X- _ O
+obstacle -X- _ O
+to -X- _ O
+eradicating -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV -X- _ O
+reservoirs. -X- _ O
+Consequently -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+most -X- _ O
+people -X- _ O
+living -X- _ O
+with -X- _ O
+HIV -X- _ O
+, -X- _ O
+interrupting -X- _ O
+ART -X- _ O
+leads -X- _ O
+to -X- _ O
+rapid -X- _ O
+viral -X- _ O
+load -X- _ O
+rebound -X- _ O
+, -X- _ O
+usually -X- _ O
+within -X- _ O
+weeks -X- _ O
+after -X- _ O
+treatment -X- _ O
+cessation -X- _ O
+[ -X- _ O
+3–6 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+As -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+stimulation -X- _ O
+triggers -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+proviral -X- _ O
+transcription -X- _ O
+, -X- _ O
+one -X- _ O
+strategy -X- _ O
+that -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+proposed -X- _ O
+to -X- _ O
+eliminate -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV -X- _ O
+reservoirs -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+“Shock-and-Kill” -X- _ O
+approach -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+utilizes -X- _ O
+latency-reversing -X- _ O
+agents -X- _ O
+( -X- _ O
+LRAs -X- _ O
+) -X- _ O
+to -X- _ O
+first -X- _ O
+activate -X- _ O
+dormant -X- _ O
+HIV-infected -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+and -X- _ O
+facilitate -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+death -X- _ O
+by -X- _ O
+viral -X- _ O
+cytopathic -X- _ O
+effects -X- _ O
+or -X- _ O
+immune-mediated -X- _ O
+killing. -X- _ O
+This -X- _ O
+step -X- _ O
+is -X- _ O
+done -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+presence -X- _ O
+of -X- _ O
+ART -X- _ O
+, -X- _ O
+so -X- _ O
+there -X- _ O
+are -X- _ O
+no -X- _ O
+further -X- _ O
+rounds -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV -X- _ O
+replication. -X- _ O
+[ -X- _ O
+7–9 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Alternatively -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+“Block -X- _ O
+and -X- _ O
+Lock” -X- _ O
+approach -X- _ O
+frees -X- _ O
+infected -X- _ O
+individuals -X- _ O
+from -X- _ O
+ART -X- _ O
+by -X- _ O
+silencing -X- _ O
+HIV -X- _ O
+transcription -X- _ O
+and -X- _ O
+inducing -X- _ O
+a -X- _ O
+deep -X- _ O
+state -X- _ O
+of -X- _ O
+latency. -X- _ O
+Nevertheless -X- _ O
+, -X- _ O
+despite -X- _ O
+promising -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+options -X- _ O
+, -X- _ O
+these -X- _ O
+strategies -X- _ O
+and -X- _ O
+others -X- _ O
+have -X- _ O
+regretfully -X- _ O
+failed -X- _ O
+to -X- _ O
+achieve -X- _ O
+significant -X- _ O
+clinical -X- _ O
+efficacy. -X- _ O
+These -X- _ O
+failures -X- _ O
+highlight -X- _ O
+our -X- _ O
+lack -X- _ O
+of -X- _ O
+knowledge -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+molecular -X- _ O
+mechanisms -X- _ O
+that -X- _ O
+govern -X- _ O
+latency -X- _ O
+establishment -X- _ O
+and -X- _ O
+reversal -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+need -X- _ O
+for -X- _ O
+alternative -X- _ O
+therapies -X- _ O
+capable -X- _ O
+of -X- _ O
+eliminating -X- _ O
+the -X- _ O
+viral -X- _ O
+reservoirs -X- _ O
+[ -X- _ O
+10–15 -X- _ O
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+. -X- _ O
+Epigenetic -X- _ O
+constraints -X- _ O
+that -X- _ O
+suppress -X- _ O
+proviral -X- _ O
+gene -X- _ O
+transcription -X- _ O
+are -X- _ O
+essential -X- _ O
+for -X- _ O
+establishing -X- _ O
+HIV -X- _ O
+latency -X- _ O
+[ -X- _ O
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+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Low -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+basal -X- _ O
+and -X- _ O
+elongating -X- _ O
+transcription -X- _ O
+factors -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+infected -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+together -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+absence -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+viral -X- _ O
+trans-activator -X- _ O
+of -X- _ O
+transcription -X- _ O
+( -X- _ O
+Tat -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+ensure -X- _ O
+that -X- _ O
+proviral -X- _ O
+transcription -X- _ O
+remains -X- _ O
+below -X- _ O
+detectable -X- _ O
+thresholds -X- _ O
+[ -X- _ O
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+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Within -X- _ O
+the -X- _ O
+infected -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+gene -X- _ O
+transcription -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+integrated -X- _ O
+provirus -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+host -X- _ O
+genome -X- _ O
+are -X- _ O
+synchronized -X- _ O
+[ -X- _ O
+20,21 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Both -X- _ O
+display -X- _ O
+key -X- _ O
+steps -X- _ O
+of -X- _ O
+gene -X- _ O
+transcription -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+include -X- _ O
+initiation -X- _ O
+, -X- _ O
+promoter -X- _ O
+arrest -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+elongation. -X- _ O
+HIV-Tat -X- _ O
+orchestrates -X- _ O
+transcription -X- _ O
+elongation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+provirus -X- _ O
+by -X- _ O
+binding -X- _ O
+to -X- _ O
+TAR -X- _ O
+RNA -X- _ O
+and -X- _ O
+recruiting -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+and -X- _ O
+Super -X- _ O
+Elongation -X- _ O
+Complex -X- _ O
+( -X- _ O
+SEC -X- _ O
+) -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+viral -X- _ O
+promoter -X- _ O
+[ -X- _ O
+22–26 -X- _ O
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+. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+despite -X- _ O
+extensive -X- _ O
+efforts -X- _ O
+to -X- _ O
+elucidate -X- _ O
+the -X- _ O
+mechanisms -X- _ O
+of -X- _ O
+metazoan -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+control -X- _ O
+and -X- _ O
+its -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+regulation -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV -X- _ O
+gene -X- _ O
+transcription -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+knowledge -X- _ O
+of -X- _ O
+how -X- _ O
+HIV -X- _ O
+latency -X- _ O
+is -X- _ O
+established -X- _ O
+is -X- _ O
+still -X- _ O
+incomplete -X- _ O
+[ -X- _ O
+27 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Long -X- _ O
+non-coding -X- _ O
+RNAs -X- _ O
+( -X- _ O
+lncRNAs -X- _ O
+) -X- _ O
+are -X- _ O
+transcripts -X- _ O
+with -X- _ O
+longer -X- _ O
+than -X- _ O
+200 -X- _ O
+nucleotides -X- _ O
+that -X- _ O
+lack -X- _ O
+protein-coding -X- _ O
+capacity. -X- _ O
+To -X- _ O
+date -X- _ O
+, -X- _ O
+over -X- _ O
+200,000 -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+type-specific -X- _ O
+lncRNAs -X- _ O
+have -X- _ O
+been -X- _ O
+identified -X- _ O
+and -X- _ O
+display -X- _ O
+critical -X- _ O
+regulatory -X- _ O
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+of -X- _ O
+many -X- _ O
+processes -X- _ O
+within -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+[ -X- _ O
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+. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+functions -X- _ O
+of -X- _ O
+most -X- _ O
+of -X- _ O
+these -X- _ O
+transcripts -X- _ O
+remain -X- _ O
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+In -X- _ O
+the -X- _ O
+context -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV -X- _ O
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+roles -X- _ O
+for -X- _ O
+several -X- _ O
+cellular -X- _ O
+lncRNAs -X- _ O
+have -X- _ O
+been -X- _ O
+documented -X- _ O
+[ -X- _ O
+32–40 -X- _ O
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+. -X- _ O
+Moreover -X- _ O
+, -X- _ O
+significant -X- _ O
+gaps -X- _ O
+still -X- _ O
+remain -X- _ O
+in -X- _ O
+our -X- _ O
+knowledge -X- _ O
+about -X- _ O
+the -X- _ O
+mechanistic -X- _ O
+roles -X- _ O
+that -X- _ O
+lncRNAs -X- _ O
+play -X- _ O
+in -X- _ O
+CD4 -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+activation -X- _ O
+and -X- _ O
+HIV -X- _ O
+latency. -X- _ O
+In -X- _ O
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+study -X- _ O
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+in -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+an -X- _ O
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+Jurkat-derived -X- _ B-CELL
+T -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+line -X- _ I-CELL
+( -X- _ O
+J-Lat -X- _ O
+6.3 -X- _ O
+) -X- _ O
+upon -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+stimulation -X- _ O
+with -X- _ O
+Phorbol -X- _ O
+12-myristate -X- _ O
+13-acetate—PMA -X- _ O
+/ -X- _ O
+Ionomycin -X- _ O
+( -X- _ O
+P -X- _ O
+/ -X- _ O
+I -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+We -X- _ O
+documented -X- _ O
+RNA -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+stimulated -X- _ O
+J-Lat -X- _ O
+6.3 -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+that -X- _ O
+carry -X- _ O
+either -X- _ O
+active -X- _ O
+or -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+latent -X- _ O
+HIV -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+among -X- _ O
+identified -X- _ O
+ncRNA -X- _ O
+, -X- _ O
+Cytoskeleton -X- _ O
+Regulator -X- _ O
+RNA -X- _ O
+( -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+) -X- _ O
+exhibited -X- _ O
+a -X- _ O
+profound -X- _ O
+change -X- _ O
+in -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+that -X- _ O
+expressed -X- _ O
+active -X- _ O
+HIV -X- _ O
+following -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+stimulation. -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+directly -X- _ O
+binds -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV -X- _ O
+promoter -X- _ O
+and -X- _ O
+activates -X- _ O
+viral -X- _ O
+gene -X- _ O
+transcription -X- _ O
+and -X- _ O
+latency -X- _ O
+reversal -X- _ O
+by -X- _ O
+recruiting -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+to -X- _ O
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+viral -X- _ O
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+CYTOR -X- _ O
+also -X- _ O
+exerts -X- _ O
+its -X- _ O
+effects -X- _ O
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+by -X- _ O
+controlling -X- _ O
+global -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+along -X- _ O
+with -X- _ O
+actin -X- _ O
+dynamic -X- _ O
+pathways -X- _ O
+, -X- _ O
+thereby -X- _ O
+affecting -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+activation -X- _ O
+and -X- _ O
+HIV -X- _ O
+infection. -X- _ O
+Results -X- _ O
+Discussion -X- _ O
+In -X- _ O
+search -X- _ O
+of -X- _ O
+regulators -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV -X- _ O
+latency -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+profiled -X- _ O
+changes -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+ncRNAs -X- _ O
+by -X- _ O
+employing -X- _ O
+RNA-Seq -X- _ O
+analysis -X- _ O
+in -X- _ O
+resting -X- _ O
+and -X- _ O
+stimulated -X- _ O
+HIV-infected -X- _ O
+J-Lat -X- _ O
+6.3 -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+comparing -X- _ O
+RNA -X- _ O
+expression -X- _ O
+levels -X- _ O
+in -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+that -X- _ O
+carry -X- _ O
+active -X- _ O
+HIV -X- _ O
+( -X- _ O
+GFP+ -X- _ O
+) -X- _ O
+or -X- _ O
+latent -X- _ O
+HIV -X- _ O
+( -X- _ O
+GFP- -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Our -X- _ O
+analysis -X- _ O
+show -X- _ O
+that -X- _ O
+different -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+profiles -X- _ O
+exist -X- _ O
+in -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+where -X- _ O
+HIV -X- _ O
+is -X- _ O
+activated -X- _ O
+versus -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+where -X- _ O
+it -X- _ O
+remains -X- _ O
+latent. -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+lncRNA -X- _ O
+was -X- _ O
+identified -X- _ O
+as -X- _ O
+one -X- _ O
+of -X- _ O
+these -X- _ O
+RNAs -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+its -X- _ O
+expression -X- _ O
+is -X- _ O
+elevated -X- _ O
+upon -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+stimulation -X- _ O
+, -X- _ O
+where -X- _ O
+HIV -X- _ O
+is -X- _ O
+active. -X- _ O
+These -X- _ O
+observations -X- _ O
+were -X- _ O
+further -X- _ O
+confirmed -X- _ O
+in -X- _ O
+primary -X- _ O
+CD4+ -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+( -X- _ O
+Fig -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Functional -X- _ O
+analyses -X- _ O
+show -X- _ O
+that -X- _ O
+following -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+stimulation -X- _ O
+, -X- _ O
+over-expression -X- _ O
+of -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+activates -X- _ O
+HIV -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+, -X- _ O
+while -X- _ O
+its -X- _ O
+depletion -X- _ O
+inhibits -X- _ O
+viral -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression. -X- _ O
+Significantly -X- _ O
+, -X- _ O
+upon -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+stimulation -X- _ O
+, -X- _ O
+depletion -X- _ O
+of -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+promoted -X- _ O
+entry -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV -X- _ O
+into -X- _ O
+a -X- _ O
+latent -X- _ O
+state -X- _ O
+, -X- _ O
+while -X- _ O
+its -X- _ O
+over-expression -X- _ O
+delayed -X- _ O
+entry -X- _ O
+into -X- _ O
+latency -X- _ O
+and -X- _ O
+enhanced -X- _ O
+latency -X- _ O
+reversal -X- _ O
+( -X- _ O
+Fig -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Effects -X- _ O
+of -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+on -X- _ O
+HIV -X- _ O
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+and -X- _ O
+latency -X- _ O
+establishment -X- _ O
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+also -X- _ O
+confirmed -X- _ O
+in -X- _ O
+stimulated -X- _ O
+primary -X- _ O
+CD4+ -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+( -X- _ O
+Fig -X- _ O
+3 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+We -X- _ O
+are -X- _ O
+aware -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+model -X- _ O
+of -X- _ O
+stimulated -X- _ O
+CD4+ -X- _ O
+primary -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+does -X- _ O
+not -X- _ O
+recapitulate -X- _ O
+the -X- _ O
+actual -X- _ O
+state -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
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+, -X- _ O
+which -X- _ O
+is -X- _ O
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+of -X- _ O
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+CD4+ -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+that -X- _ O
+do -X- _ O
+not -X- _ O
+support -X- _ O
+HIV -X- _ O
+infection. -X- _ O
+As -X- _ O
+this -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+limitation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+current -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+are -X- _ O
+trying -X- _ O
+to -X- _ O
+adopt -X- _ O
+a -X- _ O
+recently -X- _ O
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+approach -X- _ O
+to -X- _ O
+lncRNAs -X- _ O
+to -X- _ O
+deplete -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+in -X- _ O
+this -X- _ O
+unique -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+population -X- _ O
+and -X- _ O
+monitor -X- _ O
+the -X- _ O
+effects -X- _ O
+of -X- _ O
+latency -X- _ O
+kinetics -X- _ O
+without -X- _ O
+altering -X- _ O
+its -X- _ O
+activation -X- _ O
+[ -X- _ O
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+] -X- _ O
+. -X- _ O
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+, -X- _ O
+our -X- _ O
+observations -X- _ O
+show -X- _ O
+that -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+directly -X- _ O
+binds -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV -X- _ O
+promoter -X- _ O
+and -X- _ O
+enhances -X- _ O
+the -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+Ser2 -X- _ O
+CTD -X- _ O
+of -X- _ O
+RNAPII -X- _ O
+through -X- _ O
+association -X- _ O
+with -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+to -X- _ O
+activate -X- _ O
+viral -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+( -X- _ O
+Figs -X- _ O
+4 -X- _ O
+and -X- _ O
+5 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Changes -X- _ O
+in -X- _ O
+histone -X- _ O
+activation -X- _ O
+marks -X- _ O
+around -X- _ O
+the -X- _ O
+viral -X- _ O
+promoter -X- _ O
+in -X- _ O
+CYTOR-depleted -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+also -X- _ O
+imply -X- _ O
+that -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+activates -X- _ O
+the -X- _ O
+proviral -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+( -X- _ O
+Fig -X- _ O
+4 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+addition -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+direct -X- _ O
+effects -X- _ O
+of -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+on -X- _ O
+HIV -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+also -X- _ O
+demonstrate -X- _ O
+that -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+controls -X- _ O
+global -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression. -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+is -X- _ O
+recruited -X- _ O
+to -X- _ O
+other -X- _ O
+gene -X- _ O
+promoters -X- _ O
+that -X- _ O
+are -X- _ O
+regulated -X- _ O
+by -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+, -X- _ O
+like -X- _ O
+myc -X- _ O
+, -X- _ O
+NF-κB -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+IL2Ra -X- _ O
+( -X- _ O
+S3 -X- _ O
+Fig -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Among -X- _ O
+the -X- _ O
+identified -X- _ O
+enriched -X- _ O
+pathways -X- _ O
+that -X- _ O
+potentially -X- _ O
+are -X- _ O
+regulated -X- _ O
+by -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+are -X- _ O
+those -X- _ O
+that -X- _ O
+are -X- _ O
+involved -X- _ O
+in -X- _ O
+actin -X- _ O
+dynamics. -X- _ O
+Consistently -X- _ O
+, -X- _ O
+reduced -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+expression -X- _ O
+are -X- _ O
+associated -X- _ O
+with -X- _ O
+reduced -X- _ O
+polymerization -X- _ O
+of -X- _ O
+cortical -X- _ O
+actin -X- _ O
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+TCR -X- _ O
+engagement -X- _ O
+( -X- _ O
+Fig -X- _ O
+6 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+turn -X- _ O
+, -X- _ O
+elevated -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+do -X- _ O
+not -X- _ O
+further -X- _ O
+increase -X- _ O
+actin -X- _ O
+polymerization -X- _ O
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+stimulation -X- _ O
+and -X- _ O
+can -X- _ B-CELL
+not -X- _ I-CELL
+induce -X- _ O
+morphological -X- _ O
+responses -X- _ O
+of -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+absence -X- _ O
+of -X- _ O
+stimulation -X- _ O
+( -X- _ O
+S5 -X- _ O
+Fig -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Thus -X- _ O
+, -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+is -X- _ O
+an -X- _ O
+important -X- _ O
+regulator -X- _ O
+of -X- _ O
+TCR-induced -X- _ O
+actin -X- _ O
+polymerization -X- _ O
+in -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ I-CELL
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+its -X- _ O
+normal -X- _ O
+endogenous -X- _ O
+expression -X- _ O
+levels -X- _ O
+are -X- _ O
+sufficient -X- _ O
+for -X- _ O
+a -X- _ O
+proper -X- _ O
+response. -X- _ O
+To -X- _ O
+test -X- _ O
+a -X- _ O
+mechanistic -X- _ O
+link -X- _ O
+between -X- _ O
+actin -X- _ O
+remodeling -X- _ O
+, -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+levels -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+HIV -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+actin -X- _ O
+dynamics -X- _ O
+with -X- _ O
+specific -X- _ O
+inhibitors -X- _ O
+( -X- _ O
+Fig -X- _ O
+6I -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Effects -X- _ O
+of -X- _ O
+inhibition -X- _ O
+of -X- _ O
+actin -X- _ O
+polymerization -X- _ O
+phenocopied -X- _ O
+the -X- _ O
+effect -X- _ O
+of -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+depletion -X- _ O
+on -X- _ O
+HIV -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+that -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+may -X- _ O
+affect -X- _ O
+HIV -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+by -X- _ O
+the -X- _ O
+regulation -X- _ O
+of -X- _ O
+genes -X- _ O
+that -X- _ O
+control -X- _ O
+cellular -X- _ O
+actin -X- _ O
+dynamics -X- _ O
+( -X- _ O
+Fig -X- _ O
+6I -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Accordingly -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+propose -X- _ O
+a -X- _ O
+model -X- _ O
+where -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+exerts -X- _ O
+its -X- _ O
+effects -X- _ O
+on -X- _ O
+global -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+and -X- _ O
+promotes -X- _ O
+HIV -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+by -X- _ O
+both -X- _ O
+direct -X- _ O
+and -X- _ O
+indirect -X- _ O
+effects -X- _ O
+( -X- _ O
+Fig -X- _ O
+7 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+directly -X- _ O
+binds -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV -X- _ O
+promoter -X- _ O
+and -X- _ O
+recruits -X- _ O
+the -X- _ O
+elongation -X- _ O
+transcription -X- _ O
+machinery -X- _ O
+to -X- _ O
+enhance -X- _ O
+RNAPII -X- _ O
+CTD -X- _ O
+phosphorylation -X- _ O
+and -X- _ O
+deposition -X- _ O
+of -X- _ O
+active -X- _ O
+histone -X- _ O
+markers -X- _ O
+around -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV -X- _ O
+promoter -X- _ O
+, -X- _ O
+ultimately -X- _ O
+activating -X- _ O
+HIV -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression. -X- _ O
+Indirectly -X- _ O
+, -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+controls -X- _ O
+gene -X- _ O
+targets -X- _ O
+that -X- _ O
+regulate -X- _ O
+actin -X- _ O
+dynamics -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+nucleus -X- _ O
+and -X- _ O
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+plasma -X- _ B-TISSUE
+membrane -X- _ O
+to -X- _ O
+optimize -X- _ O
+the -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+activation -X- _ O
+, -X- _ O
+presumably -X- _ O
+via -X- _ O
+the -X- _ O
+regulation -X- _ O
+of -X- _ O
+cellular -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression. -X- _ O
+10.1371 -X- _ O
+/ -X- _ O
+journal.ppat.1012172.g007Fig -X- _ O
+7***A -X- _ O
+working -X- _ O
+model -X- _ O
+for -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+functions.*** -X- _ O
+Following -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+activation -X- _ O
+, -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+are -X- _ O
+elevated -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+nucleus. -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+is -X- _ O
+recruited -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV -X- _ O
+promoter -X- _ O
+and -X- _ O
+binds -X- _ O
+to -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+, -X- _ O
+leading -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+viral -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression. -X- _ O
+Cellular -X- _ O
+genes -X- _ O
+regulated -X- _ O
+by -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+include -X- _ O
+actin -X- _ O
+remodeling -X- _ O
+genes -X- _ O
+that -X- _ O
+promote -X- _ O
+actin -X- _ O
+polymerization -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+indirect -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression. -X- _ O
+Like -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+, -X- _ O
+other -X- _ O
+lncRNAs -X- _ O
+have -X- _ O
+been -X- _ O
+reported -X- _ O
+to -X- _ O
+occupy -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV -X- _ O
+promoter -X- _ O
+and -X- _ O
+modulate -X- _ O
+its -X- _ O
+activity -X- _ O
+at -X- _ O
+either -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+or -X- _ O
+posttranscriptional -X- _ O
+levels -X- _ O
+[ -X- _ O
+57 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Most -X- _ O
+act -X- _ O
+as -X- _ O
+scaffolds -X- _ O
+that -X- _ O
+associate -X- _ O
+with -X- _ O
+other -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+activators -X- _ O
+or -X- _ O
+repressors -X- _ O
+to -X- _ O
+control -X- _ O
+HIV -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+[ -X- _ O
+35–39,58–60 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+the -X- _ O
+case -X- _ O
+of -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+, -X- _ O
+its -X- _ O
+effects -X- _ O
+on -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+occur -X- _ O
+by -X- _ O
+recruiting -X- _ O
+the -X- _ O
+transcription -X- _ O
+elongation -X- _ O
+machinery -X- _ O
+to -X- _ O
+activate -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+, -X- _ O
+either -X- _ O
+from -X- _ O
+the -X- _ O
+viral -X- _ O
+promoter -X- _ O
+or -X- _ O
+other -X- _ O
+cellular -X- _ O
+promoters. -X- _ O
+It -X- _ O
+will -X- _ O
+be -X- _ O
+essential -X- _ O
+to -X- _ O
+identify -X- _ O
+other -X- _ O
+partners -X- _ O
+that -X- _ O
+are -X- _ O
+associated -X- _ O
+with -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+lncRNA -X- _ O
+and -X- _ O
+control -X- _ O
+HIV -X- _ O
+promoter -X- _ O
+activity. -X- _ O
+As -X- _ O
+we -X- _ O
+also -X- _ O
+aim -X- _ O
+to -X- _ O
+dissect -X- _ O
+the -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+in -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+control -X- _ O
+, -X- _ O
+specifically -X- _ O
+for -X- _ O
+HIV -X- _ O
+gene -X- _ O
+regulation -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+will -X- _ O
+be -X- _ O
+essential -X- _ O
+to -X- _ O
+define -X- _ O
+how -X- _ O
+events -X- _ O
+within -X- _ O
+the -X- _ O
+nucleus -X- _ O
+are -X- _ O
+regulated -X- _ O
+by -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+and -X- _ O
+translated -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+control -X- _ O
+of -X- _ O
+downstream -X- _ O
+effector -X- _ O
+functions -X- _ O
+of -X- _ O
+stimulated -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ I-CELL
+Future -X- _ O
+studies -X- _ O
+will -X- _ O
+further -X- _ O
+identify -X- _ O
+the -X- _ O
+downstream -X- _ O
+targets -X- _ O
+of -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+that -X- _ O
+control -X- _ O
+actin -X- _ O
+dynamics -X- _ O
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+activation. -X- _ O
+As -X- _ O
+additional -X- _ O
+pathways -X- _ O
+were -X- _ O
+identified -X- _ O
+by -X- _ O
+our -X- _ O
+RNA-seq -X- _ O
+analysis -X- _ O
+in -X- _ O
+CYTOR-depleted -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+visualize -X- _ O
+that -X- _ O
+future -X- _ O
+work -X- _ O
+will -X- _ O
+identify -X- _ O
+novel -X- _ O
+downstream -X- _ O
+targets -X- _ O
+of -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+and -X- _ O
+elucidate -X- _ O
+their -X- _ O
+mechanisms -X- _ O
+of -X- _ O
+function -X- _ O
+in -X- _ O
+regulating -X- _ O
+HIV -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+and -X- _ O
+latency. -X- _ O
+These -X- _ O
+may -X- _ O
+open -X- _ O
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+ways -X- _ O
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+developing -X- _ O
+novel -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+tools -X- _ O
+that -X- _ O
+will -X- _ O
+be -X- _ O
+integrated -X- _ O
+or -X- _ O
+substitute -X- _ O
+current -X- _ O
+strategies -X- _ O
+to -X- _ O
+successfully -X- _ O
+eliminate -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV -X- _ O
+reservoir. -X- _ O
+Materials -X- _ O
+and -X- _ O
+methods -X- _ O
+Analysis -X- _ O
+of -X- _ O
+actin -X- _ O
+dynamics -X- _ O
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+t -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+activation -X- _ O
+Actin -X- _ O
+remodeling -X- _ O
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+T -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+receptor -X- _ O
+( -X- _ O
+TCR -X- _ O
+) -X- _ O
+engagement -X- _ O
+was -X- _ O
+monitored -X- _ O
+by -X- _ O
+forming -X- _ O
+circumferential -X- _ O
+F-actin -X- _ O
+rings -X- _ O
+as -X- _ O
+previously -X- _ O
+described -X- _ O
+[ -X- _ O
+61,62 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+brief -X- _ O
+, -X- _ O
+stimulatory -X- _ O
+coverslips -X- _ O
+were -X- _ O
+prepared -X- _ O
+by -X- _ O
+coating -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+0.01 -X- _ O
+% -X- _ O
+poly-L-lysine -X- _ O
+( -X- _ O
+PLL -X- _ O
+; -X- _ O
+Sigma -X- _ O
+) -X- _ O
+solution -X- _ O
+for -X- _ O
+10 -X- _ O
+minutes -X- _ O
+at -X- _ O
+room -X- _ O
+temperature -X- _ O
+, -X- _ O
+followed -X- _ O
+by -X- _ O
+wet-chamber -X- _ O
+incubation -X- _ O
+for -X- _ O
+3 -X- _ O
+hours -X- _ O
+at -X- _ O
+37°C -X- _ O
+with -X- _ O
+7 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
+ml -X- _ O
+anti-CD3 -X- _ O
+antibody -X- _ O
+( -X- _ O
+50 -X- _ O
+μl -X- _ O
+per -X- _ O
+coverslip -X- _ O
+, -X- _ O
+clone -X- _ O
+HIT3a -X- _ O
+against -X- _ O
+CD3E -X- _ O
+; -X- _ O
+BD -X- _ O
+Biosciences -X- _ O
+) -X- _ O
+in -X- _ O
+phosphate-buffered -X- _ O
+saline -X- _ O
+( -X- _ O
+PBS -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Stimulatory -X- _ O
+coverslips -X- _ O
+were -X- _ O
+subsequently -X- _ O
+washed -X- _ O
+in -X- _ O
+PBS -X- _ O
+and -X- _ O
+stored -X- _ O
+at -X- _ O
+4°C -X- _ O
+in -X- _ O
+PBS -X- _ O
+until -X- _ O
+use. -X- _ O
+5x105 -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+per -X- _ O
+anti-CD3-coated -X- _ O
+coverslip -X- _ O
+, -X- _ O
+respectively -X- _ O
+) -X- _ O
+were -X- _ O
+used -X- _ O
+to -X- _ O
+seed -X- _ O
+coverslips -X- _ O
+for -X- _ O
+4 -X- _ O
+minutes -X- _ O
+to -X- _ O
+allow -X- _ O
+TCR-mediated -X- _ O
+actin -X- _ O
+ring -X- _ O
+formation. -X- _ O
+Cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+subsequently -X- _ O
+fixed -X- _ O
+in -X- _ O
+3 -X- _ O
+% -X- _ O
+paraformaldehyde -X- _ O
+for -X- _ O
+15 -X- _ O
+minutes -X- _ O
+, -X- _ O
+permeabilized -X- _ O
+for -X- _ O
+2 -X- _ O
+minutes -X- _ O
+in -X- _ O
+0.1 -X- _ O
+% -X- _ O
+TritonX-100 -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+blocked -X- _ O
+for -X- _ O
+30 -X- _ O
+minutes -X- _ O
+in -X- _ O
+1 -X- _ O
+% -X- _ O
+Fetal -X- _ O
+Calf -X- _ O
+Serum -X- _ B-TISSUE
+( -X- _ O
+FCS -X- _ O
+) -X- _ O
+in -X- _ O
+PBS. -X- _ O
+F-actin -X- _ O
+was -X- _ O
+visualized -X- _ O
+with -X- _ O
+tetramethyl -X- _ O
+rhodamine -X- _ O
+isothiocyanate -X- _ O
+( -X- _ O
+TRITC -X- _ O
+) -X- _ O
+-conjugated -X- _ O
+phalloidin -X- _ O
+( -X- _ O
+1:1,000 -X- _ O
+, -X- _ O
+1 -X- _ O
+hour -X- _ O
+, -X- _ O
+room -X- _ O
+temperature -X- _ O
+; -X- _ O
+Sigma -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Samples -X- _ O
+were -X- _ O
+mounted -X- _ O
+on -X- _ O
+glass -X- _ O
+slides -X- _ O
+and -X- _ O
+analyzed -X- _ O
+by -X- _ O
+epifluorescence -X- _ O
+( -X- _ O
+Olympus -X- _ O
+IX81 -X- _ O
+S1F-3 -X- _ O
+, -X- _ O
+cellM -X- _ O
+software -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+confocal -X- _ O
+( -X- _ O
+spinning-disc -X- _ O
+PerkinElmer -X- _ O
+UltraView -X- _ O
+VoX -X- _ O
+, -X- _ O
+Velocity -X- _ O
+software -X- _ O
+) -X- _ O
+microscopes. -X- _ O
+For -X- _ O
+quantification -X- _ O
+of -X- _ O
+phenotype -X- _ O
+frequencies -X- _ O
+, -X- _ O
+at -X- _ O
+least -X- _ O
+100 -X- _ O
+transfected -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+counted. -X- _ O
+Chromatin -X- _ O
+immunoprecipitation -X- _ O
+( -X- _ O
+chip -X- _ O
+) -X- _ O
+analysis -X- _ O
+Control -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+expressing -X- _ O
+scramble -X- _ O
+shRNA -X- _ O
+or -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+where -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+expression -X- _ O
+was -X- _ O
+depleted -X- _ O
+( -X- _ O
+KD -X- _ O
+) -X- _ O
+were -X- _ O
+cross-linked -X- _ O
+with -X- _ O
+1 -X- _ O
+% -X- _ O
+formaldehyde -X- _ O
+for -X- _ O
+10 -X- _ O
+minutes -X- _ O
+and -X- _ O
+then -X- _ O
+washed -X- _ O
+with -X- _ O
+PBS -X- _ O
+and -X- _ O
+reverse -X- _ O
+cross-linked -X- _ O
+with -X- _ O
+glycine -X- _ O
+( -X- _ O
+125mM -X- _ O
+; -X- _ O
+5 -X- _ O
+minutes -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+then -X- _ O
+lysed -X- _ O
+for -X- _ O
+10 -X- _ O
+minutes -X- _ O
+on -X- _ O
+ice -X- _ O
+in -X- _ O
+130μl -X- _ O
+sonication -X- _ O
+buffer -X- _ O
+( -X- _ O
+20 -X- _ O
+mM -X- _ O
+Tris -X- _ O
+pH-7.8 -X- _ O
+, -X- _ O
+2 -X- _ O
+mM -X- _ O
+EDTA -X- _ O
+, -X- _ O
+0,5 -X- _ O
+% -X- _ O
+SDS -X- _ O
+, -X- _ O
+0.5 -X- _ O
+mM -X- _ O
+phenylmethylsulfonyl -X- _ O
+fluoride -X- _ O
+( -X- _ O
+PMSF -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+1 -X- _ O
+% -X- _ O
+protease -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
+cocktail -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+nuclear -X- _ O
+pellets -X- _ O
+were -X- _ O
+collected. -X- _ O
+DNA -X- _ O
+was -X- _ O
+fragmented -X- _ O
+by -X- _ O
+sonication -X- _ O
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+following -X- _ O
+settings -X- _ O
+: -X- _ O
+amplitude -X- _ O
+20 -X- _ O
+% -X- _ O
+for -X- _ O
+30 -X- _ O
+cycles -X- _ O
+at -X- _ O
+10 -X- _ O
+seconds -X- _ O
+on -X- _ O
+/ -X- _ O
+10 -X- _ O
+seconds -X- _ O
+off. -X- _ O
+Samples -X- _ O
+were -X- _ O
+centrifuged -X- _ O
+( -X- _ O
+15 -X- _ O
+minutes -X- _ O
+, -X- _ O
+14,000 -X- _ O
+rpm -X- _ O
+, -X- _ O
+4°C -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+soluble -X- _ O
+chromatin -X- _ O
+fraction -X- _ O
+( -X- _ O
+25 -X- _ O
+μg -X- _ O
+) -X- _ O
+was -X- _ O
+collected -X- _ O
+and -X- _ O
+immunoprecipitated -X- _ O
+( -X- _ O
+IP -X- _ O
+) -X- _ O
+overnight -X- _ O
+at -X- _ O
+4°C -X- _ O
+on -X- _ O
+a -X- _ O
+rotating -X- _ O
+wheel -X- _ O
+in -X- _ O
+IP -X- _ O
+buffer -X- _ O
+( -X- _ O
+0.5 -X- _ O
+% -X- _ O
+Triton -X- _ O
+X-100 -X- _ O
+, -X- _ O
+2 -X- _ O
+mM -X- _ O
+EDTA -X- _ O
+, -X- _ O
+20 -X- _ O
+mM -X- _ O
+Tris -X- _ O
+pH-7.8 -X- _ O
+, -X- _ O
+150 -X- _ O
+mM -X- _ O
+NaCl -X- _ O
+and -X- _ O
+10 -X- _ O
+% -X- _ O
+glycerol -X- _ O
+) -X- _ O
+with -X- _ O
+2.5 -X- _ O
+μg -X- _ O
+of -X- _ O
+one -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+indicated -X- _ O
+antibodies. -X- _ O
+The -X- _ O
+next -X- _ O
+day -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+IP -X- _ O
+material -X- _ O
+was -X- _ O
+incubated -X- _ O
+with -X- _ O
+25 -X- _ O
+μl -X- _ O
+dynabeads -X- _ O
+protein -X- _ O
+G -X- _ O
+for -X- _ O
+two -X- _ O
+hours -X- _ O
+to -X- _ O
+ensure -X- _ O
+the -X- _ O
+binding -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+antibody -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+magnetic -X- _ O
+beads. -X- _ O
+DNA -X- _ O
+was -X- _ O
+eluted -X- _ O
+with -X- _ O
+freshly -X- _ O
+prepared -X- _ O
+elution -X- _ O
+solution -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+% -X- _ O
+SDS -X- _ O
+and -X- _ O
+0.1 -X- _ O
+M -X- _ O
+NaHCO3 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+heated -X- _ O
+at -X- _ O
+65°C -X- _ O
+overnight -X- _ O
+to -X- _ O
+reverse-crosslink -X- _ O
+the -X- _ O
+samples. -X- _ O
+Precipitated -X- _ O
+DNA -X- _ O
+fragments -X- _ O
+were -X- _ O
+then -X- _ O
+extracted -X- _ O
+using -X- _ O
+a -X- _ O
+ChIP -X- _ O
+DNA -X- _ O
+clean -X- _ O
+and -X- _ O
+concentrator -X- _ O
+kit -X- _ O
+( -X- _ O
+ZYMO -X- _ O
+Research -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+HIV -X- _ O
+DNA -X- _ O
+levels -X- _ O
+were -X- _ O
+quantified -X- _ O
+by -X- _ O
+qPCR -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+primers -X- _ O
+specifically -X- _ O
+located -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+NFκB -X- _ O
+region -X- _ O
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV-LTR -X- _ O
+promoter. -X- _ O
+All -X- _ O
+signals -X- _ O
+were -X- _ O
+normalized -X- _ O
+relative -X- _ O
+to -X- _ O
+input -X- _ O
+DNA. -X- _ O
+ChIP -X- _ O
+assays -X- _ O
+were -X- _ O
+also -X- _ O
+performed -X- _ O
+with -X- _ O
+an -X- _ O
+anti-rabbit -X- _ O
+or -X- _ O
+mouse -X- _ O
+IgG -X- _ O
+as -X- _ O
+negative -X- _ O
+control. -X- _ O
+Primers -X- _ O
+used -X- _ O
+for -X- _ O
+qpcr -X- _ O
+analysis -X- _ O
+Primers -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV -X- _ O
+promoter -X- _ O
+: -X- _ O
+NFκB -X- _ O
+forward -X- _ O
+: -X- _ O
+5’ -X- _ O
+- -X- _ O
+AGGTTTGACAGCCGCCTA -X- _ O
+-3’ -X- _ O
+NFκB -X- _ O
+Reverse -X- _ O
+: -X- _ O
+5’ -X- _ O
+- -X- _ O
+AGAGACCCAGTACAGGCAAAA -X- _ O
+-3’ -X- _ O
+gapdh -X- _ O
+Forward -X- _ O
+: -X- _ O
+5’ -X- _ O
+- -X- _ O
+AGCCACATCGCTCAGACAC -X- _ O
+-3’ -X- _ O
+gapdh -X- _ O
+Reverse -X- _ O
+: -X- _ O
+5’ -X- _ O
+- -X- _ O
+GCCCAAACGACCAAATCC -X- _ O
+-3’ -X- _ O
+Primers -X- _ O
+for -X- _ O
+CYTOR -X- _ O
+: -X- _ O
+Forward -X- _ O
+: -X- _ O
+5’- -X- _ O
+AACTTGCCAGCCTCCATC -X- _ O
+; -X- _ O
+Reverse -X- _ O
+: -X- _ O
+5’- -X- _ O
+GAGCTTCCTGTTTCATCTCCC -X- _ O
+Primers -X- _ O
+for -X- _ O
+7SK -X- _ O
+: -X- _ O
+Forward -X- _ O
+; -X- _ O
+5‘- -X- _ O
+GAGGGCGATCTGGCTGCGACAT -X- _ O
+Reverse -X- _ O
+: -X- _ O
+5‘- -X- _ O
+ACATGGAGCGGTGAGGGAGGAA -X- _ O
+Source -X- _ O
+paper -X- _ O
+: -X- _ O
+PMC11075828 -X- _ O
+
+Results -X- _ O
+Dcas9-targeted -X- _ O
+hiv-1 -X- _ O
+ltr-interactome -X- _ O
+analysis -X- _ O
+identified -X- _ O
+prmt3 -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+ltr-binding -X- _ O
+factor -X- _ O
+Seeking -X- _ O
+host -X- _ O
+factors -X- _ O
+that -X- _ O
+specifically -X- _ O
+associate -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+LTR -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+conducted -X- _ O
+an -X- _ O
+LTR-interacted -X- _ O
+proteome -X- _ O
+analysis -X- _ O
+based -X- _ O
+on -X- _ O
+a -X- _ O
+refined -X- _ O
+version -X- _ O
+of -X- _ O
+a -X- _ O
+previously -X- _ O
+described -X- _ O
+nuclease-deficient -X- _ O
+Cas9 -X- _ O
+( -X- _ O
+dCas9 -X- _ O
+) -X- _ O
+-targeted -X- _ O
+chromatin-based -X- _ O
+purification -X- _ O
+strategy -X- _ O
+( -X- _ O
+CLASP -X- _ O
+) -X- _ O
+( -X- _ O
+Cas9 -X- _ O
+locus-associated -X- _ O
+proteome -X- _ O
+) -X- _ O
+( -X- _ O
+Fig. -X- _ O
+1a -X- _ O
+) -X- _ O
+33,34. -X- _ O
+The -X- _ O
+screen -X- _ O
+used -X- _ O
+NH1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+modified -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL_LINE
+cell -X- _ I-CELL_LINE
+line -X- _ I-CELL_LINE
+that -X- _ O
+harbors -X- _ O
+an -X- _ O
+integrated -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+LTR-driven -X- _ O
+luciferase -X- _ O
+reporter -X- _ O
+gene -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+host -X- _ O
+genome35 -X- _ O
+( -X- _ O
+Fig. -X- _ O
+1b -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+To -X- _ O
+get -X- _ O
+the -X- _ O
+most -X- _ O
+effective -X- _ O
+sgRNAs -X- _ O
+that -X- _ O
+target -X- _ O
+LTR -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+used -X- _ O
+two -X- _ O
+methods -X- _ O
+for -X- _ O
+screening. -X- _ O
+We -X- _ O
+individually -X- _ O
+inserted -X- _ O
+the -X- _ O
+sgRNAs -X- _ O
+into -X- _ O
+the -X- _ O
+Cas9 -X- _ O
+plasmid -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+was -X- _ O
+then -X- _ O
+co-transfected -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+Tat-expression -X- _ O
+plasmid -X- _ O
+into -X- _ O
+NH1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+that -X- _ O
+harbors -X- _ O
+the -X- _ O
+LTR-driven -X- _ O
+luciferase -X- _ O
+reporter -X- _ O
+gene. -X- _ O
+If -X- _ O
+a -X- _ O
+sgRNA-Cas9 -X- _ O
+combination -X- _ O
+can -X- _ O
+target -X- _ O
+and -X- _ O
+disrupt -X- _ O
+the -X- _ O
+LTR -X- _ O
+sequence -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+reduction -X- _ O
+in -X- _ O
+luciferase -X- _ O
+activity -X- _ O
+is -X- _ O
+observed. -X- _ O
+We -X- _ O
+designed -X- _ O
+seven -X- _ O
+sgRNAs -X- _ O
+targeting -X- _ O
+different -X- _ O
+regions -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+LTR -X- _ O
+( -X- _ O
+Fig. -X- _ O
+1b -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+An -X- _ O
+sgRNA -X- _ O
+targeting -X- _ O
+the -X- _ O
+yeast -X- _ O
+Gal4 -X- _ O
+gene -X- _ O
+was -X- _ O
+used -X- _ O
+as -X- _ O
+the -X- _ O
+negative -X- _ O
+control. -X- _ O
+Among -X- _ O
+the -X- _ O
+designed -X- _ O
+sgLTRs -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+top -X- _ O
+three -X- _ O
+sgLTRs -X- _ O
+( -X- _ O
+# -X- _ O
+5 -X- _ O
+, -X- _ O
+6 -X- _ O
+, -X- _ O
+7 -X- _ O
+in -X- _ O
+pink -X- _ O
+, -X- _ O
+Fig. -X- _ O
+1b -X- _ O
+) -X- _ O
+exhibiting -X- _ O
+the -X- _ O
+capacity -X- _ O
+to -X- _ O
+attenuate -X- _ O
+the -X- _ O
+LTR -X- _ O
+driven-luciferase -X- _ O
+expression -X- _ O
+activated -X- _ O
+by -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+Tat -X- _ O
+( -X- _ O
+Fig. -X- _ O
+1c -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Then -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+performed -X- _ O
+anti-Flag -X- _ O
+ChIP-qPCR -X- _ O
+in -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+transfected -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+sgLTRs-dCas9-3 -X- _ O
+× -X- _ O
+Flag -X- _ O
+plasmids -X- _ O
+to -X- _ O
+further -X- _ O
+verify -X- _ O
+the -X- _ O
+abilities -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+sgLTRs -X- _ O
+to -X- _ O
+target -X- _ O
+dCas9-3 -X- _ O
+× -X- _ O
+Flag -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+LTR -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+found -X- _ O
+that -X- _ O
+sgLTR-1 -X- _ O
+and -X- _ O
+-2 -X- _ O
+failed -X- _ O
+to -X- _ O
+recruit -X- _ O
+dCas9 -X- _ O
+to -X- _ O
+LTR -X- _ O
+efficiently -X- _ O
+( -X- _ O
+Supplementary -X- _ O
+Fig. -X- _ O
+1a -X- _ O
+, -X- _ O
+b -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+sgLTR-5 -X- _ O
+and -X- _ O
+-6 -X- _ O
+displayed -X- _ O
+the -X- _ O
+most -X- _ O
+significant -X- _ O
+effect -X- _ O
+, -X- _ O
+whereas -X- _ O
+sgLTR-3 -X- _ O
+, -X- _ O
+-4 -X- _ O
+and -X- _ O
+-7 -X- _ O
+all -X- _ O
+displayed -X- _ O
+a -X- _ O
+similar -X- _ O
+and -X- _ O
+partial -X- _ O
+effect -X- _ O
+( -X- _ O
+Supplementary -X- _ O
+Fig. -X- _ O
+1c -X- _ O
+, -X- _ O
+d -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Thus -X- _ O
+, -X- _ O
+sgLTR-5 -X- _ O
+, -X- _ O
+-6 -X- _ O
+, -X- _ O
+-7 -X- _ O
+were -X- _ O
+selected -X- _ O
+for -X- _ O
+subsequent -X- _ O
+ChIP-qPCR -X- _ O
+analysis. -X- _ O
+By -X- _ O
+utilizing -X- _ O
+the -X- _ O
+combination -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+three -X- _ O
+sgRNAs -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+found -X- _ O
+that -X- _ O
+in -X- _ O
+comparison -X- _ O
+to -X- _ O
+sgGal4 -X- _ O
+, -X- _ O
+these -X- _ O
+sgRNAs -X- _ O
+can -X- _ O
+guide -X- _ O
+dCas9 -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+LTR -X- _ O
+as -X- _ O
+revealed -X- _ O
+by -X- _ O
+ChIP-qPCR -X- _ O
+analysis -X- _ O
+( -X- _ O
+Fig. -X- _ O
+1d -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Next -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+performed -X- _ O
+in -X- _ O
+vitro -X- _ O
+transcription -X- _ O
+reactions -X- _ O
+to -X- _ O
+generate -X- _ O
+these -X- _ O
+sgRNAs -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+were -X- _ O
+then -X- _ O
+used -X- _ O
+for -X- _ O
+dCas9 -X- _ O
+/ -X- _ O
+sgRNAs -X- _ O
+complex -X- _ O
+formation. -X- _ O
+This -X- _ O
+complex -X- _ O
+was -X- _ O
+subsequently -X- _ O
+incubated -X- _ O
+with -X- _ O
+sheared -X- _ O
+chromatin -X- _ O
+that -X- _ O
+contained -X- _ O
+the -X- _ O
+LTR-bound -X- _ O
+proteins -X- _ O
+for -X- _ O
+dCas9-3 -X- _ O
+× -X- _ O
+Flag -X- _ O
+immunoprecipitation -X- _ O
+, -X- _ O
+following -X- _ O
+with -X- _ O
+mass -X- _ O
+spectrometry -X- _ O
+analysis.Fig. -X- _ O
+1***dCas9-targeted -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+LTR-interactome -X- _ O
+analysis -X- _ O
+identified -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+LTR-binding -X- _ O
+factor.*** -X- _ O
+a -X- _ O
+Schematic -X- _ O
+of -X- _ O
+dCas9-targeted -X- _ O
+proteome -X- _ O
+analysis -X- _ O
+workflow. -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+sgRNAs -X- _ O
+targeting -X- _ O
+the -X- _ O
+LTR -X- _ O
+were -X- _ O
+complex -X- _ O
+formation -X- _ O
+with -X- _ O
+dCas9-3 -X- _ O
+× -X- _ O
+Flag -X- _ O
+; -X- _ O
+( -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+Crosslinking -X- _ O
+of -X- _ O
+proteins -X- _ O
+bound -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+LTR -X- _ O
+; -X- _ O
+( -X- _ O
+3 -X- _ O
+) -X- _ O
+dCas9-3 -X- _ O
+× -X- _ O
+Flag-sgRNA -X- _ O
+complex -X- _ O
+was -X- _ O
+incubated -X- _ O
+with -X- _ O
+sheared -X- _ O
+fragments -X- _ O
+from -X- _ O
+NH1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+that -X- _ O
+stably -X- _ O
+expressed -X- _ O
+LTR-luciferase -X- _ O
+reporter -X- _ O
+; -X- _ O
+( -X- _ O
+4 -X- _ O
+) -X- _ O
+Immunoprecipitation -X- _ O
+was -X- _ O
+used -X- _ O
+to -X- _ O
+capture -X- _ O
+LTR -X- _ O
+bound -X- _ O
+proteins -X- _ O
+; -X- _ O
+( -X- _ O
+5 -X- _ O
+) -X- _ O
+LTR-interacted -X- _ O
+proteins -X- _ O
+were -X- _ O
+identified -X- _ O
+by -X- _ O
+mass -X- _ O
+spectrometry. -X- _ O
+b -X- _ O
+Schematic -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+position -X- _ O
+of -X- _ O
+7 -X- _ O
+sgRNAs. -X- _ O
+c -X- _ O
+Luciferase -X- _ O
+activity -X- _ O
+was -X- _ O
+measured -X- _ O
+in -X- _ O
+NH1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+transfected -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+plasmid -X- _ O
+encoding -X- _ O
+each -X- _ O
+sgRNA -X- _ O
+and -X- _ O
+control -X- _ O
+sgRNA -X- _ O
+( -X- _ O
+sgGal4 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+expresses -X- _ O
+the -X- _ O
+Cas9 -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+presence -X- _ O
+of -X- _ O
+Tat -X- _ O
+( -X- _ O
+p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.0016 -X- _ O
+, -X- _ O
+p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.0024 -X- _ O
+, -X- _ O
+p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.0042 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+d -X- _ O
+ChIP-qPCR -X- _ O
+analyses -X- _ O
+were -X- _ O
+conducted -X- _ O
+to -X- _ O
+assess -X- _ O
+the -X- _ O
+occupancy -X- _ O
+of -X- _ O
+3 -X- _ O
+× -X- _ O
+Flag-dCas9 -X- _ O
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+Promoter -X- _ O
+( -X- _ O
+Left -X- _ O
+) -X- _ O
+or -X- _ O
+Nascent -X- _ O
+region -X- _ O
+( -X- _ O
+Right -X- _ O
+) -X- _ O
+of -X- _ O
+LTR -X- _ O
+when -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+transfected -X- _ O
+with -X- _ O
+control -X- _ O
+plasmid -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+mixture -X- _ O
+of -X- _ O
+plasmids -X- _ O
+containing -X- _ O
+sgLTRs-5 -X- _ O
+, -X- _ O
+6 -X- _ O
+, -X- _ O
+7 -X- _ O
+or -X- _ O
+the -X- _ O
+sgGal4 -X- _ O
+plasmid -X- _ O
+( -X- _ O
+Promoter -X- _ O
+: -X- _ O
+p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.0009 -X- _ O
+, -X- _ O
+p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.0011 -X- _ O
+, -X- _ O
+Nascent -X- _ O
+: -X- _ O
+p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.000004 -X- _ O
+, -X- _ O
+p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.000003 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+e -X- _ O
+Proteins -X- _ O
+showing -X- _ O
+over -X- _ O
+1.5-fold -X- _ O
+enrichment -X- _ O
+relative -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+control -X- _ O
+sample -X- _ O
+identified -X- _ O
+from -X- _ O
+3 -X- _ O
+× -X- _ O
+Flag-dCas9 -X- _ O
+immunoprecipitation -X- _ O
+following -X- _ O
+by -X- _ O
+mass -X- _ O
+spectrometry -X- _ O
+analysis -X- _ O
+were -X- _ O
+listed. -X- _ O
+f -X- _ O
+ChIP-qPCR -X- _ O
+analyses -X- _ O
+were -X- _ O
+conducted -X- _ O
+to -X- _ O
+assess -X- _ O
+the -X- _ O
+occupancy -X- _ O
+of -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+at -X- _ O
+LTR-luciferase -X- _ O
+region -X- _ O
+( -X- _ O
+p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.0001 -X- _ O
+, -X- _ O
+p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.0012 -X- _ O
+, -X- _ O
+p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.0005 -X- _ O
+, -X- _ O
+p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.0008 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+schematic -X- _ O
+display -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+four -X- _ O
+primers -X- _ O
+was -X- _ O
+shown -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+top -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+panel. -X- _ O
+g -X- _ O
+ChIP-qPCR -X- _ O
+analyses -X- _ O
+were -X- _ O
+conducted -X- _ O
+to -X- _ O
+assess -X- _ O
+the -X- _ O
+occupancy -X- _ O
+of -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+at -X- _ O
+LTR-luciferase -X- _ O
+regions -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+absence -X- _ O
+or -X- _ O
+presence -X- _ O
+of -X- _ O
+Tat -X- _ O
+( -X- _ O
+p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.0022 -X- _ O
+, -X- _ O
+p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.0012 -X- _ O
+, -X- _ O
+p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.0045 -X- _ O
+, -X- _ O
+p -X- _ O
+= -X- _ O
+0.0017 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+h -X- _ O
+CUT -X- _ O
+& -X- _ O
+Tag -X- _ O
+sequencing -X- _ O
+was -X- _ O
+performed -X- _ O
+in -X- _ O
+primary -X- _ B-CELL_CONTEXT
+CD4+ -X- _ I-CELL_CONTEXT
+T -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+isolated -X- _ O
+from -X- _ O
+virologically -X- _ O
+suppressed -X- _ O
+HIV-1-infected -X- _ B-CELL_CONTEXT
+patient -X- _ I-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+that -X- _ O
+were -X- _ O
+treated -X- _ O
+with -X- _ O
+PMA -X- _ O
+, -X- _ O
+by -X- _ O
+using -X- _ O
+IgG -X- _ O
+or -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+antibody. -X- _ O
+The -X- _ O
+alignment -X- _ O
+results -X- _ O
+of -X- _ O
+sequencing -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+genome -X- _ O
+in -X- _ O
+three -X- _ O
+patients -X- _ O
+were -X- _ O
+displayed. -X- _ O
+Error -X- _ O
+bars -X- _ O
+= -X- _ O
+mean -X- _ O
++ -X- _ O
+/ -X- _ O
+− -X- _ O
+SD -X- _ O
+of -X- _ O
+three -X- _ O
+biological -X- _ O
+replicates. -X- _ O
+*p -X- _ O
+p -X- _ O
+p -X- _ O
+t -X- _ O
+test. -X- _ O
+Source -X- _ O
+data -X- _ O
+are -X- _ O
+provided -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+Source -X- _ O
+Data -X- _ O
+file. -X- _ O
+Mass -X- _ O
+spectrometry -X- _ O
+detected -X- _ O
+a -X- _ O
+total -X- _ O
+of -X- _ O
+28 -X- _ O
+proteins -X- _ O
+with -X- _ O
+at -X- _ O
+least -X- _ O
+1.5-fold -X- _ O
+enrichment -X- _ O
+relative -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+non-targeting -X- _ O
+negative -X- _ O
+control -X- _ O
+( -X- _ O
+Fig. -X- _ O
+1e -X- _ O
+and -X- _ O
+Supplementary -X- _ O
+Data -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+shown -X- _ O
+to -X- _ O
+function -X- _ O
+in -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+regulation -X- _ O
+and -X- _ O
+antiviral -X- _ O
+innate -X- _ O
+immunity15,30,36 -X- _ O
+, -X- _ O
+was -X- _ O
+among -X- _ O
+the -X- _ O
+hits -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+highest -X- _ O
+fold -X- _ O
+enrichment -X- _ O
+of -X- _ O
+sgLTR -X- _ O
+/ -X- _ O
+sgGal4 -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+was -X- _ O
+therefore -X- _ O
+selected -X- _ O
+for -X- _ O
+subsequent -X- _ O
+investigation. -X- _ O
+We -X- _ O
+performed -X- _ O
+ChIP-qPCR -X- _ O
+analysis -X- _ O
+to -X- _ O
+examine -X- _ O
+the -X- _ O
+binding -X- _ O
+of -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+LTR. -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+was -X- _ O
+significantly -X- _ O
+enriched -X- _ O
+at -X- _ O
+LTR-luciferase -X- _ O
+reporter -X- _ O
+region -X- _ O
+( -X- _ O
+Fig. -X- _ O
+1f -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+can -X- _ O
+be -X- _ O
+further -X- _ O
+increased -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+presence -X- _ O
+of -X- _ O
+Tat -X- _ O
+( -X- _ O
+Fig. -X- _ O
+1g -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+binding -X- _ O
+of -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+LTR -X- _ O
+was -X- _ O
+also -X- _ O
+verified -X- _ O
+in -X- _ O
+Jurkat -X- _ B-CELL_LINE
+2D10 -X- _ I-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+( -X- _ O
+Supplementary -X- _ O
+Fig. -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Notably -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+performed -X- _ O
+Cleavage -X- _ O
+Under -X- _ O
+Targets -X- _ O
+& -X- _ O
+Tagmentation -X- _ O
+( -X- _ O
+CUT -X- _ O
+& -X- _ O
+Tag -X- _ O
+) -X- _ O
+sequencing -X- _ O
+by -X- _ O
+using -X- _ O
+IgG -X- _ O
+or -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+antibody -X- _ O
+in -X- _ O
+CD4+ -X- _ B-CELL_CONTEXT
+T -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+isolated -X- _ O
+from -X- _ O
+HIV-1 -X- _ B-CELL_CONTEXT
+infected -X- _ I-CELL_CONTEXT
+patient -X- _ I-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+that -X- _ O
+while -X- _ O
+IgG -X- _ O
+displayed -X- _ O
+undetectable -X- _ O
+signal -X- _ O
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+LTR -X- _ O
+, -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+showed -X- _ O
+significant -X- _ O
+binding -X- _ O
+signal -X- _ O
+around -X- _ O
+LTR -X- _ O
+( -X- _ O
+Fig. -X- _ O
+1h -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Thus -X- _ O
+, -X- _ O
+these -X- _ O
+results -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+that -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+is -X- _ O
+an -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+LTR -X- _ O
+binding -X- _ O
+factor -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+is -X- _ O
+further -X- _ O
+enhanced -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+presence -X- _ O
+of -X- _ O
+Tat. -X- _ O
+Discussion -X- _ O
+The -X- _ O
+elusive -X- _ O
+nature -X- _ O
+of -X- _ O
+latent -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+reservoirs -X- _ O
+presents -X- _ O
+a -X- _ O
+formidable -X- _ O
+challenge -X- _ O
+to -X- _ O
+eradicating -X- _ O
+the -X- _ O
+virus -X- _ O
+from -X- _ O
+infected -X- _ O
+individuals49–51. -X- _ O
+Despite -X- _ O
+the -X- _ O
+various -X- _ O
+strategies -X- _ O
+employing -X- _ O
+either -X- _ O
+the -X- _ O
+latency -X- _ O
+reversal -X- _ O
+agents -X- _ O
+( -X- _ O
+LRAs -X- _ O
+) -X- _ O
+or -X- _ O
+latency -X- _ O
+promoting -X- _ O
+agents -X- _ O
+( -X- _ O
+LPAs -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+are -X- _ O
+aimed -X- _ O
+at -X- _ O
+either -X- _ O
+purging -X- _ O
+or -X- _ O
+deeply -X- _ O
+silencing -X- _ O
+the -X- _ O
+latent -X- _ O
+viral -X- _ O
+reservoirs -X- _ O
+, -X- _ O
+these -X- _ O
+agents -X- _ O
+have -X- _ O
+yet -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+made -X- _ O
+into -X- _ O
+effective -X- _ O
+drugs -X- _ O
+for -X- _ O
+curing -X- _ O
+HIV -X- _ O
+/ -X- _ O
+AIDS -X- _ O
+and -X- _ O
+targets -X- _ O
+are -X- _ O
+still -X- _ O
+needed -X- _ O
+for -X- _ O
+the -X- _ O
+development -X- _ O
+of -X- _ O
+therapies. -X- _ O
+Furthermore -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+premise -X- _ O
+of -X- _ O
+using -X- _ O
+the -X- _ O
+current -X- _ O
+and -X- _ O
+future -X- _ O
+versions -X- _ O
+of -X- _ O
+LRAs -X- _ O
+or -X- _ O
+LPAs -X- _ O
+for -X- _ O
+treating -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+hinges -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+potential -X- _ O
+to -X- _ O
+epigenetically -X- _ O
+modulate -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+promoter -X- _ O
+activity -X- _ O
+, -X- _ O
+aiming -X- _ O
+for -X- _ O
+a -X- _ O
+sustained -X- _ O
+activation -X- _ O
+or -X- _ O
+suppression -X- _ O
+of -X- _ O
+viral -X- _ O
+transcription -X- _ O
+, -X- _ O
+respectively52–54. -X- _ O
+The -X- _ O
+significance -X- _ O
+of -X- _ O
+targeting -X- _ O
+epigenetic -X- _ O
+control -X- _ O
+of -X- _ O
+viral -X- _ O
+transcription -X- _ O
+was -X- _ O
+highlighted -X- _ O
+recently -X- _ O
+in -X- _ O
+a -X- _ O
+human -X- _ O
+clinical -X- _ O
+trial -X- _ O
+, -X- _ O
+where -X- _ O
+the -X- _ O
+combination -X- _ O
+of -X- _ O
+panobinostat -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+potent -X- _ O
+pan-histone -X- _ O
+deacetylase -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
+, -X- _ O
+with -X- _ O
+interferon-α2a -X- _ O
+resulted -X- _ O
+in -X- _ O
+an -X- _ O
+enhanced -X- _ O
+vulnerability -X- _ O
+of -X- _ O
+latent -X- _ B-CELL_CONTEXT
+HIV-1 -X- _ I-CELL_CONTEXT
+reservoir -X- _ I-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+underscoring -X- _ O
+the -X- _ O
+pivotal -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+epigenetic -X- _ O
+manipulation -X- _ O
+in -X- _ O
+combating -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+persistence2. -X- _ O
+In -X- _ O
+the -X- _ O
+current -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+by -X- _ O
+performing -X- _ O
+the -X- _ O
+dCas9-targeted -X- _ O
+LTR -X- _ O
+interactome -X- _ O
+screening -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+have -X- _ O
+identified -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+positive -X- _ O
+regulator -X- _ O
+to -X- _ O
+promote -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+latency -X- _ O
+reversal. -X- _ O
+Mechanistically -X- _ O
+, -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+activates -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+transcription -X- _ O
+by -X- _ O
+interaction -X- _ O
+with -X- _ O
+TEAD4 -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+two -X- _ O
+proteins -X- _ O
+co-localize -X- _ O
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+LTR -X- _ O
+by -X- _ O
+using -X- _ O
+specific -X- _ O
+TEAD4-binding -X- _ O
+motifs -X- _ O
+, -X- _ O
+thereby -X- _ O
+regulating -X- _ O
+chromatin -X- _ O
+accessibility -X- _ O
+and -X- _ O
+facilitating -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+/ -X- _ O
+Tat -X- _ O
+recruitment. -X- _ O
+Thus -X- _ O
+, -X- _ O
+our -X- _ O
+findings -X- _ O
+propose -X- _ O
+a -X- _ O
+promising -X- _ O
+epigenetic -X- _ O
+strategy -X- _ O
+to -X- _ O
+combat -X- _ O
+latent -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+infection -X- _ O
+, -X- _ O
+underscoring -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+and -X- _ O
+its -X- _ O
+partners -X- _ O
+as -X- _ O
+promising -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+targets -X- _ O
+for -X- _ O
+anti-HIV-1 -X- _ O
+drug -X- _ O
+development. -X- _ O
+Our -X- _ O
+study -X- _ O
+demonstrates -X- _ O
+TEAD4 -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+positive -X- _ O
+regulator -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+transcription -X- _ O
+, -X- _ O
+acting -X- _ O
+alongside -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+through -X- _ O
+a -X- _ O
+specific -X- _ O
+interaction -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+LTR’s -X- _ O
+GGAAT -X- _ O
+motif. -X- _ O
+This -X- _ O
+discovery -X- _ O
+expands -X- _ O
+our -X- _ O
+current -X- _ O
+understanding -X- _ O
+of -X- _ O
+TEAD4’s -X- _ O
+regulatory -X- _ O
+roles -X- _ O
+in -X- _ O
+host -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+and -X- _ O
+suggests -X- _ O
+its -X- _ O
+potential -X- _ O
+regulation -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+viral -X- _ O
+expression. -X- _ O
+The -X- _ O
+specificity -X- _ O
+of -X- _ O
+TEAD4’s -X- _ O
+interaction -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+motif -X- _ O
+containing -X- _ O
+the -X- _ O
+core -X- _ O
+GGAAT -X- _ O
+sequence -X- _ O
+within -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+LTR -X- _ O
+and -X- _ O
+its -X- _ O
+synergy -X- _ O
+with -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+in -X- _ O
+promoting -X- _ O
+Tat-dependent -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+transcription -X- _ O
+and -X- _ O
+a -X- _ O
+specific -X- _ O
+subset -X- _ O
+of -X- _ O
+host -X- _ O
+gene -X- _ O
+transcription -X- _ O
+is -X- _ O
+particularly -X- _ O
+intriguing -X- _ O
+given -X- _ O
+TEAD4’s -X- _ O
+established -X- _ O
+roles -X- _ O
+in -X- _ O
+cell -X- _ O
+survival -X- _ O
+, -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+, -X- _ O
+tissue -X- _ O
+regeneration -X- _ O
+, -X- _ O
+stem -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+maintenance -X- _ O
+, -X- _ O
+embryonic -X- _ B-CELL_CONTEXT
+trophoblast -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+organ -X- _ O
+development -X- _ O
+and -X- _ O
+tumorigenesis9,11,13,14,55. -X- _ O
+Specifically -X- _ O
+, -X- _ O
+we -X- _ O
+selected -X- _ O
+three -X- _ O
+host -X- _ O
+genes -X- _ O
+, -X- _ O
+PRDM1 -X- _ O
+, -X- _ O
+SLITRK5 -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+TGFB2 -X- _ O
+, -X- _ O
+for -X- _ O
+further -X- _ O
+validation -X- _ O
+of -X- _ O
+our -X- _ O
+proposed -X- _ O
+PRMT3-TEAD4 -X- _ O
+regulation -X- _ O
+model. -X- _ O
+Our -X- _ O
+data -X- _ O
+demonstrate -X- _ O
+that -X- _ O
+in -X- _ O
+addition -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+LTR -X- _ O
+, -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+and -X- _ O
+TEAD4 -X- _ O
+indeed -X- _ O
+associated -X- _ O
+with -X- _ O
+these -X- _ O
+cellular -X- _ O
+gene -X- _ O
+promoters -X- _ O
+, -X- _ O
+where -X- _ O
+the -X- _ O
+binding -X- _ O
+of -X- _ O
+TEAD4 -X- _ O
+significantly -X- _ O
+decreases -X- _ O
+after -X- _ O
+the -X- _ O
+depletion -X- _ O
+of -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+a -X- _ O
+common -X- _ O
+regulatory -X- _ O
+mechanism -X- _ O
+involving -X- _ O
+the -X- _ O
+PRMT3-TEAD4 -X- _ O
+complex -X- _ O
+that -X- _ O
+exists -X- _ O
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+LTR -X- _ O
+, -X- _ O
+as -X- _ O
+well -X- _ O
+as -X- _ O
+the -X- _ O
+promoters -X- _ O
+of -X- _ O
+selected -X- _ O
+host -X- _ O
+genes. -X- _ O
+At -X- _ O
+the -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+LTR -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+interaction -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+PRMT3-TEAD4 -X- _ O
+complex -X- _ O
+with -X- _ O
+Tat -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+provides -X- _ O
+further -X- _ O
+regulation -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+transcription. -X- _ O
+On -X- _ O
+cellular -X- _ O
+gene -X- _ O
+promoters -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+the -X- _ O
+three -X- _ O
+genes -X- _ O
+mentioned -X- _ O
+above -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+is -X- _ O
+conceivable -X- _ O
+that -X- _ O
+transcription -X- _ O
+can -X- _ O
+also -X- _ O
+be -X- _ O
+modulated -X- _ O
+through -X- _ O
+controlling -X- _ O
+the -X- _ O
+function -X- _ O
+and -X- _ O
+/ -X- _ O
+or -X- _ O
+binding -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+PRMT3-TEAD4 -X- _ O
+complex -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+GGAAT -X- _ O
+motif -X- _ O
+in -X- _ O
+response -X- _ O
+to -X- _ O
+changes -X- _ O
+in -X- _ O
+physiological -X- _ O
+or -X- _ O
+pathological -X- _ O
+conditions. -X- _ O
+This -X- _ O
+co-regulation -X- _ O
+of -X- _ O
+viral -X- _ O
+and -X- _ O
+host -X- _ O
+gene -X- _ O
+transcription -X- _ O
+by -X- _ O
+PRMT3-TEAD4 -X- _ O
+underscores -X- _ O
+a -X- _ O
+finely -X- _ O
+tuned -X- _ O
+regulatory -X- _ O
+mechanism -X- _ O
+that -X- _ O
+integrates -X- _ O
+the -X- _ O
+cellular -X- _ O
+and -X- _ O
+viral -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+control. -X- _ O
+Furthermore -X- _ O
+, -X- _ O
+TEAD4 -X- _ O
+has -X- _ O
+also -X- _ O
+been -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+to -X- _ O
+interact -X- _ O
+with -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+is -X- _ O
+the -X- _ O
+core -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+component -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+Super -X- _ O
+Elongation -X- _ O
+Complex -X- _ O
+( -X- _ O
+SEC -X- _ O
+) -X- _ O
+essential -X- _ O
+for -X- _ O
+Tat-activated -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+transcription. -X- _ O
+Given -X- _ O
+the -X- _ O
+fact -X- _ O
+that -X- _ O
+TEAD4 -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+DNA -X- _ O
+sequence-specific -X- _ O
+transcription -X- _ O
+factor -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+remains -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+investigated -X- _ O
+whether -X- _ O
+it -X- _ O
+plays -X- _ O
+a -X- _ O
+key -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+recruiting -X- _ O
+SEC -X- _ O
+to -X- _ O
+both -X- _ O
+host -X- _ O
+and -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+gene -X- _ O
+promoters -X- _ O
+that -X- _ O
+contain -X- _ O
+the -X- _ O
+TEAD4-binding -X- _ O
+motif. -X- _ O
+While -X- _ O
+previous -X- _ O
+studies -X- _ O
+have -X- _ O
+indicated -X- _ O
+PRMT3’s -X- _ O
+involvement -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+key -X- _ O
+factor -X- _ O
+in -X- _ O
+mediating -X- _ O
+host -X- _ O
+responses -X- _ O
+to -X- _ O
+viral -X- _ O
+infection17,30 -X- _ O
+, -X- _ O
+its -X- _ O
+specific -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+infection -X- _ O
+and -X- _ O
+latency -X- _ O
+remains -X- _ O
+largely -X- _ O
+unexplored. -X- _ O
+For -X- _ O
+instance -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+zebrafish -X- _ O
+, -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+shown -X- _ O
+to -X- _ O
+negatively -X- _ O
+regulate -X- _ O
+antiviral -X- _ O
+responses17. -X- _ O
+Similarly -X- _ O
+, -X- _ O
+recent -X- _ O
+studies -X- _ O
+utilizing -X- _ O
+the -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
+, -X- _ O
+SGC707 -X- _ O
+treatment -X- _ O
+, -X- _ O
+or -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+knockout -X- _ O
+mice -X- _ O
+have -X- _ O
+revealed -X- _ O
+PRMT3’s -X- _ O
+facilitation -X- _ O
+of -X- _ O
+HSV-1 -X- _ O
+infection30. -X- _ O
+In -X- _ O
+conjunction -X- _ O
+with -X- _ O
+our -X- _ O
+current -X- _ O
+discovery -X- _ O
+demonstrating -X- _ O
+PRMT3’s -X- _ O
+promotion -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+transcription -X- _ O
+to -X- _ O
+reverse -X- _ O
+latency -X- _ O
+, -X- _ O
+these -X- _ O
+findings -X- _ O
+suggest -X- _ O
+that -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+may -X- _ O
+serve -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+potential -X- _ O
+target -X- _ O
+for -X- _ O
+broad-spectrum -X- _ O
+antiviral -X- _ O
+drugs. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+future -X- _ O
+comprehensive -X- _ O
+research -X- _ O
+is -X- _ O
+imperative -X- _ O
+to -X- _ O
+fully -X- _ O
+comprehend -X- _ O
+the -X- _ O
+extent -X- _ O
+of -X- _ O
+PRMT3’s -X- _ O
+involvement -X- _ O
+in -X- _ O
+mediating -X- _ O
+viral-host -X- _ O
+interactions. -X- _ O
+It -X- _ O
+is -X- _ O
+noteworthy -X- _ O
+that -X- _ O
+besides -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+, -X- _ O
+other -X- _ O
+PRMTs -X- _ O
+have -X- _ O
+also -X- _ O
+been -X- _ O
+implicated -X- _ O
+in -X- _ O
+regulating -X- _ O
+anti-HIV -X- _ O
+activity. -X- _ O
+For -X- _ O
+instance -X- _ O
+, -X- _ O
+PRMT6 -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+shown -X- _ O
+to -X- _ O
+inhibit -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+replication -X- _ O
+in -X- _ O
+vitro -X- _ O
+by -X- _ O
+directly -X- _ O
+methylating -X- _ O
+several -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+proteins -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+Tat -X- _ O
+, -X- _ O
+Rev -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+nucleocapsid -X- _ O
+protein -X- _ O
+, -X- _ O
+thereby -X- _ O
+interfering -X- _ O
+with -X- _ O
+their -X- _ O
+functions56,57. -X- _ O
+Similarly -X- _ O
+, -X- _ O
+PRMT2 -X- _ O
+was -X- _ O
+recently -X- _ O
+discovered -X- _ O
+to -X- _ O
+suppress -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+transcription -X- _ O
+by -X- _ O
+methylating -X- _ O
+Tat -X- _ O
+and -X- _ O
+promoting -X- _ O
+the -X- _ O
+phase -X- _ O
+separation -X- _ O
+of -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+and -X- _ O
+Tat58. -X- _ O
+Thus -X- _ O
+, -X- _ O
+in -X- _ O
+addition -X- _ O
+to -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+, -X- _ O
+other -X- _ O
+members -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+PRMT -X- _ O
+family -X- _ O
+should -X- _ O
+be -X- _ O
+explored -X- _ O
+as -X- _ O
+potential -X- _ O
+targets -X- _ O
+for -X- _ O
+developing -X- _ O
+effective -X- _ O
+antiviral -X- _ O
+drugs. -X- _ O
+In -X- _ O
+addition -X- _ O
+to -X- _ O
+its -X- _ O
+effects -X- _ O
+on -X- _ O
+viral -X- _ O
+gene -X- _ O
+expression -X- _ O
+, -X- _ O
+PRMT3’s -X- _ O
+regulation -X- _ O
+of -X- _ O
+host -X- _ O
+gene -X- _ O
+transcription -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+implicated -X- _ O
+in -X- _ O
+various -X- _ O
+cellular -X- _ O
+processes -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+tumorigenesis -X- _ O
+, -X- _ O
+oxaliplatin -X- _ O
+resistance -X- _ O
+in -X- _ O
+liver -X- _ O
+cancer -X- _ O
+, -X- _ O
+retinoic -X- _ O
+acid -X- _ O
+signaling -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+hepatic -X- _ O
+lipogenesis18,20,28,29,59,60. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+precise -X- _ O
+mechanism -X- _ O
+( -X- _ O
+s -X- _ O
+) -X- _ O
+underlying -X- _ O
+these -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+effects -X- _ O
+of -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+remain -X- _ O
+unclear. -X- _ O
+In -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+comparison -X- _ O
+of -X- _ O
+ATAC-Seq -X- _ O
+and -X- _ O
+RNA-Seq -X- _ O
+data -X- _ O
+between -X- _ O
+WT -X- _ B-CELL_CONTEXT
+and -X- _ O
+PRMT3 -X- _ B-CELL_CONTEXT
+KO -X- _ I-CELL_CONTEXT
+cells -X- _ B-CELL
+reveals -X- _ O
+that -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+selectively -X- _ O
+regulates -X- _ O
+chromatin -X- _ O
+accessibility -X- _ O
+and -X- _ O
+transcription -X- _ O
+of -X- _ O
+a -X- _ O
+small -X- _ O
+subgroup -X- _ O
+of -X- _ O
+human -X- _ O
+genes -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+some -X- _ O
+well-studied -X- _ O
+genes -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+TGFB2 -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+is -X- _ O
+relevant -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+potential -X- _ O
+pathogenic -X- _ O
+effects -X- _ O
+of -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+in -X- _ O
+tumorigenesis. -X- _ O
+The -X- _ O
+selectivity -X- _ O
+of -X- _ O
+PRMT3’s -X- _ O
+action -X- _ O
+is -X- _ O
+apparently -X- _ O
+achieved -X- _ O
+through -X- _ O
+forming -X- _ O
+a -X- _ O
+complex -X- _ O
+with -X- _ O
+TEAD4 -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+then -X- _ O
+co-localizes -X- _ O
+at -X- _ O
+specific -X- _ O
+gene -X- _ O
+promoter -X- _ O
+regions -X- _ O
+via -X- _ O
+binding -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+TEAD4-recognition -X- _ O
+motif. -X- _ O
+Together -X- _ O
+, -X- _ O
+these -X- _ O
+findings -X- _ O
+have -X- _ O
+revealed -X- _ O
+the -X- _ O
+mechanistic -X- _ O
+basis -X- _ O
+for -X- _ O
+PRMT3’s -X- _ O
+control -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+transcription -X- _ O
+of -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+and -X- _ O
+a -X- _ O
+selected -X- _ O
+group -X- _ O
+of -X- _ O
+host -X- _ O
+genes. -X- _ O
+Although -X- _ O
+the -X- _ O
+PRMT3-created -X- _ O
+transcription -X- _ O
+hub -X- _ O
+containing -X- _ O
+TEAD4 -X- _ O
+and -X- _ O
+P-TEFb -X- _ O
+is -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+current -X- _ O
+study -X- _ O
+as -X- _ O
+important -X- _ O
+for -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+to -X- _ O
+escape -X- _ O
+latency -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+is -X- _ O
+presently -X- _ O
+unknown -X- _ O
+whether -X- _ O
+it -X- _ O
+also -X- _ O
+plays -X- _ O
+a -X- _ O
+role -X- _ O
+during -X- _ O
+the -X- _ O
+establishment -X- _ O
+of -X- _ O
+latency. -X- _ O
+It -X- _ O
+is -X- _ O
+conceivable -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+loss -X- _ O
+of -X- _ O
+expression -X- _ O
+/ -X- _ O
+function -X- _ O
+of -X- _ O
+any -X- _ O
+component -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+hub -X- _ O
+could -X- _ O
+be -X- _ O
+responsible -X- _ O
+in -X- _ O
+this -X- _ O
+latter -X- _ O
+process. -X- _ O
+Further -X- _ O
+studies -X- _ O
+are -X- _ O
+thus -X- _ O
+necessary -X- _ O
+to -X- _ O
+test -X- _ O
+this -X- _ O
+hypothesis -X- _ O
+and -X- _ O
+explore -X- _ O
+the -X- _ O
+possibility -X- _ O
+of -X- _ O
+targeting -X- _ O
+the -X- _ O
+PRMT3 -X- _ O
+transcription -X- _ O
+hub -X- _ O
+to -X- _ O
+cure -X- _ O
+HIV -X- _ O
+/ -X- _ O
+AIDS. -X- _ O
+Methods -X- _ O
+Dcas9-targeted -X- _ O
+ltr -X- _ O
+proteome -X- _ O
+analysis -X- _ O
+One -X- _ O
+million -X- _ O
+NH1 -X- _ B-CELL_LINE
+cells -X- _ I-CELL_LINE
+with -X- _ O
+an -X- _ O
+integrated -X- _ O
+with -X- _ O
+HIV-1 -X- _ O
+5’ -X- _ O
+LTR-driven -X- _ O
+luciferase -X- _ O
+reporter -X- _ O
+construct -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+contains -X- _ O
+424 -X- _ O
+bp -X- _ O
+of -X- _ O
+LTR. -X- _ O
+Cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+fixed -X- _ O
+with -X- _ O
+1 -X- _ O
+% -X- _ O
+formaldehyde -X- _ O
+for -X- _ O
+15 -X- _ O
+min -X- _ O
+at -X- _ O
+room -X- _ O
+temperature -X- _ O
+and -X- _ O
+0.125 -X- _ O
+M -X- _ O
+Glycine -X- _ O
+for -X- _ O
+5 -X- _ O
+min -X- _ O
+to -X- _ O
+quench -X- _ O
+unreacted -X- _ O
+formaldehyde -X- _ O
+at -X- _ O
+room -X- _ O
+temperature. -X- _ O
+Use -X- _ O
+20 -X- _ O
+ml -X- _ O
+of -X- _ O
+cold -X- _ O
+PBS -X- _ O
+to -X- _ O
+wash -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+twice. -X- _ O
+Scrape -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+with -X- _ O
+2 -X- _ O
+ml -X- _ O
+cold -X- _ O
+PBS -X- _ O
+containing -X- _ O
+protease -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
+and -X- _ O
+dithiothreitol -X- _ O
+( -X- _ O
+DTT -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Spin -X- _ O
+at -X- _ O
+700 -X- _ O
+× -X- _ O
+g -X- _ O
+at -X- _ O
+4 -X- _ O
+°C -X- _ O
+for -X- _ O
+3 -X- _ O
+min -X- _ O
+to -X- _ O
+pellet -X- _ O
+cells. -X- _ B-CELL
+Cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+lysed -X- _ O
+with -X- _ O
+lysis -X- _ O
+buffer -X- _ O
+[ -X- _ O
+1 -X- _ O
+% -X- _ O
+SDS -X- _ O
+, -X- _ O
+10 -X- _ O
+mM -X- _ O
+EDTA -X- _ O
+, -X- _ O
+50 -X- _ O
+mM -X- _ O
+Tris -X- _ O
+, -X- _ O
+pH -X- _ O
+8.1 -X- _ O
+] -X- _ O
+and -X- _ O
+incubated -X- _ O
+on -X- _ O
+ice -X- _ O
+for -X- _ O
+20 -X- _ O
+min. -X- _ O
+Cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+sheared -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+Covaris -X- _ O
+sonicator -X- _ O
+M220 -X- _ O
+until -X- _ O
+genomic -X- _ O
+DNA -X- _ O
+was -X- _ O
+visualized -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+at -X- _ O
+200–1000 -X- _ O
+bp. -X- _ O
+The -X- _ O
+DNA -X- _ O
+was -X- _ O
+cleared -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+high-speed -X- _ O
+spin -X- _ O
+( -X- _ O
+15,000 -X- _ O
+g -X- _ O
+for -X- _ O
+10 -X- _ O
+min -X- _ O
+) -X- _ O
+at -X- _ O
+4 -X- _ O
+°C. -X- _ O
+The -X- _ O
+DNA -X- _ O
+was -X- _ O
+diluted -X- _ O
+by -X- _ O
+ChIP -X- _ O
+Dilution -X- _ O
+Buffer -X- _ O
+[ -X- _ O
+0.01 -X- _ O
+% -X- _ O
+SDS -X- _ O
+, -X- _ O
+1 -X- _ O
+% -X- _ O
+Triton -X- _ O
+X-100 -X- _ O
+, -X- _ O
+1.2 -X- _ O
+mM -X- _ O
+EDTA -X- _ O
+, -X- _ O
+16.7 -X- _ O
+mM -X- _ O
+Tris-HCl -X- _ O
+, -X- _ O
+pH -X- _ O
+8.1 -X- _ O
+, -X- _ O
+167 -X- _ O
+mM -X- _ O
+NaCl -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+dCas9-3 -X- _ O
+× -X- _ O
+Flag -X- _ O
+/ -X- _ O
+sgRNAs -X- _ O
+complex -X- _ O
+was -X- _ O
+added -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+sheared -X- _ O
+DNA -X- _ O
+and -X- _ O
+incubated -X- _ O
+at -X- _ O
+4 -X- _ O
+°C -X- _ O
+overnight. -X- _ O
+The -X- _ O
+anti-Flag -X- _ O
+M2 -X- _ O
+agarose -X- _ O
+resin -X- _ O
+( -X- _ O
+Sigma -X- _ O
+) -X- _ O
+was -X- _ O
+added -X- _ O
+, -X- _ O
+followed -X- _ O
+by -X- _ O
+a -X- _ O
+3 -X- _ O
+h -X- _ O
+incubation -X- _ O
+at -X- _ O
+4 -X- _ O
+°C. -X- _ O
+The -X- _ O
+resin -X- _ O
+was -X- _ O
+spun -X- _ O
+down -X- _ O
+at -X- _ O
+1500 -X- _ O
+× -X- _ O
+g -X- _ O
+at -X- _ O
+4 -X- _ O
+°C -X- _ O
+for -X- _ O
+1 -X- _ O
+min -X- _ O
+and -X- _ O
+washed -X- _ O
+with -X- _ O
+high -X- _ O
+salt -X- _ O
+wash -X- _ O
+buffer -X- _ O
+[ -X- _ O
+0.1 -X- _ O
+% -X- _ O
+SDS -X- _ O
+, -X- _ O
+1 -X- _ O
+% -X- _ O
+Triton -X- _ O
+X-100 -X- _ O
+, -X- _ O
+2 -X- _ O
+mM -X- _ O
+EDTA -X- _ O
+, -X- _ O
+20 -X- _ O
+mM -X- _ O
+Tris-HCl -X- _ O
+, -X- _ O
+pH -X- _ O
+8.1 -X- _ O
+, -X- _ O
+300 -X- _ O
+mM -X- _ O
+NaCl -X- _ O
+] -X- _ O
+for -X- _ O
+once -X- _ O
+, -X- _ O
+low -X- _ O
+salt -X- _ O
+wash -X- _ O
+buffer -X- _ O
+[ -X- _ O
+0.1 -X- _ O
+% -X- _ O
+SDS -X- _ O
+, -X- _ O
+1 -X- _ O
+% -X- _ O
+Triton -X- _ O
+X-100 -X- _ O
+, -X- _ O
+2 -X- _ O
+mM -X- _ O
+EDTA -X- _ O
+, -X- _ O
+20 -X- _ O
+mM -X- _ O
+Tris-HCl -X- _ O
+, -X- _ O
+pH -X- _ O
+8.1 -X- _ O
+, -X- _ O
+150 -X- _ O
+mM -X- _ O
+NaCl -X- _ O
+] -X- _ O
+for -X- _ O
+three -X- _ O
+times -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+TE -X- _ O
+buffer -X- _ O
+[ -X- _ O
+10 -X- _ O
+mM -X- _ O
+Tris-HCl -X- _ O
+, -X- _ O
+1 -X- _ O
+mM -X- _ O
+EDTA -X- _ O
+, -X- _ O
+pH -X- _ O
+8.0 -X- _ O
+] -X- _ O
+for -X- _ O
+twice -X- _ O
+, -X- _ O
+with -X- _ O
+each -X- _ O
+wash -X- _ O
+for -X- _ O
+5 -X- _ O
+min -X- _ O
+rotated -X- _ O
+at -X- _ O
+4 -X- _ O
+°C. -X- _ O
+The -X- _ O
+products -X- _ O
+concentrated -X- _ O
+by -X- _ O
+beads -X- _ O
+were -X- _ O
+used -X- _ O
+for -X- _ O
+subsequent -X- _ O
+experiments. -X- _ O
+Mass -X- _ O
+spectrometry -X- _ O
+( -X- _ O
+ms -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+analysis -X- _ O
+The -X- _ O
+sample -X- _ O
+of -X- _ O
+dCas9-3 -X- _ O
+× -X- _ O
+Flag-sgLTRs -X- _ O
+and -X- _ O
+dCas9-3 -X- _ O
+× -X- _ O
+Flag-sgGal4 -X- _ O
+( -X- _ O
+control -X- _ O
+) -X- _ O
+immnuoprecipitated -X- _ O
+proteins -X- _ O
+were -X- _ O
+prepared -X- _ O
+and -X- _ O
+analyzed -X- _ O
+by -X- _ O
+MS. -X- _ O
+In -X- _ O
+general -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+eluted -X- _ O
+LTR -X- _ O
+binding -X- _ O
+proteins -X- _ O
+were -X- _ O
+reduced -X- _ O
+in -X- _ O
+20 -X- _ O
+mM -X- _ O
+DTT -X- _ O
+at -X- _ O
+95 -X- _ O
+°C -X- _ O
+for -X- _ O
+5 -X- _ O
+min -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+subsequently -X- _ O
+alkylated -X- _ O
+in -X- _ O
+50 -X- _ O
+mM -X- _ O
+iodoacetamide -X- _ O
+for -X- _ O
+30 -X- _ O
+min -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+dark -X- _ O
+at -X- _ O
+room -X- _ O
+temperature. -X- _ O
+After -X- _ O
+alkylation -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+samples -X- _ O
+were -X- _ O
+transferred -X- _ O
+to -X- _ O
+a -X- _ O
+10 -X- _ O
+kD -X- _ O
+centrifugal -X- _ O
+spin -X- _ O
+filter -X- _ O
+( -X- _ O
+Millipore -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+sequentially -X- _ O
+washed -X- _ O
+with -X- _ O
+200 -X- _ O
+μl -X- _ O
+of -X- _ O
+8 -X- _ O
+M -X- _ O
+urea -X- _ O
+for -X- _ O
+three -X- _ O
+times -X- _ O
+and -X- _ O
+200 -X- _ O
+μl -X- _ O
+of -X- _ O
+50 -X- _ O
+mM -X- _ O
+ammonium -X- _ O
+bicarbonate -X- _ O
+for -X- _ O
+two -X- _ O
+times -X- _ O
+by -X- _ O
+centrifugation -X- _ O
+at -X- _ O
+14,000 -X- _ O
+× -X- _ O
+g. -X- _ O
+Next -X- _ O
+, -X- _ O
+tryptic -X- _ O
+digestion -X- _ O
+was -X- _ O
+performed -X- _ O
+by -X- _ O
+adding -X- _ O
+trypsinat -X- _ O
+1:50 -X- _ O
+( -X- _ O
+enzyme -X- _ O
+/ -X- _ O
+substrate -X- _ O
+, -X- _ O
+m -X- _ O
+/ -X- _ O
+m -X- _ O
+) -X- _ O
+in -X- _ O
+200 -X- _ O
+μl -X- _ O
+of -X- _ O
+50 -X- _ O
+mM -X- _ O
+ammonium -X- _ O
+bicarbonate -X- _ O
+at -X- _ O
+37 -X- _ O
+°C -X- _ O
+for -X- _ O
+16 -X- _ O
+hours. -X- _ O
+Peptides -X- _ O
+were -X- _ O
+recovered -X- _ O
+by -X- _ O
+transferring -X- _ O
+the -X- _ O
+filter -X- _ O
+to -X- _ O
+a -X- _ O
+collection -X- _ O
+tube -X- _ O
+and -X- _ O
+spinning -X- _ O
+at -X- _ O
+14,000 -X- _ O
+× -X- _ O
+g. -X- _ O
+To -X- _ O
+increase -X- _ O
+the -X- _ O
+yield -X- _ O
+of -X- _ O
+peptides -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+filter -X- _ O
+was -X- _ O
+washed -X- _ O
+twice -X- _ O
+with -X- _ O
+100 -X- _ O
+μl -X- _ O
+of -X- _ O
+50 -X- _ O
+mM -X- _ O
+ammonium -X- _ O
+bicarbonate. -X- _ O
+Peptides -X- _ O
+were -X- _ O
+desalted -X- _ O
+by -X- _ O
+StageTips. -X- _ O
+MS -X- _ O
+experiments -X- _ O
+were -X- _ O
+performed -X- _ O
+on -X- _ O
+a -X- _ O
+nanoscale -X- _ O
+EASY-nLC -X- _ O
+1200 -X- _ O
+UHPLC -X- _ O
+system -X- _ O
+( -X- _ O
+Thermo -X- _ O
+Fisher -X- _ O
+Scientific -X- _ O
+) -X- _ O
+connected -X- _ O
+to -X- _ O
+an -X- _ O
+Orbitrap -X- _ O
+Fusion -X- _ O
+Lumos -X- _ O
+equipped -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+nanoelectrospray -X- _ O
+source -X- _ O
+( -X- _ O
+Thermo -X- _ O
+Fisher -X- _ O
+Scientific -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Mobile -X- _ O
+phase -X- _ O
+A -X- _ O
+contained -X- _ O
+0.1 -X- _ O
+% -X- _ O
+formic -X- _ O
+acid -X- _ O
+( -X- _ O
+v -X- _ O
+/ -X- _ O
+v -X- _ O
+) -X- _ O
+in -X- _ O
+water -X- _ O
+; -X- _ O
+mobile -X- _ O
+phase -X- _ O
+B -X- _ O
+contained -X- _ O
+0.1 -X- _ O
+% -X- _ O
+formic -X- _ O
+acid -X- _ O
+in -X- _ O
+80 -X- _ O
+% -X- _ O
+acetonitrile -X- _ O
+( -X- _ O
+ACN -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+peptides -X- _ O
+were -X- _ O
+dissolved -X- _ O
+in -X- _ O
+0.1 -X- _ O
+% -X- _ O
+formic -X- _ O
+acid -X- _ O
+( -X- _ O
+FA -X- _ O
+) -X- _ O
+with -X- _ O
+2 -X- _ O
+% -X- _ O
+acetonitrile -X- _ O
+and -X- _ O
+separated -X- _ O
+on -X- _ O
+an -X- _ O
+RP-HPLC -X- _ O
+analytical -X- _ O
+column -X- _ O
+( -X- _ O
+75 -X- _ O
+μm -X- _ O
+× -X- _ O
+25 -X- _ O
+cm -X- _ O
+) -X- _ O
+packed -X- _ O
+with -X- _ O
+2 -X- _ O
+μm -X- _ O
+C18 -X- _ O
+beads -X- _ O
+( -X- _ O
+Thermo -X- _ O
+Fisher -X- _ O
+Scientific -X- _ O
+) -X- _ O
+using -X- _ O
+a -X- _ O
+linear -X- _ O
+gradient -X- _ O
+ranging -X- _ O
+from -X- _ O
+5 -X- _ O
+% -X- _ O
+to -X- _ O
+22 -X- _ O
+% -X- _ O
+ACN -X- _ O
+in -X- _ O
+90 -X- _ O
+min -X- _ O
+and -X- _ O
+followed -X- _ O
+by -X- _ O
+a -X- _ O
+linear -X- _ O
+increase -X- _ O
+to -X- _ O
+35 -X- _ O
+% -X- _ O
+B -X- _ O
+in -X- _ O
+20 -X- _ O
+min -X- _ O
+at -X- _ O
+a -X- _ O
+flow -X- _ O
+rate -X- _ O
+of -X- _ O
+300 -X- _ O
+nl -X- _ O
+/ -X- _ O
+min. -X- _ O
+The -X- _ O
+Orbitrap -X- _ O
+Fusion -X- _ O
+Lumos -X- _ O
+acquired -X- _ O
+data -X- _ O
+in -X- _ O
+a -X- _ O
+data-dependent -X- _ O
+manner -X- _ O
+, -X- _ O
+alternating -X- _ O
+between -X- _ O
+full-scan -X- _ O
+MS -X- _ O
+and -X- _ O
+MS2 -X- _ O
+scans. -X- _ O
+The -X- _ O
+spray -X- _ O
+voltage -X- _ O
+was -X- _ O
+set -X- _ O
+at -X- _ O
+2.2 -X- _ O
+kV -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+temperature -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+ion -X- _ O
+transfer -X- _ O
+capillary -X- _ O
+was -X- _ O
+300 -X- _ O
+°C. -X- _ O
+The -X- _ O
+MS -X- _ O
+spectra -X- _ O
+( -X- _ O
+350–1500 -X- _ O
+m -X- _ O
+/ -X- _ O
+z -X- _ O
+) -X- _ O
+were -X- _ O
+collected -X- _ O
+with -X- _ O
+120,000 -X- _ O
+resolutions -X- _ O
+, -X- _ O
+AGC -X- _ O
+of -X- _ O
+4 -X- _ O
+× -X- _ O
+105 -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+50 -X- _ O
+ms -X- _ O
+maximal -X- _ O
+injection -X- _ O
+time. -X- _ O
+Selected -X- _ O
+ions -X- _ O
+were -X- _ O
+sequentially -X- _ O
+fragmented -X- _ O
+by -X- _ O
+HCD -X- _ O
+with -X- _ O
+30 -X- _ O
+% -X- _ O
+normalized -X- _ O
+collision -X- _ O
+energy -X- _ O
+, -X- _ O
+specified -X- _ O
+isolated -X- _ O
+windows -X- _ O
+1.6 -X- _ O
+m -X- _ O
+/ -X- _ O
+z -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+15,000 -X- _ O
+resolutions. -X- _ O
+AGC -X- _ O
+of -X- _ O
+5 -X- _ O
+× -X- _ O
+104 -X- _ O
+and -X- _ O
+40 -X- _ O
+ms -X- _ O
+maximal -X- _ O
+injection -X- _ O
+time -X- _ O
+were -X- _ O
+used. -X- _ O
+Dynamic -X- _ O
+exclusion -X- _ O
+was -X- _ O
+set -X- _ O
+to -X- _ O
+40 -X- _ O
+s. -X- _ O
+Unassigned -X- _ O
+ions -X- _ O
+or -X- _ O
+those -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+charge -X- _ O
+of -X- _ O
+2 -X- _ O
++ -X- _ O
+and -X- _ O
+> -X- _ O
+7 -X- _ O
++ -X- _ O
+were -X- _ O
+rejected -X- _ O
+for -X- _ O
+MS -X- _ O
+/ -X- _ O
+MS. -X- _ O
+Raw -X- _ O
+data -X- _ O
+was -X- _ O
+processed -X- _ O
+using -X- _ O
+Proteome -X- _ O
+Discoverer -X- _ O
+( -X- _ O
+PD -X- _ O
+, -X- _ O
+version -X- _ O
+2.4 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+MS -X- _ O
+/ -X- _ O
+MS -X- _ O
+spectra -X- _ O
+were -X- _ O
+searched -X- _ O
+against -X- _ O
+the -X- _ O
+reviewed -X- _ O
+SwissProt -X- _ O
+human -X- _ O
+proteome -X- _ O
+database. -X- _ O
+Only -X- _ O
+peptides -X- _ O
+with -X- _ O
+at -X- _ O
+least -X- _ O
+six -X- _ O
+amino -X- _ O
+acids -X- _ O
+in -X- _ O
+length -X- _ O
+were -X- _ O
+considered. -X- _ O
+The -X- _ O
+peptide -X- _ O
+and -X- _ O
+protein -X- _ O
+identifications -X- _ O
+were -X- _ O
+filtered -X- _ O
+by -X- _ O
+PD -X- _ O
+to -X- _ O
+control -X- _ O
+the -X- _ O
+false -X- _ O
+discovery -X- _ O
+rate -X- _ O
+( -X- _ O
+FDR -X- _ O
+) -X- _ O
+***Generation -X- _ O
+of -X- _ O
+stable -X- _ O
+knockout -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+line*** -X- _ I-CELL
+sgRNA -X- _ O
+sequence -X- _ O
+was -X- _ O
+ligate -X- _ O
+into -X- _ O
+plasmid -X- _ O
+pSpCas9 -X- _ O
+( -X- _ O
+BB -X- _ O
+) -X- _ O
+−2A-Puro -X- _ O
+( -X- _ O
+PX459 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+was -X- _ O
+purchased -X- _ O
+from -X- _ O
+Addgene -X- _ O
+( -X- _ O
+# -X- _ O
+48139 -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+transfected -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+plasmid -X- _ O
+expressing -X- _ O
+sgPRMT3 -X- _ O
+by -X- _ O
+using -X- _ O
+Lipofectamine -X- _ O
+3000 -X- _ O
+( -X- _ O
+Invitrogen -X- _ O
+) -X- _ O
+according -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+manufacturer’s -X- _ O
+protocol. -X- _ O
+After -X- _ O
+48 -X- _ O
+h -X- _ O
+of -X- _ O
+transfection -X- _ O
+, -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+that -X- _ O
+did -X- _ O
+not -X- _ O
+contain -X- _ O
+the -X- _ O
+plasmid -X- _ O
+were -X- _ O
+killed -X- _ O
+with -X- _ O
+puromycin -X- _ O
+for -X- _ O
+2 -X- _ O
+days -X- _ O
+, -X- _ O
+then -X- _ O
+changed -X- _ O
+into -X- _ O
+DMEM -X- _ O
+with -X- _ O
+no -X- _ O
+antibiotics -X- _ O
+and -X- _ O
+plated -X- _ O
+into -X- _ O
+96-well -X- _ O
+plate -X- _ O
+for -X- _ O
+single -X- _ O
+clone -X- _ O
+selection. -X- _ O
+After -X- _ O
+verification -X- _ O
+with -X- _ O
+western -X- _ O
+blot -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+genome -X- _ O
+was -X- _ O
+extracted -X- _ O
+and -X- _ O
+sent -X- _ O
+for -X- _ O
+sequencing. -X- _ O
+Source -X- _ O
+paper -X- _ O
+: -X- _ O
+PMC12081701 -X- _ O
+
+Materials -X- _ O
+and -X- _ O
+methods -X- _ O
+Statistical -X- _ O
+analysis -X- _ O
+The -X- _ O
+data -X- _ O
+were -X- _ O
+described -X- _ O
+as -X- _ O
+mean -X- _ O
+± -X- _ O
+standard -X- _ O
+deviation -X- _ O
+( -X- _ O
+SD -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+statistical -X- _ O
+significance -X- _ O
+was -X- _ O
+determined -X- _ O
+by -X- _ O
+one-way -X- _ O
+ANOVA -X- _ O
+before -X- _ O
+LSD -X- _ O
+test -X- _ O
+for -X- _ O
+multiple -X- _ O
+comparisons -X- _ O
+and -X- _ O
+independent-sample -X- _ O
+t-test -X- _ O
+for -X- _ O
+comparison -X- _ O
+between -X- _ O
+the -X- _ O
+two -X- _ O
+groups. -X- _ O
+The -X- _ O
+level -X- _ O
+of -X- _ O
+p -X- _ O
+***Results*** -X- _ O
+Discussion -X- _ O
+The -X- _ O
+host -X- _ O
+immune -X- _ B-TISSUE
+system -X- _ I-TISSUE
+exerts -X- _ O
+immunosurveillance -X- _ O
+to -X- _ O
+control -X- _ O
+cancer -X- _ O
+development. -X- _ O
+By -X- _ O
+inducing -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+immunosuppressive -X- _ O
+factors -X- _ O
+, -X- _ O
+however -X- _ O
+, -X- _ O
+tumor -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+signaling -X- _ O
+subdues -X- _ O
+both -X- _ O
+the -X- _ O
+innate -X- _ O
+and -X- _ O
+adaptive -X- _ O
+immune -X- _ O
+responses -X- _ O
+, -X- _ O
+thereby -X- _ O
+shielding -X- _ O
+the -X- _ O
+tumor -X- _ O
+from -X- _ O
+immune -X- _ O
+attacks. -X- _ O
+In -X- _ O
+addition -X- _ O
+, -X- _ O
+insufficient -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+on -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+is -X- _ O
+one -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+important -X- _ O
+strategies -X- _ O
+employed -X- _ O
+by -X- _ O
+cancer -X- _ O
+to -X- _ O
+evade -X- _ O
+the -X- _ O
+immune -X- _ B-TISSUE
+system. -X- _ I-TISSUE
+Therefore -X- _ O
+, -X- _ O
+inhibition -X- _ O
+of -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+and -X- _ O
+improvement -X- _ O
+of -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+expression -X- _ O
+on -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+is -X- _ O
+important -X- _ O
+to -X- _ O
+induce -X- _ O
+effective -X- _ O
+responses -X- _ O
+of -X- _ O
+cell-mediated -X- _ B-CELL
+immunity -X- _ O
+against -X- _ O
+cancer -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+lung -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ O
+for -X- _ O
+immunotherapies -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+PD-1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+PD-L1 -X- _ O
+inhibitor. -X- _ O
+The -X- _ O
+effect -X- _ O
+of -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+in -X- _ O
+inhibiting -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+and -X- _ O
+promoting -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+expression -X- _ O
+on -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+lung -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+may -X- _ O
+counteract -X- _ O
+cancer -X- _ O
+immune -X- _ O
+evasion -X- _ O
+and -X- _ O
+thereby -X- _ O
+benefit -X- _ O
+cancer -X- _ O
+immunotherapy. -X- _ O
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+this -X- _ O
+remains -X- _ O
+unclear. -X- _ O
+This -X- _ O
+study -X- _ O
+was -X- _ O
+designed -X- _ O
+to -X- _ O
+determine -X- _ O
+the -X- _ O
+effect -X- _ O
+of -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+in -X- _ O
+inhibiting -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+and -X- _ O
+promoting -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+expression -X- _ O
+on -X- _ O
+lung -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ I-CELL
+Endostar -X- _ O
+was -X- _ O
+administrated -X- _ O
+to -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+NCI-H1299 -X- _ B-CELL
+lung -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+and -X- _ O
+the -X- _ O
+protein -X- _ O
+of -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+and -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+and -X- _ O
+their -X- _ O
+mRNAs -X- _ O
+was -X- _ O
+detected -X- _ O
+by -X- _ O
+western -X- _ O
+blot -X- _ O
+and -X- _ O
+RT-qPCR. -X- _ O
+The -X- _ O
+lower -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+and -X- _ O
+higher -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+were -X- _ O
+found -X- _ O
+in -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+treated -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+NCI-H1299 -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ B-CELL
+These -X- _ O
+findings -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+inhibtion -X- _ O
+on -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+and -X- _ O
+promotion -X- _ O
+on -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+by -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+the -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+to -X- _ O
+benefit -X- _ O
+lung -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ O
+immunotherapy. -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+, -X- _ O
+an -X- _ O
+N-terminal -X- _ O
+modified -X- _ O
+recombinant -X- _ O
+human -X- _ O
+endostatin -X- _ O
+, -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+human -X- _ O
+recombinant -X- _ O
+endostatin -X- _ O
+, -X- _ O
+an -X- _ O
+attractive -X- _ O
+anti-angiogenesis -X- _ O
+protein. -X- _ O
+Therefore -X- _ O
+, -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+has -X- _ O
+anti-angiogenesis -X- _ O
+effects. -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+was -X- _ O
+developed -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+specific -X- _ O
+drug -X- _ O
+permitted -X- _ O
+by -X- _ O
+the -X- _ O
+State -X- _ O
+Food -X- _ O
+and -X- _ O
+Drug -X- _ O
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+in -X- _ O
+China -X- _ O
+in -X- _ O
+2005 -X- _ O
+for -X- _ O
+its -X- _ O
+use -X- _ O
+in -X- _ O
+NSCLC -X- _ B-CELL
+therapy.25,26 -X- _ O
+Endostatin -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+natural -X- _ O
+protein -X- _ O
+, -X- _ O
+first -X- _ O
+isolated -X- _ O
+and -X- _ O
+extracted -X- _ O
+from -X- _ O
+mouse -X- _ O
+tumors -X- _ O
+by -X- _ O
+Judah -X- _ O
+Folkman -X- _ O
+, -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+wide -X- _ O
+antitumor -X- _ O
+spectrum -X- _ O
+and -X- _ O
+strong -X- _ O
+antiangiogenic -X- _ O
+capacity.27,28 -X- _ O
+Angiogenesis -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+physiological -X- _ O
+process -X- _ O
+of -X- _ O
+forming -X- _ O
+new -X- _ O
+blood -X- _ B-TISSUE
+vessels -X- _ B-TISSUE
+from -X- _ O
+existing -X- _ O
+blood -X- _ B-TISSUE
+vessels -X- _ B-TISSUE
+and -X- _ O
+circulating -X- _ O
+endothelial -X- _ O
+precursors. -X- _ O
+It -X- _ O
+is -X- _ O
+essential -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+occurrence -X- _ O
+and -X- _ O
+development -X- _ O
+of -X- _ O
+tumors -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+grow -X- _ O
+rapidly -X- _ O
+and -X- _ O
+metastasize -X- _ O
+eventually.24 -X- _ O
+Physiologically -X- _ O
+, -X- _ O
+angiogenesis -X- _ O
+is -X- _ O
+essential -X- _ O
+to -X- _ O
+physiological -X- _ O
+processes -X- _ O
+like -X- _ O
+embryogenesis -X- _ O
+, -X- _ O
+tissue -X- _ B-TISSUE
+growth -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+regeneration.29,30 -X- _ O
+Oncologically -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+is -X- _ O
+also -X- _ O
+important -X- _ O
+for -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+that -X- _ O
+grow -X- _ O
+rapidly -X- _ O
+and -X- _ O
+metastasize -X- _ O
+eventually -X- _ O
+because -X- _ O
+angiogenesis -X- _ O
+supplies -X- _ O
+oxygen -X- _ O
+and -X- _ O
+nutrients -X- _ O
+which -X- _ O
+are -X- _ O
+deficient -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+for -X- _ O
+their -X- _ O
+rapid -X- _ O
+growth -X- _ O
+and -X- _ O
+eventual -X- _ O
+metastasis.31 -X- _ O
+Therefore -X- _ O
+, -X- _ O
+anti-angiogenesis -X- _ O
+is -X- _ O
+one -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+most -X- _ O
+important -X- _ O
+cancer -X- _ O
+therapies.32 -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+recombinant -X- _ O
+human -X- _ O
+endostatin -X- _ O
+with -X- _ O
+nine -X- _ O
+added -X- _ O
+amino -X- _ O
+acids -X- _ O
+( -X- _ O
+MGGSHHHHH -X- _ O
+) -X- _ O
+33 -X- _ O
+to -X- _ O
+maintain -X- _ O
+stability -X- _ O
+and -X- _ O
+a -X- _ O
+long -X- _ O
+half-life -X- _ O
+has -X- _ O
+effective -X- _ O
+antiangiogenic -X- _ O
+effect. -X- _ O
+Besides -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+was -X- _ O
+shown -X- _ O
+in -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+that -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+with -X- _ O
+upregulation -X- _ O
+of -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+NCI-H1299 -X- _ B-CELL
+lung -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+benefiting -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+killing -X- _ O
+by -X- _ O
+effectory -X- _ O
+lymphocytes. -X- _ B-CELL
+HIF-1 -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+heterodimer -X- _ O
+consisting -X- _ O
+of -X- _ O
+a -X- _ O
+constitutive -X- _ O
+β-subunit -X- _ O
+and -X- _ O
+an -X- _ O
+oxygen-sensitive -X- _ O
+α-subunit,34 -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+main -X- _ O
+transcriptional -X- _ O
+regulator -X- _ O
+responsible -X- _ O
+for -X- _ O
+metabolic -X- _ O
+adaptation -X- _ O
+to -X- _ O
+alterations -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+oxygen -X- _ O
+environment. -X- _ O
+It -X- _ O
+involves -X- _ O
+in -X- _ O
+many -X- _ O
+physiological -X- _ O
+and -X- _ O
+pathological -X- _ O
+processes -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+body -X- _ O
+and -X- _ O
+is -X- _ O
+closely -X- _ O
+associated -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+pathogenesis -X- _ O
+of -X- _ O
+many -X- _ O
+diseases.13 -X- _ O
+In -X- _ O
+solid -X- _ O
+tumors -X- _ O
+, -X- _ O
+uncontrolled -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+of -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+vs -X- _ O
+disorganized -X- _ O
+growth -X- _ O
+of -X- _ O
+blood -X- _ B-TISSUE
+vessels -X- _ B-TISSUE
+results -X- _ O
+in -X- _ O
+limited -X- _ O
+supply -X- _ O
+of -X- _ O
+nutrients -X- _ O
+and -X- _ O
+oxygen -X- _ O
+resulting -X- _ O
+in -X- _ O
+low -X- _ O
+oxygen -X- _ O
+tension -X- _ O
+; -X- _ O
+therefore -X- _ O
+, -X- _ O
+regions -X- _ O
+with -X- _ O
+hypoxic -X- _ O
+microenvironments -X- _ O
+are -X- _ O
+created. -X- _ O
+In -X- _ O
+these -X- _ O
+regions -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+highly -X- _ O
+overexpressed -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+is -X- _ O
+important -X- _ O
+to -X- _ O
+drive -X- _ O
+tumor -X- _ O
+growing -X- _ O
+, -X- _ O
+invasion -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+metastasis -X- _ O
+in -X- _ O
+different -X- _ O
+human -X- _ O
+cancers.35,36 -X- _ O
+The -X- _ O
+association -X- _ O
+of -X- _ O
+a -X- _ O
+poor -X- _ O
+survival -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+high -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+HIF-1α -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+indicated -X- _ O
+by -X- _ O
+survival -X- _ O
+analysis -X- _ O
+in -X- _ O
+patients -X- _ O
+with -X- _ O
+lung -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+different -X- _ O
+SNPs -X- _ O
+in -X- _ O
+HIF-1α -X- _ O
+may -X- _ O
+have -X- _ O
+different -X- _ O
+effects -X- _ O
+on -X- _ O
+overall -X- _ O
+cancer -X- _ O
+risk -X- _ O
+in -X- _ O
+an -X- _ O
+ethnicity- -X- _ O
+and -X- _ O
+type-specific -X- _ O
+manner.37 -X- _ O
+Reduction -X- _ O
+of -X- _ O
+HIF-1α -X- _ O
+by -X- _ O
+Simvastatin -X- _ O
+enhanced -X- _ O
+Anti-tumor -X- _ O
+Effects -X- _ O
+of -X- _ O
+Bevacizumab -X- _ O
+in -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+cells.38 -X- _ O
+Targeting -X- _ O
+ATM -X- _ O
+/ -X- _ O
+HIF-1α -X- _ O
+signaling -X- _ O
+by -X- _ O
+solanidine -X- _ O
+induced -X- _ O
+anti-angiogenesis -X- _ O
+and -X- _ O
+anti-cancer -X- _ O
+effect -X- _ O
+in -X- _ O
+lung -X- _ B-TISSUE
+cancer.39 -X- _ O
+Besides -X- _ O
+its -X- _ O
+involvement -X- _ O
+in -X- _ O
+various -X- _ O
+aspects -X- _ O
+of -X- _ O
+tumor -X- _ O
+development -X- _ O
+, -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+tumor -X- _ O
+growth -X- _ O
+, -X- _ O
+invasion -X- _ O
+, -X- _ O
+metastasis -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+angiogenesis -X- _ O
+, -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+is -X- _ O
+also -X- _ O
+involved -X- _ O
+in -X- _ O
+tumor -X- _ O
+immune -X- _ O
+evasion -X- _ O
+which -X- _ O
+facilitates -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+to -X- _ O
+proliferate -X- _ O
+and -X- _ O
+metastasize -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+contributes -X- _ O
+to -X- _ O
+failure -X- _ O
+in -X- _ O
+immunotherapy.40 -X- _ O
+Inhibition -X- _ O
+of -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+contributes -X- _ O
+to -X- _ O
+cancer -X- _ O
+control -X- _ O
+and -X- _ O
+induction -X- _ O
+of -X- _ O
+effective -X- _ O
+anti-cancer -X- _ O
+immunity -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ O
+immunotherapy. -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+has -X- _ O
+the -X- _ O
+effect -X- _ O
+to -X- _ O
+down-regulate -X- _ O
+HIF-1.41 -X- _ O
+It -X- _ O
+was -X- _ O
+shown -X- _ O
+in -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+that -X- _ O
+25 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
+ml -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+NCI-H1299 -X- _ B-CELL
+lung -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ I-CELL
+HIF-1 -X- _ O
+is -X- _ O
+induced -X- _ O
+by -X- _ O
+hypoxia -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells,42 -X- _ O
+and -X- _ O
+in -X- _ O
+normoxia -X- _ O
+, -X- _ O
+it -X- _ O
+is -X- _ O
+not -X- _ O
+usually -X- _ O
+observed -X- _ O
+or -X- _ O
+only -X- _ O
+basal -X- _ O
+expression -X- _ O
+can -X- _ O
+be -X- _ O
+observed.43,44 -X- _ O
+In -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+experiments -X- _ O
+showed -X- _ O
+a -X- _ O
+high -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+in -X- _ O
+control -X- _ O
+and -X- _ O
+untreated -X- _ O
+cells. -X- _ B-CELL
+However -X- _ O
+, -X- _ O
+this -X- _ O
+did -X- _ O
+not -X- _ O
+necessarily -X- _ O
+mean -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+in -X- _ O
+control -X- _ O
+and -X- _ O
+untreated -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+was -X- _ O
+really -X- _ O
+high -X- _ O
+because -X- _ O
+it -X- _ O
+was -X- _ O
+detected -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+treated -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+NCI-H1299 -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+as -X- _ O
+the -X- _ O
+backgroud. -X- _ O
+The -X- _ O
+expression -X- _ O
+detected -X- _ O
+by -X- _ O
+Western -X- _ O
+blot -X- _ O
+and -X- _ O
+Immunocytochemistry -X- _ O
+is -X- _ O
+relative -X- _ O
+quantification. -X- _ O
+The -X- _ O
+assays -X- _ O
+had -X- _ O
+been -X- _ O
+optimized -X- _ O
+for -X- _ O
+enough -X- _ O
+sensitivity -X- _ O
+to -X- _ O
+detect -X- _ O
+the -X- _ O
+reduced -X- _ O
+expression -X- _ O
+in -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+treated -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+NCI-H1299 -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ B-CELL
+An -X- _ O
+effective -X- _ O
+adaptive -X- _ O
+response -X- _ O
+can -X- _ O
+be -X- _ O
+achieved -X- _ O
+through -X- _ O
+a -X- _ O
+multi-step -X- _ O
+antigen -X- _ O
+processing -X- _ O
+and -X- _ O
+pathway -X- _ O
+, -X- _ O
+namely -X- _ O
+the -X- _ O
+cellular -X- _ O
+antigen -X- _ O
+processing -X- _ O
+machinery -X- _ O
+( -X- _ O
+APM -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Antigens -X- _ O
+must -X- _ O
+be -X- _ O
+processed -X- _ O
+into -X- _ O
+antigenic -X- _ O
+peptides -X- _ O
+by -X- _ O
+APM. -X- _ O
+These -X- _ O
+peptides -X- _ O
+are -X- _ O
+loaded -X- _ O
+onto -X- _ O
+an -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+molecule. -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+molecules -X- _ O
+are -X- _ O
+glycoproteins -X- _ O
+of -X- _ O
+heterodimers -X- _ O
+with -X- _ O
+a -X- _ O
+polymorphic -X- _ O
+heavy -X- _ O
+chain -X- _ O
+( -X- _ O
+α-chain -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+an -X- _ O
+invariable -X- _ O
+β2 -X- _ O
+microglobulin -X- _ O
+( -X- _ O
+β2 -X- _ O
+m -X- _ O
+) -X- _ O
+light -X- _ O
+chain -X- _ O
+( -X- _ O
+β-chain -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+α-chain -X- _ O
+is -X- _ O
+encoded -X- _ O
+by -X- _ O
+the -X- _ O
+Human -X- _ O
+Leukocyte -X- _ B-CELL
+Antigen-HLA -X- _ O
+A -X- _ O
+, -X- _ O
+B -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+C -X- _ O
+genes -X- _ O
+in -X- _ O
+humans. -X- _ O
+There -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+groove -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+molecules -X- _ O
+to -X- _ O
+preferentially -X- _ O
+bind -X- _ O
+8-11mer -X- _ O
+peptides. -X- _ O
+The -X- _ O
+antigenic -X- _ O
+epitope -X- _ O
+binds -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+exposed -X- _ O
+surface -X- _ O
+of -X- _ O
+this -X- _ O
+groove -X- _ O
+as -X- _ O
+a -X- _ O
+part -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+complex. -X- _ O
+It -X- _ O
+is -X- _ O
+recognized -X- _ O
+by -X- _ O
+the -X- _ O
+TCR -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+T -X- _ O
+cells.45 -X- _ O
+This -X- _ O
+study -X- _ O
+showed -X- _ O
+that -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+α-heavy -X- _ O
+chain -X- _ O
+and -X- _ O
+β2 -X- _ O
+m -X- _ O
+light -X- _ O
+chain -X- _ O
+in -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+NCI-H1299 -X- _ B-CELL
+lung -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+was -X- _ O
+improved -X- _ O
+by -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+benefited -X- _ O
+cancer -X- _ O
+immunotherapy -X- _ O
+against -X- _ O
+the -X- _ O
+lung -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ I-CELL
+In -X- _ O
+the -X- _ O
+context -X- _ O
+of -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+down-regulation -X- _ O
+by -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+was -X- _ O
+shown -X- _ O
+in -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+to -X- _ O
+demonstrate -X- _ O
+the -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+α-heavy -X- _ O
+chain -X- _ O
+and -X- _ O
+β2 -X- _ O
+m -X- _ O
+light -X- _ O
+chain -X- _ O
+in -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+NCI-H1299 -X- _ B-CELL
+lung -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+over-expressing -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+gene -X- _ O
+was -X- _ O
+transfected -X- _ O
+into -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+NCI-H1299 -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+resulting -X- _ O
+in -X- _ O
+decrease -X- _ O
+of -X- _ O
+relative -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+α-heavy -X- _ O
+chain -X- _ O
+and -X- _ O
+β2 -X- _ O
+m -X- _ O
+light -X- _ O
+chain. -X- _ O
+This -X- _ O
+results -X- _ O
+were -X- _ O
+in -X- _ O
+line -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+decrease -X- _ O
+of -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+by -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+treatment -X- _ O
+accompanied -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+enhancement -X- _ O
+of -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+α-heavy -X- _ O
+chain -X- _ O
+and -X- _ O
+β2 -X- _ O
+m -X- _ O
+light -X- _ O
+chain. -X- _ O
+In -X- _ O
+addition -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+important -X- _ O
+role -X- _ O
+in -X- _ O
+metabolic -X- _ O
+adaptation -X- _ O
+to -X- _ O
+hypoxia -X- _ O
+stress -X- _ O
+caused -X- _ O
+by -X- _ O
+deficient -X- _ O
+supply -X- _ O
+of -X- _ O
+nutrients -X- _ O
+and -X- _ O
+oxygen -X- _ O
+because -X- _ O
+of -X- _ O
+uncontrolled -X- _ O
+growth -X- _ O
+of -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+disorganized -X- _ O
+neoangiogenesis -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+signaling -X- _ O
+pathways -X- _ O
+of -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+heterodimer -X- _ O
+highly -X- _ O
+expressed -X- _ O
+in -X- _ O
+a -X- _ O
+variety -X- _ O
+of -X- _ O
+tumor -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+suppress -X- _ O
+innate -X- _ O
+and -X- _ O
+adaptive -X- _ O
+immune -X- _ B-TISSUE
+systems -X- _ I-TISSUE
+to -X- _ O
+escape -X- _ O
+immune -X- _ O
+attack. -X- _ O
+That -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+downregulates -X- _ O
+the -X- _ O
+antigen -X- _ O
+presenting -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+molecules -X- _ O
+is -X- _ O
+an -X- _ O
+important -X- _ O
+strategy -X- _ O
+for -X- _ O
+cancer -X- _ O
+to -X- _ O
+evade -X- _ O
+immune -X- _ O
+attack -X- _ O
+, -X- _ O
+because -X- _ O
+only -X- _ O
+in -X- _ O
+combination -X- _ O
+with -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+target -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+can -X- _ O
+tumor -X- _ O
+antigenic -X- _ O
+peptides -X- _ O
+be -X- _ O
+recognized -X- _ O
+by -X- _ O
+CD8+ -X- _ O
+CTL -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+subsequent -X- _ O
+destruction -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+target -X- _ O
+cells. -X- _ B-CELL
+Theoretically -X- _ O
+, -X- _ O
+inhibition -X- _ O
+of -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+may -X- _ O
+upregulate -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+on -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells. -X- _ B-CELL
+This -X- _ O
+study -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+that -X- _ O
+25 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
+ml -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+upregulation -X- _ O
+of -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+α-heavy -X- _ O
+chain -X- _ O
+and -X- _ O
+β2 -X- _ O
+m -X- _ O
+light -X- _ O
+chain -X- _ O
+in -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+NCI-H1299 -X- _ B-CELL
+lung -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+the -X- _ O
+potential -X- _ O
+for -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+to -X- _ O
+facilitate -X- _ O
+cancer -X- _ O
+immunotherapy. -X- _ O
+Experimental -X- _ O
+evidence -X- _ O
+, -X- _ O
+however -X- _ O
+, -X- _ O
+is -X- _ O
+required -X- _ O
+and -X- _ O
+further -X- _ O
+research -X- _ O
+with -X- _ O
+experimental -X- _ O
+evidence -X- _ O
+remains -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+performed -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+future -X- _ O
+to -X- _ O
+confirm -X- _ O
+the -X- _ O
+possible -X- _ O
+suppression -X- _ O
+of -X- _ O
+immune -X- _ O
+evasion -X- _ O
+tactic -X- _ O
+with -X- _ O
+endostar -X- _ O
+treatment. -X- _ O
+Other -X- _ O
+limitations -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+lack -X- _ O
+of -X- _ O
+an -X- _ O
+in -X- _ O
+vivo -X- _ O
+tumor -X- _ O
+model -X- _ O
+and -X- _ O
+further -X- _ O
+validation -X- _ O
+using -X- _ O
+flow -X- _ O
+cytometry -X- _ O
+remain -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+supplementarily -X- _ O
+performed -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+future. -X- _ O
+The -X- _ O
+mechanism -X- _ O
+of -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+regulation -X- _ O
+involves -X- _ O
+the -X- _ O
+innate -X- _ O
+immune -X- _ O
+molecule -X- _ O
+NLR -X- _ O
+family -X- _ O
+CARD -X- _ O
+domain -X- _ O
+containing -X- _ O
+5 -X- _ O
+( -X- _ O
+NLRC5 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+member -X- _ O
+of -X- _ O
+recently -X- _ O
+discovered -X- _ O
+NLRs-like -X- _ O
+receptor -X- _ O
+family -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+highly -X- _ O
+conserved -X- _ O
+one.46 -X- _ O
+NLRC5 -X- _ O
+is -X- _ O
+an -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+gene -X- _ O
+transactivation -X- _ O
+factor -X- _ O
+which -X- _ O
+induces -X- _ O
+the -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+gene -X- _ O
+transcription -X- _ O
+and -X- _ O
+subsequently -X- _ O
+activates -X- _ O
+antigen -X- _ O
+presentation -X- _ O
+process.47,48 -X- _ O
+NLRC5 -X- _ O
+is -X- _ O
+transcriptionally -X- _ O
+regulated -X- _ O
+in -X- _ O
+JAK2 -X- _ O
+/ -X- _ O
+STAT3 -X- _ O
+signaling-dependent -X- _ O
+pathway.49 -X- _ O
+This -X- _ O
+study -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+that -X- _ O
+some -X- _ O
+concentrations -X- _ O
+of -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+decreased -X- _ O
+the -X- _ O
+relative -X- _ O
+levels -X- _ O
+of -X- _ O
+STAT3 -X- _ O
+and -X- _ O
+pSTAT3 -X- _ O
+in -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+lung -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+with -X- _ O
+statistical -X- _ O
+significance -X- _ O
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+is -X- _ O
+in -X- _ O
+line -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+JAK2 -X- _ O
+/ -X- _ O
+STAT3 -X- _ O
+pathway -X- _ O
+in -X- _ O
+regulation -X- _ O
+of -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+via -X- _ O
+NLRC5 -X- _ O
+, -X- _ O
+suggesting -X- _ O
+the -X- _ O
+underlying -X- _ O
+mechanism -X- _ O
+of -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+upregulation -X- _ O
+involving -X- _ O
+JAK2 -X- _ O
+/ -X- _ O
+STAT3 -X- _ O
+signaling -X- _ O
+pathway. -X- _ O
+Conclusions -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+( -X- _ O
+25 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
+ml -X- _ O
+) -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+the -X- _ O
+expression -X- _ O
+of -X- _ O
+HIF-1 -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+upregulation -X- _ O
+of -X- _ O
+MHC -X- _ O
+class -X- _ O
+I -X- _ O
+α-heavy -X- _ O
+chain -X- _ O
+and -X- _ O
+β2 -X- _ O
+m -X- _ O
+light -X- _ O
+chain -X- _ O
+in -X- _ O
+A549 -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+NCI-H1299 -X- _ B-CELL
+lung -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+which -X- _ O
+showed -X- _ O
+the -X- _ O
+potential -X- _ O
+for -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+to -X- _ O
+facilitate -X- _ O
+cancer -X- _ O
+immunotherapy. -X- _ O
+It -X- _ O
+is -X- _ O
+needed -X- _ O
+for -X- _ O
+future -X- _ O
+studies -X- _ O
+that -X- _ O
+are -X- _ O
+warranted -X- _ O
+to -X- _ O
+confirm -X- _ O
+the -X- _ O
+role -X- _ O
+of -X- _ O
+Endostar -X- _ O
+treatment. -X- _ O
+Source -X- _ O
+paper -X- _ O
+: -X- _ O
+PMC12101583 -X- _ O
+
+2. -X- _ O
+results -X- _ O
+3. -X- _ O
+discussion -X- _ O
+Conifer -X- _ O
+bark -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+medicinal -X- _ O
+use -X- _ O
+of -X- _ O
+which -X- _ O
+dates -X- _ O
+back -X- _ O
+more -X- _ O
+than -X- _ O
+2000 -X- _ O
+years -X- _ O
+, -X- _ O
+contains -X- _ O
+bioactive -X- _ O
+alkaloids -X- _ O
+, -X- _ O
+flavonoids -X- _ O
+, -X- _ O
+lignans -X- _ O
+, -X- _ O
+phenolic -X- _ O
+acids -X- _ O
+, -X- _ O
+proanthocyanidins -X- _ O
+, -X- _ O
+stilbenes -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+terpenoids -X- _ O
+that -X- _ O
+contribute -X- _ O
+to -X- _ O
+its -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+potential. -X- _ O
+Various -X- _ O
+conifer -X- _ O
+bark -X- _ O
+extracts -X- _ O
+are -X- _ O
+used -X- _ O
+nowadays -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+nutraceutical -X- _ O
+, -X- _ O
+food -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+pharmaceutical -X- _ O
+industries -X- _ O
+because -X- _ O
+of -X- _ O
+their -X- _ O
+health-promoting -X- _ O
+effects -X- _ O
+in -X- _ O
+numerous -X- _ O
+ailments -X- _ O
+and -X- _ O
+diseases -X- _ O
+[ -X- _ O
+27,28,29 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Such -X- _ O
+extracts -X- _ O
+are -X- _ O
+Pycnogenol® -X- _ O
+, -X- _ O
+Flavangenol® -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+Oligopin® -X- _ O
+derived -X- _ O
+from -X- _ O
+Pinus -X- _ O
+pinaster -X- _ O
+Ait. -X- _ O
+bark -X- _ O
+[ -X- _ O
+29 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+Enzogenol® -X- _ O
+produced -X- _ O
+from -X- _ O
+Pinus -X- _ O
+radiata -X- _ O
+D. -X- _ O
+Don -X- _ B-CELL
+bark -X- _ O
+[ -X- _ O
+30 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+Abigenol® -X- _ O
+originating -X- _ O
+from -X- _ O
+Abies -X- _ O
+alba -X- _ O
+Mill. -X- _ O
+bark -X- _ O
+[ -X- _ O
+31 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Pinus -X- _ O
+cembra -X- _ O
+L. -X- _ O
+( -X- _ O
+Pinaceae -X- _ O
+, -X- _ O
+Swiss -X- _ O
+stone -X- _ O
+pine -X- _ O
+, -X- _ O
+Arolla -X- _ O
+pine -X- _ O
+, -X- _ O
+cembran -X- _ O
+pine -X- _ O
+, -X- _ O
+cedar -X- _ O
+pine -X- _ O
+) -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+coniferous -X- _ O
+tree -X- _ O
+growing -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+Alps -X- _ O
+and -X- _ O
+Carpathian -X- _ O
+Mountains -X- _ O
+[ -X- _ O
+32 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+bark -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+scarcely -X- _ O
+investigated -X- _ O
+for -X- _ O
+its -X- _ O
+chemical -X- _ O
+composition -X- _ O
+and -X- _ O
+biological -X- _ O
+activity. -X- _ O
+We -X- _ O
+have -X- _ O
+previously -X- _ O
+assessed -X- _ O
+the -X- _ O
+antioxidant -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+raw -X- _ B-CELL
+bark -X- _ O
+extract -X- _ O
+( -X- _ O
+80 -X- _ O
+% -X- _ O
+methanolic -X- _ O
+bark -X- _ O
+extract -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+found -X- _ O
+EC50 -X- _ O
+values -X- _ O
+of -X- _ O
+71.1 -X- _ O
+± -X- _ O
+0.5 -X- _ O
+and -X- _ O
+26.0 -X- _ O
+± -X- _ O
+0.3 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+DPPH -X- _ O
+radical -X- _ O
+scavenging -X- _ O
+and -X- _ O
+reducing -X- _ O
+power -X- _ O
+assays -X- _ O
+, -X- _ O
+respectively. -X- _ O
+The -X- _ O
+antioxidant -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+raw -X- _ B-CELL
+bark -X- _ O
+extract -X- _ O
+is -X- _ O
+strongly -X- _ O
+associated -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+total -X- _ O
+phenolic -X- _ O
+content -X- _ O
+, -X- _ O
+quantified -X- _ O
+as -X- _ O
+299.3 -X- _ O
+± -X- _ O
+1.4 -X- _ O
+mg -X- _ O
+/ -X- _ O
+g. -X- _ O
+In -X- _ O
+the -X- _ O
+same -X- _ O
+assays -X- _ O
+, -X- _ O
+catechin -X- _ O
+was -X- _ O
+more -X- _ O
+effective -X- _ O
+( -X- _ O
+EC50 -X- _ O
+= -X- _ O
+5.56 -X- _ O
+± -X- _ O
+0.05 -X- _ O
+and -X- _ O
+3.70 -X- _ O
+± -X- _ O
+0.03 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+, -X- _ O
+respectively -X- _ O
+) -X- _ O
+[ -X- _ O
+26 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Other -X- _ O
+polar -X- _ O
+conifer -X- _ O
+bark -X- _ O
+extracts -X- _ O
+( -X- _ O
+80 -X- _ O
+% -X- _ O
+methanolic -X- _ O
+, -X- _ O
+aqueous -X- _ O
+) -X- _ O
+scavenged -X- _ O
+the -X- _ O
+DPPH -X- _ O
+radical -X- _ O
+with -X- _ O
+EC50 -X- _ O
+values -X- _ O
+ranging -X- _ O
+from -X- _ O
+6.46 -X- _ O
+± -X- _ O
+0.36 -X- _ O
+to -X- _ O
+100.1 -X- _ O
+± -X- _ O
+0.1 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+[ -X- _ O
+29,33,34,35,36 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+the -X- _ O
+reducing -X- _ O
+power -X- _ O
+assay -X- _ O
+, -X- _ O
+polar -X- _ O
+conifer -X- _ O
+bark -X- _ O
+extracts -X- _ O
+exhibited -X- _ O
+EC50 -X- _ O
+values -X- _ O
+ranging -X- _ O
+from -X- _ O
+9.17 -X- _ O
+± -X- _ O
+0.13 -X- _ O
+to -X- _ O
+25.32 -X- _ O
+± -X- _ O
+0.62 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+[ -X- _ O
+29,35,37 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Overall -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+EC50 -X- _ O
+values -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+raw -X- _ B-CELL
+extract -X- _ O
+of -X- _ O
+cembran -X- _ O
+pine -X- _ O
+bark -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+DPPH -X- _ O
+and -X- _ O
+reducing -X- _ O
+power -X- _ O
+assays -X- _ O
+fall -X- _ O
+within -X- _ O
+the -X- _ O
+range -X- _ O
+of -X- _ O
+values -X- _ O
+reported -X- _ O
+for -X- _ O
+other -X- _ O
+polar -X- _ O
+conifer -X- _ O
+bark -X- _ O
+extracts. -X- _ O
+The -X- _ O
+cytotoxic -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+raw -X- _ B-CELL
+bark -X- _ O
+extract -X- _ O
+was -X- _ O
+further -X- _ O
+investigated. -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+used -X- _ O
+for -X- _ O
+this -X- _ O
+purpose -X- _ O
+as -X- _ O
+they -X- _ O
+have -X- _ O
+advantages -X- _ O
+over -X- _ O
+other -X- _ O
+tumor -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+lines -X- _ I-CELL
+, -X- _ O
+for -X- _ O
+example -X- _ O
+, -X- _ O
+high -X- _ O
+adaptive -X- _ O
+capacity -X- _ O
+and -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+rate -X- _ O
+[ -X- _ O
+38 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+study -X- _ O
+revealed -X- _ O
+moderate -X- _ O
+or -X- _ O
+weak -X- _ O
+cytotoxicity. -X- _ O
+At -X- _ O
+25 -X- _ O
+and -X- _ O
+50 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+extract -X- _ O
+had -X- _ O
+an -X- _ O
+insignificant -X- _ O
+impact -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+viability -X- _ O
+of -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+lacked -X- _ O
+apoptosis-inducing -X- _ O
+effects -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+induced -X- _ O
+slight -X- _ O
+increases -X- _ O
+( -X- _ O
+≤5 -X- _ O
+% -X- _ O
+) -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cell -X- _ B-CELL
+percentages -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+S -X- _ O
+, -X- _ O
+G2 -X- _ O
+/ -X- _ O
+M -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+sub-G1 -X- _ O
+phases -X- _ O
+in -X- _ O
+comparison -X- _ O
+with -X- _ O
+the -X- _ O
+control. -X- _ O
+Other -X- _ O
+polar -X- _ O
+conifer -X- _ O
+bark -X- _ O
+extracts -X- _ O
+exhibited -X- _ O
+higher -X- _ O
+activity -X- _ O
+on -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ B-CELL
+The -X- _ O
+aqueous -X- _ O
+extract -X- _ O
+of -X- _ O
+Pinus -X- _ O
+massoniana -X- _ O
+Lamb. -X- _ O
+bark -X- _ O
+significantly -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cell -X- _ B-CELL
+viability -X- _ O
+and -X- _ O
+caused -X- _ O
+a -X- _ O
+substantial -X- _ O
+increase -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+proportions -X- _ O
+of -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+sub-G1 -X- _ O
+and -X- _ O
+G2 -X- _ O
+/ -X- _ O
+M -X- _ O
+phases -X- _ O
+[ -X- _ O
+39 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Accumulation -X- _ O
+of -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+sub-G1 -X- _ O
+phase -X- _ O
+is -X- _ O
+considered -X- _ O
+an -X- _ O
+indicator -X- _ O
+of -X- _ O
+a -X- _ O
+pro-apoptotic -X- _ O
+effect -X- _ O
+[ -X- _ O
+39,40 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+other -X- _ O
+studies -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+extract -X- _ O
+significantly -X- _ O
+inhibited -X- _ O
+the -X- _ O
+migration -X- _ O
+and -X- _ O
+invasion -X- _ O
+of -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+respectively -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+latter -X- _ O
+effect -X- _ O
+being -X- _ O
+attributed -X- _ O
+to -X- _ O
+cathepsin -X- _ O
+B -X- _ O
+down-regulation -X- _ O
+[ -X- _ O
+41,42 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Pro-apoptotic -X- _ O
+effects -X- _ O
+in -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+were -X- _ O
+also -X- _ O
+reported -X- _ O
+for -X- _ O
+the -X- _ O
+80 -X- _ O
+% -X- _ O
+methanolic -X- _ O
+extract -X- _ O
+of -X- _ O
+Pinus -X- _ O
+sylvestris -X- _ O
+L. -X- _ O
+bark -X- _ O
+[ -X- _ O
+43 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+ethanolic -X- _ O
+extract -X- _ O
+of -X- _ O
+Pinus -X- _ O
+merkusii -X- _ O
+Jung. -X- _ O
+& -X- _ O
+de -X- _ O
+Vriese -X- _ O
+bark -X- _ O
+[ -X- _ O
+44 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+procyanidin-rich -X- _ O
+extract -X- _ O
+of -X- _ O
+Pinus -X- _ O
+koraiensis -X- _ O
+Siebold -X- _ O
+& -X- _ O
+Zucc. -X- _ O
+bark -X- _ O
+[ -X- _ O
+45 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+pro-apoptotic -X- _ O
+effects -X- _ O
+of -X- _ O
+conifer -X- _ O
+bark -X- _ O
+extracts -X- _ O
+were -X- _ O
+found -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+mediated -X- _ O
+by -X- _ O
+activation -X- _ O
+of -X- _ O
+caspase-9 -X- _ O
+and -X- _ O
+-3 -X- _ O
+, -X- _ O
+up-regulation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+pro-apoptotic -X- _ O
+protein -X- _ O
+Bax -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+down-regulation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+anti-apoptotic -X- _ O
+protein -X- _ O
+Bcl-2 -X- _ O
+and -X- _ O
+survivin -X- _ O
+[ -X- _ O
+39,44,45 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Purification -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+cembran -X- _ O
+pine -X- _ O
+raw -X- _ B-CELL
+bark -X- _ O
+extract -X- _ O
+resulted -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+isolation -X- _ O
+of -X- _ O
+two -X- _ O
+stilbene -X- _ O
+glycosides -X- _ O
+, -X- _ O
+namely -X- _ O
+resveratroloside -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+pinostilbenoside -X- _ O
+( -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+structures -X- _ O
+of -X- _ O
+which -X- _ O
+were -X- _ O
+confirmed -X- _ O
+through -X- _ O
+spectroscopic -X- _ O
+techniques. -X- _ O
+To -X- _ O
+the -X- _ O
+best -X- _ O
+of -X- _ O
+our -X- _ O
+knowledge -X- _ O
+, -X- _ O
+this -X- _ O
+is -X- _ O
+the -X- _ O
+first -X- _ O
+report -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+presence -X- _ O
+of -X- _ O
+resveratroloside -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+pinostilbenoside -X- _ O
+( -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+in -X- _ O
+Pinus -X- _ O
+cembra -X- _ O
+L. -X- _ O
+bark. -X- _ O
+Both -X- _ O
+compounds -X- _ O
+were -X- _ O
+previously -X- _ O
+isolated -X- _ O
+from -X- _ O
+other -X- _ O
+conifer -X- _ O
+barks -X- _ O
+: -X- _ O
+resveratroloside -X- _ O
+from -X- _ O
+Pinus -X- _ O
+sibirica -X- _ O
+R. -X- _ O
+Mayr -X- _ O
+bark -X- _ O
+[ -X- _ O
+46 -X- _ O
+] -X- _ O
+and -X- _ O
+pinostilbenoside -X- _ O
+from -X- _ O
+Pinus -X- _ O
+sibirica -X- _ O
+R. -X- _ O
+Mayr -X- _ O
+bark -X- _ O
+[ -X- _ O
+46 -X- _ O
+] -X- _ O
+and -X- _ O
+Pinus -X- _ O
+koraiensis -X- _ O
+Siebold -X- _ O
+& -X- _ O
+Zucc. -X- _ O
+bark -X- _ O
+[ -X- _ O
+18 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+evaluation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+antioxidant -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+resveratroloside -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+pinostilbenoside -X- _ O
+( -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+weaker -X- _ O
+effects -X- _ O
+than -X- _ O
+the -X- _ O
+raw -X- _ B-CELL
+bark -X- _ O
+extract -X- _ O
+, -X- _ O
+indicating -X- _ O
+a -X- _ O
+potential -X- _ O
+synergistic -X- _ O
+interaction -X- _ O
+among -X- _ O
+the -X- _ O
+components -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+extract. -X- _ O
+Previous -X- _ O
+studies -X- _ O
+have -X- _ O
+reported -X- _ O
+similar -X- _ O
+synergistic -X- _ O
+interactions -X- _ O
+in -X- _ O
+pine -X- _ O
+bark -X- _ O
+extracts. -X- _ O
+Pycnogenol -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+standardized -X- _ O
+extract -X- _ O
+obtained -X- _ O
+from -X- _ O
+the -X- _ O
+bark -X- _ O
+of -X- _ O
+French -X- _ O
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+pine -X- _ O
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+Pinus -X- _ O
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+Lam. -X- _ O
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+, -X- _ O
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+stronger -X- _ O
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+effects -X- _ O
+than -X- _ O
+its -X- _ O
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+resveratroloside -X- _ O
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+the -X- _ O
+DPPH -X- _ O
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+( -X- _ O
+IC50 -X- _ O
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+14.0 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+) -X- _ O
+[ -X- _ O
+47 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+explanation -X- _ O
+lies -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+fact -X- _ O
+that -X- _ O
+Dar -X- _ O
+et -X- _ O
+al. -X- _ O
+[ -X- _ O
+47 -X- _ O
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+experimental -X- _ O
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+( -X- _ O
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+in -X- _ O
+both -X- _ O
+assays. -X- _ O
+The -X- _ O
+findings -X- _ O
+align -X- _ O
+with -X- _ O
+previous -X- _ O
+studies -X- _ O
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+a -X- _ O
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+than -X- _ O
+pinostilbenoside -X- _ O
+( -X- _ O
+1.89 -X- _ O
+± -X- _ O
+0.25 -X- _ O
+Trolox -X- _ O
+equivalents -X- _ O
+/ -X- _ O
+μM -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+the -X- _ O
+same -X- _ O
+assay -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+aglycones -X- _ O
+, -X- _ O
+resveratrol -X- _ O
+and -X- _ O
+pinostilbene -X- _ O
+, -X- _ O
+were -X- _ O
+more -X- _ O
+active -X- _ O
+than -X- _ O
+the -X- _ O
+corresponding -X- _ O
+glycosides -X- _ O
+, -X- _ O
+showing -X- _ O
+ORAC -X- _ O
+values -X- _ O
+of -X- _ O
+5.26 -X- _ O
+± -X- _ O
+0.26 -X- _ O
+and -X- _ O
+5.01 -X- _ O
+± -X- _ O
+0.27 -X- _ O
+Trolox -X- _ O
+equivalents -X- _ O
+/ -X- _ O
+μM -X- _ O
+, -X- _ O
+respectively -X- _ O
+[ -X- _ O
+48 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Glycosylation -X- _ O
+and -X- _ O
+methylation -X- _ O
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+impact -X- _ O
+the -X- _ O
+antioxidant -X- _ O
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+stilbenes -X- _ O
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+the -X- _ O
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+the -X- _ O
+other -X- _ O
+hand -X- _ O
+, -X- _ O
+glycosylation -X- _ O
+and -X- _ O
+methylation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+stilbene -X- _ O
+hydroxyl -X- _ O
+groups -X- _ O
+might -X- _ O
+enhance -X- _ O
+other -X- _ O
+bioactivities -X- _ O
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+tyrosinase -X- _ O
+inhibitory -X- _ O
+activity -X- _ O
+[ -X- _ O
+48 -X- _ O
+] -X- _ O
+and -X- _ O
+anticancer -X- _ O
+activity -X- _ O
+, -X- _ O
+respectively -X- _ O
+[ -X- _ O
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+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Glycosylation -X- _ O
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+the -X- _ O
+stability -X- _ O
+of -X- _ O
+stilbenes -X- _ O
+, -X- _ O
+while -X- _ O
+methylation -X- _ O
+increases -X- _ O
+their -X- _ O
+lipophilicity -X- _ O
+, -X- _ O
+leading -X- _ O
+to -X- _ O
+improved -X- _ O
+bioavailability -X- _ O
+[ -X- _ O
+3 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+resveratroloside -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+pinostilbenoside -X- _ O
+( -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+demonstrated -X- _ O
+promising -X- _ O
+cytotoxic -X- _ O
+activity -X- _ O
+against -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ B-CELL
+The -X- _ O
+activity -X- _ O
+was -X- _ O
+evaluated -X- _ O
+after -X- _ O
+48 -X- _ O
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+equivalent -X- _ O
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+or -X- _ O
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+resveratroloside -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
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+or -X- _ O
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+μM -X- _ O
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+2 -X- _ O
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+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+selection -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+concentrations -X- _ O
+to -X- _ O
+be -X- _ O
+tested -X- _ O
+and -X- _ O
+incubation -X- _ O
+time -X- _ O
+was -X- _ O
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+studies -X- _ O
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+the -X- _ O
+cytotoxicity -X- _ O
+of -X- _ O
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+in -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
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+In -X- _ O
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+selecting -X- _ O
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+25 -X- _ O
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+50 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
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+in -X- _ O
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+the -X- _ O
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+this -X- _ O
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+the -X- _ O
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+study -X- _ O
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+2 -X- _ O
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+on -X- _ O
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+Resveratroloside -X- _ O
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+1 -X- _ O
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+has -X- _ O
+been -X- _ O
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+its -X- _ O
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+effects -X- _ O
+on -X- _ O
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+To -X- _ O
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+best -X- _ O
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+been -X- _ O
+investigated -X- _ O
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+Cytotoxic -X- _ O
+therapies -X- _ O
+eliminate -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+by -X- _ O
+triggering -X- _ O
+various -X- _ O
+pathways -X- _ O
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+cell -X- _ B-CELL
+death. -X- _ O
+Induction -X- _ O
+of -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+( -X- _ O
+programmed -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+death -X- _ O
+) -X- _ O
+has -X- _ O
+been -X- _ O
+a -X- _ O
+primary -X- _ O
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+in -X- _ O
+cancer -X- _ O
+therapy -X- _ O
+for -X- _ O
+more -X- _ O
+than -X- _ O
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+[ -X- _ O
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+. -X- _ O
+In -X- _ O
+recent -X- _ O
+years -X- _ O
+, -X- _ O
+many -X- _ O
+drugs -X- _ O
+, -X- _ O
+including -X- _ O
+natural -X- _ O
+compounds -X- _ O
+, -X- _ O
+have -X- _ O
+been -X- _ O
+reported -X- _ O
+to -X- _ O
+trigger -X- _ O
+other -X- _ O
+types -X- _ O
+of -X- _ O
+death -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+such -X- _ O
+as -X- _ O
+autophagy -X- _ O
+, -X- _ O
+ferroptosis -X- _ O
+, -X- _ O
+necroptosis -X- _ O
+, -X- _ O
+pyroptosis -X- _ O
+, -X- _ O
+paraptosis -X- _ O
+, -X- _ O
+lysosome-dependent -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+death -X- _ O
+, -X- _ O
+oncosis -X- _ O
+, -X- _ O
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+] -X- _ O
+. -X- _ O
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+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+pinostilbenoside -X- _ O
+( -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
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+not -X- _ O
+the -X- _ O
+sole -X- _ O
+stilbenes -X- _ O
+that -X- _ O
+cause -X- _ O
+tumor -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+death -X- _ O
+by -X- _ O
+triggering -X- _ O
+non-apoptotic -X- _ O
+mechanisms. -X- _ O
+Resveratrol -X- _ O
+was -X- _ O
+reported -X- _ O
+to -X- _ O
+induce -X- _ O
+tumor -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+death -X- _ O
+by -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
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+autophagy -X- _ O
+, -X- _ O
+necroptosis -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+necrosis -X- _ O
+[ -X- _ O
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+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Pterostilbene -X- _ O
+was -X- _ O
+found -X- _ O
+to -X- _ O
+activate -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+, -X- _ O
+autophagy -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+necrosis -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+being -X- _ O
+the -X- _ O
+major -X- _ O
+mechanism -X- _ O
+involved -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+death -X- _ O
+[ -X- _ O
+58 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Combrestatins -X- _ O
+( -X- _ O
+diaryl -X- _ O
+stilbenoids -X- _ O
+) -X- _ O
+are -X- _ O
+effective -X- _ O
+promoters -X- _ O
+of -X- _ O
+tumor -X- _ O
+necrosis -X- _ O
+[ -X- _ O
+59 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Dysregulation -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+cycle -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+process -X- _ O
+involving -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+growth -X- _ O
+, -X- _ O
+DNA -X- _ O
+replication -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+division -X- _ O
+, -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+hallmark -X- _ O
+of -X- _ O
+cancer. -X- _ O
+An -X- _ O
+important -X- _ O
+strategy -X- _ O
+in -X- _ O
+cancer -X- _ O
+therapy -X- _ O
+is -X- _ O
+the -X- _ O
+induction -X- _ O
+of -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+cycle -X- _ O
+arrest. -X- _ O
+Flavopiridol -X- _ O
+, -X- _ O
+abemaciclib -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+palbociclib -X- _ O
+are -X- _ O
+a -X- _ O
+few -X- _ O
+examples -X- _ O
+of -X- _ O
+antitumor -X- _ O
+drugs -X- _ O
+that -X- _ O
+suppress -X- _ O
+the -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+cycle -X- _ O
+via -X- _ O
+inhibition -X- _ O
+of -X- _ O
+enzymes -X- _ O
+/ -X- _ O
+proteins -X- _ O
+( -X- _ O
+cyclin-dependent -X- _ O
+kinases -X- _ O
+/ -X- _ O
+cyclins -X- _ O
+) -X- _ O
+responsible -X- _ O
+for -X- _ O
+driving -X- _ O
+the -X- _ O
+progression -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+cycle -X- _ O
+from -X- _ O
+one -X- _ O
+phase -X- _ O
+to -X- _ O
+the -X- _ O
+next -X- _ O
+one -X- _ O
+[ -X- _ O
+60 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+According -X- _ O
+to -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+resveratroloside -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+pinostilbenoside -X- _ O
+( -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+impeded -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cell -X- _ B-CELL
+proliferation -X- _ O
+, -X- _ O
+with -X- _ O
+pinostilbenoside -X- _ O
+( -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+being -X- _ O
+more -X- _ O
+active -X- _ O
+than -X- _ O
+resveratroloside -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+at -X- _ O
+25 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL. -X- _ O
+This -X- _ O
+result -X- _ O
+aligns -X- _ O
+with -X- _ O
+previous -X- _ O
+studies -X- _ O
+showing -X- _ O
+that -X- _ O
+stilbenes -X- _ O
+inhibit -X- _ O
+the -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+of -X- _ O
+tumor -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+lines. -X- _ I-CELL
+Resveratrol -X- _ O
+[ -X- _ O
+57 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+piceatannol -X- _ O
+[ -X- _ O
+10 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+pterostilbene -X- _ O
+[ -X- _ O
+61,62,63 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+polydatin -X- _ O
+( -X- _ O
+piceid -X- _ O
+) -X- _ O
+[ -X- _ O
+64 -X- _ O
+] -X- _ O
+were -X- _ O
+reported -X- _ O
+to -X- _ O
+suppress -X- _ O
+the -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+of -X- _ O
+various -X- _ O
+cancer -X- _ B-CELL
+cell -X- _ I-CELL
+lines -X- _ I-CELL
+( -X- _ O
+lung -X- _ B-TISSUE
+, -X- _ O
+prostate -X- _ B-TISSUE
+, -X- _ O
+breast -X- _ B-TISSUE
+, -X- _ O
+colorectal -X- _ O
+, -X- _ O
+liver -X- _ B-TISSUE
+, -X- _ O
+pancreatic -X- _ O
+, -X- _ O
+cervical -X- _ O
+, -X- _ O
+ovarian -X- _ O
+, -X- _ O
+bladder -X- _ B-TISSUE
+, -X- _ O
+leukemia -X- _ O
+, -X- _ O
+multiple -X- _ O
+myeloma -X- _ O
+, -X- _ O
+bone -X- _ B-TISSUE
+, -X- _ O
+oral -X- _ O
+, -X- _ O
+esophageal -X- _ O
+, -X- _ O
+head -X- _ B-TISSUE
+and -X- _ O
+neck -X- _ B-TISSUE
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Regarding -X- _ O
+the -X- _ O
+impact -X- _ O
+of -X- _ O
+resveratroloside -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+pinostilbenoside -X- _ O
+( -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cell -X- _ B-CELL
+cycle -X- _ O
+, -X- _ O
+both -X- _ O
+compounds -X- _ O
+induced -X- _ O
+a -X- _ O
+significant -X- _ O
+dose-dependent -X- _ O
+increase -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+sub-G1 -X- _ O
+phase -X- _ O
+population. -X- _ O
+In -X- _ O
+addition -X- _ O
+, -X- _ O
+both -X- _ O
+compounds -X- _ O
+( -X- _ O
+25 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+) -X- _ O
+induced -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+cycle -X- _ O
+arrest -X- _ O
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+S -X- _ O
+phase -X- _ O
+, -X- _ O
+indicating -X- _ O
+a -X- _ O
+blockage -X- _ O
+of -X- _ O
+DNA -X- _ O
+replication -X- _ O
+[ -X- _ O
+60 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+As -X- _ O
+mentioned -X- _ O
+earlier -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+sub-G1 -X- _ O
+population -X- _ O
+is -X- _ O
+a -X- _ O
+hallmark -X- _ O
+of -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+[ -X- _ O
+39,40 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+fact -X- _ O
+, -X- _ O
+not -X- _ O
+only -X- _ O
+apoptotic -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+accumulate -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+sub-G1 -X- _ O
+phase -X- _ O
+, -X- _ O
+but -X- _ O
+this -X- _ O
+phase -X- _ O
+consists -X- _ O
+of -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+showing -X- _ O
+DNA -X- _ O
+fragmentation -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+process -X- _ O
+observed -X- _ O
+in -X- _ O
+both -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+and -X- _ O
+necrosis -X- _ O
+[ -X- _ O
+65,66,67 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+When -X- _ O
+exploring -X- _ O
+a -X- _ O
+potential -X- _ O
+pro-apoptotic -X- _ O
+effect -X- _ O
+, -X- _ O
+only -X- _ O
+resveratroloside -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+showed -X- _ O
+activity -X- _ O
+( -X- _ O
+approximately -X- _ O
+11 -X- _ O
+% -X- _ O
+increase -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+early -X- _ O
+and -X- _ O
+late -X- _ O
+apoptotic -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+following -X- _ O
+48 -X- _ O
+h -X- _ O
+treatment -X- _ O
+with -X- _ O
+resveratroloside -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+at -X- _ O
+50 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+results -X- _ O
+of -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+indicate -X- _ O
+that -X- _ O
+resveratroloside -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+pinostilbenoside -X- _ O
+( -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+impact -X- _ O
+the -X- _ O
+viability -X- _ O
+and -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+of -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+by -X- _ O
+triggering -X- _ O
+mainly -X- _ O
+non-apoptotic -X- _ O
+( -X- _ O
+highly -X- _ O
+likely -X- _ O
+necrotic -X- _ O
+) -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+death -X- _ O
+, -X- _ O
+as -X- _ O
+well -X- _ O
+as -X- _ O
+S-phase -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+cycle -X- _ O
+arrest. -X- _ O
+Similar -X- _ O
+results -X- _ O
+have -X- _ O
+been -X- _ O
+reported -X- _ O
+for -X- _ O
+other -X- _ O
+stilbene -X- _ O
+derivatives. -X- _ O
+Resveratrol -X- _ O
+was -X- _ O
+found -X- _ O
+to -X- _ O
+induce -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+and -X- _ O
+block -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+cycle -X- _ O
+progression -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+S -X- _ O
+phase -X- _ O
+in -X- _ O
+human -X- _ O
+SW480 -X- _ B-CELL
+colon -X- _ B-TISSUE
+carcinoma -X- _ O
+, -X- _ O
+MCF7 -X- _ B-CELL
+breast -X- _ B-TISSUE
+carcinoma -X- _ O
+, -X- _ O
+HCE7 -X- _ O
+esophageal -X- _ O
+squamous -X- _ O
+carcinoma -X- _ O
+, -X- _ O
+HL60 -X- _ O
+promyelocytic -X- _ O
+leukemia -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+[ -X- _ O
+68 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+neuro-2a -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+derived -X- _ O
+from -X- _ O
+C1300 -X- _ O
+murine -X- _ O
+neuroblastoma -X- _ O
+[ -X- _ O
+69 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Piceatannol -X- _ O
+caused -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+and -X- _ O
+G0 -X- _ O
+/ -X- _ O
+G1 -X- _ O
+phase -X- _ O
+arrest -X- _ O
+in -X- _ O
+T24 -X- _ O
+and -X- _ O
+HT1376 -X- _ O
+human -X- _ O
+bladder -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+[ -X- _ O
+70 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Pterostilbene -X- _ O
+was -X- _ O
+reported -X- _ O
+to -X- _ O
+induce -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+and -X- _ O
+S-phase -X- _ O
+arrest -X- _ O
+in -X- _ O
+MOLT4 -X- _ O
+human -X- _ O
+leukemia -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+[ -X- _ O
+71 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+Jurkat -X- _ B-CELL
+and -X- _ O
+Hut-78 -X- _ O
+T-cell -X- _ B-CELL
+leukemia -X- _ O
+/ -X- _ O
+lymphoma -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+[ -X- _ O
+72 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+diffuse -X- _ O
+large -X- _ O
+B-cell -X- _ B-CELL
+lymphoma -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+[ -X- _ O
+73 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+and -X- _ O
+G1 -X- _ O
+phase -X- _ O
+arrest -X- _ O
+in -X- _ O
+HT-29 -X- _ B-CELL
+colon -X- _ B-TISSUE
+cancer -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+[ -X- _ O
+58 -X- _ O
+] -X- _ O
+and -X- _ O
+human -X- _ O
+gastric -X- _ O
+carcinoma -X- _ O
+AGS -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+[ -X- _ O
+74 -X- _ O
+] -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+autophagy -X- _ O
+and -X- _ O
+S -X- _ O
+phase -X- _ O
+arrest -X- _ O
+in -X- _ O
+HCCC-9810 -X- _ O
+and -X- _ O
+RBE -X- _ O
+human -X- _ O
+cholangiocarcinoma -X- _ B-CELL
+cells -X- _ I-CELL
+[ -X- _ O
+62 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+To -X- _ O
+conclude -X- _ O
+the -X- _ O
+cytotoxicity -X- _ O
+assays -X- _ O
+, -X- _ O
+resveratroloside -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+pinostilbenoside -X- _ O
+( -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+reduced -X- _ O
+viability -X- _ O
+( -X- _ O
+mostly -X- _ O
+via -X- _ O
+non-apoptotic -X- _ O
+routes -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+( -X- _ O
+via -X- _ O
+sub-G1- -X- _ O
+and -X- _ O
+S-phase -X- _ O
+arrest -X- _ O
+) -X- _ O
+in -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ B-CELL
+The -X- _ O
+results -X- _ O
+are -X- _ O
+consistent -X- _ O
+with -X- _ O
+previous -X- _ O
+studies -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+antitumor -X- _ O
+potential -X- _ O
+of -X- _ O
+stilbenes. -X- _ O
+Resveratrol -X- _ O
+, -X- _ O
+the -X- _ O
+basic -X- _ O
+scaffold -X- _ O
+of -X- _ O
+resveratroloside -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+pinostilbenoside -X- _ O
+( -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+was -X- _ O
+reported -X- _ O
+to -X- _ O
+promote -X- _ O
+cell -X- _ B-CELL
+cycle -X- _ O
+arrest -X- _ O
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+S -X- _ O
+phase -X- _ O
+, -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+autophagy -X- _ O
+in -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+[ -X- _ O
+52 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+Polydatin -X- _ O
+, -X- _ O
+a -X- _ O
+glycoside -X- _ O
+of -X- _ O
+resveratrol -X- _ O
+, -X- _ O
+namely -X- _ O
+resveratrol-3-O-β-mono-D-glucoside -X- _ O
+, -X- _ O
+reduced -X- _ O
+proliferation -X- _ O
+and -X- _ O
+induced -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+in -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+[ -X- _ O
+64 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+In -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+, -X- _ O
+resveratroloside -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+pinostilbenoside -X- _ O
+( -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+exhibited -X- _ O
+comparable -X- _ O
+activity -X- _ O
+in -X- _ O
+arresting -X- _ O
+the -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cell -X- _ B-CELL
+cycle -X- _ O
+at -X- _ O
+the -X- _ O
+S -X- _ O
+and -X- _ O
+sub-G1 -X- _ O
+phases -X- _ O
+( -X- _ O
+at -X- _ O
+25 -X- _ O
+and -X- _ O
+50 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+, -X- _ O
+respectively -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+On -X- _ O
+the -X- _ O
+other -X- _ O
+hand -X- _ O
+, -X- _ O
+pinostilbenoside -X- _ O
+( -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+exhibited -X- _ O
+higher -X- _ O
+activity -X- _ O
+than -X- _ O
+resveratroloside -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+) -X- _ O
+in -X- _ O
+increasing -X- _ O
+the -X- _ O
+number -X- _ O
+of -X- _ O
+dead -X- _ O
+cells -X- _ B-CELL
+through -X- _ O
+non-apoptotic -X- _ O
+mechanisms -X- _ O
+( -X- _ O
+at -X- _ O
+25 -X- _ O
+and -X- _ O
+50 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+) -X- _ O
+and -X- _ O
+in -X- _ O
+reducing -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cell -X- _ B-CELL
+proliferation -X- _ O
+( -X- _ O
+at -X- _ O
+25 -X- _ O
+μg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+latter -X- _ O
+findings -X- _ O
+are -X- _ O
+consistent -X- _ O
+with -X- _ O
+earlier -X- _ O
+studies -X- _ O
+reporting -X- _ O
+increased -X- _ O
+cytotoxic -X- _ O
+activity -X- _ O
+for -X- _ O
+the -X- _ O
+methoxylated -X- _ O
+analogs -X- _ O
+of -X- _ O
+resveratrol -X- _ O
+compared -X- _ O
+to -X- _ O
+resveratrol -X- _ O
+itself -X- _ O
+[ -X- _ O
+75 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+The -X- _ O
+two -X- _ O
+compounds -X- _ O
+( -X- _ O
+1 -X- _ O
+and -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+isolated -X- _ O
+in -X- _ O
+this -X- _ O
+study -X- _ O
+are -X- _ O
+stilbene -X- _ O
+glycosides. -X- _ O
+Glycosylation -X- _ O
+is -X- _ O
+known -X- _ O
+to -X- _ O
+positively -X- _ O
+impact -X- _ O
+the -X- _ O
+water -X- _ O
+solubility -X- _ O
+, -X- _ O
+intestinal -X- _ O
+absorption -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+bioactivity -X- _ O
+of -X- _ O
+stilbenes -X- _ O
+[ -X- _ O
+76,77 -X- _ O
+] -X- _ O
+. -X- _ O
+A -X- _ O
+notable -X- _ O
+example -X- _ O
+is -X- _ O
+polydatin -X- _ O
+, -X- _ O
+one -X- _ O
+of -X- _ O
+the -X- _ O
+main -X- _ O
+compounds -X- _ O
+in -X- _ O
+the -X- _ O
+roots -X- _ B-TISSUE
+of -X- _ O
+Polygonum -X- _ O
+cuspidatum -X- _ O
+Sieb. -X- _ O
+et -X- _ O
+Zucc. -X- _ O
+, -X- _ O
+identified -X- _ O
+in -X- _ O
+other -X- _ O
+plant -X- _ O
+species -X- _ O
+across -X- _ O
+the -X- _ O
+Liliaceae -X- _ O
+, -X- _ O
+Fabaceae -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+Vitaceae -X- _ O
+families. -X- _ O
+Based -X- _ O
+on -X- _ O
+its -X- _ O
+anti-inflammatory -X- _ O
+, -X- _ O
+antioxidant -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+apoptosis-modulating -X- _ O
+potential -X- _ O
+, -X- _ O
+polydatin -X- _ O
+displays -X- _ O
+diverse -X- _ O
+biological -X- _ O
+activities -X- _ O
+( -X- _ O
+anticancer -X- _ O
+, -X- _ O
+antidiabetic -X- _ O
+, -X- _ O
+antimicrobial -X- _ O
+, -X- _ O
+cardioprotective -X- _ O
+, -X- _ O
+hepatoprotective -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+neuroprotective -X- _ O
+effects -X- _ O
+, -X- _ O
+as -X- _ O
+well -X- _ O
+as -X- _ O
+protective -X- _ O
+effects -X- _ O
+on -X- _ O
+the -X- _ O
+gastrointestinal -X- _ O
+, -X- _ O
+renal -X- _ O
+, -X- _ O
+respiratory -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+skeletal -X- _ B-TISSUE
+systems -X- _ I-TISSUE
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+A -X- _ O
+large -X- _ O
+number -X- _ O
+of -X- _ O
+studies -X- _ O
+conducted -X- _ O
+on -X- _ O
+polydatin -X- _ O
+has -X- _ O
+revealed -X- _ O
+versatility -X- _ O
+in -X- _ O
+modulating -X- _ O
+numerous -X- _ O
+targets -X- _ O
+related -X- _ O
+to -X- _ O
+oxidative -X- _ O
+stress -X- _ O
+( -X- _ O
+Nrf2 -X- _ O
+and -X- _ O
+Akt -X- _ O
+pathways -X- _ O
+, -X- _ O
+glutathione -X- _ O
+, -X- _ O
+catalase -X- _ O
+( -X- _ O
+CAT -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+SOD -X- _ O
+, -X- _ O
+GPx -X- _ O
+, -X- _ O
+GST -X- _ O
+, -X- _ O
+MPO -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+inflammation -X- _ O
+( -X- _ O
+NF-κB -X- _ O
+, -X- _ O
+phospholipase -X- _ O
+A2 -X- _ O
+( -X- _ O
+PLA2 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+COX-2 -X- _ O
+, -X- _ O
+iNOS -X- _ O
+, -X- _ O
+TNF-α -X- _ O
+, -X- _ O
+IL-1β -X- _ O
+, -X- _ O
+IL-6 -X- _ O
+, -X- _ O
+ICAM-1 -X- _ O
+, -X- _ O
+MAPKs -X- _ O
+, -X- _ O
+ERK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+, -X- _ O
+JNK1 -X- _ O
+/ -X- _ O
+2 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+apoptosis -X- _ O
+( -X- _ O
+p53 -X- _ O
+/ -X- _ O
+MAPK -X- _ O
+/ -X- _ O
+JNK -X- _ O
+and -X- _ O
+PI3K -X- _ O
+/ -X- _ O
+Akt -X- _ O
+/ -X- _ O
+mTOR -X- _ O
+pathways -X- _ O
+, -X- _ O
+B-cell -X- _ B-CELL
+lymphoma -X- _ O
+2 -X- _ O
+( -X- _ O
+Bcl-2 -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+Bcl-2-associated -X- _ O
+x -X- _ O
+( -X- _ O
+Bax -X- _ O
+) -X- _ O
+, -X- _ O
+D-cyclins -X- _ O
+, -X- _ O
+caspase-3 -X- _ O
+, -X- _ O
+cytochrome -X- _ O
+c -X- _ O
+) -X- _ O
+. -X- _ O
+Clinical -X- _ O
+trials -X- _ O
+support -X- _ O
+the -X- _ O
+benefits -X- _ O
+of -X- _ O
+polydatin -X- _ O
+in -X- _ O
+chronic -X- _ O
+pelvic -X- _ O
+pain -X- _ O
+, -X- _ O
+liver -X- _ B-TISSUE
+diseases -X- _ O
+, -X- _ O
+inflammatory -X- _ O
+bowel -X- _ O
+syndrome -X- _ O
+, -X- _ O
+and -X- _ O
+EGFR-tyrosine -X- _ O
+kinase -X- _ O
+inhibitor -X- _ O
+( -X- _ O
+TKI -X- _ O
+) -X- _ O
+-related -X- _ O
+ashes. -X- _ O
+Moreover -X- _ O
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+HeLa -X- _ B-CELL
+cells. -X- _ B-CELL
+At -X- _ O
+25 -X- _ O
+and -X- _ O
+50 -X- _ O
+µg -X- _ O
+/ -X- _ O
+mL -X- _ O
+, -X- _ O
+they -X- _ O
+significantly -X- _ O
+reduced -X- _ O
+the -X- _ O
+viability -X- _ O
+of -X- _ O
+HeLa -X- _ B-CELL
+cells -X- _ B-CELL
+, -X- _ O
+mainly -X- _ O
+through -X- _ O
+non-apoptotic -X- _ O
+mechanisms. -X- _ O
+Glycosylated -X- _ O
+stilbene -X- _ O
+scaffolds -X- _ O
+have -X- _ O
+great -X- _ O
+potential -X- _ O
+for -X- _ O
+therapeutic -X- _ O
+applications -X- _ O
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+so -X- _ O
+further -X- _ O
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