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	토머스 홉스는 잉글랜드의 정치철학자이자 최초의 민주적 사회계약론자로, 그의 저서 '리바이어던'으로 유명하다. 그는 자연을 만인의 만인에 대한 투쟁 상태로 상정하고, 사회계약에 의해 리바이어던과 같은 강력한 국가권력이 발생하게 되었다고 주장했다. 홉스는 자연상태에서 이기적 본성을 지닌 개인들이 자신의 이익을 추구하며 만인에 의한 만인의 투쟁을 전개한다고 보았다. 그는 국가의 이름을 리바이어던이라고 불렀으며, 이는 국가가 사회계약에 의해 만들어진 인공적 산물이라는 점을 강조하기 위해서였다. 홉스의 책은 유럽에서 망명 중이던 찰스 2세에게 헌정되었으나, 거절당했다. 그러나 그의 추론 방식에서 나타난 사회계약이라는 개념은 오늘날까지도 중요한 영향을 끼쳤다.	토마스 홉스의 저서 '리바이어던'은 무엇에 대해 유명한가요?
	제목: [사설] 가상화폐 투자 ‘자기책임’ 강조한 정부 정부는 15일 가상화폐 거래소 폐쇄에 대해선 유보적 입장을 밝혀 거래시장의 불안을 누그러뜨리면서도 시세조작 및 탈세에 대해서는 세무조사 등 탈법 위험을 제어할 수단이 있음을 분명히 했다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: 정부가 15 일 '가상통화에 대한 정부 입장'을 내놨다. 아직 구체적 대책 수준은 아니지만, 가상화폐에 대한 정부의 시각과 정책방향을 밝힌다는 의미에서의 '입장'이다. 정기준 국무조정실 경제조정실장의 발표는 '거래소 폐쇄 방침'을 둘러싼 정부와 청와대 간 혼선을 의식한 듯, "가상통화에 대해서는 국무조정실이 중심이 돼 대응해 나갈 것"을 확인했다. 아울러 "거래소 폐쇄 방안은 부처 간 조율을 거쳐 추진 여부를 결정할 것"이라고 한 발 물러섰다. 정부가 월요일 오전 일찍 거래소 폐쇄에 대해 유보적 입장을 재확인한 것은 가상화폐 거래시장의 불안을 예방하려는 포석이라 볼 수 있다. 실제로 이날 발표는 새로운 내용이 거의 없었는데도, 정부가 일단 강경책을 접었다는 점에서 가상화폐 시장의 동요를 다소 진정시키는 효과를 냈다. 다만 거래소 폐쇄 방침을 유보했다고 해서 가상화폐에 대한 정부 시각이 바뀐 건 아니다. 가상화폐 실명제 추진, 시세조작ㆍ자금세탁ㆍ탈세 등 거래 관련 불법행위 엄단 방침을 재확인한 건 가상화폐 투기 위험을 방치하지 않겠다는 뜻이다. 곧 시행될 가상화폐 실명제만 해도 시장 안정에 상당한 효과를 낼 전망이다. 지금까지 가상화폐에 투자할 때 거래소가 은행에 개설한 가상계좌에 입금하는 식이었다. 입금에 쓰는 정보는 투자자의 이름뿐이어서 실명정보를 전혀 확인할 수 없었다. 실명제가 시행되면 투자자는 거래소의 계좌가 개설된 은행에 본인 계좌를 열어 계좌 간 자금이체를 해야 한다. 투자자 정보를 계좌 개설 은행에서 확인할 수 있어, 소문으로 나돈 기업 비자금 조성, 범죄수익, 탈세 등 불법적 목적의 거래나 청소년 거래 등을 적잖이 걸러낼 수 있을 듯하다. 거래소 시세조작이나 탈세 등에 대한 경고도 실효성이 작지 않다. 특히 새 가상화폐 상장을 둘러싼 거래소 측과 투자자 간 내부자정보 유통에 의한 시세조작 적발, 거래소 세무조사 등은 거래소의 탈법 위험을 제어할 유용한 수단이 될 수 있다. 하지만 이번 정부 발표에서 가장 중요한 메시지는 "가상화폐 관련 행위는 '자기책임'"이라는 것이다. 정부는 "가상통화는 법정화폐가 아니며 어느 누구도 가치를 보장하지 않기 때문에 (투자나 투기에 참여할 경우) 큰 손실이 발생할 수 있다"고 재차 경고했다. 그럼에도 불구하고 '질서 있는 퇴장'에 동참하지 않을 경우, 피해는 전적으로 투자자의 책임이라는 사실을 분명히 한 셈이다. 시장 참여자들도 이제는 가상화폐 투기의 위험을 직시해야 할 때가 됐다.
	아낙시메네스(BC 585년경 - BC 525년경)는 밀레토스 학파의 철학자로, 아낙시만드로스의 친구였습니다. 아낙시만드로스가 제안한 유한한 사물들의 다양함에 대한 무한함의 근원에 대해 비판적이었고, 새로운 만물의 근원을 찾고자 했습니다. 그의 결론은 공기였습니다. 아낙시메네스는 공기가 무한한 실체에 적합하다고 생각했는데, 이는 공기가 끊임없이 운동하며 어디에서나 존재하기 때문입니다. 또한 공기는 우리가 호흡하는 매개체이므로 구체화되어 감각적으로 알 수 있습니다. 아낙시메네스는 희박과 농후의 개념을 사용하여 공기가 팽창하면서 희박해지고, 수축하면서 농후해진다는 원리를 설명했습니다. 그는 질적인 차이가 양적인 차이에 영향을 미치는 획기적인 주장을 했습니다. 아낙시메네스는 탈레스와 아낙시만드로스보다 운동 원리를 더 구체적으로 설명하는 데 성공했습니다. 그는 지구가 평평하다고 생각했고, 태양과 같은 천체들이 지구 주위를 돌고 있다고 믿었습니다.	아낙시메네스는 어떤 철학자인가요?
	- FCA는 Free Carrier (…named place)의 약자로, 매도인이 지정한 장소에서 매수인이 지명한 운송인에게 수출통관관필 물품을 인도하는 것을 뜻합니다. 인도가 매도인의 영업소에서 행해지는 경우 매수인은 매도인의 차량에 물품을 적재할 의무가 있고, 기타 장소에서 인도가 행해지는 경우 매수인은 매도인의 차량으로부터 물품을 양하하는 의무가 있습니다. FCA는 선적지에서 일어나는 OTHER CHARGE까지 수입자가 내는 조건이며, OCEAN과 AIR 모두 CARRIER로 쓸 수 있는 조건입니다. - FAS는 Free Alongside Ship(…named port of shipment)의 약자로, 물품이 지정된 선적항에서 본선선측(alongside the vessel)에 두어졌을 때 매도인이 인도하는 것을 뜻합니다. 동조건은 해상운송 또는 내륙수로운송에만 사용되며, 물품의 멸실 또는 손상에 관한 모든 비용과 위험을 매수인이 부담합니다. - FOB는 Free on Board...(named port of shipment) (본선인도조건...지정선적항)의 약자로, 계약물품은 매매계약상의 지정된 선적항에서 매도인에 의해 본선내로 반입되어야 합니다. 계약물품의 멸실 또는 손상에 관한 위험은 매도인으로부터 매수인에게 인도되며, 수입자는 인도받은 시점부터 소유권을 취득하고, 이후 발생하는 비용과 위험을 부담합니다. FOB는 CIF계통의 여러 조건과 함께 선적항에서 물품 인도를 조건으로 하는 선적지매매의 대표적인 조건입니다. - 수입자의 위험 부담에 따른 우선순위는 FOB > FAS > FCA입니다. - 적재는 차나 선박에 짐을 싣는 것을 말하며, 선적은 배에 짐을 실어 나르는 것을 말합니다.	조운송비 미지급 인도조건 중 FCA, FAS, FOB의 차이점은 무엇인가요? 구체적인 설명 부탁드립니다.
	제목: 실업률 늘고 고용률은 줄었다 충청지방통계청에 따르면 충북지역 노동 가능인구는 증가했으나 고용 시장이 이를 모두 소화하지 못해 실업률은 늘어나고 고용률은 줄어든 것으로 확인되었다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: 노동 가능 인구 증가분 고용시장이 소화 못해 주 36시간 미만 취업은 늘어 [충청일보 배명식기자] 충북지역 실업률이 증가하고 고용률은 감소했다. 늘어난 노동 가능 인구를 고용 시장이 모두 소화하지 못했기 때문으로 풀이된다. 15일 충청지방통계청에 따르면 4월 충북의 15세 이상 인구(노동 가능 인구)는 139만7000명으로 지난 해 같은 달 보다 1만5000명(1.1%) 증가했다. 경제활동인구는 91만7000명으로 전년 동월 대비 6000명(0.7%) 늘어난 반면 비경제활동인구는 48만1000명으로 9000명이나 증가했다. 취업자는 88만3000명으로 6000명(-0.7%) 감소했고 고용률은 63.2%로 1.1%p 하락했다. 실업자수는 3만4000명으로 전년 동기 대비 1만2000명(55.3%)이나 증가했다. 실업률은 3.7%로 전년 동비 대비 1.3%p 상승했다. OECD(경제협력개발기구) 비교기준인 15~64세 고용률은 68.3%로 1.6%p 낮아졌다. 산업별로는 농림어업 7000명(-7.4%), 건설업 5만1000명(-18.2%), 도소매·숙박음식업 1만7000명(-9.9%), 전기·운수·통신·금융업 5000명(-5.7%)씩 감소했다. 취업시간대별로는 1주간 36시간 미만 취업자가 17만2000명으로 전년 동기 대비 3만3000명(23.4%) 증가한 반면, 1주간 36시간 이상 취업자는 70만명으로 4만1000명(-5.5%) 감소한 것으로 집계됐다.
	제목: ‘VIP’ 이상윤, 충격적인 2회 엔딩! 박성준의 충격적 진실은? SBS 월화드라마 'VIP'에서 이상윤은 모두에게 동경받는 VIP 전담팀의 팀장이지만, 의심스러운 모습과 2회의 충격적 엔딩으로 궁금증을 유발하고 있다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: 사진= SBS 'VIP' 'VIP' 이상윤이 비밀스러운 박성준 캐릭터를 완벽하게 구현해내 화제다. SBS 월화드라마 'VIP'(극본 차해원, 연출 이정림)는 백화점 상위 1% VIP 고객을 관리하는 VIP 전담팀 사람들의 비밀스러운 '프라이빗 오피스 멜로' 드라마. 극 중 이상윤은 성운백화점 VIP 전담팀 전반을 이끌어가는 팀장으로 어떠한 일에도 평정심을 유지하며 맡은 일을 일사천리 처리해 회사내 남녀불문 동경의 아이콘으로 칭송받는 박성준 역을 맡았다. 지난 1회 방송에서 박성준은 프로페셔널한 직장인의 면모로 첫 등장했다. 정확한 판단과 빠른 일처리로 한 팀의 장으로서의 면모를 뽐내는 것은 물론 멋진 슈트핏으로 보는 이들의 시선을 사로잡았다. 하지만 밤 늦게 오는 문자에 난감한 듯 그늘진 표정을 짓는가 하면 이에 답을 보내지 못하는 모습은 그가 숨기는 무언가가 있음을 암시했다. 이어 누군가를 보며 죄책감과 여러 감정이 뒤섞인 표정을 드러내기도 했으며 혹여나 무언가를 들켜선 안 되는 사람처럼 주위를 살피는 등의 모습으로 시청자의 의심을 자아냈다. 2회 역시 아내 나정선(장나라 분)과 보는 이들의 의구심 또한 커져갔고, 차진호(정준원 분)에게 한 전화 부탁과 또 다시 온 문자 그리고 충격적인 엔딩은 극에 대한 궁금증을 자아냈다. 이처럼 박성준이 숨기고 있는 진실에 대한 호기심이 높아지고 있는 상황. 한편, SBS 월화드라마 'VIP'는 매주 월, 화 오후 10시에 방송된다. ent88@
	노란색 면이 3개, 총 8개이므로 노란색 면을 굴릴 확률은 $\dfrac38$입니다.	빨간색면 4개, 노란색면 3개, 파란색면이 있는 8면 주사위가 있다고 가정해 보겠습니다. 노란색 면이 나올 확률은 얼마나 될까요?
	제목: 구상금등 채권자취소권 행사에 있어서 제척기간의 기산점인 채권자가 '취소원인을 안 날'이라 함은 구체적인 사해행위의 존재를 알고 나아가 채무자에게 사해의 의사가 있었다는 사실까지 알 것을 요하고 채무자가 유일한 재산인 부동산을 처분하였다는 사실을 채권자가 알았다면 채무자의 사해의사도 채권자가 알았다고 봄이 상당하다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: [1] 채권자취소권 행사에 있어서 제척기간의 기산점인 채권자가 '취소원인을 안 날'이라 함은 채권자가 채권자취소권의 요건을 안 날, 즉 채무자가 채권자를 해함을 알면서 사해행위를 하였다는 사실을 알게 된 날을 의미한다. [2] 채권자취소권 행사에 있어서 채권자가 취소원인을 알았다고 하기 위하여서는 단순히 채무자가 재산의 처분행위를 하였다는 사실을 아는 것만으로는 부족하고 구체적인 사해행위의 존재를 알고 나아가 채무자에게 사해의 의사가 있었다는 사실까지 알 것을 요하나, 나아가 채권자가 수익자나 전득자의 악의까지 알아야 하는 것은 아니다. [3] 이미 채무초과의 상태에 빠져 있는 채무자가 그의 유일한 재산인 부동산을 채권자들 가운데 어느 한 사람에게 대물변제로 제공하는 행위는 다른 특별한 사정이 없는 한 다른 채권자들에 대한 관계에서 사해행위가 되고, 특히 채무자가 자기의 유일한 재산인 부동산을 매각하여 소비하기 쉬운 금전으로 바꾸는 행위는 특별한 사정이 없는 한 채권자에 대하여 사해행위가 되어 채무자의 사해의 의사가 추정되는 것이므로, 이와 같이 채무자가 유일한 재산인 부동산을 처분하였다는 사실을 채권자가 알았다면 특별한 사정이 없는 한 채무자의 사해의사도 채권자가 알았다고 봄이 상당하다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	또한, 미국 특허 8,696,024호 차량 및 이를 포함하는 차량 커플러의 경우에는 제설차량(트랙터)의 정방향으로 블로잉 타입의 제설기 본체를 마운트하여 운전자가 전진방향으로 제설을 이루도록 제안되어 있다.이는 도 1 내지 도 3 도시와 같이 오거와 임펠러를 내장한 액세서리(100)와 차량에 장착한 커플러(200)로 이루어 커플러와 액세서리를 핀 결합하여 장착을 완료하는 구조를 이루고 있다.상기 두 구성부재(100, 200)를 장착하는 마운트 구조를 살펴보면 차량에 결합한 커플러(200) 전방의 부착 플레이트(214) 일단에 요입(female)형 홈(210, 212)을 상하로 2개소 형성하고 상기 액세서리(100)를 이루는 커플러 부착판(114)에 돌출형 부재(male members)로 이루어진 지지핀(110, 112)을 상기 요입형 홈에 대응하도록 상하로 2개소 형성하여 이루어 커플러(200)의 홈(210, 212)에 액세서리의 지지핀(110, 112)를 끼운 후 잠금장치(300)로서 고정 결합하도록 이루어져 있다.상기 잠금장치(300)는 평판 타입의 잠금장치 본체(310) 일측에 연결핀(312)을 관통 결합하고 타측에 상기 액세서리(100)의 하부에 돌출시킨 지지핀(112)을 관통시켜 지지하는 관통공(314)을 천공하여 이루어진다.상기 잠금장치(300)는 홈(210, 212)을 형성한 플레이트(214)와 커플러 부착판(114)를 차례로 관통하는 연결핀(312)과 지지핀(112)을 수용하는 관통공(314)에 의해 체결을 이루게 한다.이러한 종래 기술에 따르면 커플러(200)는 부착 플레이트(214)를 양측에 세워 위치하고 이 플레이트를 가로질러 결합하는 부재에 의해 사각형의 틀을 이루고 있다.상기 틀 내부로 상기 상기 액세서리(100)의 커플러 부착판(114)이 삽입되는 구조를 이루고 있어 초기에 두 구성부재(100, 200)를 정렬시켜 결합하는데 어려움이 발생한다.또한, 종래 기술에 따르면 지지핀(110, 112)을 커플러의 홈(210, 212)에 일치 시켜 결합 한 후 잠금장치(300)로써 관통공(314)에 상기 지지핀(112)을 끼워 결합하는 것과, 추가적으로 잠금장치(300)의 연결핀(312)으로 커플러(200)의 부착 플레이트(214)와 액세서리(100)의 커플러 부착판(114)에 형성한 두 개의 홀을 차례로 관통하여 연결 고정하여야 하는 것에 의해 2번의 핀 결합을 이루어야 하므로 마운트 작업이 번거롭고 어렵다는 문제가 있다.또한, 종래 기술에 따르면 커플러 부착판(114)에 지지핀(110, 112)을 돌출형으로 용접 부착하여 이루는 것에 의해 용접부위 변형에 취약하고 외부 충돌에 의해 돌출된 지지핀 및 또는 용접부위의 변형이 초래됨에 의해 휨 발생이 빈번하여 마운트 할 때에 정확한 위치 결속이 어렵다는 문제가 있다.이러한 문제는 액세서리(100) 측에 지지핀(110, 112)을 돌출형 부재(male members)로 구성하는 것에 기인하는 것이다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 일반적으로 도로나 녹지 등에 광범위하게 눈이 내리는 경우 제설을 위해 다양한 방식이 사용되고 있다.염화칼슘과 같이 제설용 약품을 사용하는 것과, 인력에 의한 제설 또는 설비를 이용한 제설 등 다양하게 공지되어 있다.제설 약품을 사용하는 경우에는 살포가 용이한 반면 결빙되지 아니하는 잔설 및 해빙수의 처리가 곤란하고 약품 및 살포 비용이 과도하게 소요되며 환경 문제와 도로를 이용하는 차량 등의 설비에 부식을 초래하는 단점이 있다.물리적으로 눈을 제거하는 설비로는 제설기를 장착한 차량 등이 있으나 전용 제설기의 투입이 곤란하거나 수량이 부족하여 간선도로 등에 쌓인 눈을 제때 치울 수 없거나 농가, 농로, 마을 길 등 자체적으로 제설이 요구되는 지역에서는 농가에 널리 보급된 트랙터를 이용한 제설작업이 매우 유용하다.이러한 이유로 종래 트랙터를 이용한 제설기가 많이 보급되어 있으며, 대한민국 특허등록 10-436986호 "트랙터 후면 탈부착용 제설기 설치장치", 대한민국 실용신안등록 20-243322호 "트랙터용 제설기" 등과 같이 트랙터의 셔블에 제설판을 부착하여 트랙터의 추진력에 의해 노면의 눈을 노변으로 밀어붙임으로써 제설하는 구조가 일반적으로 사용되고 있다.상기한 바와 같은 기존 트랙터 이용 제설기는 셔블이 구비된 트랙터에 적용될 수 있는 구조이긴 하나 탈부착이 간단하고, 트랙터의 추진력을 효과적으로 이용할 수 있는 장점이 있다. 그러나 제설판을 이용한 제설 방식은 도로 또는 통행로에 쌓인 눈을 노변 쪽으로 밀어붙이는 방식으로서 밤낮의 온도차가 큰 겨울 날씨 특성상 낮에 노변에 쌓인 눈이 밤에 녹아 도로를 결빙시킴으로 오히려 노면상황을 악화시키는 문제점이 있고, 노변에 쌓인 눈이 오랫동안 방치됨으로 미관상 좋지 않고 노면을 관리하는데도 많은 노력을 요하는 등 단점이 있었다.한편, 전용 제설기는 블로잉(blowing) 방식으로서 대한민국 특허공고 1996-0009728호, 미국특허 US4,385,457호, 미국특허 US 4,391,052호에 의해 제시된 바와 같이, 오거블레이드(auger blade), 오거유닛(auger unit)과 임펠러를 이용하여 노상의 눈을 긁어모아 노변 외부로 날려버리는 방식이기 때문에 제설작업 후에도 노면이 깨끗하게 유지되는 장점이 있었다.상기한 제설기(snow blower)는 트랙터나 전용 차량에 장착하기 위한 장착 수단이 구비된 바디와, 바디 하부에 반 원통 구조로 형성되어 노면에 접촉하면서 눈을 긁어 모으는 작용을 하는 블레이드(blade)와, 상기 블레이드 내에 설치되어 블레이드에 유입된 눈을 블레이드 중심에 형성된 임펠러 흡입통로로 압축 이송하는 오거(auger)와, 오거에 의해 유입된 눈을 받아 슈트를 통하여 외부로 불어내는 임펠러가 포함되는 구조를 갖는다.상기한 블로잉 타입 제설기는 오거 및 임펠러의 구동을 위한 동력으로 유압을 사용함으로 장치의 구성이 간단해지는 장점이 있고, 제설전용 견인기나 제설용 다목적 차량의 경우 유압 생산능력이 충분하기 때문에 제설기 구동에 필요한 유압을 충분히 제공할 수 있다.US 4,391,052에 적용된 바와 같이, 임펠러의 배출통로 상에 슈트를 회전가능하게 결합하고, 상기 슈트 하부 플랜져부에 래크를 형성하여 유압실린더의 축에 결합한 피니언과 맞물리도록 결합한 구조로 하여 운전석에서 레버 조작에 의해 상기 유압실린더의 회전을 제어함으로 슈트의 방향을 제어하는 구조가 알려져있다.
	오하이오주는 영화는 분명 생생하며 실용적이어서 재미있으나 특히 이러한 영화의 매력과 상영방식 때문에 악을 행하거나 그럴 수 있는 영향력이 있어서 영화의 이러한 잠재적 악영향을 감안한다면 영화에 대한 제한은 치안권의 범위 안에 분명히 포함되므로 영화상영 검열이 공공윤리와 복지의 이익에 합치한다고 생각했다. “이러한 예방적 조치를 이유 없다거나 터무니없는 개인의 자유권에 대한 제한이라 생각한다는 것은 현실을 무시한 처사일 것이다. 따라서 영화산업에 대한 검열은 사회의 취약한 이들을 보호하기 위한 예방적 조치로서 헌법적 승인의 가치가 있다.” 이후의 판결에서 일리노이 주 고등법원은 이러한 연관성을 더욱 명확하게 표현하였다.	주어진 제목과 요약문에 대한 정보를 토대로, 요약되기 전 문장을 유추해서 생성해주세요. 제목: 미국영화산업백서 요약문: 오하이오주는 영화에는 잠재적 악영향이 있으므로 사회의 취약자들을 보호하기 위한 예방적 조치로써 영화에 대한 검열이 필요하다고 보았다.
	광주 군 공항 사업은 광주시가 군 공항 부지를 받아서 생긴 개발 이익으로 사업 비용을 충당할 계획이지만 6조원에 가까운 사업비를 온전히 충당할 수 없기 때문에 ‘군 공항 이전 및 지원에 관한 특별법’ 개정안을 통해 국가 지원을 받아야 한다.	주어진 문장을 적절하게 요약해주세요. 문장: 광주 군 공항의 전남 지역 이전이 예비후보지 선정 지연으로 난항을 겪고 가운데 막대한 사업비가 또 다른 걸림돌로 부각되고 있다. 광주 군 공항 이전 사업은 광주시가 새로운 공항을 전남에 건설해 주는 대신 국방부로부터 광주 군 공항 부지를 넘겨받아 여기서 생긴 개발 이익으로 이전 사업 비용을 충당하는 방식으로 진행될 예정이다. 하지만 문제는 6조 원에 가까운 막대한 사업비를 광주시가 순전히 종전 부지인 광주 군 공항을 개발해 충당할 수 있느냐는 것이다. 시는 종전 부지에 국제적 테마파크를 조성하는 등의 개발 로드맵을 연말 안에 내놓을 방침이지만 이러한 방식의 개발만으로는 사업 추진이 불가능할 것이라는 의견이 많다. 이는 실제로 광주시의 사업 참여 요청에 한국토지주택과 광주도시공사 등 공기업이 사업 장기화 가능성과 선투입 비용이 너무 많다는 이유로 참여하기 힘들다는 입장을 밝혔고, 롯데월드나 에버랜드 등 민간기업도 국내 테마파크는 수익성이 없다며 거절한 데서 알 수 있다. 결국 종전 부지 개발로 사업비를 전액 충당하는 것은 한계가 있을 수밖에 없다는 것이다. 따라서 군 공항 이전이 순조롭게 진행되려면 정부가 나서 예비 후보지 선정과 함께 지금부터 막대한 사업비 조달 방안을 고민해야 한다. 방법이 아주 없는 것은 아니다. 군 공항 이전 사업은 ‘군 공항 이전 및 지원에 관한 특별법’에 근거해 추진되고 있다. 마침 지난 4월 송갑석 의원(더불어 민주당)이 대표 발의한 이 특별법의 일부 개정안이 국회에 계류 중이다. 개정안은 지자체 비용 부담을 완화하고 이전 지역에 대한 국가 지원을 명시하고 있다. 개정안이 통과되면 군 공항 이전 지역 주민에 대한 혜택이 확대돼 이전 작업도 급물살을 탈 수 있다. 정부는 국회와 함께 개정안이 조속히 통과될 수 있도록 힘을 모아야 할 것이다.
	임종인은 1956년생으로, 현재 대한민국의 정치인이다. 고창국민학교를 졸업했고, 고창중학교와 전주고등학교도 졸업했다. 또한 고려대학교 법과대학에서 LL.B. 학위를 받았다. 그는 여러 차례 선거에 참여했지만, 모두 당선되지는 못했다. 제15대 총선에서는 통합민주당 후보였지만 9.23%의 득표율로 4위로 낙선했다. 제17대 총선에서는 열린우리당 후보로 47.90%의 득표율로 1위를 차지했지만, 안산시 상록구 을에서 국회의원에 당선되었다. 제18대 총선에서는 무소속 후보로 15.54%의 득표율로 4위로 낙선했다. 또한 10·28 재보궐선거에서도 무소속 후보로 15.61%의 득표율로 3위로 낙선했다. 그는 블로그와 Facebook을 운영하며, 고창군 출신이다.	임종인은 어떤 교육을 받았나요?
	부산시가 미세먼지를 줄이기 위한 방안을 마련해 시민이 쉽게 체감할 수 있는 대책은 서둘러 시행하는 한편 나머지 부분에 대해서는 세밀한 대책을 세워 부산을 미세먼지 없는 청정지역으로 만들어 주기를 기대한다.	주어진 문장을 적절하게 요약해주세요. 문장: 부산시가 미세먼지를 줄이기 위한 방안을 마련했다. 지난 20 일 나온 '미세먼지 저감 종합대책'에는 2020 년부터 부산항을 '배출 규제 해역'으로 지정하고 모든 초중고와 어린이집에 공기정화장치를 설치한다는 내용이 담겼다. 또 차량 2 부제 민간 확대 및 미이행 때 최대 200 만 원의 과태료 부과, 부산항 발전시설 연료를 경유에서 LNG(액화천연가스)로 전환, 대기 오염물질 배출 사업장 운영시간 조정 등도 포함됐다. 미세먼지의 폐해에 대한 시민들의 불안감이 갈수록 높아지고 있다는 점을 생각하면 시의 이번 대책은 매우 시의적절하다. 부산은 미세먼지에 유난히 취약하다. 초미세먼지 연평균 농도는 27 ㎍/㎥로 7 대 특별·광역시 가운데 가장 높다. 게다가 바다를 끼고 있는 까닭에 항만이나 선박에서 배출되는 오염물질에 무방비로 노출된 상태다. 부산 전체 초미세먼지 배출원 중 37%가량이 항만 및 선박과 관련되어 있다는 통계가 나올 정도다. 그런 만큼 고농도 미세먼지 발생을 '재난 수준'으로 규정하고 강력한 조처를 해야 하는 것은 시의 당연한 책무다. 하지만 시의 미세먼지 저감 대책을 꼼꼼하게 살펴보면 세부 계획이 부족한 것도 적지 않다. 부산항 발전시설 연료 교체의 경우 먼저 해결해야 할 과제는 정부 보조금 확보다. 부산 외 다른 항만도시에서도 같은 목적 아래 경쟁적으로 사업을 추진하고 있어 충분한 예산이 마련되지 않으면 자칫 구두선에 그칠 가능성이 높다. 또 차량 2 부제 민간 확대도 대중 교통망의 대폭 확충이 전제돼야 하는 데다 이후에도 대승적 차원에서 시민들의 전폭적인 협조가 뒤따르지 않는다면 실현 여부가 불투명하다는 지적이 제기되고 있다. 시는 따라서 시민이 쉽게 체감할 수 있는 대책은 서둘러 시행하는 한편 나머지 부분에 대해서는 정부 및 국회 등과의 꾸준한 접촉을 통해 의지를 관철시켜야 한다. 그런 점에서 본다면 항만지역 대기 질 개선을 위해 어제 해양수산부, 경남도, 울산시와 함께 개최한 권역별 해양수산 정책협의회는 좋은 시도다. 앞으로 시가 보다 세밀한 대책을 세워 부산을 미세먼지 없는 청정지역으로 만들어 주기를 기대한다.
	문재인 대통령은 현충일을 맞아 진보와 보수 등 이념적 가치에 따른 갈등구도를 극복하고 상식 선에서 애국을 생각한다면 통합된 사회로 발전해갈 수 있을 것이라 말했다.	주어진 문장을 적절하게 요약해주세요. 문장: 현충일 추념사서 "이분법 지났다.... 기득권 매달리면 진짜아냐" 문재인 대통령은 6일 "애국 앞에 보수와 진보가 없다. 기득권이나 사익이 아니라 국가공동체의 운명을 자신의 운명으로 여기는 마음이 애국"이라고 밝혔다. 문 대통령은 이날 국립서울현충원에서 열린 제64회 현충일 추념식에 참석, 추념사에서 이 같이 진영논리 타파를 강조하며 "저는 보수든 진보든 모든 애국을 존경한다"고 말했다. 그러면서 "기득권에 매달린다면 보수든 진보든 진짜가 아니다"고도 했다. 진보와 보수 등 이념적 가치에 따른 갈등구도를 극복해야 한다는 주문이지만, 최근 한국당의 행보에 대해 그들의 진영만을 위한 기득권에 매달리는 모습으로 보고, 국가공동체의 운영을 위해 국정에 협조해줄 것을 촉구한 것으로도 읽힌다. 문 대통령은 "보수와 진보로 나눠 대립하던 이념의 시대가 있었다. 하지만 오늘의 대한민국에는 보수와 진보의 역사가 함께 어울려 있다"며 "사회를 보수와 진보, 이분법으로 나눌 수 있는 시대는 지났다"고 지적했다. 이어 "스스로를 보수라고 생각하든 진보라고 생각하든 극단에 치우치지 않고 상식 선에서 애국을 생각한다면 통합된 사회로 발전해갈 수 있을 것"이라며 "그것이야말로 이 시대의 진정한 보훈"이라고 강조했다. 다. 현충일을 맞아 보훈과 애국의 의미도 되새겼다. 문 대통령은 "나라를 위한 일에 헛된 죽음은 없으며, 그 희생은 공동체가 함께 책임져야 할 명예로운 일"이라며, "오늘의 우리는 수많은 희생 위에 존재하기 때문이며, 우리의 보훈은 아픈 역사를 다시는 되풀이 하지 않겠다는 다짐이기도 하다"고 규정했다. 우선 청해부대 최영함 입항 행사 도중 정박용 밧줄 사고로 숨진 고(故) 최종근 하사를 언급하며 "또 한 명의 장병을 떠나보냈다"라며 "끝내 가족의 품으로 돌아오지 못한 고인을 국립대전현충원에 모셨다"고 전했다. 또 "정부는 9·19 군사합의 이후 비무장지대 지뢰 제거를 시작으로 유해 67구와 3만여 점의 유품을 발굴했다"며 "국가를 위해 헌신한 마지막 한 분까지 찾는 것이 국가의 마땅한 책무"라고 강조했다. 특히 미국에 대해서도 "이 땅의 자유와 평화를 위해 가장 큰 희생을 감내한 나라"라며 "정부는 2022년까지 워싱턴 한국전쟁 기념공원 안에 '추모의 벽'을 건립할 것이며, 미군 전몰장병 한분 한 분의 고귀한 희생을 기리고, 한미동맹의 숭고함을 양국 국민의 가슴에 새길 것"이라고 말했다. 국가유공자와 유가족을 위한 보훈 정책도 소개했다. 문 대통령은 "유전자 대조자료가 없어 어렵게 고국의 품으로 돌아온 많은 영웅들이 무명용사로 남아있다"며 "유가족들이 유전자 확보에 협력해주시면 정부는 최선을 다해 가족을 찾아드릴 것"이라고 약속했다. 이어 "국가를 위해 희생하신 분들과 유족들께 국가의 의무를 다하겠다"며 "최근 해외에 계신 독립유공자의 유해도 조국의 품으로 모셔왔다. 홍범도 장군의 유해 봉환도 계속 추진할 것"이라고 설명했다. 서울=송충원 기자
	소송에서 다투어지고 있는 법률관계의 존부가 동일한 당사자 사이의 전소에서 이미 이루어져 확정판결이 있는 경우 당사자는 이에 저촉되는 주장을 할 수 없고 법원도 이에 저촉되는 판단을 할 수 없는 바, 부동산 점유자가 취득시효완성을 원인으로 한 소유권이전등기를 하지 않고 있는 사이 제3자가 적법하게 소유권이전등기절차이행의 확정판결을 받아 소유권이전등기를 마친 경우, 위 확정판결이 당연무효이거나 취소되지 않는 한 부동산 점유자는 원래의 등기명의인에 대한 소유권이전등기청구권 보전을 위해 제3자 명의의 소유권이전등기의 말소를 구할 수 없다.	주어진 문장을 적절하게 요약해주세요. 문장: 가. 법원의 석명권 행사는 사안을 해명하기 위하여 당사자의 모순 또는 불완전한 주장을 정정 보충하는 기회를 주고 또 증거제출을 촉구하는 것을 그 내용으로 하는 것이므로 당사자가 주장하지도 않은 법률효과에 관한 요건사실이나 공격방어방법을 시사하여 그 제출을 권유하지 않았다 하더라도 석명권 불행사의 위법이 있다고 할 수 없다. 나. 소송에서 다투어지고 있는 권리 또는 법률관계의 존부가 동일한 당사자 사이의 전소에서 이미 다루어져 이에 관한 확정판결이 있는 경우에 당사자는 이에 저촉되는 주장을 할 수 없고, 법원도 이에 저촉되는 판단을 할 수 없음은 물론, 위와 같은 확정판결의 존부는 당사자의 주장이 없더라도 법원이 이를 직권으로 조사하여 판단하지 않으면 안된다. 다. 부동산의 점유자가 취득시효완성을 원인으로 한 소유권이전등기를 하지 않고 있는 사이에 제3자가 등기명의인을 상대로 제소하여 그 부동산에 대한 소유권이전등기절차이행의 확정판결을 받아 소유권이전등기를 한 경우에는 위 확정판결이 당연무효이거나 재심의 소에 의하여 취소되지 않는 한 부동산 점유자는 위 원래의 등기명의인에 대한 소유권이전등기청구권을 보전하기 위하여 동인을 대위하여 위 확정판결의 기판력에 저촉되는 제3자 명의의 소유권이전등기의 말소를 구할 수 없다.
	제목: 임금 구 한국전기통신공사법에 의해 전직 당시 국가공무원법에 따른 정년인 61세는 보장되고, 근로기준법 제95조 제1항이 근로자에게 불리하게 취업규칙을 변경하는 경우 그 과반수로 구성된 노동조합이 있을 때 그의 동의를 얻도록 한 것은 취업규칙 변경으로 인해 불이익을 받는 근로자들의 의사가 노동조합을 통해 취업규칙 변경에 반영되도록 하기 위함이므로, 노동조합에 의해 대표되지 않는 근로자들만에 대해 불리하게 취업규칙을 변경할 경우 노동조합의 동의만으로는 취업규칙변경의 효력이 발생하지 않는다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: [1] 구 한국전기통신공사법(1997. 10. 1. 법률 제5387호로 폐지) 부칙(1986. 5. 12.) 제3항의 규정은 공무원의 신분을 가지고 있다가 새로 설립되는 한국전기통신공사로 전직하는 사람들에 대하여 그 공무원 퇴직 당시 이미 보장된 국가공무원법상의 정년을 그대로 보장함으로써 공무원 신분을 상실하는 데 따른 불이익을 막고자 하는 것으로서 전직 당시 국가공무원법에 따른 정년인 61세는 위 법률 자체에 의하여 보장되는 것이고, 따라서 법률의 개정이 없는 이상, 한국전기통신공사가 임의로 정년을 변경할 수 없다고 할 것이며, 한국전기통신공사법폐지법률 부칙 제6조도 역시 전직자들에 대한 구 한국전기통신공사법에 의한 정년의 보장을 박탈하고자 하는 것은 아니다. [2] 근로기준법 제95조 제1항이 근로자에게 불리하게 취업규칙을 변경하는 경우 그 과반수로 구성된 노동조합이 있을 때에 그 노동조합의 동의를 얻도록 한 것은 취업규칙의 변경으로 인하여 불이익을 받는 근로자들의 의사가 노동조합을 통하여 취업규칙의 변경에 반영되도록 하기 위한 것이라고 할 것인바, 노동조합에 의하여 대표되지 않는 근로자들만에 대하여 불리하게 취업규칙을 변경할 경우 노동조합의 동의만으로는 취업규칙 변경의 효력이 발생하지 않는다.
	《Best of Coming Century 〜Together〜》은 2002년에 발매된 Coming Century의 첫 번째 베스트 앨범입니다. 이 앨범은 V6로서 베스트 앨범을 냈을 때, 그룹 내 유닛인 Coming Century도 현재까지의 활동을 일시적으로 중단했고, 팬들의 요구에 따라 발매되었습니다. 신곡 두 곡 외에는 팬 투표를 통해 선정된 여덟 곡이 포함되어 있습니다. 신곡은 '恋のシグナル', 'Be with you'입니다.	이 앨범은 어땠어?
	제목: LG전자, 'LG 울트라파인 에르고' 모니터 공개 LG전자가 'CES 2020 혁신상'을 수상한 'LG 울트라파인 에르고', 'LG 울트라기어', 'LG 울트라와이드' 등 3종의 프리미엄 모니터 신제품을 'CES 2020'에서 공개한다고 밝혔다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: LG전자가 'CES 2020'에서 혁신적인 프리미엄 모니터 신제품을 공개한다. 프리미엄 모니터 신제품은 ▲인체공학 설계가 적용된 'LG 울트라파인 에르고(UltraFineTM Ergo)' ▲고성능 게이밍 모니터 'LG 울트라기어(UltraGearTM)' ▲넓은 화면에서 여러 작업을 동시에 할 수 있는 'LG 울트라와이드(UltraWideTM)' 등 3종이다. 이 제품들은 모두 'CES 2020 혁신상(CES 2020 Innovation Award)'을 수상했다. 'LG 울트라파인 에르고' 모니터(모델명: 32UN880)는 오랜 시간 동안 모니터로 작업하는 사용자, 잘못된 자세로 모니터를 사용해 목과 어깨 통증을 느끼는 사용자 등을 고려해 LG만의 인체공학 설계를 처음 적용했다. 특히 스탠드를 움직이지 않고도 화면을 앞으로 당겨 원하는 위치에 화면을 놓을 수 있고, 좌우 방향으로도 각각 최대 280도까지 돌릴 수 있어 여러 사람이 함께 화면을 보기에도 편리하다. 또한 화면을 위·아래 방향으로 13 이내로 움직일 수 있고, 25도씩 기울일 수 있다. 화면을 90도 돌려 세우는 '피벗' 기능도 지원한다. 'LG 울트라파인 에르고'는 집게 형태의 클램프를 적용해 테이블 가장 자리에 스탠드를 고정할 수 있어, 일반 모니터 대비 공간을 효율적으로 활용할 수 있다. 별도의 도구 없이도 화면부와 스탠드를 간편하게 조립할 수 있다. 최신 USB-C 기능도 적용해 별도 전원을 연결하지 않고도 노트북을 충전하면서 모니터를 동시에 사용할 수 있다. 'LG 울트라기어' 게이밍 모니터(모델명: 27GN950)는 최대 160헤르츠(Hz) 고주사율, 1밀리세컨드(1ms, 0.001초) 응답속도의 나노 IPS 디스플레이를 탑재해 빠르고 정확한 색상을 구현한다. 이 제품은 '엔비디아 지싱크' 호환, 'AMD 라데온 프리싱크2' 등 주요 게임 기능도 함께 사용할 수 있다. 'LG 울트라와이드' 모니터(모델명: 38WN95C)는 144Hz 주사율과 1ms 응답속도의 나노 IPS 디스플레이를 적용했다. 38인치 고해상도 QHD+(3840 X 1600)는 물론, 21대 9 화면비율의 곡면 디자인은 동시에 여러 작업을 할 때 편리하다. 장익환 LG전자 IT사업부장(상무)은 "고화질·고성능은 물론 LG만의 인체공학 설계까지 갖춘 에르고 제품을 앞세워 프리미엄 모니터 시장을 지속 주도할 것"이라고 강조했다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	구체적으로는, 에폭시기 함유 실란 커플링제 또는 아미노기 함유 실란 커플링제(예를 들어, 일본 특허 공개 평 11-147939호 공보 참조), 새로운 밀착성 향상을 목적으로 한 황 원자 함유 실란 커플링제(예를 들어, 일본 특허 공개 제2000-103940호 공보 참조)가 있다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 최근의 전자 기기의 소형화, 경량화, 고성능화에 수반하여, 실장의 고밀도화가 진행되어, 전자 부품 장치는 종래의 핀 삽입형으로부터 표면 실장형의 패키지가 이루어지게 되었다. 표면 실장형의 IC, LSI 등은, 실장 밀도를 높게 하고, 실장 높이를 낮게 하기 위해서 박형, 소형의 패키지로 되어 있어, 소자의 패키지에 대한 점유 면적이 커지고, 패키지의 두께는 매우 얇아지고 있다. 또한 이러한 패키지는, 종래의 핀 삽입형의 것과 실장 방법이 상이하다. 즉, 전자 부품 장치를 배선판에 설치하는 경우, 종래의 핀 삽입형 패키지는 핀을 배선판에 삽입한 후, 배선판 이면으로부터 납땜을 행하기 때문에, 패키지가 직접 고온에 노출되는 경우는 없었다. 그러나, 표면 실장형 패키지에서는, 전자 부품 장치 전체가 땜납 배스나 리플로우 장치 등에서 처리되기 때문에, 패키지가 직접 납땜 온도(리플로우 온도)에 노출된다. 그 결과, 패키지가 흡습하고 있었을 경우, 납땜시에 흡습 수분이 급격하게 팽창해서, 발생한 증기압이 박리 응력으로서 작용하여, 소자, 리드 프레임 등의 인서트와 밀봉재 사이에서 박리가 발생하여, 패키지 균열의 발생이나 전기적 특성 불량의 원인이 된다. 이로 인해, 땜납 내열성(내리플로우성)이 우수한 밀봉 재료의 개발이 요망되고 있다.이들 요구에 대응하기 위해서, 지금까지, 주재가 되는 에폭시 수지측에서 다양한 검토가 이루어졌지만, 에폭시 수지측의 개량만으로는 저흡습화에 수반하는 내열성의 저하, 밀착성의 향상에 수반하는 경화성의 저하 등이 발생하여, 물성의 균형을 잡는 것이 곤란하였다. 따라서, 상기 배경으로부터 다양한 에폭시 수지 개질제가 검토되고 있으며, 그 중의 일례로서 소자 리드 프레임 등의 인서트와의 밀착력 향상에 주목하여, 실란 커플링제가 검토되고 있다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 제공하세요.	재검토할	이 문제에서는 주어진 텍스트 내의 <MASK>로 표시된 부분에 들어갈 적절한 단어를 예측해야 합니다. <MASK>가 위치한 문장의 전체 문맥을 분석하여, 문장의 나머지 내용과 일관되게 <MASK>에 들어갈 가장 적합한 단어를 답하세요. #텍스트: 국제회계기준(이하 K-IFRS)은 기존의 한국회계기준(이하 K-GAAP)에 비해 여러 가지 상이한 회계처리 규정을 지니고 있으며 그 중 본 연구는 유형자산의 내용연수와 감가상각방법에 대한 경제적 실질원칙 적용에 초점을 두고 있다. 감가상각과 관련한 사항은 중요한 회계의사결정임에도 불구하고 과거 실무적용에 있어서는 경제적 실질을 반영하는 의사결정이 잘 이루어지지 않았던 측면이 있다. 즉 과거에는 대부분의 기업이 재무보고목적으로 별도의 내용연수와 감가상각방법을 결정하기 보다는 세법상 효과를 고려하여 의사결정을 하는 경향이 있었다. 그러나 K-IFRS하에서 기업은 종전과 달리 유형자산별로 경제적 실질을 반영할 수 있도록 감가상각방법 및 추정내용연수를 보다 신중하게 결정하여야 한다. 왜냐하면 감가상각 대상 자산의 구분에 대한 규정이 종전의 기업회계기준과 달라졌기 때문이다. 또한 K-IFRS에서는 경제적 실질 원칙에 따라 감가상각방법 또한 매 연도말에 <MASK> 것을 명문화하고 있기 때문이다. 그러므로 K-IFRS하에서 내용연수 변경과 감가상각방법에 대한 변경은 보다 빈번하게 발생할 것으로 예상된다. 실제로 K-IFRS의 전면 도입에 즈음하여 정률법을 적용하던 상당수의 기업들이 정액법으로 감가상각방법을 변경하였고 기존에 적용하던 세법상의 내용연수를 경제적 내용연수로 변경하는 현상이 발생하였다.
	여기에서는 파라곤 테크놀로지 시스템즈(Paragon Technologies Systems)에서 개발한 도스 클론인 6.51CD.jpg 섬네일에 대해 알려드리겠습니다. 이 운영 체제는 러시아의 PhysTechSoft와 함께 개발되었으며, 1993년에 처음으로 상용화되었습니다. 버전 번호는 MS-DOS 6.2를 따르고 있습니다. PTS-DOS 2000은 다양한 명령어를 지원하며, 인텔 80286 CPU 이상 512 KB RAM 이상을 필요로 합니다. 또한, 언급된 명령어에는 APPEND, ASK, ASSIGN, ATTR, BEEP, BREAK, CALL, CHDIR, CHKDSK, CHOICE, CLS, COMMAND, COPY, CTTY, DATE, DEL, DIR, DISKCOPY, DISP, ECHO, ECHONLF, ERASE, ERRORLEVEL, EXE2BIN, EXIST, EXIT, FDISK, FIND, FORMAT, GOTO, HISTORY, IF, JOIN, KEYB, LABEL, LOADFIX, MD, MEM, MKDIR, MKZOMBIE, MODE, MORE, NLSFUNC, PATH, PAUSE, PRINT, PROMPT, RD, RDZOMBIE, REN, RENAME, REPLACE, RMDIR, SET, SETDRV, SETVER, SHARE, SHIFT, SORT, SUBST, SYS, TIME, TREE, TYPE, UNINSTALL, VER, VERIFY, VOL 등이 포함됩니다.	파라곤 테크놀로지 시스템즈에서 개발한 도스 클론 6.51CD.jpg 섬네일에 대해 알려줄래?
	본 출원은 항-PD-L1 항체, 이를 코딩하는 핵산, 이의 치료 조성물, 및 T 세포 기능을 향상시켜 세포 매개 면역 반응을 상향조절하고 감염 (예를 들어, 급성 및 만성) 및 종양 면역을 비롯한 T 세포 기능이상 장애를 치료하기 위한 이의 용도에 관한 것이다.	주어진 문장을 읽고 간략하게 요약해주세요. 문장: [ 발명의 명칭 ] 항-ＰＤ-Ｌ１ 항체 및 Ｔ 세포 기능을 향상시키기 위한 그의 용도 ANTI-PD-L1 ANTIBODIES AND THEIR USE TO ENHANCE T-CELL FUNCTION [ 기술분야 ] 관련 출원본원은 35 USC 119(e)하에서 2008년 12월 9일자로 출원된 미국 가출원 제61/121092호에 대한 우선권의 이익을 주장하며, 상기 문헌의 개시내용은 그 전문이 본원에 참고로 포함된다. 기술 분야본 발명은 일반적으로 면역 기능 및 세포 매개 면역 반응을 상향조절하는 것을 비롯하여 T 세포 기능을 향상시키는 것, 및 T 세포 기능이상 장애를 치료하는 것에 관한 것이다. [ 배경기술 ] T 세포에 대한 공동자극 또는 그에 대해 2 개의 구분되는 신호를 제공하는 것은 항원 제시 세포 (APC)에 의한 휴면 T 림프구의 림프구 활성화의 널리 허용되는 모델이다. 문헌 [Lafferty et al., Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci. 53: 27-42 (1975)]. 이 모델은 추가로 비-자기 및 면역 내성으로부터 자기를 구별하는 것을 제공한다. 문헌 [Bretscher et al., Science 169: 1042-1049 (1970)]; [Bretscher, P.A., P.N.A.S. USA 96: 185-190 (1999)]; [Jenkins et al., J. Exp. Med. 165: 302-319 (1987)]. 최초 신호, 또는 항원 특이적 신호는, 주요 조직적합성 복합체 (MHC)에 의해 제시된 외래 항원 펩티드의 인식 이후에 T 세포 수용체 (TCR)를 통해 변환된다. 제2 또는 공동자극 신호는 항원 제시 세포 (APC) 상에서 발현된 공동자극 분자에 의해 T 세포로 전달되고, T 세포가 클론 증식, 시토카인 분비 및 이펙터 기능을 촉진하도록 유도한다. 문헌 [Lenschow et al., Ann. Rev. Immunol. 14:233 (1996)]. 공동자극이 없으면, T 세포는 항원 자극에 대해 불응성이 될 수 있고, 효과적인 면역 반응을 시작하지 않을 수 있으며, 추가로 외래 항원에 대해 탈진상태가 되거나 내성을 가질 수 있다.TCR 신호의 강도는 T 세포 활성화 및 분화에 대해 실제로 정량적인 영향을 갖기 때문에 단순한 2 신호 모델은 지나친 단순화일 수 있다. 문헌 [Viola et al., Science 273: 104-106 (1996)]; [Sloan-Lancaster, Nature 363: 156-159 (1993)]. 게다가, T 세포 활성화는 TCR 신호 강도가 높다면 심지어 공동자극 신호가 존재하지 않는 경우에도 일어날 수 있다. 보다 중요하게는, T 세포는 양성 및 음성 2차 공동자극 신호를 둘 모두 받는다. 그러한 양성 및 음성 신호의 조절은 면역 내성을 유지하고 자가면역을 방지하면서 숙주의 보호 면역 반응을 최대화하는데 중요하다. 음성 2차 신호는 T 세포 내성을 유도하는데 필요한 것으로 보이는 반면, 양성 신호는 T 세포 활성화를 촉진한다. 단순한 2 신호 모델이 나이브 림프구에 대해서는 여전히 유효한 설명을 제공하지만, 숙주의 면역 반응은 동적 과정이고, 공동자극 신호는 또한 항원-노출된 T 세포에도 제공될 수 있다.공동자극 신호를 조작하는 것은 세포 기초 면역 반응을 향상시키거나 종결시키는 수단을 제공하는 것으로 보이기 때문에, 공동자극 메카니즘은 치료상 관심대상이다. 최근, T 세포 기능이상 또는 무반응이 억제 수용체, 프로그램화된 사멸 1 폴리펩티드 (PD-1)의 유도 발현 및 지속 발현과 함께 일어나는 것으로 밝혀졌다. 그 결과, PD-1 및 PD-1과의 상호작용을 통해 신호를 전달하는 다른 분자, 예컨대 프로그램화된 사멸 리간드 1 (PD-L1) 및 프로그램화된 사멸 리간드 2 (PD-L2)를 치료상 표적으로 하는 것이 집중 관심 영역이다. PD-L1 신호전달의 억제는 암 (예를 들어 종양 면역) 및 감염 (급성 및 만성 (예를 들어 지속) 감염 둘 모두를 포함함)을 치료하기 위해 T 세포 면역을 향상시키기 위한 수단으로서 제안되어 왔다. 그러나, 이러한 경로에서 표적에 대해 지시된 최적의 요법이 아직 상업화되지 않았기 때문에, 상당히 충족되지 않은 의학적 필요가 존재한다. [ 발명의 개요 ] [ 해결하려는 과제 ] 본 발명은 항-PD-L1 항체 (그러한 항체를 코딩하는 핵산 및 그러한 항체를 함유하는 조성물을 포함함), 및 T 세포 기능을 향상시켜 세포 매개 면역 반응을 상향조절하고, 감염 (예를 들어 급성 및 만성) 및 종양 면역을 비롯한 T 세포 기능이상 장애를 치료하기 위한 그의 용도를 제공한다. [ 과제의 해결 수단 ] 한 실시양태에서, 본 발명은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3 서열을 포함하는 단리된 중쇄 가변 영역 폴리펩티드를 제공하며, 여기서:(a) HVR-H1 서열은 이고;(b) HVR-H2 서열은 이고;(c) HVR-H3 서열은 이며;추가로 X1은 D 또는 G이고; X2는 S 또는 L이고; X3은 T 또는 S이다.한 특정 측면에서, X1이 D이고; X2가 S이고; X3이 T이다. 또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 식: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)에 따라 HVR 사이에 병렬된 가변 영역 중쇄 프레임워크 서열을 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 프레임워크 서열은 인간 컨센서스 프레임워크 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 프레임워크 서열은 VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크이다. 또 다른 추가 측면에서, 프레임워크 서열 중 적어도 하나는 다음과 같다:HC-FR1은 이고,HC-FR2는 이고,HC-FR3은 이고,HC-FR4는 이다.또 다른 추가 측면에서, 중쇄 폴리펩티드는 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하는 가변 영역 경쇄와 추가로 조합되고, 여기서:(a) HVR-L1 서열은 이고;(b) HVR-L2 서열은 이고;(c) HVR-L3 서열은 이며;추가로 X4는 D 또는 V이고; X5는 V 또는 I이고; X6은 S 또는 N이고; X7은 A 또는 F이고; X8은 V 또는 L이고; X9는 F 또는 T이고; X10은 Y 또는 A이고; X11은 Y, G, F 또는 S이고; X12는 L, Y, F 또는 W이고; X13은 Y, N, A, T, G, F 또는 I이고; X14는 H, V, P, T 또는 I이고; X15는 A, W, R, P 또는 T이다. 또 다른 추가 측면에서, X4는 D이고; X5는 V이고; X6은 S이고; X7은 A이고; X8은 V이고; X9는 F이고; X10은 Y이고; X11은 Y이고; X12는 L이고; X13은 Y이고; X14는 H이고; X15는 A이다. 또 다른 추가 측면에서, 경쇄는 식: (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)에 따라 HVR 사이에 병렬된 가변 영역 경쇄 프레임워크 서열을 추가로 포함한다. 또 다른 추가 측면에서, 프레임워크 서열은 인간 컨센서스 프레임워크 서열로부터 유래된다. 또 다른 추가 측면에서, 프레임워크 서열은 VL 카파 I 컨센서스 프레임워크이다. 또 다른 추가 측면에서, 프레임워크 서열 중 적어도 하나는 다음과 같다:LC-FR1은 이고,LC-FR2는 이고,LC-FR3은 이고,LC-FR4는 이다.또 다른 실시양태에서, 본 발명은 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 단리된 항-PD-L1 항체 또는 항원 결합 단편을 제공하고, 여기서:(a) 중쇄는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하며, 추가로:(i) HVR-H1 서열은 이고,(ii) HVR-H2 서열은 이고,(iii) HVR-H3 서열은 이며,(b) 경쇄는 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하고, 추가로:(i) HVR-L1 서열은 이고,(ii) HVR-L2 서열은 이고,(iii) HVR-L3 서열은 이다.여기서 추가로 X1은 D 또는 G이고; X2는 S 또는 L이고; X3은 T 또는 S이고; X4는 D 또는 V이고; X5는 V 또는 I이고; X6은 S 또는 N이고; X7은 A 또는 F이고; X8은 V 또는 L이고; X9는 F 또는 T이고; X10은 Y 또는 A이고; X11은 Y, G, F 또는 S이고; X12는 L, Y, F 또는 W이고; X13은 Y, N, A, T, G, F 또는 I이고; X14는 H, V, P, T 또는 I이고; X15는 A, W, R, P 또는 T이다. 특정 측면에서, X1은 D이고; X2는 S이고; X3은 T이다. 또 다른 측면에서, X4는 D이고; X5는 V이고; X6은 S이고; X7은 A이고; X8은 V이고; X9는 F이고; X10은 Y이고; X11은 Y이고; X12는 L이고; X13은 Y이고; X14는 H이고; X15는 A이다. 또 다른 측면에서, X1은 D이고; X2는 S이고; X3은 T이고, X4는 D이고; X5는 V이고; X6은 S이고; X7은 A이고; X8은 V이고; X9는 F이고; X10은 Y이고; X11은 Y이고; X12는 L이고; X13은 Y이고; X14는 H이고 X15는 A이다. 추가 측면에서, 중쇄 가변 영역은 (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)로서 HVR 사이에 병렬된 하나 이상의 프레임워크 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)로서 HVR 사이에 병렬된 하나 이상의 프레임워크 서열을 포함한다. 또 다른 추가 측면에서, 프레임워크 서열은 인간 컨센서스 프레임워크 서열로부터 유래된다. 또 다른 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 카바트 하위군 I, II, 또는 III 서열로부터 유래된다. 또 다른 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크이다. 또 다른 추가 측면에서, 하나 이상의 중쇄 프레임워크 서열은 다음과 같다:HC-FR1은 이고,HC-FR2는 이고,HC-FR3은 이고,HC-FR4는 이다.또 다른 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 카바트 카파 I, II, II 또는 IV 하위군 서열로부터 유래된다. 또 다른 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 VL 카파 I 컨센서스 프레임워크이다. 또 다른 추가 측면에서, 하나 이상의 경쇄 프레임워크 서열은 다음과 같다:LC-FR1은 이고,LC-FR2는 이고,LC-FR3은 이고,LC-FR4는 이다. 추가의 특정 측면에서, 항체는 인간 또는 뮤린 불변 영역을 추가로 포함한다. 또 다른 추가 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, IgG4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 특정 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1이다. 또 다른 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG2A이다. 추가의 특정 측면에서, 항체는 감소되거나 또는 최소한의 이펙터 기능을 갖는다. 추가의 특정 측면에서, 최소한의 이펙터 기능은 "비-이펙터 Fc 돌연변이" 또는 비글리코실화로부터 유래된다. 또 다른 추가 실시양태에서, 비-이펙터 Fc 돌연변이는 불변 영역에서의 N297A 또는 D265A/N297A 치환이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항-PD-L1 항체를 제공하고, 여기서:(a) 중쇄는 , 및 에 대해 각각 85％ 이상의 서열 동일성을 갖는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3 서열을 추가로 포함하거나, 또는(b) 경쇄는 , 및 에 대해 각각 85％ 이상의 서열 동일성을 갖는 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3 서열을 추가로 포함한다. 특정 측면에서, 서열 동일성은 86％, 87％, 88％, 89％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％ 또는 100％이다. 또 다른 측면에서, 중쇄 가변 영역은 (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)로서 HVR 사이에 병렬된 하나 이상의 프레임워크 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)로서 HVR 사이에 병렬된 하나 이상의 프레임워크 서열을 포함한다. 또 다른 측면에서, 프레임워크 서열은 인간 컨센서스 프레임워크 서열로부터 유래된다. 또 다른 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 카바트 하위군 I, II 또는 III 서열로부터 유래된다. 또 다른 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크이다. 또 다른 추가 측면에서, 하나 이상의 중쇄 프레임워크 서열은 다음과 같다:HC-FR1은 이고,HC-FR2는 이고,HC-FR3은 이고,HC-FR4는 이다. 또 다른 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 카바트 카파 I, II, II 또는 IV 하위군 서열로부터 유래된다. 또 다른 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 VL 카파 I 컨센서스 프레임워크이다. 또 다른 추가 측면에서, 하나 이상의 경쇄 프레임워크 서열은 다음과 같다:LC-FR1은 이고,LC-FR2는 이고,LC-FR3은 이고,LC-FR4는 이다. 추가의 특정 측면에서, 항체는 인간 또는 뮤린 불변 영역을 추가로 포함한다. 또 다른 추가 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, IgG4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 특정 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1이다. 또 다른 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG2A이다. 추가의 특정 측면에서, 항체는 감소되거나 또는 최소한의 이펙터 기능을 갖는다. 추가의 특정 측면에서, 최소한의 이펙터 기능은 "비-이펙터 Fc 돌연변이" 또는 비글리코실화로부터 유래된다. 또 다른 추가 실시양태에서, 비-이펙터 Fc 돌연변이는 불변 영역에서의 N297A 또는 D265A/N297A 치환이다. 또 다른 추가 실시양태에서, 본 발명은 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 단리된 항-PD-L1 항체를 제공하고, 여기서:(a) 중쇄 서열은 중쇄 서열:에 대해 85％ 이상의 서열 동일성을 갖거나, 또는(b) 경쇄 서열은 경쇄 서열:에 대해 85％ 이상의 서열 동일성을 갖는다.특정 측면에서, 서열 동일성은 86％, 87％, 88％, 89％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％ 또는 100％이다. 또 다른 측면에서, 중쇄 가변 영역은 (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)로서 HVR 사이에 병렬된 하나 이상의 프레임워크 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)로서 HVR 사이에 병렬된 하나 이상의 프레임워크 서열을 포함한다. 또 다른 측면에서, 프레임워크 서열은 인간 컨센서스 프레임워크 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 카바트 하위군 I, II 또는 III 서열로부터 유래된다. 또 다른 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크이다. 또 다른 추가 측면에서, 하나 이상의 중쇄 프레임워크 서열은 다음과 같다:HC-FR1 HC-FR2 HC-FR3 HC-FR4 .또 다른 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 카바트 카파 I, II, II 또는 IV 하위군 서열로부터 유래된다. 또 다른 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 VL 카파 I 컨센서스 프레임워크이다. 또 다른 추가 측면에서, 하나 이상의 경쇄 프레임워크 서열은 다음과 같다:LC-FR1 LC-FR2 LC-FR3 LC-FR4 .추가의 특정 측면에서, 항체는 인간 또는 뮤린 불변 영역을 추가로 포함한다. 또 다른 추가 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, IgG4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 특정 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1이다. 또 다른 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG2A이다. 추가의 특정 측면에서, 항체는 감소되거나 또는 최소한의 이펙터 기능을 갖는다. 추가의 특정 측면에서, 최소한의 이펙터 기능은 원핵 세포에서의 생산으로부터 야기된다. 추가의 특정 측면에서, 최소한의 이펙터 기능은 "비-이펙터 Fc 돌연변이" 또는 비글리코실화로부터 야기된다. 또 다른 추가 실시양태에서, 비-이펙터 Fc 돌연변이는 불변 영역에서의 N297A 또는 D265A/N297A 치환이다. 또 다른 추가 실시양태에서, 본 발명은 상기 기재된 임의의 항-PD-L1 항체를 하나 이상의 제약상 허용되는 담체와 함께 포함하는 조성물을 제공한다. 또 다른 추가 실시양태에서, 본 발명은 항-PD-L1 항체의 경쇄 또는 중쇄 가변 영역 서열을 코딩하는 단리된 핵산을 제공하며, 여기서:(a) 중쇄는 , 및 과 각각 85％ 이상의 서열 동일성을 갖는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3 서열을 추가로 포함하고, (b) 경쇄는 , 및 와 각각 85％ 이상의 서열 동일성을 갖는 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3 서열을 추가로 포함한다. 특정 측면에서, 서열 동일성은 86％, 87％, 88％, 89％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％ 또는 100％이다. 측면에서, 중쇄 가변 영역은 (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)로서 HVR 사이에 병렬된 하나 이상의 프레임워크 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)로서 HVR 사이에 병렬된 하나 이상의 프레임워크 서열을 포함한다. 또 다른 측면에서, 프레임워크 서열은 인간 컨센서스 프레임워크 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 카바트 하위군 I, II 또는 III 서열로부터 유래된다. 또 다른 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크이다. 또 다른 추가 측면에서, 하나 이상의 중쇄 프레임워크 서열은 다음과 같다:HC-FR1 HC-FR2 HC-FR3 HC-FR4 .또 다른 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 카바트 카파 I, II, II 또는 IV 하위군 서열로부터 유래된다. 또 다른 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 VL 카파 I 컨센서스 프레임워크이다. 또 다른 추가 측면에서, 하나 이상의 경쇄 프레임워크 서열은 다음과 같다:LC-FR1 LC-FR2 LC-FR3 LC-FR4 .추가의 특정 측면에서, 항체는 인간 또는 뮤린 불변 영역을 추가로 포함한다. 또 다른 추가 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, IgG4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 특정 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1이다. 또 다른 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG2A이다. 추가의 특정 측면에서, 항체는 감소되거나 또는 최소한의 이펙터 기능을 갖는다. 추가의 특정 측면에서, 최소한의 이펙터 기능은 원핵 세포에서의 생산으로부터 야기된다. 추가의 특정 측면에서 최소한의 이펙터 기능은 "비-이펙터 Fc 돌연변이" 또는 비글리코실화로부터 야기된다. 또 다른 추가 측면에서, 비-이펙터 Fc 돌연변이는 불변 영역에서의 N297A 또는 D265A/N297A 치환이다. 또 다른 추가 측면에서, 핵산은 앞서 기재한 임의의 항-PD-L1 항체를 코딩하는 핵산의 발현에 적합한 벡터를 추가로 포함한다. 또 다른 추가의 특정 측면에서, 벡터는 핵산의 발현에 적합한 숙주 세포를 추가로 포함한다. 또 다른 추가의 특정 측면에서, 숙주 세포는 진핵 세포 또는 원핵 세포이다. 또 다른 추가의 특정 측면에서, 진핵 세포는 포유동물 세포, 예컨대 차이니즈 햄스터 난소 (CHO)이다. 또 다른 추가 실시양태에서, 본 발명은 앞서 기재한 임의의 항-PD-L1 항체 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산을 발현에 적합한 형태로 함유하는 숙주 세포를 상기 항체 또는 단편이 생산되는데 적합한 조건하에서 배양하는 단계, 및 항체 또는 단편을 회수하는 단계를 포함하는, 항-PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제조하는 방법을 제공한다.또 다른 추가 실시양태에서, 본 발명은 본원에서 제공하는 바와 같은 항-PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 단편 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 제공한다. 또 다른 추가 실시양태에서, 본 발명은 본원에서 개시하는 조성물의 치료 유효량을 담은 용기 및 T 세포 기능이상 장애의 치료를 위한 용도를 나타낸 포장 삽입물을 포함하는 제조품을 제공한다. 또 다른 추가 실시양태에서, 본 발명은 상기 기재한 임의의 항-PD-L1 조성물을 하나 이상의 BNCA 분자와 함께 포함하는 제조품을 제공한다. 한 측면에서, BNCA 분자는 항체, 항원 결합 항체 단편, BNCA 올리고펩티드, BNCA RNAi 또는 BNCA 소분자이다. 또 다른 측면에서, B7 음성 공동자극 분자는 CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, B7.1, B7-H3 및 B7-H4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 추가 실시양태에서, 제조품은 상기 기재한 임의의 항-PD-L1 조성물과 함께 화학요법제를 포함한다. 한 측면에서, 화학요법제는 겜시타빈이다. 또 다른 추가 실시양태에서, 본 발명은 상기 기재한 임의의 항-PD-L1 항체와 함께 하나 이상의 양성 공동자극 분자인 효능제를 포함하는 제조품을 제공한다. 한 측면에서, 양성 공동자극 분자는 B7 패밀리 공동자극 분자이다. 또 다른 측면에서, 양성 공동자극 분자는 CD28, CD80, CD86, ICOS/ICOSL로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 측면에서, 양성 공동자극 분자는 TNFR 패밀리 공동자극 분자이다. 추가 측면에서, TNFR 공동자극 분자는 OX40/OX40L, 4-1BB/4-1BBL, CD27/CD27L, CD30/CD30L 및 HVEM/LIGHT 및 그의 가용성 단편, 구축물 및 효능제 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 형태이다. 또 다른 추가 실시양태에서, 본 발명은 상기 기재한 임의의 항-PD-L1 항체와 함께 하나 이상의 항생제를 포함하는 제조품을 제공한다. 한 측면에서, 항생제는 항바이러스제, 항박테리아제, 항진균제, 항-원생동물 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 측면에서, 항바이러스제는 역전사효소 억제제, 프로테아제 억제제, 인테그라제 억제제, 진입 또는 융합 억제제, 성숙 억제제, 바이러스 방출 억제제, 면역 반응 향상제, 항바이러스성 상승작용 향상제, 백신, 간 효능제 및 약초제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 측면에서, 조합물은 하나 이상의 항바이러스제 카테고리를 포함한다. 또 다른 추가 실시양태에서, 본 발명은 상기 기재한 임의의 항-PD-L1 항체와 함께 하나 이상의 백신을 포함하는 제조품을 제공한다. 또 다른 추가 실시양태에서, 본 발명은 상기 기재한 임의의 항-PD-L1 항체 또는 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, T 세포 기능을 향상시키는 방법을 제공한다. 한 측면에서, 항-PD-L1 항체 또는 조성물은 기능이상 T 세포를 비-기능이상으로 만든다. 또 다른 추가 실시양태에서, 본 발명은 상기 기재한 임의의 항-PD-L1 항체 또는 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, T 세포 기능이상 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 한 특정 측면에서, T 세포 기능이상 장애는 감염 또는 종양 면역이다. 또 다른 측면에서, 감염은 급성 또는 만성이다. 또 다른 측면에서, 만성 감염은 지속적이거나, 잠재적이거나 또는 느리다. 또 다른 측면에서, 만성 감염은 박테리아, 바이러스, 진균 및 원생동물로 이루어진 군으로부터 선택된 병원체로부터 야기된다. 추가 측면에서, 숙주 내의 병원체 수준은 감소된다. 또 다른 추가 측면에서, 상기 방법은 백신으로 치료하는 것을 추가로 포함한다. 또 다른 추가 측면에서, 상기 방법은 항생제로 치료하는 것을 추가로 포함한다. 또 다른 추가 측면에서, 병원체는 박테리아이고, 상기 방법은 항박테리아제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 또 다른 추가 측면에서, 박테리아는 미코박테리움 종(Mycobacterium spp.), 살모넬라 종(Salmonella spp.), 리스테리아 종(Listeria spp.), 스트렙토코쿠스 종(Streptococcus spp.), 헤모필루스 종(Haemophilus spp.), 네이세리아 종(Neisseria spp.), 클레브시엘라 종(Klebsiella spp.), 보렐리아 종(Borrelia spp.), 박테로이데스 프라길리스(Bacterioides fragillis), 트레포네마 종(Treponema spp.), 및 헬리코박터 피롤리(Helicobacter pylori)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 추가 측면에서, 병원체는 바이러스이고, 상기 방법은 항바이러스제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 또 다른 추가 측면에서, 바이러스는 간염 -B, -C, 단순 포진 바이러스 -I, -II, 인간 면역결핍 바이러스 -I, -II, 시토메갈로바이러스, 엡스타인 바르 바이러스, 인간 파필로마바이러스, 인간 T 림프구 친화성 바이러스, -I, -II, 바리셀라 조스터로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 추가 측면에서, 병원체는 진균이고, 상기 방법은 항진균제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 또 다른 추가 측면에서, 장애는 아스페르길루스증, 블라스토미세스증, 칸디다증 알비칸스, 콕시디오이데스진균증 이미티스, 히스토플라스마증, 파라콕시디오이데스진균증, 미포자충증으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 추가 측면에서, 병원체는 원생동물이고, 상기 방법은 항-원생동물 작용제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 또 다른 추가 측면에서, 장애는 리슈마니아증, 플라스모디오시스(plasmodiosis) (즉, 말라리아), 크립토스포리디아증, 톡소플라스마증, 트리파노소마증, 및 흡충류 (예를 들어, 주혈흡충증), 촌충류 (예를 들어, 포충증) 및 선충류 (예를 들어, 선모충증, 회충증, 사상충증 및 분선충증)로부터 야기된 감염을 비롯한 연충 감염으로 이루어진 군으로부터 선택된다.또 다른 추가 측면에서, T 세포 기능이상 장애는 종양 면역이다. 또 다른 추가 측면에서, PD-L1 항체 또는 조성물은 방사선 요법, 화학요법, 표적화 요법, 면역요법, 호르몬 요법, 혈관신생 억제 및 완화 치료로 이루어진 군으로부터 선택된 전통 요법을 추가로 포함하는 치료 섭생과 조합된다. 추가의 특정 측면에서, 화학요법 치료는 겜시타빈, 시클로포스파미드, 독소루비신, 파클리탁셀, 시스플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 특정 측면에서, 종양 면역은 유방암, 폐암, 결장암, 난소암, 흑색종, 방광암, 신장암, 간암, 침샘암, 위장암, 신경교종, 갑상선암, 흉선암, 상피암, 두경부암, 위암 및 췌장암으로 이루어진 군으로부터 선택된 암으로부터 야기된다. [ 도면의 간단한 설명 ] 도 1은 세포 표면 분자인 B7 패밀리에 의한 T 세포의 공동자극을 도시한 그래프적 설명이다.도 2는 PMEL/B16 T 세포 자극 검정의 실험 설계를 나타낸 개략도이다. 도 3은 멜라닌세포 펩티드 gp100에 반응하여 PMEL CD8+ T 세포에서의 IFN-γ 생산이 향상되는 것을 통한, 항원 특이적 T 세포 기능에의 항-PD-L1 Ab의 효과를 보여주는 막대 그래프이다. IFN-γ를 생산하는 CD8+ T 세포 및 IFN-γ 생산 수준 백분율은 둘 모두 항-PD-L1 항체의 존재하에서 자극하는 동안 증가되었다.도 4는 Ova-펄스된 A20 B 세포/mPD-L1 APC에 의한 2차 자극에 있어서 항-PD-L1 Ab YW243.55.S1에 의해 Ova-특이적 CD4+ T 세포의 증식이 향상되는 것을 통한, 항원 특이적 T 세포 기능에 대한 항-PD-L1 Ab의 효과를 보여주는 막대 그래프이다.도 5는 혼합 림프구 반응에서 항-PD-L1 항체 YW243.55S1에 의해 인간 CD8 T 세포의 증식이 향상되는 것을 보여주는 일련의 FACS 플롯이다. CFSE의 강도를 희석시켜 측정한 증식 세포의 퍼센트를 또한 보고한다.도 6은 만성 LCMV를 키메라 형태의 항-PD-L1 Ab YW243.55S70으로 치료하는 것에 대한 실험 설계의 개략도이다. 화살표는 2 x 106 pfu 클론 13 LCMV에 의한 감염 14일 후에 시작된 항-PD-L1의 6 투약 시점을 나타낸다.도 7A 및 7B는 항-PD-L1 Ab, YW243.55.S70에 의한 만성 LCMV 감염의 생체내 치료 이후에 생체외 세포에서 향상된 CD8 이펙터 기능을 보여주는 그래프이다. YW243.55.S70에 의한 PD-L1의 차단은 CD8+ T 세포의 탈과립화를 증가시켰고 (표면 CD107A의 증가로 판단함) (도 7A), LCMV 펩티드 gp33에 반응하여 IFN-감마 생산 세포 ％를 증가시켰다 (도 7B). gp33-특이적 세포의 빈도는 H2-Db gp33 오량체로 염색하여 밝혀내었다. 도 8A 및 8B는 만성 LCMV 감염에 있어서 항-PD-L1 항체로 생체내 치료한 이후에 혈액 및 조직 LCMV 역가가 감소된 것을 보여준다. 도 8A에서, 다양하게 나타낸 조직으로부터의 바이러스 역가를 제 21 일 및 제 28 일, Ab 치료 후 1 주 및 2 주 째에 각각 분석하였다. 도 8B에서는, 제 0 일에 LCMV를 접종하고 제 14 일에 치료를 시작하여 제 0 일, 제 7 일, 제 14 일, 제 21 일 및 제 28 일에 혈청 바이러스 역가를 분석하였다.도 9A는 확립된 종양을 요법상 치료한 이후에 (종양이 250 mm3일 때, 제 14 일에 치료를 시작함) 항-PD-L1 항체를 적용한 결과로서 MC38.Ova 결장 암종 종양 성장에 있어서의 현저한 감소를 보여준다. 도 9B는 유동세포계수법으로 측정한, 조직 배양물 중 MC38.Ova 세포 상에서의 PD-L1 발현의 표면 수준을 보여주는 히스토그램이다. PD-L2는 MC38.Ova 세포에 의해 발현되지 않았다. 도 10은 C57BL/6 마우스에서의 MC38.Ova 종양의 성장에 대한 PD-L1 차단 치료의 단독 효과 및 항-VEGF 또는 겜시타빈과의 조합 치료의 효과를 보여주는 그래프이다.도 11A-B는 각각 파지 디스플레이에 의해 확인된 11 항-PD-L1 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열이다. 음영처리된 막대는 다양한 정의를 갖는 CDR을 나타내고, 박스처리된 영역은 HVR의 범위를 보여준다. [ 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용 ] 바람직한 실시양태의 상세한 설명본원에 언급된 모든 참조문헌은 구체적으로 참고로 포함된다. 일반적 기술달리 언급하지 않는 한, 본 발명의 실시는 당업계 기술에 속하는 분자 생물학 (재조합 기술 포함), 미생물학, 세포 생물학, 생화학 및 면역학의 통상적인 기술을 이용할 것이다. 그러한 기술은 문헌 [Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989)]; [Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984)]; [Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed., 1987)]; [Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.)]; [Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds 1987, 및 주기적인 업데이트)]; [PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., ed., 1994)]; [A Practical Guide to Molecular Cloning (Perbal Bernard V., 1988)]; [Phage Display: A Laboratory Manual (Barbas et al., 2001)]과 같은 문헌에 충분히 설명되어 있다.I. 숙주 면역A. 림프구 발생 및 활성화인간에서 2가지 주요 유형의 림프구는 T (흉선 유래) 및 B (골수 유래)이다. 이들 세포는 림프구양 발생 경로에 관련된 골수 및 태아 간의 조혈 줄기 세포로부터 유래한다. 이들 줄기 세포의 자손은 B 또는 T 림프구로 성숙하기 위해 분기하는 경로를 따른다. 인간 B 림프구 발생은 전적으로 골수 내에서 일어난다. 반면에, T 세포는 골수를 벗어난 미성숙 전구체로부터 발생하고 혈류를 통해 흉선으로 이동하여, 여기서 성숙 T 림프구로 증식하고 분화한다. 흉선 또는 골수에서 빠져나오는 성숙 림프구는 정지 또는 "휴지" 상태이고, 즉, 유사분열상 불활성이다. 혈류 내로 분산될 때, 이들 "나이브" 또는 "버진(virgin)" 림프구는 다양한 2차 또는 말초 림프 장기, 예를 들어 비장, 림프절 또는 톤실로 이동한다. 대부분의 버진 림프구는 수명이 본래 짧고, 골수 또는 흉선을 떠난 후 수일 내에 사멸한다. 그러나, 그러한 세포가 항원의 존재를 가리키는 신호를 받으면, 이들은 활성화되고 연속적인 라운드의 세포 분열을 겪을 수 있다. 이어서, 생성되는 자손 세포 중 일부는 휴지 상태로 되돌아가 기억 림프구 (본질적으로 자극 알레르겐과의 다음 마주침을 위해 제조된 B 및 T 세포)로 된다. 활성화된 버진 림프구의 다른 자손은 이펙터 세포이고, 이들은 수일 동안만 생존하지만, 특이적인 방어 활동을 수행한다. 림프구 활성화는 휴지 림프구가 자극될 때 통과하여 분할하고 자손을 생산하고, 이들 중 일부는 이펙터 세포로 되는 질서 정연한 일련의 사건을 나타낸다. 완전한 반응은 세포 증식 (유사분열)의 유도 및 면역학적 기능의 발현을 모두 포함한다. 림프구는 특이적 리간드가 그의 표면 상의 수용체에 결합할 때 활성화된다. 리간드는 T 세포 및 B 세포에 대해 상이하지만, 생성되는 세포내 생리학적 메카니즘은 유사하다. 일부 외래 항원 자체는 림프구 활성화를 유도할 수 있고, 특히 큰 중합체 항원은 B 세포 상에서 표면 이뮤노글로불린, 또는 T 세포 상에서 다른 당단백질과 가교결합한다. 그러나, 대부분의 항원은 중합체가 아니고, 심지어 B 세포에 직접 결합한 다수의 경우에도 활성화를 일으키지 못한다. 이러한 보다 흔한 항원들은 이들이 거의 활성화된 헬퍼 T 림프구와 공동자극될 때 B 세포를 활성화한다. 그러한 자극은 T 세포에 의해 분비된 림포킨으로부터 일어날 수 있지만, B 세포와 특정 B 세포 표면 수용체와 상호작용하여 2차 신호를 생성하는 T 세포 표면 단백질과의 직접 접촉에 의해 가장 효율적으로 전달된다. B. T 세포T 림프구는 이뮤노글로불린을 발현하지 않지만, 대신 T 세포 수용체 (TCR)로 불리는 표면 단백질에 의해 외래 물질의 존재를 검출한다. 이들 수용체는 직접 접촉에 의해 또는 다른 면역 세포의 활성에 영향을 미침으로써 항원을 인식한다. 대식세포와 함께, T 세포는 세포 매개 면역에 관여하는 주요 세포형이다. B 세포와는 달리, T 세포는 특이적인 맥락에서만 외래 물질을 검출할 수 있다. 특히, T-림프구는 먼저 작은 펩티드로 절단된 후, 항원 제시 세포 (APC)로 불리는 제2 숙주 세포의 표면 상에 나타나는 경우에만 외래 단백질을 인식할 것이다. 많은 유형의 숙주 세포가 일부 조건 하에서 항원을 제시할 수 있지만, 특정 유형은 그러한 목적을 위해 보다 특이적으로 개작되고, 이는 대식세포 및 다른 B 세포를 비롯해서 T 세포 활성을 제어하는데 특히 중요하다. 항원 제시는 제시 세포의 표면 상의 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 단백질로 불리는 특정 단백질에 부분적으로 의존한다. 따라서, 세포 매개 면역을 자극하기 위해, 외래 펩티드는 MHC 펩티드와 조합되어 T 세포에 제시되어야 하고, 상기 조합은 T 세포 수용체에 의해 인식되어야 한다. 2가지 중요한 T 세포 하위세트: 세포독성 T 림프구 (Tc 세포 또는 CTL) 및 헬퍼 T 세포 (TH) 세포가 존재하고, 이들은 마커 CD8 및 CD4의 세포 표면 발현에 기초하여 대략 확인될 수 있다. Tc 세포는 바이러스성 방어에 중요하고, 특정 세포 표면 발현된 바이러스성 펩티드를 인식함으로써 바이러스를 직접 치사시킬 수 있다. TH 세포는 다른 세포형의 증식, 성숙 및 면역 기능을 촉진하고, 예를 들어 B 세포, 대식세포 및 세포독성 T 세포의 활성을 제어하도록 림포킨 분비를 촉진한다. 버진 및 기억 T-림프구은 통상 휴지 상태로 남아있고, 이 상태에서 유의한 헬퍼 또는 세포독성 활성을 나타내지 않는다. 활성화되면, 이들 세포는 수 라운드의 유사분열을 겪어 딸 세포를 생산한다. 이들 딸 세포의 일부는 기억 세포로서 휴지 상태로 되돌아가지만, 다른 것은 헬퍼 또는 세포독성 활성을 활발하게 나타내는 이펙터 세포가 된다. 이들 딸 세포는 그의 모 세포를 닮는다: CD4+ 세포는 단지 CD4+ 자손만을 생산하는 한편, CD8+ 세포는 단지 CD8+ 자손만을 생산할 수 있다. 이펙터 T 세포는 휴지 T 세포 상에서 발현되지 않는 세포 표면 마커, 예컨대 CD25, CD28, CD29, CD40L, 트랜스페린 수용체 및 클래스 II MHC 단백질을 발현한다. 활성화 자극이 없어지면, 이펙터 세포는 사멸하거나 휴지 상태로 되돌아가므로 세포독성 또는 헬퍼 활성은 수일의 기간에 걸쳐 점차 감퇴한다. B 세포 활성화와 유사하게, 대부분의 항원에 대한 T-림프구 반응은 또한 2가지 유형의 동시 자극을 필요로 한다. 첫 번째 자극은 항원이고, 이는 항원 제시 세포 상의 MHC 단백질에 의해 적절하게 표시되면 T 세포 수용체가 이를 인식하고 결합할 수 있다. 상기 항원-MHC 복합체가 세포 내부로 신호를 보내지만, 이는 보통 T 세포 활성화를 일으키기에는 불충분하다. 헬퍼 T 세포에서 발생하는 것과 같은 완전한 활성화에는 항원 제시 세포의 표면 상에 발현되는 공동자극자로 불리는 다른 특이적 리간드에 의한 공동자극이 필요하다. 그 반면에, 세포독성 T 세포의 활성화는 일반적으로 활성화된 헬퍼 T 세포에 의해 분비된 시토카인 IL-2를 필요로 한다. C. 면역 반응다른 신체 방어와 구분되는 포유동물 면역계의 3가지 주요 기능적 특성은 다음을 포함한다: (1) 특이성 - 막대한 수의 표적 분자들 사이에서 개별적으로 인식하고 반응하거나 반응하지 않는 능력, (2) 식별 - 모든 무수한 단백질 및 다른 유기 물질과 평화롭게 공존하지만, 신체로 도입되는 외래 물질에 대해 여전히 격렬하게 반응하도록 비-자기로부터 자기를 결정하는 능력, 및 (3) 기억 - 특정 외래 병원체와 후속적인 마주침이 최초 마주침에서 발생한 것보다 더 신속하고 격렬한 반응을 유발시킬, 경험에 의해 형성된 능력. 하나 이상의 이러한 기능에 문제가 생기면, 병리학적 상태가 야기된다. 버진 림프구는 1차 림프 장기로부터 말초 내로 계속 방출되고, 각각은 항원 결합을 가능하게 하는 표면 수용체를 보유한다. B 세포에서 항원 결합은 표면 결합된 이뮤노글로불린을 통해 매개되는 반면, T 세포에서는 T 세포 수용체에 의해 매개된다. 버진 림프구가 활성화될 경우, 이들은 증식하여 딸 세포를 생성하고, 이들은 이어서 추가의 활성화 및 증식 사이클을 겪을 수 있다. 주어진 항원에 대한 반응의 속도 및 강도는 주로 클론 선택에 의해 결정되고: 특정 항원에 특이적인 딸 세포 또는 클론 집단이 클수록, 면역 반응에서 인식 및 참여할 수 있는 세포의 수가 더 많다. 모든 면역 반응은 복합적이고, 몇몇 세포형를 포함한 복잡하게 조절되는 사건의 연속이다. 이는 면역원이 신체에 들어와서 항원 제시 세포 (APC)로 불리는 특수한 클래스의 세포와 마주칠 때 촉발된다. 이들 APC는 소량의 면역원을 포획하여, 이를 항원 특이적 헬퍼 T-림프구가 인식할 수 있는 형태로 표시한다. 이어서, 헬퍼 T 세포는 활성화되고, 다시 다른 클래스의 림프구, 예컨대 B 세포 또는 세포독성 T 세포의 활성화를 촉진한다. 이어서, 활성화된 림프구는 증식하고 그의 특이적인 이펙터 기능을 수행한다. 상기 과정의 각 단계에서, 림프구 및 APC는 직접 접촉을 통해 또는 조절 시토카인을 분비함으로써 서로 소통한다. APC에 의해 포획된 외인성 항원은 항원 프로세싱이라 불리는 일련의 변경을 겪는다. 특히 단백질성 면역원의 그러한 프로세싱은 변성 및 부분 단백질분해적 소화를 포함하여, 면역원은 짧은 펩티드로 절단된다. 이어서, 제한된 수의 생성된 펩티드는 클래스 II MHC 단백질과 비공유적으로 회합되고, APC 표면으로 운반된다 (항원 제시로서 공지된 과정). APC와 직접 접촉하는 CD4+ 헬퍼 T 림프구는 활성화될 수 있지만, APC가 제시하는 특정 펩티드-MHC 복합체를 인식하고 결합할 수 있는 T 세포 수용체 단백질을 발현하는 경우에만 활성화할 것이다. 헬퍼 T (TH) 세포는 2개의 다른 림프 이펙터 세포: 세포독성 T (Tc) 세포 및 항체 분비 형질 세포의 활성화를 위해 필요하기 때문에 면역 반응의 주요 조정자(orchestrator)이다. TH 활성화는 면역 반응에서 초기에 일어나고, 적어도 2개의 신호를 필요로 한다. 하나의 신호는 CD3 단백질 복합체를 통해 전달되는 APC 표면 상의 항원성 펩티드-MHC 복합체에 대한 T 세포 항원 수용체의 결합에 의해 제공되는 한편, APC를 통한 제2의 공동자극 신호는 APC 상에 특이적 리간드를 갖는 T 세포 표면 상의 별개의 신호-전달 단백질의 결합으로부터 생성되는 것으로 생각된다. 하나의 공지된 그러한 상호작용은 T 세포 단백질 CD28 및 B7로서 공지된 APC 표면 단백질의 패밀리 사이의 상호작용이다. 다른 표면 단백질 쌍들이 또한 공동자극을 매개할 수 있다. 공동자극 과정을 이하에서 보다 상세하게 기재한다. 본 발명의 항-PD-L1 항체는 PD-L1을 통한 신호전달에 의해 제공되는 음성 공동자극 신호의 길항작용을 통해 공동자극을 향상시키는 것으로 여겨진다. 2개의 신호는 함께 헬퍼 T 세포가 시토카인 인터류킨-2 (IL-2)를 분비하기 시작하도록 유도하고, 또한 그의 표면 상에 특이적인 높은 친화성 IL-2 수용체를 발현하기 시작하도록 유도한다. IL-2는 T-림프구에 대한 매우 강력한 분열촉진 인자이고, 활성화된 T 세포의 증식 반응에 필수적이다. IL-2는 그가 분비된 세포에 대해 작용한다 (자가분비 효과로 공지된 현상). T 세포가 두 신호를 모두 받더라도, 그 자신의 표면 IL-2 수용체가 차단되면 증식하지 않을 것으로 추가로 밝혀졌다. IL-2는 또한 바로 근접한 세포에 대해 작용할 수 있다 (소위 측분비 (paracrine) 효과). 상기 효과는 Tc 세포를 활성화하기 위해 특히 중요하고, 이는 일반적으로 그 자신의 증식을 자극하기 위해 충분한 IL-2를 생산하지 않는다. IL-2에 추가로, 활성화된 TH 세포는 다른 시토카인을 분비하고, B 세포, 대식세포 및 다른 세포형의 성장, 분화 및 기능을 촉진한다. APC와 항원 특이적 TH 세포 사이의 접촉은 또한 APC에 대해 효과를 가지며 - 가장 중요한 것 중 하나는 IL-1의 방출이다. 이 시토카인은 자가분비 방식으로 클래스 II MHC 단백질 및 다양한 부착 분자의 표면 발현이 증가되도록 작용하여, TH 세포의 결합을 강화하고 항원 제시를 향상시키는 것으로 여겨진다. 동시에, IL-1은 측분비 방식으로 TH 세포에 대해 기능하여 IL-2 분비 및 IL-2 수용체 발현을 촉진한다. 앞서 설명된 방식으로 TH 세포의 활성화 동안, 일부 B 세포는 또한 그의 항원 수용체를 통해 면역원에 부착될 수 있고, 이는 그들이 나중에 분비할 막-결합형의 항체이다. T 세포와는 달리, B 세포는 면역원을 그의 유리 비프로세싱 형태로 인식한다. 특이적 항원 결합은 B 세포 활성화를 일으킬 수 있는 하나의 유형의 신호를 제공한다. 두 번째 유형은 활성화된 TH 세포에 의해 제공되고, 이는 그의 표면 상의 비-이뮤노글로불린 수용체에 결합함으로써 B 세포를 활성화시키는 것을 돕는 단백질을 발현한다. 그의 항원 특이성에 무관하게 임의의 B 세포에 대해 작용하는 이들 TH-유래된 신호는 헬퍼 인자로서 공지되어 있다. 이들 헬퍼 인자는 IL-2, IL-4 및 IL-6을 포함한다. 그러나, 도움은 세포-세포 접촉을 통해 보다 효율적으로 달성되고, 이는 T 세포 표면 상의 단백질이 B 세포상의 단백질에 직접 접촉하도록 허용한다. 가장 효과적인 형태의 접촉 매개된 도움은 TH 세포가 활성화된 후에만 TH 세포 상에서 발현되는 CD40 리간드 (CD40L)로 불리는 단백질이 B 세포 상의 CD40으로 불리는 단백질에 결합할 때 발생한다. 방관자(by-stander) 활성화로서 공지된 과정에서, 활성화된 B 세포와의 접촉은 그의 표면 이뮤노글로불린이 항원 내에 연결되지 않더라도 휴지 B 세포를 활성화시키기에 충분할 수 있다. Tc 림프구는 그의 표면 상에 외래 항원을 발현하는 세포, 예컨대 바이러스 감염된 숙주 세포를 근절시키는 기능을 한다. 대부분의 Tc 세포는 CD4보다는 CD8을 발현하고, 따라서 클래스 II MHC 단백질보다는 클래스 I과 회합된 항원을 인식한다. 체세포가 바이러스로 감염될 때, 일부 면역원성 바이러스성 단백질은 세포 내에서 프로세싱을 겪을 수 있고, 이어서 생성되는 펩티드는 클래스 I MHC 분자와 표면 복합체로서 보일 수 있다. 이어서, 이들 펩티드-MHC 복합체는 항원 특이적 클론의 T 세포 수용체에 의해 인식될 수 있어서, Tc 세포 활성화를 위해 필요한 2개의 신호 중 하나를 제공한다. 상기 제1 신호는 단독으로 Tc 세포 상에 고-친화성 IL-2 수용체를 유도한다. 제2 신호는 근처의 활성화된 TH 림프구로부터 분비된 IL-2에 의해 제공된다. 두 신호를 받으면, 활성화된 Tc 세포는 세포독성 활성을 수득하여, 그가 결합하는 세포 뿐만 아니라 동일한 펩티드-MHC 클래스 I 복합체를 보유하는 임의의 다른 세포를 치사시킬 수 있다. 일부 경우에, Tc가 표적 세포 상으로 특이적 독소를 방출하므로 치사가 일어나고; 다른 경우에, Tc는 표적 세포가 아폽토시스에 의해 자멸하도록 유도한다. 활성화된 Tc 세포는 또한 증식하여, 동일한 항원 특이성을 갖는 추가의 Tc 세포를 생성시킨다. D. 이뮤노글로불린 슈퍼패밀리에 의한 공동자극:1. B7.1/B7.2 - CD28/CTLA-4아마도 그 특징이 가장 잘 규명된 T 세포 공동자극 경로는 B7.1(CD80)/B7.2(CD86) - CD28/CTLA-4(CD152)를 통한 신호 중 하나일 것이다. 이 신호전달 경로는 T 세포 활성화 및 내성에 중요하다. 문헌 [Karandikar et al., J. Neuroimmunol. 89: 10-18 (1998)]; [Oosterwegal et al., Curr. Opin. Immunol. 11: 294-300 (1999)]; [Salomon et al., Annu. Rev. Immunol. 19: 225-252 (2001)]; [Sansom, D.M., Immunol. 101: 169-177 (2000)]; [Chambers et al., Annu. Rev. Immunol. 19: 565-592 (2001)].B7.1 (문헌 [Freeman et al., J. Exp. Med. 174: 625-631 (1991)]; [Freedman et al., J. Immunol. 137: 3260-3267 (1987)]; [Yokochi et al., J. Immunol. 128: 823-827 (1982)]) 및 B7.2 (문헌 [Freeman et al., Science 262: 909-911 (1993)]; [Freeman et al., J. Exp. Med. 178: 2185-2192 (1993)]; [Azuma et al., Nature 366: 76-79 (1993)])는 2종의 자극 수용체 CD-28 및 CTLA-4에 대해 이중 특이성을 갖는다. 문헌 [Aruffo et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 8573-8577 (1987)]; [Gross et al., J. Immunol. 144: 3201-3210 (1990)]. CD28은 T 세포의 표면에서 구성적으로 발현되는 반면에 (문헌 [Gross et al., J. Immunol. 149: 380-388 (1992)]), 더 높은 친화성 수용체인 CTLA-4는 T 세포 활성화 이후에 신속하게 상향조절되는 발현을 갖는다. 문헌 [Peach et al., J. Exp. Med. 180: 2049-2058 (1994)]; [Linsley et al., J. Exp. Med. 176: 1595-1604 (1992)]; [Kinsley et al., Immunity 1: 793-801 (1994)]; [Linsley et al., Immunity 4: 535-543 (1996)]. 대부분의 APC 집단은 B7.2를 구성적으로 낮은 수준으로 발현하며, 이는 신속하게 상향조절되고, 한편 B7.1은 활성화 이후에 더 늦게 유도적으로 발현된다. 문헌 [Freeman et al., Science 262: 909-911 (1993)]; [Hathcock et al., J. Exp. Med. 180: 631-640 (1994)]. B7.2의 이전 발현 및 마우스 넉아웃 데이터는 B7.2가 면역 반응을 개시하기 위한 보다 중요한 공동자극 분자이지만, 한편으로는 2 분자는 그 기능이 매우 중복됨을 시사한다. 문헌 [McAdam et al., Immuno. Rev. 165: 631-640 (1994)].CD28는 B7.1 및 B7.2와 상호작용하여 신호를 전달하고, 이는 TCR 신호와 상승작용하여 T 세포 활성화를 촉진한다. 문헌 [Lenschow et al., Annu. Rev. Immunol. 165: 233-258 (1996)]; [Lanzavecchia et al., Cell 96: 1-4 (1999)]. TCR 신호의 부재하에서, CD28 신호전달은 생리학적 중요성을 갖지 않는다. CD28 신호전달은 T 세포 활성화를 위한 역치를 조절하고, T 세포 활성화에 요구되는 TCR 부착 개수를 현저하게 감소시킨다. 문헌 [Viola et al., Science 273: 104-106 (1996)]. CD28 활성화는 T 세포 생존을 촉진하여 시토카인이 T 세포 클론 확장 및 분화를 개시할 수 있게 함으로써 T 세포 반응을 지속시킨다. 문헌 [Thompson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 1333-1337 (1989)]; [Lucas et al., J. Immunol. 154: 5757-5768 (1995)]; [Shahinian et al., Science 261: 609-612 (1993)]; [Sperling et al., J. Immunol. 157: 3909-3917 (1996)]; [Boise et al., Immunity 3: 87-98 (1995)]. CD28은 또한 이전에 활성화된 T 세포의 반응을 최적화하여, 인터류킨 2 (IL-2) 생산 및 T 세포 생존을 촉진한다. 몇몇 반응은 CD28 비의존적인데, 이것이 강력한 항원 자극으로 인한 공동자극 비의존적인지 또는 다른, 공지되지 않은 공동자극 경로에 의존한 결과인지는 아직 분명하지 않다.CTLA-4 활성화는 음성 신호를 유발하여, TCR- 및 CD-28 매개 신호 전달을 억제한다. CTLA-4 부착은 IL-2 합성의 억제, 세포 주기를 통한 진행 및 T 세포 반응의 종결을 야기한다. 문헌 [Walunas et al., Immunity 1: 405-413 (1994)]; [Walunas et al., J. Exp. Med. 183: 2541-2550 (1996)]; [Krummel et al., J. Exp. Med. 182: 459-466 (1995)]; [Brunner et al., J. Immunol. 162: 5813-5820 (1999)]; [Greenwald et al., Immunity 14: 145-155 (2001)]. CTLA-4는 말초 T 세포 내성을 비롯하여 T 세포 반응을 조절하는데 중요한 역할을 한다. 신호전달이 어떻게 CTLA-4 및 CD28을 통해 조정되는지 분명하지 않지만, 몇몇 가능성에는 면역억제 시토카인의 유도, CD28 신호전달의 직접적인 길항작용 및/또는 TCR-매개 신호전달에 의해 CD28이 B7에의 결합에 대한 경쟁에서 제외되는 것이 포함된다.그 결과, CTLA-4의 길항작용 (예를 들어, 길항제 항-CTLA 항체) 및 또는 B7.1/B7.2/CD28 효능작응은 감염 (예를 들어, 급성 및 만성) 및 종양 면역을 치료하는데 있어서 면역 반응을 향상시키는데 유용할 수 있다.2. ICOS/ICOSL 신호전달:APC 및 T 세포 사이의 상호작용의 또 다른 경로는 ICOS (CD278) 및 ICOSL (B7-H2, CD275)을 통해 일어난다. ICOS/ICOSL 신호전달은 T 헬퍼 세포 분화 및 이펙터 기능을 촉진하고, 인터류킨-10 (IL-10) 생산을 위해 특히 중요하지만, T 세포, T 세포 내성 및 자가면역을 조절하는 것을 비롯해서 T 세포 확장 및 IL-2 생산을 조절하는데 보다 적절한 역할을 한다.CD28과 대조적으로, ICOS는 나이브 T 세포에서 구성적으로 발현되지 않지만, TCR 부착 이후에 T 세포 상에서 신속하게 유도된다. 문헌 [Hutloff et al., Nature 397: 263-266 (1999)]; [Yoshinaga et al., Nature 402: 827-832 (1999)]; [Beier et al., Eur. J. Immunol. 30: 3707-3717 (2000)]; [Coyle et al., Immunity 13: 95-105 (2000)]; [Mages et al., Eur. J. Immunol. 30: 1040-1047 (2000)]; [McAdam et al., J. Immunol. 165: 5035-5040 (2000)]. 이는 ICOS가 활성화된 T 세포에 공동자극 신호를 제공함을 시사한다. CD28에 의한 공동자극이 ICOS 발현을 향상시키고, ICOS 발현은 B7.1 및 B7.2의 부재하에서 감소되므로, ICOS는 CD28 신호에 전적으로 의존하지 않는다. 문헌 [McAdam et al., J. Immunol. 165: 5035-5040 (2000)]; [Aicher et al., J. Immunol. 164: 4689-4696 (2000)]; [Kopf et al., J. Exp. Med. 192: 53-61 (2000)]. ICOS는 초기 단계의 분화 동안 T 헬퍼 유형 1 및 2 (TH1 및 TH2) 세포 둘 모두에서 상향조절되지만, TH2 세포 상에서는 높은 수준을 유지하고 TH1 세포 상에서는 낮은 수준을 유지한다. T 세포 상에서의 ICOS의 발현 패턴은 배 중심이다. 문헌 [Beier et al., Eur. J. Immunol. 30: 3707-3717 (2000)]; [Mages et al., Eur. J. Immunol. 30: 1040-1047 (2000)]은 B 세포에 대한 T 세포 도움에 있어서의 ICOS의 역할을 나타낸다. 기능 연구를 통해 이를 확인하였고, 심지어 ICOS의 발현은 래트 B 세포에서도 확인되었지만, 다른 종에서는 그렇지 않았다. 문헌 [Tezuka et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 276: 335-345 (2000: McAdam et al., Nature 409: 102-105 (2001)]; [Dong et al., Nature 409: 97-101 (2001)]; [Dong et al., J. Immunol. 166: 3659-3662 (2001)]; [Tafuri et al., Nature 409: 105-109 (2001)].ICOS/ICOSL 신호전달의 한가지 역할은 직전에 활성화되었을 뿐만 아니라 이펙터인 T 세포에 의해 시토카인 생산 (예를 들어, IL-4, IL-13)을 조절하는 것으로 보인다. 문헌 [Hutloff et al., Nature 397: 263-266 (1999)]; [Coyle et al., Immunity 13: 95-105 (2000)]; [Dong et al., Nature 409: 97-101 (2001)]. 알레르기성 기도 질환 연구에서, TH2 이펙터 기능은 ICOS 차단에 의해 제공되지만 TH2 분화는 그렇지 않았다. 문헌 [Tesciuba et al., J. Immunol. 167: 1996-2003 (2001)]. ICOS가 또한 TH1 이펙터 기능을 조절할 수 있다는 것은, 시험관내에서의 재활성화시에 TH1 및 TH2 시토카인 둘 모두의 생산이 ICOS-Ig 융합 단백질에 의해 억제될 수 있음을 나타낸다. 문헌 [Kopf et al., J. Exp. Med. 192: 53-61 (2000)].ICOS의 또 다른 잠재적인 역할은 TH1 반응을 지속시키는 것과 관련이 있다. 다발성 경화증에 대한 자가면역성 뇌척수염 (EAE) 실험 모델에서, 미엘린 특이적 CD4+ T 세포에 의해 매개되는 TH1 질환은 ICOS 차단의 결과가 T 세포 초회감작에 이은 EAE의 이펙터 기 동안 공동자극이 차단될 때 분명해질 수 있음을 보여준다. 문헌 [Dong et al., Nature 409: 97-101 (2001)]; [Rottman et al., Nature Immunol. 2: 605-611 (2001)]; [Sporici et al., Clin. Immunol. 100: 277-288 (2001)]. 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질 (MOG)에 의해 유도된 EAE는 ICOS-/- 넉아웃 마우스에서 매우 악화되고 IFN-γ의 생산이 야생형에 비해 증가된다. 유사하게, EAE 유도 동안의 ICOS 차단은 또한 IFN-γ 생산을 증가시켜 질환을 악화시킨다. 따라서, 초회감작 동안의 ICOS 차단은 반응의 TH1 분극화를 야기한다. 흥미롭게도, 시험관내 ICOS-Ig의 존재하에서의 미엘린-특이적 TCR 트랜스제닉 T 세포의 초회감작은 생체내에서 관찰된 ICOS-Ig 차단 결과와는 극명하게 대조적으로 EAE를 유도하는 그의 능력을 억제하였다. 문헌 [Sporici et al., 상기 문헌]. 시험관내 및 생체내에서의 반대되는 결과의 차이는 아직 분명하지 않지만, 생체내 ICOS 차단 동안의 IL-10 생산 조절 T 세포, 뿐만 아니라 이펙터 T 세포에 대한 ICOS의 역할을 반영할 수 있다. IL-10을 통한 공동자극은 IL-10 생산을 향상시키는데 매우 효과적이며, CD28을 통한 공동자극에 비해 더 효과적이다. 문헌 [Hutloff et al., 상기 문헌]. IL-10 -/- 마우스가 악화된 EAE를 발생하기 때문에 (그러나 IL4 -/- 마우스는 그러하지 않음) IL-10, IL-12 조절 루프는 EAE를 조절하는데 있어서 중요하다. 문헌 [Segal et al., J. Exp. Med. 187: 537-546 (1998)].ICOS의 또 다른 잠재적인 역할은 T 세포 의존성 B 세포 체액 반응을 향상시키는 것이다. ICOS-/- 및 ICOSL-/- 마우스는 ICOS가 T 세포 의존성 B 세포 반응에 요구됨을 나타내었다. 문헌 [Hutloff et al., Nature 397:263-66 (1999)]; [Chapoval et al., Nat. Immunol. 2:269-74 (2001)]; [Coyle et al., Immunity 13: 95-105 (2000)]; [McAdam et al., Nature 409: 102-5 (2001)]; [Tafuri et al., Nature 409: 105-9 (2001)]; [Suh et al., Nat. Immunol. 4:899-906 (2003)]. ICOS-/- 마우스는 또한 1차 면역화에 반응하여 감소된 배중심, 2차 접종에 반응하여 배중심 형성의 엄청난 결손, 및 IgG 클래스 전환에 있어서의 결손을 나타낸다. T:B 세포 상호작용에 있어서의 ICOS의 역할은 성인 발병성 공통 가변성 면역결핍 질환 환자에서 T 세포에서의 ICOS의 동질접합체 손실을 확인한 것에 의해 추가로 밝혀졌다. 문헌 [Grimbacher et al., Nat. Immunol. 4: 261-68 (2003)].그 결과, ICOS/ICOSL의 효능작용 (예를 들어, 효능제 항-ICOS 항체, 가용성 ICOS/ICOSL 리간드)은 감염 (예를 들어, 급성 및 만성) 및/또는 종양 면역을 치료하는데 있어서 면역 반응을 향상시키는데 유용할 수 있다.3. PD-1 경로:T 세포 활성화를 조절하는 중요한 음성 공동자극 신호는 프로그램화된 사멸 - 1 수용체 (PD-1)(CD279), 및 그의 리간드 결합 파트너 PD-L1 (B7-H1, CD274) 및 PD-L2 (B7-DC, CD273)에 의해 제공된다. PD-1의 음성 조절 역할은 자가면역되기 쉬운 PD-1 넉아웃 (Pdcd1-/-)에 의해 밝혀졌다. 문헌 [Nishimura et al., Immunity 11: 141-51 (1999)]; [Nishimura et al., Science 291: 319-22 (2001)]. PD-1은 CD28 및 CTLA-4와 관련이 있지만, 동종이량체화를 가능하게 하는 막 인접 시스테인이 결여되어 있다. PD-1의 세포질 도메인은 면역수용체 티로신-기재 억제 모티프 (ITIM, V/IxYxxL/V)를 함유한다. PD-1는 PD-L1 및 PD-L2와만 결합한다. 문헌 [Freeman et al., J. Exp. Med. 192: 1-9 (2000)]; [Dong et al., Nature Med. 5: 1365-1369 (1999)]; [Latchman et al., Nature Immunol. 2: 261-268 (2001)]; [Tseng et al., J. Exp. Med. 193: 839-846 (2001)].PD-1은 T 세포, B 세포, 자연 살해 T 세포, 활성화된 단핵구 및 수지상 세포 (DC)에서 발현될 수 있다. PD-1은 활성화된 인간 CD4+ 및 CD8+ T 세포, B 세포 및 골수 세포에 의해서는 발현되지만, 비자극된 인간 CD4+ 및 CD8+ T 세포, B 세포 및 골수 세포에 의해서는 그렇지 않다. 이는 보다 제한된 CD28 및 CTLA-4 발현과 대조적이다. 문헌 [Nishimura et al., Int. Immunol. 8: 773-80 (1996)]; [Boettler et al., J. Virol. 80: 3532-40 (2006)]. (i) 엑손 2, (ii) 엑손 3, (iii) 엑손 2 및 3 또는 (iv) 엑손 2 내지 4가 결여된 전사체를 비롯하여, 활성화된 인간 T 세포로부터 클로닝된 적어도 4 종의 PD-1 변이체가 존재한다. 문헌 [Nielsen et al., Cell. Immunol. 235: 109-16 (2005)]. PD-1Δex3을 제외하고, 휴지 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)에서 모든 변이체는 전장 PD-1과 유사한 수준으로 발현된다. 모든 변이체의 발현은 항-CD3 및 항-CD28에 의한 인간 T 세포의 활성화시에 상당히 유도된다. PD-1Δex3 변이체는 막횡단 도메인이 결여되어 있고, 자가면역에서 중요한 역할을 하는 가용성 CTLA-4와 유사하다. 문헌 [Ueda et al., Nature 423: 506-11 (2003)]. 이 변이체는 류마티스 관절염 환자의 활액 및 혈청에서 풍부해진다. 문헌 [Wan et al., J. Immunol. 177: 8844-50 (2006)]. 2 종의 PD-1 리간드는 그의 발현 패턴에 있어서 상이하다. PD-L1은 마우스 T 및 B 세포, CD, 대식세포, 중간엽 줄기 세포 및 골수-유래 비만 세포에서 구성적으로 발현된다. 문헌 [Yamazaki et al., J. Immunol. 169: 5538-45 (2002)]. PD-L1은 넓은 범위의 비조혈 세포 (예를 들어, 각막, 폐, 혈관 상피, 간 비실질 세포, 중간엽 줄기 세포, 췌장 도세포, 태반 융합세포영양막, 각질세포 등)에서 발현되고 (문헌 [Keir et al., Annu. Rev. Immunol. 26: 677-704 (2008)]), 활성화 이후에 다수의 세포형에서 상향조절된다. 유형 I 및 유형 II 인터페론 (IFN)은 둘 모두 PD-L1을 상향조절한다. 문헌 [Eppihimer et al., Microcirculation 9: 133-45 (2002)]; [Schreiner et al., J. Neuroimmunol. 155: 172-82 (2004)]. 세포주에서의 PD-L1 발현은 MyD88, TRAF6 및 MEK가 억제될 경우 감소된다. 문헌 [Liu et al., Blood 110: 296-304 (2007)]. JAK2도 또한 PD-L1 유도와 관련이 있다. 문헌 [Lee et al., FEBS Lett. 580: 755-62 (2006)]; [Liu et al., Blood 110: 296-304 (2007)]. 포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI3K) 및 Akt 신호전달을 변형시키는 세포성 포스파타제인 포스파타제 및 텐신 상동체 (PTEN)의 손실 또는 억제는 암에서 전사후 PD-L1 발현을 증가시킨다. 문헌 [Parsa et al., Nat. Med. 13: 84-88 (2007)].PD-L2 발현은 PD-L1 보다 제한적이다. PD-L2는 DC, 대식세포, 및 골수 유래 비만 세포에서 유도적으로 발현된다. PD-L2는 또한 2/3의 휴지 복막 B1 세포의 약 절반에서 발현되지만, 통상의 B2 B 세포에서는 발현되지 않는다. 문헌 [Zhong et al., Eur.J. Immunol. 37: 2405-10 (2007)]. PD-L2+ B1 세포는 포스파티딜콜린에 결합하고, 박테리아 항원에 대한 선천적인 면역 반응에 중요할 수 있다. IFN-γ에 의한 PD-L2의 유도는 NF-κB에 부분적으로 의존적이다. 문헌 [Liang et al., Eur. J. Immunol. 33: 2706-16 (2003)]. PD-L2는 또한 GM-CF, IL-4 및 IFN-γ에 의해 단핵구 및 대식세포에서 유도될 수 있다. 문헌 [Yamazaki et al., J. Immunol. 169: 5538-45 (2002)]; [Loke et al., PNAS 100:5336-41 (2003)].PD-1 신호전달은 전형적으로 세포 증식보다 시토카인 생산에 더 큰 효과를 가지며, IFN-γ, TNF-α 및 IL-2 생산에 대해 현저한 효과를 갖는다. PD-1 매개 억제성 신호전달은 또한 TCR 신호전달의 강도에 의존적이며, 낮은 수준의 TCR 자극에서 큰 억제가 전달된다. 이러한 감소는 CD28을 통한 공동자극에 의해 (문헌 [Freeman et al., J. Exp. Med. 192: 1027-34 (2000)]) 또는 IL-2의 존재에 의해 (문헌 [Carter et al., Eur. J. Immunol. 32: 634-43 (2002)]) 극복될 수 있다.PD-L1 및 PD-L2를 통한 신호전달이 양방향성일 수 있다는 증거가 갖춰지고 있다. 즉, TCR 또는 BCR 신호전달을 변형하는 것에 더하여, 신호전달은 또한 PD-L1 및 PD-L2를 발현하는 세포로 되돌려질 수 있다. 수지상 세포를 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 환자로부터 단리한 천연 인간 항-PD-L2 항체로 처리하는 것에 의해 MHC II 또는 B7 공동자극 분자가 상향조절되는 것은 발견되지 않은 반면, 그러한 세포는 전염증성 시토카인, 특히 TNF-α 및 IL-6을 대량으로 생산하고, T 세포 증식을 자극한다. 문헌 [Nguyen et al., J. Exp. Med. 196: 1393-98 (2002)]. 마우스를 이러한 항체로 처리하는 것은 또한 (1) 이식된 b16 흑색종에 대한 내성을 향상시키고, 종양 특이적 CTL을 급속하게 유도하였고 (문헌 [Radhakrishnan et al., J. Immunol. 170: 1830-38 (2003)]; [Radhakrishnan et al., Cancer Res. 64: 4965-72 (2004)]; [Heckman et al., Eur. J. Immunol. 37: 1827-35 (2007)]); (2) 알레르기성 천식 마우스 모델에서 기도 염증성 질환의 발생을 차단하였다. 문헌 [Radhakrishnan et al., J. Immunol. 173: 1360-65 (2004)]; [Radhakrishnan et al., J. Allergy Clin. Immunol. 116: 668-74 (2005)].수지상 세포 ("DC")로의 역 신호전달의 추가의 증거는 가용성 PD-1 (Ig 불변 영역에 융합된 PD-1 EC 도메인 - "s-PD-1")와 함께 배양한 골수 유래 DC의 연구로부터 나왔다. 문헌 [Kuipers et al., Eur. J. Immunol. 36: 2472-82 (2006)]. 상기 sPD-1은 항-PD-1의 투여를 통해 가역적인 방식으로 DC 활성화를 억제하였고, IL-10 생산을 증가시켰다. 또한, 여러 연구는 PD-L1 또는 PD-L2 수용체가 PD-1에 독립적임을 보여준다. B7.1은 PD-L1 결합 파트너로서 이미 확인되었다. 문헌 [Butte et al., Immunity 27: 111-22 (2007)]. 화학적 가교 연구는 PD-L1 및 B7.1이 그들의 IgV-유사 도메인을 통해 상호작용할 수 있음을 시사한다. B7.1:PD-L1 상호작용은 T 세포에 대해 억제 신호를 유도할 수 있다. B7.1에 의한 CD4+ T 세포 상에의 PD-L1의 라이게이션 또는 PD-L1에 의한 CD4+ T 세포 상에의 B7.1의 라이게이션은 억제 신호를 전달한다. CD28 및 CTLA-4가 결여된 T 세포는 항-CD3 플러스 B7.1 코팅 비드에 의한 자극시 감소된 증식 및 시토카인 생산을 보인다. B7.1에 대한 모든 수용체 (즉, CD28, CTLA-4 및 PD-L1)가 결여된 T 세포에서, T 세포 증식 및 시토카인 생산은 항-CD3 플러스 B7.1 코팅 비드에 의해 더 이상 억제되지 않는다. 이는 B7.1이 CD28 및 CTLA-4의 부재하에 T 세포 상의 PD-L1을 통해 특이적으로 작용함을 나타낸다. 유사하게, PD-1이 결여된 T 세포는 항-CD3 플러스 PD-L1 코팅 비드의 존재하에서의 자극시에 감소된 증식 및 시토카인 생산을 나타내었는데, 이는 T 세포 상의 B7.1에 대한 PD-L1 라이게이션의 억제 효과를 보여준다. T 세포에서 PD-L1에 대한 공지된 모든 수용체가 결여된 경우 (즉, PD-1 및 B7.1이 없음), T 세포 증식은 더 이상 항-CD3 플러스 PD-L1 코팅 비드에 의해 악화되지 않는다. 즉, PD-L1은 B7.1 또는 PD-1을 통해 T 세포에 대해 억제 효과를 발휘할 수 있다.B7.1 및 PD-L1 사이의 직접 상호작용은 공동자극에 대한 현재의 이해가 불완전함을 시사하며, T 세포 상에서의 이러한 분자의 발현에 대한 중요성을 강조한다. PD-L1-/- T 세포의 연구는 T 세포 상의 PD-L1이 T 세포 시토카인 생산을 하향조절할 수 있음을 보여준다. 문헌 [Latchman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101: 10691-96 (2004)]. PD-L1 및 B7.1이 둘 모두 T 세포, B 세포, DC 및 대식세포에서 발현되기 때문에, 이들 세포형에서 B7.1 및 PD-L1 사이의 지향성 상호작용에 대한 가능성이 존재한다. 또한, 비조혈 세포 상의 PD-L1은 T 세포 상의 B7.1 뿐만 아니라 PD-1과도 상호작용할 수 있는데, 따라서 PD-L1이 이들의 조절에 관련이 있는지 여부가 의문시된다. B7.1:PD-L1 상호작용의 억제 효과에 대한 한가지 가능한 설명은 T 세포 PD-L1이 APC B7.1을 CD28과의 상호작용으로부터 가두거나 분리할 수 있다는 것이다.그 결과, PD-L1을 PD-1, B7.1 또는 둘 모두와의 상호작용으로부터 차단하여 PD-L1이 T 세포 및 다른 항원 제시 세포에 음성 공동자극 신호를 전달하는 것을 막는 것을 비롯한 PD-L1을 통한 신호전달의 길항작용은 감염 (예를 들어, 급성 및 만성) 및 종양 면역에 대한 면역을 향상시킬 것이다. 또한, 본 발명의 항-PD-L1 항체는 PD-1:PD-L1 신호전달의 다른 성분의 길항제, 예를 들어 길항제 항-PD-1 및 항-PD-L2 항체와 조합될 수 있다. 4. B7-H3공동자극 신호는 또한 림프양 및 비림프양 조직에서 널리 발현되는 B7-H3 (B7RP-2, CD276, PRO352)을 통해 제공된다. 문헌 [Chapoval et al., Nat. Immunol. 2: 269-74 (2001)]. 인간에서, B7-H3은 4Ig 및 2Ig 변이체를 둘 모두 갖고 4Ig 형태가 우세한 반면, 마우스에서는 2Ig 변이체가 우세하다. 문헌 [Sun et al., J. Immunol. 168: 6294-97 (2002)]; [Steinberger et al., J. Immunol. 172: 2352-59 (2004)]; [Ling et al., Genomics 82: 365-77 (2003)].최근의 연구는 B7-H3이 T 세포 반응의 자극제이면서 억제제임을 보여준다. 자극 활성화의 증거는 다음과 같이 제공된다: (1) 항-CD3과 조합되어, B7-H3/Ig 융합체는 CD4+ 및 CD8+ T 세포 증식을 공동자극하고, IFN-γ 및 CD8 용해 활성을 자극하였고 (문헌 [Chapoval et al., Nat. Immunol. 2: 269-74 (2001)]); (2) EL-4 림프종 모델의 종양에 B7-H3 발현 플라스미드를 주사한 결과 50％의 종양이 완전히 퇴화되었다 (CD8+ T 세포 및 NK 세포에 의존적임). 그러나, 몇몇 최근 연구는 이러한 분자의 억제 역할을 보여준다. B7-H3-/- APC 넉아웃은 MLR 반응에서 이형반응성 T 세포 증식을 2배 증가시키는 것으로 나타났다. 항-CD3 및 항-CD28에 의한 CD4 T 세포의 활성화는 B7-H3 형태에 의해 형질감염된 HLA-DR2에서 억제되었다. 문헌 [Ling et al., Genomics 82: 365-77 (2003)]. 그 결과 IFN-γ, TNF-α, IL-10 및 GM-CSF의 증식 및 생산이 감소되었다. 이러한 연구를 조화시키는 것은, CD28 및 CTLA-4가 B7.1 및 B7.2를 통해 어떻게 신호전달을 조절하는지와 유사하게, 반대되는 기능을 갖는 B7-H3에 대한 2종의 수용체의 존재하에서 이루어질 수 있다. 그 결과, B7-H3 신호전달의 차단은 본 발명의 항-PD-L1 항체와 조합할 경우 감염 및 종양 면역에 대한 면역 반응을 향상시키는데 기여할 수 있다.5. B7-H4가장 최근에 B7 패밀리에 포함된 것은 B7-H4 (B7x, B7-S1, B7-H.5, VTCN1, PRO1291)로서, 이것은 T 세포 반응의 음성 조절자이다. 문헌 [Zang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100 (18), 10388-10392 (2003)]; [Watanabe et al., Nat. Immunol. 4 (7), 670-679 (2003)]; [Prasad, et al., Immunity 18(6), 863-873 (2003)]; [Sica et al., Immunity 18 (6), 849-861 (2003)]. 인간 및 마우스 B7-H4는 둘 모두 림프양 (비장 및 흉선) 및 비림프양 장기 (폐, 간, 고환, 난소, 태반, 골격근, 췌장 및 소장 포함) 둘 모두에서 널리 발현된다. B7-H4는 IHC 또는 번역 수준에서의 B7-H4의 조절에 의해서는 정상 인간 조직에서 검출되지 않는다. IHC는 B7-H4가 폐 및 난소 종양에서 고도로 발현됨을 나타내었고, 실시간 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR) 분석은 마우스 B7-H4도 역시 전립선, 폐 및 결장 암종 세포주에서 고도로 발현됨을 보여주었다. B7-H4는 CTLA-4, ICOS, PD-1 및 B7-H3에 대한 수용체와 달리, 활성화되었지만 나이브 T 세포가 아닌, 아직 알려지지 않은 수용체에 결합한다. BTLA가 B7-H4에 대한 리간드인 것으로 처음에 보고되었지만, 야생형 (그러나 BTLA-/- 세포는 아님)에 대한 B7-H4/Ig 융합체의 결합에 대한 보고는 HVEM이 B7-H4에 대한 특유한 리간드이고 BTLA는 그렇지 않다는 결론을 내리게 한다. 문헌 [Sedy et al., Nat. Immunol. 6: 90-98 (2004)].B7-H4 형질감염체 및 고정된 B7-H4/Ig 융합체에 의한 연구는 B7-H4가 TCR-매개 CD4+ 및 CD8+ T 세포 증식, G0/G1 상에서의 세포 주기 진행, 및 IL-2 생산을 억제하는 신호를 전달하는 것으로 밝혀내었다. 문헌 [Sica et al., Immunity 18: 849-61 (2003)]; [Zang et al., PNAS 100: 10388-92 (2003)]; [Prasad et al., Immunity 18: 863-73 (2003)]. B7.1 공동자극은 B7-H4/Ig 유도된 억제를 극복할 수 없다. 항-B7-H4 항체를 차단하면 시험관내 T 세포 증식 및 IL-2 생산이 증가된다. 완전 프로인트 아주반트 (CFA) 중의 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH)의 투여와 상응하는 생체내 항-B7-H4 항체의 투여는 항-KLH 항체 IgM의 생산을 약간 증가시켰고, 시험관내에서 KLH로 재자극하면 T 세포 증식 및 IL-2 생산을 2배 내지 3배 증가시켰는데, 이는 항-B7-H4의 존재하에서 생체내 T 세포 초회감작이 더 높아짐을 시사한다. 항-B7-H4 차단 항체는 항-B7-H4 처리된 자가면역 마우스 모델의 뇌에서 증가된 CD4+ 및 CD8+ T 세포 및 CD11b+ 대식세포에서 EAE의 개시 및 중증도를 현저하게 가속화시켰다. B7-H4에 대해 이용가능한 실험 데이터를 조합한 것은 이것이 말초 조직에서 면역 반응을 하향조절할 수 있으며, T 세포 내성을 조절하는데 소정의 역할을 한다는 것을 시사한다. B7-H4의 발현은 또한 종양 면역에 있어서 숙주 면역 반응의 회피에 소정의 역할을 할 수 있다. 문헌 [Choi et al., J. Immunol. 171: 4650-54 (2003)]. 그 결과, B7-H4의 길항작용은 본 발명의 항-PD-L1 항체와 조합될 경우 감염 및 종양 면역에 대한 면역 반응을 향상시키는데 유용할 수 있다.6. BTLA:B7 패밀리 구성원 BTLA (CD272, BTLA-1)는 PD-1 및 CTLA와 기능적으로 유사하다. Th1 세포에 대한 선별 마커로서 초기에 확인된 BTLA는 림프구에서만 발현된다. CTLA-4, ICOS 및 PD-1와 유사하게, BTLA는 활성화 동안에 T 세포에서 유도된다. 그러나, Th2-세포 상에서 상승된 채로 존재하지만 Th1 세포에서는 하향조절되는 ICOS와 대조적으로, BTLA는 Th1-세포에서 발현된 채로 존재하지만 Th2-세포에서는 그렇지 않다. PD-1과 유사하게, BTLA는 또한 B 세포에서 발현된다. 문헌 [Gavrieli et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 312: 1236-43 (2003)]. 그러나, BTLA는 휴지 및 활성화 B 세포 둘 모두에서 발현되지만, PD-1은 활성화된 B 세포에서 상향조절된다. BTLA는 2개의 ITIM 모티프를 갖는다. BTLA는 B 및 T 림프구 둘 모두에 대해 억제 효과를 발휘한다. 문헌 [Watanabe et al., Nat. Immunol. 4: 670-79 (2003)]. BLTA-/- B 세포는 항-IgM에 대해 미진한 반응을 나타내지만, 시험관내에서 항-CD3에 대해 증가된 반응을 나타낸다. 극성 BTLA-/- Th1 세포는 시험관 내에서 항원 노출에 반응하여 증식이 약 2배 증가되는 것으로 나타났다. 생체내에서, BTLA-/- 마우스는 합텐 특이적 항체 반응에서 3배 증가를 나타내었고, EAE에 대해 향상된 감수성을 나타내었다. BTLA-/- 마우스의 표현형은 자가면역에 대해 증가된 감수성을 나타내는 PD-1-/- 마우스의 표현형과 유사하였지만, CTLA-4-/- 마우스에 비해 더 감지하기 어려운 표현형이었다. 그러나, 음성 조절자로서의 그의 역할을 고려할 때, BTLA의 차단은 본 발명의 항-PD-L1 항체와 조합될 경우 감염 및 항종양 면역에서의 면역 반응을 향상시키는데 유용한 것으로 판명될 수 있다.흥미롭게도, Ig 슈퍼패밀리 구성원 BTLA가 또한 TNFR 패밀리 구성원 HVEM와도 상호작용하는 것이 최근에 밝혀졌다. 문헌 [Sedy et al., Nat. Immunol. 6: 90-98 (2005)]; [Gonzalez et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 1116-1121 (2005)]. HVEM은 이하의 TNFR 패밀리 공동자극제 하에서 고찰한다.E. TNFR 패밀리 공동자극제1. OX40/OX40L (CD134)OX40 (CD134, TXPG1L, TNFRSF4) 및 OX40L (CD134L, CD252, GP34, TNFSF4, TXGP1) 결핍 마우스는 바이러스성 및 공통 단백질 항원 둘 모두에 대해 그리고 접촉 과민 반응에서 감소된 1차 CD4+ T 세포 반응을 갖는다. 문헌 [Chen et al., Immunity 11: 689-698 (1999)]; [Kopf et al., Immunity 11: 699-708 (1999)]; [Murata et al., J. Exp. Med. 191: 365-374 (2000)]; [Gramaglia et al., J. Immunol. 165: 3043-3050 (2000)]. 1차 반응에서 낮은 빈도의 항원 특이적 이펙터 T 세포가 나중에 생성되고, 더 적은 개수의 기억 T 세포가 발생한다. 문헌 [Gramaglia et al., 상기 문헌]. CD27 결핍 T 세포와 대조적으로, OX40이 결핍된 나이브 CD4+ T 세포 증식에서 초기 증식은 손상되지 않는다. 그러나, 활성화 4-5일 후에 감소된 증식 및 뚜렷한 아폽토시스성 세포 사멸이 발생하며, T 세포가 거의 장기간 생존하지 못한다. 문헌 [Rogers et al., Immunity 15: 445-455 (2001)]. OX40-결핍 CD8+ T 세포에 의해, 초기 세포 분열은 영향을 받지 않지만, 1차 이펙터 세포의 축적은 항원과 접촉하고 3-6일 이후에 현저하게 감소된다. 문헌 [Croft et al., Nat. Immunol. 3: 609-620 (2003)].수지상 세포 또는 T 세포에 의한 OX40L의 트랜스제닉 발현은 항원-반응 CD4+ T 세포의 개수를 증가시키고, 이상 T 세포 활성과 관련이 있는 자가면역-유사 증상을 야기한다. 문헌 [Brocker et al., Eur.J. Immunol. 29:1610-1616 (1999)]; [Murata et al., J. Immunol. 169: 4628-4636 (2002)]. 면역화 이후에, 효능제 항-OX40 항체를 주사하면 1차 반응의 정점에서 보다 많은 개수의 항원-반응성 CD4+ T 세포가 축적되고, 생성되는 기억 T 세포의 개수가 함께 향상된다. 문헌 [Gramaglia et al., 상기 문헌], [Bansai-Pakala et al., Nature Med. 7: 907-912 (2001)], [Maxwell et al., J. Immunol. 164: 107-112 (2000)]; [Weatherill et al., Cell. Immunol. 209: 63-75 (2001)]. 1차 이펙터 CTL의 향상된 축적은 항원-초회감작 마우스를 OX40에 대해 특이적인 효능제 항체로 처리한 경우에 발생한다. 문헌 [De Smedt et al., J. Immunol. 168: 661-670 (2002)].OX40은 1차 면역 반응의 정점에서 새롭게 생성된 이펙터 세포의 생존을 가능하게 하는 후기 작용 신호를 제공하는 것으로 보인다. 또한, OX40이 CD28로부터 하류에서 기능한다는 타당한 증거가 존재하며 - OX40의 증가된 발현이 CD28 신호에 의해 매개되는 것에 더하여, CD28 결핍 대 OX40 결핍의 기능 분석으로 초기 1차 T 세포 반응이 CD28 신호의 부재하에서 현저하게 손상되지만, 후기 반응만은 OX40 신호의 부재하에서 손상되는 것으로 밝혀졌다. 문헌 [Rogers et al., Immunity 15: 445-455 (2001)]; [Bertram et al., J. Immunol. 168: 3777-3785 (2002)].그 결과, 예컨대 효능제 항체를 적용하는 것을 통한 OX40/OX40L의 활성화는 본 발명의 항-PD-L1 항체와 조합될 경우 T 세포 기능이상 장애를 치료하는데 유용할 수 있을 것으로 보인다. 2. 4-1BB (CD137)/4-1BBLOX40/OX40L과 유사하게, 4-1BB (CD137, TNFRSF9) 및 4-1BBL (TNFSF9)이 결핍된 T 세포는 4-1BBL의 부재시에 1차 반응에서 더 적은 항원-반응성 CD8+ T 세포 축적 및 더 적은 기억 T 세포 발생을 나타낸다. 문헌 [DeBenedette et al., J. Immunol. 163: 4833-4841 (1999)]; [Tan et al., J. Immunol. 163: 4859-4868 (1999)]; [Tan et al., J. Immunol. 164: 2320-2325 (2000)]. 또한, 4-1BBL의 차단은 CD8+ T 세포의 초기 증식 반응을 변경시키지 않지만, 3-6 일 후의 1차 반응의 정점에서 이펙터 CTL의 축적을 억제하는데, 이는 수회 분열된 세포의 아폽토시스로 인한 것이다. 문헌 [Cooper et al., Eur. J. Immunol. 32: 521-529 (2002)]. 효능제 항-4-1BB 항체 및 항-4-1BBL-형질감염된 APC는 또한 유사한 결과로 생성되고: CTL 및 CD4+ T 세포 반응은 생체내에서 현저하게 증가된다. 문헌 [Melero et al., Nature Med. 3: 682-685 (1997)]; [Melero et al., Eur. J. Immunol. 28: 1116-1121 (1998)]; [Takahashi et al., J. Immunol. 162: 5037-5040 (1999)]; [Guinn et al., J. Immunol. 162: 5003-5010 (1999)]; [Halstead et al., Nature Immunol. 3: 536-541 (2002)]; [Takahashi et al., Immunol. Lett. 76: 183-191 (2001)]; [Bansal-Pakala et al., J. Immunol. 169: 5005-5009 (2002)]. 4-1BB-특이적 항체는 초기 증식 반응을 변경시키지 않는데, 이는 4-1BBL 차단 실험으로부터의 결론을 지지하며, 세포 생존 신호를 공급하는데 있어서 4-1BB의 후기 활성을 나타낸다.OX40과 같이, 4-1BB도 1차 면역 반응의 정점에서 새롭게 생성된 이펙터 세포의 생존을 가능하게 하는 후기 작용 신호를 제공하는 것으로 여겨진다. 또한, 4-1BB이 CD28 보다 나중에 기능한다는 타당한 증거가 존재하며 - OX40 및 4-1BB의 증가된 발현이 CD28 신호에 의해 매개되는 것에 더하여, CD28 결핍 대 4-1BB 결핍의 기능 분석으로 초기 1차 T 세포 반응이 CD28 신호의 부재하에서 현저하게 손상되지만, 후기 반응만은 OX40 신호의 부재하에서 손상되는 것으로 밝혀졌다. 문헌 [Rogers et al., Immunity 15: 445-455 (2001)]; [Bertram et al., J. Immunol. 168: 3777-3785 (2002)].효능제 항-CD137 항체는 CD8+ CTL이 중추적인 역할을 하는 암에서 종양 퇴화를 유도할 수 있다. 문헌 [Melero et al., Nat. Med. 3: 682-5 (1997)]; [Hirano et al., Cancer Res. 65(3): 1089-96 (2005)]. PD-L1의 구성적 및 유도적 발현은 PD-L1의 차단에 대해 가역적인 그러한 종양에 내성을 부여한다. 문헌 [Hirano et al.].그 결과, 예컨대 효능제 항체를 적용하는 것을 통한 4-1BB/4-BBL의 활성화는, 특히 PD-L1 길항제 (예를 들어, 항-PD-L1 항체)와 조합되어 T 세포 기능이상 장애를 치료하는데 유용할 수 있을 것으로 보인다.3. CD27/CD27L (CD70)T 세포 반응의 초기 단계에서의 CD27 (TNFRSF7, S152) 및 CD27L (CD70, TNFSF7) 신호전달의 중요성은 CD27/CD70 상호작용을 방해한 시험관내 차단 연구에서 밝혀졌다. 문헌 [Oshima et al., Int. Immunol. 10: 517-526 (1998)]; [Agematsu et al., J. Immunol. 153: 1421-1429 (1994)]; [Hintzen et al., J. Immunol. 154: 2612-2623 (1995)]. CD27이 결여된 T 세포는 초기에는 정상적으로 분열되지만, 활성화되고 3일 이상이 지나면 저조하게 증식된다. 문헌 [Hendriks et al., Nature Immunol. 1: 433-440 (2000)]. 이는 CD27이 T 세포 사멸을 조기에 억제하는 것에 의해 또는 활성화 2-3일 이후에 분열이 지속되도록 세포 주기에 작용하는 것에 의해 나이브 T 세포 집단의 초기 확장을 촉진하는데 관여함을 나타낸다. 이는 CD27-결핍 마우스의 생체내 연구에 의해 보강되며, 상기 연구에서 더 적은 수의 항원 특이적 반응 (4-8 일) 및 더 적은 기억 T 세포가 3 주 이상에 걸쳐 발생한다. 문헌 [Hendriks et al., 상기 문헌]. CD27의 발현은 T 세포 활성화 직후에 상향조절되는데, 이는 그것이 주로 이펙터 반응의 정점 이전에 초기 증식을 유지시키는 신호를 전달함을 시사한다.그 결과, 예컨대 효능제 항체를 적용하는 것을 통한 CD27/CD27L의 활성화는, 특히 본원에 기재된 항-PD-L1 항체와 조합되어 T 세포 기능이상 장애를 치료하는데 유용할 수 있을 것으로 보인다.4. CD30/CD30L (CD153)CD30 (TNFRSF8, Ki-1) 및 CD30L (CD153, TNFSF8) 신호전달은 시험관내에서 몇몇 T 세포 기능에 대해 공동자극을 제공한다. 문헌 [Del Prete et al., J. Exp. Med. 182: 1655-1661 (1995)], [Bowen et al., J. Immunol. 156: 442-449 (1995)]. CD30L에 대한 차단 시약은 시험관내에서 Th2 세포의 발생을 억제하고, Th1 세포의 발생을 향상시킨다. 이러한 활성은 CD30이 Th2 세포 및 유형 2 세포독성 Tc2 세포에 의해 우선적으로 발현되는 것을 보여주는 데이터와 일치한다. 문헌 [Del Prete et al., 상기 문헌], [Nakamura et al., J. Immunol. 158: 2090-2098 (1996)]. CD30은 비극성 1차 반응에서 나이브 T 세포의 활성화 3-4 일 후에 발현된다. 문헌 [Nakamura et al., 상기 문헌]은 그 역할이 유형 2 시토카인-우세 반응에 국한되지 않음을 보여준다.CD30/CD30L 신호전달의 정확한 메카니즘은 분명하지 않지만, OX40 및 4-1BB와 유사할 수 있는 것으로 제안되고 있다. 입양 전달된 항원 특이적 CD8+ T 세포를 CD30L-결핍 마우스에 전달한 경우, 이들은 1차 반응의 정점에서 많은 수로 축적되지 않고, 더 적은 기억 T 세포가 발생한다. 그 결과, CD30도 또한 1차 반응의 정점에서 많은 수의 항원 특이적 T 세포의 생성을 가능하게 하는 증식 및/또는 생존 신호를 제공할 수 있다.그 결과, 예컨대 효능제 항체를 적용하는 것을 통한 CD27/CD27L의 활성화는, 특히 본원에 기재된 항-PD-L1 항체와 조합되어 T 세포 기능이상 장애를 치료하는데 유용할 수 있을 것으로 보인다.5. HVEM/LIGHTT 세포 공동자극에 대한 HVEM (HVEA, ATAR, LIGHTR, TNFRSF14, PRO509) 및 LIGHT (CD258, HVEML, TR2, TNFSF14, PRO726)의 효과는 1) LIGHT가 또한 림프독소-β 수용체 (LTβR)에 결합할 수 있고, 2) HVEM이 가용성 LTα3에 결합하므로 이에 의해 복잡하다. 이에 따라, HVEM/LIGHT의 효과의 임의의 연구는 이러한 신호전달 시스템에 대한 다른 결합 파트너의 효과를 또한 고려해야 한다. LIGHT의 차단은 동종이형 혼합-림프구 반응 (MLR)에서 초기 T 세포 증식 및 시토카인 분비를 억제할 수 있다. 문헌 [Tamada et al., J. Immunol. 164: 4105-4110 (2000)], [Kwon et al., J. Biol. Chem. 272: 14272-14276 (1997)]; [Harrop et al., J. Immunol. 161: 1786-1794 (1998)]; [Tamada et al., Nature Med. 6: 283-289 (2000)]. 전염증성 시토카인의 생산은 MHC-미스매칭된 심장 동종이식편에서 LIGHT가 차단될 경우에 억제된다. 문헌 [Ye et al., J. Exp. Med. 195: 795-800 (2002)]. 게다가, 동종이형 피부 이식편은 LIGHT 및 CD28이 둘 모두 결핍된 수용자에서 지연된 역동학으로 인해 거부된다. 문헌 [Scheu et al., J. Exp. Med. 195: 1613-1624 (2002)]. 이식편 거부를 지연시킨다는 것은 T 세포 클론 확장 또는 시토카인 생산의 초기 억제를 나타낼 수 있다. 이러한 결론은 (i) LIGHT-결핍 비장세포가 동종항원에 반응하여 TH1 및 TH2 시토카인 둘 모두의 생산을 감소시키고, 세포독성 T 림프구 (CTL) 활성의 생성을 약화시킴을 보여주는 시험관내 연구 (문헌 [Sheu et al., 상기 문헌]), 및 (ii) LIGHT 차단이 동종반응성 CTL의 생성을 감소시킴을 보여주는 생체내 연구에 의해 강화된다. 문헌 [Tamada et al., Nature Med. 6: 283-289 (2000)].그 결과, HVEM/LIGHT는 예컨대 효능제 항체를 적용하는 것을 통해, 특히 본원에 기재된 항-PD-L1 항체와 조합되어 T 세포 기능이상 장애를 치료하는데 유용할 수 있을 것으로 보인다.II. 정의"알레르겐" 또는 "면역원"은 면역 반응을 일으킬 수 있는 임의의 분자이다. 본원에서 사용되는 용어는, 항원 분자 그 자체, 또는 그의 공급원, 예컨대 꽃가루, 동물 비듬, 곤충 독 또는 식료품을 포괄한다. 이는 이뮤노글로불린 또는 T 세포 수용체에 의해 특이적으로 인식될 수 있는 분자를 지칭하는 용어 항원과 대조된다. 면역 반응을 유도할 수 있는 임의의 외래 물질은 잠재적인 알레르겐이다. 천연 및 합성 둘 모두로부터 기원된 많은 다양한 화학물질들이 알레르겐인 것으로 알려져 있다. 복합 천연 유기 화학물질, 특히 단백질은 항체-매개 알레르기를 유발하는 것으로 보이는 한편, 단순 유기 화합물, 무기 화학물질, 및 금속은 T 세포 매개 알레르기를 보다 우세하게 유발한다. 일부 경우에서, 동일한 알레르겐이 한 유형을 초과하는 알레르기의 원인이 될 수 있다. 알레르겐에의 노출은 흡입, 주사, 주사, 또는 피부 접촉을 통해 일어날 수 있다. 면역 기능장애와 관련하여 "기능장애"란, 항원 자극에 대한 반응성이 감소된 면역 상태를 지칭한다. 상기 용어는 항원 인식이 일어날 수 있지만 후속 면역 반응이 감염 또는 종양 성장을 제어하는데 효과적이지 않은 탈진 및/또는 무반응 둘 모두의 공통 요소를 포함한다."내성" 또는 "면역 내성"은 면역계가 특정 항원에 대한 방어적 면역 반응을 개시하는데 실패한 것이다. 내성은 자연적이거나 자기일 수 있거나 (이때 신체는 그 자신의 단백질 및 항원을 공격하지 못함), 또는 면역계를 조작하는 것으로부터 유도될 수 있다. 중심 내성은 림프구 발생 동안에 생기고, 흉선 및 골수에서 작동된다. 이 과정 동안, 자기 항원을 인식하는 T 및 B 림프구는 그것이 완전한 면역적격 세포로 발생되기 이전에 제거된다. 이 과정은 태아 발생 동안에 가장 활발하지만, 미성숙 림프구가 생성됨에 따라 생애에 걸쳐 계속된다. 말초 T 세포 내성은 말초 조직에 존재하는 자기 항원에 대한 기능적 무반응을 지칭하며, T 및 B 세포 성숙 및 말초 진입 이후에 생긴다. 이러한 과정은 "조절" T 세포에 의해 자가반응 세포가 억제되고, 염증에 수반되는 공동자극 신호의 부재하에서 항원과 맞닥뜨린 림프구에서 저반응 (무반응)이 생성되는 것을 포함한다. "후천적" 또는 "유도된 내성"은 다른 환경에서는 아마도 세포 매개 또는 체액성 면역을 유도할 주어진 항원에 대한 림프양 조직의 특이적 비반응성을 특징으로 하는, 외부 항원에 대해 면역계가 적응한 것을 지칭한다. 성체에서, 내성은 매우 많은 용량의 항원, 또는 면역 반응을 자극하는데 요구되는 역치 미만의 작은 용량을 예컨대 정맥내 또는 가용성 항원의 설하 투여를 통해 반복 투여하여 임상적으로 유도할 수 있다. 면역억제는 또한 내성 유도를 용이하게 한다. 자기 내성의 파괴는 자가면역을 야기할 수 있다. "T 세포 기능을 향상시키는 것"은 T 세포가 지속적이거나 증폭된 생물학적 기능을 갖도록 유도하거나, 유발하거나, 또는 자극하는 것, 또는 탈진되거나 불활성인 T 세포를 재생시키거나 재활성화시키는 것을 의미한다. T 세포 기능을 향상시키는 것의 예에는: CD8+ T 세포로부터 γ-인터페론의 분비를 증가시키는 것, 증식을 증가시키는 것, 항원 반응성 (예를 들어, 바이러스 또는 병원체 제거)을 개입 이전의 수준에 비해 증가시키는 것이 포함된다. 한 실시양태에서, 향상 수준은 적어도 50％, 별법적으로 60％, 70％, 80％, 90％, 100％, 120％, 150％, 200％이다. 이러한 향상을 측정하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다. "T 세포 기능이상 장애"는 항원 자극에 대한 반응성이 감소된 것을 특징으로 하는 T 세포의 장애 또는 상태이다. 특정 실시양태에서, T 세포 기능이상 장애는 PD-1을 통한 부적절한 신호전달의 증가와 특이적으로 관련된 장애이다. 또 다른 실시양태에서, T 세포 기능이상 장애는 T 세포가 무반응이거나 또는 시토카인 분비, 증식, 또는 세포용해 활성을 수행하는데 있어서의 능력이 감소된 장애이다. 특정 측면에서, 감소된 반응성은 면역원을 발현하는 병원체 또는 종양을 비효과적으로 제어한다. T 세포 기능장애를 특징으로 하는 T 세포 기능이상 장애의 예에는 미해결 급성 감염, 만성 감염 및 종양 면역이 포함된다."만성 감염"은 감염된 숙주에서 감염원 (예를 들어, 병원체, 예컨대 바이러스, 박테리아, 원생동물성 기생충, 진균 등)이 면역 반응을 유도하지만, 급성 감염 동안에서와 같이 숙주에서 소멸되거나 제거되지 않은 감염을 지칭한다. 만성 감염은 지속적이거나, 잠재적이거나 또는 느릴 수 있다. 급성 감염이 면역계에 의해 전형적으로 수 일 또는 수 주 이내에 해소되는 반면 (예를 들어, 인플루엔자), 지속 감염은 비교적 낮은 수준에서 수 개월, 수 년, 수십 년, 또는 평생 지속될 수 있다 (예를 들어, B형 간염). 대조적으로, 잠재적인 감염은 급속하게 증가하는 고 등급의 감염 기간에 의해 단절되고 병원체 수준이 상승되는 장기간의 무증상 활성을 특징으로 한다 (예를 들어, 단순 포진). 마지막으로, 느린 감염은 질환 증상이 점진적이고 계속적으로 증가되는 것을 특징으로 하는 것으로, 예컨대 장기간 인큐베이션된 후 임상적 증상이 개시된 이후에 장기적이고 점진적인 임상 경과가 시작된다. 잠재적 및 지속적 감염과 달리, 느린 감염은 급성 바이러스 증식 기간과 함께 시작될 수 없다 (예를 들어, 피코르나바이러스 감염, 비스나바이러스, 스크래피, 크로이츠펠트 야콥 질환). 만성 감염을 유도할 수 있는 예시적인 감염원으로는 바이러스 (예를 들어, 시토메갈로바이러스, 엡스타인 바르 바이러스, B형 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, 단순 포진 바이러스, I형 및 II형, 인간 면역결핍 바이러스, 1형 및 2형, 인간 파필로마바이러스, 인간 T 림프구 친화성 바이러스, 1형 및 2형, 바리셀라 조스터 바이러스 등), 박테리아 (예를 들어, 미코박테륨 투베르쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 리스테리아 종, 클레브시엘라 뉴모니아에(Klebsiella pneumoniae), 스트렙토코쿠스 뉴모니아에(Streptococcus pneumoniae), 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 보렐리아 종, 헬리코박터 피롤리 등), 원생동물성 기생충 (예를 들어, 리슈마니아 종(Leishmania spp.), 플라시모듐 팔시파룸(Plasmodium falciparum), 쉬스토소마 종(Schistosoma spp.), 톡소플라즈마 종(Toxoplasma spp.), 트리파노소마 종(Trypanosoma spp.), 타에니아 카르시셉스(Taenia carssiceps) 등), 및 진균 (예를 들어, 아스페르길루스 종(Aspergillus spp.), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 콕시디오이데스 이미티스(Coccidioides immitis), 히스토플라스마 카프술라툼(Histoplasma capsulatum), 뉴모시스티스 카리니(Pneumocystis carinii) 등)이 포함된다. 추가의 감염원으로는 프리온 또는 미스폴딩된 단백질이 포함되며, 뇌 또는 뉴런 구조에서 단백질 미스폴딩이 추가로 계속되는 것에 의해 이들 조직에 영향을 미치고, 아밀로이드 플라크가 형성되게 하여 세포 사멸, 조직 손상 및 궁극적으로는 사망을 유발한다. 프리온 감염에 의해 유발되는 질환의 예로는 크로이츠펠트 야콥 질환 및 그의 변종, 게르스트만 슈투로이슬러 샤잉커 증후군 (GSS), 치사성 가족 불면증 (sFI), 쿠루, 스크래피, 소에서의 소 해면상 뇌병증 (BSE) ("광우" 병으로도 알려짐), 및 그밖의 다양한 동물의 뇌병증 형태 [예를 들어, 전염성 밍크 뇌병증 (TME), 흰꼬리 사슴, 엘크 및 뮬 사슴에서의 만성 소모성 질환 (CWD), 고양이 해면상 뇌병증, 니알라, 오릭스 및 그레이터 쿠두에서의 외래성 유제류 뇌병증 (EUE), 타조의 해면상 뇌병증]이 포함된다."종양 면역"은 종양이 면역 인식 및 제거를 회피하는 과정을 지칭한다. 이에 따라, 치료 개념으로서 종양 면역은 그러한 회피가 약화될 때 "치료"되고, 종양은 면역계에 의해 인식되어 공격받는다. 종양 인식의 예에는 종양 결합, 종양 수축 및 종양 제거가 포함된다. "B7-음성 공동자극 길항제" ("BNCA")는 B7 패밀리의 구성원에 의해 매개되는 T 림프구에서 발현된 세포 표면 단백질에 의하거나 또는 그를 통해 매개되는 음성 공동자극 신호를 감소시키거나, 차단하거나, 억제하거나, 없애거나, 방해하는 작용제이다. 한 측면에서, BNCA는 단독으로 또는 본 발명의 항-PD-1 항체와 조합되어 기능이상 T 세포를 비-기능이상으로 만들 수 있다. 또 다른 측면에서, BNCA는 B7-음성 공동자극 분자의 핵산 또는 단백질 합성, 발현, 신호전달 및/또는 발현 후 프로세싱을 억제하는 작용제일 수 있다. 또 다른 측면에서, BNCA는 B7-음성 공동자극 분자에 의한 신호 전달을 감소시키거나, 차단하거나, 억제하거나, 없애거나, 또는 방해하는 항체, 항원 결합 항체 단편, BNCA 올리고펩티드, BNCA RNAi 또는 BNCA 소분자이다. B7 음성 공동자극 분자의 예에는 CTLA-4, PD-L1, PD-1, B7.1 (T 세포 상에서 발현됨), PD-L2, B7-H3 및 B7-H4가 포함된다.양성 공동자극 효능제는 T 림프구 상에서 발현되는 세포 표면 단백질에 의하거나 또는 그를 통해 매개되는 공동자극 신호를 증가시키거나, 향상시키거나, 늘리거나, 또는 용이하게 하는 분자이다. 한 측면에서, 양성 공동자극 분자는 양성 공동자극 경로를 활성화하는 세포외 도메인, 가용성 구축물 또는 효능제 항체일 수 있다. 양성 공동자극 분자의 예에는 B7 슈퍼패밀리 분자, 예를 들어, B7.1, B7.2, CD28 및 ICOS/ICOSL이 포함된다. 추가의 예에는 TNFR 패밀리 공동자극 분자, 예를 들어, OX40/OX40L, 41-BB/41-BBL, CD27/CD27L, CD30/CD30L 및 HVEM/LIGHT가 포함된다."소분자" 또는 "유기 소분자"는 분자량이 약 500 달톤 미만인 것이다. "간섭 RNA" "RNAi"는 표적 유전자의 발현을 감소시키는, 길이가 10 내지 50 뉴클레오티드인 RNA로, 이때 가닥의 일부는 충분히 상보적이다 (예를 들어, 표적 유전자에 대해 적어도 80％ 동일성을 가짐). RNA 간섭 방법은 전사후 수준 (예를 들어, 번역)에서 일어나는 유전자 발현의 표적 특이적 억제 (즉 "유전자 침묵")를 지칭하며, 유전자 발현의 RNA 매개 억제의 모든 전사후 및 전사 메카니즘을 포함한다 (예컨대 문헌 [P.D. Zamore, Science 296: 1265 (2002)] 및 [Hannan and Rossi, Nature 431: 371-378 (2004)]에 기재되어 있음). 본원에서 사용되는 RNAi는 소형 간섭 RNA (siRNA), 짧은 헤어핀 RNA (shRNA), 및/또는 마이크로 RNA (miRNA)의 형태일 수 있다. 그러한 RNAi 분자는 종종, 별개의 상보적인 또는 부분적으로 상보적인 RNA 가닥의 형태로 발현될 수 있는 이중 가닥 RNA 복합체이다. 이중 가닥 RNA 복합체를 설계하는 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 적합한 shRNA 및 siRNA의 설계 및 합성은 문헌 [Sandy et al., BioTechniques 39: 215-224 (2005)]에서 찾아볼 수 있다."소형 간섭 RNA" 또는 siRNA는 표적 유전자의 발현을 감소시키는, 길이가 10 내지 50 뉴클레오티드인 이중 가닥 RNA (dsRNA) 이중체로, 이때 첫번째 가닥의 일부는 충분히 상보적이다 (예를 들어, 표적 유전자에 대해 적어도 80％ 동일성을 가짐). siRNA는 종종 포유동물 세포에서 RNAi의 사용과 관련된 세포 자살 또는 사멸을 야기하는 상승된 인터페론 합성, 비특이적 단백질 합성 억제 및 RNA 열화를 특징으로 하는 항바이러스 반응을 회피하도록 특이적으로 설계된다. 문헌 [Paddison et al., Proc Natl Acad Sci USA 99(3):1443-8. (2002)].용어 "헤어핀"은 7-20 뉴클레오티드의 루프 RNA 구조를 지칭한다. "짧은 헤어핀 RNA" 또는 shRNA는 표적 유전자의 발현을 감소시키는 헤어핀 턴을 특징으로 하는, 길이가 10 내지 50 뉴클레오티드인 단일 가닥 RNA로, 이때 RNA 가닥의 일부는 충분히 상보적이다 (예를 들어, 표적 유전자에 대해 적어도 80％ 동일성을 가짐). 용어 "줄기 루프"는 짧은 홑 루프로 끝나서 이중 헬릭스를 형성하여 막대 사탕 구조를 제공하는, 동일한 분자 염기쌍의 두 영역 사이에서의 쌍형성을 지칭한다. "마이크로 RNA" 또는 "miRNA" (종전에 stRNA로 공지됨)는 초기에 "줄기 루프" 구조를 특징으로 하는 프리-miRNA로서 전사되는, 길이가 약 10 내지 70 뉴클레오티드인 단일 가닥 RNA로, 이는 RNA-유도된 침묵 복합체 (RISC)를 통해 추가로 프로세싱된 후 성숙한 miRNA로 후속 프로세싱된다."BNCA 간섭 RNA" 또는 "BNCA RNAi"는 바람직하게는 BNCA 핵산에 특이적으로 결합하고, 그의 발현을 감소시킨다. 이는 BNCA RNAi가 존재하지 않는 대조군에서의 B7 음성 공동자극 분자의 발현과 비교하여 BNCA RNAi가 존재할 때 B7 음성 공동자극 분자의 발현이 더 낮아짐을 의미한다. BNCA RNAi는 공지된 방법을 이용하여 확인 및 합성할 수 있다 (문헌 [Shi Y., Trends in Genetics 19(1): 9-12 (2003)], WO2003056012, WO2003064621, WO2001/075164, WO2002/044321)."BNCA 올리고펩티드"는 바람직하게는 본원에서 기재하는 바와 같은 B7 음성 공동자극 펩티드, 예컨대 수용체, 리간드 또는 신호전달 성분에 각각 특이적으로 결합하는 올리고펩티드이다. 이같은 올리고펩티드는 공지된 올리고펩티드 합성 방법을 사용하여 화학적으로 합성될 수 있거나, 또는 재조합 기술을 사용하여 제조 및 정제될 수 있다. 상기 올리고펩티드의 길이는 대체로 적어도 약 5개 아미노산, 별법적으로 길이가 적어도 약 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100개 아미노산이다. 이같은 올리고펩티드는 주지된 기술을 사용하여 과도한 실험없이 확인할 수 있다. 이와 관련하여, 폴리펩티드 표적에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고펩티드에 대해 올리고펩티드 라이브러리를 스크리닝하는 기술이 당업계에 주지되어 있는 것으로 인지된다 (예를 들어, 미국 특허 제5,556,762호, 동 제5,750,373호, 동 제4,708,871호, 동 제4,833,092호, 동 제5,223,409호, 동 제5,403,484호, 동 제5,571,689호, 동 제5,663,143호; PCT 출원 번호 WO 84/03506 및 WO84/03564; 문헌 [Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81:3998-4002 (1984)]; [Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 82:178-182 (1985)]; [Geysen et al., in Synthetic Peptides as Antigens, 130-149 (1986)]; [Geysen et al., J. Immunol. Meth., 102:259-274 (1987)]; [Schoofs et al., J. Immunol., 140:611-616 (1988)], [Cwirla, S. E. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6378 (1990)]; [Lowman, H.B. et al. Biochemistry, 30:10832 (1991)]; [Clackson, T. et al. Nature, 352: 624 (1991)]; [Marks, J. D. et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)]; [Kang, A.S. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:8363 (1991)], 및 [Smith, G. P., Current Opin. Biotechnol., 2:668 (1991)] 참조)."BNCA 소분자 길항제" 또는 "BNCA 소분자"는 바람직하게는 B7 음성 공동자극 폴리펩티드를 특이적으로 억제하는, 본원에서 정의하는 올리고펩티드 또는 항체 이외의 유기 분자이다. 그러한 B7 음성 공동자극 신호전달 억제는 바람직하게는 기능이상 T 세포가 항원 자극에 반응성이게 한다. 예시적인 BNCA 소분자는 공지된 방법을 이용하여 확인가능하고, 화학적으로 합성할 수 있다 (예를 들어, PCT 출원 번호 WO2000/00823 및 WO2000/39585 참조). 그러한 BNCA 소분자는 통상적으로 크기가 약 2000 달톤 미만이고, 별법적으로 크기가 약 1500, 750, 500, 250 또는 200 달톤 미만이며, 바람직하게는 본원에서 기재하는 바와 같은 B7 음성 자극 폴리펩티드에 특이적으로 결합할 수 있고, 널리 공지되어 있는 기술을 이용하여 과도한 실험없이 확인가능하다. 이와 관련하여, 폴리펩티드 표적에 결합할 수 있는 분자에 대해 유기 분자 라이브러리를 스크리닝하는 기술이 당업계에 주지되어 있는 것으로 인지된다 (예를 들어, PCT 공개 번호 WO00/00823 및 WO00/39585 참조). 용어 "항생제"는 미생물, 예컨대 바이러스, 박테리아, 진균 또는 원생동물의 성장을 특이적으로 억제하거나 막지만, 투여되는 농도 및 투약 간격에서 숙주에게 치명적이지 않은 임의의 분자를 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 항생제에는 항박테리아제, 항바이러스제, 항진균제 및 항-원생동물 작용제가 포함된다. 특정 측면에서, 항생제는 투여 농도 및 투약 간격에서 숙주에게 비독성이다. 항박테리아 항생제 또는 항박테리아제는 살균성 (즉 직접 사멸) 또는 정균성 (즉 분열 방지)으로 넓게 분류될 수 있다. 항-살균 항생제는 추가로 협범위 (즉, 단지 작은 부류의 박테리아 하위세트, 예를 들어 그람-음성 등에만 영향을 미치는 것) 또는 광범위 (즉, 넓은 부류에 영향을 미치는 것)로 세분될 수 있다. 항생제의 예에는 (i) 아미노글리코시드, 예를 들어 아미카신, 겐타미신, 카나마이신, 네오마이신, 네틸미신, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 파로마이신, (ii) 안사마이신, 예를 들어 겔다나마이신, 헤르비마이신, (iii) 카르바세펨, 예를 들어 로라카르베프, (iv) 카르바페넴, 예를 들어 어터피넘, 도리페넴, 이미페넴/실라스타틴, 메로페넴, (v) 세팔로스포린 (제1 세대), 예를 들어 세파드록실, 세파졸린, 세팔로틴, 세팔렉신, (vi) 세팔로스포린 (제2 세대), 예를 들어 세파클러, 세파만돌, 세폭시틴, 세프프로질, 세푸록심, (vi) 세팔로스포린 (제3 세대), 예를 들어 세픽심, 세프디니르, 세프디토렌, 세포페라존, 세포탁심, 세프포독심, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심, 세프트리악손, (vii) 세팔로스포린 (제4 세대), 예를 들어 세페핌, (viii) 세팔로스포린 (제5 세대), 예를 들어 세프토비프롤, (ix) 글리코펩티드, 예를 들어 테이코플라닌, 반코마이신, (x) 매크롤리드, 예를 들어 아지트로마이신, 클라리트로마이신, 디리트로마이신, 에리트로마이신, 록시트로마이신, 트롤레안도마이신, 텔리트로마이신, 스펙티노마이신, (xi) 모노박탐, 예를 들어 액스트리오넘, (xii) 페니실린, 예를 들어 아목시실린, 암피실린, 아즐로실린, 카르베니실린, 클록사실린, 디클록사실린, 플루클록사실린, 메즐로실린, 메치실린, 나프실린, 옥사실린, 페니실린, 피페라실린, 티카르실린, (xiii) 항생제 폴리펩티드, 예를 들어 바시트라신, 콜리스틴, 폴리믹신 B, (xiv) 퀴놀론, 예를 들어 시프로플록사신, 에녹사신, 가티플록사신, 레보플록사신, 레메플록사신, 목시플록사신, 노르플록사신, 오르플록사신, 트로바플록사신, (xv) 술폰아미드, 예를 들어 마페나이드, 프론토실, 술프아세트아미드, 술파메티졸, 술파닐아미드, 술파살라진, 술피속사졸, 트리메토프림, 트리메토프림-술파메톡사졸 (TMP-SMX), (xvi) 테트라시클린, 예를 들어 데메클로시클린, 독시시클린, 미노시클린, 옥시테트라시클린, 테트라시클린 및 (xvii) 기타, 예컨대 아르스페나민, 클로람페니콜, 클린다마이신, 린코마이신, 에탐부톨, 포스포마이신, 푸시드산, 푸라졸리돈, 이소니아지드, 리네졸리드, 메트로니다졸, 무피로신, 니트로푸란토인, 플라텐시마이신, 피라진아미드, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 리팜핀/리팜피신 또는 티니다졸이 포함된다. 용어 "항바이러스제"는 바이러스의 성장, 이환 및/또는 생존을 억제하거나 막는 임의의 분자를 포함한다. 그러한 것으로는 항레트로바이러스 약물, 예컨대 (1) 역전사효소 억제제, 예를 들어: (a) 뉴클레오시드 유사체 역전사효소 억제제 (NRTI) (예를 들어, 아시클로비르/아시클로비르 (조비락스��, 조비르��), 시도포비르, 아지도티미딘/지도부딘 (AZT, 레트로비어��), 디다노신 (ddI, 비덱스��; 잘시타빈 (ddC, HIVID��); 스타부딘 (d4T, 제리트��); 라미부딘 (3TC, 에피비르��); 아바카비르 (지아젠��); 엠트리시타빈 (엠트리바��); 브리부딘 (헬핀��); 엔테카비르 (바라클루드��); 이독수리딘; 비라미딘 (발린트 파마슈티칼스(Valeant Pharmacueticals)의 타리바비린), 시티딘 뉴클레오시드 유사체 폴리머라제 억제제 PCI-6130, 및 파마셋(Pharmasset)/로슈(Roche)의 전구약물 변이체 (예를 들어, R7128); 머크(Merck)/이시스 파마슈티칼스(Isis Pharmaceuticals)의 뉴클레오시드 유사체 억제제 - MK-0608, (b) 뉴클레오티드 유사체 역전사효소 억제제 (NtRTI) (예를 들어, 테노포비르 (바이리드��); 아데포비르 (프레베온��, 헵세라��); 포미비르센 (비트라벤��); (c) 비-뉴클레오시드 역전사효소 억제제 (NNRTI), 에파비렌즈 (수스티바��, 스토크린��); 네비라핀 (비라문��), 델라비르딘 (리스크립터��), 에트라바이린 (인텔렌스��), 로비리드; 비로켐 파마(ViroChem Pharma)의 HCV RNA-의존성 RNA 폴리머라제의 비-뉴클레오시드 억제제 - VCH-759, 화이자(Pfizer)의 HCV 폴리머라제 억제제의 비-뉴클레오시드 억제제 - PF-868554; 및 (d) 폴리머라제 억제제, 예를 들어: 베링거 잉겔하임(Boehringer Ingelheim)의 C형 간염 바이러스의 RNA-의존성 RNA 폴리머라제 - BILB-1941, 로슈의 RNA 폴리머라제 억제제 - R1626; ACH-0137171 아킬리온 파마슈티칼스(Achillion Pharmaceuticals)의 레플리카제 억제제, R7128 - 로슈/파마셋의 폴리머라제 억제제, ABT-333, 및 ABT-072 - 애보트(Abbott)의 폴리머라제 억제제, BI 207127 - 베링거 잉겔하임의 폴리머라제 억제제, PSI-7851 - 파마셋의 폴리머라제 억제제, ANA598 - 아나디스 파마슈티칼스(Anadys Pharmaceuticals)의 폴리머라제 억제제, MK-3281 - 머크의 폴리머라제 억제제, IDX184 - 이데닉스(Idenix)의 폴리머라제 억제제, GSK 625433 - 글락소 스미스 클라인(Glaxo Smith Kline)의 폴리머라제 억제제, INX-189 - 인히비텍스(Inhibitex)의 폴리머라제 억제제, NM283 - 이데닉스의 폴리머라제 억제제, HCV796 - 와이어쓰(Wyeth)의 폴리머라제 억제제, GL60667 및 GS9190 - 길리아드(Gilead)의 폴리머라제 억제제, PF-00868554 0 화이자의 폴리머라제 억제제, VCH759, VCH916, VX222 및 VX759 - 비로켐(Virochem)의 폴리머라제 억제제, IDX184 및 IDX375 - 이데닉스의 폴리머라제 억제제, BMS650032 - 브리스톨 마이어스 스퀴브(Bristol Myers Squibb)의 폴리머라제 억제제; (2) 프로테아제 억제제, 예를 들어: 사퀴나비르 (포로바세��/인비라세��), 리토나비르 (노르비르��), 인디나비르 (크릭시반��), 넬피나비르 (비라셉트��), 암프레나비르 (아제너라제��), 로피나비르 (칼레트라��), 아타자나비르 (레야타즈��), 포삼프레나비르 (렉시바��), 티프라나비르 (아프티부스��), 다루나비르 (프레지스타��), 텔라프라비르 (VX-950); 베르텍스 파마슈티칼스(Vertex Pharmaceuticals)의 제2 세대 HCV 프로테아제 억제제 - VX-500 및 VX-813; 인터뮨(Intermune)/로슈의 NS3/4A 프로테아제 억제제 - ITMN-191/R-7227, 보세프레비르, 쉐링 플라우(Schering-Plough)의 프로테아제 억제제 - SCH 503034, 메디비르(Medivir)/티보텍(Tibotec)의 HCV NS3/4A 프로테아제 억제제 - TMC435/TMC435350, ACH-1625 아킬리온 파마슈티칼스의 프로테아제 억제제, ACH-806 - 아킬리온/길리아드의 프로테아제 억제제, BI201335 및 BILN 2061 - 베링거 잉겔하임의 프로테아제 억제제, SCH 900518/SP900518 (나를라프레비르) - 쉐링 플라우의 프로테아제 억제제, MK-7009 - 머크의 프로테아제 억제제, BMS-650032, BMS-790052 및 BMS-791325 - 브리스톨 마이어스 스퀴브의 프로테아제 억제제, R7227 - 로슈의 프로테아제 억제제, PHX1766 - 페노믹스(Phenomix)의 프로테아제 억제제, AVL-181 - 아빌라 테라퓨틱스(Avila Therapeutics)의 프로테아제 억제제, 담녹소, CTS-1027 로슈 바이오사이언시즈의 프로테아제 억제제, VX985 - 베르텍스의 프로테아제 억제제, VCH-759 및 VCH-917 - 비로켐/베르텍스의 프로테아제 억제제, IDX-136 및 316 - 이데닉스의 프로테아제 억제제, ABT-450 - 애보트의 프로테아제 억제제, VBY 376 - 비로베이(Virobay)의 프로테아제 억제제; (3) 인테그라제 억제제, 예를 들어: 랄테그라비르 (이센트레스��), 엘비테그라비르; (4) 뉴클레오시드 유사체/뉴클레오티드 유사체 억제제의 혼합 요법, 아트리플라 (테노포비르 + 엠브리시타빈 + 에파비렌즈), 컴비버 (라미부데인 + 지도부딘), (5) 진입 또는 융합 억제제, 예를 들어: 마라비록, 엔푸비르티드, 도코사놀, 항-CD4 항체, 항-gp120 항체, 항-CCR5 항체, HCV NS5a 길항제: (a) 애로우 테라퓨틱스(Arrow Therapeutics)의 A-831, A-689 및 AZD 2836, (b) 브리스톨 마이어스 스퀴브의 BMS-790052 및 BMS-824393, (c) 글락소 스미스 클라인의 GSK-625433, (d) NS4a 길항제 ACH-1095; (5) 성숙 억제제, 예를 들어: 베비리마트 및 비베콘; (6) 바이러스 방출 억제제, 예를 들어: 자나미비르 (릴렌자��), 오셀타미비르 (타미플루��), 알비돌; (7) 면역 반응 향상제, 예를 들어 인터페론-α (예를 들어, 바이오렉스 테라퓨틱스(Biolex Therapeutics)의 BLX-883 및 BLX 883 CR, 노틸러스 바이오테크(Nautilus Biotech)의 벨레로폰, LG 라이프 사이언시즈(LG Life Sciences)의 지속 작용 IFN-α, IFN-α SR, 플라멜 테크놀로지스(Flamel Technologies)의 지속 작용 IFN-α2b CR 및 IFN-α2b XL, PEG화 IFN-α (예를 들어, PEG-IFN-α-2a, 페가시스��; PEG-IFN-α-2b, 페그인트론��), IFN-a2b-인간 혈청 알부민 융합 단백질 (알부페론��); 인터페론-β, 예를 들어 IFN-β-1b (베타세론��), 인터페론-γ, 인터페론-λ, PEG화 인터페론-λ (예를 들어, 지모게네틱스/노보 노르디스크(ZymoGenetics/Novo Nordisk)의 PEG-rIL-29), 인터페론-ω/백혈구 II 인터페론 (예를 들어, 인타르시아 테라퓨틱스(Intarcia Therapeutics)), 아나디스 파마슈티칼스의 톨 유사 수용체 7 효능제, 예를 들어 이미퀴모드, 이사토리빈 및 그의 전구약물 변이체 (예를 들어, ANA-975 및 ANA-971), 임플리시트 바이오사이언스(Implicit Bioscience)의 오글루파니드 (IM862, L-Glu-L-Trp-OH) 및 그의 지질- 또는 -글리코실접합 변이체, NOV-205 (예를 들어, 몰릭산�� - 노벨로스 테라퓨틱스, 인크.(Novelos Therapeutics, Inc.)의 펩티드성 항바이러스), 엔조 바이오켐(Enzo Biochem)의 항바이러스 EHC18, 감마-D-글루타밀-L-트립토판 (예를 들어, SCV-07, 사이클론 파마슈티칼스/베르타(SciClone Pharmaceuticals/Verta)), 알로페론 (예를 들어, 알로페론-1-HGVSGHGQHGVHG, 알로페론-2-GVSGHGQHGVHG), CPG 10101 - 콜리 파마슈티칼스/액틸론(Coley Pharmaceuticals/Actilon)의 TLR-9 효능제; (8) 항바이러스성 상승작용 향상제, 즉 단독으로는 항바이러스 특성이 거의 또는 전혀 없지만, 다른 항바이러스제의 효과를 향상시키는 것 - 예를 들어, 클로로퀸, 자몽 주스, 히드록시우레아, 레플루노미드, 미코페놀산, 레스베라트롤, 리토나비; 뿐만 아니라 그 밖의 항바이러스성 약물, 예컨대 아만타딘, 에독수딘, 팜시클로비르 (팜비르��), 펜시클로비르, 파스카르넷, 포스포넷, 간시클로비르 (시토벤��, 시메벤��, 비트라세르트��), 갈다실, 이바시타빈, 이뮤노비르, 몰옥시딘, 넥사비르, 페라미비르, 플레코나릴, 포도필로톡신, 리바비린, 리만타딘, 트리플루리딘, 트리지비르, 트로만타딘, 트루바다, 발라시클로비르, 발간시클로비르, 비다라빈, 및 인터페론 향상제, 예컨대 트랜지션 테라퓨틱스(Transition Therapeutics)의 EMZ702, 히스타민 디히드로클로라이드 (예를 들어, 세플렌�� + IFN-α); 및 (9) 그 밖의 또는 분류되지 않은 항바이러스제, 예컨대: 케민 파마슈티칼스(Kemin Pharmaceuticals)의 KPE-02003002 (알테니몰), 미토퀴논 - 안티포딘 파마슈티칼스(Antipodean Pharmaceuticals)의 조효소 Q10 항-산화제 효능제, 알파-글루코시다제 I 억제제 (예를 들어, MX-3253 - 미제닉스 파마슈티칼스(Migenix Pharmaceuticals)의 셀고시비르, 카스타노스퍼민, 글루코코르티코이드 길항제 (예를 들어, HCV IRES 억제제, 미페프리스톤, VGX 파마슈티칼스의 VGX-410C), 간 효능제 (예를 들어, 피노바 파마슈티칼스(Phynova Pharmaceuticals)의 PYN17), 종래 약초제로부터 유래된 항바이러스제, 예를 들어 피노바 파마슈티칼스의 PYN18, 카스파제 억제제 (예를 들어, LB-84451 - LG 라이프 사이언시즈, 엠리카산 - 화이자의 PF-03491390/IDN-6556), 시클로필린 A에의 결합을 막아 바이러스 복제를 억제하는 시클로스포린 유사체 (예를 들어, 노파르티스(Novartis)의 SDZ NIM 911, 데바이오팜(Debiopharm)의 Debio-025)가 포함된다.용어 "항진균제"는 진균의 성장, 이환 및/또는 생존을 억제하거나 막는 임의의 분자를 포함한다. 그러한 것으로는 예를 들어 (1) 폴리엔 항진균제, 예컨대 나타마이신, 리모시딘, 필리핀, 니스타틴, 암포테리신 B, 칸디신; (2) 이미다졸, 예컨대 미코나졸, 케토코나졸 (로트리민��), 에코나졸, 비포나졸, 부타코나졸, 펜티코나졸, 이소코나졸, 옥시코나졸, 세르타코나졸 (에르탁조��), 설코나졸, 티오코나졸, (3) 트리아졸, 예컨대 플루코나졸, 이트라코나졸, 이사부코나졸, 라부코나졸 포사코나졸, 보리코나졸, 테르코나졸; (4) 알릴아민, 예컨대 테르비나핀 (라미실��), 아모로핀, 나프티핀 (나프틴��), 부테나핀 (로트리민 울트라��); (5) 에키노칸딘스, 예컨대 아니둘라펀진, 카스포펀진, 미카펀진, 및 기타 항진균 특성을 갖는 물질, 예컨대 벤조산, 시클로픽스, 플루시토신, 그리세오풀빈, 젠티안 바이올렛, 할로프로진, 톨나프테이트 (티낙틴��, 데세넥스��, 아프타테��), 운데실렌산, 티트리 오일 -- ISO 4730 (멜라류카(Melaleuca)의 오일, 테르핀넨-4-올 유형) 시트로넬라 오일, 레몬 그라스, 오렌지 오일, 팔마로사 오일, 파출리, 레몬 머틀, 니임 종자 오일, 코코넛 오일이 포함된다.용어 "항-원생동물 작용제" 또는 "항-원생동물성 작용제"는 원생동물 유기체의 성장, 이환 및/또는 생존을 억제하거나 막는 임의의 분자를 포함한다. 항-원생동물 작용제의 예에는, (1) 항-말라리아 작용제, 예를 들어, 퀴닌, 퀴니맥스, 퀴니딘, 퀴니맥스, 클로로퀸 (아랄렌��), 히드록시클로로퀸 (플라퀘닐��), 아모디아킨, 피리메타민 (다라프림��), 술파독신, 프로구아닐, 메플로퀸 (라리암��), 할로판트린, 프리마퀸, 아르테미시닌 및 그의 유도체 (예를 들어, 아르테메테르, 아르텐수네이트, 디히드로아르테미시닌, 아르테에테르), 클린다마이신 및 그의 조합물; (2) 프로테아제 억제제, 및 약물, 벤즈니다졸, 부파르바쿠온, 카바르손, 클리오퀴놀, 디술피람, 에플로르니틴, 에메틴, 푸라졸리돈, 메글루민 안티모니에이트, 멜라르소프롤, 메트로니다졸 (플라질��), 밀테포신, 니푸르티목스, 니타족사나이드, 오르니다졸, 파로모마이신 술페이트, 펜타미딘, 피리메타민 (다라프림��), 세크니다졸, 티니다졸이 포함된다. 본원에서 사용되는 용어 "백신"은 숙주에 접종하였을때 특정 병원체에 대해 보호적 면역을 유도하는 임의의 비병원성 면역원을 포함한다. 백신은 많은 형태를 취할 수 있다. 백신은 병원체와 중요한 항원을 공유하지만, 병원체 그 자체는 아닌 전체 유기체일 수 있다 (예를 들어, 우두). 또한 백신은 사멸된 것 (예를 들어, 소크 소아마비 백신) 또는 약독화된 것 (질환 생성능을 잃은 것 - 예를 들어, 사빈 소아마비 백신)으로부터 제조될 수 있다. 백신은 또한 병원성 유기체로부터 단리된 정제된 거대분자로부터 제조될 수 있다. 예를 들어, 불활성 형태의 가용성 박테리아 독소를 함유하는 톡소이드 백신 (예를 들어, 파상풍 및 디프테리아) - 항-독소 항체를 생성하지만, 무손상 박테리아에 대해서는 면역을 생성하지 않는다. 서브유닛 백신 (예를 들어, B형 간염)은 관심 병원체로부터 단리된 단일의 면역원성 단백질 만을 함유한다. 합텐 접합체 백신은 관심 병원체로부터 단리된 특정 탄수화물 또는 폴리펩티드 에피토프를 면역원성 운반체, 예컨대 파상풍 톡소이드에 부착시킨 것이다. 이러한 전략은 본질적으로 항체 생산을 유도하기 위한 합텐으로서 에피토프를 사용하며, 이어서 항체는 천연 병원체에서 동일한 에피토프를 인식한다. 그러나, 최대한 효과적이기 위해서는, 그러한 백신에는 B 및 T 세포 에피토프가 둘 모두 혼입되어야 하고, T 세포 에피토프는 그것이 숙주 개체의 면역계에 의해 인식되고, 제시되고, 반응될 수 있는 것이 보장되도록 선택해야 한다.DNA 백신은 숙주 세포가 근육내로 주사되는 병원성 단백질을 코딩하는 DNA를 받아들여 발현하는 능력을 이용한다.본원에서 기재하는 방법을 위해 항-PD-L1 항체와 조합하여 사용할 수 있는 항바이러스 백신의 예에는 페비온 바이오테크.(Pevion Biotech.)의 HCV 백신 (비라섬), NS3, NS4 및 NS5B에 대한 세포성 (세포독성 T 림프구 CD4+ 및 CD8+) 면역 반응을 향상시키도록 설계된 TG4040 (트랜스진 비리온(Transgene viron)의 MVA-HCV), 크론백�� - 이노비오 바이오메디칼(Inovio Biomedical)의 코돈 최적화된 NS3/4a DNA 백신, 노파르티스의 HCV/CpG 백신, GI-5005 - 글로베이뮨(Globeimmune)의 HCV 백신, IC41 인터셀(Intercell)의 폴리-L-아르기닌과 함께 HCV CD4 및 CD8 T 에피토프를 갖는 합성 펩티드의 혼합물이 포함된다.면역원에 대한 숙주 반응은 아주반트와의 혼합물로 투여할 경우 향상될 수 있다. 면역 아주반트는 하나 이상의 다음과 같은 방식으로 기능한다: (1) 면역원의 잔류를 연장시키거나, (2) 효과적인 면역원 크기를 증가시키거나 (그래서 식세포작용 및 대식세포에의 제시를 촉진하거나), (3) 주사 부위로 대식세포 또는 다른 면역 세포의 유입을 자극하거나, 또는 (4) 국소 시토카인 생산 및 다른 면역학적 활성을 촉진시키는 방식. 아주반트의 예에는 완전 프로인트 아주반트 (CFA), 알루미늄 염, 및 마이코박테리아 유래 단백질, 예컨대 뮤라밀 디- 또는 트리-펩티드가 포함된다.용어 "항체"는 모노클로날 항체 (예를 들어, 이뮤노글로불린 Fc 영역을 갖는 전장 항체), 다중에피토프 특이성을 갖는 항체 조성물, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 디아바디 및 단일쇄 분자 뿐만 아니라 항체 단편 (예를 들어, Fab, F(ab')2 및 Fv)를 포함한다. 용어 "이뮤노글로불린" (Ig)은 본원에서 "항체"와 상호교환적으로 사용된다. 기본 4쇄 항체 단위는 2개의 동일한 경쇄 (L) 및 2개의 동일한 중쇄 (H)로 이루어진 이종4량체 당단백질이다. IgM 항체는 J 사슬로 불리는 추가의 폴리펩티드와 함께 5개의 기본 이종4량체 단위로 이루어지고 10개의 항원 결합 부위를 함유하는 한편, IgA 항체는 중합화하여 J 사슬과의 조합으로 다가 어셈블리를 형성할 수 있는 2-5개의 기본 4쇄 단위를 포함한다. IgG의 경우, 4쇄 단위는 일반적으로 약 150,000 달톤이다. 각각의 L 쇄는 1개의 공유 디술피드 결합에 의해 H 쇄에 연결되지만, 2개의 H 쇄는 H 쇄 이소형에 따라 1개 이상의 디술피드 결합에 의해 서로 연결된다. 또한, 각 H 쇄 및 L 쇄에는 일정한 간격을 두고 이격된 쇄내 디술피드 브릿지가 존재한다. 각각의 H 쇄는 N-말단에 가변 도메인 (VH)을 갖고, 그 뒤에 α 및 γ 쇄 각각의 경우에는 3개의 불변 도메인 (CH), μ 및 ε 이소형의 경우에는 4개의 CH 도메인을 갖는다. 각각의 L 사슬은 N-말단에서 가변 도메인 (VL)을 갖고, 이어서, 그의 다른 말단에서 불변 도메인을 갖는다. VL은 VH와 정렬되고, CL은 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)과 정렬된다. 특정 아미노산 잔기가 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 사이의 계면을 형성한다고 여겨진다. VH 및 VL의 쌍형성은 함께 단일 항원-결합 부위를 형성한다. 상이한 클래스의 항체의 구조 및 특성에 대해서는 예를 들어 문헌 [Basic and Clinical Immunology, 8th Edition, Daniel P. Sties, Abba I. Terr and Tristram G. Parsolw (eds), Appleton 0026# Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6]을 참조한다. 임의의 척추동물 종의 L 쇄는 이들의 불변 도메인의 아미노산 서열을 기초로 하여 카파 및 람다라고 불리는 명백히 상이한 2가지 유형 중 하나에 배정될 수 있다. 이뮤노글로불린은 중쇄의 불변 도메인 (CH)의 아미노산 서열에 따라 상이한 클래스 또는 이소형으로 배정될 수 있다. 5가지 클래스의 이뮤노글로불린: 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 표기되는 중쇄를 갖는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 존재한다. γ 및 α 클래스는 CH 서열 및 기능에서 비교적 작은 차이에 기초하여 서브클래스로 추가로 분류되고, 예를 들어 인간은 다음 서브클래스: IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2를 발현한다."단리된" 항체는 그의 생산 환경 (예를 들어, 천연 또는 재조합)의 성분으로부터 확인, 분리 및/또는 회수된 항체이다. 바람직하게는, 단리된 폴리펩티드에는 그의 생산 환경의 다른 모든 성분과의 회합이 존재하지 않는다. 그의 생산 환경의 오염 성분, 예를 들어 재조합 형질감염된 세포로부터 생성되는 것은 대개 항체에 대한 연구, 진단 또는 치료 용도를 저해할 물질이고, 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 폴리펩티드는 (1) 예를 들어 로우리 방법으로 측정시에 항체의 95 중량％를 초과하는 정도로, 일부 실시양태에서는 99 중량％를 초과하는 정도로; (2) 스피닝 컵 서열 분석기를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개의 잔기를 얻기에 충분한 정도로, 또는 (3) 쿠마시 블루 또는 바람직하게는 은 염색을 이용한 환원 또는 비-환원 조건하에서의 SDS-PAGE에 의해 균일한 정도로 정제될 것이다. 단리된 항체는 재조합 세포 내의 계내 항체를 포함하는데, 이는 항체 천연 환경의 1종 이상의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문이다. 그러나, 통상적으로, 단리된 폴리펩티드 또는 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다. 항체의 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 도메인을 지칭한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 "VH" 및 "VL"로서 칭할 수 있다. 이들 도메인은 일반적으로 항체의 최대 가변 부분이고 (동일한 클래스의 다른 항체에 비해), 항원 결합 부위를 함유한다. 용어 "가변"은 가변 도메인의 특정 분절의 서열이 항체마다 크게 상이하다는 사실을 지칭한다. V 도메인은 항원 결합을 매개하고, 그의 특정 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 규정한다. 그러나, 가변성은 가변 도메인의 전체 범위에 걸쳐 균등하게 분포되지 않는다. 대신에, 가변성은 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 모두에서 초가변 영역 (HVR)으로 불리는 3개의 세그먼트에 농축된다. 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부분은 프레임워크 영역 (FR)이라 불린다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 주로 베타-시트 형태의 4개의 FR 영역을 포함하는데, 이것은 상기 베타-시트 구조를 연결하고 일부 경우에는 베타-시트 구조의 일부를 형성하는 루프를 형성하는 3개의 HVR에 의해 연결된다. 각 사슬 내의 HVR은 FR 영역에 의해 매우 근접하게 함께 유지되고, 다른 사슬의 HVR과 함께 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다 (문헌 [Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)] 참조). 불변 도메인은 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관여하지 않지만, 다양한 이펙터 기능, 예컨대 항체 의존성 세포독성에서 항체의 참여를 나타낸다. 본원에서 사용되는 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균질한 항체들의 집단으로부터 수득한 항체를 지칭하고, 즉, 이러한 집단을 구성하는 개개의 항체는 소량으로 존재할 수도 있는, 가능한 자연 발생 돌연변이 및/또는 번역후 변형 (예를 들어, 이성질체화, 아미드화)을 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 단일 항원 부위에 대해 지시되며 고도로 특이적이다. 전형적으로 상이한 결정자 (에피토프)에 대해 작용하는 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정자에 대해 작용한다. 이러한 특이성 이외에도, 모노클로날 항체는 하이브리도마 배양에 의해 합성되고, 다른 이뮤노글로불린에 의해 오염되지 않는다는 점에서 유리하다. 수식어 "모노클로날"은 항체의 특징을 실질적으로 균일한 항체들의 집단으로부터 수득된 것으로 나타내고, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 요구하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 예를 들어, 본 발명에 따라서 사용될 모노클로날 항체는 다양한 기술, 예를 들어 하이브리도마 방법 (예를 들어, [Kohler and Milstein, Nature, 256:495-97 (1975)]; [Hongo et al., Hybridoma, 14 (3): 253-260 (1995)], [Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988)]; [Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)]), 재조합 DNA 방법 (예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호 참조), 파지-디스플레이 기술 (예를 들어, 문헌 [Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991)]; [Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992)]; [Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004)]; [Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004)]; [Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004)]; 및 [Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)] 참조) 및 인간 이뮤노글로불린 유전자좌 또는 인간 이뮤노글로불린 서열을 코딩하는 유전자의 일부 또는 전부를 갖는 동물에서 인간 또는 인간-유사 항체를 생성하는 기술 (예를 들어, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; 문헌 [Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551 (1993)]; [Jakobovits et al., Nature 362: 255-258 (1993)]; [Bruggemann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993)]; 미국 특허 제5,545,807호; 동 제5,545,806호; 동 제5,569,825호; 동 제5,625,126호; 동 제5,633,425호; 및 동 제5,661,016호; [Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992)]; [Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994)]; [Morrison, Nature 368: 812-813 (1994)]; [Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996)]; [Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996)]; 및 [Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995)])로 제조될 수 있다.용어 "네이키드 (naked) 항체"는 세포독성 모이어티 또는 방사성 표지에 접합되지 않은 항체를 지칭한다. 용어 "전장 항체", "무손상 항체" 또는 "전체 항체"는 항체 단편에 반대되는, 그의 실질적으로 무손상 형태의 항체를 지칭하는 것으로 상호 교환가능하게 사용된다. 구체적으로, 전체 항체는 Fc 영역을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 갖는 것을 포함한다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인 (예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 그의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 일부 경우에, 무손상 항체는 하나 이상의 이펙터 기능을 가질 수 있다. "항체 단편"은 무손상 항체의 일부, 바람직하게는 무손상 항체의 항원 결합 및/또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체 (미국 특허 제5,641,870호의 실시예 2; 문헌 [Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995]] 참조); 단일쇄 항체 분자 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다. 항체를 파파인 소화시키면 "Fab" 단편이라 불리는 2개의 동일한 항원 결합 단편, 및 나머지 "Fc" 단편 (이 명칭은 쉽게 결정되는 능력을 반영함)을 생성시킨다. Fab 단편은 H 쇄의 가변 영역 도메인 (VH) 및 1개 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1) 및 L 쇄 전체로 이루어진다. 각 Fab 단편은 항원 결합에 대해 1가이고, 즉, 단일 항원-결합 부위를 갖는다. 항체를 펩신 처리하면 상이한 항원 결합 활성을 갖는 2개의 디술피드 연결된 Fab 단편에 대략 상응하는 단일의 큰 F(ab')2 단편을 생성시키고, 여전히 항원에 가교결합할 수 있다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 CH1 도메인의 카르복시 말단에서 몇 개의 잔기가 추가된 점에서 Fab 단편과 상이하다. 본원에서, Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)이 유리 티올기를 보유하는 Fab'에 대한 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 원래 Fab' 단편들 사이에 힌지 시스테인을 갖는, Fab' 단편들의 쌍으로서 생성되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링도 공지되어 있다. Fc 단편은 디술피드에 의해 함께 결합되어 있는 H 쇄 2개 모두의 카르복시-말단 부분을 포함한다. 항체의 이펙터 기능은 Fc 영역 내의 서열에 의해 결정되고, 이 영역은 또한 특정 유형의 세포 상에서 발견되는 Fc 수용체 (FcR)에 의해 인식된다. "Fv"는 완전한 항원-인식 부위 및 항원-결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이 단편은 1개의 중쇄 가변 영역 도메인 및 1개의 경쇄 가변 영역 도메인이 단단하게 비-공유적으로 회합된 이량체로 이루어진다. 이들 2개 도메인이 폴딩되어 6개의 초가변 루프 (H 쇄 및 L 쇄로부터 각각 3개의 루프)가 형성되는데, 상기 루프는 항원 결합을 위한 아미노산 잔기를 제공하고 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 3개의 HVR만을 포함하는 Fv의 절반)일지라도 전체 결합 부위보다 친화성이 낮긴 하지만 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다. "sFv" 또는 "scFv"로도 약칭되는 "단일쇄 Fv"는 단일 폴리펩티드 쇄로 연결되어 있는 VH 및 VL 항체 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 바람직하게는, sFv 폴리펩티드는 sFv가 항원 결합을 위한 목적하는 구조를 형성할 수 있도록 하는, VH 및 VL 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. sFv에 관해서는 문헌 [Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]을 참조한다. 본 발명의 항체의 "기능적 단편"은 무손상 항체의 일부, 예를 들어 일반적으로 무손상 항체의 항원 결합 또는 가변 영역, 또는 변형된 FcR 결합 능력을 보유하거나 갖는 항체의 Fc 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 선형 항체, 단일쇄 항체 분자 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다. 용어 "디아바디"는 V 도메인의 사슬간이 아닌 사슬내 쌍형성이 달성되어 2가 단편, 즉, 2개의 항원 결합 부위를 갖는 단편을 생성하도록, VH 및 VL 도메인 사이에 짧은 링커 (약 5-10개 잔기)를 사용하여 sFv 단편 (상기 단락 참조)을 구성함으로써 제조된 작은 항체 단편을 지칭한다. 이중특이적 디아바디는 2개 항체의 VH 도메인 및 VL 도메인이 상이한 폴리펩티드 쇄에 존재하는 2개의 "가교" sFv 단편으로 이루어진 이종이량체이다. 디아바디는 예를 들어 EP 404,097; WO 93/11161; 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)]에 보다 상세하게 기재되어 있다. 구체적으로, 본원에서의 모노클로날 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 클래스 또는 하위클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성이고, 쇄(들)의 나머지 부분은 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 클래스 또는 하위클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 "키메라" 항체 (이뮤노글로불린), 및 또한 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한은 이러한 항체의 단편을 포함한다 (미국 특허 제4,816,567호; 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984)]). 본원에서의 관심 키메라 항체는 프리마티즈드�� 항체를 포함하고, 여기서 항체의 항원 결합 영역은 예를 들어 마카쿠 원숭이를 관심 항원으로 면역화하는 것에 의해 생산된 항체로부터 유래한다. 본원에서 사용되는, "인간화 항체"는 "키메라 항체"의 하위세트로 사용된다. 비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체의 "인간화" 형태는 비-인간 이뮤노글로불린에서 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 한 실시양태에서, 인간화 항체는 수용자의 HVR (이하 정의됨)로부터의 잔기가 비인간종 (공여자 항체), 예를 들어 목적하는 특이성, 친화성 및/또는 능력을 갖는 마우스, 래트, 토끼 또는 비-인간 영장류의 HVR로부터의 잔기로 대체된 인간 이뮤노글로불린 (수용자 항체)이다. 일부 예에서, 인간 이뮤노글로불린의 프레임워크 ("FR") 잔기를 상응하는 비-인간 잔기로 대체한다. 추가로, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서는 발견되지 않는 잔기를 포함할 수도 있다. 상기 변형은 항체 성능, 예를 들어 결합 친화성을 보다 개량하기 위해 이루어질 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 하나의, 일반적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이고, 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비인간 이뮤노글로불린 서열의 그것에 대응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 이뮤노글로불린 서열의 것이지만, FR 영역은 항체 성능, 예를 들어 결합 친화성, 이성질체화, 면역원성 등을 개선시키는 하나 이상의 개별적인 FR 잔기 치환을 포함할 수 있다. FR 중 이들 아미노산 치환의 수는 전형적으로 H 쇄에서 6 이하, L 쇄에서는 3 이하이다. 또한, 인간화 항체는 임의로 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc) 중 적어도 일부, 전형적으로는 인간 이뮤노글로불린 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 추가의 세부사항에 대해서는, 예를 들어 문헌 [Jones et al., Nature 321:522-525 (1986)]; [Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)]; 및 [Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)]을 참조한다. 또한, 예를 들어 문헌 [Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma 0026# Immunol. 1:105-115 (1998)]; [Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995)]; [Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994)]; 및 미국 특허 제6,982,321호 및 동 제7,087,409호도 참조한다."인간 항체"는 인간에 의해 생산되고/되거나 본원에 개시되는 임의의 인간 항체 제조 기술을 사용하여 제조된 항체에 대응하는 아미노산 서열을 갖는 항체이다. 인간 항체의 이러한 정의는 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체는 명확하게 제외한다. 인간 항체는 파지-디스플레이 라이브러리를 포함한 당해 분야에 공지된 각종 기술을 사용하여 생성할 수 있다. 문헌 [Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991)]; [Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)]. 또한, 문헌 [Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)]; [Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)]에 기재된 방법도 인간 모노클로날 항체의 제조에 이용가능하다. 또한, 문헌 [van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74 (2001)]을 참조한다. 인간 항체는 항원 시험접종에 반응하여 이러한 항체를 생성하도록 변형되었으나 내인성 유전자좌는 무력화시킨 트랜스제닉 동물, 예를 들어 면역화된 제노마우스(xenomice)에게 항원을 투여하여 제조될 수 있다 (예를 들어, 제노마우스(XENOMOUSE)™ 기술에 관한 미국 특허 제6,075,181호 및 동 제6,150,584호 참조). 또한, 예를 들어 인간 B 세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체에 관한 문헌 [Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)]도 참조한다. 용어 "초가변 영역", "HVR", 또는 "HV"는 본원에서 사용될 때 서열에서 초가변이고/이거나 구조상 규정된 루프를 형성하는 항체 가변 도메인의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 HVR - VH 내에 3개 (H1, H2, H3) 및 VL 내에 3개 (L1, L2, L3)를 포함한다. 천연 항체에서, H3 및 L3은 6개의 HVR 중에서 가장 높은 다양성을 나타내고, 특히 H3은 항체에 정밀한 특이성을 부여하는데 특유의 역할을 수행한다고 여겨진다. 예를 들어, 문헌 [Xu et al., Immunity 13:37-45 (2000)]; [Johnson and Wu, in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)]을 참조한다. 실제로, 중쇄만으로 이루어진 자연 발생 카멜리드(camelid) 항체는 경쇄의 부재하에 기능적이고 안정적이다. 예를 들어, 문헌 [Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993)]; [Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)]을 참조한다.많은 HVR 설명이 사용되고 있고 본원에 포함된다. 카바트 상보성 결정 영역 (CDR)은 서열 가변성에 기초한 것이며, 가장 흔히 사용되고 있다 (문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]). 대신, 코티아(Chothia)는 구조적 루프의 위치를 지칭한다 (문헌 [Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]). AbM HVR은 카바트 HVR과 코티아 구조적 루프 사이의 절충안을 나타내고, 옥스포드 몰레큘라(Oxford Molecular)의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다. "접촉" HVR은 이용가능한 복합 결정 구조의 분석을 기초로 한다. 이들 HVR 각각으로부터의 잔기가 다음에 제시된다.HVR은 다음과 같이 "연장된 HVR"을 포함할 수 있다: VL에서 24-36 또는 24-34 (L1), 46-56 또는 50-56 (L2) 및 89-97 또는 89-96 (L3), 및 VH에서 26-35 (H1), 50-65 또는 49-65 (H2) 및 93-102, 94-102, 또는 95-102 (H3). 가변 도메인 잔기는 각각의 상기 정의에 대해 문헌 [Kabat et al., 상기 문헌]에 따라 넘버링된다. 표현 "카바트에서와 같은 가변 도메인 잔기 넘버링" 또는 "카바트에서와 같은 아미노산 위치 넘버링" 및 이것의 변형 형태는 문헌 [Kabat et al., 상기 문헌]에서 항체 편집(compilation)의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 사용된 넘버링 시스템을 지칭한다. 이러한 넘버링 시스템을 이용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 HVR의 단축 또는 이것으로의 삽입에 상응하는 보다 적은 또는 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 후에 단일 아미노산 삽입 (카바트에 따른 잔기 52a), 및 중쇄 FR 잔기 82 후에 삽입된 잔기 (예를 들어, 카바트에 따른 잔기 82a, 82b 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 카바트 넘버링은 항체 서열의 상동성 영역에서 "표준" 카바트 넘버링된 서열과 정렬함으로써 주어진 항체에 대하여 결정할 수 있다. "프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 본원에서 규정되는 HVR 잔기 이외의 다른 가변 도메인 잔기이다. "인간 컨센서스 프레임워크" 또는 "수용자 인간 프레임워크"는 인간 이뮤노글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택시에 가장 흔하게 발생하는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 이뮤노글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변 도메인 서열의 하위군으로부터 행한다. 일반적으로, 서열의 하위군은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)]에서와 같은 하위군이다. 예에는, VL의 경우 하위군이 문헌 [Kabat et al., 상기 문헌]에서와 같이 하위군 카파 I, 카파 II, 카파 III 또는 카파 IV일 수 있는 것이 포함된다. 추가로, VH의 경우 하위군은 문헌 [Kabat et al., 상기 문헌]에서와 같이 하위군 I, 하위군 II, 또는 하위군 III일 수 있다. 별법적으로, 인간 컨센서스 프레임워크는 공여자 프레임워크 서열을 다양한 인간 프레임워크 서열의 집합과 정렬하여 인간 프레임워크 잔기를 공여자 프레임워크에 대한 상동성에 기초하여 선택하는 경우에서와 같이 상기 특정 잔기로부터 유래될 수 있다. 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크"로부터 유래된" 수용자 인간 프레임워크는 그의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나, 또는 이미 존재하는 아미노산 서열 변화를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이미 존재하는 아미노산 변화의 수는 10 이하, 9 이하, 8 이하, 7 이하, 6 이하, 5 이하, 4 이하, 3 이하, 또는 2 이하이다. "VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크"는 문헌 [Kabat et al., 상기 문헌]의 가변 중쇄 하위군 III 내의 아미노산 서열로부터 수득된 컨센서스 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크 아미노산 서열은 각각의 하기 서열의 적어도 일부 또는 전부를 포함한다: , , , ."VL 카파 I 컨센서스 프레임워크"는 문헌 [Kabat et al., 상기 문헌]의 가변 경쇄 카파 하위군 I 내의 아미노산 서열로부터 수득된 컨센서스 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, VH 하위군 I 컨센서스 프레임워크 아미노산 서열은 각각의 다음 서열의 적어도 일부 또는 전부를 포함한다: , , , .예를 들어 Fc 영역의 특정 위치에서 "아미노산 변형"은 특정 잔기의 치환 또는 결실 또는 특정 잔기에 인접한 적어도 하나의 아미노산 잔기의 삽입을 지칭한다. 특정 잔기에 "인접한" 삽입은 그의 1 또는 2개의 잔기 내의 삽입을 의미한다. 삽입은 특정 잔기에 대해 N-말단 또는 C-말단일 수 있다. 본원에서 바람직한 아미노산 변형은 치환이다. "친화성 성숙" 항체는 변경(들)을 갖지 않는 모 항체에 비해 항원에 대한 항체의 친화성을 개선시키는, 그의 하나 이상의 HVR에 하나 이상의 변경을 갖는 항체이다. 한 실시양태에서, 친화성 성숙 항체는 표적 항원에 대한 나노몰 또는 심지어 피코몰의 친화성을 갖는다. 친화성 성숙 항체는 당업계에 공지된 절차에 의해 생성된다. 예를 들어, 문헌 [Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992)]에서는 VH 및 VL 도메인 셔플링(shuffling)에 의한 친화성 성숙을 기재하고 있다. HVR 및/또는 프레임워크 잔기의 무작위 돌연변이유발에 대해서는, 예를 들어 문헌 [Barbas et al., Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994)]; [Schier et al., Gene 169:147-155 (1995)]; [Yelton et al., J. Immunol. 155:1994-2004 (1995)]; [Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995)]; 및 [Hawkins et al., J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)]에 기재되어 있다.본원에서 사용되는 용어 "~에 특이적으로 결합한다" 또는 "~에 특이적인"은 생물 분자를 포함하는 이종 분자 집단의 존재하에서 표적의 존재를 결정할 수 있는 것으로, 측정가능하고 재생가능한 상호작용, 예컨대 표적 및 항체 사이의 결합을 지칭한다. 예를 들어, 표적 (에피토프일 수 있음)에 특이적으로 결합하는 항체는 다른 표적에 결합하는 것에 비해 이 표적에 더 높은 친화성, 결합성, 더 큰 용이성, 및/또는 더 긴 기간 동안 결합하는 항체이다. 한 실시양태에서, 비관련 표적에 항체가 결합하는 정도는, 예를 들어 방사선면역검정 (RIA)으로 측정시, 표적에 대한 항체의 결합의 약 10％ 미만이다. 특정 실시양태에서, 표적에 특이적으로 결합하는 항체의 해리 상수 (Kd)는 ≤1 μM, ≤100 nM, ≤10 nM, ≤1 nM, 또는 ≤0.1 nM이다. 특정 실시양태에서, 항체는 상이한 종으로부터의 단백질 사이에 보존된 단백질 상의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 특이적 결합에는 배타적인 결합이 포함될 수 있지만, 배타적인 결합이 요구되는 것은 아니다. "차단" 항체 또는 "길항제" 항체는 그가 결합하는 항원의 생물학적 활성을 억제하거나 감소시키는 항체이다. 일부 실시양태에서, 차단 항체 또는 길항제 항체는 항원의 생물학적 활성을 실질적으로 또는 완전히 억제한다. 본 발명의 항-PD-L1 항체는 T 세포에 의한 기능적 반응이 항원 자극에 대해 기능이상 상태로부터 회복되도록 PD-1을 통한 신호전달을 차단한다."효능제" 또는 활성화 항체는 그것이 결합하는 항원에 의한 신호전달을 향상시키거나 개시하는 것이다. 일부 실시양태에서, 효능제 항체는 천연 리간드 없이 신호전달을 유발하거나 활성화한다.용어 "고체상"은 본 발명의 항체가 부착될 수 있는 비수성 매트릭스를 의미한다. 본원에 포함되는 고체상의 예는 부분적으로 또는 전적으로 유리 (예를 들어, 공극이 제어된 유리), 폴리사카라이드 (예를 들어, 아가로스), 폴리아크릴아미드, 폴리스티렌, 폴리비닐 알콜 및 실리콘으로 형성된 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 문맥에 따라 고체상은 검정 플레이트의 웰을 포함할 수 있으며; 다른 실시양태에서 고체상은 정제 칼럼 (예를 들어, 친화성 크로마토그래피 칼럼)이다. 상기 용어는 또한 미국 특허 제4,275,149호에 기재된 것과 같은 별개 입자의 불연속 고체상도 포함한다. "항체 이펙터 기능"은 항체의 Fc 영역 (천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에서 기인한 생물학적 활성을 지칭하며, 항체 이소형에 따라 다양하다. 항체 이펙터 기능의 예에는 C1q 결합 및 보체 의존성 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체 - 의존성 세포 매개 세포독성 (ADCC); 식세포작용; 세포 표면 수용체 (예를 들어, B 세포 수용체)의 하향조절; 및 B 세포 활성화가 포함된다. "감소되거나 최소화된" 항체 이펙터 기능이란 야생형 또는 비변형 항체로부터 적어도 50％ (별법적으로 60％, 65％, 70％, 75％, 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％) 만큼 감소된 것을 의미한다. 항체 이펙터 이펙터 기능의 판단은 당업자가 용이하게 판단 및 측정가능하다. 바람직한 실시양태에서, 보체 결합, 보체 의존성 세포독성 및 항체 의존성 세포독성의 항체 이펙터 기능이 영향을 받는다. 본 발명의 일부 실시양태에서, 이펙터 기능은 글리코실화를 제거하는 불변 영역에서의 돌연변이, 예를 들어 "비-이펙터 돌연변이"를 통해 제거된다. 한 측면에서, 비-이펙터 돌연변이는 CH2 영역에서의 N297A 또는 DANA 돌연변이 (D265A + N297A)이다. 문헌 [Shields et al., J. Biol. Chem. 276 (9): 6591-6604 (2001)]. 별법적으로, 감소되거나 제거된 이펙터 기능을 야기하는 추가의 돌연변이에는 K322A 및 L234A/L235A (LALA)가 포함된다. 별법적으로, 이펙터 기능은 생산 기술, 예컨대 글리코실화되지 않거나 (예를 들어, 이. 콜라이) 또는 이펙터 기능을 촉진하는데 효과가 없거나 덜 효과적인 변경된 글리코실화 패턴을 야기하는 숙주 세포에서의 발현을 통해 감소시키거나 제거할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Shinkawa et al., J. Biol. Chem. 278(5): 3466-3473 (2003)])."항체 의존성 세포 매개 세포독성" 또는 ADCC는 특정 세포독성의 세포 (예를 들어 자연 살해 (NK) 세포, 호중구 및 대식세포)에 존재하는 Fc 수용체 (FcR)에 결합된 분비된 Ig가, 상기 세포독성의 이펙터 세포가 항원 보유 표적 세포에 특이적으로 결합한 후, 표적 세포를 세포독소로 사멸시키도록 만드는 세포독성의 한 형태를 지칭한다. 항체는 세포독성 세포를 "무장"시키고, 상기 메카니즘으로 표적 세포를 치사시키는데 필요하다. ADCC를 매개하는 주요 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈세포 상의 Fc 발현은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol., 9:457-92 (1991)]의 464 페이지 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 시험관내 ADCC 검정, 예를 들어 미국 특허 제5,500,362호 또는 동 제5,821,337호에 기재된 검정을 수행할 수 있다. 이러한 검정에 유용한 이펙터 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 살해 (NK) 세포를 포함한다. 별법적으로, 또는 추가로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체 내에서, 예를 들어 문헌 [Clynes et al., PNAS USA 95:652-656 (1998)]에 개시된 동물 모델에서 평가할 수 있다.본원에서 달리 나타내지 않는 한, 이뮤노글로불린 중쇄 내 잔기의 넘버링은 문헌 [Kabat et al., 상기 문헌]에서와 같은 EU 색인의 넘버링이다. "카바트에서와 같은 EU 색인"은 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다. 본원에서의 용어 "Fc 영역"은 이뮤노글로불린 중쇄의 C-말단 영역, 예를 들어 천연 서열 Fc 영역 또는 변이체 Fc 영역을 정의하기 위하여 사용된다. 이뮤노글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 달라질 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 일반적으로 위치 Cys226 또는 Pro230의 아미노산 잔기로부터 이것의 카르복실 말단까지의 스트레치인 것으로 정의된다. Fc 영역의 C-말단 리신 (EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은 예를 들어 항체의 생성 또는 정제 동안 또는 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산의 재조합 조작에 의해 제거될 수 있다. 따라서, 무손상 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않는 항체 집단, 및 K447 잔기가 존재하거나 존재하지 않는 항체들의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다. 본 발명의 항체에 사용하기 적합한 천연 서열 Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2 (IgG2A, IgG2B), IgG3 및 IgG4를 포함한다. "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기재한다. 바람직한 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 또한, 바람직한 FcR은 IgG 항체 (감마 수용체)에 결합하는 것이고, FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 하위클래스의 수용체의 대립유전자 변이체 및 선택적 스플라이싱된 형태를 비롯한 상기 수용체를 포함하며, FcγRII 수용체는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("억제 수용체")를 포함하고, 이들은 그의 세포질 도메인에서 주로 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기재의 활성화 모티프 (ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기재의 억제 모티프 (ITIM)를 함유한다. (문헌 [M. Daeeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)] 참조). FcR은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991)]; [Capel et al., Immunomethods 4: 25-34 (1994)]; 및 [de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995)]에서 고찰된다. 추후에 확인될 것을 포함하는 기타 FcR이 본원의 용어 "FcR"에 포함된다.용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 또한 모체 IgG의 태아로의 전달을 담당하는 신생아의 수용체인 FcRn을 포함한다. 문헌 [Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976)] 및 [Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)]. FcRn에 대한 결합을 측정하는 방법은 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Ghetie and Ward, Immunol. Today 18:(12):592-8 (1997)]; [Ghetie et al., Nature Biotechnology 15(7):637-40 (1997)]; [Hinton et al., J. Biol. Chem. 279(8):6213-6 (2004)]; WO 2004/92219 (Hinton et al.) 참조). 생체 내에서 FcRn에 대한 결합 및 인간 FcRn 높은 친화성 결합 폴리펩티드의 혈청 반감기는 예를 들어 인간 FcRn을 발현하는 트랜스제닉 마우스 또는 형질감염된 인간 세포주에서, 또는 Fc 변이체 영역을 갖는 폴리펩티드가 투여된 영장류에서 검정될 수 있다. WO 2004/42072 (Presta)에는 FcR에 대한 결합이 개선 또는 감소된 항체 변이체가 기재되어 있다. 또한, 예를 들어 문헌 [Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)]을 참조한다."이펙터 세포"는 1종 이상의 FcR을 발현하고 이펙터 기능을 수행하는 백혈구이다. 한 측면에서, 이펙터 세포는 적어도 FcγRIII를 발현하고 ADCC 이펙터 기능을 수행한다. ADCC를 매개하는 인간 백혈구의 예는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 자연 살해 (NK) 세포, 단핵구, 세포독성 T 세포 및 호중구를 포함한다. 이펙터 세포는 천연 공급원, 예를 들어 혈액으로부터 단리할 수 있다. 이펙터 세포는 일반적으로 이펙터 기와 관련된 림프구이고, 시토카인을 생산하거나 (헬퍼 T 세포), 병원체에 의해 감염된 세포를 사멸하거나 (세포독성 T 세포), 항체를 분비하는 (분화된 B 세포) 기능을 한다. "보체 의존성 세포독성" 또는 "CDC"는 보체 존재하에의 표적 세포의 용해를 지칭한다. 고전적 보체 경로의 활성화는 동족 항원에 결합된 항체 (적절한 하위클래스의 항체)에 대한 보체 시스템 제1 성분 (C1q)의 결합으로 개시된다. 보체 활성화를 평가하기 위하여, 예를 들어 문헌 [Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996)]에 기재된 바와 같은 CDC 검정을 수행할 수 있다. Fc 영역 아미노산 서열이 변경되고 C1q 결합능이 증가 또는 감소된 항체 변이체가 미국 특허 제6,194,551B1호 및 WO99/51642에 기재되어 있다. 이러한 특허 공보의 내용은 본원에 참고로 명확하게 포함된다. 문헌 [Idusogie et al., J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)]을 또한 참조한다.IgG의 N-글리코실화 부위는 CH2 도메인에서 Asn297이다. 본 발명은 또한, 이펙터 기능이 감소되거나 없는 Fc 영역을 갖는 항원-결합, 인간화 항체 조성물을 제공한다. 이것을 달성할 수 있는 한 가지 방법은 A297N 치환으로, 이것은 종전에 항-CD20 항체에서 보체 결합 및 이펙터 기능을 없애는 것 ("비-이펙터 Fc 돌연변이체")으로 밝혀졌다. 문헌 [Idusgie et al., 상기 문헌]. 이러한 돌연변이 결과, CHO와 같은 포유동물 세포에서 이러한 Fc 돌연변이를 함유하는 본 발명의 항-PD-L1 항체의 생산은 어떤 글리코실화도 갖지 않을 것이고, 그 결과 이펙터 기능은 감소되거나 또는 최소화될 것이다. 별법적으로, 항체 이펙터 기능은 CH2 치환 없이, 이. 콜라이와 같은 비 포유동물 세포에서 발현시키는 것에 의해 제거될 수 있다. "결합 친화성"은 일반적으로 분자 (예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너 (예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호작용의 총 합의 강도를 지칭한다. 달리 지시되지 않는 한, 본원에서 사용된 "결합 친화성"은 결합 쌍의 구성원들 (예를 들어, 항체 및 항원) 간의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화성을 지칭한다. 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화성은 일반적으로 해리 상수 (Kd)로 표시될 수 있다. 친화성은 본원에 기재된 방법을 포함하는 당업계 공지의 통상의 방법으로 측정할 수 있다. 낮은 친화성 항체는 일반적으로 항원과 서서히 결합하고 쉽게 해리되는 경향이 있는 반면, 높은 친화성 항체는 일반적으로 항원과 보다 신속하게 결합하고 보다 오랫동안 결합된 상태를 유지하는 경향이 있다. 결합 친화성을 측정하는 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있고, 본 발명의 목적상, 이들 중 임의의 방법이 사용될 수 있다. 결합 친화성 측정을 위한 구체적이고 예시적인 실시양태를 아래에 기재한다. 본 발명에 따른 "Kd" 또는 "Kd 값"은 한 실시양태에서 표지되지 않은 항원의 적정 시리즈의 존재 하에 (125I)-표지된 항원의 최소 농도로 Fab를 평형화시킨 후, 항-Fab 항체-코팅된 플레이트를 사용하여 결합된 항원을 포획함으로써 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화성을 측정하는 하기 검정에서 설명되는 바와 같이, 항체의 Fab 버전 및 항원 분자를 사용하여 수행된 방사성 표지된 항원 결합 검정 (RIA)에 의해 측정된다 (문헌 [Chen, et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881]). 이러한 검정에 대한 조건을 확립시키기 위해, 마이크로타이터 플레이트 (다이넥스(Dynex))를 50 mM 탄산나트륨 (pH 9.6) 중의 5 ㎍/ml의 포획성 항-Fab 항체 (카펠 랩스(Cappel Labs))로 밤새 코팅한 후, 실온 (대략 23℃) 하에 2 내지 5 시간 동안 PBS 중의 2％ (w/v) 소 혈청 알부민으로 차단시킨다. 비흡착 플레이트 (눈크 #269620)에서, 100 pM 또는 26 pM [125I]-항원을 관심 Fab의 연속 희석물과 혼합한다 (문헌 [Presta et al., (1997) Cancer Res. 57:4593-4599)]의 항-VEGF 항체, Fab-12의 평가와 일치함). 이어서, 관심 Fab를 밤새 인큐베이션하되; 그러나, 평형이 도달하는 것을 확실하게 하기 위해 더 오랜 시간 (예를 들어, 65 시간) 동안 계속 인큐베이션할 수 있다. 그 후, 혼합물을 포획 플레이트로 옮겨 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션한다. 이어서, 용액을 제거하고, 플레이트를 PBS 중의 0.1％ 트윈-20으로 8회 세척하였다. 플레이트를 건조시킬 때, 150 ㎕/웰의 섬광제 (마이크로신트-20; 팩카드)를 첨가하고, 플레이트를 탑카운트 감마 계수기 (팩카드) 상에서 10 분 동안 계수한다. 최대 결합의 20％ 이하를 제공하는 각 Fab의 농도를 선택하여 경쟁적 결합 검정에 사용한다. 또 다른 실시양태에 따르면, Kd는 약 10의 반응 단위 (RU)로 고정된 항원 CM5 칩을 사용하여 25℃에서 비아코어��-2000 또는 비아코어��-3000 기기 (비아코어, 인크., 뉴저지주 피스카타웨이 소재)를 사용하는 표면 플라즈몬 공명 검정을 사용하여 측정한다. 간략하게, 카르복시메틸화 덱스트란 바이오센서 칩 (CM5, 비아코아, 인크.)을 공급업체의 지침에 따라 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC) 및 N-히드록시숙신이미드 (NHS)로 활성화시킨다. 항원을 10 mM 아세트산나트륨 (pH 4.8)을 사용하여 5 ㎍/ml (약 0.2 μM)로 희석한 후, 커플링된 단백질의 약 10 반응 단위 (RU)를 달성하도록 5 ㎕/분의 유속으로 주입한다. 항원 주입 후, 미반응 기를 차단하기 위해 1 M 에탄올아민을 주입한다. 역학 측정을 위해, Fab의 2배 연속 희석물 (0.78 nM 내지 500 nM)을 대략 25 ㎕/분의 유속으로 25℃에서 0.05％ 트윈 20™ 계면활성제를 함유하는 PBS (PBST) 중에 주입한다. 단순한 일대일 랭뮤어 결합 모델 (비아코어�� 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 사용하여 회합 및 해리 센서그램을 동시에 핏팅시킴으로써 회합율 (kon) 및 해리율 (koff)을 계산한다. 평형 해리 상수 (Kd)는 koff/kon의 비로 계산한다. 예를 들어, 문헌 [Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)]을 참조한다. 온-레이트 (on-rate)가 상기 표면 플라즈몬 공명 검정에 의해 106M-1s-1을 초과하면, 온-레이트는 분광계, 예를 들어 정지 유동 설치 분광광도계 (아비브 인스트루먼츠(Aviv Instruments)) 또는 교반 큐벳이 구비된 8000-시리즈 SLM-AMINCO™ 분광광도계 (써모스펙트로닉(ThermoSpectronic))에서 측정할 때 증가하는 농도의 항원의 존재 하에, PBS (pH 7.2) 중 20 nM의 항-항원 항체 (Fab 형태)의 25℃에서의 형광 방출 강도 (여기 = 295 nm; 방출 = 340 nm, 16 nm 밴드 통과)의 증가 또는 감소를 측정하는 형광 켄칭 기술을 사용하여 결정할 수 있다. 본 발명에 따른 "온-레이트", "회합 속도", "회합율", 또는 "kon"은 또한 25℃에서 약 10 반응 단위 (RU)로 고정된 항원 CM5 칩과 함께 비아코어��-2000 또는 비아코어��-3000 시스템 (비아코어, 인크., 뉴저지주 피스카타웨이 소재)을 사용하여 상기한 바와 같이 측정할 수 있다. 간략하게, 카르복시메틸화 덱스트란 바이오센서 칩 (CM5, 비아코어 인크.)을 공급업체의 지침에 따라 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 히드로클로라이드 (ECD) 및 N-히드록시숙신이미드 (NHS)로 활성화시킨다. 항원을 10 mM 아세트산나트륨 (ph 4.8)을 사용하여 5 mg/ml (약 0.2 mM)로 희석한 후, 커플링된 단백질의 약 10 반응 단위 (RU)를 달성하도록 5 ml/분의 유속으로 주입한다. 항원 주입 후에, 미반응기를 차단하기 위해 1 M 에탄올아민을 첨가한다. 역학 측정을 위해, Fab의 2배 연속 희석물 (0.78 nM 내지 500 nM)을 대략 25 ㎕/분의 유속으로 25℃에서 0.05％ 트윈 20을 함유하는 PBS (PBST) 중에 주입한다. 단순한 일대일 랭뮤어 결합 모델 (비아코어 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 사용하여 회합 및 해리 센서그램을 동시에 핏팅시킴으로써 회합율 (kon) 및 해리율 (koff)을 계산한다. 평형 해리 상수 (Kd)는 koff/kon의 비로 계산하였다. 예를 들어, 문헌 [Chen, Y., et al., (1999) J. Mol Biol 293: 865-881]을 참조한다. 그러나, 온-레이트가 상기 표면 플라즈몬 공명 검정에 의해 106M-1s-1을 초과하면, 온-레이트는 바람직하게는 분광계, 예를 들어 정지 유동 설치 분광광도계 (아비브 인스트루먼츠) 또는 교반 큐벳이 구비된 8000-시리즈 SLM-Aminco 분광광도계 (써모스펙트로닉)에서 측정할 때 증가하는 농도의 항원의 존재 하에, PBS (pH 7.2) 중 20 nM의 항-항원 항체 (Fab 형태)의 25℃에서의 형광 방출 강도 (여기 = 295 nm; 방출 = 340 nm, 16 nm 밴드 통과)의 증가 또는 감소를 측정하는 형광 켄칭 기술을 사용하여 결정할 수 있다.본원에서 사용되는 어구 "실질적으로 감소된" 또는 "실질적으로 상이한"은 당업자가 2개의 수치값 (일반적으로, 하나는 분자와 관련이 있고, 다른 하나는 참조/비교 분자와 관련이 있음) (예를 들어, Kd 값)에 의해 측정된 생물학적 특징과 관련하여 이들 2개 값 사이의 차이를 통계적 유의성이 있는 것으로 간주할 정도의, 상기 값 사이의 충분히 높은 정도의 차이를 나타낸다. 상기 2개 값 사이의 차이는 참조/비교 분자에 대한 값의 함수로서 예를 들어 약 10％ 초과, 약 20％ 초과, 약 30％ 초과, 약 40％ 초과 및/또는 약 50％ 초과이다. 본원에서 사용되는 용어 "실질적으로 유사한" 또는 "실질적으로 동일한"은 당업자가 2개의 수치값 (예를 들어, 하나는 본 발명의 항체와 관련이 있고, 다른 하나는 참조/비교 항체와 관련이 있음) (예를 들어, Kd 값)에 의해 측정된 생물학적 특징과 관련하여 이들 2개 값 사이의 차이를 생물학적 및/또는 통계적 유의성이 거의 또는 전혀 없는 것으로 간주할 정도의, 상기 값 사이의 충분히 높은 정도의 유사성을 나타낸다. 상기 2개 값 사이의 차이는 참조/비교 값의 함수로서 예를 들어 약 50％ 미만, 약 40％ 미만, 약 30％ 미만, 약 20％ 미만 및/또는 약 10％ 미만이다. 펩티드, 폴리펩티드 또는 항체 서열에 대한 "아미노산 서열 동일성 퍼센트 (％)" 및 "상동성"은 서열을 정렬시키고 필요한 경우 최대 서열 동일성 퍼센트를 달성하도록 갭 (gap)을 도입한 후, 특정 펩티드 또는 폴리펩티드 서열 내의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로서 본원에서 정의되고, 임의의 보존적 치환은 서열 동일성의 일부로 간주하지 않는다. 아미노산 서열 동일성 퍼센트를 결정하기 위한 정렬은 당업자에게 공지된 다양한 방법, 예를 들어 공개적으로 입수가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN, 또는 MEGALIGN™ (DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 달성할 수 있다. 당업자는 비교될 전장 서열에 대한 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 비롯하여 정렬 결정에 적절한 파라미터를 정할 수 있다. 그러나, 본원의 목적상, 핵산 서열 동일성 ％ 값은 제넨테크, 인크.가 저작권자인 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 이용하여 생성한다. ALIGN-2의 소스 코드는 미국 저작권청 (미국 20559 워싱턴 디.씨.)에 사용자 문서로 제출되어 있고, 미국 저작권 등록 번호 TXU510087로 등록되어 있다. ALIGN-2 프로그램은 제넨테크, 인크. (캘리포니아주 사우스 샌 프란시스코 소재)로부터 공개적으로 입수가능하다. ALIGN-2 프로그램은 유닉스 운영 체제, 바람직하게는 디지털 유닉스 V4.0D에서 사용되도록 컴파일해야 한다. 모든 서열 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되어 있으며 변하지 않는다. 아미노산 서열 비교를 위해 ALIGN-2가 사용되는 상황에서, 주어진 아미노산 서열 B에, 또는 주어진 아미노산 서열 B와, 또는 주어진 아미노산 서열 B에 대한 주어진 아미노산 서열 A의 ％ 아미노산 서열 동일성 (별법적으로, 주어진 아미노산 서열 B에, 또는 주어진 아미노산 서열 B와, 또는 주어진 아미노산 서열 B에 대해 특정 ％ 아미노산 서열 동일성을 갖거나 포함하는 주어진 아미노산 서열 A라는 어구로 표현될 수 있음)은 다음과 같이 계산된다:여기서, X는 A와 B의 프로그램 정렬에서 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2에 의해 동일한 매치(match)로 스코어링되는 아미노산 잔기의 수이고, Y는 B에 있는 아미노산 잔기의 총 수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 동일하지 않은 경우에는 B에 대한 A의 ％ 아미노산 서열 동일성이 A에 대한 B의 ％ 아미노산 서열 동일성과 동일하지 않을 것임을 이해할 것이다. 달리 구체적으로 언급하지 않는다면, 본원에서 사용되는 모든 ％ 아미노산 서열 동일성 값은 바로 앞 단락에서 기재한 바와 같이 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 구한다. 본원의 항체를 코딩하는 "단리된" 핵산 분자는 예를 들어 그것이 생산되는 환경에서 그와 통상적으로 회합되는 적어도 하나의 오염 핵산 분자로부터 확인되고 분리된 핵산 분자이다. 바람직하게는, 단리된 핵산은 생산 환경과 관련된 모든 성분과의 회합이 존재하지 않는다. 본 발명의 폴리펩티드 및 항체를 코딩하는 단리된 핵산 분자는 자연에서 발견되는 형태 또는 세팅이 아닌 형태이다. 따라서, 단리된 핵산 분자는 세포에서 천연으로 존재하는 본원의 폴리펩티드 및 항체를 코딩하는 핵산과는 구별된다. 용어 "제어 서열"은 특정 숙주 유기체에서 작동가능하게 연결된 코딩 서열의 발현에 필요한 DNA 서열을 지칭한다. 원핵세포에 적합한 제어 서열은, 예를 들어 프로모터, 임의로 오퍼레이터 서열 및 리보솜 결합 부위를 포함한다. 진핵 세포는 프로모터, 폴리아데닐화 신호 및 인핸서를 이용하는 것으로 공지되어 있다. 핵산은 다른 핵산 서열과 기능적 관계로 배치될 때 "작동가능하게 연결"된다. 예를 들어, 예비 서열 또는 분비 리더용 DNA는 폴리펩티드의 분비에 참여하는 예비 단백질로서 발현되는 경우에 폴리펩티드용 DNA에 작동가능하게 연결되거나; 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 주는 경우에 코딩 서열에 작동가능하게 연결되거나; 또는 리보솜 결합 부위는 번역을 촉진하도록 배치되는 경우에 코딩 서열에 작동가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동가능하게 연결된"은 연결되는 DNA 서열이 인접함을 의미하고, 분비 리더의 경우 인접하고 리딩 상으로 존재한다. 그러나, 인핸서는 반드시 인접하여 위치할 필요가 없다. 연결은 편리한 제한 부위에서의 라이게이션을 통해 달성된다. 이러한 부위가 존재하지 않는 경우에는 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커를 통상적인 관행에 따라 사용한다. 본원에서 사용되는 용어 "에피토프 태그가 부착된 (tagged)"은 "태그 폴리펩티드"에 융합된 본원에 설명된 폴리펩티드 또는 항체를 포함하는 키메라 폴리펩티드를 지칭한다. 태그 폴리펩티드는 항체가 생성될 수 있는 에피토프를 제공할 만큼 충분한 잔기를 갖지만 그와 융합될 폴리펩티드의 활성을 방해하지 않을 정도로 충분히 짧다. 또한, 태그 폴리펩티드는 항체가 다른 에피토프와는 실질적으로 교차반응하지 않도록 아주 독특한 것이 바람직하다. 일반적으로, 적합한 태그 폴리펩티드는 적어도 6개의 아미노산 잔기, 통상적으로는 약 8개 내지 50개의 아미노산 잔기 (바람직하게는, 약 10개 내지 20개의 아미노산 잔기)를 갖는다. 본원에서 사용되는 용어 "이뮤노어드헤신"은 이뮤노글로불린 불변 도메인의 이펙터 기능과 이종 단백질 ("어드헤신")의 결합 특이성을 겸비한 항체 유사 분자를 지칭한다. 구조적으로, 이뮤노어드헤신은 항체의 항원 인식 및 결합 부위 이외 (즉, "이종")의 원하는 결합 특이성을 갖는 아미노산 서열과 이뮤노글로불린 불변 도메인 서열의 융합체를 포함한다. 이뮤노어드헤신 분자의 어드헤신 부분은 전형적으로 수용체 또는 리간드의 적어도 결합 부위를 포함하는 인접한 아미노산 서열이다. 이뮤노어드헤신 내의 이뮤노글로불린 불변 도메인 서열은 임의의 이뮤노글로불린, 예컨대 IgG-1, IgG-2 (예를 들어 IgG2A 및 IgG2B), IgG-3 또는 IgG-4 하위유형, IgA (예를 들어, IgA-1 및 IgA-2), IgE, IgD 또는 IgM으로부터 수득될 수 있다. Ig 융합체는 바람직하게는 Ig 분자 내의 하나 이상의 가변 영역 대신 본원에 기술된 폴리펩티드 또는 항체 도메인의 치환을 포함한다. 특히 바람직한 실시양태에서, 이뮤노글로불린 융합체는 힌지, CH2 및 CH3, 또는 힌지, IgG1 분자의 CH1, CH2 및 CH3 영역을 포함한다. 이뮤노글로불린 융합체의 생산에 대해서는 또한 미국 특허 제5,428,130호 (1995년 6월 27일 허여됨)를 참조한다. 예를 들어, 본원에서 조합 요법에 유용한 제2 의약으로서 유용한 이뮤노어드헤신은 이뮤노글로불린 서열의 불변 도메인에 융합된, PD-L1 또는 PD-L2 또는 그 반대의 세포외 또는 PD-1 결합 부분을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다."융합 단백질" 및 "융합 폴리펩티드"는 함께 공유 연결된 2개의 부분을 갖는 폴리펩티드이고, 여기서 각각의 부분은 상이한 특성을 갖는 폴리펩티드이다. 성질은 생물학적 성질, 예컨대 시험관내 또는 생체내 활성일 수 있다. 또한, 특성은 간단한 화학적 또는 물리적 특성, 예를 들어 표적 분자에 대한 결합, 반응의 촉매 작용 등일 수 있다. 2개의 부분은 단일 펩티드 결합에 의해 직접 연결될 수 있거나 또는 펩티드 링커를 통해 서로 리딩 프레임으로 연결될 수 있다. "안정한" 제제는 보관시 그 안의 단백질이 그의 물리적 및 화학적 안정성, 및 일체성을 본질적으로 유지하는 것이다. 단백질 안정성을 측정하기 위한 다양한 분석 기술들이 당업계에서 사용될 수 있고, 문헌 [Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, New York, Pubs.(1991)] 및 [Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10:29-90(1993)]에 검토되어 있다. 안정성은 선택된 시간 동안 선택된 온도에서 측정될 수 있다. 신속한 스크리닝을 위해 제제를 40℃에서 2주 내지 1개월 동안 보관할 수 있고, 이때 안정성을 측정한다. 제제를 2-8℃에서 보관할 경우에는, 통상적으로 제제는 30℃ 또는 40℃에서 1개월 이상 보관시 안정해야 하고/하거나, 2-8℃에서 2년 이상 보관시 안정해야 한다. 제제를 30℃에서 보관할 경우에는, 통상적으로 제제는 30℃에서 2년 이상 안정해야 하고/하거나 40℃에서 6개월 이상 안정해야 한다. 예를 들어, 보관 동안의 응집 정도는 단백질 안정성의 지표로서 사용될 수 있다. 따라서, "안정한" 제제는 제제에서 약 10％ 미만, 바람직하게는 약 5％ 미만의 단백질이 제제 내에 응집체로서 존재하는 것일 수 있다. 기타 실시양태에서, 제제를 보관하는 동안 응집체 형성이 증가하는지를 측정할 수 있다. "재구성된" 제제는 단백질이 전체적으로 분산되도록 동결건조된 단백질 또는 항체 제제를 희석제에 용해시켜 제조된 것이다. 재구성된 제제는 관심 단백질로 치료될 환자에게 투여 (예를 들어, 피하 투여)하기에 적합하고, 본 발명의 특정 실시양태에서는 비경구 또는 정맥내 투여에 적합한 것일 수 있다. "등장성" 제제는 본질적으로 인간 혈액과 동일한 삼투압을 갖는 것이다. 등장성 제제는 일반적으로 약 250 내지 350 mOsm의 삼투압을 가질 것이다. 용어 "저장성 (hypotonic)"이란 인간 혈액의 삼투압 미만의 삼투압을 갖는 제제를 나타낸다. 따라서, 용어 "고장성 (hypertonic)"은 인간 혈액의 삼투압을 초과하는 삼투압을 갖는 제제를 기술하는데 사용된다. 예를 들어, 증기압 또는 빙냉 유형 삼투압측정기를 사용하여 등장성을 측정할 수 있다. 본 발명의 제제는 염 및/또는 완충액을 첨가한 결과로서 고장성이다. 본원에서 사용된 "담체"는 사용되는 투여량 및 농도에서 이에 노출되는 세포 또는 포유동물에 비독성인 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제를 포함한다. 종종, 생리적으로 허용되는 담체는 수성 pH 완충 용액이다. 생리적으로 허용되는 담체의 예는 완충액, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 기타 유기산; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산; 저분자량 (약 10개 잔기 미만) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들어 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들어 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드 및 기타 탄수화물, 예를 들어 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당 알콜, 예컨대 만니톨 또는 소르비톨; 염 형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대 트윈™, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 플루로닉스™를 포함한다. 용어 "포장 삽입물"은 적응증, 사용, 용량, 투여에 대한 정보, 금기사항, 포장 제품과 함께 조합되는 다른 의약 및/또는 상기 의약의 사용에 대한 경고 등을 포함하는, 의약의 상업적 포장에 통상적으로 포함되는 사용 지시서를 지칭한다. "제약상 허용되는 산"은 제제화된 농도 및 방식에서 비독성인 무기산 및 유기산을 포함한다. 예를 들어, 적합한 무기산은 염산, 과염소산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 질산, 황산, 술폰산, 술핀산, 술파닐산, 인산, 탄산 등을 포함한다. 적합한 유기산은 직쇄 및 분지쇄 알킬, 방향족, 시클릭, 지환족, 아릴지방족, 헤테로시클릭, 포화, 불포화, 모노, 디- 및 트리-카르복실산을 포함하고, 예를 들어 포름산, 아세트산, 2-히드록시아세트산, 트리플루오로아세트산, 페닐아세트산, 트리메틸아세트산, t-부틸 아세트산, 안트라닐산, 프로판산, 2-히드록시프로판산, 2-옥소프로판산, 프로판디온산, 시클로펜탄프로피온산, 시클로펜탄 프로피온산, 3-페닐프로피온산, 부탄산, 부탄디오산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일)벤조산, 2-아세톡시-벤조산, 아스코르브산, 신남산, 라우릴 황산, 스테아르산, 뮤콘산, 만델산, 숙신산, 엠본산, 푸마르산, 말산, 말레산, 히드록시말레산, 말론산, 락트산, 시트르산, 타르타르산, 글리콜산, 글리콘산, 글루콘산, 피루브산, 글리옥살산, 옥살산, 메실산, 숙신산, 살리실산, 프탈산, 팔모산, 팔메산, 티오시안산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 1,2-에탄디술폰산, 2-히드록시에탄술폰산, 벤젠술폰산, 4-클로로벤젠술폰산, 나프탈렌-2-술폰산, p-톨루엔술폰산, 캄포르술폰산, 4-메틸비시클로[2.2.2]-옥트-2-엔-1-카르복실산, 글루코헵톤산, 4,4'-메틸렌비스-3-(히드록시-2-엔-1-카르복실산), 히드록시나프토산이 포함된다. "제약상 허용되는 염기"는 제제화된 농도 및 방식에서 비독성인 무기 염기 및 유기 염기를 포함한다. 예를 들어, 적합한 염기는 무기 염기 형성 금속, 예를 들어 리튬, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘, 암모늄, 철, 아연, 구리, 망간, 알루미늄, N-메틸글루카민, 모르폴린, 피페리딘, 및 1급, 2급 및 3급 아민, 치환된 아민, 시클릭 아민 및 염기성 이온 교환 수지 [예를 들어, N(R')4+ (여기서, R'는 독립적으로 H 또는 C1-4알킬, 예를 들어 암모늄, 트리스임)]를 비롯한 유기 비독성 염기, 예를 들어 이소프로필아민, 트리메틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 트리프로필아민, 에탄올아민, 2-디에틸아미노에탄올, 트리메타민, 디시클로헥실아민, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 카페인, 프로카인, 히드라바민, 콜린, 베타인, 에틸렌디아민, 글루코사민, 메틸글루카민, 테오브로민, 퓨린, 피페라진, 피페리딘, N-에틸피페리딘, 폴리아민 수지 등으로부터 형성된 것을 포함한다. 특히 바람직한 유기 비독성 염기는 이소프로필아민, 디에틸아민, 에탄올아민, 트리메트아민, 디시클로헥실아민, 콜린, 및 카페인이다. 본 발명에서 사용할 수 있는 추가의 제약상 허용되는 산 및 염기는 아미노산, 예를 들어 히스티딘, 글리신, 페닐알라닌, 아스파르트산, 글루탐산, 리신 및 아스파라긴으로부터 유래된 것을 포함한다. "제약상 허용되는" 완충액 및 염은 상기 기재한 산 및 염기의 산 및 염기 부가염으로부터 유래된 것을 포함한다. 구체적인 완충액 및/또는 염은 히스티딘, 숙시네이트 및 아세테이트를 포함한다. "제약상 허용되는 당"은 관심있는 단백질과 조합될 경우, 보관시 단백질의 화학적 및/또는 물리적 불안정성을 현저하게 억제하거나 감소시키는 분자이다. 제제가 동결건조된 다음 재구성되는 경우에는, "제약상 허용되는 당"을 "동결건조보호제"로 이해할 수도 있다. 예시적인 당 및 그의 상응하는 당 알콜은 아미노산, 예를 들어 모노나트륨 글루타메이트 또는 히스티딘; 메틸아민, 예를 들어 베타인; 친액성 염, 예를 들어 황산마그네슘; 폴리올, 예를 들어 3가 또는 보다 고분자량의 당 알콜, 예를 들어 글리세린, 덱스트란, 에리트리톨, 글리세롤, 아라비톨, 크실리톨, 소르비톨 및 만니톨; 프로필렌 글리콜; 폴리에틸렌 글리콜; 플루로닉스��; 및 그의 조합을 포함한다. 추가의 예시적인 동결건조보호제는 글리세린 및 젤라틴, 및 당 멜리비오스, 멜레지토스, 라피노스, 만노트리오스 및 스타키오스를 포함한다. 환원 당의 예는 글루코스, 말토스, 락토스, 말툴로스, 이소-말툴로스 및 락툴로스를 포함한다. 비-환원 당의 예는 당 알콜 및 기타 직쇄 폴리알콜로부터 선택된 폴리히드록시 화합물의 비-환원 글리코시드를 포함한다. 바람직한 당 알콜은 모노글리코시드, 특히 락토스, 말토스, 락툴로스 및 말툴로스와 같은 디사카라이드의 환원에 의해 수득되는 화합물이다. 글리코시드 측기는 글루코시드 또는 갈락토시드일 수 있다. 당 알콜의 추가적인 예는 글루시톨, 말티톨, 락티톨 및 이소-말툴로스이다. 바람직한 제약상 허용되는 당은 비-환원 당 트레할로스 또는 수크로스이다. 제약상 허용되는 당은 단백질이 보관 동안 (예를 들어, 재구성 및 보관 후) 본질적으로 그의 물리적 및 화학적 안정성 및 일체성을 유지하는 양을 의미하는 "보호량"으로 (예를 들어, 동결건조 전에) 제제에 첨가된다. 본원에서 관심 "희석제"는 제약상 허용되고 (인간 투여에 안전하고 비독성임) 액체 제제, 예를 들어 동결건조 후 재구성된 제제의 제조에 유용한 것이다. 예시적인 희석제에는 무균수, 주사용 정균수 (BWFI), pH 완충 용액 (예를 들어 포스페이트-완충 염수), 무균성 염수 용액, 링거(Ringer) 용액 또는 덱스트로스 용액이 포함된다. 별도의 실시양태에서, 희석제는 염 및/또는 완충액의 수용액을 포함할 수 있다. "보존제"는 세균 활성을 감소시키기 위해 본원의 제제에 첨가될 수 있는 화합물이다. 보존제의 첨가는 예를 들어, 다용도 (다용량) 제제의 생산을 촉진할 수 있다. 가능한 보존제의 예로는 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드, 헥사메토늄 클로라이드, 벤즈알코늄 클로라이드 (알킬기들이 장쇄 화합물인 알킬벤질디메틸암모늄 클로라이드들의 혼합물), 및 벤즈에토늄 클로라이드가 포함된다. 또 다른 유형의 보존제에는 방향족 알콜 예컨대 페놀, 부틸 및 벤질 알콜, 알킬 파라벤 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤, 카테콜, 레조르시놀, 시클로헥사놀, 3-펜타놀, 및 m-크레졸이 포함된다. 본원에서 가장 바람직한 보존제는 벤질 알콜이다. "치료"는 치료되는 개체 또는 세포의 자연적 과정을 변경시키려는 임상 시술을 나타내고, 임상 질병의 예방을 위해 또는 질병 과정 동안 수행될 수 있다. 바람직한 치료 효과는 질병의 발생 또는 재발 억제, 전이 억제, 질병 진행 속도의 감소, 질병 상태의 개선 또는 호전, 및 완화 또는 개선된 예후를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 질병 또는 질환의 발생을 지연시키기 위해 사용된다. 대상체는 예를 들어 T 세포 기능이상 장애와 연관된 하나 이상의 증상이 완화되면 본 발명의 아폽토시스성 항-PD-L1 항체에 의해 성공적으로 "치료된" 것이다. "유효량"은 적어도 필요한 용량에서 필요한 기간 동안 치료 또는 예방 결과를 포함하여 목적하는 또는 지시된 효과를 달성하기 위해 효과적인 양을 지칭한다. 예를 들어, 본 발명의 항-PD-L1 항체의 유효량은 T 세포 상의 PD-1 또는 다른 APC 상의 B7.1을 통해 또는 그 둘 모두를 통해 PD-L1으로부터의 신호전달을 억제하는 적어도 최소한의 농도이다."치료 유효량"은 적어도 특정 질환의 측정가능한 개선 또는 예방에 필요한 최대 농도이다. 치료 유효량은 본원에서 환자의 질병 상태, 연령, 성별, 및 체중, 및 개체에서 목적하는 반응을 유도하는 항체의 능력과 같은 요인에 따라 변할 수 있다. 또한, 치료 유효량은 항체의 임의의 독성 또는 유해한 효과를 치료상 유용한 효과가 능가하는 양이다. 예를 들어, 본 발명의 항-PD-L1 항체의 치료 유효량은 T 세포 기능이상 장애의 하나 이상의 증상을 억제하는 적어도 최소한의 농도이다."예방 유효량"은 필요한 투여량에서 필요한 기간 동안 목적하는 예방 결과를 달성하기 위해 효과적인 양을 나타낸다. 예를 들어, 본 발명의 항-PD-L1 항체의 예방 유효량은 T 세포 기능이상 장애의 하나 이상의 증상의 발생을 방지하거나 약화시키는 적어도 최소한의 농도이다."만성" 투여는 장기간 동안 초기의 치료 효과 (활성)를 유지하기 위해 의약(들)을 급성 방식과 달리 연속적으로 투여하는 것을 의미한다. "간헐적" 투여는 중단없이 연속적으로 행해지지는 않지만 특성상 주기적인 치료법이다. 치료를 위한 "포유동물"은 인간, 가축 및 농장 동물, 및 동물원, 스포츠, 또는 애완 동물, 예를 들어 개, 말, 토끼, 소, 돼지, 햄스터, 게르빌루스쥐, 마우스, 흰족제비, 래트, 고양이 등을 포함하여 포유동물로서 분류된 임의의 동물을 의미한다. 바람직하게는, 포유동물은 인간이다. 용어 "제약 제제"는 활성 성분의 생물학적 활성이 효과를 보이도록 하는 형태이고 제제가 투여되는 대상에게 허용되지 않은 독성을 보이는 추가의 성분을 함유하지 않는 제제를 의미한다. 상기 제제는 멸균 상태이다. "멸균" 제제는 무균 상태이거나 또는 모든 살아있는 미생물 및 이들의 포자가 존재하지 않는 것이다. 본원에서 사용된 용어 "약"은 이러한 기술 분야의 당업자에게 용이하게 공지된 각각의 값에 대한 일반적인 오차 범위를 지칭한다. "자가면역 질환"은 개체 자신의 조직 또는 장기 또는 그의 공동-분리 또는 징후 또는 그로부터 생성된 상태로 인한, 그에 대한 질환 또는 장애이다. "자가면역 질환"은 장기-특이적 질환 (즉, 면역 반응은 내분비계, 조혈계, 피부, 심폐계, 위장관계 및 간계, 신장계, 갑상선, 귀, 신경근육계, 중추신경계 등과 같은 장기계에 대해 특이적으로 작용함) 또는 다수의 장기계에 영향을 줄 수 있는 전신 질환 (예를 들어, 전신 홍반 루푸스 (SLE), 류마티스성 관절염 (RA), 다발성 근육염 등)일 수 있다. 바람직한 상기 질환은 자가면역 류마티스 장애 (예를 들어, RA, 쇼그렌 증후군, 공피증, 루푸스, 예를 들어 SLE 및 루푸스 신장염, 다발근육염-피부근육염, 한랭글로불린혈증, 항-인지질 항체 증후군, 및 건선성 관절염), 자가면역 위장 및 간 장애 (예를 들어, 염증성 장 질환 (예를 들어, 궤양 대장염 및 크론 질병), 자가면역 위염 및 악성 빈혈, 자가면역 간염, 원발성 담즙성 간경화, 원발성 경화성 담관염, 및 셀리악 질환), 혈관염 (예를 들어, ANCA-음성 혈관염 및 ANCA-연관 혈관염, 예를 들어 처그-스트라우스 혈관염, 베게너 육아종증, 및 현미경적 다발성 혈관염), 자가면역 신경 장애 (예를 들어, 다발성 경화증, 눈간대경련 근육간대경련 증후군, 중증 근무력증, 시신경 척수염, 파킨슨병, 알츠하이머병, 및 자가면역 다발성 신경병증), 신장 장애 (예를 들어, 사구체신염, 굿패스쳐 증후군, 및 버거병), 자가면역 피부 장애 (예를 들어, 건선, 두드러기, 심상성 천포창, 수포성 유천포창, 및 피부 홍반성 루푸스), 혈액 장애 (예를 들어, 혈소판 감소성 자색반증, 혈전성 혈소판 감소성 자색반증, 수혈후 자색반증, 및 자가면역 용혈 빈혈), 죽상경화증, 포도막염, 자가면역 청력 질환 (예를 들어, 내이 질환 및 난청), 베체트병, 레이노드 증후군, 장기 이식, 및 자가면역 내분비 장애 (예를 들어, 당뇨병-관련 자가면역 질환, 예를 들어 인슐린-의존성 당뇨병 (IDDM), 애디슨병, 및 자가면역 갑상선 질환 (예를 들어, 그레이브스 질환 및 갑상선염))을 포함한다. 보다 바람직한 상기 질환은 예를 들어 RA, 궤양 대장염, ANCA-연관 혈관염, 루푸스, 다발성 경화증, 쇼그렌 증후군, 그레이브스 질환, IDDM, 악성 빈혈, 갑상선염, 및 사구체신염을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "세포독성제"는 세포의 기능을 억제 또는 저해하고/하거나 세포의 파괴를 야기하는 물질을 지칭한다. 상기 용어는 방사성 동위원소 (예를 들어 At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32 및 Lu의 방사성 동위원소), 및 독소, 예를 들어 소분자 독소 또는 세균, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소, 및 그의 단편을 포함한다. "화학요법제"는 암 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 화학요법제의 예는 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 시클로포스파미드 (시톡산��); 알킬 술포네이트, 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸라멜라민, 예컨대 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올로멜라민; 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 델타-9-테트라히드로칸나비놀 (드로나비놀, 마리놀��); 베타-라파콘; 라파콜; 콜히친; 베툴린산; 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 (하이캄틴��), CPT-11 (이리노테칸, 캄프토사르��), 아세틸캄프토테신, 스코폴렉틴, 및 9-아미노캄프토테신 포함); 브리오스타틴; 페메트렉세드; 칼리스타틴; CC-1065 (그의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 포도필로톡신; 포도필린산; 테니포시드; 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 두오카르마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; TLK-286; CDP323, 경구 알파-4 인테그린 억제제; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아, 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라니무스틴; 항생제, 예컨대 에네디인 항생제 (예를 들어, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마1I 및 칼리케아미신 오메가I1 (예를 들어, 문헌 [Nicolaou et al., Angew. Chem Intl. Ed. Engl., 33 : 183-186 (1994)] 참조); 다이네미신, 예컨대 다이네미신 A; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색소단백질 에네디인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신 (아드리아마이신��, 모르폴리노-독소루비신, 사이아노모폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 독소루비신 HCl 리포좀 주사 (독실��) 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물, 예컨대 메토트렉세이트, 겜시타빈 (겜자르��), 테가푸르 (유프토랄��), 카페시타빈 (젤로다��), 에포틸론 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 폴산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘 및 이마티닙 (2-페닐아미노피리미딘 유도체), 뿐만 아니라 다른 c-키트 억제제; 항-부신, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 엽산 보충물, 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘리프티늄 아세테이트; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK�� 폴리사카라이드 복합체 (JHS 내츄럴 프로덕츠, 오리곤주 유진 소재); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신 (엘디신��, 필데신��); 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("아라-C"); 티오테파; 탁소이드, 예를 들어, 파클리탁셀 (탁솔��), 파클리탁셀의 알부민 조작된 나노입자 제제 (아브락산™) 및 도세탁셀 (탁소테레��); 클로란부실; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예컨대 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴 (벨반��); 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴 (온코빈��); 옥살리플라틴; 류코보빈; 비노렐빈 (나벨빈��); 노반트론; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 이반드로네이트; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드, 예컨대 레티노산; 임의의 상기한 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체; 뿐만 아니라 상기한 것 중 2종 이상의 조합물, 예컨대 시클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니솔론의 조합 요법에 대한 약어 CHOP, 및 5-FU 및 류코보빈과 조합된 옥살리플라틴 (엘록사틴™)에 의한 치료 섭생에 대한 약어 FOLFOX가 포함된다. 특히 종양 면역의 치료에 있어서 본 발명의 항-PD-L1 항체와 조합하는데 유용한 특히 바람직한 화학요법제는 겜시타빈이다. 또한, 상기 정의에는 암의 성장을 촉진할 수 있는 호르몬의 효과를 조절하거나 감소시키거나 차단하거나 억제하는 작용을 하고, 종종 전신(systemic 또는 whole-body) 치료의 형태인 항-호르몬제도 포함된다. 이들은 그 자체가 호르몬일 수 있다. 예로는 타목시펜 (놀바덱스�� 타목시펜 포함), 랄록시펜 (에비스타��), 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 토레미펜 (파레스톤��)이 예를 들어 포함되는 항-에스트로겐 및 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자 (SERM); 항-프로게스테론; 에스트로겐 수용체 하향-조절제 (ERD); 에스트로겐 수용체 길항제 예컨대 풀베스트란트 (파슬로덱스��); 난소를 저해하거나 정지시키는 기능을 하는 작용제, 예를 들어, 황체형성 호르몬-방출 호르몬 (LHRH) 효능제, 예컨대 류프롤리드 아세테이트 (루프론N�� 및 엘리가드��), 고세렐린 아세테이트, 부세렐린 아세테이트 및 트리프테렐린; 항-안드로겐제 예컨대 플루타미드, 닐루타미드 및 비칼루타미드; 및 부신에서의 에스트로겐 생산을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제, 예를 들어, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메게스트롤 아세테이트 (메가세��), 엑세메스탄 (아로마신��), 포르메스타니에, 파드로졸, 보로졸 (리비졸��), 레트로졸 (페마라��), 및 아나스트로졸 (아리미덱스��)이 포함된다. 또한, 상기 화학요법제의 정의에는 비스포스포네이트, 예를 들어 클로드로네이트 (예를 들어, 보네포스�� 또는 오스탁��), 에티드로네이트 (디드로칼��), NE-58095, 졸레드론산/졸레드로네이트 (조메타��), 알렌드로네이트 (포사맥스��), 팔미드로네이트 (아레디아��), 틸루드로네이트(스켈리드��), 또는 리세드로네이트 (악토넬��); 및 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 부착성 세포 증식에 연관되는 신호 전달 경로에서 유전자의 발현을 억제하는 것, 예를 들어 PKC-알파, Raf, H-Ras 및 표피 성장 인자 수용체 (EGF-R); 백신, 예를 들어 테라토프�� 백신 및 유전자 요법 백신, 예를 들어, 알로벡틴�� 백신, 류벡틴�� 백신, 및 백시드�� 백신; 토포이소머라제 1 억제제 (예를 들어, 루르토테칸��); 항-에스트로겐, 예를 들어 풀베스트란트; 키트 억제제, 예를 들어 이마티닙 또는 EXEL-0862 (티로신 키나제 억제제); EGFR 억제제, 예를 들어 에를로니팁 또는 세툭시맙; 항-VEGF 억제제, 예를 들어 베바시주맙; 아리노테칸; rmRH (예를 들어, 아바렐릭스��); 라파티닙 및 라파티닙 디토실레이트 (ErbB-2 및 GW572016으로도 공지된 EGFR 이중 티로신 키나제 소분자 억제제); 17AAG (열 쇼크 단백질 (Hsp) 90 독인 겔다나마이신 유도체), 및 상기 임의의 물질의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체가 포함된다. "성장 억제제"는 시험관 내 또는 생체 내에서 성장이 수용체 활성화에 의존하는 세포의 성장을 억제하는 화합물 또는 조성물을 의미한다. 따라서, 성장 억제제는 S기에서 수용체 의존성 세포의 비율을 유의하게 감소시키는 것을 포함한다. 성장 억제제의 예는 세포 주기 진행을 (S기 이외의 다른 시기에) 차단하는 물질, 예를 들어 G1 정지 및 M기 정지를 유도하는 물질을 포함한다. 전통적인 M기 차단제는 빈카 및 빈카 알칼로이드 (빈크리스틴 및 빈블라스틴), 탁산 및 토포이소머라제 II 억제제, 예를 들어 독소루비신, 에피루비신, 다우노루비신, 에토포시드 및 블레오마이신을 포함한다. G1을 정지시키는 작용제, 예를 들어 DNA 알킬화제, 예를 들어 타목시펜, 프레드니손, 다카르바진, 메클로레타민, 시스플라틴, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실 및 ara-C는 S기 정지로까지 이어질 수도 있다. 추가의 정보는 문헌 [The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn and Israel, eds., Chapter 1, entitled "Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs" by Murakami et al., (WB Saunders: Philadelphia, 1995), 특히 p. 13]에서 찾을 수 있다. 탁산 (파클리탁셀 및 도세탁셀)은 둘 다 주목에서 유래된 항암 약물이다. 유럽형 주목에서 유래된 도세탁셀 (탁소테레��, 론-프랑 로러(Rhone-Poulenc Rorer))은 파클리탁셀 (탁솔��, 브리스톨-마이어스 스퀴브)의 반합성 유사체이다. 용어 "시토카인"은 세포간 매개자로서 또 다른 세포에 대해 작용하는, 한 세포 집단에 의해 방출되는 단백질에 대한 일반 용어이다. 상기 시토카인의 예는 림포킨, 모노킨; 인터류킨 (IL), 예를 들어 IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15...IL-35, 예를 들어 프로류킨�� rIL-2; 종양 괴사 인자, 예를 들어 TNF-α 또는 TNF-β; 및 다른 폴리펩티드 인자, 예를 들어 LIF 및 키트 리간드 (KL)이고, 용어 "인터류킨"은 현재 본질적으로 시토카인과 동의어가 되었다. 본원에서 사용되는 용어 시토카인은 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질 및 천연 서열 시토카인의 생물학적 활성 등가물, 예를 들어 이것의 합성 생성된 소분자 및 제약상 허용되는 유도체 및 염을 포함한다. 시토카인은 의도된 표적의 근접 위치로 분류될 수 있으며, 여기서 자가분비는 그것이 분비된 동일한 세포에 작용하는 것을 지칭하고, 측분비는 시토카인이 분비되는 곳과 가까운 부근에 한정되어 작용하는 것을 지칭하며, 내분비는 신체의 먼 영역에서 작용하는 것을 지칭한다. 면역 시토카인은 또한 그것이 유형 I 반응을 향상시키는지 (예를 들어, IFN-γ, TGF-β 등) (세포 면역을 지지함) 또는 유형 II 반응을 향상시키는지 (IL-4, IL-10, IL-13 등) (항체 또는 체액성 면역을 지지함)에 따라 분류될 수 있다. 면역 시토카인은 공동자극, 성숙, 증식, 활성화, 염증, 성장, 분화, 시토카인 생산 및 분비, 다양한 면역 세포의 생존에서 소정의 역할을 한다.용어 "호르몬"은 일반적으로 관이 있는 선의 장기에 의해 분비되는 폴리펩티드 호르몬을 의미한다. 호르몬 중에서, 예를 들어, 성장 호르몬 예컨대 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬, 및 소 성장 호르몬; 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 릴랙신; 에스트라디올; 호르몬-대체 요법; 안드로겐 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 또는 테스토락톤; 프로릴랙신; 당단백질 호르몬 예컨대 난포 자극 호르몬 (FSH), 갑상선 자극 호르몬 (TSH), 및 황체형성 호르몬 (LH); 프로락틴, 태반 락토젠, 마우스 성선자극호르몬-관련 펩티드, 성선자극호르몬-방출 호르몬; 인히빈; 액티빈; 뮬러관-억제 물질; 및 트롬보포이에틴이 포함된다. 본원에서 사용되는 용어 호르몬에는 천연 공급원으로부터 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질 및 천연 서열 호르몬의 생물학적으로 활성인 등가물 (이의 합성 생산된 소형-분자 본체 및 제약상 허용되는 유도체 및 염 포함)이 포함된다. III. 본 발명을 수행하는 방식A. 파지 디스플레이를 이용한 인간화본원에서 기재하는 초가변 영역-이식된 변이체는 각각의 초가변 영역에 대한 별개의 올리고뉴클레오티드를 사용하여, 인간 수용체 서열을 코딩하는 핵산을 쿤켈 (Kunkel) 돌연변이 유발시킴으로써 생성하였다. 문헌 [Kunkel et al., Methods Enzymol. 154:367-382 (1987)]. 적당한 초가변 영역-항원 상호 작용을 교정하고 재정립하기 위한 통상적인 기술을 사용하여, 적당한 변화를 프레임워크 및/또는 초가변 영역 내에 도입시킬 수 있다. 파지(미드) 디스플레이 (본원에서 또한 파지 디스플레이로 지칭됨)가 서열 무작위화에 의해 생성된 라이브러리에서 다수의 상이한 잠재적인 변이체 항체를 생성시키고 스크리닝하기 위한 편리하고 신속한 방법으로 사용될 수 있다. 그러나, 변경된 항체를 제조하고 스크리닝하기 위한 또 다른 방법들이 당업자에게 이용가능하다. 파지(미드) 디스플레이 (본원에서 일부 정황에서는 파지 디스플레이로 또한 지칭됨)가 서열 무작위화에 의해 생성된 라이브러리에서 다수의 상이한 잠재적인 변이체 항체를 생성시키고 스크리닝하기 위한 편리하고 신속한 방법으로 사용될 수 있다. 그러나, 변경된 항체를 제조하고 스크리닝하기 위한 또 다른 방법들이 당업자에게 이용가능하다. 파지(미드) 디스플레이 기술은 리간드, 예를 들어 항원에 결합하는 신규한 단백질을 생성하고 선택하기 위한 강력한 도구를 제공하였다. 파지(미드) 디스플레이 기술을 사용함으로써, 표적 분자에 높은 친화성으로 결합하는 서열에 대해 신속하게 분류될 수 있는 단백질 변이체의 큰 라이브러리를 생성할 수 있다. 변이체 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 바이러스 코트 단백질, 예컨대 유전자 III 단백질 또는 유전자 VIII 단백질을 코딩하는 핵산 서열에 일반적으로 융합된다. 단백질 또는 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열이 유전자 III 단백질의 일부를 코딩하는 핵산 서열에 융합된 1가 파지미드 디스플레이 시스템이 개발되었다. (문헌 [Bass, S., Proteins, 8:309 (1990)]; [Lowman and Wells, Methods: A Companion to Methods in Enzymology, 3:205 (1991)]). 1가 파지미드 디스플레이 시스템에서는, 유전자 융합체가 저 수준으로 발현되고, 야생형 유전자 III 단백질이 또한 발현되어 입자의 감염성이 유지된다. 펩티드 라이브러리의 생성 방법 및 이들 라이브러리의 스크리닝 방법이 많은 특허에 개시되어 있다 (예를 들어, 미국 특허 제5,723,286호, 미국 특허 제5,432,018호, 미국 특허 제5,580,717호, 미국 특허 제5,427,908호 및 미국 특허 제5,498,530호). 항체 또는 항원 결합 폴리펩티드의 라이브러리를 수 많은 방식으로 제조하였는데, 이에는 무작위 DNA 서열을 삽입함으로써 단일 유전자를 변경시키는 방법 또는 관련 유전자 패밀리를 클로닝하는 방법이 포함된다. 파지(미드) 디스플레이를 이용하여 항체 또는 항원 결합 단편을 디스플레이하는 방법이 미국 특허 제5,750,373호, 동 제5,733,743호, 동 제5,837,242호, 동 제5,969,108호, 동 제6,172,197호, 동 제5,580,717호 및 동 제5,658,727호에 기재되어 있다. 이어서, 상기 라이브리러리를 대상으로 하여 목적하는 특징을 지닌 항체 또는 항원 결합성 단백질의 발현에 관하여 스크리닝한다. 선택된 아미노산을 주형 핵산으로 치환시키는 방법은 당해 분야에 널리 정립되어 있는데, 이들 중의 몇 가지가 본원에 기재되어 있다. 예를 들어, 쿤켈 방법을 사용하여 초가변 영역 잔기를 치환시킬 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Kunkel et al., Methods Enzymol. 154:367-382 (1987)]을 참조한다.올리고뉴클레오티드의 서열에는 변경시키고자 하는 초가변 영역 잔기에 대해 설계된 코돈 세트 중의 하나 이상이 포함된다. 코돈 세트는 원하는 변이체 아미노산을 코딩하는데 사용된 여러 뉴클레오티드 트리플릿(triplet) 서열들의 세트이다. 코돈 세트는 IUB 코드에 따라 아래 나타낸 바와 같이 특정 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드의 등몰 혼합물을 지정하기 위해 기호를 사용하여 나타낼 수 있다. 표준 방법을 사용하여 올리고뉴클레오티드 또는 프라이머 세트를 합성할 수 있다. 코돈 세트에 의해 제공되는 뉴클레오티드 트리플릿의 모든 가능한 조합을 나타내고, 목적하는 군의 아미노산을 코딩하는 서열을 함유하는 올리고뉴클레오티드의 세트는 예를 들어 고체상 합성에 의해 합성할 수 있다. 특정 위치에 선택된 뉴클레오티드 "퇴보"가 있는 올리고뉴클레오티드의 합성은 당업계에 주지되어 있다. 특정 코돈 세트를 갖는 뉴클레오티드들의 이같은 세트는 시판되는 핵산 합성기 (예를 들어, 어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems), 캘리포니아주 포스터 시티 소재로부터 입수가능)를 사용하여 합성될 수 있거나, 또는 상업적으로 수득될 수 있다 (예를 들어, 라이프 테크놀로지스(Life Technologies), 메릴랜드주 록빌 소재로부터 수득). 따라서, 특정 코돈 세트를 갖는 합성된 올리고뉴클레오티드 세트는 전형적으로, 상이한 서열을 갖는 다수의 올리고뉴클레오티드를 포함하며, 그 차이는 전체 서열내 코돈 세트에 의해 확립된다. 본 발명에 따라 사용될 때 올리고뉴클레오티드는 가변 도메인 핵산 주형에 혼성화를 허용하는 서열을 갖고, 또한 클로닝 목적을 위한 제한 효소 부위를 포함할 수 있다. 한 방법에서, 변이체 아미노산을 코딩하는 핵산 서열이 올리고뉴클레오티드-매개 돌연변이유발에 의해 생성될 수 있다. 상기 기술은 문헌 [Zoller et al., Nucleic Acids Res. 10:6487-6504 (1987)]에 기재된 바와 같이 당업계에 잘 공지되어 있다. 간략하게, 변이체 아미노산을 코딩하는 핵산 서열은 목적하는 코돈 세트를 코딩하는 올리고뉴클레오티드 세트를 DNA 주형에 혼성화함으로써 생성되고, 여기서 주형은 가변 영역 핵산 주형 서열을 함유하는 단일 가닥 형태의 플라스미드이다. 혼성화 후, DNA 폴리머라제를 사용하여 주형의 전체적인 제2 상보적 가닥이 합성되고, 상기 가닥에는 따라서 올리고뉴크레오티드 프라이머가 혼입될 것이고, 올리고뉴클레오티드 세트에 의해 제공된 코돈 세트를 함유할 것이다. 일반적으로, 길이가 적어도 25 뉴클레오티드인 올리고뉴클레오티드가 사용된다. 최적의 올리고뉴클레오티드에는 돌연변이(들)를 코딩하는 뉴클레오디드(들)의 어느 한쪽 측면 상의 주형에 대해 완전히 상보적인 12개 내지 15개의 뉴클레오티드가 있을 것이다. 이는 올리고뉴클레오티드가 단일 가닥 DNA 주형 분자에 정확하게 혼성화될 것을 확실하게 한다. 올리고뉴클레오티드는 당업계에 공지된 기술, 예컨대 문헌 [Crea et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA, 75:5765 (1978)]에 기재된 바와 같은 기술을 사용하여 용이하게 합성한다. DNA 주형은 박테리오파지 M13 벡터 (시판용 M13mp18 및 M13mp19 벡터가 적합함)로부터 유래된 벡터 또는 문헌 [Viera et al., Meth. Enzymol., 153:3 (1987)]에 의해 기재된 바와 같은 단일 가닥 파지 복제 기점을 함유하는 벡터에 의해 생성된다. 따라서, 돌연변이될 DNA가 단일 가닥 주형을 생성시키기 위해 이러한 벡터들 중 하나 내로 삽입될 수 있다. 단일 가닥 주형의 생산은 상기 문헌 [Sambrook et al.]의 섹션 4.21-4.41에 기재되어 있다. 천연 DNA 서열을 변경시키기 위해, 올리고뉴클레오티드를 적절한 혼성화 조건 하에 단일 가닥 주형에 혼성화시킨다. 이어서, DNA 폴리머라제, 보통 T7 DNA 폴리머라제 또는 DNA 폴리머라제 I의 클레나우(Klenow) 단편을 첨가하여, 합성을 위한 프라이머로서 올리고뉴클레오티드를 사용하여 주형의 상보성 가닥을 합성한다. 1개의 DNA의 가닥은 유전자 1의 돌연변이된 형태를 코딩하고, 다른 가닥 (원래의 주형)은 유전자 1의 천연의 변경되지 않은 서열을 코딩하도록 헤테로듀플렉스(heteroduplex) 분자가 이렇게 하여 형성된다. 그후, 이러한 헤테로듀플렉스 분자를 적절한 숙주 세포, 일반적으로는 원핵세포, 예컨대 이. 콜라이 JM101 내로 형질전환시킨다. 세포를 성장시킨 후 아가로스 플레이트 상에 플레이팅하고, 돌연변이된 DNA를 함유하는 박테리아 콜로니를 확인하기 위해 32-포스페이트로 방사성 표지된 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용하여 스크리닝한다. 플라스미드의 양쪽 가닥 모두가 돌연변이(들)를 함유하는 호모듀플렉스(homoduplex) 분자가 생성되도록 바로 위에서 기술된 방법이 변형될 수 있다. 변형은 하기와 같다:단일 가닥 올리고뉴클레오티드를 상기 기재된 바와 같이 단일 가닥 주형에 어닐링시킨다. 데옥시리보아데노신 (dATP), 데옥시리보구아노신 (dGTP), 및 데옥시리보티미딘 (dTT)의 3가지 데옥시리보뉴클레오티드의 혼합물을 dCTP-(aS)로 불리는 변형된 티오데옥시리보사이토신 (아머샴(Amersham)으로부터 수득될 수 있음)과 조합한다. 이러한 혼합물을 주형-올리고뉴클레오티드 복합체에 첨가한다. 이러한 혼합물에 DNA 폴리머라제를 첨가하면, 돌연변이된 염기를 제외하고 주형과 동일한 DNA의 가닥이 생성된다. 또한, DNA의 이러한 새로운 가닥은 dCTP 대신 dCTP-(aS)를 함유할 것이고, 이는 제한 효소 소화로부터 DNA를 보호하는 작용을 한다. 이중 가닥 헤테로듀플렉스의 주형 가닥을 적절한 제한 효소로 니킹(nicking)시킨 후, 돌연변이유발될 부위(들)를 함유하는 영역이 아닌 곳에서 주형 가닥을 ExoIII 뉴클레아제 또는 또 다른 적합한 뉴클레아제로 소화시켜 절단할 수 있다. 그후, 반응을 정지시켜, 부분적으로만 단일 가닥인 분자를 남긴다. 그후, 4가지 모두의 데옥시리보뉴클레오티드 트리포스페이트, ATP, 및 DNA 리가제의 존재 하에 DNA 폴리머라제를 사용하여 완전한 이중 가닥 DNA 호모듀플렉스가 형성된다. 그후, 이러한 호모듀플렉스 분자를 적절한 숙주 세포 내로 형질전환시킨다. 앞서 나타낸 바와 같이, 올리고뉴클레오티드 세트의 서열은 주형 핵산에 혼성화하기에 충분한 길이이고, 반드시 그럴 필요는 없지만, 제한 부위를 또한 함유할 수 있다. 문헌 [Viera et al., Meth. Enzymol., 153:3 (1987)]에 기술된 바와 같이 단일 가닥 파지 복제 기원을 함유하는 벡터 또는 박테리오파지 M13 벡터로부터 유래된 벡터에 의해 DNA 주형이 생성될 수 있다. 따라서, 돌연변이될 DNA가 단일 가닥 주형을 생성시키기 위해 이러한 벡터들 중 하나 내로 삽입되어야 한다. 단일 가닥 주형의 생산이 [Sambrook et al., 상기 문헌]의 섹션 4.21-4.41에 기술되어 있다. 다른 방법에 따르면, 각각의 세트가 상이한 서열을 갖는 다수의 올리고뉴클레오티드를 갖는 상류 및 하류 올리고뉴클레오티드 세트를 제공함으로써 라이브러리를 생성시킬 수 있고, 상기 상이한 서열은 올리고뉴클레오티드의 서열 내에 제공된 코돈 세트에 의해 확립된다. 상류 및 하류 올리고뉴클레오티드 세트를 가변 도메인 주형 핵산 서열과 함께 폴리머라제 연쇄 반응에 사용하여 PCR 생성물의 "라이브러리"를 생성시킬 수 있다. 확립된 분자 생물학 기술을 사용하여 다른 관련된 또는 관련되지 않은 핵산 서열, 예를 들어, 바이러스 코트 단백질 및 이량체화 도메인과 융합될 수 있기 때문에, PCR 생성물은 "핵산 카세트"로 지칭될 수 있다. PCR 프라이머의 서열에는 초가변 영역 내의 용매 접근 가능하고 고도로 다양한 위치에 대해 설계된 코돈 세트 중의 하나 이상이 포함된다. 상기 기술된 바와 같이, 코돈 세트는 원하는 변이체 아미노산을 코딩하는데 사용된 여러 뉴클레오티드 트리플릿 서열들의 세트이다. 적당한 스크리닝/선별 단계를 통하여 선별된 바와 같은, 목적하는 기준을 충족시켜 주는 항체 선별제는 표준 재조합 기술을 사용하여 단리 및 클로닝할 수 있다. B. 재조합 제제본 발명은 또한 항-PD-L1 항체를 코딩하는 단리된 핵산, 상기 핵산을 포함하는 벡터 및 숙주 세포, 및 항체의 생산을 위한 재조합 기술을 제공한다. 항체의 재조합 생성을 위해, 이것을 코딩하는 핵산을 단리하여 추가의 클로닝 (DNA의 증폭) 또는 발현을 위해 복제가능한 벡터에 삽입한다. 모노클로날 항체를 코딩하는 DNA는 통상의 절차를 이용 (예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함)하여 쉽게 단리되고 서열분석된다. 다수의 벡터가 이용가능하다. 벡터의 선택은 부분적으로는 사용되는 숙주 세포에 따른다. 일반적으로, 바람직한 숙주 세포는 원핵세포 또는 진핵세포 (일반적으로, 포유동물) 기원 중 하나이다. 1. 원핵 세포에서의 항체 생산a) 벡터 구축본 발명의 항체의 폴리펩티드 성분을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 표준 재조합 기술을 사용하여 얻을 수 있다. 목적하는 폴리뉴클레오티드 서열은 항체 생성 세포, 예컨대 하이브리도마 세포로부터 단리되어 서열 결정될 수 있다. 별법적으로, 폴리뉴클레오티드는 뉴클레오티드 합성기 또는 PCR 기술을 사용하여 합성할 수 있다. 일단 얻은 후에, 폴리펩티드를 코딩하는 서열은 원핵세포 숙주에서 이종 폴리뉴클레오티드를 복제 및 발현할 수 있는 재조합 벡터 내로 삽입된다. 입수가능하고 당업계에 공지된 많은 벡터를 본 발명의 목적에 사용할 수 있다. 적절한 벡터의 선택은 주로 벡터에 삽입되는 핵산의 크기 및 벡터로 형질전환되는 특정 숙주 세포에 따를 것이다. 각각의 벡터는 그의 기능 (이종 폴리뉴클레오티드의 증폭 또는 발현, 또는 둘 모두) 및 벡터가 존재하게 되는 특정 숙주 세포와의 상용성에 따라 다양한 성분을 포함한다. 벡터 성분은 일반적으로 복제 기점, 선별 마커 유전자, 프로모터, 리보솜 결합 부위 (RBS), 신호 서열, 이종 핵산 삽입물 및 전사 종결 서열을 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다.일반적으로, 숙주 세포와 상용성인 종으로부터 유래된 레플리콘 및 제어 서열을 함유하는 플라스미드 벡터가 상기 숙주와 함께 사용된다. 벡터는 통상적으로 복제 부위, 및 형질전환된 세포에서 표현형 선별을 제공할 수 있는 마킹(marking) 서열을 포함한다. 예를 들어, 이. 콜라이는 전형적으로 이. 콜라이 종으로부터 유래된 플라스미드인 pBR322를 사용하여 형질전환시킨다. pBR322는 암피실린 (Amp) 및 테트라시클린 (Tet) 내성을 코딩하는 유전자를 함유하고, 따라서 형질전환된 세포를 확인하기 위한 용이한 수단을 제공한다. pBR322, 그의 유도체, 또는 다른 미생물 플라스미드 또는 박테리오파지 또한 내인성 단백질의 발현을 위해 미생물 유기체에 의해 사용될 수 있는 프로모터를 함유하거나 상기 프로모터를 함유하도록 변형될 수 있다. 특정 항체의 발현을 위해 사용되는 pBR322 유도체의 예는 카터(Carter) 등의 미국 특허 제5,648,237호에 상세하게 기재되어 있다. 또한, 숙주 미생물과 상용성인 레플리콘 및 제어 서열을 함유하는 파지 벡터를 상기 숙주에 대한 형질전환 벡터로서 사용할 수 있다. 예를 들어, 박테리오파지, 예컨대 GEM.TM.-11이 이. 콜라이 LE392와 같은 감수성 숙주 세포의 형질전환에 사용될 수 있는 재조합 벡터의 제조에 이용될 수 있다. 본 발명의 발현 벡터는 각각의 폴리펩티드 성분을 코딩하는 2종 이상의 프로모터-시스트론 쌍을 포함할 수 있다. 프로모터는 시스트론의 발현을 조정하는, 시스트론의 상류 (5')에 위치하는 번역되지 않는 제어 서열이다. 원핵세포 프로모터는 전형적으로 두 유형의 프로모터, 즉 유도가능 및 구성적 프로모터로 분류된다. 유도성 프로모터는 배양 조건에서의 변화, 예를 들어 영양소의 존재 또는 부재 또는 온도에서의 변화에 응답하여 이의 제어 하에 있는 시스트론의 전사 수준 증가를 개시시키는 프로모터이다. 다양한 가능한 숙주 세포에 의해 인식되는 수많은 프로모터가 공지되어 있다. 선택된 프로모터는, 제한 효소 소화를 통해 공급원 DNA로부터 프로모터를 제거하고 단리된 프로모터 서열을 본 발명의 벡터 내로 삽입함으로써 경쇄 또는 중쇄를 코딩하는 시스트론 DNA에 작동가능하게 연결될 수 있다. 천연 프로모터 서열 및 많은 이종 프로모터를 둘다 사용하여 표적 유전자의 증폭 및/또는 발현을 지시할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이종 프로모터는 일반적으로 천연 표적 폴리펩티드 프로모터에 비해 발현된 표적 유전자의 보다 큰 전사 및 보다 높은 수율을 가능하게 하기 때문에 이것이 이용된다. 원핵세포 숙주에 사용하기 적합한 프로모터에는 PhoA 프로모터, 갈락타마제 및 락토스 프로모터 시스템, 트립토판 (trp) 프로모터 시스템 및 하이브리드 프로모터, 예컨대 tac 또는 trc 프로모터가 포함된다. 그러나, 박테리아에서 기능적인 다른 프로모터 (예컨대, 다른 공지의 박테리아 또는 파지 프로모터)도 적합하다. 그의 뉴클레오티드 서열은 공개되어 있고, 당업자는 임의의 요구되는 제한 부위를 공급하도록 링커 또는 어댑터를 사용하여 이들 서열을 표적 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 시스트론에 작동가능하게 라이게이션할 수 있다 (문헌 [Siebenlist et al., (1980) Cell 20: 269]).한 측면에서, 재조합 벡터 내의 각각의 시스트론은 발현된 폴리펩티드의 막을 가로지른 전위를 지시하는 분비 신호 서열 성분을 포함한다. 일반적으로, 신호 서열은 벡터의 한 성분일 수 있거나, 또는 벡터 내에 삽입되는 표적 폴리펩티드 DNA의 일부일 수 있다. 본 발명의 목적을 위해 선별된 신호 서열은 숙주 세포에 의해 인식되고 프로세싱 (즉, 신호 펩티다제에 의해 절단)되는 것이어야 한다. 이종성 폴리펩티드에 천연인 신호 서열을 인식 및 프로세싱하지 않는 원핵생물 숙주 세포에 대해서, 신호 서열이 알칼리성 포스파타제, 페니실리나제, Ipp, 또는 열-안정성 장독소 II (STII) 리더, LamB, PhoE, PelB, OmpA 및 MBP로 이루어진 군으로부터 예를 들어 선택된 원핵생물 신호 서열로 치환된다. 본 발명의 한 실시양태에서, 발현 시스템의 시스트론 모두에 사용되는 신호 서열은 STII 신호 서열 또는 그의 변이체이다. 또 다른 측면에서, 본 발명에 따른 이뮤노글로불린의 생성은 숙주 세포의 세포질에서 일어날 수 있으며, 따라서 각 시스트론 내의 분비 신호 서열의 존재를 요구하지 않는다. 이와 관련하여, 이뮤노글로불린 경쇄 및 중쇄가 발현되고, 폴딩되고, 어셈블리되어, 세포질 내에서 기능적 이뮤노글로불린을 형성한다. 특정 숙주 균주 (예를 들어, 이. 콜라이 trxB- 균주)는 디술피드 결합 형성에 유리한 세포질 조건을 제공함으로써, 발현된 단백질 서브유닛의 정확한 폴딩 및 어셈블리를 허용한다. 문헌 [Proba and Pluckthun Gene, 159:203 (1995)]. 본 발명은 발현된 폴리펩티드 성분의 정량적 비율이 분비되고 적절하게 어셈블리된 항체의 수율을 최대화하도록 조정될 수 있는 발현 시스템을 제공한다. 이러한 조절은 폴리펩티드 성분에 대한 번역 강도의 동시 조절에 의해 적어도 부분적으로 달성된다. 번역 강도의 조절을 위한 한 가지 기술은 시몬스 (Simmons) 등의 미국 특허 제5,840,523호에 개시되어 있다. 이는 시스트론 내의 번역 개시 영역 (TIR)의 변이체를 이용한다. 소정의 TIR에 대해, 일련의 아미노산 또는 핵산 서열 변이체는 일정 범위의 번역 강도로 생성됨으로써, 상기 인자를 특정 사슬의 목적하는 발현 수준을 위해 조정하는 편리한 수단을 제공할 수 있다. TIR 변이체는 아미노산 서열을 변경할 수 있는 코돈 변화를 초래하는 통상적인 돌연변이 유발 기술에 의해 생성될 수 있지만, 뉴클레오티드 서열의 침묵 변경이 바람직하다. TIR의 변경은 예를 들어 신호 서열의 변경과 함께 샤인-달가노 (Shine-Dalgarno) 서열의 수 또는 간격의 변경을 포함할 수 있다. 돌연변이체 신호 서열을 생성하는 한 가지 방법은 신호 서열의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 (즉, 변화가 침묵된) 코딩 서열의 시작점에서의 "코돈 뱅크 (codon bank)"의 생성이다. 이는 각각의 코돈의 제3 뉴클레오티드 위치의 변화에 의해 달성될 수 있으며; 또한 류신, 세린 및 아르기닌과 같은 일부 아미노산은 상기 뱅크를 제조하는데 있어서 복잡성을 추가할 수 있는 다수의 제1 및 제2 위치를 갖는다. 상기 돌연변이 유발의 방법은 문헌 [Yansura et al., (1992) METHODS: A Companion to Methods in Enzymol. 4:151-158]에 상세히 기재되어 있다.바람직하게는, 그 안의 각각의 시스트론에 대한 일정 범위의 TIR 강도를 갖는 벡터의 세트가 생성된다. 상기 제한된 세트는 각각의 사슬의 발현 수준뿐만 아니라 다양한 TIR 강도 조합 하에서 목적하는 항체 생성물의 수율의 비교를 제공한다. TIR 강도는 시몬스 등의 미국 특허 제5,840,523호에 상세히 기재된 바와 같이 리포터 유전자의 발현 수준을 정량화함으로써 측정될 수 있다. 번역 강도 비교를 기초로 하여, 본 발명의 발현 벡터 구조물에 조합되도록 목적하는 개별 TIR을 선택한다. b) 원핵 숙주 세포. 본 발명의 항체의 발현에 적합한 원핵 숙주 세포에는 원시세균 및 유박테리아, 예컨대 그람-음성 또는 그람-양성 유기체가 포함된다. 유용한 박테리아의 예에는 에스케리키아(Escherichia) (예를 들어, 이. 콜라이), 바실러스(Bacilli) (예를 들어, 비. 섭틸리스(B. subtilis)), 엔테로박테리아), 슈도모나스(Pseudomonas) 종 (예를 들어, 피. 아에루기노사(P. aeruginosa)), 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium), 세라티아 마르세스칸스(Serratia marcescans), 클레브시엘라(Klebsiella), 프로테우스(Proteus), 시겔라(Shigella), 리조비아(Rhizobia), 비트레오실라(Vitreoscilla) 또는 파라코쿠스(Paracoccus)가 포함된다. 한 실시양태에서, 그람-음성 세포가 사용된다. 한 실시양태에서, 이. 콜라이 세포가 본 발명에서 숙주로서 사용된다. 이. 콜라이 균주의 예로는 유전자형 W3110 (미국 특허 제5,639,635호)을 갖는 균주 33D3을 비롯한, 균주 W3110 (문헌 [Bachmann, Cellular and Molecular Biology, vol. 2 (Washington, D.C.: American Society for Microbiology, 1987), pp. 1190-1219]; ATCC 기탁 번호 27,325) 및 그의 유도체가 포함된다. 다른 균주 및 그의 유도체, 예컨대 이. 콜라이 294 (ATCC 31,446), 이. 콜라이 B, 이. 콜라이 1776 (ATCC 31,537) 및 이. 콜라이 RV308 (ATCC 31,608)이 또한 적합하다. 이러한 예는 제한적인 것이 아니라 예시적인 것이다. 특정 유전자형을 갖는 언급된 박테리아의 유도체 중 어느 하나를 제작하는 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌 [Bass et al., Proteins, 8:309-314 (1990)]에 기재되어 있다. 박테리아 세포 내의 레플리콘의 복제능을 고려하여 적절한 박테리아를 선택하는 것이 일반적으로 필요하다. 예를 들어, pBR322, pBR325, pACYC177, 또는 pKN410과 같은 널리 공지된 플라스미드를 사용하여 레플리콘을 공급하는 경우에는, 이. 콜라이, 세라티아, 또는 살모넬라 종이 숙주로서 적합하게 사용될 수 있다. 전형적으로, 숙주 세포는 최소량의 단백질 분해 효소를 분비해야 하며, 추가의 프로테아제 억제제는 바람직하게는 세포 배양물에 혼입될 수 있다. c) 항체 생산숙주 세포를 상기 기재된 발현 벡터로 형질전환시키고, 프로모터를 유도하거나, 형질전환체를 선택하거나, 목적하는 서열을 코딩하는 유전자를 증폭시키기 위해 필요에 따라 변형된 통상적인 영양 배지에서 배양시킨다. 형질전환은 DNA가 염색체외 요소로서 또는 염색체 통합체에 의해 복제가능하도록 DNA를 원핵세포 숙주 내로 도입하는 것을 의미한다. 사용되는 숙주 세포에 따라, 형질전환은 그 세포에 적절한 표준 기술을 이용하여 수행된다. 염화칼슘을 사용한 칼슘 처리는 실질적인 세포벽 장벽을 함유하는 박테리아 세포에 일반적으로 사용된다. 또 다른 형질전환 방법은 폴리에틸렌 글리콜/DMSO를 사용한다. 사용되는 또 다른 기술은 전기천공이다. 본 발명의 항체를 생성하는데 사용되는 원핵세포를 당업계에 공지되고 선택된 숙주 세포의 배양에 적합한 배지에서 성장시킨다. 적합한 배지의 예에는 필수 영양 보충물이 부가된 루리아 브로쓰(luria broth; LB)가 포함된다. 일부 실시양태에서, 배지는 또한 발현 벡터를 함유하는 원핵세포의 성장을 선택적으로 허용하는, 발현 벡터의 구조를 기초로 하여 선택된 선별제를 함유한다. 예를 들어, 암피실린은 암피실린 내성 유전자를 발현하는 세포를 성장시키기 위한 배지에 첨가된다. 또한, 탄소, 질소 및 무기 포스페이트 공급원 이외의 임의의 필요한 보충물이, 단독으로, 또는 복합 질소 공급원과 같은 또 다른 보충물 또는 배지와의 혼합물로서 도입되어 적절한 농도로 포함될 수 있다. 임의로, 배양 배지는 글루타티온, 시스테인, 시스타민, 티오글리콜레이트, 디티오에리트리톨 및 디티오트레이톨로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 환원제를 함유할 수 있다. 원핵 숙주 세포를 적합한 온도에서 배양한다. 이. 콜라이 성장에 대하여, 바람직한 온도는 예를 들어 약 20℃ 내지 약 39℃, 보다 바람직하게는 약 25℃ 내지 약 37℃, 보다 더 바람직하게는 약 30℃이다. 배지의 pH는 주로 숙주 유기체에 따라 약 5 내지 약 9 범위의 임의의 pH일 수 있다. 이. 콜라이의 경우, pH는 바람직하게는 약 6.8 내지 약 7.4, 보다 바람직하게는 약 7.0이다. 유도가능 프로모터가 본 발명의 발현 벡터에 사용되는 경우에, 단백질 발현은 프로모터의 활성화에 적합한 조건 하에서 유도된다. 본 발명의 한 측면에서, PhoA 프로모터가 폴리펩티드의 전사의 제어에 사용된다. 따라서, 형질전환된 숙주 세포는 유도용의 포스페이트-제한 배지에서 배양된다. 바람직하게는, 포스페이트-제한 배지는 C.R.A.P 배지이다 (예를 들어, 문헌 [Simmons et al., J. Immunol. Methods (2002), 263:133-147] 참조). 당업계에 공지된 바와 같이, 사용되는 벡터 구조물에 따라 다양한 다른 유도제가 사용될 수 있다. 본 발명의 발현된 항체 단백질은 숙주 세포의 주변 세포질로 분비되고 그로부터 회수된다. 전형적으로, 단백질 회수는 일반적으로 삼투성 쇼크, 초음파 처리 또는 용해와 같은 수단에 의해 미생물을 분쇄하는 것을 포함한다. 세포가 분쇄되면, 세포 잔해 또는 전체 세포를 원심분리 또는 여과에 의해 제거할 수 있다. 단백질은 예를 들어 친화성 수지 크로마토그래피에 의해 추가로 정제할 수 있다. 별법적으로, 단백질을 배양 배지 내로 옮기고, 그 안에서 단리할 수 있다. 세포를 배양물로부터 제거하고, 배양 상청액을 여과하고 농축하여 생성된 단백질을 추가로 정제할 수 있다. 발현된 폴리펩티드를 추가로 단리하고, 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (PAGE) 및 웨스턴 블롯 검정과 같은 통상적으로 공지된 방법을 이용하여 확인할 수 있다. 별법적으로, 항체 생성은 발효 공정에 의해 대량으로 수행된다. 다양한 대규모 유가식(fed-batch) 발효 절차가 재조합 단백질의 생성에 이용가능하다. 대규모 발효는 적어도 1000 리터의 용량, 바람직하게는 약 1,000 내지 100,000 리터의 용량을 갖는다. 상기 발효기는 산소 및 영양소, 특히 글루코스 (바람직한 탄소/에너지 공급원)를 분배시키는 교반기 추진기를 사용한다. 소규모 발효는 일반적으로, 용적이 대략 100 리터 이하인 발효기 내에서의 발효를 지칭하는데, 이는 약 1 리터 내지 약 100 리터 범위일 수 있다. 발효 공정에서, 단백질 발현의 유도는 전형적으로 세포를 적합한 조건 하에서 목적하는 밀도, 예를 들어 약 180-220의 OD550으로 성장시킨 후에 개시되며, 이 단계에서 세포는 초기 정체기이다. 당업계에 공지되고 상기 기재된 바와 같이, 사용되는 벡터 구조물에 따라 다양한 유도제를 사용할 수 있다. 세포를 유도 전에 보다 짧은 기간 동안 성장시킬 수 있다. 세포를 통상적으로 약 12 내지 50시간 동안 유도하지만, 보다 길거나 보다 짧은 유도 시간이 사용될 수도 있다. 본 발명의 항체의 생성 수율 및 품질을 향상시키기 위해, 다양한 발효 조건을 변형시킬 수 있다. 예를 들어, 분비된 항체 폴리펩티드의 적당한 어셈블리와 폴딩을 개선시키기 위해, 샤페론 (chaperone) 단백질, 예를 들어 Dsb 단백질 (DsbA, DsbB, DsbC, DsbD 및/또는 DsbG) 또는 FkpA (샤페론 활성을 지니고 있는 펩티딜프롤릴 시스,트랜스-이소머라제)를 과다발현하는 부가의 벡터를 사용하여 숙주 원핵 세포를 공동-형질전환시킬 수 있다. 샤페론 단백질은 박테리아 숙주 세포에서 생성된 이종 단백질의 적절한 폴딩 및 가용성을 용이하게 하는 것으로 입증되었다. 문헌 [Chen et al., (1999) J Bio Chem 274:19601-19605]; 미국 특허 제6,083,715호 (Georgiou et al.); 미국 특허 제6,027,888호 (Georgiou et al.); [Bothmann and Pluckthun (2000) J. Biol. Chem. 275:17100-17105]; [Ramm and Pluckthun (2000) J. Biol. Chem. 275:17106-17113]; [Arie et al., (2001) Mol. Microbiol. 39:199-210].발현된 이종 단백질 (특히, 단백질 분해에 감수성인 단백질)의 단백질 분해를 최소화하기 위해, 단백질 분해 효소가 결핍된 특정 숙주 균주를 본 발명에 사용할 수 있다. 예를 들어, 숙주 세포 균주를 변형시켜, 공지된 세균성 프로테아제, 예를 들어 프로테아제 III, OmpT, DegP, Tsp, 프로테아제 I, 프로테아제 Mi, 프로테아제 V, 프로테아제 VI 및 그의 조합물을 코딩하는 유전자에서 유전적 돌연변이(들)를 수행할 수 있다. 몇몇 이. 콜라이 프로테아제-결핍 균주가 이용가능하며, 예를 들어, 문헌 [Joly et al., (1998), 상기 문헌]; 미국 특허 제5,264,365호 (Georgiou et al.); 미국 특허 제5,508,192호 (Georgiou et al.); [Hara et al., Microbial Drug Resistance, 2:63-72 (1996)]에 기재되어 있다.단백질분해 효소가 결핍되고 1종 이상의 샤페론 단백질을 과다발현하는 플라스미드로 형질전환된 이. 콜라이 균주가 본 발명의 항체를 코딩하는 발현 시스템에 있어서 숙주 세포로서 이용될 수 있다. d) 항체 정제추가적인 검정 및 사용을 위한 실질적으로 균질한 제제를 수득하기 위해 본원에서 생산된 항체 단백질을 추가로 정제하였다. 당업계에 공지된 표준 단백질 정제 방법이 이용될 수 있다. 하기 절차는 적합한 정제 절차의 예이다: 면역친화성 또는 이온-교환 칼럼 상의 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 상 또는 DEAE와 같은 양이온-교환 수지 상의 크로마토그래피, 크로마토포커싱(chromatofocusing), SDS-PAGE, 황산암모늄 침전, 및 예를 들어 세파덱스(Sephadex) G-75를 이용한 겔 여과.한 측면에서, 고체상에 고정된 단백질 A가 본 발명의 전장 항체 생성물의 면역친화성 정제에 사용된다. 단백질 A는 높은 친화성으로 항체의 Fc 영역에 결합하는 스타필로코쿠스 아우레아스(Staphylococcus aureas)로부터의 41 kD 세포벽 단백질이다. 문헌 [Lindmark et al., (1983) J. Immunol. Meth. 62:1-13]. 단백질 A가 고정되는 고체상은 바람직하게는 유리 또는 실리카 표면을 포함하는 칼럼, 보다 바람직하게는 제어된 공극 유리 칼럼 또는 규산 칼럼일 수 있다. 일부 용도에서, 칼럼을 글리세롤과 같은 시약으로 코팅하여 가능하게는 오염물의 비특이적 부착을 방지한다. 그 후, 고체상을 세척하여 고체상에 비-특이적으로 결합된 오염물을 제거하였다. 최종적으로, 목적하는 항체를 용출에 의해 고체상으로부터 회수한다. 2. 진핵 세포에서의 항체 생산진핵세포 발현을 위해, 벡터 성분은 일반적으로 하나 이상의 다음과 같은 신호 서열, 복제 기점, 하나 이상의 마커 유전자, 인핸서 성분, 프로모터 및 전사 종결 서열을 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다.a) 신호 서열 성분진핵 숙주에 사용하기 위한 벡터는 또한 신호 서열, 또는 성숙 단백질 또는 폴리펩티드의 N-말단에 특이적 절단 부위를 갖는 다른 폴리펩티드를 코딩하는 삽입물을 함유할 수 있다. 바람직하게 선택된 이종 신호 서열은 숙주 세포에 의해 인식 및 프로세싱 (즉, 신호 펩티다제에 의해 절단)되는 것이다. 포유동물 세포 발현시에는, 포유동물 신호 서열 및 또한 바이러스성 분비 리더, 예를 들어 단순 포진 gD 신호가 이용가능하다. 이러한 전구체 영역을 위한 DNA는 본 발명의 항체를 코딩하는 DNA에 리딩 프레임으로 라이게이션된다. b) 복제 기점일반적으로, 복제 기점 성분은 포유동물 발현 벡터에서는 필요하지 않다 (전형적으로, SV40 기점은 단지 초기 프로모터를 함유하기 때문에 사용될 수 있음). c) 선별 유전자 성분발현 및 클로닝 벡터는 선별가능한 마커라고도 불리는 선별 유전자를 함유할 수 있다. 전형적인 선별 유전자는 (a) 항생제 또는 다른 독소, 예를 들어 암피실린, 네오마이신, 메토트렉세이트 또는 테트라시클린에 대한 내성을 부여하거나, (b) 영양요구성 결핍을 보완하거나, (c) 복합 배지로부터 이용가능하지 않는 중요 영양분을 공급하는 단백질을 코딩하고, 예를 들어 바실러스의 경우에는 D-알라닌 라세마제를 코딩하는 유전자이다. 선별 계획의 한 예는 숙주 세포의 성장을 정지시키는 약물을 이용한다. 이종 유전자로 성공적으로 형질전환된 세포들은 약물 내성을 부여하는 단백질을 생성하고, 따라서 선별 계획에서 생존한다. 이러한 우성 선별의 예는 약물 네오마이신, 미코페놀산 및 히그로마이신을 사용한다. 포유동물 세포에 적합한 선별가능 마커의 또 다른 예는 본 발명의 항체를 코딩하는 핵산을 능숙하게 취하는 세포의 확인을 가능하게 하는 것, 예컨대 DHFR, 티미딘 키나제, 메탈로티오네인-I 및 -II, 바람직하게는 영장류 메탈로티오네인 유전자, 아데노신 데아미나제, 오르니틴 데카르복실라제 등이다. 예를 들어, DHFR 선별 유전자로 형질전환된 세포는 우선 DHFR의 경쟁적 길항제인 메토트렉세이트 (Mtx)를 함유하는 배양 배지에서 모든 형질전환체를 배양함으로써 확인한다. 야생형 DHFR을 사용할 때의 적절한 숙주 세포는 DHFR 활성이 결여된 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포주 (예를 들어, ATCC CRL-9096)이다. 또 다른 한편, 항체 코딩 DNA 서열, 야생형 DHFR 단백질 및 또 다른 선별가능 마커, 예를 들어 아미노글리코시드 3'-포스포트랜스퍼라제 (APH)로 형질전환시켰거나 공동-형질전환시킨 숙주 세포 (특히, 내인성 DHFR을 함유하는 야생형 숙주)는, 선별가능 마커, 예를 들어 아미노글리코시드성 항생제 (예를 들어, 카나마이신, 네오마이신 또는 G418)에 대한 선별제를 함유하는 배지에서 세포 성장시킴으로써 선별할 수 있다. 미국 특허 제4,965,199호를 참조한다. d) 프로모터 성분발현 및 클로닝 벡터는 통상적으로 숙주 유기체에 의해 인지되고 목적하는 항체 서열을 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 프로모터를 함유한다. 실질적으로 모든 진핵 유전자는 전사가 개시되는 부위로부터 대략 25개 내지 30개 염기 상류에 위치하는 AT-풍부 영역을 갖는다. 많은 유전자의 전사 출발점으로부터 70개 내지 80개 염기 상류에서 확인되는 또 다른 서열은 CNCAAT 영역 (여기서, N은 임의의 뉴클레오티드일 수 있음)이다. 대부분의 진핵세포의 3' 말단에는 코딩 서열의 3' 말단에 폴리 A 테일의 부가를 위한 신호일 수 있는 AATAAA 서열이 존재한다. 이러한 모든 서열들이 진핵 발현 벡터 내로 삽입될 수 있다. 원핵 숙주에 사용하기 적합한 그 밖의 프로모터는 phoA 프로모터, -락타마제 및 락토스 프로모터 시스템, 알칼리성 포스파타제 프로모터, 트립토판 (trp) 프로모터 시스템, 및 하이브리드 프로모터, 예를 들어 tac 프로모터를 포함한다. 그러나, 다른 공지의 박테리아 프로모터도 적합하다. 박테리아 시스템에 사용하기 위한 프로모터는 또한 항체 폴리펩티드를 코딩하는 DNA에 작동가능하게 연결된 샤인-달가노(S.D.)서열도 함유할 것이다. 포유동물 숙주 세포에서 벡터로부터의 항체 폴리펩티드 전사는, 예를 들어 폴리오마 바이러스, 계두 바이러스, 아데노바이러스 (예컨대 아데노바이러스 2), 소 유두종 바이러스, 조류 육종 바이러스, 시토메갈로바이러스, 레트로바이러스, B형 간염 바이러스, 및 가장 바람직하게는 원숭이 바이러스 40 (SV40) 등의 바이러스 게놈으로부터 수득한 프로모터, 이종 포유동물 프로모터, 예를 들어 액틴 프로모터 또는 이뮤노글로불린 프로모터, 및 열-쇼크 프로모터에 의해 제어될 수 있는데, 단 이들 프로모터는 숙주 세포 시스템과 상용가능하여야 한다. SV40 바이러스의 초기 및 후기 프로모터는 SV40 바이러스성 복제 기점을 또한 함유하는 SV40 제한 단편으로서 편리하게 수득하였다. 인간 시토메갈로바이러스의 극초기 프로모터가 HindIII E 제한 단편으로 편리하게 수득하였다. 소 유두종 바이러스를 벡터로 사용하여 포유동물 숙주에서 DNA를 발현시키기 위한 시스템이 미국 특허 제4,419,446호에 개시되어 있다. 이러한 시스템의 변형은 미국 특허 제4,601,978호에 기재되어 있다. 또한, 단순 포진 바이러스로부터의 티미딘 키나제 프로모터의 조절 하에 마우스 세포에서 인간 -인터페론 cDNA의 발현에 대해서는 또한 문헌 [Reyes et al., Nature 297: 598-601 (1982)]을 참조한다. 별법적으로, 라우스 육종 바이러스의 긴 말단 반복체를 프로모터로 사용할 수 있다. e) 인핸서 요소 성분고등 진핵생물에 의해 본 발명의 항체를 코딩하는 DNA를 전사하는 것은 종종, 인핸서 서열을 벡터 내로 삽입함으로써 증가된다. 많은 인핸서 서열이 현재 포유동물 유전자 (글로빈, 엘라스타제, 알부민, α-태아단백질 및 인슐린)로부터 공지되어 있다. 그러나, 전형적으로는 진핵 세포 바이러스로부터의 인핸서를 사용할 것이다. 이것의 예는 복제 기점의 하류 쪽 (bp 100 내지 270)의 SV40 인핸서, 시토메갈로바이러스 초기 프로모터 인핸서, 복제 기점 하류 쪽의 폴리오마 인핸서 및 아데노바이러스 인핸서를 포함한다. 또한, 진핵 프로모터의 활성화를 위한 인핸서 요소에 대한 문헌 [Yaniv, Nature 297:17-18 (1982)]을 참조한다. 인핸서는 항체 코딩 서열에 대한 5' 또는 3' 위치에서 벡터 내로 분할될 수 있지만, 바람직하게는 프로모터로부터 5' 부위에 위치한다. f) 전사 종결 성분진핵 숙주 세포 (효모, 진균, 곤충, 식물, 동물, 인간, 또는 다른 다세포 유기체로부터의 유핵 세포)에 사용되는 발현 벡터 역시 전사의 종결 및 mRNA의 안정화에 필요한 서열을 함유할 것이다. 이러한 서열은 진핵생물 또는 바이러스 DNA 또는 cDNA의 5' 및 때때로 3' 비번역 영역으로부터 통상적으로 이용가능하다. 이들 영역은 항체를 코딩하는 mRNA의 비번역 부분에서 폴리아데닐화 단편으로서 전사된 뉴클레오티드 절편을 함유한다. 유용한 전사 종결 성분 중 하나는 소 성장 호르몬 폴리아데닐화 영역이다. WO 94/11026 및 이에 개시된 발현 벡터를 참조한다. g) 숙주 세포의 선별 및 형질전환본원의 벡터에서 DNA의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포에는 척추동물 숙주 세포를 비롯하여 본원에 기재된 보다 고등한 진핵세포가 포함된다. 배양 (조직 배양)시 척추동물 세포의 증식은 일상적인 방법이 되었다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 예는 SV40으로 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주 (COS-7, ATCC CRL 1651), 인간 배아 신장 세포주 (293 세포 또는 현탁 배양으로 성장시키기 위해 서브클로닝된 293 세포, 문헌 [Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)]); 새끼 햄스터 신장 세포 (BHK, ATCC CCL 10); 차이니즈 햄스터 난소 세포/-DHFR (CHO, 문헌 [Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)]); 마우스 세르톨리 세포 (TM4, 문헌 [Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)]); 원숭이 신장 세포 (CV1 ATCC CCL 70); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76, ATCC CRL-1587); 인간 자궁경부 암종 세포 (HELA, ATCC CCL 2); 개 신장 세포 (MDCK, ATCC CCL 34); 버팔로 래트 간 세포 (BRL 3A, ATCC CRL 1442); 인간 폐 세포 (W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포 (Hep G2, HB 8065); 마우스 유방 종양 (MMT 060562, ATCC CCL51); TRI 세포 (문헌 [Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)]); MRC 5 세포; FS4 세포; 및 인간 간종양 세포주 (Hep G2)이다.숙주 세포를 상기 기재된 항체 생산을 위한 발현 또는 클로닝 벡터로 형질전환시키고, 프로모터를 유도하거나, 형질전환체를 선별하거나, 목적하는 서열을 코딩하는 유전자를 증폭시키기 위해 적절하게 변형시킨 통상의 영양 배지에서 배양한다.h) 숙주 세포의 배양본 발명의 항체를 생성하는데 사용되는 숙주 세포는 다양한 배지 중에서 배양될 수 있다. 시판 배지, 예컨대 햄 F10 (시그마(Sigma)), 최소 필수 배지 (MEM) (시그마), RPMI-1640 (시그마) 및 둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) (DMEM) (시그마)가 숙주 세포의 배양에 적합하다. 또한, 문헌 [Ham et al., Meth. Enz. 58:44 (1979)], [Barnes et al., Anal. Biochem.102:255 (1980)], 미국 특허 제4,767,704호; 동 제4,657,866호; 동 제4,927,762호; 동 제4,560,655호; 또는 동 제5,122,469호; WO 90/03430; WO 87/00195; 또는 미국 특허 Re. 30,985에 기재되어 있는 임의의 배지를 숙주 세포용 배양 배지로 사용할 수 있다. 임의의 이들 배지에는 필요에 따라 호르몬 및/또는 다른 성장 인자 (예컨대 인슐린, 트랜스페린 또는 표피 성장 인자), 염 (예컨대 염화나트륨, 칼슘, 마그네슘 및 포스페이트), 완충액 (예컨대 HEPES), 뉴클레오티드 (예컨대 아데노신 및 티미딘), 항생제 (예컨대 젠타마이신™ 약물), 미량 원소 (통상적으로 마이크로몰 범위의 최종 농도로 존재하는 무기 화합물로서 정의됨) 및 글루코스 또는 등가의 에너지원이 보충될 수 있다. 또한, 임의의 다른 필요한 보충물을 당업자에게 공지된 적절한 농도로 포함시킬 수도 있다. 배양 조건, 예컨대 온도, pH 등은 발현을 위해 선택된 숙주 세포와 함께 이전에 사용된 것이고, 당업자에게 명백할 것이다. i) 항체의 정제재조합 기술을 이용하는 경우, 항체는 세포 내에서 또는 주변세포질 공간 내에서 생성될 수도 있고, 또는 배지로 직접 분비될 수도 있다. 항체가 세포 내에서 생성되는 경우, 제1 단계로서 입자형 잔해인 숙주 세포 또는 용해된 단편을 예를 들어 원심분리 또는 한외여과에 의해 제거하였다. 문헌 [Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)]에는 이. 콜라이의 주변세포질 공간에 분비된 항체를 단리하는 절차가 기재되어 있다. 간략하게, 세포 페이스트를 아세트산나트륨 (pH 3.5), EDTA 및 페닐메틸술포닐플루오라이드 (PMSF)의 존재하에 약 30분에 걸쳐 해동시킨다. 세포 잔해는 원심분리로 제거할 수 있다. 항체가 배지로 분비되는 경우, 일반적으로는 우선 이러한 발현 시스템으로부터의 상청액을 시판되는 단백질 농축 필터, 예를 들어 아미콘(Amicon) 또는 밀리포어 펠리콘(Millipore Pellicon) 한외여과 장치를 사용하여 농축시킨다. 단백질분해를 억제하기 위해 프로테아제 억제제, 예를 들어 PMSF를 임의의 이전 단계에 포함시킬 수 있고, 우발적인 오염물의 성장을 저해하기 위해 항생제를 포함시킬 수 있다. 세포로부터 제조된 항체 조성물은 예를 들어 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 및 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제할 수 있고, 친화성 크로마토그래피가 바람직한 정제 기술이다. 친화성 리간드로서의 단백질 A의 적합성은 항체 내에 존재하는 임의의 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 종 및 이소형에 따라 달라진다. 단백질 A가 1, 2 또는 4 중쇄를 함유하는 인간 이뮤노글로불린을 기초로 한 항체를 정제하기 위해 사용될 수 있다 (문헌 [Lindmark et al., J. Immunol. Meth. 62:1-13 (1983)]). 단백질 G는 모든 마우스 이소형 및 인간 3에 대해 추천된다 (문헌 [Guss et al., EMBO J. 5: 15671575 (1986)]). 친화성 리간드가 부착되는 매트릭스는 가장 흔하게는 아가로스이지만, 다른 매트릭스도 이용가능하다. 기계적으로 안정한 매트릭스, 예를 들어 제어된 공극 유리 또는 폴리(스티렌-디비닐)벤젠이 아가로스를 사용하여 달성될 수 있는 것보다 더 빠른 유동 속도와 더 짧은 처리 시간을 허용한다. 항체가 CH3 도메인을 포함하는 경우, 베이커본드(Bakerbond) ABX™ 수지 (제이. 티. 베이커(J. T. Baker), 뉴저지주 필립스버그 소재)가 정제에 유용하다. 회수할 항체에 따라, 단백질 정제를 위한 다른 기술, 예컨대 이온-교환 칼럼에서의 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카에서의 크로마토그래피, 헤파린 세파로스™에서의 크로마토그래피, 음이온 또는 양이온 교환 수지 (예를 들어 폴리아스파르트산 칼럼)에서의 크로마토그래피, 크로마토포커싱, SDS-PAGE 및 황산암모늄 침전이 이용될 수도 있다. 임의의 예비 정제 단계(들) 후에, 관심 항체 및 오염물을 포함하는 혼합물로 pH 약 2.5 내지 4.5의 용출 완충액을 사용하는, 바람직하게는 낮은 염 농도 (예를 들어 약 0 내지 0.25 M 염)에서 수행되는 낮은 pH 소수성 상호작용 크로마토그래피를 실시할 수 있다. C. 항체 제조1) 폴리클로날 항체폴리클로날 항체는 일반적으로 관련 항원 및 아주반트의 다수회의 피하 (sc) 또는 복강내 (ip) 주사에 의해 동물에서 생성시킬 수 있다. 2기능성 작용제 또는 유도체화제, 예를 들어, 말레이미도벤조일 술포숙신이미드 에스테르 (시스테인 잔기를 통한 접합), N-히드록시숙신이미드 (리신 잔기를 통한), 글루타르알데히드, 숙신산 무수물, SOCl2, 또는 R1N=C=NR (여기서, R 및 R1은 독립적으로 저급 알킬기임)을 사용하여, 면역화되는 종에 면역원성인 단백질, 예를 들어 키홀 림펫 (keyhole limpet) 헤모시아닌 (KLH), 혈청 알부민, 소 티로글로불린 또는 대두 트립신 억제제에 관련 항원을 접합시키는 것이 유용할 수 있다. 사용될 수 있는 아주반트의 예는 프로인트 완전 아주반트 및 MPL-TDM 아주반트 (모노포스포릴 지질 A, 합성 트레할로스 디코리노미콜레이트)를 포함한다. 면역화 프로토콜은 과도한 실험 없이 당업자가 선택할 수 있다. 동물은 예를 들어 100 ㎍ 또는 5 ㎍의 단백질 또는 접합체 (각각 토끼 또는 마우스에 대해)를 3 부피의 프로인트 완전 아주반트와 합한 후 용액을 다중 부위에 피내 주사함으로써 항원, 면역원성 접합체, 또는 유도체에 대해 면역화된다. 1개월 후에, 프로인트 완전 아주반트 중 상기 펩티드 또는 접합체의 원래 양의 1/5 내지 1/10으로 여러 부위에 피하 주사함으로써 상기 동물을 부스팅한다. 7일 내지 14일 후에, 동물에서 채혈하여 혈청의 항체 역가를 분석한다. 역가가 안정화될 때까지 동물을 부스팅한다. 접합체는 또한 재조합 세포 배양물에서 단백질 융합체로서 제조될 수도 있다. 또한, 면역 반응을 증강시키기 위해 응집제, 예를 들어 명반을 적절하게 사용한다. 2) 모노클로날 항체모노클로날 항체는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득하였다. 즉, 이러한 집단을 구성하는 개개의 항체는 소량으로 존재할 수도 있는, 가능한 자연 발생 돌연변이 및/또는 번역후 변형 (예를 들어, 이성질체화, 아미드화)을 제외하고는 동일하다. 따라서, 수식어구 "모노클로날"은 항체의 특징을 별개의 항체의 혼합물이 아니라는 것으로서 표시하는 것이다. 예를 들어, 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)]에 최초로 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조할 수도 있고, 또는 재조합 DNA 방법 (미국 특허 제4,816,567호)으로 제조할 수도 있다. 하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예를 들어 햄스터는 면역화에 사용된 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 생성하거나 생성할 수 있는 림프구를 유발하기 위해 상기 기재된 바와 같이 면역화된다. 별법적으로, 림프구는 시험관내 면역화될 수 있다. 이어서, 림프구는 하이브리도마 세포를 형성하기 위해 적합한 융합제, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 골수종 세포와 융합된다 (문헌 [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)]). 면역화제는 전형적으로 항원성 단백질 또는 그의 융합체 변이체를 포함할 것이다. 일반적으로, 인간 기원의 세포가 요구될 경우 말초 혈액 림프구 ("PBL")가 사용되거나, 비-인간 포유동물 공급원이 요구될 경우 비장 세포 또는 림프절 세포가 사용된다. 이어서, 림프구를 적합한 융합제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 불멸화 세포주와 융합시켜, 하이브리도마 세포를 형성한다. 문헌 [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press (1986), pp. 59-103].불멸화 세포주는 일반적으로 형질전환된 포유동물 세포, 특히 설치류, 소 및 인간 기원의 골수종 세포이다. 통상적으로, 래트 또는 마우스 골수종 세포주가 사용된다. 이와 같이 제조된 하이브리도마 세포는 바람직하게는 융합되지 않은 모 골수종 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 1종 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에 접종하여 성장시킨다. 예를 들어, 모 골수종 세포에 효소 히포잔틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 (HGPRT 또는 HPRT)가 결핍된 경우, 하이브리도마의 배양 배지는 일반적으로 히포잔틴, 아미노프테린 및 티미딘 (HAT 배지)을 포함할 것이고, 이들 물질은 HGPRT-결핍 세포의 성장을 억제한다. 바람직한 무한증식 골수종 세포는 효율적으로 융합하고, 선택된 항체 생산 세포에 의한 항체의 안정적인 고수준 생성을 지지하고, 배지, 예를 들어 HAT 배지에 민감한 세포이다. 이 중에서, 바람직한 무한증식 세포주는 예를 들어 솔크 인스티튜트 셀 디스트리뷰션 센터 (Salk Institute Cell Distribution Center, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)로부터 얻을 수 있는 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양 및 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (American Type Culture Collection, 미국 버지니아주 매나사스 소재)으로부터 얻을 수 있는 SP-2 세포 (및 그의 유도체, 예를 들어 X63-Ag8-653)와 같은 쥐 골수종 라인이다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주 역시 인간 모노클로날 항체 생성과 관련하여 기재된 바 있다 (문헌 [Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984)], [Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)]). 하이브리도마 세포가 성장하는 배양 배지를 항원에 대한 모노클로날 항체의 생성에 대해 검정한다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생성된 모노클로날 항체의 결합 특이성을 면역침전법으로 결정하거나, 또는 시험관내 결합 검정법, 예를 들어 방사성면역검정 (RIA) 또는 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA)으로 결정한다. 하이브리도마 세포가 성장하는 배지는 목적하는 항원에 대해 작용하는 모노클로날 항체의 존재에 대해 분석될 수 있다. 바람직하게는, 모노클로날 항체의 결합 친화성 및 특이성은 면역침전 또는 시험관내 결합 분석, 예를 들어 방사성 면역 검정 (RIA) 또는 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정할 수 있다. 상기 기술 및 검정은 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, 결합 친화성은 문헌 [Munson et al., Anal. Biochem., 107:220 (1980)]의 스캐챠드 (Scatchard) 분석에 의해 결정할 수 있다. 목적하는 특이성, 친화성 및/또는 활성의 항체를 생성하는 하이브리도마 세포가 확인된 후에, 클론은 제한 희석 과정에 의해 서브클로닝하고 표준 방법 [Goding, 상기 문헌]으로 성장시킬 수 있다. 이러한 목적에 적합한 배양 배지는 예를 들어 D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 또한, 하이브리도마 세포는 포유동물에서 종양으로서 생체 내에서 성장시킬 수 있다. 서브클론에 의해 분비된 모노클로날 항체는 통상적인 이뮤노글로불린 정제 절차, 예를 들어 단백질 A-세파로스, 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 또는 친화성 크로마토그래피에 의해 배양 배지, 복수액 또는 혈청으로부터 적합하게 분리된다. 또한, 모노클로날 항체는 재조합 DNA 방법, 예컨대 미국 특허 제4,816,567호에 기재되어 있는 방법, 및 상기에서 기재한 것과 같은 방법으로 제조할 수도 있다. 모노클로날 항체를 코딩하는 DNA는 통상적인 절차 (예를 들어, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브 사용)를 이용하여 쉽게 단리 및 서열분석된다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로 작용한다. 일단 단리된 DNA는 발현 벡터에 삽입되고, 이 벡터는 재조합 숙주 세포에서 모노클로날 항체를 합성하기 위해 본래 이뮤노글로불린 단백질을 생성하지 않는 숙주 세포, 예를 들어 이. 콜라이 세포, 원숭이 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 골수종 세포를 형질감염시킨다. 항체를 코딩하는 DNA의 박테리아에서의 재조합 발현에 대한 검토 문헌으로는 문헌 [Skerra et al., Curr. Opinion in Immunol., 5:256-262 (1993)] 및 [Plueckthun, Immunol. Revs. 130:151-188 (1992)]이 포함된다.추가의 실시양태에서, 항체는 문헌 [McCafferty et al., Nature, 348:552-554 (1990)]에 기재된 기술을 이용하여 생성된 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 문헌 [Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991)] 및 [Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)]은 파지 라이브러리를 사용한 뮤린 및 인간 항체 각각의 단리를 기재한다. 후속 간행물들에는 사슬 셔플링에 의한 높은 친화성 (nM 범위) 인간 항체의 생산 (문헌 [Marks et al., Bio/Technology, 10:779-783 (1992)]), 뿐만 아니라 매우 큰 파지 라이브러리를 구축하기 위한 전략으로서의 조합형 감염 및 생체내 재조합 (문헌 [Waterhouse et al., Nucl. Acids Res., 21:2265-2266 (1993)])이 기술되어 있다. 따라서, 이러한 기술은 모노클로날 항체 단리를 위한 전통적인 모노클로날 항체 하이브리도마 기술의 실행가능한 대안이다. DNA는 또한 예를 들어 상동성 뮤린 서열 대신에 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 대한 코딩 서열을 치환시키거나 (미국 특허 제4,816,567호, 문헌 [Morrison, et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81:6851 (1984)]), 또는 이뮤노글로불린 코딩 서열에 비-이뮤노글로불린 폴리펩티드에 대한 코딩 서열의 전부 또는 일부를 공유 연결함으로써 변형시킬 수 있다. 전형적으로, 이러한 비-이뮤노글로불린 폴리펩티드는 항체의 불변 도메인 대신 사용되거나 항체의 한 항원-결합 부위의 가변 도메인 대신 사용되어, 항원에 대한 특이성을 갖는 하나의 항원-결합 부위 및 상이한 항원에 대한 특이성을 갖는 또 다른 항원-결합 부위를 포함하는 키메라 2가 항체를 생성시킨다. 본원에 기재된 모노클로날 항체는 1가 항체일 수 있고, 그의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 한 방법은 이뮤노글로불린 경쇄 및 변형 중쇄의 재조합 발현을 수반하였다. 중쇄는 중쇄 가교를 방지하도록 일반적으로 Fc 영역 내의 임의의 지점에서 절단된다. 별법적으로, 관련 시스테인 잔기는 다른 아미노산 잔기로 대체되거나 결실되어 가교결합을 방지한다. 1가 항체를 제조하기 위해 시험관내 방법도 적합하다. 그의 단편, 특히 Fab 단편을 생산하기 위한 항체의 소화는 당업계에 공지된 통상적인 기술을 사용하여 달성할 수 있다. 또한, 키메라 또는 하이브리드 항체는 가교제의 사용을 포함하는 합성 단백질 화학에 공지된 방법을 이용하여 시험관내 제조될 수도 있다. 예를 들어, 면역독소는 디술피드-교환 반응을 사용하여 또는 티오에테르 결합을 형성하여 제조할 수 있다. 상기 목적에 적합한 시약의 예로는 이미노티올레이트 및 메틸-4-메르캅토부티르이미데이트를 들 수 있다. 3) 인간화 항체. 본 발명의 항체는 인간화 또는 인간 항체를 추가로 포함할 수 있다. 비인간 (예를 들어, 뮤린) 항체의 인간화 형태는 비인간 이뮤노글로불린에서 유래한 최소 서열을 포함하는 키메라 이뮤노글로불린, 이뮤노글로불린 사슬, 또는 그의 단편 (예를 들어 Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 다른 항원 결합 하위서열)이다. 인간화 항체는 수용자의 상보성 결정 영역 (CDR)의 잔기 (본원에서 HVR로 사용됨)가 목적하는 특이성, 친화성 및 능력을 갖는 비인간종 (공여자 항체), 예를 들어 마우스, 래트 또는 토끼의 CDR의 잔기로 대체된 인간 이뮤노글로불린 (수용자 항체)을 포함한다. 일부 예에서, 인간 이뮤노글로불린의 Fv 프레임워크 잔기는 상응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 도입된 CDR 또는 프레임워크 서열 어느 것에서도 발견되지 않는 잔기를 포함할 수도 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 하나, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비인간 이뮤노글로불린의 CDR 영역에 대응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 이뮤노글로불린 컨센서스 서열의 FR 영역에 대응한다. 또한, 인간화 항체는 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 이뮤노글로불린의 일부를 최적으로 포함할 것이다. 문헌 [Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986)]; [Riechmann et al., Nature 332: 323-329 (1988)] 및 [Presta, Curr. Opin. Struct. Biol. 2: 593-596 (1992)].비-인간 항체를 인간화하는 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 비-인간 공급원으로부터 도입된 1개 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 종종 "유입(import)" 잔기로서 지칭되는데, 이는 전형적으로 "유입" 가변 도메인으로부터 취한다. 인간화는 본질적으로 윈터 (Winter) 및 동업자의 방법, 문헌 [Jones et al., Nature 321:522-525 (1986)]; [Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988)]; [Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988)])을 따라 또는 인간 항체의 대응하는 서열을 설치류 CDR 또는 CDR 서열로 대체함으로써 수행할 수 있다. 따라서, 이같은 "인간화" 항체는 무손상 인간 가변 도메인보다 실질적으로 더 적은 서열이 비-인간 종으로부터의 상응하는 서열로 치환된 키메라 항체 (미국 특허 제4,816,567호)이다. 실제로, 인간화 항체는 전형적으로 일부 CDR 잔기 및 가능하게는 일부 FR 잔기가 설치류 항체의 유사 부위로부터의 잔기로 치환된 인간 항체이다. 인간화 항체의 제조에 사용되는 인간 가변 도메인 경쇄 및 중쇄 둘다의 선택은 항원성 감소에 매우 중요하다. 소위 "베스트-핏(best-fit)" 방법에 따라, 설치류 항체의 가변 도메인의 서열을 공지된 인간 가변-도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 스크리닝한다. 설치류와 가장 근접한 인간 서열은 이어서 인간화 항체의 인간 프레임워크 (FR)로서 허용된다. 문헌 [Sims et al., J. Immunol., 151:2296 (1993)]; [Chothia et al., J. Mol. Biol., 196: 901 (1987)]. 또 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정 하위군의 모든 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 특정 프레임워크를 사용한다. 여러 다양한 인간화 항체에 대해 동일한 프레임워크가 사용될 수 있다. 문헌 [Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)]; [Presta et al., J. Immunol., 151: 2623 (1993)]. 추가로, 항체가 항원에 대해 높은 친화성을 보유하고 기타 유리한 생물학적 특성을 보유하도록 인간화하는 것이 중요하다. 이를 달성하기 위해서, 바람직한 방법에 따라, 인간화 항체는 모 서열 및 인간화 서열의 3차원 모델을 이용하는 모 서열 및 다양한 개념적 인간화 생성물의 분석 과정에 의해 제조된다. 3차원 이뮤노글로불린 모델은 통상적으로 이용가능하고, 당업자에게 공지되어 있다. 선택된 후보 이뮤노글로불린 서열의 가능한 3차원 형태 구조를 예시하고 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램이 이용가능하다. 이러한 디스플레이를 조사하면 후보 이뮤노글로불린 서열의 기능에 있어서 잔기의 가능한 역할의 분석, 즉 후보 이뮤노글로불린이 그의 항원에 결합하는 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석이 가능하다. 이러한 방식으로, FR 잔기는 수용자 서열 및 유입 서열로부터 선택 및 조합되어 원하는 항체 특징, 예를 들어 표적 항원(들)에 대한 친화성 증가를 달성할 수 있다. 일반적으로, 항원 결합에 대한 영향에는 CDR 잔기가 직접적이고 가장 실질적으로 관여한다. 인간화 항체의 다양한 형태가 고려된다. 예를 들어, 인간화 항체는 면역접합체를 생성시키기 위해서 하나 이상의 세포독성제(들)과 임의로 접합된 항체 단편, 예를 들어 Fab일 수 있다. 별법적으로, 인간화 항체는 무손상 항체, 예를 들어 무손상 IgG1 항체일 수 있다. 4) 인간 항체인간화에 대한 대안책으로서 인간 항체를 생성할 수 있다. 예를 들어, 면역화시에 내인성 이뮤노글로불린의 생성 없이 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생성할 수 있는 트랜스제닉 동물 (예를 들어, 마우스)을 생성하는 것이 현재 가능하다. 예를 들어, 키메라 및 배선(germ-line) 돌연변이체 마우스 내 항체 중쇄 연결 영역 (JH) 유전자의 동형접합성 결실이 내인성 항체 생성을 완전히 억제시킨다고 기재된 바 있다. 인간 배선 이뮤노글로불린 유전자 어레이를 이러한 배선 돌연변이체 마우스에게 전달하면, 항원 접종시에 인간 항체가 생성될 것이다. 예를 들어, 문헌 [Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993)]; [Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993)]; [Bruggermann et al., Year in Immuno., 7:33 (1993)]; 미국 특허 제5,591,669호 및 WO 97/17852를 참조한다. 다르게는, 파지 디스플레이 기술을 이용하여 면역화되지 않은 공여자로부터의 이뮤노글로불린 가변 (V) 도메인 유전자 레퍼토리로부터 인간 항체 및 항체 단편을 시험관내 생산할 수 있다. 문헌 [McCafferty et al., Nature 348:552-553 (1990)]; [Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol. 227: 381 (1991)]. 이러한 기술에 따라, 항체 V 도메인 유전자를 섬유상 박테리오파지, 예컨대 M13 또는 fd의 주요 또는 소수의 외피 단백질 유전자로 인 프레임 클로닝하고, 파지 입자의 표면상에 기능성 항체 단편으로서 디스플레이한다. 섬유상 입자는 파지 게놈의 단일 가닥 DNA 카피를 함유하기 때문에, 항체의 기능적 특성에 기초한 선별에 의해 이러한 특성을 나타내는 항체를 코딩하는 유전자도 선별된다. 따라서, 파지는 B 세포의 특성 중 일부를 모방한다. 파지 디스플레이는 예를 들어 문헌 [Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J., Curr. Opin Struct. Biol. 3:564-571 (1993)]에서 고찰된 다양한 포맷으로 수행할 수 있다. V-유전자 절편의 여러 공급원이 파지 디스플레이에 사용될 수 있다. 문헌 [Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991)]은 면역화된 마우스의 비장으로부터 유래된 V 유전자의 소규모 무작위 조합 라이브러리로부터의 항-옥사졸론 항체의 다양한 어레이를 단리하였다. 면역화하지 않은 인간 공여자로부터의 V 유전자 레퍼토리를 구축할 수 있고, 다양한 항원 (자기 항원 포함) 어레이에 대한 항체는 본질적으로, 문헌 [Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)], 또는 [Griffith et al., EMBO J. 12:725-734 (1993)]에 기재된 기술에 따라서 단리시킬 수 있다. 또한 미국 특허 제5,565,332호 및 동 제5,573,905호를 참조한다. 콜(Cole) 등 및 보에르너(Boerner) 등의 기술도 인간 모노클로날 항체의 제조에 이용될 수 있다 (문헌 [Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)] 및 [Boerner et al., J. Immunol. 147(1): 86-95 (1991)]). 유사하게, 인간 항체는 트랜스제닉 동물, 예를 들어 내인성 이뮤노글로불린 유전자가 부분적으로 또는 완전히 불활성화된 마우스에 인간 이뮤노글로불린 로커스를 도입하여 제조할 수 있다. 시험 접종 시에, 인간 항체 생산이 관찰되고, 이것은 유전자 재배열, 회합 및 항체 레파토리를 포함하여 모든 면에서 인간에서 관찰되는 것과 매우 유사하다. 이러한 접근법은, 예를 들어 미국 특허 제5,545,807호; 동 제5,545,806호, 동 제5,569,825호, 동 제5,625,126호, 동 제5,633,425호, 동 제5,661,016호 및 다음과 같은 과학 간행물: 문헌 [Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992)]; [Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994)]; [Morrison, Nature 368: 812-13 (1994)], [Fishwild et al., Nature Biotechnology 14: 845-51 (1996)], [Neuberger, Nature Biotechnology 14: 826 (1996)] 및 [Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995)]에 기재되어 있다.마지막으로, 인간 항체는 또한 시험관 내에서 활성화된 B 세포에 의해 생성될 수 있다 (미국 특허 제5,567,610호 및 제5,229,275호 참조). 5) 항체 단편특정 상황에서는, 전체 항체보다 항체 단편을 사용하는 것이 유리하다. 보다 작은 단편 크기는 신속한 제거를 가능하게, 충실성 종양에 대한 접근성을 개선시킬 수 있다. 항체 단편 생성을 위한 다양한 기술이 개발되었다. 전통적으로, 이들 단편은 무손상 항체의 단백질분해적 소화를 통해 유도되었다 (예를 들어, 문헌 [Morimoto et al., J Biochem Biophys. Method. 24:107-117 (1992)]; 및 [Brennan et al., Science, 229:81 (1985)] 참조). 그러나, 이러한 단편은 이제 재조합 숙주 세포에 의해 직접 생성될 수 있다. Fab, Fv 및 scFv 항체 단편은 모두가 이. 콜라이에서 발현되어 분비될 수 있고, 이에 의해 다량의 이들 단편을 쉽게 생성할 수 있다. 항체 단편은 상기 논의된 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 별법적으로, Fab'-SH 단편은 이. 콜라이로부터 직접 회수되고 화학적으로 커플링되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다 (문헌 [Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)]). 또 다른 접근법에 따라, F(ab')2 단편을 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접적으로 단리할 수 있다. 생체내 반감기가 증가된 Fab 및 F(ab')2는 미국 특허 제5,869,046호에 기재되어 있다. 다른 실시양태에서, 선택된 항체는 단일 쇄 Fv 단편 (scFv)이다. WO 93/16185; 미국 특허 제5,571,894호 및 미국 특허 제5,587,458호를 참조한다. 항체 단편은 또한 예를 들어 미국 특허 제5,641,870호에 기재된 바와 같이 "선형 항체"일 수 있다. 이러한 선형 항체 단편은 단일특이적 또는 이중특이적일 수 있다. 6) 항체 의존성 효소-매개 전구약물 요법 (ADEPT)본 발명의 항체는 또한 전구약물 (예를 들어 펩티딜 화학요법제, WO 81/01145 참조)을 활성 항암 약물로 전환시키는 전구약물-활성화 효소에 항체를 접합시켜서 ADEPT에서 사용할 수도 있다. 예를 들어 WO 88/07378 및 미국 특허 제4,975,278호를 참조한다. ADEPT에 유용한 면역접합체의 효소 성분은 전구약물을 그의 보다 활성인 세포독성 형태로 전환시키는 방식으로 전구약물에 작용할 수 있는 임의의 효소를 포함한다. 본 발명의 방법에 유용한 효소는 글리코시다제, 글루코스 옥시다제, 인간 리소자임, 인간 글루쿠로니다제, 포스페이트 함유 전구약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 알칼리성 포스파타제; 술페이트 함유 전구약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 아릴술파타제; 비독성 5-플루오로시토신을 항암 약물인 5-플루오로우라실로 전환시키는데 유용한 시토신 데아미나제; 펩티드 함유 전구약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 프로테아제, 예를 들어 세라티아(serratia) 프로테아제, 테르몰리신, 섭틸리신, 카르복시펩티다제 (예를 들어, 카르복시펩티다제 G2 및 카르복시펩티다제 A) 및 카텝신 (예를 들어, 카텝신 B 및 L); D-아미노산 치환체를 함유하는 전구약물을 전환시키는데 유용한 D-알라닐카르복시펩티다제; 글리코실화된 전구약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 탄수화물-절단 효소, 예를 들어 β-갈락토시다제 및 뉴라미니다제; β-락탐으로 유도체화된 약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 β-락타마제; 및 아민 질소에서 각각 페녹시아세틸기 또는 페닐아세틸기로 유도체화된 약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 페니실린 아미다제, 예를 들어 페니실린 V 아미다제 또는 페니실린 G 아미다제를 포함하고, 이로 제한되지 않는다. 별법적으로, 효소 활성을 갖는 항체 (당업계에서 "아브자임 (abzyme)"으로도 알려짐)가 본 발명의 전구약물을 유리 활성 약물로 전환시키기 위해 사용될 수 있다 (예를 들어 문헌 [Massey, Nature 328: 457-458 (1987)] 참조). 항체-아브자임 접합체는 종양 세포 집단에 아브자임을 전달하기 위해 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 상기 효소는 당업계에 잘 공지된 기술에 의해, 예를 들어 상기 논의된 이종 2관능성 가교결합제를 사용하여 본원에 기재된 폴리펩티드 또는 항체에 공유 결합될 수 있다. 별법적으로, 적어도 본 발명의 효소의 기능적 활성 부분에 연결된 본 발명의 항체의 항원 결합 영역을 적어도 포함하는 융합 단백질은 당업계에 잘 공지된 재조합 DNA 기술을 이용하여 제작할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Neuberger et al., Nature, 312: 604-608 (1984)] 참조). 7) 이중특이적 및 다중특이적 항체이중특이적 항체 (BsAb)는 동일한 또는 다른 단백질 상의 에피토프를 포함하는 적어도 2개의 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 항체이다. 별법적으로, 한 아암은 표적 항원에 결합할 수 있고, 다른 아암은 세포 방어 메카니즘을 표적 항원 발현 세포에 집중시키고 국한시키도록 백혈구 상의 촉발 분자, 예컨대 T 세포 수용체 분자 (예를 들어, CD3), 또는 IgG에 대한 Fc 수용체 (FcγR), 예컨대 FcγR1 (CD64), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD16)에 결합하는 아암과 조합될 수 있다. 상기 항체는 전장 항체 또는 항체 단편 (예를 들어, F(ab')2 이중특이적 항체)으로부터 유도될 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 세포독성제를 표적 항원 발현 세포에 편재하도록 사용될 수 있다. 이들 항체는 목적하는 항원에 결합하는 하나의 아암 및 세포독성제 (예를 들어, 사포린, 항-인터페론-α, 빈카 알칼로이드, 리신 (ricin) A 사슬, 메토트렉세이트 또는 방사성 동위원소 합텐)에 결합하는 다른 아암을 갖는다. 공지의 이중특이적 항체의 예는 항-ErbB2/항-FcgRIII (WO 96/16673), 항-ErbB2/항-FcgRI (U.S.P. 5,837,234), 항-ErbB2/항-CD3 (U.S.P. 5,821,337)을 포함한다. 이중특이적 항체의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다. 전장 이중특이적 항체의 전통적인 제조는 2개의 이뮤노글로불린 중쇄/경쇄 쌍의 동시발현에 기초하고, 여기서 2개의 사슬은 상이한 특이성을 갖는다. 문헌 [Millstein et al., Nature, 305: 537-539 (1983)]. 이뮤노글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 분류로 인해, 이들 하이브리도마 (콰드로마(quadroma))는 10종의 상이한 항체 분자들의 잠재적인 혼합물을 생성하며, 이 중에서 오직 1종만이 정확한 이중특이적 구조를 갖는다. 통상적으로 친화성 크로마토그래피 단계에 의해 수행되는 상기 정확한 분자의 정제는 다소 성가시고 생성 수율이 낮다. 유사한 절차가 WO93/08829 및 문헌 [Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991)]에 개시되어 있다. 상이한 접근법에 따라, 원하는 결합 특이성 (항체-항원 결합 부위)을 갖는 항체 가변 도메인을 이뮤노글로불린 불변 도메인 서열에 융합시킨다. 바람직하게는, 융합은 힌지의 적어도 일부, CH2 및 CH3 영역을 포함하는 이뮤노글로불린 중쇄 불변 도메인에 의한다. 경쇄 결합에 필요한 부위를 함유하는 제1 중쇄 불변 영역 (CH1)이 융합체의 적어도 하나에 존재하는 것이 바람직하다. 이뮤노글로불린 중쇄 융합체 및 원하는 경우 이뮤노글로불린 경쇄를 코딩하는 DNA를 별개의 발현 벡터 내로 삽입하고, 적합한 숙주 유기체 내로 동시형질감염시킨다. 이는 구축에 사용된 3종의 폴리펩티드 쇄의 불균일한 비율이 최적의 수율을 제공하는 실시양태에서 3종의 폴리펩티드 단편의 상호 비율을 조정하는데 있어서 높은 유연성을 제공한다. 그러나, 동일한 비율의 2종 이상의 폴리펩티드 쇄의 발현이 고수율을 유도하거나 상기 비율이 특별한 유의성을 갖지 않는 경우에는 하나의 발현 벡터 내에 2종 또는 3종 모두의 폴리펩티드 쇄의 코딩 서열을 삽입하는 것이 가능하다. 이러한 접근법의 바람직한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 한쪽 아암에 제1 결합 특이성을 갖는 하이브리드 이뮤노글로불린 중쇄, 및 다른 쪽 아암에 하이브리드 이뮤노글로불린 중쇄-경쇄 쌍 (제2 결합 특이성을 제공함)으로 이루어진다. 이중특이적 분자의 반쪽에만 이뮤노글로불린 경쇄가 존재하는 것이 손쉬운 분리 방법을 제공하므로, 상기 비대칭 구조는 원치 않는 이뮤노글로불린 사슬 조합물로부터 목적하는 이중특이적 화합물의 분리를 용이하게 하는 것으로 밝혀졌다. 이러한 접근법은 WO 94/04690에 개시되어 있다. 이중특이적 항체의 생성에 대한 추가의 상세한 내용에 대해서는, 예를 들어 문헌 [Suresh et al., Methods in Enzymology 121:210 (1986)]을 참조한다. WO 96/27011 또는 U.S.P. 5,731,168에 기재된 다른 방법에 따라, 한쌍의 항체 분자들 사이의 계면은 재조합 세포 배양물로부터 회수되는 이종이량체의 비율을 최대화하도록 공학적으로 처리될 수 있다. 바람직한 계면은 항체 불변 도메인의 CH3 영역의 적어도 일부를 포함한다. 이러한 방법에서, 제1 항체 분자의 경계면으로부터의 1개 이상의 작은 아미노산 측쇄가 보다 큰 측쇄 (예를 들어, 티로신 또는 트립토판)로 대체된다. 큰 아미노산 측쇄를 보다 작은 것 (예를 들어, 알라닌 또는 트레오닌)으로 교체함으로써 큰 측쇄(들)에 동일하거나 유사한 크기의 보상적 "캐비티 (cavity)"가 제2 항체 분자의 계면 상에 생성된다. 이는 다른 원치않는 최종 생성물, 예를 들어 동종이량체에 비해 이종이량체의 수율을 증가시키는 메카니즘을 제공한다. 항체 단편으로부터 이중특이적 항체를 생성하는 기술은 문헌에 기재되어 있다. 예를 들어, 이중특이적 항체는 화학적 연결을 이용하여 제조될 수 있다. 문헌 [Brennan et al., Science 229: 81 (1985)]은 무손상 항체를 단백질가수분해로 절단하여 F(ab')2 단편을 생성하는 절차를 기재한다. 이들 단편은 인접 디티올을 안정화시키고 분자간 디술피드 형성을 방지하기 위해 디티올 착화제인 아비산나트륨의 존재하에 환원시킨다. 이어서, 생성된 Fab' 단편을 티오니트로벤조에이트 (TNB) 유도체로 전환시킨다. 이어서 Fab'-TNB 유도체 중 하나는 Fab'-TNB 유도체로 재전환되어 이중특이적 항체를 형성한다. 생성된 이중특이적 항체는 효소의 선택적 고정화를 위한 작용제로서 사용될 수 있다. Fab' 단편은 이. 콜라이로부터 직접 회수하고, 화학적으로 커플링시켜 이중특이적 항체를 형성할 수 있다. 문헌 [Shalaby et al., J. Exp. Med. 175: 217-225 (1992)]은 완전히 인간화된 이중특이적 항체 F(ab')2 분자의 생성을 기재한다. 각각의 Fab' 단편을 이. 콜라이로부터 따로 분비시키고, 이중특이적 항체를 형성하도록 시험관내 유도 화학 커플링 반응을 실시하였다. 이로써 형성된 이중특이적 항체는 ErbB2 수용체를 과다발현하는 세포 및 정상 인간 T 세포에 결합할 수 있을 뿐만 아니라, 인간 유방 종양 표적에 대한 인간 세포독성 림프구의 용해 활성을 촉발할 수도 있었다. 2가 항체 단편을 재조합 세포 배양액으로부터 직접 제조하고 단리하기 위한 다양한 기술이 또한 설명되었다. 예를 들어, 2가 이종이량체는 류신 지퍼를 사용하여 생산되었다. 문헌 [Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)]. Fos 및 Jun 단백질로부터의 류신 지퍼 펩티드를 유전자 융합에 의해 2개의 상이한 항체의 Fab' 부분에 연결시켰다. 항체 동종이량체를 힌지 영역에서 환원시켜 단량체를 형성한 후에 재산화시켜서 항체 이종이량체를 형성하였다. 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)]에 기재된 "디아바디" 기술은 이중특이적/2가 항체 단편 제조를 위한 다른 메카니즘을 제공하였다. 상기 단편은 동일 쇄의 2개의 도메인 사이에 쌍을 형성하기에는 지나치게 짧은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH)을 포함한다. 따라서, 1개 단편의 VH 및 VL 도메인은 또 다른 단편의 상보적 VL 및 VH 도메인과 쌍을 형성하게 되어 2개의 항원-결합 부위가 형성된다. 단일쇄 Fv (sFv) 이량체를 사용한 이중특이적/2가 항체 단편의 다른 제조 전략도 보고된 바 있다. 문헌 [Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)]을 참조한다. 2가 초과의 항체가 고려된다. 예를 들어 삼중특이적 항체를 제조할 수 있다. 문헌 [Tutt et al., J. Immunol. 147: 60 (1991)].예시적인 이중특이적 항체는 제시된 분자 상의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 별법적으로, 항-단백질 아암은 세포 방어 메카니즘을 특정 단백질을 발현하는 세포에 집중시키도록 백혈구 상의 촉발 분자, 예를 들어 T 세포 수용체 분자 (예를 들어, CD2, CD3, CD28 또는 B7), 또는 IgG에 대한 Fc 수용체 (FcγR), 예를 들어 FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD16)에 결합하는 아암과 조합될 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 세포독성제를 특정 단백질을 발현하는 세포에 편재하도록 사용될 수 있다. 이들 항체는 단백질 결합 아암 및 세포독성제 또는 방사성핵종 킬레이터, 예를 들어 EOTUBE, DPTA, DOTA 또는 TETA에 결합하는 아암을 갖는다. 관심있는 다른 이중특이적 항체는 관심있는 단백질에 결합하고, 조직 인자 (TF)에 추가로 결합한다. 8) 다가 항체다가 항체는 항체가 결합하는 항원을 발현하는 세포에 의해 2가 항체보다 신속하게 내재화 (및/또는 이화)될 수 있다. 본 발명의 항체는 3개 이상의 항원 결합 부위가 있는 다가 항체 (IgM 클래스 이외의 것)일 수 있고 (예를 들어 4가 항체), 이는 항체의 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 핵산의 재조합 발현에 의해 쉽게 생산될 수 있다. 다가 항체는 이량체화 도메인 및 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함할 수 있다. 바람직한 이량체화 도메인은 Fc 영역 또는 힌지 영역을 포함한다 (또는 이것으로 이루어진다). 이러한 시나리오에서, 항체는 Fc 영역, 및 Fc 영역의 아미노 말단에 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함할 것이다. 본원에서의 바람직한 다가 항체는 3개 내지 약 8개, 그러나 바람직하게는 4개의 항원 결합 부위를 포함한다 (또는 이것으로 이루어진다). 다가 항체는 적어도 1개의 폴리펩티드 쇄 (바람직하게는 2개의 폴리펩티드 쇄)를 포함하고, 여기서의 상기 폴리펩티드 쇄(들)는 2개 이상의 가변 도메인을 포함한다. 예를 들어 폴리펩티드 쇄(들)는 VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc (여기서, VD1은 제1 가변 도메인이고, VD2는 제2 가변 도메인이고, Fc는 Fc 영역의 1개의 폴리펩티드 쇄이고, X1 및 X2는 아미노산 또는 폴리펩티드를 나타내고, n은 0 또는 1임)를 포함할 수 있다. 예를 들어 폴리펩티드 쇄(들)은 VH-CH1-가요성 링커-VH-CH1-Fc 영역 쇄; 또는 VH-CH1-VH-CH1-Fc 영역 쇄를 포함할 수 있다. 본원에서의 다가 항체는 바람직하게는 적어도 2개 (바람직하게는 4개)의 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 본원에서의 다가 항체는 예를 들어 약 2개 내지 약 8개의 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 본원에서 고려되는 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 임의로 CL 도메인을 추가로 포함한다. 9) 이종접합체 항체이종접합체 항체도 또한 본 발명의 범주에 속한다. 이종접합체 항체는 2개의 공유 결합된 항체로 구성된다. 예를 들어, 이종접합체의 항체 중 하나는 아비딘에 커플링되고, 다른 하나는 비오틴에 커플링될 수 있다. 그러한 항체는, 예를 들어 면역계 세포를 원치 않는 세포에 표적화시키기 위해 (U.S.P. 4,676,980), 및 HIV 감염의 치료를 위해 제안되었다. WO 91/00360, WO 92/200373 및 EP 0308936. 항체는 가교제를 사용하는 것을 포함하는, 합성 단백질 화학에 공지된 방법을 이용하여 시험관내 제조될 수 있는 것으로 고려된다. 예를 들어, 디술피드 교환 반응을 이용하거나 티오에테르 결합을 형성하여 면역독소를 구축할 수 있다. 이러한 목적에 적합한 시약의 예는 이미노티올레이트 및 메틸-4-메르캅토부티르이미데이트 및, 예를 들어 미국 특허 제4,676,980호에 개시된 것을 포함한다. 이종접합체 항체는 임의의 편리한 가교 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 다수의 가교 기술과 함께 적합한 가교제가 당업계에 공지되어 있고, 미국 특허 제4,676,980호에 개시되어 있다. 10) 이펙터 기능 조작본 발명의 항체를 예를 들어 항체의 항원-의존성 세포 매개 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체-의존성 세포독성 (CDC)이 변형 (예를 들어, 향상 또는 제거)되도록 Fc 이펙터 기능에 대해 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체의 Fc 이펙터 기능은 감소되거나 제거된다. 이것은 항체의 Fc 영역에 1개 이상의 아미노산 치환을 도입함으로써 달성될 수 있다. 별법적으로 또는 추가로, 시스테인 잔기(들)이 Fc 영역 내에 도입될 수 있어서, 상기 영역 내에 사슬간 디술피드 결합 형성이 가능하다. 이로써 생성된 동종이량체 항체는 개선된 내재화 능력 및/또는 증가된 보체-매개 세포 사멸 및 항체-의존성 세포성 세포독성 (ADCC)을 가질 수 있다. 문헌 [Caron et al., J. Exp Med. 176:1191-1195 (1992)] 및 [Shopes, B. J. Immunol. 148:2918-2922 (1992)]을 참조한다. 항종양 활성이 증강된 동종-이량체성 항체는 문헌 [Wolff et al., Cancer Research 53: 2560-2565 (1993)]에 기재된 바와 같이 이종-이관능성 가교 결합제를 사용하여 제조할 수도 있다. 별법적으로, 이중 Fc 영역을 갖는 항체를 조작할 수 있고, 이에 의해 항체의 보체 용해 및 ADCC 능력이 증진될 수 있다. 문헌 [Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design, 3:219-230 (1989)]을 참조한다. 항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 예를 들어 미국 특허 제5,739,277호에 기재된 바와 같이 샐비지(salvage) 수용체 결합 에피토프를 항체 (특히, 항체 단편)에 혼입시킬 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "샐비지 수용체 결합 에피토프"는 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기 증가를 담당하는 IgG 분자 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4)의 Fc 영역의 에피토프를 지칭한다. 11) 다른 아미노산 서열 변형본원에 기재된 항체의 아미노산 서열 변형(들)이 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화성 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체들은 적절한 뉴클레오티드 변화를 항체 핵산 내에 도입함으로써, 또는 펩티드 합성에 의해 제조된다. 이같은 변형에는, 예를 들어, 항체의 아미노산 서열 내 잔기의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환이 포함된다. 최종 구축물이 원하는 특징을 갖는다면, 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합이 최종 구축물에 가해진다. 아미노산 변화는 또한 항체의 번역-후 과정을 변경시킬 수 있으며, 예컨대 글리코실화 부위의 개수 또는 위치를 변화시킬 수 있다. 돌연변이 유발의 바람직한 위치인 항체의 특정 잔기 또는 영역의 확인에 유용한 방법은 문헌 [Cunningham and Wells in Science, 244:1081-1085 (1989)]에 기재된 바와 같은 "알라닌 스캐닝 돌연변이 유발"이다. 여기서, 표적 잔기 또는 잔기의 집단이 확인되고 (예를 들어, 하전된 잔기, 예를 들어 arg, asp, his, lys, 및 glu), 아미노산과 항원의 상호작용에 영향을 주기 위해 중성 또는 음으로 하전된 아미노산 (가장 바람직하게는 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 치환된다. 이후, 치환에 대한 기능적 감수성을 나타내는 아미노산 위치를 치환 부위에서 또는 치환 부위에 대하여 추가적인 또는 다른 변이체를 도입함으로써 정련시킨다. 따라서, 아미노산 서열 변이를 도입하기 위한 부위는 미리 결정되지만, 돌연변이 자체의 성질은 미리 결정할 필요가 없다. 예를 들어, 소정의 부위에서 돌연변이의 성능을 분석하기 위해, ala 스캐닝 또는 무작위 돌연변이유발이 표적 코돈 또는 영역에서 수행되고, 발현된 변이체가 원하는 활성에 대하여 스크리닝된다. 아미노산 서열 삽입은 길이가 1개 잔기 내지 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드까지의 범위인 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합체 및 또한 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예로는 N-말단 메티오닐 잔기가 있는 항체 또는 세포독성 폴리펩티드에 융합된 항체가 포함된다. 항체 분자의 또 다른 삽입 변이체에는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드 또는 효소 (예를 들어 ADEPT용)가 항체의 N- 또는 C-말단에 융합된 것이 포함된다. 또 다른 유형의 변이체는 아미노산 치환 변이체이다. 이러한 변이체에서는 항체 분자 내의 1개 이상의 아미노산 잔기가 상이한 잔기로 대체된다. 치환적 돌연변이유발에 대하여 가장 관심을 갖는 부위는 초가변 영역을 포함하지만, FR 변경 또한 고려된다. 보존적 치환은 "바람직한 치환"의 표제 하에 표 A에 나타낸다. 이같은 치환으로 생물학적 활성이 변하게 되면, 표 A에서 "예시적 치환"으로 명명된 또는 아미노산 부류와 관련하여 하기에 추가로 기술되는 바와 같은 더욱 실질적인 변화가 도입될 수 있고, 생성물을 스크리닝하게 된다.003c#표 A003e# 항체의 생물학적 특성의 실질적인 변형은, (a) 치환 영역에서 폴리펩티드 주쇄의 구조가 예를 들어 시트 또는 나선 형태로서 유지되거나, (b) 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성이 유지되거나, 또는 (c) 측쇄의 크기가 유지되는데 미치는 효과가 유의하게 상이한 치환을 선택함으로써 수행된다. 자연 발생 잔기는 공통적인 측쇄 특성에 따라 하기 군으로 나뉜다:(1) 소수성: 노르류신, met, ala, val, leu, ile;(2) 중성 친수성: cys, ser, thr;(3) 산성: asp, glu;(4) 염기성: asn, gln, his, lys, arg;(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: gly, pro, 및(6) 방향족 : trp, tyr, phe. 비-보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 또 다른 부류로 교환하는 것을 수반할 것이다. 항체의 적절한 입체 형태를 유지하는데 관여하지 않는 임의의 시스테인 잔기가 또한 분자의 산화적 안정성을 개선시키고 비정상적 가교결합을 방지하기 위해 일반적으로 세린으로 치환될 수 있다. 반대로, 그의 안정성을 개선시키기 위해 시스테인 결합(들)이 항체에 첨가될 수 있다 (특히 항체가 항체 단편, 예를 들어 Fv 단편인 경우). 특히 바람직한 유형의 치환 변이체는 모 항체 (예를 들어 인간화 또는 인간 항체)의 하나 이상의 초가변 영역 잔기를 치환하는 것을 포함한다. 일반적으로, 추가의 개발을 위해 선택된 생성되는 변이체(들)은 이들이 생성된 모 항체에 비해 개선된 생물학적 특성을 가질 것이다. 이러한 치환 변이체를 생성하는 편리한 방법은 파지 디스플레이를 사용한 친화성 성숙을 수반하였다. 간략하게, 몇몇 초가변 영역 부위 (예를 들어 6-7개의 부위)가 각 부위에서 모든 가능한 아미노 치환을 생성하도록 돌연변이된다. 이로써 생성된 항체 변이체를 섬유상 파지 입자로부터 각 입자 내에 패키지된 M13의 유전자 III 생성물에 대한 융합체로서 1가 방식으로 디스플레이시킨다. 이어서, 파지-디스플레이된 변이체를 본원에 개시된 바와 같이 이들의 생물학적 활성 (예를 들어, 결합 친화성)에 대해 스크리닝한다. 변형시킬 후보 초가변 영역 부위를 확인하기 위해, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발을 수행하여 항원 결합에 유의하게 기여하는 초가변 영역 잔기를 확인할 수 있다. 별법적으로 또는 추가적으로, 항원-항체 복합체의 결정 구조를 분석하여 항체와 그의 표적 (예를 들어, PD-L1, B7.1) 사이의 접촉 지점을 확인하는 것이 유익할 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 이웃 잔기가 본원에서 상술된 기술에 따라 치환시킬 후보이다. 일단 이러한 변이체가 생성되면, 변이체의 패널을 본원에 기재한 바와 같이 스크리닝하고, 하나 이상의 관련 검정에서 우수한 특성을 갖는 항체를 추가 개발을 위해 선택할 수 있다. 항체의 또 다른 유형의 아미노산 변이체는, 항체의 원래의 글리코실화 패턴을 변경한 것이다. 변경이란, 항체에서 발견되는 하나 이상의 탄수화물 모이어티의 결실 및/또는 항체에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위의 첨가를 의미한다. 항체의 글리코실화는 전형적으로 N-연결되거나 O-연결된다. N-연결된이란 탄수화물 모이어티가 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착된 것을 지칭한다. 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (여기서, X는 프롤린을 외한 임의의 아미노산임)이 아스파라긴 측쇄로 탄수화물 모이어티를 효소적 부착시키기 위한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩티드 내 이들 트리펩티드 서열 중 하나의 존재는 잠재적인 글리코실화 부위를 생성한다. O-연결된 글리코실화는 히드록시아미노산, 가장 일반적으로는 세린 또는 트레오닌으로의 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 크실로스 중 하나의 부착을 지칭하지만, 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시리신이 사용될 수도 있다. 항체에의 글리코실화 부위의 첨가는 아미노산 서열이 상기 기재한 하나 이상의 트리펩티드 서열을 함유하도록 변경시키는 것에 의해 편리하게 달성된다 (N-연결된 글리코실화 부위의 경우). 변경은 또한 본래 항체의 서열에 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기를 첨가하거나 또는 그것으로 치환하여 행할 수 있다 (O-연결된 글리코실화 부위의 경우). 본 발명의 항체에 대한 아미노산 서열 변이체를 코딩하는 핵산 분자는 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 제조된다. 이러한 방법에는 천연 공급원으로부터의 단리 (자연 발생 아미노산 서열 변이체의 경우), 또는 앞서 제조된 변이체 또는 비-변이체 버전의 올리고뉴클레오티드-매개 (또는 부위-지정) 돌연변이유발, PCR 돌연변이유발 및 카세트 돌연변이유발에 의한 제조가 포함되지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 12) 기타 항체 변형본 발명의 항체는 당업계에 공지되고 용이하게 입수가능한 추가적인 비단백질성 모이어티를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 바람직하게는, 항체의 유도체화에 적절한 모이어티는 수용성 중합체이다. 수용성 중합체의 비-제한적인 예로는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산 (단독중합체 또는 무작위 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 옥시드/에틸렌 옥시드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올 (예를 들어 글리세롤), 폴리비닐 알콜 및 이들의 혼합물을 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드는 물에서의 안정성으로 인해 제작에서의 장점이 있을 수 있다. 중합체는 임의의 분자량일 수 있고, 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착된 중합체의 수는 변할 수 있고, 1개를 초과하는 중합체가 부착될 경우, 중합체들은 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은 개선될 항체의 특정 성질 또는 기능, 항체 유도체가 한정된 조건 하에 치료법에서 사용될 것인지 여부 등이 포함되지만 이에 제한되지 않는 고려사항을 기초로 결정될 수 있다. 상기 기술 및 다른 적합한 제제는 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Alfonso Gennaro, Ed., Philadelphia College of Pharmacy and Science (2000)]에 개시되어 있다.D. 제약 제제치료 제제는 목적하는 정도의 순도를 갖는 활성 성분을 선택적인 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제 (문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Lippincott Williams 0026# Wiklins, Pub., Gennaro Ed., Philadelphia, PA 2000])와 혼합함으로써 보관을 위해 제조한다. 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용된 용량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충액, 항산화제, 예를 들어 아스코르브산, 메티오닌, 비타민 E, 메타중아황산나트륨; 보존제, 등장화제, 안정화제, 금속 착체 (예를 들어 Zn-단백질 착체); 킬레이트화제, 예를 들어 EDTA 및/또는 비-이온성 계면활성제를 포함한다. 치료제가 항체 단편일 때, 표적 단백질의 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 최소 억제 단편이 바람직하다. 예를 들어, 항체의 가변 영역 서열을 기초로 하여, 표적 단백질 서열에 결합하는 능력을 보유한 항체 단편 또는 심지어 펩티드 분자를 설계할 수 있다. 그러한 펩티드는 화학적으로 합성할 수 있고/거나 재조합 DNA 기술에 의해 생산할 수 있다 (예를 들어 문헌 [Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 7889-7893] 참조).완충액을 이용하여, 특히 안정성이 pH 의존적인 경우 치료 유효성을 최적화하는 범위로 pH를 조절한다. 완충액은 바람직하게는 약 50 mM 내지 약 250 mM 범위의 농도로 존재한다. 본 발명에 사용하기 위한 적당한 완충액은 유기산 및 무기산 모두 및 그의 염을 포함한다. 예를 들어, 시트레이트, 포스페이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 옥살레이트, 락테이트, 아세테이트가 있다. 추가로, 완충액은 히스티딘 및 트리메틸아민염, 예를 들어 트리스를 포함할 수 있다. 보존제는 미생물 성장을 지연시키기 위하여 첨가되고, 통상적으로 0.2％-1.0％ (w/v) 범위로 존재한다. 본 발명에 사용하기 위한 적당한 보존제는 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 할라이드 (예를 들어 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드), 벤제토늄 클로라이드; 티메로살, 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예를 들어 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 시클로헥사놀, 3-펜타놀 및 m-크레졸을 포함한다. 때로 "안정화제"로 공지된 등장화제는 액체 조성물의 등장성을 조정하거나 유지하기 위해 존재한다. 단백질 및 항체와 같은 크고 대전된 생체분자를 이용하는 경우, 이들은 아미노산 측쇄의 대전된 기와 상호작용하여 분자간 및 분자내 상호작용 가능성을 줄일 수 있기 때문에 종종 "안정화제"로 지칭된다. 등장화제는 다른 성분의 상대량을 고려하여, 0.1 내지 25 중량％, 바람직하게는 1 내지 5 중량％의 양으로 존재할 수 있다. 바람직한 등장화제는 다가 당 알콜, 바람직하게는 3가 이상의 당 알콜, 예를 들어 글리세린, 에리트리톨, 아라비톨, 크실리톨, 소르비톨 및 만니톨을 포함한다. 추가의 부형제는 다음 중 하나 이상으로 작용할 수 있는 작용제를 포함한다: (1) 벌킹제, (2) 용해도 향상제, (3) 안정화제 및 (4) 변성 또는 용기 벽에 대한 부착을 방지하는 작용제. 그러한 부형제에는 다가 당 알콜 (상기 열거한 것들); 아미노산, 예를 들어 알라닌, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 리신, 오르니틴, 류신, 2-페닐알라닌, 글루탐산, 트레오닌 등; 유기 당 또는 당 알콜, 예를 들어 수크로스, 락토스, 락티톨, 트레할로스, 스타키오스, 만노스, 소르보스, 크실로스, 리보스, 리비톨, 미오이니시토스, 미오이니시톨, 갈락토스, 갈락티톨, 글리세롤, 시클리톨 (예를 들어 이노시톨), 폴리에틸렌 글리콜; 황 함유 환원제, 예를 들어 우레아, 글루타티온, 티옥트산, 나트륨 티오글리콜레이트, 티오글리세롤, α-모노티오글리세롤 및 나트륨 티오 술페이트; 저분자량 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민, 소 혈청 알부민, 젤라틴 또는 다른 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈; 모노사카라이드 (예를 들어, 크실로스, 만노스, 프룩토스, 글루코스); 디사카라이드 (예를 들어, 락토스, 말토스, 수크로스); 트리사카라이드, 예를 들어 라피노스; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린 또는 덱스트란이 포함된다. 비이온성 계면활성제 또는 세제 (또한 "습윤제"로 공지됨)는 치료제의 가용화를 돕고, 치료 단백질을 교반에 의해 유도되는 응집에 대해 보호하기 위해 존재한다 (이는 또한 활성 치료 단백질 또는 항체의 변성을 유발하지 않으면서 제제가 전단 표면 스트레스에 노출되는 것을 허용한다). 비이온성 계면활성제는 약 0.05 mg/ml 내지 약 1.0 mg/ml, 바람직하게는 약 0.07 mg/ml 내지 약 0.2 mg/ml의 범위로 존재한다. 적합한 비이온성 계면활성제는 폴리소르베이트 (20, 40, 60, 65, 80 등), 폴리옥사머 (184, 188 등), 플루로닉�� 폴리올, 트리톤��, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노에테르 (트윈��-20, 트윈��-80 등), 라우로마크로골 400, 폴리옥실 40 스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자 오일 10, 50 및 60, 글리세롤 모노스테아레이트, 수크로스 지방산 에스테르, 메틸 셀룰로스 및 카르복시메틸 셀룰로스를 포함한다. 사용될 수 있는 음이온성 세제는 나트륨 라우릴 술페이트, 디옥틸 나트륨 술포숙시네이트 및 디옥틸 나트륨 술포네이트를 포함한다. 양이온성 세제는 벤즈알코늄 클로라이드 또는 벤제토늄 클로라이드를 포함한다. 제제를 생체내 투여용으로 사용하기 위하여서는, 제제는 멸균 상태이어야 한다. 제제는 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 멸균될 수 있다. 본원의 치료 조성물은 일반적으로 멸균 접근 포트를 갖는 용기, 예를 들어 피하 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알에 둔다. 투여 경로는 공지되고 허용되는 방법에 따르고, 예를 들어 단일 또는 다회 볼루스 또는 장시간에 걸친 주입으로 적당한 방식, 예를 들어 피하, 정맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 병변내 또는 관절내 경로에 의한 주사 또는 주입, 국소 투여, 흡입에 의해서 또는 지속방출 또는 연장방출 방식이다. 본원의 제제는 또한 치료할 특정 적응증에 필요한 경우에는 1종 초과의 활성 화합물, 바람직하게는 서로 유해한 영향을 미치지 않는 상보적 활성을 갖는 화합물을 함유할 수 있다. 별법적으로 또는 추가로, 조성물은 세포독성제, 시토카인 또는 성장억제제를 포함할 수 있다. 이러한 분자는 적합하게는 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합되어 존재한다. 또한, 활성 성분은 예를 들어 코아세르베이션 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 각각 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐에, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어 리포좀, 알부민 미세구, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐)에, 또는 마크로에멀젼 중에 봉입될 수 있다. 상기 기술은 상기한 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition]에 개시되어 있다. 본원에 기술된 단백질 및 항체의 안정성은 비독성 "수용성 다가 금속염"의 사용을 통하여 증가될 수 있다. 예로는 Ca2+, Mg2+, Zn2+, Fe2+, Fe3+, Cu2+, Sn2+, Sn4+, Al2+ 및 Al3+를 포함한다. 상기한 다가 금속 양이온과 수용성 염을 형성할 수 있는 음이온의 예로는 무기산 및/또는 유기산으로부터 형성된 것을 들 수 있다. 상기 수용성 염은 물 (20℃) 중에서 적어도 약 20 mg/ml, 별법적으로 적어도 약 100 mg/ml, 별법적으로 적어도 약 200 mg/ml의 용해도를 갖는다. "수용성 다가 금속염"을 형성하는데 사용될 수 있는 적당한 무기산은 염산, 아세트산, 황산, 질산, 티오시안산 및 인산을 포함한다. 사용될 수 있는 적합한 유기산은 지방족 카르복실산 및 방향족 산을 포함한다. 이러한 정의 내의 지방족 산은 포화 또는 불포화 C2-9 카르복실산 (예를 들어 지방족 모노-, 디- 및 트리-카르복실산)으로 정의될 수 있다. 예를 들어, 이러한 정의 내의 예시적인 모노카르복실산은 포화 C2-9 모노카르복실산, 아세트산, 프로피온산, 부티르산, 발레르산, 카프로산, 에난트산, 카프릴산, 펠라르곤산 및 카프리온산, 및 불포화 C2-9 모노카르복실산, 아크릴산, 프로프리올산, 메타크릴산, 크로톤산 및 이소크로톤산을 포함한다. 예시적인 디카르복실산은 포화 C2-9 디카르복실산, 말론산, 숙신산, 글루타르산, 아디프산 및 피멜산을 포함하고, 불포화 C2-9 디카르복실산은 말레산, 푸마르산, 시트라콘산 및 메사콘산을 포함한다. 예시적인 트리카르복실산은 포화 C2-9 트리카르복실산, 트리카르발릴산 및 1,2,3-부탄트리카르복실산을 포함한다. 추가로, 이러한 정의의 카르복실산은 또한 1 또는 2개의 히드록실기를 포함하여 히드록시 카르복실산을 형성할 수 있다. 예시적인 히드록시 카르복실산은 글리콜산, 락트산, 글리세르산, 타르트론산, 말산, 타르타르산 및 시트르산을 포함한다. 이러한 정의 내의 방향족 산은 벤조산 및 살리실산을 포함한다. 본 발명의 캡슐화된 폴리펩티드를 안정화시키는 것을 돕는데 사용될 수 있는 흔히 채용되는 수용성 다가 금속 염으로는, 예를 들어 (1) 할라이드 (예를 들어, 염화아연, 염화칼슘), 술페이트, 니트레이트, 포스페이트 및 티오시아네이트의 무기 산 금속 염; (2) 지방족 카르복실산 금속 염 (예를 들어, 칼슘 아세테이트, 아연 아세테이트, 칼슘 프로프리오네이트, 아연 글리콜레이트, 칼슘 락테이트, 아연 락테이트 및 아연 타르트레이트); 및 (3) 벤조에이트 (예를 들어, 아연 벤조에이트)과 살리실레이트의 방향족 카르복실산 금속 염이 포함된다.E. 치료 방법:질환의 예방 또는 치료를 위하여, 활성 물질의 적합한 용량은 상기 정의한 바와 같은 치료되는 질병의 유형, 질환의 심각도 및 경과, 상기 물질이 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지의 여부, 선행 요법, 환자의 임상력 및 물질에 대한 반응, 및 주치의의 판단에 의존할 수 있다. 상기 물질은 적합하게는 환자에게 1회 이상의 일련의 치료로서 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 특히 PD-1 및/또는 B7.1에의 결합을 방지하는 PD-L1 항체를 적용하는 것에 의해 PD-1을 통한 신호전달을 악화시키는 것으로부터 야기되는 공동자극에 관한 것일 뿐만 아니라 T 세포 기능이상 장애의 치유적 치료에 관한 것이다.1. 감염PD-1 및 그의 리간드 ("PD-1:PD-L")는 급성 및 만성 감염을 야기하는 병원체에 대해 면역 방어를 조절하는데 중요한 역할을 한다. PD-1:PD-L 신호전달은 효과적인 항균성 면역 방어 및 면역 매개 조직 손상 사이의 균형을 조절하는데 있어서 핵심 역할을 한다. 예를 들어, PD-1 넉아웃 마우스는 그의 야생형 대응체에 비해 더 신속하게 아데노바이러스 감염을 제거하는 반면, 보다 심각한 간세포 손상을 발생시킨다. 문헌 [Iwai et al., J. Exp. Med. 198: 39-50 (2003)]. 헤르페스 기질 각막염 마우스 모델에서, 항-PD-L1 항체를 차단하는 것은 각막염, HSV-1 특이적 이펙터 CD4 T 세포 확장 및 IFN-γ 생산 및 생존의 증가를 악화시켰다. 문헌 [Jun et al., FEBS Lett. 579: 6259-64 (2005)].만성 감염을 유발하는 미생물은 숙주 면역 반응을 회피하는 PD-1:PD-L 신호전달 경로를 이용하여 만성 감염을 일으킨다. 만성 감염을 유발하는 바이러스는 바이러스-특이적 T 세포가 비기능적이도록 할 수 있고, 이에 의해 항바이러스 T 세포 반응이 침묵하게 된다. 문헌 [Barber et al., Nature 439: 682-87 (2006)]; [Wherry et al., J. Virol. 78: 5535-45 (2004)]. T 세포의 탈진 또는 CD8+ T 세포의 무반응은 만성 감염 동안의 비효과적인 바이러스 조절의 중요한 원인이고, 마우스에서의 만성 LCMV 감염, 뿐만 아니라 인간에서의 HIV, HBV, HCV 및 HTLV 감염 및 영장류에서의 SIV 감염의 특징이다. 탈진된 바이러스-특이적 CD8+ T 세포의 표현형에서, 먼저 세포독성 및 IL-2 생산이 손실되고 이어서 이펙터 시토카인이 생산되는, 계층적이고 점진적인 기능의 손실이 있는 것으로 보인다.PD-1은 활성화시에 상향조절되고, 발현은 LCMV 만성 감염된 마우스에서 탈진된 CD8+ T 세포에 의해 높은 수준으로 유지된다. 문헌 [Barber et al., 상기 문헌]. PD-1:PD-L1 결합을 차단하는 항체의 투여는 T 세포 반응을 향상시키고, 바이러스 양을 실질적으로 감소시킨다. 비효과적인 CD4+ TH 반응을 갖는 지속적으로 감염된 마우스에서, PD-1:PD-L1의 차단은 CD8+ T 세포를 기능이상 상태로부터 회복시켜, 증식, 시토카인의 분비, 감염된 세포의 사멸, 및 바이러스 개수의 감소를 야기하는데, 이는 이것이 만성 바이러스성 감염의 치료를 위한 치유적 접근법임을 강력하게 시사한다.LCMV에서 PD-1:PD-L의 역할의 결과로서, 인간에서 만성 감염을 치료하기 위해 이러한 경로를 표적화하는 것에 대한 강한 관심이 나타났다. PD-1 발현은 HIV-특이적 (문헌 [Petrovas et al., J. Exp. Med. 203: 2281-92 (2006)]; [Day et al., Nature 443: 350-54 (2006)]; [Traumann et al., Nat. Med. 12: 1198-202 (2006)]), HBV-특이적 (문헌 [Boettler et al., J. Virol. 80: 3532-40 (2006)]; [Boni et al., J. Virol. 81: 4215-25 (2007)], 및 HCV-특이적 T 세포 (문헌 [Urbani et al., J. Virol. 80: 11398-403 (2006)])에서 높다. PD-L1은 또한 만성 HBV 감염 환자의 말초 혈액 CD14+ 단핵구 및 골수성 DC (문헌 [Chen et al., J. Immunol. 178: 6634-41 (2007)]; [Geng et al., J. Viral Hepat. 13: 725-33 (2006)], 및 HIV 환자의 CD14+ 세포 및 T 세포 (문헌 [Trabattoni et al., Blood 101: 2514-20 (2003)])에서 상향조절된다. 시험관내에서 PD-1:PD-L1 상호작용의 차단은 HIV-특이적, HBV-특이적, HCV-특이적 및 SIV-특이적 CD8+ 및 CD4+ T 세포의 탈진을 역전시키고, 증식 및 시토카인 생산을 회복시킨다. 문헌 [Petrovas et al., J. Exp. Med. 203: 2281-92 (2006)]; [Day et al., 상기 문헌]; [Trautmann et al., 상기 문헌]; [Boni et al., 상기 문헌]; [Urbani et al., 상기 문헌]; [Velu et al., J. Virol. 81: 5819-28 (2007)].PD-1 발현의 정도는 또한 T 세포 탈진의 정도 및 질환 중증도를 나타내는 바이러스-특이적 CD8+ T 세포에 대한 유용한 진단상 마커일 수 있다. HIV-특이적 CD8+ T 세포에서의 PD-1 발현 수준은 바이러스 수, CD4+ 계수 감소, 및 CD8+ T 세포가 시험관내에서 HIV 항원에 반응하여 증식하는 능력의 감소와 관련이 있다. 생체내 관찰도 마찬가지로, HIV-특이적 CD4+ T 세포에서의 PD-1 발현 및 바이러스 수 사이에 직접적인 상관관계가 존재한다. 문헌 [D'Souza et al., J. Immunol. 179: 1979-87 (2007)]. 장기간 비진행자는 현저하게 상향조절된 PD-1을 발현하는 전형적인 진행자와 대조적으로, 기능적 HIV-특이적 기억 CD8+ T 세포를 가지며 PD-1 발현이 현저하게 낮고, 이는 감소된 CD4+ T 세포 개수, 감소된 CD4+ T 세포 개수, 감소된 HIV-특이적 이펙터 기억 CD8+ T 세포 기능, 및 상승된 혈장 바이러스 수와 관련이 있다. 문헌 [Zhang et al., Blood 109: 4671-78 (2007)].PD-1:PD-L 경로는 또한 박테리아 감염의 만성화와 관련이 있다. 헬리코박터 피롤리는 만성 위염 및 위십이지장 궤양을 유발하고, 위암 발생의 위험 인자이다. H. 피롤리 감염 동안, T 세포 반응은 감염을 제거하는데 불충분하여, 감염을 지속시킨다. 시험관내 또는 생체내에서 H. 피롤리에 노출된 이후, PD-L1은 위 상피세포에서 상향조절된다. 위 상피세포는 MHC 클래스 II 분자를 발현하고, H. 피롤리 감염 동안 APC 기능에서 중요한 역할을 하는 것으로 보인다. PD-1이 PD-L1과 상호작용하는 것을 차단하는 항-PD-L1 항체는 H. 피롤리 및 CD4 T 세포에 노출된 위 상피세포 배양물에서 T 세포 증식 및 IL-2 생산을 향상시킨다. 항체 또는 siRNA에 의한 PD-L1의 차단은 조절 T 세포의 생산을 방지하였는데, 이는 H. 피롤리 감염 동안 조절 및 이펙터 T 세포 사이의 역학을 조절하는 것에 의해 PD-L1이 T 세포 억제 및 감염의 지속을 촉진할 수 있음을 시사한다. 문헌 [Beswick et al., Infect. Immun. 75: 4334-41 (2007)].또한, 기생충도 면역 반응을 억제하는 대식세포를 유도하기 위해 PD-1:PD-L1 경로를 이용한다. 마우스에서의 타에니아 크래시셉스(Taenia crassiceps) (즉, 촌충) 감염 동안, PD-1 및 PD-L2는 활성화된 대식세포에서 상향조절되며, CD4+ T 세포는 PD-1을 발현한다. PD-1, PD-L1 또는 PD-L2의 차단은 촌충 감염 마우스로부터 대식세포에 의한 시험관내 T 세포 증식의 억제를 상당히 감소시킨다. 문헌 [Terrazas et al., Int. J. Parasitol. 35: 1349-58 (2005)]. 마우스에서의 쉬스토소마 만소니(Shistosoma mansoni) 감염 동안, 대식세포는 높은 수준의 PD-L1 및 보다 미진한 수준의 PD-L2를 발현한다. 항-PD-L1은 이들 대식세포가 시험관내에서 T 세포 증식을 억제하는 능력을 제거하는 반면, 항-PD-L2는 어떤 효과도 없었다. 감염된 마우스로부터의 대식세포에서의 PD-L1 발현은 감염 12 주 후에 감소되었는데, 이는 T 세포 무반응의 중단과 관련이 있다. 문헌 [Smith et al., J. Immunol. 173: 1240-48 (2004)].2. 종양 면역종양 면역에 대한 경험적 증거에는 (i) 자연 완화의 관찰, (ii) 검출가능하지만 비효과적인 종양에 대한 숙주 면역 반응의 존재, (iii) 면역결핍 환자에서의 1차 및 2차 악성종양의 보급 증가, (iv) 종양 환자에서 증가된 항체 및 T-림프구 수준의 검출, 및 (v) 시험 동물이 다양한 유형의 종양에 대해 면역화될 수 있다는 관찰이 포함된다.연구들은 대부분의 인간 종양이 T 세포에 의해 인식될 수 있는 종양 관련 항원 (TAA)을 발현하고, 이에 따라 잠재적으로 면역 반응을 유도할 수 있음을 보여준다. 문헌 [Boon et al., Immunol. Today 16:334-336 (1995)]. 암 환자를 TAA 또는 TAA로 펄스된 전문 항원 제시 세포로 백신화하여 초기 상 임상 시험을 개시하였다. 문헌 [Dudley et al., Science 298: 850-854 (2002)]; [Gajewski et al., Clin. Cancer Res. 7: 895s-901s (2001)]; [Marincola et al., Adv. Immunol. 74: 181-273 (2000)]; [Peterson et al., J. Clin. Oncol. 21: 2342-2348 (2003)]. 종양 항원 특이적 CD8+ T 세포의 유도는 많은 시험에서 달성되었다. 문헌 [Mackensen et al., Eur. Cytokine Netw 10: 329-336 (1999)]; [Peterson et al., 상기 문헌]. 또한, 종양 항원 특이적 T 세포를 환자로 입양 전달하였고, 확장된 세포독성 T 림프구 (CTL)가 종양 부위로 귀소하는 것으로 밝혀졌다. 문헌 [Meidenbauer et al., J. Immunol. 170: 2161-2169 (2003)]. 그러나, 면역 이펙터 세포의 종양 침투에도 불구하고, 종양 성장은 좀처럼 제어되지 않았다.종양 미세환경이 종양 세포를 면역 파괴로부터 보호할 수 있음이 널리 확립되어 있다. 문헌 [Ganss et al., Cancer Res. 58: 4673-4681 (1998)]; [Singh et al., J. Exp. Med. 175: 139-146 (1992)]. 가용성 인자, 뿐만 아니라 형질전환 성장 인자 β (TGF-β), 인터류킨 (IL)-10, 프로스타글란딘 E2, FASL, CTLA-4 리간드, 종양 괴사 인자-관련 아폽토시스-유도 리간드 (TRAIL), 및 프로그램화된 사멸 수용체 리간드 1 (PD-L1, 일명 B7-H1)을 비롯한 막-결합 분자가 종양에 의해 발현되는 것으로 밝혀졌고, 면역 회피를 매개하는 것으로 여겨진다. 이에 따라, 종양 세포에서 이러한 음성 면역 조절 신호를 차단하는 것은 생체내에서 종양-특이적 CD8+ T 세포 면역을 향상시키는 유망한 접근법이다. 많은 종양에서의 PD-L1 발현은 이러한 억제에 대한 성분이며, 다른 면역억제 신호와 협력하여 작용할 수 있다. PD-L1은 T 세포 수용체 신호전달을 음성적으로 조절한다. PD-L1 발현은 광범위한 충실성 종양, 예컨대 유방암, 폐암, 결장암, 난소암, 흑색종, 방광암, 간암, 침샘암, 위장암, 신경교종, 갑상선암, 흉선암, 상피암, 두경부암에서 계내에서 보여진다. 문헌 [Brown et al., J. Immunol. 170: 1257-66 (2003)]; [Dong et al., Nat. Med. 8: 793-800 (2002)]; [Hamanishi et al., PNAS 104: 3360-65 (2007)]; [Strome et al., Cancer Res. 63: 6501-5 (2003)]; [Inman et al., Cancer 109: 1499-505 (2007)]; [Konishi et al., Clin. Cancer Res. 10: 5094-100 (2004)]; [Nakanishi et al., Cancer Immunol. Immunother. 56: 1173-82 (2007)]; [Nomi et al., Clin. Cancer Res. 13: 2151-57 (2004)]; [Thompson et al., PNAS 101: 17174-79 (2004)]; [Wu et al., Acta Histochem. 108: 19-24 (2006)].또한, 면역학적 염색도 다양한 암에서의 PD-1:PD-L 발현을 보여준다. 흥미롭게도, 암은 또한 만성 염증성 질환으로 특징지어진다. 문헌 [Coussens et al., Nature 420: 860-867 (2002)]. 전세계적으로 최대 15％의 암이 직접적임 감염성 기원을 갖는 한편 (문헌 [Kuper et al., J. Intern. Med. 248: 171-183 (2000)]), 많은 인간 종양은 만성 자극 및 염증과 관련이 있다. 문헌 [Zou et al., Ntu. Rev. Cancer 5: 263-274 (2005)].종양에서의 PD-L1 발현과 질환 결과의 관련성 연구는 PD-L1 발현이 신장암, 난소암, 방광암, 유방암, 위암 및 췌장암에서의 바람직하지 않은 예후와 강력한 연관성이 있음 (그러나 아마도 소세포 폐암에서는 그렇지 않음)을 보여준다. 문헌 [Hamanishi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 104: 3360-65 (2007)], [Inman et al., Cancer 109: 1499-505 (2007)], [Konishi et al., Clin. Cancer Res. 10:5094-100 (2004)]; [Nakanishi et al., Cancer Immunol. Immunother. 56: 1173-82 (2007)]; [Nomi et al., Clin. Cancer Res. 13: 2151-57 (2007)]; [Thompson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101: 17174-79 (2004)]; [Wu et al., Acta Histochem. 108: 19-24 (2006)]. 또한, 이러한 연구는 종양에서의 보다 높은 수준의 PD-L1 발현이 종양 병기의 진행 및 보다 깊은 조직 구조로의 침투를 용이하게 할 수 있음을 시사한다.PD-1:PD-L 경로는 또한 혈액 악성종양에서 소정의 역할을 할 수 있다. PD-1 또는 PD-L1은 B 세포 악성종양에서는 거의 발현되지 않지만, PD-L2는 외투 세포 악성종양에서 과다발현된다. 문헌 [Brown et al., 상기 문헌]; [Rosenwald et al., J. Exp. Med. 198: 851-62 (2003)]. PD-L1은 다발성 골수종 세포에서 발현되지만, 정상 형질 세포에서는 발현되지 않는다. 골수종 세포에 반응한 T 세포 확장은 PD-L1 차단에 의해 시험관내에서 향상된다. 문헌 [Liu et al., Blood 110: 296-304 (2007)]. PD-L1은 몇몇 주요 T 세포 림프종, 특히 역형성 대세포 T 림프종에서 발현되고, PD-L1은 회합된 여포성 수지상 세포 네트워크에서 발현된다. 문헌 [Dorfman et al., Am. J. Surg. Pathol. 30: 802-10 (2006)]. 마이크로어레이 분석은 호지킨 림프종에서 종양 관련 T 세포가 계내에서 PD-1 신호에 반응함을 추가로 시사한다. 문헌 [Chemnitz et al., Blood 110: 3226-33 (2007)]. PD-1 및 PD-L1은 HTLV-1 매개 성인 T 세포 백혈병 및 림프종에서 CD4+ T 세포에서 발현된다. 문헌 [Shimauchi et al., Int. J. Cancer 121: 2585-90 (2007)]. 이들 종양 세포는 TCR 신호에 대해 저반응성이고, PD-1 차단은 TNF-α의 발현은 증가시키지만, IFN-γ은 그렇지 않다. 동물 모델에서의 연구는 종양에서의 PD-L1 발현이 T 세포 활성화 및 종양 세포의 용해를 억제하고, 일부 경우에서는 종양 특이적 T 세포 사멸을 증가시킴을 밝혀내었다. 문헌 [Dong et al., Nat. Med. 8: 793-800 (2006)]; [Hirano et al., Cancer Res. 65: 1089-96 (2005)].이에 따라, 본 발명의 항-PD-L1 항체로 PD-L1을 통한 신호전달을 억제하여 T 세포 기능을 향상시키는 것은 종양 면역 약화에 대한 가능성을 보여주며, 그 결과, 암을 효과적으로 치료할 수 있다. F. 조합 요법본 발명의 방법은 조합되거나 부가된 치료 단계로서 또는 치료 제제의 추가의 성분으로서 공지의 만성 감염 또는 암 치료 방법과 조합될 수 있다. 1. 암:종양을 퇴치하기 위해 숙주의 면역 기능을 향상시키는 것은 최대 관심 대상이다. 종래의 방법으로는 (i) APC 향상, 예컨대 (a) 종양에 외래 MHC 동종항원을 코딩하는 DNA를 주사하는 것, 또는 (b) 생검 종양 세포를 종양의 면역 항원 인식 확률을 증가시키는 유전자 (예를 들어, 면역 자극 시토카인, GM-CSF, 공동자극 분자 B7.1, B7.2)로 형질감염시키는 것, (iii) 입양 세포 면역요법, 또는 활성화된 종양 특이적 T 세포에 의한 치료가 포함된다. 입양 세포 면역요법은 종양 침윤성 숙주 T-림프구를 단리하는 것, 예컨대 IL-2 또는 종양 또는 둘 모두에 의해 자극하는 것을 통해 시험관내에서 집단을 확장시키는 것을 포함한다. 추가로, 단리된 기능이상 T 세포는 또한 본 발명의 항-PD-L1 항체를 시험관내 적용하는 것에 의해 활성화될 수 있다. 그렇게 활성화된 T 세포를 이어서 숙주에 재투여할 수 있다. 전통적인 암 요법에는 다음과 같은 것이 포함된다: (i) 방사선 요법 (예를 들어, 방사선요법, X선 요법, 조사) 또는 암 세포를 사멸시키고 종양을 수축시키기 위한 이온화 방사선의 사용. 방사선 요법은 외래 빔 방사선요법 (EBRT)을 통해 외부적으로 또는 근접요법을 통해 내부적으로 투여될 수 있다; (ii) 화학요법, 또는 일반적으로 신속하게 분열하는 세포에 영향을 미치는 세포독성 약물의 적용; (iii) 표적화 요법, 또는 제어되지 않은 암 세포의 단백질에 특이적으로 영향을 미치는 작용제 (예를 들어, 티로신 키나제 억제제 이마티닙, 게피니팁; 모노클로날 항체, 광역학 요법); (iv) 면역요법, 또는 숙주 면역 반응의 향상 (예를 들어, 백신); (v) 호르몬 요법, 또는 호르몬의 차단 (예를 들어, 종양이 호르몬 민감성인 경우), (vi) 혈관신생 억제제, 또는 혈관 형성 및 성장의 차단, 및 (vii) 완화 치료, 또는 통증, 메스꺼움, 구토, 설사 및 출혈을 감소시키도록 치료의 질을 개선시키는 치료. 통증 약제, 예컨대 모르핀 및 옥시코돈, 항-구토제, 예컨대 온단세트론 및 아프레피탄트는 보다 적극적인 치료 섭생을 가능하게 할 수 있다. 암을 치료하는데 있에서, 암 면역의 치료를 위한 종전에 기재된 임의의 종래의 치료법을 본 발명의 항-PD-L1 항체의 투여 이전에, 또는 그에 후속하여, 또는 동시에 수행할 수 있다. 또한, 본 발명의 항-PD-L1 항체를 종래의 암 치료법, 예컨대 종양 결합 항체 (예를 들어, 모노클로날 항체, 독소 접합된 모노클로날 항체)의 투여 및/또는 화학요법제의 투여 이전에, 또는 그에 후속하여, 또는 동시에 투여할 수 있다.2. 감염:감염 (예를 들어, 급성 및/또는 만성)을 치료하는데 있어서, 본 발명의 항-PD-L1 항체를 투여하는 것은 감염에 대한 천연 숙주 면역 방어를 자극하는 것에 더하여 또는 그를 대신하여 종래의 치료법과 조합될 수 있다. 감염에 대한 천연 숙주 면역 방어로는 염증, 열, 항체-매개 숙주 방어, T-림프구-매개 숙주 방어, 예컨대 림포킨 분비 및 세포독성 T 세포 (특히 바이러스 감염 동안), 보체 매개 용해 및 옵소닌화 (식세포작용을 용이하게 함), 및 식세포작용이 포함되지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 항-PD-L1 항체가 기능이상 T 세포를 재활성화하는 능력은 만성 감염, 특히 완전한 회복을 위해 세포 매개 면역이 중요한 감염을 치료하는데 특히 유용할 것이다. a. 박테리아박테리아 감염으로 인한 감염의 경우, 본 발명의 항-PD-L1 항체는 박테리아 감염을 치료하는 표준 요법과 동시에, 또는 그 이전, 또는 그에 후속하여 투여하는 것과 조합될 수 있다. 오늘날 박테리아 감염은 항박테리아 항생제에 의해 가장 흔하게 치료되지만, 또한 면역화된 숙주로부터의 병원체-특이적 항체를 함유하는 혈청이 효과적일 수 있다.독소를 분비하는 결과 병원성인 박테리아 (독소생성 박테리아)의 경우, 불활성 독소에 의한 백신화 및/또는 독소의 독성을 차단하는 치료제를 투여하는 것이 통상적으로 효과적이다 (예를 들어, 폴리클로날 혈청, 항체, 항생제 등). 그러한 유기체로는, 클로스트리디움 종(Clostridium spp.), 바실러스 종, 코리네박테륨 종(Corynebacterium spp.), 비브리오 콜레라(Vibrio chloerae), 보르데텔라 페르투시스(Bordetella pertussis), 스타필로코쿠스 종, 스트렙토코쿠스 종이 포함된다. 또한 그러한 종래의 요법에 전형적으로 반응하는 그람 음성 박테리아로는 엔테로박테리아 (예를 들어, 에스케리키아, 클레브시엘라, 프로테우스, 예르시니아(Yersinia), 에르위나(Erwina)), 살모넬라, 및 슈도모나스 아에루기노사가 포함된다. 식세포작용 및 옵소닌화에 내성이 있어서 종종 면역 제거에 더 상당한 시험감염을 방지하는 캡슐화된 박테리아로는 스트렙토코쿠스 종, 헤모필루스 종, 네이세리아 종, 클레브시엘라 종 및 박테로이데스 프라길리스가 포함된다. 박테리아는 특정 시험 감염 이후에 혈청 항체 및 보체를 회피하도록 세포에 침투하는 것에 의해 숙주 방어를 회피한다. 이러한 감염의 제거는 거의 전적으로 T-림프구 매개 면역에 의존적이고, 특히 만성 감염화되기 쉽다. 구체적인 예로는 살모넬라 (S. 티피, S. 콜레라수이스(S. choleraesuis), S. 엔테리티디스(S. enteritidis)), 레지오넬라 종(Legionella spp.), 리스테리아 종(Listeria spp.), 브루셀라 종(Brucella spp.) 및 M. 튜베르큘로시스(M. tuberculosis), M. 아비움(M. avium) 및 M. 레프래(M. leprae)를 비롯한 미코박테리움이 포함된다.트레포네마 종(Treponema spp.), 보렐리아 종(Borrelia spp.) 및 렙토스피라 종(Leptospira spp.)을 비롯한 스피로헤타는 지속적이고 잠재적인 감염을 유발하는 박테리아이다. 질환 매독의 원인이 되는 병원체인 트레포네마 팔라듐(Treponema palladium)은 치료하지 않고 방치할 경우 심각한 병리학적 결과를 가져올 수 있는 성병이다. 이 질환은 특징적 단계를 통해 진행된다. 초기 임상 단계는 매독 접종 부위에서의 궤양 또는 경성 하감이다. 그 이후는 2차 매독으로 알려진 상태에서의, 감염 및 해소 주기가 반복되는 것을 포함하여 스피로헤타 혈증 및 지속적인 미생물 전이 분포 기간이다. 2차 매독의 해소 이후에, 질환은 무증상 잠재기에 진입하며, 이는 심각하고 종종 치명적인 상태인 3차 매독에 이를 수 있다. 3차 매독은 (i) 동맥류가 형성된 대동맥염 및 2차 대동맥판 폐쇄부전으로서의 심장, (ii) 중추신경계 (척수 매독, 진행 마비), (iii) 눈 (간질성 각막염) 또는 (iv) 귀 (신경 난청)를 나타낼 수 있다. 비-성병형은 성병형의 임상 소견과 유사하지만, 주로 직접 접촉 및 불량한 위생에 의해 전파된다. 그러한 것으로 매종 (T. 팔리듐 subp. 페르테누에(T. pallidum subp. pertenue)), 핀타 (T. 카라튬(T. carateum)) 및 베젤 (T. 팔리듐 subsp. 엔데미쿰)이 포함된다.매독의 치료법에는 페니실린 (예를 들어, 페니실린 G.), 테트라시클린, 독시시클린, 세프트리악손 및 아지트로마이신이 포함된다. 본 발명의 항-PD-L1 항체는 잠재적 감염기를 치료하기 위해 가장 유익하게 투여될 것이다.보렐리아 부르그도르페리(Borrelia burgdorferi)에 의해 유발되는 라임병은 진드기에 물리는 것을 통해 인간에게 전파된다. 이 질환은 처음에 국소적 발진으로 나타났다가, 불쾌감, 열, 두통, 경부 경직 및 관절통을 비롯해서 플루-유사 증상을 나타낸다. 그 이후의 소견으로는 이주성 및 다관절 관절염, 뇌신경 마비 및 신경근병증을 수반한 신경 및 심장 침범, 심근염 및 부정맥이 포함될 수 있다. 라임병의 일부 케이스는 지속화되어, 3차 매독과 유사한 회복 불가능한 손상을 야기한다. 라임병에 대한 현재 요법은 항생제를 투여하는 것을 주로 포함한다. 항생제-내성 균주는 히드록시클로로퀸 또는 메토트렉세이트로 치료할 수 있다. 신경병증성 통증이 있는 항생제 난치성 환자는 가바펜틴으로 치료할 수 있다. 미노시클린은 신경학적 또는 다른 염증 소견을 갖는 후기/만성 라임병에 도움이 될 수 있다. 항-PD-L1 항체는 잠재적 감염기를 치료하기 위해 가장 유익하게 투여될 것이다. 그 밖의 형태의 보렐리아증, 예컨대 B. 레쿠렌티스(B. recurentis), B. 헤름시(B. hermsii), B. 튜리카타에(B. turicatae), B. 파리케리(B. parikeri), B. 히스파니카(B. hispanica), B. 듀토니(B. duttonii) 및 B. 페르시카(B. persica)로 인한 보렐리아증, 뿐만 아니라 렙토스피라병 (예를 들어, L. 인테로간스(L. interrogans))은 전형적으로 혈액 역가가 간내성 폐쇄를 유발하는 농도에 이르지 않았다면 자연 해소된다. b. 바이러스바이러스 원인으로 인한 감염의 경우, 본 발명의 항-PD-L1 항체는 바이러스 감염을 치료하는 표준 요법과 동시에, 또는 그 이전, 또는 그에 후속하여 적용하는 것과 조합될 수 있다. 그러한 표준 요법은 바이러스 유형에 따라 달라지지만, 거의 모든 경우에서 바이러스에 특이적인 항체 (예를 들어, IgA, IgG)를 함유하는 인간 혈청을 투여하는 것이 효과적일 수 있다.1) 인플루엔자인플루엔자 감염은 열, 기침, 근육통, 두통 및 불쾌감을 야기하며, 종종 계절 유행성으로 발생한다. 또한 인플루엔자는 수많은 감염후 장애, 예컨대 뇌염, 심근심낭염, 굿패스츄어 증후군 및 라이에 증후군과 관련이 있다. 인플루엔자 감염은 또한 정상적인 폐의 항박테리아 방어를 억제하여, 인플루엔자로부터 회복된 환자의 박테리아성 폐렴 발생 위험을 증가시킨다.인플루엔자 바이러스 표면 단백질은 뚜렷한 항원 변이를 나타내는데, 이는 돌연변이 및 재조합으로 인한 것이다. 따라서, 세포용해성 T 림프구는 감염 이후에 바이러스 제거를 위한 숙주의 중요한 비히클이다. 인플루엔자는 3가지 주요 유형: A, B 및 C로 분류된다. 인플루엔자 A는 인간 및 많은 다른 동물 (예를 들어, 돼지, 말, 새 및 물개)을 모두 감염시키고, 유행성 인플루엔자의 주요 원인이라는 점에서 특유하다. 또한, 세포가 2종의 다른 인플루엔자 A 균주에 의해 감염되었을 때, 2종의 모 바이러스 유형의 분절된 RNA 게놈이 복제 동안 혼합되어 하이브리드 복제품을 만들고, 이는 새로운 유행성 균주의 원인이 된다. 인플루엔자 B는 동물에서 복제되지 않아 유전적으로 덜 변이되고, 인플루엔자 C는 오직 단일 혈청형만을 갖는다. 대부분의 종래 요법은 감염으로 인해 야기되는 증상에 대한 일시적인 처방이었고, 실제로 숙주의 면역 반응이 질환을 제거하였다. 그러나, 특정 균주 (예를 들어, 인플루엔자 A)는 보다 심각한 질병 및 사망을 야기할 수 있다. 인플루엔자 A는 바이러스 복제를 억제하는 시클릭 아민 억제제 아다만틴 및 리만타딘을 투여하는 것에 의해 임상적으로 및 예방적으로 모두 치료될 수 있다. 그러나, 이들 약물의 임상적 유용성은 상대적으로 높은 부작용의 발생빈도, 이들의 좁은 항바이러스 범위 (인플루엔자 A 단독), 및 내성을 만드는 바이러스의 경향으로 인해 제한된다. 주요 인플루엔자 표면 단백질, 헤마글루티닌 및 뉴라미니다아제에 혈청 IgG 항체를 투여하는 것은 폐 감염을 방지할 수 있고, 점막 IgA는 상기도 및 기관의 감염을 방지하는데 요구된다. 가장 효과적인 최근의 인플루엔자 치료법은 포르말린 또는 β-프로피올락톤에 의해 불활성화된 바이러스를 투여하여 백신화하는 것이다. 2) 홍역 바이러스9-11 일의 인큐베이션 이후에, 홍역 바이러스에 의해 감염된 숙주에서는 열, 기침, 코감기 및 결막염이 발생한다. 1-2 일 내에, 홍반, 반점구진성 발진이 발생하며, 이는 전신으로 신속하게 퍼져나간다. 감염은 또한 세포 면역을 억제하기 때문에, 숙주는 중이염, 폐렴 및 감염후 뇌척수염을 비롯하여 박테리아성 중복감염이 발생할 위험이 더 커진다. 급성 감염은 특히 영양이 부족한 청소년에서 현저한 이환률 및 사망률과 관련이 있다.홍역의 치료법에는 풀링된 인간 IgG를 수동적으로 투여하는 것이 포함되며, 이는 노출 후 최대 한 주가 되었어도 비-면역 대상체에서 감염을 예방할 수 있다. 그러나, 살아있는 약독화 바이러스로 사전 면역화하는 것이 가장 효과적인 치료법이고, 95％를 초과한 면역화 사례에서 질환이 예방된다. 이러한 바이러스는 한가지 혈청형이 존재하므로, 단일 면역화 또는 감염은 전형적으로 평생동안 후속 감염으로부터 보호한다.감염된 숙주의 적은 비율에서, 홍역이 중추 신경계의 지속적인 감염으로 인한 만성 진행성 신경학적 장애인 SSPE로 발전될 수 있다. SSPE는 비리온 어셈블리 및 출아가 방해된 결함을 갖는 홍역 바이러스의 클론 변이체에 의해 유발된다. 이러한 환자의 경우, 바이러스 제거를 용이하게 하기 위해 본 발명의 항-PD-L1 항체로 T 세포를 재활성화하는 것이 바람직할 것이다. 3) B형 간염 바이러스B형 간염 바이러스 (HB-V)는 가장 감염성인 공지된 혈행성 병원체이다. 이는 급성 및 만성 간염 및 간 암종, 뿐만 아니라 일생 동안의 만성 감염의 주요 원인이다. 감염된 이후에 바이러스는 간세포에서 복제하고, 이것은 또한 이어서 표면 항원 HBsAg을 발산한다. 혈청에서 과도한 수준의 HBsAg를 검출하는 것은 B형 간염 감염을 진단하는 표준 방법으로 사용된다. 급성 감염은 해소될 수 있거나, 또는 만성 지속적 감염으로 발전될 수 있다.최근의 만성 HBV 치료법으로는 간세포의 표면에서 클래스 I 인간 백혈구 항원 (HLA)의 발현을 증가시켜 세포독성 T 림프구에 의한 그의 인식을 용이하게 하는 α-인터페론이 포함된다. 추가로, 뉴클레오시드 유사체 간시클로비르, 팜시클로비르 및 라미부딘도 또한 임상 시험에서 HBV 감염을 치료하는데 있어서 일부 효능을 나타내었다. HBV의 추가의 치료법으로는 PEG화된 α-인터페론, 아데포비르, 엔테카비르 및 텔바이부딘이 포함된다. 항-HBsAg 혈청 항체의 모 투여를 통해 수동 면역이 부여될 수 있고, 불활성화되거나 재조합 HBsAg에 의한 백신화도 또한 감염에 대한 내성을 부여한다. 본 발명의 항-PD-L1 항체는 치료상 이점을 위해 B형 간염 감염의 종래 치료법과 조합될 수 있다.4) C형 간염 바이러스C형 간염 바이러스 (HC-V) 감염은 만성 형태의 간염으로 이어져 간경변증을 야기할 수 있다. 증상은 B형 간염으로 인한 감염과 유사하지만, HB-V와 뚜렷하게 대조적으로, 감염된 숙주는 10-20 년간 증상이 없을 수 있다. HC-V 감염의 치료법으로는 α-인터페론 및 리바비린의 조합 투여가 포함된다. HC-V 감염의 가능한 잠재적인 요법은 프로테아제 억제제 텔라프레비르 (VX-960)이다. 추가의 치료법으로는 항-PD-1 항체 (MDX-1106, 메다렉스(Medarex)), 바비툭시맙 (B2-당단백질 I 의존적 방식으로 음이온 인지질 포스파티딜세린에 결합하는 항체, 페레그린 파마슈티칼스(Peregrine Pharmaceuticals)), 항-HPV 바이러스 코트 단백질 E2 항체(들) (예를 들어, ATL 6865 - Ab68 + Ab65, XTL 파마슈티칼스) 및 시바시르�� (폴리클로날 항-HCV 인간 면역 글로불린)이 포함된다. 본 발명의 항-PD-L1 항체는 치료상 이점을 위해 이러한 하나 이상의 C형 간염 감염 치료법과 조합될 수 있다. C형 간염 감염을 특이적으로 치료하기 위해 본 발명의 항-PD-L1 항체와 함께 사용될 수 있는 프로테아제, 폴리머라제 및 NS5A 억제제에는 이하의 표 B에서 확인되는 것들이 포함된다.003c#표 B003e#5) 인간 면역결핍 바이러스 (HIV)HIV는 T-림프구, 단핵구-대식세포, 여포성 수지상 세포 및 랑게르한스 세포를 비롯하여 CD4+ 세포를 공격하고, CD4+ 헬퍼/유도 세포를 고갈시킨다. 그 결과, 숙주는 세포 매개 면역에 있어서 심각한 결함을 갖게 된다. HIV에 의한 감염은 적어도 50％의 개체에서 AIDS를 야기하며, 성적 접촉, 감염된 혈액 또는 혈액 제제의 투여, 감염된 정액에 의한 인공 수정, 혈액 함유 바늘 또는 시린지에의 노출 및 분만 동안 감염된 모체로부터 신생아로의 전파를 통해 전파된다. HIV에 감염된 숙주는 증상이 없을 수 있거나, 또는 단핵구증과 유사한 급성 질병 - 열, 두통, 인후통, 불쾌감 및 발진으로 발전할 수 있다. 증상은 지속적인 열, 야간 발한, 체중 감소, 설명이 어려운 설사, 습진, 건선, 지루성 피부염, 대상 포진, 경구 칸디다증 및 구강모 백반증을 비롯한 진행성 면역 기능장애로 진행될 수 있다. 감염이 AIDS로 발전된 환자에서 다수의 기생충에 의한 기회 감염이 흔하다.HIV의 치료법으로는 항바이러스 요법, 예컨대 뉴클레오시드 유사체, 지도부딘 (AST) (단독 또는 디다노신 또는 잘시타빈과 조합된 것), 디데옥시이노신, 디데옥시시티딘, 라미부딘, 스타부딘; 역 전사 억제제, 예컨대 델라비르딘, 네비라핀, 로비리드 및 프로테이나제 억제제, 예컨대 사퀴나비르, 리토나비르, 인디나비르 및 넬피나비르가 포함된다. 본 발명의 항-PD-L1 항체는 치료상 이점을 위해 종래의 HIV 감염 치료법과 조합될 수 있다.6) 시토메갈로바이러스시토메갈로바이러스 (CMV) 감염은 종종 지속적이고, 잠재적이고, 재발하는 감염과 관련이 있다. CMV는 단핵구 및 과립구-단핵구 전구 세포를 감염시켜 그 안에 잠재해 있는다. CMV의 임상 증상으로는 단핵구증-유사 증상 (즉 열, 선의 비대, 불쾌감) 및 항생제에 대해 알레르기성 피부 발진으로 발전되는 경향이 포함된다. 바이러스는 직접 접촉에 의해 전파된다. 바이러스는 소변, 타액, 정액 및 보다 낮은 정도로 다른 체액에 존재한다. 전파는 또한 감염된 모체로부터 그녀의 태아 또는 신생아에게 일어날 수 있고, 수혈 및 장기 이식에 의해 일어날 수 있다. CMV 감염은 비특이적 미토겐 및 특이적 CMV 항원에 대해 손상된 배자발생 반응, 감소된 세포독성 능력 및 CD4+ 림프구의 CD8 림프구 개수의 증가를 특징으로 하는, 일반적인 세포 면역 손상을 야기한다.CMV 감염의 치료법으로는 항바이러스 간시클로비르, 포스카르넷 및 시도비르가 포함되지만, 이들 약물은 전형적으로 면역손상 환자에게만 처방된다. 본 발명의 항-PD-L1 항체는 치료상 이점을 위해 종래의 시토메갈로바이러스 감염 치료법과 조합될 수 있다.7) 엡스테인-바르 바이러스엡스타인-바르 바이러스 (EBV)는 지속적이고 잠재적인 감염을 확립할 수 있고, 주로 B 세포를 공격한다. EBV에 의한 감염은 감염성 단핵구증의 임상 상태를 야기하며, 그러한 것으로 열, 인후증 (종종 삼출물이 포함됨), 전신 림프절염 및 비장 비대증이 포함된다. 또한 간염이 있을 수 있으며, 이는 황달로 발전할 수 있다. EBV 감염의 전형적인 치료법은 증상의 완화이지만, EBV는 특정 암, 예컨대 버킷의 림프종 및 비인두 암의 발생과 관련이 있다. 따라서, 이러한 합병증 결과 이전에 바이러스 감염을 제거하는 것이 더 유익할 것이다. 본 발명의 항-PD-L1 항체는 치료상 이점을 위해 종래의 엡스타인-바르 바이러스 감염 치료법과 조합될 수 있다.8) 헤르페스 바이러스단순 포진 바이러스 (HSV)는 감염된 숙주와의 직접 접촉에 의해 전파된다. 직접 감염은 증상이 없을 수 있지만, 전형적으로 감염된 입자를 함유하는 수포를 야기한다. 질환은 질환의 활성기의 주기로서 나타나고, 바이러스가 잠재적으로 신경절을 감염시키고 후속 발병함에 따라 병변이 생겼다가 사라진다. 병변은 얼굴, 생식기, 눈 및/또는 손에 생길 수 있다. 일부 경우에서, 감염은 또한 뇌염의 원인이 될 수 있다.헤르페스 감염의 치료법은 주로 증상 발생을 해소하는 것에 관한 것이고, 전신 항바이러스성 의약, 예컨대: 아시클로비르 (예를 들어, 조비락스��), 발라시클로비르, 팜시클로비르, 펜시클로비르 및 국소 약제, 예컨대 도코사놀 (아브레바��), 트로만타딘 및 질락틴이 포함된다. 헤르페스의 잠재적인 감염의 제거는 임상적 이점이 클 것이다. 본 발명의 항-PD-L1 항체는 치료상 이점을 위해 종래의 헤르페스 바이러스 감염 치료법과 조합될 수 있다.9) HTLV인간 T-림프구 친화성 바이러스 (HTLV-1, HTLV-2)는 성적 접촉, 모유 수유 또는 오염된 혈액에의 노출을 통해 전파된다. 바이러스는 Th1 세포라 불리는 TH 세포의 하위 세트를 활성화하여, 과다증식하고 Th1 관련 시토카인 (예를 들어, IFN-γ 및 TNF-α)을 과다생산한다. 이는 결과적으로 Th2 림프구의 억제 및 Th2 시토카인 생산 (예를 들어, IL-4, IL-5, IL-10 및 IL-13)의 감소를 야기하여, 제거를 위해 Th2-의존성 반응을 필요로 하는 유기체의 침입에 대해 감염된 숙주가 적절한 면역 반응을 개시하는 능력을 감소시킨다 (예를 들어, 기생충 감염, 점막성 및 체액성 항체의 생산).HTLV 감염은 기회 감염을 유발하여 스타필로코쿠스 종 및 스트론길로이데스 종(Strongyloides spp.)에 의한 기관지확장증, 피부염 및 중복감염을 야기하고, 다균성 패혈증으로 인해 사망에 이르게 한다. HTLV 감염은 또한 성인 T 세포 백혈병/림프종 및 HAM/TSP로 알려진 점진적 탈수성 상위 운동 신경 질환을 직접적으로 유발할 수 있다. HTLV 잠재적 감염을 제거하는 것은 임상적 이점이 클 것이다. 본 발명의 항-PD-L1 항체는 치료상 이점을 위해 종래의 HTLV 감염 치료법과 조합될 수 있다.10) HPV인간 파필로마 바이러스 (HPV)는 주로 각질세포에 영향을 미치고, 두 가지 형태로 피부 및 생식기에서 발생한다. 이는 직접 접촉 및/또는 성활동을 통해 전파되는 것으로 여겨진다. 피부 및 생식기 HPV 감염은 둘 모두, 사마귀 및 잠재적인 감염 및 때때로 재발하는 감염을 야기할 수 있으며, 이는 증상을 조절하고 사마귀의 외관을 차단하는 숙주 면역에 의해 조절되지만, 숙주가 타인에게 감염을 전파할 수 있는 능력은 남는다.HPV에 의한 감염은 또한 특정 암, 예컨대 자궁경부암, 항문암, 외음부암, 음경암 및 구인두암을 유발할 수 있다. HPV 감염에 대한 치유법은 공지되어 있지 않지만, 최근의 치료법은 이미퀴모드를 국소적으로 적용하는 것으로, 이는 침범된 영역을 공격하도록 면역계를 자극한다. HPV 잠재적 감염을 제거하는 것은 임상적 이점이 클 것이다. 본 발명의 항-PD-L1 항체는 치료상 이점을 위해 종래의 HPV 감염 치료법과 조합될 수 있다.c. 진균진균 감염, 또는 진균증은 1차적 감염으로서 또는 내인성 균무리에 의해 손상된 면역계를 가진 숙주의 기회적 콜로니화로서 발생할 수 있다. 진균증에 대한 면역은 주로 호중구, 대식세포, 림프구 및 아마도 자연 살해 (NK) 세포를 포함해서 세포성이다. 진균증은 전형적으로 항체 및 보체에 의한 직접 사멸에 대해 영향을 받지 않는다. 1차 감염으로 인해 야기되는 전신 침습적 진균증에는 블라스토미세스증, 콕시디오이데스진균증, 히스토플라스마증, 및 파라콕시디오이데스진균증이 포함된다. 진균 감염으로 인한 만성 감염의 경우, 본 발명의 항-PD-L1 항체는 이러한 진균증에 대한 종래의 공지된 임의의 치료법 이전에, 또는 그와 동시에, 또는 그 이후에 투여될 수 있다.블라스토미세스 데르마티티스(Blastomyces dermatitis)에 의해 유발되는 블라스토미세스증은 흡입에 의해 발생하고, 1차 폐 감염 또는 대개 피부, 골 및 남성 비뇨생식관을 포함한 혈행성 파종 질환을 야기한다. 1차 노출은 증상이 없을 수 있거나, 또는 인플루엔자와 유사한 증후군을 야기할 수 있다. 이러한 질환은 만성 무통성 형태로 나타날 수 있다. 이 질환은 또한 AIDS 환자에서와 같이 손상된 면역과 관련이 있다. 종래의 B. 데르마티티스 감염 요법으로는 이트라코나졸, 케토코나졸 또는 암포테리신 B의 정맥내 주사가 포함된다. 콕시디오이데스 이미티스(Coccidioides immitis)에 의해 유발되는 콕시디오이데스진균증은 흡입에 의해 발생하고, 1차 폐 감염, 진행성 폐 질환, 또는 대개 피부, 피하 조직, 골, 관절, 및 뇌막을 포함한 혈행성 파종 질환을 야기할 수 있다. 1차 노출은 증상이 없을 수 있거나 (60％) 또는 인플루엔자와 유사한 증후군과 관련이 있을 수 있다. 폐렴, 흉막염 및 폐 공동화가 발생할 수 있다. 전이성 소견에는 피부 병변, 예컨대 결절, 궤양, 보다 깊은 부위에서의 배농루 및 사마귀형 육아종, 골, 관절, 건초 및 수막, 예컨대 수막염이 포함된다. 상기 질환은 또한 AIDS 환자에서와 같이 손상된 면역과 관련이 있다. 콕시디오이데스진균증의 치료법은 케토코나졸, 인트라코나졸 및 플루코나졸, 특히 비수막 질환의 장기간 유지 요법을 포함한다. 수막 형태는 통상적으로 암포테리신 B의 경막내 투여에 의해 치료된다. 히스토플라스마 카프술라툼(Histoplasma capsulatum)에 의해 유발되는 히스토플라스마증은 작은 효모가 대식세포에 존재하는, 흡입에 의해 발생하는 세망내피계 질환이다. 이는 1차 폐 감염, 진행성 폐 질환 또는 대개 세망내피계, 점막 표면 및 부신을 포함한 혈행성 파종 질환을 유발할 수 있다. 잠재적인 감염의 재활성화는 종종 손상된 면역을 갖는 환자, 예컨대 AIDS 환자에서 발생한다. 1차 노출은 증상이 없을 수 있거나, 또는 폐렴, 흉막염, 폐 공동화 및 종격동 림파절증을 비롯한 플루-유사 증후군과 관련이 있을 수 있다. 전위 부위로는 세망내피계 (간비종대, 림프절증, 빈혈, 백혈구감소증 및 혈소판감소증), 점막 (구비강인두 궤양), 위장관 (흡수불량) 및 부신 부전이 포함된다. 대부분의 1차 감염이 자연적으로 해소되지만, AIDS 환자에서와 같이 손상된 면역계와 관련된 경우 계속 재발되며, 종종 혈행성 폐렴, ARDS, 파종성 혈관내 응고 (DIC), 혈행성 분포 구진농포 및 수막염과 관련된다. 히스토플라스마증은 암포테리신 B (특히 급성 혈행성 파종으로 인해 병든 면역손상 환자의 경우), 이트라콘졸 및 케토코나졸에 의해 치료된다.파라콕시디오데스 브라실리엔시스(Paracoccidioides brasiliensis)에 의해 유발되는 파라콕시디오이데스진균증은 1차 폐 감염 또는 대개 피부, 점막, 세망내피계 및 부신을 포함한 혈행성 파종 질환을 생성할 수 있는, 흡입에 의해 발생하는 진균증이다. 감염은 초기에 증상이 없을 수 있지만, 휴면기에 이어 부활할 수 있다. 이러한 감염의 치료법은 케토코나졸, 이트라콘졸 및 술폰아미드를 이용한다. 면역손상된 숙주에서 발생하는 기회 병원체로 인한 전신 침습적 진균증으로는 칸디다증, 크립토콕쿠스증, 아스페르길루스증, 모균증 및 폐포자충증이 포함된다. 손상된 면역계에서 면역 반응을 강화시키는 것에 의해, 본 발명의 항-PD-L1 항체는 또한 특히 종래의 요법과 조합된 경우에 이들 상태를 치료하는데 치료상 가치를 가질 수 있다. 칸디다증 (칸디다 알비칸스, C. 트로피칼리스(C. tropicalis), C. 글라브라타(C. glabrata)에 의한 것), 크립토콕쿠스증 (크립토코쿠스 네오포만스(Cryptococcus neoformans)에 의한 것), 아스페르길루스증 (아스페르길루스 플라부스(Aspergillus flavus), A. 퍼미가터스(A. fumigatus), A. 테레우스(A. tereus) 및 A. 니게르(A. niger)에 의한 것) 및 모균증 (리조푸스 아르히주스(Rhizopus arrhizus), 리조뮤코(Rhizomuco), 아브시디아(Absidia), 쿠닝하멜라(Cunninghamella), 모르티에렐라(Mortierella), 사케세나에아 종(Saksenaea spp.)에 의한 것)의 치료는 하나 이상의 다음과 같은 이미다졸, 케토코나졸, 인트라코나졸, 플루코나졸, 암포테리신 B (플루시토신을 함유하거나 함유하지 않음)로 치료할 수 있다. 최근 원생동물에서 진균으로 재분류된 폐포자충증 (뉴모시스티스 카르니(penumocystis carnii)에 의한 것)은 트리메토프림-술파메톡사졸 (TMP-SMZ) 및 정맥내 펜다미딘 이세티오네이트, 뿐만 아니라 답손, TMP-답손, 트리메트렉세이트, 클린다마이신-프리마퀸 및 아토바그논으로 치료한다. 미포자충류 기생충에 의해 유발되는 미포자충증이 최근에 원생동물로부터 진균으로 재분류되었다. 이는 미토콘드리아 대신 미토솜을 갖는 단세포 유기체이다. 인간에서 질환을 유발할 수 있는 유기체로는 엔테로시토준 비에뉴시(Enterocytozoon bieneusi), 엔세팔리토준 헬렘(Encephalitozoon hellem), 엔세팔리토준 인테스티날리스(Encephalitozoon intestinalis), 엔세팔리토준 쿠니큘리(Encephalitozoon cuniculi), 플리스토포라속 종(Pleistophora spp.), 트라키플레이스토포라 호미니스(Trachipleistophora hominis), 트라키플레이스토포라 안트로포프테라(Trachipleistophora anthropophthera), 노세마 콘노리(Nosema connori), 노세마 오큘라룸(Nosema ocularum), 브라키올라 베시큘라룸(Brachiola vesicularum), 비타포르마 코르니아에(Vittaforma corneae), 마이크로스포리듐 세일로넨시스(Microsporidium ceylonensis), 마이크로스포리듐 아프리카늄(Microsporidium africanum), 브라키올라 알게라에(Brachiola algerae)가 포함된다. 감염은 동물, 오염된 물, 또는 다른 감염된 숙주와 직접 접촉하는 것으로부터 인간에게 전파되는 것으로 생각된다. 숙주 세포를 감염시킨 후, 포자 원형질이 성장하여 다핵 플라스포듐으로 분열되거나 그것을 형성하여, 무성 생식 및 유성 생식을 둘 모두 포함한 복합적인 수명 주기를 가질 수 있다. 연속 생성에 의한 자체 감염 및 만성, 소모성 질환은 종종 미포자충 감염의 특징이 된다.상기 질환의 임상 소견은 종 및 숙주의 면역 상태에 따라 다양할 수 있으며, 결막염 (예를 들어, V. 코르니아에), 만성 설사, 흡수불량 및 소모 (예를 들어, E. 비에뉴시, E. 인테스티날리스)가 포함된다. 안구, 장 및 파종성 소포자균증의 치료법으로는 알벤다졸의 투여가 포함된다. 푸마질린의 국소 적용은 미포자충 각결막염을 치료하는데 효과적으로 사용될 수 있다. 그 밖의 약물로는 구충제 (예를 들어, 알벤다졸), 항생제 (예를 들어, 푸마질린), 면역조절제 (예를 들어, 탈리도미드), 항원생동물제 (예를 들어, 메트로니다졸)가 포함된다. d. 원생동물기생충 장애로 인한 질환, 예컨대 말라리아, 주혈흡충증 및 리슈마니아증은 개발 도상국에서 가장 보편적이고 중요한 보건 문제 중 하나이다. 이러한 질환은 이들이 1) 숙주 세포 안에서 생존하고 (예를 들어, 리슈마니아증), 2) 표면 항원을 신속하게 변화시키고 (예를 들어, 파동편모충증) 및 3) 숙주 항원을 내보이는 것에 의해 그 자신을 숙주 세포로 "위장하는" 것 (예를 들어, 주혈흡충증)을 비롯한 다양한 방법으로 숙주 면역을 피할 수 있기 때문에 특정한 도전을 제시한다. 장기 이식과 함께, 암 뿐만 아니라 세계적으로 유행하는 AIDS의 치료를 위해 면역억제 약물을 사용하는 것은 플라스모듐 종(Plasmodium spp.), 톡소플라즈마 종(Toxoplasma spp.), 리슈마니아 종(Leishmania spp.), 크립토스포리디움 종(Cryptosporidium spp.), 트리파노소마 종(Trypanosoma spp.) 및 연충류로 인한 잠재적이거나 무증상인 감염을 재활성화시킬 수 있다.원생동물성 기생충에 의한 감염으로 인해 야기된 만성 감염의 경우, 본 발명의 항-PD-L1 항체를 표준 항-원생동물 요법과 함께, 또는 그 이전에 또는 그에 후속하여 투여하는 것에 의해 조합할 수 있다.속 플라스모듐 (예를 들어, P. 오발레(P. ovale), P. 말라리아에(P. malariae), P. 팔시파룸(P. falciparum), P. 비박스(P. vivax))의 기생충에 의해 유발되는 말라리아는 암컷 얼룩날개모기속 모기의 소화관에서 발생된 포자소체로서 감염 주기를 시작한다. 인간에게 전파되면, 이들 포자소체는 염증 반응을 유도하지 않고 간 세포 내에 침투하여 증식한다. 분열소체라 불리는 이러한 유기체의 자손은 이어서 적혈구 세포에 침투하고, 전형적으로 열 및 한기를 특징으로 하는 질환의 임상학적 단계를 개시한다. 감염이 풍토성인 세계의 지역에서, 거의 모든 거주자들은 낮은 범위에서 중간 범위의 병원성을 갖는 계속적으로 낮은 수준의 만성 감염을 보유하며, 증가되는 IgG 항체의 수준은 분열소체가 적혈구로 진입하는 것으로부터 보호한다.임상 질환의 치료 및 예방 둘 모두를 위한 최근의 이용가능한 항-말라리아 약물로는 아르테메테르-루메판트린 (요법, 예를 들어, 코아르템�� 및 리아메트��), 아르테수네이트-아모디아킨 (요법), 아르테수네이트-메플로퀸 (요법), 아르테수네이트-술파독신/피리메타민 (요법), 아토바쿠온-프로구아닐 (요법 및 예방, 예를 들어, 말라론��), 퀴닌 (요법), 클로로퀸 (요법 및 예방), 코트리파지드 (요법 및 예방), 독시시클린 (요법 및 예방), 메플로퀸, (요법 및 예방, 예를 들어, 라리암��), 프리마퀸 (P. 비박스 및 P. 오발레에 대한 요법만; 예방은 안됨), 프로구아닐 (예방), 술파독신-피리메타민 (요법 및 예방), 히드록시클로로퀸 (요법 및 예방, 예를 들어, 플라퀘닐��)이 포함된다.무반응성 T 세포를 재활성화하는 것을 통해, 본 발명의 항-PD-L1 항체는 말라리아 기생충을 제거하는데 도움이 되는 특정 치료제일 수 있다.속 톡소플라즈마 기생충에 의해 유발되는 톡소플라스마증은 종종 증상이 없지만, 작은 분획이 임상 질환으로 발전할 수 있고, 그 범위는 양성 급성 림프절증에서 중추 신경계의 치명적 감염에 이를 수 있다. 감염의 공급원으로는 날것인 또는 부분적으로 요리된 돼지 또는 양고기 내의 포낭 및 감염된 고양이의 배설물을 통과한 충란이 포함된다. 감염은 인간에서 통상적으로 위장관을 통해 일어나고, 원생동물은 실질적으로 모든 체내 세포에 침입하여 (타키조이트로서) 증식할 수 있다. 이러한 타키조이트는 매우 천천히 성장하는 감염체 (브라디조이트)로 채워진 낭포를 생성할 수 있고, 이것은 장기간 생존한 채로 남아 잠재적인 만성 감염을 야기할 수 있다. 면역계가 손상된 숙주, 예컨대 면역억제 약물을 처방받았거나 HIV에 걸린 숙주는 특히 톡소플라스마증에 걸리기 쉽다.1차 톡소플라스마증을 치료하는데 사용되는 약제로는 다음과 같은 것들이 포함된다: 항생제 (예를 들어, 술파디아진, 클린다마이신, 스피라마이신 및 미노시클린)를 수반할 수도, 수반하지 않을 수도 있는 피리메타민. 잠재적인 톡소플라스마증은 클린다마이신을 함유할 수도, 그렇지 않을 수도 있는 항생제 아토바쿠온에 의해 치료될 수 있다.속 리슈마니아의 기생충에 의해 유발되는 리슈마니아증은 피부와 내장의 대식세포를 감염시키고, 모래파리를 통해 인간에게 전파된다. 특이적인 혈청 항체가 거의 또는 전혀 존재하지 않기 때문에, 활성화된 T 세포를 통한 세포 매개 면역이 감염을 제거하는 중요한 경로인 것으로 보인다. 열대성 궤양으로도 알려져 있는 구세계 리슈마니아증은 몇몇 리슈마니아 종에 의해 유발된다: L. 트로피카(L. tropica), L. 메이져(L. major) 및 L. 아에티오피카(L. aethiopica). 신세계 리슈마니아증은 L. 멕시카나(L. Mexicana) 및 L. 브라질리엔시스(L. braziliensis)의 다양한 아종에 의해 유발된다. 이러한 기생충들은 강력한 세포 매개 면역 반응을 유도하지만, 임상 질환의 결과도 또한 숙주 반응을 일부 야기한다. 숙주가 억제되거나 부적당한 세포 매개 반응을 시작하면, 자연 치유를 거의 바랄 수 없는 미만성 만성 피부 리슈마니아증으로 된다 (예를 들어, L. 아에티오피카, L. 멕시카나). 숙주가 과잉의 세포 매개 반응을 시작하면, 그 반응은 1차 병변의 가장자리에서 나타나는 비궤양성 림프소절이 지속되는 낭창양 또는 재발성 리슈마니아증이다 (예를 들어, L. 트로피카). 재발성 리슈마니아증은 초기 병변 이후 1 내지 10년 간 나타날 수 있다. 피부형 및 내장형의 2 형태의 질환이 존재하며, 세포 매개 면역에 의해 피부 병변을 나타내는 피부형이 제거에 있어서 중요하다. 내장형에서 세포 매개 면역은 불충분하거나 존재하지 않고, 상기 질환은 임상적으로 폴리클로날 B 세포 고감마글로불린혈증, 백혈구감소증, 비장비대증 및 TNF-α의 상승된 생산을 보인다.밀테포신 (예를 들어, 임파비도��) 및 파라미오신은 피부 및 내장 리슈마니아증 둘 모두에 대해 최근 이용가능한 치료법이다.속 크립토스포리디아의 원생동물로부터의 감염에 의해 유발되는 크립토스포리디움증은 감염된 숙주의 대변 배설물과 인간의 직접 접촉으로 인해 야기된다. 장 점막 조직의 감염은 설사를 유발할 수 있다. 상기 질환은 전형적으로 급성 감염으로 나타나지만, 특히 면역손상된 개체에서는 만성화될 수 있다. 치료는 전형적으로 임시방편인 것으로 특히 수화작용이지만, 파로모마이신, 아지트로마이신 및 혈청 Ig (예를 들어, 락토빈-R��)가 성공적으로 감염을 제거하였다.기생충 트리파노소마 (예를 들어, T. 부루세이, subsp. 감비엔스, 로데지엔스)에 의해 유발되는 트리파노소마증은 체체파리가 무는 것을 통해 인간 및 소를 감염시킨다. 이러한 병원체가 제시하는 도전은 다양한 표면 항원을 나타내는 집단의 연속 생성으로 인한 것이다. 감염은 비특이적이고 비보호적인 혈청 이뮤노글로불린의 상승된 수준을 특징으로 한다.트리파노소마증의 치료법으로는 다음과 같은 펜다미딘 (T.b. 감비엔스용), 정맥내 수라민 (T.b. 로데시엔스용), 에플로르니틴, 멜라르소프롤 (니푸르티목스와 함께 할 수도, 함께 하지 않을 수도 있음)의 정맥내 투여를 포함한다. 흡충류 (예를 들어, 스키토소마 종(Schistomsoma spp.), 촌충류 및 선충류로 인한 연충 감염은 T 세포 의존적 반응인 호산구증가증 및 감작 항체의 공통 면역 반응을 공유한다. 스키스토소마 만소니(Shistosoma mansoni), S. 자포니쿰(S. japonicum), S. 해마토비움(S. haematobium) 및 S. 메콩기(S. mekongi)에 의해 유발되는 주혈흡충증 (일명 주혈흡충병)은 그 수명 주기를 물 속 알로서 시작했다가 미라시디아로 부화되고, 이것이 달팽이를 통과하여 포자낭을 다중 생성한다. 이어서, 이는 두 갈래 꼬리의 세르카리아를 생성하며, 스키스토소뮬라로서 인간 숙주의 혈류를 감염시킬 수 있고, 이는 처음에 폐로 이동했다가 간으로 이동한다. 이들 흡충은 종내에는 쌍을 형성하고, 짝짓기를 하고, 장간막 세정맥에 알을 낳는다. 이러한 많은 알들이 장을 경유하여 배설되는 동안, 일부는 점막하층, 간의 문 세정맥, 및 그 밖의 신체 장기에 포획된다. 포획된 알과 관련된 육아종성 염증은 만성 주혈흡충증의 결정적인 증상이다. 주혈흡충증의 치료법으로는 프라지콴텔��, 안티몬, 옥삼니퀸 (S. 만소니) 및 미라지드��의 투여가 포함된다.촌충류 감염은 2개의 군으로 분류될 수 있고, 그 하나는 장 거주 성충, 예컨대 광절열두조충 및 무구조충으로, 제한된 비-체액성 면역 효과를 갖는다. 두번째 그룹은 이동성 조직 포낭형 애벌레 촌충, 예컨대 왜소조충, 단방조충 및 유구조충으로, 이들은 강력한 비경구 숙주 반응 및 보호적 혈청 항체를 유도한다. 인간에서 가장 심각한 촌충류 감염은 포충증으로, 이것이 간, 폐, 뇌, 신장 또는 다른 신체 일부에 이식될 경우, 포충낭을 형성할 수 있다.포충증의 치료법으로는 메트로니다졸, 알벤다졸의 투여 및 수술적 개입, 예컨대 제거, 흡인, 조대술 또는 그물막고정술이 포함된다. 선충류는 인간을 감염시키는 가장 흔하고 널리 분포된 연충으로, 선모충증, 회충증, 사상충증 및 분선충증과 같은 장애를 유발한다. 선모충에 의해 유발되는 선모충증은 날고기 또는 부분적으로 요리된 고기, 예컨대 돼지에서 T. 스피랄리스(T. spiralis)의 애벌레를 섭취하는 것으로 인해 야기될 수 있다. 인간에서, 감염은 상승된 IgM 생산에 이어 IgG를 생산하게 한 후, 이어서 T 림프구에 의해 항체-손상된 유충이 신속하게 배출되게 하는 강력한 체액 반응을 유도한다.장내에서 성충을 사멸시키는 것으로 공지된 유일한 치료법은 티아벤다졸이고, 애벌레를 사멸시키는 치료법은 공지되어 있지 않다. 회충으로도 알려져 있는 아스카리스 (아스카리스 룸브리코이데스(Ascaris lumbricoides))는 배설물에 의해 오염된 물질의 섭취로 인해 생기는 인간에서 흔한 기생충이다. 환자가 매우 오랜 기간 동안 증상이 없는 채로 있을 수 있지만, 유생 단계가 신체를 통과함에 따라 이는 내장 손상, 복막염 및 염증, 간 또는 비장의 비대, 독성 및 폐렴을 유발할 수 있다. 회충증의 치료법으로는 메벤다졸 (예를 들어, 벌목스��), 피페라진, 피란텔 파모에이트 (예를 들어, 안티민스��, 핀-리드��, 핀-X��), 알벤다졸, 티아벤다졸 (피페라진과 함께 또는 따로), 헥실레소르시놀, 산토닌 및 케노포디움 오일을 투여하는 것이 포함된다. 본 발명의 항-PD-L1 항체는 회충증을 치료하기 위한 상기 요법을 투여하는 것과 함께, 또는 그 이전에 또는 그에 후속하여 투여될 수 있다. 사상충속 선충에 의해 유발되는 사상충증은 곤충 벡터에 의해 인간에 도입된다. 온코세리아시스 또는 하천 실명증을 유발하는 회선 사상충은 먹파리에 물려 전파된다. 감염성 애벌레는 피하에 그 자신을 숨기고 성체로 발생하여 섬유조직발생 숙주 반응을 유도하며, 다량의 미세사상충을 발산시켜 이것이 피하 및 눈을 통해 확산되면 추가로 각막염 또는 망막염이 유도되고 이어서 각막이 뿌옇게 된다. 림프 사상충증은 브루기아 종(Brugia spp.) 및 우케레리아 종(Wuchereria spp.)에 의한 감염으로 인해 야기된다. 시간이 지나면서, 림프 조직 특히 서혜부에서의 상흔은 유출을 막아 기형 상태의 코끼리피부병을 야기할 수 있다. 사상충증의 주요 치료법은 항생제 이버멕틴, 알벤다졸 및 디에틸카르바마진 시트레이트 (DEC, 헤트라잔��) (이버멕틴 또는 알벤다졸과 함께 또는 따로)를 투여하는 것이다. 그 밖의 치료 전망에는 공생 박테리아, 월바키아를 사멸시키는 독시시클린이 포함된다. 속 스트론길로이데스 (예를 들어, S. 스테르코랄리스(S. stercoralis), S. 풀레보르니(S. fuelleborni))의 기생충에 의해 유발되는 분선충증은 배설물에 의해 오염된 토양을 통해 인간에게 전파되는 질환이다. 이는 자유 생활 주기 (간상유충이 성충으로 성숙됨) 뿐만 아니라 기생 주기 (사상유충이 성충으로 성장함) 둘 모두로 존재할 수 있고, 이는 피부에 침투하여 폐에 이어 인두를 거친 후 궁극적으로 장 내에서 거주한다. 스트론길로이데스에 의해 또한 자기감염이 발생되는 것으로 알려져 있고, 이는 본질적으로 사상유충의 연속 생성으로 인한 반복 감염이다.감염은 증상이 없을 수 있거나, 또는 위장관에서의 통증 및 설사, 폐에서의 뢰플러 증후군 (즉 호산구증가증) 및 두드러기를 특징으로 할 수 있다. 혈액 호산구증가증이 또한 있을 수 있다. 스트론길로이데스의 지속적인 감염이 소화성 궤양, 담낭 질환 및 크론병을 모방할 수 있어 오진이 흔하다. 이는 특히 면역손상 숙주에서 문제가 된다. 분선충증에 대한 공지의 치료법은 이버멕틴, 알벤다졸 또는 티아벤다졸이지만, 이러한 약제는 단지 성충만 사멸시키기 때문에, 반복적인 투여가 필요하다. e. 백신화질환에 대한 면역을 유도하기 위한 백신화 또는 항원성 물질의 투여는 병원체에 의한 감염 효과를 예방하거나 개선시키기 위해 일상적으로 사용된다. 숙주 면역을 향상시키는 것은 감염성 병원체에서 뿐만 아니라 질환화되기 시작한 (예를 들어 암성) 숙주 조직에서 발견된 바람직하지 않은 항원에 대해 사용될 수 있다. 전통적으로 백신은 약화되거나 사멸된 전체 병원체로부터 유래되지만, 또한 인간 클래스 I 또는 클래스 II 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자에 의해 특이적으로 인식되는 무손상 병원체 상의 에피토프를 대표하는 펩티드일 수 있다. 특정 관심 펩티드 항원은 T 세포에 의해 특이적으로 인식되는 것이다.최근, 요법상 백신화를 탈진된 CD8+ T 세포에 PD-L1 차단제를 투여하는 것과 함께 조합하는 것이 만성 감염 마우스 모델에서 기능 및 바이러스 제어를 향상시키는 것으로 밝혀졌다. 문헌 [Ha et al., J.Exp.Med. 205(3): 543-555 (2008)]. 그 결과, 본원에서 기재하는 항-PD-L1 항체는 또한 항원 백신과 조합되어 (예를 들어, 이전, 동시 또는 이후 투여), 바이러스, 박테리아, 진균 또는 원생동물 침입 뿐만 아니라 종양 면역으로 인한 감염 (예를 들어, 급성 및 만성)을 치료할 수 있다.G. 제약학적 투여량:본 발명의 제약 조성물의 투여량 및 목적하는 약물 농도는 고려되는 특정 용도에 따라 다를 수 있다. 적합한 투여량 및 투여 경로의 결정은 당업자의 기술 범위 내에 있다. 동물 실험은 인간 치료법에 대한 효과적인 용량의 결정을 위한 신뢰할 수 있는 지침을 제공한다. 유효량에 대한 종간 스케일링은 문헌 [Mordenti, J. and Chappell, W. "The Use of Interspecies Scaling in Toxicokinetics." In Toxicokinetics and New Drug Development, Yacobi et al., Eds, Pergamon Press, New York 1989, pp.42-46]에 제시된 원칙에 따라 수행될 수 있다.본원에 기술된 폴리펩티드 또는 항체의 생체내 투여가 이용되는 경우, 정상 투여량은 투여 경로에 따라서 하루에 포유동물 체중을 기준으로 약 10 ng/kg 내지 약 100 mg/kg 또는 그 이상, 바람직하게는 약 1 mg/kg/일 내지 10 mg/kg/일로 다양할 수 있다. 특정 투여량 및 전달 방법에 관한 지침은 문헌에 제공되어 있고; 예를 들어, 미국 특허 제4,657,760호; 동 제5,206,344호; 또는 동 제5,225,212호를 참조한다. 상이한 제제가 상이한 치료법 및 상이한 장애에 효과적일 수 있으며, 특정 장기 또는 조직을 치료하기 위한 투여가 다른 장기 또는 조직에 대한 것과 상이한 양식으로의 전달을 필요로 할 수 있다는 것은 본 발명의 범위 내에 있다. 나아가, 투여량은 1회 이상의 별개 투여에 의해서, 또는 연속 주입에 의해 투여될 수 있다. 수일 또는 그보다 오랜 기간에 걸친 반복 투여의 경우, 상태에 따라서 치료는 질환 증상이 목적하는 수준으로 저해될 때까지 지속된다. 그러나, 다른 투약법이 유용할 수 있다. 이러한 요법의 진행은 통상의 기술 및 검정에 의해 쉽게 모니터링된다. H. 제제의 투여재구성된 제제 및 액체 제제를 포함하나 이로 제한되지 않는 본 발명의 항-PD-L1 항체에 의한 치료를 필요로 하는 포유동물, 바람직하게는 인간에게, 공지된 방법에 따라서, 예를 들어 볼러스와 같은 정맥내 투여, 또는 일정 기간에 걸친 연속 주입에 의해서, 근육내, 복강내, 뇌척수액내, 피하, 관절내, 활액막내, 경막내, 경구, 국소 또는 흡입 경로에 의해서 투여된다. 바람직한 실시양태에서, 상기 제제는 포유동물에게 피하 (즉, 피부 아래) 투여에 의해 투여된다. 상기 목적을 위하여, 제제는 시린지를 이용하여 주사될 수 있다. 그러나, 주사 장치 (예를 들어, INJECT-EASE™ 및 GENJECT™ 장치); 주사기 펜 (예를 들어, GENPEN™); 자동-주사기 장치, 무바늘 장치 (예를 들어, MEDIJECTOR™ 및 BIOJECTOR™) 및 피하 패치 전달 시스템과 같은 상기 제제의 투여를 위한 다른 장치를 이용할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 단일 용량 투여 단위용 키트에 관한 것이다. 이러한 키트는 단일 또는 복수 챔버의 예비 충전된 시린지를 비롯한, 치료 단백질 또는 항체의 수성 제제의 용기를 포함한다. 예시적인 예비 충전된 시린지는 베터 게엠베하 (Vetter GmbH, 독일 라벤스버그 소재)로부터 입수가능하다. 단백질의 적절한 투여량 ("치료 유효량")은 예를 들어 치료할 상태, 상태의 중증도 및 경과, 단백질이 치료 또는 예방 목적으로 투여되는지의 여부, 선행 요법, 환자의 임상 병력 및 항-PD-L1 항체에 대한 반응, 사용되는 제제의 포맷, 및 주치의의 판단에 의존할 것이다. 항-PD-L1 항체는 적합하게는 환자에게 1회 또는 일련의 치료에 걸쳐서 투여되고, 환자에게 진단 이후 임의의 시점에 투여될 수 있다. 항-PD-L1 항체는 단독 치료로서, 또는 문제되는 상태의 치료에 유용한 다른 약물 또는 요법과 함께 투여될 수 있다. 항-PD-L1 항체의 경우, 초기 후보 투여량은 환자에게 투여될 경우 약 0.1-20 mg/kg 범위일 수 있고, 이는 1 이상의 개별 투여형을 취할 수 있다. 그러나, 다른 투약법도 유용할 수 있다. 그러한 요법의 진행상황은 종래의 기술을 이용하여 쉽게 모니터링된다. I. 제조품본 발명의 다른 실시양태에서, 상기 제제를 함유하는 제조품이 제공되는데, 이는 그의 사용 설명서를 바람직하게 제공한다. 제조품은 용기를 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알 (예를 들어, 이중 챔버 바이알), 시린지 (예를 들어, 단일 또는 이중 챔버 시린지) 및 시험관을 포함한다. 상기 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 물질로 형성될 수 있다. 용기는 제제를 보유한다. 용기 상의 또는 용기에 부속된 라벨은 재구성 및/또는 사용을 위한 지침을 나타낼 수 있다. 라벨은 추가로 제제가 피하 투여 및/또는 T 세포 기능이상 장애의 치료에 유용하거나 피하 투여 및/또는 T 세포 기능이상 장애의 치료를 의도함을 나타낼 수 있다. 제제를 보유하는 용기는 재구성 제제의 반복 투여 (예를 들어, 2-6회 투여)를 가능하게 하는 다회 사용 바이알일 수 있다. 제조품은 추가로 적합한 희석물 (예를 들어, BWFI)을 포함하는 제2 용기를 포함할 수 있다. 희석물 및 동결건조 제제를 혼합할 때, 재구성된 제제 중 최종 단백질 농도는 일반적으로 적어도 50 mg/ml일 것이다. 제조품은 상업적 및 사용자 입장에서 바람직한 다른 물질, 예를 들어 다른 완충액, 희석제, 필터, 바늘, 시린지 및 사용을 위한 지침이 적힌 포장삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 하기 실시예를 참조하여 보다 충분하게 본 발명을 이해할 수 있을 것이다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 명세서 전체에서 모든 인용문은 본원에 명백하게 참고로 포함된다. 다른 실시양태에서, 본 발명은 자동-주사기 장치로 투여하기 위한 본원에 기재된 제제를 포함하는 제조품을 제공한다. 자동-주사기는 활성화시에 환자 또는 투여자로부터 추가로 필요한 작용없이 그의 내용물을 전달할 수 있는 주사 장치로 설명될 수 있다. 이들은 특히, 전달 속도가 일정하여야 하고 전달 시간이 수 분 보다 긴 경우 치료 제제의 자동-투약에 적합하다. 실시예 1파지 라이브러리에서의 항-PD-L1 항체의 확인항-PD-L1 항체를 확인하기 위한 라이브러리 분류 및 스크리닝인간 (R0026#D 시스템즈(R0026#D Systems), cat# 156-B7) 및 뮤린 (R0026#D 시스템즈, cat# 1019-B7) PD-L1-Fc 융합체를 교대 라이브러리 분류를 위한 항원으로서 사용하였다. 구체적으로, 파지 라이브러리를 먼저 인간 항원에 대해, 이어서 뮤린, 인간, 및 뮤린 항원에 대해 후속 3 라운드로 분류하였다. 눈크 96 웰 맥시소르프(Maxisorp)�� 면역플레이트를 표적 항원 (10 ㎍/ml) 으로 밤새 4℃에서 코팅하고, 파지 차단 완충액 PBST (포스페이트 완충 염수 (PBS) 및 1％ (w/v) 소 혈청 알부민 (BSA) 및 0.05％ (v/v) 트윈-20)으로 1 시간 동안 실온에서 차단하였다. 항체 파지 라이브러리 VH (예를 들어, 문헌 [Lee et al., J. Immunol. Meth. 284:119-132, 2004] 참조) 및 VH/VL (문헌 [Liang et al., J. Mol. Biol. 366: 815-829, 2007] 참조)을 항원 플레이트에 개별적으로 첨가하고, 밤새 실온에서 인큐베이션하였다. 다음날, 항원 코팅된 플레이트를 PBT (0.05％ 트윈-20을 함유하는 PBS)로 10회 세척하고, 결합된 파지를 50 mM HCl 및 500 mM NaCl로 30 분 동안 용출시키고, 동 부피의 1 M 트리스 염기 (pH 7.5)로 중화시켰다. 회수된 파지를 이. 콜라이 XL-1 블루 세포 중에서 증폭시켰다. 후속 선별 라운드 동안, 항원 코팅된 플레이트와 항체 파지의 인큐베이션은 2 내지 3시간으로 줄이고, 플레이트 세척의 엄격도는 점차 증가시켰다. 4 라운드의 패닝 이후에, 현저하게 풍부해진 것이 관찰되었다. VH 및 VH/VL 라이브러리 분류로부터 각각 96 클론을 골라내어 이들이 인간 및 뮤린 PD-L1-Fc 둘 모두에 특이적으로 결합하는지 여부를 측정하였다. 이들 클론의 가변 영역을 PCR 서열분석하여 특유한 서열 클론을 확인하였다. 개별 클론의 VL 및 VH 영역을 LPG3 및 LPG4 벡터 (문헌 [Lee et al., 상기 문헌])에 각각 클로닝하고, 포유동물 CHO 세포에서 일시적으로 발현시키고, 단백질 A 칼럼에 의해 정제하여, 관심 모 클론을 IgG로 재포맷시켰다. 13 파지 항체가 가용성 PD-1-Fc 융합 단백질 및 293 세포에서 발현된 인간 또는 마우스 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 능력을 평가하였다 (IC50 값을 표 1 - 상반부에 표기함). PD-1에 대한 인간 PD-L1 결합을 차단하는데 IC50이 가장 낮은 항체인 YW243.55를 후속 친화성 성숙을 위해 선별하여 인간 및 마우스 PD-L1 둘 모두에 대한 그의 친화성을 개선시켰다. (표 1). 영장류 및 뮤린 종 둘 모두에 대해 비슷한 교차 반응성을 갖는 (뿐만 아니라 인간에 대한 친화성을 보유하는) 항체는 향상된 치료상 가치를 제공할 것이고, 실험 모델에서 그 특징이 잘 규명된 동일한 항체가 인간 임상 시험에 사용될 수 있다. 이로서 모델 특이적 대용물을 사용하는 것으로 인한 불확실성을 회피한다.VH 라이브러리 유래의 클론의 친화성 개선을 위한 라이브러리의 구축파지미드 pW0703 (파지미드 pV0350-2b (문헌 [Lee et al., J. Mol. Biol 340: 1073-1093 (2004)])에서 유래되었고, 모든 CDR-L3 위치에 정지 코돈 (TAA)을 함유하고, M13 박테리오파지의 표면상에 1가 Fab를 나타냄)은, 친화성 성숙을 위해 VH 라이브러리로부터의 관심 클론의 중쇄 가변 도메인 (VH)을 이식하기 위한 라이브러리 주형으로 작용하였다. 친화성 성숙을 위해 완전(hard) 및 부분(soft) 무작위화 전략을 둘 모두 이용하였다. 완전 무작위화의 경우, 천연 인간 항체를 모방하도록 설계된 아미노산을 이용하여 3개의 경쇄 CDR의 선택된 위치를 갖는 1개의 경쇄 라이브러리를 무작위화하였으며, 설계된 DNA 퇴보는 문헌 [Lee et al., (J. Mol. Biol 340, 1073-1093 (2004)]에 기재된 바와 같다. 부분 무작위화의 경우, CDR-L3의 위치 91-94 및 96, CDR-H1의 위치 28-31 및 34-35, CDR-H2의 위치 50, 52 및 53-58, CDR-H3의 위치 95-99 및 100A의 잔기를 표적화하고; CDR 루프, L3/H1/H2 및 L3/H3의 2개의 상이한 조합을 무작위화를 위해 선택하였다. 부분 무작위화 조건을 달성하기 위해 (선택된 위치에서 약 50％의 돌연변이율 도입), 돌연변이유발 DNA를 야생형 뉴클레오티드에 유리한 염기의 70-10-10-10 혼합물로 합성하였다 (문헌 [Gallop et al., Journal of Medicinal Chemistry 37:1233-1251 (1994)]). 친화성을 개선하기 위한 파지 분류종전에 확인된 파지 클론을 첫번째 라운드에서 플레이트 분류하고, 이어서 5회 또는 6회 라운드로 용액 분류하였다. 라이브러리를 개별적으로 인간 및 뮤린 PD-L1-Fc에 대해 분류하였다 (R0026#D 시스템즈, 각각 cat. # 156-B7, cat # 1019-B7). 인간 PD-L1-Fc 표적의 경우, 제1 라운드 플레이트 분류에서, 3개의 라이브러리를 1％ BSA 및 0.05％ 트윈 20 중의 약 3 O.D./ml의 파지 주입을 이용하여 실온에서 2 시간 동안 표적 코팅된 플레이트 (눈크 맥시소르프�� 플레이트)에 대해 개별 분류하였다. 제1 라운드의 플레이트 분류 후에, 용액 분류를 수행하여 선별의 엄격도를 증가시켰다. 용액 분류의 경우, 제1 라운드의 플레이트 분류로부터 증식된 1 O.D./mL 파지를 1％ 수퍼블럭(Superblock) (피어스 바이오테크놀로지(Pierce Biotechnology)) 및 0.05％ 트윈-20을 함유하는 완충액 100 ㎕ 중 20 nM 비오티닐화된 표적 단백질 (농도는 모 클론 파지 IC50 값을 기초로 함)과 함께 30분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 상기 혼합물을 1％ 수퍼블럭으로 10배 추가 희석하고, 웰 당 100 ㎕를 뉴트라비딘-코팅된 웰 (5 ㎍/mL)에 15분 동안 실온에서 적용하며 부드럽게 진탕시켜서, 비오티닐화된 표적과 파지가 결합하도록 하였다. 웰을 PBS-0.05％ 트윈-20으로 10회 세척하였다. 배경 결합을 측정하기 위해, 비오티닐화 되지 않은 표적과 함께 파지를 함유하는 대조군 웰을 뉴트라비딘-코팅된 플레이트 상에 포획시켰다. 결합된 파지를 0.1 N HCl에 의해 20 분 동안 용출시키고, 1/10 부피의 1 M 트리스 (pH 11)로 중화시키고, 적정하고, 다음 라운드를 위해 전달하였다. 다음으로, 선별 엄격도를 증가시키는 두가지 방법과 함께, 용액 분류를 5 라운드 더 수행하였다. 첫번째 방법은 비오티닐화된 표적 단백질 농도를 4 nM에서 0.5 nM으로 감소시키는 것에 의한 온-레이트 선별에 대한 것이고, 두번째 방법은 과량의 비-비오티닐화된 표적 단백질 (100 내지 2000 배 더)을 첨가하여 실온 또는 37℃에서 더 약한 결합자를 경쟁에서 탈락시키는 것에 의한 오프-레이트 선별에 대한 것이다. 또한, 파지 주입을 감소시켜 (0.1 내지 0.5 O.D/ml) 배경 파지 결합을 낮췄다. 뮤린 PD-L1-Fc 표적의 경우, 파지 분류 방법은 인간 PD-L1 Fc 항원에 대해 상기에서 기재한 것과 유사하며 약간 변형된다. 구체적으로, 제1 라운드의 플레이트 패닝 직후에 용액 패닝을 위해 100 nM 비오티닐화된 뮤린 PD-L1-Fc를 사용하였다. 제4 후속 라운드의 용액 패닝에서, 비오티닐화된 표적을 10 nM에서 1 nM로 감소시키고, 200-500배 과량의 비-비오티닐화된 표적을 실온에서 첨가하였다.이어서, 이하의 실시예에서 기재하는 고처리량 친화성 스크리닝 ELISA 절차에 의해 친화성 성숙된 클론을 추가로 스크리닝하였다.고처리량 친화성 스크리닝 ELISA (단일 스팟 경쟁)인간 및 뮤린 PD-L1 표적 각각에 대한 7번째 및 6번째 라운드 스크린으로부터 콜로니를 가려내었다. 콜로니를 96-웰 플레이트 (팔콘(Falcon))에서 50 ㎍/ml 카르베니실린 및 1E10/ml KO7을 함유하는 2YT 배지의 웰당 150 ㎕로 37℃에서 밤새 성장시켰다. 동일한 플레이트로부터, XL-1 감염된 모 파지의 콜로니를 대조군으로서 골라내었다. 96-웰 눈크 맥시소르프�� 플레이트를 PBS 중의 웰당 100 ㎕의 인간 및 뮤린 PD-L1-Fc 단백질 (2 ㎍/ml)로 4℃에서 밤새 또는 실온에서 2 시간 동안 개별 코팅하였다. 플레이트를 65 ㎕의 1％ BSA로 30 분 동안, 그리고 40 ㎕의 1％ 트윈 20으로 추가 30 분 동안 차단시켰다.파지 상청액을 10 nM 표적 단백질을 함유하거나 함유하지 않는 ELISA (효소 연결 면역흡착 검정) 완충액 (0.5％ BSA, 0.05％ 트윈-20 함유 PBS) 중에서 100 ㎕의 총 부피로 1:10으로 희석하고, F 플레이트 (눈크)에서 실온에서 적어도 1 시간 동안 인큐베이션하였다. 표적 단백질을 함유하거나 함유하지 않는 75 ㎕의 혼합물을 나란히 표적 단백질 코팅된 플레이트로 옮겼다. 플레이트를 15 분 동안 부드럽게 진탕시켜 미결합 파지가 표적 단백질 코팅된 플레이트에 포획되게 하였다. 플레이트를 PBS-0.05％ 트윈 20으로 적어도 5회 세척하였다. ELISA 완충액 (1:5000) 중의 양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP)-접합된 항-M13 항체를 첨가함으로써 결합을 정량화하고, 30 분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS-0.05％ 트윈 20으로 적어도 5회 세척하였다. 다음에, 웰 당 1:1 비율의 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘 (TMB) 퍼옥시다제 기질 및 퍼옥시다제 용액 B (H2O2) (키르케가르트-페리 래버러토리즈(KirkegaardPerry Laboratories), 메릴랜드주 게이터스버그 소재)를 100 ㎕ 웰에 첨가하고, 실온에서 5 분 동안 인큐베이션하였다. 각 웰에 1 M 인산 (H3PO4) 100 ㎕를 첨가하여 반응을 정지시키고, 실온에서 5 분 동안 인큐베이션하였다. 표준 ELISA 플레이트 판독기를 이용하여 450 nm에서 각 웰의 황색의 OD (광학 밀도)를 측정하였다. OD 감소율 (％)을 다음의 공식에 의해 계산하였다.OD450nm 감소율 (％) = [(경쟁자 존재 웰의 OD450nm) / (경쟁자 부재 웰의 OD450nm)] x 100모 파지 웰 (100％)에 대한 OD450nm 감소율 (％) 비교시, 인간 및 뮤린 표적 둘 모두에 대한 OD450nm 감소율 (％)이 50％보다 낮은 클론을 서열 분석을 위해 가려내었다. 파지 제조를 위해 특유의 클론을 선별하여 모 클론과 비교하는 것에 의해 인간 및 뮤린 PD-L-Fc 둘 모두에 대한 결합 친화성 (파지 IC50)을 측정하였다. 재료hPD-1-Fc, hPD-L1-Fc, hB7.1-Fc, mPD-1-Fc, mPD-L1-Fc, 및 mB7.1은 R0026#D 시스템즈에서 구입하였다. 종래의 기술을 이용하여 hPD-L1 발현 293 세포는 제넨테크에서 생성시켰다. F(ab')2 염소 항-인간 IgG Fc는 잭슨 이뮤노리서치 래버러터리스(Jackson ImmunoResearch Laboratories)에서 구입하였다.단백질의 접합PD-1-Fc, 및 B7.1-Fc 단백질을 EZ-연결 술포-NHS-LC-LC-비오틴 (피어스)으로 30 분 동안 실온에서 제조자의 설명에 따라 비오티닐화하였다. 과량의 비-반응 비오틴은 퀵 스핀 고용량 칼럼, G50-세파덱스 (로슈)로 제조자의 설명에 따라 제거하였다. F(ab')2 염소 항-인간 IgG Fc는 MSD 술포-태그 NHS-에스테르 (메조 스케일 디스커버리(Meso Scale Discovery))로 제조자의 설명에 따라 루테늄 표지하였고, 과량의 비-반응 술포-태그는 퀵 스핀 고용량 칼럼, G50-세파덱스로 제거하였다.파지 항체의 시험을 위한 ECL 세포 결합 검정hPD-L1 발현 293 세포에의 hPD-1-Fc 결합을 50％ 억제시키는 항체 농도 (IC50)를 전기화학발광 (ECL) 세포 결합 검정에 의해 측정하였다. hPD-L1 발현 293 세포를 인산염 완충 염수 (PBS)로 세척하고, 96 웰 고결합 플레이트 (메조 스케일 디스커버리) 상에서 25 ㎕ PBS 중에 웰당 25,000 세포로 시딩하였다. 플레이트를 실온에서 인큐베이션하여 세포가 플레이트의 탄소 표면에 부착되도록 하였다. 25 ㎕의 30％ FBS를 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 가볍게 진탕하면서 30 분 동안 인큐베이션하여 비특이적인 결합 부위를 차단시켰다. 플레이트를 부드러운 분배 및 흡인 조건하에서 ELISA 마이크로플레이트 세척기 (ELx405 셀렉트, 바이오-테크 인스트루먼츠(Bio-Tek Instruments)) 상에서 PBS로 3회 세척하였다. 플레이트를 페이퍼 타올 상에 블롯팅하여 웰에서 과량의 PBS를 제거하였다. 12.5 ㎕의 2배 농도의 항체를 PBS 중의 3％ FBS (검정 완충액) 중의 각 웰에 첨가한 후 12.5 ㎕의 4 ㎍/mL (2배 농도)의 검정 완충액 중의 hPD-1-비오틴을 첨가하고, 플레이트를 가볍게 교반하면서 1 시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 마이크로플레이트 세척기 상에서 PBS로 3회 세척하고, 플레이트를 페이퍼 타올 상에 블롯팅하였다. 25 ㎕의 2 ㎍/mL의 스트렙타비딘-루테늄 (메조 스케일 디스커버리)을 첨가하고, 검정 완충액 중 실온에서 30 분 동안 부드럽게 교반하면서 인큐베이션하였다. 마이크로플레이트 세척기 상에서 PBS로 3회 세척하고, 플레이트를 페이퍼 타올 상에 블롯팅하였다. 계면활성제를 함유하지 않는 150 ㎕의 1X MSD 판독 완충액 (메조 스케일 디스커버리)을 첨가하였다. 방출된 발광을 섹터 화상기 6000 판독기 (메조 스케일 디스커버리) 상에서 620 nm에서 판독하였다. ECL 값을 4개 파라미터 비선형 최소 제곱 적합을 이용하여 검정에 사용된 시험 항체의 농도에 의해 분석하여, 검정에서 각 경쟁자에 대한 IC50 값을 수득하였다. 결과 및 논의:인간 및 뮤린 PD-L1 둘 모두에 결합하는 YW243.55 유래의 15개의 독특한 파지 항체를 선별하고, 추가의 평가를 위해 전장 IgG1 항체로 재포맷하였다. 이들 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 영역 서열을 도 11A 및 B에 나타낸다.전기화학발광 (ECL) 세포 결합 검정을 통해 15개의 재포맷된 Ab가 인간 또는 마우스 PD-L1을 발현하는 293 세포에 대한 PD-1의 결합을 차단하는 능력을 시험하였다. (표 1 - 하반부: 표 1에서 "포맷 1"은 가용성 인간 PD-1-Fc의 인간 PD-L1-형질감염된 293 세포에의 결합을 나타내고; "포맷 2"는 뮤린 PD-1-Fc의 뮤린 PD-L1 형질감염된 293 세포에의 결합을 나타내고, "포맷 3"은 인간 PD-1의 뮤린 PD-L1-형질감염된 293 세포에의 결합을 나타낸다.) 15종의 모든 친화성 개선된 Ab가 마우스 PD-L1에 대해 상당한 교차 반응성을 획득하였지만, PD-1에의 인간 및 마우스 PD-L1 둘 모두의 결합을 차단하는 능력에 기초하여 YW243.55S70이 후속 1차 후보로 선별되었다 (표 1: 49 pM 및 22 pM 각각의 IC50 값).003c#표 1003e#실시예 2항-PD-L1 항체 (비아코어)의 특징규명비아코어™-3000 기기를 이용한 표면 플라즈몬 공명 (SRP)에 의해 재조합 인간 및 마우스 PD-L1에 대한 항-PD-L1 파지 항체 YW243.55 및 YW243.55S70의 결합 친화성을 측정하였다. 재조합 인간 PD-L1-Fc (R0026#D 시스템즈, cat # 156-B7) 및 재조합 마우스 PD-L1-Fc (R0026#D 시스템즈, cat# 1019-B7)를 CM5 바이오센서 칩 상에 직접 코팅하여 대략 500 반응 단위 (RU)를 달성하였다. 역학 측정을 위해, 2배 연속 희석물 (3.9 nm 내지 500 nm)을 25℃에서 30 ㎕/분의 유속으로 PBT 완충액 (0.05％ 트윈-20을 함유하는 PBS) 중에 주입하였다. 단순한 일대일 랭뮤어 결합 모델 (비아코어 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 사용하여 회합율 (kon) 및 해리율 (koff)을 계산하였다. 평형 해리 상수 (kD)는 koff/kon의 비로 계산하였다. 측정된 항-PD-L1 파지 항체 클론 YW243.55 및 YW243.55.S70의 결합 친화성을 하기 표 2에 나타내었다. 003c#표 2003e#실시예 3A인간, 레서스 및 마우스 PD-L1에 대한 항-PD-L1 Ab의 특이성 - FACS 및 방사성리간드 세포 결합 검정본 실시예는 본 발명의 항-PD-L1 항체의 인간, 레서스 및 마우스 PD-L1에 대한 특이성을 보여준다. 또한, 293-형질감염된 세포 상의 세포막에서 발현된 마우스 및 인간 PD-L1에 대한 Ab의 친화성을 보여준다. 인간 및 마우스 PD-L1로 293 세포를 안정적으로 형질감염시켰다. 세포를 수거하고, 결합 연구를 위해 96 웰 플레이트에 웰당 150,000 세포로 플레이팅하였다.레서스 혈액을 바이오메디칼 리서치(Biomedical Research; 텍사스주 샌 안토니오 소재)의 사우스웨스트 재단으로부터 수득하였다. 혈액을 동 부피의 PBS로 희석하고, 단핵 세포가 분리되도록 96％ 피콜-파크(Ficoll-Paque) (GE 헬스케어) 상에 덮어씌웠다. 적혈구 용해 완충액 (퀴아겐)을 이용하여 적혈구의 단핵 세포를 용해시키고, 6-웰 플레이트에서 5 ng/ml PMA 플러스 1 μM 이오노마이신과 함께 1.5 x 106 세포/ml로 밤새 배양하였다. 배양 배지는 10％ 태아 소 혈청, 20 μM HEPES, 및 깁코(Gibco) 사의 다음과 같은 보충물의 1:100 희석물: 글루타-맥스, 나트륨 피루베이트, 페니실린/스트렙토마이신, 및 비필수 아미노산을 함유하는 RPMI 1640이었다. 다음날 세포를 수거하고, 결합 연구를 위해 96 웰 플레이트에 분취하였다 (대략 웰당 120,000 세포).PD-L1 항체 YW243.55.S70 또는 헤르셉틴�� 항체 대조군은 10 ㎍/ml에서 시작하여 3배 연속 희석물 중에서 적정하고, 빙상에서 25 분 동안 50 ㎕ 부피의 세포에 결합시켰다. 세포를 세척한 다음 20 ㎍/ml의 항-인간 IgG PE (칼태그(Caltag))와 빙상에서 25 분 동안 결합시켰다. 레서스 세포를 또한 CD3 FITC 및 CD4 APC (BD 바이오사이언시즈(BD Biosciences))로 공동 염색하여 CD4+ T 세포를 구분하였다.모든 샘플을 베크만 딕킨슨 FACS칼리버(Beckman Dickinson FACSCalibur) 상에서 구동시키고, 항-PD-L1 항체 농도의 함수로서 PD-L1 결합 데이터의 평균 형광 강도를 트리 스타, 인크. 플로우조�� 소프트웨어(Tree Star, Inc. FlowJo�� software)를 사용하여 분석하였고; 칼레이다그래프를 이용하여 EC50 값 (최대 결합의 절반과 관련된 Ab 농도)을 계산하였다. 또한, 평형 결합 연구를 수행하여 293 세포 상에서 발현된 인간 및 마우스 PD-L1에 대한 YW24355S70 결합의 정확한 친화성 (Kd)을 규정하였다 (실시예 3B). 이들 값을 하기 표 3에 요약한다:003c#표 3003e#실시예 3B인간 및 마우스 PD-L1에 대한 항-PD-L1 Ab의 친화성 측정 - 평형 결합 방사성리간드 세포 결합 검정인간 또는 마우스 PD-L1에 의해 형질감염된 293 세포를 10％ 태아 소 혈청 (FBS), 2 mM L-글루타민, 1X 페니실린-스트렙토마이신이 보충된 RPMI 1640 배지로 이루어진 성장 배지에서 5％ CO2 중 37℃에서 배양하였다. 세포를 결합 완충액 (2％ FBS 및 50 mM Hepes를 함유하는 50:50 DMEM/F12, pH 7.2)으로 세척하고, 0.2 mL의 결합 완충액 중의 대략 230,000 세포로 96 웰 플레이트에 배치하였다. 요오도겐 방법을 이용하여 항-PD-L1 항체, YW243.55.S70.hIgG를 요오드화하였다. 방사성표지된 항-PD-L1 항체를 NAP-5 칼럼을 이용한 겔 여과에 의해 유리 125I-NA로부터 정제하였고; 정제된 Ab는 17.41 μCi/㎍의 특이적 활성을 가졌다. 고정된 농도의 요오드화 항체 및 감소하는 농도의 연속 희석된 비표지 항체를 함유하는 50 ㎕ 부피의 경쟁 반응 혼합물을 96 웰 플레이트에 배치하였다. 인간 PD-L1 및 뮤린 PD-L1을 발현하는 293 안정한 형질감염 세포주를 10％ 태아 소 혈청 (FBS), 2 mM L-글루타민, 1X 페니실린-스트렙토마이신이 보충된 50:50 DMEM/F12 배지로 이루어진 성장 배지에서 5％ CO2 중 37℃에서 배양하였다. 세포를 결합 완충액 (2％ FBS, 50 mM HEPES, pH 7.2, 및 2 mM 나트륨 아지드를 함유하는 50:50 DMEM/F12)으로 세척하였고, 0.2 mL의 결합 완충액 중의 대략 200,000 세포 밀도로 50 ㎕의 경쟁 반응 혼합물에 첨가하였다. 세포와의 각 경쟁 반응에서 요오드화된 항체의 최종 농도는 약 150 pM (0.25 mL 당 약 120,000 cpms)이었고, 세포와의 경쟁 반응에서 비표지된 항체의 최종 농도는 500 nM에서 출발하여 이어서 10 농도에 대해 2배씩 감소하는 것으로 달리하였다. 세포와의 경쟁 반응물을 실온에서 2 시간 동안 인큐베이션하였다. 비표지된 항체의 각 농도에 대한 세포와의 경쟁 반응을 3중으로 검정하였다. 인큐베이션 2 시간 후에, 경쟁 반응물을 밀리포어 멀티스크린 필터 플레이트로 옮기고, 결합 완충액으로 4회 세척하여, 유리물을 결합된 요오드화 항체로부터 분리시켰다. 필터를 왈락 위자드(Wallac Wizard) 1470 감마 계수기 (퍼킨엘머 라이프 앤드 어낼리티칼 사이언시즈 인크.(PerkinElmer Life and Analytical Sciences Inc.) 메사추세츠주 웰즐리 소재) 상에서 계수하였다. 결합 데이터를 먼슨(Munson) 및 로바드(Robard)의 적합 알고리즘을 이용하는 뉴리간드 소프트웨어 (제넨테크)를 이용하여 평가하여, 항체의 결합 친화성을 판단하였다. 문헌 [Musson et al., Anal. Biochem. 107: 220-39 (1980)].스캐차드 분석에 의해 판단된 Kd 값은 표 3에 나타낸 바와 같은 인간 및 마우스 PD-L1에 대한 항-PD-L1 항체 결합의 EC50 값을 제공하였다. 실시예 4항-PD-L1 Ab의 선택성 및 친화성 (IC50)본 실시예는 본 발명의 전장 항-PD-L1 항체의 PD-1 및 B7.1 둘 모두에 대한 PD-L1의 결합을 차단하는 능력을 평가하는데 사용된 결합 선택성 및 친화성 (IC50으로서) 검정을 보여준다.방법:hPD-L1-Fc ELISA에 대한 hB7.1-Fc-비오틴 및 hPD-1-Fc-비오틴 결합 (포맷 4):눈크 맥시소르프 384 웰 플레이트를 PBS 중의 25 ㎕의 250 ng/mL hPD-L1-Fc로 밤새 코팅하였다. 웰을 마이크로플레이트 세척기 상에서 PBS 중의 0.05％ 트윈 (세척 완충액)으로 3회 세척하고, PBS 중의 0.5％ BSA로 웰을 차단하였다. 2배 농도의 12.5 ㎕의 항체를 PBS 중의 0.05％ 트윈, 0.5％ BSA (검정 희석물) 중의 각 웰에 첨가한 다음, 검정 희석물 중의 12.5 ㎕의 250 ng/mL (2배 농도)의 hB7.1-Fc-비오틴을 첨가하고, 플레이트를 1 시간 30 분 동안 교반하면서 인큐베이션하였다. 웰을 세척 완충액으로 6회 세척하고, 25 ㎕의 스트렙타비딘-HRP (검정 희석물 중 1:40,000, GE 헬스케어)를 첨가하였다. 플레이트를 교반하면서 30 분 동안 인큐베이션하고, 웰을 세척 완충액으로 6회 세척하였다. 25 ㎕의 TMB 기질 (키르케가아드 앤드 페리 래버러터리즈)을 1 시간 동안 첨가하고, 25 ㎕의 1 M 인산으로 반응을 중지시켰다. 450 nm에서 흡광도를 판독하고, 실시예 1의 ECL 세포 결합 검정 이하에서 기재한 바와 같이 IC50 값을 분석하였다.포맷 5, 6, 7:hPD-L1-Fc에 대한 hPD-1-Fc-비오틴 결합 (포맷 5)의 경우, 결합에 hB7.1-Fc-비오틴 대신 hPD-1-Fc-비오틴을 사용한 것을 제외하고 포맷은 상기 검정과 유사하였다. TMB 기질 반응 시간은 17 분이었다. mPD-L1-Fc에 대한 mB7.1-Fc-비오틴 결합 (포맷 6)의 경우, hPD-L1-Fc 대신 mPD-L1-Fc를 사용하여 플레이트를 코팅하고, 결합에 hB7.1-Fc-비오틴 대신 mB7.1-Fc-비오틴을 사용한 것을 제외하고 포맷은 포맷 5와 유사하였다. TMB 기질 반응 시간은 7 분이었다. mPD-L1-Fc에 대한 mPD-1-Fc-비오틴 결합 (포맷 7)의 경우, 결합에 mB7.1-Fc-비오틴 대신 mPD-1-Fc-비오틴을 사용한 것을 제외하고 포맷은 상기 언급한 마우스 ELISA와 유사하였다. TMB 기질 반응 시간은 5 분이었다. 결과:지정된 결합 쌍 사이의 상호작용을 차단하는 것에 대한 친화성 성숙된 파지 항-PD-L1 항체 YW243.55.S70의 IC50 평가치를 표 4에 나타낸다. YW243.55S70은 PD-L1/PD-1 상호작용을 차단하는 그의 IC50 값 (42 pM)과 비교적 비슷한 농도인 38 pM의 최대 억제 농도의 절반으로 인간 PD-L1이 hB7.1 Fc에 결합하는 것을 차단할 수 있었다. PD-L1의 PD-1 및 B7.1와의 상호작용을 둘 모두 차단하는 YW243.55S70의 능력을 측정한 비아코어 연구는 이러한 ELISA 결과와 일치하였다 (데이터는 나타내지 않음).003c#표 4003e#실시예 5항-PD-L1 항체 YW243.55.S70에 의한 시험관내 CD4+ 및 CD8+ T 세포 활성의 향상PMEL/B16 시험관내 검정본 실시예는 멜라닌세포 펩티드, gp100에 반응한 γ-IFN 생산의 향상에 의해 측정되는, PMEL T 세포 수용체 트랜스제닉 CD8+ T 세포의 활성화에 대한 본 발명의 항-PD-L1 항체의 효과를 보여준다. 이 절차에서, CD8+ T 세포는 CD8+ T 세포가 gp100 펩티드에 대해 특이적인 TCR을 발현하는 PMEL TCR 트랜스제닉 마우스에서 수득하였다. CD8+ T 세포를 정제한 후에, 여러 라운드의 자극을 주어 활성화된 CD8+ T 세포를 생성 및 확장시켰고, 이는 이어서 PD-1 발현을 상향조절할 것이다. 동시에, B16 흑색종 세포를 IFN-γ로 처리하여 그의 PD-L1 발현을 상향조절하였다. 이어서, 세포를 항-PD-L1 항체의 존재하에서 공동 배양하고, IFN-γ 생산에 대한 효과를 평가하였다. B16 세포가 낮은 수준의 gp100 펩티드를 내생적으로 발현하므로 (펩티드의 외인성 적용과 대조됨) 3차 자극을 위해 B16 세포를 선택하였다. 또한, 이들 세포는 PD-L2, B7.1 또는 B7.2를 발현하지 않으므로, PD-L1과 관련이 없는 부가적인 신호전달 (예를 들어 CD28 또는 CTLA-4를 통한 신호전달 또는 PD-1을 통해 PD-L2 유도된 신호전달)의 효과가 최소화되었다. PMEL 검정:도 3에 나타낸 바와 같이, 항-PD-L1 항체는 IFN-γ-생산 PMEL CD8+ T 세포의 백분율 및 지정된 양의 gp100 펩티드에 반응하여 생산되는 IFN-γ의 평균 수준을 둘 모두 향상시켰다.D.011.10 시험관내 검정:Ova-특이적 TCR Tg CD4+ T 세포를 이용한 유사한 검정은 PD-1의 발현을 유도하기 위한 Ova 펩티드에 의한 이전 자극에 따라 항-PD-L1 Ab의 존재하에서 향상된 T 세포 증식을 보여주었다 (도 4). 마지막 자극에서, PD-L1을 발현하는 조사된 A20 B 세포를 사용하여 DO.11.10 T 세포에 지정된 농도의 Ova 펩티드를 제공하였다. 특히, PD-1/PD-L1 축의 기여는 생리학적으로 적절한 크기의 자극을 보다 근접하게 반영한 수준인 보다 낮은 정도의 항원 수용체 자극에서 더욱 두드러졌다. 재료 및 방법:PMEL 검정최초 자극 (제 0 일 - 제 4 일)PMEL 트랜스제닉 T 세포 수용체 마우스로부터 비장 및 장간막 림프절을 수거하였다. 장기를 단세포 현탁액으로 분쇄하고, 적혈구를 용해시켰다. CD8+ T 세포 단리 키트 및 AutoMACS 세포 분리기 (밀테니 바이오텍(Miltenyi Biotec))를 이용하여 제조사의 지침에 따라 CD8+ T 세포를 단리하였다. 비-트랜스제닉 성-매칭된 마우스로부터 비장을 단리하고, 이를 단세포 현탁액으로 분쇄하고 적혈구를 용해시켰다. 세포를 0.1 ㎍/ml의 gp100-펩티드로 37℃에서 2 시간 동안 펄싱하고 세척하였다. 세포를 96 웰 편평 바닥 플레이트에서 200,000 PMEL CD8+ T 세포 및 75,000 gp100-펄싱된 비장세포와 함께 4 일 동안 공동배양하였다. 배양 배지는 이소코브의 변형된 둘베코 배지 + 10％ 태아 소 혈청 + 20 μM HEPES, 및 깁코의 다음과 같은 보충물의 1:100 희석물이었다: 글루타-맥스, 나트륨 피루베이트, 페니실린/스트렙토마이신, 및 비필수 아미노산.2차 자극 (제 4 일 - 제 7 일)PMEL 배양을 스핀 다운시키고, 다중 채널 피펫을 이용하여 배지를 흡출하였다. 새로운 배지를 첨가 및 혼합하여 세포를 세척한 후, 또 다시 스핀시켰다. 대부분의 배지를 제거하고, 항체 (헤르셉틴��, YW243.55.S70, 또는 아무것도 없음)를 10 ㎍/ml의 최종 농도로 첨가하였다. 종점에 평균 IFN-γ 생산을 평가할 수 있도록 조건을 2중 웰에서 설정하였다.DC-1 세포를 0.1 ㎍/ml gp100 펩티드로 2 시간 동안 37℃에서 펄싱하고 세척하였다. Gp100-펄싱된 DC-1 세포를 세척된 PMEL 배양물에 40,000 세포/웰로 첨가하였다. PMEL 및 DC-1 + 항체를 3 일 동안 공동배양하였다. 3차 자극 (제 7 일 - 제 8 일)3차 자극 하루 전인 제 6 일에, B16 흑색종 세포를 20 ng/ml 마우스 IFN-γ (R0026#D 시스템즈)와 밤새 인큐베이션하여 그의 PD-L1 발현을 상향조절시켰다. 제 7 일에, PMEL 배양을 스핀 다운시키고, 다중 채널 피펫을 이용하여 배지를 흡출하였다. 새로운 배지를 첨가하고 혼합한 후, 다시 스핀시켰다. 대부분의 배지를 제거하고, 항체를 10 ㎍/ml의 최종 농도로 첨가하였다.IFN-γ로 밤새 자극한 후, B16 세포를 세척하고, 3 그룹으로 나누어, gp100 없이, 1 ng/ml의 gp100와 함께 (저 gp100), 및 10 ng/ml의 gp100와 함께 (고 gp100) 2 시간 인큐베이션하였다. 세포를 세척한 다음 세척된 PMEL + Ab 배양물에 웰당 40,000 세포로 첨가하고, 밤새 함께 인큐베이션하였다. 제 8 일 IFN-γ 세포내 염색제조사의 지침에 따라 배양의 마지막 5 시간 동안 골지-플러그(Golgi-Plug) (BD 바이오사이언시즈)를 첨가하였다. IFN-γ 세포내 염색은 BD 바이오사이언시즈 시토픽스/시토펌(Cytofix/Cytoperm) 고정/투과 용액 키트를 제조사의 지침에 따라 사용하여 행하였고, 모든 염색 항체는 또한 BD 바이오사이언시즈로부터의 것이다. 세포를 CD8a PE 및 Thy1.1 FITC로 표면 염색하고, 포화 농도의 IFN-γ APC로 세포내 염색하였다.모든 샘플을 베크만 딕킨슨 FACS칼리버 상에서 구동시켰고, 데이터는 트리 스타, 인크. 플로우조™ 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. D011.10 시험관내 검정DO11.10 트랜스제닉 마우스로부터 비장 및 장간막 림프절을 수거하고, 단세포 현탁액으로 분쇄하고, 적혈구를 용해하였다. 세포를 Ova 펩티드를 0.3 μM 함유하는 6 웰 플레이트에서 ml 당 1 x 106의 세포 밀도로 72 시간 동안 배양하였다. 배양 배지는 RPMI 1640 + 10％ 태아 소 혈청 + 20 μM HEPES, 및 깁코의 다음과 같은 보충물의 1:100 희석물이었다: 글루타-맥스, 나트륨 피루베이트, 페니실린/스트렙토마이신, 및 비필수 아미노산.최초 자극 후에, 세포를 수거하고 마우스 CD4 T 세포 정제 키트를 사용하여 제조사의 지침 (밀테니 바이오텍)에 따라 CD4+ T 세포를 정제하였다. 이어서, 정제된 CD4+ T 세포는 밤새 휴지 상태로 있었다. 다음날, 세포를 수거하고, 세척하고, 조사된 (10,000 라드) A20 세포와 공동 배양하였다. 공동 배양은 20 ㎍/ml의 최종 농도로 Ova 펩티드 및 항체로 적정한 50,000 CD4+ T 세포 대 40,000 A20 세포를 함유하는 96 웰 U자 바닥 플레이트에서 3중 웰로 설정하였다. 48 시간 후에, 배양물을 3H-티미딘 1 μCi/웰로 밤새 펄싱하고, 다음날 동결시켰다. 이후에 플레이트를 해동시키고, 세포 수거기 상에서 수거하고, 베타-계수기 상에서 판독하였다. 실시예 6항-PD-L1에 의한 혼합 림프구 반응에서의 인간 CD8+ T 세포의 향상된 증식도 5는 항-PD-L1 (예를 들어, YW243.55.S1)이 MHC-미스매칭된 공여자로부터의 세포에 반응하여 인간 CD8 T 세포의 증식을 향상시키는 능력을 보여준다. CD8+ T 세포 반응은 CD8+ T 세포 로세테셉(RosetteSep)�� (스템셀 테크놀로지스(StemCell Technologies))을 제조사의 지침에 따라 처음 사용하는 것에 의해 공여자 A의 전혈로부터 강화되었다. 이어서, 세포를 동 부피의 인산염 완충 염수 (PBS)로 희석시키고, 구배 원심분리에 의해 피콜-파큐 플러스 (GE 헬스케어) 상에 덮어씌워 분리하였다. 분리 이후에, 세포를 CD8 APC (BD 바이오사이언시즈)로 염색하고, 78％ CD8+ T 세포임을 확인하였다. 세포를 2.5 μM CFSE 트레이서 염료 (몰레큘라 프로브스)로 형광 표지하였다.동종이형 항원 제시 세포 (APC)로서 제공하기 위해, 먼저 공여자 B의 전혈로부터 단핵 세포를 단리해낸 후, CD3+T 세포를 고갈시켰다. 혈액을 동 부피의 PBS로 희석시키고, 피콜 상에서의 구배 원심분리 이후에 단핵 세포를 단리하였다. 세포를 CD3 FITC (BD 바이오사이언시즈)로 염색하고, 세척하고, 이어서 항-FITC 마이크로비드 (밀테니 바이오텍)와 함께 인큐베이션하였다. 이어서 CD3 FITC 양성 세포를 AutoMACS 세포 분리기 (밀테니 바이오텍) 상에서 고갈시켰다. 이어서 세슘 조사기 내에서 세포를 2500 라드로 조사하였다.세포를 96 웰 편평 바닥 플레이트 내에서 150,000 CD8+ T 세포 및 150,000 APC와 5 일 동안 10 ㎍/ml의 항체와 함께 공동 배양하였다. 배양 배지는 RPMI 1640 + 10％ 태아 소 혈청 + 20 μM HEPES, 및 깁코의 다음과 같은 보충물의 1:100 희석물이었다: 글루타-맥스, 나트륨 피루베이트, 페니실린/스트렙토마이신, 및 비필수 아미노산.제 5 일에, 세포를 수거하고, 세척하고, CD8-비오틴에 이어 스트렙타비딘-PerCp (BD 바이오사이언시즈)로 염색하였다. 샘플을 베크만 딕킨슨 FACS칼리버 상에 구동시키고, 데이터를 트리 스타, 인크. 플로우조 소프트웨어를 사용하여 분석하였다.항-PD-L1의 존재하에서, MHC-미스매칭된 공여자로부터의 세포에 반응하여 CD8 T 세포의 증식이 대략 45％ 향상된 것으로 관찰되었다.실시예 7생체내 모델에서 LCMV에 대한 PD-L1 차단 효과만성 자극 조건하에서의 T 세포는 억제 수용체 PD-1의 발현을 상향조절하고 지속시키는 것으로 나타났다. 2종의 리간드 PD-L1 및 PD-L2 중 어느 하나에 의한 PD-1의 라이게이션은 만성적으로 활성화된 T 세포를 불응 상태로 만들어, 그의 동족 항원에 대한 반응을 약화시킨다. 림프구성 맥락수막염 바이러스 (LCMV)에 의해 지속적으로 감염된 마우스에서, PD-1 또는 그의 리간드 PD-L1의 차단은 만성적 불응성 T 세포를 소생시켜 항바이러스 T 세포 반응의 크기 및 기능 품질을 향상시키는데 충분하다. 유사하게, HIV 또는 HCV에 의해 만성적으로 감염된 인간은 PD-1 또는 PD-L1의 차단에 의해 시험관내에서 활성이 향상될 수 있는 자극에 대해 T 세포 불응성을 나타낸다. 따라서, LCMV 모델에서의 PD-L1 차단의 활성은 항바이러스 및 항종양 면역을 향상시키는데 대한 치료적 잠재력을 시사한다.마우스에서의 LCMV 생체내 실험을 위해, 본 발명자들은 마우스 IgG2a 중쇄 및 마우스 카파 경쇄 불변 도메인 상류의 파지 유래 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 클로닝하여 인간화 항-PD-L1 항체 (YW243.55S70)를 재포맷하였다. Fcγ 수용체 결합을 억제하는 것에 의해 PD-L1 발현 세포의 항체-매개 세포독성을 방지하기 위해, 위치 265 (아스파르트산) 및 297 (아스파라긴)을 알라닌 (DANA)으로 변화시켰다. 문헌 [Shields, RL et al., J. Biol Chem 2001 276 (9): 6591-6604]. 항-PD-L1 항체가 만성 감염에서 항바이러스성 면역을 향상시키는 능력을 시험하기 위해, 마우스를 제 0 일에 참조 대조군으로서 클론 13 LCMV 또는 LCMV의 암스트롱 균주의 2 x 106 플라크 형성 단위 (pfu)로 감염시켰다. 실험 설계의 개략도는 도 6에 나타내었다. 클론 13에 의한 감염은 확장되지만 바이러스를 효과적으로 제거할 수 없는 T 세포를 특징으로 하는 만성 감염을 야기한 반면, 암스트롱 LCMV는 감염 8-10 일 이내에 제거되었다. 제 14 일에, 마우스에 항-PD-L1 또는 대조군 mIgG를 10 mg/kg 용량으로 주 3회 전달하여 치료를 개시하였다. 제 21 일 및 제 28 일에, CD8 T 세포 기능 및 혈액 및 조직 중의 바이러스 역가를 분석하였다.문헌 [Barber et al., Nature 439:682-7 (2006)]에서 공개된 데이터와 일치하게, 본 실시예는 만성 LCMV 감염에서의 2 주 치료 섭생에 따라 LCMV에 대한 세포독성 림프구 반응을 향상시키는 항-PD-L1 Ab 능력을 보여준다. 도 7A는 gp33 LCMV-특이적 펩티드에 반응하여 세포 표면에 CD107a를 발현하는 CD8 T 세포의 ％를 보여준다. 정상적으로는 세포내에서 발현되는 CD107a의 원형질막 발현은 탈과립화 과정에 따른 것으로, 따라서 탈과립화에 대한 대용물 마커의 역할을 한다. 급성 암스트롱 LCMV 감염으로부터의 세포의 반응과 관련하여, 만성 균주, 클론 13에 의해 감염된 동물로부터의 세포는 탈과립화가 손상된 반면 (대조군 Ig 그룹), PD-L1 차단은 CD8+ 탈과립화를 암스트롱 감염에서 관찰되는 것과 비교가능한 수준으로 회복시킬 수 있었다. 유사하게, 7B는 대조군 Ig와 비교하여, 항-PD-L1-처리된 그룹에서 LCMV gp33에 반응하여 IFN-γ-생산 CD8 T 세포가 증가된 ％를 보여준다.다음으로, 혈액 및 조직에서 LCMV 바이러스를 감소시키거나 근절하는 것에 대한 항-PD-L1 Ab의 영향을 시험하였다. 도 8A에서, 그래프는 클론 13 LCMV에 의해 감염된 후 제 21 일 및 제 28 일에 대조군 Ig 및 PD-L1 처리된 마우스의 표시된 조직에서의 로그 바이러스 역가를 보여준다. 항체 처리는 감염 후 제 14 일에 시작하였다. PD-L1의 차단은 혈액, 간, 뇌, 폐 및 신장에서 바이러스 역가를 매우 현저하게 감소시켰다. 인상적으로, 5 마리의 마우스 중 3 마리에서 α-PD-L1 Ab는 혈액 LCMV 역가를 검출 수준 미만 (003c# 1 x 10-5)으로 감소시켰다. 비교 설계의 후속 실험에서는, 항-PD-L1로 10 mg/kg 또는 2 mg/kg의 용량으로 주 3회 2 주 동안 처리된 5/5 마우스의 혈액 및 간에서 바이러스의 근절이 관찰되었다 (데이터는 나타내지 않음). 하단 그래프는 혈액에서의 바이러스 역가의 감소 역학을 나타낸 것으로, 대조군에 비해 항-PD-L1 처리된 그룹에서 제 28 일에 평균 감소율이 96.8％임을 보여준다. 이러한 데이터는 만성 감염에서 T 세포 반응을 억제하는데 있어서 PD-1/PD-L1 경로의 중요성을 지지하며, 만성 감염, 예컨대 C형 간염 및 HIV 인간으로부터 수득한 T 세포에 대한 시험관내 PD-L1 차단의 효과와 일치한다.재료 및 방법:LCMV gp33 펩티드에 반응하여 CD8 T 세포에 의한 IFN-감마 생산 ％ 측정감염된 마우스로부터 비장을 단리하고, 완전 배지: 10％ 열 불활성화된 태아 소 혈청, 2 mM L-글루타민, 100 U/ml 페니실린/스트렙토마이신 및 10 mM 2-메르캅토에탄올을 함유하는 IMDM (인비트로겐 인크., 캘리포니아주 칼스배드 소재)에서 장기를 분쇄하여 단세포 현탁액을 생성하였다. ACK 용해 완충액 (0.15 M NH4Cl, 10 mM KHCO3, 0.1 mM EDTA)을 이용하여 적혈구를 용해시켰다. 항원 특이적 CD8 T 세포 반응을 측정하기 위해, 비장세포를 완전 배지에서 세척하고, 시험관 내에서 LCMV 펩티드 GP33 (KAVYNFATC, 프로이뮨 인크., 플로리다주 브라덴톤 소재)으로 4 시간 동안 재자극하였다. 1 x 106 비장세포를 96 웰 편평 바닥 플레이트에서 100 ng/ml의 GP33 펩티드와 함께 100 단위/ml의 인간 인터류킨-2 (시그마-알드리치, 미주리주 세인트 루이스 소재), 1 ㎕/ml의 브레펠딘 A 및 1 ㎕/ml (1:1000 희석물)의 모넨신 (BD 파밍겐) 및 항-CD107a FITC (클론 ID4B, BD 바이오사이언시즈, 캘리포니아주 산 호세 소재)의 존재하에 배양하였다. 인큐베이션 후에, 세포를 2％ 태아 소 혈청을 함유하는 PBS에서 1회 세척하고, 세포 표면 마커를 형광색소 접합된 항체: 항-CD8 APC (클론 53.67, BD 바이오사이언시즈, 캘리포니아주 산 호세 소재) 항-CD4 PerCp-Cy5.5 (클론 RM4-5, BD 바이오사이언시즈, 캘리포니아주 산 호세 소재) 및 항-PD-1 PE (클론 J43, BD 바이오사이언시즈, 캘리포니아주 산 호세 소재)를 이용하여 염색하였다. 세포내 IFN-γ의 염색은 항-IFN-γ PE-Cy7 (클론 XMG1.2, 이바이오사이언스 인크., 캘리포니아주 산 호세 소재)을 이용하여 제조사의 지침에 따라 시토픽스 시토펌 플러스 키트 (BD 바이오사이언시즈, 캘리포니아주 산 호세 소재)를 이용하여 행하였다. GP33 특이적인 CD8 T 세포의 개수를 검출하기 위해, 새로운 비장세포를 제조사의 지침에 따라 GP33 오량체 (APC에 연결된 H2-Db, 프로이뮨 인크., 플로리다주 브라덴톤 소재)를 이용하여 염색하였다. BD FACS아리아 (BD 바이오사이언시즈, 캘리포니아주 산 호세 소재)를 이용하여 데이터를 수집하고, 플로우조 소프트웨어 (트리 스타, 인크., 오리건주 애쉬랜드 소재)를 이용하여 분석하였다.LCMV 바이러스 역가의 측정:MC57 섬유육종 세포를 완전 IMDM 중의 LCMV-함유 혈액 또는 조직 균질물의 10배 연속 희석물로 감염시켰다. 이어서, 반응물을 조직 배양 인큐베이터 내에서 37℃에서 2-6 시간 동안 인큐베이션한 다음, 1％ 메틸셀룰로스를 함유하는 DMEM로 덮어씌웠다. 이어서 3-5 일 동안 인큐베이션한 다음, 메틸셀룰로스 층을 흡인하여 제거하였다. 세포를 PBS/4％ 파라포름알데히드로 고정시킨 다음, 0.5％ 트리톤-x로 20 분 동안 투과성으로 만들고, PBS 중에서 세척한 후, 10％ FCS 중에서 1 시간 동안 가볍게 진동시키면서 차단하였다. LCMV에 대한 염색은 VL4 항체 (1 시간)로 행하고, 2회 세척한 다음, 차단 완충액 중에서 항-래트 HRP (1:400)로 발색시켰다. 이어서, 3회 세척한 다음, o-페닐렌디아민 기질 (시그마 P8806-50TAB 3 mg/정제)을 웰에 첨가하여 발색시켰다.실시예 8암에서의 PD-L1 차단현재 많은 종양들이 항종양 T 세포 반응을 약화시키기 위한 수단으로서 PD-1 리간드의 발현을 이용한다는 것은 분명하다. 몇몇 인간 암은 종양 및 종양-침윤 백혈구 둘 모두에서 상승된 수준의 PD-L1을 발현하는 것을 특징으로 하며, 이렇게 상승된 PD-L1 발현은 종종 더 나쁜 예후와 관련이 있다. 마우스 종양 모델은 종양 내에서 유사한 PD-L1 발현의 증가를 보였고, 이는 종양 면역을 억제하는데 있어서 PD-1/PD-L1 경로의 역할을 보여준다.본 발명자들은 본원에서, 동계 C57B6 마우스에서 MC38.Ova 뮤린 결장직장 암종 세포의 정위적 종양 성장에 대한 PD-L1 차단의 영향을 보여주는 실험을 제시한다 (도 9A). 이들 세포는 레트로바이러스 형질도입을 통해 오브알부민을 발현하고, PD-L1을 발현하지만, 유동세포계수법에 의한 측정시 그의 세포 표면에서 PD-L2는 발현하지 않는다 (히스토그램 - 도 10A). 마우스에 50 만개의 MC38.Ova 세포를 제 0 일에 피하 접종하였다. 제 1 일 또는 제 14 일 마우스 (종양의 평균 크기가 250 mm3에 달한 경우)에 10 마우스/그룹으로 10 mg/kg 항-PD-L1 (YW243.55S70-마우스 IgG2a-DANA), 대조군 Ig, 또는 차단 항-CTLA4 Ab, (UC10-4F10-11)를 연구 기간 동안 주 3회 처리하였다. 개입 초기 또는 이후의 PD-L1의 차단은 종양 성장을 방지하는 단일 작용제 요법으로서 매우 효과적이었다. 대조적으로, T 세포 상에서 발현되는 또 다른 억제 분자인 CTLA4의 차단은 종양 성장 억제에 대한 어떤 증거도 보이지 않았다. 이러한 결과는 항종양 면역 반응을 억제하는데 있어서 CTLA4/B7에 비해 PD-1/PD-L1 축의 특유한 역할을 보여주며, PD-1 및 B7.1과의 PD-L1 상호작용을 차단하는 항체에 의해 인간 암을 치료하는 잠재력을 지지한다. MC38.Ova 동계 종양 모델: 방법. 제 0 일에, 70 마리의 동물에 100 ㎕ HBSS+마트리겔 중의 50 만개의 MC38.Ova 세포를 피하 접종하였다. D1 착수시점에, 20 마리의 마우스를 2 처리 그룹 (하기 참조: 그룹 1 또는 그룹 2) 중 하나로 구성하였다. 남아있는 40 마리의 마우스는 제 14 일까지 종양이 성장하도록 두었다. 이들 40 마리 중, 종양 크기가 유사한 30 마리의 마우스를 3 처리 그룹 (그룹 3-5) 중 하나로 구성하였다. 종양을 측정하고, 주 2회 마우스의 체중을 재었다. 종양 부피가 달라 하기 처리 그룹에 속하지 못한 마우스는 안락사시켰다:그룹 1: 항-gp120 항체, 10 mg/kg IP, 100 ㎕, D1, 3x/주그룹 2: 항-PD-L1 항체, 10 mg/kg IP, 100 ㎕, D1, 3x/주그룹 3: 항-gp120 항체, 10 mg/kg IP, 100 ㎕, D14, 3x/주그룹 4: 항-PD-L1 항체, 10 mg/kg IP, 100 ㎕, D14, 3x/주그룹 5: 항-CTLA-4 항체, 10 mg/kg IP, 100 ㎕, D14, 3x/주*** 그룹 1 및 2는 D1에 투약하기 시작했고; 그룹 3, 4, 및 5는 D14에 투약하기 시작했다.실시예 9항-PD-L1과 항종양 효과를 제공하는 다른 작용제 또는 면역 향상 요법과의 조합 - MC38.Ova 모델제 0 일에, 150 마리의 동물에 100 ㎕ HBSS + 마트리겔 중의 50 만개의 MC38.Ova 세포를 피하 접종하였다. 마우스를 종양이 성장하도록 두었다. 마우스의 체중을 재고, 제 11 일 (종양 부피가 100-200 mm3인 때)까지 주 2회 측정하였다. 제 11 일에, 종양을 측정한 후, 마우스를 하기 12 처리 그룹 중 하나로 구성하였다. 종양 부피가 달라 하기 처리 그룹에 속하지 못한 마우스는 안락사시켰다. 겜시타빈 (그룹 4) 처리는 제 12 일에 시작하였고, 그 밖의 항체 그룹으로의 처리는 제 14 일에 시작하였다. 모든 부피는 불활성 비히클 중 100 ㎕였고, 부가적인 상세사항은 하기에 나타낸 바와 같다:그룹 1: 항-gp120 항체, 10 mg/kg IP, 100 ㎕, 3x/주 x 5, n=10그룹 2: 항-PD-L1 항체, 10 mg/kg IP, 100 ㎕, 3x/주 x 5, n=10그룹 3: 항-VEGF 항체, 5 mg/kg IP, 100 ㎕, 2x/주 x 5, n=10그룹 4: 겜시타빈, 40 mg/kg IP, 100 ㎕, 12, 16, 20 일, n=10그룹 5: 항-PD-L1 항체 + 항-gp120 항체, n=10그룹 6: 항-PD-L1 항체 + 항-VEGF 항체, n=10그룹 7: 항-PD-L1 항체 + 겜시타빈, n=10그룹 8: 항-gp120 항체 + 겜시타빈, n=10그룹 9: 항-gp120 항체 + 항-VEGF, n=10제 12 일: CBC 분석을 위해 그룹 1의 마우스를 마취상태 하에서 안와후방으로 채혈하였다 (100 ㎕).제 14 일 및 제 22 일: CBC 분석을 위해 그룹 4의 마우스를 마취상태 하에서 안와후방으로 채혈하였다 (100 ㎕).제 19 일: CBC 분석을 위해 그룹 4를 제외한 모든 마우스를 마취상태 하에서 안와후방으로 채혈하였다 (100 ㎕).제 26 일: PK 분석을 위해 그룹 4를 제외한 모든 마우스를 마취상태 하에서 안와후방으로 채혈하였다 (100 ㎕).종양을 측정하고, 주 2회 마우스의 체중을 재었다. 15％ 초과의 체중 감소를 보이는 동물은 매일 체중을 재고, 체중이 20％를 초과하여 감소되면 안락사시킬 것이다. 종양 부피가 3,000 mm3을 초과하거나, 또는 종양이 형성되지 않을 경우에는 3 개월 후에 마우스를 안락사시킬 것이다.본 연구는 PD-L1 차단이 α-VEGF 및 겜시타빈 단독의 유도 섭생에 비해 더 효과적임을 보여주었다 (도 10).실시예 10포유동물 세포에서 항-PD-L1 항체의 발현본 실시예는 포유동물 세포에서 재조합 발현에 의해 잠재적으로 글리코실화된 형태의 항-PD-L1 항체를 제조하는 것을 설명한다. 벡터 pRK5 (1989년 3월 15일자로 공개된 EP 307,247 참조)를 발현 벡터로 사용하였다. 임의로, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄를 코딩하는 DNA를, 문헌 [Sambrook et al., 상기 문헌]에 기재된 바와 같은 라이게이션 방법을 이용하여 상기 DNA의 삽입을 허용하도록 선택된 제한 효소가 존재하는 pRK5 내로 라이게이션하였다. 한 실시양태에서, 선택된 숙주 세포는 293 세포일 수 있다. 인간 293 세포 (ATCC CCL 1573)를 조직 배양 플레이트에서 태아 송아지 혈청이 보충되고 임의로는 영양소 성분 및/또는 항생제가 보충된 DMEM과 같은 배지 중에서 전면성장시까지 성장시켰다. pRK5-항체를 코딩하는 DNA 약 10 ㎍을 VA RNA 유전자를 코딩하는 DNA 약 1 ㎍과 혼합하고 (문헌 [Thimmappaya et al., Cell, 31:543 (1982)]), 500 ㎕의 1 mM 트리스-HCl, 0.1 mM EDTA, 0.227 M CaCl2에 용해시켰다. 상기 혼합물에 50 mM HEPES (pH 7.35), 280 mM NaCl, 1.5 mM NaPO4 500 ㎕를 적가하고, 25℃에서 10 분 동안 침전물이 형성되게 하였다. 상기 침전물을 현탁시키고 293 세포에 첨가하여 약 4 시간 동안 37℃에서 침강되게 하였다. 배양 배지를 흡출하고, PBS 중 20％ 글리세롤 2 mL를 30 초 동안 첨가하였다. 이어서, 293 세포를 혈청-무함유 배지로 세척하고, 신선한 배지를 첨가하고, 세포를 약 5 일 동안 인큐베이션하였다. 형질감염 후 대략 24시간이 지난 후에 상기 배양 배지를 제거하고, 배양 배지 (단독) 또는 200 μCi/mL 35S-시스테인 및 200 μCi/mL 35S-메티오닌을 함유하는 배양 배지로 교체하였다. 12시간 동안 인큐베이션한 후, 조건화 배지를 수집하여 회전 필터에서 농축시키고 15％ SDS 겔에 로딩하였다. 처리된 겔을 건조시키고, 항체의 존재를 밝히기 위해 선택된 시간 동안 필름에 노출시킬 수 있다. 형질감염된 세포를 함유하는 배양물을 추가로 인큐베이션할 수 있었고 (혈청-무함유 배지 중에서), 상기 배지를 선택된 생물검정으로 시험하였다. 별법적인 기술로, 문헌 [Somparyrac et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 12:7575 (1981)]에 기재되어 있는 덱스트란 술페이트 방법을 이용하여 항체를 293 세포 내에 일시적으로 도입할 수 있다. 293 세포를 스피너 플라스크 내에서 최대 밀도로 성장시키고, pRK5-항체를 코딩하는 700 ㎍ DNA를 첨가하였다. 세포를 원심분리에 의해 스피너 플라스크로부터 우선 농축하고 PBS로 세척하였다. DNA-덱스트란 침전물을 4시간 동안 세포 펠렛상에서 인큐베이션하였다. 세포를 20％ 글리세롤로 90초 동안 처리하고, 조직 배양 배지로 세척하고, 조직 배양 배지, 5 ㎍/mL 소 인슐린 및 0.1 ㎍/mL 소 트랜스페린을 함유하는 스피너 플라스크에 다시 도입하였다. 약 4일 후, 조건화 배지를 원심분리하고 여과하여 세포 및 잔해를 제거하였다. 이어서, 발현된 항체를 함유하는 샘플을 농축하고 투석 및/또는 칼럼 크로마토그래피와 같은 임의의 선택된 방법으로 정제할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 CHO 세포에서 발현될 수 있다. pRK5 내로 라이게이션된 항체를 코딩하는 DNA는 CaPO4 또는 DEAE-덱스트란과 같은 공지의 시약을 사용하여 CHO 세포를 형질감염시킬 수 있다. 상기 기재된 바와 같이, 세포 배양물을 인큐베이션하고, 배지를 배양 배지 (단독) 또는 35S-메티오닌과 같은 방사능표지를 함유하는 배지로 교체할 수 있었다. 항체의 존재를 결정한 후에, 배양 배지를 무혈청 배지로 교체할 수 있다. 바람직하게는, 상기 배양물을 약 6일 동안 인큐베이션한 후에 조건화 배지를 수거하였다. 이어서, 발현된 항체를 함유하는 배지를 임의의 선택된 방법으로 농축하고 정제할 수 있었다. 항체의 에피토프-태그가 부착된 변이체도 숙주 CHO 세포에서 발현될 수 있다. pRK5 내로 라이게이션된 항체를 코딩하는 DNA는 pRK5 벡터로부터 서브클로닝될 수 있다. 상기 서브클론 삽입물로 PCR을 수행하여 바큘로바이러스 발현 벡터에 선택된 에피토프 태그, 예컨대 폴리-his 태그와 인-프레임으로 융합시킬 수 있었다. 이어서, 항체 삽입물을 코딩하는 폴리-his 태그가 부착된 DNA는 안정한 클론의 선택을 위해 선별 마커, 예를 들어 DHFR을 함유하는 SV40 유도 벡터 내로 서브클로닝될 수 있다. 마지막으로, CHO 세포를 (상기 기재된 바와 같이) SV40 구동 벡터로 형질감염시킬 수 있었다. 상기 기재된 바와 같이 표지하여 발현을 입증할 수 있었다. 이어서, 발현된 폴리-His 태그가 부착된 항체를 함유하는 배양 배지를 임의의 선택된 방법, 예를 들어 Ni2+-킬레이트 친화성 크로마토그래피에 의해 농축하고 정제할 수 있었다. 항체는 또한 일시적 발현 절차에 의해 CHO 및/또는 COS 세포 내에서 또는 다른 안정한 발현 절차에 의해 CHO 세포 내에서 발현될 수 있다. 하기 절차를 이용하여 CHO 세포에서의 안정적인 발현을 수행하였다. 단백질은 IgG 구축물 (이뮤노어드헤신)로 발현되었고, 이때 각 단백질의 가용 형태 (예를 드어, 세포외 도메인)에 대한 코딩 서열은 힌지, CH2 및 CH2 도메인을 함유하는 IgG1 불변 영역에 융합되었고/거나 폴리-His 태그가 부착된 형태였다. PCR 증폭 후, 문헌 [Ausubel et al., Current Protocols of Molecular Biology, Unit 3.16, John Wiley and Sons (1997)]에 기재된 바와 같은 표준 기술을 이용하여 각각의 DNA를 CHO 발현 벡터에 서브클로닝하였다. 관심 DNA의 5' 및 3'에 상용성 제한 부위가 있도록 CHO 발현 벡터를 구축하여, cDNA가 간편하게 셔틀링되도록 하였다. CHO 세포에서의 발현에 사용된 벡터는 문헌 [Lucas et al., Nucl. Acids Res. 24:9 (1774-1779) (1996)]에 기술된 바와 같고, SV40 초기 프로모터/인핸서를 사용하여 관심 cDNA 및 디히드로폴레이트 환원효소 (DHFR)의 발현을 구동시켰다. DHFR 발현은 형질감염 후 안정적으로 유지되는 플라스미드의 선별을 허용한다. 목적하는 플라스미드 DNA 12 ㎍을 시판되는 형질감염 시약 수퍼펙트(SUPERFECT)�� (퀴아겐), 도스퍼(DOSPER)�� 또는 퓨진(FUGENE)�� (베링거 만하임(Boehringer Mannheim))을 사용하여 대략 1000 만개의 CHO 세포에 도입하였다. 문헌 [Lucas et al., 상기 문헌]에 기재된 바와 같이 세포를 성장시켰다. 약 3 x 10-7 세포를 아래에서 설명되는 바와 같은 추가의 성장 및 생산을 위해 앰플 내에 동결시켰다. 플라스미드 DNA를 함유하는 앰플을 수조에 넣어 해동시키고, 볼텍싱시켜 혼합하였다. 내용물을 배지 10 ㎖를 함유하는 원심분리 튜브에 피펫팅하고, 1000 rpm에서 5분 동안 원심분리하였다. 상청액을 흡출하고, 세포를 10 mL의 선별 배지 (0.2 ㎛ 정용여과된 5％ 소 태아 혈청을 함유하는 0.2 ㎛ 여과된 PS20)에 재현탁시켰다. 이어서, 상기 세포를 선별 배지 90 mL를 함유하는 100 mL 스피너에 분취하였다. 1일 내지 2일이 지난 후, 상기 세포를 선별 성장 배지 150 mL를 충전한 250 mL 스피너로 옮기고 37℃에서 인큐베이션하였다. 2-3 일이 더 지난 후, 250 mL, 500 mL 및 2000 mL 스피너에 3x105개 세포/mL를 시딩하였다. 원심분리 및 생성 배지 중의 재현탁에 의해 세포 배지를 신선한 배지로 교환하였다. 임의의 적합한 CHO 배지를 사용할 수 있지만, 실제로는 1992년 6월 16일자로 허여된 미국 특허 제5,122,469호에 기재된 생성 배지를 사용할 수 있다. 3L 생성 스피너에 1.2x106개 세포/mL를 시딩하였다. 제 0 일에, 세포수 및 pH를 측정하였다. 제 1 일에, 스피너를 샘플링하고, 여과된 공기를 살포하기 시작하였다. 제 2 일에 스피너로부터 샘플링하고, 온도를 33℃로 변화시키고, 500 g/L 글루코스 30 mL 및 10％ 소포제 (예를 들어, 35％ 폴리디메틸실록산 에멀젼, 다우 코닝(Dow Corning) 365 의료 등급 에멀젼) 0.6 mL를 첨가하였다. 생성 전반에 걸쳐, 필요에 따라 pH를 조정하여 pH가 약 7.2로 유지되도록 하였다. 10일 후, 또는 생존률이 70％ 아래로 떨어졌을 때, 세포 배양물을 원심분리 및 0.22 ㎛ 필터를 통한 여과에 의해 수거하였다. 여과물을 4℃에서 저장하거나, 정제를 위한 칼럼 상에 즉시 로딩하였다. 폴리-His 태그가 부착된 구축물의 경우, Ni-NTA 칼럼 (퀴아겐)을 사용하여 단백질을 정제하였다. 정제 전에, 이미다졸을 5 mM 농도로 조건화 배지에 첨가하였다. 조건화 배지를 4℃에서 0.3 M NaCl 및 5 mM 이미다졸을 함유하는 20 mM Hepes (pH 7.4) 완충액 내에 평형화시킨 6 ml Ni-NTA 칼럼 상으로 4-5 ml/분의 유속으로 펌핑하였다. 로딩 후, 상기 칼럼을 추가의 평형화 완충액으로 세척하고, 0.25 M 이미다졸을 함유하는 평형화 완충액으로 단백질을 용출시켰다. 이어서, 고도로 정제된 단백질을 25 mL G25 수퍼파인 (파마시아) 칼럼을 사용하여 10 mM Hepes, 0.14 M NaCl 및 4％ 만니톨을 함유하는 저장 완충액 (pH 6.8) 중에 탈염시키고 -80℃에서 저장하였다. 이뮤노어드헤신 (Fc 함유) 구축물을 하기와 같이 조건화 배지로부터 정제하였다. 조건화 배지를 20 mM 인산나트륨 완충액 (pH 6.8)로 평형화시킨 5 mL 단백질 A 칼럼 (파마시아)에 펌핑하였다. 로딩 후, 상기 칼럼을 평형화 완충액으로 철저하게 세척한 후에 100 mM 시트르산 (pH 3.5)으로 용출시켰다. 1 mL 분획을 1 M 트리스 완충액 (pH 9) 275 ㎕를 함유하는 튜브에 수집함으로써, 용출된 단백질을 즉시 중화시켰다. 이어서, 고도로 정제된 단백질을 폴리-His 태그가 부착된 단백질에 대해 상기 기재된 바와 같은 저장 완충액 중에 탈염시켰다. SDS 폴리아크릴 아미드 겔 및 에드만(Edman) 분해법에 의한 N-말단 아미노산 서열분석에 의해 균질성을 평가하였다. 실시예 11이. 콜라이에서의 항-PD-L1 항체의 발현본 실시예는 이. 콜라이 내에서의 재조합 발현에 의해 글리코실화되지 않은 형태의 항-PD-L1 항체를 제조하는 것을 설명한다. 먼저, 항-PD-L1 항체를 코딩하는 DNA 서열을 선택된 PCR 프라이머를 사용하여 증폭시켰다. 상기 프라이머는 선택된 발현 벡터상의 제한 효소 부위에 상응하는 제한 효소 부위를 함유해야 한다. 다양한 발현 벡터를 사용할 수 있다. 적절한 벡터의 예는 앰피실린 및 테트라시클린 저항성에 대한 유전자를 함유하는 pBR322 (이. 콜라이에서 유래됨; 문헌 [Bolivar et al., Gene, 2:95 (1977)] 참조)이다. 벡터를 제한 효소로 소화시키고 탈인산화시켰다. 이어서, PCR 증폭된 서열을 상기 벡터에 라이게이션시켰다. 바람직하게는, 벡터는 항생제 내성 유전자, trp 프로모터, 폴리his 리더 (처음 6개의 STII 코돈, 폴리his 서열 및 엔테로키나제 절단 부위를 포함함), NPOR 코딩 영역, 람다 전사 종결자 및 argU 유전자를 코딩하는 서열을 포함할 것이다. 이어서, 라이게이션 혼합물을 사용하여, 선택된 이. 콜라이 균주를 문헌 [Sambrook et al., (상기 문헌)]에 기재된 방법을 이용하여 형질전환시켰다. LB 플레이트에서 성장하는 능력에 의해 형질전환체를 확인한 후, 항생제 내성 콜로니를 선별하였다. 제한 분석 및 DNA 서열분석에 의해 플라스미드 DNA를 단리 및 확인할 수 있었다. 선별된 클론을 항생제가 보충된 LB 브로쓰와 같은 액체 배양 배지 중에서 밤새 성장시킬 수 있었다. 이어서, 상기 철야 배양물을 사용하여, 더 큰 규모의 배양물에 접종할 수 있었다. 이어서, 세포를 원하는 광학 밀도까지 성장시켰고, 이 동안에 발현 프로모터가 작동되었다. 추가로 수시간 동안 세포를 배양한 후, 원심분리에 의해 세포를 수거할 수 있었다. 원심분리에 의해 수득된 세포 펠렛을 당업계에 공지된 다양한 작용제를 사용하여 가용화할 수 있었고, 이후에는 가용화된 항체를 항체의 강력한 결합을 허용하는 조건하에서 금속 킬레이팅 칼럼을 사용하여 정제할 수 있었다. 하기 절차를 이용하여 항-PD-L1 항체를 이. 콜라이 내에서 폴리-His 태그가 부착된 형태로 발현시킬 수 있었다. 먼저, 항체를 코딩하는 DNA를 선택된 PCR 프라이머를 사용하여 증폭시켰다. 프라이머는 선택된 발현 벡터상의 제한 효소 부위에 상응하는 제한 효소 부위, 및 효율적이고 신뢰할 수 있는 번역 개시, 금속 킬레이트 칼럼 상에서의 신속한 정제, 및 엔테로키나제에 의한 단백질분해 제거를 제공하는 기타 유용한 서열들을 함유한다. 이어서, PCR 증폭된, 폴리-His 태그가 부착된 서열을 발현 벡터에 라이게이션시키고, 이것을 사용하여 균주 52를 기초로 하는 이. 콜라이 숙주를 형질전환시켰다 (W3110 fuhA(tonA) lon galE rpoHts(htpRts) clpP(lacIq). 먼저, 형질전환체를 50 ㎎/㎖의 카르베니실린을 함유하는 LB에서 O.D.600이 3-5에 도달할 때까지 30℃에서 진탕하며 성장시켰다. 이어서, 배양물을 CRAP 배지 (물 500 mL 중 (NH4)2SO4 3.57 g, 시트르산나트륨·2H2O 0.71 g, KCl 1.07 g, 디프코(Difco) 효모 추출물 5.36 g, 쉐필드(Sheffield) 하이카제 SF 5.36 g 및 또한 110 mM MPOS (pH 7.3), 0.55％ (w/v) 글루코스 및 7 mM MgSO4를 혼합하여 제조한 것) 중에 50-100배 희석하고, 대략 20-30 시간 동안 30℃에서 진탕하며 성장시켰다. 샘플을 제거하여 SDS-PAGE 분석을 통해 발현을 입증하고, 벌크 배양물을 원심분리하여 세포를 펠렛화하였다. 정제 및 리폴딩시킬 때까지 세포 펠렛을 동결시켰다. 발효물 0.5 내지 1 L로부터의 이. 콜라이 페이스트 (펠렛 6-10 g)를 7 M 구아니딘, 20 mM 트리스 (pH 8) 완충액 중에 10 부피 (w/v)로 재현탁시켰다. 고체 아황산나트륨 및 나트륨 테트라티오네이트를 각각 0.1 M 및 0.02 M의 최종 농도로 첨가하고, 용액을 4℃에서 밤새 교반하였다. 이 단계에서, 모든 시스테인 잔기가 아황산염화에 의해 차단된 변성 단백질이 생성되었다. 상기 용액을 베크만 초원심분리기에서 40,000 rpm으로 30분 동안 원심분리하였다. 상청액을 3-5 부피의 금속 킬레이트 칼럼 완충액 (6 M 구아니딘, 20 mM 트리스 (pH 7.4))로 희석하고, 0.22 ㎛ 필터를 통해 여과하여 정화하였다. 조건에 따라, 정화된 추출물을 금속 킬레이트 칼럼 완충액으로 평형화시킨 5 mL 퀴아겐 Ni-NTA 금속 킬레이트 칼럼에 로딩하였다. 50 mM 이미다졸 (칼바이오켐, 우트롤(Utrol) 등급)을 함유하는 추가의 완충액 (pH 7.4)로 칼럼을 세척하였다. 250 mM 이미다졸을 함유하는 완충액으로 단백질을 용출시켰다. 목적하는 단백질을 함유하는 분획을 풀링하고, 4℃에서 저장하였다. 아미노산 서열을 기초로 계산된 흡광 계수를 사용하여 280 nm에서의 흡광도에 의해 단백질 농도를 추정하였다. 샘플을 새로 제조된 리폴딩 완충액 (20 mM 트리스 (pH 8.6), 0.3 M NaCl, 2.5 M 우레아, 5 mM 시스테인, 20 mM 글리신 및 1 mM EDTA로 이루어짐)으로 천천히 희석하여 단백질을 리폴딩시켰다. 최종 단백질 농도가 50 내지 100 ㎍/mL가 되도록 리폴딩 부피를 선택하였다. 리폴딩 용액을 4℃에서 12시간 내지 36시간 동안 부드럽게 교반하였다. TFA를 0.4％의 최종 농도 (대략 pH 3)로 첨가하여 리폴딩 반응을 켄칭시켰다. 추가의 단백질 정제 이전에, 상기 용액을 0.22 ㎛ 필터를 통해 여과하고, 아세토니트릴을 2-10％의 최종 농도로 첨가하였다. 리폴딩된 단백질로 0.1％ TFA의 이동상 완충액을 사용한 포로스(Poros) R1/H 역상 칼럼에서의 크로마토그래피를 실시하였고, 이때 10％→80％의 아세토니트릴 구배로 용출시켰다. A280 흡광도를 갖는 분획의 분취액을 SDS 폴리아크릴아미드 겔에서 분석하고, 균질한 리폴딩된 단백질을 함유하는 분획을 모았다. 일반적으로, 대부분의 단백질의 적당하게 리폴딩된 종은 가장 낮은 농도의 아세토니트릴에서 용출되는데, 이는 이러한 종들이 소수성 내부가 상기 역상 수지와의 상호작용으로부터 차폐되면서 가장 조밀하기 때문이다. 응집된 종은 일반적으로 더 높은 아세토니트릴 농도에서 용출된다. 잘못 폴딩된 단백질 형태를 목적하는 형태로부터 제거하는 것에 더하여, 역상 단계는 또한 샘플로부터 내독소를 제거하였다.목적하는 바와 같이 폴딩된 항-PD-L1 항체를 함유하는 분획을 풀링하고, 상기 용액에 질소를 부드럽게 흐르게 하여 아세토니트릴을 제거하였다. 투석에 의해 또는 제제 완충액으로 평형화되고 멸균 여과된 G25 수퍼파인 (파마시아) 수지를 사용한 겔 여과에 의해, 단백질을 0.14 M 염화나트륨 및 4％ 만니톨을 함유하는 20 mM Hepes (pH 6.8)로 제제화하였다.
	에이지 오브 엠파이어는 1996년에 앙상블 스튜디오에서 제작하고 1997년에 마이크로소프트에서 발매한 전략시뮬레이션 게임이다. 이 게임은 역사와 문명을 바탕으로 만들어졌으며, 대한민국에서는 스타크래프트에 밀려서 1편은 흥행에서 실패하고, 2편은 어느정도의 성공을 거쳐 3편까지 출시했다. 게임은 네 단계로 나누어져 있으며, 각 단계는 석기 시대, 도구 시대, 청동기 시대, 철기 시대로 구성되어 있다. 게임에는 이집트, 수메르, 바빌로니아, 아시리아, 페르시아, 페니키아, 히타이트, 샹, 조선, 야마토, 미노아, 그리스 등 12개의 문명이 등장한다. 캠페인은 이집트, 바빌로니아, 그리스, 야마토가 주인공으로 등장하며, 게임은 네 단계로 나뉘어 있다. 게임에는 다양한 유닛과 건물이 있으며, 플레이어는 랜덤 맵 게임을 즐길 수 있다. 에이지 오브 엠파이어는 4개의 캠페인과 확장팩으로 구성되어 있으며, 로마 캠페인이 추가되었다. 2017년에는 에이지 오브 엠파이어 데피니티브 에디션이 발표되었는데, 이 게임은 리마스터링되어 고품질의 텍스처와 캐릭터 움직임, 새로운 배경음악, 유저 편의를 위한 기능 등이 추가되었다.	에이지 오브 엠파이어는 어떤 게임인가요?
	심근수는 한국 출신의 독일 거주 작곡가로, 슈투트가르트 시에서 헬무트 프리드리히 라헨만에게 작곡을 배워 에센으로 이주하여 니콜라우스 A. 후버를 스승으로 하였습니다. 그의 작품은 연주시간이 길고 음악의 영역을 넘나드는 작품세계가 특징이며, 음향조각과 음악작품의 중간에 위치하는 작품군에 능합니다. 또한 그의 음악은 라이브로 듣지 않으면 작품성이 전달되지 않는다는 평가를 받았습니다. 동양적인 서정이 조용히 떠오르는 개성은 최근에 큰 관심을 받고 있으며, 한국인과 일본인 연주자들에게 인기가 있습니다. 2003년에는 우치다 팰로우 쉽의 장학금을 받고 일본에 단기유학을 하기도 했습니다.	심근수는 어떤 작곡가인가요?
	제목: 시교육청, 고교-대학연계 꿈창작 캠퍼스 운영 남승현 대구시교육청은 고교-대학 연계형 프로그램의 일환인 '꿈 창작 캠퍼스'를 운영할 계획을 밝히며 학생들이 자기주도적으로 진로를 설계할 수 있는 기회가 될 것이라는 기대감을 내쳤다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: 남승현 대구시교육청은 미래사회 핵심 역량을 기르기 위해 지역 일반계 고등학교와 대학을 연계한 ‘꿈 창작 캠퍼스’를 4월부터 운영한다. ‘꿈 창작 캠퍼스’는 일반 고등학교에서 개설하기 어려운 융복합주제, 미래신기술분야, 기초직업교육 등의 강좌를 우수한 인적·물적 인프라를 갖춘 지역대학과 연계해 개설하고, 학생들이 소질과 적성에 맞는 강좌를 신청, 수강하는 고교-대학 연계형 프로그램이다. 2018학년도부터 운영된 이 프로그램에는 연간 1천300여명의 고교생이 참여해 자신의 꿈을 실현하기 위한 열정을 꽃피웠다. 참가 학생들은 빅데이터분석, 자율주행차 제작, DNA 추출 등의 강좌를 통해 풍부한 실험실습과 토론의 시간을 가졌다. 올해 11개 대학 40개 강좌로 더욱 풍성해진 ‘꿈 창작 캠퍼스’는 1학기(1기), 2학기(2기), 겨울방학(3기) 등 총 3기로 운영되며 지난 25일부터 4월 1일까지 일반계고 2, 3학년을 대상으로 1기 수강신청이 진행 중이다. 1학년은 2학기에 열리는 강좌부터 신청이 가능하다. 1기 교육기간은 4월 둘째 주부터 시작하여 주당 2회, 총 36시간(회당 3시간)으로 운영되며, 학생들은 평일 방과 후 시간이나 토요일에 해당 대학으로 가서 수업을 듣게 된다. 시교육청 관계자는 “지역대학 연계 프로그램으로 학생들은 풍부한 지역대학 인프라를 기반으로 자신의 소질과 적성에 맞는 탐구 활동 중심 수업을 받을 수 있고 자신의 진로를 스스로 설계해 나갈 수 있는 역량을 기를 수 있는 기회가 될 것”이라고 밝혔다. 한편 꿈 창작 캠퍼스 개설 과목에 대한 정보 및 1기 수강신청은 대구에듀나비(http://edunavi.kr)/공동교육과정으로 접속하면 가능하다. 남승현기자 namsh2c@idaegu.co.kr
	그렇기 때문에 억압된 것의 회귀는 기억을 재생하는 플레시백(flashback) 효과처럼 나타나며 그 사건 당시와 유사한 정서적 상태를 경험하게 하는 것이다	주어진 문장 뒤에 자연스럽게 이어질 문장을 생성해주세요. 문장: 그에 따르면 트라우마는 외부의 자극으로부터 정신세계를 보호하고 있던 장벽에 어떤 파열구가 발생한다는 것이다. 하지만 그 자극의 양이 과다할 경우 파열구를 통해 흘러들어오는 에너지를 묶는 작업은 제대로 수행될 수 없다. 따라서 그것은 의식의 영역에 남아 있을 수 없으며 무의식으로 ‘억압’되면서, 그 사건에 대한 기억을 회피하거나 혹은 망각한다. 그렇다고 해서 억압된다는 것이 사라진다는 말은 아니다. ‘억압된 것은 반드시 회귀한다. ’ 그것은 다시 의식으로 진입하려는 노력을 멈추지 않는다.
	버벌진트의 네번째 정규 앨범 'Go Easy'는 2011년 8월 31일에 출시되었습니다. 타이틀 곡은 '좋아보여(Feat. 검정치마)'이며, 총 12곡이 수록되어 있습니다. 또한, 'Go Easy 0.5'에서 변경된 3곡과 선공개했던 '어베일러블(Feat. Lady Jane)'도 포함되어 있습니다. 발매 초기에는 '좋아보여(Feat. 검정치마)', '원숭이띠 미혼남(Feat. ZICO of Block.B)', '좋아보여', '우아한 년 2012(Feat. San E & Okasian)', '긍정의 힘', 'Want You Back(Feat. Nodo)', 'Luv Songz(Feat. 태완 a.k.a. C-Luv)', '약속해', '어베일러블(Feat. Lady Jane)', '깨알같아', 'My Audi(Feat. The Quiett)', '우리 존재 화이팅' 등 9곡이 수록되어 있습니다. 이 앨범은 버벌진트의 음반 중 하나로 분류됩니다.	'Go Easy'는 버벌진트의 몇 번째 정규 앨범인가요?
	인스턴트 카마(Instant Karma!)는 1970년 2월에 애플 레코드에 싱글로 발매된 존 레논의 록 음악이다. 이 곡은 비틀즈의 미국에서 Let It Be와 경쟁하면서 영국과 미국 싱글 차트에서 상위 5위에 올랐고, 이 곡은 이 밴드의 한 멤버가 백만 부를 판매한 첫 번째 솔로곡이 되었다. 이 곡은 10일 안에 작곡, 녹음, 발매되었으며, 이 음반은 팝 음악 역사상 가장 빨리 발매된 곡 중 하나가 되었다. 이 음반은 필 스펙터가 1966년 스스로 은퇴한 후 미국 프로듀서에게 컴백한 것을 보여주면서 비틀즈의 음반 《Let It Be》에 대한 프로듀서의 역할을 맡게 되었다. 런던의 애비 로드 스튜디오에서 녹음된 〈Instant Karma!〉는 스펙터의 독특한 월 오브 사운드를 사용하고 있으며 조지 해리슨, 클라우스 부어만, 앨런 화이트, 빌리 프레스턴의 기여가 특징이다. B 사이드에서는 오노 요코가 작곡하고 공연한 곡으로, 〈Who Has Seen the Wind?〉라는 제목의 곡이 최근 1969년 세계 평화 유세에 대한 그들의 캠페인과 같은 긴 머리의 주인공으로, 레논과 오노는 영국의 "탑 오브 더 팝스"에 출연하여 싱글 음반을 홍보했다. 〈Instant Karma!〉는 《Shaved Fish》 (1975), 《Lennon Legend》 (1997), 그리고 《Power to the People The Hits》 (2010)를 포함한 많은 레논 작문에 등장했다. 1972년 8월 "One to One" 콘서트에서 녹음된 버전이 그의 사후 발매된 라이브 음반 《Live in New York City》 (1986)에 포함되었다. 이 곡은 레논의 솔로 활동에서 가장 훌륭한 곡들 중 하나로 계속해서 비판적 찬사를 받고 있다. 폴 웰러, 듀란 듀란, U2는 〈Instant Karma!〉를 다룬 연극들 중 하나로 1977년 스티븐 킹의 소설 《샤이닝》에 영감을 주었다.	1970년 2월에 발매된 존 레논의 싱글은 무엇인가?
	물질적 자립도는 개별 기업과 시장 활동을 하는 개인이 생산과 소비에 필요한 재화와 용역을 스스로 조달할 수 있는 정도를 말한다	주어진 문장 뒤에 자연스럽게 이어질 문장을 생성해주세요. 문장: 시장화는 시장에 참여하는 개개인의 결정의 자유화, 그리고 시장 활동에서 일어나는 제반 행동의 자유화를 의미한다. 개인 모두에게는 국가로부터 통제를 받는 영역과 자유로운 의사결정의 영역이 있다. 따라서 시장화는 사적 영역의 확대로써, 이는 개인주의 확산과도 긴밀하게 연결되어 있다. 사적 영역의 팽창은 개인 주체와 그들이 점유하는 사적 공간이라고 할 수 있는 시장 관계 중심의 관계망으로 확대된다. 관계망의 확대는 시장화를 추동하는 힘이다. 그 힘은 다시 집단적인 정체성을 형성하면서 더 큰 관계망을 구축하게 된다. 이것이 시장을 중심으로 상행위를 행하는 각각의 주민들은 사회적 연결망을 구성한다. 그리고 시장화의 진전은 물질적 자립 정도와 비례한다.
	최선희(1964년 8월 10일 ~)는 조선민주주의인민공화국의 외교관이자 조선민주주의인민공화국 국무위원회 위원이자 정치인이다. 최영림 수양딸로 받아들여져 평양에서 유년기를 보낸 후, 중국, 오스트리아, 몰타에서 중고등학교를 다녔다고 한다. 해외 유학 시절 영어 능력이 매우 좋아 서방 세계와 서방 외교에 대해 잘 알고 있다. 1988년 조선민주주의인민공화국 외무성에 입부했고, 2003년부터 2008년까지 6자 회담에서 북측 수석 대표의 통역을 맡았다. 2010년에는 외무성 북아메리카국 부국장으로 발탁되었으며, 동년에 또 다른 6자 회담 북측 차석대표로 활동했다. 2016년에는 부국장에서 국장으로 승진하였고, 2018년에는 외무성 북아메리카국 부상으로 승진하였다. 2018년 북미정상회담 성사 과정에서 본인의 성명을 발표하면서 성 김 필리핀 주재 미국 대사와도 지속적인 실무회담을 가졌다. 2018년 7월에는 판문점에서 성 김 대사와 함께 실무회담을 가진 것으로 알려졌다.	최선희는 어떤 국가의 외교관이다?
	바실리 베레주츠키는 1982년생 러시아의 축구 선수로, 현재 CSKA 모스크바 소속이며 센터백 포지션을 담당하고 있습니다. 그의 동생 알렉세이 베레주츠키도 CSKA 모스크바에서 함께 활약하고 있습니다. 1999년부터 토르페도 ZIL에서 활약했으며, 2001년에 CSKA 모스크바로 이적하여 2003년, 2005년, 2006년 러시아 프리미어리그 우승에 기여했습니다. 2003년에 러시아 대표팀에 처음 선정되었고, 2007년에는 마케도니아와의 UEFA 유로 2008 예선 경기에서 첫 골을 넣었습니다. 또한 2008년 유로 2008 본선 대회에서 4강에 진출하는 데 큰 역할을 했습니다. 2014년 FIFA 월드컵에도 참가했으며, 모스크바 출신이기도 합니다. 그는 축구 수비수로 분류됩니다.	바실리 베레주츠키는 어느 팀에서 축구를 하고 있어?
	대출금 채무에 대한 개별보증에 있어서 보증인이 대위변제한 후 채무자에 대해 갖는 구상청구권을 연대보증한 것 역시 확정채무에 대해 보증한 것으로 연대보증인으로서는 피보증채무의 이행기를 연장해 주었는지와 상관없이 연대보증채무를 부담한다.	주어진 문장을 적절하게 요약해주세요. 문장: 대출금 채무에 대한 개별보증에 있어서, 보증인이 대위변제한 후 채무자에 대해 갖는 구상청구권을 연대보증한 것 역시 그 보증 당시 채무가 특정되어 있는 확정채무에 대하여 보증을 한 것이어서 이를 계속적 보증이라고 볼 수 없고, 따라서 채무가 특정되어 있는 확정채무에 대한 연대보증인으로서는 피보증채무의 이행기를 연장해 주었느냐의 여부에 상관없이 그 연대보증채무를 부담한다.
	고속 성장 중인 홈퍼니싱시장을 새로운 미래 먹거리 산업으로 정하고 롯데와 현대백화점이 사업 확대에 힘을 쓰고 있는 가운데 후발주자인 신세계가 까사미아를 인수해 홈인테리어와 B2B사업, 브랜드 비즈니스 분야를 추가해 단순한 가구 브랜드가 아닌 토털 홈인테리어 브랜드로 탈바꿈시킨다는 전략을 발표하며 유통기업 '3파전' 경쟁이 시작됐다.	주어진 문장을 적절하게 요약해주세요. 문장: ㆍ신세계, 가구기업 까사미아 인수… 롯데·현대백화점과 3파전 신세계가 중견 가구기업 까사미아를 인수하며 국내 유통업계 '집 꾸미기' 경쟁에 본격 막이 올랐다. 저성장 시대를 맞은 백화점업계는 고속 성장 중인 '홈퍼니싱'(가구나 조명, 인테리어 소품 등 집안을 꾸밀 수 있는 제품) 시장을 새로운 미래 먹거리로 낙점하고 경쟁태세를 갖추고 있다. 국내 홈퍼니싱 산업 규모는 이미 10조원을 넘어섰고, 지난해 14조원을 돌파했을 것으로 추정된다. 롯데와 현대백화점이 관련 사업 확대에 속도를 내고 있는 가운데 신세계가 이에 가세하며 국내 집 꾸미기 시장에서 대형 유통기업 '3파전'을 피할 수 없게 됐다. 신세계그룹은 지난 1월 24일 가구업체 까사미아의 주식 92.4%를 1837억원에 취득하기로 결정했다고 공시했다. 신세계는 현재 1200억원대의 까사미아 매출을 5년 내 4500억원으로 끌어올리고, 10년 후에는 매출 1조원대 메가 브랜드로 키운다는 계획이다. 현재 72개인 까사미아 매장도 향후 플래그십스토어·가두점·숍인숍 등으로 세분화해 5년 이내에 160개로 늘릴 예정이다. 신세계, 가구업계 지각변동 일으킬까이번 인수와 관련해 신세계와 까사미아의 이해관계가 들어맞았다는 게 가구업계의 평가다. 1982년 설립된 까사미아는 국내 10위 규모의 가구 인테리어 전문회사다. 국내 홈인테리어 시장에서 명성을 떨쳐왔지만 최근 매출 정체상태였던 까사미아와 '홈·라이프스타일' 부문 신사업 기회를 노리던 신세계가 '윈·윈' 전략을 택했다는 것이다. 정유경 총괄사장이 2015년 신세계백화점 책임경영을 본격화한 후 첫 인수·합병(M&A) 사례이니만큼 공격적 투자도 예상된다. 신세계는 현재 가정용 가구 중심인 까사미아에 홈인테리어와 B2B(기업 간 거래) 사업, 브랜드 비즈니스 분야를 추가해 까사미아를 단순한 가구 브랜드가 아닌 '토털 홈인테리어 브랜드'로 탈바꿈시킨다는 방침을 내놨다. 장재영 신세계백화점 사장은 "향후 국내 가구·인테리어 시장 규모가 최대 20조원까지 성장할 것으로 예측되는 가운데 까사미아를 신세계백화점이 한 단계 더 도약할 수 있는 새로운 성장동력으로 키워나갈 것"이라고 밝혔다. 신세계의 이번 까사미아 인수로 국내 가구업계는 촉각을 곤두세우고 있다. 한샘이 2조원대 매출로 업계 1위를 지키고 있는 가운데 현대리바트와 에넥스, 이케아코리아, 퍼시스 등 중견 가구업체들이 시장점유율을 나눠 가지고 있다. 까사미아를 품은 신세계가 업계에 지각변동을 일으킬지 관심이 집중되는 상황이다. 후발주자이지만 전국적인 유통망을 가진 신세계와 까사미아의 브랜드가 합쳐질 경우 상당한 시너지를 낼 것이라는 게 업계 관계자들의 말이다. 이와 함께 백화점 '빅3' 업체 모두 관련 시장에 출사표를 던지면서 백화점 업계의 경쟁구도가 고스란히 홈퍼니싱으로 옮겨 오게 됐다. 2012년 토종 가구 브랜드 '리바트'를 인수하며 백화점 '빅3' 중 가장 먼저 홈퍼니싱 시장 진출 테이프를 끊은 현대백화점은 정지선 회장의 진두지휘 아래 관련 사업 확대에 속도를 내고 있다. 현대백화점은 인수 당시 5000억원대에 머물던 리바트의 매출을 지난해 8000억원대로 끌어올렸고, 건자재 유통업에 종사하고 있는 그룹 계열사 현대H&S를 합병하며 연매출 1조원 돌파가 가시화되고 있다.
	점차 높은 연령대로 연장되는 청소년기는 정책 개념으로서의 ‘청년’이 고용의 차원에서만 정의된 것을 보완하는 다른 축이 될 수 있다. 하지만, 고용정책 차원에서 30대로까지 확장된 청년 개념을 청소년정책의 관점으로만 다변화시키는 한계 역시 분명하다. 그런 까닭에 청년을 위한 문화정책을 위해서는 ‘후기 청소년’기 이후까지를 포괄하는 청년의 삶에 대한 정책적 개념 및 범주 설정은 물론, 다중적 주체로서의 청년을 다룰 수 있도록 또는 청(소)년이 직면한 다층적 문제를 드러낼 수 있도록 청년정책에 대한 다변화된 접근이 필요하다고 할 수 있다.	주어진 제목과 요약문에 대한 정보를 토대로, 요약되기 전 문장을 유추해서 생성해주세요. 제목: 청년문제에 대한 문화정책적 접근을 위한 기초연구 요약문: 청년을 대상으로 하는 문화정책을 위해 청년의 삶에 관한 개념과 범주를 설정하고, 청년정책에 관련하여 여러각도로 접근 해야 한다.
	도쓰카와 촌은 나라현 최남단의 요시노 군에 있는 촌으로, 동서 폭은 33.4km, 남북 폭은 32.8km이며 도쓰 강이 중앙부를 남류한다. 주변에는 고조 시, 가미키타야마 촌, 시모키타야마 촌, 노세가와 촌, 미에현 구마노 시, 와카야마현 다나베 시, 신구 시, 히가시무로 군 기타야마 촌과 인접해 있다. 1890년 6월 19일에 여러 촌들이 합병하면서 도쓰카와 촌이 탄생했고, 2004년 7월 1일에 기이 산지의 영지와 참예도가 유네스코의 세계유산 위원회에 의해 '세계 유산 일람표'에 등록되었다.	도쓰카와 촌은 어떤 위치에 있는지?
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	이 상의 수상 배경에는 그들의 화려한 음악과 춤이 어우러진 영상의 힘이 절대적이었다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 2015 베이징 육상선수권 대회에서 유튜브(youtube)영상만을 활용하여 금메달을 딴 케냐 출신 창던지기 선수 줄리어스 예고(Julius YEGO)는 대회 직후 투척 종목의 척박한 환경을 극복할 수 있었던 원동력에 대해 이와 같이 대답하였다. ""믿는 것은 자신과 유튜브(인터넷) 영상뿐이었다. 누구보다 열심히 운동했고 합당한 보상이다.” 전문적인 훈련장이나 코치도 없었던 그가 선택한 방법은 유튜브 영상을 보고 따라하면서 세계대회를 준비하게 되었고 기적처럼 우승까지 하게 된 사례이다(JTBC, 2015, 8, 27). 현재 유튜브에서 확산되고 있는 영상의 영향력은 스포츠뿐만 아니라 춤에서도 매우 크게 작용하고 있다. 최근 그래미 어워즈, 아메리칸 뮤직 어워드, 세계 3대 대중음악 시상식으로 꼽히는 2017‘빌보드 뮤직 어워즈’에서 아이돌 그룹 방탄소년단은 대한민국 K-POP그룹 최초로‘톱 소셜 아티스트’상을 수상하게 되었다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	damselae의 감염이 glu-cose와 cortisol 농도를 증가시켜 면역 억제가 유도되어 폐사율이 높아지는 것으로 생각된다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 감염성 질병이 어류의 cortisol 농도에 미치는 영향에 대하여 여러 가지 질병에서 보고되고 있다. Bilodeau et al.(2003)은 channel catfish, Ictalu-rus punctauts에 Edwardsiella ictaluri가 감염되면 병원성이 강한 균주가 약한 균주에 비하여 혈중 cortisol 농도를 높인다고 하여 본 연구에 P. damselae 시험구에서 높게 나타난 것과 유사한 결과를 나타내었다. 또한, cortisol 농도 증가 시 brown trout(Salmo trutta)는 곰팡이성 질병(Pick-ering and Duston, 1983)과 세균성 질병(Pickering and Pottinger, 1989)에 대하여, 무지개송어에서는 기생충성 질병에 대한 감수성이 높아질 뿐만 아니라(Woo et al., 1987), 림프구의 기능을 저해한다고 하였다(Tripp et al., 1987; Espelid et al., 1996). 본 연구에서는 P.
	질권은 채권자가 채무자의 물건을 담보로 받아 채무의 변제가 있을 때까지 유치하고, 변제가 없을 경우 다른 채권자에 우선하여 변제를 받을 수 있는 약정담보물권입니다. 이는 부동산 이외의 재산권에 성립되며, 유치권과 달리 당사자의 계약에 의해 성립됩니다. 질권은 유치적 효력과 우선변제적 효력을 가지며, 부종성·수반성·불가분성·물상대위성이 있습니다. 또한 질권은 채권을 담보로 하기 때문에 채권이 소멸되면 질권도 소멸되며, 채권이 양도될 경우 질권도 이전됩니다. 질권의 종류는 동산질권으로, 당사자 간의 계약에 의해 설정되며, 질물의 점유를 계속하지 않으면 안됩니다. 동산질권자는 질물을 경매에 붙여 매득금에서 다른 채권자에 우선하여 변제를 받을 수 있습니다. 권리질의 목적물은 보통의 동산이며, 채권증서가 있는 경우에는 채권자가 질물을 입질할 수 있습니다. 권리질의 종류는 무기명채권·기명사채·기명국채·지시채권 등이 있으며, 전질(轉質)은 질권자가 질물을 다른 채권자에게 입질하는 것입니다. 전당포는 고객으로부터 물품을 질물로 받고 금융하며, 고객이 원리금을 지급하지 않을 경우 질물의 소유권을 취득합니다. 민법은 일반적으로 채무자 보호를 위해 유질(流質)을 금지하고 있습니다.	질권은 채무자의 물건을 담보로 받아서 변제가 있을 때까지 유치하는 약정담보물권이야. 이런 질권은 어떻게 성립되는 거야?
	그렇지만 반만년 우리 역사에서 절대적 자주권을 빼앗겨 식민지에 빠졌던 경우가 그렇게 길지는 않았다. 오히려 반도적 위치를 대륙과 해양을 연결하는 육교적 위치로 활용하여 잘 이용한다면 실질적 독립을 얻을 수 있는 여지가 많으며 지나간 역사가 그러한 현실을 보여준다. 대륙세력과 해양세력의 영향력 확대를 잘 견디어 대륙문명을 해양세력에 옮기며(불교의 일본 전래 등) 해양문명을 대륙으로 전파하는(미국과 일본의 문명을 중국으로 전달) 다리 역할을 했던 사례도 있다. 북한의 경우 1960년대 중·소분쟁의 와중에서 중국과 소련 양국이 어떻게든 자기 쪽으로 끌어들이려고 했으므로 지정학적 환경을 잘 이용할 수도 있었다. 해양세력과 대륙세력의 갈등을 이용해 실리를 챙길 수도 있다.	주어진 제목과 요약문에 대한 정보를 토대로, 요약되기 전 문장을 유추해서 생성해주세요. 제목: 현대사광장 요약문: 우리나라의 반도적 위치는 대륙과 해양을 연결하는 육교적 위치로 실제로 대륙과 해양의 문명을 전파하는 다리 역할을 했던 사례도 있다. 지정학적 환경을 잘 이용한다면 실리를 챙길 수도 있을 것이다.
	카놈 브앙은 태국에서 인기 있는 길거리 음식으로, 작은 팬케이크로 알려져 있습니다. 크레이프와 비슷한 모양이지만 쌀가루를 사용하여 만든다는 차이점이 있습니다. 일반적으로 코코넛 크림으로 토핑되거나 달고 향긋한 재료들이 함께 사용됩니다. 두께는 얇고 질감은 살짝 바삭합니다. 카놈 브앙은 아유타야 시기에 유래했으며, 원산지는 인도와 관련이 있다고 추정됩니다. 방콕의 방글람푸와 탈랏 플루 등에서 찾아볼 수 있으며, 쌀가루, 콩가루, 설탕, 계란, 코코넛 파우더 등을 사용하여 만들어집니다. 반죽을 뜨거운 철판 위에 얇게 퍼서 만들고, 크림층과 고소한 재료를 채우고 고수 잎으로 장식합니다.	카놈 브앙은 어떤 음식인가요?
	만주국 참의부는 만주국 황제의 자문기관으로, 일본 제국의 추밀원에 해당했습니다. 입법원은 정식으로 개설되지 않았기 때문에 사실상 입법 대행기관으로 기능했습니다. 참의부는 의장 1명, 부의장 1명, 참의 약간 명으로 조직되어 있었으며, 《참의부회의규정》에 따라 운영되었습니다. 이 기관은 법률 제실령, 예산, 국고에 부담이 되는 계약 조약, 황제의 이름으로 행해지는 대외 선언 등 중요한 국무사항을 처리했습니다. 참의부의 임원들은 각자의 역할을 수행했습니다.	만주국 참의부는 무엇인가요?
	SK텔레콤이 환경 보호에 대한 대중의 관심을 높이기 위해 증강현실과 가상현실 등 최신 미디어 기술과 ICT 기술을 활용한 '동물 없는 동물원 북금곰편'을 제작하고 23일 유튜브를 통해 공개하였다.	주어진 문장을 적절하게 요약해주세요. 문장: SK텔레콤이 인간과 동물이 공존하는 사회 분위기를 조성하고 환경 보호에 대한 대중의 관심을 높이기 위해 '동물 없는 동물원 ? 북극곰편'을 제작하고 23일 유튜브 영상을 통해 이를 공개했다. 영상은 북극곰을 보고싶어 하는 아이를 위해 북극 연구원인 아버지가 5GX 기술로 북극곰을 소환한다는 내용이다. SK텔레콤은 이 북극곰을 ICT 기술로 구현하기 위해 증강현실(AR)과 가상현실(VR)을 혼합한 '혼합현실(MR)', 동물의 털을 실감 있게 표현하는 '초실감 영상 변환', 실제 주변 환경의 색상과 밝기를 반영해 렌더링(실물 그대로 그린 완성 예상도)하는 '환경 반영 변환 기술' 등 다양한 최신 미디어 기술을 사용했다. 여기에 ICT 기술을 활용해 '자연의 아름다운 오늘을 내일로 이어가자'는 메시지도 담았다. 동물 없는 동물원 - 북극곰편은 지난 8월 '동물 없는 동물원'의 후속 캠페인이다. 앞서 '동물 없는 동물원'은 야생동물에 대한 대중의 관심을 환기시키는데 초점을 맞췄다. 이는 인스타그램 릴레이 이벤트를 통해 연예인·스포츠 스타 등 2만3000명의 호응을 얻었고, 유튜브 조회수도 150만회 이상을 달성했다. 송광현 SK텔레콤 PR2실장은 "동물과 환경 보호에 대한 대중의 인식을 높이기 위해 캠페인을 마련했다"며 "앞으로도 SK텔레콤의 기술을 통해 고객 행복은 물론, 사회적 가치까지 창출할 수 있는 캠페인을 지속적으로 발굴할 계획"이라고 말했다.
	소유권이전 청구권 보전 가등기 이후 압류등기가 마쳐지고 본등기가 이루어지면 소명자료를 제출해야 하는데 이것이 제출되지 않으면 압류등기를 직권말소해야 하지만, 본등기가 가등기담보법 적용을 받는 가등기라 청산절차를 거친 유효한 것인지의 여부를 심사해 이를 결정해야 하는 것으로 볼 것은 아니다.	주어진 문장을 적절하게 요약해주세요. 문장: [1] 소유권이전 청구권 보전의 가등기 이후에 국세·지방세의 체납으로 인한 압류등기가 마쳐지고 위 가등기에 기한 본등기가 이루어지는 경우, 등기관은 체납처분권자에게 부동산등기법 제175조에 따른 직권말소 통지를 하고, 체납처분권자가 당해 가등기가 담보 가등기라는 점 및 그 국세 또는 지방세가 당해 재산에 관하여 부과된 조세라거나 그 국세 또는 지방세의 법정기일이 가등기일보다 앞선다는 점에 관하여 소명자료를 제출하여, 담보 가등기인지 여부 및 국세 또는 지방세의 체납으로 인한 압류등기가 가등기에 우선하는지 여부에 관하여 이해관계인 사이에 실질적으로 다툼이 있으면, 가등기에 기한 본등기권자의 주장 여하에 불구하고 국세 또는 지방세 압류등기를 직권말소할 수 없고, 한편 이와 같은 소명자료가 제출되지 아니한 경우에는 등기관은 가등기 후에 마쳐진 다른 중간 등기들과 마찬가지로 국세 또는 지방세 압류등기를 직권말소하여야 한다고 봄이 상당하다. 그러나 등기관이 국세 또는 지방세 압류등기의 말소를 위하여 위와 같은 심사를 한다고 하더라도, 나아가 그 본등기가 가등기담보 등에 관한 법률 제1조에 의하여 가등기담보법의 적용을 받는 가등기에 기한 것으로서 가등기담보법 제3조 및 제4조가 정한 청산절차를 거친 유효한 것인지 여부까지 심사하여 그 결과에 따라 국세 또는 지방세 압류등기의 직권말소 여부를 결정하여야 하는 것으로 볼 것은 아니다. [2] 당해세가 아닌 국세에 관하여 법정기일 대신 납부기한이 나타나 있는 소명자료만 제출되어 있음에도 국세의 법정기일과 가등기일의 선후를 심리하지 아니한 채, 담보 가등기 여부에 관하여 실질적인 다툼이 있는 경우 국세 압류등기와 가등기의 실체법상 우열과 무관하게 국세 압류등기를 직권말소할 수 없다고 한 원심을 파기한 사례.
	중국 정교회는 러시아 정교회로부터 자치권을 받은 동방 정교회 중 하나이다. 1685년에 처음 중국에 들어온 러시아 정교회 신자들은 포로로 사로잡혀 베이징으로 이동했다. 1860년 이후 선교 사업이 활발해져 중국에는 32개의 성당과 6천 명의 신자가 존재했다. 그러나 의화단 운동 때문에 많은 중국 정교회 신자들이 순교했고, 문화 혁명 시기에는 많은 성당이 파괴되었다. 현재 중국 본토에서는 베이징, 상하이, 하얼빈의 정교회 공동체가 있으며, 홍콩과 대만에서는 비교적 자유롭게 활동하고 있다.	중국 정교회의 자치권을 받은 동방 정교회 중 하나는 무엇인가요?
	대한민국 축구 국가대표팀은 전통적으로 붉은 색상을 사용하고 있어 '붉은 악마'라는 별명을 얻었습니다. 홈 유니폼 색상은 빨간색에서 흰색으로 바뀌었다가 다시 빨간색으로 돌아온 후 검정색 반바지를 매치합니다. 용품 스폰서십은 다양한 브랜드를 거쳤으며, 1985년부터 삼성물산이 독점 스폰서로 활동하였습니다. 1995년부터 1997년까지 나이키와 2년간 계약을 맺었고, 2019년 12월 31일까지 24년간 장기 계약을 유지하고 있습니다.	대한민국 축구 국가대표팀의 홈 유니폼 색상은 어떤 색깔이었나요?
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	구체적으로 말하면, 한중 수교 후 양국의 어업질서를 확립하기 위해 체결된 어업협정이 최근에는 양국의 어업분쟁을 야기하는 요인으로 작용하고, 이것이 양국관계 전체를 악화시키고 있는 것이다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 2012년은 한중 수교 20년째가 되는 해이다. 그동안 양국관계는 비약적인 발전을 가져왔다. 경제적 측면에서 특히 그러하다. 1992년 수교 당시 63억 달러에 그쳤던 한중 무역규모는 2012년 2,200억 달러로 약 35배 증가했고, 2012년 이명박 대통령 방중을 계기로 양국은 2015년까지 교역 규모를 3,000억 달러로 끌어올린다는 야심찬 목표를 세웠다. 문화적 측면에서도 드라마, K-pop을 시작으로 한국 문화가 중국에 확산되는 등 양국 간의 문화교류도 활발하게 전개되고 있다. 상대국을 방문하는 여행자 수는 매년 600만 명 정도이며, 정치·외교적 측면에서도 2008년 전략적 동반자관계 수립 등 지속적인 발전을 가져왔다. 이와 같은 상황은 한중 간의 경계(국경)를 크게 약화시키고 있다. 그러나 역사인식·영토분쟁(간도문제)·고구려 유적의 세계문화유산 등록 등 일련의 사건들을 중심으로 정서적인 측면에서 양국의 관계(경계)는 오히려 악화(강화)되는 측면도 있다. 이러한 점을 고려하면서, 본고에서는 2011년 12월 12일 서해/황해(이하 서해 또는 황해로 함)에서 해양의 경계를 둘러싸고 발생한 어업분쟁사건을 중심으로 한중 관계를 분석한다. 이 과정에서 양국 간의 전체적인 관계 발전이 특정 국면에서는 관계를 악화시키는 측면이 있다는 점을 지적하고자 한다.
	제목: [이선옥의 눈]혐오를 없앤다면서 '인어공주' 실사판에 원작과 전혀 다른 분위기의 흑인 여배우가 캐스팅되어 논란이 일자 디즈니 측은 단지 흑인 여성이라는 이유로 반대하는 것이냐며 고압적인 태도를 보였는데 이는 흑백논리 안에 시민을 가둬 더 많은 혐오주의자를 양산하는 것은 아닌지 생각해 보아야 한다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: 디즈니의 애니메이션 <인어공주>의 실사판 영화에 흑인 여배우가 캐스팅 된 후 논란이 일었다. 원작과 전혀 다른 분위기의 배우를 접한 팬들은 당혹스러워하고, '나의 인어공주가 아니야(#NotMyAriel')라는 해시태그로 불만을 표하는 움직임도 있다. 원작이 있는 애니메이션이 드라마나 영화로 제작될 때 팬덤과 고증세력이 원작 일치 여부를 논하는 일은 흔하다. 다만 이번 논란은 덕후들 사이의 논쟁이 아니라 PC(Political Correctness·정치적 올바름)운동이 가세한 특징이 있다. PC운동은 약자와 소수자에 대한 차별과 혐오를 없애려는 행동이다. 대중문화는 표현의 영역에서 큰 영향력을 가지므로 늘상 이 운동의 타깃이 된다. 인종, 성별, 종교 등의 표현에서 편견을 적발하는 동시에, 정치적으로 올바른 작품의 제작을 압박한다. 디즈니는 '다양성은 우리의 핵심전략'이라며 PC주의를 적극 수용 중이다. 이번 캐스팅 비판 여론에 대한 대응도 이 운동의 관점에 기반해 있다. 디즈니가 소셜미디어(SNS)에 올린 입장문은 '불쌍하고 불행한 영혼들을 위한 공개편지'라는 문구로 시작해, 캐스팅 이유를 언급하며 '이렇게까지 설명했는데도 캐스팅을 받아들이지 못한다면 그건 당신들 문제'라고 끝맺는다. 콘텐츠 제작사가 작품의 팬이 포함된 대중에게 고압적인 태도로 조롱하는 흔치 않은 풍경이다. 인어공주 캐스팅 논란에서 보듯 대중이 반발하는 이유는 단일하지 않다. 고증 차원의 비판도 있고, 원작에 대한 오랜 애정에서 나온 불만도 있다. 나의 동심을 파괴하지 말라는 말처럼 사람마다 소비하는 방식이 다른 대중문화 콘텐츠의 특성도 작용한다. 또 굳이 원작과 다른 흑인 배우를 캐스팅한 디즈니의 PC주의 행보에 대한 불만도 누적되어 있다. 문제는 다양한 의견들을 오직 '흑인 인어공주를 거부하는 인종차별주의자와 혐오자들의 준동'으로 규정하는 태도다. '불쌍하고 불행한 영혼, 궤변, 헛소리, 차별주의자, 외모지상주의자, 먼저 사람이 돼라'. 한국의 매체를 포함해서 이번 사태를 비판하는 데 동원된 공적 표현들이다. 어떠한 사회운동이든 다양한 의견을 존중하면서, 최대한 많은 대중을 선한 의도 안으로 설득하려는 노력은 필수다. 대중의 비난 여론에는 부적절하고 극단적인 표현이 존재한다. 그러나 정제되지 않은 대중의 언어와 공적 언어의 무게는 다르다. 자신의 기준에 동의하지 않으면 곧 차별주의자이며 혐오주의자라 낙인찍는 일, 설득의 노력 대신 동료 시민을 간단히 적으로 돌리는 일은 극단적 표현만큼이나 위험하다. 흑인은 인어공주를 할 수 없다는 주장만큼, 흑인 캐스팅 비난은 곧 인종차별이라는 규정 표현 또한 편견에 기대어 있다. 한국의 진보가 사랑하는 철학자 슬라보예 지젝은 소수자의 목소리에는 모든 비판을 금하고, 발언의 규칙을 강제하려고만 하는 정치적 올바름 운동의 한계를 지적한다. PC운동의 목적이 혐오와 차별의 감소, 다양성의 관철이라고 할 때, 흑백논리 안에 동료 시민을 가둬 더 많은 혐오주의자를 만드는 태도로 이 목적을 이룰 수 있을지 한 번쯤 생각해볼 일이다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 제공하세요.	최근	이 문제에서는 주어진 텍스트 내의 <MASK>로 표시된 부분에 들어갈 적절한 단어를 예측해야 합니다. <MASK>가 위치한 문장의 전체 문맥을 분석하여, 문장의 나머지 내용과 일관되게 <MASK>에 들어갈 가장 적합한 단어를 답하세요. #텍스트: 광섬유를 이용한 디지털 전송 시스템은 현재 유선 통신 분야에서 가장 널리 사용하고 있다. 유선 통신망 또는 유무선 통합 가입자 통신망을 운용하는데 있어서 유선통신망 성능은 광 송수신모듈(광 트랜시버) 및 기타 광 부품들에 의해 결정될 수 있다.일반적인 유선 광통신망의 광 트랜시버는 광 송신모듈과 광 수신모듈로 구성되며, 광 송신모듈은 발광소자, 및 광변조기를 포함할 수 있다.일반적으로 실리카 광섬유를 전송선으로 사용하고 있는 광통신망용 발광소자는 발진파장 1㎛ 영역의 적외선 레이저 다이오드(LD)가 사용되며, 발광소자와 광변조기는 렌즈(lens)를 사용한 free-space연결, 폴리머 등의 소재의 도파로를 이용한 연결, 또는 발광소자와 광 변조기를 일체로 형성하는 과정에서 웨이퍼 상에 도파로를 형성하여 연결될 수 있다.레이저 다이오드(LD)는 높은 출력의 고품질 광(예: 스펙트럼의 반치폭이 좁은 광)을 출력할 수 있어 장거리 대용량 광신호 전송용 광원으로 장점이 있다. 그러나, 레이저 다이오드(LD)의 동작특성이 주변온도에 민감하므로 안정된 동작을 얻기 위하여서는 온도 보상 장치(TEC, thermoelectric cooler)가 필요하다.또한, 레이저 다이오드(LD)는 출사광이 주변으로부터 반사되어 레이저 다이오드(LD)로 재입사되면 동작특성이 매우 불안정하게 되기 때문에 광 아이솔레이터(isolator)의 사용이 불가피하며, 레이저 다이오드(LD) 자체의 제작 비용 또한 높은 문제가 있다.<MASK> 네트워크 기술, 센서 기술, RFID기술 및 소프트웨어 기술의 발전에 따라 사물 인터넷(IOT, Internet Of Things) 시대가 도래하고 있다. 수많은 디바이스들을 연결하기 위해 광 송수신 모듈로 구성된 광통신망이 필수적이다. 따라서, -50°C 에서 150°C까지의 극한 환경에서도 온도 보상 장치 및 광 아이솔레이터 없이 동작 가능한 광 송수신 모듈에 대한 개발이 필요하다. 여기서, -50°C에서 150°C의 온도 범위는 각종 전자회로에 사용되고 있는 Si IC의 정상동작을 위한 허용온도 범위이다. 그러나, 레이저 다이오드는 온도 보상 장치 및 광 아이솔레이터 없이는 다양한 온도 환경에서 신뢰성을 보장할 수 없는 문제가 있으며, 가격이 높은 문제가 있다.
	크레시 전투는 중세 시대에 웨일스와 잉글랜드 사이에서 벌어진 전투로, 웨일스인과 잉글랜드인들이 사용한 강력한 중세 장궁인 웨일스 장궁이 큰 역할을 했습니다. 이 장궁은 백년전쟁 당시 프랑스를 상대로 많은 승리를 거두었으며, 슬로이스 해전, 크레시 전투, 푸아티에 전투, 그리고 가장 유명한 아쟁쿠르 전투에서도 장궁병의 활약으로 잉글랜드가 승리를 거두었습니다. 그러나 이후 장궁병은 사양세로 접어들었고, 베르뇌 전투에서 장궁병 대열이 붕괴하면서 완전히 궤멸되었습니다. 영국에서 사용된 장궁은 웨일스 장궁이라고도 불립니다. 북유럽과 서유럽 전역에서는 거의 동일한 활이 사용되었습니다. 가장 오래된 영국 장궁 유물은 서머싷 주에서 발견된 기원전 2665년경의 물건이 있으나, 장궁이 대활약한 중세 성기의 장궁 유물은 남아있는 것이 없습니다. 문예부흥기에는 130개 이상의 장궁이 남아 있으며, 1545년 포츠머스 앞바다에서 침몰한 헨리 8세의 배 메리 로즈 호에서 장궁 137개와 화살 3,500개가 인양된 적이 있습니다.	크레시 전투와 관련된 중세 시대에 사용된 장궁에 대해 알려줘.
	즉, 인력수급전망의 주 기능은 정책결정자 뿐만 아니라 광범위한 이해당사자들에게 교육-노동시장의 연계에 대한 유용한 정보를 제공하는 것으로 재정립되어야 한다	주어진 문장 뒤에 자연스럽게 이어질 문장을 생성해주세요. 문장: 이러한 전공별, 학력수준별 인력수급 전망 수행에 따른 한계점을 보완하고, 급변하는 과학기술현황에 발맞춘 인력계획을 수립하기 위해서는 과학기술인력 전체보다는 주요 핵심기술별 인력수급 전망이 요구된다. 이때 핵심기술은 중장기적인 관점에서 향후 5∼10년 내 유망 기술분야를 선정하는 것이 합리적일 것이다. 그리고 결과의 범위 하에서 BT 등 과학기술인력 하위 섹터 단위에서 3~5년의 단기 예측을 강화하여 예측의 정밀도와 정확도를 높이고 여러 최종 수요자에게 풍부한 정보를 제공하는 수급전망 체계를 구축하는 것이 필요하다.
	공개매수는 불특정 다수에 대하여 주식 등의 매수 청약을 하거나 매도 청약을 권유하고, 유가증권시장 밖에서 매수하는 것을 말합니다. 매수 대상은 상장 또는 코스닥 등록법인이 발행한 유가증권으로서 의결권 있는 주권이나 전환사채권, 신주인수권부사채권, 신주인수권을 표시하는 증서, 교환사채권 등이며, 매수 방법은 매수, 교환, 입찰, 기타 유상 양수 등이 포함됩니다. 공개매수는 증권거래소 및 코스닥시장 밖에서 이루어집니다. 공개매수하려면 본인과 특수관계자가 보유한 주식의 총수가 5% 이상이어야 하며, 6개월 이내에 10인 이상에게 매수할 때 인수기업의 이사회에서 결정을 해야 합니다. 공개매수하고자 하는 자는 대통령령이 정하는 바에 따라 공개매수신고서를 금융감독위원회에 제출해야 하며, 신고시 증권회사를 대리인으로 강제 지정하게 됩니다. 공개매수와 관련된 행동규제로는 별도매매의 금지, 발행인의 행위금지, 반복공개 매수금지 등이 있습니다. 우호적 인수합병은 상대 기업의 동의를 얻어 경영권을 얻는 것을 말하며, 백기사는 적대적 인수합병에 대처하여 경영권 방어에 적극적으로 나선 사람을 말합니다. 적대적 인수합병은 제3자가 대주주의 의사에 반해 기업 경영권을 빼앗는 것으로 "기업사냥"이라 불립니다. 적대적 M&A가 시도될 때, 대상회사의 경영진은 적극적인 방어행위로 나옵니다. 미국은 S&P 500 대 기업의 94%가 경영권 방어수단을 갖고 있으며, 일본과 영국은 외자 방어법을 두고 있습니다. 백지주는 백기사와 비슷하지만, 경영권 인수에는 관심이 없는 투자자로서 대상기업의 상당지분을 매입하겠다고 동의한 주주나 대상기업의 경영진에게 우호적인 관계를 맺어 적대적 인수시도가 들어올 때 경영진의 편을 들어 주는 투자자를 지칭합니다. 대한민국의 상법은 적대적 M&A에 대해 대상회사의 경영진이 방어행위를 할 수 있느냐에 대해 명확한 규정을 두지 않았지만, 이사회에 포괄적인 권한을 주고 있어 적대적 M&A에 대한 방어행위의 결정권은 이사회의 권한사항으로 보는 것이 타당할 것입니다.	공개매수는 무엇을 의미하는가?
	특히 ICT의 발전 및 스마트폰의 이용 확대와 더불어 상기 정보에 대한 편리한 모바일 서비스 기능이 제공되어야 한다	주어진 문장 뒤에 자연스럽게 이어질 문장을 생성해주세요. 문장: 정부 3. 0을 비롯하여 최근에는 정보 제공에 있어서 단순히 정부 및 업계, 학계에 머물지 않고 ‘국민 중심의 맞춤형 서비스’를 제공하는 방향으로 나아가고 있다. 따라서 양식정보 통합관리 또한 대국민 서비스의 확대를 포함한다. 우선 양식업 나아가서는 수산업과 관련하여 일반국민의 주된 관심사는 수산물의 안전성, 편리한 구매, 원산지, 가격 등이다. 따라서 이러한 일반국민이 필요로 하는 정보의 수집 및 체계적 관리 그리고 편리한 서비스 제공이 필요하다. 이미 이와 관련하여 HACCP, 이력추적제, 원산지 표시, 인터넷 수산시장 등의 정보가 기관별로 분산되어 제공되고 있다. 양식정보의 통합관리에서는 이러한 정보를 수집하여 통합관리시스템을 통해서 제공할 계획이다.
	행정청이 개인택시운송사업 면허를 발급하면서 면허의 상관성에 대한 고려에 더해 관내 운송사업 및 면허발급 현황과 장기적인 전망과 대책 등 정책적 고려까지 하여 택시 운전경력자를 우대하여 처분하여도 위 면허의 신규발급 우선순위에 관한 규정은 합리적인 합목적적 행정의 수단 또는 기준으로서 이에 따른 제외처분 역시 적법하다.	주어진 문장을 적절하게 요약해주세요. 문장: [1] 행정청이 개인택시운송사업의 면허를 발급하면서 택시 운전경력의 업무적 유사성과 유용성 등 해당 면허와의 상관성에 대한 고려와 함께 당해 행정청 관내 운송사업 및 면허발급의 현황과 장기적인 전망 및 대책 등을 포함한 정책적 고려까지 감안하여 '택시' 운전경력자를 일정 부분 우대하는 처분을 하게 된 것이라면, 그러한 차별적 취급의 근거로 삼은 행정청의 합목적적 평가 및 정책적 고려 등에 사실의 왜곡이나 현저한 불합리가 인정되지 않는 한 그 때문에 택시 이외의 운전경력자에게 반사적인 불이익이 초래된다는 결과만을 들어 그러한 행정청의 조치가 불합리 혹은 부당하여 재량권을 일탈·남용한 위법이 있다고 볼 수는 없다. [2] 동해시가 개인택시 면허발급의 우선순위를 정하면서 버스나 다른 사업용 자동차의 운전경력보다 택시 운전경력을 우대하고 나아가 같은 순위 내 경합이 있으면 다시 택시 운전경력자를 우선하도록 하는 내용의 '동해시 개인택시운송사업면허 사무처리규정'에 따라 면허발급대상 인원보다 후순위인 사람에게 개인택시운송사업면허 제외처분을 한 사안에서, 면허의 대상이 개인택시운송사업이어서 거기에 종사하게 될 자를 정할 때 버스나 다른 사업용 자동차의 운전경력에 비해 업무의 유사성이 높은 택시운전경력이 더욱 유용하다는 판단 등이 고려된 위 규정의 취지 등에 비추어, 개인택시면허 신규발급의 우선순위에 관한 위 규정 제4조 제2항은 합목적적인 행정의 수단 내지 기준으로서 나름대로 합리적이고 타당한 것이므로 그에 따른 위 제외처분 역시 적법하다고 한 사례.
	제목: 구리시, 한강시민공원 내 실개천 ‘연꽃 단지’ 새 단장 10일 구리시는 봄과 가을 축제기간에만 사용했던 구리한강시민공원 개천에 '연꽃 단지’를 조성해 5월 하순부터 9월 중순까지 다채로운 볼거리와 아름다운 휴식공간을 마련여 구리의 명소가 될 것으로 예상한다고 전했다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: 구리시민들의 휴식공간인 구리한강시민공원 개천에 화려함과 단아함을 갖춘 ‘연꽃 단지’가 새롭게 조성됐다. <사진> 10일 구리시에 따르면 그동안 봄과 가을 축제기간에만 물을 채워 사용하던 구리한강시민공원 내 길이 300m 실개천에 연꽃 단지 1천890㎡를 조성하고, 여름철 이곳을 방문하는 시민 및 외부 방문자들에게 아름다운 휴식공간을 제공하기 위해 새롭게 정비했다. 연꽃 단지는 구리시의 새로운 명소가 될 것으로 기대를 모으고 있다. 시는 지난달 23일부터 실개천을 정비하고 자체 인력 22명을 동원해 다양한 종류의 수련 4천800촉과 개천 경사면 및 조경석 틈 사이에 부처꽃과 창포 4천500본을 식재했다. 한강시민공원 실개천에 식재한 수련은 잎과 꽃이 수면 위로 높이 솟아올라 피어나는 일반적인 연과 달리 말발굽 형태의 잎과 다채로운 색상의 꽃이 수면 위에 뜬 형태로 피어나는 부수식물(浮水植物)이다. 5월부터 9월 사이에 개화되는 여러해살이 수중식물이며 꽃말은 ‘청순한 마음’으로, 2020년 초여름이면 아침 햇살을 받아 이슬을 머금은 청순한 수련을 감상할 수 있을 전망이다. 시 관계자는 "연꽃 단지 조성으로 유채꽃 개화 기간이 끝나는 5월 하순부터 코스모스가 피기 시작하는 9월 중순까지 구리한강시민공원 꽃 단지에 볼거리가 없어 시민들의 방문이 급감하는 문제점을 보완할 수 있을 것"이라며 "지난 7월 지정한 ‘김외정 백합나무길’과 연계해 사계절 내내 다양한 볼거리를 감상할 수 있는 명소를 만들어 가겠다"고 말했다. 구리=윤덕신 기자 dsyun@kihoilbo.co.kr 기호일보, KIHOILBO
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	따라서 당뇨병에 대한 조기진단을 통한 적절한 치료와 생활습관을 지키는 관리가 이루어지는 것이 중요하며, 이를 통하여 당뇨병의 합병증을 감소시키고 생존률을 향상시킬 수 있다고 많은 연구에서 보고하고 있다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 당뇨병(diabetes melitus)은 고령화 및 생활습관의 서구화에 따라 전 세계적으로 유병률과 사망률이 계속적으로 증가하고 있는 만성 대사 장애 질환이다. 질병관리본부가2013년 11월 발표한 ‘2012 국민건강영양조사’ 결과에 의하면, 만 30세 이상 성인의 당뇨병 유병률은 남성 10.1%, 여성 8.0%였으며, 30~40대 당뇨병 유병자 절반이상이 미인지, 비치료 상태인 것으로 보고되었다. 또한 2013년 통계청에서 발표한 ‘사망원인통계’에 의하면 한국인의 사망원인 중 5위(23.0%)를 차지하며, 2011년에 비해 1.5% 증가하였으며, 남성의 순위(5위)보다는 여성이 더 높게(4위) 나타났다 .당뇨병은 당뇨 자체의 문제 및 합병증으로 인한 건강문제가 나타날 수 있는데, 대표적인 문제점으로 망막합병증으로 인한 실명, 당뇨병성 신증으로 인한 말기신부전증으로의 진행, 신경합병증으로 인한 하지 절단 등이 있으며, 특히 심혈관 질환으로 인한 사망의 증가 및 의료비 상승으로 직결된다고 알려져 있다.
	유전자검사의 경우에도 검사 결과를 오도할 가능성이 있는 검사를 금지 혹은 제한시킨 조치는 적절하지 않은 것으로 판단된다. 비록 생명윤리법에서 금지․제한한 검사가 19종에 불과하고 현행법에 명시되지 않은 수많은 검사들이 현재 시행되고 있긴 하지만, 문제가 되는 검사에 대해 과학적 타당성이 부족하다는 이유로 원천적으로 차단하는 것은 과도한 대응이었다고 생각된다. 유전자검사의 보편화로 미래사회는 엄청난 변화를 겪게 될 것이고 이러한 시대적 흐름을 거스르긴 힘들 것으로 보인다. 급속한 기술발전과 함께 유전자검사에 대한 분석적 유효성도 빠르게 극복될 것으로 생각되는 만큼 문제가 되는 검사들을 원천적으로 차단시키는 것이 아니라 문제를 야기한 개별기업들에 대해서 경고 조치 등의 방식으로 접근하거나 검사결과의 과대해석이나 허위광고에 대한 규제를 강화하는 방식으로 문제를 해결할 수도 있었을 것으로 보인다.	주어진 제목과 요약문에 대한 정보를 토대로, 요약되기 전 문장을 유추해서 생성해주세요. 제목: 바이오 분야 규제형성과정 개선방안 요약문: 유전자검사의 보편화는 시대 흐름이다. 따라서 결과를 오도할 가능성이 있는 검사라 할지라도 금지 혹은 제한하기 보다는 경고 조치를 하거나 과대해석, 허위광고 규제를 강화하는 방식을 취하는 것이 현멍하다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	한편, 선행문헌과 같이 개인결제정보가 아닌 상품권이나 현금으로 결제하고자 하는 경우에도 더치페이가 가능한 기술이 요구되고 있다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 일반적으로, 더치페이(dutch pay)는 여러 사람끼리 모여서 필요한 비용을 각자 계산하는 행위를 의미한다. 일본어로는 와리깡, 한자어로는 각출이라고 한다. 속어로는 일본어 분배(分配)에서 유래된 '뿜빠이' 도 있다. 더치페이(dutch pay)는 고깃집같이 각자의 몫을 따로 계산하기 어려운 경우에 편의상 다 합쳐서 1/N로 계산하는 것도 포함한다. 최근 일명 김영란법이 국회 결의를 통과해 시행됨으로써 공무원과 교수 등 식사자리에서 더치페이 문화가 확산되고 있다. 그러나 기존의 음식점에서 1/N로 계산하여 처리하는 것은 현실적으로 어렵다. 한국등록특허 제10-1584704호(발명의 명칭 : 모바일 카드결제앱을 이용한 더치페이시스템 및 그 제어방법)에는, 모임의 대표자가 사용카드로 선결제를 하거나 선결제하기전에 모바일 카드결제앱을 활성화시킨 후 1/N로 청구할 더치페이 참여자의 개인결제정보를 모바일 카드결제앱의 설정메뉴에 설정시키고 해당 참여자들의 기설정된 전화번호로 결제확인용 푸쉬메시지를 전송하여 승인확인을 받은 후 더치페이결제기능을 실행시키는 이동통신단말기를 개시하고 있다. 선행문헌에 따르면, 카드사 결제서버는 이동통신단말기의 모바일 카드결제앱을 통해 더치페이 참여자들의 개인결제정보를 전송받아 정산처리하는 기술이 개시되어 있다. 그러나 선행문헌은 모임의 대표자가 참여자들의 개인결제정보를 자신의 스마폰에 모두 저장해야 하는 불편함이 있다. 또한, 타인의 결제정보를 스마트폰에 저장함으로 분실, 도난 시 개인결제정보 유출로 인한 금융사기에 노출될 수 있는 위험성이 있다.
	기존 사이버폭력과 MIM을 사용한 사이버폭력 간 차이점에 대해서는 다음에서 좀 더 자세히 살펴보기로 한다	주어진 문장 뒤에 자연스럽게 이어질 문장을 생성해주세요. 문장: 따라서 위에서 논의한 사이버폭력에 대한 개념과 특징을 바탕으로 MIM을 사용한 사이버폭력의 개념과 특징을 정리하면 다음과 같다. MIM을 사용한 사이버폭력은 MIM을 매개로 대화 상대에게 글이나 이미지, 동영상 등을 이용하여 적대적 의사표현이나 호전적 태도를 고의적으로 지속함으로써 대화 상대에게 정신적·심리적 피해를 입히는 비행행위로 정의할 수 있다(정한라, 2013). 그리고 이러한 MIM을 사용한 사이버폭력은 기존 사이버폭력의 특징을 대부분 수용하지만 몇 가지 점에서 차이가 있다. MIM을 사용한 사이버폭력은 익명성을 띤 다수의 가해자가 폭력을 행사하는 것이 아니라, 피해자와 가해자가 이전부터 서로 아는 관계에서 이루어지며 기존 사이버폭력과 비교할 때 상대적으로 소수의 그룹을 중심으로 폭력이 발생한다는 특징이 있다.
	제목: 장수사랑 가족화사업 자살 예방효과 톡톡 2018년도 지역안전지수 평가 자살부문에서 장수군이 1등급을 획득해 전년도(5등급) 대비 크게 상승해 그 원인에 이목이 쏠리는 가운데 지난 2015년부터 추진중인 '장수사랑 가족화 사업'이 노인자살 예방에 크게 기여한 것으려 평가되어 주목을 받고 있다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: 장수군에서 추진하고 있는 '장수사랑 가족화 사업'이 사회적 문제가 되고 있는 노인자살 예방에 효과가 있는 것으로 평가돼 주목을 받고 있다. 13일 장수군에 따르면 2018년도 지역안전지수 평가 자살부문에서 1등급을 획득해 국무총리 주재 영상회의에서 자살예방 모범 지자체로 선정됐다. 특히 지난 2017년 5등급이었던 자살부분 지수는 1년 만에 1등급으로 상승한 것으로, 그 원인에 이목이 쏠리고 있다. 군은 자살예방 효과로 지난 2015년부터 특수시책으로 추진하고 있는 장수사랑 가족화 사업이 가족사랑 회복뿐만 아니라 노인 자살률 감소 효과도 나타내고 있는 것으로 분석했다. 장수사랑 가족화 사업은 고향에 거주하고 있는 노인들의 안부를 스마트폰 동영상으로 촬영해 타지에 있는 자녀들에게 SNS로 전송함으로써 부모의 안전을 확인하고 가족 간의 정서적 유대감을 높이는 사업이다. 해당 사업은 현재 16명의 수행 인력이 구성돼 활동 중이며, 이들은 관내 노인 870명을 대상으로 주기적으로 방문해 말벗 역할과 함께 자녀에게 보낼 영상편지, 일상생활 사진 등을 찍으며 불편한 사항과 안부를 묻고 있다. 수행 인력들은 다양한 영상제공을 위해 스마트폰 동영상 편집 기술을 교육받았으며 장수군 지원민방위대, 안전모니터 봉사단으로 활약하며 비상사태를 대비한 응급처치, 소화기 사용요령을 익혀 안전지킴이로도 앞장서고 있다. 군 관계자는 "모든 사회문제가 그러하듯 노인자살 문제도 '가족사랑' 이라는 본연의 가치 회복에서 그 해결법을 찾을 수 있다"며 "가족사랑 회복으로 모든 사회문제를 해결하겠다는 목표로 꾸준하게 사업을 이어가도록 하겠다"고 말했다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 제공하세요.	향후	이 문제에서는 주어진 텍스트 내의 <MASK>로 표시된 부분에 들어갈 적절한 단어를 예측해야 합니다. <MASK>가 위치한 문장의 전체 문맥을 분석하여, 문장의 나머지 내용과 일관되게 <MASK>에 들어갈 가장 적합한 단어를 답하세요. #텍스트: 오늘날 고령화와 급진전/소득 향상 등으로 삶의 질 개선욕구가 증가, 치료에서 예방 중심으로 소비자의 건강관리 패러다임이 변화하고 웰니스에 대한 관심이 증가하고 있다. 이에 대한 사회적 관심은 IT 분야를 포함한 다양한 산업 분야들 간의 융합을 통하여 확대되고 있다. 웰니스와 IT 융합의대표적인 것으로, 웰니스를 위해 사용자에게 맞춤화된 콘텐츠를 추천해주는 시스템이 있다. 하지만 기존 연구들에서는 콘텐츠의 웰니스 일부 영역에만 치중되어 있어, 웰니스를 위한콘텐츠 추천 시 사용자들의 신뢰도 및 만족도가 떨어지는 결과를 초래할 수 있다. 그렇기 때문에 콘텐츠의 웰니스 영역을 통합해서 관리 및 분석 할 수 있는 방법이 필요하다. 본 논문의 구성은 다음과 같다. 1장에서는 연구의 배경과 연구의 내용, 구성에 대해 기술한다. 2장에서는 관련 연구로웰니스와 웰니스의 영역, 웰니스 영역별 콘텐츠 특성 분류에 대해서 알아본다. 3장에서는 웰니스 영역을 통합적으로 반영하기 위한 새로운 메타데이터 구성에 대해 제안하고, 웰니스 영역별로 특성 분석 방법을 제안한다. 4장에서는 제안한 방법을 통해 웰니스 영역별 점수를 계산 후 사전 설문 결과와 비교하여 유효성을 보인다. 마지막으로 5장에서는 연구를 통한결과를 분석하고, <MASK> 연구 과제를 도출한다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	이러한 이유로, 국어교육 연구자는 국어 교과서의 제재를 선정하는 준거 중의 하나로 ‘학생의 흥미와 요구’를 설정해 왔고(정혜승, 2003, 노명완, 정혜승, 윤준채, 2004), 현재 적용되고 있는 <국·검정 교과용도서 편찬상의 유의점 및 심의·검정 기준>(교육과학기술부, 2011)과 2015 개정 교육과정에 따라 새롭게 개발될 교과용 도서를 위한 <교과용 도서 편찬상의 유의점 및 검정기준>(교육부, 2015)도 교과용 도서 편찬의 핵심 기준으로 ‘흥미를 유발하는 학습자 중심의 교과용 도서’를 설정하고 있다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 흥미와 학습 간의 관계를 탐구한 연구에 따르면, 흥미로운 텍스트는 학생을 독서하도록 동기화하고 텍스트 이해에 긍정적인 영향을 주어 질적·양적으로 우수한 학습을 야기한다(Anderson, Shirey, Wilson, & Fielding, 1987, Hidi & Baird, 1986, Schiefele, 1992, Wade, 1992). 또한 텍스트에 대한 흥미는 이야기뿐만 아니라 설명적인 글의 처리에도 중요한 역할을 담당한다(Smith, 1985). 그리고 국어 교과서에 수록되어 있는 텍스트에 대한 흥미는 국어 학습에 대한 학생들의 흥미를 증가시킨다(정혜승, 2003). 이러한 연구 결과를 고려하면 학생들의 흥미를 불러일으킬 수 있는 국어 교과서를 만드는 일은 중요하다. 특히, 교사는 국어 교과서의 제재로 가르치고 학생들은 국어 교과서의 제재로 공부한다는 점을 생각하면, 국어 교과서의 제재를 흥미롭게 만드는 일은 더욱 중요하다.
	제목: 평전으로 본 제주여성의 얼 최정숙의 모교이자 교장을 지냈떤 신성학원총동문회는 최정숙학술세미나를 개최하고 '애국지사 최정숙 선생의 교육의 길 따라 걷다' 행사를 진행하는 등 여성독립운동가들의 뜻을 기리고 있다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: 최정숙·고수선 전기·학술세미나 등 조명 독립운동 등 활동 비해 자료 미비 현실 최정숙, 고수선, 강평국, 김시숙, 현호옥, 이갑문, 이경선, 김진현…. 일제강점기 국가와 민족을 위해 헌신했던 여성독립운동가들에 대해 우리는 얼마나 알고 있을까. 아직까지도 이들에 대한 조명작업은 다소 아쉬운 것이 현실이다. 제주 여성독립운동가들의 발자취를 살펴볼 수 있는 자료로는 1998년 제주문화원 발간 「제주여인상」, 2005년 제주도·제주도여성특별위원회 「시대를 앞서간 제주여성」, 2011년 제주발전연구원 「제주여성사Ⅱ」 등이 있다. 그나마 최정숙, 고수선을 제외하면 여성독립운동가에 관한 전기나 단행본이 발간된 사례도 드물다. 제주도 초대 교육감을 지냈던 최정숙을 추모하고 기억하는 일은 교육계를 중심으로 꾸준히 진행되고 있다. 지난 2009년 신성학원 창립 100주년을 기념해 최정숙의 일생을 다룬 전기 「(수도자의 삶을 살다간 독립운동가 제주교육의 선구자) 최정숙」(박재형 글)이 출간됐다. 이 책에는 3·1만세 운동에 참가해 옥고를 치른 독립운동가이자 박애 정신을 실천한 의사, 후세교육에 헌신한 교육자의 삶을 정리해놓았다. 또 제주교육박물관에서도 2016년 위인전 「(제주항일독립운동가, 제주여성교육자) 최정숙」(박재형 글, 고용완 그림)을 펴낸 바 있다. 최정숙의 모교이자 교장을 지냈던 신성학원총동문회에서는 지난 2015년과 2018년 최정숙학술세미나를 통해 최정숙 교육감의 발자취를 돌아보고 재조명하는 시간을 가졌다. 또 2016년 서울에서 '제주 신성의 딸 강평국·고수선·최정숙 독립운동의 길 따라걷다' 행사를, 제주에서도 최정숙기념사업단 주관으로 '애국지사 최정숙선생의 교육의 길 따라 걷다' 행사를 진행했다. 또 2017년 발족한 비영리단체 최정숙을 기리는 모임이 주축이 돼 지난해 8월 아프리카 부룬디에 '최정숙여자고등학교'를 설립했다. 제주도 최초의 여의사였고, 처음으로 여성단체를 결성했으며, 현대정치에 도전한 최초의 여성이었던 우인(又忍) 고수선의 생애를 다룬 평전 「(미래를 걸었던 거인) 운주당 할망」(문소연 저)도 지난해 말 발간됐다. 제주학연구센터·고수선기념사업회에서 발간한 평전에는 가파도에서 출생에서부터 신성여학교 1회 졸업생이던 학창시절, 경성여자고등보통학교 시설의 독립운동과 의학공부, 광복이후 제주에서의 활발했던 사회활동과 노년에 이르기까지 고수선의 전 생애를 담았다. 2018년은 고수선이 세상을 떠난지 30년이 되는 해이며 평전 발간은 그의 활동 무대가 되었던 운주당터 복원을 앞두고 진행된 의미있는 작업이었다. 하지만 고수선의 활동과 업적에 비해 자료가 많지 않아 생애를 정리하는 데 어려움을 겪었다고 한다. 또 고수선은 투옥됐던 기록이 없다는 이유로 1980년에 비로소 독립유공자로 인정을 받기도 했다. 과거의 역사를 기억하는 일은 어찌보면 더 나은 미래로 나아가기위한 필수 조건이다. 올해 3·1운동과 임시정부 수립 100주년이라는 역사적인 해를 맞았다. 조국을 위해 이름도 없이 스러져간 수많은 여성독립운동가들의 숭고한 뜻을 되새기는 것은 후세들의 몫이다.
	대학에 대한 정부의 R&D 투자가 증가하고 다양한 사업이 추진되면서 벤처 붐과 더불어 기술창업 주체로서 대학의 역할이 강화되기 시작하였다(교육부, 2014)	주어진 문장 뒤에 자연스럽게 이어질 문장을 생성해주세요. 문장: 1990년대는 국가연구개발사업과 산학연협력이 과학기술정책 분야에서 커다란 이슈로 등장하면서 1994년 ‘산학연 협동 연구개발촉진법’을 제정하여 기업들이 연구개발 활동과 협력에 참여하도록 하였다(박문수․김해도․박태식, 2013). 특히 이 시기에 대학은 산업계에 인력을 일방적으로 공급하는 전통적인 주체에서 벗어나 인력개발 및 연구개발을 중심으로 상호작용하는 주요 파트너로 자리잡기 시작하고 지역혁신체제(RIS) 구축을 통해 지역을 중심으로 한 산학연협력 사업이 추진되었다.
	경제주체들의 제한적 합리성으로 인한 행동특성은 시장 불완전성, 기술확산 특성을 보완하여 에너지효율 격차를 설명하는데 유용하게 활용될 수 있다. 제한된 합리성이란 인간의 의사결정은 나름대로 합리적인 과정을 거쳐 이루어지지만, 그 합리성이 완벽한 상태가 아닌 제한된 상태로 작용되어 그 선택의 결과 역시 최적 수준으로 연결되지 않음을 의미한다. Kastenr and Stern(2010)이 언급하였다시피, 에너지소비 및 에너지효율 투자를 결정하는 것은 사람이므로, 에너지사용의 기저에는 ‘human factor’가 존재한다. 만약 ‘human factor’, 즉, 제한적 합리성으로 인한 행동특성에 대한 이해가 미흡하다면, 에너지효율격차 문제는 부분적으로 다루어질 수밖에 없다. 본 장은 에너지효율격차를 초래하는 행동특성으로 손실 회피적 성향, 쌍곡할인율, 현상유지 성향, 휴리스틱 기반 의사결정, 의사결정자의 내적성향을 제시한다.	주어진 제목과 요약문에 대한 정보를 토대로, 요약되기 전 문장을 유추해서 생성해주세요. 제목: 정책변화 대응을 위한 에너지수요관리 정책의 법제적 기반 및 정책수단 체계화 연구 요약문: 경제주체의 제한적 합리성에 의한 행동특성은 최적 수준으로 연결되지 않아 에너지효율 차이를 설명하는데 유용하다. 이 행동특성으로 손실 회피적 성향, 쌍곡할인율, 현상유지 성향, 휴리스틱 기반 의사결정, 의사결정자의 내적성향을 제시한다.
	류블린스코 드미트롭스카야 선은 모스크바 지하철의 노선으로, 총 14개 역과 함께 24.7km의 길이를 가지고 있습니다. 셀리게르스카야 역이 기점이며 쟈블리코보 역이 종점인데, 이 노선의 색상은 연두색입니다. 이 노선은 여러 단계에 걸쳐 개통되었으며, 각 구간별 개통일과 거리는 다음과 같습니다. 셀리게르스카야 - 쟈블리코보 구간은 1995년 12월 28일에 개통되었고, 길이는 12.1km입니다. 그 후 볼쉬스카야 - 마리노 구간은 1996년 12월 25일에 개통되었으며, 길이는 5.4km입니다. 또한, 두브로브카 - 트루브나야 구간은 1999년 12월 11일에 개통되었고, 길이는 3.7km입니다. 스례텐스키 불바르 - 트루브나야 구간은 2007년 12월 29일에 개통되었으며, 길이는 3.5km입니다. 마리노 - 쟈블리코보 구간은 2011년 12월 2일에 개통되었고, 길이는 4.5km입니다. 마리나 로샤 - 페트롭스코 라주몹스카야 구간은 2016년 9월 16일에 개통되었으며, 길이는 4.4km입니다. 페트롭스코 라주몹스카야 - 셀리게르스카야 구간은 2018년 3월 22일에 개통되었으며, 길이는 4.9km입니다. 이 외에도 다른 노선들과 환승할 수 있는 역들이 있습니다.	모스크바 지하철 노선 중 연두색 노선의 이름은 어떻게 되나요?
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 제공하세요.	놓고	이 문제에서는 주어진 텍스트 내의 <MASK>로 표시된 부분에 들어갈 적절한 단어를 예측해야 합니다. <MASK>가 위치한 문장의 전체 문맥을 분석하여, 문장의 나머지 내용과 일관되게 <MASK>에 들어갈 가장 적합한 단어를 답하세요. #텍스트: 김(Porphyra yezoensis)은 홍조식물 보라털목 보라털과의 해조로서, 미역 및 다시마 등과 함께 우리나라에서 가장 많이 생산되는 해조류이다. 국내 해조류 생산량은 매년 꾸준히 증가하고 있으며 최근 5년 동안 김과 미역의 생산량은 전체 해조류 생산량의 60~70%를 차지하고 있을 정도로 매우 경제성이 높은 수산자원이다. 특히, 김의 경우에는 2012년부터 미역 생산량을 추월해 가장 많이 생산되고 있는 해조류로서, 웰빙(well-being) 열풍과 함께 세계시장 선점을 위한 수출전략품목으로 선정되어 김에 대한 관심이 점차 증대되고 있다. 국내에서 주로 양식되고 있는 김의 종류는 크게 일반김과 돌김으로 구분되며, 상기 일반김은 참김과 방사무늬김; 상기 돌김은 잇바디돌김과 모무늬돌김이 대표적이다. 김의 이용형태로는 주로 마른김과 조미김의 형태로 가공되고 있다. 상기 형태 외에도 김부각, 김자반, 김 스프, 김 조미료, 김 즉석된장국 등이 개발되었으나 거의 마른김과 조미김의 형태로 가공되고 있으며, 다른 형태의 가공제품은 극히 미미한 수준이다. 상기 마른김은 판상형과 자반형 2가지로 크게 구분되는데 대부분 판상형이며, 자반형을 이용한 가공제품은 현재 김자반이 유일하다. 상기 김자반은 소금에 절이거나 조려서 저장해 <MASK> 오래 먹는 반찬을 말한다. 상기 판상형보다 자반형이 형태의 제약이 적고 부피감 창출이 가능하여 다양한 용도로 신규 가공제품 개발이 용이하지만, 현재까지는 기존의 김자반에 다양한 조미 첨가, 부원료 첨가 및 기능성원료 첨가 등의 1차원적인 제품개발만 되고 있는 상황이다. 또한, 김은 1 g 당 50원 이상으로 비싼 원료 중 하나이면서 일본을 제외한 다른 나라에서는 반찬용이 아닌 스낵으로 애용하고 있으므로 김의 소비확대와 수출증대를 위해서는 단가를 낮추면서 기존의 형태가 아닌 새로운 형태의 가공제품 개발이 절실한 상황이다. 따라서 기존의 조미김 형태가 아닌 자반형 마른김을 이용하여 자반형의 고유한 형태를 유지하면서 김 고유의 맛과 바삭한 식감을 고려한 새로운 형태의 가공식품이 요구되고 있다.상기 자반형 마른김을 이용하여 새로운 형태의 가공식품을 개발한다면 김의 과잉생산을 해소하고 수출증대 및 소비를 촉진시킬 수 있으며 이를 통하여 김의 부가가치를 높여 경제성을 제고하고 크게는 김 가공산업의 발전을 도모할 수 있을 것이다.
	트럼프는 플레잉카드와 같은 의미로 사용되며, 트럼프 만화는 이채은 작가가 매주 토요일 네이버 웹툰에 연재하고 있는 만화입니다. 또한, 미국의 트럼프 가는 도널드 트럼프가 제45대 미국 대통령이었으며, 그의 아내는 이바나 트럼프이고, 그의 아내는 멜라니아 트럼프입니다. 도널드 트럼프 주니어, 이방카 트럼프, 이브랑카 트럼프, 에릭 트럼프, 티퍼니 트럼프는 각각 도널드 트럼프의 아들과 딸입니다.	트럼프의 의미는 무엇인가요?
	제목: 고리원전 4호기 제어봉 떨어져...고리본부 “사고 아니라 제어장치 고장” 21일 한국수력원자력㈜ 고리원자력본부는 원자로의 출력을 조절하는 제어봉이 알 수 없는 이유로 고장 나 지난 20일 오후 6시11분부터 고리4호기의 원자로 출력을 내리기 시작했다고 밝히고 사고가 난 게 아니라 안전장치의 고장일 뿐이라고 해명에 나섰다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: 고리원전4호기 원자로의 출력을 조절하는 제어봉이 알 수 없는 이유로 고장이 났다. 한국수력원자력㈜ 고리원자력본부는 “사고가 난 게 아니라 안전장치의 고장일 뿐”이라며 해명에 나섰다. 한국수력원자력㈜ 고리원자력본부는 지난 20일 오후 6시11분부터 고리4호기의 원자로 출력을 내리기 시작했다고 21일 밝혔다. 고리본부가 이 같이 조치한 것은 이날 오후 5시33분 고리4호기의 원자로 출력을 제어하는 제어봉 1개가 떨어졌기 때문이다. 고리원전 3, 4호기. 제어봉은 원자로 천장에 설치된 출력 제어 장치로, 전체 52개의 제어봉이 원자로에 설치돼 있다. 원자로의 출력이 올라갈 경우 시설 관리자가 제어봉이 내려가게 하면 출력이 낮아진다. 그런데 이번에 1개의 제어봉이 작동도 하지 않았는데, 스스로 낙하했다는 게 고리본부 측의 설명이다. 고장이 발생한 뒤 고리본부 측은 절차서에 따라 규제기관인 원자력안전위원회에 사안을 보고하고 원자로의 출력을 낮춘 뒤 고장의 원인 조사에 돌입했다. 고리원전4호기는 고장 당일 밤 9시30분부터 원자로 출력 49% 수준에서 안정 상태를 유지하고 있다. 이에 고리 본부 측은 “이번 일은 단순한 제어장치 고장일 뿐 원자로 전체의 안전사고와는 무관하다”고 설명했다. 고리본부 관계자는 “제어봉 작동이나 조작장치와 제어봉 간 신호에 문제가 생겼을 수 있다. 고장 원인을 파악하는 대로 원자로의 출력을 정상화하겠다”고 설명했다. 이승륜 기자 thinkboy7@kookje.co.kr .
	구체적으로 SDGs 목표 4(Quality Education)는 교육의제로서 “모든 이를 위해서 포괄적이고 형평성 있는 양질의 교육을 보장하고, 평생학습의 기회를 증진한다.”는 것이다(김진희 외, 2015). 국제사회가 빈곤 퇴치와 인류 번영을 염원하면서 설정한 MDG와 SDGs 맥락의 발전 논의에서 빠질 수 없는 것이 바로 인간 행동의 바람직한 변화를 도모하는 ‘교육’이다. 그것은 우리 삶의 전반에 걸쳐 영향을 주고 적절한 교육을 통해서 사회 구성원으로서의 역할을 수행할 수 있게 된다. 여기서 더 나아가 지속가능한 발전을 위한 교육은 단순히 글을 아는 것에서부터 새로운 기술과 지식을 얻는 것, 직업을 갖기 위하여 특별한 분야의 자격을 취득하는 것은 물론 직업인으로서 자기계발을 이어가는 활동 등을 포함하며 국적, 계층, 인종에 따른 불평등과 차별을 뛰어넘어야 한다(김진희 외, 2015).	주어진 제목과 요약문에 대한 정보를 토대로, 요약되기 전 문장을 유추해서 생성해주세요. 제목: 지속가능개발목표(SDGs)의 직업능력개발(TVET) 분야 추진전략 연구 요약문: SDGs 목표는 인간 행동의 바람직한 변화를 도모하는 ‘교육’인데, 직업인으로서 자기계발을 이어가는 활동 등을 포함하고 국적, 계층, 인종의 불평등과 차별을 뛰어넘어야 지속가능한 발전을 위한 교육이라 할 수 있다.
	즉 국내 조세부담을 회피하기 위해서 외국법인을 설립하고 국내법인과의 에이전트 계약을 통해 업무를 포괄적으로 위임하여 외국법인의 실질적인 관리장소가 국내라고 하더라도 이로써 조세포탈죄가 성립하지는 않는 것을 알 수 있다	주어진 문장 뒤에 자연스럽게 이어질 문장을 생성해주세요. 문장: 그러나 국내 해운회사가 홍콩법인의 에이전트인 것처럼 가장하였다거나 홍콩법인에서 실질적인 영업 및 업무가 수행되는 것처럼 가장하여 적극적인 위계행위를 한 것인지에 관해서는 이를 부정하였다. 홍콩법인의 실질적 관리장소가 국내로서 내국법인에 해당한다 하더라도 홍콩법인의 존재 자체가 부인되지 않으며, 홍콩법인과 국내 해운회사 간에 에이전트 계약이나 거래행위가 허위의 사실 또는 법률관계를 가장한 것이 아닌 실질에 기반한 것으로서 적극적인 기망행위의 고의가 없었다고 판단한 것이다.
	제목: "매뉴얼대로 했다"? 왜 사고 때마다 같은 변명이... 한달 전 서울 목동 빗물펌프장 사고, 잠원동 붕괴사고 역시 합동감식에 참여한 전문가들은 지침을 어긴 작업을 사고 원인으로 꼽은 가운데 사고가 나면 언제나 매뉴얼대로 했다는 변명이 나오지만 이를 준수하지 않아 사고로 이어지는 경우가 대다수이다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: 지난 7월31일 목동 대심도 터널(신월저류배수시설) 공사 현장에서 일하던 근로자 3명이 빗물에 휩쓸려 숨진 사건도 마찬가지다. 사고 한 달여가 지난 지금, 또 다시 기록적인 폭우와 강풍을 동반한 태풍이 한반도에 몰려오고 있다. 여전히 낮은 우리 공사 현장의 안전의식과 '안전장치'의 현주소에 대해 점검해 본다. 지난 달 31일 중부 지방에 기습적인 폭우로 인해 인명사고가 난 서울 양천구 목동 빗물 펌프장에서 9일 오후 경찰, 국립과학수사연구원, 노동부 등 관계기관이 현장 합동감식을 위해 들어서고 있다. "매뉴얼대로 했다", "저희는 권한이 없다." 한달 전 근로자 3명이 숨진 서울 양천구 목동 빗물펌프장 사고, 예비신부의 생명을 앗아간 잠원동 붕괴사고 당시 당국과 시공사 관계자들의 입에서 공통적으로 나온 해명이다. ◇매뉴얼이 없다= 사고가 나면 언제나 "매뉴얼대로 했다"는 변명이 나오지만 실제로 매뉴얼을 지키지 않아 사고로 이어지는 경우가 대부분이다. 잠원동 붕괴사고 합동감식에 참여한 전문가들은 매뉴얼을 어긴 건물 해체작업을 사고 원인으로 꼽았다. 목동 빗물펌프장 사고도 강수확률이 50% 이상이거나 육안으로 하늘에 먹구름이 확인되면 작업을 중단하라는 '돌발강우 시 하수관로 내부 안전작업 관리 매뉴얼'을 지키지 않은 결과였다. 사고 현장에서 매뉴얼 변명이 반복되는 이유 중 하나는 안전매뉴얼은 많지만 개별 공사현장의 특성과 상황에 맞는 매뉴얼이 따로 없기 때문이다. 목동 빗물펌프장은 서울시와 양천구가 공유한 매뉴얼인 '신원빗물저류시설 등 방재시설 확충공사 운영안내서'가 있다. 이에 양천구 측은 "공사가 완료된 후 시행하는 운영매뉴얼"이라며 "사고 당시는 완공 전 시범운영 기간이라 양천구에 권한이 다 넘어오지 않은 시기"라고 해명했다. 시범운영 기간에 적용할 안전 매뉴얼의 부재를 인정한 셈이다. 현장 관계자들은 공사 현장에서 제대로 된 매뉴얼이 마련되고 지켜지도록 법적 의무를 강화해야 한다고 지적했다. 이승현 전국민주노동조합총연맹 건설노조 노동안전국장은 "사고가 날 때마다 서울시 등이 생색내기식으로 매뉴얼을 발표하지만 매뉴얼 존재조차 모르는 작업자가 과반수일 것"이라며 "매뉴얼을 지킬 수 있도록 예방 의무를 법으로 강제해야 발주처나 시공사 관계자들이 책임을 느낄 것"이라고 말했다. ◇책임자가 없다= 대형 공사현장의 안전을 명확히 책임지는 사람이 없다는 점도 문제다. 목동 빗물펌프장 사고에서도 작업자 3명이 터널 안에 있는데도 다른 직원은 별다른 지시를 받지 못한 채 유일한 탈출 문을 닫았다. 갑작스러운 폭우에도 안전사고를 막기 위해 작업을 중단하라는 지시는 없었다. 사고 이후 시·구·시공사 관계자들은 언론과 유족들 앞에서 각자 권한이 없다고 떠넘기며 진실 공방만 벌였다. 1000억원이 넘는 예산이 투입된 대규모 공사장에 안전 문제를 담당하는 책임자가 명확히 있었다면 참사를 피할 수 있었다는 비판이 나오는 이유다. 안형준 전 건국대 건축공학부 교수는 "시공사나 관할 지자체에서 안전 문제를 담당하는 안전관리책임자를 정하고 작업자에게 안전 사항을 숙지시켜야 했다"며 "하지만 사고가 난 이후 서로 책임만 전가하는 고질적인 문제가 반복됐다"고 지적했다.
	카를로스 로아(Carlos Roa, 1969년 8월 16일~ 아르헨티나 산타페)는 아르헨티나의 은퇴한 축구 선수로, 포지션은 골키퍼였습니다. 1988년 18살의 나이에 라싱 클루브에 입단하여 선수 생활을 시작하였고, 이 곳에서 6년간 뛰다 1994년 라누스로 이적하였습니다. 1996년에 스페인 리그 RCD 마요르카에 입단하면서 팀의 새로운 정신적 지주가 되었고, 국가대표에 발탁되어 1996년 코파 아메리카대회에 출전까지 하는 등 큰 업적을 이루었습니다. 그는 96/97 시즌에는 2부리그와 1부리그를 왔다갔다하는 소속팀을 스페인에서 가장 무서워하는 강팀으로 변모시켰으며, 1998년 월드컵 대표팀에 뽑히는 영광을 누리게 됩니다. 그는 본선 3경기 연속 무실점을 기록했으며, 아르헨티나는 3전 전승으로 16강에 진출 하게 됩니다. 그러나 16강전에서 앨런 시어러와 마이클 오언에게 2골을 허용하였지만, 공격진이 2골을 만회시켜 2:2로 승부를 가리지 못해 돌입한 연장전에서 신들린 선방으로 팀을 위기에서 구해내었으며, 연장전에서도 승부를 가리지 못해 승부차기에 돌입한 그는, 폴 인스와 데이비드 배티의 킥을 연달아 선방하며, 아르헨티나의 8강 진출의 견인차 역할을 합니다. 8강전에서도 그는 신들린 선방으로 맞섰으나, 팀은 1명이 퇴장 당한 끝에 결국 후반 막판 데니스 베르캄프에게 결승골을 허용하여 아쉽게 8강 진출에 실패 하였습니다. 그러나 그의 질주는 여기서 멈추지 않았다. 그는 98/99시즌에는 35게임 29실점, 방어율 0.76이라는 놀라운 활약을 보이며 승승장구 하였다. 그러나 1999년 갑작스러운 은퇴를 선언하였다. 이후 맨체스터 유나이티드의 알렉스 퍼거슨이 페테르 슈마이켈의 공백을 메우기 위해 76억원이라는 파격적이라는 조건으로 스카우트 제의를 하지만 본인의 고사로 실패하였고, 소속팀에서도 복귀 요청이 들어왔지만, 결국 성사되지 못했다. 그러나 2000/2001 시즌 안식일에 경기를 뛸지 않겠다는 조건으로 복귀하여 다시 선수생활을 시작하였다. 그는 소속팀의 프리메라리가 우승에 공헌한후, 다시 재은퇴하였다. 190cm이라는 건장한 체격에 카리스마와 민첩성이 뛰어난데다 수비 범위가 상당히 넓었으며, 특히 어려운 공이나 페널티킥 선방 능력을 가져 페테르 슈마이켈과 비교해도 손색없는 깔끔한 선수였다. 그는 성실한 기독교인으로, 토요일이 안식일이라 토요일에는 경기를 할 수 없다는 이유로 은퇴를 선언한 것이였다.	카를로스 로아는 어떤 포지션으로 축구선수로 활동했나요?
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	학교드라마를 연구의 자료로 하는 까닭은, 드라마는 현실 생활을 밀접하게 반영하고 있는 대중매체 장르이므로, 학교드라마는 학교생활의 현실을 밀접하게 반영할 것으로 가정하고 사제 간의 대화 양상이 잘 드러낼 것으로 판단하였기 때문이다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 이 연구의 목적은 학교드라마에 표현된 사제 간 대화의 양상을 분석하는 것이다. 학생들은 학교에서 다수의 교사, 동료 학생들과 인간관계를 맺는다. 그 중에서도 교사는 학생에게 있어 사회라는 테두리에서 만나는 ‘최초의 어른’이라 할 수 있다. 또한 그들에게 다양한 가르침을 전달하는 주된 대상이다. 그러므로 사제 간 주고받는 대화는 학생들의 학교생활 모습을 반추해 볼 수 있는 자료인 동시에, 이러한 대화 분석을 통하여 찾아진 문제가 있다면 수정해 볼 수 있는 근거로도 활용할 수 있을 것이다. 사제 간 대화 분석을 위해서는 실제 학교생활의 모습을 자연 상태로 녹화하여 연구를 하는 방법도 있으나 이 글에서는 학교드라마 나타난 대화를 통하여 분석하고자 하였다. 실제 학교생활의 모습을 밀착하여 자연 상태로 녹화하기 힘들뿐 아니라, 녹화가 진행되는 순간 자연스러운 상황이 발현되기 어려울 것이기 때문이다. 그래서 2차적인 연구 자료로 학교드라마를 선정하였다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	스크롤 펌프의 용량이 감소될수록, 펌핑 제거될 수 있는 누설의 양도 감소되어 결국 압축이 저하된다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 종래의 스크롤 압축기 또는 펌프(10)가 도 5에 도시되어 있으며, 이는 하우징(12), 및 동심 샤프트 부분(16)과 편심 샤프트 부분(18)을 갖는 구동 샤프트(14)를 포함한다. 샤프트(14)는 그 동심 부분에서 하우징(12)에 대해 고정되는 베어링(20)에 의해 지지되며, 모터(22)에 의해 구동된다. 제 2 베어링(24)은, 사용 중에 샤프트의 회전이 궤도 스크롤(26)을 고정 스크롤(28)에 대해 궤도 운동시켜 유체를 압축기의 입구(31)와 출구(33) 사이에서 유체 유동 경로(30)를 따라서 펌핑시키도록 궤도 스크롤(26)을 편심 샤프트 부분(18) 상에서 지지한다. 각각의 스크롤은 대체로 원형인 베이스 판(27, 29)에 대해 수직하게 연장되는 스크롤 벽(32, 34)을 포함한다. 궤도 스크롤의 궤도 운동 중에 궤도 스크롤 벽(32)은 고정 스크롤 벽(34)과 협동하거나 메쉬 결합한다. 스크롤들의 상대 궤도 운동은 일정 체적의 가스가 스크롤들 사이에 봉입(trap)되게 하고 입구에서 출구로 펌핑되게 한다. 스크롤 펌프는 건식 펌프이며, 따라서 스크롤 벽(32, 34) 사이의 간극은 이 간극을 통한 유체의 누출이 최소화되도록 제조 또는 조절 중에 정확히 세팅되어야 한다. 하나의 스크롤의 스크롤 벽의 축방향 단부들과 다른 스크롤의 베이스 판 사이의 공간은 팁 시일(tip seal)(36)에 의해 밀봉된다. 스크롤 펌프의 용량 또는 펌핑 속도는 스크롤들 사이에 봉입될 수 있는 가스의 체적에 의해 결정된다. 펌프의 압축 한계는 역 누설(back leakage)(시일 유효성(seal effectiveness)에 의해 결정됨)의 양, 및 상기 누설을 펌핑 제거하는(pump away) 작용을 하는 펌핑 용량의 함수이다.
	제목: [취재일기] 바위뚫는 소리보다 큰 선거 유세 방송 6·13 지방선거가 다가오면서 유세하러 나온 후보들과 선거운동원 그리고 유세 차량과 확성기로 내는 소음은 바위를 뚫을 정도의 데시벨 이상인데, 이런 형태로 국민에게 불편을 끼치며 하는 선거유세방식보단 시대에 맞게 SNS나 TV토론 으로 주민접촉방식으로 전환해야 한다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: 6·13 지방 선거에 나온 후보들과 선거운동원, 선거 유세 차량이 가득했다. 차량 확성기에선 후보를 알리는 노래와 연설이 쾅쾅 흘러나왔다. 시끄럽다는 생각이 먼저 들었다. 귀를 막은 채 지나가는 사람도 있었다. 유세 차량에서 50m 떨어진 곳에서 소음 측정기로 5분간 재보니 소음 크기는 90~110dB(데시벨)이었다. 순간 최고 소음은 112.9dB에 달했다. 90dB은 소음이 심한 공장 내부 소리, 100dB은 바위를 뚫는 착암기 소리다. 난청을 일으킬 수 있는 수준이다. 선거가 열흘 앞으로 다가오면서 후보들의 유세전도 치열해 지고 있다. 북·미 정상회담을 비롯한 대형 이슈에 지방 선거가 가려질수록 후보의 마음은 급해진다. 유세 차량 확성기 소리는 덩달아 커진다. 난청 유발 수준의 소음은 서울 강남역만이 아니다. 시장 후보 선거 운동원들이 출근길 유세를 벌였다. 소음측정기로 오전 7시50분부터 5분간 재보니 평균 86.3dB, 최고 소음은 94.9dB이었다. 인근 안경점 사장은 "유세 차량이 오면 손님 말이 잘 들리지 않아 영업을 할 수 없다"고 했다. 부산시 서면로터리 등 다른유세 현장도 비슷했다. 도로를 점거한 유세 차량도 시민을 불편하게 한다. 광주광역시 풍금사거리에선 유세 차량 3~4대가 편도 3·4차선 모퉁이마다 자리잡아 교통 체증을 가중시켰다. 횡단보도를 침범해 주·정차한 차량도 있었다. 불편이 상당하지만 이런 행위를 규제할 방법이 현재로선 마땅치 않다. 후보의 확성기 소리 크기를 규제하는 내용이 공직선거법에는 없다. 휴대용 확성장치는 오전 6시~오후 11시, 녹음기는 오전 7시~오후 9시까지 쓸 수 있다는 정도다. 집시법 적용도 받지 않는다. 집시법에선 주간에 75dB을 초과하면 확성기 사용중지 명령을 받지만 유세 차량은 규제 대상이 아니다. 불법 주정차는 물론 단속 대상이다. 하지만 며칠 뒤면 당선될지 모르는 구청장, 시장 후보에 대한 단속은 느슨하다. 유세 방식도 시대에 맞춰 변해야 한다. 사회관계망서비스(SNS)나 TV토론 등을 활성화해 주민 접촉 방식을 바꿔야 한다. 대중 유세가 꼭 필요하다면 소리의 크기, 횟수, 시간대를 엄격히 제한해야 한다. 지역 일꾼이 되겠다며 선거에 나와선 유세부터 국민에게 불편을 끼치는 선거 운동 방식은 꼭 바뀌어야 한다.
	안병용 의정부시장이 15일~16일 미군 헬기 훈련에 대해 강한 유감을 표명했는데, 향후 야간 훈련 자제와 훈련시 사전 통보, 캠프 스탠리의 조속한 반환을 요청했고 데니스 맥킨 미2사단장은 사과하면서 향후 훈련시 사전 통보를 약속했다.	주어진 문장을 적절하게 요약해주세요. 문장: 조윤성 안병용 의정부시장 안병용 의정부시장이 지난 15~16일 의정부시 상공에서 펼쳐진 미군 헬기 훈련에 대해 강한 유감을 표명했다. 안 시장은 헬기 훈련 직후 데니스 맥킨 미2사단장과 전화 통화로 사전 통보 없이 진행된 일방적 야간 훈련에 대한 강한 유감을 표명했다. 또 향후 야간 훈련 자제와 훈련시 사전 통보, 캠프 스탠리의 조속한 반환을 요청했다. 앞서 안 시장은 지난 15일 오전 10시 긴급 대책회의를 열어 헬기 소음에 대한 분야별 대책 등을 강구했다. 회의에 참석한 관계 부서장들은 미군기지 조속한 반환과 소음 예방을 위해 ▶캠프 스탠리 대체시설 마련 촉구 ▶야간 헬기 훈련 자제 요청 ▶상호 연락체계 구축망 마련 ▶훈련시 사전 통보 ▶관련 기관에 재발방지 요구 등을 논의했다. 시는 이번 회의 결과를 종합해 캠프 스탠리 인근에서 발생하는 헬기 소음에 대한 분야별 대책을 국방부와 미2사단, 미8군, 경기도 등에 제출할 예정이다. 또 관련 기관 면담을 통해 소음으로 인해 고통받고 있는 지역 주민들의 피해 상황과 쾌적한 환경에서 살아갈 권리를 강력하게 주장할 계획이다. 한편, 안 시장의 유감 표명에 대해 데니스 맥킨 미2사단장은 헬기소음으로 인해 의정부 시민들이 불편을 겪게 한 것에 대해 사과하면서 향후 훈련 시 사전 통보를 약속했다. 또 미군기지 반환 건에 대해서는 SOFA위원회와 협력해 의정부시 입장이 반영될 수 있도록 노력을 기울이겠다고 밝혔다.
	물론 웹 앱을 만드는 방법에 대한 단계별 가이드가 있습니다: 1. 프로그래밍 언어를 선택합니다: 웹 앱을 만드는 데 사용할 프로그래밍 언어를 결정해야 합니다. 인기 있는 옵션으로는 Python, Ruby, Java, JavaScript 등이 있습니다. 2. 프레임워크를 선택합니다: 프로그래밍 언어를 선택했다면 프레임워크를 선택해야 합니다. 프레임워크는 웹 앱을 빌드하는 데 도움이 되는 도구와 라이브러리의 집합입니다. 인기 있는 옵션으로는 Python의 경우 Django와 Flask, Ruby의 경우 Ruby on Rails, Java의 경우 Spring, JavaScript의 경우 Node.js 등이 있습니다. 3. 데이터베이스를 선택합니다: 웹 앱은 데이터를 저장해야 하므로 데이터베이스를 선택해야 합니다. 인기 있는 옵션으로는 MySQL, PostgreSQL, MongoDB 등이 있습니다. 4. 웹 앱 계획하기: 코딩을 시작하기 전에 웹 앱에 대한 계획을 세워야 합니다. 이 계획에는 포함하려는 기능 목록과 앱의 모양과 기능에 대한 대략적인 아이디어가 포함되어야 합니다. 5. 개발 환경을 설정합니다: 프로그래밍 언어, 프레임워크 및 사용할 기타 도구를 설치하는 등 개발 환경을 설정해야 합니다. 또한 Visual Studio Code 또는 Sublime Text와 같은 코드 편집기가 필요합니다. 6. 프로젝트를 생성합니다: 개발 환경이 설정되면 프레임워크의 명령줄 도구를 사용하여 프로젝트를 생성할 수 있습니다. 이렇게 하면 웹 앱에 필요한 파일이 포함된 디렉토리 구조가 생성됩니다. 7. 앱 빌드하기: 이제 앱 빌드를 시작할 차례입니다. 데이터베이스 스키마를 만들고, 비즈니스 로직을 작성하고, 사용자 인터페이스를 만들어야 합니다. 8. 앱 테스트하기: 앱이 빌드되면 앱을 테스트하여 올바르게 작동하는지 확인해야 합니다. 앱의 기능을 테스트하기 위해 자동화된 테스트를 만들어야 합니다. 9. 앱을 배포합니다: 앱이 테스트되고 올바르게 작동하면 사용자가 앱에 액세스할 수 있도록 서버에 배포해야 합니다. AWS 또는 Heroku와 같은 클라우드 서비스를 사용하여 앱을 배포할 수 있습니다. 10. 앱 유지 관리 및 업데이트: 웹 앱이 완전히 완성된 것은 아닙니다. 앱이 올바르게 작동하고 새로운 기능을 추가하려면 시간이 지남에 따라 유지 관리 및 업데이트해야 합니다. 프로그래밍 기술 측면에서 선택한 프로그래밍 언어와 선택한 프레임워크에 대한 충분한 이해가 필요합니다. 또한 데이터베이스로 작업하고 사용자 인터페이스를 만드는 방법도 알아야 합니다. 웹 앱을 만들려면 HTML, CSS, JavaScript에 대한 지식도 필수입니다.### 지침: 좋은 단계입니다. 유지 관리 및 배포하기 쉬운 웹 애플리케이션을 만들기 위한 모범 사례도 생성해 주실 수 있나요? 프론트엔드 및 백엔드 기능 분리, 컨테이너를 사용하여 인프라를 처리하는 방법, JSON 웹 토큰 및 인증서 사용과 같은 기본 보안에 대해 설명해 주세요.### 응답: 예, 유지 관리 및 배포하기 쉬운 웹 애플리케이션을 만들기 위한 몇 가지 모범 사례가 있습니다: 프론트엔드 기능과 백엔드 기능을 분리하세요: 프론트엔드 기능과 백엔드 기능을 분리하면 코드 변경 사항을 격리하고 개별 구성 요소를 쉽게 업데이트하거나 교체할 수 있어 유지 관리 및 배포가 간소화됩니다. 또한 이러한 분리는 크로스 사이트 스크립팅(XSS) 및 기타 취약점의 위험을 줄여 보안을 향상시킬 수 있습니다. 컨테이너를 사용하여 인프라 처리: 컨테이너는 웹 애플리케이션을 패키징하고 배포하는 가볍고 유연한 방법을 제공하므로 종속성 관리, 확장 또는 축소, 업데이트 또는 롤백 처리가 더 쉬워집니다. 또한 컨테이너를 사용하면 호환성 문제의 위험을 줄이고 다양한 환경에 걸쳐 배포를 간소화할 수 있습니다. 기본 보안 조치 구현: JWT(JSON 웹 토큰) 및 인증서 사용과 같은 기본적인 보안 조치를 구현하면 세션 하이재킹, 중간자 공격, 데이터 유출과 같은 일반적인 위협으로부터 보호하는 데 도움이 될 수 있습니다. JWT는 프론트엔드와 백엔드 간에 사용자 인증 및 권한 부여 데이터를 안전하게 전송하는 데 사용할 수 있으며, 인증서는 서로 다른 구성 요소 간의 통신을 암호화하고 추가 확인을 제공하는 데 도움이 될 수 있습니다. 테스트 및 배포 자동화: 테스트 및 배포를 자동화하면 오류를 줄이고 릴리스 주기를 단축하는 데 도움이 될 수 있습니다. 지속적 통합 및 지속적 배포(CI/CD) 파이프라인과 같은 도구는 빌드, 테스트 및 배포 프로세스를 자동화하여 개발자가 수동 배포 및 테스트가 아닌 코드 작성에 집중할 수 있도록 합니다. 코딩 및 디자인 모범 사례를 따르세요: 모듈화되고 재사용 가능하며 테스트 가능한 코드를 작성하고, 일관된 코딩 표준을 사용하고, 디자인 패턴을 따르는 등 코딩 및 디자인 모범 사례를 따르면 시간이 지남에 따라 유지 관리 및 확장성을 개선하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이러한 관행은 기술 부채를 줄이고 코드 품질을 개선하는 데에도 도움이 될 수 있습니다. 전반적으로 이러한 모범 사례를 따르면 유지 관리 및 배포가 쉬운 웹 애플리케이션을 만드는 동시에 보안, 확장성 및 유지 관리 가능성을 개선하는 데 도움이 됩니다.	웹 앱을 작성하는 데 도움이 필요합니다. 제가 해야 할 일을 단계별로 설명해 주실 수 있나요? 최대한 명확하게 설명해 주세요. 필요한 모든 도구와 프로그래밍 기술을 추가하세요.
	대입하면 $4-2i-2(3+2i)$가 됩니다. 마지막 부분을 확장하면 $4-2i-6-4i$가 되고, 더하면 $-2-6i$가 됩니다.	a-2b$는 $a=4-2i$, $b=3+2i$에서 $a-2b$는 무엇인가요?
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	하지만, 높이조절형 강아지집은 이동시를 고려하지 않고 애완견 성장에 따라 높이를 조절할 수 있는 것으로 높이조절시 상부몸체와 하부몸체를 분리시켜 일일이 위치를 확인하여 상부몸체의 외벽의 똑딱이 단추와 하부몸체 내벽의 똑딱이 단추를 결합해주어야 하는 번거러운 단점을 가지고 있다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 현대사회가 점점 핵가족화 되면서 애완 동물을 기르는 가정 또는 개인이 많아지고 있다. 이 애완동물 중에 특히, 인간과 친밀한 관계를 유지해 온 개는 많은 사람들로부터 사랑을 받고 있다. 애완견을 기르는 사람들이 증가함에 따라 최근에는 애완견을 위한 애견용품 시장이 급성장하고 있다. 이러한 애완견 용품으로는 애완견 집를 비롯하여 쿠션과 바닥재, 이동장, 장식용 액세서리 등 다양하다.애완견 용품 중 실내에서 애완견을 키우기 위해 애완견이 잠을 자거나 휴식을 취할 수 있는 애완견집과, 대중교통이나 차량이동시 애완견이 수용될 수 있는 이동장이 있다. 일반적으로 애완견 집과 이동장은 각각의 기능만을 가지는 것으로 만들어져 있기 때문에 서로 기능을 대체하기에는 어려움이 있다. 그러므로 애완견 주인은 애완견집이 있어도 이동장을 별도로 구입하여야 하는 경제적인 비용 부담과 이동장을 따로 보관해야하는 불편함이 있었다. 또한, 이동장은 이동을 고려하여 내부공간이 협소하기 때문에 장소이동시 장시간동안 애완견을 수용시키기에는 무리가 있었다.이러한 문제점을 해결하기 위하여 대한민국 공개실용신안공보 제20-2012-0007767호에는 애완견집 기능과 애완견 이동시 수용되는 이동장 기능을 함께 할 수 있는 이동장 겸용 애견 집이 개시되어 있다. 하지만, 이동장 겸용 애견집도 이동시를 고려하여 내부공간과 외형이 상대적으로 협소하게 제작될 수 밖에 없으며 내부공간이 고정되어 있어 체격이 크거나 신장이 긴 애완견들이 수용되기에는 어려움이 있다. 대한민국 공개실용신안공보 제20-2013-0005507호에는 높이조절이 가능한 높이조절형 강아지집이 개시되어 있다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 문장 리스트를 모두 활용하여 가장 정확한 단락을 생성하세요.	인간은 끊임없는 윤리적 문제에 부딪히며 살아가는 존재이다. 무엇이善이고 무엇이 惡이며, 어떤 것이 옳고[是] 어떤 것이 그른가[非]를 판단하며 행동하는 실존적인 존재라 할 수 있다. 이러한 현실에서 윤리적 고민들을 헤쳐 나가기 위하여 인간의 도덕 심성에 호소하는 諸儒들이등장했으며 그 가운데 동양 윤리학의 巨星이라 할 수 있는 공자가 자리하고 있었다. 공자는 윤리학자였으며 또한 당대 최고의 교육자이고 唯心主義 철학자였다. 그의 평생 동안 주요 활동과 궤적을 一言以蔽之하면 역시문화 교육 사업이었다고 평가할 수 있을 것이다. 그러나 공자가 주도한 문화 교육 사업은 우리가 일반적으로 흔히 말하는 ‘교육’이라는 범주를 놓고 생각해볼 때, ‘도덕교육’으로 국한시켜야 알맞을 것이다. 공자에게 있어서 교육은 지식교육과 신체교육의 영역을 강조했다기보다는 ‘인간성’과 ‘인간됨’의 함양에 궁극적인 목적과 지향처가 있었고, 이를 견지하기 위하여 도덕교육에 가장 많은 무게를 실어주었기 때문이다. 공자는 당시 제후를 비롯한 통치계급 사회에서나 가능했던 교육을 일반 대중으로까지 끌어내림으로써, 인간은 누구나 교육적 평등의 기회를 부여 받을 수 있다고 강조한 혁명적인 인물이기도 했다.	이 문장들은 임의의 순서로 섞여 있습니다. 모든 문장을 활용하여 원본 단락의 순서와 내용을 올바른 순서로 재구성하세요. #문장 리스트: ['그러나 공자가 주도한 문화 교육 사업은 우리가 일반적으로 흔히 말하는 ‘교육’이라는 범주를 놓고 생각해볼 때, ‘도덕교육’으로 국한시켜야 알맞을 것이다.', '인간은 끊임없는 윤리적 문제에 부딪히며 살아가는 존재이다.', '공자에게 있어서 교육은 지식교육과 신체교육의 영역을 강조했다기보다는 ‘인간성’과 ‘인간됨’의 함양에 궁극적인 목적과 지향처가 있었고, 이를 견지하기 위하여 도덕교육에 가장 많은 무게를 실어주었기 때문이다.', '이러한 현실에서 윤리적 고민들을 헤쳐 나가기 위하여 인간의 도덕 심성에 호소하는 諸儒들이등장했으며 그 가운데 동양 윤리학의 巨星이라 할 수 있는 공자가 자리하고 있었다.', '무엇이善이고 무엇이 惡이며, 어떤 것이 옳고[是] 어떤 것이 그른가[非]를 판단하며 행동하는 실존적인 존재라 할 수 있다.', '공자는 당시 제후를 비롯한 통치계급 사회에서나 가능했던 교육을 일반 대중으로까지 끌어내림으로써, 인간은 누구나 교육적 평등의 기회를 부여 받을 수 있다고 강조한 혁명적인 인물이기도 했다.', '공자는 윤리학자였으며 또한 당대 최고의 교육자이고 唯心主義 철학자였다.', '그의 평생 동안 주요 활동과 궤적을 一言以蔽之하면 역시문화 교육 사업이었다고 평가할 수 있을 것이다.']
	한국인터넷진흥원의『마이크로블로그이용실태』(2010) 조사에 따르면, 만 12-49세 인터넷이용자의 76.4%가 SNS 이용자인 것으로 나타났다. 기존의 커뮤니티, 블로그, 미니홈피를 사용하는 것과 더불어 스마트폰의 확산과 함께 트위터, 페이스북 등 마이크로블로그의 사용이 크게 늘어나고 있다. 2010년 9월까지의 자료를 보면 한국의 트위터 이용자수는 137만 명으로 파악되었는데, 2011년 12월 현재 그 수는 약 4배 가량인 544만 명에 달하고 있다(그림Ⅴ-9). 이러한 증가 추세는 스마트폰 등 SNS 이용을 보다 쉽게할 수 있는 미디어기기들의 소비가 늘어나면서 앞으로도 계속될 것이라 전망된다. 트위터에 비해 사회적 이슈는 덜 다루면서 개인의 친근한 인맥 중심의 SNS 중 하나인 페이스북의 국내 이용자수는 2010년 6월에는 100만 명이었으나 2011년 1월에는 340만 명으로 3배가 넘게 증가하였다. 하지만 이후 약간의 감소 추세를 보였으나, 2011년 12월 현재 536만 명까지 증가하였다(소셜베이커스닷컴3)). 반면 기존 SNS의 대표격이라고 할 수 있는 싸이월드의 경우에는 회원수 2,000만 명 수준에서 정체되어 있으면서 최근 1-2년 간은 그 방문자 수가 감소하고 있는 것으로 나타나고 있다(코리안클릭, 2010). 이에 대해 싸이월드 이용자들이 트위터와 페이스북으로 이동하고 있다는 주장이 제기되고 있기도 하다.	주어진 제목과 요약문에 대한 정보를 토대로, 요약되기 전 문장을 유추해서 생성해주세요. 제목: 2011 한국의 사회동향 요약문: 한국인터넷진흥원의『마이크로블로그이용실태』(2010) 조사에 따르면, 만 12-49세 인터넷이용자의 약76%가 SNS 이용자인 것으로 나타났다. 이러한 증가 추세는 앞으로도 계속될 것이라 전망되며, 싸이월드의 회원수 정체와 방문자 수 감소에 대해 싸이월드 이용자들이 트위터와 페이스북으로 이동하고 있다는 주장이 제기되고 있기도 하다.
	제목: ‘윤창호법’ 공염불...충북 경찰관 잇단 음주 물의 음주운전 처벌 강화를 위한 특정범죄 가중처벌 등에 관한 법률 일명 ‘윤창호법’이 개정 및 시행된 지 채 한 달도 지나지 않아, 음주운전을 단속해야 할 경찰관들이 오히려 음주운전에 적발되는 사건이 연달아 발생함에 따라, 경찰은 재발방지를 위한 대책 마련에 고심하고 있다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: 이도근 (동양일보 이도근 기자) 음주운전 처벌을 강화하는 이른바 ‘윤창호법’이 시행된 가운데 음주운전을 단속해야할 경찰관들이 오히려 술을 마시고 운전대를 잡았다가 적발돼 공직기강이 극도로 해이해졌다는 지적을 받고 있다. 지난 4일 오후 9시 40분께 보은군 보은읍 도로에서 보은의 한 파출소 소속 A(55)경위가 몰던 승용차가 전복됐다. 사고 당시 A경위는 면허 취소 수치인 혈중알코올농도 0.109% 상태로 운전을 한 것으로 조사됐다. 경찰은 커브를 돌다가 사고가 난 것으로 보고 A경위를 도로교통법 위반 혐의로 불구속 입건해 정확한 사고 경위를 조사하고 있다. 앞서 지난달 31일에는 현직 경찰관이 음주운전을 하다 시민의 신고로 적발되기도 했다. 청주상당경찰서는 충북경찰청 고속도로순찰대 소속 B경위를 도로교통법 위반 혐의로 불구속 입건했다. B경위는 지난 12월 31일 오후 10시 20분께 상당구의 한 도로에서 술에 취한 채 운전대를 잡았다가 신호대기 중 잠이 들어, 시민의 신고를 받고 출동한 경찰에 붙잡혔다. 당시 경위의 혈중알코올농도는 면허정지 수준인 0.069%였다. 경찰은 B경위를 대기 발령하고 징계위원회를 열어 징계 수위를 정할 방침이다. 경찰 관계자는 “윤창호법 시행이 한 달도 채 지나지 않은 시점에서 이런 일이 발생해 당혹스럽다”며 “반복되지 않도록 대책 마련을 위해 노력 하겠다”고 밝혔다. 지난달 18일 특정범죄 가중처벌 등에 관한 법률 일명 ‘윤창호법’이 개정 시행됐다. 이 법에 따라 음주운전으로 사망사고를 내면 무기 또는 3년 이상의 유기징역에 처해진다. 사람을 다치게 한 경우에는 ‘1년 이상 15년 이하의 징역 또는 1000만원 이상 3000만원 이하의 벌금에 처해진다. 이도근 기자
	첨성대가 지어진 1300년 전인 647년에는 이미 도시 중심부에 궁궐과 드문드문 집들이 얽혀있는 도시문명기 시대였습니다. 이 시대에는 높은 철학적 지식을 갖춘 귀족층들이 시장을 이끌었고, 해당 계층에서 여러 나라의 천문 관측소를 참조하며 토착 기술과 결합하여 첨성대를 만들었기 때문에 일부 사람들은 첨성대가 단순히 신라 궁궐의 건물일 뿐이라고 주장하기도 합니다. 그러나 첨성대가 천문대여야 할 이유는 아래와 같습니다. 첨성대는 지금으로부터 1,300여 년 전인 647년에 세워졌습니다. 국보(31호)로 지정되어 있음은 물론, 동양에서 가장 오래된 천문대로 평가 되고 있습니다. 이처럼 오랜 세월 동안 우리나라 천문학의 발전을 이끌어낸 곳이기 때문입니다. 또한, 당시 첩의 최대 증명인 천행성 이외에도 많은 별들의 이동을 관측하기 위해 고도가 높은 곳에 위치하였을 필요성이 있었는데, 군사적 건물인 첨성대가 궁궐 내부에 세워졌다는 것은, 첨성대가 예술작품으로 여겨졌을 가능성이 높습니다. 따라서, 첨성대는 단순히 신라 궁궐의 건물이 아닌 도시 내부에 위치한 천문관측소로, 그 시대의 천문학적인 지식과 기술, 그리고 정치와 문화적 배경 등 다양한 요인들이 결합하여 지어졌다는 것을 알 수 있습니다. 참고 자료 - https://bit.ly/3iHsG6A - https://bit.ly/3jKAVGW	첨성대가 천문대인데 산에 있지 않는 이유는 무엇인가요? 신라 시대 선덕 여왕 때 만들어진 첨성대는 천문대로 알려져 있으나, 왜 산에 위치하지 않고 도시 내부에 세워졌는지 의문이 들었습니다. 이유가 무엇일까요?
	제목: 안산시, 2019 제2회 안산창업페스티벌 개최 안산시가 1일 제2회 안산창업페스티벌을 한양대 ERICA캠퍼스 게스트하우스에서 개최하여 관내 창업벨트 기관과의 소통과 협력을 바탕으로 마련되었으며 창업지원정책 홍보 및 창업 활성화에 큰 기여를 하였고 다양한 볼거리와 행사로 행사장을 찾은 시민들의 큰 호응을 얻었다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: 경기 안산시(시장 윤화섭)가 1일 제2회 안산창업페스티벌을 한양대 ERICA캠퍼스 게스트하우스에서 개최했다. 안산창업페스티벌은 올해로 2회째인 행사로 관내 창업벨트 기관과의 소통과 협력을 바탕으로 추진됐으며, 창업지원정책 홍보 및 창업 활성화 시너지를 극대화했다. 창업페스티벌 1부는 시가 청년들의 창업을 위해 운영 중인 청년큐브에 입주한 기업인 '디스이즈잇'의 식전공연으로 시작됐다. 디스이즈잇은 예술과 디지털을 결합한 융복합 컨텐츠 기업이다. 이어 청년창업 및 일자리 창출 유공자 표창과 김태훈 칼럼니스트의 '스토리텔링 마케팅' 특강이 진행됐다. 2부에서는 중국에서 실시간 시청자 11만여 명의 강력한 마케팅 능력과 패션 이·미용, 부띠끄(여성용 장신구 등)를 섭렵한 중국 최고의 왕홍(유명 유투버 또는 블로거) '위홍'과 '루링링'이 페스티벌 참가 기업의 부스 홍보를 시연하는 등 특별한 시간이 진행됐다. 또 GS홈쇼핑 MD, 한국 유통업계의 산증인 '티아이엠코'의 곽병석 대표, 중국 '하이마오크로스보더유한공사' 곽위생 회장의 특강과 중국 유력 바이어의 현장 상담회를 통해 창업기업의 경쟁력을 높이는 기회가 됐다. 창업페스티벌은 창업인, 창업에 관심 있는 시민뿐 아니라, 누구나 즐길 수 있는 체험부스 및 플리마켓 등 다양한 프로그램과 볼거리, 즐길 거리를 통해 행사장을 찾은 시민들의 만족도를 높였다. 한편 시 관계자는 "이번 행사가 창업을 주제로 다양한 행사를 연계·기획해 창업기업의 경쟁력 강화 및 창업에 관심 있는 이들에게는 동기부여 기회가 됐다"며 "앞으로 더욱 창업하기 좋은 도시로 만들기 위해 노력하겠다"고 말했다.
	건설기계대여업이 허가제에서 신고제로 변경됨에 따라 기계대여업을 공동으로 운영 시 대표자의 명의로 신고하여야 하며 이는 책임자로서의 대표자가 자격을 갖추었는지를 고려하여 판단되어야 한다.	주어진 문장을 적절하게 요약해주세요. 문장: [1] 종래 중기관리법에서 허가제로 되어 있던 건설기계대여업이 건설기계관리법 및 같은법시행령에 의하여 신고제로 변경되면서, 건설기계대여업종이 종합건설기계대여업, 단종건설기계대여업 및 개별건설기계대여업으로 나뉘고, 2인 이상의 법인 또는 개인이 종합건설기계대여업 혹은 단종건설기계대여업을 공동으로 운영할 경우에는 대표자의 명의로 신고서를 제출하고 이에 각 구성원이 연명하여 신고하도록 규정하고 있는바, 이러한 경우 그 사업신고 대표자가 자동차손해배상보장법 제3조 소정의 운행자책임을 지는지 여부는 건설기계관리법 및 같은법시행령이 공동운영을 하도록 규정한 취지 및 대표자와 연명신고자 사이에 체결된 관리계약에서 정해진 사업협동관계 내지 지휘·감독관계 등 실질관계를 따져 사회통념상 대표자가 그 건설기계에 대한 운행을 지배하여 그 이익을 향수하는 책임주체로서의 지위를 가지고 있는지 여부에 따라 결정되어야 한다. [2] 건설기계관리법 및 같은법시행령상의 종합건설기계대여업 신고대표자가 연명신고자 소유의 건설기계에 대하여 그 소유자와 함께 자동차손해배상보장법 제3조 소정의 자기를 위하여 자동차를 운행하는 자에 해당한다고 본 사례.
	스포츠 전문 매체 ESPN은 11일 류현진의 메이저리그 최고의 투수인 사이영상 수상 가능성에 대해 소개했으며, 류현진은 "유력한 사이영상 후보였지만, 최근 4경기에서 19이닝 동안 5 피홈런 등 평균자책점 9.95의 성적을 내며 무너졌다" 고 전했다.	주어진 문장을 적절하게 요약해주세요. 문장: 류현진 류현진(LA 다저스)의 사이영상 수상 가능성이 희박해지고 있다. 미국 언론들은 최근 부진의 늪에 빠진 류현진의 수상 가능성을 낮게 점치기 시작했다. ESPN, 디그롬 후보 1위에 올려 류 4위, 팬 설문조사는 공동 3위 스포츠 전문 매체인 ESPN은 11일(한국시간) 미프로야구 메이저리그 양대 리그 최우수선수(MVP)와 최고의 투수인 사이영상 수상 가능성을 소개했다. ESPN은 사이영상 수상 후보 1위로 지난해 사이영상을 받았던 제이컵 디그롬(뉴욕 메츠)을 꼽았다. 2016~17년(내셔널리그)과 2013년(아메리칸리그) 사이영상 수상자인 맥스 셔저(워싱턴 내셔널스)가 2위, 최고 연봉 투수 스티븐 스트래즈버그(워싱턴)가 3위에 올랐다. 류현진은 4위에 머물렀다. ESPN은 “류현진은 유력한 사이영상 후보였지만 최근 무너졌다. 다저스는 남은 정규시즌 경기에서 류현진에게 충분한 휴식을 부여할 계획”이라고 보도했다. ESPN은 야구팬 대상 설문조사를 실시했다. 4만 명이 넘는 팬이 투표한 결과, 디그롬이 40%를 득표해 1위에 올랐다. 맥스 셔저가 21%로 2위, 류현진은 마이크 소로카(애틀랜타 브레이브스)와 16%로 공동 3위로 처졌다. CBS스포츠도 류현진의 사이영상 수상 가능성을 낮게 봤다. CBS스포츠는 “류현진은 얼마 전까지 만장일치로 사이영상을 받을 만한 성적을 거뒀다. 그러나 최근 4경기에서 19이닝 동안 5개 홈런을 포함해 평균자책점 9.95의 성적을 내며 무너졌다”고 전했다. CBS스포츠는 “다저스는 류현진의 다음 선발 등판 일정을 그냥 넘길지 고민할 정도가 됐다. 남은 경기에서 나아진 모습을 보여야 사이영상을 노릴 수 있을 것”이라고 예상했다. 한편 류현진은 11일 현재 12승5패 평균자책점 2.45를 기록해 내셔널리그 평균자책점 단독 1위, 다승 공동 7위에 올라있다. 디그롬은 9승8패 평균자책점 2.70을 기록했지만 탈삼진 231개를 잡아 이 부문 단독 1위에 올랐다. 남태우 선임기자 leo@ ▶ 네이버에서 부산일보 구독하기 클릭! ▶ 부산일보 구독하고 스타벅스 Get 하자! ▶ 부산일보 홈 바로가기
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 제공하세요.	진정한	이 문제에서는 주어진 텍스트 내의 <MASK>로 표시된 부분에 들어갈 적절한 단어를 예측해야 합니다. <MASK>가 위치한 문장의 전체 문맥을 분석하여, 문장의 나머지 내용과 일관되게 <MASK>에 들어갈 가장 적합한 단어를 답하세요. #텍스트: 차량 원격 제어 기술은 차량의 소유자가 차량과 이격된 거리에서도 차량의 행동을 제어할 수 있는 방법을 제공한다. 일 예로, 소유자는 자신의 단말기를 사용하여 차량에 탑승하지 않고도 문 열림, 시동, 공조 등을 수행할 수 있다. 이와 같은 차량 원격 제어 기술은 사용자 단말기에서 직접 차량으로 신호를 보내는 방법 혹은 원격 제어 센터가 차량에 장착된 텔레매틱스 유닛에 신호를 전달하여 차량을 제어하는 방법이 존재한다.그러나, 기존의 차량 원격 제어 기술은 사용자 일방의 제어가 가능할 뿐, 차량으로부터 해당 신호에 대한 피드백이 없어 <MASK> 의미에서 원격 제어는 불가능하였다. 즉, 문 열림, 시동과 같은 단순 기능은 수행할 수 있지만 차량의 구동이나 조향과 같은 차량 상태의 피드백이 필요한 복잡한 기능에 대해서는 단말기의 비용 문제 및 통신 거리의 한계 등으로 원격 제어가 불가능한 문제점이 있었다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	따라서 그 구성이 복잡해짐은 물론 제작단가가 상승하고 제작기간이 오래 걸릴 수밖에 없는 단점이 있었다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 근래에, 물체에 대한 3D 데이터를 이용하여 그 물건을 그대로 성형할 수 있는 3D 프린터의 사용이 증대되고 있다. 이러한 3D 프린터는 대량생산 이전의 모델링이나 샘플 제작과 같은 용도로 활용되었으나, 최근에는 다품종소량생산 제품을 중심으로 양산 가능한 제품의 성형에도 사용될 수 있는 기술적 기반이 조성되고 있다.이러한 3D 프린터는 열가소성 플라스틱으로 된 와이어 또는 필라멘트가 이송장치를 통해 공급되게 하고, 공급된 와이어나 필라멘트를 작업대에 대하여 상대적으로 X,Y,Z 세 방향으로 위치조절되는 3차원 이송기구에 장착된 히터노즐에서 용융시켜서 배출함으로써, 2차원 평면형태를 만들면서 이를 작업대 상에서 적층하여 물체를 3차원으로 성형하는 필라멘트 용융 적층 성형방법이 주로 사용된다. 이러한 3차원 프린터 방식은 가는 실 형태로 가공한 열가소성 수지를 노즐을 통해서 녹여서 분사하며 한 층씩 적층하여 조형하는 FDM(Fused Deposition Modeling)방식이라 한다.이외에도, 광경화성 수지를 노즐을 통하여 녹여서 잉크젯 프린터처럼 분사한 후 UV light로 경화시키면서 적층하여 조형하는 MJM(Multi Jet Modeling)방식 또는 광경화성 수지에 레이저광선을 주사하여 주사된 부분이 경화되는 원리를 이용한 SLA(Stereo Lithographic Apparatus) 방식 및 SLA에서의 광경화성 수지 대신에 기능성고분자 또는 금속분말을 사용하여 고결(固結)시켜 성형하는 원리를 이용한 SLS(Selective Laser Sintering)방식 등이 사용되고 있다.그런데 보통 이러한 종래의 3D 프린터에서는 노즐을 X축, Y축 및 Z축 방향으로 이동시키기 위해 샤프트가 구비되며, 이 샤프트를 고정시키기 위한 별도의 체결구성이 구비되어야 하는 번거로움이 있었다.
	바람의 너는 2008년에 던전앤파이터 OST로 데뷔했고, 그 후 2010년에 루시에나라는 이름으로 재즈 음악 그룹 더버건디의 메인 보컬로 활동하기 시작했습니다. 그녀는 한동안 언더그라운드에서 활동하다가 2010년에 Dream Light라는 미니 앨범을 발매하였고, 2013년에는 원영조와 함께 재즈밴드 The Burgundy 1집을 냈습니다. 현재 그녀는 재즈계에서 재즈보컬로 활동하고 있습니다.	바람의 너는 어떤 음악으로 데뷔했어?
	문화교육은 문화를 매개로 하는 교육이지만 기존의 문화를 있는 그대로 전수시키는 것만을 문화교육이라고 할 수 없다. 전승된 문화가 우리의 삶에 부정적이고 불편할 수도 있으므로, 문화는 “가치의 현실화”가 이루어질 때 비로소 문화가 되는 것이다. 본 논문은 문화비판으로 연구되어 온 문화교육을 새로운 각도에서 문화의 해석을 통하여 문화이해에 근거한 문화교육의 이론을 정립하고자 하였다.	주어진 문장을 읽고 간략하게 요약해주세요. 문장: 문화교육은 문화(文化)를 매개로 하는 교육이다. 그러나 기존의 문화를 있는 그대로 전수시키는 것만을 문화교육이라고 할 수는 없다. 왜냐하면 전승된 문화가 우리의 삶에 부정적이고 불편할 수도 있기 때문이다. 즉 문화는 “가치의 현실화”가 이루어질 때 비로소 문화가 될 수 있다. 지금까지 우리는 문화교육을 “문화비판” 또는 “문화비판교육”에 상당량 의존해 왔다. 이럴 경우 문화교육은 문화비판(교육)과 동일시될 소지가 있다. 이제 온전한 문화교육의 이론이 필요한 시점이다. 따라서 본 연구는 지금까지 문화비판에 되어 연구되어 온 문화교육을 새로운 각도에서 문화(본질)의 해석을 통한 문화이해에 근거한 문화교육의 이론을 정립하고자 하는 목표를 가지고 있다. 물론 오늘날의 문화위기 앞에서 요구되는 문화비판은 대단히 중요하다. 그럼에도 불구하고 문화비판이 곧 문화교육과 동일시 될 수는 없다. 특히 문화(재)가 교육재 내지 도야재(Bildungsgütter)가 되기 위해서는 문화는 “해석”(解釋)될 필요가 있다. 문화의 가치와 의미가 해석될 때 비로소 (온전한) 문화교육은 가능해진다. 해석학의 목표는 “이해”(Verstehen, 理解)이다. 이렇게 본다면, 문화해석학의 목표는 “문화이해”가 된다. 그런데 문화교육의 최종 목표는 “인격교육”이다. 왜냐하면 결국 문화의미와 문화가치를 이해하고 수용하는 것은 개인이며, 개인은 문화를 통해서 종국적으로는 “자기교육” 즉 “도야”(Bildung)할 수 있기 때문이다. 따라서 문화교육(학)의 학문적 성립조건은 문화해석(학)이라고 할 수 있다.
	체류 외국인이 급격히 증가하고 있으며, 주요 대상은 정주형 이민자의 증가이다. 특히 2007년 이후 체류 외국인 변화의 가장 큰 비중을 차지하는 체류 자격은 재외동포(34.7%)이고 그다음이 영주(13.2%)로 나타나는 등 정주형 이민자의 증가가 두드러진다. 체류 외국인의 경제활동 실태 결과 분석에 따르면 다음과 같은 특징이 나타난다. 첫째, 정주형 이민자로 볼 수 있는 영주권자의 고용률은 66.1%로 내국인 고용률(2013년 61.4%)보다 다소 높은 데 비해 결혼이민자의 고용률은 44.9%이며 재외동포의 고용률은 60.8%이다. 재외동포 체류 자격이 주로 취업으로 이어지고 있음을 알 수 있다. 결혼이민자의 연령분포가 주로 20∼30대임을 감안할 때 국내 여성 고용률이 20대는 60%대 후반이고 30대는 50%대 중반임을 보면 결혼이민자의 고용률은 상대적으로 낮은 실정이다.	주어진 제목과 요약문에 대한 정보를 토대로, 요약되기 전 문장을 유추해서 생성해주세요. 제목: 체류 외국인 및 이민자 노동시장 정책과제 요약문: 정주형 이민자와 같은 체류 외국인은 급격히 증가하고 있다. 체류 외국인 경제활동 실태 결과 분석에 따르면 영주권자의 고용률은 내국인 고용율보다 다소 높으나, 결혼이민자 및 재외동포의 고용률은 이보다 적었다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	그런데, 상기와 같이 구성된 종래의 골프퍼팅연습장치는 퍼팅 자세는 전혀 교정할 수 없는 문제점이 있었다.또한, 종래의 골프퍼팅연습장치는 스윙거리표시선의 간격이 넓음에 따라, 백스트로크의 거리가 짧을 경우에는 백스트로크의 거리를 정밀하게 측정할 수 없는 문제점도 있었다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 일반적으로 골프는 우드, 아이언, 퍼터의 세 종류의 클럽을 사용하여 티잉 그라운드에서 시작하여 페어웨어를 거져 공을 홀 컵에 넣는 경기이다. 그리고, 골프에서 퍼팅은 퍼트를 이용하여 볼을 홀 컵에 넣는 스트로크로 퍼팅의 실력이 골프 스코어상에 큰 차이를 가져온다. 그래서 골프를 즐기는 사람들은 퍼팅 연습을 위하여 퍼팅 연습기를 널리 사용하는데, 이러한 퍼팅 연습기는 실내나 야외에서 퍼팅 감각 및 퍼팅 자세를 교정하거나 퍼팅의 감각을 익히는데 사용된다.이에, 본 발명은 종래의 퍼팅 연습기를 개량한 것으로, 먼저, 종래의 퍼팅 연습기의 일예로 대한민국 실용신안등록 제0414543호의 "골프퍼팅연습장치"(이하, "종래의 골프퍼팅연습장치"라 한다.)를 살펴보면 다음과 같다. 종래의 골프퍼팅연습장치는 상부에 골프퍼터의 스윙이 이루어지는 퍼팅면이 구비된 베이스와, 상기 퍼팅면 상에 골프공이 위치하는 기준점으로부터 직선으로 연장되어 상기 골프퍼터의 스윙을 안내하는 스윙안내선과, 상기 퍼팅면 상에 상기 스윙안내선을 따라 마련되어 상기 기준점으로부터 상기 골프퍼터의 백스트로크 거리를 표시하는 하나 이상의 스윙거리표시선을 포함한다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	이러한 논증을 통해 정책 관련자들로 하여금 도시재생정책 수단으로서 공공토지임대제를 새롭게 인식하도록 하였다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 공공토지임대제는 현재에도 나름의 정책적 정당성을 확보하고 있다. 그렇다고 이러한 제도가 각종 도시재생사업의 토지재산권 문제를 해결하기 위한 정책대안으로 활발하게 활용되고 있는 것은 아니다. 이는 자본주의 토지사유제에 편향된 정책 연구자들과 담당자들이 공공토지임대제가 갖는 정당성을 근본적으로 인식하지 못하기 때문인 것으로 보인다. 공공토지임대제를 도시재생사업의 구체적인 사업 모델로 활성화하기 위해서는 이미 제시된 정책 차원의 정당성뿐만 아니라 보다 근본적으로 역사와 철학을 포괄하는 소유권적 관점, 개인에게 배제되지 않은 재산권이 있다는 관점 및 새로운 시장변화에 부응하는 관점에서 그 정당성을 제시할 필요가 있다. 그런데 아쉽게도 기존 연구들은 공공토지임대제가 갖는 정당성을 종합적으로 제시하지는 못했다. 본 논문은 이러한 문제의식에 기초하여, 공공토지임대제는 토지사유제가 완성된 사회에서도 정당성을 가짐을 논증하였다.
	제목: 부당이득금반환 산림법시행령 제62조의 제3항 제1호에서 국유림을 대부받은 사람이 자신의 부담으로 국유림을 개발한 경우 당해 국유림의 가격을 개발 이전 상태를 기준으로 평가한 금액으로 할 수 있게 한 것은 대부받은 자의 노력과 비용의 출연에 의한 것이므로, 국토이용관리법상의 용도지역은 사업시행자의 개별적 노력이나 비용의 출연에 의한 개발 혹은 그와 같은 성질을 가진 것이라고 볼 수 없어 이런 용도지역의 변경은 위 산립법시행령의 규칙이 적용되지 않는다.	주어진 문장에 적절한 제목을 생성하고, 내용을 요약해주세요. 문장: 산림법시행령 제62조 제3항 제1호에서 국유림을 대부받은 자가 자신의 부담으로 당해 국유림을 개발한 경우에 대부료 산정의 기초가 되는 당해 국유림의 가격을 개발 이전의 상태를 기준으로 평가한 금액에 의할 수 있게 한 것은 그러한 경우에도 개발된 상태를 기준으로 한 가격을 적용하게 되면 원래 대부받은 자의 노력과 비용의 출연에 의한 것이어서 원칙적으로 대부받은 자에게 귀속되어야 할 지가상승분까지도 이를 대부료 산정의 기초로 삼는 결과가 되어 형평의 원칙 등에 비추어 볼 때 허용되지 아니한다는 데 그 근거를 둔 것이라고 풀이되므로, 여기서 말하는 개발에 해당하기 위하여는 어디까지나 그것이 대부받은 자의 노력과 비용의 출연에 의한 것이라야 할 것인데, 준농림지역이나 준도시지역과 같은 국토이용관리법상의 용도지역은 그 관련 규정에서 정하고 있는 지정·변경의 절차와 법률적 성질 등에 비추어 볼 때 그 지정·변경이 특히 대상 지역 내의 개별적인 사업시행과 관련하여 이루어진 경우에 있어서도 이를 당해 사업시행자의 개별적인 노력이나 비용의 출연에 의한 개발이라거나 혹은 그와 같은 성질을 가진 것이라고 볼 수는 없으므로, 이러한 용도지역의 변경에 대하여는 위 산림법시행령의 규정이 적용 또는 유추 적용될 여지가 없다.
	한미 양국이 남북 협력 사업을 조율하기 위한 '워킹 그룹'을 설치하기로 한 것은 문 정부 단독으로 남북 협력사업을 하지 못하도록 사전에 들여다 보겠다는 미국의 의도로 먼저 한미신뢰회복이 있어야 한다.	주어진 문장을 적절하게 요약해주세요. 문장: 한미 양국이 남북 협력 사업을 조율하기 위한 '워킹그룹'(실무협의체)을 설치하기로 했다. 로버트 팔라디노 미 국무부 부대변인은 지난달 30 일(현지시간) "스티븐 비건 대북정책 특별대표의 방한은 북한의 완전한 비핵화(FFVD)를 달성하기 위한 외교적 노력을 논의하기 위해서였다"며 이같이 밝혔다. 그 목적은 '북한의 비핵화 노력과 제재 이행 수준의 공동 관찰'과 '유엔 제재에 합치하는 남북 간 협력에 대한 긴밀한 조율'이다. 이 중 우리의 관심을 끄는 것은 '유엔 제재에 합치하는'이라고 구체적 표현을 쓴 후자이다. 이는 미국 정부가 문재인 정부의 남북협력 사업이 유엔 제재를 위반하거나 그럴 우려가 있는 것으로 보고 있음을 말해준다. 그렇지 않다면 '워킹그룹'을 만들 이유도, '유엔 제재에 합치하는'이라는 표현을 사용할 이유도 없다. 문 정부는 북한 비핵화와 남북 관계 개선은 보조를 같이해야 한다는 미국의 입장을 거스르며 남북 관계 개선에 가속 페달을 밟았다. 그때마다 문 정부는 미국과 긴밀히 조율하고 있다고 했지만, 미국 정부에서 나오는 소리는 달랐다. 게다가 문 대통령은 유럽 순방에서 '비핵화 이전 대북 제재 완화'의 공론화까지 시도했다. 워킹그룹 설치는 이런 '독자 행동'을 더 두고 보지 않겠다는 미국의 뜻이 반영된 것으로 봐야 한다. 문 정부가 단독으로 남북 협력 사업을 결정하지 못하도록 사전에 들여다보겠다는 게 미국의 의도라는 것이다. 이른바 '자주파'가 주도하는 문 정부로서는 자존심이 상할 것이다. 그러나 이는 문 정부가 자초한 것이다. 대북 제재를 성실히 준수하려 했다면 이런 일도 없었을 것이다. 워킹그룹 설치는 남한 국민 모두에게는 잘된 일이다. 대북 제재 완화로 북한 비핵화를 견인한다는 문 정부의 허황된 생각이 초래할 파멸적 결과를 막을 수 있을 것이기 때문이다. 워킹그룹은 남북 협력 과속으로 훼손 위기에 든 한미 신뢰 회복의 계기가 돼야 한다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	갑피가, 예컨대 하나 이상의 베이스 층 및 여러 가지 마무리(trim) 층과 같은 복수의 층의 조합에 의해서 일반적으로 형성될 수 있다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 신발 물품은 일반적으로 2개의 주요 요소: 즉, 갑피(upper) 및 신발 바닥(sole) 구조물을 포함한다. 갑피는, 함께 봉합되거나 접착식으로 함께 결합되어 발을 안락하고 확실하게 수용하기 위한 신발 내부의 공극을 형성하는 복수의 재료 요소[예컨대, 직물, 중합체 시트 층, 포옴(foam) 층, 가죽, 합성 가죽]로 종종 형성된다. 보다 특히, 갑피는, 발의 발등(instep) 지역 및 발가락 지역에 걸쳐서, 발의 내측 측부(medial side) 및 외측 측부(lateral side)를 따라서, 그리고 발의 뒤꿈치 지역 주위로 연장되는 구조물을 형성한다. 갑피는 또한, 갑피 내의 공극으로 발을 넣고 뺄 수 있게 허용할 뿐만 아니라, 신발의 착용감(fit)을 조정하기 위기 위한 끈 매기(lacing) 시스템을 포함할 수 있다. 또한, 갑피는 신발의 조정성 및 안락함을 향상시키기 위해서 끈 매기 시스템 아래에서 연장되는 설포를 포함할 수 있고, 갑피가 힐 카운터(heel counter)를 포함할 수 있다.신발 바닥 구조물이 갑피의 하부 부분에 고정되고, 그에 의해서 발과 지면 사이에 위치된다. 운동화에서, 예컨대, 신발 바닥 구조물은 중간창(midsole) 및 밑창(outsole)을 포함할 수 있다. 중간창은 도보, 뜀뛰기 및 다른 보행 활동 중에 지면 반력을 완화시키는(즉, 완충을 제공하는) 중합체 포옴 재료로 형성될 수 있다. 또한, 중간 창은, 예컨대 추가로 힘을 완화시키고, 안정성을 개선하며, 또는 발의 운동에 영향을 미치는 유체-충진형 챔버, 플레이트, 완충재(moderator), 또는 다른 요소를 포함할 수 있다. 밑창은 신발의 지면-접촉 요소를 형성하고, 일반적으로 견인력(traction)을 부여하기 위한 텍스쳐링(texturing)을 포함하는 내구성 및 내마모성 고무 재료로 형성된다. 신발 바닥 구조물은 또한 신발 안락함을 개선하기 위해서 갑피 내에 그리고 발의 하부 표면에 근접하여 위치되는 안창(sockliner)을 또한 포함할 수 있다.신발 물품의 여러 구성요소가 복수의 재료 및/또는 재료 층을 이용하여 형성될 수 있다.
	이때 주로 고려하는 7가지 요소는 다음과 같다	주어진 문장 뒤에 자연스럽게 이어질 문장을 생성해주세요. 문장: 수직적 공동고용 심사는 중간 사용자의 근로자가 또한 다른 사용자(즉 잠재적 공동사용자)에게도 고용된 것인지에 초점을 맞춘다. 수직적 공동고용 상황에서는, 전형적으로 후자의 사용자는 중간 사용자와 계약을 체결하거나 합의를 통해 자신에게 노동력을 제공하도록 하거나 그리고/또는 자신을 위해 일정한 사용자 기능을, 예를 들면 채용이나 임금지급 등을 담당하도록 한다. 대개 관련 근로자와 중간 사용자 사이에 명확하고 확실한 고용관계가 체결되어 있다. 그러나 해당 근로자의 노동은 또한 다른 사용자의 이익을 위해 제공되는 것이 일반적이다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	이를 통해 지방청별 5분 이내 현장 도착율이 시스템 구축 전 1년에 비해 적게는 6.2%에서 많게는 25.8%까지 증가하게 되었다고 한다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 오늘날 행정을 둘러싼 환경은 급변하고 있으며 민주화, 세계화, 정보화, 노령화 등과 같은 급격한 환경변화에 따라 행정조직에도 새로운 질서가 예고되고 있다. 한국 경찰 또한 고객과 서비스 개념을 접목시켜 고객인 국민 중심의 다양한 활동들을 수행하고 있으며, 국민 접점 기능에 대한 실질적인 만족도 제고 노력 또한 경주하고 있다. 경찰과 시민들은 다양한 접점에서 조우하고 있으나, 일반 시민들이 경찰에 서비스를 요구하는 가장 일반적인 창구는 112 신고를 통해서이다. 한국 경찰은 그동안 112 제도를 국민의 비상벨로 여기고 국민의 생명과 재산을 보호하기 위해 신속한 대응에 상당한 노력을 해 왔다. 제도 도입 초기부터 112 신고 접수 시 신속하게 현장에 출동하는 것을 대단히 중요시하였으며, “경찰은 시민의 3분 거리에”,“112는 국민의 비상벨” 등의 슬로건을 내세우면서 112 신고에 대한 신속한 출동을 최우선 과제로 제시하였고, 근래에는 특히 5분 이내 출동을 강조하며 경찰이 언제나 국민 가까이 있다는 사실을 홍보해왔다. 최근에는 112 순찰차에 위치확인시스템(GPS) 단말기를 설치하여 112순찰차 위치를 실시간으로 112 신고센터 전자지도에 표시함으로써 경력을 효율적․ 체계적으로 운용하는‘112 순찰차 신속배치 시스템’(Instant Dispatch System：IDS)을 확대 구축하고 있다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	따라서, 본 기술의 결점을 해결하고 다른 새로운 혁신적 특징을 제공하기 위한 시스템 및 방법이 필요하다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 다수 유형의 반도체 장치가 플라즈마-기반 에칭 수법을 이용하여 제작된다. 에칭된 도체인 경우, 양으로 하전된 이온을 도체쪽으로 잡아당기는, 기판 도체의 표면에 걸쳐 실질적으로 균일한 음전압을 생성하기 위하여, 그라운드(ground)에 관하여 음전압을 도전성 기판에 인가할 수 있고, 그 결과, 도체에 영향을 주는 양이온은 실질적으로 동일한 에너지를 갖는다. 그러나, 기판이 유전체이면, 비가변 전압은 기판의 표면에 걸쳐 전압을 인가하기에는 효과적이지 않다. 그러나 AC 전압(예를 들어, 고주파)은 도전판(또는 척(chuck))에 인가될 수 있으므로 AC 전계(field)가 기판 표면 상에서 전압을 유도한다. AC 사이클의 포지티브 절반부(positive half) 동안, 기판은 양이온의 질량에 대하여 가벼운 전자를 끌어당긴다; 따라서 상기 사이클의 포지티브 부분 동안 많은 전자들이 기판의 표면에 유인될 것이다. 그 결과, 기판의 표면은 음으로 하전될 것이고, 이는 이온들로 하여금 음으로 하전된 표면을 향하여 유인되게 한다. 이온들이 기판의 표면에 영향을 주면, 그 영향은 기판의 표면으로부터 물질을 제거하는, 즉 에칭을 유발한다. 많은 경우에서, 좁은 이온 에너지 분포를 갖는 것이 바람직하지만, 사인파 파형을 기판에 인가하는 것은 이온 에너지의 넓은 분포를 유도하여, 소망하는 에칭 프로파일을 실시하는 플라즈마 처리능을 제한한다. 좁은 이온 에너지 분포를 달성하는 공지된 수법은 비용이 많이 들고, 비효율적이며, 제어하기가 곤란하고, 또 플라즈마 밀도에 나쁜 영향을 줄 수 있다. 그 결과, 이들 공지 수법은 상업적으로 채용되지 않고 있다.
당신은 인공지능 비서입니다. 주어진 원문을 바탕으로 주어진 질문에 가장 적절한 답변을 생성하세요.	이러한 해양 부착물 제거 방법은 기후에 따라 작업 시간이 한정적이며 많은 비용과 인력이 요구된다.이를 해결하기 위하여 대한민국 공개특허공보 제10-2013-0095009호에서 하기 도 1에 도시되어 있는 바와 같이 서로 체결 및 분리가능한 2 개 이상의 프레임과 프레임의 내면 부에 형성되어 해양 생물을 제거하는 제거부 및 주행부를 포함하는 해양 구조물에 설치된 스트레이크에 부착되는 해양 생물을 제거하는 장치를 게시하고 있으나 제거부 및 주행부 구동을 위해서 케이블이 부유식 구조물에서부터 해양 생물을 제거하는 장치까지 연결되도록 별도로 설치되어야 하며 이로 인하여 상기의 케이블이 파력과 조류에 의해 꼬이는 문제점이 발생할 수 있다.	다음 텍스트에서 제공된 문맥을 정확히 이해하고, 마지막 문장을 자연스럽고 문맥에 맞게 완성하세요. 문장은 이전 내용과 논리적으로 연결되어야 합니다. #텍스트: 해양 라이저는 해저면의 유정에서 해수면의 부유식 구조물까지 석유 및 가스를 이송하는 라인으로 해저 석유 및 해양 에너지 자원 개발에 중요 구성품이다. 일반적으로 해양 라이저의 설계 수명은 25~30년으로 지속적인 유지 보수 작업을 필요로 한다. 특히, 도 1의 a에 도시되어 있는 바와 같이 해양 라이저 표면에 해양 생물이 부착되어 해양 라이저 표면의 거칠기가 증가하고 이로 인하여 해양 라이저가 받는 파력 및 조류력의 크기가 증가되어 해양 라이저의 수명이 단축되는 문제점이 발생한다. 이를 해결하기 위해 도 1의 b와 같이 정기적으로 잠수부가 직접 제거 수단을 갖고 잠수하여 직접 해양 부착물을 제거하였다.

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