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Degradazione della dimetilnitrosoammina catalizzata da agenti fisici e chimici.È stata ulteriormente studiata la decomposizione della dimetilnitrosoammina (DMNA) da parte di agenti chimici e fisici. Sia la fotoirradiazione con la luce solare o raggi ultravioletti e reazioni riduttive in condizioni acide (probabilmente che si verificano nello stomaco) hanno portato alla formazione di formaldeide, acido formico e N-metidrazina, oltre a composti denitrosati come metilammina, dimetilammina e N-metilidrossilammina. era l'unico composto che non è stato rilevato dalla fotoirradiazione in condizioni neutre. L'accordo tra i prodotti di degradazione fisiochimica e metabolica e il possibile significato biologico sono discussi insieme al problema della contaminazione ambientale da parte del composto nitroso.
Identificazione dei metaboliti della dimetilnitrosoamina in vitro.L'incubazione della dimetilnitrosoamina (DMNA) in presenza di microsomi di fegato di ratto porta alla produzione di formaldeide, acido formico , metilammina, e N-metilidrazina. Quando al terreno vengono aggiunti enzimi a pH 5 si ha anche la formazione di N-metilidrossilamide e N,N-dimetilidrazina. L'ultimo composto è l'unico metabolita prodotto, in misura minore, dal Enzimi a pH 5. Pertanto, i metaboliti denitrosati o non denitrosati sono prodotti sia da una dealchilazione ossidativa che da una riduzione del DMNA, catalizzata da enzimi solubili microsomiali e cellulari.
[Risposte dei chemocettori del tessuto dell'intestino tenue alle variazioni di pCO2, pH e (HCO3-) nelle soluzioni di perfusione].Perfusione dell'intestino tenue di gatti anestetizzati con una soluzione avente un'eccessiva concentrazione di CO2 e H+ (pCO2 60 mm Hg; pH; 7,2; [HCO3-] 25 MM) ha prodotto un aumento riflesso soglia della pressione sanguigna. Il successivo aumento della pCO2 a 380 mm Hg e diminuzione di pH a 6,4 ha evocato un graduale aumento della pressione sanguigna (8,0 +/- 0,6 mm Hg) seguito dal brusco aumento dell'ampiezza dei riflessi pressori nell'intervallo di pH 6,4--6,1. I recettori tissutali sono risultati essere essenzialmente sensibili alle soluzioni acidosi metabolica imitativa (diminuzione di [HCO3-] all'interno dell'intervallo fisiologico delle variazioni di pH (pH 7,1--6,8). Le soluzioni con pH 6,4--6,1 che imitavano l'acidosi respiratoria (aumento di pCO2) erano più efficaci di quelle che imitavano l'acidosi metabolica. possibile ruolo delle variazioni del pH interstiziale nelle risposte dei chemocettori tissutali al C O2, si discute.
[Aumento dell'attività anticolinesterasica del clorofos nella sua interazione con il riattivatore TMB-4 in vitro].Esperimenti in vitro hanno dimostrato che un trattamento termostatico di un soluzione acquosa di clorofos a 38 gradi è accompagnata dalla sua maggiore attività colinesterasica. La velocità del processo è molto più elevata in un mezzo alcalino. Un'incubazione congiunta di clorofos con il riattivatore TMB-4 di pH di 7,5 e 38 gradi non solo non riesce a risultare nella decomposizione del veleno, ma al contrario tende ad accelerare il progressivo accrescimento delle proprietà inibitorie di questo composto organofosforico. L'autore considera i dati ottenuti come una delle prove che indicano la formazione durante l'interazione diretta di TMB-4 con clorofos o il prodotto della sua trasformazione di un complesso stabile che sembra essere un potente agente anticolinesterasico.
[Farmacologia della methvin--una nuova preparazione bloccante gangliare con effetto a breve termine].Methvin (vincanin chlormethylate) è un agente bloccante gangliare attivo di azione a breve termine. Per quanto riguarda la sua azione gangliolitica è circa 6 volte superiore all'afronad. Negli animali da esperimento il farmaco produce un effetto ipotensivo ben marcato e a breve termine (facilmente controllabile), senza provocare alcun effetto istaminico e diretto azione di vasodilatazione. Quando utilizzata in dosi relativamente elevate, la methvin blocca la conduzione neuromuscolare, potenzia l'azione dei principali miorilassanti. Uno studio sulla methvin in condizioni cliniche ha confermato la sua elevata attività gangliolitica precedentemente rivelata in esperimenti.
Influenza dei cationi mono e multivalenti sulle proprietà elettrocinetiche delle cellule normali linfoidi umane e di linfoma di Burkitt.Vari cationi mono e multivalenti, a forza ionica, ha influenzato le proprietà elettrocinetiche di superficie delle normali cellule linfoidi umane e di linfoma di Burkitt in un modo che rifletteva più le proprietà fisico-chimiche e le affinità di legame del catione che la sua valenza. L'effetto è stato espresso nei cambiamenti dell'entità della carica superficiale netta e nello spostamento del punto isoelettrico della superficie. Questi cambiamenti erano maggiori sulla superficie delle cellule del linfoma di Burkitt rispetto alla superficie delle loro normali controparti della linea cellulare.
Azione antiaritmica del nadololo, un agente bloccante i recettori beta-adrenergici.L'azione antiaritmica del 2,3-cis-1, Il 2,3,4-tetraidro-5-[(2-idrossi-3-terz-butilammino)propossi]2,3-naftalendiolo (nadololo) è stato valutato e confrontato con quello del propranololo in diversi modelli sperimentali di aritmie cardiache. e propranololo ha antagonizzato la tachicardia indotta da isoproterenolo e le aritmie indotte da ouabaina nei gatti, la fibrillazione ventricolare indotta dalla legatura dell'arteria coronaria antagonizzata e l'attività ectopica ventricolare soppressa durante la stimolazione vagale nei cani. , mancava di attività anestetica locale e non deprimeva il cuore nei cani. A causa di questi risultati, si conclude che l'attività antiaritmica del nadololo è apparentemente correlata al blocco dei recettori beta-adrenergici.
Effetti della stimolazione chimica del sistema dopaminergico mesolimbico sull'attività locomotoria.Gli effetti delle iniezioni locali di farmaci nelle aree terminali del sistema dopaminergico mesolimbico sono stati La somministrazione bilaterale di dopamina, ma non di noradrenalina e serotonina, nel nucleo accumbens di ratti non pretrattati ha provocato la stimolazione dell'attività locomotoria. Non sono stati osservati effetti chiari o solo minori dopo le iniezioni dei metaboliti della dopamina 3-metossitiramina, DOPAC e HVA e dopo iniezioni di terreni con diverso pH e osmolalità. La d-Amfetamina si è dimostrata più efficace della dopamina nel produrre stimolazione locomotoria, mentre sono stati osservati effetti sia stimolanti che depressivi in seguito all'iniezione di apomorfina nel nucleo accumbens. ET 495 e gli agonisti della noradrenalina clonidina, fenilefrina e isoprenalina non hanno potenziato l'attività locomotoria, ma la teofillina è risultata efficace. Pretrattamento con aloperidolo, ma non con clozapina, ha ridotto significativamente gli effetti della dopamina e della teofillina. La stimolazione locomotoria è stata riscontrata anche in seguito a somministrazione bilaterale di dopamina, d-anfetamina e apomorfina nel tuberculum olfattorio, mentre noradrenalina, serotonina ed ET 495 non hanno prodotto effetti depressivi. Questi risultati forniscono ulteriori prove per un ruolo importante del sistema dopaminergico mesolimbico rispetto all'attività locomotoria.
Azione degli inibitori H1 e H2 sulla risposta dell'adenilociclasi sensibile all'istamina della mucosa di cavia.Nella cavia, è stato hanno dimostrato che gli omogenati della mucosa del fondo contengono un sistema adenilico ciclasi attivato dall'istamina e dalle prostaglandine PGE1 e PGA1 Sono stati testati gli effetti della burimamide, un inibitore dell'H2, e della mepiramina e della clorfeniramide, entrambi inibitori dell'H1. Sia gli inibitori H1 che H2 si sono comportati cineticamente come inibitori competitivi dell'istamina, ma il Km derivato per la burimamide (2,5 - 4,1 , 10 (-5)) era significativamente inferiore a quello per la clorfeniramina (0,9 - 1,9, 10 (-4)) o mepyramine (1.3 - 1.4 .10(-4)) D'altra parte nessuno dei tre inibitori ha influenzato l'attivazione della ciclasi da parte di PGE1 e PGA1 Questi risultati suggeriscono che ci sono almeno due tipi di recettori nel preparato studiato, uno responsivo all'istamina e l'altro alle prostaglandine, e che la specificità di I recettori H1 e H2 non sono assoluti nella preparazione delle cellule rotte.
Legame ionico ai fosfolipidi. Interazione del calcio con la fosfatidilserina.Il legame del Ca2+ ai monostrati e ai doppi strati di fosfatidilserina è stato studiato in funzione di pH, forza ionica (concentrazione di NaCl) e concentrazione di Ca2+ utilizzando tecniche chimiche di superficie e colloidale. Il rapporto molare tra lipidi e calcio legato diminuisce a 2 quando la concentrazione di Ca2+ viene aumentata a circa 0,1 mM. A [Ca2+] maggiore di 0,1 mM a 1 Si forma il complesso :1. La costante di legame apparente Ka varia da circa 10(6) - 10(4) l/mol a seconda della concentrazione di Ca2+. Dopo aver tenuto conto degli effetti elettrostatici e delle interazioni del gruppo vicino, la costante di legame intrinseca Ki del il gruppo polare della fosforilserina a pH 7 (I = 0,01 M), dove trasporta una carica negativa netta di uno, è di circa 10 (4) l/mol; valori coerenti per Ki sono stati ottenuti utilizzando diversi approcci indipendenti. Ka per il legame di Ca2+ diminuisce all'aumentare di NaCl concentrazione perché i cationi monovalenti competono con Ca2+ per lo stesso sito di legame. Na+ e K+ sono ugualmente efficaci nello spiazzare il 45Ca2+ adsorbito su monostrati di fosfatidilserina, sia per quanto riguarda la cinetica che l'equilibrio dello spostamento. Il Ka per la reazione tra fosfatidilserina e cationi monovalenti è circa 10(3) volte più piccolo di quello del Ca2+. Un'indagine sul legame di Mn2+ alla fosfatidilserina mediante metodi di risonanza magnetica nucleare e chimica di superficie mostra che questo catione ha una costante di legame simile a quella del Ca2+. Sono state anche determinate le capacità di legame del Ca2+ di monostrati contenenti solo gruppi carbossilici (cioè acido arachidico) e gruppi fosfodiestere (cioè dicetilfosfato); il pK apparente per il gruppo -COOH nei monostrati è maggiore o uguale a 9 e quello per il gruppo fosfodiestere è inferiore a 4. Poiché questi gruppi non mantengono gli stessi valori di pK quando sono in stretta vicinanza nel gruppo fosforilserina, il i contributi relativi dei due gruppi al legame del Ca2+ alla fosfatidilserina non sono evidenti.
[L'accoppiamento della beta1-24-corticotropina al sistema adenilato-cilasi negli adipociti di ratto. Evidenza dell'interazione ormone-nucleotidi (autore\'s trad.)].L'obiettivo generale era definire alcuni dei parametri più importanti coinvolti nella fase di accoppiamento tra l'analogo sintetico dell'ormone adrenocoricotropina (peptide beta1-24-corticotropina tetracosa) e l'unità catalitica del sistema adenilato-ciclasi delle cellule adipose Questi studi sono stati eseguiti con una frazione purificata di membrana plasmatica da tessuto adiposo di ratto. A tal proposito, sono stati studiati alcuni effetti di ioni, pH e nucleotidi (ATP nad GTP) su questo sistema sensibile agli ormoni Un modello semplice basato su un processo di associazione casuale di reagenti ha fornito un'approssimazione statistica dei dati cinetici. In contrasto con i risultati ottenuti da altri due gruppi, che sono stati analizzati da De Haen, non è stata trovata alcuna prova per una regolazione dell'attività dell'adenilato-ciclasi da parte dell'adenosina trifosfato che h non era complessato al magnesio...
Sintetasi dell'acido ribonucleico a trasferimento istidico da Salmonella typhimurium. Interazione con substrati e analoghi dell'ATP.Requisiti strutturali per il legame del substrato all'istidil-tRNA sintetasi da Salmonella typhimurium sono stati studiati utilizzando analoghi dell'ATP. I valori di Ki e la relativa affinità di legame dell'enzima per questi analoghi sono stati determinati nella reazione di amminoacilazione del tRNA. L'enzima è altamente specifico per l'ATP: non è stato trovato alcun legame per GTP, CTP, TTP e UTP. Il dATP è un substrato molto povero per l'acilazione del tRNA, con un Km 40 volte superiore a quello dell'ATP. Il legame dell'adenosina 5\'-trifosfato richiede interazioni del gruppo amminico dell'adenosina e della frazione zuccherina; il 2\' e il 5\' posizioni del ribosio sembrano essere essenziali per il riconoscimento; i gruppi fosfato migliorano il legame. L'AMP è un inibitore non competitivo con l'ATP. L'interazione dell'istidil-tRNA sintetasi, un enzima dimerico, con l'istidina un d L'ATP è stato esaminato mediante misurazioni di fluorescenza all'equilibrio e mediante dialisi all'equilibrio. Il legame con la L-istidina è significativamente più stretto a pH 6 che a pH 7, mentre il legame con l'ATP è indipendente dal pH. La stechiometria è stata misurata a pH 6 rispetto a pH 7, mentre il legame dell'ATP è indipendente dal pH. La stechiometria è stata misurata a pH 7,5 mediante dialisi all'equilibrio ed è 1 mol di ATP/mol di enzima e, in modo variabile, vicino a 2 o 1 mol di istidina/mol di enzima.
[Interruzione della gravidanza e mortalità perinatale (transl.autore\'s)].L'induzione elettiva fu praticata nel 1875 su 10 537 parti (17,8%) La durata del parto è stata, semmai, ridotta dopo l'induzione elettiva, rispetto al parto spontaneo Non c'era evidenza di distocia dei tessuti molli dopo l'induzione elettiva Il punteggio di Apgar era 8-10 nel 95,7% dei bambini nati dopo l'induzione elettiva. di sangue dell'arteria ombelicale nel 95,7% dei bambini dopo l'induzione elettiva è stata maggiore o uguale a 7,2. C'è stato un notevole aumento dell'incidenza della posizione posteriore dell'occipite con induzione elettiva (2,7% dei casi). L'incidenza del parto vaginale operativo è stata frequente dopo l'elezione come dopo tutte le altre forme di parto. L'incidenza della sezione è stata del 4,7% dopo l'induzione elettiva, 11,5% nell'intera serie, l'asfissia intrauterina è un'indicazione nell'1,7%, rispetto al 2,5% per il gruppo totale. La frequenza delle operazioni è stata inve strettamente proporzionale all'indice cervicale. La mortalità perinatale è stata dello 0,53 per mille (un caso) dopo l'induzione elettiva, del 10,15 per mille nel gruppo totale, del 5,9 per mille in quelli con indicazione all'induzione precoce. La mortalità perinatale è diminuita dal 23,0 per mille al 7,2 per mille dal 1967 al 1974.
N-acetilazione di farmaci. Studi farmacogenetici in conigli selezionati per le loro caratteristiche di acetilatore.Studi sull'acetilazione di sulfadiazina, isoniazide e acido p-aminobenzoico in linee selezionate di acetilatori lenti e rapidi sono descritti conigli L'analisi del pedigree di conigli classificati come acetilatori sulfadiazina lenti o rapidi ha confermato studi precedenti che il tasso di eliminazione della sulfadiazina (acetilazione) è geneticamente controllato, con una rapida eliminazione dominante rispetto a una lenta eliminazione del farmaco. Studi farmacocinetici in conigli di specifici genotipi di sulfadiazina acetilatore con isoniazide e acido p-aminobenzoico mostrano che la velocità di eliminazione dell'isoniazide è sotto lo stesso controllo genetico della sulfadiazina, mentre la velocità di eliminazione dell'acido p-aminobenzoico non lo è. , che controlla la velocità di acetilazione enzimatica dell'acido p-aminobenzoico nelle cellule del sangue periferico e che è correlato alla sulfadiazina Viene descritto il polimorfismo di acetilazione.
Farmacocinetica della digossina nel ratto.Precedenti studi sulla farmacocinetica della 3H-digossina nel ratto si sono basati sulla radioattività totale nel plasma, anche se il farmaco è ampiamente metabolizzato in questa specie. Un confronto tra radioattività totale e farmaco immodificato nel plasma di ratto dopo somministrazione di 3H-digossina ha mostrato chiaramente la necessità di separare la digossina dai suoi metaboliti. La farmacocinetica della digossina è stata quindi esaminata mediante estrazione con solvente e cromatografia su strato sottile per isolare il farmaco immodificato. I livelli di digossina dopo una dose di 1 mg/kg ev sono stati misurati nel plasma e nelle urine di ratti maschi adulti in cui il dotto biliare o gli ureteri erano stati legati, nonché in controlli. In tutti i casi, le concentrazioni di digossina sono state meglio descritte da un modello aperto a due compartimenti. La digossina è stata rapidamente eliminata dal plasma dei controlli, con un'emivita di 2,5 ore, un volume di distribuzione di 3,6 litri/kg e un clearanc renal renale e leggermente inferiore alla velocità di filtrazione glomerulare. Nessun cambiamento significativo in questi parametri è stato osservato nei ratti con legatura del dotto biliare. La clearance corporea totale di 5,77 ml/min nei controlli è stata ridotta solo del 10% nei ratti legati al dotto biliare. Negli animali con legatura bilaterale dell'uretere, la clearance corporea è stata ridotta del 30% e l'emivita plasmatica della digossina è stata aumentata a 4 ore, sebbene non sia stato notato alcun cambiamento significativo nel volume di distribuzione apparente. Circa il 60% della clearance corporea totale non era influenzato dalle legature del dotto biliare e dell'uretere e si presumeva fosse dovuto alla biotrasformazione. L'escrezione biliare è risultata importante per la digossigenina bisdigitoxside, in quanto i ratti con legatura del dotto biliare hanno mostrato livelli elevati di metaboliti nel plasma e un aumento di 3 volte dell'escrezione renale del bisglicoside.
Legame di composti organici al fegato e ai polmoni di ratto.Il legame di vari composti organici marcati con radioisotopi al fegato e ai polmoni di ratto è stato studiato in vitro. Pezzi di polmone di ratto e fette di fegato di ratto sono state incubate a 37 gradi C sotto atmosfera di azoto in una soluzione modificata di fosfato di Krebs-Ringer (pH 7,4) CONTENENTE il composto da studiare. Dei composti neutri studiati, digitossina, digossina e desametasone erano altamente legato sia al fegato che al tessuto polmonare, mentre il grado di legame dell'amitrolo, dell'eritritolo e dell'ouabaina era del 20% o meno. Gli acidi deboli che erano legati nella misura maggiore sia nel fegato che nei polmoni erano fenobarbital, pentobarbital e difenilidantoina. era scarsamente legato e non vi erano prove per il legame dell'acido 5,5-dimetiloxazolidine-2,4-dione o p-aminoippuric in entrambi i tessuti. Il legame dei glicosidi cardiaci e dei barbiturici correva direttamente in parallelo con le loro solubilità lipidiche. Il d Il grado di legame di composti neutri e acidi deboli al tessuto polmonare ed epatico non variava molto con la concentrazione, anche se sono stati studiati ampi intervalli di concentrazione. Questo era vero anche per la morfina a base debole. D'altra parte, il legame al fegato e ai polmoni delle basi organiche nicotina, pilocarpina, d-anfetamina, lidocaina, eritromicina e clorochina variava con la concentrazione. Il composto di ammonio quaternario decametonio era legato solo al fegato e anche questo legame variava con la concentrazione. Due ulteriori composti di ammonio quaternario, tetraetilammonio e N1-metilnicotinammide, non erano significativamente legati a nessuno dei due tessuti. I confronti sulla base dell'uguale contenuto di solidi hanno rivelato che il legame di diversi composti organici nel fegato è maggiore o uguale a quello nel polmone.
Metabolismo dell'adriamicina nell'uomo. Evidenza dai metaboliti urinari.Abbiamo studiato il metabolismo umano dell'adriamicina isolando e identificando i metaboliti urinari che mantengono la specificità dell'adriamicina proprietà di fluorescenza. I metaboliti sono stati estratti mediante adsorbimento su sorbenti polimerici di polistirene, separati su colonne di acido silicico e purificati mediante cromatografia su strato sottile. Le strutture sono state determinate mediante cromatografia comparativa, spettroscopia infrarossa, a fluorescenza e di massa e degradazione enzimatica e chimica. Le sostanze identificate sono state adriamicinolo, adriamicinolo aglicone, adriamicina aglicone, deossiadriamicina aglicone, deossiadriamicinolo aglicone, demetildeossiadriamicinolo aglicone, demetildeossiadriamicinolo aglicone 4-O-solfato e demetildeossiadriamicina aglicone butimicina. riduzione del carbonile, scissione glicosidica riduttiva, idrolita scissione glicosidica, O-demetilazione, O-solfatazione e O-beta-glucuronidazione. La riduzione del carbonile è stata la principale conversione enzimatica che si verifica nell'essere umano.
Disposizione fisiologica e metabolismo del (3H)bitolterolo nell'uomo e nel cane.Il metabolismo e la disposizione del bitolterolo, l'estere di-p-toluato di Il Nt-butilarterenolo (tBA) è stato studiato nell'uomo dopo una singola dose orale e nel cane dopo somministrazione intraduodenale, ev o orale La radioattività plasmatica di picco media (+/- SE) nell'uomo (dose 70 mug/kg) è stata di 180 +/- 18 ng equivalenti di [3H]bitolterolo per ml o circa l'11% della dose, mentre il picco di radioattività plasmatica nel cane (dose, 200 mug/kg) era di 144 +/- 23 ng equivalenti per ml o circa il 4% di la dose. Sia per l'uomo che per il cane, il tempo per il massimo livello plasmatico di radioattività variava da 0,5 a 2 ore. Nell'uomo, solo l'1% della radioattività plasmatica rappresentava [3H]bitolterolo intatto 1,0 ore dopo il trattamento. Nel cane, la radioattività era concentrato nel tessuto polmonare dopo somministrazione ev di [3H]bitolterolo Il recupero del [3H]bitolterolo intatto nel polmone a 4,5 ore variava dal 26 al 46% della radioac totale tissutale vità dopo dosaggio ev e dal 4 al 14% di radioattività totale dei tessuti dopo somministrazione intraduodenale. La radioattività recuperata nelle urine e nelle feci umane (0-72 ore) rappresentava rispettivamente l'86 e l'8,1% della dose. Il recupero della radioattività nelle urine e nelle feci del cane ha rappresentato rispettivamente il 58 e il 23% della dose, nello stesso periodo di tempo. I radiocromatogrammi di campioni di urina di uomini e cani hanno rivelato modelli simili di metaboliti, comprese le forme libere e coniugate sia del tBA che del metabolita 3-O-metil, N-t-butilmetarterenolo. I principali componenti radioattivi delle feci erano bitolterolo e tBA. I risultati indicano che il bitolterolo viene assorbito per via orale e trattenuto come estere intatto nei polmoni. L'attività broncodilatatrice prolungata del bitolterolo è dovuta al lento rilascio dell'estere dal polmone e all'idrolisi al tBA, un agonista attivo dei beta2-adrenorecettori. L'attività farmacologica viene interrotta dal metabolismo del tBA tramite coniugazione o 3-O-metilazione.
Disposizione fisiologica e metabolismo del Nt-butilarterenolo e del suo estere di-p-toluato (bitolterolo) nel ratto.Il metabolismo e la disposizione del broncodilatatore, Nt-butilarterenolo (tBA) e il suo estere di-p-toluato (bitolterolo) sono stati confrontati nel ratto. trattenuta nei tessuti dopo somministrazione endovenosa con [3H]tBA. Dopo somministrazione orale e endovenosa con [3H]bitolterolo, la radioattività fecale rappresentava il 24% della dose e il 65 e il 79% della radioattività, rispettivamente, era escreta nelle urine (0- 72 ore). In confronto, la radioattività urinaria dopo farmaci orali e ev con [3H]tBA era rispettivamente del 43 e dell'83% della dose, e la radioattività fecale rappresentava rispettivamente il 43 o il 23% della dose (0-72 ore) Il bitolterolo è stato idrolizzato in vitro a tBA dalle esterasi presenti in vari tessuti tra cui l'intestino tenue, fegato e plasma. Inoltre, tBA era un substrato per la catecolamina O-metiltransferasi ma non per la monoamino ossidasi. Metaboliti simili sono stati osservati in campioni di urina di ratti trattati con [3H]tBA o [3H]bitolterolo. I metaboliti delle urine sono stati identificati come forme libere e coniugate sia di tBA che di 3-O-metil-tBA.
Metabolismo del 2-(3-cloro-4(4-clorobenzoil)-fenil)-as-triazina-3,5(2H,4H)-dione da parte del pollo .Il metabolismo dell'anticoccidiale 2-[3-cloro-4-(4-clorobenzoil)fenil]-as-triazina-3,-5(2H,4H)-dione (CP-25,415) è stato studiato nel pollo È stato dimostrato che il residuo predominante presente nel pollo era 2-[3-cloro-4-(alfa-idrossi-4-clorobenzoil)fenil]-as-triazina-3,5(2H,4H )-dione (CP-25,641). È stato sviluppato un saggio cromatografico gas-liquido per l'analisi di CP-25,641 in fluidi biologici e tessuti che era rapido, accurato e riproducibile. I risultati del metodo analitico erano ben correlati con le misurazioni radiochimiche e sono stati indicativo dei residui totali correlati al farmaco. L'emivita di CP-25.641 nei tessuti era di circa 32 ore tranne che nel rene, dove l'emivita era di circa 40 ore a causa della ritenzione di urina dai reni. CP-25.641 è stato escreto senza ulteriori modifiche.
Proprietà spettrali microsomiali e attività narcotica della N-demetilasi in ratti metadone-dipendenti.Ai ratti è stato dato accesso ad lib. a varie concentrazioni (da 0,3 a 1,0 mg/ml) di metadone cloridrato disciolto in soluzione di saccarosio. La N-demetilazione di vari narcotici è stata studiata in preparazioni epatiche di ratti consumatori di metadone per determinare se vi fosse specificità di substrato per il sistema microsomiale demetilasi. la demetilazione di metadone, etilmorfina e meperidina è stata aumentata del 40-65%, mentre quella per la N-demetilazione della morfina è stata ridotta al 55% del valore di controllo. Gli effetti additivi o sinergici sul contenuto del citocromo P-450 microsomiale sono stati osservati quando il consumo di metadone era integrato dalla somministrazione di dosi massime induttive di 3-metilcolantrene (3-MC) o fenobarbital (PB). Questo ha suggerito che vi era un aumento di un tipo di citocromo P-450 che era indipendente da quello indotto da PB o 3-MC. Il cambiamento qualitativo nel citocromo P-450 riflesso nello spettro di legame dell'etilisocianuro era evidente anche dopo il trattamento con metadone, PB o 3-MC e la combinazione di metadone e PB ha mostrato effetti che differivano dal solo PB. L'analisi cinetica a due substrati con metadone e morfina come substrati ha indicato che più di un sistema enzimatico può essere coinvolto nella reazione di N-demetilazione e che un componente comune di questo sistema di N-demetilasi non può essere indotto con fenobarbital. Tuttavia, il metadone e la meperidina sembrano essere demetilati dallo stesso sistema enzimatico.
Rilascio anaerobico di fluoro dall'alotano. Relazione con il legame dei metaboliti dell'alotano ai costituenti cellulari epatici.È stato scoperto che l'alotano subisce una defluorurazione riduttiva. Questa reazione richiede un sistema attivo del citocromo P-450 e NADPH, ed è inducibile dal fenobarbital e dai policlorobifenili ma non dal metilcolantrene. Il rilascio di fluoro avviene solo a bassa tensione di O2, mentre un'alta tensione di O2 provoca l'ossidazione dell'alotano ad acido trifluoroacetico, bromuro inorganico e cloruro. Il rilascio del fluoruro inorganico è lineare fino a 60 min. Poiché le condizioni richieste per il rilascio di fluoro e il legame di un metabolita dell'alotano ai fosfolipidi microsomiali sono simili, si presume che la molecola di alotano defluorato sia coinvolta in questo Tuttavia, in base alla quantità di fluoro rilasciato, il metabolita alotano defluorato rappresenta solo circa il 60% della quantità totale di hal otano legato al metabolita, il che suggerisce che più di un metabolita può essere coinvolto nel legame.
Epossidazione di aldrina catalizzata da monoossigenasi e idrossilazione di diidroisodrina in campioni di agobiopsia di fegato di scimmia. Saggio e proprietà.Epossidazione di Aldrin e diidroisodrina (1,8, 9,10,11,11-esacloro-2,3-7,6-endo-2,1-7,8-endo-tetraciclo [6.2.1.1(3), (6).0(2), (7 )]dodec-9-ene (DHI) sono stati studiati in preparazioni di monoossigenasi epatica da 0,2 ml. I campioni di biopsia epatica di scimmie rhesus (Macaca mulatta) e bonnet (M. radiata) ottenuti con un ago Menghini da 1,9 mm sono stati i principali fonti enzimatiche. Dieldrin e monoidrossidiidroisodrina (DHI-OH) sono stati gli unici metaboliti rilevati mediante analisi GLC a cattura di elettroni di estratti di esano dei mezzi di incubazione. L'incubazione, l'estrazione e l'analisi potrebbero essere eseguite nello stesso recipiente. Le velocità massime sono state ottenute in presenza di NADPH e O2, ed entrambe le trasformazioni sono state inibite da CO. L'apparente KM e Vmax (+/-SD) per l'epossidazione era 1.2 +/- 0.2 X 10(-5) M aldrin e 210 +/- 20 pmol di dieldr in per mg di proteine al minuto e i valori corrispondenti per l'idrossilazione erano 2,3 +/- 0,4 X 10 (-5) M DHI e 150 +/- 20 pmol di DHI-OH per mg di proteine al minuto. Dopo il trattamento con fenobarbital sono state valutate l'epossidazione di Aldrin e le attività di idrossilazione del DHI della biopsia epatica di scimmia rhesus e delle preparazioni di fegato di ratto. Le procedure di analisi possono essere utilizzate in protocolli in cui gli animali fungono da controlli.
Sviluppo postnatale dell'ossidazione a funzione mista misurato nei microsomi dell'intestino tenue e del fegato dei conigli.Sviluppo postnatale dell'aminopirina N-demetilasi, anilina 4-idrossilasi, benzpirene idrossilasi, bifenil 4-idrossilasi, attività della 7-etossicumarina 0-deetilasi, NADPH-citocromo c reduttasi e citocromo P-450 sono stati confrontati in microsomi del fegato e dell'intestino tenue di conigli bianchi della Nuova Zelanda. attività epatica anilina idrossilasi, tutte le attività enzimatiche metabolizzanti xenobiotiche esaminate hanno avuto un modello di sviluppo simile nel fegato e nell'intestino tenue. In entrambi i tessuti la capacità di metabolizzare gli xenobiotici era generalmente non rilevabile a 2 giorni di età ed è rimasta relativamente bassa per il primo 20 giorni di vita Dopodiché, è stato osservato un rapido aumento da 2 a 5 volte di tutta l'attività enzimatica studiata e i valori degli adulti sono stati raggiunti o superati entro i 30 giorni di età. l'abolizione delle attività enzimatiche nell'intestino tenue, ma non nel fegato, ha mostrato una caduta transitoria a 50 giorni di età prima che le attività degli adulti fossero raggiunte dopo i 75 giorni di età. Il modello di sviluppo del citocromo P-450 nell'intestino tenue assomigliava molto a quello delle attività enzimatiche che metabolizzano gli xenobiotici, ma nel fegato questa correlazione era meno esatta.
L'influenza del deidrocolato sulla captazione epatica e sull'escrezione biliare di 3H-taurocolato e 3H-ouabaina.La captazione epatica e l'escrezione biliare di 3H-taurocolato e 3H-ouabain è stato studiato nel ratto durante le infusioni di soluzione salina (controllo) e deidrocolato. Il deidrocolato (140 mumol/h) non ha influenzato la scomparsa plasmatica né l'escrezione biliare di taurocolato dopo una singola iniezione ev (37 mumol/kg). la produzione nell'esperimento deidrocolato è stata aumentata da 2 a 3 volte rispetto ai controlli. Il trasporto biliare massimo per il taurocolato somministrato per via esogena è stato determinato mediante infusione costante pari a 135,0 +/- 3,0 mumol/ora (22 mumol/min/g di fegato) Le infusioni concomitanti di 140 mumol di deidrocolato all'ora non hanno alterato la produzione massima di taurocolato Gli effetti dei due sali biliari sul flusso biliare sono stati additivi Il deidrocolato (140 mumol/ora) ha ridotto l'escrezione biliare di 3H-ouabaina (0,8 mumol/ora) kg) ed elevata la seconda ry lento componente della scomparsa plasmatica del glicoside cardiaco. I livelli epatici di ouabain erano aumentati rispetto ai controlli. Si conclude che il deidrocolato interferisce con il trasporto di ouabaina a livello canalicolare ma non con la captazione epatica primaria. Il taurocolato (140 mumol/h) non è riuscito a influenzare la produzione biliare totale di ouabain. Queste differenze e la mancanza di interazione tra deidrocolato e taurocolato suggeriscono una via di trasporto epatico del taurocolato che differisce da quella del taurocolato che differisce da quella del deidrocolato e/o dei suoi metaboliti.
Epidemiologia della discinesia tardiva Parte I.Abbiamo condotto uno studio epidemiologico sulla discinesia tardiva su un campione di 332 pazienti schizofrenici cronici (142 maschi e 190 femmine, età media 48,6 anni, durata media del trattamento neurolettico 14,5 anni). Si potrebbe concludere che l'età dei pazienti al momento delle procedure di valutazione è la variabile più importante. La prevalenza della discinesia tardiva era significativamente più alta nella popolazione anziana. Il significato di un inizio insidioso della malattia potrebbe essere solo secondario al ruolo altamente significativo dell'età Altri fattori, come il sesso, il tipo di schizofrenia, la sindrome iniziale, lo stato psichico presente, le sindromi organiche e la sindrome extrapiramidale da neurolettici, non visto giocare un ruolo nella prevalenza della discinesia tardiva.
Sviluppo postnatale del ritmo circadiano dell'attività della tirosina aminotransferasi del fegato di ratto.Il ritmo dell'attività della tirosina aminotransferasi (TAT) nei ratti di 2 giorni è caratterizzato da un massimo all'inizio e un ulteriore alla fine del tempo luce. Negli animali di 7 giorni il ritmo è molto meno pronunciato che nei cuccioli di 2 giorni. Al 21° giorno di vita i ratti già mostrano lo schema ritmico degli adulti, sebbene i valori assoluti siano ancora leggermente inferiori a quelli degli adulti. Il ritmo TAT nei neonati è ovviamente generato da variazioni periodiche nel rilascio ciclico AMP-dipendente di TAT dai polisomi.
Interazione elastina-proteoglicano. Cambiamenti conformazionali dell'alfa-elastina indotti dall'interazione.L'interazione tra alfa-elastina e un proteoglicano del tessuto connettivo è stata seguite da misurazioni della densità ottica e spettroscopia di dicroismo circolare. È stato riscontrato che l'interazione avviene a valori di pH inferiori al punto isoelettrico dell'elastina con la formazione di un complesso coacervato. Gli spettri CD hanno dimostrato cambiamenti conformazionali dell'alfa-elastina causati dall'interazione e risultanti in un aumento del contenuto della struttura elicoidale. Questa scoperta suggerisce la possibilità del coinvolgimento dei proteoglicani nell'organizzazione molecolare dell'elastina.
L'effetto dell'acidosi sulla rimozione del lattato da parte del rene di ratto perfuso.1. I reni perfusi isolati di ratti nutriti in normale stato acido-base hanno mostrato una velocità costante di rimozione del lattato dal perfusato tra 5 e 90 minuti di perfusione a un pH del perfusato di 7-4-7-5 2. La rimozione del lattato da parte dei reni di ratti in stato acido-base normale è stata stimolata entro 30 minuti da un riduzione del pH del perfusato a 7-1-7-2, ma depresso quando il pH del perfusato veniva ulteriormente ridotto 3. I reni prelevati da ratti precedentemente resi acidotici e perfusi con terreni di vari valori di pH hanno mostrato una progressiva diminuzione della velocità di rimozione del lattato durante 4. La produzione di glucosio da parte dei reni di ratti in normale stato acido-base perfuso con lattato come substrato non è stata influenzata da un'alterazione del pH del perfusato. I reni di ratti acidotici hanno generalmente mostrato un aumento della velocità di produzione di glucosio rispetto a quelli di ratti di controllo.
Gli effetti emodinamici dell'acidosi metabolica nel ratto.1. L'effetto dell'acidosi metabolica della durata di 4-6 h sulla gittata cardiaca, pressione sanguigna , frequenza cardiaca e flusso sanguigno epatico e renale sono stati studiati nel ratto. 2. Nei ratti anestetizzati, la pressione sanguigna e la frequenza cardiaca sono diminuite linearmente con il pH del sangue sia nei ratti operati con finta che nei ratti nefrectomizzati. Non c'era alcuna differenza significativa tra i due gruppi nell'effetto dell'acidosi su entrambe le variabili 3. La gittata cardiaca ha mostrato un calo significativo con l'aumento dell'acidosi nel ratto cosciente 4. Il flusso sanguigno epatico stimato nei ratti coscienti ha mostrato una significativa correlazione positiva con il pH del sangue sia nei ratti operati con finta che nei nefrectomizzati animali. Non c'era alcuna differenza significativa nel flusso sanguigno epatico stimato tra i due gruppi di animali a qualsiasi pH del sangue. 5. Nei ratti coscienti, l'aumento dell'acidosi ha causato una diminuzione progressiva del flusso sanguigno renale stimato. 6. Si conclude che l'aumento nell'apparente contributo renale precedentemente descritto alla rimozione del lattato nel ratto acidotico non può essere spiegato da alcun effetto circolatorio mediato dal rene. Viene discussa la possibile rilevanza dei risultati per l'omeostasi del lattato.
Gli effetti acuti dell'acidosi respiratoria e metabolica sulla funzione renale nel cane.1. Flusso plasmatico renale effettivo, velocità di filtrazione glomerulare e gittata cardiaca sono stati misurata in cani sottoposti a carico osmotico prima e durante acidosi respiratoria e metabolica acuta comparabile 2. La produzione di urina è aumentata nei cani di controllo e negli animali con acidosi metabolica, ma è diminuita con l'acidosi respiratoria Il flusso plasmatico renale effettivo e la velocità di filtrazione glomerulare sono diminuiti con l'acidosi respiratoria e metabolica 3. Quando l'acidosi respiratoria è stata tamponata con bicarbonato di sodio, il volume delle urine è aumentato e la velocità di filtrazione glomerulare e il flusso plasmatico renale effettivo sono rimasti invariati; con triidrossimetilamminometano, il volume delle urine è aumentato ma la velocità di filtrazione glomerulare e il flusso plasmatico renale effettivo sono diminuiti. 4. Quando l'acidosi metabolica era tamponato con bicarbonato di sodio, volume urinario aumentato; con triidrossimetilamminometano, volume urinario aumentato ma glomerula r la velocità di filtrazione è diminuita. La gittata cardiaca è diminuita solo durante l'acidosi metabolica, sia tamponata che non tamponata. 5. Questi studi dimostrano che, anche con carico osmotico: (1) l'acidosi respiratoria ha causato una diminuzione della velocità di filtrazione glomerulare, del flusso plasmatico renale effettivo e del volume delle urine; (2) l'acidosi metabolica deprime la velocità di filtrazione glomerulare e il flusso plasmatico renale effettivo ma non modifica il volume delle urine anche se la gittata cardiaca diminuisce; (3) Il bicarbonato di sodio è più efficace del triidrossimetilamminometano nel preservare la funzione renale durante l'acidosi respiratoria e metabolica.
Molteplici cambiamenti nei modelli distali degli elettroliti di arresto del flusso e riduzione dell'escrezione acida indotta nei conigli dall'angiotensina.1. In precedenza è stato dimostrato che l'angiotensina inibisce riassorbimento del sodio tubulare renale distale. In conseguenza di ciò, o indipendentemente, potrebbe influenzare la manipolazione distale di altri elettroliti. Abbiamo quindi esaminato gli effetti dell'angiotensina sul riassorbimento distale o sulla secrezione di uno spettro di elettroliti. 2. Stop bilaterale standard -sono stati condotti studi di flusso su conigli anestetizzati e adrenalectomizzati, in cui gli effetti delle infusioni endovenose di 0-02-0-05 mug min-1 kg-1 o 1 mug min-1 kg-1 di angiotensina sono stati confrontati con l'interruzione del controllo 3. La dose più bassa di angiotensina ha inibito il riassorbimento distale di sodio, cloruro, acqua e magnesio, ha inibito la secrezione distale di idrogeno e stimolato la secrezione distale di potassio. La dose più alta di angiotensina ha prodotto questi cambiamenti e inoltre ha inibito riassorbimento distale del calcio. La maggior parte dei cambiamenti osservati era correlata alla dose. La bassa dose di angiotensina non ha aumentato significativamente la pressione sanguigna, ma la dose alta è stata pressoria. 4. I cambiamenti nei modelli di arresto del flusso indotti dalla dose più elevata di angiotensina erano compatibili con, e possono aiutare a spiegare, i cambiamenti che ha prodotto nell'escrezione urinaria di sodio, cloruro, potassio, magnesio e calcio negli studi sulla clearance prima dell'arresto del flusso. La soppressione della secrezione di idrogeno causata da entrambe le dosi di angiotensina negli studi di arresto del flusso si è riflessa anche sulla riduzione dell'escrezione acida prodotta da queste velocità di infusione in ulteriori esperimenti eseguiti con metodi di eliminazione in conigli coscienti e carichi di acido. 5. I risultati supportano l'idea che l'angiotensina possa avere un importante ruolo intrarenale, almeno nei conigli.
Effetto della tobramicina sull'attività della gamma-glutamiltransferasi urinaria: studi in un caso di carcinoma renale.L'attività della gamma-glutamiltransferasi è stata studiata in un uomo che presentava setticemia ricorrente dovuta a pionefrosi e carcinoma renale. L'aumento dell'attività nelle urine era attribuibile alla somministrazione dell'antibiotico aminoglicosidico tobramicina. Che il carcinoma renale non contribuisse all'aumento dei valori è stato confermato dall'omogeneizzazione e dall'istochimica enzimatica del tumore. Sebbene l'attività di questo enzima nel siero era maggiore del normale, questo persisteva dopo l'intervento e quindi non era correlato al carcinoma renale.
Nuove tecniche per misurazioni iono-selettive del calcio ionizzato nel siero dopo la regolazione del pH di sieri manipolati aerobicamente.Riferisco un'ulteriore esperienza nella misurazione del calcio ionizzato ( Ca2+) con il sistema di elettroni AMT e i suoi standard di siero e elettrodi a stato solido, a immersione, calcio-selettivi. Con questo sistema, il pH del siero può essere regolato con gas CO2 e Ca2+ e pH misurati contemporaneamente, quando 5,2% di CO2 (40 mm pco2 ) viene utilizzato per l'equilibrio del campione, viene fornita anche la concentrazione standard di bicarbonato. Ho misurato il Ca2+ sierico in funzione del pH tra pH 7,0 e 9,0 e ho riscontrato che la relazione è riproducibile, senza evidenza di complessazione irreversibile del Ca2+. Quando il pH di I sieri spediti esposti in condizioni aerobiche sono stati riportati ai valori originali, i loro valori di Ca2+ erano gli stessi dei sieri freschi. La misurazione del Ca2+ in sieri manipolati di routine (aerobicamente) dopo il ripristino del pH con gas CO2 è stata quindi convalidata, entrambi i campioni all'interno di unistituto e esemplari spediti. La standardizzazione a pH 7,40 è raccomandata per le misurazioni di routine, è generalmente più accurata dell'uso di eparina o tecniche quasi anaerobiche ed è un approccio pratico. Nei pazienti con possibili disturbi acido-base non compensati (che possono essere indicati da una concentrazione standard di bicarbonato anormale se non sospettata clinicamente), il pH del paziente deve essere misurato in modo indipendente come parte delle consuete procedure di emogasanalisi anaerobiche rigorose. Il pH anomalo del paziente deve essere considerato nell'interpretazione dei risultati di Ca2+ determinati a pH 7,40 che sono borderline o leggermente anormali; più accuratamente, Ca2+ può essere misurato nei sieri separati al valore di pH del paziente precedentemente determinato. Studi di soluzioni acquose con gli elettrodi Ca2+ attualmente utilizzati hanno mostrato un coefficiente di selettività (la costante che mette in relazione l'attività di uno ione interferente con l'attività del calcio che contribuirebbe alla stessa fem) KNa=0.0031 +/- 0.0003 (SE) e KMg=0.046 +/- 0.004 (SE). A concentrazioni fisiologiche di Ca2+, le variazioni fisiologiche di Na+ non hanno alcun significato nel Ca2+ risultante, ma variazioni estreme di Mg2+ possono causare un errore di circa l'1%.
Gamma-glutamiltransferasi: inibizione del substrato, meccanismo cinetico e condizioni del dosaggio.L'attività della gamma-glutamiltransferasi nel siero si è dimostrata inibita in modo competitivo dai due substrati gamma-glutamil-4-nitroanilide e glicilglicina. La consapevolezza di ciò è importante quando si scelgono le condizioni di reazione finali per il dosaggio dell'enzima. La gamma-glutamiltransferasi probabilmente agisce con un meccanismo cinetico "ping-pong bi-bi" , che si adatta alla doppia inibizione competitiva del substrato dimostrata. Il prodotto, 4-nitro-anilina, sembra essere un inibitore non competitivo di entrambi i substrati. Vari amminoacidi, in particolare glicina e L-alanina, inibiscono l'enzima. La loro inibizione non sono competitivi con la glicilglicina e competitivi con la gamma-glutamil-4-nitroanilide Sulla base dei presenti e di altri studi, la Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology raccomanderà per l'uso di routine un metodo della gamma-glutamiltransferasi in cui le concentrazioni finali di gamma-glutamil-4-nitroanilide e glicilglicina sono rispettivamente 4 e 75 mmol/litro.
Misurazione della 25-idrossivitamina D3 nel siero.Descriviamo un metodo per misurare la 25-idrossivitamina D3 nel siero. Estrazione con diclorometano/metanolo (2 /1 per vol), seguita da cromatografia su colonna di Sephadex LH-20, ha determinato un recupero analitico complessivo dell'82% +/- 3,5% (DS). Siero di ratto normale diluito è stato utilizzato come proteina legante poiché contiene un proteina che ha sia un'elevata affinità (Ka = 2 X 10(10) litro/mol) sia un'elevata capacità (3 X 10(-6) mol/litro) per la 25-idrossivitamina D3. Non vi è alcun vantaggio nell'usarne di più proteine leganti complesse derivate sia da animali rachitici che da preparazioni di citosol Le concentrazioni di 25-idrossivitamina D3 (13,4 +/- 4 mug/litro) nel siero di soggetti belgi apparentemente normali sono inferiori a quelle riportate per i nordamericani, ma somigliano a quelle riportate per il Regno Unito.
Contributo dell'acidosi tissutale al danno ischemico nel cuore di ratto perfuso.La preparazione del cuore di ratto perfusa isolata è stata utilizzata per studiare gli effetti dell'attività respiratoria acidosi sul metabolismo miocardico e contrattile. I cuori sono stati perfusi con glucosio 5 mM e 10(-2) U/ml di insulina al fine di migliorare il metabolismo del glucosio rispetto a quello degli acidi grassi. Dopo perfusione con terreno bicarbonato Krebs a pH 6.6, i cuori ha cessato rapidamente di svolgere il lavoro esterno e la pressione ventricolare sinistra di picco è diminuita del 75% dopo 5 minuti. Anche il consumo di ossigeno, il tasso di generazione di ATP e il flusso glicolitico complessivo sono diminuiti rapidamente. Dopo circa 2 minuti di perfusione, la caduta del flusso glicolitico ha mostrato una parziale inversione, che è stato in gran parte rappresentato dall'aumento della produzione di lattato, in modo che l'ossidazione del glucosio diminuisse ulteriormente. L'inversione del flusso glicolitico potrebbe essere spiegata dal rilascio parziale dell'inibizione H + della fosfo-fruttochinasi da parte livelli tissutali di adenosina 5\'-difosfato (ADP), adenosina monofosfato (AMP) e P1 e livelli ridotti di adenosina trifosfato (ATP) e creatina fosfato. L'aumento della percentuale di assorbimento del glucosio convertito in lattato insieme a un aumento del rapporto lattato/piruvato tissutale potrebbe essere spiegato dall'inibizione del ciclo malato-aspartato combinata con l'ipossia tissutale. Lattato accumulato nei tessuti a causa di una ridotta permeabilità della membrana plasmatica al lattato. La diminuzione dell'apporto di ossigeno al miocardio è stata causata dalla costrizione secondaria dei vasi coronarici. In ulteriori esperimenti, il flusso coronarico è stato regolato da una pompa esterna che erogava fluido a una velocità controllata nella cannula aortica sopra le arterie coronarie e il grado di ipossia tissutale è stato monitorato misurando i cambiamenti dello stato di riduzione dei nucleotidi piridinici mediante tecniche di fluorescenza superficiale. Gli effetti dell'acidosi non complicata dalla possibile ipossia sono stati confrontati direttamente con quelli prodotti dall'ipossia ischemica. Gli effetti dell'acidosi in queste condizioni erano simili a quelli descritti sopra ea quelli prodotti dall'ischemia. Da questi ed altri dati si conclude che gli effetti dell'ischemia sono causati da un abbassamento del pH intracellulare, che fa diminuire il tasso di produzione di energia rispetto al tasso di richiesta di energia. Tuttavia, si suggerisce che la causa primaria della diminuzione della pressione sistolica di picco con acidosi o ischemia non sia il risultato di un difetto del metabolismo energetico, ma sia dovuta all'alterazione del ciclo del calcio del cuore. Vengono discusse le possibili cause di insufficienza cardiaca irreversibile dopo un'ischemia prolungata.
Metodo polarografico per la microdeterminazione rapida del colesterolo con colesterolo esterasi e colesterolo ossidasi.Le concentrazioni di colesterolo nel siero sono determinate enzimaticamente rapidamente mediante l'uso di un analizzatore di ossigeno polarografico con un circuito modificato per registrare contemporaneamente la quantità e la velocità di consumo di ossigeno. Il sistema di analisi finale, valutato dal valore di consumo di ossigeno che abbiamo trovato ottimale, è costituito da 1 ml di tampone fosfato di sodio (0,6 mol/litro, pH 7,0) contenente NaN3 (10 mg/litro), tensioattivo Triton X-100 (10 ml/litro), 0,4 U di colesterolo estere idrolasi e 0,6 U di colesterolo ossidasi. Il consumo di ossigeno e la concentrazione di colesterolo sono correlati linearmente a 8,0 g/litro e sono necessari solo 10 mul di siero. Le analisi replicate del siero in pool con il presente metodo hanno dimostrato la seguente precisione tra le serie: media = 1731 mg/litro, SD = 22,3 mg/litro, CV = 1,3% Bilirubina e ascorbico l'acido era con effetto sul presente metodo, a differenza dei metodi enzimatici colorimetrici.
La repressione e la derepressione della tirosina aminotransferasi epatica da parte di agenti cancerogeni.Come l'idrocortisone, una singola dose cancerogena di dimetilnitrosamina (50 mg/kg) avvia l'induzione ciclo per la tirosina aminotransferasi epatica in ratti adrenalectomizzati. Tuttavia, a seguito di questa induzione iniziale in presenza di dimetilnitrosamina, l'enzima diventa refrattario alla reinduzione da parte di induttori noti. La somministrazione di tioacetamide a ratti adrenalectomizzati o intatti porta ad un'immediata e progressiva perdita di inducibilità da idrocortisone, dibutirrilciclico AMP o dimetilnitrosamina. Anche se la repressione indotta dalla tioacetamide non è stata invertita nemmeno fino a 10 settimane dopo l'interruzione del trattamento, è stata invertita dopo l'induzione della rigenerazione epatica. Sia l'induzione mediata dal cancerogeno che la repressione della tirosina aminotransferasi appare avvenire mediante meccanismi che non coinvolgono le proteine leganti i corticosteroidi che non mediano in modo efficace l'induzione da parte dei glucocorticoidi.
Inibizione della perossidazione lipidica microsomiale guidata dal nadph da parte del/i fattore/i del citosol. Effetto di una dieta priva di grassi e ricca di carboidrati.Topi svizzeri maschi hanno avuto libero accesso a una dieta priva di grassi e ricca di carboidrati. La frazione del citosol epatico di questi topi conteneva un fattore sensibile al calore che inibiva notevolmente la perossidazione lipidica microsomiale, stimolata dal pirofosfato ferrico e guidata dal NADPH. Il fattore indotto dalla dieta era apparentemente incorporato nei microsomi dopo 12 giorni di alimentazione continua, poiché la perossidazione lipidica da parte di questi microsomi era fortemente diminuita. Il fattore è scomparso dal citosol dopo 24 ore di digiuno ed è ricomparso dopo aver rialimentato i topi con la dieta priva di grassi e ricca di carboidrati.
Confronto del metabolismo del benzo[alfa]pirene e del legame al DNA causato dai nuclei e dai microsomi del fegato di ratto.somministrazione di 3-metilcolantrene (3MC ) nei ratti ha notevolmente potenziato l'attività dell'aril idrocarburo idrossilasi (AHH) dei nuclei del fegato. Tuttavia, il legame in vitro del [3H]benzo[alfa]pirene (BP) al DNA all'interno dei nuclei che si è verificato contemporaneamente all'idrossilazione della BP è stato molto meno potenziato. La cromatografia su strato sottile dei metaboliti della BP prodotti da questi nuclei ha rivelato gli stessi metaboliti in quantità relative simili a quelle prodotte dai microsomi di fegato di ratto preparati da ratti che avevano ricevuto 3MC. Il legame al DNA è stato ulteriormente analizzato mediante idrolisi del DNA e frazionamento su una colonna Sephadex. Questa analisi ha rivelato che il legame al DAN nei nuclei era di natura molto simile a quello che si verificava quando il DNA del timo di vitello è stato aggiunto ai microsomi che metabolizzano la PA.
L'estinzione della fluorescenza del triptofanile dell'ormone della crescita umano da parte di ioduro.L'estinzione della fluorescenza del triptofanile dell'ormone della crescita umano da parte di I- ha seguito la cinetica di saturazione ed è stata abolita da KSCN. In presenza di guanidina cloridrato 6 M, l'estinzione è stata lineare tra 0 e 0,2 M KI. Questi risultati suggeriscono che I- ha spento la fluorescenza dell'ormone nativo legandosi in corrispondenza o vicino al singolo residuo di triptofanile. L'estinzione di 0,1 M KI è diminuita in modo esponenziale con concentrazioni crescenti di ormoni della crescita umani e bovini. L'acidificazione non ha avuto un effetto significativo sull'estinzione dell'ormone umano, ma ha notevolmente diminuito l'estinzione dell'ormone bovino. Differenze conformazionali in prossimità del residuo triptofanile solitario che potrebbero essere dedotte da questi e altri esperimenti potrebbero contribuire alla specificità biologica degli ormoni della crescita umani e bovini nativi.
Tumori carcinoidi del timo.Sono descritti tre pazienti con tumori carcinoidi del mediastino anteriore. Studio di questi pazienti e analisi di casi precedentemente segnalati indica che il timo è il sito primario di questi tumori, che sono probabilmente correlati alla presenza di cellule di Kulchitsky nel timo normale. Queste neoplasie differiscono clinicamente e anatomicamente dai timomi convenzionali. Si verificano prevalentemente negli uomini, non sono associati a miastenia grave o rosso -ipoplasia cellulare, e sono tumori più aggressivi dei timomi. Istologicamente, sono simili ai tumori carcinoidi di altri organi e differiscono dalla combinazione variabile di cellule epiteliali e linfociti dei timomi. Anche se sono solitamente localmente invasivi e metastatizzano frequentemente, il decorso clinico è di solito protratto È probabile che gli esempi riportati di sindrome di Cushing correlata a timomi fossero effettivamente associati a tumore carcinoide del timo S.
Valutazione in doppio cieco della L-prolil-Lleucil-glicina ammide orale nella malattia di Parkinson.Uno studio in doppio cieco di 4 mesi che confronta l'effetto dell'aumento delle dosi orali (fino a 1,0 g al giorno) di L-proil-L-leucil-glicina ammide (PLG) e placebo in 20 pazienti parkinsoniani non ha mostrato miglioramenti significativi nei punteggi oggettivi della disabilità funzionale. Tuttavia, tendenze importanti e alcuni risultati significativi sono stati osservati con le dosi più basse di PLG. Questi risultati essenzialmente negativi possono essere attribuiti a scarso assorbimento intestinale del composto, una breve emivita biologica nel sangue, o somministrazione di dosi orali molto più elevate di quanto richiesto, o una combinazione di fattori. In ulteriori studi con questo peptide, che sono incoraggiati, la via endovenosa dovrebbe essere utilizzata fino a quando non sarà risolta la questione dell'assorbimento intestinale.
Chemiotassi di zoospore in isolati australiani di specie Phytophthora.Zoospore di isolati australiani di Phytophthora drechsleri, P. cryptogea, P. cinnamomi, P. nicotianae var parasitica e P. citricola sono stati esaminati per le loro risposte chemiotattiche ad asparagina, glutammina, aspartato, glutammato e composti strutturalmente correlati. I requisiti strutturali per l'attrazione includono il gruppo alfa-amminoacido con una catena di carbonio corta che termina in un gruppo ammidico. L'unico isolato americano testato ha dato un risultato diverso e vengono discusse le possibili ragioni per questo. Il pH dell'ambiente era importante, una molecola con carica neutra era più attraente di una molecola con carica negativa, quindi la glutammina e l'aspartato erano più attraenti a pH 3.0 rispetto a pH 5.0. Le zoospore tendevano ad allontanarsi dalle regioni con un'alta concentrazione di ioni idrogeno. I composti diversi dagli amminoacidi erano leggermente attraenti, inclusi diversi zuccheri ed etanolo. Interazione sinergica zioni tra amminoacidi, etanolo e saccarosio sono state osservate e possono spiegare gli alti livelli di attrazione delle zoospore verso gli essudati e gli estratti radicali.
Caratteristiche di una specie di Acinetobacter facoltativamente psicrofila isolata dal sedimento fluviale.Un batterio facoltativo psicrofilo isolato dal sedimento fluviale è stato identificato come una specie di Acinetobacter, simile a quelli precedentemente caratterizzati come A. lwoffi. Il ceppo era estremamente lipolitico ed emolitico. È stata osservata anche una certa azione sul petrolio greggio. L'organismo è stato in grado di utilizzare un'ampia varietà di fonti di carbonio ed energia quando testato sia a 20 che a 30 gradi C. A il confronto viene fatto con il ceppo tipo di A. lwoffi proposto in precedenza. I batteri avevano una parete cellulare Gram-negativa contenente uno strato intermedio denso di elettroni. La divisione cellulare avveniva con la formazione di un setto e una leggera costrizione.
Caratteristiche di crescita di una linea cellulare derivata dall'ovidotto di maiale.Ulteriori prove per l'istituzione della linea cellulare delle tube di Falloppio di maiale (PFT) come la linea cellulare continua è stata mostrata da un aumento della densità massima della popolazione all'aumentare del numero di subcolture. Gli intervalli ottimali di crescita del pH e della temperatura sembravano essere rispettivamente di 7,4-7,8 e 37-41 gradi C e il tempo di raddoppio della popolazione era di 20- 25 h in condizioni di crescita ottimali. Con la subcoltura progressiva, il fabbisogno di siero è sceso dal 20 al 2%. In tutte le subcolture seriali è stata riscontrata un'efficienza di piastratura dal 2 al 4%. Sono state osservate colonie nella coltura in sospensione di agar alla 146a sottocoltura e successivamente. Alterazioni cromosomiche sono state trovate nella 100a sottocultura e in seguito.
Ossidazione dell'alanina indotta dalla temperatura in uno Pseudomonas psicrotrofico.Una pseudomonade psicrotrofica isolata da pesce ghiacciato ha ossidato l'alanina a temperature prossime a 0 gradi C ed è cresciuta sopra l'intervallo 0 gradi C-35 gradi C. Il tasso di ossidazione dell'alanina, misurato manometricamente, da parte delle cellule cresciute a 2 gradi C era inferiore a quello delle cellule cresciute a 22 gradi C. Tuttavia, il consumo di ossigeno dopo il trattamento termico a 35 gradi per 35 min è stata ridotta considerevolmente da cellule coltivate a 2 gradi C. L'attività dell'alanina ossidasi è stata testata in un estratto di cellule coltivate a 2 gradi C e 22 gradi C con alanina come unica fonte di carbonio, azoto ed energia. gradi C ha prodotto un'alanina ossidasi con una temperatura ottimale di 35 gradi C e pH ottimale di 8, che ha perso circa l'80% di attività mediante trattamento termico a 40 gradi C per 30 minuti. Non c'è stato alcun cambiamento nell'attività dopo la dialisi a pH 7, 8 , o 9. Estratti da cellule cresciute a 22 gradi C conteneva un sistema di alanina ossidasi con una temperatura ottimale di 45 gradi C, un pH ottimale superiore a 8 e una riduzione dell'attività solo del 30% circa dopo il trattamento termico. Questa attività enzimatica è stata concentrata nella frazione di eluizione 0,5 M da una colonna Sephadex e la dialisi ha ridotto l'attività a pH 7 e 8. La sintesi enzimatica mesofila apparentemente è iniziata intorno a una temperatura di crescita di 10 gradi C. I sistemi grezzi di alanina ossidasi di Pseudomonas aeruginosa derivavano da cellule cresciute a 13 gradi C e 37 gradi C avevano una temperatura ottimale comune di 45 gradi C. Questi dati suggeriscono che un meccanismo di crescita psicrofila da parte dei batteri psicrotrofi potrebbe essere l'induzione di enzimi con basse temperature ottimali in risposta a condizioni di bassa temperatura.
Frazionamento delle proteine nucleolari mediante elettroforesi su gel bidimensionale.L'isolamento delle proteine nucleolari è stato ottenuto mediante dissociazione in presenza di urea-guanidina cloridrato, seguita mediante centrifugazione ad alta velocità per rimuovere gli acidi nucleici. Almeno 31 frazioni di proteine nucleolari sono state rilevate mediante elettroforesi su gel di isoelettrofocalizzazione nell'intervallo di pH 3,5-10. Dopo l'elettroforesi su gel bidimensionale su gel a lastre di sodio dodecil solfato-poliacrilammide, più di 100 componenti di le proteine nucleolari sono state identificate. Due terzi delle proteine nucleolari si trovavano nell'intervallo di pH 5-8 dopo l'isoelettrofocalizzazione. I pesi molecolari di queste classi di proteine hanno dimostrato di essere per lo più 30000-70000 mediante elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato-poliacrilammide.
Un'endogalattosaminidasi da Streptomyces griseus.Un'endogalattosaminidasi è stata purificata 34 volte dal filtrato di coltura di Streptomyces griseus. Questo enzima scinde i legami GalN-GalN in oligogalattosaminoglicano, un oligosaccaride ricco di galattosamina isolato dal filtrato di coltura di un mutante di Neurospora. Poiché alcuni o tutti i legami GalN-GalN in questa molecola collegano le posizioni 1 e 4 e sono nella configurazione alfa, probabilmente abbiamo a che fare con una endo-alfa-(1 porta a 4)-galattosaminidasi, ma questa caratterizzazione è solo provvisoria perché i pochi legami scissi dall'enzima potrebbero avere una struttura diversa. L'enzima è inattivo nei confronti dell'N-acetil-oligogalattosaminoglicano e del chitosano. Le preparazioni di endogalattosaminidasi inoltre scinde il galattosaminoglicano ad alto peso molecolare (ottenuto da Neurospora) in frammenti maggiori o uguali a 10(4) dalton di peso molecolare e catalizza il rilascio di spore di Neurospora da le superfici vetrate a cui sono ancorati. Le attività di scissione dei galattosaminoglicani e di rilascio di spore eluiscono congiuntamente dalle colonne di cellulosa DEAE. Questa osservazione fornisce ulteriore supporto a una precedente proposta secondo cui gli sporeli sono ancorati al vetro per mezzo di molecole di galattosaminoglicani.
La riduzione del tempo di coma in caso di sovradosaggio di farmaci lipofili utilizzando olio di ricino.Uno studio clinico sull'olio di ricino in caso di sovradosaggio di farmaci lipofili ha dato una forte impressione clinica che era efficace nell'accelerare il recupero. Pertanto, sono stati condotti esperimenti su animali per confermare che l'olio di ricino agisce come un ligando nell'avvelenamento da etclorvinolo e che il suo uso riduce il tempo di coma. I livelli sierici seriali di etclorvinolo sono stati ottenuti da cani a cui era stato somministrato Ethchlorvynol 150 mg/kg da solo, e la stessa dose sciolta in olio di ricino 15 ml/kg in modo incrociato. Il risultato è stato una riduzione dei livelli sierici di picco e dell'emivita del farmaco quando è stata utilizzata la soluzione di olio di ricino. situazione clinica più da vicino, un ulteriore studio crossover è stato condotto utilizzando ethchlorvynol 300 mg/kg da solo e la stessa dose seguita da olio di ricino 15 ml/kg ripetuto ogni 12 ore, che non ha mostrato alcun ritardo nel raggiungimento della concentrazione sierica di picco e nessuna riduzione dei livelli di picco. , esso ha mostrato una riduzione del 31% dell'emivita del farmaco. Questo cambiamento è statisticamente significativo e supporta l'uso continuato dell'olio di ricino nell'overdose di farmaci lipofili.
Estrazione di un complesso calcio-fosfolipide-fosfato dall'osso.Un complesso calcio-fosfolipide-fosfato con un rapporto costante 1:1 tra calcio e fosfato totale è dimostrato che il rapporto molare esiste nell'osso di coniglio e di vitello. Questo complesso, che può essere coinvolto nel trasporto e nella deposizione di minerali ossei, sembra costituire una proporzione significativamente maggiore dei lipidi dell'osso più giovane rispetto a quello dell'osso più maturo. isolato da un'estrazione Folch modificata che utilizza la distruzione ultrasonica del materiale cellulare. Vengono presentate prove per dimostrare che il complesso è un costituente naturale dell'osso piuttosto che uno creato in modo artificiale durante l'estrazione.
Localizzazione quantitativa di tirosina idrossilasi, dopamina-beta-idrossilasi, fenoloetanolammina-N-metil transferasi e decarbossilasi dell'acido glutammico nel midollo spinale.Radiometrico sensibile saggi per tirosina idrossilasi (TH), dopamina-beta-idrossilasi (DBH), feniletanolammina-N-metil transferasi (PNMT) e acido glutammico decarbossilasi (GAD) sono stati combinati con tecniche di microdissezione per la localizzazione quantitativa di questi enzimi sintetici nel midollo spinale di coniglio cordone. TH era presente uniformemente nella sostanza grigia e bianca. DBH era più alto nelle corna laterali che nelle altre aree di sostanza grigia e non era rilevabile nella sostanza bianca. PNMT era rilevabile nella sostanza grigia ma non bianca, ed era considerevolmente più basso in attività rispetto agli altri enzimi sintetici delle catecolamine. Il GAD era più alto nelle corna dorsali a livello cervicale e lombare rispetto ad altre aree della materia grigia e relativamente basso nella sostanza bianca. L'attività del GAD era considerevolmente più alto del ca attività enzimatica sintetica della tecolamina. Le localizzazioni quantitative sono coerenti con le mappe e le distribuzioni qualitative degli enzimi immunoistochimici dei relativi neurotrasmettitori putativi.
Sensibilizzazione e assuefazione del riflesso del cuscino plantare nei gatti.Il riflesso del cuscino plantare nei gatti è stato esaminato come sistema modello in un mammifero per lo studio degli effetti della stimolazione ripetuta sulla trasmissione neurale. Gli effetti di varie frequenze e intensità di stimolazione erano simili a quelli osservati in altri sistemi riflessi. Ad esempio, per un numero fisso di stimoli, l'abitudine del riflesso del cuscino plantare era più marcata a 10 Hz rispetto a 2,0 Hz e con stimolazione della soglia di 1,0 X rispetto alla stimolazione della soglia di 5,0 X. La sensibilizzazione si è verificata a intensità e frequenze di stimolazione intermedie. riflesso del cuscino plantare. Questi cambiamenti nel riflesso del cuscino plantare erano anche indipendenti dalle variazioni nella trasmissione afferente periferica al midollo spinale. Sensibilizzazione e assuefazione nel pl Il riflesso del cuscino antar si è verificato durante la stimolazione iterata, è stato prodotto centralmente e non è stato correlato ai meccanismi di inibizione presinaptica.
L'effetto della rimozione degli organi taget sullo sviluppo dei neuroni simpatici.Il ruolo degli organi bersaglio nella maturazione dei neuroni adrenergici è stato studiato nel neonato ratto. Il ganglio cervicale superiore (SCG) e i suoi organi terminali, le ghiandole salivari e l'iride sono stati impiegati come sistema modello. La sialectomia unilaterale e l'iridectomia in animali di 3 giorni hanno impedito il normale sviluppo della tirosina idrossilasi gangliare (T-OH) e DOPA decarbossilasi. Questi enzimi sono altamente localizzati nei neuroni adrenergici nell'SCG e sono stati utilizzati per monitorare la maturazione di queste cellule. L'attività enzimatica è rimasta depressa per almeno due mesi, il tempo più lungo testato. Al contrario, la proteina gangliare totale, un misura della crescita gangliare nel suo complesso, inizialmente sviluppata normalmente. Sei settimane dopo l'intervento, tuttavia, il contenuto proteico era significativamente inferiore nei gangli privati del normale campo di innervazione. Il fallimento della normale maturazione enzimatica era apparentemente dipendente nt sulla rimozione dei soli organi terminali omolaterali, poiché la sialectomia bilaterale non ha esercitato un effetto maggiore della sialectomia unilaterale. Negli adulti, la sialectomia unilaterale e l'iridectomia non hanno alterato significativamente l'attività T-OH gangliare o la proteina nei ratti seguiti fino a un mese dopo l'intervento.
Cambiamenti ipossici ultrastrutturali nel corno di Ammon e nelle cellule di Purkinje.Le cavie sono state esposte per periodi variabili a diversi gradi di ipossia mediante la respirazione di miscele controllate di O2-N2 e del SNC sottoposti ad esame al microscopio ottico ed elettronico dopo fissazione con aldeide per perfusione. Gli esperimenti di anossia subacuta hanno rivelato un'alterazione del reticolo endoplasmatico rugoso delle cellule di Purkinje costituito dalla formazione di \'cisterne appaiate\'. esperimenti di anossia cronica, sono state riscontrate piccole alterazioni ultrastrutturali delle stesse cellule in associazione con la comparsa di glicogeno monoparticolato. Gli autori discutono il significato di queste alterazioni ultrastrutturali in relazione al danno riscontrato in altri organi.
Diminuzione dell'assorbimento e dello scambio di aminoacidi neurotrasmettitori dopo l'esaurimento dei loro pool sinaptosomiali.Sinaptosomi premarcati a 37 gradi C con aminoacidi radioattivi (GABA, glutammato, glicina, taurina, acido alfa-aminoisobutirrico, fenilalanina, leucina) e poi lavati a 0 gradi C su filtri Millipore (DAWP 02500) hanno perso il 60-70% della radioattività accumulata. La perdita era simile con GABA triziato e glutammato esogeno, e con [14C]GABA e [14C]glutammato derivato metabolicamente dal [14C]glucosio. Al contrario, noradrenalina, dopamina e 5-idrossitriptamina radioattive sono state trattenute quasi totalmente dai sinaptosomi sottoposti a shock freddo. Dopo il pretrattamento con reserpina e nialamide la perdita di norepinefrina è diventata significativamente maggiore (circa 25%) L'assorbimento di GABA radioattivo, glutammato e cicina dopo shock da freddo era ridotto di circa il 50%, mentre quello delle ammine biogene radioattive era meno influenzato (riduzione del 22% per la noradrenalina e, 29% per 5-idrossitriptamina e 35% per dopamina). La perdita di aminoacidi e la riduzione dell'assorbimento potrebbero essere minimizzate eseguendo lo shock freddo in condizioni ipertoniche. Nei sinaptosomi pre-marcati con [3H]GABA, è stata osservata una buona correlazione tra l'entità della deplezione del pool di aminoacidi indotta dallo shock da freddo o da 56 mM KCl, la diminuzione del successivo accumulo di [14C]GABA e la diminuzione di [14C]-GABA- stimolato il rilascio di [3H]GABA (scambio omosessuale).
Farmaci benzodiazepinici in pazienti di medicina generale.I dati di un programma di sorveglianza dei farmaci in ospedale sono stati utilizzati per determinare la frequenza con cui i farmaci benzodiazepinici sono stati utilizzati in medicina generale Le benzodiazepine erano i farmaci più comunemente usati come ipnotici e venivano somministrati al 32% di questi pazienti. L'uso concomitante di più di un farmaco benzodiazepinico o di benzodiazepine con altri farmaci psicoattivi era comune e spesso irrazionale. Una serie di pazienti in doppio cieco- studi di preferenza che confrontano varie benzodiazepine e una benzodiazepina con un antistaminico hanno mostrato che per l'effetto ipnotico a breve termine non c'erano differenze tra tre comuni benzodiazepine ma i pazienti anziani preferivano le benzodiazepine all'antistaminico, che produceva più effetti indesiderati. Questi risultati suggeriscono che attualmente il diazepam è il ipnotico di scelta per i pazienti ricoverati nel reparto medico.
Salicilati e funzione renale nell'artrite reumatoide.È stato studiato l'effetto del trattamento con salicilato sul rene, in particolare sulla funzione midollare. In un'analisi retrospettiva dei pazienti con artrite reumatoide (AR) trattati con alte dosi di salicilati hanno dimostrato di avere un potere di concentrazione urinaria inferiore e una maggiore escrezione di N-acetil-beta-D-glucosaminidasi (NAG) rispetto ai pazienti che non avevano ricevuto un trattamento con salicilati. della funzionalità renale in persone sane e pazienti con AR iniziando il salicilato a dosi terapeutiche ha mostrato che mentre l'escrezione delle cellule epiteliali è stata aumentata solo transitoriamente in entrambi i gruppi, l'escrezione di NAG è stata aumentata in tutti i casi a tre giorni e questo aumento è stato sostenuto a 10 giorni, tutti i valori sono molto più alti nei pazienti rispetto ai soggetti sani, quindi il trattamento con salicilati causa un danno tubulare renale ma questo danno si traduce in una compromissione della funzione solo minima e non costituisce un motivo per rifiutare il trattamento con salicilato.
L'aspettativa di esito della terapia di mantenimento nei pazienti schizofrenici cronici.I risultati di uno studio prospettico di follow-up su un gruppo di pazienti schizofrenici suggeriscono che una percentuale significativa (41%) ha probabilità di ricadute durante un periodo di due anni nonostante la prescrizione di neurolettici iniettabili a lunga durata d'azione. Alcuni recidiveranno a causa di un fallimento del regime, ma altri (32-37%) perché la protezione farmacologica di questi farmaci sembrerebbe essere meno efficace in alcuni pazienti. Anche con i maggiori vantaggi dei neurolettici iniettabili a lunga durata d'azione rispetto ai farmaci orali, la popolazione di pazienti schizofrenici rimane un gruppo con un'alta incidenza di morbilità psichiatrica e sociale che continua per richiedere tutte le risorse sia dell'ospedale che dei servizi comunitari.
Effetti della somministrazione cronica di nicotina sulla midollare del surrene di ratto denervato.1 Gli effetti della somministrazione cronica di nicotina (1 o 10 mg/kg, sc, due volte al giorno) sono stati studiati in ghiandole surrenali di ratto intatte e denervate per determinare i ruoli relativi di input centrale e azioni dirette sulle catecolamine.2 La deplezione di catecolamine è stata ottenuta nelle ghiandole intatte da 1-7 giorni di trattamento con 10 mg/kg, con recupero entro 14 giorni di trattamento; le catecolamine non sono diminuite nelle ghiandole surrenali denervate.3 La deplezione di catecolamine è stata accompagnata da una diminuzione delle vescicole di accumulo funzionali (determinate dall'assorbimento di [3H]-adrenalina per ghiandola) nel lato intatto, mentre non è stato osservato alcun cambiamento il lato denervato; la proporzione di vescicole di nuova sintesi è aumentata notevolmente durante 1-7 giorni di trattamento con 10 mg/kg nel lato intatto, mentre un aumento molto più piccolo e di durata più breve è stato osservato nella ghiandola surrenale denervata.4 Somministrazione cronica di nicotina La concentrazione a entrambi i livelli di dose ha indotto tirosina idrossilasi sia nelle ghiandole intatte che in quelle denervate, ma l'aumento si è verificato più lentamente nelle ghiandole denervate. 5 I livelli di dopamina beta-idrossilasi sono aumentati in modo simile in entrambi i lati durante il trattamento con nicotina (10 mg/kg). 6 Questi studi suggeriscono che sebbene la denervazione surrenalica a lungo termine elimini la deplezione di catecolamine causata dalla somministrazione cronica di nicotina, i meccanismi di induzione degli enzimi che sintetizzano le catecolamine sono ancora in grado di rispondere al farmaco.
La catecol O-metiltransferasi nei globuli rossi di soggetti umani schizofrenici, depressi e normali.La catecol O-metiltransferasi di globuli rossi umani lisati è stata dosato in condizioni ottimali, utilizzando concentrazioni saturanti dei substrati, S-adenosil-L-metionina e acido 3-4-diidrossibenzoico. L'attività enzimatica media riscontrata in 24 soggetti normali era di 29-2 nmol/h/ml RBC. L'attività media nel sangue di 33 donne depresse unipolari non era significativamente diverso dal normale. Tuttavia, sono state osservate attività enzimatiche più elevate nel sangue di 11 pazienti schizofrenici (38-9 nmol/hr/ml RBC). Preparazioni enzimatiche parzialmente purificate da sangue normale e schizofrenico gli individui erano indistinguibili per quanto riguarda le specificità del substrato, i valori di pH isoelettrico e i rapporti dei due prodotti metilati con O. Pertanto è improbabile che qualsiasi difetto nella metilazione O che può verificarsi nella schizofrenia possa essere attribuito a un cambiamento nell'intrinseca c proprietà della catecolo eritrocitario O-metiltransferasi.
Lo shock elettroconvulsivo aumenta le risposte comportamentali dei ratti all'accumulo di 5-idrossitriptamina nel cervello e ai farmaci stimolanti del sistema nervoso centrale.1 Un singolo shock elettroconvulsivo (ECS) di 150 V per 1 s ha aumentato la concentrazione di acido 5-idrossiindoleacetico (5-HIAA) nel cervello di ratto ma non ha alterato le concentrazioni di 5-idrossitriptamina (5-HT) o di triptofano nel cervello 3 ore dopo.2 Un singolo ECS ha diminuito la sintesi di 5-HT 3 h e 6 h dopo La sintesi è tornata alla normalità dopo 24 ore I ratti trattati con ECS non hanno mostrato una maggiore iperattività prodotta dall'aumento dell'accumulo di 5-HT cerebrale dopo la somministrazione di L-triptofano e tranilcipromina in qualsiasi momento fino a 24 h più tardi. Ciò suggerisce che un singolo elettroshock non altera l'attività funzionale della 5-HT.3 Ventiquattro ore dopo l'ECS finale di una serie di 10 scariche somministrate una volta al giorno, ai ratti sono stati somministrati tranilcipromina e L-triptofano. Hanno mostrato una maggiore iperattività rispetto ai ratti di controllo non trattati ted con ECS, suggerendo che ECS aumenta l'attività funzionale 5-HT. Le concentrazioni cerebrali di 5-HT, 5-HIAA e triptofano sono state quindi invariate dall'ECS. La sintesi di 5-HT e l'accumulo di 5-HT a seguito di tranilcipromina e L-triptofano non sono stati alterati dall'ECS. 4 L'iperattività dopo la somministrazione dell'agonista 5-HT 5-metossi N,N-dimetiltriptamina è stata potenziata da ECS ripetute (10 giorni), suggerendo risposte post-sinaptiche alterate alla stimolazione del recettore 5-HT. 5 L'ECS ripetuto ha potenziato l'attività locomotoria in seguito a tranilcipromina e L-DOPA. Non ha alterato le concentrazioni di noradrenalina o dopamina nel cervello. 6 Il periodo di latenza prima di una convulsione indotta da pentilentetrazolo è stato accorciato da ECS ripetute. 7 A seguito di ECS ripetute sembra esserci un aumento della sensibilità neuronale a determinati stimoli che producono una stimolazione comportamentale mediata a livello centrale. Questo è discusso in relazione al meccanismo con cui la terapia elettroconvulsivante (ECT) produce il suo effetto terapeutico.
La valutazione della nuova attività pressoria della gamma-piperidinobutiramide (WY 20051, DF480).1 gamma-Piperidinobutyramide (Wy 20051, DF480) iniettato le risposte pressorie evocate per via endovenosa nel ganglio anestetizzato hanno bloccato la preparazione del ratto nell'intervallo di dosi 2,4 x 10 (-6)-3,0 x 10 (-4) mol/kg 2 Alte dosi (maggiori di 3,8 x 10 (-5) mol/kg ) o anche dosi submassimali ripetute (1,9 x 10(-5) mol/kg) di Wy 20051 hanno causato tachifilassi di questa risposta pressoria.3 La curva di risposta pressorio alla noradrenalina è stata spostata significativamente a destra della curva di controllo a seguito di una dose di Wy 20051 (1,5 x 10(-4) mol/kg cumulativo).4 La curva dose-risposta per l'azione pressoria di Wy 20051 è stata potenziata nei ratti anestetizzati trattati con reserpina. Al contrario, le risposte pressorie indotte dalla tiramina sono state abolite.5 Wy 20051 ha contratto la preparazione della spirale aortica isolata da cavia (3,8 x 10 (-5) -6,0 x 10 (-4) mol) e ha evocato risposte costrittive nel me perfuso preparazione vascolare senterica del ratto (5,9 x 10(-7)-1,2 x 10(-5) mol). A dosi più elevate le risposte sono state ridotte. 6 Le risposte costrittive indotte dal Wy 20051 del mesentere perfuso non sono state influenzate dal blocco dei recettori alfa-adrenergici o dalla tachifilassi dei recettori 5-idrossitriptamina. 7 Il tempo per l'abolizione delle risposte costrittive del mesentere indotte da Wy 20051 in un mezzo privo di calcio non era significativamente diverso da quello richiesto per la noradrenalina, ma era significativamente maggiore di quello per KCl (P inferiore a 0,001). 8 Wy 20051 e noradrenalina, ma non KCl, hanno evocato risposte costrittive nel sistema vascolare mesenterico depolarizzato del ratto. 9 I risultati indicano che Wy 20051 evoca risposte pressorie che hanno alcune caratteristiche di quelle della noradrenalina. Tuttavia, le risposte non sono suscitate da un meccanismo alfa-adrenergico.
Doppio effetto degli antagonisti dei recettori alfa-adrenergici nei vasi deferenti isolati dal ratto.1 Nei vasi deferenti isolati dal ratto, le risposte contrattili isotoniche a basse dosi di noradrenalina o adrenalina sono stati antagonizzati, e quelli a dosi elevate sono stati potenziati, da yohimbina, piperoxan, fentolamina e tolazolina. Gli effetti dovuti a dosi intermedie non sono stati influenzati, o sono stati potenziati entro circa 30 minuti, a seguito di un'inibizione iniziale.2 Gli alfa-bloccanti degli adrenorecettori ha quindi causato uno spostamento a destra e un aumento dell'altezza massima delle curve logaritmiche dose-risposta degli stimolanti dei recettori alfa-adrenergici. Per una data dose di antagonista, l'insorgenza è stata più lenta per l'effetto potenziante che per l'effetto bloccante.3 Il passaggio a il diritto indotto da piperoxan e yohimbina sulle curve dose-risposta di noradrenalina e adrenalina è stato analizzato con il grafico di Schild, e le pendenze ottenute, intorno a 0,3, erano inferiori a quelle previste dalla teoria dei recettori. k captazione neuronale, le pendenze erano vicine a 1.0. 4 L'aumento della risposta massima alla noradrenalina e all'adrenalina indotta dai bloccanti dei recettori alfa-adrenergici dipendeva dal tempo di incubazione, dalla dose di antagonista e dall'altezza iniziale delle risposte all'agonista. Un potenziamento meno pronunciato è stato ottenuto anche quando l'acetilcolina è stata utilizzata come agonista. 5 I risultati sono spiegati in termini di teoria dei recettori come dovuti a un duplice effetto degli antagonisti dei recettori alfa-adrenergici; antagonismo competitivo vero e proprio, che può manifestarsi dopo il blocco della captazione neuronale, e un'interazione in un locus diverso, che si traduce in un potenziamento degli effetti della noradrenalina e dell'adrenalina.
Compromissione della clearance epatica della (35S)-bromosulfoftaleina in ratti intossicati da paracetamolo.1 La capacità funzionale complessiva del fegato è stata valutata utilizzando [ 35S]-bromosulfoftaleina (BSP, 100 mg/kg, iv) in ratti adulti con fistola biliare pretrattati per via orale con diverse dosi di paracetamolo (APAP) per intervalli di tempo variabili.2 Il danno epatico massimo si è verificato tra 12-18 ore dopo singole dosi di APAP (0,5 o 1 g/kg); la funzione escretoria epatica è tornata ai livelli di controllo entro 48-72 ore.3 La somministrazione di 0,5 o 1 g/kg di APAP 18 ore prima della BSP ha causato un'inibizione dose-dipendente dell'effetto coleretico della BSP e dei 60 min di escrezione cumulativa del colorante, ma, al contrario, ha prodotto un aumento significativo delle concentrazioni epatiche e plasmatiche di 35 S. 4 Dopo acuta (0,25 g/kg) o subacuta (0,5 g/kg, due volte al giorno per 7 giorni) trattamento con APAP, l'escrezione totale di 35S nella bile e la ritenzione di 35S nel fegato o plasma rimasta sostanzialmente la stessa di quella dei controlli. 5 Nei ratti trattati con dosi singole di 1 g/kg di APAP, l'assorbimento epatico del colorante era significativamente aumentato durante le prime fasi dell'intossicazione, mentre l'effetto opposto è stato osservato nei periodi tardivi. 6 Il flusso biliare sembrava essere inversamente correlato all'escrezione di BSP invariato e direttamente correlato all'escrezione del principale coniugato di BSP nella bile. 7 La clearance epatica della BSP è stata più rapida nei ratti trattati in modo subacuto con 0,5 o 1 g/kg di APAP, rispetto a quelli trattati in modo acuto con dosi uguali, suggerendo che l'intensità dell'epatotossicità indotta da APAP è diventata meno grave dopo la somministrazione ripetuta di questo farmaco. 8 Si conclude che l'assorbimento epatico, il metabolismo e l'escrezione di BSP sono reversibilmente compromessi a seguito di danno epatico indotto da APAP.
[Disturbi acido-base in stato asmatico (autore\'s transl)].In 85 patinet con stato asmatico, gli autori hanno studiato il equilibrio basale, le tensioni gassose e vari parametri umorali. I valori sono stati classificati in due gruppi in base al livello di PaCO2: inferiore o uguale a 44 torr (Gruppo I), superiore a 44 torr (Gruppo II). Nei 58 casi di Gruppo II, c'era una correlazione positiva molto stretta tra PaCO2 e ioni H +, praticamente la stessa di quella stabilita da BRACKETT et al. [3] nell'ipercapnia acuta sperimentale nell'uomo. Al contrario, la correlazione derivava da casi di stato asmatico in letteratura ha mostrato, in alcuni casi, una componente metabolica nell'acidosi. Nel presente lavoro, il valore medio dei lattati era vicino alla norma; si è registrato un lento aumento del contenuto proteico e dell'ematocrito, nei due gruppi. La prognosi del lo stato asmatico dipende dai gradi di ipercapnia: quando raggiunge i 70 torr, m la ventilazione meccanica è urgentemente necessaria ed è la parte principale del trattamento; l'uso di farmaci aggiuntivi rimane una questione di caso specifico.
[Studio isotopico dei disturbi di fluidi ed elettroliti nell'insufficienza respiratoria cronica scompensata (autore\'s trad.)].Lo studio dei disturbi di fluidi ed elettroliti da parte di Il metodo di radiodiluizione degli isotopi viene eseguito in 22 pazienti con insufficienza respiratoria cronica e insufficienza cardiaca. Le misurazioni simultanee dei compartimenti idro-ionici sono state eseguite con acqua triziata (HTO), sodio marcato (22Na), potassio marcato (42K) e bromo marcato (82Br) Da queste misurazioni si calcolano i vari spazi d'acqua: acqua totale (ET) e fluidi extracellulari (LEC), anche elettroliti scambiabili: sodio (NaE), potassio (KE), cloro (ClE) e valori derivati. sono confrontati con valori corrispondenti nei controlli con lo stesso indice di obesità I pazienti con insufficienza respiratoria mostrano un aumento di liquidi e sodio, simile a quello riscontrato nello scompenso cardiaco e nella denutrizione Il rapporto (NaE + KE)/ET non è significativamente ridotto sed e la natriemia è solo leggermente inferiore. Non c'è una vera deplezione di potassio nella maggior parte dei pazienti.
[Ruolo di P50 nella rianimazione (transl.autore\'s)].La quantità di ossigeno resa disponibile ai tessuti del corpo dipende essenzialmente da scambi gassosi polmonari, gittata cardiaca e sua distribuzione regionale, concentrazione di emoglobina e anche sull'affinità dell'ossigeno della molecola di emoglobina. Che una curva di dissociazione dell'ossiemoglobina standard descriva fedelmente il carico e lo scarico di ossigeno sia nei soggetti sani che in quelli affetti da processi patologici Oltre all'effetto di pH, PCO2 e temperatura, la curva di dissociazione dell'ossiemoglobina può essere modificata da alterazioni di altri fattori (concentrazione di 2,3-difosfoglicerato, ormoni, farmaci). Anche se gli spostamenti della curva di dissociazione dell'ossiemoglobina, espressi da variazioni di P50 può sembrare minuscolo, l'effetto di questi spostamenti, espressi in termini di "valore funzionale dell'emoglobina" è molto ampio. La valutazione del paziente in terapia intensiva deve prendere in o tenere conto dell'effetto delle alterazioni della curva di dissociazione dell'ossiemoglobina che possono aumentare o diminuire l'ossigenazione dei tessuti.
Studi su alcuni enzimi lipogenici di cellule leucemiche mieloidi in coltura.La frazione microsomiale delle cellule M1 (una linea cellulare consolidata di leucemia mieloide) era in grado di catalizzando l'acilazione di sn-glicerolo 3-fosfato da parte di acil-CoA tioesteri grassi a catena lunga Il principale prodotto lipidico formato è stato identificato come acido fosfatidico Palmityl-CoA, stearil-CoA e oleil-CoA erano donatori di acile più efficaci rispetto al linoleyl- CoA e arachidonil-CoA. Le cellule M1 e i macrofagi differenziati da loro hanno mostrato livelli simili di attività acilante del sn-glicerolo 3-fosfato, che erano circa la metà di quella del fegato di topo e circa quattro volte quella dei macrofagi peritoneali. -L'attività della carbossilasi della CoA nelle cellule M1 e nei macrofagi differenziati da esse non erano significativamente differenti tra loro ed erano paragonabili a quelli nel fegato di topo, mentre non è stata rilevata alcuna attività nei macrofagi peritoneali. Questi risultati hanno indicato che dif la ferenziazione delle cellule leucemiche mieloidi, che si traduce in perdita di leucemogenicità e attività mitotica, non è associata a cambiamenti nelle attività di questi enzimi lipogenici, sebbene le cellule coltivate abbiano mostrato attività notevolmente più elevate rispetto ai macrofagi peritoneali appena raccolti. Inoltre, il presente studio supporta l'idea che la via del glicerofosfato dia un contributo essenziale alla sintesi de novo dei fosfolipidi nelle cellule M1, così come in entrambi i tipi di macrofagi.
Preparazione e proprietà dei coenzimi nicotinammide solubili-insolubili.Una forma solubile-insolubile di nicotinammide adenina dinucleotide (NAD+), che può essere resa solubile o insolubile mediante semplice regolazione del pH, è stato preparato accoppiando covalentemente NAD ad acido alginico utilizzando 1,2,7,8-diepossiottano. Il NAD legato all'acido alginico ha mostrato la funzione coenzimatica allo stato solubile e potrebbe essere raccolto per ulteriori utilizzare come precipitato abbassando il pH al di sotto di 3. L'accoppiamento di coenzimi solubili-insolubili con apoenzimi insolubilizzati è possibile nei reattori a letto fluido e fisso.
Massimizzazione della produzione batterica allo stato stazionario in un chemostato con controllo del pH e del substrato.Questo studio analitico si occupa del comportamento e del controllo dello stato stazionario di crescita microbica in colture continue. Un modello Haldane-Monod di secondo ordine di colture continue viene utilizzato come base per lo studio degli effetti della regolazione del pH mediante l'aggiunta di materiali acidi (o basici). Il trattamento di una concentrazione di ioni idrogeno, oltre al substrato e alle concentrazioni microbiche come variabili di stato, risulta in un sistema di equazioni del terzo ordine che descrive il processo. L'analisi del sistema in equilibrio produce diversi stati stazionari ammissibili, cioè stati stazionari che soddisfano tutti i vincoli. Un problema di controllo ottimo è formulato e successivamente risolto per massimizzare la produzione microbica allo stato stazionario.
[dipendenza dal pH e spettri EPR di complessi Fe-NO con purine e pirimidine].Equilibri tra diversi tipi di complessi Fe(I)-dinitrosile con basi azotate in soluzione sono state studiate mediante spettroscopia EPR. Sono state utilizzate simulazione al computer e sostituzione isotopica del 15NO per rendere più facile l'interpretazione di pattern EPR complicati. È stata studiata la dipendenza dal pH dei complessi purinici e pirimidinici. Diversi segnali EPR, in condizioni lente condizioni di scambio, erano presenti nell'intervallo dei valori di pH di rilevanza biologica. Sono stati identificati quattro tipi di complessi sulla base della struttura iperfine nucleare: B\' = dove due molecole di purina erano legate al ferro tramite N-7 nell'imidazolo anello; B\'\' = dove due molecole di mercapto-base erano legate al ferro tramite S-; B\'\'\' = dove una molecola di mercapto-base era legata al ferro tramite S- e un'altra tramite pirimidina- azoto; B* = dove due pirimidine m le olecole erano legate al ferro tramite l'azoto pirimidinico.
Effetti del pH durante la ricombinazione dell'apoproteina e dei lipidi della membrana degli eritrociti umani.La ricombinazione delle proteine della membrana dei globuli rossi umani e dei lipidi risultanti dalla dialisi dei componenti in 2-cloroetanolo contro tamponi acquosi da pH2-12 sono state studiate mediante centrifugazione in gradiente di densità, elettroforesi su gel di poliacrilammide e microscopia elettronica a frattura congelata. Tra pH 4 e 10 la maggior parte delle proteine sono state trovate nei ricombinati mentre sotto pH 4 e sopra pH 10 solo una parte di esse è stata recuperata nella banda lipoproteica dopo centrifugazione in gradiente di densità A pH basso, è stata rilevata l'incorporazione crescente della "glicoproteina principale" nei ricombinati mediante elettroforesi su gel e in parallelo sono state trovate quantità crescenti di particelle nel congelamento -facce di membrana di frattura. La necessità di lavorare a valori di pH bassi da pH 2-4, tuttavia, e una valutazione critica di tutti i dati attualmente disponibili porta alla conclusione che il La tecnica del 2-cloroetanolo non è adeguata per gli studi di ricombinazione che tendono alla ricostituzione della membrana.
Cinetica della lenta variazione della corrente di picco di sodio nella membrana del nervo mielinizzato in seguito a cambiamenti del potenziale di ritenzione o del pH extracellulare.(1) Cambiamenti di il potenziale di ritenzione applicato alla membrana delle fibre nervose mielinizzate ha indotto lente variazioni della corrente di picco del sodio, che si sovrappongono all'effetto dell'inattivazione del sodio. (2) Queste lente variazioni sono transizioni tra vari livelli costanti di conduttanza del sodio disponibile. l'andamento temporale può essere descritto dalla funzione erfc (radice quadrata t/tau) dove tau è il tempo ed erfc il complemento della funzione di errore. Il tempo caratteristico tau è compreso nell'intervallo 2-4 min e dipende dal potenziale di membrana. (3) Le variazioni del pH extracellulare provocano una rapida variazione della corrente di picco del sodio seguita da una lenta variazione osservata dopo le variazioni del potenziale di ritenzione Questa lenta variazione può essere prevenuta applicando contemporaneamente una variazione appropriata del potenziale di ritenzione, ad es. G. l'effetto della variazione del pH da 7,3 a 5,3 è bilanciato modificando il potenziale da -70 a -55 mV. (4) I risultati sono interpretati postulando una lenta diffusione dei componenti carichi all'interno della membrana nodale. La loro distribuzione trasversale controlla il numero di canali del sodio disponibili ad un dato potenziale di membrana. L'equivalenza tra variazione di pH e tensione è spiegata assumendo cariche fisse negative sulla superficie esterna della membrana, che sono protonate a pH basso e quindi influenzano il potenziale intrinseco di membrana. (5) Si conclude che gli effetti attribuiti all'azione degli agenti sui singoli canali del sodio devono essere corretti per le variazioni nel numero di canali disponibili se questi agenti influenzano il potenziale intrinseco di membrana, ad es. variazioni del pH extracellulare.
Un'analisi termodinamica di non equilibrio del trasporto attivo nell'ambito della teoria chemiosotica.Il circuito protonico ideato da Mitchell nella teoria chemiosmotica è stato sottoposto all'analisi utilizzando il formalismo della termodinamica irreversibile. I coefficienti fenomenologici e il grado di accoppiamento relativi ai flussi co-permeanti sono stati derivati dai modelli anione/H+, substrato/H+, catione/H+ e anione/anione biporter. i coefficienti nelle relazioni di Onsager sono sempre stati soddisfatti. I flussi macroscopici che portano alla scissione delle cariche, come l'ossidoriduzione, l'idro-disidratazione e la transidrogenasi, sono guidati da una forza termodinamica composita che include la componente protone-motrice. L'accoppiamento multiplo si verifica nel circuito quando si assume che il flusso netto verso l'interno di protoni diventa zero, cioè quando la circolazione dei protoni raggiunge uno stato stazionario. In queste condizioni, la fosforilazione ossidativa, ATPasi- o re La transidrogenasi legata alla respirazione e l'assorbimento di anione o catione contro il loro gradiente elettrochimico possono essere previsti, in accordo con prove sperimentali note.
Controllo traslazionale della sintesi proteica nei fibroblasti WI-38 stimolati.Un sistema di sintesi proteica privo di cellule che impiega ribosomi da fibroblasti diploidi umani WI-38 è stato sviluppato e sono stati trovati i livelli ottimali di MgC12 e KC1 e il valore di pH La velocità con cui i ribosomi sono in grado di incorporare la leucina radioattiva nelle proteine ([14C] incorporazione della leucina/10 min/100 mug di rRNA) e il numero di catene peptidiche in crescita [3H] puromicinopeptidi formati/100 mug rRNA). Quando monostrati confluenti di cellule WI-38 sono stati stimolati a proliferare dal siero, è stato osservato un aumento transitorio della velocità di allungamento del peptide da parte dei ribosomi a 60 minuti dopo la stimolazione. Questo aumento non è stato influenzato da la presenza di actinomicina D (10 mug/ml) nel mezzo stimolante. Un cambiamento nella quantità relativa di alcune proteine associate ai ribosomi ha accompagnato l'aumento del tasso di allungamento della crescita del peptide. L'alterazione nelle proteine associate non può essere spiegata d per una maggiore sintesi di proteine. Infine, l'attivazione precoce dei ribosomi nelle cellule WI-38 stimolate sembra derivare dalla rimozione di uno o più inibitori della funzione ribosomiale.
Effetto della dieta materna sulla lipogenesi epatica fetale.Gli effetti di: a, dieta materna; b, ciclico-3\',5\' -adenosinamonofosfato (AMP ciclico) ec, clofibrato sulla lipogenesi epatica in ratti fetali sono stati studiati. Le diete sperimentali contenevano il 22% di proteine, il 40-50% di carboidrati, adeguate vitamine e minerali. Inoltre, le diete contenenti grassi sono state integrate con il 15% di olio di mais, il 25% di olio di mais o il 5% di colesterolo + il 10% di acido oleico Negli studi sull'alimentazione con clofibrato, lo 0,3% (p/v) dell'estere etilico è stato aggiunto a una razione di brodo o a dieta. La lipogenesi è stata misurata in fette di fegato incubate con [2-14C] piruvato, [1-14C] acetato o 3H2O. Inoltre, le attività degli enzimi lipogenici sono state misurate in frazioni di citosol da omogenati di fegato. sono state anche esaminate diete sulla composizione del fegato. L'attività lipogenica era più alta nel fegato fetale che in quello materno. Quando alla dieta materna veniva aggiunto il 15% di olio di mais, il grasso la sintesi di acidi ty nel fegato fetale non è diminuita come nel fegato materno. Il digiuno materno ha ridotto la sintesi di acidi grassi fetali del 50% quando misurata con 14C e meno del 10% quando misurata con 3H2O. Sebbene l'aggiunta di colesterolo alla dieta materna abbia ridotto la sintesi del colesterolo nel fegato materno, non è stata osservata tale diminuzione nel fegato fetale. I cambiamenti nelle attività enzimatiche hanno messo in parallelo le alterazioni nella lipogenesi nel fegato materno ma non nel feto. L'alimentazione o il digiuno con olio di mais aumentava la velocità di trasferimento del linoleato dalla madre al feto. Tuttavia, l'accumulo di linoleato nel fegato fetale non era correlato a una diminuzione del tasso di sintesi degli acidi grassi come nel fegato materno. Le riserve di glicogeno epatico materno sono state esaurite dal digiuno, ma i livelli di glicogeno nel fegato fetale sono rimasti elevati in queste condizioni.
Purificazione e proprietà dell'estere idrolasi del colesterolo dall'intima e dalla media dell'aorta umana.1. L'idrolasi dell'estere del colesterolo dell'intima e della media dell'aorta umana è stata isolata e purificata circa 650 volte con un recupero del 10-15% dell'attività originale mediante precipitazione sequenziale con acetone al 35%, filtrazione su gel su Sephadex G-75 e cromatografia su colonna DEAE-cellulosa 2. Due valori ottimali di pH di 4,5-5,0 e 7,0-7,5 sono stati costantemente osservata per l'idrolasi dell'estere del colesterolo parzialmente purificato dell'intima e della media dell'aorta umana 3. Nel sistema utilizzato nel presente studio, la crescente concentrazione di emulsionanti, sodio taurocolato e fosfatidilcolina, ha inibito l'attività degli enzimi neutri ma non sull'acido enzimi. Al contrario, i prodotti di reazione, colesterolo e acido oleico, erano molto più inibitori sugli enzimi acidi che su quelli neutri 4. Risultati di studi sull'effetto della presentazione del substrato sull'attività enzimatica e su t viene discussa anche la differenza tra enzimi acidi e neutri.
Attività della lisofosfolipasi nei frammenti della parete cellulare che contaminano le frazioni mitocondriali di Neurospora crassa.Preparazioni mitocondriali grezze di Neurospora crassa contengono alti livelli di lisofosfolipasi (EC 3.1. 1.5) attività quando dosato con lisofosfatidilcolina come substrato. Nei mitocondri purificati mediante centrifugazione su un gradiente di densità di saccarosio questa attività è praticamente assente. L'enzima ha dimostrato di essere legato a una frazione cellulare contaminante che consiste principalmente di materiale della parete cellulare come era dimostrato mediante microscopia elettronica e analisi chimica. L'enzima non ha un requisito assoluto di Ca2+ ma è leggermente stimolato da 10 mM CaCl2. Il pH ottimale è 5,8 in presenza di CaCl2 e viene spostato a 4,2 quando è presente EDTA. A differenza di altre lisofosfolipasi questo enzima è solo leggermente inibito dal desossicolato. Questo detergente è in grado di liberare parte dell'attività della lisofosfolipasi dai frammenti di parete senza produrre un aumento dell'attività specifica. L'enzima è probabilmente secreto dalle cellule poiché nel terreno di coltura sono state trovate anche elevate attività di lisofosfolipasi.
Regolazione della NADH e NADPH-ferredossina ossidoriduttasi nei clostridi del gruppo butirrico.NADH e NADPH-ferredossina ossidoriduttasi sono state studiate in Clostridium acetobutylicum, Cl. tyrobutyricum e Cl. pasteurianum Lo studio della distribuzione e della regolazione di queste attività enzimatiche in condizioni di coltura ben definite, rivela che la funzione essenziale della NADPH-ferredoxin ossidoreduttasi è quella di produrre NADPH, mentre la NADH-ferredoxin ossidoriduttasi può, a seconda condizioni cellulari, producono o ossidano NADH Quando questi Clostridi utilizzano la glicolisi, la regolazione della NADH-ferredossina ossidoreduttasi da parte dell'acetil-CoA (attivatore obbligatorio dell'attività della NADH-ferroxina reduttasi) e da parte del NADH (inibitore competitivo dell'attività della ferredossina-NAD+ reduttasi) consente la enzimi per funzionare correlativamente con la gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi e quindi controllare i livelli di NAD+ e NADH nella cellula In Cl. tyrobutyricum e Cl. pasteurianum, il fer le attività della redoxin-NADP+ reduttasi sono regolate da NAD+ e NADH in accordo con le concentrazioni intracellulari di questi coenzimi. In cl. tyrobutyricum che cresce su piruvato/acetato, attività di NADH e NADPH-ferredossina reduttasi non può essere rilevata; si trovano solo le attività ferredoxin-NAD+ e ferredoxin-NADP+ reduttasi. In questo Clostridium, la regolazione dell'attività della ferredossina-NADP+ reduttasi è la stessa sia che venga coltivata su glucosio o piruvato. Al contrario, l'attività della ferredossina-NAD+ reduttasi subisce un drastico cambiamento, poiché NADH non controlla più l'attività enzimatica. In questo caso la regolazione non è più necessaria, poiché la gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi non funziona.
Proprietà dell'adenilato ciclasi stimolata dalla tossina del colera e da NaF dai timociti di topo.Sono stati determinati i parametri cinetici dell'attività dell'adenilato ciclasi dei timociti di topo. NaF e colera la tossina ha stimolato l'adenilato ciclasi. La stimolazione da parte di entrambi gli agenti non ha modificato il pH o Mg2+ ottimale rispetto al controllo (ciclasi non stimolata). Il valore Km per l'ATP dell'adenilato ciclasi stimolata da NaF è stato significativamente ridotto rispetto al controllo. Al contrario, il trattamento con la tossina del colera non ha modificare il Km relativo al controllo. L'adenilato ciclasi, quando stimolata da NaF, aveva un ottimo per Mn2+ da solo, o Mn2+ in combinazione con Mg2+, almeno doppio rispetto al controllo. Al contrario, l'attività della ciclasi preparata da cellule trattate con la tossina del colera è rimasta invariata per quanto riguarda questi cationi bivalenti rispetto al controllo. L'aggiunta di NaF all'adenilato ciclasi preparata da cellule trattate con la tossina del colera ha comportato una significativa riduzione (30%) dell'attività suggerendo th a NaF e la tossina del colera agivano sulla stessa ciclasi. È stato dimostrato che l'inibizione del NaF dell'attività stimolata dalla tossina del colera è un'interazione diretta del fluoro sull'enzima ciclasi stimolato. Questa inibizione sembrava essere immediata e indipendente dalle concentrazioni di pH, Mg2+ o ATP. Sebbene l'inibizione del NaF fosse persa quando Mn2+ era presente nella miscela di reazione, l'attività espressa dall'aggiunta di NaF alla ciclasi preparata da cellule trattate con la tossina del colera era molto inferiore rispetto all'aggiunta di NaF al controllo. Come osservato con la sola stimolazione della tossina del colera, l'attività espressa dall'enzima inibito (tossina del colera trattata + NaF) ha mostrato un Km per ATP e un ottimo per Mn2+ da solo o in combinazione con Mg2+ simile al controllo.
Studi comparativi sulla struttura e le proprietà aggregative della molecola di miosina. III. Le proprietà aggregative in vitro della molecola di miosina di aragosta.La solubilità di La miosina del muscolo scheletrico di coniglio e dell'addome di aragosta è stata studiata in soluzioni saline monovalenti in funzione del pH (nell'intervallo 4,75-8,5) e della forza ionica (50-500 mM). La miosina del muscolo scheletrico di coniglio è stata trovata precipitare in un intervallo di pH più ristretto rispetto alla miosina del muscolo addominale di aragosta ma a valori di pH e forze ioniche equivalenti la prima ha mostrato una maggiore solubilità. Il confronto della solubilità della miosina di coniglio, di per sé con quella della meromiosina leggera e della miosina di aragosta con il suo equivalente frammento prodotto proteoliticamente (frazione B1) ha mostrato che entrambi i frammenti di bastoncino erano più solubili delle loro molecole madri. In condizioni di bassa solubilità (bassa forza ionica e pH) la quantità di proteine in soluzione rimaneva sostanzialmente costante all'aumentare proteina totale, suggerendo così che il fenomeno di aggregazione è di tipo a transizione di fase. L'esame degli aggregati mediante microscopia elettronica ha rivelato che la miosina di coniglio formava filamenti classici, allungati, a forma di fuso simili a quelli precedentemente osservati da altri. Al contrario, la miosina di aragosta formava solo filamenti corti, a forma di manubrio, lunghi 0,2-0,3 mm. La considerazione degli intervalli di pH in cui si è verificata l'aggregazione suggerisce che la protonazione dei residui di istidina può essere coinvolta nella formazione dei filamenti di miosina di coniglio, mentre per la miosina di aragosta, l'aggregazione può comportare la protonazione di gruppi epsilon-ammino o guanidino. È stata esplorata la possibile relazione tra la distribuzione di questi gruppi lungo la porzione a bastoncino della molecola di miosina e la formazione di filamenti allungati.
Cinetica della reazione degli anioni con i derivati della metemeritrina.La cinetica dell'anazione della metemeritrina su un'ampia gamma di pH e concentrazione di anioni è stata studiata a 25 gradi C. Gli ioni azide e tiocianato sono stati studiati più intensamente, ma sono stati riportati anche esperimenti con fluoruro e cloruro. È stata studiata anche la sostituzione dell'anione negli addotti metemeritrina-anionici con altri anioni. Eccetto per la sostituzione del met-fluoruro con azide , tutte le sostituzioni possono essere spiegate da un meccanismo dissociativo attraverso le specie acquate. Le anazioni sono di secondo ordine e si preferisce un meccanismo associativo. La costante di velocità di secondo ordine diminuisce con l'aumentare delle concentrazioni di anioni (da 20 muM a 20 mM). Questo è attribuito all'effetto di un sito di legame dell'anione secondario. Il comportamento delle forme ottameriche e monomeriche della proteina verso il tiocianato è identico. Un confronto dei risultati con semplici complessi Fe(III) e alcuni meta vengono prodotte le lloproteine.
La disposizione delle subunità nella tossina del colera.La tossina del colera consiste di cinque subunità B simili di peso molecolare apparente di circa 10 600 e una subunità A (29 000) costituito da due peptidi (A1 23 000-24.000 e A2 circa 5500) legati da un singolo legame disolfuro. Ogni subunità B contiene anche un legame disolfuro interno che viene facilmente ridotto ma è protetto dalla carbossimetilazione a meno che le subunità ridotte non siano riscaldate in I residui di tirosina nelle subunità A1 e B sono facilmente iodati, ma l'insieme B intatto non reagisce con lo iodio. A2. A1 e A2 possono anche essere reticolati. Le subunità B sono probabilmente disposte in un anello con A sull'asse. A2 è necessario per il riassemblaggio della tossina dalle sue subunità e può servire a trattenere A1 sull'anello B L'attività massima della tossina del colera in vitro si ottiene solo w Quando il peptide attivo, A1, viene separato dal resto della molecola. Tale separazione e l'inserimento di A1 nel citosol devono seguire il legame della tossina completa, attraverso il componente B, all'esterno delle cellule intatte. Questo legame aumenta la concentrazione effettiva della tossina in prossimità della membrana plasmatica. I possibili modi in cui A1 poi attraversa la membrana sono considerati nella discussione.
Proprietà del componente legante la tetrodotossina nelle membrane plasmatiche isolate da Electrophorus electricus.Le proprietà biochimiche dei canali del sodio elettricamente eccitabili nell'elettroplacca di Electrophorus electricus sono stati studiati utilizzando la tetrodotossina triziata (TTX) come sonda di membrana specifica. I frammenti di membrana dall'elettroplacca sono stati isolati essenzialmente mediante centrifugazione differenziale e caratterizzati rispetto ai marcatori di membrana plasmatica recettori dell'acetilcolina, acetilcolinesterasi, (Na+ + K+)ATPasi e [3H] Legame TTX. Gli studi sul legame di equilibrio hanno mostrato che [3H]TTX si legava a una singola popolazione di siti recettoriali non interagenti con un'apparente costante di dissociazione di 6 +/- 1 X 10(-9) M. Il complesso tossina-membrana si dissociava con un primo- costante di velocità d'ordine di 0,012 sec-1. Gli studi sulla dipendenza dal pH della formazione di complessi hanno dimostrato la necessità di un gruppo funzionale ionizzabile con un pK di 5,3 e questo gr oup ha dimostrato di essere un carbossile. Il trattamento delle membrane con trimetilossonio tetrafluoroborato, un reagente che modifica il gruppo carbossilico, ha determinato una perdita irreversibile del legame di [3H]TTX, che potrebbe essere prevenuta da basse concentrazioni di TTX o sassitossina. Questa diminuzione era dovuta a una riduzione del numero totale di siti di legame e non a una diminuzione delle affinità di legame della tossina. Le relative affinità di legame di vari metalli alcalini monovalenti e cationi poliatomici per il sito del recettore TTX hanno mostrato che questo sito mostrava proprietà di discriminazione cationica simili a quelle riportate in precedenza per il canale del sodio elettricamente eccitabile nelle fibre nervose intatte. Viene proposto un possibile ruolo di questo sito nella selettività ionica del canale del sodio.
Ionoforo A23187: l'effetto della concentrazione di H+ sulla formazione di complessi con cationi bivalenti e monovalenti e la dimostrazione del trasporto del K+ nei mitocondri mediato da A23187.Il La tecnica di estrazione a due fasi è stata utilizzata per studiare l'equilibrio tra A23187, cationi metallici e H+ In queste condizioni le forme ionofori caricano complessi isostechiometrici neutri con cationi bivalenti in cui entrambi i gruppi carbossilato dei complessi 2:1 A23187:M2+ sono deprotonati In etanolo, tuttavia, l'estere metilico di A23187 lega anche i cationi bivalenti indicando che dovrebbero esistere anche complessi protonati tra A23187 e cationi. Con i cationi monovalenti, A23187 forma due complessi a carica neutra delle stechiometrie e delle relative stabilità: A2HM maggiore di AM. di utilizzo dell'energia movimenti K+ e H+ e capacità di diffusione della luce dei mitocondri in presenza di chelanti cationici bivalenti, A23187 e valinomicina dimostra t hat A23187 può agire come ionoforo della nigericina di tipo K+ in condizioni appropriate. Le costanti di formazione per i complessi A2HM con cationi monovalenti indicano che con condizioni appropriate ci si aspetterebbe anche il trasporto di Li+ e Na+ mediato da A23187. I dati della costante di legame e le energie libere associate di formazione complessa vengono confrontati in funzione del raggio ionico e della carica del catione. I dati indicano che la mancanza di mobilità conformazionale in A23187 è responsabile dell'elevata selettività delle dimensioni dei cationi di questo composto. Per spiegare la selettività di trasporto di A23187 per cationi bivalenti, si propone che questo ionoforo formi una famiglia di cinque complessi, isostechiometrici tra cationi di diversa valenza ma di cui solo le specie a carica neutra sono permeabili alle membrane. La carica di un dato complesso è a sua volta determinata da quella del catione. Il concetto è coerente con la specificità del trasporto di cationi bivalenti di A23187, spiega il trasporto di cationi monovalenti osservato ed è utile per razionalizzare le differenze di selettività di carica tra A23187 e X-537A.
Uno studio cinetico sulle interazioni proteina-proteina.Sono stati condotti studi cinetici sull'interazione monomero-dimero di insulina, beta-lattoglobulina e alfa-chimotripsina utilizzando tecniche di flusso interrotto e salto di temperatura. Gli indicatori di pH blu bromotimolo, blu bromofenolo e rosso fenolo sono stati utilizzati per monitorare le variazioni di pH associate all'interazione monomero-dimero. In tutti e tre i casi è stato osservato un processo cinetico che potrebbe essere attribuito ad un semplice equilibrio monomero-dimero, e sono state determinate le costanti di velocità di associazione (k1) e dissociazione (k-1) I risultati ottenuti sono i seguenti: per l'insulina a 23 gradi C, pH 6.8, 0.125 M KNO3, k1 \ = 1,14 X 10(8) M-1 s-1, k-1 - 1,48 X 10(4)s(-1) per beta-lattoglobulina AB a 35 gradi C, pH 3,7, 0,025 M KNO3, d1 = 4,7 X 10 (4) M-1 s-1, k-1 = 2,1 s-1; per alfa-chimotripsina a 25 gradi C, pH 4,3, 0,05 M KNO3 k1 - 3,7 X 10 (3) M-1 s- 1, k-1 - 0,68 s-1 Il comportamento cinetico della separat ed la beta-lattoglobulina A e B era simile a quella della miscela. Nel caso della chimotripsina, è stato riscontrato che il blu di bromofenolo attiva l'idrolisi catalizzata dall'enzima del p-nitrofenil acetato ed è stato osservato un processo di velocità con il salto di temperatura che potrebbe essere attribuito a un cambiamento conformazionale del complesso indicatore-proteina. La costante di velocità di associazione per la formazione di dimeri dell'insulina si avvicina al valore atteso per un processo controllato dalla diffusione, mentre i valori ottenuti per le altre due proteine sono inferiori a quelli previsti per una reazione controllata dalla diffusione, a meno che non siano presenti effetti sterici ed elettrostatici insolitamente grandi".
Metionina solfossido citocromo c.Il citocromo c è stato modificato chimicamente mediante fotoossidazione mediata dal blu di metilene. È accertato che i residui di metionina della proteina sono stati specificamente convertito in residui di metionina solfossido. Durante la reazione di fotoossidazione non si verifica alcuna ossidazione di altri residui amminoacidici o dei ponti cisteina tioetere della molecola. Lo spettro di assorbimento del ferricitocromo c di metionina solfossido a neutralità è simile a quello della proteina non modificata tranne che per un aumento del coefficiente di estinzione della banda di assorbanza di Soret e per la completa perdita della banda di assorbanza di 695 nm sensibile al ligando nello spettro del derivato. La proteina rimane nella configurazione a basso spin che implica la ritenzione di due ligandi di campo forte. titolazioni spettrali sensibili e studi modello di peptidi eme indicano che il sesto ligando non è sicuramente fornito da un residuo di lisina ma può essere metionina-80 solfossido coordinato tramite il suo atomo di zolfo. Gli spettri di dicroismo circolare indicano che la fessura eme di metionina solfossido ferri- e ferrocitocromo c è indebolita rispetto al citocromo c nativo. Il potenziale redox del citocromo c di metionina solfossido è 184 mV, che è notevolmente diminuito rispetto al potenziale redox di 260 mV del citocromo c nativo. La proteina modificata è equivalente al citocromo c nativo come substrato per la citocromo ossidasi e non è autoossidabile a pH neutro, ma è virtualmente inattiva con la succinato-citocromo c reduttasi. Questi risultati indicano che il ruolo principale della metionina-80 nel citocromo c è di preservare una fessura eme idrofobica chiusa che è essenziale per il mantenimento del potenziale redox necessario.
Caratterizzazione di una monoterpene idrossilasi dipendente dal citocromo P-450 dalla pianta superiore Vinca rosea.Una monoossigenasi isolata da piantine di Vinca rosea eziolate di 5 giorni ha dimostrato di catalizzare l'idrossilazione degli alcoli monoterpenici, geraniolo e nerolo, ai loro corrispondenti derivati 10-idrossi. L'attività dell'idrossilasi era indipendente dal NADPH (né NADH né la combinazione di NADH, NADP+ e ATP servivano come sostituti) e O2. potenziato dal ditiotreitolo (i monotioli erano meno efficaci) e inibito da fosfolipasi, reagenti tiolici, metirapone e citocromo c, nonché altri inibitori dei sistemi del citocromo P-450. Il geraniolo era idrossilato a una velocità maggiore del nerolo, ma gli alcoli possedevano simili valori apparenti di Km. L'idrossilasi legata alla membrana è stata solubilizzata mediante trattamento con sodio colato, Renex-30 o Lubrol-WX. L'enzima trattato con colato è stato risolto mediante cromatografia DEAE-cellulosa e ricognizione istituzione dell'idrossilasi è stata effettuata utilizzando diverse frazioni contenenti citocromo P-450, una NADPH-citocromo c reduttasi e lipidi.
Studi elettrofocalizzanti e cinetici di piruvato chinasi di pollo adulti ed embrionali.Embrioni di pollo di età inferiore a 15 giorni contengono solo l'isoenzima K della piruvato chinasi, che sembra esistere in vivo come un insieme conformazionale R,T con valori di pI di 7.2 e 6.6, rispettivamente. Si ottengono anche set di varianti di isoenzima K con pI inferiore e pI superiore. Embrioni interi di 15 giorni o più di sviluppo mostrano quantità progressivamente crescenti di varianti enzimatiche con pI superiore e K0,5S inferiore. La distribuzione tissutale e le proprietà cinetiche suggeriscono che la forma con pI più elevato (pH 8,8-9,0) è un analogo dell'isoenzima M. Le forme intermedie sono ipotizzate essere ibridi. Gli estratti di fegato adulto contengono solo il isoenzima K embrionale; non è stata ottenuta alcuna evidenza per un analogo dell'isoenzima L. Tutte le principali forme degli enzimi vengono confrontate rispetto alla saturazione da parte del fosfoenolpiruvato in assenza di effettore e in presenza di fruttosio 1,6-difosfato, alanina, serina, fenilalanina, tripto phan e/o Mg-ATP.
Reazioni redox catalizzate da enzimi con gli analoghi della flavina 5-deazariboflavina, 5-deazariboflavina 5\'-fosfato e 5-deazariboflavina 5\'-difosfato, 5\' derivazioni to 5\'-adenosine ester.La capacità della 5-deazaisoalloxazine di sostituire il coenzima isoalloxazina (flavina) è stata esaminata con diversi flavoenzimi. Senza eccezioni, la deazaflavina viene riconosciuta nel sito attivo e subisce un cambiamento redox in presenza dello specifico substrato enzimatico. Così, la deazariboflavina viene ridotta cataliticamente da NADH in presenza della Beneckea harveyi NAD(P)H:(flavina) ossidoreduttasi, la reazione procede verso un equilibrio con una costante di equilibrio prossima all'unità Ciò implica un E0 di -0.310 V per la coppia deazariboflavindiidrodeazariboflavina, molto inferiore a quello per le isoallossazine. Con questo enzima, sia la riboflavina che la deazariboflavina mostrano la stessa stereospecificità rispetto al nucleotide piridinico, e nonostante una grande ge differenza in Vmax per i due, entrambi hanno lo stesso passaggio determinante la velocità (trasferimento di idrogeno). Si osserva il trasferimento diretto dell'idrogeno tra la nicotinammide e la deazariboflavina in entrambe le direzioni di reazione. DeazaFMN ricostituito lievito NADPH: (accettore) ossidoreduttasi (Old Yellow Enzyme) e deazaFAD ricostituito D-amminoacido:O2 ossidoreduttasi e Aspergillus niger D-glucosio O2 ossidoriduttasi sono tutti ridotti dal substrato a circa 10(-5) il tasso di oloenzima; nessuno è riossidato dall'ossigeno o da uno qualsiasi degli accettori di elettroni artificiali testati, sebbene la deazaFADH legata al D-amminoacido:O2 ossidoriduttasi sia rapidamente ossidata dal prodotto dell'iminoacido. Il trasferimento diretto di idrogeno dal substrato alla deazaflavina è stato dimostrato per entrambe le ossidasi ricostituite da deazaFAD. Questi dati implicano le deazaflavine come una sonda unica della catalisi flavina, in quanto qualsiasi meccanismo per la catalisi flavina deve tenere conto anche della reattività della deazaflavina.
Preparazione, caratterizzazione e proprietà chimiche degli analoghi del coenzima flavino 5-deazariboflavina, 5-deazariboflavina 5\'-fosfato e 5-deazariboflavina 5\'-difosfato, 5 \'leas to5\'-adenosine ester.Per facilitare l'interpretazione del sistema deazaisoalloxazine come valida sonda meccanicistica della catalisi dei flavoenzimi, abbiamo esaminato alcune delle proprietà chimiche fondamentali di questo sistema. La sintesi enzimatica , su scala micromolecolare, degli analoghi del coenzima flavino 5-deazariboflavina 5\'-fosfato (deazaFMN) e 5-deazariboflavina 5\'-difosfato, 5\' porta a 5\' adenosina estere (deazaFAD). la sintesi è realizzata con un complesso FAD sintetasi parzialmente purificato (da Brevibacterium ammoniagenes), contenente attività sia fosforilanti che adenililanti, che consente la conversione diretta dell'analogo della riboflavina al livello di flavina adenina dinucleotide. L'e della deazaflavina ridotta risultante dalla riduzione enzimatica e chimica è stabilita come 1,5-diidrodeazaflavina mediante risonanza magnetica protonica. Allo stesso modo, è dimostrato che la posizione C-5 delle deazaflavine è il luogo per il trasferimento dell'idrogeno nelle reazioni redox della deazaflavina. La preparazione di 1,5-diidrodeazaflavine mediante riduzione del sodio boroidruro le ha stabilizzate all'autossidazione (t 1/2 circa 40 h, 22 gradi C) sebbene le diidrodeazaflavine siano rapidamente ossidate da altri accettori di elettroni, tra cui riboflavina, fenazina metosolfato, blu di metilene e diclorofenolindofenolo. Miscele di deazaflavine ossidate e ridotte subiscono una rapida sproporzione di due elettroni (k = 22 M-1 S-1 0 gradi C) e le deazaflavine ossidate formano addotti covalenti transitori con anioni nitroalcani a pH inferiore a 5. Metodi generalizzati per la sintesi dei coenzimi flavina e deazaflavina marcati con isotopi e la loro purificazione mediante cromatografia adsorbente.
Pomerasi dell'acido desossiribonucleico ad alto peso molecolare da cellule tumorali della corona galla della pervinca (Vinca rosea).DNA polimerasi vegetale ad alto peso molecolare (6 S) da cellule di coltura tissutale axenica di Vinca rosea è stato purificato 2200 volte e caratterizzato. L'enzima ha un peso molecolare di 105.000 (+/-5000). L'elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato-acrilammide dell'enzima purificato produce subunità polipeptidiche con pesi molecolari di 70 000 e 34 000. L'enzima purificato ha un pH ottimale di 7,5, un requisito cationico ottimale di 6 mM Mg2+ o 0,5 mM Mn2+, un fabbisogno apparente di Zn2+, un Km di 1 muM per dTTP e una stimolazione di 3,5 volte 50 mM KCl. L'enzima è sensibile a N-etilmaleimmide (1 mM), eparina (0,1 muM), etanolo (5%), pirofosfato (0,05 muM) e o-fenantrolina (0,1 mM), ma è insensibile alla rifamicina. Il DNA risulta essere il miglior stampo naturale e solo un'attività trascurabile può essere dimostrata con il ribopolimero r modelli poli(dT)n-poli(rA)n e p(dT)10-poli(rA)n. Oltre alla reazione di polimerizzazione, l'enzima catalizza una reazione di scambio di pirofosfato. L'anticorpo contro il timo di vitello 6-8S DNA polimerasi non inibisce la DNA polimerasi della Vinca rosea, suggerendo l'assenza di relazioni antigeniche tra gli enzimi dei mammiferi e delle piante.
Peptidi flavinilici sintetici correlati al sito attivo della monoamino ossidasi II mitocondriale. Proprietà di fluorescenza.Le proprietà di fluorescenza di vari peptidi flavinilici 8alfa-legati allo zolfo e relativi analoghi della flavina sono stati studiati mentre il pH del solvente, la temperatura e la concentrazione di flavina venivano variati. La sostituzione nella posizione 8alfa con un peptide legato al tioetere determina un marcato estinzione della fluorescenza (fino al 98% in acqua), un leggero spostamento batocromico e l'ampliamento degli spettri di emissione di fluorescenza e una leggera diminuzione dei tempi di vita della fluorescenza. L'ossidazione della funzione tioetere a un solfone rilascia parzialmente questa estinzione della fluorescenza senza ulteriori cambiamenti negli spettri di emissione della fluorescenza. L'effetto principale sull'intensità della fluorescenza è dovuto a un interazione tra gli elettroni di non legame del tioetere, il legame idrogeno, il solvente polare e l'anello isoallossazinico. des in solventi non acquosi aumenta l'intensità della fluorescenza fino a 20 volte. Un effetto secondario sulla fluorescenza flavinilica può essere attribuito a un'estinzione collisionale da parte del residuo tirosile vicinale all'interno dei peptidi flavinilici contenenti tirosina. Le proprietà di fluorescenza forniscono un'ulteriore conferma dell'identità dei peptidi flavinilici sintetici e ottenuti naturalmente e dell'interazione tra le funzioni idrossiliche libere della catena laterale ribitilica e il tioetere.
Uno studio spettrofotometrico e fluorimetrico delle transizioni alcaline del citocromo Euglena c 552.Il comportamento del citocromo fotosintetico c552 alla titolazione con alcali dipende dal composizione del mezzo In acqua la scomparsa della banda di 695 nm, che indica lo spostamento del ligando della metionina, nonché un notevole miglioramento della fluorescenza del triptofano, segue una singola curva di titolazione protonica con pK di 10.0 e n=1.0. Il prodotto è una proteina di tipo a basso spin Nei mezzi contenenti sale si osservano due passaggi successivi: nel primo, completato a circa pH 10,3, si ottiene una forma ad alto spin del citocromo c 552 e si rileva un miglioramento della fluorescenza relativamente piccolo. Nella seconda fase si verificano cambiamenti fluorometrici più profondi, mentre il materiale ritorna alla sua forma a basso spin L'aggiunta di sali ad una soluzione alcalina di citocromo c 552 in acqua porta alla formazione di una banda ad alto spin di 600 nm con un concomitante spegnimento della fluorescenza del triptofano. I risultati implicano che ad alto pH lo sviluppo della molecola è evidente solo quando si ottiene il prodotto a basso spin. Nella forma alcalina ad alto spin, il ligando della metionina è probabilmente spostato dalla coordinazione del ferro dagli ioni ossidrile, mentre nella forma alcalina a basso spin la metionina può essere sostituita da un residuo lisile della proteina del citocromo c552. I risultati implicano che il residuo lisile è disponibile per il coordinamento in soluzioni saline a un pH più elevato rispetto all'acqua.
Ossidazione di corticosteroidi ad acidi steroidei-21-oici da parte di enzimi epatici umani.Un enzima che ossida i corticosteroidi a metaboliti acidi è stato purificato da cellule umane post mortem fegato. Il substrato più rapidamente ossidato era 11-desossicorticosterone (DOC). Altri corticosteroidi sono stati ossidati a tassi che erano il 10% o meno di DOC. I prodotti dell'ossidazione di DOC erano acido 3,20-dioxopregn-4-en-21-oico e acido 20-idrossi-3-oxopregn-4-en-21-oico. Il 20-chetoacido era il metabolita predominante in tutte le preparazioni enzimatiche. Il chetoacido e l'idrossiacido non sono stati interconvertiti. L'attività enzimatica è stata saggiata misurando il trasferimento di trizio da [21-3H]DOC in acqua. L'enzima è giallo e ha massimi spettrali a 278 e 405 nm. L'inibizione da parte della o-fenantrolina suggerisce che potrebbe essere un metalloenzima. Il peso molecolare è stato stimato a 74 000 +/- 8 000; un pH massimo si è verificato a pH 8-8,5 Questo enzima può partecipare alla conversione in vivo dei corticosteroidi in i metaboliti acidi che abbiamo descritto in precedenza (H. L. Bradlow et al. (1973), J. Clin. Endocrinolo. Metab. 37, 811).
L'interazione di borato e solfito con nucleotidi piridinici.La cinetica e gli equilibri dell'interazione del borato al ribosio con NAD+ e NMN+ sono stati misurati utilizzando come una sonda cromoforica l'effetto di perturbazione del borato ha sull'aggiunta di solfito alla posizione 4 dell'anello della nicotinammide. NAD+ e NMN+ hanno costanti di associazione del borato più favorevoli rispetto ai loro corrispondenti complessi di addizione di solfito. La velocità di interazione della frazione di ribosio con il borato a una bassa concentrazione di tampone borato dipende dalla concentrazione sia di borato che di acido borico Ad alta concentrazione di borato la velocità diventa indipendente dalla concentrazione di borato, indicando l'esistenza di un processo in due fasi per l'interazione di NAD-solfito con borato con un cambiamento di passaggio determinante la velocità dall'interazione del gruppo ossidrile ribosio con borato a basso borato all'eliminazione del solfito ad alta concentrazione di borato. Una relazione lineare di energia libera con una pendenza di 0,94 descrive un'aumentata reattività del nucleotide per il solfito all'aumentare dell'affinità del nucleotide per il solfito.
Interazione del manganese (II) e del substrato con la glutammina sintetasi non denilata (Escherichia coli w). II. Studi di risonanza paramagnetica elettronica e risonanza magnetica nucleare di manganese (II) legato all'enzima con substrati e un potenziale analogo dello stato di transizione, metionina sulfoximina.Il miglioramento del tasso di rilassamento longitudinale del protone dei protoni dell'acqua del solvente che si verifica quando Mn(II) è legato al sito ionico metallico "stretto" della glutammina sintetasi non denilata (GS) è stata utilizzata per determinare la costante di legame dei complessi L-metionina (SR)-sulfoximina ai complessi GS-Mn(II). Il potenziamento binario per GS-Mn(II) è 22 a 24 MHz, 25 gradi C. L'enhancement si abbassa in presenza della sulfoximina e la costante di dissociazione calcolata è 30 muM con epsilont, l'enhancement per il complesso ternario, pari a 3.0. Le curve di titolazione per la sulfoximine sono state ottenute anche in presenza di Mg-ADP, Mg-ADP più Pi e Mg-ATP La dissociazione le costanti erano rispettivamente 9, 5 e 0,8 muM. Il progressivo restringimento delle costanti di dissociazione è sintomatico di cambiamenti conformazionali nel sito attivo poiché il sottosito totale occupato dall'ATP è riempito. Il numero di molecole d'acqua che si scambiano rapidamente scende da 2 a circa 0,1 quando sono presenti concentrazioni saturanti di L-metionina (SR)-sulfoximina e nucleotide. Il valore KI cineticamente determinato di circa 4 muM per la sulfoximina è di circa tre ordini di grandezza più stretto del valore di te Km\' di circa 3 mM per L-glutammato. Le costanti di dissociazione precedentemente menzionate ottenute dalle titolazioni di enhancement sono anche ordini di grandezza più strette di Km\'. Questi dati suggeriscono che la L-metionina (SR)-sulfoximina è un analogo dello "stato di transizione" della reazione della glutammina sintetasi. ...
L'attivazione della ribulosio-1,5-bisfosfato carbossilasi da anidride carbonica e ioni magnesio. Equilibri, cinetica, un meccanismo suggerito e implicazioni fisiologiche.La ribosio-1,5-bisfosfato carbossilasi è stata attivata mediante incubazione con CO2 e Mg2++ e inattivata dopo la rimozione di CO2 e Mg2+ mediante filtrazione su gel. Il processo di attivazione ha coinvolto CO2 anziché HCO3-. L'attività dell'enzima dipendeva dalla preincubazione concentrazioni di CO2 e Mg2+ e dal pH di preincubazione, indicando che l'attivazione implicava la formazione reversibile di un complesso di equilibrio di enzima-CO2-Mg. La velocità iniziale di attivazione era linearmente dipendente dalla concentrazione di CO2 ma indipendente dalla concentrazione di Mg2+. indicato che l'enzima ha reagito prima con CO2 in un passaggio determinante e reversibile, seguito da una reazione rapida con Mg2+ per formare un complesso ternario attivo (vedi eq 1 nel testo). nstant, kobsd, per il processo di attivazione a pH costante è stato derivato: kobsd=k1[CO2] + (k2k4/k3[Mg2+]). Sperimentalmente, è stato dimostrato che il kobsd è linearmente dipendente dalla concentrazione di CO2 e inversamente dipendente dalla concentrazione di Mg2+. L'attività dell'enzima dopo la preincubazione all'equilibrio a concentrazioni costanti di CO2 e Mg2+ aumentava all'aumentare del pH di preincubazione, indicando che la CO2 reagiva con un gruppo enzimatico il cui pK era nettamente alcalino. Si propone che l'attivazione del ribulosio-1, 5-bifosfato carbossilano comporti la formazione di un carbammato.