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Miglioramento della determinazione della renina nel plasma umano utilizzando uno standard di renina comunemente disponibile in un metodo radioimmunologico.Un nuovo metodo per la misurazione della renina nel plasma umano è descritto. Il metodo si basa sull'introduzione dello standard renina disponibile a livello internazionale del Medical Research Council (MRC) di Londra, come sistema di calibrazione. Pertanto, alcuni principali svantaggi dei metodi che esprimono risultati solo nella velocità di reazione della renina (tasso di generazione dell'angiotensina) Entrambe le renine, sconosciuta e standard, reagiscono con una preparazione di substrato di pecora e vengono gestite in modo identico durante l'intera procedura, compreso il dosaggio radioimmunologico dell'angiotensina I (RIA). La concentrazione plasmatica di renina (PRC) è data in 10(-6) MRC- unità di renina (muM/ml). lo standard di renina è privo di angiotensina, angiotensinasi e angiotensinogeno; è stabile durante la conservazione. La cinetica enzimatica identica è mostrata per entrambe le renine. Un'interferenza tra endogena ed e substrato xogena potrebbe essere evitato. Vengono mostrate le influenze potenzialmente dannose delle proteine dalla miscela di incubazione enzimatica della curva dose-risposta RIA. L'uso di un sistema di calibrazione dell'angiotensina I potrebbe essere omesso. Utilizzando una diluizione standard di renina da 250-0,9 muU/ml viene coperto anche l'intero range biologico. Quando si somministra una dieta senza restrizioni, i valori normali preliminari della PRC sono 21,9 +/- 12,6 muU/ml in posizione sdraiata e 40,1 +/- 19,8 muU/ml in posizione eretta (n = 16,x +/- s, età 20-35 anni). Sono stati confermati i primi risultati della dipendenza dall'età della RPC.
[Meccanismi immunitari nell'uremia].Esistono prove sia cliniche che sperimentali che l'immunità cellulare e umorale è soppressa nei pazienti con insufficienza renale: osservazioni in Nel documento vengono discussi il trapianto di organi e la stimolazione in vitro dei linfociti da pazienti uremici, le indagini sulle reazioni di ipersensibilità acuta e tardiva, la risposta immunitaria dopo l'immunizzazione attiva nonché i cambiamenti delle immunoglobuline e degli organi linfatici nell'uremia. I meccanismi sottostanti sono complessi e non ancora pienamente compreso. Linfopenia, atrofia della ghiandola del timo, fattori sierici tossici, induzione di meccanismi di potenziamento da parte di alcune frazioni sieriche e difetti metabolici dei linfociti - tutti hanno dimostrato di essere coinvolti o almeno considerati. è impossibile definire il loro grado di importanza e il posto esatto che possono occupare nella genesi di questo tipo di "immunosoppressione naturale".
Effetto dell'invecchiamento su renina plasmatica e aldosterone nell'uomo normale.L'influenza dell'invecchiamento sul sistema renina-angiotensina-aldosterone è stata valutata confrontando giovani (da 20 a 30 anni) con soggetti sani anziani (da 62 a 70 anni) Nonostante l'equilibrio idro-sodico corporeo comparabile nei due gruppi di età, la concentrazione sierica di renina, l'attività della renina plasmatica e le concentrazioni di aldosterone erano più basse negli anziani. le diminuzioni delle concentrazioni di renina e aldosterone circolanti erano lievi mentre i soggetti erano supini e ricevevano normale assunzione di sodio, in posizione eretta e durante la deplezione di sodio erano più pronunciate. lieve deplezione di sodio (r = -0,44 e -0,47, rispettivamente), ma non durante la progressiva deplezione di sodio. I livelli di renina plasmatica sono diminuiti negli anziani indipendentemente dalla presenza o assenza di una relazione inversa na con la pressione sanguigna. Le risposte di aldosterone e cortisolo all'infusione di corticotropina erano inalterate negli anziani. Si conclude che l'invecchiamento può causare una diminuzione della renina circolante, con un abbassamento parallelo delle concentrazioni plasmatiche di aldosterone.
Fosfodiesterasi a nucleotidi ciclici multipli nel rene di ratto.Utilizzando la cromatografia con DEAE-cellulosa e la filtrazione su gel di agarosio abbiamo parzialmente purificato un adenosina monofosfato ciclico a basso Km ) fosfodiesterasi dal surnatante di 100.000 X g di reni di ratto. Le caratteristiche di questo enzima includevano un Km di circa 4 muM un pH ottimale di circa 8,0 e un fabbisogno di magnesio. Questa preparazione dovrebbe essere adatta per lo studio di possibili effetti di ormoni, farmaci e costituenti cellulari sulla via dell'AMP ciclico attraverso qualsiasi effetto diretto sull'enzima a basso Km. Abbiamo anche dimostrato una fosfodiesterasi di nucleotidi ciclici non specifici e ad alto Km e possibilmente una specifica fosfodiesterasi di guanosina monofosfato ciclico (GMP) nella frazione solubile dai reni di ratto.
[Regolazione di interrelazione tra ventilazione polmonare e circolazione].In esperimenti acuti su 92 gatti anestetizzati con Uretano e tenuti sotto respirazione controllata il meccanismo del tonico è stata studiata l'attività dei vasi polmonari in presenza di una diminuzione della pressione parziale di ossigeno negli alveoli. La tonicità dei vasi polmonari è stata registrata durante l'autoperfusione dei vasi del lobo posteriore del polmone sinistro mediante una pompa di perfusione. , è stata registrata la pressione nell'arteria carotide comune e misurata la saturazione di ossigeno del sangue. L'analisi farmacologica è stata utilizzata per lo studio del meccanismo della reazione pressoria dei vasi polmonari sotto ipossia ipossica, e ha dimostrato che la pressione del i vasi polmonari che si sviluppano sotto l'ipossia alveolare sono meno distinti sotto l'effetto dell'agente ganglioblocking Benzo-esonio, così come degli agenti miotropici Papaverina e Clora cizina. La reazione di cui sopra è stata significativamente inibita dagli agenti bloccanti delle strutture reattive alla D- e M-serotonina - Diidroergotamina, Morfina e Novocaina, ed era completamente assente sullo sfondo dell'azione di Izadrina e Dimedrol - agenti bloccanti della serotonina - e strutture reattive all'istamina. Si può supporre che le strutture D- e M-serotonina-reattive, e probabilmente anche le strutture reattive all'istamina, partecipino alla regolazione dell'interrelazione tra ventilazione e circolazione polmonare.
[Effetto della contropulsazione periferica sul corpo di un animale con cuore intatto].L'effetto della contropulsazione periferica duratura sull'emodinamica e sui principali fattori biochimici fattori del sangue è stato studiato in 14 cani con cuore intatto. In caso di tachicardia significativa la contropulsazione in regime 1:2 determina solo una riduzione parziale della resistenza alla gittata cardiaca. Ciò non sempre permette di prevenire la formazione del fenomeno di elevata contrattilità miocardica. Le condizioni emodinamiche sono ottimali in un regime di contropulsazione 1:1. Il rallentamento del ritmo cardiaco è stato ottenuto mediante ipotermia.
Diarrea sperimentale nelle scimmie cynomolgus per somministrazione orale con cellule vitali di Clostridium perfringens di tipo A o enterotossina.Enterotossina di C. perfringens di tipo A purificata alimentata per via orale in un una quantità di 5 mg ha causato sia vomito che diarrea nella scimmia solo quando il succo gastrico era stato neutralizzato. L'esposizione di enterotossina a pH 4.0 o inferiore ha rapidamente distrutto l'attività. Tutte e tre le scimmie che hanno ricevuto bicarbonato di sodio e 2,4 X 10 (10) cellule vitali sono cresciute in media DS ha sviluppato diarrea, e solo uno di loro ha vomitato una volta. La diarrea è durata per 13, 18 e 19 ore. I sintomi erano simili a quelli riportati in casi umani di intossicazione alimentare da C. perfringens. Questi risultati hanno verificato la nozione generale che L'intossicazione alimentare da C. perfringens dovrebbe essere classificata come una vera "intossicazione intravitale". Il test di emoagglutinazione passiva inversa ha rilevato l'enterotossina direttamente nella maggior parte dei campioni fecali. Questo metodo può essere applicabile per la diagnosi di casi umani di intossicazione alimentare da C. perfringens. Né l'enterotossina né l'antienterotossina sono stati rilevati nei campioni di siero prelevati da alcuna scimmia fino a 21 giorni dopo il challenge. Siamo tentati di concludere, quindi, che nessuna quantità significativa di enterotossina di C. perfringens viene assorbita dall'intestino.
Esame radiografico delle lesioni mandibolari in caribù sterili.Anomalie dentali sono state osservate in 43 dei 1.226 caribù sterili (Rangifer tarandus groenlandicus) presi tra il 1966 e il 1968. In cinque di questi 43 animali, le mandibole presentavano deformità che la radiografia ha mostrato essere il risultato di ascessi dentali in quattro casi e probabilmente di un trauma nell'altro. L'assenza di lesioni actinomicotiche delle ossa mascellari di questi 1.226 animali, e di oltre 500 esaminati in precedenza, indica che la "mascella grumosa" è rara nei caribù a terra. Gli autori suggeriscono l'uso della radiografia per determinare la natura della crescita ossea sui resti scheletrici, in assenza di tessuti molli per l'esame per Actinomyces, sia microscopicamente che con metodi colturali.
Il virus Uukuniemi contiene una RNA polimerasi.È stata trovata un'attività RNA polimerasi RNA-dipendente associata ai virioni di Uukuniemi. L'attività enzimatica è espressa solo dopo interrompendo i virioni con il detergente non ionico Triton X-100 ed è assolutamente dipendente da Mn2+, mentre Mg2+ non è richiesto, una scoperta che distingue questa polimerasi da quelle di altri virus a RNA con involucro meno. ottimale è stato trovato. La temperatura ottimale era tra 37 e 40 C. La reazione non è stata inibita da actinomicina D, rifampicina o DNasi, mentre RNasi era completamente inibitoria. Il prodotto parzialmente resistente alla RNasi era costituito da RNA di dimensioni piuttosto piccole, che conteneva sequenze complementari all'RNA del virus Uukuniemi come mostrato dall'ibridazione con le specie di RNA modello L, M e S del virus Uukuniemi.
Componenti della piastra base del batteriofago T4. II. Legame e posizione della diidrofolato reduttasi indotta dal batteriofago.La posizione della diidrofolato reduttasi indotta dal fago T4D (dfr) è stato determinato in particelle fagiche intatte e incomplete. È stato scoperto che i mutanti fagici che inducono un dfr termosensibile (dfrts) producono particelle fagiche termolabili. Il dfr strutturale prodotto da questi mutanti ts ha dimostrato di assumere configurazioni diverse a seconda della temperatura alla quale il fago è assemblato. La morfogenesi di particelle fagiche incomplete prive della proteina del gene 11 sulle loro piastre di base è stata trovata inibita dai reagenti che si legano al dfr, come gli anticorpi al dfr. Inoltre, molecole cofattori per dfr, come la ridotta nicotinammide adenina dinucleotide fosfato e ridotto nicotinammide adenina dinucleotide, hanno anche inibito il passaggio nella morfogenesi che comporta l'aggiunta del prodotto del gene 11. D'altra parte, gli inibitori di dfr, come l'ade nosina defosforibosio, ha stimolato l'aggiunta della proteina del gene 11. È stato concluso che il dfr indotto dai fagi è un componente della piastra di base parzialmente coperto dalla proteina del gene 11. Le proprietà delle particelle fagiche prodotte dopo l'infezione dell'ospite non permissivo con l'unico mutante T4D noto contenente una mutazione senza senso nel suo gene dfr hanno suggerito che queste particelle di progenie contenevano un polipeptide parziale, che era abbastanza grande da fungere da elemento strutturale.
Effetto dell'antistaminico-antiserotonina e degli agenti bloccanti gangliari sull'aumento della permeabilità capillare a seguito di un trauma da ustione.Piccola (0,2% TBS), spessore parziale, non le ustioni da calore radiante da contatto nelle cavie hanno provocato, entro 3 ore, una significativa formazione di edema e perdita di proteine nel sito della lesione. Anche le aree della pelle distanti dall'ustione hanno mostrato un aumento del contenuto di acqua ma nessuna perdita di proteine. con clorisondamina cloridrato o una miscela di metisergide e clorfeniramina ha ridotto significativamente la formazione di edema post-bruciatura e la perdita di proteine. L'autoradiografia con emulsione liquida ha rivelato che la perdita di proteine si verifica principalmente nelle aree della pelle adiacenti al pannicolo carnoso. Gli studi suggeriscono che: l'aumento della la permeabilità che si verifica come conseguenza delle ustioni è mediata umoralmente; la perdita di albumina è limitata ai tessuti danneggiati; e l'istamina, la serotonina e la presu probabilmente le catecolamine svolgono un ruolo significativo nello sviluppo di questo fenomeno.
Soluzione di emoglobina e curva di dissociazione dell'ossiemoglobina.1) È stato condotto uno studio per determinare la curva di dissociazione dell'ossiemoglobina della soluzione e dei fattori di emoglobina privi di stroma che lo influenzano, (pH; 2,3 DPG). 2) Per simulare la sostituzione acuta del volume, sono stati eseguiti esperimenti di diluizione, in vitro, impiegando sia la soluzione di emoglobina che il lattato di Ringer nel sangue intero. 3) È stato determinato che lo stroma- la soluzione di emoglobina libera ha una curva di dissociazione dell'ossiemoglobina spostata a sinistra che risponde alla variazione del pH ma non all'aggiunta di 2,3 DPG 4) L'effetto di diluizione della soluzione di emoglobina quando miscelata con sangue intero in volumi fino al 50% era a sinistra- spostare la curva dell'ossiemoglobina, a differenza dell'effetto del lattato di Ringer (nessun cambiamento). 5) Questo può avere importanza nella risposta compensatoria emodinamica all'anemia normovolemica acuta.
L'eritrocita aviaria: uno studio sulla fissazione per la microscopia elettronica.Viene valutata la qualità della conservazione ultrastrutturale dell'eritrocita aviaria ottenuta utilizzando varie tecniche di fissazione. Sono state testate diverse combinazioni di fissativi iniziali, tamponi e procedure di post-fissazione, nonché variazioni nell'osmolarità del fissativo, nel pH e nella temperatura. Tra i fissativi iniziali comunemente usati (glutaraldeide, acroleina e formaldeide), il 2% di glutaraldeide, da solo in un tampone leggermente ipertonico contenente ioni bivalenti, ha prodotto una conservazione ottimale degli eritrociti. L'osmolarità è stata bilanciata utilizzando un non elettrolita come il saccarosio. L'aggiunta del 12% di esilenglicole alle soluzioni tampone migliora anche la conservazione degli eritrociti, come evidenziato dalla maggiore stabilità dei microtubuli marginali, microfilamenti e materiale proteico L'utilizzo della resina epossidica a bassa viscosità Spurr consente di raccogliere le cellule mediante centrifugazione a bassa gravità.
Livello di potenziale negativo nello strato esterno della pelle del rospo.La pelle isolata del rospo Bufo marinus ictericus quando viene trafitto dalla superficie esterna da un vetro microelettrodi riempiti con 3 M KCl mostrano un profilo di tensione che è una funzione continua della profondità di impalamento. La differenza di potenziale intraepiteliale superficiale misurata con riferimento alla soluzione esterna (PDi) è negativa con la soluzione di NaCl-Ringer\'s su entrambi i lati del pelle, visualizzando un minimo di -26,7+/-3,6 mV a 6+/-2 mamma Il valore nullo si ottiene a 19+/-3 mamma, con valori positivi per impalamenti più profondi Indicazioni di impalamento cellulare (bruschi salti di tensione e di resistenza ) sono stati frequentemente osservati in siti più profondi di 25 mamma dalla superficie esterna. Le misurazioni della resistenza elettrica tra il microelettrodo e la soluzione esterna, effettuate con microelettrodi a singola e doppia canna, hanno mostrato grandi discrepanze, che possono essere attribuite a percorsi distinti s di diverse resistenze nello strato corneo. La PDi misurata a una profondità di 5 mum era una funzione logaritmica della concentrazione di Na2SO4 o K2SO4 nella soluzione esterna, che aumentava di negatività con una riduzione della concentrazione. La sostituzione di Na con K nella soluzione esterna ha avuto solo effetti minori su PDi. L'acidificazione della soluzione esterna da pH 9 è accompagnata da una riduzione del valore negativo di PDi. A pH 3 PDi era positivo. PDi è stato interpretato come un potenziale di diffusione sulla punta del microelettrodo a causa della diffusione di KCl dall'elettrodo nella matrice dello strato corneo. Le differenze di mobilità di K e Cl, responsabili dell'origine di PDi, sono state attribuite a cariche fisse nella matrice dello strato corneo, con densità e polarità determinate dal loro grado di proponazione, controllato dalla concentrazione di ioni idrogeno della soluzione esterna. Sono stati discussi il potenziale cutaneo, la corrente di cortocircuito e la loro relazione con la PDI.
Fosfolipasi. III. Effetti dei tensioattivi ionici sull'idrolisi catalizzata da fosfolipasi di liposomi di lecitina d'uovo non sonicati.Sono stati misurati i valori apparenti di Km e Vmax per la catalisi dell'idrolisi di liposomi di lecitina d'uovo non sonicati, attivati mediante aggiunta di 0.4 M n-esanolo, da fosfolipasi A2 da veleni d'api e serpenti e da fosfolipasi C da Clostridium welchii in funzione della concentrazione di tre tensioattivi: esadecilammina, esadeciltrimide,metilammonio e diesadecilfosfato. Per tutti e tre gli enzimi, i valori di Km e Vmax mostrano poca o nessuna dipendenza dalla concentrazione di questi tensioattivi ionici, dimostrando che la carica superficiale liposomiale non è un fattore cruciale nel determinare la suscettibilità all'idrolisi catalizzata da fosfolipasi.
N-isopropil derivati della dopamina e 5,6-diidrossi-2-amminotetralin.Sono stati preparati omologhi amminici secondari e terziari dei composti del titolo , recante un gruppo N-isopropile. Nella valutazione periferica, alcuni membri della serie hanno mostrato effetti agonisti beta-adrenergici di attività inferiore rispetto all'isoproterenolo. L'N-metil-N-isopropil-5,6-diidrossitetralina ha mostrato proprietà marcate coerenti con il suo essere un alfa agonisti, e si conclude che l'introduzione di una notevole massa sull'azoto di una catecolamina non distrugge a priori gli effetti alfa-agonisti. I composti hanno qualitativamente parallelo gli effetti della dopamina in saggi basati sulla somministrazione intrastriatale diretta nei ratti, sebbene fossero meno potente della dopamina.
La formazione di sinapsi nel muscolo striato degli anfibi durante lo sviluppo.1. muscoli anfibi reinnervati che ricevono un'innervazione focale (iliofibularis) o distribuita (sartorio) dalle terminazioni nervose della placca, utilizzando tecniche istologiche, ultrastrutturali ed elettrofisiologiche. 2. Durante lo sviluppo del girino attraverso la metamorfosi nella rana adulta, le miofibre del sartorio aumentarono in lunghezza a circa il doppio della velocità delle miofibre ileofibulari, a causa di un rapido tasso di crescita alle loro inserzioni sul tendine pelvico. una singola sinapsi e le miofibre ileofibulare non hanno ricevuto ulteriore innervazione durante lo sviluppo, mentre le miofibre sartorio hanno ricevuto un'ulteriore innervazione transitoria sul nuovo muscolo deposto durante lo sviluppo all'inserzione pelvica a crescita rapida, fino a quando la distanza tra la sinapsi originale formata sulle miofibre e la sinapsi all'estremità pelvica del muscolo era di circa 12 mm. 4. Durante lo sviluppo le sinapsi possedevano un m. e. p. p. asimmetrico, multimodale o unimodale. distribuzioni ampiezza-frequenza; gli intervalli tra m. e. p. p. s. non sono stati distribuiti casualmente secondo un processo di Poisson, poiché m. e. p. p. s. di ampiezze simili tendevano ad essere separate da intervalli molto brevi; l'unità di misura e. p. p. aveva una distribuzione ampiezza-frequenza simile a quella del m. e. p. p. s. se questi avessero una distribuzione unimodale. 5. La reinnervazione o reinnervazione incrociata dei muscoli sartorio e ileofibulare negli adulti o in uno stadio avanzato di sviluppo ha semplicemente ricostituito i normali schemi di innervazione focale e distribuita dei muscoli, come si trova nei muscoli di controllo delle gambe controlaterali e non operate. 6. Queste osservazioni sulla formazione di sinapsi negli anfibi sono coerenti con l'ipotesi che durante lo sviluppo l'assone che effettua il contatto sinaptico iniziale sulle cellule muscolari induca una proprietà su un tratto di membrana muscolare adiacente a questo sito che lo rende refrattario alla formazione di sinapsi; quindi durante la reinnervazione o la reinnervazione incrociata dei muscoli adulti questa proprietà refrattaria limita la formazione di sinapsi a questi siti.
Studi comparativi su Trypanosoma vespertilionis Battaglia e Trypanosoma dionisii Bettencourt \& França.In agar sangue bifasico Trypanosoma vespertilionis ha sviluppato grappoli sferoidi rispetto a piuttosto lunghi , grappoli a forma di salsiccia (a volte ramificati) formati da Trypanosoma dionisii La prima specie ha raggiunto una densità di popolazione maggiore (circa 6 X 10 (7) organismi/ml) rispetto alla seconda (circa 2 X 10 (7) organismi/ml). Durante la fase logaritmica della crescita è stato osservato un numero maggiore di epimastigoti, alcuni dei quali in divisioni binarie attive, e durante la coltivazione si sono verificati cambiamenti morfologici correlati all'aumento dell'acidità e all'esaurimento del glucosio. fasi. La maggior parte delle forme osservate dopo 20 giorni erano sphaeromastigotes. Le concentrazioni di glucosio sono diminuite a 0 M in T. vespertilionis e a 4,4 X 10(-5) M in colture di T. dionisii d durante le fasi stazionarie e di morte. Al 12° giorno di incubazione le colture di T. vespertilionis erano più acide (pH 5,5) di quelle di T. dionisii vespertilionis e T. dionisii contenevano antigeni comuni e specifici. Sono stati rilevati almeno 2-3 antigeni comuni negli estratti che hanno reagito contro gli antisieri eterologhi. Antigeni specifici sono stati osservati come linee non identiche formate da estratti che reagivano contro antisieri omologhi ed eterologhi e con antisieri assorbiti con antigeni eterologhi. Almeno 2 antigeni specifici erano evidenti negli estratti di T. vespertilionis e 1 negli estratti di T. dionisii.
L'influenza del pH sulla velocità di azione della tetrodotossina sulle fibre nervose mielinizzate.1. Gli esperimenti sono stati condotti su singole fibre nervose mielinizzate di Rana esculenta I tassi di effetto della tossina sono stati studiati misurando la velocità massima di aumento, VA, dei potenziali d'azione ripetutamente evocati o misurando le correnti di Na durante gli impulsi periodici nella pinza di tensione. 2. Le misurazioni VA hanno mostrato che nelle soluzioni alcaline (pH fino a 8-8) il tasso di offset è rimasto invariato mentre l'insorgenza è stata rallentata in accordo quantitativo con una presunta diminuzione della forma cationica attiva della tetrodotossina 3. Sia le misurazioni VA che quelle nel clamp di tensione hanno rivelato una diminuzione di T\'off, l'offset costante di tempo e in aumento della costante di tempo di insorgenza, T\'on, man mano che il pH si abbassava 4. Per le concentrazioni di tetrodotossina, [TTX], fino a 400 nM e valori di pH fino a 5-3 la semplice relazione T\'on/ T\'off = p\'R tenuto, dove p\'T è il fatto costante o per cui la permeabilità al Na è stata ridotta all'equilibrio con un dato [TTX]. 5. L'accordo tra risultati cinetici e di equilibrio era valido anche quando, a [TTX] e pH costanti. p\'T è stato modificato dal potenziale di tenuta durante l'equilibratura. 6. Non è possibile fornire una spiegazione univoca dei risultati, ma alcune delle loro caratteristiche ricordano la catalisi acida.
L'influenza del pH sugli effetti di equilibrio della tetrodotossina sulle fibre nervose mielinizzate di Rana esculenta.1. Gli esperimenti sono stati condotti su singoli nodi di Ranvier di Rana esculenta Gli effetti della tetrodotossina e degli ioni H sono stati determinati o dalla riduzione della velocità massima di aumento, VA, dei potenziali d'azione evocati con stimoli soglia o nel clamp di tensione dalla diminuzione della permeabilità di picco al Na, PNa. 2. Con il campione di tetrodotossina utilizzato durante l'indagine, la costante di dissociazione dell'equilibrio, KT, della reazione recettore-tossina a pH neutro è stata determinata essere 2-8 nM. Tra 1-55 e 15-5 nM di tetrodotossina il valore normalizzato, A, di VA, è risultato correlato alla concentrazione di tossina normalizzata cT = [TTX]/2-8 nM dall'equazione empirica log [(1-A)/A] = 1-22 log cT-0-573. 3 Aumentando il pH (fino a 8-8) l'effetto della tetrodotossina diminuiva come rivelato da un aumento di A. L'apparente riduzione di cT (come cal culata da A) suggerisce che la tossina sia attiva solo nelle sue forme cationiche. 4. Le soluzioni di tetrodotossina debolmente acide (7-3 in meno di pH inferiore o uguale a 5-5) hanno ridotto A in misura minore rispetto alle soluzioni di tossine neutre nonostante l'effetto deprimente intrinseco del pH acido su A (A = 0 -5 a circa pH 5-5). In soluzioni tossiche più acide A diminuiva nuovamente ea pH 4-6 era circa uguale al valore in una soluzione priva di tossine. 5. Quando, dopo l'equilibrio in una soluzione di tossina acida, il perfusato è stato improvvisamente cambiato in soluzione Ringer neutra A è balzato a un valore più alto A\' misurato 1 secondo dopo il passaggio. Poiché l'effetto bloccante degli ioni idrogeno si attenua in una frazione di secondo mentre la costante di tempo del washout della tossina è dell'ordine di 1 min, A\' riflette il numero di canali del Na bloccati dalla tetrodotossina a pH acido. 6. In una soluzione priva di tossine acide, il picco di PNa ottenuto negli esperimenti di clamp di tensione è stato ridotto di un fattore voltaggio-dipendente (cH + 1)-1 con CH = [H+]/KH(E) e KH(E) \ = 2-04 muM esp (0-34 EF/RT). L'aggiunta di tetrodotossina ha comportato un'altra riduzione di un fattore costante p\'T. 7. Esperimenti che impiegano varie combinazioni di concentrazione della tossina (3-1-93 nM) e valori di pH (7-3-5-2) confermano la diminuzione dell'effetto della tossina a pH basso. Inoltre, p\'T era minore (l'effetto della tossina aggiuntiva maggiore) quando la membrana era stata mantenuta depolarizzata e quindi cH ridotto durante l'equilibrio. Ciò suggerisce che i cationi della tetrodotossina e gli ioni H competono per lo stesso sito di blocco. Un adattamento quantitativo, tuttavia, richiede ulteriori presupposti.
Caratteristiche dell'inibizione gastrica mediante acidificazione dell'area delle ghiandole ossintiche.1. Le risposte dell'acido gastrico ai pasti di prova sono state misurate nella sacca di Heidenhain, gastrica e cani con fistola pancreatica, utilizzando il metodo della titolazione intragastrica, e monitorando la velocità con cui si doveva aggiungere una soluzione di 1-0 N-NaOH per mantenere costante il pH del contenuto gastrico a valori preselezionati compresi tra 5-0 e 1 -0. In questo modo è stato possibile determinare il profilo del pH delle risposte dell'acido gastrico e della pepsina a un pasto di estratto di fegato conservato nella sacca di Heidenhain o nella fistola gastrica, nonché a stimoli esogeni come istamina, pentagastrina o urecolina. farina di estratto regolata a pH 5-0 ha prodotto una stimolazione potente e correlata alla pressione della secrezione acida dalla sacca di Heidenhain senza alcun cambiamento nella secrezione dallo stomaco principale e dal pancreas o nella concentrazione sierica di gastrina immunodosabile. la farina di estratto di fegato pH t o al di sotto di 5-0 ha provocato l'inibizione pH-dipendente della produzione di acido gastrico, che a pH 1-0 era solo circa il 30% del valore raggiunto a pH 5-0. Anche la secrezione acida dalla sacca di Heidenhain indotta da stimoli esogeni come istamina, pentagastrina o urecolina ha mostrato una diminuzione graduale quando il pH del contenuto della sacca è diminuito in ordine sequenziale da 5-0 a 1-0. Questa inibizione pH-dipendente è stata accompagnata da un aumento della secrezione di pepsina. 4. L'inibizione pH-dipendente della risposta della sacca di Heidenhain al pasto di estratto di fegato non è stata alterata dall'applicazione topica di un anestetico locale e atropina o dall'infusione endovenosa di grandi dosi di atropina, secretina o metiamide, che hanno dimostrato di causare un marcata inibizione della risposta principale dello stomaco al pasto di fegato. 5. I risultati indicano che esiste un meccanismo di inibizione locale e indipendente dalla gastrina della secrezione acida gastrica attivato da un pasto acidificato che entra in contatto con l'area della ghiandola ossintica.
Studi sul meccanismo di deplezione della dopamina striatale da parte dell'alfa-metil-m-tirosina.Questi esperimenti sono stati progettati per studiare il meccanismo di deplezione di dopamina (DA) nello striato prodotto dall'alfa-metil-m-tirosina (alfa-MMT) l'alfa-metil-m-tiramina (alfa-MMTA), il metabolita dell'alfa-MMT, sembra essere l'attivo depletore di DA poiché la somministrazione di un inibitore della decarbossilasi prima dell'alfa-MMT riduceva notevolmente sia la formazione di alfa-MMTA che la deplezione di DA. Dopo l'iniezione di alfa-MMT (100 mg/kg ip), la concentrazione striatale di acido omovanillico (HVA ) è aumentato del 41% a 1 ora. Ciò è probabilmente dovuto a un aumento del metabolismo della DA, poiché l'alfa-MMT ha notevolmente migliorato il declino della DA prodotta dall'alfa-metil-p-tirosina (alfa-MPT). A 2, 3 e 4 ore dopo l'alfa-MMT, la concentrazione di HVA e di acido diidrossifenilacetico era al di sotto del livello di controllo La diminuzione di acido diidrossifenilacetico è dovuta in parte ad una diminuzione ed formazione di acido diidrossifenilacetico da DA. Nelle fette striatali, sia l'alfa-MMT che l'alfa-MMTA hanno diminuito la formazione di 3H-H2O e l'accumulo di 3H-DA da 1-3,5-3H-tirosina. L'alfa-MMT non ha alterato l'attività specifica della 3H-tirosina né ha rilasciato 3H-DA dalle fette, ma ha inibito l'attività della tirosina idrossilasi negli omogenati striatali a basse concentrazioni di tirosina (10 muM). L'alfa-MMTA ha rilasciato 3H-DA sia di nuova sintesi che accumulata esogenamente da fette striatali. A basse concentrazioni di alfa-MMTA, la riduzione percentuale di 3H-H2O era molto maggiore della percentuale di 3H-DA rilasciata nel mezzo. Tuttavia, a concentrazioni più elevate, l'inibizione di 3H-H2O ha raggiunto un massimo mentre il rilascio di 3H-DA ha continuato ad aumentare. Questi risultati suggeriscono che sia l'inibizione dell'attività della tirosina idrossilasi che il rilascio di DA dai siti di stoccaggio da parte dell'alfa-MMTA possono spiegare l'esaurimento del DA prodotto dall'iniezione di alfa-MMT.
La neurochimica del Parkinson \ malattia 's: effetto della terapia con L-dopa.", materiale cerebrale post-mortem dal controllo e il Parkinson \ 's pazienti con malattia era esaminati per chiarire ulteriormente la neurochimica della malattia e per determinare il meccanismo di azione della L-dopa come agente terapeutico. le attività di decarbossilasi L-aromatici amminoacido (dopa D), tirosina idrossilasi, monoamino ossidasi e catecolo-O-metil transferasi sono stati esaminati, inoltre sono stati determinati i livelli tissutali di dopa, 3-O-metildopa, dopamina (dA) e acido omovanillico (HVA) nei pazienti parkinsoniani non-dopa-trattati, le maggiori flessioni sono state rilevate per striatale dA e. dopa D, con livelli di acido e tirosina idrossilasi omovanilico mostrano una variazione minore. le attività di monoamino ossidasi e delle catecol-O-metil nei nuclei striatali non erano diversi dai controlli. i putamen era costantemente la regione più gravemente colpiti. dopa e 3-Om ethyldopa erano rilevabili in tutte le aree del cervello solo in quei pazienti trattati con L-dopa poco prima della morte. Le concentrazioni medie di DA nello striato di questi pazienti sono stati 1) 9 a 15 volte superiori a quelli nei pazienti non-dopa-trattati, 2) relativo alla prima morte dell'ultimo dose di L-dopa e 3) superiore a striato di pazienti clinicamente classificati come \ "buoni responder " in confronto a \ "poor responders. " Anche se la terapia con L-dopa ha aumentato i livelli di acido omovanilico in tutte le aree del cervello, un aumento preferenziale è stata osservata nello striato. Si è concluso che la L-dopa \ 's effetti terapeutici principali nella malattia di Parkinson \ 's sono coerenti con la sua trasformazione per DA nello striato.
Accumulo di amodiaquin da eritrociti di topo infettati con Plasmodium berghei.L'accumulo di [14C]amodiaquin da preparazioni di eritrociti lavati è stato caratterizzato per consentire confronti con l'accumulo di clorochina. infettati da Plasmodium berghei CS (clorochina-sensibile) accumulano amodiachina mediante un processo saturabile che ha un'apparente costante di dissociazione per l'amodiachina di 7,6 X 10 (-8) M ed è inibito in modo competitivo da clorochina, chinina e chinacrina, così come il processo della clorochina All'interno dell'errore sperimentale, il K1 di 8 X 10(-7) M stimato per la clorochina è lo stesso indipendentemente dal fatto che il farmaco accumulato sia [14C]amodiachina o [14C]clorochina. Allo stesso modo, il K1 per amodiachina è lo stesso indipendentemente da quale farmaco viene accumulato. Inoltre, il glucosio stimola e gli ioni idrogeno, il freddo o l'interruzione della glicolisi inibiscono l'amodiachina e l'accumulo di clorochina. Questi risultati sono evidenti ce che un unico processo serve per accumulare entrambi i farmaci. In assenza di substrato, gli eritrociti infettati con P. berghei CR (resistente alla clorochina) accumulano il doppio di amodiachina rispetto alla clorochina e ne accumulano più amodiachina rispetto agli eritrociti infettati con P. berghei CS. Queste differenze si verificano perché P. berghei CR infetta gli eritrociti policromatofili che possiedono un processo di accumulo ad alta affinità e indipendente dal substrato a cui l'amodiachina ha un accesso maggiore rispetto alla clorochina. In presenza di glucosio, l'accumulo di amodiachina da parte degli eritrociti infettati da P. berghei CR, quando viene tracciato in funzione della concentrazione di amodiachina nel mezzo, descrive una curva sigmoidea.
Adsorbimento in vitro di difenossilato cloridrato su carbone attivo e sua relazione con gli effetti farmacologici del farmaco in vivo. I.L'adsorbimento di difenossilato cloridrato, un è stato studiato in vitro un potente agente antidiarroico su polvere di carbone attivo. Le isoterme di adsorbimento di Langmuir sono state stabilite a pH 4 e 7 e la capacità massima di adsorbimento del carbone per questo farmaco è stata stimata utilizzando questi valori. Il carbone attivo ha modificato la biodisponibilità del difenossilato cloridrato in vivo L'azione antipropulsiva del difenossilato nel topo è stata fortemente inibita in presenza di carbone attivo Una valutazione comparativa di carbone e ossido di cromo utilizzati come marcatori inerti e non assorbibili ha rivelato che l'ossido di cromo può essere il marcatore di scelta negli studi di transito gastrointestinale su animali da laboratorio poiché non influenza la biodisponibilità del difenossilato cloridrato.
Effetto inibitorio del diottil sodio solfosuccinato sull'attività della tripsina.L'effetto inibitorio del diottil sodio solfosuccinato sull'attività proteolitica della tripsina è stato studiato a pH 6 intervallo -8. L'attività antitriptica è stata determinata utilizzando due diversi substrati: caseina e N,alfa-benzoil-DL-arginina-p-nitroanilide cloridrato. Gli studi meccanicistici hanno rivelato che l'interazione substrato-inibitore è il principale meccanismo di inibizione. È stato dimostrato che l'interazione comporta la deplezione del substrato, probabilmente coinvolgendo alcuni siti primari del substrato naturale della caseina. È stato anche dimostrato che una certa inibizione è dovuta a un'interazione tra l'enzima e le molecole inibitrici. Le interazioni dell'inibitore con l'enzima e il substrato sono state irreversibile. Viene discusso il possibile significato terapeutico dell'effetto inibitorio del tensioattivo.
Complessazione nella formulazione di soluzioni parenterali: solubilizzazione dell'agente citotossico esametilmelamina mediante complessazione con specie di acido gentisico.L'apparente solubilità dell'esametilmelamina in soluzioni acquose adatte per uso endovenoso è stato aumentato dalla complessazione con acido gentisico. Gli studi sono stati condotti nell'intervallo di pH 0-8. esametilmelamina non protonata non ha formato complessi con lo ione gentisato, mentre lo ione esametilmelammonio sembrava formare diversi complessi sia con lo ione gentidato che acido gentisico. Sono stati isolati e caratterizzati due diversi complessi solidi. Gli aumenti di solubilità osservati a pH 3,5-5,0 sono descritti da relazioni matematiche che coinvolgono le costanti di stabilità di alcune specie complesse postulate. Da questi risultati vengono proposte formulazioni sultabili da utilizzare come soluzioni parenterali. L'aumento della solubilità acquosa apparente dell'esametilmelammina in tali formulazioni può variare ge da cinque a 90 volte, a seconda del pH e delle concentrazioni di gentisazione totale.
Solvolisi di un'imidazolina sostituita, mazindol.Idrolisi di mazindolo per formare 2-(2-amminoetil)-3-(p-clorofenil)- La 3-idrossiftalimidina è stata seguita spettrofotometricamente in soluzioni acquose a temperature comprese tra 37 e 70 gradi, valori di pH fino a 7,6 e una forza ionica di 0,2. Gli effetti dei tamponi acetato, formiato e fosfato, nonché della forza ionica sulla velocità osservata sono state studiate le costanti. È stata notata un'interessante dipendenza non lineare dei kob con la concentrazione del tampone. Le costanti di velocità sono diminuite con l'aumentare della concentrazione di ioni idrogeno; il profilo log k-pH e la legge sulla velocità sono forniti insieme ad altri dati rilevanti.
Solubilizzazione e stabilizzazione dell'agente citotossico coralyne.Sono stati condotti studi cinetici sull'apertura dell'anello del catione azoto quaternario, ione coralynium (I) , a dare 6\'-acetilpapaverina (III), sulla ciclizzazione di III a dare I, e su una reazione fotochimica subita da I in soluzioni acquose esposte alla luce visibile. Dai risultati si è concluso che: (a) I e III sono in facile equilibrio in soluzione acquosa ma quantità apprezzabili di III non esistono in soluzioni diluite con valori di pH inferiori a 10: (b) la reazione fotochimica di I in acqua (presumibilmente una fotoidratazione) può essere invertita mediante liofilizzazione, riscaldamento, e aumentando il pH delle soluzioni a valori maggiori di 12; (c) la reazione fotochimica di I può essere inibita proteggendo le soluzioni acquose dalla luce visibile e la velocità in presenza di luce può essere ridotta aumentando la concentrazione di I nella soluzione; e (d) sebbene il ch i sali di loruro e solfoacetato di I reagiscono in modo identico e hanno solubilità simili in acqua, è possibile preparare soluzioni più concentrate e, quindi, più stabili del sale solfoacetato includendo idrossido di sodio nel solvente. La solubilità del cloruro di corallo rimane circa la stessa nell'idrossido di sodio diluito come nell'acqua.
Riconoscimento e significato dell'acidosi fetale maternogenica durante il monitoraggio intensivo del travaglio.Il monitoraggio della FCF e la microanalisi del sangue fetale sono procedure complementari e una conoscenza ottimale lo stato fetale si ottiene avvalendosi di entrambi, il primo per lo screening preliminare di tutti i casi a rischio e il secondo allo scopo di decidere sulla gestione ostetrica laddove siano evidenti alterazioni patologiche nella FHR. La maggiore difficoltà nell'ottenere un valore preciso per l'equilibrio acido-base fetale risiede nel verificarsi di casi di "falsamente anormali", cioè casi in cui il pH fetale scende durante il travaglio ma la condizione clinica alla nascita è buona (APGAR maggiore o uguale a 7). propria serie l'incidenza di tali casi tra i feti a rischio è stata dell'11,2% (Tab. I) Nella maggior parte di questi casi si ritiene che l'acidosi fetale sia il risultato di un aumento dell'acidosi metabolica nella madre (acidosi metabolica fetale maternogenica). io L'importanza dell'acidosi fetale maternogenica durante il travaglio risiede nel fatto che, se non riconosciuta, l'estrazione rapida del feto apparirà sul piano clinico, anche se in realtà non è necessaria, poiché questa forma di acidosi non ha effetti negativi sul feto. Vari parametri sono stati proposti per la diagnosi differenziale dell'acidosi fetale maternogenica. Questi includono la differenza feto-materna nel deficit di basi (F/M deltaBD), le differenze materno-fetali nel pHqu 40 (M/F deltapHqu 40) la differenza materno-fetale nel pH effettivo (M/F effettivo deltapH) e il -differenza fetale nel deficit di basi del fluido extracellulare (M/F deltaBDHb5). Un'analisi critica di questi parametri è stata condotta sui risultati dei microtest eseguiti durante un periodo di 5 anni (1968-1972) presso la Prima Clinica di Ostetricia e Ginecologia dell'Università degli Studi di Milano. I casi comprendevano 59 considerati normali (corso normale della gravidanza, inizio spontaneo del travaglio a termine, liquido amniotico limpido, FHR regolare, parto spontaneo, APGAR a 90 sec tra 8 e 10, peso alla nascita maggiore di 2500 g), e 335 considerati a rischio (malattia materna, presenza di liquido amniotico macchiato di meconio e/o alterazioni anomale della FCF). In tutti questi casi la FHR è stata registrata mediante cardiotokografia e i tracciati sono stati interpretati secondo HON. Sono stati prelevati microcampioni di sangue sia dalla madre che dal feto durante il travaglio e sono state effettuate le seguenti determinazioni: pH effettivo, pHqu 40, concentrazione di Hb, saturazione di ossigeno nell'emoglobina, deficit di basi Hb5 (BDHb5). Sono state poi calcolate le differenze materno-fetali. Le stesse determinazioni sono state effettuate su campioni di sangue materno e di sangue cordonale arterioso e venoso prelevati subito dopo il parto. La condizione clinica del bambino è stata valutata dal punteggio APGAR a 90 secondi dopo la nascita.
Risposta renale al carico acido nel feto di agnello in via di sviluppo, intatto nell'utero.La risposta del rene fetale all'acidosi metabolica è stata studiata in cinque agnelli fetali , 115-125 giorni di gestazione, al fine di valutare il contributo renale all'eliminazione dello ione idrogeno durante lo sviluppo intrauterino. Gli esperimenti sono stati condotti su feti sani non anestetizzati, intatti in utero, con cateteri impiantati all'isterotomia in un'arteria e vena femorale fetale e nella vescica attraverso l'uraco, quattro o più giorni prima dello studio. Un'acidosi metabolica è stata indotta mediante infusione di acido lattico isotonico, 15 m mole/kg, per via endovenosa per un periodo di 90 minuti. Sono stati prelevati campioni arteriosi seriali e raccolte di urina nelle frazioni prima, durante e per tre ore dopo l'infusione, per le misurazioni di pH, bicarbonato, lattato ed elettroliti, nonché la produzione di urina. Durante l'infusione, il pH delle urine è sceso da 6,65 a 6,25 e tre ore dopo era 6,34 (Fig. 1 a 4, schede. III-IV). L'infusione di acido lattico ha causato un rapido aumento della produzione di urina da una velocità media di 0,12 a un massimo di 0,28 ml/kg/min al termine dell'infusione, tornando alla velocità di controllo tre ore dopo. L'escrezione di lattato è aumentata da 0,05 a un massimo di 4,6 mumole/kg/min alla fine dell'infusione; acido titolabile aumentato da 0,22 a un massimo di 4 muEq/kg/min; i tassi di escrezione di lattato e acido titolabile erano ancora superiori al controllo alla fine delle tre ore. L'escrezione di ammoniaca è aumentata da 0,21 a un massimo di 0,56 muEq/kg/min tre ore dopo la fine dell'infusione. L'infusione acida ha causato una piccola ma significativa diminuzione dell'escrezione di bicarbonato. Durante i 90 minuti di infusione e nelle tre ore successive, circa 800 mumole lattato sono state escrete mentre l'escrezione acida netta nello stesso periodo non è stata superiore alla metà di tale quantità. La diuresi era accompagnata anche da una perdita netta di sodio e cloruro, l'escrezione di questi ioni aumentava di più di tre volte a seguito dell'infusione acida; l'escrezione di potassio è diminuita a un terzo della sua velocità prima dell'infusione. Durante i 90 minuti di infusione, il pH ematico è sceso da 7,36 a 7,13, il deficit di basi è passato da 3,8 a 16,4 mEq/L e il lattato è passato da 2,2 a 14,8 mM/L; c'è stato anche un piccolo ma significativo aumento sia della PCO2 che della PO2 nel sangue (Figg. da 1 a 2, Tabelle da I a II). Durante le successive tre ore di recupero, il pH è salito gradualmente a 7,29, il deficit di basi e il lattato sono scesi rispettivamente a 7,4 mEq/L e 8,7 mM/L. Poiché l'escrezione renale di acido e lattato netto era piccola, la diminuzione del deficit di basi ematiche e dei livelli di lattato durante il recupero deve quindi essere principalmente dovuta all'equilibrio in vari compartimenti fetali e al trasferimento della placenta. Questi esperimenti indicano che, nel feto di agnello, intatto nell'utero, il rene, sebbene limitato dall'immaturità di diversi meccanismi, è in grado di rispondere a un carico acido e quindi può dare un piccolo contributo all'omeostasi fetale. L'aumento dell'escrezione di acido netto è accompagnato dalla perdita di sodio e cloruro nelle urine.
Studi metabolici sullo sviluppo del fegato grasso indotto da etanolo in topi KK-Ay.Meccanismi coinvolti nello sviluppo del fegato grasso alcolico in KK -Sono stati studiati topi Ay. Studi di incorporazione utilizzando [14C] acetato e [3H] palmitato hanno indicato che l'emivita dei trigliceridi epatici era raddoppiata nei topi che ingeriscono etanolo e che l'utilizzo del grasso esogeno era significativamente aumentato rispetto a quello di controllo. Nessuna alterazione persistente è stata riconosciuta nell'ossidazione epatica del palmitato, come stimato da esperimenti in vitro utilizzando fette di fegato ottenute da controllo e topi che bevevano etanolo. Studi enzimatici hanno indicato che le attività di acetil COA carbossilasi, ATP citrato liasi, enzima malico, e 6-fosfogluconato deidrogenasi sono stati aumentati con l'assunzione di etanolo. L'aumento dei trigliceridi epatici accumulati durante l'ingestione di etanolo è stato in gran parte rappresentato dagli acidi palmitoleico, oleico e linoleico. Questi risultati hanno dimostrato un aumento della lipogenesi epatica e un maggiore utilizzo dei grassi esogeni. Il consumo di etanolo non ha causato alcun cambiamento apprezzabile nel livello di trigliceridi plasmatici e nel metabolismo del tessuto adiposo. In sintesi dei presenti studi, la lipogenesi accelerata e l'aumento dell'utilizzo dei grassi alimentari possono essere possibili fattori causali nel fegato grasso alcolico dei topi KK-Ay.
Metabolismo degli acidi grassi e dei corpi chetonici nel ratto: risposta alla dieta e all'esercizio fisico.Questo studio è stato progettato per misurare la risposta degli enzimi chiave del chetone metabolismo corporeo nel cuore, nei muscoli scheletrici e nel fegato alla dieta e all'esercizio fisico, due condizioni note per influenzare l'utilizzo del corpo chetonico A 3 (dieta: controllo, alto contenuto di grassi o alto contenuto di carboidrati) X 2 (condizione di uccisione: riposo o esaurimento) X 2 (allenamento: addestrato o non addestrato) è stato utilizzato un disegno fattoriale per stimare i principali effetti sperimentali e identificare le interazioni significative delle variabili L'allenamento fisico (corsa su tapis roulant) è stato associato a un raddoppio dell'attività del muscolo scheletrico 3-oxoacid CoA transferasi, enzima chiave nell'utilizzo del corpo chetonico extraepatico L'attività dell'enzima limitante della produzione del corpo chetonico epatico, l'idrossimetilglutaril CoA sintetasi (HMG CoA sintetasi), non è stata fortemente influenzata dall'allenamento o dall'esercizio fisico, il che indica che il controllo metabolico della chetosi dell'esercizio può essere più probabilmente una funzione dell'apporto di acidi grassi al fegato piuttosto che l'attività dell'HMG CoA sintetasi. L'alimentazione con una dieta ricca di grassi, d'altra parte, ha aumentato significativamente l'attività della sintetasi HMG CoA del fegato, indicando che la chetosi dell'alimentazione con grassi può essere di natura diversa rispetto a quella dell'esercizio. I risultati di questo studio indicano che l'allenamento fisico è associato ad adattamenti biochimici nel metabolismo dei corpi chetonici e all'ossidazione degli acidi grassi, e che gli individui allenati sono metabolicamente più dotati per beneficiare della chetosi dell'esercizio rispetto agli individui non allenati.
Alcuni meccanismi di riduzione dei livelli di carotenoidi nei polli infettati da Eimeria acervulina o E.tenella.I livelli di carotenoidi plasmatici sono stati notevolmente ridotti nei galletti da carne infettati da Eimeria acervulina o E. tenella. I meccanismi di questa depigmentazione differivano tra le due specie, essendo principalmente associati all'interferenza dell'assorbimento di xantofille (carotenoidi) dal lume intestinale con infezione da E. acervulina e con fuoriuscita attraverso la parete danneggiata del cieco con infezione da E. tenella I pulcini allevati con una dieta essenzialmente priva di carotenoidi e inoculati con E. acervulina non hanno mostrato livelli rilevabili di carotenoidi nel sangue 48 ore dopo essere stati modificati con una dieta contenente 30 mg di xantofilla/kg. pulcini e pulcini inoculati con E. tenella hanno mostrato aumenti significativi e simili dei livelli plasmatici di carotenoidi Pulcini allevati con una dieta contenente xantofilla e inoculati con E. t enella ha mostrato una diminuzione più rapida dei carotenoidi plasmatici rispetto ai controlli non inoculati quando è passata a una dieta priva di xantofille. Nei pulcini alimentati con diete ad alto contenuto di xantofille contenenti ossido cromico, non è stata osservata alcuna indicazione di malassorbimento nei pulcini infettati da E. tenella rispetto ai controlli non inoculati, mentre i pulcini inoculati con E. acervulina hanno mostrato un assorbimento di xantofilla significativamente inferiore. Al contrario, è stato osservato un marcato aumento del rapporto xantofilla: Cr2O3 nel contenuto cecale dei pulcini inoculati con E. tenella rispetto ai controlli non vaccinati oa quelli inoculati con E. acervulina. Studi su pulcini non inoculati alimentati in coppia con pulcini inoculati con E. acervulina o E. tenella hanno indicato che la diminuzione dei carotenoidi plasmatici e l'aumento del pH intestinale non sono associati alla ridotta assunzione di mangime associata all'infezione. Gli studi che coinvolgono uccelli non inoculati con cambiamenti reciproci tra diete ad alto e basso contenuto di xantofilla hanno indicato che i carotenoidi plasmatici sono un mezzo più rapido e sensibile per misurare i cambiamenti nei livelli di pigmentazione rispetto ai punteggi visivi della pelle dei livelli di carotenoidi dalla pelle.
Valutazione sperimentale della spasmogenicità della dopamina sull'arteria basilare.Arteriogrammi dell'arteria basilare rivelano che la dopamina somministrata per via intracisternale ai cani può generare vasospasmo cerebrale. Questa scoperta supporta una recente ipotesi di altri che la dopamina possa svolgere un ruolo nella patogenesi del vasospasmo, soprattutto perché sono note molte sostanze che non riescono a produrre tale spasmo. Rispetto al sangue o alla prostaglandina E2, tuttavia, lo spasmo indotto dalla dopamina è stato ritardato in insorgenza, meno in incidenza e di solito meno intensa. Vengono discusse le possibili spiegazioni per tali differenze sperimentali.
Desensibilizzazione sistematica per ridurre l'ansia indotta dal sogno.Una versione modificata della desensibilizzazione sistematica è stata utilizzata per ridurre l'ansia e le conseguenze interpersonali negative prodotte da un sogno avversivo risultante da eventi nel mondo reale. Al soggetto, un maschio di 16 anni incarcerato, è stata insegnata per la prima volta una tecnica di rilassamento standard. Il sogno del soggetto è stato diviso in 12 scene immaginarie gerarchiche. Dopo il rilassamento iniziale, ogni scena è stata introdotto in sequenza e seguito dal suggerimento del terapeuta che il soggetto era ancora molto rilassato. Dopo tre sessioni con i terapeuti e diverse sessioni di pratica da solo, il soggetto non ha riferito più ansia al sogno (che ha continuato a verificarsi) e ha migliorato le relazioni con il personale istituzionale. Sei mesi di follow-up non hanno mostrato il ripetersi dell'ansia o della successiva irritabilità che il soggetto aveva inizialmente segnalato come determinanti rapporti personali con il personale.
Ossidazione di monossido di carbonio e metano da Pseudomonas methanica.È stata studiata l'ossidazione di monossido di carbonio e metano da sospensioni ed estratti ultrasonici di Pseudomonas methanica. A è stato ideato un saggio continuo per l'ossidazione di CO in CO2, utilizzando elettrodi O2 e CO2 in combinazione. mono-ossigenasi in queste ossidazioni. Vengono presentate prove che suggeriscono che l'ossidazione del metano e della CO sono catalizzate da un singolo sistema enzimatico, distinto, almeno in parte, dalla NADH ossidasi presente negli estratti. L'etanolo è stato in grado di fornire il riducente necessario per l'ossidazione della CO mediante sospensioni cellulari, anche se è stato trovato improbabile che il metabolismo dell'etanolo da parte di P. methanica determini la formazione di NADH a livello di substrato; i mezzi con cui l'ossidazione dell'alcol potrebbe fornire un riducente per il mono-ox ygenase sono discussi.
Effetto del fosfato inorganico sull'inibizione dell'acridina e sulla polimerizzazione del plasmide in Escherichia coli.Alcuni mutanti e ceppi stock di Escherichia coli K12 erano sensibili all'acriflavina nel presenza di fosfato inorganico ma erano resistenti all'acriflavina in sua assenza. Sono mutati spontaneamente alla resistenza all'acriflavina più fosfato. L'effetto sinergico del fosfato sulla sensibilità all'acriflavina è stato aumentato a valori di pH elevati. L'analisi genetica ha suggerito che le mutazioni si sono verificate nel gene acrA. L'osservazione al microscopio elettronico ha suggerito che la presenza di acriflavina più fosfato ha influenzato la struttura della membrana plasmatica e del citoplasma sottostante. Questa alterazione strutturale non è stata causata dalla sola acriflavina. L'arancia di acridina più fosfato può eliminare più efficacemente il plasmide F8-gal+ rispetto all'arancia di acridina solo.
Le proprietà e la produzione su larga scala di L-asparaginasi da citrobacter.Una L-asparaginasi intracellulare con attività antitumorale è stata purificata da un ceppo di Citrobacter Sono state studiate le condizioni ottimali per la produzione di enzimi mediante fermentazione su scale fino a 2700 l. La resa enzimatica più elevata è stata ottenuta in un mezzo di liquore ripido (9-2%, W/V) a 37 gradi C. La limitazione dell'ossigeno non era necessaria per elevata resa enzimatica. Dopo la purificazione sono stati ottenuti un recupero totale del 4-3% dall'estratto privo di acidi nucleici e un aumento di 180 volte dell'attività specifica. L'attività specifica della preparazione purificata era di 45 ui/mg di proteine. L'enzima idrolizzato D-asparagina e L-glutammina al 7 e 5%, rispettivamente, della sua attività verso L-asparagina, ma l'attività della L-glutaminasi può essere dimostrata solo a concentrazioni di substrato superiori a 5 mM. I valori di Km per L-asparagina e D-asparagina erano rispettivamente 2-6 X 10(-5) e 1-4 X 10(-4) l'attività dell'enzima è stata dimostrata con il linfosarcoma di Gardner ed è stata trovata solo leggermente meno potente della crasnitina, l'asparaginasi più attiva finora testata in questo sistema.
Mutagenesi del manganese nel lievito. Un'applicazione pratica del manganese per l'induzione di mutazioni mitocondriali resistenti agli antibiotici.Quando le cellule di lievito sono state incubate da 4 a 8 h in terreno estratto di lievito-peptone-glucosio, pH 6, contenente 8 mM-manganese, e quindi piastrato su terreni selettivi, si è verificata una forte induzione di mutazioni antibiotico-resistenti Evidenze indirette suggeriscono che praticamente tutti i mutanti resistenti selezionati erano di origine indipendente L'analisi dei mutanti resistenti indotti dal manganese ha mostrato che la maggior parte erano extranucleari, mentre quelli testati hanno mostrato ricombinazione con marcatori mitocondriali noti. I nostri risultati suggeriscono che il manganese può essere considerato un mutageno che induce specificamente mutazioni mitocondriali in Saccharomyces cerevisiae.
Chitina sintasi in Mortierella vinacea: proprietà, localizzazione cellulare e sintesi in colture in accrescimento.Chitina sintasi di Mortierella vinacea era presente nel "microsomiale\ frazione ' (100 000 g di precipitato), la frazione \' parete cellulare\' (2000 g di precipitato) e la frazione \'mitocondriale\' (10 000 g di precipitato). Sono state studiate le proprietà dell'enzima \'microsomiale\'. L'optimum del pH era tra 5-8 e 6-2 e l'optimum della temperatura era tra 31 e 33 gradi C. Il Km per UDP N-acetil-D-glucosamina era 1,8 mM. L'enzima è stato stimolato da Mg2+ e una leggera stimolazione è stata effettuata anche da N-acetil-D-glucosamina. Le chitodestrine solubili erano inibitorie. Un inibitore termostabile e dipendente dal pH dell'attività della chitina sintasi era presente nel citoplasma solubile del micelio. Sono stati studiati anche gli effetti dell'aerazione e della concentrazione di glucosio sulla produzione di enzimi nelle colture in accrescimento; la massima attività specifica della chitina sintasi era associata alla cessazione della crescita esponenziale.
Effetto della reinnervazione incrociata sui parametri fisiologici e sulle proprietà della miosina e del reticolo sarcoplasmatico dei muscoli veloci e lenti del coniglio.Reinvervazione incrociata di i muscoli a contrazione rapida (estensore lungo delle dita) e lenta (soleo) del coniglio hanno mostrato una conversione essenzialmente completa da veloce a lenta e da lenta a veloce, rispettivamente, 11-12 mesi dopo l'intervento chirurgico rispetto a una serie di parametri fisiologici tra cui accorciamento intrinseco, velocità, e tempo di contrazione isometrica al picco. Vi è stata pronunciata una conversione biochimica incompleta come giudicato dall'assorbimento di Ca2+ da parte del reticolo sarcoplasmatico, dell'ATPasi della miosina, della labilità degli alcali e del complemento della catena leggera. La questione delle sostanze trofiche di origine neurale è discussa alla luce del fatto che la stimolazione cronica per 15 settimane di un muscolo veloce produce una conversione biochimica e fisiologica completa al tipo lento.
Proprietà ioniche del recettore dell'acetilcolina nei miotubi di ratto in coltura.Il potenziale di inversione dell'acetilcolina (Er) dei miotubi di ratto in coltura è -3mV. Quando attivato, il recettore è permeabile agli ioni K+ e Na+, ma non agli ioni Cl-. La misurazione di Er in terreno Tris+-sostituito e privo di Na indicava anche una permeabilità agli ioni Tris+. A differenza del muscolo di rana adulto, l'entità di Er era insensibile al cambiamento nell'ambiente esterno Ca++ (fino a 30 mM) o alle variazioni di pH esterno (tra 6,4 e 8,9) L'equazione del circuito equivalente che descrive il circuito elettrico composto da due batterie ioniche parallele (EK ed ENa) e le rispettive conduttanze (gK e gNa), che è stato generalmente utile nel descrivere l'Er del muscolo adulto di ratto e rana, potrebbe essere applicato anche a miotubi di ratto quando Er è stato misurato su un'ampia gamma di concentrazioni esterne di Na +. L'equazione del circuito equivalente non potrebbe essere applicata a miotubi immersi in mezzi di diversa concentrazioni esterne di K+ I n questo caso, l'Er è stato descritto più da vicino dall'equazione di campo costante di Goldman. In determinate circostanze, è noto che il recettore nel muscolo adulto di ratto e rana può essere indotto a spostarsi in modo reversibile dal comportamento descritto dall'equazione del circuito equivalente a quello descritto dall'equazione di Goldman. I tentativi di manipolare in modo simile le risposte dei miotubi di ratto in coltura sono stati infruttuosi. Questi studi includevano una riduzione della temperatura (15 gradi C), un blocco parziale di alfa-bungarotossina e l'attivazione delle risposte con l'agonista colinergico, il decametonio.
Alcuni effetti del pH basso sullo scambio di cloruri nei globuli rossi umani.Per testare l'intervallo di valori di pH su cui il modello titolabile trasportava poiché lo scambio anionico inorganico è valido, l'autoscambio di cloruro attraverso i globuli rossi umani è stato esaminato tra pH 4,75 e 5,7 a decreti 0 c. È stato riscontrato che il flusso di autoscambio di cloruro aveva un minimo vicino a pH 5 e aumentava di nuovo con un ulteriore aumento di attività degli ioni idrogeno. L'energia di attivazione di Arrhenius per lo scambio di cloruri è stata notevolmente ridotta a bassi valori di pH. Il flusso di cloruro a pH 5,1 non ha mostrato la cinetica di saturazione riportata a valori di pH più elevati ma era proporzionale al valore della concentrazione di cloruro al quadrato. Inoltre , l'entità dell'inibizione del flusso di autoscambio del cloruro da parte della floretina è stata ridotta a basso pH. La nostra interpretazione di questi risultati è che il flusso mediato dal vettore diventa una frazione progressivamente più piccola del flusso totale a valori di pH più bassi e che un diverso t La modalità di trasporto che richiede due ioni cloruro per formare la specie permeante e che ha una bassa specificità e dipendenza dalla temperatura diventa significativa al di sotto del pH5. Un possibile meccanismo per questo trasporto è che il cloruro attraversa le membrane dei globuli rossi come dimeri di HCl a questi valori di pH molto bassi.
Idrolisi della membrana vitellina dell'uovo di gallina da parte dello sperma di gallo acrosina e altri enzimi.Una tecnica che utilizza il trattamento con gonadotropina sierica di cavalla gravida e gonadotropina corionica umana di galline (Gallus domesticus), seguita dall'ovulazione manuale dei follicoli asportati, è stata sviluppata per ottenere un gran numero di ovuli maturi. Gli ovuli intatti sono stati utilizzati per verificare se l'acrosina, parzialmente purificata dagli spermatozoi del gallo (Gallus domesticus), L'acrosina testicolare di coniglio parzialmente purificata e preparazioni commerciali di diversi enzimi idrolitici potrebbero dissolvere la membrana vitellina interna Gli enzimi sono stati applicati a pezzi di carta da filtro posti sull'ovulo. come la leucina aminopeptidasi e la carbossipeptidasi A no. Anche la fosfolipasi A, la solfatasi, la ialuronidasi, la beta-glucuronidasi e l'acrosina testicolare di coniglio portato a idrolizzare la membrana. L'idrolisi dell'acrosina di gallina della superficie dell'ovulo è stata inibita dall'inibitore della tripsina di soia. La superficie dell'ovulo sopra la regione del disco germinale è stata idrolizzata più rapidamente dall'acrosina di gallo rispetto alla superficie sopra altre regioni dell'ovulo. L'acrosina dallo sperma di gallo ha causato il rilascio di materiale solubile in acido tricloroacetico che assorbe a 280 nm dalle preparazioni sonicate delle membrane vitelline interne. L'idrolisi era massima a pH 8,0 ed è stata inibita dall'inibitore della tripsina di soia.
Processi fotorecettori: alcuni problemi e prospettive.I fotorecettori visivi sia dei vertebrati che degli invertebrati sono caratterizzati da un'ampia elaborazione della membrana che contiene pigmento visivo (rodopsina) I pigmenti visivi in tutti i phyla esaminati sono chimicamente simili: il cromoforo è retinaldeide 11-cis attaccato da un legame aldiminico (base di Schiff) a una proteina di membrana, opsina. L'effetto della luce è di isomerizzare il cromoforo alla configurazione all-trans. Oltre a queste somiglianze fondamentali, vengono discusse diverse aree specifiche in cui appaiono variazioni e differenze. (1) La luce fa sbiancare i pigmenti visivi dei vertebrati, liberando il cromoforo. La maggior parte dei pigmenti visivi degli invertebrati non sbiancano alla luce, ma formano invece una metarodopsina termicamente stabile , con il cromoforo nella configurazione tutto-trans ancora attaccato all'opsina. (2) Nelle membrane del disco dei segmenti esterni del cono e dell'asta dei vertebrati, la mole di rodopsina le ule sono orientate con i loro cromofori quasi complanari con i dischi. All'interno di questo piano, tuttavia, sono possibili sia la diffusione rotazionale che quella traslazionale. Nelle membrane microvillari dei rabdomanti di artropodi e cefalopodi, invece, la situazione è meno chiara. Ci sono prove per un certo orientamento preferenziale dei cromofori che implica restrizioni alla rotazione browniana. (3) Nei segmenti esterni dei recettori dei vertebrati, l'assorbimento della luce da parte della rodopsina provoca l'iperpolarizzazione della membrana plasmatica a causa di una diminuzione della conduttanza del sodio, possibilmente mediata dagli ioni calcio. Nella maggior parte dei fotorecettori degli invertebrati, la luce provoca una depolarizzazione dovuta ad un aumento della conduttanza, principalmente agli ioni sodio. Un successivo ingresso di calcio provoca una parziale ripolarizzazione della membrana, per diminuzione della conduttanza del sodio. (4) Per i recettori dei vertebrati, la soglia logaritmica è direttamente proporzionale alla frazione di rodopsina sbiancata (relazione Dowling-Rushton). La costante di proporzionalità varia in diverse preparazioni da meno di quattro a più di 30 e la base fisica della relazione è sconosciuta. Per gli invertebrati, al contrario, la dipendenza della sensibilità dalla concentrazione di rodopsina è molto meno drammatica e potrebbe dipendere semplicemente dalla probabilità di cattura quantistica. (5) Nella maggior parte delle specie, vertebrati e invertebrati, l'accumulo di fotoprodotto probabilmente non ha effetto sulla conduttanza della membrana, ma esistono diverse possibili eccezioni. (6) La fotorigenerazione della rodopsina dalla metarodopsina è probabilmente un importante meccanismo di recupero in alcuni artropodi come gli insetti diurni, ma esistono anche meccanismi oscuri di recupero in tutti i phyla. In nessun caso sono adeguatamente compresi.
Come fanno i sistemi biologici a discriminare tra ioni fisicamente simili?Questo articolo passa in rassegna la storia della comprensione di come i sistemi biologici possano discriminare in modo così sorprendente tra ioni fisicamente simili, soprattutto alcali cationi L'apprezzamento delle regolarità qualitative ("sequenze consentite") e delle regolarità quantitative ("isoterme di selettività") nella selettività ionica è cresciuto prima dagli studi sugli scambiatori di ioni e sugli elettrodi di vetro, poi sui sistemi biologici come enzimi e cellule membrane e, più recentemente, di doppi strati lipidici drogati con pori modello e vettori. La discriminazione degli ioni dipende dalle forze sia elettrostatiche che steriche. Studi "scatola nera" su membrane biologiche intatte hanno in alcuni casi fornito indizi molecolari sulla struttura del effettivi pori biologici e vettori. I principali problemi attuali riguardano l'estrazione di queste molecole; come farlo, cosa fare quando viene raggiunto e come (e se) è rilevante per il p centrale problemi della funzione di membrana. Ulteriori progressi sono attesi presto dagli studi delle barriere di velocità all'interno delle membrane, dei canali conduttori dipendenti dalla tensione ("eccitabili") e dei sistemi modello sempre più complessi e delle membrane biologiche.
Emoglobine ed emocianine: aspetti comparativi di struttura e funzione.Gli studi comparativi sulla struttura e la funzione delle proteine possono essere piuttosto interessanti da soli, e anche più interessanti quando interpretato rispetto alla fisiologia di un animale. Nel caso delle emoglobine dei pesci, è stato ottenuto un certo successo in quest'ultima, ma ci sono ancora molti problemi irrisolti. Sembra che la fisiologia comparata e la biochimica siano entrate in un'era in cui i risultati degli studi comparativi può gettare molta luce sui meccanismi biochimici in generale. Il sistema dell'emoglobina della trota è un esempio. Le emoglobine distintive in questo sistema sono attualmente utilizzate come sonde ad alta risoluzione del meccanismo di legame del ligando. Caratterizzazione delle subunità multiple e strutturalmente distinte di la molecola 60S Limulus emocianina può similmente aiutare nella comprensione della sua funzione. I nostri studi suggeriscono la possibilità di utilizzare l'emocianina Limulus e altri emocia nins come omologhi strutturali e analoghi di array macromolecolari più complessi. Il rapido sviluppo dei dati strutturali molecolari dei cristallografi a raggi X, combinato con i vasti dati della fisiologia comparata e della biochimica, rende questa una delle aree più interessanti della scienza odierna.
L'attività chemiotattica selettiva degli eosinofili dell'istamina.È stato dimostrato che l'istamina difosfato attrae selettivamente eosinofili umani da popolazioni miste di granulociti quando oltre il 20% di eosinofili è stato utilizzato in un sistema di dosaggio chemiotattico della camera di Boyden modificato. Questo effetto dell'istamina viene abolito dall'incubazione con diammina ossidasi (istaminasi) ed è stato generato dalla decarbossilazione dell'istidina L. È stato osservato un aumento dipendente dalla dose lineare nella migrazione degli eosinofili tra 3 X 10 (-7) M e 1,25 X 10(-6) M, mentre concentrazioni più elevate di istamina hanno inibito la migrazione degli eosinofili. L'attività attrattiva dell'istamina non è stata inibita dagli antagonisti dei recettori H-1 o H-2, tuttavia, l'inibizione della migrazione osservata a livelli più elevati le concentrazioni di istamina sono state invertite dalla metiamina, un antagonista del recettore H 2. Gli effetti dell'istamina sulla migrazione degli eosinofili sono stati dimostrabili utilizzando tre diversi saggi: (a) conteggio delle cellule che hanno attraversato 5-mum po ad esempio filtri in policarbonato dello spessore di 12 mum, (b) conteggio delle cellule che hanno migrato a varie distanze in un poro di 3 mum, filtri in nitrato di cellulosa da 145 mum, o (c) misurazione del numero di celle che hanno attraversato un filtro in policarbonato superiore e migrato in un filtro di nitrato di cellulosa inferiore utilizzando cellule marcate con 15Cr. È stato dimostrato che la capacità dell'istamina di aumentare la migrazione degli eosinofili dipende dalla presenza di un gradiente di concentrazione; l'istamina non ha causato un aumento dose-dipendente della motilità casuale. Inoltre, la preincubazione degli eosinofili con istamina disattiva le cellule per un'ulteriore stimolazione da parte dell'istamina o della C5a. Si conclude che a basse dosi l'istamina è un chemiotattico per gli eosinofili umani, mentre a dosi più elevate l'istamina inibisce la migrazione degli eosinofili. Queste osservazioni possono riguardare l'afflusso e la localizzazione degli eosinofili nelle reazioni di ipersensibilità immediata.
Un'analisi elettrofisiologica della chemorecezione nell'anemone di mare Tealia felina.1. Sono state impiegate tecniche elettrofisiologiche per esaminare la natura della risposta osservata nel sistema ectodermico a lenta conduzione (SSI) quando le sostanze alimentari disciolte entrano in contatto con la colonna di Tealia felina. La risposta sembra consistere interamente nell'attività sensoriale che può continuare per periodi di molti minuti, a condizione che le sostanze chimiche stimolanti rimangano a contatto con la colonna. l'intervallo tra ogni impulso evocato aumenta gradualmente con il progredire della risposta sensoriale. Ciò non deriva da affaticamento nel sistema di conduzione ma comporta un vero e proprio processo di adattamento sensoriale. Questo può verificarsi in un periodo di diversi minuti, che è molto più lungo di un adattamento comparabile in animali superiori 3. L'evidenza fisiologica suggerisce che i chemocettori coinvolti sono dispersi in tutto l'ectoderma della colonna e sono assenti dal disco del pedale, dal disco orale, tentacoli e faringe. 4. Viene rivisto il ruolo fondamentale delle SSI nel coordinare l'attività comportamentale negli anemoni di mare. Si conclude che funziona principalmente come una singola unità a conduzione diffusa responsabile della trasmissione di informazioni sensoriali codificate in frequenza dai chemocettori ectodermici agli effettori ectodermici (e forse endodermici).
L'innervazione della ghiandola salivare della falena, Manduca sexta: prove che la dopamina è il trasmettitore.1. Utilizzo della tecnica istochimica Falck-Hillarp per le monoamine è stata trovata evidenza della presenza di una catecolamina nei nervi delle ghiandole salivari della falena Manduca sexta 2. L'innervazione è stata studiata al microscopio elettronico Solo la regione della ghiandola che secerne fluido è innervata e le terminazioni nervose sono caratteristici dei terminali contenenti monoamine. 3. Usando un saggio enzimatico-isotopico per le catecolamine, è stato riscontrato che le ghiandole salivari intere contengono 0,33 mug/g di dopamina ma nessuna noradrenalina. 4. Sembra probabile che la dopamina media la secrezione di liquidi nel ghiandola salivare di Manduca come fa un certo numero di altri artropodi.
Effetto della forza ionica e della composizione ionica dei tamponi del dosaggio sull'interazione della tiroxina con le proteine plasmatiche.Quando le proteine plasmatiche vengono diluite con il tampone, la forza ionica e la composizione ionica di quel tampone influenza le interazioni tra la tiroxina (T4) e i suoi siti di legame alle proteine plasmatiche. L'aumento della concentrazione di ioni fosfato, cloruro o barbiturico da 50 a 200 mmol/l ha causato una diminuzione significativa dell'affinità delle proteine plasmatiche per T4 , e un contemporaneo aumento della concentrazione di T4 non legato. Questi risultati non possono essere completamente spiegati dai cambiamenti nella forza ionica poiché alla stessa forza ionica diversi anioni hanno causato effetti quantitativamente diversi sulla concentrazione di T4 non legata. Il grado di depressione del legame di T4 da parte del tre anioni studiati era nell'ordine barbiturico maggiore del cloruro maggiore del fosfato. I risultati di uno studio sistematico sulla composizione dei sistemi tampone diluente hanno indicato che whe n come diluente del plasma è stato utilizzato un tampone 50 mM-sodio fosfato-100 mM-NaCl (pH 7-4), era improbabile che si verificassero cambiamenti grossolani nelle proprietà di legame T4 delle proteine plasmatiche con la diluizione.
Sulle interazioni tra lipasi pancreatica e colipasi e il substrato, e l'importanza dei sali biliari.Le interazioni tra lipasi pancreatica e colipasi e il substrato e l'effetto dei sali biliari su queste interazioni sono stati studiati mediante l'uso di esperimenti cinetici e studi sulla distribuzione semiquantitativa di fase delle attività lipasi e colipasi I risultati suggeriscono che la lipasi si lega alle interfacce idrofobiche con inattivazione parziale irreversibile. di concentrazioni micellari e al di sopra di un pH di circa 6,5 spostano la lipasi da questo legame, determinando un'attivazione reversibile. A valori di pH inferiori a circa 6,5, la lipasi si lega fortemente al substrato anche in presenza di sale biliare, e un picco di attività basso è visto intorno a pH 5,5. Questo è il risultato del legame della lipasi al "supersubstrato" e dell'attività del sito catalitico. In presenza di sale biliare, la colipasi favorisce il legame di lipasi al "supersubstrato" ma non ad altre interfacce idrofobiche e l'attività catalitica viene ristabilita. I dati cinetici indicano che il legame tra colipasi e lipasi in presenza di substrato è forte e si verifica in una relazione approssimativamente stechiometrica.
Effetti inibitori degli antistaminici e delle antiserotonine sulle reazioni del midollo osseo prodotte dall'endotossina di Escherichia coli nei topi.Le reazioni del midollo osseo (ovvero diminuzione della conta delle cellule nucleate e aumento della conta dei globuli rossi) dell'osso di topo sono stati osservati 1 ora dopo l'iniezione di endotossina e hanno raggiunto il picco dopo 18 ore. Queste reazioni sono state significativamente inibite quando difenidramina, prometazina (antistaminici), clorpromazina (antiserotonina) o ciproeptadina (antistaminico e antiserotonina) è stato somministrato 30 minuti prima dell'endotossina. Tali reazioni del midollo osseo sono state indotte anche con istamina o serotonina e hanno raggiunto il picco 1 ora dopo la somministrazione. I cambiamenti indotti dall'istamina sono stati inibiti dal precedente trattamento con difenidramina. Queste reazioni sono state anche prodotte mediante iniezione di un piccola quantità sia di istamina che di serotonina, mentre non è stato riscontrato alcun cambiamento quando ai topi è stata somministrata una singola iniezione di una dose maggiore di istamina o serotonina. t indicano che l'istamina e la serotonina rilasciate nei topi nella fase iniziale dopo l'endotossina innescano sinergicamente le reazioni del midollo osseo, che poi continuano in presenza di ulteriori mediatori. Si ritiene che gli antistaminici e le antiserotonine ostacolino l'intero processo delle reazioni prodotte dall'endotossina.
Sviluppo del perossisoma nel rene metanefrico di topo.La relazione dell'attività enzimatica con lo sviluppo e il numero di organelli durante la differenziazione del rene metanephric nel topo Le analisi biochimiche degli enzimi marcatori per i perossisomi (catalasi e D-aminoacido ossidasi), i mitocondri (citocromo ossidasi) e i lisosomi (fosfatasi acida) sono state eseguite su reni di età compresa tra 17 giorni prenatali e adulti. sono stati correlati con un'analisi morfometrica di popolazioni di perossisomi e mitocondri in cellule differenzianti del tubulo prossimale. Lo sviluppo postnatale del rene metanefrico è risultato essere accompagnato da un rapido aumento sia dell'attività specifica della catalasi che del numero di perossisomi per 100 mu2 nel tubulo prossimale durante le prime 4 settimane di crescita postnatale È stato osservato che l'elaborazione del reticolo endoplasmatico (ER) è parallela all'aumento in numero di perossisomi a cui i segmenti di ER erano spesso in stretta apposizione. Interazioni estese tra segmenti di ER e perossisomi erano facilmente visibili in sezioni di 0,5 mu visualizzate al microscopio elettronico ad alta tensione. Contrariamente ai perossisomi, né i mitocondri né i lisosomi hanno seguito un modello simile di aumento netto degli organelli, suggerendo che una densità di popolazione definita di mitocondri e lisosomi può esistere nel tubulo prossimale alla nascita, prima del completo sviluppo del rene.
Effetto degli oligoelementi sulla dissoluzione dell'idrossiapatite da parte degli streptococchi cariogeni.L'effetto di bassi livelli di stronzio, boro, litio, molibdeno e fluoro, da sola e in combinazione, sulla solubilità dell'idrossiapatite, sulla crescita batterica e sulla produzione di acido in cinque tipi antigenici di Streptococcus mutans sono state utilizzate piastre pour contenenti idrossiapatite sintetica per confrontare la dissoluzione dell'idrossiapatite. Le colonie dei cinque tipi antigenici di S mutans hanno prodotto zone di dissoluzione che sono stati misurati. La produzione e la crescita acide sono state studiate in terreni di coltura in brodo. I risultati mostrano che bassi livelli di stronzio e fluoro possono ridurre significativamente la demineralizzazione dell'idrossiapatite sintetica da parte di S mutans in vitro.
Murexide per la determinazione del calcio libero e legato alle proteine nei sistemi modello.La determinazione con il murexide del calcio libero e legato alle proteine nei sistemi modello di è stata studiata la composizione nota, la forza ionica e il pH. Gli spettri del murexide di calcio in presenza di quantità variabili di ioni calcio indicavano che il massimo di assorbimento del complesso di murexide di calcio si verifica a 480 nm mentre quello dello ione murexide è a 520 nm. a 509 nm è indipendente dalla concentrazione di ioni di calcio e, pertanto, potrebbe essere utilizzato per misurare il colorante totale. Gli spettri sono dipendenti dal pH ma costanti nell'intervallo da 6,5 a 7,0. L'apparente costante di dissociazione del murexide di calcio dipende dall'ambiente ionico, ionico forza e concentrazione di ioni calcio libero. È stata stabilita la relazione tra la costante di dissociazione apparente e la concentrazione di calcio libero. La caseina intera non ha avuto effetto sugli spettri di assorbimento del murexide di calcio e nessuna affinità per il complesso di murexide di calcio o lo ione murexide. La beta-caseina, alle concentrazioni impiegate, non ha influenzato la dissociazione del Murexide di calcio. A pH 7,0, forza ionica 0,1 e 2C, calcio legato alla beta-caseina come se ci fossero 8,65 siti di legame per molecola, ciascuno di pK 2,23, corrispondente a una costante di associazione intrinseca di 168,9 litri per mole.
Evidenza dai ratti che la tolleranza alla morfina è una risposta appresa.Si propone che l'effetto analgesico diretto della morfina si attenui nel corso delle somministrazioni successive del narcotico da una risposta condizionata, compensatoria, iperalgesica suscitata dalla procedura di somministrazione, il risultato netto è la tolleranza analgesica Utilizzando la situazione di valutazione dell'analgesia "piastra calda" con i ratti, questa visione condizionante della tolleranza è supportata da diversi risultati: ( a) è necessario disporre di segnali ambientali affidabili che predicono gli effetti sistemici della morfina se si vuole osservare la tolleranza, (b) una risposta condizionata iperalgesica può essere osservata in soggetti tolleranti alla morfina quando i segnali di somministrazione del farmaco sono seguiti da un placebo, e ( c) semplicemente presentando ripetutamente segnali ambientali precedentemente associati alla morfina (ma ora presentati con un placebo), la tolleranza alla morfina può essere estinta.
Lorazepam confrontato con pentobarbital per la sedazione notturna.Lorazepam (0,5, 1, 2 e 4 mg) è stato confrontato con pentobarbital (60 e 180 mg ) per il suo effetto sul sonno nell'"insonnia ospedaliera". I dati sulla risposta soggettiva sono stati raccolti da infermieri ricercatori. Il lorazepam è risultato essere un potente sedativo notturno: da 1 a 1,25 mg di lorazepam equivalgono a 100 mg di pentobarbital sodico per misure di qualità e durata del sonno. A questo livello di dose è meno efficace di 100 mg di pentobarbital come induttore del sonno. Studi a dosi più elevate (fino a 4 mg) indicano che il lorazepam ha un ampio indice terapeutico.
Fattori che influenzano la solubilità dei cristalli di pirofosfato diidrato di calcio.La solubilità dei cristalli di pirofosfato diidrato di calcio triclinico (CPPD) è stata misurata in condizioni variabili utilizzando 45Ca- cristalli marcati, che esprimono la solubilità come micromoli per litro di 45Ca in soluzione In un tampone Tris-HC1 0,1-M pH 7,4, la solubilità dei cristalli CPPD di dimensioni accurate (37-20 mum) era di 60 μM con la massima solubilità raggiunta dopo circa 8 ore di incubazione a 37 gradi C. La riduzione delle dimensioni dei cristalli, la diminuzione del pH, l'aumento della forza ionica, il Mg++, il citrato e l'albumina aumentano tutti la solubilità. Gli effetti più marcati sulla solubilità si sono verificati quando si modifica la concentrazione di calcio o per idrolisi enzimatica del pirofosfato inoganico in ortofosfato. è stato riscontrato che la diminuzione del livello di calcio ionizzato al di sotto di 5 mg/100 ml ha determinato un progressivo aumento della solubilità. Gli effetti di aumento della solubilità osservati dell'albumina potrebbero essere spiegati esclusivamente su la sua capacità di legare il calcio e, di conseguenza, alterare il livello di calcio ionizzato. Il calcio diffondebile nel liquido sinoviale era solo il 40% della concentrazione totale di calcio, il che significa che la maggior parte dei fluidi articolari è normalmente vicina alla concentrazione critica di 5 mg/100 ml di calcio ionizzato, al di sotto della quale la solubilità è migliorata. Durante l'intervento chirurgico, in particolare la paratiroidectomia, i livelli di calcio diminuiscono, favorendo la dissoluzione dei cristalli di CPPD. Ipotizziamo che la leggera diminuzione delle dimensioni dei cristalli durante la dissoluzione li liberi dalla loro muffa cartilaginea, provocando una reazione infiammatoria dose-dipendente mentre vengono "sparati" nello spazio articolare. Lo spargimento di cristalli può essere rafforzato dal modesto calo del pH del fluido articolare che accompagna la risposta infiammatoria.
Dipendenza dalla dose degli effetti acuti dell'etanolo sul metabolismo epatico in vivo.La dipendenza dalla dose degli effetti acuti dell'etanolo sul metabolismo intermedio del fegato in vivo è stato dimostrato nei ratti. L'etanolo è stato somministrato ip in dosi di 0,69, 1,7 e 3,0 g/kg in volumi uguali (20 ml/kg). Il fegato è stato congelato 120 minuti dopo l'iniezione e sono stati misurati più metaboliti in l'estratto di acido perclorico del tessuto. Ogni gruppo ha mostrato un pattern significativamente diverso di metaboliti, stati redox e potenziali di fosforilazione sebbene il tasso di scomparsa dell'etanolo, almeno tra i due gruppi a dose più alta, non fosse significativamente diverso. Il mitocondriale libero [NAD+ I rapporti ]/[NADH] e il rapporto [NADP+]/[NADPH] libero citoplasmatico erano paradossalmente più ridotti con la dose più bassa di etanolo e si ossidavano progressivamente con l'aumentare della dose. Una volta stabilite, le differenze in questi rapporti tra i gruppi tendevano apersistono nel tempo, relativamente indipendenti dalla concentrazione di etanolo. In un modello leggermente diverso, il potenziale di fosforilazione ([ATP]/[ADP][P1]) è rimasto al livello di controllo nel gruppo a basso dosaggio, ma è stato significativamente elevato nei due gruppi a dosaggio più elevato. I risultati, quindi, mostrano modelli dose-dipendenti distinti e complicati del metabolismo intermedio che non possono essere spiegati completamente da nessuna ipotesi, ma che implicano significativi effetti dose-dipendenti dell'etanolo sul metabolismo intermedio non direttamente correlati alla produzione di NADH.
Metodi per migliorare la rilevazione di pneumococchi nelle secrezioni respiratorie.Sono necessari metodi semplici per migliorare la rilevazione di pneumococchi nelle secrezioni respiratorie. Agar sangue di montone contenente 5 tazza di gentamicina per ml è risultata più spesso positiva (89%) rispetto all'agar sangue di pecora standard (54%) o all'inoculazione di topo (65%) nel recupero di pneumococchi da 62 pazienti adulti e pediatrici. Negli adulti, il test quellung diretto sullo striscio di espettorato era un metodo rapido e sensibile per prevedere il successivo isolamento pneumococcico mediante coltura (19 su 20 pazienti, 95%). Il test del quellung e la piastra alla gentamicina mostrano una sensibilità migliorata rispetto alle tecniche attuali per il rilevamento dello pneumococco e possono essere raccomandati per un uso generale.
Determinazione del 3-(5-tetrazolil) tioxantone 10,10-diossido nel plasma umano, nelle urine e nelle feci.Descrizione di un metodo gascromatografico per il dosaggio del 3-(5-tetrazolil) tioxantone 10,10-diossido (BW 59C) nel plasma, nelle urine e nelle feci umani Dopo estrazione in 1,2-dicloroetano da mezzo alcalino il composto viene convertito nel derivato eptafluorobutirrato che viene iniettato in un gascromatografo e misurato utilizzando un rivelatore a cattura di elettroni 63Ni. Il test produce una curva di calibrazione lineare nell'intervallo 0-30 mug/ml quando viene utilizzato il metodo dello standard interno. La riproducibilità è buona e la sensibilità fino a 1 ng iniettata sulla colonna è possibile. Il metodo è stato utilizzato per studiare le proprietà farmacocinetiche di BW 59C nell'uomo ed è stato semiautomatico mediante l'uso di un autocampionatore e di un computer dedicato.
Determinazione simultanea di propranololo e 4-idrossipropranololo nel plasma mediante frammentazione di massa.Un metodo quantitativo per la determinazione simultanea del propranololo e del suo metabolita attivo 4- viene descritto l'idrossipropranololo nel plasma umano. I campioni di plasma vengono estratti a pH 9,6 con acetato di etile dopo l'aggiunta di bisolfito di sodio e lo standard interno oxprenololo. Gli estratti vengono derivatizzati con anidride trifluoroacetica prima della separazione su un gascromatografo-spettrometro di massa. Rilevazione e quantificazione dei derivati trifluoroacetilici sono ottenuti mediante monitoraggio a ione singolo La concentrazione minima rilevabile di propranololo è 1 ng/ml e di 4-idrossipropranololo 5 ng/ml utilizzando campioni di plasma da 1 ml Nessuna interferenza da normali costituenti plasmatici o da farmaci comunemente prescritti insieme al propranololo sono stati rilevati.
Purificazione della glucosio 6-fosfato deidrogenasi umano mediante cromatografia di affinità.Glucosio 6-fosfato deidrogenasi umano associato a NADPH è stato efficacemente legato con agarosio- legato al NADP, mentre l'enzima associato al NADP era scarsamente legato al NADP legato all'agarosi Dopo l'eliminazione dell'emoglobina dall'emolizzato mediante trattamento con DEAE-cellulosa, l'enzima è stato convertito nella forma legata al NADPH ed è stato applicato su una colonna di affinità. L'enzima è stato eluito in modo specifico dalla colonna mediante NADP nel tampone di eluizione. È stata ottenuta una preparazione enzimatica omogenea con resa elevata.
Isolamento e studi dei granuli degli amebociti di Limulus polyphemus, il granchio a ferro di cavallo.I granuli sono stati isolati dal citoplasma degli amebociti di Limulus polyphemus , il granchio a ferro di cavallo, mediante distruzione di cellule ottenute dal sangue che era stato prelevato in propranololo 2 mM. I granuli successivamente sono stati purificati mediante centrifugazione attraverso un gradiente di saccarosio che conteneva eparina. Gli estratti dei granuli sono stati preparati mediante congelamento e scongelamento dei preparati di granuli in acqua distillata. La microscopia elettronica a trasmissione e scansione dei granuli ha rivelato particelle rotonde o ovoidali. Tuttavia, sembrava essere presente un solo tipo di granulo. Lo spettro ultravioletto dell'estratto di granuli di amebociti ha mostrato un picco a 277 nm a pH 7,4 e un spostamento in due picchi di 281 nm e 290 nm a pH alcalino L'ultracentrifugazione analitica ha rivelato un pattern simile a quello osservato con i lisati preparati da amebociti intatti. l'elettroforesi su gel, in presenza di urea a pH 4,5, ha mostrato pattern simili a quelli osservati con il lisato di amebociti. Gli estratti dei granuli sono stati gelificati da endotossine batteriche. Il sangue del granchio a ferro di cavallo contiene un solo tipo di cellula, l'amebocita. Precedenti studi hanno dimostrato che il meccanismo di coagulazione del sangue di Limulus è contenuto interamente all'interno degli amebociti. Gli studi attuali suggeriscono che i granuli, che racchiudono il citoplasma di queste cellule, contengano tutti i fattori necessari per la coagulazione del sangue, compresa la proteina coagulabile. Il sistema di coagulazione localizzato intracellulare viene rilasciato dagli amebociti quando i loro granuli si rompono durante l'aggregazione cellulare.
Stimolazione della produzione di acido lattico nei fibroblasti di embrione di pollo mediante siero e pH elevato in assenza di glucosio esterno.Si verifica la produzione di acido lattico da parte di fibroblasti di embrione di pollo in assenza di glucosio esogeno. In assenza di glucosio si forma da 15 a 50 volte meno acido lattico che in sua presenza. Tuttavia, la stimolazione del siero e del pH aumenta questa produzione residua di acido lattico nella stessa misura relativa di quando è presente il glucosio. La quantità di acido lattico che si forma non può essere spiegata dal catabolismo del glucosio residuo nel mezzo in quanto la sua concentrazione è inferiore ad un decimo di quella dell'acido lattico eventualmente prodotto. Inoltre, la concentrazione di glucosio residuo rimane costante o aumenta nel corso del l'esperimento In larga misura l'accumulo di acido lattico in assenza di glucosio esterno dipende dalla presenza di amminoacidi nel mezzo, ma il trasporto degli amminoacidi non è influenzato dallo stimolante a signori utilizzati in questo studio. I risultati suggeriscono che i trattamenti che stimolano la moltiplicazione cellulare attivano anche quelle vie enzimatiche che convertono gli amminoacidi in piruvico e quindi in acido lattico.
Crescita senza siero di cellule HTC contenenti tirosina aminotransferasi inducibile da glucocorticoidi e insulina e recettori citoplasmatici dei glucocorticoidi.Le cellule HTC sono state fatte crescere in mezzo chimicamente definito senza alcun supplemento macromolecolare di sorta. Sono state fatte stime iniziali dei loro relativi requisiti di aminoacidi. Le cellule cresciute nel mezzo definito conservano molte delle caratteristiche differenziate che sono state al centro dell'indagine nelle loro controparti coltivate nel siero. le cellule nel mezzo definito contengono recettori glucocorticoidi citoplasmatici e hanno tirosina aminotransferasi che può essere indotta da glucocorticoidi, siero o insulina. Queste cellule producono anche, in piccole quantità, una proteina sierica di ratto non ancora definita.
Effetto degli agenti farmacologici sulla mitosi dei cheratinociti umani in vitro. II. Inibizione da parte delle catecolamine.Le catecolamine producono inibizione mitotica in colture cellulari primarie di cheratinociti umani probabilmente attraverso un blocco nella parte G2 del ciclo cellulare L'adrenalina ha prodotto una significativa inibizione mitotica (49%) a una concentrazione di appena 4,5 X 10 (-10) M, mentre il suo analogo, isoproterenolo, ha prodotto un'inibizione del 47% a 1 X 10 (-10) M. La noradrenalina ha provocato una risposta inibitoria del 49% a 1 X 10 (-8) M. Un'altra catecolamina, la dopamina, ha causato una diminuzione del 53% della mitosi a 1 X 10 (-6) M. Altre ammine strutturalmente correlate per esibire l'inibizione mitotica erano fenilefrina, 58% a 1 X 10 (-7) M, octopamina, 47% a 1 X 10 (-5) M e tiramina, 52% a 1 X 10 (-4) M. La serotonina ha mostrato nessuna inibizione mitotica a 1 X 10(-4) M. Vari agenti bloccanti alfa e beta adrenergici sono stati aggiunti al sistema cellulare. L'agente bloccante alfa, fentolamina, non ha avuto effetto sulla mitosi. Quando aggiunta in combinazione con epinefrina o norepinefrina, non è stata osservata alcuna riduzione dell'inibizione mitotica indotta da catecolamine. L'agente beta-bloccante, propranololo, di per sé ha mostrato una leggera inibizione mitotica a 1 X 10(-6) M. Quando aggiunto insieme a epinefrina o noreinefrina, il propranololo ha ridotto l'inibizione mitotica indotta da catecolamine di circa il 65%. Inoltre, il propranololo ha bloccato l'inibizione mitotica causata dalla fenilefrina, un agente alfa adrenergico. Tuttavia, un altro agente beta-bloccante, il dicloroisoproterenolo, ha mostrato una forte inibizione mitotica (53%) quando aggiunto alle colture a una concentrazione di 1 X 10(-8) M. L'effetto è stato ridotto a zero in presenza di propranololo. Questi dati suggeriscono che mentre i recettori beta possono essere coinvolti nell'inibizione mitotica indotta da catecolamine dei cheratinociti umani in vitro, la natura dell'interazione recettore-molecola può essere complessa.
Secrezione enzimatica lisosomiale difettosa nei reni di topi Chediak-Higashi (beige).Il topo beige è un modello animale per la sindrome umana di Chediak-Higashi , una malattia caratterizzata da lisosomi giganti nella maggior parte dei tipi di cellule. Nei topi, il trattamento con ormoni androgeni provoca un aumento di 20-50 volte in almeno un enzima lisosomiale renale, la beta-glucuronidasi. I topi beige trattati con androgeni avevano beta-reni significativamente più alti. livelli di glucuronidasi, beta-galattosidasi e N-acetil-beta-D-glucosaminidasi (esosaminidasi) rispetto ai topi normali Altri enzimi inducibili dagli androgeni e marcatori enzimatici per il citosol, i mitocondri e i perossisomi non sono stati aumentati nel rene dei topi beige. significativo aumento dell'enzima lisosomiale è stato osservato in altri cinque organi di topi beige con o senza trattamento con androgeni, né nei reni di femmine beige non trattate con androgeni. La colorazione istochimica per la glucuronidasi insieme al frazionamento subcellulare ha mostrato che l'hi gher contenuto di glucuronidasi del rene di topo beige è causato da un notevole accumulo di lisosomi giganti contenenti glucuronidasi nelle cellule dei tubuli vicino al confine corticomidollare. Nei topi normali gli enzimi lisosomiali vengono rilasciati in modo coordinato nel lume dei tubuli renali e nelle urine sono presenti quantità apprezzabili di enzimi lisosomiali. I livelli di enzimi lisosomiali urinari sono molto più bassi nei topi beige rispetto ai topi normali. Sembra che i lisosomi possano accumularsi nei topi beige a causa dell'esocitosi difettosa derivante dalla ridotta motilità intracellulare dei lisosomi o dalla loro fusione impropria con la membrana plasmatica. Un difetto simile potrebbe spiegare le caratteristiche della sindrome di Chediak-Higashi.
Stimolazione del trasporto di 2-desossi-d-glucosio nelle cellule di controllo e trasformate da virus mediante bromuro di etidio.Recentemente abbiamo dimostrato che il bromuro di etidio alterava il plasma e glicoproteine della membrana subcellulare nelle cellule di controllo e trasformate da virus. È riportato qui che il bromuro di etidio ha anche stimolato il processo associato alla membrana di trasporto dello zucchero. Il KM delle cellule trasformate dal virus e delle cellule trattate con bromuro di etidio è lo stesso di quello del controllo cellule mentre la velocità massima rispetto alle cellule di controllo è significativamente aumentata. Il trasporto di 2-desossil-D-glucosio è stato inibito dal glucosio, dalla citocalasina B e dalla neuraminidasi, ma non è stato influenzato dalle variazioni della densità cellulare o del pH del mezzo di incubazione".
Localizzazione della NADH ossidasi sulla superficie dei leucociti polimorfonucleati umani mediante un nuovo metodo citochimico.La localizzazione ultrastrutturale della NADH ossidasi, un possibile enzima nel È stata studiata l'attività ossidativa aumentata dei leucociti polimorfonucleati (PMN) durante la fagocitosi È stata sviluppata una nuova tecnica citochimica per la localizzazione di H2O2, un prodotto dell'attività ossidasi del NADH Gli ioni cerosi, in presenza di perossido, formano un precipitato denso di elettroni I PMN a riposo e stimolati fagocitamente sono stati esposti a ioni cerosi a pH 7,5 per dimostrare siti di produzione di H2O2 NADH-dipendente e insensibile al cianuro. e sulla membrana plasmatica. Il coinvolgimento del perossido è stato dimostrato dall'effetto inibitorio della catalasi sulla precipitazione del cerio; la localizzazione superficiale dell'enzima responsabile e è stato confermato utilizzando inibitori non penetranti dell'attività enzimatica. È stato condotto uno studio correlativo con un sistema di riduzione del tetrazolio NADH-dipendente. Come con il cerio, la deposizione di formazano sulla superficie della cellula era dipendente da NADH, insensibile al cianuro e stimolata dalla fagocitosi. La superossido dismutasi non ha inibito la riduzione del tetrazolio, come osservato citochimicamente, indicando una riduzione enzimatica diretta del colorante senza interposizione di superossido. Questi risultati, combinati con studi sul consumo di ossigeno sul PMN a riposo e stimolato in presenza o assenza di NADH, indicano che la NADH ossidasi è un enzima di superficie nel PMN umano. Viene interiorizzato durante la fagocitosi e conserva la sua capacità di generare perossido all'interno del vacuolo fagocitico.
Struttura, composizione, proprietà fisiche e turnover dei perossisomi proliferati. Uno studio sugli effetti trofici del Su-13437 sul fegato di ratto.Proliferazione dei perossisomi è stata indotta con acido 2-metil-2-(p-[1,2,3,4-tetraidro-1-naftil]-fenossi)-propionico (Su-13437). DNA, proteine, citocromo ossidasi, glucosio-6 -fosfatasi e le concentrazioni di fosfatasi acida rimangono quasi costanti Le attività degli enzimi perossisomiali cambiano a circa il 165%, 50%, 30% e 0% dei controlli per catalasi, urato ossidasi, L-alfa-idrossiacido ossidasi e D-ammino acido ossidasi, rispettivamente. Per la catalasi il cambiamento deriva da una diminuzione dell'attività legata alle particelle e un aumento di cinque volte dell'attività solubile. Il diametro medio delle sezioni perossisomiali è 0,58 +/- 0,15 mum nei controlli e 0,73 +/- 0,25 mum dopo il trattamento. Pertanto, gli enzimi perossisomiali misurati sono altamente diluiti in particelle proliferate. Dopo il frazionamento dei tessuti, circa la metà di th I perossisomi normali e tutti i perossisomi proliferati mostrano un'estrazione della matrice con formazione di fantasmi, ma nessun cambiamento nelle dimensioni. Negli omogenati sottoposti a stress meccanico, i perossisomi proliferati non rivelano aumentata fragilità; inaspettatamente, Su-13437 stabilizza i lisosomi. I nostri risultati suggeriscono che l'estrazione della matrice e l'aumento delle attività enzimatiche solubili derivano dal passaggio transmembrana delle proteine perossisomiali. Le variazioni di concentrazione delle ossidasi perossisomiali e della catalasi solubile dopo Su-13437 consentono il calcolo delle loro emivite. Questi sono gli stessi riscontrati per la catalasi totale, nei ratti normali e trattati, dopo allil isopropil acetammide: circa 1,3 giorni, un risultato compatibile con la degradazione del perossisoma da parte dell'autofagia. Un aumento sequenziale della concentrazione di RNA nel fegato, l'incorporazione di [14C]leucina nelle proteine solubili in DOC e nella catalasi immunoprecipitabile e un aumento delle dimensioni del fegato e del volume perossisomiale per grammo di fegato, caratterizzano l'effetto trofico del farmaco utilizzato. Nei maschi, Su-13437 è più attivo del CPIB, un altro farmaco che induce la proliferazione dei perossisomi; nelle femmine, solo Su-13437 è attivo.
Arterializzazione delle vene coronariche nell'arteriosclerosi coronarica diffusa.Dal momento che le vene coronariche e i capillari non sono coinvolti nella malattia arteriosclerotica, gli autori hanno eseguito sperimentalmente, e successivamente , arterializzazione clinica totale e selettiva della vena coronarica. Ischemia miocardica acuta creata ad esempio dalla legatura del ramo discendente anteriore, è stata trattata da un'arteria mammaria interna per anastomosi regionale della vena coronaria. In 21 pazienti l'arterializzazione selettiva della "Vena cordis magna" " o di "Vena cordis media", ed è stata eseguita l'arterializzazione totale del seno coronarico. Il miglioramento clinico e gli studi di follow-up sembrano essere promettenti nel trattamento di pazienti con arteriosclerosi coronarica pesante diffusa avanzata. Nell'ischemia miocardica acuta con occlusione coronarica localizzata coronarograficamente, lo scopo dell'arterializzazione venosa regionale è ridurre al minimo l'area di infarto.
Studi biochimici della sensazione gustativa. Legame di L-[3H]alanina a una frazione sedimentabile dall'epitelio del barbo di pesce gatto.Un gran numero di papille gustative sono distribuito sulla superficie corporea del pesce gatto di canale ictalurus punctatus, con i barbigli aventi una densità particolarmente elevata. L-alanina, così come alcuni altri amminoacidi, sono stimoli gustativi in questo animale. Tessuto epiteliale ottenuto raschiando delicatamente la superficie del barbo è stata frazionata mediante centrifugazione differenziale È stata preparata una frazione sedimentabile (P2) che è stata arricchita nell'attività di legame della L[OH]alanina, nel marker della membrana plasmatica enzima 5\'-nucleotidasi e nel marker mitocondriale succinato citocromo c reduttasi, ma non nella microsomiale marcatore NADH citocromo c reductasi. Il legame della L-[OH]alanina è stato misurato utilizzando un metodo di filtro Millipore in cui è stata determinata anche la correzione per il legame non specifico. Tempo, temperatura e pH per misurare l'attività di legame sono stati stabilitis hed. Al pH ottimale di 7,8, il KD per L-alanina è 4,8 X 10 (-6) M. La costante di velocità di dissociazione del primo ordine a 6 gradi è 3,8 X 10 (-4) s-1 ea 24 gradi è 12,1 X10(-4) s-1. La costante di velocità del secondo ordine per l'associazione è compresa tra 10(2) e 10(3) M-1 S-1. La reversibilità dell'interazione di legame è stata dimostrata anche dal rapido spostamento della L-[3H]alanina legata da un grande eccesso di L-alanina non etichettata. Che il legame non rappresenti l'incorporazione nella proteina è stato confermato dalla mancanza di effetto della puromicina. Sono state determinate anche le quantità legate a diversi altri amminoacidi chemostimolatori.
Leucina aminopeptidasi (lente bovino). Effetto del pH sul legame relativo di Zn2+ e Mg2+ all'attivazione dell'enzima.Incubazione della leucina l'aminopeptidasi (lente bovina) (EC 3.4.1.1) con varie concentrazioni di Mg2+ a vari valori di pH in 1 M KCl e 0,155 M trimetilammina-HCl a 37 gradi conferma che Mg2+ compete con Zn2+ per legare solo 1 sito per subunità da 54.000 dalton. Il rapporto delle costanti di associazione apparenti (1KZn:1KMg = 1KZn/Mg) in questo sito (sito 1) è stato stimato essere 20.720 a pH 8,16, 10.570 a pH 8,44, 3.590 a pH 8,78 e 660 a pH 9,14. la diminuzione dei valori di 1KZn/Mg all'aumentare del pH nell'attivazione della leucina aminopeptidasi da parte di Mg2+ è attribuita all'abbassamento della concentrazione di Zn2+ libero rispetto a quella di Mg2+ libero causata dalla formazione di complessi ZnOH+ e Zn(OH)2 con OH crescente - concentrazione Quando vengono apportate correzioni per il legame di Zn2+ da parte degli ioni OH-, il rapporto pH-indipendente di costanti di associazione (1KZn:1KMg = 1KZn/Mg) per il legame relativo di Zn2+ e Mg2+ nel sito 1 della leucina aminopeptidasi in 29.800. Dall'effetto del pH sulla relativa costante di legame, un valore (beta2) per il prodotto delle due costanti di associazione a gradini per la formazione di Zn(OH)2 da Zn2+ e OH- (Zn2+ + OH- in equilibrio ZnOH+; ZnOH+ + OH- in equilibrio Zn(OH)2) è stato stimato essere 4,42 X 10 (10) M-2 a 37 gradi. I valori di Km a pH 7,5 E 30 gradi con L-leucina p-nitroanilide come substrato in presenza di 0,01 M NaHCO3 sono 4,13 e 2,01 mM per gli enzimi zinco-zinco e magnesio-zinco, rispettivamente. I valori per Vmax sono rispettivamente 0,2 e 2,49 mumol/min/mg.
Un complesso di citocromo cardiaco c1 e citocromo c.Sono state studiate le interazioni del citocromo c1 e del citocromo c dai mitocondri cardiaci bovini. Citocromo c1 e citocromo c ha formato un complesso molecolare 1:1 in soluzioni acquose di bassa forza ionica. Il complesso era stabile alla cromatografia Sephadex G-75. La formazione e la stabilità del complesso erano indipendenti dallo stato di ossidazione dei componenti del citocromo per quanto riguarda le reazioni studiate Il complesso è stato dissociato in soluzioni di forza ionica superiore a 0,07 o pH superiore a 10 e solo parzialmente dissociato in urea 8 M. Nessuna complessazione si è verificata quando il citocromo c è stato acetilato sul 64% dei suoi residui di lisina o fotoossidato sui suoi 2 residui di metionina Complessi con rapporti molecolari inferiori a 1:1 (cioè più citocromo c) sono stati ottenuti quando polimerizzato citocromo c, o citocromo c con tutti i residui di lisina guanidinati, o un "1-65 eme peptide" dal ciano è stata utilizzata la scissione del bromuro di geni del citocromo c. Questi risultati sono stati interpretati per implicare che il complesso fosse prevalentemente mantenuto da interazioni ioniche che probabilmente coinvolgevano alcuni dei residui di lisina del citocromo c ma con una stabilizzazione maggiore dipendente dalle conformazioni native di entrambi i citocromi. Il complesso ridotto era autoossidabile con cinetica bifasica con costanti di velocità del primo ordine di 6 X 10(-5) e 5 X U0(-5) s-1 ma non ha reagito con il monossido di carbonio. Il complesso ha reagito con il cianuro ed è stato ridotto dall'ascorbato a circa il 32% e il 40% rispettivamente delle velocità di reazione con il solo citocromo c. Il complesso era meno fotoriducibile del solo citocromo c1. Il complesso ha mostrato un comportamento dicroico circolare notevolmente diverso da quello della sommatoria del citocromo c1 più il citocromo c. Abbiamo concluso che quando i citocromi c1 e c hanno interagito hanno subito drammatici cambiamenti conformazionali con conseguente indebolimento delle loro fessure dell'eme. Tutti i risultati disponibili indicherebbero che nel complesso il citocromo c1 era legato all'ingresso della fessura dell'eme del citocromo c sul lato della metionina-80 della fessura dell'eme.
Attività fotosintetiche sensibili alla tripsina nelle membrane dei cloroplasti da Chlamydomonas reinhardi, y-1.Posizione dei componenti della catena di trasporto degli elettroni nelle membrane dei cloroplasti di Chlamydomonas reinhardi, y-1 è stato studiato mediante digestione proteolitica con tripsina solubile o insolubilizzata. La digestione di vescicole di membrana intatte con tripsina solubile inattiva il sistema di scissione dell'acqua, il sito di inibizione 3-(3,4-diclorofenil)-1,1-dimetilurea di Fotosistema II, il trasporto di elettroni tra i due fotosistemi e la ferredossina NADP reduttasi La riduzione di NADP con donatori di elettroni artificiali per il fotosistema I potrebbe essere ripristinata, tuttavia, mediante l'aggiunta di reduttasi purificata alle membrane digerite con tripsina. I centri di reazione I e II erano resistenti alla digestione della tripsina dall'esterno o dall'interno dei tilacoidi quando la tripsina attiva era intrappolata all'interno delle vescicole di membrana mediante sonicazione e d digestione effettuata in presenza di inibitore della tripsina aggiunto dall'esterno. In quest'ultimo caso, anche il sistema di scissione dell'acqua è risultato resistente alla digestione. La tripsina insolubilizzata legata a poliacrilammide ha inattivato solo la ferredossina NADP reduttasi. Le membrane fotosinteticamente attive ottenute in diversi stadi di sviluppo hanno mostrato un comportamento sostanzialmente simile nei confronti della tripsina.
Enzimi proteolitici del ceppo K-1 di Streptomyces griseus ottenuti da un preparato commerciale (Pronase). Purificazione e caratterizzazione della carbossipeptidasi.Abbiamo descritto in precedenza le purificazioni facilitate dei componenti tripsina e aminopeptidasi presenti in Pronase (Vosbeck, KD, Chow, K. -F. e Awad, WM, Jr. (1973) J. Biol. Chem. 248, 6029-6034). miscela proteica parzialmente risolta rimasta dopo che uno dei passaggi di tale procedura è stato fatto passare attraverso una colonna Sephadex G-75. In questo modo, un componente con attività carbossipeptidasi è stato separato dalle endopeptidasi seriniche associate. È stata ottenuta un'ulteriore purificazione di questa esopeptidasi fino all'apparente omogeneità per rifiltrazione attraverso la stessa colonna Sephadex e per cromatografia CM-cellulosa Dopo elettroforesi su gel di acrilammide è stata osservata una singola banda proteica, l'analisi all'equilibrio di sedimentazione con il metodo della deplezione del menisco ha dato un peso molecolare di 30.300. Questo enzima mostra attività contro la Nalfa-benzilossicarbonilglicil-L-leucina e l'ippuril-D,L-fenillattato; nessuna attività è stata trovata contro Nalfa-acetil-L-tirosina etil estere, Nalfa-benzoil-D,L-arginina-p-nitroanilide, o L-leuckne-p-nitroanilide. L'attività massima è compresa tra i valori di pH di 7 e 8; l'enzima è stabile tra valori di pH di 6 e 10. A temperatura ambiente la 1,10-fenantrolina inattiva completamente l'enzima mentre l'EDTA non ha effetto. Dei molti cationi testati, solo Co2+, Ni2+ o Zn2+ ripristinano l'attività dell'enzima trattato con 1,10-fenantrolina; Co2+ ha fornito 3 volte l'attività nativa. Il metallo nella proteina nativa è risultato essere lo zinco. Questi risultati sono simili a quelli registrati con la carbossipeptidasi pancreatica bovina A, e suggeriscono la possibilità che il presente enzima possa essere geneticamente correlato alla proteina dei mammiferi, come negli esempi precedentemente noti di omologia di tre endopeptidasi pronasi con enzimi serina pancreatica.
Biosintesi in vitro di sialosylgalattosylceramide (G7) da parte di microsomi cerebrali di topo.Un'attività della sialytransferasi che catalizza la sintesi di sialosylgalattosylceramide (G7) dall'aggiunta di galactocerebroside e L'acido CMP-N-acetilneuraminico è stato dimostrato nei microsomi del cervello di topo. La reazione enzimatica mostra un pH ottimale di 6,3 e richiede detergenti. Sia Mn2+ che Ca2+ hanno inibito la reazione, mentre Mg2+ non ha avuto effetto. Il Km apparente per il galattocerebroside che porta a G7 è stato stimata essere 8,7 X 10(-4) M. La stessa preparazione microsomiale sintetizzava anche l'ematoside quando il ceramide lattoside era l'accettore del glicolipide. Il Km apparente per il ceramide lattoside era circa un decimo di quello per il galattocerebroside. Quando i preparati erano parzialmente inattivati dal calore la sintesi di G7 e di ematoside è stata ridotta approssimativamente alla stessa velocità. Il fegato sembrava avere la più alta attività per la sintesi di G7 (così come di ematoside), seguito da brai n. La sintesi di B7 da parte di microsomi cerebrali di topo in vitro dimostra un nuovo percorso per la sintesi dei gangliosidi cerebrali.
Enzimi che metabolizzano i nucleotidi in Chlamydomonas flagella.I nucleotidi hanno almeno due funzioni nelle ciglia e nei flagelli degli eucarioti. Viene utilizzato l'ATP, originario delle cellule prerequisiti per l'assemblaggio dei microtubuli sono la motilità da parte di una o più proteine che trasmettono energia chiamate dineina, e il legame dei nucleotidi guanina alla tubulina, e probabilmente alcune trasformazioni dei nucleotidi legati, sono prerequisiti per l'assemblaggio dei microtubuli. abbiamo purificato e caratterizzato altri cinque enzimi flagellari coinvolti nelle trasformazioni nucleotidiche, una eterogenea, Mg2+ o Ca2+-attivata ATPasi. Questo enzima non è stato formato trattando la dineina purificata con proteasi. Era assente dagli estratti di Tetrahymena cilia. La sua funzione potrebbe essere un trasduttore di energia ausiliario, o nel guidare o risposte tattiche. Sono state isolate due specie di adenilato chinasi, una delle quali era molto elevata nella rigenerazione dei flagelli; quest'ultimo era presente anche nei corpi cellulari. Una gran parte dell'attività della difosfochinasi del nucleoside flagellare non può essere solubilizzata. Sono state identificate due specie enzimatiche solubili, una delle quali era presente anche nei corpi cellulari. Poiché questi enzimi sono di interesse perché potrebbero funzionare nell'assemblaggio dei microtubuli, abbiamo studiato la misura in cui il nucleoside difosfochinasi cerebrale copolimerizza con la tubulina purificata da ripetuti cicli di polimerizzazione. L'arginina chinasi non è stata rilevata negli estratti flagellari di Chlamydomonas.
Inibitore proteico delle desossiribonucleasi acide. Procedura e proprietà di purificazione migliorate.Viene descritto un metodo per la purificazione estesa della desossiribonucleasi acida (DNasi acida) e dei suoi inibitore specifico da fegato bovino, la cui esistenza era stata supportata solo da evidenze indirette. Con l'uso della desossiribonucleasi acida insolubilizzata, sono state rilevate altre otto proteine interagenti con l'enzima. Una di esse (peso molecolare 59.000) è stata identificata come responsabile per l'attività della fosfodiesterasi che è spesso un contaminante delle preparazioni di DNasi. La DNasi acida (esente da fosfodiesterasi) e il suo inibitore sono stati ottenuti come proteine omogenee, come determinato mediante elettroforesi su gel di sodio dodecilsolfato-poliacrilammide. Il peso molecolare della DNasi acida e del suo inibitore sono , rispettivamente, 26.500 e 21.500; quelle di altre proteine vanno da 17.000 a 112.000. Le proprietà della DNasi acida del fegato bovino sono simili a quelle descritte per gli enzimi estratti da altre fonti. È stata confermata la stessa alterazione della cinetica della DNasi da parte di questo inibitore, come quella precedentemente dimostrata con una proteina impura; la forma sigmoidale osservata a pH 5 per il grafico della velocità iniziale rispetto alla concentrazione del substrato scompare progressivamente all'aumentare del pH. Abbiamo anche dimostrato che l'RNA, che inibisce la DNasi acida attraverso un legame competitivo al sito catalitico, è in grado, come il substrato, di invertire il legame dell'inibitore all'enzima.
Ossidazione di NADPH da parte di particelle subcondriali da cuore di manzo in completa assenza di attività transidrogenasica da NADPH a NAD.Trattamento di particelle subcondriali (ETP) con tripsina a 0 gradi il NADPH distrutto porta all'attività della transidrogenasi NAD (o 3-acetilpiridina adenina dinucleotide, AcPyAD). L'attività della NADH ossidasi non è stata influenzata; NADPH ossidasi e NADH portano all'attività della transidrogenasi AcPyAD sono state diminuite di meno del 10%. Quando l'ETP è stato incubato con tripsina a 30 gradi, NADPH porta a NAD L'attività della transidrogenasi è stata rapidamente persa, l'attività della NADPH ossidasi è stata lentamente distrutta, ma l'attività della NADH ossidasi è rimasta intatta. Il modello di riduzione di NADPH, NADPH + NAD e NADH dei cromofori che assorbono a 475 meno 510 nm (flavina e centri ferro-zolfo) nel complesso I (NADH-ubichinone reduttasi) o ETP trattati con tripsina a 0 gradi indicavano anche una specifica distruzione dell'attività della transidrogenasi. La sensibilità del NADPH l eads alla reazione della transidrogenasi NAD alla tripsina ha suggerito il coinvolgimento di residui di arginile suscettibili nell'enzima. I residui di arginile sono considerati siti di legame carichi positivamente per substrati e ligandi anionici in molti enzimi. Il trattamento dell'ETP con lo specifico reagente legante l'arginina, butandione, ha inibito la transidrogenazione da NADPH porta a NAD (o AcPyAD). Non ha avuto alcun effetto sull'ossidazione di NADH e l'inibizione dell'ossidazione di NADPH e NADH porta alla transidrogenazione di AcPyAD solo del 10-15% anche dopo 30-60 minuti di incubazione di ETP con butanedione. L'inibizione del NADPH porta alla transidrogenazione del NAD è stata notevolmente ridotta quando il butanedione è stato aggiunto all'ETP in presenza di NAD o NADP. Quando erano presenti sia NAD che NADP, l'effetto butanedione era completamente abolito, suggerendo così la possibile presenza di residui di arginile nel sito di legame del nucleotide del NADPH che porta all'enzima NAD transidrogenasi. In condizioni in cui la transidrogenazione da NADPH a NAD era completamente inibita dalla tripsina o dal butandione, il tasso di ossidazione del NADPH era maggiore o uguale a 220 nmol min-1 mg-1 di proteina ETP a pH 6,0 e 30 gradi. I risultati di cui sopra stabiliscono che nella catena respiratoria dei mitocondri del cuore di manzo l'ossidazione del NADH, l'ossidazione del NADPH e il NADPH portano alla transidrogenazione del NAD sono reazioni indipendenti.
Modelli di rilascio di acidi grassi da substrati endogeni da parte di omogenati e membrane piastriniche umane.Descriviamo un metodo per misurare il rilascio di acidi grassi da substrati endogeni di omogenati e membrane piastrinici umani. Il metodo dipende dalla disponibilità di lipidi i cui acidi grassi sono a catena dispari e quindi idonei come composti di riferimento interni che, al momento dell'estrazione lipidica, possono essere aggiunti ad un'incubazione per consentire la successiva quantificazione del contenuto di acidi grassi liberi o acidi grassi esterificati a lipidi specifici. Abbiamo trovato quattro tipi di attività lipolitica nelle piastrine umane. Negli omogenati a pH 4.0 una lipasi trigliceride ha operato come mostrato dalla sincronia della degradazione dei trigliceridi e del rilascio di glicerolo e quegli acidi grassi che sono i costituenti predominanti dei trigliceridi. Tuttavia, a questo livello di pH è stato rilasciato abbastanza acido arachidonico da suggerire una certa degradazione dei fosfolipidi, poiché i trigliceridi trattengono quantità relativamente piccole di questo acido. Con le preparazioni membranose, nell'intervallo di pH alcalino c'erano due picchi di rilascio di acidi grassi con accompagnata degradazione dei fosfolipidi. A pH 8,5, dove predominava il rilascio degli acidi saturi, palmitico e stearico, la loro somma era 3,5 volte quella dell'acido arachidonico. A pH 9,5 il rilascio di acido palmitico e stearico era solo leggermente al di sotto dei loro valori di picco; tuttavia, il rilascio di acido arachidonico quasi eguagliava la somma degli acidi saturi. L'acido linoleico non è stato rilasciato in quantità rappresentative da quelle reazioni che hanno rilasciato acido arachidonico, nonostante la schiacciante propensione di entrambi ad essere esterificati nella posizione 2 dei fosfolipidi. Pertinenza, i fosfolipidi di colina sono ricchi di linoleico ei fosfolipidi di non-colina-poveri di linoleico, mentre entrambi hanno una generosa dotazione di acido arachidonico. Con questo in mente, solleviamo la possibilità che la fosfolipasi A2 delle piastrine umane sia un endoenzima a causa della sua tendenza ad agire su quei fosfolipidi che si pensa costituiscano lo strato interno della membrana cellulare.
Hemoglobin Deer Lodge (beta 2 His sostituito da Arg). Conseguenze dell'alterazione del sito di legame del 2,3-difosfoglicerato.Hemoglobin Deer Lodge è un emoglobina umana anormale con arginina sostituita all'istidina in posizione beta 2. La cristallografia a raggi X dell'emoglobina umana normale ha mostrato che il residuo beta 2 è normalmente parte del sito di legame per il 2,3-difosfoglicerato. La sostituzione dell'arginina per l'istidina a beta 2 influenza sia la cinetica che gli equilibri del legame con il ligando. Quando viene privato degli anioni, l'Hb Deer Lodge ha una maggiore affinità per l'ossigeno e un diminuito grado di cooperatività rispetto all'Hb A. L'effetto Bohr alcalino è leggermente aumentato e vi sono aumenti marcati dell'ossigeno affinità inferiore a pH 6 e superiore a pH 8. In presenza di 2,3-difosfoglicerato la cooperatività in aumenta a normale e la dipendenza dal pH del legame con l'ossigeno è ridotta. Ciò contrasta con l'aumento dell'effetto Bohr visto per Hb A in presenza di fosfati organici. A causa del maggiore legame anionico a pH elevato, Hb Deer Lodge ha un'affinità per l'ossigeno leggermente inferiore rispetto a Hb A a pH 9 in presenza di 2,3-difosfoglicerato o inositolo esafosfato. Studi cinetici a pH neutro in assenza di fosfati organici hanno rivelato bifasicità nel tasso di dissociazione dell'ossigeno da Hb Deer Lodge, mentre sono stati osservati corsi temporali approssimativamente lineari per Hb A. La fase veloce della cinetica di dissociazione dell'ossigeno mostra una grande sensibilità al pH e i fosfati aumentano la velocità e la percentuale della fase veloce senza influenzare notevolmente la fase lenta. Le due fasi non sono risolvibili a pH elevato. La cinetica della combinazione di CO è molto simile a quella dell'Hb A eccetto che le fasi "veloce" e "lenta" erano evidenti a lunghezze d'onda vicine al punto isobestico deossi-CO. Suggeriamo che le differenze funzionali tra le catene alfa e beta siano migliorate in Hb Deer Lodge. Dopo la fotolisi flash del derivato della CO, la percentuale di materiale a reazione rapida era leggermente maggiore per Hb Deer Lodge che per Hb A. Ciò può implicare una tendenza leggermente maggiore a dissociarsi in subunità ad alta affinità. La sostituzione dell'arginina con l'istidina a beta 2 si traduce quindi in una macromolecola le cui proprietà di legame al ligando sono significativamente alterate, le differenze primarie sono espresse a pH elevato dove Hb Deer Lodge lega gli anioni più fortemente di Hb A. Le proprietà di Hb Deer Lodge sono rispetto a quelli di altre varianti dell'emoglobina con sostituzioni ai residui coinvolti nel legame del 2,3-difosfoglicerato.
Decarbossilazione dell'ossalacetato in piruvato mediante fosfoenolpiruvato carbossichinasi purificata del fegato aviario.La fosfoenolpiruvato carbossichinasi, che è stata isolata dai mitocondri del fegato di pollo in forma essenzialmente omogenea, trasporta la decarbossilazione irreversibile di ossalacetato a piruvato in presenza di quantità catalitiche di GDP o IDP, nonché la decarbossilazione reversibile di ossalacetato a fosfoenolpiruvato in presenza di quantità di substrato di GTP o ITP. Le reazioni di formazione di piruvato e fosfoenolpiruvato sono simili nella loro specificità nucleosidica e sembrano essere svolte dalla stessa proteina. Tuttavia, le due attività variano notevolmente nella loro risposta agli ioni metallici aggiunti e ai reagenti sulfidrilici. La formazione del fosfoenolpiruvato è completamente dipendente dalla presenza di uno ione metallico bivalente, con Mn2+ il specie più efficaci Questa reazione è anche stimolata da reagenti sulfidrilici come il 2-mercaptoetanolo. la reazione di formazione del piruvato è fortemente inibita da ioni metallici bivalenti, incluso Mn2+, e anche da moderate concentrazioni di reagenti sulfidrilici. Queste osservazioni e la dimostrazione che l'attività simile alla piruvato chinasi è molto bassa o assente rendono improbabile che la formazione del piruvato proceda attraverso il fosfoenolpiruvato come intermedio. Sebbene la reazione di formazione del piruvato sia inibita da ioni metallici aggiunti, la reazione è anche inibita da agenti chelanti dei metalli come 8-idrossichinolina e o-fenantrolina, suggerendo che la reazione dipende dalla presenza di uno ione metallico. Non è stato possibile, tuttavia, dimostrare che l'enzima sia una metalloproteina.
Il recettore NSILA-s nelle membrane plasmatiche del fegato. Caratterizzazione e confronto con il recettore dell'insulina.NSILA-s (attività insulino-simile non soppressibile, solubile) in acido etanolo) è un peptide sierico che ha attività simili all'insulina e di promozione della crescita. Abbiamo dimostrato in precedenza che le membrane plasmatiche del fegato possiedono recettori separati per NSILA-s e insulina e abbiamo caratterizzato in dettaglio il recettore dell'insulina. Nel presente studio abbiamo hanno caratterizzato le proprietà e la specificità del recettore NSILA-s e le hanno confrontate con quelle del recettore dell'insulina nello stesso tessuto. Sia 125I-NSILA-s che 125I-insulina si legano rapidamente e reversibilmente ai loro recettori nelle membrane epatiche; Il legame s si verifica a 20 gradi mentre il legame massimo dell'insulina è visto a 1-4 gradi. Il pH ottimale per il legame NSILA-s è ampio (da 6,0 a 8,0), in contrasto con il pH ottimale molto acuto (da 7,5 a 8,0) per il legame con l'insulina Entrambi i recettori mostrano un alto grado di s specificità. Con il recettore dell'insulina, gli NSILA-s e gli analoghi dell'insulina competono per il legame in proporzione alla loro potenza insulino-simile: insulina maggiore della proinsulina maggiore di NSILA-s. Con il recettore NSILA-s, NSILA-s è più potente e l'ordine è invertito: NSILA-s maggiore della proinsulina maggiore dell'insulina. Inoltre, sei preparazioni di NSILA-s che variavano di 70 volte nell'attività biologica gareggiavano per il legame 125I-NSILA-s in ordine di potenza. Gli NSILA che erano stati inattivati biologicamente dalla riduzione e dall'aminoetilazione e dall'ormone della crescita erano meno di 1/100.000 potenti quanto la preparazione di NSILA più purificata. Preparazioni purificate di fattore di crescita dei fibroblasti, fattore di crescita epidermico, fattore di crescita nervoso e somatomedine B e C erano meno dell'1% efficaci quanto gli NSILA nel competere per i 125I-NSILA, suggerendo che questi fattori agiscono attraverso altri recettori. Al contrario, la somatomedina A era attiva per il 10% quanto gli NSILA-s e l'attività di stimolazione della moltiplicazione era pienamente attiva quanto gli NSILA-s nel competere per il recettore NSILA-s. L'analisi dei dati suggerisce che ci sono circa 50 volte più recettori dell'insulina rispetto ai recettori NSILA-s per cellula epatica, mentre l'apparente affinità dei recettori NSILA-s è leggermente superiore a quella del recettore dell'insulina.
Uso del 5-deazaFAD per studiare il trasferimento di idrogeno nella reazione della D-aminoacido ossidasi.L'apoproteina della D-aminoacido ossidasi del rene di maiale era ricostituito con 5-deazaflavina adenina dinucleotide (5-deazaFAD) per produrre una proteina che contiene 1,5 mol di 5-deazaFAD/mol di enzima. L'enzima contenente deazaFAD forma complessi con benzoato, 2-ammino benzoato e 4-amminobenzoato che sono sia qualitativamente che quantitativamente simili a quelli osservati con l'enzima nativo. Il complesso con 2-amminobenzoato mostra una nuova banda di assorbimento a lunghezza d'onda lunga caratteristica di un complesso di trasferimento di carica della flavina. L'enzima ricostituito non mostra alcuna attività quando testato dall'ossidazione della D-alanina. Tuttavia, il cromoforo legato può essere ridotto da alanina, fenilalanina, prolina, metionina e valina, ma non da glutammato o aspartato, indicando che l'enzima deazaFAD mantiene la specificità di substrato dell'enzima nativo. La riduzione dell'enzima da parte della D-alanina mostra un 1,6- piega effetto isotopo di deuterio. La riossidazione dell'enzima ridotto si è verificata in presenza di piruvato più ammoniaca, ma non con solo piruvato o solo ammoniaca. il beta-fenilpiruvato e l'alfa-chetobutirrato, ma non l'alfa-chetoglutarato, potrebbero sostituire il piruvato. È stato riscontrato che l'enzima ridotto isolato in seguito alla reazione con [alfa-3H]alanina contiene 0,5 moli di trizio/mole di deazaFADH2. Dopo la denaturazione dell'enzima marcato con trizio, la radioattività è stata identificata come deazaFADH2. La reazione dell'enzima marcato con trizio ridotto con piruvato più ammoniaca prima della denaturazione produce [alfa-3H]alanina e deazaFAD non marcato. Questi risultati suggeriscono che la riduzione e la riossidazione del deazaFAD legato all'enzima implica il trasferimento stereo-specifico dell'idrogeno alfa dal substrato al deazaFAD.
Studi strutturali di due glicopeptidi di ovalbumina in relazione alla specificità dell'endo-beta-N-acetilglucosaminidasi.Eterogeneità dei due glicopeptidi di ovalbumina, (Uomo) 5(GlcNAc)2Asn e (Man)6(GlcNAc)2Asn, sono stati rilevati mediante elettroforesi su carta borato di alcoli oligosaccaridi ottenuti dai glicopeptidi mediante digestione endo-beta-N-acetilglucosaminidasi H e riduzione di NaB3H4. gli oligosaccaridi sono stati determinati dalla combinazione di analisi di metilazione, acetolisi e digestione con alfa-mannosidasi. In base ai risultati, sono state chiarite le strutture intere dei componenti principali di (Man)5(GlcNAc)2Asn e (Man)6(GlcNAc)2Asn come Manalpha1 porta a 6[Manalpha1 porta a 3]-Manalpha1 porta a 6[Manalpha1 porta a 3[Manbeta1 porta a 4GlcNAcbeta1 porta a 4GlcNAc porta ad Asn e Manalpha1 porta a 6[Manalpha1 porta a 3]Manalpha1 porta a 6[Manalpha1 porta a 2Manalpha1 porta a 3]Manbeta1 porta a 4GlcN Acbeta1 porta a GlcNAc porta ad Asn, rispettivamente. Poiché l'endo-beta-N-acetilglucosamini dasi D idrolizza (Man)5(GlcNAc)2Asn ma non (Man)6(GlcNAc)2Asn, la presenza del residuo alfa-mannosile non sostituito legato alla posizione C-3 del mannosio terminale di Manbeta1 porta a 4GlcNAcbeta1 porta a 4 GlcNAcAsn core deve essere essenziale per l'azione dell'enzima.
Studi sulle proteine leganti l'ormone tiroideo. I. La struttura della subunità della globulina legante la tiroxina umana e la sua interazione con i ligandi.globulina legante la tiroxina è stato isolato dal plasma umano mediante frazionamento del solfato di ammonio, separazioni cromatografiche su dietilamminoetil-Sephadex, cromatografia su gel e due diverse procedure elettroforetiche. Il prodotto altamente purificato era omogeneo quando sottoposto a elettroforesi su gel di poliacrilammide, analisi di ultracentrifugazione e determinazioni immunochimiche. Il peso molecolare medio ponderale come determinato dalle ultracentrifugazioni di equilibrio di sedimentazione era 54.000 e dai dati di diffusione di sedimentazione 55.000. Le analisi degli amminoacidi hanno indicato un minimo di 110 residui di amminoacidi per molecola. Determinando il minimo nella curva per la frazione di deviazione massima dalle analisi degli amminoacidi è stato trovato che il peso molecolare minimo per il polipeptide era 12.200. Le analisi dei carboidrati de hanno mostrato la presenza di quantità equimolari di amnosio, galattosio e glucosamina, e la quota di carboidrati costituiva il 7,5% del peso totale. Le analisi degli aminoacidi hanno suggerito che la globulina legante la tiroxina è composta da 4 subunità. Le determinazioni del peso molecolare mediante cromatografia su gel in guanidina cloridrato 6 M hanno indicato la presenza di tre specie di globuline con pesi molecolari apparenti rispettivamente di 52.000, 25.000 e 13.500. Lo stoccaggio prolungato in guanidina cloridrato ha promosso una resa superiore al 60% delle specie monomeriche. Inoltre, è stata isolata una semimolecola di globulina legante la tiroxina che si è dimostrata costituita da due catene polipeptidiche di peso molecolare simile...
attività di sn-glicerolo-3-fosfato aciltransferasi in preparazioni di particolato da cellule anaerobiche di crescita leggera di Rhodopseudomonas spheroides. Coinvolgimento di derivati acil tiolesteri della proteina trasportatrice acilica nella sintesi di lipidi complessi.Preparati particolati grezzi ottenuti da cellule anaerobiche di Rhodopseudomonas spheroides cresciute alla luce hanno dimostrato di possedere un livello significativo di attività della sn-glicerolo-3-fosfato aciltransferasi (EC 2.3.1.15). In Contrariamente all'enzima di Escherichia coli, l'R. spheroides glicerofosfato aciltransferasi ha un'elevata specificità per i derivati acil tiolestere della proteina trasportatrice acilica (ACP) come donatori di acil per la reazione. I derivati CoA) sono impiegati come substrato acilico Con l'oleil-ACP come substrato, l'attività enzimatica massima è stata osservata a 40 gradi, in un ampio intervallo di pH (da 6,0 a 8,5) e non ha richiesto un catione metallico bivalente. La presenza di ditiotreitolo ha stimolato l'attività enzimatica dal 15 al 20%. Quando l'oleil-ACP o il palmitil-ACP è stato impiegato come unico donatore di gruppi acilici, i principali prodotti recuperabili dalle miscele di reazione erano l'acido lisofosfatidico, l'acido fosfatidico e il monogliceride. Althouh oleyl-ACP e palmityl-ACP hanno fornito velocità massime comparabili nell'acilazione iniziale del glicerofosfato, la formazione di acido fosfatidico si è verificata preferibilmente con il derivato acil-ACP insaturo.
Trasporto ionico e controllo respiratorio in vescicole formate da nicotinammide adenina dinucleotide coenzima Q reduttasi e fosfolipidi.NADH-coenzima Q reduttasi dai mitocondri del cuore bovino ( complesso I) è stato incorporato nelle vescicole fosfolipidiche mediante la procedura di dialisi colata. Sono state richieste miscele di fosfatidilcolina purificata e fosfatidiletanolammina. L'ossidazione di NADH da parte del coenzima Q1 catalizzata dalle vescicole ricostituite è stata accoppiata a traslocazione protonica, diretta verso l'interno, con un maggiore rapporto H+/2e di 1.4. Esperimenti simili che misurano la traslocazione protonica nelle particelle subcondriali hanno dato un rapporto H+/2e di 1.8. La traslocazione protonica in entrambi i sistemi non è stata osservata in presenza di agenti disaccoppianti ed era in aggiunta all'assorbimento netto di protoni dalla riduzione del coenzima Q1 da NADH. Il trasferimento di elettroni nelle vescicole ricostituite ha anche causato l'assorbimento dell'anione permeante tetrafenilboro. Il tasso di elettrone tr risposta da parte delle vescicole ricostituite è stata stimolata circa 3 volte da disaccoppiatori o da valinomicina più nigericina e ioni K+. I risultati indicano che l'accoppiamento energetico può essere osservato con la NADH-coenzima Q reduttasi isolata se il complesso enzimatico è adeguatamente incorporato in una vescicola fosfolipidica.
Ricostituzione del trasporto ionico e controllo respiratorio in vescicole formate da coenzima Q-citocromo c reduttasi e fosfolipidi ridotti.Coenzima Q-citocromo c riduttasi ridotto da i mitocondri del cuore bovino (complesso III) sono stati incorporati nelle vescicole fosfolipidiche mediante la procedura di dialisi colata. Possono essere utilizzati fosfolipidi di soia o miscele di fosfatidilcolina purificata, fosfatidiletanolammina e cardiolipina. L'ossidazione del coenzima Q2 ridotto da parte dei vescicoli citoossidati ha mostrato in seguito a fenomeni di accoppiamento energetico. 1. I protoni sono stati traslocati verso l'esterno con un rapporto di accoppiamento, H+/2e, di 1,9 +/- 0,2 Misurazioni con mitocondri in condizioni simili hanno mostrato un rapporto H+/2e di 1,8. presenza di agenti disaccoppianti ed era in aggiunta all'acidificazione netta del mezzo dalla reazione di ossidazione complessiva 2. Gli ioni di potassio sono stati assorbiti dai ves ricostituiti ghiaccioli in presenza di valinomicina in una reazione accoppiata al trasferimento di elettroni. Il rapporto di accoppiamento per l'assorbimento di K+, K+/2e, era 2,0 nelle vescicole e circa 1,5 nei mitocondri. 3. La velocità di ossidazione del coenzima Q2 ridotto da parte delle vescicole ricostituite è stata stimolata fino a 10 volte da disaccoppiatori o da valinomicina più nigericina e ioni K+. L'aggiunta della sola valinomicina in un mezzo K+ ha causato una stimolazione transitoria del trasferimento di elettroni. I risultati indicano che l'accoppiamento energetico può essere osservato con il coenzima Q-citocromo c reduttasi ridotto isolato se il complesso enzimatico è adeguatamente incorporato in una vescicola fosfolipidica.
Effetti dell'elettrolita forte sull'attività della sialidasi di Clostridium perfringens verso sialyllactose e sialoglycolipids.La sialidasi di Clostridium perfringens è stata purificata mediante cromatografia di affinità. Proprietà cinetiche del l'enzima è stato esaminato con sialyllactose e con sialoglycolipidi misti (gangliosidi) come substrati. Con quest'ultimo substrato in 0,01 M Tris-acete in assenza di elettrolita forte, il pH ottimale per l'attività enzimatica era 6,8. Aggiunta di elettrolita forte (da 0,01 a 0,10 M Nac1) al mezzo di reazione ha causato uno spostamento acido e un allargamento del pH ottimale, l'attività enzimatica a pH 5,8 è aumentata di circa 2,5 volte, è stata anche osservata una concomitante perdita di attività a pH 6,8 L'alterazione dell'attività enzimatica causata da un forte elettrolita dipendevano dai cambiamenti di Vmax. Km è rimasto quasi invariato. Pertanto, una transizione reversibile dell'enzima da una forma relativamente inattiva a una forma altamente attiva si è verificata come functi su una forte concentrazione di elettroliti. La determinazione dei valori di pK dei gruppi funzionali attivi della sialidasi di C. perfringens ha rivelato che gli effetti dell'elettrolita forte sono stati esercitati sul gruppo pKa dell'enzima. Un forte elettrolita sembrava proteggere le interazioni elettrostatiche sfavorevoli tra le micelle di sialoglicopidi polianionici e la molecola enzimatica, proteggendo così il gruppo pKa dall'inattivazione. In confronto con gli effetti dell'elettrolita forte sull'attività enzimatica verso il substrato sialoglycolipid, quelli osservati con il substrato monovalente, sialyllactose, erano minori. Nel loro insieme, questi risultati indicano che l'ambiente ionico può controllare efficacemente l'attività e la relativa specificità di substrato della sialidasi di C. perfringens a un dato pH. Inoltre, spiegano il basso pH ottimale e i profili di pH distorti precedentemente riportati per l'attività enzimatica verso substrati ad alto peso molecolare.
La forma attiva del citocromo P-450 dai mitocondri adrenocorticali bovini.Il citocromo P-450 dai mitocondri corticosurrenalici bovini esiste in tre forme di peso molecolare: 850.000 (proteina 16), di metà (proteina 8), e di un quarto di questo valore (proteina 4) Le forme dell'enzima sono denominate in base al numero di subunità e sembrano tutte attive nella conversione del colesterolo a 3beta-idrossi-5-pregnen-20-one (scissione della catena laterale) (Shikita, M. e Hall, PF (1973) J. Biol. Chem. 248, 5606). Per determinare se tutte e tre le forme sono attive a i loro pesi molecolari caratteristici, i tre citocromi sono stati ciascuno stratificato su gradienti di densità di saccarosio separati e centrifugati a 49.000 rpm per 60 min; i gradienti contenevano tutti i fattori necessari per la scissione della catena laterale incluso uno dei seguenti substrati: colesterolo, 20S-idrossicolesterolo e 20S,22R-diidrossicolesterolo Indipendentemente dalla forma di P-450 a strati sul g radiosa e indipendentemente dal substrato, l'attività enzimatica (scissione della catena laterale) è stata osservata solo in frazioni corrispondenti a un coefficiente di sedimentazione da 20 a 22 S che è quello per la proteina 16. Nessuna attività è stata osservata a valori di S corrispondenti alla proteina 8 o alla proteina 4. Questi risultati indicano che la forma attiva del citocromo P-450 dai mitocondri surrenalici è quella contenente 16 subunità, cioè la forma in cui il citocromo è normalmente isolato dai mitocondri surrenalici. Forme costituite da otto e quattro subunità che possono essere preparate dalla proteina 16 diventano attive solo formando la proteina 16, almeno in un mezzo acquoso in vitro.
Metabolismo della mucosa gastrica del cane. Livelli di nucleotidi nelle cellule parietali.I livelli di nucleotidi di adenina e piridina e quelli di fosfato, fosfocreatina, lattato, piruvato , beta-idrossibutirrato, acetoacetato, glucosio e glicogeno sono stati misurati in sezioni di cellule parietali e mucose istologicamente definite di biopsie di mucosa gastrica di cane a riposo e in vari stati secretori. Come risultato della stimolazione della secrezione, non sembrava esserci alcun cambiamento nei livelli di adenina nucleotide, o fosfocreatina, ma c'è stato un aumento del fosfato inorganico e una caduta del potenziale di fosforilazione. Tuttavia, c'è stato un marcato aumento di NADH, ma nessun cambiamento di NADPH con l'inizio della secrezione acida. L'aumento del lattato a rapporto piruvato ha mostrato che l'aumento del livello di NADH si è verificato nel citoplasma e questi dati sono discussi con riferimento alla variazione del pH cellulare.
Dipendenza da ioni metallici del legame della triiodotironina da parte delle proteine del citosol dei tessuti dei girini di rana toro.Il legame della triiodotironina da parte di Rana catesbeiana girino pinna caudale, muscolo della coda È stato studiato il citosol del fegato, del rene e del fegato utilizzando carbone rivestito di destrano per separare l'ormone legato da quello libero. Una dipendenza dagli ioni metallici è stata suggerita dal fatto che l'EDTA ha ridotto il legame della triiodotironina dall'80 al 90% nel citosol della pinna caudale e del muscolo della coda. il legame nel rene o nel fegato era inferiore, dal 40 al 50%. Questa inibizione potrebbe essere ripristinata aggiungendo un eccesso di cationi bivalenti con un ordine di potenza di Mn2+ maggiore di Ca2+ congruente a Co2+ maggiore di Sr2+ maggiore di Ba2+ maggiore di Mg2+. , ad esempio o-fenantrolina, 8-idrossichinolina e glicole etilenico bis(beta-amminoetiletere)-N,N\'-tetraacetato hanno anche diminuito il legame della triiodotironina, mentre citrato, ossalato, imidazolo e glicina non hanno avuto effetto. La capacità di rilevamento del citosol della pinna caudale è stata ridotta dal trattamento con EDTA e dalla dialisi contro tampone. Ca2+ nell'intervallo da 1 a 10 mM e Mn2+ a 1 mM potrebbero riportare il legame a livelli normali. Mn2+ più alto ha aumentato il legame del 70% rispetto al normale o ai livelli di Ca2+ ripristinati. L'attività di legame del citosol della triiodotironina era non dializzabile, termolabile. pH-dipendente, digeribile dalla pronasi, ma non influenzato dall'incubazione con tripsina, RNasi e DNasi, suggerendo che i siti di legame del citosol siano proteine acide. Analisi Scatchard del legame della triiodotironina dal citosol di diversi tessuti, ha rivelato Kassoc di 7,1 x 10(6) M(-1), 11,6 x 10(6) M(-1), 3,6 X 10(6) M(-1) e 68,0 x 10(6) M(-1) rispettivamente per pinna caudale, muscolo della coda, rene e citosol epatico. Le corrispondenti capacità di legame massime in picomoli per mg di proteina citosol grezza in questi quattro tessuti erano rispettivamente 10,4, 0,86, 1,3 e 0,04.
Studi sull'inibitore della tripsina nell'orzo. I. Purificazione e alcune proprietà.Per chiarire le proprietà e le funzioni di un inibitore della tripsina dell'orzo giapponese a confronto con l'inibitore dell'orzo Pirkka, è stato isolato un inibitore dall'orzo Hordeum distichum L var. emend Lamark mediante estrazione con NaCl 1%, frazionamento di solfato di ammonio e cromatografia ripetuta su DEAE-cellulosa e CM-cellulosa. La preparazione purificata finale dell'inibitore è risultato omogeneo sia dall'analisi cromatografica che elettroforetica. L'inibitore era termostabile ed era stabile nell'ampio intervallo di pH da 2 a 11. Nessuna inibizione è stata osservata da ioni di metalli pesanti e molti reagenti a 10(-2) M, tranne che Il p-cloromercuribenzoato ha causato una perdita di attività del 69%. L'inibitore è stato sottoposto a focalizzazione isoelettrica a pH 7,51 e il suo peso molecolare è stato calcolato pari a 14.200 +/- 900 mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide in presenza di sodio d odecil solfato. L'apparente costante di dissociazione per il complesso tra l'inibitore e la tripsina[EC 3.4.21.4] era 1,64 X 10(-7)M con caseina come substrato. Un microgrammo di inibitore purificato ha inibito 1,5 tazza di tripsina pura nell'idrolisi dell'alfa-N-benzoil-DL-arginina-p-nitroanilide. Mediante modifica chimica dei residui di arginina nell'inibitore con 1,2-cicloesandione, è stato dimostrato che l'inibitore è un inibitore dell'arginina. L'inibitore conteneva relativamente molti amminoacidi basici e poche mezze cistina rispetto all'inibitore della tripsina d'orzo di Pirkka.
Etichettatura di affinità della D-amminoacido ossidasi con un substrato acetilenico.Il substrato acetilenico, acido D-2-amino-4-pentinoico (D -propargilglicina), è stata deaminata ossidativamente dalla D-amminoacido ossidasi [EC 1.4.3.3] del rene di maiale, con conseguente inattivazione dell'enzima. La flavina che è stata estratta con metanolo caldo dall'enzima inattivato era identica alla FAD autentica mediante strato sottile cromatografia e dicroismo circolare. Lo spettro di eccitazione di emissione a 520 nm della flavina rilasciata era molto simile allo spettro di assorbimento del FAD ossidato. La flavina rilasciata era ridotta dal boroidruro di potassio. L'apoenzima preparato dopo il trattamento con propargilglicina non mostrava D-ammino ripristinato attività ossidasi acida all'aggiunta di FAD esogeno. Lo spettro di assorbimento di questo apoenzima inattivato ha mostrato picchi di assorbimento a 279 e 317 nm e una spalla a circa 290 nm. Questi risultati indicano fortemente che la reazione di inattivazione è un'affinità dinamica marcatura con D-propargilglicina che produce l'inattivazione irreversibile dell'enzima mediante una modifica covalente di un residuo amminoacidico nel sito attivo.
La ricombinazione della dineina ciliare di Tetrahymena con le fibre esterne.La ricombinazione della dineina ciliare di Tetrahymena pyriformis con le fibre esterne è stata studiata mediante turbidimetria, co- analisi di sedimentazione e microscopia elettronica. Come riportato da Gibbons, la dineina 30S potrebbe ricombinarsi con le fibre esterne, mentre la dineina 14S lo ha fatto in misura minore. A pH acido, tuttavia, la maggior parte della dineina 14S è stata anche rimbalzata sulle fibre esterne. Quando un eccesso di frazione di dineina grezza è stato aggiunto alla frazione di fibra esterna a pH 8,2, osservazioni al microscopio elettronico hanno mostrato che i microtubuli del doppietto esterno erano decorati non solo con braccia ma anche con altri materiali densi di elettroni. è stato miscelato con le fibre esterne in una quantità appropriata, solo le braccia sono state ricostituite nelle posizioni regolari delle subfibre A. L'ATP ha avuto un effetto inibitorio sulla ricombinazione della dineina con le fibre esterne.