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Un modello per l'origine di protocelle stabili in un primitivo oceano alcalino.Quando una miscela dei diciotto amminoacidi proteici viene opportunamente riscaldata in ambiente secco stato con sali di acqua di mare, si ottiene un copoliamminoacido. Una frazione di questo polimero si trova, mediante focalizzazione isoelettrica, costituita da una miscela di proteinoidi acidi e basici, ciascuno di eterogeneità nettamente limitata. Quando una frazione del proteinoide dell'acqua di mare viene dissolta in acqua calda acqua, e la soluzione viene raffreddata, si ottengono microsfere proteinoidi che hanno proprietà comuni ai tipi più semplici, ma anche stabili a valori di pH fino a 9, in comune con le microsfere preparate mescolando proteinoidi acidi e basici. Questi processi costituiscono quindi un semplice modello per l'origine di una protocella stabile in un primitivo oceano alcalino.
[L'effetto dei substrati ossidabili e dell'ATP sulla sensibilità di alcune funzioni dipendenti dall'energia delle particelle sottoposte a fosfolipasi A, C e D].La è stato studiato l'effetto di NADH, succinato e ATP sulla sensibilità di un certo numero di funzioni energia-dipendenti delle particelle subcondriali delle fosfolipasi A, C e D. È stato dimostrato che nelle condizioni di ossidazione di NADH e succinato da parte dell'ossigeno e anche dell'idrolisi dell'ATP, accelera la diminuzione dell'attività fosforilante delle particelle sotto l'azione delle fosfolipasi C e D. Tale accelerazione non è stata osservata con la fosfolipasi A. ) e la reazione della transidrogenasi ATP-dipendente i risultati si sono rivelati differenti. I substrati ossidabili e l'ATP hanno promosso il mantenimento di queste funzioni in presenza di fosfolipasi A, ma non ne hanno ritardato la soppressione da parte di pho sfolipasi C e D. Gli effetti di NADH, succinato e ATP sulla sensibilità delle diverse funzioni dipendenti dall'energia delle particelle subcondriali alle fosfolipasi A, C e D potrebbero essere rimossi dall'agente disaccoppiante carbonil cianuro-m-clorofenil idrazone. Si conclude che gli effetti rivelati sono associati ad un aumento della sensibilità dei siti di accoppiamento II PAND/OR III alle fosfolipasi C e D e ad una diminuzione della sensibilità dei siti I e IV alla fosfolipasi A all'eccitazione delle particelle subcondriali.
[Attività della polinucleotide fosforilasi nella frazione ribosomiale del fegato di ratto].Viene descritto un metodo per isolare la polinucleotidefosforilasi (PNPase) contenente la frazione poliribosomiale dal fegato di ratto La PNPasi si lega all'RNA in poliribosomi con deboli legami elettrostatici che sono facilmente scomposti in un mezzo alcalino debole con forza ionica superiore a 0,1 ADP, PIL, UDP e CDP marcati con beta-22P si trovano tra i prodotti di endogeni Degradazione dell'RNA nella frazione di poliribosomi totali in presenza di 32P-ortofosfato Si osserva un notevole cambiamento nella composizione in basi dell'RNA degradato da PNP a diversi tempi di incubazione dei poliribosomi totali con 32P-ortofosfato: G+C//A+U rapporto aumentato da 2,3 a 3,1 e rapporto purine/pirimidine-da 0,47 a 1,06 con l'aumento del tempo di incubazione Attività specifica di PNP in frazioni ribosomiali ottenute sotto ultracentrifugazione di poliribosomi totali in saccarosio densità gra diente (0,3-1,0 M) è aumentato nella direzione dalla frazione di polisomi pesanti a trimeri e dimeri e poi è sceso nella regione dei monomeri (particelle 80 S). I dati ottenuti non danno la possibilità di determinare il tipo di RNA legato al PNP nei poliribomi del fegato di ratto.
[Proprietà fluorescenti dell'istidina decarbossilasi da Micrococcus sp. n].Una dipendenza dei parametri di fluorescenza dell'istidinadecarbossilasi (HDC) da Micrococcuc sp. n. sui valori di pH viene studiato. L'HDS nativo ha una posizione massima a onde corte (325 nm) e una piccola semiampiezza dello spettro di fluorescenza (48 nm). La variazione nella resa quantica della fluorescenza enzimatica è stata parallela alla variazione della attività enzimatica I residui di triptofano dell'HDC nativo si trovano nella regione idrofobica della globula enzimatica La dipendenza dei parametri di fluorescenza dell'HDC dai valori di pH in 8 M di urea era simile a quella del triptofano libero Uno studio comparativo dei parametri di fluorescenza dell'HDC e dei suoi inibitori complessi con estere metilico di istidina (MEH), idrossilammina e p-cloromercurio bensoato Viene discusso l'effetto dell'interazione di HDC con inibitori sui parametri di fluorescenza dell'enzima. Non sono state trovate differenze negli spettri infrarossi di HDC e il suo complesso inibitorio con MEH.
[Molteplici forme di fosfofruttochinasi del muscolo di coniglio rivelate mediante eluizione specifica].La procedura modificata per la purificazione della fosfofruttochinasi del muscolo scheletrico di coniglio (PFK) viene eseguita utilizzando il metodo di eluizione specifica da DEAE-cellulosa in tris-EDTA-fosfato 0,1 M pH 8,0 con citrato 10 mM. Con quest'ultima procedura il PFK può essere risolto nelle frazioni A, B e C che vengono eluite in modo specifico, con tampone 0,3 M e con 1,5 M NaCl rispettivamente. La ricromatografia di ciascuna frazione rivela la loro interconvertibilità. I preparati sono caratterizzati da elettroforesi su disco e velocità di sedimentazione. I risultati degli esperimenti di formalinizzazione dimostrano che elevate concentrazioni di formaldeide dissociano PFK u al componente 5,3 S. La presenza del 19.3 Il componente S nelle preparazioni formalizzate evidenzia contro la possibilità che il componente intermedio, presentato ai modelli schlieren di PFK a pH 8.0, sia un artefatto di sovrapposizione. I profili complessi della distribuzione proteica osservati in diversi esperimenti di trasporto sono discussi dal punto di vista del lento equilibrio di oligomeri e conformeri caratteristici del PFK nell'intervallo di pH da 6 a 9.
[Isoenzimi della fosforilasi dai muscoli scheletrici dei ciclostomi e dei pesci disossati].Separazione e purificazione parziale degli isoenzimi della fosforilasi B dai muscoli scheletrici dei è stata effettuata la lampreda (Lampetra) e la carpa (Cyprinus carpio) L'isoenzima I è stato adsorbito su cellulosa DEAE ed eluito da KCl, l'isoenzima II non è stato adsorbito su cellulosa DEAE Sono state determinate alcune caratteristiche cinetiche della fosforilasi del sangue freddo, ad es. valori per glucosio-1-fosfato, glicogeno e AMP Ki per glucosio-6-fosfato stabilità alla denaturazione (riscaldamento ed effetto dell'urea) e pH ottimale È stato osservato che nel corso dell'evoluzione dei vertebrati i valori di Km per i substrati e attivatore allosterico (AMP), nonché l'inibizione da parte del glucosio-6-fosfato hanno mostrato una diminuzione. Gli isoenzimi I e II della fosforilasi B sono stati trovati non identici rispetto ad alcune caratteristiche molecolari, nelle carpe le differenze essendo molto più pronunciate t han in lampreda.
[Altipiani intermedi nella cinetica della reazione catalizzata dalla L-treonina deidratasi biodegradabile da Escherichia coli].È stato dimostrato che per la reazione catalizzata da "biodegradabile" L-treonina deidratasi da ceppi di E. coli K-12 e 980 in tampone fosfato-carbonato 0,5 M, pH 8,4 e pH 9,5, i grafici della velocità di reazione iniziale (v) rispetto alla concentrazione del substrato iniziale ([ S]0 sono caratterizzati da diversi punti di flesso, cioè un plateau intermedio. Il grafico di v rispetto alla concentrazione di attivatore allosterico (AMP) ha forme molto complicate: ci sono diversi punti di flesso, ed anche il massimo a concentrazione di L-treonina pari a 3 -10(2) e 5-10(-2) M. Elevate concentrazioni di AMP inibiscono l'enzima ad alte concentrazioni di substrato La dose ridotta di glutatione non influenza l'enzima e non altera l'effetto attivante dell'AMP Sulla base dei dati ottenuto si propone che il substrato e l'AMP spostino l'eq equilibrio tra più forme enzimatiche oligomeriche che differiscono nell'attività catalitica e nelle manifestazioni cinetiche delle interazioni allosteriche tra i siti di legame AMP attivi e allosterici verso la polimerizzazione. Pertanto, il funzionamento dell'enzima oggetto di studio è discusso nell'ambito del modello di dissociazione degli enzimi regolatori con più forme oligomeriche intermedie.
[Specificità della RNAasi alcalina extracellulare da Penicillium chrysogenum 152A].Specificità della RNAasi alcalina extracellulare cromatograficamente omogenea da Pen. crysogenum 152A su RNA, polinucleotidi sintetici , dinucleosidemonofosfati e nucleoside-2\',3\'-ciclofosfati. L'enzima si trova a rilasciare dall'RNA guanosina-3\'-monofosfato e guanosina-2\',3\'-ciclofosfato. Solo l'acido guanilico è un Nucleotide 3\'-terminale di oligonucleotidi di diversa lunghezza. L'enzima idrolizza facilmente il poli-I e praticamente non divide il poli-G. GpN si è dimostrato un buon substrato per l'RNasi, mentre G maggiore di p idrolizza con una bassa velocità L'RNAasi catalizza la sintesi di GpC (47,7% di resa) e GpU (38,8% di resa). Pertanto, l'RNAasi del Pen. chrysogenum 152A è considerata guanil-RNAasi.
[Alcune proprietà fisiche e chimiche della serinesulfidrasi dal fegato di pollo].Viene descritta una procedura migliorata di purificazione della serinesulfidrasi dal fegato di pollo. Preparazioni di enzimi (purificazione di 700 volte con la resa del 40% dall'attività totale) sono stati ottenuti omogenei sull'elettroforesi su gel di poliacrilammide. Il peso molecolare della serinesulfidrasi è 90.000;1 mole di enzima contiene 2 moli di piridossalfosfato e consiste apparentemente di 2 subunità. Amminoacido viene studiata la composizione dell'enzima. Lo spettro di assorbimento della serinesulfidrasi ha un massimo a 430 nm che è caratteristico di numerosi enzimi piridossal-P. La posizione di questo massimo non dipende dal pH (entro il suo range 6--10) e dalla presenza di L-serina, un substrato enzimatico primario Un cambiamento essenziale nello spettro di assorbimento dell'enzima è stato osservato in presenza di alcuni composti tiolici--DL-omocisteina, beta-mercaptoetanolo e glutatione (cosubstra tes della reazione) e L-cisteina (un substrato di reazione primario). Si suggerisce che questo cambiamento nello spettro sia dovuto all'azione dei composti SH sulla conformazione dell'enzima prima dell'inizio della reazione enzimatica o nelle sue fasi iniziali.
[Cinetica e meccanismo d'azione della perossidasi di rafano nella reazione di ossidazione dell'acido diossifumarico con ossigeno atmosferico].I dati cinetici quantitativi sono forniti sull'ossidazione reazione dell'acido diossifumarico (DFA) con l'ossigeno atmosferico in presenza di perossidasi di rafano (HRP) a seconda del pH. Le costanti di attivazione dell'ossidazione con perossido di idrogeno e ioni Mn sono determinate a pH 3.0. Il carattere autocatalitico dell'ossidazione FRA è dimostrato essere dovuto a la formazione di H2O2 e altri composti di tipo idroperossido nella reazione, le conversioni HRP nel sistema DFA--O2 sono studiate mediante spettrofotometria. Viene proposto un meccanismo di iniziazione dei radicali liberi nel sistema HRP--DFA--O2.
[Modifica dell'attività della ribonucleasi pancreatica in complessi con polianioni].Carbossimetilcellulosa, carbossimetilchitina, sulfoetilcellulosa e destrano solfato interagiscono con la ribonucleasi pancreatica. In confronto alla ribonucleasi attività l'attività dei complessi formati cambia in modo diverso nelle fasi di transesterificazione e idrolisi e in ogni fase l'effetto dei polimeri sull'attività della ribonucleasi differisce essenzialmente L'uso del complesso ribonucleasi-destrano solfato nella reazione di uridilil-(3\' porta a 5\') - la sintesi della citidina ha dimostrato che l'attività di sintesi proteica è completamente mantenuta quando l'attività idrolitica è stata considerevolmente soppressa.
[Disolfuro reduttasi della proteina del grano].La proteindisolfuro reduttasi viene isolata e parzialmente purificata dalle piantine di frumento e vengono studiate alcune proprietà dell'enzima: il pH ottimale è 7,4; temperatura ottimale - 37 gradi C; Km = 2,6-10(-4)M per il substrato (albumina di frumento); Km = 7,5-10(-5) M per il coenzima (NADP-H). L'enzima è specifico per NADP-H e non è attivo in presenza di NAD-H. L'attività massima della proteindisolfuro reduttasi viene sviluppata in condizioni anaerobiche. Si elabora una tecnica di stima dell'attività della proteindisolfuro reduttasi utilizzando come substrato l'albumina di frumento. L'attività enzimatica diminuisce regolarmente durante la maturazione del mais e aumenta durante la germinazione. È accompagnato dal rispettivo aumento o diminuzione della quantità di legami disolfuro nella proteina del glutine e da cambiamenti delle caratteristiche fisico-chimiche del glutine. L'incubazione del glutine con il preparato enzimatico influisce sulle proprietà reologiche di glutine (diventa più debole) e diminuisce la viscosità del glutine della soluzione di glutine.
[Effetto del gruppo prostetico della perossidasi di rafano sulla stabilità enzimatica].Costanti del tasso di inattivazione della perossidasi di rafano (HRP) apo-HRP e apo- La HRP-protoporfirina (PP) è stimata nell'intervallo di pH 2,8-12,8 e 25 gradi C. Nei casi di HRP e apo-HRP vengono rilevati due gruppi ionogenici (acido e alcalino), responsabili della conformazione stabile dell'HRP. l'intervallo di pH 5-10 supera di 30 volte quello dell'apo-HRP, mentre la stabilità del complesso apo-HRP-PP è simile a quella dell'apo-HRP I dati ottenuti mostrano che la formazione del complesso dell'apo-HRP con PP, un analogo del gruppo prostetico privo di atomo di Fe centrale, praticamente non influisce sulla stabilità del globulo proteico HRP a pH 5-10, ma apo-HRP significativamente stabilizzato ai valori di pH estremi La complessa formazione di apo-HRP con gruppo prostetico attivo - emina - risultati sulla conformazione stabile della globula proteica HRP, che suggerisce un ruolo determinante dello ione Fe - complesso porfirinico (emina) sul supporto della struttura HRP stabile.
Studi su un attivatore della (Ca2+ più Mg2+)-ATPasi delle membrane degli eritrociti umani.1. Un attivatore della (Ca2+ più Mg2+) L'ATPasi stimolata presente negli eritrociti umani (membrana) è stata isolata in forma solubile dagli emolisati di queste cellule. La purificazione parziale è stata ottenuta mediante l'uso della cromatografia con carbossimetil-Sephadex. La frazione attivatore risultante non conteneva emoglobina e solo lo 0,3% del totale attività adenilato chinasica della cellula 2. Mentre l'attivatore è stato rilasciato da eritrociti sottoposti ad emolisi in tampone 20 miosm a pH 7,6 o a pH 5,8, solo le membrane preparate a pH 7,6 ne sono state interessate 2. Mentre l'attivatore è stato rilasciato da eritrociti sottoposti ad emolisi in tampone 20 miosm a pH 7,6 o a pH 5,8, solo le membrane preparate a pH 7,6 ne sono state interessate 3. Quando l'attività (Ca2+ più Mg2+)-ATPasi è stata misurata mediante rilascio di 32Pi da (gamma-32P )ATP, eritrociti congelati e s membrane preparate a pH 5,8 ea pH 7,6, hanno espresso valori inferiori a quelli rilevati dal saggio per il rilascio totale di Pi. Quando l'ADP invece dell'ATP è stato utilizzato come substrato, una quantità significativa di Pi è stata rilasciata da questi preparati di eritrociti. Ulteriori studi hanno rivelato (a) la produzione di ATP e AMP dall'ADP con membrane e solo emolisato e (b) lo scambio del fosfato di posizione gamma e B su (gama-32P) ATP in presenza di membrane più emolisati. Queste osservazioni hanno stabilito la presenza di attività adenilato chinasi negli emolisati (senza membrana) e nelle membrane. Supporta ulteriormente la conclusione che il rilascio di Pi dall'ADP da parte degli eritrociti umani (congelati e scongelati) e dalle loro membrane isolate è dovuto alla formazione di ATP da parte dell'adenilato chinasi e all'idrolisi di questo ATP generato da (Ca2+ più Mg2+)-ATPasi. 4. Sono stati inoltre stabiliti i seguenti punti: (a) assenza di un'ADPasi negli eritrociti umani; (b) l'attivatore (Ca2+ più Mg2+)-ATPasi potenzia la scissione solo della posizione gamma dell'ATP e (c) l'attivatore (Ca2+ più Mg2+)-ATPasi non è né adenilato chinasi né emoglobina.
Aminopeptidasi nelle larve di falena. Proprietà e specificità degli enzimi della mobilità elettroforetica intermedia.Il gruppo principale di aminopeptidasi (EC 3.4.11. -) di mobilità elettroforetica intermedia, da larve di Tineola bisselliella, sono state frazionate in sei bande mediante elettroforesi preparativa su gel di poliacrilammide e sono state studiate le proprietà di queste frazioni. risposte a vari inibitori del sito attivo e cationi metallici e le loro specificità verso diciassette substrati di L-ammino-acil-beta-naftilamide I derivati di metionina, leucina, alanina, lisina, arginina e acido glutammico erano quelli più rapidamente idrolizzati. essere vere amminopeptidasi che idrolizzano ammidi, dipeptidi e oligopeptidi di amminoacidi dall'estremità N-terminale.
Endo-arabinanase da Bacillus subtilis F-11.Un arabinanasi è stato purificato dal fluido di coltura di Bacillus subtilis F-11. Il processo è stato segue: salatura mediante (NH4)2SO4, cromatografia ripetuta su idrossiapatite e gel filtrazione su Sepharose-6B. L'enzima purificato si è dimostrato omogeneo mediante elettroforesi su disco. L'enzima è risultato attivo su arabinan e 1,5-arabinan , ma inattivo su fenil alfa-L-arabinofuranoside, p-nitrofenil beta-D-galattopiranoside, arabinoxilano, gomma arabica L'enzima rilascia arabinosio, arabinobiosio, arabinotriosio e oligosaccaridi superiori durante l'idrolisi dell'1,5-arabinano. i prodotti sono risultati arabinosio e arabinobiosio dopo 144 ore di idrolisi.
Inibizione delle beta-galattosidasi e della beta-glucosidasi epatiche umane da parte della n-bromoacetil-beta-D-galattosilamina.N-bromoacetil-beta-D -galattosilamina è un inibitore irreversibile dell'\'acido\' e delle beta-galattosidasi \'neutre\' (beta-D-galattoside galattoidrolasi, EC 3.2.1.23) del fegato umano. L'inattivazione della beta-galattosidasi acida sembra coinvolgere un gruppo con un pKa = 4.5. L'inibizione della beta-galattosidasi neutra si verifica solo al di sopra del pH 8,0. Entrambi gli enzimi sono protetti dall'inibizione dalla presenza di substrati, suggerendo che l'inibitore reagisce con il sito attivo degli enzimi. Altre idrolasi lisosomiali non lo sono inibito dalla N-bromoacetil-beta-D-galattosilamina, ad eccezione della \'neutra\' beta-glucosidasi (beta-D-glucoside glucoidrolasi, EC 3.2.1.21). La dipendenza dal pH dell'inattivazione della beta-glucosidasi neutra è essenzialmente identica a quello della beta-galattosidasi neutra Inibizione della la beta-glucosidasi di questo derivato del galattosio suggerisce che lo stesso enzima può legare glucosidi e galattosidi. Inoltre, sia la beta-galattosidasi neutra che la beta-glucosidasi sono inattivate a 52 gradi C con un'emivita di 7,5 min. La presenza di un singolo enzima con attività sia beta-glucosidasi che beta-galattosidasi è supportata anche da esperimenti con substrato misto.
Purificazione e alcune proprietà di una nuova esoamilasi che produce maltoesaosio da Aerobacter aerogenes.Amilasi che produce maltoesasio (EC 3.2.1. -) è il quarto noto exo-amilasi, i tre precedentemente noti sono glucoamilasi, beta-amilasi e Pseudomonas stutzeri maltotetraose che producono amilasi. L'enzima dopo il rilascio dalle cellule di Aerobacter aerogenes mediante estrazione di 0,1% di sodio laurilsolfato è stato purificato mediante precipitazione di solfato di ammonio, colonna DEAE-Sephadex cromatografia e filtrazione su gel di Sephadex G-100 a 80 volte l'attività originale dell'estratto di sodio laurilsolfato, ha fornito una singola banda sull'elettroforesi del disco e il peso molecolare mediante filtrazione su gel era 54 000. Questa amilasi ha mostrato un'attività massima a 50 gradi C e pH 6,80. L'intervallo di stabilità del pH era relativamente ampio, l'enzima conservava più del 90% della sua attività iniziale nell'intervallo 6,50-9,0. L'80% dell'attività veniva mantenuto dopo 15 minuti a 50 gradi C. Questo enzima produce d maltoesaosio da amido, amilosio e amilopectina mediante eso-attacco, ma non ha agito su alfa o beta-ciclodestrina, pullulano o maltoesaitolo. Anche l'enzima ha agito sulle destrine beta-limite dell'amilopectina e del glicogeno per formare oligosaccaridi ramificati. L'insolita reazione di questo enzima sulla destrina beta-limite è discussa dal punto di vista della stereochimica dei legami 1,4-alfa- e 1,6-alfa-glucosidici. Questa è l'amilasi anomala per la quale è riconosciuto che i legami 1,6-alfa-glucosidici nei substrati possono imitare l'effetto dei legami 1,4-alfa, come precedentemente osservato nelle reazioni di pseudo-innesco della fosforilasi di E. coli.
Glucanases in Schizosaccharomyces. Isolamento e proprietà di una eso-beta-glucanasi dagli estratti cellulari e dal fluido di coltura di Schizosaccharomyces japonicus var. versatilis.( 11 Estratti cellulari e fluidi di coltura extracellulare di specie del genere di lievito Schizosaccharomyces hanno mostrato attività eso-beta-(1 porta a 3)- ed eso-beta-(1 porta a 6)-glucanasi (EC 3.2.1. -). ( 2) Utilizzando una combinazione di Sephadex G-100 e cromatografia DEAE-cellulosa, l'exo-beta-(1 porta a 3)-glucanasi dagli estratti cellulari e dal fluido di coltura di Schizosaccharomyces japonicus var. versatilis sono stati ampiamente purificati. Gli enzimi di entrambi la posizione mostrava una purificazione simile e altre proprietà. (3) Gli enzimi purificati hanno idrolizzato il legame beta-(1 porta a 6)-glucosidico oltre al legame beta-(1 porta a 3). Denaturazione termica, inibizione e studi elettroforetici hanno indicato che entrambe le attività idrolitiche erano proprietà di una singola proteina L'idrolisi di arina e pustola ha seguito la cinetica di Michaelis-Menten. I Km e V per l'idrolisi della laminarina erano 6,25 mg/ml e 350 mumole di glucosio rilasciato/min/mg di proteine, e per il pustolano erano 166 mg/ml e 52 mumole di glucosio rilasciate/min/mg di proteine. (4) All'eso-beta-glucanasi è stato assegnato un peso molecolare di 43 000. (5) L'enzima purificato non è riuscito a idrolizzare le pareti cellulari isolate del lievito di birra o di Schizosaccharomyces pombe o di indurre la formazione di protoplasti da cellule intatte di S. japonicus var. versatilis o Saccharomyces cerevisiae.
Fosfodiesterasi nucleotidica ciclica nel baco da seta. Caratterizzazione della fosfodiesterasi GMP ciclica.L'esistenza della fosfodiesterasi GMP ciclica (EC 3.1.4. -) è stata dimostrata in larva di baco da seta mediante filtrazione su gel dell'omogenato La fosfodiesterasi ciclica GMP è stata separata dalle fosfodiesterasi AMP cicliche mediante cromatografia su colonna su idrossiapatite e Sephadex G-200 L'enzima ha un peso molecolare di circa 260.000 e un pH ottimale di 8,3 e un Km valore di 2 muM. L'enzima è attivato da 5 mM di Mg2+ e 2 mM di Mn2+. L'attività della fosfodiesterasi GMP ciclica è stata fortemente inibita da basse concentrazioni di IMP ciclico ma in misura minore da AMP ciclico anche ad alta concentrazione. era anche inibito dalla caffeina e dalla teofillina.
Isoenzima della fosfolipasi A2 dal pancreas suino. Purificazione e alcune proprietà.Il pancreas suino sintetizza una prefosfolipasi A2 che si presenta in un rapporto 5:95 rispetto al zimogeno più abbondante dello stesso enzima (fosfatide-acilidrolasi; EC 3.1.1.4). Queste due prefosfolipasi potrebbero essere ben separate mediante cromatografia su CM-cellulosa. Sia la forma attiva che quella zimogena dell'isoenzima sono state isolate e purificate. I peptidi di attivazione di entrambe le prefosfolipasi sembravano identiche, mentre gli enzimi attivi mostravano alcune interessanti differenze. Le differenze più evidenti sono state la perdita di un'istidina e di una metionina nell'isoenzima, corrispondenti rispettivamente ai residui 24 e 27, nell'alfa-fosfolipasi A2. La specificità posizionale e stereo di entrambi gli enzimi è la stessa, ma l'attività specifica della beta-fosfolipasi A2 è inferiore Il peso molecolare dell'isoenzima è stato stimato in circa 14 000, mentre l'i i punti soelettrici erano 5,1 e 5,9 rispettivamente per l'isoprecursore e l'isoenzima attivo.
Pirofosfotransferasi a nucleotide purinico da Streptomyces morookaensis, in grado di sintetizzare pppApp e pppGpp.La pirofosfotransferasi a nucleotide purinico è stata purificata ad apparente omogeneità da un filtrato di coltura di Streptomyces morookaensis È una proteina monomerica con un peso molecolare di 24 000-25 000 e il suo punto isoelettrico è 6,9. L'enzima sintetizza il nucleoside purinico 5\'-fosfato (mono, di o tri) 3\'-difosfati come pppApp , ppApp, pApp, pppGpp, ppGpp e pppIpp trasferendo un gruppo pirofosforilico dalla posizione 5\' di ATP, dATP e ppApp alla posizione 3\' dei nucleotidi purinici L'enzima purificato ha catalizzato la formazione di 435 mumol di pppApp e 620 mumol di pppGpp da ATP e GTP per min mg di proteina nelle condizioni standard. L'enzima richiede assolutamente un catione bivalente per l'attività e il pH ottimale per l'attività enzimatica è superiore a 10 per Mg2+, per Co2+ e Zn2+ da 9 a 9,5, e per F e2+ da 7,5 a 8. Sono state determinate le seguenti costanti di Michaelis: AMP, 2,78 mM; ADP, 3,23 mM; GMP, 0,89 mM; PIL, 0,46 mM e GTP, 1,54 mM, nel caso del donatore di ATP. L'enzima è inibito da guanina, guanosina, dGDP, dGTP, N-bromosuccinimide, iodacetato, borato di sodio e acetato di mercurio.
Rilevazione e caratterizzazione parziale della lipoproteina lipasi nell'aorta bovina.Estratti di polveri acetone-etere dell'aorta toracica bovina contengono attività lipasica a pH alcalino massimo (7,8-8,4) ed è stimolato 4-10 volte aggiungendo siero o apolipoproteina-glutammato isolata alla miscela di analisi. L'attivazione del siero è completamente invertita dall'apolipoproteina-serina o apolipoproteina-alanina isolata. La lipolisi è fortemente inibita da NaCl (0,5 M) e protamina solfato (1 mg/ml) e parzialmente inibita dall'eparina. In base a queste caratteristiche, la lipasi viene identificata come lipoproteina lipasi.
Proprietà conformazionali dell'albumina plasmatica bovina con un legame peptidico interno scisso.Come mostrato in precedenza, le proteinasi frequentemente associate ai campioni di albumina plasmatica catalizzano un scissione specifica della molecola di albumina quando esiste nello stato conformazionale F vicino a pH 3,7. Il prodotto proteolitico primario, BPA, ha un peso molecolare simile o identico a quello della proteina madre ma produce due grandi frammenti di peso molecolare circa 46000 e 23000 sulla riduzione. Qui viene presentata la prova che la scissione si verifica all'interno dell'anello disolfuro tra Cys390 e Cys434 senza perdita rilevabile di piccoli peptidi, la composizione amminoacidica del BPA è identica a quella della proteina madre entro un errore sperimentale. La scissione espone un nuovo ammino -terminale residuo di fenilalanina e può verificarsi al legame Glx392-Phe393 sebbene esista la possibilità che si verifichi in un altro legame X-Phe nella regione non sequenziata di r residui 400-402. La proteina danneggiata ha una struttura secondaria alquanto alterata come giudicato dalle misurazioni della dispersione ottica rotatoria e del dicroismo circolare, probabilmente una perdita di elicità approssimativa del 15%. Il volume idrodinamico è aumentato di circa il 20%. Tuttavia, vari studi fisici indicano che la struttura terziaria è sorprendentemente simile a quella della proteina nativa. Di maggior importanza è il fatto che la proteina subisca ancora le transizioni N-F e N-B, sebbene in entrambi i casi si verifichino a un pH leggermente più moderato rispetto alla proteina madre. Inoltre si osserva ancora una sensibilità della transizione N-B al Ca2+ e il comportamento di legame verso il colorante acido 8-anilino-1-naftalensolfonico è sostanzialmente inalterato. I risultati sono meglio compresi in termini del concetto di struttura multidominio che è stato suggerito frequentemente per l'ablumin al plasma. La scissione del legame danneggia un dominio ma lascia la struttura complessiva sostanzialmente inalterata, tranne per un certo indebolimento dell'interazione tra i domini.
Studi su proteine monoclonali IgA e IgA derivate da un singolo paziente. Evidenza di catene leggere identiche e regioni variabili della catena pesante.Due immunoglobuline, IgA(K) e IgG(K), sono state isolate dal siero di un singolo paziente con due componenti monoclonali (proteine biclonali) Dopo la separazione delle catene, le catene leggere di ciascuna molecola sono risultate identiche secondo i seguenti criteri: mobilità elettroforetica in varie condizioni di pH e dissociazione, composizione amminoacidica, analisi delle impronte digitali dei peptidi triptici e dei peptidi chimotriptici 14C-succinilati e sequenza amminoacidica dei residui N-terminali 40. Le catene pesanti erano indistinguibili per i residui N-terminali 45 amminoacidici Questi dati sono coerenti con l'ipotesi che una singola regione variabile della catena pesante (VH) possa essere associata a due diversi geni della costante della catena pesante (CH).
La purificazione e la caratterizzazione della proteina legante i folati umani a basso peso molecolare mediante cromatografia di affinità.La proteina legante i folati a basso peso molecolare (FABP) è stata purificato 1000 volte ad un'attività specifica di 7,2 g di acido pteroilglutammico (PGA) legato per mg di proteina. Questo FABP purificato rappresenta due bande proteiche che legano PGA su elettroforesi su gel di poliacrilammide, eluisce da DEAE-cellulosa in tampone fosfato 0,001 M , si colora positivo con PAS, eluisce da colonne di affinità concanavalina A Sepharose con metil alfa-mannoside e mostra tre picchi principali (pl =6.8, 7.5, 8.2) mediante focalizzazione isotrica. Il legame di PGA a FABP purificato dipende da pH e è inibito dall'urea...
Influenza dei prodotti della fosfolipolisi della fosfatidilcolina sulla solubilizzazione micellare degli acidi grassi in presenza di sali biliari.1. La solubilità degli acidi grassi in sono state studiate soluzioni acquose contenenti sali biliari e lisolecitina a valori di pH compresi tra 2-0 e 7-4 Sia l'isomero 1-acilico che quello 2-acilico della lisolecitina hanno aumentato nella stessa misura la solubilità degli acidi grassi, l'ordine di solubilità essendo linoleico maggiore di oleico maggiore di elaidico maggiore di palmitico maggiore di stearico 2. È stata determinata l'influenza dei prodotti della fosfolipolisi della lecitina sulla solubilità dell'acido palmitico Su base molare, la lisolecitina era più efficace dei sali biliari nel promuovere la solubilizzazione del acido grasso 3. Nelle soluzioni di sali biliari in cui la concentrazione di fosfolipidi era costante su base molare, la solubilità dell'acido palmitico diminuiva linearmente con la progressiva sostituzione della lecitina con la lisolecitina. l'acido è stato solubilizzato nella stessa misura sostituendo la lecitina con la lisolecitina a peso costante. 4. In una soluzione di sali biliari contenente lisolecitina e acido oleico in quantità equimolari, la solubilità dell'acido palmitico era simile a quella di una soluzione di sali biliari contenente lecitina in proporzione equivalente. 5. I risultati sono discussi in relazione all'azione dell'attività fosfolipolitica sull'assorbimento intestinale degli acidi grassi negli ovini.
Solubilità micellare di acidi grassi in mezzi acquosi contenenti sali biliari e fosfolipidi.1. La solubilità degli acidi grassi in mezzi acquosi contenenti solo sali biliari e in miscela con lecitina (fosfatidilcolina) o fosfatidiletanolammina è stata determinata 2. Nell'intervallo di pH 2-0-7-4, l'ordine di solubilità degli acidi grassi in soluzioni acquose contenenti sali biliari era linoleico maggiore di oleico maggiore di elaidico maggiore di palmitico maggiore dello stearico. La solubilità di ciascun acido grasso aumentava poiché il pH delle soluzioni miceus dei sali biliari aumentava notevolmente la solubilità dell'acido palmitico e dell'acido stearico. 4. In presenza di sali biliari e lecitina, la solubilità dell'acido oleico e dell'acido elaidico L'acido diminuiva con l'aumentare del pH della soluzione micellare, indicando un effetto competitivo tra gli anioni degli acidi grassi e la lecitina La solubilità dell'acido linoleico aumentava linearmente con la concentrazione di lecitina 5. Fosfatidil l'etanolamina come additivo ai sali biliari ha aumentato la solubilità degli acidi grassi sia saturi che insaturi nell'intervallo di pH 2-3-7-4. L'efficacia della fosfatidiletanolammina come anfifilo era simile a quella della lecitina, sebbene a pH 3.0 la solubilità degli acidi grassi fosse maggiore in presenza di fosfatidiletanolamina. 6. Il significato di questi risultati è discusso in relazione all'assorbimento intestinale degli acidi grassi nelle pecore.
Studio della sporulazione di Bacillus thuringiensis var. thuringiensis.Durante la coltivazione sommersa di Bacillus thuringiensis var. thuringiensis in fermentatori da 300 e 3000 litri , la lisi avveniva al termine della fase esponenziale di crescita. Successivamente si formavano nuove cellule vegetative che solitamente sporulavano. Al momento della lisi la quantità di zucchero solubile era di 1-12 g/litro, il valore del pH scendeva a 5,3-5,8 dal PH originale 6.8 e ha iniziato a salire dopo che tutte le cellule si erano lisate. L'attività proteolitica era bassa durante la lisi e aumentava all'inizio della sporulazione.
[Trattamento dell'insufficienza pancreatica esocrina con lipasi fungina (autore\'s trad.)].7 pazienti affetti da insufficienza pancreatica esocrina grave sono stati trattati con un enzima lipolitico estratto da Rhizopus arrhizus Confrontando la lipasi fungina con un placebo il farmaco ha ridotto il peso giornaliero delle feci da 809 g a 443 g in media, cioè del 45,2% La steatorrea è stata ridotta da 75,6 g/24 h a 32,9 g , cioè del 56,5% Quando si incuba l'enzima in vitro in soluzioni saline di pH diverso per 1 h la perdita di attività lipolitica è del 13% a pH 5, del 15% a pH 4 e del 19% a pH 3. Quindi l'enzima, come le proteasi fungine, non è quasi alterato dall'acido cloridrico a concentrazioni che si trovano fisiologicamente nello stomaco.
Studi comparativi di farmaci parasimpaticolitici sullo stomaco (test in doppio cieco) e analisi della relazione tra forma gastrica e tono.Effetti di 3 tipi di farmaci parasimpaticolitici (bromuro di timepidium, bromuro di ioscina-N-butil e bromuro di prifinio) e placebo (soluzione salina fisiologica) sul tratto gastrointestinale sono stati valutati radiograficamente mediante tecnica in doppio cieco in un totale di 101 soggetti umani di sesso maschile. I risultati possono essere brevemente riassunti come segue: 1 Ci sono state differenze significative sul tasso ipotonico essendo uno degli indici del tono gastrico tra timepidium-bromuro e placebo. Gli effetti di 3 farmaci sperimentali erano significativamente elevati rispetto a quelli del placebo sul movimento peristaltico dello stomaco. L'effetto del timepidium -bromuro era significativamente diverso da quello del placebo nel sito di arrivo del bario 2. Il confronto dei gradi del tono gastrico tra i test principali e di controllo ha rivelato che il l'effetto del placebo ottenuto nel test principale era significativamente inferiore a quello della ioscina-N-butilbromuro ottenuto nel test di controllo, mentre non esistevano differenze significative degli effetti tra 3 farmaci attivi. 3. Gli effetti di ciascun farmaco sul tono gastrico, valutato in base allo stato ipertonico, normotonico e ipotonico, sono stati valutati mediante stratificazione. Il risultato ha mostrato che l'effetto del bromuro di timepidium era significativamente maggiore di quello del placebo. 4. Tutti i farmaci attivi non erano significativamente differenti in termini di 7 valori osservati ciascuno sulla forma gastrica.
Distribuzione ed eliminazione della radioattività nel ratto dopo somministrazione di 14C-4-acetamidofenil-2-acetossibenzoato (benorilato).Dopo somministrazione orale di 4-acetamido-fenil-2-acetossibenzoato (carbossil-14C) (benorilato) ai ratti, non sono state rilevate differenze grossolane 7,5 h dopo la somministrazione rispetto alla distribuzione del 14C in vari tessuti, comprese le sezioni superiori dell'intestino tenue. 4 ore dopo la somministrazione è stata riscontrata un'elevata concentrazione di 14C nelle sezioni inferiori dell'intestino. Il 14C nell'intestino era presente come benorilato immodificato, come rilevato dalla cromatografia su strato sottile, suggerendo che l'assorbimento del benorilato era lento. Iniezione endovenosa di 14C-benorilato ai ratti hanno mostrato che il farmaco aveva un tasso di eliminazione relativamente alto dal sangue con un'emivita di 1,9 ore. Nel sangue il benorilato deve essere rapidamente idrolizzato enzimaticamente poiché non è stato possibile rilevare alcun metabolita del 14C, a parte l'acido salicilico.
[Azione centrale di WA-335-BS, una sostanza con antiserotonina periferica e attività antistaminica].In ratti e topi antagonisti della serotonina e dell'istamina il farmaco 9,10-diidro-10-(1-metil-4-piperidilidene)-9-antrolo (WA 335-BS) ha causato effetti sedativi centrali più forti della ciproeptadina. WA 335-BS ha anche mostrato una maggiore attività contro reserpina e centrale effetti indotti dal tremore rispetto alla ciproeptadina e ha leggermente potenziato gli effetti indotti dalla d-anfetamina: quindi può avere proprietà antidepressive. WA 335-BS si è dimostrato molto efficace contro l'aggressione indotta da isolamento nei topi maschi. Gli effetti ansiolitici relativamente piccoli possono avere stato causato in parte dalle proprietà antiserotonina centrali. Come la ciproeptadina, la WA 335-BS ha aumentato il consumo di cibo nei gatti. Negli esperimenti EEG nel coniglio cosciente, i farmaci antagonisti della serotonina WA 335-BS e la ciproeptadina hanno esercitato una maggiore attività depressiva sulle reazioni di eccitazione T han fatto il neurolettico clorpromazina. I risultati dei nostri studi sugli animali suggeriscono che WA 335-BS sia un antidepressivo con proprietà sedative.
[Sulla farmacologia del 9,10-diidro-10-(1-metil-4-piperidilidene)-9-antrolo (WA 335), un antagonista dell'istamina e della serotonina (author\'s transl)].La sostanza 9,10-diidro-10-(1-metil-4-piperidilidene)-9-antrolo (WA 335) è stata esaminata per i suoi effetti antagonisti contro l'istamina e serotonina, per le sue proprietà atropina-simili oltre che per una serie di altre qualità rispetto alla ciproeptadina e al pimetixene. Le attività antistaminiche e antiserotonina del composto WA 335 sulla muscolatura liscia e sul capillare non solo superano quella della ciproeptadina ma anche quella del pimetixene. WA 335 mostra un legame estremamente forte con i recettori dell'istamina e della serotonina. Nell'intervallo di dosi in cui provoca già un effetto antaminico, il suo assorbimento orale è molto buono. L'effetto anti-anafilattico è molto più forte di quello della ciproeptadina Come pimetixene e ciproeptadina, WA 335 non ha qualità antagoniste distinte contro la bradichinina. Gli effetti anticolinergici di WA 335 dipendono dall'oggetto in esame. Negli esami sui bronchi della cavia e sulla pupilla del topo, l'efficienza atropina corrisponde a quella della ciproeptadina; è più forte sul vago stimolato del gatto e meno efficace della ciproeptadina sullo stomaco del ratto. WA 335 ha distinte proprietà centrali simili all'atropina. Possiede una forte attività anestetica superficiale. Gli effetti di WA 335 sulla circolazione dipendono dalle specie. A differenza del pimetixene, il composto WA 335 come la ciproeptadina potenzia gli effetti della noradrenalina nei gatti. La riduzione del riflesso del seno carotideo nel gatto è più netta dopo WA 335 che dopo pimethixene e corrisponde a quella prodotta dalla ciproeptadina. Dosi di WA 335 superiori a quelle necessarie per dimostrare gli effetti antaminici sono necessarie per provocare effetti sul sistema nervoso centrale. WA 335 non mostra potenza analgesica nei topi. L'influenza sulla temperatura corporea nel ratto è simile a quella della ciproeptadina. WA 335 è altrettanto efficace del pimetixene per quanto riguarda l'inibizione della motilità spontanea e il prolungamento del sonno da barbiturici nei topi e mostra la stessa attività antiemetica della clorpromazina nei cani. A differenza della clorpromazina il comportamento di cani e gatti è nettamente alterato già da dosi di WA 335 che provocano una leggera sedazione.
Flavossato e acido 3-metilflavone-8-carbossilico. Metodi di dosaggio nel sangue e nelle urine, ripartizione e stabilità dei globuli rossi del plasma.Il seguente dosaggio vengono descritti i metodi per gli studi di farmacocinetica sul flavossato (F) e sul suo principale metabolita, ovvero l'acido 3-metilflavone-8-carbossilico (A) 1. Spettrofotometria per il dosaggio di F e di A nel plasma, 2. Spettrodensitometria TLC e GLC per il dosaggio di A nelle urine dopo idrolisi acida, 3. TLC-Spettrodensitometria per la determinazione del rapporto F : A nel plasma o nelle urine Si è riscontrato che F idrolizza in A. Questo processo dipende dal pH e dal mezzo In acqua, a pH 5,0, F è stabile, mentre in tampone fosfato a pH 7,4 il tempo di semiidrolisi è di 60 min In soluzione con albumina di siero bovino, in plasma di ratto, coniglio, cane o umano i tempi di semiidrolisi sono comprese tra 5 e 60 min Infine sono state studiate in vitro le ripartizioni dei globuli rossi plasmatici di F e di A nel sangue di ratto, coniglio, cane e umano e sono state trovate tra 0,8 e 2,0 per F e tra 2,1 e 4,6 per A.
[Sperimentazione clinica di un nuovo derivato delle benzodiazepine in uno studio in doppio cieco utilizzando la scala di valutazione psichiatrica di Wittenborn (transl dell'autore)].Da testare un nuovo derivato delle benzodiazepine, 8-cloro-1-fenil-2,3,4,5-tetraidro-1H-1,5-benzodiazepina-2-one (Bu 1014), misurato contro un placebo in doppio cieco prova, si possono trarre le seguenti conclusioni: La prova è stata condotta su due periodi di quindici giorni ciascuno con un cambio tra i due periodi: 1. Il metodo del cambio si è dimostrato idoneo a rivelare effetti collaterali della sostanza che durano per almeno due settimane. A causa delle sequele della sostanza, tuttavia, l'analisi statistica delle informazioni del secondo periodo di trattamento non è possibile con questo disegno sperimentale. 2. I metodi statistici utilizzati si sono dimostrati più efficaci dei metodi usuali in quanto consentono dichiarazioni più chiare da rendere sull'efficacia della sostanza 3. Entro il primo termine di 14 giorni sia il gro ricevendo il placebo e il gruppo trattato con il farmaco ha mostrato una diminuzione dell'intensità dell'ansia. 4. Le sequele di Bu 1014 possono essere descritte come un aumento dell'irrequietezza e dell'ansia in quei pazienti che hanno ricevuto il placebo nel secondo periodo di trattamento.
Agenti antinfiammatori acidi--correlazioni di alcuni dati fisici, farmacologici e clinici.Quindici agenti antinfiammatori acidi, per i quali sono stati precedentemente pubblicati alcuni dati clinici , sono stati esaminati per la loro potenza nel test dell'edema del piede di ratto indotto dalla carragenina, e per la loro acidità (pKa) e coefficienti di partizione. vengono discusse le correlazioni tra questi vari parametri. Il test della carragenina per l'edema del piede di ratto si è dimostrato un predittore abbastanza affidabile della dose clinica per la maggior parte degli agenti antinfiammatori acidi con emivita sierica moderata.
[Studi termografici e istologici dell'effetto antinfiammatorio del benorilato mediante il test del pellet di cotone nel ratto (autore\'s trad.)].1. L'effetto del (4-acetamido-fenil)-2-acetossi-benzoato (benorilato, Benortan) sul processo infiammatorio è stato studiato termograficamente e istologicamente in test con pellet di cotone su ratti 2. Dopo l'impianto del pellet di cotone, la termografia mostra una chiara inibizione dell'infiammazione locale dovuta al trattamento con benorilato. 3. L'esame istologico mostra una corrispondente influenza del benorilato sulla fase proliferativa dell'infiammazione. 4. Il successo della terapia antiflogistica è in correlazione con il tempo di trattamento.
Nitrosazione della fenacetina. Formazione di N-nitroso-2-nitro-4-etossiacetanilide come prodotto instabile della nitrosazione in soluzione acquosa-acida diluita."La reazione della fenacetina con N2O4 in acido acetico glaciale a 10 (0) C dà N-nitroso-2-nitro-4-etossiacetanilide. Questa N-nitrosoacilarilammina è stabile a basse temperature (--30 gradi C) ma instabile a ambiente temperatura. Nessun N-nitroso-2-nitro-4-etossiacetanilide intatto può essere rilevato quando la fenacetina è nitrosa in condizioni che simulano quelle nello stomaco (37 gradi C, pH 1). Invece, il 2-nitro-4-etossibenzenediazonio cloruro è il principale prodotto di reazione trovato. Nelle condizioni applicate, la N-nitrosoacylarylamine si riorganizza rapidamente per 1,3-migrazione del gruppo acetile. Il diazoestere risultante si dissocia nel corrispondente sale di diazonio. Intrappolamento dello ione diazonio con 1-naftolo come colorante azoico fornisce un mezzo utile per identificare il composto N-nitroso progenitore e per misurare c olorimetricamente il suo tasso di formazione. Le rese ottenute in miscele acquose diluite di nitrosazione sono inferiori alle attese; si discutono le ragioni di questa constatazione. I risultati preliminari degli esperimenti sugli animali mostrano che il composto N-nitroso è un cancerogeno ad azione diretta.
Proprietà della 5-aminolevulinato sintetasi e sua relazione con l'ossidazione microsomiale a funzione mista nel verme dell'esercito meridionale (Spodoptera eridania).1. Attività di 5 -aminolaevulinate sintetasi è stata misurata nell'intestino medio e in altri tessuti dell'ultimo stadio larvale del verme dell'esercito meridionale (Spodoptera eridania Cramer, ex Prodenia eridania Cramer) 2. Sono state stabilite condizioni ottimali per misurare l'attività rispetto a tutte le variabili coinvolte e notevoli differenze da quelli riportati per i preparati enzimatici dei mammiferi sono stati trovati 3. L'attività massima (20 nmol/h per mg di proteina) si verifica 18-24 h dopo la quinta muta e successivamente diminuisce in tracce quando le larve invecchiano e si avvicinano alla pupa. l'attività è stata rapidamente indotta dalla somministrazione orale (nella dieta) di pentametilbenzene, fenobarbital, dietil 1,4-diidro-2,4,6-trimetilpiridina-3, 5-dicarbossilato e 2-allil-2-isopropilacetammide. inibire ted l'induzione della sintetasi da pentametilbenzene. 6. L'induzione della 5-aminolevulinasi sintetasi correlava bene con l'induzione della N-demetilazione microsomiale della p-cloro-N-metilanilina, ad eccezione del fenobarbital, che induceva l'ossidasi microsomiale relativamente più della sintetasi.
Attività di citrato sintasi, isocitrato deidrogenasi legato a NAD+ e NADP+, glutammato deidrogenasi, aspartato aminotransferasi e alanina aminotransferasi nei tessuti nervosi di vertebrati e invertebrati.1. Le attività della citrato sintasi e delle isocitrato deidrogenasi legate a NAD+ e NADP+ sono state misurate nel tessuto nervoso di diversi animali nel tentativo di fornire maggiori informazioni sul ciclo dell'acido citrico in questo tessuto. Negli animali superiori le attività del citrato sintasi sono maggiori della somma delle attività dell'isocitrato deidrogenasi, mentre sono simili nei tessuti nervosi degli animali inferiori. Ciò suggerisce che negli animali superiori la reazione dell'isocitrato deidrogenasi è molto lontana dall'equilibrio. Se si assume che le attività dell'isocitrato deidrogenasi fornire un'indicazione del flusso massimo attraverso il ciclo dell'acido citrico, la capacità glicolitica massima nel tessuto nervoso è considerevolmente gr mangiatore di quello del ciclo. Ciò suggerisce che la glicolisi può fornire energia in eccesso rispetto alla capacità aerobica del tessuto. 2. Le attività della glutammato deidrogenasi sono elevate nella maggior parte dei tessuti nervosi e le attività dell'aspartato aminotransferasi sono elevate in tutti i tessuti nervosi esaminati. Tuttavia, le attività dell'alanina aminotransferasi sono basse in tutti i tessuti eccetto i gangli della cimice e dello scarafaggio. In questi tessuti di insetti, la glicolisi anaerobica può portare alla formazione di alanina piuttosto che di lattato.
La sequenza amminoacidica della Neurospora NADP-specifica glutammato deidrogenasi. Peptidi peptici e chimotriptici e la sequenza completa.Peptidi peptici e chimotriptici sono stati isolati dal NADP-specifica glutammato deidrogenasi di Neurospora crassa e sostanzialmente sequenziata. Su 452 residui nella catena polipeptidica, 265 sono stati recuperati nel peptico e 427 nei peptidi chimotriptici. Insieme ai peptidi triptici [Wootton, JC, Taylor, JG, Jackson, AA, Chambers, GK \& Fincham, JRS (1975) Biochem. J. 149, 749-755], questi stabiliscono la sequenza completa della catena, comprese le assegnazioni di acido e ammide, ad eccezione di sette punti in cui le sovrapposizioni sono inadeguate. gli allineamenti rimanenti sono dedotti dalle informazioni sui frammenti CNBr ottenute in un altro laboratorio [Blumenthal, KM, Moon, K. \& Smith, EL (1975), J. Biol. Chem. 250, 3644-3654]. Ulteriori informazioni sono state depositate come pubblicazione supplementare icazione SUP 50054 (17 pagine) presso la British Library (Lending Division), Boston Spa, Wetherby, W. Yorkshire LS23 7BQ, U. K. , presso la quale si possono ottenere copie alle condizioni indicate in Biochem. J. (1975) 145, 5.
La sequenza amminoacidica della glutammato deidrogenasi Neurospora NADP-specifica. Peptidi dalla digestione con una proteinasi stafilococcica.La proteinasi extracellulare di Staphylococcus aureus ceppo V8 è stata utilizzato per digerire la NADP-specifica glutammato deidrogenasi di Neurospora crassa. Dei 35 peptidi non sovrapposti attesi dal contenuto di glutammato della catena polipeptidica, 29 sono stati isolati e sostanzialmente sequenziati. Le sequenze ottenute sono state preziose nel fornire sovrapposizioni per l'allineamento di circa due -terzi delle sequenze trovate nei peptidi triptici [Wootton, JC, Taylor, J, G. , Jackson, AA, Chambers, GK \& Fincham, JRS (1975) Biochem. J. 149, 739-748]. Il peptide -terminale della proteina è stato isolato. Questo peptide è stato sequenziato mediante spettrometria di massa e ha scoperto che contiene N-acetilserina N-terminale da Howard R. Morris e Anne Dell, i cui risultati sono presentati come appendice al documento principale. proteinasi ha mostrato una specificità molto elevata per i legami glutamilici nel tampone NH4HCO3 utilizzato. Le scissioni parziali di due legami aspartilici, entrambi Asp-Ile, erano probabilmente attribuibili alla proteinasi. Non è stata trovata alcuna scissione dei legami glutamminile o S-carbossimetilcisteinile. Ulteriori dettagli sperimentali sono stati depositati come Pubblicazione Supplementare SUP 50053 (5 pagine) presso la British Library (Lending Division), Boston Spa, Wetherby, W. Yorkshire LS23 7BQ, U. K, dalla quale è possibile ottenerne copie nei termini indicati in Biochem. J. (1975) 1458 5.
Determinazione dell'acido ribonucleico ricco di poliadenilato nel nucleo e nel citoplasma delle cellule di plasmocitoma.Un certo numero di parametri che influenzano l'adsorbimento di rRNA e poli I filtri da RNA contenenti (A) ai filtri Millipore sono stati studiati separatamente. Il legame di entrambi i tipi di RNA al filtro dipendeva dalla concentrazione di RNA, dal pH e dalla concentrazione di Mg2+ della miscela di reazione. Entrambi i tipi di RNA si legano al filtro in modo ottimale a leggermente valori di pH acido. Il legame dell'RNA contenente poli(A) al filtro ha mostrato un'ampia dipendenza dal pH rispetto a quello dell'rRNA. Il rapporto di RNA/rRNA ricco di poli(A) trattenuto dal filtro era massimo tra pH7 e 8. La presenza di 1 mM-EDTA o un'elevata concentrazione di NaCl (oltre 0,5 M) ha diminuito l'affinità dell'RNA per il filtro La quantità di RNA contenente poli(A) nel nucleo e nel citoplasma di una cellula di plasmocitoma la linea (MPC-11) etichettata con [32P]Pi è stata determinata mediante la tecnica del filtro Millipore sotto c condizioni che riducono al minimo la contaminazione da rRNA. Questi dati sono stati confrontati con le stime effettuate mediante cromatografia oligo(dT)-cellulosa. I risultati ottenuti con questi due metodi erano in buon accordo per l'RNA marcato per brevi periodi (fino a 2 ore). In esperimenti di etichettatura lunga e di impulso-chase, tuttavia, la contaminazione del filtro da parte dell'rRNA di radioattività specifica crescente nel citoplasma ha fornito un valore errato per l'RNA contenente poli(A) mediante la tecnica del filtro Millipore. Le determinazioni effettuate sulla frazione nucleare con questi due metodi non hanno mostrato variazioni significative negli esperimenti di etichettatura a breve e lungo termine.
Purificazione della 2-ossoaldeide deidrogenasi e sua dipendenza da ammine insolite.1. La 2-ossoaldeide deidrogenasi è stata purificata dal fegato di pecora e ha fornito una banda su elettroforesi su gel di poliacrilammide 2. L'enzima era completamente dipendente per la sua attività dalla presenza di Tris o di una delle numerose ammine correlate, tutte di struttura generale: (Vedi articolo). Quando più di un gruppo R era idrogeno nessuna attività enzimatica 3. È nota l'esistenza di una sola di queste ammine nei tessuti viventi e per la massima attività erano necessarie grandi concentrazioni di tutte le ammine L-2-Aminopropan-1-olo era l'ammina più efficace sulla base del substrato Km e Valori di Vmax e valori di ammina Km. 4. L'enzima è stato attivato dal fosfato che ha abbassato i valori di Km per metilgliossale, ammina e NAD+ 5. Il pH ottimale dell'enzima era 9,3 e non c'era attività a valori di pH inferiori a 7,8. La ricerca di attivatori che potrebbero produrre attività a pH 7,4 si è rivelata infruttuosa pieno. 6. L'enzima è stato inibito da concentrazioni piuttosto elevate di barbiturici (6-46 mM) e analoghi nitroalcolici delle ammine attivanti (66-139 mM).
Enzima ossidasi-perossidasi di Datura innoxia. Ossidazione dell'estere etilico dell'acido formilfenilacetico.Un sistema enzimatico delle radici di Datura innoxia ossidanti l'estere etilico dell'acido formilfenilacetico è stato purificato 38 volte con metodi convenzionali come frazionamento (NH4)2SO4, adsorbimento negativo su gel di allumina Cy e cromatografia su DEAE-cellulosa. L'enzima purificato ha dimostrato di catalizzare l'ossidazione stechiometrica dell'estere etilico dell'acido formilfenilacetico in estere etilico dell'acido benzoilformico e acido formico , utilizzando l'O2 molecolare. Gli analoghi del substrato come la fenilacetaldeide e il fenilpiruvato sono stati ossidati a una velocità molto bassa e il formilfenilacetonitrile era un agente inalante, cianuro, composti tiolici e acido ascorbico. Questo enzima era identico a un isoenzima ossidasi-perossidasi. Un altro ossidasi-perossidasi isoenzima che si è separato alla cromatografia con DEAE ha anche mostrato attività dell'estere etilico ossidasi dell'acido formilfenilacetico, sebbene in misura minore. le proprietà dei due isoenzimi dell'ossidasi sono state confrontate e hanno mostrato di differire nelle loro proprietà di ossidazione e perossidazione. Anche l'ossidazione dell'estere etilico dell'acido formilfenilacetico è stata catalizzata dalla perossidasi di rafano. Gli isoenzimi di Datura hanno mostrato i tipici spettri emoproteici. L'ossidazione dell'estere etilico dell'acido formilfenilacetico era diversa da altre reazioni catalizzate da perossidasi in quanto non veniva attivata né da Mn2+ né da monofenoli. L'ossidazione è stata inibita da diversi mono e polifenoli e dalla catalasi. Viene proposto un meccanismo di reazione per l'ossidazione.
La dipendenza dal pH e la modificazione di gruppo della beta-lattamasi I.La dipendenza dal pH dei parametri cinetici per l'idrolisi del beta-lattame è stato studiato l'anello della beta-lattamasi I (penicillinasi, EC 3.5.2.6) Sono state utilizzate benzilpenicillina e ampicillina (acido 6-[D(-)-alfa-amminofenilacetamido]penicillanico) Sia kcat. che kcat. /Km per entrambi i substrati ha dato grafici a campana del parametro rispetto al pH. La dipendenza dal pH di kcat. /Km per i due substrati ha dato lo stesso valore (8,6) per il pK apparente più alto, e quindi questo valore può caratterizzare un gruppo sull'enzima libero; valori di pK apparente inferiori erano circa 5 (4,85 per la benzilpenicillina, 5,4 per l'ampicillina). Per la benzilpenicillina sia kcat. che kcat. /Km dipendevano dal pH esattamente allo stesso modo. Il valore di Km per la benzilpenicillina era quindi indipendente dal pH, suggerendo che la ionizzazione dell'enzima\'s gruppi cataliticamente importanti non influisce sul legame di questo substrato. La dipendenza dal pH di kcat. per am la picillina differiva, tuttavia, presumibilmente a causa del gruppo polare nella catena laterale. È stata testata l'ipotesi che il gruppo pK5 sia un gruppo carbossilico. Tre reagenti che normalmente reagiscono preferenzialmente con i gruppi carbossilici hanno inattivato l'enzima: i reagenti erano il reagente K di Woodward, una carbodi-immide solubile in acqua e il fluoroborato di trietilossonio. Questi risultati tendono a supportare l'idea che un gruppo carbossilato abbia un ruolo nell'azione della beta-lattamasi I.
Il meccanismo di idrolisi del beta-glicerofosfato da parte della fosfatasi alcalina renale.1. Identificare i gruppi funzionali coinvolti nella conversione del beta- glicerofosfato da fosfatasi alcalina (EC 3.1.3.1) da rene di maiale, la cinetica della fosfatasi alcalina è stata studiata nell'intervallo di pH 6.6-10,3 a concentrazioni di substrato di 3 muM-30 mM. Dai grafici di log VH+ contro pH e log VH+/ KH+m contro pH sono stati identificati un gruppo funzionale con pK = 7.0 e due gruppi funzionali con pK = 9.1. Questi gruppi sono coinvolti nel legame del substrato. È stato trovato un altro gruppo con pK = 8.8, che nella sua forma non protonata catalizza il substrato 2. Il GSH inibisce la fosfatasi alcalina in modo reversibile e non competitivo attaccando lo Zn(II legato) 3. L'influenza della concentrazione di H+ sull'attivazione da parte degli ioni Mg2+ del fosfato di rene di maiale alcalino è stata studiata tra pH 8,4 e 10,0. Il legame del substrato e l'attivazione degli ioni Mg2+ avviene indipendentemente a tutti i valori di pH compresi tra 8,4 e 10,0. Il meccanismo di attivazione non è influenzato dalla concentrazione di H+. Gli ioni Mg2+ sono legati da un gruppo funzionale con un pK di 10,15. 4. Viene proposto uno schema per la reazione tra enzima, substrato, Mg2+ e H+ e viene derivata l'equazione della velocità complessiva. 5. Il meccanismo di legame e scissione del substrato da parte dei gruppi funzionali del centro attivo è discusso sulla base di un modello. Mg2+ sembra svolgere un ruolo di effettore autosterico.
L'interazione degli ioni magnesio con l'acido teicoico.Il legame di Mg2+ alla parete dell'acido teicoico di Lactobacillus buchneri NCIB 8007 è stato misurato mediante dialisi all'equilibrio a concentrazione ionica controllata e pH. In una soluzione acquosa contenente 10mM-NaCl a pH 5,0 uno ione Mg2+ è stato legato per ogni due gruppi fosfato dell'acido teicoico, con un'apparente costante di associazione, Kassoc. = 2,7 x 10(3) M- 1. Abbassando il pH al di sotto del pKa dei gruppi fosfato la quantità di Mg2+ legato diminuiva in concomitanza con la diminuzione della ionizzazione dei gruppi fosfato Sia la quantità di Mg2+ legata all'acido teicoico che le apparenti costanti di associazione erano simili in presenza di 10 concentrazioni mM di NaCl o KCl ma sono diminuite notevolmente in presenza di 10 mM-CaCl2 a causa della competizione tra Ca2+ e Mg2+ per i siti di legame. Un effetto simile è stato riscontrato quando la concentrazione di NaCl è stata aumentata da 0 a 50 mM. I risultati sono D discusso in relazione alla funzione dell'acido teicoico nelle pareti dei batteri Gram-positivi.
La stimolazione da parte dei trasmettitori sinaptici dell'incorporazione dell'oleato nel fosfolipide delle membrane sinaptiche.La noradrenalina ha stimolato l'incorporazione dell'oleato nella colina glicerofosfolipidi di Guinea- membrane sinaptiche di cervello di maiale incubate in tampone sodio fosfato In presenza di 1 mm-NaF, la noradrenalina ha stimolato l'incorporazione di oleato nelle membrane sinaptiche di colina glicerofosfolipidi, fosfatidilinositolo, etanolamina glicerofosfolipidi, fosfatidilserina e acido fosfatidico delle membrane sinaptiche incubate da 10 mmT In Tris-CHl contenente 1 mm-NaF, la stimolazione dell'incorporazione dell'oleato nei glicerofosfolipidi della colina da parte della noradrenalina è stata potenziata da ATP, CaCl2, MgCl2 e CoA più ditiotreitolo. La concentrazione ottimale di CaCl2 per la stimolazione da 10 mum-noradrenalina era 10 mum In presenza di CaCl2, la concentrazione ottimale di ATP-2MgCl2 era nell'intervallo 0,1-1 mm Acetilcolina, carbamoilcolina, 5-idro anche la xitriptamina, la dopamina, l'istamina e l'acido gamma-aminobutirrico hanno stimolato l'incorporazione dell'oleato nei glicerofosfolipidi della colina delle membrane sinaptiche. Sono state ottenute curve dose-risposta sigmoidali, simili a quelle ottenute in precedenza per la stimolazione da parte degli stessi agonisti dell'idrolisi della fosfatidilcolina da parte della fosfolipasi A2 (Gullis \& Rowe, 1975a). La velocità iniziale di trasferimento dell'oleato dall'oleato-CoA alla colina glicerofosfolipide era simile alla velocità iniziale di trasferimento dall'oleato-albumina, stimolata dalla noradrenalina. Il trasferimento di oleato dall'oleoil-CoA non è stato stimolato in modo apprezzabile dalla noradrenalina, ma è stato stimolato dall'ATP e dal MgCl2.
Desaturazione dell'acido stearico da parte del fegato e del tessuto adiposo di topi obesi-iperglicemici (ob/ob).L'attività della desaturasi dell'acido stearico è stata saggiata in preparati da tessuto adiposo perigenitale e fegato di topi femmine magri e geneticamente obesi (ob/ob). L'attività totale nel tessuto adiposo perigenitale di topi obesi era tre volte maggiore rispetto al tessuto di topi magri, ma per g di tessuto adiposo l'attività era doppia maggiore nei tessuti dei topi magri Nel fegato, l'attività nei topi obesi è stata elevata a 8 settimane di età, è rimasta elevata fino a 24 settimane e poi è diminuita della metà a 48 settimane, ma a tutte le età era superiore a quella dei topi magri. La diminuzione dell'attività desaturasi del fegato da topi obesi a 48 settimane corrispondeva a un cambiamento nella composizione degli acidi grassi dei lipidi epatici verso quella riscontrata nei topi magri, mentre nel tessuto adiposo gran parte dell'attività enzimatica aumentata può essere dovuta all'iperplasia tissutale, in fegato è principalmente un aumento attività sed per cellula.
Ciclo dell'acido tricarbossilico ed enzimi correlati in metilotrofi facoltativi ristretti.E' descritto l'isolamento di colture pure di tre batteri metilotrofi che non utilizzano metano che , insieme al Bacillus PM6 precedentemente descritto, hanno una gamma molto limitata di substrati di crescita; questi organismi sono designati "facoltativi ristretti\' metilotrofi. Due di questi isolati, W6A e W3A1, crescono solo su glucosio su 50 composti non C1 testati, mentre il terzo isolato S2A1 e Bacillus PM6 crescono su betaina, glucosio, gluconato, alanina, glutammato, citrato e agar nutriente, ma non su uno degli altri 56 composti non-C1. Estratti sonici grezzi di isolati W6A e W3A1 coltivati con trimetilammina e coltivati con glucosio e di C2A1 coltivati con trimetilammina (un metilotropo obbligato) non contengono (i) attività 2-ossogltarato deidrogenasi rilevabile, (ii) attività specifiche del succinato molto basse o nulle deidrogenasi e succinil-CoA sintetasi e (iii) attività dell'isocitrato deidrogenasi NAD+-dipendente. Gli estratti dei metilotrofi PM6 e S2A1 coltivati con trimetilammina hanno (i) attività specifiche della 2-ossoglutarato deidrogenasi molto basse, (ii) attività specifiche relativamente elevate di succinato deidrogenasi, malato deidrogenasi e succinil-CoA sintetasi e (iii) attività dell'isocitrato deidrogenasi NADP+-dipendente ma nessuna attività dell'isocitrato deidrogenasi NAD+-dipendente. Le attività della maggior parte di questi enzimi sono aumentate durante la crescita su glucosio, alanina, glutammato o citrato, ma in tutte le condizioni di crescita sono presenti solo attività molto basse della 2-ossoglutarato deidrogenasi. I metilotrofi facoltativi ristretti crescono su alcuni composti non-C1 in assenza della 2-ossoglutarato deidrogenasi e, in alcuni casi, di altri enzimi del ciclo dell'acido tricarbossilico; queste lesioni non possono quindi essere l'unica causa di metilotrofia obbligata.
Sviluppo plastidi nelle foglie primarie di Phaseolus vulgaris. Sviluppo dell'attività plastidi adenosina trifosfatasi durante l'inverdimento.Gli etioplasti delle foglie di fagiolo scuro hanno mostrato ATPasi ( l'attività dell'adenosina trifosfatasi) che aveva un pH ottimale di 8,5, è stata stimolata dal ditiotreitolo e non è stata influenzata dall'attivazione della luce. un pH ottimale di 8,0. L'attività innescata dalla luce dipendeva da ditiotreitolo e Mg2+ ed era promossa dal metosolfato di fenazina. L'attività dell'ATPasi innescata dalla luce era completamente inibita da 20mum-dicicloesilcarbodi-immide. Gli etioplasti sviluppavano attività dell'ATPasi innescata dalla luce in risposta a 30 min illuminazione delle foglie eziolate. Durante le 48 h di inverdimento indotto dalla luce delle foglie scure si è verificato un aumento del 70% dell'attività dell'ATPasi dei cloroplasti riscontrata dopo l'attivazione della luce e una diminuzione del 30% dell'attività indotta dal buio, entrambe espresse su base foglia. Poiché la maggior parte di questi cambiamenti si è verificata durante i primi 30 minuti di illuminazione, si conclude che la maggior parte o tutta l'ATPasi del cloroplasto era presente nell'etioplasto, una conclusione identica a quella di Lockshin et al. (1971) per il mais. Durante le 48 ore di inverdimento c'è stato un aumento di dieci volte della quantità di membrana tilacoide nella foglia insieme a una diminuzione dell'83% dell'attività dell'ATPasi per m2 di membrana tilacoide, misurata dopo l'attivazione della luce.
Gli effetti della somministrazione acuta e cronica di nicotina idrogeno (+)-tartrato e successiva sospensione sull'attività della triptofano pirrolasi del fegato di ratto e loro confronto con quelli di morfina, fenobarbital ed etanolo." La somministrazione acuta di nicotina idrogeno (+)-tartrato aumenta l'attività della triptofano pirrolasi del fegato di ratto mediante un meccanismo ormonale. Il trattamento cronico con nicotina inibisce e la successiva sospensione aumenta l'attività della pirrolasi. L'inibizione durante il trattamento cronico non è a causa di una sintesi difettosa dell'apoenzima né di una ridotta disponibilità di cofattori. La rigenerazione di NADP+ epatico in vitro e in vivo inverte l'inibizione. La somministrazione cronica di nicotina aumenta la concentrazione di NADPH nel fegato. Gli effetti sopra descritti della nicotina assomigliano in misura notevole a quelli precedentemente mostrati per la morfina, fenobarbital ed etanolo. Tutti gli effetti vengono confrontati e viene discusso il loro possibile significato in relazione alla tossicodipendenza.
Natura molecolare della beta-galattosidasi da diversi tessuti in due ceppi del topo domestico.Un ceppo di topo consanguineo, C57BL/Kl, ha un'elevata galattosidasi attività in tutti i tessuti mentre un altro ceppo, DBA/2/Kl, ha una bassa attività determinata dal locus Bgs. La beta-galattosidasi da questi due ceppi è stata parzialmente purificata mediante una procedura in cinque fasi: acidificazione, precipitazione di solfato di ammonio, gel filtrazione a due pH e focalizzazione isoelettrica. Non sono state riscontrate differenze qualitative tra i preparati enzimatici dei due ceppi. Avevano curve di inattivazione al calore, pH ottimale, peso molecolare e punti isoelettrici identici e i valori di Km erano molto simili. Sembra quindi che questo la differenza genetica nell'attività enzimatica probabilmente non può essere spiegata da una variazione dell'attività specifica della galattosidasi, ma riflette piuttosto una differenza nel numero di molecole enzimatiche. Otto diversi isoenzimi sono stati separati da fegato, rene e milza. l'isoenzima ha una diversa mobilità elettroforetica e vi è un aumento graduale del peso molecolare da 143.000 a 380.000 a partire dalla proteina con il punto isoelettrico più basso. Una probabile interpretazione è che gli isoenzimi leghino un polipeptide più piccolo in numero variabile oltre al polipeptide enzimatico di per sé.
Influenza di alcuni fattori fisici sulla sopravvivenza del virus del vaccino contro la malattia di Marek.Il vaccino contro la malattia di Marek (MD) associato alle cellule è stato sospeso a diluizioni normalmente utilizzate per la vaccinazione in sette diluenti disponibili in commercio e in brodo triptosio fosfato. La stabilità dei vaccini diluiti è stata determinata mediante saggio in colture cellulari sottoposte a 0-37 C per 0-90 minuti. Le temperature ottimali di mantenimento per la sopravvivenza del virus del vaccino MD variavano con i diluenti specifici impiegati Alcuni diluenti hanno offerto la massima sopravvivenza quando la diluizione era a 0 C e mantenuta a 0 C, mentre altri hanno dato i migliori risultati quando la diluizione era a 25 C seguita da raffreddamento e mantenimento a 0 C. Diluenti che hanno consentito la massima sopravvivenza quando testati a 37 La C si è comportata bene anche ad altri regimi di temperatura. Ai diluenti commerciali utilizzati per diluire il vaccino MD sono stati aggiunti spectinomicina dicloridrato pentaidrato e vari composti tampone. Additivi che producono un'osmolalità di 745 mOsm/kg e una sopravvivenza del virus vaccinale notevolmente ridotta. Gli effetti negativi dell'elevata pressione osmotica sono stati accentuati dal tempo di mantenimento prolungato, dall'elevata temperatura di incubazione e dalle manipolazioni fisiche, compresa la miscelazione meccanica o l'estrazione attraverso una siringa e un ago. La sopravvivenza soddisfacente del virus del vaccino MD è stata garantita da un diluente commerciale appositamente formulato per adattarsi ai cambiamenti di osmolalità del pH prodotti dall'aggiunta di spectinomicina dicloridrato pentaidrato.
Cambiamenti nello stato acido base di pecore anestetizzate con una combinazione di atropina solfato acepromazina e ketamina cloridrato.pH, PaCO2, PaO2, bicarbonato standard, l'eccesso di basi e il pH ridotto sono stati misurati negli ovini prima e ad intervalli regolari dopo la somministrazione di ketamina con e senza premedicazione con atropina e acepromazina. Una diminuzione del pH e della PaO2 e un aumento della PaCO2 sono stati osservati 15 minuti dopo la somministrazione di ketamina. e senza acepromazina non ha avuto effetti significativi su pH, PaCO2 e PaO2. I valori di bicarbonato standard, eccesso di basi e pH ridotto non sono stati influenzati in modo significativo. Ciò indica che variazioni minori osservate in pH, PaCO2 dopo la somministrazione di ketamina sono compensate dall'animale sano \'s sistema tampone del sangue.
Leucodistrofia metacromatica. Studio ultrastrutturale ed enzimatico di un caso di forma variante O.Una variante della leucodistrofia metacromatica (MLD), malattia di Austin, è caratterizzata da un deficit multiplo di isoenzimi di arilsulfatasi. Una bambina di 3 anni e mezzo con progressivo deterioramento mentale e fisico aveva una ridotta attività delle arilsolfatasi A e B nei leucociti, mostrata dall'elettroforesi su gel di acilamide. Al microscopio elettronico, campioni bioptici di il cervello e il nervo periferico hanno mostrato strutture lamellari con i cosiddetti corpi zebra nei processi citoplasmatici delle cellule gliali, inclusioni granulo-membranose con configurazioni di impronte digitali nei neuroni e materiale simile alla mielina nelle cellule di Schwann. I risultati del nostro studio suggeriscono una natura intricata di questo disturbo dismetabolico , che mostra cambiamenti ultrastrutturali solitamente osservati nella DLM classica, un deficit della sola arilsulfatasi A, concomitante con quelli osservati nelle mucopolisaccaridosi come Hurler e sindromi di Sanfilippo.
[Manifestazioni morfologiche e morfogenesi della reazione del trapianto contro l'ospite nel cervello di ibridi F1 a seguito della somministrazione di cellule linfoidi parentali e del suo effetto sull'inoculazione del tumore].È stato stabilito che l'introduzione intracerebrale di cellule parentali di 10 min della milza ha determinato negli ibridi (CBAXC57Bl/6) alterazioni infiltrative-distruttive F1 (sviluppo di infiltrazioni linfocitarie, distrofia nelle cellule nervose, fibre mieliniche e neurogliaciti) il la cui intensità è risultata notevolmente maggiore nei casi di iniezione di cellule della milza dei genitori da donatori specificamente sensibilizzati. Le cellule della milza dei topi CBA hanno prodotto cambiamenti molto maggiori rispetto a quelli prodotti dalle cellule della milza dei topi C57Bl/6. Inoculazione nel cervello dei topi di 10 mln di cellule della milza insieme al tumore in una dose di 1500 cellule ha prodotto un chiaro effetto inibitorio sulla crescita del tumore, questo effetto essendo più pronunciato dopo l'introduzione di sensi cellule della milza di topi CBA.
Concentrazioni tissutali di propossifene e norpropossifene in decessi associati a propossifene cloridrato e propossifene napsilato.Il propossifene e il suo principale metabolita norpropossifene sono stati determinati nel sangue e nel fegato in 29 casi di morte in cui è stato coinvolto il propossifene, sia come cloridrato che come sale napsilato L'uso del propossifene napsilato (Darvon-N) ha contribuito alla morte di 4 persone, di cui 3 ex eroinomani che ricevevano grandi quantità di questo farmaco in connessione con programmi di sostituzione del propossifene. Nella maggior parte dei casi le concentrazioni ematiche di norpropossifene superano le concentrazioni di propossifene, sebbene le determinazioni cerebrali in diversi casi indichino che il norpropossifene non attraversa la barriera ematoencefalica con la stessa facilità del propossifene. della tossicità comparativa del propossifene e del norpropossifene negli animali e delle alte concentrazioni tissutali di norporpoxifene e nell'uomo dopo la somministrazione di propossifene, è ipotizzabile che il norpropossifene contribuisca agli effetti tossici del propossifene.
Crescita di microbi nelle emulsioni lipidiche utilizzate nella nutrizione parenterale.La nutrizione parenterale tramite cateterismo venoso centrale è associata a gravi rischi, in particolare quello della sepsi. Emulsione lipidica (Intralipid[Svezia]), che può essere somministrato periferico, è stato valutato per il suo potenziale di supportare la crescita microbica. Colture lavate di Staphylococcus aureus, Candida albicans e tre specie di bastoncini Gram-negativi erano tutte in grado di moltiplicarsi nell'emulsione a camera temperatura. Le variazioni nella dimensione dell'inoculo non hanno influenzato il tasso di crescita. Gli studi che confrontano l'emulsione con soluzioni di aminoacidi-glucosio (nutrizione parenterale totale [TPN]) hanno confermato altri rapporti che TPN inibisce la crescita di alcuni batteri ma semplicemente ritarda la moltiplicazione fungina. Quando umano siero è stato aggiunto all'emulsione lipidica nel tentativo di simulare condizioni in vivo sulla punta del catetere, Escherichia coli è stato inibito mentre la crescita di S aureus e C albicians è rimasta inalterata ed.
Studi sul dolore prodotto da preparati di acetato di mafenide nelle ustioni.In uno studio clinico in doppio cieco triplo cross-over, 37 pazienti sono stati esposti a diverse formulazioni di mafenide acetato (Sulfamylon Cream) e le loro risposte al dolore sono state registrate e convertite in un indice di dolore semiquantitativo. La concentrazione dell'11,2% nella crema era da due a tre volte più dolorosa della concentrazione del 5%. L'ipertonicità e non il livello di pH sembra essere la causa del dolore prodotto dall'elevata concentrazione (11,2%). La tonicità del veicolante crema e dell'11,2% di mafenide acetato sono rispettivamente di 1.080 mOsm/kg e 1.100 mOsm/kg, per un totale di 2.180 mOsm/kg. la crema vettore senza glicerolo e una concentrazione del 5% di crema al mafenide erano molto meno dolorose rispetto alla concentrazione dell'11,2% di mafenide. Entrambi hanno offerto un grande sollievo ai pazienti che hanno ricevuto i farmaci.
[Iperacidulazione tumorale mediante infusione endovenosa di glucosio potenziata dall'applicazione di amigdalina e beta-glucosidasi (autore\'s trad.)].Peracidità tumorale in soggetti altrimenti moderatamente iperacidulati tumori o regioni tumorali di ratti Wistar portatori di carcinosarcoma DS ottenuti dall'infusione di glucosio è stato sostanzialmente aumentato dall'infusione simultanea di amigdalina e dall'applicazione intratumorale im o ev di beta-glucosidasi. Qui il valore del pH del tessuto sano, misurato al muscolo scheletrico, è rimasto invariato Mediante tale processo, l'iperacidulazione tumorale è stata elevata a un livello di deltapH =0.97, raggiungendo una differenza di pH tra tessuto tumorale e normale fino a deltapH = 1.6. In un caso, la pendenza della riduzione del pH in il tumore è aumentato all'870%. Inoltre, la somministrazione combinata di glucosio, amigdalina e beta-glucosidasi ha evocato un significativo effetto cancerostatico (ipogenesi, regressione del tumore) essendo paragonabile all'actio n di un dosaggio di Ifosfamid di 150 mg-kg-1. Tuttavia, i. m. e i. v. l'applicazione della beta-glucosidasi sotto narcosi provoca un processo complessivo che rimane ancora un po' troppo tossico. Pertanto, gli studi di ottimizzazione sono intesi con l'obiettivo particolare di migliorare ulteriormente la comparabilità di questo processo.
Uso ambulatoriale di fenotiazina e depressione midollare. Un rapporto dell'unità di epidemiologia dei farmaci e del programma collaborativo di sorveglianza sui farmaci di Boston.Depressione del midollo osseo indotta da fenotiazina (BMD) è stata valutata in tre banche dati separate ma complementari: (1) Tra 1.048 pazienti ricoverati in ospedali psichiatrici, non vi era evidenza di depressione subclinica della conta dei globuli bianchi (WBC) attribuibile alle fenotiazine utilizzate prima del ricovero. (2) Tra i 18.587 pazienti ricoverati, erano 34 i pazienti ricoverati per BMD in assenza di neoplasia o precedente terapia farmacologica citotossica, uno di questi ha riferito di aver utilizzato clorpromazina cloridrato, ma è dubbio che questo farmaco sia stato la causa della BMD. 24.795 pazienti medici, chirurgici e ginecologici intervistati per un periodo di dieci mesi nel 1972, quattro erano stati ricoverati per BMD; uno di questi aveva una leucopenia reversibile attribuita alla trifluoperazina cloridrato de.
[Ipertermia nel coniglio. II. Studi sull'influenza della respirazione con ipertermia esogena].Temperatura rettale, frequenza respiratoria, pH arterioso e venoso e arterioso e venosa pCO2 sono stati registrati ad intervalli di 15-30 minuti in conigli da carne esposti a una temperatura ambientale di 35 gradi C, fino alla loro morte. La frequenza respiratoria e il pH del sangue sono aumentati e la pCO2 è diminuita, fino a raggiungere una temperatura rettale di 42 gradi C Dopo un ulteriore aumento della temperatura rettale, la frequenza respiratoria e il pH iniziarono a diminuire, mentre la pCO2 iniziò a salire. I conigli morirono quando la temperatura rettale raggiunse i 43 gradi C. Sono state discusse le caratteristiche della funzione respiratoria peculiari del coniglio.
Una nuova indagine sui siti di trascrizione e traduzione della fenilalanil-tRNA sintetasi cloroplastica di Euglena.È stato fatto un tentativo per determinare i siti del cloroplasto fenillanil- Trascrizione e traduzione della tRNA sintetasi Inibitori dell'RNA batterico e della sintesi proteica sono stati aggiunti alle colture in fase logaritmica e stazionaria di Euglena gracilis wild-type B. Le colture in fase logaritmica erano sensibili a entrambi i tipi di inibitori Nelle colture in fase stazionaria la plastide sintetasi è stata ridotta dall'RNA ma non dagli inibitori della sintesi proteica. È stato anche notato l'effetto degli antibiotici sull'enzima mitocondriale. Vengono discusse diverse possibili spiegazioni di questi risultati.
Distribuzione subcellulare di fosfatasi, proteinasi e ribonucleasi nello strato corneo umano normale e nelle squame psoriasiche.La distribuzione subcellulare di fosfatasi, proteinasi e ribonucleasi di normale strato corneo umano e squame psoriasiche è stata determinata dopo centrifugazione differenziale. Tutti gli enzimi psoriasici hanno mostrato attività molto aumentate rispetto ai normali enzimi dello strato corneo. Le più alte attività della fosfatasi alcalina dalle squame psoriasiche potrebbero essere rilevate nella frazione nucleare. Le principali attività di tutte le altre fosfatasi e proteinasi testate erano presenti nella frazione citoplasmatica. La distribuzione subcellulare delle ribonucleasi variava in base al valore del pH.
Separazione delle desossiribonucleasi (DNasi) dello strato corneo umano normale e delle squame psoriasiche mediante elettroforesi su micro-disco.Lo strato corneo normale e le squame psoriasiche sono state omogeneizzate ed è stata eseguita una centrifugazione differenziale. L'attività DNasi delle singole frazioni è stata studiata mediante micro-dis-elettroforesi. A pH 5 solo nel pellet 600xg e 105.000xg surnatante della normale attività cheratina DNasica è stata osservata. Tuttavia, tutte le frazioni psoriasiche hanno mostrato attività enzimatiche distinte. A pH 7,4, una piccola attività psoriasica della DNasi può essere dimostrata solo nel surnatante da 105.000xg. Ad eccezione del pellet da 15.000xg, tutte le frazioni dello strato corneo normale hanno mostrato attività marcate. Inoltre, il surnatante da 105.000xg ha mostrato due diverse bande di DNasi".
Sindrome nefrosica nei bambini indiani.Uno studio clinicopatologico su 206 bambini indiani con sindrome nefrosica ha mostrato una causa renale primaria in 195 (96%), di di cui il 77% maschi. In 126 bambini (96 maschi, 30 femmine) l'esordio della malattia è avvenuto prima dei 5 anni. La biopsia renale ha mostrato lesioni minime in 150 pazienti (77%); in 85 di questi la biopsia è stata eseguita a 3 mesi a 16 anni dopo l'insorgenza della sindrome nefrosica Anomalie istologiche renali significative in 45 casi sono state etichettate come mesangiocapillare 8, mesangioproliferativa 4, proliferativa con estese mezzelune 2, membranosa 3, glomerulosclerosi focale segmentaria 9, glomerulosclerosi focale globale 2, avanzata non specifica 8 e lieve proliferazione 9. Le manifestazioni nefritiche sono state principalmente associate a lesioni renali significative, che sono state riscontrate più frequentemente quando l'insorgenza della malattia era dopo i 5 anni di età. La clearance della proteinuria con la terapia con corticosteroidi era pratica lly limitato a pazienti con alterazioni istologiche renali minime o lievi. I nostri risultati suggeriscono che il modello della sindrome nefrosica idiopatica nei bambini indiani è simile a quello riportato nei paesi occidentali.
Reazione del trapianto contro l'ospite. Uno studio ultrastrutturale.Reazione del trapianto contro l'ospite (GvH) a seguito di trasfusioni di leucociti si è verificata in un uomo di 34 anni con un linfosarcoma generalizzato. Sono stati eseguiti studi istologici e ultrastrutturali, con particolare riferimento alle cellule discheratosiche sparse nell'epidermide. Queste cellule sono generalmente considerate una caratteristica costante e importante della reazione GvH. Densissima aggregazione di tonofilamenti, inclusi organelli citoplasmatici e perdita di desmosomi , sono stati osservati in cellule discheratosiche. Sono stati osservati diversi desmosomi intracellulari con tonofilamenti legati alla placca di attaccamento. Alcune di queste cellule sono state in grado di raggiungere lo strato corneo, altre sono state fagocitate dai cheratinociti vicini. Queste cellule potrebbero essere il risultato di un danno tossico all'epidermide, provocata dal fenomeno immunologico implicato nella reazione GvH. Più tardi nel decorso clinico si sono verificate formazioni di bolle, che mostrano alcune caratteristiche di necrolisi epidermica tossica (TEN), così come le caratteristiche della reazione GvH.
Caratterizzazione di una destranasi extracellulare da Fusarium moniliforme.Una destranasi extracellulare (EC 3.2.1.11) è stata purificata circa 75 volte da una coltura priva di cellule filtrati di Fusarium moniliforme. La destranasi purificata era di tipo endo e l'isomaltosio è stato identificato come il prodotto finale primario dell'idrolisi del destrano. Il peso molecolare della destranasi è stato determinato in 39.000 mediante cromatografia a permeazione di gel. L'enzima era più attivo a pH 5,5 e la temperatura ottimale era vicina a 55 C. L'attività non è stata inibita né dall'acido etilendiamminotetraacetico né dallo iodoacetato. Il Km per destrano con un peso molecolare medio di 10.000 è stato stimato essere 1,1 X 10(-4) M. La mobilità elettroforetica di la destranasi era nettamente diversa da quella di una destranasi commerciale derivata dal Penicillium. Anche la destranasi di F. moniliforme è risultata diversa dalla preparazione commerciale per la sua maggiore attività relativa contro il gluca ns isolato da Streptococcus mutans.
Crescita di Staphylococcus e Salmonella su wurstel con e senza nitrito di sodio.I wurstel convenzionali e senza nitriti in confezioni sciolte sono stati confrontati in base alla loro capacità per supportare la crescita di Salmonella, Staphylococcus e la loro flora alterativa naturale a 7 C (simulando la conservazione refrigerata) e 20 C (simulando il possibile abuso di temperatura). la flora a volte cresceva più rapidamente in assenza di nitrito, ma la differenza non era significativa. A 20 °C la crescita di Salmonella, Staphylococcus e della flora alterata era, al massimo, solo leggermente più veloce sui wurstel privi di nitriti. La salmonella non è stata soppressa negli esperimenti di brodocoltura il pH e il contenuto di nitriti riscontrati nei wurstel. Anche se entrambi i tipi di wurstel possono diventare pericolosi a causa della crescita di Salmonella o Staphylococcus, nessun rischio insolito o aggiuntivo derivato dall'omissione di nitrito da wurstel.
Sopravvivenza delle salmonelle durante la produzione di peperoni.È stata studiata la sopravvivenza delle salmonelle in miscele di manzo-maiale contaminate artificialmente (circa 10(4) salmonelle/g) in peperoni preparati mediante fermentazione di flora naturale o coltura lattica o in salsicce non fermentate. I peperoni non sono diventati esenti da salmonelle durante il consueto periodo di essiccazione commerciale di 15-30 giorni. La salmonella dublin era presente in tutti i prodotti, fermentati o non fermentati, dopo 42-43 giorni di essiccazione. A un livello di contaminazione più basso, 10(3)/g, S. dublin non può essere recuperato dai peperoni fermentati in coltura starter dopo 14 giorni di essiccazione, ma persiste nella salsiccia fermentata con flora naturale. typhimurium (conta iniziale, 10(4)/g) era assente dopo 42 giorni di essiccamento quando veniva utilizzata la coltura starter per far fermentare i peperoni, ma era ancora presente nei prodotti vegetali naturali fermentati e non fermentati S. dublin, ospite adattato al bestiame, o S. choleraesuis, ospite ad adattato ai maiali, aveva modelli di sopravvivenza simili nel manzo di maiale o nei peperoni di manzo-maiale. Riscaldare i peperoni manzo-maiale contaminati da salmonelle (dopo la fermentazione ma prima dell'essiccazione) a una temperatura interna di 60 C (inattivazione delle trichine) ha eliminato l'agente patogeno di origine alimentare dal prodotto della salsiccia.
Influenza del pH sull'inattivazione al calore dell'enterotossina A stafilococcica come determinato dall'alimentazione delle scimmie e dal test sierologico.L'effetto del pH sull'inattivazione termica di è stata studiata l'enterotossina stafilococcica A. L'analisi della tossina riscaldata mediante immunodiffusione in gel ha indicato che l'enterotossina A nel brodo di manzo è stata inattivata più velocemente a pH 5,3 che a pH 6,2. I valori z (pendenze) per le curve di inattivazione al calore a pH 6,2 e 5,3 erano 49,5 e 55 F (circa 27 e 30 °C), rispettivamente. L'enterotossina prodotta e riscaldata nel mezzo dializzato Casamino Acids e analizzata dall'alimentazione delle scimmie è stata inattivata più facilmente dal calore a pH 5,3 che a pH 7,8. Curve di inattivazione termica per l'enterotossina A nel brodo di manzo (5 mug/ml, pH 5,3) sono stati determinati con due metodi, alimentazione delle scimmie e dosaggio sierologico. I valori z per le curve ottenute con questi due metodi erano entrambi 55 F, sebbene la perdita di attività biologica o tossica dell'enterotossina si sia verificata prima della perdita s di attività sierologica.
Gamma-glutamil transpeptidasi. Un indicatore sensibile di danno ischemico renale negli animali da esperimento e rigetto di omotrapianto renale nell'uomo.I siti di danno ischemico all'interno del vengono esaminati i reni e viene esaminato il valore diagnostico delle misurazioni degli enzimi plasmatici ed urinari nel danno ischemico renale e nel rigetto dell'omotrapianto renale negli animali da esperimento e nell'uomo. La gamma-glutamil transpeptidasi (gamma-GT) è un enzima situato principalmente nel bordo a spazzola di il tubulo contorto prossimale del rene. La sua localizzazione unica nelle cellule più facilmente danneggiate dall'ischemia e la sua facilità di dosaggio forniscono il razionale per il suo utilizzo nella misurazione e diagnosi del danno ischemico renale. L'attività gamma-GT è stata misurata in cani sottoposti a vari periodi di ischemia renale e in condizioni di ipotermia renale locale e si è dimostrato un indicatore sensibile di danno ischemico Venti pazienti consecutivi sottoposti a omotrapianto renale zione sono stati studiati stimando giornalmente la loro attività gamma-GT urinaria nelle 24 ore; è stata ottenuta un'eccellente correlazione tra livelli elevati di questo enzima e la diagnosi clinica di rigetto del trapianto.
Una fosfatasi alcalina associata all'epatoma, l'isoenzima Kasahara, confrontata con uno degli isoenzimi delle cellule amniotiche FL.È stato riscontrato che un epatoma umano -associata ALP (ortofosforico monoestere fosfoidrolasi, EC 3.1.3.1) mobilità elettroforetica condivisa, inattivazione da parte dell'urea, inibizione da parte di fosfato inorganico, etilendiamminotetraacetato e amminoacidi (L-fenilalanina, L-leucina e L-omoarginina), stabilità al calore, sensibilità a neuraminidasi, pH ottimale, valore Km e sito antigenico con isoenzimi ALP in rapido movimento del ceppo di cellule FL derivato dalla membrana amniotica umana. Tuttavia, la membrana amniotica fresca di 40 settimane mancava di questo isoenzima. Invece, aveva un ALP di tipo placentare costituito da componenti minori L'altro isoenzima ALP delle cellule FL aveva proprietà comuni all'epatoma ALP per quanto riguarda la sensibilità alla L-fenilalanina, l'inibizione da parte dell'etilendiamminotetraacetato, l'inattivazione da parte dell'urea e il sito dell'antigene, ma differiva da esso nei mobili elettroforetici ty, sensibilità a L-leucina e L-omoarginina e presenza di un altro sito antigenico. Era più stabile al calore e più sensibile all'inibizione del fosfato inorganico rispetto all'Hepatoma AP. Viene considerato il possibile meccanismo di regolazione tra l'ALP di tipo epatoma e l'ALP di tipo placentare nelle cellule amniotiche.
Alterazioni carcinofetali della glucosamina-6-fosfato sintetasi.I livelli di glucosamina-6-fosfato sintetasi in vari tessuti di ratto compresi quelli in fase di differenziazione o rigenerazione ha rivelato che l'enzima è correlato alla proliferazione e differenziazione dei tessuti. Nel fegato in seguito a trasformazione neoplastica, il livello di glucosamina 6-fosfato sintetasi aumenta e la forma epatica dell'enzima avente un pI a 5,0 è sostituita da una forma con un pI di 4,1 Poiché quest'ultima forma è stata trovata presente anche in interi embrioni (12 e 14 giorni) e nel cervello, le alterazioni molecolari della glucosamina-6-fosfato sintetasi nelle neoplasie epatiche possono essere considerate carcinofetali.
Il trasporto di membrana dell'acido ascorbico.Un sistema per misurare la velocità di trasporto del deidroascorbato nei globuli rossi umani mostra una cinetica di tipo Michaelis-Menten con inibizione del substrato a livelli superiori a 150 muM DHA L'aggiunta di zuccheri compromette questo trasporto nella gerarchia decrescente D-glucosio, D-mannosio, D-xilosio, D-galattosio, L-lissosio, D-araboascorbato, L-sorbosio e 2- deossi-D-ribosio. L'effetto del glucosio sul trasporto dell'ascorbato è marcato a livelli fisiologici. Il trasporto di DHA è accelerato dallo ione rame e consente al deidroascorbato di muoversi contro un gradiente di concentrazione. L'evidenza supporta le ipotesi che suggeriscono che l'iperglicemia compromette la capacità intracellulare disponibilità di vitamina C.
Trapianto di midollo osseo nell'uomo.Il trapianto di midollo osseo sta emergendo come un valido approccio terapeutico per una serie di malattie che sono generalmente o uniformemente fatali. Noi rivedere qui le recenti esperienze nel trapianto di midollo osseo nell'uomo all'UCLA e in varie altre istituzioni in tutto il mondo Esaminiamo il trapianto di midollo nelle malattie da immunodeficienza, leucemia acuta e anemia aplastica e consideriamo i problemi di infezione nei riceventi di trapianto. sono riportati anche la tipizzazione al trapianto di midollo e le manipolazioni immunologiche, che possono influenzare l'attecchimento e la malattia del trapianto contro l'ospite.
Valore dell'emogasanalisi capillare nella gestione del distress respiratorio acuto.Uno studio comparativo di emogasanalisi e parametri acido-base, ottenuto contemporaneamente da campioni arteriosi e capillari delle dita, è stata eseguita in 45 pazienti con distress respiratorio acuto senza shock circolatorio. Sebbene siano state riscontrate piccole e significative differenze tra i 2 campioni di pH, Po2, Pco2 e valori di bicarbonato, le correlazioni tra i 2 erano maggiori o uguali a 0,97 per ogni variabile. Si è concluso che sebbene il sangue arterioso sia il campione preferito per la valutazione dei gas ematici e dello stato acido-base dei pazienti in distress respiratorio acuto, il sangue capillare sembra essere un valido sostituto nella gestione di questi pazienti. Questa tecnica è particolarmente utile nella pratica pediatrica, dove è meno facile ottenere campioni arteriosi ripetuti.
Preservazione della risposta pressoria polmonare ipossica nella polmonite pneumococcica canina.Per determinare il ruolo della vasocostrizione polmonare ipossica nella polmonite pneumococcica, sono state effettuate misurazioni emodinamiche in 16 cani prima, ed entro 36 ore dopo, la somministrazione intrapolmonare di pneumococco di tipo 3. Dieci cani con uno o più lobi di polmonite hanno aumentato le loro resistenze vascolari polmonari e diminuito leggermente le loro tensioni arteriose di O2. L'ipossia è aumentata e l'iperossia ha diminuito le loro resistenze vascolari polmonari. Durante l'O2 respirazione, la PO2 arteriosa era inferiore rispetto a prima della polmonite e aumentava quando la perfusione polmonare veniva deviata lontano dal polmone malato. In 2 cani che respiravano aria, forzare la gittata cardiaca attraverso il polmone malato ha causato un aumento della resistenza vascolare che poteva essere chiaramente ridotta da Respirazione O2. In 5 cani, la conta dei mastociti polmonari non ha mostrato diminuzione nei lobi con polmonite. Nella polmonite pneumococcica, t Il meccanismo di pressione polmonare ipossica serve a diminuire il flusso sanguigno ai lobi malati e, quindi, a mantenere la PO2 arteriosa. I mastociti polmonari potrebbero partecipare a questa risposta.
Trasferimento di farmaci attraverso la parete ruminale nelle capre.Le velocità con cui pentobarbital, salicilato, antipirina e chinino sono stati trasferiti dal rumine di , sono state misurate le capre coscienti. Sono state anche valutate le velocità con cui gli stessi farmaci si sono diffusi dal plasma sanguigno (in condizioni di concentrazione costante del farmaco) nella soluzione ruminale. Questi composti sono stati assorbiti per semplice diffusione e le velocità di trasferimento erano una funzione del pH della soluzione intraruminale. La diffusione dei farmaci dal plasma nel reticolorumenico ha permesso di stabilire distribuzioni allo stato stazionario in alcune capre. Sono state confrontate le distribuzioni allo stato stazionario teoriche e osservate. Ci sono state buone correlazioni per pentobarbital e antipirina, ma non per salicilato e chinino. Questi risultati confermano in vivo i principi generali del trasferimento di farmaci attraverso l'epitelio ruminale che sono stati derivati da studi precedenti condotti in vitro.
Caratterizzazione di un herpesvirus caprino.Un virus, che è stato isolato da bambini (Capra hircus) affetti da un'infezione generalizzata relativamente grave, è risultato contengono DNA e di avere una densità di galleggiamento di 1.2820 g/cm3 Il virus era sensibile all'azione dei solventi lipidici e della tripsina ed era rapidamente inattivato a pH 3.0 e a temperature di 50 e 56 C. Il virione, un icosaedro costituito da un nucleoide circondato da una doppia membrana, misurato circa 135 nm di diametro. Sulla base delle sue proprietà chimiche e fisiche, il virus è considerato un herpesvirus.
Effetto protettivo dell'ipotermia nella carenza di ossigeno cerebrale causata dall'ipossia arteriosa.Per studiare gli effetti protettivi cerebrali dell'ipotermia nell'ipossia arteriosa, anestetizzata (70% N2O), ratti ventilati meccanicamente sono stati raffreddati a una temperatura corporea di 27 C. L'ipossia è stata indotta diminuendo il contenuto di ossigeno nella miscela di gas inspirata al 6-7 percento o al 2,5-3 percento. 25 e 11-12 torr, rispettivamente. A PaO2 torr, non vi era alcun cambiamento nel flusso sanguigno cerebrale (CBF), nel consumo di ossigeno cerebrale (CMRO2) o nei metaboliti tissutali labili. L'assenza di segni di ipossia cerebrale potrebbe essere attribuita a un effetto di temperatura e pH sulla curva di dissociazione emoglobina-ossigeno, quindi a 27 C con una PaO2 di 25 torr il contenuto totale di ossigeno (TO2) del sangue arterioso rimaneva maggiore di 15 ml (100 ml)-1, circa tre volte il valore ottenuto a questa PO2 in ratti normotermici A PaO2 11-12 torr, il TO2 arterioso era rosso portato a circa 5 ml (100 ml) (-1). L'ipossia non ha indotto alcun cambiamento in CMRO2, un aumento di tre volte in CBF, una moderata lattoacidosi nel tessuto e una piccola diminuzione del contenuto di fosfocreatina, ma nessun cambiamento in ATP, ADP o AMP. Questi cambiamenti sono meno marcati di quelli che si verificano allo stesso TO2 arterioso nei ratti normotermici. Si conclude che l'ipotermia esercita un pronunciato effetto protettivo sul cervello nell'ipossia ipossica e che sono coinvolti due meccanismi. Innanzitutto, poiché l'ipotermia sposta la curva di dissociazione dell'ossiemoglobina verso sinistra e previene o riduce al minimo uno spostamento verso destra dovuto all'acidosi, mantiene un alto TO2 nel sangue arterioso a una data PaO2. In secondo luogo, riducendo il CMRO2, e quindi presumibilmente anche il fabbisogno energetico cellulare, l'ipotermia esercita un effetto protettivo a livello cellulare.
Panoramica: terapia di mantenimento in psichiatria: I. Schizofrenia.La psichiatria ospedaliera si è evoluta dai programmi di "trattamento" a lungo termine che erano principalmente di custodia al successo del trattamento farmacologico degli episodi psicotici acuti. Purtroppo, molti pazienti tornano ancora in ospedale con recidive. Questa cosiddetta sindrome della porta girevole richiama l'attenzione sull'importanza fondamentale della prevenzione e del trattamento degli episodi acuti. Nella prima parte di questo panoramica, l'autore passa in rassegna la letteratura clinica sul trattamento profilattico della schizofrenia con farmaci antipsicotici di mantenimento. La seconda parte passerà in rassegna la letteratura sul trattamento profilattico dei disturbi affettivi con litio e triciclici. A parere dell'autore questi farmaci forniscono il potenziale per una vera prevenzione psichiatria.
Pressione del fluido interstiziale e secrezione gastrica alcalina.La pressione del fluido interstiziale della sottomucosa del fondo gastrico è stata monitorata mediante capsule di Guyton in cani anestetizzati con pentobarbital. La pressione intracapsulare (ICP) è stata misurata durante la secrezione prodotta da: a) soluzioni ipertoniche poste all'interno dello stomaco b) ipertensione arteriosa (200 mmHg) applicata durante l'infusione intra-arteriosa di istamina, ec) intra-arteriosa infusione di acetilcolina. La prima procedura non ha modificato l'ICP. D'altra parte, ogni volta che il liquido interstiziale è apparso nel lume gastrico durante l'ipertensione più istamina, l'ICP medio è aumentato, principalmente a causa dell'aumento della filtrazione capillare. Il coefficiente idraulico misurato in questi esperimenti era di almeno 4 ordini di grandezza maggiore del rispettivo coefficiente osmotico. L'azione dell'acetilcolina era complessa: grandi dosi aumentavano la filtrazione capillare netta, ma piccole dosi aumentavano ha alleviato l'ICP medio solo con la stimolazione muscolare. La contrazione della muscolaris mucosae potrebbe essere il meccanismo più importante alla base del flusso di massa del liquido interstiziale in condizioni fisiologiche. Si conclude che i gradienti idraulici attraverso l'epitelio potrebbero spiegare la "secrezione" del succo "alcalino".
Effetti dei neuroumori autonomici sui potenziali transmembrana delle fibre del plateau atriale.Le fibre del plateau atriale canino isolate sono state trattate con acetilcolina o norepinefrina per notare gli effetti sulla potenziale transmembrana. L'acetilcolina, 1,0 o 2,0 mug/ml, ha costantemente ridotto la pendenza della depolarizzazione intrinseca di fase 4. Aumenti del potenziale diastolico massimo e della velocità di salita si sono verificati insieme a una diminuzione del superamento. La fase di plateau è scomparsa. Pretrattamento con atropina, 1,0 mug/ ml, ha impedito queste risposte e da solo questo farmaco non ha avuto effetti riconoscibili. La noradrenalina ha costantemente aumentato la pendenza della depolarizzazione di fase 4. Spesso le fibre di plateau generavano potenziali d'azione dal normale meccanismo del pacemaker. "Aritmie" caratterizzate da eccitazioni spontanee sono state indotte in 92 % degli esperimenti sulla noradrenalina La noradrenalina ha anche migliorato la fase di plateau del potenziale d'azione e ha diminuito la velocità di salita e superamento. Il propranololo racemico, 1,0 mug/ml, ha bloccato tutti gli effetti di cui sopra, comprese le aritmie. Il destropropranololo, 1,0 tazza/ml, non ha bloccato gli effetti prodotti dalla noradrenalina. L'acetilcolina, applicata alle fibre in trattamento con noradrenalina, ha ridotto la pendenza della depolarizzazione di fase 4 indotta dalla noradrenalina e ha interrotto le aritmie indotte.
Ph e K+ intracellulari del muscolo cardiaco e scheletrico in acidosi e alcalosi.Gli effetti di un'acidosi e alcalosi metabolica e respiratoria sul pH intracellulare (pHi ) e K+ sono stati confrontati nel muscolo cardiaco e scheletrico del coniglio anestetizzato. Lo spazio extracellulare e il pHi sono stati calcolati dai volumi di distribuzione di [51Cr] EDTA e [14C] DMO, rispettivamente. Quando il pHe è stato variato alterando la PCO2, la pendenza della linea che mette in relazione il pHi con il pH extracellulare (pHe) era maggiore (P minore di 0,05--0,001) di quello ottenuto durante i cambiamenti metabolici del pHe nei ventricoli destro e sinistro, negli atri, nel diaframma e nel quadricipite. Durante l'acidosi metabolica e l'alcalosi, la pendenza della linea pHi/pHe non variava tra i tessuti. Durante l'acidosi respiratoria, non c'era differenza di pendenza tra i tessuti cardiaci, ma era minore nel ventricolo sinistro rispetto al quadricipite (P inferiore a 0,001). Nel ventricolo sinistro il K+ intracellulare aumentava un metabolico (P meno tha n 0,05) o acidosi respiratoria (P inferiore a 0,02), mentre nel diaframma è diminuito (P inferiore a 0,02). K+ intracellulare correlato con pHe e pHE-PHi. I cambiamenti nel pHi ma non nel K+ intracellulare potrebbero spiegare le differenze note nella funzione miocardica nell'acidosi respiratoria e metabolica.
ECS, pH intracellulare ed elettroliti del muscolo cardiaco e scheletrico.Lo spazio extracellulare (ECS) del muscolo da ciascun ventricolo del cuore (RV e LV), gli atri, il diaframma e il quadricipite sono stati stimati nel coniglio anestetizzato dai volumi di distribuzione di [14C]insulina, [14C]saccarosio, [51Cr]EDTA e C1-- Sono stati misurati gli elettroliti del tessuto intero e intracellulari elettroliti calcolati. L'ECS dei tessuti variava, aumentando nell'ordine quadricipite meno di LV meno di RV meno di atri. Il volume di distribuzione di [14C]inulina era sempre inferiore a quello di [14C]saccarosio o [51Cr]EDTA che concordavano strettamente, mentre quello di C1-- era sempre maggiore Non c'era differenza di K+ intracellulare nel muscolo da ciascuna delle camere cardiache, mentre Na+ e C1-- intracellulari variavano, aumentando nell'ordine quadricipite meno di LV meno di RV inferiore agli atri Il pH intracellulare, misurato con [14C]DMO non differiva in nessuno dei tessuti è studiato. Si conclude che, in vivo, l'ECS muscolo incardiaco stimato è inferiore a quello riportato in vitro, che [51Cr]EDTA è un marker ECS soddisfacente e che esistono differenze di Na+ e C1-- intracellulari ma non di K+ o pH tra i muscoli dalle camere cardiache.
Fabbisogno ionico del trasporto del sodio tubulare prossimale. II. Ione idrogeno.La perfusione simultanea ai tubuli contorti prossimali e ai capillari peritubulari è stata utilizzata per studiare gli effetti di diversi fluidi di perfusione sul riassorbimento di sodio e sulla secrezione di idrogeno, che è stato calcolato come riassorbimento di bicarbonato e acido titolabile. I risultati mostrano che il riassorbimento di sodio non era strettamente accoppiato alla secrezione di idrogeno. Il bicarbonato stimola sia il riassorbimento di sodio che la secrezione di idrogeno, ma Tris stimola solo il riassorbimento di sodio. un gradiente di cloruro avverso attraverso il tubulo prossimale (C1- peritubulare maggiore di C1- luminale) ha ridotto il riassorbimento di sodio ma non ha diminuito la secrezione di idrogeno. Diamox ha inibito sia il trasporto netto di sodio che di idrogeno. Si conclude che non esiste un legame stabile tra riassorbimento di sodio e secrezione di idrogeno e che il bicarbonato probabilmente stimola il trasporto di sodio con una serie di meccanismi, incluso g un effetto sul trasporto del sodio non correlato alla sua capacità di aumentare la secrezione di ioni idrogeno.
Malformazioni congenite del sistema nervoso centrale prodotte da analgesici narcotici nel criceto.Dati di risposta teratogena alla dose materna-fetale sono stati ottenuti per una varietà di narcotici e composti correlati mediante singole iniezioni sottocutanee dei farmaci in criceti gravidi durante i periodi critici dell'organogenesi del sistema nervoso centrale. Il numero di feti anormali da femmine iniettate con diacetilmorfina (eroina), tebaina, fenazocina, pentazocina, propossifene e metadone è aumentato come la dose materna dei composti è stata aumentata. Al contrario, morfina, idromorfone e meperidina hanno prodotto un aumento del numero (percento) di anomalie fetali solo fino a un certo livello di dose materna. Ulteriori aumenti dei livelli di dose materna non hanno prodotto ulteriori anomalie fetali Studi comparativi di dosi materne singole e multiple hanno indicato che la diacetilmorfina (eroina) e il metadone hanno prodotto un aumento da quattro a sei volte di fe tal anomalie con dosi ripetitive mentre la percentuale di feti malformati è rimasta la stessa con idromorfone (Dilaudid). Gli antagonisti dei narcotici nalorfina, naloxone, levallofano e ciclazocina hanno bloccato gli effetti teratogeni di dosi singole e multiple dei narcotici.
Indagini epidemiologiche sull'epidemia di encefalite venezuelana del 1969 in Ecuador.Un'epizoodemica di encefalite equina venezuelana (VEE), sottotipo I variante B, si è verificata in Ecuador durante la stagione piovosa e calda del 1969. In questo lavoro viene fornita una descrizione generale dell'epidemia e vengono riportati gli isolamenti del virus nell'uomo. È stata eseguita un'indagine sierologica per determinare l'estensione dell'epidemia lungo la zona costiera del paese. Non è chiaro se il tasso di anticorpi più elevato nelle persone anziane sia dovuto al fatto che erano a maggior rischio di infezione o era il risultato di un'immunità accumulata nel tempo. Quest'ultima potrebbe essere un'indicazione di attività virale endemica, non ancora dimostrata per il Variante del virus VEE IB. Sono stati effettuati la sorveglianza delle zanzare e il tentativo di controllo mediante irrorazione aerea.
Endosimbiosi e tolleranza cellulare nel corallo molle hawaiano Sarcothelia edmondsoni verrill.La relazione tra il corallo molle Sarcothelia edmondsoni Verrill e le sue alghe simbionti è considerata come un primo esempio di tolleranza cellulare che può essere disturbata da una varietà di condizioni avverse. Le cellule algali giacciono in vescicole profonde all'interno delle cellule endodermiche dell'ospite e non sono soggette a digestione. La loro espulsione sembra essere una traslocazione inversa all'estremità distale della cellula ospite e fuoriescono da una forma di fagocitosi inversa simile alla secrezione. I meccanismi cellulari coinvolti non sono chiari.
Forme multiple di alfa-tossina stafilococcica.Un gruppo di proteine è stato prontamente estratto a neutralità dai precipitati di acido tricloroacetico dei supernatanti del filtrato di colture stafilococciche, mentre l'alfa - la tossina è stata sciolta e attivata trattando il precipitato con urea 8 M, con tamponi acidi o riscaldando a 90-100 gradi C in condizioni di neutralità. L'attivazione termica del precipitato ha prodotto una alfa-tossina relativamente pura con un peso molecolare di 39.000 alfa -La tossina è stata eluita insieme ad altre tre proteine su cromatografia apatite idrossilica, ed è stata ottenuta evidenza di un'associazione tra le quattro proteine. Sulla focalizzazione isoelettrica è stata ottenuta una frazione emolitica a pH 6.2, probabilmente a causa dell'attivazione acida del precipitato formatosi alla fase catodica fine della colonna Le frazioni alfa-emolitiche con pI\'s di 7,4 e 8,6 hanno dimostrato di essere costituite da alfa-tossina solo quando analizzate mediante elettroforesi di acrilammide in presenza di sodio dodec il solfato. Il componente emolitico con un pI di 9,2 conteneva due componenti aggiuntivi di peso molecolare di 27.500 e 18.000. La cromatografia di questo materiale su Sephadex G-200 ha mostrato che l'alfa-tossina e le due proteine apparivano come un complesso ad alto peso molecolare.
Otite media acuta. Uno studio clinico batteriologico e sierologico su bambini con frequenti episodi di otite media acuta.Una serie di episodi di otite media acuta è stata studiati con riferimento ai reperti batterici e alle risposte sierologiche specifiche in 48 bambini con anamnesi di episodi frequenti prima. D. pneumoniae e H. influenzae sono stati i patogeni più frequentemente isolati. I re-isolamenti dopo la terapia sono stati spesso effettuati in episodi di lenta guarigione o fallimento terapeutico La maggior parte dei bambini ospitava patogeni nel rinofaringe anche quando non presentavano segni di infezioni del tratto respiratorio. Le recidive omologhe sono state osservate solo in pochi casi e mai con pneumococco di tipo 3 e solo una volta con H. influenzae di tipo b. Risposte sierologiche specifiche sono state generalmente dimostrabili nei bambini di età superiore ai 2 anni D. pneumococcus di tipo 3 e H. influenzae di tipo B hanno generalmente provocato una risposta anticorpale Non sono stati trovati livelli che indichino carenze di immunoglobuline nei bambini.
Studio comparativo delle infezioni virologiche in bambini asmatici e non asmatici.L'autore mostra analisi complesse: cliniche, di laboratorio, radiografiche, broncoscopiche, broncografiche e misurazione dei test di funzionalità polmonare nonché degli esami sierologici nel siero sanguigno di entrambi i gruppi di bambini asmatici e non asmatici con infezione virologica Il calcolo delle differenze statisticamente significative tra i vari risultati diagnostici di entrambi i gruppi ha confermato che nei bambini asmatici infezione virologica delle vie respiratorie del tratto respiratorio, reperti patologici nei test a raggi X e di funzionalità polmonare, bronchiectasie e invasione batteriologica secondaria si verificano statisticamente significativamente più spesso che nei bambini non asmatici.
Studi di rilassamento chimico sul sistema alcol deidrogenasi del fegato, NADH e imidazolo.Diversi anni fa, Theorell e Czerlinski hanno condotto esperimenti sul sistema del fegato di cavallo alcol deidrogenasi, ridotto nicotinammide adenina dinucleotide e imidazolo, utilizzando la prima versione dell'apparato di salto di temperatura con rilevamento di cambiamenti nella fluorescenza. Questi primi esperimenti sono stati ripetuti con strumentazione migliorata e hanno confermato i primi esperimenti in termini generali. Tuttavia, il sistema di rilevamento migliorato ha permesso misurare una leggera dipendenza dalla concentrazione del tempo di rilassamento di circa 3 ms. Inoltre, il tempo di rilassamento chimico era inferiore a quello determinato in precedenza (dal fattore 2). I dati sono stati valutati in modo molto più rigoroso rispetto a prima, consentendo un'interpretazione appropriata del risultati. Il tempo di rilassamento osservato è in gran parte dovuto alle costanti di velocità in un'interconversione di complessi ternari, che sono più veloci di thr ee (delle quattro) costanti di velocità di dissociazione, determinate in precedenza da Theorell e McKinley-McKee.1,2 Questo fatto ha contribuito alle precedenti difficoltà di trovare una dipendenza dalla concentrazione. Tuttavia, il legame dell'imidazolo al complesso binario enzima-coenzima può essere fatto accoppiare cineticamente nella velocità di interconversione dei due complessi ternari. Il segnale osservato deriva in gran parte dal complesso(i) ternario(i). Un sostanziale cambiamento del segnale di fluorescenza è associato al processo di rilassamento osservato, suggerendo una rilocazione dell'imidazolo in riferimento alla frazione nicotinammide del coenzima legato. Sono considerati nove modelli con due tipi di accoppiamento dei pre-equilibri (nessuno). Le valutazioni quantitative favoriscono il modello con due complessi ternari collegati da un'interconversione al di fuori del ciclo a quattro fasi (bimolecolare). Il complesso ternario esterno al ciclo ha una resa di fluorescenza molto più elevata di quello interno. L'equilibrio di interconversione è vicino all'unità per l'imidazolo. Se si spostasse molto dal lato del complesso "vicolo cieco" (come nell'isobutiramide. . ), l'azione stimolante non potrebbe aver luogo.
[Effetto del nervo vago sugli atri di coniglio isolati nel blocco gangliare dovuto all'esametonio].Per stimolazione quantitativa dei nervi vaghi di atri di coniglio isolati sono state ottenute relazioni frequenza-risposta sia per l'effetto elettrotropico (riduzione dell'area del potenziale d'azione monofasico) che per la risposta inotropa. Un'aggiunta di esametonio in una concentrazione finale di 10(-5) g/ml ha determinato una diminuzione del l'efficacia nell'intervallo delle basse e medie frequenze di stimolazione, ed era collegata con uno spostamento della caratteristica di risposta in frequenza a destra. Alle frequenze più alte l'efficacia vagale era aumentata. In contrasto con l'effetto inibitorio dell'esametonio, l'azione facilitante è irreversibile. Aumentando la concentrazione fino a 4-10(-5) g/ml gli effetti vagali sono stati ridotti in larga misura e la dipendenza dalla frequenza della risposta è stata abolita alle frequenze medie. Nel range di 20 sec(-1) a 100 secondi c(-1) questa dipendenza è stata ristabilita e può essere considerata come parte di una normale relazione frequenza-risposta estremamente spostata a destra. L'andamento temporale di entrambi i tipi di effetto è caratterizzato da un forte aumento e da un decadimento della risposta durante il periodo di stimolazione. Una gestione matematica delle caratteristiche di risposta in frequenza fornisce prove quantitative per l'entità del blocco esametonio delle cellule gangliari vagali negli atri; inoltre porta al concepimento di queste cellule per fungere da sistema distributivo per un'innervazione omogenea da una diffusa divergenza di fibre postgangliari.
Ulteriore caratterizzazione dell'associazione della gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi con le membrane dei reticolociti.1. Il comportamento e le proprietà della GAPDH legata alla membrana del coniglio sono stati studiati i reticolociti. 2. La GAPDH legata è più resistente all'inattivazione da parte di KCl rispetto all'enzima solubile (allotopia). 3. L'enzima legato viene rilasciato dagli elettroliti. Questo effetto non dipende solo dalla forza ionica ma anche dal tipo di ioni, valore del pH e concentrazione proteica 4. Un confronto dell'effetto di rilascio degli analoghi del NAD mostra la necessità della frazione 5\'-AMP nella struttura dell'effettore 5. I risultati rappresentati dimostrano la specificità del GAPDH- legame di membrana nei reticolociti di coniglio.
Aerobacter aerogenes PRL-R3 ureasi. Purificazione e proprietà.Un metodo per la preparazione di un'ureasi di A. aerogenes purificata e omogenea 150 volte è riportato. L'enzima ha mostrato due valori ottimali di pH a pH 7,0 e 7,5 rispettivamente in tampone trietanolamina e fosfato. L'affinità dell'enzima verso il suo substrato è aumentata con l'aumento del pH. Nessun effetto del pH è stato osservato sul coefficiente di temperatura misurato (Q10 Non c'era discontinuità nei grafici di Arrhenius a pH 5,4 e 7,5 ma una discontinuità verso l'alto a pH 6,15 e 8,7 con temperatura di transizione a 30 gradi C. Inoltre, le energie di attivazione calcolate sono fortemente influenzate dal pH della miscela di reazione enzimatica.