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Classi di credibilità per desensibilizzazione e pseudoterapia tra studenti universitari moderatamente e moderatamente evitanti i serpenti.Venti soggetti moderatamente evitanti e 20 moderatamente evitanti sono stati scelti come se dovevano partecipare a un esperimento di desensibilizzazione per evitare i serpenti. Dopo l'allenamento di rilassamento, i soggetti hanno ascoltato un estratto registrato di desensibilizzazione o pseudoterapia e hanno risposto a un questionario di 5 voci che ha valutato la credibilità del trattamento. I soggetti leggermente evitanti hanno valutato la desensibilizzazione come più credibile rispetto alla pseudoterapia. L'implicazione di questa scoperta è che moltissimi studi sperimentali sulla desensibilizzazione sistematica non sono riusciti a controllare in modo soddisfacente l'azione degli effetti di aspettativa e delle forme aspecifiche di influenza comportamentale.
Arilsulfatasi B del polmone umano. Isolamento, caratterizzazione e interazione con la sostanza a reazione lenta dell'anafilassi.Arilsulfatasi B è stata separata dall'arilsulfatasi A negli estratti del tessuto polmonare umano mediante cromatografia a scambio anionico e ulteriormente purificato mediante filtrazione su gel e cromatografia a scambio cationico L'arilsolfatasi B del polmone umano era simile a quell'enzima in altri tessuti e specie, mostrando un peso molecolare apparente di circa 60.000, un pH ottimale per la scissione di 4-nitrocatecol solfato (pNCS) di 5,5-6,0 e una sensibilità all'inibizione da parte degli ioni fosfato e soprattutto del pirofosfato in presenza di NaCl L'arilsolfatasi polmonare umana ha inattivato la sostanza a reazione lenta dell'anafilassi (SRS-A) in un tempo lineare- reazione dipendente in cui la velocità è stata determinata dal rapporto enzima-substrato. La scissione di pNCS da parte dell'arilsolfatasi polmonare umana è stata soppressa in modo competitivo da SRS-A. La scoperta che il tessuto polmonare umano contiene prevalentemente l'arilsulfatasi B rivela un potenziale meccanismo di regolazione per l'inattivazione di SRS-A in corrispondenza o in prossimità del sito della sua generazione.
Un modello di reticolociti di coniglio per il ruolo del repressore controllato dall'emina nelle anemie ipocromiche.L'emina consente la massima sintesi proteica nei reticolociti di coniglio intatti e nelle loro cellule- preparazioni di lisato libero ritardando la formazione di un repressore traduzionale (HCR) presente nel supernato postribosomiale Per valutare il ruolo dell'HCR nella patogenesi delle anemie ipocromiche, l'HCR è stato isolato e parzialmente purificato da reticolociti di coniglio intatti incubati in vitro con 0,1 mM alfa,alfa-dipiridile (un agente chelante del ferro) o 0,1 M etanolo. Entrambi questi agenti inibiscono la sintesi proteica dei reticolociti. L'emina (50 muM) protegge dall'inibizione di entrambi gli agenti. Una miscela ferrosa-transferrina, tuttavia, protegge solo contro l'alfa, l'alfa-dipiridile. Sia l'alfa, l'alfa-dipiridile che l'etanolo inibiscono la sintesi dell'eme prima che venga influenzata la sintesi proteica, mentre nessuno dei due riduce i livelli di ATP o GSH. Questi risultati indicano th mentre entrambi gli agenti inibiscono la sintesi dell'eme, l'alfa, l'alfa-dipiridile lo fa inducendo carenza di ferro mentre l'etanolo agisce in una fase che non richiede ferro. Quando l'HCR è stato isolato da cellule intatte e analizzato nei sistemi privi di cellule reticolocitarie, più e meno emina, è stata riscontrata la comparsa prematura dell'HCR nelle cellule incubate in vitro con alfa, alfa-dipiridile o etanolo. Quando l'emina era presente nell'incubazione delle cellule intatte, l'aspetto dell'HCR era ritardato. L'HCR da cellule trattate con alfa,alfa-dipiridile etanolo è stato parzialmente purificato ed eluito nella stessa posizione su una colonna Sephadex G-200 (peso molecolare circa 3 x 10(5)) di quello dei supernati postribosomiali incubati meno emina. Inoltre a conigli con anemia emolitica indotta da fenilidrazina è stato somministrato etanolo per via endovenosa in vivo alla dose di 0,4 ml/kg. Questa concentrazione di alcol ha determinato un'inibizione della velocità di sintesi dell'eme e della sintesi proteica, nonché un'accelerazione della formazione di HCR nei reticolociti. L'HCR di questi conigli trattati in vivo è stato isolato, parzialmente purificato e analizzato in modo identico agli esperimenti in vitro. Questi esperimenti in vivo supportano ulteriormente il ruolo fisiologico e fisiopatologico dell'HCR nei reticolociti. Sulla base di questi risultati viene proposto un modello per un ruolo dell'HCR in alcune delle anemie ipocromiche. Nella carenza di ferro o nelle malattie croniche (dove il ferro non è disponibile per l'eritroblasto per la sintesi dell'eme) l'HCR compare prematuramente e inibisce la sintesi proteica. Quando la sintesi dell'eme è inibita dall'etanolo ma c'è abbastanza ferro intracellulare, l'HCR compare prematuramente e inibisce la sintesi proteica, il ferro si accumula nell'eritroblasto e il risultato finale è l'anemia sideroblastica.
Risposta degli androgeni plasmatici alla stimolazione con hCG in ragazzi in età prepuberale con ipospadia e criptorchidismo.I livelli sierici di testosterone, androstenedione e deidroepiandrosterone sono stati misurati prima e dopo 5 giorni di trattamento con hCG (2000 UI/die) in 36 ragazzi in età prepuberale con criptorchidismo e 11 con ipospadia al fine di determinare se un difetto nella sintesi degli androgeni potesse essere una causa comune di questi disturbi. I livelli basali e stimolati di testosterone, androstenedione e deidroepiandrosterone sono stati simili nei pazienti con criptorchidismo unilaterale, monorchismo e ipospadia; i livelli basali e stimolati di testosterone erano più bassi nei ragazzi con criptorchidismo bilaterale I livelli di testosterone non erano correlati né con la posizione anatomica del testicolo nei pazienti con criptorchidismo unilaterale né con la sede dell'uretra nei ragazzi con ipospadia Sette dei 36 pazienti con criptorchidismo avevano una storia familiare positiva di un simile r disordine; i livelli di testosterone erano simili nei pazienti con e senza storia familiare. Si conclude che: 1) in tutti i pazienti studiati è presente la fase gonadotropina dipendente della produzione di testosterone; 2) la stimolazione con hCG non è in grado di rilevare la disfunzione unilaterale delle cellule di Leydig; e 3) nei casi familiari di criptorchidismo, qualche fattore diverso da un'anomalia nella sintesi degli androgeni può essere responsabile della tendenza ereditaria.
Separazione di alcuni acidi tipici del ciclo di Krebs mediante isotacoforesi ad alta velocità.Al fine di eseguire una separazione richiesta, una procedura sperimentale per la selezione di idonei le condizioni operative sono suggerite e discusse. Si basa su misurazioni delle dipendenze delle mobilità effettive relative dei componenti in esame dal pH dell'elettrolita principale. La procedura è stata applicata ad un insieme di acidi tipici del ciclo di Krebs e ai valori del Le mobilità relative effettive misurate sono riportate in tabelle e grafici. Un pH di 3,8 è stato scelto come il più adatto. A questo valore, gli acidi studiati sono stati separati con successo in meno di 4 minuti usando acido cloridrico 0,011 M + beta-alanina come elettrolita principale.
Determinazione dell'indometacina nel siero e nelle urine mediante cromatografia gas-liquido a cattura di elettroni.Metodo specifico e sensibile per la determinazione quantitativa dell'indometacina nel siero e viene descritta l'urina. Il farmaco viene estratto a pH 5,0 con 1,2-dicloroetano e una parte dell'estratto organico viene concentrata e fatta reagire con diazoetano in etere etilico. Il derivato dell'estere etilico viene analizzato mediante gas-liquido a cattura di elettroni cromatografia, quantificazione ottenuta mediante confronto delle aree dei picchi per campioni e standard, preparati nel siero o nelle urine e trattati allo stesso modo dei campioni. Il limite di sensibilità è di 50 ng/ml e la relativa derivazione standard per determinazioni ripetute su lo stesso campione è circa il 3%.
Identificazione dell'albumina come fattore sierico essenziale per la crescita dei linfociti umani attivati.L'albumina da siero umano, bovino o di coniglio ha sostenuto la crescita di altrettanto bene i linfociti umani derivati dal timo stimolati dalla concanavalina A. Questa attività è stata completamente abolita dalla digestione con pepsina. È stato dimostrato per l'albumina sierica bovina che la molecola di albumina stessa, e né un'impurità né un fattore legato all'albumina, era essenziale per la crescita di linfociti Questa conclusione si basava sulle osservazioni che l'attività di promozione della crescita non poteva essere rimossa dall'albumina e che l'attività specifica dell'albumina rimaneva inalterata dopo le seguenti procedure: setacciamento molecolare a pH 7,5 a pH 3,0 e in urea 8 M a pH 6,6; cromatografia a scambio ionico a pH 4,3 e in urea 8 M a pH 7,2; focalizzazione isoelettrica; trattamento con carbone vegetale; precipitazione con acetone e riduzione con 2-mercaptoetanolo in presenza di urea 8 M. L'albumina dimerica era f È stato dimostrato che mercaptalbumina e non-mercaptalbumina hanno la stessa attività.
Stechiometria dell'espulsione di H+ durante l'accumulo di Ca2+ dipendente dalla respirazione da parte dei mitocondri di fegato di ratto.Abbiamo studiato l'assorbimento di Ca2+ dipendente dall'energia da parte del fegato di ratto mitocondri con succinato come substrato respiratorio con aggiunta di rotenone per bloccare il trasporto di elettroni legato al NAD In presenza di acido 3-idrossibutirrico o altri acidi monocarbossilici permeabili il Ca2+ è stato assorbito in misura vicina a quella osservata in presenza di fosfato. La relazione quantitativa tra catione e L'assorbimento di anioni è stato determinato dalla pendenza di un grafico dell'assorbimento di 3-idrossibutirrato rispetto all'assorbimento di Ca2+, un metodo che ha consentito la determinazione della stechiometria senza richiedere correzioni ambigue per eventi di legame precoci non energizzati o non stechiometrici. Questa procedura ha mostrato che 2 molecole di 3-idrossibutirrato erano accumulati con ogni ione Ca2+. In queste condizioni sono stati accumulati vicino a 2 ioni Ca2+ e 4 molecole di 3-idrossibutirrato per coppia di e elettroni per sito di conservazione dell'energia della catena respiratoria. Poiché il 3-idrossibutirrato deve essere protonato per passare la membrana come acido libero indissociato, si conclude che sono stati espulsi (e successivamente riassorbiti) 4 protoni per coppia di elettroni per sito di conservazione dell'energia, in contrasto con il valore 2.0 postulato dal chemiosmotico ipotesi.
Trasporto di calcio guidato da un gradiente di protoni e vescicole di membrana invertite di Escherichia coli.È stato osservato che il trasporto di calcio in vescicole invertite di Escherichia coli avviene senza un fonte di energia esogena quando è stato utilizzato un gradiente protonico artificiale. L'orientamento del gradiente protonico era acido all'interno e alcalino all'esterno. Per il trasporto era necessario sia fosfato che ossalato, come è stato riscontrato per l'assorbimento guidato dalla respirazione o dall'ATP (Tsuchiya, T. , e Rosen, BP (1975) J. Biol. Chem. 250, 7687-7692). È stato riscontrato che l'accumulo di fosfato si verifica in concomitanza con l'accumulo di calcio. Il trasporto di calcio guidato da un gradiente protonico artificiale è stato stimolato dalla dicicloesilcarbodiimmide, un inibitore del Mg2+ATPasi (EC 3.6.1.3) La valinomicina, che catalizza il movimento elettrogenico del potassio, ha stimolato l'accumulo di calcio, mentre la nigericina, che catalizza lo scambio elettroneutro di potassio e protoni, ha inibito entrambi i protoni artificiali trasporto guidato dal gradiente e trasporto guidato dalla respirazione. Altre proprietà del sistema guidato dal gradiente protonico e del sistema di trasporto del calcio collegato all'energia precedentemente riportato sono simili, indicando che il calcio viene trasportato dallo stesso vettore se l'energia viene fornita attraverso un gradiente protonico artificiale o uno stato di membrana energizzato. Questi risultati suggeriscono l'esistenza di un antiporto calcio/protone.
Isolamento e caratterizzazione di indolo-3-acetaldeide reduttasi da Cucumis sativus.In uno studio continuo della via biosintetica e dei meccanismi regolatori che governano l'indolo-3 -formazione di acido acetico (auxina), riportiamo l'isolamento e la caratterizzazione iniziale di tre distinte indolo-3-acetaldeide reduttasi da piantine di cetriolo. Questi enzimi catalizzano la riduzione dell'indolo-3-acetaldeide a indolo-3-etanolo con la concomitante ossidazione di Da NAD(P)H a NAD(P)+. Due delle reduttasi sono specifiche per NADPH come secondo substrato, mentre la terza è specifica per NADH. Gli enzimi mostrano una forte specificità per l'indoleacetaldeide, con valori Km apparenti di 73mum, 130mum, e 400mum calcolati rispettivamente per le due reduttasi specifiche per NADPH e per la reduttasi specifica per NADH. In nessuna condizione di concentrazione del substrato, tempo di incubazione o metodo di dosaggio è stato possibile osservare la reazione inversa. Cromatografia su un Sephadex g calibrato el ha portato a pesi molecolari stimati di 52.000 e 17.000 per le reduttasi specifiche per NADPH, mentre è stato ottenuto un valore di 33.000 per la reduttasi specifica per NADH. Entrambe le reduttasi specifiche per NADPH hanno mostrato un pH ottimale di 5,2 con un ottimo secondario a 7,0 ed entrambi gli enzimi sono stati attivati aumentando la forza ionica. La reduttasi specifica per NADH ha mostrato un pH ottimale di 7,0 con un ottimale secondario di 6,1 ed è stata leggermente inibita dall'aumento della forza ionica.
31P NMR dei complessi fosfato e fosfonato delle fosfatasi metalloalcaline.31P NMR dei complessi fosfato e fosfonato della fosfatasi alcalina di Escherichia coli sono stati ottenuti da Fourier metodi NMR di trasformazione. Un equivalente di P1i, legato alla fosfatasi alcalina Zn(II), pH 8, dà luogo a una singola risonanza 31P a 2 ppm a valle di quella del Pi, e assegnabile al complesso non covalente EP. Fosfato inorganico superiore a 1 eq per dimero enzimatico dà luogo a una risonanza nella posizione prevista per il Pi libero. A pH 5.1, una seconda risonanza appare a 8,5 ppm a valle di quella per il Pi libero ed è assegnabile al complesso covalente, EP. Il grande spostamento verso il basso suggerisce che il gruppo fosforile dell'enzima è fortemente teso con un angolo di legame OPO inferiore a 100 gradi.
Metallophosphoryl and Apophosphoryl Alkaline Phosphatases.I complessi di fosfato non covalente (EP) e fosforo covalente (EP) di Zn(II), Cd(II) , e le fosfatasi apoalcaline di Escherichia coli sono state studiate mediante metodi cinetici a flusso interrotto e tecniche di etichettatura con 32 P. Con 2,4-dinitrofenilfosfato come substrato, la preincubazione dell'enzima Zn(II) con Pi a pH 8 rallenta il burst pre-stazionario velocità, ma non influenza l'entità del burst di 1 mol di ROH per dimero enzimatico. La preincubazione dell'enzima con Pi a pH 5,5 riduce l'entità del burst della metà, oltre a ridurre la velocità di scoppio. La riduzione dell'entità del burst come una funzione del pH della preincubazione con Pi segue la stessa funzione di quella precedentemente stabilita per la formazione di EP. Quindi, ROP fosforila l'enzima spostando il fosfato da EP durante una reazione pre-stazionaria, mentre EP gira allo stato stazionario velocità dello stato.
Meccanismi di trasporto in membrane plasmatiche isolate. Processamento nucleosidico da parte di vescicole di membrana da cellule di fibroblasti di topo cresciute in un terreno definito.Vescicole di membrana plasmatica isolate da una linea secondaria di fibroblasti di topo L929 cresciuti su terreno definito in assenza di siero. Queste vescicole non erano significativamente contaminate dai mitocondri o dal reticolo endoplasmatico. La procedura di isolamento, una modifica di quella originariamente sviluppata da McKeel e Jarett (McKeel, DW e Jarett, L. (1970) J. Cell Biol. 44, 417-432) impiega l'omogeneizzazione meccanica in mezzo isotonico seguita da centrifugazione differenziale. Le vescicole della membrana plasmatica risultanti assorbono radioattività quando esposte a nucleosidi etichettati uniformemente. Sono state isolate due sottofrazioni della membrana plasmatica, distinte per la loro diversa attività della 5\'-nucleotidasi e dell'ATPasi stimolata da (Na+,K+), due ben noti marcatori enzimatici della membrana plasmatica. ampiamente studiato in una sottofrazione; era lineare con il tempo e la concentrazione di membrana negli intervalli utilizzati per gli studi. I valori di Km apparenti per l'assorbimento della radioattività da adenosina, inosina e uridina erano 7,1 +/- 26 muM, rispettivamente. L'assorbimento della radioattività da tutti e tre i nucleosidi mostra un ampio pH ottimale da pH 7 a pH 9, ma diminuisce rapidamente a pH più basso. N-etilmaleimmide era un inibitore efficace della captazione della radioattività da tutti e tre i nucleosidi; l'assorbimento della radioattività dall'uridina è più sensibile dell'assorbimento della radioattività dai nucleosidi purinici. L'adenosina ha inibito l'assorbimento della radioattività dall'inosina più che dall'uridina. L'inosina ha inibito l'assorbimento della radioattività dall'adenosina, ma non l'uridina. La caffeina e il riboside 6-metilaminopurina (6-N-metiladenosina inibiscono in modo differenziale l'assorbimento della radioattività da adenosina e inosina, e quindi le vescicole apparentemente possiedono sistemi di trasporto separati per l'assorbimento della radioattività dai nucleosidi purinici e dall'uridina.
Condroitinasi C da Flavobacterium heparinum.Da Flavobacterium heparinum è stata isolata una condroitinasi che agisce sul condroitin solfato C e sull'acido ialuronico. Questo enzima è stato separato dal condroitinasi AC e una condroitinasi B indotta presente anche in estratti di F. heparinum precedentemente coltivati in presenza di condroitin solfati A, B o C. L'enzima agisce sul condroitin solfato C producendo tetrasaccaride più un disaccaride 6-solfatato insaturo (delta Di-6S ), e su acido ialuronico che produce disaccaride insaturo non solfato (delta Di-OS). Anche la condroitina solfato A viene degradata producendo oligosaccaridi e delta Di-6S ma non delta Di-4S. La condroitinasi C si distingue anche dalle condroitinasi B e AC per diverse proprietà, come l'effetto degli ioni, la temperatura per un'attività ottimale e la suscettibilità all'aumento delle concentrazioni di sale. La specificità del substrato della condroitinasi C è diversa da quello di qualsiasi altra condroitinasi o ialuronidasi finora descritta.
Dimostrazione di una relazione precursore-prodotto tra elastina solubile ed elastina reticolata e la biosintesi delle desmosine in vitro.Evidenza diretta che dimostra che un La forma solubile dell'elastina è il precursore dell'elastina reticolata è stata ottenuta da esperimenti di pulse-chase utilizzando l'aorta di embrioni di pollo e dimostrando la conversione dell'elastina solubile in elastina reticolata in un sistema privo di cellule. marcate a impulsi con [14C]lisina contengono due proteine radioattive di peso molecolare 74.000 e 138.000 che sono state identificate in precedenza rispettivamente come elastina solubile e catena pro-alfa del collagene. durante l'impulso con [14C]lisina è scomparso durante un inseguimento di 24 ore con [12C]lisina e l'89% di ciò che è scomparso è stato rappresentato nelle desmosine dell'elastina insolubile in alcali. L'oattività della frazione solubile e la sua comparsa nelle desmosine dell'elastina sono state inibite dal beta-aminopropionitrile, un inibitore specifico dell'enzima reticolante lisil ossidasi. Inoltre esperimenti in vitro, è stato dimostrato che la radioattività nelle desmosine dell'elastina può derivare da quella presente in una proteina precursore solubile in acido. Questa proteina precursore è l'elastina solubile, come dimostrato dalla formazione di desmosine quando una preparazione omogenea di elastina solubile è stata incubata con lisil ossidasi purificata.
Reazioni di autoossidazione e idrossilazione del citocromo P-450cam ossigenato.Il citocromo P-450cam legato al substrato ossi-ferroso (mrsO2) si autoossida in assenza di la sua specifica proteina effettrice, la putidaredossina, senza idrossilare il substrato, la canfora. L'autoossidazione è di primo ordine con un'energia di attivazione di 17 kcal mol-1 a 25 gradi, pH 7,0. La rimozione del substrato e il pH basso accelerano la reazione. Il prodotto, 5- L'exo-OH canfora e uno pseudosubstrato non idrossilato, la norcanfora, stabilizzano il complesso in modo simile alla canfora L'aumento della velocità di ossidazione di mrsO2 e l'idrossilazione del substrato sono indotti da putidaredoxina, rebredossina, citocromo b5 e dalle apoproteine di questi ultimi due. e altri ditioli sostituiscono anche la putidaredossina come molecole effettrici, ma sono necessarie concentrazioni 1000 volte più elevate. Le molecole effettrici non aumentano il tasso di autoossidazione di mrsO2 a meno che canfora, norcanfora o un altro pseudosubstrato è presente. Viene presentata una prova cinetica che mostra che un complesso attivo tra mrsO2 ed effettore è un intermedio richiesto nell'ossidazione a funzione mista.
Correlazione della cinetica dell'attività di trasferimento di elettroni di vari citocromi c eucariotici con il legame alla citocromo c ossidasi mitocondriale.1. Uno studio dettagliato del citocromo c l'attività ossidasi con le particelle di Keilin-Hartree e l'enzima del cuore di manzo purificato, a bassa forza ionica e basse concentrazioni di citocromo c, ha mostrato una cinetica bifasica con Km1 apparente = 5 x 10(-8) M e Km2 apparente = da 0,35 a 1,0 x 10 (-6) M. Studi di legame diretto con ossidasi purificata, contenenti fosfolipidi e impoveriti di fosfolipidi, hanno dimostrato due siti di interazione del citocromo c con l'enzima, con KD1 inferiore o uguale a 10(-7) M, e KD2 = 10(-6) M. 2. Le velocità massime come bassa forza ionica aumentavano con il pH ed erano più alte al di sopra del pH 7.5 3. La presenza e le proprietà della fase di Km apparente basso della cinetica erano fortemente dipendenti dalla natura e concentrazione degli anioni nel mezzo Gli anioni multivalenti , fosfato, ADP e ATP, hanno notevolmente ridotto la proporzione di questa fase e similmente hanno ridotto la quantità di complesso citocromo c-citocromo ossidasi ad alta affinità formato. L'ordine di efficacia era ATP maggiore di ADP maggiore di P1 e poiché il fosfato si lega al citocromo c più fortemente dei nucleotidi, si conclude che l'inibizione deriva dall'interazione dell'anione con l'ossidasi. 4mat a basse concentrazioni Baker\' lievito iso-1, Bakers\' lievito iso-1, cavallo e citocromi c di Euglena ad alte concentrazioni hanno tutti raggiunto la stessa velocità massima. Le diverse proporzioni della fase Km apparente bassa nei modelli cinetici di questi citocromi c correlavano con le quantità di complesso ad alta affinità formato con la citocromo c ossidasi purificata. 5. Il Km apparente per l'attività del citocromo c nel sistema succinato-citocromo c reduttasi delle particelle di Keilin-Hartree era identico a quello ottenuto con l'ossidasi (5 x 10(-8) M), suggerendo che lo stesso sito serve entrambe le reazioni. 6. Si conclude che la cinetica osservata risulta da due siti cataliticamente attivi sulla proteina citocromo c ossidasi di diversa affinità per il citocromo c. Il legame ad alta affinità del citocromo c alla membrana mitocondriale è fornito dall'ossidasi e in questo sito il citocromo c può essere ridotto dal citocromo c1. Le concentrazioni fisiologiche di ATP riducono l'affinità di questo legame al punto che l'interazione del citocromo c con numerosi siti polfolipidi mitocondriali può rimuovere in modo competitivo il citocromo c dall'ossidasi. Si suggerisce che questo effetto dell'ATP rappresenti un possibile meccanismo per il controllo del flusso di elettroni all'ossidasi.
Trasporto e metabolismo della vitamina B6 in Salmonella typhimurium LT2.La Salmonella typhimurium LT2 concentra la radioattività a livello intracellulare dal [3H]piridossale o [3H]piridossina fino a 25 volte la concentrazione esterna. Dopo 1 min di assorbimento la radioattività intracellulare si trova come vitamina B6 fosforilata. Il processo è sensibile alla temperatura ed è massimamente attivo a pH 8,1, ma nelle condizioni testate è insensibile ai cationi monovalenti o agli inibitori metabolici, e non richiede una fonte di energia esogena. I valori di Km per l'assorbimento di piridossina e piridossale sono 2,0 x 10(-7) M e 1,2 x 10(-7) M, rispettivamente; la [3H]piridossamina non viene trasportata. La prova è presentata per un meccanismo di assorbimento che coinvolge una diffusione facilitata seguita dall'intrappolamento da parte della piridossal chinasi. Anche S. typhimurium sembra mancare di una proteina legante periplasmatica per la vitamina B6.
Trasporto e metabolismo della vitamina B6 nel lievito Saccharomyces carlsbergensis 4228.Il trasporto attivo di piridossina, piridossale e piridossamina avviene nelle cellule a riposo di Saccharomyces carlsbergensis 4228 e può portare a concentrazioni intracellulari di vitamina libera molto superiori a quelle fornite esternamente. Il Km iniziale per l'assorbimento della piridossina è 3,6 x 10(-7) M a 30 gradi e pH 4,5, che sono ottimali per la crescita. Il trasporto è inibito da molti analoghi vitaminici non fosforilati, i più efficaci sono 5\'-deossipiridossina, 5\'-deossipridossale, toxopirimidina, 4\'-deossipiridossina e 3-ammino-3-deossipiridossina. Due sistemi di assorbimento distinti che differiscono per specificità strutturale e requisiti ionici sono Uno, con pH ottimale di 3,5, trasporta efficacemente piridossale, ma non piridossamina, l'altro (pH ottimale 6,0) trasporta efficacemente piridossamina, ma non piridossale. Entrambi i sistemi trasportano piridossina, mentre nessuno dei due trasporta piridossal 5\'-fosfato. Altre proprietà di questi sistemi sono simili, indicando che condividono alcuni elementi in comune. Si osserva una temperatura iniziale ottimale di 30 gradi per il trasporto della pirodossina e, a questa temperatura, si verifica con il tempo un "overshoot" dei livelli di vitamina intracellulare, con successiva diminuzione a un livello costante. Sembra che la vitamina intracellulare, o un suo derivato, attivi il meccanismo di uscita della vitamina. I tassi di uscita dipendono anche dal tampone di risospensione e sono aumentati in presenza di glucosio e diminuiti dall'azide. Sopra i 30 gradi l'assorbimento netto di piridossina diminuisce inizialmente, quindi aumenta rapidamente fino a un secondo ottimo a 50 gradi; il sistema di captazione è disattivato a circa 55 gradi. L'optimum a 50 gradi risulta apparentemente dall'attivazione dell'afflusso poiché l'uscita è rapida ed è accelerata dall'azide. Nessun superamento è stato rilevato a 50 gradi, quindi sembra che il sistema di uscita non sia regolato dalla vitamina intracellulare a questa temperatura. Una transizione di fase nei lipidi di membrana avviene a 30 gradi e può essere responsabile del cambiamento delle proprietà dei meccanismi di ingresso e uscita al di sopra di questa temperatura.
Inibizione da parte della superossido dismutasi della formazione di metaemoglobina dall'ossiemoglobina.La formazione di metaemoglobina dall'ossiemoglobina in una soluzione contenente riboflavina fotoridotta e ossigeno è stata inibita dalla superossido dismutasi La velocità della reazione era pH-dipendente nell'intervallo da 6,8 a 7,8, aumentando al diminuire del pH. L'inibizione da parte della superossido dismutasi era aumentata all'aumentare della concentrazione di EDTA ed era dipendente dall'attività enzimatica. In condizioni in cui l'inibizione della superossido dismutasi era incompleta, la catalasi ha inibito la reazione ma il mannitolo non ha avuto alcun effetto. I dati supportano la mediazione della formazione di metaemoglobina da parte del superossido. L'ipotesi è che l'anione superossido abbia ridotto l'ossigeno legato all'eme nell'ossigemoglobina di un elettrone, permettendo la successiva dissociazione della ferriemoglobina e perossido La capacità della superossido dismutasi di inibire la formazione di metaemoglobina può rappresentare una delle sue funzioni nell'eritrocita maturo.
Acilazione della subtilisina Carlsberg da parte di esteri fenile.Costanti di reazione di Hammett approssimative rho calcolate dai valori k2/K8 di diversi esteri fenile di N-acetil-L -fenilalanina, acido ippurico e acido beta-fenilpropionico sono rispettivamente 0,0, 0,4 e 1,0 Per determinare se la mancanza di effetto sostituente di k2/K8 con gli esteri di N-acetil-L-fenilalanina è il risultato di k2 insensibile al sostituente o associazione limitante della velocità di enzima e substrato, profondità di pH-k2/K8 ed effetti dell'isotopo del deuterio del solvente sono stati determinati per alcuni dei substrati e confrontati con quelli trovati con i corrispondenti ippurati e beta-fenilpropionati. k2/K8 degli esteri fenile e 4-nitrofenile di ciascuna serie dipende dalla forma non protonata di una base enzimatica di pKa apparente approssimativamente 7,4, identico al pKa trovato per l'enzima libero. Con gli esteri fenile di ciascuna classe di substrato, k2 /K8 diminuito da 2 a 3 volte s in ossido di deuterio rispetto all'acqua. I risultati suggeriscono che un passaggio che coinvolge un trasferimento di protoni catalizzato dalla base generale, quasi certamente k2, è limitante con gli N-acetil-L-fenilalaninati, così come gli ippurati e i beta-fenilpropionati. L'attacco da parte della proteina su questi ultimi substrati è prevalentemente nucleofilo, giudicato dalla somiglianza di rho nelle idrolisi catalizzate da ioni idrossido enzimatico e di riferimento. I valori di potenza rho per N-acetil-L-fenilalaninati e ippurati potrebbero derivare da una componente elettrofila nei loro meccanismi idrolitici.
Etichettatura di affinità del sito di legame primario della bilirubina dell'albumina sierica umana.Un'etichetta per i siti di legame della bilirubina dell'albumina sierica umana è stata sintetizzata reagendo 2 mole di Woodward\'s reagente K (N-etil-5-fenilisossazolium-3\'-solfonato) con 1 mole di bilirubina. Questo ha prodotto un derivato idrosolubile in cui entrambi i gruppi carbossilici della bilirubina sono stati convertiti in esteri enolici reattivi. l'etichettatura è stata ottenuta facendo reagire l'etichetta con albumina sierica umana sotto azoto a pH 9,4 e gradi 20. Nelle stesse condizioni, non è stato possibile dimostrare alcun legame covalente con i monomeri di diverse proteine. Sono stati trovati il numero di siti di legame per la bilirubina e l'etichetta essere lo stesso, e gli esperimenti di competizione con la bilirubina hanno mostrato l'inibizione della marcatura covalente. L'assorbimento, la fluorescenza e gli spettri CD della marcatura in un complesso con albumina di siero umano erano simili a quelli del complesso di albumina di siero umano di bilirubina. Tuttavia , in seguito all'attaccamento covalente alle proprietà spettrali sono state modificate, indicando la perdita di libertà conformazionale del cromoforo. I rapporti di etichettatura sono stati selezionati per ottenere l'incorporazione di meno di 1 mole di etichetta/mole di albumina sierica umana. In queste condizioni, si pensa che l'etichettatura avvenga principalmente nel sito di legame ad alta affinità.
Inibitori della proteasi a doppia testa da piselli dall'occhio nero. III. Interazioni di subunità delle proteine native e semi-sito modificate chimicamente.La modificazione chimica di due nuovi inibitori della proteasi a doppia testa da piselli dall'occhio nero, un inibitore della tripsina-chimotripsina (BEPCI) e un inibitore della tripsina (BEPTI) con dansil cloruro è stata studiata in varie condizioni. La serina NH2-terminale di BEPCI e BEPTI, i 4 residui lisilici di BEPCI, e 4 dei 5 residui lisilici di BEPTI, non potevano essere dansilati in assenza di urea. La singola tirosina per subunità di BEPCI e BEPTI non era reattiva anche in presenza di urea ma poteva essere marcata con metà -reattività del sito con il metodo Celite. Lisina, serina NH2-terminale e tirosina erano reattive in BEPCI e BEPTI completamente ridotti e carbamidometilati. La filtrazione su gel è stata utilizzata per studiare le interazioni delle subunità di BEPCI e BEPTI. A pH 8 o pH 3.0 c'è un insieme complesso di equilibri multipli con wid ely differenti tassi di realizzazione. Abbiamo trovato prove di un rapido equilibrio dimero-tetramero, un distinto equilibrio dimero-tetramero a velocità moderata, un equilibrio molto lento di monomero-dimero e postulato una lenta isomerizzazione delle due forme di dimero e delle due forme di tetramero. L'equilibrio monomero-dimero è piuttosto insolito in quanto il dimero è stabilizzato da ioni caotropici e anche leggermente da guanidina HC1. In contrasto con il modello complesso visto nel BEPCI nativo, il BEPCI dansilato semisito esiste a concentrazione simile esclusivamente come un tetramero a pH neutro.
Inibitori della proteasi a doppia testa da piselli dall'occhio nero. II. Studi strutturali mediante assorbimento ottico e dicroismo circolare.Due nuovi inibitori della proteasi a doppia testa da piselli dall'occhio hanno composizioni amminoacidiche tipiche degli inibitori della proteasi a basso peso molecolare dai semi di leguminose. La chimotripsina e l'inibitore della tripsina del pisello dall'occhio nero (BEPCI) non contengono triptofano, 1 tirosina e 14 semicistina su 83 residui di aminoacidi per monomero. L'inibitore della tripsina del pisello dagli occhi neri (BEPTI) non contiene triptofano, 1 tirosina e 14 semicistina su 75 residui per monomero. Le estinzioni molari a 280 nm sono 2770 per BEPCI e 3440 per BEPTI. Il singolo residuo tirosile è molto inaccessibile al solvente in BEPCI e BEPTI nativi a pH neutro e titola in modo anomalo con un pK apparente = 12. La ionizzazione della tirosina è completa in 13 ore al di sopra del pH 12. Nessuna eterogeneità dell'ambiente locale dei residui di tirosile in diverse subunità può essere de spettrofotometricamente controllata. Il gran numero di residui di cistina porta ad uno spettro CD intenso e complesso vicino all'ultravioletto con contributi di cistina nelle regioni di 248 e 280 nm e contributi di tirosina a 233 e 280 nm. È necessaria una struttura disolfuro intatta per l'aspetto delle bande CD tirosile. Gli inibitori sono insolitamente resistenti alla denaturazione rispetto a proteine simili a basso peso molecolare ad alto contenuto di disolfuro. Tutte le osservazioni sono coerenti con una struttura molto più rigida per BEPCI e BEPTI rispetto a una tipica proteina.
Mitocondriale malato deidrogenasi del cervello bovino. Caratterizzazione e meccanismi di inibizione da parte degli ioni d'argento.Sono stati fatti tentativi per caratterizzare mitocondriale malato deidrogenasi [L-malato: NAD+ ossidoreduttasi, EC 1.1.1.37] (M-MDH) purificata dal cervello bovino e per chiarire i meccanismi responsabili dell'inibizione dell'attività enzimatica da parte dell'Ag+ I pesi molecolari dell'enzima nativo e delle sue subunità erano 54.000-55.000 e 30.000-32.000 , rispettivamente. In generale, le proprietà fisiochimiche e catalitiche dell'M-MDH cerebrale bovino non erano molto diverse da quelle di altri corrispondenti enzimi di mammifero. L'incubazione dell'enzima con Ag+ ha causato la perdita di quantità equivalenti di sulfidrili con una parallela diminuzione dell'enzima Quando l'enzima è stato esposto ad eccessi molari di Ag+ di 2, 3,5 e 5 volte, l'attività enzimatica ha mostrato una rapida caduta iniziale e un successivo lento ripristino a un livello parzialmente inattivato (60- 70, 45-50 e 15-20% di un controllo non trattato, rispettivamente), mentre il contenuto di alfa-elica dell'enzima è diminuito esponenzialmente nel tempo. Un eccesso molare di 7 volte di Ag+ ha ridotto sia l'attività enzimatica che il contenuto di alfa-elica in misura molto maggiore e non è stato osservato alcun ripristino dell'attività enzimatica. I valori di Km dell'enzima inattivato da Ag+ per NADH e ossalacetato erano gli stessi di quelli dell'enzima nativo. I dati suggeriscono che l'Ag+ potrebbe inibire l'attività enzimatica sia riducendo la regolarità strutturale della molecola enzimatica sia attaccando i gruppi sulfidrilici necessari per l'attività catalitica dell'M-MDH cerebrale bovino.
Purificazione e caratterizzazione degli inibitori della proteinasi dai fagioli azuki (Phaseolus angularis).Due inibitori della proteinasi, designati come inibitori I e II, sono stati purificati da adzuki fagioli (Phaseolus angularis) mediante cromatografie su DEAE- e CM-cellulosa e filtrazione su gel su una colonna Sephadex G-100. Ogni inibitore mostra attività inibitorie uniche. L'inibitore I era un potente inibitore della tripsina [EC 3.4.21.4], ma essenzialmente non della chimotripsina ]EC 3.4.21.1]. D'altra parte, l'inibitore II ha inibito la chimotripsina più fortemente della tripsina. I pesi molecolari stimati dall'inibizione enzimatica erano 3,750 e 9,700 rispettivamente per gli inibitori I e II, assumendo che le inibizioni fossero stechiometriche e in rapporto molare 1 : 1. Le composizioni amminoacidiche di entrambi gli inibitori sono molto simili a quelle degli inibitori a basso peso molecolare di altri semi di leguminose: contengono grandi quantità di semicistina, acido aspartico e serina e poco le o no amminoacidi idrofobici e aromatici. L'inibitore I manca sia di tirosina che di triptofano. I pesi molecolari sono stati calcolati in 7.894 e 8.620 per gli inibitori I e II, rispettivamente. L'affidabilità di questi pesi molecolari è stata confermata dall'equilibrio di sedimentazione e dai metodi di filtrazione su gel di guanidina 6 M. Confrontando i valori ottenuti dall'inibizione enzimatica, si è concluso che l'inibitore I e due siti inibitori della tripsina sulla molecola, mentre l'inibitore II aveva un sito inibitorio della chimotripsina e uno sulla molecola.
Modifica chimica dei gruppi carbossilici del fibrinogeno e suo effetto sul legame del detergente cationico.I gruppi carbossilici del fibrinogeno umano nativo sono stati modificati con glicina metil estere e 1-etil-3(3-dimetilamminopropil)carbodiimmide. Sembrava probabile che la modifica fosse avvenuta gradualmente. Circa il 26% dei gruppi carbossilici del fibrinogeno è stato infine modificato. Il fibrinogeno modificato non ha avuto interazione con il detergente cationico e non ha formato complesso con il detergente. In acido diluito, è stato osservato che il fibrinogeno mostra solo una leggera interazione con il detergente cationico. È probabile che i gruppi carbossilici esposti e ionizzati siano essenziali per la formazione di un complesso tra fibrinogeno e detergente cationico.
Etichettatura di fotoaffinità della concanavalina A. Preparazione di un derivato della concanavalina A con valenza ridotta.La concanavalina A (Con A) è stata marcata con p-azidofenil alfa -D-mannopiranoside sotto irraggiamento ultravioletto e i prodotti di reazione sono stati separati mediante cromatografia di affinità su Sephadex G-100 a pH 5. Uno dei derivati ConA così ottenuti è stato caratterizzato come dimero monovalente a pH 5 e tetramero bivalente a pH 7 mediante equilibrio di sedimentazione e dialisi di equilibrio, indicando che questa etichettatura di fotoaffinità non ha alterato la struttura quaternaria di Con A. In accordo con questi risultati, il Con A etichettato non ha mostrato la capacità di precipitare glicogeno a pH 5, ma ha formato precipitati con glicogeno a pH 7. Sebbene la sua attività emoagglutinante sia risultata più debole di quella del Con A nativo, la cura dose-risposta del Con A marcato nella stimolazione mitogena dei linfociti periferici umani era quasi identica a quella del nativo con A.
Effetto degli ioni metallici nel terreno di coltura sull'attività di stearoil-coenzima A desaturasi di Mycobacterium phlei.Una frazione particolata preparata da Mycobacterium phlei cresciuto in un mezzo carente di metalli ha mostrato un'attività della stearoil-CoA desaturasi notevolmente ridotta rispetto a quella delle cellule normalmente cresciute. il processo di desaturazione. Quando le cellule sono state coltivate nel mezzo carente integrato con Fe2+ e Mg2+, l'attività desaturasi è stata ripristinata al livello normale. La supplementazione con Mg2+ da solo ha promosso la crescita ma non ha ripristinato l'attività desaturasi, mentre Fe2+ da solo ha causato un ripristino significativo. Tra i vari ioni metallici testati, solo Fe2+ e Fe3+ hanno potenziato la formazione di attività desaturasi nel terreno carente. Quando aggiunti al terreno di analisi in vitro, Fe2+ e Fe3+ hanno non stimolare l'attività desaturasi della frazione particolata dalle cellule carenti. La coltivazione nel mezzo carente di metalli non ha avuto essenzialmente alcun effetto sui livelli di citocromi nella frazione particolata, ma ha drasticamente ridotto il contenuto di ferro non eme e la quantità di una specie ferrica ad alto spin che mostra un segnale ESR a g=4.3. Non è stato possibile rilevare zolfo labile nelle frazioni particolate normali o carenti di metalli. Si conclude che la presenza di ioni ferro nel terreno di coltura è necessaria per la sintesi e/o l'assemblaggio della porzione terminale del sistema desaturasi.
Studi polarografici su ubichinone-10 e rodochinone legati a cromatofori di Rhodospirillum rubrum.Componenti redox legati a cromatofori di Rhodospirillum rubrum e campioni puri di ubichinone -10 e rodochinone sono stati studiati polarograficamente a gradi 24. In una miscela di etanolo e acqua (4 : 1, v/v) a pH 7, ubichinone-10 e rodochinone avevano potenziali di semionda (E1/2) DI +43 MV e -63 mV, rispettivamente. Per entrambi i chinoni, i valori del numero di trasferimento di elettroni (n) erano 2 e i grafici di E1/2 rispetto al pH formavano linee rette con pendenze di -30 mV/pH nell'intervallo di pH neutro; quindi, i valori del numero di trasferimento protonico (na) sono stati stimati per entrambi i chinoni pari a 1. Quando legati con i cromatofori, l'ubichinone-10 e il rodochinone avevano valori E1/2 di +50 mV (n=2) e -30 mV (n=2 ), rispettivamente, a pH 7. I valori di (na) sono stati stimati pari a 1 per l'ubiquinone-10 e 2 per il rodochinone. Un componente (POC-170) ritenuto uno dei è stata caratterizzata la batterioclorofille a centro attivo (Liac-890); ha un valore E1/2 di -170 mV a pH 7 e la sua ossidazione-riduzione è possibile per deidrogenazione-idrogenazione. Concepibilmente, i siti di ossidoriduzione di ubichinone-10, rodochinone e POC-170 in parte, se non tutti, esistono sulla superficie della membrana del cromatoforo o sporgono all'esterno della membrana, a causa della loro accessibilità all'elettrodo polarografico.
Studi sul sistema microsomiale di trasporto degli elettroni del lievito cresciuto anaerobicamente. III. Caratterizzazione spettrale del citocromo P-450.Un pigmento che lega il monossido di carbonio che mostra un picco di assorbimento a circa 450 nm nello spettro di differenza del monossido di carbonio ridotto è stato purificato dalla frazione microsomiale di lievito cresciuto in anaerobiosi. Le caratteristiche spettrali del pigmento erano praticamente identiche a quelle del citocromo P-450 dei microsomi epatici, soprattutto da quelli policiclici animali indotti da idrocarburi. Il pigmento è stato denaturato a P-420 e legato con isocianuro di etile allo stato ridotto. Sebbene il cambiamento spettrale di tipo I non fosse evidente, il pigmento ha mostrato cambiamenti spettrali di tipo II e modificato di tipo II dopo il legame con alcuni composti organici , come nel caso del citocromo P-450 epatico. Queste osservazioni indicano chiaramente che il pigmento che lega il monossido di carbonio dei microsomi di lievito può essere designato come citocromo P-450 del lievito.
Risonanza Raman scattering da emoproteine. Effetti dei ligandi sugli spettri Raman di vari citocromi di tipo C.Gli spettri Raman di risonanza sono stati misurati per vari C- citocromi di tipo (citocromo c di mammifero, citocromo batterico c3, citocromo f fotosintetico algale e citocromo c alchilato) e citocromo di tipo B (citocromo b5) nei loro stati ridotti e ossidati. (1) Per il citocromo c alchilato ferroso, una linea Raman sensibile alla sostituzione di un ligando assiale del ferro eme uas trovato intorno a 1540 cm=1 Questa linea Raman sensibile al ligando indicava la transizione da forme acide (1545 cm-1) a forme alcaline (1533 cm-1) con pK 7,9. La dipendenza dal pH dello spettro Raman corrispondeva bene a quella degli spettri di assorbimento ottico (2) Per il citocromo f ferroso, la linea Raman sensibile al ligando è stata trovata alla stessa frequenza del citocromo c (1545 cm-1). è probabile che i ligandi siano istidina e metionina come nelle citochine roma c. (3) Per il citocromo c3 ferroso, la frequenza della linea Raman sensibile al ligando era compresa tra quelle del citocromo c e del citocromo b5. Poiché due ligandi assiali del ferro eme nel citocromo c3 potrebbero essere istidine. Tuttavia, una combinazione di istidina e metionina come possibile insieme di due ligandi assiali non è stata completamente esclusa per uno o due dei quattro emi. (4) Nel citocromo ferroso b5, sono apparse due linee Raman deboli a 1302 e 1338 cm-1 invece della banda più forte a 1313 cm-1 dei citocromi ferrosi di tipo C. Ciò suggerisce l'uso pratico di queste bande per l'identificazione di tipi di citocromi. La differenza di frequenza e intensità tra i tipi B e C di eme implica che la bassa simmetria efficace dell'eme nel citocromo c ferroso è dovuta all'accoppiamento vibrazionale dei modi dell'anello con i sostituenti periferici piuttosto che alla disorganizzazione geometrica dell'eme.
Effetti sull'assorbimento del triptofilo della ionizzazione dei carbossili catalitici nei lisozimi di gallina e tacchino.La differenza degli spettri dei lisozimi di albume di gallina e tacchino [ EC 3.2.1.17] prodotto dall'acidificazione sono stati misurati gli spettri differenza di entrambi i lisozimi avevano picchi a 295 e 301 nm che sono caratteristici dei residui triptofili Le curve di dipendenza dal pH delle differenze di estinzione (delta eplision) a 301 nm e 295 nm per hen lisozima erano identiche alle curve corrispondenti per il lisozima di tacchino. La dipendenza dal pH dell'eplisione delta a 301 nm è stata analizzata assumendo che l'estinzione a 301 nm sia dovuta solo al Trp 108, che interagisce con i carbossili catalitici, Glu 35 e Asp 52. I valori macroscopici di pK di Glu 35 e Asp 52 in entrambi i lisozimi così determinati sono stati rispettivamente 6,0 e 3,3, in ottimo accordo con quelli determinati misurando la dipendenza dal pH della banda dicroica circolare a 305 nm (Kuramitsu et al. (1974) J. Biochem, 76, 671-683; (1975) ibid. 77, 291-301). La dipendenza dal pH dell'eplisione delta a 295 nm non può essere completamente spiegata in termini di effetti elettrostatici dei gruppi catalitici su Trp 108.
Cromatografia di affinità di tripsina ed enzimi correlati. I. Preparazione e caratteristiche di un adsorbente di affinità contenente peptidi triptici da protamina come ligandi.Un assorbente per È stata preparata la cromatografia di affinità della tripsina [EC 3.4.21.4] (AP Sepharose) Il ligando era una miscela di oligopeptidi (principalmente di- e tripeptidi) contenente L-arginina come terminali carbossilici ed è stato ottenuto da un digerito triptico di protamina. è stato assorbito a pH relativamente basso (7-4), ma non è stato assorbito al pH ottimale di catalisi (8.2). Questo è stato chiaramente spiegato sulla base della dipendenza dal pH dell'interazione della tripsina con i suoi prodotti. tripsina inattivata, tripsinogeno , e la chimotripsina non sono state assorbite. L'assorbimento della tripsina attiva è stato ostacolato dalla benzamidina o dall'urea. Da queste osservazioni, è evidente che AP Sepharose è un adsorbente per affinità. AP Sepharose era utile per la purificazione della tripsina bovina commerciale. Ha avuto successo anche un'applicazione preliminare per la purificazione della tripsina dello Streptomyces griseus.
Studio collaborativo del metodo Food Chemicals Codex per la determinazione del valore neutralizzante del fosfato di sodio e alluminio.Quindici laboratori hanno partecipato a uno studio collaborativo per valutare Nello studio è stato incluso anche il metodo Food Chemical Codex per la determinazione del valore neutralizzante del sodio alluminio fosfato. Nello studio è stato incluso anche il metodo AOAC per la determinazione del valore neutralizzante del sodio pirofosfato acido, sez. 8.010. Le precisioni del metodo Food Chemical Codex, basati sulla deviazione standard tra le repliche e su un collaboratore che effettua una determinazione, sono rispettivamente 1,16 e 3,66. Il metodo Food Chemical Codex per la determinazione del valore neutralizzante del fosfato di sodio e alluminio è stato adottato come prima azione ufficiale.
Separazione dei residui di pesticidi dai lipidi prima dell'analisi cromatografica gas-liquido.I lipidi sono separati da dieldrin, endrin e p,p\'- Residui di DDE mediante saponificazione in idrossido di sodio etanolico, acidificazione con acido solforico diluito e cromatografia ad adsorbimento su allumina disattivata, utilizzando etere di petrolio come eluente. Dieldrin, endrin e p,p\'-DDE vengono recuperati in modo efficiente (95-102%) , e p,p\'-DDT viene convertito in p,p\'-DDE, che viene quindi recuperato con resa elevata (90-96%). -1,0 g campioni di grasso di pollo.
Analisi di residui di pesticidi mediante derivatizzazione chimica. II. N-metilcarbammati in acque naturali e suoli.Un metodo per la determinazione quantitativa di diversi N- vengono descritti i metilcarbammati nelle acque naturali e l'applicabilità del derivato a campioni di suolo utilizzando una procedura di estrazione precedentemente pubblicata. Dopo l'estrazione dei carbammati dal substrato, i carbammati vengono idrolizzati in una soluzione di metanolo-idrossido di potassio al 10% per formare i prodotti di idrolisi fenolica , che vengono isolati e derivatizzati con pentafluorobenzil (PFB) bromuro per produrre i derivati eterei PFB. I derivati PFB vengono ripuliti e frazionati su una microcolonna di gel di silice e determinati mediante cromatografia gas-liquido a cattura di elettroni (GLC). Otto pesticidi organofosfati e 2 esteri dell'acido ftalato che idrolizzano a fenoli o acido ftalico sono stati valutati come potenziali interferenze e si è scoperto che non interferiscono con nessuno dei carbammati tes ted. Sono possibili determinazioni quantitative di 0,1 mug di carbofuran e 3-ketocarbofuran e 0,5 mug di carbaryl, metmercapturon e Mobam in un campione di acqua da 1 L. Propoxur non è stato determinato a livelli inferiori a 1 tazza/L a causa del breve tempo di ritenzione GLC del derivato e delle interferenze dei reagenti ai livelli inferiori.
Metodo per misurare l'assorbimento epatico di ossigeno o di altre sostanze trasportate dal sangue in situ.È descritto un preparato mediante il quale il flusso sanguigno arterioso epatico e venoso portale il flusso sanguigno può essere misurato in modo accurato e continuo fornendo contemporaneamente un metodo mediante il quale è possibile prelevare più campioni di sangue dall'arteria epatica, dalla vena porta e dalla vena epatica senza interrompere l'emodinamica epatica o causare emodiluizione. le sostanze trasportate possono essere misurate in situ e correlate con i parametri emodinamici In 13 gatti splenectomizzati, l'assorbimento di ossigeno da parte del fegato denervato è stato di 4,5 +/- 0,3 ml min-1.100 g-1 di tessuto, pari al 54% dell'ossigeno totale rimosso dal letto splancnico L'emodinamica epatica determinata con questo metodo è simile a quella riportata da altri in vivo e lo stato metabolico del fegato è rimasto stabile per almeno 2 ore durante le quali sono stati prelevati in media 29 campioni di sangue. Vengono discussi i vantaggi di questa preparazione rispetto ad altri metodi per ottenere dati simili.
Flusso sanguigno cerebrale totale e regionale durante l'esercizio moderato e severo nei suini nani.Per determinare l'influenza dell'esercizio sul flusso sanguigno cerebrale, abbiamo eseguito 14 suini a 3-6 mph e a 0-10% di pendenza su un tapis roulant per 30 minuti a livelli di esercizio moderati e severi Misurando la frequenza cardiaca, la gittata cardiaca e la pressione aortica tramite sonde impiantate, abbiamo iniettato microsfere radiomarcate di 15 mamme attraverso il atrio sinistro prima e durante l'esercizio. Abbiamo misurato la loro distribuzione mediante spettrometria gamma, determinando il flusso sanguigno cerebrale totale, il flusso sanguigno regionale e il rapporto tra flusso di sostanza grigia e bianca. La frequenza cardiaca, la gittata cardiaca e la pressione aortica aumentavano progressivamente con l'aumento dell'esercizio. Il flusso cerebrale totale assomigliava a quello riportato negli esseri umani, cioè non cambiava in modo significativo con l'esercizio. Anche la distribuzione del flusso regionale non cambiava significativamente con l'esercizio. Il rapporto tra il flusso di materia grigia e bianca non cambiava se non nel cervelletto dove è aumentato significativamente dai valori a riposo sia con esercizio moderato che severo. La materia grigia ha ricevuto più flusso della materia bianca durante tutte e tre le condizioni di osservazione. Il flusso sanguigno cerebrale era notevolmente costante anche durante l'esercizio fisico intenso.
Ipoventilazione nei pony dopo denervazione del corpo carotideo.Sette pony sono stati sottoposti a denervazione del corpo carotideo (CD) e due pony sono stati operati simulatamente (S). La misurazione dei gas ematici arteriosi e dell'equilibrio acido-base del sangue arterioso e del liquido cerebrospinale (CSF) è stata effettuata prima e 1,2,4,9 e 17 settimane dopo l'intervento chirurgico in animali non anestetizzati Ventilazione a riposo e risposta ventilatoria all'ipossia e all'infusione di NaCN sono stati valutati prima e 2,9 e 17 settimane dopo l'intervento chirurgico. L'ipoventilazione alveolare nei pony CD è stata contrassegnata 1-2 settimane dopo l'intervento chirurgico quando VE e VA sono state ridotte del 40% e del 10%, rispettivamente, dal controllo e la PaCO2 era 12- 15 mmHg sopra il controllo Tuttavia, l'effetto non è stato così grande 4, 9 e 17 settimane dopo l'intervento chirurgico quando la PaCO2 si è stabilizzata a circa 6 mmHg sopra il controllo PaCO 2. Il pH del sangue arterioso era normale nei pony CD ipercapnici, ma il pH del liquido cerebrospinale è rimasto acido rispetto al normale durante il periodo di 17 settimane Cambiamenti nella ventilazione La reattività all'ipossia e al NaCN tendeva a cambiamenti paralleli nella ventilazione a riposo. Questi risultati suggeriscono: 1) i corpi carotidei sono essenziali nei pony per mantenere la normale ventilazione: 2) nei pony CD la chemiosensibilità periferica è parzialmente riacquistata in alcuni locus non stabiliti; e 3) i meccanismi di compensazione del pH nei pony ipercapnici cronici funzionano relativamente meglio nel sangue che nel liquido cerebrospinale.
Tecnica di campionamento del liquido cerebrospinale e valori di pH e PCO2 di Astrup.I valori di pH e PCO2 misurati con la tecnica Astrup sono stati confrontati nel liquido cerebrospinale (CSF) ottenuto utilizzando due diverse tecniche di campionamento: 1) una tecnica diretta o in vivo e 2) la tecnica del campionamento a siringa ampiamente accettata In 65 paia di misurazioni in 9 cani si è riscontrato che il pH era sempre sovrastimato e la PCO2 sempre sottostimata nella siringa campione rispetto al campione in vivo. Le equazioni che descrivono le relazioni sono le seguenti: 1) pH (siringa = 0,995 pH (in vivo) + 0,084 e 2) PCO2 (siringa) = 0,873 PCO2 (in vivo) + 0,2 La quantità di cui il campione della siringa ha sottostimato il valore reale di PCO2 è aumentata con il valore assoluto di PCO2, coerente con la possibilità che si verifichi una perdita diffusionale di CO2 durante il trasferimento del liquido cerebrospinale dalla siringa all'elettrodo pH (PCO2 (in vivo) - PCO2 (siringa) = 2.4, 4.9, 7.5 e 10,0 mmHg a PCO2\' in vivo di 20, 40, 60 e 80 mmHg). Questo studio indica che la tecnica utilizzata per il campionamento del liquido cerebrospinale è fondamentale per l'accuratezza attesa dei risultati e che il numero di trasferimenti di liquido cerebrospinale durante le procedure di campionamento e misurazione dovrebbe essere ridotto al minimo per ottenere risultati affidabili.
Ontogenesi del liquido tracheale, del surfattante polmonare e dei corticoidi plasmatici nell'agnello fetale.Abbiamo esaminato i corticoidi plasmatici fetali e la portata, la composizione degli elettroliti e contenuto di tensioattivo del liquido tracheale in esperimenti cronici con otto agnelli fetali Da 120 a 148 giorni di gestazione la velocità di produzione di liquidi è stata di 4,5 ml/kg per h, e non vi è stata alcuna variazione del sodio fluido medio (147,8 meq/1), cloruro (153,1 meq/1), calcio (2,2 mg/100 ml) e pH (6,23). Il potassio nel liquido tracheale è aumentato da 4,3 meq/1 a 120-130 giorni a 8,9 meq/1 a termine, mentre sodio, cloruro, calcio, pH e potassio erano costanti rispettivamente a 146,1 meq/1, 110,0 meq/1, 12,1 mg/100 ml, 7,39 e 4,0 meq/1. 100 ml liberi) fino a 130 giorni, quando sono aumentati rapidamente fino a 10,5 totali (3,2 liberi) a 148 giorni. Il tensioattivo è stato rilevato per la prima volta nel liquido tracheale tra 124 e 133 giorni e la sua secrezione è aumentata r rapidamente dopo 135 giorni ad un valore di 125 mug/kg per ha 148 giorni. Un improvviso aumento dei corticoidi plasmatici fetali non sembra essere lo stimolo per la comparsa del surfattante nell'agnello, sebbene questi ormoni possano indurre il rapido accumulo di surfattante prima del parto.
La concentrazione di ioni idrogeno e l'assorbimento di ossigeno in un arto posteriore canino isolato.L'utilizzo di ossigeno (VO2) e la produzione di lattato da parte di un arto posteriore canino isolato sono stati valutati a varie concentrazioni di ioni idrogeno. Un sistema di perfusione polmonare a membrana è stato istituito in modo tale che il flusso sanguigno e la temperatura potessero essere fissati a livelli normali. I flussi di ossigeno, azoto e anidride carbonica (CO2) al polmone a membrana erano regolati in modo indipendente per fornire un ossigeno arterioso fisso contenuto (CaO2). Modificando il flusso di CO2, il pH del sangue arterioso è stato variato tra 6,9 e 7,6 a intervalli di 10 minuti. L'erogazione media di O2 (flusso sanguigno CaO2 X) era compresa tra 16,3 ML O2/min e 20,5 ml O2/ min L'errore standard della media in ciascun cane, tuttavia, era inferiore a 0,4 ml O2/min VO2 era linearmente correlato al pH del sangue perfusore: VO2% = 100,1 pH - 643 (r = 0,866). il consumo era inversamente correlato alla PCO2: VO2% = -0,62 PCO2 + 124, ma la correlazione n era meno buono (r = 0,729). La produzione di lattato era correlata linearmente al pH del sangue perfusore (sopra un pH di 7,4): lattato prodotto = 22,5 pH - 162,5 (r = 0,75). Ad un pH inferiore a 7,4, il lattato non è stato prodotto. Il consumo di ossigeno del muscolo scheletrico sembra dipendere in modo critico dal pH del fluido extracellulare. Una variazione del pH di 0,1 altera il VO2 quasi esattamente del 10%. L'alcalosi è un potente stimolo alla produzione di acido lattico da parte del muscolo scheletrico.
Effetto del plasma [K+] sul potenziale DC e sulla distribuzione ionica tra CSF e sangue.Mantenere il pH arterioso a 7,4 e la PaCO2 a 40 mmHg in otto cani anestetizzati, abbiamo aumentato acutamente la concentrazione plasmatica di potassio da 3,4 a 8,2 meq/1, quindi l'abbiamo lasciata decadere ai livelli di controllo. La differenza di potenziale elettrico (pd) tra liquido cerebrospinale (CSF) e sangue è aumentata di 13,2 mV per 10- volte l'aumento del plasma [K+]. Sempre mantenendo il pH arterioso a 7,4 e la PaCO2 a 40 mmHg, abbiamo aumentato il plasma [K+] in quattro cani da 3,3 a 8,0 meq/1 e mantenuto questo livello per 6 ore. Abbiamo trovato 1) che il La PD è aumentata da un valore di controllo di +1,3 a +8,9 mV, senza mostrare alcuna tendenza al decadimento nelle 6 ore; e 2) che la variazione di PD non ha influenzato la distribuzione di Na+, K+, H+, Cl- o HCO3- tra sangue e CSF nelle 6 h. Questi risultati suggeriscono che in queste condizioni la PD tra CSF e sangue può non svolgere un ruolo efficace nel determinare le distribuzioni di questi cha specie coltivate da 6 h. Questi risultati sono in contrasto con recenti scoperte che suggeriscono che H+ e HCO3- sono distribuiti secondo forze passive tra CSF e sangue.
Effetti di dbcAMP e teofillina sul midollo surrenale di ratto cresciuto in coltura tissutale.Espianti di midollo surrenale di ratto sono stati coltivati in coltura tissutale. Gli effetti di vari dosi di dbcAMP comprese tra 0,001 mM e 1 mM e quantità equimolari di teofillina sono state registrate mediante ottica a contrasto di fase e istochimica delle catecolamine (metodo dell'acido gliossilico) per sei giorni. Vi è stata un'inibizione dose-dipendente della normale crescita delle cellule di Schwann, cellule "cromaffini" e assoni dagli espianti. Anche il mantenimento della fluorescenza indotta dall'acido gliossilico nelle cellule "cromaffini" era dose-dipendente. Poiché è noto che la teofillina aumenta solo i livelli intracellulari di cAMP, questi effetti sono probabilmente dovuti all'azione del cAMP. Il cAMP ovviamente mantiene il grado di differenziazione delle cellule cromaffini. Quindi si potrebbe sostenere che un certo grado di dedifferenziazione è un prerequisito per la formazione di assoni da queste cellule.
Uno studio istochimico sull'apparente deaminazione delle proteine da parte dell'ipoclorito di sodio.I possibili meccanismi chimici mediante i quali soluzioni neutre di ipoclorito di sodio contenenti un'alta concentrazione di il cloruro di sodio abolisce l'acidofilia delle proteine in sezioni di tessuto fissato viene esaminata la più probabile è la clorurazione dei gruppi amminici terminali della proteina, seguita dalla scomposizione della N-cloramina così formata in acido alfa-chetocarbossilico, nitrile o gruppi aldeidici Le soluzioni di ipoclorito certamente non deaminano le sezioni tissutali come si pensava in precedenza. Si riportano prove sperimentali per la formazione di gruppi di N-cloramina relativamente stabili in situ e la loro limitata conversione in aldeidi. Ad esempio, l'acidofilia delle sezioni trattate con ipoclorito è stata trovata a essere ripristinati dopo averli inondati con acido iodidrico seguito dall'estrazione dello iodio liberato con un alcool. Il significato di questi esperimenti l i risultati vengono discussi.
Il legame dei nucleotidi alla 3\'-nucleotidasi dal germe di grano.La 3\'-mononucleotidasi (3\'-ribonucleotide fosfoidrolasi, EC 3.1.3.6) dal germe di grano è stato purificato 2.000 volte L'enzima ha un peso molecolare di circa 32.000, come giudicato dall'uso della filtrazione su gel G-100, e non attacca 2\'- o 5\'- nucleotidi. Al fine di ottenere alcune indicazioni sui requisiti strutturali per il legame e la reattività, l'enzima purificato è stato sottoposto ad analisi cinetiche, comprese velocità iniziali con diversi 3\'-ribomononucleotidi, inibizione da parte di 5\'- nucleotidi e analoghi nucleotidici, ed effetto del pH e dei composti sulfidrilici. I dati indicano un sito di legame della base nel sito attivo dell'enzima. Questo sito sembra essere lo stesso coinvolto nel legame sia dei substrati che degli inibitori, con maggiore affinità per i nucleotidi purinici rispetto ai composti pirimidinici, in l'ordine guanosina maggiore di adenosina maggiore dell'inosina maggiore dell'uridina maggiore dei nucleotidi citidinici.
Autossidazione alcalina catalizzata dal rame della selenocistamina.In ambiente alcalino e in presenza di ioni rameici la selenocistamina subisce autossidazione e si trasforma interamente in selenoipotaurina. Tra le diversi ioni metallici testati, Fe, Co, Ni, Cu, Ag, Mg, Mn, solo gli ioni rameici sono efficaci nel catalizzare la reazione. La reazione mostra un ottimo intorno al pH 13. Per molti aspetti l'autossidazione della selenocistamina è simile a quella alcalina autossidazione della cistamina Vengono riportati alcuni dati sul comportamento cromatografico della carta e dello scambio ionico della selenoipotaurina e della selenotaurina, nonché dettagli per la sintesi della selenotaurina.
Studi EEG sul sonno di insonni sottoposti a trattamento con flunitrazepam.Questo studio indaga l'effetto del flunitrazepam, una nuova benzodiazepina, sul sonno di pazienti insonni in trattamento cronico trattamento. Le registrazioni poligrafiche hanno dimostrato che questo farmaco diminuisce non solo l'attività del sistema di veglia, ma anche l'attività del sistema di sincronizzazione del sonno a onde lente. La sensazione soggettiva di un sonno migliore e più sano sembra essere correlata a una diminuzione della veglia pressione nonché ad una diminuzione della motoriità corporea, ma non con la modifica delle fasi del sonno stesse. Il flunitrazepam sembra possedere alcune proprietà regolatorie sul sonno REM, poiché questa fase è potenziata nei pazienti con una quantità iniziale di sonno REM bassa e ridotta coloro che hanno un sonno REM iniziale più elevato. Il flunitrazepam possiede proprietà ipnogene potenti e utili nell'uomo, ma non induce il sonno fisiologico.
[Correlazione tra concentrazione plasmatica ed effetto clinico di neurolettici e antidepressivi].Risultati di indagini riguardanti la correlazione tra concentrazioni plasmatiche ed effetto clinico di neurolettici e antidepressivi sono riassunti. Nel caso dei neurolettici non vi è in generale alcuna relazione tra parametri clinici di attività e concentrazione plasmatica. Per gli antidepressivi esiste, nella maggior parte dei casi, una correlazione tra effetti collaterali e concentrazioni plasmatiche. Se l'effetto terapeutico dipende da la concentrazione plasmatica o meno, è tuttavia suscettibile di qualche dubbio. Il valore pratico delle stime delle concentrazioni plasmatiche durante la terapia con i suddetti farmaci è quindi limitato. Un'efficacia inadeguata e/o una scarsa tolleranza possono occasionalmente essere spiegate dalla stima delle concentrazioni plasmatiche che da sole però , a malapena consentono di fare profezie. Nella determinazione del dosaggio individuale ottimale deve continuare a essere un processo empirico basato su osservazioni ed esperienze cliniche.
Secrezione di acido gastrico, livelli sierici di gastrina e funzione psicomotoria sotto l'influenza di placebo, ipoglicemia insulinica e/o bromazepam.Produzione di acido gastrico , la glicemia, la gastrina sierica e le prestazioni psicomotorie sono state misurate in quattro soggetti sani un'ora prima e due ore dopo l'iniezione endovenosa di (a) 2 ml di soluzione fisiologica, (b) 0,2 U/kg di peso corporeo di insulina, (c) 0,1 mg /kg di peso corporeo bromazepam. Ogni soggetto è stato sottoposto ad un esperimento di ogni tipo. Lo studio è stato strutturato come un quadrato latino e analizzato di conseguenza. La secrezione di acido gastrico è stata misurata mediante titolazione intragastrica e una capsula telemetrica;glicemia e siero-gastrina i livelli e le prestazioni psicomotorie come misura della vigilanza sono stati determinati a intervalli di 15 minuti. Nella serie salina (a), nessuno dei quattro parametri ha mostrato alcuna variazione sistematica. Nella serie (b), una risposta bimodale della produzione di acido all'insulina, è stata osservata l'inibizione iniziale e la successiva stimolazione d in tutte le materie. I livelli sierici di gastrina hanno mostrato solo un lieve e transitorio aumento nei primi trenta minuti. Le prestazioni psicomotorie diminuivano notevolmente con il progredire dell'ipoglicemia e aumentavano quando i livelli di glucosio aumentavano di nuovo. Nella serie bromazepan (c), la produzione di acido e le prestazioni psicomotorie sono diminuite e, dopo la prima ora, sono aumentate quasi parallelamente, mentre i livelli di glucosio e gastrina sono rimasti invariati. Nella serie (d), si è verificato un effetto additivo di insulina e bromazepam: la produzione di acido e le prestazioni psicomotorie erano inferiori rispetto alla sola insulina; il picco della secrezione acida, l'ipoglicemia massima e il picco della gastrina sierica sono stati spostati a destra. Si conclude che la ridotta secrezione acida basale e stimolata dall'insulina dopo il bromazepam è dovuta all'effetto centrale del farmaco e che questo effetto è mediato dalle ghiandole gastriche direttamente attraverso le vie nervose autonomiche senza coinvolgere un rilascio di gastrina endogena.
Confronto tra due popolazioni anticorpali nel sistema EBV: anti-MA contro attività anticorpale neutralizzante.I titoli anticorpali neutralizzanti EBV sono stati determinati in 11 sieri derivati da pazienti con linfoma di Burkitt africano o carcinoma nasofaringeo e nelle corrispondenti frazioni sieriche trattenute sopra le membrane XM 100 Diaflo dopo trattamento a pH basso e dopo ricombinazione delle frazioni trattenute e passate mediante neutralizzazione dei campioni acidificati e confrontate con il corrispondente antigene antimembrana ( MA) in sette degli stessi sieri. Mentre tutti i sieri testati hanno mostrato un aumento sostanziale dell'attività anti-MA nella frazione trattenuta, con conseguente aumento significativo del titolo medio, l'attività di neutralizzazione dell'EBV non è cambiata affatto dopo lo stesso trattamento o è cambiata solo in modo casuale, risultando in titoli medi stabili. Si suggerisce che gli anticorpi anti-MA e neutralizzanti siano diretti contro antigeni almeno parzialmente diversi sul virus.
Regolazione centrale dell'eosinofilia nel sangue da parte del sistema beta-adrenergico nei ratti.L'effetto dell'isoprenalina e di tre diversi agenti bloccanti beta-adrenergici sull'eosinofilia nel sangue è stato valutato nel ratto. L'effetto eosinopenico dell'isoprenalina è stato antagonizzato dal pretrattamento intraperitoneale con propranololo e da dosi elevate ma non basse di practololo. Il sotalolo, un beta-bloccante che a differenza del propranololo non penetra nella barriera ematoencefalica, non ha effetto la conta degli eosinofili quando iniettata per via intraperitoneale, ma ha prodotto un marcato aumento del numero di eosinofili circolanti a seguito dell'iniezione intracerebroventricolare. -gli agenti adrenergici regolano il numero di eosinofili circolanti attraverso un meccanismo centrale e in presenza sia dell'ipofisi che delle ghiandole surrenali è necessaria per questa azione.
Microcapsule di ceppi di streptococco di gruppo B: produzione e morfologia.La resa del polisaccaride di tipo III purificato di streptococco di gruppo B è stata significativamente migliorata da modifica del mezzo di crescita. La coltura di organismi in brodo Todd-Hewitt standard ha provocato accumulo di acido durante la fase esponenziale di crescita e scarsa resa del polisaccaride di tipo III quando estratto dalle cellule mediante lavaggio con soluzione tampone neutra. Aumentando la capacità tampone del mezzo di crescita brodo, è stato impedito l'accumulo di acido e il numero di cellule vitali è stato aumentato nella fase stazionaria di crescita Inoltre, aumentando la concentrazione di glucosio nel mezzo tamponato, la resa del polisaccaride di tipo III è stata aumentata da due a tre volte. le indagini microscopiche sulle cellule cresciute nel brodo modificato hanno dimostrato una microcapsula più spessa rispetto a quella riscontrata negli organismi cresciuti nel brodo standard.
Effetto del glucosio e del saccarosio sulla sopravvivenza in colture batch di Streptococcus mutans C67-1 e un mutante non cariogeno, C67-25.La crescita e la sopravvivenza di due ceppi di Streptococcus mutans in glucosio al 5% (wt/vol) o brodo di saccarosio è stato studiato. Il ceppo di S. mutans C67-1 ha mostrato poca perdita di vitalità dopo 30 h di incubazione in coltura batch in presenza di uno degli zuccheri. mutans ceppo C67-25, un mutante non cariogeno di C67-1 che ha perso la capacità di quest'ultimo di produrre polisaccaride extracellulare appiccicoso e insolubile quando coltivato in brodo di saccarosio, ha mostrato una drammatica perdita di vitalità dopo 30 h di incubazione in glucosio o saccarosio brodo, l'effetto è più marcato in presenza di glucosio. La perdita di vitalità si è dimostrata dovuta alla produzione di acido. La produzione di polisaccaridi extracellulari insolubili sembra essere un fenomeno che favorisce la sopravvivenza di organismi soggetti ad alti livelli di saccarosio. Altri fattori devono essere coinvolto, tuttavia, poiché ci sono differenze tra i due ceppi per quanto riguarda la loro sopravvivenza in brodo di glucosio.
Sulla natura del presunto recettore per IgE sui mastociti. III. Cinetica del blocco della reazione PCA da parte di preparazioni di particolato prive di cellule da mastociti peritoneali di ratto ed effetto del pH e della concentrazione di calcio sulla reazione.Il \'legame\' delle IgE alle preparazioni particellari derivate da mastociti di ratto purificati sonicati è stato misurato bloccando le titolazioni PCA delle soluzioni surnatante da incubazioni con tali preparazioni Si è riscontrato che la reazione di blocco della PCA era inibita dall'aggiunta di ioni calcio alle incubazioni. La reazione di blocco era fortemente dipendente dal pH delle incubazioni, essendo massima a valori di pH inferiori a 5-0. La reazione di blocco procedeva in in modo lineare per almeno 3 ore a condizione che non più del 70% della quantità di IgE inizialmente fornita fosse stata rimossa dalla frazione particellare. Solo i preparati derivati dai mastociti erano in grado di bloccare la PCA.
Effetto del butirrato di sodio sulle cellule di mammifero in coltura: una revisione.Il butirrato di sodio produce cambiamenti reversibili nella morfologia, nel tasso di crescita e nelle attività enzimatiche di diversi tipi di cellule di mammifero in coltura Alcuni di questi cambiamenti sono simili a quelli prodotti da agenti che aumentano il livello intracellulare di adenosina 3\',5\'-monofosfato ciclico (cAMP) o da analoghi del cAMP Il butirrato di sodio aumenta il livello intracellulare di cAMP di circa due volte nelle cellule di neuroblastoma; quindi, alcuni degli effetti del butirrato di sodio su queste cellule possono essere in parte mediati dal cAMP. Il butirrato di sodio sembra avere proprietà di un buon agente chemioterapico per i tumori del neuroblastoma perché il trattamento delle cellule di neuroblastoma in la coltura provoca la morte cellulare e la "differenziazione"; tuttavia, è innocua o produce alterazioni morfologiche e biochimiche reversibili in altri tipi di cellule.
Caratterizzazione di proteine chinasi da Blepharisma intermedium", . "Proteine chinasi Tre (CE 2.7.1.37) sono stati rilevati nel Blepharisma e parzialmente purificato Gli enzimi sono stati più attivo con l'istone come proteina substrato. La stabilità del legame tra fosfato e accettore proteico ha mostrato le caratteristiche del seril- o treonilfosfato. La proteina chinasi I è stata solubilizzata mediante ultrasuoni o congelamento e scongelamento, mentre gli enzimi II e III sono stati prontamente solubilizzati mediante lieve omogeneizzazione Le proteine II e III sono state notevolmente attivate da cAMP e cGMP, mentre la protein chinasi I è stata inibita dal cAMP. Associata all'attività della protein chinasi II e III era la capacità di legare cAMP marcato. Sono stati determinati i seguenti pesi molecolari: 90000 per l'enzima I, 280000 per enzima II, e 95000 per enzimi III. Varie costanti Michaelis apparenti stati stimati.
[Induzione enzimatica in Streptomyces hydrogenans. V. Caratterizzazione della testosterone-17 beta-deidrogenasi e sua induzione da parte di steroidi].Il testosterone 17beta-deidrogenasi può essere arricchito da Streptomyces hydrogenans. L'enzima deidrogenizza il testosterone con Km=13muM e l'estradiolo-17beta con Km=21muM ai corrispondenti 17-chetoderivati. Il NAD forma NADH con Km=125muM. L'enzima è fortemente inibito dall'androstandione e dal 17alfa-metiltestosterone. Ki per 17alfa-metiltestosterone è 18muM. L'attività enzimatica aumenta con l'aumento del pH fino alla denaturazione mediata da alcali a circa pH 10. La temperatura ottimale è a 45 gradi C. Se Streptomyces hydrogenans viene coltivato in assenza di steroidi, l'attività specifica di la testosterone 17beta-deidrogenasi nel citosol dei microrganismi ammonta a 10 mU/mg di proteine e aumenta fino a 10 volte se le cellule vengono coltivate in presenza di determinati steroidi. erone, alfa-diidrotestosterone, beta-diidrotestosterone, estradiolo-17beta e 17alfa-metiltestosterone sono induttori molto efficaci. Così, per la prima volta, viene mostrata la capacità dell'estradiolo-17beta di indurre una sintesi enzimatica in un microrganismo. L'induzione steroide-dipendente è inibita dal testosterone acetato e dalla rifamicina SV. Il ciproterone, tuttavia, non riduce l'induzione enzimatica dipendente dal testosterone della 17beta-deidrogenasi di testosterone.
Acrosin di cinghiale, II: Composizione amminoacidica, residuo amminoterminale e stime del peso molecolare mediante ultracentrifugazione.Il peso molecolare dell'acrosina di cinghiale in soluzione neutra era stimato in 41000 +/- 1000 dall'analisi dell'equilibrio di sedimentazione ad alta velocità. Questo risultato è in buon accordo con il valore trovato in precedenza [1] dall'elettroforesi su gel di poliacrilammide di sodio dodecilsolfato. Il coefficiente di sedimentazione dell'acrosina ottenuto mediante centrifugazione enzimatica attiva di preparati è in accordo con il coefficiente di sedimentazione del preparato puro stimato dall'analisi della velocità di sedimentazione convenzionale. Il coefficiente di sedimentazione dell'acrosina è considerevolmente diminuito in una soluzione leggermente acida (pH 4), indicando che i cambiamenti nella struttura terziaria si verificano durante l'acidificazione. composizione omogenea del preparato di acrosina secondo criteri elettroforetici e cromatografici e negli studi di sedimentazione wa è determinato. La valina è stata trovata come l'unico amminoacido N-terminale. Tuttavia, nelle forme microeterogenee di acrosina, sono state rilevate anche alanina e metionina nell'analisi dei gruppi terminali.
D-glucosio deidrogenasi da Bacillus megaterium M 1286: purificazione, proprietà e struttura.1) La glucosio deidrogenasi da Bacillus megaterium è stata purificata a una specifica attività di 550 U per mg di proteina. L'omogeneità dell'enzima purificato è stata dimostrata mediante elettroforesi su gel e focalizzazione isoelettrica. 2) È stata determinata la composizione dell'amminoacido 3) Il peso molecolare dell'enzima nativo è risultato pari a 116000 mediante permeazione del gel cromatografia, in buon accordo con i valori di 120000 e 118000, accertati elettroforeticamente secondo il metodo di Hedrick e Smith e per centrifugazione in gradiente di densità, rispettivamente 4) In presenza di 0,1% di sodio dodecilsolfato e 8M di urea, l'enzima si dissocia in subunità con un peso molecolare di 30000 come determinato mediante elettroforesi su gel di dodecilsolfato. Questi valori indicano che l'enzima nativo è composto da quattro catene polipeptidiche, ciascuna probabilmente dotata di un sito di legame del coenzima, che può essere concluso dalla titolazione fluorescente dei siti di legame del NADH. 5) Nell'elettroforesi su disco di poliacrilammide, i campioni dell'enzima purificato mostrano tre bande di attività, che presentano la forma nativa (tetramerica) della glucosio deidrogenasi e due forme monomeriche (peso molecolare 30000), che si manifestano nelle condizioni di pH e forza ionica di questo metodo. 6) L'enzima mostra un ottimo pH acuto a pH 8,0 in tampone Tris/HCl e uno spostamento dell'ottimo pH a pH 9,0 in tampone acetato/borato. La costante di Michaelis limite a pH 9,0 per NAD è 4,5 mM e 47,5 mM per il glucosio. La costante di dissociazione per NAD è 0,69 mM. 7) La D-Glucosio deidrogenasi è altamente specifica per il beta-D-glucosio ed è in grado di utilizzare sia NAD che NADP. L'enzima è insensibile agli inibitori del gruppo sulfidrilico, agli ioni di metalli pesanti e agli agenti chelanti.
Elettrodecantazione delle proteine del siero.La sedimentazione dell'albumina sotto l'azione dei campi elettrico e gravitazionale è stata determinata in funzione del tempo in esperimenti discontinui in una cella rettangolare, utilizzando siero con la frazione di albumina colorata in blu. È stato dimostrato che anche sotto l'influenza di forti campi elettrici, il limite superiore dello strato di albumina non scendeva oltre il punto medio della cella. separazione delle gamma-globuline da altre proteine del siero, dalla soluzione si può ottenere solo circa la metà delle gamma-globuline perché rimane omogeneamente distribuita in tutta la soluzione ed è priva di albumina e di altre proteine nella metà superiore della cellula. con cellule triangolari a funzionamento continuo, il processo è stato ottimizzato per fornire gamma-globulina di purezza del 97,5% con una resa dell'80%, a velocità di flusso del siero fino a 0,5 l/h in un blocco composto da 40 cellule.
Deaminazione ossidativa delle ammine biogene da parte delle amminoossidasi intestinali: l'istamina è specificamente inattivata dalla diammina ossidasi.La capacità dell'intestino di inattivare varie ammine mediante ossidazione la deaminazione è stata testata con una preparazione di ammino ossidasi purificata 130 volte dall'intestino tenue di cane. Di 34 ammine testate, putrescina, benzilamina, cadaverina e serotonina erano i substrati più favorevoli. Anche l'istamina è stata inattivata rapidamente da questa preparazione enzimatica. Derivati dell'istamina metilati al nucleo imidazolico sono stati anche deaminati, mentre la Nalfa-metilistamina era solo un substrato scadente e la Nalfa, la Nalfa-dimetilistamina non era affatto un substrato. Utilizzando una seconda procedura per la purificazione delle ammino ossidasi dall'intestino, la separazione di una monoamino ossidasi solubile dalla diammina ossidasi è stata ottenuta mediante filtrazione su gel su Sephadex G-200. La putrescina deaminata dalla diammina ossidasi (Km = 1,3 x 10(-4)M) e l'istamina (Km = 6,6 x 1 0(-5)M), ma non la serotonina, ed è stato inibito dall'aminoguanidina, ma non dalla pargilina. La monoamino ossidasi solubile ha inattivato la serotonina (Km = 4,5 x 10(-4)M), ma non l'istamina e la putrescina ed è stata inibita dalla pargilina, ma non dall'aminoguanidina. Si è concluso che nell'intestino tenue del cane (così come nell'intestino tenue del coniglio) solo la diammina ossidasi era in grado di inattivare l'istamina mediante deaminazione ossidativa.
Studi recenti sulle funzioni legate al citocromo P-450 in cellule epatiche di ratto isolate.In cellule epatiche di ratto isolate per perfusione nella perfusione in presenza di collagenasi, la maggior parte del citocromo P-450 è presente nello stato ossidato, non legato al substrato, a basso spin L'aggiunta di farmaci a una sospensione di cellule epatiche provoca la rapida formazione del complesso citocromo P-450 (Fe3+)-substrato che a sua volta è seguita dalla comparsa di altre specie con caratteristiche spettrali diverse prima che venga raggiunta la monoossigenazione del farmaco allo stato stazionario. Il metabolismo legato al citocromo P-450 di vari farmaci testati e idrocarburi policiclici cancerogeni da parte di cellule epatiche di ratto isolate è altrettanto veloce, o più veloce, come con i microsomi di fegato di ratto integrati con un sistema di generazione di NADPH. Entrambi i modelli sperimentali rispondono in modo simile al pretrattamento degli animali con fenobarbital o 3-metilcolantrene e a vari dei ben noti inibitori del metabolismo dei farmaci. th cellule epatiche isolate da ratti a digiuno trattati con fenobarbital, la generazione di NADPH citosolico sembra sufficiente per supportare il metabolismo ottimale del farmaco anche in assenza di substrati aggiunti del metabolismo intermedio. Nelle cellule epatiche isolate i metaboliti dei farmaci ossidati subiscono una successiva conversione metabolica, il più delle volte per formare i corrispondenti glucuronidi e solfati. Questi sono facilmente escreti, mentre i prodotti non coniugati, ad es. fenoli liberi, tendono ad accumularsi a livello intracellulare. La formazione di glucuronide cellulare è fortemente inibita dall'etanolo, presumibilmente a causa di un effetto sfavorevole dell'aumento del rapporto NADH/NAD+ sulla sintesi dell'acido uridina-5\'-difosfoglucuronico (UDPGA). Al contrario, basse concentrazioni di etanolo non hanno, o hanno solo un leggero effetto stimolante sulla fase del metabolismo del farmaco legata al citocromo P-450 e vi sono indicazioni che l'ossidazione di basse concentrazioni di etanolo sia infatti stimolata da una facilitata riossidazione del citosolico. NADH che si verifica durante la monoossigenazione del farmaco.
[Malattia cerebrovascolare infiammatoria: reperti angiografici e modelli di distribuzione (autore\'s trad.)].Sebbene l'angiografia cerebrale debba essere affrontata con cautela in Nella diagnosi di malattia infiammatoria cerebro-vascolare vi sono alcuni reperti angiografici caratteristici che possono essere utili per la classificazione e la diagnosi differenziale. Le arterie cerebrali prossimali sono favorevolmente colpite da meningite basale e trombangite obliterante con conseguenti stenosi ed occlusioni, mentre quelle infiammazioni che originano dal cranio limitrofo le strutture interessano per lo più le parti intracavernose della carotide, l'arterite tubercolare e micotica preferiscono il sifone carotideo sopraclinoideo Le alterazioni vascolari periferiche si riscontrano nell'endangite luetica, nell'angioite necrotizzante e tossica e nelle collagenosi Il coinvolgimento simultaneo delle arterie temporali è di grande importanza diagnostica dimostrando il carattere sistemico dell'infiammazione processo matorio; nell'arterite di Horton può essere un reperto patognomonico. L'endocardite infettiva, alcune micosi e la malaria possono portare all'occlusione embolica dei vasi cerebrali. Gli aneurismi micotici hanno per lo più una base larga o una forma fusiforme e non prediligono le localizzazioni degli aneurismi congeniti. Angiograficamente, ascessi, tubercolomi ed encefalite virale possono determinare aree ipervascolarizzate circoscritte. I caratteristici reperti angiografici sono esemplificati e discussi sulla base di 8 casi di malattia infiammatoria cerebro-vascolare (tubercolosi, pneumococco e meningite batterica aspecifica, sifilide, micosi, sindrome di Takayasu, panarterite nodosa, arterite temporale).
Tossicologia comparata nell'umor vitreo e nel sangue.Droga e sostanze tossiche sono state rilevate nel sangue e nell'umor vitreo in cinquantasei casi, in cui cause di la morte è avvenuta sia per overdose delle particolari sostanze che per altre cause non correlate. Sono riportati cinque casi in cui due sostanze stupefacenti sono state rilevate nel sangue e nell'umor vitreo dello stesso soggetto. Pazienti con lunghi tempi di sopravvivenza, così come quelli che muoiono per cause non correlate cause, rivelano valori del farmaco prossimi all'unità, quando si confrontano le concentrazioni ematiche e vitree. I rapporti raggiunti all'equilibrio dipendono probabilmente dalla solubilità del farmaco nell'umore vitreo, dalla liposolubilità e dalla percentuale di proteine nel sangue. L'umore vitreo fornisce un altro parametro di test e può essere utile negli studi sul tempo di sopravvivenza.
Riduzione dell'attività delle monoaminossidasi piastriniche nei pazienti schizofrenici trattati con fenotiazine.Un test di nuova concezione per l'attività delle monoaminossidasi (MAO) nelle piastrine del sangue (serotonina) utilizzato come substrato) è stato applicato per la misurazione dell'attività enzimatica in 76 pazienti schizofrenici. Non è stata riscontrata alcuna riduzione significativa dell'attività delle MAO piastriniche nel sangue in un gruppo di 33 pazienti schizofrenici non trattati, rispetto a quella nei controlli normali. I pazienti di sesso maschile hanno rivelato avere un'attività enzimatica inferiore rispetto alle femmine nel gruppo schizofrenico, come abbiamo descritto in precedenza nei soggetti normali. Il trattamento con fenotiazine ha causato una significativa riduzione dell'attività delle MAO piastriniche nel sangue, mentre il contenuto di serotonina piastrinica e la conta piastrinica non sembravano essere influenzati dal trattamento farmacologico. Gli autori suggeriscono che l'attività MAO piastrinica può essere correlata a fattori ormonali, ma non alla diagnosi psichiatrica di schizofrenia o costituzione suscettibile di malattie schizofreniche.
Caratteristiche dei lipopolisaccaridi di Salmonella typhi isolati da portatori e pazienti affetti da febbre tifoide.Lipopolisaccaridi (LPS) di ceppi di Salmonella typhi, isolati da portatori e pazienti affetti da febbre tifoide, sono stati caratterizzati in base alle loro proprietà biochimiche, struttura morfologica e grado di aggregazione dei complessi. Tutti i preparati di LPS, indipendentemente dalla loro origine, erano morfologicamente eterogenei. L'elettroforesi libera e l'immunoelettroforesi hanno dimostrato che i preparati di LPS erano composti da componenti che possedevano diverse mobilità nei campi elettrici LPS di ceppi batterici isolati sia da portatori che da pazienti, suddivisi per reazione in immunoelettroforesi con antisiero specifico 73, antisiero di coniglio a Salmonella typhi Vi Bhatnagar e 0-901 suddivisi in frazioni anodica e catodica. La frazione anodica ha reagito in modo simile come antigene Vi. LPS da Salmonella typhi Ty-2 ha prodotto solo t e frazione catodica, tipica dell'antigene O. LPS da ceppi che sono stati passati due volte nel mezzo nutritivo possedevano proprietà identiche a LPS da colture fresche di Salmonella typhi. La microscopia elettronica ha rivelato che LPS appare come lunghe bande, bastoncelli, forme ellissoidi e materiale amorfo. Contrariamente al materiale amorfo, le bande, i bastoncelli e le forme ellissoidi possedevano una struttura a tre strati.
[Il significato dell'età gestazionale nella valutazione del cardiotocogramma antepartal (autore\'s transl)].L'influenza dell'età gestazionale sul probabile significato di caratteristiche nel CTG antepartal che non sono chiaramente patologiche sono state studiate in 232 nascite nel 1973/74. Il pH dell'arteria ombelicale era significativamente più basso tra i neonati prematuri che mostravano anomalie rispetto a quelli che mostravano modelli CTG normali. Nessuna differenza simile è stata trovata nel termine o in ritardo nascite. La diagnosi clinica della condizione neonatale utilizzando lo schema di Apgar ha confermato i risultati biochimici: la frequenza dei bambini depressi è a sua volta chiaramente più alta nei casi con modelli CTG antepartali anormali. Si presume che la ragione di ciò sia la maggiore sensibilità dei bambini prematuri a disturbi emodinamici. Pertanto, ne consegue che i bambini prematuri che mostrano modelli antepartali che non sono completamente normali richiedono un'attenta osservazione.
[Monitoraggio continuo del pH sottocutaneo nei neonati con metabolismo anomalo (transl.autore\'s)].Nei neonati con acidosi postpartum il pH dello spazio interstiziale sottocutaneo era monitorato in continuo con l'apposito elettrodo di Stamm e Moeller. Questo è stato confrontato con determinazioni intermittenti del pH nel sangue capillare dal calcagno del neonato. La gravità del disturbo metabolico può essere riconosciuta in tutti i casi di test con entrambi i metodi. La correzione dell'acidosi si sviluppa in modo concorde, in ampiezza concorde e con una velocità ampiamente sincrona. Le osservazioni mostrano che è possibile monitorare la fase di adattamento postpartum attraverso il monitoraggio continuo del pH nello spazio interstiziale del tessuto sottocutaneo e osservarne l'efficienza del trattamento dell'acidosi, della somministrazione di ossigeno o di un'infusione tampone.
Un recettore della dopamina nella muscolatura liscia esofagea dell'opossum.Abbiamo esaminato la possibilità che la dopamina possa svolgere un ruolo nello "off" mediato dal nervo " risposte del corpo esofageo (EB) e rilassamenti della muscolatura liscia dello spintere esofageo inferiore (LES). Gli effetti della dopamina, dell'epinina e degli antagonisti della dopamina sulla muscolatura liscia di EB e LES sono stati studiati su queste risposte. La dopamina e l'epinina hanno causato un effetto dose-correlato caduta della tensione muscolare basale LES e dell'ampiezza delle risposte "off" del muscolo EB. La dose soglia per entrambi era di circa 10 (-7) M e la dose massima era di circa 10 (-4) M. Ad alte concentrazioni, anche causato contrazioni transitorie ripetitive del muscolo LES ed EB dopo il periodo di inibizione. Questi effetti sono stati antagonizzati da aloperidolo, 10(-5) M e bulbocapnina, 10(-5) M, ma non sono stati influenzati dal propranololo, 10(- 5) M, né dalla fenossibenzamina, 10(-5) M. Né l'aloperidolo né la bulbocapnina hanno influenzato le risposte allo stimolo del campo elettrico ione. La tetrodotossina 10(-7) M ha abolito le risposte alla stimolazione del campo elettrico ma non ha antagonizzato gli effetti della dopamina e dell'epinina. La muscolatura liscia EB e LES contiene un recettore della dopamina. È improbabile che la dopamina sia coinvolta nelle risposte alla stimolazione del campo elettrico.
Misurazione delle funzioni gastriche durante la digestione di pasti solidi ordinari nell'uomo.Un metodo per misurare le secrezioni gastriche e i tassi di svuotamento dopo l'ingestione di un normale -liquid) è stato sviluppato e convalidato. La tecnica quantifica i movimenti di volume attraverso il piloro utilizzando la perfusione duodenale costante con un marker non assorbibile, il polietilenglicole (PEG), che, a sua volta, quantifica lo svuotamento nel duodeno di un altro marker, [14C ]PEG, incorporato nel pasto. Le uscite di acido e pepsina possono essere determinate senza manipolazione del pH intragastrico. Utilizzando questo metodo, abbiamo quantificato contemporaneamente la produzione di acido, pepsina e secrezione totale, i tassi di svuotamento gastrico del pasto e delle secrezioni e il siero livelli di gastrina durante la digestione. Questi dati caratterizzano le risposte fisiologiche al cibo ordinario in salute.
La via alternativa del complemento nella malattia infiammatoria intestinale. Quantificazione della proteina proattivatrice C3 (fattore B).Un componente del sistema del complemento\' alternativo è stato studiato nella colite ulcerosa e nella malattia di Crohn. Il titolo medio di C3PA (fattore B) nei soggetti normali era 74 +/- 15%, nella colite ulcerosa, 92 +/- 18% e nella malattia di Crohn, 119+ /- 24%. La significatività era al livello P inferiore a 0,001 quando i valori medi per la colite ulcerosa e i gruppi con malattia di Crohn sono stati confrontati con soggetti normali. I titoli non sono cambiati significativamente con l'esacerbazione o il miglioramento delle malattie o quando il paziente i gruppi sono stati analizzati in base alla modalità di trattamento ricevuta.
[Possibile partecipazione di ioni potassio nella regolazione del flusso sanguigno cerebrale locale].Le microiniezioni di fluido spinale simulato con varie concentrazioni di potassio nel gatto e tessuto cerebrale di scimmia sono stati realizzati in esperimenti acuti e cronici. Le reazioni vascolari studiate con la microfotografia e il metodo H-clearance sono risultate essere linearmente correlate alle concentrazioni di potassio nell'intervallo 0--12 mEq/1, essendo costrittive al di sotto 5 mEq/1 e dilatorio al di sopra. Un'interazione tra MSF potassio e pH sembra essere debole, se presente, poiché la pendenza del diagramma di attività vascolare del potassio rimane invariata entro 6,8--7,8 variazione di pH. I dati ottenuti suggeriscono che gli ioni di potassio prendono parte nel controllo rCBF poiché è noto che il potassio fuoriesce dalle cellule nervose stimolate e quindi aumenta sostanzialmente una concentrazione extracellulare di potassio.
[Capacità dei nervi adrenergici di accumulare noradrenalina esogena sotto alcune influenze farmacologiche].Utilizzando la spettrofluorimetria e l'istochimica quantitativa fluorescente il contenuto di noradrenalina (NE) in è stata misurata nel tessuto e nei nervi adrenergici dei Vasi deferenti del ratto dopo esaurimento delle riserve del trasmettitore\'s con tiramina ed il loro successivo reintegro mediante incubazione del tessuto con NE esogeno. e imipramina) e della spasmolitina colinolitica (diphacyl) sui processi di accumulo di NE. La ftoracizina, l'impamina e la spasmolitina sono risultate in grado di inibire l'accumulo di NE esogeno nel tessuto e nei nervi adrenergici dei Vasi deferenti, purché il mediatore sia presente nel mezzo extraneuronale in una concentrazione di 0,5 gamma/ml Quando il neurotrasmettitore è stato introdotto nel mezzo in a concentrazioni più elevate (10 gamma/ml) gli antidepressivi ei colinolitici non hanno prodotto il suddetto effetto. È stata osservata una correlazione tra risultati spettrofluorimetrici e istochimici fluorescenti quantitativi nei casi in cui il tessuto conteneva meno del 50% (cioè meno di 9 gamma/ml) delle riserve totali di NE.
Analisi delle risposte cronotrope cardiache al diazepam e al bromazepam in cani addestrati coscienti.In cani addestrati coscienti, somministrazione di bromazepam (0,3 mg/kg PO) o diazepam (0,3 e 1,0 mg/kg PO) non ha avuto alcuna influenza sulla frequenza cardiaca. Una dose più elevata (10 mg/kg PO) di due benzodiazepine ha suscitato un effetto cronotropo positivo di rapida insorgenza e di lunga durata. l'agente bloccante practolol (2,5 mg/kg iv) non ha riportato la frequenza cardiaca dopo le benzodiazepine allo stesso livello dei controlli, indicando che la tachicardia non è stata prodotta da un aumento del deflusso simpatico al cuore. l'interazione parasimpatica non può essere esclusa. Tuttavia, diazepam e bromazepam hanno ridotto significativamente la tachicardia che si osserva normalmente dopo la somministrazione di metilatropina (0,5 mg/kg iv) da sola o in combinazione con practololo. Nei cani anestetizzati, il bromazepam non è riuscito a modificare il cuore r ate risposte alla stimolazione elettrica dei nervi cardiaci vagali o simpatici, escludendo un'azione su questo composto sulla trasmissione gangliare e sui colinocettori cardiaci e sugli adrenocettori. Si conclude che alte dosi di diazepam e bromazepam influenzano la frequenza cardiaca dei cani coscienti in modo bifasico. In primo luogo, provocano una riduzione centrale del tono vagale al cuore con conseguente tachicardia. In secondo luogo, i due farmaci riducono direttamente la frequenza del pacemaker cardiaco. Poiché l'effetto complessivo è la tachicardia, l'azione centrale è più pronunciata.
Effetti sulla temperatura rettale nei ratti dell'acido gamma-aminobutirrico; possibile mediazione attraverso trasmettitori putativi.La temperatura rettale dei ratti maschi è stata misurata in un termoneutro ambiente (25 gradi C) e a temperature ambiente di 15 e 35 gradi C. Se non diversamente specificato tutti i farmaci sono stati somministrati per via intracerebroventricolare (icv) e tutti i risultati sono riportati per l'ambiente termoneutrale. L'esposizione a 15 gradi C non ha influenzato la temperatura rettale ma l'esposizione a 35 gradi C ha prodotto ipertermia. A 15 e 25 gradi C, 20 tazze di GABA hanno prodotto ipertermia che era più duratura alla precedente temperatura ambiente. GABA (20 tazze) ha impedito l'effetto ipertermico dell'esposizione a 35 gradi C e ha prodotto ipotermia negli animali mantenuto a questa temperatura per 1 ora Una dose bassa (1 tazza) di NA ha prodotto ipertermia e una dose più alta ipotermia (tazza) Nei ratti pretrattati con salicilato di sodio (ip), 20 tazze di GABA e 1 tazza di NA p ipotermia indotta invece dell'ipertermia, suggerendo il rilascio di PGE nella mediazione dell'ipertermia. L'effetto ipotermico di 10 tazze di NA e di GABA osservato a 35 gradi C è stato bloccato dalla fentolamina, un'indicazione della possibilità di mediazione dei recettori alfa-adrenergici.
Effetti bloccanti cardiovascolari e beta-adrenergici del timololo.Gli effetti emodinamici del timololo e la sua azione inibente sugli effetti cardiovascolari e bronchiali dell'isoproterenolo sono stati L'attività del nervo splancnico è stata registrata L'azione antiaritmica del timololo è stata studiata su atri isolati di cavia, utilizzando aritmie indotte da epinefrina, ouabaina o legatura coronarica nel cane Il timololo è un agente bloccante beta-adrenergico molto potente, senza specificità su beta1 - o recettori beta2. Non sono stati trovati effetti beta-stimolanti o depressivi intrinseci. Il timololo riduceva le scariche splancniche. L'effetto antiaritmico del timololo era limitato alle aritmie indotte dall'adrenalina.
Anestesia combinata con azaperone e metomidato nel trapianto di fegato nel suino.L'anestesia combinata con azaperone e metomidato è stata utilizzata in 86 procedure chirurgiche su 84 suinetti, sia come tale o approfondito e prolungato.51 animali sono stati sacrificati al termine della procedura come previsto in precedenza. L'anestesia ha permesso l'esecuzione di vari interventi brevi e lunghi. Dei 33 suini rimasti, sottoposti a 35 operazioni, 4 sono morti durante la procedura di un guasto tecnico; 2 non si sono ripresi da un'ipotermia profonda (sotto i 10 gradi C) 1 è deceduto per coma epatico indotto dall'intervento chirurgico. Gli altri 26 si sono svegliati e hanno recuperato la respirazione spontanea entro 1-4 h dal tipo di anestesia e la procedura operativa che avevano presentato, che durava da 15 a 330 min.
Effetto dell'anossia ischemica sull'attività elettrica e meccanica dello stomaco suino totalmente isolato.L'attività elettrica e meccanica è stata registrata da stomaci suini interi totalmente isolati perfusi con sangue omologo. Si produceva quindi ischemia stagnante completa chiudendo l'arteria e la vena gastrica per vari periodi di tempo fino a 3 h. Dopo un determinato periodo di ischemia, si faceva ricircolare il sangue per 10 min e poi si iniettava pentagastrina nell'arteria gastrica Il nervo vago è stato anche stimolato elettricamente in vari stadi di anossia e ricircolo. Dopo un massimo di 90 minuti di ischemia, gli stomaci sono stati in grado di dimostrare attività di controllo elettrico a bassa frequenza dopo 10 minuti di ricircolo sanguigno. Dopo l'iniezione di pentagastrina, attività di controllo elettrico rapidamente è diventato normale Quando l'ischemia è durata 120 min o più, il ricircolo del sangue non ha indotto la ricomparsa dell'attività di controllo elettrico, ma l'iniezione di pentagastrina pr dotto una risposta normale. Dopo un'ischemia di durata pari o superiore a 240 minuti, il ricircolo e la pentagastrina non hanno avuto effetto. Negli stomaci precedentemente ischemici la risposta alla stimolazione vagale si verificava solo negli stomaci che rispondevano alla pentagastrina.
Terapia antipiretica orale: valutazione del benorilato, un estere dell'acido acetilsalicilico e del paracetamolo.La capacità del benorilato, un estere dell'acido acetilsalicilico e del paracetamolo, per ridurre la febbre nei bambini è stata confrontata con quella dei componenti in quanto tali o in combinazione. La serie di casi studiati era costituita da 66 pazienti di età compresa tra 4 mesi e 12 anni con temperatura rettale superiore a 38,5 gradi C. Le temperature sono state registrate a 15 e 20 minuti e 1, 2, 4 e 6 ore dopo la somministrazione del farmaco. L'effetto antipiretico dell'acido acetilsalicilico combinato (11 mg/kg) e del paracetamolo (14 mg/kg) era superiore all'effetto del benorilato con una dose di 25 mg/kg e anche di 50 mg/kg nonché migliore dell'effetto di entrambi i farmaci da soli L'acido acetilsalicilico (10 mg/kg) e il paracetamolo (12,5 mg/kg) da soli hanno prodotto un effetto antipiretico significativamente maggiore rispetto al benorilato con una dose di 25 mg/kg Dato in una dose di 35-40 mg/kg, benorilato sembra avere un notevole effetto antipiretico. Tuttavia, questo effetto è chiaramente inferiore a quello di uno dei suoi componenti, acido acetilsalicilico o paracetamolo. Pertanto il benorilato probabilmente non è adatto per essere usato come agente antipiretico generale nei bambini.
Assorbimento e disaccoppiamento di anioni e ammine nelle particelle subcondriali.1. A differenza dei cloroplasti, le particelle subcondriali non sono disaccoppiate dalla nigericina + KCl o NH4Cl. Anche il L'effetto disaccoppiante degli anioni lipofili è in gran parte indipendente dall'aggiunta di basi deboli 2. Basse concentrazioni di anioni permeanti causano uno spostamento del livello di energia allo stato stazionario piuttosto che un ciclo di utilizzo dell'energia Il grado di inibizione della sintesi di ATP da parte del tetrafenilboro è 3. Gli anioni lipofili come bromthymolblue, bromcresolpurple e 8-anilino-1-naftalene solfonato causano un disaccoppiamento del 50% indipendente dal pH nelle particelle subcondriali a concentrazioni di 3, 30 e 30 muM L'interazione passiva di bromthymolblue e bromcresolpurple appare come una distribuzione pH-dipendente tra due pHasi L'ATP provoca un leggero cambiamento indipendente dal pH nella distribuzione degli anioni, con un accumulo di anioni trascurabile. 4. L'aggiunta di ammine alle particelle subcondriali energizzate provoca due tipi di effetti; assorbimento di ammine e disaccoppiamento. Mentre nei cloroplasti l'assorbimento e il disaccoppiamento dell'ammina sono strettamente associati, questo non è il caso delle particelle subcondriali. L'effetto disaccoppiante si osserva solo con ammine lipofile e non con ammine idrofile, e il grado di disaccoppiamento aumenta con la lipofilia delle ammine. L'assorbimento di ammina, d'altra parte, è accompagnato da un disaccoppiamento trascurabile. 5. Mentre l'assorbimento delle ammine dipende dalla presenza di anioni non permeanti, come Cl-, l'effetto di disaccoppiamento è indipendente da Cl-. Inoltre il disaccoppiamento amminico è notevolmente potenziato dagli anioni lipofili. 6. Viene discussa l'opinione che l'effetto disaccoppiante degli anioni lipofili e delle ammine lipofile nelle particelle subcondriali sia dovuto a una dissipazione di energia catalitica piuttosto che a un utilizzo dell'energia stechiometrica. Il meccanismo molecolare del disaccoppiamento implica presumibilmente un ciclo di cariche dopo una perturbazione della struttura della membrana.
Distribuzione subcellulare delle attività enzimatiche di degradazione dell'istone dal fegato di ratto.La cromatina preparata dal tessuto epatico contiene un'attività enzimatica di degradazione dell'istone con un pH ottimale di 7.5-8.0, mentre la cromatina isolata da nuclei purificati ne è priva. L'attività enzimatica di degradazione dell'istone è stata saggiata con istoni totali marcati radioattivamente da cellule tumorali di ascite di Ehrlich. Tra le diverse frazioni subcellulari analizzate, solo i lisosomi e i mitocondri hanno esibito enzimi di degradazione dell'istone È stato trovato un pH ottimale intorno a 4,0-5,0 per la frazione lisosomiale, mentre per i mitocondri è stato trovato un valore di 7,5-8,0. origina da mitocondri danneggiati. I modelli di degradazione proteica ottenuti dopo l'elettroforesi su gel di acrilammide sono simili per la cromatina-associata e la proteinasi mitocondriale e diversa da quella ottenuta dopo incubazione con lisosomi. La proteinasi associata alla cromatina e la proteinasi mitocondriale sono fortemente inibite dal fluoruro di fenilmetansolfonile 1,0 mM. Si riscontra una debole inibizione per le proteinasi lisosomiali a pH 5. L'inibitore della callicreina-tripsina, tuttavia, inibisce l'attività della proteinasi lisosomiale e non ha alcun effetto sulle proteinasi associate alla cromatina o mitocondriali. La maggiore attività stampo della cromatina isolata da un omogenato totale rispetto alla cromatina preparata dai nuclei può essere dovuta alla presenza di questa attività enzimatica di degradazione dell'istone.
Effetto della triiodotironina sulla proteina chinasi della cromatina del fegato di ratto.1. L'iniezione di triiodotironina ai ratti stimola l'attività della proteina chinasi nelle proteine non istoniche della cromatina epatica. è stato riscontrato un aumento dopo due iniezioni giornaliere Un aumento di 4 volte è stato osservato con l'enzima purificato dopo otto iniezioni giornaliere dell'ormone Non sono state osservate variazioni nell'attività della protein chinasi del citosol Schema elettroforetico, effetto della denaturazione termica, effetto del p-idrossimercuribenzoato sembrano indicare che l'enzima presente nei ratti trattati non è identico all'enzima negli animali di controllo, il che suggerisce che l'ormone tiroideo abbia indotto la protein chinasi nucleare. La diiodotironina, 3, 3\', 5\'-triiodotironina non ha alcun effetto sulla protein chinasi 2. Le proteine della cromatina non istoniche isolate da ratti iniettati con triiodotironina incorporavano più 32P quando incubate con [gamma-32P]ATP rispetto alle proteine della cromatina di ratti non trattati. ctomy ha ridotto l'incorporazione di 32P in vitro. Si suggerisce che parte dell'attività biologica dell'ormone tiroideo potrebbe essere mediata dal suo effetto sulle proteine non istoniche della cromatina.
Uno studio dei residui lisilici nell'inibitore basico della tripsina pancreatica utilizzando la risonanza magnetica nucleare 1H a 360 Mhz.Risonanza magnetica nucleare 1H in trasformata di Fourier (NMR) ) esperimenti a 360 MHz utilizzando tecniche di differenza di convoluzione per migliorare la risoluzione spettrale sono stati impiegati per studiare le risonanze dei residui lisilici nell'inibitore della tripsina pancreatica bovina. Le osservazioni sia nella proteina nativa che nella proteina chimicamente modificata contenente Nepsilon-dimetillsisina mostrano che tre dei quattro lisine si estendono prevalentemente liberamente nel solvente, mentre la lisina-41 è coinvolta in un'interazione intramolecolare con la tirosina 10. Poiché nella struttura monocristallina la tirosina-10 è coinvolta in un'interazione intermolecolare con l'arginina-42 della molecola proteica vicina, il I dati NMR rivelano quindi una differenza di conformazione locale per l'inibitore della tripsina pancreatica bovina in soluzione e in forma cristallina che sembra risultare p principalmente dall'interazione intermolecolare nel reticolo cristallino.
Biosintesi del glicosaminoglicano nella parete arteriosa. Esosaminiltransferasi e glucuroniltransferasi nelle membrane cellulari del media-intima aortico.Esosaminiltransferasi e glucuroniltransferasi sono ben note per il loro ruolo nel biosintesi dei proteoglicani. Questi due enzimi sono caratterizzati in membrane ruvide e lisce, ottenute a seguito di frazionamento subcellulare del media-intima aortico. Richiedono la presenza di Mn2+ o Mg2+ per l'attività. La concentrazione ottimale per questi due cationi è 5 mM. Il pH ottimale per esosaminiltransferasi e glucuroniltransferasi è di circa 6,8 nel tampone Tris e la loro temperatura ottimale è di 30 gradi C. L'esosaminiltransferasi ha un Km apparente di 0,27 nM. La glucoroniltransferasi ha un Km apparente di 0,21 nM. L'assorbimento degli zuccheri marcati da parte dei proteoglicani endogeni è inibito dalla puromicina. L'esosaminiltransferasi e la glucuroniltransferasi sono presenti nelle frazioni submicrosomiali sia ruvide che lisce. ferenti glicosaminoglicani endogeni sono marcati durante i nostri esperimenti di incubazione. La maggiore incorporazione si nota per l'acido ialuronico e l'eparan solfato; il minimo si vede per il condroitin solfato. I risultati ottenuti in vitro per l'incorporazione di precursori marcati nei proteoglicani endogeni sono coerenti con quelli osservati durante lo studio in vivo del turnover di queste macromolecole.
La purificazione e le proprietà della diidrofolato reduttasi resistente al trimetoprim mediata dal fattore R, R388.Il fattore R R388 media la produzione di una diidrofolato reduttasi resistente al trimetoprim. Questo enzima ha un peso molecolare e un profilo di pH diversi dall'enzima sensibile al trimetoprim dell'ospite di Escherichia coli. L'enzima mediato dal fattore R è stato separato completamente dall'enzima ospite di E. coli dallo ione DEAE-cellulosa -cromatografia di scambio L'enzima del fattore R purificato era circa 20 000 volte meno suscettibile al trimetoprim rispetto all'enzima E. coli e sebbene fosse inibito in modo competitivo dal trimetoprim, la sua costante inibitrice (Ki) era 20 000 volte maggiore di quella dell'ospite Gli enzimi R388 ed E. coli differivano anche nei loro requisiti di specificità del substrato. Inoltre, l'enzima R388 ha sorprendentemente conferito un alto livello di resistenza all'inibitore della diidrofolato reduttasi ad ampio spettro, l'ametopterina. vengono discusse le origini bili dell'enzima R388.
Deidrogenasi dell'acido uronico da Pseudomonas syringae. Purificazione e proprietà.1. La deidrogenasi dell'acido uronico è stata purificata fino all'omogeneità. Dopo una purificazione di 338 volte una resa del 16% è stato raggiunto con un'attività specifica di 81 mumol NADH formata min-1 mg di proteina 1. 2. La purezza dell'enzima è stata controllata mediante elettroforesi su disco, elettroforesi di sodio dodecilsolfato e ultracentrifugazione 3. Un peso molecolare di 60 000 è stato determinato mediante cromatografia su gel e per ultracentrifugazione 4. L'enzima nativo è composto da due subunità il cui peso molecolare è di 30 000 stimato mediante elettroforesi di sodio dodecilsolfato Le subunità in quanto tali sono inattive 5. Lo spettro di assorbimento con un massimo a 278 nm non mostra evidenza di un gruppo prostetico 6. Per l'attività catalitica non sembrano essere necessari gruppi SH e nessun metallo 7. Le costanti di Michaelis determinate con l'enzima puro sono per acido glucuronico Km = 0,37 mM, acido galatturonico Km = 54 muM e NAD+ (con acido glucuronico) Km = 80 muM. 8. Si può osservare una debole reazione inversa con i lattoni dell'acido glucarico a pH acido. 9. NADH è competitivo con NAD+. La costante dell'inibitore è Ki = 60 muM. 10. Il sito di legame del NAD+ sembra avere una specificità inferiore rispetto al sito di legame dell'acido uronico.
Influenza degli acidi grassi insaturi nei cloroplasti. Spostamento del pH ottimale del flusso di elettroni e relazioni con deltapH, pH interno tilacoide e assorbimento di protoni.Linolenico L'acido (C18:3) è il principale acido grasso insaturo endogeno dei lipidi di membrana tilacoide e sembra che nella sua forma libera eserciti effetti significativi sulla struttura e sulla funzione delle membrane fotosintetiche. In questa indagine è stato studiato l'effetto dell'acido linolenico a vari pH valori sulla velocità di flusso degli elettroni in cloroplasti isolati di spinaci e relativi al deltapH, alla pompa protonica e al pH dello spazio tilacoide interno (pHi). Il deltapH e il pHi sono stati stimati dall'entità dell'estinzione della fluorescenza della 9-aminoacridina. ha causato uno spostamento (circa un'unità) del pH ottimale per il flusso di elettroni verso l'acidità nei seguenti sistemi: (a) fotosistemi II + I (da H2O a NADP+ o a 2,6-diclorofenolindofenolo) accoppiati o non accoppiati; (b ) fotosistema II (f da H2O a 2,6-diclorofenolindofenolo in presenza di dibromotimochinone). Nelle condizioni del fotosistema I (fenazina metosolfato), il deltapH del controllo aumenta in funzione del pHo esterno con un massimo intorno a pH 8,8. Quando è stato aggiunto l'acido linolenico, il deltapH è diminuito, ma il suo valore ottimale è stato spostato verso un pHo più acido. Gli stessi fenomeni sono stati osservati anche nel fotosistema II + I (da H2O a ferricianuro) e in condizioni del fotosistema II (da H2O a ferricianuro in presenza di dibromotimochinone). Tuttavia, il deltapH era più piccolo e la sensibilità del gradiente protonico verso l'acido linolenico era alla fine maggiore rispetto all'attività del flusso di elettroni del fotosistema I. La pompa protonica che potrebbe essere considerata una misura della capacità tampone interna dei tilacoidi era ottimale a pHo, 6,7 nei controlli. Un'aggiunta di acido linolenico ha diminuito la pompa protonica e spostato il suo valore ottimale verso un pHo più alto. Di conseguenza, pHi è aumentato quando è stato aumentato pHo. Al pHo ottimale da 8,6 a 9, il pHi era da 5 a 5,5. L'aggiunta di concentrazioni crescenti di acido linolenico ha spostato le curve verso un pHi più alto. Era quindi necessaria una diminuzione del pHo per mantenere il pHi nell'intervallo 5-5,5 per il flusso massimo di elettroni. In conclusione, l'attività del flusso di elettroni sembra essere delicatamente controllata dalla pompa protonica (capacità tampone), deltapH, pHi e pHo. Gli acidi grassi danneggiano l'integrità della membrana in modo tale da disturbare il sottile equilibrio tra i fattori.
Guanilato ciclasi: dosaggio e proprietà degli enzimi particolato e surnatante nella parotide di topo.Un nuovo dosaggio, molto sensibile, rapido e affidabile per la guanilato ciclasi è stato stabilito sulla base della conversione di [32P]GTP in [32P]guanosina 3\':5\'-monofosfato e della sua separazione su colonne Dowex 50 e ossido di alluminio. Sono state stabilite le condizioni ottimali per il dosaggio della guanilato ciclasi parotide di topo e utilizzando questa procedura sono state studiate le proprietà dell'enzima. L'enzima è stato trovato sia nella frazione particolato che nel surnatante. L'enzima particolato è stato attivato 12 volte da Triton X-100 e l'attività enzimatica surnatante è aumentata di 2 volte. Nel presenza di attività detergente guanilato ciclasi è stata distribuita 85% nel particolato e 15% nelle frazioni surnatante, rispettivamente. L'attività particolato è stata localizzata in una frazione di membrana plasmatica. L'attività guanilato ciclasi è stata anche saggiata in un ampio v varietà di altri tessuti. In tutti i casi è stata riscontrata attività enzimatica sia nel particolato che nel surnatante. La distribuzione variava con il tessuto, ma solo la mucosa intestinale aveva una proporzione maggiore di attività guanilato ciclasi totale nella frazione particolata rispetto alla parotide. I due enzimi hanno mostrato alcune proprietà simili. Il loro pH ottimale era pH 7,4, entrambi gli enzimi erano inibiti da ATP, dATP, dGTP e ITP, richiedevano Mn2+ per l'attività e i grafici di attività rispetto alla concentrazione di Mn2+ erano sigmoidali. Tuttavia, in molte proprietà gli enzimi erano dissimili. I rapporti tra Mn2+ e GTP per l'attività ottimale erano 4 e 1,5 rispettivamente per il surnatante e gli enzimi legati al plasma. La pendenza dei grafici di Hill per l'enzima surnatante con Mn2+ variabile era 2. Anche i grafici dell'enzima particolato avevano una pendenza di 2 a basse concentrazioni di Mn2+ ma a concentrazioni più elevate (sopra 0,7 mM) il coefficiente di Hill è passato bruscamente a 4. Gli ioni di calcio hanno ridotto la sigmoidicità della cinetica abbassando il coefficiente di Hill, ha attivato l'enzima a tutte le concentrazioni di Mn2+ ma non ha avuto effetto sul rapporto Mn2+:GTP con l'enzima surnatante mentre con l'enzima di membrana plasmatica Ca2+ non ha avuto effetto sulla forma sigmoide della cinetica a basso Mn2+ ma ha impedito il passaggio a un coefficiente di Hill maggiore a Mn2+ più alto, ha inibito l'attività a Mn2+ basso e ha spostato il rapporto ottimale Mn2+:GTP a 4. Per i grafici di attività dell'enzima particolato rispetto alla concentrazione di GTP erano sigmoidi (n = 1.3), mentre il l'enzima surnatante ha mostrato una cinetica iperbolica.
Un'endonucleasi intracellulare di Bacillus subtilis specifica per DNA a filamento singolo.Abbiamo frazionato da estratti di Bacillus subtilis l'attività DNasi specifica per DNA a filamento singolo DNA; l'attività si separa in due frazioni principali su Sephadex G-200, una più grande (Mr maggiore di 400 000) e una più piccola (Mr circa 30 000) Abbiamo purificato la frazione più piccola e più abbondante di quasi 3000 volte. L'enzima purificato ha un pH ottimale vicino a 8, è attivato dal Ca2+ ed è inibito dall'EDTA, l'enzima idrolizza il DNA a singolo filamento ad una velocità circa 40 volte maggiore del DNA a doppio filamento. Il meccanismo d'azione è endonucleolitico su entrambi substrati, ma non è esclusa la possibilità che le due attività possano risiedere su molecole diverse. I prodotti hanno estremità 5\'-P e 3\'-OH. L'enzima è diverso da quelli purificati dai terreni di coltura dello stesso organismo sotto diversi aspetti; questi ultimi sono tutti extracellula r enzimi, non sono specifici per il DNA a filamento singolo (tranne uno) e hanno tutti un meccanismo d'azione esonucleolitico.
Caratterizzazione dell'attività dell'ossigenasi in un mutante di Chlamydomonas reinhardi che mostra un'alterazione della carbossilasi ribulosebisfosfato.Un mutante mendeliano precedentemente descritto di Chlamydomonas reinhardi, ac i72, che mostra L'attività alterata della ribulosebisfosfato carbossilasi e incapace di crescere su un terreno minimo viene esaminata per i cambiamenti nell'attività dell'ossigenasi ribulosebisfosfato dell'enzima purificato sia da wild type che da ac i72 viene confrontata su un intervallo di pH da 7,0 a 9,5. Entrambi gli enzimi mostrano il massimo attività a pH 9,0 Tuttavia, l'enzima ac i72 è due volte più attivo dell'enzima wild type a un pH fisiologico di 7,0 Gli studi in vivo dei prodotti della fissazione di CO2 di ac i72 e cellule wild type in presenza di una bassa concentrazione di O2 mostra che a causa di un livello inferiore di carbossilazione, le cellule ac i72 fissano la CO2 a metà della velocità delle cellule wild type. In ac i72, il 24% del 14C fissato fotosinteticamente viene convogliato nella frazione idrosolubile rispetto al 6% del wild type. La cromatografia su strato sottile della frazione solubile in acqua ha mostrato un ampio accumulo di componenti della via del glicolato in ac i72 rispetto al wild type. Ciò indica che l'attività ossigenasica dell'enzima prevale in ac i72 in vivo. Poiché un'elevata concentrazione di glicolato è tossica per le cellule di C. reinhardi, l'elevata attività ossigenasica di ac i72 fornisce una spiegazione per l'incapacità di ac i72 di crescere fototroficamente anche se il suo tasso di fissazione della CO2 è metà di quello del wild type. Questa tossicità per il glicolato viene superata dalla crescita sotto illuminazione ambrata o bassa concentrazione di O2.
Studi spettroscopici di dicroismo circolare e di assorbimento su specifici residui aromatici coinvolti nelle diverse modalità di aggregazione delle proteine del tabacco-mosaico-virus.Cambiamenti conformazionali che accompagnano le diverse modalità di aggregazione della proteina del virus del mosaico del tabacco (proteina TMV) sono state studiate utilizzando il dicroismo circolare (CD) e gli spettri della differenza di assorbimento nell'intervallo di assorbimento aromatico. Confrontando la proteina wild-type e il mutante Ni 2068 (Tyr-139 conduce a Cys -139) è resa possibile una localizzazione provvisoria di amminoacidi aromatici nella struttura tridimensionale In tutte le modalità di aggregazione gli spettri CD sono determinati da interazioni intrasubunità tra residui aromatici, in particolare Trp-17 e Trp-52 nonché Tyr -70, Tyr-72 e Tyr-139. L'interazione Trp-17-Trp-52 è risultata essere molto sensibile ai cambiamenti della struttura quaternaria soprattutto rispetto agli aggregati elicoidali. Ciò suggerisce che l'ambiente del due residui di triptofano sono di cruciale importanza nella struttura tridimensionale della subunità; nel corso dell'aggregazione le interazioni intersubunità competono con le specifiche interazioni intrasubunità Trp-17--Trp52. Si suggerisce che Try-70 e Tyr-72 formino legami idrogeno in un ambiente fortemente idrofobo. La formazione del doppio disco diminuisce la forza rotatoria, indicando un aumento della flessibilità conformazionale. Prove spettroscopiche e chimiche dimostrano che Tyr-70, Tyr-72 e Tyr-139 sono nelle immediate vicinanze. La formazione di un doppio disco abbassando il pH (pH 8 PORTA A 6,9, I = 0,1 M) o aumentando la forza ionica (pH 8, I = 0,1 PORTA A 0,6 M) si riflette da identici effetti spettrali nell'ambiente di Tyr- 70 - Tyr-72. Tuttavia l'interazione tra Trp-17 e Trp-52 indica differenze significative nella conformazione che possono essere importanti per la formazione di aggregati superiori, cioè \'rondelle\', eliche e \'dischi impilati\'.
La cinetica di reazione del fluoro e dell'ammoniaca con ferrimioglobina acida e alcalina allo stato cristallino.Sono state studiate le differenze tra la reattività della mioglobina amorfa e quella cristallina con il metodo a flusso rapido combinato con spettrofotometria a doppia lunghezza d'onda. Il legame dell'ammoniaca al composto idrossido ha un tempo di dimezzamento di 55 ms. La reazione inversa ha un tempo di dimezzamento di 70 ms. A pH 7,0 i tempi di dimezzamento relativi di combinazione e dissociazione con il fluoruro sono 10 min per i materiali cristallini e 1,8 min per i materiali amorfi. La reattività dei cristalli al fluoruro a pH 6,0 è notevolmente aumentata rispetto a pH 8,7. Il tempo di dimezzamento a pH 8,7 è di 10 min, mentre a pH 6,0 la il tempo di dimezzamento è 2,5 s per il materiale cristallino e 1,4 s per il materiale amorfo. Lo scambio di fluoruro con azide a pH 6,0 è 3,1 volte più veloce nel materiale amorfo rispetto al materiale cristallino.
Intermedi nell'interconversione dell'emoglobina ferrica acida e alcalina. Aspetti strutturali e cinetici.Il salto di pH acido-alcalino in sospensione dell'emoglobina cristallina di pecora ha stato studiato nell'intervallo da 5,95 a 8,94. Cristalli sospesi in 3,8 M Cs2SO4 mostrano una rapida transizione ottica di tempo di dimezzamento uguale o inferiore a 2 ms All'aumentare della concentrazione di ammoniaca nei cristalli sospesi Cs2SO4, una seconda transizione ottica si osserva come una reazione di pseudo-primo ordine, con una costante di velocità compresa tra 10 e 15 s-1. Il salto di pH acido-alcalino procede attraverso uno spostamento molto rapido dell'equilibrio acido-alcalino ed è seguito da un primo- costante di dissociazione dell'ordine tra 9 e 12 s-1. La dissociazione dell'ammoniaca è bifasica e il rapporto tra le fasi veloce e lenta è 9.
Attività di glutammina sintetasi, glutaminasi e fosfodiesterasi nel cervello in ipossia: effetto in vitro di cortisolo, GABA e serotonina sulla glutammina sintetasi.L'effetto dell'ipobarica l'ipossia sulle attività della glutammina sintetasi, glutaminasi e ciclica 3\'5\' AMP fosfodiesterasi nel cervello di ratto è stata studiata dopo l'esposizione a 25.000\' per 6 ore. L'attività della glutammina sintetasi è stata aumentata in tutte le regioni del cervello studiate e l'aggiunta di gamma acido amino butirrico, serotonina e cortisolo in vitro hanno prodotto una risposta differenziale L'attività della glutamminasi è diminuita in tutto il cervello L'attività ciclica della 3\'5\' AMP fosfodiesterasi è diminuita nel cervelletto, midollo, ipotalamo e ipofisi mostrando un accumulo di 3\'5\' ciclico AMP in queste regioni I risultati suggeriscono che la sintesi e la degradazione della glutammina sono regolate nel sistema nervoso centrale dall'AMP ciclico e dal cortisolo: acido gamma aminoburyrico e altri composti ds può modulare l'attività della glutammina sintetasi e della glutaminasi.
Determinazione dell'insulina totale (TIRI) nel plasma di diabetici trattati con insulina e neonati di madri diabetiche trattate con insulina.Plasma di diabetici trattati con insulina diabetici e dei neonati di madri diabetiche trattate con insulina contiene anticorpi contro l'insulina che invalidano il dosaggio radioimmunologico dell'insulina. Pertanto, il complesso di anticorpi dell'insulina endogena deve essere scisso a un pH inferiore a 5 e l'IRI totale (TIRI) viene separato mediante estrazione con etanolo. È stato studiato il tasso di recupero in funzione del volume di plasma utilizzato per l'estrazione. Riducendo il volume di plasma utilizzato da 500 a 200 mul per estrazione, il tasso di recupero è stato aumentato da 65,1 +/- 8,4 a 88,3 +/- 4,2% (media +/- - SEM). Il basso volume plasmatico di 200 mul per l'estrazione del TIRI ha permesso di determinare il TIRI durante i carichi di glucosio dei neonati. Per eliminare le diverse condizioni di incubazione per campioni di plasma standard e sconosciuto i livelli di TIRI sono stati calcolati mediante s o cosiddetta curva standard "estratta", ottenuta con insulina estratta dalla diluizione di insulina standard in plasma umano in pool privo di insulina. Utilizzando il metodo descritto, è stato possibile dimostrare una rigenerazione temporanea della secrezione di insulina di un diabetico giovanile di nuova diagnosi dopo il trattamento con insulina. A differenza dei neonati di madri sane, è stato riscontrato un rilascio bifasico/insulina durante i carichi di glucosio per via endovenosa nei neonati di madri diabetiche trattate con insulina.
Siti di legame adrenergico e attività enzimatica nel cuore di ratti ipertiroidei.In questo studio le interazioni di alcuni farmaci adrenergici con il legame della 3H-norepinefrina ( NE) e la risposta di alcuni sistemi enzimatici nel cuore di ratti con ipertiroidismo farmacologico sono stati studiati Il legame di NE alle particelle cardiache è stato inibito da isoproterenolo, propranololo e in concentrazioni inferiori da un altro farmaco beta-bloccante trimepranolo sia nel controllo che nel cuore ipertiroideo in lo stesso grado. Tuttavia, dopo l'aggiunta di noradrenalina non radioattiva (10(-3) M) il grado di spostamento era inferiore nel gruppo ipertiroideo che nel gruppo eutiroideo. L'attività dell'adenilato ciclasi era inferiore nelle particelle cardiache ipertiroidee. Questa differenza è rimasta preservata dopo la stimolazione noradrenalina o NaF. Le attività della lipasi ormone-sensibile e della lipoproteina lipasi sono state aumentate nella preparazione dei cuori ipertiroidei. L'attività della fosforilasi "a" è stato anche aumentato nelle particelle cardiache ipertiroidee. Non c'era alcun cambiamento nelle proprietà dei siti di legame adrenergici cardiaci nell'ipertiroidismo con l'eccezione di un minore spostamento di NE da parte dell'ormone non marcato. I risultati indicano che l'aumento delle attività lipolitica e della fosforilasi "a" nei cuori ipertiroidei non sono necessariamente legate all'elevata attività dell'adenilato ciclasi.
Regolazione dei neurotrasmettitori dell'ormone della crescita e dell'ACTH nella scimmia rhesus: effetti delle ammine biogene.Nel tentativo di chiarire il ruolo dei neurotrasmettitori centrali nel GH e regolazione dell'ACTH, scimmie rhesus maschi adulti non anestetizzati adattati alla sedia e cannule intratriali croniche permanenti sono state somministrate infusioni di 30 minuti di vari agonisti noti per influenzare le ammine centrali e campioni di plasma sono stati prelevati per le determinazioni di GH e cortisolo. nessun effetto significativo sul GH plasmatico o sul cortisolo (P inferiore a 0,05) L-Diidrossifenilalanina (L-Dopa) (4,5 e 45 mg/kg), ma non l'apomorfina (7 mug/kg), uno specifico agonista dopaminergico, ha prodotto aumenti significativi di GH. Sia noradrenergico (clonidina HCl, 1,5, 15 e 150 mug/kg, e D,L-treodiidrossifenilserina (D,L-treodops) 90 mg/kg) e serotoninergico (5-idrossi-L-triptofano (5- HTP), 45 mg/kg) agonisti hanno indotto significative risposte del GH. Questi risultati suggeriscono che Il GH è regolato nella scimmia rhesus dai neuroni noradrenergici e serotoninergici, mentre non è stata stabilita la partecipazione dei neuroni dopaminergici. Risposte significative al cortisolo sono state osservate solo dopo l'infusione di 5HTP (45 mg/kg). Gli agonisti dopaminergici e noradrenergici non solo non sono riusciti ad alterare i livelli di cortisolo a riposo, ma non hanno nemmeno influenzato la risposta del cortisolo al 5-HTP. Nella scimmia rhesus i meccanismi serotoninergici sembrano essere responsabili della regolazione dei livelli di cortisolo a riposo. In questa specie non è stato dimostrato un meccanismo inibitorio delle catecolamine.
Fallimento dei bloccanti dei recettori monoaminergici e colinergici per prevenire il rilascio dell'ormone luteinizzante indotto dalla prostaglandina E2.Farmaci che bloccano i recettori sono stati utilizzati per determinare se adrenergici, dopaminergici, le sinapsi serotoninergiche o colinergiche sono coinvolte nella mediazione del rilascio di LH indotto dalla PGE2 iniettata per via intraventricolare 2. La prostaglandina E2 (5mug) è stata iniettata nel 3° ventricolo (3° V) di ratti ovariectomizzati e le concentrazioni plasmatiche di LH prima e dopo il trattamento sono state determinate mediante dosaggio radioimmunologico. La fentolamina, 20 o 30 mug, o il pronetalolo, 20 mug (bloccanti dei recettori alfa e beta adrenergici, rispettivamente) iniettati nel 3° V non sono riusciti ad alterare l'elevazione dell'LH plasmatico evocato dalla PGE2 iniettata nel ventricolo 10 minuti dopo. Allo stesso modo, il rilascio di LH dopo PGE2 non è stato modificato quando un bloccante dopaminergico, pimozide (0,63 mg/kg, SC), è stato iniettato 2 ore prima della PGE2. Due antagonisti della serotonina, metisergide maleato (3 mg/kg ip) o cinan la serina HC1 (1 mg/kg iv) somministrata rispettivamente 2 ore o 45 minuti prima della PGE2, non è riuscita ad alterare l'azione della PGE2. Anche l'atropina (100 o 250 tazze) iniettata nel 3° V 10 minuti prima della PGE2 è risultata inefficace nel bloccare l'aumento dell'LH plasmatico dopo la PGE2. I risultati di questo studio indicano che l'effetto della PGE2 sul rilascio di LH non è mediato dai recettori adrenergici, dopaminergici, serotoninergici o colinergici. Suggeriscono anche che PGE2 non agisca trans-sinapticamente ma probabilmente direttamente sul neurone LHRH per indurre lo scarico di LHRH nei vasi portali ipofisari che poi evoca il rilascio di LH dall'adenoipofisi.