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Fosfatasi acida di fegato umano.Il fegato umano contiene tre forme cromatograficamente distinte di fosfatasi acida non specifica (EC 3.1.3.2). Fosfatasi acida I, II e III hanno pesi molecolari rispettivamente superiori a 200 000, 107 000 e 13 400. Dopo purificazione parziale, l'isoenzima II è stato ottenuto come singola banda di attività, come valutato mediante colorazione dell'attività con p-nitrofenil fosfato e alfa- naftil fosfato su gel di poliacrilammide viene eseguito a diversi valori di pH. Con p-nitrofenil fosfato 50 mM come substrato, gli enzimi II e III mostrano plateau di attività nell'intervallo di pH 3 - 5 e 3,5 - 6, rispettivamente. La fosfatasi acida II non è significativamente inibita dello 0,5% di formaldeide. Viene confrontata l'attività della fosfatasi acida epatica umana II e della fosfatasi acida prostatica umana verso diversi substrati. L'enzima epatico, in netto contrasto con l'enzima prostatico, non idrolizza la O-fosforilcolina.
Un micro-metodo per la determinazione quantitativa degli acidi acilneuraminici dalle membrane degli eritrociti.Viene presentato un micro-metodo che consente la determinazione rapida ed esatta dell'acido -acidi acilneuraminici idrolizzati nelle membrane eritrocitarie Gli eritrociti da 1 ml di sangue umano e di coniglio contenente tampone ACD vengono lavati ed emolizzati su filtri Millipore di dimensione dei pori 1.2 mu Gli acidi acilneuraminici vengono rilasciati dalle membrane eritrocitarie ancora sui filtri nelle condizioni ottimali di 0,1 N HCl a 80 gradi C per 50 min Un prerequisito per la determinazione della quantità reale di acidi acilneuraminici utilizzando il saggio dell'acido periodico/acido tiobarbiturico è l'estrazione su piccola scala dei lipidi dall'idrolizzato e la cromatografia a scambio anionico dell'acido acilneuraminico acidi. I valori così ottenuti devono essere corretti, in quanto il 20% degli acidi acilneuraminici viene distrutto durante l'idrolisi acida. In campioni di sangue umano di 10 individui sani, in media ge 223 nmol di acidi acilneuraminici per ml di eritrociti concentrati, e nella stessa quantità di eritrociti di coniglio, viene discusso il metodo 1e per uno screening del contenuto di acido acilneuraminico delle membrane degli eritrociti nelle malattie emolitiche o di altre membrane cellulari.
[Furti senza motivo di lucro come sindrome psicopatologica (trad. autore\')].I furti senza motivo di dolore sono noti fin dall'inizio XIX secolo. Ma il problema non è stato risolto. Mentre in passato erano considerati una malattia mentale, oggi non sono visti come qualcosa di speciale. Ma continuano a verificarsi. Solo una piccola percentuale di comuni taccheggi può essere definita una sindrome psicopatologica. Sono state pubblicate molte spiegazioni e analisi che sono discusse in dettaglio. In un gruppo qui descritto complessivamente situazioni coniugali difficili e piene di conflitto, frustrazione sessuale coniugale, depressione, esaurimento fisico e mentale e tendenze aggressive e suicide. Il furto sembra essere strettamente connesso con questi. Ma il modello di motivazione e causalità non è affatto stereotipato. Per chiarire tali azioni bisognerà considerare il più esattamente possibile la connessione biografica e ciò che accade durante l'atto - indipendentemente dalle condizioni somatiche. La valutazione presente nei rapporti è totalmente insoddisfacente. È urgente chiarire le questioni controverse.
Metodo su piastra di fibrina con reagenti purificati mediante cromatografia di affinità e suo utilizzo per la determinazione dell'attività fibrinolitica e di altre attività proteolitiche nella saliva, nella bile e nel plasma.Una modifica Per la stima dell'attività della plasmina e dell'attivatore del plasminogeno sono state utilizzate piastre di fibrina senza e con una quantità costante di plasminogeno e con agarosio come mezzo stabilizzante. . L'attività dell'attivatore potrebbe essere dimostrata nella bile sterile e nella saliva. Quando era presente l'attività della plasmina, le stime dell'attivatore del plasminogeno erano approssimative. Il metodo è sensibile, sono necessari piccoli volumi di reagenti e campioni. L'errore del metodo è relativamente basso e la riproducibilità è buono.
Ibridazione genetica nei loci thy e str non collegati di Streptococcus.Le specie sanguis e pneumoniae di Streptococcus sono state utilizzate come recipienti nelle trasformazioni da str+ a str -r e da thy- a thy+. Le mutazioni str-r nelle due specie erano state precedentemente dimostrate essere alleliche. L'omologia delle mutazioni thy- nelle due specie è stata dimostrata nelle proprietà fenotipiche simili che hanno conferito (morte in assenza di timidina, mancanza di timidilato sintetasi). I loci str e thy sono scollegati in ciascuna specie. --- Quando le due specie vengono trasformate da DNA sia omospecifico che eterospecifico, l'efficienza è sempre inferiore nell'incrocio eterospecifico. L'efficienza dell'eterospecifico la trasformazione è considerevolmente inferiore al thy rispetto al locus str. Il DNA è stato estratto da riceventi che avevano marcatori integrati di origine eterospecifica. Quando tale DNA ibrido viene testato sulla specie ricevente originale, i marcatori eterospecifici sono solitamente efficiente quanto i marcatori omospecifici. Quando testato sulla specie donatrice originale, tuttavia, il DNA ibrido è solitamente più efficiente del DNA eterospecifico. Questo è vero sia per la tua trasformazione che per quella di str. -- -- Quaranta ibridi thy+ indipendenti sono stati ottenuti nell'incrocio di sanguis thy- destinatari con pneumoniae thy+ DNA. Questi ibridi rientrano in un certo numero di classi in base alla relativa efficienza con cui i loro DNA\' estratti sono in grado di trasferire il marcatore thy+ nelle cellule timoniere della polmonite. Il più efficiente di questi DNA mostra circa il 20% dell'efficienza del tuo DNA omospecifico di polmonite e tre ordini di grandezza maggiore di efficienza rispetto al tuo DNA eterospecifico di sangue. Quindi, molto poco dell'inefficienza della trasformazione eterospecifica del tuo locus è ascrivibile ad un classico meccanismo di restrizione. Piuttosto, i loci thy+ wild-type nelle due specie sembrano differire in più siti e trasferimenti eterospecifici indipendenti determinano estensioni differenziali di integrazione di questi siti. Su questa base, i thy+ loci delle due specie differiscono in un numero maggiore di siti rispetto ai rispettivi str+ loci.
Uno studio sui merodiploidi pneumococcici a livello molecolare.Il DNA di un ceppo di pneumococco resistente alle sulfonamidi (eterozigote per sulr-c) e quello di tre trasformanti cd altamente resistenti e persistentemente eterozigoti, derivati dall'introduzione del marcatore sulr-c in un ceppo stabile resistente alla sulfonamide (sulr-d), sono stati studiati per analizzare le basi genetiche della loro merodiploidia. Le proprietà fisiche del DNA nativo e denaturato dal gli eterozigoti e i ceppi non eterozigoti non erano distinguibili. La denaturabilità e la rinaturabilità dell'attività biologica per i marcatori eterozigoti erano essenzialmente identiche a quelle dei marcatori normali. L'eterozigosi si estende al locus strettamente collegato dando origine a quattro diverse configurazioni di trasformanti cd e cd+ , caratterizzati dalle loro frequenze di segregazione e attività donatore-marcatore I rapporti marcatore-attività e la frequenza di co-trasferimento di marcatori eterozigoti w Si è scoperto che rimaneva lo stesso in ciascuno di essi quando il DNA del donatore era nativo, denaturato o ricotto senza frazionamento o ricotto dopo il rimescolamento dei filamenti risolti. I possibili modelli sono stati valutati rispetto a queste osservazioni e queste considerazioni hanno portato a suggerire che la duplicazione in tandem di una regione genica potrebbe essere responsabile dell'eterozigosi e dell'instabilità di questa regione. Un esame più dettagliato di questo modello sarà presentato in un documento di accompagnamento.
Evidenza di duplicazione in tandem di geni in una regione merodiploide di mutanti pneumococcici resistenti alla sulfonamide.Un mutante pneumococcico, sulr-c, resistente ai sulfonamidi, e tre trasformanti portatori di marcatori di resistenza d o d+ associati sono stati precedentemente segnalati come instabili e mostrano modelli e frequenze distinti di segregazione della progenie stabile priva del marcatore C. Ciascuno dei quattro ceppi ha mostrato un dosaggio caratteristico dei geni coinvolti nella merodiploidia. filamenti di DNA\' da questi ceppi stabili e instabili sono stati risolti e gli ibridi omoduplex ed eteroduplex realizzati dai filamenti di DNA separati sono stati usati come donatori nelle trasformazioni genetiche. Attività di un normale marcatore (resistenza alla streptomicina) e quelle coinvolte nell'eterozigosi (c, d e d+) sono stati misurati quantitativamente. Da quegli eteroduplex costituiti da filamenti opposti derivati da un eterozigote e da un ceppo stabile, il marker normale è transfe rred efficientemente, ma i marcatori eterozigoti non lo sono. D'altra parte, se entrambi i filamenti di un eteroduplex sono derivati da diversi ceppi eterozigoti, tutti i marcatori possono essere trasferiti con la consueta efficienza a un ceppo ricevente stabile. L'efficienza ridotta nel primo tipo di eteroduplex è attribuita a un'inomologia risultante da una duplicazione in tandem nei ceppi merodiploidi e da un postulato processo di riparazione del DNA stimolato da esso mentre si trova nella forma del duplex donatore. L'inomologia probabilmente include (a) una microeterogeneità tra il sito c e il locus wild type, e (b) un'incompatibilità più estesa attribuibile a un segmento extra del genoma in una duplicazione in tandem che copre i siti c e d. La prima di queste inomologie produce una ridotta efficienza di trasferimento da tutte le configurazioni del particolare allele d associato al marcatore c mutante, e quindi tiene conto dei caratteristici schemi di trasferimento anche dal DNA merodiploide nativo\'.
Confronto di aminoacidi che bagnano l'area della ghiandola ossintica nella stimolazione della secrezione gastrica.Questo studio è stato intrapreso per confrontare la capacità di L- e D -isomeri di aminoacidi che bagnano l'area della ghiandola ossintica per stimolare la secrezione acida nei cani coscienti con tasca di Heidenhain (HP), fistola gastrica (GF) e fistola pancreatica (PF). Le uscite acide da HP sono state determinate mediante un metodo di titolazione intragastrica quando l'aminoacido soluzioni sono state perfuse in HP a varie concentrazioni, valori di pH e pressioni di distensione. Solo gli isomeri L di tutti gli amminoacidi naturali sono stati trovati per stimolare la secrezione acida, mentre gli isomeri D degli amminoacidi testati erano completamente inerti a questo riguardo. l'attività secretagoga degli amminoacidi mostra che la L-istidina tra gli amminoacidi essenziali e la glicina tra gli amminoacidi non essenziali hanno mostrato la più forte stimolazione delle uscite acide, raggiungendo, rispettivamente, il 52 e il 40% della risposta massima all'istamina. l'aumento del pH della soluzione di L-istidina perfusa in HP in ordine sequenziale da 5,0 a 1,0 ha comportato una riduzione graduale della produzione di acido, scendendo a pH 1,0 a circa il 40% della risposta di picco raggiunta a pH 5,0. L'irrigazione locale di HP con xilocaina al 2% e l'infusione endovenosa di atropina (100 tazze per kg per ora) o metiamide (2,9 mg per kg per ora) hanno ridotto ma non abolito la risposta di HP alla stimolazione chimica e la dipendenza dal pH di questa risposta. Concludiamo che solo gli isomeri L- e non D degli amminoacidi che bagnano l'area della ghiandola ossintica stimolano la secrezione acida mediante un meccanismo locale, indipendente dalla gastrina, sensibile alla pressione di distensione e al pH.
Fluorescenza di flavoproteine ossidate da isole pancreatiche isolate perfuse.Nelle isole pancreatiche perfuse, la fluorescenza delle flavoproteine ossidate (FAD) è stata registrata continuamente. Elevazione di concentrazione di glucosio nel mezzo da 0 o 5 mM a 20 mM ha portato a una diminuzione della fluorescenza FAD a partire da 10 secondi dopo il cambio del mezzo L-leucina (10 mM), (+/-)-B-BCH (20 mM) e l'acido alfa-chetoisocaproico (10 mM) ha causato la tipica cinetica della diminuzione della fluorescenza del FAD. I risultati sono interpretati per indicare rapidi cambiamenti dello stato funzionale dei mitocondri delle cellule B indotti dai suddetti stimolatori del rilascio di insulina.
Il sistema di trasporto dell'ossigeno dei globuli rossi durante la chetoacidosi diabetica e il recupero.Le valutazioni giornaliere di 8 diabetici chetoacidotici appena rilevati hanno mostrato l'effetto Bohr dell'emoglobina essere diminuito del 50% mentre il 2,3-DPG eritrocitario era diminuito al di sotto di 10 mumoli/g Hb. Il 2,3-DPG era fortemente correlato con il pH durante l'acidosi e con il fosfato inorganico plasmatico (Pi) successivamente alla prima somministrazione di insulina. dell'emoglobina, misurata come pH P50 act, è rimasta invariata nella chetoacidosi rispetto al tempo, tuttavia, il pH P50 act è sceso sorprendentemente (p inferiore a 0,001) ed è rimasto diminuito fino a 7 giorni a seconda della risintesi di 2,3-DPG in relazione a Pi. Il coefficiente di Hill nel riflettere la pendenza della curva di dissociazione dell'ossigeno era diminuito nella chetoacidosi (p inferiore a 0,005) e diminuito ulteriormente dopo la normalizzazione del pH (p inferiore a 0,005). C'era una stretta associazione di n con 2 ,3-DPG (p inferiore a 0,001) e inoltre con Pi a livelli di 2,3-DPG inferiori a 10 mumole/g Hb. Sulla base di questi risultati si può ipotizzare una diminuzione del rilascio di ossigeno negli eritrociti di un quinto durante l'acidosi e di più di un terzo dopo la correzione del pH. In considerazione dell'intima relazione del Pi con il sistema di trasporto dell'ossigeno, si suggerisce che il trattamento della chetoacidosi dovrebbe includere la sostituzione del Pi.
Funzione alterata delle cellule di Sertoli nel criptorchidismo sperimentale nel ratto.La produzione di proteina legante gli androgeni testicolare (ABP), come misura della cellula di Sertoli funzione, è stata studiata dopo criptorchidismo sperimentale unilaterale o bilaterale in ratti adulti. Due o 4 settimane dopo la traslocazione del testicolo nell'addome, non sono state riscontrate grandi variazioni nella concentrazione di ABP per mg di proteina, sebbene si sia verificata una diminuzione marcata e progressiva nel contenuto di SOA per testicolo. Tuttavia, il tasso di produzione di SOA è stato notevolmente diminuito, come misurato dall'accumulo di SOA durante la legatura di 16 ore dei dotti efferenti o dalla produzione di SOA da testicolo tritato in un sistema in vitro. Ciò indica che la funzione delle cellule del Sertoli è gravemente compromessa dalla posizione intra-addominale.
Analisi di innesti cutanei attraverso la barriera MSA in topi pretrattati con sieri di donatori innestati specificamente o singeeicamente.Sopravvivenza prolungata di allotrapianti cutanei debolmente incompatibili in topi (attraverso la barriera presentata dall'MSA) possono essere indotti pretrattando i riceventi non solo con un siero anti-MSA specifico (ottenuto il giorno 5 dopo un singolo innesto cutaneo incompatibile con MSA) ma anche essere mezzo di siero di controllo ottenuto in un in modo simile dai destinatari di innesti cutanei completamente compatibili (singenici). La somministrazione di siero da topi non trapiantati non ha avuto alcun effetto sulla sopravvivenza dell'innesto. L'effetto biologico simile di entrambi i sieri ha avuto una controparte nel loro contenuto e spettro simili di glicosaminoglicani. Anche in gli stessi innesti cutanei, il corso dei cambiamenti sia qualitativi che quantitativi di GAG nel primo periodo post-trapianto è stato nella situazione allogenica e singenica simile Il possibile ruolo di queste sostanze nel siero e nel sito dell'innesto e del loro effetto sull'esito della risposta all'allotrapianto sono discussi.
[Differenze nelle risposte dei recettori gustativi agli acidi organici e inorganici con variazioni della concentrazione di bicarbonato in soluzione].Le soglie del È stato riscontrato che il pH dell'acido citrico (pH=4.9) supera di 1,4 pH le soglie per HC1 (3,5) a 1,2 mmol/1 di bicarbonato nella soluzione. La reazione all'acido citrico era superiore a quella dell'HC1 a pH uguale. di bicarbonato da 1,2 mmol/1 a 0 ha ridotto la soglia del pH solo per l'acido sitrico da 4,90 a 3,15 La soglia del pH per HC1 è rimasta 3,5 La risposta della chorda tympani alla stimolazione con soluzioni contenenti bicarbonato (1,2 mmol/1) è stata superiore rispetto all'assenza di bicarbonato. I dati ottenuti suggeriscono due gamme degli acidi in azione.
[Regolazione della PO2 tissutale locale nella corteccia cerebrale del gatto].La PO2 locale è stata misurata nella corteccia del gatto in siti adiacenti con un platino elettrodo di superficie multifilo sia in condizioni di stato stazionario che con apporto di ossigeno arterioso variabile. Contemporaneamente, la PO2 nel seno sagittale è stata registrata continuamente attraverso la parete vascolare. In condizioni di normossia e di stato stazionario i valori di PO2 tissutale locale variavano tra O Torr e livelli quasi arteriosi di 85 Torr in accordo con i calcoli teorici. Con un aumento dell'apporto di ossigeno arterioso, la PO2 tissutale locale, misurata in siti adiacenti, reagisce in modo abbastanza diverso. Aumenti lineari della PO2 tissutale locale rispetto alla PO2 arteriosa, nonché livelli costanti o solo aumenti molto piccoli , sono stati registrati. La costanza della PO2 locale (="autoregolazione della PO2 locale") è stata causata dalla vasocostrizione locale. Con una ridotta fornitura di ossigeno arterioso, tuttavia, la PO2 tissutale è diminuita in tutti gli studi ed i siti fino all'ipossia e all'anossia. L'autoregolazione della PO2 durante una diminuzione della PO2 arteriosa come descritto da Bicher (1973) non è stata trovata.
[Possibile organizzazione strutturale-funzionale del sistema di regolazione del flusso sanguigno cerebrale locale].rCBF in condizioni normali nel coniglio, gatto e scimmia è stato scoperto che il cervello ha una periodicità spontanea mentre le risposte rCBF alla stimolazione afferente dello sfarfallio di solito hanno rivelato un modello fluttuante a doppia fase. Questo suggerisce che il sistema di regolazione rCBF è costituito da non meno di due catene regolatorie con diverse costanti di tempo e un feedback. sulle risposte vascolari cerebrali alla microapplicazione di soluzioni di mCSF con varie concentrazioni di pH, potassio e catecolamine, suggeriscono che le catene regolatorie rapide possono essere condizionate da potassio e effetti vascolari neurogeni, mentre quelle lente potrebbero essere mediate dalla CO2 e dai relativi cambiamenti di pH.
Metabolismo batterico dei composti resorcinilici: purificazione e proprietà di orcinol idrossilasi e resorcinol idrossilasi da Pseudomonas putida ORC.Le attività idrossilasi osservate negli estratti di Pseudomonas putida Gli ORC dopo la crescita su orcinolo e resorcina come unica fonte di carbonio sono stati purificati fino all'omogeneità. Entrambi gli enzimi hanno dimostrato di essere flavoproteine e di contenere circa 1 mole di FAD per ciascuna catena polipeptidica, i valori S20,W per ciascun enzima sono 4.1 +/- 0.1 e sono indipendenti dalla presenza dei loro substrati aromatici. Le determinazioni del peso molecolare in condizioni native (circa 68000) e denaturanti (circa 70000) hanno indicato che sono monomeriche. Gli spettri di assorbimento visibili sono identici ma gli spettri dicroici circolari delle due proteine possono essere Sebbene ogni proteina catalizza l'idrossilazione NAD(P)H e O2-dipendente sia dell'orcinolo che della resorcina, l'efficienza della trasformazione s dei substrati da parte dei due enzimi è radicalmente diverso; inoltre la resorcina idrossilasi è molto più versatile nei composti aromatici che può utilizzare come substrati ed effettori. Altre proprietà degli enzimi che stabiliscono chiaramente la propria identità includono le loro caratteristiche sierologiche e la composizione amminoacidica; quest'ultima proprietà è particolarmente evidente quando si confrontano le quantità di residui di valina e di alanina. Anche la sintesi di ciascun enzima è soggetta a diversi vincoli normativi, essendo controllata dal substrato utilizzato per la crescita.
Scambio idrogeno-isotopo di citocromo ossidato e ridotto c. Un confronto tra spettrometria di massa e metodi infrarossi.Scambio idrogeno-deuterio in soluzioni 2H20 del due stati redox del citocromo c del cuore di cavallo sono stati studiati a 20 gradi C, pH 7, mediante spettrometria di massa e spettroscopia a infrarossi. La spettrometria di massa indica che il ferricitocromo ha 20 idrogeni non scambiati dopo 24 ore, 28 idrogeni scambiati tra 10 min e 24 ore e 156 idrogeni che si scambiano entro 10 min, i valori comparativi per il ferrocitocromo sono 45, 19 e 140. Lo spostamento delle curve di scambio ottenute dall'infrarosso corrisponde a 8-9 idrogeni peptidici Questi metodi combinati mostrano che molti idrogeni non peptidici si scambiano rapidamente (87 e 79 per ferricitocromo c e ferrocitocromo c rispettivamente), mentre altri, probabilmente sepolti all'interno della molecola e coinvolti nei legami idrogeno, non vengono scambiati, anche dopo 24 h (rispettivamente 14 e 30 idrogeni, il che è relativo molto grande per una piccola proteina). I risultati all'infrarosso sono dati in termini di variazioni dell'energia libera standard per la reazione transconformazionale che espone gli idrogeni peptidici al solvente: nel ferricitocromo c e nel traghettocoitocromo c, rispettivamente il 30% e il 40% degli idrogeni peptidici sono protetti da transizioni conformazionali stabilizzate da oltre 5 kcal/mol (21 kJ/mol), il che implica un forte aumento della rigidità per la forma ridotta.
Incorporazione di (1-14C)palmitoil-CoA nella fosfatidilcolina da parte delle membrane plasmatiche delle ghiandole sottomascellari di ratto in vitro.1. membrane plasmatiche delle ghiandole sottomascellari di ratto, il [1-14C]palmitoil-CoA è stato incorporato principalmente nella fosfatidilcolina e idrolizzato nell'acido [1-14C]palmitico e nel CoASH 2. L'aggiunta di lisofosfatidilcolina ha migliorato l'incorporazione nella fosfatidilcolina e ha ridotto l'idrolisi del palmitoil- CoA marcatamente 3. In presenza di lisofosfatidilcolina, l'incorporazione del palmitoil-CoA nella fosfatidilcolina era massima a 0,1 mM di palmitoil-CoA, 0,5 mM di lisofosfatidilcolina e tra pH 7,0 e 9,0 4. L'incorporazione nella fosfatidilcolina è stata stimolata e da Na+, K+ -, inibito da Ca2+ e Mg2+ e non influenzato da sodio desossicolato e ATP 5. L'adrenalina ha inibito l'incorporazione di palmitoil-CoA nella fosfatidilcolina in presenza o assenza di ATP, l'inibizione è più in presenza di ATP che in sua assenza. Dibutirril adenosina 3\':5\'-monofosfato imitava l'effetto inibitorio dell'adrenalina.
Pirofosfatasi e glucuronosiltransferasi nel metabolismo microsomiale dell'acido glucuronico UDP nel fegato di ratto.1. Un metodo radiochimico per gli studi sul metabolismo microsomiale dell'acido glucuronico UDP ha 2. I microsomi di fegato di ratto hanno causato una rapida idrolisi dell'acido UDPglucuronico in acido D-glucuronico 1-fosfato e ulteriormente, sebbene molto più lento, in acido D-glucuronico libero. In tampone Tris-HCl (pH 7,4) sono stati prodotti in rapporto 72 : 1. Non sono stati trovati altri metaboliti in quantità misurabili L'acido UDPglucuronico che scinde la pirofosfatasi ha mostrato un pH ottimale a 8,9, ma la liberazione di acido D-glucuronico dall'acido UDPglucuronico ha avuto due massimi di pH (pH 3,5 e 8,5). essere un inibitore della pirofosfatasi meno potente di quanto suggerito in precedenza. Circa il 25% dell'attività idrolizzante dell'acido glucuronico dell'UDP rimaneva ancora in presenza di EDTA 10 mM. È stato riscontrato che il D-Glucaro-1,4-lattone ha una leggera azione inibitoria sul pi attività della rofosfatasi. Il citrato ha inibito potentemente l'idrolisi dell'acido UDPglucuronico e la liberazione dell'acido D-glucuronico libero. Anche il fosfato era inibitorio. 3. In presenza di un substrato esogeno di UDPglucuronosiltransferasi, 4-nitrofenolo, la formazione di acido D-glucuronico 1-fosfato e acido D-glucuronico libero era leggermente ridotta e acido D-glucuronico 1-fosfato, 4-nitrofenilglucuronide e D libero -acido glucuronico sono stati prodotti nel rapporto 78: 23: 1. Quando è stato aggiunto 10 mM EDTA per diminuire il consumo idrolitico del substrato donatore di glucuronile, il rapporto corrispondente era ancora sfavorevole come 19: 2,6: 1. L'attività misurabile dell'UDPglucuronosiltransferasi era inferiore in presenza di fosfato o citrato rispetto al tampone Tris-HCl, sebbene proteggano il substrato donatore di glucuronile dall'idrolisi. 4. I risultati indicano che anche in presenza di un substrato accettore di glucuronile aggiunto l'idrolisi dell'acido UDPglucuronico predomina la coniugazione nei microsomi di fegato di ratto. La velocità di idrolisi dell'acido glucuronico UDP è piuttosto considerevole anche in presenza di EDTA, e si raccomanda di controllare l'attività pirofosfatasica dell'acido glucuronico UDP quando si studiano le reazioni di UDPglucuronosiltransferasi e di glucuronidazione. L'acido D-glucuronico libero sembra essere prodotto dall'acido UDPglucuronico per un ulteriore utilizzo tramite l'acido D-glucuronico 1-fosfato, la fase limitante essendo l'idrolisi di questo intermedio. UDP-glucuronosiltransferasi, glucuronidi di agliconi endogeni o esogeni e beta-glucuronidasi hanno solo un ruolo minore a questo riguardo nei microsomi del fegato di ratto.
GAMMA-glutamil transpeptidasi della corteccia renale di pecora. Isolamento, proprietà catalitiche e dissociazione in due catene polipeptidiche.La gamma-glutamil transpeptidasi è stata isolata dalle pecore corteccia renale come una proteina apparentemente omogenea e altamente attiva. A pH ottimale e in assenza di accettori, l'enzima catalizza il rilascio di circa 510 mumolo di p-nitroanilina per mg di proteina al minuto dal substrato modello L-gamma-glutamil-p -nitroanilide. L'elettroforesi su gel di poliacrilammide in un sistema tampone di sodio dodecilsolfato ha mostrato la presenza di una catena polipeptidica grande (Mr circa 65000) e una piccola (Mr circa 27000). La dissociazione in due catene polipeptidiche è stata ottenuta anche in urea 8 M. Amidinazione con dimetilsuberimidato ha prodotto una proteina reticolata di peso molecolare circa 90000. Nel corso di questo lavoro è stata sviluppata una procedura conveniente per la determinazione dell'attività della gamma-glutamil transpeptidasi utilizzando L[glicina e-2-3H]glutatione come substrato. In questa procedura si segue il rilascio di cisteinil-[2-3H]glicina dal glutatione, dopo separazione del di-peptide radioattivo dal glutatione non reagito su una piccola colonna di acetato Dowex-1. Le reazioni con gamma-glutamil-p-nitroanilide e glutatione sono entrambe fortemente attivate da diversi ioni metallici (Ca2+, Mg2+, Na+ e K+) e da numerosi amminoacidi e accettori peptidici. I prodotti della reazione con il glutatione sono stati identificati come cisteinilglicina, gamma-glutamilglutatione e glutammato. La formazione di questi prodotti è coerente con la funzione della gamma-glutamil transpeptidasi sia nella reazione di trasferimento gamma-glutamile che nell'idrolisi del legame gamma-glutamile. È stato dimostrato che l'effetto di attivazione degli ioni metallici nella reazione con il glutatione dipende dall'accelerazione della reazione di trasferimento; la velocità di idrolisi del legame gamma-glutamil rimane invariata.
Glutatione reduttasi da eritrociti umani. Peso molecolare, composizione delle subunità e proprietà di aggregazione.La glutatione reduttasi da eritrociti umani esiste prevalentemente come entità di 100.000 molecole peso in varie condizioni di pH e forza ionica. S20,W di 5,5 S e D20W di 50 mum2/s sono correlati con il peso molecolare determinato dall'equilibrio di sedimentazione. L'omogeneità di questa specie dipende principalmente dalla presenza di tioli e secondariamente elevate concentrazioni di sale La composizione amminoacidica dell'enzima mostra somiglianze sia con glutatione reduttasi da altre fonti che con lipoammide deidrogenasi Dal contenuto di flavina e dall'elettroforesi dodecilsolfato-poliacrilammide si deduce che l'enzima nativo è un dimero composto da subunità simili di peso molecolare 50.000. In assenza di tioli, la glutatione reduttasi mostra una tendenza a formare tetrameri e aggregati più grandi. se specie più grandi sono anche cataliticamente attive, in condizioni cellulari la presenza del suo prodotto, il glutatione ridotto, dovrebbe mantenere l'enzima come entità dimerica.
Nucleasi epatiche. Origine extraepatica e associazione della ribonucleasi epatica neutra con i lisosomi.Nella frazione di grandi granuli del fegato di ratto, la distribuzione della densità dell'inibitore- la ribonucleasi neutra sensibile è simile a quella delle idrolasi acide e la sua distribuzione della densità è similmente modificata dall'accumulo di Triton WR-1339 nei lisosomi. La ribonucleasi neutra particellare è latente, l'enzima è smascherato da concentrazioni di digitonina molto basse o shock iposmotico. Queste osservazioni dimostrano che la la maggior parte della ribonucleasi neutra epatica è associata al sistema lisosomiale. In considerazione del pH ottimale dell'enzima e di alcune particolarità della sua distribuzione negli esperimenti di frazionamento, è stata studiata la possibilità di un'origine extraepatica della ribonucleasi neutra. Dopo pancreasectomia parziale, si osserva una diminuzione significativa della ribonucleasi neutra sia plasmatica che epatica. L'effetto è specifico, poiché non si verifica per altri enzimi lisosomiali. Inoltre, la ribonucleasi pancreatica bovina marcata, quando iniettata per via endovenosa, viene assorbita dal fegato. L'enzima marcato sedimentabile ha una distribuzione della densità simile alla distribuzione di altre proteine estranee, perossidasi di rafano o invertasi di lievito. Questi risultati sono spiegati dall'assorbimento della ribonucleasi neutra plasmatica di origine pancreatica da parte del fegato.
L'interazione dei fosfati organici con l'emoglobina umana e di pollo.In questo studio sulle proprietà di legame dell'inositolo esafosfato e del 2,3-bisfosfoglicerato al pollo e deossiemoglobina umana e carbossiemoglobina sono stati confrontati. È apparso che in tutti i casi il legame all'emoglobina di pollo è molto più forte che all'emoglobina umana. Ciò è molto probabilmente dovuto al fatto che 4 dei 12 residui, responsabili del legame dei fosfati in l'emoglobina di pollo, sono arginine. Queste sono assenti nell'emoglobina umana, dove il sito di legame è costituito da soli 8 residui. Per l'emoglobina di pollo si può osservare un forte sito di legame sia nell'emoglobina non legata che in quella con legante. Da queste osservazioni concludiamo che lo stesso il sito di legame è coinvolto sia nella struttura ossi che in quella deossi, mostrando una diversa affinità con i fosfati nei due stati conformazionali. Per l'emoglobina umana siamo giunti alla stessa conclusione.
Purificazione e proprietà di un'aminoendopeptidasi periplasmatica di Escherichia coli.Un'amminoendopeptidasi periplasmatica di Escherichia coli è stata purificata all'emogeneità. È un monomero di molecole peso 45000 e contenente un - gruppo SH necessario per l'attività catalitica. Lo studio della sua specificità di substrato ha indicato che l'enzima ha sia attività aminopeptidasi che endopeptidasi. Il pH ottimale per l'idrolisi della L-alanina p-nitroanilide è compreso tra 7 e 7,5 e quella per la proteolisi della caseina marcata con 125I tra 7,3 e 7,6. L'energia di attivazione per l'idrolisi della L-anina p-nitroanilide è stata calcolata in 5,3 kcal X mol-1 (22,2 kJ X mol-1).
Acetilglucagone: preparazione e caratterizzazione.Derivati acetilati del glucagone sono stati preparati facendo reagire questo ormone in varie condizioni con anidride acetica. Sono stati caratterizzati chimicamente mediante l'uso di un reagente marcato con 14C, mediante tecniche di mappatura peptidica a seguito di idrolisi mediante pronasi e chimotripsina e mediante spettroscopia L'acetilazione in acetato di sodio (pH 5,5) determina una sostituzione completa del gruppo alfa-amminico dell'istidile N-terminale residuo, ma in una sostituzione parziale (circa 0,3 gruppi acetilici per residuo) del gruppo epsilon-ammino del residuo lisilico 12. I componenti acetilati monosostituiti (sul gruppo alfa-amminico) e disostituiti (su entrambi i gruppi amminici) sono stati separati mediante cromatografia su DEAE-cellulosa e CM-cellulosa L'acetilazione in bicarbonato di sodio (pH 8,0) determina una sostituzione completa sia dei gruppi amminici che dei gruppi ossidrilici dei residui tirosile 10 e 13. Completa la deacetilazione dei residui di O-acetiltirosile avviene per trattamento con idrossilammina. Mono, di e tetraacetilglucagone sono omogenei quando analizzati mediante elettroforesi su gel su disco; i derivati di e tetrasostituiti mostrano una maggiore mobilità verso l'anodo. I derivati dell'acetilglucagone marcati con 125I mostrano coefficienti di distribuzione più elevati nel sistema acquoso a due fasi destrano/poli(etilene glicole) rispetto a derivati simili del glucagone. L'acetilazione diminuisce parallelamente la capacità del glucagone di stimolare l'attività dell'adenilato ciclasi e di legarsi ai suoi recettori nelle membrane delle cellule epatiche del ratto. Le potenze biologiche dei derivati mono, di e tetrasostituiti sono, rispettivamente, di circa 10, 1 e 0,1% di quelle del glucagone nativo. Le proprietà di legame del materiale dissociato dal complesso acetilglucagone-recettore suggeriscono che la riduzione dell'attività biologica deriva da una diminuzione dell'affinità intrinseca del glucagone modificato per i recettori, nonché dalla presenza di piccole quantità di glucagone residuo non reagito. Studi con derivati del glucagone marcati con 125I indicano che l'acetilazione riduce il tasso di associazione e aumenta il tasso di dissociazione del complesso ormone-recettore.
Inibizione dipendente dal tempo della diammina ossidasi da parte dei reagenti del gruppo carbonilico e dell'urea.1. Il comportamento di diversi reagenti del gruppo carbonilico e dell'urea come tempo- vengono descritti gli inibitori dipendenti sia del rene di maiale che della diammina ossidasi placentare umana 2. I grafici di log (vt/vo) rispetto al tempo non erano lineari con questi reagenti come prevedono le solite teorie 3. Questo è stato in particolare il caso con aminoguanidina e fenilidrazina e viene descritto uno studio approfondito degli effetti di questi composti sulla diammina ossidasi placentare umana 4. Applicando una nuova teoria per l'inibizione dipendente dal tempo, l'inibizione della diammina ossidasi da parte dell'aminoguanidina e della fenilidrazina è adeguatamente spiegata. il recupero dell'attività dipendente dall'aggiunta di piruvato di sodio ha suggerito che i composti utilizzati agiscano esclusivamente come reagenti del gruppo carbonilico, inibendo la formazione della base di Schiff nel gruppo carbonilico del sito attivo.
RNA poliadenilato da cellule meristematiche della radice di Vicia faba. Localizzazione e stima delle dimensioni del segmento poli (A).Dopo l'incubazione degli apici radicali da due giorni -vecchie piantine di fagiolo con [3H] adenina l'RNA è stato estratto da cellule intere o polisomi, e le sequenze di poli (A) sono state isolate mediante digestione con nucleasi seguita da cromatografia con poli(U)-Sefarosio. Le alterazioni delle molecole di RNA dovute alla vari trattamenti sono stati monitorati da gradienti di densità di saccarosio. Si è riscontrato che l'estrazione sequenziale prima a pH 7,6 poi a pH 9,0 non ha comportato una separazione tra RNA povero di sequenze poli(A) e RNA ricco poli(A). Inoltre analisi cromatografica di idrolizzati da RNA resistente alla nucleasi estratto a pH 7,6 o pH 9,0 ha rivelato che l'AMP costituiva quasi il 95% delle basi e che le sequenze di poli(A), circa 200 basi, erano localizzate al 3\' terminale dell'RNA poliadenilato Nessuna differenza di dimensioni è stata trovata per il poli(A) s segmento tra l'RNA estratto a pH 7,6 e quello estratto a pH 9,0.
Indagini sulla struttura della 3-metilcrotonil-CoA carbossilasi da Achromobacter.È stato dimostrato mediante elettroforesi su gel in soluzione di sodio dodecilsolfato che 3-metilcrotonil- La carbossilasi CoA di Achromobacter IVS è composta da due diverse subunità con pesi molecolari rispettivamente di circa 78000 e 96000. La biotina è legata alla subunità più pesante. In precedenza è stato scoperto che la 3-metilcrotonil-CoA carbossilasi contiene quattro molecole di biotina per complesso. complesso composto da quattro di ciascuna subunità avrebbe quindi un peso molecolare di circa 700000. Ciò è compatibile con il peso molecolare di 760000 determinato in precedenza mediante ultracentrifugazione analitica. Entrambe le subunità sono state isolate preparativamente. Poiché le subunità, a differenza del complesso, sono molto sensibili a ossigeno, particolari precauzioni dovevano essere prese durante l'isolamento. La subunità contenente biotina è stata isolata mediante cromatografia su DEAE-cellulosa in urea 5 M. Non ha più catalizzato l'overa ll reazione, ma potrebbe ancora carbossilare biotina libera. La subunità priva di biotina è stata separata dopo dissociazione dell'enzima mediante dialisi di tre giorni\' a pH 9,8 sotto azoto. Sulla cromatografia su una colonna di avidina legata a Sepharose, la subunità di biotina è stata fissata e la subunità priva di biotina è stata eluita senza ritardo. Quest'ultima subunità non ha mostrato attività enzimatica. Dopo l'aggiunta della subunità contenente biotina, l'attività complessiva è stata rigenerata. La velocità di riassociazione è molto aumentata dal 3-metilcrotonil-CoA. È stato dimostrato da esperimenti di riassociazione in condizioni diverse che probabilmente si forma un complesso iniziale, AxBy, che possiede un sito di legame per il 3-metilcrotonil-CoA. Al legame di questo substrato la conformazione può essere modificata in una forma favorevole alla ricostituzione. Infine, vengono confrontate le strutture degli enzimi della biotina provenienti da diverse fonti. Nel corso dell'evoluzione c'è una tendenza all'integrazione delle diverse proteine costituenti in una sola catena polipeptidica.
Gli inibitori della tripsina e della chimotripsina nei ceci (Cicer arietinum L.). Purificazione e proprietà degli inibitori.Da un estratto grezzo di ceci (Cicer arietinum L. ) inibitori della tripsina e della chimotripsina sono stati isolati mediante cromatografia di affinità su una colonna di tripsina-Sepharose 6B. Il contenuto di inibitori è risultato pari a 1,5 g/kg. Sono stati ulteriormente separati in sei isoinibitori mediante cromatografia a scambio ionico su DEAE-Sephadex A-25. Due degli isoinibitori rappresentavano circa il 50% degli inibitori isolati e sono stati ulteriormente purificati fino a raggiungere uno stato omogeneo. Gli isoinibitori avevano un peso molecolare di circa 10000 come determinato mediante cromatografia su setaccio molecolare su Sephadex G- 75. Erano stabili verso valori estremi di pH e temperature fino a 75 gradi C o verso la digestione da parte della pepsina. Erano anche stabili in urea 6 M ma non in guanidina-HCl 6 M. Gli inibitori intatti sono stati distrutti quando i piselli sono stati cotti a 100 gradi C o quando th Sono stati tostati a 130 gradi C. I quattro principali inibitori avevano composizioni di amminoacidi simili e non contenevano quantità rilevabili di gruppi sulfidrilici liberi, triptofano o carboidrati. La cisteina è il residuo amminoacidico dominante in tutti loro e rappresentava circa il 20% del loro contenuto di amminoacidi. Il punto isoelettrico degli isoinibitori si trova nell'intervallo di pH 4,9-8,6 e due dei principali inibitori avevano punti isoelettrici di pH 4,75 e pH 4,96. Hanno inibito la chimotripsina nella stessa misura ma differivano nelle loro attività inibitorie nei confronti della tripsina, indicando che sono miscele di forme native e modificate dalla tripsina e che probabilmente hanno siti separati per i due enzimi. Non hanno inibito altri enzimi proteolitici appartenenti a due gruppi (cioè enzimi serina o cisteina) o provenienti da fonti diverse (cioè animali, piante o batteri).
Interazione del citocromo c con le membrane. Spettri di assorbimento ed emissione e caratteristiche di legame del citocromo c. privo di ferroUn derivato del citocromo c da cui viene rimosso il ferro è stata preparata e caratterizzata. Diverse linee di evidenza indicano che il citocromo c nativo e la porfirina hanno conformazioni simili: hanno caratteristiche di eluizione simili alla cromatografia su gel di Sephadex; in entrambe le proteine la fluorescenza del triptofano è spenta e i valori di pK di protonazione della porfirina sono identici La porfirina citocromo c non sostituisce il citocromo c nativo né nella reazione dell'ossidasi né nel ripristino del trasporto di elettroni nei mitocondri impoveriti di citocromo c. Tuttavia inibisce in modo competitivo il citocromo c nativo in queste reazioni, il Ki per l'inibizione è maggiore del Km per la reazione Gli spettri di assorbimento ed emissione e lo spettro di eccitazione polarizzata del citocromo c della porfirina sono caratteristici della base libera porfirina. L'assenza di spegnimento della fluorescenza della porfirina citocromo c quando la proteina è legata alla citocromo ossidasi suggerisce che la distanza eme-eme tra queste proteine è maggiore di 0,5-0,9 nm a seconda dell'orientamento. Il legame del citocromo c della porfirina ai fosfolipidi o ai mitocondri aumenta la polarizzazione della fluorescenza di una banda di assorbimento polarizzata positivamente, il che indica che la forma legata della proteina non ruota liberamente entro la scala temporale del rilassamento dallo stato eccitato.
Fosfofruttochinasi marcata con spin. Un approccio semplice e diretto allo studio degli equilibri allosterici in condizioni quasi fisiologiche.Fosfofruttochinasi del muscolo di coniglio, marcata con spin nel suo gruppo tiolico più reattivo, ha uno spettro di risonanza di spin elettronico molto sensibile al legame di substrati ed effettori allosterici. Le variazioni spettrali sono state interpretate in termini di transizione allosterica concertata tra due stati conformazionali con legame non esclusivo di effettori Su questa base MgATP, fruttosio 6-fosfato più ATP e ioni NH+4 si comportano come potenti effettori positivi, fosfato inorganico, solfato, AMP, fruttosio 6-fosfato e fruttosio 1,6-bisfosfato sono attivatori meno potenti e ATP libero e Gli ioni H+ sono effettori negativi, in accordo con il comportamento cinetico, ma il citrato si comporta in modo anomalo. Inoltre, l'equilibrio allosterico può essere spostato verso lo stato inibito modificando selettivamente due ulteriori er gruppi tiolici. Una forte cooperatività positiva si verifica in condizioni adatte con ATP, metallo-ATP e fruttosio 6-fosfato. Cambiamenti di conformazione bifasici, attribuiti al legame nei siti catalitici e inibitori, sono stati osservati nelle titolazioni con ATP. La differenziazione dei due siti di legame dell'ATP avviene in presenza di fruttosio 6-fosfato a causa di un distinto effetto concertato sulla conformazione tra i due substrati nel sito attivo. Un effetto simile si verifica tra ATP e citrato. Altri effetti eterotropi sono più coerenti con i modelli semplici; i fosfati favoriscono il legame, e riducono la cooperatività, del fruttosio 6-fosfato e del metallo-ATP, mentre l'eccesso di ATP e ioni H+ antagonizzano il legame e aumentano la cooperatività del fruttosio 6-fosfato. Le osservazioni sono relative a studi cinetici e di legame esistenti ove possibile. Le caratteristiche anomale del comportamento suggeriscono che il modello dovrebbe essere considerato solo come una prima approssimazione.
Interazione idrofobica determinata dalla partizione in sistemi acquosi a due fasi. Partizione di proteine in sistemi contenenti esteri di acidi grassi del poli(etilenglicole).In questo rapporto descriviamo un nuovo metodo utile per misurare le interazioni idrofobiche tra catene di idrocarburi alifatici e proteine in ambiente acquoso. Il metodo si basa sulla partizione di proteine in un sistema acquoso a due fasi contenente destrano e poli(etilenglicole) e diversi esteri di acidi grassi del poli(etilenglicole). La partizione viene misurata in condizioni in cui vengono eliminati i contributi delle interazioni elettrostatiche. La differenza nella partizione delle proteine in sistemi di fase con e senza gruppi idrocarburici legati al poli(etilenglicole), deltalog K, dove K è il coefficiente di partizione, viene preso come misura dell'interazione idrofobica. Deltalog K varia con la dimensione della catena idrocarburica e il tipo di proteina. La lunghezza della catena alifatica dovrebbe essere maggiore di 8 atomi di carbonio per ottenere un effetto misurabile in termini di deltalog K. È stato dimostrato che l'albumina sierica bovina, la beta-lattoglobulina, l'emoglobina e la mioglobina hanno diverse affinità per l'estere dell'acido palmitico del polietilenglicole. Non è stato possibile osservare alcun effetto idrofobico per l'ovoalbumina, il citocromo c o l'alfa-chimotripsinogeno A.
Forme multiple di glutatione S-transferasi umana e loro affinità per la bilirubina.La fase enzimatica iniziale nella formazione dell'acido mercapturico è catalizzata dalla glutatione S-transferasi Diverse specie di questo enzima, designate come transferasi alfa, beta, gamma, delta ed epsilon sulla base di punti isoelettrici crescenti, sono state isolate dal fegato umano. Si presenta evidenza che ciascuna delle specie purificate è omogenea rispetto al dodecilsolfato di sodio- elettroforesi su gel. Le transferasi alfa, beta ed epsilon appaiono ciascuna come una singola banda sull'elettrofocalizzazione su gel; le transferasi gamma e delta sono presenti rispettivamente come due e tre bande, con ciascuna banda cataliticamente attiva. L'analisi degli amminoacidi ha indicato che le cinque transferasi sono molto strettamente correlati o identici in questo senso. Tutte le specie di enzimi hanno un peso molecolare di circa 48500 e sono costituiti da due subunità apparentemente identiche. Lo spettro dei substrati è lo stesso per ea ch sebbene gli enzimi differiscano leggermente nell'attività specifica. Come nel caso degli enzimi epatici di ratto, ciascuna delle transferasi umane si lega alla bilirubina sebbene questo composto non sia un substrato.
Composizione chimica dell'assoplasma in Myxicola e proprietà di solubilità delle sue proteine strutturali.Analizza la composizione chimica dell'assoplasma estratto dall'assone gigante di Myxicola infundibulum , e sono stati identificati alcuni dei fattori che disperdono la sua struttura gel. 2. L'assoplasma contiene circa il 3-6% di proteine e lo 0-12% di lipidi. È isosmotico con l'acqua di mare e ha un pH vicino a 7-0. 3 Gli ioni inorganici nell'assoplasma estratto includono: Na+, 13 m-mole/kg peso umido; K+, 280; Cl-, 24; Ca2+, 0-3; Mg2+, 3. 4. Gli ioni organici liberi nell'assoplasma includono: gly, 180 m -mole/kg wet st. ; acido cisteico, 120; asp, 75; glu, 10; ala, 7; tau, 5; thr, 2; gln e ser, trace; homarine, 63; isethionate, 0. 5. Il la struttura del gel è dispersa da soluzioni contenenti 1--10 mM-Ca2+, poiché questo ione attiva una proteasi endogena. Il gel può anche essere disperso senza proteilisi da soluzioni contenenti 0-5 M-KCl, o 0-5 M guanidina cloridrato, o 3-5 M urea, tutto wh ich abbattere i neurofilamenti. 6. Si sostiene che molti aspetti della composizione e delle proprietà di dispersione di Myxicola axoplasm siano simili a quelli di altri assoni.
Il metabolismo del cicloesanolo da parte di Acinetobacter NCIB 9871.Acinetobacter NCIB 9871 è stato isolato mediante coltura elettiva su cicloesanolo e cresce con questo composto come unica fonte di carbonio Mostra uno spettro di crescita ristretto, non essendo in grado di crescere su un'ampia gamma di alcoli e chetoni aliciclici alternativi. Le cellule coltivate con cicloesanolo ossidano il substrato di crescita a una velocità di 230 mul di O2/h per mg di peso secco con un consumo di 5,65 mumol di O2/mumol substrato Il cicloesanone viene ossidato ad una velocità simile con il consumo di 4,85 mumol di O2/mumol 1-Oxa-2-ossocicloeptano e 6-idrossiesanoato sono entrambi ossidati alla stessa velocità di 44 mul di O2/ h per mg di peso secco e l'adipato non viene ossidato Studi con estratti cellulari rivelano la presenza di deidrogenasi inducibili per cicloesanolo, 6-idrossiesanoato e 6-ossoesanoato e una monoossigenasi, che in combinazione con una lattonasi converte il cicloesanone in 6-idrossiesanoato. è quindi presumibilmente del tipo lattonico e della via di conversione del cicloesanolo ad adipato; cicloesanolo porta a cicloesanone porta a 1-ossa-2-ossocicloeptano porta a 6-idrossiesanoato porta a 6-ossoesanoato porta ad adipato; per i quali gli intermedi chiave sono stati identificati cromatograficamente, è identico al percorso per l'ossidazione del cicloesanolo da parte di Nocardia globerula CL1.
Fattori che influenzano la struttura molecolare e la capacità di agglutinazione della concanavalina A e di altre lectine.Le analisi di ultracentrifugazione sono state eseguite su lectine in condizioni variabili di pH, ionico resistenza e temperatura È stato dimostrato che la fitoemoagglutinina da Phaseolus vulgaris, l'agglutinina del germe di grano e l'agglutinina della soia sono stabili quando questi parametri vengono variati, mentre la molecola di concanavalina A mostra una sorprendente transizione reversibile dimero-tetramero con variazione di pH (da 6,0-7,2) e temperatura (da 4 gradi fino a 37 gradi C). È stato inoltre dimostrato che, in esperimenti di agglutinazione effettuati a temperature diverse, le cellule alla fine si aggregano con le prime tre lectine purché il tempo di incubazione sia sufficiente, mentre le L'agglutinazione indotta da concanavalina-A è stata precedentemente trovata essere sensibile alla temperatura. Questi risultati suggeriscono fortemente che l'effetto della temperatura sull'ag la lutinazione da parte delle lectine può essere essenzialmente dovuta a una transizione strutturale della lectina stessa e non solo alla modifica delle proprietà della superficie cellulare.
Purificazione e proprietà della patata 1,4-alfa-D-glucano:1,4-alfa-D-glucano 6-alfa-(1,4-alfa-glucano )-transferasi.Evidenza contro una doppia funzione catalitica nell'enzima di ramificazione dell'amilosio.Q-Enzyme, l'enzima che sintetizza i legami ramificati 1,6-alfa-glucosidici dell'amilopectina, è stato purificato dalla patata al vicino all'omogeneità. Il peso molecolare dell'enzima è 85000. L'enzima attivo è un monomero, con un'attività molare a pH 7,0 e 24 gradi C di 15. L'energia di attivazione è 25 kJ/mol al di sotto di 15 gradi C, cambiando bruscamente a 63 kJ/mol al di sopra di tale temperatura. L'attività enzimatica non è influenzata da Mg2+ o ATP. Ci sono circa 11 gruppi sulfidrilici facilmente titolabili per molecola. L'evidenza che l'enzima è una singola entità proteica, senza attività idrolitica verso l'amilosio, contrasta con una precedente riportano che il Q-enzima è costituito da due componenti, un'idrolasi con peso molecolare 70000 e una transferasi con peso molecolare 20000. L'enzima Q agisce sulle amilosi native e sintetiche per dare prodotti simili all'amilopectina in termini di lunghezza media della catena unitaria, grado di beta-amilolisi e colorazione con iodio. I profili delle catene unitarie di questi prodotti sintetici sono tuttavia diversi da quelli dell'amilopectina nativa. Ulteriori legami di ramificazione vengono introdotti dall'enzima Q nell'amilopectina della patata, ma il prodotto non ha alcuna somiglianza con il fitoglicogeno.
D-glucosio-6-fosfato deidrogenasi (enzima Entner-Doudoroff) da Pseudomonas fluorescens. Purificazione, proprietà e regolazione.1. L'esistenza di sono state dimostrate due diverse D-glucosio-6-fosfato deidrogenasi in Pseudomonas fluorescens In base alla loro diversa specificità e alla loro diversa regolazione metabolica, un enzima viene assegnato alla via di Entner-Doudoroff e l'altro alla via dell'esoso monofosfato. è descritto per l'isolamento di quella D-glucosio-6-fosfato deidrogenasi che fa parte della via Entner-Doudoroff (enzima Entner-Doudoroff). È stata ottenuta una purificazione di 950 volte con una resa complessiva del 44%. La preparazione finale, avente un'attività specifica di circa 300 mumol NADH formate per min per mg di proteina, si è dimostrato omogeneo 3. Il peso molecolare dell'enzima Entner-Doudoroff è stato determinato in 220000 mediante cromatografia a permeazione di gel e quello dell'altro enzima (Zwisco henferment) è stato dimostrato essere 265000. 4. È stato dimostrato che il pI dell'enzima Entner-Doudoroff è 5,24 e quello dello Zwischenferment 4,27. L'enzima Entner-Doudoroff è stabile nell'intervallo da pH 6 a 10,5 e mostra la sua attività massima a pH 8,9. 5. L'enzima Entner-Doudoroff ha mostrato specificità per NAD+ e per NADP+ e ha mostrato effetti omotropici per D-glucosio 6-fosfato. È inibito dall'ATP che agisce come effettore allosterico negativo. Anche altri nucleosidi trifosfati e l'ADP sono inibitori. 6. L'enzima catalizza il trasferimento dell'idrogeno assiale al carbonio-1 del beta-D-glucopiranosio 6-fosfato alla faccia si del carbonio-4 dell'anello nicotinammide e deve essere classificato come deidrogenasi stereospecifica lato B.
Sul meccanismo della chetogenesi e suo controllo. Purificazione, meccanismo cinetico e regolazione di diverse forme di acetoacetil-CoA tiolasi mitocondriali da fegato di bue.1 Dal fegato di bue sono state cristallizzate due forme mitocondriali di acetoacetil-CoA tiolasi designate come enzima A e enzima B. Potrebbero essere dimostrate omogenee mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide 2. In direzione di scissione dell'acetoacetil-CoA l'enzima A mostra un doppio substrato competitivo inibizione quando l'acetoacetil-CoA viene variato a diverse concentrazioni fisse di CoA Con l'enzima B si ottiene un modello cinetico parallelo quando l'acetoacetil-CoA viene variato a diverse concentrazioni fisse di CoA Nella direzione della sintesi dell'acetoacetil-CoA entrambi gli enzimi mostrano grafici reciproci lineari delle velocità iniziali contro le concentrazioni di acetil-CoA in assenza di CoA. Queste cinetiche di velocità iniziali nella direzione avanti e indietro sono in accordo con un meccanismo di reazione ping-pong per entrambi gli enzimi che coinvolgono un acetil-S-enzima come intermedio. 3. A concentrazioni saturanti del substrato, i rapporti di sintesi di acetoacetil-CoA/scissione di aceto-acetil-CoA sono 0,31 per l'enzima A e 0,08 per l'enzima B. La velocità massima in direzione della sintesi di acetoacetil-CoA degli enzimi A e B è 0,43 mumol X min-1 X unità tiolasi-1 e 0,10 mumol X min-1 X unità tiolasi-1, rispettivamente. 4. Entrambi gli enzimi mostrano quasi la stessa affinità per l'acetil-CoA. I valori di Km sono 91 muM (enzima A) e 80 muM (enzima B). 5. Il coenzima A e l'acetoacetil-CoA agiscono entrambi come inibitori nella direzione della sintesi dell'acetoacetil-CoA: il coenzima A è un inibitore competitivo non lineare di entrambi gli enzimi. L'acetoacetil-CoA esercita una cooperatività negativa sull'enzima A (nH = 0,63) ed è un inibitore competitivo per l'enzima B (Ki = 1,6 muM). 6. Le proprietà catalitiche e regolatorie delle acetoacetil-CoA tiolasi A e B sono discusse in termini del loro ruolo proposto nella regolazione della chetogenesi. Le fluttuazioni intracellulari dei rapporti acetoacetil-CoA/3-idrossibutirril-CoA, che determinano una sospensione dell'inibizione di entrambi gli enzimi ad alti rapporti NADH/NAD, sono postulate come meccanismo di controllo della chetogenesi in aggiunta ai meccanismi già noti.
Ulteriori studi sulla formazione di perossido lipidico in epatociti isolati.La formazione di perossido lipidico è stata avviata mediante l'aggiunta di Fe3+ ADP-complesso o idroperossido di cumene a una sospensione di epatociti isolati. La reazione è stata monitorata mediante misurazioni della malonaldeide. Dopo l'aggiunta di ferro, la produzione di malonaldeide nelle cellule è iniziata immediatamente ma è cessata entro 30-60 minuti e la risposta è stata correlata alla dose con concentrazioni di ferro comprese tra 19 e 187 muM. La formazione di malonaldeide è stata associata ad un aumento dell'assorbimento di ossigeno e alla produzione di diene coniugato. L'aggiunta in vitro di N,N,N\',N\'-tetrametil-p-fenilendiammina, menadione o p-benzochinone ha inibito la produzione di malonaldeide indotta dal ferro È stato anche possibile dimostrare un'apparente scomparsa della malonaldeide dalle cellule fresche mediante l'aggiunta di quantità adeguate di N,N,N\',N\'-tetrametil-p-fenilendiammina (100 muM). d La produzione di malonaldeide è risultata correlata con un aumento del legame del ferro a una frazione di ferritina intracellulare. Inoltre, la formazione di malonaldeide era anche associata a una conversione del glutatione ridotto nella forma ossidata che, a sua volta, rivelava una permeazione più rapida dalle cellule nel mezzo circostante del tiolo ossidato rispetto a quello del tiolo ridotto. Quindi, in concomitanza con le alterazioni redox, c'era anche una perdita complessiva di glutatione dalle cellule. La produzione di malonaldeide indotta da idroperossido di cumene potrebbe essere avviata mediante l'aggiunta di questo perossido in concentrazioni che vanno da 150 muM all'incubazione delle cellule epatiche. Con concentrazioni inferiori a 150 muM, era presente una fase di latenza che sembrava essere dipendente dal glutatione. Si conclude che il ferro entra nella cellula, quindi è probabilmente ridotto all'interno della cellula da NADPH tramite la NADPH-citocromo P-450 reduttasi, e nello stato ridotto avvia la perossidazione lipidica. La reazione è inibita da meccanismi intracellulari, essendo di primaria importanza il sistema redox del glutatione, e possibilmente terminata dalla formazione del complesso ferro-apoferritina.
La rinaturazione del polialanil-chimotripsinogeno e del chimotripsinogeno ridotti.Il chimotripsinogeno è stato rinaturato con successo in soluzione, dopo la riduzione dei suoi 5 legami disolfuro in 6 M guanidina -HCl. Ciò è stato reso possibile dallo studio della rinaturazione di un derivato modello, il polialanil-chimotripsinogeno. Il derivato ridotto si è dimostrato ripiegarsi e riossidarsi spontaneamente, con una resa del 30-40%, in molecole monomeriche e completamente suscettibili all'attivazione da parte della tripsina. Anche il chimotripsinogeno può essere rinaturato ma solo in presenza di reagenti che consentano l'interscambio di disolfuro e di moderate concentrazioni di guanidina-HCl o urea. Questi risultati illustrano come l'intrappolamento cinetico di molecole erroneamente piegate da errati legami SS e aggregazione possa essere superati, permettendo così il corretto ripiegamento della proteina.
Esochinasi di lievito A. Succinilazione e proprietà della subunità attiva.Esochinasi di lievito A (ATP:D-esoso 6-fosfotransferasi, EC2.7.1. 1) si dissocia nelle sue subunità per reazione con anidride succinica. Le subunità chimicamente modificate potrebbero essere isolate in una forma cataliticamente attiva. I valori di Km trovati per l'ATP e per il glucosio erano dell'ordine di quelli trovati per l'enzima nativo. Di 37 gruppi amminici presenti per subunità enzimatica, 2-3 di questi gruppi potrebbero essere localizzati in prossimità della regione di interazione subunità. La perdita del 50% dell'attività iniziale, che segue la succinilazione di questi gruppi amminici più reattivi, non sembra essere dovuto alla modifica di un residuo sul sito attivo dell'enzima o ad un cambiamento della struttura terziaria della proteina. Questa perdita del 50% dell'attività enzimatica può essere correlata alla dissociazione del dimero in monomeri. Sia l'enzima nativo che il subunità succinilate hanno la stessa den. H-dipendente profili di velocità di saturazione in risposta a 2 M di urea. Inoltre, il pK apparente del gruppo coinvolto nella transizione da una conformazione più stabile della proteina nell'intervallo acido ad una meno stabile a pH alcalino sembra essere simile al pK del gruppo implicato nella transizione tra l'inattivo protonato forma dell'enzima e una forma deprotonata attiva. La subunità succinilata presenta \'cooperatività negativa\' rispetto all'ATP a pH leggermente acido; tuttavia, il transitorio lento di tipo burst nella curva di avanzamento della reazione e l'effetto di attivazione indotto dai polianioni fisiologici, effetti osservati per l'enzima nativo, non sono stati rilevati nelle condizioni sperimentali standard con la subunità succinilata.
Arginina decarbossilasi da piantine di Lathyrus sativus. Purificazione e proprietà.Arginina decarbossilasi che fa la sua comparsa nelle piantine di Lathyrus sativus dopo 24 h di germinazione del seme raggiunge la sua livello massimo intorno a 5-7 giorni, i cotiledoni contengono circa il 60% dell'attività totale nelle piantine al giorno 5. L'enzima citosol è stato purificato 977 volte da piantine intere mediante passaggi che prevedevano il trattamento con cloruro di manganese, solfato di ammonio e frazionamenti di acetone, positivi adsorbimento su gel di allumina C-gamma, cromatografia DEAE-Sephadex seguita da elettroforesi preparativa su gel su disco. L'enzima si è dimostrato omogeneo con criteri elettroforetici e immunologici, aveva un peso molecolare di 220.000 e sembra essere un esamero con subunità identiche. Il pH e la temperatura per l'attività enzimatica erano rispettivamente di 8,5 e 45 gradi C. L'enzima segue la tipica cinetica di Michaelis-Menten con un valore Km di 1,73 mM per l'arginina e. Sebbene Mn2+ a concentrazioni inferiori stimolasse l'attività enzimatica, non vi era alcuna dipendenza dell'enzima da alcun metallo per l'attività. L'arginina decarbossilasi di L. sativus è un enzima sulfidrilico. I dati sul requisito del cofattore, l'inibizione da parte dei reagenti carbonilici, gli agenti riducenti e gli inibitori del piridossalfosfato e una parziale inversione da parte del piridossal fosfato dell'inibizione da parte del piridossal-HCl suggeriscono che il piridossal 5\'-fosfato sia coinvolto come cofattore per il enzima. L'attività enzimatica è stata inibita in modo competitivo da varie ammine compreso il prodotto agmatina. La più alta inibizione è stata ottenuta con spermina e arcaina. L'analogo del substrato, L-canavanina, l'omologo L-omoarginina e altri amminoacidi basici come L-lisina e L-ornitina hanno inibito l'attività enzimatica in modo competitivo, l'omoarginina è la più efficace in questo senso.
Il complesso piruvato-deidrogenasi da Azotobacter vinelandii. 2. Regolazione dell'attività.La presenza di attivatori (AMP e solfato) o inibitori (acetil -CoA) non ha alcuna influenza sul coefficiente di Hill della curva a forma di S [piruvato]--velocità della reazione complessiva piruvato-NAD+ (h uguale a 2,5) o quella del piruvato-K3Fe(CN)6 ATTIVITA' DEL PRIMO ENZIMA (H EQUALs 1.3). GLI STUDI DEL pH INDICANO CHE IL coefficiente di Hill dipende dalla ionizzazione delle subunità all'interno del complesso contenente piruvato e non da quelle nel complesso libero. Si conclude che la conversione del piruvato piuttosto che il legame del piruvato è responsabile del pattern allosterico L'attività è dovuta all'assenza di una proteina chinasi, regolata principalmente ai livelli di acetil-CoA/CoA e NADH/NAD+ e dal valore della carica energetica.
Purificazione e proprietà degli isoenzimi dell'alcool cinnamil deidrogenasi da colture in sospensione di cellule di soia.Due isoenzimi di un'alcool cinnamil deidrogenasi dipendente da NADP+ e da colture in sospensione cellulare di soia (Glycine max L. , var. Mandarin) è stata estratta una NAD+ - alcol deidrogenasi alifatica dipendente che durante la crescita forma la lignina, questi enzimi possono essere separati tra loro mediante cromatografia su DEAE-cellulosa e idrossiapatite. gli isoenzimi dell'alcol deidrogenasi sono stati parzialmente purificati mediante frazionamento (NH4)2SO4 e cromatografia su colonna su DEAE-cellulosa, Sephadex G-100 e idrossiapatite. Il peso molecolare degli enzimi è stato stimato dai volumi di eluizione da una colonna Sephadex G-100 e sono stati risulta essere circa 43.000 (isoenzima 1) e 69.000 (isoenzima 2). Le velocità massime di reazione sono state osservate nel caso di ossidazione dell'alcool coniferilico a pH 9,2 (isoenzima 1) e pH 8,8 (isoenzima 2); nel r La reazione inversa pH 6.5 era ottimale per l'isoenzima 2. Mentre l'isoenzima 1 è specifico per l'alcol coniferico, l'isoenzima 2 può anche ossidare l'alcol cinnamilico e un certo numero di alcoli cinnamilici sostituiti, i valori di Km per le cinnamaldeidi sostituite sono 3-11 volte inferiori rispetto agli alcoli corrispondenti. Nessuno dei due isoenzima ha reagito con alcol benzilico, alcol anisico o etanolo. L'inibizione del substrato per la reazione diretta e inversa è stata trovata con l'isoenzima 2 ma non con l'isoenzima 1. La costante di equilibrio è stata determinata essere circa 10 (9) a favore della riduzione della coniferaldeide. Viene discusso il possibile ruolo dell'alcool cinnamil deidrogenasi nella biosintesi della lignina.
Il meccanismo catalitico dell'anidrasi carbonica. Effetti dell'isotopo dell'idrogeno sui parametri cinetici dell'isoenzima C umano.1. La cinetica dello stato stazionario di l'interconversione di CO2 e HCO3 catalizzata dall'anidrasi carbonica umana C è stata studiata utilizzando come solventi 1H2O e 2H2O Le parti indipendenti dal pH dei parametri k(cat) e Km sono 3-4 volte maggiori in 1H2O rispetto a 2H2O per entrambe le direzioni di la reazione, mentre i rapporti k(cat)/Km mostrano effetti isotopici molto più piccoli. Con CO2 o HCO3 come substrato la maggiore dipendenza dal pH si osserva in k(cat), mentre Km appare indipendente dal pH. Il valore pKa che caratterizza il pH I profili di velocità sono circa 0,5 unità maggiori in 2H2O rispetto a 1H2O 2. L'idrolisi del p-nitrofenil acetato catalizzata dall'anhudrasi carbonica umana C è circa il 35% più veloce in 2H2O rispetto a 1H2O In entrambi i solventi i valori di pKa del pH- i profili di velocità sono simili a quelli osservati per l'interconversione CO2-HCO3. ha proposto entatively che il passaggio limitante della velocità a concentrazioni saturanti di CO2 o HCO3 sia un trasferimento di protoni intramolecolari tra due gruppi ionizzanti nel sito attivo. Non si può decidere se la trasformazione tra CO2 e HCO3 legata all'enzima implichi o meno un trasferimento di protoni.
Indagini sul meccanismo cinetico dell'octopina deidrogenasi. 1. Cinetica allo stato stazionario.È stato studiato il meccanismo cinetico d'azione dell'octopina deidrogenasi. Questo enzima catalizza la deidrogenazione reversibile di D-octopina in L-arginina e piruvato, in presenza di nicotinammide-adenina dinucleotide. Gli studi iniziali sulla velocità e sull'inibizione del prodotto sono stati condotti in entrambe le direzioni. La maggior parte dei risultati sono coerenti con un meccanismo sequenziale biter dove NAD+ si lega per primo all'enzima seguito da D-octopina e i prodotti vengono rilasciati nell'ordine L-arginina, piruvato e NADH Vari parametri cinetici sono stati determinati per ciascun reagente a 33 gradi C, a pH 9,6 per la riduzione del NAD, a pH 6,6 per l'ossidazione del NADH.
L'oscillazione conformazionale del coinvolgimento della delta-chimotripsina della metionina-192.Nella delta-chimotripsina la reattività della metionina-192 verso il p-nitrofenacil bromuro è fortemente ridotto quando il gruppo alfa-amminico dell'isoleucina-16 è stato acetilato. Poiché l'acetilazione dell'isoleucina-16 porta la delta-chimotripsina ad una conformazione simile a quella alcalina, ciò suggerisce che la metionina-192 dovrebbe presentare una reattività ridotta nella conformazione alcalina di della proteina. Si osserva infatti che la sua reattività chimica in funzione del pH dipende dallo stato di ionizzazione del gruppo alfa-amminico dell'isoleucina-16 (pKapp 9 a 15°C) così come la struttura dell'enzima. reazione chimica della metionina-192 con perossido di idrogeno, l'isoleucina-16 presenta una velocità di reazione più lenta con la fluorescamina rispetto a quando la metionina-192 è libera. Come risultato dell'ossidazione della metionina-192, il pK apparente della transizione alcalina viene spostato da 9 a circa 11 a 15 gradi C. Ciò si riflette nella scomparsa della fase di latenza precedentemente osservata per l'attività iniziale dell'enzima quando viene incubato a pH alcalino [Eur. J. Biochimica. (1973) 39.293-300]. L'assenza di reattività chimica della metionina-192 allo stato alcalino dell'enzima è confermata dalla comparsa di una fase di latenza nella reazione della proteina con iodoacetato dopo un'incubazione a pH alcalino. Tale fase di ritardo non appare quando questa incubazione viene effettuata a pH neutro. Poiché questa fase di ritardo è simile a quella che si manifesta nell'attività durante l'isomerizzazione dell'enzima dal suo stato alcalino al suo stato neutro, i dati attuali sono interpretati come implicanti un movimento concertato di isoleucina-16 e metionina-192 durante questo processo di isomerizzazione. Indicano anche che nella forma alcalina dell'enzima la metionina-192 è tornata all'interno della proteina. Poiché le proprietà spettroscopiche dello zimogeno e della forma ad alto pH dell'enzima sono simili, suggeriscono che la metionina-192 occupi nella conformazione alcalina dell'enzima una posizione simile a quella dello zimogeno.
La reazione dell'alcol deidrogenasi del fegato di cavallo con il gliossale.L'alcol deidrogenasi del fegato di cavallo è stata fatta reagire con il gliossale a diversi valori di pH compresi tra 6,0 e 9,0. A pH 9,0 l'enzima subisce una rapida attivazione nei primi minuti di reazione, seguita da un declino dell'attività, che raggiunge il 10% di quella dell'enzima nativo L'analisi chimica dell'enzima inattivato dopo la riduzione del sodio boroidruro mostra che 11 argi-ina e 11 residui di lisina per mole vengono modificati. A pH 7,7 l'attività enzimatica aumenta durante la prima ora della reazione con il gliossale e poi diminuisce lentamente. L'analisi chimica mostra che 4 residui di arginina e 3 residui di lisina per mole sono modificati nell'enzima al massimo di attivazione. A pH 7,0 l'enzima subisce un'attivazione di 4 volte. L'analisi chimica mostra che in questo enzima attivato 3 lisina e nessun residuo di arginina per mole sono stati modificati. L'analisi cinetica allo stato stazionario suggerisce che l'en attivato zima non è soggetto all'inibizione del substrato e che la sua costante di Michaelis per l'etanolo è tre volte maggiore di quella dell'enzima nativo. Viene discusso il possibile ruolo dei residui di arginina e lisina nella funzione catalitica dell'alcol deidrogenasi epatica.
Effetti differenziali di fenobarbital e pentobarbital sul tessuto nervoso isolato.Epilettiforme dopo scariche evocate da stimolazione elettrica ripetitiva di lastre corticali cronicamente isolate (gatto) sono state accorciate da basse dosi di fenobarbital ma non influenzate da dosi ipnotiche di pentobarbital Sia il pentobarbital che il fenobarbital hanno alzato la soglia e abbassato l'ampiezza dello spike nei nervi sciatici isolati L'azione di entrambi i farmaci è stata aumentata riducendo il Na nel mezzo e diminuendo il pH del Ringer Analogamente all'azione di altri anestetici generali, l'effetto assonale del pentobarbital è stato potenziato dalla sostituzione D2O di H2O nei Ringer\' (suggerendo che l'acqua tissutale è coinvolta nell'azione del pentobarbital), mentre la sostituzione D2O non ha modificato l'azione del fenobarbital o di anestetici locali. Questi risultati suggeriscono che i vari effetti in vivo di pentobarbital e fenobarbital possono essere dovuti a una differenza nella loro azione upo n membrane eccitabili (piuttosto che a una diversa distribuzione regionale nel cervello).
Il trasferimento acqua-aria di 35SO4= facendo scoppiare bolle.Il trasferimento di 35SO4= dall'acqua all'aria facendo scoppiare le bolle è stato studiata in funzione di tre livelli ciascuna delle tre variabili in una soluzione gorgogliante. Le variabili erano pH, concentrazione di tensioattivo e concentrazione di Na235SO4. Una combinazione delle suddette variabili è stata studiata anche a tre diverse temperature. Soluzioni di acqua sterile contenenti diverse combinazioni di i suddetti fattori e una quantità fissa di 22NaCl sono stati fatti gorgogliare in un recinto per 1 ora. Dopo aver gorgogliato, sono stati raccolti campioni dell'aerosol prodotto, le gocce più grandi che cadevano dall'aria e la soluzione in massa e analizzati per il loro 35S e 22Na contenuto mediante conteggio in scintillazione liquida. È stato determinato l'arricchimento di 35S/22Na per ciascun campione di goccioline rispetto al rapporto per la soluzione in massa ed è stato riscontrato che dipende dalla combinazione dei livelli di fattore che vengono gorgogliati. Sia positivo che n sono stati trovati arricchimenti negativi, con grandi arricchimenti positivi che sono stati trovati costantemente solo per il valore più alto di concentrazione di tensioattivo. Lo studio della temperatura non ha mostrato differenze significative di arricchimento per nessuna delle tre temperature studiate.
Identificazione di "big" lattogeno placentare umano nella placenta e nel siero.A causa della crescente evidenza dell'eterogeneità degli ormoni polipeptidici, gli studi sul sono state avviate specie molecolari di lattogeno placentare umano (hPL). Quando estratti di placenta umana appena consegnata sono stati passati su Sephadex G-100 in carbonato di ammonio 0,05 M, sono stati rilevati tre picchi immunoreattivi. Oltre a un picco corrispondente a hPL nativo (Kav \ = 0,39) e uno nel volume vuoto, era presente un picco coerente che eluiva prima di hPL (Kav = 0,20). Quest'ultimo rappresentava il 2-25% dell'attività ormonale totale e poteva essere rieseguito senza una conversione significativa in hPL. In 8M urea , il picco ha continuato a comportarsi come una forma di grande peso molecolare sia sulla cromatografia Sephadex che sull'elettroforesi su gel di poliacrilammide. Le procedure di estrazione a pH neutro e alcalino hanno prodotto quantità simili del materiale più grande. [125I] iodo-hPL non è stato convertito d alla forma più grande dalle condizioni di estrazione o analisi. Queste proprietà sono coerenti con una forma non aggregata di peso molecolare maggiore di hPL. In confronto con l'ormone nativo, le curve di posizionamento dell'ids per la forma più grande erano parallele negli studi di dosaggio radioimmunologico. Anche i sieri ottenuti da donne in gravidanza durante le varie fasi della gestazione hanno mostrato prove consistenti per una forma di grande peso molecolare dell'ormone. Queste osservazioni forniscono prove dirette, sia nel tessuto placentare che nel siero per "grande" hPL.
Misurazione del citocromo P-450 nell'omogenato e nei microsomi di fegato di ratto. Il suo uso per la correzione delle perdite microsomiali sostenute dalla centrifugazione differenziale.Il citocromo P-450 era dosati in omogenati e microsomi di fegato di ratto per calcolare i recuperi microsomiali e correggere le perdite durante l'ultracentrifugazione o la sedimentazione in presenza di CaCl 2. I valori ottenuti per la proteina microsomiale corretta in ratti Sprague-Dawley femmina non trattati erano compresi tra 40 e 50 mg/g di fegato Il dosaggio del citocromo P-450 nell'omogenato di fegato è sufficientemente accurato per calcolare un fattore di recupero riproducibile. Il valore del metodo risiede nella sua rapidità, nella sua capacità di correggere su un'ampia gamma di perdite e nella sua capacità di fornire valori affidabili di la massa proteica microsomiale totale. I limiti di questo metodo includono la sovrastima del citocromo P-450 omogenato e l'incapacità di correggere la contaminazione da proteine non microsomiali. Sovrastima del citocromo P-450 ca n essere corretto misurando la differenza di assorbanza tra 450 e 510 nm con il coefficiente di estinzione di 100 mM-1cm-1. Per essere precisi, la determinazione del citocromo P-450 sui microsomi deve essere eseguita a concentrazioni proteiche di circa 3 mg/ml. L'errore inerente al metodo può essere mantenuto costante e minimo. Si raccomanda l'uso della correzione per le perdite microsomiali al fine di ottenere l'uniformità tra i risultati dei vari laboratori e un'adeguata correlazione con gli studi in vivo delle funzioni microsomiali.
Cambiamento nella cinetica della distribuzione tissutale della sulphacetamide nei ratti portatori di tumore di Walker.L'effetto del tumore di Walker sulla distribuzione della sulfacetamide è stato studiato nei ratti per 21 giorni dopo l'impianto del tumore in una zampa posteriore. Dopo somministrazione orale di sulfacetamide (5 e 20 min), la concentrazione del farmaco è risultata inferiore nel plasma e nel fegato dei ratti portatori di tumore rispetto a quella del gruppo di controllo. 90 minuti dopo la somministrazione di sulfacetamide, la concentrazione del farmaco in questi stessi tessuti è risultata essere maggiore nei ratti portatori di tumore rispetto agli animali di controllo. Mentre il tumore non ha avuto effetti evidenti sulla concentrazione di sulfacetamide nel cervello, le concentrazioni del farmaco nel tessuto adiposo dei ratti portatori di tumore erano costantemente superiori a quelli degli animali di controllo. Questi cambiamenti nella cinetica di disposizione del sulfacentamide potrebbero essere spiegati in parte dal ritardo nell'assorbimento gastrointestinale del farmaco. Al contrario di quanto osservato dopo somministrazione orale, sono state riscontrate concentrazioni di farmaco costantemente più elevate nel plasma di ratti portatori di tumore dopo iniezione endovenosa di sulfacetamide. Inoltre, l'emivita della sulfacetamide in questi stessi animali era molto più elevata rispetto agli animali di controllo. Si conclude che, nei ratti portatori di tumore Walker, ci sono cambiamenti nella cinetica della sulfacetamide che sono funzioni della via di somministrazione del farmaco.
Studi cinetici e spettrali di composti di tipo I e di tipo II con microsomi epatici di ratto in presenza del principale metabolita della difenilidantoina.La natura del sono stati esaminati gli effetti inibitori del principale metabolita della difenilidantoina, 5-(p-idrossifenil)-5-fenilidantoina (HPPH), sul metabolismo in vitro di etilmorfina e anilina da parte dei microsomi epatici di ratto. La N-demetilazione dell'etilmorfina è stata inibita in modo competitivo da HPPH, mentre l'inibizione dell'idrossilazione dell'anilina non era competitiva. Lo spettro prodotto da HPPH quando aggiunto a sospensioni microsomiali non assomiglia ai classici spettri di tipo I o di tipo II, ma piuttosto uno spettro invertito di tipo I. Vengono presentate prove spettrali che indicano che HPPH diminuisce anche l'entità del cambiamento spettrale prodotto dai composti di tipo I e II.
Captazione e disposizione di aldrin e dieldrin da polmone di coniglio perfuso isolato.Sono stati studiati l'assorbimento, il metabolismo e il rilascio di aldrin e dieldrin dai polmoni mediante l'uso di polmoni di coniglio perfusi isolati che sono stati ventilati artificialmente e perfusi attraverso l'arteria polmonare. Sono stati condotti esperimenti sia di ricircolo che a passaggio singolo utilizzando un mezzo artificiale come perfusato. Aldrin si è accumulato nel polmone dal perfusato attraverso due distinte fasi di assorbimento: a fase rapida che coinvolge diffusione semplice e legame non specifico e una fase più lenta che rappresenta il suo turnover metabolico come dieldrin. Il dieldrin non è stato metabolizzato ma accumulato nei polmoni da un processo saturabile e non saturabile. Esperimenti a passaggio singolo con aldrin hanno indicato che la velocità iniziale di assorbimento potrebbe essere adattato a un componente e una costante che rappresenta la velocità del metabolismo L'assorbimento di dieldrin era bifasico: una fase indipendente dalla concentrazione di perfusato a e l'altro saturabile rispetto alla concentrazione di perfusato. Mediante l'applicazione della cinetica di Michaelis-Menten, la quantità massima di accumulo di dieldrin attribuibile al componente saturabile è stata calcolata pari a 0,64 mumol/polmone. I nostri risultati indicano che l'accumulo di questi xenobiotici clorurati avviene attraverso processi di semplice diffusione seguiti da legame tissutale non specifico. Non c'erano prove del legame irreversibile di aldrin o dieldrin, il suo epossido, nel polmone. Sebbene il polmone svolga un ruolo nella metabolizzazione dell'aldrin in dieldrin seguito da un deposito transitorio, nessuno dei due substrati ha il potenziale per l'immagazzinamento a lungo termine nel polmone.
Disposizione nei ratti di un copolimero di poliossipropilene-poliossietilene utilizzato nel frazionamento del plasma.Un copolimero a blocchi di poliossipropilene-poliossietilene di circa 4750 dalton (Poloxamer 108, Pluronic F-38) utilizzato in una nuova procedura di frazionamento proteico può essere infuso in pazienti che ricevono frazioni plasmatiche terapeutiche. Abbiamo studiato la disposizione e la farmacocinetica di Poloxamer 108 nei ratti come primo passo verso la comprensione del suo comportamento nell'uomo. Dopo la somministrazione endovenosa nei ratti, circa Il 94% di dosi da 7 o 100 mg/kg di polimero marcato con etilene-14C è stato escreto nelle urine in 3 giorni. Circa il 6% dell'etichetta è apparso nelle feci. Le membrane degli eritrociti non erano permeabili al polimero e solo il composto progenitore era dimostrabile nelle urine. Venti ore dopo la somministrazione, piccoli residui erano rilevabili solo nel rene, nel fegato, nell'intestino tenue e nella carcassa. La terza fase del pattern di scomparsa del plasma era evidente solo alla dose maggiore, ma il plasma disapp la cinetica dell'orecchio era indipendente dalla dose nell'intervallo qui utilizzato. Pertanto, la maggior parte del poloxamer 108 è stata eliminata rapidamente nei ratti per escrezione renale e una porzione più piccola probabilmente è stata rimossa per escrezione biliare. Questi risultati saranno applicati a studi continui sulla disposizione del Poloxamer 108 nell'uomo.
Escrezione biliare di colchicina nei ratti neonati.La DL50 di colchicina nelle 24 ore nei ratti neonati è 0,24 mg/kg, che è circa 1/ 10 quella osservata nell'adulto. La DL50 della colchicina nelle 24 ore era relativamente costante nei ratti di età superiore ai 25 giorni. Nel tentativo di determinare il meccanismo dell'aumentata sensibilità del ratto neonato all'azione tossica della colchicina, la distribuzione di La 3H dopo la somministrazione di 3H-colchicina (0,1 mg/kg) è stata misurata in ratti di 10 e 35 giorni di età. La concentrazione di 3H era più alta in tutti i tessuti del neonato rispetto all'adulto dopo somministrazione ip, suggerendo un'immaturità in la via di eliminazione della colchicina. Dopo somministrazione endovenosa, la radioattività è scomparsa molto più lentamente dal plasma del ratto neonato che dall'adulto. Ciò era dovuto ad una minore capacità del fegato del neonato di concentrare la colchicina e di espellerla nella bile Sviluppo del meccanismo epatico escretore responsabile dell'es la creazione di colchicina si è verificata alla stessa età dell'aumento della DL50. Questi risultati suggeriscono che la colchicina è più tossica nel neonato perché il farmaco rimane nel corpo più a lungo a causa dell'immaturità del processo escretore del fegato.
L'assorbimento gastrointestinale del metadone nel ratto.L'assorbimento del dl-metadone dal tratto gastrointestinale del ratto Sprague-Dawley è stato esaminato dal tecnica del segmento in vivo. L'assorbimento duodenale, misurato in funzione del tempo e della dose, ha seguito una cinetica di primo ordine con un'emivita di 15,6 min. L'assorbimento non è stato influenzato dalla somministrazione precedente o concomitante di una varietà di farmaci. Assorbimento da altre regioni dell'intestino era simile a quello del duodeno; al contrario, l'assorbimento dallo stomaco era notevolmente più lento. L'assorbimento gastrico era aumentato dall'alcalinizzazione del contenuto dello stomaco, ma era ancora notevolmente più lento rispetto al duodeno. Lo svuotamento gastrico del metadone sembra essere il tasso - fase limitante nell'assorbimento gastrointestinale complessivo del farmaco, poiché anche la velocità di svuotamento dopo l'intubazione del farmaco nello stomaco era considerevolmente più lenta della velocità di assorbimento duodenale.
Assorbimento e disposizione dell'acido 2-[4-(2,2-diclorociclopropil)fenossi]-2-metilpropanoico, WIN 35,833, in ratti, scimmie e uomini." L'acido 2-[4-(2,2-diclorociclopropil)fenossi]-2-metilpropanoico, Win 35,833, è stato prontamente assorbito dopo somministrazione orale; nei ratti, nelle scimmie rhesus e nei volontari umani, le concentrazioni di picco del farmaco nel plasma sono stati raggiunti entro 2 ore dal farmaco. La curva tempo-concentrazione del farmaco somministrato era bifasica nelle scimmie e negli uomini, mentre nei ratti è stata osservata la cinetica di un modello a un compartimento. Gli studi di distribuzione del farmaco marcato con 14C nel ratto hanno mostrato che la maggior parte della radioattività è stata escreta con le feci e che quantità significative di 14C sono state sequestrate dal grasso depositato. Sia le scimmie che i soggetti umani hanno eliminato Win 35.833 principalmente attraverso i reni. Il farmaco è stato escreto nella bile di ratto e nelle urine umane, sia come acido e coniugato con acido glucuronico. A concentrazioni fisiologiche, Win 35.833 era e fortemente legato alle proteine plasmatiche di ratto, scimmia e umano. Un metodo gascromatografico per l'analisi del farmaco nel plasma, nelle urine o nella bile ha fornito una relazione lineare tra i rapporti di altezza dei picchi e le concentrazioni, nell'intervallo 1-60 mug/ml.
Natura e destino dei residui di insetticidi inalati dai ratti nel fumo di sigaretta.Carbaryl radioattivo, carbofuran, parathion, leptophos e DDT sono stati aggiunti alle sigarette e il fumo principale è stato diretto ai polmoni dei ratti attraverso la trachea. Il trasferimento totale di radiocarbonio ai polmoni variava dal 9 al 15% di quello nel tabacco bruciato durante un processo di fumo che prevedeva otto boccate da 5 ml. Esalazione di residui di 14C durante questo periodo era dal 24 al 30% di quello inalato con tutti gli insetticidi tranne il carbofurano, di cui il 42% dei residui è stato espirato. Dopo 5 ore, l'esalazione totale del radiocarbonio consumato era del 35% per il paration, 65% per il carbofurano e circa il 50% per gli altri prodotti. Viene presentata la natura dei residui di 14C inalati, la loro escrezione urinaria e fecale e la loro deposizione e dissipazione da vari organi e tessuti.
Ulteriori studi sugli effetti del metirapone sull'idrossilazione dell'anilide.L'effetto potenziante del metirapone sulla p-idrossilazione dell'acetanilide è stato confermato con l'uso di un nuovo metodo gas-cromatografico per la determinazione del paracetamolo. È stato dimostrato che questo effetto non è dovuto all'inibizione dell'idrolisi del paracetamolo o all'interferenza con la sua determinazione, o alla formazione preferenziale di altri metaboliti fenolici. Questo effetto del metirapone è notevolmente specifico del substrato : la formazione di fenoli dagli omologhi di acetanilide, formanilide e propionanilide, e quella dall'analogo sulfonamidico di acetanilide, metansulfonanilide, è inibita dal metirapone nell'intervallo di concentrazione in cui l'idrossilazione dell'acetanilide è aumentata. La stessa specificità di substrato è stata osservata quando il modificatore era l'acetofenone. alpha,alpha\'-dipyridyl, tuttavia, migliora la formazione di fenoli da tutti e tre i carbonacilanilidi, ma non lo influenza da metansolfonanilide.
Biotrasformazione ossidativa del 2-acetilaminofluorene nei tessuti fetali e placentari di esseri umani e scimmie. Correlazioni con attività aril idrocarburi idrossilasi.L'ossidazione a funzione mista di Il 2-acetilamminofluorene (AAF) marcato con 14C è stato studiato in vitro nei tessuti placentari e fetali di esseri umani e scimmie (Macaca nemestrina). Il principale metabolita formato nella maggior parte dei tessuti era il 7-idrossi-AAF. I tassi delle reazioni di idrossilazione variavano ampiamente tra i tessuti esaminati ed erano generalmente da uno a due ordini di grandezza inferiori a quelli misurati nei tessuti epatici di ratto. Sono state osservate alte correlazioni tra i tassi di 7-,5- e 3- e tra 1- e N-idrossilazioni di AAF. Questi ultimi due reazioni erano meno sensibili all'inibizione da parte del monossido di carbonio. I tassi di 3-idrossilazioni di benzo[a]pirene (BP) erano anche altamente correlati con i tassi di 7-, 5- e 3-idrossilazioni di AAF ma non erano correlati con i tassi di 1- e N-idrossilazioni in huma n microsomi placentari. È stata osservata una mancanza di correlazioni statisticamente significative tra i tassi di molte di queste reazioni di idrossilazione studiate nei tessuti fetali dei primati. I tassi di 7-, 5- e 3-idrossilazioni di AAF non erano statisticamente correlati con i tassi di 3-idrossilazione di PA negli omogenati di tessuti fetali di primati nella maggior parte dei casi, ma correlazioni statisticamente significative tra i tassi di 3-idrossilazione di PA e 1 - e N-idrossilazioni di AAF sono state osservate in queste preparazioni. I risultati hanno suggerito due meccanismi separati per il controllo genetico dei tassi di reazioni di idrossilazione dell'anello aromatico placentare e di N-idrossilazione rispetto a controlli genetici multipli apparenti per i tassi di queste reazioni di idrossilazione nei tessuti fetali dei primati.
Correlazione del metabolismo della 14C-griseofulvina in microsomi di fegato di ratto, fegati isolati di ratto perfusi e in ratti con cannule del dotto biliare.Il metabolismo del 14C- griseofulvina è stata confrontata in microsomi di fegato di ratto, fegati di ratto perfusi isolati e ratti con cannule del dotto biliare. In tutte e tre le preparazioni, 4-desmetilgriseofulvina e 6-desmetilgriseofulvina erano i principali metaboliti. Il rapporto tra 4-desmetilgriseofulvina totale e 6-desmetilgriseofulvina formato era 1,20, 0,89 e 1,01 rispettivamente in microsomi epatici, fegati isolati perfusi e ratti con cannule del dotto biliare. Dopo un'incubazione di 7 minuti con microsomi epatici, la maggior parte (96%) della griseofulvina è rimasta invariata. Solo piccole quantità di 4 -desmetilgriseofulvina (1,26%) della dose) e 6-desmetilgriseofulvina (1,05% della dose) Nel fegato perfuso isolato, la maggior parte del farmaco (59% della dose) è stata escreta nella bile entro 4 ore, principalmente come 4-desmetilgriseofulvina (24% della dose) e 6-metilgrise ofulvina (24% della dose). Negli animali con cannule del dotto biliare, il 65% della dose è stata escreta nella bile e il 18% della dose nelle urine entro 4 ore. Nella bile, il 32% della dose è stato escreto come 4-desmetilgriseofulvina e il 20% della dose come 6-desmetilgriseofulvina, mentre nelle urine il farmaco è stato escreto prevalentemente come 6-desmetilgriseofulvina (13% della dose) con solo una piccola quantità di 4 -desmetilgriseofulvina (1% della dose), durante le prime 4 ore. Questi risultati mostrano che esiste una buona correlazione nel destino metabolico della 14C-griseofulvina nei microsomi epatici, nel fegato perfuso isolato e nei ratti con cannule del dotto biliare. Oltre al rapporto simile tra 4-desmetilgriseofulvina e 6-desmetilgriseofulvina, c'è anche un accordo nell'entità del metabolismo e dell'escrezione biliare nel fegato perfuso isolato e nei ratti con cannule del dotto biliare, il che suggerisce che il fegato perfuso isolato è un importante tecnica per studiare il metabolismo dei farmaci negli animali.
Il metabolismo dello spironolattone nell'uomo studiato mediante gascromatografia-spettrometria di massa.La gascromatografia-spettrometria di massa è stata utilizzata per identificare i metaboliti dello spironolattone nel sangue e nelle urine umani In tre uomini sani circa il 20% della radioattività è stata escreta nelle urine entro 24 ore dopo una dose orale di [20-3H]spironolattone (200 mg + 200 muCi). Circa la metà di questa radioattività è stata estratta con cloroformio a pH 3 e da questo estratto sono stati isolati quattro metaboliti stabili mediante cromatografia su colonna e su strato sottile. Due di questi erano i metaboliti precedentemente identificati, il canrenone (VII; 2,9% della dose) e il 6beta-idrossi-solfossido (X; 1,8% di la dose). I rimanenti erano i nuovi metaboliti, 15alfa-idrossicanrenone (XI; 0,8% della dose) e i 6beta-idrossi-tiometil derivati (VI; 0,5% della dose). Il principale metabolita urinario idrosolubile era il canrenoato estere glucuronide (XII; 4,5% della dose) Nel siero aggregato di 24-32 ore, canren uno (VII) era il principale metabolita della frazione organica estraibile; VI era presente in quantità apprezzabili ma X e XI erano presenti a livelli estremamente bassi.
Disposizione fisiologica e metabolismo dell'acido 5-(2\',4\'-difluorofenil)salicilico, un nuovo salicilato.5-(2 \'4\'-Difluorofenil) [carbossi-14C] acido saliciclico (MK-647) è stato rapidamente e completamente assorbito nei ratti, nei cani e nell'uomo. I livelli massimi di radioattività plasmatica si sono verificati in 1-2 ore dopo la somministrazione orale. La dose è stata 10 mg/kg in ratti e cani e 50 o 500 mg nell'uomo La maggior parte del farmaco nel plasma era MK-647 intatto che era ampiamente legato alle proteine plasmatiche Nell'uomo il picco di concentrazione dopo la dose di 500 mg era di circa 10 volte che dopo la dose più bassa, il che suggerisce che i tassi di assorbimento di entrambe le dosi erano simili. L'eliminazione del farmaco dal plasma era dose-dipendente. L'area sotto la curva per MK-647-14C nel plasma era 18 volte più alta dopo il dosaggio di 500 mg dose superiore alla dose di 50 mg I cani a cui è stato somministrato 10 mg/kg per via orale o endovenosa hanno escreto il 44% della dose nelle urine e il 42% nelle feci in 72 ore. se livello da entrambe le vie di somministrazione escreto l'80% nelle urine e l'11% nelle feci. Nell'uomo circa il 95% di una dose orale di 50 o 500 mg è stato escreto nelle urine e il 3% nelle feci, in 96 ore. MK-647 e due metaboliti erano presenti nelle urine di tre specie. L'etere e l'estere glucuronidi sono stati identificati nell'urina umana. Quest'ultimo metabolita è stato identificato anche nell'urina di ratto e cane. Il coniugato glicina di MK-647 non è stato osservato nelle urine delle tre specie. Nessuna interazione è stata osservata tra MK-647 e bisidrossicumarina nel test del tempo di protrombina né con tolbutamide nel test di tolleranza al glucosio. Un significativo abbassamento del tempo di sonno esobarbitale è stato osservato nelle femmine, ma non nei ratti maschi, dopo quattro dosi giornaliere consecutive di MK-647. Dopo somministrazione giornaliera ripetuta di MK-647 (12,5-100 mg/kg), il livello plasmatico diurno nei cani non è stato alterato in modo significativo, indicando che non si è verificata saturazione, induzione o inibizione del proprio metabolismo.
Biotrasformazione comparativa del triflubazam in ratti, cani e scimmie.La biotrasformazione del 14C-triflubazam (ORF 8063; 1-metil-5-fenile -7-trifluorometil-1H-1,5-benzodiazepin-2-4-[3H,5H]-dione) è stato studiato in ratti, cani e scimmie I metaboliti urinari, che rappresentano rispettivamente il 65, 74 e 87% di la radioattività urinaria totale escreta da queste tre specie, è stata isolata mediante cromatografia su strato preparativa e caratterizzata da varie tecniche spettrali tra cui gascromatografia/spettrometria di massa, spettrometria di massa a sonda solida, polarimetria e spettrometria di risonanza magnetica nucleare e infrarossa. nell'urina di qualsiasi specie. Dal ratto sono stati isolati quattro metaboliti, inclusi i derivati 4\'-idrossifenile, diidrodiolo e 3\'-metossi-4\'idrossi. I metaboliti N-demetilati non sono stati isolati dall'urina di ratto. Cinque metaboliti sono stati isolati dall'urina del cane, incluso 4-idrossifenile, dihy drodiolo e derivati catecolici del triflubazam. A differenza del caso del ratto, nell'urina del cane non è stato rilevato un catecol-O-metil etere. Sei metaboliti sono stati isolati dall'urina di scimmia. L'unica grande differenza nel metabolismo nella scimmia era l'esistenza di entrambi i metaboliti diidrodiolo e N-desmetildiidrodiolo. Nessun catecol-0-metil etere è stato rilevato nelle urine di scimmia. Per queste tre specie animali può essere proposta la biotrasformazione attraverso un intermedio comune di ossido di arene.
metaboliti tissutali di trifluorperazina, flufenazina, proclorperazina e perfenazina. Cinetica nel trattamento cronico.Trattamento orale ripetuto di ratti maschi con farmaci fenotiazinici sostituiti con piperazina a dosi di 25 mg/kg o più giornaliere ha portato ad un accumulo di metaboliti contenenti un gruppo etilendiammino invece dell'anello piperazinico Questi prodotti di degradazione dell'anello con e senza rimozione del gruppo N-alchilico sono stati trovati, insieme ai farmaci progenitori e i loro metaboliti N-dealchilati, nel fegato, polmone, rene e milza, nonché nel cervello quando sono state somministrate dosi elevate. Dopo la fine del trattamento, i derivati dell'etilendiammina sono stati eliminati più lentamente dei loro congeneri contenenti l'anello piperazinico intatto. sono state fatte osservazioni in cani trattati con flufenazina in dosi giornaliere fino a 40 mg/kg. Differenze quantitative sono state osservate nelle quantità relative di metaboli dell'etilendiammina mono e disostituita tes accumulati nei tessuti di ratto durante il trattamento con i vari farmaci; la proporzione del prodotto monosostituito formato dalla N-dealchilazione e dalla scissione dell'anello è diminuita nel seguente ordine: perazina, proclorperazina, trifluoperazina, flufenazina, perfenazina. I prodotti di condensazione dei derivati dell'etilendiammina con formaldeide sono stati suddivisi nella procedura di estrazione utilizzata.
Identificazione ed escrezione urinaria di p-clorofenossiacetamide, un metabolita dell'iproclozide, nell'uomo.La presenza di p-clorofenossiacetamide è stata rilevata nelle urine di uomo che riceveva iproclozide [1-(p-clorofenossiacetil)-2-isopropilidrazina]. Questo nuovo metabolita è stato identificato mediante cromatografia combinata gas-liquido-spettrometria di massa e per confronto con il composto sintetico. Una procedura appropriata per l'estrazione e la quantificazione di p- è stata sviluppata la clorofenossiacetamide mediante cromatografia gas-liquido su una colonna riempita di OV-225 al 5% con l'analogo 2-butilico di iproclozide come standard interno. Dopo somministrazioni orali di una dose singola da 20 e 50 mg di iproclozide, 5,2 e 8,3 % sono stati escreti lentamente nelle urine come p-clorofenossiacetamide rispettivamente entro 30,5 e 36 ore. Dopo l'assunzione orale di 20 mg da parte di pazienti psichiatrici, l'escrezione urinaria di p-clorofenossiacetamide nelle 24 ore è stata pari a circa il 2-4% della dose di iproclozide somministrata.
Lorazepam e diazepam nel trattamento dell'ansia nevrotica: uno studio in doppio cieco.Cinquantotto pazienti nevrotici con ansia intensa sono stati trattati con il lorazepam o diazepam in uno studio in doppio cieco tra pazienti. L'analisi statistica ha indicato che i due gruppi erano omogenei prima del trattamento e che i risultati del trattamento erano simili per entrambi i farmaci. Secondo la valutazione globale della malattia settimana dopo settimana, dopo quattro settimane di trattamento un numero maggiore di pazienti trattati con lorazepam rispetto a diazepam era normale o presentava una malattia lieve (82,1% vs 70,8%). A giudizio dei ricercatori, il 71,9% dei pazienti trattati con lorazepam ha avuto una risposta eccellente o buona rispetto al 56,7+ di quelli trattati con diazepam. La riduzione media del punteggio sulla Hamilton Anxiety Scale è stata di 17,7 per lorazepam e 16,5 per diazepam. Tuttavia, nessuna delle differenze di risultati di cui sopra è risultata statisticamente significativa. La dose maggiore di lorazepam richiesta nel trattamento è stata s 6 mg, rispetto a 30 mg di diazepam. Due pazienti trattati con lorazepam hanno avuto effetti collaterali, contro sei con diazepam. Sei pazienti nel gruppo diazepam non hanno completato lo studio, inclusi tre che hanno interrotto a causa di effetti collaterali (rash, tremori, agitazione); nessun paziente del gruppo lorazepam si è ritirato.
Problemi di patogenesi, clinica e terapia della panarterite dell'aorta e dei suoi rami.138 pazienti con panarterite dell'aorta e dei suoi rami sono stati esaminati e confrontati i reperti clinici e morfologici. La malattia è più diffusa di quanto finora ipotizzato, ed è più frequente nelle giovani donne. La localizzazione del processo nell'aorta addominale con coinvolgimento (stenosi) delle arterie renali provoca ipertensione renovascolare , che ha spesso un decorso maligno, soprattutto con un'affezione ambilaterale delle arterie renali. Nel trattamento sono di fondamentale importanza cicli terapeutici ripetitivi con corticosteroidi ed eparina. Con un'affezione isolata, specialmente nell'ipertensione renovascolare e nei disturbi della circolazione cerebrale, il trattamento chirurgico è indicato anche.
Variazioni stagionali nella composizione delle urine in relazione alla formazione di calcoli di calcio.1. È stato condotto uno studio trasversale retrospettivo sui dati derivati da singole raccolte di urine delle 24 ore da 246 uomini che formano calcoli idiopatici di calcio 2. Il volume e il pH giornalieri delle urine e le esrezioni di calcio, ossalato, fosfato, creatinina e magnesio erano correlati al periodo dell'anno in cui l'urina è stata raccolta e la saturazione delle urine con ossalato di calcio e fosfato ottocalcico calcolata per ogni mese 3. Si sono verificate variazioni stagionali significative nell'escrezione urinaria di calcio e ossalato, ciascuna con un massimo durante i mesi estivi e un minimo in inverno. variazione stagionale del pH urinario, del volume, della creatinina, del fosfato o del magnesio 4. C'è stato un aumento significativo della saturazione delle urine con ossalato di calcio e una tendenza verso livelli di saturazione più elevati di otto-fosfato di calcio in estate. Questi cambiamenti dipendevano solo dalla variazione stagionale del calcio urinario e dell'ossalato e non dal volume delle urine. 5. Uno studio retrospettivo sull'incidenza stagionale degli episodi di calcolosi tra questi 246 formatori di calcoli ha mostrato che il tasso di passaggio di calcoli al mese era del 50% più alto in estate che in inverno. Non c'era alcuna variazione stagionale significativa nell'incidenza di calcoli rimossi chirurgicamente.
L'eliminazione renale della procainamide.La questione del pH o della dipendenza dal flusso per l'eliminazione renale della procainamide (PCA) è stata studiata in 4 condizioni in ciascuna di 4 soggetti. Ciascun soggetto ha ricevuto 500 mg di PCA per via endovenosa a intervalli settimanali mentre era in uno stato di (1) carico acido (NH4Cl) e privazione di acqua, (2) carico acido ed eccesso di acqua, (3) carico alcalino (NaHCO3) e privazione dell'acqua e (4) carico alcalino ed eccesso di acqua. Plasma e urina sono stati raccolti a intervalli frequenti per l'analisi PCA e N-acetil PCA (NAPA). Le portate delle urine variavano notevolmente tra gli stati di privazione ed eccesso di acqua (circa 1,2 vs. 5 ml/min, rispettivamente) e il pH delle urine variava notevolmente tra gli stati di carico acido e alcalino (pH = ca 5 vs 8, rispettivamente). Nonostante questa marcata variazione, non ci sono stati cambiamenti significativi nella clearance renale PCA o nelle 24 ore Escrezione di PCA o NAPA. Se si verificasse una diffusione passiva di PCA, tale flusso e variazioni di pH sarebbero Avrei causato notevoli cambiamenti nella clearance del PCA se l'ipotesi della partizione del pH fosse vera. Concludiamo quindi che la diffusione passiva non è un meccanismo importante nell'eliminazione renale del PCA nell'uomo e che deve esserci secrezione tubulare. L'implicazione per l'uso clinico del farmaco è che non è necessario apportare aggiustamenti della dose in risposta alle variazioni del flusso urinario e del pH.
Le concentrazioni plasmatiche e il decorso del beta-blocco dovuto al propranololo.L'efficacia del propranololo somministrato per via endovenosa nell'antagonizzare l'effetto cronotropo dell'isoproterenolo e l'esercizio è stato studiato, ed è stato trovato in ogni momento essere una funzione prevedibile delle sue concentrazioni plasmatiche secondo la classica teoria dei recettori farmacologici per l'antagonismo competitivo I dati mostrano inoltre che la relazione tra efficacia e tempo dipende dal modo in cui l'antagonismo viene misurato. Se viene misurato il rapporto tra dose e isoproterenolo (DR), allora (DR-1) diminuisce con il tempo parallelamente alla concentrazione del farmaco. D'altra parte, se gli effetti del propranololo sono misurati come riduzione percentuale in una data risposta, poi questo decresce linearmente nel tempo, anche se le concentrazioni plasmatiche diminuiscono in modo esponenziale. Questo fatto spiega perché in passato sia sorta confusione circa la relazione tra la durata del beta blocco de e emivita farmacocinetica.
Tossicità del fluorosseno indotta dal fenobarbital.A causa di segnalazioni di tossicità del fluorosseno nell'uomo, è stato studiato l'effetto del trattamento con fenobarbital sulla tossicità e sul metabolismo del fluorosseno in 9 scimmie rhesus. Sei scimmie che sono state esposte a una concentrazione media di fluorosseno alveolare calcolata del 5,8% per periodi di 4 ore fino a un totale di 16 ore non hanno mostrato segni di tossicità. Due animali sono stati sacrificati dopo una singola esposizione di 4 ore a ottenere misure di controllo dei metaboliti del fluorosseno nei tessuti Quattro scimmie che erano sopravvissute in precedenza hanno ricevuto esposizioni al fluorosseno e 3 scimmie che non hanno avuto esposizione al fluorosseno sono morte durante l'anestesia con fluorossene dopo il trattamento con fenobarbital (tempo medio, 3 ore). La tossicità si è manifestata con ipotensione arteriosa , edema polmonare e ipossiemia arteriosa Il trattamento con fenobarbital ha aumentato la produzione di metaboliti del fluorosseno, incluso il trifluoroetanolo altamente tossico Concentrazioni di trifluoroetanolo in gas scaduti misti , sangue e urina e del fluoro non volatile totale nel sangue, nelle urine e nei tessuti di animali trattati con fenobarbital erano da 2 a 10 volte rispetto agli animali di controllo. I risultati suggeriscono che la scimmia rhesus è un modello prezioso per lo studio della farmacologia del fluorosseno e che l'inclusione di una stimolazione enzimatica nella valutazione della potenziale tossicità di altri anestetici sembra giustificata.
Formazione di rosette da parte dei linfociti di topo. IV. Recettori Fc e C3 che si verificano insieme e separatamente su cellule T e altri leucociti.Viene descritto un metodo per rilevare la presenza simultanea di recettori Fc e C3 sulle cellule della milza di topo. Una proporzione di cellule T e non T porta entrambi i recettori. Entrambi i recettori Fc delle cellule T e non T sono stati bloccati dalla IgG2 di topo aggregata nella stessa misura I recettori C3, ma non Fc, sono stati bloccati da fattori presenti nel siero di topi irradiati o topi sottoposti a reazione graft-versus-host. Sono comparsi timociti attivati mediante iniezione in topi ibridi F1 irradiati e timociti che si rigenerano dopo irradiazione e iniezione di midollo osseo avere un aumento dei recettori Fc. Viene suggerito un ruolo generale per i recettori Fc e C3 nella cooperazione cellula T-cellula B.
Deficit di glucosio-fosfato isomerasi dovuto a una nuova variante (GP I Barcelona) e a un gene silente: studi biochimici, immunologici e genetici.A Una ragazza di 12 anni di origine spagnola è risultata doppia eterozigote per una variante carente di GP I (GP I Barcelona) e per un gene silent GP I. La madre era eterozigote per GP I Barcelona e il padre era eterozigote per il silente gene. GP I Barcelona era una variante veloce (116%) con un punto isoelettrico aumentato (9,55), labilità al calore e all'urea e spostamento della curva del pH verso il pH acido. Le altre caratteristiche cinetiche erano normali. Il rapporto tra l'attività enzimatica rispetto alla reattività immunologica era normale negli eritrociti e nei globuli bianchi del padre e della madre, ma è diminuita al 75% del normale nelle cellule del sangue della figlia. Vengono discussi i meccanismi genetici e molecolari del deficit di GP I di questo paziente.
Proprietà dell'attività della beta-glucuronidasi nel liquido sinoviale umano.Lo scopo del presente studio era valutare le proprietà della beta-glucuronidasi (EC 3.2 .1.31) nel liquido sinoviale umano. È stato dimostrato che ha un requisito di pH di 5,0 e un valore KM di circa 8,0 - 10 (-3) M utilizzando fenolftaleina beta-glucuronide come substrato. A bassa concentrazione di substrato è dimostrabile un inibitore endogeno L'inibizione è di tipo competitivo e viene rimossa mediante digestione proteolitica del liquido sinoviale, mentre la digestione con ialuronidasi e l'aggiunta o di Triton X-100 o di vari sali alla miscela del saggio, sono inefficaci. La possibilità che l'inibitore sia una proteina da il siero è discusso.
Un fattore stabilizzante per la gamma-glutamil transpeptidasi nelle urine.La gamma-glutamil transpeptidasi urinaria (gamma-GT) è risultata stabile quando conservata a temperatura ambiente e 4 gradi C. L'attività si perde rapidamente quando l'urina è congelata, ma la dialisi precedente previene questa perdita. L'urea è il principale fattore responsabile della perdita di attività; l'albumina è protettiva a concentrazioni di 6 g/lo più. A Nel siero e nelle urine è stato trovato un fattore di 10 000-30 000 peso molecolare che impedirà la perdita dell'attività gamma-GT urinaria al congelamento; ha un'elevata potenza nel siero e nelle urine di pazienti con insufficienza renale cronica, ma solo una bassa potenza nell'urina normale. La sua natura è sconosciuta ma è stabile al calore.
Separazione migliorata dell'isoenzima cardiaco della creatina chinasi nel siero mediante frazionamento in batch.Descrivo una semplice procedura di frazionamento batch a provetta singola per separare MM e MB isoenzimi della creatinchinasi su uno scambiatore anionico forte macroporoso (AG MP-1, Laboratori Bio-Rad) Gli isoenzimi possono essere separati in meno di 3 min, con conseguente diluizione del siero con non più di un uguale volume di tampone. Senza concentrazione del campione o misurazione spettrofluorimetrica, la procedura rileva 4 U di isoenzima MB per litro. La sensibilità è limitata dalla sensibilità e dalla precisione del metodo di misurazione. Il CV per il frazionamento può essere mantenuto a meno del 4,0% a 65 U di MB per litro Gli attuali metodi di frazionamento vengono confrontati con la procedura proposta Con l'uso di un analizzatore discreto (Du Pont aca) l'attività MB media in una popolazione senza malattie cardiache era di 3,2 +/- 3,0 U/litro (intervallo da 0 a 8 U/litro) La cinetica e la stabilità di isol isoenzimi tati, indicando l'opportunità di conservare o pre-incubare i campioni con mercaptoetanolo.
Frazionamento quantitativo degli isoenzimi della fosfatasi alcalina in base alla loro termostabilità.Monitoraggio continuo della denaturazione termica di una miscela di isoenzimi della fosfatasi alcalina a 60 gradi C e pH 7.5 permette l'identificazione e la quantificazione diretta simultanea di tre isoenzimi: l'isoenzima placentare, l'isoenzima intestinale sensibile alla L-fenilalanina e l'isoenzima epatocitario (epatocitico). L'isoenzima che è principalmente di origine ossea non può essere identificato come tale senza l'ausilio di altri ausili diagnostici e anamnesi del paziente. Tutti i tessuti umani contengono fosfatasi alcalina, molti organi più di uno degli isoenzimi. La fosfatasi alcalina epatica, che costituisce il 40-50% della normale attività della fosfatasi alcalina sierica, è stata misurata nel siero di persone con varie malattie del fegato La sua attività ha superato il normale in tutti i tipi di malattie del fegato; nell'80% dei casi questo aumento è stato accompagnato da un aumento del gamma-gl attività dell'utamil-transferasi, ma la correlazione quantitativa (r = 0,54) non era buona come previsto se entrambi gli enzimi provengono dalla stessa fonte e sono indici di malattie del fegato. L'attività della fosfatasi alcalina epatica aumenta nel sangue all'inizio della malattia epatica, prima che la maggior parte dei test epatici mostri anomalie. L'altro principale isoenzima del siero normale rappresenta probabilmente una miscela di isoenzimi dell'osso e dei tessuti reticolo-endoteliali e vascolari, che contengono tutti la stessa fosfatasi alcalina "molto termolabile". Il sangue del cordone ombelicale e i sieri dei bambini contengono principalmente questo isoenzima termolabile.
Effetti della conservazione al freddo sull'attività della gamma-glutamiltransferasi nel siero.I sieri di pazienti con disturbi epatobiliari sono stati selezionati per rappresentare un'ampia gamma di attività della gamma-glutamiltransferasi (EC 2.3.2.2). I campioni sono stati conservati a 4 gradi C e testati periodicamente per un massimo di nove settimane, altri a -6 gradi C fino a 40 settimane. I campioni congelati sono stati scongelati e quindi congelato di nuovo dopo ogni test. L'attività dell'enzima è rimasta sostanzialmente invariata in entrambe le condizioni di conservazione. Questi risultati sono coerenti con i commenti in letteratura sulla stabilità dell'enzima.
Evidenza di un ruolo fisiologico dei nervi simpatici renali nella stimolazione adrenergica del rilascio di renina nel ratto.Studi precedenti sul rilascio di renina da parte di un sistema in vitro di fette di rene di ratto, che è privo di influenze emodinamiche, hanno fornito prove che il rilascio di renina è stimolato da un meccanismo beta-adrenergico Abbiamo usato questo sistema per studiare gli effetti della tiramina (un'ammina ad azione indiretta in grado di spostare le catecolmine endogene dalle terminazioni nervose simpatiche ) sul rilascio di renina Tiramina (10(-3)M) in presenza di un inibitore della monoamino ossidasi (feniprazina, 10(-5)M) e di un inibitore della fosfodiesterasi (teofillina, 10(-3)M) significativamente (P meno superiore a 0,01) ha stimolato il rilascio di renina quando i valori sono stati confrontati con le osservazioni di controllo per i terreni contenenti solo gli inibitori. La stimolazione del rilascio di renina indotta dalla tiramina è stata bloccata dall'agente beta-bloccante, propranololo (2 X 10(-4) M) e agente di blocco dell'assorbimento neurale, cocaina (10 (-5) M), ma non dall'antagonista alfa, fentolamina (9 X 10(-4) M). Queste osservazioni dimostrano un ruolo potenziale per l'innervazione simpatica dell'apparato iuxtaglomerulare sul rilascio di renina.
Attività antitumorali e immunosoppressive degli antibiotici del gruppo lankacidina: relazioni struttura-attività.Le attività antitumorali e immunosoppressive degli antibiotici del gruppo lankacidina sono state studiate in topi. Diciassette dei 29 antibiotici del gruppo lankacidina di nuova preparazione, inclusi 14 derivati di lankacidina C, lankacidinolo, isolankacidinolo e lankacidinolo 14-acetato, possedevano una notevole attività antitumorale contro il linfosarcoma dell'ascite 6C3HED/OG. Studi comparativi sull'attività antitumorale della lankacidina C e otto dei suoi derivati contro la leucemia L1210 e il linfosarcoma solido 6C3HED/OG hanno dimostrato che la sostituzione del gruppo idrossile in posizione 8 o 14 della lankacidina C con un gruppo acilossico potenziava l'attività antitumorale. attività.
Acido L-[alphaS, 5S]-alfa-ammino-3-cloro-4,5-diidro-5-isossazoleacetico (NSC-163501): un nuovo amminoacido antibiotico con le proprietà di un antagonista della L-glutammina.acido L-[alphaS,5S]-alfa-amino-3-cloro-4,5-diidro-5-isossazoleacetico (NSC-163501) , un antibiotico elaborato da Streptomyces sviceus, ha dimostrato di essere un potente inibitore di molte reazioni di mammiferi e batteri che comportano il trasferimento di azoto dalla gamma-carbossamide della L-glutammina. fosfato, L-asparagina, guanosina-5\'-monofosfato, citidina-5\'-trifosfato, N-formilglicinamidina ribonucleotide, NAD, glucosamina-6-fosfato e acido antranilico sono fortemente o totalmente inibiti da una concentrazione di NSC-163501 di 1 X 10(-3) M. L-glutammato sintetasi di Escherichia coli è solo modestamente inibito e la sintesi di 5-fosforibosilamina nel fegato fetale di ratto è relativamente refrattaria all'inibizione. 63501 il trattamento delle cellule L1210 che crescono in un terreno di coltura a basso contenuto di L-glutammina ha prodotto l'arresto nella fase G o S precoce. Degli amminoacidi testati, solo la L-glutammina ha antagonizzato tale inibizione della crescita.
Immunoterapia per il cancro: una panoramica.L'immunoterapia del cancro è di interesse per gli oncologi perché è specificamente diretta alle cellule tumorali, risparmiando le cellule normali. Mentre è inefficace nella maggior parte dei pazienti, specialmente quelli con malattia metastatica diffusa, occasionalmente produce buoni risultati. Ognuno dei metodi disponibili ha problemi intrinseci e, recentemente, sono stati fatti tentativi per superarne alcuni. Vi è un forte caso per i piccoli studi sperimentali su larga scala in gruppi altamente selezionati di pazienti che sono intensamente studiati per il loro stato immunologico in relazione al loro tumore. Nonostante l'assenza di successo in generale, l'immunoterapia sembra ancora avere un futuro in aggiunta alla terapia esistente al fine di controllare quanto più per curare il tumore residuo.
Proprietà di una forma libera e solubilizzata di alfa,alfa-trealasi legata purificata dal torace delle api.Le forme libere e legate di alfa, l'alfa-trealasi (EC 3.2.1.28) del torace delle api sono state separate e l'enzima legato è stato solubilizzato portando il pH a 8,0 per 10 h. Entrambi gli enzimi sono stati purificati. Erano omogenei come determinato da diversi criteri elettroforetici. È stato trovato che i due enzimi avevano Km\' molto simili (ognuno di circa 0,89 mM), Vm\' (53,2 e 54,3 U/mg per libero e solubilizzato, rispettivamente), caratteristiche di inibizione, specificità (entrambi solo alfa idrolizzato, alfa-trealosio), massimi di pH (ognuno aveva massimi a circa 3,5 e 6,5), pesi molecolari (65.000), punti isoelettrici (5,1), reattività ai reagenti sulfidrilici, mobilità elettroforetica, energie di attivazione (circa 12,8 kcal/mol) e stabilità simili al calore, pH , e urea Sono state tuttavia riscontrate alcune differenze significative tra i due enzimi: l'alfa,alfa-trealasi solubilizzata galleggiava al 70% di saturazione di solfato di ammonio mentre l'alfa,alfa-trealasi libera no; l'alfa,alfa-trealasi solubilizzata non si dissociava in subunità così facilmente come quella libera; e si è scoperto che l'alfa,alfa-trealasi solubilizzata si lega più facilmente a un raggruppamento idrofobo rispetto all'enzima libero. Oltre a questi confronti, sono riportati tre nuovi risultati relativi al torace alfa, alfa-trealasi. (1) Le alfa,alfa-trealasi del torace sono fortemente inibite dai beta-glucosidi (valori di Ki di circa 8 x 10(-4) M); (2) in determinate condizioni torace alfa, alfa-trealasi delle api mellifere dissociate in subunità di metà del peso molecolare normale; (3) le alfa, alfa-trealasi del torace delle api hanno insoliti profili di attività del pH bifasico.
Chimotripsina A-pi suina, una chimotripsina più acida.Uno studio cinetico della chimotripsina A-pi procina ha rivelato due proprietà caratteristiche di questo tipo di chimotripsina : 1. La chimotripsina A-pi suina, come la chimotripsina B-pi bovina, non lega la proflavina, che è un inibitore competitivo della tripsina bovina e della chimotripsina A-alfa. 2. I profili di pH dei parametri allo stato stazionario mostrano i due consueti importanti pK\'s. Quello basico, pK2 = 9.6, colpisce sia Km che kcat/Km e probabilmente controlla la conformazione del legame della chimotripsina. Quello acido, pK1 = 5.7, colpisce kcat e kcat/Km e svolge un ruolo nel processo catalitico. Il valore di pK1 è insolitamente basso.
Meccanismo d'azione di Mg2+ e Zn2+ sulla fosfatasi alcalina placentare di ratto. I. Studi sulle fosfatasi alcaline solubili Zn2+ e Mg2+.Fosfatasi alcalina placentare di ratto (EC 3.1.3.1), un dimero di 135.000 dalton, è fortemente attivato da Mg2+. Tuttavia, Zn2+ deve essere presente sull'apoenzima per ottenere questa attivazione. Mg2+ da solo non è in grado di ricostituire i siti attivi funzionali. Zn2+ in eccesso che compete per il Il sito Mg2+ porta a una fosfatasi con scarsa attività catalitica a pH alcalino ma con normali siti attivi a pH acido come mostrato dall'incorporazione covalente di orto-[32P]fosfato. Sono state ricostituite due specie enzimatiche con siti attivi funzionali identici che differiscono solo per il presenza di Zn2+ o Mg2+ nel sito effettore. Viene presentato un meccanismo mediante il quale l'attività della fosfatasi alcalina della placenta di ratto sarebbe controllata da un processo molecolare che coinvolge l'interazione di Mg2+ e Zn2+ con la molecola dell'enzima dimerico.
Regolazione trans-sinaptica dello sviluppo dell'innervazione dell'organo terminale da parte dei neuroni simpatici.Esaminare la regolazione dello sviluppo dell'innervazione dell'organo terminale del ganglio cervicale superiore (SCG) e due dei suoi organi bersaglio, l'iride e la ghiandola pineale, sono stati studiati utilizzando approcci biochimici e istofluorescenti. Durante l'ontogenesi postnatale l'attività della tirosina idrossilasi (T-OH), che è localizzata nei neuroni adrenergici, è aumentata di 50 volte nell'iride e 34 volte nelle terminazioni nervose pineale del ratto. Questi aumenti sono stati paralleli all'aumento in vitro dell'assorbimento di [3H]norepinefrina ([3H]NE) nell'iride, una misura della presenza di membrana terminale nervosa funzionale. Questi indici biochimici dell'innervazione dell'organo terminale era ben correlata con l'aumento dello sviluppo della densità dell'innervazione, della ramificazione del plesso terrestre adrenergico e dell'intensità della fluorescenza delle fibre nervose come determinato mediante microscopia a fluorescenza. es che innervano l'SCG in ratti di 2-3 giorni di età hanno impedito il normale sviluppo dell'innervazione dell'organo terminale: attività T-OH, assorbimento di [3H]NE, densità di innervazione, ramificazione del plesso e intensità di fluorescenza non si sono sviluppate normalmente nelle iridi innervate da gangli. Si conclude che i fattori trans-sinaptici regolano la maturazione dei terminali nervosi adrenergici e lo sviluppo dell'innervazione dell'organo terminale da parte del SCG.
Studi neurochimici in un teratoma di topo con differenziazione neuroepiteliale. Presenza di AMP ciclico, serotonina ed enzimi dei sistemi serotoninergico, adrenergico e colinergico.Un trapiantabile Il teratoma testicolare di topo (OTT 6050) che mostra uno spettro di differenziazione neuroepiteliale è stato valutato biochimicamente per le concentrazioni di AMP ciclico (cAMP), serotonina (5-HT) ed enzimi coinvolti nel metabolismo delle ammine biogene e dell'acetilcolina. Questi valori sono stati confrontati tra teratomi con differenziazione neuroepiteliale come componente maggiore o minore e cervello di topi neonati e adulti di ceppi correlati erano presenti cAMP, 5-HT, triptofano idrossilasi (TPH), amminoacido aromatico decarbossilasi (AADC) e monoamino ossidasi (MAO). Inoltre, enzimi del sistema adrenergico, cioè tirosina idrossilasi (TH) e dopamina-beta-idrossilasi (DBH), e del sistema colinergico, cioè colina acetiltransferasi e acetilcolinesteras e, sono stati studiati. Le differenze biochimiche nei gruppi tumorali riflettevano probabilmente variazioni nella proporzione dei componenti neuroepiteliali: le tendenze suggerivano un aumento del cAMP e un'aumentata attività di TPH, AADC, TH e DBH nei tumori con proporzioni aumentate di cellule neuroepiteliali. Questi risultati indicano che la componente neuroepiteliale del teratoma del topo può servire come modello per lo studio della differenziazione neuronale nelle neoplasie neuroepiteliali primitive.
L'impatto dei fattori psicosociali sulla conduzione della ricerca combinata tra farmaci e psicoterapia.L'effetto degli atteggiamenti di terapeuti, pazienti e ricercatori sulla condotta e sull'esito della ricerca combinata di droga e psicoterapia è stata esaminata in una breve clinica di psicoterapia orientata alla crisi. Settantasette pazienti consecutivi hanno ricevuto uno dei due farmaci ansiolitici o un placebo in combinazione con il tipico trattamento a orientamento psicoanalitico utilizzato nella clinica. \' sono stati chiaramente trasmessi ai pazienti atteggiamenti favorevoli alla psicoterapia rispetto alla terapia farmacologica (e alla ricerca in psicoterapia), indicativi di quanto segue: (a) l'82% dei pazienti ha abbandonato l'assunzione di farmaci, sebbene una percentuale simile sia rimasta in trattamento; (b) solo un terzo dei pazienti percepiva come importante per i loro terapeuti che assumessero farmaci; (c) l'87 percento dei pazienti è stato valutato come migliorato; e il 75 percento dei pazienti c la compilazione di moduli riteneva che la maggior parte o tutto il loro miglioramento fosse attribuibile al parlare. Il team di ricerca, composto da membri dello stesso dipartimento che quindi avevano valori simili ai terapeuti, ha raccolto diligentemente i dati sugli esiti, ma ha ignorato la sua responsabilità di far rispettare le parti del protocollo relative al rapporto con la droga. Nel complesso, i pazienti sono rimasti in terapia, sono migliorati e hanno partecipato alla compilazione dei moduli, così che solo gli obiettivi di ricerca della terapia combinata sono stati vanificati, mentre il servizio clinico tradizionale e gli obiettivi di formazione sono proseguiti come al solito.
L'uso di microsfere radioattive per confrontare gli effetti di idralazina, guanetidina e SK \& F 24260 sulla ridistribuzione della gittata cardiaca nei conigli anestetizzati.1 Viene descritto l'uso di microsfere radioattive per la misurazione della gittata cardiaca nei conigli anestetizzati e la sua ridistribuzione dopo la somministrazione di farmaci che abbassano la pressione sanguigna 2 L'idralazina ha aumentato la conduttanza vascolare periferica del 123%. I letti vascolari in cui ha avuto maggiore effetto sono stati quelli della carcassa (principalmente muscolo) e dei reni.3 SK\&F 24260, (1,4 diidro-2,6-dimetil-4(2-trifluoremetilfenia)-3,5,-etil estere dell'acido piridinedicarbossilico), aveva simili azione vasocilatrice. Il suo effetto nella carcassa ha contribuito relativamente di più all'aumento della conduttanza periferica totale. Ha anche causato un notevole grado di vasodilatazione cerebrale.4 La guanetidina ha avuto un effetto relativamente piccolo sulla conduttanza periferica totale e ha abbassato la pressione sanguigna ure principalmente riducendo la gittata sistolica e la gittata cardiaca.
Effetti antiaritmici, emodinamici e metabolici del 3alfa-amino-5alfa-androstan-2beta-ol-17-one cloridrato nei levrieri dopo legatura acuta dell'arteria coronaria.1 Gli effetti antiaritmici, emodinamici e metabolici di un nuovo aminosteroide, ORG6001, sono stati studiati nell'infarto miocardico acuto sperimentale in levrieri anestetizzati. 2 ORG6001 somministrato per via endovenosa (2-10 mg/kg) o per via orale (50 mg/kg ) ha ridotto significativamente l'incidenza di battiti ectopici ventricolari nei primi 30 minuti dopo la legatura dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra.3 Nei cani pretrattati con ORG6001, i cambiamenti metabolici indicativi di ischemia miocardica (produzione di lattato ed efflusso di potassio) erano meno marcati di quelli che si verificano negli animali di controllo.4 Le dosi antiaritmiche di ORG6001 hanno causato solo effetti emodinamici transitori minimi.5 Questi risultati suggeriscono che ORG6001 può possedere vantaggi distinti rispetto agli antiaritmici attualmente utilizzati d tappetini nella prevenzione e nel trattamento delle aritmie precoci che si verificano dopo infarto miocardico.
Prove per noradrenalina e adrenalina come trasmettitori simpatici nel pollo.1 Le concentrazioni di noradrenalina e adrenalina in vari organi, plasma arterioso e deflusso venoso da sono stati determinati cuori isolati di polli adulti.2 Le concentrazioni relative di adrenalina (percentuale della somma di noradrenalina e adrenalina) nel cuore (33%), nella milza (16%) e nel cervello (26%) erano superiori a quelle riscontrate nei mammiferi organi. La simpatectomia chimica mediante pretrattamento con 6-idrossidopamina ha causato una diminuzione delle concentrazioni di noradrenalina e adrenalina nel cuore al 20 e al 23% e nella milza al 16 e al 29%, rispettivamente. 3 Stimolazione dei nervi simpatici di destra, infusione di tiramina o l'infusione di una soluzione di Tyrode modificata contenente 108 mM K+ e 44 mM Na+ ha causato un'uscita sia di noradrenalina che di adrenalina nel perfusato di cuori isolati. La concentrazione relativa di adrenalina nel perfusato (20-28%) non è stata significativamente diverso dalla concentrazione relativa di adrenalina rimasta in questi cuori (19-22%). Nei singoli esperimenti, i rapporti noradrenalina: adrenalina dei perfusati di stimolazione erano correlati positivamente con i rapporti riscontrati nei cuori. 4 Gli effetti della noradrenalina e dell'adrenalina sulla frequenza cardiaca e sullo sviluppo della tensione sono stati studiati rispettivamente nel battito spontaneo dell'atrio destro e dell'atrio sinistro azionato elettricamente. Inoltre, l'aumento della pressione arteriosa in risposta alla noradrenalina o all'adrenalina è stato misurato nei polli. Si è riscontrato che la frequenza cardiovascolare, lo sviluppo della tensione cardiaca e la pressione arteriosa non erano significativamente differenti da quelli dell'adrenalina. 5 Si conclude che, nel cuore e nella milza di pollo, sia la noradrenalina che l'adrenalina agiscono come neutrotrasmettitori simpatici.
Trapianto di midollo osseo per anemia aplastica da un donatore non correlato HL-A e MLC-identico.Trapianto di midollo osseo (BMT) da un non correlato, HL-A-fenotipo-identico, donatore MLC-negativo è stato eseguito in una donna di 31 anni con grave anemia aplastica di lunga durata. I test in vitro non sono riusciti a dimostrare la sensibilizzazione umorale o cellulare del ricevente contro antigeni di tipo donatore. Dopo il condizionamento con ciclofosfamide, si è verificato un attecchimento rapido ma solo transitorio del trapianto accompagnato da segni di lieve malattia del trapianto contro l'ospite (GVHD) del fegato. I risultati di un secondo trapianto di midollo osseo dallo stesso donatore non possono essere valutati a causa della morte prematura del ricevente Si conclude che il midollo osseo di donatori non imparentati, HL-A e MLC-identici può essere trapiantato senza grave GVHD. Il rigetto dell'innesto nel nostro paziente potrebbe essere stato correlato a maggiori differenze antigeniche che ci si può aspettare tra HL-A e MLC-i individui dentali non imparentati che tra fratelli HL-A e MLC-identici. Tuttavia, un'immunosoppressione preparativa insufficiente con ciclofosfamide a causa di una grave emosiderosi epatica appare ugualmente probabile come causa del rigetto del trapianto. Il possibile aumento del rischio di rigetto dell'innesto o di grave GVHD non dovrebbe precludere l'uso di donatori di midollo non imparentati con HL-A e MLC-identici, quando non sono disponibili donatori di fratelli e sorelle istocompatibili; ma possono essere necessari regimi immunosoppressivi più potenti del protocollo con ciclofosfamide per garantire l'attecchimento permanente.
La specificità degli anticorpi eterofili in pazienti e donatori sani con segni minimi o assenti di mononucleosi infettiva.Nel corso di diversi anni sono stati raccolti sieri da 14 studenti positivi o pazienti che non soddisfacevano i criteri ematologici minimi per la mononucleosi infettiva (IM) La specificità di queste reazioni eterofile per IM è stata studiata determinando gli anticorpi contro gli antigeni determinati dal virus di Epstein-Barr, cioè contro gli antigeni del capside virale (VCA), antigeni nucleari (EA) e antigeni nucleari associati a EBV (EBNA) Sulla base di anti-EA rilevabili e/o dell'assenza precoce e dell'emergenza tardiva di anti-EBNA, quattro di questi 14 individui hanno mostrato evidenza di una corrente o molto recente infezione primaria da virus Epstein-Barr. Gli altri dieci pazienti hanno mostrato modelli anticorpali indicativi di infezioni da virus Epstein-Barr in passato e non è stato possibile trarre conclusioni definitive in merito alla specificità delle loro reazioni eterofile. ummato, tuttavia, che alcuni rappresentavano forme cliniche atipiche di infezione da EBV e che la tempistica della raccolta dei campioni era un fattore nello spiegare la scarsità di cellule di Downey. In tre pazienti, le reazioni eterofile positive assorbite sono persistite con un piccolo cambiamento nel titolo per almeno 22 mesi e quindi potrebbero rappresentare test falsi positivi.
Profili per pH, temperatura e livelli di O2 disciolto nella produzione di enzimi: monitoraggio in fermentatori su piccola scala.I profili così stabiliti possono essere utilizzati per indagini sulla relazione di un organismo con il suo microambiente, compresi gli spostamenti e le vie metaboliche. Le aree di massima attività respiratoria, produzione di enzimi, degradazione enzimatica e raggiungimento della fase stazionaria sono abbastanza evidenti; tuttavia, la durata e l'entità dei vari fenomeni possono cambiare con nutrienti, temperatura ed efficienza di aerazione. L'applicazione pratica di questo metodo semplificato includerebbe: a) determinazione delle condizioni ambientali esistenti durante la massima crescita o sintesi enzimatica e applicazione di queste condizioni al controllo del feedback; b) stima dei requisiti di pH, ossigeno e capacità di rimozione del calore necessarie per lo scale-up; c) punti specifici durante la fermentazione in cui i campioni dovrebbero essere analizzati per ottenere la massima informazione sull'esaurimento dei nutrienti e dei suoi effetti sull'attività microbica.
Alcune proprietà di una proteasi (subtilisina BPN\') immobilizzata su vetro poroso.La subtilisina BPN\' è stata immobilizzata su vetro poroso tramite accoppiamento con isotiocianato. Il pH ottimale dell'enzima è stato spostato sul lato alcalino al momento del legame. Questo effetto è stato più pronunciato con l'etil lattato che con l'estere metilico di N-tosil arginina (TAME). Presumibilmente, lo spostamento è un riflesso della carica negativa sulla superficie di il vetro. La costante di Michaelis e il Vmax della subtilisina solubile BPN\' con TAME erano rispettivamente di due e uno ordini di grandezza inferiori rispetto al lattato di etile. Vmax, calcolato per g di enzima attivo, con TAME poiché il substrato non era influenzato da immobilizzazione, mentre Vmax con etil lattato è diminuito più di dieci volte. Il KM apparente è diminuito con l'immobilizzazione con etil lattato come substrato e aumentato con TAME. I risultati sono spiegati in termini di resistenza alla diffusione e una possibile attrazione di etil lattato al vetro superficie. La titolazione del sito attivo indicava che circa il 25% dell'enzima immobilizzato era attivo.
Ipotesi sul ruolo degli stati legati delle proteine nei sistemi di trasduzione di energia.Nei sistemi di trasduzione di energia si propone di mantenere la direzione del trasferimento di energia da i turni sincronizzati del cambiamento conformazionale di una proteina che si accoppia per influenzarne un'altra. La catalisi da parte di tali sistemi implica, quindi, che in presenza di nuove restrizioni di spazio i gruppi dell'enzima trasduttore aumentino e diminuiscano la reattività tra loro, con ligandi attivatori e/o inibitori ( H+, H2O, metalli, ecc. ) e con i gusci elettronici delle molecole reagenti. Il turnover esoergonico reazione-dipendente delle forme dell'enzima all'interno dei complessi di transizione verrebbe mantenuto, quindi, sotto angoli di fase asimmetrici di reattività conformazionale-dipendente che limiterebbe efficacemente la reversibilità microscopica dei sistemi trasduttori. Alcune reazioni ben note, come l'effetto Bohr delle emoglobine, possono essere utilizzate per illustrare che il microscopio Le interazioni ic (molecolari) soggette a leggi di equilibri termodinamici possono similmente partecipare come forze motrici nei sistemi di trasduzione dell'energia. Ciò consentirebbe la descrizione termodinamica del ruolo della traslocazione protonica come forza modificativa dei parametri strutturali delle proteine. Allo stesso modo, la relazione tra gli stati legati dell'emoglobina e il suo cambiamento di conformazione è stata utilizzata per sviluppare un modello illustrativo che collega i cambiamenti nella ossidoriduzione dei portatori di elettroni agli effetti di adattamento indotto che portano a una sequenza di forme di ATPasi in complessi di transizione che si stabilizzano come intermedi ad alta energia sotto i vincoli imposti dalla membrana degli organelli trasduttori di energia.