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Valutazione della simpatectomia permanente prodotta dalla somministrazione di guanetidina a ratti adulti.La somministrazione di guanetidina a ratti adulti è stata dimostrata mediante criteri morfologici per distruggere i neuroni simpatici. L'obiettivo di questo studio era valutare con criteri biochimici e funzionali il grado e la permanenza di questa simpatectomia. Ratti maschi giovani adulti (260-300 g) sono stati iniettati con soluzione salina (controlli) o con guanetidina per 5 settimane. lo stato del sistema nervoso simpatico negli animali è stato valutato 1, 3 e 6-7 mesi dopo l'interruzione del trattamento. Sette mesi dopo l'interruzione del trattamento, l'attività della tirosina idrossilasi nei gangli cervicali superiori degli animali trattati è stata notevolmente ridotta, così come lo erano i livelli di noradrenalina nei tessuti periferici La concentrazione di epinefrina e l'attività della tirosina idrossilasi nelle ghiandole surrenali non erano differenti dai controlli in nessuno dei tempi studiati. le concentrazioni in diverse aree del sistema nervoso centrale sono rimaste invariate. Gli aumenti della pressione sanguigna in risposta alla stimolazione del deflusso vasomotorio simpatico nella preparazione di ratto snocciolato sono stati notevolmente e permanentemente ridotti negli animali trattati con guanetidina. Preparazioni isolate di muscoli nervosi intestinali da animali trattati con guanetidina di solito si contraevano in risposta alla stimolazione nervosa, piuttosto che rilassarsi come nei controlli. La risposta alla stimolazione del nervo ipogastrico nelle preparazioni del dotto deferente è stata ridotta 1 mese dopo l'interruzione del trattamento. Le risposte dei vasi deferenti degli animali trattati con guanetidina e di controllo erano le stesse 7 mesi dopo il trattamento nonostante una riduzione del 93% della concentrazione di noradrenalina. I dati dimostrano che la somministrazione di guanetidina a ratti adulti produce una distruzione marcata e permanente del sistema nervoso simpatico periferico.
Effetti cardiovascolari simpatici dell'avvelenamento da stricnina sperimentale nei cani.Gli effetti cardiovascolari della stricnina somministrata per via endovenosa sono stati studiati in cani anestetizzati e paralizzati. La somministrazione di stricnina in dosi cumulative fino a 0,1-0,2 mg/kg hanno causato effetti pressori significativi, nonché effetti inotropi e cronotropi positivi sul cuore che sono stati aboliti dagli agenti bloccanti adrenergici. Le risposte cardiovascolari possibilmente sono state suscitate da un meccanismo centrale in contrasto con quello periferico azione inibitoria della stricnina sul sistema simpatico. Il diazepam ha causato una marcata attenuazione della risposta pressoria con solo lievi cambiamenti sul cuore. Una combinazione di diazepam e propranololo sembrerebbe essere una terapia utile nei casi di avvelenamento da stricnina che mostrano una marcata eccitazione cardiovascolare.
secrezione di procainamide nella saliva dipendente dal pH.La relazione tra le concentrazioni sieriche e stimolate di procainamide nella saliva è stata determinata in 12 pazienti trattati cronicamente. I campioni sono stati prelevati in momenti scelti per approssimare le concentrazioni sieriche massime e minime del farmaco durante un intervallo di somministrazione. È stata riscontrata una marcata variabilità interindividuale nel rapporto tra saliva e concentrazione sierica del farmaco (0,27-8,93). Non c'era correlazione tra la dose (milligrammi per chilogrammo al giorno) e la concentrazione minima sierica o salivare di procainamide. Il pH della saliva variava da 6,3 a 8,0 in otto soggetti. Il rapporto tra saliva e concentrazione sierica di procainamide aumentava con la diminuzione del pH. Questo risultato può essere ampiamente spiegato da la ionizzazione e la distribuzione dipendenti dal pH della procainamide, una base debole.
Decorso nel tempo e dose-dipendenza dell'effetto antiacido sul pH delle urine.Somministrazione giornaliera di una sospensione brevettata di idrossidi di magnesio e alluminio, 15 ml quattro volte al giorno , a volontari adulti normali ha determinato un aumento statisticamente significativo del pH delle urine il 1° giorno di trattamento. Il pH\' delle urine nel 2° e nei giorni successivi di trattamento era statisticamente significativamente più alto rispetto al 1° giorno. Una dose di 7,5 ml di la sospensione di antiacidi, assunta quattro volte al giorno, ha avuto solo un piccolo e non statisticamente significativo effetto sul pH delle urine, mentre 30 ml quattro volte al giorno hanno aumentato il pH delle urine approssimativamente della stessa grandezza delle dosi da 15 ml. sul pH delle urine è rimasto per almeno 1 giorno dopo l'interruzione della somministrazione.
Nuova e opportuna determinazione dell'atenololo in campioni biologici.Viene descritto un metodo per la determinazione GLC della PA dell'atenololo nel plasma e nelle urine. L'estrazione è compiuta in condizioni di disidratazione e le impurità interferenti vengono rimosse utilizzando una miscela di cicloesano-isopropanolo acidificato (2:1) e dischi di carta trattati con carbone. Il farmaco così isolato sembra reagire in modo più efficiente con l'anidride eptafluorobutirrica, aumentando la sensibilità della cattura elettronica GLC analisi. Concentrazioni fino a 0,02 mug/ml sono state misurate utilizzando aliquote di 0,5 ml di plasma o 0,1 ml di urina. Gli amminoalcoli come l'atenololo possono formare idrati o alcolati, precludendo la completa derivatizzazione con anidride eptafluorobutirrica.
Pompa osmotica elementare.La pompa osmotica elementare è un nuovo sistema di somministrazione di farmaci o altri agenti attivi; eroga l'agente tramite un processo osmotico a una velocità controllata Il controllo risiede nelle: (a) caratteristiche di permeazione dell'acqua di una membrana semipermeabile che circonda l'agente formulato e (b) proprietà osmotiche della formulazione. Nella sua forma di realizzazione più semplice, il sistema è costruito rivestendo un agente solido osmoticamente attivo con la membrana semipermeabile a controllo della velocità. Questa membrana contiene un orifizio di dimensioni critiche attraverso il quale viene erogato l'agente solubilizzato. Il sistema può contenere l'agente in forma solida a un carico superiore al 90% del volume totale e l'agente può essere erogato a velocità di diversi ordini di grandezza superiori a quelle che possono essere raggiunte dalla diffusione della soluzione attraverso membrane polimeriche. La velocità di consegna, la frazione del contenuto totale consegnato all'ordine zero e le dimensioni del portale di consegna del sistema hanno bee n calcolato per la consegna di un singolo composto. Il lavoro sperimentale ha verificato la teoria. La velocità di rilascio dal sistema è risultata indipendente dall'agitazione esterna quando il sistema non viene deformato dall'azione di scuotimento, dal pH dell'ambiente e dalle dimensioni del portale di erogazione per dimensioni entro un intervallo specificato. Il tasso di consegna da questo sistema in vitro e nel tratto gastrointestinale dei cani è risultato essere uguale.
Cinetica e meccanismi di azione dei farmaci sui microrganismi XXII: Effetti dell'aminosidina con e senza pretrattamento dell'organismo con agenti batteriostatici.Generazione di Escherichia coli nella crescita logaritmica fase è stata inibita nel brodo peptone USP a pH 7,0 senza uccisione al di sotto di 3,0 mug/ml di aminosidina. Al di sopra di questo valore, i logaritmi del numero di vitali della coltura trattata con il farmaco alla fine diminuivano linearmente nel tempo e le pendenze di questi grafici erano indipendenti di concentrazione. È stato osservato un ritardo concentrazione-dipendente nel tempo di raggiungimento dell'azione cicida, e l'entità di questo ritardo era correlata alla facilità di emergenza di organismi resistenti. La concentrazione minima per l'azione cicida aumentava con l'aumentare delle concentrazioni di nutrienti e con pH decrescente Il pretrattamento delle colture con novobiocina e tetraciclina ha diminuito la concentrazione battericida minima di aminosidina mentre il pretrattamento con cloramfenicolo aumenta modificare. Il pretrattamento con tetraciclina ha inibito la comparsa di organismi resistenti all'aminosidina.
Determinazione di basse concentrazioni del composto di ammonio quaternario tiazinamio metilsolfato nel plasma e nelle urine.Metodo sensibile e selettivo per la determinazione quantitativa dell'ammonio quaternario viene descritto un composto antiacetilcolina tiazinamio metilsolfato (Multergan) nel plasma e nelle urine. La procedura si basa sull'estrazione di coppie di ioni del composto con ioduro come controione. Questa è seguita da una gascromatografia utilizzando un rivelatore a ionizzazione di fiamma alcalino. Il limite di rilevazione è 2 ng ml-1 con un recupero di 88-0 +/- 6-2% dal plasma, 91-4 +/- 4-6% dall'urina. Il metodo descritto può essere applicato anche ad altri composti di ammonio quaternario.
Metabolismo del delta1-tetraidrocannabinolo da parte del polmone di cane perfuso isolato. Confronto con il metabolismo epatico in vitro.Il metabolismo del (-)-delta1-tetraidrocannabinolo (delta1-THC) è stato studiato nel polmone di cane perfuso isolato. Dopo somministrazione intravascolare di [3H]-delta1-THC si è verificata una biotrasformazione complessiva del 12%. Due metaboliti principali sono stati isolati e identificati come 3\'-idrossi-delta1 -THC e 4\'-idrossi-delta1-THC. Il 7-idrossi-delta1-THC era presente anche insieme a piccole quantità di 6alfa-idrossi-delta1-THC e 6beta-idrossi-delta1-THC. Un esperimento in vitro utilizzando un è stata anche effettuata la preparazione di microsomi di fegato di cane e ha mostrato che i principali metaboliti erano 6beta-idrossi-delta1-THC e 6alfa-idrossi-delta1-THC. Anche 7-idrossi-delta1-THC e 1,2-epossi-esaidrocannabinolo sono stati isolati insieme con piccole quantità di 3\'-idrossi-delta1-THC e 4\'-idrossi-delta1-THC. I composti idrossilati a catena laterale sono metaboliti finora non descritti di delta1-THC.
L'effetto del pancuronio sulla contrazione miocardica e sul metabolismo delle catecolamine.Gli effetti dell'infusione di pancuronio bromuro sull'assorbimento e sul rilascio di [14C] noradrenalina (14C) -NA) dal cuore di ratto isolato e perfuso e sull'attività cronotropa e inotropa del cuore isolato sono stati valutati I cuori sono stati rimossi dagli animali sotto leggera anestesia con etere, trasferiti in un apparato perfusore di Langendorff modificato e perfusi con soluzione di bicarbonato di Krebs-Ringer a una velocità di 5 ml min 1. L'effetto del pancuronio sull'assorbimento della noradrenalina è stato determinato perfondendo i cuori per 5 minuti con perfusato contenente varie concentrazioni di pancuronio e 200 ng ml-1 di 14C-NA. Dopo 5 minuti trattati con pancuronio cuori contenevano meno 14C-NA. Il grado di assorbimento ridotto aumentava con l'aumentare delle concentrazioni di pancuronio. Inoltre, la combinazione di perfusione di pancuronio e stimolazione elettrica (15 mA per 10 ms a 4 Hz) bloccava la Assunzione di 50 minuti di 14C-NA da parte del cuore in misura maggiore rispetto a entrambi i fattori separatamente. Il rilascio di noradrenalina è stato determinato dopo aver perfuso i cuori con 14C-NA seguito da perfusione con una soluzione contenente pancuronio ma senza 14C-NA per 1 h. L'infusione di pancuronio non ha alterato significativamente il rilascio di 14C-NA dal cuore dopo 1 ora di perfusione. L'infusione di pancuronio ha causato una riduzione sia della velocità che della forza della contrazione miocardica del cuore isolato che è stata invertita mediante perfusione con perfusato privo di pancuronio. Dopo la perfusione con pancurnio, la velocità e la forza di contrazione del cuore sono state osservate "rimbalzare" al di sopra dei valori pre-pancuronio per un breve periodo.
Interazione fenilbutazone-warfarin nel cane.La somministrazione di fenilbutazone insieme a warfarin ai cani ha determinato un aumento della frazione libera di warfarin nel plasma dal 2-6 all'8-0% fornendo così un supporto diretto alla nozione che il fenilbutazone induce l'inibizione del legame del warfarin alle proteine plasmatiche. Questa inibizione, valutata con un metodo cinetico, è stata accompagnata da una diminuzione di due volte dell'emivita plasmatica di warfarin da 18-4 ore negli animali di controllo a 9-6 ore negli animali trattati con fenilbutazone Sono stati osservati aumenti marcati dell'ipoprotrombinemia indotta da warfarin quando a dosi fino a 8 mg kg-1 (per via orale) è stato somministrato con fenilbutazone (50 mg kg-1, per via orale). La frazione non legata di warfarin nel plasma canino variava da 1-7 a 4-3% indicando differenze individuali nell'entità del legame plasmatico di warfarin nel cane.
Tachifilassi anfetaminica nella cavia snocciolata.Una singola dose di (+)-anfetamina (8 mg kg-1, ip) somministrata 4 h prima della sperimentazione, riduceva gli effetti pressori e cronotropi positivi suscitati da questo farmaco (0-6 mg kg-1, iv) e aumentava la velocità di sviluppo della tachifilassi a queste risposte nella preparazione di cavia snocciolata. pressore e gli effetti cronotropi positivi della fenilefrina (0-1 mg kg-1, iv) e gli effetti cronotropi positivi dell'angiotensina (30 mug kg-1, iv) Il tasso di sviluppo della tachifilassi alle risposte cardiovascolari suscitate dalla fenilefrina e l'angiotensina è stata aumentata dal pretrattamento con anfetamine. I risultati suggeriscono che un meccanismo indiretto (noradrenalina) può in parte mediare gli effetti cardiovascolari di questi 3 farmaci e/o che l'anfetamina può agire come antagonista competitivo nei siti adrenergici.
L'effetto della miscelazione sulle proprietà reologiche delle soluzioni e dei gel di gelatina.L'effetto della miscelazione sulle proprietà reologiche per una gelatina trattata acida e alcalina ha La miscelazione di gel deboli (1-0-3-5% p/v a 25 gradi), ha comportato una diminuzione della rigidità del gel mentre nei gel più forti (5-50% p/v a 25 gradi) e soluzioni (18% e 30% p/v a 35 gradi), si è verificato un aumento. La diminuzione della struttura nei gel deboli è considerata dovuta agli effetti coulombiani, resistenza minima che si verifica per una miscela che possedeva carica zero in soluzione. viene offerta una spiegazione degli effetti nei gel rigidi e nelle soluzioni concentrate.
Effetto dei monomeri tensioattivi sull'associazione del cloramfenicolo a un complesso albumina-lecitina: un modello per l'assorbimento modificato del farmaco.Il legame del cloramfenicolo con un albumina- È stato esaminato il complesso di lecitina in presenza o assenza di concentrazioni premicellari di tensioattivi ionici e non ionici Detergenti ionici forti a catena lunga, come sodio dodecil solfato o cetiltrimetilammonio bromuro, perturbano gravemente la struttura proteica e alla fine consentono la completa separazione del complesso in complessi lecitina e albumina-detergente. Il processo di dissociazione è reversibile previa rimozione del detergente mediante dialisi esaustiva. Dopo la scissione del complesso, la quantità di antibiotico associata alla miscela lipide-proteina aumenta. Alterazioni strutturali dell'albumina-lecitina complesso e l'aumento del legame del cloramfenicolo hanno un effetto sulla velocità di trasferimento di questo antibiotico attraverso una barriera artificiale costituita da un dispersione acquosa dello stesso complesso, come osservato in un sistema modello. Si suggerisce che un'alterazione reversibile nella struttura della membrana, e conseguentemente nella permeabilità della membrana, possa essere facilmente effettuata, a livello molecolare, attraverso una dissociazione reversibile delle lipoproteine strutturali nei loro componenti, operata da concentrazioni premicellari di tensioattivi ionici. Questo rappresenta un quadro provvisorio dei possibili eventi che si verificano all'interno della membrana e modificano la velocità di assorbimento di un farmaco, quando è associato a tensioattivi in una preparazione farmaceutica.
L'interazione di antistaminici con monostrati di lecitina.È stata esaminata l'interazione di una serie di antistaminici con monostrati di L-alfa-dipalmitoil lecitina. Un è stato osservato un aumento della pressione superficiale del monostrato per i monostrati sparsi sulle soluzioni di antistaminici, suggerendo la penetrazione del film da parte delle molecole di farmaco. A pressioni superficiali elevate c'era un'apparente espulsione di molecole di farmaco dal film. La capacità degli antistaminici di aumentare la pressione superficiale è stato correlato con la loro attività superficiale all'interfaccia aria-soluzione. L'effetto della concentrazione del farmaco sull'entità della pressione superficiale è stato esaminato per la difenidramina cloridrato. L'applicazione dell'equazione di adsorbimento di Gibbs a basse compressioni superficiali ha indicato un'area approssimativa per molecola per la difenidramina in il film che era in buon accordo con il valore precedentemente ottenuto all'interfaccia aria-soluzione. Misurazioni preliminari hanno mostrato che t l'aumento della pressione superficiale era maggiore in presenza di tampone fosfato a pH 6-8. Non era chiaro se questo effetto fosse causato dai componenti del tampone o fosse un effetto del pH.
Il significato della cellula di Leydig in relazione all'eziologia del criptorchidismo: uno studio sperimentale al microscopio elettronico.Nei nostri studi al microscopio elettronico dei testicoli biopsie, sia normali che criptorchidi, abbiamo trovato una semplice atrofia della cellula di Leydig nel testicolo criptorchide Basandosi su esperimenti di Raynaud1,2 e Jean3 su topi gravidi, abbiamo cercato di trovare la ragione dei cambiamenti nella cellula di Leydig relativi all'eziologia di criptorchidismo. Abbiamo trovato su uno studio al microscopio elettronico dei testicoli nella prole di topi gravidi trattati con estrogeni la stessa atrofia della cellula di Leydig come vediamo nel criptorchidismo umano. Questi cambiamenti non sono evidenti quando estrogeni e HCG sono dati insieme. Possiamo concludere da questo esperimento che la mancanza di stimolazione delle gonadotropine porta all'atrofia delle cellule di Leydig. Questa atrofia produce quindi una mancanza di androgeni che potrebbe essere responsabile del criptorchidismo.
Attività tiamina trifosfatasi della miosina ed effetto accelerante della tiamina di- e tri-fosfati sulla superprecipitazione dell'actomiosina.Superprecipitazione dell'actomiosina indotta dall'ATP accelerata da TTP in una concentrazione più bassa di 30 muM e diminuzione della diffusione della luce da parte dell'actomiosina. Questi effetti potrebbero anche essere osservati allo stesso modo, ma in misura minore, in aggiunta a TDP. La miosina è stata in grado di idrolizzare TTP a TDP, ma alcune importanti differenze sono stati confermati tra miosina TTPasi e ATPasi. La miosina TTPasi è stata inibita dall'actina e ha mostrato un Km molto più grande di quello dell'ATPasi. TTP ha inibito significativamente l'ATPasi della miosina B e l'ATP ha inibito notevolmente la miosina B TTPasi. Questi risultati suggeriscono che l'effetto accelerante di TDP e TTP può essere dovuto al legame del fosfato di tiamina al sito di regolazione della miosina seguito da un cambiamento nella sua proprietà chimico fisica, piuttosto che al legame competitivo del fosfato di tiamina al cataliticamente sito di attività della miosina.
Studi sull'effetto del colesterolo alimentare sulla sintesi proteica epatica, sulla riduzione dei livelli di glutatione e sull'attività della serina deidratasi nel ratto.Una dieta di base o una dieta più 1% di colesterolo e acido colico 0,33% è stata somministrata ai ratti per periodi di tempo variabili e (1) le attività di fosfoenolpiruvato-carbossichinasi (PEP-CK), tirosina transaminasi (TT) e serina deidratasi (SD); (2) il tasso di sintesi proteica epatica totale e (3) la concentrazione di glutatione ridotto epatico (GSH) sono stati quantificati. L'attività specifica di PEP-CK è stata significativamente ridotta dall'assunzione di colesterolo più acido colico, mentre l'attività specifica di TT è stata invariato. Non è stato riscontrato alcun effetto significativo del colesterolo alimentare più acido colico sulle attività epatiche totali. Al contrario, l'attività specifica SD è stata aumentata di 3 volte. Il tasso di incorporazione di (U-14C)-L-leucina nella proteina precipitabile totale del TCA in seguito a l'ingestione di colesterolo più acido era significativamente ridotto quando i dati sono stati espressi come dpm (U-14C)-L-leucina/mg proteina. Dopo aver corretto questa espressione per la radioattività specifica del pool di leucina libera dal tessuto epatico, non esisteva alcun effetto significativo del colesterolo alimentare più l'acido colico sulla sintesi proteica epatica. Infatti, la quantità di leucina 14C incorporata nelle proteine su base epatica totale era del 50% maggiore per il gruppo colesterolo. Su una base per grammo di fegato, la concentrazione di GSH nel fegato di ratti alimentati con una dieta a base di colesterolo più acido colico era significativamente ridotta. Considerando l'ingrossamento del fegato nei ratti alimentati con colesterolo più acido colico, il GSH totale degli organi è risultato significativamente maggiore rispetto ai ratti alimentati con una dieta di base.
Cambiamenti dinamici nel CBF regionale, pressione intraventricolare, pH del liquido cerebrospinale e livelli di lattato durante la fase acuta del trauma cranico.Gli autori hanno misurato il 133xeno cerebrale regionale ( 133Xe) flusso sanguigno (rCBF), pressione intraventricolare (IVP), pH e lattato del liquido cerebrospinale (CSF), pressione arteriosa sistemica (SAP) e gas del sangue arterioso durante la fase acuta in 23 pazienti in coma con gravi lesioni alla testa. è stato mantenuto al di sotto di 45 mm Hg. Il rCBF è stato misurato ripetutamente ed è stata testata la risposta all'ipertensione e all'iperventilazione indotte. La maggior parte dei pazienti aveva un rCBF ridotto. Non è stata trovata alcuna correlazione tra CBF medio e condizione clinica, e né l'ischemia globale né regionale ha contribuito in modo significativo a la ridotta funzione cerebrale. Non è stata trovata alcuna correlazione tra CBF e IVP o CBF e pressione di perfusione cerebrale (CPP). Il lattato nel liquido cerebrospinale era significativamente elevato nei pazienti con lesioni del tronco cerebrale, ma non nei pazienti con cort "puro" lesione ica. Le curve di clearance 133Xe da aree di gravi lesioni corticali avevano componenti iniziali molto veloci chiamati picchi tissutali. Le aree dei picchi tissutali erano correlate con le aree delle prime vene negli angiogrammi, indicando uno stato di relativa iperemia, indicato come iperemia dei picchi tissutali. L'iperemia del picco tissutale è stata riscontrata in tutti i pazienti con lacerazione corticale o grave contusione, ma non in pazienti con lesioni del tronco cerebrale senza tali lesioni corticali. I picchi aumentavano di numero durante il deterioramento clinico e scomparivano durante il miglioramento. Potrebbero essere provocati dall'ipertensione indotta e scomparire durante l'iperventilazione. I cambiamenti nelle aree dei picchi tissutali sembravano essere correlati al decorso clinico della lesione corticale.
Un modello per sostituire gli ospedali psichiatrici.Un sistema completo di trattamento comunitario nel sud-ovest di Denver ha ridotto la necessità di posti letto per pazienti psichiatrici per adulti a meno di 1 /100.000 abitanti. Sei piccoli ambienti terapeutici basati sulla comunità, intervento di crisi, trattamento domiciliare, intervento sui sistemi sociali e rapida tranquillizzazione comprendono i componenti essenziali di questo sistema di assistenza comunitaria totale. Il sistema opera in un quadro di partecipazione dei cittadini e controllo della comunità, l'eliminazione degli uffici formali del personale e l'attenzione al lavoro nell'ambiente di vita reale del cliente e della sua famiglia. Per valutare l'efficacia dell'assistenza comunitaria, i pazienti in procinto di essere ricoverati sono stati assegnati in modo casuale a un ospedale psichiatrico o a un trattamento alternativo comunitario Le misure di esito alla dimissione e al follow-up completate dal cliente stesso, dal personale di trattamento e dai familiari indicano che il trattamento di comunità è stato più efficace rispetto al ricovero psichiatrico.
Interruzione del batteriofago Vi III e localizzazione della sua attività deacetilasica.È stato dimostrato che le particelle del batteriofago Vi III catalizzano la deacetilazione dell'O-acetil pectico acido (poligalatturonico), un analogo strutturale del polisaccaride Vi (antigene Vi). Utilizzando questo substrato e determinando l'acido acetico liberato mediante cromatografia gas-liquido, è stato sviluppato un metodo per la stima dell'attività della deacetilasi del fago Vi. Particelle purificate di Vi fago III sono stati esposti a una varietà di reagenti e condizioni leggermente dissociativi e quindi testati per la formazione di placca e per l'attività deacetilasi sono stati anche ispezionati al microscopio elettronico Shock osmotico e incubazione in presenza di acido etilendiamminotetraacetico (maggiore than o equil 0-01 M), o di L-arginina (0-25 M), sono stati trovati per causare la disintegrazione dei virioni in capsidi a testa vuota, acido desossiribonucleico e piastre di base che ancora portano le punte. es di frammenti virali hanno mostrato un'attività di deacetilasi aumentata. Mediante sedimentazione zonale e cromatografia a scambio ionico, i frammenti fagici ottenuti per trattamento con acido etilendiamminotetraacetico sono stati frazionati e le piastre di base isolate. Tra i componenti virali, queste strutture hanno mostrato la più alta attività di deacetilasi specifica. Avevano la forma di stelle a sei punte (circa 9-5 nm interna, e 14-5 nm esterna diam. ) con un foro centrale o tappo (circa 3 nm), recanti sei spighe, organelli grossolanamente cilindrici di ca. 11 X 4 nm, uno in ciascuno dei punti. Dei polipeptidi di sei dimensioni (P.1, circa 153.000 dalton; P.2, 91.000; P.3, 71.000; P.4 56.500; P.6, 22.000), rilevati in virioni interi del fago III di Vi dal sodio dodecilsolfato -elettroforesi su gel di poliacrilammide, solo due, P.2 e P.3 sono stati trovati nelle piastre di base.
Trasmissione di virus delle piante da afidi indotta da poliamminoacido.Virus del mosaico del tabacco (TMV) trattato con poli-L-ornitina (OLP) trasmesso da afidi quando somministrato periodi di acquisizione e di accesso all'inoculazione di appena 30 s e 2 min, rispettivamente; la capacità di trasmissione è stata persa entro 90 min. Gli afidi senza artigli sono stati in grado di trasmettere il virus. La trasmissione sembra quindi simile a quella dei virus non persistenti. Il rapporto del virus al poliamminoacido, così come la concentrazione di KCl, hanno notevolmente influenzato la trasmissione. La trasmissione è stata migliore da miscele che contenevano 250 mug/ml TMV, 2-5 MUG/ML PLO (mol. wt. 120000) e 0-6 M-KCl. Una miscela simile ha favorito la trasmissione quando la poli-L-lisina (mol. 85000) è stata sostituita con PLO, ma con la poli-L-lisina (mol. 30 000) è stato necessario ridurre il KCl a 0-3 M per ottenere la trasmissione. Meno KCl (da 0-08 a 0-24 M) hanno anche favorito la trasmissione degli afidi del virus X della patata trattato con l'OLP e del virus del sonaglio del tabacco. ultracentrifugato in presenza di, e risospeso in, 0-6 M-KCl è rimasto trasmissibile agli afidi mentre il virus trattato con PLO in 2 M-DCl, che favorisce una maggiore dissociazione del complesso virus-OLP, non era trasmissibile né prima né dopo la sedimentazione mediante ultracentrifugazione , e risospensione in 0-6 M-KCl. questi risultati mostrano che la trasmissibilità non è dovuta ad un'alterazione permanente del virus da parte dell'OLP e indicano che per la trasmissione è necessaria la formazione di un complesso TMV-OLP. Esperimenti di acquisizione sequenziale suggeriscono che l'OLP può agire legando il TMV ai siti recettoriali negli afidi. Tuttavia, non è stata esclusa la possibilità che l'OLP influisca sul processo di infezione.
Trasporto di aminoacidi basici e neutri in Aspergillus nidulans.Il trasporto di arginina e metionina da parte del micelio di Aspergillus nidulans è stato studiato. Un singolo sistema di assorbimento è responsabile del trasporto di arginina, lisina e ornitina. Il trasporto è energia-dipendente e specifico per questi aminoacidi basici. Il valore Km per l'arginina è 1 X 10(-5) M e Vmax è 2-8 nmol/mg peso secco/min; Km per lisina è 8 X 10(-6) M; Kt per lisina come inibitore dell'assorbimento di arginina è 12 muM e Ki per ornitina è mM. Su un terreno minimo, la metionina viene trasportata con un Km di 0-I mM e Vmax circa I nmol/mg peso secco/min; il trasporto è inibito dall'azide Gli amnioacidi neutri come serina, fenilalanina e leucina sono probabilmente trasportati dallo stesso sistema, come indicato dalla loro inibizione della captazione della metionina e dall'esistenza di un mutante specificamente il loro trasporto Il mutante recessivo nap3, incapace di trasportare amminoacidi neutri, è stato isolato come resi stanti alla selenometionina e alla p-fluorofenilanina. Questo mutante ha un trasporto invariato di metionina da parte di permeasi regolate dallo zolfo generali e specifiche.
Produzione e purificazione della gamma emolisina di Staphylococcus aureus \'Smith 5R\'.Prodotta la gamma emolisina di Staphylococcus aureus \'Smith 5R\' su agar Dolman-Wilson ricoperto con cellophane Le rese massime di lisina grezza con titoli da 2000 a 4000 unità emolitiche/ml sono state ottenute entro 24 ore a 37 gradi C in 10% (v/v) CO2 in aria, su terreno aggiustato a pH 7-0. La lisina grezza è stata purificata 2700 volte (con recupero del 75%) mediante ultrafiltrazione, gel filtrazione e frazionamento con solfato di ammonio. L'attività specifica della lisina era di 10 (5) unità emolitiche/mg di proteina dopo che il precipitato attivo dializzato era estratto con NaCl e riprecipitato con solfato di ammonio. La gamma lisina purificata era omogenea mediante elettroforesi su disco e immunoelettroforesi.
Proprietà di alcune batteriocine prodotte da Rhizobium trifolii.Le batteriocine prodotte da sei ceppi di Rhizobium trifolii sono risultate essere di peso molecolare relativamente basso, non -tipo fagico I pesi molecolari variavano da circa 1-8 X 105 a 2-0 X 105. Tutti erano di composizione proteica, come indicato dalla densità di galleggiamento (da 1-32 a 1-34 g/cm3) in CsC1 e dalla sensibilità agli enzimi proteolitici. Erano resistenti alla RNAasi ma sensibili alla DNAasi. Le sei batteriocine potrebbero ulteriormente essere separate in due sottogruppi sulla base della sensibilità agli estremi del pH, del legame alle membrane filtranti, dello spettro di attività sui ceppi sensibili di R. trifolii e possibile meccanismo d'azione sui batteri sensibili. La produzione di batteriocina si è verificata spontaneamente durante la fase da prima a metà esponenziale della crescita batterica nella coltura in brodo.
Studi sul flagellato ruminale Neocallimastix frontalis.Il vasto aumento della densità di popolazione del flagellato ruminale Neocallimastix frontalis poco dopo che l'animale ospite ha iniziato a mangiare è causato dalla stimolazione di un corpo riproduttivo in una fase vegetativa dell'organismo per differenziare e liberare i flagellati. Lo stimolante è un componente della dieta dell'ospite. Lo stadio vegetativo di N. frontalis ha una forte somiglianza morfologica con quello di alcuni specie di funghi ficomiceti acquatici, e consiste in un corpo riproduttivo portato su un singolo rizoide molto ramificato. I flagellati liberati in vivo entro 15-45 min dall'alimentazione perdono la loro motilità entro 1 h e si sviluppano nella fase vegetativa, producendo così un rapido diminuzione della densità di popolazione dei flagellati Le condizioni per la massima produzione di flagellati sono simili a quelle che si verificano nel rumine: pH 6-5, 39 gradi C, assenza di O2, presenza di CO2. L'attività del corpo riproduttivo è inibita da composti che influenzano la struttura e la funzione della membrana, ma non dagli inibitori della sintesi proteica. L'organismo è stato coltivato in vitro in un terreno indefinito in assenza di batteri o altri flagellati.
Analisi di un mutante che utilizza L-istidinolo di Pseudomonas aeruginosa.L'analisi trasduzionale è stata applicata al mutante PAO14 di Pseudomonas aeruginosa (hnc-1). Questo mutante può utilizzare L-istidinolo come unica fonte di carbonio e azoto e ha un contenuto di istidinolo deidrogenasi (HDH) aumentato di 60 volte (Dhawale, Creaser \& Loper, 1972). L'analisi trasduttiva è stata effettuata utilizzando 18 mutanti che richiedono istidina per vedere dove mappa il locus hnc-1 in relazione ai geni strutturali della biosintesi dell'istidina Il marcatore hnc-1 cotrasdotto con i geni del gruppo IV dal 97 al 100% e per niente con il gruppo I, che è noto per essere il gene strutturale per HDH. I dati ottenuti negli studi di Km (istidinolo) e Km (NAD) e l'effetto del pH e della temperatura sull'attività dell'HDH da PAO1 e PAO14 sono in pieno accordo con i dati genetici che la mutazione hnc-1 non è nel gene strutturale per HDH. Si suggerisce che hnc-1 possa essere una mutazione in un regu gene che influenza la sintesi dell'HDH in PAO14 e può mappare vicino a his-IV la cui funzione nella biosintesi dell'istidina non è nota.
Transitori del pH intracellulare negli assoni giganti dei calamari causati da CO2, NH3 e inibitori metabolici.Il pH intracellulare (pHi) degli assoni giganti dei calamari è stato misurato utilizzando microelettrodi di vetro per pH. Il pHi a riposo in acqua di mare artificiale (ASW) (pH 7,6-7,8) a 23 gradi C era 7,32 +/- 0,02 (7,28 se corretto per il potenziale di giunzione liquida). L'esposizione dell'assone al 5% di CO2 a costante il pH esterno provocava una forte diminuzione del pHi, mentre la successiva rimozione del gas provocava il superamento del valore iniziale di pHi. Se l'esposizione alla CO2 era prolungata, si osservavano due ulteriori effetti: (a) durante l'esposizione, la rapida caduta iniziale di Il pHi è stato seguito da un lento aumento e (b) dopo l'esposizione, il superamento è stato notevolmente esagerato. L'applicazione di NH4Cl esterno ha causato un brusco aumento del pHi; il ritorno all'ASW normale ha causato il ritorno del pHi a un valore inferiore a quello iniziale. l'esposizione a NH4Cl è stata prolungata, sono stati osservati due effetti aggiuntivi: (a) durante l'esposizione, il il rapido aumento iniziale del pHi è stato seguito da una lenta caduta e (b) dopo l'esposizione, l'undershoot è stato notevolmente esagerato. L'esposizione a diversi inibitori metabolici acidi deboli ha causato una caduta del pHi la cui reversibilità dipendeva dalla durata dell'esposizione. L'inversione del gradiente elettrochimico per H+ con 100 mM K-ASW non ha avuto effetto sui cambiamenti di pHi derivanti dall'esposizione a breve termine all'azide. Un modello matematico spiega le variazioni di pHi causate da NH4Cl sulla base di movimenti passivi sia di NH3 che di NH4+. I movimenti passivi simultanei di CO2 e HCO3 non possono spiegare i risultati degli esperimenti sulla CO2; questi dati richiedono la postulazione di un meccanismo attivo di estrusione e/o sequestro di protoni.
Regolazione dell'acqua da parte di un presunto ormone contenuto nella cellula neurosecretoria identificata R15 di Aplysia.Prodotta l'iniezione di un omogenato del neurone identificato R15 nell'emocele di Aplysia un aumento di peso del 3-10% entro 90 min. Le iniezioni di controllo di molti altri neuroni identificati o di acqua di mare, sono state inefficaci. L'aumento di peso si è verificato anche quando gli animali sono stati mantenuti in acqua di mare iperosmotica al 5%. L'attività dell'omogenato R15 è stata mantenuta dopo acidificazione a pH 2 e riscaldamento a 100 gradi C; ma l'attività è stata distrutta dalla digestione proteolitica con Pronase. La dialisi in tubi di dialisi di cellulosa ha provocato una significativa perdita di aione su Sephadex G-50 (limiti di esclusione nominale 1.500-30.000 dalton), attività era presente nei volumi parzialmente inclusi, ma era assente nei volumi totalmente esclusi o totalmente inclusi I dati supportano l'idea che R15 contenga uno o più ormoni coinvolti nella regolazione ionica o nell'acqua bilancia. I risultati dei saggi biologici di estratti di R15 sottoposti a diversi trattamenti sono coerenti con l'ipotesi che l'attività sia dovuta a uno o più polipeptidi stabili di peso molecolare relativamente basso.
Sistemi di conduzione coloniali negli Antozoi: Octocorallia.1. Gli ottocoralli Alcyonium digitatum, Pennatula phosphorea e Virgularia mirabilis hanno ciascuno una rete nervosa passante La rete nervosa dimostrata elettrofisiologicamente potrebbe essere la stessa di quella mostrata in precedenza mediante l'uso di tecniche istologiche 2. Presenta sia facilitazione che defacilitazione nella velocità di conduzione degli impulsi 3. La distanza di diffusione dell'attività della rete nervosa non è limitato dal numero di stimoli applicati. 4. La rete nervosa controlla le contrazioni muscolari veloci; la frequenza degli impulsi è importante per determinare quali muscoli si contraggono e in quale sequenza. 5. La rete nervosa è \'spontaneamente\' attiva. 6. Un precedente un sistema lento non descritto è stato identificato in Pennatula. Ha molte delle proprietà dei sistemi lenti negli anemoni di mare e potrebbe essere ectodermico. Si suggerisce che più sistemi di conduzione siano frequenti nell'Anthozo un.
Macromolecole che legano i peptidi nel sangue di pazienti gravemente malati o con ritardo mentale.Questo rapporto descrive le macromolecole che legano (acido des-aspartico1)-angiotensina II, il derivato dell'acido desaspartico1 dell'angiotensina I e diversi analoghi biologicamente attivi e inattivi di questi polipeptidi. Le macromolecole sono state trovate nel plasma di circa il 2% degli adulti ambulatoriali e dei bambini ospedalizzati e del 32% dei pazienti in due istituti per i ritardati mentali. Le proprietà di legame di queste macromolecole sono state studiate incubando con peptidi marcati con 125 iodio e separando il peptide libero marcato utilizzando piccole colonne di gel filtrazione. Le macromolecole leganti il peptide di diversi pazienti sono state confrontate. Hanno mostrato specificità molto simili per un gruppo di peptidi arginilici della sequenza des-aspartil1-angiotensina I leganti plasmatici differivano tra loro per il loro pH ottimale e la loro mobilità ità nei campi elettroforetici. Quelli con pH ottimale più acido hanno mostrato una mobilità elettroforetica più rapida. I leganti si dividono in due classi in base al peso molecolare apparente, circa 140.000 e 250.000. Quelli con il peso molecolare apparente più elevato contenevano una grande proporzione di legante che poteva essere precipitato con l'antisiero alle IgA umane. Le misurazioni cinetiche hanno mostrato che i leganti del plasma erano alquanto eterogenei rispetto all'affinità per (des-asp1)-angiotensina, con costanti di associazione apparenti che vanno da 10(7) a 10(8) M-1. L'attività di legame era labile al calore e al trattamento con pepsina o tripsina. È stato inibito da calcio, protamina, streptomicina e alcuni altri composti cationici. Il legante del peptide plasmatico differiva per specificità e peso molecolare dalle molecole solubili che legano l'angiotensina estratte dai tessuti e dalle proprietà attese da un recettore per l'angiotensina. Queste macromolecole possono essere utili reagenti per misurare (des-asp1)-angiotensine. La loro presenza nei campioni di plasma può interferire con i test dell'angiotensina in alcune circostanze.
La trasmissione degli impulsi nel sistema ectodermico a lenta conduzione dell'anemone di mare Calliactis parasitica (Couch).1. La SS 1 si affatica in risposta a stimolazione elettrica ripetitiva. Questa fatica si manifesta con un aumento del ritardo di conduzione e una diminuzione dell'ampiezza dell'impulso SS 1. 2. La stimolazione ripetitiva continua porta al guasto del sistema. Il recupero può richiedere molti secondi. Le strisce strette della colonna si guastano più rapidamente delle strisce larghe 3. L'aumento del ritardo di conduzione è spiegato in termini di una diminuzione della popolazione di cellule spiking 4. Viene descritto e analizzato un modello computerizzato che suggerisce che la conduzione tra cellule ectodermiche accoppiate elettricamente potrebbe essere la base per la SS1. 1 può avere proprietà non ancora dimostrate sperimentalmente; ad esempio, in determinate condizioni potrebbe comportarsi come un sistema locale.
Effetto di PGA1, PGE2, diazossido sulla forza contrattile miocardica.Sono stati condotti esperimenti in cani anestetizzati confrontando gli effetti di PGA1, PGE2 e diazossido su forza contrattile miocardica (MC). I tre agenti sono stati somministrati in successive iniezioni in bolo per via endovenosa in dosi equidepressive e la forza contrattile miocardica è stata misurata mediante un arco estensimetrico suturato sul ventricolo destro. I farmaci sono stati somministrati prima e durante il ganglio (esametonio ) e beta-blocco (practolol). Sia PGA1 che PGE2 hanno causato un marcato aumento di MC, 24 e 20 percento, rispettivamente, prima del blocco e 10 e 11 percento durante il blocco. Il diazossido ha causato solo un aumento minimo, 0,9 percento , prima del blocco e una marcata diminuzione, 27 per cento, durante il blocco. La somministrazione di diazossido durante il bypass ventricolare sinistro indica che la diminuzione della MC non è un risultato diretto di alterazioni nel precarico o dopo il carico. Si suggerisce che il paziente iperteso ts trattati con agenti bloccanti autonomi possono essere più suscettibili allo scompenso cardiaco in risposta alla terapia con diazossido.
L'effetto del pH ambientale sul metabolismo dei glicosaminoglicani da parte di condrociti umani normali.La sintesi e il rilascio di glicosaminoglicani solfatati da parte dei condrociti umani normali in coltura sono notevolmente influenzati dal pH ambientale La velocità biosintetica aumenta di tre volte quando il pH del mezzo di crescita viene aumentato da 7,0 a 8,0. Ciò coincide con un corrispondente aumento della crescita totale delle proteine e delle cellule La velocità di rilascio dei glicosaminoglicani solfati di nuova sintesi dallo strato cellulare così come la loro distribuzione tra localizzazione intra ed extracellulare nello strato cellulare è modulata anche dal pH ambientale: a pH 8, il 35 per cento si trova all'interno delle cellule, questo valore si riduce al 13 per cento a pH 7. gli esperimenti hanno mostrato che i proteoglicani solfatati precedentemente incorporati venivano rilasciati a una velocità maggiore a pH 7 rispetto a pH 8. I dati suggeriscono che le concentrazioni di protoni influenzano la biosintesi e la modalità di distribuzione n di glicosaminoglicani solfati di nuova sintesi.
Radioassay per siero e acido folico.Viene descritto un dosaggio semplice e affidabile per siero e eritrociti. Utilizza liquido non trattato o in polvere latte, che non richiede trattamento o purificazione speciale, come legante. Tale latte consente di ignorare il legante sierico endogeno dei folati, poiché il latte grezzo (ma non purificato) contiene un fattore che rilascia folati dal legante sierico. Semplifica il conteggio della radioattività impiegando un gamma isotopo emettente dell'acido pteroilglutammico (PGA), vale a dire il 125I-tiramide del PGA. Come il saggio 3H-PGA di Givas e Gutcho, consente l'uso di standard PGA stabili anziché instabili di acido metiltetraidrofolico (MeTHFA), perché viene effettuato a pH 9,3, un pH al quale il legante del folato del latte non è in grado di distinguere il PGA dal MeTHFA, che è il folato predominante nei tessuti umani. L'attrezzatura necessaria per eseguire il radiodosaggio è presente nella maggior parte dei laboratori di chimica diagnostica. I risultati sono essenzialmente identici a t ha generalmente accettato il metodo microbiologico del dosaggio dei folati del Lactobacillus casel, tranne per il fatto che i risultati falsi bassi non vengono prodotti nel dosaggio radio da antibiotici, tranquillanti e agenti chemioterapici. Tre avvertimenti nel suo utilizzo sono la relativa instabilità del 125I-PGA rispetto al 3H-PGA, il fatto che vari latti in polvere differiscono ampiamente nella capacità di legare i folati e che solo il 60% circa delle preparazioni di latte scremato o in polvere ottenute in commercio appare contenere la sostanza che scinde il folato dal legante del siero.
La capsula polisaccaride di Bacteroides fragilis sottospecie fragilis: definizione immunochimica e morfologica.Un polisaccaride capsulare di grande peso molecolare è stato isolato da ceppi di Bacteroides fragilis sottospecie fragilis. Mediante microscopia elettronica e colorazione con rosso rutenio, è stata anche visualizzata la capsula spessa del polisaccaride Con l'uso di un saggio di legame dell'antigene radioattivo, è stato dimostrato l'anticorpo a questo polisaccaride capsulare in antisieri preparati nei conigli per ciascuno degli otto ceppi di B. fragilis fragilis Anticorpo di specificità simile non è stato trovato negli antisieri preparati per Bacteroides melaninogenicus o per ceppi di Bacteroides fragilis sottospecie vulgatus e Bacteroides fragilis sottospecie distasonis; tale anticorpo è stato trovato in antisieri a solo uno dei due ceppi di Bacteroides fragilis sottospecie thetaiotaomicron. Il saggio di legame dell'antigene radioattivo è un test sensibile per la rilevazione di anticorpi anti-capsulare polisaccaride. Questo antigene polisaccaridico può costituire la base di un sistema di sierogruppi per B. fragilis.
Inibizione dell'attività antibatterica della gentamicina da parte delle urine.I livelli urinari di antibiotici determinano l'esito del trattamento della maggior parte delle infezioni del tratto urinario. L'effetto antibatterico di è stata studiata la gentamicina contro Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa nelle urine. Utilizzando costituenti urinari in concentrazioni normalmente presenti nell'urina umana, è stato dimostrato che l'urina ha un effetto inibitorio che dipende dall'acidità e dall'osmolalità totale dell'urina, nonché in presenza di singoli soluti. Per prevenire la crescita di E. coli o P. aeruginosa nell'urina umana acida concentrata, può essere necessaria una quantità di gentamicina fino a 40 volte superiore a quella richiesta nel brodo. Questo effetto inibitorio può essere particolarmente importante quando si urina le concentrazioni di gentamicina sono ridotte a causa di una riduzione del dosaggio oa causa della ridotta escrezione dovuta all'insufficienza renale.
Alcune proprietà della proteolisi mediante estratti di granuli di leucociti polimorfonucleati.Gli estratti di granuli di leucociti polimorfonucleati umani hanno idrolizzato una varietà di proteine tra cui l'emoglobina umana e bovina , fibrinogeno umano, albumina sierica umana e bovina, elastina bovina e caseina L'idrolisi di tutte le proteine eccetto fibrinogeno ed elastina è stata aumentata dall'aggiunta di urea Vari inibitori di tripsina, callicreina, plasmina, Clr, Cls e altri enzimi proteolitici non ha avuto alcun effetto inibitorio. Leggera inibizione è stata osservata con polianetolo solfonato e forte inibizione con siero umano normale. Il siero di pazienti con edema angioneurotico ereditario senza inibitore della C1-esterasi è stato efficace nell'inibire la proteolisi quanto il siero normale. L'inibitore è stato localizzato in Frazioni 4S di siero normale frazionato su Sephadex G-200 Frazionamento di siero normale mediante precipitazione di solfato di ammonio, filtrazione di Sephadex G-200, un d La cromatografia CM-Sephadex non ha mostrato la comparsa di attività inibitoria in più di un picco proteico, suggerendo la possibilità che un solo inibitore possa essere responsabile. Poiché tutte le frazioni che contenevano l'inibitore della proteolisi contenevano anche alfa1-antitripsina, poiché i sieri di pazienti con bassi livelli di alfa1-antitripsina contenevano una minore attività inibitoria e poiché gli anticorpi contro l'alfa1-antitripsina hanno invertito l'inibizione ottenuta dal siero normale, l'inibizione della proteolisi può essere attribuito all'alfa1-antitripsina.
Difetti nella biochimica del collagene nelle malattie del tessuto connettivo.I collageni sono le principali glicoproteine strutturali dei tessuti connettivi. Una struttura primaria unica e un una molteplicità di reazioni di modificazione post-traduzionale sono necessarie per la normale fibrillogenesi. Le modificazioni post-traduzionali includono l'idrossilazione dei residui di prolile e lisile, la glicosilazione, il ripiegamento della molecola in una conformazione a tripla elica, la conversione proteolitica del precursore procollagene in collagene e la deaminazione ossidativa del alcuni residui lisilici e idrossilisilici. Qualsiasi difetto nei normali meccanismi responsabili della sintesi e secrezione di molecole di collagene o della deposizione di queste molecole nelle fibre extracellulari potrebbe provocare una fibrillogenesi anormale; tali difetti potrebbero provocare una malattia del tessuto connettivo. Recentemente, difetti di la regolazione dei tipi di collagene sintetizzati e degli enzimi coinvolti nella post-traduzione modificazioni finali sono state riscontrate in malattie ereditarie del tessuto connettivo. Finora, i principali disturbi ereditari del metabolismo del collagene nell'uomo includono il deficit di lisilidrossilasi nella sindrome di Ehlers-Danlos di tipo VI, il deficit di p-collagene peptidasi nella sindrome di Ehlers-Danlos di tipo VII, la ridotta sintesi del collagene di tipo III nella sindrome di Ehlers-Danlos di tipo IV , carenza di lisil ossidasi nella cutis laxa legata all'S e nella sindrome di Ehlers-Danlos di tipo V e ridotta sintesi del collagene di tipo I nell'osteogenesi imperfetta.
Idrocarburo aril idrossilasi epidermico di topo.La pelle di topo contiene un'aril idrocarburo idrossilasi (AHH) dipendente dal NADPH, che è inducibile da idrocarburi policiclici aromatici. In generale, gli idrocarburi policiclici non sostituiti causano una maggiore induzione di AHH epidermico rispetto a quello sostituito (1,2,3,4-dibenzantracene maggiore di 1,2,5,6-dibenzantracene maggiore di benz (a)antracene uguale 3-metilcolantrene maggiore di 7,12-dimethlbenz (a)antracene) che non era correlato con la loro capacità di avviare tumori nella pelle del topo. Sono state utilizzate due diverse tecniche per isolare l'epidermide e risultati simili sono stati ottenuti con entrambe. Tuttavia, la tecnica di isolamento dell'epidermide utilizzando un blando il trattamento termico richiedeva che la temperatura fosse mantenuta a 52 gradi C per 30 secondi. Se la temperatura veniva aumentata a 54 gradi C o più, si verificava una grande riduzione dell'attività dell'AHH. L'epidermide isolata ha da 4 a 5 volte l'attività dell'AHH come derma e circa t wice quello della pelle intera. Questo era vero per i topi di controllo o per i topi in cui l'AHH è stata indotta dal pretrattamento con benz(a)antracene.
Cinetica della risposta anticorpale al polisaccaride pneumococcico di tipo III. II. Fattori che influenzano i livelli di anticorpi sierici dopo l'immunizzazione con una dose di antigene ottimamente immunogenica.Quando il numero di PFC presenti nella milza è stato misurato a intervalli di 24 ore dopo l'immunizzazione con una dose immunogenica ottimale di polisaccaride pneumococcico di tipo III (SSS-III), il numero massimo di PFC è stato raggiunto 4 giorni dopo l'immunizzazione; successivamente, il numero di PFC Il PFC è diminuito rapidamente. Al contrario, i livelli di anticorpi sierici, che sono stati misurati negli stessi topi utilizzando un test di Farr, hanno raggiunto i valori massimi 5 giorni dopo l'immunizzazione e poi sono diminuiti molto più lentamente del numero di PFC. Due fattori sono stati trovati per contribuire a questa disparità. In primo luogo, gli esperimenti condotti con topi splenectomizzati hanno mostrato che la sintesi di anticorpi extrasplenici, che iniziava tra i giorni 3 e 4 dopo l'immunizzazione e raggiungeva il picco nei giorni 6-7, rappresentava quasi un terzo del totale quantità di anticorpi sierici prodotti. In secondo luogo, il tasso medio di sintesi anticorpale da parte del PFC è aumentato fino al giorno 6 dopo l'immunizzazione e poi è diminuito. I test di dissociazione antigene-anticorpo hanno mostrato che l'avidità dell'anticorpo sierico ottenuta da 4 a 7 giorni dopo l'immunizzazione era la stessa. Inoltre, nello stesso intervallo, tutti gli anticorpi rilevati dal test di Farr erano della classe IgM. Pertanto, un cambiamento nell'avidità o nella classe di immunoglobuline dopo il giorno 5 non ha tenuto conto della disparità osservata. Il tasso di clearance dell'anticorpo iniettato e. v. in topi non immuni e immunizzati è stato studiato. I dati ottenuti hanno indicato che la clearance accelerata dell'anticorpo si verificava prima del giorno 3 dopo l'immunizzazione; tuttavia, dopo il giorno 3 il tasso di clearance dell'anticorpo era costante ed era lo stesso di quello riscontrato quando l'anticorpo è stato iniettato in topi non immuni. Questi risultati hanno confermato i risultati di studi precedenti che mostravano che la neutralizzazione su tapis roulant non era importante nel determinare i livelli di anticorpi sierici presenti dopo l'immunizzazione con una dose immunogenica ottimale di SSS-III.
Cinetica della risposta anticorpale al polisaccaride pneumococcico di tipo III (SSS-III). I. Uso di SSS-III marcato con 125I per studiare i livelli di anticorpi sierici, nonché il distribuzione ed escrezione dell'antigene dopo l'immunizzazione.È stato descritto un metodo semplice per la preparazione di polisaccaride neumococcico di tipo III marcato con 125I (SSS-III) con un'elevata radioattività specifica che conservava le proprietà fisiche e immunologiche dei SSS-III. SSS-III è stato utilizzato per studiare i livelli sierici e tissutali dell'antigene, nonché la sua escrezione, dopo l'iniezione ip. Quando è stata somministrata una dose immunogenica ottimale (0,5 tazze) di antigene, superiore al 90% dell'iniettato l'antigene è stato escreto durante i primi 3 giorni dopo l'iniezione, tuttavia, dopo il giorno 3, l'SSS-III che è rimasto in ciascun topo è stato saldamente legato a vari tessuti e meno di 5 ng di SSS-III è stato rilasciato giornalmente nella circolazione. III è stato utilizzato anche in un test di Farr per misurare i livelli di anticorpi sierici; il ki netics per la comparsa di PFC/milza e livelli di anticorpi sierici sono stati misurati a intervalli di 24 ore dopo l'immunizzazione con 0,5 tazze di antigene. Il massimo di PFC/milza è stato osservato il giorno 4 dopo l'immunizzazione, mentre il livello di picco di anticorpi sierici è stato osservato il giorno 5. Il decadimento del livello di anticorpi sierici dal suo valore massimo è stato molto più lento di quello del PFC/milza. I dati che descrivono la distribuzione di SSS-III in vivo e la misurazione dei livelli di anticorpi sierici hanno indicato che la neutralizzazione del tapis roulant non era un fattore nel determinare i livelli di anticorpi sierici dopo l'immunizzazione con una dose immunogenica ottimale di SSS-III.
L'effetto della malattia neonatale del trapianto contro l'ospite di ratto (GVHD) sui linfociti del recettore Fc.Il livello dei linfociti che formano la rosetta del recettore Fc ( Fc-RFL) è stato esaminato in sospensione di cellule di milza e linfonodi di ratti neonatali DA e BN inoculati entro 24 ore dalla nascita con cellule linfoidi allogeniche L (sperimentali) o singeniche (di controllo). Inoltre, questi livelli sono stati confrontati con quelli fetali e animali neonati che non hanno ricevuto alcuna iniezione. Le cellule indicatrici (EA) erano eritrociti di pecora sensibilizzati con metà della concentrazione della più alta diluizione di IgG(A) eritrocitaria di pecora anti-pecore che agglutinava una quantità uguale di sospensione all'1% di E. preso per escludere macrofagi punteggio iniettando carbonio colloidale almeno 1 ora prima di uccidere gli animali di prova La milza di ratti fetali DA 19 giorni ha mostrato un livello del 19,3% Fc-RFL, simile a quello degli animali che hanno ricevuto cellule singeniche adulte alla nascita (40,0%) entro il giorno 7. Successivamente il livello di Fc-R FL non variava in modo apprezzabile tra questi due gruppi. Tuttavia, già 2 giorni dopo l'inoculazione c'era un numero significativamente maggiore di Fc-RFL nella milza dei neonati DA sperimentali rispetto ai controlli. I linfonodi degli animali da esperimento non hanno mostrato un numero significativamente maggiore di Fc-RFL fino al giorno 6 con entrambi i compartimenti tissutali che hanno raggiunto il picco al giorno 10 e sono rimasti significativamente più alti dei controlli fino alla morte. Negli animali BN neonatali, livelli significativamente più alti di Fc-RFL negli animali da esperimento non erano evidenti così presto e hanno raggiunto il picco più tardi (giorno 12) in entrambi i compartimenti tissutali, ma anche in questo caso queste differenze sono rimaste fino alla morte. Gli alloantisieri citotossici hanno dimostrato che nei giorni 6, 10 e 12 la maggior parte, se non tutti, gli Fc-RFL erano ospiti in origine sia in DA che in BN GVHD, con una risposta plasmacellulare ospite molto significativa in tali animali GVHD. La sezione di un micron di tessuto ha rivelato la presenza di un gran numero di plasmacellule particolarmente prominenti nel midollo dei linfonodi con la corteccia dei linfonodi e la polpa bianca della milza marcatamente impoverita di linfociti indicativi di citotossicità.
Fosfomonoesterasi alcaline non specifiche di otto specie di trematodi digenetici.Fosfatasi alcaline provenienti da diversi trematodi che occupano lo stesso habitat hanno pH otima identico ma diversi livelli di attività enzimatica Isoparorchis hypselobagri, dal pesce Wallago attu, mostra da quattro a sei volte più attività enzimatica di Fasciolopsis buski, Gastrodiscoides hominis ed Echinostoma malayanum, dal maiale Sus scrofa, e Fasciola gigantica, Gigantocotyle explanatum, Cotylophoron cotylaphorum e Gastrothylaphorum il bufalo Bubalus bubalis. Per ogni trematode esaminato sono stati ottenuti almeno due picchi di attività a diversi livelli di pH. Sia gli enzimi Gastrodiscoides hominis che Isoparorchis hypselobagri avevano tre picchi di attività della fosfatasi alcalina. La temperatura ottimale per l'attività enzimatica massima era di 40 gradi C, al di sopra del quale si è verificata una rapida inattivazione. A temperature inferiori a 40 gradi C, gli enzimi dei pesci e dei mammiferi n trematodi non si sono comportati allo stesso modo; L'enzima I. hypselobagri è attivo in un intervallo più ampio di temperatura (20 gradi-40 gradi C. Varie concentrazioni di KCN e arsenato hanno inibito proporzionalmente l'attività enzimatica. Il NaF non ha influenzato significativamente l'attività enzimatica, mentre Mg++ e Co++ hanno agito come attivatori. l'inibizione o l'attivazione dell'attività enzimatica di diversi trematodi variava, probabilmente a causa delle differenze di specie. Sia l'inibizione che l'attivazione dell'enzima I. hypselobagri erano più alte che nel caso di altri trematodi.
Dimostrazione di un sistema nervoso inibitorio non adrenergico nella trachea della cavia.Nella trachea della cavia è stato dimostrato un sistema nervoso inibitorio non adrenergico. La stimolazione del campo elettrico di questo sistema, in presenza di blocco adrenergico e colinergico, ha provocato il rilassamento degli anelli tracheali contratti dai mediatori dell'ipersensibilità immediata o istamina. Il rilassamento è stato bloccato dalla tetrodotossina, che ha indicato che la stimolazione nervosa era responsabile del rilassamento. Il tratto gastrointestinale, che ha un'origine embriologica simile al tratto respiratorio, possiede anche un sistema inibitorio non adrenergico, nel tratto gastrointestinale si ritiene che questo sistema sia responsabile della fase di rilassamento della peristalsi, e l'assenza di questo sistema, nel colon e il retto, si pensa che sia una spiegazione per l'intestino spastico nella malattia di Hirschsprung\'. È possibile che un'anomalia del sistema respiratorio Il sistema inibitorio non adrenergico può svolgere un ruolo nella patogenesi delle vie aeree iperreattive nell'asma. Le vie aeree, a causa della mancanza di inibizione, possono essere parzialmente contratte o incapaci di rilassarsi, e quindi apparire iperreattive agli stimoli.
Distribuzione e rimozione del mercurio aggiunto nel latte.Modelli di distribuzione del mercurio aggiunto nel latte intero crudo dopo l'equilibratura per 30 min e 2 h a 37 C ha mostrato una distribuzione tra caseina acida, proteine del siero di latte, membrana dei globuli di grasso e membrana dei globuli di grasso solubile del 33, 28, 16 e 2%. In base al contenuto proteico, la membrana dei globuli di grasso aveva la più alta quantità di mercurio. al latte poiché il cloruro mercurico è stato rimosso mediante trattamento con amminoetilcellulosa tiolata e capelli umani ridotti. rispettivamente, dal latte intero inizialmente contenente 1 ppm di mercurio ed equilibrato per 2 ore a 37 C. Dopo il trattamento per 60 minuti, 82, 52 e 64% del mercurio è stato rimosso mediante amminoetilcellulosa tiosuccinilata, amminoetil cel tiosuccinilato lulose e capelli ridotti, rispettivamente. Tuttavia, l'aumento della temperatura di incubazione e del tempo prima del trattamento ha diminuito l'efficienza della rimozione. L'aminoetilcellulosa tiosuccinilata e i capelli umani ridotti hanno mostrato un aumento dell'efficienza direttamente con il pH, mentre l'amminoetilcellulosa tionitrocarbossifenilata ha mostrato l'effetto opposto e aveva una maggiore affinità per il mercurio a pH 5,5 rispetto a pH 7,5. Inoltre, la velocità di rimozione del mercurio a 4 C rispetto a 37 C era molto più lenta. La rimozione del mercurio dalla caseina solubile e dalle proteine del siero di latte solubili è risultata più efficiente rispetto alla caseina micellare. Le proteine, il contenuto di lattosio e il pH del latte non sono stati modificati dai trattamenti polimerici.
Screening rapido di Veillonella mediante fluorescenza ultravioletta.Tra 51 ceppi di cocchi anaerobi Gram-negativi appartenenti alla famiglia Veillonellaceae, tutti i ceppi di Veillonella (V parvula e V. alcalescens) hanno mostrato fluorescenza rossa sotto luce ultravioletta a onde lunghe (366 nm), mentre nessun Acidaminococcus o Megasphaera ha mostrato fluorescenza. A differenza di Bacteroides melaninogenicus, la crescita di Veillonella non richiede emina e menadione e la fluorescenza si perde rapidamente dopo esposizione all'aria. Il componente fluorescente di un ceppo di V. parvula esaminato non può essere estratto in soluzione con acqua, etere, metanolo o cloroformio, ma è stato facilmente estratto con NaOH 0,4 N. Spettrofotofluorimetricamente, il massimo di fluorescenza di questo estratto è stato 660 nm con un massimo di eccitazione di 300 nm, quando misurato a pH 7,2 e 25 C. Insieme alla colorazione di Gram, la fluorescenza ultravioletta può essere uno strumento utile per lo screening rapido di Veillonella ed è particolarmente utile per il rilevamento e l'isolamento di questo organismo da colture miste.
Controimmunoelettroforesi degli antigeni pneumococcici:migliorata sensibilità per la rilevazione dei tipi VII e XIV.È stata segnalata una rapida identificazione di Streptococcus pneumoniae utilizzando la controimmunoelettroforesi per la rilevazione di antigeni capsulari specifici nel siero, nel liquido cerebrospinale e nelle urine. Precedenti studi clinici non sono riusciti a rilevare l'antigene pneumococcico di tipo VII o XIV. Questi due tipi, tuttavia, rappresentano una parte significativa della malattia pneumococcica. L'incorporazione di un derivato solfonato del fenilboronico acido nel sistema tampone fornisce un metodo per il rilevamento sensibile di questi tipi in miscele artificiali senza ridurre notevolmente la sensibilità per il rilevamento di altri tipi di pneumococco. Un problema con i falsi positivi riscontrati utilizzando siero umano e tampone barbital è stato ridotto dall'uso di tampone contenente acido fenilboronico solfonato.
Analisi del dosaggio radioimmunologico per l'ormone di rilascio delle gonadotropine (GnRH): studi sull'effetto del GnRH radioiodato.Quando il GnRH è radioiodato dalla clorammina- T, due specie marcate immunoreattive si formano a pH 6,5 con un rapporto molare cloramina-T: GnRH di 11:1, mentre quattro bande (I, IIa, IIb e III) sono separate mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide quando l'ormone è iodato a pH 7,5 in un sistema contenente un rapporto molare di 97: 1 di cloramina-T: GnRH. Poiché erano più stabili e più immunoreattivi degli altri prodotti, la banda I e la banda IIa di quest'ultimo sistema sono state utilizzate separatamente come traccianti con Niswender antisiero R-42 nei radioimmunodosaggi per GnRH Le curve standard di ciascun tracciante sono distinte: analizzata dopo trasformazione log-logit, la curva della banda I aveva una pendenza media di -3,31 +/- 0,2 (SE) e un 50% B/ livello di Bt di 9 +/- 0,8 pg (n=8) di GnRH sintetico, mentre la curva standard della banda IIa aveva una pendenza e di -2,30 +/- 0,6 e un valore B/Bt del 50% di 20 +/- 0,9 pg (n=11). La sensibilità di entrambi i test è di circa 2.0 pg. Le concentrazioni di GnRH nei campioni di plasma e siero dosati con la banda I erano costantemente maggiori di quelli dosati con la banda IIa. I plasmi di maschi adulti normali saggiati con la banda I misuravano 21 +/- 0,9 pg/ml, mentre i valori della banda IIa erano 8 +/- 0,4 pg/ml. Non è stata rilevata alcuna differenza tra plasma e siero, né vi è stata alcuna differenza tra uomini adulti, donne adulte, bambini in età prepuberale, pazienti ipogonadici o pazienti ipopituitari con entrambi i test. Le concentrazioni plasmatiche di GnRH erano simili anche nei campioni giugulari e nella vena cava di ratti maschi intatti e castrati. Poiché molti dei campioni erano pari o inferiori alla sensibilità del test della banda IIa, sono stati concentrati dopo l'estrazione con metanolo o acido-etanolo. Tuttavia, il GnRH immunoreattivo endogeno non può essere concentrato con queste procedure di estrazione. Come misurato nel saggio della banda IIa, gli estratti ipotalamici da ratti maschi adulti di controllo contenevano 3,1 +/- 0,4 ng mentre l'ipotalami da ratti castrati conteneva 1,4 +/- 0,1 ng. Valori simili ma leggermente inferiori sono stati ottenuti con la banda I. Al contrario, il contenuto di GnRH delle ghiandole pineali di ratti maschi intatti e castrati era simile (circa 150 pg) quando determinato in entrambi i saggi. Questi studi sottolineano che: 1) le caratteristiche dell'ormone radioiodato possono influenzare la quantificazione del GnRH; e 2) le concentrazioni plasmatiche endogene di GnRH sono molto inferiori rispetto a quanto riportato in precedenza.
Cromatografia specifica a scambio ionico e dosaggio fluorimetrico per la 3-O-metildopamina urinaria.Una tecnica per l'estrazione selettiva della 3-O-metildopamina, sono state studiate normetanefrina e metanefrina da un singolo campione di urina. Dopo l'idrolisi dei coniugati, la miscela diluita viene fatta passare attraverso una colonna Dowex 50W-X2 e le ammine metossilate vengono eluite mediante ammoniaca concentrata. L'eluato, contenente metanefrina, normetanefrina e Si evapora la 3-O-metildopamina e si fraziona una soluzione del residuo in tampone borato in condizioni rigorosamente controllate su colonna Amberlite CG-50. Le tre ammine così separate vengono stimate mediante specifici metodi fluorimetrici. Il recupero di estrazione è 80+/ - 3% per soluzioni pure e 78 +/- 4% per 3-O-metildopamina aggiunta alle urine La procedura fluorimetrica, condotta in condizioni ben definite, permette di stimare 10 ng di 3-O-metildopamina. carattere le caratteristiche del derivato fluorescente sono simili a quelle ottenute con la dopamina, per cui si può presumere che l'ossidazione con iodio della 3-O-metildopamina demetila questo composto e ossida la dopamina risultante al fluoroforo dopaminergico (5,6-diidrossi-indolo). Dei composti che potrebbero interferire nella procedura fluorimetrica, la dopamina, la DOPA e l'alfa-metil-DOPA vengono distrutti dall'eluizione ammoniacale dalla colonna Dowex e la 3-O-metil-DOPA viene eliminata nell'effluente dalla colonna Amberlite. L'eliminazione dei composti interferenti e la migliore separazione su Amberlite garantiscono un'elevata specificità per questa procedura. Abbiamo applicato il metodo alle urine normali e patologiche di pazienti con tumori adrenergici o di soggetti parkinsoniani non trattati e trattati; sono state ottenute informazioni vitali sulla prognosi dei tumori adrenergici. La presenza di grandi quantità di dopamina, normetanefrina e/o metanefrina non influenza il dosaggio per la 3-O-metildopamina. Il metodo è applicabile anche all'urina di ratto e cane e può essere applicato agli estratti di tessuto con poche modifiche.
Un nuovo metodo gascromatografico per la stima di reserpina e rescinnamina.Nelle condizioni descritte per l'idrolisi alcalina di reserpina e rescinnamina in metanolo assoluto e acquoso , e dopo esterificazione (con diazometano) della frazione acida risultante, è stato recuperato quantitativamente il metil 3,4,5-trimetossibenzoato, mentre il metil trans-3,4,5-trimetossicinnamato, in condizioni di luce normale, è stato parzialmente isomerizzato a metil cis -trimetossicinnamato o formato un addotto con una molecola di metanolo, producendo metil 3-metossi-3-(3,4,5-trimetossifenil)propionato. Le strutture dei prodotti sono state stabilite mediante sintesi, studi di risonanza magnetica nucleare e spettrometria di massa. lo studio delle condizioni idrolitiche ha consentito di realizzare una determinazione gascromatografica affidabile e rapida di reserpina e/o rescinnamina in quantità rispettivamente fino a 500 e 2000 mug.
Analisi cromatografica liquida ad alta risoluzione di basi puriniche e pirimidiniche metilate nell'RNA di trasferimento.Le basi puriniche e pirimidiniche metilate e maggiori sono state separate e quantificate mediante -cromatografia liquida a risoluzione dopo idrolizzazione degli acidi ribonucleici di trasferimento (tRNA). La separazione è stata ottenuta eluendo i campioni idrolizzati da una colonna a scambio anionico con un gradiente di concentrazione di acetato di ammonio a pH 9,2. I campioni isolati di tRNA sono stati idrolizzati alle basi libere con un miscela di acido trifluoroacetico-acido formico di 200 gradi. Sono stati misurati limiti di rilevazione di 100-200 ng/ml per le basi metilate; i dati analitici sono riportati per dieci basi metilate più le quattro basi principali del tRNA di fegato di vitello e di fegato di ratto.
Determinazione delle basi dell'acido nucleico metilato trimetilsilile nelle urine mediante cromatografia gas-liquido.Metodo per la determinazione del livello di escrezione urinaria dell'acido nucleico metilato basi mediante cromatografia gas-liquido (GLC). Una procedura di pulizia prima dell'analisi GLC consisteva in idrolisi, filtrazione, adsorbimento del carbone e scambio anionico. Studi per determinare le condizioni di derivatizzazione ottimali per la conversione delle basi metilate al loro trimetilsilile derivati e per valutare i parametri e le colonne GLC per ottenere la migliore separazione sono stati condotti. L'applicazione del metodo è stata dimostrata determinando i livelli di escrezione di basi metilate nelle urine di controlli normali e di pazienti con vari tipi di malignità.
Comportamento cromatografico di alcaloidi su strati sottili di scambiatori di anioni e cationi. I. AG 1-X4 e cellex D.Il comportamento cromatografico di 48 alcaloidi è stata studiata su Bio-Rad AG 1-X4, Cellex D e cellulosa microcristallina, eluendo con soluzioni a pH diverso ma forza ionica costante (0,5). Molte interessanti separazioni sono state effettuate sia sugli strati AG 1-X4 che Cellex D. L'influenza del pH sul comportamento cromatografico degli alcaloidi è stata studiata quantitativamente ed è stata utilizzata un'equazione che esprime il comportamento degli alcaloidi sia su strati di AG 1-X4 (AcO-) che di cellulosa microcristallina. Viene discussa la non applicabilità di questa equazione agli strati di Cellex D.
Un sistema rapido e completo per l'identificazione di routine dei farmaci nel materiale biologico basato sull'estrazione in microfase e sui profili di colore dei farmaci.La separazione di sostanze basiche, acide e farmaci neutri da estratti di propanolo-2 di siero, urina e omogenati tissutali a diversi valori di pH mediante una tecnica di estrazione in microfase. Dopo uno screening preliminare, le varie frazioni contenenti farmaco ottenute vengono ulteriormente esaminate mediante strato sottile bidimensionale cromatografia. I farmaci presenti vengono identificati con riferimento a standard documentati con l'ausilio di un sistema di profilo colore del farmaco e valori RF relativi a tre diversi standard di riferimento. Per mezzo di analisi gascromatografiche degli stessi estratti, stime semiquantitative delle quantità di farmaci presenti, che sono sufficientemente accurati per scopi di emergenza clinica, possono essere realizzati in molti casi. I principali vantaggi del sistema sono estratti "puliti" con un minimo di interferenza di fondo, rapidità (4-6 h per un'analisi completa) e comportamento sistematicamente documentato e presentato visivamente dei farmaci dopo la spruzzatura con vari reagenti cromogeni e fluorogenici, consentendo l'identificazione sistematica di sostanze sconosciute.
[Cromatografia modello su oligonucleotidi immobilizzati. Sintesi e applicazione di oligodeossiadenosina-5\'-fosfato--DEAE-cellulosa (autore\'s trad.)]."Gli oligomeri dell'acido desossiadenilico, ottenuti per policondensazione, sono stati attaccati in modo covalente all'alcol polivinilico. Questi oligonucleotidi legati al polimero subiscono un assorbimento molto forte su DEAE-cellulosa in modo tale che a pH neutro e con 1 M NaCl, il desorbimento parziale si verifica solo sopra i 60 gradi. Viene discusso l'uso di questa PV(pA)n-DEAE-cellulosa per la separazione cromatografica su colonna di oligomeri dell'acido deossitimidilico ottenuti per policondensazione, secondo il principio dell'appaiamento delle basi. Oligomeri lineari e anche derivati pirofosfati dell'acido timidilico che contengono più più di cinque unità monomeriche subiscono un forte ritardo nelle condizioni di appaiamento delle basi. Gli oligonucleotidi ciclici non mostrano alcuna interazione evidente con la fase stazionaria. Quindi, attraverso l'uso di un temperatur e gradiente, è possibile separare frazionalmente il policondensato, dando un grado medio di polimerizzazione di 6--10.
Separazione analitica di amminoacidi su una resina scambiatrice di cationi reticolata con m-divinilbenzene.Le bande di eluizione di amminoacidi acidi e neutri di gli idrolizzati proteici, emergenti dalla colonna di una resina scambiatrice di cationi reticolata con m-divinilbenzene puro, sono più stretti di quelli di una resina preparata da stirene e divinilbenzene tecnico. Per effetto di queste bande più strette, una risoluzione più completa del si ottengono coppie critiche treonina-serina, glicina-alanina e tirosina-fenilalanina La ragione più probabile per i picchi di eluizione più stretti è la più rapida diffusione dei componenti scambiati attraverso la massa della resina a causa di una disposizione più regolare di cross -legami nella resina a scambio cationico preparata da m-divinilbenzene.
Cromatografia a partizione a coppia ionica ad alta velocità nell'analisi farmaceutica.La cromatografia a coppia ionica offre interessanti possibilità nell'analisi farmaceutica. La specificità dei sistemi di separazione può essere variato in un ampio intervallo mediante opportuna selezione della fase stazionaria La scelta di un controione idoneo può anche migliorare drasticamente il limite di rilevabilità, permettendo la determinazione di sostanze farmacologiche a basso dosaggio ed eventualmente di sottoprodotti o prodotti di degradazione. La cromatografia a coppia ionica di alcaloidi tropanici ed ergot è stata studiata utilizzando picrato come controione. Sono stati testati allumina, farina fossile e vari gradi di gel di silice come supporti. Le proprietà di partizione studiate in una procedura batch sono state confrontate con le condizioni cromatografiche effettive. Colonne (10 cm) riempite con gel di silice (dimensione delle particelle, 5 mum; dimensione dei pori, 1000 A) mostrano le migliori prestazioni nella separazione di iosciamina, scopolamina ed ergotamina come picrato coppie di ioni. Uno stretto controllo del pH e della temperatura è essenziale per separazioni riproducibili. Con questi sistemi sono stati osservati miglioramenti nei limiti di rilevamento tra 100 e 300 volte. Le estrazioni di coppie ioniche di questi alcaloidi da forme di dosaggio possono essere utilizzate per la preparazione del campione prima dell'iniezione sulla colonna. Ciò fornisce un ulteriore grado di selettività e sensibilità.
Controllo della sintesi della fenilalanina idrossilasi in colture di tessuti mediante siero e insulina.Colture cellulari di epatoma a deviazione minima H4-II-E-C3 in fase stazionaria che sono deprivati di siero rispondono con un decorso bifasico di induzione della fenilalanina idrossilasi quando viene aggiunto siero fetale di vitello dializzato o insulina. Questi due agenti inducono in modo additivo la fenilalanina idrossilasi, sia durante le fasi iniziali di 3 ore che nelle fasi ritardate di 24 ore. la fase di induzione da parte dell'insulina è inibita dalla cicloesimide ma non dall'actinomicina D. L'induzione ritardata da parte sia del siero fetale di vitello dializzato che dell'insulina è inibita dalla cicloesimide 10(-6) M e da 0,20 mug/ml di actinomicina D. H4-II-E- Le cellule C3 in coltura non sintetizzano il/i fattore/i nel siero che inducono la fenilalanina idrossilasi.
Dinoflagellate bioluminescenza: uno studio comparativo di componenti in vitro.Componenti di bioluminescenza in vitro dei dinoflagellati Gonyaulax polyedra, G. tamarensis, Dissodinium lunual e Pyrocystis noctiluca sono state studiate. Le luciferasi e le luciferine delle quattro specie reagiscono in modo incrociato in tutte le combinazioni. Tutte queste specie possiedono luciferasi ad alto peso molecolare (200.000-400.000 dalton) con profili di attività del pH simili. Le singole catene attive di luciferasi dal Gonyaulax le specie hanno un MW di 130.000 mentre quelli di P. noctiluca e D. lunula hanno un MW di 60.000. L'attività della luciferasi estraibile varia con l'ora del giorno nelle due specie Gonyaulax, ma non nelle altre due. Una proteina legante la luciferina (LBP) può essere facilmente estratta dalle due specie Gonyaulax (MW circa 120.000 dalton), ma non è stata rilevata nessuna negli estratti di D. lunula o P. noctiluca. Gli Scintillon sono estraibili da tutte e quattro le specie, ma v ario in densità e il grado in cui l'attività può essere aumentata dall'aggiunta di luciferina. Sebbene la biochimica della bioluminescenza in questi dinoflagellati sia generalmente simile, le osservazioni secondo cui D. lunula e P. noctiluca apparentemente mancano di LBP e hanno luciferasi con catene singole a basso PM richiedono ulteriori chiarimenti.
Stimolazione sierica dell'assorbimento di fosfato nelle cellule 3T3.La stimolazione da parte del siero di vitello dell'assorbimento di fosfato nelle cellule 3T3 risulta da un cambiamento nella velocità massima del processo di trasporto senza variazione della costante di Michaelis. Solo l'arsenato tra una serie di analoghi strutturali inorganici del fosfato ha inibito l'assorbimento del fosfato indicando un'elevata specificità per il processo. L'inibizione dell'arsenato era di natura competitiva. Papaverina, teofillina e protaglandina E1, farmaci noti per mantenere elevati livelli intracellulari di cAMP, ha avuto scarso effetto sull'assorbimento di fosfato stimolato dal siero. Il fattore(i) stimolante(i) di stimolazione dell'assorbimento di fosfato nel siero potrebbe essere distinto dai fattori di sopravvivenza e migrazione delle cellule 3T3 per le caratteristiche di stabilità, ma questo(i) fattore(i) non potrebbe essere completamente separato da un'attività di stimolazione della captazione dell'uridina o da un'attività di promozione della crescita utilizzando una varietà di procedure di frazionamento del siero Stimolazione solo parziale del processo di captazione s è stato ottenuto con una qualsiasi frazione del siero che indica che una molteplicità di componenti del siero è probabilmente coinvolta in questo processo. A causa della rapidità dell'attivazione sierica dell'assorbimento del fosfato e della sua apparente indipendenza dai livelli di nucleotidi ciclici intracellulari, si suggerisce che i fattori sierici possano stimolare l'assorbimento del fosfato inducendo cambiamenti strutturali nel sistema di trasporto del fosfato.
Effetto del blocco simpatico lombare e del blocco dei recettori alfa adrenergici indotto da clorpromazina sulla temperatura cutanea nelle malattie arteriose periferiche.Le variazioni di temperatura delle dita dei piedi post-raffreddamento dopo blocco simpatico lombare e dopo somministrazione intramuscolare di una sostanza bloccante dei recettori alfa adrenergici (clorpromazina) sono stati studiati in 14 pazienti con imminente cancrena a causa di insufficienza arteriosa periferica. L'aumento della temperatura post-raffreddamento era simile dopo blocco simpatico e somministrazione di clorpromazina e significativamente diverso dalle variazioni di temperatura del dito basale dopo il raffreddamento. Si conclude che la somministrazione di una sostanza bloccante i recettori alfa adrenergici è efficace quanto il blocco simpatico lombare per la valutazione del tono vasomotore simpatico residuo nei pazienti con malattia arteriosa.
Ciclo dei nucleotidi purinici. Evidenza del verificarsi del ciclo nel cervello.Estratti privi di cellule di cervello di ratto catalizzano le reazioni del ciclo dei nucleotidi purinici L'ammoniaca si forma durante la deaminazione ma non la fase di amminazione del ciclo L'attività dell'adenilato deaminasi nel cervello è sufficiente per spiegare i tassi massimi di produzione di ammoniaca che sono stati riportati L'attività della glutammato deidrogenasi non è sufficiente per spiegare questi tassi di produzione di ammoniaca. Le attività di adenilosuccinato sintetasi e adenilosuccinasi sono quasi sufficienti per spiegare i tassi di produzione di ammoniaca allo stato stazionario osservati nel cervello. La dimostrazione del ciclo negli estratti di cervello è complicata dal verificarsi di reazioni collaterali, in particolare quelle catalizzata da fosfomonoesterasi, nucleoside fosforilasi e guanasi.
Cinetica della dimerizzazione dell'alfa-chimotripsina.E' stato ideato un metodo che permette di osservare la perdita di siti attivi promossa dall'aggregazione dell'alfa-chimotripsina Quando l'alfa-chimotripsina in soluzione non tamponata a pH 7 viene miscelata con proflavina tamponata mediante strumentazione a flusso interrotto per dare un pH finale di 3,89, si verifica una diminuzione dei siti attivi, misurata da una diminuzione del complesso enzima-colorante. la velocità dei siti attivi mostra una dipendenza lineare dal quadrato della concentrazione dei siti attivi che rimangono all'equilibrio. I dati cinetici della reazione sono stati correlati con le misurazioni dell'equilibrio. Le costanti di velocità per la formazione e la dissociazione del dimero sono 9,45 X 10(3) M (-1)S(-1) e 1,9 S(-1), rispettivamente. Il calcolo di Kdis per dimero dalle costanti di velocità dà un valore di 2,01 X 10(-4) M, mentre la determinazione diretta di Kdis dà un valore di 1,44 X 10 (-4) M.
Risonanze del carbonio 13 degli addotti di carbamino 13CO2 delle catene alfa e beta nell'emoglobina umana adulta.Il componente principale dell'emoglobina umana normale Ao dell'adulto, è stato equilibrato in varie condizioni con 13CO2 Inoltre, derivati contenenti gruppi NH2-terinali specificamente carbammilati in catene alfa o beta, o entrambi, sono stati preparati mediante trattamento con cianato, ed equilibrati allo stesso modo per consentire l'identificazione di risonanze specifiche osservate dalla risonanza magnetica nucleare 13C. Nella deossiemoglobina, una risonanza a 29,2 ppm upfield di CS2 esterno è stata assegnata all'addotto terminale della catena alfa e una a 29,8 ppm all'addotto terminale della catena beta. Nello stato ligando come derivato della CO, l'addotto terminale su entrambe le catene ha mostrato un posizione comune di risonanza a 29,8 ppm Sono stati osservati piccoli effetti del pH sulle posizioni di risonanza In determinate condizioni è stata osservata una risonanza a 33,4 ppm, probabilmente non ascrivibile a un composto di carbamino und. Una risonanza carbamino che è diventata prominente a pH più alto è stata trovata a 28,4 ppm, ed è provvisoriamente attribuita a uno o più addotti sui gruppi amminici epsilon. Le risonanze della catena beta in particolare sono minimizzate dalla presenza di inositolo esafosfato o 2,3-difosfoglicerato. L'analisi quantitativa delle intensità di risonanza mostra che gli effetti della conversione dallo stato deossi allo stato ligando nel ridurre il grado di addotto carbammino sono molto più pronunciati per le catene beta che per le catene alfa.
Dimensione molecolare del fattore di crescita nervoso in soluzione diluita.Il fattore di crescita nervoso (NGF) è una proteina composta da due catene identiche di massa 13.259. Un l'analisi dell'equilibrio di sedimentazione, della velocità di sedimentazione e del comportamento di gel filtrazione di soluzioni diluite di NGF indica l'esistenza di un monomero rapidamente reversibile in equilibrio dimero di equilibrio e che la costante di associazione K per la reazione a pH neutro è 9,4 X 10(6)M -1. Le miscele di reazione sono costituite da concentrazioni uguali di monomero e dimero a una concentrazione di proteine totali pari a 1,4 mug/ml e, a 1 ng/ml, il monomero rappresenta più del 99% del totale. Quest'ultima concentrazione è compresa tra 20 e 30 volte quella richiesta per l'attività biologica dell'NGF. Diverse linee di evidenza suggeriscono che la reazione di dimerizzazione è altamente stereospecifica, sebbene il suo significato biologico non sia noto.
Legame dell'inositolo esafosfato alla metaemoglobina umana.Lo spettro di differenza statica osservato prodotto dal legame dell'inositolo esafosfato alla metaemoglobina è la somma di un transizione spettrale lenta. La variazione di assorbanza più rapida è troppo rapida per essere misurata con tecniche di flusso interrotto, mentre la variazione lenta presenta un tempo di dimezzamento nell'intervallo da 1 a 6 s. Dalla dipendenza dal pH dello spettro di differenza formato rapidamente e da un serie di studi sul legame dell'eme ligando, la fase rapida viene interpretata in modo da riflettere un cambiamento conformazionale terziario localizzato che accompagna immediatamente il legame dell'inositolo esafosfato e si traduce in un aumento selettivo dello spin e della reattività dei gruppi eme della catena beta. Al contrario, la fase lenta sembra riflettono un processo di isomerizzazione del primo ordine che coinvolge solo una piccola porzione (meno del 10%) delle molecole di emoglobina e si traduce principalmente in una marcata alterazione delle proprietà spettrali di th e catene alfa con scarso cambiamento di spin. Mentre la rapida transizione spettrale non può essere direttamente correlata alla transizione quaternaria complessiva che si verifica durante il legame dell'ossigeno alla deossiemoglobina ferrosa, la lenta transizione spettrale può rappresentare la formazione abortiva di una conformazione simile alla deossiemoglobina A che è inibita sia in velocità che in estensione dalla presenza di molecole d'acqua legate agli atomi di ferro eme.
Effetti del legame del p-idrossimercuribenzoato sullo spettro di assorbimento visibile della metaemoglobina.Il legame del p-idrossimercuribenzoato con la metaemoglobina umana provoca una perturbazione del visibile spettro di assorbimento dell'eme che è espresso da un aumento dell'assorbanza nelle regioni ad alta banda di spin, da 480 a 510 nm e da 590 a 640 nm, concomitante con una diminuzione dell'assorbanza nelle regioni di assorbimento delle bande alfa e beta. Lo spettro di differenza indotto dal p-idrossimercuribenzoato può essere spiegato quantitativamente da uno spostamento del 5% verso uno spin più alto della forma aquo della metaemoglobina, uno spostamento del 15% verso uno spin più alto della forma idrossido e uno spostamento del pKa apparente per l'acqua a transizione dell'idrossido da 7,92 a 8,04 quando il mercurio è legato. La velocità di questi cambiamenti nell'assorbimento dell'eme è coerente con la rapida formazione del secondo ordine della cisteina beta93, legame mercurio-mercaptide e non rappresenta un cambiamento dovuto al disso ciazione dei tetrameri della metaemoglobina in dimeri, anche se quest'ultimo, lento processo segue il legame mercuriale. L'osservazione di un aumento di spin prodotto dal legame di un reagente che promuove anche la formazione di dimeri depone fortemente contro qualsiasi correlazione diretta tra un aumento di spin e la comparsa di conformazioni simili alla deossiemoglobina.
Purificazione a omogeneità e proprietà di due D-alanina carbossipeptidasi I Da Escherichia coli.Tre preparazioni omogenee di D-alanina carbossipeptidasi I sono state ottenute da Escherichia coli ceppo H2143, chiamato enzimi IA, IB e IC. L'enzima IA purificato dalla membrana dopo estrazione con Triton X-100 è apparso sull'elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato essere un doppietto polipeptidico i cui pesi molecolari del monomero erano circa 32.000 e 34.000. In oltre all'attività della D-alanina carbossipeptidasi, ha catalizzato una reazione di transpeptidasi con diversi substrati, legata alla [14C]penicillina G, aveva una debole attività penicillinasi, ma era priva di attività endopeptidasica. Enzima IB ottenuto dalla membrana dopo estrazione di LiCl ed enzima IC ottenuto dalla soluzione surnatante erano identici o estremamente simili. Essi erano composti da un singolo polipeptide il cui peso molecolare del monomero era di circa 41.000. Oltre ai carbossipeptidi attività dase, hanno catalizzato una reazione endopeptidasica, hanno avuto una debole attività penicillinasica e hanno avuto un'attività transpeptidasica molto scarsa, ma non hanno legato la [14C]penicillina G. Sono descritti alcuni dati relativi al meccanismo di catalisi da parte di questi enzimi. Viene discusso il loro possibile ruolo fisiologico.
Fosforilasi dei nucleosidi purinici monomerici dal fegato di coniglio. Purificazione e caratterizzazione.Fosforilasi dei nucleosidi purinici del fegato di coniglio (purina nucleoside: ortofosfato ribosiltransferasi EC 2.4.2.1. ) è stato purificato all'omogeneità mediante cromatografia su colonna e frazionamento con solfato di ammonio. L'omogeneità è stata stabilita mediante elettroforesi su gel su disco in presenza e assenza di sodio dodecil solfato e focalizzazione isoelettrica. I pesi molecolari di 46.000 e 39.000 sono stati determinati, rispettivamente, mediante filtrazione su gel e mediante sodio dodecile elettroforesi su gel su disco di solfato-poliacrilammide. L'inibizione del prodotto è stata osservata con guanina e ipoxantina come forti inibitori competitivi per la fosforolisi enzimatica della guanosina. Rispettivamente Kis calcolati erano 1,25 x 10(-5) M per guanina e 2,5 x 10(-5) M per ipoxantina Il ribosio 1-fosfato, un altro prodotto della reazione, ha dato un'inibizione non competitiva con la guanosina come substrato variabile e un'inibizione è stata calcolata una costante ionica di 3,61 x 10(-4) M. La protezione dei gruppi -SH essenziali sull'enzima, mediante 2-mercaptoetanolo o ditiotreitolo, era necessaria per il mantenimento dell'attività enzimatica. Inibizione non competitiva è stata osservata per p-cloromercuribenzoato con una costante di inibizione di 5,68 x 10(-6)M. È stata dimostrata la completa inversione di questa inibizione mediante un eccesso di 2-mercaptoetanolo o ditiotreitolo. In presenza di blu di metilene, l'enzima ha mostrato un'elevata sensibilità alla fotoossidazione e una dipendenza della fotoinattivazione dal pH, implicando fortemente l'istidina come gruppo suscettibile nel sito attivo dell'enzima. I valori di pKa determinati per i gruppi ionizzabili del sito attivo dell'enzima erano vicini a pH 5,5 e pH 8,5. Le evidenze chimiche e cinetiche suggeriscono che l'istidina e la cisteina possono essere essenziali per la catalisi. L'ortofosfato inorganico (Km 1,54 x 10(-2) M) era un requisito obbligatorio per gli anioni e l'arsenato ha sostituito il fosfato con risultati comparabili. Guanosina (Km 5,00 x 10 (-5) M), deossiguanosina (Km 1,00 x 10 (-4) M) e inosina (Km 1,33 x 10 (-4) M), erano substrati per la fosforolisi enzimatica. La xantosina era un substrato estremamente povero e l'adenosina non era fosforilizzata a un eccesso di 20 volte rispetto all'enzima omogeneo. Guanina (Km 1,82 x 10(-5)M), ribosio 1-fosfato (Km 1,34 x 10(-4) M) e ipoxantina erano substrati per la reazione inversa, ovvero la sintesi enzimatica dei nucleosidi. Gli studi iniziali sulla velocità della saturazione dell'enzima con guanosina, a varie concentrazioni fisse di ortofosfato inorganico, suggeriscono un meccanismo catalitico bireattivo sequenziale per l'enzima.
Permeabilità alla rickettsia. Un sistema di trasporto ADP-ATP.Il batterio parassita intracellulare obbligato, Rickettsia prowazeki, ha un sistema di trasporto mediato dal vettore per ADP e ATP. Il trasporto dei nucleotidi è stato misurato mediante saggi di filtrazione su membrana; è stato dimostrato che il saggio non danneggia le rickettsie relativamente labili. È stato dimostrato che il sistema di trasporto dei nucleotidi risiede nelle rickettsie, non nei mitocondri contaminanti del sacco vitellino del preparato. di nucleotide aveva un'energia di attivazione da 12 a 13 kcal al di sopra di 22 gradi (una temperatura di transizione apparente) e 30 kcal al di sotto di questo valore. L'assorbimento del nucleotide era indipendente dalla concentrazione di Mg2+, ma era notevolmente stimolato dalla concentrazione di fosfato. Il pH ottimale dell'afflusso di nucleotide era pH 7. La specificità del sistema di trasporto era notevole in quanto richiedeva una frazione specifica in ciascuna porzione del nucleotide, cioè una base adenina, uno zucchero ribosio, un d due o tre, ma non uno, fosfati. Dell'ampia varietà di composti testati, il sistema poteva trasportare solo ADP, ATP e (beta, gamma-metilene) adenosina 5\'-trifosfato. L'afflusso di nucleotide era un processo saturabile; la metà della velocità massima è stata raggiunta a una concentrazione di nucleotidi di circa 75 muM. ADP e ATP erano inibitori competitivi del trasporto reciproco. Sebbene almeno il 95% del nucleotide intracellulare marcato fosse scambiabile, l'efflusso del nucleotide marcato è stato osservato solo in presenza di nucleotide non marcato nel mezzo. Il mezzo efflusso massimo è stato raggiunto ad una concentrazione di circa 75 muM. In presenza di inibitori e disaccoppiatori metabolici è stato mantenuto un ampio gradiente di concentrazione da intracellulare a extracellulare del nucleotide marcato, che ha completamente abolito l'emolisi da rickettsie. Pur non avendo alcun effetto sullo stato stazionario, KCN e DNP hanno accelerato sia l'afflusso che l'efflusso. Le misurazioni del pool endogeno di nucleotidi di adenina in rickettsie isolate mostrano che è grande (5 mM) e che questi nucleotidi non etichettati si scambiano, approssimativamente su una base 1/1, con nucleotidi aggiunti esogenamente. Questi studi supportano la proposta che le rickettsie non siano "permeabili" per i nucleotidi adennici o per le piccole molecole in generale, e che abbiano un sistema di trasporto mediato dal vettore che consente uno scambio di ADP e ATP dell'ospite e del parassita.
Effetti della colipasi e del taurodesossicolato sulle proprietà catalitiche e fisiche della lipasi pancreatica B all'interfaccia olio-acqua.Un sistema di reazione monostrato che impiega tripropionina e siliconato le perle di vetro sono state utilizzate per studiare gli effetti del taurodesossicolato e della colipasi sull'attività catalitica, sulla stabilità interfacciale e sull'affinità interfacciale della lipasi pancreatica suina B (EC 3.1.1.3) La stabilità e l'attività catalitica della lipasi all'interfaccia perlina-acqua sono regolate da gli stessi due gruppi ionizzabili con valori di pKa (in assenza di cofattori) di 5,6 e 9,3. La colipasi da sola o con sale biliare ha causato solo una leggera perturbazione di questi valori. A basse concentrazioni, da 0 a 0,3 mM, il taurodesossicolato aumenta la stabilità della lipasi di 5 volte. A concentrazioni più elevate, da 0,3 a 0,8 mM, ma ancora al di sotto della sua concentrazione micellare critica, il taurodesossicolato impedisce l'adsorbimento della lipasi nell'interfaccia perlina-acqua. meccanismo mediante il quale questo sale biliare inibisce la lipolisi. La colipasi esercita piccoli effetti positivi sulla stabilità della lipasi e sull'attività catalitica. Ancora più importante, la colipasi consente l'assorbimento della lipasi in presenza di sale biliare, invertendo così l'inibizione.
Ossigenasi dell'acido 3-idrossiantranilico di rene di manzo. Purificazione, caratterizzazione e analisi del dosaggio.Ossigenasi dell'acido 3-idrossiantranilico di rene di manzo è stata purificata per omogeneità. È una singola proteina di subunità di Mr = 34.000 +/- 2.000 con un coefficiente di attrito (f/f0) di circa 1,1. L'enzima si aggrega prontamente per formare oligomeri di peso molecolare più elevato, apparentemente inattivi. La perdita molto rapida di L'attività enzimatica durante il test è stata analizzata in modo approfondito. È risultato essere dovuto all'inattivazione dell'enzima da parte del substrato, 3-idrossiantranilato, e non correlato al turnover enzimatico o all'ossidazione del ferro legato. La perdita di attività è risultata essere di primo ordine processo di decadimento, e vengono forniti metodi per ottenere accurate velocità di reazione iniziale in tutte le condizioni. È stata presentata la prova che l'enzima assume una conformazione cataliticamente inattiva a pH 3,4, che solo relativamente lentamente si riorganizza in una forma attiva a pH 6,5; il rangement può essere bloccato dalla presenza di substrato. Abbiamo trovato che Fe2+, che è richiesto per l'attività enzimatica, può equilibrarsi liberamente, anche se lentamente, con l'enzima nel corso della reazione enzimatica anche in presenza di saturazione di 3-idrossiantranilato. In condizioni di analisi, il Fe2+ ha una costante di dissociazione apparente di 0,04 mM. Le proprietà cinetiche dell'enzima sono risultate notevolmente diverse nel tampone beta,beta-dimetilglutarato e nel tampone collidina; sia il tasso di perdita di attività durante il dosaggio che il substrato Km e Vmax sono stati influenzati.
Isolamento e caratterizzazione della metilgliossale sintetasi cristallina da Proteus vulgaris.Metilgliossale sintetasi, che catalizza la conversione del diidrossiacetone fosfato in metilgliossale e fosfato inorganico, è stata isolato e cristallizzato con buone rese da Proteus vulgaris. L'enzima si è dimostrato omogeneo con una varietà di criteri ed è risultato essere un dimero (Mr = 135.000; s20,w = 7,2 S) composto da due catalizzatori e proprietà fisiche e la loro natura interconvertibile suggeriscono che non rappresentano veri isoenzimi. L'enzima è specifico per diidrossiacetone fosfato e non forma metilgliossale da gliceraldeide 3-fosfato, gliceraldeide o diidrossiacetone.
Studi sulla citocromo ossidasi. Risoluzione parziale di enzimi contenenti sette o sei subunità, rispettivamente da lievito e cuore di manzo.Altamente attivo, essenzialmente omogeneo, preparazioni di ferrocitocromo c ossidasi (EC 1.9.3.1) sono state ottenute sia dal lievito che dal cuore di manzo mediante estrazione con colato, frazionamento con solfato di ammonio e sostituzione del colato con Tween 20. I pesi molecolari delle proteine risultanti sono pari a 260 +/- 23 X 10(3) e 205 +/- 10(3); contengono rispettivamente sette e sei diverse subunità polipeptidiche, tutte in quantità equimolari, con pesi molecolari apparenti di 42,4, 34,1, 24,7, 14,6, 14,6, 12,3, 10,6 X 10(3) e 47,5, 20,4, 14,5, 14,5, 13,0, 11,0 X 10(3), rispettivamente. Mediante cromatografia apolare su L-leucina accoppiata ad agarosio questi enzimi possono essere privati delle loro subunità più grandi risultanti in preparati con pesi molecolari di 170 +/- 17 X 10 (3) e 124 +/- 20 X 10 (3) e contenenti solo cinque polipeptidi, con il più grande rimanente (peso molecolare congruente a 20 X 10(3)) presente in quantità inferiori a quelle stechiometriche. Questa interconversione e rimozione di subunità è stata monitorata mediante cromatografia di esclusione, quattro sistemi di elettroforesi su gel di acrilammide, alcuni con la proteina marcata con 125I in condizioni denaturanti, focalizzazione isoelettrica e metodi idrodinamici. Non ha praticamente alcun effetto sul contenuto di eme a e rame e sui parametri catalitici degli enzimi. Concludiamo che le subunità I e II negli enzimi fungini e la subunità I in quelli animali sono fonti superflue per la catalisi dell'ossidazione del ferrocitocromo c da parte di queste proteine, e probabilmente non sono essenziali per l'attaccamento di gruppi prostetici a queste proteine.
Controllo della differenziazione negli streptomiceti: coinvolgimento dell'acido desossiribonucleico extracromosomico e della repressione del glucosio nello sviluppo del micelio aereo.Quando le spore di Streptomyces alboniger sono state coltivate in Hickey-Tresner brodo contenente 5 muM di bromuro di etidio, è stata recuperata un'alta frequenza di colonie di micelio-negativo (am-) permanentemente curate L'aspetto delle colonie di am era dipendente dal tempo: una frequenza molto bassa (0,3%) a tempo zero, un massimo ( 9-21%) dopo 2-5 giorni di crescita, e un nuovo declino a basse frequenze più avanti nel ciclo di crescita. Su agar, le colonie di am indurite di S. alboniger producevano ancora puromicina. Lo sviluppo di miceli aerei in S. alboniger , S. scabbia e S. coelicolor erano anche sensibili alla repressione del glucosio. Le colonie cresciute su agar Hickey-Tresner contenente il 2% di glucosio sono rimaste fenotipicamente am- per tutto il periodo di osservazione. Adenina (2,5 mM o maggiore) e, in misura minore, adenosina e guanosina, specifica ly invertito la repressione. L'accumulo di acidi organici indissociati sembra essere coinvolto nella repressione del glucosio della formazione di miceli aerei. Tuttavia, questo non sembra essere il caso della produzione di puromicina in S. alboniger; la repressione del glucosio è stata osservata nell'intervallo di pH da 5,0 a 7,5.
Derepressione di alcuni enzimi biosintetici di aminoacidi aromatici di Escherichia coli K-12 mediante crescita in terreno carente di Fe3+.3-Deossi-arabino-eptulosonico acido 7-fosfato sintasi, prefenato deidratasi, triptofano sintasi e attività dell'enzima 2,3-diidrossibenzoilserina sintasi sono derepresse in cellule K-12 di Escherichia coli wild-type cresciute su terreno carente di Fe3+. Questa derepressione è invertita quando FeSO4 viene aggiunto al terreno di coltura L'aggiunta di acido shikimico al terreno di coltura carente di Fe3+ ha causato la repressione delle prime tre attività enzimatiche ma non dell'attività della 2,3-diidrossibenzoilserina sintasi L'aggiunta di acido 2,3-diidrossibenzoico al terreno di coltura carente di Fe3+ non ha effetto su una qualsiasi delle attività enzimatiche sopra menzionate. La derepressione mediata da carenza di Fe3+ dell'attività 3-deossiarabino-eptulosonico acido 7-fosfato sintasi è dovuta ad un aumento dell'isoenzima tirosina-sensibile; l'isoenzima fenilalanina-sensibile non viene depresso in queste condizioni.
Arginina decarbossilasi da una specie di Pseudomonas.Un'arginina decarbossilasi è stata isolata da una specie di Pseudomonas. L'enzima è costitutivo e non sembra essere represso da una varietà di fonti di carbonio. Dopo una purificazione di circa 40 volte, l'enzima è apparso più simile nelle sue proprietà all'Escherichia coli arginina decarbossilasi biosintetica che all'enzima inducibile (biodegradabile) di E. coli. La Pseudomonas arginina decarbossilasi ha mostrato un pH ottimale di 8,1 e un fabbisogno assoluto di Mg2+ e piridossalfosfato, ed è stato inibito significativamente a concentrazioni inferiori di Mg2+ dalle poliammine putrescina, spermidina e cadaverina. Il Km per L-arginina era di circa 0,25 mM a pH 8,1 E 7,2. L'enzima era completamente inibito dal p-cloromercuribenzoato. L'inibizione è stata prevenuta dal ditiotreitolo, una caratteristica che suggerisce il coinvolgimento di un gruppo -SH. Di una varietà di aminoacidi marcati testati, solo L-arginina e, ma non la D-arginina è stata decarbossilata. La D-arginina era un potente inibitore dell'arginina decarbossilasi con un Ki di 3,2 muM.
Attività idrolizzante dell'urea di un micoplasma di ceppo T: Ureaplasma urealyticum.L'attività idrolizzante dell'urea di un micoplasma di ceppo T è stata studiata in esperimenti utilizzando cellule intere e preparati enzimatici privi di cellule misurando il rilascio di 14CO2 da [14C]urea. Nelle condizioni utilizzate, la concentrazione ottimale di urea è di circa 5,6 X 10 (-3) M urea. L'attività è solubile e non legata alla membrana È stabile a -70 C per diverse settimane ma è più labile a temperature più elevate Il pH ottimale è compreso tra 5,0 e 6,0 L'effetto di diversi inibitori sull'attività è stato testato e ha rivelato somiglianze, nonché differenze, tra T- ceppo dell'attività dell'ureasi del micoplasma e dell'attività dell'ureasi di altri organismi e piante.
Preparati e proprietà della polimerasi dell'acido ribonucleico da Acinetobacter calcoaceticus.Acido desossiribonucleico (DNA)-dipendente dalla polimerasi dell'acido ribonucleico (RNA) (EC 2.7.7.6 ) di Acinetobacter calcoaceticus è stato purificato fino a raggiungere un'apparente omogeneità e le sue proprietà sono state confrontate con quelle dell'enzima Escherichia coli B. I pesi molecolari dei due enzimi attivi nativi e le loro subunità alfa e beta sembravano essere simili. di sigma da E. coli, e inoltre nessuna separazione tra le subunità beta è stata rilevata mediante elettroforesi su gel. Un certo numero di DNA diversi sono stati trascritti dall'enzima di A. calcoaceticus. La massima sintesi di RNA si è verificata a pH 8,7, 10 mM Mg2+ , o 0,3 mM Mn2+ e con una forza ionica totale di 0,1. Forze ioniche più elevate hanno portato ad un aumento dell'inibizione della trascrizione e a mu = 0,4 è stata osservata un'inibizione completa. Il meccanismo di inibizione del sale era n ot correlato all'evento di iniziazione osservato con la RNA polimerasi del core T4 (R. Kleppe, 1975). Nel tentativo di comprendere il meccanismo di inibizione da parte del sale, è stato studiato l'effetto della forza ionica sulle proprietà di sedimentazione dell'enzima. A bassa forza ionica, erano presenti specie enzimatiche con coefficienti di sedimentazione, s20,w, di 5,8 S, 12,4 S e 19,3 S. Nei tamponi con forze ioniche più elevate le quantità relative delle specie 12.4S sono diminuite. Si suggerisce, quindi, che l'inibizione dell'attività a concentrazioni di sale più elevate sia causata da una diminuzione della concentrazione della specie enzimatica attiva.
Fabbisogno nutrizionale alterato associato a mutazioni che interessano le strutture della polimerasi dell'acido ribonucleico in Lactobacillus casei.Mutanti resistenti alla rifampicina sono stati isolati da Lactobacillus casei S1 ed esaminati per una possibile contemporanea alterazione delle proprietà nutritive. Tra i 36 mutanti ottenuti spontaneamente o dopo mutagenesi con 2-aminopurina, 22 sono risultati alterati rispetto alle specifiche esigenze di crescita. La maggior parte (20 su 22) di questi ultimi mutanti è stata mostrata richiedere L-glutammina in aggiunta ai nutrienti richiesti dal ceppo parentale per la massima crescita, mentre i rimanenti mutanti avevano apparentemente perso il fabbisogno di L-aspartato. Ulteriori studi con uno dei mutanti che richiedono glutammina hanno rivelato che la resistenza alla rifampicina di questo ceppo è dovuto alla resistenza della stessa polimerasi dell'acido ribonucleico e che una singola mutazione è responsabile sia della resistenza alla rifampicina che alla glutammina Requisiti. Questi risultati indicano fortemente che un'alterazione strutturale della polimerasi dell'acido ribonucleico causata dalla mutazione della resistenza alla rifampicina ha in qualche modo influenzato il metabolismo della glutammina, probabilmente attraverso un cambiamento nella trascrizione selettiva dei geni coinvolti.
Attività proteasica acida durante la germinazione di microcisti della muffa melmosa cellulare Polysphondylium pallidum.Estratti di microcisti dormienti di Polysphondylium pallidum dimostrano pH ottimale per l'idrolisi di caseina a 3.5 e 6.0. Durante la germinazione l'attività caseinolitica specifica intracellulare pH 6.0 non cambia in modo significativo. La proteasi pH 6.0 è attiva anche sull'azo-albumina, rivelando lo stesso pattern di sviluppo con questo substrato. Entrambe le attività della proteasi acida vengono escrete durante la germinazione L'aggiunta di proteasi aspecifica purificata alle colture accelera la germinazione, suggerendo che la proteasi escreta può svolgere un ruolo nella rimozione della parete della microcisti Quando la cicloeximide viene aggiunta alle colture, la completa germinazione (emergenza) viene interrotta mentre l'attività della proteasi a pH 6.0 continua si accumula tra il 50 e il 60% dell'attività di controllo massima, sebbene ciò suggerisca che i controlli post-traduzionali potrebbero mediare la l'accumulo di una porzione dell'aumento della proteasi a pH 6.0, gli esperimenti di miscelazione e diluizione con estratti cellulari non rivelano la presenza differenziale di attivatori solubili o inibitori di questa attività a diversi stadi di sviluppo. La presenza di complessi enzima-inibitore strettamente legati per la proteasi B nelle microcisti dormienti non è stata esclusa ed è attualmente in fase di studio.
Purificazione e proprietà della beta-N-acetilglucosaminidasi da Escherichia coli.la beta-N-acetilglucosaminidasi (EC 3.2.1.30) è stata purificata da Escherichia coli K-12 a quasi omogeneità basata sull'elettroforesi su gel di poliacrilammide sia in sodio dodecil solfato allo 0,5% che in urea 6 M a pH 8,5. L'enzima purificato mostra un pH ottimale di 7,7 e il Km per p-nitrofenil-beta-D-2 -acetamido-2-deossiglucopiranoside è 0,43 mM. Il peso molecolare di questo enzima, determinato sia mediante filtrazione su gel di Sephadex che mediante elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato, è pari a 36.000. È dimostrato essere un enzima citoplasmatico solubile. Studi sul substrato le specificità dell'enzima purificato indicano che questo enzima è una eso-beta-N-acetilglucosaminidasi.
Complesso proteico-carboidrato-lipidico isolato dagli involucri cellulari di Chlamydia psittaci in tampone alcalino ed etilendiamminotetraacetato.Esposizione di involucri cellulari isolati da elementi infettivi purificati (EB) di Chlamydia psittaci a tampone sodio carbonato-bicarbonato a pH 10 più etilendiamminotetraacetato (EDTA) determina una parziale solubilizzazione della proteina totale. I materiali rilasciati rappresentano il 20% del peso secco, il 16% della proteina totale, il 40% del i carboidrati totali e il 9% dei lipidi totali degli involucri cellulari. La centrifugazione in gradiente di densità di saccarosio e la cromatografia su colonna di Sephadex G-200, Sepharose 4B o dietilamminoetilcellulosa, rivelano un complesso proteina-carboidrato-lipidi di diverse centinaia di migliaia di molecole peso che contiene il 50% di proteine. L'elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato-poliacrilammide degli involucri delle cellule EB isolate rivela due principali bande proteiche, A e B, con masse molecolari stimate di ap rispettivamente circa 85.000 e 53.000, entrambi i quali si colorano anche per la presenza di carboidrati e lipidi. L'elettroforesi su gel del complesso proteina-carboidrato-lipidi rivela due bande proteiche, C e D, con pesi molecolari stimati rispettivamente di circa 17.000 e 13.000, che contengono lipidi e una piccola quantità di carboidrati; le bande A e B non sono presenti nel complesso. L'elettroforesi su gel dei residui dell'involucro cellulare dopo estrazione del complesso con alcali ed EDTA mostra un'unica banda principale, corrispondente alla posizione della banda B, che contiene proteine, carboidrati e lipidi; la banda A è completamente assente. Si ritiene che B e A siano un componente del complesso, che viene diviso in due subunità durante la solubilizzazione degli alcali.
Effetto degli alcali sulla struttura degli involucri cellulari dei corpi elementari di Chlamydia psittaci.Sospensioni degli involucri cellulari isolati dei corpi elementari infettivi (EB) di Chlamydia psittaci a pH alcalino ha mostrato una rapida ed estesa diminuzione dell'assorbanza, accompagnata dal rilascio di un componente dell'involucro cellulare in forma sedimentabile, fenomeno osservato sia a 0 C che con involucri precedentemente riscaldati a 100 C. Monovalente e bivalente i cationi hanno efficacemente inibito la perdita di torbidità, mentre l'etilendiamminotetraacetato (EDTA) ha causato una diminuzione accelerata della torbidità. La perdita di torbidità osservata dopo l'incubazione delle buste a pH alcalino potrebbe essere riportata al livello del valore iniziale mediante dialisi contro acqua distillata contenente Mg2+. -microfotografie elettroniche in sezione di EB purificato esposto a tampone alcalino con EDTA ha rivelato la perdita del contenuto interno delle cellule, ma queste cellule hanno comunque mantenuto il le loro forme rotonde. La superficie cellulare dell'EB trattato appariva butterata nelle preparazioni colorate negativamente, mentre l'EB intatto aveva una superficie liscia. Studi al microscopio elettronico su preparazioni colorate negativamente del surnatante trasparente ottenuto dopo il trattamento dell'involucro con tampone alcalino contenente EDTA hanno dimostrato la presenza di particelle sferiche, di circa 6-7 nm di diametro, e particelle a forma di bastoncino, che sembravano essere costituite da due o più particelle sferiche.
Purificazione e proprietà della poliolo deidrogenasi da Cephalosporium chrysogenus.Una poliolo deidrogenasi di ampia specificità è stata purificata 178 volte da estratti del fungo filamentoso Cephalosporium chrysogenum Si è scoperto che l'enzima agisce come ossido-riduttasi in due sistemi substrato-coenzima: D-sorbitolo (o xilitolo)-nicotinammide-adenina dinucleotide (NAD) e D-mannitolo-nicotinammide adenina dinucleotide fosfato (NADP). composto da cinque isoenzimi, che, come una miscela, hanno mostrato queste proprietà: Km a D-sorbitolo e D-mannitolo, da 7,15 a 10(-2) M; PH ottimale, da 9 a 10; peso molecolare, 300.000 subunità di peso, 29.000; PI, da 5,8 a 7,5. L'attività legata al NADP era labile al trattamento con calore o acido etilendiamminotetraacetico. I saggi di substrato misto supportano l'ipotesi che sia le attività legate al NAD che quelle legate al NADP sono associate agli isoenzimi di una singola deidrogenasi.
Studio microcalorimetrico della crescita anaerobica di Escherichia coli: misurazioni dell'affinità di intere cellule per vari substrati energetici.La microcalorimetria è stata utilizzata per determinare la affinità di cellule intere di Escherichia coli per glucosio, galattosio, fruttosio e lattosio. Sono stati analizzati termogrammi di crescita anaerobica e i valori di Km e Vmax per questi substrati energetici sono stati misurati a pH 7,8. Risultati ottenuti con questa tecnica utilizzando vari organismi che crescono anaerobicamente su vengono confrontati diversi zuccheri. Questo confronto mostra che praticamente in tutti i casi il tasso cellulare di attività catabolica è una funzione iperbolica delle concentrazioni del substrato energetico a basse concentrazioni di zucchero. In alcuni casi questa tecnica consente anche la determinazione della cinetica ad alte concentrazioni di zucchero.
Studio fisiologico dell'ergot: induzione della sintesi di alcaloidi da parte del triptofano a livello enzimatico.Il potenziamento della produzione di alcaloidi dell'ergot da parte del triptofano e dei suoi analoghi in entrambi colture normali e ad alto contenuto di fosfato è più direttamente correlato all'aumento dell'attività di dimetilalliltriptofano (DMAT) sintetasi piuttosto che alla mancanza di regolazione degli enzimi biosintetici del triptofano. Il tiotriptofano [beta-(1-benzo-tien-3-il)-alanina] è piuttosto inefficace nella regolazione del prodotto finale della biosintesi del triptofano, mentre triptofano e 5-metiltriptofano sono potenti effettori. La presenza di livelli aumentati di DMAT sintetasi nelle colture di ergot integrate con triptofano o tiotriptofano e, in misura minore, con 5-metiltriptofano, suggerisce che l'effetto di induzione coinvolge la sintesi de novo dell'enzima. Il tiotriptofano e il triptofano ma non il 5-metiltriptofano possono superare il blocco della sintesi degli alcaloidi da parte del fosfato inorganico. I risultati wi Il tiotriptofano indica che l'effetto fosfato non può essere spiegato semplicemente sulla base di un blocco della sintesi del triptofano.
Correzione del disadattamento nella trasformazione pneumococcica: lunghezza del donatore ed efficienza del marcatore dipendente da esadecimale.Un'ipotesi che il rifiuto preferenziale dei marcatori del donatore da parte del sistema esadecimale di pneumococco è dovuto a rotture letali del doppio filamento è stato esaminato in termini di implicazioni per l'entità dell'escissione richiesta. Gli esperimenti qui riportati erano diretti a chiedere se l'efficienza del marcatore esa-dipendente dipende dalla lunghezza dell'acido desossiribonucleico donatore (DNA). In assenza di competizione intracellulare per la funzione esagonale, non c'era alcun effetto rilevabile della dimensione del DNA sull'efficienza del marcatore dipendente dall'esagono poiché il DNA del donatore è stato tagliato da più di 1 x 107 dalton a 3,6 x 105 dalton. Quest'ultimo DNA è stato purificato da due successivi frazionamenti di velocità per garantire che l'attività osservata fosse rappresentativa del DNA di quella dimensione L'esame quantitativo del sistema mostra che, affinché l'ipotesi dell'evento letale sia vera, la fase di escissione deve rimuovere e una media da 7.000 a 10.000 nucleotidi. Questa cifra è così tanto maggiore di quella vista in altri processi di escissione che dovrebbero essere prese in considerazione ipotesi alternative. Le proprietà attualmente note del sistema esadecimale possono essere spiegate da un modello che invoca le caratteristiche migratorie degli enzimi di restrizione di tipo I.
Sopravvivenza alla fame di Salmonella enteritidis.Cellule lavate di Salmonella enteritidis raccolte da un terreno definito durante la crescita logaritmica sono state sottoposte a fame in tampone fosfato a pH 7 a 37 C. La vitalità è stata misurata mediante colture su vetrino e conte su piastre. La sopravvivenza di sospensioni cellulari equivalenti a 1-10 mg (peso secco)/ml è stata influenzata dalla crescita criptica. La velocità di crescita criptica, valutata tramite conteggi su piastra, aumentava con densità e non poteva essere alleviata dalla fame con la dialisi. La dialisi della cultura affamata ha ritardato l'inizio della crescita criptica ma non l'ha eliminata, indicando che i principali substrati per la ricrescita erano componenti cellulari relativamente grandi. Nel tampone fosfato, 6,7 omologo di calore- le cellule uccise consentivano il raddoppio di una cellula di S. enteritidis La crescita criptica non è stata osservata quando le cellule sono state affamate sulla superficie dei filtri a membrana o in sospensioni equivalenti a 20 mug (peso secco)/ml (105 cellule/ml). Tempi di sopravvivenza simili all'emivita sono stati calcolati per entrambe queste popolazioni, ma la forma delle loro curve di sopravvivenza differiva significativamente. Queste differenze sono state attribuite a fattori di stress riscontrati durante la preparazione delle cellule e durante la fame. Il tempo di sopravvivenza dell'emivita di S. enteritidis affamato a 20 mug (peso secco)/ml era di 140 h in tampone fosfato, 82 h in tampone acido 3,6-endometilene-1,2,3,-6-tetraidroftalico e 77 h in tampone tris(idrossimetil)amminometano.
Proprietà del sistema di trasporto del 3-O-metil-D-glucosio in Acholeplasma laylawii.Trasporto del 3-O-metil-D-glucosio (3-O-MG) da cellule di Acholeplasma laylawii è stato studiato. Il sistema di trasporto 3-O-MG sembrava essere costitutivo in cellule cresciute su 3-O-MG e glucosio; il processo di trasporto dipendeva dalla concentrazione di substrato utilizzato ed esibito tipica cinetica di saturazione, con un Km apparente di 4,6 muM. 3-O-MG è stato trasportato come carboidrato libero e non è stato ulteriormente metabolizzato nella cellula. La dipendenza dal pH e dalla temperatura e i risultati degli esperimenti di efflusso e "controflusso" hanno dimostrato la natura del vettore del sistema di trasporto.6-desossiglucosio e glucosio hanno inibito in modo competitivo il trasporto di 3-O-MG, mentre il maltosio ha inibito il trasporto non competitivo di p-cloromercuribenzoato, p-cloromercuribenzene solfonato, N-etilmaleimmide e iodoacetato hanno inibito il trasporto di 3- O-MG Le cellule sono state in grado di accumulare 3-O-MG contro un gradiente di concentrazione me inibitori del trasferimento di elettroni (rotenone e amytal), arsenato, dicicloesilcarbodiimmide e conduttori di protoni come 2,4-dinitrofenolo, carbonilcianuro, m-clorofenilidrazone, pentaclorofenolo e tetraclorotrifluorometilbenzimidazolo hanno inibito questo processo.
Necrosi tubulare acuta. Un modello sperimentale che dettaglia gli eventi biochimici che accompagnano il danno renale e il recupero.Topi maschi Charles River, divisi in gruppi di controllo o sperimentali, ricevuto il Giorno 0 o 0,3 MNaHCO3 sterile in soluzione fisiologica allo 0,9% (pH7.4) per iniezione intraperitoneale o acido pteroilglutammico (200 tazze per peso corporeo), similmente tamponato a pH 7,6, e sono stati sacrificati nei Giorni 0, 1/4, 1 /2, 1,2,3,4,7 e 14. I reni sperimentali hanno dimostrato depositi intratubulari di acido pteroilglutammico con edema tra i giorni 1 e 4 con cicatrici corticali entro il giorno 14. I reni sperimentali hanno raggiunto il massimo aumento di peso (+90 per cento) il giorno 2, RNA (+61%, proteine (+67 per cento) il giorno 3 e DNA (+25 per cento) il giorno 4 prima di scendere al di sotto dei livelli di controllo il giorno 14. I reni di controllo hanno dimostrato i graduali aumenti incrementali della normale crescita renale durante questo periodo. Nessun cambiamento nella dimensione renale, nelle proteine, nell'RNA o nel DNA c potrebbe essere rilevato in quegli animali che non sono riusciti a dimostrare un danno tubulare renale. Si ipotizza che la risposta del rene alla somministrazione di acido folico sia una risposta riparativa e non una risposta diretta verso una crescita renale accelerata.
Induzione del rigetto dell'innesto corneale mediante trasferimento cellulare passivo.Viene presentato un modello sperimentale che dimostra che gli innesti corneali penetranti nel coniglio possono essere respinti mediante trasferimento passivo nella camera anteriore di cellule linfoidi specificamente sensibilizzate. La distruzione dell'endotelio corneale isto-incompatibile è sempre contrassegnata dalla formazione di aree focali simili a macchie di danno in questo sistema, piuttosto che dalla tipica linea in movimento dell'endotelio rigettante solitamente osservata nell'innesto spontaneo rigetto. Quando le cellule linfoidi trasferite sono compatibili con i tessuti del ricevente dell'innesto, il quadro è quello di un innesto gravemente colpito su un campo di endotelio corneale non coinvolto del ricevente. Quando le cellule linfoidi sono compatibili con l'innesto e non con i tessuti del il ricevente, si vede un chiaro innesto corneale sopravvivere su un campo di distruzione endoteliale sul letto ricevente. La specificità di queste reazioni è illustrata in ter ms delle relazioni di istocompatibilità tra donatore di cornea, ricevente del trapianto e donatore di cellule linfoidi sensibilizzate.
Indagini sull'escrezione della gamma-glutamil-transpeptidasi nelle urine.L'escrezione dell'enzima gamma-glutamil-transpeptidasi e dei suoi isoenzimi nel è stata studiata l'escrezione delle urine in pazienti con malattie renali e confrontata con l'escrezione degli enzimi leucina-aminopeptidasi e lattato-deidrogenasi. In esperimenti su animali è stata riscontrata un'aumentata escrezione di questi enzimi dopo l'autotrapianto. Un'aumentata escrezione di gamma-glutamil-transpeptidasi è stata riscontrata anche in pazienti con glomerulonefrite e in fase poliurica di necrosi tubulare acuta, ma non in caso di pielonefrite e in fase oligurica di necrosi tubulare acuta. Le alterazioni del pattern isoenzimatico durante malattie con aumentata escrezione enzimatica sono in accordo con l'ipotesi che gli enzimi vengono liberati dal tessuto renale nelle urine e solo una minoranza proviene dal sangue. Indagine sull'escrezione di gamma-glutamil-transpeptida se e i suoi isoenzimi nelle urine sembra essere di interesse sia scientifico che clinico.
Interazione di antagonisti adrenergici con prostaglandina E2 e tetraidrocannabinolo nell'occhio.Sia gli antagonisti alfa che beta-adrenergici sono stati utilizzati nel tentativo di discernere il sito di azione della prostaglandina (PG) e del tetraidrocannabinolo (THC) nell'occhio. Entrambi gli antagonisti alfa e beta-adrenergici (alfa-antagonisti, fentolamina e fenossibenzamina; beta-antagonisti, propranololo e sotalolo) hanno causato una riduzione dose-dipendente pressione intraoculare e pressione sanguigna e maggiore facilità di deflusso totale. I risultati sono coerenti con il concetto che sia i recettori alfa- che beta-adrenergici sono presenti nell'uvea anteriore e che il tono vasomotore è essenziale per il mantenimento della normale pressione intraoculare. Nessun antagonista ridotto l'aumento della pressione intraoculare indotto dal PG a meno che la pressione sanguigna non sia stata gravemente abbassata. Tutti gli antagonisti inibiscono il normale aumento indotto dal PG nella facilità di deflusso totale, indicando che questi età nts proteggono la barriera emato-acquosa dalla rottura senza alterare la risposta vasodilatatoria al PG. Tutti gli antagonisti hanno ridotto la caduta della pressione intraoculare prodotta dal THC di circa il 50%, ad eccezione del sotalolo che ha completamente abolito la caduta della pressione intraoculare. Solo gli antagonisti alfa-adrenergici hanno impedito l'aumento indotto dal THC nella struttura di deflusso totale. I risultati indicano che il vero impianto di deflusso può essere regolato esclusivamente da recettori alfa. I dati sono coerenti con l'effetto del THC che è principalmente una vasodilatazione dei vasi sanguigni efferenti dell'uvea anteriore. L'inibizione parziale da parte degli antagonisti alfa-adrenergici può anche suggerire un ruolo minore del THC sui vasi afferenti.
Formazione del medico scalzo nella Repubblica Popolare Cinese: dalla prevenzione al servizio curativo.Tra i cambiamenti che sono stati apportati in assistenza sanitaria nella Repubblica Popolare Cinese, l'introduzione del medico a piedi nudi è stato uno dei modi più importanti ed efficaci che il governo ha escogitato per modificare radicalmente il concetto di assistenza sanitaria. Attraverso una stretta identificazione con la comunità in termini di reclutamento, formazione e pratica, il medico scalzo è una manifestazione concreta dei principi ideologici del seguire la linea di massa e dell'autosufficienza. Il documento si concentra sulla costruzione di servizi sanitari rurali, con particolare riferimento alla formazione del medico scalzo come referente di primo livello nelle cure primarie nei comuni, descrive i programmi di formazione in una scuola di sanità pubblica e la mobilità di carriera possibile per il medico scalzo nell'entrare nei ranghi degli studi medici oneri.
Crescita della popolazione-una minaccia a cosa?In origine, molti degli iniziatori della Conferenza mondiale sulla popolazione, che ebbe luogo a Bucarest nel 1974, avevano sperava che la Conferenza rappresentasse una svolta definitiva per la visione secondo cui le misure di pianificazione familiare dovrebbero avere la massima priorità in tutti i paesi meno sviluppati. In realtà, tuttavia, il Piano d'azione approvato dalla Conferenza contiene molto poco riguardo alla popolazione e alla pianificazione familiare Al contrario, il documento è dominato da frasi prolisse sulla necessità di raggiungere lo sviluppo sociale ed economico in quei paesi L'intuizione che i programmi di pianificazione familiare funzioneranno efficacemente solo se sono parte integrante dei programmi per lo sviluppo sociale ed economico di un paese. portare alla realizzazione di tali programmi. Ci sono tutte le ragioni per dubitare che il piano d'azione avrà tale effetto. Le ragioni del sottosviluppo dei paesi del Terzo mondo non possono essere rimosse attraverso tali Nazioni Unite zioni risoluzioni. Nella Repubblica Popolare Cinese la pianificazione familiare è ampiamente accettata, soprattutto nelle città, e ora anche tra la popolazione rurale. Limitare il numero di bambini è considerato parte dello sforzo di sviluppo della Cina. La Cina è un paese meno sviluppato che sta vivendo un rapido sviluppo sociale ed economico. La posta in gioco in altri paesi del Terzo mondo è come raggiungere uno sviluppo simile. Non appena questo obiettivo viene raggiunto, gli sforzi di pianificazione familiare sono significativi e hanno una possibilità di successo. L'esperienza della Cina dimostra che anche lì c'è voluto del tempo prima che gli sforzi riuscissero. Sono molti i paesi del Terzo Mondo che potrebbero, senza troppe difficoltà, sostenere una popolazione notevolmente più grande di quella attuale. Ma ci sono senza dubbio anche un certo numero di paesi in cui la popolazione è già così grande che un continuo aumento della popolazione sarebbe dannoso. Diventa sempre più urgente la necessità di raggiungere un rapido sviluppo, non ultimo per consentire di ottenere una crescita demografica ridotta. La triste verità è che in quei paesi c'è così poco sviluppo. Senza sviluppo sociale ed economico, l'attuale rapido aumento della popolazione continuerà in quei paesi dove c'è già una popolazione eccessivamente densa.
[Aspetti passati e presenti della malattia diarroica nell'infanzia. Studio clinico e trattamento (transl dell'autore\'s)].I risultati eziologici e fisiopatologici descritti nella prima parte di questo lavoro hanno importanti conseguenze: Il riconoscimento dell'eziologia specifica della diarrea richiede nuovi metodi di laboratorio: la maggior parte di questi, tuttavia, sono tecnicamente facili da eseguire e non richiedono un grande laboratorio. il cambiamento di concetto è una modificazione ben fondata della terapia. La scoperta più importante è stata che in una soluzione elettrolitica di glucosio ben bilanciata sodio e glucosio migliorano il loro assorbimento reciproco e aumentano l'assorbimento di acqua per trascinamento del solvente. Poiché nella maggior parte delle diarree acute i meccanismi di l'assorbimento del glucosio e degli elettroliti viene mantenuto questo meccanismo può essere utilizzato per una rapida reidratazione orale e il ripristino della normale omeostasi intestinale. La soluzione di glucosio-elettrolita menzionata di solito previene la disidratazione grave e la necessità di un trattamento stazionario. L'eliminazione del lattosio e degli acidi grassi a catena lunga dalla dieta impedisce il perdurare delle condizioni patologiche osmotiche e chimiche nell'intestino. Gli antibiotici non sono indicati nelle diarree acute ad eccezione delle diarree causate da E. Coli o Shigella enteroinvasiva, in caso di Salmonella-gastroenterite addirittura controindicata. Ulteriori ricerche si concentrano sullo sviluppo di farmaci per la neutralizzazione dell'enterotossina di E. Coli e la prevenzione delle diarree mediante lo sviluppo di vaccini efficaci.
Cellule T soppressori e resistenza dell'ospite allo pneumococco tye 111 dopo il trattamento con siero antilinfociti.La risposta anticorpale al polisaccaride pneumococcico di tipo III (SS-II) è stato significativamente aumentato nei topi trattati con siero antilinfocitario (SLA). I topi BALG/c trattati con 0,25 ml di SLA nei giorni -1, 0 e 1 rispetto ai giorni di immunizzazione con 0,5 tazze di SSS-II hanno avuto un incremento di 20 volte (11.383 aumentati a 199.917) nel numero di cellule formanti placca splenica enumerate al giorno 5 rispetto ai controlli immunizzati non trattati. Questo effetto è stato attribuito all'eliminazione della sottopopolazione di linfociti (cellule T) derivati dal timo che ha funzione di soppressione. La presente serie di esperimenti correla la risposta anticorpale aumentata a SSS-II nei topi trattati con SLA all'aumento della resistenza dell'ospite dopo l'infezione con Streptococcus pneumoniae, tipo III (Pn-II). La dose letale del 50% di Pn-III nei topi niminunizzati era 102 e la dose letale al 100% era 10 3 organismi. I topi immunizzati con 0,5 tazze di SSS-III e sfidati 5 giorni dopo con Pn-III erano completamente protetti contro una dose fino a 108 organismi. I topi trattati con 0,25 ml di SLA nei giorni -1, 0 e 1, immunizzati con SSS-III il giorno 0 e stimolati con 2,5 X 10 (9) Pn-III il giorno 5 hanno avuto un tempo di sopravvivenza medio superiore a 100 h rispetto a 16 h per i controlli immunizzati non trattati con siero. Gli animali a cui è stata somministrata una singola iniezione di SLA prima dell'immunizzazione non hanno mostrato aumento della resistenza, mentre i topi trattati dopo l'immunizzazione hanno avuto un prolungamento significativo dei tempi di sopravvivenza. Topi immunizzati e non trattati sfidati con 5 X 10 (9), 1 X 5 X 10 (8) Pn-II sono sopravvissuti da 14 a 19 h, mentre gli animali trattati con SLA hanno avuto tempi di sopravvivenza medi di 48, 174 e 222 h, rispettivamente. Questi risultati suggeriscono che le cellule T immunoregolatrici possono avere un effetto biologicamente significativo in una zona ristretta in cui la normale risposta immunitaria dell'ospite è insufficiente ma ancora potenzialmente in grado di fornire un ulteriore grado di protezione se le cellule soppressorie vengono eliminate.
Isolamento e caratterizzazione del collagene di tipo III trattato con pepsina dalla pelle di vitello.Il collagene della pelle di vitello è stato solubilizzato incubando la pelle di vitello estratta con acido con pepsina a pH 2,0 e 25 gradi C, condizioni che non hanno causato la degradazione della regione a tripla elica del collagene. Il collagene di tipo III è stato separato dal collagene di tipo I mediante precipitazione differenziale del sale a pH 7,5. Il collagene di tipo III isolato conteneva principalmente gamma e peso molecolare più elevato componenti reticolati da legami riducibili e/o non riducibili Le catene alfa1(III) isolate avevano una composizione amminoacidica caratteristica del collagene di tipo III Collagene di tipo III denaturato ma non ridotto, cromatografato su carbossimetilcellulosa, eluito nell'alfa 2 mentre dopo la riduzione e l'alchilazione le catene alfa1 (III) eluiscono tra le posizioni di alfa1 (I) e alfa 2. La temperatura di fusione del punto medio (tm) del collagene di tipo III (35,1 gradi C) in un citrato b ffer a pH 3,7 era leggermente inferiore a quello del collagene di tipo I (35,9 gradi C). Esperimenti di rinaturazione a 25 gradi C hanno mostrato che le molecole di collagene di tipo III denaturato con ponti disolfuro intramolecolari intatti (componenti gamma) riformano la struttura a tripla elica del collagene molto più velocemente delle catene alfa1 (III) ridotte e carbossimetilate.