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Otite media sperimentale da Streptococcus pneumoniae: risposta immunopatogena nel cincillà.L'otite media acuta è stata prodotta in 110 cincillà mediante inoculazione di Streptococcus pneumoniae di tipo 23 direttamente nella cavità dell'orecchio medio mediante timpanotomia. Durante i primi tre giorni dopo l'inoculazione, sono state osservate cellule infiammatorie nel mucoperiosteo dell'orecchio medio. Dopo quattro-sette giorni, c'era essudazione purulenta nella cavità dell'orecchio medio e il 40% del gli animali avevano meningite e/o batteriemia pneumococcica. Le orecchie medie erano sterili in cinque dei 28 animali sacrificati durante la seconda settimana e in sei dei sette animali sacrificati a sei settimane, anche se nel mucoperiosteo persistevano alterazioni subepiteliali Livelli di anticorpi contro S. pneumoniae nel siero sono stati misurati mediante dosaggio radioimmunologico; i valori medi erano di 6,1 ng di azoto anticorpale pneumococcico/ml in 28 animali di controllo non infetti e 16,5 ng di azoto anticorpale/ml in 29 animali sacrificati due settimane dopo l'inoculazione (P inferiore a 0,025). L'attività opsonica del siero contro S. pneumoniae è stata valutata in cincillà infetti e non infetti. Il titolo opsonico era significativamente più alto negli animali infetti sacrificati a sei settimane rispetto ai controlli non infetti. Sebbene l'antigene polisaccaridico pneumococcico sia stato trovato mediante controimmunoelettroforesi in 25 su 30 versamenti dell'orecchio medio, non è stato possibile rilevarlo nel siero di animali infetti. I metodi per l'infezione e il sacrificio dei cincillà hanno prodotto risultati riproducibili. Questo modello dovrebbe consentire la valutazione della risposta patologica ad altri sierotipi di S. pneumoniae ed eventualmente a regimi profilattici e terapeutici.
Interazioni tra virus e batteri in pazienti con bronchite cronica.È stata studiata la possibilità che le infezioni virali delle vie respiratorie possano predisporre alla colonizzazione o infezione batterica in 120 pazienti con malattia polmonare ostruttiva cronica e 30 soggetti di controllo; questi individui sono stati osservati per sette anni. Il rapporto tra il numero di osservati e il numero di associazioni previste tra virus e batteri era 2,43 (P = 0,037) per la coppia influenza virus e Streptococcus pneumoniae ed era 2,06 (P = 0,056) per virus influenzale e Haemophilus influenzae. Sono state rilevate associazioni costantemente positive, ma non significative, tra infezioni da virus rhinovirus e herpes simplex e isolamenti di S. pneumoniae e H. influenzae. , gli isolamenti dell'Haemophilus parainfluenzae non patogeno non possono essere correlati a precedenti infezioni virali Aumenti significativi del titolo di anticorpi contro H. influenzae sono stati rilevati in 76 occasioni e 20 (26%) di questi aumenti anticorpali sono stati associati a infezioni virali o micoplasmatiche durante i precedenti 120 giorni. Il numero previsto di tali associazioni era 8,34 (rapporto tra numero osservato e numero atteso, 2,40; P = 0,08). Questi risultati suggeriscono che le infezioni virali del tratto respiratorio in pazienti con malattia polmonare ostruttiva cronica sono associate a un aumento della colonizzazione da parte di batteri potenzialmente patogeni e possono anche predisporre alle infezioni da H. influenzae.
Transglutaminasi epidermica umana. II. Proprietà immunologiche.Un anticorpo monospecifico per la transglutaminasi epidermica umana è stato preparato nei conigli. L'anticorpo ha formato singole linee di immunoprecipitina con o transglutaminasi umana grezza e attività della transglutaminasi quantitativamente precipitata. Non ci sono state reazioni di precipitina tra il fattore XIII umano (zimogeno o enzima attivo) e la transglutaminasi epidermica antiumana o tra la transglutaminasi epidermica umana e il fattore XIII antiumano. Riscaldamento della transglutaminasi epidermica (56 gradi C, 15 min) in presenza di calcio ha aumentato l'attività enzimatica fino a 10 volte i livelli basali. La transglutaminasi epidermica umana attivata dal calore era identica per immunodiffusione con l'enzima nativo, sebbene siano stati rilevati titoli di precipitazione leggermente più alti dopo il riscaldamento. Non c'era alcuna reazione crociata di antiumano transglutaminasi epidermica con follicolo pilifero di rana, ratto, topo, pollo o umano transglutaminasi.
[Il rischio di arresto cardiaco durante la laparoscopia. Uno studio su 50.000 laparoscopie e sperimentazione animale].In un'inchiesta nazionale francese su 50.000 laparoscopie emerge che il numero di arresti cardiaci è di 1 su 2.000. La percentuale di arresti cardiaci reversibili è stata di 1 su 2500 e di arresti cardiaci irreversibili 1,2 su 10.000. 25 casi sono stati studiati in modo molto dettagliato, sia clinicamente che fisiopatologicamente, grazie a un questionario molto ricco gentilmente compilato da chi ci aveva detto che questo tipo di incidente era accaduto nel loro studio. La fisiopatogenesi degli arresti circolatori durante la laparoscopia è complessa. Sembra però che tra i diversi fattori di potenziamento vi siano alterazioni emodinamiche e alterazioni biologiche che danno luogo ai maggiori rischi. Il lavoro sperimentale effettuato con un babbuino dalla coda lunga è stato eseguito dagli autori con l'idea da un lato di confermare che emodinamica e bi erano importanti i problemi logici derivanti dal pneumoperitoneo e d'altra parte di analizzare i cambiamenti in dettaglio e di elaborare principi profilattici per l'anestesista e il laparoscopista.
[Diagnosi di sofferenza fetale durante il travaglio con l'ausilio del punteggio cardiotocografico di Hammacher e determinazione del pH fetale].Gli autori studiano il valore di il sistema di punteggio tocografico Hammacher nella diagnosi di sofferenza fetale durante il travaglio. Questo punteggio dà uguale valore a tre componenti della frequenza cardiaca fetale: la linea di base, le variazioni transitorie (cali) e le fluttuazioni (oscillazioni). Vi è un valore statisticamente molto significativo ( p minore di 0,001) relazione tra il punteggio cardiotocografico e il pH fetale come è stato riscontrato in 106 travagli con un coefficiente di correlazione di 0,67. Il punteggio può essere effettuato utilmente solo quando un "battito su battito" a cuore tasso è registrato e quando questo non è influenzato dalla somministrazione di farmaci alla madre. Il punteggio si è dimostrato particolarmente utile nella diagnosi di sofferenza fetale quando le membrane sono ancora intatte.
L'uso sistemico della procaina nel trattamento degli anziani: una revisione.Questo articolo è una revisione e valutazione della letteratura mondiale sulla uso della procaina nel trattamento del processo di invecchiamento e delle comuni malattie croniche dell'età avanzata. Sono inclusi i dati di 285 articoli e libri, che descrivono il trattamento in più di 100.000 pazienti negli ultimi 25 anni. Fatta eccezione per un possibile effetto antidepressivo, vi è nessuna prova convincente che la procaina (o Gerovital, di cui la procaina è il componente principale) abbia alcun valore nel trattamento della malattia nei pazienti più anziani. Se la procaina ha un effetto antidepressivo, c'è qualche probabilità che questo spieghi i rapporti di diminuzione dei disturbi riferibili ai sistemi muscoloscheletrico, cardiovascolare, endocrino-sessuale, gastrointestinale e respiratorio.
Risposte adattative dei sistemi cerebrali che generano AMP ciclico alle alterazioni dell'input sinaptico.Il concetto di subsensibilità e supersensibilità come meccanismo di adattamento neuronale alle alterazioni nell'attività sinaptica nel cervello è attraente. Tuttavia, la complessità del sistema nervoso centrale ha reso difficile determinare la base cellulare di apparenti cambiamenti nell'eccitabilità neuronale derivanti da alterazioni nell'input sinaptico (cfr. rif. 83). ora sembra che, almeno per le vie centrali inibitorie in cui i sistemi ciclici che generano AMP mediano le risposte dei recettori postsinaptici, le alterazioni nell'input sinaptico portano nella corteccia del ratto a prevedibile super o subsensibilità dei sistemi AMP ciclici sensibili alla noradrenalina. -sistemi AMP ciclici sensibili si verificano anche nella corteccia di ratto a causa di lesioni apparenti dei tratti istaminergici. La ragione per cui la supersensibilità non si sviluppa alla noradrenalina e hi la stamina nella corteccia della cavia dopo simili "denervazioni" non è nota, ma è fondamentale per la comprensione dei fattori coinvolti nel ruolo dei meccanismi ciclici dell'AMP nella plasticità adattativa del sistema nervoso centrale. Tuttavia, anche prima di ottenere una comprensione di tutti i fattori coinvolti nelle alterazioni delle risposte cicliche all'AMP nel tessuto cerebrale, gli studi sugli effetti delle manipolazioni ambientali e farmacologiche possono fornire approfondimenti sia sui ruoli centrali dei meccanismi ciclici dell'AMP sia sul natura dell'azione del farmaco. Chiaramente, una comprensione delle interrelazioni tra input sinaptico e cambiamenti adattivi nei sistemi AMP ciclici postsinaptici e lo sfruttamento di tale conoscenza per la delucidazione della funzione adattativa centrale è una sfida entusiasmante per la ricerca futura.
Inibizione dell'attività della guanilato ciclasi solubile nei mammiferi da parte di adenosina 5\'-tetrafosfato, guanosina 5\'-tetrafosfato e altri nucleotidi.Gli effetti di un varietà di nucleotidi purinici e pirimidinici sono stati testati per la loro capacità di inibire l'attività della guanilato ciclasi solubile dei mammiferi. È stato riscontrato che l'adenosina 5\'-tetrafosfato (ATetP), l'ATP, l'ADP, l'AMP, la guanosina 5\'-tetrafosfato (GTetP) e il PIL inibiscono attività guanilato ciclasi solubile da polmone di ratto e altri tessuti di mammiferi I corrispondenti nucleotidi citosina e timina hanno mostrato poca o nessuna attività inibitoria, ad eccezione della timidina 5\'-tetrafosfato, che ha inibito l'attività della glanilato ciclasi ma in misura minore rispetto ai nucleosidi purinici tetrafosfati Si è scoperto che ATetP e GTetP sono potenti inibitori dell'attività della guanilato ciclasi solubile da polmone di ratto, cavia e topo, cuore di ratto e cervello di ratto. 5 inibitori dell'enzima solubile nel polmone di ratto. ATetP e GTetP avevano valori Ki di 1 muM e 2,5 muM, rispettivamente. I dati sperimentali suggeriscono che i nucleosidi tetrafosfati purinici, e forse altri nucleotidi purinici, possono svolgere un ruolo biologico nella modulazione dell'attività della guanilato ciclasi solubile nei mammiferi.
Inibizione dell'attività della renina plasmatica umana da parte della pepstatina.La pepstatina, un pentapeptide isolato dagli streptomici, è un potente inibitore di diverse proteasi acide. La sua capacità di inibire la reazione renina-angiotensinogeno è stato studiato in vitro, in vari plasma umani. Un'inibizione del 50% dell'attività della renina plasmatica è stata ottenuta con pepstatina 10(-6)M a pH 5,7 e 10(-5) M a pH 7,4. dell'attività della renina plasmatica da parte della pepstatina è stata studiata in pazienti ipertesi con vari livelli di renina plasmatica. L'effetto inibitorio potrebbe essere dimostrato in pazienti con attività reninica bassa, normale e alta a entrambi i pH\'. Il tipo di inibizione e la costante inibitoria sono stati studiati da Dixon plot e Lineweaver-Burk plot in tre esperimenti separati. Su entrambe le rappresentazioni, è stato trovato un tipo di inibizione competitiva con una costante inibitoria di circa 1,2 x 10(-6)M.
Proprietà anioniche residue di un vetro a pori controllati covalentemente sostituito, glyceryl-CPG.Un mezzo di vetro commerciale a pori controllati per cromatografia di esclusione che è sostituito con glicerolo per eliminare l'adsorbimento non specifico (Glyceryl-CPG) è stato esaminato Esperimenti sull'eluizione di acetilcolinesterasi e micelle gangliosidiche a forza ionica e pH variabili hanno mostrato che un leggero carattere anionico persisteva ancora sulla matrice di vetro. A forze ioniche superiori a 0,1, questo non ha avuto effetto sull'eluizione delle proteine. Il materiale è risultato non avere tendenza ad adsorbire proteine e altri composti ed è stato giudicato un ottimo mezzo per la cromatografia di esclusione. Come supporto per la cromatografia di affinità, Glyceryl-CPG potrebbe essere attivato dal periodato per formare un sistema matrice-ligando virtualmente neutro.
Uso di acetonitrile per l'estrazione di residui di erbicidi dal suolo.Utilizzo di una soluzione acquosa di acetonitrile al 10% per l'estrazione e un'identica procedura di pulizia con solvente , i residui a base di terreno degli erbicidi alaclor, benzoil-prop-etile, flufenprop-isopropile, flufenprop-metile, diclorfop-metile, nitrofene e profluralin sono stati recuperati in modo riproducibile da tre terreni della prateria fortificati a livelli di 0,5 e 0,1 ppm. benazolin, 2,4-D e 2,4,5-T, insieme agli acidi derivati da benzoilprop-etile, diclorfop-metile, flufenprop-isopropile e flufenprop-metile sono stati recuperati in modo riproducibile dai tre terreni della prateria fortificati a 0,5 e 0,1 ppm utilizzando il 30% di acetonitrile acquoso contenente l'1% di acido acetico dopo identiche fasi di pulizia. Tutti i composti sono stati analizzati mediante mezzi gascromatografici utilizzando un rivelatore a cattura di elettroni. Le due procedure descritte sono state sviluppate per l'estrazione di routine e l'analisi del neutro residui di erbicidi ral e acidi da studi di persistenza del suolo sul campo.
Caratterizzazione cromatografica di farmaci fenotiazinici mediante una tecnica su strato sottile in fase inversa.Per la caratterizzazione è stata utilizzata una tecnica cromatografica su strato sottile in fase inversa di 26 farmaci fenotiazinici. Con due sistemi cromatografici aventi lo stesso rapporto di fase stazionaria e volume di fase, ma fasi mobili di diverso pH, è stato possibile identificare tutti i composti tranne due. I valori di Rf nei diversi sistemi sono stati standardizzati applicando un composto di riferimento a le piastre accanto a ciascun composto in esame; i valori Rf corretti sono stati calcolati dalle differenze tra i valori Rm dei composti e il composto di riferimento e il valore Rm teorico del riferimento. È stato dimostrato che i valori Rf per diversi sistemi cromatografici con la stessa fase stazionaria potrebbe essere prevista con ragionevole accuratezza. Il pH della fase mobile, per cui è stata ottenuta una differenza massima nei valori di Rf per coppie di composti, potrebbe anche essere calcolata e corrispondere bene ai valori osservati.
Legame differenziale del metilbenzimidazolo-2-il carbammato alla tubulina fungina come meccanismo di resistenza a questo agente antimitotico in ceppi mutanti di Aspergillus nidulans.Il composto antimitotico metil benzimidazolo-2-il carbammato (MBC) ha formato un complesso in vitro con una proteina presente negli estratti miceliali dei funghi. La proteina legante di Aspergillus nidulans ha mostrato una serie di proprietà uniche per la tubulina. Il legame si è verificato rapidamente a 4 gradi C ed è stato inibito in modo competitivo da oncodazolo e colchicina. Altri inibitori della funzione dei microtubuli come podofillotossina, vinblastina solfato, melatonina e griseofulvina non hanno interferito con il legame di MBC. L'analisi elettroforetica di preparazioni parzialmente purificate della proteina legante ha rivelato la presenza di proteine con mobilità simili a quelle dei monomeri di tubulina dei mammiferi. Quindi si conclude che la proteina legante è identica alla tubulina fungina. L'effetto di MBC sul micelio gr Il consumo di ceppi mutanti di A. nidulans era correlato positivamente con l'affinità dei siti di legame per questo composto. L'apparente costante di legame per MBC e tubulina da un tipo selvatico è stata stimata a 4,5 X 10(5), da un ceppo resistente a 3,7 X 10(4) e da un ceppo con maggiore sensibilità a MBC a 1,6 X 10(6) litri/mol. I mutanti che mostrano resistenza e maggiore sensibilità all'MBC sono candidati ad avere alterazioni nella struttura della tubulina. L'affinità della tubulina per MBC è probabilmente un meccanismo comune di resistenza a questo composto nei funghi. La bassa affinità della tubulina per MBC è probabilmente un meccanismo comune di costante di legame alla resistenza di 2,5 X 10 (3) litri/mol.
[Vagotomia ultraselettiva nel trattamento dell'ulcera duodenale. Relazione sulla tavola rotonda (77° Congresso francese di chirurgia, 1975)].Questo Il panel ci consente di trarre le seguenti conclusioni sulla vagotomia altamente selettiva per l'ulcera duodenale: alcuni punti sono ancora in discussione e molto dibattuti: --lo scopo utile dei test per-operatori; --l'aggiunta più o meno frequente di procedure di drenaggio --Infine, l'efficacia antiulcera a lungo termine (oltre 5 anni) è ancora non noto con precisione; alcuni pensano che il rischio di rigenerazione vagale sia maggiore dopo questo tipo di vagotomia.
Sintesi di proteine plasmatiche da parte di epatociti isolati di ratto.Un sistema di preparazione di epatociti di ratto con vitalità estesa è stato sviluppato per studiare il ruolo di ormoni e altri componenti del plasma dopo la sintesi proteica secretoria. Gli epatociti mantenuti nel mezzo essenziale minimo hanno ridotto i livelli di tutti gli aminoacidi nel mezzo ad eccezione degli aminoacidi lentamente catabolizzati leucina, isoleucina e valina, che aumentano costantemente come risultato del catabolismo delle proteine epatiche. le cellule epatiche catabolizzano il 10-15% delle proprie proteine durante un'incubazione di 20 ore, le cellule continuano a secernere proteine in modo lineare per tutto il periodo Gli effetti di insulina, cortisolo ed epinefrina sulla sintesi proteica generale, e in particolare sul fibrinogeno e la sintesi dell'albumina, sono stati testati su cellule sia di ratti normali che di ratti adrenalectomizzati. Le cellule di animali normali mostrano preinduzione della tirosina aminotransferasi (TAT), avente al momento della isolare un alto livello di enzima che mostra solo un aumento di circa il 60% dopo incubazione con cortisolo. Al contrario, le cellule degli animali adrenalectomizzati inizialmente hanno un basso livello di enzima che aumenta di quattro volte in un periodo di 9 ore. Gli effetti sia dell'adrenalina che del cortisolo sulla sintesi proteica sono anche molto maggiori nelle cellule di animali adrenalectomizzati. Dopo un ritardo di diverse ore, il cortisolo aumenta bruscamente la sintesi del fibrinogeno, così che alla fine dell'incubazione di 20 ore, le cellule trattate con l'ormone hanno secreto quasi 2,5 volte più fibrinogeno delle cellule di controllo. L'effetto è specifico; il cortisolo non stimola né la secrezione di albumina né la sintesi proteica intracellulare. La combinazione di cortisolo ed epinefrina deprime fortemente la sintesi dell'albumina in entrambi i tipi di cellule. L'insulina migliora l'albumina e la sintesi proteica generale, ma ha scarso effetto sulla sintesi del fibrinogeno.
Confronto delle dimensioni e delle proprietà fisiche della gamma-glutamiltranspeptidasi purificata da rene di ratto dopo solubilizzazione con papaina o con Triton X-100.gamma-glutamiltranspeptidasi è associato alla membrana del bordo a spazzola delle cellule del tubulo rettilineo prossimale del rene. Può essere solubilizzato qualitativamente mediante trattamento con papaina o Triton X-100. Nessuna delle procedure influisce sulla sua attività catalitica, ma le due forme risultanti dell'enzima differiscono notevolmente nelle loro proprietà fisiche. La transpeptidasi solubilizzata con papaina è solubile in tamponi acquosi ed è stata purificata 430 volte. Ha un s20,w di 4,9 S, un raggio di Stokes di 36 A e un peso molecolare calcolato di 69.000. Appare omogeneo mediante centrifugazione all'equilibrio di sedimentazione ( Mr=66,700). Al contrario, la transpeptidasi solubilizzata con Triton è solubile solo in presenza di detergenti ed è stata purificata di 300 volte. Questa forma dell'enzima ha un raggio di Stokes di 70 A ma un s20,w di soli 4,15 S. L'aggregazione dell'enzima appena al di sotto della concentrazione micellare critica di Triton X-100 e la sua capacità di legare 1,16 mg di complesso Triton X-100-proteina è stata calcolata in 169.000, ma la porzione di glicoproteina del complesso è 52 % della massa totale (87.000). La massa di Triton X-100 (82.000) è coerente con il peso molecolare della micella riportato. Il trattamento della transpeptidasi purificata con Tritone con papaina o bromelina determina una forma dell'enzima identica sotto tutti gli aspetti all'enzima purificato con papaina. Sia la transpeptidasi purificata con Tritone che quella con papaina mostrano due bande proteiche all'elettroforesi su gel di sodio laurilsolfato-poliacrilammide. Le subunità più piccole delle due forme appaiono identiche (Mr=27.000), mentre le subunità più grandi dell'enzima purificato con Tritone e papaina hanno pesi molecolari apparenti rispettivamente di 54.000 e 51.000. Questi dati suggeriscono che un peptide (da 3.000 a 19.000) nella subunità più grande della gamma-glutamiltranspeptidasi è responsabile del suo legame con le micelle di Tritone e probabilmente per trattenere l'enzima nella membrana del bordo a spazzola.
Aggregazione di subunità di deossiemoglobina.La formazione di deossiemoglobina è stata esaminata misurando il cambiamento spettrale dell'eme che accompagna l'aggregazione di catene alfa e beta isolate. basse concentrazioni di eme (inferiori a 10(-5) M), la formazione di tetrameri può essere descritta da due reazioni consecutive di secondo ordine che rappresentano l'aggregazione di monomeri seguita dall'associazione di dimeri alfabetici. A pH neutro, i tassi di aggregazione di monomeri e dimeri sono all'incirca lo stesso, circa 5 X 10(5) M(-1) X(-1) a 20 gradi. Alzando o abbassando il pH si ottiene una diminuzione uniforme di entrambi i tassi di aggregazione dovuta presumibilmente alla repulsione delle subunità caricate positivamente a pH acido e repulsione delle subunità caricate negativamente a pH alcalino. L'aggiunta di p-idrossimercuribenzoato alle catene alfa riduce il tasso di aggregazione del monomero mentre l'aggiunta di mercuriali alle subunità beta sembra abbassare sia il tasso di monomero che il tasso di dimero aggregazione. Ad alte concentrazioni di eme (maggiori di 10(-5) M) o in presenza di fosfati organici, la velocità di aggregazione della catena viene limitata, in parte, dalla lenta dissociazione dei tetrameri della catena beta. Nel caso dell'inositolo esafosfato, la velocità di formazione dell'emoglobina mostra una dipendenza a forma di campana dalla concentrazione di fosfato. Quando le concentrazioni intermedie di inositolo esafosfato (circa 10 (-4 M) vengono preincubate con subunità beta, si osserva un andamento lento del primo ordine e mostra un tempo di dimezzamento di circa 8 minuti. Man mano che viene aggiunto più inositolo esafosfato, la reazione di aggregazione a catena inizia a verificarsi più rapidamente. Alla fine a circa 10(-2) esafosfato di M inositolo, l'andamento temporale diventa quasi identico a quello osservato in assenza di fosfati. L'aumento della velocità della reazione di aggregazione a catena ad alte concentrazioni di fosfato suggerisce fortemente che l'inositolo esafosfato si lega ai monomeri beta e, se aggiunto in quantità sufficientemente grandi, promuove la dissociazione del beta 4. Un'analisi quantitativa di questi risultati ha mostrato che l'affinità dei monomeri beta per l'inositolo esafosfato è la stessa di quella dei dimeri alfabetici. sia alfa2beta2 che beta4, è stato osservato un marcato aumento dell'affinità per l'inositolo esafosfato.
Latenza dell'inosina-5\'-difosfatasi in microsomi isolati dal fegato di ratto.La latenza dell'inosina-5\'-difosfatasi è stata studiata in microsomi isolati da fegato di ratto. La comparsa di attività latente era il risultato di un aumento della Vmax dell'enzima. Questo è stato osservato quando i saggi sono stati effettuati in presenza di sodio desossicolato, dopo che i microsomi sono stati trattati con fosfolipasi C, o a pH 10,3 e dopo i microsomi sono stati sottoposti a cavitazione di azoto. Il Km apparente di inosina-5\'-difosfatasi per IDP è rimasto invariato quando i microsomi sono stati trattati con fosfolipasi C o a pH 10,3 dopo entrambi questi trattamenti circa l'85% dell'enzima è rimasto legato a la membrana. Al contrario, quando i microsomi sono stati trattati con fosfolipasi C o a pH 10,3 dopo entrambi questi trattamenti circa l'85% dell'enzima è rimasto legato alla membrana. Al contrario, quando i microsomi sono stati trattati con sodio desossicolato o sottoposti a t o cavitazione dell'azoto, circa il 75% dell'attività dell'inosina-5\'-difosfatasi è stato rilasciato dalla membrana e il Km apparente dell'enzima per l'IDP è aumentato rispettivamente di 4 e 2 volte. Le cisterne microsomiali sono state caricate con fosfato di piombo mediante incubazione con glucosio-6-P e Pb2+ ed è stato determinato il rilascio di questo fosfato di piombo in seguito all'aggiunta di EDTA al mezzo per stimare la permeabilità della membrana microsomiale. Quando i microsomi sono stati trattati con sodio desossicolato, fosfolipasi C oa pH alcalino, la membrana microsomiale è diventata quasi completamente permeabile all'EDTA in condizioni in cui l'attività dell'inosina-5\'-difosfatasi era scarsa o assente. I microsomi sono stati trattati a pH 10,3 e quindi regolati lentamente a pH 7,5. L'attività dell'inosina-5\'-difosfatasi è diminuita alla stessa attività osservata nei preparati non trattati. I risultati sembrano escludere la possibilità che l'attività latente dell'inosina-5\'-difosfatasi sia il risultato di un'aumentata permeabilità della membrana all'IDP. Sono, tuttavia, coerenti con la presenza di un inibitore non competitivo dell'enzima nella membrana microsomiale.
Purificazione e proprietà dell'adenilato chinasi del mantello di calamaro. Ruolo del NADH nel controllo dell'enzima.Adenilato chinasi (ATP:AMP fosfotransferasi, EC 2.7. 4.3) dal muscolo del mantello del calamaro, Loligo pealeii, è stato purificato di oltre 170 volte fino all'omogeneità valutata mediante elettroforesi su poliacrilammide e gel di amido. Il tessuto contiene un singolo isoenzima dell'adenilato chinasi, l'enzima dei compartimenti citoplasmatico e mitocondriale (90 e 10% dell'attività totale, rispettivamente) essendo identici nelle proprietà fisiche e cinetiche. Il peso molecolare è risultato essere 27.000 +/- 400. L'enzima mostra un pH ottimale di 8,2 in avanti (utilizzando l'APD) e 7,4 nella direzione inversa. Le costanti di Michaelis per ADP, ATP e AMP sono rispettivamente 0,70, 0,13 e 0,15 mM, con rapporti ottimali Mg2+:adenilato di 1:2 per ADP e 1:1 per ATP. Un confronto dei rapporti di azione di massa con la costante di equilibrio indicata che il calamaro adenilato chinasi è tenuto fuori equilibrio m in riposo, ma non attivo, muscolo. Una ricerca di modulatori metabolici dell'adenilato chinasi ha rivelato che NADH (Ki di 0,1 mM) era l'unico modulatore che esercitava un effetto significativo all'interno del suo intervallo di concentrazione in vivo. I dati presentati indicano che l'inibizione del NADH è il fattore che mantiene l'adenilato chinasi in uno stato di non equilibrio nel muscolo a riposo e che il rilascio di questa inibizione può servire a integrare l'adenilato chinasi nello schema noto del metabolismo intermedio in questo tessuto. Un forte calo dei livelli di NADH all'inizio del lavoro muscolare coordina l'attivazione del metabolismo aerobico in questo tessuto e consente all'adenilato chinasi di tornare alla funzione di equilibrio. All'equilibrio, l'enzima può funzionare per amplificare la concentrazione di AMP, un potente attivatore e deiinibitore degli enzimi chiave glicolitici e del ciclo di Krebs. L'effetto dei modulatori dell'adenilato chinasi nel prevenire la denaturazione da calore o proteolisi ha rivelato che NADH e substrati inducono cambiamenti conformazionali nell'enzima che lo rendono meno suscettibile alla denaturazione. Lo stato di conformazione indotto da NADH differiva da quello indotto dal substrato.
Sintesi di adenosina trifosfato legato da adenosina difosfato legato mediante il fattore di accoppiamento purificato 1 dei cloroplasti. Prova del coinvolgimento diretto del fattore di accoppiamento in questo "adenilato chinasi-simile" reazione.Il fattore di accoppiamento elettroforeticamente omogeneo 1 dei cloroplasti di spinaci lega l'ADP e converte l'ADP legato in ATP e AMP legati. Che questa transfosforilazione dell'ADP legato all'enzima è catalizzata dal fattore di accoppiamento stesso e non è un adenilato chinasi convenzionale che potrebbe eventualmente contaminare le preparazioni del fattore di accoppiamento, è supportato dalle seguenti prove: 1. La procedura per l'isolamento del fattore di accoppiamento è progettata per separare questo enzima grande (circa 13 S) dal più piccolo (4,2 S) convenzionale adenilato chinasi dei cloroplasti di spinaci L'adenilato chinasi convenzionale non può essere rilevata nelle preparazioni purificate del fattore di accoppiamento mediante analisi biochimiche o mediante elettroforo su gel di poliacrilammide esi. 2. L'attività dell'adenilato chinasi degli spinaci dipende completamente dagli ioni magnesio. Tuttavia, la produzione di ATP e AMP legati dall'ADP legato da parte del fattore di accoppiamento può essere analizzata in totale assenza di ioni magnesio aggiunti o anche in presenza di EDTA aggiunto. 3. Studi comparativi con inibitori mostrano che il fattore di accoppiamento può produrre ATP legato dall'ADP in condizioni in cui l'attività dell'adenilato chinasi è fortemente inibita. Al contrario, al fattore di accoppiamento viene impedito di sintetizzare l'ATP legato dall'ADP in altre condizioni in cui l'adenilato chinasi convenzionale ha alti livelli di attività. 4. L'AMP, aggiunto in soluzione al fattore di accoppiamento, non si lega a questo enzima, anche in presenza di APT. Pertanto, è improbabile che la comparsa di AMP legato al fattore di accoppiamento dopo la sua incubazione con ADP sia dovuta alla produzione di AMP libero contaminando l'adenilato chinasi. Questi risultati dimostrano che il fattore di accoppiamento isolato e omogeneo dai cloroplasti degli spinaci ha la capacità intrinseca di eseguire un trasferimento di gruppi fosforilici tra due molecole di ADP legate e quindi di sintetizzare ATP. Questa reazione può avere un ruolo importante nella produzione fotosintetica di ATP da parte del cloroplasto, come discusso in questa comunicazione.
Apparenza dell'attività della guanilato ciclasi di magnesio nel fegato di ratto con attivazione della sodio azide.La guanilato ciclasi solubile e particolata nativa da diversi tessuti di ratto preferiva Mn2+ a Mg2+ come l'unico cofattore cationico. Con il catione 4mM, le attività con Mg2+ erano inferiori al 25% delle attività con Mn2+. Il NaN3 1 mM ha aumentato notevolmente l'attività dei preparati solubili e particolati dal fegato di ratto. Con l'attivazione di NaN3 attività guanilato ciclasi wite simili con Mn2+ e Mg2+. Co2+ era parzialmente efficace come cofattore in presenza di NaN3, mentre Ca2+ era un catione povero con o senza NaN3. Le attività con Ba, Cu2+ o Zn2+ non erano rilevabili senza o con 1 mM NaN3. Con l'enzima epatico solubile sia le attività del manganese e del magnesio dipendevano dall'eccesso di Mn2+ o Mg2+ a una concentrazione fissa di MnGTP o MgGTP di 0,4 mm; i valori di Km apparenti per l'eccesso di Mn2+ e Mg2+ erano rispettivamente di 0,3 e 0,24 mM. Dopo l'attivazione di NaN3, l'attività y era meno dipendente da Mn2+ libero e ha mantenuto la sua dipendenza per Mg2+ libero, a 0,4 mM MgGTP il Km apparente per Mg2+ in eccesso era 0,3 mM. L'attività della guanilato ciclasi epatica solubile saggiata con Mn2+ o Mg2+ è stata aumentata con Ca2+. Dopo l'attivazione di NaN3, il Ca2+ non ha avuto alcun effetto o è stato in qualche modo inibitorio con entrambi i Mn2+. Dopo l'attivazione di NaN, il Ca2+ non ha avuto alcun effetto o era in qualche modo inibitorio con Mn2+ o Mg2+. L'effetto stimolante di NaN2 sull'attività della guanilato ciclasi dipendente da Mn2+ e Mg2+ dalle frazioni del surnatante della corteccia cerebrale o del fegato ha richiesto la presenza del fattore attivatore della sodio azide. Con la guanilato ciclasi epatica solubile parzialmente purificata e il fattore attivatore dell'azide, la concentrazione (1 mjM) di NaN3 che ha dato un'attivazione semimassima con Mn2+ o Mg2+ era simile. Pertanto, in alcune condizioni, la guanilato ciclasi può utilizzare efficacemente Mg2+ come unico cofattore cationico.
Una pompa H+ non elettrogenica nelle membrane plasmatiche dello stomaco di maiale.La centrifugazione differenziale e in gradiente di densità è stata utilizzata per preparare una frazione di membrana vescicolare da mucosa gastrica di maiale arricchita 17 volte rispetto ad ATPasi attivata da cationi e 5\'-AMPasi Il frazionamento del materiale del gradiente mediante elettroforesi a flusso libero ha prodotto una frazione arricchita di 35 volte in ATPasi attivata da cationi ed essenzialmente priva di 5\'-AMPasi e Mg2 +ATPasi. L'aggiunta di ATP a entrambe le frazioni ha determinato l'assorbimento di H+ e l'efflusso di Rb+. La sensibilità ionoforica e osmotica ha mostrato che questi movimenti di ioni erano dovuti al trasporto piuttosto che al legame. Le sequenze di selettività cationica, le specificità del substrato e l'azione degli inibitori indicavano che il il trasporto era una funzione dell'attività K+ATPasi Le caratteristiche del potenziamento ATP-dipendente dell'assorbimento di SCN e della fluorescenza dell'8-anilinonaftalene-1-solfonato in presenza di valinomicina e dell'azione dello ione gli ofori e gli ioni permeabili ai lipidi hanno suggerito che lo scambio K+:H+ dipendente dall'energia fosse effettivamente non elettrogenico. Quindi queste vescicole contengono una (H+ + K+)-ATPasi non elettrogena, quindi la secrezione acida dello stomaco è probabilmente dovuta a uno scambio H+ + K+ ATP-dipendente.
Enzima di scissione post-prolina. Purificazione di questa endopeptidasi mediante cromatografia di affinità.L'endopeptidasi, enzima di scissione post-prolina, è stata purificata 10.500 volte in una resa complessiva del 18% da rene di agnello L'enzima possiede un'attività specifica di 45 mumol/mg/min come testato con il substrato Z-Gly-Pro-Leu-Gly (Km = 6,0 X 10(-5)) , ha un peso molecolare di 115.000, è composto da due subunità con un peso molecolare di 57.000 e presenta un'attività massima a pH da 7,5 a 8,0 Ad eccezione del legame -Pro-Pro, il legame -Pro-X-peptidico ( X è uguale ai residui di L- e D-amminoacidi) situati all'interno della sequenza peptidica possono essere idrolizzati (la scissione avviene più velocemente quando X = catena laterale lipofila rispetto a X = catena laterale acida). I legami -Pro-X- appropriati nell'insulina suina senza zinco, l'ossitocina, l'arginina vasopressina, l'angiotensina II, il fattore di potenziamento della bradichinina sono stati scissi. Gastrina umana, ormo adrenocorticotropo uno, il collagene della pelle di cavia denaturato e il collagene della cuticola di ascaride non sono stati degradati. I dipeptidi con la struttura Z-Pro-LD-X inibiscono in modo competitivo l'enzima di scissione post-prolina.
Fornitura dell'emoglobina. Conseguenze funzionali di due alterazioni del sito di legame del 2,3-difosfoglicerato in posizione beta 82.Posizione beta 82 nell'emoglobina umana ( Hb) è normalmente occupata dalla lisina, un residuo carico positivamente che è coinvolto nel legame dei cofattori anionici. Questo residuo è sostituito da un residuo neutro in Hb Providence Asn e da un residuo caricato negativamente in Hb Providence Asp. Hb Providence Asp mostra di più differenze da Hb A rispetto a Hb Providence Asn negli studi sulla cinetica e sugli equilibri del legame del ligando Per entrambe le forme, le interazioni omotropiche (cooperative) sono normali con valori di n da 2,5 a 2,7, mentre le interazioni eterotropiche (pH e anione) sono notevolmente ridotte La riduzione della sensibilità agli anioni è attribuita all'assenza di un residuo positivo in posizione beta 82. La riduzione della sensibilità al pH può essere dovuta a un cambiamento legato al ligando nel pK di un residuo vicino, l'istidina beta 143, che normalmente è non un gruppo di Bohr. Questo cambiamento di pK agirebbe in opposizione al normale effetto di Bohr. La riduzione della carica netta positiva della cavità centrale ha un'ulteriore conseguenza. Rispetto all'Hb A, sia l'Hb Providence Asn che l'Hb Providence Asp mostrano una ridotta affinità per l'ossigeno a pH neutro in assenza di cofattori. Ciò suggerisce che nell'Hb A il legame dei cofattori anionici influenza direttamente l'affinità dell'ossigeno neutralizzando i gruppi carichi del sito di legame del difosfoglicerato e stabilizzando così la conformazione a bassa affinità (T). Da pH 6 a 9 in presenza di 1 M NaCl, dove tutti i gruppi carichi possono essere mascherati, le proprietà di legame dell'ossigeno dell'Hb A e dei mutanti Hb Providence sono identiche. Inoltre, la dissociazione delle subunità dei mutanti Hb Providence legati sembra essere aumentata, come è noto per l'Hb A in presenza di un alto contenuto di sale. I risultati ottenuti con Hb Providence Asn e Hb Providence Asp illustrano come le sostituzioni di singoli amminoacidi possono modificare emoglobine\' pH e interazioni anioniche senza alterare le interazioni cooperative tra le subunità. L'alterazione degli effetti del cofattore osservata con questi mutanti illustra anche le differenze tra gli effetti allosterici indotti dagli anioni organici e inorganici.
Complesso adrenodossina reduttasi-adrenodesina.Sono state mostrate adrenodossina reduttasi e adrenodossina (Chu, J. -W. e Kimura, T. (1973) ) J. Biol. Chem. 248, 5183-5187) per formare una bassa costante di dissociazione, complesso 1:1 quando entrambe le proteine sono nella forma ossidata Abbiamo scoperto che quando adrenodossina: i rapporti adrenodossina reduttasi vengono variati aumentando la concentrazione di adrenodossina , con l'adrenodossina reduttasi mantenuta costante, si osserva un tasso crescente di riduzione del citocromo c, con NADPH come riducente, fino a un rapporto di 1:1, indicando che la riduzione del citocromo c avviene tramite il complesso proteina-proteina. Spettri osservati durante la titolazione di questo complesso proteina-proteina con NADH sono stati risolti in componenti mediante il metodo di programmazione lineare, utilizzando un programma per computer scritto in Fortran IV. L'analisi dei dati ha mostrato che la flavoproteina viene ridotta prima della proteina ferro-zolfo e che il punto medio di ossidazione-riduzione potenziali (pH 7,5) dei due pr le proteine sono rispettivamente -295 e -331 mV, quando entrambe sono presenti nel complesso. La formazione del complesso non altera il potenziale dell'adrenodossina reduttasi, ma modifica quello dell'adrenodossina di -40 mV. Le costanti di equilibrio derivate da potenziali misurazioni mostrano che la forza dell'interazione proteina-proteina nel complesso non è alterata dalla riduzione dell'adrenodossina reduttasi, ma è diminuita di circa 1 kcal a causa della riduzione dell'adrenodossina. Le basse costanti di dissociazione per entrambe le forme ridotte ossidate del complesso adrenodossina reduttasi-adrenodossina indicano che il complesso deve rimanere associato durante tutto il suo ciclo catalitico. La titolazione del complesso adrenodossina reduttasi-adrenodossina con il riducente fisiologico, NADPH, è stata seguita da EPR e dagli spettri visibili e ha prodotto un ordine di riduzione dei componenti identico a quello osservato quando NADH è stato utilizzato come riducente. La riduzione del complesso proteina-proteina con NADPH ha prodotto un complesso ternario tra NADP+, flavoproteina e proteina ferro-zolfo, con i due elettroni situati in un complesso di "trasferimento di carica" tra flavoproteina e nucleotide piridinico.
Meccanismi catalitici degli enzimi della glutammina sintetasi. Studi con analoghi di possibili intermedi e stati di transizione.Gli enzimi della glutammina sintetasi isolati dai semi di pisello e da Escherichia coli sono osservato comportarsi diversamente negli esperimenti progettati per sondare il meccanismo di reazione. Anche se entrambi gli enzimi sono stati trovati legare e rilasciare substrati in meccanismi di ordine casuale (Wedler, FC (1974) J. Biol. Chem, 247, 5080-5087), scambi isotopici con i sistemi di reazione indicativi di un intermedio gamma-glutamilfosfato sono catalizzati solo dall'enzima del seme di pisello. Il sistema E. coli non riesce a catalizzare alcuno scambio a velocità apprezzabili a meno che tutti i substrati non siano presenti. Questo risultato negativo implica un requisito conformazionale assoluto per i substrati legati o che il complesso putativo (E-Glu-P-MgADP) è estremamente stretto. Per testare quest'ultimo, un analogo strutturale non reattivo del gamma-glutamil-fosfato, vale a dire 3-(fosfonoacetilammido) -L-alanina (PA2LA), è stata sintetizzata. Con l'enzima E. coli, è stato scoperto che PA2LA non si lega più strettamente dell'L-glutammato ed è strettamente competitivo rispetto all'L-glutammato (Ki = 3 mM). Pertanto, l'incapacità di catalizzare reazioni di scambio parziale indicative di gamma-Glu-P non è probabilmente attribuibile alla formazione di complessi stretti. Il legame di PA2LA con l'enzima del seme di pisello apparentemente comporta un processo in due fasi: una fase rapida e reversibile in cui PA2LA si lega 10 volte più strettamente dell'L-glutammato, seguita da un processo lento (ma reversibile) che implica un legame molto stretto di PA2LA , apparentemente con isomerizzazione enzimatica promossa dal nucleotide. Anche la specificità dei due enzimi verso L-metionina-SR-sulfoximina, Met(O)(NH), era diversa...
effetti pH-dipendenti di Cr(NH3)2ATP sulla cinetica dell'esochinasi del lievito PII. Relazione con il meccanismo di transizione lenta.L'effetto del Cr( NH3)2ATP, un complesso metallo-legante a sfera interna virtualmente inerte, sulla cinetica dell'esochinasi di lievito purificata PII è stato studiato a pH 6,5 e pH 7,5. A pH 6,5, dove i normali saggi mostrano un transitorio lento di tipo burst, basso concentrazioni di Cr(NH3)2ATP sono state trovate per attivare sia phii, la velocità iniziale, e phiII, la velocità allo stato stazionario. A concentrazioni più elevate, Cr(NH3)2ATP è risultato essere un inibitore competitivo rispetto a MgATP sia per phii che per phiII. I valori di Ki apparenti per entrambe le velocità erano gli stessi. L'inibizione da parte di Cr(NH3)2ATP a pH 6,5 è risultata essere un processo lento con tempi di dimezzamento simili a quelli trovati per il normale transitorio di tipo burst a questo valore di pH. pH 7,5, dove i normali dosaggi mostrano curve di progressione lineari, Cr(NH3)2ATP si è comportato in modo simile a quello osservato in precedenza a pH 7 (Danenberg , D. D. e Cleland, W. W. (1975) Biochemistry 14, 28-39), cioè era un inibitore competitivo rispetto a MgATP e causava un rallentamento della velocità di reazione nei primi minuti. Il Ki apparente per la velocità iniziale era 8 volte superiore al Ki apparente per la velocità allo stato stazionario, suggerendo un legame più stretto di Cr(NH3)2ATP con il tempo. Gli esperimenti di preincubazione hanno indicato che il normale transitorio di tipo burst a pH 6,5 potrebbe essere eliminato mediante un'appropriata preincubazione con Cr(NH3)2ATP e uno zucchero. In accordo con Danenberg e Cleland (1975), è stato dimostrato che simili preincubazioni producono saggi lineari a pH 7,5 in presenza di Cr(NH3)2ATP. Risultati simili sono stati osservati con MgITP come substrato nucleotidico, in cui non si osserva un transitorio di tipo burst a nessuno dei due valori di pH in condizioni di analisi normali. A pH 7,5, si osserva una lenta diminuzione della velocità di reazione nei primi minuti in presenza di Cr(NH3)2ATP. Il Ki apparente per phii era 7 volte superiore al valore Ki apparente per phiII, suggerendo ancora una volta un legame più stretto di Cr(NH3)2ATP con il tempo. Un'osservazione simile è stata fatta a pH 6,5, ma i valori di Ki per phii e phiII erano gli stessi, suggerendo che non si restringe il legame di Cr(NH3)2ATP con il tempo a questo valore di pH. Questi risultati hanno suggerito che entrambi i processi lenti riflettono lo stesso cambiamento molecolare di base, ma le conseguenze sono diverse ai due valori di pH, presumibilmente a causa della differenza nella carica dell'enzima. La cinetica del Cr(NH3)2ATP a pH 6,5 è stata interpretata in termini di modificazione del meccanismo di transizione lenta per l'esochinasi (Shill, J. P. e Neet, K. E. (1975) J. Biol. Chem. 250, 2259-2268). Si ipotizza che il glucosio e il Cr(NH3)2ATP inducano lo stesso lento cambiamento conformazionale a pH 6.5 di quello indotto dal glucosio e dall'MgATP, che dà origine al normale transitorio di tipo burst. Ciò suggerisce che Cr(NH3)2ATP può essere uno strumento utile per gli studi fisici per determinare la causa della lenta transizione dell'esochinasi del lievito. L'attivazione da basse concentrazioni di Cr(NH3)2ATP è stata interpretata come legame del nucleotide a un sito attivatore sull'enzima, causando uno spostamento nella distribuzione dell'enzima verso la forma più attiva.
Effetto dei fosfati organici sulla riduzione della metaemoglobina da parte dell'acido ascorbico.La velocità di riduzione della metaemoglobina da parte dell'acido ascorbico è stata accelerata in presenza di ATP,2, 3-difosfoglicerato (2,3-DPG) e inositolo esafosfato (IHP) L'accelerazione è stata fino a tre, quattro e dieci volte in presenza di ATP, 2.3-DPG e IHP a pH 7.0, rispettivamente Sono state determinate le variazioni delle concentrazioni di metaemoglobina e acido ascorbico durante la riduzione della metaemoglobina e la reazione è stata trovata procedere stechiometricamente in presenza di IHP. Il tasso di riduzione della metaemoglobina da parte dell'acido ascorbico è stato confrontato a diverse concentrazioni di fosfati organici (ATP ,2,3-DPG e IHP) a vari valori di pH (6.3, 7.0, 7.7) Dalle variazioni della velocità di riduzione sotto diverse concentrazioni di fosfati organici, le costanti di dissociazione di ATP, 2,3-DPG e IHP alla metaemoglobina potrebbe essere determinata e sono stati stimati essere 3,3 X 10(-4) M, 2 X 10(-3) M e 8 X 10(-6) M a pH 7,0, rispettivamente. Sulla base di questi risultati è stato descritto il meccanismo di accelerazione della riduzione della metaemoglobina da parte dell'acido ascorbico dovuto alla presenza di fosfati organici. Il ruolo fisiologico del 2,3-DPG nei globuli rossi umani è stato discusso in relazione alla riduzione della metaemoglobina da parte dell'acido ascorbico.
Indagine sulle ossigenasi microsomiali dei processi biosintetici. Stearil-CoA desaturasi del tessuto adiposo e del fegato.Le desaturasi microsomiali di stearil-CoA suina e ratto richiedono una riduzione della piridina nucleotide e ossigeno, sono sensibili al cianuro e sono insensibili al monossido di carbonio. Il Km per stearil-CoA è leggermente maggiore per il fegato che per le desaturasi adipose, ma, in generale, le condizioni di analisi sono abbastanza simili. I microsomi del tessuto adiposo contengono citocromi b5 e P-450, così come le citocromo reduttasi specifiche per NADH e NADPH Rispetto al fegato, i contenuti e le attività specifici dei trasportatori di elettroni sono molto più bassi nel tessuto adiposo e anche le attività della 4-metil sterolo ossidasi della biosintesi del colesterolo in quanto l'aminopirene demetilasi e la benzipirene idrossilasi dipendenti dal citocromo P-450, sono trascurabili nei microsomi del tessuto adiposo Inoltre, a differenza della desaturasi epatica, la somministrazione di insulina stimola le desaturazioni adipose e 3 volte senza influenzare né le quantità né le attività delle proteine di ossidoriduzione microsomiali; i cambiamenti nelle attività desaturasi prodotti sia dall'alterazione del grasso alimentare sia dal digiuno e/o dal digiuno seguito da rialimentazione sono, in generale, sia più estesi che più permanenti nell'adiposo rispetto ai microsomi epatici. Gli effetti prodotti dalla sostituzione isotopica dell'idrogeno sia nello stearil-CoA che nel mezzo (2H2O) sono simili con i microsomi di entrambi i tessuti. La fase determinante della desaturasi sembra essere simile in entrambi i tessuti. L'effetto isotopico primario, k H/Tr, osservato con [9,10-3H2]stearil-CoA è relativamente piccolo, 2,88. Poiché l'effetto dell'isotopo primario è minimo, se non nullo, associato alla metilsterolo ossidasi, anche queste due ossidasi a funzione mista dei processi biosintetici sembrano condividere questa proprietà in comune.
Studi di risonanza magnetica nucleare della mioglobina di capodoglio specificamente arricchita con 13C nei gruppi metilici della metionina.Il gruppo metilico di Cepsilon dei 2 residui di metionina nello sperma la mioglobina di balena è stata arricchita rispetto al 13°C. Ciò è stato ottenuto mediante trattamento dell'apomioglobina a pH 4 a temperatura ambiente con una proporzione 100 volte maggiore di 13CH3I per formare un intermedio contenente S-metilmetionina arricchita. È stata ottenuta una demetilazione non selettiva per riguadagnare la struttura dell'apomioglobina mediante trattamento a pH 10,5 con ditioeritritolo 0,5 M a 37 gradi per 18 ore. I reagenti sono stati rimossi in ogni fase mediante dialisi contro soluzione di sodio azide diluita. L'emina è stata reincorporata per formare l'oloproteina in modo da evitare la presenza di un eccesso di piccola molecola. Dopo purificazione cromatografica la mioglobina arricchita è stata ottenuta con una resa compresa tra il 29 e il 60%. La composizione, spettro di assorbanza, spettro di dicroismo circolare, isoione Il punto ic, il comportamento elettroforetico e il comportamento di legame dell'ossigeno dopo la riduzione erano tutti indistinguibili da quelli della proteina vergine. Le misurazioni NMR sono state effettuate a 15,1, 25,2 e 67,9 MHz a 27-30 gradi. I due loci arricchiti sono rappresentati da risonanze separate che appaiono leggermente al di sotto della posizione spettrale della corrispondente risonanza nella metionina libera. Le posizioni di queste risonanze sono sensibili al pH e al ligando legato al gruppo eme che dista circa 17 A da ciascuna metionina Cepsilon. Sulla base di due distinti tipi di esperimenti, la risonanza downfield è stata assegnata alla metionina 55 e la risonanza upfield alla metionina 131. Parte delle variazioni osservate nello spostamento chimico potrebbero essere trattate come derivanti da interazioni di pseudocontatto, ma parte è stata attribuita a cambiamenti strutturali comunicati a l'ambiente di ciascun residuo di metionina come risultato di cambiamenti nel legante eme, pH o temperatura. Le larghezze di riga delle risonanze di Cepsilon della metionina si restringono all'aumentare della temperatura secondo un'energia di attivazione di Arrhenius di circa 3 kcal. I tempi di rilassamento spin-reticolo, T1, delle due risonanze della metionina Cepsilon alle tre frequenze dello spettrometro sono stati interpretati per indicare l'esistenza di moti rotazionali in ciascuna catena laterale oltre a quello sul legame Sdelta-Cepsilon. I risultati nel loro complesso mostrano che le due catene laterali della metionina subiscono continue variazioni nell'ambiente e che queste variazioni sono controllate da eventi a distanza all'interno della struttura proteica. Si suggerisce che la labilità strutturale serva alla funzione di facilitare le variazioni conformazionali e gli adattamenti all'interno della tasca dell'eme.
Valutazione del rapporto H+/sito del trasporto di elettroni mitocondriale dalle misurazioni della velocità.Il rapporto mitocondriale H+/sito (cioè il numero di protoni espulsi per coppia di elettroni che attraversano ciascuno dei siti di conservazione dell'energia della catena respiratoria) è stata valutata utilizzando un nuovo approccio sperimentale. In questo metodo i tassi di assorbimento di ossigeno e di espulsione di H+ sono stati misurati simultaneamente durante il periodo iniziale di respirazione evocato dall'aggiunta di succinato a mitocondri aerobici, inibiti dal rotenone, diseccitati. Il K+, in presenza di valinomicina, o il Ca2+, è stato utilizzato come catione mobile per dissipare il potenziale di membrana e consentire l'espulsione quantitativa di H+ nel mezzo. Il rapporto H+/sito osservato con questo metodo in assenza di precauzioni per inibire l'assorbimento del fosfato era prossimo a 2.0, in accordo con i valori ottenuti utilizzando la tecnica dell'impulso di ossigeno (Mitchell, P. e Moyle, J. (1967) Biochem. J. 105, 1147-1162 ). Tuttavia r, quando i movimenti di fosfato sono stati eliminati o mediante inibizione dell'antiporter fosfato-idrossido con N-etilamaleimmide o impoverendo i mitocondri del loro contenuto endogeno di fosfato, sono stati costantemente osservati rapporti H+/sito prossimi a 4.0. Questo rapporto era indipendente dalla concentrazione di succinato, di proteina mitocondriale, di pH compreso tra 6 e 8, e di composizione ionica del mezzo, purché fosse presente una quantità sufficiente di K+ (più valinomicina) o Ca2+. È stato dimostrato che inibitori specifici dell'idrolisi dell'ATP endogeno o del trasporto di altri ioni (nucleotidi adenina, tricarbossilati, HCO3-, ecc. ) non influenzano il rapporto H+/sito osservato. Inoltre, la sostituzione del succinato con alfa-glicerolo fosfato, un substrato che è ossidato sulla superficie esterna della membrana interna e quindi non ha bisogno di entrare nella matrice, ha dato gli stessi rapporti H+/sito del succinato. Si conclude che il rapporto H+/sito del trasporto di elettroni mitocondriale, quando vengono eliminati i movimenti di fosfato, può essere vicino a 4.0.
Reticolazione fotoattivata di proteine all'interno del nucleo della membrana degli eritrociti.Descriviamo le reazioni di tre reagenti reticolanti lipofili, fotoattivati, 1,5 -diazidonapthalene, 4,4\'-diazidobifenile, e il reversibile 4,4\'-ditiobisfenilazide, con membrane eritrocitarie. La reticolazione avviene solo dopo la fotoattivazione. A pH 7-8, solo i componenti della spectrina sono reticolati da questi reagenti A pH da 5,0 a 5,5 diverse proteine di membrana aggiuntive, comprese le principali proteine "integrali" di membrana, sono anch'esse reticolate, nonostante il legame equivalente dei reticolanti a pH neutro e acido. Le velocità di reticolazione di varie proteine di membrana a pH da 5,0 a 5,5 dipendono nettamente dalla durata della fotoattivazione L'elettroforesi bidimensionale delle proteine di membrana dopo reticolazione con il reticolante reversibile, 4,4\'-ditiobisfenilazide, ha consentito l'identificazione di prodotti omopolimerici di reticolazione (es. meri e tetrameri della Banda 3) ed eterocomplessi (spetrina più altre proteine di membrana). I dati suggeriscono che a pH ridotto, la reticolazione può procedere non solo sulla superficie della membrana ma anche nel nucleo della membrana.
"recettori" nucleari solubilizzati per gli ormoni tiroidei. Caratteristiche fisiche e proprietà leganti, evidenza di forme multiple.I tessuti regolati dagli ormoni tiroidei contengono cromatina "recettori" localizzati che possono essere coinvolti nelle azioni di questi ormoni. In questo rapporto, descriviamo alcune proprietà di questi recettori dopo la loro solubilizzazione dai nuclei del fegato di ratto e la loro separazione dagli acidi nucleici e dalle proteine basiche. L'estratto nucleare e preparazioni parzialmente purificate contengono una classe dominante di siti di legame che hanno un'elevata affinità per la triiodotironina (3,5,3\'-triiodo-L-tironina, Kd circa 1 nM) e per l'isopropil diiodotironina (3,5-diiodo) biologicamente potente -3\'-isopropil-L-tironina, Kd congruente a 1 nM) e si legano anche alla tiroxina (3,5,3\',5\'-tetraiodo-L-tironina, Kd circa 5 nM) e triiodotironina inversa (3 ,3\',5\'-triiodo-L-tironina, Kd circa nM). Questo legame l'attività eluisce su Sephadex G-100 in un picco incluso che ha un raggio di Stokes di 35 A e sedimenta su gradienti di glicerolo a 3,5 S. Da questi dati sono stati calcolati un rapporto di peso molecolare di 50.500 e un rapporto di attrito di 1,4, suggerendo che il recettore è alquanto asimmetrico. C'è stato un forte calo del legame della triiodotironina da parte di questo componente sopra pH 8,7 (ottimale intorno a pH 7,6) dove c'è una marcata dissociazione dell'idrossile fenolico 4\' della triiodotironina (pKalpha circa 8,5). Non è stata osservata una diminuzione simile del legame della tiroxina (pKalpha circa 6,7) con aumenti del pH in questo intervallo. Pertanto, la ionizzazione dell'idrossile fenolico può influenzare il legame. Le preparazioni solubilizzate possono anche contenere un componente legante specifico minore che può essere identificato mediante analisi di legame e mediante cromatografia G-100 o amminoetil Sephadex quaternario. questo componente ha un'affinità molto inferiore per la triiodotironina e l'isopropil diiodotironina rispetto alla tiroxina rispetto al componente principale. Probabilmente ha un pH ottimale intorno a 6,0 e mostra un'apparente tendenza ad aggregarsi. Il componente minore non è stato sempre identificato dall'analisi Scatchard diretta e può essere generato in parte dal componente principale poiché è stato osservato più comunemente dopo lo stoccaggio o la purificazione dell'estratto nucleare. Pertanto, almeno due componenti leganti l'ormone tiroideo possono essere presenti negli estratti di nuclei di fegato di ratto purificati; il componente minore può essere una forma alterata o una subunità del componente principale. Le relative attività di legame di triiodotironina, isopropil diiodotironina e tiroxina da parte del componente principale, simili a quelle dei nuclei intatti, sono parallele alle potenze biologiche di questi composti e suggeriscono che il legame dominante sia da parte di recettori biologicamente rilevanti. Poiché la ionizzazione dell'idrossile fenolico può influenzare il legame, la minore attività della tiroxina rispetto alla triiodotironina può essere in parte dovuta al fatto che a pH fisiologico, l'idrossile fenolico della tiroxina è più dissociato di quello della triiodotironina. La scoperta che questo recettore è in qualche modo asimmetrico fornisce un'indicazione della forma di una proteina intrinseca della cromatina implicata nella regolazione genica specifica...
Controllo della fosfofruttochinasi dal muscolo scheletrico di ratto. Effetti di fruttosio difosfato, AMP, ATP e citrato.In condizioni utilizzate in precedenza per dimostrare le oscillazioni glicolitiche in estratti muscolari (pH 6,65, ATP da 0,1 a 0,5 mM), la fosfofruttochinasi del muscolo scheletrico di ratto è fortemente attivata da concentrazioni micromolari di fruttosio difosfato. L'attivazione dipende dalla presenza di AMP. Attivazione da fruttosio difosfato e AMP e inibizione da ATP, è principalmente dovuto a grandi cambiamenti nell'apparente affinità dell'enzima per il substrato fruttosio 6-fosfato. Queste proprietà di controllo possono spiegare la generazione di oscillazioni glicolitiche. L'enzima è stato studiato anche in condizioni che si avvicinano al contenuto di metaboliti del muscolo scheletrico in vivo ( pH 7,0, 10 mM ATP, 0,1 mM fruttosio 6-fosfato). In queste condizioni più inibitorie, la fosfofruttochinasi è fortemente attivata da basse concentrazioni di fruttosio difosfato, con attivazione semimassima a circa 10 muM. Il citrato è un potente inibitore a concentrazioni fisiologiche, mentre l'AMP è un forte attivatore. Sia l'AMP che il citrato influenzano la velocità massima e hanno scarso effetto sull'affinità dell'enzima per il fruttosio difosfato.
L'attivazione della guanilato ciclasi solubile dal polmone di ratto mediante incubazione o mediante perossido di idrogeno.Una frazione surnatante di 37.000 X g preparata da omogenato di polmone grasso ha dimostrato un 2 - all'aumento di 3 volte dell'attività della guanilato ciclasi dopo incubazione a 30 gradi per 30 min (preincubazione). Il trattamento della frazione surnatante con Triton X-100 aumenta l'attività all'incirca nella stessa misura della preincubazione, ma non aumenterebbe l'attività dopo la preincubazione Mediante cromatografia su Sepharose 2B, prima e dopo la preincubazione, è stato dimostrato che l'aumento di attività era associato solo alla guanilato ciclasi solubile, e non all'enzima particolato. L'attivazione mediante preincubazione richiedeva O2. Era completamente inibito da tioli come 2 -mercaptoetanolo e da albumina sierica bovina, KCN e dietilditiocarbammato di sodio Questi inibitori suggerivano un fabbisogno di rame per l'attivazione e ciò è stato confermato dimostrando che 20 a 60 muM CuCl2 potrebbe alleviare l'inibizione del dietilditiocarbammato di sodio 0,1 mM. L'inibizione del 2-mercaptoetanolo potrebbe anche essere invertita rimuovendo il tiolo su una colonna Sephadex G-25, tuttavia, questo trattamento ha attivato parzialmente l'enzima. L'aggiunta di 2-mercaptoetanolo a una preparazione preincubata non invertirebbe l'attivazione. È stato scoperto che l'H2O2 attiva la guanilato ciclasi, sia per la sua generazione nel surnatante polmonare con glucosio ossidasi e glucosio, sia per la sua aggiunta a una preparazione in cui la catalasi è stata inibita con KCN. KCN o albumina sierica bovina è stata in grado di inibire parzialmente l'attivazione da parte della glucosio ossidasi più glucosio, tuttavia, quantità maggiori di glucosio ossidasi potrebbero superare tale inibizione, indicando un ruolo catalitico per Cu2+ a basse concentrazioni di H2O2. Non è stata trovata alcuna prova diretta della formazione di H2O2 durante la preincubazione, tuttavia, è stata ottenuta una prova indiretta mediante il rilevamento spettrofotometrico della formazione di coleglobina dall'emoglobina presente nel liquido sopranatante polmonare. Si ritiene che l'H2O2 derivi dalla reazione dell'ossiemoglobina con l'ascorbato.
Transglutaminasi epidermica umana. Preparazione e proprietà.Una transglutaminasi dall'epidermide priva di follicoli piliferi umani è stata purificata fino all'omogeneità mediante filtrazione su gel e cromatografia a scambio ionico. L'enzima aveva un apparente Mr = 51.000 +/- 2.000 mediante elettroforesi di sodio dodecil solfato, 100.000 +/- 5.000 mediante elettroforesi discontinua su gel e 50.000 +/- 2.000 mediante filtrazione su gel in agarosio Bio-Gel A-0,5 m. fibrinogeno reticolato privo di fattore XIII formando dimeri gamma e polimeri alfa. Per l'attività enzimatica era necessario calcio o stronzio. In presenza di calcio, l'attività enzimatica è stata aumentata mediante riscaldamento a 56 gradi o mediante trattamento con dimetilsolfossido. L'attivazione richiedeva calcio e si è verificato in presenza di inibitori della serina proteasi. L'enzima attivato e nativo avevano mobilità apparentemente identiche nell'elettroforesi del disco di acrilammide e nell'elettroforesi del sodio dodecil solfato. I valori di Km per due subst le velocità nella reazione, caseina e putrescina, erano molto simili per l'enzima nativo e quello attivato. L'enzima attivato ha avuto un volume di eluizione maggiore su Bio-Gel A-0.5m in presenza di calcio rispetto all'enzima nativo. Il meccanismo dettagliato di attivazione resta da determinare.
[Cinetica di dissoluzione di idrossiapatite sintetica e cristalli di smalto umano].Uno studio comparativo sulla dissoluzione di idrossiapatite sintetica e cristalli di smalto umano è stato realizzato in una soluzione tamponata (citrato di sodio - acido citrico) in presenza di quantità variabili di fluoruro di sodio. Il pH delle soluzioni utilizzate era 3,7 e 5,6. Le curve di dissoluzione dell'idrossiapatite sintetica e dei cristalli di smalto umano erano simili. In tutti i casi, il meccanismo di dissoluzione è stato caratterizzato da una prima fase con una cinetica rapida corrispondente alla formazione di una cavità centrale che si estende parallelamente all'asse c del cristallo di apatite ed osservata al microscopio elettronico. In una seconda fase, la cinetica della dissoluzione è stata molto più lenta corrispondente a una saturazione della soluzione tamponata e un'estensione della distruzione del cristallo verso le sue superfici laterali esterne. La cinetica di dissoluzione era più veloce in una soluzione più acida e il totale di la soluzione in un dato momento variava inversamente alla quantità di fluoruro.
Pepsinogeno C e pepsina C dalla mucosa gastrica della scimmia giapponese. Purificazione e caratterizzazione.Un nuovo componente pepsinogeno, il pepsinogeno C, è stato purificato dallo stomaco mucosa di scimmia giapponese. Il comportamento cromatografico di questo componente su cellulosa DE-32 è stato coincidente con quello del pepsinogeno III-2 precedentemente riportato (1) e la purificazione finale è stata eseguita mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide su larga scala. Il peso molecolare era di 35.000 come determinato mediante filtrazione su gel. I rapporti tra acido glutammico e acido aspartico e tra leucina e isoleucina erano superiori a quelli di altri pepsinogeni di scimmia giapponesi. La forma attivata, la pepsina C, aveva un peso molecolare di 27.000 e conteneva un gran numero di acido glutammico residui. Il pH ottimale per la digestione dell'emoglobina era 3.0. La pepsina C poteva a malapena idrolizzare il substrato sintetico, N-acetil-L-fenillanil-3, 5-diiodo-L-tirosina (APDT). 1, 2-Epoxy-3-( p-nitrofenossi)propano (EPNP), p-brom l'ofenacil bromuro e il diazoacetil-DL-norleucina metil estere (DAN) hanno inibito la pepsina C [EC 3.4.23.3] allo stesso modo della pepsina III-3 della scimmia giapponese. La suscettibilità alla pepstatina della pepsina C era inferiore a quella della pepsina III-3 e per lo stesso effetto inibitorio era necessaria una quantità di pepstatina 500 volte maggiore. Vengono discusse la classificazione e la nomenclatura dei pepsinogeni e delle pepsine delle scimmie giapponesi.
La struttura e la funzione delle proteasi acide. VI. Effetti degli inibitori specifici delle proteasi acide sulle proteasi acide da Aspergillus niger var. macrosporus.1 La proteasi acida di tipo B da Aspergillus niger var. macrosporus è stata inattivata mediante reazione con diazoacetil-DL-norleucina metil estere (DAN), DL-1-diazo-3-tosilammido-2-eptanone (DTH) e L-1- diazo-3-tosilammido-4-fenil-2-butanone (DTPB) in presenza di ioni rameici La reazione con DAN è avvenuta con stechiometria 1:1 L'enzima è stato inoltre inattivato per reazione con 1, 2-epossi-3 -(p-nitrofenossi)-propano (EPNP) con incorporazione concomitante di circa due molecole di EPNP per molecola di proteina. Inoltre, queste reazioni di DAN e di EPNP sono state fortemente inibite dalla pepstatina. Questi risultati sembrano indicare che, come nel caso della pepsina suina [EC 3.4.23.1] e delle relative proteasi acide, l'enzima ha due gruppi carbossilici essenziali nel sito attivo, uno reattivo con DAN e relativi diazo reagenti in presenza di ioni rameici e l'altro reattivo con EPNP, e che la pepstatina si lega in prossimità di questi residui. 2. La proteasi acida di tipo A della stessa muffa, d'altra parte, è risultata essere notevolmente meno sensibile a questi inibitori specifici. In condizioni in cui l'enzima di tipo B è stato completamente inattivato dal DAN e dai relativi diazo reagenti, si è verificata solo un'inattivazione parziale di questo enzima. Anche l'effetto della precedente miscelazione di DAN e ioni rameici sul profilo di inattivazione del pH era diverso da quello dell'enzima di tipo B. Inoltre, l'enzima di tipo A non è stato inattivato da EPNP. Questi risultati indicano quindi che la natura del sito attivo dell'enzima di tipo A è piuttosto diversa da quella dell'enzima di tipo B e quindi che l'enzima di tipo A appartiene a una classe di proteasi acide diversa dall'enzima di tipo B.
Scambio idrogeno-deuterio nei residui di istidina dell'alfa-lattoalbumina bovina.È stato osservato lo spettro di risonanza magnetica protonica dell'alfa-lattoalbumina bovina e tre picchi assegnabili ai protoni CH di posizione 2 dei tre rpsidue istidinici (His 32, 68 e 107) di questa proteina sono stati sottoposti ad esame dettagliato Le assegnazioni di questi picchi a His 32, 68 e 107 sono state effettuate su la base della differenza nelle loro reattività con acido iodoacetico. Le costanti di velocità delle reazioni di scambio idrogeno-deuterio sono risultate essere 8,0 X 10 (-5), 2,6 X 10 (-4) e 8,0 X 10 (-5) min-1, rispettivamente, a pH 8,5 e a 35 gradi, mentre a 62 gradi tutti e tre sono risultati essere 0,84 circa 1,1 X 10(-2) min 1. Sulla base di questi dati, è stato dimostrato che, nella forma nativa di questa proteina, His 68 è la più esposta al solvente mentre His 32 e His 107 sono sepolte leggermente più in profondità nella superficie della molecola. le ampiezze di attivazione gamma, o le possibilità effettive di His 32, 68 e 107 di essere completamente esposte al solvente, sono risultate essere rispettivamente di 0,4, 1,3 e 0,4.
Metabolismo del triacilglicerolo in Mycobacterium smegmatis.Le cellule di Mycobacterium smegmatis hanno incorporato l'acido [1-14C]oleico nei triacilgliceroli (TG) dal terreno più rapidamente di quanto acidi grassi a catena più corta, acido caprilico e butirrico. Questa incorporazione è stata inibita più fortemente da 10(-3) M N-etilmaleimmide che da 10(-3) M KCN. [14C]TG nelle cellule batteriche è stato utilizzato quando le cellule erano in cattive condizioni nutrizionali, come tampone fosfato (pH 7,0) contenente acido oleico. È stato osservato accumulo di TG nelle cellule nelle fasi avanzate della crescita. L'attività della digliceride aciltransferasi [EC 2.3.1.20] è stata rilevata in un estratto privo di cellule da questo batterio. Il pH ottimale di questo enzima era compreso tra pH 7 e 9. F- e Tween 20 hanno mostrato notevoli effetti potenzianti e inibitori, rispettivamente.
Studi enzimatici su un sistema cellulasi di Trichoderma viride. IV. Purificazione e proprietà di una cellulasi di tipo meno casuale.Una cellulasi [EC 3.2. 1.4] è stato purificato da una preparazione di cellulasi grezza di Trichoderma viride (Meicelase) mediante procedure di cromatografia su colonna consecutive ed è stato designato come cellulasi III. L'enzima era omogeneo all'elettroforesi su disco di gel di poliacrilammide. Il peso molecolare dell'enzima è stato stimato essere di circa 45.000 mediante filtrazione su gel. Il pH e la temperatura ottimali dell'enzima erano rispettivamente di pH 4,5-5,0 e 50 gradi. L'enzima era stabile nell'intervallo di pH 4,5-7,5 a 4 gradi per 24 ore e conservava il 40% dell'originale attività carbossimetilcellulosa-saccarificante dopo riscaldamento a 100 gradi per 10 min. L'enzima è stato completamente inattivato da 1 mM Hg2+, e parzialmente da 1 mM Ag+ e Cu2+. L'enzima è stato caratterizzato come cellulasi di tipo meno casuale in base alla sua azione su carbossimo etilcellulosa. L'enzima scinde il celloesaosio, mantenendo la configurazione beta degli atomi di carbonio anomerici nei prodotti dell'idrolisi. I valori di Km della cellulasi III per i cellooligosaccaridi sono diminuiti parallelamente all'aumento della lunghezza della catena dei substrati, mentre i valori di Vmax hanno mostrato una tendenza all'aumento. L'enzima produce principalmente cellobiosio e glucosio da vari substrati cellulosici e da cellooligosaccaridi superiori. La cellulasi III ha attaccato preferenzialmente il legame aglicone del p-nitrofenil beta-D-cellobioside. Si è scoperto che l'enzima catalizza la rapida sintesi del cellotetraose dal cellobiosio (azione di condensazione).
Significato fisiologico dell'assorbimento di Ca da parte dei mitocondri nel cuore rispetto a quello del reticolo sarcoplasmatico cardiaco.È stato studiato se i mitocondri svolgono un ruolo significativo nel la regolazione fisiologica del processo contrattile da parte del Ca2+ nel muscolo cardiaco rispetto al reticolo sarcoplasmatico (SR). L'attività di captazione del Ca del SR cardiaco di pollo e dei mitocondri cardiaci di coniglio è stata misurata mediante centrifugazione, spettrofotometria a doppia lunghezza d'onda e metodi di filtrazione Millipore La capacità massima di assorbimento di Ca della RS cardiaca era solitamente di 50-60 nmoli/mg di proteina e la costante di legame apparente era di 2,0 X 10 (6) M-1. La costante di legame di Ca apparente dei mitocondri cardiaci in condizioni di carico limitato era di 2,4 X 10(5) M-1 a pH 7,4 e 5,9 X 10(4) M-1 a pH 6,8 In presenza di 100 muM Ca2+ a 28-29 gradi, il tasso iniziale stimato di assorbimento di Ca della RS cardiaca variava da 20 a 30 nmoli Ca/mg-sec, mentre quello di m l'itocondria era di 4,6 nmoli Ca/mg-sec in condizioni di carico limitate a pH 7,4 e 0,64 nmoli Ca/mg-sec in condizioni di carico massiccio a pH 6,8, che era molto più vicino alle condizioni fisiologiche. In presenza di basse concentrazioni di Ca2+, la velocità iniziale di assorbimento di Ca della RS cardiaca era di 0,5 nmoli Ca/mg-sec a 3,5 X 10(-7) M Ca2+ e quella dei mitocondri in condizioni di carico massivo a 1 X 10(-6). ) M Ca2+ era 0,02 nmoli Ca/mg-sec a pH 7,4 e 0,004 nmoli Ca/mg-sec a pH 6,8. Le attività di assorbimento del Ca sono state esaminate anche utilizzando fibre muscolari cardiache estratte con glicerolo. Cardiac SR, 1,7 mg/ml, ha ridotto la tensione delle fibre muscolari cardiache massimamente contratte ad un livello corrispondente a circa il 30% della tensione massima, ma in presenza di 14,3 mg/ml di mitocondri le tensioni massime sia del muscolo scheletrico che del muscolo cardiaco le fibre sono state mantenute per almeno 3 min. Da questi risultati è stato calcolato il decorso temporale del rilassamento del muscolo cardiaco indotto dalla SR cardiaca o dai mitocondri. Si è concluso che, nella contrazione fisiologica del muscolo cardiaco, il SR svolge un ruolo importante nel controllo del movimento intracellulare di Ca2+; l'assorbimento di Ca dei mitocondri è relativamente insignificante. Quando il muscolo cardiaco si contrae al massimo, SR da solo non può rilassare il muscolo cardiaco senza l'aiuto di altri sistemi di rimozione del Ca.
Uno studio sull'interazione tra D-amminoacido ossidasi e quasi-substrati.Per studiare l'interazione tra D-amminoacido ossidasi [EC 1.4 .3.3] e quasi-substrati come benzoato e o-, m- e p-amminobenzoato, sono stati misurati spettri di dicroismo circolare visibile (spettri CD) e sono state osservate la velocità di legame e l'affinità dell'o-aminobenzoato all'enzima seguendo il cambiamenti di assorbimento a varie lunghezze d'onda. Abbiamo trovato una nuova banda CD intorno a 560 nm, corrispondente ai complessi di trasferimento di carica che risultano dalla formazione di complessi aminobenzoati con l'enzima. L'ellitticità di questa banda era positiva per il complesso p-aminobenzoato, ma negativi per i complessi o- e m-aminobenzoato. Punti di crossover negli spettri CD sono stati osservati a 470 nm per il complesso m-aminobenzoato ea 475 nm per il complesso o-amminobenzoato. Probabilmente derivavano dalla sovrapposizione della banda CD positiva di FAD legato con l'enzima e la banda CD negativa del complesso a trasferimento di carica. Proponiamo che il gruppo amminico nell'aminobenzoato, non gli elettroni pi dell'anello benzenico, sia il donatore di elettroni nel complesso di trasferimento di carica e che la posizione del gruppo amminico è molto importante per l'interazione di trasferimento di carica. La velocità di legame e l'affinità dell'o-amminobenzoato all'enzima sono state determinate utilizzando i cambiamenti di assorbimento a 370 nm (380 nm), causati dalla modifica degli stati elettronici del FAD legato all'enzima, e a 550 nm (565 nm), causati dalla formazione del complesso di trasferimento di carica di o-amminobenzoato con l'enzima. Non sono state osservate differenze tra questi parametri con la lunghezza d'onda. Questa indipendenza dalla lunghezza d'onda semplifica la discussione dei dati sperimentali ottenuti dai cambiamenti di assorbimento.
Interazione tra D-amminoacido ossidasi e piccole molecole.1. Dal punto di vista dell'equilibrio monomero-dimero della D-aminoacido ossidasi del rene di maiale [EC 1.4.3.3] e l'interazione tra l'enzima e piccole molecole, l'effetto del pH sul legame del p-amminobenzoato al monomero e al dimero dell'enzima è stato studiato mediante metodi cinetici e titolazione spettrofotometrica 2. Il numero massimo di legame di p-amminobenzoato al dimero è di due molecole e non vi è interazione tra i due siti attivi del dimero (cioè, nessuna cooperatività) nell'intervallo di pH da 6,5 a 10. 3. L'affinità del dimero per p- l'aminobenzoato è parecchie volte superiore a quello del monomero a pH 6,5-10, e di conseguenza il p-amminobenzoato induce la dimerizzazione nello stato di equilibrio dell'aminoacido ossidasi D. L'energia di interazione di due subunità del dimero è stabilizzata dal legame di p -aminobenzoato di 1-2 kcal/mole nell'intervallo di pH studiato 4. Il bindin g siti del quasi-substrato, p-amminobenzoato, nel dimero e il sito di legame intersubunità del dimero sono chiaramente differenti, perché p-amminobenzoato induce la dimerizzazione dell'enzima. 5. I valori di pK dei gruppi ionizzanti nel monomero libero e nel dimero libero che partecipano al legame dell'inibitore competitivo, p-amminobenzoato, sono approssimativamente gli stessi, 8,7, come determinato dalla dipendenza dal pH dell'affinità dell'inibitore per l'enzima. Inoltre, non è stato osservato alcun pK per il complesso enzima-inibitore nell'intervallo di pH 6,5-10. 6. Non c'è interazione tra i due gruppi ionizzanti del dimero durante la protonazione-deprotonazione, perché un'equazione teorica che non implica cooperatività tra i due gruppi ionizzanti nel dimero spiega bene i risultati.
Il meccanismo di riassemblaggio dell'immunoglobulina G.L'interazione non covalente della catena leggera (L) con la catena pesante (H) o Fd isolata da un essere umano La proteina del mieloma Jo (IgG1, kappa) è stata studiata seguendo il cambiamento dicroico circolare (CD) a 235 nm. Le costanti di dimerizzazione della catena Jo-L determinate misurando il cambiamento CD a 293 nm con la concentrazione di proteine hanno mostrato che esiste la catena Jo-L come forma monomerica nelle condizioni sperimentali utilizzate per la ricombinazione con la catena H. Le costanti di velocità del secondo ordine per l'interazione tra catene H e L erano in buon accordo con quelle per l'interazione tra catena Fd e L a vari valori di pH. comportamento della catena L a Fd potrebbe essere descritto da una singola costante di associazione Nell'interpretazione del legame della catena L alla catena H, tuttavia, era necessario assumere che il legame della catena L a uno dei due siti sulla catena H dimero (H2) diminuisce l'affinità dell'altro sito per catena L. La costante di legame della prima catena L a H2 era la stessa di quella della catena L a Fd. Processi di rinaturazione della catena L, Fd, frammento Fab(SS) (con legame disolfuro intercatena intatto) e frammento Fab(RA) (in cui il legame disolfuro intercatena è stato ridotto e alchilato) dagli stati denaturati in 0,5 o 1 M acetico acido sulla neutralizzazione sono stati studiati. La rinaturazione di Fd è avvenuta molto rapidamente, mentre quella della catena L consisteva in un processo molto rapido e un processo lento che seguiva una cinetica del primo ordine. Il processo di rinaturazione di Fab(SS) consisteva in fasi rapide e lente, di cui quest'ultima seguiva una cinetica del primo ordine. Anche il processo di rinaturazione di Fab(RA) consisteva in fasi rapide e lente, ma quest'ultimo processo seguiva una cinetica di secondo ordine. La costante di velocità complessiva della rinaturazione di Fab (RA) era la stessa di quella della riformazione di Fab (RA) dalla catena Fd e L isolata. Sulla base di questi fatti, il meccanismo cinetico con cui la catena Fd e L si ricombinano per produrre Fab(RA) può essere descritto nei termini dello schema Fd + L in equilibrio Fd ... L porta a Fab(RA), dove Fd ... L è un intermedio e il cambiamento di CD si osserva solo nel secondo processo unimolecolare e non nel primo processo bimolecolare.
Una proteina coagulabile (coagulogen) dal lisato di amebociti del granchio a ferro di cavallo giapponese (Tachypleus tridentatus). Il suo isolamento e le sue proprietà biochimiche.Una proteina coagulabile, denominata coagulogeno, è stato altamente purificato dal lisato di amebociti del granchio a ferro di cavallo giapponese (Tachypleus tridentatus) con un metodo simile a quello utilizzato per il lisato di amebociti di Limulus polyphemus Il materiale isolato ha fornito una singola banda proteica all'elettroforesi su gel analitico a pH 3,2, elettrofocalizzazione su gel , ed elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato (SDS) con o senza 2-mercaptoetanolo. Era coagulabile al 90% e la resa totale da 10 ml di lisato di amebociti era di circa 40 mg. Il coefficiente di sedimentazione del coagulogeno purificato era di 2,6 S e il suo il peso molecolare è stato stimato in circa 15.300 dall'analisi dell'equilibrio di sedimentazione. Il peso molecolare stimato dall'analisi elettroforetica su gel SDS era di 19.500 +/- 1.000. Questa discrepanza era apparentemente dovuta alla mobilità anormale derivante dalla natura basica di questa proteina all'elettroforesi. La proteina aveva un alto punto isoelettrico di pH 10,0 +/- 0,2, misurato con la tecnica di focalizzazione isoelettrica. Consisteva in un totale di 132-135 residui di amminoacidi e conteneva alti livelli di amminoacidi basici, che rappresentavano oltre il 16% dei residui di amminoacidi totali. Non è stata rilevata metionina. Sono stati trovati alti contenuti di valina, semicistina, acido glutammico (glutammina) e fenilalanina. La sequenza N-terminale dei primi tre residui del coagulogeno era Ala-Asx-Thr e i suoi residui C-terminali sono stati identificati come fenilalanina, indicando che consiste in una singola catena polipeptidica. È interessante che i primi tre residui N-terminali siano omologhi a quelli della catena alfa del fibrinogeno dei primati non umani.
Purificazione e proprietà dell'ossitocinasi (cistina amino-peptidasi) dalla placenta di scimmia.L'ossitocinasi (cistil-aminopeptidasi) [EC 3.4.11.3] è stata isolata dalla placenta di scimmia in forma purificata mediante una procedura in sei fasi comprendente estrazione dall'omogenato di placenta di scimmia, frazionamento di solfato di ammonio, cromatografia ripetuta su idrossiapatite, cromatografia su una colonna di DEAE-cellulosa e filtrazione su gel su una colonna di Sephadex G-200. l'enzima purificato ha mostrato una singola banda sull'elettroforesi del disco di poliacrilammide. L'ossitocina è stata inattivata da questa preparazione enzimatica. L'enzima ha idrolizzato diverse amminoacil-beta-naftilammidi. Un gruppo amminico terminale è stato richiesto per l'attività dell'enzima. Il peso molecolare dell'enzima purificato è stato stimato essere 87.000 mediante filtrazione su gel e 83.000 mediante elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato Altre proprietà dell'enzima, gli effetti degli ioni metallici e di vari reagenti chimici sull'attività dell'enzima, il pH ottimali e sono stati esaminati anche i valori di Km per un certo numero di amminoacil-beta-naftilammidi.
Studi sulle lipasi dei trigliceridi da tessuto adiposo di ratto.È stata sviluppata una nuova procedura di analisi per la lipasi dei trigliceridi [EC 3.1.1.3] in cui la trioleina radioattiva è stata disciolto in etanolo e aggiunto direttamente alla miscela di reazione in assenza di siero e albumina. Nel tessuto adiposo di ratto risultava essere presente una lipasi trigliceride misurabile con questo saggio oltre alle due lipasi precedentemente definite, lipoproteina lipasi [EC 3.1.1.34 ] e lipasi ormone-sensibile. L'enzima era attivo in assenza di siero ed era fortemente inibito dall'albumina. Il peso molecolare era stimato intorno a 42.000. Adenosina 3\',5\'-proteina chinasi monofosfato-dipendente [EC 2.7 .1.27] non è stato in grado di attivare l'enzima. Le tre specie di lipasi sopra menzionate si sono comportate diversamente alla cromatografia su una colonna Sepharose 4B ed erano distinguibili l'una dall'altra nelle loro proprietà fisiche e cinetiche. I ruoli fisiologici della nuova specifica I problemi della lipasi restano da esplorare.
Studi sulla fosfolipasi A nel veleno di Trimeresurus flaoviridis. III. Purificazione e alcune proprietà dell'inibitore della fosfolipasi A nel siero di Habu.Fosfolipasi A [EC 3.1. 1.4] inibitore è stato purificato dal siero di Habu (Trimeresurus flavivurudls) mediante filtrazione su gel su Sephadex G-200, cromatografia su cellulosa DE-23 e cromatografia di affinità su una colonna Sepharose 4B-fosfolipasi A. Con queste procedure, un aumento di 31 volte della specifica l'attività è stata raggiunta con una resa del 15%. Il materiale purificato era omogeneo come giudicato mediante elettroforesi su acetato di cellulosa e gel di poliacrilammide. Aveva un peso molecolare apparente di 100.000 come misurato mediante filtrazione su gel su Sephadex G-200. L'inibitore purificato era stabile per 20 min a 80 gradi ed era instabile al di sotto di pH 6. Migrava prima dell'albumina nell'elettroforesi dell'acetato di cellulosa e non formava alcuna linea di precipitina con il veleno grezzo o con la fosfolipasi A purificata nei test di immunodiffusina. Per inibire completamente sia l'azione di schiarimento del tuorlo d'uovo che l'azione emolitica della fosfolipasi A era necessaria la quantità di peso dell'inibitore purificato.
Coinvolgimento del GMP ciclico nella fase iniziale della proliferazione degli epatociti.Un aumento transitorio della guanosina ciclica 3\' : 5\' monofosfato (c- GMP) nel fegato è stato osservato nei ratti in vivo 10-20 min dopo epatectomia parziale. Un simile aumento di c-GMP nel fegato è stato riscontrato anche nei ratti in vivo 15 min dopo l'infusione di soluzione di TGH (una miscela di triiodotironina, glucagone ed eparina). In entrambi i casi, sono state riscontrate induzioni di ornitina decarbossilasi [EC 4.1.1.17] e tirosina aminotransferasi [EC 2.6.1.5] 4 ore dopo l'inizio degli esperimenti. Successivamente, 22 ore dopo l'intervento chirurgico o l'ormone infusione, la timidina chinasi [EC 2.7.1.21] è stata attivata e le fette di fegato sono state in grado di incorporare la [3H] timidina nel DNA. Questi fenomeni biochimici sono stati osservati comunemente nel fegato rigenerante e nel fegato di ratti infusi con soluzione di TGH. GMP, ma non c-AMP, potrebbe indurre ornitina decarbossilasi e tirosina aminotransfera e nel fegato isolato e perfuso.
La modificazione chimica della catalasi del fegato bovino. V. Etossiformilazione dei residui di istidina e tirosina della catalasi con dietilpirocarbonato.Per chiarire i possibili ruoli di istidina e tirosina residui della catalasi [EC 1.11.1.6] nel mantenimento della struttura quaternaria e dell'attività catalatica, sono stati condotti esperimenti di modificazione del dietilpirocarbonato Un metodo per la stima di N-etossiformil (EF)-His a pH 5--7 e di O-etossiformil (EF)-Tyr in soluzione alcalina misurando rispettivamente A 242 nm (ximM = 3.2) e A278 nm (ximM = 1.16) La formazione di EF-His e EF-Tyr era un elettrofilo reazione ed era dipendente dal pH, presentando valori di pK di 6,8 e 9,9, rispettivamente. La resa massima di EF-His a pH 6,0 era del 49% del contenuto totale di istidina, ma non è stata osservata inattivazione né sviluppo dell'enzima. La formazione di 12 residui di EF-Tyr per mole di catalasi a pH 8,1 non hanno causato in attivazione, ma la formazione di altri 8 residui di EF-Tyr a pH 8,9 ha provocato sia l'inattivazione che lo spiegamento. Sono state osservate inattivazione quasi completa e scissione parziale della catalasi quando sono stati prodotti 43-46 residui di EF-Tyr per mole a pH 10,0. Più residui di EF-His sono stati formati dalla reazione del dietil pirocarbonato con il monomero cianoetilato (CE)-catalasi (subunità) che con il tetramero CE-catalasi. Il tetramero e il monomero della CE-catalasi sono stati ampiamente O-etossiformilati, raggiungendo il 100% di formazione di EF-Tyr. Questi risultati indicano che metà dei residui di istidina può trovarsi al di fuori del nucleo proteico e che tre quarti dei residui di tirosina si trovano probabilmente nel nucleo proteico dell'enzima. La produzione di 2--3 residui di EF-Tyr per mole del monomero mediante etossiformilazione a pH 7,0 è stata accompagnata da una diminuzione dell'ampiezza del picco di Soret. Viene discussa una possibile interazione di quei residui di tirosina con la porfirina del gruppo eme.
Caratterizzazione ultrastrutturale, fisiologica e citochimica dei nuclei negli streptococchi di gruppo D.I nuclei sono grandi strutture a forma di bastoncino che sono state trovate quasi esclusivamente in streptococchi di gruppo D, misurano da 0,1 a 0,16 mm di diametro ed estendono la larghezza o la lunghezza delle cellule Questo studio ha dimostrato che i nuclei vengono prodotti nelle cellule in un punto riproducibile nella crescita stazionaria precoce dopo un'ampia formazione mesosomiale e dopo che il pH è sceso inferiore a 6,5. Quando le cellule contenenti nuclei sono state introdotte in un terreno fresco con un pH superiore a 6,5, le strutture sono scomparse entro 5 minuti. Le strutture non sono state trovate in cellule giovani, in crescita logaritmica, ma si sono formate in queste cellule dopo autolisi o trattamento con penicillina. che si stavano formando o disintegrando sembravano avere una sottostruttura lamellare. Quando il cloramfenicolo è stato aggiunto al terreno prima che la coltura raggiungesse la fase stazionaria, non sono stati trovati nuclei nelle cellule. Studi citochimici hanno indicato che i nuclei contengono proteine e non sono composti da materiale della parete cellulare o altri polisaccaridi che contengono gruppi 1,2-glicole.
L'escissione del disadattamento e i possibili effetti di polarità determinano il filamento preferito di integrazione dell'acido desossiribonucleico nella trasformazione pneumococcica.Molecole di acido desossiribonucleico eteroduplex aventi un marker di resistenza ai farmaci su uno filamento e il suo allele wild-type dall'altro sono stati usati come donatori nella trasformazione pneumococcica. I filamenti opposti non sono ugualmente efficaci nella produzione di trasformanti, e questo bias del filamento non è lo stesso, né in direzione né in grandezza, per vari diversi marcatori genetici. L'escissione selettiva di coppie di basi non corrispondenti è probabilmente responsabile delle grandi differenze nell'efficienza del filamento osservate con i ceppi discriminanti (hex+), poiché quando il ricevente è non discriminante (hex-), e quindi presumibilmente privo di un sistema enzimatico di escissione, il bias del filamento è drasticamente ridotto o L'evidenza indica anche che l'escissione avviene dopo l'integrazione, in quanto provocata da una specifica discrepanza donatore-ricevente e non da t lo stesso disadattamento quando introdotto all'interno di molecole eteroduplex del donatore. L'escissione può estendersi fino a includere un marcatore collegato vicino che altrimenti non verrebbe asportato, alterando così la sua distorsione intrinseca del filamento e la sua efficienza nella trasformazione. C'è una piccola distorsione nell'efficienza relativa del filamento per alcuni marcatori, non causata dall'escissione del disadattamento, che forse è dovuta alla polarità nel processo di integrazione stesso.
Carbossilazione del fosfoenolpiruvato mediante estratti di Neisseria gonorrhoeae.La carbossilazione enzimatica del fosfoenolpiruvato da parte di estratti privi di cellule di Neisseria gonorrhoeae è stata esaminata e determinata essere simile alla reazione catalizzata dalla fosfoenolpiruvato carbossilasi (PEPC). Ciò è stato dimostrato dall'irreversibilità della reazione e dall'indipendenza nucleotidica. L'enzima è risultato avere alcune caratteristiche diverse dalle altre PEPC batteriche riportate. L'enzima ha mostrato attività catalitica in presenza di cobalto ioni di magnesio e manganese, non è stato inibito dal succinato negli estratti freschi e ha mostrato una bassa costante di Michaelis per il bicarbonato (0,27 mM), rispetto ad altre PEPC. Il significato di questa bassa costante di Michaelis è discusso rispetto alla crescita dell'organismo e l'importanza di questo enzima per la sintesi di proteine e acidi nucleici.
Proteasi a rilascio di penicillinasi di Bacillus licheniformis: purificazione e proprietà generali.La penicillinasi di membrana di Bacillus licheniformis 749/C è una fosfolipoproteina che differisce dalla esoenzima in quanto ha una sequenza aggiuntiva di 24 residui amminoacidici e una fosfatidilserina all'estremità NH2 Nelle colture in fase esponenziale, la conversione della penicillinasi di membrana in esoenzima avviene a pH neutro e alcalino. Un enzima che scinderà la penicillinasi di membrana in L'esoenzima è presente (in piccole quantità) nelle cellule in fase esponenziale e viene rilasciato durante la loro conversione in protoplasti L'enzima si trova nel filtrato di una coltura in fase stazionaria del ceppo 749 inducibile dalla penicillinasi non indotta ed è stato purificato a apparente omogeneità da questa fonte. La proteasi ha un peso molecolare approssimativo di 21.500 e richiede ioni Ca2+ per la stabilizzazione. Ha un pH ottimale compreso tra 7,0 e 9,5 per l'idrolisi è di caseina e per la scissione della penicillinasi di membrana. Entrambe le attività sono inibite dal diisopropilfluorofosfato; quindi, l'enzima è una serina proteasi. Questo enzima può essere interamente responsabile della formazione di esopenicillinasi da parte di questo organismo, poiché le altre proteasi neutre e alcaline del ceppo 749 hanno poca o nessuna attività nel rilasciare l'esopenicillinasi. L'enzima è stato chiamato proteasi a rilascio di penicillinasi.
Penicillinasi vescicolare di Bacillus licheniformis: esistenza di fattori di rilascio periplasmaticoIn studi precedenti sulla penicillinasi legata alla membrana di Bacillus licheniformis 749 /C, l'enzima presente nelle vescicole che sono state rilasciate durante la formazione del protoplasto e l'enzima trattenuto nella membrana plasmatica dei protoplasti sembravano differire (i) nel loro comportamento sulla cromatografia a permeazione di gel in presenza o assenza di desossicolato e (ii) in la loro tendenza a convertirsi nell'esoenzima idrofilo (Sargent e Lampen, 1970). Abbiamo ora dimostrato che queste preparazioni di vescicole contengono un enzima/i solubile/i termosensibile che viene rilasciato insieme alle vescicole durante la formazione del protoplasto. L'enzima convertirà la vescicola penicillinasi in una forma che assomiglia all'exopenicillinasi e questa conversione può essere inibita dal desossicolato in determinate circostanze. La sedimentazione di tali preparati di vescicole a 100.000 X g produce vescicole che co nta penicillinasi che si comporta come l'enzima della membrana plasmatica ottenuto dai protoplasti. Le esopenicillinasi rilasciate dalle cellule in crescita a pH 6,5 e da cellule lavate o protoplasti a pH 9,0 hanno gli stessi residui NH2-terminali (lisina e un po' di acido glutammico); inoltre, i vari sistemi di rilascio mostrano una parallela sensibilità all'inibizione da parte di desossicolato, chinacrina, clorochina e o-fenantrolina. La formazione di exopenicillinasi (per scissione dell'enzima legato alla membrana) potrebbe dipendere dall'azione dell'enzima di rilascio.
Proprietà della 3-desossi-d-arabinoeptulosonico acido-7-fosfato sintasi da Salmonella.3-deossi-D inibibile dalla tirosina -acido arabinoeptulosonico-7-fosfato (DAHP) sintasi è stato purificato fino all'omogeneità senza perdita significativa di sensibilità all'inibizione da parte della tirosina da un ceppo costitutivo dell'operatore (tyrOc) di Salmonella. L'enzima aveva un peso molecolare apparente di 76.000 mediante filtrazione su gel e un peso molecolare della subunità di 40.000 mediante elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato e reazione con dimetil suberimidato. Aveva un punto isoelettrico di 4,68. L'inibizione da parte della L-tirosina mostrava un coefficiente di Hill di 1,8 a pH 7,0, suggerendo un'interazione cooperativa tra i siti di legame della tirosina , ed era competitivo con il fosfoenol piruvato e non competitivo con l'eritrosio-4-fosfato.
Chemiotassi verso gli amminoacidi da Bacillus subtilis.Sono descritte le condizioni per il dosaggio della chemiotassi in Bacillus subtilis. Il mezzo chemiotattico che abbiamo usato ha fornito un'eccellente motilità per ore. In esso, la chemiotassi misurata mediante analisi capillari era insensibile al pH tra 5,5 e 9 e alla temperatura tra 28 gradi C e 42 gradi C. La chemiotassi è stata osservata verso tutti i 20 amminoacidi comuni, con soglie variabili da 3 nM per alanina a 0,1 mM per glutammato, nel test capillare, e da 0,1 muM per l'alanina a 0,32 mM per il glutammato nel test al microscopio.
Purificazione parziale e alcune proprietà della delta1-pirrolina-5-carbossilato reduttasi da Escherichia coli.delta1-pirrolina-5-carbossilato (PCA) reduttasi [L-prolina:NAD(P)+5-ossidoreduttasi, EC 1.5.1.2] è stata purificata oltre 200 volte da Escherichia coli K-12. Ha un peso molecolare di circa 320.000. La PCA reduttasi media la piridina legata al nucleotide riduzione della PCA a prolina ma non la reazione inversa (anche ad alte concentrazioni di substrato). La preparazione parzialmente purificata è priva di attività concorrenti di piridina nucleotide ossidasi, PCA deidrogenasi e prolina ossidasi. I valori della costante di Michaelis (Km) per il substrato, PCA , con ridotto nicotinammide adenina dinucleotide fosfato (NADPH) o NADH come cofattore sono rispettivamente 0,15 e 0,14 mM. I valori di Km determinati per NADPH e NADH sono rispettivamente 0,03 e 0,23 mM. Sebbene NADPH o NADH possano funzionare come cofattore, l'attività osservato con NADPH è diverso piega maggiore. La PCA reduttasi non è repressa dalla crescita in presenza di prolina, ma è inibita dai prodotti finali della reazione, prolina e NADP.
Influenza del monossido di carbonio sul legame emoglobina-ossigeno.La curva di dissociazione dell'ossigeno e l'effetto Bohr sono stati misurati nel sangue intero normale in funzione della concentrazione di carbossiemoglobina [HbCO]. Il pH è stato modificato variando la concentrazione di CO2 (effetto CO2 Bohr) o mediante aggiunta di NaOH o HCl isotonico a PCO2 costante (effetto Bohr acido fisso). Poiché [HbCO] variava nell'intervallo di 2, 25, 50 e 75%, P50 era rispettivamente di 26,3, 18,0, 11,6 e 6,5 mmHg. L'effetto di CO2 Bohr era più alto a basse saturazioni di ossigeno. Questo effetto non cambiava con l'aumento di [HbCO]. Tuttavia, poiché [HbCO] era aumentato da 2 a 75%, il fattore di Bohr acido fisso è aumentato di grandezza da -0,20 a -0,80 a saturazioni di ossigeno molto basse. L'effetto del legame molecolare di CO2 (carbammino) sull'affinità dell'ossigeno è stato eliminato ad alta [HbCO]. Questi risultati sono coerenti con l'iniziale legame di O2 o CO alla catena alfa dell'emoglobina. I risultati suggeriscono anche che l'interazione eme-eme i è diverso per l'ossigeno rispetto al monossido di carbonio.
La ventilazione nei cani coscienti durante l'ipercapnia acuta e cronica.La ventilazione minuto è stata misurata nei cani coscienti, a riposo e durante l'esercizio (1 mph), oltre 60 min immediatamente dopo l'inalazione acuta di anidride carbonica al 5% nell'aria e a 2, 4, 7 e 14 giorni respirando la stessa miscela di gas in camera. I cani sono stati studiati anche nell'immediato periodo di recupero dell'aria dall'ipercapnia cronica e 1 giorno dopo. Sono stati condotti studi di controllo con i cani che respiravano aria nella camera in condizioni comparabili. Un cambiamento trifasico della ventilazione è stato osservato nei cani a riposo durante i 14 giorni di ipercapnia. Dopo un iniziale marcato aumento della ventilazione durante l'ipercapnia acuta, la ventilazione è tornata ai livelli di controllo di 2 giorni e quindi sembrava essere elevata rispetto agli studi di controllo da 4 a 14 giorni in un momento in cui l'equilibrio acido-base del sangue è stato compensato. Quando gli stessi cani sono stati studiati durante l'esercizio, anche la ventilazione non è stata diversa t dal controllo aereo a 2 giorni di ipercapnia; tuttavia durante l'esercizio, a differenza degli studi a riposo, c'era solo una tendenza ad un aumento secondario della ventilazione a 7 e 14 giorni di ipercapnia. Durante l'immediato recupero dall'ipercapnia cronica, quando i cani respiravano aria, non vi era evidenza di ipoventilazione né a riposo né durante l'esercizio nonostante l'alcalosi arteriosa. A 24 ore dal recupero è apparso che i cani a riposo avevano una risposta ventilatoria leggermente ridotta al 5% di anidride carbonica rispetto agli studi di controllo. I risultati forniscono prove suggestive che altri fattori, oltre all'equilibrio acido-base, potrebbero contribuire alla regolazione della ventilazione durante l'ipercapnia cronica e al recupero dall'ipercapnia cronica.
Alterazioni della circolazione coronarica dell'uomo dopo la salita a 3.100 m di altitudine.Sono state esaminate le alterazioni del flusso sanguigno coronarico associate all'adattamento all'alta quota. Tre sono stati studiati uomini normali originari di bassa quota, prima a livello del mare e di nuovo dopo 10 giorni\' di soggiorno a 3.100 m di altitudine. Durante il riposo ad alta quota, una diminuzione del 32% del flusso sanguigno coronarico è stata ampiamente compensata da un aumento del 28% estrazione di O2 nell'arteria coronaria per mantenere il rilascio di O2 dal miocardio. L'aumento dell'estrazione di O2 è dovuto principalmente a una diminuzione del contenuto e della saturazione di O2 nel seno coronarico. Tuttavia, la tensione di O2 del seno coronarico è rimasta costante, implicando una diminuzione dell'affinità dell'emoglobina per l'O2. le osservazioni sono coerenti con l'ipotesi che il flusso sanguigno coronarico sia regolato per mantenere costante la tensione di O2 del tessuto miocardico (come qui riflesso dalla tensione di O2 nel seno coronarico). ione o una diminuzione dell'estrazione del lattato miocardico implicano che l'ipossia miocardica non si è sviluppata. Pertanto, l'ipossia miocardica non è la base per la diminuzione della gittata sistolica ad alta quota riportata in precedenza e osservata anche nel presente studio.
Proprietà elettroforetiche di particelle mutanti sensibili alla temperatura del virus delle scimmie 40.Quarantacinque ceppi sensibili alla temperatura delle particelle del virus 40 delle scimmie (SV40) appartenenti a quattro gruppi di complementazione sono stati analizzati mediante elettroforesi su gel di agarosio. Cinque ceppi (B204, B218, B233 e BC226), che sono membri dei gruppi di complementazione B e BC, hanno prodotto virioni con mobilità aberrante. La mappatura genetica di LAI e NATHANS ha suggerito che B e le mutazioni BC sono in un singolo gene. I virioni mutanti che possiedono mobilità alterata hanno maggiori cariche positive rispetto alle particelle wild-type. I risultati qui presentati indicano che il prodotto del gene B e BC è un componente significativo del capside SV40.
Ridotto potenziale di membrana dei globuli rossi e acidificazione del plasma in risposta a mezzi di contrasto. Andamento temporale dell'alterazione del pH plasmatico.Aggiunto mezzi di contrasto radiografici al sangue riducono il potenziale di membrana dei globuli rossi bilanciando gli anioni impenetrabili interni, l'emoglobina e i fosfati organici. In questo modo, si verifica una ridistribuzione dei protoni tale che il plasma viene acidificato. Il tempo di acidificazione del plasma è misurato in secondi, con un nadir di pH che si verifica da 12 a 15 secondi dopo l'aggiunta di Hypaque (da 1,5 a 3,0 ml/10 ml di sangue) e un tempo intermedio di acidificazione che richiede circa 6 secondi. Il processo di acidificazione è in parte rallentato da un'alcalosi iniziale dovuta a Hypaque. L'acidificazione di sangue è più rapido dopo l'aggiunta di Renografin (da 1,5 a 3,0 ml/10 ml di sangue) che dopo l'aggiunta di Hypaque poiché la prima soluzione è leggermente acida. Il decorso temporale dell'acidificazione plasmatica indica che una riduzione massima del sangue d Il pH può non verificarsi nei capillari di una circolazione regionale dopo l'iniezione di mezzi di contrasto nel suo vaso afferente, poiché il tempo di transito del materiale di contrasto può essere inferiore al tempo necessario per la massima acidificazione del plasma.
Gravidanza tubarica negli Igbo nigeriani.Cinquanta casi di gravidanza tubarica asportata verificatisi negli Igbo della Nigeria. Il 20% dei tubi non era rotto al momento dell'escissione, indicando un alto livello di consapevolezza della condizione tra i medici locali. Ci sono stati diversi indizi per concludere che, in questo gruppo etnico, la gravidanza tubarica tende ad essere vista in una fase avanzata. E tende a manifestarsi anche in le donne più giovani, a manifestarsi durante la prima gravidanza nota, a recidivare e ad essere associate a salpingite. Anche la gravidanza tubarica interstiziale è probabilmente relativamente comune.
Frequenza degli spermatozoi portatori di cromatina Y nei test intracervicali e intrauterini postcoitali.Per mezzo del Sims-Huhner-test intracervicale e complementare a questo, al test postcoitale intrauterino, è stata determinata la percentuale di spermatozoi positivi alla cromatina Y dopo la penetrazione nella cervice e nel cavo uterino. Si è potuto osservare un aumento significativo degli spermatozoi positivi per Y dopo la penetrazione. Non c'era alcuna influenza di alcuni parametri del spermiogramma sulla relazione degli spermatozoi da X a Y dopo la PCT. I calcoli statistici mostrano le dipendenze dei test postcoitali positivi e negativi dai parametri individuali dei fattori cervicali e dallo spermiogramma.
Attività diesterasica GPC nella secrezione endometriale umana. (Sue variazioni sotto l'azione di estrogeni, clomifene citrato, D-norgestrel (post-coitale e a basso dosaggio) e dispositivo intrauterino (IUD) ).)L'attività della diesterasi è stata studiata nelle secrezioni uterine umane di donne normali e in quelle sottoposte a trattamento per sterilità o contraccezione. Le secrezioni endometriali sono state ottenute da 78 pazienti e il materiale è stato suddiviso in quattro gruppi: donne normali, sotto diversi estrogeni, con trattamento con D-Norgestrel (giornaliero e post-coitale) e pazienti con IUD Lippes D. La concentrazione media di colina libera fornita dalla diesterasi GPC nel gruppo normale era 777 +/- 128 mug/ml (SD 286) Durante il trattamento ormonale è stato osservato un aumento dell'attività diesterasica. Il D-Norgestrel post-coitale ha prodotto una diminuzione dell'attività enzimatica tra 180 e 420 minuti. L'uso ininterrotto di D-Norgestrel (30 gamma al giorno) ha prodotto una perdita di attività diesterasica in 80% dei casi stud io. L'uso di IUD (Lippes D) non ha modificato l'attività enzimatica in questo gruppo.
Effetto della caffeina sulla motilità, vitalità, consumo di ossigeno e tasso glicolitico degli spermatozoi umani normocinetici e ipocinetici eiaculati.In questo rapporto l'effetto della caffeina , IBMX e la tossina del colera sugli spermatozoi umani eiaculati sono stati testati. È stato scoperto che la caffeina era il farmaco più efficace e che la tossina del colera era inefficace. La caffeina ha stimolato la motilità, preservato la vitalità e aumentato l'utilizzo di glucosio, fruttosio e la produzione di lattato di spermatozoi in tutto sperma e sperma lavato. Il consumo di ossigeno è stato invece diminuito. Questi risultati degli eiaculati normocinetici sono stati definiti come base per il confronto con la risposta dello sperma ipocinetico. Un gruppo di 11 spermatozoi eiaculati ipocinetici è stato trattato con caffeina e solo cinque hanno risposto alla stimolazione con caffeina da una risposta, simile a quella degli spermatozoi normocinetici. Sono stati definiti come "reattivi". L'altro gruppo di sei pazienti che non hanno risposto è stato definito come un Classe "non rispondente". Viene discussa la possibilità che lo sperma trattato in vitro dell'eiaculato di classe reattiva sia adatto per l'inseminazione artificiale alle loro mogli.
Interazioni tra recettori ormonali--meccanismi di base.La comprensione dei meccanismi di base dell'azione degli ormoni sta diventando una parte importante della formazione di un medico Con l'avvento dei dosaggi dei radiorecettori e il loro confronto con i dosaggi radioimmunologici, stiamo diventando sempre più consapevoli che la normale funzione fisiologica di un ormone non dipende necessariamente dai livelli "normali" di ormone presenti nel plasma. Anche se i livelli plasmatici sono normale, se una particolare cellula bersaglio manca del recettore per il particolare ormone, il tessuto bersaglio non risponderà all'ormone. È stato dimostrato, ad esempio, da molti lavoratori che gli ormoni steroidei agiscono sulle loro cellule tramite un recettore situato nel citoplasma di le cellule bersaglio (1-4) Poiché la presenza o l'assenza di tali recettori stanno diventando sempre più importanti in termini di infertilità inspiegabile, carcinoma dell'endometrio e cancro al seno, è necessario che il medico praticante sia fami mentire con il concetto di recettori e avere una certa comprensione del loro modo di agire. In questa breve presentazione spiegherò una certa terminologia e riassumerò lo stato dell'arte in modo che possiate leggere criticamente la letteratura riguardante i nuovi sviluppi nell'area dell'azione degli ormoni che diventerà sempre più importante nei prossimi anni. Discuterò alcuni degli aspetti del meccanismo degli ormoni peptidici come LH e FSH, ma dedicherò la maggior parte della mia attenzione a discutere i dettagli dell'azione degli ormoni steroidei poiché la nostra conoscenza in questo settore è molto più completa. Spiegherò anche i termini discussi frequentemente nella letteratura riguardo alle interazioni tra recettori ormonali.
Gravidanza completata a seguito di autotrapianto eterotopico vascolarizzato della tuba di Falloppio nella pecora.Il trapianto di tuba di Falloppio è un'operazione tecnicamente fattibile. Gli autori precedenti hanno riportato gravidanze a seguito di trapianti turbo-ovarici, ma non sembra esserci alcuna traccia di gestazione a seguito di trapianto dell'ovidotto isolato Questa comunicazione illustra il metodo che abbiamo utilizzato per eseguire i trapianti di tube di Falloppio nella pecora e documenta la nostra prima gravidanza a termine a seguito di questo operazione. Fornisce ulteriori prove della fattibilità tecnica dei trapianti di tube di Falloppio.
Esperienza preliminare con trapianti di tube di Falloppio vascolarizzati nella femmina umana.Lo screening preoperatorio e le cartelle cliniche postoperatorie di due pazienti sottoposti a trapianto di tube di Falloppio vascolarizzato sono In entrambi i casi l'operazione è stata seguita da rigetto immunologico, cronico e clinicamente quiescente nel primo paziente, ma è stato osservato un rigetto accelerato associato a piressia e aumento dei livelli sierici di fibrinogeno, piastrine e lattica deidrogenasi il secondo caso. La fattibilità tecnica è stata dimostrata, ma ulteriori progressi nel campo dei trapianti delle tube di Falloppio dipenderanno dallo sviluppo di tecniche più sicure di immunosoppressione ritenute necessarie per la sopravvivenza dell'innesto.
[Effetto del fominoben sulla ventilazione, sull'assorbimento di ossigeno e sui gas ematici in pazienti con disturbi della ventilazione ostruttiva].Il fominoben, un derivato della benzilammina sostituito (PB 89) Noleptan) è stato somministrato per via endovenosa a 12 pazienti con malattia polmonare ostruttiva cronica al fine di determinare se un'azione analeptica sulla respirazione, che era stata riscontrata da altri in studi su animali e in soggetti sani, può essere dimostrata anche in pazienti con FREDDO. non ha mostrato alcun cambiamento statisticamente significativo. La frequenza respiratoria è stata aumentata per un breve periodo, la ventilazione alveolare ha mostrato un leggero ma significativo aumento 35 minuti dopo l'iniezione ev di fominoben, tuttavia nessun cambiamento significativo nei primi 10 minuti dopo l'iniezione. -- La pO2 arteriosa era leggermente ma non significativamente aumentato nei primi 10 minuti dopo fominoben, mentre gli stessi pazienti hanno mostrato una diminuzione significativa della pO2 dopo l'iniezione di placebo. questa volta non era cambiato in modo significativo, l'aumento di pO2 può essere spiegato solo da un miglioramento del rapporto ventilazione-perfusione regionale da parte del fominoben. -In conclusione si può affermare che non è stata dimostrata una marcata azione stimolante sulla respirazione da parte del fominoben. Non c'era, tuttavia, depressione della respirazione poiché è associata alla maggior parte degli altri farmaci contro la tosse. Poiché il farmaco ha dimostrato di essere un eccellente sedativo per la tosse, la mancanza di depressione respiratoria può essere considerata un vantaggio considerevole.
Effetto del bromazepam sulla secrezione acida gastrica correlata all'ansia indotta da ipnosi.Gli effetti del bromazepam (0,1 mg/kg di peso corporeo) e del placebo sull'effetto gastrico la secrezione acida correlata all'ansia indotta da ipnosi è stata valutata in uno studio in doppio cieco, sono stati condotti 22 esperimenti su 4 volontari sani. I farmaci sono stati iniettati dopo un'ora basale. L'ipnosi è stata indotta subito dopo, e una sequenza di situazioni cariche di ansia fuori dal sono stati ricordati i soggetti del passato. Dopo un'ora, è stata suggerita l'amnesia postipnotica, i soggetti si sono svegliati e l'osservazione è continuata per un'altra ora. La produzione di acido è stata misurata mediante titolazione intragastrica e una capsula telemetrica. Durante l'ipnosi e il ricordo dell'ansia in entrambe le serie, la produzione di acido è stata misurata diminuito. Nell'ora postipnotica c'è stato un aumento significativo della secrezione nella serie placebo, mentre non c'era praticamente alcun cambiamento nella serie bromazepam. La serie placebo sembra derivare da un'attivazione del sistema simpatico sotto ansia e da un'attivazione vagale di rimbalzo nell'ora postipnotica. Al contrario, sotto l'effetto sedativo del bromazepam, non è stato possibile evocare ansia e non è risultata alcuna attivazione vagale di rimbalzo e quindi nessun aumento della secrezione acida.
Meccanismi microbicidi dei granulociti umani: effetti sinergici dell'elastasi dei granulociti e della mieloperossidasi o proteina cationica simile alla chimotripsina.L'attività antibatterica di una mieloperossidasi (MPO) -Si è scoperto che il sistema della glucosio ossidasi è notevolmente aumentato dall'elastasi dei granulociti, presente nei granuli azzurrofili dei neutrofili umani. solo l'uccisione di E. coli è stata potenziata. L'effetto di potenziamento dell'elastasi non dipendeva dalle proprietà enzimatiche della proteina poiché non è stata abolita dal riscaldamento, che distrugge l'attività enzimatica. Un inibitore peptidico clorometilchetone elastasi ha abolito sia l'attività elastolitica che la effetti attenuanti sull'uccisione batterica mediata da MPO-H2-O2 L'attività antibatterica della proteina cationica simile alla chimotripsina dei neutrofili umani è stata anche tiato da elastasi. Altri enzimi degradativi isolati da granulociti umani, ad esempio collagenasi e lisozima, non hanno potenziato l'uccisione batterica mediata da MPO-H2O2 o dipendente da proteine cationiche. Il presente studio indica che un componente neutrofilo, l'elastasi, che di per sé non è microbicida, può avviare cambiamenti subletali che rendono alcuni microrganismi più suscettibili all'azione di agenti microbicidi come l'MPO e la proteina cationica simile alla chimotripsina.
Studi chimici sul fumo di tabacco. XLII. Nitrosonornicotina: presenza nel tabacco, formazione e cancerogenicità.NNN è il primo cancerogeno organico isolato dal tabacco incombusto. È stato trovato nei tabacchi da fumo, da masticare e nel tabacco da fiuto in concentrazioni comprese tra 0,3 e 90,0 tazze. Questa sembra essere una concentrazione insolitamente alta per una nitrosamina in un agente ambientale. Abbiamo presentato dati che suggeriscono che NNN, e forse altri sconosciuti nitrosammine, si formano durante la stagionatura del tabacco e che il contenuto di nitrati del tabacco è un fattore importante nella formazione di nitrosammine. Sono attualmente in corso studi con N\'-metilanabasina applicata alle piante di tabacco per testare l'idea che la nicotina piuttosto che la nornicotina sia il principale precursore di NNN nel tabacco lavorato. Nei topi, NNN induce adenomi polmonari. Saggi biologici con ratti hanno dimostrato che NNN è cancerogeno per l'esofago e la cavità nasale. Questi prodotti chimici e bio i dati logici sono coerenti con l'osservazione che i masticatori di tabacco affrontano un aumentato rischio di cancro dell'esofago. Questa osservazione, ovviamente, non esclude la possibilità che altri agenti cancerogeni del tabacco siano responsabili dell'aumento del rischio di cancro dei masticatori di tabacco.
Effetti di alcuni inibitori sulla nitrosazione di farmaci nel succo gastrico umano.La nitrosazione di diversi farmaci in condizioni di stomaco simulate è stata inibita solo debolmente dalla bevande studiate. Con farmaci facilmente e rapidamente nitrosabili, come l'aminofenazone o la piperazina, somministrati per via orale, si raccomanda l'uso di un inibitore della nitrosazione. Di tutte le sostanze studiate, l'acido ascorbico dovrebbe essere considerato il miglior inibitore a causa della sua pronunciata attività ai valori di pH che si verificano nello stomaco e la sua assenza di effetti tossici. Vorremmo proporre che i farmaci in esame dovrebbero essere preparati per contenere una quantità sufficiente di acido ascorbico.
Effetto del tiocianato sulla stima dei nitriti e sulla scissione delle nitrosammine.Il tiocianato o il bromuro aumentano il colore formato dal nitrito che reagisce con l'acido solfanilico e la naftilendiammina. Se i reagenti coloranti sono stati aggiunti insieme al tiocianato (concentrazione finale, M/10), l'intensità del colore è stata raddoppiata. Se l'acido solfanilico è stato aggiunto tre minuti prima dell'aggiunta di naftilendiammina, il rapporto tra concentrazione di nitriti e produzione di colore era più lineare in presenza di tiocianato. Questo effetto era dovuto al tiocianato che catalizzava la diazotazione dell'acido sulfanilico e inibeva la reazione del nitrito con naftiletilendiammina. Il bromuro e il tiocianato sono simili nei loro effetti catalitici sulla nitrosazione e l'acido bromidrico nell'acido acetico glaciale è un reagente efficace per la denitrosazione della nitrosammina Sebbene il tiocianato catalizzasse la denitrosazione delle nitrosammine, l'effetto era piccolo tranne che con il nitrosom etilanilina, che era stata anche trovata denitrosata dall'acido sulfanilico. Il tiocianato non poteva essere usato generalmente per la distruzione delle nitrosammine; è stato anche trovato inefficace come alternativa all'acido bromidrico nella stima delle nitrosammine.
Effetti dell'acido gallico e dell'etanolo sulla formazione di nitrosodietilammina.Esperimenti in vitro dimostrano che il polifenolo, l'acido gallico, può sia catalizzare che inibire la NDEA formazione. I prodotti della reazione dipendono notevolmente dalle condizioni di pH e dalle concentrazioni relative dei reagenti. Pertanto, l'interpretazione degli esperimenti in vitro in termini di possibili effetti in vivo in una data popolazione deve prendere in considerazione informazioni dettagliate sulle abitudini alimentari e di consumo che potrebbero influenzare condizioni di pH e relative concentrazioni dei reagenti nel tubo digerente. A questo proposito è interessante notare che studi epidemiologici condotti dall'agenzia (giorno 1) indicano che il tè, che contiene gallotannini, viene consumato più frequentemente ma in modo più diluito birra nella zona ad alta incidenza di cancro esofageo del litorale caspico rispetto alla zona a bassa incidenza. Il nostro studio preliminare sull'etanolo suggerisce che i suoi effetti saranno risulterebbe privo delle complicazioni presenti con i tannini e sarebbe quindi più facilmente estrapolabile a situazioni in vivo.
Cancro da radiazioni, standard di sicurezza e attuali livelli di esposizione.Il cancro può essere indotto da radiazioni in qualsiasi tessuto in cui il cancro si presenta naturalmente. L'osservazione che prenatale la radiografia diagnostica provoca un piccolo ma definito aumento dei tumori infantili è una buona prova quanto ci si potrebbe aspettare a sostegno dell'aspettativa scientifica che non ci sarebbe alcuna soglia di dose per la carcinogenesi. Una relazione lineare tra dose di radiazioni e frequenza di cancro indotto è un presupposto necessario per un sistema di radioprotezione, ma non è necessariamente una base ragionevole per valutazioni realistiche del rischio di cancro. Infatti ci sono ragioni radiobiologiche ed epidemiologiche in senso contrario. Se l'ipotesi lineare è accettata allora attualmente nel Regno Unito la pratica di routine della medicina è di circa 2 ordini di grandezza più importante nel provocare il cancro rispetto all'inquinamento ambientale dovuto allo scarico di radioattività. Gli standard di sicurezza per l'esposizione professionale possono essere giustificati dal confronto dei rischi di cancro da radiazioni con i rischi di incidenti mortali nelle industrie più sicure. L'accettabilità degli standard corrispondenti per i membri del pubblico sembra richiedere una discussione più pubblica sul concetto di rischio trascurabile. Le reazioni emotive a rilasci incontrollati di radioattività si basano almeno in parte sull'incapacità di apprezzare l'ipotesi della linearità.
[Idrocarburi policiclici aromatici cancerogeni nei prodotti petroliferi: possibile prevenzione del cancro degli oli minerali].Una vera e propria epidemia di cancro cutaneo è comparsa dal 1954 in un area francese specializzata nell'industria della lavorazione dei metalli (valle dell'Arve, Haute-Saoie) Sono state effettuate due indagini: - una, di natura clinica ed epidemiologica nell'arco di 15 anni, ha registrato 133 casi di epiteli spinocellulari spesso localizzati in lo scroto e ha permesso di stimare la pericolosità per la popolazione di questa regione a 25 per 100.000 (cioè 36 volte di più che per la popolazione generale) - dall'altro, di natura chimica, ha rivelato da un lato che il gli oli da taglio nuovi, come quelli consegnati agli utilizzatori, contengono piuttosto frequentemente benzo[a]pirene (concentrazione: da 0,5 a 150 ug/l), e d'altra parte che gli oli usati tendono ad arricchirsi di idrocarburi cancerogeni. La prevenzione deve essere orientata verso un'assistenza sforzo lementale nella raffinazione degli oli industriali e proposte di soglia tossicologica, che consentirebbero di rifornire le officine meccaniche di oli non più a rischio cancerogeno.
[Esiste un ciclo gamma-glutamil modificato negli eritrociti umani (autore\'s transl)].Il primo passo nella biosintesi del glutatione è la formazione di gamma-glutamil-cisteina da parte dell'enzima glutamil-cisteina sintetasi. Poiché questo enzima non è specifico per la cisteina, si possono formare in vivo diversi gamma-glutamilamminoacidi che rappresentano potenziali substrati per gli enzimi gamma-glutamilciclotransferasi; in questo modo 5 -oxo-L-prolina e amminoacido libero. Abbiamo studiato in emolisato privo di membrana la competizione tra la biosintesi del glutatione o dell'acido oftalmico e la degradazione dei peptidi gamma-glutamil misurando la formazione di 5-ossoprolina. Il tasso endogeno della produzione di 5-oxoprolina era di 0,13 muM/min. Questo è aumentato a 2 muM/min dopo l'aggiunta di 2-amminobutirrato e a 10 muM/min dopo l'aggiunta di glutammato e 2-amminobutirrato all'emolisato. L'aggiunta di cisteina ha determinato un aumento della produzione di ossoprolina solo in condizioni di accumulo di glutamil-cisteina. Inoltre, è stato dimostrato che per il glutamil-2-amminobutirrato la degradazione a 5-ossoprolina è più rapida dell'utilizzo per la sintesi del tripeptide. Questo non era il caso della glutamil-cisteina. Poiché l'emolisato privo di membrana (che manca di gamma-glutamiltransferasi) è in grado di produrre 5-ossoprolina a partire dal glutammato, si conclude che questo amminoacido 5-ossoprolinente trasporta attraverso un ciclo gamma-glutamil modificato.
[La biosintesi del glutatione negli eritrociti umani (autore\'s transl)].Sono state studiate le concentrazioni dei precursori del glutatione negli eritrociti umani. 300muM glutammato , 375 muM di glicina e 10 muM di cisteina sono stati trovati mediante analisi automatizzata degli amminoacidi. La concentrazione di 2-amminobutirrato, il precursore dell'acido oftalmico, era di 15 muM. L'influenza delle attività della glutamil-cisteina sintetasi endogena o aggiunta e della glutatione sintetasi sul Il tasso di biosintesi del glutatione è stato misurato in emolisati privi di membrana in condizioni fisiologiche. I risultati mostrano che il tasso della biosintesi complessiva dipende principalmente dalla formazione del dipeptide glutamil-cisteina. L'effetto delle concentrazioni di precursori del glutatione sulla sintesi del tripeptide è stato studiato ad attività (endogena) costante degli enzimi di sintesi. La velocità non è stata aumentata dall'aggiunta di glutammato e/o glicina a meno che la cisteina o il glutamil- è stata aggiunta anche cisteina. Si conclude che la concentrazione di cisteina limita la velocità effettiva della reazione glutamil-cisteina-sintetasi in vivo. Nessuna cisteina o bis(glutamil)cistina è stata rilevata nell'emolisato umano; tuttavia, questi disolfuri sono stati convertiti in glutatione. Ciò indica che gli eritrociti hanno un sistema appropriato per la loro riduzione, poiché i disolfuri stessi non sono substrati per gli enzimi che sintetizzano il glutatione. Gli studi con globuli rossi umani intatti indicano che l'assorbimento della cisteina è il passaggio determinante nella biosintesi del glutatione.
Inattivazione della peptidasi degli ormoni di rilascio ipotalamico.Con la caratterizzazione strutturale degli ormoni ipotalamici, ormone di rilascio dell'ormone luteinizzante (LH-RH), tireotropina- rilascio (TRH), l'ormone inibitore del rilascio dell'ormone stimolante i melanociti (MIH) e l'ormone che inibisce il rilascio dell'ormone della crescita (GH-RIH o somatostatina), è stato possibile studiare la loro inattivazione enzimatica da parte delle peptidasi che sono presenti in vari siti Gli enzimi possono svolgere un ruolo importante nel controllo dei livelli di ormone polipeptidico e le peptidasi che agiscono su questi quattro ormoni ipotalamici possono regolare la quantità di TRH, LH-RH, MIH e somatostatina rilasciati dall'ipotalamo, o la loro azione a livello dell'organismo. livello dell'ipofisi e loro rimozione dalla circolazione Studiando gli enzimi peptidasi, si possono ottenere ulteriori informazioni sui meccanismi fisiologici che controllano la secrezione e l'azione degli ormoni ipotalamici, nonché un s sulla progettazione di analoghi con attività aumentata o competitiva.
Testosterone plasmatico in ragazzi criptorchidi in età prepuberale sottoposti a terapia HCG a lungo termine.Le concentrazioni plasmatiche di testosterone sono state determinate prima e dopo 6 settimane di trattamento con gonadotropina corionica umana in 36 ragazzi in età prepuberale con criptorchidismo bilaterale o unilaterale. I valori medi +/- DS basali e post-trattamento (ng/100 ml) nel gruppo bilaterale sono stati: trattamento riuscito (n = 14): 32 +/- 19 e 302 +/- - 49, trattamento non riuscito (n = 12): 20 +/- 15 e 176 +/- 73. Le cifre per il gruppo unilaterale erano: trattamento riuscito (n = 6): 23 +/- 9 e 244 +/ - 41, trattamento non riuscito (n = 5): 22 +/- 11 e 264 +/- 102. Nel gruppo bilaterale sono emerse differenze significative nella risposta T quando i ragazzi trattati con successo sono stati confrontati con quelli trattati senza successo. La funzione delle cellule di Leydig può essere compromessa in alcuni casi di criptorchidismo.
Presenza di inattivatore C1 e altri inibitori della proteinasi nelle frazioni di euglobulina e loro influenza sull'attività fibrinolitica.Quantità considerevoli di inattivatore C1 e inter-alfa-tripsina inibitore pecipitato durante il frazionamento dell'euglobulina del plasma umano. La quantità precipitata dipende dalla forza ionica e dal pH durante la procedura di frazionamento. Al contrario, l'alfa1-anti-tripsina, l'alfa2-macroglobulina e l'antitrombina II sono presenti nelle frazioni di euglobulina solo in tracce. l'attività fibrinolitica delle frazioni di euglobulina è inibita dall'inattivatore endogeno C1, in particolare come dimostrato dal confronto tra plasma normale ed edema angioneurotico ereditario (HANE).
Legame reversibile della noradrenalina al miometrio di coniglio: relazione con siti di noto significato biologico.Le catecolamine si legano specificamente a diversi tipi di cellule e frazioni subcellulari. Questo legame è non coerente con il legame al recettore adrenergico. Ci si aspetta che le catecolamine si leghino a siti diversi dal recettore adrenergico (captazione 1, captazione 2, vescicole nervose, catecolamina-O-metil transferasi e albumina sierica). Abbiamo caratterizzato il legame di 3H- noradrenalina ai microsomi preparati dal miometrio di coniglio. In presenza di legame antiossidante era reversibile e la 3H-norepinefrina potrebbe essere recuperata legata ai microsomi o libera nei mezzi di incubazione. Il legame non era caratteristico del legame a nessun sito biologico noto. Può rappresentare il legame a una miscela di questi siti o può essere un legame fortuito a siti di significato biologico sconosciuto.
Ph del sangue: un test per la valutazione della gravità nella proctocolite.Il bilancio acido-base è stato studiato in 58 pazienti con proctocolite idiopatica attiva; la condizione di 10 di questi era complicato da megacolon tossico. Il pH del sangue arterioso aumentava progressivamente con l'aumentare della gravità della colite e con la diffusione delle lesioni. Sono state osservate differenze statisticamente significative nei valori di pH tra le forme lievi/moderate e gravi e tra le forme gravi e complicate (\'megacolon tossico\'). È stata trovata una correlazione lineare tra il pH e la quantità di gas intestinale, frequenza cardiaca e albumina plasmatica.
Effetto della metiamide sui livelli di colecistochinina basale e stimolata nei pazienti con ulcera duodenale.I livelli sierici di colecistochinina (CCK) sono stati misurati in 10 pazienti con duodenale cronico ulcere, digiuno e ad intervalli dopo due pasti standard di prova (300 ml di 40 mmol/1 soluzione di fenilalanina), uno somministrato prima e uno durante il blocco del recettore H2 con metiamide (200 mg quattro volte al giorno). I livelli sierici di CCK a digiuno erano più bassi in tutti i pazienti durante il trattamento con metiamide (il livello medio scende da 306-0 +/- 102-0 (SEM) a 82-1 +/- 23-6 pg/ml dopo il trattamento (p inferiore a 0-01)). Al contrario, i livelli sierici di CCK di picco dopo il pasto non erano significativamente differenti (7400 +/- 1141 pg/ml prima del trattamento e 7569 +/- 1293 pg/ml su metiamide). Concludiamo che nei pazienti con ulcera duodenale la secrezione di CCK in condizioni basali può dipendere in parte dalla stimolazione della mucosa dell'intestino tenue da parte dell'acido gastrico, ma che, dopo un pasto di aminoacidi, la secrezione di cid è meno importante nel determinare la quantità di CCK rilasciata.
Relazioni tra l'idrolisi della mucosa e il trasporto di due dipeptidi di fenilalanina.Per studiare la fonte di aminoacidi liberi trovati nel lume intestinale durante l'assorbimento di dipeptidi, oltre a valutare il ruolo delle peptidasi del bordo a pennello nell'idrolisi della mucosa dei dipeptidi durante l'assorbimento, sono stati misurati i tassi di scomparsa del dipeptide e l'aspetto dei prodotti idrolitici durante la perfusione del digiuno e dell'ileo di ratto in vivo con soluzioni 10 mM tamponate e non tamponate di glicl -L-fenilalanina (Gly-Phe) e L-fenilalanil-glicina (Phe-Gly). Successivamente è stata misurata in vitro l'attività della peptidasi del bordo a spazzola della mucosa nei segmenti perfusi a pH luminale e a due concentrazioni di substrato. Inoltre l'attività della peptidasi del citosol in i segmenti perfusi sono stati misurati a pH 7-4 e a concentrazioni di substrato 10 mM. Nel digiuno, c'era una relazione tra i tassi di comparsa di fenilalanina libera in vivo (Phe-Gly maggiore di Gly-Ph e) e tassi di attività peptidasi del citosol (Gly-Phe maggiore di Phe-Gly) del bordo a spazzola (Phe-Gly maggiore di Gly-Phe) piuttosto che del citosol. Negli studi ileali non è stata osservata alcuna relazione costante tra l'aspetto della fenilalanina libera e l'idrolisi dei dipeptidi da parte del bordo a spazzola o delle peptidasi del citosol. Questi risultati suggeriscono che, nel digiuno, i prodotti idrolitici provengono dalla superficie della cellula mentre, nell'ileo, i prodotti idrolitici provengono sia dal compartimento intracellulare che dalla superficie della cellula mucosa. Nel digiuno, i tassi in vitro di idrolisi del bordo a spazzola di Gly-Phe erano sempre inferiori ai tassi di scomparsa in vivo, mentre i tassi di idrolisi del bordo a spazzola di Phe-Gly hanno sempre superato i tassi di scomparsa del lume. Questi dati implicano che Gly-Phe è prevalentemente trasportato intatto e idrolizzato dalle peptidasi del citosol. Al contrario, le peptidasi del bordo a spazzola svolgono un ruolo importante nell'idrolisi della mucosa di Phe-Gly.
Attività sierica gamma-glutamil transpeptidasi nell'epatite virale: soppressione in gravidanza e da pillole anticoncezionali.attività gamma-glutamil transpeptidasi (GGT) nel siero era aumentata nella maggior parte delle donne con epatite virale che si verificava nella prima metà della gravidanza. Al contrario, l'attività della GGT era anormale meno frequentemente e il valore medio era relativamente basso, anche se l'epatite era altrettanto grave, nella seconda metà della gestazione. Anche l'attività della GGT era inferiore e i valori anormali erano meno frequenti nelle donne non gravide con epatite virale che stavano assumendo pillole anticoncezionali (BCP). La GGT depressa non è attribuibile a un inibitore nel siero nelle donne in tarda gravidanza o che assumono BCP. I dati suggeriscono che gli estrogeni e/o i composti progestazionali influenzano il fegato in modo tale che meno GGT viene rilasciato nel sangue con danno epatocellulare acuto Inoltre, l'iperbilirubinemia è stata trovata associata a ridotta attività sierica di GGT e bilirubi n aggiunto al siero in vitro ha interferito con l'attività misurata dell'enzima.
[Effetto dell'O-metilidrossilammina sul fago extracellulare cd].Lo studio è stato condotto sull'effetto letale e mutageno di 1 M e 0,5 M O -metilidrossilammina (OMHA) sul fago extracellulare Sd. La correlazione tra le modificazioni chimiche del genoma e il grado di inattivazione dei fagi sotto l'azione di OMHA è stata stabilita nell'intervallo di pH studiato (4,5-7,0) della reazione medio. OMHA in attiva il fago alla velocità più alta a pH 5,0, che concorda con i dati chimici che indicano che la velocità totale di modificazione OMHA delle unità di citidina è massima a questo pH. Le curve di inattivazione del fago trattato con OMHA sono single-hit a pH indagato, ma hanno una piccola spalla iniziale; a pH 5,0 e 4,5 le curve di inattivazione sono costituite da due esponenti, il secondo esponente con la pendenza minore, cioè il fago è caratterizzato da una maggiore resistenza all'OMHA in questa sezione L'aumento della resistenza dei fagi può essere spiegato trasformando il prodotto originale IV (reticolato con proteine) nel prodotto II (N4-metossi-6-metossiammina-5,6-diidrocitidina) che può essere riparato in contrasto con IV. OMHA ha un elevato effetto mutageno sul fago Sd. In condizioni ottimali (a pH 4,5) il mutageno induce mutanti di placca (fino al 6%) tra i fagi sopravvissuti. I dati ottenuti sono correlati al fatto che al diminuire del pH (da 5,0 a 4,5) il rapporto tra l'unità "mutagen" - N4-metossicitidina (prodotto III) e quella "inattivante" (prodotto II ) aumenta. Le curve di induzione di mutazione sotto l'azione di OMHA hanno una forma caratteristica con la sezione lineare iniziale e la massima o il plateau simile alle curve di mutazione da osservare sotto l'azione di radiazioni e agenti chimici.
Modelli isoenzimatici dell'aminoacido transminasi a catena ramificata nell'epatoma di Morris 7316A in coltura.Cellule coltivate dell'epatoma di Morris 7316A contenevano isoenzimi I e II, ma non isoenzima III, delle transaminasi degli aminoacidi a catena ramificata. Contenevano anche tirosina transaminasi. L'isozima II e la tirosina transaminasi sono state indotte dall'aggiunta di cortisolo. Questi risultati concordano bene con i risultati in vivo. Tuttavia, una coltura prolungata delle cellule per oltre 500 giorni ha causato deviazione del fascio cromosomico e attività di entrambi gli enzimi, e non erano più influenzati dal cortisolo. Un tumore formatosi per retrotrapianto delle cellule mostrava il tipico pattern isoenzimatico degli epatomi a rapida crescita, come gli epatomi Yoshida ascite, cioè gli isoenzimi I e III. Questi risultati sono stati discussi in relazione al cambiamento dell'espressione genica durante la coltura.
Proprietà dei recettori F2alfa delle prostaglandine nelle membrane cellulari del corpo luteo bovino.Il legame specifico della prostaglandina (PG) F2alfa marcata con 3H alla cellula del corpo luteo bovino le membrane erano un processo rapido (K1=1.1 X 10(4) M(-1)S(-1) e reversibile (K(-1)=3.3 X 10(-4) S(-1)) a 22 gradi C. Il legame specifico era anche un processo saturabile che esibiva due classi di recettori con costanti di dissociazione apparente (Kds) di 1,6 X 10 (-9) M e 2,4 X 10 (-8) M. La natura eterogenea di [3H ]Il legame di PGF2alpha non sembra essere dovuto a una cooperazione negativa ma semplicemente rappresentare l'esistenza di due gruppi indipendenti di siti recettori con affinità discrete. Cambiamenti di energia libera di +11,9 e +10,3 Kcal/mol sono stati calcolati dai Kd di alto e basso recettori di affinità, rispettivamente. Il legame di [3H]PGF2alfa alle membrane non è stato accompagnato da alcun cambiamento rilevabile nel [3H]PGF2alfa legato o libero. quantità di PGF2alfa non etichettato hanno provocato un'inibizione dose-dipendente del legame [3H]PGF2alfa alle membrane, con inibizione completa che si è verificata a 10(-6) M. Altri PG non etichettati come PGF1alpha, PGE2 (5 volte), PGE1 (120 -fold), PGA1 e PGB1 (circa 10.000 volte) erano meno efficaci rispetto a PGF2alpha non etichettato nell'inibire il legame di [3H] PGF2alpha alle membrane. I metaboliti di PGF2alfa, 15-cheto-PGF2alfa e 13,14-diidro-15-cheto-PGF2alfa avevano un'affinità 100 volte inferiore per i recettori PGF2alfa. Il 15(S)15-Metil-PGF2alfa, un analogo del PGF2alfa, aveva un'affinità abbastanza elevata ma inferiore alla sua molecola progenitrice. Vari acidi grassi insaturi, l'indometacina e l'acido 7-oxa-13-prostinoico avevano affinità da 3.000 a 10.000 volte inferiori per i recettori PGF2alfa. L'incubazione delle membrane con vari enzimi ha rivelato che le molecole del recettore PGF2alpha sono di natura proteica che richiedono lipidi di membrana e fosfolipidi specifici per la funzione di legame. Tra i vari fosfolipidi utilizzati, la sfingomielina si è rivelata molto efficace nel ripristinare la perdita del legame [3H]PGF2alfa nelle membrane trattate con fosfolipasi C. N-etilmaleimmide, ma non altri agenti alchilanti del gruppo SH hanno inibito il legame. Il legame è stato anche inibito da tetranitrometano, dinitrofluorobenzene e anidride acetica. Ciò ha suggerito che tirosile, istidile, triptofano e ammino (uno o tutti) ma non i gruppi SH fossero coinvolti nell'interazione di legame.
Gli effetti dell'alterazione del pH del liquido seminale sul rapporto tra i sessi della prole di coniglio.È stato suggerito che il pH della vagina alla il momento della fecondazione può avere un effetto differenziale sugli spermatozoi portatori di X o Y e quindi influenzare il sesso della prole Per testare questo postulato, è stato raccolto lo sperma di coniglio, diluito 1:10 con un tampone di pH 5,4, 6,9 o 9,6 , e dopo 20 minuti 0,5 ml di miscela sperma-tampone sono stati utilizzati per l'inseminazione in una femmina indotta dall'ovulazione. I cuccioli appena nati sono stati esaminati sia esternamente che internamente per il sesso. Le femmine inseminate con seme acido hanno avuto 6 cucciolate, 50 figli, con il 48% maschi; quelli con seme neutro avevano 8 cucciolate, 48 figli, con il 63% di maschi e quelli con sperma alcalino avevano 7 cucciolate, 49 figli, con il 49% di maschi. Non c'era alcuna differenza significativa in questi rapporti tra i sessi rispetto al previsto 50% di maschi La motilità dello sperma di coniglio a 23 gradi C in tamponi con pH 4,6, 5,4, 6,9, 9,6 e 9,8 è stata ridotta in vitro poiché il pH devia dalla neutralità. Le condizioni acide erano più dannose di quelle alcaline. Gli spermatozoi hanno perso la loro motilità più rapidamente nei tamponi di 37 gradi C rispetto ai tamponi di 23 gradi C. Non era possibile con la microscopia elettronica a scansione distinguere morfologicamente tra spermatozoi portatori di X e Y. Sembra improbabile che un effetto diretto del pH sullo sperma possa essere una singola influenza sul sesso della prole.
Recettori separati che mediano l'effetto inotropo e cronotropo positivo dell'istamina negli atri di cavia.L'effetto inotropo positivo diretto dell'istamina è stato studiato sulla sinistra stimolata preparazione atriale da cavie. L'istamina (da 10(-8) a 10(-4) M) ha aumentato la tensione massima sviluppata negli atri sinistri incubati a 35 gradi C e guidati a 2 Hz. L'aumento massimo della tensione è stato del 60% di quello osservato con noradrenalina. Metiamide (3 X 10(-5) M, un antagonista specifico del recettore H2) non ha alterato la risposta inotropa dell'atrio sinistro all'istamina. Tuttavia, la tripelennamina (un tipico antagonista del recettore H1) ha spostato in modo competitivo la dose inotropa dell'istamina- curva di risposta a destra a concentrazioni da 10(-8) a 10(-7) M. Concentrazioni più elevate (3 X 10(-7) e 10(-6) M) hanno causato un piccolo spostamento aggiuntivo a destra. l'effetto cronotropo positivo dell'istamina sugli atri che battono spontaneamente è stato antagonizzato in modo competitivo dalla metiamide (10( -6) e 3 X 10(-6) M). Questi risultati dimostrano che negli atri di cavia l'istamina aumenta la contrattilità miocardica mediante un'interazione con i recettori strettamente correlati ai recettori H1 classici mentre il suo effetto cronotropo è mediato dall'interazione con i recettori H2.
Effetto del propranololo sulle proprietà antinocicettive, di tolleranza e di dipendenza della morfina nei roditori e nelle scimmie.Poiché una sindrome da astinenza può accompagnare l'iniezione di oppioidi nei tossicodipendenti pretrattati con propranololo sono state studiate le proprietà antagoniste della morfina di questo composto. Il propranololo racemico non ha influenzato significativamente l'ED50 antinocicettivo della morfina nei roditori e né ha precipitato l'astinenza nelle scimmie morfina-dipendenti né ha esacerbato la sindrome nelle scimmie ritirate da 24 ore. di propranololo non ha alterato lo sviluppo della dipendenza fisica dalla morfina nelle scimmie. L'antagonismo narcotico clinico non sarebbe stato previsto da questo profilo. L'evidenza di una possibile interazione tra propranololo e morfina è venuta da studi utilizzando il test della coda di topo. Pertanto, dopo 8 iniezioni di propranololo (oltre 4 giorni) topi sono stati tolleranti a dosi normalmente efficaci di morfina. Iniezioni concomitanti di naloxone formica tormentato questo effetto. Quando propranololo e morfina sono stati somministrati contemporaneamente, la morfina ED50 (il giorno 5) è stata doppia rispetto a quella del gruppo che ha ricevuto la sola morfina. Risultati simili sono stati ottenuti con d-propranololo; practolol ha avuto un effetto neutro.
Un confronto tra le azioni di ICI66082 e propranololo sui beta-adrenocettori cardiaci e periferici.Le relative potenze di blocco di ICI66082 e propranololo rispetto al cuore La frequenza di contrattilità, la pressione arteriosa diastolica e la conduttanza vascolare periferica sono state confrontate in cani anestetizzati. Il flusso sanguigno periferico è stato misurato con una sonda di flusso elettromagnetica intorno all'aorta discendente con cannulazione retrograda dell'arteria mesenterica inferiore per iniezioni intra-arteriose di isoprenalina. gli effetti vascolari di ICI66082 e propranololo sono stati confrontati in termini di cambiamenti nelle curve dose-risposta dopo iniezioni ev e intra-arteriose di isoprenalina. Il propranololo era due volte più potente di una dose equimolare di ICI66082 sui beta-adrenocettori cardiaci. Era 70 --130 volte più potente nella sua azione sui recettori vascolari periferici Il propranololo stesso era 3 volte più potente nel bloccare il recettore vascolare periferico tori rispetto ai beta-recettori cardiaci. ICI66082 era 17--21 volte più attivo nel bloccare i beta-adrenocettori miocardici rispetto a quelli dei vasi periferici. Studi elettrofisiologici hanno dimostrato che ICI66082 è privo di proprietà depressive di membrana in concentrazioni fino a 100 mg/l.
L'azione della bombesina sulla secrezione gastrica del pollo.La bombesina naturale tetradecapeptide alla dose soglia di 3-5 ng/kg/min iv stimola la secrezione gastrica nel pollo con una fistola proventriculus acuta o cronica, questo effetto è bloccato dall'atropina L'insorgenza di tachifilassi nel preparato acuto, ma non in quello cronico, e l'inibizione della risposta da parte dell'acidificazione del proventriculus, in la presenza di una intatta sensibilità alla ceruleina - un agente direttamente stimolante - supporta l'ipotesi di un meccanismo d'azione indiretto della bombesina, ovvero il rilascio di gastrina endogena, nonché dell'esistenza di gastrina anche nel pollo.
[Valori plasmatici di testosterone in pazienti con disturbi dello sviluppo somatosessuale dagli 11 anni all'età adulta].Il livello plasmatico di testosterone è stato determinato in 5 gruppi: 1 in 69 giovani normali e 85 maschi fertili all'età di 11-45 anni, 2. in 42 pazienti con ipospadia o epispadia di età compresa tra 11 e 25 anni, 3. in 72 maschi con criptorchidismo unilaterale all'età di 11-45 anni, 4. in 83 maschi con criptorchidismo bilaterale di età compresa tra 11 e 45 anni e 5. in 106 pazienti con sindrome di Klinefelter di età compresa tra 16 e 45 anni È stato riscontrato un aumento puberale del livello plasmatico di testosterone in soggetti con criptorchidismo o Sindrome di Klinefelter a un'età simile a quella del gruppo di controllo. Tuttavia, già all'età di 13-14 anni sono stati riscontrati valori di testosterone diminuiti nei pazienti rispetto ai giovani normali. Tra i 19 e i 20 anni, il testosterone plasmatico livello era significativamente diminuito in tutti i pazienti-g gruppi rispetto ai controlli di età simile. In età adulta, le concentrazioni plasmatiche di testosterone nei gruppi di pazienti sono state osservate da 4 a 6 ng/ml senza cambiamenti significativi dipendenti dall'età, che sono caratteristici dei maschi normospermici. Diversi gradi di sintomi clinici che indicano una carenza di androgeni riscontrata in vari gruppi di pazienti nonostante livelli di androgeni simili nell'età adulta suggeriscono una diversa reattività dei loro organi bersaglio agli androgeni.