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Legame del complesso nucleare della proteina-T3 legante la triiodotironina (T3) alla cromatina.Complesso nucleare della proteina legante la tirrodotironina (T3) (NTBP)-T3, preparato da nuclei di fegato di ratti a cui è stato somministrato [125I]T3 in vovo, si ricollega alla cromatina nucleare di ratto a pH 7,4 e a concentrazioni di KCl basse, ma non elevate. Il complesso NTBP-T3 del fegato si lega alla cromatina di fegato, reni, cuore, cervello, testicolo e milza. Il legame è stato depresso a pH 8, con l'aggiunta di 10 mm CaCl2 o 100 mM MgCl2 e di 1 mM GTP o UTP. Sebbene la cromatina del cuore leghi il più complesso NTBP-T3 e il cervello meno, non c'è separazione chiara dell'attività di legame sul confronto di tre tessuti sensibili al T3 (cuore, fegato, rene) con i tessuti insensibili al T3. Nelle condizioni di questi esperimenti, non c'era competizione evidente per i siti di legame su nessuna delle sei cromatine testate.
Effetti teratopsicogenetici apparentemente prodotti da concentrazioni non fisiologiche di neurotrasmettitori durante la differenziazione cerebrale.In ratti maschi trattati con pargilina, reserpina o piridostigmina durante la vita neonatale cambiamenti permanenti significativi di comportamento sessuale e comportamento di apprendimento condizionato sono stati osservati nella vita giovanile e/o adulta. L'attività sessuale maschile e la capacità di apprendimento erano permanentemente diminuite negli animali trattati con pargilina o reserpina neonatale, ma aumentate permanentemente nei ratti trattati con piridostigmina neonatale. Questi risultati suggeriscono che non fisiologico le concentrazioni e/oi tassi di turnover dei neurotrasmettitori, se prodotti durante un periodo critico di differenziazione cerebrale, sono in grado di indurre cambiamenti comportamentali efficaci per tutta la vita, cioè effetti teratopsicogenetici.
Distribuzione del fattore di rilascio della corticotropina nel cervello di ratto normale e Brattleboro ed effetto della deafferentazione, dell'ipofisectomia e del trattamento con steroidi negli animali normali.Fattore di rilascio della corticotropina ( CRF) è stata determinata l'attività (saggio di cellule pituitarie disperse) nell'eminenza mediana (ME) del ratto, in vari nuclei ipotalamici, nonché nell'intero ipotalamo basale mediano (MBH) e nelle aree extra-ipotalamiche. Le concentrazioni più elevate sono state osservate nella ME, con concentrazioni ridotte le stime di potenza notate procedendo dorsalmente e cefalee da ME. (NIAMDD HE-RP-1, estratto di riferimento ME, equivalente a 1.0) erano: ME-2.2; arcuato n. -0.88; dorsomediale n. -041; ventromediale n. -0.35; periventricolare n. -0.24; ipotalamo - 0.05; talamo - 0.01; corteccia - 0.005. Quantità misurabili, ma inferiori rispetto ai nuclei sopra citati, erano presenti nei nuclei sopraottici e paraventricolari. L'attività del CRF non era misurabile nell'area preottica, setto, bulbo olfattivo, striato, mesencefalo, p ons, midollo o cervelletto. La completa deafferentazione ipotalamica è stata accompagnata da un aumento dell'attività della CRF/proteina della tazza in ME e MBH, associata a una diminuzione delle concentrazioni plasmatiche di ACTH e corticosterone AM. L'attività simile a CRF in ME e MBH è aumentata dopo ipofisectomia e dopo pretrattamento con desametasone. Questi risultati indicano che la CRF è principalmente sintetizzata nella ME e nell'area circostante, e questa fonte di CRF è sensibile agli effetti di feedback e che gli input extraipotalamici influenzano il rilascio di CRF. Gli animali femmine avevano un contenuto di ME CRF più elevato rispetto agli animali maschi. I ratti Brattleboro omozigoti ed eterozigoti avevano significativamente meno CRF in ME e MBH rispetto agli animali di controllo, con differenze significative anche notate tra animali omozigoti ed eterozigoti.
Il recettore dell'insulina dell'eritrocita di tacchino: somiglianza con i recettori dell'insulina dei mammiferi.Gli eritrociti aviari possiedono recettori dell'insulina che hanno proprietà di legame praticamente identiche a quelle dei recettori dell'insulina dei mammiferi ben studiati. L'affinità per l'insulina suina era identica per i recettori del tacchino e dei mammiferi nell'intero intervallo di concentrazioni di insulina, così come l'affinità di ciascuno dei quattro analoghi dell'insulina che differivano di 300 volte nella potenza biologica. l'accelerazione della dissociazione (cioè l'interazione sito-sito negativamente cooperativite) era indistinguibile in un intervallo di 10(6) di concentrazioni di insulina. La forte dipendenza del legame dal pH era identica per i recettori di tacchino e di mammifero. Gli effetti della temperatura sull'associazione, sulla dissociazione e sulla stabilità anche il legame di stato era identico. Pertanto, sebbene gli uccelli e i mammiferi si siano evoluti separatamente per 300 milioni di anni, ci sono stati pochi cambiamenti nella pro proprietà del recettore dell'insulina in questo periodo di tempo.
Modifiche dello sviluppo dell'ormone luteinizzante sierico, dell'ormone follicolo-stimolante e dei livelli di androgeni nei maschi di due ceppi di topi consanguinei.Uno studio completo sullo sviluppo dell'LH sierico, Le concentrazioni di FSH e di androgeni sono state effettuate in topi maschi di due ceppi consanguinei. I livelli di ormone gonadotropico (GTH) sono aumentati 10-15 giorni prima dell'aumento puberale degli androgeni sierici con l'FSH che precede l'LH. In entrambi i ceppi il titolo di GTH è aumentato a un picco a 30 o 35 giorni e poi costantemente declinato a livelli adulti che erano ceppo-specifici. Gli androgeni sierici sono stati rilevati a livelli bassi e relativamente costanti fino all'aumento puberale tra 30 e 50 giorni dopo il parto. I risultati sono interpretati come a sostegno dell'ipotesi che un lo spostamento della sensibilità al feedback, che si verifica a circa 20 giorni di età, può essere coinvolto nell'inizio della pubertà nel topo maschio.
[Interazioni alcol-farmaci psicotropi].Il problema delle interazioni dell'etanolo con i farmaci psicotropi coinvolge vari fattori la cui complessa azione è esaminata in questo articolo. Ottimo occorre prestare attenzione al consumo di alcol tra i pazienti trattati con sedativi; l'azione depressiva dell'etanolo sul sistema nervoso centrale potrebbe essere potenziata soprattutto all'inizio del trattamento, in quanto sembra che possa esistere una certa abitudine alle interazioni. Tuttavia, bisogna essere consapevoli che la personalità del paziente è forse più importante da tenere in considerazione che il consumo di farmaci, almeno per quanto riguarda i fattori di rischio negli incidenti stradali Parallelamente alle interazioni che coinvolgono i recettori del sistema nervoso centrale sistema metabolico, sono possibili interazioni metaboliche, tuttavia più difficili da descrivere: influenzano l'assorbimento dei farmaci, il loro metabolismo epatico e sembrano agire soprattutto nell'alcolismo cronico o durante b arbitra il consumo.
[Acidosi lattica nei diabetici su biguanidi (autore\'s trad.)].Una ricerca sistematica di casi di acidosi lattica tra diabetici su biguanidi ha rivelato dieci nell'arco di otto mesi, mentre nei dieci anni precedenti non era stato diagnosticato con certezza un solo caso, con una prevalenza di 1 paziente su 2000 ricoverati, tutti e dieci avevano più di 60 anni ed erano stati precedentemente trattati per scompenso cardiaco La maggior parte di loro soffriva da tempo di insufficienza renale. Non si sono verificati casi di sovradosaggio di biguanide. I criteri per la diagnosi di acidosi lattica sono una concentrazione lattica nel sangue media di 18,4 mmol/l e un pH basso, mediamente di 6,9. Concentrazione sierica di biguanide (misurato con test radioimmunologici) era notevolmente aumentato. La maggior parte dei pazienti era in shock circolatorio al momento del ricovero o subito dopo e tutti avevano una storia di disturbi gastrointestinali. Nonostante il trattamento intensivo con insulina e glucosio e un'attenta correzione zione dell'acidosi con bicarbonato quattro dei dieci pazienti sono morti.
[Livelli sierici di gastrina e secrezione di acido gastrico nei neonati (autore\'s trad.)].La secrezione di acido gastrico è stata misurata in 20 bambini di età 6-438 giorni. I valori per la produzione di acido basale e quello dopo stimolazione con 6 mug/kg di pentagastrina per via sottocutanea sono risultati essere correlati all'età, al peso corporeo e alla superficie corporea, ma queste correlazioni non erano paragonabili a quelle degli adulti. devono quindi essere stabiliti i valori per i diversi gruppi di età nell'infanzia. Inoltre, i risultati indicano l'immaturità delle cellule parietali durante i primi sei mesi di vita. Misurazione della concentrazione sierica di gastrina a digiuno mediante test radioimmunologico in 74 bambini, di età compresa tra 1-438 giorni e 154 adulti come controlli hanno rivelato un elevato livello sierico di gastrina nei neonati, con una diminuzione esponenziale durante il primo anno di vita. Nonostante valori di pH comparabili nel succo gastrico ad un anno di vita, le concentrazioni di gastrina erano superiori a quelle degli adulti (ad un livello statisticamente significati livello di sopraelevazione). D'altra parte, le normali concentrazioni sieriche di gastrina sono state trovate in dieci donne in gravidanza appena prima del parto. I risultati suggeriscono un meccanismo di feedback negativo tra la secrezione di acido gastrico e i livelli sierici di gastrina a digiuno, ma tale meccanismo è probabilmente limitato dalla secrezione di gastrina extragastrica.
Un metodo per la misurazione della senape L-fenilalanina nel topo e nel cane mediante cromatografia liquida ad alta pressione.La distribuzione della senape L-fenilalanina (L-PAM) è stato studiato in cani e topi mediante cromatografia liquida ad alta pressione. La separazione di L-PAM dai suoi prodotti di idrolisi è stata ottenuta con una colonna mu-Bondapak C18, un sistema solvente composto da 2-metossietanolo/0,1% acetico acido e la programmazione del solvente con un gradiente a gradini. La separazione completa è stata effettuata in meno di 15 minuti. L'emivita per la scomparsa di L-PAM dal sangue di topo era di 41 minuti, mentre quella dal sangue di cane era di 29 minuti. Il derivato monoidrossilico di L-PAM, L-MOH, è scomparso dal siero del cane con un'emivita di 32 minuti L-MOH non era rilevabile nel tessuto del topo diverso dal sangue a volte superiore a 15 minuti dopo l'iniezione Nel cane a 4 ore dopo l'iniezione , i rapporti di concentrazione tessuto/siero erano maggiori di 1 per fegato, milza, intestino, muscolo scheletrico, urinar y vescica e cistifellea. La concentrazione di L-PAM nella bile era circa 500 volte superiore a quella nel siero.
Metabolismo della metossifenamina nell'uomo e nella scimmia.I metaboliti della metossifenamina nelle urine di soggetti umani e scimmie sono stati separati mediante cromatografia gas-liquido e identificati confrontando il loro comportamento cromatografico e spettrometrico di massa con quelli dei composti sintetici: è stato dimostrato che la O-demetilazione aromatica, l'idrossilazione dell'anello aromatico (entrambe seguite da coniugazione del glucuronide) e la N-demetilazione si verificano nell'uomo e nella scimmia. erano i principali metaboliti, mentre nella scimmia si sono formati altri tre metaboliti principali non identificati.
Identificazione dei metaboliti basici del 4-[4-(p-cloro- robenzoil)piperidino]-4\'-fluorobutirrofenone, un agente neurolettico sperimentale.Due metaboliti del 4-[4-(p-(clorobenzoil)piperidino]-4\'-fluorobutirrofenone (RMI 9901) e del farmaco immodificato, sono stati identificati nelle urine di ratti a seguito di somministrazione orale del farmaco. Analisi di estratti di urina di base mediante gascromatografia-spettrometria di massa combinata è stato impiegato per l'identificazione del metabolita. La N-dealchilazione sembra essere una delle principali vie metaboliche e porta alla formazione di 4-(p-clorobenzoil)piperidina (I). La successiva ossidazione di questo metabolita risulta nella formazione del 4-(p-clorobenzoil)-2-piperidone (II), e rappresenta una via metabolica piuttosto insolita per i composti di questa classe chimica.
La formazione di complessi intermedi metabolici del citocromo P-450 in frazioni microsomiali da tessuti extraepatici del coniglio.Complessi intermedi metabolici del citocromo P-450 sono stati formati da N-idrossiamfetamina, benzfetamina, norbenzfetamina e d- e l-anfetamina nelle frazioni microsomiali polmonari e da N-idrossiamfetamina nelle frazioni microsomiali della mucosa intestinale. I complessi non si sono formati nei tessuti né dall'SKF 525-A né dal propossifene. i tassi di formazione di complessi intermedi metabolici, per mole di citocromo P-450, erano più alti nel polmone che nel fegato o nell'intestino tenue. In contrasto con quello nel fegato, la formazione di complessi intermedi metabolici nei tessuti extraepatici non era drammaticamente influenzata dal fenobarbital o dal 3- trattamento con metilcolantrene.
Differenze di specie nel metabolismo e nella disposizione dello spironolattone.L'assorbimento, l'escrezione e il metabolismo dello spironolattone [22-14C] sono stati confrontati nei ratti di Charles River , cani beagle e scimmie rhesus. Il farmaco è stato somministrato alla dose fissa di 5 mg/kg PO e iv. Dai rapporti po/iv delle aree sotto le curve radioattività plasmatica-tempo, è stato stimato che l'assorbimento gastrointestinale del farmaco essere dell'82% nel ratto, del 62% nel cane e del 103% nella scimmia. La biodisponibilità assoluta di un metabolita farmacologicamente attivo, il canrenone, è stata del 57% nel cane e del 48% nella scimmia. Lo spironolattone è stato ampiamente metabolizzato in tutti esistevano tre specie e differenze nella composizione dei metaboliti nel loro plasma, nelle urine e nelle feci. La quantità di radioattività che è stata escreta nelle urine e nelle feci di tutte e tre le specie era simile dopo la somministrazione PO o IV del farmaco. escrezione media di radioattività in l'urina come percentuale della dose PO in 6 giorni era del 4,69% nel ratto (N = 5), del 18,5% nel cane (N = 3) e del 46,0% nella scimmia (N = 3). Nelle feci, i corrispondenti valori di escrezione erano rispettivamente 74,2, 69,3 e 40,1%. L'escrezione di canrenone nelle urine costituiva lo 0,65% della dose PO nel ratto, lo 0,82% nel cane e il 5,86% nella scimmia, mentre l'escrezione dei metaboliti fluorogenici totali costituiva rispettivamente l'1,1, 1,9 e 12,1%. Il confronto dei dati sugli animali con quelli pubblicati per l'uomo ha indicato che la disposizione e il metabolismo dello spironolattone nella scimmia rhesus, piuttosto che nel ratto o nel cane, era il più vicino a quello dell'uomo.
Effetto degli ormoni sessuali sulla disposizione nei ratti dell'acido 1-aminocicloesanocarbossilico, un metabolita della penicillina semisintetica.La clearance renale dell'1-aminocicloesancarbossilico acido (ACHC), un metabolita della penicillina semisintetica, la ciclacillina, è circa 10 volte più veloce nelle femmine che nei ratti maschi. La clearance più lenta nei maschi è attribuita a un tasso netto più elevato di riassorbimento del composto dal tubulo del rene. Poiché l'ACHC non viene metabolizzato, apparentemente viene continuamente ricircolato attraverso il rene del maschio, con conseguente emivita più lunga. La disposizione del metabolita correlata al sesso può essere modificata dalla gonadectomia e/o dal trattamento con ormoni sessuali. I maschi castrati mostrano aumento dell'escrezione urinaria e diminuzione dell'emivita plasmatica di ACHC rispetto ai maschi intatti. Nelle femmine ovariectomizzate, viene escreto meno ACHC e l'emivita è più lunga rispetto alle femmine intatte. Quindi, in entrambi i sessi, la gonadectomia sposta l'escrezione e il tempo di permanenza nel plasma verso i valori di questi parametri per il sesso opposto. Il trattamento dei maschi castrati con estradiolo aumenta notevolmente l'effetto della castrazione, ma il trattamento delle femmine ovariectomizzate con testosterone propionato ha poco o nessun effetto aggiuntivo sull'ovariectomia. Il trattamento di maschi intatti con estradiolo modifica in larga misura sia l'escrezione che il tempo di permanenza nel plasma, ma il trattamento di femmine intatte con testosterone ha un effetto minore sulla disposizione dell'ACHC. Questi risultati indicano che l'escrezione e il tempo di permanenza dell'ACHC nei ratti maschi e femmine sono influenzati dagli ormoni sessuali. L'effetto descritto è un esempio dell'azione degli ormoni sessuali sul trasporto di composti estranei in questa specie. Il suo meccanismo è molto diverso dalla ben nota influenza degli ormoni sessuali sul metabolismo microsomiale di composti estranei nei ratti.
Localizzazione di nicotina-14C, cotinina-14C e nicotina-1\'-N-ossido-14C nei tessuti del topo.Il le distribuzioni di nicotina-14C (2\'- o metil-marcate), cotinina-14C e nicotina-1\'-N-ossido-14C sono state studiate mediante autoradiografia su tutto il corpo nei topi e nel polmone di coniglio perfuso. somministrato ev, sc, ip o per inalazione. Le sezioni bianche sono state incubate anche con nicotina-14C e cotinina-14C in vitro. Le distribuzioni sono state confrontate in un nero (C57BL/6J), marrone (C57L/J) e albino (A/HeJ) e in topi privi di germi CD-1 Dopo la somministrazione di nicotina-14C in vivo, la radioattività è stata localizzata in tutti i ceppi nei bronchi, nella mucosa nasale, nelle ghiandole salivari, nella ghiandola più dura, nel fegato, nei reni, nello stomaco , milza, pancreas, intestino, ossa, cistifellea e midollo surrenale. Nei ceppi pigmentati, era anche localizzata nella melanina negli occhi, nel cervello e nei capelli. La radioattività non si accumulava nei bronchi di f tardiva etuses o il neonato di 1 giorno, ma era presente nel neonato di 2 giorni e oltre. La cotinina-14C e la nicotina-1\'-N-ossido-14C, dopo somministrazione endovenosa, non si sono localizzate nei bronchi o nella mucosa nasale a brevi intervalli di tempo dopo l'iniezione. Le sezioni congelate incubate in vitro non hanno accumulato nicotina-14C o cotinina-14C nei bronchi; mentre l'affinità per la melanina è rimasta invariata. L'incubazione di polmone di topo fresco e non congelato e la perfusione di polmone di coniglio in vitro con nicotina-14C hanno prodotto la stessa localizzazione della radioattività nei bronchi come quella osservata dopo la somministrazione in vivo. Il preriscaldamento delle sezioni o dei polmoni congelati in un forno a microonde prima dell'incubazione non ha modificato la localizzazione della radioattività nei bronchi o in altri tessuti. La localizzazione della radioattività nei bronchi può essere dovuta al metabolismo, al trasporto attivo o al legame della nicotina; questo meccanismo viene distrutto congelando il tessuto.
Il cervello di ratto come "compartimento profondo" nella cinetica di un metabolita comune di proclorperazina e perfenazina.N-[gamma-( La 2-clorofenotiazina-10-il)propil]etilendiammina (Cl-PPED), un metabolita comune della proclorperazina e della perfenazina, è stata somministrata per via orale a ratti maschi alla dose di 50 mg/kg e le sue concentrazioni nel plasma, fegato, polmone, rene e cervello sono stati seguiti da 6 ore a 40 giorni dopo il dosaggio. Piccole quantità sono state misurate mediante cromatografia bidimensionale su strato sottile di un derivato fluorescente e fluorometria in situ dei cromatogrammi. Il comportamento cinetico di Cl-PPED nel cervello differiva da quello in altri tessuti in quanto il massimo di concentrazione è stato raggiunto più tardi e l'emivita di eliminazione è stata nettamente più lunga (8 giorni contro 1,2-3 giorni). Cl-PPED era uniformemente tra le tre principali regioni del cervello. Frazionamento subcellulare di fegato e cervello ha rivelato una localizzazione preferenziale nei mitocondri.
Metabolismo xenobiotico e induzione enzimatica in microsomi intestinali isolati di ratto.Microsomi intestinali sono stati isolati da ratti pretrattati con 3-metilcolantrene (MC), fenobarbital (PB ) e pregnenolone-16alfa-carbonitrile (PCN). Sono stati esaminati il metabolismo di benzo[a]pirene (BP), 7-etossiresorufina, 7-etossicumarina e bifenile. La MC induce un aumento di 30 volte del metabolismo della PA. Con controllo microsomi, il metabolismo della PA è inibito da metirapone, SKF 525-A e antimicina A, ma è stimolato 4,5 volte dal rotenone. Con i microsomi di ratti trattati con MC, il metabolismo della PA è inibito da metirapone, SKF 525-A, antimicina A, e rotenone. Il pretrattamento con MC aumenta la 7-etossiresorufina de-etilasi di quasi 20 volte e l'etossicumarina de-etilasi di quasi 18 volte. Il pretrattamento con PB produce un aumento inferiore a 2 volte in entrambe le de-etilasi. Il pretrattamento con PCN inibisce la 7-etossiresorufina e 7-etossicumarina de-etilasi Nei ratti a digiuno per 2 giorni, né de-etil ase potrebbe essere rilevato nei microsomi intestinali. Le attività della bifenil 2- e 4-idrossilasi sono state indotte meno di 4 volte dal pretrattamento con MC o PB.
Differenze di organi e specie nell'attivazione microsomiale della metildopa.È stato studiato il legame covalente di 3H-metildopa alla proteina microsomiale in presenza di NADHP e ossigeno microsomi di fegato di ratto e topo hanno mostrato un legame elevato, microsomi di fegato di criceto e cavia hanno dato valori intermedi, mentre nessun legame è stato osservato con microsomi di fegato di coniglio. Nessuna attivazione di metildopa è stata rilevata con microsomi di rene. suini e conigli erano piuttosto attivi rispetto al legame della metildopa e le reazioni erano totalmente bloccate dalla superossido dismutasi. Non c'era differenza di sesso nel legame della metildopa nei microsomi epatici di ratti adulti. Nessuna attivazione della metildopa potrebbe essere rilevata nei microsomi epatici fetali , mentre nei primi 2 giorni dopo la nascita si è verificato un rapido aumento dell'attività al di sopra dei livelli degli adulti.
Ipersensibilità immediata alla tubercolina. Studi in vivo e in vitro.Sono state osservate risposte immediate di ipersensibilità ai test cutanei con il derivato purificato della tubercolina (PPD) nel 2,3% dei 3.248 pazienti visitati in una clinica per le allergie ed è stata messa in dubbio la relazione con le risposte ritardate. Le reazioni cutanee immediate ai test con PPD sono apparse in tutti i gruppi di età e si sono verificate nei pazienti non atopici, ma erano più comuni nei pazienti atopici (p inferiore a 0,005 ). Reazioni cutanee ritardate ai test con PPD si sono verificate solo in tre pazienti su 76 con reattività immediata. La soppressione antistaminica della reattività immediata non è stata seguita da evidenza di reattività cutanea ritardata. I test in vitro di stimolazione linfocitaria hanno rivelato che gli indici di stimolazione con PPD erano simile sia nei pazienti con reattività cutanea immediata che ritardata Mancata manifestazione di reattività cutanea ritardata a seguito di reazioni cutanee immediate al uno può essere spiegato dal legame antigene-anticorpo e dalla fagocitosi, dai linfociti T soppressori o dal rilascio alterato o dalla mancanza di risposta ai mediatori dei linfociti T. Potrebbero essere previste reazioni avverse alla somministrazione del vaccino BCG in pazienti con reattività cutanea immediata.
L'influenza degli aminoacidi a catena ramificata e dei loro chetoderivati sulla gluconeogenesi renale.I tubuli renali isolati sono serviti come modello per studiare l'effetto diretto degli aminoacidi a catena ramificata e i loro chetoderivati sulla gluconeogenesi. I dati presentati in questo documento dimostrano che i chetoderivati, piuttosto che gli stessi aminoacidi a catena ramificata, inibiscono la sintesi del glucosio renale da vari precursori che entrano nella via glucogenica a diversi livelli. Sebbene il punto dell'attacco inibitorio dei chetoacidi non possa essere localizzato , dai presenti dati è evidente un'incapacità della corteccia renale di rispondere all'acidosi metabolica con un aumento della gluconeogenesi La rilevanza dei dati presentati riguardo alla produzione di ipoglicemia e acidosi metabolica nell'ipoglicemia indotta da leucina e nella malattia delle urine a sciroppo d'acero è discussa.
Sul ruolo della gamma-glutamiltransferasi nel riassorbimento degli aminoacidi tubulari renali.La degradazione del glutatione nel rene del ratto è stata studiata in vivo e in vitro. Quando glutatione radioattivo o il suo acido oftalmico analogo è stato somministrato per via endovenosa a topi o ratti, i tripeptidi sono stati rapidamente e completamente degradati. All'interno degli organi, non è stato trovato glutatione radioattivo, ma solo glicina marcata. La parte principale dell'attività degradante è stata localizzato nel rene L'omogenato renale ha degradato il glutatione ad una velocità di 46,5 nmoli/min per mg di proteina. Questo potrebbe essere inibito dall'inibitore della gamma-glutamiltransferasi serina-borato. I tubuli renali isolati hanno degradato il tripeptide ad una velocità di 18 nmoli/min /mg; questa reazione è stata inibita anche da serina-borato. L'intera attività è stata trovata nella frazione particolata (100000 xg). Glicina e gamma-glutamilglicina sono stati identificati come prodotti radioattivi. I risultati indicano che la gamma-glutamiltransferasi è in grado di scindere il glutatione a livello extracellulare nel lume del tubulo ad una velocità molto elevata. Si conclude che l'enzima è rivolto verso il lato luminale della membrana del bordo a spazzola rispetto al suo substrato glutatione. Questo sembra essere incompatibile con un prerequisito topologico di base per la funzione in vivo del ciclo gamma-glutamil nel riassorbimento renale degli aminoacidi tubulari.
Proprietà degli enzimi glutaminasi del rene di ratto e loro ruolo nell'ammoniagenesi renale.Il rene di ratto contiene due distinte attività glutaminasi; la glutaminasi mitocondriale dipendente dal fosfato e una seconda attività della glutaminasi associata alla membrana del bordo a spazzola che è attivata dal maleato e indipendente dal fosfato. È stato recentemente dimostrato che la glutaminasi fosfato-indipendente è una reazione parziale della gamma-glutamil transpeptidasi e che il maleato attiva questo enzima bloccando la transpeptidazione. anche la gamma-glutamil transpeptidasi in altri tessuti di ratto è influenzata dal maleato. Questo enzima ha un'affinità per il glutatione o per i derivati del glutatione almeno 100 volte maggiore rispetto alla glutammina, suggerendo che in condizioni fisiologiche il glutatione è il substrato preferito. Con entrambi i tipi di substrato, il maleato influenza il Vmax della reazione ma non il Km. Questi risultati suggeriscono che questo enzima contribuisce probabilmente molto l poco per l'ammoniogenesi renale. Al contrario, la glutaminasi fosfato-dipendente, la cui attività aumenta da 20 a 30 volte nelle cellule del tubulo contorto prossimale in risposta all'acidosi metabolica, probabilmente contribuisce in modo significativo all'ammoniacogenesi renale. Abbiamo purificato la glutaminasi fosfato dipendente dal rene di ratto e confrontato l'attivazione del fosfato e la dimerizzazione indotta dal fosfato della forma Tris di questo enzima. Esiste un'eccellente correlazione tra l'aumento dell'attività e l'entità della dimerizzazione all'aumentare della concentrazione di fosfato. I pesi molecolari della forma Tris sono rispettivamente 1600000 e 316000 in assenza e presenza di -1 M NaPO4. Alla concentrazione saturante di fosfato, concentrazioni crescenti di ione cloruro invertono similmente sia l'attivazione che la dimerizzazione. Queste osservazioni suggeriscono che solo la forma dimero dell'enzima Tris è attiva.
Polarità delle cellule epiteliali tubulari prossimali in relazione al trasporto transepiteliale.Proprietà di trasporto dei microvilli a spazzola e delle membrane plasmatiche basali-laterali isolate dalla corteccia renale di ratto sono stati studiati mediante una tecnica di filtrazione millipore. I microvilli a bordo spazzola ma non le membrane plasmatiche basali-laterali contengono un sistema di trasporto stereospecifico sodio dipendente per D-glucosio, L-fenilalanina e fosfato inorganico come indicato da saturabilità, controtrasporto e inibizione da parte di composti strutturalmente correlati. l'assorbimento dell'equilibrio aumentando l'osmolarità del mezzo suggerisce il trasporto in uno spazio osmoticamente reattivo piuttosto che il legame alle membrane. L'elettrogenicità del sistema di cotrasporto sodio-zucchero e sodio-amminoacido è stata stabilita dalla loro dipendenza da potenziali di diffusione imposti artificialmente. Anche un NA+/H+ il sistema antiport può essere dimostrato nelle vescicole dei microvilli dimostrando il controflusso di entrambi gli ioni sotto sh condizioni del circuito orto. Le membrane plasmatiche basali-laterali contengono sistemi di trasporto stereospecifici indipendenti dal sodio per zuccheri e amminoacidi. Questi risultati dimostrano una marcata polarità funzionale delle membrane cellulari rispetto ai sistemi di trasporto sodio dipendenti e sodio indipendenti. Questa polarità, insieme alla distribuzione asimmetrica del sodio tra lo spazio intra ed extracellulare, sembra consentire alle cellule epiteliali del tubulo prossimale di svolgere un trasporto transepiteliale attivo.
Il ruolo dell'ATPasi stimolata da HCO3 nel trasporto del tampone.È stata trovata un'ATPasi stimolata da ioni HCO-3 e altre ossibasi e inibita da SCN- nel dotto escretore principale della ghiandola sottomascellare di ratto, un tessuto, in grado di secernere attivamente ioni HCO-3. Nessuna ATPasi è stata trovata nel dotto di coniglio, che normalmente non secerne HCO-3. L'HCO-3ATPasi era localizzata nella frazione della membrana plasmatica dell'omogenato, come evidenziato dal marcatore 5\'nucleotidasi. Le attività della HCO-3ATPasi sono aumentate nell'alcalosi metabolica e diminuite nell'acidosi metabolica parallelamente alla secrezione di ioni HCO-3 e K+ da parte dell'epitelio del dotto salivare di ratto. Nella corteccia renale tessuto, in cui l'HCO-3 viene attivamente riassorbito e l'H+ viene secreto, è stato anche riscontrato un cambiamento parallelo nell'attività dell'HCO-3ATPasi e nella velocità di secrezione attiva dell'H+. Questi risultati forniscono ulteriori prove che l'HCO-3ATPasi legata alla membrana è coinvolto nel trasporto attivo di H+/HCO-3. L'HCO-3ATPasi non è stimolata solo dall'HCO-3 ma anche da altre ossibasi non trasportabili, una scoperta che indica che H+ piuttosto che HCO-3 è il componente attivamente trasportato del sistema tampone. Piccole concentrazioni di ioni K+ diminuiscono il Km per HCO-3 e quindi producono stimolazione dell'HCO-3-ATPasi. Il cambiamento della porta in parallelo con quello di H+/HCO-3 può essere considerato indicativo di un meccanismo di scambio accoppiato K+-H+ a cui è collegata l'HCO-3ATPasi.
Lorazepam nel trattamento della nevrosi.Uno studio aperto è stato condotto su 40 pazienti nevrotici ambulatoriali con sintomi classici di ansia per valutare quale dei loro sintomi ha risposto più prontamente e favorevolmente al trattamento con lorazepam. Le dosi variavano da 2 mg a 15 mg al giorno e sono state adattate alle esigenze dei singoli pazienti. Il periodo di studio è durato 4 settimane e i sintomi individuali dei pazienti sono stati valutati settimanalmente su una scala di valutazione della gravità a 4 punti I risultati hanno mostrato un miglioramento statisticamente significativo e marcato durante la prima settimana per la maggior parte dei 16 sintomi valutati, in particolare tensione emotiva, irritabilità e apprensione. I sintomi con un elemento cognitivo di ansia sono stati controllati in misura minore e sono stati più lenti a rispondere. I pochi effetti collaterali riportati, principalmente sonnolenza, sembravano essere correlati alla dose e di solito si sono verificati durante i primi giorni di trattamento.
Erbicidi e microrganismi del suolo.La produzione e l'uso di erbicidi sono aumentati notevolmente negli ultimi anni. Di conseguenza, c'è una crescente preoccupazione per gli effetti di queste sostanze chimiche sull'ambiente, in particolare i possibili effetti a lungo termine sulla fertilità del suolo che possono derivare dal disturbo della microflora del suolo Questa rassegna considera i recenti sviluppi nello studio delle interazioni tra erbicidi e microrganismi e discute i problemi di valutazione dei risultati di tali studi al fine di determinare o prevedere possibili effetti a breve o lungo termine che possono avere un significato pratico.
Valutazione degli effetti ansiolitici e amnesici del lorazepam intramuscolare come farmaco preoperatorio.In un'indagine in doppio cieco su 21 pazienti sottoposti a chirurgia plastica minore sono stati studiati gli effetti di 4 mg di lorazepam o di una miscela di 20 mg di papaveretum/400 tazze di ioscina somministrati per via intramuscolare come premedicanti. Il lorazepam ha prodotto un'amnesia anterograda preoperatoria e postoperatoria superiore, sia per quanto riguarda l'incidenza che la durata. Non c'era alcuna differenza nella pre -gli effetti ansiolitici e soporofici dei due regimi e dopo l'intervento, i requisiti analgesici e l'incidenza di vomito e irrequietezza erano gli stessi in entrambi i gruppi di pazienti.
Galactosio-1-fosfato uridiltransferasi in cellule in coltura.Viene descritto un metodo per misurare l'enzima galattosio-1-fosfato uridiltransferasi in cellule in coltura. il pH ottimale era 8,7 e non è stata trovata alcuna attività enzimatica senza preincubazione con ditiotreitolo. I valori di KM per Gal-1-P e UDPG per l'enzima wild type sono stati trovati rispettivamente di 0,2 mM e 0,08 mM. Sono stati trovati valori per la variante Duarte essere identici. Nessun cambiamento significativo nell'attività enzimatica con il tempo dopo la subcoltura è stato trovato sia in colture di fibroblasti cutanei che in colture di cellule di liquido amniotico. Diversi genotipi di transferasi sono stati chiaramente distinti e si è stabilito un intervallo di riferimento. I livelli di transferasi trovati in colture normali di cellule di liquido amniotico erano gli stessi come nelle colture di fibroblasti cutanei normali. I risultati di una diagnosi prenatale sono stati ottenuti entro 3 settimane dall'amniocentesi.
Adenilato ciclasi sensibile alla catecolamina dei fantasmi delle cellule adipose umane. Caratteristiche dello stato legato al GMP(PNP).Gli effetti di 5\'- guanylyl-imidodiphosphate (GMP(PNP)) sull'adenilato ciclasi sensibile alla catecolamina di cellule adipose umane fantasma sono stati studiati. Il composto ha aumentato l'attività enzimatica basale e stimolata dall'epinefrina di circa il 300%; inoltre GMP(PNP) ha aumentato la sensibilità agli ormoni riducendo la concentrazione di adrenalina richiesta, per produrre la metà della stimolazione massima. Il tasso di attivazione indotta da GMP(PNP) era lento nell'insorgenza e poteva essere potenziato dall'adrenalina. Lo stato attivato da GMP(PNP) era resistente all'inattivazione termica e non poteva essere invertito mediante lavaggio estensivo. L'applicazione di questo composto negli studi clinici può essere utile per la sua azione stimolante e stabilizzante.
Studi comparativi sulle colesterolo ossidasi di diverse fonti.1. Il confronto delle caratteristiche delle colesterolo ossidasi di diverse fonti è stato effettuato mediante un nuovo metodo polarografico per misurazione del tasso di consumo di ossigeno 2. È stato osservato un pH ottimale di 7,0 per le ossidasi del colesterolo isolate da Nocardia e Brevibacterium, pH 5,0 per l'enzima da Schizophyllum e pH 7,5 per l'enzima da Streptomyces. 3. Nel sistema utilizzato nel presente studio, Ca2+ e Mg2+ non hanno avuto effetto su queste attività enzimatiche, mentre l'enzima Schizophyllum è stato fortemente inibito dall'aumento delle concentrazioni di Cu2+, mentre l'enzima brevibacterium è stato leggermente attivato da essi e gli enzimi Nocardia e Streptomyces non sono stati influenzati. inibivano fortemente le attività degli enzimi l'enzima Schizophyllum 4. Usando il siero come substrato, le ossidasi del colesterolo impiegate, ad eccezione dell'enzima da Streptomyces, non erano attive senza d detergente nella miscela di reazione. Sono stati studiati gli effetti di vari detergenti a varie concentrazioni sulle attività enzimatiche. 5. Sono stati inoltre confrontati i risultati degli studi sulla reazione delle colesterolo ossidasi sul colesterolo libero nelle lipoproteine a bassa e ad alta densità.
Saggio colorimetrico rapido della beta-galattosidasi e della N-acetil-beta-glucosaminidasi nelle urine umane.Metodi colorimetrici che utilizzano substrati 4-nitrofenil-glicosidi per sono descritti il dosaggio della beta-galattosidasi e della N-acetil-beta-glucosaminidasi nelle urine umane. Le sostanze interferenti sono state rimosse mediante filtrazione su gel delle urine. È stato trovato un inibitore a basso peso molecolare non identificato della N-acetil-beta-glucosaminidasi. Una maggiore sensibilità dei metodi è stata ottenuta da volumi di campione elevati, piccoli volumi di tampone per terminare la reazione enzimatica e concentrazione ottimale del substrato e pH del tampone. I periodi di incubazione sono stati ridotti a 15 min. Entrambi i metodi sono stati progettati come test a provetta singola in cui il tampone- le soluzioni di substrato vengono preparate in massa e le aliquote vengono conservate in contenitori individuali a -25 gradi C. In queste condizioni i reagenti sono rimasti stabili per almeno sei mesi. La precisione di entrambi i metodi è stata soddisfacente. Le stime dei limiti normali sono riportate tito.
Caratterizzazione dell'alfa-L-fucosidasi da due diverse famiglie con fucosidosi.1. Sono descritte due diverse famiglie con un diverso tipo di deficit di fucosidasi. 2. Nella prima famiglia l'attività dell'alfa-L-fucosidasi nei leucociti di due pazienti con fucosidosi di tipo I era di circa il 4-8% del valore normale L'attività dell'alfa-L-fucosidasi nei leucociti del padre e del madre sono nella gamma eterozigote, mentre una sorella del propositus ha mostrato valori normali 3. Anche l'attività dell'alfa-L-fucosidasi del propositus da urina, siero e fegato era gravemente diminuita. L'attività dell'alfa-L-fucosidasi in le urine dei genitori e della sorella sana di thr propositus erano circa il 5% del valore medio normale, tuttavia nel siero questi valori erano superiori al 50% 4. Il valore KM per l'alfa-L-fucosidasi dai leucociti del paziente era aumentato di circa 10 volte e nel siero questo valore era ancora più alto. I valori di KM dal enzima dei genitori erano nel range di normalità. 5. L'enzima anormale dal propositus è unico nel suo comportamento termico poiché dopo il riscaldamento la sua attività è aumentata. 6. Nel secondo caso l'attività dell'alfa-L-fucosidasi nei leucociti del paziente è di circa il 30% del valore medio normale, mentre risulta ridotta anche l'attività dell'arilsolfatasi A (25% del valore medio normale). 7. L'attività dell'alfa-L-fucosidasi dei leucociti del padre e del fratello sano è circa il 50% del livello medio normale, mentre l'enzima della madre ha mostrato un'attività normale. 8. Anche l'attività dell'alfa-L-fucosidasi nelle urine e nel fegato del propositus è ridotta. L'attività enzimatica sierica tuttavia era nell'intervallo normale. 9. Il valore KM dell'alfa-L-fucosidasi e la stabilità al calore dell'enzima del paziente erano normali. Nel modello leectrophoretic di tutta la famiglia mancava un legame.
Human leucocyte alfa-L-fucosidase.1. L'alpha-L-fucosidase umana (EC 3.2.1.51) è stata studiata da leucociti, urina e 2. I leucociti e gli enzimi urinari sono simili in molte proprietà (KM, pH ottimale, pattern elettroforetico, stabilità al calore) 3. L'alfa-L-fucosidasi sierica differisce dal leucocita e dall'enzima 4rine per quanto riguarda: pattern elettroforetico , pH ottimale e stabilità al calore 4. Il peso molecolare della alfa-L-fucosidasi leucocitaria è stato determinato pari a 80 000 +/- 5000. 5. Cu2+, Hg2+ e PCMB sono forti inibitori della alfa-L-fucosidasi leucocitaria. Questa inibizione potrebbe essere completamente invertito dal beta-mercaptoetanolo, indicando che i gruppi tiolici sono essenziali per l'attività catalitica.
Studi sulle molteplici forme di gamma-glutamiltransferasi.In sieri di 53 pazienti con gamma-glutamiltransferasi (gamma-GT) molto elevata (EC 2.3 .2.2), la gamma-GT è stata separata mediante cromatografia su colonna su Sephadex DEAE A-50 in due frazioni In 35 sieri solo una frazione gamma-GT è stata trovata con una conduttività di 2,0--2,5 mS e in 18 sieri due gamma-GT -Le frazioni GT sono state trovate a una conduttività di 0,2 mS e di nuovo a 2,0--2,5 mS. Non c'era alcuna correlazione evidente con la malattia di base. In 20 sieri i parametri aggiuntivi, proteine, elettroforesi proteica, colesterolo libero ed esterificato, bilirubina, trigliceridi , sono stati esaminati il pattern lipoproteico e la lipoproteina X. Abbiamo riconosciuto che le due forme della gamma-GT non sono veri isoenzimi ma che la separazione della gamma-GT in due frazioni è causata da una diversa distribuzione del colesterolo contenente lipoprotei,s.
Eritrocita glutatione sintetasi in 5-ossoprolinuria: studi cinetici dell'enzima mutante e rilevazione di eterozigoti.Il difetto metabolico primario nella 5-ossoprolinuria è un carenza generalizzata di glutatione sintetasi. L'attività di questo enzima è stata determinata in estratti cell-free di eritrociti da pazienti con 5-ossoprolinuria, i loro genitori e un fratello, nonché da individui di controllo normali. Le seguenti attività (pkat/mg di emoglobina) per la glutatione sintetasi sono stati ottenuti: omozigoti media 0,10 (intervallo 0,07-0,12), eterozigoti media 3,1 (intervallo 2,8-3,7) e soggetti di controllo media 6,1 (intervallo 5,4-6,7). Questi risultati indicano che la 5-ossoprolinuria, cioè la glutatione sintetasi difettosa gene(i), viene trasmesso per trasmissione autosomica recessiva. Gli studi sulla cinetica della bassa attività residua della glutatione sintetasi eritrocitaria in pazienti con 5-ossoprolinuria non sono riusciti a rivelare un'affinità difettosa per glicina, gamma- glutamil-alfa-amminobutirrato, ioni ATP e Mg2+. Inoltre, il pH ottimale, le curve temporali e la dipendenza dalla temperatura per l'attività dell'enzima mutante non differivano significativamente dai parametri corrispondenti osservati con l'enzima normale.
Metodo del tasso enzimatico per misurare il colesterolo nel siero.Viene descritto un saggio del tasso enzimatico per misurare il colesterolo nel siero. Il colesterolo viene analizzato mescolando 5 mul di campione con un reagente costituito da colesterolo esterasi, colesterolo ossidasi, catalasi, acetilacetone, metanolo e idrossipolietossidodecano in un tampone fosfato di ammonio a pH 7,0. La velocità di aumento dell'assorbanza del prodotto diidrolutidinico è misurata a 37 gradi C e 405 nm. la variazione dell'assorbanza tra 4 e 10 min viene utilizzata per calcolare le concentrazioni di colesterolo utilizzando standard di colesterolo libero determinati simultaneamente La variazione è correlata linearmente alla concentrazione di colesterolo fino a 4 g/litro Campioni contenenti bilirubina fino a 200 mg/litro, acido urico fino a 200 mg/litro e l'emoglobina fino a 1 g/litro o alcuni farmaci (clofibrato, fenobarbital, acido nicotinico, salicilato, ketochol e Ovral) non hanno dato interferenza. L'acido ascorbico aggiunto al siero c utilizzato un'interferenza positiva. I campioni lipemici hanno fornito valori leggermente inferiori rispetto al metodo di Abell et al. , utilizzato per il confronto. Il nostro test cinetico, confrontato con il metodo di Abell et al. , il test enzimatico utilizzato con l'analizzatore bicromatico Abbott\'s e la procedura enzimatica Technicon SMA 12/60 ha fornito coefficienti di correlazione rispettivamente di 0,992, 0,985 e 0,986.
Una procedura di monitoraggio continuo ottimizzata per la determinazione semiautomatica dell'attività della fosfatasi acida sierica.Un metodo di monitoraggio continuo per misurare l'attività della fosfatasi acida con alfa-naftile fosfato poiché il substrato è stato valutato e modificato in modo critico. Utilizzando la fosfatasi acida prostatica parzialmente purificata, mostriamo che determinate condizioni per il dosaggio devono essere soddisfatte per garantire la linearità. Queste condizioni includono il mantenimento del pH tra 5,6 e 5,9 e l'aggiunta di detergente per sostenere la linearità. I risultati ottenuti con l'alfa-naftil fosfato sono stati confrontati con quelli ottenuti utilizzando il p-nitrofenil fosfato come substrato. Se utilizzato con un analizzatore automatico di velocità, il metodo modificato è altrettanto sensibile ma più riproducibile.
Relazione tra il pH e la fluorescenza di serotonina, melatonina e altri composti indolici che reagiscono con l'o-ftaldialdeide.Abbiamo distinto serotonina, malatonina e altri indolo composti per il loro comportamento di fluorescenza marcatamente diverso quando riscaldato con o-ftaldialdeide in diverse concentrazioni di HCl, o dopo la successiva aggiunta di alcali. La fluorescenza può aumentare, scomparire o cambiare dal blu al rosso arancio. Solo la melatonina ha sviluppato una fluorescenza significativa (a meno di 0,5 mug/litro) quando riscaldato con il reagente in 50 mmol/litro di HCl. I composti della serotonina e del 5-idrossiindolo con una catena alifatica C-3 perdono la loro fluorescenza blu quando vengono portati da un pH forte a debolmente acido e alcalino. Si sviluppa un'intensa fluorescenza rossastra in soluzione fortemente alcalina I derivati C-5 metossi, come la melatonina, hanno mantenuto la loro fluorescenza blu in soluzione alcalina Differenze nel colore della fluorescenza (e RF) hanno caratterizzato anche questi composti su silice lastre di gel. L'uso del toluene ha ridotto la fluorescenza del bianco, mentre la preparazione del campione in condizioni di scarsa illuminazione, come spesso raccomandato, ha comportato una fluorescenza ridotta e meno stabile.
Un meccanismo per la conversione dell'ossiemoglobina in metaemoglobina mediante nitrito.Ogni mole di ferro ossiemoglobina convertita in metaemoglobina provoca l'ossidazione di 1,5 moli di nitrito in nitrato e consuma 1 mole di protoni. Non viene liberato ossigeno. La reazione complessiva ha due parti che si verificano contemporaneamente. All'inizio la reazione di limitazione della velocità che converte O2Hb in metHb è direttamente proporzionale alle concentrazioni di H+ e NO2- ed è indipendente da metHb. la seconda parte rappresenta in gran parte la stechiometria e la velocità della reazione complessiva. In questa parte i tetrameri O2Hb e metHbNO2- sono i reagenti. In sostanza non avviene alcuna reazione in presenza di CN-, che sposta il nitrito dal metHbNO2-, né in la presenza di 0,5 mol/litro Nal, che converte l'O2Hb in alfa-dimeri La natura autocatalitica della reazione complessiva in presenza di un eccesso di nitrito è il risultato di metHb, che si forma in entrambe le parti dei reattivi on, associandosi al nitrito per aumentare la concentrazione di un reagente della parte sensibile al cianuro. Le velocità di reazione a pH costante in eccesso di nitrito sono proporzionali al prodotto della concentrazione di O2Hb e al quadrato della concentrazione di metHb. Il tasso aumenta fino a circa il 66% di conversione di O2Hb seguito da una diminuzione quando l'O2Hb diventa limitante. La costante di dissociazione di metHbNO2- a 25 gradi C e pH = 6,4 è risultata essere 1,11+/-0,11 mmol/litro.
Diazotizzazione di catecolamine e loro analoghi e metaboliti per test di screening urinario: aspetti chimici.Accoppiamento di p-nitroanilina diazotata con catecolamine e loro metaboliti nelle urine è stato proposto per l'uso nello screening per neuroblastoma secernente nell'infanzia. Abbiamo accoppiato p-nitroanilina diazotata a catecolamine, derivati e metaboliti ed esaminato i prodotti di reazione mediante cromatografia su strato sottile e metodi fisico-chimici (spettri ultravioletti, spettroscopia di massa, spettroscopia nucleare risonanza magnetica). Concludiamo che durante la diazotazione, i prodotti contenenti una struttura di p-idrossibenzilico o acido p-idrossibenzoico (ad es. acido vanillico, acido vanilmandelico, 3-metossi-4-idrossifenil-etilenglicole, metanefrina, normetanefrina, sinefrina e isoproterenolo) reagiscono con un catione diazonio, con rilascio della loro frazione alcolica o acida. Pertanto i metodi di screening qualitativo menzionati sono molto aspecifici. I metodi di screening cromatografico su strato sottile rast forniscono la separazione completa e l'identificazione univoca di quei metaboliti e sono da preferire per l'uso nella rilevazione di neuroblastoma secernente nell'infanzia.
Vena facciale nel coniglio. Vasodilatazione neurogena mediata dai recettori beta-adrenergici.Un segmento della vena facciale del coniglio, quella opposta a quella buccale cavità orale, risponde alla noradrenalina (NE) e di fronte alla cavità buccale, risponde alla noradrenalina (NE) e alla stimolazione del nervo transmurale (TNS) con una vivace dilatazione bifasica. La dilatazione in risposta a entrambe le procedure viene annullata dalla precedente esposizione al propranololo (10( -6)M). Il pretrattamento con fenossibenzamina (10(-5)M) aumenta l'entità della risposta neurogena e sposta a sinistra la curva dose-rilassamento NE. L'istamina provoca esclusivamente una risposta costrittiva. Stimolazione simpatica di un segmento del la vena facciale prossimale a questo segmento buccale, e anche della vena giugulare esterna, provoca una costrizione. La microscopia ottica non ha mostrato fequtres che possano spiegare la dilatazione e l'istochimica a fluorescenza utilizzando una tecnica di Flack modificata ha mostrato un plesso nervoso adrenergico denso estendersi per tutto lo spessore del supporto. Abbiamo scoperto che le caratteristiche di risposta in frequenza e l'assorbimento neuronale di 3H-NE erano coerenti con i risultati di un vaso sanguigno con una pesante innervazione mediale. Inoltre, le attività della monoamino ossidasi e della catecol O-metiltransferasi erano simili a quelle trovate in altre vene di coniglio. Inoltre, questi risultati sono coerenti con un'organizzazione di neuroeffettori adrenergici in cui vi è una predominanza di recettori beta- su alfa-adrenergici. In conclusione, la presenza di una risposta dilatativa in questo segmento buccale della vena facciale può essere correlata alla sua posizione nella parete della guancia, dove può essere soggetta a un notevole allungamento.
[Caratteristiche enzimatiche della guanilato ciclasi delle cellule KB: il loro cambiamento in funzione dello sviluppo delle colture].Abbiamo localizzato il 71% dell'attività della guanilato ciclasi nella frazione sopranatante (GX 105.000) delle cellule KB rotte La reazione segue la cinetica di Michaelis-Menten, il Km apparente per GTP è 0,5 mM, purché GTP sia inferiore a una concentrazione limitata, quindi l'attività è inibito. Lo ione Mn++ è un attivatore assolutamente necessario, non modifica l'affinità enzima-substrato. L'enzima mostra diversi tipi di siti di legame di Mn++. La guanilato ciclasi, studiata durante un periodo di sviluppo della coltura, mostra, nelle cellule KB senza contatto cellulare, un'attività superiore a quella osservata nelle cellule confluenti. Ciò non è dovuto al fatto di un cambiamento nell'affinità enzima-substrato ma a una modifica dell'influenza di Mn++.
Attivazione della guanilato ciclasi da parte di streptozotocina e 1-metil-1-nitrosourea.È stato dimostrato che la streptozotocina induce la produzione di una varietà di tumori in ratti Il presente rapporto dimostra che la streptozotocina e l'1-metil-1-nitrosourea, un componente della molecola della streptozotocina e un noto cancerogeno, stimolano l'enzima guanilato ciclasi che catalizza la produzione di guanosina 3\',5\'-monofosfato. una concentrazione massima di 3 mg/ml, questi agenti attivavano la guanilato ciclasi circa 30 volte nel fegato, 20 volte nel rene, 15 volte nel cervelletto, da 15 a 30 volte nel cervello, da 4 a 20 volte nel cuore, 12 volte nel tronco cerebrale, 10 volte nel polmone e 2 volte nel pancreas Poiché recenti evidenze suggeriscono un ruolo della guanosina 3\',5\'-monofosfato nella trasformazione maligna, i dati possono aiutare a spiegare l'induzione del tumore capacità di questi agenti.
Uso di una dieta elementare negli animali durante il trattamento con 5-fluorouracile (NSC-19893).Ratti che seguono una dieta contenente idrolizzato di caseina (10% wt/wt)(dieta 3) invece della caseina intera (dieta 1) ha mostrato una maggiore tolleranza a nove iniezioni giornaliere consecutive di 15 mg/kg di 5-fluorouracile (5-FU). L'efficienza nutrizionale relativa della dieta 3 era significativamente maggiore durante Trattamento con 5-FU I livelli di albumina sierica misurati dopo il trattamento con 5-FU sono diminuiti solo del 2,7% nei gruppi con dieta 3 e del 13,5% nei gruppi con dieta 1. I valori di albumina sierica per i ratti nella dieta di controllo (Chow da laboratorio Purina) erano paragonabili a quelli sulla dieta 1. Non è stata osservata mortalità correlata al 5-FU in nessuno dei gruppi. Gli enzimi intestinali del bordo a spazzola sono stati determinati in un gruppo di ratti a dieta 1. Alla fine del trattamento con 5-FU sono stati osservati cambiamenti statisticamente significativi: la sucrasi è diminuita al 30% del controllo e l'attività idrolizzante della leucilnaftilamide è scesa al 19% del controllo. l'iltransferasi non è cambiata in modo significativo. Si ipotizza che in queste circostanze una miscela con una prevalenza di amminoacidi liberi (caseina idrolizzata) potrebbe essere assorbita più facilmente di una miscela corrispondente contenente una proporzione maggiore di oligopeptidi.
Aumento dell'attività della guanilato ciclasi e del contenuto di guanosina 3\',5\'-monofosfato negli epatomi indotti da etionina.Gli epatomi indotti da etionina sono caratterizzati da elevata attività adenilato ciclasi e contenuto di adenosina ciclica 3\',5\'-monofosfato rispetto a quelli del fegato circostante o del fegato di ratti di controllo alimentati in coppia. Il presente studio ha esaminato le proprietà della guanilato ciclasi-guanosina ciclica 3\',5 \'-monofosfato (cGMP) di questi tessuti. I livelli di cGMP degli epatomi indotti da etionina, determinati in entrambi i campioni rapidamente forzen in situ e dopo l'incubazione in vitro di fette di tessuto, erano circa 2 volte superiori a quelli del fegato circostante o controlli. Un cGMP più alto nei tumori è stato associato ad un aumento delle attività dell'intero omogenato, solubile e particolato della guanilato ciclasi, nonché ad un aumento dell'attività della cGMP-fosfodiesterasi solubile. 3-isobutil-1-metilxantina, un potente inibitore di cG L'attività della MP-fosfodiesterasi ha potenziato le differenze di cGMP tra le sezioni degli epatomi e il fegato circostante o il controllo, suggerendo che il contenuto di cGMP allo stato stazionario più elevato dei tumori rifletteva una maggiore sintesi di cGMP basale che era parzialmente compensata da un aumento della degradazione dei nucleotidi. Negli epatomi, una proporzione maggiore dell'attività totale della guanilato ciclasi era localizzata nella frazione cellulare particolato (31%) rispetto alla distribuzione subcellulare dell'attività enzimatica nel fegato circostante o nei controlli (15% del totale nella frazione particolato). La carbamilcolina, che ha aumentato di 3 volte il cGMP nel fegato circostante e nei controlli, non è riuscita ad alterare i livelli di cGMP nelle sezioni di epatoma. Inoltre, i cambiamenti relativi sia nell'accumulo di cGMP che nell'attività della guanilato ciclasi dei tumori in risposta a NaN3, NH2OH e NaNO2 sono stati attenuati rispetto al fegato circostante o ai controlli, sebbene in ogni caso una risposta fosse chiaramente evidente. Gli epatomi indotti da etionina sono quindi caratterizzati da: (a) aumenti significativi del contenuto di cGMP e delle attività di guanilato ciclasi e cGMP-fosfodiesterasi, (b) un cambiamento nella distribuzione subcellulare della guanilato ciclasi e (c) alterata reattività della guanilato ciclasi -cGMP a più agonisti.
Composizione isoferritina di tessuti e siero nei tumori umani.Una tecnica altamente sensibile per il rilevamento dell'isoferritina che utilizza anticorpi monospecifici anti-ferritina epatica umana marcati con 125I per l'identificazione di isoferritine dopo l'analisi di piccole quantità di ferritina mediante focalizzazione isoelettrica in gel di poliacrilammide è stata applicata allo studio dei carcinomi renali, pancreatici e del colon In tutti i tumori studiati, la composizione dell'isoferritina differiva da quella del corrispondente tessuto normale ; sono state costantemente rilevate isoferritine maggiori con pl più basico di quelle dei tessuti normali. La composizione della ferritina purificata da metastasi assomigliava molto alla composizione isoferritina dei tumori primari. L'esame dei profili sierici di isoferritina di quattro pazienti con tumori non ha rivelato la presenza di qualsiasi cambiamento tumore-specifico nelle isoferritine Si suggerisce che l'anomalia nelle ferritine tissutali nei tre tumori umani studiati sia la sintesi delle principali isoferritine nell'intervallo più basico, piuttosto che la comparsa di isoferritine tumore-specifiche nell'intervallo più acido.
La fusione degli eritrociti mediante trattamento con enzimi proteolitici e polietilenglicole.Il polietilenglicole (PEG) è stato utilizzato per indurre la formazione di omocariociti negli uccelli e nei mammiferi eritrociti precedentemente trattati con enzimi proteolitici PEG di peso molecolare 6.000-7.5000 è risultato superiore a PEG 1.500 e 20.000 MW Cellule esposte alla sola proteasi, prima del trattamento con PEG, fuse ad alto grado (60-95% cellule multinucleate) , mentre il trattamento con tripsina o pepsina da solo ha permesso una fusione molto ridotta (2,5%). La tripsina ha ridotto l'efficacia della proteasi quando usata in combinazione. Le cellule che non sono state trattate con enzimi proteolitici agglutinavano in presenza di PEG ma non si fondevano in misura significativa ( 0,01%). La fusione dipendeva anche notevolmente dalla velocità con cui il PEG veniva eluito durante il processo di fusione. La microscopia elettronica indicava che la fusione era iniziata durante l'eluizione del PEG dalle cellule agglutinate.
Retroflessione congenita del pene e criptorchidismo inguinale in un presunto gemello bovino con costituzione cromosomica 60,XY/60,XX/61,XX,+cen.Gli studi sono stati condotti su una Holstein di un anno con genitali esterni simili a quelli di un freemartin la cui nascita e storia di sviluppo erano sconosciute. La dissezione dopo la macellazione ha mostrato testicoli vicino agli anelli inguinali esterni, un pene sottosviluppato arrotolato sottocutaneo nel perineo e terminante in una fossa profonda a livello dell'arco ischiatico e nessuna evidenza di un tratto genitale femminile. Le analisi cromosomiche hanno mostrato cellule 60,XY nel sangue e cellule 60,XX e 61,XX,+cen in altri tessuti. Si ipotizza che l'animale aveva una costituzione di base del cromosoma mixoploide 60,XX/61,XX+cen, che il frammento centrico funzionava come un cromosoma Y o come un modificatore autosomico del cromosoma X nella determinazione del sesso che spiegava la sindrome di Klinefelter dell'animale anomalie, a e quell'animale era anche gemello di un toro che spiegava la presenza di cellule 60,XY nel sangue.
Studi di dicroismo circolare dell'ormone beta-lipotropo di pecora.Sono stati registrati gli spettri di dicroismo circolare lontano ultravioletto dell'ormone beta-lipotropico di pecora (beta-LPH) in diverse condizioni di pH, temperatura, concentrazione salina e composizione del solvente. I risultati confermano la stabilità dell'ormone in soluzioni fortemente basiche o acide, inoltre temperature fino a 50 gradi C non sembrano influenzare sensibilmente la conformazione del beta-LPH. Tuttavia, l'aumento della concentrazione di NaC1 o l'aggiunta di diossano nella soluzione determina una transizione conformazionale della catena, interpretata come un aumento del contenuto dell'elica. Il metodo di Yang (Chen, YH, Yang, JT \& Martinez, HM (1972) ) La biochimica 11, 4120-4131) è stata utilizzata per calcolare la proporzione delle forme elicoidali, beta e non ordinate della catena ormonale. Le proporzioni vengono confrontate con quelle ottenute dal metodo predittivo di Fasman (Chou, P. Y \& Fasman, GD (1974) Bioche mitry 13, 211-221 e Chou, P. Y. \& Fasman, G. D. (1974) Biochemistry 13, 222-245) basato sulla nota sequenza di amminoacidi di beta-LPH.
Interazioni istone-istone. II. Stabilità strutturale del complesso istone H3-H4.La stabilità del complesso istone H3-H4 verso l'urea, variazioni del pH e della forza ionica e alcune modificazioni chimiche sono state esaminate mediante elettroforesi su gel e dicronismo circolare Quando non sono complessi, i due residui di cisteina dell'istone H3 si ossidano rapidamente, formando un ponte disolfuro intramolecolare che apparentemente blocca la formazione dei complessi al ritorno alle condizioni complessanti Il complesso è risultato instabile verso bassi valori di pH e forza ionica, concentrazioni di urea superiori a 1 M, modificazioni dei residui di cisteina e frammentazione in cui vengono rimosse le porzioni C terminali di H3 o H4. Una possibile struttura per questo complesso è proposto.
Adenosina trifosfato - legame e accumulo di calcio dipendente dal sarcolemma cardiaco di cavia.Sarcolemma isolato dai ventricoli cardiaci di cavia possedeva legame e accumulo di Ca2+ ATP-dipendente (+ ossalato) attività che non erano inibite da sodio azide, oligomicina o rosso rutenio. Il legame e l'accumulo di Ca2+ da parte del sarcolemma erano sensibili al pH, il valore ottimale era di circa 6,8. Le concentrazioni di ATP richieste per il legame e l'accumulo semimassimi erano 94,3 e 172 muM, rispettivamente. Mg2+ fino a 5 mM ha potenziato significativamente entrambe le attività ma è stato inibitorio a concentrazioni più elevate (maggiori di 10 mM). Il legame e l'accumulo di Ca2+ del sarcolemmal sono stati stimolati al 100% dal K+, l'enhancement semimassimo si è verificato a 5-10 mM K+. Il legame e l'accumulo di Ca2+ erano entrambi processi saturabili e i rispettivi valori di Km apparenti per Ca2+ erano 16,4 e 14,3 muM. Il legame di Ca2+ per sarcolemma era un processo rapido e il Ca2+ legato era rele ased su esaurimento di ATP nel mezzo. Si suggerisce che il sistema di trasporto sarcolemmale del Ca2+ possa essere importante nella regolazione del ciclo di contrazione-rilassamento del muscolo cardiaco.
L'attività idrolitica dell'acido L-ascorbico.La capacità dell'acido L-ascorbico di catalizzare la liberazione di 4-metilumbelliferone da 4-metilumbelliferil- sono documentati beta-DN-acetilglucosaminide, 4-metilumbelliferil-beta-D-glucuronide, 4-metilumbelliferil-alfa-D-mannoside e 4-metilumbelliferil-beta-D-galattoside. Vi è un'apparente dipendenza da metallo e ossigeno. di due lipidi è stato dimostrato oltre all'idrolisi di questi glicosidi fluorogeni. Il galattosio è stato liberato dal galattosil-6-[3H]ceramide e dall'acido oleico dal colesterolo-[1-14C]oleato dall'acido L-ascorbico in condizioni solitamente utilizzate per in incubazioni in vitro. In comune con la maggior parte dei sistemi in vitro, solo una piccola percentuale di substrato è stata degradata.
Pirofosfatasi e ATPasi di vescicole della matrice cartilaginea isolate.Alcune delle caratteristiche delle attività della pirofosfatasi e dell'ATPasi studiate nelle vescicole della matrice cartilaginea isolate sono risultate essere simili a quelli già riportati per la fosfatasi alcalina ossea solubilizzata e purificata. Pertanto, il pH ottimale dell'attività pirofosfatasica ha risposto in modo simile alle variazioni della concentrazione di Mg2+, Ca2+ e PPi. Inoltre, l'attività ATPasica non è stata attivata dal Ca2+ nel presenza di una concentrazione ottimale di Mg2+. Si propone che una funzione della fosfatasi alcalina delle vescicole della matrice in vivo sia quella di idrolizzare i substrati PPi, ADP e ATP, che sono noti inibitori della precipitazione del fosfato di calcio.
La crescita seminata di fosfati di calcio. La cinetica di crescita di fosfato dicalcico diidrato su idrossiapatite.La cinetica di crescita di fosfato di calcio su seme HAP sintetico cristalli è stato studiato a 37 gradi C e a valori di pH di 4,5 e 5,0 mediante l'aggiunta di base controllata da pH-stat. Seguendo un'induzione, la crescita dei cristalli DCPD avviene con cinetiche di crescita caratteristiche della cristallizzazione del seme DCPD puro. sono stati determinati la velocità di agitazione, la concentrazione del seme HAP e il grado iniziale di sovrasaturazione rispetto al DCPD sulla cinetica del processo di crescita. La cristallizzazione sembra essere controllata da una reazione superficiale e la nucleazione di DCPD sul substrato HAP è completata nell'induzione iniziale La formazione di DCPD in queste condizioni simula da vicino la produzione di placca e tartaro in bocca, quindi è noto che il tartaro che si sviluppa dalla placca iniziale contiene una quantità apprezzabile di DCPD.
Attività, caratterizzazione e distribuzione subcellulare della fosfatasi alcalina durante la scheletogenesi iniziale nell'arto di ratto prenatale.L'attività specifica, la specificità tissutale e la distribuzione subcellulare di fosfatasi alcalina sono stati studiati nell'arto fetale di ratto durante la calcificazione iniziale della cartilagine e la formazione ossea. Le caratteristiche di pH ottimale, Km, attivazione e inibizione dell'enzima dosato in 900 X g surnati di omogenati dell'intero arto hanno indicato che l'attività rappresentava un osso fetale fosfatasi alcalina. Gli studi che hanno esaminato le variazioni temporali dell'enzima in queste preparazioni hanno dimostrato un aumento sostanziale dell'attività durante ciascuno dei giorni durante i quali sono state studiate (giorni 15-18). Sono state utilizzate frazioni derivate dalla centrifugazione in gradiente di densità discontinuo delle preparazioni degli arti per studiare la distribuzione cronologica subcellulare dell'enzima. L'attività enzimatica è stata trovata in tutte le frazioni con la maggiore prima attività che si verifica in frazioni costituite da ribosomi e piccole vescicole. La componente vescicolare era simile alle vescicole della matrice descritte da altri nei tessuti calcificanti. L'aumento giornaliero dell'attività misurato nel surnatante della cagliata è stato ulteriormente riflesso negli studi di distribuzione. L'associazione della fosfatasi alcalina con la struttura vescicolare è compatibile con le funzioni teorizzate delle vescicole della matrice e il sostanziale aumento dell'attività tra i giorni 15 e 18 dimostra ulteriormente un'intima associazione della fosfatasi alcalina con lo sviluppo scheletrico.
Putativi neurotrasmettitori della via visiva aviaria.È stata studiata la capacità degli omogenati del lobo ottico del pulcino di accumulare una serie di possibili neurotrasmettitori. Alta l'assorbimento dell'affinità di diversi possibili neurotrasmettitori è stato esaminato nei lobi ottici di embrioni di 21 giorni a cui era stato rimosso un solo occhio il terzo giorno di incubazione e in pulcini di 23 giorni a cui era stato rimosso un occhio alla schiusa. grave riduzione dello sviluppo della capacità del lobo ottico controlaterale di assorbire GABA triziato, dopamina, colina, serotonina e glutammato da soluzioni intorno a 10 (-8) M. La rimozione unilaterale dell'occhio dei pulcini appena nati ha causato il fallimento del lobo ottico denervato a crescere, ma solo la capacità di assorbimento del glutammato è stata significativamente ridotta. Questo deficit era evidente già 4 giorni dopo l'enucleazione. Il trasporto di altri composti era intatto. L'assorbimento del glutammato da parte degli omogenati del tratto ottico wa s il 43% di quello o il lobo ottico. Questa era una frazione molto maggiore del valore corrispondente per altri neurotrasmettitori ipotizzati. Questi dati suggeriscono che il glutammato potrebbe essere il neurotrasmettitore primario delle fibre del tratto ottico originarie delle cellule gangliari retiniche.
Sviluppo della captazione di neurotrasmettitori nelle regioni del cervello di pollo.La captazione di postulati neurotrasmettitori dei loro precursori nelle regioni del cervello di pollo e della retina in via di sviluppo ha Il trasporto di basse concentrazioni (circa 10(-8) M) di GABA, acido glutammico, colina, dopamina e serotonina negli omogenati era sodio ed energia dipendente e inibito da una varietà di agenti farmacologici che si ritiene agiscano presinapticamente. Dopo il frazionamento morfologico, il meccanismo di trasporto ad alta affinità si è concentrato nella frazione di terminazione nervosa. I composti sono stati scarsamente accumulati dalle regioni cerebrali dell'embrione di pollo incubato per 6 giorni. Dopo questo tempo, la capacità di assorbimento di ciascuna regione cerebrale studiata ha mostrato un caratteristico profilo di sviluppo I meccanismi per il trasporto del GABA sono comparsi all'inizio dello sviluppo, mentre i sistemi di catecolamine e colina sono maturati più tardi Gli omogenati degli emisferi cerebrali e dei lobi ottici per ok su tutti i composti studiati, mentre la retina e il cervelletto del giovane pulcino erano in grado di assorbire solo il GABA in misura significativa.
Enzimi e indici di ipossia correlati ai neurotrasmettitori nella demenza senile e altre abiotrofie.Cinquantasei cervelli di mezza età e anziani normali e soggetti dementi e pazienti con diagnosi clinica provvisoria di altre malattie neurologiche e psichiatriche sono stati valutati istologicamente. Su questa base i campioni sono stati classificati in 14 gruppi diagnostici. Su questi cervelli è stata effettuata un'indagine di potenziali indici di specifici neuroni in cui neurotrasmettitori correlati enzimi, gamma-GTP (un potenziale indice di capillari) e proteine specifiche sono stati determinati in regioni del cervello fino a 20. Inoltre, lo stato agonico è stato valutato provvisoriamente esaminando gli stati post-mortem dei sistemi circolatorio e respiratorio. e le attività gamma-GTP e la concentrazione di una proteina solubile di tipo neuronale (neuronina S-5) sono risultate relativamente inalterate dallo stato agonico. Quando i casi di demenza senile erano com Rispetto ai controlli (uguali rispetto alla causa di morte) l'attività della CAT (l'indice potenziale dei neuroni colinergici) sembra essere ridotta nella corteccia cerebrale. Questo è un risultato preliminare, sebbene sia stata indicata una correlazione tra l'attività CAT e i cambiamenti morfologici \'senile\', l'attività è stata notevolmente ridotta in soli 3 cervelli. Tuttavia, nonostante le incongruenze nella letteratura (Karczmar, 1975) almeno uno studio farmacologico sull'uomo sembra mostrare che il sistema colinergico può essere coinvolto nella degenerazione della memoria legata all'età (Drachman e Leavitt, 1974). I neuroni colinergici possono essere anormali nelle altre abiotrofie esaminate (corea di Huntington, malattia del motoneurone e demenza mista vascolare e senile). gamma-GTP e neuronina S-5 (identica sotto molti aspetti alla proteina neuronale acida solubile 14-3-2 dell'antigene alfa) non sono state ridotte nella demenza senile. Le attività della decarbossilasi cerebrale (GAD e AAD) e la concentrazione di un'altra proteina cerebrale acida solubile (neuronina S-6) sembrano essere influenzate dallo stato agonico. Ciò è notevole perché il GAD e, in particolare, la neuronina S6, non sono relativamente influenzati dall'autolisi post mortem. Come giudicato dallo stato dei sistemi extraneurali che regolavano l'apporto di sangue e ossigeno al cervello, sembra che l'\'ipossia cerebrale\' terminale sia responsabile dell'esaurimento di questi costituenti del cervello. Questo effetto sembra essere particolarmente marcato nella materia grigia profonda. Nei pazienti non dementi che muoiono di broncopolmonite, le aree della corteccia prive di neuronina S-6 sono coerenti con il modello della \'vulnerabilità selettiva\' della corteccia all'ipossia, suggerendo che lo stato terminale può anche influenzare il neocorteccia. Se è così, allora questo è particolarmente rilevante per gli studi sulla demenza senile, poiché l'effetto della broncopolmonite terminale che così spesso si verifica in questi pazienti (e in pazienti con altre abiotrofie) può essere esacerbato da una riduzione terminale del flusso sanguigno cerebrale...
Funzione gonadica nei giovani adulti dopo il trattamento chirurgico del criptorchidismo.In uno studio di follow-up su 48 giovani che erano stati precedentemente trattati chirurgicamente per criptorchidismo la funzione testicolare della pubertà è stata valutata esaminando i genitali, il volume testicolare, i caratteri sessuali secondari, lo sperma, le concentrazioni plasmatiche dell'ormone luteinizzante (LH) e dell'ormone follicolo-stimolante (FSH) dopo la stimolazione dell'ormone di rilascio dell'ormone luteinizzante e le concentrazioni plasmatiche di testosterone. erano normali. Il volume testicolare medio di entrambi i testicoli era nell'intervallo basso normale in coloro che avevano avuto criptorchidismo unilaterale e al di sotto della norma in coloro che avevano avuto criptorchidismo bilaterale. Dei 37 pazienti i cui conteggi spermatici sono stati registrati (14 bilaterali) sei hanno mostrato azoospermia ( tutti bilaterali), cinque avevano oligospermia grave (quattro bilaterali) e 10 oligospermia moderata (una bilaterale). In quasi tutti coloro che avevano avuto criptorchidismo bilaterale e la maggior parte di coloro che avevano avuto livelli di gonadotropina plasmatica unilaterale di criptorchidismo erano aumentati. Sono stati identificati quattro casi di possibile deficit parziale di LH. Le concentrazioni plasmatiche di testosterone erano normali in tutti tranne due pazienti.
La rilevazione di agenti dopanti nel sangue.Sono state valutate procedure di screening gascromatografico che consentono la rilevazione di stimolanti e sedativi nel sangue dopo somministrazione di farmaci vengono presentate le tecniche effettivamente utilizzate nella preparazione dei campioni e nel lavoro gascromatografico, nonché esempi di studi farmacocinetici e casi di droga positivi. L'uso di rivelatori sensibili e selettivi come il rivelatore specifico per l'azoto o uno spettrometro di massa è assolutamente essenziale per il lavoro di routine , come per i rivelatori non specifici il numero di "falsi positivi" comporta un carico di lavoro intollerabile per il laboratorio.
Antagonismo da parte di alcuni antistaminici delle risposte evocate da aminoacidi registrate dalla fibra muscolare dell'aragosta e dal midollo spinale della rana.1 Gli effetti di alcuni antistaminici sulla fibra muscolare dell'aragosta e sul midollo spinale della rana sono stati studiati utilizzando rispettivamente registrazioni intracellulari ed extracellulari. (GABA). Anche i potenziali iontoforetici del glutammato sono stati ridotti. L'istamina (fino a 1 mM) non ha avuto effetto su questa preparazione. 3 Gli antagonisti H1 hanno prodotto un piccolo aumento della conduttanza della membrana muscolare e una leggera iperpolarizzazione. Questi effetti sono rimasti sostanzialmente invariati in un soluzione di bagno a basso contenuto di C1. La procaina (1 mM) ha diminuito la conduttanza di membrana e non ha influenzato le risposte al GABA o al glutammato. Il muscolo dell'aragosta senza influenzare il potenziale di riposo o la conduttanza. 5 Nel cordone di rana, l'istamina applicata al bagno produceva depolarizzazioni delle radici ventrali e iperpolarizzazioni delle radici dorsali (a volte risposte bifasiche). Questi effetti sono stati ridotti dalla tetrodotossina (TTX) ma non dall'antazolina (bloccante H1) o dalla burimamide; quest'ultimo ha antagonizzato in modo reversibile le risposte sia al glutammato che al GABA sui cordoni trattati con TTX mentre l'antazolina era inefficace. 6 Si suggerisce che gli antistaminici possano agire come antagonisti degli amminoacidi non specifici interagendo a livello degli ionofori accoppiati al recettore.
Escrezione e metabolismo della niketamide nel cavallo.È noto che la niketamide (N,N-dietilnicotinammide, CoramineR) viene metabolizzata molto rapidamente in nicotinamide. Quindi, c'è difficoltà nel dimostrare che la niketamide è stata usata come sostanza dopante perché la nicotinammide è un normale metabolita fisiologico nell'organismo così come un preparato vitaminico. Tuttavia, un metabolita intermedio (N-etilnicotinammide) è stato trovato da noi in l'urina di cavalli trattati con Coramine R. Questa è stata caratterizzata mediante gascromatografia/spettrometria di massa, e sintetizzata e identificata come N-etilnicotinammide. L'escrezione e il metabolismo della niketamide dopo l'iniezione intramuscolare nel cavallo sono stati seguiti mediante gascromatografia quantitativa di estratti di urina su un periodo di diverse ore e vengono riportati i risultati di questi esperimenti. Le variazioni del pH urinario non hanno avuto effetti significativi né sul metabolismo né sulla velocità di escrezione del farmaco.
Sull'accoppiamento funzionale dell'assorbimento e del rilascio del neurotrasmettitore nel cervello.1 Frazioni sinaptosomiali isolate dal proencefalo di topo sono state incubate [14C]-acido gamma-aminobutirrico ([14C]-GABA). È stato misurato il rilascio dell'etichetta accumulata in una soluzione ad alto contenuto di potassio. 2 Il rilascio frazionario dipendente dal calcio è stato diminuito aumentando la concentrazione di [14C]-GABA durante l'etichettatura, ma non è stato influenzato dall'alterazione del tempo consentito per l'etichettatura o il tempo tra l'etichettatura e la stimolazione.3 Questi dati suggeriscono che il GABA extracellulare ottiene un rapido accesso ai pool intraterminali disponibili. La distribuzione relativa del GABA accumulato nei diversi pool può essere influenzata dalla concentrazione di GABA nel mezzo di incubazione ma, una volta (memorizzato", non c'è ridistribuzione netta del GABA accumulato in assenza di stimolazione.
Effetti cardiovascolari della dopamina dopo somministrazione centrale in gatti coscienti.Dopamina (30 e 45 tazze) somministrata per via intracerebroventricolare (icv) a un gruppo di 10 persone coscienti gatti normotesi hanno causato aumenti dose-correlati della pressione sanguigna e della frequenza cardiaca. In 4 di questi animali gli effetti stimolanti cardiovascolari iniziali della dopamina icv sono stati seguiti da ipotensione e bradicardia.2 alfa-metildopamina (30 e 45 mug icv) hanno prodotto risposte qualitativamente simili a dopamina, tranne per il fatto che gli effetti stimolanti cardiovascolari erano minori e gli effetti depressivi secondari un po' più prolungati.3 Sia gli effetti stimolanti che quelli depressivi della dopamina icv e dell'alfa-metildopamina erano fortemente inibiti dal blocco del ganglio autonomo o dal blocco dei neuroni adrenergici.4 Gli effetti stimolanti cardiovascolari di sia icv dopamina che icv alfa-metildopamina sono stati selettivamente inibiti da agenti bloccanti i beta-adrenorecettori mentre il gli effetti depressivi cardiovascolari di queste sostanze sono stati aboliti dal bloccante dei recettori alfa-adrenergici fentolamina o dall'inibitore della dopamina-beta-idrossilasi disulfiram. 5 Aloperidolo per via i. c. v. o la via endovenosa ha abolito sia gli effetti stimolanti cardiovascolari che depressivi dell'i. c. v. dopamina, mentre la pimozide per entrambe le vie ha inibito solo gli effetti stimolanti cardiovascolari. 6 In 2 gatti, l'iniezione di dopamina nella cisterna magna ha prodotto effetti prevalentemente depressivi sul sistema cardiovascolare tranne che con una dose più elevata che ha indotto risposte bifasiche.
Capacità totale di legare i folati del plasma umano normale e variazioni di uremia, cirrosi e gravidanza.L'attuale studio presenta prove che tutto il siero umano contiene una classe di leganti dei folati ad alta affinità (KA=2.8 X10 (10 litri/mole), che migrano come un singolo picco sulla filtrazione su gel. L'incapacità di studi precedenti di rilevare questa caratteristica in tutti i soggetti tranne una minoranza è attribuibile a la sua saturazione variabile, spesso totale. La misurazione diretta della capacità totale di legame dei folati (TFBC) è stata resa possibile dalla dissociazione dei complessi endogeni leganti dei folati a pH acido, dalla rimozione del folato libero mediante carbone rivestito e dall'etichettatura dei radiofolati. non sembra denaturare in modo significativo i leganti, che rilasciano e rilegano quantità simili di 3H-PGA In 20 soggetti normali, il TFBC variava da 100 a 325 pg/ml (media +/-SE = 174+/-16), ed era sempre saturo almeno al 33% In tre condizioni cliniche, tutte associate con elevata capacità di legame dei folati insaturi, sono emersi tre modelli diversi quando è stato misurato anche il TFBC. I soggetti uremici avevano un TFBC medio significativamente elevato con una saturazione normale. Nei soggetti cirrotici, il TFBC medio si avvicinava alla norma, ma la saturazione era significativamente ridotta. In gravidanza sono stati osservati due gruppi: uno con TFBC aumentato e l'altro con TFBC normale, alcuni dei quali avevano una saturazione ridotta. Il livello di folato sierico di Lactobacillus casei era circa 30 volte maggiore del TFBC; non vi era alcuna correlazione tra le due misurazioni.
Anemia aplastica trattata con trapianto di midollo osseo allogenico: un rapporto su 49 nuovi casi da Seattle.Quarantanove pazienti con anemia aplastica grave, 33 dovuti a causa sconosciuta, 11 correlati a farmaci o sostanze chimiche, 2 associati a epatite, 1 con emoglobinuria parossistica notturna e 2 possibilmente associati a sindrome di Fanconi non hanno mostrato recupero dopo 0,5-96 (mediana 2) mesi di terapia convenzionale. e 21 erano refrattari a trasfusioni di piastrine casuali al momento del ricovero. Tutti sono stati sottoposti a innesti di midollo da fratelli HLA identici. 45 sono stati condizionati per l'innesto con ciclofosfamide (CY), 50 mg/kg in ciascuno dei 4 giorni successivi, e quattro per 1000 rad di irradiazione corporea totale. Tutti hanno ricevuto una terapia intermittente con metotrexato entro i primi 100 giorni dall'innesto per modificare la malattia del trapianto contro l'ospite (GVHD). Tre pazienti sono morti per infezione troppo presto per essere valutati (giorni 1-8). Quaranta -sei avevano l'attecchimento del midollo. Di questi, 20 sono sopravvissuti con una buona conta del sangue periferico tra 186 e 999 giorni e 18 sono tornati alle normali attività. La GCHD cronica è un problema su cinque. Dodici pazienti sono morti di infezione a seguito del rigetto del trapianto di midollo. Dodici pazienti sono morti con infezioni batteriche o fungine o polmonite interstiziale e GVHD attiva o subito dopo la risoluzione della GVHD. Due pazienti sono morti con attecchimento di midollo e senza GVHD, uno con un interstiziale e l'altro con una polmonite batterica. Trentasei pazienti che avevano ricevuto trasfusioni di sangue da donatori casuali sono stati assegnati in modo casuale a ricevere CY o procarbazina-globulina antitimocita-CY come regimi di condizionamento per verificare se l'incidenza del rigetto del trapianto potesse essere ridotta. Non c'era alcuna differenza nell'incidenza del rigetto del trapianto tra i due regimi. In 13 pazienti con rigetto, sono stati tentati secondi trapianti con il donatore di midollo originale (9 pazienti) o con un altro fratello identico all'HLA (4 pazienti). Tre di questi trapianti non erano valutabili, sette non hanno avuto successo e tre hanno avuto successo con solo uno dei tre sopravvissuti per più di 468 giorni. In conclusione, la sopravvivenza a lungo termine del 41% dei pazienti nel presente studio è simile a quella ottenuta nei nostri primi 24 pazienti e conferma l'importanza del trapianto di midollo per il trattamento dell'anemia aplastica grave. Il rigetto del trapianto di midollo, la GVHD e le infezioni continuano a essere le principali cause di fallimento.
Produzione di cellulasi da Trichoderma.Il complesso di cellulasi in T. viride è inducibile. Per la produzione di enzimi su larga scala il fungo deve essere coltivato su terreno contenenti cellulosa Gli enzimi cellulasi sono reprimibili Per produrre e mantenere le migliori rese di cellulasi dovrebbero essere evitate condizioni colturali che portano a un consumo di carboidrati in eccesso rispetto alle esigenze cellulari Con il presente mutante (QM9414) preparazioni enzimatiche extracellulari aventi 1,6 unità FP/ml e 1,6 mg di proteine/ml sono stati ottenuti entro quattro o cinque giorni in fermentazione sommersa Tali preparazioni sono in grado di produrre una soluzione zuccherina al 5% se miscelate con 10% di cellulosa macinata con palline e incubate 24 ore a 50 gradi C. Ulteriori miglioramenti delle rese di cellulasi sono ricercato dalla continua mutagenesi e dall'aumento dei livelli di nutrienti nel mezzo di crescita.
Ph eritrocitario nei disturbi respiratori e metabolici acido-base. Studi sul sangue umano in vitro.L'influenza dell'ossigenazione nelle vie respiratorie e metaboliche acido-base i disturbi del pH degli eritociti sono stati studiati su sangue umano normale "in vitro". Nell'intervallo di pH fisiologico, la relazione pHe-pHi è la stessa per le variazioni di PCO2 a livello metabolico costante e per le variazioni di livello metabolico a PCO2 costante. " La relazione pHe-pHi è stata calcolata a 0 e 100% SO2. Lo spostamento del pH legato all'ossigeno dipende dal livello di pH e dalla PCO2 ed è diverso nel plasma e negli eritrociti. Da questi risultati derivano conclusioni sulla dipendenza da pHi e pHe, ruolo fisiologico di livello di saturazione dell'emoglobina e condizioni di normalizzazione della P50 a pH 7,4.
Varianti dell'albumina sierica umana: determinazione e ripartizione degli allotipi in 24 casi di bisalbuminemia osservati nella popolazione francese.Weitkamp et al. (1973) using l'elettroforesi su gel di amido in tre diversi sistemi di tamponi (pH 5, 5,6 e 6,9) distingue almeno 24 varianti geneticamente determinate. Nell'area europea sono state osservate solo sette varianti. Lo studio di 24 casi di bisalbuminemia osservati nella popolazione francese da acetato l'elettroforesi a pH 8,6 e l'elettroforesi su gel di poliacrilammide agarosio a pH 8,7 e pH 6,9 consentono di distinguere tre varianti più lente rispetto all'albumina normale, la variante più frequente è quella di tipo B osservata in 16 casi, gli altri tipi sono di tipo Pollibauer osservata in 7 casi, e il tipo Gainsville in un solo caso. L'incidenza di queste varianti può essere stimata a 0,7 p. 1000 individui.
L'effetto di Trichinella spiralis sulla reazione del trapianto contro l'ospite, sull'immunità al trapianto e sulla formazione di anticorpi.L'effetto di Trichinella spiralis nelle diverse fasi dell'infezione sull'immunità al trapianto, è stata studiata la capacità dei linfociti di indurre la reazione del trapianto contro l'ospite, sulla produzione di anticorpi e cellule formanti placca. In alcune fasi della Trichinella spiralis a partire dai primi giorni di infezione e durante i 40 giorni soppressione significativa dell'immunità da trapianto Pertanto, il 24 ° giorno dell'infezione, la necrosi dell'allotrapianto cutaneo si è verificata molto più tardi (26,2 giorni) rispetto ai topi non infetti (12,5 giorni). Le cellule della milza dei topi C57BL/6j infettati da Trichinella spiralis il 22, 29 , 36, 42, 56, 72 giorni hanno indotto una leggera reazione graft-versus-host in (CBA X C57B1/6j) topi ibridi F1 o non l'hanno indotta affatto (42° giorno di infezione). La quantità di cellule che formano l'anticorpo in Topi infetti da Trichinella significa ntly diminuito il 20, 25, 47, 55 giorni di infezione. La produzione di emoagglutinina nei globuli rossi di pecora è stata significativamente inibita il 25° giorno dell'infezione da Trichinella spiralis. Viene brevemente discusso il concetto di immunodepressori rilasciati dagli elminti.
Effetto dei cambiamenti osmotici sul pH intracellulare e sull'affinità dell'ossigeno dell'emoglobina degli eritrociti umani.L'effetto dell'osmolalità sul pH intra-eritrocitario e sull'affinità dell'ossigeno dell'emoglobina di i globuli rossi sono stati studiati a tre diversi livelli di osmolalità (le osmolalità medie erano rispettivamente 257, 294 e 341 mOsmol). Non è stata osservata alcuna alterazione osmoticamente indotta della relazione pHe-pHi. Al contrario, P50(7.4) è aumentato (vale a dire: 24,5, 24,9 e 25,6 torr) con l'aumentare dell'osmolalità. Questo aumento è stato accompagnato da un incremento simultaneo sia della concentrazione di MCHC (rispettivamente 30,5, 33,4 e 36,3 g percento) che di 2,3-DPG (4,495, 4,924 e 5,392 mM/l di globuli rossi) mentre il Il rapporto molare 2,3-DPG/Hb è rimasto costante. Sono stati discussi i diversi fattori che potrebbero indurre un tale cambiamento nell'affinità dell'emoglobina per l'ossigeno. Sarebbe meglio spiegato da una modifica nella quantità di 2,3-DPG legato all'emoglobina quando Le concentrazioni di 2,3-DPG e di emoglobina nei globuli rossi variano contemporaneamente.
[Alfa-glucosidasi da reni umani].I dati ottenuti mostrano che la maggior parte dell'attività delle alfa-glucosidasi neutre da reni umani è osservata nella frazione particellare, e solo il 15% circa nel surnatante. Le alfa-glucosidasi neutre solubili hanno almeno 4 forme diverse, come dimostrato dal loro frazionamento su Sephadex G-150, Bio-Gel P-200 e da elettroforesi su gel di poliacrilammide Quattro forme sono diverse per peso molecolare, mobilità elettroforetica e specificità del substrato Due delle forme hanno un peso molecolare di 310000 e 110000 Tutte le alfa-glucosidasi neutre eccetto la forma ad alto peso molecolare (maggiore di 400000) sono state ritardate su colonna di Sephadex G-150.
[Isolamento e varie proprietà di preparati purificati della ribonucleasi alcalina della frazione solubile degli emisferi cerebrali di ratto].Preparati di ribonucleasi alcalina con attività ottimale a pH 7,8 sono stati isolati dalla frazione postmitocondriale del tessuto cerebrale di ratto mediante precipitazione di solfato di ammonio, estrazione di 0,1 HCl e successivo frazionamento di solfato di ammonio. Due preparazioni di questo enzima sono state ottenute mediante filtrazione su gel tramite Sephadex G-25 e G-75 , peso molecolare di uno di essi (il preparato più purificato) è di circa 13000. Durante l'elettroforesi i preparati sono passati dall'anodo al catodo attraverso gel di poliacrilammide a pH 3,2. I cationi bivalenti (Ca2+, Mg2+) hanno attivato i preparati enzimatici alla concentrazione di u.10 (-3)--5.10(-3) M. Il grado di purificazione dei preparati esaminati era rispettivamente di 60 e 250.
[Regolazione del metabolismo della glutammina in Chlorella pyrenoidosa. Meccanismi di regolazione dell'attività della glutammina sintetasi durante l'assimilazione dell'ammoniaca].Glutammina sintetasi (GS) (EC 6.3.1.2) l'attività nelle cellule di Chlorella è diminuita quando NH4+ è stato aggiunto al mezzo di crescita privo di azoto. Questa inattivazione di GS ha avuto una velocità tale, che non poteva essere dovuta alla repressione della sintesi enzimatica: l'attività di GS è diminuita del 20% entro 5 minuti di assimilazione di NH4+ Il contenuto di glutammina nella cellula è aumentato di 2,5 volte per questo periodo Esperimenti in vitro hanno dimostrato che la glutammina è un forte inibitore del GS dalla clorella coltivata in presenza di NO3- e, in misura minore, un inibitore di GS da cellule cresciute in terreno contenente ammonio. I dati ottenuti sono negativi rispetto a possibili meccanismi di regolazione dell'attività GS tramite adenilazione e distruzione ATP-dipendente della glutammina sintetasi.
[Effetto dei fattori ambientali sull'inattivazione della glicerolo deidratasi dipendente dalla B12 da Aerobacter aerogenes].Effetto della temperatura, del pH e del catione univalente sulla cinetica di è stata studiata l'autoattivazione della glicerolo deidratasi (GD) dipendente dalla B12 da Aerobacter aerogenes con Co alfa-[alfa-(5,6-dimetilbenzimidazolil]-Co beta-adenosilcobamide (AdoCbl). L'energia di attivazione del processo di inattivazione della GD è stata studiata trovato essere 3,9 kcal/M, l'effetto del pH sull'inattivazione della GD è insignificante. Il catione monovalente non è richiesto per la formazione del complesso GD-AdoCbl, ma protegge il complesso dall'autoinattivazione. La velocità di inattivazione della GD dipende molto dalla concentrazione di cationi monovalenti L'effetto dei cationi K+, Rb+, Cs+, Tl+ e NH4+, che sono cofattori enzimatici, differisce qualitativamente dall'effetto di Na+ e Li+, che sono inattivi in una reazione catalitica La presenza di almeno due siti di legame cationico in Si suggerisce la molecola GD. Viene discusso il possibile meccanismo dell'effetto dei fattori ambientali nell'autoinattivazione del complesso GD-AdoCbl.
[Regolazione dell'attività dell'urocaninasi nel fegato: ruolo di 3\',5\'-AMP].Una dipendenza dell'attività dell'urocaninasi del fegato di ratto sugli agenti che influiscono sul sistema adenilato ciclasi è stata studiata in vitro e in vivo. L'urocaninasi è notevolmente attivata dopo l'iniezione di glucagone, NaF, teofillina e 3\',5\'-AMP. In condizioni ottimali per l'attività protein chinasica della fosforilasi l'urocaninasi degli estratti di fegato è stata attivata in media 7 volte. Il nezima mantiene la sua attività dopo gel-filtrazione attraverso Sephadex G-25 ed è in grado di inattivazione in presenza di Mg2+ e di riattivazione dopo aggiunta di ATP e 3\', 5\'-AMP. Questi dati suggeriscono una possibilità di regolazione dell'attività dell'urocaninasi epatica dei mammiferi mediante la fosforilazione 3\',5\'-AMP-dipendente dell'enzima. Derivati dell'ipoxantina (teofillina e caffeina) in concentrazione 10(-4) M attiva l'urocaninasi negli estratti di fegato 2--3 e 1,5 volte r rispettivamente. L'attivazione probabilmente non è dovuta all'inibizione della 3\',5\'-AMP della fosfodiesterasi, poiché un altro inibitore della fosfodiesterasi, la papaverina, non ha alcun effetto di attivazione sull'urocaninasi.
[Meccanismo della fosforilazione ossidativa degli oppiacei nei mitocondri].L'effetto di morfina, codeina, dionina e nalorfina sulla fosforilazione ossidativa nei mitocondri del fegato di ratto è stato Si è scoperto che la morfina inibisce le attività sia dell'ATP-sintetasi che dell'ATP-asi nei mitocondri, ma non nelle particelle subcondriali. La fosforilazione ossidativa soppressa dalla morfina è stata invertita in modo competitivo con alte concentrazioni di ADP, ma non di fosfato inorganico. L'effetto di altri oppiacei (cioè codeina, dionina, nalorfina) era simile. Si suggerisce che gli oppiacei inibiscono il trasporto dei nucleotidi di adenina attraverso la membrana mitocondriale interna, come fa l'atractyloside. Un significato dell'interazione idrofobica tra l'inibitore e la traslocasi del nucleotide adenina è delineato, poiché il grado di inibizione della fosforilazione ossidativa aumenta con l'aumento del numero di molecole di oppiacei non ionizzati (a valori di pH alcalini) e la lunghezza della catena di carbonio della molecola narcotica come segue: morfina--codeina--dionina--nalorfina.
Purificazione e alcune proprietà della destransucrasi libera e cellulo-associata da Streptococcus sanguis.Dextransucrase of Streptococcus sanguis si è verificata in forme cell-free e cell-associate La destransucrasi priva di cellule è stata purificata mediante quattro cromatografie successive su Bio-Gel P 60, DEAE-cellulosa e Bio-Gel P 200 dal surnatante di coltura. La purificazione della destransucrasi associata alle cellule è stata effettuata dal pellet di coltura di Streptococcus sanguis. Il pellet batterico è stato estratto con tampone fosfato 1 M (pH 6,0) e cromatografato utilizzando una colonna immunoassorbente. I due enzimi hanno fornito bande singole nell'elettroforesi su gel di poliacrilammide. Il peso molecolare determinato dal gel di poliacrilammide di sodio dodecilsolfato era di circa 100.000 dalton per i due forme di destransucrasi. Il pH ottimale degli enzimi cell-free e cell-associati era intorno a 6 e la temperatura ottimale era ampia per i due enzimi. I valori di KM per il saccarosio erano rispet 2 mM e 3 mM per gli enzimi cell-free e cell-associati. Quando è stato aggiunto il primer destrano, la velocità di reazione è aumentata ma il KM per il saccarosio è rimasto lo stesso e il KA per il destrano è stato di 200 muM per le due destransucrasi. Trealosio e maltosio hanno agito anche come accettori di residui di glucosile. Gli enzimi purificati avevano un'attività di sintesi del destrano e un'attività simile all'invertasi. Le stesse proprietà delle due forme di enzimi e la reazione crociata positiva contro le globuline anti-free e anticell-associate suggeriscono fortemente l'identità dei due enzimi.
La via dello shikimate. III. 3-deidrochinato sintetasi di E. coli. Studi meccanicistici per effetto dell'isotopo cinetico.La conversione del 3-desossi D -arabino eptulosonato 7-fosfato a 3-deidrochinato dalla 3-deidrochinato sintetasi di E. coli è caratterizzato da un effetto isotopico cinetico basso ma significativo per il trizio trasportato in posizione 5 di DAHP, mentre nessun effetto isotopico è stato rilevabile per il trizio in posizione -4. Questo effetto è stato osservato a diversi pH e viene interpretato come il risultato dell'intermediazione di una forma 5-chetonica del substrato, formata in una fase preliminare non limitativa durante la reazione di ciclizzazione enzimatica. Uno schema sperimentale per la 3-DHQ sintetasi viene proposta una reazione che prevede cinque fasi: ossidazione con NAD+ in posizione-5, eliminazione del fosfato dopo enolizzazione, riduzione con NADH formato in precedenza e ciclizzazione per attacco del 2-carbonile da parte del gruppo metilene C-7.
[Struttura primaria di anidrasi carbonica di eritrociti bovini CI. I. Peptidi triptici].Anidrasi carbonica di eritrociti bovini CI consiste di 259 residui di amminoacidi di cui 18 lisine e 9 arginine. La sua struttura primaria è stata dapprima studiata mediante isolamento e determinazione della sequenza delle unità triptiche. L'acidificazione dell'idrolizzato triptico porta alla precipitazione del 40% del materiale peptidico. Tutti i peptidi solubili in acido sono stati isolati dal surnatante mediante cromatografia su Dowex 50 W-X2 e Dowex 1-X2 seguita da purificazione di frazioni eterogenee Due dei tre peptidi insolubili in acido sono stati ottenuti in forma pura dall'intero idrolizzato triptico mediante gel filtrazione su Sephadex G-50 e cromatografia su DEAE- Sephadex in ambiente alcalino La sequenza delle unità triptiche così isolate è stata determinata ad eccezione di due di esse ottenute con una resa molto scarsa.
[Purificazione e proprietà della catecol-O-metiltransferasi del rene di ratto].La S-adenosil-metionina: catecol-O-metiltransferasi (EC 2.1 .1.6) dal rene di ratto è stato purificato circa 650 volte rispetto all'omogenato e presentato il risultato dell'elettroforesi su disco. La purificazione ha comportato l'estrazione, la precipitazione a pH 5, il frazionamento del solfato di ammonio, le cromatografie su Biogel 0,5 m, Ultrogel AcA 44 e DE Sephadex È stata tentata una cromatografia di affinità 50. L'enzima ha mostrato due valori ottimali di pH a 7,9 e 9,6 con un minimo a circa 8,9. Il COMT aveva una temperatura ottimale di 50 gradi C, con energia di attivazione di 23,1 Kcal/mole tra 25-35 gradi C, 18,9 Kcal/mole tra 35-45 gradi C e il Q10 nell'intervallo 25-35 gradi pari a 3,5. Il peso molecolare è stato stimato in 21500 +/- 1000 dalton dal suo comportamento su Ultrogel AcA 44 e il Il pH1 determinato mediante elettrofocalizzazione era vicino a 5,50. Il tempo di metà la vita del miglior estratto enzimatico purificato è risultata essere di 2 h 10 min. a -20 gradi C. A pH basico l'instabilità dell'enzima è aumentata. Poiché la O-metilazione richiedeva la presenza di cationi bivalenti, i nostri risultati mostrano che le apparenti costanti di Michaelis per Mg++ e Mn++ erano rispettivamente 0,50 X 10(-3) M e 0,33 X 10(-5) M. Lo studio del loro numero di Hill\'s indicato che c'era un solo punto di fissazione sull'enzima. Il valore Km determinato dal metodo Florini e Vestling\'s era 2,5 X 10(-4) M e 11,9 X 10(-5) M rispettivamente per epinefrina e S-adenosil-metionina. Tutti i risultati sono stati discussi rispetto ad altre indagini.
Fosforilazione della membrana plasmatica da parte di donatori endogeni di fosfato nelle piastrine del sangue umano. Selettività dell'azione dell'AMP dibutirrile ciclico.Incubazione di plasma ricco di piastrine con 32Pi porta alla captazione cellulare dell'isotopo e all'incorporazione covalente in diversi costituenti cellulari. Le membrane plasmatiche isolate da piastrine marcate intatte, delipidate e solubilizzate in sodio dodecil solfato, mostrano, all'analisi elettroforetica su gel, tre principali picchi di radioattività: due nell'intervallo del peso molecolare 100 000-30 000 e un ulteriore componente a migrazione molto lenta fortemente positivo dalla reazione acido peirodico-Schiff Il trattamento delle cellule con AMP dibutirril ciclico in condizioni appena sufficienti per inibire completamente l'aggregazione piastrinica porta ad un aumento dell'incorporazione isotopica Analisi elettroforetica delle membrane isolato dalla cellula trattata con AMP ciclico dibutirrile rivela: (a) nessun cambiamento nel modello generale di distribuzione dell'isotopo, (b) nessuna differenza nell'incorporazione dell'isotopo ai due componenti della mol inferiore. peso e (c) un marcato aumento (maggiore del 100%) nell'incorporazione di isotopi nel materiale a migrazione lenta rispetto alle membrane isolate dalle cellule di controllo. Questo materiale può essere estratto dalle membrane plasmatiche piastriniche dopo trattamento delle membrane per 5 h con Triton X-100, con un rapporto detergente/proteina di 7,5. Quando il materiale della membrana estratto con Triton X-100 viene sottoposto a cromatografia su gel in Agarosio (Biogel A-15m), il materiale fosforilato che corrisponde alla banda a migrazione lenta nell'elettroforesi su gel di poliacrilanide viene eluito con o molto vicino al volume vuoto del colonna. La focalizzazione isoelettrica di questa frazione, mostra un singolo picco radioattivo corrispondente ad un punto isoelettrico di 3,78. Il componente isolato è sensibile alla pronasi, contiene il 52% di carboidrati e il 15% di acido sialico. L'analisi della stabilità del fosfato legato suggerisce che circa il 43% di esso è legato come acilfosfato. I risultati riportati, ottenuti attraverso un approccio che ricorda da vicino le condizioni fisiologiche, sono compatibili con la partecipazione di questa fosfoglicoproteina di membrana ai fenomeni di aggregazione piastrinica.
Legame glucosio-6-fosfato-dipendente dell'esochinasi alle membrane delle cellule tumorali dell'ascite.Legame saturabile e pH-dipendente dell'isozima I dell'esochinasi di Ehrlich ascite carcinoma alla membrana plasmatica e preparazioni di microsomi dallo stesso tessuto è dimostrato. Questo legame è potenziato dal glucosio 6-fosfato e può essere considerato come la somma di un legame glucosio-6-fosfato dipendente e un legame indipendente. La concentrazione di semisaturazione di l'esochinasi è di circa 0,4 unità per ml per entrambi i tipi di legame e per entrambi si osserva un legame massimo di 0,5-2,0 unità per mg di proteina di membrana, sebbene il pH ottimale del legame indipendente (5.4) sia inferiore a quello del legame dipendente (5.9). La concentrazione di mezza saturazione del glucosio 6-fosfato richiesta per il legame dipendente è 0,05 mM a pH 6,1. Il 2-desossiglucosio 6-fosfato inverte in modo competitivo l'effetto del glucosio 6-fosfato sul legame ma non diminuisce la sua inibizione di hexoki attività del naso.
Leucil-tRNA sintetasi alterato da un mutante di coltura cellulare di mammifero.Leucil-tRNA sintetasi alterato da un mutante sensibile alla temperatura di coltura cellulare di mammifero, tsHl , è stato confrontato con l'enzima proveniente da cellule ovariche di criceto cinese normale wild type. L'enzima mutante aveva un Km per la leucina quattro volte maggiore di quello del wild type e livelli enzimatici del 3-10% rispetto al wild type. La presenza di tRNA era necessaria durante riscaldamento in vitro dell'enzima mutante per consentire l'espressione della termolabilità mentre la presenza di tRNA proteggeva l'enzima di tipo selvatico contro l'inattivazione termica. L'enzima tsHl era stabile quando riscaldato da solo o in presenza di tRNA, leucina e ATP contemporaneamente. Gli enzimi mutanti amminoacilato tRNALeu, tRNAVal e tRNAIle con fedeltà in vitro come determinato mediante cocromatografia degli isoaccettori ammino-acil-tRNA su cromatografia in fase inversa RPC-5. Il mutante non è riuscito a mostrare alcun difetto diverso dalla formazione diretta di leucil tRNALeu dalla leucil-tRNA sintetasi.
Purificazione dal lievito di birra di un attivatore della fotoliasi del DNA.L'attività della fotoliasi del DNA purificata dal lievito di Baker è potenziata da un composto (Attivatore (III)) ottenuto dal lievito mediante cromatografia a scambio ionico di estrazione con cloroformio e filtrazione su gel. La cromatografia su strato sottile e i dati spettrali indicano che il composto è omogeneo. L'attivatore III emette a 350 e 440 nm quando eccitato a 290 nm ed emette a 440 nm quando eccitato a 358 nm. Dopo l'idrolisi acida, l'emissione a 440 nm è prodotta solo dall'eccitazione a 358 nm, indicando che l'attivatore (III) contiene due porzioni cromoforiche separate. Il cromoforo eccitato dalla luce a 358 nm ha un pK di 9-11 , mentre l'altro cromoforo ha un pK di 4-5, ed eventualmente di 9-11. Il potenziamento dell'attività fotolitica da parte dell'attivatore (III) ad una concentrazione equimolare con quella dell'enzima e la somiglianza degli spettri fluorescenti dell'attivatore con quello di photolya. denaturato al calore se, suggerisce che l'attivatore potrebbe essere il cromoforo associato all'enzima.
Relazioni struttura-attività della lulibrina sostituita in posizione 8.Sostituzione dell'arginina in posizione 8 della luliberina con gli amminoacidi basici omoarginina, lisina e diamminobutirrico acido ha prodotto analoghi in cui l'attività di rilascio dell'ormone luteinizzante è marcatamente ridotta, mentre è preservata la reattività crociata con anticorpi specifici contro la luliberina. Titolazioni fluorimetriche di questi analoghi, effettuate come per la luliberina, hanno rivelato valori di pK di 6,00 +/- 0,05 e di 9,75 +/- 0,15 rispettivamente per His 2 e Try 5 che sono essenzialmente gli stessi di lubiberin Tuttavia, il tasso di collisioni tra le catene laterali di His 2 e Trp 3 in questi analoghi è risultato diminuire del 36-39% La sostituzione in posizione 8 con l'aminoacido non basico omega-nitro arginina ha prodotto un analogo con un'attività ormonale molto bassa e uno scarso riconoscimento degli anticorpi specifici per la lulibrina. Le proprietà di fluorescenza di questo peptide sono marcatamente differenti da quelli di lubiberin e dei suoi tre analoghi di base. Questi risultati indicano che l'integrità funzionale dell'unità attiva His 2. . . Tiro 5. . . Arg 8 in lubiberin dipende sia dalla dimensione che dalla basicità della catena laterale dell'amminoacido in posizione 8.
Un insolito spettro di fluorescenza di un inibitore della proteinasi proteica, Streptomyces subtilisina inibitore.Streptomyces subtilisina inibitore, un inibitore della proteinasi proteica dimerica isolato in forma cristallina da Murae et al. nel 1972, contiene tre residui di tirosina e uno di triptofano per unità monomerica e ha proprietà di fluorescenza insolite. Quando eccitato a 280 nm, mostra un caratteristico spettro di fluorescenza con un picco a 307 nm e una spalla vicino a 340 nm, una caratteristica che è stato riconosciuto solo per pochissimi casi in proteine contenenti sia residui di triptofano che di triptofano. Quando eccitato a 295 nm, a cui la tirosina assorbe poco, l'inibitore mostra uno spettro di emissione con un picco a 340 nm caratteristico di un residuo di triptofano. con un picco a 307 nm si ritiene derivi dai residui di tryrosina. La resa quantica del triptofano dell'inibitore della subtilisina Streptomyces eccitato a 295 nm è molto piccola, indicando che il try la fioritura del ptofano è fortemente estinta nello stato nativo dell'inibitore. Al di sotto di pH 4 il picco dello spettro di fluorescenza dell'inibitore eccitato a 280 nm si sposta verso 340-350 nm con un concomitante aumento della resa quantica. Il cambiamento strutturale indotto dal basso pH sembra rilasciare la fluorescenza del triptofano dall'estinzione.
Emoglobina Fannin-Lubbock [alpha2 beta 2 119 (GH2) Gly sostituito da Asp]. Una nuova variante dell'emoglobina al contatto alpha1 beta 1.Emoglobina Fannin-Lubbock è stata trovata in una femmina messicana-americana di 9 anni. L'emoglobina anormale è stata rilevata come una variante in rapido movimento mediante elettroforesi su acetato di cellulosa a pH 8,4. L'analisi strutturale ha indicato una sostituzione nella catena beta dell'aspartico acido per la glicina in posizione 119, una posizione coinvolta nel contatto alfa1beta1 del tetramero dell'emoglobina. Questo contatto tra catene dissimili è maggiore e subisce uno spostamento minore durante il processo di ossigenazione e deossigenazione che il contatto alfa1beta2 (Perutz, MF, Muirhead, H. , Cox, JM e Goaman, LCG (1968) Nature 219, 131-139). Le mutazioni in questo contatto tendono a causare lievi o nessun cambiamento nel comportamento funzionale. A parte una lieve anemia, il propositus non ha mostrato alcun sintomo clinico evidente.
Effetto degli ioni metallici bivalenti sulla digeribilità della concanavalina A da parte delle endopeptidasi.La concanavalina A demetallizzata viene degradata rapidamente a pH 7,0 e 8,2 dall'alfa-chimotripsina , termolisina o tripsina, producendo frammenti peptidici privi di capacità di legarsi al Sephadex G-75 L'aggiunta di Ni2+ e di Ca2+ conferisce alla concanavalina un'elevata resistenza all'attacco proteolitico per cui anche dopo lunghi periodi di esposizione agli enzimi, la quasi totalità dei La capacità di legare i saccaridi è preservata. Il solo Ni2+ protegge fortemente a pH 7,0 ma non a pH 8,2 Apparentemente, sia lo ione del metallo di transizione che il Ca2+ svolgono un ruolo importante nella stabilizzazione della conformazione nativa della molecola proteica. Digestione della concanavalina A demetallizzata con alfa -chimotripsina o termolisina produce facilmente piccoli frammenti peptidici (Mr meno di 10 000), mentre la tripsina produce come prodotto principale peptide(i) più grande (Mr circa 20 000) di apprezzabile resistenza a ulteriori frammenti zione.
Legame competitivo del ferro da parte delle transferrine di diversi vertebrati.1. È stata utilizzata una tecnica di dialisi competitiva per studiare le affinità relative dei due siti di legame sulle molecole di transferrina e le relative forze di legame delle transferrine isolate dal plasma di specie diverse. 2. I confronti sono stati estesi per includere la transferrina umana desialylata, l'ovotransferrina e un frammento di bromuro di cianogeno di quest'ultimo. 3. Sebbene i risultati di esperimenti bilaterali potrebbero essere generalmente spiegate in termini di teoria dei siti indipendenti, c'erano alcune eccezioni e i confronti ciclici erano incoerenti 4. Tutti i confronti effettuati erano compatibili con un modello in cui si verificava l'interazione del sito, ma non era possibile decidere se i siti erano intrinsecamente identici o meno. Per la maggior parte delle specie ciò corrispondeva a una cooperatività positiva, ma per il coniglio era negativo. 5. L'affinità media della transferrina per iro n dipendeva dalla specie, ma la variazione non era mai superiore a circa un ordine di grandezza. 6. Non è stato possibile rilevare alcun effetto sulle costanti di legame per la transferrina umana quando i residui di acido sialico sono stati rimossi. 7. Il frammento di ovotransferrina ha gareggiato abbastanza efficacemente con la molecola nativa per il ferro, sebbene l'affinità relativa media fosse solo di circa 1:15. 8. Il legame relativo del ferro da parte dell'ovotranferrina e della transferrina umana è stato poco influenzato quando l'anione bicarbonato è stato sostituito dall'ossalato, sebbene il rapporto tra le due costanti di legame per l'ovotranferrina sia aumentato.
Purificazione e caratterizzazione di una proteina coagulante dal veleno della vipera di Russell.La proteina coagulante dal veleno della vipera di Russell è stata purificata mediante successiva cromatografia su Sephadex G-50, DEAE-cellulosa e Sephadex G-200. La proteina coagulante purificata è risultata omogenea mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide e ultracentrifugazione. Il peso molecolare è stato stimato in circa 100.000 mediante ultracentrifuga e 130 000 mediante filtrazione su gel La proteina coagulante contiene l'11,1% di carboidrati che include il 5,1% di esoso (galattosio: mannosio = 1:1), il 5% di esosamina (glucosamina) e l'1% di acido neuraminico (acido N-acetilneuraminico e acido N-glicolineuraminico). Il punto isoelettrico è pH 6,3. I risultati sia dell'elettroforesi del sodio dodecil solfato che della filtrazione su gel nel cloruro di guanidio 6 M suggeriscono che consiste di quattro catene polipeptidiche. La proteina coagulante funziona come un enzima nell'attivazione della co fattore di agulazione X in presenza di Ca2+. L'attività idrolizzante dell'estere metilico della N-a-p-toluensolfonil-L-arginina nella preparazione è decisamente diminuita durante la purificazione e ciò suggerisce che l'attività di coagulazione non è associata all'attività esterasica. L'attività di coagulazione è inibita dal diisopropilfosforofluoruro e dal fenilmetilsolfonilfluoruro, suggerendo che la proteina coagulante sia una serina proteasi. Il pH ottimale è tra pH 7,0 e pH 8,0. A pH neutro la proteina coagulante è stabile al di sotto dei 50 gradi C, ma viene rapidamente inattivata al di sopra dei 55 gradi C.
Proprietà di fluorescenza di 2\' (o 3\')-O-(2,4,6-trinitrofenil) adenosina 5\'-trifosfato e suo utilizzo nello studio di legame alla pesante meromiosina ATPasi.2\' (o 3\')-O-(2,4,6-Trinitrofenil) adenosina 5\'-trifosfato (N3ph-ATP), che contiene un La frazione del complesso di Meisenheimer, è una delle classi di composti che non emettono fluorescenza in acqua ma emettono fluorescenza sia in solventi a bassa polarità che quando legati alla molecola proteica. Intensità di fluorescenza di N3ph-ATP nell'intervallo di 540 nm, quando eccitato a 410 nm , diminuiva con l'aumento della polarità del solvente che accompagnava l'incremento della lunghezza d'onda di emissione massima. Quando legato alla pesante meromiosina ATPasi, le proprietà di fluorescenza di N3ph-ADP erano quasi le stesse di quelle di N3ph-ATP in un solvente a bassa polarità, suggerendo che N3ph -L'ADP era legato all'area idrofoba sulla pesante meromiosina ATPasi.
Inattivazione di Streptomyces subtilisina inibitoria mediante modificazioni chimiche.1. Si trova l'attività inibitoria di un inibitore della proteasi alcalina, (Streptomyces subtilisina inibitore) verso la subtilisina a diminuire per fotoossidazione sensibilizzato dal blu di metilene con una chiara dipendenza dal pH, il cui punto medio è circa 6,0 2. Le analisi degli aminoacidi dell'inibitore della subtilisina dello Streptomyces fotoossidato indicano che uno dei due residui istidilici e i tre residui metionilici sono distrutti, in concomitanza con 3. In accordo con questa osservazione, una delle risonanze magnetiche nucleari chiaramente risolte dai protoni C2 dei due residui istidilici viene selettivamente diminuita. Questo residuo istidilico, sensibile alla fotoossidazione e dando un picco di risonanza magnetica protonica a campo inferiore, è assegnato a His-106 dalle analisi dei peptidi 4. Anche la modifica indipendente dei residui di metionile mediante una reazione con H2O2 o Cl2 decr facilita l'attività inibitoria di Streptomyces subtilisina inibitore. 5. La modifica dei residui lisile, tirosile e triptofanile da parte del diazonio-1-H-tetrazolo non porta alla perdita dell'attività inibitoria. 6. I risultati di cui sopra indicano che uno o più residui di metionile sono essenziali per l'attività inibitoria dell'inibitore di Streptomyces subtilisina, mentre i residui di lisile, tirosile e triptofanile non sono essenziali per l'attività inibitoria. Anche la modifica di His-106 è fortemente correlata alla perdita di attività, sebbene non sia stata dimostrata la sua distinta partecipazione al meccanismo di inattivazione.
Controllo della fissazione dell'azoto simbiotico in Rhizobia. Regolazione dell'assimilazione di NH4+.Questa comunicazione riguarda studi fisiologici, biochimici e genetici sulla regolazione di l'assimilazione dell'ammonio (NH4+) da parte dei Rhizobia (batteri noduli radicali) che infettano le leguminose Le principali conclusioni sono (i) studi fisiologici mostrano che i Rhizobia sono in grado di assimilare NH4+ per la crescita solo se integrati con determinate fonti di azoto organico (ad esempio, L-aspartato , L-leucina, L-serina). L'aggiunta di appena 2 mug/ml di L-aspartato ha sostenuto la crescita su NH4+ come fonte di azoto. Al contrario, l'aggiunta di glutammato in combinazione con l'utilizzo di NH4+ bloccato da NH4+; (ii) biochimica analisi mostrano che l'attività del glutammato sintasi (NADP- e NAD-linked) è sempre presente nelle cellule in grado di assimilare NH4+, anche le cellule senza attività del glutammato sintasi sono risultate incapaci di utilizzare NH4+. I livelli di glutammato sintasi sono stati osservati a f fortunatamente a seconda della fonte di azoto disponibile e dello stadio di crescita della coltura; (iii) sono stati selezionati mutanti in cui l'assimilazione di NH4+ non è più soggetta ad inibizione (repressione. ) da parte del glutammato. I livelli di attività del glutammato sintasi (legata al NADP) (in presenza di glutammato) mostrano un aumento di circa due volte rispetto al livello nel ceppo genitore. I mutanti non richiedono più l'integrazione con piccole quantità di azoto organico per la crescita in terreno contenente azoto inorganico (ad es. NH4+ o NO3-); (iv) questi risultati sono discussi in relazione al modello di lavoro della fissazione dell'azoto simbiotico recentemente proposto (O\'Gara e Shanmugam (1976), Biochim. Biophys. Acta 437, 313--321).
Fotoinattivazione della fotofosforilazione e dell'ATPasi scura nei cromatofori di Rhodospirillum rubrum.Preilluminazione dei cromatofori di Rhodospirillum rubrum con una forte luce rossa lontana in presenza di metosolfato di fenazina in condizioni di non fosforilazione si traduce in un'inattivazione selettiva e irreversibile (tipicamente circa il 70%) della fotofosforilazione e dell'ATPasi scura stimolata da disaccoppiatore. Il corso temporale della fotoinattivazione è simile alla cinetica di assorbimento del protone indotta dalla luce in l'assenza di ADP. Solo poca fotoinattivazione si verifica quando è presente il disaccoppiatore carbonil cianuro m-clorofenil idrazone o quando il metosolfato di fenazina è assente durante la preilluminazione, indicando che la reazione avviene solo quando la membrana è eccitata. Le condizioni di fosforilazione offrono una protezione praticamente completa contro la fotoinattivazione Fosfati inorganici, Mg2+ o ADP non forniscono una protezione significativa contro la fotoinattivazione, né l'ATP. La dipendenza dal pH della/e reazione/i che porta alla fotoinattivazione può indicare che una reazione parziale del processo di fotofosforilazione (forse solo un cambiamento conformazionale del fattore di accoppiamento) precede la fotoinattivazione.
Studi sull'attività della ferrochelatasi di mitocondri isolati di fegato di ratto con particolare riferimento all'effetto dei substrati ossidabili e della concentrazione di ossigeno.L'attività della ferrochelatasi mitocondriale è stata studiato in mitocondri accoppiati di fegato di ratto utilizzando deuteroporfirina IX (incorporata in liposomi di lecitina) e Fe(III) o Co(II) come substrati 1. È stato scoperto che i mitocondri che respirano catalizzano l'inserimento di Fe(II) e Co(II) ) in deuteroporfirina. Quando Fe(III) è stato utilizzato come donatore di metallo, la reazione ha rivelato un'esigenza assoluta di una fornitura di equivalenti riducenti supportati dalla catena respiratoria. 2. È stata trovata una stretta correlazione tra la scomparsa della porfirina e la formazione di eme che consente una stima accurata del coefficiente di estinzione per la conversione da porfirina a eme. Il valore deltae (mM-1 - cm-1) = 3,5 per la coppia di lunghezze d'onda 498 509 nm, è notevolmente inferiore a quanto riportato in precedenza. 3. La velocità massima di sintesi del deuteroema è risultata essere di ca. 1 nM - min-1 - mg-1 di proteina a 37 gradi C, PH 7,4 e concentrazioni di substrato ottimali, ovvero 75 muM Fe(III) e 50 muM deuteroporfirina. 4. A condizione che i mitocondri siano integrati con un substrato ossidabile, la presenza di ossigeno non ha alcun effetto sulla velocità di sintesi del deuteroema.
Cambiamenti dipendenti dalla luce della concentrazione di Mg2+ nello stroma in relazione alla dipendenza da Mg2+ della fissazione di CO2 nei cloroplasti intatti.(1) Light- le variazioni dipendenti del contenuto di Mg2+ delle membrane tilacoidi sono state misurate a pH 8,0 e confrontate con misurazioni precedenti a pH 6,6 In un mezzo NaCl e KCl, la diminuzione dipendente dalla luce del contenuto di Mg2+ delle membrane tilacoidi a pH 8,0 è risultata essere 23 nmol Mg2+ per mg di clorofilla, mentre in un mezzo di sorbitolo è 83 nmol Mg2+ per mg di clorofilla (2) È stato rilevato un aumento dipendente dalla luce nel contenuto di Mg2+ dello stroma quando i cloroplasti sono stati sottoposti a shock osmotico, pari a 26 nmol/ mg di clorofilla Inoltre, è stato osservato un rapido e reversibile efflusso fotodipendente di Mg2+ in cloroplasti intatti quando è stato aggiunto il catione bivalente ionoforo A 23 187, indicando un trasferimento fotodipendente di circa 60 nmol di Mg2+ per mg di clorofilla dal tilacoide membrane allo str oma. (3) La fissazione della CO2, ma non la riduzione del fosfoglicerato, potrebbe essere completamente inibita quando A 23 187 è stato aggiunto a cloroplasti intatti in assenza di Mg2+ esterno. Se Mg2+ è stato poi aggiunto al terreno, la fissazione della CO2 è stata ripristinata. La metà del restauro massimo è stata ottenuta con circa 0,2 mM Mg2+, che è calcolato per riflettere una concentrazione di Mg2+ nello stroma di 1,2 mM. L'ulteriore aggiunta di Ca2+ inibisce fortemente la fissazione della CO2. (4) I risultati suggeriscono che l'illuminazione dei cloroplasti intatti provoca un aumento della concentrazione di Mg2+ di 1-3 mM nello stroma. Rispetto al contenuto totale di Mg2+ dei cloroplasti, questo aumento è molto basso, ma sembra essere abbastanza alto da avere una possibile funzione nella regolazione della luce della fissazione della CO2.
Trasduzione energetica in batteri fotosintetici. XI. Ulteriore risoluzione dei citocromi di tipo b e natura dell'ossidasi co-sensibile presente nella catena respiratoria di Rhodopseudomonas capsulata.1. In membrane preparate da cellule scure di Rhodopseudomonas capsulata, cinque citocromi di tipo b (E\'0 a pH 7,0 +413+/-5, +270+/-5, +148+/-5, +56+/-5 e -32+/-5 mV) possono essere rilevati mediante titolazioni redox a diversi valori di pH. I potenziali del punto medio di solo tre di questi citocromi (b148, b56 e b-32) variano in funzione di pH con pendenza di 30 mV per unità di pH 2. In presenza di una miscela CO/N2 l'E\'0 apparente del citocromo b270 si sposta nettamente verso potenziali più elevati (+355 mV); è evidente anche uno spostamento simile ma meno pronunciato per il citocromo b150. L'effetto della CO sul potenziale del punto medio del citocromo b270 è assente nel mutante con deficit di respirazione M6 che possiede una lesione specifica nel segmento CO-sensibile o f la catena respiratoria ramificata presente nel ceppo selvatico. 3. Le preparazioni di sferoplasti con digestione con lisozima portano al rilascio di una grande quantità di citocromo c2 e praticamente di tutto il citocromo cc\'. Questi preparati mostrano una catena respiratoria compromessa nella via degli elettroni sensibile a basse concentrazioni di KCN, in accordo con il ruolo proposto del citocromo c2 in questo ramo; al contrario, l'attività del ramo CO-sensibile rimane inalterata, indicando che né il citocromo c2 né il citocromo legante la CO cc\' sono coinvolti in questa via. 4. Le membrane preparate da sferoplasti possiedono ancora un pigmento legante il CO caratterizzato da massimi a 420,5, 543 e 574 nm e minimi a 431, 560 nm negli spettri di differenza C0 e con una banda alfa a 562,5 nm negli spettri di differenza ridotti meno ossidati. Questo citocromo legato alla membrana, che coincide con il citocromo b270, può essere classificato come un tipico citocromo "0" e considerato l'ossidasi CO-sensibile alternativa.
Caratterizzazione della reazione di ricombinazione della rodopsina.La cinetica della ricombinazione dell'11-cis-retinico con i segmenti esterni dell'asta sbiancati e la rodopsina solubilizzata con colato di sodio hanno A pH neutro, è stato scoperto che i segmenti esterni dei bastoncelli sbiancati in presenza di un eccesso di retina 11-cis seguono una cinetica di pseudo-primo ordine. I risultati suggeriscono la formazione di secondo ordine di un composto di addizione intermedio seguito da una fase di disidratazione del primo ordine per formare un legame aldiminico protonato. Inoltre, a valori di pH superiori a 7,5 o inferiori a 6,5 la cinetica di ricombinazione è complessa, indicando la formazione di una specie molecolare inattiva nella ricombinazione che è in equilibrio con la forma attiva di in base alle costanti di velocità osservate in funzione del pH, viene presentato uno schema per descrivere la reazione di ricombinazione nei segmenti esterni dei bastoncini sbiancati. La cinetica di ricombinazione dell'opsina solubilizzata con colato di sodio è stata anche analizzato. In termini di formazione di un composto di addizione intermedio e successiva disidratazione, i valori per le singole costanti di velocità sia per i segmenti esterni dell'asta sbiancati che per l'opsina solubilizzata con colato sono risultati molto favorevoli. Questi risultati dimostrano che il sodio colato (2 mg/ml) mantiene l'opsina in una conformazione molto simile a quella della membrana del segmento esterno dell'asta e suggeriscono che il complesso colato-opsina è un eccellente sistema modello per studi sulle interazioni opsina-membrana".
Analogi contenenti fluoro di intermedi nella via dello Shikimate.L'analogo del fosfoenolpiruvato (Z)-fosfoenol-3-fluoropiruvato è un substrato per la fenilalanina- inibibile 3-desossi-D-arabino-eptulosonico acido-7-fosfato sintasi da Escherichia coli In presenza di un eccesso di eritrosi 4-fosfato, sono stati osservati valori KM apparenti di 65 e 38 muM per fosfoenol-3-fluoropiruvato e fosfoenolpiruvato, rispettivamente Poiché il Vmax apparente per il fosfoenolo-3-fluoropiruvato è solo l'1,17% di quello per il fosfoenolpiruvato, si può studiare il primo come inibitore della 3-desossi-arabino-eptulosonico acido-7-fosfato sintasi. fluoropiruvato per essere competitivo rispetto al fosfoenolpiruvato. Sono stati ottenuti due valori di Ki distinguibili di 8 e 48 muM. Il prodotto (3S)-3-deossi-3-fluoro-arabino-eptulosonico acido 7-fosfato è stato purificato, caratterizzato e mostrato agire come substrato per 5-deidroqu inato sintasi. L'acido 3-desossi-3-fluoro-arabino-eptulosonico 7-fosfato, contrariamente all'acido 3-desossi-arabino-eptulosonico 7-fosfato reagisce lentamente o per niente con i reagenti specifici per gli zuccheri 2-cheto-3-desossi ed è relativamente resistente alla scissione ossidativa da periodato di sodio. Il prodotto atteso dell'ossidazione del periodato, 3-fluoro-3-formilpiruvato, non può essere rilevato. Questa osservazione è stata chiarita da studi con composti modello.