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Ipersensibilità all'istamina nei topi indotta da Bordetella pertussis o blocco farmacologico beta-adrenergico. Effetti di farmaci adrenergici, colinergici e altri.Gli effetti della prostaglandina E1 , E2, F2alpha (PGE2 PGF2alpha), isoproterenolo, epinefrina, norepinefrina, salbutamolo, practolol, atropina, aminofillina e corticosterone sull'ipersensibilità all'anafilassi, all'istamina e alla serotonina in topi trattati con Bordetella pertussis e trattati con propranololo. I topi HLA-SW (ICR), 27-29 gm, sono stati iniettati per via endovenosa con il vaccino contro la pertosse 4 giorni prima del challenge con antigene, istamina o serotonina. In alternativa, invece del vaccino contro la pertosse, è stato iniettato propranololo per via intraperitoneale 45 minuti prima del challenge con istamina. sono stati somministrati per via intraperitoneale 15 minuti prima del challenge. PGE1 e PGE2 in un intervallo ristretto compreso tra 10 e 100 tazze e l'epinefrina a 100 tazze hanno protetto sia la pertosse che il propranololo-trea topi ted. L'isoproterenolo (25 tazze) e l'aminofillina (800 tazze) proteggevano i topi beta-bloccati, ma non proteggevano i topi trattati con pertosse anche con dosi molto elevate (rispettivamente 1.000 e 3.2000 tazze), sebbene lo facesse il salbutamolo (500 tazze). PGF2alpha, noradrenalina e atropina non erano affatto protettivi. Practolol, un beta 1-bloccante, somministrato per via intraperitoneale 30 minuti prima dell'istamina, non ha sensibilizzato i topi normali né ha modificato l'effetto dell'isoproterenolo o del salbutamolo nei topi trattati con pertosse. Il corticosterone 10 mg/kg ha ridotto il numero di decessi per istamina nei topi beta-bloccati, ma non nei topi trattati con pertosse. L'effetto protettivo è discusso in relazione ai probabili effetti dei farmaci sui livelli intracellulari di adenosina monofosfato ciclico (cAMP).
Confronto delle destranasi per il loro possibile utilizzo nell'eliminazione della placca dentale.Le destranasi prodotte da P lilacinum NRRL 896 e NRRL 895 e da P funiculosum NRRL 1768 sono state studiati per la loro possibile incorporazione in un sistema di eliminazione della placca dentale. Sono state confrontate le seguenti proprietà degli enzimi: effetto del livello di pH sull'attività e sulla stabilità degli enzimi sul lato acido dell'intervallo di pH;peso molecolare;affinità a Sephadex G-25 che fungeva da modello per il destrano insolubile nelle placche e l'entità dell'azione idrolitica sui destrani contenenti legami alfa-1,3, alfa-1,4 e alfa-1,6 in varie proporzioni. NRRL 1768 ha certamente i suoi limiti come enzima di degradazione della placca, ad esempio, diminuita attività a un livello di pH elevato e mancanza di attività sui legami alfa-1, 3. Tuttavia, dai nostri studi e da un'indagine della letteratura pertinente con rispetto alle suddette proprietà in altri dex transasi, l'enzima di P funiculosum NRRL 1768 emerge come una scelta adatta per l'incorporazione come destranasi, possibilmente insieme ad altri enzimi, in un sistema enzimatico di eliminazione della placca dentale.
Il sistema particolato che forma superossido dai neutrofili umani. Proprietà del sistema e ulteriori prove a sostegno della sua partecipazione al burst respiratorio.Sono stati condotti studi per caratterizzare il sistema di formazione di O2 particolato precedentemente riportato dai neutrofili umani. Degli otto agenti riducenti esaminati, tra cui glutatione, acido ascorbico e intermedi delle vie di shunt glicolitico ed esoso monofosfato, solo i nucleotidi piridinici potrebbero fungere da donatori di elettroni. A 0,1 mM nucleotide piridinico, la produzione di O2 era relativamente indipendente dal pH. Il Km per NADH era di circa 0,7 mM indipendentemente dal pH, mentre con NADPH il Km variava da 0,02 mM a pH 6,0 a 0,3 mM a pH 7,5. Il rapporto molare di NADPH ossidato a L'O2- prodotto era coerente con la reazione: NADPH + 2 O2- porta a NADP+ H+; il prodotto nucleotide è stato dimostrato enzimaticamente essere NADP La produzione di O2- non è stata inibita da CN-, Na-, EDTA o 1,10-fenantrolina. La produzione di O2 particolato rappresentava il 35% dell'ossigeno assorbito durante il burst respiratorio da un numero equivalente di neutrofili intatti. È stata osservata una produzione di O2 notevolmente ridotta con particelle preparate da cellule ottenute da tre pazienti con malattia granulomatosa cronica, con NADPH 2,5 mM come donatore di elettroni. Con 5,0 mM NADH osservazioni simili sono state fatte con particelle di due dei pazienti, ma con questo nucleotide, la produzione di O2 è stata solo leggermente ridotta nel terzo caso. Le prove disponibili suggeriscono che questo sistema particolato che forma O2 è il responsabile dell'esplosione respiratoria nei neutrofili attivati. Viene discussa la relazione tra questo sistema e altri sistemi che formano O2 trovati nei neutrofili umani.
Metalloproteasi della cartilagine articolare umana che digeriscono i proteoglicani della cartilagine a pH neutro e acido.Estratti di cartilagine articolare umana contengono proteasi in grado di degradare il componente proteoglicano di matrice cartilaginea a pH neutro e acido. Questi enzimi sono stati parzialmente purificati mediante cromatografia a scambio ionico e caratterizzati da elettroforesi su disco, modelli di inibizione e azione del proteoglicano. Vengono descritte tre distinte metalloproteasi. Una proteasi neutra che digerisce in modo ottimale la subunità del proteoglicano a pH 7,25 ha stato purificato fino a 900 volte. È fortemente inibito da o-fenantrolina, alfa-2-macroglobulina e albume d'uovo e, in misura minore, da D-penicillamina e EDTA. L'inibizione da agenti chelanti è invertita da cobalto, zinco, e ioni ferrosi. Due metalloproteasi acide, distinte dalle catespin B1, D e F, digeriscono la subunità proteoglicana a pH 4,5 e 5,5. Entrambe sono inibite dalla o-fenantrolina e l'attività viene ripristinata d da cobalto, zinco o ioni ferrosi. Con la microscopia elettronica, è stato scoperto che le fette di cartilagine erano impoverite del proteoglicano della matrice colorante di rutenio dopo l'incubazione in vitro con un estratto di cartilagine parzialmente purificato a pH neutro. La sedimentazione, la cromatografia su gel, l'elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato e gli studi di immunodiffusione di digeriti della frazione di proteoglicani isolata prodotta dall'estratto di cartilagine parzialmente purificato a pH neutro e acido hanno confermato che gli enzimi della cartilagine agiscono solo sul componente proteico della subunità proteoglicano, producendo frammenti con 5-12 catene di condroitin solfato. Le proteine di collegamento non sono state digerite.
Le condizioni ottimali per l'eluizione dell'antigene dell'epatite B dopo l'assorbimento su silice colloidale.L'antigene di superficie dell'epatite B (HBSAg) adsorbito dai sieri su silice colloidale potrebbe essere completamente eluito mediante l'uso di sodio desossicolato allo 0,25% in borace 0,01 M, pH 9,3, a 56 gradi C. L'HBSAg recuperato nell'eluato rappresentava il 100% di quello presente nel siero originale ed era contaminato solo da tracce di siero proteine (in quantità decrescenti: beta-lipoproteina, immunoglobulina G, albumina). Questa fase preliminare facilita notevolmente la purificazione di grandi quantità di HBSAg e fornisce piccoli volumi di materiale altamente concentrato per la successiva purificazione mediante centrifugazione in gradiente di densità.
Agglutinazione al lattice nella diagnosi di infezione da pneumococco.Un metodo di agglutinazione al lattice (LA) per il rilevamento di antigeni pneumococcici è stato valutato e confrontato con la controimmunoelettroforesi (CIE LA era da 2 a 10 volte più sensibile della CIE per il rilevamento di polisaccaridi capsulari purificati in terreni definiti, ma solo quando una reazione di agglutinazione 1+ o 2+ veniva interpretata come positiva. LA era molto meno sensibile della CIE con campioni clinici. In 50 casi di polmonite pneumococcica, l'antigene è stato rilevato nel siero quasi due volte più spesso con CIE (40%) rispetto a LA (22%). LA era positivo in sei casi di polmonite dove CIE era negativo; tuttavia, in tre di questi casi, l'antigene è stato rilevato solo nei sieri non diluiti, il che ha sollevato qualche dubbio sulla specificità del risultato. Con 18 campioni di liquido cerebrospinale (CSF) da 11 pazienti con meningite pneumococcica, il test CIE è risultato positivo più frequentemente (14 campioni) di quanto non fosse LA (11 campioni) le). Inoltre, l'antigene è stato rilevato nel liquido cerebrospinale da LA in un solo paziente aggiuntivo rispetto a quello positivo dal solo CIE. Si è verificata una reazione LA falsamente positiva tra 45 campioni di liquido cerebrospinale da pazienti senza infezione da pneumococco. Sebbene LA sia un metodo meno complicato del CIE, non è un test sensibile per gli antigeni pneumococcici e sarebbe di scarso valore come metodo diagnostico di routine.
Effetto del vetro sulla stabilità pH-dipendente del vaccino contro il tifo.I vaccini ottenuti dal ceppo Ty-2 di Salmonella typhosa sono stati testati periodicamente per la stabilità di pH e della potenza Le colture trattate con acetone preparate in soluzioni saline tamponate hanno mantenuto la potenza oltre i 30 mesi di conservazione a 0-5 C. Vaccini simili in soluzioni saline non tamponate hanno perso potenza in coincidenza con l'aumento dell'alcalinità Vaccini confezionati in vetro borosilicato della Farmacopea degli Stati Uniti le fiale hanno mantenuto la potenza e la stabilità del pH, mentre quelle nelle fiale di vetro soda-calcico della farmacopea degli Stati Uniti di tipo III erano meno stabili.
Promotore della germinazione delle spore di Dictyostelium discoideum escreto da Aerobacter aerogenes.Il mezzo nutritivo in cui è stato coltivato Aerobacter aerogenes, contiene un promotore della germinazione delle spore (SGP) per la muffa melmosa cellulare Dictyostelium discoideum. SGP può provocare la germinazione sincrona delle spore in breve tempo e innesca il processo di germinazione in pochi minuti. La capacità di promuovere la germinazione di SGP diminuisce quando viene a contatto con un numero crescente di spore. Quando le spore attivati da SGP sono conservati a 4 gradi C, ritornano gradualmente allo stato dormiente. SGP è relativamente stabile al calore, ma è instabile a pH superiore a 10 o inferiore a 3.
Sindrome aortitica da morbo di Takayasu\'. Linee guida per l'indicazione chirurgica.Sette casi di sindrome aortitica sono stati trattati chirurgicamente con buoni risultati: Addominale aneurisma aortico 1, coartazione atipica dell'aorta 2, insufficienza valvolare aortica 2, ipertensione renovascolare 2. Diverse attenzioni sono state prestate come segue: 1. L'operazione deve essere evitata durante la fase acuta dell'aortite 2. Il materiale da innesto sintetico dovrebbe essere evitato se possibile Autogeno vena è consigliabile per la ricostruzione dell'arteria di piccole dimensioni. 3. L'intervento chirurgico deve essere eseguito prima della perdita della funzione dell'organo. 4. Vale la pena considerare l'ematologo per prevenire l'ipercoagulopatia dovuta all'aortite.
Trattamento chirurgico dell'aneurisma dissecante dell'aorta. Vent'anni\' di esperienza.Sono stati riportati i risultati precoci e tardivi di 40 casi di aneurisma aortico dissecante. 1. Il risultato di 6 casi con dissezione acuta è stato il seguente: due dei tre pazienti chirurgici sono sopravvissuti, mentre tutti e tre con la terapia farmacologica sono morti. Il trattamento chirurgico è preferito per la dissezione dell'aorta ascendente o dell'arco. Sono stati discussi alcuni problemi della morbilità postoperatoria: 2. Sia trattata medicamente che chirurgicamente, la dissezione cronica dell'aorta discendente o dell'aorta addominale aveva una prognosi migliore rispetto a quella dell'altro sito. La dissezione cronica senza ingrossamento sacculare aveva una prognosi buona. Ci si attende una sopravvivenza di oltre 10 anni. L'operatore il risultato per la dissezione aortica cronica è stato scarso, specialmente nel caso dell'aorta ascendente e dell'arco coinvolti. Per l'ingrandimento sacculare del metodo di avvolgimento dello pseudolume con o senza la resezione potrebbe essere il pref procedura possibile per evitare una rottura precoce.
Clorurazione del sito attivo della D-amminoacido ossidasi da parte della N-cloro-D-leucina.La N-cloro-D-leucina è un inibitore irreversibile o D-amminoacido ossidasi su una scala temporale di secondi Studi con N-[36C]cloro-D-leucina, N-cloro-D-[1-14C]leucina e N-cloro-D-[4,5- 3H]leucina mostrano che l'enzima modificato è stato clorurato in un sito, o siti, sull'apoenzima. Le misurazioni di 36Cl concordano con le titolazioni dell'attività catalitica nel mostrare che due equivalenti di cloro sono incorporati per flavina del sito attivo. Cineticamente, l'interazione con N -cloro-D-leucina si comporta in modo coerente con clorurazioni consecutive di un residuo amminoacidico, o residui, nella regione del sito attivo da parte delle prime 2 molecole di N-cloro-D-leucina che devono essere processate dall'enzima. L'effetto della clorazione dell'enzima sui parametri di stato stazionario per l'ossidazione della D-alanina è interamente spiegato da una singola perturbazione, vale a dire una riduzione di 1000 volte nella specifica c tasso di riduzione della flavina misurato direttamente mediante tecniche di reazione rapida.
Stechiometria della reazione tra perossidasi di rafano e p-cresolo.Su un ampio intervallo di pH il composto I di perossidasi di rafano può essere ridotto quantitativamente tramite il composto II all'enzima nativo di solo 1 equivalente molare di p-cresolo. Poiché sono necessari 2 equivalenti molari di elettroni per il singolo turnover del ciclo enzimatico, il p-cresolo si comporta come un riducente di 2 elettroni. Con p-cresolo e composto I in allo stato transitorio si ottengono un composto II in rapporto 1:1 e radicali p-metilfenossi. Il composto II viene quindi ridotto all'enzima nativo. Una possibile spiegazione per la facile riduzione del composto II comporta la reazione con il prodotto di dimerizzazione di questi radicali, 1 /2 equivalente molare di 2,2\'-diidrossi-5,5\'-dimetilbifenile. Se è presente solo 1/2 equivalente molare di p-cresolo, allora ad alto pH la riduzione si ferma al composto II. Il principale stato stazionario prodotto di ossidazione della perossidasi di p-cresolo (con p-cresolo in grande eccesso compa rosso alla concentrazione dell'enzima) è il chetone di Pummerer. Il chetone di Pummerer è reattivo solo a valori di pH superiori a circa 9, dove si possono formare quantità significative di enolo tramite l'anione enolato. Pertanto, in soluzione alcalina è reattivo con il composto I, ma non con il composto II, che viene convertito in una forma basica non reattiva. Questi risultati indicano che il chetone di Pummerer non può essere il prodotto radicale libero intermedio responsabile della riduzione del composto II negli esperimenti di turnover singolo. Si ipotizza che il chetone di Pummerer si formi solo allo stato stazionario dalla reazione del radicale p-metilfenossi con un eccesso di p-cresolo.
Ossidazione del p-cresolo da parte del composto I di perossidasi di rafanoLe costanti di velocità per la reazione tra il composto I di perossidasi di rafano e p-cresolo sono state determinate a diversi valori di pH tra 2,98 e 10,81. Queste costanti di velocità sono state utilizzate per costruire un log (velocità) rispetto al profilo del pH da cui si vede facilmente che la forma più reattiva dell'enzima è la sua forma più basica all'interno di questo intervallo di pH in modo che la base catalisi sta avvenendo. Alla velocità massima si ottiene una costante di velocità del secondo ordine di (5,1 +/- 0,3) x 10 (-7) M-1 s-1 a 25 gradi. L'energia di attivazione della reazione alla velocità massima è stata determinato da un diagramma di Arrhenius essere 5,0 +/- 0,5 kcal/mol. Viene presentata la prova di un'eccezione al ciclo enzimatico generalmente accettato della perossidasi di rafano. Mezzo equivalente molare di p-cresolo può convertire quantitativamente il composto I nel composto II a pH elevato, mentre di solito questo passaggio richiede 1 equivalente molare di riducente l'oichiometria di questa reazione è dipendente dal pH.
Evidenza da 13C NMR per la protonazione di carbamil-P e N-(fosfonacetil)-L-aspartato nel sito attivo dell'aspartato transcarbamilasi.Nucleare La risonanza magnetica è stata utilizzata per studiare il legame del [13C]carbamil-P (90% arricchito) alla subunità catalitica dell'aspartato transcarbamilasi di Escherichia coli. Dopo la formazione di un complesso binario, si verifica un piccolo cambiamento nello spostamento chimico del carbonio carbonilico risonanza, 2 Hz upfield a pH 7,0, indicando che gli ambienti del gruppo carbonilico nel sito attivo e nell'acqua sono simili Quando il succinato, un analogo dell'L-aspartato, viene aggiunto per formare un complesso ternario, c'è un ampio downfield cambiamento nello spostamento chimico per carbamil-P, coerente con l'interazione tra il gruppo carbonile e un donatore di protoni dell'enzima. Il cambiamento potrebbe anche essere causato da una corrente ad anello proveniente da un residuo di amminoacido aromatico vicino. Dalla dipendenza dal pH di questo cambiamento a valle e dagli effetti degli analoghi dell'L-aspartato oltre al succinato, si propone che la forma dell'enzima coinvolto sia un complesso ternario isomerizzato, precedentemente osservato in studi di salto di temperatura e NMR di protoni. Il cambio di downfield allo spostamento chimico per il carbamil-P legato al complesso isomerizzato è 17,7 +/- 1,0 Hz. Utilizzando questo valore, è stata valutata quantitativamente la capacità relativa di altri acidi bicarbossilici a quattro atomi di carbonio di formare complessi ternari isomerizzati con l'enzima e il carbamil-P. Il picco 13C per l'analogo dello stato di transizione N-(fosfonacetil)-L-aspartato (PALA), arricchito al 90% in modo specifico nel gruppo carbonilico ammidico, viene spostato di 20 Hz verso il basso del picco per il PALA libero dopo il legame alla subunità catalitica a pH 7.0. Al contrario, il picco per [1-13C] fosfonaceatmide si sposta verso l'alto di circa 6 Hz dopo il legame. Poiché PALA induce l'isomerizzazione dell'enzima e la fosfonacetammide no, questi dati forniscono ulteriori prove coerenti con la protonazione del gruppo carbonilico solo dopo l'isomerizzazione. Sono stati determinati i gradi di protonazione degli acidi forti dei gruppi carbonilici di PALA, fosfonacetammide e uretano (un modello per il carbamil-P labile), così come gli spostamenti chimici per questi composti a protonazione completa. Da questi dati si calcola che i gruppi ammidico carbonilici di carbamil-P e PALA potrebbero essere protonati ad un massimo di circa il 20% nei complessi isomerizzati a pH 7,0. Il cambiamento di conformazione del complesso enzima-carbamil-P dopo il legame con L-aspartato, precedentemente proposto per aiutare la catalisi comprimendo i due substrati insieme nel sito attivo, può essere accompagnato dalla polarizzazione del legame C=O, rendendolo normalmente non reattivo raggruppare un elettrofilo molto migliore. Anche un analogo cheto di PALA, il 4,5-dicarbossi-2-ketopentil fosfonato, si lega strettamente alla subunità catalitica e induce un cambiamento conformazionale molto simile, mentre un analogo dell'alcol, il 4,5-dicarbossi-2-idrossipentil fosfonato, non lo fa. si legano strettamente, indicando l'importanza critica di un gruppo carbonilico senza ostacoli con geometria trigonale.
Aspartato transcarbamilasi di Escherichia coli. Eterogeneità dei siti di legame per carbamil fosfato e analoghi fluorurati di carbamil fosfato.Alcune preparazioni di entrambe le aspartato transcarbamilasi native da Escherichia coli e subunità catalitica hanno meno siti di legame stretto per oligomero per carbamil-P rispetto al numero di catene peptidiche catalitiche. Al contrario, il numero di siti per l'inibitore di legame stretto N-(fosfonacetil)-L-aspartato è uguale al numero di catene catalitiche in ogni caso. Il legame del carbamil-P labile è stato determinato mediante gel filtrazione rapida, con conversione in carbammil-L-aspartato stabile durante la raccolta. Enzima nativo (sei catene catalitiche) ottenuto da cellule cresciute nelle condizioni di JC Gerhart e H. Holoubek (J. Biol. Chem. (1967) 242, 2886-2892) ha 5,4 siti stretti per carbamil-P a pH 8,0 (KD = 9,9 muM), mentre l'enzima nativo da cellule cresciute con concentrazioni più elevate di glucosio, uracile e h l'istidina (per produrre più enzima per unità di volume di coltura) ha solo 1,9 siti stretti a pH 8,0 (KD = 4,6 muM) e solo 2,3 siti stretti a pH 7,0 (KD = 2,6 muM). A pH 8,0, la subunità catalitica (tre catene catalitiche) ottenuta dall'ex enzima nativo ha 2,2 siti stretti per carbamil-P (KD = 2,4 muM) e il numero di siti è 2,3 in presenza di 35 mM succinato, mentre la subunità catalitica ottenuto da quest'ultimo enzima nativo ha 1,8 siti stretti (KD = 3,6 muM) in assenza di succinato e 2,3 siti stretti in sua presenza. Il numero di siti di legame stretto è anche inferiore al numero di catene peptidiche subunità negli esperimenti di risonanza magnetica nucleare 19F eseguiti con subunità catalitica e due analoghi fluorurati di carbamil-P a concentrazioni comparabili di analoghi e siti attivi. Viene proposto un modello in cui la rimozione incompleta della formilmetionina dai terminali NH2 dell'enzima in condizioni di estrema depressione influenza l'affinità per i ligandi.
La NADH deidrogenasi della catena respiratoria di Escherichia coli. II. Cinetica dell'enzima purificato e effetti degli anticorpi suscitati contro di esso sull'enzima libero e legato alla membrana.", La catena respiratoria purificata NADH deidrogenasi di Escherichia coli ossida NADH con diclorofenolindofenolo (DCIP). ferricianuro o menadione come accettori di elettroni, con valori per NADH sono simili con i tre accettori di elettroni (circa 50 muM). Il purificato l'enzima non contiene flavina e ha un fabbisogno assoluto di FAD, con valori di Km intorno a 4 muM. Il pH ottimale dell'enzima risulta essere compreso tra 6,5 e 7, l'optimum è difficile da stabilire a causa della riduzione non enzimatica del DCIP ai valori di pH inferiori Il cianuro di potassio stimola l'attività della DCIP reduttasi circa 2 volte, ma non ha alcun effetto sulla ferricianuro reduttasi L'enzima mostra una cinetica iperbolica rispetto alla concentrazione di NADH sia nel ferricianuro che nel DCIP red uctasi, ma si osserva in modo cooperativo nella reazione della menadione reduttasi. NAD+ è un efficace inibitore competitivo della reazione (Ki congruente a 20 muM); in presenza di NAD+, la curva di saturazione del NADH diventa cooperativa, anche nel dosaggio della DCIP reduttasi. Molti nucleotidi contenenti adenina sono inibitori competitivi dell'enzima. I valori di Ki apparenti per questi nucleotidi come inibitori dell'enzima purificato, la NADH deidrogenasi legata alla membrana e la NADH ossidasi sono equivalenti. Un esame degli effetti inibitori di una serie di nucleotidi di adenina suggerisce che gli inibitori agiscono come analoghi del NAD+, che è il vero inibitore fisiologico. I risultati suggeriscono che l'enzima in situ è sempre parzialmente inibito dai livelli di NAD- nella cellula di E coli, e quindi si comporta in modo cooperativo alle variazioni del rapporto NAD+/NADH. È stato suscitato un anticorpo contro la NADH deidrogenasi purificata. L'immunodiffusione e l'immunoelettroforesi incrociata mostrano che l'anticorpo è diretto principalmente contro la NADH deidrogenasi, con una certa attività contro contaminanti minori nella preparazione purificata. L'anticorpo inibisce l'attività della NADH deidrogenasi del 50% a livelli di saturazione. Quando questa preparazione di anticorpi viene utilizzata per esaminare preparazioni di membrane solubilizzate, si trovano due principali immunoprecipitati. È stata osservata un'inibizione parallela delle attività della NADH deidrogenasi e della NADH ossidasi legate alla membrana, a sostegno dell'ipotesi che l'enzima purificato sia effettivamente un componente della via della NADH ossidasi dipendente dalla catena respiratoria.
Steroide 5alfa-reduttasi in colture di fibroblasti umani. Evidenze biochimiche e genetiche per due distinte attività enzimatiche.Varie proprietà della steroide 5alfa-reduttasi sono state esaminati in estratti cell-free di cute e di fibroblasti coltivati da cute genitale e non di soggetti di controllo e di pazienti con diverse forme di pseudoermafroditismo maschile. Quando 20alfa-idrossi-4-[1,2-3H] pregnen-3-one è stato utilizzato come substrato, due attività 5alfa-reduttasi potrebbero essere dimostrate nella pelle intatta e nei fibroblasti in coltura. L'attività principale, precedentemente descritta per microsomi da prepuzio umano ed estratti di fibroblasti di prepuzio in coltura, è caratterizzata da un pH ottimale stretto vicino a 5,5 ed è limitata a fibroblasti derivati dalla cute dei genitali Una seconda attività, non limitata alla sede della biopsia, è stata dimostrata su un range di pH più alto e più ampio (da 7 a 9); tale attività enzimatica si riscontra sia nella cute genitale che non genitale e in fibroblasti coltivati da tutte le regioni cutanee. Mentre esiste un'ampia variabilità nell'attività a pH 5,5 nei fibroblasti della pelle genitale, l'attività a pH 7-9 è simile nei fibroblasti derivati da tutti i siti anatomici. Le due attività mostrano cinetiche diverse rispetto al substrato steroideo e sono anche dissimili nelle loro distribuzioni subcellulari. Altre proprietà, come il fabbisogno di coenzima, la specificità del substrato steroideo e l'instabilità con l'aumento della temperatura, sembrano essere simili.
Studi a raggi X e funzionali delle emoglobine Nancy e Cochin-Port-Royal.Le mutazioni nell'emoglobina Nancy beta145(HC2) Tyr portano ad Asp e l'emoglobina Cochin-Portal-Royal beta146 (HC3) I suoi risultati su Arg coinvolgono residui che si ritiene siano essenziali per la piena espressione dell'azione allosterica nell'emoglobina. Relativamente alla struttura della deossiemoglobina A, il nostro studio a raggi X sulla deossiemoglobina mostra Nancy grave disordine del tetrapeptide COOH-terminale della catena beta e un possibile movimento dell'atomo di ferro beta eme verso il piano dell'anello porfirinico Queste perturbazioni strutturali determinano un'elevata affinità per l'ossigeno, un ridotto effetto Bohr e una mancanza di cooperazione nell'emoglobina Nancy. In presenza di inositolo esafosfato (IHP), la costante di Hill per l'emoglobina Nancy aumenta da 1,1 a 2,0, ma rispetto alla sua azione sull'emoglobina A, l'IHP è molto meno efficace nel ridurre l'affinità all'ossigeno e nell'aumentare l'effetto Bohr dell'emoglobina N anzia. Ciò indica che l'IHP non influenza la R in equilibrio T tanto nell'emoglobina Nancy quanto nell'emoglobina A, e questo probabilmente è dovuto al disordine di His 143beta che è noto per essere parte del sito di legame dell'IHP. È anche noto che l'IHP produce grandi cambiamenti nello spettro di assorbimento della metaemoglobina A, ma scopriamo che non ha alcun effetto sullo spettro della metaemoglobina Nancy. In contrasto con i grandi cambiamenti strutturali nella deossiemoglobina Nancy, la struttura della deossiemoglobina Cochin-Port-Royal differisce dalla deossiemoglobina A solo nella posizione della catena laterale del residuo 146beta. Il ponte salino intrasubunità tra His 146beta e Asp 94beta nella deossiemoglobina A si perde nella deossiemoglobina Cochin-Portal-Royal con lo ione guanidinio di Arg 146beta che galleggia liberamente in soluzione. Questa piccola differenza nella struttura si traduce in un effetto Bohr ridotto, ma non provoca un cambiamento nel coefficiente di Hill, nella risposta al 2,3-difosfoglicerato o nell'affinità dell'ossigeno a pH fisiologico.
Un metodo stereochimico per la rilevazione del trasferimento di fosfato terminale dell'ATP nelle reazioni enzimatiche. Glutammina sintetasi.Un metodo di rimescolamento degli isotopi è descritto per la rilevazione di transienti [ Formazione di Enz:ADP:PX] da [18O]ATP nelle reazioni enzimatiche accoppiate ad ATP. Il metodo utilizza la simmetria torsionale del gruppo appena formato (vedi articolo) nell'ADP. [18O]ATP marcato nell'ossigeno del ponte betagama è stato incubato con enzima e la scissione reversibile del legame PbetaO-Pgamma è stata rilevata dalla comparsa di 18O negli ossigeni beta non ponte del pool di ATP Esperimenti con cervello di pecora ed Escherichia coli glutammina sintetasi mostrano che la scissione dell'ATP dell'ADP legato all'enzima e PX richiede glutammato. Lo scambio catalizzato dall'enzima E. coli con glutammato avviene in assenza di ammoniaca ed è parzialmente inibito dall'aggiunta di NH4Cl, come previsto se lo scambio è nella via meccanicistica per la sintesi della glutammina. I risultati forniscono supporto cinetico ort per un meccanismo in due fasi in cui il trasferimento di fosforile dall'ATP al glutammato precede la reazione con l'ammoniaca.
Identificazione di un residuo di arginina funzionale coinvolto nel legame del coenzima da parte della glutammato deidrogenasi NADP-specifica di Neurospora.La glutammato deidrogenasi NADP-specifica (EC 1.4 .1.4) di Neurospora crassa viene inibito per reazione con 1,2-cicloesandione che si lega ai residui di arginina Con il reagente marcato con 14C è stato isolato un peptide con la sequenza: Gly-Gly-Leu-Arg-Leu-His-Pro -Ser-Val-Asn-Leu, corrispondente ai residui nella proteina da 78 a 88. L'arginina, residuo 81, era presente come N7,N8-(1,2-diidrossicicloes-1,2-ilene)-arginile (o DHCH -arginina). Evidenze attuali indicano che questo residuo di arginina risiede in corrispondenza o in prossimità del dominio di legame della nicotinammide dell'enzima. Sequenze simili sono presenti nell'enzima epatico bovino (EC 1.4.1.3) e nella glutammato deidrogenasi NAD-specifica di Neurospora (EC 1.4 .1.2).
Stimolazione della guanilato ciclasi dei fibroblasti da parte degli acidi grassi liberi.La guanilato ciclasi membranosa dei fibroblasti Balb 3T3 è stata stimolata da una frazione di siero di vitello estratto da etere. La stimolazione è stata osservata con Mg2+ come l'unico catione bivalente in presenza di Lubrol PX. L'attivatore co-cromatografato con acidi grassi liberi, e molti di questi sono stati trovati per stimolare la guanilato ciclasi. Tra gli acidi grassi saturi, l'acido miristico aveva il massima attività. L'attività stimolante diminuiva quando la catena idrocarburica dell'acido grasso veniva allungata o accorciata. L'introduzione di un legame insaturo ha potenziato l'attivazione da parte degli acidi grassi più lunghi. Questo modello di specificità è simile a quello osservato per l'effetto degli acidi grassi su molti altre funzioni membranose. In condizioni appropriate è stato scoperto che gli acidi grassi stimolano l'attività della guanilato ciclasi in assenza di Lubrol PX. La relazione tra gli effetti di Mg2+, Mn2+, Lubr ol PX e acidi grassi sull'attività enzimatica è stato esaminato. Sulla base di questi studi, sembra che gli acidi grassi stimolino l'enzima con un meccanismo diverso dai detergenti non ionici o Mn2+.
Collagen cross-linking. Sintesi di legami crociati di collagene in vitro con lisil ossidasi altamente purificata.In questo articolo, la sintesi di collagene legami incrociati in vitro è stato studiato in un sistema definito costituito da cartilagine di pollo lisil ossidasi altamente purificata e fibrille di collagene di osso di pollo. intermedi di legame e collagene reticolato derivato dal collagene latiritico. La concentrazione dei due principali legami crociati riducibili, N6:6\'-deidro-5,5\'-diidrossilisinonorleucina e N6:6\'-deidro-5- idrossilisinonorleucina, aumentata a un valore di picco di circa due legami incrociati per molecola e poi diminuita. La sintesi di istidinoidrossimerodesmosina e un secondo legame incrociato polifunzionale di struttura sconosciuta è iniziata dopo che la sintesi di legami incrociati bifunzionali è stata ampiamente completata e proceduta eded linearmente in seguito. L'inibizione della lisil ossidasi dopo che si è verificata la maggior parte della sintesi di cross-link bifunzionale non ha alterato il tasso di diminuzione della concentrazione di cross-link riducibile, ma ha inibito l'ulteriore sintesi dell'istidinoidrossimerodesmosina. Questi risultati indicano che la lisil ossidasi e le fibrille di collagene sono le uniche macromolecole richieste per la biosintesi del cross-link in vivo. È probabile che la diminuzione dei legami crociati riducibili osservata durante la maturazione delle fibrille derivi da reazioni spontanee all'interno della fibrilla di collagene piuttosto che da reazioni enzimatiche aggiuntive.
Accumulo di lipidi neutri in Saccharomyces carlsbergensis da deficit di mio-inositolo e suo meccanismo. Regolazione reciproca dell'acetil-CoA carbossilasi di lievito da parte di fruttosio bisfosfato e citrato.L'accumulo anomalo di lipidi dovuto alla carenza di mio-inositolo in Saccharomyces carlsbergensis e il meccanismo coinvolto è stato studiato. Le cellule carenti contenevano lipidi molto più neutri con un rapporto maggiore di acidi grassi insaturi rispetto alle cellule integrate, mentre non vi era alcun significativo cambiamento nel loro contenuto di fosfolipidi. La biosintesi degli acidi grassi e degli steroli dall'acetato e dei triacilgliceroli e degli esteri di steroli dal palmitato è stata notevolmente aumentata nelle cellule carenti. L'attività dell'acetil-CoA carbossilasi del surnatante carente era da 2 a 5 volte superiore a quella quella del supplemento. Tuttavia, l'attività da entrambe le fonti non era significativamente differente dopo la filtrazione su gel di Sephadex G-25 del surnatante, s suggerendo la presenza di effettori a basso peso molecolare nel surnatante carente. C'è stato un grande aumento di glicogeno acido solubile, trealosio e fruttosio-1,6-P2, nonché una drastica diminuzione del citrato nelle cellule carenti. I loro livelli intracellulari sono stati calcolati in modo che i loro effetti sull'acetil-CoA carbossilasi siano stati esaminati nell'intervallo di concentrazione fisiologica. Il citrato ha fortemente inibito l'attività enzimatica del surnatante, ma non ha avuto effetto sulla preparazione dopo la filtrazione su gel. D'altra parte, il fruttosio-1,6-P2 ha stimolato l'attività enzimatica sia prima che dopo la filtrazione su gel. L'attività dell'acetil-CoA carbossilasi nel gel filtrato è stata misurata in funzione della concentrazione di citrato a diverse concentrazioni fisse di fruttosio-1,6-P2. Il citrato ha contrastato l'attivazione del fruttosio-1,6-P2 in modo dose-dipendente. Il citrato non ha avuto l'effetto inibitorio in assenza di fruttosio-1,6-P2. Da questi risultati si è concluso che l'accumulo di lipidi neutri nelle cellule carenti rifletteva un aumento della sintesi degli acidi grassi, almeno in parte basato su un potenziamento dell'attività dell'acetil-CoA carbossilasi, e che l'operazione di regolazione reciproca dell'enzima da parte di fruttosio-1,6-P2 e citrato hanno causato un marcato aumento dell'attività enzimatica nelle cellule carenti con un alto livello di fruttosio-1,6-P2 e un basso livello di citrato.
Reticolazione del collagene. Purificazione e specificità del substrato della lisil ossidasi.La lisil ossidasi è una specifica ammina ossidasi che catalizza la formazione di reticolazione aldeidica intermedi in collagene ed elastina. In questo studio, la lisil ossidasi dalla cartilagine embrionale di pollo è stata purificata ad attività specifica costante e una singola banda proteica su elettroforesi su gel di acrilammide di sodio dodecilsolfato. Questa banda aveva un peso molecolare apparente di 62.000. La proteina eluita cross- reagiva con gli antisieri inibitori sviluppati contro la lisil ossidasi altamente purificata. L'enzima altamente purificato era attivo sia con l'elastina insolubile che con la pelle embrionale di pollo o il collagene osseo precipitato come fibrille native ricostituite. C'era una bassa attività con collagene non idrossilato, monomeri di collagene o fibrille native isolate da calvaria latiritica. Il numero massimo di intermedi aldeidici formati per molecola di collagene che diventava insolubile era due. Questi risultati s indicano che la lisil ossidasi ha la massima attività su aggregati ordinati di molecole di collagene che possono essere associazioni sovrapposte di solo poche molecole di collagene. La formazione di intermedi aldeidici e legami incrociati durante la formazione delle fibrille può facilitare la biosintesi delle fibrille di collagene stabili e contribuire ad aumentare la resistenza alla trazione delle fibrille in vivo.
Proprietà di una ribonucleasi epatica umana. Inibizione da parte di polinucleotidi e specificità per la scissione del legame fosfodiestereo per produrre nucleosidi purinici alle estremità 5\'.Una ribonucleasi , purificato 2500 volte dal fegato umano, è risultato inattivo contro gli omopolinucleotidi sintetici, mentre i copolimeri sintetici contenenti acido adenilico sono stati rapidamente degradati. La specificità della RNasi è unica in quanto solo residui purinici, in un rapporto 5:4 di guanilico ad acido adenilico, si trovano ai terminali 5\' dei prodotti di degradazione dell'RNA di lievito. Non è stata osservata alcuna specificità ai terminali 3\' dei frammenti. Se analizzato mediante cromatografia DEAE-cellulosa, circa l'80% degli oligonucletoidi erano residui di lunghezza da 4 a 11. L'idrolisi dell'RNA da parte dell'enzima epatico, quando esaminata in un tampone a bassa forza ionica, potrebbe essere aumentata di diverse volte rispetto ai livelli di controllo mediante l'aggiunta di poliammine. L'enzima è risultato esistere come due distinti specie su gradienti di saccarosio, con pesi molecolari di 128.000 e 14.000. Tuttavia, l'aggiunta di spermidina ai gradienti ha portato al recupero di tutta l'attività enzimatica delle specie più piccole. È stato anche dimostrato che le poliammine invertono l'inibizione dell'enzima da parte dei polinucleotidi ordinati, dell'acido poliguanilico e dell'acido poliadenilico. È stata anche dimostrata l'inibizione dell'attività enzimatica da parte del segmento dell'acido poliadenilico di vari mRNA di mammiferi.
Sintesi di triacilglicerolo in cellule adipose isolate. Evidenza che le attività di sn-glicerolo-3-fosfato e diidrossiacetone fosfato aciltransferasi sono doppie funzioni catalitiche di un singolo enzima microsomiale.Le attività di acil-CoA:sn-glicerol-3-fosfato aciltransferasi (EC 2.3.1.15) (glicerolo-P aciltransferasi) e acil-CoA:diidrossiacetone fosfato aciltransferasi (EC 2.3.1.42) (DHAP aciltransferasi) sono state studiate in vitro al fine di valutare il contributo quantitativo delle vie del glicerolo-P e DHAP per la sintesi dei triacilgliceroli in cellule adipose isolate e per verificare l'ipotesi che queste due attività possano essere doppie funzioni catalitiche di un singolo enzima. Più dell'85% di entrambi l'attività dell'aciltransferasi è stata associata alla frazione microsomiale subcellulare. L'attività dell'aciltransferasi microsomiale della glicerolo-P ha mostrato un Km apparente di 8 muM per la glicerolo-P con una Vmax di 15,6 nmol/min/mg, mentre l'attività dell'aciltransferasi DHAP ha mostrato un Km apparente di 40 muM per DHAP con un Vmax di 9,7 nmol/min/mg. Il glicerolo-P era un inibitore competitivo (Ki = 7.2 muM) dell'aciltransferasi DHAP e DHAP era un inibitore competitivo (Ki = 92 muM) dell'aciltransferasi glicerolo-P. Le due attività dell'aciltransferasi hanno mostrato identità virtuale nella loro dipendenza dal pH, dipendenza dalla lunghezza della catena acil-CoA, termolabilità e inattivazione da parte di N-etilmaleimmide. Anche tripsina, detergenti, collagenasi, fosfolipasi e vari sali e solventi organici hanno avuto effetti simili su entrambe le attività. Presi nel loro insieme, i dati suggeriscono fortemente che le attività microsomiali di glicerolo-P e DHAP aciltransferasi rappresentino effettivamente una doppia funzione di un singolo enzima. I calcoli basati sulle costanti cinetiche di cui sopra e sui pool di glicerolo-P e DHAP precedentemente riportati negli adipociti suggeriscono che il rapporto in vivo tra glicerolo-P e acilazione DHAP dovrebbe essere maggiore di 24:1.
Facile alchilazione della metionina da parte del bromuro di benzile e dimostrazione dell'inattivazione della fumarasi accompagnata dall'alchilazione di un residuo di metionina.Il bromuro di benzile è un alchilatore selettivo di nucleofili di zolfo comprese metionina e cisteina Solo lo ione mercaptide è un nucleofilo più efficiente dell'etere di zolfo della metionina I tassi di alchilazione relativi alla metionina sono 200: minore o uguale a 0,03: minore o uguale a 0,03: minore o uguale a 0,02 per GS-, istidina, triptofano e GSH, rispettivamente. L'alchilazione della metionina da parte del benzil bromuro è più di 50 volte più veloce dell'alchilazione da parte dello iodoacetato. La fumarasi è prontamente inattivata dall'esposizione al benzil bromuro a pH da 6,6 a 6,8 accompagnata da un'alchilazione vicina a 1 residuo/subunità di metionina La fumarasi completamente inattivata dall'esposizione al bromuro di benzile non mostra alchilazione rilevata di residui di amminoacidi diversi dalla metionina La velocità di inattivazione della fumarasi da parte del bromuro di benzile è diminuito di circa 4 volte dalla presenza di substrati in eccesso. La denaturazione della fumarasi in 6 M di urea a pH 6,5 espone metionina addizionale e residui di cisteina all'alchilazione.
Rivalutazione del rapporto H+/sito del trasporto di elettroni mitocondriale con la tecnica dell'impulso di ossigeno.Il numero di protoni espulsi per coppia di elettroni che passano ciascun sito di conservazione dell'energia nella catena di trasporto degli elettroni (il rapporto H+/sito) è stato studiato nei mitocondri di fegato di ratto mediante la tecnica dell'impulso di ossigeno introdotta da Mitchell e Moyle (1967) (Biochem. J. 105, 1147-1162) Gli usuali valori di H+/sito di 2,0 osservati con questo metodo sono risultati sostanzialmente sottostimati a causa dell'afflusso di fosfato nei mitocondri, come dimostrato da tre diversi tipi di esperimenti 1. Aggiunta di N-etilmaleimmide o mersalil , inibitori del trasporto mitocondriale del fosfato, ha aumentato il rapporto H+/sito da 2.0 a 3.0. La dipendenza di questo effetto dalla concentrazione di entrambi gli inibitori era identica a quella per l'inibizione del trasporto del fosfato. Il fosfato aggiunto ha diminuito il rapporto H+/sito a valori inferiori 2,0 pollici assenza di N-etilmaleimmide. La N-etilmaleimmide ha protetto l'elevato rapporto H+/sito di 3,0 contro l'effetto deleterio del fosfato aggiunto, ma non ha impedito un effetto di riduzione degli anioni acidi deboli come il 3-idrossibutirrato. 2. Il precedente lavaggio dei mitocondri per rimuovere il fosfato endogeno che fuoriesce durante la preincubazione anaerobica ha portato a rapporti H+/sito vicino a 3.0, che non sono stati aumentati dalla N-etilmaleimmide. L'aggiunta di basse concentrazioni di fosfato a tali mitocondri impoveriti di fosfato ha ridotto il rapporto H+/sito a 2,0; l'aggiunta di N-etilmaleimmide ha riportato il rapporto a 3,0. 3. L'abbassamento della temperatura a 5 gradi, che rallenta il trasporto del fosfato, ha portato a valori di H+/sito di 3.0 anche in assenza di N-etilmaleimmide. Il rapporto H+/sito di 3,0 osservato in assenza di movimenti di fosfato non dipendeva da un insieme ristretto di condizioni sperimentali. Si è verificato con Ca2+ o K+ (in presenza di valinomicina) come catione mobile permeante. Era indipendente dalla concentrazione di succinato, ossigeno, mitocondri o rotenone, aggiunte di Ca2+, Li+ o Na+ ed era indipendente dal pH medio tra 6,5 e 7,5. Gli inibitori del trasporto di ioni o acidi diversi dal fosfato non hanno influenzato il rapporto H+/sito. Questi risultati indicano che la ricaptazione del fosfato endogeno, perso dai mitocondri durante la preincubazione anaerobica, riduce l'espulsione di H+ osservata e porta a rapporti H+/sito sottostimati di 2.0 nel metodo dell'impulso di ossigeno. Quando i movimenti di fosfato vengono eliminati con le procedure sopra descritte, il rapporto H+/sito osservato è di circa 3.0. Questo valore sembra essere più vicino al vero rapporto H+/sito per il processo di espulsione dell'H+ primario durante il trasporto degli elettroni.
Fosfofruttochinasi. III. Correlazione delle proprietà cinetiche regolatorie e molecolari dell'enzima muscolare del coniglio.È dimostrato che il grado di comportamento cinetico regolatorio di La fosfofruttochinasi muscolare di coniglio aumenta a un dato pH e a temperature inferiori, nonché a una data temperatura e a valori di pH inferiori È inoltre dimostrato che il comportamento cinetico di regolazione che si manifesta a valori di pH inferiori è inerente alla forma tetramerica (attiva) del Concludiamo che una parte del meccanismo proposto in precedenza (Bock, PE e Frieden, C. (1976) J. Biol. Chem. 251, 5630-5636) per descrivere l'inattivazione o riattivazione dipendente dal pH e dalla temperatura può anche essere utilizzato per spiegare il comportamento cinetico regolatorio dipendente dal pH e dalla temperatura. Secondo questa proposta, due forme rapidamente equilibranti dell'enzima, che differiscono nel grado di protonazione di residui specifici, differiscono nella loro capacità di legare i substrati. Mentre la f protonata Quando l'enzima diventa successivamente inattivo per isomerizzazione e dissociazione, questo processo è troppo lento per influenzare i risultati cinetici, rendendo non validi i confronti diretti tra il comportamento di associazione-dissociazione e il comportamento cinetico regolatorio. Viene discussa la dipendenza dal tempo dei processi di inattivazione o riattivazione in presenza o assenza di ligandi e della comparsa di comportamenti cinetici regolatori in relazione al loro possibile ruolo nella regolazione metabolica.
Fosfofruttochinasi. II. Ruolo dei ligandi nei cambiamenti strutturali dipendenti dal pH dell'enzima del muscolo di coniglio.L'effetto dei ligandi, compresi i substrati e gli effettori allosterici , sull'inattivazione e riattivazione pH-dipendente della fosfofruttochinasi muscolare di coniglio è stata esaminata nei termini del meccanismo proposto in precedenza (Bock, PE e Fireden, C. (1976) J. Biol. Chem. 251, 5630-5636). hanno concluso che molti ligandi esercitano il loro effetto legandosi preferenzialmente alle forme protonate o non protonate dell'enzima e quindi spostando un pK apparente per il processo di inattivazione o riattivazione. ATP e fruttosio 6-fosfato influenzano il pK apparente in misura diversa e in direzioni diverse, con l'ATP che si lega preferenzialmente alle forme protonate e il fruttosio 6-fosfato alle forme non protonate. L'enzima inattivato dall'ATP può essere riattivato mediante l'aggiunta di fruttosio 6-fosfato. Gli esperimenti indicano che l'inattivazione e la riattivazione zione in presenza di questi ligandi può avvenire per vie cineticamente differenti come è stato riscontrato per questi processi in assenza di ligandi. I risultati sono discussi in relazione a ciò che ci si potrebbe aspettare per le proprietà di legame del ligando dell'enzima in funzione del pH, della temperatura e della concentrazione dell'enzima. L'effetto di ATP e MgATP è complesso, forse rappresentando più di un sito di legame. Il citrato sembra legarsi preferenzialmente alle forme protonate dell'enzima mentre il fruttosio 1,6-bisfosfato e l'AMP si legano preferenzialmente alle forme non protonate. ADP, K+ e NH4+ sembrano avere poca o nessuna preferenza nel legarsi a diverse forme enzimatiche.
Fosfofruttochinasi. I. Meccanismo di inattivazione e riattivazione pH-dipendente dell'enzima muscolare di coniglio.La cinetica di inattivazione e riattivazione del muscolo scheletrico di coniglio fosfofruttochinasi sono state studiate in funzione del pH e della concentrazione dell'enzima a temperatura costante nel tampone fosfato. Dalla dipendenza dalla concentrazione dell'enzima, concludiamo che il meccanismo minimo per l'inattivazione comporta una fase di protonazione seguita da isomerizzazione in una forma inattiva e quindi dissociazione in una specie di metà del peso molecolare Altri dati indicano una successiva isomerizzazione della forma dissociata La dipendenza dal pH e dalla temperatura del processo di inattivazione mostra che è controllato da gruppi ionizzabili e che il pK apparente per questi gruppi è dipendente dalla temperatura in tale da far manifestare all'enzima la caratteristica di labilità al freddo al di sotto del pH 7. La riattivazione dell'enzima inattivo avviene per mezzo di una percorso che coinvolge la deprotonazione di una forma inattiva e dissociata in una forma che può isomerizzare in un'altra forma inattiva o dimerizzare nell'enzima attivo. Viene postulato un meccanismo generale in cui i processi di inattivazione e riattivazione sono aspetti diversi dello stesso meccanismo. Questo meccanismo presuppone quattro specie (due contenenti quattro subunità e due contenenti due subunità) ciascuna delle quali può esistere in forma protonata e non. L'inattivazione o la riattivazione indotta da variazioni del pH o della temperatura riflettono l'instaurazione cinetica di un nuovo stato stazionario tra queste forme. Il modo in cui i valori di pK apparenti che controllano la distribuzione dell'enzima tra forme protonate e non protonate descrivono le caratteristiche dipendenti dal pH dell'enzima è discusso in termini di meccanismo proposto.
Trasporto del calcio ATP-dipendente in vescicole di membrana isolate di Azotobacter vinelandii.Vescicole di membrana di Azotobacter vinelandii O preparate mediante lisi osmotica di sferoplasti in tris (idrossimetil ) il tampone amminometano/acetato (pH 7,8) contiene una adenosina trifosfatasi (ATPasi) latente, che può essere attivata quando le vescicole vengono incubate in presenza di un donatore di elettroni (D-lattato) e una miscela di adenosina difosfato e fosfato inorganico o mediante trattamento controllato con tripsina. Dopo l'attivazione dell'ATPasi, le vescicole di membrana in presenza di adenosina trifosfato accumulano calcio ma non glucosio o rubidio (in presenza di valinomicina). L'assorbimento di calcio ATP-dipendente segue la cinetica di Michaelis-Menten con un Km di 48 muM e un Vmax di 20 nmol/min/mg di proteina di membrana ed è altamente specifico per calcio su cationi magnesio, bario, lantanio, sodio, potassio e litio. Il calcio accumulato nel presenc e di ATP è liberamente scambiabile con il calcio esterno e viene rapidamente rilasciato in presenza di disaccoppianti o inibitori dell'ATPasi. L'assorbimento del calcio in presenza di ATP è bloccato da dicicloesilcarbodiimmide, ADP, p-cloromercurifenilsolfonato, dagli ionofori conduttori di protoni m-clorofenilcarbonilcianuro idrazone, nigericina, monensina e gramicidina D, ma non dal cianuro di potassio, anossia o valino di potassio). Le misurazioni del pH esterno delle sospensioni delle vescicole rivelano che i protoni vengono attivamente assorbiti dalle membrane durante l'idrolisi dell'ATP. Questi risultati suggeriscono che le vescicole preparate in queste condizioni hanno una topologia invertita rispetto alla cellula intatta e che il calcio viene accumulato per mezzo dell'antiporto protonico.
Trasferimento rapido di ossigeni da fosfato inorganico a glutammina catalizzato da Escherichia coli glutammina sintetasi.Sono riportate misurazioni su alcuni flussi isotopici durante la conversione netta della glutammina , ADP e Pi a glutammato, NH3 e ATP da Escherichia coli glutammina sintetasi (forma adenililata, Mn2+ attivato) in presenza di una trappola esochinasi/glucosio per rimuovere l'ATP formato durante la reazione I risultati mostrano che il trasferimento di ossigeni da Pi alla glutammina è il più rapido degli scambi isotopici misurati, oltre cinque ossigeni da Pi vengono trasferiti alla glutammina per ogni glutammato formato dalla reazione netta. In condizioni simili, il trasferimento di ossigeno da Pi a glutammato, è stato stimolato in qualche modo da un aumento del glutammato concentrazione ma inibito da un aumento della concentrazione di ammoniaca. L'enzima dal cervello o piselli non ha mostrato il rapido trasferimento di 18O da Pi a glutammina mostrato dall'enzima E. coli. re ricavato anche dai dati sulla disponibilità degli ossigeni del gamma-carbossile del glutammato legato per la reazione. La spiegazione più logica dei risultati con l'enzima E. coli è che il gruppo gamma-carbossilico del glutammato legato ha una libertà di rotazione sufficiente in modo che in condizioni di rapida interconversione del substrato l'ossigeno carbossilato possa partecipare alla reazione. I risultati con l'enzima pisello sono coerenti con la rotazione ostacolata della cura gamma ulteriori risultati rendono probabile un ordine relativo di alcuni passaggi catalitici per l'enzima E. coli come segue: rilascio di ATP inferiore a rilascio di NH3 inferiore a rilascio di glutammato inferiore a interconversione del substrato meno del rilascio di glutammina e rilascio di Pi e rilascio di glutammato meno del rilascio di ADP.
Dissociazione tetramero-dimero nell'omoglobina e l'effetto Bohr.La dipendenza dal pH dell'apparente tetramero alla costante di dissociazione del dimero è stata determinata a 20 gradi per sia ossi- che deossiemoglobine A e Kansas. Queste misurazioni sono state effettuate mediante tre diverse procedure: cromatografia su gel, velocità di sedimentazione e metodi cinetici in uno dei tre sistemi tampone: 0,05 M cacodilato, Tris o glicina con 1 mM EDTA e 0,1 M NaCl tra pH 6,5 e 11. La costante di dissociazione tetramero-dimero dell'ossiemoglobina umana A diminuisce da circa 3,2 X 10 (-6) M a pH 6,0 a circa 3,2 X 10 (-8) M a pH 8,5. La pendenza di questa linea indica che la dissociazione del tetramero in dimero è accompagnata dall'assorbimento di circa 0,6 protoni per mole di tetramero in questa regione. La corrispondente costante di dissociazione per la deossiemoglobina nella stessa regione del pH aumenta apparentemente quasi linearmente da 1,0 x 10(-12) M a pH da 6,5 a circa 1,0 x 10 (-5) M a pH 11. To dimero è associato al rilascio di circa 1,6 protoni per mole di tetramero. Il confronto di questi dati con il noto rilascio di protoni che accompagna l'ossigenazione dei tetrameri conferma che la dipendenza dal pH del legame dell'ossigeno da parte dei dimeri deve essere molto piccola. I dati attuali prevedono che il rilascio o l'assorbimento complessivo di protoni per ossigeno legato al dimero dovrebbe essere inferiore a 0,1. Gli equilibri di dissociazione tetramero-dimero di ossi- e deossiemoglobine sopra pH 8,5 hanno identiche dipendenze dal pH. In questo intervallo la costante di dissociazione della deossi-Hb è circa un decimo di quella dell'ossiemoglobina. È noto che l'ossiemoglobina umana del Kansas ha una maggiore dissociazione tetramero-dimero rispetto a quella dell'emoglobina A. Al di sotto di pH 8,5 la costante di dissociazione tetramero-dimero dell'Hb Kansas è circa 400 volte maggiore di quella dell'HbA in assenza di tamponi fosfato. Al contrario, le costanti di dissociazione tetramero-dimero delle deossiemoglobine A e del Kansas sembrano essere identiche. Questi risultati sono coerenti con precedenti osservazioni strutturali su queste emoglobine. I dati sulla dissociazione tetramero-dimero dell'emoglobina umana sono stati utilizzati per calcolare l'energia libera totale di legame dell'ossigeno al tetramero e la pressione mediana dell'ossigeno sulla base delle relazioni fondamentali di legame e una stima indipendente dal pH dell'energia libera totale di legando l'ossigeno al dimero. Le curve di legame dell'ossigeno simulate sono state generate con le equazioni di Ackers e Halvorson (Ackers, GK e Halvorson, H. (1974) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 71, 4312-4316) facendo due ipotesi: (a) che i dimeri sono non cooperativi e indipendenti dal pH nel legame con l'O2 e (b) che la distribuzione dell'energia cooperativa nell'ossigenazione dei tetrameri è indipendente dal pH. Abbiamo confrontato queste simulazioni con dati sperimentali ottenuti a basse concentrazioni proteiche (da 30 a 124 muM eme) per mostrare che la variazione dell'affinità dell'ossigeno con il pH può essere descritta in termini di equilibri delle subunità. Concludiamo che un'analisi accurata dei contributi dei singoli passaggi di legame dell'ossigeno all'effetto Bohr non può essere effettuata senza considerare i contributi dei dimeri al legame dell'ossigeno...
Risonanza elettronica paramagnetica del derivato di tungsteno della solfito ossidasi del fegato di ratto.Solfito ossidasi purificata dal fegato di ratti trattati con tungsteno è stata utilizzata per studi EPR di tungsteno sostituito al sito molibdeno dell'enzima in una frazione delle molecole. Il segnale EPR di W(V) in solfito ossidasi è abbastanza simile a quello di Mo(V) nella sua forma lineare e nella sua sensibilità alla presenza di anioni come fosfato e fluoruro. In entrambi i segnali si osserva anche un'interazione iperfine con un protone dissociabile. L'alterazione pH-dipendente nella forma della linea esibita dal segnale Mo(V) EPR dell'enzima del fegato di ratto. Riduzione incompleta del centro di tungsteno a Il pH 9 è indicato da un'intensità del segnale attenuata a questo pH. Il segnale W(V) ha valori g inferiori a quelli del segnale Mo(V), ha un inviluppo di risonanza molto più ampio ed è molto meno facilmente saturato aumentando la potenza delle microonde. Studi cinetici sulla riduzione dell'eme e del tu I centri ngsten di solfito ossidasi hanno dimostrato che la riduzione delle forme di demolibdo della solfito ossidasi da parte del solfito è catalizzata dalle tracce residue di molecole contenenti molibdeno nativo. La riduzione è ottenuta mediante trasferimento di elettroni che coinvolge l'interazione intermolecolare eme-eme. Il segnale W(V) viene generato solo dopo che tutti i centri dell'eme sono stati ridotti. La velocità e l'entità della riduzione dell'eme a pH 9 sono le stesse che a pH 7. Studi sulla riossidazione di W(V) e sulla riduzione dell'eme da parte di O2 e citocromo c suggeriscono che il citocromo b5 della solfito ossidasi è il sito di trasferimento degli elettroni al citocromo c, mentre l'attività ossidasi è proprietà del centro del molibdeno. Sembra che il centro di tungsteno nella solfito ossidasi non sia in grado di ossidare il solfito.
Adenosina deaminasi umana. Distribuzione e proprietà.L'adenosina deaminasi esiste in molteplici forme molecolari nel tessuto umano. Una forma dell'enzima sembra essere " particolato". Tre forme dell'enzima sono solubili e interconvertibili con pesi molecolari apparenti di circa 36.000, 114.000 e 298.000 (designate rispettivamente piccola, intermedia e grande). La forma piccola di adenosina deaminasi è convertibile solo nella forma grande in presenza di una proteina, che ha un peso molecolare apparente di 200.000 e non ha attività adenosina deaminasi. Questa conversione della forma piccola dell'enzima nella forma grande avviene a 4 gradi, presenta un pH ottimale compreso tra 5,0 e 8,0 e è associata a una perdita di attività di conversione. La forma piccola dell'enzima predomina nelle preparazioni tissutali che mostrano le attività enzima-specifiche più elevate e nessuna attività di conversione rilevabile. La forma grande di adenosina deaminasi predomina in tis sue estratti che esibiscono le attività specifiche dell'enzima inferiore e l'attività di conversione abbondante. La piccola forma di adenosina deaminasi mostra diverse varianti elettroforetiche mediante focalizzazione isoelettrica. L'eterogeneità elettroforetica osservata con la forma grande dell'enzima è simile a quella osservata con la forma piccola, con l'eccezione che vengono identificate uniformemente diverse varianti elettroforetiche aggiuntive. Nessuna specificità d'organo è dimostrabile per le diverse forme elettroforetiche. Le caratteristiche cinetiche delle tre specie molecolari solubili dell'adenosina deaminasi sono identiche tranne che per il pH ottimale, che è 5,5 per le specie intermedie e da 7,0 a 7,4 per le forme grande e piccola.
3-Deossi-D-arabino-eptulosonato 7-fosfato sintasi. Purificazione, proprietà e cinetica dell'isoenzima tirosina-sensibile da Escherichia coli.La tirosina-sensibile 3-desossi-D-arabino-eptulosonato 7-fosfato sintasi (7-fosfo-2-cheto-3-deossi-D-arabino-eptonato D-eritrosio-4-fosfato liasi (piruvato-fosforilante), EC 4.2.1.15) è stato purificato all'omogeneità da estratti di Escherichia coli K12. È stato sviluppato un saggio spettrofotometrico dell'attività enzimatica, basato sulla differenza di assorbimento di substrati e prodotti a 232 nm. L'enzima ha un peso molecolare di 66.000 come giudicato mediante filtrazione su gel su Sephadex G-200 e un peso molecolare della subunità di 39.000 come determinato mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide in presenza di sodio dodecil solfato, il che suggerisce un rapido equilibrio monomero-dimero o una forma molto asimmetrica per l'enzima nativo. L'enzima mostra un pH ottimale stretto intorno a pH 7,0. L'enzima è stabile per se mesi se conservati a -20 gradi in tampone fosfato contenente fosfoenolo-piruvato. Linee che si intersecano in doppi grafici reciproci di dati di velocità iniziale a concentrazioni di substrato nell'intervallo micromolare suggeriscono un meccanismo sequenziale con reazione catalizzata. Gli studi di inibizione del prodotto specificano un meccanismo BiBi sequenziale ordinato con un complesso EP senza uscita. L'inibitore del feedback tirosina a concentrazioni superiori a 10 muM mostra un'inibizione non competitiva rispetto all'eritrosio-4-P e un'inibizione competitiva rispetto all'altro substrato, il P-enolpiruvato. Inoltre, la tirosina a concentrazioni di almeno 10 muM provoca un'alterazione di uno o più parametri cinetici dell'enzima.
Sul meccanismo d'azione dell'oligomicina e dei disaccoppiatori acidi sulla traslocazione protonica e sul trasferimento di energia nelle particelle subcondriali "soniche".Viene presentato uno studio dell'effetto dei disaccoppiatori acidi e dell'oligomicina sulla traslocazione protonica passiva e legata all'energia, sulla fosforilazione ossidativa e sulla transidrogenasi del nucleotide-nicotinammide-adenina legata all'energia nelle particelle submitocondriali di EDTA da cuore di manzo. della fase iniziale rapida della pompa protonica redox. L'analisi rapida della cinetica mostra che il carbonil-cianuro-p-trifluorometossifenil-idrazone (FCCP) non esercita alcun effetto diretto sul trasporto protonico attivo legato al redox. L'azione disaccoppiante di FCCP sulla fosforilazione ossidativa e la transidrogenasi legata all'energia ha dimostrato di essere quantitativamente spiegata dal suo effetto promotore della diffusione passiva del protone attraverso la membrana mitocondriale. diffusione del protone nelle particelle soniche EDTA e questo effetto spiega l'azione di accoppiamento esercitata dall'antibiotico sulla fosforilazione ossidativa e sulla transidrogenasi legata all'energia. Infatti, una rapida analisi cinetica dimostra che l'oligomicina non influenza direttamente la pompa protonica legata al redox. I risultati attuali mostrano che non esiste alcun intermedio labile nella pompa protonica legata all'ossidoriduzione che sia sensibile ai disaccoppianti acidi.
Purificazione e caratterizzazione di beta-N-acetilesosaminidasi e beta-galattosidasi da Streptococcus 6646 K.Tre beta-N-acetilesosaminidasi [EC 3.2.1.52 ] e una beta-galattosidasi [EC 3.2.1.23] sono state purificate dal filtrato di coltura di streptococco 6646 gruppo K mediante una combinazione di cromatografie su colonna su p-amminofenil beta-D-tiogalattopiranoside-sostituito Sepharose e acido N-(paminofenil)ossamico- sostituito Sepharose. Queste beta-N-acetilesosaminidasi hanno mostrato attività ottimali tra pH 5,0 e 5,5 e potrebbero idrolizzare substrati sintetici e glicopeptidici. Glicolipidi come GM2, asialo-GM2 e globoside I non erano sensibili a queste beta-esosaminidasi. beta-galattosidasi, che è stato purificato più di 11.000 volte, aveva una specificità di substrato piuttosto simile a quella della beta-galattosidasi di E. coli. Questo enzima è stato inibito dall'EDTA e attivato da Mn2+, Ca2+ e Mg2+. Problemi relativi all'applicazione dell'affinità sono discussi anche la cromatografia per la purificazione delle glicosidasi.
Interazione della tropomiosina con i componenti della troponina.1. I componenti TN-T e TN-I della troponina interagiscono entrambi con la tropomiosina e ne provocano la precipitazione in 0,1 M KC1 a pH neutro. Il precipitato contiene sia aggregati end-to-end che side-by-side di molecole di tropomiosina. 2. I componenti TN-T e TN-I cambiano il pattern di banda dei paracristalli di tropomiosina formati in MgC1(2 ) soluzioni, anche se in modi diversi. TN-T provoca la formazione di strutture a rete esagonale, rete a doppio filamento o paracristalli che risultano dal collasso della rete a doppio filamento. TN-I a pH 7,9 provoca la formazione di paracristalli con un Schema di banda periodico di 400 A e ripetizione di 200 A. Lo stesso schema di banda può essere visto anche nei paracristalli di tropomiosina formati a valori di pH inferiori a 6,0 3. Il componente TN-C non fa precipitare la tropomiosina in 0,1 M KC1 Gli aggregati di tropomiosina ottenuti con TN-T o TN-I può essere solubilizzato mediante l'aggiunta di TN-C. Nessuna interazione lo ione di TN-C è stato osservato con paracristalli di tropomiosina formati in presenza di MgC12.
Purificazione e proprietà di un enzima che catalizza la scissione dei legami carbonio-mercurio dal ceppo Pseudomonas K-62 resistente al mercurio. I. Enzima di scissione 1.Un enzima (S-1) che catalizza la scissione dei legami carbonio-mercurio dei composti organomercuriali è stato purificato circa 24 volte dall'estratto privo di cellule del ceppo Pseudomonas K-62 resistente al mercurio mediante trattamento con streptomicina, precipitazione con solfato di ammonio , e successiva cromatografia su Sephadex G-150, DEAE-Sephadex e DEAE-cellulosa. Una preparazione purificata dell'enzima ha mostrato una singola banda sull'elettroforesi su gel di poliacrilammide ed era incolore. Il peso molecolare dell'enzima è stato stimato essere 19.000, e Km era 5,3 X 10 (-5) M per l'acido p-cloromercuribenzoico (PCMB). La temperatura e il pH ottimali per la reazione erano rispettivamente di 50 gradi e 7,0. L'enzima era in grado di catalizzare la decomposizione del cloruro di metilmercurio (MMC), cloruro di etilmercurico (EMC ), fenilmercurico acetato (PMA) e PCMB in presenza di un composto solfidrilico per formare uno ione mercurico più metano, etano, benzene o acido benzoico, rispettivamente. Lo ione mercurico così formato è stato ridotto a mercurio metallico dall'enzima metallico che rilascia mercurio (enzima MMR).
La struttura e la funzione delle proteasi acide. IV. Inattivazione della proteasi acida da Mucor pusillus da parte di inibitori specifici della proteasi acida.Proteasi acida di Mucor pusillus è stato rapidamente inattivato con stechiometria 1 : 1 per reazione con diazoacetil-DL-norleucina metil estere (DAN) in presenza di ioni rameici. Gli ioni rameici erano essenziali per questa inattivazione. La velocità di inattivazione era massima intorno a pH 6 quando l'enzima era miscelato con DAN e ioni rameici senza previa miscelazione dei reagenti e a pH 5,3 quando DAN e ioni rameici sono stati miscelati e incubati prima dell'aggiunta alla soluzione enzimatica. In entrambi i casi, la velocità di inattivazione è diminuita all'aumentare o alla diminuzione del pH La composizione amminoacidica di un idrolizzato acido dell'enzima DAN-Modified era indistinguibile da quella dell'enzima nativo tranne che per l'incorporazione di circa un residuo di norleucina per molecola di proteina. L'enzima è stato inoltre inattivato per reazione con 1,2-epossi-3-(p-nitrofenossi)-propano (EPNP). Allo stadio di circa il 90% di inattivazione, sono stati incorporati 1,50 residui di EPNP per molecola di proteina e la velocità di inattivazione ha seguito una cinetica di pseudo-primo ordine. Il pH ottimale per l'inattivazione era pH 3.0 e la velocità di inattivazione diminuiva all'aumentare o diminuire del pH. Inoltre, l'enzima è stato fortemente inibito dalla pepstatina e anche le reazioni del DAN e dell'EPNP sono state inibite significativamente dal precedente trattamento dell'enzima con pepstatina. Questi risultati suggeriscono che l'enzima può avere due gruppi carbossilici essenziali nel sito attivo, uno reattivo con DAN in presenza di ioni rameici e l'altro con EPNP, e che la pepstatina lega parte del sito attivo per inibire le reazioni con DAN ed EPNP così come l'attività enzimatica.
Incorporazione di serina ed etanolamina nei fosfolipidi nella retina di coniglio.L'incorporazione di serina ed etanolamina nei fosfolipidi nelle frazioni subcellulari della retina di coniglio e nelle retine asportate è stato studiato in vitro, e sono state esaminate alcune proprietà enzimatiche dell'incorporazione di basi fosfolipidiche mediante scambio di basi nella frazione microsomiale. La retina è risultata avere un tasso di scambio di basi più elevato per l'incorporazione di basi fosfolipidiche rispetto ad altri tessuti. Il microsomiale retinico frazione possedeva la più alta attività specifica di scambio di basi, mentre il segmento esterno dei bastoncelli aveva pochissima attività. Questi risultati suggeriscono che i fosfolipidi nel segmento esterno dei bastoncelli possono essere trasferiti dal segmento interno della cellula fotorecettrice. I valori di Km apparenti per serina e l'etanolamina nella frazione microsomiale diminuiva al diminuire della concentrazione di Ca2+, sebbene non aumentasse ulteriormente l'incorporazione di serina ed etanolamina e si è verificato dopo 40 minuti nella frazione microsomiale, l'incorporazione continua di entrambe le basi nei fosfolipidi è stata osservata per 3 ore nella retina asportata. L'illuminazione non ha influenzato significativamente l'incorporazione di serina ed etanolamina nella retina asportata o nella frazione del segmento esterno del bastoncino. La reazione di scambio di basi quindi potrebbe non svolgere un ruolo diretto nel processo visivo.
Purificazione e proprietà di una ribonucleasi alcalina dalla frazione del citosol epatico della rana toro, Rana catesbeiana.Nella frazione del citosol epatico della rana toro, Rana catesbeiana, una RNasi alcalina [EC 3.1.4.22] esiste in due forme: una è la forma libera di RNasi, che eluisce da una colonna di carbossimetilcellulosa ad una concentrazione di 0,2 M NaC1, l'altra è una forma mascherata o latente (RNasi-RNasi complesso inibitore) che non viene adsorbito sulla colonna di carbossimetilcellulosa e che può essere convertito nella forma libera di RNasi mediante l'aggiunta di p-cloromercuribenzoato. La RNasi elettroforeticamente pura è stata ottenuta con la seguente procedura. La frazione non adsorbita di citosol epatico su un colonna di carbossimetilcellulosa è stata trattata con p-cloromercuribenzoato e quindi applicata a una seconda colonna di carbossimetilcellulosa Il peso molare della RNasi è stato determinato essere di circa 12.000 mediante gel filtrazione ed elettroforesi su gel di poliacrilammide in la presenza di sodio dodecil solfato. Dai risultati della filtrazione su gel, il peso molecolare del complesso inibitore della RNasi-RNasi era di 130.000. La RNasi idrolizzata poli C, poli U e poli I, ma non poli A o poli G. Quando poli C è stato utilizzato come substrato, 2\',3\'-CMP ciclico come intermedio e 3\'-CMP come identificato un prodotto finale. I risultati dell'analisi degli amminoacidi hanno indicato la presenza di un componente insolito. Sono riportate anche le proprietà generali della RNasi e del complesso inibitore della RNasi-RNasi.
Caratterizzazione della NAD+ glicoidrolasi associata all'involucro nucleare del fegato di ratto.La localizzazione della NAD+ glicoidrolasi [EC 3.2.2.5] (NADasi) in sono stati esaminati nuclei di fegato di ratto. Il frazionamento subnucleare ha rivelato che almeno il 70% della NADasi nei nuclei era associato alla frazione dell'involucro nucleare. La frazione dell'involucro nucleare era praticamente priva di contaminazione microsomiale come giudicato dalla morfometria al microscopio elettronico e dai saggi di enzimi marcatori microsomiali Pertanto, la NADasi è risultata essere un componente integrale dell'involucro nucleare. Le proprietà enzimatiche dell'involucro nucleare NADasi sono state confrontate con quelle dell'enzima microsomiale. La NADasi dell'involucro nucleare era identica all'enzima microsomiale nel suo Km per NAD+ (60 muM), pH ottimale (pH 6,5), rapporto tra attività transglicosidasica e attività NADasi (circa 0,5), stabilità termica e sensibilità a vari inibitori. Pertanto, la NADasi è un comune co enzimatico mponente sia dell'involucro nucleare che del reticolo endoplasmatico.
Stabilizzazione della fosfatasi alcalina sierica umana all'inattivazione al calore indotta dall'istidina mediante digestione triptica.1. La fosfatasi alcalina sierica [EC 3.1.3.1] era fortemente inattivato dall'istidina durante l'incubazione a pH 8,0 e 45 gradi; tuttavia, la digestione triptica del siero proteggeva fortemente l'enzima dall'inattivazione da parte dell'istidina. In assenza di istidina, tuttavia, né l'inattivazione termica della fosfatasi né l'effetto della tripsina [EC 3.4. 21.4] I fattori che influenzano l'inattivazione della fosfatasi alcalina sono stati ulteriormente studiati 2. L'effetto della tripsina sull'inattivazione al calore indotta dall'istidina differiva notevolmente a seconda della fonte tissutale dell'enzima, il che suggerisce un possibile metodo per distinguere gli isoenzimi della fosfatasi alcalina.
Tioli della miosina. IV. Reattività "anomala" del tiolo S1 e cambiamenti conformazionali intorno al tiolo S2.La flessibilità della struttura terziaria attorno al sito attivo della miosina ATPasi [EC 3.6.1.3] è stato studiato utilizzando la reattività di due gruppi tiolici specifici, S1 e S2, come sonda strutturale. I seguenti quattro derivati maleimmidici sono stati utilizzati come reagenti tiolici diretti: N-etilmaleimmide ( NEM), N-(4-metossi-2-benzimidazolil metil)maleimmide (MBM), N-(p-(2-benzimidazolil)fenil)maleimmide (BIPM) e N-(4-dimetil-ammino-3,5- dinitrofenil)maleimmide (DDPM). 1. Tutti i derivati maleimmidici utilizzati attivano l'attività Ca2+-ATPasi e inibiscono l'attività EDTA-ATPasi, come NEM, indicando che modificano S1. La velocità di modifica di S1 da parte di NEM e BIPM aumenta con l'aumentare pH, mentre quello di DDPM è diminuito. BIPM ha modificato contemporaneamente S1 e S2 2. S1 ha mostrato una reattività molto più elevata verso le maleimmidi, ad eccezione di BIPM, rispetto a N-acetilci teina (N-Ac-Cys) un composto modello a basso peso molecolare. Il valore di pKa estremamente piccolo di S1, 6.28, spiegava questa elevata reattività. Inoltre, l'aumento della sua reattività indotto dall'ATP indicava che S1 era in uno stato sepolto. L'analisi cinetica ha mostrato che la struttura terziaria intorno a S1 a pH alcalino differiva da quella a pH acido. 3. La costante di velocità apparente della modifica di S2 con NEM era di circa un settecentesimo e un quattrocentesimo di quelle di S1 e N-Ac-Cys, rispettivamente. Studi fluorimetrici utilizzando BIPM hanno rivelato che S2 nello stato sepolto è stato esposto all'aggiunta di ATP; questo è stato compensato dall'interramento di alcuni altri gruppi tiolici (Sp). La non linearità dei grafici di Arrhenius della velocità di reazione di S2 ha suggerito che la regione S2 della miosina aveva conformazioni diverse ad alte e basse temperature, la temperatura di transizione era di 10--15 gradi. Questa non linearità è completamente scomparsa in presenza di Mg2+-ATP. D'altra parte, i grafici di Arrhenius per i tioli reattivi al BIPM non hanno mostrato non linearità in presenza o assenza di ATP.
Purificazione parziale e caratterizzazione di una endo-alfa-N-acetilgalattosaminidasi dalla coltura del terreno di Diplococcus pneumoniae.Il terreno di coltura di Diplococcus pneumoniae contiene l'attività enzimatica che scinde Galbeta1 porta a 3GalNAc dalla glicoproteina di membrana degli eritrociti umani desializzata L'enzima è stato purificato di 180 volte mediante frazionamento di solfato di ammonio, filtrazione su gel attraverso una colonna Sephadex G-200 e cromatografia Sephadex A-25 DEAE A-25. L'enzima purificato libera Galbeta1 porta a 3GalNAc da glicopeptidi e glicoproteine con Galbeta1 porta a 3GalNAcalpha1 porta a porzioni Ser e Thr. Il pH ottimale di questo enzima è 6,0 Utilizzando i glicopeptidi ottenuti dalla digestione con tripsina della glicoproteina di membrana degli eritrociti umani come substrato, un Km di 0,20 mM (su la base della quantità di Galbeta1 porta a 3GalNAc residui). Finora, l'enzima sembra avere una stretta specificità per Galbeta1 porta a 3GalNAcalpha1 conduce alle strutture Ser e Thr, perché dalla mucina sottomascellare suina non sono stati liberati oligosaccaridi più grandi dei trisaccaridi.
Spostamento alcalino nel liquido cerebrospinale lombare e intracranico nell'uomo dopo 5 giorni in alta quota.In sei volontari maschi sani a livello del mare (PB 747-759 Torr), abbiamo misurato pH e PCO2 nel liquido cerebrospinale (CSF), e nel sangue del bulbo arterioso e giugulare; da questi dati abbiamo stimato la PCO2 (12) e il pH per la porzione intracranica del CSF. Le misurazioni sono state ripetute dopo 5 giorni in un camera ipobarica (PB 447 Torr). Sia il liquido cerebrospinale lombare che quello intracranico erano significativamente più alcalini ad altitudine simulata che a livello del mare. La diminuzione dell'[HCO3-] IN nel liquido cerebrospinale lombare in altitudine era simile a quella del plasma sanguigno. Sia a livello del mare che a ad alta quota, la PCO2 misurata nel CSF lombare era superiore a quella stimata per il CSF intracranico In quota, l'iperossia, rispetto all'aria respirabile, ha provocato un aumento della PCO2 intracranica e una diminuzione del pH stimato nel CSF intracranico. Con l'iperossia in quota, la ventilazione alveolare era significativamente più alta che durante l'iperossia o la normossia a livello del mare, confermando che si era verificato un certo grado di acclimatazione. I cambiamenti nelle differenze arterovenose cerebrali nella CO2, misurati in tre soggetti, suggeriscono che il flusso sanguigno cerebrale potrebbe essere stato elevato dopo 5 giorni in altitudine.
Giunzione liquida per elettrodi di riferimento insensibile alla pressione e al flusso.Progettazione e costruzione di una giunzione liquida di riferimento insensibile alla pressione e al flusso per l'uso nei sistemi di misurazione con elettrodi a concentrazione di ioni. La giunzione è economica, è molto semplice e rapida da costruire, è robusta ed è adattabile a varie applicazioni. Quando viene utilizzata in un sistema di misurazione del pH, la deriva, gli artefatti di pressione e gli artefatti di flusso sono trascurabili Il tempo di risposta del sistema sembra essere inferiore a 10 ms. Utilizzando il dispositivo con elettrodo pH come descritto, la costante di velocità di reazione di dissociazione di H2CO3 a 24 gradi C è stata determinata in 22 s-1.
[Una questione medico-legale sull'ipoacusia dopo la vaccinazione (traduzione dell'autore\')].Tre mesi dopo la vaccinazione contro il vaiolo, è stato trovato un bambino essere affetto da sordità sensoriale profonda. Un parere medico-legale del 1962 non rilevò alcun nesso tra vaccinazione e sordità. Tuttavia, in sede di successivo ricorso in sentenza, dovette essere giustificata la legittimità della decisione iniziale. La conseguenza del caso, avvalorata da pubblicazione, ha indicato che una stretta probabilità temporale tra la vaccinazione e la complicazione cerebrale postvacciniale era necessaria per giustificare qualsiasi ulteriore pretesa legale. Questo non è stato considerato un fattore nel caso in esame poiché la scoperta di un gozzo nel paziente in associazione con una disfunzione dello iodio ha scoperto una sindrome di Pendred come causa della perdita dell'udito del paziente.
Cinetica e controllo della glucosio-6-fosfato deidrogenasi surrenale bovino.La cinetica di Michaelis-Menten è stata osservata in studi su glucosio-6 surrenale bovino altamente purificato -fosfato deidrogenasi a pH 8,0 in bicina 0,1 M. Il Km per NADP+ è 3,8 muM e per il glucosio-6-fosfato, 61 muM. A pH 6,9 Km per NADP+ aumenta a 6,5 muM. L'enzima è inibito dal NADPH sia a pH 6,8 e a 8,0 con un Kip di 2,36 muM a pH 8,0. L'inibizione è competitiva rispetto a entrambi i substrati, il che implica che l'aggiunta di substrati è ordinata casualmente. I dati vengono interpretati anche in termini di "carica riducente", la frazione molare di coenzima in forma ridotta. Questo sembra essere il principale meccanismo per la regolazione dello shunt pentoso. Il D-glucosio, ossidato dall'enzima a una velocità molto lenta, è anche un inibitore competitivo per il substrato naturale con un Ki di 0,29 M. Il fosfato è un inibitore competitivo per l'ossidazione del glucosio-6-fosfato ma sia il fosfato che il solfato ac accelerano l'ossidazione del glucosio suggerendo un sito di legame comune per i due anioni e il fosfato del substrato naturale. Sebbene sia stato osservato il legame dell'ACTH ai nostri preparati enzimatici, non siamo stati in grado, nonostante ripetuti tentativi, di dimostrare un aumento dell'attività dell'enzima mediante l'aggiunta di ACTH.
Uso ipnotico e tranquillanti minori tra i pazienti ricoverati e dopo la dimissione.Una delle principali preoccupazioni nella prescrizione di ipnotici e tranquillanti minori in ospedale è che l'assuefazione a lungo termine Gli ex pazienti psichiatrici ricoverati sono stati intervistati per valutare l'uso di ipnotici e tranquillanti minori dopo la dimissione. I pazienti che usavano flurazepam e cloralio idrato come pazienti ricoverati non avevano maggiori probabilità di usare questi ipnotici come pazienti ambulatoriali rispetto ai pazienti che non ricevevano ipnotici come pazienti ricoverati. C'era un significativo associazione tra uso ospedaliero e ambulatoriale di tranquillanti minori. Anche l'uso ambulatoriale di tranquillanti minori era significativamente associato all'uso ambulatoriale di ipnotici.
Purificazione e proprietà della ialuronato liasi streptococcica.La ialuronato liasi (ialuronidasi) è stata purificata e caratterizzata da uno streptococco di tipo 4 di gruppo A. Produzione del L'enzima è stato favorito dalla crescita nell'infusione di vitello tripsinizzato in presenza di ialuronato oligosaccaride e tetrasaccaride L'attività enzimatica rilevabile è stata ridotta in presenza di N-acetilglucosamina e acido glucuronico La purificazione della ialuronato liasi consisteva nel 40-60% di precipitazione di ammonio solfato A, dietilamina -50 Cromatografia a scambio ionico Sephadex, filtrazione su gel con G-200 Sephadex e adsorbimento su Sepharose 6B. L'enzima purificato era antigenicamente omogeneo e privo di proteinasi, desossiribonucleasi, streptolisina 0 e streptochinasi. La ialuronato liasi attiva è stata recuperata da gel di poliacrilammide neutra, e sembrava essere una glicoproteina. Una singola banda è stata rilevata mediante elettroforesi di sodio dodecil solfato-acrilammide, che aveva un peso molecolare di circa 50.000. Un peso molecolare di 70.000 è stato osservato mediante filtrazione su gel. L'enzima purificato aveva un Km di 3,8 x 10(-4) e un pH ottimale di 6,0. Gli agenti riducenti aumentavano di almeno tre volte l'attività dell'enzima grezzo ed erano necessari per prevenire l'inattivazione dell'enzima purificato.
Fattori che influenzano il potenziamento immunitario dei meccanismi battericidi intrapolmonari.L'effetto dell'immunizzazione specifica sui meccanismi di difesa antibatterica del polmone murino è stato valutato contro Streptococcus pneumoniae , Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus (Smith), Serratia marcescens, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis e Pseudomonas aeruginosa. L'immunizzazione mediante inalazione di aerosol ha migliorato significativamente l'uccisione intrapolmonare di Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis, ma non del sistema Pseudomonas mirabilis. l'immunizzazione ha indotto titoli più elevati di specifiche agglutinine sieriche rispetto all'immunizzazione locale del tratto respiratorio; tuttavia, l'immunizzazione locale è stata più efficace nel potenziare l'attività battericida polmonare rispetto alla vaccinazione parenterale. uccisione dell'omolo bell'organismo. Con S. aureus, l'attività battericida polmonare non è stata accelerata dalla provocazione di aerosol con l'organismo preopsonizzato, né è stata accelerata nei topi immunizzati passivamente. Questi dati dimostrano che il potenziamento immunitario dell'attività battericida polmonare è governato dal batterio utilizzato per il challenge e dalla via di immunizzazione. I risultati dimostrano inoltre che con P. mirabilis, i meccanismi mediati dagli anticorpi sono coinvolti nel potenziamento immunitario dell'attività battericida polmonare.
Fattori che influenzano l'attività dell'enterotossina di Escherichia coli termolabile.In questo studio, le condizioni per la produzione, il rilevamento e la conservazione dell'enterotossina di Escherichia coli termolabile (LT) nei filtrati di coltura di E. coli H-10407 sono stati definiti utilizzando il sistema di analisi delle cellule tumorali surrenali. Un terreno arricchito contenente 0,6% di estratto di lievito, 2% di casaminoacidi e 0,25% di glucosio tamponato a pH 8,5 ha prodotto il LT più alto attività dei vari terreni di prova. Nel ceppo di E. coli H-10407, l'attività LT è stata notevolmente ridotta se il pH iniziale del terreno di coltura è stato ridotto a pH 7,5 o meno. Contrariamente a E. coli P-263, se il ceppo H -10407 è stato coltivato in presenza di mitomicina C non vi è stato alcun aumento della produzione di LT. I filtrati di coltura grezza contenenti LT possono essere conservati a 4 gradi C per diversi giorni senza un'apprezzabile perdita di attività; tuttavia, per la liofilizzazione a lungo termine o si consiglia il congelamento a -70 gradi C.
Immunità umorale a Streptococcus pneumoniae indotta da una frazione proteica ribosomiale pneumococcica.È stato ottenuto l'isolamento di una sottofrazione protettiva di ribosomi da Streptococcus pneumoniae, e la risposta immunitaria che induce è stata studiata. I topi immunizzati con ribosomi pneumococcici o proteina purificata estratta dalla preparazione ribosomiale (proteina 2-CE) mostrano tassi di sopravvivenza simili su sfida da parte di S. pneumoniae virulento. Al contrario, i destinatari di acido ribonucleico ribosomiale purificato non sono mai stati protetto contro il challenge pneumococcico. Siero di topi immunizzati con ribosomi pneumococcici o riceventi singenici immunizzati passivamente con proteina 2-CE contro challenge pneumococcico, mentre le cellule della milza degli stessi donatori non erano in grado di trasferire l'immunità. L'immunizzazione passiva con siero antiribosoma potrebbe essere abrogata dall'assorbimento con intero ribosomi, proteina 2-CE, o vari sierotipi di S. pneumoniae (tipi capsulari 2, 3, 6, un d 14). Il siero antiribosoma ha aumentato significativamente la clearance di S. pneumoniae dal sangue di topo in vivo e in vitro. Ciò richiedeva cellule fagocitarie, poiché il siero antiribosoma da solo, con o senza complemento, supportava la crescita di S. pneumoniae in misura paragonabile al siero normale. I dati suggeriscono che l'immunogeno primario dei ribosomi pneumococcici risiede nella frazione proteica. Inoltre, l'immunità indotta dalla frazione proteica è mediata da un anticorpo che sembra funzionare come opsonina per S. pneumoniae.
Emoagglutinazione da virus dell'anemia infettiva equina.Il virus dell'anemia infettiva equina (EIA) che è stato propagato su una linea cellulare dermica equina ha agglutinato eritrociti di cavia. Virale fluidi contenenti circa 10 (7,5) dosi medie infettive di coltura tissutale/ml hanno mostrato titoli emoagglutinanti (HA) compresi tra 16 e 32 unità/0,05 ml. I risultati della centrifugazione in gradiente di densità di equilibrio di cloruro di cesio hanno rivelato che l'emoagglutinina era inseparabile dalle particelle virali. La reazione di emoagglutinazione è persistita in un ampio intervallo di temperatura e pH e l'assenza di cationi bivalenti non ha diminuito la sua attività. L'attività dell'HA era stabile a 4 gradi C ma non a 56 gradi C. L'attività è stata distrutta da solventi lipidici che distruggono il virus e moderatamente sensibile a un enzima proteolitico La neuraminidasi ha leggermente potenziato l'attività dell'HA La fosfolipasi C non ha avuto alcun effetto sul titolo dell'HA, sebbene abbia completamente inattivato l'infettività. irradiazione ultravioletta. Pertanto, l'emoagglutinina sembra essere strettamente associata alle particelle virali e la sua attività dipende dalla presenza dei suoi lipidi e proteine. L'emoagglutinazione è stata inibita dai sieri di cavalli infettati dal virus EIA. I recettori dell'emoagglutinina sugli eritrociti sono stati inattivati da un enzima proteolitico e dalla formaldeide, ma non sono stati influenzati da neuraminidasi, sodio desossicolato o KIO4.
Differenziazione in vitro e sensibilità al pH di ceppi attenuati di campo e colture cellulari di virus della gastroenterite trasmissibile.Caratteristiche di quattro campi di virus della gastroenterite trasmissibile (TGE) ceppi (Miller, Purdue, Bl e V203) e quattro ceppi attenuati da colture cellulari (Purdue, SH, CKp e Bl) sono stati studiati per trovare metodi di differenziazione tra i due gruppi di virus. I ceppi di virus di campo TGE non si sono replicati come così come ceppi attenuati a 37 C e non potevano essere passati in serie per più di 4-6 passaggi a 33 C. C'erano chiare differenze nella dimensione della placca quando i ceppi sono stati confrontati. I ceppi di campo avevano dimensioni medie della placca che andavano da 3,59 a 3,15 mm, considerando che i ceppi attenuati hanno indotto placche più grandi di 4,2 mm. Sono state osservate variazioni nella stabilità dei ceppi a pH 3.0. I ceppi di campo e i ceppi attenuati da colture cellulari CKp-270 e SH-114 sono stati ridotti nel titolo di circa 1 log10. Una riduzione di circa 3 log 10, tuttavia, è stato ottenuto con ceppi di colture cellulari B1-300 e Purdue-113.
Antigenicità dei polisaccaridi pneumococcici specifici del tipo nei ratti.Risposte anticorpali emoagglutinanti di ratti Lewis-Wistar e Sprague-Dawley a dosi graduate di tipo specifico sono stati misurati polisaccaridi pneumococcici Ratti a cui è stata somministrata una piccola dose (da 0,2 a 50 tazze) di polisaccaride di tipo 1 o 8 hanno sviluppato per via intraperitoneale un anticorpo emoagglutinante specifico del tipo. , e non rispondevano a una successiva iniezione di una piccola (e normalmente antigenica) dose di polisaccaride. Si è verificata antigenemia prolungata nei ratti iniettati con una grande dose di polisaccaride. C'era antigenemia prolungata nei ratti iniettati con una grande dose di polisaccaride, e la cinetica della clearance dell'antigene in questi animali assomigliava a quella riportata per i topi con paralisi immunologica polisaccaridica Questi risultati indicano che un fenomeno simile a immu paralisi nologica con polisaccaridi pneumococcici tipo-specifici può essere prodotta nei ratti.
Studi sull'inibitore della proteinasi A I3A dal lievito.La purificazione e alcune proprietà dei due inibitori I2A e I3A della proteinasi A dal lievito hanno precedentemente descritto [Saheki et al, (1974) Eur. J. Biochem. 47, 325]. Viene presentato un metodo migliorato per la preparazione di I3A che richiede meno tempo e porta a rese più elevate. Sulla base dell'analisi degli amminoacidi, I3A contiene 68 amminoacidi per molecola, il peso molecolare era 7676. L'inibitore non conteneva prolina, arginina, cisteina e triptofano, ma conteneva un gran numero di amminoacidi polari glutammato + glutammina, aspartato + asparagina e lisina. Né per dansilazione né per degradazione di Edman è stato possibile rilevare un amminoacido N-terminale. I cambiamenti nel dicroismo circolare durante la transizione da pH 6,9 a 3,0 suggeriscono diverse strutture terziarie a questi valori di pH. Esperimenti sulla cinetica di inibizione della proteinasi A hanno rivelato un apparente Valore Ki di 5,5 X 10 (-8) M per I3A e 1,6 X 10 (-8) M per pepstatina. Dai dati cinetici si conclude una "inibizione non stechiometrica" di tipo "pseudo-irreversibile". Un tipo idrofobico di legame di I3A alla proteinasi A del lievito è suggerito da esperimenti che dimostrano una grande diminuzione della percentuale di inibizione causata dall'aggiunta di 2 M di urea, 2 M di guanidina cloridrato, 0,125% di Triton o 0,125% di acido colico.
Identità della chinurenina: piruvato aminotransferasi con istidina: piruvato aminotransferasi.La chinurenina piruvato aminotransferasi è stata purificata dal rene di ratto. L'enzima purificato aveva un punto isoelettrico di pH 5,2 e un pH ottimale di 9,3. L'enzima era attivo con il piruvato come accettore di amminoacidi ma non con il 2-ossoglutarato e utilizzava vari amminoacidi aromatici come donatori di amminoacidi. Gli amminoacidi L erano efficaci nel seguente ordine di attività: istidina maggiore rispetto alla fenilalanina maggiore della chinurenina maggiore della tirosina maggiore del triptofano maggiore del 5-idrossitriptofano I valori Km apparenti erano di circa 0,63 mM, 1,4 mM e 0,09 mM rispettivamente per istidina, chinurenina e fenilalanina I valori Km per piruvato erano 5,5 mM con istidina come donatore amminico, 1,3 mM con chinurenina e 8,5 mM con fenilalanina L'attività della chinurenina piruvato aminotransferasi dell'enzima è stata inibita dall'aggiunta di istidina o fenilalanina. r pesi determinati mediante filtrazione su gel e centrifugazione in gradiente di densità di saccarosio erano circa 76000 e 79000, rispettivamente. Sulla base del rapporto di purificazione, specificità del substrato, inibizione da substrati comuni, distribuzione subcellulare, focalizzazione isoelettrica ed elettroforesi su gel di poliacrilammide, si suggerisce che la chinurenina piruvato aminotransferasi sia identica all'istidina piruvato aminotransferasi e anche alla fenilalanina piruvato aminotransferasi. Viene discusso il significato fisiologico dell'enzima.
[Preparazione e alcune proprietà della tripsina immobilizzata dal gambero Cambarus affinis Say (autore\'s trad.)].L'enzima triptico anionico del gambero di fiume (tripsina del gambero) è stato adsorbito su DEAE-Sephadex A-50 e accoppiato covalentemente a Sepharose 4B attivato da BrCN e vetro poroso caricato con gruppi propilici isotiocianato (vetro ITC). Sono state trovate le relative attività contro l'estere metilico della p-tosilarginina (TosArgOMe). essere dal 30 al 100% per la tripsina dei gamberi DEAE-Sephadex, dal 20 al 53% per la tripsina dei gamberi Sepharose e dal 17 al 38% per la tripsina dei gamberi di fiume ITC. Le attività relative aumentano con la diminuzione del contenuto proteico dei complessi della matrice enzimatica. le relative attività proteasiche (substrato: caseina 1%) sono state ottenute con tripsina gamberi Sepharose (74%), seguita da tripsina gamberi DEAE-Sephadex (68%) e tripsina gamberi vetro ITC (45%). Risultati simili si ottengono con protamina e lattato deidrogenasi nativa come substrati In accordo con il complesso della tripsina bovina Sepharose, l'apparente costante di Michaelis (Km(app)) della tripsina dei gamberi di fiume Sepharose con TosArgOMe è risultata nettamente superiore a quella dell'enzima nativo. È stato dimostrato che i profili di pH-attività dei derivati della tripsina dei gamberi utilizzando TosArgOMe come substrato sono spostati verso valori di pH più alcalini di 0,5 (tripsina di gamberi di vetro ITC) e 1 (tripsina di gamberi di fiume Sepharose) rispettivamente, o verso un pH più acido valori (di 1,5 unità di pH) con il derivato policationico (tripsina del gambero DEAE-Sephadex) rispetto all'enzima nativo (pH ottimale 8,6). Per quanto riguarda la stabilità alla temperatura dei derivati, la tripsina di gambero di fiume Sepharose era più stabile, la tripsina di gambero di vetro ITC si comportava come la tripsina di gambero di fiume nativa e la tripsina di gambero di fiume DEAE-Sephadex era più sensibile a temperature elevate rispetto all'enzima solubile. Le proprietà dei derivati della tripsina dei gamberi vengono confrontate con le proprietà degli analoghi bovini.
Sul meccanismo e alcune proprietà della vinilacetil-CoA delta-isomerasi del Clostridium kluyveri.Vinilacetil-CoA delta-isomerasi del Clostridium kluyveri cresciuto su etanolo /acetato è stato purificato 32 volte. L'enzima è piuttosto labile. Tutti gli esperimenti sono stati condotti con l'analogo substrato tioestere dell'acido vinilacetico e N-acetilchisteamina (vinilacetil-SEtNAc (1 f)). Il 3-butinoil-SEtNAc è un forte inibitore di l'isomerasi Il trasferimento di idrogeno dalla posizione alfa del vinilacetil-SEtNAc alla posizione gamma del 2-butenoil-SEtNAc (1f porta a 2 f) avviene parzialmente per via intramolecolare (40-50%) come mostrato da esperimenti in 3HOH/H2O , 2H2O e 3HOH/2H2O nonché da esperimenti con [2,3-3H]vinilacetil-SEtNAc. Solo 0,07 atomi di trizio sono incorporati nella posizione gamma di 2f quando l'isomerizzazione avviene in 3HOH/H2O. intramolecolarità è in accordo con i risultati di esperimenti condotti in 2H2O con cellule intere [4]. su 1f porta a 2f mostra una reversibilità nulla o solo trascurabile e almeno nessun effetto isotopico considerevole.
Il poli(adenosina difosfato ribosio) è legato covalentemente alle proteine nucleari da due tipi di legami.(ADP-ribosio)n residui formati da brevi L'incubazione a termine di fegato di ratto adulto e nuclei di carcinoma di Ehrlich con NAD marcato sono stati analizzati mediante centrifugazione in gradiente di densità di Cs2SO4/guanidinio cloruro/urea. Il confronto con campioni in cui la proteina era stata completamente digerita ha rivelato che la maggior parte, o probabilmente tutti, acido insolubile (ADP -ribosio)n sono legate in modo covalente alle proteine nucleari, come è vero per le catene corte, solubili in acido (ADP-ribosio)n. Il rilascio completo delle catene (ADP-ribosio)n è effettuato da alcali diluiti. Al contrario, NH2OH liberato solo una parte dei residui lunghi e corti (ADP-ribosio)n dai coniugati proteici, indicando due tipi di legami, entrambi alcali-labili, ma solo uno suscettibile all'idrossilammina neutra. Entrambi i tipi di legami erano equamente distribuiti tra acido- catene solubili e insolubili in acido (ADP-ribosio)n. -Stabilità di th La proteina e (ADP-ribosio)n coniugata durante l'isolamento è garantita solo a valori di pH inferiori a 7.
[Registrazione poligrafica del sonno sotto l'influenza di Plantival plus].10 pazienti con disturbi del sonno moderati non psicotici sono stati esaminati poligraficamente per un totale di 14 notti ciascuna Queste 14 notti sono state suddivise in 4 serie di test: Placebo è stato somministrato durante la prima, Plantival plus durante la seconda e la terza e ancora placebo durante la quarta serie I risultati hanno mostrato che la veglia è diminuita dopo l'applicazione di Plantival plus e che c'è stato un aumento del sonno profondo. Questi effetti potevano essere osservati principalmente durante la prima ora di sonno e scomparivano gradualmente durante le ore di sonno successive. Le fasi REM non erano influenzate dal farmaco. A causa di queste osservazioni, Plantival plus dovrebbe essere applicato principalmente quando si verificano continuamente disturbi dell'addormentamento e disturbi del sonno. Nel caso si riscontrasse un sonno interrotto nelle prime ore del mattino, questo preparato può essere applicato solo in combinazione con altri tipi di trattamento.
[Malattie infiammatorie intestinali: colite ulcerosa e morbo di Crohn. Diagnosi precoce e trattamento].Sintomi precoci piuttosto caratteristici si trovano nella colite ulcerosa come così come nel morbo di Crohn. In questi pazienti, ma anche in stadio avanzato, la diagnosi differenziale tra questi due disturbi è possibile mediante tecniche endoscopiche e biopsia guidata. In un'alta percentuale di pazienti con colite ulcerosa si ottengono buoni risultati con terapia conservativa, utilizzando la sola salazopiridina o in combinazione con cortisone. La terapia combinata con salazopiridina e cortisone sembra offrire i migliori risultati anche nella malattia di Crohn, tuttavia in una certa percentuale di casi l'intervento chirurgico è inevitabile.
[Aspetti più recenti nella terapia dell'angina pectoris].I progressi nella chirurgia coronarica hanno portato a nuovi aspetti nel trattamento dell'angina pectoris. Secondo i reperti coronaro-angiografici, che rendono possibile un'esatta identificazione della cardiopatia coronarica, e in base alla funzione ventricolare è oggi possibile determinare una strategia terapeutica con adeguata sicurezza per ogni singolo caso. Il criterio più importante per una decisione di intervento chirurgico o conservativo il trattamento non è solo il miglioramento dei sintomi soggettivi, in particolari forme di malattia coronarica l'operazione di bypass non solo si traduce in un miglioramento della qualità della vita ma anche in un tempo di sopravvivenza notevolmente aumentato.
[Situazione attuale di resistenza in un reparto di chirurgia e urologia].Lo spettro e la sensibilità dei batteri sono stati studiati presso il Surgical (534 strisci di ferita positivi) e le Cliniche Urologiche (7879 campioni di urina). Krankenhaus Nordwest, Frankfurt/M. , durante il periodo 1969-1971 e nel 1973. I microrganismi più comuni identificati negli strisci di ferita erano E. coli, seguito da Staph. areus, Aerobacter e Proteus specie. E. coli erano anche predominanti nelle urine, ma seguiti da Enterococchi, Proteus e Pseudomonas. E. coli, specie Proteus e soprattutto Pseudomonas sono aumentati di numero mentre gli Enterococchi sono diminuiti. Non c'è stato un aumento pronunciato della resistenza a 9 antibiotici attuali così come ai chemioterapici durante il periodo di osservazione che è stato particolarmente eclatante nel caso dell'ampicillina utilizzata su larga scala. I risultati del nostro studio supportano il metodo terapeutico attualmente impiegato utilizzando antibiotici battericidi del gruppo delle penicilline in rigorose indicazioni.
Basi biochimiche di un modello animale di malattia depressiva--un rapporto preliminare--.Le analisi biochimiche di campioni di cervello di un modello animale di depressione indicano lo stato di immobilità osservato in risposta a uno stimolo condizionato era dovuto a un eccesso di attività funzionale della serotonina. Un'attività funzionale in eccesso della serotonina può essere direttamente responsabile della malattia depressiva umana. Questa conclusione contrastante con le teorie attualmente popolari sulla carenza di serotonina è stata discussa con riferimento all'animale e ai dati clinici in letteratura che sono coerenti con la conclusione.
[Fato metabolico del carteololo cloridrato (OPC-1085), un nuovo agente beta-adrenergico. (3) Studi autoradiografici sulla distribuzione corporea totale nei topi].La distribuzione di un nuovo agente bloccante beta-adrenergico, 3H-carteololo nei topi è stata studiata mediante autoradiografia su tutto il corpo. La distribuzione della radioattività è stata osservata in tutti gli organi tranne gli occhi e il cervello, con attività specifiche particolarmente elevate nei reni, fegato, cistifellea e contenuto nell'intestino in breve tempo dopo la somministrazione orale o endovenosa. La radioattività è stata quindi prontamente eliminata da tutti i tessuti e organi ed escreta quasi interamente nelle urine e nella bile. Il propranololo è noto per essere distribuito ad alta concentrazione nel cervello, mentre la concentrazione di (3H-) carteololo rilevabile nel cervello era lieve. Nella ghiandola surrenale, la radioattività era localizzata nel midollo. La radioattività è stata rilevata anche nel contenuto dello stomaco dopo l'infusione endovenosa s amministrazione. La distribuzione della radioattività nel feto attraverso la placenta era inferiore a quella negli organi principali della madre topo e l'eliminazione dell'attività era più rapida nel feto che nella madre. Questi risultati indicano che il carteololo e i suoi metaboliti attraversano in una certa misura la barriera emato-encefalica e la placenta.
[Interazione di dl-mandelamidina (Olimidine) con alcuni farmaci antipertensivi espressi nella pressione sanguigna di ratti coscienti].Effetto ipotensivo di dl-Mandelamidina (Olmidine, MA) in combinazione con alcuni farmaci antipertensivi affermati è stato studiato in ratti normotesi coscienti. La pressione sanguigna media e la frequenza cardiaca sono state misurate per mezzo di un trasduttore di pressione tramite un tubo di polietilene inserito nell'aorta addominale di ratto secondo il metodo descritto di settimane. I risultati ottenuti sono stati i seguenti: 1) Gli effetti ipotensivi di guanetidina e idroclorotiazide sono stati potenziati in combinazione con MA. 2) L'effetto ipotensivo della reserpina è stato ridotto da MA. 3) Gli effetti ipotensivi di clonidina, C6, propranololo e idralazina non sono stati influenzati da MA. D'altra parte, i cambiamenti nella frequenza cardiaca indotti da reserpina e C6 sono stati aumentati da MA, tuttavia, quelli indotti da guanetidina, clonidina propranololo e idralazina sono stati ridotti d di MA. La leggera diminuzione della frequenza cardiaca indotta dall'idroclorotiazide non è stata influenzata dall'MA. Alla luce dei nostri dati, si ritiene importante che le indagini sull'interazione dei farmaci antipertensivi vengano effettuate utilizzando animali coscienti, poiché questi farmaci verranno prescritti clinicamente.
Presenza o assenza di inibitori della crescita dei cristalli nella bile. 1. Effetto della bile sulla formazione di fosfato di calcio, un costituente dei calcoli biliari.Quando gli ioni calcio e fosfato sono stati miscelati in modo che la loro concentrazione finale fosse di 4 mmol/1 e il pH è stato mantenuto a 7-0, si è formato immediatamente un precipitato amorfo che dopo un certo tempo si è trasformato in materiale cristallino con una struttura simile all'apatite. la formazione di uno o di entrambi i tipi di precipitato potrebbe essere rallentata o impedita aggiungendo al mezzo di cristallizzazione tracce di pirofosfato o citrato che sono noti inibitori della formazione di fosfato di calcio, o grandi quantità di cloruro di sodio che aumentavano la forza ionica del soluzione e quindi la solubilità del fosfato di calcio, Sia il dotto comune che la bile della colecisti da pazienti con calcoli biliari composti da colesterolo e/o carbonato di calcio hanno avuto un'azione inibitoria molto pronunciata sulla formazione di questi pre cipita. Per produrre questi effetti erano necessarie solo piccolissime quantità di bile, che quindi non erano dovute ad un aumento della forza ionica. L'ultrafiltrazione della bile ha mostrato che il principale responsabile di questa attività era il materiale con un peso molecolare superiore a 10.000. Poiché l'inibitore era presente sia nel dotto comune che nella bile della colecisti, il fegato è la probabile fonte di origine. Viene esaminata la possibile identità di questo materiale. Il potente effetto inibitorio della bile sulla cristallizzazione del fosfato di calcio è probabilmente un fattore che contribuisce alla rara presenza di fosfati di calcio, apatite e whitlockite, nei calcoli biliari.
gamma-glutamil transpeptidasi dell'intestino di ratto: localizzazione e possibile ruolo nel trasporto degli aminoacidi.gamma-glutamil transpeptidasi (gamma-GT), un enzima possibilmente coinvolto nel trasporto di aminoacidi, è stato studiato nell'intestino tenue di ratto utilizzando il substrato sintetico L-gamma-glutamil-p-nitroanilide. La localizzazione e le caratteristiche dell'enzima sono state correlate con le caratteristiche di assorbimento degli aminoacidi. Attività gamma-GT copurificata con sucrasi e fosfatasi alcalina L'attività era massima a pH 8,2 ed era stimolata da cationi monovalenti La specificità relativa della reazione gamma-GT con diglicina e otto amminoacidi essenziali come substrati era ben correlata con la velocità di assorbimento intestinale di questo dipeptide e di questi amminoacidi come osservato da altri. L'attività gamma-GT era 12 volte maggiore nel digiuno che nell'ileo, ancora una volta in accordo con i tassi relativi di assorbimento degli amminoacidi lungo la lunghezza dell'intestino di ratto. L'attività specifica di gam ma-GT nelle cellule della punta dei villi era 10 volte maggiore rispetto alle cellule della cripta e l'assorbimento di aminoacidi era da 2 a 6 volte maggiore con la punta dei villi che con le cellule della cripta. La bromosulfoftaleina, un inibitore non competitivo della gamma-GT, ha inibito l'assorbimento degli aminoacidi. Questi studi supportano il concetto che la gamma-GT di membrana può essere coinvolta nell'assorbimento di amminoacidi e dipeptidi e indicano che ulteriori indagini su tale coinvolgimento possono essere convenientemente perseguite utilizzando l'intestino tenue dei mammiferi.
Influenza dello stato di secrezione acida sulla tolleranza della mucosa gastrica alla retrodiffusione di H+.L'effetto della retrodiffusione di H+ SULLA DIFFERENZA DI POTENZIALE (PD ), sono state studiate in vitro la resistenza elettrica (R) e la corrente di cortocircuito (Isc) delle mucose gastriche anfibie secernenti spontaneamente e inibite da burimamide, quando la retrodiffusione di H+ è stata indotta dal passaggio di una corrente elettrica di 510 mua per cm2 da dal lato secretorio (S) di pH 2,25 al lato nutritivo (N) per 30 min, le mucose secernenti spontaneamente hanno mostrato piccole diminuzioni di PD (23,6 derivazioni a 16,2 mv) e Isc (80 derivazioni a 61 mua per cm2) ma non significative variazione di R. Nelle mucose inibite dalla burimamide si sono verificate diminuzioni marcate e significativamente maggiori di PD (26,8 conduce a 3,4 mv), R (473 conduce a 170 ohm cm2) e Isc (50 conduce a 13 mua per cm2). la diffusione di H+ è stata indotta stabilendo un gradiente di concentrazione di H+ da S conduce a N o esponendo il superficie secretoria al taurocolato di sodio con pH secretorio 2,25, il tessuto inibito dalla burimamide ha dimostrato una depressione significativamente maggiore dei parametri elettrici rispetto alle mucose secernenti. Il pH intracellulare, misurato con il metodo 5,5-dimetossiazolidina-2,4-dione, era significativamente più alto nei tessuti stimolati con istamina (7,28) rispetto ai tessuti inibiti con metiammide (7,11). Questi studi suggeriscono fortemente che lo stato secretorio della mucosa e quindi il suo stato acido-base siano importanti determinanti nella tolleranza del tessuto alla retrodiffusione esogena di H+. La misura della perdita assoluta di H+ dalla sola soluzione mucosale potrebbe non essere una valutazione adeguata della barriera mucosa gastrica.
Lesioni della mucosa gastrica prodotte da infusione endovenosa di aspirina nei gatti.L'aspirina è stata somministrata mediante infusione endovenosa continua a 35 gatti intatti per 7 giorni in dosi variabili da 25 a 200 mg kg-1 giorno-1. Lesioni della mucosa gastrica si sono verificate nel 50-70% degli animali nei vari gruppi di dosaggio, comprese le ulcere profonde nel 20%. Tutte le ulcere erano nella mucosa antrale vicino al suo confine con mucosa. L'incidenza delle lesioni, comprese le ulcere, non ha mostrato alcuna relazione apparente con la dose di aspirina. Con tutte le dosi, tranne la più alta, i livelli plasmatici di salicilato erano all'interno o al di sotto di quello che è considerato l'intervallo terapeutico per l'uomo. Asprin, 100 mg kg- 1 giorno-1, è stato somministrato per 7 giorni a 4 gatti con tasche contenenti tutta la mucosa antrale più parte della mucosa ossintica. Una o più ulcere profonde si sono verificate nella mucosa antrale delle tasche in ciascuno di questi 4 gatti. La differenza di potenziale elettrico attraverso la mucosa non è diminuito e i flussi netti di ioni idrogeno fuoriescono della sacca e degli ioni sodio nella sacca non sono aumentati durante i 7 giorni di somministrazione di aspirina nonostante la comparsa di ulcere nelle sacca. Si conclude che l'aspirina per via endovenosa, in dosi che danno livelli plasmatici all'interno o al di sotto dell'intervallo terapeutico per l'uomo, provoca lesioni della mucosa gastrica comprese ulcere profonde entro 7 giorni nei gatti. Queste lesioni si verificano senza i cambiamenti nella differenza di potenziale elettrico e nei flussi di idrogeno e sodio che sono considerati caratteristici della "barriera rotta.
Meccanismo di prevenzione delle lesioni gastriche indotte dall'aspirina mediante legamento del dotto biliare nel ratto.È stato riportato che il reflusso gastrico della bile è essenziale per la produzione di lesioni acute della mucosa gastrica da parte dell'aspirina intragastrica nel ratto Lo scopo del presente studio era di determinare se la legatura del dotto biliare della legatura del piloro nel ratto inibisce le lesioni gastriche indotte dall'aspirina e, in caso affermativo, quali sono i meccanismi protettivi. Le operazioni sono state eseguite in anestesia con etere. Asprina, 200 mg per kg, è stata instillata nello stomaco 1/2 ora dopo l'intervento chirurgico (legatura del dotto biliare o del piloro). Quattro ore dopo i ratti sono stati uccisi, lo stomaco è stato esaminato e le lesioni della mucosa sono state La legatura del dotto biliare, ma non la legatura del piloro, è significativamente protetta contro le lesioni gastriche indotte dall'aspirina La legatura del dotto biliare, nei ratti legati al piloro, ha inibito la produzione di acido gastrico del 78%. lesione per rmazione. Lo shunt della bile al colon (per prevenire il reflusso biliare) non ha impedito le lesioni da aspirina. La determinazione del salicilato, per accertare se la legatura del dotto biliare alterasse l'assorbimento dell'aspirina, non ha rivelato differenze significative tra legatura del dotto biliare e aspirina, shunt + aspirina e shunt sham + aspirina nelle concentrazioni di salicilato plasmatico e del tessuto gastrico. (1) La legatura del dotto biliare protegge dalle lesioni della mucosa gastrica indotte dall'aspirina inibendo la secrezione gastrica di HCl. Come corollario, è necessaria una certa quantità di acido nello stomaco per la formazione di lesioni gastriche indotte dall'aspirina. (2) Il reflusso biliare non è necessario per le lesioni gastriche indotte dall'aspirina nel ratto.
Effetti iono-selettivi del salicilato sulla mucosa antrale.Gli effetti del salicilato luminale, 5mM, sono stati misurati sui tassi di trasporto ionico da parte della mucosa antrale isolata. A pH luminale neutro, il salicilato aumenta la permeabilità al Na e diminuisce la permeabilità al Cl. Il salicilato non altera il trasporto netto di Na ma diminuisce la secrezione netta di Cl. A pH luminale 4, gli effetti del salicilato possono essere arbitrariamente suddivisi in due fasi. La fase iniziale è associata ad un aumento di Na e marcata diminuzione della permeabilità al Cl. Successivamente, si verifica un maggiore aumento della permeabilità al Na e un marcato aumento della permeabilità al Cl. Il trasporto attivo di Na persiste in presenza di salicilato a pH 4. Evidenze indirette suggeriscono anche che la secrezione di Cl persiste sotto questi condizioni, acquistare a un tasso ridotto. Il tasso di perdita di acido acido luminale aumenta anche in presenza di salicilato. Un aumento di 4 volte della concentrazione di salicilato o una diminuzione del pH luminale da 4 a 3 non sembra intensificarsi y gli effetti osservati per salicilato 5 mM a pH 4. L'aumento del catione e la diminuzione della permeabilità agli anioni osservati a pH 7 e inizialmente a pH 4 sono compatibili con l'influenza di una carica negativa dell'anione salicilato. Anche i successivi cambiamenti osservati in presenza di acido sono compatibili con il concetto che quando la mucosa viene sopraffatta dall'acido, si verifica un aumento aspecifico della permeabilità. Tuttavia, l'effetto del salicilato sul trasporto attivo di Cl è largamente indipendente dalla diffusione dell'acido nella mucosa.
Elevata attività di transpeptidazione e ampia specificità di accettore delle gamma-glutamiltransferasi dei tumori.La gamma-glutamiltransferasi (EC 2.3.2.2) (=gamma-glutamiltranspeptidasi , l'attività gamma-GTP) nell'epatoma indotta dal 3\'-metil-4-(dimetilammino)azobenzene (3\'-Me-DAB) era 120 volte superiore a quella del fegato normale e un'elevata attività è stata riscontrata anche nell'epatocellulare bovino carcinoma. I gamma-GTP di questi tessuti maligni hanno risposto di più e hanno mostrato una specificità più ampia agli accettori del gruppo gamma-glutamil rispetto a quelli di tessuti normali come fegato bovino, ratto e topo e rene bovino. Tre specie di gamma-GTP sono state isolate dal rene bovino mediante cromatografia DEAE-cellulosa, mentre solo due specie sono state isolate dal carcinoma epatocellulare bovino. Il carcinoma mancava delle specie enzimatiche meno acide. Appropriati accettori del gruppo gamma-glutammico stimolavano specie enzimatiche più acide rispetto alle specie meno acide in entrambi i tessuti. T Le frazioni separate dall'epatoma sono state stimolate più di quelle del rene dall'accettore del gruppo gamma-glutammico. Gli enzimi dei tessuti normali hanno risposto in modo simile a un accettore di gruppi gamma-glutamile indipendentemente dalla differenza nella loro attività. Pertanto, i gamma-GTP dei tessuti maligni sembrano essere più versatili per il trasporto di aminoacidi, sia qualitativamente che quantitativamente. In queste proprietà l'enzima del fegato fetale di topo che ha mostrato la più alta attività nell'ultimo periodo di gravidanza somigliava agli enzimi dei tessuti maligni piuttosto che a quelli normali. L'attività della gamma-GTP epatica non è parallela alla velocità di proliferazione cellulare durante il normale sviluppo.
Effetto dell'acidificazione duodenale sul muco gastrico e sulla secrezione acida nei gatti coscienti.Nei gatti con fistole gastriche e sacchetti di Heidenhein, l'effetto dell'acido che entra nel duodeno sulla secrezione di acido, pepsina e muco dalla sacca di Heidenhain durante la massima stimolazione acida con pentagastrina o istamina, L'acidificazione duodenale ha prodotto una stimolazione della secrezione di pepsina e muco paragonabile a quella indotta da ormoni esogeni (secretina e colecistochinina). Inoltre, l'acidificazione duodenale ha causato un aumento della secrezione acida, suggerendo così che, oltre alla secretina e alla colecistochinina, anche un fattore che stimola la secrezione acida è stato rilasciato dall'acido.
Metabolismo muscolare durante il riposo e l'esercizio: influenza sul sistema di trasporto dell'ossigeno del sangue nei soggetti normali e diabetici.La curva di dissociazione dell'ossigeno si è spostata meno verso il proprio nel sangue venoso che drena dal muscolo in otto diabetici con deficit di insulina che lavorano a un carico di lavoro submassimale costante rispetto a sette controlli normali (28,7 mm Hg vs 30,8 mm Hg; P inferiore a 0,05) Questa diminuzione dell'effetto Bohr in vivo a livello del tessuto muscolare durante l'esercizio nei diabetici era dovuto ad una diminuzione significativamente minore del pH del sangue venoso (fino a 7,33 vs 7,27 nei soggetti normali; P inferiore a 0,05), probabilmente una conseguenza di un metabolismo muscolare ritardato nella carenza di insulina. il glucosio è stato assorbito, anche durante l'esercizio, e meno lattato è stato prodotto dal muscolo insulino-deficiente (P inferiore a 0,05), le differenze di pH del sangue venoso sembravano essere dovute principalmente a una diversa produzione di CO2 del muscolo in allenamento nei due gruppi. La risposta dell'attività del ciclo di Krebs da esercitare in muscoli con deficit di insulina potrebbe essere stata inadeguata, come suggerito dall'aumento del rapporto 3-idrossibutirrato/acetoacetato nel sangue venoso osservato nei controlli normali ma non nei diabetici. Inoltre, nei diabetici con deficit di insulina è stata utilizzata in proporzione una minore concentrazione del corpo chetonico arterioso. I cambiamenti nell'eritrocita 2,3-difosfoglicerato non hanno contribuito alle differenze nell'effetto Bohr in vivo.
Aumento della permeabilità microvascolare alle proteine plasmatiche nei diabetici giovanili a breve e lungo termine.I risultati attuali di un aumento del passaggio delle proteine microvascolari sono compatibili con l'ipotesi che la microangiopatia diabetica organica, istologicamente dimostrata, è un effetto a lungo termine di periodi di aumentato stravaso di proteine plasmatiche, con conseguente deposizione proteica nella parete microvascolare, cioè il concetto di vasculosi plasmatica. L'ipertensione arteriosa, frequentemente presente nel diabete, aumenta la sviluppo di ialinosi arteriolare. Un trattamento efficace del diabete e dell'ipertensione arresta lo sviluppo delle lesioni microvascolari.
Compromissione del trasporto dell'ossigeno nel diabete.Le curve di dissociazione dell'ossiemoglobina (ODC) da zero a piena saturazione sono state sviluppate da test eseguiti su sangue intero di vari gruppi di soggetti sani diabetici e non diabetici La P50 a pH in vivo era leggermente ma significativamente inferiore al normale nei giovani diabetici ambulatoriali non acidotici e non complicati (26,0 vs 27,3 mm Hg, P inferiore a 0,001), nonostante l'aumento del 2,3-difosfoglicerato eritroide (2,3-DPG) concentrazioni negli eritrociti diabetici (15,0 vs 13,7 mumole/gm. Hb, P inferiore a 0,001) Questa combinazione di cambiamenti è in linea con la presenza di proporzioni aumentate di emoglobina AIc nei diabetici trattati con insulina. La posizione dell'ODC era correlata positivamente con la concentrazione di 2,3-DPG (P inferiore a 0,01), che variava in risposta alle fluttuazioni della concentrazione plasmatica di fosfato inorganico (Pi) (P inferiore a 0,001). Un controllo metabolico ottimale può portare ad una normalizzazione dell'ODC in associazione con aumentate concentrazioni di globuli rossi 2,3-DPG e P. Quando il diabete non era controllato, l'ODC era solitamente invariato durante la fase acidotica perché il pH abbassato bilanciava l'effetto della diminuita concentrazione di 2,3-DPG sull'ODC. Dopo la correzione dell'acidosi, la sproporzione tra l'eritrocita 2,3-DPG e il pH è diventata piuttosto evidente, accompagnata da un corrispondente calo di P50 (21,0 contro 26,1 mm Hg, P inferiore a 0,001). Dopo la chetoacidosi, con un Pi persistentemente abbassato, può essere necessaria fino a una settimana prima che il 2,3-DPG ritorni a un livello approssimativamente normale e la P50 sarà ridotta per lo stesso periodo. Un difosfonato (EHDP) noto per aumentare il riassorbimento tubulare del fosfato nell'uomo è stato somministrato a volontari sani e diabetici trattati con insulina non acidosi per 28 giorni. Ha causato un aumento significativo del Pi medio e del P50 sia nei soggetti sani che in quelli diabetici (r = 0,58, P inferiore a 0,01). Quando un integratore alimentare di calcio fosfato dibasico è stato somministrato a soggetti diabetici per 28 giorni, si è verificato anche un aumento significativo della P50 (25,2 vs 27,2 mm Hg, P inferiore a 0,001). Si raccomanda di integrare la dieta del diabete con fosfato di calcio dibasico per prevenire l'effetto inibitorio di una bassa concentrazione di Pi sulla somministrazione di ossigeno ai globuli rossi.
Accumulo di nicotina nel liquido uterino della coniglio gravida di sei giorni.In conigli New Zealand White gravidi di 6 giorni trattati per via endovenosa con 3H- nicotina, l'attività 3H nel fluido uterino era approssimativamente da 5 a 11 volte maggiore di quella nel plasma nei tempi corrispondenti; la stessa nicotina 3H rappresentava la maggior parte di questa radioattività. Anche il diclorodifeniltricloroetano (DDT) si accumulava nel fluido luminale uterino di Coniglie gravide di 6 giorni, ma in misura minore. Tuttavia, l'accumulo di nicotina o DDT non si è verificato in conigli trattati in modo simile, non gravidi. La radioattività nel liquido uterino di conigli trattati con 14C-isoniazide, acido salicilico, barbital, antipirina e la caffeina non era diversa da quella nel plasma (i rapporti tra fluido uterino e radioattività plasmatica variavano tra 0,67 e 1,85) sia nelle coniglie gravide di 6 giorni che in quelle non gravide Nessuna differenza per quanto riguarda il metabolismo della nicotina, il volume di distribuzione, la scomparsa del plasma rance, legame alle proteine plasmatiche o escrezione urinaria sono stati trovati tra conigli gravidi di 6 giorni e non gravidi. L'accumulo di nicotina ha avuto luogo nel fluido luminale uterino di donne non gravide pretrattate con progesterone o gonadotropina corionica umana, ma non si è verificato nelle donne pretrattate con estrogeni. È possibile che l'accumulo di nicotina nel liquido uterino delle femmine gravide e nelle femmine non gravide pretrattate con gonadotropina corionica o progesterone umano sia dovuto al legame della nicotina a specifiche proteine del fluido uterino.
L'effetto della cromatografia su colonna a scambio ionico sulla separazione degli spermatozoi umani portatori di cromosomi X e Y.Separazione di spermatozoi portatori di cromosomi X e Y è stato tentato utilizzando la cromatografia su colonna a scambio ionico, con resine a scambio ionico e anionico di bassa, intermedia e alta forza ionica Esame dei corpi F sul cromosoma Y di spermatozoi umani trattati e progenie derivanti dall'inseminazione di spermatozoi di coniglio trattati indica che in nessuno dei casi esaminati il trattamento ha causato la separazione degli spermatozoi portatori del cromosoma X e Y. Il trattamento sembra filtrare gli spermatozoi morti di coniglio (e toro), ma i possibili effetti benefici di questo fenomeno non sono ancora stati studiati.
Effetto del benzimidazolo sull'attività della nicotinammide adenina dinucleotide fosfato fosfomonoesterasi nelle foglie di frumento.La nicotinammide adenina dinucleotide fosfato fosfomonoesterasi è stata isolata e parzialmente purificata dal grano (Triticum aestivum L. var. Selkirk) foglie. L'enzima aveva un valore KNADP di 1,4 X 10(-4) M e un pH ottimale di 5,9. L'attività in vitro di questo enzima non era influenzata dai precursori di NAD (nicotinammide e acido nicotinico) o citochinine ( cinetina e benzimidazolo). Tuttavia, quando le foglie di grano staccate sono state trattate con soluzioni di questi composti, i precursori hanno abbassato l'attività specifica mentre le citochinine hanno potenziato l'attività. Si suggerisce che la separazione spaziale e la compartimentazione dell'enzima e del suo substrato NADP spieghino la effetto simile del benzimidazolo su entrambi.
Ipossia in colture di fibroblasti. 2. Influenza del pH sul pattern di distribuzione dei mucopolisaccaridi acidi.Colture secondarie di fibroblasti embrionali di ratto [NEUPERT et al. , Exp. Path. 7, 19-28 (1972)] sono stati coltivati in concentrazione 21% e 5% O2 a pH 6,6 e 7,4 per 6 o 8 giorni I mucopolisaccaridi acidi sono stati isolati e frazionati mediante precipitazione alcolica, digestione con papaina, CPC -precipitazione e frazionamento dopo le microtecniche di SVEJCAR e ROBERTSON [vedi KITTLICK e NEUPERT, Exp. Path. 7, 7-18 (1972)] Cellule e terreno sono stati studiati insieme I risultati sono stati correlati alla densità cellulare e confrontati con il glucosio e valori di lattato [vedi KITTLICK e NEUPERT, Exp. Path. 10, 109-114 (1975)]. Riguardo alla questione delle interrelazioni tra sintesi MPS e glicolisi, viene fornita una rassegna sulla letteratura. I risultati dei nostri test sono stati i seguenti: 1 L'ipossia (5% O2) non ha influenzato la sintesi totale di MPS 2. A seconda della densità cellulare l'indivi le doppie frazioni MPS erano diverse nella loro reazione all'ipossia. 3. L'acido ialuronico (e l'eparan solfato) nel modello MPS hanno mostrato un comportamento diverso rispettivamente dal condroitin solfato e dal dermatan solfato. 4. A bassa densità cellulare l'ipossia ha effettuato un aumento dell'acido ialuronico e una diminuzione rispettivamente del condroitin solfato e del dermatan solfato. 5. Ad alta densità cellulare l'ipossia ha effettuato una diminuzione dell'acido ialuronico e un aumento rispettivamente del condroitin solfato e del dermatan solfato. Viene discussa la possibile relazione con i processi nel tessuto.
Ipossia in colture di fibroblasti. I. Variazioni nel consumo di glucosio con concentrazione di ossigeno del 5 vol.-% e pH ridotto.In colture secondarie di embrioni di ratto fibroblasti il consumo di glucosio e la concentrazione di lattato sono stati studiati comparativamente in ambiente 5 e 21 Vol. -% O2 a pH 6,6 e pH 7,4 (tampone HEPES). I risultati sono stati correlati con la densità cellulare. Sono state fatte le seguenti osservazioni: 1. A pH 6,6 il tasso di proliferazione cellulare è stato ridotto all'81%, per ulteriore ipossia è stato ridotto al 71% 2. L'aumento della densità cellulare ha determinato una diminuzione del consumo di glucosio e della produzione di lattato a pH 7,4 e pH 6,6 nel 5% e nel 21 % O2 ambiente 3. A pH 7,4 l'aumento del consumo di glucosio e della produzione di lattato dovuto all'ipossia può essere osservato solo a bassa densità cellulare 4. A pH 6,6 la respirazione dei fibroblasti era poco influenzata dall'ambiente 5% O2 5. Transizione dal pH 7,4/21% O2 a pH 6,6/5% O2 ha effettuato una diminuzione del glucosio c assunzione e concentrazione di lattato nei tessuti in ambiente ipossico. Ciò suggerisce un meccanismo di feedback governato dal pH. Abbreviazioni utilizzate nel testo: c-AMP = adenosina monofosfato ciclico; MPS = mucopolisaccaridi acidi (glicosaminoglicani).
Acido omovanillico cerebrale: cambiamenti regionali nel tempo con farmaci antipsicotici.La somministrazione acuta di dosi equivalenti rispettivamente di clorpromazina, tioridazina o clozapina ha prodotto aumenti progressivamente più piccoli dell'acido omovanillico cerebrale (HVA) nel coniglio; tuttavia, i cambiamenti nell'HVA in tre regioni del cervello erano di uguale entità per una singola dose di un dato farmaco. trattamento nelle regioni caudate più che limbiche. Non sono state osservate differenze tra le regioni caudate e limbiche durante la somministrazione giornaliera di clorpromazina per 3 o 8 giorni. La tolleranza sembrava svilupparsi in circa 1 settimana. Il trattamento cronico con clozapina non ha prodotto tolleranza a una settimana ma evidenza suggestiva di tolleranza nelle regioni caudate e limbiche a due settimane Nessuna tolleranza è stata osservata nell'ipotalamo durante il trattamento cronico con qualsiasi farmaco utilizzato Cisternal CSF HVA p aralle caudato HVA durante i trattamenti acuti e cronici.
Trattamento a lungo termine dell'ipertensione moderata con penbutololo (Hoe 893d). II. Effetto sulla risposta delle catecolamine plasmatiche e dell'attività della renina plasmatica all'ipoglicemia indotta da insulina.L'effetto dell'ipoglicemia indotta dall'insulina sui livelli ematici delle catecolamine e sull'attività della renina è stato studiato in cinque pazienti con ipertensione moderata prima e dopo il trattamento per 3 - 8 mesi con penbutololo (PEN) 20-30 mg due volte al giorno. Penbutololo non ha causato alcun cambiamento nel livello di glucosio nel sangue a digiuno. L'insulina o.1 UI per kg di peso corporeo iv ha ridotto la concentrazione di glucosio nel sangue di circa il 50% dopo 30-45 minuti, sia prima che durante il trattamento con penbutololo. L'ipoglicemia prima del farmaco era accompagnata da un marcato aumento della produzione di adrenalina e un lieve aumento di noradrenalina in tutti e cinque i pazienti Durante il trattamento la risposta dell'adrenalina all'ipoglicemia è stata ridotta in quattro pazienti e i dati sono stati inconcludenti in uno. l'attività della renina era piuttosto bassa in tre pazienti, entro il range di normalità in uno e relativamente alta in uno. Prima del penbutololo, l'aumento della produzione di catecolamine indotto dall'ipoglicemia non provocava alcun cambiamento nell'attività della renina plasmatica nei tre pazienti con bassi livelli basali, mentre negli altri due era stato osservato un aumento marcato. Durante il trattamento l'attività della renina plasmatica è rimasta invariata all'induzione dell'ipoglicemia indipendentemente dalla risposta delle catecolamine. Nonostante il marcato aumento dell'adrenalina plasmatica in seguito all'ipoglicemia indotta dall'insulina, non è stato registrato alcun aumento statisticamente significativo della frequenza cardiaca.
Assorbimento gastrointestinale e metabolismo di due esteri di ampicillina marcati con 35S.Due esteri di ampicillina, 35S-pivampicillina e 35S-carampicillina e glicole polietilenico (marcatore non assorbibile ) sono stati somministrati per via orale a soggetti sani con tubi gastrointestinali. L'assorbimento cumulativo della radioattività in entrambi i composti (60-90%) era superiore a (25-67%) precedentemente riscontrato dopo la somministrazione di 35S-ampicillina. I livelli plasmatici di radioattività pek erano raggiunte in precedenza ed erano circa il doppio rispetto a quest'ultimo studio. La quantità di radioattività escreta nelle urine era circa la stessa di quella assorbita dalla parte prossimale del tratto gastrointestinale. Sia la 35S-pivampicillina che la 35S-carampicillina erano parzialmente idrolizzate nel lo stomaco e l'intestino tenue superiore e l'ampicillina marcata sono stati rilasciati. Sono stati anche decomposti dopo l'assorbimento poiché tutta la radioattività recuperata dal sangue e dalle urine sembrava essere attaccata all'ampicillina e all'ampicillina m metaboliti. Studi in vitro hanno indicato che gli esteri dell'ampicillina assorbiti intatti possono essere idrolizzati non solo nel sangue ma anche nella parete intestinale e nel fegato.
Farmacocinetica e relativa biodisponibilità di eptabarbital ed eptabarbital sodico dopo somministrazione orale all'uomo.È stato sviluppato un metodo per la determinazione quantitativa di eptabarbital [5- acido (1-cicloepten-1-il)-5-etilbarbiturico] nel plasma umano dopo somministrazione di singole dosi terapeutiche del farmaco, che prevede una singola fase di estrazione seguita da gascromatografia con rilevazione a ionizzazione di fiamma alcalina, e i risultati sono stati lineari in l'intervallo di concentrazione 0,125 - 5,0 mug/ml plasma La farmacocinetica e la relativa biodisponibilità di eptabarbital ed eptabarbital sodico sono state studiate in un disegno crossover in 7 volontari sani dopo somministrazione orale di 20 compresse contenenti 200 mg di eptabarbital e capsule di gelatina dura contenenti una quantità equivalente di il suo sale sodico. Le concentrazioni di eptabarbital nel plasma sono state determinate a intervalli regolari. L'assorbimento di eptabarbital dalle compresse ha assorbito più rap pigramente e le concentrazioni di picco si sono verificate tra 1/3 e 2 h. In tutti i casi l'eliminazione dell'eptabarbital potrebbe essere descritta da un singolo processo di primo ordine con un'emivita media di 7,6 h (range 6,1 - 11,2 h). L'emivita del farmaco in ogni individuo era circa la stessa nei due studi. La biodisponibilità relativa in ciascun volontario è stata stimata confrontando le aree sotto le curve di concentrazione plasmatica. Il sale sodico aveva una biodisponibilità media dell'83% rispetto all'acido libero. In alcuni volontari è stata misurata l'escrezione urinaria di eptabarbital immodificato; l'escrezione cumulativa è stata pari allo 0,16 - 0,30% della dose somministrata. Quattro volontari hanno ricevuto una compressa ogni notte per otto o dieci giorni, ma non è stato riscontrato alcun accumulo. In tre volontari l'emivita del farmaco prima e dopo questi esperimenti non è cambiata, mentre nell'altro volontario l'emivita è diminuita da 7,1 a 4,6 h. La possibilità di induzione enzimatica deve essere presa in considerazione quando l'eptabarbital viene assunto regolarmente. Si è concluso che l'eptabarbital era un farmaco adatto per il trattamento dell'insonnia, poiché la sua emivita era piuttosto breve. L'eptabarbital sodico può essere usato per indurre il sonno, mentre le compresse di Medomin, cioè l'acido libero di eptabarbital, possono essere prescritte quando il mantenimento del sonno è la ragione principale per il trattamento con un farmaco ipnotico.
La disposizione fisiologica dell'etilefrina nell'uomo.Sono stati condotti studi farmacocinetici e metabolici con 3H-etilefrina per valutare l'importanza di un effetto di primo passaggio su l'azione farmacodinamica di questa ammina simpaticomimetica Quantità identiche di attività 3H, circa l'80% della dose, sono state escrete nelle urine dopo somministrazione endovenosa o orale, il che indica il completo assorbimento enterale del farmaco Confronto delle aree sotto il plasma curve di etilefrina invariata dopo entrambe le vie di somministrazione hanno determinato un fattore di biodisponibilità di 0,55, che può essere spiegato da un ampio effetto di primo passaggio. La curva temporale dei livelli plasmatici di etilefrina era compatibile con un modello aperto a 2 compartimenti caratterizzato da un grande volume di distribuzione (Vd, beta) di 160 1 e un'emivita predominante di 2 ore L'azione farmacodinamica corrispondeva alla quantità di farmaco nel compartimento centrale La principale via di metabolismo di et ilefrina è stata coniugata per formare il solfato fenolico e una proporzione molto minore del farmaco è stata escreta come acido idrossimandelico corrispondente. Questo schema metabolico sembra confermare la nostra ipotesi che le fenilalchilammine con gruppo ossidrile nella posizione m dell'anello benzenico siano prevalentemente coniugate in contrasto con i composti p-idrossilati che sono principalmente deaminati.
Valutazione in vivo dei parametri dell'attività dell'enzima metabolizzante il farmaco nell'uomo dopo somministrazione di clemastina, fenobarbital o placebo.L'escrezione urinaria di 6beta- idrossicortisolo e acido D-glucarico, l'emivita plasmatica e la clearance totale dell'aminopirina e l'attività della gamma-glutamil-transpeptidasi sierica sono state misurate in diciannove volontari maschi sani. Lo studio è stato condotto in doppio cieco ed è stato condotto come test di induzione di microsomi enzimi che metabolizzano i farmaci durante e dopo dosi giornaliere di 6 mg di clemastina, 300 mg di fenobarbital o un placebo. L'escrezione urinaria di 6beta-idrossicortisolo e acido D-glucarico è risultata significativamente aumentata nel gruppo fenobarbital, lo standard per l'induzione. Non sono state osservate modifiche dopo trattamento con clemastina o placebo. Il fenobarbital ha anche ridotto l'emivita dell'aminopirina, ma non è stato influenzato da clemastina o placebo. L'attività della gamma-glutamil-transpeptidasi è aumentata solo nel ph gruppo enobarbital. La costante di eliminazione k2 dell'aminopirina e l'escrezione di acido glucarico nel periodo di premedicazione sono state correlate (p inferiore a 0,05). I risultati indicano che i test avevano valore diagnostico nella determinazione dell'induzione di enzimi microsomiali da parte del fenobarbital. La mancata osservazione di cambiamenti simili dopo il trattamento con clemastina implica il fallimento dell'induzione di questa attività nelle condizioni sperimentali.
Trattamento a lungo termine dell'ipertensione moderata con penbutololo (Hoe 893d). I. Effetti su pressione sanguigna, frequenza cardiaca, catecolamine nel sangue e nelle urine, attività renina plasmatica e aldosterone urinario sotto condizioni basali e successivo esercizio.Gli effetti del penbutololo (Hoe 893 d), un nuovo agente bloccante non selettivo dei recettori beta, sono stati studiati in 5 pazienti con ipertensione moderata. Inizialmente, è stato dimostrato che 2 -4 mg somministrati per via orale una o due volte al giorno tendevano ad abbassare la pressione sanguigna e la frequenza cardiaca, sia a riposo che dopo un lavoro submassimale. In studi prolungati (3-8 mesi) erano necessari 4-60 mg/die per produrre un effetto antipertensivo accettabile. Il penbutololo non ha avuto effetto sul normale aumento della noradrenalina plasmatica e dell'adrenalina in posizione eretta, né ha alterato l'escrezione urinaria basale di catecolamine. renina durante il trattamento con penbutololo. In studi a breve termine si è verificata una diminuzione della renina plasmatica di 4 ore dopo la somministrazione orale di penbutololo 2-4 mg, che è persistita per 24 ore. Il trattamento prolungato con 20-30 mg di penbutololo due volte al giorno ha inibito la produzione di renina in condizioni basali e in seguito a lavoro submassimale, nonché una ridotta escrezione urinaria di aldosterone basale. In un paziente sono comparsi lievi sintomi asmatici dopo un trattamento di 3 mesi con penbutololo. Per altri aspetti, il penbutololo è stato ben tollerato.
Effetti della dixirazina e del metaqualone sul ritmo del sonno nell'uomo normale.EEG di tutta la notte e registrazioni poligrafiche sono state effettuate in dieci giovani volontari sani di sesso maschile dopo dixirazina (12,5 mg, 25 mg, 50 mg), metaqualone (250 mg) e Isonox (methaqualone 250 mg + etodroxizina 50 mg) sono state conteggiate un totale di 156 notti di registrazione (36 notti di adattamento non sono state incluse nelle analisi) per diverse fasi del sonno secondo criteri accettati. La dose più piccola di dixirazina (12,5 mg) non ha avuto effetti significativi sul ritmo del sonno: le dosi maggiori (25 mg e 50 mg) hanno causato significative diminuzioni del sonno REM durante le prime notti di somministrazione. diminuzione è scomparsa durante le successive due notti di trattamento. Non sono stati osservati effetti da sospensione. Il metaqualone ha anche causato una moderata depressione del sonno REM durante la prima notte di trattamento, e anche questo effetto è scomparso durante la somministrazione prolungata. Isonox (metaqualone + etodroxizina) aveva un effetto soppressivo un po' più forte sul sonno REM rispetto al solo metaqualone.
Confronto incrociato in doppio cieco di compresse di clenbuterolo e salbutamolo in pazienti ambulatoriali asmatici.Un confronto incrociato in doppio cieco di un nuovo broncodilatatore beta2-simpaticomimetico, clenbuterolo, con salbutamolo e placebo è stato somministrato durante un periodo di 24 giorni di trattamento ambulatoriale di 19 adulti con asma moderatamente grave Clenbuterolo orale (10 tazze 3 volte al giorno) e salbutamolo (4 mg 3 volte al giorno) erano ugualmente e significativamente (p inferiore a 0,001) più efficaci del placebo, quando i criteri di attività erano le registrazioni giornaliere del picco di flusso espiratorio o l'uso di inalazioni di isoprenalina. Le registrazioni giornaliere dei sintomi secondo un questionario suggerivano anche un sollievo dagli effetti soggettivi di asma durante il trattamento con entrambi i farmaci attivi (p inferiore a 0,01).
Gli effetti cardiovascolari dell'etilefrina.L'etilefrina per via endovenosa aumenta la frequenza del polso, la gittata cardiaca, la gittata sistolica, la pressione venosa centrale e la pressione arteriosa media di individui sani Le resistenze vascolari periferiche diminuiscono durante l'infusione di 1-8 mg di etilefrina ma iniziano ad aumentare a dosaggi più elevati Quando l'etilefrina viene infusa si verificano marcate riduzioni della frequenza cardiaca, della gittata cardiaca, della gittata sistolica e del flusso sanguigno periferico, accompagnate da aumenti della pressione arteriosa media dopo somministrazione endovenosa di 2,5 mg di propranololo. Questi risultati indicano che l'etilefrina ha effetti sia beta 1 che alfa adrenergici nell'uomo.
Farmacocinetica e farmacodinamica dell'alprenololo nel trattamento dell'ipertensione. I. Relazione tra concentrazione plasmatica e blocco dei recettori beta adrenergici.Plama medio allo stato stazionario le concentrazioni di alprenololo sono state studiate in relazione al grado di beta-blocco, in sedici pazienti trattati con 600 mg al giorno in dosi frazionate. Le concentrazioni di alprenololo allo stato stazionario sono state determinate dall'area sotto la curva concentrazione plasmatica-tempo durante un intervallo di dosaggio di otto ore dopo il trattamento per sei settimane. Il beta-blocco durante il trattamento con alprenololo è stato valutato dalla risposta cronotropa all'isoprenalina per via endovenosa rispetto alla risposta dopo sei settimane di terapia con placebo. Sebbene vi fosse una variabilità interindividuale nella concentrazione media di alprenololo allo stato stazionario (intervallo 11-141 ng/ml) e nel grado di beta-blocco (7 volte), la correlazione tra le due variabili era altamente significativa (r = 0,80, p inferiore a 0,0 01). La dose prescritta di alprenololo (mg/kg) non era significativamente correlata con il livello plasmatico di alprenololo o con il beta-blocco. Gli effetti cronotropi dell'isoprenalina durante il placebo e l'alprenololo erano significativamente correlati (r = 0,79, p inferiore a 0,001).
Risposta cardiovascolare all'esercizio con dosi crescenti di clortalidone.Cinque soggetti maschi con ipertensione essenziale hanno ricevuto clortalidone a ciascuno dei quattro livelli di dose (25, 50, 100 e 200 mg/die) per periodi di otto settimane ciascuno preceduto da un periodo di placebo di otto settimane. L'ordine di dosaggio è stato randomizzato e in doppio cieco. Durante l'ultima settimana di ciascun periodo attivo e placebo è stato condotto uno studio sull'esercizio della bicicletta in posizione verticale a tre carichi (100, 200, 300 kpm/min) per 6 min ciascuno. Il consumo di ossigeno al carico di lavoro massimo era del 42% del previsto a una frequenza cardiaca di 170. Durante la terapia con placebo, l'aumento dei carichi di lavoro era associato a un aumento progressivo della pressione sanguigna, frequenza cardiaca, e indice di frequenza pressoria (pressione sistolica per frequenza cardiaca). Con dosi crescenti di clortalidone fino a 100 mg/die, si verificava una progressiva riduzione della pressione arteriosa e dell'indice di frequenza pressoria. A 200 mg/die si manifestavano paradossali aumenti della pressione diastolica, sentire t tassi e indici di velocità di pressione superiori ai valori osservati a 100 mg/giorno. Con dosi crescenti di clortalidone, si è verificato un progressivo aumento del contenuto di CO2 nel sangue arterioso e del pH. L'aumento dei carichi di lavoro è stato associato a un aumento del lattato nel sangue arterioso ea una diminuzione del lattato nel sangue arterioso e a una diminuzione del pH del sangue arterioso. Le variazioni del lattato e del pH non erano differenti ai diversi livelli di dose. Il miglior effetto antipertensivo in questi soggetti in esercizio è stato osservato alla dose giornaliera di 100 mg di clortalidone. La risposta all'esercizio è stata utile nella determinazione delle conseguenze emodinamiche potenzialmente avverse della dose maggiore di clortalidone.