Split (1)

train · 17.2M rows

text stringlengths 9 6.27k
Tromboflebite da infusione sperimentale. Importanza del pH delle soluzioni di glucosio.Viene presentato un metodo sperimentale che confronta la tendenza di diverse infusioni a causare tromboflebiti. Si basa su un'analisi istologica quantitativa dei cambiamenti infiammatori nelle vene delle orecchie di coniglio dopo infusioni in condizioni standardizzate. Con questo metodo è stato dimostrato che i cambiamenti infiammatori nelle vene sono significativamente meno pronunciati quando il pH delle soluzioni di glucosio è alterato da 3,0 a 3,6. Questa variazione di pH è stata prescritta nelle correzioni del 1971 alla Farmacopea Nordica 1963. Mediante la completa neutralizzazione del 5% di glucosio si è ottenuta un'ulteriore riduzione del danno alle vene. A questo scopo si consiglia tampone fosfato.
Tromboflebite da infusione sperimentale. Importanza della velocità di infusione.E' stata studiata l'importanza del metodo di somministrazione delle infusioni di glucosio acido per la risposta infiammatoria venosa in due serie di prove sperimentali 60 ml di soluzione glucosata al 5% sono stati somministrati nelle vene dell'orecchio di coniglio in tre modi: 1) continuamente per 5 ore (infusione lenta), 2) continuamente per 1 ora (infusione rapida), 3) discontinuo durante 2 X 30 minuti con un intervallo di 4 ore (infusione discontinua). L'esame microscopico delle vene ha rivelato che i cambiamenti infiammatori erano meno pronunciati dopo infusioni rapide e discontinue che dopo infusioni lente.
Meccanismo di discriminazione tra tRNA affini e non affini da parte della fenilalanil-tRNA sintetasi del lievito.L'interazione tra fenilalanil-tRNA sintetasi del lievito ed Escherichia coli e tRNAPhe (lievito), tRNASer (lievito), tRNA1Val (E. coli) sono state studiate mediante analisi di ultracentrifugazione, titolazioni di fluorescenza e tecniche di cinetica veloce. La fluorescenza della base Y di tRNAPhe e la fluorescenza intrinseca delle sintetasi sono state studiate utilizzati come indicatori ottici 1. Complessi specifici tra fenilalanil-tRNA sintetasi e tRNAPhe del lievito si formano in un meccanismo a due fasi: una ricombinazione quasi controllata dalla diffusione è seguita da una rapida transizione conformazionale. la resa quantica della fluorescenza della base Y al momento del legame è data in una varietà di condizioni rispetto a pH, sale aggiunto, concentrazione di ioni Mg2+ e temperatura 2. Complessi eterologhi tra feni lalanil-tRNA sintetasi (E. coli) e tRNAPhe (lievito) si formano con un meccanismo a due fasi simile a quello dei complessi specifici; la transizione conformazionale, invece, è più lenta di un fattore 4-5. 3. La formazione di complessi aspecifici tra fenilalanil-tRNA sintetasi (lievito) e tRNATyr (E. coli) procede con un meccanismo one-step. La fenilalanil-tRNA sintetasi (lievito) lega o due molecole di tRNAPhe (lievito) o solo una molecola di tRNATyr (E. coli); Anche tRNA1Val (E. coli) o tRNASer (lievito) sono legati in una stechiometria 1:1. Le costanti di legame per i complessi di fenilalanil-tRNA sintetasi (lievito) e tRNATyr (E. coli) sono determinate in una varietà di condizioni. Contrariamente alla formazione di complessi specifici, il legame non specifico è sfavorito dalla presenza di ioni Mg2+ e non è influenzato dal pH e dalla presenza di pirofosfato. La differenza nelle stabilità dei complessi specifici e non specifici può essere variata di un fattore di 2-100 a seconda delle condizioni ioniche. La discriminazione del tRNA affine e non affine da parte della fenillanil-tRNA sintetasi (lievito) è discussa in termini di meccanismo di legame, topologia dei siti di legame, natura delle forze interagenti e relazione tra specificità e condizioni ioniche.
Fasi distinti nel legame specifico del tRNA all'aminoacil-tRNA sintetasi. Studi a salto di temperatura sul sistema specifico della serina dal lievito e sul sistema specifico della tirosina dall'Escherichia coli. La cinetica dell'interazione di tRNASer e seryl-tRNA sintetasi da lievito, nonché di tRNATyr e tirosil-tRNA sintetasi da Escherichia coli è stata studiata mediante esperimenti di salto di temperatura. Si potrebbe dimostrare che la formazione di complessi procede in due fasi distinte. Ciò è stato dimostrato sia per il primo che per il secondo sito di legame. Il meccanismo a due fasi è stato dedotto dalla caratteristica dipendenza dalla concentrazione dei tempi di rilassamento. La Seryl-tRNA sintetasi si ricombina con il primo tRNA per formare un complesso intermedio (kI12, kI21), che si trasforma in una reazione rapida al complesso finale 1:1 (kI23, kI32). A pH 7,2 con 0,1 M KCl le costanti di velocità sono: kI12 = 2,7 X 10(8) M-1 S-1;kI23, kI32) A pH 7,2 con 0,1 M KCl il ra le costanti sono: kI12 = 2,7 x 10(8) M-1 S-1; kI21 = 220 S-1; kI23 = 760 S-1; kI32 = 330 S-1. Il complesso 1:1 può legare un secondo tRNA. A pH 7,2 senza sale aggiunto le costanti di velocità sono: KII2 = 0,9 X 10(8) M-1 S-1; kII21 = 270 S-1; kII23 = 120 S-1; kII32 = 1250 S-1. Il sistema specifico della tirosina si comporta in modo molto simile al sistema specifico della serina. I dati sono forniti per pH 7,2 (pH 6,0) per il legame del secondo tRNA: kII12 = 1 X 10(8) (2,5 X 10(8)) M-1 S-1; kII21 = 470 (170) S-1; kII23 = 150 (530) S-1; kII32 = 1540 (720) S-1. I risultati cinetici sono discussi in termini di rilevanza per il processo di riconoscimento e la loro relazione con il comportamento di legame antioperatorio del tRNA alla sintetasi.
Isolamento e caratterizzazione parziale della citocromo ossidasi di Rhodopseudomonas palustris.La citocromo ossidasi (EC 1.9.3.1) di Rhodopseudomonas palustris è stata estratta con Triton X -100 più KCl, dalla frazione di membrana di cellule cresciute aerobicamente al buio. L'enzima solubilizzato è stato purificato mediante precipitazione (NH4)2SO4 e cromatografia su DEAE-cellulosa. La purificazione ha determinato un arricchimento di 108 volte di citocromo ossidasi sulla base di attività specifica rispetto alla frazione di membrana. L'enzima purificato era sensibile al fosfato (inferiore a mM), ha ridotto il citocromo c bovino, equino e di lievito ossidato ed è stato inibito al 50% da 0,5 muM KCN o 7 muM NaN3. preparato migrato come una banda nell'elettroforesi su gel di poliacrilammide In presenza di dodecilsolfato sono stati osservati quattro principali polipeptidi con pesi molecolari apparenti di 30500, 25500, 12200 e 9500. L'enzima ha reagito con l'ossigeno tramite il citocromo o. La preparazione purificata conteneva citocromo c ma era priva di flavoproteine e attività enzimatiche della catena respiratoria legate al NADH e al succinato.
Biosintesi dell'acido stizolobinico e dell'acido stizolobico nelle piante superiori. Un sistema enzimatico che catalizza la conversione della diidrossifenilalanina in acido stizolobinico e acido stizolobico da piantine eziolate di Stizolobium hassjoo." È stato dimostrato che un sistema enzimatico estratto da piantine eziolate di Stizolobium hassjoo ha catalizzato la conversione della L-diidrossifenilalanina in acido stizolobinico, alfa-ammino-6-carbossi-2-osso-2H-piran- acido 3-propionico e acido stizolobico, acido alfa-ammino-6-carbossi-2-osso-2H-piran-4-propionico, in presenza di NADP+ o NAD+ in condizioni aerobiche Acido stizolobinico radioattivo sintetizzato enzimaticamente e acido stizolobico isolato dalle miscele di reazione sono state purificate e confermate per avere radioattività specifiche costanti mediante cocristallizzazione con campioni autentici. La massima attività della preparazione enzimatica è stata ottenuta utilizzando un adsorbente polifenolico insolubile (Polyclar AT) e un agente riducente t (acido araboascorbico) nel mezzo di estrazione e dal successivo frazionamento dell'estratto con solfato di ammonio seguito da gel filtrazione Sephadex G-25. L'attività catalitica del preparato enzimatico era più instabile in condizioni aerobiche che anaerobiche. Sono stati fatti tentativi per stabilizzare l'attività enzimatica mediante l'uso di molte sostanze note per stabilizzare altri enzimi o per arrestarne l'inattivazione. In questo documento viene fornita la prova che le vie biosintetiche precedentemente proposte dell'acido stizolobinico e dell'acido stizolobico dalla diidrossifenilalanina procedevano nel sistema a cellule libere da piantine eziolate di S. hassjoo.
Il ruolo della lisina-41 nella ribonucleasi A studiato mediante spettroscopia di risonanza magnetica protonica della ribonucleasi guanidinata A.La ribonucleasi A è stata guanidinata al residui di lisina e prodotti non a-guanidinati e deca-guanidinati (completamente sostituiti) separati. A conferma di un precedente rapporto di Glick e Barnard (1970), è stato dimostrato mediante procedure chimiche che il primo derivato non reagisce alla lisina-41 La guanidinazione della lisina-41 per produrre il prodotto completamente sostituito provoca la perdita di attività enzimatica senza alcun apparente cambiamento di conformazione, come testato da confronti conformazionali (usando la spettroscopia di risonanza magnetica protonica) inclusa (a) spettroscopia di differenza, evidenza del coinvolgimento di lisina- 41 in un ruolo catalitico nell'enzima La dimetilazione della lisina-41 della ribonucleasi A non-guanidinata produce risonanze protoniche acute che si spostano quando il gruppo dimetilammino viene titolato e consentono la determinazione di un pK apparente di 8,8 per la lisina-41 non sostituita.
Sequenza amminoacidica di una tossina celenterata: tossina II da Anemonia sulcata.Tossina II da Anemonia sulcata, il componente principale del veleno dell'anemone di mare , consiste di 47 residui amminoacidici che sono interconnessi da tre ponti disolfuro. Il polipeptide S-aminoetilato è stato accoppiato a perline di vetro attivate e sequenziato alla posizione 33 mediante degradazione automatica Edman in fase solida. Bianchi derivanti da punti di ancoraggio e il resto della sequenza sono stati determinati dai peptidi triptici della tossina [14C]carbossimetilata. La tossina II non mostra omologie significative con altre sequenze note di neurotossine o cardiotossine. Potrebbe costituire una nuova classe di tossine polipeptidiche.
Specificità e proprietà della destabilizzazione, indotta dal fattore di iniziazione IF-3, di complessi ternari della subunità ribosomiale 30-S, aminoacil-tRNA e polinucleotidi.Il fattore di iniziazione IF-3 provoca la destabilizzazione dei complessi ternari preformati della subunità ribosomiale 30-S, dei codoni e degli amminoacil-tRNA o peptidil-tRNA. Questa destabilizzazione dipende dalla diluizione e interessa tutti i complessi ternari ad eccezione di quelli contenenti il iniziatore fMet-tRNA, che rimangono più resistenti alla destabilizzazione indotta da IF-3 nelle varie condizioni studiate. Sono state esaminate diverse possibili ragioni di questa specificità. Si è riscontrato che la base per la specificità non è: (a) un intrinseco maggiore stabilità dei complessi ternari contenenti fMet-tRNA, (b) la quantità di amminoacil-tRNA legati al ribosoma, (c) le condizioni in cui si forma il complesso ternario o (d) la formilazione del gruppo amminico. mano, la natura di th Si è scoperto che il polinucleotide in risposta al quale si forma il complesso ternario influenza la quantità di amminoacil-tRan legato al ribosoma e, in una certa misura, la quantità di amminoacil-tRNA che può essere rilasciata. Il complesso ternario contenente l'iniziatore erroneamente caricato tRNA fVal-tRNAfMet mostra una maggiore resistenza alla destabilizzazione indotta da IF-3 rispetto al complesso contenente fVal-tRNAVal. Questi risultati indicano che la specificità dell'attività dell'IF-3 è dovuta alla speciale caratteristica strutturale della molecola di tRNA iniziatore e in una certa misura alla natura del polinucleotide. La destabilizzazione dei complessi ternari indotta da IF-3 è risultata essere poco influenzata dalle variazioni delle condizioni di reazione, quindi questa attività di IF-3 può essere utilizzata per misurare il legame stechiometrico di IF-3 al ribosoma su un ampio intervallo di pH e le concentrazioni di K+ e Mg2+. Diversi antibiotici sono stati testati per la loro capacità di interferire con questa reazione; solo alte concentrazioni di tetraciclina hanno bloccato questa attività dell'IF-3.
Legame non convalente di piccole molecole da parte della ligandina. Interazioni con steroidi e loro coniugati, acidi grassi, agenti cancerogeni della bromosulfoftaleina, glutatione e composti correlati.1. Sono stati effettuati studi di dialisi di equilibrio sul legame di un certo numero di piccole molecole da parte della ligandina di ratto. Misurazioni dirette del legame insieme a esperimenti di competizione hanno indicato che bromosulfoftaleina, estrone solfato e deidroepiandrosterone solfato si legano ciascuno allo stesso singolo sito di legame primario con costanti di associazione di 1,1 X 10(7), 6,6 X 10(5) e 2,6 X 10(5) 1/mol rispettivamente a pH 7,0,IO.16M,4 gradi C. Oltre alla bromosulfoftaleina e al deidroepiandrosterone solfato, un numero di sostanze strutturalmente simili anioni organici tra cui 2-idrossioestradiolo-glutatione estrone glicironide, N-metil-4-amminoazobenzene-glutatione e diversi acidi biliari, sono stati in grado di spostare l'estrone solfato dalla ligandina in modo coerente con la concorrenza su un singolo sito di legame. Da questi esperimenti sono state derivate le costanti di associazione per i ligandi concorrenti; questi erano nell'intervallo 1 X 10(4)-1 X 10(6) 1/mol. 2. È stato scoperto che la ligandina lega un certo numero di composti per i quali, a causa della loro bassa solubilità in acqua rispetto alle loro affinità di legame, è possibile ottenere isoterme di legame complete. Questi includevano diversi steroidi (ma non cortisolo), 20-metilcolantrene, dietilstilbestrolo, oleato e palmitato. L'estrone solfato è stato in grado di competere con questi ligandi per il legame ei risultati degli esperimenti di concorrenza erano interpretabili in termini di competizione 1:1 in un singolo sito di legame. 3. In generale la coniugazione di ligandi non polari con solfato o glutatione ha determinato un aumento delle affinità, ma tali aumenti erano relativamente piccoli (circa il 15% in termini di energia libera) il che implica che la principale forza trainante per il legame sia del coniugato che di specie non coniugate era l'effetto idrofobico. Questa conclusione è confermata dalle osservazioni che sia l'estrone che il suo solfato hanno mostrato lievi aumenti di affinità con l'aumento della forza ionica, come ci si aspetterebbe per le interazioni idrofobiche. 4. Oltre ai composti non polari e agli anioni organici, si è scoperto che anche la ligandina lega solfato e glucuronato in misura misurabile e interagisce abbastanza fortemente con il glutatione. Per quest'ultimo composto è stato trovato un singolo sito di legame con una costante di associazione di 1 X 10(5) 1/mol. Il glutatione era in grado di causare la dissociazione del complesso ligandin-estrone solfato, ma questo effetto non era spiegabile in termini di semplice competizione 1:1. 5. Sia l'estrone che l'estrone solfato erano legati più fortemente a pH 6-7, l'affinità della proteina per questi ligandi cadeva abbastanza bruscamente su entrambi i lati di questo massimo. 6. Le affinità della ligandina per la bromosulfoftaleina, gli steroidi e i loro coniugati, il dietilstilbestrolo e l'N,N-dimetil-4-amminoazobenzene sono in grandezza simili a quelle dell'albumina sierica e della proteina A che lega gli amminoazocolori (B. Ketterer, E. Tipping, JF Hackney e D. Beale, 1976).
Studi di equilibrio sul ripiegamento e la riattivazione dell'aldolasi del muscolo di coniglio dopo dissociazione acida.Dssociazione, denaturazione e disattivazione dell'aldolasi dal muscolo di coniglio nel L'intervallo di pH acido è stato studiato utilizzando analisi di sedimentazione, fluorescenza, dicroismo circolare e test di attività. In condizioni sperimentali comparabili, i profili pH-dipendenti di disattivazione e denaturazione sono paralleli alla dissociazione dell'enzima. Nell'intervallo di dissociazione a pH4-5 tetrameri e monomeri sono in equilibrio. I cromofori intrinseci e il dicroismo circolare lontano ultravioletto suggeriscono che la transizione sia un processo complesso a più fasi. A pH circa 2,3 l'enzima viene suddiviso nei suoi monomeri completamente inattivi che contengono ancora una struttura secondaria residua. Dopo la riassociazione in condizioni ottimali (0,2 Tampone fosfato M pH 7,6, EDTA 1 mM, ditiotreitolo 0,1 mM, 0 gradi C, concentrazione enzimatica 0,4-59 mug/ml) fino al 95% di azione enzimatica viene recuperata l'attività che appartiene a una specie tetramerica rinaturata indistinguibile dall'enzima nativo secondo tutti i criteri biochimici e fisico-chimici disponibili.
Il ruolo dei ponti disolfuro intercatena nella stabilità conformazionale della sottoclasse di immunoglobuline umane G1. Studi sullo scambio idrogeno-deuterio.I dati sullo scambio idrogeno-deuterio di le immunoglobuline umane G1 (IgG1) sono interpretate assumendo rapide fluttuazioni della conformazione proteica, attraverso le quali i gruppi peptidici vengono esposti al solvente. La probabilità di esposizione al solvente degli idrogeni peptidici riflette una conformazione piuttosto lasca per le IgG native rispetto ad altre proteine globulari La probabilità di esposizione al solvente è maggiore di 10(-3) per metà dei gruppi peptidici, il che mostra che le transizioni conformazionali con cui questi gruppi sono esposti al solvente sono accompagnate da variazioni dell'energia libera standard inferiori a 17 kJ/mol (4 kcal/mol) Nell'intervallo di pH 6,2-8,45, a 25 gradi C nessun cambiamento conformazionale grossolano si riflette nel comportamento di scambio idrogeno-deuterio del nativo, il rea ridotto-nonalchilato associata e l'IgG1 ridotto-S-alchilato-riassociato. Non è stata rilevata alcuna differenza nella stabilità conformazionale delle proteine IgG1 riassociate native e riossidate. La mancanza di ponti disolfuro tra subunità nelle molecole S-alchilate riassociate determina un aumento della motilità conformazionale. Questa destabilizzazione della conformazione proteica colpisce circa il 90% dei gruppi peptidici coperti dalle misurazioni e corrisponde a variazioni dell'energia libera standard di 8 kJ/mol in media.
Legame del fosfato ai cromatofori di Rhodospirillum rubrum.La dialisi di equilibrio è stata utilizzata per determinare il legame del fosfato ai cromatofori di Rhodospirillum rubrum. Assumendo uno scambio completo del 32Pi aggiunto con fosfato endogeno, la saturazione con fosfato trattenuto in qualsiasi forma dai cromatofori è stata raggiunta a circa 20 nmoli Pi per mg di batterioclorofilla. La ritenzione di fosfato ha avuto un pH ottimale a pH 6,5-6,8. A pH 8,0 solo i cromatofori che non sono stati liberati dal DNA e l'RNA mostrano una notevole ritenzione di fosfato. Tuttavia, l'illuminazione dei cromatofori prima della dialisi in presenza di ADP porta a una ritenzione di fosfato a pH 8,0 che persiste durante la dialisi al buio in assenza di magnesio aggiunto.
Glutatione reduttasi da eritrociti umani. Proprietà catalitiche e aggregazione.Le proprietà catalitiche della glutatione reduttasi da eritrociti umani sono state studiate in una serie di condizioni tampone e concentrazioni di substrato. Questo studio fornisce le condizioni ottimali per la determinazione dei parametri cinetici di base dell'enzima. Il comportamento catalitico della glutatione reduttasi è coerente con i siti di legame spazialmente separati per i suoi substrati. In alcuni saggi sono state osservate anomalie che sono correlate con un'inattivazione del enzima da NADPH. Esperimenti di sedimentazione concomitanti hanno mostrato che il NADPH ha promosso l'aggregazione dell'enzima. Sia l'inattivazione che l'aggregazione potrebbero essere collegate all'ossidazione dei tioli nel sito attivo. Viene discussa la relazione tra le proprietà della glutatione reduttasi e le condizioni cellulari.
8-Azidoacenine analoghi di NAD+ e FAD. Sintesi e proprietà coenzimatiche con enzimi NAD+-dipendenti e FAD-dipendenti.La sintesi e purificazione del Vengono descritti gli analoghi dell'8-azidoadenina di NAD+ (azido-NAD+) e FAD (AZIDO-FAD) da 8-azidoadenosina 5\'-fosfato e NMN+ o FMN, rispettivamente. Gli analoghi del coenzima sono caratterizzati da assorbimento, risonanza magnetica nucleare e circolazione spettri di dicroismo. Gli ultimi due metodi indicano una struttura ripiegata di azido-NAD+ e azido-FAD. Dopo irradiazione a 300 mn in soluzione acquosa, un cambiamento degli spettri di assorbimento ultravioletto degli analoghi del coenzima indica fotolisi del gruppo azido. Le proprietà del coenzima di azido-NAD+ sono dimostrati con lattato, glutammato e alcol deidrogenasi che producono rispettivamente 14, 154 e 60% del V osservato con NAD+ Contemporaneamente, i valori di Km degli analoghi del coenzima sono 1,7, 3,5 e 3 volte superiori a quelli di NAD+. Azido-FAD è dimostrato essere coenzima dell'apo-glucosio ossidasi. Il recupero dell'attività, tuttavia, è molto più lento in presenza di azido-FAD rispetto a FAD. Si ottiene un valore finale del 66% dell'attività con FAD. Con l'apo-D-amminoacido ossidasi, l'azido-FAD è completamente inattivo, sebbene sia specificamente legato all'enzima.
Effetto degli inibitori sull'estinzione dipendente dal substrato della fluorescenza della 9-aminoacridina nelle vescicole di membrana inside-out di Escherichia coli.L'effetto di vari inibitori sull'estinzione dipendente dal substrato della fluorescenza della 9-aminoacridina è stata misurata nelle vescicole di membrana inside-out di Escherichia coli La velocità di estinzione della fluorescenza in presenza di inibitori dipendeva dalla velocità di trasferimento di elettroni attraverso la catena respiratoria con NADH, succinato, D-lattato o DL-glicerolo 3-fosfato come substrati. Gli inibitori hanno fornito diversi modelli di risposta. Gli inibitori competitivi con il substrato, o quelli che agiscono solo sulle deidrogenasi, hanno fornito una relazione diretta tra il grado di inibizione dell'attività ossidasi e la velocità di spegnimento. Una relazione bifasica era data da 2-eptil-4-idrossichinolina N-ossido e piericidina A che era dovuta a questi composti che agivano sia come inibitori della catena respiratoria che, un t concentrazioni più elevate, come agenti disaccoppianti. I disaccoppiatori hanno inibito l'estinzione della fluorescenza con una minima inibizione dell'attività ossidasi. La differenza di pH transmembrana è stata calcolata dall'entità dell'estinzione della fluorescenza e dal volume intravescicolare. La differenza di pH massima di 3,3-3,7 unità è stata generata da ciascuno dei substrati testati.
Fotolisi di desmosina e isodesmosina mediante luce ultravioletta.1. Desmosina e isodesmosina sono state separate mediante scambio ionico e cromatografia su carta, dopo idrolisi acida di elastina da manzo legamento nuchae. Le frazioni ottenute mediante cromatografia a scambio ionico erano chiaramente miscele di composti correlati. La frazione desmosina poteva essere risolta in sette composti e l'isodesmosina in quattro mediante cromatografia su carta. 2. La desmosina è stata degradata al massimo mediante irradiazione a 274 nm e isodesmosina a 285 nm. Queste lunghezze d'onda non corrispondevano ai massimi di assorbimento dei collegamenti incrociati, ma alle spalle dei principali picchi di assorbimento. 3. Quando irradiati alle loro lunghezze d'onda ottimali, ma a pH diversi, sia la desmosina che l'isodesmosina sembravano abbastanza stabili a pH maggiore di 8,5. Tra pH 8 e 5, la velocità fotolitica era massima e diminuiva leggermente a pH più acido. Al di sotto di pH 4,0, uno dei prodotti della fotolisi era la lisina libera. 4. In analogia al meccanismo di degradazione fotolitica dell'N-metil piridinio cloruro, sembra che le (iso)desmosine siano state degradate attraverso la formazione di un'amminoaldeide aperta, che è stata idrolizzata a pH acido per dare lisina libera e un'aldeide glutaconica sostituita.
Antistaminici: farmacologia e uso clinico.Gli antistaminici sono un gruppo eterogeneo di farmaci che possiedono la capacità di inibire varie azioni istaminiche. In generale, essi hanno una certa somiglianza strutturale con l'istamina e agiscono principalmente per prevenire l'interazione del recettore dell'istamina attraverso la competizione con l'istamina per i recettori dell'istamina. Di conseguenza, sono utili terapeuticamente nel prevenire, piuttosto che invertire, le azioni istaminiche. I singoli farmaci antistaminici agiscono per inibire l'azione istaminica a uno o un altro recettore dell'istamina (recettore H1 o H2), ma non su entrambi i recettori Il gran numero di antistaminici che sono disponibili da molti anni e impiegati principalmente come farmaci \'antiallergici\' sono classificati come inibitori del recettore H1; più efficace dal punto di vista terapeutico nell'inibire le manifestazioni di formazione di pomfo ed eritema indotta dall'istamina e prurito Inibitori dei recettori H2, agenti in grado di inh ibit secrezione acida gastrica indotta da istamina, sono stati sviluppati più recentemente. Gli antistaminici in generale e gli inibitori del recettore H1 in particolare esercitano un'ampia varietà di attività farmacologiche. Il loro uso è spesso accompagnato da effetti collaterali indesiderati, in particolare depressione del SNC, secchezza delle mucose ed effetti gastrointestinali. I farmaci antistaminici, usati con giudizio e in dosi adeguate, sono utili nel controllo di disturbi allergici, riniti allergiche e orticaria in particolare; gli inibitori del recettore H2 di nuova concezione mostrano una promessa terapeutica nel trattamento dell'ulcera peptica.
Studio quantitativo della struttura secondaria degli istoni H1, H2A e H4 in soluzione mediante spettroscopia infrarossa.La struttura secondaria degli istoni H1, H2A e H4 (F1, F2a2 e F2a1) è stato studiato quantitativamente in soluzioni di acqua pesante (2H2O) in un'ampia gamma di concentrazione di istoni, p2H e concentrazione di cloruro di sodio utilizzando un metodo di spettroscopia a infrarossi migliorato. In tutte le condizioni ci sono circa 5- -10% dell'alfa elica. Le condizioni favorevoli all'aggregazione inducono la formazione di una struttura a fogli pieghettati antiparalleli in misura di circa il 15% in H1 e H2A e di circa il 30% in H4. Quando la p2H e la concentrazione di NaCl sono nell'intervallo fisiologico, è lo stesso contenuto di questa struttura in H2A e H4 e nessuno in H1.
L'effetto del pH sull'assorbimento dell'acido folico nell'uomo.1. L'assorbimento dell'acido pteroilmonoglutammico (PteGlu) è stato misurato utilizzando la tecnica del piccolo perfusione intestinale con PteGlu triziato in soggetti normali e in pazienti con malattia celiaca 2. A pH intradigiunale simile, i pazienti con malattia celiaca non trattata hanno significativamente meno PTEGlu rispetto ai soggetti normali e ai pazienti con malattia celiaca trattata 3. Il pH "a riposo" nel digiuno non differiva notevolmente tra soggetti normali e pazienti con malattia celiaca 4. L'aumento del pH ha diminuito l'assorbimento di PteGlu nei pazienti con malattia celiaca e nei soggetti normali 5. Questi risultati suggeriscono che il malassorbimento di PteGlu nella malattia celiaca non è dovuto a pH nel digiuno.
Generazione di ammoniaca da fonti non ureiche in un sistema di incubazione fecale.1. Sospensione fecale al 25% in soluzione di cloruro di sodio, incubata in anaerobiosi a 37 gradi C per 48 ore, ha mostrato un'eccellente sopravvivenza di tutti i principali gruppi di batteri fecali 2. Tutti i sistemi di incubazione fecale studiati hanno generato grandi quantità di ammoniaca, in particolare quelli in cui la conta batterica è diminuita durante l'incubazione. Poiché le feci normali contengono quantità trascurabili di urea questa ammoniaca deve essere stata generata da fonti diverse dall'urea 3. L'ammoniaca è stata generata anche dalle feci rilasciate dal clistere di cloruro di sodio e dal fluido ileostomico, indicando che il fenomeno non è limitato al contenuto distale del colon 4. Generazione di ammoniaca da feci incubate è stata inibita dalla precedente sterilizzazione in autoclave del campione, ma non dalla sterilizzazione con raggi gamma 5. La generazione di ammoniaca da feci incubate è stata accompagnata dal rilascio di grandi quantità di anione organico e da una caduta del pH. le osservazioni sono interpretate come prova che l'ammoniaca generata all'interno del colon in situ non è derivata esclusivamente dall'urea, ma anche dalla deaminazione batterica di amminoacidi, peptidi e proteine. Contemporaneamente l'attività batterica genera grandi quantità di organoacido. La presenza di batteri vivi non è essenziale per la generazione di ammoniaca, a condizione che siano presenti enzimi batterici. 7. La generazione batterica di soluto organico nelle feci che hanno lasciato il corpo è sufficientemente rapida da far sorgere seri dubbi sulla validità della centrifugazione fecale, o di altre tecniche che richiedono tempo e che comportano una lunga manipolazione delle feci, come metodi per ottenere fluido fecale extracellulare per misurazioni di costituenti organici o ammoniaca.
Antigeni tissutali circolanti. III. Identificazione e caratterizzazione di antigeni di corpo limitato e di corpo ampio e distribuzione nella bile della cistifellea umana. Presenza nel siero di pazienti con epatite acuta.", Tre antigeni condivisi da bile e tessuti (BT-1, BT-2 e BT-3) e uno condiviso da bile e saliva (BA) sono stati identificati nella bile della colecisti umana mediante immunodiffusione. I primi sono stati rilevati in tutti campioni di bile esaminati, mentre quest'ultimo è stato rilevato solo nella metà. BT-1 era limitato nella distribuzione a reni, urine e bile, mentre BT-2 e BT-3 erano ampiamente distribuiti principalmente nel fegato, nei polmoni e nella bile. Gli antigeni non erano presente nella bile di altri mammiferi testati, ad eccezione del BA che era presente anche nella scimmia Rhesus. Tutti gli antigeni sono stati inattivati da Pronase, avevano mobilità elettroforetica relativa delle globuline sieriche e separati l'uno dall'altro nella filtrazione su gel Sephadex G-200 e solfato di ammonio frazionamento Etanolo inattivato BT-1 e ha precipitato gli altri antigeni. BT-2 e BA erano relativamente resistenti alla temperatura di ebollizione e al pH acido, mentre BT-1 e BT-3 erano sensibili. Gli antigeni BT-2 e BT-3 sono stati rilevati nel siero di pazienti con epatite acuta ma non di pazienti con altre malattie o di controlli normali.
Aumento della gamma-glutamiltransferasi nell'ipertrigliceridemia: confronto con la pseudocolinesterasi sierica.Sia la gamma-glutamiltransferasi (gammaGT) che la pseudocolinesterasi (PCE) sono risultate essere aumentato nei soggetti ipertrigliceridemici. Alti valori di gammaGT sono stati osservati nei soggetti alcolisti e specialmente in quelli con aumento dei trigliceridi sierici o dell'alanina aminotransferasi superiore a 16 mU/ml, mentre la PCE non è stata significativamente modificata nei soggetti alcolisti. Anche se entrambi gli enzimi erano fortemente correlati con il logaritmo dei trigliceridi sierici e della frazione elettroforetica prebeta, vi erano notevoli differenze riguardo al loro comportamento in vari soggetti ipertrigliceridemici. L'attività della PCE era elevata anche nelle ipertrigliceridemie moderate ma la sua correlazione con i trigliceridi sierici tendeva ad appiattirsi con l'aumentare della concentrazione di trigliceride. l'aumento di gammaGT era piuttosto caratteristico per l'ipertriglicemico grossolano ridemia. La terapia a breve termine per abbassare i trigliceridi è stata accompagnata da una tendenza alla normalizzazione di gammaGT, mentre i valori di PCE non sono stati influenzati. Si è cercato di interpretare questi cambiamenti dell'attività sierica-enzimatica nell'ipertrigliceridemia in connessione con i meccanismi di sintesi delle lipoproteine e con la patogenesi delle condizioni iperlipemiche.
Degradazione dell'arilsolfato da parte dei microsomi epatici.L'enzima liberato da alcuni trattamenti e i cambiamenti nell'attività dell'arilsolfatasi C nel danno epatico cronico sono stati studiati nel fegato di ratto 1. L'attività enzimatica liberata dagli ultrasuoni era la più alta nelle condizioni studiate 2. L'arilsolfatasi C è stata dosata usando p-nitrofenil solfato in tampone Tris/acetato 0,25 M. È dimostrato che questo metodo può essere utilizzato per misurare l'arilsulfatasi Attività C in una miscela di arilsulfatasi A e B. 3. L'enzima è localizzato principalmente nella frazione microsomiale nel fegato di ratto. Nel danno epatico tossico, l'attività enzimatica diminuisce fin dalla fase iniziale, diminuisce notevolmente nel danno epatico cronico. L'attività sembra per riflettere i danni ai microsomi e quindi l'attività dell'arilsulfatasi C può essere un buon indicatore di danno ai microsomi epatici.
Saggi esterolitici radiochimici sensibili per l'urochinasi.Sono descritti due saggi esterolitici radiochimici per l'urochinasi. Un saggio si basa sull'idrolisi urochinasi-dipendente di Nalpha- acetil-glicil-L-lisina [3H]metil estere e l'altro sull'attivazione urochinasi-dipendente del plasminogeno e saggio della plasmina generata con Nalpha-tosil-L-arginina [3H]metil estere. I saggi vengono eseguiti in tubi posti in fiale di conteggio per scintillazione liquida. Alla fine dell'esperimento generato [3H] metanolo viene estratto nel cocktail di scintillazione liquida e contato. Il substrato non idrolizzato rimane in gran parte nella fase acquosa e contribuisce solo una piccola frazione dei conteggi. Questa facile separazione di 3H- l'alcol etichettato dal substrato estere consente il test semplice e altamente sensibile per l'urochinasi. I test danno risultati in buon accordo con il classico test su piastra di fibrina.
Titolazione della fosfatasi alcalina placentare umana con ortofosfato radioattivo.La fosfatasi alcalina placentare umana incorpora fosfato radioattivo in modo specifico e covalente a pH acido. Mediante titolazione di soluzioni di l'enzima purificato con ortofosfato radioattivo, l'enzima ha dimostrato di incorporare fino a 2 gruppi fosfato per molecola. Non è stata trovata alcuna prova che suggerisca che i due siti avessero affinità diverse per il fosfato. Titolazioni simili possono essere utilizzate per determinare la molarità di soluzioni di non -fosfatasi alcalina placentare di purezza sconosciuta, se si presume che anche queste possiedano 2 siti di legame per molecola.
L'attività della lisilossidasi in pelli umane normali e cicatrici post-ustione.L'attività della lisilossidasi delle pelli normali umane derivate dalle cosce frontali di 33 soggetti ha mostrato grandi variazioni e il valore medio era di 11 455 +/- 7 172 (DS) cpm/g di tessuto umido. L'età della lesione ha influenzato l'attività della lisil ossidasi nelle cicatrici post-ustione. I tessuti di granulazione hanno mostrato un'attività piuttosto bassa; tuttavia, l'attività è aumentata notevolmente entro 2-3 mesi, e ha raggiunto un valore significativamente più alto di quello della pelle normale. L'alto livello di attività è continuato fino a 2-3 anni, per poi diminuire gradualmente fino a raggiungere i valori normali dopo circa 5 anni. L'attività della lisil ossidasi è stata rilevata solo dopo trattamento dei tessuti con urea 4 M. L'attività della benzilammina ossidasi ha anche mostrato ampie variazioni sia nella pelle normale che nelle cicatrici post-ustione, con valori medi di: 0,128 +/- 0,077 (SD) e 0,145 +/- 0,090 (SD) mmol/g di peso umido/h, rispettivamente. Non è stata osservata alcuna correlazione tra lisil ossidasi e attività della benzilammina ossidasi. I tessuti di granulazione hanno mostrato valori significativamente elevati di attività della benzilammina ossidasi in contrasto con i bassi valori di attività della lisil ossidasi.
Determinazione dell'urea sierica mediante frammentazione di massa.Viene descritto un metodo frammentatografico di massa di elevata precisione per la determinazione dell'urea sierica. Una quantità fissa di [15N2 Ad una quantità fissa di siero viene aggiunta ]urea, quindi l'urea viene convertita in acido 5,5-diallil barbiturico mediante accoppiamento con dietil estere dell'acido diallil malonico, il barbiturico viene quindi trasferito da una fase acquosa alcalina ad una fase organica contenente metil iodio mediante estrazione di coppia ionica utilizzando tetrabutilammonio come controione positivo La quantità di urea è determinata dal rapporto tra le registrazioni a m/e 236 e m/e 238 ottenute dopo analisi con un gascromatografo combinato-spettrometro di massa dotato di un MID -unit (rivelatore a ioni multipli). I due ioni utilizzati corrispondono al picco molecolare nello spettro di massa del derivato metilico dell'acido 5,5-diallil barbiturico non marcato e marcato, rispettivamente. La deviazione standard relativa del metodo è stata del 3,6% Un comp l'insorgenza tra il metodo frammentario di massa e un metodo di routine per la determinazione dell'urea sierica basato sulla reazione ureasi-Berthelot ha fornito un'elevata correlazione (r = 0,99) e un coefficiente di regressione di 0,95.
Isolamento e caratterizzazione di isoenzimi dell'alfa-amilasi salivare e pancreatica umana.Alfa-amilasi salivare e pancreatica umana (1,4-glucano 4- glucanoidrolasi, EC 3.2.1.1) sono state separate mediante elettrofocalizzazione. Nel primo caso abbiamo ottenuto sei isoenzimi con punti isoelettrici di pH 5.70, 5.72, 6.23, 6.32, 6.73 e 6.88. L'alfa-amilasi pancreatica umana è stata separata in otto isoenzimi con isoelettrico punti di pH 5,72, 5,77, 5,88, 6,05, 6,23, 6,69, 6,72 e 6,95. Alcuni degli isoenzimi si sono rivelati sialoproteine, altri che rappresentano circa l'80% dell'attività totale non contenevano acido neuraminico. gli isoenzimi sialoproteici sono risultati essere circa 47.000 in tutti i casi.
Focalizzazione isoelettrica di componenti della spectrina nella sferocitosi ereditaria.1. Mediante focalizzazione isoelettrica in 8 M di urea, la spectrina purificata da eritrociti umani normali è stata risolta in 12 a 15 bande peptidiche che differiscono per il loro punto isoelettrico. La maggior parte di esse erano focalizzate tra pH 6.4 e 5.2, una a pH 8.7 e alcuni componenti minori tra pH 7.4 e 6.8. 2. I risultati non sono stati influenzati dall'età della popolazione di eritrociti. 3. La spettrina purificata dagli eritrociti di cinque pazienti con sferocitosi ereditaria ha fornito modelli di focalizzazione isoelettrica simili, con l'eccezione della mancanza del componente focalizzato a pH 8,7 in due pazienti correlati.
Molteplici forme di DNA polimerasi DNA-dipendente durante lo sviluppo iniziale e nelle cellule somatiche di Xenopus laevis.Quattro distinte attività DNA-polimerasi DNA-dipendenti (DNA polimerasi I, II, III e IV secondo l'ordine di eluizione da colonna DEAE) sono state separate da estratti di uova di Xenopus laevis non fecondate. Le stesse attività, in base alle loro proprietà cromatografiche, specificità stampo e coefficienti di sedimentazione, sono state trovata negli embrioni almeno fino allo stadio di gastrula. D'altra parte, le cellule renali di Xenopus cresciute in coltura, così come gli ovociti cresciuti completamente, mancano di DNA polimerasi I. Questi dati suggeriscono che la DNA polimerasi I potrebbe essere una speciale attività della DNA polimerasi coinvolta nella sintesi del DNA estremamente rapida che avviene durante lo sviluppo iniziale di X. laevis.
Ossidazione del bromo di metil alfa e beta-piranosidi di D-galattosio, D-glucosio e D-mannosio.Metile alfa e beta -piranosidi di D-galattosio, D-glucosio e D-mannosio sono stati ossidati con bromo in soluzione acquosa a vari valori di pH I chetoglicosidi risultanti sono stati convertiti nei loro derivati O-metilossima più stabili che sono stati caratterizzati mediante spettroscopia e cromatografia L'ossidazione in un atomo di carbonio ad anello in cui l'idrogeno è assiale è ostacolata da sostituenti voluminosi in relazione diassiale syn (cioè un 1,3). Così, il gruppo aglicone negli anomeri alfa protegge la posizione 3, l'HO-4 assiale nei galattopiranosidi protegge la posizione 2 e l'HO-2 assiale nei mannopiranosidi protegge la posizione 4 dall'ossidazione.
Produzione e purificazione di due emicellulasi da Cephalosporium sacchari.La produzione di emicellulasi extracellulari da parte del fungo Cephalosporium sacchari è stata studiata in presenza di varie fonti di carbonio e a vari valori di pH e temperature iniziali. L'emicellulosa B e l'olocellulosa da erba di lancia (Heteropogon contortus) erano le migliori fonti di carbonio e la temperatura ottimale era di 27 gradi. Il valore di pH iniziale aveva poca influenza sulla resa finale di emicellulasi. Due emicellulasi (HC-III e HC-IV) sono state purificate mediante precipitazione di solfato di ammonio e focalizzazione isoelettrica. I loro pesi molecolari erano 10.700 e 9.550 e i loro valori di pI 9,40 e 6.0, rispettivamente. HC-III emicellulosa B idrolizzata a oligosaccaridi senza produzione di monosaccaridi.
Residui di triptofanile e acido carbossilico nel centro attivo della glucoamilasi I da Aspergillus niger.La dipendenza dal pH della fotoossidazione dell'L-triptofano , in presenza di rosa bengala e blu di metilene, è stato investigato vero che le costanti di velocità iniziali sono state determinate per aggirare errori dovuti a processi secondari Fotoossidazione della glicoamilasi I da A. niger in presenza di blu di metilene o rosa Il Bengala ha provocato una perdita di attività enzimatica pH-dipendente, che era analoga alla distruzione dell'L-triptofano libero durante la fotoossidazione. La perdita di attività enzimatica era strettamente associata alla distruzione dei residui di triptofano nell'enzima. Protezione significativa di entrambi l'attività enzimatica e i residui di triptofanile nella molecola enzimatica è stata ottenuta effettuando la fotoossidazione in presenza di maltosio, che è un substrato dell'enzima. I residui di triptofanile della glucoamilasi I, che era stato inattivato e per reazione dei suoi residui di acido carbossilico con glicina metil estere in presenza di una carbodi-immide idrosolubile, erano anche sostanzialmente protetti dal maltosio. Si conclude che il centro attivo della glucoamilasi I è una fessura rivestita di residui di triptofanile che partecipano al legame del substrato. Uno o più residui di acido carbossilico sono coinvolti nella scissione del legame.
Proprietà antimicotiche degli acidi alfa,omega-alcandicarbossilici e dei loro esteri dimetilici.Tredici acidi alfa, omega-alcandicarbossilici (C2-C12, C14 e C16) e i loro esteri dimetilici sono stati testati contro Aspergillus niger, Trichoderma viride e Myrothecium verrucaria in agar destrosio Sabourauc a pH 4,0 e 5,6. La tossicità per Canadida albicans, Trichophyton mentagrophytes e Mucor mucedo è stata determinata nello stesso terreno a pH 5,6 e 7,0 in assenza e presenza di siero di manzo al 10%. Gli acidi dicarbossilici possedevano un'attività antimicotica da molto scarsa a nulla contro tutti e sei i funghi. La fungitossicità degli esteri dimetilici su A. niger, T. viride e M. verrucaria era C8 = C9 maggiore di C7 maggiore di C6 = C5 maggiore di C10 maggiore di C4 maggiore di C11 e a C. albicans, T. mentagrophytes e M. mucedo C9 maggiore di C10 maggiore di C11 maggiore di C12 = C8 maggiore di C7 maggiore di C6 maggiore di C5 maggiore di C4 grande più di C3. La fungitossicità degli esteri degli acidi grassi e degli acidi alfa-omega-alcanedicarbossilici è stata influenzata dalla lunghezza della catena e non dal pH del mezzo o dall'assenza o presenza di siero bovino.
Concorrenza tra Phytophthora cinnamomi e Trichoderma spp. in terreno autoclavato.Risultati delle analisi della beta-glucosidasi (EC 3.2.1.21) e della fosfatasi (EC 3.1.3.1;EC 3.1.3.2) le attività hanno indicato che la presenza di un isolato di Trichoderma riduceva lo sviluppo di Phytophthora cinnamomi È stato inoltre osservato che P. cinnamomi era più competitivo nelle colture coinoculate rispetto alle colture in cui è stato aggiunto Trichoderma il giorno 3. Analisi di l'attività della trealasi (EC 3.2.1.28) indicava che Trichoderma utilizzava porzioni del micelio di P. cinnamomi come substrato o l'azione di P. cinnamomi rilasciava nutrienti aggiuntivi normalmente non disponibili per Trichoderma. L'isolato di Trichoderma più forte era T. harzianum.
Forme L stabili di Clostridium perfringens e loro crescita su superfici di vetro.Forme L di Clostridium perfringens sono state indotte in un brodo di infusione cuore-cervello contenente 10 % di saccarosio e 2 unità di penicillina. Dopo alcune ore di crescita, erano evidenti sferoplasti, granuli e bacilli allungati. A intervalli di 24 h, sono state effettuate subcolture seriali nel suddetto terreno che ha portato a una coltura composta interamente da sferoplasti (o protoplasti) e granuli. Dopo il ritiro della penicillina queste colture di forma L sono cresciute bene e, dopo 100 passaggi, non c'era ritorno alla forma bacillare. Anche il saccarosio poteva essere prelevato dal terreno. Gli effetti della centrifugazione, stabilizzatore osmotico, ultravioletto sono stati esaminati la luce, la temperatura, il pH e la liofilizzazione su forme L stabili. È stato riscontrato che le forme L si attaccano alle pareti dei tubi di coltura durante il trowth e sono stati ottenuti fogli di crescita della forma L su vetrini coprioggetto in provette Leighton e sui lati di medicina bo piccoli.
Una chitina sintasi particolata da Aspergillus flavus Link: le proprietà, la posizione e i livelli di attività nel micelio e nelle preparazioni di protoplasti rigeneranti.Chitina sintasi (ED 2.4.1.16) è stato caratterizzato in Aspergillus flavus. Per il substrato UDPGlcNAc è stato ottenuto un valore di AK(m) di 2,5 m(M). L'enzima aveva un fabbisogno di GlcNAc e Mg2+ e l'attività era aumentata in presenza di chitodestrine solubili F1 e F2 L'attività ottimale è stata ottenuta utilizzando il tampone Tris-HCl, pH 7,5, con un picco secondario a pH 6,2 e una temperatura di incubazione di 29,5 gradi C. I modelli di distribuzione della chitina sintasi nei protoplasti e nel materiale miceliale erano molto simili. attività specifica è stata trovata in una frazione di 200 000 X g. I livelli di enzimi nel micelio in crescita sono aumentati durante la fase di crescita esponenziale dopo la quale sono diminuiti. L'attività è aumentata anche durante le prime fasi di rigenerazione dei protoplasti sia conidi che miceliali, des nonostante un'iniziale mancanza di sintesi proteica netta. I livelli di chitina sintasi dipendevano anche dalla fonte di carbonio disponibile durante la rigenerazione.
Purificazione e caratterizzazione della tonina.La tonina è stata purificata dalle ghiandole sottomascellari di ratto mediante centrifugazione differenziale, precipitazione di solfato di ammonio, gel filtrazione su Sephadex G150 e mediante cromatografia a scambio ionico su DEAE-cellulosa, fosfo-cellulosa, SP-Sephadex C25 e SP-Sephadex C50. La tonina purificata si è dimostrata omogenea mediante elettroforesi analitica e analisi analitica di ultracentrifugazione. La tonina purificata era molto stabile se conservata in tamponi di valori di pH bassi o quando incubato ad alte temperature in soluzione neutra. Il peso molecolare stimato dall'equilibrio di sedimentazione era 28 700. Il pH ottimale era vicino a 6,8 in un tampone fosfato di potassio 0,1 M. La costante di Michaelis-Menten per la tonina usando l'angiotensina I come substrato era di circa 4 X 10(-5) M. L'attività della tonina era fortemente inibita dal plasma. Gli studi cinetici che utilizzavano l'angiotensina I come substrato hanno mostrato che l'inibizione della tonina da parte del plasma era del tipo non competitivo e.
[Reazione di splenomegalia dell'embrione di pollo a seguito di innesto corio-allantoide di frammenti di milza di pollo].Reazione di potenziamento della milza dell'embrione di pollo, a seguito l'inserimento (procedura di innesto o iniezione) di cellule spleniche omologhe è uno dei risultati della reazione del trapianto contro l'ospite (reazione GVH). Indipendentemente dai normali tipi di reazione GVH misurati, è stato dimostrato che la relazione tra il numero di cellule immunocompetenti e l'intensità della reazione è lineare. Il nostro studio mostra che la relazione non è la stessa quando si utilizza la procedura di innesto della membrana corio-allantoide invece dell'iniezione nelle vene. Tuttavia, due fatti rimangono invariati 1) la quantità minima di le cellule della milza sufficienti a provocare un aumento della milza è basso, 2) c'è un legame tra il numero di cellule della milza omologhe e il tasso di aumento della milza, ma in questo caso non è stato dimostrato essere lineare. ruolo svolto da la membrana corio-allantoide è oggetto di dibattito.
[Applicazioni dell'estrazione e del dosaggio radioimmunologico di LH-RH nell'urina umana].L'esistenza di immunoreattività simile a LH RH endogeno è mostrata in urine umane dopo opportuna estrazione, mediante il dosaggio radioimmunologico di LH RH. Nelle donne normali in bicicletta e in menopausa le quantità di ormone endogeno riscontrate nelle urine sono maggiori dopo estrazione acida rispetto a quelle riscontrate dopo estrazione a pH 7. Inoltre, l'aumento osservato per estrazione in il metanolo è direttamente correlato e proporzionale alla quantità di ormone dosabile per estrazione a pH 7. L'ipotesi dell'escrezione urinaria di LH RH come polimero di unità immunoreattive è suggerita da questo studio.
[Ruolo immunosoppressivo del fegato nella reazione del trapianto contro l'ospite].La capacità del fegato di ridurre l'intensità del trapianto contro l'ospite ( GVH) è stata studiata in ratti ibridi F1 impiantati con linfonodi parentali. Gli impianti di tessuto intraepatico e intrarenale sono stati confrontati utilizzando i classici criteri GVH. L'impianto intraepatico di linfonodi sopprime la mortalità osservata dopo l'impianto intrarenale. I risultati confermano l'interesse del drenaggio portale nel trapianto di organi e suggerire un nuovo sito di impianto per le cellule linfoidi.
Composizione del contenuto del raccolto e del ventriglio nella gallina ovaiola.Il contenuto del raccolto e del ventriglio è stato analizzato in sei fasi della formazione delle uova. 2. Il raccolto è stato vuoto durante il giorno e pieno durante la notte mentre il ventriglio conteneva una quantità costante di sostanza secca Il contenuto d'acqua del raccolto non variava ma quello del ventriglio era minimo subito dopo l'ovulazione e massimo 18 h dopo. 3. La pressione osmotica del contenuto del ventriglio è rimasta costante e vicina a quella del sangue, quella del contenuto del raccolto era quasi isotonica all'ovideposizione ma ipertonica 18 ore dopo. In entrambi gli organi il pH della fase liquida variava ciclicamente con la formazione dell'uovo ed era più basso durante la deposizione del guscio d'uovo 4. I contenuti di Na+, K+ e Cl- della fase liquida del raccolto non variavano ma Ca2+ aumentava con la diminuzione del pH. Anche Na+ e K+ erano costanti nella fase liquida del ventriglio ma Cl- e Ca2+ aumentavano durante la formazione del guscio 5. Si conclude che la quantità di H Il Cl secreto dal proventiculus è correlato alla deposizione del guscio d'uovo e la solubilizzazione del calcio dipende dalla fermentazione microbica nelle colture e dalla secrezione di HCl da parte del proventriculus.
Autolisi di Neisseria gonorrhoeae. Relazione tra stabilità meccanica e vitalità.La relazione tra stabilità meccanica e vitalità di N. gonorrhoeae (Tipo 4) in sospensione. È stata spesso trovata una correlazione tra la vitalità e le registrazioni della densità ottica. Tuttavia, nonostante la maggiore stabilità meccanica in soluzioni a basso pH (5-2) o contenenti Cu++ o saccarosio (10 per cento), questi ambienti erano tossico per i gonococchi. È stato dimostrato un effetto di conservazione della vitalità di Mg++ (4 mM), Ca++ (4 mM), spermina (0-5 mM), polivinilpirrolidone (10 %) e bassa temperatura (4 gradi C). viene discussa la possibilità di migliorare i mezzi di trasporto per i gonococchi.
Cluster analysis applicata alla valutazione dei sintomi dei pazienti psichiatrici: una valutazione della sua capacità predittiva.La valutazione su 39 sintomi è stata esaminata per i pazienti ricoverati in Neuropsichiatria Institute of the University of Michigan Medical Center. È stata effettuata una valutazione dettagliata dei cluster derivati da un algoritmo di clustering gerarchico, utilizzando il collegamento completo e un semplice coefficiente di matching sulle variabili binarie di presenza o assenza di sintomi. I quattro gruppi di pazienti suggeriti da la cluster analysis può essere caratterizzata come segue: (1) molteplicità generalizzata di sintomi; (2) capacità di far fronte tranne che per l'orientamento al di fuori delle norme generalmente ritenute; (3) livello di attività e processi di pensiero accelerati, intensificati e non selezionati; (4 ) internamente punitivo, rallentato e angosciato. È dimostrato che questi gruppi hanno ricevuto un trattamento significativamente diverso e che l'effetto del trattamento è stato significativamente diverso, mentre non nces sono state annotate per i gruppi definiti in termini di diagnosi. Per mezzo di funzioni discriminanti lineari, vengono suggerite regole per l'assegnazione di altri pazienti psichiatrici a uno di questi quattro gruppi.
Gli effetti del pH sull'attività della corineina e dei relativi sali fenolici di ammonio quaternario sulla preparazione del retto di rana.L'attività di m-idrossibenziltrimetilammonio, corineina (3:4-diidrossifenetiltrimetilammonio, \'dopamina quaternaria\') e m-idrossifenilpropiltrimetilammonio rispetto al tetrametilammonio sono stati misurati sulla preparazione del retto di rana (Rana pipiens) a pH 7 e pH 9. 2 I composti sono più attivi nel più acido ambiente che indica che la ionizzazione del gruppo fenolico riduce l'attività tra la metà e un decimo di quella della forma con il gruppo ossidrile intatto.3 In contrasto con la situazione ai recettori degli amminoacidi, non c'è motivo di credere che ad altri recettori È probabile che gli zwitterioni siano più attivi delle forme prive di carica con cui sono in equilibrio.
Dinamica dei residui amminoacidici aromatici nella conformazione globulare dell'inibitore basico della tripsina pancreatica (BPTI). Studi I. 1H NMR.La base l'inibitore pancreatico della tripsina (BPTI) è stato studiato mediante tecniche 1H NMR ad alta risoluzione a 360 MHz. L'osservazione delle risonanze protoniche ammidiche dello scheletro polipeptidico ha mostrato che la conformazione globulare di BPTI determinata da studi a raggi X in cristalli singoli è mantenuta in soluzione acquosa per l'intervallo di temperatura da 4 gradi a 87 gradi. Gli studi NMR su questo intervallo di temperatura dei residui di amminoacidi aromatici di BPTI, ovvero 4 tirosine e 4 fenilalanine, hanno portato a completare le assegnazioni di tutti i sistemi di spin aromatici nella proteina. Da questo, le informazioni è stata ottenuta sui moti di rotazione attorno all'asse del legame C beta--Cv degli anelli aromatici nella forma globulare di PBTI. A 25 gradi, due anelli di tirosina e un anello di fenilalanina ruotano rapidamente sulla scala temporale NMR. Fo Negli altri anelli sono state studiate le transizioni da movimenti rotatori lenti a rapidi a temperature variabili e sono state determinate le barriere energetiche per questi processi di velocità intramolecolare. Gli studi sulle risonanze tirosina erano stati descritti in dettaglio in una precedente pubblicazione. Il presente lavoro descrive l'identificazione delle risonanze della fenilalanina e commenta alcuni aspetti tecnici che potrebbero essere di interesse abbastanza generale per l'analisi di spettri 1H NMR di proteine altamente risolti. I dati per le tirosine e le fenilalanine sono raccolti in tre tabelle, vale a dire i valori pK alfa per le tirosine, i parametri NMR per tutti gli otto aromatici, e i parametri delta G diverso da e, se disponibile, delta H diverso da e delta S non uguale a per i moti di rotazione degli anelli.
microelettrodi di vetro sensibili al pH e misurazioni del pH intracellulare.1. Sono state esaminate alcune proprietà del microelettrodo di vetro a punta aperta, non isolato e sensibile al pH in diversi esperimenti elettrici 2. Sulla base di queste osservazioni, sono stati considerati problemi tecnici e teorici per l'applicazione alla misurazione del pH in piccole cellule 3. Il pH intracellulare, (pH)i, della cellula epiteliale nel duodeno di ratto misurato era di circa 7,0 Una riduzione del (pH)i era evidente (circa 0,3) con l'aggiunta di 20 mM-glucosio al fluido di bagno 4. Si è concluso che con alcune limitazioni tali microelettrodi a punta aperta non isolati possono essere utilizzati con successo per il pH intracellulare misure.
Equilibrio di sedimentazione di proteine in gradienti di densità.La tecnica dell'equilibrio di sedimentazione in gradienti di densità nell'ultracentrifuga analitica è stata applicata allo studio delle proteine. Sono stati sviluppati una varietà di effetti e procedure tra cui l'uso di perline marker di densità, gli effetti della pressione sulla densità di galleggiamento e sul pH e il calcolo delle costanti di proporzionalità del gradiente di densità compositive e delle relazioni densità-indice di rifrazione. sono state misurate quattro proteine e calcolati i valori di idratazione. Sono state misurate le titolazioni di galleggiamento di sei proteine. Questi dati sono stati interpretati in termini di titolazioni di galleggiamento ottenute per sei omopolipeptidi ionizzabili, cinque copolipeptidi, due omopolipeptidi non ionizzabili e tre proteine chimicamente modificate Per interpretare ulteriormente questi dati sono state impiegate spettropolarimetria e titolazioni potenziometriche. sono stati ottenuti i valori per le costanti di dissociazione, il numero di residui ionizzabili e la natura degli ioni legati o dissociati per ionizzazione. È stata esplorata la relazione tra titolazioni potenziometriche e di galleggiamento e l'uso della centrifugazione in gradiente di densità come sonda per la struttura delle proteine.
Plasticità biochimica della trasmissione sinaptica: una revisione critica del Principio di Dale."Principio di Dale" afferma che ogni neurone ne rilascia uno e un solo trasmettitore sinaptico. I disturbi mentali e gli effetti comportamentali dei farmaci sono attribuiti all'attivazione o al blocco di uno o più di questi specifici trasmettitori. Una serie di studi biochimici, elettrofisiologici e comportamentali suggerisce la visione alternativa che ad ogni sinapsi monoaminergica l'azione del trasmettitore è modulato da diverse sostanze metabolicamente correlate: analoghi amminici (2-feniletilamina [PEA], p-tiramina, ecc. ), prodotti deaminati (aldeidi, acidi e alcoli) e forse anche precursori di aminoacidi. , gli autori presentano prove della presenza, sintesi, metabolismo e attività biologica (a livello cellulare, utilizzando tecniche di microelettrodi) di amminoacidi, ammine e composti deaminati metabolicamente correlati alla catecolamina es e sorotonina. Che i neuroaminoacidi esercitino effetti diretti (non mediati dai loro metaboliti amminici) è illustrato dai rapidi effetti della dopa microiontoforetica sull'attività dell'unità corticale e dall'osservazione che né l'effetto letargico del 5-idrossitriptofano (ritenuto a sostegno della teoria serotoninergica di Jouvet del sonno) né gli effetti stimolanti comportamentali della dopa (ritenuti a supporto della teoria delle catecolamine del comportamento affettivo) sono significativamente prevenuti dagli inibitori della decarbossilasi degli aminoacidi L-aromatici. L'attività biologica dei metaboliti deaminati delle catecolamine e della serotonina è illustrata dagli effetti della loro somministrazione microiontoforetica sulle unità corticali. Inoltre, il probenecid (un inibitore del trasporto acido attraverso la barriera ematoencefalica) ha dimostrato di alterare qualitativamente gli effetti della PEA somministrata per via intraventricolare e del suo metabolita acido fenilacetico sui potenziali evocati visivi. È stato dimostrato che il cervello di coniglio sintetizza una serie di feniletilammine non catecoliche farmacologicamente attive come sottoprodotti del metabolismo delle catecolamine. I modulatori di ammine come la PEA differiscono dai tipici trasmettitori per la loro capacità di attraversare le barriere biologiche; l'inibizione della decarbossilasi solo nei tessuti periferici (usando alfa-metildopa idrazina) impoverisce notevolmente la PEA cerebrale (ma non le catecolamine). A causa del controllo omeostatico della velocità di sintesi e disposizione dei trasmettitori, ci si può aspettare che cambiamenti fisiologici, farmacologici e patologici influenzino maggiormente i livelli tissutali dei relativi modulatori. Questa teoria del modulatore dell'azione dei farmaci è illustrata dall'effetto di diversi farmaci psicotropi sui livelli cerebrali di PEA e di noradrenalina. Ad esempio, l'anfetamina inizialmente diminuisce e poi aumenta i livelli di PEA nel cervello, senza alterare i livelli di noradrenalina nel cervello. Gli autori propongono un "Principio di Dale\' esteso": ogni neurone è specifico in quanto rilascia a tutte le sue estremità lo stesso pool di messaggeri chimici, composto da un trasmettitore e modulatori metabolicamente correlati, la cui proporzione relativa è determinata da lo stato fisiologico della cellula (plasticità biochimica)...
Studi biochimici della membrana eccitabile di Paramecium aurelia. I. 45Ca2+ fluisce attraverso la membrana a riposo ed eccitata.Le caratteristiche del trasporto di Ca2+ attraverso la membrana eccitabile di Paramecium aurelia sono stati studiati misurando l'afflusso e l'efflusso di 45Ca2+. La concentrazione intracellulare di Ca2+ libero in P. aurelia a riposo era almeno dieci volte inferiore alla concentrazione extracellulare. L'afflusso di Ca2+ era facilmente misurabile a 0°C, ma non a 23°C L'afflusso di 45Ca2+ è stato stimolato dalle stesse condizioni che causano la depolarizzazione della membrana e l'inversione ciliare. L'aggiunta di Na+ e K+ (che stimolano l'inversione ciliare) ha determinato un aumento di 10 volte della velocità di afflusso di Ca2+. Un'applicazione esterna, pulsata, campo elettrico (1-2 mA/cm2 di superficie dell'elettrodo), ha fatto aumentare la velocità di afflusso di Ca2+ 3-5 volte, con l'entità della stimolazione dipendente dalla densità di corrente e dalla larghezza dell'impulso. L'afflusso di Ca2+ aveva le caratteristiche di un sistema di trasporto passivo ed è stato associato al meccanismo "gating" del Ca2+ innescato chimicamente o elettricamente, che è stato studiato elettrofisiologicamente. Al contrario, l'efflusso di Ca2+ sembrava essere catalizzato da un sistema di trasporto attivo. Con cellule precedentemente caricate a 0 gradi C con 45Ca2+, l'efflusso di Ca2+ era rapido a 23 gradi C, ma non si verificava a 0 gradi C. Questo meccanismo attivo di efflusso di Ca2+ è probabilmente responsabile del mantenimento dei bassi livelli interni di Ca2+ nelle cellule non stimolate.
Protein chinasi associate alla mielina del nervo periferico. 1. Fosforilazione di proteine mieliniche endogene e substrati esogeni.Quando è stata incubata mielina altamente purificata dal nervo sciatico di ratto con [gamma-32P]ATP, i componenti proteici della membrana sono stati fosforilati indicando la presenza sia del substrato (proteina del recettore) che di una chinasi endogena nella membrana Elettroforesi su gel di poliacrilammide delle proteine di membrana fosforilate seguita da conteggio per scintillazione di fette di gel e l'autoradiografia ha mostrato che i polipeptidi dei pesi molecolari 28000, 23000 e 19000 erano fosforilati e che 32P da [gamma-32P]ATP era stato incorporato nei residui di serina delle proteine del substrato. La fosforilazione della mielina purificata era Mg2+-dipendente, era ottimale a pH 6,5 e non è stato stimolato dall'adenosina 3\',5\'-monofosfato Abbiamo scoperto che proteine diverse da quelle della mielina, come fosvitina, caseina, protamina e istoni , può anche agire come substrato per la chinasi associata alla membrana. L'inibitore della proteina chinasi muscolare non ha avuto effetto sulla fosforilazione endogena delle proteine mieliniche o sulla fosforilazione della fosvitina da parte della proteina mielina chinasi dei nervi periferici. Tuttavia, la fosforilazione dell'istone da parte della proteina chinasi della mielina del nervo periferico è stata inibita dall'inibitore della proteina chinasi. Dopo aver lavato la membrana con 150 mM KCl, nel surnatante è stata trovata la protein chinasi che utilizza l'istone come substrato. Al contrario, la fosforilazione endogena delle proteine di membrana o la fosforilazione della fosvitina da parte della chinasi associata alla membrana non è stata influenzata dal lavaggio. Da questi risultati concludiamo che esistono almeno due sistemi di protein chinasi nella mielina del nervo periferico purificata. Un sistema non è inibito dall'inibitore della chinasi muscolare, è strettamente legato alla membrana e utilizza come proteine recettoriali la fosvitina esogena o le proteine endogene di membrana. Il secondo sistema è inibito dall'inibitore della chinasi muscolare, è rimovibile dalla membrana e utilizza gli istoni come proteine recettrici.
Relazione tra il pH medio e quello della matrice lisosomiale studiata con due metodi indipendenti.1. Il metodo di stima del pH intralisosomiale misurando il è stata esaminata criticamente la distribuzione della [14C]metilammina nei lisosomi isolati dal fegato di ratti trattati con Triton WR 1339. 2. Nei lisosomi lisati, la metilammina è legata ai frammenti di membrana, ma questo legame può essere completamente soppresso aumentando la concentrazione di cationi monovalenti nel mezzo 3. Nei lisosomi intatti, il legame della [14C]metilammina è solo parzialmente inibito dai cationi monovalenti a 25 gradi C. 4. L'accumulo di [14C]metilammina nei lisosomi intatti viene progressivamente inibito man mano che la concentrazione di la metilammina è aumentata. Un'inibizione simile dell'accumulo di [14C]metilammina si ottiene con NH4Cl 5. Valori simili per il pH intralisosomiale sono stati ottenuti dalle misurazioni della distribuzione di metilammina, dimetilammina e trimetila le mie, che si accumulano nei lisosomi, e del 5,5-dimetiloxazolidinedione-2,4, che è escluso. 6. La scomposizione dell'albumina sierica bovina marcata con 123I endocitata da parte dei lisosomi isolati intatti è molto meno sensibile al pH del terreno rispetto alla scomposizione delle proteine aggiunte da parte dei lisosomi lisati. 7. Il pH intralisosomiale è stato stimato confrontando la velocità di degradazione dell'albumina marcata con 125I endocitata nei lisosomi intatti in funzione del pH medio con quella dell'albumina marcata con 125I aggiunta dai lisosomi lisati a diversi valori di pH. I valori ottenuti concordano bene con quelli calcolati dalla distribuzione della [14C]metilammina. 8. La metilammina e l'NH4Cl inibiscono la scomposizione dell'albumina marcata con 125I nei lisosomi intatti, in particolare a pH medio alto, ma non hanno alcun effetto sulla scomposizione da parte dei lisosomi lisati. 9. Si conclude che una differenza di pH attraverso la membrana lisosomiale (più acida all'interno che all'esterno) è mantenuta dalla presenza di gruppi indiffusibili caricati negativamente all'interno dei lisosomi e dalla permeazione attraverso la membrana lisosomiale dei protoni insieme agli anioni permeanti (o di OH- in cambio di anioni).
L'interazione della tireotropina radioiodurata con le membrane plasmatiche. Evidenza di siti di legame ad alta affinità nella tiroide.Il legame della [125I]tirotropina biologicamente attiva alla sono state studiate membrane plasmatiche purificate preparate da ghiandole tiroidee bovine. A 4 gradi C, il legame specifico ha raggiunto un massimo dopo 2 ore di incubazione e un plateau è stato mantenuto fino a 20 ore. La degradazione della [125I] tireotropina non era rilevabile dopo 2 ore di incubazione ed era solo il 10% del totale dopo 20 ore. A pH 6,0, al quale il legame era massimo, era evidente una singola classe di siti di legame, avente una costante di dissociazione di circa 25 nM. Gli studi di dissociazione hanno rivelato una cinetica di primo ordine con un tempo di dimezzamento di 2-3 minuti A pH 7,5, le curve di legame erano complesse, suggerendo due ordini di siti di legame con costanti di dissociazione di circa 200 nM e 80 pM. Inoltre, a questo pH, la dissociazione della tireotropina dal suo recettore era anche complesso, suggerendo la presenza di tw o reazioni del primo ordine, una con un tempo di dimezzamento simile a quello osservato a pH 6.0 e un'altra con un tempo di dimezzamento di 4 h. Sia a pH 6,0 che a 7,5, l'insulina, il glucagone, l'ormone della crescita e la prolattina non hanno avuto effetto sul legame della [125I]tirotropina. Siti di legame ad alta e bassa affinità simili sono stati osservati con le membrane della tiroide suina, ma solo siti a bassa affinità sono stati osservati con membrane di fegato di ratto o linfociti umani coltivati.
Permeabilità agli ioni potassio passiva delle membrane dell'involucro cellulare di Halobacterium halobium.Vescicole dell'involucro cellulare, preparate da Halobacterium halobium, sono state caricate con 3 M KCl, sospese in 3 M NaCl, e la perdita di K+ è stata seguita a varie temperature. Il grafico di Arrhenius dei tassi di efflusso di K+ mostra una rottura a 30 gradi C, con una maggiore energia di attivazione al di sopra della rottura. Questa dipendenza dalla temperatura è coerente con studi precedenti di movimenti di catena in liposomi preparati da lipidi isolati. L'efflusso di K+ è più rapido con l'aumento del pH tra pH 5 e 7. Poiché queste vescicole non respirano nelle condizioni sperimentali, ci si aspettava che i dati sull'efflusso di K+ fossero correlati al passivo permeabilità delle membrane al K+ La permeabilità apparente al K+ a 30 gradi C è di 1-2 - 10(-10) cm - s-1 Questo valore corrisponde a un'emivita di 5 h per il K+ trattenuto nelle vescicole dell'involucro e ad un'emivita probabilmente molto più lunga nelle cellule intere La capacità precedentemente osservata di Halobacterium di trattenere il K+ in assenza di metabolismo può quindi essere spiegata esclusivamente dalle caratteristiche di permeabilità delle membrane.
Ultrastruttura a doppio strato lipidico. Profili di densità elettronica e angoli di inclinazione della catena determinati dalla diffrazione dei raggi X.Profili di densità elettronica ad alta risoluzione (6A) sono stati calcolati su una scala di densità elettronica assoluta per i doppi strati composti sia da acidi grassi saturi che da acidi grassi associati alla serie alcalina di cationi bivalenti. I dati di diffrazione dei raggi X di Lowangle sono stati interpretati mediante una tecnica di sostituzione isomorfa. La posizione sulla radiografia film di riflessioni grandangolari discrete ha fornito informazioni dirette sull'impaccamento della catena idrocarburica e sull'inclinazione della catena in questi doppi strati. Questi risultati sono stati correlati a uno studio di microscopia elettronica degli stessi doppi strati (Waldbilling, RC, Robertson, JD e McIntosh, TJ ( 1976) Biochim. Biophys. Acta 448, 1-14) e anche agli studi di diffrazione a raggi X di cristalli di acidi grassi. Viene anche descritto un metodo per formare e analizzare strutturalmente doppi strati di asimmetria chimica ben definita. letto.
Diverse stechiometrie protone-zucchero per l'assorbimento di analoghi del glucosio da parte di Chlorella vulgaris. Evidenza dell'assorbimento di protoni zucchero-dipendente senza assorbimento concomitante di zucchero da parte del sistema protone-zucchero.", L'assorbimento di esosi da parte della Chlorella vulgaris è accompagnato dall'assorbimento di protoni. Per il 6-desossiglucosio è stata misurata la stechiometria di un protone prelevato per molecola di zucchero, mentre per l'1-desossiglucosio vengono prelevati circa due protoni per molecola di zucchero. Si è riscontrato che in presenza di 1-desossiglucosio una proporzione considerevole di "carrier" catalizza il trasporto di protoni senza il concomitante trasporto di zucchero. Presumibilmente, il legame dello zucchero avvia la traslocazione del trasportatore-protone- complesso dello zucchero, ma mentre l'1-desossiglucosio può ancora dissociarsi dal complesso sul lato esterno della membrana citoplasmatica, la traslocazione del complesso vettore-protone continua. Questa conclusione è stata raggiunta poiché (a) il la composizione del complesso trasportatore-protone-zucchero traslocato è la stessa per entrambi gli zuccheri. La sua formazione è una reazione del primo ordine rispetto ai protoni. (b) Quando il 6-desossiglucosio, presente all'interno delle cellule, viene scambiato con zucchero esterno, il rapporto di scambio è di due a uno quando lo zucchero esterno è 1-desossiglucosio, si perdono due molecole di 6-desossiglucosio per ogni molecola di 1-desossiglucosio che entra. Questo risultato indica che statisticamente durante l'assorbimento dell'1-desossiglucosio solo ogni seconda molecola di trasporto che appare sul lato interno della membrana citoplasmatica trasporta zucchero.
L'interazione degli ioni magnesio con la pompa del calcio del reticolo sarcoplasmatico.1. In presenza di Ca2+, l'ATP fosforila la pompa del Ca2+ del reticolo sarcoplasmatico nello stesso sito e nella stessa misura indipendentemente dal fatto che Mg2+ venga aggiunto o meno ai mezzi di incubazione, l'effetto principale dell'aggiunta di Mg2+ è quello di aumentare la velocità di fosforilazione 2. Quando il fosfoenzima viene prodotto in un mezzo contenente Mg2+ si defosforila circa 30 volte più veloce di quando viene effettuato in assenza di Mg2+ aggiunto L'aggiunta di Mg2+ dopo la fosforilazione non è efficace nell'accelerare l'idrolisi del fosfoenzima anche nell'enzima solubilizzato, suggerendo che la fosforilazione della pompa del Ca2+ porta all'occlusione del sito in cui Mg2+ combina per accelerare il rilascio di fosfato 3. L'occlusione del sito per Mg2+ può essere parzialmente invertita dall'acido trans-1,2-diamminocicloesonetetraacetico (CDTA). L'uso di questa proprietà è stato fatto per dimostrare che per il rilascio rapido se di fosfato si verifica Mg2+ deve essere legato all'enzima. 4. I risultati sembrano indicare che Mg2+ si combina con la pompa Ca2+ prima della fosforilazione.
Immagini di cationi bivalenti in doppi strati lipidici simmetrici e asimmetrici non colorati.I cationi bivalenti sono stati visualizzati microscopicamente in associazione con semplici doppi strati lipidici. Orientamento simmetrico e asimmetrico i doppi strati sono stati costruiti da monostrati di acidi grassi e sono stati tagliati in sottili sezioni trasversali per l'esame mediante microscopia elettronica a campo chiaro in assenza di macchie, fissativi o materiali di inclusione. È stato scoperto che i doppi strati formati da molecole lipidiche con gruppi di testa alcalino-terrosi mostrano elettroni naturali L'immagine intrinseca è stata associata alle variazioni locali del profilo di densità elettronica assoluta del doppio strato determinato dall'analisi di diffrazione dei raggi X degli stessi campioni (McIntosh, TJ, Waldbillig, RC e Robertson, JD (1976) Biochim. Biophys. Acta 448 , 15-33). Combinando l'evidenza microscopica, chimica e ai raggi X è stato stimato che incrementi locali di circa 1 g/cm3 possono produrre elettroni rilevabili contrasto in 500 A sezioni trasversali di doppi strati.
Nucleotidi ciclici e aggregazione piastrinica. Effetto degli agenti aggreganti sull'attività degli enzimi metabolizzanti i nucleotidi ciclici.Le attività di adenilato e guanilato ciclasi e ciclici nucleotide 3\':5\'-fosfodiesterasi sono stati determinati durante l'aggregazione delle piastrine del sangue umano con trombina, ADP, acido arachidonico ed epinefrina L'attività della guanilato ciclasi è alterata in misura molto maggiore rispetto all'adenilato ciclasi, mentre l'attività del nucleotide ciclico fosfodiesterasi rimane invariato. Durante le prime fasi dell'aggregazione piastrinica indotta da trombina e ADP si verifica una marcata attivazione della guanilato ciclasi mentre l'aggregazione indotta da acido arachidonico o epinefrina determina una rapida diminuzione di questa attività. In tutti e quattro i casi, l'attività dell'adenilato ciclasi è solo leggermente diminuito se esaminato in condizioni identiche Aggregazione piastrinica indotta da un'ampia varietà di agenti aggreganti incluso il collagene e gli isoanticorpi piastrinici determinano il "rilascio" solo di piccole quantità (1-3%) di guanilato ciclasi e nucleotide ciclico fosfodiesterasi e nessuna adenilato ciclasi. Le attività della guanilato ciclasi e del nucleotide ciclico fosfodiesterasi sono associate quasi interamente alla frazione citoplasmatica solubile delle piastrine, mentre l'adenilato ciclasi si trova esclusivamente in forma legata alla membrana. L'ADP e l'adrenalina inibiscono moderatamente la guanilato e l'adenilato ciclasi nelle preparazioni subcellulari, mentre gli acidi grassi arachidonici e altri insaturi stimolano moderatamente (2-4 volte) i primi. Si conclude che (1) l'attività della guanilato ciclasi piastrinica durante l'aggregazione dipende dalla natura e dalla modalità di azione dell'agente induttore, (2) l'attività della membrana adenilato ciclasi durante l'aggregazione è indipendente dall'agente aggregante ed è associata a una riduzione dell'attività e (3) la fosfodiesterasi del nucleotide ciclico rimane invariata durante il processo di aggregazione e rilascio delle piastrine. Inoltre, queste osservazioni suggeriscono un ruolo degli acidi grassi insaturi nel controllo dei livelli di GMP ciclico intracellulare.
Studi sui nucleotidi ciclici nel cancro. I. Adenilato guanilato ciclasi e protein chinasi nel tessuto del sarcoma prostatico.Adenilato, guanilato ciclasi e protein chinasi in sono stati studiati un sarcoma fibroso originato dalla prostata di ratto. Una diminuzione dei livelli di adenosina 3\', 5\'-monofosfato (AMP ciclico) e delle attività dell'adenilato ciclasi e un aumento dei livelli di guanosina 3\',5\'-monofosfato (GMP ciclico) e attività della guanilato ciclasi sono state osservate nel tessuto tumorale rispetto al normale tessuto prostatico dei ratti. Le protein chinasi del tumore e della prostata erano entrambe responsivi all'AMP ciclico esogeno, con un Ka apparente di 0,08 muM nel tumore e di 0,11 muM nella prostata. È interessante notare che le protein chinasi del tumore hanno risposto all'AMP ciclico nella stessa misura osservata nella preparazione enzimatica della prostata. La protein chinasi del tumore era più sensibile alla GMP ciclica ns uno dalla prostata, che mostra un Ka apparente di 0,88 muM nel tumore e di 4,85 muM nella prostata. Questo tumore è stato caratterizzato da un aumento delle attività della guanilato ciclasi con un conseguente aumento della GMP ciclica cellulare e una maggiore sensibilità della protein chinasi alla GMP ciclica.
Distribuzione subcellulare e proprietà della guanilato ciclasi nel cervelletto di ratto.Nel cervelletto di ratto la maggior parte della guanilato ciclasi è risultata legata al particolato. sono state esaminate comparativamente le proprietà delle guanilato ciclasi del particolato e del surnatante del cervelletto. Entrambi gli enzimi richiedevano la stessa concentrazione ottimale di Mn2+ e venivano stimolati dal Ca2+ in presenza di una bassa concentrazione di Mn2+. Ma la dispersione dell'enzima particolato con Triton X-100 alterava la concentrazione di Mn2+ producendo la massima attività e l'effetto inibitorio del Ca2+. Le distribuzioni subcellulari di guanilato e adenilato ciclasi sono state studiate anche nel cervelletto di ratto. Le porzioni maggiori delle due ciclasi sono state trovate nella frazione mitocondriale. Le frazioni subcellulari separate da gradiente di saccarosio hanno mostrato che le principali attività di entrambe le ciclasi erano concentrate nella frazione contenente principalmente particelle di terminazione nervosa.
Attività biologica delle catecolamine immobilizzate con agarosio.Le catecolamine sostituite all'agarosio sono state sintetizzate in vari modi. La noradrenalina e l'isoproterenolo sono state collegate al p-aminobenzamidoesil agarosio mediante un legame azo con l'anello catecolo La noradrenalina è stata anche accoppiata all'esil agaros tramite il gruppo amminico, formando un legame amminico, guanidino o amido L'attività biologica delle catecolamine immobilizzate è stata determinata valutando la loro capacità di interagire con l'adenilato ciclasi in diverse preparazioni di membrane e preparazioni intatte di eritrociti. Nelle membrane del cuore del cane, la stimolazione dell'adenilato ciclasi da parte dei gel di catecolamina potrebbe essere spiegata dall'ormone lisciviato che era stato rilasciato dai gel. Nelle membrane degli eritrociti di rana, la lisciviazione era minima e nessuna stimolazione significativa dell'adenilato ciclasi Le catecolamine immobilizzate con agarosio, tuttavia, inibiscono competitivamente la stimolazione dell'isoproterenolo dell'adenilato ciclabile e in queste membrane eritrocitarie indicando che le catecolamine legate all'agarosio interagiscono con i recettori beta-adrenergici come antagonisti piuttosto che come agonisti. Quando testate su eritrociti di rana intatti, le catecolamine immobilizzate con agarosio non hanno aumentato i livelli intracellulari di AMP ciclico, sebbene l'isoproterenolo abbia causato un aumento di 8-10 volte in questi livelli. Allo stesso modo, quando testate per l'attività antagonista nelle cellule intatte, le agarosio-catecolamine non sono riuscite a inibire la stimolazione dell'AMP ciclico causata dall'isoproterenolo. La differenza osservata nell'attività antagonista beta-adrenergica delle catecolamine legate all'agarosio nei preparati di membrana e nelle cellule intatte può essere attribuita a fattori sterici che potrebbero aver impedito l'accesso dei ligandi legati alla perlina con la superficie della cellula o alla possibilità che i recettori potrebbero essere sepolti nella matrice della membrana.
Isolamento del sistema di pompa del calcio e purificazione dell'ATPasi ione calcio-dipendente dal muscolo cardiaco.La procedura per l'isolamento della frazione altamente attiva del sarcoplasmatico reticolo da cuori di piccione e cane. Il metodo si basa sul caricamento parziale dei microsomi cardiaci con ioni calcio e ossalato e sulla precipitazione di vescicole cariche in gradienti di concentrazione di saccarosio e cloruro di potassio. I preparati ottenuti possiedono un'elevata attività di ATPasi Ca2+-dipendente e sono anche in grado di accumulare fino a 10 mumol Ca2+ per mg di proteina. La purificazione delle membrane del reticolo sarcoplasmatico è accompagnata da una diminuzione della concentrazione del citocromo a+a3 e da un aumento del contenuto di [32P]fosfoenzima. I componenti di base del "calcio -preparazione di ossalato" dai cuori sono proteine con pesi molecolari di circa 100000 (ATPasi Ca2+-dipendente) e 55000 La preparazione di ossalato di calcio dai cuori di piccione è stata utilizzata per la successiva purificazione sull'ATPasi Ca2+-dipendente. L'attività specifica dell'enzima purificato dai cuori di piccione è di 12-16 mumol Pi/min per mg di proteina. L'attività enzimatica dell'ATPasi Ca2+-dipendente purificata è inibita dall'EGTA e non è sensibile all'azide, al 2,4-dinitrofenolo e all'ouabaina. I dati ottenuti dimostrano la somiglianza dei sistemi di pompa del calcio e delle ATPasi Ca2+-dipendenti isolate dal cuore e dai muscoli scheletrici.
Studi sugli intermedi fosforilati di una ATPasi stimolata da K+ da mucosa gastrica di coniglio.Preparazione di membrana microsomiale purificata con gradiente di densità da mucosa gastrica fundica di coniglio è stato utilizzato per uno studio dettagliato dell'ATPasi stimolata da K+ e delle reazioni intermedie associate. Le membrane incubate con gamma-[32P]ATP mostrano la rapida incorporazione di 32P nella fosfoproteina. I livelli di fosfoproteina si sono notevolmente ridotti (1) quando l'idrolisi dell'ATP è stata completata o (2) dopo l'aggiunta di ATP non marcato, suggerendo così la partecipazione di un intermedio fosforilato a rapido turnover nell'ATPasi microsomiale gastrica L'aggiunta di K+, Rb+ o Tl+ ha notevolmente ridotto il livello dell'intermedio stimolando l'attività dell'ATPasi; le affinità osservate di questi cationi erano simili per gli effetti sia sull'ATPasi che sui livelli intermedi, con Tl+ maggiore di K+ maggiore di Rb+ Né l'ATPasi né l'intermedio sono stati stimolati da Na+ e l'ouabaina non influiscono sulle reazioni, differenziando così questo sistema dalla (Na+ + K+)-ATPasi. L'aggiunta di vari inibitori ha mostrato effetti differenziali sulle reazioni parziali del sistema ATPasi gastrico. N-etilmaleimmide e Zn2+ hanno mostrato caratteristiche di abolizione completa della componente stimolata dal K+ dell'ATPasi nonché gli effetti del K+ nel ridurre il livello dell'intermedio, suggerendo così che questi agenti esercitano il loro effetto inibitorio su una reazione parziale della fosfoproteina fosfatasi. F- ha abolito l'ATPasi stimolata da K+, ma i suoi effetti più complessi sull'intermedio hanno suggerito un ulteriore passaggio di reazione all'interno del dominio dell'intermedio fosforilato. I risultati sono coerenti con un sistema modello per l'ATPasi microsomiale gastrica che coinvolge una proteina chinasi Mg2+-dipendente, uno o più intermedi fosforilati e una fosfoproteina fosfatasi stimolata da K+.
Modalità di assorbimento dell'ortofosfato e marcatura di ATP da parte di cellule di mammifero.L'incubazione di cellule HeLa con [32P]ortofosfato determina una marcatura più rapida del gamma- fosforo dell'ATP rispetto al pool intracellulare di ortofosfato La radioattività specifica dell'ATP è uguale a quella dell'ortofosfato extracellulare dopo 2 h di incubazione Un modello di marcatura simile si osserva con gli eritrociti umani quando incubati a concentrazioni fisiologiche di ortofosfato (2 mM) e pH 7,4-7,8 A pH più basso, 6,8-7,2, la velocità di assorbimento dell'ortofosfato aumenta e supera la velocità di marcatura dell'ATP Questi dati sono spiegati dall'esistenza di un sistema primario per l'assorbimento di ATP che prevede la mediazione della gliceraldeide legata alla membrana -3-fosfato deidrogenasi. Il fosfato prima entra nella cellula come acido 1,3-difosfoglicerico, viene quindi trasferito all'ATP e quindi entra nel pool di ortofosfato intracellulare. A pH più basso l'ortofosfato monovalente entra anche nell'eritroc yte mediante un processo che non coinvolge la gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi.
Siti di alchilazione di poli(U) da parte di agenti di diversa cancerogenicità e stabilità dei prodotti.Diversi agenti alchilanti di cancerogenicità ampiamente riportata (dimetilsolfato, dietilsolfato, etilmetansolfonato, metilnitrosourea, etilnitrosourea ed etilnitrosoguanidina) sono stati fatti reagire con poli(U) a valori di pH compresi tra 4,5 e 7,5. Tutti i centri nucleofili (gruppi fosfato interni, idrossili di ribosio e siti O2, N-3 e O4 della base uracile ) sono risultati reattivi, anche se in misura diversa, a neutralità e in soluzione leggermente acida. La distribuzione dei prodotti è funzione dell'agente alchilante e del pH. I nitroso composti sono più reattivi nei confronti degli ossigeni dei dialchilsolfati e degli alchilalcansolfonati. Il rapporto tra N : I prodotti alchilici O sono fortemente dipendenti dal pH, principalmente a causa del fatto che l'N-3 è più reattivo ai valori di pH più alti, mentre il diestere è più reattivo ai valori di pH più bassi. L'entità della reazione dell'O2, O4 o 2\'-O o ribosio non è molto influenzato nell'intervallo di pH testato. A pH 5,0 gli alchil ribofosfotriesteri perdono principalmente alcol per riformare un fosfodiestere stabile. All'aumentare della concentrazione di OH-, la reazione favorita è la scissione della catena al legame 3\'-O-P.
Purificazione e proprietà della ribonucleasi alcalina dal siero umano.1. Cinque ribonucleasi alcaline (EC 3.1.4.22) sono state purificate da circa 140- a 1900- volte dal siero umano mediante cromatografie di fosfocellulosa e DEAE-cellulosa e filtrazione Sephadex G-75, con un recupero totale del 22%. Questi sono stati designati come RNAasi 1-5. 2. Attività ottimali sono state osservate a pH 8,5-8,7 per RNAasi 1- 4 e a pH 7,5 per l'RNAasi 5. I pesi molecolari di questi enzimi sono stati stimati mediante filtrazione su gel rispettivamente pari a 45 000, 32 000, 20 000, 13 000 e 8500. 3. Queste RNAasi sono risultate essere proteine termolabili ma sono marcatamente stabilizzati con albumina plasmatica bovina. La reazione è stata attivata da Na+, K+, Mg2+ e Ca2+ e inibita da Co2+, Fe2+, Cu2+ e Zn2+. L'EDTA ha avuto scarso effetto sulla velocità della reazione. La spermina ha causato da 2 a 7 -fold attivazione 4. Tra i substrati esaminati, queste RNAasi idrolizzate preferenzialmente corpi pirimidinici e ad eccezione di L'RNAasi 5 aveva un'affinità maggiore per il poli(C) rispetto al poli(U) come substrato. Ciascun enzima era privo di altri enzimi nucleolitici e idrolizzato solo l'RNA.
Legame dell'anfolina per trasferire RNA.La temperatura di fusione dell'isoaccettore tRNAfMet è influenzata da Ampholine. Il grafico di Tm rispetto al logaritmo della concentrazione di Ampholine mostra chiaramente un effetto crescente di Ampholine quando il pH cambia da 7,4 a 4,2. Questo risultato è interpretato come legame di Ampholine all'acido nucleico. Gli effetti di Ampholine sono stati confrontati con quelli di sodio, magnesio e tetraetilene pentamina. Amfoliti portatori di anfolina a pH 4.2 si legano al tRNA con la stessa affinità del magnesio; a valori di pH più elevati sono meno attivi. Viene proposta un'ipotesi sul meccanismo d'azione dell'amfolina sugli acidi nucleici durante la focalizzazione isoelettrica.
Reazioni del sistema ferri-ferrocitocromo-c con superossido/ossigeno e CO2-/CO2 studiate mediante radiolisi a impulsi veloci.La riduzione del ferricitocromo c da O2- e CO2- è stato studiato nell'intervallo di pH 6,6-9,2 e Arrhenius così come i parametri di Eyring sono stati derivati dalle costanti di velocità e dalla loro dipendenza dalla temperatura. Gli effetti ionici sulla velocità indicano che il processo redox procede attraverso un moltiplicatore di carica positiva sito di interazione sul citocromo c. È dimostrato che la reazione con O2- (e corrispondentemente con O2 del ferrocitocromo c) è di un fattore di circa 10(3) più lenta di quanto giustificato da fattori come il potenziale redox. l'opinione che questa lentezza sia collegata al ruolo dell'acqua nell'interazione tra O2-/O2 e ferri-ferrocitocromo c nel sito di interazione caricato positivamente sul citocromo c in cui le molecole d'acqua sono specificamente coinvolte nel mantenimento della struttura locale del citocromo c e par partecipare al processo di trasferimento di elettroni equivalenti.
Una stima della differenza di potenziale elettrochimico indotta dalla luce dei protoni attraverso la membrana di Halobacterium halobium.L'assorbimento del trifenilmetilfosfonio (TPMP+) dipendente dalla luce e di 5,5-dimetilossazolidina-2,4-dione (DMO) da parte di cellule viola affamate di Halobacterium halobium è stato utilizzato l'assorbimento di DMO per calcolare la differenza di pH (deltapH) attraverso la membrana e TPMP+ è stato utilizzato come indice di la differenza di potenziale elettrico, deltapsi. Nella maggior parte delle condizioni, sia alla luce che al buio, le cellule sono più alcaline del mezzo. Alla luce a pH 6,6, deltapH ammonta a 0,6-0,8 unità di pH. Il suo valore può essere aumentato a 1,5-2,0 incubando le cellule con TPMP+ (10(-3) M) o a pH esterno basso (5,5). --deltapH può essere abbassato mediante disaccoppiatore o nigericina. L'assorbimento di TPMP+ da parte delle cellule indica un'ampia deltapsi attraverso la membrana, negativo all'interno. È stato stimato che alla luce, a pH 6,6, deltapsi m raggiungano un valore di circa 100 mV e che di conseguenza l'equivalente elettrico della differenza di potenziale elettrochimico del protone, deltamuH+/F, ammonta in queste condizioni a circa 140 mV. Gli effetti di diversi ionofori sull'estrusione di protoni guidati dalla luce da parte delle cellule erano in accordo con gli effetti di questi composti su --deltapH.
La cinetica di riduzione della clorofilla aI come indicatore dell'assorbimento di protoni tra le reazioni alla luce nei cloroplasti.La cinetica di ossidazione indotta dal flash dell'accettore primario della luce Reazione II (X-320) e la cinetica di riduzione della clorofilla aI (P-700) dopo preilluminazione far-red sono state studiate con elevata risoluzione temporale nei cloroplasti di spinaci 1. La cinetica della clorofilla aI mostra una fase di latenza pronunciata di 2--3 ms all'inizio della riduzione come ci si aspetterebbe per il prodotto finale di reazioni consecutive Poiché l'ossidazione del pool di plastochinone è il fattore limitante per il trasporto di elettroni tra le due reazioni luminose, il ritardo indica il massimo tempo di trasferimento di elettroni su tutte le reazioni precedenti dopo la reazione alla luce II. 2. L'osservazione che la fase di ritardo diminuisce con la diminuzione del pH è la prova di un passaggio di trasferimento di elettroni accoppiato a una reazione di assorbimento del protone. 3. Protonazione di X-320 dopo la riduzione di il flash è escluso in quanto si riscontra un leggero aumento del tempo di decadimento a valori di pH decrescenti. 4. L'andamento temporale della formazione del plastoidrochinone è dedotto dal primo derivato della cinetica di riduzione della clorofilla al. Questo approccio copre quelle molecole di plastoidrochinone che sono disponibili per i portatori di elettroni del Sistema I tramite la fase di limitazione della velocità. Le misurazioni dirette delle variazioni di assorbanza non consentirebbero di discriminare tra queste e molecole di plastoidrochinone funzionalmente differenti. 5. L'andamento temporale derivato del plastoidrochinone a pH diverso evidenzia un ulteriore passaggio di trasferimento di elettroni con un tempo di dimezzamento di circa 1 ms dopo l'assorbimento del protone e prima del passaggio di limitazione della velocità. È provvisoriamente attribuito alla diffusione del plastoidrochinone neutro attraverso il nucleo idrofobico della membrana tilkaloide. 6. Il limite inferiore della costante di velocità per l'assorbimento di protoni da parte di un trasportatore di elettroni, coerente con il ritardo della riduzione della clorofilla aI, è stimato maggiore di 10(11) M-1s-1. Il valore è superiore a quello delle protonazioni a diffusione controllata più veloci di molecole organiche in soluzione. I possibili meccanismi di trasporto lineare degli elettroni tra la reazione luminosa II e l'ossidazione limitante della velocità del plastoidrochinone neutro sono discussi a fondo.
Conformazione del polisaccaride extracellulare di Xanthomonas campestris.La conformazione in soluzione del polisaccaride extracellulare del batterio Xanthomonas campestris viene esaminata mediante rotazione ottica, viscosimetria, e titolazione potenziometrica Le misurazioni della rotazione ottica in funzione della temperatura per soluzioni del polisaccaride a bassa forza ionica rivelano una brusca transizione verso una struttura denaturata che è reversibile se è presente una quantità sufficiente di sale La temperatura Tm nel punto medio di transizione aumenta con log (Na+) o log (Ca2+). I profili di viscosità-temperatura sostanziano un cambiamento strutturale del polisaccaride a Tm. La viscosità intrinseca della molecola nativa a velocità di taglio zero supera i 5000 ml/g. Questa cifra elevata è indicativa di una catena rigida. La viscosità di la molecola nativa è relativamente insensibile al sale, mentre la molecola denaturata collassa in presenza di sale. La titolazione degli ioni di idrogeno mostra che il pKapp del COO- g rompi del polimero diminuisce da 3,2 in NaC1 0,01 M a 2,6 in NaC1 0,2 M. Tutti questi dati suggeriscono che il polisaccaride nativo possiede una struttura secondaria ordinata stabilizzata da interazioni non ioniche che superano la repulsione tra gruppi COO adiacenti.
Analisi cinetica dei singoli passaggi riduttivi catalizzati dalla beta-idrossi-beta-metilglutaril-coenzima A reduttasi ottenuta da lievito.Il meccanismo d'azione di lievito beta-idrossi-beta-metilglutaril-coenzima A reduttasi è stata studiata mediante studi cinetici sull'ossidazione del mevaldato da parte della nicotinammide aeninina dinucleotide fosfato (NADP) in presenza del coenzima A (CoA) e sulla riduzione del mevaldato da parte del NADP ridotto ( NADPH) in assenza di presenza di CoA o acetil-CoA. NADP e mevalonato sono stati utilizzati anche come prodotti inibitori della riduzione di mevaldato. Nella riduzione di mevaldato a mevalonato, coenzima A e acetil-CoA hanno diminuito il Km per mevaldato 30- e 3 volte, rispettivamente. Entrambi i composti hanno aumentato la Vmax di 1,5 volte. Questi risultati suggeriscono che il CoA è un attivatore allosterico per il secondo passaggio riduttivo e che agisce migliorando il legame del mevaldato. I modelli intersecanti ottenuti dai veloci i legami e gli schemi prodotti dalle inibizioni del prodotto suggeriscono le seguenti caratteristiche del meccanismo. Il legame dei substrati e il rilascio dei prodotti procede sequenzialmente in entrambi i passaggi riduttivi, ed è ordinato in tutto o in modo casuale rispetto al legame del beta-idrossi-beta-metilglutaril-coenzimaA e del primo NADPH. Il legame di NADPH migliora il legame della porzione beta-idrossi-beta-metilglutarile dell'estere CoA e il legame del mevaldato libero, mentre il legame di NADP porta ad un'aumentata affinità dell'enzima per l'emitioacetale (di mevaldato e CoA) e per mevalonato. Pertanto, la sostituzione di NADP con NADPH dopo il primo passaggio riduttivo favorisce la conversione dell'emitioacetale nella forma carbonilica libera, che viene poi rapidamente ridotta. I prodotti, CoA e acido mevalonico, del secondo passaggio riduttivo lasciano l'enzima prima del rilascio del secondo NADP. Questa versione dell'ultimo prodotto è probabilmente il passaggio che limita la velocità per l'intero processo.
Cambiamenti conformazionali nelle sottofrazioni dell'istone H1 del timo di vitello",Questo documento presenta il primo studio sui cambiamenti conformazionali nelle sottofrazioni del timo di vitello H1. H1 era frazionato con il metodo di Kincade e Cole (Kincade, JM e Cole, RD (1966), J. Biol. Chem. 241. 5790) utilizzando un gradiente Gdn-HC1 molto superficiale. Una possibile nuova sottofrazione H1, circa 5-- L'8% dell'H1 è stato individuato e caratterizzato mediante analisi degli amminoacidi ed elettroforesi. Gli effetti della concentrazione salina e del pH sulla conformazione di ciascuna delle quattro principali sottofrazioni sono stati studiati misurando l'anisotropia di fluorescenza dell'emissione di tirosina e l'effetto circolare dicroismo (CD) del legame peptidico. Dopo l'aggiunta di sale a soluzioni acquose a pH neutro, tutte e quattro le sottofrazioni mostrano un cambiamento istantaneo nell'anisotropia della fluorescenza, nell'intensità della fluorescenza, nell'assorbanza della tirosina e nel CD. Il ripiegamento associato a questo cambiamento istantaneo è altamente cooperativa , e coinvolge la regione della molecola contenente la tirosina solitaria, che viene sepolta nella forma ripiegata. Il ripiegamento della sottofrazione 3a è più sensibile al sale rispetto alle altre principali sottofrazioni. Al ripiegamento, circa il 13% dei residui delle sottofrazioni 1b e 2 forma la struttura alfa e beta; 3a e 3b hanno circa il 16% dei residui nelle strutture alfa e beta. Non ci sono prove di interazioni tra le sottofrazioni. Nelle soluzioni prive di sale, ciascuna delle quattro principali sottofrazioni mostra un cambiamento di conformazione molto piccolo nel passaggio da pH basso a pH neutro, ma ciascuna mostra una transizione molto netta vicino a pH 9. Questa transizione dà luogo a un marcato aumento dell'anisotropia e della fluorescenza della fluorescenza intensità e comporta la formazione di struttura sia alfa che beta in un modo simile a quello dello stato indotto dal sale.
Istidina decarbossilasi di Lactobacillus 30a: funzione e reattività dei gruppi sulfidrilici.Due classi di gruppi sulfidrilici in istidina decarbossilasi da Lactobacillus 30a possono essere differenziate da loro reazione con 5,5\'-ditiobis(acido 2-nitrobenzoico) (DTNB). Cinque residui cisteinici (classe I) dell'enzima nativo vengono titolati mediante DTNB all'aumentare del pH del mezzo di reazione da 6,5 a 7,5; Il profilo di velocità del pH per la loro reazione è descritto da un pKa di 9,2. Altri cinque gruppi tiolici (classe II) vengono titolati solo quando gli agenti denaturanti vengono aggiunti al di sopra del pH neutro. L'istidina decarbossilasi viene completamente inattivata dal DTNB in un processo cineticamente di secondo ordine (Kapp = 660 +/- 20 M-1 min-1 a pH 7,6 e 25 gradi C) che si verifica in coincidenza e alla stessa velocità della modifica dei cinque gruppi SH di classe I dell'enzima, ovvero un tiolo per gruppo prostetico piruvoile Gli inibitori competitivi, istamina e imidazolo , ha notevolmente migliorato la reattività di questi residui cisteinici verso DTNB; questo miglioramento è accompagnato da un concomitante aumento del tasso di inattivazione. Un singolo gruppo SH in ciascuna delle cinque unità catalitiche dell'istidina decarbossilasi è quindi implicato come critico per l'espressione dell'attività enzimatica.
Polimorfismo molecolare e meccanismi di attivazione e disattivazione della funzione idrolitica del fattore di accoppiamento della fosforilazione ossidativa.Il fattore di accoppiamento 13S della fosforilazione ossidativa da Alcaligenes faecalis ha una funzione latente di adenosina trifosfatasi (ATPasi) che può essere attivata riscaldando a 55 gradi C per 10 min a pH 8,5 in glicerolo al 50%. L'attività specifica aumenta da 0,1 a 20-30 mumol min-1 mg-1. L'adenosina 5\'-trifosfato (ATP) non è necessaria per la stabilizzazione a 55 gradi C quando è presente glicerolo. L'attivazione comporta lo spostamento della subunità dell'inibitore dell'ATPasi endogena (subunità epsilon) e la riedizione di questa subunità determina la disattivazione. La subunità dell'inibitore dell'ATPasi può essere sostituita da altre proteine cationiche come la protamina, gli istoni o la poli(lisina). Anche Mg2+ e H+ sono efficaci disattivatori. Il fatto che ogni sostanza caricata positivamente testata ha disattivato t L'enzima suggerisce che la subunità inibitrice sia complessata con l'enzima in un sito contenente un'eccedenza di cariche negative. L'enzima attivato non è labile, ma è labile al sale, avendo un'emivita di 2-3 minuti in 0,1 M KI a 25 o 0 gradi C. L'ATPasi attivato è anche inibito dall'aurovertin, 7-cloro-4- nitrobenzo-2-ossa-1,3-diazolo (NBD), e dall'agente reticolante dimetil suberimidato. La prova del polimorfismo deriva dalla scoperta che le proprietà dell'enzima non attivato (ATPasi intrinseca) sono diverse in molti modi dalle proprietà dell'ATPasi attivata. Per quanto riguarda la capacità del fattore di accoppiamento di idrolizzare l'ATP, i dati di questo studio suggeriscono che ci sono almeno quattro distinti allomorfi funzionali di questo enzima: (1) l'enzima latente, che non ha attività ATPasi misurabile cineticamente, (2) ATPasi intrinseca, che è catalizzata da una piccola percentuale della popolazione molecolare che è stata attivata da qualche meccanismo naturale, (3) ATPasi attivata, che ha proprietà diverse da quelle dell'ATPasi intrinseca, e (4) ATPasi attivata invecchiata, in cui alcuni delle proprietà (Km per substrato, sensibilità alla disattivazione da parte di Mg2+ e H+) cambiano spontaneamente entro 30 min.
Iodopeptidi dell'acido ribonucleico tiroideo. Confronto tra Tyrosyl-Complex II e Tyrosyl-tRNA.È stato precedentemente dimostrato che i complessi RNA-peptidilico dei mammiferi sono trovato in stretta associazione con il tRNA, ma può essere separato dalla maggior parte del tRNA mediante cromatografia con dietilamminoetilcellulosa benzoilata (Kull, FJ e Soodak, M. (1971), Biochim. Biophys. Acta 246, l; Gadski, RA e Kull , FJ (1973), Biochemistry 12, 1907). Questi studi hanno anche mostrato che in condizioni di amminoacilazione le frazioni complesse erano in grado di agire come accettori per alcuni amminoacidi e che la formazione di tirosil-complesso tiroideo II suino era particolarmente elevata. questa elevata funzione accettore, e data l'importanza della tirosina per il metabolismo tiroideo, sono stati condotti ulteriori studi confrontando alcune delle proprietà del complesso tirosilico tiroideo suino II con quelle del tirosil-tRNA tiroideo suino. ex cess di 200 volte e caratterizzato. Si è riscontrato che la massima amminoacilazione è stata ottenuta a pH 8,1 in presenza di 150 mM KCl. Il Km per la tirosina è stato determinato essere 3,0 X 10(-6) M. La tiroide purificata tirosil-tRNA sintetasi è stata utilizzata in condizioni di amminoacilazione per preparare la tiroide suina marcata radioattivamente tirosil-tRNA e complesso di tirosile II. I confronti effettuati utilizzando la cromatografia su colonna in fase inversa (RPC-5) hanno mostrato differenze distinte tra le due specie aminoacilate e hanno rivelato, inoltre, una serie di forme isoaccettanti del tRNA della tirosina. È stato anche scoperto che il tirosil-complesso II differisce dal tirosil-tRNA in quanto è più stabile alla deacilazione a pH 7,0 e a pH 4,4 e alla degradazione da parte della ribonucleasi A. Inoltre, il tirosil-complesso II, a differenza del tirosil-tRNA, è degradato da tripsina. Studi di legame ribosomiale hanno mostrato che il complesso tirosilico II non rispondeva ai codoni per la tirosina, UpApU e UpApC, mentre il tRNA tirosile rispondeva a entrambi. Si suggerisce che il complesso tiroideo tirosina II sia rappresentativo di un gruppo di complessi correlati che costituiscono la frazione del complesso II e che, sebbene i complessi assomiglino al tRNA sotto molti aspetti, hanno caratteristiche nettamente diverse rispetto al tRNA convenzionale.
Interazione di derivati 1,N6-etenoadenina di trifosfopiridina e nucleotidi trifosfopiridinici ridotti con diidrofolato reduttasi da cellule L1210 resistenti all'ametotterina.Il 1,N6- derivati etenoadeninici della trifosfopiridina e dei nucleotidi trifosfopiridinici ridotti (TPN e TPNH) epsilon-TPN ed epsilon-TPNH) sono stati sintetizzati e utilizzati come sonde fluorescenti per esaminare il sito di legame dei nucleotidi piridinici della diidrofolato reduttasi L1210. Epsilon-TPNH (Km 16,7 \u ) è stato in grado di sostituire il TPNH (Km = 3,8 muM) nella riduzione catalizzata da enzimi del diidrofolato, e sia epsilon-TPN che epsilon-TPNH hanno formato complessi binari con l'enzima che erano stabili all'elettroforesi su gel di poliacrilammide. TPN è stato potenziato e il massimo di emissione spostato da 415 a 405 nm quando il nucleotide è stato legato all'enzima. La frazione etenoadenina in epsilon-TPNH si è comportata in modo simile, ma i cambiamenti di fluorescenza erano complicata da effetti concomitanti del legame sul fluoroforo diidronicotinammide. Le titolazioni di miglioramento della fluorescenza hanno prodotto valori di 1,8 e 0,59 muM, rispettivamente, per le costanti di dissociazione dei complessi enzima-epsilon-TPN e enzima-epsilon-TPNH. Esperimenti di titolazione basati sull'estinzione della fluorescenza enzimatica hanno fornito valori simili, vale a dire 2,1 e 0,53 muM per le costanti di dissociazione di questi complessi. La titolazione fluorimetrica del complesso enzima-TPNH con epsilon-TPN (o del complesso enzima-TPN con epsilon-TPNH) non è riuscita a rivelare la presenza di un secondo sito di legame del nucleotide piridinico. Il potenziamento della fluorescenza dell'epsilon-TPN o del diidrofolato legato all'enzima è stato spento quando ametotterina o epsilon-TPN, rispettivamente, sono stati aggiunti per formare un complesso ternario. Questi risultati forniscono informazioni sulla natura del sito di legame del nucleotide piridinico e la sua relazione spaziale con il sito di legame del diidrofolato/ametopterina.
Influenza di substrati e coenzimi sul ruolo dello ione manganoso nelle reazioni catalizzate dalla trifosfopiridina del cuore di maiale isocitrato deidrogenasi dipendente dal nucleotide.L'interazione degli ioni manganosi con il cuore di maiale trifosfopiridina nucleotide (TPN) l'isocitrato deidrogenasi specifica è stata studiata mediante esperimenti cinetici e mediante misurazioni dirette di ultrafiltrazione del legame degli ioni manganosi. A basse concentrazioni di ioni metallici, si osserva un ritardo nella produzione dipendente dal tempo di ridotto nucleotide trifosfopiridinico (TPNH) che può essere eliminato aggiungendo 20 muM TPNH alla miscela di reazione iniziale. Un grafico di 1/upsilon vs. 1/ (Mn2+) ottenuto a concentrazioni di TPNH relativamente elevate (20 muM) è lineare e produce un valore Km di 2 muM per il metallo ione, che è paragonabile alla costante di legame diretto misurata in presenza di isocitrato. Un grafico simile a basse concentrazioni di TPNH (2 muM) rivela una relazione bifasica: ad alte concentrazioni di metallo il p i punti sono collineari con quelli ottenuti ad alti livelli di TPNH, ma a basse concentrazioni di metalli quella linea è caratterizzata da un Km di 19 muM per Mn2+. Una differenza nell'effetto isotopico del solvente dell'ossido di deuterio sul Vmax osservato con 20 muM TPNH rispetto a 2 muM TPNH suggerisce che ad alte concentrazioni di TPNH o ad alte concentrazioni di ioni manganosi il fattore limitante è la deidrogenazione dell'isocitrato, mentre a basse concentrazioni di ioni manganosi e basse concentrazioni di TPNH, il passaggio lento è la decarbossilazione dell'oxalosuccinato legato all'enzima. La prova a sostegno di questa ipotesi è fornita dalla sensibilità alla concentrazione di isocitrato del Km per manganese totale misurata in presenza di 20 muM TPNH che contrasta con la relativa insensibilità all'isocitrato del Km misurata a 2 muM TPNH e bassa concentrazione di ioni manganoso. Le misurazioni dirette della decarbossilazione dell'oxalosuccinato rivelano che il Vmax e il Km per lo ione manganoso sono influenzati dalla presenza di TPN ossidato o ridotto con il Km più basso (5-7 muM) in presenza di TPNH. La dipendenza del Km per lo ione manganoso dalla presenza di substrato, TPN e TPNH, è responsabile della variazione con le condizioni nella fase determinante la velocità. L'enzima lega solo 1 mole di ione metallico e 1 mole di isocitrato/mole di proteina in tutte le condizioni. La dipendenza dal pH del legame dello ione manganoso libero, dell'isocitrato libero e del complesso isocitrato manganoso indica differenze nell'interazione di queste specie con l'isocitrato deidrogenasi. Questi risultati possono essere descritti in termini di due funzioni per lo ione manganoso nelle reazioni catalizzate dall'isocitrato deidrogenasi, ciascuna delle quali richiede un distinto sito di legame per lo ione metallico: nella fase di deidrogenazione, Mn2+ facilita il legame dell'isocitrato di substrato, e nella fase di decarbossilazione può stabilizzare l'enolato di alfa-chetoglutarato che viene generato.
Formazione di anidrozuccheri nella depolimerizzazione chimica dell'eparina.Nelle reazioni usate per scomporre l'eparina in mono- e oligosaccaridi, gli androzuccheri si formano a due La prima di queste è la ben nota scissione dell'eparina con acido nitroso per convertire le D-glucosamine N-solfatate in residui di anidro-D-mannosio, reazione che è stata studiata in dettaglio, è dimostrato qui che solo un pH basso (meno di 2,5) le condizioni di reazione favoriscono la deaminazione dei residui di D-glucosamina N-solfatata, la reazione procede molto lentamente a pH 3,5 o superiore, mentre gli amminozuccheri N-non sostituiti vengono deaminati ad una velocità massima a pH 4 con tassi notevolmente ridotti a pH 2 o pH 6. A temperatura ambiente le soluzioni di acido nitroso perdono da un quarto a un terzo della loro capacità di deaminare gli zuccheri amminici in 1 h a tutti i pH Un reagente di acido nitroso a basso pH che convertirà quantitativamente l'eparina nel suo prodotti di deaminazione in 10 min a temperatura ambiente e viene descritto e viene presentato un confronto dell'efficacia di questo reagente con altri reagenti di acido nitroso comunemente usati. È stato inoltre dimostrato che le condizioni utilizzate per l'idrolisi acida dell'eparina convertono circa un quarto dei residui di 2-solfato dell'acido L-iduronosiluronico in un acido 2,5-anidrouronico. Questo prodotto è un artefatto delle condizioni di reazione e la sua formazione rappresenta uno dei numerosi percorsi seguiti nella scissione catalizzata dall'acido del legame glicosidico dei residui di acido L-idosiluronico solfato.
Stimolazione dei chemocettori periferici con bicarbonato di sodio.È stato riscontrato che la somministrazione ev di bicarbonato di sodio provoca un aumento del pH arterioso, seguito da un aumento in PaCO2. Ciò ha causato un forte aumento della ventilazione polmonare in in PaO2. La somministrazione di ossigeno nei soggetti umani e la denervazione anatomica dei chemocettori nei cani, ha causato un sostanziale ritardo nelle risposte ventilatorie al bicarbonato di sodio. Si è concluso che la somministrazione iv di il bicarbonato di sodio fornisce un metodo per testare la presenza di chemoreflessi periferici che ha il vantaggio di essere indipendente dalla ventilazione alveolare.
Ipertermia maligna suina. III: Blocco adrenergico.Gli effetti dell'instaurazione di un blocco adrenergico sull'ipertermia maligna suina indotta da suxametonio (MH) sono stati studiato in maiali Pietrain. Sei animali sono stati alimentati con reserpina 10 mg al giorno per 7 giorni e poi stimolati con suxametonio. Tre sono sopravvissuti ma il resto ha sviluppato MH fatale. In un ulteriore studio su 10 suini, fentolamina 40 mug/kg/min o propranololo 50 mug/kg/min sono stati somministrati per 30 minuti prima della stimolazione con suxametonio e sono proseguiti per tutta la durata dell'esperimento. I suini beta-bloccati di cinque anni sono diventati tutti ipertermici e sono morti mentre il gruppo trattato con fentolamina è sopravvissuto. Tuttavia, sia il blocco alfa adrenergico che il successo la reserpinizzazione non è riuscita a prevenire la risposta muscolare anormale alla prima dose di suxametonio.
[Organizzazione e risultati del trapianto di rene da cadavere dal 1969 al 1973 (autore\'s transl)].Il trapianto di Francia è stato fondato per organizzare razionalmente il trasporto e il trapianto di reni da cadavere con test di compatibilità omogenea.2143 pazienti emodializzati sono stati attualmente trattati in 82 centri dialisi in Francia (1-9-72), di cui 964 in lista d'attesa per il trapianto di Francia. la cessazione delle funzioni è sinonimo di morte. Ciò ha reso possibile, grazie a buone tecniche di rianimazione, di mantenere un buon livello di circolazione e ossigenazione degli organi. A tal fine è necessario il permesso familiare.17 personale medico di trasporto è al lavoro in 12 città francesi e collabora con 12 laboratori di dattilografia che lavorano con le stesse tecniche e reagenti. Un segretariato permanente a Parigi è sempre collegato via telex con tutto il personale e mantiene una lista di attesa dei pazienti continuamente aggiornata.415 reni da cadavere sono stati trapiantati, 255 nello stesso comune e 160 trasportati da un comune all'altro. Recentemente si è verificato un aumento significativo dei tempi di ischemia fredda a causa del numero crescente di reni trasportati.
[Cambiamenti nell'eliminazione del farmaco sotto l'influenza della terapia con perazina (autore\'s trad.)].In 8 pazienti maschi che sono stati trattati con perazina per psicosi schizofrenica (200-800 mg/die), è stata studiata la velocità di eliminazione del fenazone. Sono state effettuate determinazioni simultanee dei livelli plasmatici di perazina e desmetilperazina. L'emivita media del fenazone è stata di 27,0 h nei pazienti trattati con perazina e di 11,2 ore. h nei controlli Corrispondentemente, la clearance del fenazone è diminuita da 47,0 ml/min a 18,9 ml/min sotto perazina, entrambe le differenze sono altamente significative La quantità di 4-OH-fenazone, il principale metabolita idrossilato escreto nelle urine, è stata di 66 mg/24 h nel gruppo perazina, e significativamente diverso dai risultati ottenuti nel gruppo di controllo: 185 mg/24 h. Al contrario, l'escrezione urinaria del fenazone immodificato è aumentata da 29 a 40 mg/24 h sotto perazina. sono interpretati per dimostrare inibi zione dell'idrossilazione del farmaco nel fegato mediante trattamento con perazina.
[Confronto di risultati sperimentali-psicologici e clinici sull'effetto di una sostanza in esame (autore\'s trad.)].I risultati di un test farmacopsicologico studio su studenti maschi con stabilità emotiva alta o bassa sono confrontati con quelli di uno studio clinico su pazienti nevrotici ambulatoriali e ricoverati. Questi studi esaminano gli effetti del diazepam e di varie dosi di una tienodiazepina (Bay g 5653), un farmaco in esame. gli studi non sono completamente comparabili (controllo placebo mancante nello studio clinico, informazioni insufficienti sulle misure di riferimento comparabili) le differenze negli effetti di Bay g 5653 e diazepam sull'effettivo stato emotivo, come misurato da una lista di controllo degli aggettivi, mostrano un certa corrispondenza tra soggetti normali e pazienti ma anche discrepanze notevoli.
[Azione di un tranquillante specifica per la personalità (traduzione dell\'autore)].23 soggetti emotivamente labili e 22 emotivamente stabili che abbiamo selezionato da un totale campione di 147 studenti da tre inventari di personalità (FPI, GT, MPI) In un disegno a 2 (3) fattori sono stati riscontrati i seguenti effetti di una singola dose di 1,5 mg di bromazepam PO contro placebo: mentre l'attività motoria fine (tapping , line-tracing) si stabilizzava indipendentemente dai tratti di personalità, la performance nei test di attenzione (d2, tempo di scelta-reazione) era diminuita nel gruppo emotivamente stabile, nel gruppo emotivamente labile, cioè in quei soggetti per i quali il bromazepam poteva essere indicato terapeuticamente , è stato possibile un effetto vantaggioso sulle prestazioni in questi test.
[Descrizione gratuita degli effetti dei farmaci e descrizione tramite questionario di un induttore del sonno (flurazepam) da parte di soggetti normali del test (autore\'s trad.)].Somministrando flurazepam e placebo agli studenti come soggetti, la descrizione libera degli effetti del farmaco (FD) è stata confrontata con la descrizione di un questionario (QD) I risultati sono stati: 1. Il metodo FD era più informativo del metodo QD. 2. Il metodo FD ha indotto effetti placebo meno frequenti e effetti verum più frequenti rispetto al metodo QD 3. I risultati (1) e (2) si basavano principalmente sulle variabili tempo per addormentarsi, soggettivo qualità del sonno e tempo totale di sonno, in cui le variabili flurazepam differivano significativamente dal placebo.
Stimolazione della tirosina idrossilasi striatale di ratto da parte di fosfolipidi e adenosina-3\',5\'-monofosfato.La tirosina idrossilasi striatale di ratto viene stimolata in vitro da vari fosfolipidi. Questa stimolazione è stata prodotta da un aumento da 3 a 4 volte dell'affinità per il cofattore pteridina. Non è stato osservato alcun cambiamento nel Km per la tirosina, Il modello di sedimentazione della tirosina idrossilasi su gradienti lineari di saccarosio non ha mostrato alcuna indicazione di dissociazione enzimatica la presenza di lisolecitina alla massima concentrazione stimolante. La tirosina idrossilasi striatale grezza viene attivata anche da una combinazione di ATP, Mg++, EGTA e cAMP. Dopo aver rimosso questi agenti mediante cromatografia Sephadex G-25, la forma attivata dell'enzima può essere ulteriormente stimolata da lisolecitina. Questi risultati suggeriscono un possibile ruolo dei fosfolipidi nella regolazione della sintesi della dopamina striatale.
[Effetti acuti e cronici di carpipramina, clozapina, aloperidolo e sulpiride sul metabolismo delle ammine biogene nel cervello di ratto (autore\'s trad.)].In esperimenti acuti e cronici sono state effettuate indagini riguardanti l'effetto di clozapina, aloperidolo, sulpiride e carpipramina su MHPG, HVA e 5-HIAA nel cervello di ratto e sull'attività motoria degli animali. L'attività dei ratti trattati con clozapina e aloperidolo è stato ridotto il primo giorno. Dopo 10 giorni di trattamento questo effetto della clozapina era significativamente diminuito. Il livello di MHPG è aumentato leggermente il primo giorno di trattamento con tutti e quattro i farmaci. Questo aumento è stato mantenuto dopo il trattamento cronico con carpipramina e sulpiride, mentre la clozapina e aloperidolo hanno diminuito il contenuto di MHPG. I valori di 5-HIAA non hanno mostrato cambiamenti significativi negli esperimenti acuti, mentre in quelli cronici c'è stato un aumento. Aloperidolo e clozapina hanno indotto un forte aumento di HVA che d è aumentata dopo 11 giorni negli animali trattati con aloperidolo. Rispetto all'aloperidolo, dopo l'applicazione di clozapina la percentuale di aumento dell'HVA era più alta nel sistema limbico che nel nigrostriato.
[Interazioni di agonisti e antagonisti del recettore della dopamina in relazione alla sintesi e al metabolismo della dopamina].Iniezione intraperizionale di solfato di d-anfetamina, 0,3-3 mg /kg, ha portato a un marcato aumento della formazione di dopa nelle aree ricche di dopamina c. striatum e corteccia mesolibbica del cervello di ratto inibizione dell'aminoacido aromatico decarbossilasi con 3-idrossibenzilidrazina HCL (NSD 1015) Tuttavia, l'anfetamina somministrata in una dose di 10 mg/kg ha diminuito il tasso di idrossilazione della tirosina nella corteccia mesolimbica e nella neocorteccia contenente noradrenalina. In combinazione con aloperidolo, l'effetto stimolante del neurolettico sulla formazione di dopa è stato notevolmente potenziato dall'anfetamina nel proencefalo di ratto. Inoltre, l'anfetamina ha potenziato l'aloperidolo aumento indotto del rilascio di dopamina in vivo misurato come formazione di 3-metossitiramina. Gli antagonisti funzionali aloperidolo e d-amfetamina sembrano avere effetti sinergici sui neuroni dopaminergici.
[Atti: Farmaci psicotropi e qualità del sonno: parametri quantitativi neurofisiologici e soggettivi (transl.autore\'s)].L'effetto dei farmaci del Sono state studiate 3 classi principali di psicofarmaci (ansiolitici, neurolettici, antidepressivi) sui parametri oggettivi e soggettivi del sonno in volontari sani normali, tra cui: fasi del sonno classificate al computer, attività REM valutata visivamente e 22 variabili del sonno notturno analizzato quantitativamente e REM-sonno EEG. Le alterazioni della qualità soggettiva del sonno sono state valutate in base a una scala di autovalutazione del sonno. È stato riscontrato che ansiolitici, neurolettici e antidepressivi inducono cambiamenti caratteristici nei parametri oggettivi del sonno. Soggettivamente, la qualità del sonno era migliore dopo ansiolitici, mentre la qualità del risveglio mattutino dipendeva dalla dose del farmaco ansiolitico Infine, il rapporto tra sonno oggettivo e soggettivo parametri è stato esplorato.
Interazione di agenti psicotropi con neurotrasmettitori centrali come rivelata dai loro effetti sulle onde PGO nel gatto.Uno dei fenomeni fasici di REM (occhio rapido movimento) il sonno, le onde pontogeniculo-occipitale (PGO), sono indotte nei gatti dall'esaurimento delle monoamine cerebrali con il derivato della benzochinolizina Ro 4-1284 o dall'inibizione della sintesi della 5-idrossi-triptamina (5-HT) da parte della p- clorofenilalanina (PCPA). Gli effetti dei più importanti agenti psicotropi su PGO1284 e PGOPCPA sono riportati e spiegati dalla loro interazione con uno o più dei 4 neurotrasmettitori finora noti per essere coinvolti nella regolazione della generazione dell'onda PGO nel reticolo pontino Gli antidepressivi triciclici deprimono le onde PGO inibendo l'assorbimento neuronale di noradrenalina (NE) e/o 5-HT Alcuni neurolettici aumentano la densità delle onde GO bloccando i recettori 5-HT e/o NE Vari allucinogeni indolici deprimono le onde PGO stimolante Recettori 5-HT. Le benzoldiazepine sembrano potenziare un'influenza inibitoria (acido gamma-aminobutirrico)-ergico (GABA)-ergico sui neuroni NE e aumentare la densità delle onde PGO in presenza di neuroni NE funzionalmente intatti.
Studi sugli antocianosidi di Vaccinium myrtillus. I. Attività vasoprotettiva e antinfiammatoria.Una preparazione di antocianosidi di Vaccinium myrtillus (equivalente al 25% di antocianidine) ha dimostrato una significativa azione vasoprotettiva proprietà antiedemigene in animali da esperimento. Nel coniglio, l'aumento della permeabilità capillare cutanea, dovuto al cloroformio, è stato ridotto sia dopo ip (25--100 mg/kg) che per via orale (200--400 mg/kg) di antocianosidi. l'attività era più duratura rispetto alla rutina o alla mepiramina e ciò non sembrava essere dovuto ad un antagonismo specifico verso mediatori del processo infiammatorio come l'istamina o la bradichinina Esperimenti condotti sui ratti hanno dimostrato che gli antocianosidi del Vacinium myrtillus erano efficaci sia nel test di permeabilità capillare cutanea così come sulla resistenza vascolare di ratti alimentati con una dieta carente di fattore P. Nel primo test le dosi efficaci erano comprese tra 25 e 100 mg/kg (per via orale). specie animali studiate, gli antocianosidi erano due volte più attivi rispetto al flavonoide rutina. Gli antocianosidi di Vaccinium myrtillus per via orale hanno inibito l'edema della zampa di carragenina nei ratti, mostrando una relazione dose-risposta. È stata rilevata un'attività antiedematosa anche dopo somministrazione e. v. o applicazione topica.
La scelta dei neurolettici nel trattamento della schizofrenia: una revisione critica.L'uso selettivo di diversi neurolettici nel trattamento della schizofrenia da parte di alcuni psichiatra secondo alla maggiore necessità di un effetto sedativo, antidelirante o attivante è supportata solo da alcune osservazioni cliniche incontrollate. I più ampi studi controllati condotti fino ad ora non hanno mostrato differenze significative tra i neurolttici nella loro efficacia terapeutica. L'ipotesi che questi farmaci abbiano azioni specifiche e selettive quindi non può essere accettato. Nel singolo paziente sembra più razionale scegliere il giusto schema posologico invece del "giusto farmaco". Anche se lo studio del metabolismo di questi farmaci rimane l'approccio più interessante al problema dell'individualizzazione del terapia. , i risultati di questi studi sono stati fino ad ora deludenti, ad esempio i livelli plasmatici di clorpromazina correlavano debolmente con il miglioramento clinico. ica pratica un elemento importante nel processo di scelta è ancora l'incidenza di effetti collaterali e infatti al momento "il farmaco di scelta" non può che essere il farmaco meglio tollerato dal paziente.
Confronto dell'azione di BD 40 A e di alcuni altri stimolanti dei recettori beta-adrenergici sulla trachea e sugli atri isolati della cavia.3-Formylamino Il -4-idrossi-a-(N-1-metil-2-p-metossifenetil-amminometil)-benzilalcol emifumarato (BD 40A) è stato confrontato con isoproterenolo, orciprenalina, trimetochinolo e salbutamolo per la sua attività beta-adrenergica e selettività in vitro. Sulla trachea, le risposte rilassanti massime a cinque agonisti erano simili, ma l'ordine di potenza era BD 40A maggiore del trimetochinolo maggiore dell'isoproterenolo maggiore o uguale al salbutamolo maggiore dell'orciprenalina Negli atri, le risposte cronotrope e inotrope massime all'isoproterenolo erano maggiori rispetto a quelli di BD 40A, orciprenalina e trimetochinolo e salbutamolo hanno causato l'effetto di stimolazione cardiaca più debole. Vale a dire, questi ultimi quattro farmaci sembravano agonisti parziali sugli atri. Il salbutamolo ha mostrato l'elevata selettività per la trachea, mentre l'orciprenalina e il tr l'imetochinolo era equipotente su trachea e atri. L'isoproterenolo era più potente sugli atri che sulla trachea. BD 40A aveva la più alta broncoselettività tra cinque agonisti e sembrava agire direttamente sul recettore beta-adrenergico.
[Attività antibatterica della sisomicina rispetto alla gentamicina].L'attività antibatterica della sisomicina - un nuovo antibiotico aminoglicosidico - rispetto alla gentamicina è stata testato su 521 ceppi batterici di specie diverse in un test di diluizione seriale. Stafilococchi, streptococchi, E. coli, Klebsialla-Enterobacter, ceppi indolopsitivi di Proteus, pseufomonads, Salmonads, Salmonellae e Serratia marcescens sono stati inibiti nella misura del 100% ad un massimo di 4,0 mug/ml. La sisomicina ha mostrato una maggiore attività antibatterica contro parte delle specie batteriche. Le pseudomonadi resistenti alla gentamicina e la Klebsiella (isolati clinici) erano ancora inibite nella misura del 42 e del 67%, rispettivamente, dalla sisomicina. oltre alla determinazione dei valori di MIC per l'uso di diversi mezzi liquidi, indagini sulla determinazione della concentrazione battericida minima (MBC), l'effetto del siero, del pH e dell'inoculo sull'attività batterica, e in sono state inoltre effettuate indagini sullo sviluppo della resistenza in vitro.
Alcuni aspetti della farmacologia del bromuro di diclonio (2-(3,2-dicloroanilino)chinolizinio bromuro). Parte I: Azione antispasmodica.Diclonio è stato dimostrato che il bromuro (EU-2972; 2-(3,4-dicloroanilino)chinolizinio bromuro) possiede un'efficace e prolungata azione inibitoria sulle contrazioni in risposta a stimoli o movimenti propulsivi nella parte inferiore dell'intestino del cane. all'attività contrattile era maggiore nel colon distale che nel duodeno o nell'intestino superiore. Il bromuro di diclonio era un antispasmodico non selettivo ma, a differenza della papaverina, causava un profondo antagonismo contro le risposte contrattili della muscolatura liscia all'eccitazione neurale motoria intrinseca. Il farmaco aveva una debole azione anticolinergica specifica, ma la sua mancanza di effetto antagonista su altre risposte colinergiche in questo studio indica che l'azione anticolinergica contribuisce molto poco, se non del tutto, al suo effetto antispasmodico complessivo. Il composto ha potenziali applicazioni nel trattamento della malattia spastica del colon.
Associazione tra HLA e venulite necrotizzante cutanea.Un gruppo di pazienti è stato identificato con venulite necrotizzante cutanea (vasculite). Questi pazienti, alcuni con concomitante disturbi del tessuto connettivo, presentano lesioni cutanee che li separano dall'arterite comunemente descritta come vasculite reumatoide. La tipizzazione HLA è stata eseguita su 31 di questi pazienti non imparentati con venulite cutanea necrotizzante, di cui 19 con disturbi cronici associati. È stata trovata la coppia di antigeni A11, BW35 in 5 di questi 19 pazienti e in 11 di 346 controlli. Questa differenza di frequenza è statisticamente significativa. Poiché i geni HLA sembrano essere collegati ai geni della risposta immunitaria, questi dati suggeriscono che tali geni possono esistere in pazienti con questa forma di venulite necrotizzante cutanea con associata malattia del tessuto connettivo.
Caratterizzazione del legame dell'ormone della crescita umano alle membrane microsomiali del fegato di ratto.Il legame dell'ormone della crescita umano marcato con 125I alla membrana microsomiale da 100000 g La frazione preparata dal fegato di ratti femmina normali dipendeva da tempo, temperatura, pH, concentrazione di membrana e concentrazione dell'ormone della crescita umano marcato con 125 I. A 22 gradi C il legame ha raggiunto uno stato stazionario dopo 16 ore, con un legame specifico massimo medio di 20 % del tracciante inizialmente aggiunto La dissociazione dell'ormone della crescita umano marcato con 125I dalle membrane, dopo l'aggiunta di un eccesso di ormone non marcato, è stata relativamente lenta con un tempo di dimezzamento maggiore di 24 ore. Solo una degradazione minore dell'ormone della crescita umano marcato con 125I è stato osservato durante l'incubazione con membrane per 16 o 25 ore a 22 gradi C. Allo stesso modo, nessun cambiamento significativo nella capacità delle membrane di legare l'ormone della crescita umano era evidente dopo la preincubazione delle membrane per 16 o 25 ore. Studi di specificità hanno mostrato che fino al 90% dell'ormone della crescita umano marcato con 125I potrebbe essere sostituito da 1 tazza di ormone non marcato. La prolattina ovina ha anche mostrato una notevole competizione per il sito di legame. Preparazioni di ormone della crescita non primate (ovino, bovino, suino e ratto) e ormoni non correlati (insulina, tireotropina, lutropina e follitropina) hanno mostrato una concorrenza trascurabile. L'analisi Scatchard dei dati di legame era coerente con due classi di siti di legame con affinità di legame di 0,64 X 10 (10) +/- 0,2 X 10 (10) M-1 e 0,03 X 10 (10) +/- 0,007 X 10 ( 10)M-1 e corrispondenti capacità di legame di 98,4 +/- 10 fmol/mg di proteina e 314,6 +/- 46,3 fmol/mg di proteina. Questi studi forniscono dati che, in generale, sono coerenti con i criteri richiesti per l'interazione ormone-recettore. Tuttavia, la prova della tesi secondo cui i siti di legame dell'ormone della crescita umano nel fegato di ratto femmina rappresentano recettori fisiologici deve attendere la dimostrazione di una correlazione tra il legame dell'ormone e una risposta biologica.