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[Sostituti del potassio durante la tocolisi].Il livello di potassio sierico durante la terapia tocolitica con Partusisten e Isoptin diminuisce nelle prime 24 ore di terapia. Questo la diminuzione non è dovuta ad un aumento dell'eliminazione renale del potassio. Durante il trattamento tokolitico il livello sierico di potassio ritorna al suo valore normale dopo 48 ore senza sostituzione del potassio. Mentre vi è una diminuzione del potassio sierico, cambiamenti evidenti nell'elettrocardiogramma che sono tipici per l'ipopotassemia sono Questi cambiamenti scompaiono dopo 48 ore di trattamento con tocolitico, ma nondimeno il calo iniziale di potassio sierico deve essere bilanciato dalla sostituzione del potassio entro queste 48 ore.
Gli effetti di alcuni fattori sulla crescita e sulla morfologia di Naegleria sp. e tre ceppi del genere Acanthamoeba.Gli effetti di vari fattori biofisici e chimici sono stati studiati fattori sulla citologia degli stadi vegetativi di Naegleria sp. , ceppo Vitek, Acanthamoeba culbertsoni, Acanthamoeba castellanii, ceppo Neff e Acanthamoeba polyphaga, No. 1289. Le amebe sono state coltivate in un mezzo liquido in condizioni axeniche. La temperatura ottimale è stata 37 gradi C per i ceppi patogeni di Naegleria sp. e Acanthamoeba culbertsoni e 20 gradi C per A. castellanii Non sono stati osservati cambiamenti nella crescita di A. polyphaga alle temperature di 20 gradi e 37 gradi C. I ceppi studiati sono cresciuti a valori di pH da 5,6 a 7,7 utilizzando tampone Soerensen\'s. Ai valori limite la crescita è stata inibita e la morfologia delle cellule è stata notevolmente modificata. Tutti e quattro i ceppi sono cresciuti ancora a pH 8,4 mantenuto da NaHCO3. A. polyphaga è cresciuto ad anaerobio parziale sorella I tre ceppi testati del genere Acanthamoeba sono cresciuti in terreno axenico liquido con 0,89% di NaCl. La crescita di Naegleria sp. , Vitek è stata inibita già alla concentrazione dello 0,2% di questo sale. L'aggiunta di 3 X 10(-2) m KCl al terreno di coltura ha avuto un effetto dannoso sulla crescita e sulla morfologia di tre ceppi testati, ad eccezione di A. polyphaga. Nel mezzo di coltura contenente 2 X 10(-3) m CaCl2 è stato stimolato l'incisamento di entrambi i ceppi patogeni. I cambiamenti citologici in condizioni sperimentali si sono manifestati con il movimento atipico dei trofozoiti e della loro struttura intracellulare.
Effetto della cimetidina sull'acidità intragastrica nelle 24 ore in soggetti normali.L'effetto del blocco del recettore H2 sull'acidità intragastrica è stato studiato in nove maschi normali Il pH del loro contenuto gastrico è stato misurato a intervalli di un'ora diurna e di due ore notturne per 48 ore. I soggetti hanno mangiato pasti identici, bevuto volumi identici di liquidi e fumato lo stesso numero di sigarette durante i due giorni di studio. La loro attività fisica è stata senza restrizioni in un ambiente di reparto. La cimetidina ematica e la gastrina plasmatica sono state misurate in campioni di sangue seriali. I nove soggetti sono stati trattati in sequenza casuale con cimetidina 0-8-1-0 g in un giorno e capsule di placebo nell'altro. Il farmaco è stato somministrato in quattro dosi divise: quattro soggetti l'hanno ricevuto prima e cinque dopo i tre pasti principali. Tutti hanno preso la quarta dose prima di coricarsi. Studi replicati in un ulteriore soggetto a cui è stato somministrato placebo in entrambi i giorni di studio hanno mostrato una buona riproducibilità (r=0-80, P minore di 0-01). La terapia con cimetidina ha ridotto l'acidità intragastrica in tutti e nove i soggetti. La diminuzione è stata simile nei due gruppi che assumevano il farmaco prima o dopo i pasti, l'attività media degli ioni idrogeno intragastrica nelle 24 ore era ridotta rispettivamente del 70 e del 72%. L'anaacidità notturna è stata registrata solo in due dei 45 campioni. La somministrazione di cimetidina prima dei pasti ha prodotto livelli ematici di farmaco precoci e più elevati rispetto ai farmaci post-prandiali, ma quando è stata assunta dopo i pasti i livelli ematici erano più alti nel momento in cui la capacità tampone del cibo stava diminuendo. Le concentrazioni ematiche di cimetidina hanno superato il livello secretorio IC50 per la maggior parte del tempo tra le dosi. I risultati mostrano che la cimetidina 0-8-1-0 g/die in quattro dosi suddivise produce una notevole e consistente diminuzione dell'acidità intragastrica. Sebbene la variazione nella tempistica della dose in relazione ai pasti non abbia influenzato la diminuzione dell'acidità, i dati sull'assorbimento suggeriscono che i pazienti dovrebbero assumere il farmaco dopo i pasti.
Inattivazione ipotalamica dell'ormone di rilascio della tireotropina.In seguito alla dimostrazione di peptidasi nell'ipotalamo di ratto che inattivano l'ormone di rilascio della tireotropina (TRH), un sensibile e il dosaggio radioimmunologico specifico per l'ormone di rilascio è stato utilizzato per indagare la presenza di peptidasi simili nell'ipotalamo di coniglio. È stato riscontrato che il TRH è rapidamente inattivato dal surnatante e dalle frazioni ipotalamiche del particolato, con una maggiore attività peptidasica nel surnatante rispetto alla frazione del particolato. Per gli enzimi di entrambe le frazioni esaminate è stato ottenuto un pH di 7,3 entro limiti fisiologici. I risultati ottenuti confermano che l'ipotalamo di coniglio contiene enzimi in grado di inattivare il TRH, e poiché è stato riscontrato che tali peptidasi interferiscono con gli studi sulla biosintesi del TRH, è possibile che le peptidasi possano svolgere un ruolo nel controllo della produzione dell'ormone di rilascio La specificità dell'antisiero utilizzato nel dosaggio radioimmunologico ha anche suggerito che le peptidasi possono scindere il C-terminale-ProNH2,-NH2 o entrambi dalla molecola di TRH per causare l'inattivazione.
Nitriti, nitrosamines and cancer.I composti N-nitrosi cancerogeni si formano dalla reazione di ammine e nitriti presenti in natura che possono essere aggiunti a alimenti o prodotti dalla riduzione batterica del nitrato. I composti N-nitroso possono essere prodotti durante la lavorazione, la conservazione e la preparazione degli alimenti e nello stomaco dei mammiferi. I fattori che influenzano la velocità delle reazioni di nitrosazione includono pH, temperatura, catalizzatori e inibitori. l'entità della nitrosazione è complicata da questi fattori e, infine, le quantità e i tipi di composti N-nitrosi presenti devono essere determinati mediante analisi diretta. Sono disponibili metodi per il rilevamento e la stima delle nitrosammine volatili e sono stati trovati bassi livelli (parti per miliardo) in alcuni salumi e prodotti ittici Metodi generali per la rilevazione di tutti i composti N-nitroso non sono ancora disponibili, ma sono in fase di sviluppo La valutazione del rischio per le popolazioni umane da questi composti è difficile in assenza di dati più completi sulla loro distribuzione ambientale.
Influenza dei cicli diurni sui parametri biochimici della sensibilità ai farmaci: la ghiandola pineale come modello.I cicli diurni nei parametri fisici nell'ambiente modulano biochimici e ritmi circadiani fisiologici negli animali da esperimento, compresi i cicli nella sensibilità alle influenze esterne. L'illuminazione ambientale sincronizza i cicli del metabolismo dell'indolo e della sintesi della melatonina nella ghiandola pineale del ratto modulando l'attività dei nervi simpatici postgangliari. Di conseguenza, la sensibilità dell'N- pineale acetiltransferasi alla stimolazione da parte dell'isoproterenolo o del dibutirril AMP ciclico varia di giorno. Inoltre, la capacità dell'actinomicina D di inibire questa induzione varia con la periodicità circadiana. I cicli della sensibilità all'isoproterenolo riflettono i cicli nel sistema che regola la produzione di AMP ciclico e comprendono la variazione della la disponibilità di specifici siti di legame B-adrenergici e la sensibilità dell'adenilato accoppiato al recettore ciclasi alle catecolamine. Inoltre, una variazione nella risposta al dibutirril AMP ciclico indica inoltre la partecipazione di controlli intracellulari nella regolazione della sensibilità della N-acetiltransferasi alle catecolamine. La diversa sensibilità all'actinomicina D suggerisce un cambiamento della necessità per la sintesi dell'RNA in funzione delle precedenti condizioni di illuminazione ambientale. La natura fondamentale di questi cambiamenti di sensibilità suggerisce che i cicli diurni di illuminazione ambientale possono influenzare in modo simile altri sistemi.
Mitigazione della malattia del trapianto contro l'ospite nei topi mediante trattamento dei donatori con endotossina batterica.Trattamento di topi DBA/2 (H-2d) con endotossina batterica prima del trapianto della milza e delle cellule linfonodali in topi immunosoppressi AKR (H-2k) ha prevenuto la mortalità acuta da malattia del trapianto contro l'ospite (GVH). I topi AKR che hanno ricevuto cellule immunocompetenti da topi DBA/2 non trattati avevano un tempo di sopravvivenza mediano (MST) di giorni 13. Al contrario, i topi AKR che hanno ricevuto cellule immunocompetenti da donatori DBA/2 trattati con endotossine avevano un MST di giorni 54. Il trattamento con endotossine dei riceventi AKR non era essenziale per prevenire la mortalità da malattia acuta di GVH. Il chimerismo è stato dimostrato dimostrando che le cellule linfoidi dei topi AKR sopravvissuti a lungo termine avevano le caratteristiche delle cellule linfoidi DBA/2 misurate dalla loro risposta nei test di coltura mista di leucociti (MLC). Le cellule della milza di topi DBA/2 trattati con endotossine erano capace di stimolare, e di essere stimolato da, Cellule di milza AKR in saggi MLC. Inoltre, le cellule della milza di topi DBA/2 trattati con endotossina non hanno soppresso le risposte delle cellule della milza DBA/2 o AKR nei test MLC \'a tre parti\'.
Reazione acuta del trapianto contro l'ospite nei topi. 3. Distribuzione organica di 51 linfociti marcati con cromo iniettati.La distribuzione delle cellule linfonodali marcate, Le cellule linfonodali di topi C57BL sono state marcate con 51Cr e iniettate in: a) topi C57BL, b) topi CBA, c) topi CBA sensibilizzati agli antigeni C57BL prima irradiazione, d) topi CBA splenectomizzati prima dell'irradiazione. Sono state studiate altre due situazioni sperimentali in cui i donatori C57BL di cellule linfonodali erano: e) presensibilizzati agli antigeni CBA, oppure f) privati dei linfociti T. La quantità di radioattività è stata determinata nel corpo intero, sangue, fegato, milza, linfonodi sottocutanei, polmoni, femori e reni del ricevente irradiato a intervalli regolari dal momento dell'iniezione fino alla 120a ora successiva Abbiamo scoperto che le cellule viventi si depositavano prevalentemente nella milza e nella linfa nodi, mentre Le cellule morte e morenti si sono accumulate nel fegato. Altri organi contenevano quantità molto piccole di radioattività. Tutti i risultati indicano il ruolo primario della milza nella reazione acuta del trapianto contro l'ospite.
Un confronto tra un fattore inibitorio dell'ormone stimolante i melanociti (MIF-I) e sostanze note per attivare i recettori centrali della dopamina.Il tripeptide, prolil- la leucil glicina ammide, un fattore inibitore dell'ormone stimolante i melanociti (MIF-I), che è stato segnalato per essere efficace nel migliorare i sintomi della malattia di Parkinson, è stata confrontata con farmaci noti per attivare i recettori della dopamina nel cervello di ratto e topo. apomorfina, anfetamina e amantadina non era in grado di produrre un comportamento stereotipato nel ratto e, a differenza dell'1-dopa, era inefficace anche nei ratti pretrattati con l'inibitore delle monoaminoossidasi mebanazina. Né ha potenziato l'apomorfina né l'anfetamina in questo test. perdita dell'attività locomotoria indotta da clorpromazina nei topi, un effetto che è stato antagonizzato da apomorfina, anfetamina e amantadina L'ipotermia da clorpromazina nel topo è stata antagonizzata da 1-dopa ma non da MIF-I; r risultati sono stati ottenuti in topi pretrattati con reserpina. Questi risultati suggeriscono che è improbabile che l'effetto benefico riportato del MIF-I nella malattia di Parkinson sia dovuto a un'interazione con i sistemi dopaminergici nel cervello.
L'effetto delle infusioni di fruttosio sul sistema di trasporto dell'ossigeno nel sangue umano.In 9 soggetti sani l'eritrocita 2,3-difosfoglicerato (2,3 -DPG), che modifica l'affinità all'ossigeno dell'emoglobina, è diminuita di oltre il 25% entro 60 minuti dall'inizio di un'infusione di fruttosio (0,5 g. kg di peso corporeo-1. h-1). (ATP) è rimasta invariata. Nonostante le diminuite concentrazioni di 2,3-DPG, l'affinità per l'ossigeno del sangue intero effettivamente misurata è rimasta inalterata. Tuttavia, allo stesso tempo, il pH del sangue arterioso e venoso era sceso di 0,05 o più. Esperimenti in vitro hanno indicato che questa caduta dell'eritrocita 2,3-DPG non era dovuta a un effetto diretto del fruttosio sulla regolazione intra-eritrocitaria del 2,3-DPG o a cambiamenti indirettamente correlati alla somministrazione endovenosa di fruttosio in vivo, cioè un aumento del rapporto lattato/piruvato nel sangue o una diminuzione del plasm ma fosfato inorganico. Si suggerisce che due effetti opposti sul sistema di trasporto dell'ossigeno del sangue siano indotti dalle infusioni di fruttosio: 1) uno spostamento della curva di dissociazione dell'ossigeno verso destra a causa dell'effetto Bohr 2) uno spostamento virtualmente controbilanciato della curva di dissociazione dell'ossigeno verso il lasciato a causa della diminuzione delle concentrazioni di 2,3-DPG negli eritrociti.
Effetti di ouabain e ipossia sulla soglia di stimolazione cardiaca nel cane (con particolare riferimento alle variazioni delle concentrazioni di potassio extra ed intracellulare).La In 9 cani con blocco atrioventricolare totale è stata studiata l'influenza sulla soglia di stimolazione cardiaca dei cambiamenti nel rapporto intra/extracellulare del potassio miocardico indotti con ouabaina e ipossia. non visto. Si suggerisce che diverse condizioni sperimentali siano responsabili delle grandi variazioni nei risultati di studi precedenti su questo argomento.
Superossido dismutasi del fegato di ratto. Purificazione e modifiche legate all'età.La superossido dismutasi citoplasmatica è stata purificata da fegati di giovani (6 mesi) e anziani (27 mesi) ratti. L'enzima purificato da animali anziani mostra una riduzione dell'attività specifica legata all'età, accumulo di materiale antigenicamente cross-reattivo e una maggiore sensibilità alla temperatura. Non sono state riscontrate differenze nel peso molecolare, mobilità elettroforetica, antigenicità e Ki tra enzimi purificati da ratti giovani e vecchi. Questa è la prima dimostrazione di alterazioni legate all'età in una forma purificata di un enzima non metabolico, che può essere correlato a ridotta attività. Il possibile ruolo di questa ridotta attività in età-dipendente viene discusso il deterioramento delle funzioni cellulari.
Confronto della defosforilazione promossa da ioni metallici dei 5\'-trifosfati di adenosina, inosina, guanosina e citidina da parte di Mn2+, Ni2+ e Zn2+ in complessi binari e ternari. La dipendenza della velocità di defosforilazione di ATP, ITP, GTP e CTP (= NTP), espressa come costanti di velocità di primo ordine (50 gradi C; I = 0,1 M, NaClO4), su È stato studiato il pH (da 2 a 10), in assenza e presenza di Mn2+, Ni2+ e Zn2+, la reazione è accelerata da Zn2+ e passa attraverso un pH ottimale a circa 8 per il sistema Zn2+-ATP o 9 per Zn2+-ITP e Zn2+-GTP; ciò è analogo alle osservazioni fatte in precedenza con i corrispondenti sistemi Cu2+ Calcolando la dipendenza dal pH della distribuzione delle diverse specie presenti in questi sistemi si mostra che i tassi più alti si osservano nelle regioni di pH dove la concentrazione di Zn(ATP)2-, Zn(ITP-H)3- o Zn(GTP-H)3-. Valutando la dipendenza dal pH si dimostra che a il nucleofilo che attacca è OH- o H2O per Zn (ATP)2- e H2O per Zn (ITP-H)3- o Zn(GTP-H)3-. Per tutti questi complessi sono note interazioni metallo-ione/nucleo-base che portano alla formazione di macrochelati. Queste interazioni metallo-ione/nucleo-base sono cruciali per l'osservazione di una defosforilazione promossa da metallo-ione; in accordo con ciò, e la scarsa tendenza della porzione citosina a coordinarsi, i sistemi CTP sono piuttosto stabili verso la defosforilazione. Va notato che questi risultati sperimentali non significano necessariamente che i macrochelati solitamente descritti siano i complessi reattivi, ma solo che il complesso attivo deve essere strettamente correlato ad essi (es. isomeri, ecc. ). Sebbene per i sistemi Ni2+ con ATP, ITP e GTP, e per il sistema Mn2+-ATP sia nota anche un'interazione metallo-ione/nucleo-base, questi sistemi non sono molto sensibili alla scissione idrolitica del legame P-O-P terminale. L'unica differenza strutturale significativa nota tra i complessi Ni2+-NTP o Mn2+-ATP e quelli di Cu2+ o Zn2+ è che Ni2+ Mn2+ si coordinano a tutti e tre i gruppi fosfati, mentre Cu2+ e Zn2+ coinvolgono solo quelli beta e gamma. Questa relazione struttura-reattività è razionalizzata dal suggerimento che nelle specie attive lo ione metallico dovrebbe essere coordinato ai gruppi alfa,beta-fosfato lasciando il gruppo gamma aperto all'attacco nucleofilo. Ovviamente, una coordinazione beta,gamma iniziale è adatta per uno spostamento dello ione metallico lungo lo scheletro fosfato nella posizione alfa-beta reattiva, mentre per una coordinazione alfa,beta,gamma solo la rimozione meno favorevole del rimane il gruppo gamma coordinato. L'interazione metallo-ione/nucleo-base è considerata importante per ottenere questa struttura reattiva. Viene discussa la connessione tra transfosforilazione in vitro e in vivo. È stato inoltre dimostrato che la formazione di complessi misti o ternari inibisce il processo di defosforilazione. Ciò da un lato interessa per quanto riguarda il trasporto in natura di fosfati sensibili all'idrolisi, dall'altro mette in dubbio le conclusioni basate su esperimenti condotti in presenza di tamponi, poiché questi contengono basi deboli e quindi potenziali ligandi.
[Proprietà spettrali del plasminogeno suino: studio della transizione acida (autore\'s transl)].La transizione acida del plasminogeno suino, preparato da cromatografia di affinità, è stata studiata con metodi non distruttivi. Questi metodi si basano sull'analisi del comportamento dei triptofili in varie condizioni. Si utilizzano la perturbazione degli spettri di assorbimento e di emissione da parte del pH o della temperatura e l'estinzione dinamica della fluorescenza intrinseca. ottenere informazioni sui cambiamenti strutturali che interessano l'ambiente di questi residui. Si dimostra che diminuendo il pH gli spettri di emissione di fluorescenza si spostano verso le lunghezze d'onda lunghe, con un allargamento della banda di fluorescenza. Lo stesso effetto può essere ottenuto a pH costante mediante riscaldando la soluzione proteica Per analizzare questi fenomeni si assume che le intensità di fluorescenza a 355 nm e 328 nm riflettano la proporzione dei triptofani che sono esposti a t lui solvente e sepolto, rispettivamente. Il grafico del rapporto delle intensità di fluorescenza a queste lunghezze d'onda rispetto al pH o alla temperatura porta a una curva di titolazione che mostra uno smascheramento dei triptofani. La proporzione di triptofani esposti viene misurata mediante la tecnica di spegnimento dinamico della fluorescenza ei dati analizzati secondo Lehrer. Il grafico della frazione di triptofili esposti rispetto al pH mostra anche lo smascheramento di questi cromofori. La perturbazione termica di una soluzione di plaminogeno a pH neutro induce uno spettro di assorbimento differenza le cui ampiezze ai massimi sono proporzionali al numero di residui aromatici esposti. Il confronto con una soluzione di plasminogeno completamente denaturato in cloruro di guanidio 6 M, dove sono esposti tutti i triptofili, mostra che la percentuale di esposizione è pari al 59%. Questo numero è significativamente superiore alla percentuale riscontrata con la tecnica di estinzione della fluorescenza (20%), indicando che alcuni triptofili si trovano in fessure, esposte al solvente ma non allo ioduro. A pH acido gli spettri differenza di assorbimento indotti dalla perturbazione termica non sono classici, in quanto mostrano un'inversione e una nuova banda tra 300 nm e 305 nm. Questa banda è citata in letteratura come banda minore del triptofano che compare quando questo cromoforo si trova in un ambiente asimmetrico. Tracciando l'ampiezza massima di questi spettri ottenuti a pH acido in funzione della temperatura, otteniamo una curva che indica che due tipi di interazioni antagoniste sono coinvolti nella perturbazione degli spettri dei cromofori. La titolazione spettrofotometrica del plasminogeno fornisce i classici spettri di differenza di assorbimento. Tracciando l'ampiezza massima a 292 nm rispetto al pH, otteniamo una curva di titolazione con un pK apparente di 2,9 unità. Questo pK è acido rispetto al valore di pK di un normale carbossile. Questo valore basso può essere dovuto a un gruppo carico positivamente nelle vicinanze di un carbossile, che interagisce con uno o più cromofori. Quando il carbossile diventa protonato, questo gruppo caricato positivamente è libero e disponibile a perturbare l'ambiente di alcuni cromofori...
Il gradiente elettrochimico protonico nelle cellule di Escherichia coli.Il pH interno delle cellule di Escherichia coli è stato stimato dalla distribuzione di 5,5-[14C ]dimetil-2,4-ossazolidinedione o [14C]metilammina. Il trattamento delle cellule con EDTA/valinomicina è stato impiegato per stimare il delta psi dalla distribuzione di 86Rb+ in concomitanza con il delta pH per il calcolo del delta muH. Le cellule intatte che respirano hanno mantenuto un pH interno più alcalino 0,63-0,75 unità rispetto a quello dell'ambiente a pH extracellulare 7, sia in mezzo di crescita che in soluzioni di KCl Il delta pH diminuiva quando la respirazione era inibita da anaerobiosi o in presenza di KCN Il delta muH, stabilito da EDTA/valinomicina trattati cellule, era costante (122-129 mV) rispetto alla concentrazione extracellulare di potassio di 0,01 mM-1 mM. Alla concentrazione di potassio più bassa il delta psi (110-120 mV) era il componente predominante, e alla concentrazione più alta il pH delta aumentava a 0,7 unità (42 mV) A 150 mM di potassio delta muH è stato ridotto a 70 mV principalmente a causa di una componente delta pH di 0,89 (53 mV). L'intercambiabilità dei componenti delta muH è coerente con una pompa protonica elettronica e con il potassio che funge da controione in presenza di valinomicina. Infatti entrambi i parametri di delta muH sono diminuiti in presenza di carbonilcianuro p-trifluorometossifenilidrazone. Il delta pH più alto di 2 unità è stato osservato nelle cellule intatte a pH 6; l'aumento del pH extracellulare ha ridotto il pH delta a 0 a pH 7,65 e a -0,51 a pH 9. Un modello simile di dipendenza del pH delta dal pH extracellulare è stato osservato nelle cellule trattate con EDTA/valinomicina, ma il delta psi è stato quasi costante nel corso del tutta la gamma di valori di pH extracellulare (6-8) che implicano movimento protonico elettroneutro. Il potassio è specificamente richiesto per la respirazione delle cellule di E. coli K12 trattate con EDTA poiché altri cationi monovalenti o bivalenti non potevano sostituire il potassio e la valinomicina non era necessaria.
Regolazione della respirazione e della fissazione dell'azoto in diversi tipi di Azotobacter vinelandii.I livelli dei nucleotidi adenina, nucleotidi piridinici e i parametri cinetici degli enzimi della via di Entner-Doudoroff (glucosio-6-fosfato deidrogenasi e 6-fosfogluconato deidrogenasi) sono stati determinati in cellule di Azotobacter vinelandii, coltivate in condizioni O2- o N2-limitanti. Si è concluso che i livelli sia dei nucleotidi adenina che dei nucleotidi piridinici non limitare il tasso di ossidazione del saccarosio Esperimenti con piruvato radioattivo e saccarosio mostrano che il tasso di ossidazione del saccarosio delle cellule di Azotobacter è associato ad un aumento del tasso di assorbimento del saccarosio I siti di fosforilazione ossidativa e la composizione delle membrane respiratorie con rispetto ai citocromi c4 + c5, b e d differiscono per la crescita cellulare limitata a O2 o N2. È stato possibile dimostrare che la protezione respiratoria dell'azotofissatore sistema in Azotobacter è principalmente indipendente dalla capacità di ossidazione delle cellule. La capacità di ossidazione dipende intrinsecamente dal tipo di substrato e può essere in parte adattata. L'attività massima della nitrogenasi in Azotobacter dipende dal tipo di substrato ossidato. Sebbene il livello di carica energetica dipenda in qualche modo dal tipo di substrato utilizzato, non è possibile derivare alcuna relazione ovvia tra i cambiamenti nella carica energetica e l'attività della nitrogenasi. Viene data una proposta alternativa.
Alchilazione dell'estradiolo 17beta-deidrogenasi dalla placenta umana con 3-cloroacetilpiridina--adenina dinucleotide.3-cloroacetilpiridina--adenina dinucleotide, che è attivo come accettore di idruro (Km = 0,6 mM), inattiva e alchila l'estradiolo 17beta-deidrogenasi La cinetica di inattivazione da parte di 3-cloroacetilpiridina-adenina dinucleotide e l'assenza di inattivazione da parte di 3-cloroacetilpiridina ribosio fosfato mostrano che l'alchilazione segue la formazione di un complesso binario (Kd = 4,5 X 10(-4) M). Gli studi sull'etichettatura con 3-cloro[2-14C]acetilpiridina-adenina dinucleotide e la velocità di alchilazione in funzione del pH, dimostrano l'alchilazione di una cisteina, la stechiometria essendo una mole per subunità. Il marcatore 14C è distribuito tra tre peptidi chimotriptici, uno dei quali rappresenta circa il 50% del marcatore radioattivo.
Cinetica della riassociazione e riattivazione della lattica deidrogenasi del muscolo suino dopo dissociazione acida.La deidrogenasi lattica dal muscolo scheletrico del maiale (M4) può essere dissociata in modo reversibile in il monomero a pH 4-5 a seconda dell'anione applicato Utilizzando condizioni sperimentali identiche, i profili di dissociazione, denaturazione e disattivazione dipendenti dal pH coincidono tra loro Le deviazioni nella dipendenza dal pH della fluorescenza proteica riflettono i cambiamenti nel microambiente di specifici cromofori piuttosto che differenze significative nella relazione struttura-funzione al variare del pH. Lo stato di dissociazione è caratterizzato dal monomero inattivo omogeneo di 35000. Il materiale riassociato consiste fino all'85% di tetrameri completamente attivi, indistinguibili dagli enzimi nativi iniziali, come mostrato dalle proprietà idrodinamiche, spettroscopiche ed enzimatiche. Il resto rappresenta una miscela di aggregati alti irreversibilmente denaturati. In condizioni ottimali ns di riattivazione sia il recupero dell'attività enzimatica che la fluorescenza nativa obbediscono a una stretta cinetica del secondo ordine con un'energia di attivazione di 44 kcal/mol (184 kJ/mol). NAD+ e NADH non mostrano alcuna influenza significativa sulla resa e sulla cinetica del processo di ripiegamento e sul recupero dell'attività enzimatica. I risultati cinetici suggeriscono che la riassociazione di monomeri inattivi sia limitante nei processi di ripiegamento e riattivazione considerati.
Identificazione e proprietà dell'8-idrossiflavina--adenina dinucleotide nella flavoproteina a trasferimento di elettroni da Peptostreptococcus elsdenii.1. Un nuovo gruppo prostetico flavinico è stato isolato in forma pura dalla flavoproteina a trasferimento di elettroni di Peptostreptococcus elsdenni. La sua struttura è stata stabilita come derivato FAD della 7-metil-8-idrossiisoallossazina: (vedi articolo). La prova di questa struttura è stata ottenuta mediante sintesi chimica di 7- modelli di metil-8-idrossiisoallossazina e per degradazione graduale del composto nativo in 7-metil-8-idrossiallossazina. Il cromoforo arancione è caratterizzato da una forte banda di assorbimento con un massimo a 472 nm (xi = 41 000 M-1 CM -1) e un pK a 4,8 dovuto alla ionizzazione del gruppo C(8)-OH. 2. Sono state studiate le proprietà di una serie di derivati funzionalmente sostituiti di 8-idrossi flavine e lumincromi per fornire una base per l'interpretazione del effetti del pH sullo spettrosco pic proprietà degli 8-idrossi derivati di FAD e FMN. 3. L'8-idrossi derivato del FAD è legato dall'apo-D-amminoacido ossidasi; il complesso non mostra attività catalitica. Il derivato 8-idrossi di FMN è legato dall'apoflavodossina per dare un complesso che ha attività catalitica simile a quella della flavodossina nativa. Il complesso viene ridotto in modo reversibile dalla ditionite, prima a un semichinone relativamente stabile e poi alla forma diidroflavina.
Reattività dei gruppi sulfidrilici della succinato deidrogenasi solubile.La succinato deidrogenasi solubile preparata mediante estrazione del butanolo reagisce con la N-etilmaleimmide secondo una cinetica del primo ordine con rispetto sia all'enzima attivo rimanente che alla concentrazione dell'inibitore. Il legame dei gruppi sulfidrilici dell'enzima impedisce la sua alchilazione da parte di N-etilmaleimmide e l'inibizione da parte dell'ossalacetato. Un'analisi cinetica dell'inattivazione del reagente alchilante in presenza di succinato o malonato suggerisce che N -etilmaleimmide agisce come un inibitore sito-diretto. L'apparente costante di velocità del primo ordine di alchilazione aumenta tra pH 5,8 e 7,8 indicando un valore pKa per il gruppo enzima sulfidrilico pari a 7,0 a 22 gradi C in tampone tris-solfato 50 mM. anioni (fosfato, citrato, maleato e acetato) diminuiscono la reattività dell'enzima nei confronti del reagente alchilante L'attività della metosolfato reduttasi succinato/fenazina misurata nel pr L'esistenza di una concentrazione saturante di succinato mostra la stessa dipendenza dal pH della velocità di alchilazione da parte della N-etilmaleimmide. Viene discusso il meccanismo della prima fase dell'ossidazione del succinato, compreso un attacco nucleofilo del substrato da parte del gruppo sulfidrilico del sito attivo.
Ornitina carbamoiltransferasi da Escherichia coli W. Purificazione, struttura e analisi cinetica allo stato stazionario.L'ornitina carbamoiltransferasi da Escherichia coli W è stata purificata fino all'omogeneità. L'enzima ha un peso molecolare di 105000. È composto da tre subunità apparentemente identiche con pesi molecolari di 35000. Il meccanismo del sistema enzimatico dell'ornitina carbamoiltransferasi di E. coli W è stato studiato cineticamente utilizzando l'approccio dell'inibizione del prodotto e dell'inibizione senza uscita di reazioni sia dirette che inverse Sulla base dei dati cinetici e degli studi di legame sembra che il meccanismo della reazione comporti una sequenza obbligatoria di legame del substrato all'enzima, in cui il carbamoilfosfato è il primo substrato a legarsi all'enzima e al fosfato l'ultimo prodotto ad essere rilasciato. Gli stessi studi indicano anche che il meccanismo coinvolge complessi dead-end. Il meccanismo di reazione sembra coerente con tha t proposto da Theorell e Chance. Sono stati determinati i valori per le costanti di Michaelis e di dissociazione coinvolte nella combinazione di ciascun reagente con l'enzima. Il confronto dei valori per le costanti cinetiche che sono comuni sia alla reazione diretta che a quella inversa ha mostrato che sono sempre di grandezza comparabile.
Un'aminopeptidasi extracellulare da Clostridium histolyticum.Un'aminopeptidasi è stata isolata dal filtrato di coltura di Clostridium histolyticum e purificata fino all'omogeneità. Assenza di attività endopeptidasi nel è stata dimostrata la preparazione purificata. La gel filtrazione su una colonna calibrata indica un peso molecolare apparente di 340000 per l'enzima nativo. L'elettroforesi su gel dell'enzima denaturato in presenza di dodecilsolfato in concentrazione costante di acrilammide e in un gradiente di concentrazione, ha portato alla comparsa di un singolo componente per il quale è stato calcolato un peso molecolare rispettivamente di 51000 e 59000. Dalla mobilità delle specie proteiche reticolate e denaturate è stato ottenuto per il monomero un peso molecolare di 56000. Studi di specificità mostrano che l'enzima scinde tutti i tipi di amminoacido N-terminale residui tra cui prolina e idrossiprolina da piccoli peptidi e da polipeptidi. Il legame peptidico formato tra it un residuo amminoacidico N-terminale e la prolina non vengono scissi dall'enzima. L'azione combinata dell'aminopeptidasi-P e dell'aminopeptidasi clostridica porta all'idrolisi completa della bradichinina nonapeptide ricca di prolina. Sono stati osservati bassi tassi di idrolisi per residui carichi e ammidi di amminoacidi. Studi cinetici con cinque tripeptidi della struttura generale X-Gly-Gly, dove X sta per Leu, Phe, Val, Ala o Pro, mostrano una diminuzione in Km con l'aumentare delle dimensioni della catena laterale idrofoba di X. Il più alto Kcat si osservano valori con prolina e alanina. Nella serie Pro-Gly, Pro-Gly-Pro, Pro-Gly-Pro-Pro, l'ultimo peptide è il miglior substrato, indicando un sito attivo complementare ad almeno quattro residui amminoacidici. L'attività enzimatica dipende dalla presenza di cationi bivalenti, la massima attivazione viene raggiunta con Mn2+ e Co2+. Il pH ottimale per l'enzima attivato da Mn2+ e Co2+ è rispettivamente di 8,6 e 8,2. La temperatura ottimale è di 40 gradi C. L'inibizione dell'aminopeptidasi è stata ottenuta con Zn2+, Cu2+ e p-mercuribenzoato, ma non con diisopropilfosfofluoridato.
Fluroescenza di proteine in guanidina cloridrato 6-M. Metodo per la determinazione quantitativa del triptofano.Per determinare il contenuto di triptofano nelle proteine,un metodo analitico viene proposto il metodo della fluorescenza ultravioletta basato sull'uniformità dell'ambiente dei cromofori aromatici in guanidina cloridrato 6-7 M. La scala dell'intensità di fluorescenza è calibrata utilizzando soluzioni standard di triptofano libero. Un coefficiente di correlazione tra la fluorescenza dei residui proteici triptofanilici e del triptofano libero è stato stimata nel test di 17 proteine ben caratterizzate. Questo metodo è particolarmente adatto a proteine che trasportano gruppi che assorbono nella regione 290-370 nm, come flavina, eme e piridossalfosfato e in presenza di sostanze come il 2-mercaptoetanolo che vietano l'uso di i metodi spettroscopici o magnetici del dicroismo circolare. Richiede meno tempo rispetto alle tecniche che richiedono idrolisi o reazioni chimiche.
Studio di risonanza magnetica nucleare della struttura del sito attivo della fosfoglicerato chinasi del lievito.L'enzima 3-fosfoglicerato chinasi del lievito è stato studiato da osservazione dello spettro di risonanza magnetica nucleare protonica a 270 MHz utilizzando tecniche di trasformata di Fourier. La spettroscopia di differenza è stata utilizzata per migliorare la risoluzione e per identificare effetti specifici di legame del ligando e cambiamenti conformazionali. Pertanto, è stato possibile rilevare perturbazioni che coinvolgono singoli protoni di residui di amminoacidi nonostante peso molecolare relativamente elevato della proteina (47000), in particolare nelle regioni aromatiche (6-9 ppm) e metilene (2-3 ppm) dello spettro.
Cambiamento dipendente dalla temperatura nella fase limitante della velocità dell'ITPasi stimolata dal magnesio della miosina.Gli effetti della temperatura sull'attività Mg-ITPasi di pesanti meromiosina e sottoframmento di miosina 1 sono stati misurati in 0,1 M KC1. Il burst iniziale di liberazione di Pi era una mole per mole di meromiosina pesante o due mole di sottoframmento di miosina 1, cioè una mole per due moli di siti attivi di miosina, a 20 gradi C. Tuttavia, era quasi zero mol al di sotto di 8 gradi C. Gli effetti della concentrazione di KC1 e del pH sull'attività dell'ITPasi della meromiosina pesante a 20 gradi C erano diversi da quelli al di sotto degli 8 gradi C, suggerendo che il fattore limitante nell'idrolisi di Mg-ITP di la miosina dipende dalla temperatura. L'effetto della temperatura sull'attivazione dell'actina della pesante meromiosina Mg-ITPasi è stato analizzato misurando la dipendenza dalla temperatura di grafici doppi reciproci dell'attività dell'ITPasi rispetto alla concentrazione di actina. L'entità dell'attivazione dell'actina era maggiore a bassa temperatura. risultati prima In questo articolo potrebbe essere spiegato assumendo l'esistenza di due tipi di siti attivi su una molecola di miosina.
Purificazione e proprietà di un enzima ossidante il metanolo in Pseudomonas C.Un enzima ossidante il metanolo è stato purificato da Pseudomonas C, cresciuto su metanolo come un'unica fonte di carbonio ed energia. La procedura di purificazione ha coinvolto la precipitazione del solfato di ammonio, la cromatografia a scambio ionico e la filtrazione su gel e ha portato a una resa del 35,4%. L'attività enzimatica può essere accoppiata al metosolfato di fenazina e richiede la presenza di ioni ammonio nel saggio miscele. Gli enzimi possiedono un'ampia specificità per gli alcoli primari. Anche la formaldeide viene ossidata dall'enzima purificato. Il valore Km per il metanolo è 15 muM. Il pH ottimale per l'ossidazione sia del metanolo che della formaldeide è di circa 10,4. L'enzima ha un valore molecolare peso di circa 128000 ed è costituito da due subunità aventi ciascuna un peso molecolare di 60000.
Purificazione e proprietà della ciclopentanone ossigenasi di Pseudomonas NCIB 9872.1. La ciclopentanone ossigenasi di Pseudomonas NCIB 9872 è stata purificata circa 40 volte. un singolo picco nell'ultracentrifuga e una singola banda proteica principale su gel di poliacrilammide contaminati con circa il 5% di un'impurezza a migrazione più lenta. La flavina si dissocia dalla proteina durante l'elettroforesi. 2. L'enzima ha un peso molecolare di circa 200000 ed è un assemblaggio omopolimerico di tre delle quattro subunità di peso molecolare 54000-58000. 3. Il gruppo prostetico è FAD e si ottengono tipicamente valori di circa 2,5 per il numero di moli legate a ciascuna mole di oloenzima. Alcuni FAD probabilmente si dissociano durante la purificazione e sembra probabile che ogni subunità leghi un FAD nella proteina non danneggiata.
Forme multiple di cicloesanone ossigenasi da Nocardia globerula CL1.La cicloesanone 1,2-monoossigenasi di Nocardia globerula CL1 esiste come due forme elettroforeticamente distinte. Queste sono presenti in estratti cellulari grezzi e non sono artefatti di purificazione enzimatica o elettroforesi. Sono stati separati in quantità di mg mediante elettroforesi preparativa su gel di poliacrilammide e hanno dimostrato di avere caratteristiche cinetiche, spettrali e fisiche essenzialmente identiche. Differiscono nel profilo di pH-attività e stabilità della temperatura. Non è stato stabilito se siano isoenzimi conformazionali o derivino dalla duplicazione genica e dall'evoluzione divergente. La cicloesanone ossigenasi costituisce l'8% della proteina solubile delle cellule indotte. Questo alto livello sarebbe correlato bene con la presenza di geni duplicati. Esso si propone che la presenza di una grande quantità di cicloesanone ossigenasi possa conferire un vantaggio ecologico all'organismo.
Algal gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi. Fabbisogno di nucleotidi piridinici di due enzimi purificati da Scenedesmus obliquus.Due enzimi con gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi L'attività è stata purificata da Scenedesmus obliquus cresciuto in modo eterotrofico mediante cromatografia a scambio ionico e filtrazione su gel. L'enzima D ha un peso molecolare di 550000 e un rapporto VNADH:VNADPH di 16 mentre l'enzima T ha un peso molecolare di 140000 e un VNADH :VNADPH ratio di 0,15. I due enzimi, tuttavia, sono molto simili per quanto riguarda le loro costanti di Michaelis per i nucleotidi piridinici ridotti, il pH ottimale, la dimensione della subunità e l'assorbimento dell'ultravioletto.
Lisi delle pareti cellulari del lievito. La beta-(1 litica porta a 3)-glucanasi da Bacillus circulans WL-12.Bacillus circulans WL-12 quando cresciuto in un mezzo minerale con pareti cellulari di lievito o glucano di lievito come fonte di carbonio solitario, ha prodotto cinque beta-glucanasi. Due beta-(1 porta a 3)-glucanasi (I e II), che sono litiche per le pareti cellulari del lievito, sono stati isolati dal liquido di coltura mediante adsorbimento discontinuo su lievito glucano e separati mediante cromatografia su idrossiapatite. La beta-litica (1 porta a 3)-glucanasi I è stata ulteriormente purificata mediante cromatografia con carbossimetilcellulosa. L'attività specifica della beta-litica (1 porta a 3)-glucanasi I su laminarina era 4,1 U per mg di proteina. L'enzima si è mosso come una singola proteina con un peso molecolare di 40000 durante l'elettroforesi del sodio dodecilsolfato in gel in lastre. Era specifico per il beta-(1 conduce a 3)- legame glucosidico ma l'enzima non ha idrolizzato il laminaribiosio L'idrolisi della laminarina è passata attraverso una serie di oligosaccari des, e laminaribiosio e glucosio accumulati fino alla fine della reazione. Dalla laminarina è stata prodotta anche una piccola quantità di gentibiosio. I prodotti delle pareti cellulari del lievito e del glucano del lievito includevano laminaripentasio, laminaritriosio, laminaribiosio, glucosio e gentiobiosio, ma non è stato rilevato laminaritetraosio. Questa glucanasi ha un pH ottimale di 5,5.
Lisi delle pareti cellulari del lievito. La beta-(1 litica porta a 6)-glucanasi da Bacillus circulans WL-12.Quando cresciuto in un minerale terreno con pareti cellulari di lievito o glucano di lievito come unica fonte di carbonio, Bacillus circulans WL-12 produce enzimi litici di parete oltre a beta-(1 porta a 3) e beta-(1 porta a 6)-glucanasi non litiche. Gli enzimi litici sono stati isolati dal liquido di coltura mediante adsorbimento su lievito glucano insolubile in operazione batch. Dopo la digestione del glucano, la miscela di enzimi è stata cromatografata su idrossiapatite su cui l'attività litica potrebbe essere risolta in un litico beta-(1 porta a 6)glucanasi e due beta-(1 porta a 3)-glucanasi litiche è stata ulteriormente purificata mediante cromatografia su dietilammino-etil-agarosio e carbossimetilcellulosa. La sua attività specifica sul pustolano era di 6,2 unità per mg di proteina. L'enzima si è mosso come un singolo proteina con un peso molecolare di 54000 durante l'elettroforesi del dodecilsolfato di sodio in lastre di gel S. L'idrolisi del pustolano è passata attraverso una serie di oligosaccaridi, portando a una miscela di gentiotriosio, gentiobiosio e glucosio. L'enzima produce anche piccole quantità di gentiobiosi da laminarina e pachiman e su questa base la sua attività litica sulle pareti cellulari del lievito, è stata attribuita a beta-(1 conduce a 3) oligosaccaridi legati non sono stati rilevati. La beta-(1 litica porta a 6)-glucanasi ha un pH ottimale di 6,0. L'idrolisi della pustola ha seguito la cinetica di Michaelis-Menten. Sono stati calcolati un Km di 0,29 mg di pustolano per ml e un V di 9,1 microequivalenti di glucosio rilasciato/min per mg di enzima. L'enzima non ha bisogno di ioni metallici. La beta-(1 litica porta a 6)-glucanasi differisce essenzialmente dalla beta-(1 non litica porta a 6)-glucanasi dello stesso organismo per la sua azione positiva sulle pareti cellulari del lievito e sul glucano del lievito e per la sua specificità molto inferiore attività sul pustolano solubile.
Un modello quantitativo per la partizione in sistemi acquosi multifase.È stato sviluppato un modello per la partizione di molecole cariche in sistemi acquosi multifase. Il coefficiente di partizione di un componente, o il coefficiente di ripartizione complessivo di più componenti, tra due fasi arbitrarie è espresso in termini di differenza di potenziale elettrico tra le fasi (dovuta agli elettroliti presenti nel sistema), le cariche nette dei componenti ripartiti e i loro coefficienti di partizione in uno stato (a volte ipotetico) senza carica. La frazione di materiale in una fase è stata anche descritta in funzione delle cariche nette dei componenti partizionati. Il modello si adatta bene ai dati sperimentali per la partizione di cromato, piridina, ribonucleasi A, due tipi di CO-emoglobina e una miscela enzimatica (lisato di lievito) in sistemi trifase costituiti da poli(etilenglicole), destrano, Ficoll e acqua. Piccole deviazioni dal modello sono co considerato come un assorbimento di ioni dipendente dal pH. I dati sono stati utilizzati anche per rilevare differenze nella solvatazione di proteine simili, nonché la presenza di diverse forme di alcuni enzimi glicolitici presenti nel lisato di lievito.
H+-ATPasi reversibile a membrana di Micrococcus lysodeikticus.Il trattamento dei frammenti fosforilanti della membrana batterica di Micrococcus lysodeikticus con tripsina aumenta l'attività dell'ATPasi. a seguito di questo trattamento, i frammenti di membrana acquisiscono la capacità di trasformare l'energia dell'ATP in differenza di potenziale transmembrana. Il ditiotreitolo ha un effetto simile a quello della tripsina sui frammenti di membrana di M. lysodeikticus. La dicicloesilcarbodimide inibisce l'ATPasi dei frammenti di membrana di M. lysodeikticus, e anche la generazione di potenziale di membrana accoppiata alla reazione dell'ATPasi È stato suggerito che l'aumento dell'attività dell'ATPasi delle membrane di M. lysodeikticus durante il trattamento con tripsina e ditiotreitolo sia collegato con l'effetto di questi agenti sull'inibitore proteico di ATPasi.
Inibizione diretta al sito attivo del vettore di membrana plasmatica che trasporta amminoacidi neutri a catena corta nel Trypanosoma brucei.1. Glicina clorometile inibita il trasporto attivo di L-serina nelle forme ematiche di Trypanosoma brucei 2. I substrati del sistema di trasporto degli amminoacidi neutri a catena corta (N1), ma non di altri sistemi di trasporto degli amminoacidi, proteggevano la proteina trasportatrice dall'inibizione.3 L'inibizione non è mai stata completa per più dell'80% L'attività residua potrebbe essere dovuta a una proporzione di siti attivi del vettore N1 che non avevano reagito con l'inibitore 4. L'inibizione era altamente selettiva per il sistema di trasporto degli aminoacidi N1. Altri aminoacidi i sistemi di trasporto non sono stati influenzati e la velocità di respirazione è stata solo leggermente influenzata 5. L'inibizione era di primo ordine rispetto alla concentrazione, indicando che una molecola dell'inibitore ha reagito con ciascun sito attivo del vettore 6. L'elevata selettività di questo inibire dovrebbe renderlo un utile agente di etichettatura durante l'isolamento e la purificazione della(e) proteina(e) trasportatrice(e) di trasporto degli amminoacidi N1.
Succinilazione della gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi da Bacillus stearothermophilus. Un residuo di treonina reattiva nell'apoenzima.1. Gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi da bacillus stearothermophilus può essere ampiamente succinilato in presenza di substrati e coenzima senza apprezzabile perdita di attività 2. L'apoenzima in assenza di substrati è rapidamente inibito da piccole quantità di anidride succinica NAD+, gliceraldeide-3-fosfato e fosfato inorganico forniscono tutti protezione dall'inibizione e l'inibizione viene lentamente invertita in presenza di pirofosfato a pH 8,5. 3. Studi cinetici e spettrali hanno dimostrato che l'inibizione specifica è associata alla succinilazione del gruppo idrossile alifatico di un residuo di serina o treonina. residuo specificamente succinilato è stato identificato come uno dei due residui di treonina, molto probabilmente Thr-150, adiacente al residuo di cisteina del sito attivo nella prima ria struttura. La sua insolita reattività è discussa in relazione alla struttura tridimensionale dell'enzima. 5. Un secondo residuo, una lisina omologa con Lys-212 nell'enzima muscolare del maiale, può essere succinilato sia nell'oloenzima che nell'apoenzima senza alcun effetto rilevabile sull'attività enzimatica.
Studi conformazionali di due proteine cromosomiche non istoniche e loro interazioni con il DNA.Le proprietà conformazionali di due proteine cromosomiche non istoniche (alta mobilità sono state studiate con metodi spettroscopici le proteine del gruppo 1 e 2) È stata anche studiata l'interazione della proteina 1 del gruppo ad alta mobilità con il DNA 1. I risultati del dicroismo circolare indicano che in presenza di sale entrambe le proteine sono 40-50% elicoidale tra pH 1 e 9. Al di sopra di pH 9 avviene la denaturazione In assenza di sale le proteine si denaturano al di sotto di pH 4. 2. Gli spettri di risonanza magnetica nucleare mostrano la presenza di picchi spostati di corrente d'anello e risonanze aromatiche perturbate, dimostrando che l'elica formazione è accompagnata da ripiegamento terziario specifico 3. Gli spettri di risonanza magnetica nucleare dei complessi tra la proteina 1 del gruppo ad alta mobilità e il DNA dimostrano che una bassa forza ionica una porzione della molecola ricca di lisina e contenente tutti i residui aromatici ues è legato al DNA, mentre una regione più acida della catena rimane libera dal DNA.
Le attività dell'omoserina deidrogenasi e dell'aspartochinasi treonina-sensibili di Escherichia coli K-12. Incubazione dell'enzima in condizioni alcaline: dissociazione e formazione di ponti disolfuro.Aspartochinasi I - omoserina deidrogenasi I da Escherichia coli K-12, un enzima omotetramerico, si dissocia in dimeri dopo trattamento alcalino. Sia l'inattivazione dell'aspartochinasi che quella dell'omoserina deidrogenasi, così come la desensibilizzazione verso la L-treonina, avvengono in un processo a più fasi. Il ditiotreitolo stabilizza una forma dimerica mantenendo piena attività e sensibilità; L-omoserina stabilizza un'altra forma dimerica priva di attività dell'aspartochinasi e conserva una sostanziale attività deidrogenasi insensibile alla L-treonina. Viene proposto un modello che mostra che la dissociazione in dimeri avviene in una prima fase, il il dimero risultante perde la sensibilità sia all'aspartochinasi che all'omoserina deidrogenasi in due fasi successive che comportano la formazione di disu intracatena lide obbligazioni.
Uno studio calorimetrico dell'effetto CO Bohr delle emoglobine monomeriche.E' stato effettuato uno studio calorimetrico dei calori di reazione della CO con le emoglobine monomeriche di Chironomus thummi thummi III e IV in funzione del pH. Il numero di protoni Bohr rilasciati a pH 7,1 è stato determinato dai calori di reazione in diversi tamponi come 0,19 e 0,31 mol H+/mol CO rispettivamente per l'emoglobina III e IV. Il processo di ionizzazione di Bohr è risultato essere di 6 e 8 kcal/mol H+ (25 e 34 kJ/mol) per le emoglobine III e IV. Questi valori sono coerenti con i valori trovati per i gruppi istidina. Una parte indipendente dal pH dell'entalpia di reazione è stata determinato come - 19,7 kcal/mol CO (-82,4 kJ/mol). La stessa reazione con la mioglobina è meno esotermica. Dalla combinazione dei valori deltaG0 e deltaH0 sono stati calcolati i valori di TdeltaS0. Si è riscontrato sia per le emoglobine che per l'entropia di reazione è maggiore di 2 cal K-1 mol-1 (8,4 JK-1 mol-1) a pH 9,5 as rispetto al pH 6.0.
Encefalite virale equina.Le più importanti infezioni virali neurotropiche del cavallo sono le encefaliti trasmesse da artropodi. Queste includono l'encefalite venezuelana (VE), l'encefalite (EE) e l'encefalite occidentale (WE), che si trovano nelle Americhe, e l'encefalite giapponese B che si verifica in Estremo Oriente. Tutti i virus causano l'encefalite nell'uomo. Tra il 1969 e il 1972 si è verificata un'epidemia di VE in America Centrale. Nel 1971 la malattia è stata segnalata in Texas, dove è stata tenuta sotto controllo con la vaccinazione dei cavalli suscettibili con un vaccino a virus vivo attenuato e dalla riduzione della popolazione di zanzare con insetticidi spruzzati dagli aerei. Una viremia ad alto titolo si verifica con il virus VE in il cavallo e le epidemie sono mantenute da un ciclo zanzara/cavallo; l'infezione dell'uomo e di altre specie è incidentale. EE e WE sono state riconosciute come malattie separate dal 1933 e negli USA i cavalli sono protetti dalla vaccinazione di routine n. Le epidemie di queste malattie sono le vaccinazioni di routine. Le epidemie di queste malattie sono ormai rare. In contrasto con VE, sia i virus EE che WE sono mantenuti da un ciclo uccello/zanzara. La viremia nel cavallo è generalmente considerata insufficiente per infettare le zanzare vettori; il cavallo è un "ospite senza uscita". Diverse specie di zanzare possono agire come vettori di VE, WE ed EE. L'estensione di altre malattie trasmesse da artropodi ad aree originariamente al di fuori della loro distribuzione geografica (ad esempio la febbre catarrale degli ovini) serve a illustrare il potenziale di VE, WE ed EE di causare malattie in altri continenti.
Valutazione clinica dei livelli di lattato nel sangue nella colica equina.I livelli di lattato nel sangue sono stati valutati in 36 cavalli (43 casi) con colica. Una correlazione tra è stato mostrato un aumento dei livelli di lattato nel sangue e una percentuale di sopravvivenza decrescente. Un apprezzabile gap anionico è stato riscontrato in 7 casi su 10 analizzati in dettaglio ma in ogni caso l'intero gap non è stato contabilizzato dal solo lattato. anioni. La determinazione del lattato nel sangue è suggerita come ausilio prognostico piuttosto che come ausilio diagnostico per il medico equino e dovrebbe essere utilizzata per aumentare altri risultati clinici nel cavallo che mostra coliche.
Glucosio-6-fosfato deidrogenasi piastrinica umana. Purificazione totale, studi cinetici e relazione con l'enzima di altre cellule del sangue.Piastrina umana G-6- Il PD è stato altamente purificato, fino all'omogeneità, e sono state studiate le sue caratteristiche cinetiche, elettroforetiche e immunologiche. Il G-6-PD piastrinico differisce dagli enzimi eritrocitari o leucocitari per un'aumentata costante di Michaelis per G-6-P e una lenta attività al pH acidi. Mediante elettrofocalizzazione è stata trovata solo una banda attiva principale (banda a) della piastrina G-6-PD. L'incubazione a 37 gradi C in presenza di NADP+ e ditiotreitolo normalizza Km-G-6-P della piastrina G-6 -PD; l'incubazione con estratti di granulociti leucemici bolliti e ultrafiltrati ha portato ad un'anodizzazione delle forme attive del G-6-PD, una diminuzione dell'attività specifica molecolare e un ulteriore aumento di Km-G-6-P; queste ultime modificazioni sono le gli stessi di quelli subiti da G-6-PD incubati in estratti grezzi di granulociti normali o leucemici.
Gli effetti degli amminoacidi neuronali sulla secrezione di prolattina.Diversi amminoacidi neuroattivi sono stati iniettati nel terzo ventricolo di ratti maschi anestetizzati. Due o otto mumole di GABA hanno prodotto aumenti significativi delle concentrazioni plasmatiche di prolattina (PRL), indicando un aumento del rilascio di PRL dall'ipofisi. Due mumole di glicina erano anche efficaci nell'elevare i livelli di PRL. L'iniezione intraventricolare della dose più bassa di GABA (1,0 mumole) , glutammato (0,4 o 2,3 mumole), lisina (0,2 o 2,0 mumole) o 0,9% NaCl non hanno alterato significativamente i livelli di PRL Le concentrazioni plasmatiche di PRL non sono aumentate dopo l'iniezione di GABA o glicina direttamente nella ghiandola pituitaria anteriore. I risultati suggeriscono che GABA e glicina possono svolgere un ruolo nella regolazione neurale della secrezione di PRL.
Determinazione della D-3-idrossibutirrato deidrogenasi nelle isole pancreatiche di topo con una tecnica fotocinetica che utilizza la luciferasi batterica.Un saggio sensibile per la d-3idrossibutirrato deidrogenasi ( EC 1.1.1.30) è stato sviluppato per l'uso con piccole quantità di materiale ottenuto da isole di Langerhans microdissezionate da sezioni pancreatiche liofilizzate. Il NADH formato nella reazione enzimatica è stato determinato mediante analisi fotocinetica della luminescenza ottenuta con luciferasi batterica da Achromobacter fishcherii. In questo modo, è stata ottenuta una determinazione accurata con meno di 0,1 mug di peso secco di materiale insulare. Nei topi obesi iperglicemici, l'enzima insulare aveva un'attività di 4,7 mumoli/min e g di peso secco. Un'attività enzimatica ottimale è stata trovata a pH 8 per il enzima delle isole. L'attività enzimatica era simile nelle isole pancreatiche e negli acini, mentre un'attività considerevolmente più elevata è stata trovata nel muscolo cardiaco, nel fegato e nella corteccia renale. Le normali isole di topo hanno mostrato circa e qual attività enzimatica come le isole di topi iperglicemici obesi.
Distribuzione di fattori di rilascio, ammine biogene ed enzimi correlati nell'eminenza mediana bovina.L'eminenza mediana bovina è stata sezionata in otto diverse suddivisioni: rostrale , anteriore interno, anteriore esterno, medio esterno mediale, medio esterno laterale, medio interno mediale, medio interno laterale e caudale L'ormone di rilascio della tireotropina (TRH) è stato trovato nelle più alte concentrazioni nelle suddivisioni mediale esterno medio e laterale; ormone luteinizzante -ormone di rilascio (LHRH) era concentrato nelle suddivisioni medio esterno laterale e anteriore interno. Tra i vari neurotrasmettitori ed enzimi saggiati, solo la dopamina e la colina acetiltransferasi erano presenti in concentrazioni più elevate nelle stesse suddivisioni dell'eminenza mediana bovina risultata essere ricca di TRH e LHRH Le distribuzioni di noradrenalina, dopamina-beta-idrossilasi, serotonina, triptofano idrossilasi, feniletanolammina-N-metiltransferasi , la decarbossilasi dell'acido glutammico e l'istamina sembravano correlare scarsamente con le principali distribuzioni di TRH e LHRH. Questi risultati suggeriscono che a livello dell'eminenza mediana, la regolazione neuroendocrina centrale del rilascio di TRH e LHRH può comportare un'interazione solo con dopamina e acetilcolina.
Attività nucleare della 3alfa-idrossisteroide deidrogenasi (3alfaOHD) per il 5alfa-diidrotestosterone nella prostata di ratto.L'esame in vitro del 3alfa prostatico di ratto adulto maschio L'attività dell'idrossisteroide deidrogenasi (3alphaOHD) utilizzando il 5alfa-diidrotestosterone4 come substrato indica che livelli significativi di attività enzimatica sono associati ai nuclei purificati e alle frazioni del citosol Sia la frazione nucleare purificata che quella del citosol hanno mostrato livelli più elevati di attività 3alphaOHD con NADH rispetto NADPH. Le curve di attività del pH per le reazioni catalizzate da NADH e NADPH erano diverse sia per la frazione nucleare che per quella del citosol. I risultati suggeriscono la presenza di un numero di enzimi 3alphaOHD nella prostata di ratto.
[Betabloccanti come farmaci psicotropi].La gamma di indicazioni per le sostanze betabloccanti si è estesa a vari campi della patologia: sistema vascolare, endocrinologia. .. La scoperta di alcuni dei loro effetti collaterali dà buoni motivi per cercare di scoprire se dovrebbero avere un posto nella psicofarmacoterapia e se potrebbero soddisfare le sue attuali esigenze. I sintomi iniziali dell'obiettivo erano l'ansia - che, essendo polimorfa, può essere , a vari gradi, reattivo a un ambiente ovviamente stressante, ma che è anche implicato da distorsioni strutturali della personalità - e manifestazioni psicosomatiche. Se il loro luogo di azione era inizialmente pensato periferico, ora sembra che anche la loro azione sia centrale, genuinamente psicotropa, ansiolitico, e non sedativo, psicoanalettico e, allo stesso tempo, stimolante e aumento del livello di attenzione (abbiamo osservato in alcuni casi una riduzione del tempo di sonno)-timoanalettico, aumentando l'incitamento mento all'azione. D'altra parte, calmano certi stati di eccitazione causati dalla comparsa di ansie mal controllate. Questo studio contiene tre serie di esperimenti concepiti con una metodologia simile.
[Cambiamenti legati all'età nel contenuto e nelle caratteristiche dei glicosaminoglicani nell'aorta umana].La parete vascolare è ricca di glucosio-amiglicani (GAG), che formare la sostanza intercellulare di base e determinarne le molteplici funzioni. Utilizzando metodi analitici e cromatografici l'autore ha esaminato acido esauronico (HA), pentosi (P), gruppi solfato e vari derivati di GAG (acido ialuronico (HA), pentosi (P), solfato gruppi e vari derivati di GAG (acido ialuronico (HA), dermatan-solfato (DS), cheratansolfato (KS), condroitinsolfato (HS) e cheransolfato (HES) nell'aorta umana, ottenuti da persone di età compresa tra 10 e più di 70 anni anni di età. Sono state esaminate dieci aorte di ciascun gruppo. Gli studi hanno mostrato che nelle aorte delle persone adulte il contenuto di gruppi HA, P, HS, KS e solfato era notevolmente superiore a quello delle aorte, ottenute dai giovani C'era l'impressione che il fattore adulto influenzasse sostanzialmente il Le caratteristiche qualitative dei GAG--con l'avanzare dell'età si accorcia la lunghezza delle catene polisaccaridiche e aumenta il grado di solfatazione. L'accumulo di GAG acidi nell'aorta delle persone adulte ha alterato il metabolismo delle sostanze tra sangue e tessuto, che ha favorito l'infiltrazione dei vasi sanguigni con lipidi e proteine, specialmente quando c'era un aumento del sangue nel loro contenuto (iperlipemia, ipercolesterolemia, ecc. .
[Effetto dei bloccanti beta-adrenergici sull'attività bioelettrica della formazione reticolare mesenchefalica].Gli autori hanno esaminato le strutture beta-adrenergiche nel mesencefalico formazione (MSF) in vista di stabilire il loro ruolo sull'attività di MSF in vista di stabilire le in rol sull'attività di MSF stessa e il rapporto della stessa formazione con la corteccia cerebrale e il sistema linfatico. i bloccanti adrenergici dopo la loro applicazione locale in MSF potrebbero inibire la sua funzione. I dati dall'effetto sull'attività bioelettrica indotta indicano anche una diminuzione dell'attività funzionale di MSF. Gli autori hanno scoperto che le influenze inibitorie dei beta-bloccanti sono state abolite dal loro antagonista isoprenalite. Si deduce che ci sono strutture beta-adrenergiche, che agiscono eccitatori.
[Glicemia e dinamica ipossica nell'acidosi metabolica e alcalosi (dati sperimentali)].È stata esaminata la dinamica della concentrazione di glucosio e del gradiente arterovenoso del glucosio durante le diverse deviazioni metaboliche dell'equilibrio acido-base. L'acidosi metabolitica ha aumentato il livello di zucchero nel sangue. Una certa influenza su quest'ultimo ha avuto la gravità dell'acidosi e in una certa misura la sua forma patogenetica. La differenza di glucosio artero-venosa cambia da negativo a positivo con l'aumento dell'attività protonica Il tipo di struttura ipossica periferica, formatasi durante lo stato di acidosi influenza sia il gradiente di glucosio che le sue relazioni quantitative con gli indici acido-base e di ossigeno Il contenuto di zucchero nel sangue durante l'alcalosi metabolica non è stata modificata in modo significativo, si è verificato un aumento del gradiente artero-venoso e una correlazione inversa tra il livello di glucosio e la differenza di ossigeno artero-venoso con h l'aumento della concentrazione di bicarbonato.
[La nostra esperienza con il metodo di D\'Amour e Smith].Gli autori hanno effettuato studi su un gruppo di preparati analgesici (morfina, lido , tilidina, pentazocina e analgine) con il metodo di D Amour e Smith, utilizzando la stimolazione termica dolorosa. Gli esperimenti sono stati condotti su ratti bianchi - giovani e adulti di entrambi i sessi del ceppo Wistar. Sono state determinate le dosi letali medie e le dosi efficaci medie e gli indici terapeutici. I risultati sperimentali hanno mostrato che la tilidina era l'agente analgesico più forte con un indice aterapeutico di 67. L'indice della morfina era 63 ed era vicino a quello della tilidina, ma senza significatività statistica. I restanti indici analgesici erano con indici bassi: lyndiol-con 5, pentazocina - 12 e analgine - 2. Il metodo utilizzato, secondo i nostri dati, potrebbe essere applicato con successo su ratti di entrambi i sessi, a varie fasce di età ed entrambi i ceppi. Il metodo è conveniente per testare l'analgetico attività di preparati da due tipi fondamentali di agenti analgesici: narcotici e non narcotici.
L'ipertensivo difficile.Con l'ampia gamma di farmaci oggi disponibili dovrebbe essere possibile ottenere un controllo soddisfacente nella maggior parte dei pazienti ipertesi. Tuttavia, esistono diverse categorie di pazienti che possono presentare particolari problemi di gestione, come ad esempio i pazienti con malattie cerebro-vascolari e coronariche, o con insufficienza renale. Un gruppo particolarmente importante è quello che si presenta con ipertensione grave resistente, e questi pazienti possono costituire circa 5 al 10% della popolazione ipertesa. Vengono discusse considerazioni relative alla gestione dei pazienti che presentano tali problemi. I regimi farmacologici combinati che impiegano clonidina o beta-bloccanti con vasodilatatori periferici sembrano essere particolarmente utili.
Ritmi circadiani persistenti e inalterati di sei giovani uomini sani con un turno di lavoro notturno ogni 48 ore e un'atmosfera di CO2 al 2% durante un arco di 4 settimane.Sei giovani maschi apparentemente sani (20 +/- 0,5 anni di età) hanno vissuto in un laboratorio appositamente progettato per un periodo di 1 settimana in aria normale, seguite da 4 settimane in un'atmosfera di CO2 al 2% e successivamente 1 settimana di nuovo in aria normale. La temperatura della stanza era di 24 gradi C. +/- 1 gradi C. ; igrometria relativa 75% +/- 5%. Per quanto riguarda gli indizi e gli spunti temporali socio-ecologici, i soggetti non erano isolati. I soggetti\' sociali la sincronizzazione era alterata solo dall'orario di lavoro a turni (luce accesa, 07(00); luce spenta, 22(30) nei giorni normali). A giorni alterni ogni soggetto aveva un compito notturno di 3 ore, situato tra il 23( 00) e 07(00). Una volta alla settimana, per 48 ore (sabato e domenica) è stata documentata una serie di variabili fisiologiche ogni 4 ore per studiarne i cambiamenti circadiani: temperatura orale, picco di flusso espiratorio, grip s forza, pressione arteriosa, ritmo e pH urinario, volume ed escrezione di potassio. Per quanto riguarda i ritmi rilevabili (metodo cosenore) il risultato più sorprendente è che sia le acrofasi che le ampiezze del ritmo non mostrano cambiamenti statisticamente significativi quando si confrontano il lavoro notturno con il lavoro diurno e/o l'aria normale rispetto all'aria con il 2% di CO2. Sia 3 ore di lavoro notturno a giorni alterni che una quantità insolita di CO2 non alterano i parametri che caratterizzano i ritmi circadiani considerati. L'assenza di desincronizzazione durante il lavoro notturno potrebbe essere correlata: 1) alla velocità di rotazione nel lavoro a turni; 2) la breve durata del lavoro notturno; e 3) la giovinezza dei soggetti.
Il trapianto di midollo nell'anemia aplastica e nella leucemia.Il trapianto di midollo umano ha portato a osservazioni di fondamentale importanza nella comprensione sia dell'anemia aplastica che della leucemia acuta. Ad esempio , l'osservazione che il midollo trapiantato può crescere con successo nei pazienti con anemia aplastica indica che la malattia è dovuta a un difetto nelle cellule precursori del midollo e non nel microambiente del midollo Allo stesso modo, l'osservazione della leucemia ricorrente nelle cellule del donatore ha importanti implicazioni. , il trapianto di midollo è sufficientemente consolidato dal punto di vista terapeutico per essere considerato il trattamento di scelta per i pazienti con anemia aplastica grave e un'alternativa realistica per i pazienti con leucemia acuta ricorrente. Suggeriamo che i pazienti siano gestiti per quanto riguarda il trapianto di midollo secondo l'approccio generale delineato in Tabella 3. Il trapianto di midollo e la tipizzazione di istocompatibilità sono disponibili a n. crescenti numero di istituzioni in tutto il mondo. Sempre più pazienti con anemia aplastica grave o leucemia acuta ricorrente dovrebbero avere a disposizione il trapianto di midollo quando indicato come parte della gestione ottimale di queste malattie non più senza speranza.
Il pH intracellulare dei leucociti umani in risposta ai cambiamenti acido-base in vitro.1. I leucociti umani vitali sono stati isolati dal sangue venoso e sospesi in mezzi artificiali. Le misurazioni del pH intracellulare sono state effettuate con la tecnica del dimetiloxazolidinedione in condizioni che simulano disturbi acido-base "respiratori" o "metabolici". 2. Il pH intracellulare normale era 7-11 +/- 0-02 (media +/- - 2 SD) a una PCO2 extracellulare di 5-8 kPa e una concentrazione di bicarbonato di 25 mmol/l 3. L'acidosi "respiratoria" e "metabolica" ha causato pochi cambiamenti nel pHi sebbene aumenti di PCO2 abbiano portato a cadute del pHi rispetto alla riduzione della concentrazione esterna di bicarbonato. 4. L'alcalosi "respiratoria" e "metabolica" ha causato aumenti del pHi simili e relativamente maggiori rispetto alla risposta a un'acidosi esterna.
Secrezione dell'ormone della crescita nelle alterazioni acido-base a riposo e durante l'esercizio.1. Sette maschi sani sono stati studiati durante l'esercizio con cicloergometro al 33%, 66% e 90% di VO2 max in tre occasioni quando NH4C1, NaHCO3 o CaCO3 (come sostanza di controllo) sono stati somministrati in capsule di gelatina in doppio cieco e in ordine randomizzato Concentrazione di ormone della crescita plasmatico (HGH), acido lattico e ioni idrogeno ( [H+]) sono stati misurati a intervalli frequenti. 2. Il cloruro di ammonio ha prodotto il sangue più alto [H+] e NaHCO3 il più basso. Queste differenze sono state mantenute durante l'esercizio e durante il recupero. Le concentrazioni plasmatiche di acido lattico erano simili a riposo. Al 66%, 90% VO2 max e recupero dell'acido lattico erano più alti con NaHCO3 e più bassi con NH4C1. 3. L'esercizio ha stimolato la secrezione di HGH in tutti gli studi e l'aumento è stato proporzionale all'intensità dell'esercizio. max Al 66% VO2 max. , l'HGH plasmatico era significativamente elevato a concentrazioni simili in tutti gli studi e, al 90% di VO2 max. , l'HGH era più alto con NaHCO3. 4. Un'infusione di sodio L(+)-lattato producendo concentrazioni di lattato plasmatico di 3-5 mmol/l non ha influenzato la secrezione di HGH. 5. L'esercizio è uno stimolo fisiologico alla secrezione di HGH e il meccanismo è indipendente dalle concentrazioni di [H+] e di lattato nel sangue.
Radiology in Mendelson\'s sindrome.Sono presentati quattro casi di sindrome di Mendelson\'s (aspirazione polmonare acida). Tutti mostrano un alveolare acuto diffuso pattern di riempimento. Questo aspetto non è affatto specifico. Tuttavia, in assenza di altre cause per questo pattern e di evidenza di insufficienza ventricolare sinistra, il radiologo può avvisare il medico della corretta diagnosi. Il riconoscimento precoce di questa sindrome si tradurrà in un trattamento tempestivo che differisce significativamente da quella di altre cause di questo aspetto radiografico. Viene discussa la diagnosi differenziale.
Acebultolol: base per la previsione dell'effetto sulla tolleranza all'esercizio.Dodici maschi non selezionati affetti da insufficienza coronarica documentata e angina moderatamente grave sottoposti a tapis roulant multistadio graduato test da sforzo in 3 giorni separati, 3,5 ore dopo una singola dose di 0,200 o 400 mg di acebulololo, un beta bloccante cardioselettivo. Le misure di controllo includevano l'assegnazione casuale di 2 pazienti a ciascuna delle 6 sequenze bilanciate di somministrazione, condizioni standardizzate in doppio cieco, e analisi della varianza per il disegno a quadrato latino con misurazioni ripetute su ciascun soggetto. Le prestazioni sono state valutate misurando il tempo trascorso fino al dolore anginoso, la frequenza cardiaca massima, il prodotto massimo della frequenza cardiaca e della pressione sanguigna e il consumo massimo di ossigeno. I valori medi per tutti i criteri erano significativamente consumato da 400 mg di acebutololo. Sette su dodici pazienti sono stati classificati come responder (cioè, la durata dell'esercizio è aumentata del 100% o più). La risposta dopo acebutololo w come correlato con le prestazioni sul placebo in base alla durata dell'esercizio, alla frequenza cardiaca di picco e al prodotto di picco della frequenza cardiaca e della pressione sanguigna. Si conclude che: (1) i criteri di prestazione sono utili predittori della risposta al beta-blocco e (2) l'acebutololo è un potente agente antianginoso se giudicato da un test da sforzo oggettivo sul tapis roulant.
Durata degli effetti cardiaci di timololo e propranololo.La durata degli effetti cardiaci di singole dosi endovenose dei beta-antagonisti, timololo e propranololo, è stato confrontato in 6 soggetti maschi sani. Timololo e propranololo sono stati somministrati in dosi di 1 mg e 10 mg, rispettivamente, e in tempi specificati dopo la loro somministrazione, il beta-blocco è stato valutato dalla riduzione della tachicardia massima indotta dall'esercizio e dall'inibizione degli effetti cronotropi e inotropi dell'isoproterenolo. Gli effetti inotropi sono stati misurati dai cambiamenti nel periodo di pre-eiezione della sistole ventricolare sinistra ottenuta dagli intervalli di tempo sistolico. Non c'era alcuna differenza statisticamente significativa nei tempi di timololo e propranololo del beta-blocco. Il cambiamento nella tachicardia da sforzo è stato al massimo 5 minuti dopo l'infusione di beta-antagonista, ma si è dissipato rapidamente in modo che nessun cambiamento statisticamente significativo sia stato osservato 9 ore dopo. i fetti dell'isoproterenolo sono stati quasi completamente antagonizzati per 1 ora e mezza dopo l'infusione di beta-antagonisti e 9 ore dopo è stato possibile dimostrare un beta-blocco significativo. Non c'era alcuna differenza nel decorso temporale degli effetti cronotropi e inotropi negativi di entrambi i beta-antagonisti.
Efficacia ipnotica di lorazepam e flurazepam.In uno studio crossover in doppio cieco che ha coinvolto 15 soggetti insonni, l'efficacia ipnotica di lorazepam, 2 e 4 mg , è stato confrontato con flurazepam, 15 e 30 mg e placebo. Sono state utilizzate cinque misure soggettive: insorgenza, durata e profondità del sonno, numero di volte in cui si è risvegliato e soddisfazione con l'ipnotico. Il lorazepam in dosi da 2 e 4 mg è stato paragonabile nell'efficacia ipnotica al flurazepam, 30 mg, secondo la maggior parte dei parametri di misurazione. Gli effetti collaterali erano minori, sebbene relativamente numerosi alle dosi di 4 mg.
Meccanismo di iperventilazione post dialisi in pazienti con insufficienza renale cronica.Diverse ipotesi sono state avanzate per spiegare l'ipocapnia post-dialisi. Tre sono state testate in questo studio : compromissione dell'ossigenazione dei tessuti da alcalosi indotta dalla dialisi (D) (effetto Bohr), sindrome da squilibrio D e perdita di anidride carbonica (CO2) nel fluido D. In 17 pazienti il pre-DPCO2 era significativamente correlato con la concentrazione plasmatica di bicarbonato ( HCO3) e nessuna riduzione sproporzionata della PCO2 era distinguibile. In 10 pazienti che utilizzavano una concentrazione di acetato da bagno di 38 mEq/1 PCO2 era invariata dopo D (35,4 contro 35,9 mm Hg prima di D), ed era bassa rispetto a HCO3 che aumentava da 21,2 a 28,0 mEq/1. Dopo una dialisi con una concentrazione di acetato di 25 mEq/1 HCO3 è rimasta costante (20,4 contro 21,1 mEq/1 pre-D), mentre la PCO2 è scesa da 35,3 a 30,8 mm Hg (P inferiore a 0,001). era di nuovo basso rispetto a HCO3 Rimozione di CO2 da D f luid è stato escluso come causa di bassa PCO2 nel sangue: l'aggiunta di CO2 gassosa al bagno non ha avuto influenza sui gas del sangue arterioso. Poiché l'ipocapnia post-D non è stata prevenuta quando l'HCO3 è stato mantenuto costante, si è concluso che l'alcalosi post-D non può essere la ragione principale dell'iperventilazione post-D e che altri fattori correlati al processo di D sono responsabili.
Un metodo semplice per la crioconservazione dei linfociti. Ritenzione di specifiche funzioni immunitarie da parte delle cellule congelate.Un metodo semplice, rapido ed economico per Quando iniettati in appropriati recipienti normali, i linfociti di ratto e di pecora conservati congelati hanno causato rispettivamente reazioni GVH e NLT. I linfociti di pecora sono rimasti vitali dopo diversi mesi di conservazione e hanno funzionato in modo soddisfacente come cellule bersaglio marcate con 51Cr nei test per gli anticorpi citotossici.
Due alfa-glucosidasi in colture di cellule del liquido amniotico e loro differenziazione nella diagnosi prenatale della malattia di Pompe.Un saggio fluorometrico sensibile che utilizza 4- metilumbelliferil-alfa-D-glucopiranoside è stato sviluppato per la determinazione dell'alfa-glucosidasi. La maggiore sensibilità è stata ottenuta aumentando la solubilità del substrato con un solvente organico miscibile in acqua. Con questo sistema, è stato scoperto che le cellule di liquido amniotico in coltura hanno due principali forme di alfa-glucosidasi con pH ottimale acido in qualche modo sovrapposto: una con pH ottimale a 4,5 è carente nella malattia di Pompe (glicogenosi di tipo II), mentre una con pH ottimale a 6,0 non è interessata in questa malattia. 4 di alfa-glucosidasi è stata ottenuta sfruttando la maggiore labilità termica dell'enzima a pH 6. La forma a pH 6 dell'enzima è stata rilevabile anche in estratti appena preparati di fibroblasti coltivati. La procedura è diretta e semplice ed è stato applicato alla diagnosi prenatale in due gravidanze a rischio di malattia di Pompe.
La stima dei fosfolipidi nella bile.Il fosforo totale e lipidico è stato misurato nell'aspirato duodenale di 24 soggetti a digiuno dopo un'iniezione di colecistochinina. Il lipide i valori di fosforo erano inferiori al fosforo totale, una differenza più pronunciata nei campioni diluiti. La conservazione a -20 gradi C per 4 settimane ha comportato una perdita di oltre il 50% di fosforo lipidico. Tali alterazioni nel fosforo lipidico hanno influenzato il calcolo del fosfolipide biliare e da qui l'indice di saturazione del colesterolo nella bile che ne causa un erroneamente elevato. Si conclude che l'analisi dei campioni di bile dovrebbe essere eseguita su campioni appena ottenuti e includere una fase preliminare per l'estrazione dei lipidi.
Depurazione parziale e proprietà del fegato ovino Echinococcus granulosus protoscolices fosfolgucosio isomerasi.Echinococcus granulosus protoscolex è l'attuale stadio larvale del cestode che causa echinococcosi sia nell'uomo e animali. Nella presente relazione, alcune proprietà della fosfoglucosio isomerasi del fegato ovino E. granulosus protoscolices sono state studiate e confrontate con quelle del fluido della cisti idatidea e degli enzimi epatici ovini sani. L'enzima protoscolices preparato in modo simile al il fluido della cisti idatidea e gli enzimi epatici ovini hanno mostrato le seguenti proprietà: (1) pH ottimale di 8,2 (2) valore KM di 0,23 mM, (3) l'enzima è stato inibito in presenza di alte concentrazioni di alfa-D-glucosio 6- fosfato, (4) non è stata osservata alcuna inibizione rilevabile dell'enzima in presenza di ione fosfato fino a 4,1 mM, (5) l'enzima protoscolices era meno termostabile rispetto al fluido della cisti idatidea e all'ovino l iver enzimi, (6) l'enzima protoscolices aveva un valore Ki più basso (0,7 mM) rispetto al fluido della cisti idatidea (1,1 mM) o agli enzimi epatici ovini (4,6 mM) quando l'acido 6-fosfogluconico è stato utilizzato come inibitore competitivo.
Proprietà fisico-chimiche e immunologiche dell'alfa-glucosidasi acida da vari tessuti umani in relazione alla glicogenosi di tipo II (malattia di Pompeo).La sono state studiate le proprietà fisico-chimiche e immunologiche dell'alfa-glucosidasi acida da vari tessuti umani. La stabilità al calore dell'alfa-glucosidasi acida da cuore, fegato e muscolo scheletrico è identica, ma per i reni si ottengono risultati diversi. Si trovano modelli di isoelettrofocalizzazione identici per cuore, fegato e muscolo scheletrico. Inoltre, viene studiato l'effetto dell'antisiero contro l'alfa-glucosidasi acida del fegato umano sull'attività dell'alfa-glucosidasi acida da vari tessuti. I risultati sono discussi in relazione alla glicogenosi di tipo II (malattia di Pompeo) ).
Purificazione e proprietà delle ribonucleasi termostabili acide umane e diagnosi di fibrosi pancreatica infantile.Le ribonucleasi termostabili acide sono state isolate dal pancreas umano, contenuto duodenale , fegato, milza, siero e urina e purificato 15--1000 volte. Sono stati studiati il pH ottimale, i requisiti ionici e alcuni requisiti di specificità di questi enzimi. Gli enzimi isolati hanno formato due gruppi distinti: (a) le ribonucleasi del pancreas, il contenuto duodenale e la frazione A del siero e delle urine presentano un pH ottimale di 8,5, sono inibite da An2+ e Cu2+ e idrolizzano in tempi relativamente brevi il substrato sintetico uridina 3\'-(alfa-naftilfosfato); (b) la le ribonucleasi del fegato e della milza, e delle frazioni B del siero e delle urine, con un pH ottimale di 7, sono meno sensibili ad An2+ e Cu2+, e mostrano un'attività trascurabile rispetto all'uridina 3\'-(alfa-naftilfosfato). il livello sierico di tipo pancreatico l'attività della ribonucleasi, con l'uso di uridina 3\'-(alfa-naftilfosfato) o RNA come substrati, sembra essere un valido strumento diagnostico per la fibrosi pancreatica nei bambini.
Radioiodinazione di lipoproteine umane a bassa densità: quattro metodi a confronto.È stato effettuato un confronto tra quattro tecniche di etichettatura utilizzate per radioiodare lipoproteine umane a bassa densità (LDL). (1) La iodurazione della cloramina T a pH 7,4 era efficiente del 20-25% e forniva un prodotto immunologicamente indistinguibile dalle LDL native. Tuttavia, circa il 30% della radioattività incorporata è stata trovata nei lipidi LDL e il decadimento metabolico di il complesso marcato nei ratti non obbediva alla cinetica di primo ordine. La marcatura radioattiva a pH 10 ha ridotto l'assorbimento di 125I nei lipidi al 10%, ma ha anche ridotto l'incorporazione complessiva di iodio radioattivo di un fattore di 7. (2) Marcatura della lattoperossidasi e (3) coniugazione con N-succinimidil-3-(4-idrossifenil)propionato iodato erano altamente efficienti (100%), ma l'incorporazione della radioattività nella frazione lipidica era inaccettabilmente alta (circa 30%). (4) L'efficienza della marcatura del monocloruro di iodio era altamente riproducibile e il prodotto era immunologicamente indistinguibile dalle LDL native. L'incorporazione della radioattività nella frazione lipidica era inferiore al 4% quando il rapporto I/proteina del prodotto era mantenuto uguale o inferiore a 1: 1. Il decadimento delle LDL radiomarcate nei ratti era monoesponenziale.
Creatinchinasi nel siero: 1. Determinazione delle condizioni ottimali di reazione.Per stabilire le condizioni ottimali per la misurazione dell'attività della creatinchinasi (EC 2.7.3.2) con la creatina fosfato nella reazione di equilibrio della creatina, abbiamo riesaminato tutti i fattori cinetici rilevanti per un dosaggio enzimatico ottimale e standardizzato a 30 e 25 gradi C. Abbiamo determinato il pH ottimale in vari tamponi, considerando l'effetto del tipo e della concentrazione del tampone , così come l'influenza di vari anioni tampone sull'attività. È stata mostrata la relazione tra attività e concentrazione del substrato e sono state valutate le apparenti costanti di Michaelis della creatina chinasi per la creatina fosfato e l'ADP. Abbiamo testato l'effetto sulla misurazione della creatina chinasi della concentrazione di substrati (glucosio e NADP+) nelle reazioni ausiliarie e indicatori, in particolare l'influenza degli enzimi ausiliari (esochinasi) e indicatori (glucosio-6-fosfato deidrogenasi) aggiunti su th e fase di latenza, a diverse temperature. La concentrazione di NADP+ si è rivelata il fattore limitante la durata della velocità di reazione costante. Abbiamo studiato l'inibizione della creatina chinasi e dell'adenilato chinasi da parte dell'AMP e abbiamo stabilito una comoda concentrazione di AMP. Per la riattivazione della creatina chinasi, è stata introdotta la N-acetil cisteina come composto sulfidrilico. Infine, abbiamo esaminato la relazione tra attività e temperatura.
Miglioramento della specificità della determinazione dell'albumina sierica e della stima dei "reagenti di fase acuta" mediante l'uso della reazione del verde di bromcresolo.La reazione dei campioni di siero con bromcresolo verde procede in due fasi. L'albumina è responsabile della reazione più rapida (meno di 1 min); la reazione più lenta (30 minuti) è una misura del "reagente/i di fase acuta" nel siero. Il siero è semplicemente miscelato con il reagente verde bromcresolo e l'assorbanza viene misurata due volte, immediatamente ea 60 min. Le concentrazioni di albumina, determinate dall'assorbanza a 0 min, si correlano bene con quelle determinate dall'immunoelettroforesi "razzo" di Laurell; r = 0,95 senza certezza deviazione dall'unità per la pendenza e con una differenza trascurabile a concentrazione zero. La reazione lenta è stata espressa come deltaA% = 100 (deltaAs/deltaAv) dove deltaAs e delta Av sono le variazioni di assorbanza tra 60 e 0 min per il campione e rispettivamente un siero di controllo commerciale lue per deltaA% si correla bene con la percentuale della frazione alfa2 determinata mediante elettroforesi su acetato di cellulosa, nonché con orosomucoide e ceruloplasmina, che sono tutti reagenti di fase acuta. Non è stato ancora stabilito se queste proteine o altri reagenti di fase acuta causino effettivamente la reazione lenta.
Approcci teorici alla stima dell'attività della renina plasmatica: una revisione e alcune osservazioni originali.Prestazioni di saggi accurati, riproducibili e interpretabili per l'attività della renina plasmatica e altri componenti del sistema renina/angiotensina in ambito clinico richiede una chiara comprensione delle varie reazioni nella cascata renina/angiotensina e della natura delle loro interazioni L'attività della renina plasmatica, il tasso di generazione di angiotensina dal plasma incubato in vitro, è l'indice clinico di funzione più comunemente usato nel sistema renina/angiotensina L'attività della renina è misurata mediante dosaggio radioimmunologico dell'angiotensina I generata in vitro in condizioni attentamente controllate Il valore ottenuto per l'attività della renina plasmatica dipende dal pH e dalla durata dell'incubazione e dal metodo utilizzato per proteggere l'angiotensina I. Si consiglia l'incubazione a pH neutro in plasma tamponato per tre ore in presenza di etilendiamminote traacetato + 8-idrossichinolone + dimercaprolo o etilendiamminotetraacetato + fenilmetilsulfonilfluoruro. L'aggiunta di una preparazione standard di renina umana alla fase di incubazione del plasma dell'analisi dell'attività della renina ha il duplice scopo di consentire la misurazione dell'attività della renina e fornire uno standard interno per il confronto delle procedure di analisi. Le molte variabili tra i metodi di dosaggio della renina possono essere annullate facendo riferimento a uno standard interno comune sulla renina.
Perossidasi nella saliva umana: frazionamento isoelettrico microanalitico e proprietà in persone normali e in casi con ceroide-lipofuscinosi neuronale.La saliva umana contiene un'elevata attività perossidasica che può essere stimato spettrofotometricamente con il donatore di idrogeno p-fenilendiammina e il substrato perossido di idrogeno da 20 mul di materiale. Il pH ottimale dell'enzima con tampone citrato-fosfato è 5,5. Dopo il frazionamento isoelettrico microanalitico 3 principali componenti dell'isoenzima a pI 8,6, 6,5 e 4.3, e sono rilevabili alcune sottofrazioni isoenzimatiche a pI 9.5, 7.3 e 3.8 In 3 pazienti con la forma giovanile di ceroide-lipofuscinosi neuronale (tipo Spielmeyer-Vogt), in cui era stata segnalata da altri autori una carenza di perossidasi leucocitaria , sia l'attività totale della perossidasi salivare che l'attività dei singoli isoenzimi sono risultati entro i limiti normali Questi risultati non sono coerenti con una perossidasi generalizzata def icienza in questa malattia.
Attività della gamma-glutamil transpeptidasi nel siero di pazienti in trattamento con anticonvulsivanti o terapia anticoagulante.1. Effetti della terapia anticoagulante cronica nei cardiopatici e della terapia anticonvulsivante negli epilettici è stata studiata l'attività della gamma-glutamil transpeptidasi nel siero 2. L'enzima era elevato nel 22% di 18 pazienti trattati con anticoagulanti. In questi pazienti anche il tempo di protrombina era anormalmente alto 3. L'84% di 65 epilettici mostrava livelli elevati di gamma-glutamil attività transpeptidasica, il 67% delle quali non era associata ad elevate attività di fosfatasi alcalina o aspartato aminotransferasi In questi ultimi casi, il coinvolgimento del fegato non era evidente 4. Possibili relazioni di induzione enzimatica mediata da anticonvulsivanti o tossicità epatica a gamma-glutamil transpeptidasi elevata viene discussa l'attività nel siero negli epilettici.
Cinetica del recupero emopoietico in topi trattati con endotossine.La cinetica delle unità formanti colonie di milza di topo è stata studiata dopo l'iniezione intraperitoneale di 1 tazza/sangue peso dell'endotossina batterica S. typhosa. Quando questi topi sono stati utilizzati come donatori non irradiati e irradiati subletalmente, è stato possibile studiare l'effetto dell'iniezione di endotossina sulle cellule. L'uso dei topi trattati come destinatari irradiati di cellule normali ha fornito informazioni sull'ospite Nei topi trattati non irradiati, la conta delle cellule nucleate totali e la conta delle CFU sono state alterate e 2 giorni dopo una grande frazione delle CFU è stata trovata nella fase di sintesi del DNA (S). Ciò significava che l'iniezione di endotossina generava fattori che influenzavano la cinetica delle CFU e innescando le CFU a riposo nel ciclo proliferativo. Se poi i topi sono stati sottoposti a irradiazione soprataletale e utilizzati come riceventi di cellule normali del midollo osseo, più CFU seminate nella milza rispetto al normale ricevente S; ma il calo e il tasso di crescita del CFU non sono stati modificati. Quindi i fattori generati dall'endotossina erano stati eliminati in 2 giorni. Un'irradiazione subletale totale del corpo di 400 raggi X rad 2 giorni dopo l'iniezione di endotossina ha ridotto il tuffo post-irradiazione nella curva di recupero della CFU, indicando che sebbene i fattori che influenzano la cinetica cellulare fossero stati eliminati, la CFU ciclica si comportava come un popolazione. Durante la prima settimana, il tasso di crescita delle CFU è rimasto lo stesso dei topi irradiati di controllo. Il tasso di crescita della CFU della milza dei topi trattati con endotossine è rallentato durante la seconda settimana e la loro capacità di autoreplicazione era bassa. Le fluttuazioni nella frazione di sintesi del DNA della milza CFU hanno suggerito una variabilità nel rapporto tra la lunghezza della fase S e il tempo di generazione cellulare.
Dipendenza dall'età del numero delle cellule staminali nei tessuti emopoietici dei ratti.Il numero e la concentrazione delle cellule staminali emopoietiche nel midollo osseo femorale e è stata studiata la milza di ratti Wistar di età diverse. Le cellule staminali sono state saggiate con la tecnica della colonia di milza in riceventi di ratti irradiati. La capacità della milza del ricevente di raccogliere il tessuto trapiantato come colonia macroscopica è risultata essere dipendente dall'età del ricevente. Cambiamenti con la senescenza sono stati osservati anche nella concentrazione e nella dimensione del compartimento delle cellule staminali sia nel midollo che nella milza. Nessuna differenza è stata dimostrata nella semina di unità formanti colonie trapiantate nella milza di riceventi di 1 e 4 mesi di età. Viene discussa una differenza di ceppo ratto-topo nell'effetto della senescenza sulle cellule staminali emopoietiche.
Legame dell'1-(2-cloroetil)-3-cicloesil-1-nitrosourea alle proteine nucleari delle cellule L1210.Il legame di 1-( La 2-cloroetil)-3-(cicloesil)-1-nitrosourea (CCNU) alle proteine del nucleo della cellula L1210 è stata studiata utilizzando sia il [cicloesil-14C]CCNU che il [cloroetil-14C]CCNU. -14C] porzione di CCNU è risultata esistere in una forma stabile in soluzione acida ma labile e dializzabile in soluzione alcalina. Una piccola quantità della porzione cicloesile è stata legata agli istoni in una forma stabile, non dializzabile. Il rapporto farmaco/proteina per l'istone H1 era da circa 0,01 a 0,02 mole/mole. Non è stato osservato alcun legame del gruppo cicloesile con proteine acide o del gruppo cloroetilico con istoni o proteine acide. Pertanto, l'interazione di CCNU con le proteine del nucleo cellulare può essere definito in termini di modificazione degli istoni da parte della frazione cicloesile.
Titolazioni del pH della risonanza magnetica nucleare 31P del mio-inositolo esafosfato.Con l'uso della spettroscopia 31P nmr, i valori pKa separati di ciascuno dei sono stati determinati sei gruppi monoesteri fosforici del mio-inositolo esafosfato L'intervallo di concentrazioni di ioni idrogeno coperto si estendeva da quello richiesto per i sali di fosfonio a quello per l'anione dodecil completo e le determinazioni sono state effettuate in presenza di cationi sodio e tetrabutilammonio Il pKa per ciascun gruppo fosfato nella transizione dalle forme acide libere di ciascun gruppo alla forma monoanionica di ciascun gruppo è stato determinato essere: 1.1, C-2; 1.5, C-1 e C-3; 2.1, C- 4 e C-6; e 1,7, C-5. Nella transizione da mono- a di-anione, i valori di pKa erano: 6,85, C-2; 7,60, C-5; 5,70 e 12,0, C-1 e C- 3 e 10.0, C-4 e C-6. Questi dati e l'aspetto del multipletto 31P esafosfato nmr sono discussi in termini di conformazioni del mio-inositolo esafosfato.
Coltura in ambiente controllato di espianti di midollo osseo da mieloma umano.Campioni di biopsia di midollo osseo da pazienti con mieloma sono stati coltivati in 1 o 2 film sottile sistemi di coltura, un sistema di stato stazionario in ambiente controllato o una configurazione a tubo oscillante del sistema, per periodi fino a 42 giorni. In questi sistemi sono state ben mantenute sia le caratteristiche funzionali che morfologiche delle cellule di mieloma. cellule che includevano dal 5% a quasi il 100% di plasmacellule. L'esame istologico dei campioni in coltura ha rivelato un'infiltrazione del midollo con cellule di mieloma. Le proteine del mieloma sono state rilasciate a una velocità costante per tutto il periodo di coltura dopo i primi 4 giorni. Riassorbimento osseo l'attività è stata dimostrata nei terreni di coltura in 7 dei 9 terreni di coltura del mieloma ed è stata ben mantenuta, in particolare durante la 1a settimana di coltura. Questa attività è stata associata a gravi lesioni osteolitiche nel paziente donatore e marcata infiltrazione del campione in coltura da parte di cellule mielomatose. Viene discusso il potenziale utilizzo di questi sistemi di coltura di organi per l'ulteriore identificazione definitiva del fattore responsabile della distruzione ossea nel mieloma.
Agenti carcinoembrionali e fosfoesoso isomerasi, gammaglutamil transpeptidasi e lattato deidorgenasi in pazienti con e senza metastasi epatiche.Aggene carcinoembrionario plasmatico (CEA) ed enzima sierico i livelli di fosfoesoso isomerasi (PHI), gamma-glutamil transpeptidasi (psi-GTP) e lattato deidrogenasi (LDH) sono stati misurati in 147 pazienti con neoplasie. I livelli erano più alti nei pazienti (in particolare con tumori gastrointestinali, mammari e polmonari) rispetto ai normali o in pazienti con cancro in remissione clinica. Gli aumenti di CEA e di tutti e tre gli enzimi nel sangue erano più frequenti nei pazienti con metastasi epatiche. Gli aumenti di CEA erano correlati direttamente con i livelli di PHI. Il 78% dei pazienti con cancro gastrointestinale metastatico poteva essere identificato da CEA (maggiore di 5 ng/ml) da solo, così come il 38% con cancro al seno e l'85% con cancro ai polmoni, ma solo il 17% degli altri tumori potrebbe essere identificato dal solo CEA. Il CEA o uno o più enzimi era ele vata nel 64% dei pazienti con carcinoma mammario metastatico, nel 92% del carcinoma polmonare e nel 41% di altri tumori, ma la misurazione degli enzimi non ha aumentato l'identificazione di G. I. cancro rispetto a quello raggiunto dalla sola CEA. Questi risultati suggeriscono che i livelli circolanti di CEA, PHI, psi-GTP e LDH possono riflettere un contributo diretto del tessuto maligno e/o malfunzionamento del fegato secondario alla sostituzione del fegato.
Lavoro prematuro.La prematurità è di gran lunga la causa più comune di morbilità e mortalità neonatale. La gestione del parto prematuro è empirica perché si sa poco della meccanismo del travaglio. I farmaci rilassanti uterini efficaci hanno un ruolo importante, anche se minore. La fototerapia ha ridotto le complicanze dell'iperbilirubinemia neonatale e l'effetto benefico della terapia corticosteroidea antepartum nel ridurre al minimo il rischio di sindrome da distress respiratorio è ora convincente. La terapia antibiotica profilattica nei pazienti prematuri è ora convincente. la rottura delle membrane non altera la mortalità perinatale, sebbene la morbilità materna postpartum sia ridotta. L'introduzione di unità di terapia intensiva neonatale ha migliorato il tasso di sopravvivenza dei neonati prematuri. Il giudizio clinico sano rimane il cardine nella gestione del travaglio prematuro.
Metastasi epatiche rilevate dal follow-up di pazienti operati per cancro del colon-retto.Centoventisei pazienti precedentemente operati per cancro del colon-retto sono stati follow-up una volta all'anno con test di screening sierici. Sono state registrate le attività della fosfatasi alcalina (AP) e della gammaglutamiltranspeptidasi (GT).58 pazienti hanno avuto test positivi. La maggior parte dei pazienti con metastasi epatiche (20/21) era possibile circondare con questi semplici test sierici. 38 dei 58 "pazienti positivi allo screening" sono stati ulteriormente studiati con angiografia celiaca e/o scintigrafia epatica e le metastasi epatiche erano molto sospette in 29 di questi pazienti. 18 di loro sono stati laparotomizzati e il sospetto è stato verificato in 8.7 di questi pazienti potrebbero essere sottoposti a intervento chirurgico contro i loro tumori epatici e 2 di loro sono poi sopravvissuti per più di 2 anni. Gli autori suggeriscono un sistema di follow-up con un intervallo più breve tra gli esami.
Strati superficiali della parete cellulare su Spirillum "Ordal" e loro riassemblaggio in vitro.L'involucro cellulare del ceppo Sporillum sp. "Ordal " (probabilmente una varietà di S. anulus) ha dimostrato più strati superficiali della parete che erano diversi nelle loro matrici macromolecolari. Le tecniche di colorazione negativa e di congelamento hanno rivelato uno strato esagonale esterno e uno strato tetragonale interno. Tuttavia, sia sezioni sottili che le fessure congelate del muro hanno mostrato che ciascuna di queste strutture regolari poggiava su uno strato di supporto e che c'era un delicato strato amorfo sovrastante l'array esagonale esterno. L'integrazione rotante, la defrazione ottica e la ricostruzione dell'immagine sono state utilizzate per chiarire le misurazioni di ciascun array e per verificare la validità di un modello schematico del sistema esagonale esterno. L'integrità di questi strati richiedeva cationi adatti (Ca2+ appariva essenziale) e pH (pH minore o uguale a 4,6 dissociato più superf strati di ghiaccio). Queste osservazioni hanno aiutato nello sviluppo di una tecnica di sostituzione cationica a basso pH, in cui il Na+ ha sostituito il Ca2+ essenziale, per l'estrazione degli strati dalla superficie cellulare. La dialisi per rimuovere il Na+ e il ripristino del Ca2+ hanno avviato il riassemblaggio in vitro dei componenti dello strato superficiale fino alla formazione di prodotti di assemblaggio regolarmente strutturati.
Effetto di varie condizioni colturali sulla composizione in acidi grassi e lipidi di Choanephora cucurbitarum.La composizione in acidi grassi delle frazioni lipidiche totali e polari di Choanephora cucurbitarum cresciuto in diverse condizioni colturali sono state analizzate mediante cromatografia su strato sottile e gas-liquido, osservando che temperatura, età, pH e luce influenzavano il grado di insaturazione, dovuto principalmente alle variazioni della concentrazione di acido gamma-linolenico. Le condizioni utilizzate in questo studio non hanno alterato il profilo qualitativo degli acidi grassi normalmente presenti nell'organismo, né hanno stimolato la produzione di ulteriori acidi grassi a catena lunga (C20-C26) oltre all'acido gamma-linolenico (C18:3) come riportato in precedenza utilizzando terreni di crescita contenenti acido glutammico. Il modello di acidi grassi delle frazioni lipidiche sebbene lo stesso qualitativamente, differiva quantitativamente. Le frazioni lipidiche polari, fosfatidilcolina, fosfatidil etanolammina, e il difosfatidil glicerolo ha mostrato un'apprezzabile variazione nel contenuto di acido gamma-linolenico in diverse condizioni culturali. Il grado di insaturazione delle varie frazioni lipidiche diminuiva con l'aumentare della temperatura, dell'intensità della luce e del pH, ma all'interno di ciascun trattamento è stato osservato lo stesso modello di grado di insaturazione decrescente con l'aumentare dell'età. Il significato di queste osservazioni è discusso.
Beta-glucanasi nel lievito Cryptococcus albidus var. aerius. Produzione e separazione di beta-glucanasi in colture asincrone.le beta-glucanasi sono state rilevate in estratti cell-free del lievito Cryptococcus albidus var. aerius quando coltivato su glucosio come unica fonte di carbonio La produzione di beta-glucanasi è stata seguita in cellule in fase logaritmica e cellule in fase stazionaria; la produzione massima di beta-(1 conduce a 3) e beta-(1 conduce a 6) glucanasi avviene rispettivamente in cellule in fase logaritmica e in fase stazionaria I risultati mostrano che ci sono marcate differenze nei profili di eluizione su Sephadex G-50 di frazioni contenenti beta-glucanasi da cellule cresciute per 12, 24, 48, 72 e 96 ore. Viene discussa la possibilità o di cambiamenti di sostituzione nelle frazioni contenenti attività beta-glucanasica o di una diversa sintesi di ciascuna beta-glucanasi durante la crescita del lievito. I risultati suggeriscono che tutte le frazioni contenenti beta-glucanasi idroli ze entrambi i legami beta-(1 porta a 3) e beta-(1 porta a 6). Viene anche mostrata la prova a sostegno della conclusione che una forma a basso peso molecolare di beta-glucanasi ha un peso molecolare di 2100 +/- 100.
Caratterizzazione di un ceppo batterico azotofissatore dalle radici di Digitaria sanguinalis.Tassi di fissazione dell'azoto da 3 a 10 g di N2 fissati per ettaro al giorno sono stati associati agli apparati radicali di Digitaria sanguinalis Un ceppo batterico aerobico mobile Gram-negativo in grado di fissare l'N2 è stato isolato da un campione di radice lavato di una di queste piante. La crescita ottimale e la fissazione di N2 si sono verificate a un pH di circa 6,5 , una temperatura di 30-37 gradi C e una pO2 di circa 0,01 atm. Aumento dei tassi di fissazione di N2 è risultato quando questo ceppo è stato coltivato in colture miste con batteri aerobici o facoltativi. Osservazioni della morfologia cellulare e culturale e risultati di biochimica e studi fisiologici indicano che l'isolato può essere correlato alle Azotobacteraceae ma che non è identico a nessuno dei membri di questa famiglia. L'importanza della fissazione dell'N2 da parte di questo isolato in natura è sconosciuta.
Captazione ed efflusso di acido succinico da parte del micelio non indotto di Claviceps purpurea.Claviceps purpurea PRL 1980 è cresciuto su acido succinico parzialmente dissociato (pH 4) ma non su acido succinico completamente dissociato (pH 7,2). Il mieclio sospeso in una soluzione 42 mM di acido succinico parzialmente ionizzato (pH 4; 60,1% non ionizzato, 39% monoanione e 0,9% dianione, sale K+) per un periodo di 25 minuti accumulato più succinico carbonio acido rispetto al micelio sospeso in soluzione altamente ionizzata (pH 6,8; 0,01% non ionizzato, 4,8% monoanione e 95% dianione). Il maggiore accumulo da soluzione parzialmente ionizzata non è attribuibile unicamente al metabolismo dell'acido succinico né alla minore concentrazione esterna di ione potassio. La velocità di assorbimento da parte di sodio azide e micelio trattato con iodoacetato era proporzionale alla concentrazione esterna almeno fino a 200 mumol/ml. Non erano necessari ioni potassio o sodio esterni per l'assorbimento da parte del micelio inibito o non inibito e ione sodio esterno e gl ucose non ha permesso la concentrazione di acido succinico. Le concentrazioni interne di carbonio dell'acido succinico espresso come acido succinico nell'acqua cellulare erano circa le stesse delle concentrazioni esterne. L'assorbimento non è stato influenzato in modo apprezzabile dall'entità della ionizzazione dell'acido succinico esterno, ma l'accumulo è stato notevolmente influenzato. Un grafico del carbonio dell'acido succinico accumulato rispetto al pH esterno ha prodotto una curva bimodale con i due massimi corrispondenti alle concentrazioni massime di acido succinico non ionizzato e monoanionico. La curva bimodale risulta probabilmente dalla sovrapposizione di due curve separate; la forma non ionizzata si accumula in modo efficiente a causa di un'interazione con la cellula e la forma monoanionica si accumula in modo efficiente a causa di un'altra interazione. L'assorbimento dalla soluzione concentrata avviene per diffusione e l'efflusso è rapido ma non completo. L'efflusso non è ritardato dalla presenza di fosfato nella soluzione esterna.
Biosintesi del cloramfenicolo in Streptomyces sp. 3022a. Identificazione della p-amino-L-fenilalanina come prodotto dell'azione dell'arilamina sintetasi sull'acido chorismico."I prodotti ottenuti dall'azione dell'arilamina sintetasi sull'acido [G-14C] corismico sono stati frazionati mediante filtrazione su gel e cromatografia su colonna a scambio ionico per fornire un componente radioattivo parzialmente purificato con una funzione arilammina. Dal suo spettro di assorbimento ultravioletto e cromatografia su strato sottile comportamento il prodotto è stato considerato p-aminofenilalanina e l'identificazione è stata confermata dalla co-cristallizzazione con un campione autentico. La deaminazione specifica del prodotto con L-aminoacido ossidasi indicava che si trattava dell'epimero L. Questi risultati rafforzano le prove precedenti che l'arilamina sintetasi è in un punto di diramazione nella via dell'acido shikimico, deviando specificamente gli intermedi alla sintesi del cloramfenicolo.
Produzione, purificazione e caratterizzazione della termomicolasi, la serina proteasi extracellulare del fungo termofilo Malbranchea pulchella var. sulfurea.Il fungo termofilo Malbranchea pulchella produce un singola proteasi extracellulare, alcalina, serina quando coltivata a 45 gradi C, su caseina al 2% come unica fonte di carbonio. La produzione di proteasi associata alla crescita nelle colture sommerse è stata inibita dall'aggiunta di glucosio, amminoacidi o estratto di lievito. Un semplice quattro Viene descritta la purificazione in un unico passaggio che produce proteasi omogenea con una resa del 78%. La proteasi ha un punto isoelettrico di 6,0, un pH ottimale di 8,5 ed è completamente inibita dagli inibitori della serina proteasi. Uno studio di specificità con piccoli substrati di esteri sintetici ha indicato che la proteasi legami preferenzialmente idrolizzati situati sul lato carbossilico di residui di amminoacidi aromatici o apolari che non sono beta-ramificati, carichi positivamente o della configurazione D. Peptidasi s gli substrati e altri come N-acetil-L-tirosina-etil estere non sono stati idrolizzati. La proteasi era stabile in un ampio intervallo di pH (6,5-9,5 a 30 gradi C, 20 h) ed era particolarmente termostabile (t1/2 = 110 min a 73 gradi C, pH 7,4) in presenza di Ca2+ (10 mm). Le macromolecole e il Ca2+ forniscono anche protezione contro la significativa autolisi che si verifica a concentrazioni di proteasi pura superiori a 0,01 mg/mo, nonché contro la denaturazione superficiale che è potenziata dalla presenza di un agente antischiuma siliconico. Quindi la stabilità della proteasi nelle colture sommerse è razionalizzata.
Sviluppo dell'attività di captazione degli aminoacidi in Neurospora.Durante la germinazione e la crescita dei conidi di Neurospora, i sistemi di permeasi di aminoacidi I (neutri) e II ( generale) aumento dell'attività specifica Il sistema III (di base) diminuisce l'attività specifica con l'inizio della germinazione Il sistema I mostra due picchi di attività durante la fase logaritmica di crescita Un picco si verifica a 6 h, l'altro a 12 h di crescita. Entrambi i picchi sono aboliti nel mutante mtr. Entrambi i picchi hanno un Km per la fenilalanina di 40 muM. I picchi di attività del sistema I sembrano essere correlati ai cambiamenti morfologici.
Edema polmonare e perdita di acido ascorbico.La perdita di acido ascorbico dal polmone e l'edema polmonare sono stati prodotti nei topi mediante iniezione endovenosa di adrenalina o noradrenalina ( 5 mumol/kg). Mentre la surrenectomia eseguita prima della somministrazione di noradrenalina riduceva il grado di edema polmonare, una precedente dose di esametonio accentuava questo effetto. Dato da solo, l'esametonio provocava sia la perdita di acido ascorbico che l'edema polmonare. I risultati mostrano che sebbene le catecolamine endogene possano potenziano l'edema polmonare prodotto dall'adrenalina o dalla noradrenalina, non svolgono alcun ruolo specifico nella perdita di acido ascorbico. L'evidenza suggerisce che i livelli di acido ascorbico polmonare sono diminuiti in seguito allo sviluppo dell'edema polmonare, indipendentemente da come è stato causato.
Impedenza mioplasmatica della fibra muscolare del cirripede.L'impedenza mioplasmatica è stata misurata su una singola fibra muscolare del cirripede (Balanus nubilus) posta in una cavità cilindrica per limitare il volume e prevenire l'idratazione del mioplasma. A entrambe le estremità della cavità, il mioplasma era a diretto contatto con una soluzione elettrolitica. Quando è stato raggiunto l'equilibrio con il mezzo esterno, l'impedenza mioplasmatica è stata misurata a 10 gradi C con un ponte di impedenza a 1000 Hz. I risultati hanno indicato che l'impedenza mioplasmatica della fibra muscolare è principalmente resistiva. Trattando il mioplasma come una sospensione di piccole particelle conduttrici, abbiamo dedotto la conducibilità specifica dei filamenti contrattili kf e la loro frazione di volume rho (kf \ = 2,78 X 10(-3) omega-1cm-1, e rho = 0,48). La tecnica sperimentale permette una stima della conduttività mioplasmatica specifica in vivo (6,27 X 10(-3) omega-1cm-1). Infine , una diminuzione del pH dell'ex soluzione interna da 10.1 a 4.0 ha abbassato la conducibilità mioplasmatica del 16%. Questa può essere considerata una prova indiretta che la conduttività dei filamenti contrattili è associata ai controioni proteici, poiché Hinke et al. (1973. Ann. N. Y. Acad. Sci. 204, 274-296. ) hanno riportato prove che un abbassamento del pH riduce il numero di controioni.
Effetto della metiamide sulla secrezione acida della mucosa fundica del gattino isolato.La mucosa fundica del gattino isolato dimostra bassi tassi di secrezione acida spontanea in vitro quando viene bagnata in Krebs -Henseleit soluzione, e risponde costantemente a istamina, pentagastrina e acetilcolina posti nel bagno. Alti tassi di secrezione spontanea o secrezione in risposta a istamina e pentagastrina sono stati significativamente inibiti dall'aggiunta di metiamide (5 X 10(-3) M); ma la mucosa stimolata dall'aggiunta costante di acetilcolina cloruro (10(-4) M) non è stata inibita dalla metiamide alla stessa concentrazione.
Studi sulla formazione da parte di preparati di cervello di ratto di CDP-digliceride da CTP e acidi fosfatidici di varia composizione di acidi grassi.L'enzima, CTP:phosphatidate citidylyltransferase (EC2.7.7.41) che catalizza la formazione di CDP-digliceride da CTP e acido fosfatidico è stata studiata in preparazioni di cervello di ratto e altri tessuti. Il miglioramento, come giudicato dalle attività tissutali più elevate ottenute, nel metodo di dosaggio per questo enzima è stato ottenuto attraverso l'uso di acidi fosfatidici sonicati in soluzione tampone-detergente saturata con etere e contenente albumina di siero bovino e l'uso di brevi tempi di incubazione che essenzialmente fornivano una misura dei tassi iniziali. L'enzima dei microsomi del cervello di ratto ha prodotto con acido 1,2-dioleolfosfatidico come substrato un pH ottimale di 6,8 con tampone maleato e concentrazioni ottimali di 60 mM per MG2+, 6 mm per CTP e 250 mug per 0,8 ml per acido fosfatidico L'attività enzimatica è stata principalmente localizzata nel frac di 90.000 X g zione (microsomiale) con attività piccola ma significativa nella frazione 12.000 X g. Il confronto delle attività (nanomoli CTP incorporati per milligrammo di proteina al minuto) tra i tessuti ha mostrato il seguente ordine: cervello, 1,87; fegato, 1.32; polmone, 1.19; intestino tenue, 1,00; rene, 0,69; cuore, 0,41; diaframma, 0,07; muscolo scheletrico, 0,02. L'esame dell'effetto della variazione della composizione in acidi grassi negli acidi fosfatidici aggiunti esogenamente ha dato il seguente ordine (attività tra parentesi); 1-stearoil-2-oleoil- (5,58), 1-oleoil-2-stearoil- (5,37), 1,2-dioleoil- (4,49) 1-palmitoil-2-oleoil- (3,85), 1-stearoil-2 -arachidonoil-(3.31), 1-arachidonoil-2-stearoil-(3.16), 1,2-diarachidonoil-(0,72), 1,2-dicaproil-(0,67), 1,2-dipalmitoil-(0,67) e 1 ,2-distearoil-(0,18). I singoli acidi bis- e lisofosfatidici testati erano inattivi come substrati. A parte una possibile preferenza per uno o più acidi grassi insaturi, l'enzima transferasi non ha mostrato selettività rispetto alla distribuzione degli acidi grassi degli acidi fosfatidici.
Studi fisici, chimici ed enzimatici sulla principale sucrasi delle api mellifere (Apis mellifera).Una sucrasi delle api mellifere (Apis mellifera) che precipitato tra saturazioni di solfato di ammonio del 50 e 70% (5 mg di proteine per millilitro) e che costituisce la maggior parte delle sucrasi delle api è stato purificato fino all'omogeneità come dimostrato da diversi criteri. Una gran parte della sucrasi è stata trovata nel testa mentre la maggior parte del resto era nell'addome (una piccola quantità era nel torace). L'enzima è precipitato tra gli stessi valori di saturazione del solfato di ammonio come ha fatto il sucrasi nel miele e il sucrasi del miele ha mostrato una cinetica molto simile a quella di questo enzima. L'enzima è risultato essere un'alfa-glucosidasi relativamente aspecifica e ha dimostrato di avere attività transglucosidasica. La produzione di glucosio dal saccarosio era rettilinea quando tracciata con il metodo Hofstee a basse concentrazioni di substrato ma diminuiva ad alte concentrazioni di saccarosio. la produzione di fruttosio era rettilinea in tutto l'intervallo di concentrazione utilizzato. La produzione sia di glucosio che di rho-nitrofenolo quando il rho nitrofenil alfa-D-glucoside era il substrato era lineare secondo il diagramma di Hofstee. Si è scoperto che questi effetti sono dovuti alla transglucolisi e viene proposto un meccanismo d'azione. Le analisi degli amminoacidi e degli amminozuccheri indicavano che la sucrasi era una glicoproteina. Il peso molecolare è risultato essere compreso tra 51000 e 82000 con tre diversi metodi e si è ottenuto un valore di so20. w di 4.0 S. Non c'erano prove per la struttura della subunità. I test dell'enzima in varie condizioni di denaturazione non hanno rivelato stabilità insolite. La sucrasi si legava molto strettamente a una colonna idrofoba. L'acido iodoacetico diminuiva l'attività della sucrasi, ma era necessaria una grande concentrazione per provocare una perdita di attività del 50%. Gli agenti riducenti hanno causato alcuni cali di attività. Il dietil pirocarbonato ha attivato l'enzima.
Proteasi acide da specie di Mucor. III. Interazione con concanavalina A e concanavalina A Sepharose.È stata seguita la reazione della proteasi di Mucor miehei con concanavalina A mediante un test turbidimetrico nell'intervallo di pH 5-8. A pH 4.0, non si è sviluppata alcuna torbidità ma è stato possibile dimostrare il legame dell'enzima alla concanavalina A. Sono state isolate due frazioni di peso molecolare apparente 65000 e 52000, il peso molecolare 65000 specie che apparentemente rappresenta un protomero della concanavalina A (24.000) legato all'enzima. Un'analisi dello spettro di dicroismo circolare di questo complesso ha suggerito che il legame del protomero determini un cambiamento conformazionale nell'enzima che è associato ad un aumento del 30% dell'attività proteolitica. A pH 6.0, l'enzima era fortemente legato alle colonne di concanavalina A Sepharose ma poteva essere rimosso includendo alfa-metil D-glucoside e NaC1 nel tampone di eluizione. Una certa degradazione della colonna si è verificata a temperatura ambiente e ma non era rilevabile a 4 gradi C dove la rapida eluizione dell'enzima ha portato a una resa superiore al 90% di proteine altamente attive. La Mucor miehei proteasi e la Mucorrenina ossidate con periodato non hanno reagito con la concanavalina A e non sono state legate alla colonna di affinità.
Studi relativi agli antibiotici antitumorali. Parte V. Reazioni della mitomicina C con il DNA esaminato mediante saggio di fluorescenza dell'etidio.L'azione citotossica dell'antibiotico mitomicina C si verifica principalmente a livello del DNA Utilizzando saggi di fluorescenza altamente sensibili che dipendono dall'aumento della fluorescenza dell'etidio solo quando intercala regioni duplex del DNA, sono stati studiati tre aspetti dell'azione della mitomicina C sul DNA: (a) eventi di reticolazione , (b) alchilazione senza necessariamente reticolazione e (c) rottura del filamento. La reticolazione del DNA è determinata dal ritorno della fluorescenza dopo una fase di denaturazione termica a pH alcalino\'. In queste condizioni il DNA denaturato non dà fluorescenza. La reticolazione è stata confermata indipendentemente dalla digestione con S1-endonucleasi (EC 3.1.4. -) A concentrazioni relativamente elevate di mitomicina è stato dimostrato che la soppressione dell'aumento della fluorescenza dell'etidio non è dovuta alla depurinazione ma piuttosto all'alchil zione, a seguito di perdite in potenziali siti di intercalazione. Esiste una relazione lineare tra il rapporto di legame per la mitomicina e la perdita di fluorescenza. La diminuzione proporzionale della fluorescenza con il pH suggerisce fortemente che l'alchilazione è dovuta alla frazione aziridina dell'antibiotico in queste condizioni. Un parallelo aumento della velocità e dell'efficienza complessiva della reticolazione covalente del DNA con pH più basso suggerisce che l'evento di reticolazione, a cui è stata collegata l'azione citotossica primaria, si verifica in sequenza con alchilazione da aziridina e quindi da carbammato. È stato dimostrato che la mitomicina C, ridotta chimicamente, induce la scissione a singolo filamento, nonché la monoaklilazione e la reticolazione covalente nel DNA circolare covalentemente chiuso del PM2. L'inibizione di questa scissione da parte della superossido dismutasi (EC 1.15.1.1) e della catalasi (EC 1.11.1.6) e degli scavenger dei radicali liberi suggerisce che la degradazione del DNA osservata per accompagnare l'azione citotossica della mitomicina C è in gran parte dovuta al radicale libero O2. In contrasto con il comportamento dell'antibiotico streptonigrina, la mitomicina C non inattiva gli enzimi protettivi superossido dismutasi o catalasi. Infine, la mitomicina C è in grado di reticolare il DNA in assenza di riduzione a pH 4. Ciò è coerente con i meccanismi di reticolazione postulati.
Metabolismo del testosterone nell'epifisi di ratto maschio.Utilizzo di substrato radioattivo, cromatografia su strato sottile e metodi di ricristallizzazione, nonché centrifugazione differenziale, gel filtrazione ed elettroforesi, Il metabolismo del testosterone è stato studiato nella piastra di crescita epifisaria di ratto maschio. Il 5alfa-androstano 3alfa-17beta-diolo è stato trovato essere un metabolita principale in vitro, sono state identificate anche quantità minori di androstenedione e androstanedione e una quantità molto piccola di 5alfa-diidrotestosterone. è stato recuperato nelle frazioni subcellulari epifisarie 30 minuti dopo la somministrazione in vivo di 5alfa-diidrotestosterone triziato; entro 2 ore la radioattività era scesa essenzialmente al livello di fondo in tutte le frazioni tranne nel citosol. Non è stato possibile identificare una proteina legante il testosterone all'interno del citosol epifisario.
Risoluzione, specificità e attività transfosforilasi delle fosfatasi alcaline calcificanti della cartilagine.L'attività di rilascio di fosfato dalla cartilagine della scapola di vitello è stata risolta mediante cromatografia DEAE-cellulosa in due attività fosfatasi distinte. L'attività eluita prima dalla colonna (fosfatasi I) era attiva verso una varietà di esteri fosfato e diversi oligofosfati lineari compreso il pirofosfato di sodio, mentre la seconda attività fosfatasi (fosfatasi II) era attiva solo verso esteri fosfato semplici. Ho agito verso gli oligofosfati in modo graduale idrolizzando un fosfato alla volta. Entrambe le fosfatasi sono sialoproteine e possono trasferire il fosfato da qualsiasi loro substrato in molecole accettore di fosfato diverse dall'acqua come il glicerolo. Con diversi criteri, si può concludere che il due fosfatasi sono diverse entità enzimatiche.
Tirosina idrossilasi e dopamina-beta-idrossilasi: distribuzione in aree discrete del sistema limbico del ratto.La tirosina idrossilasi e la dopamina-beta-idrossilasi sono state misurata in 34 aree e nuclei discreti del sistema limbico del ratto. Entrambi gli enzimi hanno mostrato una distribuzione non uniforme in questo sistema. Il rapporto tra attività tirosina idrossilasi e attività dopamina-beta-idrossilasi ha mostrato una correlazione significativa se confrontato con il rapporto tra dopamina e norepinefrina concentrazioni per le aree studiate. I risultati suggeriscono fortemente che i terminali dopaminergici sono presenti in aree discrete della corteccia limbica, e diversi nuclei settali e amigdaloidi, e consentono la precisa localizzazione delle aree dopaminergiche e noradrenergiche nel sistema limbico.
Gammaglutamil transpeptidasi urinaria, un indicatore di danno ischemico renale e rigetto dell'omotrapianto.La gammaglutamil transpeptidasi è un enzima situato principalmente nel bordo a spazzola del tubuli contorti prossimali del rene. La sua localizzazione unica nelle cellule renali più facilmente danneggiate dall'ischemia e la sua facilità di dosaggio forniscono il razionale per il suo utilizzo nella misurazione del danno ischemico renale. Utilizzando un modello sperimentale animale standard, gamma-GT urinaria canina è stato dimostrato che l'attività è aumentata fino a 70 volte dopo 90 minuti di ischemia renale unilaterale ed è stata significativamente aumentata dopo soli 5 minuti di ischemia. La gamma-GT urinaria è stata utilizzata come misura del danno ischemico associato al trapianto renale nell'uomo e 20 consecutivi i pazienti sottoposti a trapianto di rene sono stati studiati mediante stime giornaliere di gamma-GT urinaria nelle 24 ore ed è stata ottenuta un'eccellente correlazione tra l'attività enzimatica aumentata e la diagnosi clinica di tr rigetto dell'impianto.
Verso una terapia razionale con inibitori delle monoaminossidasi.Si delinea un approccio razionale all'uso degli inibitori delle monoaminossidasi (IMAO). I pazienti idonei al trattamento non possono essere classificati adeguatamente utilizzando etichette diagnostiche convenzionali. Includono quelli con sintomi primari di ipocondria, agorafobia e fobie sociali, irritabilità, ansia somatica e anergia; quelli con umore depresso primario, senso di colpa, idee di riferimento e disturbi della personalità raramente rispondono. C'è una grande variazione nell'intervallo tra la prima somministrazione di questi farmaci e la risposta clinica, e questo può spiegare le incongruenze negli studi pubblicati. Il tipo di farmaco e la sua dose possono influenzare il tasso di risposta, così come i fattori biochimici, incluso lo stato dell'acetilatore e della monoamino ossidasi. Per ottenere il massimo beneficio, un ciclo di terapia con IMAO dovrebbe durare diversi mesi.