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Determinazione cromatografica liquido-solido della 6-demetilgriseofulvina nelle urine.Metodo cromatografico liquido-solido specifico e quantitativo per la determinazione della 6-demetilgriseofulvina in viene riportata l'urina umana. Il metodo consiste nell'estrazione in un solvente organico, aggiunta di standard interno e analisi mediante cromatografia liquido-solido utilizzando un rilevatore UV. La griseofulvina, se presente, può essere determinata contemporaneamente. La sensibilità del metodo è di 6 mug /ml di urina. La 6-demetilgrisefulvina totale viene determinata dopo l'idrolisi del coniugato glucuronide con la soluzione dell'enzima glucuronidasi-solfatasi. Il metodo è particolarmente adatto per l'analisi di un gran numero di campioni.
Stabilità di alcuni enzimi piridossalfosfato dipendenti in ratti carenti di vitamina B-6.Gli effetti dell'abbassamento della concentrazione di piridossalfosfato (PLP) nel fegato di Sono stati esaminati il deficit di vitamina B-6 sulla stabilità di diversi enzimi epatici di ratto: tre enzimi PLP-dipendenti (serina deidratasi, ornitina-delta-aminotransferasi e tirosina aminotransferasi) e due enzimi non PLP-dipendenti (glucosio-6-fosfato deidrogenasi e fosfoenolpiruvato carbossichinasi) sono stati indotti in ratti con carenza di vitamina B-6 e ratti di controllo alimentandoli con diete ad alto contenuto proteico o iniettandoli con glucagone o desametasone. Il declino di ciascuna attività è stato seguito dopo la sospensione dell'induttore. L'attività della serina deidratasi è diminuita più rapidamente nel fegato carente di vitamina B-6 rispetto al fegato di controllo; tuttavia, le attività dell'ornitina aminotransferasi e della tirosina aminotransferasi erano ugualmente stabili nel fegato carente e di controllo. forma oloenzima sia nei ratti di controllo che in quelli carenti, mentre la tirosina aminotransferasi era prevalentemente in forma apoenzimatica in entrambi i gruppi. La proporzione di serina deidratasi nell'apoenzima era meno stabile dell'oloenzima. I cambiamenti di attività della glucosio-6-fosfato deidrogenasi e della fosfoenolpiruvato carbossichinasi nei ratti di controllo e con carenza di vitamina B-6 erano simili. I risultati suggeriscono che le differenze nella stabilità degli enzimi PLP-dipendenti nei ratti carenti di vitamina B-6 dipendono dalle differenze nelle proporzioni di questi enzimi esistenti come olo e apoenzima.
L'incarico multiplo: un'alternativa efficace per le esperienze di laboratorio.Lo scopo dello studio è stato quello di testare l'efficacia sia del Tradizionale che del Multiplo Approcci di assegnazione alle esperienze di laboratorio degli studenti di infermieristica. I soggetti erano 22 studenti iscritti al primo trimestre di un Corso di Laurea Magistrale in Infermieristica e inseriti sia nell'incarico multiplo che in quello tradizionale. I risultati hanno mostrato che gli studenti nell'esperienza tra pari sono superiori nelle prestazioni complessive sui test di conoscenza infermieristica, utilizzo dei concetti e autostima. Si è concluso che l'approccio dell'assegnazione multipla alle esperienze di laboratorio è un metodo praticabile e utile per la formazione degli studenti infermieri.
Programmi estivi sequenziali in infermieristica.Nel 1970 la Texas Woman\'s University, College of Nursing istituì programmi sequenziali estivi in infermieristica in base ai quali uno studente poteva studiare per un master frequentando l'Università per tre estati. Ogni anno dal 1970 al 1973 è stato aggiunto un diverso focus clinico. infermieristica materno-infantile. L'assistenza infermieristica di comunità è ancora in corso. La tabella II è una tabulazione del numero e della percentuale di studenti che sono entrati, hanno rinunciato, sono incompleti o si sono laureati. Facoltà e studenti ritengono che il programma abbia successo. Immatricolazione per la prima estate di una sequenza di tre estati a partire dall'estate del 1974 c'erano venticinque studenti in infermieristica medico-chirurgica e quindici studenti in infermieristica psichiatrica-mentale.
Alcune proprietà della piruvato carbossilasi di Pseudomonas fluorescens.La piruvato carbossilasi di Pseudonomas fluorescens è stata purificata 160 volte da cellule cresciute su glucosio a 20 gradi C. L'attività di questo enzima purificato non è stata influenzata dall'acetil-coenzima A o dall'L-aspartato, ma è stata fortemente inibita dall'ADP, che era competitivo nei confronti dell'ATP. determinato, ovvero 0-08 e 0-21 mM, rispettivamente dall'intervallo di concentrazione inferiore e superiore. Il Km apparente per HCO3 a pH 6-9, in presenza dello ione manganese ATP (MnATP2-), è stato di 3- 1 mM. La reazione enzimatica aveva un valore di pH ottimale di 7-1 o 9-0 a seconda dell'uso di MnATP2- o MgATP2-, rispettivamente, come substrato. Il Mg2+ libero era un attivatore a valori di pH inferiori a 9-0. L'enzima è stato fortemente attivato da cationi monovalenti; NH4+ e K+ erano i migliori attivatori, con valori di Ka apparenti di 0-7 e 1- 6 mm, rispettivamente. Enzimi parzialmente purificati da cellule cresciute su glucosio a 1 o 20 gradi C avevano le stesse proprietà, inclusa la stabilità termica. In entrambi i casi il 50% dell'attività enzimatica è stato perso dopo pre-incubazione per 10 minuti a 46°C. Il peso molecolare è stato stimato in circa 300000 dalton mediante filtrazione su gel su Sephadex G-200. Le proprietà regolatorie e il peso molecolare sono quindi simili a quelli determinati per le piruvato carbossilasi di Pseudomonas citronellolis e Azotobacter vinelandii.
Trasporto di cationi in Escherichia coli. VIII. Mutanti per il trasporto di potassio.L'analisi dei mutanti per il trasporto di K indica l'esistenza di quattro sistemi separati di captazione del K in Escherichia coli K-12. Un sistema ad alta affinità chiamato Kdp ha un Km di 2 muM e Vmax a 37 gradi C di 150 mumol/g min. Questo sistema è represso dalla crescita in alte concentrazioni di K. Due sistemi costitutivi, TrkA e TrkD, hanno Km\' di 1,5 e 0,5 mM e Vmax\' di 550 e 40 rispettivamente a 37 e 30 gradi C. I mutanti privi di tutti e tre questi sistemi saturabili assorbono K lentamente mediante un processo, chiamato TrkF, la cui velocità di trasporto è linearmente dipendente dalla concentrazione di K fino a 105 mM. Nel complesso, ciascuno di questi sistemi sembra funzionare come un percorso indipendente per l'assorbimento di K poiché la cinetica dell'assorbimento quando ne sono presenti due è la somma di ciascuno che opera da solo. Questo non è vero per ceppi aventi entrambi i sistemi TrkD e Kdp, dove la presenza di quest'ultimo determina l'assorbimento di K che satura ad una concentrazione di K ben al di sotto di 0,1 mM. Questo risultato indica una certa interazione tra questi sistemi in modo che l'assorbimento abbia ora la caratteristica di affinità del sistema Kdp. Tutti i sistemi di trasporto sono in grado di estrudere Na durante l'assorbimento di K. Le misurazioni del Na cellulare suggeriscono che le cellule in crescita di E. coli hanno concentrazioni di Na molto basse, considerevolmente inferiori a quelle indicate da studi precedenti.
Proprietà cinetiche e farmacologiche del canale del sodio del muscolo scheletrico di rana.I canali del Na del muscolo scheletrico di rana sono studiati sotto tensione di clamp e le loro proprietà confrontate con quelli del nervo mielinizzato di rana. Un modello matematico standard viene adattato alle correnti di sodio misurate nel nervo e nel muscolo per ottenere una descrizione quantitativa della cinetica di gating. A 5 gradi C la cinetica nel nervo di rana e nel muscolo scheletrico è simile tranne che l'attivazione procede cinque volte più veloce nei nervi Il blocco dei canali del Na da parte della sassitossina viene misurato nei nervi e nei muscoli Le costanti di dissociazione apparenti per il complesso inibitorio sono di circa 1 nM e non differiscono significativamente nei nervi e nei muscoli Blocco dei canali del Na da parte di protoni esterni nel muscolo risulta avere un pKalpha apparente di 5,33 e una dipendenza dal voltaggio corrispondente all'azione del 27% della caduta del potenziale di membrana. Entrambi i valori sono come quelli per il nervo. Spostamento del picco di sodio perm La curva del potenziale di capacità-membrana con variazioni del pH esterno e del Ca++ risulta essere la stessa nei nervi e nei muscoli. Si conclude che i canali del Na di nervi e muscoli sono quasi gli stessi.
Lisozima di rana. I. La sua identificazione, presenza come isoenzimi e distribuzione quantitativa nei tessuti della rana leopardo, Rana pipiens.Nel corso di esaminando l'eziologia dell'adenocarcinoma renale Lucké della rana, Rana pipiens, si è riscontrato che gli organi dell'adulto normale contengono enzimi batteriolitici, questi enzimi soddisfano tutti i sei criteri per l'identificazione dei lisozimi e almeno otto forme sono separabili mediante gel di poliacrilammide elettroforesi. La loro distribuzione qualitativa e quantitativa era organo-specifica. Tutti e otto gli isoenzimi sono stati trovati nel rene normale, mentre il fegato e la milza contenevano sette forme; pelle, sei; uovo ovarico, cinque e siero, due. In saggi quantitativi utilizzando una diffusione radiale test, la milza aveva la maggiore concentrazione di lisozima, seguita in ordine decrescente da rene, fegato, pelle e ovaio. Il siero conteneva quantità molto basse. In termini di attività enzimatica per animale, l'ovaio era l'organo più alto. Come un numero così elevato di isoenzimi lisozimici non è stato riportato in nessun altro organismo, le loro origini e funzioni sono considerate nel contesto della loro presenza in un ectotermo.
Precursori ematopoietici dei timociti. I. Saggio e cinetica della comparsa della progenie.È stato sviluppato un saggio quantitativo per il precursore ematopoietico dei timociti. Utilizzando questo test è stata studiata la cinetica di comparsa della progenie di midollo osseo trasfuso e cellule della milza nel timo di topi irradiati (760 R). Le cellule precursori sono da sette a otto volte più comuni nel midollo osseo che nella milza e sono assenti nella linfa periferica nodi. Diminuiscono di numero con l'età degli animali. Quando le cellule ematopoietiche vengono iniettate subito dopo l'irradiazione letale, solo un piccolo numero di cellule effettivamente entra nella ghiandola. La loro progenie non è rilevabile nel timo per 8-12 giorni. Il tempo della loro rilevazione dipende sia dalla dimensione della popolazione residua di timociti endogeni sia dal numero di cellule progenitrici iniettate. Sono state presentate prove che escludono il danno timico come base per il ritardo nella comparsa di cellule di tipo donatore s e indica che né la produzione di un segnale "homing" nell'animale irradiato né lo sviluppo di cellule precursori sono fattori limitanti nel tasso di ripopolamento timico. Questi studi indicano che è necessario solo un numero estremamente piccolo (meno di 100) di protimociti per ripopolare il timo di un topo irradiato. Questo numero ristretto di progenitori deve produrre l'intero repertorio della risposta immunologica delle cellule T osservata nelle prime settimane dopo il ripopolamento.
Ulteriori osservazioni sul potenziamento dell'effetto antibatterico della metenamina da parte dell'acido acetoidrossamico.L'uso della metenamina nel trattamento delle infezioni del tratto urinario dovute a Proteus specie è limitata dall'alcalinità delle urine L'acido acetoidrossamico, un inibitore dell'ureasi, mantiene l'acidità nonostante la crescita di Proteus nelle urine Concentrazioni facilmente ottenibili di acido acetoidrossamico in sistemi in vitro che hanno simulato la dinamica del tratto urinario hanno potenziato l'effetto antibatterico della metenamina contro le specie Proteus L'uso combinato di un inibitore dell'ureasi e metenamina può essere efficace nel trattamento dell'infezione urinaria causata da questi organismi.
Effetto della stimolazione e del blocco beta adrenergici sulla reattività cutanea all'istamina.È stato precedentemente dimostrato che la ionoforesi di agenti beta adrenergici altera le dimensioni di test cutanei di ipersensibilità immediata. Non era chiaro se questa alterazione fosse dovuta ad un effetto sui mastociti dermici (inibizione del rilascio di istamina) o sul sistema vascolare cutaneo (inibizione della permeabilità capillare). Per questo motivo isoproterenolo, propranololo, difenidramina come positivi controllo e la soluzione salina come controllo negativo sono stati iontoforati sull'avambraccio di 10 soggetti adulti atopici e 10 non atopici. Per bypassare il rilascio di istamina dai mastociti i pazienti sono stati poi stimolati direttamente con l'istamina mediante la tecnica "prick". dei pomfi risultanti è stata notata. I dati ottenuti hanno permesso le seguenti conclusioni: (1) Il gruppo atopico ha risposto all'istamina con dimensioni del pomfo maggiori rispetto al gruppo non atopico. (2) Iontoforo L'esis della difenidramina ha effettivamente ridotto l'entità del pomfo dell'istamina in entrambi i gruppi. (3) L'isoproterenolo ha ridotto la dimensione del pomfo in entrambi i gruppi. (4) Il propranololo ha aumentato le dimensioni dei pomfi solo nel gruppo non atopico. (5) Il successo della modulazione del pomfo e del flare indotti dall'istamina ha indicato che questi farmaci, indipendentemente dal loro effetto sui mastociti dermici, esercitano un effetto misurabile sull'organo bersaglio (vascolarizzazione).
Adesione del sierotipo e Streptococcus mutans e l'effetto inibitorio dell'antisiero di Lancefield gruppo E e S mutans tipo e.S mutans ceppo MT703 da una cariosa attiva lesione nel dente di un bambino aveva specificità di tipo e e mostrava una reazione crociata con l'antigene polisaccaridico streptococcico della parete cellulare di Lancefield gruppo E. Le cellule MT703 uccise a caldo aderivano a una superficie di vetro in presenza di CGT MT703 e saccarosio. cellule con sieri di cellule intere anti-MT703 hanno inibito l'adesione. La rimozione dell'anticorpo dell'acido teicoico glicerolo e dell'anticorpo del gruppo E dal siero MT703 non ha comportato una perdita di attività inibitoria. L'antisiero con o senza adsorbimento ha inibito significativamente la sintesi del glucano da parte della CGT dal saccarosio. Anticorpi specifici per il poliglicerolo fosfato dell'acido teicoico non hanno inibito l'aderenza Sieri anti-gruppo E e sieri specifici per altri tipi di S mutans, non hanno mostrato attività inibitoria dell'aderenza tranne che in alcune occasioni antisiero ionico specifico di tipo c. L'anticorpo specifico per l'antigene di tipo e ha prodotto una significativa inibizione del legame di CGT alla parete cellulare MT703 e non si è verificata l'adesione di queste cellule. L'anticorpo contro la CGT ha inibito la sintesi del glucano. Il trattamento delle cellule con destranasi, anticorpo destrano o tripsina ha causato una significativa riduzione dell'aderenza. I risultati suggeriscono che l'antigene di tipo e il destrano sulla superficie della cellula S mutans di tipo e sono funzionali in aderenza e che questi polimeri sono associati alla proteina della parete cellulare.
Aspetti non immunologici della resistenza alla carie.Una varietà di componenti fornisce alle secrezioni salivari una serie di mezzi potenzialmente efficaci per combattere le sfide cariogene. Questi fattori di difesa variano da una pulizia meccanica laissez-faire alla produzione squisitamente controllata di anticorpi altamente specifici. Tra i due estremi ci sono sistemi antibatterici le cui caratteristiche operative stanno appena iniziando a essere comprese. Questi sistemi meritano la nostra attenzione. Potrebbero essere la chiave per la nostra comprensione di variazioni nella suscettibilità individuale e potrebbe fornire indicazioni preziose per lo sviluppo di agenti anticarie.
Influenza della microflora vitale dello yogurt sulla digestione del lattosio da parte del ratto.I ratti di laboratorio sono stati nutriti con diete sperimentali tra cui yogurt, yogurt pastorizzato e yogurt simulato con saccarosio o lattosio per 7 giorni seguiti da un singolo pasto sperimentale di yogurt, yogurt pastorizzato o yogurt simulato. Le analisi del galattosio nel sangue hanno dimostrato che gli animali alimentati con yogurt naturale contenente la microflora di coltura vitale erano in grado di assorbire il galattosio in modo più efficiente. Attività della lattasi intestinale dello yogurt animali nutriti era maggiore rispetto agli animali alimentati con altre diete sperimentali, incluso lo yogurt pastorizzato. La sopravvivenza gastrointestinale degli organismi di coltura è stata dimostrata in vivo fino a 3 ore dopo l'alimentazione e, quindi, le cellule vitali hanno determinato un'idrolisi più efficiente che ha favorito la digestione del lattosio nello yogurt naturale.
Distribuzione e rimozione del cadmio dal latte.Sono state studiate la distribuzione del cadmio aggiunto nei sistemi del latte e la fattibilità della rimozione del cadmio. Nel latte contenente 1 ppm cadmio, il 96% del cloruro di cadmio aggiunto è stato disperso nella frazione di latte scremato e il 3% è stato associato alla frazione crema. Il cadmio non è stato legato fortemente ad alcuna frazione proteica. L'associazione del cadmio con caseina acida, proteine del siero di latte e membrana dei globuli di grasso era 18,6 e 0,5% del cadmio aggiunto totale. Con un'esposizione di 5 minuti amminoetilcellulosa tiosuccinilata, amminoetilcellulosa tionitrocarbossifenilata e capelli umani ridotti rimossi rispettivamente 72, 70 e 30%, di aggiunta cadmio nel latte scremato precedentemente equilibrato per 2 ore a 37 C. L'aumento del tempo di equilibrazione oltre le 24 ore non ha avuto alcun effetto sull'efficienza di rimozione, mentre l'aumento del pH ha ridotto notevolmente la rimozione del cadmio.
Lipasi pancreatica bovina.I.Isolamento, omogeneità e caratterizzazione.La lipasi pancreatica bovina è stata isolata in forma pura mediante liofilizzazione di pancreas bovino fresco, estrazione dell'enzima con soluzione di saccarosio, precipitazione frazionata con solfato di ammonio e acetone, seguita da cromatografia su Sephadex G-100. L'attività specifica della frazione di lipasi più pura era di 1750 micromoli di acido grasso, liberate in 30 min per milligrammo di proteina, indicando una purificazione di circa 473 volte, con una resa complessiva di circa il 42%. L'omogeneità dell'enzima è stata confermata mediante ricromatografia su Sephadex G-100 nonché con le tecniche elettroforetica su gel e ultracentrifuga. L'enzima purificato ha fornito un tipico spettro di assorbimento ultravioletto della proteina con assorbimento massimo a 276 nm e minimo a 252 nm. L'enzima purificato ha mostrato un singolo valore ottimale di pH di 8,8 e un punto isoelettrico vicino a pH 5,5. La sua temperatura ottimale era di 37 C e la sua op la concentrazione massima del substrato era del 10%. Queste proprietà assomigliavano a quelle della lipasi del latte.
Un concetto cinetico del trasporto lipidico nei ruminanti.La sintesi della letteratura mostra una forte correlazione tra l'assunzione di acidi grassi nella dieta e la concentrazione totale di lipidi nel plasma in vacche in lattazione mentre il grasso totale del latte secreto non è correlato a nessuno di questi. Nel processo di rimozione dei trigliceridi plasmatici, i chilomicra e le lipoproteine a densità molto bassa vengono convertite in lipoproteine a bassa densità. Dati cinetici limitati indicano che i tassi di rimozione frazionaria per chulomicra e lipoproteine a densità molto bassa le lipoproteine sono rapide nelle vacche in lattazione mentre la rimozione frazionata delle lipoproteine a bassa densità è più lenta, con conseguente accumulo di queste ultime nel plasma. In tali condizioni, le concentrazioni plasmatiche di lipoproteine a bassa densità non dovrebbero riflettere quantitativamente il trasferimento di acidi grassi trigliceridi plasmatici a grasso del latte L'analisi quantitativa o il turnover degli acidi grassi dei trigliceridi con una densità inferiore a 1.006 lipoproteine dovrebbe delineare il ruolo e del trasporto dei lipidi plasmatici nella sintesi dei grassi del latte. Le diete ricche di grassi protette dalla bioidrogenazione ruminale hanno dimostrato di essere un approccio utile nello studio del metabolismo dei grassi dei ruminanti e possono essere utilizzate più ampiamente per chiarire il ruolo del colesterolo nel trasporto dei lipidi plasmatici e nel metabolismo degli acidi grassi essenziali nei ruminanti.
Effetti dei fattori dell'uovo sul metabolismo dei nucleotidi ciclici nello sperma di riccio di mare.L'AMP ciclico nello sperma di Strongylocentrotus purpuratus è stato aumentato di circa 2 volte dalla teofillina o 1 -metil-3-isobutilxantina. I fattori rilasciati dalle uova di riccio di mare (FRE) hanno aumentato l'AMP ciclico spermatico di circa 7 volte entro 1 minuto e la combinazione di FRE con teofillina ha aumentato l'AMP ciclico spermatico fino a 100 volte entro 1 minuto. La GMP nello sperma di riccio di mare è stata leggermente aumentata dalla teofillina, ma è stata abbassata dalla FRE. La GMP ciclica negli spermatozoi trattati con FRE più teofillina non era superiore a quella degli spermatozoi trattati con la sola teofillina. La capacità dell'acqua di mare contenente FRE di aumentare l'AMP ciclico dello sperma in presenza di teofillina è stato alterato solo leggermente se non del tutto mediante ebollizione, ma è stato ridotto di circa il 50% mediante dialisi e distrutto per incenerimento. La filtrazione di FRE su colonne Sephadex G-50 ha prodotto due picchi di attività ciclica di aumento dell'AMP. Uno picco (picco I) è stato eluito al volume vuoto della colonna, e l'altro (picco II) è stato trattenuto dalla colonna. L'attività ciclica di abbassamento di GMP è stata localizzata in frazioni approssimativamente corrispondenti al picco I dell'attività di abbassamento di AMP ciclico. La dialisi dell'acqua di mare contenente FRE prima della sua applicazione alla colonna G-50 ha virtualmente eliminato il picco II dell'attività ciclica di elevazione dell'AMP. Quando l'attività di elevazione dell'AMP ciclico nel picco I è stata filtrata su colonne Bio Gel A-5m, è migrata anche in corrispondenza o vicino al volume vuoto della colonna. Le frazioni corrispondenti al picco I contenevano materiale che inibiva le attività sia della guanilato che dell'adenilato ciclasi nelle preparazioni di cellule spezzate di sperma e guanilato ciclasi dal polmone di ratto. Il materiale inibitorio era stabile all'ebollizione, non dializzabile e distrutto dalla cenere. In una varietà di condizioni, l'acqua di mare contenente FRE o i picchi ciclici che elevano l'AMP I o II non hanno stimolato l'attività dell'adenilato ciclasi dello sperma nelle preparazioni di cellule rotte.
Defosforilazione della caseina bovina da parte della fosfatasi alcalina del latte.Il pH dell'attività ottimale della fosfatasi alcalina del latte vaccino dipendeva dal substrato, essendo 10 -1 per il rho-nitrofenilfosfato, 8-6 per la fosfoserina, 8-0 per la fosvitina e 6-8 per la caseina I singoli componenti della caseina sono stati defosforilati più rapidamente delle miscele di alfa e beta-caseine o di alfa, beta e kappa -caseine e caseina micellare. Le miscele di 2 componenti che coinvolgono kappa-caseina erano più facilmente defosforilate rispetto alle miscele di alfa e beta-caseina. A pH 6-8, il lattosio, le proteine del siero di latte e gli ioni fosfato avevano un effetto inibitorio. La beta-lattoglobulina aveva un effetto inibitorio effetto inibitorio solo quando il pH della reazione era inferiore al valore pH ottimale dell'enzima. Mg2+ e Zn2+ non erano inibitori. Vengono descritte le condizioni ottimali per la defosforilazione della caseina.
Caratteristiche del rilascio di adenosina 3\':5\'-monofosfato dalle micropipette mediante microiontoforesi.Il numero di trasferimento per AMP ciclico radiomarcato Il rilascio di AMP ciclico è stato correlato linearmente sia all'intensità della corrente iontoforetica che al tempo, come previsto dalla legge di Faraday\'s. I risultati hanno rivelato che l'AMP ciclico ha un valore piuttosto basso numero di trasferimento. Inoltre, una quantità insolitamente grande di variazione di rilascio, sia all'interno che tra le pipette è stata trovata in una varietà di tempi e correnti. La causa della variazione non è nota ma potrebbe essere dovuta alla struttura insolita dell'AMP ciclico molecola e il fatto che deve essere iontoforato come ione negativo. Queste caratteristiche del rilascio di AMP ciclico possono contribuire alla difficoltà di ottenere risposte positive da cellule bersaglio neuronali appropriate in vivo.
Proprietà agoniste parziali e tossicità dell'oxilorfano orale.Sono necessari coadiuvanti farmacologici alternativi per la gestione dell'abuso di oppiacei. È stato studiato l'ossilorfano, un antagonista narcotico a 5 diversi livelli di dose (1, 2, 4, 6 e 8 mg) in 30 soggetti normali per determinare la relazione tra singole dosi orali e tossicità. Il farmaco provoca costrizione pupillare e lievi effetti collaterali del sistema nervoso centrale (nausea, vertigini) a tutte le dosi. Il volume medio delle urine è aumentato (P inferiore a 0,05) durante le 12 ore successive a 1 e 2 mg. L'ossilorfano ha proprietà di agonista parziale simili a dl-ciclazocina.
Escrezione di cephradine negli esseri umani con urine a pH alterato.In uno studio incrociato casuale, dieci uomini sani sono stati pretrattati con cloruro di ammonio o bicarbonato di sodio per alterare pH urinario, e poi è stata somministrata una singola dose di 1 Gm di cefradina, per via orale o endovenosa. Non sono stati trovati cambiamenti significativi nella costante di velocità della fase terminale né nel tempo o nell'entità della concentrazione di picco. Il recupero totale è stato superiore al 90% ogni volta che la degradazione della cefradina non si verificava. Una riduzione inspiegabile ma significativa dell'area sotto la curva era presente nei dati per i soggetti prealcalinizzati e per tutti i soggetti che assumevano cefradina per via orale. L'intrappolamento della cefradina non era significativo nella via escretoria.
Modellazione di approccio graduale in un compito avverso.Sessanta donne S sono state assegnate casualmente a sei condizioni che implicavano l'autosomministrazione di scosse elettriche. Queste erano: (1) nessuna risposta S di prova modello uno; (2) nessuna risposta S di prova graduata sul modello; (3) una risposta S di prova modello uno di prova; (4) una risposta S graduata sul modello di prova; (5) modello graduato -una risposta di prova e (6) risposta graduata su modello graduato. I risultati indicavano che l'esposizione graduata di S a stimoli avversivi era più efficace di una singola esposizione del genere e che il tipo di esposizione fornito da un modello aveva scarso effetto.
Ruolo dell'aspettativa impostata nella desensibilizzazione sistematica dell'ansia del linguaggio: un'estensione della ricerca precedente.L'influenza dell'aspettativa impostata per quanto riguarda l'esito della terapia su è stata studiata l'efficacia della desensibilizzazione sistematica (SD) per ridurre l'ansia di parlare in pubblico. I 7 soggetti a cui è stata assegnata un'aspettativa elevata per un esito favorevole della terapia sono stati informati sulla ricerca psicologica che indica che la SD è efficace per ridurre le paure di parlare in pubblico. La SD è stata somministrata con il istruzioni standard per gli 11 S hanno dato un set di aspettativa neutrale. Questa manipolazione dell'aspettativa non ha richiesto l'inganno e forse potrebbe essere usata con i clienti effettivi della terapia SD. Come nella precedente ricerca di Woy ed Efran, la manipolazione del set di aspettativa ha modificato significativamente l'auto- rapporto di percezioni soggettive di ansia dai discorsi pre-trattamento a quelli post-trattamento, ma non ha influenzato gli indici comportamentali o fisiologici evidenti di ansia. le concezioni delle risposte ansiose sono comportamenti psicologicamente significativi, questi dati suggeriscono l'importanza di trasmettere un'elevata aspettativa di miglioramento alla SD e forse anche ad altri tipi di clienti della terapia. Le sessioni SD somministrate a piccoli gruppi di clienti in giorni consecutivi, come in questo studio, sembravano essere efficaci nel ridurre l'ansia del linguaggio quanto le sessioni SD somministrate a ciascun cliente individualmente a intervalli di 1 settimana, come nello studio Woy ed Efran.
Isolamento di eosinofili fosfolipasi D.La fosfolipasi D preferibilmente contenuta nei leucociti polimorfonucleati eosinofili umani rispetto ad altri leucociti è stata isolata mediante asione sequenziale e scambio cationico cromatografia e filtrazione su gel. L'enzima eosinofilo purificato ha liberato in modo specifico la colina dalla I-alfa-fosfatidilcolina con un pH ottimale di 4,5-6,0 e ha mostrato un pI di 5,8-6,2 sulla focalizzazione isoelettrica del gel di poliacrilammide, che sono proprietà condivise dalla fosfolipasi D da fonti vegetali; tuttavia, il suo peso molecolare apparente di 60.000 è circa la metà di quello degli enzimi vegetali. L'eosinofilo e la fosfolipasi D del cavolo hanno inattivato un fattore di attivazione delle piastrine di ratto (PAF) parzialmente purificato in una reazione dipendente dal tempo e dalla dose. la scissione di questa attività PAF è stata attribuita all'attività intrinseca della fosfolipasi D dell'enzima eosinofilo poiché le due attività sono state cromatografate insieme a ciascuna fase di purificazione e il re era apparente inibizione reciproca dell'attività generatrice di colina da parte del PAF e dell'attività di inattivazione del PAF da parte della fosfatidilcolina. Pertanto, le possibili funzioni regolatorie dell'eosinofilo nelle reazioni di ipersensibilità immediata includono l'inattivazione di un PAF da parte della fosfolipasi D e la degradazione della sostanza a reazione lenta dell'anafilassi da parte dell'arilsulfatasi B.
Confronto simultaneo dei livelli di delta 5-3beta-idrossisteroide nella circolazione fetoplacentare di gravidanza normale in travaglio e non in travaglio.Concentrazioni di pregnenolone (delta5P ), il deidroepiandrosterone (DHEA), il 16alfa-idrossideidroepiandrosterone (16alfa-OH DHEA), il pregnenolone solfato (delta5P-S) e il deidroepiandrosterone solfato (DHEA-S) sono stati misurati simultaneamente mediante dosaggio radioimmunologico in arteria ombelicale (UA) e vena ( UV) sieri di 18 gravidanze a termine normale, 6 in travaglio, 12 non in travaglio. I livelli medi di UA e UV +/- SEM (ng/ml) erano per delta5P: 30,39 +/- 1,69, 35,55 +/- 3,06; DHEA: 12,31 +/- 2,34, 3,66 +/- 0,38; 16alpha-OH DHEA: 7,48 +/- 0,63, 10,59 +/- 0,78; delta5P-S: 1.652 +/- 154, 1.486 +/- 130; DHEA-S: 2.122 +/- 134, +/- 134, 1.906 +/- 134. I livelli di delta5P-S, DHEA-S e DHEA dell'arteria ombelicale erano significativamente più alti dei livelli UV, mentre era vero il contrario per delta5P e 16alpha-OH DHEA. arterio-v. inverso enoso (A-V) per il 16alfa-OH DHEA era contrario ai precedenti rapporti pubblicati che utilizzavano campioni aggregati. Il confronto mediante regressione lineare delle concentrazioni accoppiate di steroidi UA e UV di delta5P, delta5P-S, DHEA e DHEA-S ha rivelato una correlazione significativa (P inferiore a 0,01) per ogni steroide. Il travaglio è stato associato a un aumento significativo dei livelli di UA di DHEA-S e un aumento minore, ma non del tutto significativo, dei livelli di UA di delta5P-S, mentre non sono stati osservati cambiamenti simili per delta5-3beta-idrossisteroidi non coniugati. I gradienti medi A-V tra il gruppo di pazienti in travaglio e quelli non in travaglio non erano significativamente differenti. Questi dati dimostrano che: 1) esiste una differenza significativa tra le concentrazioni di UA e UV per delta5P, DHEA, 16alpha-OH DHEA, delta5P-S e DHEA-S; 2) esiste una correlazione significativa tra le concentrazioni di UA e UV per delta5P, DHEA, delta5P-S e DHEA-S, il che implica che ogni unità fetoplacentare mantiene un equilibrio relativo a queste concentrazioni di steroidi nella circolazione ombelicale; 3) il travaglio è associato a un aumento significativo dei livelli di UA di DHEA-S e probabilmente di delta5P-S.
Adenilato ciclasi sensibile al glucagone nel midollo renale umano.Nelle preparazioni prive di cellule (pellet lavate da 600 xg) di midollo renale umano, il glucagone ha prodotto un stimolazione dose-dipendente dell'adenilato ciclasi. La stimolazione dell'adenilato ciclasi midollare renale mediante concentrazioni saturanti di glucagone si è additiva alle dosi saturanti di vasopressina. Inoltre, L-isoproterenolo ha stimolato l'adenilato ciclasi midollare renale in modo dose-dipendente, e questa stimolazione è stata bloccata dal DL-propranololo. La stimolazione dell'adenilato ciclasi midollare renale mediante dosi massime di glucagone e L-isoproterenolo è stata additiva. Il DL-propranololo non ha inibito la stimolazione del glucagone. Pertanto, i risultati indicano l'esistenza di una specifica adenilato ciclasi che risponde al glucagone - distinto dall'adenilato ciclasi sensibile all'isoproterenolo e dall'adenilato ciclasi sensibile alla vasopressina precedentemente descritto nel midollo renale umano. Suggeriamo che il t renale l'effetto bulare del glucagone può essere mediato dalla produzione di AMP ciclico glucagone-dipendente nel tessuto renale.
Dimostrazione e alcune proprietà delle proteine leganti il citosol per la tiroxina e la triiodotironina nel fegato umano.Proteine leganti il citosol per la L-tiroxina (T4) e triiodo-L-tironina (T3) sono stati studiati in campioni di fegato umano ottenuti all'autopsia da 5 soggetti di sesso maschile e 2 di sesso femminile. Il citosol epatico contenente 131I-T4 o T3, insieme o senza aggiunta di ormoni stabili, è stato frazionato mediante strato sottile di Pevikon elettroforesi a pH 8,6, 8,0 e 7,4 È stato dimostrato in tutti i campioni che, oltre a una piccola quantità di globulina legante la T4 sierica, esistevano tre proteine leganti la T4, denominate hT4-1, hT4-2 e hT4-3 , con la mobilità elettroforetica delle alfa2 e beta-globuline e di due proteine leganti il T3, denominate hT3-1 e hT3-2, con la mobilità della gamma-globulina. Il legame degli ormoni da parte delle proteine del citosol era pH-dipendente, e una dialisi preliminare non ha avuto effetto sul legame ormonale. La banda principale di T4, hT4-2, legava più della metà del tracciante T4 e possedeva la capacità di legame massima di 110 mug/100 ml di citosol al 33% a pH 7,4. Tuttavia, non ha mostrato alcuna affinità apparente per T3, perché il T4 legato non poteva essere spostato con un carico di T3 di 600 mug/100 ml. La banda principale di T3, hT3-2, legava più del 70% del tracciante T3 e sembrava avere una grande capacità per l'ormone sebbene siti di legame secondari sulla stessa molecola potrebbero essere responsabili della grande capacità. I siti di legame sembravano quasi specifici per T3, perché è stato notato solo uno spostamento piccolo e insignificante con un carico di T4 di 600 mug/100 ml. I risultati forniscono prove di proteine leganti distinte per T4 e T3 nel citosol epatico umano, sebbene i loro ruoli fisiologici restino da chiarire.
Determinazione gascromatografica di cloruri di acidi carbossilici e precursori di acidi carbossilici residui utilizzati nella produzione di alcune penicilline.Viene descritto un metodo gascromatografico migliorato per la determinazione simultanea dei cloruri degli acidi carbossilici e dei relativi acidi carbossilici utilizzati nella produzione di alcune penicilline semisintetiche commerciali Il cloruro dell'acido reagisce con la dietilamina formando la corrispondente dietilammide Le impurità dell'acido carbossilico vengono convertite in esteri trimetilsililici I due derivati vengono separati e quantificati nel stesso ciclo cromatografico. Questo metodo, un'estensione della precedente procedura di Hishta e Bomstein (1), è stato applicato ai cloruri acidi usati per produrre oxacillina, cloxacillina, dicloxacillina e meticillina (Figura 1); altri cloruri acidi. La determinazione è più selettiva rispetto ai normali metodi di titolazione, che non differenziano tra acidi con pK\' simili. Le deviazioni standard relative della determinazione del cloruro acido sono 1,0-2,5%. L'acido carbossilico residuo può essere determinato ripetutamente entro un intervallo dello 0,6% assoluto.
Cromatografia di partizione a coppia ionica ad alte prestazioni di farmaci sulfamidici. Studio e ottimizzazione dei parametri chimici.La cromatografia di partizione a coppia ionica ad alte prestazioni è mostrata per essere un metodo versatile ed efficiente per separare i sulfamidici. Per un gruppo di quattordici farmaci sulfamidici che variano ampiamente in pKA e idrofobicità, l'effetto della composizione della fase mobile, della composizione dei controioni, del pH e della forza ionica sulla loro separazione cromatografica della partizione della coppia ionica utilizzando tetrabutilammonio come controione e n-butanolo-n-eptano come fase mobile viene mostrata un'ampia variazione in k\' e a è possibile modificando questi parametri. Colonne di silice rivestite con soluzioni acquose tamponate di solfato di tetrabutilammonio hanno prodotto efficienze di 4000-6000 piastre teoriche per 25 cm. Queste colonne sono stabili per lunghi periodi di tempo e possono essere strippate e riutilizzate nella modalità di adsorbimento con poca o nessuna perdita di efficienza. Vengono presentati diversi cromatogrammi i n per illustrare le prestazioni della cromatografia a partizione a coppia ionica.
Effetti della triiodotironina su alcune proprietà elettrogeniche del sartorio di rana.A 21 gradi C in vitro, 0,2 e 2,0 muM di triiodotironina (T3) hanno prodotto un aumento nel potenziale di membrana a riposo (RMP) di Rana pipens sartorius quando il pH della soluzione esterna era 7,4. L'RMP è stato aumentato di 2.0 muM T3 in presenza di 10(-4) e 10(-3) Mouabain ma non in 10 (-3) M di 2,4 dinitrofenolo. Piccoli aumenti di RMP sono stati osservati con 2.0 muM T3 in soluzioni con basso Na esterno. A pH 7,1 0.2 muM T3 ha prodotto un piccolo aumento transitorio di RMP. La resistenza di membrana (Rm) è stata trovata a diminuire gradualmente durante l'esposizione a 0,2 muM a pH 7,4. Il trattamento con T3 2,0 muM a pH 7,4 è stato accompagnato da una riduzione transitoria di Rm. Simili cambiamenti transitori di Rm sono stati prodotti da T3 0,2 e 2,0 muM a pH 7,1 T3 ridotto a membrana resistenza in soluzioni isotoniche di K2SO4 e Mn tamponata tris (20 mM) indicando che T3 aumenta la permeabilità al potassio. potenziali di zione sono stati studiati a pH 7,1. Overshoot, ampiezza e velocità di aumento del potenziale d'azione hanno subito una graduale diminuzione in presenza di 0,2 muM T3 mentre le soglie sono rimaste invariate. Le soglie sono state aumentate durante l'esposizione a 2.0 muM T3 mentre il superamento, l'ampiezza e la velocità di aumento hanno subito diminuzioni transitorie seguite da un ritorno ai livelli di controllo.
Legame e degradazione dell'insulina da parte dei granulociti umani periferici. Dimostrazione di recettori specifici ad alta affinità.L'interazione dell'insulina con i granulociti umani circolanti è stata studiata con l'uso di insulina 125I. I granulociti umani, isolati dal sangue con la tecnica Böyum, hanno mostrato un'elevata attività di degradazione dell'insulina in vitro che ha quasi oscurato la presenza di siti di legame specifici ad alta affinità. recettori dell'insulina ben caratterizzati su linfociti umani coltivati (linea IM-9), era dovuta a enzimi extracellulari e legati alle cellule. La degradazione era aumentata da Ca2+ e tioli e inibita da vari inibitori della proteasi e reagenti sulfidril-bloccanti. Phenylmethylsulfonyl fluoruro (5 X 10(-4) M), un inibitore della serina proteasi, è stato il più potente e ha inibito la degradazione dell'insulina 125I dall'80 al 90%. Tert-butil idroperossido (2 X 10(-3) M), un glutatione-ossido reagente riducente, ha inibito la degradazione dal 35 al 50%, probabilmente a causa di un effetto su una transidrogenasi glutatione-insulina. Nessuno degli inibitori ha influito sulla vitalità cellulare. In presenza di inibitori della degradazione, sono stati rilevati siti di legame per l'insulina ad alta affinità, che per molteplici criteri erano veri recettori dell'insulina. Il legame a questi siti era rapido, saturabile e reversibile con circa 1000 siti/cella. Il coefficiente di Hill per il legame era 0,7 e il diagramma Scatchard di B/F rispetto a B era curvilineo, a causa delle interazioni sito-sito di tipo cooperativo negativo; questi ultimi sono stati dimostrati direttamente da studi cinetici. Come mostrato in precedenza per tutti gli altri recettori dell'insulina, il legame era altamente dipendente dal pH e gli analoghi dell'insulina avevano affinità per questi siti strettamente correlate alle loro potenze biologiche.
L-Asparaginasi di Klebsiella aerogenes. Attivazione della sua sintesi da parte della glutammina sintetasi.Una L-asparaginasi è stata purificata circa 250 volte da estratti di Klebsiella aerogenes a quasi omogeneità. L'enzima ha un peso molecolare di 141.000 misurato mediante filtrazione su gel e sembra essere costituito da quattro subunità di peso molecolare 37.000. L'enzima ha un'elevata affinità per L-asparagina, con un Km inferiore a 10(-5) M e idrolizza la glutammina a una velocità 20 volte inferiore, con un Km di 10(-3) M. È interessante notare che l'enzima mostra una marcata attività gamma-glutamiltransferasi ma relativamente poca attività beta-aspartil-transferasi. Un ceppo mutante privo di questa asparaginasi è stato isolato e cresce a una velocità da 1/2 a 1/3 della velocità del ceppo genitore quando l'asparagina è fornita nel terreno come unica fonte di azoto. Questo ceppo cresce così come il tipo selvatico quando il terreno è integrato con istidina o ammoniaca La glutammina sintetasi attiva la formazione di L-asparaginasi. I mutanti privi di glutammina sintetasi non riescono a produrre l'asparaginasi e anche i mutanti con un alto livello costitutivo di glutammina sintetasi contengono l'asparaginasi ad alto livello. Così, la formazione di asparaginasi è regolata parallelamente a quella di altri enzimi in grado di fornire alla cellula ammoniaca o glutammato, come l'istidasi e la prolina ossidasi. La formazione dell'asparaginasi non richiede l'induzione da parte dell'asparaginasi e non è soggetta alla repressione dei cataboliti.
Proprietà fisiche e cinetiche dell'aldoso reduttasi della lente bovina omogenea.Aldose reduttasi dalla lente del vitello è stata purificata 15.000 volte. L'omogeneità della preparazione finale è stata dimostrato mediante cromatografia su setaccio molecolare, ultracentrifugazione analitica, elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato, immunodiffusione di Ouchterlony ed elettroforesi su gel di poliacrilammide a tre valori di pH. La natura monomerica dell'enzima è suggerita dal peso molecolare di 37.000 sia dalla cromatografia su setaccio molecolare che dal sodio dodecil solfato -elettroforesi su gel con beta-mercaptoetanolo. Ciò corrisponde strettamente a un peso molecolare di 40.400 stimato utilizzando il calcolo delle costanti fisiche nell'equazione di Svedberg. L'S20,w era compreso tra 3,6 e 3,7 come determinato dai dati dell'ultracentrifuga e del gradiente di densità di saccarosio. Il raggio di Stokes era trovato essere 2,5 +/- 0,2 nm e 2,75 +/- 0,15 nm con due metodi diversi. La costante di diffusione D20,w è (7,8 +/- 10(-7) +/- 0,45 X 10 (-7) cm2/s). La molecola è quasi sferica come indicato da un rapporto di attrito f/fo = 1,14. Il contenuto di alfa-elica è stato stimato dai dati di dicroismo circolare pari al 5% e non è cambiato in presenza di substrati aggiunti, prodotti e alcuni inibitori enzimatici. Sono stati osservati effetti cooperativi omotropici come mostrato dalla curvatura concava verso il basso dei grafici reciproci.
Un residuo essenziale nel sito attivo dell'aspartato transcarbamilasi.La reazione del fenilgliossale con l'aspartato transcarbamilasi e la sua subunità catalitica isolata determina la perdita completa dell'attività enzimatica Questa reazione di modifica è marcatamente influenzata dal pH ed è parzialmente reversibile con la dialisi. Il carbammilfosfato o il carbamilfosfato con succinato proteggono parzialmente la subunità catalitica e l'enzima nativo dall'inattivazione da parte del fenilgliossale. Nell'enzima nativo la protezione completa dall'inattivazione è fornita dall'N- (fosfonacetil)-L-aspartato. La diminuzione dell'attività enzimatica è correlata alla modifica di 6 residui di arginina su ciascuna molecola di aspartato transcarbamilasi, cioè 1 arginina per sito catalitico. I dati suggeriscono che l'arginina essenziale è coinvolta nel legame del carbamil fosfato al l'enzima. La reazione del singolo tiolo sulla catena catalitica con 2-cloromercuri-4-nitrofenolo non impedisce subsequ ent reazione con fenilgliossale. Se N-(fosfonacetil)-L-aspartato viene utilizzato per proteggere il sito attivo troviamo che il fenilgliossale provoca anche la perdita dell'attivazione dell'ATP e l'inibizione da parte del CTP. Il tasso di perdita degli effetti eterotropici è esattamente lo stesso per entrambi i nucleotidi, indicando che i due effetti regolatori opposti hanno origine nella stessa posizione sull'enzima, o sono trasmessi dallo stesso meccanismo tra le subunità, o entrambi.
Effetti della formilazione delle catene laterali viniliche dell'eme sulle proprietà ottiche e di legame del ligando della mioglobina ferrica del cuore di cavallo.Effetti della sostituzione dei gruppi vinilici dell'emina con gruppi formile sono state studiate le proprietà ottiche e di legame del ligando della mioglobina ferrica del cuore di cavallo. Le posizioni dei picchi e le forme delle linee degli spettri di assorbimento dei derivati ferrici di tre tipi di formilmioglobina, 2-vinil-4-formil-, 2-formil-4-vinil- e 2,4-diformilmioglobine dipendono dal numero e dalla posizione dei gruppi formil Massimi di assorbimento nella regione di Soret delle forme acide di queste formilmioglobine ferriche in tampone fosfato di potassio 0,1 M, pH 6,0 , a 20 gradi erano rispettivamente 415,2, 422 e 429 nm. Le forme acide di queste formilmioglobine mostrano spettri di assorbimento della miscela di stati ad alto e basso spin a temperatura ambiente. Poiché proto-, deutero- e mesomioglobine hanno un alto spin stato nelle stesse condizioni n, l'aumento del ferro a basso spin in queste formilmioglobine può essere dovuto al forte ritiro di elettroni da parte dei gruppi formile verso la periferia dell'anello porfirinico. Le affinità di queste formilmioglobine ferriche e protomioglobine per N3-, F-, OCN- e SCN- sono aumentate nell'ordine di proto-, monoformil-monovinil-, 2,4-diformil-mioglobina, che corrisponde all'ordine crescente di elettroni - potere attrattivo delle catene laterali della porfirina. I valori di pKa della transizione acido-alcalina sono diminuiti nello stesso ordine. Sebbene le forme ferriche delle due monoformil-monovinilmioglobine isomeriche mostrassero spettri ottici differenti, le costanti di dissociazione dei complessi di questi isomeri per vari ligandi erano simili tra loro. Anche i valori di pKa della transizione acido-alcalina erano simili. Questi risultati indicano che le affinità della mioglobina ferrica per i ligandi, in contrasto con quelle della forma ferrosa per ossigeno e monossido di carbonio (Sono, M. e Asakura, T. (1975) J. Biol. Chem. 250, 5527-5232 e Sono, M. , Smith, PD, McCray, JA e Asakura, T. (1976) J. Biol. Chem 251, 1418-1426), non sono influenzati dalla posizione delle modifiche ai due gruppi vinilici, ma sono determinati da il numero dei gruppi formile e che due gruppi vinilici in posizione 2 e 4 sono equivalenti nel legame di vari ligandi da parte della mioglobina ferrica. La densità elettronica del ferro ferrico sembra essere simile per le due monoformil-monovinilmioglobine isomeriche.
Curve di titolazione per risonanza magnetica nucleare dei protoni dell'anello di istidina. Ribonucleasi S-peptide e S-proteine.Le curve di titolazione NMR del protone C-2 dell'istidina di sono riportati ribonucleasi S-peptide (residui da 1 a 20) e proteina S (residui da 21 a 124). Sebbene la proteina S contenga 3 residui di istidina, si osservano quattro risonanze discrete da titolare. Una di queste deriva dai residui di istidina equivalenti di proteina S dispiegata. La variazione nell'area delle quattro risonanze indica che esiste un equilibrio reversibile dipendente dal pH tra le forme ripiegate e spiegate della proteina S, con del materiale non ripiegato presente al massimo dei valori di pH. Due delle risonanze di la proteina S ripiegata può essere assegnata a 2 dei residui di istidina, 48 e 105, dalla stretta somiglianza delle loro curve di titolazione a quelle in ribonucleasi. Queste somiglianze indicano un'omologia di porzioni della conformazione ripiegata della proteina S a quella di ribonucleasi in soluzione. Questi risultati indicano che la sequenza amminoacidica completa non è necessaria per produrre una conformazione ripiegata simile alla proteina globulare nativa e sembrano eliminare la possibilità che le proteine si pieghino dal loro terminale NH2 durante la sintesi proteica. La bassa flessione del pH presente nella curva di titolazione assegnata al residuo di istidina 48 nella ribonucleasi è assente da questa curva nella proteina S. Ciò è coerente con la nostra precedente conclusione che questa inflessione deriva dall'interazione dell'istidina 48 con il residuo di acido aspartico 14, che è anche assente nella proteina S. La terza risonanza di titolazione della proteina S nativa è assegnata al residuo di istidina rimanente in posizione 119. Le proprietà di questa risonanza non sono identiche a nessuna delle curve di titolazione dei residui di istidina del sito attivo 12 e 119 della ribonucleasi. La risonanza assegnata all'istidina 119 è l'unica significativamente influenzata dall'aggiunta di fosfato di sodio alla proteina S, indicando che si verifica un certo grado di legame con il fosfato. Sia in assenza che in presenza di fosfato questa curva manca anche della bassa flessione del pH osservata nella curva di titolazione dell'istidina 119 NMR in ribonucleasi. Questa differenza presumibilmente deriva da una conformazione tra la ribonucleasi e la proteina S ripiegata che coinvolge un gruppo carbossilico.
Curve di titolazione della risonanza magnetica nucleare dei protoni dell'anello di istidina. Assegnazione diretta delle risonanze dei residui di istidina del sito attivo della ribonucleasi.Uno dei quattro titolazione dell'anello di istidina Le risonanze protoniche C-2 della ribonucleasi pancreatica bovina sono state assegnate al residuo di istidina 12. Ciò è stato ottenuto mediante un confronto diretto della velocità di incorporazione del trizio nella posizione C-2 dell'istidina 12 del peptide S (residui da 1 a 20 ) derivato dalla ribonucleasi S, con i tassi di scambio di deuterio delle quattro risonanze protoniche dell'istidina C-2 della ribonucleasi S nelle stesse condizioni sperimentali. Lo stesso compito è stato ottenuto confrontando le curve di titolazione NMR della ribonucleasi S, il complesso non covalente del peptide S e della proteina S (residui da 21 a 124) con i risultati per il complesso ricombinato in cui la posizione C-2 dell'istidina 12 è stata completamente deuterata. La seconda risonanza istidina del sito attivo è stata assegnata all'istidina re sidue 119 in considerazione dei risultati della titolazione NMR per istidine carbossimetilate e 1-carbossimetilistidina 119 ribonucleasi. Questa assegnazione è un'inversione di quella originariamente riportata e ha importanti implicazioni per l'interpretazione dei dati di titolazione NMR della ribonucleasi.
5\' porta a 3\'-esonucleasi del batteriofago T4.Due attività enzimatiche che rilasciano nucleotidi preferenzialmente dai terminali 5\' del DNA sono stati trovati in Escherichia coli infetto da T4. Poiché non sono state trovate attività corrispondenti in cellule non infette, le attività sembravano essere indotte da T4. Entrambe le attività sono in grado di asportare dimeri di pirimidina dal DNA irradiato con raggi ultravioletti che è stato trattato con endonucleasi T4 V. Una delle attività, denominata esonucleasi T4 B, è stata purificata 400 volte da un estratto di cellule infettate da T4v 1. L'enzima avvia l'idrolisi del DNA specificamente alle estremità 5\' per produrre prodotti che sono principalmente oligonucleotidi di lunghezza variabile La reazione di idrolisi procede in maniera limitata. L'enzima mostra un'attività ottimale a pH 7,0 e necessita assolutamente di Mg2+. Il peso molecolare dell'enzima, stimato mediante gel filtrazione, è di circa 35.000. Un'altra attività, riferita t o come T4 esonucleasi C, è stata purificata 240 volte dall'estratto. Questa attività asporta anche dimeri di pirimidina dal DNA inciso e irradiato dagli ultravioletti e rilascia nucleotidi a 5\' terminali. Ha un pH ottimale a 7,5 e richiede Mg2+. Il peso molecolare dell'enzima è di circa 20.000.
Analisi dei metaboliti del fosfato, del pH intracellulare e dello stato dell'adenosina trifosfato nel muscolo intatto mediante risonanza magnetica nucleare del fosforo.Spettri di risonanza magnetica nucleare 31P registrati dal muofosfato intatto e dai fosfati zuccherini. La quantificazione di questi metaboliti mediante risonanza magnetica nucleare 31P era in buon accordo con i valori ottenuti dalle analisi chimiche. Gli spettri ottenuti da vari muscoli hanno mostrato notevoli variazioni nel loro profilo di fosforo. Pertanto, è stato possibile rilevare differenze tra (a) muscolo normale e malato; (b) vertebrati e invertebrati; (c) specie diverse dello stesso animale. L'andamento temporale del cambiamento dei metaboliti del fosfato nel muscolo di rana ha mostrato che il livello di ATP rimane invariato fino a quando la fosfocreatina è quasi esaurita. gli studi hanno rivelato che in condizioni anaerobiche la rana settentrionale mantiene il suo contenuto di ATP per 7 ore, mentre altri tipi di anfibi, uccelli e mammiferi mu scles iniziano a mostrare un apprezzabile decadimento dell'ATP dopo 2 ore. Diverse linee di prova hanno indicato che l'ATP forma un complesso con il magnesio nell'acqua muscolare: (a) le risonanze fosfatiche dell'ATP nel muscolo sono state spostate verso il basso rispetto a quelle nell'estratto di acido perclorico privo di metalli alcalini del muscolo; (b) le costanti di accoppiamento dell'ATP misurate in vari muscoli vivi corrispondevano strettamente a quelle del MgATP in una soluzione simile alla composizione dell'acqua muscolare; (c) nel muscolo il gruppo gamma-fosfato di ATP non ha mostrato alcun cambiamento di spostamento per un periodo di 10 ore in condizioni in cui le risonanze di altri composti fosfato potrebbero essere titolate. Questo comportamento è simile a quello del MgATP in soluzioni modello nell'intervallo di pH fisiologico ed è diverso da quello del CaATP. Gli spostamenti chimici dei metaboliti del fosfato sono stati determinati in diverse soluzioni rilevanti in funzione del pH. In tutte le condizioni solo l'ortofosfato inorganico ha mostrato una curva di titolazione invariante. Dallo spostamento chimico del fosfato inorganico osservato durante l'invecchiamento del muscolo intatto, il pH intracellulare del muscolo di rana è stato stimato pari a 7,2.
La cinetica dell'ossigeno e del monossido di carbonio dell'emoglobina monomerica di Glycera dibranchiata.La cinetica dell'ossigeno e del monossido di carbonio dell'emoglobina monomerica di Glycera dibranchiata è stata studiata mediante fotolisi laser, aria flash e tecniche di flusso interrotto. Le reazioni di questa emoglobina con entrambi i ligandi sono risultate più rapide delle corrispondenti reazioni che coinvolgono la mioglobina ed erano anche di natura bifasica, le costanti di velocità essendo approssimativamente di un ordine di grandezza diverso per le fasi veloce e lenta in ogni caso. Nessuna dipendenza dal pH o dalla concentrazione di emoglobina delle costanti di velocità di pseudo-primo ordine era evidente tra pH 6 e 9 e nell'intervallo di concentrazione da 1,25 a 40 muM eme. Le costanti di velocità di combinazione di ossigeno di pseudo-primo ordine sia veloci che lente variavano linearmente con la concentrazione di ossigeno tra 16 e 1300 muM. È stato anche notato un rilassamento lento di primo ordine che era linearmente dipendente dalla concentrazione di eme e inversamente dipendente dall'ossi concentrazione gen. È stato dimostrato che questa reazione è dovuta alla sostituzione dell'ossigeno con il monossido di carbonio. La presenza di questa reazione è il risultato dell'elevata affinità del monomero di glicera per il monossido di carbonio come mostrato dal coefficiente di partizione Mr = circa 20.000 ana una costante di dissociazione di equilibrio dell'ordine L = 1,1 X 10(-9) M.
Studi di risonanza magnetica al carbonio 13 di DL-2-(alfa-idrossietil) tiamina e composti correlati. Relazione tra acidità cinetica e fattori elettronici nella catalisi della tiamina.Sono stati ottenuti spettri NMR del carbonio 13 per soluzioni acquose di DL-2-(alfa-idrossietil)tiamina, DL-2-(alfa-idrossibenzil)tiamina, DL-2-(alfa-idrossibenzil)ossitiamina, e relativi N- 3 analoghi metilici e N-3 benzile. Lo spostamento insolitamente grande verso il basso della risonanza 13C di C-2 di idrossietiltiamina suggerisce che questo carbonio ha una carica positiva parziale. Questo risultato è in contrasto con i risultati degli studi cristallografici a raggi X di idrossietiltiamina, che mettono una parziale carica negativa su C-2 (Pletcher, J. , and Sax, M. (1974) J. Am. Chem. Soc. 96, 155-165). Una parziale carica positiva su C-2 aiuta a spiegare la facilità di formazione di carbanioni al carbonio alfa sia enzimaticamente che nei sistemi modello Le velocità di scambio protone-deuterone di (C-alfa)-H con solvente deut erium e del rilascio di aldeide per rigenerare tiamina sono stati misurati per idrossietiltiamina e analoghi. Le differenze di acidità cinetica di (C-alfa)-H e di velocità di rilascio dell'aldeide sono razionalizzate in termini di differenti capacità di assorbire gli elettroni dei sostituenti attaccati a N-3, e non sembrano essere correlate alla catalisi basica intramolecolare di queste processi dal gruppo amminico C-4\'.
Ricostituzione e caratterizzazione del trasportatore di nucleotidi di adenina derivato dai mitocondri del cuore bovino.1. Il trasporto di scambio di nucleotidi di adenina è stato ricostituito in vescicole preparate da fosfolipidi e frazioni proteiche derivate da particelle subcondriali del cuore bovino. Il trasporto, che era specifico per ATP e ADP, è stato misurato come scambio ADP/ADP, ATP/ATP o ADP/ATP. La più alta attività specifica (370 nanomoli di scambio ADP/ADP/ min/mg di proteine a temperatura ambiente) è stato ottenuto con una frazione proteica preparata mediante estrazione colato di particelle sottocondriali parzialmente risolte seguita da frazionamento di solfato di ammonio. 2. A 200 muM di nucleotide esterno, le reazioni di scambio sono state inibite da basse concentrazioni di bongkrekate, atractyloside , e palmitoil-CoA, con valori di Ki di 1,8, 3,0 e 7,5 muM, rispettivamente. Lo scambio di nucleotidi ADP/ADP è stato stimolato circa 5 volte da 500 muM MgCl2 o MnCl2 (km di 40 muM) e circa 3 volte per 500 muM CaCl2 (Km di 90 muM). Era ottimale tra pH 6,0 e 7,0 e diminuiva rapidamente sopra pH 7,5. I grafici di Arrhenius tra 0 gradi e 40 gradi hanno mostrato un punto di rottura a 15 gradi con fosfolipidi di soia e un'energia di attivazione di 29,5 kcal/mole da 0 gradi-15 gradi e 9,0 kcal/mole da 15 gradi-40 gradi. Con i fosfolipidi mitocondriali il punto di rottura era a 9 gradi e le energie di attivazione erano 42,4 kcal/mole da 0 gradi a 9 gradi e 7,6 kcal/mole da 9 gradi a 40 gradi. 3. I requisiti di fosfolipidi per lo scambio di nucleotidi di adenina erano simili a quelli della fosforilazione ossidativa. Sono stati osservati tassi ottimali con un rapporto tra fosfatidiletanolamina e fosfatidilcolina di 4:1. La cardiolipina ha avuto un leggero effetto stimolante. 4. L'assorbimento di ADP in vescicole contenenti ATP è stato stimolato da KCl o da KPi, nonché da esafluoracetonilacetone e disaccoppiatore della fosforilazione ossidativa. L'assorbimento di ATP nelle vescicole contenenti ADP è stato inibito da KCl o da KPi, ma è stato anche stimolato dall'esafluoracetonilacetone. In entrambi i casi la valinomicina ha invertito gli effetti di KCl, mentre il mersalyl o N-etilmaleimmide ha impedito gli effetti di KPi. Al contrario, nessuno di questi sali né l'esafluoracetonilattone hanno influenzato lo scambio ADP/ADP o ATP/ATP. Questi risultati suggeriscono che nel sistema ricostituito lo scambio ADP/ATP è elettrogeno.
Solubilizzazione della perossidasi tiroidea mediante detergenti non ionici.Abbiamo esaminato la capacità dei detergenti non ionici di solubilizzare la perossidasi tiroidea da una frazione di particolato tiroideo suino, misurata mediante il rilascio di attività perossidasica nella frazione surnatante dopo centrifugazione a 105.000 X g per 1 ora e il ritardo della perossidasi surnatante di Sepharose 6B. I parametri di solubilizzazione della perossidasi da Triton X-100 sono stati studiati in dettaglio. In condizioni ottimali, Dal 60 al 95% della perossidasi tiroide e circa il 50% della proteina totale viene rilasciato nel surnatante di 105.000 X g, 1 ora Nelle condizioni ottimali stabilite con Triton X-100, una serie di detergenti Brij di diversa struttura chimica sono stati ugualmente efficace nel rilasciare perossidasi e proteine. I modelli proteici dei surnatanti ottenuti con questi detergenti erano simili su gel per elettroforesi di sodio dodecil solfato-poliacrilammide, sugge puntura che i detergenti studiati rilasciano proteine di membrana simili. I surnatanti Triton X-100 e Brij 58 sono stati cromatografati separatamente su Sepharose 6B equilibrato con 0,1% Triton X-100 o Brij 58, rispettivamente. In entrambi i casi, dal 75 all'80% dell'attività della perossidasi è stata ritardata, indicando così che i detergenti non ionici effettuano la solubilizzazione della perossidasi piuttosto che la dispersione dei frammenti di membrana non sedimentabili. Questi studi riportano la prima solubilizzazione riuscita della perossidasi tiroidea mediante detergenti non ionici. Insieme alle precedenti prove del nostro laboratorio, questi esperimenti indicano che la perossidasi tiroidea è una proteina integrale di membrana.
Solubilizzazione e caratterizzazione dei siti di legame dei recettori beta-adrenergici degli eritrociti di rana.Sono stati identificati specifici recettori beta-adrenergici presenti nelle preparazioni di membrana degli eritrociti di rana mediante il legame di (-)-[3H]diidroalprenololo, un potente antagonista competitivo beta-adrenergico. I siti di legame (-)-[3H]diidroalprenololo potrebbero essere solubilizzati mediante trattamento di una frazione di membrana eritrocitaria purificata con il glicoside vegetale digitonina ma non mediante trattamento con un'ampia varietà di altri detergenti. I siti di legame sembravano essere solubili in base a diversi criteri sperimentali indipendenti tra cui (a) mancata sedimentazione di 105.000 X g per 2 ore; (b) passaggio attraverso filtri Millipore da 0,22 mu; (c) cromatografia su gel Sepharose 6B e (d) microscopia elettronica I siti recettori solubili hanno mantenuto tutte le caratteristiche essenziali dei siti legati alla membrana, vale a dire il legame rapido e reversibile di agonisti e antagonisti beta-adrenergici S; stereospecificità rigorosa sia verso gli agonisti che gli antagonisti beta-adrenergici; appropriate relazioni struttura-attività; saturabilità dei siti a basse concentrazioni di legante; nessuna affinità per i farmaci alfa-adrenergici, i composti catecoli non fisiologicamente attivi e i metaboliti delle catecolamine. Sulla base della cromatografia su gel in presenza di detergente, si stima che il peso molecolare del recettore solubile non sia superiore a 130.000-150.000. Gli studi di legame dell'equilibrio hanno indicato un KD per il recettore solubile di 2 nM. Coefficienti di Hill (nH) di 0,77 e grafici Scatchard curvi suggerivano la presenza di interazioni negative cooperative tra i recettori solubilizzati in accordo con i risultati precedenti con i siti legati alla membrana. Gli studi cinetici hanno indicato una costante di velocità di associazione K1 = 3,8 X 10(6) M-1 min-1 e una costante di velocità inversa k2 = 2,3 X 10(-3) min-1 a 4 gradi. Il KD cineticamente derivato (k2/k1) di 0,6 nM è in ragionevole accordo con quello determinato dagli studi sull'equilibrio. I recettori solubili erano labili a temperature superiori a 4 gradi ma potevano essere stabilizzati con alte concentrazioni di EDTA. La guanidina cloridrato e l'urea hanno prodotto perdite di attività legante dipendenti dalla concentrazione che erano parzialmente reversibili con la dialisi. Tripsina e fosfolipasi A hanno entrambi degradato i recettori solubili, ma una varietà di altre proteasi e fosfolipasi, nonché DNasi e RNasi, non hanno avuto effetto. Esperimenti con reagenti specifici per gruppo hanno indicato che i gruppi liberi di lisina, triptofano, serina e sulfidrile possono essere importanti per il legame del recettore. Questi studi suggeriscono che il recettore è probabilmente una proteina che richiede lipidi per l'integrità funzionale. I dati ottenuti con i siti di legame solubilizzati sono coerenti con la tesi che questi siti rappresentino i recettori beta-adrenergici fisiologicamente rilevanti che sono stati estratti dalle membrane con piena conservazione delle loro proprietà.
Prove per il controllo coordinato dell'attività della glicogeno sintasi e della fosforilasi epatiche da parte di una singola proteina fosfatasi.Fosfatasi fosforilasi epatica omogenea di coniglio (Brandt, H. , Capulong, ZL e Lee, EYC (1975) J. Biol. Chem. 250, 8038-8044) defosforila anche la glicogeno sintasi b. Durante la purificazione, la fosforilasi fosfatasi e la glicogeno sintasi fosfatasi co-purificano con un rapporto costante di attività. due attività co-migrate sull'elettroforesi su gel del disco. Entrambi i substrati competono tra loro per la fosfatasi ed entrambe le attività della fosfatasi sono state inibite dall'estere etilico della lisina. Si conclude che la fosfatasi della fosforilasi epatica e la fosfatasi della glicogeno sintasi hanno un'identità comune e che coordinano la regolazione dell'attivazione catalizzata dalla fosfatasi della glicogeno sintasi e dell'inattivazione della fosforilasi avviene in vivo, fornendo un meccanismo parallelo e opposto a quello mediato dall'adenosina 3\u00 27:5\'-protein chinasi monofosfato dipendente, che inattiva in modo coordinato la glicogeno sintasi e, tramite la fosforilasi chinasi, attiva la fosforilasi. L'attività massima della glicogeno sintasi fosfatasi è stata osservata vicino alla neutralità. Mg2+ e glucosio-6-P hanno attivato la reazione di glicogeno sintasi fosfatasi e questa attivazione era dipendente dal pH. Il Km per la glicogeno sintasi b era 0,12 muM.
Specificità dell'alfa-chimotripsina con gruppi carbossilici esposti bloccati.I 15 gruppi carbossilici esposti dell'alfa-chimotripsina sono stati modificati con glicina etil estere a basso pH utilizzando il reagente barbodiimmide. La specificità dell'enzima modificato (Chy-15) è stata studiata nell'intervallo di pH da 4 a 9 con esteri di amminoacidi N-acilati e non-N-acilati. L'enzima modificato aveva una reattività inferiore verso N-acilato esteri rispetto agli esteri non-N-acilati rispetto all'enzima nativo Sostanze tipiche come gli esteri etilici di acetil- e benzoil-L-tirosina hanno mantenuto un'attività del 4 e 9%, mentre l'estere etilico della fenilalanina era leggermente più reattivo con l'enzima modificato che con il nativo Sono stati studiati in dettaglio i profili di pH dell'acetil-L-fenilalanina etil estere e del triptofano etil e benzil esteri L'analisi di questi profili ha rivelato tre valori di pKa di circa 5, 7 e 9 relativi a un carbossile funzionale, imidazoile, e un gruppo amminico, rispettivamente eli. Poiché si verificano valori di pKa simili per l'enzima nativo, la modifica non ha bloccato il carbossile corrispondente a pKa 5. Viene proposto un meccanismo per la catalisi che include sia la forma protonata che non protonata dell'imidazoile (His-57) e utilizza acqua anziché un carbossile (Asp-102) come dissipatore di protoni.
Livello di guanilato ciclasi e guanosina ciclica 3\':5\'-monofosfato fosfodiesterasi e guanosina ciclica 3\':5\'-livelli di monofosfato nei fibroblasti normali e trasformati in coltura .Per studiare il ruolo della guanosina 3\':5\'-monofosfato (GMP ciclico) nelle cellule in coltura abbiamo misurato le attività della guanilato ciclasi e della fosfodiesterasi GMP ciclica e i livelli di GMP ciclico nelle cellule fibroblastiche normali e trasformate L'attività della guanilato ciclasi si trova quasi esclusivamente nella frazione particolata delle cellule normali di rene di ratto (NRK) e BALB 3T3 L'attività enzimatica è stimolata da 3 a 10 volte dal trattamento con il detergente Lubrol PX. il fattore di crescita non può essere dimostrato in una varietà di condizioni di analisi. In entrambe le cellule NRK e BALB 3T3 l'attività della guanilato ciclasi è bassa durante la crescita logaritmica e aumenta quando le cellule si affollano e la crescita rallenta. Guanilato c l'attività yclasica non è rilevabile negli omogenati di cellule NRK trasformate dal virus del sarcoma di Kirsten (cellule KNRK) sia in presenza che in assenza di Lubrol PX. Anche l'attività della guanilato ciclasi è notevolmente ridotta nelle cellule NRK trasformate dai virus Moloney, Schmidt-Ruppin o Harvey. Le cellule BALB 3T3 trasformate da virus a RNA (Kirsten, Harvey o Moloney), da un virus a DNA (SV40), da metilcolantrene o spontaneamente, hanno tutte un'attività della guanilato ciclasi ridotta ma facilmente rilevabile. L'attività ciclica della fosfodiesterasi GMP si trova prevalentemente nella frazione solubile delle cellule NRK. Questa attività aumenta leggermente quando le cellule NRK entrano nella fase di crescita stazionaria. L'attività ciclica della fosfodiesterasi GMP non è rilevabile in due cloni di cellule KNRK in una varietà di condizioni di dosaggio ed è diminuita rispetto al livello presente nelle cellule NRK in un terzo clone KNRK. Tuttavia, entrambe le cellule NRK trasformate da Moloney e Schmidt-Ruppin hanno un'attività fosfodiesterasica simile a quella trovata nelle cellule NRK. Si osserva che il surnatante bollito da entrambe le cellule NRK e KNRK migliora notevolmente l'attività della fosfodiesterasi deficiente di attivatore dal cuore bovino. Questo risultato indica che l'assenza di attività fosfodiesterasica GMP ciclica nelle cellule KNRK non è dovuta a una perdita dell'attivatore della fosfodiesterasi. La concentrazione intracellulare di GMP ciclico risulta essere molto bassa nelle cellule NRK trasformate rispetto ai livelli misurati nelle cellule NRK confluenti. I bassi livelli di GMP ciclico nelle cellule NRK trasformate riflettono l'attività della guanilato ciclasi notevolmente ridotta osservata in queste cellule. Questi risultati non sembrano supportare il suggerimento che il GMP ciclico promuova la crescita delle cellule fibroblastiche.
Cinetica dell'interazione emeritrina-ossigeno.La cinetica della reazione di emeritrina di Golfingia gouldii con O2 è stata studiata mediante spettrofotometria a flusso interrotto. Per la processo di ossigenazione del secondo ordine, k1 = 7,4 X 10(6) M-1 s-1, deltaH1++ = 8,2 kcal-mol-1 e deltaS1++ = +1 eu a 25 gradi, pH 8,2 e I = 0,015 M La costante di velocità rimane invariata quando la concentrazione proteica viene variata da 3 a 25 muM, la forza ionica viene aumentata a 0,07 M e il pH spostato a 6,8. La deossigenazione dell'ossiemitrina viene studiata con flusso interrotto mediante lavaggio dell'O2 liberato con S2O4(2 -) Per la dissociazione del primo ordine, k-1 = 51 s-1, deltaH-1++ = 20,6 kcal-mol-1 e deltaS-1++ = +19 eu a 25 gradi, pH 8,2, e io = 0,015 M. Il valore di k-1 è indipendente da [proteina] = da 50 a 200 muM, [S2O4(2-)] = da 5 a 100 mM I = da 0,015 a 0,30 M e pH da 6,8 a 9.0 Uso della mioglobina invece di S2O4(2-) come scavenger dà risultati simili. La combinazione dei parametri di attivazione per i processi di ossigenazione e deossigenazione fornisce K1 = 1,5 X 10(5) M-1, deltaH = -12,4 kcal-mol-1 e deltaS = -18 eu, valori in buon accordo con la termodinamica indipendente dati. Lo ione perclorato (0,05 M) aumenta k-1 di circa 3 volte e difficilmente ha effetto su k1. Non c'è altro segno che una singola reazione in entrambe le direzioni, e l'emeritrina ottamerica apparentemente si comporta cineticamente come otto singole unità.
Studi sulla gamma-glutamil transpeptidasi renale umana. Purificazione e proprietà strutturali, cinetiche e immunologiche.gamma-glutamil transpeptidasi, presente in vari tessuti di mammiferi, trasferisce la frazione gamma-glutamil del glutatione a una varietà di amminoacidi e peptidi accettori. Questo enzima è stato purificato dalla corteccia renale umana circa 740 volte ad un'attività specifica di 200 unità/mg di proteina. Le fasi di purificazione hanno comportato l'incubazione del omogeneizzato a 37 gradi seguito da centrifugazione ed estrazione del sedimento con tampone Tris-HCl 0,1 M, pH 8,0, contenente l'1% di sodio desossicolato; assorbimento discontinuo su DEAE-cellulosa; DEAE-cellulosa (DE52) cromatografia su colonna; Sephadex G-200 gel filtrazione e cromatografia di affinità utilizzando concanavalina A insolubilizzata su agarosio in grani. Durante la purificazione dell'enzima sono stati utilizzati detergenti. L'enzima purificato si è separato in tre bande proteiche, tutte dotate di azione enzimatica ivity, su elettroforesi su disco di poliacrilammide in presenza di Triton X-100. L'enzima ha un peso molecolare apparente di circa 90.000 come mostrato dalla filtrazione su gel di Sephadex G-200, e sembra essere un tetramero con subunità di peso molecolare di circa 21.000. Il Km per la gamma-glutamil transpeptidasi utilizzando il substrato artificiale, gamma-glutamil-p-nitroanilide, con glicilglicina come amminoacido accettore, è risultato essere di circa 0,8 mM. Il pH ottimale per l'attività enzimatica è 8,2 e il punto isoelettrico è 4,5. Sia il GSH che il GSSG hanno inibito in modo competitivo l'attività della gamma-glutamil transpeptidasi quando la gamma-glutamil-p-nitroanilide è stata utilizzata come substrato. Il trattamento dell'enzima purificato con papaina non ha alcun effetto sull'attività enzimatica o sulla mobilità sull'elettroforesi del disco di poliacrilammide. La gamma-glutamil transpeptidasi purificata non aveva attività glutaminasi indipendente dal fosfato. Il rapporto tra gamma-glutamil transpeptidasi e glutaminasi fosfato-indipendente è cambiato significativamente durante le fasi iniziali della purificazione della gamma-glutamil transpeptidasi. Questi studi indicano che le attività della transpeptidasi e della glutaminasi fosfato-indipendenti non sono esibite dalla stessa proteina nel rene umano.
alfa-amminometilglutarato, un beta-ammino analogo del glutammato che interagisce con la glutammina sintetasi e gli enzimi che catalizzano la sintesi del glutatione.L'analogo del glutammato, alfa -acido aminometilglutarico, è stato sintetizzato dall'aggiunta di Michael di ammoniaca al 2-metilene glutaronitrile seguita dall'idrolisi dell'intermedio alfa-amminometilglutaril nitrile; l'analogo ciclizza facilmente per riscaldamento ad acido 2-piperidone-5-carbossilico. La glutammina sintetasi cerebrale di pecora utilizza un isomero di DL-alfa-amminometilglutarato a circa il 10% della velocità con L-glutammato. La gamma-glutamilcisteina sintetasi utilizza entrambi gli isomeri del DL-alfa-amminometilglutarato, agendo di preferenza sullo stesso isomero utilizzato dalla glutammina sintetasi. gamma-(alfa-amminometil) il glutaril-alfa-amminobutirrato, preparato enzimaticamente con la gamma-glutamilcisteina sintetasi, è risultato essere un substrato e un inibitore della glutatione sintetasi. L'alfa-amminometilglutarato non inibisce la gamma -glutamil ciclotransferasi e gamma-glutamil transpeptidasi in modo apprezzabile. Quando l'alfa-amminometilglutarato è stato somministrato ai topi, si sono verificate sostanziali diminuzioni dei livelli di glutammina, glutatione, glutammato e glicina nel rene e di glutammina e glutammato nel fegato, indicando che questo analogo del glutammato è efficace come inibitore della glutammina e la sintesi del glutatione in vivo e suggerendo che potrebbe anche inibire altri enzimi.
Uno studio cinetico sulla glucosio-6-fosfato deidrogenasi.La cinetica allo stato stazionario della glucosio-6-fosfato deidrogenasi del fegato di maiale è coerente con un ordinato , meccanismo sequenziale in cui NADP è legato per primo e NADPH rilasciato per ultimo. Kia è 9,0 muM, Ka è 4,8 muM e Kb è 36 muM. La glucosamina 6-fosfato, un analogo del substrato e un inibitore competitivo, viene utilizzato per escludere un possibile meccanismo casuale Si vede che l'ADP forma un complesso con la forma libera dell'enzima mentre l'ATP forma un complesso con entrambe le forme libera ed E-NADP dell'enzima. Il KI per il complesso E-ADP è 1,9 mM, mentre il Ki i valori per i complessi E-ATP e E-NADP-ATP sono rispettivamente 7,2 e 4,5 mM.
Glucosio-6-fosfato deidrogenasi. Purificazione e caratterizzazione parziale.Glucosio-6-fosfato deidrogenasi è stato purificato 1000 volte dal fegato di maiale. Questo l'enzima esiste come dimero attivo di peso molecolare 133.000 e monomero inattivo di peso molecolare 67.500. Il pH di attività massima è 8,5 e la forza ionica massima è compresa tra 0,1 e 0,5 M. La glucosio-6-fosfato deidrogenasi è altamente specifica per NADP+ e glucosio 6-fosfato. Per il glucosio 6-fosfato e NADP+ sono stati ottenuti valori Km apparenti di 3,6 muM e 5,4 muM. Questo enzima si trova quasi interamente all'interno della porzione solubile del citoplasma cellulare.
Autolisi di Neisseria gonorrhoeae.L'autolisi di Neisseria gonorrhoeae è stata studiata in condizioni diverse. È stato riscontrato che il pH e la temperatura bassi, nonché la presenza di cationi bivalenti, spermina, saccarosio e polivinilpirrolidone, gonococchi non in crescita stabilizzati. L'acido etilendiamminotetraacetico da solo ha promosso la lisi, mentre il lisozima ha avuto solo un limitato effetto additivo. Il comportamento autolitico dei gonococchi sembra essere collegato al loro prolungato processo di divisione cellulare. La relativa dipendenza da vengono discussi la membrana esterna e lo strato di peptidoglicano per la stabilità meccanica dei gonococchi.
Fosfatasi di Chlamydomonas reinhardi: approccio biochimico e citochimico con mutanti specifici.L'alga unicellulare Chlamydomonas reinhardi produce due fosfatasi acide costitutive e tre fosfatasi depressive (una neutro e due alcalini) che possono utilizzare il naftilfosfato come substrato. Per studiare le proprietà biochimiche e la localizzazione citochimica di questi enzimi, sono stati utilizzati mutanti specifici della fosfatasi deprimente. Le due fosfatasi costitutive mostrano valori di pH ottimali (circa 5,0) e Km (2 x 10(-3) a 3,3 x 10(-3) M) ma differiscono nella sensibilità al calore e nell'affinità per il glicerofosfato.
Sviluppo di microrganismi nel lievito Kloeckera che cresce su metanolo.Un certo numero di microrganismi appare regolarmente nelle cellule di lievito coltivate con metanolo, ma raramente in etanolo- o cellule coltivate con glucosio. Quando uno dei lieviti rappresentativi che utilizzano metanolo, Kloeckera sp. no. -H vecchie cellule. Il numero di microrganismi per cellula sezionata ha raggiunto da cinque a sei dopo 4 ore di coltivazione. Sebbene il numero di microrganismi non sia cambiato durante la coltivazione prolungata, la loro dimensione è diventata più grande con il passare del tempo di coltivazione. Le attività della catalasi e alcol ossidasi sono state confermate nelle frazioni particellari per tutto il periodo di coltivazione, mentre le attività di formaldeide deidrogenasi e formiato deidrogenasi non sono state rilevate nelle particelle. L'attività di isocitrato liasi è stata rilevata nel particu frazioni tardive solo nella fase di crescita iniziale.
Relazione tra emoagglutinina e sialidasi da Clostridium perfringens CN3870: filtrazione su gel di attività mutanti e reveranti.Filtrazione su gel di fluidi sopranatanti, dal wild-type Clostridium perfringens, ceppo CN3870, e molti dei mutanti e dei reveranti derivati da questo ceppo, hanno mostrato che questi mutanti non sono riusciti a produrre quantità rilevabili di attività della sialidasi III ancora prodotta. forme I e II di entrambe le attività Questi risultati mostrano che esiste una relazione diretta tra la produzione della forma I e delle attività emoagglutinine e sialidasi e la produzione della forma II di queste proteine biologicamente attive Modelli che spiegano la base genetica di questi risultati sono discussi.
Ruolo della ligasi dell'acido desossiribonucleico in una frazione di membrana dell'acido dossiribonucleico estratta da pneumococchi.La ligasi dell'acido desossiribonucleico (DNA) è stata rilevata in una frazione della membrana del DNA estratto da Pneumococcus. L'attività specifica dell'enzima in questa frazione è 10 volte maggiore rispetto all'estratto cellulare rimanente. Rimane saldamente legato (con altri enzimi) al complesso dopo un procedimento di purificazione in cui una percentuale considerevole delle macromolecole è dissociato. La ligasi agisce in due modi nella frazione di membrana del DNA in vitro. Uno, catalizza il legame di piccoli pezzi di DNA di nuova sintesi di peso molecolare in filamenti di DNA di peso molecolare più pesante come mostrato da altri (M Gellert, 1976 ; R. Okazaki, A. Sugino, S. Hirose, T. Okazaki, Y. Imae, R. Kainuma-Kuroda, T. Ogawa, M. Arisawa e Y. Kurosowa, 1973; B. Olivera e I. Lehman, 14; e A. Sugino, S. Hirose e R. Okazaki, 1972) e, due, protegge il DNA dalla degradazione n da desossiribonucleasi. Quest'ultimo effetto è dovuto a una competizione tra la capacità delle nucleasi di degradare il DNA e la capacità della DNA ligasi di sigillare le intaccature prodotte da questi enzimi degradativi. La ligasi agisce in cooperazione con altri enzimi nella frazione di membrana del DNA per sintetizzare il DNA.
Regolazione di Chorismate mutasi-prefenato deidratasi e prefenato deidrogenasi da alcaligenes eutrophus.Enzimi altamente purificati da Alcaligenes eutrophus H 16 sono stati utilizzati per studi cinetici. Chorismate mutasi era inibita a feedback dalla fenilalanina. In assenza dell'inibitore, il grafico a doppio reciproco era lineare, producendo un Km per corismato di 0,2 mM. Quando era presente la fenilalanina, si verificava una pronunciata deviazione dall'iperbole di Michaelis-Menten. Il coefficiente di Hill (n) era 1,7 e i grafici di Hill della velocità rispetto alle concentrazioni di inibitori risultavano in un valore di n\' = 2,3, indicando una cooperazione positiva. Anche la mutasi del chorismate è stata inibita dal prefenato, che ha causato grafici doppi reciproci verso il basso e un coefficiente di Hill di n = 0,7, prova di cooperatività negativa. Il pH ottimale della mutasi di chorismate variava da 7,8 a 8,2, la sua temperatura ottimale era di 47 C. Il prefenato deidratasi era inibito in modo competitivo b y fenilalanina e attivato dalla tirosina. La tirosina ha stimolato la sua attività fino a 10 volte e ha ridotto il Km per il prefenato, che era 0,67 mM senza effettori. Il triptofano ha inibito l'enzima in modo competitivo. La sua costante di inibizione (Ki = 23 muM) era quasi 10 volte superiore a quella determinata per la fenilalanina (Ki = 2,6 muM). Il pH ottimale della prefenato deidratasi era pH 5,7; la temperatura ottimale era di 48°C. Il prefenato deidrogenasi era inibito dal feedback dalla tirosina. L'inibizione era competitiva con il prefenato (Ki = 0,06 mM) e non competitiva con la nicotinammide adenina dinucleotide. L'enzima è stato ulteriormente soggetto all'inibizione del prodotto da parte del p-idrossifenilpiruvato (Ki = 0,13 mM). Il suo Km per il prefenato era di 0,045 mM e quello per la nicotinammide adenina dinucleotide era di 0,14 mM. Il pH ottimale variava tra 7,0 e 7,6; la temperatura ottimale era di 38 C. È dimostrato come la regolazione sensibile dell'intero sistema enzimatico porti a una produzione di amminoacidi ben bilanciata.
Un enzima comune alla biosintesi dell'istidina e degli amminoacidi aromatici nel Bacillus subtilis.Esistono due transaminasi per la sintesi della tirosina e della fenilalanina nel Bacillus subtilis. Un enzima è responsabile anche della transaminazione dell'imidazolo acetolo fosfato in istidinol fosfato, reazione obbligatoria nella sintesi dell'istidina. Il gene coinvolto nella sintesi di questo enzima si trova nel mezzo di un cluster di geni, tutti coinvolti nella sintesi di gli amminoacidi aromatici. L'altro gene non è stato ancora mappato. Sono stati isolati mutanti privi dell'uno o dell'altro attività enzimatica. Questi mutanti sono prototrofici per la tirosina e la fenilalanina. Tuttavia, entrambe le classi di mutanti sono più sensibili del wild-type ceppo all'analogo della fenilalanina, fluorofenilalanina, suggerendo che ciascuno di questi mutanti sintetizza meno fenilalanina rispetto al ceppo selvatico. I due enzimi possono essere separati l'uno dall'altro mediante cromatografia a scambio ionico e centrifugazione in gradiente di glicerolo. Il significato dell'osservazione che un enzima della sintesi dell'istidina svolge anche un ruolo nella sintesi degli acidi aromatici è considerato alla luce della regolazione delle vie incrociate tra le due vie.
Acido ribonucleico sintetizzato in cellule meiotiche di Saccharomyces cerevisiae: effetto del pH del terreno di coltura.L'acido ribonucleico (RNA) marcato con impulsi è stato estratto da polisomi di cellule sporulanti di Saccharomyces cerevisiae e caratterizzate in gradienti di saccarosio e mediante elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato-poliacrilammide RNA transfer, RNA ribosomiale e RNA eterodisperso, presumibilmente RNA messaggero, sono stati sintetizzati durante un impulso di 20 minuti a T4 e T6 durante l'etichettatura è stata eseguita in un mezzo di sporulazione regolato a pH 6,0. Inoltre, l'RNA ribosomiale è stato processato in ribosomi funzionali durante l'impulso. L'attività specifica dell'RNA marcato con impulsi di cellule etichettate nel mezzo di sporulazione in cui il pH non era aggiustato a T4 (pH 7,8) e T9 (pH 8,6) era da 20 a 50 volte inferiore all'RNA delle cellule marcate a pH 6,0. La bassa attività specifica derivava da una riduzione di 50 volte nell'assorbimento dei precursori marcati quando il pH medio era maggiore di 7,2. RNA terodisperso di dimensioni comprese tra 4-17 S e RNA di trasferimento sono stati sintetizzati durante l'impulso a T4 (pH 7,8), ma la bassa attività specifica dell'RNA ribosomiale ha impedito un'analisi approfondita della sua sintesi. L'impermeabilità cellulare a T9 (pH 8,6) ha comportato un assorbimento minimo di etichetta e un'analisi delle trascrizioni etichettate con impulsi era impossibile. Un confronto della percentuale di materiale polisomiale indica, tuttavia, che queste cellule erano attive nella traduzione almeno quanto le cellule marcate con impulsi a pH 6,0.
Effetto della colicina K su una funzione legata all'energia associata alla membrana.Lo scopo di questo lavoro era studiare la capacità degli estratti cellulari di Escherichia coli ed E. coli trattati con colicina K per catalizzare la seguente reazione di transidrogenasi inversa energia-dipendente: NADP + NADH + ATP in equilibrio NADPH + NAD + ADP + Pi. In condizioni anaerobiche questa reazione richiede la presenza di una porzione specifica del catena di trasporto degli elettroni, un sistema funzionale di accoppiamento dell'energia, tra cui un'adenosina trifosfatasi, un enzima e ATP come fonte di energia. La reazione legata all'ATP è stata parzialmente inibita negli estratti della stampa francese di cellule di E. coli K-12 C600 che erano state pretrattate con colicina K ma non in estratti da cellule trattate in modo simile di un mutante tollerante alla colicina L'ultracentrifugazione degli estratti ha fornito frazioni particellari competenti nel catalizzare la reazione, questa reazione è sostanzialmente inibita nelle frazioni di cellule trattate con colicina. L'entità dell'inibizione aumenta con l'aumentare della concentrazione di colicina. I surnatanti supportavano anche la formazione di NADPH legata all'ATP, ma questa reazione era insensibile all'effetto della colicina. Un confronto tra il requisito della reazione nel surnatante e le frazioni particellari suggerisce che la reazione nel surnatante è diversa da quella inibita dalla colicina. La capacità di idrolisi dell'ATP delle frazioni particellari del controllo o dei batteri trattati era identica. Allo stesso modo, la catena di trasporto degli elettroni non è stata influenzata dal trattamento con colicina, come evidenziato dalla mancanza di effetto su NADH ossidasi, succinico deidrogenasi e NADPH-NAD transidrogenasi. Si conclude che la colicina K interferisce con l'accoppiamento dell'ATP con l'utilizzo dell'intermedio per la reazione della transdeidrogenasi legata all'ATP.
Forza protonmotrice come fonte di energia per la sintesi di adenosina 5\'-trifosfato in Escherichia coli.Sintesi netta di adenosina 5\'-trifosfato ( ATP) nelle cellule di Escherichia coli impoverite di energia è stata osservata quando una forza protonmotrice diretta verso l'interno è stata imposta artificialmente Nelle cellule wild-type, la sintesi di ATP si è verificata sia che la forza protonmotrice fosse dominata dal potenziale di membrana (negativo all'interno) sia dal gradiente di pH ( alcalina interna). La formazione di ATP non si verificava a meno che la forza protonmotrice non superasse un valore di 200 mV. In queste condizioni, non è stata trovata alcuna sintesi di ATP quando le cellule sono state esposte a un inibitore dell'adenosina trifosfatasi stimolata da Ca2+- e Mg2+- legata alla membrana (EC 3.6.1.3), dicicloesilcarbodiimmide, o a un conduttore protonico, carbonilcianuro-p-trifluorometossifenil-idrazone. I mutanti negativi dell'adenosina trifosfatasi non sono riusciti a mostrare la sintesi di ATP in risposta a un potenziale di membrana o a un gradiente di pH T. La sintesi di ATP guidata da una forza protonmotrice è stata osservata in un mutante carente di citocromo. Queste osservazioni sono coerenti con l'ipotesi chemiosmotica di Mitchell (1961, 1966, 1974).
Sintesi difettosa di intermedi lipidici per la formazione di peptidoglicani in una forma L stabilizzata di Streptococcus pyogenes.Preparazioni di membrane ottenute da una forma L stabilizzata di Streptococcus pyogenes non sono in grado di sintetizzare il peptidoglicano da uridina-5\'-difosfo-N-acetil-D-muramil-L-Ala-D-iso-Glu-L-Lys-D-Ala-D-Ala e uridina-5\' -difosfo-N-acetil-D-glucosamina, in contrasto con preparazioni simili dallo streptococco parentale Inoltre, livelli 50 volte superiori di intermedi lipidici che fungono da substrati legati alla membrana per la sintesi del peptidoglicano sono sintetizzati in miscele di reazione contenenti membrane streptococciche rispetto con preparazioni simili della forma L. Queste osservazioni suggeriscono che l'incapacità di questa forma L stabilizzata di formare una parete cellulare in vivo risiede, almeno in parte, nella sua incapacità di sintetizzare quantità significative dei substrati lipidici per la sintesi del peptidoglicano.
Trasporto del glucosio in protesi isolate di Asticcacaulis biprosthecum.Il trasporto attivo del glucosio in protesi isolate da cellule di Asticcacaulis biprosthecum è stato stimolato dall'elettrone non fisiologico donatore N, N, N\', N\'-tetrametil-p-fenilendiammina dicloridrato L'assorbimento del glucosio è stato mediato da due sistemi di trasporto; il Km apparente del sistema ad alta affinità era di 1,8 muM e quello del sistema a bassa affinità era 34 muM Glucosio libero accumulato all'interno delle protesi a una concentrazione da 60 a 200 volte superiore a quella presente esternamente, a seconda del Km del sistema osservato. Il sistema di trasporto del glucosio nelle protesi era stereospecifico per il D-glucosio e nemmeno per il metilalfa-D- glucopiranoside né 2-desossiglucosio è stato trasportato. L'assorbimento del glucosio è stato inibito da N-etilmaleimmide (NEM) e p-cloromercuribenzoato (PCMB), e l'inibizione da PCMB ma non da NEM è stata invertita dal ditiotreitolo. Anche l'assorbimento del glucosio è stato inibito d dagli agenti disaccoppianti 5-cloro-3-t-butil-2\'-nitrosalicilanilide (S-13), 5-cloro-3-(p-clorofenil)-4\'-clorosalicilanilide (S-6) e cianuro di carbonile m-clorofenilidrazone (CCCP) e dall'inibitore respiratorio KCN. L'efflusso di glucosio dalle protesi precaricate è stato indotto da PCMB e KCN, ma non da S-13 o CCCP. L'assorbimento del glucosio non è stato influenzato dall'arsenato o da un inibitore delle adenosina trifosfatasi legate alla membrana, N, N\'-dicicloesilcarbodiimmide. La mancanza di inibizione da parte di questi due composti, combinata con i livelli estremamente bassi di adenosina 5\'-trifosfato presenti nelle protesi, indica che l'adenosina 5\'-trifosfato non è coinvolta nel trasporto del glucosio da parte delle protesi.
Attivazione termica delle spore di Streptomyces viridochromogenes.Il periodo di ritardo che precede la germinazione delle spore di Streptomyces viridochromogenes durante l'incubazione in un terreno di germinazione definito è stato completamente eliminato mediante un delicato shock termico. La velocità di germinazione non è stata influenzata. Il pH ottimale per l'attivazione è stato esteso da 6,0 a 9,6. Il tempo di riscaldamento richiesto per l'attivazione massima era di 1 minuto a 60 °C, da 2 a 5 minuti a 55 °C, 20 minuti a 50 °C , e da 40 a 50 minuti a 45 C. Le spore attivate avevano la stessa temperatura e pH ottimali e le stesse esigenze nutrizionali per la germinazione delle spore non attivate Le spore attivate si sono disattivate durante l'incubazione per 8 ore a 25 C e sono state riattivate da un secondo shock termico. che erano stati invecchiati per 4 settimane o più non germinavano nel mezzo di germinazione definito a meno che non fossero stati prima attivati dal calore.
Controllo della biosintesi dell'inositolo in Saccharomyces cerevisiae: proprietà di un sistema enzimatico reprimibile in estratti di cellule wild-type (Ino+).La biosintesi dell'inositolo è stata studiata in estratti cellulari solubili di un ceppo selvatico (Ino) di Saccharomyces cerevisiae Sono state rilevate due reazioni: (i) conversione del D-glucosio-6-fosfato in una forma fosforilata di inositolo, presumibilmente inositolo-1-fosfato (IP sintetasi, EC5.5.1.4) e (ii) conversione dell'inositolo fosforilato in inositolo (fosfatasi IP, EC3.1.3.25). La velocità di conversione in vitro del glucosio-6-fosfato in inositolo era proporzionale al tempo di incubazione e concentrazione dell'enzima. Il pH ottimale era 7,0. La sintesi dell'inositolo richiedeva la nicotinammide adenina dinucleotide (NAD) ossidata ed era stimolata da NH4C1 e MgC12. NADP sostituiva scarsamente NAD e NADH inibiva la reazione. L'inositolo fosforilato si accumulava in assenza di MgC12, suggerendo l'inositolo-fosfato è an intermedio nella via e che gli ioni Mg stimolano la defosforilazione dell'inositolo-fosfato. L'IP sintetasi è stata inibita di circa il 20% in presenza di inositolo nella miscela di reazione a concentrazioni superiori a 1 mM. L'enzima è stato represso circa 50 volte quando l'inositolo era presente nel mezzo di crescita a concentrazioni superiori a 50 muM. L'IP sintetasi ha raggiunto il livello completamente represso circa 10 ore dopo l'aggiunta di inositolo a colture logaritmiche cresciute in assenza di inositolo. L'attività specifica dell'enzima aumenta con il tempo in colture a crescita logaritmica prive di inositolo e si avvicina al livello completamente depresso quando le cellule entrano nella fase stazionaria.
Effetto del pH sullo sviluppo delle competenze e sull'assorbimento dell'acido desossiribonucleico in Streptococcus sanguis (Wicky).Le cellule di Streptococcus sanguis (Wicky), ceppo WE4, si sono sviluppate poco o nessuna competenza e non è riuscito ad autolisi in condizioni permissive quando trattato con fattore di competenza (CF) inferiore a PH 7,0. Questa mancanza di attività era direttamente correlata con l'incapacità delle cellule di legarsi o assorbire CF a valori di pH di 5,5, 6,0 e 6.5. D'altra parte, le cellule competenti legano le molecole di acido desossiribonucleico al massimo al di sotto di pH 7,0 e si trasformano al massimo a pH 6,5. L'acido desossiribonucleico è stato legato in modo ottimale alle cellule in una forma resistente alla desossiribonucleasi a valori di pH compresi tra 7,0 e 8,5. In concomitanza con questo legame, frammenti di DNA solubili in acido indefiniti sono comparsi nelle mestruazioni di coltura. Il legame e l'assorbimento di CF da parte delle cellule non sono stati influenzati solo dal basso pH ma anche dalla bassa temperatura. A 0 C, le cellule WE4 hanno legato solo il 4% dell'input CF e hanno assorbito meno di 1% in un tentativo stato insensibile al peccato rispetto alle cellule trattate a 37 C. Le cellule trattate con CF a 0 C non si autolizzano quando vengono trasferite in condizioni permissive. I risultati presentati in questo rapporto estendono i risultati precedenti che hanno mostrato che lo sviluppo delle competenze e l'autolisi sono correlati all'assorbimento della fibrosi cistica.
Condizioni nutrizionalmente definite per la germinazione delle spore di Streptomyces viridochromogenes.Le spore di Streptomyces viridochromogenes sono state rimosse dalla superficie dei terreni solidi con perline di vetro e sospese in un soluzione tampone-detergente. L'aggiunta di estratto di lievito e glucosio ha comportato una rapida perdita di rifrazione delle spore. Segue l'aspetto dei tubi germinali. La germinazione è stata accompagnata da una diminuzione della densità ottica (OD) della sospensione. La diminuzione dell'OD è stata utilizzata come un test per la germinazione. Un mezzo di germinazione definito (DGM) composto da L-alanina, acido L-glutammico, adenosina, acido para-aminobenzoico e ioni calcio e magnesio ha fornito un tasso di germinazione quasi uguale a quello dei mezzi complessi. Il tasso di germinazione era essenzialmente lo stesso se D-alanina e D-glutammato sostituissero gli isomeri L. Il pH e la temperatura ottimali per la germinazione erano 7,0 e 35 C. La germinazione era assolutamente dipendente dalla presenza di CO2. opo una crescita per periodi più lunghi del normale (10 giorni) è diventata meno germinabile in DGM. Lo stesso è stato osservato per le spore cresciute a 37 C rispetto a 30 C. Le spore incubate in DGM per vari periodi di tempo prima di essere trasferite in una soluzione tampone non hanno continuato a germinare. Le spore raccolte dopo la crescita di otto specie di Streptomyces non hanno mostrato una diminuzione dell'OD quando incubate in un mezzo di estratto di lievito. Un altro ceppo di S. viridochromogenes ha mostrato una diminuzione della OD nel terreno. Vengono discusse le proprietà comparative delle spore di streptomiceti, funghi e bacilli.
Fermentazione antimicina A. II. Fermentazione in fermentatori aerati-agitati.Le caratteristiche di fermentazione, precedentemente studiate in beute agitate, sono state riprodotte in fermentatori aerati-agitati , utilizzando tre ceppi di Streptomyces sp. che erano stati selezionati per la loro elevata produttività di antimicina A in flaconi shakerati. La fermentazione nei fermentatori è stata condotta in tre fasi. Il mezzo era costituito da farina di soia, glucosio, solfato di ammonio e carbonato di calcio; il pH iniziale era 7,2 circa 7,5 e temperatura 25 gradi C. Il corso della fermentazione è stato quindi modificato per favorire la massima crescita ed eliminare il periodo di latenza intermedio osservato nelle beute agitate. Utili correzioni includevano l'aggiunta continua di olio di soia all'1,25 %/giorno e il mantenimento del pH a 6 mediante aggiunta di idrossido di ammonio su richiesta. L'idrossido di ammonio aggiunto serviva anche come fonte di azoto rapidamente utilizzata e non poteva essere sostituito da NaOH o KOH. In condizioni ottimali l'antimicina A wa s prodotte a ritmo costante dal secondo al sesto giorno, quando sono state raggiunte rese massime superiori a 9 g/litro. Viene descritta una procedura per l'estrazione dell'antimicina A.
Distinzione intracellulare tra perossidasi e catalasi nelle cellule esocrine della ghiandola lacrimale di ratto: uno studio biochimico e citochimico.La ghiandola lacrimale (Glandula orbitalis esterna) di ratto contiene sia perossidasi che catalasi ed è stato utilizzato come modello per la distinzione biochimica e citochimica tra perossidasi e catalasi Entrambi gli enzimi sono stati isolati mediante precipitazione di solfato di ammonio da omogenati tissutali e gli effetti della fissazione con glutaraldeide e varie condizioni di incubazione sono stati studiati colorimetricamente utilizzando DAB come donatore di idrogeno. La perossidasi della ghiandola lacrimale è fortemente inibita dal trattamento con glutaraldeide. Al contrario, per la catalasi la fissazione con glutaraldeide è il prerequisito per la dimostrazione della sua attività perossidatica. La massima attività perossidatica è stata ottenuta dopo trattamento della catalasi con glutaraldeide al 3%, concentrazioni più elevate essendo inibitori. Per la perossidasi della ghiandola lacrimale, il tasso massimo di l'ossidazione di DAB è a pH 6,5, mentre per la catalasi è a pH 10,5. La concentrazione ottimale di H2O2 per la perossidasi della ghiandola lacrimale è a 10(-3)M e per l'attività perossidatica della catalasi a 10(-1)M. Queste condizioni ottimali ottenute biochimicamente sono state applicate a sezioni di tessuto della ghiandola lacrimale di ratto. Dopo la fissazione del tessuto a bassa concentrazione di glutaraldeide e l'incubazione nel mezzo DAB a pH neutro contenente 10(-3)M H2O2 (Mezzo perossidasi), il prodotto di reazione è stato localizzato nelle cisterne del reticolo endoplasmatico rugoso, in elementi di l'apparato del Golgi, e nei granuli secretori. Dopo la fissazione del tessuto con glutaraldeide al 3% e l'incubazione nel mezzo DAB contenente 10(-1)M H2O2 e a pH 10,5 (mezzo catalasi), la colorazione nel reticolo endoplasmatico, nell'apparato di Golgi e nei granuli secretori è stata completamente inibito e il prodotto di reazione è stato localizzato esclusivamente in piccole particelle (0,2-0,5 mu) simili a piccoli perossisomi descritti in vari altri tipi di cellule.
Interpretazioni dei gas del sangue arterioso nell'unità di terapia intensiva respiratoria.Il ruolo dell'infermiera nell'unità di terapia intensiva respiratoria richiede una maggiore sofisticatezza in quanto la nostra conoscenza del paziente diventa più complessa. Questo ruolo ampliato dovrebbe includere una comprensione approfondita dei disturbi dell'equilibrio acido-base, la relazione tra PaCO2 e la ventilazione, la differenza tra problemi respiratori acuti e cronici e le cause e il trattamento dell'ipossiemia. la capacità di analizzare e valutare le determinazioni dei gas ematici è semplicemente uno strumento più importante che l'infermiera può utilizzare nella cura e nel trattamento del paziente critico.
Analisi dei gas ematici e valutazione dello stato acido-base.In questo articolo sono stati discussi i tipi più comuni di disturbi acido-base. Per valutare con precisione il tipo di disturbo acido-base riscontrato in un paziente, il medico deve conoscere il pH arterioso, la PaCO2 e l'[HCO-3] nel sangue arterioso. I disturbi acido-base sono associati a disturbi dei fluidi e degli elettroliti. è spesso turbato da disturbi acido-base. La determinazione accurata del bilancio del K+ richiede determinazioni seriali o ripetute della concentrazione plasmatica di K+, nonché un attento monitoraggio clinico.
Effetti della gravidanza sullo sviluppo della sindrome uremica acuta nel ratto.Abbiamo valutato il ruolo contributivo che gli adattamenti metabolici gestazionali possono svolgere nello sviluppo di sindrome uremica acuta nei ratti studiando gli effetti della nefrectomia in animali gravidi e non gravidi Mentre non sono state riscontrate differenze significative nelle concentrazioni di creatinina e acido urico tra ratti di controllo e in gravidanza, le concentrazioni di urea erano significativamente più basse negli animali gravidi prima, così come anche come 6, 12 e 24 h dopo, nefrectomia bilaterale Si suggerisce che la produzione di creatinina, che è correlata alla massa muscolare, non sia alterata durante la tarda gestazione, mentre la sintesi dell'urea, che è influenzata da fattori catabolici e anabolici, sia significativamente ridotta.
Proprietà della fosfofruttochinasi del cristallino di ratto.Due forme interconvertibili di fosfofruttochinasi (PFK) sono state eluite da una colonna di DEAE-cellulosa dalla frazione surnatante di ratto omogenati di lenti centrifugati a 96.000 xg per 1 ora a 0-4 gradi C. L'interconversione può essere manipolata modificando il pH dei tamponi di estrazione ed eluizione. PFK-I è la forma dominante a pH compreso tra 7,4 e 7,05, mentre PFK -II domina a pH 7,4-8,2. Si ritiene che la forma funzionale sia la PFK-II; è inibito da alte concentrazioni di ATP e l'effetto inibitorio è potenziato da un pH più acido. Il fruttosio-6-fosfato contrasta l'inibizione dell'ATP, ma il i più potenti dei-inibitori sono ADP e AMP. Tra gli ioni inorganici testati, anche solfato, fosfato, ammonio e potassio de-inibiscono, mentre il calcio inibisce ulteriormente l'enzima. Il comportamento del PFK in condizioni fisiologiche e il significato della presenza di due forme di PFK nell'obiettivo sono discusso.
[Studio comparativo di tre psicotropi per il trattamento della depressione].È stato studiato l'effetto di tre psicotropi antidepressivi (clorimipramina, doxepina e dibenzepina) in 107 pazienti depressi. In ogni paziente è stato valutato e confrontato settimanalmente (per 4 settimane) il valore medio di dodici sintomi con metodi statistici. Inoltre, è stato analizzato l'effetto di ciascun farmaco nello strato di personalità. Una rapida azione timoretica e timoanalettica su Con Clorimipramina è stato trovato lo strato \'corporalità\' e \'endotimico-vitale\'. La doxepina agisce rapidamente con azioni sedative e ansiolitiche sui sintomi reattivi legati a sovrastrutture di personalità con effetti antidepressivi a lungo termine. La dibenzepina ha un'azione timeretica rapida e intensiva e un lento effetto timoanalettico sullo stesso strato di personalità della Clorimipramina.
Reparto di ricerca in psicofarmacologia. Dieci anni\' di esperienza.Le differenze tra i risultati della ricerca clinica controllata e le esperienze dei professionisti possono essere attribuite a una certa misura all'artificiosità del contesto in cui vengono eseguiti gli studi controllati. Il sistema sviluppato nei reparti del Dipartimento di Psicofarmacologia dell'Istituto di Psichiatria di Praga è un tentativo di superare alcune di queste difficoltà. Esistono alcune somiglianze tra questo sistema chiamato trial controllato continuo e trial \'silent\' proposto da Ross et al. Le caratteristiche principali del sistema sono: (1) tutti i pazienti ricoverati in reparto sono assegnati allo studio senza eccezioni; (2) lo studio continua ininterrottamente senza interruzione per più di 10 anni; (3) salvo che i pazienti non conoscono la qualità dei farmaci somministrati non si rendono conto di alcuna differenza tra questo ambiente di ricerca e la consueta routine tr mangiare. I vantaggi di questo sistema sono: riduzione dell'artificialità; la possibilità di eseguire studi clinici precoci in condizioni controllate e di abbreviare i consueti test in tre fasi di un nuovo farmaco; la possibilità di eseguire studi longitudinali a lungo termine con singoli pazienti ricoverati più volte in condizioni di doppio cieco.
Effetto della fame a lungo termine sui lisosomi del fegato di ratto.L'effetto della fame di 120 e 240 ore sull'ultrastruttura degli epatociti di ratto e in particolare sul sono state studiate le alterazioni dei lisosomi. Elettromicroscopicamente e citochimicamente si è osservata diminuzione del numero dei mitocondri e degranulazione e vacuolizzazione del RE. Contemporaneamente il complesso di Golgi era ipertrofico e il numero dei lisosomi era molto aumentato, principalmente quelli dell'autofagico Biochimicamente è stato dimostrato che l'attività di alcune idrolasi acide (beta-glucosidasi, alfa- e beta-galattosidasi, beta-N-acetilglucosaminidasi, beta-glucuronidasi e arilsulfatasi A e B) nel fegato di ratti affamati era marcatamente espressa. Anche le proprietà di sedimentazione dei lisosomi e la stabilità della membrana lisosomiale sono state danneggiate. I dati ricevuti sono stati discussi alla luce del ruolo ricostruttivo dei lisosomi.
Studi sull'attività dell'arilsolfatasi urinaria in ratti carenti di vitamina A.Le arilsolfatasi urinarie (EC3.1.6.1) A e B sono aumentate in ratti maschi a digiuno per 24 ore L'escrezione di azoto proteico non dializzabile è diminuita mentre l'escrezione di creatinina è aumentata Alla rialimentazione con la dieta l'attività dell'arilsolfatasi A è stata ripristinata alla normalità mentre l'arilsolfatasi B non è stata normalizzata Una singola supplementazione orale di vitamina A acetato (20 000 UI) a ratti a digiuno per 24 ore ore ha comportato una significativa riduzione sia dell'arilsolfatasi A che B anche se non era evidente alcuna ulteriore riduzione dell'escrezione di azoto proteico. In ratti maschi carenti di vitamina A si è verificata una significativa riduzione dell'escrezione urinaria di entrambe le arilsolfatasi A e B. In un numero inferiore di ratti femmine depressione della sola arilsolfatasi A. Questo effetto della carenza di vitamina A che porta a una ridotta attività dell'arilsolfatasi urinaria era evidente anche nella fase di "piatto del peso" quando nessuna riduzione nell'assunzione di cibo o nella crescita si era verificato. Questi risultati suggeriscono un possibile ruolo diretto o indiretto della vitamina A sul modello di escrezione urinaria delle arilsulfatasi presumibilmente rilasciate dai lisosomi dei tessuti.
Basso tasso di fertilità nei maschi vasovasotomizzati e suo possibile meccanismo immunologico.Viste contraddittorie sono state espresse sul ruolo dei vari anticorpi antispermatozoi che si sviluppano dopo la vasoligazione Il presente studio è stato condotto su 50 maschi normali fertili, 50 soggetti vasectomizzati e 25 soggetti dopo ricanalizzazione dei loro dotti deferenti al fine di indagare lo sviluppo di vari anticorpi anti-spermatozoi dopo vasectomia, insieme alla loro incidenza, la loro persistenza dopo il successo del sollievo di vaso-ostruzione da vasovasostomia e loro ruolo nella causa dell'infertilità nei maschi normospermia vasoanatomizzati. Gli anticorpi agglutinanti, immobilizzanti ed emoagglutinanti dello sperma hanno mostrato aumenti dei titoli con aumento durante il periodo post-vasectomia, indicando uno stimolo antigenico continuo. Età, complicanze post-operatorie e gruppo sanguigno non sembrava alterare i risultati. L'86% dei soggetti ha sviluppato agglutinine antispermatologiche, per lo più tail-t tipo o-tail (54,5%), 1-12 anni dopo la vasoligazione, mentre solo il 2% degli uomini fertili aveva spermagglutinine circolanti. Una minore incidenza di spermatozoi positivi nel test di immobilizzazione rispetto al test di agglutinazione suggerisce che questi due test rilevino anticorpi diversi o che questi test abbiano sensibilità diverse. Dei 25 soggetti vasovasostomizzati, 13 (52%) casi sono diventati normospermici e 4 (16%) oligospermici mentre 8 (32%) sono rimasti azoospermici. Ad eccezione di 3 soggetti oligospermici, tutti avevano spermagglutinine circolanti. Tra i 13 soggetti vasovasostomizzati normospermici, è stata trovata una correlazione significativa tra i titoli delle agglutinine antisperma circolanti e l'autoagglutinazione degli spermatozoi nei loro eiaculati; e anche tra i valori di immobilizzazione degli spermatozoi dei loro sieri e il grado della loro motilità spermatica. Tre uomini normospermici ricanalati, con bassi livelli di agglutinine ed emoagglutinine spermatiche con seminogramma normale e nessun anticorpo immobilizzante spermatico, hanno impregnato con successo le loro mogli. Altri 10 soggetti infertili vasovasotomizzati avevano agglutinine spermatiche in titolo significativo; 5 hanno mostrato valori di immobilizzazione degli spermatozoi positivi, un numero simile ha mostrato autoagglutinazione degli spermatozoi, mentre in 6 casi è stata osservata una diminuzione del grado di motilità degli spermatozoi. Quindi c'era una correlazione significativa tra i titoli degli anticorpi anti-sperma e l'autoagglutinazione degli spermatozoi, che potrebbe essere una causa importante di infertilità maschile dopo un efficace sollievo anatomico della vasoostruzione. Gli studi istologici della biopsia testicolare hanno mostrato una spermatogenesi normale in soggetti ricanalati azoospermici, sebbene avessero livelli elevati di anticorpi antispermatozoi. Ciò suggerisce che questi anticorpi non influenzano la normale spermatogenesi e la conta degli spermatozoi.
L'effetto delle prostaglandine e degli inibitori delle prostaglandine sulla spermatogenesi.L'effetto degli inibitori delle prostaglandine, aspirina e indometacina e delle prostaglandine PGE1 e PGE2 sulla spermatogenesi in è stato studiato il topo maschio maturo. L'aspirina a 100 mg/kg e 200 mg/kg e l'indometacina a 1,0 mg/kg somministrata per via orale due volte al giorno per quindici giorni hanno prodotto un marcato aumento della spermatogenesi. Il numero di spermatidi di passaggio 7 è aumentato significativamente rispetto ai controlli a circa la stessa velocità in tutti e tre i gruppi. Non è stato osservato alcun cambiamento significativo nel peso delle vescicole seminali o del peso dei testicoli, sebbene il peso dei testicoli abbia mostrato un aumento. 3 mg/kg una volta al giorno per quindici giorni hanno prodotto una marcata diminuzione della spermatogenesi. Gli spermatidi del passaggio 7 sono diminuiti significativamente sia a livelli di dosaggio di PGE2 che a livello di dosaggio più alto di PGE1. diminuire alla dose più alta di PGE2. Il peso testicolare ha mostrato una diminuzione significativa alla dose più alta di PGE2. Il peso delle vescicole seminali ha mostrato una diminuzione significativa alla dose più bassa di PGE1 e alla dose più alta di PGE2. Il peso dell'epididimo è diminuito alla dose più alta di PGE2. Nell'epididimo degli animali trattati con PGE1 e PGE2 è stato osservato un aumento del numero di cellule germinali immature esfoliate e di spermatozoi maturi.
Motilità del tratto oviduttale di ratto isolata nelle diverse fasi del ciclo sessuale. Effetti delle catecolamine.Caratteristiche fisiologiche e farmacologiche della motilità spontanea di ratto sono descritti i tratti oviduttali (l'ovidotto arrotolato più il suo mesosalpinge), isolati in proestro, estro o metestro. La tensione contrattile iniziale (registrata dopo l'isolamento) era comparabile nelle tre fasi del ciclo, ma il suo decremento nel tempo era maggiore nel metestro rispetto al proestro; si osserva il contrario per quanto riguarda la velocità delle contrazioni. La noradrenalina e la fenilefrina deprimono la motilità nel proestro e nel metestro, ma non nell'estro. L'inibizione della motilità durante il proestro, prodotta dall'aggiunta di noradrenalina, fenilefrina o isoproterenolo non è stata modificata dalla fenotolamina ma è stato abolito dal propranololo. Durante l'estro, noradrenalina e fenilefrina inibivano le contrazioni tubariche dei preparati incubati con fentolamina, dove poiché produceva una stimolazione distinta in presenza di propranololo. Si conclude che: (a) la mesosalpinge del ratto potrebbe svolgere un ruolo nella motilità dell'intero tratto oviduttale isolato; (b) vi sono variazioni nel decremento con il tempo della tensione contrattile e della frequenza delle contrazioni nelle diverse fasi del ciclo sessuale; (c) gli effetti delle catecolamine sul tratto oviduttale del ratto variano anche all'interno del ciclo, probabilmente a causa delle influenze imposte dagli ormoni sessuali.
"Discrinismo genitale" come causa di subfertilità nei topi del ceppo CBA.Dopo quattro generazioni di accoppiamento consanguineo (fratello-sorella) in tre linee dirette di topi del ceppo CBA è comparsa la sterilità che da quella generazione in poi è diventata più frequente: gli organi genitali negli animali di entrambi i sessi sono stati alterati, si è riscontrata una notevole presenza di cisti nelle ovaie delle femmine già dopo il terzo mese; nei topi di circa un anno di età questa condizione era seguita da iperplasia ghiandolare cistica dell'endometrio, talvolta complicata da disturbi della circolazione sanguigna, infiammazioni o addirittura tumori maligni In alcune femmine, manifestando, a causa di cisti, ovaie completamente degenerate, il resto del il sistema genitale era gravemente atrofico. Gli animali maschi mostravano frequentemente una grave atrofia dell'epitelio seminifero insieme a cellule interstiziali conservate e vescicole seminali ipertrofiche. Questi cambiamenti patologici rappresentano t un'unità nosologica indipendente, per la quale è stata proposta l'etichetta "discrinismo genitale". Gli autori hanno considerato un meccanismo endocrino come la possibile causa di questi cambiamenti patologici che si presume siano geneticamente condizionati.
Valutazione di d-norgestrel 1.0 mg come contraccettivo post-coitale.Duecentonovantotto donne sono state seguite per 2578 mesi (2739 \ 'intervalli di sanguinamento\') del trattamento con d-Norgestrel 1,0 mg somministrato come contraccettivo orale post-coitale. Sono state registrate quattordici gravidanze (tasso generale di fallimento, 6,5 per 100 donne/anni);almeno 6 di queste pazienti non hanno perso nessuna compressa (tasso di fallimento corretto, 2,8). I tassi di accettabilità (metodo della tabella di vita) erano 0,58 e 0,40 dopo 6 e 12 mesi di follow-up. La ragione medica più importante per l'abbandono era l'irregolarità del ciclo. Il modello del ciclo è profondamente disturbato da questo metodo di contraccezione orale.
Partecipazione della vitamina A alla maturazione degli spermatozoi di coniglio.La concentrazione di vitamina A è stata misurata mediante fluorimetria nell'epididimo e negli spermatozoi eiaculati di coniglio e in alcuni spermatozoi componenti subcellulari delle cellule La concentrazione di vitamina A nelle cellule dell'epididimo era circa la metà di quella osservata negli spermatozoi eiaculati (2,68 contro 1,05 mug/10(8) cellule) e sembrava essere la stessa negli spermatozoi ottenuti da entrambi i testa e la coda dell'epididimo. La concentrazione di vitamina A è risultata inoltre significativamente più elevata nel plasma seminale rispetto alla secrezione dell'epididimo (0,06 contro 0,039 mug/mg di proteina rispettivamente). Praticamente tutta la vitamina A è stata trovata nel frazioni ottenute dal trattamento con ipotonico MgCl2 (regione acrosomiale) e/o con iamina e ditiotreitolo (membrana plasmatica). Si è concluso che l'aumento improvviso della concentrazione spermatica di vitamina A che si verifica al momento dell'eiaculazione può essere richiesto rosso per la stabilizzazione delle membrane acrosomiali e plasmatiche.
Effetto dei dispositivi intrauterini in rame e plastica sull'attività fibrinolitica dell'endometrio nel ratto.L'effetto dei dispositivi intrauterini in rame e plastica ( IUD) sull'attività fibrinolitica dell'endometrio è stato studiato nel ratto. Un dispositivo di rame o di plastica è stato posto in uno dei corni uterini, mentre l'altro corno è servito come controllo. Sono stati prelevati campioni bioptici da entrambe le corna ed esaminati istochimicamente. La concentrazione di rame è stata determinata mediante spettroscopia ad assorbimento atomico. L'attività fibrinolitica del corno di controllo è risultata localizzata a piccoli vasi nello strato esterno della parete uterina, mentre quella dell'endometrio era bassa. Gli IUD di plastica e di rame hanno aumentato la attività fibrinolitica che, contrariamente a quanto visto nei controlli, era localizzata all'endometrio Rispetto all'effetto del dispositivo in plastica, l'aumento dell'attività fibrinolitica indotta dal dispositivo in rame è stato più ampio pread nell'area endometriale ed è stato accompagnato da un aumento della concentrazione di rame. Questi risultati potrebbero aiutare a spiegare perché l'effetto contraccettivo degli IUD è più affidabile quando sono parzialmente rivestiti con rame.
Oligozoospermia: un'indagine di sette anni sull'incidenza, le aberrazioni cromosomiche, il trattamento e il tasso di gravidanza.Nessun numero di spermatozoi dovrebbe essere considerato troppo basso per essere considerato trattamento estensivo al fine di migliorare lo sperma o correggere eventuali anomalie nelle partner femminili. La coppia sterile dovrebbe ricevere cure e consigli dedicati per migliorare i loro rapporti sessuali e il loro atteggiamento psicologico nei confronti del problema dell'infertilità. Un tasso di gravidanza del 51,9% dove il Il conteggio del marito era inferiore a 10 milioni/ml, offre un supporto adeguato per questa affermazione. Nei casi di trauma mentale inflitto ai pazienti da un verdetto di incapacità di raggiungere la genitorialità, a persone che hanno già subito un grave shock psicologico e tensione derivante da un periodo di infertilità - lo scoraggiamento diminuisce le già dubbie possibilità di ottenere una gravidanza. In nessun caso i pazienti oligozoospermici dovrebbero ricevere un trattamento per l'infertilità a meno che un'analisi cromosomica sis è stata completata e trovata normale, poiché il nostro tasso di anomalie cromosomiche (11,4%) in un gruppo di pazienti oligozoospermici è considerato troppo alto.
Miglioramento della motilità degli spermatozoi in pazienti con astenozoospermia mediante trattamento con callicreina.Applicazione parenterale e orale della callicreina (EC 3.4.21.8)--a chinina- rilascio di proteinasi dal tessuto pancreatico suino - stimola significativamente la motilità degli spermatozoi quantitativa e qualitativa nei maschi subfertili con criteri di astenozoospermia. È stato riscontrato un miglioramento della motilità degli spermatozoi per almeno 3 mesi dopo la fine del trattamento con callicreina della durata di 7 settimane. Inoltre, un un aumento significativo del numero di spermatozoi è stato osservato 3 e 5 mesi dopo l'inizio dell'applicazione parenterale di callicreina.
Microbiopsia della tuba di Falloppio come metodo per l'indagine clinica della funzione tubarica nell'infertilità.La microbiopsia dell'estremità fimbriale della tuba di Falloppio può rivelarsi essere un valido metodo per indagare il meccanismo di prelievo e trasporto tubarico nelle pazienti con infertilità Il conteggio della percentuale di cellule ciliate su sezioni semisottili mostra che nelle donne normali fertili è presente una percentuale di tali cellule che è maggiore rispetto a condizioni anormali come aderenze peritubali, gravidanza ectopica e amenorrea a seguito di un trattamento progestinico prolungato. Si suggerisce inoltre che l'esame ultrastrutturale della biopsia possa fornire ulteriori preziose informazioni.
Immunoelettroforesi incrociata di anticorpi spermatici nel siero umano e nel muco cervicale.Gli anticorpi agglutinanti vengono purificati da sieri e muco cervicale di donne con cause inspiegabili di infertilità che sono risultati positivi nel test FD. Il frazionamento è stato eseguito mediante cromatografia di affinità in un dispositivo batch e l'attività agglutinante dello sperma è stata controllata dal test di Franklin e Dukes. Questa frazione anticorpale spermatica è stata determinata tramite immunoelettroforesi incrociata mediante migrazione in un siero anti-umano contenente gel. In tutti i casi è risultato un solo grande picco. I campioni di siero e muco di controllo negativo non hanno mostrato picchi di precipitazione. Da studi di assorbimento è stato dimostrato che gli anticorpi agglutinanti spermatici nei sieri erano IgM e nel muco cervicale IgA. La concentrazione di IgA e Le IgM sono state determinate per confronto con IgA e IgM umane standard, pertanto solo un anticorpo sierico e un anticorpo del muco cervicale sembrano essere responsabili dell'agglutinazione. il numero di esperimenti, tuttavia, è ancora troppo piccolo per trarre conclusioni generali. Questo metodo viene eseguito facilmente e rapidamente e può quindi essere utilizzato come metodo di routine per la determinazione degli anticorpi agglutinanti dello sperma. La sua applicazione per l'attività di immobilizzazione degli spermatozoi o citotossica deve ancora essere testata.
Organi genitali. Auto e omotrapianto in quaranta cani.Il trapianto auto e omo di utero e ovaie è stato studiato in 40 cagne divise in quattro gruppi. Il gruppo A è servito come controllo, nel gruppo B è stata utilizzata la tecnica dell'omentopessia dell'autotrapianto, questo metodo non si è rivelato molto gratificante e tutti e 12 gli innesti sono risultati degenerati e non funzionanti quando è stata eseguita la relaparotomia, 3 mesi dopo il trapianto Nel gruppo C, l'autotrapianto con anastomosi vascolare è stato eseguito in 12 cani, ottenendo risultati soddisfacenti tra cui una gravidanza riuscita e il parto di 3 cuccioli sani Nel gruppo D l'omotrapianto degli organi genitali interni è stato eseguito in due gruppi di cani gemelli. è stato utilizzato un trattamento immunosoppressivo. Questi innesti sono sopravvissuti per un periodo limitato come dimostrato dai test funzionali e dall'esame radiografico ma dopo 3 mesi sono stati trovati necrotici e degenerati. ility è stato stabilito da: esame a raggi X, citologia di strisci vaginali, effetto delle gonadotropine sulle ovaie innestate e infine relaparotomia intrapresa dopo 3 settimane e 3 mesi.
Miglioramento della fertilità e della qualità dello sperma negli uomini trattati con una combinazione di farmaci anticongestionanti e antibiotici.Gli effetti di una terapia combinata di antibiotici e farmaci antinfiammatori è stata valutata in 344 uomini indirizzati alla nostra clinica per il trattamento dell'infertilità. Segni fisici di congestione, di solito non gravi, sono stati rilevati in 244 uomini. Il trattamento ha causato un miglioramento significativo della qualità del seme, in particolare della concentrazione, della morfologia e della motilità degli spermatozoi. Il quaranta percento di le mogli rimasero incinte. C'era una sorprendente relazione tra l'aumento degli spermatozoi morfologicamente normali e l'incidenza della gravidanza. Si ipotizza che la terapia abbia avuto il suo effetto maggiore a livello dell'epididimo e/o del testicolo.
Valutazione dell'effetto terapeutico dell'epimestrol e dell'epimestrol associati al clomifene nella sterilità femminile.In 24 donne con disturbi dell'ovulazione trattate per la sterilità con Epimestrol, l'ovulazione è stata ottenuta in 3 pazienti ma nessuna di queste è rimasta incinta dopo la terapia. Poiché è stato suggerito che l'associazione di Clomifene con un debole estrogeno potrebbe migliorare il tasso di gravidanza, abbiamo deciso di somministrare Clomifene associato a Epimestrol. Utilizzando questa terapia combinata in 58 pazienti, 32 delle 58 donne hanno ovulato e 17 concepito. Il tasso complessivo di gravidanza utilizzando la terapia combinata non è stato migliore di quello ottenuto quando viene somministrato Clomifene da solo. Da questo studio si conclude che: (1) Epimestrol non è un efficace metodo per l'induzione dell'ovulazione e (2) l'aggiunta di epimestrol al clomifene non ha alcun beneficio clinico.
Su spermatozoi umani a testa tonda.In un uomo sterile e nel suo unico fratello, anch'esso sterile, lo sperma conteneva solo spermatozoi con testa tonda. Elettrone l'esame microscopico dell'eiaculato inglobato ha rivelato una malformazione, ovvero assenza di acrosomi in tutti gli spermatozoi con conseguente mancato sviluppo normale delle teste degli spermatozoi. Spermatozoi privi di acrosoma sono stati trovati anche nei tubuli testicolari. Non è stato possibile dimostrare alcun disturbo delle funzioni endocrine. Le cellule del sangue erano di cariotipo maschile normale. L'indagine sulla meiosi, d'altra parte, ha mostrato una seconda divisione rudimentale. Altri due uomini infertili non imparentati hanno mostrato lo stesso disturbo isolato nel loro spermiogramma. Il trattamento con clomifene non ha avuto effetto sulla struttura degli spermatozoi o sull'infertilità. La malattia rara, che sembra essere una sindrome speciale, la prima finora distinguibile tra i vari tipi di teratospermia, e il suo probabile backgr si discute.
Età alla menopausa e inizio del climaterio nelle donne del distretto di Martin, Cecoslovacchia. Indagine statistica e alcune correlazioni biologiche e sociali.In questo studio , sono state analizzate 6877 donne di età compresa tra i 38 e i 58 anni (nate tra il 1909 e il 1929) e che non avevano avuto la menopausa artificiale, pari all'88,04% della popolazione femminile totale in questo effettivo periodo di vita, residente nel distretto di Martin nel 1967. L'età media alla menopausa è risultata, con il metodo dello status quo, pari a 51,21 anni (deviazione standard 4,4) e con il metodo delle medie aritmetiche ponderate, 48,81 anni (deviazione standard 3,9). climaterico, calcolato con gli stessi metodi, era rispettivamente di 47,55 anni o 46,74 anni, l'età media al menarca era di 14,6 anni, la natalità media era di 2,8 e il periodo medio di fertilità per l'intera serie era di 36,6 anni. Le donne con disturbi mestruali hanno avuto la menopausa circa 1 anno prima Abbiamo notato una tendenza simile nelle nullipare e nelle primipare. Non abbiamo riscontrato grandi differenze nell'età alla menopausa tra coloro che avevano avuto un menarca precoce o tardivo. Anche i disturbi mestruali hanno influenzato l'insorgenza del climaterio. Era almeno un anno prima rispetto alle mestruazioni regolari. L'età al menarca e la parità non hanno avuto alcun effetto sull'età all'inizio del climaterio. Le donne che lavorano in agricoltura e casalinghe hanno avuto la menopausa un po' più tardi dell'età media della serie, mentre le lavoratrici manuali e quelle in altre categorie professionali hanno avuto la menopausa e l'inizio del climaterio circa 1 anno prima. Inoltre, le donne single hanno avuto la menopausa circa un anno prima di quelle sposate. Le vedove hanno avuto la menopausa due volte più spesso delle donne sposate e l'hanno avuta subito dopo la morte dei mariti.
Risposta della gonadotropina ipofisaria all'ormone di rilascio dell'ormone luteinizzante (LH-RH) nei maschi con azo- e oligospermia.Ventuno maschi con azo- o oligospermia che si presentava con infertilità e senza evidenza di malattia organica sono stati studiati con l'ormone di rilascio dell'ormone luteinizzante (LH-RH). Una risposta dell'ormone luteinizzante ipofisario (LH) e dell'ormone follicolostimolante (FSH) era presente in tutti i casi ed era normale in la maggior parte dei soggetti. I livelli sierici di testosterone e 17 beta estradiolo erano normali in tutti i casi studiati. Non sono state trovate correlazioni significative tra le stime delle gonadotropine e il numero di spermatozoi, il testosterone sierico basale o la risposta del testosterone alla gonadotropina corionica umana. Si conclude che LH- L'RH è di uso diagnostico limitato nell'indagine di questo gruppo di pazienti con infertilità maschile e non fornisce ulteriori informazioni sulla patogenesi di questa condizione.
Cephacetrile, una nuova cefalosporina: valutazione in vitro, farmacologica e clinica.Cephacetrile, una cefalosporina parenterale, è stata valutata per l'attività antibatterica in vitro, clinica farmacologia ed efficacia nel trattamento delle infezioni gravi. L'attività antibatterica contro 187 isolati è stata determinata mediante una tecnica di diluizione in agar. Le MIC erano comprese tra 0,06 e 0,5 mug/ml per Streptococcus di gruppo A, D. pneumoniae e Staph. aureus, 4- 6 mug/ml per E. coli e Klebsiella-Enterobacter 8-32 mug/ml per Pr. mirabilis e più di 500 mug/ml per Ps. aeruginosa Alcuni ceppi di Klebsiella ed E. coli avevano MIC superiori a 125 mcg /ml. I livelli sierici dopo 0,5 e 1 g di im cephacetrile erano rispettivamente 14,6 e 18,6 mug/ml dopo 1 ora e 1,5 e 2,5 mug/ml dopo 6 ore. I livelli sierici dopo infusione ev di 0,5 e 1 g erano rispettivamente 16 e 25 mug/ml dopo 1 ora e 1 e 2 mug/ml dopo 6 ore Livelli urinari dopo 0,5 e 1 g im cephacetrile wer e rispettivamente 500 e 650 mug/ml nel periodo 0-3 ore, e 250 e 300 mug/ml nel periodo 3-6 ore. La clearance renale era di 166 +/- 5 ml/min/1,73 m2; l'escrezione renale era circa il 20% della dose 6 ore dopo i. m. iniezione. Il cefacetrile è stato ben tollerato quando somministrato i. m. con lidocaina. Flebite lieve si è verificata a volte dopo l'iniezione e. v. infusi. La risposta clinica, valutata in 36 pazienti con gravi infezioni sistemiche, respiratorie e urinarie, è stata buona in tutti i casi tranne due.
Attività di due batteriocine di Streptococcus mutans in presenza di saliva, levan e destrano.I destrani extracellulari prodotti dal saccarosio da ceppi di Streptococcus mutans BHT e GS-5 non ha impedito la sintesi o il rilascio di batteriocine attive da parte di questi due ceppi. Inoltre, diversi streptococchi che erano geneticamente sensibili a queste batteriocine e che potevano sintetizzare una varietà di destrani e levani extracellulari dal saccarosio, sono rimasti fenotipicamente sensibili quando coltivati in presenza di saccarosio. L'attività della batteriocina non è stata alterata dal trattamento con destrano ad alto peso molecolare o dalla saliva umana. Le batteriocine prodotte e attive contro S. mutans sembrano quindi essere in grado di agire in vivo e possono svolgere un ruolo ruolo nella regolazione dell'ecologia batterica del cavo orale.
Purificazione e proprietà dell'enterotossina termostabile di Klebsiella pneumoniae.Il materiale enterotossico nelle preparazioni di crescita senza cellule di Klebsiella pneumoniae sierotipo 5 è stato purificato sequenzialmente le procedure di ultrafiltrazione e gel filtrazione (GF) e le frazioni sono state saggiate per l'attività enterotossica determinando la loro capacità di indurre in vivo la secrezione netta di acqua nel digiuno di ratto. I lisati di cellule intere erano inattivi. Le condizioni di coltura in brodo anaerobico hanno prodotto un aumento di 10 volte nella produzione di tossine in condizioni aerobiche L'attività enterotossica era assente nel retentato UM-10 del filtrato di brodo ma presente sia nel retentato che nel filtrato della membrana UM-2 GF delle due frazioni di ultrafiltrazione UM-2 attraverso un Sephadex G-25 colonna ha prodotto un eluato attivo, la cui potenza è stata aumentata di 10 o 200 volte, all'interno o in prossimità del volume vuoto. Quando successivamente passati attraverso una colonna G-50, questi pool eluivano a un Kav compreso tra 0,4 e 0,6 e furono ulteriormente aumentati in potenza di due o cinque volte. Una seconda frazione ugualmente potente è stata recuperata anche nel volume vuoto dell'eluato G-50 del filtrato UM-2; questo può rappresentare un polimero. La purificazione progressiva da GF è stata associata ad un aumento del contenuto proteico e ad una diminuzione del contenuto di carboidrati delle frazioni più attive. L'eluato G-50 più attivo del retentato UM-2 aveva una dose enterotossica efficace minima di 5 mug/ml e quella del filtrato era inferiore a 0,1 mug/ml. Il riscaldamento degli eluati di GF attivi a 100°C per 30 minuti non ha abolito l'attività enterotossica e l'abbassamento del pH a 1 o l'incubazione con Pronase o tripsina non ha avuto alcun effetto sull'attività. Queste osservazioni indicano che l'enterotossina termostabile di K. pneumoniae è probabilmente una singola tossina con un peso molecolare apparente nell'intervallo di 5.000. Le caratteristiche di eluizione durante il GF e la composizione chimica delle frazioni di enterotossine più purificate indicano che la tossina non è associata all'endotossina.
[Terapia ambulatoriale della tricomoniasi vaginale. Sperimentazione clinica di una nuova sostanza azidica attiva da Trichomonas].Relazione sui risultati della sperimentazione clinica di un nuovo tricomonacide in pazienti ambulatoriali in uno studio ginecologico. Viene presentato un rapporto su un nuovo farmaco per il trattamento della tricomoniasi vaginale, che è stato provato in 87 pazienti di uno studio ginecologico in condizioni ambulatoriali. Il tasso di insuccessi è stato del 5,7% (5 di 87 casi). I vantaggi rispetto alle preparazioni alternative si riscontrano nella breve durata del trattamento (24 ore al massimo) e nella favorevole tollerabilità nonostante le dosi elevate.