Split (1)

train · 17.2M rows

text stringlengths 9 6.27k
Risposta anticorpale alla fosforilcolina in vitro. II. Analisi delle risposte T-dipendenti e T-indipendenti.Cellule di milza di topi BALB/c innescati con keyhole patella emocianina (KLH), sono stati stimolati con vaccino ucciso a caldo di Pneumococcus pneumoniae grezzo R36A (Pn) e/o KLH accoppiato con fosforilcolina (PC) per indurre una risposta anti-PC in vitro. La risposta a PC-KLH è stata trovata essere T-dipendente mentre è T-indipendente da Pn. Gli anticorpi indotti con entrambi gli antigeni avevano un'avidità simile ed esprimevano esclusivamente l'idiotipo TEPC 15; quindi il coinvolgimento delle cellule T nella risposta a PC-KLH non è riuscito ad alterare questi parametri dell'antigene -Risposta PC A livello di cellula precursore, Pn ha indotto piccoli cloni con una dimensione media di 10 cellule formanti placca (PFC), mentre PC-KLH ha dato origine a cloni più grandi di 40-50 PFC. Questa differenza nel potenziale proliferativo di Le cellule B precursori del PC hanno suggerito la possibilità che Pn e PC-KLH stessero stimolando diversi precu rsi. Ciò è stato corroborato dall'osservazione che a) quando Pn e PC-KLH sono stati aggiunti alle stesse colture si è osservato un effetto sinergico, cioè il numero di placche era maggiore della somma delle risposte indotte da ciascun antigene, e b) nelle microcolture , in condizioni limitanti solo le cellule B, Pn più PC-KLH ha indotto una frazione più elevata di pozzetti rispondenti rispetto a entrambi gli antigeni da soli. Ipotizziamo che Pn e PC-KLH stimolino sottopopolazioni di cellule precursori del PC che sono rispettivamente T-indipendenti e T-dipendenti.
Inibizione dell'attività delle cellule T in vivo: un modello di prova per la valutazione quantitativa.Viene presentato un modello di prova che, rispetto ai modelli convenzionali di trapianto di pelle o reazione del trapianto contro l'ospite (GvH) nei topi, consente una valutazione quantitativa più sensibile dell'inibizione delle cellule T in vivo. di A rispetto a B è inibito dal trattamento consecutivo. L'entità dell'inibizione può essere valutata dopo il trasferimento del materiale AA pretrattato sui destinatari AB mediante il calcolo della reattività GvH rimanente, se confrontata con trasferimenti di controllo adeguati. In questo modello l'animale bersaglio per la reattività delle cellule T (il ricevente AB) non viene toccato dal regime immunosoppressivo.
Le cellule soppressorie timiche prive di antigene: una classe di linfociti nel timo di pollo giovane che inibisce la produzione di anticorpi e le risposte immunitarie cellulo-mediate.Trasferimento di cellule del timo da polli giovani in combinazione con una leggera irradiazione di tutto il corpo (360 R) è stato trovato per sopprimere il rigetto degli innesti cutanei attraverso forti differenze di istocompatibilità (B) In media, gli animali soppressi hanno anche mostrato una diminuzione dei titoli di emoagglutinina sierica contro gli eritrociti del ceppo donatore di pelle e una ridotta reattività del trapianto contro l'ospite (GvH) contro gli embrioni di questo ceppo. Le cellule soppressorie timiche possono essere ottenute da animali che non hanno sperimentato l'antigene in esame. Tuttavia, dopo il trasferimento e il contatto con l'antigene (innesto cutaneo) possono portare alla formazione di cellule soppressive specifiche ("attivate") e possono mediare nel lungo periodo una specifica inibizione della risposta a questo antigene. L'attività soppressiva è associata ato con una sottopopolazione cellulare dipendente dalla borsa nel timo che è diversa dai linfociti B, dalle cellule precursori B o dalle cellule T reattive al GvH. La dipendenza dalla borsa della cellula soppressore del timo suggerisce che lignaggi funzionalmente diversi di linfociti timici e derivati dal timo siano derivati da diverse fonti di cellule staminali pretimiche. Le cellule soppressive si trovano prevalentemente nel timo di pollo giovane e già rilevabili nell'embrione di 16 giorni, mentre una scarsa attività soppressiva si trova nel timo adulto. L'effetto soppressivo può essere ottenuto con cellule del timo da donatori singenici o allogenici. I donatori embrionali allogenici forniscono preparazioni cellulari soppressive prive di reattività GvH. Viene discussa la possibilità che le cellule soppressori del timo mediano l'autotolleranza e la "tolleranza neonatale".
Ferredoxin da un'alga rossa, Porphyra umbilicalis.Una ferredossina di tipo vegetale-algale è stata isolata dall'alga rossa, Porphyra umbilicalis. Nella sua forma ossidata la ferredossina aveva massimi di assorbimento a 277, (281), 323, 420 e 462 nm. Per ogni molecola di proteina erano presenti due atomi ciascuno di ferro non eme e zolfo labile. Il potenziale del punto medio della proteina era di -400 mV ed è effettivamente mediato trasporto di elettroni nel sistema di fotoriduzione NADP dell'orzo La composizione amminoacidica di Porphyra umbilicalis ferredoxin è stata determinata come (Lys4, His2, Arg1, Asx10, Thr8, Ser7, Glx16-17, Pro3, Gly7, Ala8, Cys5, Val6, Met1 , Ile5, Leu8, Tyr5, Phe2). Il peso molecolare minimo di circa 11000 è stato confermato da studi di sedimentazione-equilibrio nell'ultracentrifuga analitica. L'approssimarsi della metà della sequenza amminoacidica totale è stata determinata mediante un sequenziatore automatico.
Il destino dell'ACTH rilasciato dall'ipofisi anteriore del ratto nel mezzo di incubazione in vitro: degradazione enzimatica e attivazione acida.La bioattività dell'ACTH rilasciato da isolati è stata determinata la ghiandola pituitaria anteriore del ratto nel mezzo di incubazione. Dopo la rimozione dell'ipofisi, l'attività dell'ACTH nel mezzo è diminuita esponenzialmente durante l'ulteriore incubazione a 37 gradi C. La perdita dell'attività dell'ACTH era dipendente dalla temperatura e dal pH e inibita sia dall'inibitore della proteasi (trasilolo ) e mediante preriscaldamento. Estratti di tessuto grezzo dall'eminenza mediana, dalla corteccia cerebrale e dal fegato hanno analogamente inibito la perdita di attività dell'ACTH. Questi risultati indicano che l'ACTH rilasciato nel terreno può essere distrutto dagli enzimi proteolitici dell'ipofisi anteriore del ratto. Attività dell'ACTH nel mezzo di incubazione è stato aumentato prontamente dall'acidificazione del mezzo a pH 1,5-2,5 con HC1 e ridotto al livello iniziale dalla rineutralizzazione con NaOH del mezzo (pH 6,8-7 .8). Questi fenomeni non sono stati osservati dopo che il mezzo di incubazione è stato riscaldato a 100°C per 5 minuti.
Determinazione diretta delle interazioni del ligando con i recettori beta-adrenergici su eritrociti di tacchino intatti: correlazione del legame con l'attività biologica.Studi precedenti sull'interazione di marcati I bloccanti beta-adrenergici con recettori beta-adrenergici hanno impiegato preparazioni di cellule rotte o membrane. Ora abbiamo effettuato analisi di legame diretto su eritrociti di tacchino intatti utilizzando il potente bloccante ad alta attività specifica [125I]-idrossibenzilpindololo (HYP). si lega a una singola classe di siti recettoriali con un K di 5,3 X 10(10)M-1 e una capacità di legame di 400-500 siti/cellula. Questi risultati così come la cinetica di associazione e dissociazione e la mancanza di prove di negatività la cooperatività tutti concordano bene con gli studi riportati in precedenza sulle preparazioni di membrane dalle stesse cellule. Le vere costanti di dissociazione (Kd) per agonisti e antagonisti determinate dall'inibizione del legame di [125I]HYP sono in buon accordo con i risultati in me preparazioni di membra. Questi Kd\' sono stati confrontati direttamente con le costanti di attivazione o inibizione per gli effetti sull'adenilato ciclasi utilizzando la generazione di [14C]cAMP da [14C]adenina in cellule intatte. La stretta correlazione tra gli effetti sul legame e l'attività dell'adenilato ciclasi nelle cellule intere è simile ai risultati ottenuti nelle preparazioni di membrane in presenza di nucleotidi guanina, suggerendo la presenza di un'analoga sostanza regolatrice in vivo.
Metabolismo del progesterone in vitro da testicoli di coniglio a diversi stadi di sviluppo.Omogenati testicolari di conigli bianchi di 0,4, 1, 3, 4, 5, 8, 18 e 24 mesi di età sono stati incubati con [3H]progesterone e NADPH. A 12 giorni di età, i principali steroidi C21-17-OH- e C19- formati dal progesterone erano 17alfa-idrossiprogesterone e testosterone. Tuttavia, a 4 -24 mesi di età, 17alfa-idrossiprogesterone, 3beta,17alfa-diidrossi-5alfa-pregnan-20-one e 5alfa-ridotti C19-steroidi come 17beta-idrossi-5alfa-androstan-3-one, 3beta-idrossi-5alfa -androstan-17-one e 5alfa-androstano-3beta,17beta-diolo erano i prodotti principali. La formazione di quantità significative di steroidi C19 ridotti a 5alfa, che era stata dimostrata in precedenza solo nei testicoli prepuberali di ratti e topi, è stata presente nei testicoli dei conigli sia in età prepuberale che adulta. Questi risultati indicano chiaramente che i modelli metabolici del progesterone nel coniglio adulto dif fer da quelli del ratto e del topo adulti. I principali steroidi C19 formati dai testicoli sono il testosterone nel ratto e nel topo adulti, ma gli steroidi C19 ridotti di 5 alfa nel coniglio adulto.
Interazione dell'uteroglobina con progesterone, 5alphapregnane-3,20-dione ed estrogeni.L'uteroglobina è stata ottenuta da conigli gravidi di 5 giorni e purificata fino all'omogeneità mediante Sephadex G 75 e cromatografie su cellulosa DEAE. Il legame del progesterone all'uteroglobina è diminuito mediante liofilizzazione e potenziato da agenti che riducono l'SH. Il ditiotreitolo era più efficace del ditioeritritolo e il beta-mercaptoetanolo era attivo solo a concentrazioni da 25 a 100 mM. Agenti bloccanti l'SH (iodoacetato, iodoacetamide, pidrossimercuribenzoato e acido ditiobisnitrobenzoico) hanno inibito il legame In assenza di agenti riducenti l'SH solo una molecola di uteroglobina su 500 si legava all'ormone, mentre in condizioni ottimali (20 mM ditiotreitolo) una molecola su due si legava al progesterone. Non c'era alcuna differenza significativa nelle costanti di dissociazione dell'equilibrio in queste due condizioni L'uteroglobina aveva un'affinità relativamente alta per il progesterone (KD=4.1 X 10 (-7)M) ma un'affinità tre volte maggiore per il 5alfa-pregnane-3,20-dione (KD=1,3 X 10(-7)M). L'estradiolo era legato ma in modo non specifico con un'affinità molto bassa e il suo legame non era potenziato dagli agenti che riducono l'SH. La specificità ormonale del legame all'uteroglobina era diversa da quella del legame al recettore del progesterone uterino di coniglio. Vari progestinici sintetici (clormadinone acetato, noretisterone, R5020) erano legati a quest'ultimo ma non alla prima proteina. Il dietilstilbestrolo aveva una certa affinità (15% di quella del progesterone) per l'uteroglobina e nessuna affinità per il recettore del progesterone. L'uteroglobina incubata in presenza o assenza di cofattori (NADH e NADPH) con o senza ditiotreitolo non ha metabolizzato il progesterone.
[Trattamento del coma e precoma diabetico con infusioni continue di insulina a basse dosi (trad.autore\'s)].13 pazienti, nove donne e quattro uomini, di età compresa tra 22 e 83 anni, sono stati trattati per coma o precoma diabetico tra settembre 1974 e gennaio 1976. Dieci pazienti erano diabetici noti e sei di loro erano stati trattati con insulina. Al momento del ricovero la glicemia era di 32,4 +/- 3,3 mmol/l (5,84 +/- 0,6 g/l). Il pH del sangue capillare era 7,15 +/- 0,06 (n = 13). Il trattamento consisteva nell'infusione continua di insulina (6 UI di insulina solubile/ora), soluzione fisiologica, sostituzione del potassio e sodio bicarbonato (se il pH era inferiore a 7,15) Nelle prime ore di trattamento sono stati 98 +/- 12 UI di insulina, 6,5 +/- 0,5 litri di liquido, 168 +/- 22 mmol di potassio e 237 +/- 55 mmol di NaHCO3 Durante le prime 4 ore dell'infusione di insulina la diminuzione oraria della glicemia è stata di 3,55 mmol/l (0,64 g/l). In un caso si è verificata ipokaliemia durante il trattamento, ipoglicemizzazione io non è stato osservato. Un precedente trattamento con insulina e acidosi grave non ha influenzato il successo terapeutico. Dodici pazienti sono stati trattati con successo, un paziente è morto 6 ore dopo il ricovero a seguito di embolia arteriosa mesenterica.
[Trattamento efficace dell'ulcera duodenale con cimetidina (autore\'s trad.)].Dodici pazienti con ulcera duodenale maschi ricoverati in doppio cieco o l'antagonista del recettore H2 dell'istamina cimetidina (4 X 200 mg/d PO) o capsule di placebo. Le dimensioni dell'ulcera sono state valutate endoscopicamente prima della terapia seguita da un'endoscopia ripetuta a intervalli settimanali. La guarigione dell'ulcera duodenale era significativamente più rapida nei pazienti trattati con cimetidina rispetto in quelli che hanno ricevuto il placebo (chi2 test; P minore di 0,0005) Il tracciamento delle dimensioni dell'ulcera logaritmica (mm2) rispetto al tempo (giorni) ha prodotto linee di regressione le cui pendenze indicavano il rispettivo emivita di guarigione dell'ulcera: circa 6 giorni terapia con cimetidina e circa 20 giorni di trattamento con placebo. La secrezione gastrica di acido, proteine, pepsina e glicoproteine contenenti acido N-acetilneuraminico non è stata alterata da un ciclo di 4 settimane di cimetidina o placebo giornalieri, né la secrezione pancreatica di bicarbonato ed enzimi. Nessuna condizione Al trattamento sono stati associati cambiamenti statisticamente significativi nei risultati di laboratorio (emoglobina, globuli bianchi, neutrofili, piastrine, fosfatasi alcalina, urea nel sangue, creatinina sierica, GOT, GPT).
Lorazepam come sedativo-amnesico in un reparto di terapia intensiva.È stato condotto uno studio clinico per valutare l'utilità del lorazepam per via endovenosa, somministrato per la sedazione invece di narcotici oppiacei o diazepam, in 25 pazienti gravemente malati trattati in un'unità respiratoria e di terapia intensiva. Tutti tranne 3 pazienti erano in ventilazione assistita. Dosi standard di 4 mg di lorazepam sono state somministrate a intervalli di 4 o 6 ore per periodi fino a 25 giorni. L'ECG, la stabilità emodinamica e le determinazioni biologiche sono state monitorate costantemente. A parte qualche ritardo nell'inizio dell'azione, il lorazepam si è dimostrato un utile sedativo con diminuito richiamo da parte dei pazienti. Non sono stati segnalati effetti collaterali, né è stato non vi è stata alcuna reazione locale all'iniezione. La gittata cardiaca è stata misurata in 9 pazienti dopo somministrazione endovenosa di una dose singola di 4 mg o 8 mg di lorazepam. Non sono stati registrati cambiamenti significativi.
Enzimi dalla cartilagine articolare umana: isolamento dell'arilsulfatasi B e suo confronto con l'arilsulfatasi A.Questo studio descrive l'isolamento delle arilsulfatasi A e B (arilsolfato sulfohydrolase EC 3.1.6.1) dalla cartilagine articolare umana. Questi enzimi sono stati estratti da digeriti di collagenasi di omogenati tissutali. Dopo il frazionamento con solfato di ammonio gli enzimi sono stati separati l'uno dall'altro mediante cromatografia DEAE-cellulosa e ulteriormente purificati mediante filtrazione su gel su Sephadex G-200 La solfatasi B, successivamente cromatografata su CM-cellulosa era apparentemente omogenea come giudicato dall'elettroforesi su gel di poliacrilammide in presenza e assenza di sodio dodecilsolfato. L'enzima ha un pH ottimale di 5,6, un peso molecolare di 51.000 e Km di 2,6 mM per 4 -nitrocatecol solfato. La solfatasi A è risultata essere una glicoproteina con un pH ottimale di 4,8, un peso molecolare di 105.000 e un Km di 0,16 mM per 4-nitrocatecolo solfato. Il competitivo inhi bizione di entrambi gli enzimi da solfato inorganico, solfito e fosfato supportano la probabilità di un meccanismo di reazione comune. A differenza della solfatasi B che ha mostrato un'inibizione minima, la solfatasi A è stata totalmente inibita dalla N-etilmaleimmide 5 mM.
Effetto dell'acido ascorbico sulle attività dell'arilsulfatasi A e B nelle colture di condrociti umani.Condrociti coltivati della cartilagine articolare umana normale hanno mostrato livelli decrescenti di arilsulfatasi A e B attività quando cresciuto in presenza di livelli crescenti di acido ascorbico (da 0 a 90 mug/ml) nei media. Che questo non fosse un effetto generale su tutti gli enzimi lisosomiali è stato supportato dall'aumento dell'attività della fosfatasi acida e nessun cambiamento nella beta- attività della glucuronidasi osservata con livelli crescenti di vitamina C in condizioni di coltura identiche. Nessuna diminuzione dell'attività dell'arilsolfatasi è stata osservata quando l'acido ascorbico è stato sostituito dall'ascorbato-2-solfato. L'acido ascorbico non ha inibito l'attività dell'arilsolfatasi quando aggiunto direttamente alla miscela del test. Questi dati, combinati con i risultati degli esperimenti di miscelazione, suggeriscono che l'effetto della vitamina C è mediato da fattori cellulari prodotti in risposta alla sua inclusione nei terreni di crescita.
acidificazione renale nell'uomo ipotiroideo.il ruolo dell'ormone tiroideo nella secrezione renale di ioni idrogeno rimane in gran parte sconosciuto e ci sono solo informazioni limitate sull'acidificazione renale in pazienti ipotiroidei. Nel presente studio, due dei cinque pazienti maschi adulti con ipotiroidismo primario non trattato e senza evidenza clinica di malattia autoimmune sistemica non sono stati in grado di abbassare adeguatamente il pH delle urine dopo un carico acido di breve durata. Poiché, prima del carico acido, il loro i valori dei gas nel sangue arterioso erano all'interno dell'intervallo normale e l'escrezione urinaria di bicarbonato era insignificante, i risultati sono coerenti con la sindrome incompleta dell'acidosi tubulare renale distale. Sebbene il meccanismo di questa anomalia rimanga sconosciuto, il deficit di tiroxina di per sé può essere in parte responsabile.
Confronto tra innesti di bypass dell'arteria mammaria interna e della vena safena per la rivascolarizzazione miocardica: test da sforzo e correlazioni angiografiche.L'efficacia della perfusione miocardica con l'arteria mammaria interna (IMA) bypass rivascolarizzazione è stata messa in discussione. Abbiamo confrontato 37 pazienti con innesti di bypass IMA singolo brevetto con 26 pazienti che hanno avuto un bypass singolo innesto di vena safena (SVG) pervio. classificati e confrontati in base alla completezza della rivascolarizzazione mediante cateterizzazione postoperatoria. Tutti i sottogruppi di pazienti hanno avuto miglioramenti statisticamente significativi nella capacità di lavoro, nella frequenza cardiaca massima, nei prodotti della frequenza massima-pressione, negli elettrocardiogrammi da sforzo anormali e nell'angina pectoris indotta dall'esercizio. I miglioramenti quantitativi in queste misurazioni della palliazione del paziente erano le stesse durante gli stress test postoperatori a dopo la rivascolarizzazione SVG o IMA. Considerando il tasso di pervietà complessivamente più elevato del bypass IMA, i dati indicano che questa procedura, quando applicabile chirurgicamente, è preferibile al bypass SVG.
Uno studio ESR sull'ancoraggio dell'acido stearico marcato con spin in multistrati di lecitina.In fasi lamellari di lecitina d'uovo-acqua, acido stearico marcato con spin fornisce due spettri ESR sovrapposti che sono ben risolti solo quando la temperatura è maggiore di 30 gradi C. Queste due componenti spettrali sono attribuite alle forme dissociate e non dissociate del gruppo carbossilico dell'acido grasso, ancorato in due diverse posizioni nell'interfaccia polare costituita dalle teste polari lipidiche idratate. Vengono presentati anche i risultati su tali interazioni di altri gruppi funzionali (estere grasso marcato con spin e alcool grasso).
Microdose mammography.Decine di migliaia di mammografie vengono eseguite ogni giorno negli Stati Uniti. I dati biologici sulle radiazioni accumulati suggeriscono che circa 90-rad è il livello di radiazioni al seno al di sopra del quale l'incidenza del cancro può essere aumentata. È descritto un sistema di microdose di radiografia che fornisce immagini migliori da un terzo a un quinto dell'esposizione del sistema a basso dosaggio comunemente usato e da circa un otto a un decimo della dose di Xeromammografia. Questo sistema dovrebbe consentire lo studio radiografico ripetuto in un paziente secondo necessità, senza superare il livello critico.
Ridotta affinità dell'emoglobina per l'ossigeno nel sangue venoso dopo l'emodiluizione, indipendentemente dalle variazioni del pH o della PCO2.Spostamento dell'affinità rapidamente indotto e facilmente reversibile di emoglobina per l'ossigeno è stato dimostrato. Lo spostamento, simile all'effetto Bohr, è indipendente dalle variazioni della PCO2 o del pH. Si è verificato entro 30 minuti dall'emodiluizione ed è stato osservato nel sangue venoso portale ma non nel sangue arterioso. Viene suggerita un'ipotesi che coinvolga un alterazione fasica dei livelli di 2,3-difosfoglicerato (DPG) o di legame dell'ATP all'emoglobina Si propone che, a seguito dell'emodiluizione, il grado di questi fosfati in emoglobina aumenti durante il passaggio attraverso il letto vascolare intestinale. nello spostamento di ossigeno aggiuntivo. Quando il sangue viene riossigenato, i livelli di legame DPG-emoglobina diminuiscono e il DPG viene spostato dall'emoglobina dall'ossigeno.
Riduzione dell'attività della tirosina idrossilasi cerebrale a seguito del blocco dell'acetilcolinesterasi nei ratti.L'attivazione dei neuroni colinergici nel cervello è prodotta dalla somministrazione degli inibitori dell'acetilcolinesterasi fisostigmina e diisopropilfluorofosfato (DFP). Questa attivazione ha un effetto bifasico sull'attività della tirosina idrossilasi (EC 4.14.3-). L'effetto acuto della DFP, 1 mg/kg, per via intraperitoneale, o della fisostigmina, 0,2 mg/kg, per via endovenosa o 10 tazze, intraventricolare, è stata una rapida riduzione dell'attività della tirosina idrossilasi nell'ipotalamo. Le attività della DOPA decarbossilasi (EC 4.1.1.28) e della dopamina-beta-idrossilasi (EC 1.14.17.1) non sono state modificate. In contrasto con l'effetto acuto, la somministrazione cronica di fisostigmina, 0,2 mg/kg, per via endovenosa, due volte al giorno per 7 giorni ha prodotto un aumento dell'attività della tirosina idrossilasi nell'ipotalamo. I rapidi effetti acuti possono essere dovuti ad una inattivazione allosterica della tirosina idrossilasi, mentre gli effetti cronici possono riflettere l'induzione enzimatica.
Differenze nel metabolismo energetico alterato di shock emorragico e ipossiemia.L'effetto di shock emorragico, ipossiemia e anossia sui livelli di adenina e piridina nucleotidi del fegato e del rene. I livelli di ATP nel fegato e nel rene di animali in stato di shock o di animali sottoposti a 7 min di anossia sono diminuiti rispettivamente dell'85 e del 73%. In condizioni ipossiche (PO2 arteriosa AT 18 MMHg), la diminuzione è stata solo 62 e 48% rispettivamente nel fegato e nel rene. I livelli di NAD tissutale sono diminuiti e i livelli di NADH sono aumentati durante lo shock, ma sono risultati sostanzialmente inalterati durante l'ipossiemia sperimentale. Pertanto, lo shock ha prodotto maggiori alterazioni nei nucleotidi adenina e piridinica rispetto alla sola ipossiemia, indicando che l'ipossiemia stagnante dovuta allo shock è più dannosa per il metabolismo energetico di quanto non sia l'ipossiemia grave con una circolazione altrimenti normale I risultati suggeriscono anche che se una PO2 anteriore di 18 MMHg rappresenta le fasi iniziali di tis citare l'ipossia, quindi i livelli di ATP tissutale sono un indicatore più sensibile di questo rispetto ai livelli di NAD.
Il propranololo induce natriuresi acuta mediante beta blocco e stimolazione dopaminergica.dl-propranololo (0,8-1,6 mg/kg - h per 1 h) ha prodotto un aumento transitorio da due a tre volte dell'escrezione di sodio nei ratti non diuretici infusi con pitressina e aldosterone e nei ratti diuretici L'escrezione di sodio è aumentata maggiormente nei ratti depleti di renina a causa della somministrazione cronica di Doca e sale rispetto ai ratti mantenuti con una dieta a basso contenuto di sale. Un inibitore dell'angiotensina (1,sarcosina-8,valina angiotensina II) ha ridotto l'escrezione di sodio. Pertanto la natriuresi non è stata mediata da ormone antidiuretico, aldosterone o renina-angiotensina. Il d-propranololo non ha prodotto natriuresi. Il precedente trattamento con fenossibenzamina non ha prodotto prevenire la risposta natriuretica, ma il pretrattamento con clorisondamina lo ha fatto. La natriuresi è prodotta dal beta-blocco e richiede la funzione del nervo post-gangliare, ma è indipendente dai recettori alfa. dl-propranololo ha ridotto la frequenza cardiaca e la gittata cardiaca ut ma la pressione sistemica non è diminuita e il flusso sanguigno renale è aumentato. Ciò suggerisce una vasodilatazione renale e natriuresi mediate dalla dopamina. L'aloperidolo e la pimozide, entrambi agenti bloccanti della dopamina con effetti beta bloccanti minimi, hanno impedito la risposta natriuretica. Concludiamo che il propranololo può aumentare l'escrezione di sodio direttamente bloccando i recettori beta nel nefrone distale e indirettamente mediante vasodilatazione renale mediata dalla dopamina.
Reattività cardiaca alla stimolazione beta-adrenergica nell'anemia sperimentale.La reattività cardiaca della stimolazione beta-adrenergica è stata valutata mediante curve dose-risposta di isoproterenolo (intervallo di dosaggio 0,025-0,4 mug/kg) prima e 1 h dopo la rapida induzione dell'anemia nei cani anestetizzati con alotano:N2O:O2. Anemai (ematocrito = 16 +/- 4%) è stato indotto da una trasfusione di scambio isovolumetrico con Dextran 70, ed è stato seguito da incrementi significativi della gittata cardiaca (+57 +/- 9%), max dP/dt del ventricolo sinistro (+37 +/- 7%) e nel picco di accelerazione del flusso sanguigno nell'aorta ascendente (+ 46 +/- 13%). L'anemia era associata ad una significativa riduzione delle risposte cronotrope a tutte le dosi di isoproterenolo tranne che alla più bassa. Le risposte inotrope determinate simultaneamente (max dP/dt) erano le stesse prima e dopo l'induzione dell'anemia. Le risposte in termini di accelerazione di picco del flusso sanguigno aortico tendevano ad essere maggiori nell'anemico che nel fase di controllo, a tutti i livelli di dose utilizzati. Questi risultati indicano che nell'anemia sperimentale indotta rapidamente il cuore è in grado di rispondere a gradi marcati di stimolazione beta-adrenergica, che rappresenta un aumento di più di due volte del dP/dt.
Effetto dell'isolamento chirurgico dell'ipotalamo sul suo contenuto di neurotrasmettitori.Le concentrazioni di norepinefrina, dopamina-beta-idrossilasi, dopamina, tirosina idrossilasi, feniletanolamina -N-metiltransferasi, serotonina, triptofano idrossilasi, istamina, decarbossilasi dell'acido glutammico e colina acetiltransferasi sono state determinate in nuclei ipotalamici selezionati e nell'eminenza mediana dopo deafferentazione dell'ipotalamo basale mediale La noradrenalina e la dopamina-beta-idrossipamina sono diminuite notevolmente mentre la dopamina tirosina idrossilasi no. Anche la serotonina è diminuita in tutte le regioni studiate; l'istamina è diminuita in nessuna. La colina acetiltransferasi, la feniletanolammina-N-metiltransferasi e la decarbossilasi dell'acido glutammico sono diminuite in alcune aree, ma non in altre.
La relazione tra la gastrina sierica e le concentrazioni di calcio in pazienti con neoplasie endocrine multiple di tipo I.La relazione tra la gastrina sierica e le concentrazioni di calcio è stata esaminati in pazienti con neoplasie endocrine multiple di tipo I. Variazioni nelle concentrazioni di gastrina sono state indotte da metiamide e secretina, le concentrazioni di calcio sono state alterate dalla paratiroidectomia e dall'infusione di calcio. Le variazioni delle concentrazioni sieriche di gastrina non sono state accompagnate da variazioni della concentrazione sierica di calcio. Tuttavia , l'alterazione del calcio sierico è stata accompagnata da significativi cambiamenti paralleli nella gastrina sierica. Si conclude che cambiamenti acuti del calcio sierico possono indurre cambiamenti nella gastrina sierica. La paratiroidectomia in questi pazienti ha prodotto una caduta della gastrina sierica, ma la capacità per produrre grandi quantità di resti di gastrina. Si ipotizza che gli ormoni tireo-paratiroidei possano modulare il rapporto b tra calcio e gastrina.
Trattamento comportamentale della disfunzione dell'orgasmo: uno studio controllato.Ventidue donne anorgasmiche hanno ricevuto 20 sessioni di terapia comportamentale con tecniche multiple. Il disegno includeva valutazioni alla cieca da due valutatori indipendenti, strumenti di valutazione multipli e un gruppo di controllo in lista d'attesa. Il trattamento è stato significativamente migliore di nessun trattamento in termini di: (1) la percentuale di pazienti che hanno avuto l'orgasmo durante almeno il 50% dei rapporti sessuali;2 ) la percentuale di donne che riferiscono rapporti sessuali soddisfacenti almeno il 50% delle volte; (3) valutazioni dei pazienti\' di reazioni positive a vari comportamenti sessuali; e (4) valutazioni cliniche globali dei valutatori\'. Un miglioramento significativo è stato notato anche su l'MMPI, l'IPAT e la lista di controllo dei sintomi. Il miglioramento è stato mantenuto con una media di follow-up 9 mesi dopo. Questi risultati supportano l'impressione che un approccio comportamentale offra molte promesse nel trattamento della disfunzione dell'orgasmo femminile.
Analgesia prodotta dalla morfina quando agisce dallo spazio liquorale.1 Nei gatti l'analgesia era prodotta dal solfato di morfina introdotto in diverse parti dello spazio liquorale in dosi troppo piccole per essere efficaci nell'iniezione endovenosa. L'analgesia è stata misurata con il metodo della pinzatura della coda di Russell \& Tate (1975).2 Durante l'infusione nel quarto ventricolo o nello spazio subaracnoideo al di sotto della superficie ventrale del tronco encefalico caudale alla pons, dosi da 100 a 200 mug di solfato di morfina erano sufficienti per produrre un'analgesia forte e di lunga durata. Per l'iniezione nella cisterna magna erano necessarie dosi leggermente maggiori (da 400 a 800mug).3 Si conclude che il sito in cui la morfina agisce durante la produzione l'analgesia in tutte e tre le circostanze è sulla superficie ventrale del tronco encefalico. 4 Si discute la possibilità che le strutture su cui agiscono sono fibre nervose triptaminergiche. Esse derivano dai nuclei del rafe, appartengono a un percorso inibitorio discendente y, e nel loro cammino verso il midollo spinale, raggiungono la superficie ventrale del tronco cerebrale lateralmente a ciascuna piramide, dove potrebbero essere raggiunti e agiti dalla morfina. Questa teoria postula una sensibilità alla morfina delle fibre nervose triptaminergiche.
[Soppressione della sintesi di interferone durante la reazione "graft-versus-host" in topi F1(CBAXC57BL/6)].Lo sviluppo della reazione del trapianto contro l'ospite (GVHR) nei topi ibridi F1(1CBA X C57BL/6 dopo il trapianto di cellule di milza dal donatore genitore C57BL/6 ha determinato una forte inibizione della produzione di interferone sierico indotta dall'iniezione intraperitoneale del virus della malattia di Newcastle. In vitro con le cellule del midollo osseo di topo durante lo sviluppo del GVHR la risposta all'interferone è stata prima ridotta e poi scomparsa completamente. Il fenomeno descritto potrebbe quindi servire come indice dello sviluppo del GVHR.
[Analisi della struttura dei componenti dell'azione convulsiva del corazolo dopo somministrazione di sulazepam e dei suoi metaboliti ai topi].E' stato effettuato uno studio dell'interrelazione tra le dosi minime efficaci di convulsioni pseudocloniche e clonico-toniche, e anche l'estensione tonica causata dall'iniezione endovenosa di corazol ai topi e l'effetto dell'azione anticonvulsivante del sulazepam e dei suoi metaboliti (diazepam, desmetildiazepam e oxadiazepam) su questo processo È stato dimostrato che tutti i composti in studio hanno aumentato i valori delle dosi minime efficaci dagli indici registrati della crisi convulsiva, mentre il massimo dell'attività anticonvulsivante è stato raggiunto 15 minuti dopo il sulazepam e oxazepam e da 5 a 30 minuti dopo somministrazione di diazepam. Si è dimostrata una netta correlazione tra i valori delle dosi minime efficaci degli indici registrati di crisi convulsiva negli animali di controllo che un persisteva anche dopo la somministrazione degli agenti in studio. Si suppone che il sulazepam e i suoi metaboliti abbiano aumentato le dosi minime efficaci di corazol per gli effetti registrati, ma non siano riusciti ad alterare il quadro generale dell'attacco convulsivo e non abbiano influenzato la dipendenza dose-effetto della dispersione di corazol.
[Effetto della cocaina sulla tirosina idrossilasi dell'ipotalamo di ratto].L'influenza della cocaina sulla tirosina idrossilasi dell'ipotalamo cerebrale di ratto è stata studiata in vivo ( 0,5 mg/kg) e in vitro (10(--6)--10(--5)M). La cocaina è stata utilizzata come sostanza con un noto tipo di azione adrenergica. È stato dimostrato che in condizioni standard la cocaina in vitro aumentato l'attività enzimatica e diminuito il Km per il cofattore DMPH4 senza modificare la Vmax della reazione analizzata dall'enzima di membrana. La cocaina in vitro ha diminuito l'attività della tirosina idrossilasi, specialmente quella dell'enzima di membrana. In questo caso si è verificata una diminuzione di Km per DMPH4 e una diminuzione di Vmax della reazione. La diminuzione di Vmax è considerata il risultato dell'effetto secondario della cocaina.
[Induzione della tirosina aminotransferasi da parte dei metaboliti blastomogenici del triptofano e della tirosina].È stato effettuato uno studio comparativo sull'effetto prodotto da agenti blastomogenici endogeni (3 -ossiantranilico e acido paraoxfenil-lattico) e loro analoghi non blastomogenici (acido antranilico e acido fenil-lattico) sull'attività della tirosina-aminotransferasi nel fegato di ratto. I metaboliti blastogeni si sono dimostrati in grado di indurre fortemente l'attività enzimatica. Questo fenomeno e dati su il ruolo svolto dall'aumento dell'attività della tirosina-aminotransferasi e della triptofano-ossigenasi nel catabolismo della tirosina e del triptofano sulla via di una possibile formazione di metaboliti blastomogenici ha permesso di avanzare un suggerimento sulla "reazione a catena" di accumulo del agenti blastomogenici endogeni nell'organismo.
La lavorazione del midollo osseo umano per la crioconservazione e la reinfusione.Il midollo osseo è stato aspirato da 22 pazienti con tumori solidi. Una mediana di 1,2 x 10( 10) Le cellule nette del midollo osseo sono state ottenute durante una procedura operativa di 1 ora e 45 minuti. Sono stati utilizzati tre metodi per concentrare il midollo osseo per la crioconservazione. La massima concentrazione di cellule mononucleate è stata ottenuta mediante la procedura di aferesi Haemonetics. Il midollo osseo è stato crioconservato nel 10% DMSO in volumi compresi tra 150 e 700 ml. Il midollo scongelato è stato ulteriormente processato per rimuovere sia il DMSO che l'emoglobina libera prima della reinfusione. È stata osservata un'aggregazione cellulare nei primi 6 dei 10 midollo scongelato. L'acidificazione del midollo scongelato a pH 6,65 è stata trovato per ritardare l'aggregazione cellulare. Il recupero immediato delle cellule congelate è stato del 66 % con una vitalità del 50 %. Il numero medio di cellule midollari mononucleate vitali per chilogrammo disponibili per la reinfusione è stato quindi di 5,5 x 10 (7).
Studi in corrente alternata sul trasporto di portatori di carica nei doppi strati lipidici. Pentaclorofenolo nelle membrane lecitina-colesterolo.Proprietà elettriche di superficie e interne delle membrane a doppio strato lecitina-colesterolo trattati con il disaccoppiatore pentaclorofenolo sono stati determinati sulla base di misurazioni in corrente alternata su un ampio intervallo di frequenze (da 0,02 a 1000 kHZ). Il metodo utilizzato dipende dalla determinazione accurata della resistenza della soluzione acquosa in serie ad ogni singola membrana estrapolando i dati di ammettenza in frequenza infinita. Le curve di perdita tangente vs frequenza vengono corrette sottraendo un contributo di perdita che è presente nelle membrane non trattate ed è dovuto, presumibilmente, al rilassamento dielettrico. I risultati, che sono utili al di sotto di 100 kHZ, possono essere adattati alla tangente di perdita curve calcolate per un circuito equivalente a tre elementi costituito da coppie conduttanza-capacità indipendenti dalla frequenza, disposte in serie per rappresentare sur Proprietà facciali e interne delle membrane. Le conduttanze interne concordano con le conduttanze nette ottenute da c. c. misurazioni. La dipendenza dal pH e dalla concentrazione della conduttanza superficiale è coerente con uno schema di trasporto in cui un numero fisso di siti di legame superficiale è riempito preferenzialmente con molecole neutre di pentaclorofenolo, che a loro volta si dissociano per fornire protoni alla fase acquosa. Le capacità superficiali variano da 15 a 90 volte quella della capacità interna e mostrano un aumento sistematico con la concentrazione di pentaclorofenolo a pH elevato e una diminuzione con la concentrazione a pH basso.
Incorporazione del calcio da parte dei microsomi muscolari lisci.Lo scopo del presente lavoro era studiare i fattori che influenzano l'incorporazione del calcio in una frazione microsomiale preparata dal muscolatura liscia dell'ileo di cavia. L'incorporazione del calcio richiedeva la presenza sia di ATP che di Mg2+ e non era influenzata dall'azide. Era potenziata dall'ossalato; questo effetto dipendeva dal pH ed era massimo a pH 6,6. La relazione tra l'assorbimento di calcio con ossalato e la concentrazione di Ca2+ libero nel mezzo era rappresentata da una curva con un ottimo per il Ca2+ pari a 3-10-5 M. La concentrazione soglia era compresa tra 5-10-7 e 10-6 7. La velocità di assorbimento ottimale del calcio era 4,5 nmol Ca2+/mg di proteine al minuto In assenza di ossalato, sono stati identificati due gruppi distinti di siti di legame I siti a bassa affinità avevano una costante di legame di 7-104 M-1 e una capacità di legame massima di 0,6-106 M-1 e una capacità di legame di 33 nmol Ca2+/mg di proteine; il loro ca pacity era sensibile alle variazioni di pH. In assenza di ossalato, il legame di Ca2+ è stato depresso da Na+ rispetto a K+ o colina. Quando il mezzo è stato integrato con ossalato, la stimolazione dell'incorporazione di 45Ca era appena rilevabile in presenza di colina+ ed era inferiore in un mezzo contenente Na+ anziché K+. I profili di distribuzione subcellulare dell'incorporazione del calcio con e senza ossalato indicano la posizione microsomiale di entrambe le attività. Tuttavia, l'attività di assorbimento del calcio stimolata dall'ossalato si è sedimentata più velocemente dell'attività di legame del calcio. È stata esaminata la distribuzione subcellulare delle attività degli enzimi marcatori. I risultati attuali indicano che le incorporazioni di Ca2+ con e senza ossalato sono il risultato di due processi probabilmente correlati a due diverse strutture. Viene discusso il ruolo dell'assorbimento microsomiale del calcio nell'accoppiamento eccitazione-contrazione e la sua modifica tramite l'attività della pompa del sodio.
Trasporto e fosforilazione del D-galattosio nelle cellule corticali renali.Una procedura analitica migliorata per l'estrazione e la determinazione dello zucchero tissutale totale, libero e fosforilato Questo metodo, impiegando ZnSO4 più Ba(OH)2 per la precipitazione dei fosfati zuccherini, fornisce valori identici a quelli ottenuti dalla più laboriosa separazione dello zucchero libero e fosforilato mediante cromatografia a scambio ionico. si evita l'azione di una fosfatasi attivata da Zn2+ e/o la labilità agli acidi di alcuni zuccheri fosfati. Utilizzando questa tecnica per lo studio del trasporto e della fosforilazione del D-galattosio in fettine corticali renali di coniglio ed estratti di tessuto, è stato riscontrato: 1. L'assorbimento cellulare di D-galattosio è stato associato alla comparsa di zucchero sia libero che fosforilato indipendentemente dalla presenza o meno di Na + esterno. A 1 mM di zucchero, il galattosio si è accumulato nelle cellule contro un modesto concentrato su pendenza di 1,445 +/- 0,097 (n = 17). Il galattosio fosfato è apparso nelle cellule molto più velocemente dello zucchero libero in condizioni di assorbimento netto e di scambio allo stato stazionario (etichettatura a impulsi). 2. L'aumento del pH salino (6-8) ha aumentato i livelli cellulari di fosfato di zucchero senza alterare i valori allo stato stazionario di zucchero libero. Con gli estratti di tessuto, l'aumento del pH ha anche stimolato l'attività della galattochinasi e la defosforilazione del galattosio 1-fosfato da parte di una fosfatasi attivata da Zn2+. 3. La florizina 0,5 mM ha inibito l'assorbimento tissutale del galattosio e la sua successiva ossidazione a CO2 solo in misura minore (rispettivamente 30 e 10%). L'assenza di Na+ esterno ha ulteriormente depresso l'effetto florizina. La preincubazione del tessuto con florizina e il successivo lavaggio hanno in parte abolito l'effetto inibitorio. I dati suggeriscono che una parte importante dell'assorbimento del galattosio da parte dei tessuti procede da un meccanismo con una bassa affinità per la florizina. 4. Gli studi sull'efflusso hanno mostrato che il wash-out del galattosio libero dalle fette era associato a una diminuzione netta dello zucchero tissutale sia libero che fosforilato. 5. I risultati di cui sopra suggeriscono la possibilità che la fosforilazione possa rappresentare un passaggio nel trasferimento Na+ -indipendente, floretina-sensibile del D-galattosio attraverso la membrana cellulare antiluminale. È stata dimostrata la partecipazione della galattochinasi intracellulare e di una fosfatasi alcalina attivata da Zn2+ nel mantenimento dello stato stazionario di galattosio libero e fosforilato nelle cellule.
Eterogeneità del trasporto dell'istidina nella cellula di Ehrlich.Abbiamo riesaminato l'eterogeneità mostrata dall'istidina nel suo assorbimento da parte della cellula tumorale dell'ascite di Ehrlich, nel Di fronte a una contraddizione della nostra precedente interpretazione, troviamo ancora una volta che la frazione di captazione dell'istidina a pH neutro inibibile dal substrato modello per il sistema A, acido 2-(metilammino)-isobutirrico, è completamente dipendente dalla presenza di Na+ o Li+. Il piccolo componente Na+ -indipendente non attribuibile al Sistema L è identificabile con il Sistema Ly+ per la sua inibibilità da parte dell'omoarginina. Questo componente aumenta al diminuire del pH con un pK\'a apparente di 6,1. La contemporanea diminuzione dell'assorbimento da parte del neutro sistemi potrebbero essere identificati, per il Sistema L, con la stessa titolazione dell'istidina alla sua forma cationica, ma per il Sistema A la netta diminuzione si identifica con la protonazione di una struttura sulla membrana piuttosto che una sul substrato. ns Quest'ultimo caso si è dimostrato approssimativamente non competitivo con Na+ quando testato con substrati ordinari.
Trasporto e fosforilazione della 2-desossi-D-galattasi nelle cellule corticali renali.Il trasporto e la fosforilazione della 2-desossi-D-[3H ]galattosio nelle cellule corticali renali di coniglio è stato studiato 1. L'assorbimento di 2-desossi-galattosio da parte delle fette corticali è associato alla comparsa di zucchero sia libero che fosforilato nelle cellule A 1 mM di zucchero esterno le cellule stabiliscono uno stato stazionario gradiente di 2-desossi-galattosio libero di 3,97 +/- 0,15 (23 animali) 2. Il fosfato acido-labile accumulato nel tessuto è stato identificato mediante una combinazione di carta e radiocromatografia, nonché sulla base di alcune delle sue proprietà chimiche, come 2-desossi-D-galattosio 1-fosfato L'acido tricloroacetico ghiacciato produce una decomposizione di questo composto 3. L'aumento del pH esterno (6-8) provoca una diminuzione dello stato stazionario livelli di zucchero a fette sia libero che fosforilato, mentre aumentando il pH si attiva la fosforilazione del 2-desossi-D-galatto ose da una chinasi grezza in un estratto di tessuto. 4. Il fosfato di zucchero accumulato nelle cellule viene defosforilato dall'azione di una fosfatasi attivata da Zn2+. 5. L'efflusso del 2-desossi-D-galattosio dalle cellule è piuttosto lento rispetto a quello riscontrato per il D-galattosio. L'efflusso è associato a una certa defosforilazione dello zucchero fosfato cellulare e si verifica una certa perdita di 2-desossi-galattosio fosfato nel mezzo di lavaggio. 6. Un'analisi di inibizione dell'assorbimento di 2-desossi-D-galattosio da parte delle fette indica che il sito di trasporto è condiviso dal D-galattosio. Si individuano i seguenti punti di interazione tra la molecola dello zucchero e il veicolo: C1-OH, C3-OH e C4-OH (entrambi assiali) e C6-OH. Anche una struttura ad anello (piranosico) è essenziale. È indicato uno stretto impaccamento tra il substrato e il supporto in prossimità di C2. 7. I dati suggeriscono che il suddetto sistema di trasporto è localizzato prevalentemente sulla faccia antiluminale (basolaterale) delle cellule tubulari renali. Mentre il meccanismo dettagliato dell'effettivo passaggio di trasporto (cioè il trasporto attivo dello zucchero libero, o per l'azione di una fosfotransferasi) è ancora poco chiaro, i dati mostrano che sia la galattochinasi che una fosfatasi attivata da Zn2+ partecipano al mantenimento di un stato stazionario dello zucchero trasportato.
Interazioni tra fosfolipidi e barbiturici.Gli effetti di alcuni barbiturici sulla temperatura della transizione di fase lipidica sono stati studiati utilizzando la clorofilla a come sonda a fluorescenza. I barbiturici provocano una riduzione della temperatura delle transizioni di fase della dipalmitoilfosfatidilcolina e della dipalmitoilfosfatidiletanolammina, gli effetti sono maggiori a valori di pH più bassi dove è presente più barbiturico in forma scarica. Non c'è stata interazione significativa tra i barbiturici e dipalmitoil fosfatidilserina. Queste e altre osservazioni sulle azioni degli anestetici locali vengono utilizzate per sviluppare un modello per l'anestesia locale. Si suggerisce che il canale del sodio sia circondato da un anello di lipidi allo stato gel, questo microambiente rigido impedisce il canale del sodio rilassante dalla sua configurazione attiva ad una inattiva Anestetici locali, che riducono la temperatura della fase lipidica transizioni, innescano un cambiamento del lipide anulare dal gel allo stato liquido-cristallino, con un conseguente rilassamento del canale del sodio ad una configurazione inattiva, in cui la corrente di sodio è ridotta o bloccata.
Indagini sulle proprietà cinetiche dell'estrone glucuroniltransferasi dal rene di maiale.La frazione microsomiale del rene di maiale catalizza la glucuronidazione dell'estrone in presenza di UDP -acido glucuronico. Questo sistema bireattivo mostra un tipo di meccanismo di reazione sequenziale. L'aumento delle concentrazioni di uno dei due substrati aumenta l'affinità dell'enzima per l'altro substrato. Il coefficiente di Hill, n, è stato calcolato essere 1,0 sia per l'estrone che per l'acido UDP-glucuronico Il Kestrone e l'acido KUDP-glucuronico sono rispettivamente 6,6 muM e 254 muM L'estrone glucuroniltransferasi (UDP-glucuronato: 17 beta-estradiolo 3-glucuronosiltransferasi, EC 2.4.1.59) mostra un'elevata specificità di substrato in quanto è inibito in modo non competitivo dall'estradiolo -17 beta, estradiolo-17 alfa, estriolo, testosterone, fenolftaleina e bilirubina; p-nitrofenolo e o-amminofenolo non inibiscono la glucuronidazione dell'estrone. Mg2+ e Ca2+ sono risultati assenti attivatori sensoriali. Uno dei due prodotti della reazione, estrone glucuronide, inibisce competitivamente l'enzima in presenza di concentrazioni crescenti di acido UDP-glucuronico. L'altro prodotto della reazione, UDP, inibisce l'enzima in modo non competitivo con concentrazioni di estrone variabili e in modo non competitivo con concentrazioni di acido glucuronico UDP variabili. In condizioni di incubazione per la glucuronidazione dell'estrone, l'enzima catalizza la reazione inversa con estrone glucuronide e UDP come reagenti in misura pari a circa lo 0,4% della reazione diretta; anche questa reazione inversa è di tipo sequenziale.
Studi sull'aspartasi. III. Alterazione delle proprietà enzimatiche su attivazione mediata da tripsina.Aspartasi altamente purificata (L-aspartato ammoniaca-liasi, EC 4.3 .1.1) da Escherichia coli, già in piena attività, viene ulteriormente attivato 3,3 volte da un trattamento limitato con tripsina. L'attivazione richiede alcuni minuti per raggiungere il livello massimo, dopodiché l'attività diminuisce gradualmente fino alla completa inattivazione. Aggiunta precedente o intermedia di l'inibitore della tripsina di soia determina l'immediata cessazione di qualsiasi ulteriore cambiamento nell'attività enzimatica. Al momento dell'attivazione mediata dalla tripsina non viene rilevato alcun cambiamento apprezzabile nel peso molecolare delle subunità enzimatiche come giudicato dall'elettroforesi su gel di poliacrilammide di sodio dodecilsolfato, né nel pH vs. profilo di attività in presenza di ioni metallici aggiunti. Tuttavia, S0.5 e il coefficiente di collina per L-aspartato aumentano considerevolmente all'attivazione. Man mano che l'attivazione mediata dalla tripsina procede, un marcato assorbimento Lo spettro della differenza di ance dell'aspartasi trattata con tripsina rispetto all'aspartasi non trattata appare con massimi di assorbanza negativi a 278 e 285 nm. Quando l'enzima attivato dalla tripsina viene denaturato in guanidina-HCl 4 M, seguito dalla rimozione del denaturante mediante diluizione, l'attività enzimatica viene prontamente ripristinata fino a 1,5 volte quella dell'enzima nativo, indicando che l'enzima attivato dalla tripsina è piuttosto una molecola stabile.
Sulla riattivazione parziale della pantotenasi inattivata da Pseudomonas fluorescens.Riattivazione parziale della pantotenasi inattivata (pantotenato amidoidrolasi, EC 3.5.1.22) da Pseudomonas fluorescens è stata Dopo una parziale inattivazione durante la conservazione, l'attività della pantotenasi è aumentata del 10-40% quando incubata con, ad esempio, ossalato, ossalacetato o piruvato. La riattivazione procede lentamente, con ossalacetato il livello stabile di attività enzimatica viene raggiunto in 20-30 min. Gli stessi composti provocano anche la riattivazione della pantotenasi termicamente inattivata quando si è verificata una parziale inattivazione a 28-37 gradi C. La quantità della forma enzimatica riattivante è relativamente maggiore quanto più bassa è la temperatura durante l'inattivazione, ma non supera mai il 20% della quantità originale di enzima attivo. Anche un'altra forma instabile di pantotenasi si forma in inattivazione termica. Questa forma si inattiva in pochi minuti dopo il trattamento termico, a pH 6-8 ea temperature comprese tra 0 e 10 gradi C. La riattivazione causa problemi particolari nelle misurazioni della cinetica enzimatica; per esempio, la curvatura si trova nelle linee di determinazione del Ki mediante il diagramma di Dixon.
Purificazione e caratterizzazione dell'idrolasi dei sali biliari da Bacteroides fragilis subsp. fragilis.Un'idrolasi di sali biliari ad alto peso molecolare (250 000) (colilglicina) idrolasi, EC 3.5. -. -) è stata isolata e purificata 128 volte dalla frazione "sferoplasto lisato" preparata da Bacteroids fragilis subsp. fragilis ATCC 25285. L'enzima intatto aveva un peso molecolare di circa 250.000 come determinato da cromatografia di infiltrazione su gel. Una banda proteica principale, corrispondente a un peso molecolare di 32.500, è stata osservata su elettroforesi su gel di poliacrilammide di sodio dodecilsolfato al 7% di frazioni raggruppate dalla cromatografia su colonna di DEAE-cellulosa (purificata 128 volte). Il pH ottimale per il L'enzima purificato 64 volte isolato dalla cromatografia Bio-Gel A 1,5 M era 4,2 e l'attività dell'idrolasi dei sali biliari misurata in sospensioni cellulari intatte aveva un pH ottimale di 4,5. Studi di specificità del substrato hanno indicato che taurina e glicina coniugati di acido colico, cheno l'acido desossicolico e l'acido desossicolico sono stati facilmente idrolizzati; tuttavia, i coniugati di acido litocolico non sono stati idrolizzati. La cinetica di saturazione del substrato era bifasica con un plateau intermedio (0,2--0,3 mM) ed è stata osservata una perdita completa dell'attività enzimatica ad alta concentrazione per alcuni substrati. La presenza o l'assenza della 7-alfa-idrossisteroide deidrogenasi era assolutamente correlata con quella dell'attività dell'idrolasi dei sali biliari in sei-dieci ceppi e sottospecie di B. fragilis.
L'effetto degli ioni calcio sull'idrolisi dell'estere etilico della benzoilarginina da parte dell'enteropeptidasi suina.È stato dimostrato che gli ioni calcio hanno un marcato effetto pH-dipendente su la cinetica dell'idrolisi dell'estere etilico della benzoillarginina da parte dell'enteropeptidasi suina (EC 3.4.21.9). Al di sotto di pH 6.0, gli ioni calcio stimolano l'idrolisi dell'estere etilico della benzoilarginina ma inibiscono questa attività sopra il pH 6.0. Questo effetto è principalmente sul Km per l'estere etilico della benzoilarginina. A pH Gli ioni calcio 5.3, 2 mM riducono il Km per l'estere etilico della benzoilarginina da 0,31 mM a 0,26 mM mentre a pH 6,5 il Km aumenta di quattro volte da 0,035 mM a 0,12 mM in presenza di ioni calcio L'attività dell'enteropeptidasi non è inibita dall'etilendiamminotetraacetato indicando che gli ioni calcio sono un cofattore non essenziale per l'idrolisi dell'estere etilico della benzoilarginina.
Studi sul ruolo della metionina nella fosfolipasi pancreatica suina A2.L'unico residuo di metionina-15 situato nel sito N-terminale di iso- o La beta-fosfolipasi A2 del pancreas suino è stata specificamente carbossimetilata con acido iodoacetico. La modificazione determina una completa inattivazione dell'attività enzimatica verso i substrati micellari e monomerici. Le misurazioni spettroscopiche hanno rivelato che la proteina carbossimetilata lega ancora Ca2+ e substrati monomerici con affinità paragonabili a enzima nativo. Il residuo istidina-54 del sito attivo nell'enzima modificato mostra una reattività verso l'inibitore irreversibile sito-diretto attivo p-bromofenacilbromuro che è identica a quella dell'enzima nativo. La proteina alchilata, tuttavia, ha perso la sua capacità di legarsi alle interfacce lipide-acqua Sebbene gli spettri dicroici circolari dell'enzima carbossimetilato mostrino alcuni cambiamenti nella struttura terziaria rispetto a l'enzima nativo, il contenuto di alfa-elica rimane piuttosto costante. Si conclude che la carbossimetilazione della metionina-15 distrugge il sito di riconoscimento dell'interfaccia ma ha solo un'influenza limitata sul sito attivo della molecola. Pertanto, sembra che la metionina-15 non sia coinvolta negli eventi catalitici ma che questo residuo sia parte del sito di riconoscimento dell'interfaccia che abbraccia la parte idrofoba N-terminale dell'enzima: Ala-Leu-Trp-Gln-Phe-Arg- Ser-Met.
Isolamento e caratterizzazione dell'aldoso reduttasi dal cervello di vitello.Attività dell'aldoso reduttasi (alditol: NADP+ 1-ossidoreduttasi, EC 1.1.1.21) dal cervello di vitello è stato separato in due frazioni proteiche mediante cromatografia DEAE. Ulteriore purificazione mediante cromatografia a setaccio molecolare ed elettrofocalizzazione producendo due enzimi distinti, che sono stati designati AR I e AR II. AR I è stato purificato 646 volte e ha riscontrato un punto isoelettrico di 6,18. AR Ero più attivo come monomero con un peso molecolare di 29 000 e sembrava essere in equilibrio con un dimero meno attivo. AR II è stato purificato 425 volte e si è scoperto che aveva un punto isoelettrico di 4,88. Il peso molecolare di questo enzima era 30 000. Sebbene entrambi gli enzimi avessero specificità per gli aldosi come substrati, AR I aveva un numero di turnover da due a tre volte maggiore con aldeidi ed esonati aromatici rispetto a AR II. AR I è stato attivato da composti solfidrilici e ha mostrato doppi grafici reciproci bifasici. era più sensibile all'inibizione da alte concentrazioni di substrato e fenobarbital rispetto a AR II. AR I e AR II non avevano somiglianza antigenica come testato dall'immunodiffusione di Ouchterlony e dalla controimmunoelettroforesi. È stata osservata una cross-reazione immunochimica tra AR II e lente aldoso reduttasi.
Proprietà delle fosfolipasi microsomiali nel fegato e nell'epatoma di ratto.Attività della fosfolipasi A1, A2 e della lisofosfolipasi nei microsomi del fegato di ratto ospite dell'epatoma di Novikoff e nella rigenerazione del fegato di ratto sono stati confrontati utilizzando 1-[9\', 10\'-3H2]palmitoil-2-[1\'-14C] linoleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolammina, 1-[1\' -3H-]esadecil-2 -acil-sn-glicero-3-fosfoetanolammina e 1-[9\', 10\'-3H2]palmitoil-sn-glicero-3-fosfoetanolammina come substrati 1. I microsomi di tutti e tre i tessuti hanno mostrato due picchi dipendenti dal pH di attività idrolitica, uno a pH 7,5 e un altro a pH 9,5. 2. L'attività idrolitica fosfolipidica nei microsomi del fegato ospite e del fegato rigenerante richiede Ca2+ per l'idrolisi a pH 9,5, ma non a pH 7,5. I microsomi di epatoma richiedono Ca2+ per l'attività a entrambi i valori di pH 3. L'attività della fosfolipasi A1, stimolata dall'aggiunta di Triton X-100 alle miscele di incubazione, è stata rilevata sia nel fegato dell'ospite che nel micro alcuni. Non c'era evidenza di attività della fosfolipasi A1 nei microsomi dell'epatoma. 4. La fosfolipasi A2 è stata rilevata nei microsomi di tutti e tre i tessuti utilizzando 1-[1\'-3H] esadecil-2-acil-sn-glicero-3-fosfoetanolammina come substrato. L'attività richiedeva calcio ed era inibita da Triton X-100. 5. L'attività della lisofosfolipasi era evidente nei microsomi di tutti e tre i tessuti. L'attività è stata inibita sia da Ca2+ che da Triton X-100. 6. Sono state rilevate anche differenze tra le attività dell'idrolasi fosfolipidica microsomiale del fegato dell'ospite e dell'epatoma rispetto all'effetto dell'aumento della concentrazione proteica, delle apparenti costanti di Michaelis-Menten e dell'andamento temporale della reazione.
Studi sulla fosfatidilinositolo fosfodiesterasi (fosfolipasi tipo C) di Bacillus cereus. I. purificazione, proprietà e attività di rilascio della fosfatasi.Una fosfatidilinositolo fosfodiesterasi dalla brodo di coltura di Bacillus cereus, è stato purificato ad uno stato omogeneo come indicato mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide, precipitazione di solfato di ammonio e cromatografia con DEAE-cellulosa e CM-Sephadex. L'enzima (peso molecolare: 29000 +/- 1000) era massimamente attivo a pH 7,2-7,5, E NON INFLUENZATO DA EDTA, ofenantrolina, monoiodoacetato, p-cloromercuribenzoato o glutatione ridotto. L'enzima ha specificamente idrolizzato il fosfatidilinositolo, ma non ha agito su fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina e enzima, sotto le condizioni della tedilinomielina. reazione erano diacilgliceroli e una miscela di mioinositolo 1- e 1, 2-fosfato ciclico, suggerendo che l'enzima era un phospha fosfolipasi C tidylinositolo-specifica. L'enzima rilascia fosfatasi alcalina quantitativamente da fette di rene di ratto. È stata effettuata un'analisi cinetica sul rilascio di fosfatasi alcalina. I risultati suggeriscono che la fosfolipasi C fosfatidilinositolo-specifica può agire in modo specifico sulla membrana plasmatica delle fette di rene di ratto.
Proprietà della triacilglicerolo lipasi in una frazione mitocondriale di lievito di birra (Saccharomyces cerevisiae).Una triacilglicerolo lipasi in una frazione mitocondriale isolata dal lievito ( Saccharomyces cerevisiae) è stata caratterizzata e l'idrolisi studiata cineticamente utilizzando una sospensione artificiale di triacilglicerolo insolubile. 1. Il triacilglicerolo è stato idrolizzato quasi completamente ad acidi grassi e glicerolo. L'attività della lipasi è stata inibita dal fluoruro di potassio e dai sali di sodio di -cloruro, -glicocolato e -pirofosfato nonché dal solfato di protamina ma a concentrazioni troppo elevate per indicare che la lipasi è un'esterasi non specifica o una lipoproteina lipasi. Anche il paracloromercuribenzoato ha inibito l'attività della lipasi. L'effetto inibitorio dell'acido grasso è stato osservato a concentrazioni superiori a 1 mM. l'inibizione può fornire un meccanismo di regolazione della lipasi in vivo 2. Il giorno dell'isolamento l'attività della lipasi di m intatto l'itocondria a pH 7,5 e 30 gradi C era 400 nmol di acido grasso libero -h-1 - mg-1 a una concentrazione di triacilglicerolo di 9,0 mM. La sonicazione dei mitocondri ha aumentato l'attività di 2-3 volte. Il congelamento dei mitocondri attivava anche la lipasi e questa attivazione dipendeva dal metodo di congelamento, dalla concentrazione di proteine mitocondriali e dalla presenza di albumina sierica bovina. 3. La natura particellare del sistema di dosaggio è stata illustrata dall'osservazione che il valore Km apparente della lipasi aumenta con la concentrazione della proteina mitocondriale. Per ogni concentrazione proteica la lipasi aveva due valori di Km apparenti quando l'attività veniva saggiata con mitocondri intatti, ma solo uno quando saggiata con particelle subcondriali. Alla stessa concentrazione proteica il valore Km per quest'ultimo era identico al Km "bassa affinità" per la lipasi nei mitocondri intatti.
Attività 3alfa-, 7alfa- e 12alfa-idrossisteroide deidrogenasi da Clostridium perfringens.25 ceppi di Clostridium perfringens sono stati sottoposti a screening per l'attività dell'idrossisteroide deidrogenasi; 19 contenevano La 3alfa-idrossisteroide deidrogenasi NADP-dipendente e otto contenevano la 12alfa-idrossisteroide deidrogenasi NAD-dipendente attiva contro i sali biliari coniugati e non coniugati Tutti i ceppi contenenti la 12alfa-idrossisteroide deidrogenasi contenevano anche la 3alfa-idrossisteroide deidrogenasi sebbene la 12alfa-idrossisteroide deidrogenasi fosse invariabilmente in quantità minore rispetto alla 3alfa-idrossisteroide deidrogenasi. Inoltre, l'attività della 7alfa-idrossisteroide deidrogenasi era evidente solo quando il 3alfa, 7alfa, 12alfa-triidrossi-5beta-colanoato era substrato ma notevolmente assente quando era substrato il 3alfa, 7alfa-diidrossi-5beta-colanoato. Il prodotto di ossidazione 12alfa -idrossi-3,7-dicheto-5beta-colanoato viene rapidamente ulteriormente degradato a un composto sconosciuto e privi di gruppi 3alfa- o 7alfa-OH. La specificità di gruppo di questi enzimi è stata confermata da studi di cromatografia su strato sottile dei prodotti di ossidazione. Questi sistemi enzimatici sembrano essere costitutivi piuttosto che inducibili. In contrasto con C. perfringens. Clostridium paraputrificum (cinque ceppi testati) non conteneva attività misurabile dell'idrossisteroide deidrogenasi. Gli studi sul pH degli enzimi C. perfringens hanno rivelato un ottimo pH acuto a pH 11,3 e 10,5 rispettivamente per le attività orientate 3alpha-OH e 12alpha-OH. Gli studi cinetici hanno fornito stime di Km di ca. 5 X 10(-5) e 8 X 10(-4) M con 3alfa, 7a-diidrossi-5beta-colanoato e 3alfa, 12alfa-diidrossi-5beta-colanoato come substrati per due rispettivi enzimi. La 3alfa-idrossisteroide deidrogenasi era attiva contro gli steroidi contenenti 3alfa-OH come l'androsterone indipendentemente dalla sterochimica del 5H (sia gli steroidi A/B cis che A/B trans erano substrati). Non c'era attività contro gli steroidi contenenti 3beta-OH. Le attività della 3alfa- e 12alfa-idrossisteroide deidrogenasi, sebbene differiscano nei requisiti del cofattore, non possono essere distinte dalla loro comparsa nella curva di crescita, dalla loro mobilità sull'elettroforesi su gel del disco, dal volume di eluizione al passaggio attraverso Sephadex G-200 o dagli studi di inattivazione al calore.
L'assorbimento della colina da parte dei mitocondri di fegato di ratto.1. I mitocondri di fegato di ratto possono accumulare colina contro un gradiente di concentrazione. Al massimo circa 30 nmol di colina per mg le proteine mitocondriali si trovano nello spazio della matrice. 2. Il processo di assorbimento della colina è bifasico. Dopo un rapido assorbimento di 1,5-15 nmol per mg di proteina, si verifica un assorbimento più lento se è presente un apporto energetico. In assenza di energia, solo si trova il rapido assorbimento. 3. L'inibizione dell'ossidazione della colina stimolata dal disaccoppiatore da parte dei cationi è il risultato di un'inibizione dell'assorbimento della colina.
Algal gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi. Conversione dell'enzima NADH di Scenedesmus obliquus in una forma che utilizza preferibilmente NADPH come coenzima.Scenedesmus obliquus contiene due gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi (EC 1.2.1. -) di cui una utilizza NADH come coenzima preferito (enzima D) e l'altra NADPH (enzima T). In caso di incubazione dell'enzima D con cisteina e un sistema generatore di 1,3-difosfoglicerato l'attività specifica con NADH come coenzima è diminuita mentre quella con NADPH è aumentata di un fattore 10. I componenti del sistema generatore non hanno avuto alcun effetto sull'enzima D individualmente e si conclude che 1 Il ,3-difosfoglicerato era probabilmente responsabile del cambiamento nella specificità del nucleotide. La specificità del coenzima dell'enzima T non era influenzata da tale trattamento. Un tipo simile di attivazione si è verificato in misura minore durante l'incubazione dell'enzima D con 2,3 -difosfoglicerato L'attività NADPH-dipendente ty dell'enzima D potrebbe anche essere promosso mediante incubazione con NADPH. Tuttavia, in questo caso l'attivazione è stata inferiore a quella osservata con 1,3- o 2,3-difosfoglicerato. Il cambiamento nella specificità del coenzima dell'enzima D si è verificato in parallelo con i cambiamenti nel comportamento di sedimentazione. Inizialmente, era presente un singolo confine di S20,w uguale a 14,5 S, ma alla conversione in attività NADPH-dipendente mediante incubazione con il sistema che genera 1,3-difosfoglicerato, sono comparsi nuovi confini di 7,5 S e 5,5 S. Il primo di questi corrisponde nel coefficiente di sedimentazione all'enzima T nativo. Alla rimozione dell'1,3-difosfoglicerato il limite 7,5 S è scomparso accompagnato da un aumento di quello di 14,5 S, mentre il limite 5,5 S è rimasto. Questi cambiamenti sono coerenti con la conversione reversibile dell'enzima D in una forma simile all'enzima T nativo in risposta alla cisteina e all'1,3-difosfoglicerato. Questi effetti possono essere spiegati se l'acilazione del sito attivo dell'enzima D da parte dell'1,3-difosfoglicerato determina lo spostamento del nucleotide legato, favorendo così lo scambio di nucleotidi. Questi risultati sono coerenti con il meccanismo cinetico stabilito per altre gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi. Un'attivazione simile è stata osservata in estratti di altre specie di Chlorophyta ma non in altri organismi fotosintetici. Viene discusso il significato di questo tipo di attivazione dell'attività enzimatica per il metabolismo di queste specie di alghe.
La cinetica della riduzione del citocromo c da parte del radicale anione superossido.1. A pH neutro il ferricitocromo c è ridotto dal radicale anione superossido ( O2-), senza perdita di attività enzimatica, mediante un processo del secondo ordine in cui non si osservano intermedi. La resa di ferrocitocromo c (82-104%), in relazione alla quantità di O2- prodotta, è leggermente dipendente dalla concentrazione di formiato di sodio nella soluzione della matrice 2. La reazione (k1 uguale (1.1+/-0.1) - 10(6) M-1 - s-1 a pH 7.2, I uguale a 4 mM e 21 gradi C) può essere inibita da superossido dismutasi e tracce di ioni rame L'inibizione degli ioni rame viene rimossa dall'EDTA senza interferenze nella reazione di riduzione dell'O2 3. La costante di velocità del secondo ordine per la reazione dell'O2- con il ferricitocromo c dipende dal pH di la soluzione della matrice, decrescendo rapidamente a pH maggiore di 8. La dipendenza della costante di velocità dal pH può essere spiegata assumendo che solo th La forma neutra del ferricitocromo c reagisce con l'O2- e la forma alcalina dell'emoproteina non è reattiva. Da studi a pH 8,9, la velocità di transizione dalla forma alcalina a quella neutra del ferricitocromo c può essere stimata in 0,3 s-1 (a 21 gradi C e I è uguale a 4 mM). 4. La costante di velocità del secondo ordine per la reazione di O2- con ferricitocromo c dipende anche dalla forza ionica del mezzo. Da un grafico di log k1 rispetto a I1/2-(I + alphaI1/2)-1 abbiamo determinato la carica effettiva sulla molecola di ferricitocromo c come +6.3 e la costante di velocità a I uguale a 0 come (3.1+/-0.1) - 10(6) M-1 - s-1 (pH 7,1, 21 gradi C). 5. La possibilità che si formi ossigeno singoletto come prodotto della reazione di O2- con ferricitocromo c può essere esclusa per motivi termodinamici.
Sulla transizione allosterica tra le strutture ad alta e bassa affinità ligando nell'emoglobina della carpa.La variazione della dispersione rotatoria magneto-ottica con il pH per la carpa la deossiemoglobina in presenza e assenza di inositolo esafosfato è stata interpretata come una transizione allosterica indotta dal pH tra le strutture ad alta e bassa affinità ligando (gli stati R e T in termini di modello a due stati di cooperatività). 11 provoca una diminuzione della frazione di molecole nello stato T da 1 a 0,65. In assenza di inositolo esafosfato la dipendenza dal pH di questa frazione ha un punto medio a 7,8, l'aggiunta di inositolo esafosfato sposta questo punto medio di 1,5 unità verso un pH elevato. Dall'analisi dei dati ottenuti e delle dipendenze dal pH delle proprietà funzionali (Tan, AL, Noble, RW e Gibson, QH (1973) J. Biol. Chem. 248, 2880-2888) i parametri del modello a due stati di cooperatività per l'emoglobina della carpa erano stimato.
Un cambiamento conformazionale pH-dipendente nelle subunità proteiche di rivestimento dal virus della patata X.Sia il dicroismo circolare che gli spettri di fluorescenza delle subunità proteiche di rivestimento dissociate dal virus della patata X è cambiato sostanzialmente nell'intervallo di pH da 8 a 4, cambiamenti irreversibili sono risultati al di sotto del pH 4, con i residui di tirosile e triptofanile maggiormente colpiti. Le curve di titolazione mostrano un pKa di circa 5,6 e non richiedono interazioni cooperative tra le subunità proteiche di rivestimento, quindi sono in netto contrasto con le titolazioni della proteina A del virus del mosaico del tabacco. Gli spettri del virus intatto erano poco modificati tra pH 8 e 4 e suggerivano che la proteina di rivestimento fosse bloccata in una conformazione simile a quella delle subunità in soluzione a pH 7. Si propone che il cambiamento conformazionale indotto dal pH sia responsabile della determinazione del ramo acido del profilo del pH per la ricostituzione del virus X della patata dalle sue subunità proteiche di rivestimento dissociate e dall'RNA.
Titolazioni alcaline di somatotropina umana, coriomammotropina umana e prolattina ovina mediante dicroismo circolare e fluorescenza.Transizioni strutturali che si verificano durante la titolazione alcalina della somatotropina umana, umana La coriomammotropina e la prolattina ovina sono state studiate mediante dicroismo circolare e spettri di emissione di fluorescenza. La somatotropina umana ha mostrato un punto isodcroico a 287 nm, con tutte le variazioni spettrali invertite alla titolazione da pH 12,50 a pH 8,0. Il pH ha prodotto una semplice curva sigmoidale. La coriomammotropina umana ha mostrato un punto isodcroico a 288 nm. Gli spettri di fluorescenza e dicroismo circolare di questa proteina sono risultati reversibili tra pH 8,0 e 11,0. Tuttavia, su titolazione sopra pH 11, il punto isocroico e il reversibilità degli spettri di dicroismo circolare sono stati persi. Questa transizione conformazionale è stata accompagnata da un forte aumento della fluorescenza qu rendimento antum. Gli spettri di dicroismo circolare della prolattina ovina non hanno mostrato sostanzialmente alcun cambiamento alla titolazione a pH 11,0. Tuttavia, tra pH 11,0 e 12,0, è stata osservata una netta transizione conformazionale simile a quella osservata nella coriomammotropina umana, ma non presentando lo stesso aumento della resa quantica della fluorescenza. La titolazione di fluorescenza della prolattina è risultata essenzialmente reversibile dopo titolazione a partire da pH 12,5, sebbene gli spettri di dicroismo circolare non fossero reversibili da questo pH.
Studi sul legame di FMN da parte dell'apoflavodossina da Peptostreptococcus elsdenii, dipendenza dal pH e dalla concentrazione di NaCl.1. Dipendenza dal pH e dalla forza ionica dell'interazione di FMN con apoflavodossina è stata studiata mediante fluorometria nella regione del pH 2-5, a 22 gradi C. 2. La costante di velocità di dissociazione e la costante di dissociazione sono state determinate sperimentalmente, le costanti di velocità di associazione sono state claculate ad un dato valore di pH. Queste costanti dipendono dalla forza ionica. I grafici di queste costanti contro la radice quadrata della forza ionica sono diritti. 3. I nostri dati sono stati interpretati in termini della teoria di Brönsted, che mette in relazione le velocità di reazione chimica con la forza ionica. I dati indicano che l'apoenzima raggiunge la sua massima carica netta positiva a pH 2,0-2,6. La carica netta calcolata in questa regione di pH è compresa tra 11 e 12 ed è in accordo con il valore teorico di 12 come dedotto dalla struttura primaria del pro teina. Il punto isoelettrico dell'oloenzima è circa 4. 4. La costante di velocità di associazione estrapolata alla forza ionica zero è 3,2-10(5)M-1-s-1 ed è indipendente dal pH. 5. La costante di velocità di dissociazione e la costante di dissociazione estrapolata a forza ionica zero dipendono dal pH. I risultati sono spiegati assumendo che ci siano due ionizzazioni proteiche con un valore pK di 3,4; questi gruppi ionizzanti sono probabilmente vicini al sito di legame FMN.
Caratteristiche dell'equilibrio dell'ossigeno dell'emoglobina adulta e fetale di scimmia giapponese (Macaca fuscata).L'emoglobina adulta e l'emoglobina fetale sono state ottenute dalla scimmia giapponese (Macaca fuscata). ) e sono state studiate le loro caratteristiche di equilibrio dell'ossigeno. (1) L'affinità all'ossigeno dell'emoglobina fetale era superiore a quella dell'emoglobina adulta sia in presenza che in assenza di 2,3-difosfoglicerato. La presenza di difosfoglicerato abbassa di molto l'affinità all'ossigeno dell'emoglobina adulta maggiore di quello dell'HbF e i livelli di difosfoglicerato dei globuli rossi delle scimmie adulte e neonate sono circa gli stessi (2) L'intensità dell'effetto Bohr, come espresso da -deltalogP50/deltapH, a pH 7,4 era nell'ordine di quello fetale emoglobina-difosfoglicerato maggiore dell'emoglobina-difosfoglicerato dell'adulto maggiore dell'emoglobina fetale maggiore dell'emoglobina dell'adulto.
Alcune proprietà dell'eritrocupreina trattata con solventi organici.È stato studiato l'effetto di vari tipi di solventi organici sulle proprietà dell'eritrocupreina bovina. Tre solventi organici sono stati trovati in cui la proteina è solubile, questi erano: dimetilsolfossido, formammide e N-metilformammide. È stato dimostrato che in mezzi di formammide e dimetilsolfossido la proteina possiede attività superossido dismutasi, ma in N-metilformammide la proteina ha attività trascurabile In solventi organici il substrato (radicale superossido) e l'elettrone solvatato determinano una riduzione della proteina rame. Ad alte concentrazioni di radicale superossido o elettroni solvatati è stata notata un'inattivazione della proteina e la stabilizzazione dei radicali superossido. La stabilizzazione è più pronunciata nella N-metilformammide. La proteina che viene ridotta dal radicale o dall'elettrone solvatato può essere riossidata dall'ossigeno molecolare, quest'ultimo essendo ridotto al radicale superossido.
Localizzazione e alcune proprietà delle dipeptidasi lisosomiali nel fegato di ratto.1. I tassi di idrolisi di 26 dipeptidi sintetici mediante estratti da frazioni lisosomiali altamente purificate da sono stati determinati fegato di ratto a pH 5,0 e da omogenati di fegato intero a pH 7,4 Gli estratti delle frazioni lisosomiali hanno idrolizzato la maggior parte dei peptidi a una velocità per mg di proteina inferiore rispetto agli omogenati e alcuni peptidi per niente 2. Proprietà delle due dipeptidasi presenti negli estratti delle frazioni lisosomiali, sono stati studiati in maggior dettaglio rispettivamente la scissione di Ile-Glu e Leu-Gly. L'enzima che ha idrolizzato Ile-Glu è stato fortemente attivato dal ditiotreitolo, ha mostrato un'attività ottimale a pH 4,5 e aveva un peso molecolare di circa 120 000. La dipeptidasi Leu-Gly apparentemente non conteneva un gruppo tiolico essenziale e aveva un peso molecolare di circa 90 000. Ha mostrato un'attività massima a pH 6,5. 3. Dopo centrifugazione differenziale degli omogenati epatici, Ile-Glu e Le attività di scissione di Leu-Gly sono state determinate nelle frazioni, nelle condizioni ottimali sopra menzionate. L'attività dell'enzima idrolizzante Ile-Glu ha mostrato circa la stessa distribuzione della fosfatasi acida dell'enzima marcatore lisosomiale. L'attività di scissione di Leu-Gly, tuttavia, era ampiamente presente nella frazione del citosol, con solo un piccolo picco nella frazione lisosomiale. Abbiamo ottenuto evidenza che le attività presenti nella frazione lisosomiale e nella frazione citosolica erano dovute a diversi enzimi, e che uno di questi enzimi era localizzato esclusivamente nei lisosomi. 4. Si conclude che alcuni dipeptidi originati dalla proteolisi intralisosomiale potrebbero essere scissi dalle dipeptidasi lisosomiali, mentre altri sono probabilmente idrolizzati solo nel compartimento extra-lisosomiale della cellula.
Proprietà e localizzazione subcellulare dell'idrolasi dell'acido CMP-N-acetilneuraminico del rene di vitello.Le proprietà e la distribuzione subcellulare dell'acido CMP-N-acetilneuraminico ( CMP-NAcNeu) idrolasi sono state studiate nella corteccia del rene di vitello. Il pH ottimale era 9,0 sia in tampone Tris-HCl che glicina/NaOH. Il Km apparente era 0,47 mM e il V apparente 15,3 mumol/h/g peso umido di vitello corteccia renale. È stata dimostrata una stimolazione da parte di ioni metallici bivalenti (Ca2+ e Mg2+) per l'idrolasi. In presenza di Triton X-100 è stato osservato un aumento dell'attività enzimatica. L'idrolasi CMP-NAcNeu è stata inibita da EDTA, beta-mercaptoetanolo, nucleoside fosfati e nucleotidi-zuccheri. L'inibizione era più pronunciata quando veniva utilizzata una concentrazione subottimale di CMP-NAcNeu. L'enzima sembrava essere localizzato nelle membrane plasmatiche. Nella preparazione della membrana plasmatica della corteccia renale di vitello, che era derivata principalmente dalla cellule del tubulo prossimale, la resa di CMP-NAcNeu idrolasi (13%) e il suo aumento dell'attività specifica (9 volte) è stato pari a quello degli enzimi marcatori della membrana plasmatica. Da studi sulla distribuzione subcellulare è apparso che l'enzima era localizzato principalmente sul lato del bordo della bordura della membrana plasmatica della cellula del tubulo prossimale.
Beta-eliminazione catalizzata dalla vitamina B-6 di serina e O-fosfoserina. Aspetti qualitativi e quantitativi delle influenze catalitiche allo stadio limitante, un confronto con il tasso di beta-eliminazione enzimatica.Le velocità di reazione complessive per la beta-eliminazione di serina e O-fosfoserina, catalizzate da vari analoghi della vitamina B-6 (piridossal 5\'-fosfato, 5\'-desossipiridossale e N-metilpiridossale 5\'-fosfato) in presenza o assenza di ioni Cu2+, il confronto della dipendenza dal pH delle attività molari delle tre aldeidi della vitamina B-6 nella beta-eliminazione della serina consente di caratterizzare le diverse specie di basi di Schiff attive e i singoli eventi catalitici. La base di Schiff che ha una carica positiva sull'azoto dell'anello piridinico e un gruppo fosfato completamente ionizzato mostra la più alta attività molare. Il gruppo fosfato agisce come catalizzatore di base generale intramolecolare, molto probabilmente all'alfa- protone di carbonio dell'amminoacido. Inoltre la catalisi acida generale da parte delle specie tampone avviene presso il gruppo beta-idrossi serina. Questi fatti insieme forniscono una descrizione cineticamente univoca del meccanismo della reazione: la rimozione del protone all'atomo di carbonio alfa della serina è la fase limitante ed è seguita dalla più rapida eliminazione del gruppo b-idrossi della serina. La costante di velocità diretta dello stadio di limitazione della velocità viene calcolata per ciascuna delle reazioni menzionate. Le costanti di velocità vengono confrontate rispetto all'efficacia dei singoli componenti catalitici nella beta-eliminazione dipendente dalla vitamina B-6. Per condizioni ottimali, la reazione dell'O-fosfoserina è più veloce di un fattore 10(4) nella velocità di eliminazione della beta rispetto alla corrispondente beta-eliminazione della serina catalizzata dall'acido. Per le eliminazioni agli atomi di carbonio alfa e beta di O-fosfoserina nelle reazioni catalizzate dalla vitamina B-6 viene discusso uno stato di transizione comune. Da un confronto tra la reazione del modello dipendente dalla vitamina beta-6 più veloce con la velocità di una beta-eliminazione enzimatica si suggerisce che per quegli enzimi beta-elininanti in cui il passaggio limitante è lo stesso del modello, i componenti catalitici menzionato potrebbe essere sufficiente per spiegare la velocità del passo limitante.
Effetto dell'imidazolo sulla gluconeogenesi renale.Gli effetti metabolici dell'imidazolo sono stati testati nella corteccia renale di ratto. L'imidazolo ha potenziato l'attività della fosfodiesterasi corticale renale in vitro L'imidazolo ha inibito la produzione di glucosio in modo dose-dipendente da una varietà di substrati nella via gluconeogenica prossimale ai fosfati triosi. La stimolazione nella gluconeogenesi renale risultante dall'isoproterenolo e dall'ormone paratiroideo è stata inibita dall'imidazolo. Questi cambiamenti sono correlati con un'inibizione del aumento dei livelli di AMP ciclico corticale renale prodotti da questi ormoni Questi studi indicano che l'imidazolo è un efficace attivatore della fosfodiesterasi nelle cellule renali intatte e forniscono ulteriore supporto all'ipotesi che la stimolazione della gluconeogenesi renale prodotta dall'isoproterenolo e dall'ormone paratiroideo sia mediata da un rilascio di AMP ciclico.
Produzione di ammoniaca e vie di utilizzazione della glutammina in fette di rene di ratto.La produzione di ammoniaca da glutammina è stata studiata in fette di reni di ratto non acidosi e acidotici. Fette di reni non acidotici hanno prodotto il 53% di ammoniaca dalla D-glutammina rispetto alla L-glutammina durante i primi 15 minuti di incubazione. Successivamente il tasso di produzione dall'isomero L è accelerato mentre quello dall'isomero D è rimasto costante. l'accelerazione della produzione di ammoniaca dalla L-glutammina dipendeva dal rigonfiamento dei tessuti poiché la prevenzione del rigonfiamento riduceva il tasso di produzione. Il rigonfiamento attiva la via mitocondriale della glutaminasi I, come evidenziato dall'aumento dell'ammoniaca prodotta per il rapporto di glutammina utilizzata, nonché dal tasso accelerato di Produzione di CO2 derivata dallo smaltimento ossidativo dello scheletro carbonioso della glutammina Il rigonfiamento della fetta corticale attiva la via mitocondriale in un modo non dissimile da quello osservato in vivo durante l'acidosi cronica e d può riflettere una maggiore permeabilità alla glutammina. I reni di ratto acido non sono rigonfi in vivo mentre le fette corticali inizialmente producono 4 volte più ammoniaca rispetto alle fette non acidotiche. Dopo 15 minuti, questa differenza di 4 volte nella produzione totale di ammoniaca scende a una differenza di 2 volte a causa dell'attivazione indotta dal gonfiore della via mitocondriale. Di conseguenza, il rigonfiamento della fetta cancella il fatto importante che la produzione di ammoniaca da parte della via mitocondriale è 15 volte maggiore nei reni acidosi rispetto a quelli non acidotici.
Metabolismo del nucleotide adenina delle piastrine del sangue. IX. Andamento temporale della secrezione e cambiamenti nel metabolismo energetico nelle piastrine trattate con trombina.Cambiamenti nel metabolismo energetico delle piastrine umane lavate sono state confrontate con la cinetica di secrezione indotta dalla trombina (5 unità/ml). Una diminuzione del 50% del livello di ATP metabolico (marcato con 3H), che era essenzialmente completa in 30 secondi, è stata abbinata in velocità dall'adenina secrezione di nucleotidi dalla conservazione in granuli densi L'incubazione delle piastrine con antimicina prima dell'aggiunta di trombina ha aumentato il tasso di caduta dell'ATP metabolico, ma non ha influenzato il tasso di secrezione di nucleotidi di adenina La secrezione di beta-N-acetilglucosaminidasi, che era più lenta della secrezione di nucleotidi di adenina nelle piastrine di controllo, è stato notevolmente inibito dall'antimicina, confermando precedenti rapporti che esistono diversi meccanismi regolatori per la secrezione densa e di granuli alfa. I tassi di rifosforilazione dell'ADP metabolico in ATP tramite glicoli sis e la fosforilazione ossidativa sono state stimate misurando la produzione di lattato e il consumo di O2 nelle piastrine a riposo e stimolate dalla trombina e confrontate con il livello di ATP metabolico (9-10 nmol/mg di proteina piastrinica a riposo). La velocità di produzione di ATP è stata stimolata almeno due volte da 12 nmol a 24 nmol/min/mg entro pochi secondi dall'aggiunta di trombina. Questo aumento della velocità è stato mantenuto per il periodo osservato di 5 min sebbene il livello di ATP metabolico fosse sceso a 4-5 nmol/mg entro 30 s; il turnover dell'ATP metabolico rimanente è quindi aumentato di quattro volte rispetto allo stato di riposo, sebbene l'effettiva stimolazione della produzione di energia fosse solo di due volte.
Stabilità relative delle due conformazioni quaternarie dell'emoglobina fetale umana.La dipendenza dal pH di diverse proprietà funzionali delle emoglobine fetali umane e adulte è stata studiata per determinano le stabilità relative delle conformazioni quaternarie ad alta e bassa affinità (R e T) delle due proteine in condizioni diverse. L'aqumetemoglobina fetale subisce cambiamenti nella reattività sulfidrilica, nello spettro di assorbimento e nel dicroismo circolare in presenza di insitolo esafosfato che sono coerenti con un transizione dallo stato quaternario R a T, ma solo a valori di pH inferiori a 6,8. Nell'emoglobina adulta questa transizione può essere indotta a valori di pH inferiori a 7,2. Anche in assenza di fosfati, lo spettro di dicroismo circolare ultravioletto (uv) dell'aquometemoglobina fetale a bassa Il pH indica la presenza di una certa conformazione a T. Il valore iniziale per la costante di velocità del secondo ordine per la combinazione di deossiemoglobina fetale con monossido di carbonio è compar capace di quella per l'emoglobina adulta in assenza di fosfati organici e non è ridotta dai fosfati organici tanto quanto quella per la proteina adulta. L'apparente costante di velocità del primo ordine per la dissociazione del CO dall'emoglobina fetale completamente legata, misurata mediante sostituzione con NO, aumenta di tre volte in assenza di fosfati organici e di quattro volte in presenza di fosfati organici, con pH decrescente; il punto medio della transizione dipendente dal pH si verifica intorno a 6,8. Un aumento simile nella costante di velocità apparente del primo ordine per la dissociazione dell'O2, misurata mediante sostituzione con CO, può essere visto anche con la diminuzione del pH. L'NO-emoglobina F può essere convertita allo stato T anche quando completamente ligando semplicemente abbassando il pH, come giudicato dal dicroismo circolare uv, dalla differenza visibile dello spettro nella regione delle bande alfa e beta e da un drammatico aumento del tasso di NO dissociazione, misurata per sostituzione con CO in presenza di ditionite. Questi risultati sono tutti coerenti con un modello per l'emoglobina fetale in cui il sito del fosfato organico può essere funzionalmente indebolito dalla sostituzione di un residuo coinvolto nelle interazioni ioniche con i gruppi fosfato caricati negativamente, ma in cui la conformazione T a bassa affinità è intrinsecamente più stabile di quello dell'adllt emoglobina. Secondo questo modello, le differenze tra emoglobina fetale e adulta possono essere spiegate principalmente in termini di stabilità relativa delle conformazioni R e T in ciascuna delle proteine con differenze nelle proprietà intrinseche delle singole conformazioni che contribuiscono a effetti solo secondari.
Transizioni termiche della miosina e dei suoi frammenti elicoidali. Regioni di instabilità strutturale nella molecola di miosina.Le stabilità strutturali di tutti i familiari frammenti proteolitici della miosina sono stati studiati in studi di fusione negli intervalli di pH 5,5-7,0 in KCl 0,5 M. Tutti i frammenti tranne il sottoframmento 2 subiscono una transizione di fusione manifestata dall'assorbimento cooperativo di protoni nell'intervallo di temperatura 34-47 gradi C, e questi frammenti subiscono un aumento nella temperatura di transizione, Tm all'aumentare del pH. Il sottoframmento 2 subisce una transizione di fusione nell'intervallo 43-55 gradi C, manifestata dalla dissociazione dei protoni, e subisce una diminuzione di Tm all'aumentare del pH. Questi risultati suggeriscono che I cambiamenti di pH possono modulare le stabilità relative delle regioni leggere meromisina, sottoframmento-1 e sottoframmento-2 della molecola di miosina.
Proprietà e distribuzione subcellulare dell'attività della guanilato ciclasi nel midollo renale di ratto: correlazione con il contenuto tissutale di guanosina 3\',5\'-monofosfato.Le proprietà dei sistemi guanilato ciclasi del midollo esterno e interno del rene di ratto sono state esaminate e confrontate con quelle della corteccia renale. È stata osservata una gradazione dei livelli di guanosina ciclica 3\',5\'-monofosfato (cGMP) allo stato stazionario in fette incubate di questi tessuti (midollo interno maggiore del midollo esterno maggiore della corteccia) Questo era correlato alla proporzione dell'attività totale della guanilato ciclasi nella frazione di particolato di 100.000 g di ciascun tessuto, ma era discordante con le attività relative della guanilato ciclasi (la più alta nella corteccia) e della cGMP-fosfodiesterasi (più bassa nella corteccia) negli omogenati dell'intero tessuto. La guanilato ciclasi solubile della corteccia e del midollo interno ha mostrato una cinetica tipica di Michaelis-Menten con un Km apparente per MnGTP di 0,11 mM, mentre la parte l'enzima iculato dal midollo interno ha mostrato un comportamento cooperativo positivo apparente e una ridotta dipendenza da Mn2+. Pertanto, l'enzima particolato potrebbe svolgere un ruolo chiave nella regolazione dei livelli di cGMP nella cellula intatta dove le concentrazioni di Mn2+ sono basse. Gli enzimi solubili e particolati del midollo interno sono stati ulteriormente distinti per le loro risposte a diversi agenti di prova. L'enzima solubile è stato attivato da Ca2+, NaN3, NaNo2 e fenilidrazina, mentre l'attività del particolato è stata inibita dal Ca2+ e non rispondeva a questi ultimi agenti. In presenza di NaNo2, il fabbisogno di Mn2+ dell'enzima solubile era ridotto ed equivalente a quello del preparato particolato. Inoltre, la reattività relativa dell'enzima solubile a NaNO2 è stata potenziata quando Mg2+ ha sostituito Mn2+ come unico catione bivalente. Questi cambiamenti nei requisiti di metallo possono essere coinvolti nell'azione di NaNO2 per aumentare il cGMP nel rene intatto. La guanilato ciclasi solubile della corteccia era chiaramente più sensibile alla stimolazione di NaN3, Nano2 e fenilidrazina che era attività solubile da entrambi i tessuti midollare. Si può anche distinguere l'efficacia degli agonisti sull'attività solubile del midollo esterno ed interno. Di conseguenza, la regolazione e le proprietà della guanilato ciclasi solubile, così come la distribuzione degli enzimi subcellulari, sono distinte nelle tre regioni del rene.
Un approccio semplice e quantitativo all'accoppiamento della fotofosforilazione al flusso di elettroni in termini di flussi di protoni.Una semplice relazione tra le efficienze di fosforilazione osservate (P/ e) e la concentrazione di protoni interni nei tilacoidi del cloroplasto degli spinaci sono stati ricavati. I rapporti P/e, variati modificando l'intensità della luce o aggiungendo l'inibitore del trasferimento di energia, 4\'-deossiflorizina, sono stati trovati a cambiare con la concentrazione di protoni interni in in accordo con questa relazione. Probabilmente si può anche fare una previsione quantitativa dell'effetto dei disaccoppiatori sul rapporto P/e. Con l'estrapolazione dei grafici dei rapporti P/e osservati rispetto alla concentrazione interna di protoni divisa per la velocità complessiva del flusso di elettroni, un massimo si ottiene un P/e intrinseco di circa 0,66. Assumendo che all'interno dei tilacoidi appaiano due protoni per ogni elettrone trasferito, un rapporto P/e di 0,66 suggerisce che per ogni ATP formato vengono consumati tre protoni interni. i protoni possono essere considerati substrati per la reazione di fosforilazione. I grafici di collina del tasso di fosforilazione rispetto alla concentrazione di protoni interni indicano anche che vengono consumati tre protoni per ogni ATP sintetizzato. Pertanto, il gradiente di concentrazione di H+ si comporta quantitativamente, oltre che qualitativamente, come se fosse il collegamento tra il flusso di elettroni e la fosforilazione nei tilacoidi illuminati.
Studi sul legame non cooperativo della proteina di svolgimento del DNA di Escherichia coli agli acidi nucleici a filamento singolo.Il legame non cooperativo della proteina di svolgimento del DNA di Escherichia coli agli oligomeri di DNA a filamento singolo è stato studiato mediante dialisi all'equilibrio. Le dialisi sono state eseguite in un certo numero di soluzioni e condizioni di temperatura utilizzando oligomeri di varia lunghezza e composizione di basi. I risultati di questi studi, che includono un'analisi Scatchard del legame, ci hanno permesso di proporre un modello per il legame cooperativo della proteina al DNA a singolo filamento. Vengono inoltre presentati i risultati di esperimenti che trattano l'interazione della proteina con l'RNA a filamento singolo.
Determinazione potenziometrica delle ionizzazioni nel sito attivo della papaina.Il comportamento di ionizzazione dei gruppi nel sito attivo della papaina è stato determinato dalla dipendenza dal pH di la differenza del contenuto di protoni della papaina e del derivato metiltio del gruppo tiolico nel sito attivo della papaina (papaina-S-SCH3). Questa differenza nel contenuto di protoni è stata determinata direttamente da due metodi indipendenti. Un metodo prevedeva misurazioni potenziometriche dei protoni rilascio e demetiltiolazione della papaina-S-SCH3 con ditiotreitolo, in funzione del pH. L'altro metodo prevedeva misurazioni analoghe dei protoni rilasciati sulla metiltiolazione della papaina con metil metantisolfonato. Le titolazioni della differenza di pH del metiltio generate da queste misurazioni indicano che la ionizzazione di il gruppo tiolico nel sito attivo della papaina è legato alla ionizzazione di His-159. Il pK del gruppo tiolico cambia da 3,3 a 7,6 alla deprotonazione di His-159 a 29 gradi C/20.05. Allo stesso modo, il pK di His-159 si sposta da 4,3 a 8,5 quando il gruppo tiolico del sito attivo viene deprotonato. Le costanti di ionizzazione microscopiche determinate in questo lavoro per Cys-25 e His-159 indicano che la costante di equilibrio per il trasferimento del protone da Cys-25 a His-159 è 8-12, e che nell'intervallo di pH fisiologico il sito attivo tiolo esiste principalmente come anione tiolo.
Identificazione e proprietà della flavina legata in modo covalente della beta-ciclopiazonato ossidociclasi.È stato precedentemente dimostrato che la beta-ciclopiazonato ossidociclasi da Penicillium cyclopium contiene flavin dinucleotide in legame covalente alla proteina. Nel presente studio, un peptide mononucleotidico flavino puro è stato isolato dall'enzima mediante digestione triptico-chimotriptica, cromatografia su Florisil e su dietilamminoetilcellulosa e idrolisi con nucleotide pirofosfatasi. Il peptide flavino contiene 9 aminoacidi, tra cui istidina in legame con la flavina e Asx come residuo N-terminale. La fluorescenza della flavina nel peptide FMN è profondamente estinta anche a pH 3,2, dove la protonazione dell'imidazolo impedisce l'estinzione della fluorescenza della flavina da parte dell'istidina. essere dovuto all'interazione della flavina con un residuo di triptofano, in quanto il quenching viene abolito dall'ossidazione del triptofano con l'acido performico. Allo stesso modo, la fluorescenza del triptofano nel peptide viene spenta, presumibilmente dalla flavina. La flavina del beta-ciclopiazonato ossidocilcase è attaccata, tramite il gruppo 8alfa-metilene, all'anello imidazolico di un'istidina. L'aminoacilflavina isolata dall'enzima è identica nel pKa del suo gruppo imidazolico, nella riduzione da parte di NaBH4, e in altre proprietà con l'8alfa-(N1-istidil)riboflavina sintetica. Il pKa del componente istidilriboflavina dell'ossidociclasi è 5,2 prima e 5,0 dopo la modificazione acida della catena ribitile, come si trova nel derivato sintetico. Si conclude che l'enzima contiene l'isomero N1 dell'istidilriboflavina e che l'idrolisi acida dei peptidi flavinici isolati dall'ossidociclasi, liberando l'istidilriboflavina, provoca anche la modificazione acida della catena ribitilica della frazione flavina.
Reazione della carbossipeptidasi C1 di lievito con reagenti specifici del gruppo.Le reazioni tra carbossipeptidasi C di lievito e i reagenti specifici del gruppo, fenilgliossale e iodoacetammide, hanno sono state studiate in dettaglio e sono state confermate le reazioni del residuo nel sito attivo con N-tosil-L-fenilalanina clorometilchetone e diisopropilfosforofluoridato. La modificazione dell'enzima da parte del fenilgliossale o della iodoacetammide determina la perdita dell'attività peptidasica, mentre l'attività esterasi rimane invariato. L'inattivazione da parte del fenilgliossale sembra essere il risultato della modifica di un singolo residuo di arginina, mentre l'inibizione da parte della iodoacetamide può essere correlata con la modifica di un singolo residuo di metionina. Inattivazione dell'enzima da parte di N-tosil-L-fenilalanina clorometile chetone o diisopropil fosforofluoridato è il risultato della modifica rispettivamente di un singolo residuo di istidina e di un singolo residuo di serina. l'inibizione indica alcune analogie nel meccanismo della carbossipeptidasi C del lievito rispetto alla chimotripsina pancreatica, da un lato, e alla carbossipeptidasi A, dall'altro.
Fosforo-31 Studio di risonanza magnetica nucleare in trasformata di Fourier di mononucleotidi e dinucleotidi. 1. Spostamenti chimici.Risonanza magnetica nucleare al fosforo-31 (NMR) viene riportato lo studio dei mononucleotidi di adenina, uracile e timina, dei loro analoghi ciclici e dei corrispondenti dinucleotidi. Dalla dipendenza dal pH degli spostamenti chimici del fosfato, si trovano valori di pKa di 6,25-6,30 per tutti i 5\'-mononucleotidi ionizzazione di fosfato secondario, indipendentemente dalla natura della base e dalla presenza di un gruppo ossidrile nella posizione 2\'. Al contrario, la sostituzione di un atomo di idrogeno con un 2\'-OH abbassa il pKa dei 3\'-monoribonucleotidi da 6,25 a 5,71-5,85 Questa indicazione di una forte influenza del gruppo 2\'-idrossile sul 3\'-fosfato è confermata dall'esistenza di uno spostamento verso il basso da 0,4 a 0,5 ppm indotto dal 2\'-OH sulla risonanza del fosfato di 3\ '-monoribonucleotidi e 3\',5\'-ciclico nucleotidi e dinucleotidi rispetto agli analoghi desossiribosile. Gli spostamenti chimici dei fosfati e le curve di titolazione sono influenzati dalla ionizzazione e dal tipo di base. Tipicamente, si osservano deviazioni dai grafici teorici di Henderson-Hasselbalch durante la titolazione della base. Inoltre, la purina mostra un'influenza più deshielding della pirimidina sui gruppi fosfato della maggior parte dei mononucleotidi (da 0,10 a 0,25 ppm di spostamento verso il basso) con una situazione inversa per i dinucleotidi. Vengono discussi questi effetti insieme all'importanza della disposizione stereochimica (pucker dell'anello furanosio, conformazione dello scheletro furanosio-fosfato, angolo di legame OPO) sugli spostamenti chimici del fosfato.
Effetto del piridossale 5\'-fosfato sull'affinità con l'ossigeno degli eritrociti umani.Piridossale 5\'-fosfato (PLP), un effettore allosterico per l'ossigenazione dell'emoglobina, è stato facilmente incorporato negli eritrociti ed è scomparso da essi per semplice diffusione passiva. La scomparsa del PLP dalle cellule è stata accelerata dalla generazione di 2,3-DPG in un mezzo di inosina, piruvato e fosfato. la curva di dissociazione misurata a un pH extracellulare di 7,4 ha dimostrato che il PLP incorporato nelle cellule ha anche abbassato l'affinità dell'ossigeno e che il PLP ha compensato funzionalmente un 2,3-DPG metabolicamente ridotto. Tuttavia, la dipendenza dell'affinità dell'ossigeno dalla concentrazione intracellulare di PLP ha mostrato un pattern diverso da quello osservato per il 2,3-DPG. D'altra parte, l'abbassamento del pH intracellulare da parte dei fosfati organici accumulati nelle cellule era molto maggiore con il PLP che con il 2,3-DPG. La peculiare relazione tra l'o l'affinità per l'ossigeno degli eritrociti e la concentrazione intracellulare di PLP è discussa in dettaglio. Il presente studio può offrire una nuova prospettiva per la conservazione del sangue con una normale funzione.
Solubilizzazione, purificazione parziale e radiodosaggio per il recettore del fattore intrinseco dalla mucosa ileale.È stata solubilizzata una macromolecola che lega il fattore intrinseco saturato con vitamina B12 dall'ileo di cavia mediante omogeneizzazione seguita da disgregazione meccanica senza solventi organici o detergenti. Questo fattore intrinseco \'recettore\' è stato ulteriormente purificato mediante precipitazione con solfato di ammonio saturo al 30%, centrifugazione a 105000 g e filtrazione su Sephadex G-200. La mancata precipitazione del recettore dopo la centrifugazione a 105000 g per 3 ore e la filtrazione del recettore con i volumi inclusi attraverso Sepharose 4B e 6B è stata la prova che è stato solubilizzato. La purificazione del recettore è stata monitorata mediante un test radiometrico in cui il fattore intrinseco- Il complesso [57Co]vitamina-B12 accoppiato al recettore solubilizzato è precipitato al 15% di solfato di sodio mentre il solo fattore intrinseco-[57Co]B12 è rimasto solubile a t questa concentrazione di sale. Questo radiodosaggio ha anche permesso lo studio in vitro dell'interazione del recettore solubilizzato e del fattore intrinseco saturato con [57Co]B12. Il recettore non si è legato al fattore intrinseco-[57Co]B12 al di sotto di pH 5 mentre è stato osservato il legame a pH 9,0. Il legame era equivalente a 37 gradi C e 25 gradi C, ma era notevolmente ridotto a 4 gradi C e 56 gradi C ed era distrutto a 100 gradi C. Il recettore ha resistito a 60 minuti di digestione da tripsina, chimotripsina, pronasi e subtilisina. Dopo 180 minuti di digestione, la pronasi e la subtilisina hanno inattivato rispettivamente il 90% e il 41% del recettore, mentre la tripsina e la chimotripsina hanno inattivato solo il 21% e il 23%. L'EDTA trisodico ha inibito il legame del fattore intrinseco-[57Co]B12 al recettore e questa inibizione potrebbe essere invertita con l'aggiunta di Ca2+ in eccesso. Mg2+ e Mn2+ erano meno efficaci del Ca2+ per l'attività del recettore. L'analisi cinetica della reazione ha indicato una velocità massima di 0,083 nmole IF legata B12/min con un Km di 1,36 x 10(-10) M. Il recettore solubilizzato aveva una maggiore affinità per il fattore intrinseco legato alla vitamina B12 che per il fattore intrinseco privo di vitamina B12. La solubilizzazione di questo recettore del fattore intrinseco senza sostanze chimiche suggerisce che non è un componente integrale delle membrane dei microvilli legate idrofobicamente alla matrice lipidica, ma piuttosto una proteina periferica debolmente associata alla membrana per interazione non covalente.
Preparazione e conservazione dei concentrati piastrinici. II. Variabili di conservazione che influenzano la vitalità e la funzione delle piastrine.I fattori che influenzano la vitalità e la funzione dei concentrati piastrinici conservati sono stati studiato in un programma di emocomponenti. È stato riscontrato che le piastrine potevano essere mantenute fino a 72 ore senza contaminazione batterica nelle seguenti condizioni: (1) preparazione chirurgica della pelle nel sito di venipuntura; (2) raccolta di sangue in CPD o anticoagulante ACD in un sistema a sacchetto chiuso; (3) centrifugazione del PRP a 3000 g per 20 min; (4) conservazione in sacchetti di plastica Fenwal PL-146, Cutter CL-2383 o McGaw; (5) risospensione del pellet piastrinico in 70 ml di plasma residuo ; (6) conservazione a 22+/-2 gradi C; e (7) miscelazione delicata e costante durante la conservazione. La vitalità delle piastrine determinata dal recupero e dalla sopravvivenza è ampiamente mantenuta, così come la funzione piastrinica misurata dal tempo di sanguinamento del templato. Sia la vitalità che la funzione di piastrine concentrate conservati a 4 gradi C sono gravemente compromessi.
Labetalolo endovenoso in pazienti ipertesi trattati con farmaci beta-bloccanti.1 L'effetto delle iniezioni endovenose di labetalolo a dosi di 1 e 2 mg /kg è stato studiato in 15 pazienti con ipertensione grave non adeguatamente controllata da farmaci beta-bloccanti adrenergici.2 Alla dose di 1 mg/kg si è verificata una riduzione lieve ma statisticamente insignificante della pressione sanguigna. Quando sono stati somministrati 2 mg/kg si è verificata una riduzione significativa prolungata (6 h) della pressione sanguigna sdraiata. A entrambi i livelli di dose c'è stato un piccolo aumento iniziale della frequenza cardiaca ma il picco di flusso forzato non è stato influenzato.3 Gli effetti collaterali erano limitati a ipotensione posturale transitoria e una sensazione di calore. 4 Si conclude che il labetalolo per via endovenosa alla dose di 2 mg/kg è sicuro ed efficace nel ridurre rapidamente la pressione sanguigna in pazienti che già ricevono farmaci beta-bloccanti adrenergici.
Labetalol, un nuovo agente bloccante i recettori alfa e beta, nell'ipertensione.1Labetalol è un nuovo composto con effetti antagonisti sia a livello alfa che siti dei recettori beta-adrenergici.2 Quando somministrato a 12 pazienti ipertesi a un dosaggio medio giornaliero di 273 mg per 7 mesi sono state osservate riduzioni statisticamente significative (rispetto ai valori pretrattamento) della pressione sanguigna in posizione sdraiata e in piedi.3 Il trattamento deve essere interrotto in un paziente a causa di sogni vividi e il dosaggio è stato ridotto in un paziente a causa di vertigini. Altrimenti non sono stati rilevati effetti collaterali di rilievo. 4 Si può quindi concludere che il labetalolo offre un utile effetto antiipertensivo e che questo composto è ben tollerato.
Blocco combinato dei recettori alfa e beta-adrenergici con labetalolo orale in pazienti ipertesi con riferimento agli effetti emodinamici a riposo e durante l'esercizio.Dodici pazienti ipertesi hanno ricevuto trattamento orale con labetalolo (dose finale media 1.200 mg/die) per un periodo di 16 mesi.2 È stato mantenuto un soddisfacente controllo della pressione arteriosa sia a riposo che dopo l'esercizio.3 L'attività della renina plasmatica è stata significativamente ridotta.4 Ipotensione posturale misurata in questo gruppo di pazienti dopo una singola dose di labetalolo 50 mg per via endovenosa è stato notevolmente ridotto durante il trattamento orale a lungo termine.5 Non sono stati osservati effetti collaterali gravi né si sono verificati cambiamenti significativi nelle variabili ematologiche e biochimiche durante il periodo.6 Dati emodinamici ottenuti in due dei pazienti dopo 16 mesi\' di trattamento suggerisce che il profilo emodinamico osservato dopo somministrazione endovenosa acuta viene mantenuto dopo un trattamento orale prolungato.
Effetti emodinamici del blocco combinato dei recettori alfa e beta-adrenergici dopo labetalolo per via endovenosa in pazienti ipertesi a riposo e durante l'esercizio.1 Gli effetti emodinamici del labetalolo 50 mg per via endovenosa sono stati studiati in 13 pazienti ipertesi a riposo in posizione supina ed eretta e durante l'esercizio mediante cateterizzazione percutanea del cuore destro e dell'arteria brachiale.2 Il labetalolo ha indotto riduzioni significative immediate della pressione arteriosa sistolica e diastolica in tutte le condizioni.3 Frequenza cardiaca, ictus volume e gittata cardiaca non erano significativamente alterati in posizione supina a riposo, ma erano significativamente ridotti in posizione eretta. Inoltre la resistenza vascolare sistemica era significativamente ridotta.4 Durante l'esercizio, la frequenza cardiaca, la gittata cardiaca e le resistenze vascolari erano significativamente ridotte; il volume è stato aumentato. Le pressioni di riempimento del ventricolo sinistro sono rimaste invariate sia a riposo che durante l'esercizio. 5 È stato concluso d che questi cambiamenti sono stati causati dal blocco dei recettori alfa e beta.
Effetti farmacologici del labetalolo nell'uomo.1 Gli effetti farmacologici del labetalolo sono stati studiati in soggetti sani normali. I risultati di questi studi sono stati riesaminati. 2 Nella valutazione degli effetti di blocco dei recettori beta-adrenergici del labetalolo sono stati utilizzati vari indici di blocco dei recettori beta-adrenergici nell'uomo. Il labetalolo somministrato per via orale ed endovenosa ha antagonizzato in modo competitivo gli effetti dell'isoprenalina sulla frequenza cardiaca e sulla pressione sanguigna diastolica. indotto è stato considerato come \'non selettivo\'. Inoltre, il labetalolo ha prodotto effetti inibitori dose-correlati sugli aumenti indotti dall'esercizio della frequenza cardiaca qualsiasi pressione sanguigna sistolica e simili effetti inibitori dose-correlati sulla tachicardia indotta dalla manovra di valsalva. Il labetalolo ha avuto solo un modesto effetto inibitorio sulla tachicardia indotta dal tilting poiché la pressione sanguigna è stata ridotta su una base dose-correlata.3 Il labetalolo era un competitivo specifico e antagonista degli effetti agonisti dei recettori alfa-adrenergici della fenilefrina somministrata per via sistemica e della noradrenalina infusa localmente. Inoltre, la somministrazione orale ed endovenosa di labetalolo ha ridotto la pressione sanguigna sistolica e diastolica in posizione supina, in piedi e seduta. 4 L'inizio e la durata degli effetti alfa e beta-antagonisti del labetalolo orale non sembravano essere dissociati nel tempo e c'era una stretta correlazione tra la variazione della concentrazione plasmatica e gli effetti farmacologici. 5 In studi comparativi con propranololo, sono stati osservati effetti beta-antagonisti simili, ma il propranololo era 4-6 volte più potente in rapporto al peso. Il confronto preciso, tuttavia, è stato complicato dagli effetti combinati alfa e beta del labetalolo, soprattutto perché l'effetto predominante del labetalolo nei soggetti normotesi era quello di ridurre la pressione sanguigna; mentre l'effetto predominante del propranololo era di ridurre la frequenza cardiaca. Inoltre, il propranololo ha avuto effetti inibitori sulla funzione ventilatoria in soggetti normali, mentre il labetalolo in dosi equivalenti di blocco dei recettori beta-adrenergici no. 6 Dai dettagli degli studi esaminati si è concluso che nell'uomo il labetalolo possiede proprietà combinate di antagonisti dei recettori alfa e beta-adrenergici.
Una revisione della farmacologia animale del labetalolo, un farmaco bloccante combinato alfa e beta-adrenergici.1 La farmacologia animale del labetalolo, un viene esaminato un farmaco che blocca sia gli alfa che i beta-adrenorecettori.2 In tessuti isolati il blocco da parte del labetalolo di entrambi i recettori alfa e beta-adrenergici ha soddisfatto i criteri accettati per l'antagonismo competitivo. Al contrario, la fentolamina era un antagonista competitivo solo per gli alfa-adrenorecettori, e propranololo, un antagonista competitivo solo sui recettori beta-adrenergici. Il labetalolo era 6-10 volte meno potente della fentolamina nel bloccare i recettori alfa-adrenergici e 1,5-3 volte meno potente del propranololo nel bloccare i recettori beta-adrenergici. Il labetalolo stesso era 4-8 volte più potente a beta- che a alfa-adrenorecettori.3 In cani anestetizzati labetalolo somministrato per via endovenosa risposte vasopressori bloccate alla risposta cronotropa, vasodepressiva e broncodilatatrice positiva alla fenilefrina all'isoprenalina Fentolamina b bloccato l'effetto della sola fenilefrina e del propranololo gli effetti della sola isoprenalina. Il labetalolo era circa 7 volte meno potente della fentolamina nel bloccare i recettori alfa-adrenergici, circa 4 volte meno potente del propranololo nel bloccare i recettori beta1 cardiaci e 11-17 volte meno potente del propranololo nel bloccare i recettori beta2 vascolari e bronchiali. Questa differenza nella potenza relativa del labetalolo deriva dal fatto che il propranololo è un antagonista leggermente più potente dei beta2- che dei beta1-adrenorecettori. Il labetaolo stesso era circa 16 volte più potente sui beta1 cardiaci che sugli alfa-adrenorecettori vascolari. Nei cani coscienti labetaolo somministrato per via orale ha bloccato risposte vasopressori alla fenilefrina e risposte chonotropiche positive all'isoprenalina. 4 In cani anestetizzati e ratti scolpiti, il labetaolo ha bloccato le risposte mediate dai recettori alfa o beta adrenergici alla stimolazione del nervo simpatico e ha somministrato per via endovenosa fenilefrina o isoprenalina approssimativamente nella stessa misura. 5 Labetalol non possiede attività agonista parziale (simpaticomimetica intrinseca) a beta1-adrenorecettori cardiaci. 6 L'azione bloccante del labetalolo sia in vivo si è dimostrata specifica per i recettori alfa e beta-adrenergici. 7 Gli effetti emodinamici del labetalolo sono attribuibili alle sue azioni di blocco dei recettori adrenergici. Le risposte osservate variano da una situazione sperimentale all'altra a seconda dell'equilibrio delle influenze autonomiche. Ad esempio, nei cani anestetizzati con barbiturici, in cui predomina il tono simpatico, sia il labetalolo che il propranololo hanno ridotto la frequenza cardiaca, la contrattilità, la produzione e gli effetti sul lavoro che sono attribuibili al blocco dei recettori beta-adrenergici. Il labetalolo differiva dal propranololo nel diminuire, piuttosto che aumentare, la resistenza periferica totale e nel causare maggiori cadute della pressione sanguigna a dosi equipotenti di blocco dei recettori beta-adrenergici. Queste differenze sono probabilmente attribuibili alla vasodilatazione periferica risultante dall'azione vascolare di blocco dei recettori alfa-adrenergici del labetalolo...
Biodisponibilità e dissoluzione di diverse formulazioni di preparati di ossitetraciclina.1 La concentrazione di ossitetraciclina nel plasma è stata studiata mediante analisi microbiologica dopo somministrazione orale di cinque diverse preparazioni dell'antibiotico. Nessuno di questi preparati era stato studiato in precedenza.2 C'era una correlazione statisticamente significativa tra il tempo necessario per la dissoluzione del 50% a pH 2 e la disponibilità biologica, valutata dal livello plasmatico di picco o dall'area sotto la concentrazione plasmatica- curva temporale. 3 La biodisponibilità media dell'ossitetraciclina era maggiore con le preparazioni del cloridrato e con le compresse rivestite con film del diidrato. Al contrario, le compresse rivestite con zucchero di ossitetraciclina diidrato erano associate a caratteristiche di dissoluzione più scarse e a una ridotta disponibilità biologica.
Una valutazione clinica e psicometrica del flurazepam.1 L'efficacia del flurazepam (15 mg o 30 mg) come ipnotico e gli effetti residui di ciascuna dose è stata confrontata con il placebo in uno studio incrociato in doppio cieco che ha coinvolto trenta pazienti in un ambiente di medicina generale. I pazienti hanno ricevuto ciascun farmaco per una settimana. Autovalutazioni giornaliere di insorgenza, durata e qualità del sonno, insieme a segnalazioni di eventuali sono stati fatti effetti spiacevoli. Al termine di ogni periodo di farmaco sono stati somministrati test psicomotori (tempo di reazione, rotore di inseguimento, velocità di picchiettamento) alle ore 09.00.2 Entrambe le dosi di flurazepam sono risultate significativamente più efficaci del placebo nell'indurre il sonno, migliorando la qualità del sonno. dormire e prolungarne la durata.3 effetti di sbornia\' sono stati contrassegnati dopo 30 mg, ma non dopo flurazepam (15 mg). Il flurazepam (30 mg, ma non 15 mg) ha significativamente ridotto le prestazioni nel test del rotore di inseguimento e nella velocità di tocco. così sembra essere un farmaco ipnotico efficace con la dose ottimale per l'uso in medicina generale di 15 mg durante la notte.
Confronto della selettività dei recettori beta2-adrenergici di rimiterolo, salbutamolo e isoprenalina per via endovenosa nell'uomo.1 L'efficacia broncodilatatrice e il grado di beta2 -La selettività dei recettori adrenergici di rimiterolo, salbutamolo e isoprenalina è stata determinata in sette soggetti che hanno mostrato broncocostrizione indotta dall'istamina.2 Rimiterolo, 0,5 (dose alta) e 0,05 (dose bassa) mug kg-1 min-1, salbutamolo, 0,3 e 0,03 mug kg -1 min-1, isoprenalina, 0,05 e 0,005 tazze kg-1 min-1 e placebo sono stati somministrati con una singola iniezione endovenosa in 6 minuti e la protezione contro la broncocostrizione indotta dall'istamina, i cambiamenti della frequenza cardiaca, la pressione del polso e il muscolo scheletrico sono stati misurati tremori.3 Rimiterolo (98%), salbutamolo (96%) e isoprenalina (69%) hanno protetto contro la broncocostrizione indotta dall'istamina. Per queste risposte ventilatorie, c'è stato un aumento della frequenza cardiaca di 31,9, 24,7 e 44,3 battiti/min per rimiterolo, salbutamolo e isoprenalina rispettivamente. I tre farmaci hanno prodotto aumenti simili della pressione del polso e del tremore. 4 Risposte dose-risposte significative sono state ottenute per tutti i parametri con ciascun farmaco. 5 L'isoprenalina era circa 7 e 5 volte più potente del rimiterolo e del salbutamolo rispettivamente nell'azione broncodilatatrice quando sono state confrontate le dosi equimolari. Allo stesso modo, l'isoprenalina era circa 14 e 10 volte più potente nell'aumentare la frequenza cardiaca rispetto a rimiterolo e salbutamolo rispettivamente. 6 Il rimiterolo, un nuovo farmaco stimolante i recettori beta, è un broncodilatatore efficace e ha una selettività dei recettori beta2 simile al salbutamolo quando somministrato per via endovenosa. Le potenze relative e i gradi di selettività dei recettori beta2-adrenergici di questi farmaci dipendono in parte dalla loro via di somministrazione.
Effetti residui del flunitrazepam.1 Dodici soggetti normali sono stati testati su una grande batteria di test dopo una dose ipnotica di flunitrazepam (1 o 2 mg) e un placebo. I test psicologici sono stati somministrati 12 ore dopo il farmaco e i test fisiologici 12, 15 e 18 ore dopo il farmaco. 2 I test includevano l'autovalutazione degli effetti ipnotici e dell'umore, l'elettroencefalogramma, la risposta evocata elettroencefalografica uditiva, la conduttanza cutanea , tapping, card-sorting e il test di copia dei simboli.3 Entrambe le dosi di flunitrazepam erano ipnotiche efficaci secondo le valutazioni, con un effetto ansiolitico il giorno successivo. L'EEG è stato significativamente alterato fino a 18 h dopo il farmaco e i test comportamentali hanno mostrato una disabilità motoria 12 ore dopo la somministrazione del farmaco. 4 Quasi tutte le modifiche hanno mostrato tendenze lineari correlate alla dose.
Confronto degli effetti residui di due benzodiazepine (nitrazepam e flurazepam cloridrato) e pentobarbital sodico sulle prestazioni umane.1 Gli effetti residui di due benzodiazepine, nitrazepam (10 mg) e flurazepam cloridrato (30 mg) e pentobarbital sodico (200 mg) sono stati studiati mediante monitoraggio adattivo e tempo di reazione. Le prestazioni sono state misurate a 10 h, 13 h, 16 h, 19 h e 34 h dopo l'ingestione di ciascun farmaco. È stata osservata una riduzione delle prestazioni sul monitoraggio adattivo a 10 ore, 13 ore, 16 ore e 19 ore dopo nitrazepam e pentobarbital sodico e a 10 ore, 13 ore e 16 ore dopo flurazepam cloridrato. Prestazioni migliorate sono state osservate a 34 ore dopo nitrazepam e pentobarbital sodico.2 Il tempo di reazione è aumentato fino a 16 h dopo nitrazepam, flurazepam cloridrato e pentobarbitone sodico e il tempo di reazione è stato aumentato anche a 34 h dopo nitrazepam e pentobarbitone sodico.3 Durante la mattina immediatamente dopo l'ingestione, il s i soggetti come gruppo sono stati in grado di differenziare correttamente tra placebo e farmaci, ma non sono stati in grado di valutare con precisione la persistenza degli effetti residui di nitrazepam e pentobarbital sodico. 4 Il flurazepam cloridrato sembrerebbe essere una benzodiazepina più promettente del nitrazepam per l'uso come ipnotico da parte di persone coinvolte in attività specializzate. C'è stato un rapido recupero delle prestazioni durante il pomeriggio e, a differenza del pentobarbitale sodico e del nitrazepam, i soggetti hanno mantenuto la capacità di riconoscere abilità compromesse.
Metabolism of lorazepam.Il metabolismo del lorazepam da parte dell'uomo e di altre quattro specie viene riesaminato. Sono stati identificati il lorazepam e i suoi metaboliti nel sangue, nelle urine e nelle feci mediante cromatografia su strato sottile e gas e spettrometria di massa. Il principale metabolita nell'uomo, cane, maiale e gatto è il glucuronide, ma il ratto produce altri metaboliti dopo piccole dosi di lorazepam, e quantità significative di glucuronide solo dopo dosi elevate. Poiché tutti i metaboliti, eccetto il glucuronide, sono presenti in piccole quantità solo nell'uomo, la maggior parte degli studi sull'uomo si è limitata alla stima del lorazepam gree e coniugato. Le concentrazioni ematiche di lorazepam non coniugato raggiungono il picco a 1-4 h, concentrazioni significative che persistono per 24 h e diminuendo lentamente nelle 24 ore successive. Circa il 95% di una dose di lorazepam è stato rilevato nelle urine e nelle feci per un periodo di 5 giorni, il 74,5% è stato escreto nelle urine come lorazepam glucuronide e il 13,5% come metaboliti minori. L'emivita era di 12 ore. Le concentrazioni ematiche e i tassi di escrezione sono compatibili con gli effetti clinici del lorazepam.
Emogasanalisi materna, PAo2--Pao2), shunt fisiologico e VD/VT in gravidanza normale.Misurazioni seriali di emogasanalisi materna, la differenza di tensione di ossigeno alveolare-arteriosa (PAO2--PaO), la miscela venosa polmonare calcolata (shunt fisiologico), il rapporto spazio morto/volume corrente (VD/VT) e il volume minuto respiratorio sono stati effettuati in un gruppo accuratamente selezionato di donne in gravidanza normale pazienti a 12, 24, 32 e 38 settimane di gestazione e 5 settimane dopo la consegna. Tutte le misurazioni sono state effettuate in posizione semi-sdraiata con un fianco laterale pelvica tilt. PO2 arteriosa media era costantemente maggiore di 100 mm Hg durante la gravidanza, sebbene la valore è diminuito da 106,4 mm Hg a 12 settimane di gestazione a 101,8 mm Hg alla settimana 38. Nonostante questa diminuzione non vi è stata alcuna variazione di (PAO2--PaO2) VD/TV o shunt percentuale con l'aumento della gestazione, né questi valori differivano significativamente dai valori non gravide negli stessi pazienti.
Adenilato ciclasi, guanilato ciclasi e nucleotide fosfodiesterasi ciclici del sarcolemma cardiaco di cavia.1. Le attività degli enzimi coinvolti nel metabolismo dei i nucleotidi sono stati studiati nel ventricolo anteriore del cuore di cavia preparato con sarcolemma; le attività enzimatiche qui riportate erano lineari nelle condizioni del test. 2. L'adenilato ciclasi è stata attivata al massimo da 3 mM-NaF; NaF ha aumentato il Km per ATP (da 0,042 a 0,19 mM) ma diminuiva il Ka per Mg2+ (da 2,33 a 0,9 mM). In presenza di saturazione di Mg2+ (15 mM), Mn2+ aumentava l'adenilato ciclasi, mentre il Co2+ era inibitore. Le ammine beta-adrenergiche (10-50 muM) stimolavano l'adenilato ciclasi (38 +/-2%). Quando aggiunti alla miscela di analisi, i nucleotidi guanilici (GTP e il suo analogo, guanilil imidofosfato) hanno stimolato l'attività enzimatica basale e potenziato la stimolazione da parte dell'isoproterenolo. Al contrario, la preincubazione del sarcolemma con guanilil imidodifosfato ha stimolato la formazione di o f una forma \'attivata\' dell'enzima, che non ha rivelato una maggiore sensibilità ormonale. 3. La guanilato ciclasi presente nelle membrane così come nell'estratto di membrana solubilizzato con Triton X-100 presentava un Ka per Mn 2+ di 0,3 mM; Mn2+ in eccesso di GTP è stato richiesto per la massima attività. La guanilato ciclasi solubilizzata è stata attivata da Mg2+ solo in presenza di basse concentrazioni di Mn2+; Ca2+ era inibitorio sia in assenza che in presenza di Mn2+ basso. L'acetilcolina e la carbamolicolina hanno stimolato la guanilato ciclasi legata alla membrana. 4. L'attività della fosfodiesterasi del nucleotide ciclico del sarcolemma ha mostrato forme sia ad alto che a basso Km con AMP ciclico e con GMP ciclico come substrato. Gli ioni Ca2+ hanno aumentato la Vmax. dell'enzima ciclico GMP-dipendente.
Proprietà e regolazione dello sviluppo di un'alfa-d-galattosidasi da Dictyostelium discoideum.Un'alfa-D-galattosidasi è stata rilevata nelle cellule della melma cellulare muffa, Dictyostelium discoideum, in tutte le fasi di sviluppo. La sua attività specifica era massima durante lo sviluppo iniziale (interfase) e questo accumulo di enzima sembra richiedere la sintesi proteica de novo. La sua distribuzione subcellulare differisce da quella di altre glicosidasi di D. discoideum, poiché la maggior parte dell'attività è stata recuperata nella frazione solubile. Nessuna evidenza è stata ottenuta per più di una forma isoenzimatica dopo aver sottoposto gli estratti ad elettroforesi e varie procedure cromatografiche. E' escreta dalla cellula durante lo sviluppo, ma non è stata trovata evidenza di una funzione extracellulare per la enzima.
Gli effetti del difenileneiodonio e del 2,4-diclorodifenileneiodonio sulle reazioni mitocondriali. Meccanismo di inibizione dell'assorbimento di ossigeno come conseguenza della catalisi dello scambio cloruro/idrossile-ione .1. L'aumento della concentrazione del substrato ha solo diminuito l'inibizione delle ossidazioni mitocondriali da parte del difenileneiodonio o del 2,4-diclorofenileneiodonio di una piccola quantità. 2. Il difenileneiodonio e il 2,4-diclorodifenileneiodonio hanno ridotto le quantità di succinato, citrato e glutammato accumulati nella matrice dei mitocondri in presenza di Cl-, ma non in sua assenza. Il 2,4-diclorodifenileneiodonio ha diminuito l'accumulo di substrati da parte dei mitocondri ossidando il glicerolo 3-fosfato. 3. Il difenileniodonio ha causato un'alcalinizzazione del terreno con una sospensione anaerobica dei mitocondri, che è stata solo in parte invertita da Triton X-100. 4. La velocità di estrusione del protone da parte del succinato ossidante dei mitocondri non è stata alterata ed dal difenileneiodonio o dal 2,4-diclorodifenileniodio, sebbene la velocità di decadimento degli impulsi protonici fosse aumentata. 5. Il 2,4-diclorodifenileneiodonio ha spostato il pH ottimale per l'ossidazione del succinato da parte dei mitocondri intatti da pH 7,2 a 8,0, mentre non vi era alcun effetto su quello dei mitocondri scongelati, che era pH 8,0. 6. La concentrazione di 2,4-diclorofenileneiodonio necessaria per inibire la respirazione del 50% è tanto minore quanto maggiore è il tasso assoluto di assorbimento di ossigeno. 7. L'EDTA, ma non l'EGTA [acido etanodiossibis(etilammina)-tetra-acetico] ha aumentato l'inibizione della respirazione da parte del difenileneiodonio, 2,4-diclorodifenileneiodonio e del tri-n-propilstagno. 8. Si conclude che il difenileneiodonio e il 2,4-diclorodifenileneiodonio limitano la respirazione nel mezzo contenente Cl provocando un'acidificazione della matrice e che vi sono siti sensibili al pH nella catena respiratoria tra NADH e succinato e tra succinato e citocromo c.
Proprietà della guanilato ciclasi particolato, associata alla membrana e solubile da muscolo cardiaco, muscolo scheletrico, corteccia cerebrale e fegato.1. Guanilato ciclasi di lavato particelle e membrane plasmatiche hanno mostrato curve di avanzamento a forma di S quando titolate con ioni GTP o Mn2+; risultati simili sono stati ottenuti con la preparazione enzimatica solubilizzata Triton X-100 da particelle lavate. 2. La guanilato ciclasi delle frazioni del surnatante mostrava le tipiche proprietà di Michaelis-Menten quando l'enzima richiedeva un eccesso di Mn2+ (libero) (oltre GTP) per le attività massime; Ka (Mn2+ libero) era di circa 0,15-0,25 mM a concentrazioni subsaturanti di GTP. 4 È stato scoperto che MnATP, MnADP e MnGDP aumentano le attività dell'enzima particolato e superantant, quando la concentrazione di MnGTP era al di sotto della saturazione e la concentrazione di ioni Mn2+ liberi era bassa (meno di 100 muM); MnATP (50 muM-1 mM) inibisce d entrambe queste attività ad alta concentrazione di Mn2+ libero (1,5 mM) e l'inibizione dell'enzima particolato era maggiore di quella dell'enzima surnatante. 5. Gli ioni Ca2+ hanno stimolato l'attività enzimatica surnatante; la concentrazione stimolatoria degli ioni Ca2+ dipendeva dalla concentrazione di Mn2+ e GTP. 6. È stata osservata una modesta stimolazione del particolato guanilato ciclasi da parte del pirofosfato (0,02-1 mM); l'effetto pirofosfato è apparso competitivo rispetto al GTP. A una concentrazione più elevata (2 mM), il pirofosfato ha prodotto una marcata inibizione dell'enzima particolato; la natura dell'effetto inibitorio è apparsa complessa. 7. I sali inorganici (ad esempio NaCl, KCl, LiBr, NaF) hanno prodotto l'inibizione dell'enzima particolato; il grado di inibizione dell'attività stimolata da Triton X-100 era inferiore a quello dell'attività non stimolata. 9. Il trattamento delle membrane sarcolemmatiche o microsomiali con fosfolipasi C o tripsina diminuiva, mentre la fosfolipasi A aumentava l'attività della guanilato ciclasi.
Guanilato ciclasi. Distribuzione subcellulare nel muscolo cardiaco, muscolo scheletrico, corteccia cerebrale e fegato.1. La guanilato ciclasi di ogni frazione studiata ha mostrato un requisito assoluto per gli ioni Mn2+ per un'attività ottimale; con Mg2+ o Ca2+ la reazione era appena rilevabile. Triton X-100 stimolava l'enzima particolato molto più dell'enzima surnatante e solubilizzava l'attività enzimatica particolato. 2. Quantità sostanziali di guanilato ciclasi sono state recuperate con la soluzione lavata frazioni particolate di muscolo cardiaco (63-98%), muscolo scheletrico (77-93%), corteccia cerebrale (62-88%) e fegato (60-75%) di varie specie I surnatanti di questi tessuti contenevano 7-38 % delle attività totali Nel cuore di rana, la maggior parte della guanilato ciclasi era presente nel liquido sovranatante 3. Le frazioni plasmatiche della membrana contenevano rispettivamente il 26, 21, 22 e il 40% delle attività totali della guanilato ciclasi omogenate presenti nel muscolo scheletrico (coniglio ), muscolo cardiaco (cavia) , fegato (ratto) e corteccia cerebrale (ratto). In ogni caso, l'attività specifica di questo enzima nelle membrane plasmatiche ha mostrato un arricchimento da cinque a dieci volte rispetto all'attività specifica dell'omogenato. 4. Questi risultati suggeriscono che la guanilato ciclasi, come l'adenilato ciclasi, e l'ATPasi Na+ + K+-dipendente sensibile all'ouabaina (adenosina trifosfatasi), è associata alle membrane superficiali del muscolo cardiaco, del muscolo scheletrico, del fegato e della corteccia cerebrale; tuttavia, sono presenti anche attività considerevoli nelle frazioni surnatante di questi tessuti che contengono pochissime attività adenilato ciclasi o ouabaina-sensibili Na+ + K+ ATPasi dipendenti.
La distribuzione asimmetrica dell'attività enzimatica tra le sei subunità della glutammato deidrogenasi del fegato bovino. Uso di D- e L-glutamil alfa-clorometil chetoni (4-ammino-6-cloro -5-oxohexanoic acid.Un metodo per la preparazione di D- e L-glutamil alfa-clorometil chetoni (acido 4-ammino-6-cloro-5-ossoesanoico). Questi clorometil chetoni irreversibilmente glutammato deidrogenasi bovina inattivata, mentre molti altri composti correlati non hanno avuto effetti negativi sull'attività dell'enzima. È stato dimostrato che il processo di inattivazione è dovuto alla modifica della lisina-126. I tempi per l'inattivazione e l'incorporazione della radioattività da L-glutamil alfa-clorometil chetone triziato nella glutammato deidrogenasi erano bifasici. I risultati sono stati interpretati per suggerire il coinvolgimento di interazioni \' cooperative\' negative nella reattività della lisina-126. Dalle prove cumulative si sostiene che il primo subunità dell'enzima, che partecipa alla catalisi, apporta il contributo maggiore e l'ultimo il più piccolo alla catalisi complessiva. Si sottolinea che tre delle sei subunità dell'enzima possono possedere fino all'80% dell'attività totale della glutammato deidrogenasi bovina.
Distribuzione organica degli isoenzimi istidina-piruvato aminotransferasi di ratto.La distribuzione organica degli isoenzimi 1 e 2 di istidina-piruvato aminotransferasi di ratto è stata esaminata utilizzando un isoelettrico -tecnica di focalizzazione L'isoenzima 1 (pI8.0) è presente solo nel fegato e la sua attività è aumentata dall'iniezione di glucagone, mentre l'isoenzima 2 (pI5.2) è distribuito in tutti i tessuti (fegato, rene, cervello e cuore) testato e non è influenzato dall'iniezione di glucagone. L'isoenzima 2 del fegato, dei reni, del cervello e del cuore è stato purificato con la stessa procedura e caratterizzato. I preparati di isoenzima 2 da questi quattro tessuti erano quasi identici nelle proprietà fisiche ed enzimatiche. Queste proprietà differivano da quelli precedentemente trovati per la preparazione altamente purificata dell'isoenzima 1 del fegato di ratto. L'isoenzima 2 era attivo con il piruvato ma non con il 2-ossoglutarato come accettore di aminoacidi. I donatori di aminoacidi erano efficaci nel seguente ordine di attività: tirosina maggiore di n istidina maggiore della fenilalanina maggiore della chinurenina maggiore del triptofano. Con il 5-idrossitriptofano è stata trovata un'attività molto ridotta. Il Km apparente per l'istidina era di circa 0,45 mM. Il Km per il piruvato era di circa 4,5 mM con l'istidina come ammino donatore. L'attività dell'aminotransferasi dell'isoenzima 2 verso la fenilalanina e la tirosina è stata inibita dall'istidina. Il rapporto delle attività di aminotransferasi verso questi tre amminoacidi è stato costante attraverso gel filtrazione, elettroforesi, focalizzazione isoelettrica e centrifugazione in gradiente di densità di saccarosio delle preparazioni di isoenzima 2 purificato. Questi risultati suggeriscono che queste tre attività sono proprietà della stessa proteina enzimatica. La filtrazione su gel di Sephadex G-150 e la centrifugazione in gradiente di densità di saccarosio hanno prodotto mol. wts. di ca. 95000 e 92000 rispettivamente. Il pH ottimale era compreso tra 9,0 e 9,3.
Determinazione del meccanismo e delle costanti cinetiche per la gamma-glutamiltransferasi del rene di maiale.La cinetica della velocità iniziale della gamma-glutamiltransferasi del rene di maiale è stata studiata. Glutammato gamma-(4-nitroanilide) e il suo derivato 3-carbossilico, glutammato gamma-(3-carbossi-4-nitroanilide), servivano come donatori di gamma-glutamil e glicilglicina come accettore. I prodotti di reazione sono stati identificati mediante cromatografia su carta e amminoacido Sono stati sviluppati meccanismi di Ping Pong inibiti e un'espressione completa della velocità iniziale che spiegano il trasferimento simultaneo di gamma-glutamil e l'autotrasferimento, l'inibizione competitiva da parte della glicilglicina e l'inibizione non competitiva da parte del donatore di carbossi. La validità del proposto Ping Pong i meccanismi sono supportati da dati di velocità enzimatica ottenuti con rapporti costanti di concentrazioni di accettore e donatore. Le costanti cinetiche sono state determinate da un'analisi di regressione non lineare. Con glutammato gamma-(4-n itroanilide) come donatore, le costanti di Michaelis per il donatore, l'accettore e il donatore che agisce come accettore sono rispettivamente 1,87, 24,9 e 2,08 mM. Con il glutammato gamma-(3-carbossi-4-nitroanilide) come donatore, queste costanti di Michaelis sono 1,63, 16,6 e 12,3 mM. Le costanti di inibizione competitiva della glicglicina con il donatore genitore e il suo derivato carbossilico sono rispettivamente di 275 e 205 mM; la costante di inibizione non competitiva del donatore di carbossi è 34 mM.
Purificazione e caratterizzazione su larga scala della diidrofolato reduttasi da un ceppo di Lactobacillus casei resistente al metotrexato.La diidrofolato reduttasi è stata purificata da un ceppo resistente al metotrexato ceppo di Lactobacillus casei NCB 6375. Facendo attenzione alle condizioni di crescita, da una coltura di 400 litri si ottengono fino a 2,5 g di enzima. La procedura di purificazione, che prevede il trattamento con polietilenimmina, la cromatografia con DEAE-cellulosa e la cromatografia di affinità su metotrexato-amminoesil- Sepharose, opera sulla scala del grammo, con rese complessive del 50-60%. E' stata utilizzata l'eluizione della colonna di affinità mediante flusso inverso (verso l'alto), in quanto ha portato al recupero dell'enzima in un volume molto più piccolo. L'enzima ottenuto sembra essere più puro del 98%, come giudicato da elettroforesi su gel, focalizzazione isoelettrica e filtrazione su gel. Ha un peso molecolare di circa 17900 e un numero di turnover di 4s-1 (50mM-trietanolammina/400mM-KCl, pH 7,2 , 25 gradi C) con diidrof olato e NADPH come substrati. Il numero di turnover per il folato è 0,02 s-1. Le costanti di Michaelis per una varietà di substrati sono state misurate utilizzando un nuovo test fluorimetrico (0,36 muM-diidrofolato; 0,78 muM-NADPH) e le costanti di legame determinate utilizzando l'estinzione della fluorescenza proteica (diidrofolato, 2,25 X 10 (6) M- 1; NADPH, maggiore di 10(8)M-1). Il profilo pH/attività mostra un unico massimo a pH 7,3; a questo pH, si osserva una marcata attivazione di 0,5 M-NaCl.
Aril idrocarburo idrossilasi e 16alfa-idrossilasi in linfociti umani in coltura.Aril idrocarburo idrossilasi e 16alfa-idrossilasi sono state esaminate in linfociti umani intatti e in coltura. due ossigenasi microsomiali a funzione mista avevano un pH ottimale diverso e mostravano un'inibizione competitiva per l'induzione e l'attività enzimatica. pazienti con cancro del colon rispetto al gruppo di controllo. Il coefficiente di correlazione (r) per la coducibilità di AHH e SAH era -0,08, indicando l'assenza di correlazione e suggerendo l'assenza di associazione tra i due enzimi nell'uomo.
Caratterizzazione dell'emoglobina Burke [beta 107 (G9) Gly sostituito da Arg].Hb Burke [beta 107 (G9) Gly sostituito da Arg] è stato scoperto in una giovane donna con anemia emolitica. Una sostituzione in questa posizione non è stata precedentemente segnalata né nella catena beta umana né in nessuna delle catene beta animali finora sequenziate. L'emoglobina anormale mostra instabilità termica e una diminuzione dell'ossigeno affinità. La sostituzione di un grande residuo di arginina carico per il piccolo residuo di glicina nell'elica G accanto a un contatto eme (Leu-106) può essere responsabile di questi effetti. Hb Burke viene confrontato con altre cinque emoglobine aventi sostituzioni Gly-Arg in altre parti della molecola.
Peptidasi geneticamente definite del mais. I. Caratterizzazione biochimica delle forme alleliche e non alleliche.Sono state studiate numerose proprietà biochimiche sia per le forme alleliche che per quelle non alleliche forme di peptidasi del mais Nel mais esistono quattro aminopeptidasi (LAP-A, LAP-B, LAP-C e LAP-D) e sono i prodotti di quattro loci diallelici Le aminopeptidasi si dividono in due gruppi biochimici sulla base di questi studi LAP-A e LAP-D hanno valori di Km apparente relativamente bassi (Kapp) per i derivati arginina-naftilamide e velocità elevate per arginina-naftil-ammide e lisina-naftilamide. LAP-B e LAP-C, invece, hanno valori di Kapp inferiori per leucina-naftilamide e velocità più elevate per amminoacidi-naftilammidi non polari rispetto a arginina-naftilamide. LAP-A e LAP-D sono anche relativamente più stabili al calore di LAP-B e LAP-C e hanno pesi molecolari leggermente più elevati ( 71.500) rispetto a LAP-B e LAP-C (63.500). Nella determinazione molecolare abbiamo tti delle peptidasi, è stato fatto uso delle loro specificità di substrato differenziali verso gli amminoacidi-naftilammidi. Vengono inoltre presentate alcune proprietà dell'endopeptidasi del mais geneticamente definita. L'endopeptidasi del mais è inibita dai reagenti sulfidrilici N-etilmaleimmide e p-cloromercuribenzoato (pCMB), e dalla tosil lisina clorometilchetone, l'attività dell'aminopeptidasi del mais è inibita da N-etilmaleimmide, pCMB e EDTA (acido etilendiamminotetraacetico).