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Ammine simpaticomimetiche con nucleo carbostirilico.È stata sintetizzata una serie di nuove ammine simpaticomimetiche contenenti una porzione 8-idrossicarbostirilica. Questi composti probabilmente esistono come ibridi di risonanza aventi due atomi di idrogeno acido in posizioni che si avvicinano a quelle dei gruppi ossidrile degli agenti adrenergici contenenti catecoli. In un test in vitro, molti di questi composti hanno mostrato una potente attività per il rilassamento della muscolatura liscia tracheale di cavia. Uno dei composti era 24 000 volte più potente dell'isoproterenolo. Le loro azioni sul muscolo cardiaco sono state anche esaminate in vitro misurando l'aumento della frequenza di battito degli atri destri delle cavie. Molti dei composti sembravano essere beta-selettivi. Alcuni dei composti sembrano adatti all'uso come broncodilatatori. Le relazioni struttura-attività di questi composti sono state discusse rispetto a quelle delle catecolamine.
Valutazione dell'azione analgesica e dell'efficacia dei farmaci antireumatici. Studio di 10 farmaci in 684 pazienti con artrite reumatoide.Metodo in singolo cieco non crossover per valutare la potenziale efficacia dei farmaci antireumatici è stato descritto il metodo utilizza indici interamente soggettivi e incorpora un grafico del dolore giornaliero per misurare la risposta al dolore per tutta la durata dello studio. Inoltre, il numero medio di giorni di sospensione e la soddisfazione dei pazienti valutazione sono misurati. Il metodo statistico può correggere gli squilibri iniziali tra i gruppi e consente il confronto valido di farmaci provenienti da studi separati. Con questa tecnica sono stati valutati dieci farmaci antireumatici in 684 pazienti con artrite reumatoide e i risultati sono in accordo con quelli di studi precedenti che utilizzano metodi clinici standard. Il nuovo metodo è semplice, rapido nelle prestazioni, economico in termini di costi e tempo e ha dimostrato di essere sensibile e e riproducibile. I risultati indicano che non ci sono differenze significative nell'efficacia tra i farmaci analgesici non steroidei e antinfiammatori attualmente disponibili nel trattamento dell'artrite reumatoide.
Fattori indotti dalla stimolazione che influenzano l'aumento e il potenziamento del rilascio del trasmettitore alla giunzione neuromuscolare.1. I potenziali della placca terminale (epps) sono stati registrati da giunzioni neuromuscolari frog sartorius in condizioni di diminuito rilascio del trasmettitore per studiare l'effetto della stimolazione ripetitiva sull'aumento e sul potenziamento del rilascio del trasmettitore 2. Le grandezze e le costanti di tempo del decadimento dell'aumento e del potenziamento sono state determinate sia seguendo un treno di condizionamento primario che seguendo un identico treno di condizionamento secondario applicato da 30 a 170 sec dopo il treno di condizionamento primario 3. L'entità dell'incremento a seguito dei treni di condizionamento secondario è stata aumentata rispetto a quella successiva ai treni di condizionamento primario anche se aumento, con una costante di tempo di decadimento di circa 7 sec, era decaduto a livelli insignificanti prima dell'inizio dei treni secondari. Questo aumento in aumento non era dovuto e ad un cambiamento nel suo tasso di decadimento durante i treni secondari. 4. L'aumento di grandezza dell'aumento può essere descritto come derivante da un fattore di espressione che, per condizionare treni di 200 impulsi a 20/sec, ha una grandezza iniziale di 1-6 +/- 1-2 (DS di osservazione) (la magnitudo dell'aumento è aumentata 2-6 volte) e decade in modo esponenziale con una costante di tempo di 90 +/- 50 (DS di osservazione) sec. Il fattore di espressione decade quindi circa dieci volte più lentamente dell'aumento. 5. Raddoppiare il numero di impulsi nel treno di condizionamento primario da 100 a 200 ha portato ad un aumento di 2-8 +/- 1-0 (SD di osservazione) dell'entità del fattore di espressione, stimato ponendo un impulso secondario di 200 treno di condizionamento 40 sec dopo il treno di condizionamento primario. 6. Il fattore di espressione, mentre aumentava l'entità dell'aumento, aveva poco o nessun effetto sull'entità del potenziamento o sul rilascio del trasmettitore in assenza di aumento. Il fattore di espressione è decaduto circa due volte più lentamente del potenziamento. 7. Le costanti di tempo che caratterizzano il decadimento del potenziamento erano maggiori dopo i treni di condizionamento secondari rispetto ai treni di condizionamento primari. 8. La costante di tempo aumentata per il decadimento del potenziamento può essere descritta come derivante da un fattore di costante di tempo che, per condizionare treni di 200 impulsi a 20/sec, ha una grandezza iniziale di 1-2 +/- 0-7 (SD di osservazione) (la costante di tempo di potenziamento è aumentata di 2-2 volte) e decade in modo esponenziale con una costante di tempo di 130 +/- 45 (SD di osservazione) sec. Il fattore della costante di tempo è decaduto circa tre volte più lentamente del potenziamento. 9. Raddoppiare il numero di impulsi nel treno di condizionamento primario da 100 a 200 ha portato ad un aumento di 1-6 +/- 0-8 (SD di osservazione) dell'ampiezza del fattore di costante di tempo, stimato ponendo un impulso di 200 treno di condizionamento secondario 40 sec dopo il treno di condizionamento primario. 10...
Svuotamento gastrico di acidi organici nel cane.Pasti di prova di 300 ml. di sei diversi acidi organici sono stati instillati nello stomaco di sei bastardi sani cani. Acido citrico, acetico, propionico, lattico, tartarico e succinico sono stati somministrati in concentrazioni di 50, 100, 150 e 200 mN 2. Durante il processo di svuotamento, il contenuto gastrico è stato aspirato e immediatamente reinstillato a intervalli di 10 minuti, e sono stati registrati i seguenti parametri: volume, concentrazione dell'anione organico, pH, concentrazione di ioni idrogeno e osmolarità 3. Mediante analisi di regressione multipla a gradini, la combinazione di parametri che determina in modo più efficace la velocità di svuotamento gastrico è risultata essere: concentrazione anione organico, seguito dal volume intragastrico e dal numero di pasti di prova precedenti somministrati nello stesso giorno Questi tre parametri compaiono nell'equazione per la velocità di svuotamento gastrico in cui la caratteristica individuale di ciascun acido è espressa da una costante. g i vari acidi, l'inibizione della velocità di svuotamento aumenta con l'aumentare del numero di gruppi carbossilici dell'acido e del suo peso molecolare. 5. Dopo la vagotomia gastrica prossimale, la velocità di svuotamento degli acidi organici è indipendente dal volume e lo svuotamento si avvicina a un modello esponenziale. 6. Si propone un modello per lo svuotamento gastrico degli acidi organici con almeno tre diversi recettori: uno per la struttura dell'acido organico, uno per la concentrazione e uno per il volume intragastrico.
Alcuni aspetti del metabolismo fetale e uteroplacentare in vacche con cateteri vascolari ombelicali e uterini permanenti.1. Gli esperimenti sono stati condotti su vacche Jersey gravide coscienti con cateteri intravascolari impiantati durante la tarda gestazione nei vasi ombelicali e uterini. Tutti tranne tre dei quindici animali hanno partorito vitelli vivi sani 2. Sono state effettuate analisi quotidiane di routine della tensione dei gas sanguigni, del pH e del volume delle cellule concentrate nel sangue fetale e materno; concentrazioni plasmatiche di sono stati inoltre determinati glucosio, fruttosio, lattato e urea. Le misurazioni degli acidi grassi liberi plasmatici e delle concentrazioni di acetato nel sangue sono state effettuate meno frequentemente. La frequenza cardiaca fetale e la pressione arteriosa sono state registrate negli animali con un catetere arterioso ombelicale. 3. Le differenze di concentrazione tra il feto e sangue materno o plasma in glucosio, urea e acetato sono stati misurati in quindici animali. I gradienti di glucosio e acetato materno-fetale attraverso il pla centa erano alti mentre le differenze di urea plasmatica fetale-materna erano piccole. 4. In quegli animali con cateteri arteriosi e venosi pervi, i flussi sanguigni uterini e ombelicali sono stati misurati insieme alle differenze arterovenose di 02, glucosio, acetato e lattato in modo da poter stimare i tassi di consumo fetale e uterino. I tassi di utilizzo di O2, glucosio e acetato da parte del feto erano inferiori ai valori dell'intero utero, mentre il metabolismo uteroplacentare di questi substrati era molto elevato. 5. Significative quantità di lattato, che sembravano essere prodotte dal tessuto uteroplacentare, sono state utilizzate dal feto; il resto è passato nel sangue venoso uterino. 6. Il quoziente substrato/O2 totale per il feto, calcolato dall'utilizzo di metaboliti noti, sembrava essere maggiore di 1. Pertanto, nel vitello un certo accumulo di carbonio da fonti diverse dagli amminoacidi, il cui assorbimento non è stato misurato, sembrerebbe verificarsi. Questi risultati e l'attività metabolica dei tessuti uterini sono discussi in relazione a risultati comparabili nelle pecore.
Conduttanze, potenziali di diffusione e flusso nel tubulo prossimale di ratto.1. Le differenze di potenziale transtubulare e le resistenze specifiche sono state misurate nei tubuli prossimali di ratto mediante microelettrodi di vetro a singola e doppia canna 2. La localizzazione della punta è stata effettuata osservando le variazioni effettive di resistenza misurate con microelettrodi a doppia canna al passaggio di goccioline di olio e mediante perfusione con colina C1. da -1 a -2 mV, e valori tardivi da +0-5 a +1 mV. Le resistenze specifiche medie variavano da 12 a 15 omega cm2. 4. Sono stati valutati i potenziali di diffusione e le conduttanze relative dei singoli ioni, perfondendo il lume con soluzioni differendo solo rispetto ad una concentrazione di sale. Le conduttanze di Na e K erano simili e maggiori di quelle di C1. 5. Le perfusioni luminali e peritubulari con soluzioni ipotoniche hanno mostrato la presenza di potenziali di flusso in questa struttura suggerendo l'esistenza di pori rivestiti di cariche negative. Il diametro effettivo di questi pori sembrava essere ridotto dalla perfusione ipotonica, come evidenziato da un significativo aumento della resistenza, indicando che il percorso ionico principale attraverso questa struttura è rappresentato dagli spazi intercellulari.
Blocco farmacologico dei canali aperti della placca terminale.1. Le azioni dell'amilobarbitale, del tiopentone, del metoesitone e del metiprilone alle placche terminali della rana bloccate dal voltaggio 2. In presenza di barbiturici il cambiamento di conduttanza evocato da un'applicazione di carbacolo iontoforetico è stato ridotto da un preimpulso di carbacolo L'inibizione extra evocata da un preimpulso è scomparsa in modo esponenziale con una costante di tempo di 150-200 ms 3. I barbiturici producono un aumento del tasso di decadimento delle correnti di placca terminale evocate dai nervi. La concentrazione di Tne e la dipendenza dal voltaggio del barbiturico epc decadono i tassi di decadimento coincidono con l'ipotesi che l'aumento del tasso di decadimento sia dovuto al blocco dei complessi recettore-canale attivi da parte dei barbiturici con una costante di velocità di 10 (6) M-1S-1 4. I cambiamenti di conduttanza prodotti dagli agonisti applicati a bagno sono stati depressi dal tiopentone, l'effetto diventa maggiore quanto maggiore è la concentrazione di agonista. Questo effetto, e anche l'osservazione che la concentrazione La quantità di tiopentone necessaria per deprimere la risposta dell'agonista del bagno è molto maggiore dell'apparente costante di dissociazione per il legame ai complessi recettore-canale attivo calcolata dalle misurazioni cinetiche, suggeriscono che la selettività per il legame ai complessi recettore-canale aperti è molto alta. 5. Il metiprilone, che è strutturalmente simile ai barbiturici, è solo un debole antagonista e non mostra alcuna interazione tra gli impulsi. È stato previsto che il metiprilone dovrebbe produrre componenti veloci e lenti nell'e. p. c. decadimento, e questa previsione è stata verificata. 6. In presenza di barbiturici, grandi applicazioni di carbacolo iontoforetico producono cambiamenti di conduttanza che mostrano componenti veloci e lenti. In queste condizioni gli effetti dei preimpulsi di carbacolo diventano complessi. Tuttavia gli effetti sono qualitativamente coerenti con l'idea che i diversi componenti della risposta sono forniti da canali situati a varie distanze dalla punta della pipetta iontoforetica. 7. Tutti i dati concordano con un modello in cui il canale ha tre fasi: chiuso, aperto e bloccato. Solo i canali aperti possono bloccare e i canali bloccati possono solo aprirsi.
Effetto del para-aminosalicilato di sodio sull'affinità dell'ossigeno nel sangue umano normale, falciforme e fetale.Para-aminosalicilato di sodio (sale di sodio di 2-idrossi L'acido -4-aminobenzoico, Na-PAS) riduce l'affinità all'ossigeno del sangue intero anemico placentare, eterozigote e omozigote dell'uomo adulto normale a 37 gradi C. La riduzione dell'affinità dell'ossigeno è correlata al tipo di emoglobina nel sangue. media P50 +/- SE a pH 7,40 per sangue anemico a cellule falciformi normale, placentare, eterozigote e omozigote in 26,2 +/- 0,1, 20,8 +/- 0,3, 26,8 +/- 0,3 e 31,0 +/- 0,5 mm Hg; nel presenza di 5,7 mmol di Na-PAS per litro di sangue i valori di P50 vengono aumentati a 28,0 +/- 0,3, 22,9 +/- 0,8, 30,5 +/- 0,6 e 33,9 +/- 0,3 mm Hg, rispettivamente. il sangue normale e placentare a questa concentrazione di Na-PAS è sostanzialmente invariato: nel sangue anemico a cellule falciformi eterozigoti e omozigoti, il fattore di Bohr (deta log P50/deta pH) è ridotto da -0. 48 +/- 0,02 a -0,41 +/- 0,01 e da -0,53 +/- 0,03 a -0,48 +/- 0,01. Le costanti di Hill (n) del sangue normale e placentare non sono influenzate da Na-PAS. Nel sangue falciforme omozigote ed eterozigote, elevate concentrazioni di Na-PAS (22,9 mmol/l) riducono la costante di Hill rispettivamente da 2,55 a 2,35 e da 2,56 a 2,28. Na-PAS è più saldamente legato ai globuli rossi che al plasma. Il legame di Na-PAS è probabilmente principalmente di natura ionica poiché il farmaco può essere rimosso quasi completamente dai componenti del sangue mediante dialisi. I cambiamenti nell'affinità dell'ossigeno causati da Na-PAS sono coerenti con i cambiamenti conformazionali (R porta a T) che aumentano la presenza di deossiemoglobina.
Interazioni tra analgesici narcotici e derivati benzodiazepinici sul comportamento nel topo.Interazioni tra derivati benzodiazepinici, diazepam e oxazepam, e analgesici narcotici, morfina e metadone, sono stati valutati sull'attività locomotoria e nei test del colpo di coda e della piastra calda per l'analgesia nel topo. La stimolazione dose-correlata dell'attività locomotoria da parte della morfina è stata ridotta da diazepam e oxazepam a dosi che da sole non hanno avuto effetto sull'attività locomotoria Tuttavia, solo l'oxazepam ha ridotto la stimolazione dose-correlata dell'attività locomotoria da parte del metadone. Le diminuzioni osservate prodotte da diazepam e oxazepam erano paragonabili in grandezza a quelle prodotte dal naloxone. La stimolazione dell'attività locomotoria da parte della d-amfetamina non è stata influenzata da nessuno dei due diazepam o oxazepam. Le curve dose-risposta per l'attività locomotoria sono state determinate anche con morfina e metadone somministrati per via intraventricolare. Come in precedenza, diazepam e naloxon e dato i. p. diminuiva la stimolazione dell'attività locomotoria prodotta dalla morfina, ma solo il naloxone influenzava l'attività locomotoria stimolata dal metadone. Né il diazepam, né l'oxazepam né il naloxone hanno ridotto i livelli cerebrali o plasmatici di morfina 3H o metadone 3H. In contrasto con i risultati sull'attività locomotoria, nessuna di queste benzodiazepine ha modificato significativamente le curve dose-risposta di morfina o metadone in entrambi i test per l'analgesia. I meccanismi coinvolti nelle interazioni osservate sull'attività locomotoria possono essere correlati alle influenze delle benzodiazepine e degli analgesici narcotici sulle vie motorie efferenti che si sommano in modo tale da interferire con la capacità di locomozione dei topi. I risultati attuali dimostrano che si verificano interazioni importanti tra i membri delle classi delle benzodiazepine e degli analgesici narcotici; queste interazioni dipendono sia dalla specifica combinazione di farmaci somministrata che dalla procedura del test.
Precipitazione della sindrome simile all'astinenza in topi morfina-dipendenti da parte di pargyline.In topi resi morfina-dipendenti da impianto di pellet per 3 giorni, la somministrazione di pargyline 6 ore dopo la rimozione del pellet ha intensificato il comportamento di astinenza narcotica, in particolare la risposta al salto di astinenza da narcotici. Pargyline, 75 mg/kg ip, ha causato un aumento da 6 a 9 volte dell'incidenza di salto nei topi che si ritiravano dalla morfina 6 ore dopo la rimozione del pellet, mentre questo effetto non è stato osservato: 1) 1 ora dopo l'iniezione di pargyline o 2) negli animali ancora impiantati con il pellet di morfina La dose efficace media (ED50) di pargyline necessaria per provocare il salto da astinenza nei topi impiantati con la morfina diminuiva con l'aumentare della dipendenza fisica. L'ED50 per 72 ore era circa un sesto di quello dopo 24 ore dall'impianto. Inoltre, la pargilina potenziava il salto da astinenza precipitato dal naloxone, come evidenziato da una riduzione del naloxone ED50 di circa la metà. La somministrazione di altri inibitori della monoamino ossidasi come la feniprazina, l'iproiazide o la tranilcipromina non è riuscita ad alterare l'indice di salto nei topi dipendenti sottoposti a brusca sospensione della morfina. Inoltre, la stimolazione del recettore della dopamina da parte di anfetamina, feniprazina o amantadina ha antagonizzato la risposta di salto indotta dalla pargilina. Questi dati suggeriscono che l'aumentata incidenza del salto da astinenza osservata dopo la pargilina nei topi dipendenti dalla morfina non è correlata all'inibizione della monoamino ossidasi ma piuttosto a una possibile diminuzione dell'attività dopaminergica indotta dalla pargilina.
Antagonismo isoproterenolo di agenti bloccanti dei recettori beta adrenergici cardioselettivi: uno studio comparativo sui recettori beta adrenergici cardiaci e bronchiali umani e di cavia.valori pA2 contro isoproterenolo sono stati determinati per un numero di agenti bloccanti dei recettori beta adrenergici cardioselettivi e non cardioselettivi utilizzando preparazioni atriali e bronchiali o tracheali isolate da uomo e cavia per studiare possibili differenze di specie. Nessuna differenza significativa nei valori di pA2 per propranololo, pindololo, Ro 3-4787, sono stati trovati acebutololo, atenololo, practololo, metoprololo, H 87/07 e tolamololo sui recettori beta adrenergici bronchiali o tracheali di entrambe le specie Per quanto riguarda i recettori beta adrenergici atriali, valori di pA2 significativamente più bassi per i preparati umani, rispetto ai preparati di cavia , sono stati trovati per tolamololo e CI 775. Questi sono gli unici due agenti della serie che derivano le loro cardioselettività da specifici subst azotati itutenti. Le diverse potenze solo di questi due composti nell'antagonizzare l'isoproterenolo sui recettori beta adrenergici atriali di entrambe le specie suggeriscono una differenza nell'area del recettore accessorio vicino al sito che interagisce con l'atomo di azoto degli agenti beta adrenergici.
Un polipeptide (AP-A) da anemone di mare (Anthopleura xanthogrammica) con potente azione inotropa positiva.Anthopleurin-A (AP-A), un polipeptide con MW circa 5500 (53 amminoacidi), isolato dall'anemone di mare, Anthopleura xanthogrammica (Brandt), ha suscitato un potente effetto inotropo positivo ma senza un effetto cronotropo di accompagnamento sui muscoli cardiaci isolati di ratto, coniglio, cavia e gatto. Analogamente in cani e gatti in situ, le iniezioni ip di AP-A hanno aumentato la forza contrattile senza effetto sulla frequenza cardiaca o sulla pressione sanguigna. La potenza cardiotonica per AP-A era equivalente a quella dell'isoproterenolo ma molto maggiore di quella per ouabain o glucagone sul muscolo cardiaco isolato. L'AP-A aumenta la forza contrattile (gittata cardiaca) e diminuisce la pressione atriale nel cuore del cane durante l'insufficienza indotta dal pentobarbital. Questo effetto inotropo non è stato inibito dal pretrattamento con propranololo. Il requisito di Ca++ per ripristinare la forza contrattile wa è inferiore nei tessuti trattati con AP-A rispetto ai tessuti trattati con ouabain o isoproterenolo. Dopo il trattamento con AP-A, la contrattilità cardiaca era più resistente all'ipossia e allo stress da bassa o alta temperatura rispetto ai preparati trattati con ouabain o di controllo. AP-A a 5 10(-9) M ha aumentato la durata del potenziale d'azione, la sua velocità media di aumento e conduzione negli atri e nei ventricoli di cavia. Alla massima concentrazione efficace, l'AP-A non ha inibito il contenuto di Na+, adenosina trifosfatasi K+ attivata, fosfodiesterasi (Km alto e Km basso) e ciclico 3\',5\'-adenosina monofosfato del cuore di cavia. AP-A (da 5 X 10 (-8) a 5 X 10 (-7) M) non ha contratto né rilassato la muscolatura liscia vascolare isolata. I risultati suggeriscono che l'AP-A può essere utile nella gestione clinica dell'insufficienza cardiaca e come strumento sperimentale per studiare la farmacologia e la fisiologia del muscolo cardiaco.
I recettori beta adrenergici dei cromatofori della rana, Rana pipiens.La pelle isolata di Rana pipiens è risultata essere un modello adatto per il quantitativo studio dei recettori beta adrenergici del cromatoforo non influenzati da fenomeni pregiunzionali Curve concentrazione-risposta cumulative per agonisti adrenergici sono state ottenute in preparazioni in cui un efficace blocco alfa adrenergico era stato prodotto con fenossibenzamina. Gli agonisti beta adrenergici oscuravano la preparazione, così come l'ormone stimolante i melanociti, ma gli effetti massimi differivano. Il massimo della curva concentrazione-risposta cumulativa di l-isoproterenolo era di circa il 50% inferiore a quello dell'ormone stimolante i melanociti, mentre i massimi per l-epinefrina e l-norepinefrina erano significativamente inferiori a quelli per l'isoproterenolo. L'esame microscopico ha rivelato una differenza qualitativa: mentre il massimo oscuramento prodotto dall'ormone stimolante i melanociti è stato associato wi th cambiamenti massimi sia nei melanofori interspot che negli iridofori, il massimo oscuramento indotto da adrenergici era associato solo alla concentrazione massima dei granuli di iridoforo. Non sono state osservate differenze qualitative nell'oscuramento causato dai tre agonisti adrenergici. Le potenze beta adrenergiche di l-norepinefrina e l-isoproterenolo rispetto alla l-epinefrina sono state determinate mediante saggio biologico a quattro punti. L'isoproterenolo è risultato essere 138 volte più potente dell'adrenalina, mentre la noradrenalina era 4 volte più potente. Allo stesso modo, è stato studiato l'antagonismo dell'oscuramento indotto da isoproterenolo di campioni di pelle pretrattati con fenossibenzamina da parte degli agenti bloccanti beta adrenergici dl-propranololo, dl-sotalolo, dl-practololo, l-butoxamina e d-butoxamina, e i loro valori KB e pA2, rispettivamente , sono risultati essere: dl-propranololo (1,44 X 10(-8)M, 7,81); dl-sotalolo (7,25 X 10(-8)M, 7,23); l-butoxamina (6,92 X 10(-6)M, 5,10); dl-prattololo (1,91 X 10(-5) M, 4,96); d-butoxamina (nessuna attività). Il confronto dei rapporti di potenza e dei valori di pA2 citati sopra con parametri simili ottenuti da altri ricercatori in diversi tessuti di mammiferi suggerisce che esiste un'ampia variazione tra i recettori beta adrenergici.
Biosintesi e metabolismo della tiramina endogena e sua normale presenza nei nervi simpatici.Con l'uso di un metodo isotopico enzimatico sensibile e specifico per la determinazione della tiramina , sono state quantificate le piccole quantità di questa ammina che sono presenti endogenamente nei tessuti del ratto, inclusi cervello, cuore, reni e ghiandole salivari. I livelli di tiramina nel cervello sono stati aumentati in misura simile iniettando agli animali un inibitore della monoamino ossidasi, pargilina e un inibitore della beta-idrossilasi della dopamina, FLA-63; al contrario, il pretrattamento degli animali con alfa-metil-para-tirosina, un inibitore della tirosina idrossilasi, non ha portato ad un aumento dei livelli di tiramina nel cervello. La 6-idrossidopamina ha determinato una marcata diminuzione del contenuto di tiramina negli atri dei ratti e nelle ghiandole salivari. La denervazione della ghiandola salivare ha ridotto il livello endogeno di tiramina di circa il 50% nelle ghiandole denervate rispetto all'unde. ghiandole nervose. Questi risultati suggeriscono che la tiramina esiste almeno in parte nei nervi simpatici in molti tessuti.
Meccanismi cellulari del trasporto tubulare renale di I-dopa e suoi derivati nel ratto: studi di microperfusione.Trasporto tubulare prossimale di L-3,4 -diidrossifenilalanina (L-dopa) e suoi derivati sono stati studiati nel rene di ratto mediante tecniche di microperfusione e perfusione capillare in situ. Con l'uso di sole tecniche di microperfusione, è stato riscontrato che L-dopa, L-3-metossi-4-idrossifenilalanina , L-tirosina e L-fenilalanina scomparvero rapidamente dal perfusato. Le velocità di riassorbimento sono state calcolate in 2,05 X 10 (-12), 2,13 X 10 (-12), 6,35 X 10 (-12) e 7,14 X 10 ( -12) mol/cm/sec, rispettivamente. Al contrario, L-alfa-metildopa e dopamina sono state solo leggermente riassorbite. I coefficienti di permeabilità sono stati calcolati per essere 0,35 X 10 (-4) e 0,21 x 10 (-4) e 0,21 x 10(-4) cm/sec, rispettivamente. Il tasso di riassorbimento di L-dopa è stato notevolmente ridotto in presenza di L-fenilalanina nel perfusato, ma non è stato influenzato da D-dopa. Con t a tecnica di microperfusione stop-flow con perfusione capillare simultanea, è stata misurata la differenza di concentrazione transtubulare a flusso netto zero (deltaC) della dopa marcata. Quando la concentrazione iniziale di L-dopa marcata con 2 mM è stata perfusa, la concentrazione luminale è scesa a un livello di plateau di 1,5 mM dopo un tempo di contatto di 20 secondi; cioè, deltaC era 0,5 mM. Il flusso netto era molto inferiore all'efflusso, suggerendo la presenza di un flusso posteriore secretorio o passivo di L-dopa. Il deltaC di L-dopa non è stato influenzato dall'inibitore della decarbossilasi, MK-486 e dall'inibitore della monoamino ossidasi, feniprazina, ma è stato significativamente ridotto da NaCN. Quindi il riassorbimento di L-dopa nel tubulo contorto prossimale è un processo attivo con una grande specificità strutturale.
La loperamide si lega ai siti dei recettori degli oppiacei del cervello e del plesso mienterico.La loperamide, un nuovo agente antidiarroico, è stato testato per determinare se la sua attività biologica implica il legame ai siti dei recettori degli oppiacei. Loperamide e morfina inibiscono competitivamente il legame del 3H-naloxone agli omogenati di un cervello di cavia e del plesso mienterico. I valori di Kp ottenuti in presenza di Na+ sono stati: morfina, 9,60-10(-9) M (cervello), 1,66-10(-7) M (plesso mienterico); loperamide, 7,20-10(-9) M (cervello), 1,33-10(-7) M (plesso mienterico); naloxone, 4,78-10(-10) M (cervello), 1,27-10(-9) M (plesso mienterico. In assenza di Na+, il legame di una loperamide e morfina all'omogenato cerebrale è stato potenziato mentre il legame del naloxone è stato ridotto. Morfina (IC50 = 7,5-10(- 8) M) e loperamide (IC50 = 6.9-10(-9) M) hanno inibito le contrazioni indotte elettricamente del muscolo longitudinale dall'ileo di cavia e il naloxone ha antagonizzato in modo competitivo questi effetti. Il valore Kd calcolato per l'interazione del naloxone con i siti di legame associati al muscolo in contrazione era compreso tra 0,98-10(-9) M e 1,85-10(-9) M. Nel test del topo con piastra calda, la somministrazione sottocutanea di morfina (dose minima efficace \ = 6,6 mugmol/kg) e loperamide (dose minima efficace = 78 mugmol/kg) hanno ritardato la risposta agli stimoli di calore e questo effetto è stato completamente bloccato dalla precedente somministrazione di naloxone. Nel cane anestetizzato, la somministrazione endovenosa di morfina (100 mug/kg) e loperamide (100 mug/kg) ha potenziato l'attività contrattile del muscolo circolare nel duodeno prossimale e distale, nell'ileo distale e nel colon prossimale ma il muscolo longitudinale duodenale era rilassato; questi effetti sono stati completamente annullati dalla successiva somministrazione di naloxone. Si conclude che la loperamide si lega ai siti dei recettori degli oppiacei e possiede attività agonista degli oppiacei sia in vivo che in vitro.
Phenacetin: trasporto tubulare renale e distribuzione intrarenale nel cane.In un totale di 22 studi nel cane anestetizzato, la clearance renale della fenacetina è stata misurata su un intervallo di concentrazioni plasmatiche e a diversi pH urinari e velocità di flusso urinario. La fenacetina viene riassorbita per diffusione passiva. Il rapporto urina/plasma è essenzialmente unitario in tutte le condizioni. Come misurato con metodi spettrofotometrici e colorimetrici ultravioletti e con cromatografia liquida a pressione, nelle urine e nella papilla renale compare un metabolita labile che in seguito all'idrolisi dà luogo a valori falsamente elevati di fenacetina. Le concentrazioni corticali e papillari renali sono state determinate in sei cani durante idropenia o diuresi. Tutti i rapporti di concentrazione tessuto/plasma per la fenacetina erano essenzialmente I risultati indicano che la localizzazione papillare delle prime lesioni della nefropatia analgesica non può essere attribuita ad alte concentrazioni di fenacetina entro n la papilla. Questo è in contrasto con il paracetamolo, il principale metabolita della fenacetina.
Effetto dell'istamina e degli antistaminici sull'emodinamica renale e sulle funzioni nel rene canino perfuso isolato.L'istamina è stata infusa per via intra-arteriosa (10-40 mug/ min) in reni canini isolati con sangue perfuso mentre i parametri funzionali ed emodinamici sono stati monitorati. Quando la pressione di perfusione (PP) è stata mantenuta costante durante l'infusione di istamina, il flusso sanguigno renale (RBF) è aumentato da 137 +/- 9 a 181 +/- 9 ml/min (P inferiore a .001). Un aumento maggiore di RBF si è verificato nella corteccia renale interna rispetto alla corteccia renale esterna come misurato da microsfere radioattive. Il flusso sanguigno corticale esterno/interno frazionario è cambiato da 79:21 prima dell'istamina a 74 :26 durante l'infusione (P inferiore a .001) L'istamina non ha alterato la clearance della creatinina (Ccr), il volume delle urine (V), l'escrezione di sodio (UNaV) o l'escrezione frazionata di sodio (FENa) o acqua (FEH20) sotto questi Quando il flusso sanguigno renale è stato mantenuto costante durante l'infusione di istamina, PP diminuito da 126/106 +/- 2 a 100/81 +/- 2 mm Hg (P inferiore a .001). Ciò ha comportato una riduzione della corticale esterna assoluta (esterna/interna) modificata da 77:23 prima dell'istamina a 72:28 durante la sua infusione (P inferiore a .001). In contrasto con gli effetti dell'istamina a PP costante, CCr, V, UNaV, FENa e FEH20 sono diminuiti quando l'infusione di istamina ha ridotto il PP. La somministrazione dell'antagonista del recettore H1, la difenidramina, ha bloccato gli effetti emodinamici dell'istamina mentre la somministrazione di un antagonista del recettore H2, la metiamide, non ha alterato la risposta dell'istamina. Risposte vasodilatatrici simili all'istamina sono state osservate in reni di cane e gatto perfusi con sangue isolato. Al contrario, risposte vasocostrittrici all'istamina si sono verificate in reni isolati di cane e gatto perfusi con soluzione di Krebs\' e in reni di coniglio isolati, perfusi con sangue o soluzione di Krebs\'.
Determinazione spettrofluorimetrica del bufuralolo nel sangue e nelle urine.L'analogo del benzofurano bufuralolo, un beta-bloccante adrenergico, è stato determinato nel sangue e nelle urine da uno specifico e saggio spettrofluorimetrico sensibile. Il composto è stato estratto in etere da sangue o urina aggiustato a pH 10. L'estratto etereo è stato separato mediante TLC per risolvere il farmaco progenitore da eventuali metaboliti basici presenti e le macchie sono state eluite dal gel di silice e quantificate mediante fluorimetria in 0,1 N HCl. Il recupero complessivo del dosaggio è stato dell'85 +/- 3,0%; il limite di sensibilità è stato di 2-4 ng/ml di sangue o urina, utilizzando un campione/analisi da 2,5 ml. Il metodo è stato applicato alla determinazione dei livelli ematici in un cane dopo una singola dose orale di 10 mg/kg e in due soggetti umani a cui è stata somministrata una singola dose orale di 20 mg.
Cinetica della neutralizzazione dell'acido mediante gel di idrossido di alluminio.La velocità di neutralizzazione dell'acido mediante un gel di idrossido di alluminio preparato dalla reazione di una soluzione di cloruro di alluminio e forte è stata studiata una soluzione di ammoniaca. La diminuzione della capacità di consumo di acido durante l'invecchiamento misurata dal test USP è dovuta a una diminuzione della velocità di reazione piuttosto che a una diminuzione della reattività di equilibrio. Il profilo di reattività ha tre fasi, che si dimostrano essere correlato alla struttura del gel. Il tasso di perdita di reattività è direttamente correlato all'entità del lavaggio.
Determinazione spettrofluorimetrica dell'idroflumetiazide nel plasma e nelle urine.Dopo gli studi è stato sviluppato un test rapido, accurato, sensibile e riproducibile per l'idroflumetiazide nel plasma e nelle urine delle sue proprietà spettrali UV e di fluorescenza e comportamento di partizionamento. Il test si basa sull'estrazione iniziale da plasma acidificato o urina in etere, retroestrazione in soluzione basica seguita da acidificazione a circa pH 1 e misurazione della fluorescenza derivata dalla molecola sindacalizzata L'analisi della varianza non ha indicato differenze significative nei test eseguiti lo stesso giorno. Il recupero medio è stato di 98,8 +/- 7,4% per il plasma in un intervallo di concentrazione di 0,2-2,0 mug/ml. Il metodo è conveniente per l'uso clinico di routine e ha sensibilità sufficiente per quantificare i livelli di idroflumetiazide dopo la somministrazione di dosi terapeutiche.
Cinetica e meccanismi di idrolisi delle 1,4-benzodiazepine I: clordiazepossido e demoxepam.La spettroscopia ad assorbimento differenziale è stata utilizzata con successo per seguire la cinetica di idrolisi di clordiazepossido e demoxepam da pH 1 a 11. Perdita del gruppo metilammino dal clordiazepossido prodotto demoxepam Demoxepam degradato da una reazione parallela consecutiva a 2-ammino-5-clorobenzofenone e un derivato della glicina. Due intermedi sono stati osservati mediante TLC per l'idrolisi del demoxepam. Uno è stata assegnata la struttura ad anello aperto risultante dall'idrolisi dell'ammide, che cineticamente sembra essere la principale via meccanicistica che porta al prodotto del benzofenone. L'altro intermedio, che rappresenta una via alternativa ma minore, presumibilmente deriva dalla scissione iniziale del legame azometinico. l'N-ossido altera leggermente l'importanza di questi due percorsi. Il riciclaggio dell'acido carbossilico intermedio era facile a valori di pH inferiori a th e pKa di questo intermedio. Sono riportati i parametri di stabilità che coinvolgono la catalisi del tampone, gli effetti della forza ionica e la dipendenza dalla temperatura delle costanti di velocità.
Struttura del gel di idrossido di alluminio III: meccanismo di stabilizzazione da parte del sorbitolo.L'effetto del sorbitolo sull'invecchiamento del gel di idrossido di alluminio, preparato dalla reazione di una soluzione di cloruro di alluminio con una soluzione di ammoniaca forte a un pH finale di 7,0, è stato studiato mediante titolazione potenziometrica, capacità di consumo di acido, pH, rapporto idrossido di alluminio, attività del cloruro, diffrazione dei raggi X e spettroscopia IR. I gel contenenti sorbitolo hanno perso meno del 10% della loro capacità di consumare acido durante un periodo di invecchiamento di 6 mesi rispetto a una perdita di oltre il 60% per un gel identico senza sorbitolo. Il meccanismo con cui il sorbitolo stabilizza il gel sembra essere l'inibizione della reazione di polimerizzazione secondaria che avviene con l'invecchiamento. Un altro composto poliidrossilico, la quercetina, stabilizza anche il gel di idrossido di alluminio.
Struttura del gel di idrossido di alluminio I: precipitato iniziale.Il precipitato di gel di idrossido di alluminio iniziale risultante dalla reazione di cloruro di alluminio o solfato di alluminio con idrossido di ammonio è mostrato dalla titolazione potenziometrica, dall'analisi chimica e dal rapporto tra idrossido legato e alluminio per adattarsi a un modello polimerico descritto in precedenza. La formazione di particelle polinucleari di idrossialluminio viene trattata come un processo graduale che coinvolge un meccanismo di deprotonazione-disidratazione, che si traduce nella formazione di anelli a sei membri; questi anelli possono ulteriormente fondersi con lo stesso meccanismo. Il gel di idrossido di alluminio precipitato dal cloruro di alluminio può essere rappresentato dalla formula Al (OH) 2,55 (Cl) 0,45 e probabilmente esiste come un polimero di 10 fusi a sei membri anelli. Il gel di idrossido di alluminio precipitato dal solfato di alluminio può essere rappresentato dalla formula Al(OH)2.30(SO4)0.35. Questa specie probabilmente esiste come un polimero di tre fusi a sei membri anelli.
Cinetica di ionizzazione del fenilbutazone.Il fenilbutazone è stato associato a problemi di biodisponibilità e ha mostrato un comportamento non classico negli studi di trasporto di fase. Questo comportamento non classico è stato attribuito, in parte, al fatto che il fenilbutazone, come un acido di carbonio, subisce una cinetica di ionizzazione non istantanea. La reazione istantanea è un'ipotesi fatta in molti modelli di trasporto a diffusione limitata che comportano una reazione di ionizzazione simultanea. La cinetica di ionizzazione del fenilbutazone è stata determinata a una forza ionica di 0,1 e 25 gradi utilizzando uno spettrofotometro a flusso interrotto. È stato determinato un log kobs rispetto al profilo del pH per l'approccio all'equilibrio di ionizzazione ed è stato postulato un meccanismo coerente con il profilo. La percentuale di enolo rispetto alla forma dicheto dell'acido fenilbutazone nonché pKaenol e pKadiketo è stato calcolato cineticamente. La reazione di protonazione è stata altamente catalizzata da acidi generali mentre la deprotonazione rea azione è stata fortemente catalizzata da basi generali. L'acido generale, l'acqua, era un povero donatore di protoni per la forma anionica (il cosiddetto mesomericanione) del fenilbutazone.
Determinazione semplice e rapida di una nuova ammina cloridrato farmaceuticamente attiva.Viene descritta l'analisi quantitativa di una nuova ammina cloridrato farmaceuticamente attiva. I campioni vengono estratti con cloroformio. Un complesso giallo ammina-colorante viene formato tamponando una soluzione campione-blu di bromotimolo a pH 8,5 +/- 0,1 e successivamente estratto con cloroformio. Il complesso viene trattato con NaOH 0,01 N per riconvertirlo al sale sodico del blu di bromotimolo , che viene poi misurato a 615 nm nello strato acquoso. La quantità di complesso estratto è linearmente correlata alla quantità di ammina presente, da 0,020 a 0,20 mg/ml. Nelle condizioni prescelte, il composto può essere determinato in presenza di prodotti di degradazione e non vi è alcuna interferenza da parte dei comuni eccipienti farmaceutici. Il metodo è adatto per studi di stabilità.
Cromatografia liquida in analisi farmaceutica V: determinazione di una miscela isoniazide-piridossina cloridrato.Sono descritti i parametri operativi per l'analisi qualitativa e quantitativa di un'isoniazide -miscela di piridossina cloridrato mediante cromatografia liquida ad alta pressione. Ciascun composto è stato cromatografato su una colonna ottadecil, utilizzando metanolo assoluto-acqua (60:40) (pH 2,5) contenente 0,01 M diottil sodio solfosuccinato. La portata è stata di 2,0 ml/min ( 2500 psig) e i picchi sono stati rilevati a 293 nm. L'analisi è stata eseguita utilizzando la formazione di coppie di ioni per effettuare la separazione cromatografica. Il tempo necessario per la separazione della miscela di farmaci è di circa 12 minuti con una precisione dell'1,17-0,30%.
Elettrochimica dell'azione farmacologica I: elettroriduzione delle ferredossine.La feredossina funge da trasportatore di elettroni nel sistema di ossidoriduzione nei microrganismi anaerobici, trasferendo elettroni da un basso potenziale donatore di sostanze biochimiche che accettano gli elettroni. L'attività anaerobicida di alcuni farmaci può essere dovuta alla loro interferenza con la funzione di trasporto degli elettroni della ferredossina. Sono stati studiati due tipi di ferredossine (isolate da Clostridium pasteurianum e spinaci) e la loro riduzione elettrochimica e le proprietà biochimiche sono state analizzate utilizzando una tecnica polarografica ac sensibile. Il potenziale di riduzione di entrambe le ferredossine è stato correlato linearmente al pH. È stato scoperto che i meccanismi di trasporto degli elettroni nelle molecole di ferredossina sono correlati ai loro legami zolfo-ferro. La dissociazione del ferro zolfo legami portavano alla formazione di un gruppo solfidrilico libero e all'interruzione dell'elettroattività della ferredossina. processo di citazione è risultato essere dipendente dal pH. L'elettroriduzione delle ferredossine era un processo che richiedeva energia e dipendeva dal pH.
Ponderazione dei dati nell'analisi farmacocinetica: paracetamolo endovenoso nell'uomo.Analisi compartimentale delle concentrazioni plasmatiche di paracetamolo dopo iniezione endovenosa di 12 mg kg-1 in soluzione acquosa la soluzione a soggetti normali è stata eseguita utilizzando metodi informatici analogici e digitali. Utilizzando una procedura di ottimizzazione "simplex" non lineare, i parametri farmacocinetici sono risultati notevolmente influenzati dalla scelta dei fattori di ponderazione (W1) attribuiti ai singoli punti dati L'emivita plasmatica del paracetamolo variava fino a sette volte con i fattori di ponderazione selezionati. Tuttavia, è stato dimostrato che le concentrazioni plasmatiche medie allo stato stazionario previste erano relativamente poco influenzate dai diversi fattori di ponderazione.
L'influenza del polivinilpirrolidone sulla soluzione e sulla biodisponibilità dell'idroclorotiazide.Le proprietà di dissoluzione della miscela meccanica idroclorotiazide-PVP 10 000 e dei sistemi coprecipitato erano qualitativamente simili a quelli precedentemente riportati utilizzando idroflumetiazide. Le differenze quantitative dipendevano dalla proporzione di PVP presente, dal suo peso molecolare e dal metodo di incorporazione. I dati cumulativi sull'escrezione urinaria dalle preparazioni delle capsule di prova hanno mostrato che la biodisponibilità era aumentata dalla presenza di PVP. Tuttavia, il grado di miglioramento era inferiore a quello previsto dagli studi sulla velocità del disco ad area superficiale costante. I test di dissoluzione sulle formulazioni della capsula, utilizzando il gruppo agitatore a cestello USP, non erano correlati ai risultati in vivo. Utilizzando il metodo del bicchiere Levy e una velocità di agitazione di 40 giri/min. 1, è stata ottenuta una buona correlazione tra la quantità disciolta in 30 min e la quantità escreta nelle urine dopo 24 h. i test hanno rivelato che il PVP ritarda la dissoluzione iniziale dalle forme di dosaggio delle capsule, probabilmente ritardando la disaggregazione e la dispersione delle particelle di farmaco.
La N-ossidazione microsomiale della fentermina.La N-ossidazione microsomiale della fentermina (Ia) in N-idrossifentermina (Ib) e in alfa, alfa-dimetil-alfa-nitroso-beta-feniletano (Ic è stato studiato. Le attività massime sono state ottenute con frazioni microsomiali (9000 g surnatante e microsomi) di fegato di coniglio in presenza di un sistema di generazione di NADPH. Incubazione di Ia con microsomi epatici lavati da un coniglio pretrattato con fenobarbital ha aumentato la formazione di Ib e diminuito quella di Ic, ma la quantità totale di metaboliti N-ossidati (cioè Ib + Ic) non è stata influenzata Il rapporto tra Ic e Ib prodotti metabolicamente ma non la quantità totale di N- i metaboliti ossigenati variavano notevolmente a seconda delle frazioni microsomiali epatiche utilizzate nelle miscele di incubazione di Ia; da Ia è stato prodotto più Ib utilizzando 9000 g di surnatante e, al contrario, più Ic è stato formato utilizzando i microsomi lavati dello stesso fegato. Il composto nitroso (Ic) era metabolicamente ridotto a Ib e Ib a Ia dal surnatante epatico da 9000 g e dalla frazione solubile; nelle stesse condizioni, i microsomi lavati avevano proprietà riduttive limitate nei confronti di Ic e Ib. La N-idrossifentermina (Ib) non è stata ossidata metabolicamente a Ic quando incubata con microsomi lavati dal fegato di coniglio. L'uso di noti inibitori dell'ossidazione del carbonio ha mostrato che il citocromo P-450 non è coinvolto nell'incorporazione di ossigeno al centro di azoto di Ia. Le caratteristiche metaboliche e il comportamento cinetico della N-ossidazione microsomiale di Ia hanno supportato un meccanismo proposto di recente che spiega la formazione indipendente di Ib e Ic da un precursore comune risultante dalla N-ossidazione metabolica di Ia.
N-ossidazione metabolica di atropina, ioscina e dei corrispondenti nor-alcaloidi mediante preparazioni microsomiali di fegato di cavia.Incubazione di microsomi di fegato di cavia preparazioni con atropina o ioscina hanno portato alla formazione dei corrispondenti nor-alcaloidi ed entrambi gli isomeri di atropina N-ossido da atropina e un isomero di ioscina N-ossido da ioscina Incubazioni separate di preparazioni microsomiali di fegato di cavia con nor-atropina e la nor-ioscina ha prodotto le corrispondenti idrossilammine. I metaboliti N-ossido e idrossilammina sono stati identificati confrontando il loro comportamento tlc e mx con i composti preparati e anche mediante la loro riduzione alle corrispondenti ammine terziarie o secondarie.
Gli effetti della somministrazione di N-(2-benzoilossietil) norfenfluramina ai ratti sulla sintesi epatica dei glicerolipidi.N-(2-benzoilossietil) norfenfluramina (S-780) è stato somministrato a ratti per sonda gastrica alla dose di 50 mg kg-1 di peso corporeo I fegati dei ratti a cui è stata somministrata una dose acuta del farmaco hanno sintetizzato più triacilglicerolo, fosfatidilcolina e fosfatidiletanolamina da [1,3 -3H]glicerolo e [14C]palmitato rispetto a quelli dei ratti di controllo. Le misurazioni sono state effettuate iniettando una miscela di precursori radioattivi nelle vene porta di ratti anestetizzati e congelando una porzione di fegato 1 minuto dopo. Diversi risultati sono stati ottenuti dopo aver trattato i ratti quotidianamente con S-780 per 5 giorni. Le fette di fegato di questi ratti hanno sintetizzato meno triacilglicerolo e relativamente più fosfatidilinositolo più fosfatidilserina da [3H]glicerolo rispetto a quelle dei ratti di controllo. Il trattamento con S-780 ha depresso la sintesi epatica di fosfati dilcolina e fosfatidiletanolamina misurati in vivo dopo iniezione intrapotale di [14C]palmitato e [3H]glicerolo. Il trattamento cronico con S-780 ha anche ridotto l'assunzione di cibo e ridotto il peso del fegato e il peso corporeo dei ratti alimentati con la dieta 41B. I risultati sono discussi in relazione agli effetti dell'S-780 sulla sintesi dei glicerolipidi.
Influenza di varie sostanze sulla biosintesi delle prostaglandine da parte di un polmone di cavia.Il tessuto polmonare di una cavia è stato utilizzato per studiare l'effetto inibitorio di vari agenti antinfiammatori steroidei e non steroidei, antipiretici, analgesici, anestetici locali e farmaci psicotropi su rilascio indotto meccanicamente di materiale simile alle prostaglandine Basse concentrazioni di agenti antinfiammatori non steroidei hanno inibito la sintesi, ma altri antipiretici e analgesici, e il gli anestetici locali hanno avuto scarso effetto. Timolettici, neurolettici e inibitori delle monoaminossidasi tranne la fenelzina hanno mostrato una debole attività. Si conclude che il metodo è un utile modello farmacologico per studiare la biosintesi delle prostaglandine. I deboli effetti dei farmaci psicotropi suggeriscono che non esercitino la loro effetto inibendo la biosintesi del PG.
Bioanalisi delle quantità di picomole di acetilcolina mediante cromatografia a partizione di coppia ionica applicata al nervo sciatico di ratto.Un metodo per la determinazione dell'acetilcolina in piccoli e discreti campioni biologici L'acetilcolina viene estratta come coppia ionica con 3,5-di-t-butil-2-idrossibenzensolfonato e separata dai componenti co-estratti mediante cromatografia di partizione a coppia ionica con picrato come controione e cellulosa porosa come supporto. La valutazione quantitativa è fatta dal picco di acetilcolina nel cromatogramma ottenuto mediante rivelazione ultravioletta. L'acetilcolina è stata analizzata in pezzi grandi 1 cm di nervo sciatico di ratto contenenti circa 60 pmol (10 ng). Il recupero complessivo del metodo è 100 +/- 10% al livello di 120 pmol di acetilcolina in un campione.
La 5-idrossitriptamina è un substrato per entrambe le specie di monoamino ossidasi nei mitocondri del cuore di manzo.L'attività della monoamino ossidasi mitocondriale del cuore di manzo verso la 5-idrossitriptamina (5-HT) è inibito dagli inibitori selettivi clorgilina, PCO [5-fenil-3-(N-ciclopropil)-etilammina-1,2,4-ossidiazolo] e Deprenyl con una dipendenza bifasica dalla concentrazione dell'inibitore. verso la tiramina, anche la dopamina e la triptamina sono state inibite in modo bifasico, ma le proporzioni apparenti delle due specie enzimatiche attive su dopamina e triptamina dipendevano dall'inibitore utilizzato. responsabile dell'ossidazione di questo substrato. La risposta bifasica dell'ossidazione 5-HT all'inibizione da parte della clorgilina persisteva quando venivano utilizzati mitocondri funzionalmente competenti e non era influenzata dagli inibitori dell'ammina ossidasi solubile semicarbazina e aminoguanidina. Questi risultati indicano che il comportamento dell'enzima del cuore di manzo nei confronti degli inibitori selettivi è considerevolmente diverso da quello di qualsiasi preparato precedentemente studiato e suggeriscono che la classificazione delle attività della monoamino ossidasi nei tipi A e B può essere solo di utilità limitata.
Aggregazione di farmaci antiacetilcolinici in soluzione acquosa: concentrazioni di monomeri in sistemi farmaceutici non micellari.L'autoassociazione dei farmaci antiacetilcolinici, bromuro di propantelina, Il bromuro di metantelina e il cloridrato di metixene in soluzione acquosa sono stati esaminati mediante metodi di tensione superficiale, diffusione della luce e conduttimetria. I grafici della tensione superficiale erano simili a quelli dei tensioattivi convenzionali, mostrando le concentrazioni micelle critiche apparenti (cmc) in punti di flesso distinti. Le misurazioni della tensione superficiale in la presenza di quantità crescenti di elettrolita indicava una diminuzione del cmc apparente con aumento della concentrazione di elettrolita per il bromuro di propantelina. Le curve di diffusione della luce per il bromuro di propantelina in soluzione elettrolitica non hanno mostrato discontinuità significative attribuibili a un cmc. Una modalità di autoassociazione che coinvolge la crescita aggregata di è stata assunta l'aggiunta graduale di monomeri e costanti di equilibrio per sono state valutate le fasi iniziali dell'associazione. È stato notato un aumento dell'entità delle costanti di associazione graduale con l'aumento della concentrazione di elettroliti. L'integrazione dei dati di diffusione della luce secondo 1n x = oo [(M/Mapp) - 1] dln c (dove M e M app sono rispettivamente il monomero e il peso aggregato apparente e x è la frazione ponderale dei monomeri) ha mostrato un asintotico aumento della concentrazione del monomero verso una concentrazione limitante, poiché la concentrazione della soluzione, c è stata aumentata. Le concentrazioni limite di monomero determinate con questo metodo erano in ragionevole accordo con i cmc apparenti dagli studi sulla tensione superficiale. Non è stato possibile rilevare un cmc per la metantelina o il bromuro di propantelina dalle misurazioni della conduttività.
Studi farmacologici con adenina, adenosina e alcuni derivati fosforilati sul muscolo tracheale di cavia.Adenina, adenosina e tre nucleotidi di adenina hanno tutti causato il rilassamento del trachea di cavia. Il rilassamento ai nucleotidi è stato spesso preceduto da una contrazione. La risposta all'adenosina e ai nucleotidi, ma non all'adenina, è stata potenziata dal dipiridamolo. L'imidazolo ha inibito la risposta alla sola adenina. Il propranololo non ha alcun effetto sulla risposta alla uno qualsiasi dei composti. Si conclude che la trachea di cavia non possiede un recettore specifico per il nucleotide, come è stato postulato per alcune altre preparazioni di muscolatura liscia. Viene presentata un'ipotesi alternativa che postula un recettore specifico per l'adenosina.
Interazioni di bradichinina, prostaglandina E1, 5-idrossitriptamina, istamina e adenosina-5\'-trifosfato sulla risposta di perdita secca nella pelle di ratto.La perdita di colorante nei ratti prodotta da iniezioni intracutanee di sostanze irritanti è stata quantificata utilizzando una tecnica del blu azovan. Le linee concentrazione-risposta sono state ottenute per le sole sostanze irritanti e in presenza di concentrazioni costanti di altre sostanze irritanti 5-Idrossitriptamina (5-HT) (10-7M) potenziato istamina, bradichinina e prostaglandina E1 (PGE1) ma inibito adenosina-5\'-trifosfato (ATP). Istamina (10-5M) potenziato bradichinina, PGE1 e ATP. Bradichinina (10-6M) potenziato solo PGE1, ma PGE1 (10 -6M) ha potenziato bradichinina, 5-HT e istamina ATP (10-4M) ha potenziato 5-HT, istamina e PGE1 Il rilascio di ATP durante la stimolazione dei nervi sensoriali potrebbe spiegare l'aumento dell'edema neurogenico osservato nella pelle circostante un'area pretrattata con il composto 48 /80.
Prostaglandine e leucotassi.Soluzioni appena preparate di prostaglandina E1 mostrano attività chemiotattica contro leucociti polimorfonucleati di coniglio raccolti dalla cavità peritoneale ma sono prive di tale attività contro cellule simili ottenute dal ratto o contro leucociti polimorfonucleati ottenuti dal sangue di coniglio, ratto e uomo Alcune implicazioni di questi risultati rispetto allo sviluppo delle risposte infiammatorie e al meccanismo d'azione dei farmaci antinfiammatori acidi non steroidei sono discussi.
Attività proteinasica nelle uova di Ascaris suum, nel liquido da cova e nelle escrezioni-secrezioni.Il liquido da cova e le escrezioni e secrezioni (ES) delle larve schiuse di Ascaris suum ha rivelato l'attività della proteinasi quando testato con 2 diverse procedure che impiegano collagene o caseina come substrati. Entrambi i test hanno apparentemente rilevato livelli simili di attività della proteinasi nel liquido di schiusa e nell'ES delle larve schiuse. Il saggio Anson (substrato di caseina) ha funzionato meglio in tampone fosfato 0,05 M , pH 8,0. Il saggio Azocoll (substrato di collagene) ha funzionato meglio in tampone borato 0,05 M a pH 8,8. I saggi Azocoll eseguiti a temperature comprese tra 25 e 65 C hanno rivelato la massima attività della proteinasi a 55 C. Analisi del fluido di schiusa da 18-, 21 -, e embrioni di 28 giorni e di estratti da stadi di sviluppo sonicati da 0 a 28 giorni hanno mostrato che l'attività della proteinasi è aumentata notevolmente 18 giorni dopo l'inizio dell'embrione. relativamente basso.
La formazione di un fattore adesivo piastrinico per rottura della molecola della creatinfosfochinasi.Si è scoperto che il prodotto di una miscela contenente l'enzima creatinfosfochinasi (CPK) e il glutatione (GSH) o la cisteina hanno causato l'adesione delle piastrine in vitro. Questo fattore adesivo piastrinico (PAF) si è formato quando l'attività dell'enzima CPK è diminuita. Un metodo alternativo per la distruzione dell'attività enzimatica: calore a 56 gradi C --ha portato anche alla formazione di un PAF attivo in vitro che era sia meno stabile che attivo rispetto alla sua controparte prodotta chimicamente. Il dosaggio della potenza adesiva piastrinica della miscela CPK-GSH, utilizzando piastrine umane, ha rivelato un'ampia variazione nella risposta di diversi individui\' piastrine a quantità standard di PAF. La natura di questa preparazione di PAF è stata studiata con mezzi biochimici e biofisici, compresa la cromatografia a scambio ionico, l'elettroforesi, l'analisi degli amminoacidi e l'analisi cal ultracentrifuga studi. Viene presentata la prova che PAF è il prodotto della rottura della struttura dimerica della molecola CPK. È stato scoperto che il PAF aderisce alla carta, nelle condizioni imposte dall'elettroforesi, e fa sì che le perle di sephadex si leghino insieme, caratteristiche che suggeriscono che la reazione di adesione delle piastrine fosse probabilmente un processo biofisico. I globuli rossi e bianchi non sono stati colpiti allo stesso modo. La fattibilità di questo nuovo concetto per l'inizio dell'adesione piastrinica, come processo naturale, è stata supportata dai risultati di esperimenti su animali in cui una depressione statisticamente delle piastrine nella circolazione sistemica ha seguito la somministrazione intravascolare di PAF. Viene discussa la possibile rilevanza per l'uomo di questo meccanismo di base in relazione all'esercizio e ai processi patologici, tra cui la trombosi ideopatica e post-traumatica, l'aterogenesi e la necrosi asettica disbarica dell'osso.
Digestione e assorbimento della xantina ossidasi del latte bovino e suo ruolo come aldeide ossidasi.Gli effetti degli ambienti proteolitici acidi e intestinali sulla xantina ossidasi del latte bovino (XO) sono state determinate per valutare la misura in cui questo enzima è stato assorbito in forma biologicamente attiva Sono state confrontate l'inibizione di XO da parte dell'acido folico e le relative affinità di XO per l'ossidazione di palmitaldeide, stearaldeide e xantina. gli effetti dell'acido e del succo gastrico sull'attività XO sono stati misurati incubando l'enzima purificato e l'enzima non purificato (latte), in tamponi con pH compreso tra 2 e 9. Il succo gastrico fresco è stato incubato anche con latte. inattivato poiché il pH della miscela di incubazione è stato ridotto al di sotto del pH 6,5. Al di sotto del pH 3,5, l'enzima è stato completamente inattivato. Succo gastrico, succo a pH incubato con latte. L'attività XO del latte è stata ridotta del 36% quando è stato incubato lieve con un v uguale lume di succo gastrico. Il latte omogeneizzato aveva il 59% di attività XO in meno rispetto al latte crudo. L'XO del latte crudo fresco, l'XO del latte omogeneizzato e l'XO purificato erano ugualmente suscettibili all'inattivazione da parte dell'acido o del succo gastrico. Dopo l'incubazione del latte con succo gastrico, o succo gastrico seguito da pancreatina, l'attività XO è stata associata a una macromolecola di peso molecolare di 300.000 dalton e non sono state trovate subunità contenenti attività. È stato stimato che lo 0,000008% dell'XO nell'intestino è stato assorbito. Sia l'acido folico che l'allopurinolo hanno inibito l'attività XO in vitro. L'allopurinolo era un inibitore 3,5 volte più potente dell'acido folico. Un grande eccesso di acido folico alimentare non ha ridotto l'attività XO del fegato di ratto o intestinale in vivo. XO aveva un'affinità molto maggiore per la xantina rispetto ai substrati di palmitaldeide o stearaldeide. È stato stimato che di 100 mg di XO nel latte crudo fresco, 41 mg sono rimasti dopo l'omogeneizzazione, 27 mg sono entrati nell'intestino e solo 20 ng sono stati assorbiti come enzima intatto.
Assunzione di azoto e tumorigenesi in ratti iniettati con 1,2-dimetilidrazina.L'incidenza del tumore è stata studiata in un maschio iniettato di 1,2-dimetilidrazina (DMH) ratti assegnati allo svezzamento a deiti isoenergetici caseina-saccarosio contenenti 7,5%, 15% o 22,5% di proteine con o senza 2,5% di urea A 20 ratti alimentati con ogni dieta sono state somministrate iniezioni intraperitoneali settimanali di DMH (15 mg/kg di peso corporeo/settimana) per le prime 24 settimane e 20 hanno ricevuto soluzione salina. Di 96 ratti iniettati con DMH sottoposti a necroscopia dopo 28 settimane, 88 sono stati sottoposti a necroscopia durante la 32a o l'ultima settimana dell'esperimento. Gli adenocarcinomi dell'intestino tenue e crasso erano più grandi e significativamente più numerosi nei ratti nutriti con 15% e 22,5% di proteine alimentari. Papillomi che producono cheratina delle ghiandole sebacee dell'orecchio esterno sono stati osservati prima a 21 settimane in ratti iniettati con DMH alimentati con proteine 22,5%. Questi sono stati successivamente osservati in alcuni ratti di tutti i gruppi trattati con DMH. Col passare del tempo, i tumori dell'orecchio sono aumentati di dimensioni ee numero in tutti i gruppi, ma l'incidenza maggiore è stata nel gruppo nutrito con il 22,5% di proteine. Non sono stati osservati tumori nei ratti iniettati con soluzione fisiologica. L'assunzione di urea non ha aumentato il numero di tumori né ha causato cambiamenti nel pH, nell'attività dell'ureasi o nella concentrazione di ammoniaca del contenuto del colon o del cieco, o del colesterolo nel sangue. Con l'aumento delle proteine alimentari, le concentrazioni di ammoniaca cecale sono aumentate mentre il pH del colon e del cieco è diminuito. L'urea nel sangue portale e il colesterolo sono aumentati con l'aumento delle proteine nella dieta. I ratti trattati con DMH avevano concentrazioni significativamente più elevate di ammoniaca del colon e del cieco e colesterolo nel sangue più basso. Sebbene i ratti alimentati con il 7,5% di proteine abbiano guadagnato significativamente meno peso durante 0-6 settimane di alimentazione, il loro aumento di peso è stato significativamente più alto durante 6-26 settimane. Nessun tumore è stato trovato nei ratti sottoposti a necroscopia a 16 settimane.
Effetti del brodo o di una dieta purificata sugli enzimi epatici di ratto coinvolti nella sintesi del dimetil seleniuro.Ratti alimentati con un brodo o una dieta purificata basata su caseina sono stati testati per la loro capacità di convertire 75Se-sodio selenito in selenio volatile (dimetil seleniuro) in vivo. Questa conversione è stata studiata anche nel fegato e nei reni in vitro. Quando iniettato con una dose subacuta di selenite (2 mg Se/kg) , i ratti precedentemente alimentati con dieta di riserva hanno volatilizzato più del doppio della dose rispetto ai ratti alimentati con dieta purificata, confermando i risultati precedenti. Sono stati osservati anche effetti dietetici paralleli in vitro utilizzando frazioni subcellulari incubate con 75Se-selenite, glutatione, TPNH e S -adenosilmetionina. Il supernato di 9-000 X g preparato da ratti alimentati con dieta di riserva sintetizzava dimetil seleniuro a una velocità approssimativamente doppia di quello preparato da ratti alimentati con dieta purificata. Un'attività quattro volte superiore è stata osservata con frazioni microsomiali epatiche di ratti alimentati con dieta di riserva, mentre il citosol era leggermente più attivo nei ratti alimentati con la dieta purificata. Le frazioni renali hanno mostrato cambiamenti analoghi con la dieta, sebbene l'attività della frazione microsomiale renale fosse molto bassa. Solo differenze minori nei livelli di glutatione reduttasi, disolfuro reduttasi non specifico e tioli non proteici sono state osservate nel fegato e nei reni di ratti alimentati con le due diete. Considerando gli effetti della dieta sui vari enzimi noti dai nostri studi precedenti per essere coinvolti nella sintesi del dimetilseleniuro, si è concluso che la maggiore capacità dei ratti alimentati con una dieta di animali di sintetizzare il dimetilseleniuro deriva dall'induzione di un enzima microsomiale del fegato, apparentemente un Se-metiltransferasi, causata da sostanze sconosciute nella dieta delle scorte.
Aumento dei componenti fosforilati della banda II della spettroscopia eritrocitaria con riferimento alla distrofia muscolare di Duchenne.In pazienti con muscolo di Duchenne è stata dimostrata un'aumentata fosforilazione della banda II degli eritrociti distrofia (DMD). La banda II è stata purificata mediante elettroforesi preparativa di sodio dodecil solfato (SDS)-poliacrilammide su gel. La focalizzazione isoelettrica della banda II purificata da cui è stata rimossa la SDS rivela eterogeneità. La banda II migra come bande multiple su gel di focalizzazione isoelettrica e come una singola banda su gel di poliacrilammide SDS. L'aumentata fosforilazione nella DMD non si verifica uniformemente in tutti i componenti della banda II. I componenti altamente fosforilati della banda II sono presenti nella DMD in cui si verifica solo una minima fosforilazione nei controlli. Questi risultati suggeriscono la presenza di un substrato anomalo della banda II nelle membrane degli eritrociti da pazienti con DMD.
Il profilo istochimico del massetere umano. Uno studio autoptico e bioptico.Uno studio istochimico è stato effettuato su campioni di muscolo ottenuti da massetere. Sedici campioni ottenuti sia all'autopsia che alla biopsia hanno mostrato che le porzioni media e profonda del muscolo contengono fibre che per dimensioni, proprietà di colorazione istochimica e numero corrispondono agli aspetti osservati nella maggior parte dei muscoli scheletrici degli arti umani. Al contrario, i campioni prelevati dalla porzione superficiale del massetere hanno mostrato diverse caratteristiche insolite: queste includevano una notevole disuguaglianza delle dimensioni delle fibre muscolari in quanto le fibre di tipo II erano molto più piccole di quelle di tipo I ma superavano queste ultime in numero totale. Questa parte del muscolo conteneva anche , in 6 campioni su 10, un numero consistente di fibre intermedie identificate mediante colorazione con ATPasi miofibrillare Questo studio ha confermato che la parte superficiale del massetere umano è diversa ent morfologicamente e presumibilmente funzionalmente dalla parte media e profonda del muscolo.
Inattivazione della maleimmide N-sostituita della risposta alla stimolazione delle cellule gustative.La N-etilmaleimide (NEM) inattiva irreversibilmente la risposta delle cellule gustative alla stimolazione da parte di NaCl, saccarosio e ioni idrogeno. Il tasso di inattivazione può essere misurato monitorando il decadimento dell'attività elettrofisiologica sommata stimolata da NaCl al nervo della corda del timpano in presenza di NEM. Le costanti di velocità di pseudo primo ordine osservate sono lineari con la concentrazione di NEM, e la costante di velocità del secondo ordine è 0,38 M-1 sec-1. Altre maleimmidi N-sostituite, come N-metilmaleimmide e N-butilmaleimmide, che hanno un coefficiente di partizione etere:acqua ed è essenzialmente inefficace come inattivatore della risposta NaCl Questi risultati, insieme all'osservazione che il tasso di inattivazione è indipendente dal pH compreso tra 4,5 e 7,0, indicano che il sito di inattivazione è intracellulare o sepolto all'interno della membrana cellulare in un locus inaccessibile alla maggior parte degli extracel fluidi lulari. La velocità di inattivazione delle risposte di saccarosio e HCl è stata misurata indirettamente e risulta essere paragonabile alla velocità di inattivazione stimolata da NaCl, indicando che l'evento inibito è comune alla trasduzione della risposta per tutti gli stimoli esaminati. I possibili siti di inattivazione da parte delle maleimmidi N-sostituite sono considerati nel contesto e nella caratterizzazione dei recettori specifici così come di altre classi di inibitori delle cellule del gusto.
Farmaci antipsicotici e risposte mediate dalla dopamina nei neuroni Aplysia.L'effetto dei farmaci antipsicotici è stato testato sulle risposte a dopamina, acetilcolina e 5-idrossitriptamina nei neuroni identificati del gasteropode marino Aplysia californica La flufenazina è stata in grado di deprimere la risposta al DA in una concentrazione di 10 muM, con 100 muM Le risposte DA di molti neuroni sono state completamente bloccate. Tioridazina (10 e 100 muM) e aloperidolo (50 muM) erano anche efficaci nel deprimere le risposte DA, mentre le fenotiazine non antipsicotiche mepazina (10 e 100 muM) e prometazina (100 muM) avevano solo una leggera azione sui recettori DA. sono stati leggermente influenzati solo da alte concentrazioni dopo perfusione di lunga durata. I farmaci studiati non hanno avuto effetti persistenti o solo insignificanti sul potenziale di membrana a riposo e sull'ampiezza dei potenziali d'azione dei neuroni. Con aloperidolo depolarizzante a poppa in alcuni neuroni sono stati osservati erpotentials che portano a doppie scariche. In alcuni casi gli EPSP spontanei sono scomparsi con la risposta DA sotto l'influenza di farmaci antipsicotici. I risultati forniscono una prova neurofisiologica diretta per il blocco dei recettori DA da parte dei farmaci antipsicotici in corrispondenza della loro efficacia clinica e concordano con i dati delle osservazioni cliniche e ottenuti in esperimenti neurochimici, comportamentali e neurofisiologici indiretti.
Autolisi in ceppi di streptococchi viridans.Sette ceppi di streptococchi viridans delle specie Streptococcus sanguis, S. mutans e S. mitis sono stati studiati per l'autolisi L'effetto del pH, della concentrazione salina e della temperatura sul processo autolitico è stato studiato in tampone Na2HPO4/NaH2PO4 Cellule intere e pareti di tutti i ceppi si sono autolisate più rapidamente a valori di pH superiori a 7. Autolisi di cellule intere di S. sanguis e un ceppo di S. mitis (ATCC15909) era massima nei tamponi 0-05 TO 0-2 M, mentre i due ceppi di S. mutans e S. mitis ATCC15912 hanno mostrato la massima autolisi nei tamponi 0-5 e 1-0 M. Colture raccolte in stazionario la fase di crescita possedeva solo un'attività autolitica leggermente ridotta rispetto a quelle della fase esponenziale. Le cellule intere si autolisi più rapidamente a 37 gradi C che a 45 gradi C e 10 gradi C. Autolisi delle pareti isolate di tre ceppi di S. mitis (ATCC903, ATCC15909 e ATCC15912) era massimo a pH 7-0 AND 7-5 e in buffer 1-0 M. Streptococcus mitis ATCC15909 ha anche mostrato la massima lisi nei tamponi 0-01 M e 0-5 M. Un'azione endopeptidasica del sistema autolitico di S. mitis ATCC15912 è stata indicata dal rilascio progressivo di gruppi amminici solubili durante l'autolisi delle pareti. Non è stato osservato alcun rilascio di gruppi riducenti. Diversi amminoacidi liberi sono stati rilasciati durante l'autolisi di queste pareti, essendo alanina, lisina e acido glutammico in quantità maggiore.
Gli effetti dell'alcalinità e dell'ipertonicità sulla morfologia e sulla motilità di Leptospira interrogans (biflexa) ceppo B16.Effetti dell'alcalinità e dell'ipertonicità sul comportamento mobile di Leptospira interrogans (biflexa) B16 sono stati osservati, quantificati e confrontati con effetti precedentemente mostrati da fattori simili sulla motilità degli eubatteri. Leptospira interrogans tollerava concentrazioni relativamente elevate di ioni idrossido. Motilità simile a quella dei controlli è stata osservata a valori di pH fino a 9-8; ma a pH 10-0 la motilità è diminuita bruscamente con il tempo di esposizione e si è verificata un'alterazione strutturale, visibile come un rigonfiamento dell'involucro cellulare. A differenza del comportamento degli eubatteri, l'immobilizzazione di L. interrogans indotta dagli ioni idrossido non poteva essere invertito abbassando il pH. Si suggerisce che limitando l'ingresso di ioni idrossido, l'involucro cellulare protegge il suo apparato di motilità da effetti avversi. Leptospira interrogans era completamente immob ilizzato in soluzioni 0-5 M e 1-0 M-saccarosio. A differenza degli eubatteri, le leptospire non erano in grado di tornare spontaneamente a forme mobili e la ripresa della motilità dipendeva sia dalla concentrazione che dal tempo di esposizione al saccarosio. L'ossido di deuterio non ha influenzato il movimento, suggerendo che anche se l'endoflagella della leptospire e l'esoflagella degli eubatteri sono analoghi, il comportamento mobile di L. interrogans è significativamente diverso da quello degli eubatteri.
Purificazione e caratterizzazione della fosfoglicerato mutasi da Hyphomicrobium X e Pseudomonas AM1 cresciuti con metanolo.La fosfoglicerato mutasi è stata purificata da Hyphomicrobium X e Pseudomonas coltivati a metanolo AMI mediante precipitazione acida, trattamento termico, frazionamento del solfato di ammonio, filtrazione su gel di Sephadex G-50 e cromatografia su colonna di cellulosa DEAE. La purificazione ottenuta utilizzando l'estratto di Hyphomicrobium X era 72 volte e utilizzando l'estratto di Pseudomonas AMI, 140 volte. la purezza dell'enzima, come dimostrato dall'elettroforesi analitica su gel di poliacrilammide, era 50% da Hyphomicrobium X e 40% da Pseudomonas AMI. L'attività enzimatica era associata ad una banda. I preparati purificati non contenevano quantità rilevabili di fosfoglicerato chinasi, fosfopiruvato idratasi, fosfoglicerato deidrogenasi o l'attività della glicerato chinasi. Il peso molecolare della preparazione enzimatica era 32000 +/- 3000. L'enzima di entrambi gli organismi era stabile a basse temperature e, in presenza di acido 2,3-difosfoglicerico, può resistere all'esposizione ad alte temperature. L'enzima di Pseudomonas AMI ha un ampio pH ottimale da 7-0 a 7-6 mentre l'enzima di Hyphomicrobium X ha un'attività ottimale a pH 7-3. Il cofattore acido 2,3-difosfoglicerico era necessario per la massima attività enzimatica e alte concentrazioni di acido 2-fosfoglicerico erano inibitorie. I valori di Km per l'enzima Hyphomicrobium X erano: acido 3-fosfoglicerico, 6-0 X 10(-3) M: acido 2-fosfoglicerico, 6-9 X 10(-4) M; acido 2,3-difosfoglicerico, 8-0 X 10(-6) M; e per l'enzima Pseudomonas AMI: 3-4 X 10(-3) M, 3-7 X 10(-4) M e 10 X 10(-6) M rispettivamente. La costante di equilibrio per la reazione era 11-3 +/- 2-5 nella direzione dell'acido 2-fosfoglicerico ad acido 3-fosfoglicerico e 0-09 +/- 0-02 nella direzione inversa. L'energia libera standard per la reazione che procede dall'acido 2-fosfoglicerico all'acido 3-fosfoglicerico era -5-84 kJ mol(-1) e nella direzione inversa +5-81 kJ mol(-1).
Ruolo del fosfomannano di parete nella flocculazione di Saccharomyces cerevisiae.Il trattamento con acido fluoridrico (HF) al 60% ha rimosso la maggior parte del fosforo e piccole quantità di mannano , glucano e proteine dalle pareti di due ceppi non flocculanti (NCYC366 e NCYC1004) e di due ceppi flocculanti (NCYC1005 e NCYC1063) di Saccharomyces cerevisiae. I microrganismi di tutti i ceppi hanno mostrato una maggiore capacità flocculante dopo il trattamento con HF. Flocculazione di organismi non trattati di NCYC10635 e NCY , e degli organismi trattati con HF di tutti e quattro i ceppi, è diminuito sensibilmente quando sono stati lavati in acqua deionizzata, con o senza EDTA, e la flocculazione è stata misurata in acqua deionizzata invece che in 0-05 M-acetato di sodio contenente Ca2+. L'1,2-epossipropano ha anche causato una diminuzione della capacità flocculante di questi organismi. L'estrazione dei lipidi dagli organismi dei ceppi NCYC366 e NCYC1004 non ha avuto alcun effetto sulla loro capacità flocculante, ma ha ridotto la capacità flocculante degli organismi dei ceppi NCYC1005 e NCYC1063. Le curve di mobilità elettroforetica del pH di organismi non trattati e trattati con HF hanno confermato la perdita di fosfato di parete dal trattamento con HF e hanno indicato che il trattamento con HF ha avuto scarso effetto sul contenuto di gruppi carbossilici proteici negli strati della parete esterna. Il mannosio a 0-22 M ha completamente impedito la formazione di fiocchi da parte di organismi del ceppo NCYC1063; ma, anche a 0-33 M, ha avuto un effetto molto limitato sulla formazione di fiocchi da parte di organismi trattati con HF dei ceppi NCYC366 e NCYC1063. I microrganismi di tutti e quattro i ceppi si legano alla concanavalina A coniugata con fluoresceina nella stessa misura dopo il trattamento con HF come prima, ma questo trattamento ha portato a un legame notevolmente diminuito dell'antisiero coniugato con fluoresceina sollevato contro gli organismi del ceppo NCYC366. I risultati indicano che i legami fosfodiestere nel mannano della parete di lievito non sono coinvolti nella formazione della sposa attraverso il Ca2+ durante la formazione dei fiocchi e che questo avviene principalmente attraverso i gruppi carbossilici.
Produzione di fosfolipasi C (alfa-tossina), emolisine e tossine letali da parte di Clostridium perfringens tipi da A a D.Per ottenere elevate rese di enzimi extracellulari e tossine per l'analisi immunologica, sono stati coltivati in fermentatori in condizioni controllate in un terreno pre-ridotto proteoso peptone i ceppi di raccolta di colture di tipo di Clostridium perfringens tipi da A a D e 28 isolati freschi di C. perfringens di tipo A da esseri umani. tutti hanno mostrato caratteristiche diverse per quanto riguarda i tassi di crescita e il pH ottimale per la crescita La produzione di fosfolipasi C (alfa-tossina), emolisina e attività letale variava considerevolmente tra i diversi tipi Crescita e produzione di proteine extracellulari in fermentatori con controllo del pH e statici o agitati colture sono state confrontate. La produzione di tutte le proteine extracellulari misurate è stata notevolmente migliorata dalla coltivazione in fermentatori con controllo del pH. Il ceppo ATCC13124 ha prodotto cinque volte più p fosfolipasi C rispetto a uno qualsiasi dei 28 ceppi appena isolati di C. perfringens tipo A, coltivati in condizioni identiche. Le attività emolitiche e letali del ceppo ATCC erano uguali o superiori alle attività di uno qualsiasi dei ceppi appena isolati. Non ci sono state differenze nella resa batterica e nella produzione di tossine extracellulari tra i ceppi di tipo A isolati da casi clinici di cancrena gassosa e ferite addominali e quelli isolati da campioni fecali di persone sane.
Fattori che influenzano l'assorbimento e il metabolismo dei carboidrati solubili da parte del ciliato ruminale Dasytricha ruminantium isolato dal contenuto di rumine ovino mediante filtrazione.Viene descritta una tecnica di filtrazione mediante la quale sospensioni metabolicamente attive di Dasytricha ruminantium possono essere isolate dal contenuto ruminale con contaminazione trascurabile da batteri o altri protozoi Sono stati esaminati gli effetti dei fattori ambientali e del ciclo diurno del rumine sull'assorbimento e metabolismo dei carboidrati solubili da parte di queste cellule isolate. Il principale contributo dei prodotti finali metabolici dei protozoi al ruminante ospite è l'apporto di acido lattico, acetico e butirrico durante i periodi in cui gli zuccheri solubili sono in eccesso.
Confronto tra le colinesterasi di un'ostrica (Crassostrea virginica) e una vongola (Macrocallista nimbosa).Attività della colinesterasi nel cuore e nei gangli di un Sono stati misurati e confrontati un'ostrica (Crassostrea virginica) e una vongola venerida (Macrocallista nimbosa). Gli estratti di tessuto sono stati parzialmente purificati mediante frazionamento con solfato di ammonio seguito da cromatografia su colonna di gel. L'attività enzimatica è stata saggiata spettrofotometricamente; i substrati erano acetil-, butirril- e propioniltiocolina ( ATC, BTC, PTC). Sono state derivate le costanti cinetiche che caratterizzano ciascun enzima. A tutte le concentrazioni di substrato, i tassi di idrolisi di entrambi gli enzimi delle vongole erano nell'ordine: BTC maggiore di PTC maggiore di ATC. Con gli enzimi ostrica la classificazione era ATC maggiore o pari a PTC maggiore BTC. Le attività specifiche del cuore di ostrica e degli enzimi gangliari erano simili. Al contrario, gli estratti del ganglio di vongola erano 75-100 volte più attivi degli estratti di cuore di vongola e, con h qualsiasi substrato, aveva un'attività maggiore di entrambi gli enzimi delle ostriche. Tutte le preparazioni enzimatiche si sono rivelate omogenee sulla base di rapporti di attività del substrato costanti in successive frazioni di colonna e di velocità intermedie con substrati misti. Sono stati testati sei inibitori della colinesterasi. L'antagonista specifico dell'acetilcolinesterasi, B. W. 62C47, ERA MOLTO PIU' EFFICACE CONTRO GLI ENZIMI DELL'OSTRICA, MENTRE LA SPECIFICA ANTIBUTIRILCOLINESTERASI, ISO-OMPA, inibiva quasi totalmente l'attività enzimatica calma, ma aveva scarso effetto sull'ostrica. L'eserina era l'inibitore più efficace di entrambi gli enzimi. In conclusione, gli enzimi nei tessuti delle ostriche sono acetilcolinesterasi, mentre gli enzimi delle vongole sono butirrilcolinesterasi. Tuttavia, l'esterasi gangliare delle vongole è sufficientemente attiva per idrolizzare il substrato fisiologico, l'acetilcolina. Questi risultati spiegano le differenze a lungo osservate nella farmacologia del cuore isolato tra bivalvi ostreid e venerid.
Inibizione della secrezione di prolattina ipofisaria da parte del lattogeno placentare umano nei ratti.Rapti femmina intatti a cui sono state somministrate iniezioni due volte al giorno di 1 mg di lattogeno placentare umano (HPL) hanno mostrato strisci vaginali diestri continui e i loro corpi lutei ovarici sono risultati ipertrofizzati e funzionanti. Il livello di prolattina sierica era significativamente più basso in questi ratti rispetto ai controlli al diestro e al pro-estro. Iniezioni due volte al giorno di 0,5 o 2 mg L'HPL nei ratti ovariectomizzati ha diminuito i livelli sierici e ipofisari di prolattina e aumentato l'attività ipotalamica dell'ormone inibitore della prolattina, sebbene l'effetto fosse inferiore alla dose più bassa. Il lattogeno placentare umano non ha avuto alcun effetto diretto sulla secrezione di prolattina ipofisaria in vitro.
Interferenza batterica da parte di isolati orofaringei e clinici di batteri anaerobici.Isolati anaerobici sono stati testati per l'attività inibitoria batterica. Di 144 isolati, 102 provenivano da lavaggi orofaringei , e 42 provenivano da campioni clinici. Tredici specie batteriche facoltative (sette membri delle Enterobacteriaceae e sei specie di cocchi gram-positivi) sono state utilizzate come indicatori di inibizione. Undici specie anaerobiche sono state isolate dalle secrezioni orali. Tutti gli isolati di Bacteroides melaninogenicus, il specie più comunemente recuperate, inibivano costantemente diverse specie di batteri indicatori. Bacteroides fragilis, Bacteroides oralis e Peptostreptococcus anaerobius avevano un'attività inibitoria imprevedibile, mentre la maggior parte degli altri anaerobi orali non erano inibitori. Le 42 specie cliniche erano generalmente non inibitorie.
Controllo genetico della risposta anticorpale al polisaccaride pneumococcico di tipo III nei topi. III. Analisi dei geni che regolano l'espressione dell'attività delle cellule T regolatorie.Ricombinante -i ceppi consanguinei di topi, così come i ceppi progenitori da cui sono stati derivati, sono stati valutati rispetto alla capacità delle cellule B di rispondere a una dose immunogenica ottimale di polisaccaride pneumococcico di tipo III (SSS-III) e la quantità di soppressore e l'attività delle cellule T amplificatrici presenti. Nessuna di queste attività funzionali è risultata essere collegata a geni all'interno dell'istocompatibilità maggiore (H-2) o del complesso allotipo IgCH, e diversi geni autosomici sembravano governare l'espressione di ciascuna di queste caratteristiche".
Confronto dell'inattivazione dei siti di fissazione del complemento IgM e IgG da parte di acido e base.Anticorpi IgM di coniglio contro DNA denaturato di mammifero o batteriofago T6 o poli( A)-poli(U) ha perso irreversibilmente la reattività di fissazione del complemento-(C) per esposizione a pH basso e rineutralizzazione, con un dimezzamento del titolo di fissazione del complemento che si verifica dopo il trattamento a circa pH 3. I titoli degli anticorpi IgG contro il DNA fagico denaturato , al poli(A)-poli(U), o all'emocianina sono stati dimezzati solo dopo esposizione a pH 2. più esteso con IgM che con IgG. L'inattivazione dell'attività di fissazione del C delle IgM a pH 2,5 e temperatura ambiente è stata una reazione di primo ordine, con un tempo di dimezzamento di circa 20 minuti. Entrambe le classi hanno mantenuto l'attività legante l'antigene dopo l'esposizione a pH 2. Nell'intervallo alcalino, la reattività della fissazione C completa è stata mantenuta e da entrambe le classi dopo la rineutralizzazione da pH 11,5, si è verificata una certa perdita a pH 12 e l'inattivazione irreversibile totale si è verificata a pH 12,5. In quest'ultimo caso, è stata persa anche l'attività di legame all'antigene. Le curve di inattivazione della fissazione C nell'intervallo alcalino erano simili per gli anticorpi IgG e IgM.
Rilevazione delle proteine del siero nei pattern elettroforetici delle proteine totali delle cellule di micoplasma.La contaminazione delle preparazioni di cellule di micoplasma da parte delle proteine del siero provenienti dal terreno di coltura è stata Le cellule di A. laylawii e M. arthritidis sono state coltivate in presenza di [14C]-amminoacidi e le cellule sono state lavate con 0-9% di NaC1 mediante centrifugazione tripla. Le proteine totali delle cellule lavate sono state analizzate mediante elettroforesi su gel SDS. I pattern elettroforetici colorati con Coomassie sono stati confrontati con autoradiografie degli stessi gel. Il pattern elettroforetico colorato di A. laylawii lavato cresciuto senza siero era identico con autoradiografie delle stesse cellule cresciute senza o con siero. Quello di A. laylawii lavato cresciuto con siero differiva dalla corrispondente autoradiografia per la presenza di bande extra proteiche I, II, III e IV con pesi molecolari rispettivamente superiori a 160.000, 80.000-87.000, 55.000 e 25.000. sono stati trovati in modelli elettroforetici colorati di lavate: (a) cellule di A. laylawii cresciute senza siero e mescolate con siero in fase stazionaria, (b) cellule di M. arthritidis, rispetto alle loro autoradiografie, (c) precipitato di siero. Le bande III e IV possono essere dovute alle catene pesanti e leggere della gamma-globulina, la banda II potrebbe appartenere alla transferrina oa qualche componente del complemento. L'acidificazione del siero a pH 5 ha determinato un aumento di circa 100 volte della quantità di precipitato sierico, essendo anche aumentato il numero di bande nel pattern elettroforetico del precipitato. I pattern elettroforetici colorati di cellule purificate mediante doppia centrifugazione in gradiente di densità di saccarosio a stadi (1-20-1-27 g. /cm.3 per A. laylawii e 1-15-1-25 per M. arthritidis) non contenevano bande aggiuntive e corrispondeva completamente con le loro autoradiografie. Si è concluso che la contaminazione delle cellule di micoplasma lavate da parte delle proteine del siero è principalmente dovuta alla coprecipitazione delle proteine del siero aggregate insieme alle cellule durante la centrifugazione piuttosto che all'adsorbimento delle proteine del siero sulla superficie cellulare.
La presenza di salmonelle, micobatteri e ceppi patogeni di Escherichia coli nel liquame suino.Novantotto campioni di liquame suino da 54 allevamenti sono stati esaminati per la presenza di salmonelle, ceppi enteropatogeni suini di Escherichia coli emolitico e micobatteri Le salmonelle sono state isolate da 12 allevamenti (22%) ed E. coli enteropatogeni da 13 allevamenti (24%). 16 allevamenti (44%) allevati con \'malattia minima\' rispetto a solo 5 su 38 allevamenti (13%) allevati con suini allevati convenzionalmente. Al contrario, coliformi enteropatogeni sono stati isolati da 3 su 16 allevamenti (19%) allevati con \'malattia minima \' suini rispetto a 10 su 38 allevamenti (26%) allevati con suini allevati in modo convenzionale.
Attività di fosfatasi alcalina ovarica di topo che rispondono alle gonadotropine: studi istochimici e biochimici.L'attività della fosfatasi alcalina è stata misurata in omogenati ovarici interi di topi pre-puberali di età diverse, con e senza previa iniezione di gonadotropina corionica umana. L'attività della fosfatasi alcalina è stata anche valutata nei diversi tipi di cellule in sezioni di ovaie simili, utilizzando due distinte procedure istochimiche. I risultati di tali metodi differivano. Studi biochimici indicavano la presenza di tre distinte attività della fosfatasi alcalina: I e Ib, entrambe ottimali a pH 10,4 e con requisiti di substrato simili e sensibilità agli inibitori (la fosfatasi I è caratteristica delle ovaie non stimolate e Ib delle ovaie stimolate con l'ormone luteinizzante umano o la gonadotropina corionica umana) e la fosfatasi II, ottimale a pH 9.4, con diversi requisiti di substrato e sensibilità agli inibitori osservata utilizzando le procedure istochimiche può probabilmente essere spiegata dagli effetti delle diverse condizioni di incubazione sulle attività di questi tre enzimi.
Ricerca sanitaria rurale recente.La ricerca sanitaria rurale recente può essere esaminata in due modi: bisogni e soluzioni. Una definizione dei bisogni richiede una valutazione del fattori sociali che influenzano le aspettative e il comportamento sia del fornitore che del consumatore Dovrebbero essere considerati tre tipi di soluzioni: l'utilizzo appropriato della manodopera, compresi gli sforzi per influenzare la posizione del medico e la distribuzione delle specialità, nuovi operatori sanitari e approcci di squadra; la nuova tecnologia per il trasporto e la comunicazione e l'organizzazione di nuovi sistemi di consegna. Due aree della ricerca sanitaria rurale che richiedono maggiore attenzione sono la valutazione del programma e la pianificazione finanziaria.
Caratterizzazione di Bacteroides melaninogenicus.Cinquantotto isolati umani di Bacteroides melaninogenicus, 42 da una varietà di infezioni cliniche e il resto da flora normale, sono stati studiato per la produzione di pigmenti e la fluorescenza della luce ultravioletta e da quaranta test biochimici e di altro tipo, compresa l'analisi del prodotto finale mediante cromatografia gas-liquido. In un certo numero di casi, i test sono stati ripetuti più volte e i risultati sono stati riproducibili. I test di sensibilità alla diluizione su piastra di agar sono stati eseguito anche su 12 agenti antimicrobici. Questi 58 ceppi potrebbero essere collocati in modo affidabile in tre gruppi, corrispondenti alle tre sottospecie descritte, in base a sette caratteristiche. Questi includevano la produzione di acido in terreno peptone-lievito-glucosio, produzione di acido n-butirrico da peptone -mezzo lievito-glucosio, idrolisi dell'esculina, idrolisi dell'amido, produzione di indolo, effetto sul latte e produzione di lipasi Produzione di gas idrogeno in med peptone-lievito-fruttosio ium può essere un'altra caratteristica distintiva. In generale non c'era molta differenza nella suscettibilità dei tre gruppi ai vari agenti antimicrobici testati. Due ceppi avevano una concentrazione inibitoria minima di penicillina G di 16 e 32 U/ml, rispettivamente. Tre ceppi non hanno prodotto un pigmento nero nonostante l'incubazione prolungata su terreni contenenti sangue.
Cattura di elettroni e rilevamento di ioni multipli di esteri delle benzodiazepine negli studi di farmacocinetica.Viene descritto un metodo cromatografico gas-liquido sensibile e altamente specifico per la determinazione di esteri delle benzodiazepine Il metodo prevede l'estrazione di pivoxazepam e 2\'-chloropivoxazepam da campioni di sangue e urine e l'idrolisi di entrambi i farmaci con acido forte al corrispondente 2-amino-5-clorobenzofenone (ACB) e 2-amino-5, 2\'-diclorobenzofenone (ACDB). Sono stati ottenuti recuperi del 97-98% e i derivati trifluoroacetici (TFA) di entrambi i benzofenoni (ACB-TFA e ACDB-TFA) possono essere cromatografati su OV-17, in breve tempo, con buone risposte del rivelatore a cattura di elettroni (ECD). Gli spettri di massa di questi derivati forniscono ioni molecolari abbondanti adatti per la rivelazione spettrometrica di massa mediante rivelazione di ioni multipli (MID), con un notevole miglioramento della specificità rispetto alle risposte ECD. mit nei campioni di sangue sono stati stabiliti a 5-10 ng/ml mediante ECD e 0,5-0,8 ng/ml mediante MID. Il metodo è stato applicato allo studio dei livelli ematici raggiunti dopo i. v. e dosi orali nei ratti e nell'uomo.
Analisi della frazione acida del condensato di fumo di marijuana mediante gascromatografia capillare-spettrometria di massa.Metodo per l'analisi di acidi organici e fenoli isolati da condensato di fumo di marijuana è stato sviluppato. Analisi comparative dei condensati di fumo standard di tabacco, messicano e di marijuana turco effettuate mediante gascromatografia capillare hanno indicato cambiamenti sia qualitativi che quantitativi nei costituenti dei profili cromatografici. I campioni sono stati convertiti in derivati volatili mediante metilazione e trimetilsililazione; dopo di che, sono stati identificati 49 acidi alifatici, acidi aromatici e composti fenolici mediante gascromatografia-spettrometria di massa capillare.
Cromatografia a coppia ionica di metaboliti di farmaci acidi e composti endogeni.Sistemi cromatografici liquido-liquido basati su partizioni di coppie ioniche con microparticelle di silice come supporto per la fase stazionaria sono stati utilizzati per la separazione di composti anionici di interesse biochimico e farmacologico. Un'elevata efficienza di separazione può essere ottenuta con fasi mobili sia acquose che organiche e la ritenzione è facilmente regolata dalla natura e dalla concentrazione del contatore di ammonio quaternario ione, presente nella fase acquosa. E' stata studiata l'influenza della composizione delle fasi liquide sulla selettività e l'efficienza di separazione, nonché i metodi di equilibrazione e la stabilità dei sistemi. Esempi sono forniti di separazioni di sulfonamidi, barbiturici, glucuronico e acido solforico coniugati di composti steroidei e fenoli glicina coniugati di acidi carbossilici (acido ippurico, nicotinurico e salicilurico) e anioni c metaboliti delle ammine biogene (derivati dell'acido indolacetico, benzoico, mandelico e fenilacetico).
Sintesi di un enzima epatico in cellule ibride.Le cellule di epatoma di ratto sono state fuse con cellule di una linea di linfoma di topo stabilita, con normali macrofagi diploidi di topo, linfociti e fibroblasti e con normali macrofagi e linfociti diploidi di ratto. L'enzima tirosina aminotransferasi fegato-specifico è stato prodotto da quasi tutte le cellule ibride, ma di solito a un livello inferiore rispetto alle cellule di epatoma parentali. La maggior parte degli ibridi ha anche mostrato livelli aumentati di questo enzima dopo esposizione a desametasone. Negli ibridi ratto x topo, la mobilità elettroforetica dell'enzima indicava che veniva prodotto solo l'enzima dell'epatoma di ratto. I risultati sono difficili da spiegare in termini di modelli semplici che coinvolgono un singolo repressore diffusibile o attivatore della tirosina sintesi delle aminotransferasi.
Secrezione di idrolasi lisosomiale da parte di Tetrahymena: confronto di diversi enzimi intralisosomiali con gli isoenzimi rilasciati nel terreno.Tetrahymena pyriformis è stata coltivata in terreno proteoso-peptone e poi lavate e incubate in una soluzione salina diluita per un'ora. Le cellule sono state quindi scartate e le idrolasi lisosomiali che erano state secrete sono state sottoposte a cromatografia su colonna di cellulosa DEAE. Almeno tre isoenzimi di fosfatasi acida, tre di proteasi acida e due di beta-N-acetilesoseaminidasi, così come singoli picchi di alfa-mannosidasi, beta-galattosidasi e beta-fucosidasi. Queste ultime due attività non sono state risolte dalla colonna DEAE e non potevano essere separate in un secondo passaggio cromatografico su CM-cellulosa Le cellule sono state anche coltivate in condizioni identiche e omogeneizzate in saccarosio 0,25 M per consentire il confronto di alcune delle idrolasi lisosomiali intracellulari con le loro controparti secrete. le popolazioni somali sono state risolte mediante sedimentazione in gradiente di densità di saccarosio, una frazione lisosomiale pesante, contenuta ad una densità di circa 1,25 gm/cm3, e una frazione lisosomiale leggera, centrata ad una densità di circa 1,16 gm/cm3. Queste due popolazioni differivano per il fatto che i lisosomi leggeri non sembravano contenere quantità significative di beta-fucosidasi, beta-galattosidasi o proteasi acida, mentre tutte e sei le attività dell'idrolasi studiate erano presenti nei lisosomi pesanti. Il picco lisosomiale leggero si è verificato in cellule cresciute in fase di transizione, ma è stato notevolmente ridotto in cellule da colture cresciute in fase stazionaria. Oltre a queste due frazioni è stata rilevata una terza particella molto leggera, contenente solo attività alfa-mannosidasi, appena all'interno del gradiente. Sono state effettuate misurazioni dell'effetto del calore (10 minuti a 66 gradi) e di una variazione del pH da 4.5 (condizione standard del saggio) a 6.0 sulle tre fosfatasi acide e due isoenzimi beta-N-acetilesoseaminidasi risolti mediante cromatografia su colonna DEAE del idrolasi secrete e su queste idroliasi nelle frazioni lisosomiali pesanti e leggere sul gradiente di saccarosio. L'uso dei criteri di termostabilità e pH ha consentito il calcolo delle proprietà attese delle attività della fosfatasi acida intralisosomiale e dell'esoseaminidasi se queste erano costituite dai rispettivi isoenzimi nelle proporzioni secrete. È stato riscontrato che né la fosfatasi acida intralisosomiale né l'esoseaminidasi intralisosomiale avevano le proprietà attese se fossero costituite dalla miscela secreta dei rispettivi isoenzimi, indicando che la modifica di alcuni di questi isoenzimi potrebbe essersi verificata durante il periodo di inedia di 1 ora o dopo la secrezione.
Miglioramento adattivo dell'assorbimento e dell'esodo degli aminoacidi da parte dei linfociti timici: influenza del pH.Ingresso di alcuni aminoacidi liberi (acido alfa aminoisobutirrico (AIB) , alanina e prolina), ma non della leucina nei linfociti timici di ratto aumentavano progressivamente quando le cellule venivano incubate in un mezzo carente di aminoacidi. L'actinomicina D, la cicloesimide o un'alta concentrazione di AIB abolivano l'aumento correlato al tempo dell'accumulo di AIB, mentre l'esposizione ad un'elevata concentrazione di leucina non ha avuto effetto. Questo fenomeno non può essere attribuito ad una progressiva alterazione della natura del mezzo di incubazione né ad una ridotta transinibizione dell'assorbimento dell'AIB. Anche l'esodo dell'AIB è aumentato con il tempo, ma in misura minore rispetto a Ingresso AIB. I tassi iniziali di ingresso ed esodo AIB sono aumentati con l'aumento del pH del mezzo di incubazione nell'intervallo 6,5-8,0. Gli effetti del pH all'ingresso e all'esodo erano correlati al tempo, aumentando progressivamente anzi annullando il incrementi ingranditi correlati al tempo nel trasporto AIB causati da un'incubazione prolungata a pH 8,0. L'influenza di un dato pH sul trasporto di AIB è diminuita rapidamente quando le cellule sono state trasferite in un mezzo di un altro pH, ma questa tendenza è diminuita quanto più a lungo le cellule sono state esposte al pH iniziale. Il pH ha influenzato l'ingresso di alanina e prolina allo stesso modo di quello di AIB, ma non ha influenzato l'ingresso di leucina. Questi risultati indicano che i linfociti timici mostrano un miglioramento adattativo nell'accumulo di amminoacidi liberi che sono trasportati in gran parte dal sistema A o che preferisce l'alanina e che il processo adattativo coinvolge sia l'ingresso che l'esodo. Inoltre, le alterazioni del pH modificano l'ingresso e l'esodo di questi stessi amminoacidi, influenzano profondamente l'entità degli aumenti rilasciati nel tempo e possono indurre cambiamenti fondamentali nei meccanismi che servono il trasporto degli amminoacidi.
Secrezione di vecchia e nuova proteina esportabile in fettine di parotide di ratto. Controllo mediante neurotrasmettitori.La possibilità che i vecchi e nuovi granuli secretori non si mescolino e che la proteina esportabile più vecchia può essere secreta preferenzialmente è stata testata sulla ghiandola parotide in vitro. Le fette di animali a digiuno sono state marcate a impulsi per 3 minuti con L-[3H]leucina. La frazione subcellulare ha mostrato che dopo un periodo di inseguimento di 90 minuti, la formazione di nuove proteine granuli secretori è stato per lo più completato. Il rapporto tra etichetta nei granuli secretori e etichetta nei microsomi è aumentato di 250 volte durante il periodo post-impulso 5-90 minuti. Dopo l'inseguimento di 90 minuti, è stato avviato un tasso di secrezione submassimale aggiungendo una bassa concentrazione di isoproterenolo alle fette. La secrezione preferenziale di vecchia proteina esportabile non etichettata era evidente dalla constatazione che la percentuale di amilasi totale secreta era 3,5 volte maggiore della percentuale di proteina etichettata secreta. La secrezione preferenziale di vecchia unl l'amilasi esportabile abeled non è diminuita anche quando il periodo di inseguimento prima dell'aggiunta di isoproterenolo è stato esteso a 240 min. Tali lunghe incubazioni di inseguimento erano ancora significative a causa del fatto che il ratto spontaneo di rilascio di amilasi e rilascio di proteine radioattive dalle fette era trascurabilmente basso. Un'elevata concentrazione di isoproterenolo aggiunta alle fette dopo un inseguimento di 90 minuti ha prodotto i seguenti risultati. Una fase iniziale di secrezione preferenziale di vecchia proteina non marcata è stata presto sostituita dalla secrezione di una miscela casuale di nuova e vecchia proteina esportabile. Le micrografie elettroniche hanno indicato che alti tassi di secrezione implicavano la fusione sequenziale dei granuli secretori in modo che il lume si estendesse in profondità nella cellula dove presumibilmente si trovavano i nuovi granuli marcati. A bassi tassi di secrezione, il lume non mostrava estensioni così profonde. Sono stati anche condotti esperimenti su fette di ghiandole che erano state in gran parte impoverite di vecchi granuli mediante previa iniezione di isoproterenolo negli animali. La secrezione di proteine marcate da tali fette si è fermata con l'esportazione dell'80% della proteina marcata. Questa scoperta indica che circa il 20% della proteina radioattiva è una proteina cellulare non esportabile e che le fette sono in grado di esportare l'intera quantità di proteina secretoria che è stata sintetizzata in vitro. Oltre al recettore beta-adrenergico che media la secrezione proteica, la cellula acinare parotide possiede anche un recettore alfa-adrenergico e uno colinergico che causano il rilascio di K+, la formazione di vacuoli e la secrezione di acqua. L'attivazione di uno degli ultimi due recettori in combinazione con il recettore beta-adrenergico ha aumentato la randomizzazione della proteina secreta. Si conclude che nella cellula acinosa parotide di ratto c'è poco mescolamento spontaneo tra vecchi granuli vicino alla membrana cellulare luminale e nuovi granuli che arrivano dietro dal complesso di Golgi. I neurotrasmettitori che inducono la secrezione producono la randomizzazione osservata.
Il tubo di invasione delle spore microsporidi. L'ultrastruttura, l'isolamento e la caratterizzazione della proteina che comprende il tubo.L'apparato di estrusione del protozoo parassita microsporidiano Nosema michaelis scarica un tubo di invasione (o polare) con una velocità adatta per perforare le cellule e iniettare sporoplasma infettivo. Il tubo è composto da una proteina del tubo polare (PTP) che consiste in un singolo polipeptide a basso peso molecolare leggermente più piccolo del chimotripsinogeno-A. I tubi PTP assemblati resistono alla dissociazione in sodio dodecil solfato e brevi esposizioni in mezzi alle estremità estreme dell'intervallo di pH; tuttavia, i tubi sono ridotti da mercaptoetanolo e ditiotreitolo. Quando acidificato, il PTP ridotto con mercaptoetanolo si autoassembla in monostrati bidimensionali di plastica. Il PTP ridotto con ditiotreitolo non si riassembla quando acidificato. Vengono presentate prove che indicano che il PTP è assemblato come un tubo all'interno della spora; che il tubo espulso ha pl asticità durante il passaggio dello sporoplasma; e, infine, che le subunità all'interno del polimero tubolare sono legate insieme, in parte, da legami disolfuro interproteici.
Un'indagine in vitro sulla polarizzazione anodica e sul comportamento della capacità dell'acciaio inossidabile 316-L.Sono state determinate le proprietà di resistenza alla corrosione di il film passivo sull'acciaio inossidabile 316-L è influenzato dagli stati meccanici e superficiali del materiale e dalle condizioni variabili di pH e PO2 del fluido interstiziale. I campioni laminati a freddo e ricotti sono stati preparati in superficie, commercialmente e in laboratorio, rispettivamente, come per l'impianto ortopedico. Il comportamento del film passivo è stato studiato mediante i metodi di polarizzazione anodica e capacità impulso-potenziostatica. Il pH e la PO2 della soluzione di prova di Ringer\'s sono stati variati per includere i valori del liquido interstiziale che si verificano dopo l'intervento e dopo il recupero. il comportamento di polarizzazione di tutti i campioni è risultato essere indipendente dal pH e dalla PO2. I potenziali di rottura dei campioni ricotti erano 800-950 mV (SCE), in contrasto con i valori precedentemente riportati di circa 3 50mV. Questo sostanziale aumento è legato all'influenza della preparazione della superficie e, in particolare, all'ottimizzazione del tempo di elettrolucidatura che agisce per produrre una superficie microscopicamente liscia, priva di detriti e materiale disordinato. Il comportamento di capacità del materiale ricotto per potenziali superiori a 400 mV era coerente con un modello che prevedeva l'ingresso di cloruro e ioni metallici (principalmente Fe) nel film passivo. Questa voce è correlata all'inizio della vaiolatura.
Fosforilazione indotta dall'acido dell'adenosina 5\'-difosfato legata al fattore di accoppiamento 1 nei tilacoidi del cloroplasto degli spinaci.Adenosina 5\'-difosfato, legata al fattore di accoppiamento 1 (CF1) nei tilacoidi del cloroplasto degli spinaci, viene in parte convertito in adenosina 5\'-trifosfato, dopo iniezione dei tilacoidi in acidi forti al buio. Il fosfato legato funge da donatore di fosforile per questa conversione insensibile al disaccoppiatore. L'esposizione dei tilacoidi al calore o all'urea prima della loro iniezione nell'acido ha causato la dissociazione dell'ADP e impedisce l'apparente sintesi di ATP indotta dall'acido. Cambiamenti conformazionali in CF1 possono essere provocati dalla denaturazione acida che assomiglia a quelli provocati dal gradiente elettrochimico del protone attraverso le membrane tilacoidi.
Aspetti quantitativi della relazione tra trasporto del glucosio 6-fosfato e idrolisi per il sistema microsomiale del fegato glucosio-6-fosfatasi. Inattivazione termica selettiva del componente catalitico in situ a pH acido.", Studi sulla stabilità termica della glucosio-6-fosfatasi di fegato di ratto (EC 3.1.3.9) sono stati condotti per elevare ulteriormente la proposta che l'attività enzimatica è il risultato dell'accoppiamento di un glucosio-6-P- traslocasi specifica e una fosfoidrolasi-fosfotransferasi non specifica. L'inattivazione è stata osservata quando i micorsomi sono stati incubati a temperature moderate tra pH 6,2 e 5,6. Il tasso di inattivazione è aumentato con l'aumento della concentrazione di ioni idrogeno o della temperatura. Tuttavia, nessuna inattivazione è stata osservata al di sotto dei 15 gradi nei terreni fino a pH 5 o a pH neutro fino a gradi 37. La stabilità termica dell'enzima può essere controllata dallo stato fisico dei lipidi di membrana e dal grado di protonazione di residui specifici in th e proteina enzimatica. I microsomi sono stati esposti a condizioni inattivanti e sono state effettuate analisi cinetiche delle attività della glucosio-6-P fosfoidrolasi prima e dopo l'integrazione con lo 0,4% di sodio taurocolato. I risultati supportano il postulato e le caratteristiche cinetiche di una data preparazione di microsomi intatti sono determinate dalle capacità relative dei componenti di trasporto e catalitici. Prima del trattamento con detergente, l'inattivazione (cioè una diminuzione della Vmax) era accompagnata da una diminuzione della Km e una riduzione della frazione di attività latente, mentre solo la Vmax era depressa nelle preparazioni disgregate. È stata esclusa la possibilità che i trattamenti inattivanti provocassero la contemporanea rottura della membrana microsomiale. Si conclude che le esposizioni al calore moderato in mezzi acidi inattivano selettivamente la componente catalitica del sistema glucosio-6-fosfatasi preservando una barriera di permeabilità intatta e un sistema di trasporto funzionale del glucosio-6-P. Le analisi dei dati cinetici ottenuti negli studi attuali e precedenti hanno rivelato diverse relazioni matematiche fondamentali tra le costanti cinetiche che descrivono le attività di glucosio-6-P fosfoidrolasi di microsomi intatti (cioè il "sistema") e interrotti (cioè il componente catalitico). Le relazioni quantitative sembrano fornire un mezzo per calcolare una costante di velocità (VT) e una costante di semisaturazione (KT) per l'afflusso di glucosio-6-P. Le risposte differenziali ben documentate del sistema glucosio-6-fosfatasi del fegato di ratto indotte dalla fame, dal diabete sperimentale o dalla somministrazione di cortisolo sono state analizzate in termini di queste relazioni. Vengono discusse le possibili influenze del fosfato inorganico cisternale sulle apparenti costanti cinetiche del sistema intatto.
Conversione dell'ormone proparatiroideo in ormone paratiroideo da parte di un enzima particolato della ghiandola paratiroidea.La conversione dell'ormone proparatiroideo (proparatormone) in ormone paratiroideo (paratormone) ) da frazioni subcellulari della paratiroide bovina. L'identificazione del prodotto di conversione come paratormone è stata stabilita dalla sua posizione di eluizione durante la cromatografia a scambio ionico e la gel filtrazione e dall'analisi parziale della sequenza amminoacidica della sua regione NH2-terminale. e le frazioni subcellulari derivate (600 X g pellet, 5.000 X g pellet, 20.000 X g pellet, 190.000 X g pellet e 190.000 X g surnatante) hanno tutte catalizzato la conversione del proormone [3H] o [14C] esogeno. Oltre il 60% dell'attività di conversione era nelle frazioni di particolato; la frazione di particolato 190.000 X g conteneva l'attività di conversione specifica più alta. L'attività di conversione sembrava essere una componente integrale del membro rane poiché poteva essere rimosso solo parzialmente mediante estrazione con Triton X-100. La produzione di paratormone da parte dell'enzima di conversione del particolato aumenta con il tempo e la concentrazione della proteina enzimatica. L'intervallo di pH ottimale era compreso tra 7 e 9 e l'enzima era inattivo al di sotto di pH 6. La conversione dell'enzima particolato era inibita dalla benzamidina o dalla clorochina, ma non dall'inibitore della tripsina pancreatica, indicando la sua dissimilarità con la tripsina. Quando una miscela di [14C]proparatormone e [3H]paratormone è stata utilizzata come substrato, l'enzima particolato non ha metabolizzato l'ormone nonostante la conversione di oltre il 70% del proormone in ormone e altri peptidi. C'era una stretta correlazione tra la distribuzione subcellulare dell'attività di conversione e quella del paratormone appena formato trovato nella frazione di membrana. Questi dati suggeriscono che l'attività di conversione del particolato riguarda la formazione del paratormone in vivo.
Isolamento e caratterizzazione parziale di monofosfoglicerato mutasi da eritrociti umani.La monofosfoglicerato mutasi è stata purificata all'omogeneità da eritrociti umani obsoleti come indicato dalla cromatografia di esclusione, poliacrilammide elettroforesi su gel e centrifugazione all'equilibrio. Occasionalmente, la procedura di purificazione raccomandata produce una piccola quantità (3% o meno) di una singola proteina estranea che può essere eliminata dalla preparazione enzimatica impiegando un ulteriore passaggio di purificazione. L'enzima nativo ha un peso molecolare da 54.000 a 56.000 come determinato mediante centrifugazione all'equilibrio e cromatografia di esclusione L'elettroforesi su gel su disco in presenza di sodio dodecil solfato produce una singola banda proteica con un peso molecolare di 28.600, indicando che la macromolecola nativa è un dimero composto da subunità di massa simile. La mutasi monofosfoglicerata omogenea è priva di difosfoglicerato mutasi, enolasi e non n attività fosfatasiche specifiche; tuttavia, l'enzima manifesta un'attività intrinseca della 2,3-difosfo-D-glicerato fosfatasi, come dimostrato da studi di denaturazione termica. L'attività della difosfatasi è stimolata da PPi e glicolato-2-P, ma è inibita da Cl-, HSO3- e Pi. Il pH ottimale sia per la difosfatasi che per la mutasi è 6,8. Il Km per il 2,3-difosfo-D-glicerato nella reazione della fosfatasi è 82 muM a 37 gradi e pH 7,2. Viene data la composizione amminoacidica della mutasi monofosfoglicerata omogenea.
Studi cinetici sull'affinità di legame dell'emoglobina umana per la 4a molecola di monossido di carbonio, L4.L4, l'affinità dell'emoglobina per la 4a molecola di CO , è stata determinata per l'emoglobina umana adulta (HbA) in funzione del pH e della presenza di fosfati organici misurando i parametri cinetici della reazione. l\'4, la velocità di combinazione di CO con la molecola trilegata, è stata misurata mediante flash fotolisi mentre l4, il tasso di dissociazione di CO per la molecola saturata dal ligando, è stata misurata mediante sostituzione del ligando. L4 è dipendente dal pH e influenzato dal 2,3-difosfoglicerato. Inoltre, questa dipendenza dal pH dello stato ad alta affinità è in gran parte eliminata da Digestione con carbossipeptidasi A. È stata inoltre determinata la L4 per l'emoglobina fetale umana (HbF) nei tamponi fosfato, che è risultata dipendente dal pH. Questi risultati non possono essere riconciliati nell'ambito del modello allosterico a due stati. Strutture aggiuntive negli equilibri conformazionali um a causa di intermedi nella transizione da T a R o devono esistere due o più stati R.
Studi fotochimici e sensibilizzazione all'ultravioletto di Escherichia coli timidilato chinasi da parte di vari analoghi del substrato alogenato.L'effetto del 5-iodo-2\'-deossiuridina monofosfato (IdUMP), vari derivati 5-alogenati-5\'-azido-2\', 5\' -dideossiuridina, 2\'-deossi-6-azauridina (AzdUrd), e suoi analoghi alogenati sulla sensibilizzazione all'ultravioletto di Escherichia coli timidilato chinasi è stata studiata. Solo quei composti iodurati in posizione 5 aumentano il tasso di inattivazione ultravioletta di questo enzima. Tuttavia, i nucleosidi 5\'-azido con sostituenti iodio, bromo, cloro o fluoro in posizione 5 non proteggono né sensibilizzano la timidilato chinasi all'inattivazione ultravioletta La timidina 5\'-monofosfato protegge parzialmente l'enzima dall'inattivazione ultravioletta sia in presenza che in assenza di analoghi iodati sensibili all'ultravioletto Lo ione magnesio non migliora l'inattivazione ultravioletta di th ymidylate chinasi da analoghi nucleosidici 5-iodurati. I dati chinatici supportano un potenziamento attivo sito-diretto dell'enzima all'inattivazione ultravioletta da parte di 5-iodo-2\'-deossiuridina monofosfato, poiché la concentrazione di IdUMP richiesta per raggiungere il 50% di potenziamento massimo è 0,24 mM, che è in buon accordo con la sua Ki di 0,18 mM. Quando [125I]IdUMP o [2-14C]IdUMP è stato irradiato con l'enzima, entrambe le radioattività sono state associate all'enzima, tuttavia solo con l'analogo del 14C la quantità legata a metà saturazione è essenzialmente uguale alla quantità necessaria per inattivare l'enzima. enzima del 50%. Questi dati supportano l'ipotesi che l'entità attiva nel potenziamento da parte di IdUMP dell'inattivazione della timidilato chinasi durante l'irradiazione ultravioletta sia il radicale libero uridilato che si forma fotochimicamente da IdUMP. Sono stati eseguiti studi fotochimici di 6-azauracil (AzUra), 2\'-deossi-6-azauridina e 5-iodo-2\'-deossi-6-azauridina (IAzdUrd). La fotolisi di IAzdUrd in presenza di un donatore di idrogeno produce AzdUrd che dopo un'ulteriore fotolisi produce il fotoidrato. Il fotoidrato di AzdUrd quando incubato al buio a pH 5,2 viene riconvertito al 90% in AzdUrd, mentre il fotoidrato di AzUra viene convertito solo parzialmente (20%) in AzUra. Il tasso di deiodinazione di IAzdUrd è 2,1 volte maggiore di quello di IdUMP. Sebbene il Ki di IdUMP e IAzdUrd sia simile, l'aumentata fotosensibilità dell'analogo aza spiega il miglioramento molto maggiore dell'inattivazione ultravioletta della timidilato chinasi. La capacità di un composto di aumentare l'inattivazione ultravioletta della deossitimidilato chinasi è correlata con il potenziale del composto di produrre un radicale libero piuttosto che un fotoidrato quando il complesso enzima-substrato analogico viene irradiato.
Purificazione e caratterizzazione della N-idrossi-2-acetilaminofluorene sulfotransferasi dal fegato di ratto.N-idrossi-2-acetilamminofluorene (N-OH-2 -AAF) sulfotransferase è un enzima che catalizza il trasferimento del solfato dal solfato attivo, 3\'-fosfoadenosina 5\'-fosfosolfato (PAPS), all'N-OH-2-AAF per formare un prodotto altamente reattivo acetilamminofluorene N-solfato. È stato purificato circa 2000 volte con una resa di oltre il 12% da fegati di ratto maschio adulto Sprague-Dawley mediante una procedura in otto fasi. La preparazione finale era omogenea sull'elettroforesi su gel del disco analitico. L'enzima purificato aveva attività verso il p-nitrofenolo con un aumento di circa 1600 volte dell'attività specifica rispetto all'omogenato grezzo, ma non aveva quasi alcuna attività rilevabile nei confronti di steroidi come estrone, beta-estradiolo, testosterone, deidroisoandrosterone e corticosterone. C'era anche pochissima attività di solfatazione verso serotonina e L -tirosina metil es ter. Il pH ottimale per l'attività enzimatica è di circa 6,3 quando misurato in tampone fosfato di sodio. Mg2+ a 6-9 mM potrebbe aumentare l'attività enzimatica fino al 30%. Mn2+ ha attivato l'enzima solo leggermente a concentrazioni molto basse. Zn2+, Co2+, Cu2+ e Ni2+ erano tutti fortemente inibitori, ma Ca2+ ha avuto un effetto molto limitato. Si è scoperto che i composti tiolici hanno un effetto stabilizzante e i reagenti che bloccano i tioli sono potenti inibitori di questo enzima. L'enzima puro era molto instabile soprattutto nelle soluzioni diluite. Il punto isoelettrico (pl) dell'enzima è 5,66 +/- 0,07. Il peso molecolare dell'enzima nativo era di 68.000 +/- 500 come stimato dalle filtrazioni su gel di Sephadex G-100 e G-200. Un singolo componente con peso molecolare di 38.250 +/- 1.350 è stato osservato su elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato in assenza e presenza di 2-mercaptoetanolo. Il confronto dell'attività enzimatica nella posta e nel fegato di ratto femmina in ogni fase della purificazione ha rivelato che c'era solo una traccia di N-OH-2-AAF sulfotransferasi presente nel fegato di ratto femmina.
Sintesi enzimatica di biopterina da D-eritrodiidroneopterina trifosfato mediante estratti di reni di criceto dorato siriano.Un sistema enzimatico è stato trovato in entrambi gli omogenati grezzi di dializzati estratti di fegato, rene, polmone e cervello di criceti dorati siriani che hanno catalizzato la sintesi di 6(L-eritro-1\',2\'-diidrossipropil)pterina (biopterina) radioattiva da [U-14C]6(D- eritro-1\',2\',3\'-triidrossipropil)-7,8-diidropterina trifosfato (D-eritroH2neopterina-PPP) La radioattività specifica della biopterina è risultata essere paragonabile a quella della D-eritroH2neopterina-PPP Il sistema enzimatico del rene di criceto è stato purificato più volte mediante frazionamento con solfato di ammonio e con una colonna Ultrogel AcA-34 È stato dimostrato che (a) NADPH o NADAH era essenziale e che (b) Mg2+ era stimolante per la sintesi enzimatica di biopterina da D-eritroH2-NEOPTERIN-PPP Anche GTP e neopterine non fosforilate w non sono stati convertiti in biopterina. Sebbene la 6-lattil-7,8-diidropterina (sepiapterina) sia stata convertita in biopterina in presenza di NADPH, la sepiapterina non è stata rilevata da D-eritroH2neopterina-PPP in assenza di NADPH. È stato eseguito un esperimento preliminare per identificare la diidrobiopterina.
Induzione della lipogenesi durante la differenziazione in una linea cellulare "preadipocita".I fibroblasti 3T3-L1 si differenziano in coltura in cellule a carattere adipocitario. La transizione è accompagnata da un aumento da 40 a 50 volte nell'incorporazione di [14C]acetato nel trigliceride. L'aumento del tasso lipogenico è esattamente parallelo a un aumento coordinato delle attività degli enzimi chiave della via biosintetica degli acidi grassi (ATP -citrato liasi, acetil-CoA carbossilasi e acido grasso sintetasi). Studi immunologici indicano che l'elevata attività dell'acetil-CoA carbossilasi è il prodotto di un aumento del livello di enzimi cellulari.
Studi sulla regolazione della gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi legata al cloroplasto NADP.I fibroblasti 3T3-L1 si differenziano in coltura in cellule a carattere adipocitario. La transizione è accompagnata da un aumento da 40 a 50 volte nell'incorporazione di [14C]acetato nel trigliceride. L'aumento del tasso lipogenico è esattamente parallelo a un aumento coordinato delle attività degli enzimi chiave della via biosintetica degli acidi grassi (ATP -citrato liasi, acetil-CoA carbossilasi e acido grasso sintetasi). Studi immunologici indicano che l'elevata attività dell'acetil-CoA carbossilasi è il prodotto di un aumento del livello di enzimi cellulari.
Composto X. Un intermedio nell'alogenazione enzimatica.Studi precedenti hanno dimostrato che la clorite funge da substrato di alogenazione per la perossidasi di rafano. Nel suo ruolo di substrato, la clorite serve sia come donatore di alogeno che come fonte di equivalenti ossidanti nella reazione di clorurazione Mostriamo ora che un nuovo intermedio spettrale, che abbiamo chiamato Composto X, può essere rilevato come il prodotto iniziale della reazione della clorite con la perossidasi di rafano La reazione della clorite con la perossidasi di rafano per formare il Composto X è una reazione relativamente veloce, specialmente a valori di pH acidi. La costante di velocità del secondo ordine (Kf) per la formazione del Composto X a pH 4.5 (pH ottimale) è 0,9 X 10(6). ) M-1 S-1. Il composto X, in assenza di un accettore di alogeno, si decompone in composto I e ione cloruro. La costante di velocità del primo ordine (Kd) per il decadimento del composto X in composto I è 0,2 s-1 a pH 4.5 Il pH ottimale per la clorazione enzimatica con cloro Si confronta favorevolmente con il profilo del pH per la durata del Composto X (Kf/Kd). Queste osservazioni indicano che il Composto X è l'intermedio alogenante nella reazione della clorite e che la velocità di clorurazione enzimatica è direttamente correlata alla stabilità del Composto X. Proponiamo un ligando -OCl su un eme ferrico come struttura più probabile per il Composto X.
Purificazione parziale e caratterizzazione di una lipasi trigliceride dal tessuto adiposo di maiale.Una lipasi trigliceride è stata estratta da polvere di tessuto adiposo di maiale sgrassato con ammoniaca diluita e purificata circa 230 volte mediante una combinazione di frazionamento di solfato di ammonio, cromatografie su colonna eparina-Sepharose 4B, DEAE-cellulosa e Sephadex G-150 ed elettroforesi isoelettrofocalizzante. L'enzima era distinguibile nelle proprietà fisiche e cinetiche dalle due lipasi precedentemente definite nel tessuto adiposo , lipoprotein lipasi e lipasi ormone-sensibile. L'enzima purificato era completamente attivo in assenza di lipoproteine sieriche e non era stimolato dalla protein chinasi adenosina 3\':5\'-monofosfato-dipendente. In netto contrasto con le lipasi già definite , l'enzima era fortemente inibito dall'albumina sierica. L'enzima aveva un peso molecolare di circa 43.000, un pI di 5,2 e un pH ottimale di 7,0. L'enzima idrolizzato trioleina ad acido oleico e glicerolo, e non ha mostrato attività esterasica. Il Km apparente per la trioleina era di 0,05 mM. Restavano da esplorare i ruoli fisiologici di questa nuova specie di lipasi.
Differenze nella regolazione della fosfofruttochinasi nelle cellule tiroidee normali e tumorali di ratto.Le proprietà cinetiche e molecolari di una fosfofruttochinasi derivata da un tumore della tiroide trapiantabile di ratto privo di regolazione sono state studiate le proprietà dell'enzima quasi purificato (attività specifica 140 unità/mg) con quelle della fosfofruttochinasi da tiroide normale di ratto (attività specifica 134 unità/mg). di questi due enzimi erano quasi simili. La fosfofruttochinasi tumorale tiroidea ha mostrato, tuttavia, un maggior grado di eterogeneità di dimensioni e/o forma in presenza di ATP rispetto al normale enzima tiroideo, come determinato mediante gel filtrazione e centrifugazione in gradiente di densità di saccarosio. al di sotto di pH 7,4 ha mostrato una curva di risposta sigmoide per entrambi gli enzimi quando la velocità è stata determinata a 1 mM di ATP con livelli variabili di fruttosio-6-P. iici, tuttavia, erano 4,2 e 2,6 rispettivamente per la fosfofruttochinasi tiroidea normale e tumorale. Il solfato di ammonio ha ridotto le interazioni cooperative con il substrato fruttosio-6-P in entrambi gli enzimi. L'enzima del tumore tiroideo, invece, era meno sensibile all'inibizione dell'ATP e del citrato. L'inversione dell'inibizione del citrato da parte del ciclico 3\':5\'-adenosina monofosfato è stata anche meno efficace con la fosfofruttochinasi del tumore tiroideo, mentre l'effetto protettivo del fruttosio-6-P è stato più forte. La differenza nell'inibizione del citrato tra il tumore e l'enzima tiroideo normale non è stata fortemente influenzata dalla variazione della concentrazione di MgCl2 fino a 10 mM. Si conclude che la complessa regolazione allosterica tipica della normale fosfofruttochinasi tiroidea è ancora presente nell'enzima isolato dal tessuto tumorale tiroideo. Quest'ultimo, tuttavia, è controllato più liberamente dai suoi effettori fisiologici, come ATP, citrato e AMP ciclico.
Miosina cardiaca dal ventricolo del cuore di maiale. Purificazione e proprietà enzimatiche.Viene descritto un metodo per la preparazione di miosina di elevata purezza dal ventricolo sinistro di maiale cuore. La miosina purificata era priva di acido nucleico, actina, tropomiosina, troponina, la proteina di peso molecolare 150.000 e altri contaminanti. Le analisi delle subunità nella miosina purificata sono state eseguite su gel di acrilammide al 3,5% con SDS allo 0,1%. Della proteina totale presente nella miosina, 11,3% era nelle catene leggere; catena leggera 1 (LC1), 5,9% e catena leggera 2 (LC2), 5,4% L'elettroforesi su gel di urea della miosina purificata ha mostrato tre bande ravvicinate corrispondenti ai 20.000 dalton, Sono state studiate anche le componenti da 20.000 dalton modificate con carica e da 20.000 dalton fosforilate. Sono state studiate anche le proprietà delle ATPasi Ca2+-attivate e K+-attivate [EC 3.6.1.3] della miosina purificata. I valori di Km erano 27 e 55 muM e il Vmax i valori erano 0,263 e 0,317 mumole P1/mg/min per t le ATPasi attivate con Ca2+ e attivate con K+, rispettivamente. I profili dell'attività del pH e gli effetti della modificazione dell'SH erano di tipo miosina scheletrico, tranne per il fatto che le attività erano inferiori.
La struttura e la funzione delle proteasi acide. V. Studi comparativi sull'inibizione specifica delle proteasi acide da parte di diazoacetil-DL-norleucina metil estere, 1,2-epossi-3- (p-nitrofenossi) propano e pepstatina.Studi comparativi sono stati effettuati sugli effetti di diazoacetil-DL-norleucina metil estere (DAN), 1,2-epossi-3-(p-nitrofenossi)propano (EPNP) e pepstatina sulle proteasi acide, comprese quelle di Acrocylindrium sp. , Aspergillus niger, Aspergillus saitoi, Mucor pusillus, Paecilomyces varioti, Rhizopus chinensis e Trametes sanguinea, e anche pepsina suina [EC 3.4.23.1] e renina di vitello [EC 3.4.23.4] per scopi comparativi. Questi enzimi sono stati rapidamente inattivati a velocità simili e in una stechiometria 1:1 per reazione con DAN in presenza di ioni rameici. I profili di pH di inattivazione di questi enzimi erano simili e avevano ottimi a pH 5,5 a 6. Sono stati anche inattivati a velocità simili per reazione con EPNP, con incorporazione concomitante su quasi 2 molecole EPNP per molecola di enzima. I profili di inattivazione del pH erano di nuovo simili e l'inattivazione massima è stata osservata a circa pH da 3 a 4. Alcuni degli enzimi inattivati da EPNP sono stati trattati con DAN e hanno dimostrato di mantenere ancora la reattività nei confronti del DAN. Tutti questi enzimi sono stati fortemente inibiti dalla pepstatina e anche le reazioni di DAN e EPNP con essi sono state notevolmente inibite dal precedente trattamento con pepstatina. Questi risultati indicano che i siti attivi di questi enzimi sono abbastanza simili e che presumibilmente hanno in comune almeno due gruppi carbossilici essenziali al sito attivo, uno reattivo con DAN in presenza di ioni rameici e l'altro reattivo con EPNP, come ha già stato dimostrato per la pepsina suina e la renina di vitello. La pepstatina sembra legare almeno una parte del sito attivo di ciascun enzima in modo simile.
Stimolazione in vitro da parte del retinolo dell'attività esterasi pancreatica suina verso gli esteri degli acidi grassi a catena corta.1. Il retinolo ha esercitato un notevole effetto stimolante (circa aumento del 260%), sostanzialmente simile a quello (300%) del fitolo, sulla cosiddetta attività esterasica manifestata dalla lipasi pancreatica grezza [EC 3.1.1.3] verso vere soluzioni di esteri, ma nessuna della tipica attività lipasica verso le emulsioni di esteri insolubili in acqua 2. Il confronto degli effetti stimolatori dei derivati del retinolo sull'attività esterasi ha rivelato che il retinil acetato era il più attivo, essendo sostanzialmente simile nell'effetto al retinolo; il retinale era abbastanza attivo, mentre l'acido retinoico, il retinil palmitato e il i beta-iononi erano molto meno attivi. 3. Con vari composti isoprenoidi, l'efficienza della stimolazione aumentava con la lunghezza della catena di carbonio, raggiungendo un massimo a 15-20 atomi di carbonio. Al di sopra di questa lunghezza della catena l'efficienza diminuiva rapidamente. 4. Confronto di t Gli effetti del retinolo e del fitolo sull'attività esterasi di vari altri enzimi lipolitici hanno indicato che questo tipo di attivatore può essere relativamente specifico per l'attività esterasi pancreatica suina.
Studi a salto di temperatura sull'interazione dell'acido benzeneboronico con il chimotripsinogeno.L'interazione del chimotripsinogeno A con l'acido benzenboronico (BBA), uno stato di transizione lungo inibitore delle serina proteasi, è stato studiato con il metodo del salto di temperatura utilizzando indicatori di pH. È stato riscontrato che l/tau dipende dalla concentrazione di BBA, contrariamente al caso del sistema alfa-chimotripsina [EC 3.4.21.1]-BBA in quale l/tau è indipendente dalla concentrazione di BBA. Esaminando le dipendenze dal pH dei parametri cinetici, è stato analizzato il comportamento di dissociazione acida di His 57 nel chimotripsinogeno, nel complesso chimotripsinogeno-BBA trigonale e nel complesso chimotripsinogeno-tetraedrico BBA. L'effetto cinetico dell'isotopo del deuterio è stato anche esaminato e si è scoperto che si verifica principalmente sulle costanti di dissociazione acida. Lo stato dei residui catalitici nella molecola dello zimogeno è discusso sulla base di questi risultati.
Alcune proprietà catalitiche e molecolari della treonina deaminasi da Bacillus stearothermophilus.La treonina deaminasi [EC 4.2.1.16] è stata altamente purificata da Bacillus stearothermophilus. L'enzima ha mostrato attività massima a 65 gradi e a pH 9,2--9,6. È stato inattivato alla diluizione e alla conservazione a 4 gradi, ma è stato protetto dall'albumina d'uovo L'enzima era labile a 65 gradi, ma è diventato stabile in presenza di albumina d'uovo e isoleucina a pH 7,0. La curva di saturazione del substrato per la reazione enzimatica a 40 o 65 gradi era iperbolica, ma in presenza di isoleucina, la curva diventava sigmoidale (n = 2). L'enzima era più sensibile all'isoleucina a 40 gradi che a 65 gradi, mentre la valina inibiva leggermente l'enzima sia a 40 che a 65 gradi. L'inibizione dell'enzima da parte dell'isoleucina era antagonizzata dalla valina a 40 e 65 gradi. Queste proprietà erano essenzialmente simili a quelle degli enzimi da mesofili e termofili c batteri. L'enzima esisteva in due forme con diverse dimensioni molecolari, 1,5-5 X 10(6) e 2 X 10(5) dalton, a pH 7,0 ea temperature inferiori a 40 gradi. Il componente più grande si è disaggregato in quello piccolo a pH 8,5 o superiore, a temperature superiori a 50 gradi o in presenza di isoleucina e valina.
Enzima di conversione dell'angiotensina I renale come miscela di enzimi sialo e asialo, e un metodo di purificazione rapida.Enzima di conversione dell'angiotensina I [ EC 3.4.15.1] è stato rapidamente e altamente purificato da una frazione particolata di corteccia renale di maiale con una resa del 13%. La procedura, che è stata rapida, ha incluso il frazionamento su DEAE-cellulosa e gel di fosfato di calcio, cromatografie su DEAE-Sephadex A-50 e colonne di idrossiapatite e filtrazione su gel su una colonna Sephadex G-200. La preparazione enzimatica purificata ha fornito due bande proteiche sull'elettroforesi su gel su disco standard, ma ha mostrato un singolo componente proteico sul gel dopo il trattamento con neuraminidasi [EC 3.2.1.18]. suggeriscono fortemente che la preparazione enzimatica purificata fosse una miscela di sialo e asialo-enzima. I residui di acido sialico apparentemente non contribuiscono all'attività catalitica dell'enzima. L'enzima è stato attivato più dagli ioni cloruro che da altri ioni alogenuro testati, usando Bz -Gly-Gly-Gly come substrato. La costante di dissociazione per gli ioni cloruro è stata determinata essere di 2,2 mM. Il cloruro non proteggeva l'enzima dal calore o dal pH basso. L'enzima era resistente all'inattivazione da parte della tripsina [EC 3.4.21.4] e della chimotripsina [EC 3.4.21.1].
Interazione di diiodo-L-tirosina e triiodofenolo con albumina sierica bovina. Studi di dicroismo circolare e fluorescenza.Come studio modello per studiare il meccanismo di legame tra gli ormoni tiroidei e la proteina carrier, l'interazione del diiodo-L-tirosina (DIT) e del triiodofenolo (I3phi) con l'albumina sierica bovina (BSA) è stata studiata mediante metodi di dicroismo circolare (CD) e fluorescenza. il sistema I3phi-BSA, l'effetto Cotton indotto è stato osservato nella regione della lunghezza d'onda vicino a 320 nm. Questo effetto Cotton indotto è stato misurato a vari rapporti molari di ligandi a BSA (L/P). Il valore dell'ellitticità a 319 nm, [theta ]319, nel sistema I3phi-BSA era notevolmente grande rispetto a quello del sistema DIT-BSA, e [theta]319 con un rapporto L/P di uno era -1,96 X 10(4) (gradi cm2 decimole-1) per il sistema I3phi-BSA e -0.1 X 10(4) per il sistema DIT-BSA Le costanti di legame per la combinazione di BSA con una singola molec ule del ligando, calcolate misurando l'estinzione della fluorescenza della proteina, erano 1,33 X 10(5) M(-1) a 15 gradi per il sistema DIT-BSA e 1,6 X 10(9) M(-1) a 28 gradi per il sistema I3theta-BSA. Questi risultati suggeriscono che il legame di I3theta a BSA è più forte di quello di DIT e potrebbe esistere una fessura più congruente con le dimensioni molecolari di I3theta che con quelle di DIT.
Dicroismo circolare vicino ai raggi UV dell'inibitore della tripsina dei fagioli azuki attribuibile a gruppi disolfuro.L'inibitore della tripsina dei fagioli azuki (Phaseolus angularis) mostra un CD spettro con estremo negativo a 280 nm e spalla positiva intorno a 245 nm. Poiché l'inibitore è privo di triptofano e tirosina, lo spettro CD osservato può essere attribuito ai sei gruppi disolfuro nella molecola. Le caratteristiche CD sono completamente scomparse con la riduzione del disolfuro gruppi e convergevano in un unico estremo negativo a 270 nm quando i gruppi venivano modificati per formare disolfuri misti con glutatione. Queste osservazioni sulle proprietà CD dell'inibitore suggeriscono fortemente la presenza di gruppi disolfuro vincolati rispetto ai loro angoli diedri.
Legame degli analoghi del substrato al lisozima dell'albume d'uovo di gallina con un legame estere tra Glu 35 e Trp 108.Le interazioni degli analoghi del substrato beta- metil-GlcNAc, (GlcNAc)2 e (GlcNAc)3 con lisozima di albume d'uovo di gallina [EC 3.2.1.17] in cui si era formato un legame estere tra Glu 35 e Trp 108 (lisozima estere 108), sono stati studiati dal tecniche circolari dicroiche e di fluorescenza, e sono state confrontate con quelle per il lisozima intatto. Le costanti di legame del beta-metil-GlcNAc e (GlcNAc)2 a 108 estere lisozima erano essenzialmente le stesse di quelle per il lisozima intatto nell'intervallo di pH da 1 a 5 Al di sopra del pH 5, le costanti di legame di questi saccaridi al lisozima estere 108 non sono cambiate con il pH, mentre le costanti di legame al lisozima intatto sono diminuite. Ciò indica che Glu 35 (pK 6.0 nel lisozima intatto) partecipa al legame di questi saccaridi. L'estensione e la direzione degli spostamenti di pK di Asp 52 (pK 3.5), Asp 48 (pK 4.4) e Asp 66 (pK 1.3) osservati quando il beta-metil-GlcNAc è legato al lisozima estere 108 erano gli stessi del lisozima intatto. Anche la partecipazione di Asp 101 e Asp 66 nel legame del (GlcNAc)2 al lisozima estere 108 era la stessa di quella del lisozima intatto. Questi risultati indicano che le conformazioni dei sottositi B e C non sono cambiate dalla formazione del legame estere. D'altra parte, le costanti di legame del lisozima estere da (GlcNAc)3 a 108 erano superiori a quelle del lisozima intatto a tutti i valori di pH studiati. Questo risultato è interpretato in termini di aumento dell'affinità per un residuo GlcNAc del sottosito D, che è situato vicino al Glu 35 esterificato.
Interazioni di alfa- e beta-N-acetil-D-glucosamine con lisozimi di gallina e tacchino.Le costanti di legame di alfa- e beta- GlcNAc ai lisozimi di gallina e tacchino [EC 3.2.1.17] sono stati determinati a vari pH\' utilizzando il metodo proposto da Ikeda e Hamaguchi (1975) J. Biochem. 77, 1-16). GlcNAc al lisozima di gallina era essenzialmente lo stesso di quello per il lisozima di tacchino. Le curve di dipendenza dal pH delle costanti di legame del beta-GlcNAc ai lisozimi di gallina e di tacchino sono state interpretate in termini di partecipazione di Glu 35 (pK 6.0), Asp 52 (pK 3.5), Asp 48 (pK 4.5) e Asp 66 (pK 1.5). Le costanti di legame di alfa-GlcNAc ai lisozimi di gallina e tacchino erano le stesse al di sotto del pH 3.5 ma erano diverse al di sopra di questo pH. I principali residui partecipanti al legame di alfa-GlcNAc erano Glu 35, Asp 48 e Asp 66 per il lisozima di gallina e Glu 35 e Asp 66 per il lisozima di tacchino. I risultati ottenuti qui sono stati ben spiegati dal fol presupposti negativi: (1) al di sopra di circa pH 4, l'alfa-GlcNAc si lega al lisozima di gallina in entrambe le modalità alfa e beta, che corrispondono all'orientamento di legame di alfa-GlcNAc e a quello di beta-GlcNAc, rispettivamente, come determinato da X studi cristallografici a raggi, ma si lega prevalentemente in modalità beta al di sotto di circa pH 4, (2) il beta-GlcNAc si lega ai lisozimi di gallina e tacchino prevalentemente in modalità beta sopra circa pH 4 e sia in modalità alfa che beta al di sotto del pH 4, e (3) l'alfa-GlcNAc si lega al lisozima di tacchino prevalentemente in modalità beta sull'intero intervallo di pH studiato.
Interazioni su derivati 3-deossi e 6-deossi di N-acetil-D-glucosamina con lisozima di gallina.Le interazioni dei derivati deossi di GlcNAc , 6-deossi-GlcNAc e 3-deossi-GlcNAc con lisozima di albume d'uovo di gallina [EC 3.2.1.17] sono stati studiati a vari pH\' misurando i cambiamenti nella banda dicroica circolare (CD) a 295 nm. mostrato che 6-deossi-GlcNAc e 3-deossi-GlcNAc si legano al sottosito C del lisozima e competono con GlcNAc. La dipendenza dal pH della costante di legame di 6-deossi-GlcNAc era la stessa di quella di GlcNAc. D'altra parte, le costanti di legame di 3-deossi-GlcNAc erano 3--10 volte inferiori a quelle di GlcNAc nell'intervallo di pH da 3 a 9. Studi cristallografici a raggi X mostrano che O(6) e O(3) di GlcNAc al sottosito C sono legati a idrogeno all'indolo NH\'s di Trp 62 e Trp 63, rispettivamente, ma i risultati di cui sopra indicano che Trp 63, non Trp 62, è importante per l'interazione di GlcNAc con lisozima.
Subunità della fosfatasi alcalina di Bacillus licheniformis: studi chimici, fisico-chimici e di dissociazione.La fosfatasi alcalina (fosfatasi ortofosforica monoestere, EC 3.1.3.1 ) di Bacillus licheniformis MC14 è stato studiato nel tentativo di determinare il numero di subunità contenute nell'enzima nativo di peso molecolare 120.000. Due moli di arginina sono state liberate per mole di enzima nativo dalle carbossipeptidasi A e B in presenza di sodio dodecil solfato L'effetto sull'enzima nativo di abbassare progressivamente il pH del tampone solvente è stato monitorato determinando il peso molecolare mediante analisi dell'equilibrio di sedimentazione, il coefficiente di sedimentazione, il coefficiente di attrito e il contenuto percentuale di alfa-elica dell'enzima. La fosfatasi alcalina si dissocia in due subunità intorno a pH 4. A pH 2,8 si osserva un'ulteriore diminuzione del valore S, ma nessun cambiamento nel peso molecolare, che indica un cambiamento di conformazione. i coefficienti razionali e il contenuto percentuale di alfa-elica concordano con questa interpretazione. È stato calcolato un peso molecolare della subunità di 59.000 da gel di sodio dodecil solfato.
Regolazione del fotosistema II della sintesi delle macromolecole nell'alga blu-verde Aphanocapsa 6714.Polimeri sintetizzati da colture eterotrofiche (glucosio come fonte di carbonio) di Aphanocapsa 6714 sono stati confrontati con polimeri sintetizzati in colture fotosinteticamente coltivate. La perdita del fotosistema II mediante incubazione al buio, o inibizione delle cellule cresciute alla luce con l'inibitore specifico del fotosistema II diclorofenilmetilurea, ha causato una riduzione dell'80-90% del tasso di lipidi e ribonucleico totale sintesi acida e una riduzione di oltre il 90% nel tasso di sintesi proteica. Al contrario, la sintesi del glicogeno è stata ridotta solo del 50% circa nelle cellule scure e meno del 30% nelle cellule inibite dalla diclorfenilmetilurea. Dopo una crescita eterotrofica più lunga, il glicogeno è diventato il componente principale, mentre nelle colture fotosintetiche la proteina era il costituente principale.14C (da 14CO2 e/o [14C]glucosio) assimilato nella proteina da cellule cresciute in modo eterotrofico w come si trova negli amminoacidi in quasi le stesse proporzioni delle cellule cresciute fotosinteticamente. Pertanto, le vie di biosintesi disponibili per le cellule autotrope erano disponibili anche per le colture eterotrofiche, ma la fornitura di precursori del carbonio a tali vie era notevolmente ridotta. La limitata biosintesi nelle cellule eterotrofi non era dovuta a una limitazione dell'energia cellulare. Gli adenilati sono stati mantenuti quasi alle stesse concentrazioni (e quindi anche la carica energetica) delle cellule fotosintetiche. La concentrazione di nicotinammide adenina dinucleotide fosfato ridotta era maggiore nelle cellule eterotrofiche (scure) rispetto alle cellule fotosintetiche. Dai tassi di fissazione della CO2 e/o biosintesi del glicogeno è stato determinato che le cellule in fase stazionaria hanno consumato circa 835, 165 e meno di 42 nmol di adenosina 5\'-trifosfato per mg (peso secco) di alghe per 30 min durante la fotosintetica, metabolismo fotoeterotrofico e chemioeterotrofio rispettivamente. L'analisi dei pool di metaboliti solubili in colture eterotrofiche scure mediante esperimenti di doppia etichettatura ha rivelato un rapido equilibrio del 14C attraverso i pool di monofosfato, ma un movimento molto più lento del marchio nei pool di difosfato di fruttosio-1,6-difosfato e sedoeptulosio-1,7- difosfato. Il carbonio è fluito nel 3-fosfoglicerato al buio; tuttavia, la velocità iniziale era bassa e la concentrazione di questo metabolita è presto scesa a un livello non rilevabile. Nelle cellule fotosintetiche, il 14C si equilibra rapidamente attraverso tutti gli intermedi del ciclo riduttivo del pentosio, in particolare, in 3-fosfoglicerato. L'analisi della glucosio-6-fosfato deidrogenasi negli estratti cellulari ha mostrato che l'enzima era molto sensibile all'inibizione del prodotto da parte della ridotta nicotinammide adenina dinucleotide.