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Identificazione di un'attività ribonucleasi P-like da cellule KB umane.Un'endoribonucleasi che scinde le molecole precursori del tRNA è stata parzialmente purificata dalla coltura di tessuti KB umani cellule. Questa attività si trova nelle frazioni citoplasmatiche ma non è rilevabile nel nucleoplasma. Le molecole precursori del tRNA da entrambe le cellule di E. coli e KB vengono scisse da questa nuova attività per produrre oligonucleotidi 5\' terminati con fosfato. E coli RNAasi P e il La nucleasi delle cellule KB produce entrambe una singola scissione endonucleolitica nel precursore tRNATyr di E. coli, separando così i 41 nucleotidi extra all'estremità 5\' della molecola precursore dalla sequenza terminale 5\' della molecola tRNATyr matura. altri precursori del tRNA di E. coli dall'attività delle cellule KB sono di dimensioni identiche a quelle prodotte dalla RNAasi P. L'endoribonucleasi delle cellule KB richiede Mg2+ e un catione monovalente (Na+, K+ o NH4+) per funzionare. L'attività ha un ampio pH ottimale, centrato vicino a pH 8,0, e l'attività è inibita dal tRNA. Diversi RNA delle cellule KB con lunghe emivite in vivo, inclusi 5S e RNA 4S di massa, non vengono scissi da questa nucleasi. L'endoribonucleasi delle cellule KB assomiglia alla RNAasi P di E. coli nella sua specificità di substrato, pH ottimale, requisiti di ioni e sensibilità al tRNA. Queste proprietà e la localizzazione citoplasmatica della nuova endoribonucleasi indicano il suo coinvolgimento nella biosintesi del tRNA delle cellule KB.
L'isolamento delle lectine su agarosio trattato con acido.La capacità di diverse lectine che legano il D-galattosio e N-acetil-D-galattosamina a Lectine da soia, Wistaria floribunda, Bauhinia purpurea alba e Sophora japonica potrebbero essere isolate mediante cromatografia di affinità su Sepharose 6B trattato con acido. Queste lectine non si legherebbero a Sepharose 2B, 4B e 6B non trattati. di B. purpurea alba e S. japonica era dipendente dalla temperatura. La lectina di S. japonica si legava solo a pH elevato. Anche la tossina di Ricinus communis mostrava una dipendenza dalla temperatura del legame; Sepharose 6B trattato con acido era un supporto di affinità migliore per il tossina di quella non trattata di Sepharose 4B Le lectine di fagiolo di lima, Dolichos biflorus e fitoemoagglutinina di fagiolo non si sono legate a Sepharose in nessuna delle condizioni studiate.
Comportamento delle attività della transaldolasi (EC 2.2.1.2) e della transchetolasi (EC 2.2.1.1) nel fegato normale, neoplastico, differenziante e rigenerante.L'obiettivo di questa indagine è stato quello di gettare luce sul comportamento biologico e sulla regolazione metabolica degli enzimi epatici del ramo non ossidativo della via dei pentoso fosfati. Le attività della transaldolasi (EC 2.2.1.2) e della trasketolasi (EC 2.2.1.1) sono state confrontate in condizioni biologiche che coinvolgono la modulazione dell'espressione genica come nella fame, nel differenziamento, dopo epatectomia parziale e in uno spettro di epatomi di diversi tassi di crescita. Le attività enzimatiche sono state determinate in condizioni cinetiche ottimali mediante metodi spettrofotometrici nei liquidi supernatanti da 100.000 X g preparato da omogenati tissutali. Le proprietà cinetiche della transaldolasi e della transchetolasi erano simili nel fegato normale e nell'epatoma a rapida crescita 3924A. Per la transaldolasi, valori di Km apparenti di 0,13 mM (fegato normale) e 0,17 mM (epatoma) sono stati osservati per l'eritrosio 4-fosfato e da 0,30 a 0,35 mM per il fruttosio 6-fosfato. Il pH ottimale nel fegato e nell'epatoma era di circa 6,9-7,2. Per i substrati della transchetolasi, ribosio 5-fosfato e xilulosio 5-fosfato, i valori di Km apparente erano rispettivamente di 0,3 e 0,5 mM, sia nel fegato che nell'epatoma. In entrambi i tessuti è stato osservato un ampio valore ottimale di pH intorno a 7,6. Negli studi sulla distribuzione degli organi, le attività enzimatiche sono state misurate nel fegato, nella mucosa intestinale, nel timo, nei reni, nella milza, nel cervello, nel tessuto adiposo, nel polmone, nel cuore e nel muscolo scheletrico. Considerando l'attività specifica del fegato pari al 100%, l'attività della transaldolasi è risultata massima nella mucosa intestinale (316%) e nel timo (219%); era il più basso nel cuore (53%) e nel muscolo scheletrico (21%). L'attività della transchetolasi era massima nei reni (155%) e minima nel cuore (26%) e nel muscolo scheletrico (23%). La fame ha ridotto le attività della transaldolasi e della transchetolasi in 6 giorni al 69 e al 74%, rispettivamente, di quelle del fegato del ratto normale alimentato. Questo era nello stesso intervallo della diminuzione della concentrazione proteica (66%y. Nei tumori epatici, l'attività della transaldolasi era aumentata da 1,5 a 3,4 volte rispetto alle attività osservate nel normale fegato di ratto di controllo. L'attività della transchetolasi non ha mostrato alcuna relazione con il tumore tasso di proliferazione. Nel fegato rigenerante a 24 ore dopo epatectomia parziale, l'attività di entrambi gli enzimi della via del pentoso fosfato era nella stessa gamma di quella dei controlli simulati. Nella differenziazione all'età postnatale di 5, 12, 23 e 32 giorni, le attività della transaldolasi epatica erano rispettivamente 33, 44, 55 e 72% delle attività osservate nel ratto maschio adulto di 60 giorni. Durante lo stesso periodo, le attività della transchetolasi erano 18, 21, 26 e il 55% delle attività osservate nel fegato di ratto adulto. La dimostrazione di un aumento dell'attività della transaldolasi negli epatomi, indipendentemente dal grado di malignità, differenziazione o tasso di crescita del tumore, suggerisce che la riprogrammazione dell'espressione genica nei tumori maligni la trasformazione delle formiche è collegata ad un aumento dell'espressione di questo enzima della via del pentoso fosfato...
L-Asparagina sintetasi nel siero come marker di neoplasia.L-Asparagina sintetasi compare nel siero circa 7 giorni dopo l'impianto sc di 1 X 10(5) cellule di Leucemia 5178Y/AR (resistente alla L-asparaginasi) e aumenta di attività man mano che la neoplasia cresce e metastatizza. La fonte principale dell'enzima è il tumore primario. Dopo l'inoculazione intravraniana del tumore, il tasso di perdita di l'enzima è più pronunciato rispetto a quando vengono utilizzate le vie sottocutanee, intramuscolari o intraperitoneali 1-(2-cloroetil)-3-cicloesil-1-nitrosourea (NSC 79037), una nitro-sourea efficace nel palliazione di L5178Y/AR , interrompe temporaneamente l'afflusso di enzima nel flusso sanguigno, così come l'escissione chirurgica dei noduli tumorali sc. Il trattamento di topi con L-asparaginasi entro 24 ore dall'inoculazione del tumore aumenta notevolmente sia la crescita del tumore che il tasso di penetrazione di L- asparagina sintetasi nella circolazione Diversi altri L-asparagi ne sintetasi in circolo. Si è scoperto che anche molti altri tumori resistenti alla L-asparaginasi riversano la L-asparagina sintetasi nel siero, ma la correlazione tra questo fenomeno e l'attività specifica dell'enzima negli omogenati del tumore era imperfetta.
Istituzione e caratterizzazione di linee cellulari di neuroblastoma umano.Tre nuove linee cellulari di coltura tissutale, CHP-100, CHP-126 e CHP-134, sono state stabilite da colture espianti di neuroblastoma umano. Le linee cellulari sono state caratterizzate rispetto alla morfologia, alla costituzione dei cromosomi, alla crescita, al contenuto di enzimi neurali e alla loro capacità di crescere in topi nudi. Le cellule crescono come masse dense composte da fibroblasti o cellule simili a neuroblasti con piccoli processi Le linee cellulari differiscono nella loro attività enzimatica neurale Il contenuto cromosomico delle 3 linee cellulari è vicino al diploide e tutte sono in grado di formare tumori nei topi nudi I risultati morfologici indicano che le cellule in coltura assomigliano a quelli trovati nel tumore e le attività enzimatiche sono coerenti con quelle del tessuto nervoso. Ciò le proprietà morfologiche, biochimiche e tumorigeniche confermano che le 3 linee cellulari sono cellule neoplastiche di origine neurale.
Riduzione non enzimatica di benzo(a)pirene diol-epossidi a triidrossipentaidrobenzo(a)pirene mediante ridotta nicotinammide adenina dinucleotide fosfato.Il diol-epossido r -7,t-8-diidrossi-t-9,10-ossi-7,8,9,10-tetraidrobenzo(a)pirene è un potente mutageno e forse l'ultima forma cancerogena del benzo(a)pirene. /8,9)-triidrossi-7,8,9,10,10-pentaidrobenzo(a)pirene è formato dal diolo-epossido r-7,t-8-diidrossi-t-9,10-ossi-7, 8,9,10-tetraidrossibenzo(a)pirene per riduzione con ridotta nicotinammide adenina dinucleotide fosfato La sua formazione è lineare con ridotta concentrazione di nicotinammide adenin dinucleotide fosfato e non richiede la presenza di enzima A (7,9/8)-triidrossi -7,8,9,10,10-pentaidrobenzo(a)pirene è formato in modo simile dal diolo-epossido r-7,t-8-diidrossi-c-9,10-ossi-7,8,9,10- tetraidrobenzo(a)pirene per riduzione con ridotto nicotinammide adenina dinucleotide fosfato. Le strutture del triidrossipentaidrobenzo(a) ) i pireni sono stati stabiliti dal loro assorbimento ultravioletto e dagli spettri di massa e dalla loro reazione con triacetilsmato di potassio.
Formazione in microsomi isolati di fegato di ratto e nuclei di metaboliti del benzo(a)pirene che si legano al DNA.La frazione nucleare epatica isolata dal 3-metilcolantrene I ratti trattati con (MC) contenevano livelli aumentati di citocromo P-450 e aril idrocarburo idrossilasi [benzo(a)pirene (BP) monoossigenasi], mentre le attività dell'epossido idrasi e della ridotta nicotinammide adenina dinucleotide fosfato-citocromo c reduttasi e la concentrazione di il citocromo b5 non è stato alterato. Il pattern dei metaboliti della PA è stato studiato mediante cromatografia liquida ad alta pressione ed è risultato essere simile nei nuclei e nei microsomi di ratti trattati con MC. Dopo l'incubazione della frazione nucleare con [3H]BP e ridotta nicotinammide adenina dinculeotide fosfato, la radioattività è risultata associata al DNA nucleare e l'entità del legame è stata notevolmente aumentata dal pretrattamento degli animali con MC. Il legame è stato fortemente inibito dall'a-naptoflavone ma non è stato influenzato da 1,1,1-tricloropropene-2,3-ossido, un inibitore dell'epossido idrasi. In presenza di microsomi di ratti trattati con MC, è stato osservato un aumento del legame di BP al DNA nei nuclei sia di ratti di controllo che di ratti trattati con MC; inoltre, quando il DNA nucleare è stato sostituito da una quantità corrispondente di DNA del timo di vitello, l'entità del legame è stata notevolmente aumentata. A differenza dei nuclei dei ratti di controllo, la frazione nucleare dei ratti trattati con MC ha mostrato un aumento della radioattività legata quando incubata con un surnatante privo di microsomi, ottenuto incubando microsomi da ratti trattati con MC con [3H]BP. L'aumento dell'entità del legame è stato eliminato in presenza di menadione o alfa-naftoflavone. Si suggerisce che nelle condizioni qui utilizzate i seguenti diversi processi potrebbero aver contribuito all'incorporazione totale dei prodotti BP nel DNA nucleare: (a) formazione di prodotti leganti il DNA derivati da BP da parte dell'aril idrocarburo idrossilasi nucleare; (b) formazione di prodotti che legano il DNA da metaboliti microsomiali della BP mediante aril idrocarburo idrossilasi nucleare; e (c) trasferimento diretto di metaboliti microsomiali reattivi al DNA nucleare.
Immunoterapia adottiva di un linfoma che produce Gross virus e di un fibrosarcoma indotto da metilcolantrene in ratti tolleranti.Tolleranza immunologica agli antigeni di trapianto specifici del virus lordo nei ratti dato il trasferimento neonatale di cellule linfoidi del donatore sotto la capsula renale di ratti riceventi singenici Le cellule donatrici immuni o normali hanno invariabilmente sviluppato una reazione immunitaria cellulo-mediata nei reni dei riceventi tolleranti al GV, presumibilmente contro gli antigeni del GV presenti sulla superficie delle cellule linfoidi del ricevente in il rene. Le cellule della milza e dei linfonodi di ratti tolleranti non sono riusciti a sviluppare una reazione nei riceventi tolleranti, ma hanno sviluppato una forte reazione agli antigeni istoincompatibili nei reni di ratti tolleranti semisyngenici. Lo stato immunologicamente tollerante nei ratti potrebbe essere interrotto dal trasferimento adottivo di milza e cellule linfonodali di ratti singenici immunizzati con cellule di linfoma indotto da GV Immunoterapia di un infezione da GV e anche da GV d Il fibrosarcoma indotto da metilcolantrene che cresce in ratti tolleranti ha avuto successo quando le cellule immunitarie della milza e dei linfonodi sono state somministrate i. p. 3 giorni dopo s. c. inoculazione di 2 X 10(7) cellule tumorali nel caso del linfoma e 1 giorno dopo l'inoculazione di 5 X 10(6) cellule tumorali nel caso del fibrosarcoma.
Uso di droghe psicotrope tra le donne.Il consistente rapporto 2:1 tra donne e uomini nel ricevere prescrizioni di psicofarmaci si riflette nella maggiore tassi per le donne di malattie nevrotiche, sintomi di disagio sia fisico che mentale e comportamento di ricerca di aiuto e di assunzione di droghe. Le percezioni dei medici sui problemi presentati dai loro pazienti maschi e femmine influenzano la loro prescrizione di questi farmaci. Statistiche recenti in Ontario indicano che un maggiore uso dei servizi medici da parte delle donne è una spiegazione inadeguata del più alto tasso di prescrizione di farmaci psicotropi alle donne. Uno studio longitudinale su un'ampia popolazione assicurata in Ontario ha mostrato che quasi il doppio della proporzione di donne, rispetto agli uomini, ricevuto una prescrizione di farmaci psicotropi nel 1970-71 e nel 1973-74, una percentuale maggiore di donne ha ricevuto più prescrizioni per ciascuna classe di farmaci e i maschi avevano più probabilità delle femmine di aver ricevuto solo una ricetta in un anno.
Caratterizzazione di un ceppo di Methanospirillum hungatti.I risultati di studi morfologici, del rapporto di base, nutrizionali, della temperatura e del pH su un ceppo di Methanospirillum hungatii , isolati da un digestore anaerobico di rifiuti di pera, sono descritti L'isolato, designato come ceppo GP 1, è stato confrontato con alcune delle caratteristiche del ceppo tipo M. hungatii JF 1. Il ceppo GP 1 è Gram-negativo, debolmente mobile e un anaerobio stretto con un contenuto di guanina più citosina (G + C) del 46,5% in moli. I substrati preferiti per la produzione di metano sono idrogeno, anidride carbonica e formiato. L'acetato viene utilizzato in determinate condizioni ma il suo contributo specifico al carbonio cellulare e (o ) la formazione di metano non è stata stabilita. La temperatura ottimale sia per la crescita che per la produzione di metano è di 35 gradi C, ma la crescita e la produzione di metano si verificano nell'intervallo 25-45 gradi C. La produzione di metano è ottimale a pH 7,0.
Trasporto di fenilalanina da parte di conidi di Fusarium sulphureum.L-fenilalanina è stata attivamente trasportata da conidi di Fusarium sulphurenum Schlect (isolato 1). L'assorbimento è stato ottimale a pH 7, 30 gradi C; dipendente dalla respirazione; e non era influenzato da concentrazioni interne relativamente elevate di fenilalanina. Il Km per il trasporto era 1-3 X 10 (-5) M e il Vmax era 2,5-4 nmol/min per milligrammo peso secco. La fenilalanina è trasportata da un sistema di trasporto generale per gli amminoacidi basici e neutri. Il saccarosio ha represso l'assorbimento della fenilalanina e questa repressione è stata ampiamente negata dalla cicloesimide. L'efflusso della fenilalanina accumulata era dipendente dall'afflusso; questo sistema di trasporto si è deteriorato lentamente con l'invecchiamento del cultura conidiale.
Ruoli dell'uso di fonti a basso pH, carbonio e azoto inorganico nella formazione di clamidospore da parte di Fusarium solani.Citrato e malato erano fonti più povere di carbonio esogeno rispetto a diversi zuccheri esosi, pentosi o disaccaridi per supportare la germinazione dei macroconidi da parte di Fusarium solani ad alta densità di conidi (1 X 10 (5) condi/ml). Tuttavia, solo il citrato non è riuscito a bloccare la morfogenesi della clamidospore a un livello paragonabile al glucosio o ad altri facilmente usati zuccheri. Per lo più clamidospore immature si sono formate in presenza di citrato. A bassa densità di conidi (5 X 10 (3) conidi/ml), la germinazione dei macroconidi esogena indipendente dal carbonio e la successiva rapida formazione di calmidospore sui tubi germinali non è stata inibita dall'ammonio o dal nitrato azoto. Il mezzo tamponato con citrato-fosfato, a basso pH (4,0) di Cochrane ha indotto una formazione di clamidospore più immatura da parte di F. solani rispetto a un mezzo a pH 6,0, ma in entrambi i terreni si sono formate poche clamidospore mature. yphal citoplasma nello sviluppo di clamidospore, un carattere tipico della formazione di clamidospore, non si è verificato in modo esteso e macroconidi, ife e clamidospore immature si sono colorate profondamente con Sudan III, suggerendo la biosintesi dei lipidi. Questa inibizione della maturazione delle clamidospore può essere dovuta in parte alla carenza di azoto imposta dall'elevato rapporto C:N del terreno e dalla presenza di citrato. Solo cellule ifali vescicolate sono state formate da F. solani f. sp. phaseoli in entrambi i media. I terreni di campo a cui è indigeno il clone di F. solani utilizzato avevano valori medi di pH compresi tra 5,2 e 6,0.
Fattori che influenzano il tasso di formazione di metano dall'acido acetico mediante colture metanogeniche arricchite.Una coltura di arricchimento stabile che converte l'acido acetico in metano è stata ottenuta con successo da una pera digestore di rifiuti, utilizzando una soluzione di substrato sintetico con acido acetico come principale fonte di carbonio. Questa coltura di arricchimento ha convertito fino a 10 mmol di acido acetico per litro al giorno a 35 gradi C e non ha utilizzato idrogeno o acido formico in quantità apprezzabili come substrato per produzione di metano in sostituzione o in aggiunta all'acido acetico. Il tasso di conversione dell'acido acetico in metano era massimo a una temperatura di 40-45 gradi C, a un pH compreso tra 6,5 e 7,1 ed è stato influenzato negativamente dall'esposizione all'aria, agenti riducenti e alte concentrazioni di sale. La velocità di conversione era indipendente dalla concentrazione di acido acetico tra 0,2 e 100 mM, ma diminuiva notevolmente a concentrazioni inferiori a 0,2 mM.
Produzione di volatili da tessuti vegetali in decomposizione ed effetto di questi volatili su Rhizoctonia solani in coltura.I volatili, di cui NH3 è un componente importante, sono stati si sono evoluti dal tessuto di mais immaturo in decomposizione (c:n9) e hanno colpito R. solani in coltura in due modi: hanno fornito ulteriore azoto al mezzo di crescita in modo che la crescita del micelio fungino aumentasse e hanno aumentato il pH del substrato da 5,5 a 8,2 che ha indotto la melanizzazione del micelio I volatili hanno aumentato la crescita e la pigmentazione dei funghi entro 2 settimane dall'aggiunta di ammendante al suolo. Gli aumenti sono stati concomitanti con la produzione di NH3 dal tessuto del mais. Più NH3 si è evoluto dai tessuti in decomposizione del mais di C: N9 e 17 rispetto a quelli di CN 33 e 81. Maggiore crescita e la pigmentazione si è verificata nelle boccette attraverso le quali sono stati fatti passare i volatili provenienti dal mais in decomposizione (C:N9) rispetto ai flaconi attraverso i quali sono stati fatti passare i volatili dal terreno non modificato o dal mais in decomposizione (C:N81). Anidride carbonica dai tessuti in decomposizione d non ha influenzato la crescita o la pigmentazione. Il doppio di NH3 si è evoluto dal tessuto di mais (C:N9) che si decomponeva nel terreno saturo rispetto al tessuto che si decomponeva nel terreno al 50% della sua capacità di trattenere l'acqua. La produzione di pigmenti è raddoppiata in condizioni di saturazione.
Alcune proprietà della p-cumarato decarbossilasi da Cladosporium phlei.Il pH e la temperatura ottimali della p-cumarato decarbossilasi erano rispettivamente di 6,0 e 23 gradi C. L'attività enzimatica è stata ridotta a tre quarti mediante trattamento termico a 35 gradi C per 5 minuti e della metà a 25 gradi C in 24 ore, ma mantenuta pressoché invariata a -20 gradi C almeno per 10 giorni. L'attività non è stata inibita da cianuro di potassio, dietilditiocarbammato di sodio, sale disodico dell'acido etilendiamminotetraacetico o citrato di sodio a una concentrazione di 10 mM, ma è stato inibito da p-cloromercuribenzoato o iodoacetato a 0,1 mM, l'inibizione del primo essendo prevenuta in larga misura dalla presenza di glutatione ridotto o ditiotreitolo. L'attività è stata inibita dall'acido cinnamico dell'acido maleico o dall'acido p-metossicinnamico, ma non dall'acido fumarico, dall'acido acrilico, dal p-idrossistirene, dall'acido p-idrossifenilacetico della furcatina o dall'acido floretico. Un gruppo p-idrossi non sostituito o n l'anello benzenico e una catena laterale di acido acrilico erano necessari per l'attività enzimatica. Il valore del km per l'acido trans-p-cumarico era di circa 6,5 X 10 (-4) M.
La dipendenza degli strati superficiali di Spirillum putridiconchylium da Ca2+ o Sr2+.Gli agenti chelanti hanno interrotto gli strati superficiali dello Spirillum putridiconchylium e l'assorbimento di ferritina cationizzata ha indicato che sia la superficie superiore che quella inferiore dei frammenti dello strato superficiale, così come la superficie della membrana esterna, possedevano aree caricate negativamente. La crescita del batterio in casaminoacidi all'1% (senza vitamine) ha portato a cellule prive degli strati superficiali, e colorazione negativa di queste cellule rivelata nel precipitato amorfo insieme a un componente vescicolare della membrana esterna che estrude dalle loro superfici nel mezzo L'aggiunta di 1 mM Ca2+ o 1 mM Sr2+ al mezzo di crescita ha prodotto la tipica superficie cellulare regolarmente strutturata, mentre l'aggiunta di uguale concentrazioni di Li+, Na+, K+, Mg2+, Ba2+, Mn2+, Fe3+ o tre poliammine hanno prodotto la superficie priva di struttura.
Biosintesi della lisina in Saccharomyces cervisiae: proprietà e determinazione spettrofotometrica dell'attività dell'omocitrato sintasi.E' descritto un saggio rapido per l'omocitrato sintasi (EC 4.1.3.21 ) della via biosintetica della lisina di Saccharomyces cerevisiae La scissione alfa-chetoglutarato-dipendente dell'acetil-coA è stata misurata spettrofotometricamente come diminuzione dell'assorbanza a 600 nm in presenza di 2,6-diclorofenolo-indofenolo ed enzima dal ceppo wild type X2180 Questa attività era presente anche nel citrato sintasi glutammato auxotroph glu3 e l'attività è stata inibita da 5 mM L-lisina. L'acido omocitrico radioattivo è stato ottenuto da una miscela di reazione contenente [1-14C] acetil-coA. L'attività dell'omocitrato sintasi dipendeva da tempo, entrambi i substrati e l'enzima. L'attività ha mostrato un pH e una temperatura ottimali di 7,5-8,0 e 32 gradi C, rispettivamente, ed è stata inibita da agenti chelanti dei metalli e leganti sulfidrile.
Confronto tra talco-Celite e polielettrolita 60 nel recupero di virus dalle acque reflue: sviluppo della tecnica ed esperimenti con campioni multilitri contaminati da poliovirus (tipo 1, Sabin).Per il recupero del virus dalle acque reflue, è stata testata una miscela di talco e celite come possibile sostituto economico del polielettrolita 60 (PE 60). Dopo la regolazione del pH a 6 e l'aggiunta di 45-60 unità formanti placca (PFU)/ ml di poliovirus di tipo I (Sabin) al campione di liquame in esame, 100 ml di esso sono stati fatti passare attraverso uno strato di PE 60 (400 mg) o di talco (300 mg)-Celite (100 mg); il virus adsorbito dallo strato è stato eluito con 10 ml di siero fetale di vitello al 10% (FCS) in soluzione fisiologica (pH 7,2). In questi esperimenti, strati di PE 60 hanno recuperato il 73-80% (media 76%) del virus in ingresso. In confronto, i recuperi del virus con il Gli strati di talco-Celite erano del 65-70% (media 68%). Passaggio di 5 litri di liquami grezzi (contenenti da 50 a 1,26 X 10(5) PFU/100 ml di poliovirus) attraverso il talco (15 g)-Celite ( 5 g) strati e l'eluizione del virus con 50 ml di FCS al 10% in soluzione fisiologica ha dato recuperi del virus del 33-63% (media 49%). Fatta eccezione per la regolazione del pH e la prefiltrazione attraverso due strati di garza per rimuovere i solidi di grandi dimensioni, non è stato rilevato alcun altro pretrattamento del campione. L'applicazione di questa tecnica al recupero di virus indigeni da campioni di campo di acque reflue ed effluenti è stata molto soddisfacente.
Thermothrix thioparus gen. et sp. nov. un chemolitotrofo facoltativo anaerobio facoltativo che vive a pH neutro e temperatura elevata.Thermothrix thioparus gen. et ep. novembre si trova naturalmente in una sorgente calda del New Mexico a una temperatura di 74 gradi C, un pH di 7,0 e una concentrazione di HS di 1 mg/litro L'organismo è gram-negativo, non mobile, 0,5-1,0 X 3 -20 mamma e forma catene cellulari lunghe fino a 1 cm. I filamenti risultanti non possiedono una guaina. Lo zolfo si deposita a livello extracellulare. L'organismo è stato isolato utilizzando un mezzo autotrofico con HS- come fonte di energia e NO3- come terminale accettore di elettroni. Anaerobicamente è richiesto NO2- o NO3-, NO2- è formato da NO3- e non si sviluppa gas osservabile. L'ossigeno può anche essere usato come accettore di elettroni terminale, ma la crescita è scarsa a causa della ridotta solubilità dell'O2 alle temperature richieste per la crescita Le fonti energetiche alternative utilizzate in modo aerobico e anaerobico includono eso se, HS-, SO3- e S2O3=. La temperatura ottimale è di 70-73 gradi C e la crescita avviene da 62 a 77 gradi C. Le caratteristiche termiche e fisiologiche dell'organismo sono confrontate con quelle di Bacillus stearothermophilus, Methanobacterium thermoautotrophicum, Sulfolobus acidocalderius, Thermus aquaticus, Thermus flavus, nonché Thiobacillus denitrificans, essendo quest'ultimo l'unico altro chemolitotrofo anaerobio facoltativo che sia stato isolato e descritto.
Distribuzione ecologica di Spirillum lipoferum Beijerinck.Un sondaggio in vari paesi ha rivelato che lo Spirillum lipoferum Beijerinck che fissa l'N2 è una radice e un abitante del suolo molto comune nei tropici Più della metà dei campioni di erba e suolo raccolti nei paesi tropicali (quattro paesi africani e Brasile) conteneva abbondanti popolazioni di S. lipoferum, mentre meno del 10% dei campioni raccolti nel sud temperato del Brasile, del Kenya e della USA contenevano l'organismo. Vi è un pronunciato effetto vegetazione. Panicum maximum sembra il più favorevole tra le graminacee da foraggio, mentre pochi campioni positivi sono stati trovati sotto la foresta tropicale vergine. Le radici di leguminose contenevano meno S. lipoferum rispetto ai terreni adiacenti. Oltre l'80% di i campioni di radici di cereali (mais, sorgo, frumento e segale) coltivati in campi fertilizzati con PK e Mo, nello stato di Rio de Janeiro, sono risultati positivi Mais e sorgo coltivati in condizioni simili nel Wisconsin contenevano s meno del 10% dei campioni positivi, ma quando i campi di mais sono stati inoculati il 90% dei campioni di radici conteneva S. lipoferum. I terreni alluvionali erano più favorevoli dei terreni collinari erosi. La presenza nel suolo era fortemente dipendente dal pH con un pH intorno a 7, essendo ottimale (coefficiente di correlazione r = 0,90). La presenza sporadica è stata osservata anche in terreni con pH 4,8. Le radici massime di P. sterilizzate in superficie raccolte da terreni con pH compreso tra 4,8 e 7,2 contenevano numeri elevati di S. lipoferum che non erano correlati al pH del suolo (r = 0,41). L'emendamento con malato di suoli acidi non è stato molto efficace nell'aumentare l'attività della nitrogenasi (N2-asi), ma in due suoli con pH superiore a 6,4, è stata ottenuta un'elevata attività di N2-asi dopo 16-48 ore di incubazione. In due suoli di una regione a clima temperato, l'inoculazione con S. lipoferum ha aumentato l'attività dell'N2-asi prodotta dall'emendamento del malato.
Nucleasi extracellulare prodotta da un batterio marino. II. Purificazione e proprietà della nucleasi extracellulare da un Vibrio marino sp.Nucleasi extracellulare prodotta da un Vibrio marino sp. , ceppo No. 2, è stato purificato mediante salatura con solfato di ammonio e cromatografia su colonna DEAE-cellulosa e due volte su colonna Sephadex G-200. La nucleasi è stata eluita come un singolo picco in cui la desossiribonucleasi (DNasi) l'attività e l'attività della ribonucleasi (RNasi) sono apparse insieme. L'elettroforesi su gel di poliacrilammide ha mostrato una singola banda di proteina colorata che aveva sia attività DNasi che RNasi. Il peso molecolare dell'enzima è stato stimato essere di 100.000 dalton. Quando si utilizza un enzima parzialmente purificato dal Colonna DEAE-cellulosa, il pH ottimale per l'attività era 8,0 e l'enzima è stato attivato fortemente da ioni Mg2+ 0,05 M e stabilizzato da ioni Ca2+ 0,01 M. Queste concentrazioni di ioni Mg2+ e Ca2+ sono simili a quelle dei due cationi nell'acqua di mare. In effetti, l'enzima ha rivelato un'elevata attività e una forte stabilità se tenuto in acqua di mare. La presenza di particolato, come polvere di cellulosa, polvere di chitina. Hyflosupercel, caolino e fango marino hanno aumentato la stabilità dell'enzima. Quando la pressione idrostatica è stata aumentata da 1 a 1000 atmosfere, i decrementi dell'attività enzimatica erano più pronunciati a 30 e 40 gradi C che a 25 o 50 gradi C. L'attività enzimatica è stata ripristinata dopo la decompressione a 1 atm a 30 gradi C.
Effetti dell'acidità, dei cationi e del frazionamento alcolico sull'assorbimento dell'eparina dal tratto gastrointestinale.L'eparina è stata introdotta nello stomaco o nel duodeno dei topi separatamente in dosi di circa 250 mg/kg. Un leggero effetto anticoagulante nella circolazione sistemica è stato rilevato nei tempi di coagulazione del sangue intero e nell'inibizione del fattore X. Contrariamente alla maggior parte dei farmaci, è stata assorbita più eparina dallo stomaco che dall'intestino. Soppressione della ionizzazione dell'eparina mediante somministrazione simultanea di acido ha determinato un migliore assorbimento dell'eparina dall'intestino tenue. L'eparina è stata separata con etanolo in cinque frazioni di peso molecolare: I, 17 999; II, 13 i99; III, 10800, IV, 8 700 e V, 6 700. Ciascuno è stato introdotto nel duodeno di topi con acido citrico. La massima ipocoagulabilità è stata prodotta con la frazione IV. Quando somministrata in acqua distillata anziché in acido citrico, questa frazione eparinica non ha prodotto un effetto anticoagulante. Questi s studi hanno dimostrato che il miglioramento dell'assorbimento dell'eparina dal tratto gastrointestinale può essere ottenuto combinando la soppressione della ionizzazione e la selezione della dimensione molecolare.
Studi comportamentali sugli enantiomeri del butaclamol che dimostrano un'assoluta specificità ottica per l'attività neurolettica.Il butaclamol è un membro di una nuova classe chimica per la quale l'attività antipsicotica in nell'uomo è stato dimostrato che il butaclamol, un racemo, è stato risolto nei suoi isomeri ottici ed è stata riscontrata una separazione di attività tra gli enantiomeri (+) e (-). I presenti esperimenti mostrano che a dosi comprese tra 0,1 e 0,3 mg /kg l'enantiomero (+) ha abolito il comportamento stereotipato indotto dall'anfetamina e (b) il comportamento rotazionale nei ratti con lesioni unilaterali nella substantia nigra. Inoltre ha inibito la risposta alla pressione della leva nella procedura di evitamento continua (Sidman), bloccata comportamento di evitamento discriminato e diminuzione della deambulazione e dell'allevamento in campo aperto. Al contrario, l'enantiomero (-) era privo di attività comportamentale a dosi 100-500 volte maggiori. A dosi considerevolmente più elevate (+)-butaclamol antagoniz ed mortalità indotta da adrenalina. Anche in questo caso, il (-)-butaclamol era privo di questa attività. Il significato della specificità ottica assoluta manifestata da un farmaco neurolettico è discusso alla luce dei meccanismi dopaminergici e adrenergici.
Catalessia indotta da morfina o aloperidolo: effetti dell'apomorfina e dei farmaci anticolinergici.Per studiare l'entità del coinvolgimento colinergico nella catalessia indotta da oppiacei, gli effetti di tre farmaci anticolinergici sono stati studiati sulla catalessia indotta dalla morfina. È stata anche esaminata la catalessia indotta da aloperidolo. La catalessi massima nei ratti è stata ottenuta con 30 mg/kg di morfina o 3 mg/kg di aloperidolo. I farmaci anticolinergici atropina, benztropina e scopolamina non erano in grado di per antagonizzare la catalessia indotta da morfina, ma prontamente antagonizzata catalessia indotta da aloperidolo Basse dosi di apomorfina (7,5 mg/kg), d'altra parte, catalessi da morfina prontamente antagonizzati, ma erano necessarie dosi di apomorfina 13 volte più elevate per bloccare l'aloperidolo- catalessia indotta. I risultati sono compatibili con l'idea che la catalessi possa essere mediata attraverso lo striato o l'amigdala; l'antagonismo morfina-dopamina può verificarsi nell'amigdala, mentre la morfina-dopamina-colinergica le interazioni avvengono nello striato.
Effetto degli analoghi strutturali del butaclamol (un nuovo farmaco antipsicotico) sull'acido omovanillico striatale e sull'adenil ciclasi del tubercolo olfattivo nei ratti.Il 3-isopropile (I), 3-cicloesile (II) e 3-fenile (III) analoghi del nuovo farmaco antipsicotico butaclamol, che contiene un gruppo butilico 3-terziario, e i loro rispettivi (+)-enantiomeri, ma non (-)-enantiomeri , ha causato un aumento dose correlato della concentrazione di acido omovanillico striatale nel ratto, indicativo di un aumento del turnover della dopamina (DA); anche il droperidolo ha mostrato questa attività. L'ordine di attività degli enantiomeri (+) era (butaclamol) circa II maggiore di I maggiore rispetto a III. È stata osservata una diminuzione della DA striatale con (+)-I e (+)-III alla dose più alta utilizzata, ma non a metà della dose. Ciascun analogo ha antagonizzato l'aumento indotto da DA in adenil ciclasi (EC 4.6.1.1) attività degli omogenati di tubercolo olfattivo, ordine di attività dei racemati (tranne II) AND (+)-ENANTIOMERI ESSERE (BUTACLAMOL) CIRCA I maggiore di III maggiore di II. Gli enantiomeri (+) del butaclamol e degli analoghi erano da due a quattro volte più potenti dei rispettivi racemi, con (+)-butaclamol e (+)-I che mostravano un'attività generalmente equivalente alla flufenazina. I rispettivi (-)-enantiomeri erano inefficaci indicando una specificità stereochimica per il blocco del recettore DA. Tali analoghi presentati dovrebbero essere utili per chiarire i meccanismi dopaminergici.
Un confronto tra le proteine da 12.000 dalton sintetizzate dai neuroni Aplysia L11 e R15.Le proteine da 12.000 dalton dei neuroni L11 e R15 del ganglio addominale di Aplysia sono state marcate mediante incubazione del ganglio in [3H]leucina e confrontate in termini di localizzazione subcellulare, solubilità in vari mezzi e carica molecolare. Entrambe le proteine sono costituenti citoplasmatici. Il loro comportamento di solubilità è identico: entrambe sono insolubili in mezzi acquosi di bassa e alta forza ionica così come cloroformio-metanolo, ed entrambi sono solubilizzati da Triton X-100 + urea e da LIS. Sono essenzialmente identici nel peso molecolare come determinato dall'elettroforesi su gel SDS ma differiscono per una singola carica per molecola a basso pH L'ampia somiglianza tra queste proteine suggerisce che potrebbero svolgere funzioni simili, mentre la differenza di carica osservata potrebbe essere importante in termini di differenze precedentemente scoperte nella loro elaborazione.
Sviluppo assonale di 5-idrossitriptamina e noradrenalina nell'ileo fetale del coniglio.Captazione assonale di 5-idrossitriptamina (5-HT) da parte è stato studiato l'ileo di coniglio adulto e fetale. Il plesso mienterico adulto ha accumulato trizio quando incubato con 5-HT triziato. Tuttavia, oltre a 5-HT marcato, acido 5-idrossiindolacetico triziato e, quando la monoamino ossidasi (MAO) è stata inibita , nel tessuto sono stati trovati 5-HT-o-glucuronide. Si possono definire due processi di assorbimento che differiscono per affinità. Solo il processo ad alta affinità era saturabile. Ileo fetale ha assunto 5-HT triziato ma la glucuronidazione non si è verificata quando la MAO è stata inibita. L'assorbimento di 5-HT triziato da parte dell'ileo fetale era dovuto a un processo singolo, saturabile, sensibile alla temperatura (Q10 a 27-37 gradi C = 2,4) inibito dall'ouabaina, identico all'assorbimento ad alta affinità riscontrato nel tessuto adulto Questo specifico assorbimento ad alta affinità potrebbe essere trovato già nel 16° d aa di gestazione, 5-8 giorni prima dell'inizio dell'assorbimento di noradrenalina (NE). La radioautografia al microscopio ottico ed elettronico ha rivelato che l'assorbimento di 5-HT era principalmente negli assoni e in una struttura caratteristica chiamata processo espanso, entrambi nel plesso mienterico. Entrambi contenevano vescicole a nucleo denso. Gli assoni non sono stati etichettati da NE triziato fino a dopo 24 giorni e il processo espanso non è mai stato etichettato da NE triziato. Questo studio mostra che l'assorbimento di 5-HT è una proprietà di un sistema distinto di assoni nel plesso mienterico dei mammiferi che si sviluppa prima degli assoni adrenergici durante l'ontogenesi.
Personalità, aspettative e psicoterapia di gruppo.Il documento riporta un'estensione del lavoro sulla rilevanza della personalità e delle aspettative pre-trattamento per l'assegnazione e la risposta di pazienti alla psicoterapia di gruppo. I risultati mostrano che i soggetti che sono interiormente orientati nell'interesse e che hanno un atteggiamento liberale verso una varietà di questioni sociali e un insieme "psicologico" al trattamento sono più sensibili alla psicoterapia di gruppo, vista dai loro terapeuti come oltre che da soli. Coloro che sono indirizzati verso l'esterno nell'interesse e che hanno un atteggiamento conservativo nei confronti della vita e una predisposizione alla cura più "medico-fisica" hanno maggiori probabilità di essere indirizzati alla terapia comportamentale; se indirizzati alla psicoterapia di gruppo sono è probabile che abbandonino o mostrino una risposta molto limitata al trattamento.
Emergenza sintomatica fresca dopo terapia comportamentale intensiva.Il documento riporta un'estensione del lavoro sulla rilevanza della personalità e delle aspettative pre-trattamento per l'assegnazione e la risposta di pazienti alla psicoterapia di gruppo. I risultati mostrano che i soggetti che sono interiormente orientati nell'interesse e che hanno un atteggiamento liberale verso una varietà di questioni sociali e un insieme "psicologico" al trattamento sono più sensibili alla psicoterapia di gruppo, vista dai loro terapeuti come oltre che da soli. Coloro che sono indirizzati verso l'esterno nell'interesse e che hanno un atteggiamento conservativo nei confronti della vita e una predisposizione alla cura più "medico-fisica" hanno maggiori probabilità di essere indirizzati alla terapia comportamentale; se indirizzati alla psicoterapia di gruppo sono è probabile che abbandonino o mostrino una risposta molto limitata al trattamento.
Inondazioni immaginarie ed esposizione a situazioni fobiche reali: cambiamenti durante il trattamento.Questo documento riporta i risultati delle misure adottate durante il trattamento nello studio delle inondazioni immaginarie e l'esposizione a situazioni fobiche reali precedentemente descritte da Mathews, Johnston, Lancashire, Munby, Shaw e Gelder (1976). Su misurazioni settimanali del cambiamento è stata riscontrata una riduzione simile del comportamento fobico in tutti i trattamenti, confermando i risultati precedenti. sono stati anche confermati. Sulle misure degli effetti immediati del trattamento, l'esposizione alla situazione fobica ha avuto effetti positivi consistenti, l'inondazione immaginaria ha avuto un effetto scarso o nullo. Si propone che i trattamenti studiati differiscano nei loro effetti immediati sul comportamento fobico ma abbiano anche l'effetto comune di facilitare il comportamento controfobico al di fuori della situazione di trattamento e che questo è l'agente principale del cambiamento terapeutico.
Inondazione immaginativa ed esposizione a situazioni fobiche reali: esito del trattamento con pazienti agorafobici.Ognuna delle trentasei pazienti agorafobiche ambulatoriali è stata curata da una di tre metodi: 8 sessioni di inondazione immaginale seguite da 8 sessioni di pratica nella situazione reale; 16 sessioni di inondazione e pratica combinate; o 16 sessioni di pratica da sola. Tre terapisti hanno trattato un numero uguale di pazienti in ciascun gruppo, e c'erano alcuni prove che la risposta dei pazienti variava a seconda del terapeuta visto, indipendentemente dal gruppo di trattamento. Non ci sono state differenze significative tra i gruppi di trattamento dopo 8 sessioni, 16 sessioni o dopo sei mesi di follow-up. Si conclude che non ci sono differenze termiche tra gli effetti dei trattamenti che comportano l'esposizione a situazioni fobiche immaginarie o reali o a una combinazione di entrambe, a condizione che i pazienti siano incoraggiati a esercitarsi tra una sessione e l'altra.
La striscia di polmone di gatto come preparazione in vitro delle vie aeree periferiche: confronto tra agonisti dei recettori beta-adrenergici, autacoidi e provocazione anafilattica sulla striscia polmonare e trachea.1 Viene descritto un nuovo preparato in vitro, la striscia polmonare isolata del gatto, per studiare l'effetto diretto dei farmaci sulla muscolatura liscia delle vie aeree periferiche del polmone. Il preparato comprende una sottile striscia di parenchima polmonare che può essere montato in un bagno d'organo convenzionale per la registrazione della tensione isometrica. Le sue risposte farmacologiche sono state caratterizzate e confrontate con la preparazione tracheale isolata del gatto 2 La striscia polmonare ha mostrato un tono intrinseco che è stato rilassato da catecolamine, aminofillina e flufenamato. È stato contratto fortemente da istamina, prostaglandina F2alfa, acetilcolina, composto 48/80, soluzione depolarizzante di potassio e stimolazione del campo di corrente alternata Al contrario, la trachea del gatto non rispondeva all'istam ine e prostaglandina F2alpha e non hanno mostrato un tono intrinseco. 3 (-)-isoprenalina e (-)-adrenalina erano molto più potenti nel rilassare la fascia polmonare rispetto alla trachea. L'ordine di potenza delle risposte di rilassamento a isoprenalina, adrenalina e (+/-)-noradrenalina nella fascia polmonare era isoprenalina maggiore dell'adrenalina maggiore della noradrenalina ma nella trachea era isoprenalina maggiore della noradrenalina maggiore o uguale all'adrenalina. 4 agonisti selettivi dei recettori beta2-adrenergici salbutamolo e terbutalina erano più potenti nella fascia polmonare rispetto alla trachea, suggerendo che i recettori beta2-adrenergici predominavano nella fascia polmonare. Il propranololo era equipotente nell'inibire i rilasci isoprenalinici della fascia polmonare e della trachea, mentre il practololo era molto meno efficace nell'inibire la fascia polmonare rispetto alla trachea, supportando ulteriormente una predominanza di beta2-adrenocettori nella fascia polmonare e beta1-adrenocettori nella trachea. 5 Forti contrazioni di tipo Schultz-Dale sono state provocate sia nelle strisce polmonari che nella trachea dall'antigene Ascaris lumbricoides in gatti attivamente sensibilizzati. È stato dimostrato che la fase iniziale della risposta contrattile della striscia polmonare dopo la stimolazione era dovuta al rilascio di istamina ed era assente nella trachea. La fase ritardata della contrazione che ha richiesto diversi minuti per svilupparsi sia nella striscia polmonare trattata con mepiramina che nella trachea non era dovuta alle prostaglandine E1, F2alfa o bradichinina, il probabile mediatore era una sostanza a reazione lenta dell'anafilassi (SRS-A). 6 Si conclude che la striscia polmonare isolata del gatto è utile come modello in vitro per studiare l'effetto dei farmaci sulla muscolatura liscia delle vie aeree periferiche dei polmoni.
Adrenorecettori della vescica urinaria di cavia.1 Adrenalina, noradrenalina e isoprenalina (5 mug/ml) non hanno influenzato il tono a riposo del vescica isolata di cavia 2 Le catecolamine (1-2 mug/ml) hanno inibito le contrazioni neuronali evocate a varie frequenze di stimolazione, l'inibizione era massima a 2 Hz e minima a 50 Hz. L'isoprenalina ha prodotto la massima inibizione 3 Propranololo ( 0,5 mug/ml) bloccava completamente l'inibizione indotta dalle catecolamine a tutte le frequenze impiegate. Le curve concentrazione-risposta dell'isoprenalina a 2, 10 e 50 Hz erano caratteristicamente spostate dal propranololo (50 ng/ml). ) era totalmente inefficace. 4 In alcuni esperimenti l'adrenalina ha aumentato significativamente il tono della vescica esposta al propranololo; questo effetto potrebbe essere bloccato dalla fenossibenzamina. 5 Le contrazioni della vescica indotte dall'acetilcolina sono state inibite dall'adrenalina (2 tazze/ml); l'inibizione è stata completa tely bloccato da propranololo (0,5 mug/ml). 6 I risultati indicano la presenza di un recettore beta-adrenergico inibitorio e suggeriscono la possibilità di un recettore alfa-adrenergico eccitatorio nella vescica urinaria di cavia.
Il contributo della captazione extraneuronale alla selettività dei vasi sanguigni trachea degli stimolanti dei recettori beta-adrenergici in vitro nelle cavie.1 Le potenze relative a sono stati determinati isoprenalina di isoetarina, terziario butil noradrenalina, salbutamolo, orciprenalina, Me 506, rimiterolo, fenoterolo, carbuterolo e terbutalina su preparazioni isolate di trachea di cavia e vasi sanguigni (arto posteriore perfuso) Tutti i composti erano selettivi per trachea e selettività valori, vale a dire la potenza relativa sulla trachea divisa per la potenza relativa sull'arto posteriore, variavano da 2,3 a 21,4. 2 Le risposte a isoprenalina (il composto di riferimento), terziario butil noradrenalina e isoetarina sono state potenziate sulla trachea da 50 muM di fenossibenzamina (PHB) e da altri inibitori della captazione extraneuronale (ENU). In queste condizioni i valori di selettività di tutti i composti erano prossimi all'unità. 3 Anche i valori di selettività erano prossimi all'unità se calcolati dai dati ottenuto senza inibizione ENU, a condizione che siano stati utilizzati solo quei composti non potenziati da PHB sulla trachea. 4 Si propone che la selettività dei vasi sanguigni trachea mostrata dagli stimolanti beta-adrenergici possa essere causata dall'influenza dell'ENU su di essi, piuttosto che dalla loro capacità di distinguere tra due beta2-adrenergici. 5 Il suggerimento che esistano differenze tra i recettori beta2 adrenergici nella muscolatura liscia respiratoria e vascolare non è supportato dagli esperimenti in vitro descritti.
Resoconto del primo incontro emisferico sulla malattia da meningococco.Il primo incontro emisferico sulla meningite meningococcica si è tenuto a San Paolo e Brasilia il 23-28 febbraio 1976. Organizzato dall'Organizzazione Panamericana della Sanità in collaborazione con il governo del Brasile e altri Stati membri della PAHO, l'incontro aveva tre obiettivi principali: rivedere il tema generale della meningite cerebrospinale e la situazione speciale in Brasile, analizzare l'esperienza maturata in Brasile per quanto riguarda la diagnosi di laboratorio, il trattamento e la riduzione della mortalità tra i pazienti ospedalizzati e sviluppare strategie di prevenzione e controllo basate su una revisione delle conoscenze scientifiche e delle tecniche disponibili per la prevenzione e il controllo della malattia meningococcica.
Una nuova emoglobina alpha2J Oxford gammaF2 resistente agli alcali in una bambina siciliana con talassemia omozigote beta0.Una bambina di 10 mesi con omozigote beta0 talassemia e alphaJOxford, presentando il quadro clinico della beta talassemia omozigote. L'elettroforesi dell'emoglobina ha mostrato tre bande: le prime due con le mobilità dell'emoglobina Hb A2 (1%) e Hb F (69%), rispettivamente, la terza migrante a poco più veloce dell'Hb A (30%). Circa il 30% delle sue catene alfa erano J Oxford che, legata alle sue catene gamma, produceva una nuova emoglobina resistente agli alcali, alfa2 J Oxford gamma F2, che non è stata descritta in precedenza. la sintesi in vitro ha mostrato l'assenza di sintesi della catena beta e un rapporto alfa/non alfa di 2. Il padre del paziente era eterozigote per entrambi i geni Hb J Oxford e beta0 talassemia, la madre portatrice di beta0 talassemia, altri quattro parenti erano portatori di Hb J Oxford, e uno era un carr più di beta talassemia.
Esperimenti fotometrici flash sul ciclo fotochimico della batteriorodopsina.Il ciclo di reazione fotochimica della batteriorodopsina è stato studiato mediante metodi fotometrici flash. Tre diversi intermedi con è stato possibile rilevare i massimi di assorbimento a circa 630 nm, 411 nm e 646 nm. I dati cinetici della presenza di questi intermedi sono stati ottenuti da membrane viola isolate in diversi mezzi e da alobatteri intatti. Un'energia di attivazione di 14,1 +/- 0,4 kcal- mol-1 e di circa 19 kcal-mol-1 per la formazione della batteriorodopsina 411 e rispettivamente della batteriorodopsina 565. Le variazioni di pH nel mezzo causate dal ciclo di reazione della batteriorodopsina sono state rilevate mediante l'uso dell'indicatore di pH verde bromocresolo.
Trasporto di elettroni da parte dei citocromi di tipo C. I. La reazione del citocromo c del cuore di cavallo con i riducenti anionici.La cinetica di riduzione del citocromo c del cuore di cavallo sono stati studiati utilizzando i riducenti ditionito di sodio e ferrocianuro di potassio. La riduzione del ditionito di sodio a pH 7,0 produce costanti di velocità di 2,8 X 10(8)M(-1)sec-1 per SO2 AND 6 X 10(5) M-1 sec- 1 per S2O4 a diluizione infinita. Inoltre, i dati presentati dimostrano la partecipazione di catene laterali di amminoacidi carichi positivamente nel sito di trasferimento degli elettroni. L'effetto del pH sulla riduzione del ferricitocromo c richiede un minimo di due valori di pK per la descrizione (pK1 = 7,0 +/- 0,4, pK2 = 9,3 +/- 0,3). In base ai valori di pK determinati, una o più lisina e uno o più residui con un pK basso sono implicati come residui carichi positivamente che partecipano al trasferimento di elettroni Da un confronto dei tassi di riduzione di varie forme denaturate di citocromo c abbiamo f anguilla che la conclusione più praticabile è che il trasferimento di elettroni avviene in corrispondenza del bordo dell'eme esposto in prossimità delle catene laterali degli amminoacidi sopra indicate. La riduzione del ferrocianuro del citocromo c del cuore di cavallo di ferro avviene in modo cineticamente complesso. Viene descritto un meccanismo che include complessi di ferrocianuro e ferricitocromo c e ferricianuro e ferrocitocromo c. Come è stato trovato per la riduzione del ditionito, una regione caricata positivamente del citocromo c partecipa al trasferimento di elettroni. Combinando i nostri risultati con ferrocianuro e ditionite concludiamo che i dati disponibili sono compatibili con un singolo meccanismo di trasferimento di elettroni. Si suggerisce che la distinzione cinetica tra diversi riducenti risieda nella durata del complesso transitorio formato, con l'ordine ferrocianuro maggiore di S2O4 maggiore di SO2.
Uno studio calorimetrico dell'acido poliguanilico a pH neutro.La struttura dell'acido poliguanilico (poli G) a pH neutro è stata studiata mediante metodi ottici e calorimetrici metodi. Si può dimostrare che divergendo dai risultati precedenti Poly G subisce reversibilmente una transizione termica cooperativa. Le curve di denaturazione termica sono registrate a 253 nm in funzione della concentrazione di ioni sodio. L'entalpia di denaturazione del poli G in soluzione acquosa diluita è determinata a 2,2 kcal/mole g. Si conclude che la parte della struttura ordinata poli G, che dà origine a una transizione cooperativa dipendente dalla temperatura, deriva dalle interazioni di impilamento di basi adiacenti nel singolo filamento.
Cromatografia su gel di enzimi attivi. I. Aspetti sperimentali.Le proprietà di trasporto delle specie enzimatiche attive possono essere studiate efficacemente stratificando una piccola banda di enzimi contenenti campione su una colonna cromatografica su gel precedentemente saturata con substrato La colonna viene scansionata otticamente a intervalli di tempo successivi per ottenere profili che rappresentano l'aspetto del prodotto cromoforo o la scomparsa del substrato cromoforico Questi profili consentono di determinare l'attività specifica e la velocità di trasporto dell'attivo specie. I primi studi sulla meccanica della tecnica stabiliscono la fattibilità di determinare con precisione le proprietà di trasporto delle specie enzimatiche attive cromatografate su colonne di gel. I risultati illustrativi sono presentati per la L-glutammato deidrogenasi e per l'omoserina deidrogenasi studiata sia nelle reazioni diretta che inversa. che le sezioni d'urto di partizione derivate dalle velocità di movimento dell'attività catalitica sono th Sono uguali a quelli determinati dagli esperimenti di saturazione dell'equilibrio che misurano direttamente il grado di partizionamento da parte della proteina. Questi risultati stabiliscono la validità della tecnica per una varietà di studi futuri. La cromatografia su gel enzimatico attivo sembra paragonabile in termini di precisione alla tecnica di sedimentazione enzimatica attiva nelle attuali fasi di sviluppo.
Cambiamenti acido-base di neonati maturi e prematuri in seguito a trasfusione di scambio.I cambiamenti dei valori acido-base di 60 neonati maturi e prematuri trattati mediante scambio sono state seguite trasfusioni. Si potrebbe dimostrare che le conserve di sangue aventi valori di pH acido non causavano acidosi se l'equilibrio acido-base dei pazienti era stato normale prima della trasfusione. Un'acidosi esistente spesso aumentava significativamente nel primo giorno di vita del paziente maturo ma anche negli ultimi giorni nei neonati prematuri. Pertanto, la determinazione dello stato acido-base prima e dopo la trasfusione di tali pazienti sembra essere importante. In caso di acidosi pronunciata la sua correzione ed anche il controllo dei valori acido-base dopo la sono necessarie trasfusioni di scambio.
[Proprietà catalitiche e stabilità della perossidasi di rafano immobilizzata in gel di poliacrilammide].Effetto del gel di poliacrilammide (PAA) sulle proprietà della perossidasi di rafano, immobilizzata da si studiano le modalità di incorporazione nel gel PAA si studiano le proprietà catalitiche dell'enzima immobilizzato si trova che il valore Km e la dipendenza dal pH dell'attività enzimatica sono vicini a quelli dell'enzima solubile, il valore kcat è 3 volte più basso a pH 7,0 PH -vengono studiate la stabilità della perossidasi immobilizzata a 20 gradi C e la termostabilità delle perossidasi solubili e immobilizzate a pH 7.0 nell'intervallo di temperatura da 20 a 81 gradi C. Si trova che la stabilità della perossidasi nel gel PAA diminuisce (in 3 volte a 20 gradi C, e in 17 volte a 56 gradi C). Viene discusso un meccanismo dell'effetto del gel PAA sulle proprietà catalitiche e sulla stabilità della perossidasi.
[Effetti spettrali della denaturazione delle B- e C-ficoeritrine].B-ficoeritrina (B-PhE) dall'alga rossa Porphyridium cruentum e C -ficoeritrina (C-PhE) dall'alga blu-verde Nostoc punctiforma sono stati misurati i loro spettri di assorbimento e fluorescenza a temperatura ambiente e dell'azoto liquido. È stato osservato il drastico cambiamento di fluorescenza e massimi di assorbimento sotto dissociazione delle proteine in subunità. del C-PhE in due subunità (peso molecolare 16 000 e 12 000) è stato rivelato mediante elettroforesi su gel di acrilammide SDS in soluzione SDS allo 0,01% a pH 7,0. Gli spettri di assorbimento delle subunità sia di B-PhE che di C-PhE erano simili L'estinzione della fluorescenza da parte degli ossidanti e la fotoossidazione distruttiva erano trascurabili e aumentavano dopo la denaturazione.
L'ecologia chimica di Biomphalaria glabrata: gli effetti dell'ammoniaca sul tasso di crescita delle lumache giovani.Quando gli esemplari giovanili di Biomphalaria glabrata sono stati sottoposti a concentrazioni di ammoniaca che vanno da 1-100 mug/ml in vari terreni sono stati osservati i seguenti effetti: l'aggiunta di ammoniaca ai terreni tamponati con borato ha causato mortalità Sia i terreni tamponati con borato che quelli tamponati con tris hanno causato una diminuzione del tasso di crescita delle lumache rispetto ai controlli in SSW. I tassi di crescita delle lumache potrebbero essere migliorati aumentando la concentrazione di ammoniaca a soglie critiche, ma ulteriori aumenti oltre queste soglie hanno comportato un'inibizione della crescita. La tossicità dell'ammoniaca nell'acqua ambiente è stata aumentata da un aumento del pH. vengono discusse le possibili cause e il significato ecologico di questi effetti. Vi sono indicazioni che le lumache siano fisiologicamente ben adattate per utilizzare l'ammoniaca quando richiesto e anche per controllarne l'escrezione e assorbimento dal medium.
[Catepsina D dalla milza di cavallo. II. Studio di alcune proprietà enzimatiche].Questo lavoro riporta alcune proprietà enzimatiche della catepsina D della milza di cavallo altamente purificata Viene confrontata la velocità di idrolisi di diverse proteine. Le costanti cinetiche (Km = 4,95 10(-5) M e Vm = 1,76 delta DO/mn/mug) sono state determinate in presenza di un substrato di emoglobina denaturato. del preparato enzimatico viene discusso in funzione del pH, della concentrazione e del tempo di conservazione. Sono descritte alcune indagini riguardanti il sito attivo. I risultati enzimatici e chimici mostrano che i residui dicarbossilici e triptofanilici sembrano essere coinvolti nel processo idrolitico. La catalisi non dipende da residui sulfidrilici o serilici. Diversi sali, in particolare nitrati, nitriti e polifosfati, sono potenti inibitori dell'attività enzimatica.
Distinte 17-chetosteroidi reduttasi testicolari, una nel tessuto interstiziale e una nei tubuli seminiferi. Modulazione differenziale da parte del testosterone e dei metaboliti del testosterone.Il passaggio finale nella biosintesi del testosterone è la riduzione dell'androstenedione, che è catalizzata dall'enzima microsomiale 17-chetosteroide reduttasi. Sono presentate prove che suggeriscono che ci sono due distinte 17-chetosteroide reduttasi nei testicoli di ratto, una nel tessuto interstiziale e una nei tubuli seminiferi I due enzimi hanno un pH ottimale diverso, 5,6 per quello del tessuto interstiziale e 6,5 per quello dei tubuli seminiferi Al pH ottimale è stata osservata una differenza di 70 volte nei valori di Km, 17 mM per l'enzima del tessuto interstiziale e 0,25 muM per l'enzima dai tubuli seminiferi Il testosterone e i metaboliti del testosterone hanno effetti molto diversi su ciascuna di queste attività enzimatiche L'attività enzimatica del tessuto interstiziale è inibita da testosterone e diversi metaboliti 5alfa-ridotti del testosterone e dagli estrogeni. L'inibitore più potente degli steroidi studiati era 5alfa-androstano-3alfa, 17beta-diolo, seguito da 17beta-estradiolo approssimativamente uguale al diidrotestosterone maggiore del testosterone maggiore dell'estrone maggiore dell'estriolo. È stato dimostrato che il 5alfa-androstan-3alfa, il 17beta-diolo e il 17beta-estradiolo agiscono mediante inibizione competitiva con valori di Ki apparenti di 2,2 e 3,7 muM, rispettivamente. Al contrario, è stato dimostrato che tra i suddetti steroidi, solo il diidrotestosterone inibisce l'attività della 17-chetosteroide reduttasi dei tubuli seminiferi e questa inibizione è stata osservata solo a concentrazioni molto elevate di inibitore. Il testosterone ha stimolato l'attività della 17-chetosteroide reduttasi dei tubuli seminiferi. 5alfa-androstano-3alfa, 17beta-diolo a basse concentrazioni stimolava l'attività enzimatica dei tubuli seminiferi, mentre non aveva effetto ad alte concentrazioni. Il resto degli steroidi testati non ha avuto effetto sull'attività della 17-chetosteroide reduttasi dei tubuli seminiferi. La differenza nella risposta delle due attività enzimatiche suggerisce un meccanismo per la regolazione locale della sintesi del testosterone in ciascun compartimento testicolare che non coinvolge direttamente le gonadotropine ipofisarie.
Secrezione di lecitina: colesterolo aciltransferasi da epatociti isolati di ratto.1. La lecitina:colesterolo aciltransferasi è secreta da eptociti isolati di ratto. 2. La secrezione è stimolato quando il siero viene aggiunto al mezzo di incubazione 3. Le condizioni ottimali per la secrezione sono: 5-10(6) epatociti per ml, 5 h di incubazione, pH 7,3-7,4 e 25% di siero nel mezzo di incubazione 4. In concomitanza con il secrezione di lecitina:colesterolo aciltransferasi c'è una secrezione di colesterolo non esterificato e triacilglicerolo. 5. La colchicina o la cicloesimide nel mezzo di incubazione inibiscono la secrezione di lecitina:colesterolo aciltransferasi.
Spettri di risonanza paramagnetica elettronica del citocromo P-450 mitocondriale e microsomiale dal surrene di ratto.Gli spettri di risonanza paramagnetica elettronica (EPR) della zona surrenale di ratto i mitocondri fascicolati hanno mostrato picchi corrispondenti al citocromo ferrico P-450 a basso spin con valori g apparenti di 2,424, 2,248 e 1,917 e segnali deboli dovuti al citocromo ferrico P-450 ad alto spin con valori gx di 8,08 e 7,80. scissione della catena laterale citocromo P-450, quest'ultimo a 11beta-idrossilasi citocromo P-450. Con l'aggiunta di deossicorticosterone il segnale g = 7,80 è stato elevato e si è verificato un calo associato nel segnale spinale basso. Poiché il pH è stato ridotto da 7,4 a 6.1, il segnale g = 8.08 è aumentato con un nuovo calo di intensità del segnale di basso spin. I mitocondri della zona glomerulosa hanno mostrato proprietà spettrali simili a quelle descritte sopra. L'aggiunta di succinato, isocitrato o pregnenolone ha causato una perdita s del segnale g = 8.08. L'aggiunta di calcio ha aumentato l'ampiezza del segnale g = 8.08 e ha causato una leggera riduzione dell'ampiezza del segnale a basso spin. Inoltre, l'aggiunta di desossicorticosterone, pregnenolone, succinato o isocitrato ha causato lievi spostamenti delle righe esterne dello spettro a basso spin. L'interazione del citocromo P-450 mitocondriale con metirapone e aminoglutetimide ha modificato i parametri spinali bassi. Il citocromo microsomiale surrenalico P-450 aveva valori di g ferrico a basso spin di 2,417, 2,244 e 1,919 e valori di gxy ferrico ad alto spin di 7,90 e 3,85, distinti dai valori ottenuti con i mitocondri.
Effetto degli ionofori A23187 e della nigericina sulla ridistribuzione indotta dalla luce di Mg2+, K+ e H+ attraverso la membrana tilacoide.Ridistribuzioni passive di Mg2+ e K+ ioni attraverso le membrane tilacoidi, che si verificano in associazione con l'afflusso elettrogenico guidato dalla luce di ioni idrogeno sono stati esaminati in sospensioni di cloroplasti di spinaci spezzati in una varietà di condizioni (i) In accordo con i risultati di Hind el al. (Proc. Natl. Acad. Sci. US (1974) 71, 1484), si è riscontrato che ad un basso rapporto di concentrazione di K/Mg nel mezzo, l'efflusso di K è trascurabilmente piccolo, mentre si osserva un sostanziale efflusso di Mg. Il contrario è vero quando il rapporto di concentrazione K/Mg nel mezzo è elevato. (ii) In presenza di A23187, che è risultato causare un'inibizione di circa il 60% del gradiente di pH indotto dalla luce, è stato osservato un afflusso significativo di Mg2+ in la luce ad un elevato rapporto di concentrazione K/Mg. Al contrario l'afflusso di Mg era piccolo in presenza di f A23187 quando il rapporto di concentrazione K/Mg nel mezzo era basso. In queste condizioni, l'afflusso di Mg è stato considerevolmente aumentato con l'aggiunta di valinomicina. È stato riscontrato che A23187 non influisce sull'efflusso di K alla luce. (iii) Si è scoperto che anche l'afflusso di K indotto dalla luce osservato in presenza di nigericina dipende dal rapporto di concentrazione del catione monovalente e bivalente. La sua grandezza aumentava all'aumentare del rapporto K/Mg. I risultati sono interpretati in termini di un modello semplificato in cui l'efflusso passivo totale di cationi, guidato dal potenziale impostato dalla pompa protonica elettrogenica, è considerato una frazione costante dell'afflusso protonico. In base a ciò, un aumento del flusso di una specie ionica, indotto sia dall'aumento della sua concentrazione, sia dall'aumento della sua permeabilità attraverso la membrana, provocherà una diminuzione del flusso degli altri cationi. La pertinenza dei risultati è discussa rispetto alle conclusioni circa il coinvolgimento e le grandezze relative degli efflussi passivi di K e Mg attraverso la membrana tilacoide durante l'energizzazione di cloroplasti intatti e cloroplasti in situ.
Fotofosforilazione in funzione del tempo di illuminazione. II. Effetti dei tamponi permeabili.(1) Le quantità di ortofosfato, bicarbonato e tris (idrossimetil) -aminometano trovato all'interno del tilacoide sono quasi esattamente le quantità previste assumendo che i tamponi si equilibrino attraverso la membrana. Poiché l'imidazolo e la piridina ritardano lo sviluppo della formazione di ATP post-illuminazione mentre aumentano la quantità massima di ATP formata, ne consegue che tale relativamente permeante i tamponi devono anche entrare nello spazio acquoso interno del tilacoide. (2) La fotofosforilazione inizia bruscamente alla piena efficienza allo stato stazionario e alla piena velocità allo stato stazionario non appena il tempo di illuminazione supera circa 5 ms quando gli ioni permeanti sono assenti o non appena il il tempo supera circa 50 ms se sono presenti valinomicina e KC1. In entrambi i casi, i tamponi permeabili hanno poco o nessun effetto sul tempo di illuminazione necessario per iniziare la fosforilazione. Una concentrazione di bicarbona te che ritarderebbe l'acidificazione della massa della fase acquosa interna per almeno 350 ms non ha alcun effetto sul tempo di inizio della fosforilazione. In cloroplasti alquanto rigonfi, il tampone combinato da parte del tris(idrossimetil) aminometano e dell'ortofosfato all'interno ritarderebbe l'acidificazione dell'interno di 1500 ms ma, anche in presenza di valinomicina e KC1, il ritardo totale nell'inizio della fosforilazione è quindi solo 65 SM. Discrepanze simili si verificano con tutti gli altri buffer menzionati. (3) Poiché queste discrepanze tra acidificazione interna e fosforilazione si trovano in presenza di quantità saturanti di valinomicina e KC1, sembra che la fotofosforilazione possa verificarsi quando non ci sono gradienti di concentrazione protonica e differenze di potenziale elettrico attraverso le membrane che separano il mezzo da la maggior parte della fase acquosa interna. (4) Suggeriamo che i protoni prodotti dal trasporto di elettroni possano essere usati direttamente per la fosforilazione senza nemmeno entrare nella massa della fase acquosa interna del sistema lamellare. In tal caso, la fosforilazione potrebbe procedere molto prima che il pH interno riflettesse i gradienti di attività protonica all'interno della membrana.
Profili di ph Raman per costituenti di acidi nucleici. II. Ribonucleotidi 5\'-AMP e 5\'-GMP.Spettri Raman di soluzioni acquose di In funzione del pH sono stati registrati 5\'-AMP e 5\'-GMP, sono state monitorate intensità e frequenze di banda per determinare bande che possono essere considerate diagnostiche per la concentrazione e il pK delle specie in soluzione. le misurazioni indicano che solo un numero selezionato di bande può essere considerato diagnostico della base o della dissociazione del fosfato protonico secondario L'utilità dei profili di pH derivati da variazioni di intensità della banda specifica per 5\'-AMP è discussa in termini di effetto dell'acidificazione sulle caratteristiche della soluzione dell'acido poliadenilico.
Profili di pH Raman per i costituenti dell'acido nucleico I. Ribonucleosidi di citidina e uridina.Gli spettri Raman di soluzioni acquose di uridina e citidina sono stati registrati in funzione del pH con le intensità di banda e le frequenze vibrazionali monitorate per determinare bande che possono essere considerate diagnostiche della concentrazione delle varie specie. Le misurazioni quantitative dell'intensità di banda indicano che non tutte le bande sensibili al pH possono essere considerate diagnostiche del valore di pK per il forma acida del nucleoside e per la percentuale di specie in soluzione Sebbene l'accuratezza del metodo dell'intensità della banda Raman sia intrinsecamente inferiore a quella dei metodi titrimetrico o spettrofotometrico visibile nell'ultravioletto, i valori di pK e le specie percentuali concordano bene con quelli ottenuti da questi metodi L'utilità dei risultati ottenuti dai profili di pH per la citidina è discussa in termini di effetto dell'acidificazione sul strutturale e conformazionale caratteristiche dell'acido policitidilico in soluzione.
Il sistema dell'embrione di segale come alternativa al sistema del grano per la sintesi proteica in vitro.Gli embrioni di segale isolati sono una fonte prontamente disponibile per la preparazione di sistemi di sintesi proteica molto attivi, privi di cellule. Livelli di incorporazione fino a 2000 pmol di leucina per 50 test mul sono normalmente ottenuti a concentrazioni saturanti di RNA TMV (virus del mosaico del tabacco);a concentrazioni limite di RNA messaggero l'incorporazione supera le 1000 molecole di leucina per TMV Molecola di RNA Le caratteristiche di questo sistema privo di cellule per la traduzione dell'RNA TMV sono identiche a quelle di un sistema di germe di grano preparato in modo simile Il principale vantaggio del sistema di embrioni di segale è la sua elevata affidabilità rispetto al sistema di germe di grano imprevedibile. L'analisi del gradiente di saccarosio della miscela di reazione durante l'incubazione mostra un'ampia formazione di polisomi con l'RNA di TMV e dimostra un efficiente rilascio della catena polipeptidica.
Ulteriore caratterizzazione di un'attività della DNA polimerasi nei nuclei dello sperma di topo.La presenza di una DNA polimerasi nucleare nello sperma di topo da testicoli adulti è stata confermata e le proprietà di questo enzima sono state ulteriormente studiate. Questa attività ha dimostrato di essere notevolmente migliorata trattando gli spermatozoi con metanolo o etanolo prima dell'incubazione nel mezzo di reazione o dalla loro aggiunta in piccole quantità a questo mezzo. È stato protetto contro la degradazione dalle proteasi nucleari mediante aggiungendo l'inibitore della tripsina di soia ed è stato stimolato dall'ATP. È risultato essere dipendente da Mg2+ (concentrazione ottimale: 7,5 mM), dipendente dal DNA e tutti e quattro i deossinucleosidi trifosfati erano necessari per una reazione ottimale. Il prodotto di polimerizzazione precipitabile con l'acido radioattivo non è stato eliminato da solventi organici, né da pronasi, ribonucleasi o da nucleasi S1, tuttavia, è stato convertito in larga misura in prodotti solubili in acido da desossiribonucleasi pancreatica. è solo parzialmente solubilizzato da Triton X-100, quindi non sembra essere preferenzialmente associato alle membrane nucleari. L'attività recuperata dopo l'incubazione dipendeva anche dal pH (ottimale a pH 8,3) e non funzionava bene in un mezzo per la DNA polimerasi alfa. La temperatura per l'incorporazione massima dei nucleotidi è risultata essere di 32 gradi C e, nelle nostre condizioni, la reazione è stata lineare per 30 min. L'attività della DNA polimerasi è stata inibita da basse e alte concentrazioni di KCl. Non è stato abbassato da N-etilmaleimmide o p-idrossimercuribenzoato; l'urea ha stimolato leggermente la reazione e questa stimolazione è stata annullata dal successivo trattamento con N-etilmaleimmide. L'actinomicina D (40 mug/ml), il bromuro di etidio (25-50 muM), la netropsina (5-50 mug/ml) e la spermidina (0,5-2,5 mM) hanno abbassato la polimerizzazione dei precursori del DNA. L'enzima nucleare potrebbe spostarsi dallo stampo endogeno al DNA esogeno del timo di vitello attivato, riducendo la radioattività nucleare risultante. La capacità del modello DNP endogeno non è stata aumentata dall'attivazione della desossiribonucleasi secondo il metodo di Aposhian e Kornberg (J. Biol. Chem. (1962) 237, 519--525) suggerendo che la quantità di DNA polimerasi associata alla cromatina stava probabilmente limitando la reazione. L'attività della DNA polimerasi rilevata nei nuclei dello sperma di topo ha numerose proprietà delle DNA polimerasi a basso peso molecolare (DNA polimerasi beta) riportate in diversi organismi eucarioti.
Studi fisici sulla dimensione e la struttura del DNA di cloroplasti circolari covalentemente chiusi da piante superiori.La dimensione e la struttura dei DNA di cloroplasti circolari covalentemente chiusi (ctDNA) di piante di pisello, lattuga e spinaci, sono stati studiati mediante ultracentrifugazione analitica. Sono stati determinati i valori di so20,w,Na+ delle forme native e denaturate dei DNA circolari aperti e chiusi di queste piante. Il peso dei monomeri di ctDNA di pisello circolare purificato è stato determinato mediante sedimentazione in equilibrio galleggiante pari a 89,1 (SD +/- 0,7)-10(6). Il valore di so20,w,Na+ del ctDNA di pisello circolare aperto e il suo peso molecolare, in combinazione con i valori corrispondenti per altre dimensioni di DNA circolare, è stato utilizzato per derivare una relazione empirica tra so20,w,Na+ e peso molecolare per DNA circolari aperti. Utilizzando questa relazione, i pesi molecolari di lattuga e spinaci ctDNA sono stati determinati a essere 98,2 (S. D. +/- 1,5)-10(6) e 97,2 (S. D. +/- 1,5)-10(6), rispettivamente. A valori di pH 12,7 e 13, si è scoperto che lattuga circolare chiusa e ctDNA di pisello esistono come miscele di DNA circolari chiusi denaturati in modo reversibile e irreversibile.
La dimensione e la struttura dei DNA di cloroplasti circolari covalentemente chiusi (ctDNA) di piante di pisello, lattuga e spinaci, sono stati studiati mediante ultracentrifugazione analitica. Sono stati determinati i valori di so20,w,Na+ delle forme native e denaturate dei DNA circolari aperti e chiusi di queste piante. Il peso dei monomeri di ctDNA di pisello circolare purificato è stato determinato mediante sedimentazione in equilibrio galleggiante pari a 89,1 (SD +/- 0,7)-10(6). Il valore di so20,w,Na+ del ctDNA di pisello circolare aperto e il suo peso molecolare, in combinazione con i valori corrispondenti per altre dimensioni di DNA circolare, è stato utilizzato per derivare una relazione empirica tra so20,w,Na+ e peso molecolare per DNA circolari aperti. Utilizzando questa relazione, i pesi molecolari di lattuga e spinaci ctDNA sono stati determinati a essere 98,2 (S. D. +/- 1,5)-10(6) e 97,2 (S. D. +/- 1,5)-10(6), rispettivamente. A valori di pH 12,7 e 13, si è scoperto che lattuga circolare chiusa e ctDNA di pisello esistono come miscele di DNA circolari chiusi denaturati in modo reversibile e irreversibile.
Un nuovo metodo per la determinazione dei fenotipi dell'inibitore dell'alfa1-proteasi (alfa1-antitripsina) basato sulla formazione di complessi allele prodotto-elastasi dell'inibitore dell'alfa1-proteasi.Finora si è ipotizzato che la proprietà di legame alla proteasi dell'inibitore dell'alfa1-proteasi (alpha1PI) sia stata distrutta dall'elettroforesi su gel di amido acido (pH 4,9). Analisi su blocchi di gel di amido acido per variazioni di pH e conduttività durante e dopo una tipica corsa elettroforetica ha mostrato che era improbabile che l'alpha1PI separatore fosse esposto a valori di pH inferiori a 6,2 e che i prodotti allelici, in seguito al passaggio del fronte tampone, si trovassero in un ambiente di pH costante (6,3), estremamente basso conduttività e un'elevata intensità di campo. Questi risultati suggerivano fortemente la probabilità che alfa1-PI sarebbe rimasto chimicamente e fisicamente invariato a seguito dell'esposizione all'elettroforesi su gel di amido acido. Per testare questa probabilità, il siero umano è stato elec separato troforeticamente in gel di amido acido e dopo elettroforesi, è stato immerso in tampone dietilbarbiturico 0,1 M, pH 8,6, contenente 20 mug/ml di elastasi pancreatica. Lo strato di gel di amido aggiustato per il pH (8,15) e impregnato di elastasi è stato sovrapposto a emoglobina-agar per 2,5 ore a 37 gradi C seguito da immersione dello strato di emoglobina-agar in 1% NaCl durante la notte, acqua distillata per 2 ore, essiccando sotto carta da filtro e colorazione. I risultati hanno mostrato zone di emoglobina non digerita indicando, inequivocabilmente, che i prodotti allelici alfa1PI separati sono in grado di formare complessi con proteasi e che alfa1PI non viene inattivato in seguito all'esposizione all'elettroforesi su gel di amido acido. L'analisi densitometrica delle zone colorate trasparenti su uno sfondo di gel di agar trasparente offre un'alternativa all'analisi delle zone separate dal gel di amido acido mediante elettroforesi incrociata antigene-anticorpo e come tale è adatta per l'identificazione di fenotipi inibitori dell'alfa1-proteasi. Inoltre, il metodo è specifico per alfa1PI e una scansione densitometrica fornisce informazioni dirette relative alla capacità di legare la proteasi del campione, nonché il contributo di ciascun prodotto allelico alfa1PI a tale capacità.
Attivazione in vitro di ormoni glicoproteici. Ibridazione di subunità da tireotropina, lutropina e coriogonadotropina umana.L'assemblaggio in vitro di subunità alfa e beta di tireotropina ha portato a un aumento del contenuto di alfa elica e foglio beta molto simile a quello riscontrato per le gonadotropine. Questo ripiegamento attivo associazione-dipendente ha comportato l'interramento di tre residui di tirosina assegnati provvisoriamente a Tyr alfa 41, Tyr beta 37 e Tyr beta 59 e comuni a tutti gli studi studiati ormoni glicoproteici Le ibridazioni in vitro tra subunità alfa e beta di vari ormoni (tireotropina, lutropina e coriogonadotropina) di specie diverse (ovina, bovina e umana) hanno innescato gli stessi eventi molecolari dell'assemblaggio di subunità omologhe: l'interramento di tre residui di tirosina e la aumento della struttura periodica della piegatura. Questi cambiamenti sono processi lenti e dipendenti dal tempo. Tassi e rese di formazione ibrida misurati mediante analisi di sedimentazione e di La spettroscopia fference delle tirosine è identica, entro l'errore sperimentale, con i tassi e le rese misurate dal recupero dell'attività biologica sia la stimolazione della tiroide di pulcino per gli ibridi tireotropina-beta sia il legame ai recettori del testicolo suino per gli ibridi gonadotropina-beta. Qualunque sia l'origine della subunità alfa, gli ibridi tireotropina-beta non sono stati in grado di legarsi ai recettori del testicolo sebbene attivi sulla tiroide dei pulcini. I tassi e le rese della formazione ibrida dipendevano essenzialmente dall'origine della subunità beta. Tutti gli ibridi potrebbero essere dissociati a pH acido con velocità simili a quelle dell'ormone nativo. L'estensione alla tireotropina e ai vari ibridi delle caratteristiche strutturali dell'assemblaggio in vitro già riconosciute per le gonadotropine rafforza l'ipotesi che si tratti di un processo di attivazione di base che avviene anche in vivo dopo la sintesi delle subunità.
Transizioni conformazionali di monellina, una proteina intensamente dolce.Transizioni conformazionali di monellina, una proteina intensamente dolce dalle bacche di Dioscoreophyllum cumminsii, sono state studiate da la sonda di dicroismo circolare (CD). Secondo gli spettri CD, la monellina ha un basso contenuto della struttura elicoidale e una quantità significativa della conformazione a foglio pieghettato (beta). La conformazione nativa è risultata sensibile agli alcali, al sodio dodecilsolfato , e guanidina-HC1, ma era stabile in acido (es pH 2.4) come dimostrato da CD e persistenza o scomparsa del sapore dolce. La conformazione della catena principale della monellina alcali-denaturata (pH 10,9) è stata ripristinata dopo l'acidificazione (pH 3.3) delle soluzioni alcaline. La struttura terziaria, tuttavia, non era completamente ripristinata, come indicato da CD nella zona spettrale 230-300 nm, sebbene ricomparisse il sapore dolce. Se il pH di una soluzione neutra veniva portato a 9,6, il CD nel vicino ultravioletto et era significativamente alterato, anche se il sapore dolce persisteva. Ciò indica che un leggero cambiamento conformazionale non ha interferito con gli effetti sulle papille gustative. Mentre il dodecil solfato di sodio ha facilmente disorganizzato la struttura terziaria, la catena principale è stata ricostruita da questo reagente in una nuova forma con un contenuto di elica più elevato rispetto alla macromolecola nativa. La ricostruzione in una conformazione modificata a più alto contenuto di elica è stata ottenuta anche con il 50% di etanolo. La conformazione della catena principale non è stata influenzata dall'etanolo al 25% che ha prodotto lievi cambiamenti nella zona CD a 230-260 nm e non ha abolito il sapore dolce.
Studi magnetici del Chromatium flavocytochrome C552. Un meccanismo per l'interazione eme-flavina.Studi di risonanza paramagnetica elettronica e suscettibilità magnetica del Chromatium flavocytochrome C552 e del suo diema sono riportate subunità prive di flavina a temperature inferiori a 45 gradi K. I risultati mostrano che nella proteina intatta e nella subunità i due ferri eme a basso spin (S = 1/2) sono distinguibili, dando origine a segnali EPR separati. solo la proteina intatta, uno dei ferri eme esiste in due diversi ambienti a basso spin nell'intervallo di pH da 5,5 a 10,5, mentre l'altro rimane in un ambiente costante. I fattori che influenzano l'ambiente variabile del ferro eme influenzano anche la reattività della flavina, indicando l'esistenza di un meccanismo per l'interazione eme-flavina.
Purificazione e proprietà delle metalloproteinasi extracellulari di Chromobacterium lividum (NCIB 10926).Quattro enzimi proteolitici extracellulari (I-IV) (EC 3.4 .22. -) sono state identificate in colture statiche di Chromobacterium lividum (NCIB 10926) mediante elettroforesi su gel di agar e focalizzazione isoelettrica. Le proteinasi I-III sono state liberate dalla proteina non enzimatica mediante cromatografia su TEAE-cellulosa e CM-cellulosa. La miscela enzimatica è stato quindi frazionato in un gradiente di pH mediante focalizzazione isoelettrica. Tutti e tre gli enzimi hanno dimostrato di essere metallo-enzimi termolabili. L'attività ottimale si è verificata a pH 5,6 per l'enzima I e a pH 6,2 per gli enzimi II e III. La polvere di pelle blu Remazolbrilliant è stata un substrato sensibile per questi enzimi. È stato anche dimostrato che la proteinasi I degrada efficacemente l'emoglobina e la caseina, ma non la mioglobina, l'ovoalbumina o l'albumina di siero bovino. Le proteinasi I-III hanno mostrato valori di peso molecolare di 75 000, 72 000 e 67 000 mediante cromatografia di esclusione e 71 000 e 66 000 mediante elettroforesi su gel di sodio dodecilsolfato-poli-acrilammide per l'enzima I e II, rispettivamente. Le composizioni amminoacidiche degli enzimi I e II erano in qualche modo simili. La proteinasi I è stata inibita dall'attività EDTA, 1,2-di(2-amminoetossi)etano-N,N,N\',N\'-tetraacetica. Mg2+ potrebbe sostituire il Ca2+ o il Mn2+ il Co2+. Viene discussa l'interrelazione delle proteinasi I-III.
Fotocontrollo dell'attività dell'ureasi nella membrana di collagene spiropirano.1. Le fibrille di collagene sono state modificate con beta-1-[3,3-dimetil-6\ '-nitrospiro-(indoline-2,2\'-2H-benzopyran)] anidride propionica 2. L'ureasi (urea amidohydrolase, EC 3.5.1.5) è stata immobilizzata nella membrana di collagene spiropirano L'attività della membrana di collagene ureasi-spiropirano è stata trovato aumentare al buio e poi diminuire con l'irradiazione della luce visibile 3. Il pH ottimale della membrana di collagene ureasi-spiropirano sotto la luce visibile è stato abbassato al buio 4. L'apparente costante di Michaelis (K\'m) dell'ureasi- La membrana di collagene spiropirano al buio era quasi la stessa di quella sotto la luce visibile. La velocità massima apparente era aumentata al buio. 5. Il coefficiente di diffusione dell'urea attraverso la membrana di collagene spiropirano al buio era 1,4 volte quello sotto la luce visibile. Tuttavia , l'aumento del tasso di diffusione non è stato responsabile per l'attività incre asi della membrana di collagene ureasi-spiropirano.
Proteasi elastolitica neutra da leucociti canini. Purificazione e caratterizzazione.1. È stata isolata una proteinasi neutra (EC 3.4. -. -) con attività elastolitica dai leucociti del sangue canino e purificato fino all'apparente omogeneità mediante una procedura in due fasi consistente in cromatografia DEAE-Sephadex e setacciamento molecolare su Sephadex G-75. 2. Il peso molecolare dell'enzima era 23 500 e l'assorbanza (A1% 1 cm ) a 282 nm era 6,1. L'analisi degli amminoacidi ha mostrato un alto contenuto di glicina, acido aspartico e valina e una bassa percentuale di metionina, lisina e istidina, nonché l'assenza di tirosina nella molecola dell'enzima. 3. La proteinasi era attiva contro diversi substrati proteici nonché verso Nt-butilossicarbonil-L-alanina p-nitrofenil estere, N-acetil-L-alanil-tirosina etil estere 4. L'enzima è stato inattivato dal diisopropilfluorofosfato, N-acetil-L-alanil-L- alanil-L-alanina clorometil chetone e Np-tosil-L-fenilalanina chl orometil chetone. È stata anche notata l'inibizione da parte di alcuni inibitori naturali della proteinasi.
Accoppiamento della proteasi acida del Penicillium duponti al copolimero lineare etilene-acido maleico (1 : 1). Preparazione e proprietà del derivato idrosolubile.L'accoppiamento della proteasi acida termostabile (EC 3.4.23. -) di Penicillium duponti K 1014 al copolimero lineare etilene-acido maleico (1 : 1) in presenza di 1-cicloesil-3-(2-morfolinoetil)-carbodiimmide a pH 3.0, ha fornito un derivato enzimatico solubile con una resa di incorporazione proteica del 67% in condizioni ottimali. Il contenuto proteico del complesso enzima-polimero, i pesi molecolari dei reagenti e il valore medio di 2,2 residui di lisina per mole di enzima trovati nel legame ammidico alla matrice, supportano una struttura costituita da due catene polimeriche per mole di proteasi, ciascuna catena acilando un singolo residuo di lisina dell'enzima. Il punto isoelettrico dell'enzima accoppiato è risultato essere 3,47, un valore inferiore rispetto a quello misurato sulla proteasi libera (3.81). L'attività specifica del la proteasi legata contro la caseina, a pH 3,7 e 30 gradi C, era il 34% di quella dell'enzima libero ea 75 gradi C aumentava al 70%. L'aumento delle dimensioni dell'enzima accoppiato ha determinato una migliore ritenzione dell'attività delle membrane di ultrafiltrazione rispetto a quella osservata con la proteasi libera, da sola o in miscela con il copolimero etilene-acido maleico. È stata preparata una pepsina accoppiata idrosolubile con una resa del 43% su base proteica utilizzando l'amminoetilmonoammide del copolimero etilene-acido maleico e la stessa carbodiimmide idrosolubile.
Microeterogeneità dell'arilsulfatasi A da tessuti umani.Arilsulfatasi umana A (cerebroside-3-solfato 3-solfoidrolasi, EC 3.1.6.8) ha mostrato microeterogeneità su focalizzazione isoelettrica in gel di poliacrilammide. L'enzima urinario puro ha fornito 3 bande di attività con valori di pI di 4,7, 4,8 e 4,9, mentre l'enzima epatico purificato ha prodotto sei bande equidistanti da pI 4,4 a 4,9. Il rilevamento dell'enzima nel gel è stato effettuato da metilumbelliferil solfato o nitrocatecolo solfato. Preparazioni enzimatiche grezze da fegato umano, kindey, placenta, cervello e testicolo hanno mostrato il modello a sei bande con quantità variabili di attività nelle diverse bande. Il modello di banding degli estratti di fibroblasti umani coltivati era distintivo: oltre all'attività nell'area delle Bande 1-6 è stata osservata con entrambe le colorazioni enzimatiche una banda netta a pI 5.1. Quest'ultima banda era presente anche negli estratti di fibroblasti di leucodistrofia metacromatica. Tuttavia, in questo caso la banda non è apparsa wh it è stata utilizzata la colorazione specifica aril-solfatasi A. Le bande enzimatiche 1, 2 e 3 dall'urina sono state isolate mediante estrazione del gel. Le tre bande si sono rimesse a fuoco nelle loro posizioni iniziali; hanno mostrato attività enzimatiche quasi identiche verso il metilumbelliferil solfato, il mitrocatecolo solfato, il cerebroside solfato e l'acido ascorbico 2-solfato; e ha dimostrato una competenza immunologica equivalente mediante titolazione dell'anticorpo. Il pattern di bande dell'arilsulfatasi A urinaria è rimasto invariato con il trattamento con neuraminidasi, mentre le bande 4-6 dell'enzima epatico sono state convertite in bande 1-3 da questo trattamento. Sembra che le bande 4-6 siano dovute alla sialilazione dell'aril-solfatasi A ma che le bande 1-3 siano probabilmente dovute a qualche altro tipo di modificazione della proteina post-ribosomiale.
Evidenza di gruppi sulfidrilici nel sito attivo della catecol-O-metiltransferasi.Studi precedenti che utilizzavano reagenti di etichettatura di affinità hanno suggerito l'esistenza di due gruppi nucleofili nel sito attivo della catecol-O-metiltransferasi (S-adenosil-L-metionina:catecolo O-metiltransferasi, EC 2.1.1.6). Entrambi i residui nucleofili sono fondamentali per l'attività catalitica. Nel tentativo di chiarire la natura di questi residui e per caratterizzare ulteriormente la relazione tra la struttura chimica e la funzione catalitica di questo enzima, sono stati intrapresi studi di inattivazione utilizzando N-etilmaleimmide L'inattivazione dell'enzima da parte di N-etilmaleimide in condizioni pseudo-primo ordine ha mostrato una relazione non lineare tra il log di la frazione di attività enzimatica residua e il tempo di preincubazione L'analisi cinetica di questo processo di inattivazione ha suggerito la modifica da parte della N-etilmaleimmide di due residui nel sito attivo dell'enzima, entrambi cruci al per l'attività catalitica. L'analisi dettagliata del processo di inattivazione, inclusi studi sulla protezione del substrato, profili di pH di inattivazione e studi di incorporazione utilizzando N-etil[2,3-14C2]maleimide, ha fornito ulteriori prove a sostegno di questa conclusione.
Studi cinetici di Rhus vernicifera laccase. Ruolo dei centri metallici nel trasferimento di elettroni.Le reazioni di Rhus vernicifera (monofenolo, diidrossifenilalanina: ossigeno ossidoriduttasi, EC 1.14.18.1) con i substrati riducenti idrochinone e acido ascorbico sono stati studiati con la tecnica del flusso interrotto. La Rhus laccase sembra essere presente in due forme molecolari con una costante di equilibrio sensibile al pH che regola le concentrazioni relative di ciascuna specie. Un modello per la reazione della laccasi di Rhus con substrati riducenti è stato formulato il modello è simile a quello formulato in precedenza per la riduzione anaerobica della laccasi da Polyporus versicolor (Andréasson, L. -E. , Malström, BG, Strömberg, C. e Vänngård, T. (1973) Eur. J. Biochem. 34, 434-439) e spiega la riduzione anche di questo enzima. Gli elementi essenziali del modello sono i seguenti: Gli elettroni vengono prelevati dai riducenti uno alla volta. Il tipo 1 Cu2+ ha un ruolo centrale in m modificando il trasferimento di almeno uno degli elettroni necessari per la riduzione dell'accettore di due elettroni cooperativo. Le reazioni intramolecolari determinano le concentrazioni di due forme molecolari dell'enzima e influenzano la velocità di riduzione dell'accettore di due elettroni. Il modello, che è stato utilizzato per simulazioni di successo della riduzione anaerobica della Rhus laccasi, è in grado di spiegare la riduzione delle laccasi anche in presenza dell'inibitore F-. Inoltre, il modello fornisce una spiegazione del comportamento delle laccasi quando substrati riducenti e O2 sono presenti contemporaneamente ed è coerente con le precedenti osservazioni sulla riduzione post-stazionaria del Cu2+ di tipo 1 e dell'accetore a due elettroni (Holwerda, RA e Gray, HB (1974) J. Am. Chem. Soc. 96, 6008-6022).
Studi sulla fenilalanina e idrossilazione della tirosina mediante tirosina idrossilasi del cervello di ratto.Tirosina idrossilasi (EC1.14.16.2), presumibilmente l'enzima limitante della velocità in la biosintesi delle catecolamine, è noto per catalizzare l'idrossilazione sia della fenilalanina che della tirosina. Utilizzando sia un preparato enzimatico isolato sia un preparato sinaptosomiale, dove è stata preservata una certa integrità architettonica del tessuto, abbiamo cercato di valutare il modo in cui questi due substrati sono idrossilati dalla tirosina idrossilasi del cervello di ratto. In presenza di tetraidrobiopterina l'enzima isolato catalizza l'idrossilazione della fenilalanina a 3,4-diidrossifenilalanina con il rilascio di tirosina libera come intermedio obbligatorio. Al contrario, la preparazione sinaptosomiale striatale del cervello di ratto nel presenza di cofattore endogeno converte la fenilalanina in 3,4-diidrossifenilalanina senza il rilascio di tirosina libera.
Controllo normativo e funzione dell'alanina deidrogenasi da un bacillo termofilo.L-alanina deidrogenasi, (L-alanina:NAD+ ossidoriduttasi (deaminante), EC 1.4.1.1) la sintesi in un bacillo termofilo è risultata soggetta a controllo regolatorio L'aggiunta di L- e D-alanina e L-serina a colture che crescono in presenza di succinato o piruvato, induceva una sintesi accelerata dell'alanina deidrogenasi La sintesi dell'enzima dipendeva dalla presenza dell'induttore durante la crescita ed è stata arrestata dall'aggiunta di glucosio La repressione dei cataboliti da parte del glucosio è stata abolita limitando la concentrazione di ammonio durante la crescita I valori Km apparenti dei substrati coinvolti nell'attività dell'alanina deidrogenasi sono come segue (M): NH4+, 4-10(-2); piruvato, 5-10(-4); NADH, 6-10(-5); L-alanina, 3.1-10(-3) e NAD, 2-10(-4) L'attività dell'alanina deidrogenasi era misurabile a temperature inferiori alla temperatura minima di crescita (a 25 de grees C) e l'attività più alta è stata trovata a 65 gradi C; la denaturazione termica si è verificata a 80 gradi C.
L'influenza della deprivazione nutrizionale postnatale sul contenuto di fosfolipidi del polmone di ratto in via di sviluppo.È stato precedentemente riportato che il digiuno può comportare una diminuzione della produzione di surfattante polmonare Per studiare questa relazione e il ruolo della nutrizione nella sintesi dei fosfolipidi polmonari, ratti di 21 giorni sono stati esposti per 60 ore a uno dei cinque regimi dietetici: cibo standard per ratti (controlli), digiuno, glucosio puro, grasso puro, o proteine pure. Dopo il periodo di digiuno si è verificata una diminuzione del 33% del contenuto di proteine polmonari, ma non vi è stato alcun cambiamento nel contenuto di DNA. L'esposizione a nessuna delle diete sperimentali ha determinato una diminuzione del contenuto totale di fosfolipidi e fosfatidilcolina nei tessuti per polmone, ma non per unità di proteina polmonare Allo stesso modo il contenuto di fosfolipidi e fosfatidilcolina del lavaggio polmonare è stato ridotto del 25% dopo il digiuno quando espresso per polmone o per unità di DNA, ma non per unità di proteina Attività della colinefosfotransferasi (EC 2.7.8.2) polmonare era diminuito negli animali a digiuno e in quelli alimentati con la dieta proteica, ma non negli animali nutriti con glucosio o grassi. Le attività dell'acetil-CoA carbossilasi (EC 6.4.1.2) e l'allungamento degli acidi grassi microsomiali sono state ridotte in tutti i gruppi sperimentali ad eccezione del gruppo alimentato con glucosio. Si conclude che il digiuno determina una diminuzione delle dimensioni delle cellule polmonari ma non del numero delle cellule polmonari. Il contenuto totale di fosfolipidi e fosfatidilcolina nel tessuto polmonare e nel lavaggio polmonare è diminuito per cellula ma non per unità di massa cellulare.
Misure del potenziale di ossidoriduzione della cloroperossidasi e dei suoi complessi.Il potenziale di ossidoriduzione della cloroperossidasi, un enzima che catalizza la clorurazione perossidativa, la bromurazione e oltre a catalizzare reazioni di alogenazione biologica, la cloroperossidasi è insolita in quanto il complesso di monossido di carbonio della cloroperossidasi ferrosa mostra il tipico assorbimento di Soret a lunghezza d'onda lungo associato alle emoproteine P-450. La dipendenza dal pH della cloroperossidasi ossidoriduzione Il potenziale mostra una discontinuità intorno a pH 4,7. Analogamente, le misurazioni dell'affinità della cloroperossidasi ferrosa per il monossido di carbonio monitorate sia mediante titolazione spettroscopica che potenziometrica mostrano una discontinuità nella regione del pH 4,7. Le misurazioni del potenziale di ossido-riduzione sulla cloroperossidasi in atmosfera di CO mostrano anche una discontinuità profilo di pH discontinuo Questi risultati suggeriscono che il cloroperossi ferroso dase subisce modificazioni reversibili a pH basso e che questi cambiamenti si riflettono nel potenziale di ossidoriduzione. Il potenziale di ossidoriduzione della cloroperossidasi a pH 6,9 è -140 mV, vicino a quello misurato per il citocromo P-450cam in presenza di substrato. Il potenziale di ossidoriduzione della cloroperossidasi a pH 2,7, il pH ottimale per la clorurazione enzimatica, è +150 mV. I potenziali di ossidoriduzione dei complessi di alogenuro della cloroperossidasi (cloruro, bromuro e ioduro) sono essenzialmente identici alle misurazioni del potenziale sull'enzima nativo. Queste osservazioni suggeriscono che, sebbene gli anioni alogenuro si leghino all'enzima, probabilmente non si legano come leganti assiali al ferro eme ferrico.
Legame del coenzima da parte della trifosfopiridina nucleotide isocitrato deidrogenasi dipendente dal fegato di manzo. Studi di equilibrio e cinetica.Il legame della nicotinammide adenina dinucleotide fosfato (NADPH) ridotta a L'isocitrato deidrogenasi dipendente dalla nicotinammide adenina dinucleotide fosfato (NADP) dal citoplasma del fegato bovino è stata studiata mediante diverse tecniche di equilibrio (ultracentrifugazione, setacciamento molecolare, ultrafiltrazione, fluorescenza). Sono stati trovati due siti di legame (per molecola enzimatica dimerica) con costanti di dissociazione leggermente diverse (0,5 e 0,12 muM) e rese in fluorescenza (7,7 e 6,3). Si è formato un complesso ternario tra enzima, isocitrato e NADPH, in cui la costante di dissociazione del NADPH era di 5 muM. Al contrario, in presenza di NADPH non si è verificato alcun legame con l'enzima di isocitrato di magnesio. Gli esperimenti di dialisi hanno mostrato l'esistenza di 1 sito/dimero di legame NADP, con una costante di dissociazione di 26 muM. Quando era presente NADPH con l'enzima nella proporzione di 1 molecola/dimero, la costante di dissociazione di NADP è stata diminuita di quattro volte, raggiungendo un valore quantitativamente paragonabile alla costante di Michaelis. La cinetica del legame del coenzima è stata seguita utilizzando la tecnica a flusso interrotto con rilevamento a fluorescenza. Il legame del NADPH all'enzima si è verificato attraverso una reazione veloce (k1 = 20 muM-1 s-1). La dissociazione di NADPH è avvenuta dopo il legame con NADP; tuttavia, l'equilibrio così come i dati cinetici erano incompatibili con un semplice schema di competizione. La dissociazione del NADPH dall'enzima in seguito al legame con l'isocitrato di magnesio è stata preceduta dalla formazione di un complesso ternario transitorio in cui la fluorescenza di NADPH era solo circa il 30% di quella nel complesso enzima-NADPH. Vengono poi discusse l'interazione tra i conenzimi e il coinvolgimento dei complessi ternari nel meccanismo catalitico in relazione a quanto è noto sul ruolo regolatorio del coenzima (Carlier, MF, e Pantaloni, D. (1976), Biochimica, 15, 1761- 1766).
Proprietà regolatorie della piridina nucleotide transidrogenasi da Pseudomonas aeruginosa. Studi di ultracentrifugazione enzimatica attiva.Studi di ultracentrifugazione enzimatica della piridina nucleotide transidrogenasi da Pseudomonas aeruginosa ( EC 1.6.1.1. ) mostrano che la reazione enzimatica è catalizzata da una specie molecolare caratterizzata da un valore S20,W di circa 34 S, qualunque sia il substrato ridotto (nucleotide tri- o difosfopiridinico). La forma aggregata filamentosa dell'enzima (S20,W = 121 S e versioni successive), identificato da indagini precedenti (Cohen, PT e Kaplan, NO (1970), J. Biol. Chem. 245, 2825-2836; Louie, DD, Kaplan, NO e Mc Lean, JD (1972), J. Mol. Biol. 70, 651-664) appare, quindi, essere una specie inattiva. Si discutono le implicazioni fisiologiche dell'enzima. Diverse linee di evidenza portano alla conclusione che il transidrogenasi potrebbe agire come un legame essenziale tra carboidrati mangiato catabolismo e la catena respiratoria.
Proprietà regolatorie della piridina nucleotide transidrogenasi da Pseudomonas aeruginosa. Studi cinetici e titolazione della fluorescenza.Meccanismi coinvolti nell'azione della piridina nucleotide transidrogenasi da Pseudomonas aeruginosa (EC 1.6.1.1) sono stati studiati mediante studi cinetici e titolazione di fluorescenza. I nostri risultati, così come quelli di precedenti indagini, suggeriscono che il modello MWC allosterico (Monod, J. , Wyman, J. e Changeux, JP (1965), J. Mol. Biol. 12, 88-118) può essere utilizzato come primo passo per la spiegazione delle proprietà della transidrogenasi La reazione di base dell'enzima è l'ossidazione del nucleotide trifosfopiridinico ridotto (TPNH) dal nucleotide difosfopiridinico (DPN+). In termini di modello, lo stato R funzionale è favorito da TPNH, mentre il prodotto nucleotide trifosfopiridinico (TPN+) si comporta come un inibitore allosterico, e si presume quindi che favorisca lo stato T non funzionale. in leggera misura, lo stato T è anche favorito dal fosfato inorganico. D'altra parte, l'adenosina 2\'-monofosfato e molti altri nucleotidi 2\'-fosfato funzionano come attivatori e quindi si presume che spostino l'equilibrio allosterico verso lo stato R. Gli studi in questo articolo suggeriscono un sito regolatorio specifico per la transidrogenasi.
Alcool deidrogenasi del fegato umano: purificazione, composizione e caratteristiche catalitiche.L'alcol deidrogenasi è stato purificato dal fegato umano mediante cromatografia di affinità. Ultracentrifugazione, Sephadex G -200 cromatografia e analisi di amminoacidi di preparazioni multiple dimostrano l'omogeneità del peso molecolare L'elettroforesi su gel del disco di sodio dodecilsolfato rivela una singola specie di peso molecolare 42 000. Basato su un peso molecolare di 85 000 per il dimero ottenuto dalla composizione amminoacidica e un assorbimento molare di A280nm0,1% = 0,58, l'enzima contiene 3,6-4,2 g-atomi di zinco, come determinato dalla spettrografia di emissione, emissione indotta da microonde e spettrometria di assorbimento atomico. Inibizione da o-fenantrolina, (etilenedinitrilo) l'acido tetraacetico e l'alfa,alfa\'-bipiridina dimostrano che lo zinco è essenziale per la funzione enzimatica Analisi cinetiche dettagliate utilizzando alcoli primari della serie omologa CH3(CH2)nOH, n = 0-5 e le aldeidi corrispondenti come substrati mostrano che i valori KM diventano più piccoli all'aumentare di n. Ciò suggerisce che le interazioni idrofobiche svolgono un ruolo nel legame al substrato. La disponibilità di preparazioni ben definite di alcol deidrogenasi del fegato umano ora consente studi genetici e funzionali definitivi di questo enzima per chiarire il metabolismo dell'etanolo umano.
Cromatografia di affinità a complesso doppio ternario: preparazione di alcol deidrogenasi.Un metodo cromatografico di affinità generale per la purificazione dell'alcol deidrogenasi è stato sviluppato impiegando 4- immobilizzato derivati pirazolici sostituiti che isolano l'enzima mediante formazione di uno specifico complesso ternario Sepharose 4B viene attivato con 300 mg di bromuro di cianogeno/ml di gel confezionato e accoppiato a 4-[3-(N-6-amminocaproil)amminopropil]pirazolo. estratti di fegato grezzi in 50 mM fosfato-0,37 mM nicotinammide adenina dinucleotide, pH 7,5, l'alcol deidrogenasi è legato in modo ottimale a una capacità di 4-5 mg di enzima/ml di gel Aggiunta di etanolo, propanolo o butanolo, 500 mM, risultati nella formazione di un secondo complesso ternario, che consente l'eluizione dell'enzima legato in alta resa e purezza. Questo complesso cromatografia di affinità a doppio ternario è stato applicato con successo a estratti di fegato umano, cavallo, ratto e coniglio per isolare il rispettivo e alcol deidrogenasi omogenee.
Modello di polimerizzazione dell'insulina a pH 7,0.Risultati dell'equilibrio di sedimentazione, ottenuti con insulina bovina zinco-free (con e senza un componente di proinsulina) a pH 7,0, I o.2, 25 gradi C, e fino a una concentrazione totale di 0,8 g/l. , si sono dimostrati coerenti con tre diversi modelli di polimerizzazione, tutti implicanti un'autoassociazione isodesmica indefinita di specie oligomeriche specificate. procedura di analisi, basata su soluzioni chiuse formate sommando serie infinite, fornisce per ogni pattern un insieme di costanti di equilibrio. a 4 g/1. ) con insulina liberata da zinco e proinsulina, tenuto conto della dipendenza dalla composizione dei coefficienti di attività. Il pattern favorito, diverso da quello precedentemente riportato in letteratura, prevede la dimerizzazione del monoma insulina rica (peso molecolare 5734), governata da una costante di dimerizzazione di 11 X 10(4) M-1 e dall'autoassociazione isodesmica indefinita del dimero, descritta da una costante di associazione di 1,7 X 10(4) M-1. Questo modello di polimerizzazione si è anche dimostrato coerente con il limite di reazione osservato negli esperimenti sulla velocità di sedimentazione.
Frazionamento del DNA da cellule di mammifero mediante eluizione alcalina.Il metodo di eluizione alcalina fornisce una misura sensibile della distribuzione della lunghezza del singolo filamento del DNA nelle cellule di mammifero ed è applicabile a una varietà di problemi riguardanti il danno, la riparazione e la replicazione del DNA. È stata studiata la base fisica del processo di eluizione. La cinetica dell'eluizione al di sopra del pH di transizione alcalina si è verificata in due fasi: una fase iniziale in cui -la lunghezza del filamento è un fattore limitante, seguita da una fase in cui l'eluizione è accelerata a causa dell'accumulo di rotture del filamento indotte da alcali. L'intervallo di lunghezze di filamento singolo del DNA che può essere discriminato dall'eluizione al di sopra della transizione alcalina pH è stato stimato mediante calibrazione rispetto agli effetti dei raggi X, ed è risultato essere 5 X 10(8)-10(10) dalton I filamenti di DNA più corti eluiscono all'interno della zona di transizione del pH, che si estendeva da pH 11,3 a 11,7 quando l'idrossido di tetrapropilammonio veniva usato come base. Questo l'eluizione era relativamente rapida, ma era nettamente limitata dal pH, a seconda della lunghezza dei filamenti: la lunghezza dei filamenti eluiti aumentava all'aumentare del pH. L'eluizione alcalina è stata inibita dal trattamento delle cellule con basse concentrazioni di mostarda di azoto, un alchilante bifunzionale noto per la reticolazione del DNA. Indagando sulla possibilità che le sottoclassi di DNA possano differire nel loro comportamento di eluizione, è stato scoperto che i filamenti L satellite eluiscono più lentamente dalle cellule esposte a una bassa dose di raggi X rispetto al DNA di massa.
Esistenza di ioni idrogeno/sodio antiport nelle vescicole dell'involucro delle cellule di Halobacterium halobium.L'illuminazione provoca l'estrusione di protoni dalle vescicole dell'involucro delle cellule di Halobacterium halobium, come risultato dell'azione della luce sulla batteriorodopsina. La forza protonmotrice sviluppata è accoppiata al trasporto attivo di Na+ fuori dalle vescicole. I flussi ionici dipendenti dalla luce in queste vescicole sono stati studiati seguendo le variazioni del pH esterno, nella fluorescenza del colorante, 3,3\'-dipentyloxadicarbocyanine, nel contenuto di 22Na delle vescicole, e nell'accumulo di [3H]dibenzildimetilammonio (DDA+). Durante l'efflusso di Na+, e in funzione della presenza di Na+ all'interno delle vescicole, la luce iniziale- l'estrusione di H+ indotta è seguita dall'afflusso di H+, che determina un'alcalinizzazione netta del mezzo a pH superiore a 6,5. Quando il contenuto di Na+ delle vescicole è esaurito, la rete originale del mezzo viene ripristinata e si sviluppa un grande deltapH, un accompagnata da una diminuzione del potenziale elettrico. Dati riportati altrove suggeriscono che la forza trainante per il trasporto di alcuni amminoacidi consiste principalmente nel potenziale elettrico, mentre per altri comprende anche il gradiente di Na+. Il trasporto del glutammato sembra essere energizzato solo dal gradiente di Na+. Lo sviluppo del gradiente di Na+ durante l'illuminazione gioca quindi un ruolo importante nell'accoppiamento energetico. I risultati ottenuti sono coerenti con l'esistenza di un meccanismo elettrogenico di antiporto H+/Na+ (H+/Na+ maggiore di 1) in H alobium che facilita l'efflusso di Na+ a monte. La forza protonmotrice indotta dalla luce diventa quindi la forza trainante nella formazione di un gradiente di Na+. La presenza del proposto antiporter H+/Na+ spiega molti degli effetti del pH indotti dalla luce nelle cellule intatte di H. halobium.
Determinazione della risonanza magnetica nucleare delle distanze intramolecolari nell'inibitore della tripsina pancreatica bovina mediante chelazione della nitrotirosina dei lantanidi.La nitrazione della tirosina è stata studiata come mezzo per introducendo siti chelanti lantanidi in posizioni note nelle proteine. Le porzioni a basso campo degli spettri di risonanza magnetica nucleare 250-MHZ e 270-MHZ 1H dell'inibitore della tripsina pancreatica bovina nativa e chimicamente modificata sono state studiate in presenza di ioni lantanidi. i cambiamenti spettrali osservati con derivati nativi, mononitro (triosina 10) e dinitro (tirosine 10 e 21) consentono di attribuire separatamente questi cambiamenti al metallo legato alla nitrotirosina 21, alla nitrotirosina 10 o all'insieme di cinque gruppi carbossilici. Gli spostamenti chimici indotti da (III) e Eu(III) forniscono costanti di stabilità di 50 e 159 M-1 per l'associazione tra lantanidi e nitrotirosine rispettivamente 10 e 21. I tempi di correlazione per le interazioni con Gd(III) legato a specifiche nitrotirosine sono stimati dall'allargamento della linea indotto delle risonanze dei protoni dell'anello di nitrotirosina. Queste costanti di stabilità e tempi di correlazione vengono utilizzati per determinare le distanze dai diversi siti di legame dei metalli ai protoni NH sepolti della dorsale che hanno risonanze risolte. I confronti con le distanze nella struttura cristallina a raggi X forniscono assegnazioni delle risonanze NH a un piccolo insieme di NH\' della spina dorsale sepolti.
Analisi cinetica allo stato stazionario del meccanismo di idrolisi della guanosina trifosfato catalizzata dal fattore di allungamento G di Escherichia coli e dal ribosoma.La nitrazione della tirosina è stata studiata come mezzo per introducendo siti chelanti lantanidi in posizioni note nelle proteine. Le porzioni a basso campo degli spettri di risonanza magnetica nucleare 250-MHZ e 270-MHZ 1H dell'inibitore della tripsina pancreatica bovina nativa e chimicamente modificata sono state studiate in presenza di ioni lantanidi. i cambiamenti spettrali osservati con derivati nativi, mononitro (triosina 10) e dinitro (tirosine 10 e 21) consentono di attribuire separatamente questi cambiamenti al metallo legato alla nitrotirosina 21, alla nitrotirosina 10 o all'insieme di cinque gruppi carbossilici. Gli spostamenti chimici indotti da (III) e Eu(III) forniscono costanti di stabilità di 50 e 159 M-1 per l'associazione tra lantanidi e nitrotirosine rispettivamente 10 e 21. I tempi di correlazione per le interazioni con Gd(III) legato a specifiche nitrotirosine sono stimati dall'allargamento della linea indotto delle risonanze dei protoni dell'anello di nitrotirosina. Queste costanti di stabilità e tempi di correlazione vengono utilizzati per determinare le distanze dai diversi siti di legame dei metalli ai protoni NH sepolti della dorsale che hanno risonanze risolte. I confronti con le distanze nella struttura cristallina a raggi X forniscono assegnazioni delle risonanze NH a un piccolo insieme di NH\' della spina dorsale sepolti.
Effetti della iodurazione dei residui tirosile sul legame e sull'azione del glucagone al suo recettore.Il legame e l'azione del glucagone al suo recettore nel plasma epatico membrane sono state confrontate, in funzione del pH, con quella del glucagone contenente residui di iodotirosile. Il glucagone iodato, a pH 7,0 e inferiore, si lega al recettore e attiva l'adenilato ciclasi con un'affinità circa tre volte superiore a quella del glucagone nativo. 8.5, l'affinità del recettore per il glucagone nativo è la stessa di quella osservata a pH 7,0. Tuttavia, il glucagone iodato si lega con un'affinità ridotta con l'aumento del pH. La ridotta affinità dell'ormone iodato è correlata alla ionizzazione dei gruppi iodotirosil fenossi, che ha un pKa di 8,2. Si suggerisce che la ridotta affinità sia in realtà dovuta all'incapacità dello iodoglucagone ionizzato di legarsi al recettore. La potenza relativa di nativo e iodoglucagone dipenderà, quindi, dalla concentrazione zioni di specie ionizzate e non ionizzate di iodoglucagone, che a loro volta dipendono dal pH del mezzo. Concludiamo che l'incorporazione di atomi di iodio nei residui tirosilici del glucagone ha due effetti principali: (i) l'atomo di iodio aumenta l'interazione idrofobica dell'ormone con il recettore e (ii) la ionizzazione dei gruppi fenossi determina la perdita di attività biologica possibilmente come risultato della perdita della capacità di legame idrogeno. Pertanto, i residui tirosile nel glucagone sono coinvolti in modo critico nella funzione dell'ormone.
Nucleasi del fagiolo mungo I. Idrolisi diretta in modo terminale del DNA nativo.In condizioni che favoriscono la struttura duplex del DNA, la nucleasi del fagiolo mungo catalizza un numero limitato di scissioni a doppio filamento (probabilmente meno di 50) all'interno del DNA T7 nativo. Tuttavia, in condizioni che non sono così favorevoli a una struttura elicoidale stretta, i grandi polimeri duplex precedentemente prodotti sono completamente degradati dalle loro estremità con un accumulo continuo di mono-, di- e trinucleotidi. L'attività diretta terminale è una proprietà intrinseca della molecola enzimatica perché (1) è inattivata e riattivata in parallelo con l'attività a singolo filamento e (2) le due attività coelettroforesi su gel analitici Le misurazioni cinetiche indicano che il Km apparente per l'idrolisi diretta terminale del DNA nativo è relativamente alto Il pH ottimale sia per l'idrolisi del DNA denaturato che per l'idrolisi diretta terminale del DNA nativo diventa più acido con l'aumentare della concentrazione di sale. La preferenza relativa per le strutture a filamento singolo aumenta man mano che il pH diventa più basico.
Nucleasi del fagiolo verde I. Proprietà fisiche, chimiche e catalitiche.È stata sviluppata una procedura di purificazione semplificata per la nucleasi del fagiolo verde che produce un enzima stabile che è omogeneo per forma e dimensione. La nucleasi è una glicoproteina costituita dal 29% di carboidrati in peso. Ha un peso molecolare di 39.000 come determinato mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide in presenza di sodio dodecilsolfato. L'enzima contiene 1 gruppo sulfidrilico e 3 legami disolfuro per molecola. Ha un alto contenuto (12,6 moli %) di residui aromatici. Circa il 70% delle molecole di enzimi contiene una scissione del legame peptidico in una singola regione della proteina. I due polipeptidi, 25.000 e 15.000 dalton, sono legati covalentemente da un legame(i) disolfuro. Entrambe le forme scisse e intatte dell'enzima sono ugualmente attive nell'idrolisi dei legami dell'estere fosfato in DNA, RNA o adenosina 3\'-monofosfato. L'attività enzimatica di mung la nucleasi di fagioli può essere stabilizzata a pH 5 in presenza di acetato di zinco 0,1 mM, cisteina 1,0 mM e Triton X-100 0,001%. L'enzima può essere inattivato e riattivato mediante la rimozione e la riedizione di Zn2+ o composti sulfidrilici.
Purificazione, caratterizzazione e meccanismo catalitico del cervello bovino purina-nucleoside fosforilasi.Fosforilasi del cervello bovino purina-nucleoside (purina-nucleoside:ortofosfato ribosiltransferasi, EC 2.4.2.1) è stato purificato a omogeneità ad un'attività specifica di 78 mumol min-1 mg di proteina 1. Per l'enzima nativo è stato calcolato un peso molecolare di 78 000-80.000 mediante felfiltrazione su Sephadex. Elettroforesi su gel in presenza di sodio dodecil solfato indicava subunità di peso molecolare di 38 000. Gli studi chimici e cinetici hanno fortemente implicato l'istidina e la cisteina come gruppi catalitici nel sito attivo dell'enzima. I pKa\' determinati per i gruppi ionizzabili nel sito attivo dell'enzima libero sono stati 5.8 e 8.2. L'enzima completamente inattivato dal p-cloromercuribenzoato è stato parzialmente riattivato enzima. È stata osservata una forte suscettibilità alla fotoossidazione in presenza di blu di metilene. La fotoinattivazione era dipendente dal pH, implicita istidina come gruppo suscettibile nel sito attivo. Una rapida perdita di attività catalitica dopo l'incubazione a 55 gradi C ha suggerito labilità al calore. È stata calcolata un'energia di attivazione di 9,6 kcal/mol. È stata studiata la natura del meccanismo catalitico dell'enzima e gli studi sulla velocità iniziale hanno mostrato modelli convergenti lineari di grafici doppi reciproci dei dati, coerenti con un meccanismo catalitico sequenziale. Il modello di inibizione del prodotto era in contrasto sia con il Bi-Bi ordinato che con i meccanismi casuali. La competizione osservata tra purina e nucleoside, e tra ortofosfato inorganico e ribosio 1-fosfato per questo meccanismo ordinato, suggerisce un meccanismo di Theorell-Chance. Le costanti di Michaelis determinate per i substrati dell'enzima erano 4,35 X 10 (-5) M per la guanosina, 3,00 X 10 (-5) M per la guanina e 2,15 X 10 (-2) M per l'ortofosfato inorganico.
Riconoscimento del ribosio da parte della ribonucleasi T1: studi di legame spettrale differenziale con guanosina e deossiguanosina.Il legame della ribonucleasi T1 con guanosina (Guo) e deossiguanosina (dGuo ) è stato studiato in esperimenti che impiegano la spettroscopia a differenza ultravioletta nell'intervallo di pH 3-9 a forza ionica 0,2 M e 25 gradi C. Esperimenti simili sono stati condotti anche con psi-carbossimetil-glutammato-58 ribonucleasi T1 a pH 5,0. sono stati ottenuti lo spettro di differenza caratteristico e la costante di associazione. La costante di legame per dGuo era di circa 550 M-1 e non variava significativamente nell'intervallo di pH 3,5-9,0. La costante di legame per Guo è aumentata da pH 3,5 a 5,0, era costante tra pH 5,0 e 7.0 (circa 3200 M-1) e diminuiscono a valori di pH più elevati. Il legame di Guo e dGuo con ribonucleasi T1 potrebbe anche essere distinto in termini di lunghezza d'onda per la massima differenza di assorbimento, lambdamax, tra pH 5,0 e 7. 0. A valori di pH più alti e più bassi, lambdamax per Guo si è avvicinata a quella che ha trovato fr dGuo. D'altra parte, il valore della costante di legame (circa 6500 M-1) e la natura degli spettri di differenza per il legame di Guo e dGuo con lambdamax-carbossimetil-glutammato-58-ribonucleasi T1 a pH 5,0 erano identici. Questi risultati suggeriscono che l'interazione discreta del gruppo Guo 2\'-idrossile con la ribonucleasi T1 coinvolge il lambda-carbossilato del glutammato-58 e un gruppo imidazolo nel sito attivo.
Un confronto dell'effetto pupillocostrittore della soluzione di pilocarpina somministrata al sacco congiuntivale come una singola goccia o come infusione continua in soggetti normali.Pilocarpina è stata somministrato nel sacco congiuntivale di volontari normali mediante somministrazione di una singola goccia o mediante infusione continua di una soluzione al canto interno per mezzo di un sottile tubo Silastic Utilizzando la pupillocostrizione come misura di risposta è stato dimostrato che l'infusione con 0-01 per soluzione al cento di pilocarpina era efficace quanto una singola goccia di pilocarpina allo 0-5 per cento. La risposta alla singola goccia era più rapida all'inizio. È stato dimostrato che a pH 7-2 la pilocarpina era più efficace che a pH acido. il metodo è semplice da usare, comodo per lunghi periodi, ha il potenziale per ridurre la necessità di frequenti somministrazioni di gocce e per ridurre la quantità totale di farmaco somministrato e potrebbe essere utilizzato per farmaci diversi dalla pilocarpina.
La sensibilità di una linea cellulare maligna all'ipertermia (42 gradi C) a basso pH intracellulare.Il postulato che un basso pH intracellulare agisce come precondizionatore per gli effetti distruttivi dell'ipertermia (42 gradi C) è stato esaminato, utilizzando una linea termosensibile di cellule maligne derivate dalla ghiandola mammaria di ratto (SDB). Il pH intracellulare (pHi) è stato misurato indirettamente, dalla distribuzione dei deboli, non acido organico metabolizzabile 5,5-dimetil-2,4-ossazolidinedione (DMO) tra acqua intra ed extracellulare La respirazione, la glicolisi aerobica e anaerobica e anaerobica delle cellule sono state studiate a pHi normale (pH 7-0-7- 4) o a pHi basso (pH 6-2-6-6) e a 38 gradi C o 42 gradi C in 6 ore nei manometri Warburg; la capacità delle cellule di replicarsi in coltura è stata esaminata dopo 3 ore o 6 ore di incubazione nei palloni. La relazione tra pHi e pH extracellulare (pHe) dipendeva dal sistema tampone utilizzato e dall'esatto pH in questione; no assumpti per quanto riguarda il pHi basandosi solo sulla misurazione del pHe potrebbe essere effettuata. A 38 gradi C e pHi basso, l'effetto Pasteur è diventato negativo a causa di un'inibizione relativamente maggiore della glicolisi anaerobica rispetto a quella aerobica. La respirazione è rimasta inalterata e la capacità di replicazione cellulare inalterata. A 42°C e pHi normale, la respirazione era totalmente inibita dopo 4 ore e l'effetto Pasteur era diminuito, in questo caso a causa di un aumento compensatorio della glicolisi aerobica senza alterazione della produzione anaerobica di CO2. Un pHi basso in presenza di ipertermia ha consentito alla respirazione cellulare di continuare a un livello ridotto senza ulteriori cambiamenti nella glicolisi. C'era una replicazione cellulare ritardata dopo 3 ore a 42 gradi C e l'incapacità di moltiplicarsi dopo l'ipertermia di 6 ore: un pHi basso non ha influenzato questi risultati. Si conclude che con queste cellule tumorali, i valori di pHi mantenuti nella regione dell'unità di pH 1-0 al di sotto della norma per 6 ore non hanno avuto effetti dannosi sulle cellule. Non è stato osservato alcun effetto sensibilizzante del pHi basso per l'effetto distruttivo dell'ipertermia sulle cellule.
Valutazione delle azioni di blocco dei recettori alfa e beta del labetalolo.Le curve dose-risposta dell'isoprenalina che riportano gli aumenti della frequenza cardiaca prima e dopo il labetalolo sono suggestive di antagonismo competitivo nei siti beta-adrenergici Le curve dose-risposta di fenilefrina che utilizzano aumenti della pressione sistolica prima e dopo il labetalolo suggeriscono un antagonismo competitivo nei siti alfa-adrenergici Il rapporto di antagonismo alfa:beta-adrenergico indotto dal labetalolo è di circa 1: 3. Il picco di risposte farmacologiche dopo una singola dose orale di labetalolo (400 mg) si è verificato tra 90-120 minuti dopo la somministrazione.
Effetti residui e abilità legati alla guida dopo una singola somministrazione orale di diazepam, medazepam o lorazepam.Sono state misurate le abilità psicomotorie e le funzioni visive legate alla guida cross-over in doppio cieco in dieci volontari sani prima e 1,3,5 e 7 ore dopo una singola somministrazione orale di diazepam (10 mg), medazepam (15 mg) o lorazepam (2,5 mg). Gli effetti tardivi del lorazepam sono stati testato in altri sette soggetti 12 e 24 ore dopo la somministrazione. Il lorazepam ha alterato quasi tutte le abilità misurate in più (P inferiore a 0,05-0,001) rispetto a diazepam, medizepam o al placebo. L'alterazione delle capacità reattive del lorazepam e la discriminazione della fusione dello sfarfallio sono rimaste statisticamente significative (P inferiore a 0,05) fino a 12 ore. Medazepam ha alterato solo le capacità reattive e la fusione dello sfarfallio, quest'ultima rimanente alterata (P inferiore a 0,05) fino a 5 ore dopo la somministrazione. L'entità e la durata degli effetti di diazepam erano inter mediano tra quelli del lorazepam e del medazepam. Il diazepam ha alterato la velocità percettiva e le capacità reattive e coordinative, nonché la discriminazione della fusione dello sfarfallio e i parametri visivi relativi alla guida. Lievi alterazioni delle prestazioni erano misurabili fino a 5 ore dopo la somministrazione, ma a 7 ore i risultati erano simili a quelli misurati dopo il placebo. La mancanza di alterazioni nell'adattamento all'oscurità, la sensibilità alla luminosità o la capacità di discriminazione visiva in controluce brillante in un momento in cui la discriminazione della fusione dello sfarfallio era gravemente depressa suggerisce che una ridotta capacità di discriminare la luce tremolante non ha o ha un significato clinico minimo per la capacità di guida. Si conclude che i pazienti che ricevono una dose di 2,5 mg di lorazepam non devono guidare o utilizzare macchinari per 24 ore dopo la somministrazione. Dopo il diazepam (10 mg) o il medazepam (15 mg) i pazienti devono astenersi dal guidare o dalla partecipazione a prestazioni non qualificate solo per 5-7 ore.
Valutazione dei farmaci nella schizofrenia. Valutazione delle reazioni extrapiramidali indotte da farmaci e dei farmaci somministrati per il loro controllo.Ho cercato di far emergere alcune delle gli importanti problemi metodologici riscontrati nell'esaminare l'efficacia dei farmaci utilizzati nel controllo del parkinsonismo da farmaci facendo riferimento principalmente agli studi a cui ho preso parte. Spero di aver dimostrato che l'intero argomento è molto meno compreso di quanto spesso si creda. i punti principali possono essere riassunti come segue: vi è dubbio che molti dei farmaci utilizzati nel controllo del parkinsonismo indotto da farmaci siano davvero efficaci; i risultati di molti studi sono contrastanti; molti studi contengono gravi difetti nella progettazione; metodi per valutare i segni extrapiramidali non sono ben sviluppati; ignoriamo il modo in cui i segni extrapiramidali indotti da farmaci cambiano spontaneamente. È evidente la necessità di ulteriori ricerche in questo settore per migliorare le tecniche di valutazione, per fornire basi c informazioni sulle sindromi indotte da farmaci e di esaminare rigorosamente l'efficacia dei farmaci utilizzati nel controllarle.
Effetto dell'N-desmetildiazepam (nordiazepam) e di un precursore, il clorazepato di potassio, sul sonno nell'uomo.1 L'effetto dell'N-desmetildiazepam (nordiazepam , 5 e 10 mg) e clorazepato di potassio (15 mg, un precursore del nordiazepam) sul sonno sono stati studiati in sei maschi adulti sani. L'elettroencefalografia (EEG) è stata utilizzata per le misurazioni del sonno e scale analogiche sono state utilizzate per le valutazioni soggettive del benessere e la qualità del sonno.2 Gli effetti sul tempo totale di sonno erano limitati alla notte di ingestione. Ci sono stati aumenti con nordiazepam (5 e 10 mg) (P = 0,05) e 0,001 rispettivamente) e con clorazepato (15 mg) (P \ = 0,01). Le latenze di insorgenza del sonno sono state accorciate, in particolare con il nordiazepam, e il risveglio all'attività dello stadio 0 è stato ridotto da entrambi i farmaci. La latenza allo stadio 3 è stata ridotta dal nordiazepam (5 e 10 mg) (P = 0,05).3 Non ci sono stati effetti del nordiazepam (5 mg) sulla durata (min) delle fasi del sonno Nordiazepam (10 mg) e clorazepat e (15 mg) ha ridotto la durata dello stadio 0 e dello stadio 1 e ci sono stati aumenti nello stadio 2. Durante la notte di recupero sono stati osservati una riduzione del sonno dello stadio 1 e un aumento dello stadio 2. Non sono stati osservati effetti con lo stadio 3, ma c'erano prove che l'attività dello stadio 4 fosse depressa solo nella notte di recupero. Non sono stati osservati effetti sul sonno REM, tranne per il fatto che l'aspetto del primo periodo REM è stato ritardato con clorazepato (15 mg) P = 0,01). L'effetto del nordiazepam (10 mg) e del clorazepato (15 mg) era paragonabile e ciascuno ha modificato il sonno per circa 28-30 ore dopo l'ingestione. 4 Con nordiazepam (10 mg) e clorazepato (15 mg) i soggetti, come gruppo, hanno riportato un miglioramento del sonno, ma le valutazioni soggettive del benessere non sono state alterate. Le correlazioni sono state calcolate per le misurazioni del sonno e le valutazioni soggettive.
Gli effetti dell'atenololo (tenormina) e della metildopa su semplici test della funzione nervosa centrale.Due studi identici, uno che confronta l'effetto di singole dosi di un nuovo beta-bloccante adrenergico, atenololo (Tenormin) (50 mg e 100 mg) e placebo, e l'altro che confrontava l'effetto di singole dosi di metildopa (250 mg e 500 mg) e placebo, in volontari sani. 2 In entrambi gli studi è stato misurato l'effetto dei farmaci su tempo di reazione, frequenza critica di sfarfallio, sonnolenza soggettiva, frequenza cardiaca e pressione sanguigna 3 L'atenololo non ha prodotto alcun effetto su tempo di reazione, frequenza critica di sfarfallio o sensazioni soggettive, mentre la metildopa ha prodotto un effetto statisticamente significativo prolungamento del tempo di reazione e un aumento statisticamente significativo della sensazione soggettiva di sonnolenza.4 L'atenololo ha prodotto riduzioni statisticamente significative della pressione sanguigna sistolica e diastolica e della frequenza cardiaca mentre la metildopa non ha avuto effetto. 5 Si conclude che è improbabile che l'atenololo produca gli effetti collaterali di sedazione o sonnolenza.
Valutazione farmacologica della cimetidina, un nuovo antagonista del recettore H2 dell'istamina, in un uomo sano.La cimetidina, un nuovo antagonista del recettore H2, è stata somministrata in sicurezza a diciotto uomini sani per via endovenosa, intraduodenale o orale.2 Quando la secrezione gastrica era massimamente stimolata dall'istamina o dalla pentagastrina, la somministrazione simultanea di cimetidina produceva una marcata inibizione della secrezione sia acida che pepsina.3 La cimetidina era ben assorbita per via orale e aveva un'emivita ematica di 2 ore. 4 La cimetidina è stata rapidamente escreta attraverso i reni e circa il 70% del materiale escreto era farmaco immodificato. 5 Si raccomanda la valutazione clinica della cimetidina in pazienti con ulcera peptica.
Antagonismo isoprenalino di agenti bloccanti dei recettori beta-adrenergici cardioselettivi su adipociti umani e di ratto.1. Le potenze bloccanti beta-adrenergiche del practololo, ICI 66082 , tolamololo, acebutololo, H 93/26, H 87/07, pindololo e Ro 3-4787 sono stati confrontati con quello del propranololo, su adipociti umani e di ratto 2. È stata trovata una buona correlazione tra le potenze sugli adipociti delle due specie ma non tra i nostri risultati e i dati della letteratura sull'antagonismo della tachicardia isopernalina nel gatto anestetizzato. 3. I risultati indicano che le differenze tra i recettori beta adrenergici nel cuore e nel tessuto adiposo possono essere rilevate utilizzando agenti bloccanti dei recettori beta-adrenergici cardioselettivi.
I primi cambiamenti nella parete arteriosa dei polli alimentati con una dieta a base di colesterolo.Un totale di 160 polli di 1-2 giorni sono stati nutriti con un colesterolo del 2% dieta per un periodo da 8 a 42 giorni e confrontate con un ugual numero di controlli. Le aorte sono state analizzate per vari indici di reattività del tessuto connettivo, contenuto di colesterolo e caratteristiche al microscopio elettronico a scansione (SEM) del rivestimento endoteliale. fino a 6 settimane ha provocato il raddoppio del livello di colesterolo sierico. Tuttavia, non ha avuto effetto sull'attività della prolil idrossilasi, lisil ossidasi, collagenasi e contenuto di collagene nella parete aortica. Già dopo 3 settimane di alimentazione si sono verificati cambiamenti significativi nella contenuto di colesterolo totale ed esterificato. Allo stesso tempo le cellule endoteliali erano caratteristicamente contratte con diversi lunghi allungamenti e protrusioni citoplasmatiche. Una significativa diminuzione dell'attività degli enzimi di cui sopra è stata trovata nel tessuto aortico con aumento età del pollo. Il contenuto di collagene nell'aorta aumenta con l'età dei polli. Si conclude che il colesterolo come agente aterogenico induce cambiamenti marcati nelle cellule endoteliali e nei lipidi dell'aorta di pollo in periodi precedenti, prima dell'attivazione del tessuto connettivo.
Adattamenti di enzimi per la regolazione della funzione catalitica.1. Gli enzimi non devono essere solo catalizzatori estremamente efficaci, ma devono anche essere i componenti operativi di sistemi regolatori sensibili e sofisticati. Un appropriato aggiustamento evolutivo delle proprietà di diversi enzimi fa sì che i siti che legano i tipici intermedi metabolici siano solo parzialmente saturati in vivo, consentendo così flessibilità per il controllo mediante variazione della concentrazione di ligandi. Al contrario, i siti che legano tale accoppiamento agenti come i nucleotidi piridina e adenina sembrano essere praticamente saturi. Quindi i rapporti, piuttosto che le concentrazioni assolute, di questi composti sono importanti nella regolazione metabolica. Questo tipo di risposta è essenziale per la funzione di questi composti simultaneamente come trasduttori di energia termodinamica e modificatori nel sistema di regolazione della cinetica 2. Si incontrano frequentemente ordini di reazione da due a quattro. Sembrano essere essenziali all'omeostasi biochimica, che è il mantenimento di concentrazioni di substrato quasi costanti a spese di un'ampia variazione nelle velocità di flusso. 3. Le strategie di adattamento enzimatico sono generali, ma gli adattamenti effettivi degli enzimi sono altamente specifici, riflettendo il posto dell'enzima in una sequenza metabolica, il posto della sequenza nel metabolismo della cellula e, negli organismi complessi, la funzione della cellula, e dell'organo o tessuto di cui fa parte, nell'organismo. I modelli di adattamento devono essere variati quasi all'infinito. Alcuni sono attualmente conosciuti a grandi linee, ma probabilmente nessuno ancora in dettaglio. Vengono discussi diversi esempi.
Anaerobiosi facoltativa nei molluschi.La fermentazione glicolitica dei molluschi è piuttosto complessa. Si accumulano più prodotti finali (lattato, alanina, octopina, succinato, propionato, acetato e CO2), che si formano in parte nel citoplasma e in parte nel mitocondrio. Sono stati presentati vari schemi per tenere conto di questi prodotti finali e per il mantenimento dell'equilibrio redox. Per quanto riguarda il ruolo dell'alanina ci sono due opinioni: (1) l'accumulo di alanina è continuo ed è essenziale per la generazione del NADH mitocondriale richiesto nella riduzione del fumarato e (2) il succinato e l'alanina (prodotti finali iniziali) si accumulano in diversi compartimenti e il loro accumulo avviene indipendentemente. valutati alla luce delle ultime osservazioni sperimentali comprese le proprietà regolatorie al branchpoint del fosfoenolpiruvato e l'effetto del pH e della \'carica energetica\'. Per il tessuto nervoso il la funzione dell'ossigeno può essere sostituita dal pigmento lipocromo, che permette ai carboidrati di essere totalmente ossidati a CO2 e acqua. La mobilitazione simultanea di carboidrati e amminoacidi non è supportata dai dati sperimentali. Vengono discussi vari vantaggi della fermentazione glicolitica nei molluschi rispetto alla glicolisi classica nel muscolo scheletrico.
[Alterazioni della meccanica del muscolo papillare del gatto indotte da variazioni di precarico al variare dei parametri fisici e chimici (transl dell'autore\'s)].Un rapido la variazione di lunghezza del muscolo papillare del gatto induce due processi diastolici e sistolici reciproci: lo stretching provoca un rilassamento viscoelastico del muscolo, il comportamento opposto si osserva dopo bruschi rilasci quando - a seguito di un aumento della tensione a riposo - la forza diastolica raggiunge il suo nuovo equilibrio. il processo di rilassamento indotto dall'allungamento è accompagnato da una transitoria diminuzione delle ampiezze del meccanogramma, quindi un rilascio è seguito da un temporaneo aumento della prestazione muscolare isometrica. I meccanogrammi dello stato stazionario risultano essere funzione del grado di allungamento o rilascio, mentre le contrazioni muscolari nella prima fase di rilassamento da sforzo dipendono dallo stato contrattile prima del cambiamento di lunghezza Tutti gli interventi che aumentano la tensione sviluppata (aumento c alcium, diminuzione del potassio, aumento o diminuzione delle concentrazioni di sodio, stronzio, potenziamento postextrasistolico, agenti simpaticomimetici, potenziamento della frequenza) diminuiscono i fenomeni transitori dovuti allo stiramento, mentre aumenta la bassa frequenza o una minore intensità di accoppiamento elettromeccanico (Esobarbital, Iproveratril, Desossicorticosterone, Ryanodina). loro. Una diminuzione della temperatura del bagno aumenta l'aumento transitorio della forza dovuto a un rilascio o una riduzione iniziale della tensione isometrica dopo un allungamento improvviso, sebbene le forze assolute aumentino. Non è stato possibile osservare cambiamenti sostanziali nei gatti reserpinizzati con agenti beta-bloccanti o in ipossia. Si suppone che alterazioni nel decorso temporale del potenziale d'azione possano essere correlate a fenomeni sistolici post-stiramento e post-rilascio. Un'interpretazione finale degli eventi meccanici ed elettrici dopo l'allungamento e il rilascio non è possibile con i metodi utilizzati in questi esperimenti.
Deficit di maltasi acida a esordio tardivo. Rilevazione di pazienti ed eterozigoti mediante analisi degli enzimi urinari.Escrezione urinaria giornaliera di maltasi acida (12,78 +/- 2,10) unità/24 ore/mg di creatinina, in 11 adulti normali) era significativamente ridotta in dieci pazienti con deficit di maltasi acida a esordio tardivo (1,33 +/- 0,16 unità/24 ore; P inferiore a 0,001) e 11 eterozigoti (3,27 + /- 0,62 unità/24 ore; P inferiore a 0,001). L'inibizione massima dell'attività della maltasi acida urinaria da parte degli anticorpi contro l'enzima placentare umano è stata del 53% nei controlli, del 30% negli eterozigoti e praticamente assente nei pazienti. l'inibizione enzimatica da parte degli anticorpi ha confermato la presenza nel rene di un enzima "extra" della maltasi immunologicamente distinto attivo a pH acido. Se la maltasi acida nelle urine normali ha origine nel rene o nelle cellule del tratto urinario inferiore, il difetto enzimatico sembra essere espresso in queste cellule nel deficit di maltasi acida a esordio tardivo.