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Equilibrio idrolisi-risintesi del legame peptidico lisina-15-alanina-16 nell'inibitore della tripsina bovina (Kunitz).Quantità catalitiche di beta bovino -tripsina, alfa-chimotripsina bovina e plasmina suina stabiliscono un vero equilibrio termodinamico tra vergine (I) (sito reattivo Lys15-Ala16 legame peptidico intatto) e modificato (I) (questo legame idrolizzato) inibitore della tripsina/callicreina bovina (Kunitz). velocità di reazione molto lente per raggiungere l'equilibrio dipendono dal pH e differiscono per i diversi enzimi. Le velocità ottimali sono per la beta-tripsina a pH 3,75, per l'alfa-chimotripsina a pH 5,5 e per la plasmina a pH 5,0. In condizioni di pH ottimale l'equilibrio viene raggiunto con il tasso più alto dalla plasmina. Nelle soluzioni di inibitore 10(-5)M le concentrazioni di equilibrio di inibitore vergine e modificato sono stabilite dalla plasmina dopo quasi 300 giorni a partire da inibitore vergine puro o puro modificato. Così, la costante di idrolisi KHyd = [io]/[io] è determinato essere 0,33 a pH 5,0. Nonostante molti tentativi falliti, ciò dimostra che il legame peptidico del sito reattivo Lys15-Ala16 nell'inibitore della tripsina bovina (Kunitz) può essere idrolizzato da quantità catalitiche di endopeptidasi. Conferma inoltre che il legame peptidico Lys15-Ala16 idrolizzato nell'inibitore modificato è soggetto a risintesi di controllo termodinamico.
Purificazione e caratterizzazione di quattro polipeptidi con attività neurotossica da Condylactis aurantiaca.Quattro polipeptidi tossici, Tossine I, II, III e IV sono stati isolati in purezza forma dall'anemone di mare Condylactis aurantiaca (Actinaria) L'isolamento della tossina è stato ottenuto mediante estrazione alcolica degli anemoni di mare omogeneizzati, adsorbimento discontinuo su scambiatori di cationi, gel filtrazione su Sephadex G-50 e G-25 e cromatografia a scambio ionico su SP-Sephadex e QAE-Sephadex. Le tossine di Condylactis aurantiaca contengono tutte tra 49 e 51 amminoacidi. Le loro composizioni amminoacidiche sono state confrontate con quelle delle tossine Anemonia sulcata. Le tossine sono state testate sul granchio costiero Carcinus maenas mediante iniezione intramuscolare. I granchi reagiscono in modo altamente sensibile alle tossine dell'anemone di mare con crampi muscolari e paralisi. Per le tossine Condylactis LD100 varia da 2 a 6,6 mug/kg Carcinus maenas.
[Effetto del 2-idrossiestradiolo-17beta sul trasferimento di elettroni NADPH-dipendente in microsomi epatici di ratto in vitro (autore\'s transl)].Se microsomi di fegato di ratto sono incubati con NADPH e 2-idrossiestradiolo-17beta in vitro, si osserva quanto segue: 1. Inibizione della perossidazione lipidica, 2. inibizione della riduzione del citocromo P-450, e 3. inibizione della riduzione del citocromo b5. catecolo inibisce la perossidazione lipidica dei liposomi in vitro. Questi fenomeni possono essere spiegati dall'interazione di diversi stati di ossidazione dell'estrogeno con la NADPH-citocromo reduttasi e con i radicali 0-2, che porta al "disaccoppiamento" terminale del trasporto di elettroni microsomiali.
La stabilità della forma insolubile di uridina chinasi di Zn2 + o ioni Pb2 +.", parzialmente purificato cervello vitello uridina chinasi precipitato da cationi metallici bivalenti è stato confrontato con la frazione enzima solubile quanto riguarda la sua stabilità in presenza di fattori inattivanti. le preparazioni liofilizzate di uridina chinasi precipitaated da Pb2 + o Zn2 + ioni, althouth enzimaticamente altamente attivo, sono insolubili in soluzioni acquose. l'attività degli enzimi metalli insolubilizzato scompare durante la preincubazione in mezzi acidi o in presenza di ioni argento. tripsina, chimotripsina e catepsina B1 causato anche diminuzioni attività enzimatica. Tuttavia, frazioni che sono state precipitate da ioni metallici e liofilizzati sono stabili alle alte temperature, mentre l'attività di uridina solubile chinasi è completamente persa. sia metallo-ione non riscaldata precipitato uridina chinasi preparazioni e quelli riscaldata a 100 ° C sono ugualmente sensibili al feed eseguire inibizione da CTP.
Concentrazione plasmatica di insulina durante variazioni fisiologiche della secretina plasmatica immunoreattiva.L'effetto della secretina endogena ed esogena sull'insulina plasmatica a digiuno e sulle concentrazioni di glucosio nel sangue venoso periferico è stato studiato. In 10 soggetti non diabetici l'instillazione intragastrica di 300 ml di acido cloridrico 0,1 mol/l ha aumentato significativamente la concentrazione plasmatica di secretina. Questo incremento non ha influenzato la concentrazione di insulina o glucosio. Esperimenti di controllo con instillazione intragastrica di 300 ml di soluzione salina isotonica non hanno influenzare la concentrazione plasmatica di secretina, insulina o glucosio In altre quattro persone non diabetiche non sono stati riscontrati cambiamenti significativi nella concentrazione plasmatica di insulina o glucosio durante un'infusione ev di secretina suina naturale pura a dosi di 0,1, 0,3, 1,0 e 3,0 unità cliniche /kg/h. I risultati suggeriscono che la secretina non ha effetto sulla secrezione di insulina nel soggetto normale a digiuno.
[Studio di campo sulla diminuzione dei lipidi mediante etofibrato].E' stato eseguito uno studio di campo su Etofibrat su 4405 pazienti affetti da iperlipoproteinemia primaria e secondaria. I risultati sono stati dimostrati statisticamente. Dopo un trattamento di 3-4 settimane la concentrazione di colesterolo e trigliceridi nel siero è diminuita significativamente. Dopo 6-8 settimane di trattamento l'effetto ipolipemizzante è stato ancora più forte. Quasi il 90% dei pazienti esaminati ha dato una risposta positiva al trattamento. Una parte della popolazione era stata precedentemente sottoposta a trattamento con altri agenti ipolipemizzanti, molto probabilmente senza sufficiente successo, in questi casi è stato possibile dimostrare un ulteriore effetto ipolipemizzante dovuto a Etofibrat. la premedicazione non può essere esclusa. La stratificazione dei pazienti in diversi gruppi di diagnosi ha mostrato una quasi somiglianza di entrambi i lipidi nel sangue indipendentemente dalla diagnosi. Ciò potrebbe essere confermato anche per il gruppo di pazienti affetti ing dal diabete. Per dimostrare l'efficacia ipolipemizzante di Etofibrat, una popolazione è stata ritirata dal trattamento. Il colesterolo e i trigliceridi sono aumentati significativamente durante l'intervallo senza trattamento. Durante uno studio a lungo termine entrambe le frazioni lipidiche potrebbero essere ridotte senza aumentare la dose giornaliera di Etofibrat. La tolleranza di Etofibrat è stata dichiarata da buona a molto buona. Oggettivamente gli enzimi misurati SGOT, SGPT e gamma-GT hanno mostrato una diminuzione delle medie. Soggettivamente era rilevante il verificarsi di una sensazione di calore e/o rubedo spesso intermedia.
[Studi galenici di un nuovo farmaco gastroterapeutico].Questo documento presenta i metodi per le indagini galeniche di un nuovo preparato gastroterapeutico. I risultati e le loro possibili vengono discusse le relazioni con la terapia. Il preparato viene presentato in una compressa rivestita. Le sue caratteristiche antiacide relative al tasso di efficacia, potenza e durata vengono confrontate con i marchi leader sul mercato tedesco. Inattivazione della pepsina insieme alla rapida liberazione dell'agente spasmolitico propantelina e l'agente stabilizzante psichicamente peranzina. Vengono descritti i risultati dei test di stabilità per i principi attivi e la disponibilità in vitro. Il nuovo prodotto è un preparato gastroterapeutico, che soddisfa tutti i requisiti per un'azione rapida e una terapia affidabile.
Eterogeneità del clone ricombinante nella congiunzione di Escherichia coli: effetto del pH e dell'acido desossiribonucleico ricevente parzialmente replicato.A pH 6.8, è stata ottenuta una frazione sostanziale di colonie ricombinanti dalla coniugazione con un donatore di HfrH conteneva più classi ricombinanti in un'unica colonia (colonia poligenotipica). Al contrario, quando la coniugazione è stata eseguita a pH 7,6, il numero di colonie poligenotipiche è stato drasticamente ridotto e le colonie ricombinanti erano prevalentemente monogenotipiche o digenotipiche. L'analisi genetica ha rivelato che i ricombinanti digenotipici differiscono in quei marcatori del donatore vicino all'origine della replicazione del DNA ma condividono quei marcatori del donatore vicino al capolinea. Questo modello di integrazione suggerisce che la formazione di ricombinanti digenotipici comporta la ricombinazione di una singola copia dell'esogenoma con un parzialmente replicato molecola di DNA ricevente Questo suggerimento è stato supportato dall'esame del genotipo del colo ricombinante nies recuperato da incroci con un donatore HfrKL96 che è stato derivato da HfrH ma trasferisce il suo cromosoma nella direzione inversa.
Effetti del carbenoxolone sulla permeabilità della mucosa gastrica e sul flusso sanguigno nel cane.Gli effetti dell'applicazione topica di carbenoxolone a pH neutro e acido sono stati confrontati in segmenti esteriorizzati e a camera di corpo gastrico canino. Quando disciolto in soluzione salina a pH 7,5-8,0, il carbenoxolone 0,25% ha causato un rapido calo della differenza di potenziale gastrico di 56 +/- 2 mv e un notevole aumento della permeabilità agli ioni H+. Flusso sanguigno, come misurato da microsfere radioattive, non è stato modificato dal trattamento con carbenoxolone, ma la successiva esposizione a HC1 isotonico ha causato un brusco aumento del flusso. L'applicazione della sospensione di carbenoxolone allo 0,25% in HC1 isotonico non ha causato alcun cambiamento nella differenza di potenziale, nella permeabilità o nel flusso sanguigno. un effetto significativo sulla retrodiffusione o sulla lesione dell'H+ indotta dall'aspirina.
Rilascio di gastrina gastrica ed extragastrica in soggetti normali in pazienti con ulcera duodenale e in pazienti con gastrectomia parziale (Billroth I).In 10 soggetti normali, in 32 pazienti con ulcera duodenale (DU) e in 11 pazienti con gastrectomia parziale (Billroth I), la gastrina sierica è aumentata significativamente dopo un pasto di prova orale e intraduodenale. Gli aumenti più elevati sono stati osservati nei pazienti con DU dopo la somministrazione orale e dopo pasto di prova intraduodenale Dopo il pasto di prova intraduodenale in 4 soggetti normali e in 17 pazienti con DU è stato misurato un aumento della secrezione acida gastrica e della gastrina sierica In stato basale, dopo un pasto di prova intraduodenale o orale, pazienti con DU con secrezione acida gastrica normale capacità aveva concentrazioni di gastrina sierica più elevate rispetto ai pazienti con DU con ipersecrezione gastrica. C'era una buona correlazione tra i livelli di picco di gastrina sierica dopo il pasto di prova orale e dopo il test intraduodenale. Da questi dati si conclude: (1) Intrad l'applicazione odenale di un pasto di prova determina il rilascio di gastrina da siti extragastrici. (2) La gastrina extragastrica è biologicamente attiva. (3) I pazienti con DU sono in grado di rilasciare più gastrina antrale ed extragastrica in risposta a un pasto di prova. Tuttavia, sono necessari ulteriori studi per mostrare il significato di questi risultati nella patogenesi dell'ulcera peptica.
[Effetti collaterali cutanei di farmaci sistemici. Parte 4 di una sinossi. 6/7. Farmaci che colpiscono il sistema nervoso centrale. C. Fotosensibilità indotta da farmaci. D. Farmaci- cambiamenti indotti del colore della pelle].Questa, la quarta parte di una sinossi degli effetti collaterali cutanei dei farmaci, copre i farmaci che colpiscono il sistema nervoso centrale: antiepilettici, ipnotici, narcotici e psicofarmaci; i miorilassanti e gli antiallergici seguono, ed infine c'è una sezione sulla tossicodipendenza e sul placebo. I vari effetti collaterali cutanei sono elencati in forma di grafico facendo riferimento a più di 500 fonti. Un indice dei farmaci è allegato per un riferimento pratico. Le recensioni di alcuni disturbi della pelle indotti da farmaci continuano con tabelle che coprono la fotosensibilità e le variazioni del colore della pelle. Vengono differenziate la fototossicità, la fotoallergia e la sensibilità alla luce da porfiria. Sono inclusi i vari disturbi della pigmentazione, i cambiamenti di colore dovuti ai depositi di metallo e le diverse localizzazioni.
[Studi di vari fattori nel dosaggio radioimmunologico dell'ormone che rilascia la tireotropina TRH) per siero (transl dell'autore\'s)].Per studiare il significato del TRH in è necessaria la misurazione dell'asse ipotalamo-ipofisi-tiroide del TRH nel fluido corporeo. Abbiamo precedentemente riportato il dosaggio radioimmunologico del TRH per l'urina. Il dosaggio radioimmunologico del TRH per il siero non è stato ancora stabilito, perché l'immunoreattività del TRH è inattivata con il siero. Abbiamo studiato gli effetti di vari fattori su questa inattivazione e metodo per prevenire questa inattivazione. Il TRH sintetico è stato aggiunto al siero umano normale a 4 gradi C e incubato a 60 gradi C, 37 gradi C, 20 gradi C, 4 gradi C o -20 gradi C per vari intervalli. Dopo l'incubazione, è stato misurato il recupero di TRH Dopo un'ora di incubazione, il recupero di TRH era del 9,2% a 37 gradi C, 34,5% a 20 gradi C, 100% a 4 gradi C o -20 gradi C. Incubazione delle miscele di siero di TRH a 65 gradi C dopo l'incubazione a 37 gradi C ha provocato s ome recupero di TRH. Dopo un'ora di incubazione a 37 gradi C, il recupero di TRH era del 9,2% a pH sierico 7,0, 100% a pH sierico da 3,0 a 5,0 o 11,0. Il recupero di TRH è stato aumentato in accordo con l'aumento graduale della diluizione del siero. Le concentrazioni dell'ormone tiroideo sierico non hanno influenzato il recupero di TRH. Quantità minori di TRH sono state inattivate più rapidamente. L'inattivazione dell'immunoreattività del TRH potrebbe essere prevenuta aggiunta di BAL (oltre 0,25 mg/ml) o miscela di 8-idrossichinolina (HQ) e Tween 20 (T) (oltre 0,1 mg/ml di HQ e 1 lmg/ml di T). La durata dell'efficacia del BAL è stata breve. L'efficacia dell'HQT è continuata per 12 settimane, se il siero trattato con HQT è stato conservato a -20 gradi C. Dai dati di cui sopra è stato suggerito che l'immunoreattività del TRH potrebbe essere inattivata con il sistema enzimatico e altri fattori e che i livelli di TRH nel siero potrebbero essere misurati con aggiunta di HQT al siero.
Effetti dei farmaci autonomi sulle contrazioni dell'epididimo.La contrattilità spontanea dell'epididimo di ratto è stata registrata in vivo e sono stati studiati gli effetti di vari farmaci autonomici. Norepinefrina , epinefrina e orciprenalina hanno prodotto un improvviso aumento del tono e delle dimensioni e della frequenza delle contrazioni dell'epididimo. La fentolamina (un agente alfa-bloccante) ha inibito gli effetti della noradrenalina. D'altra parte, l'alprenololo (un agente beta-bloccante) ha inibito la effetti dell'orciprenalina ma non bloccano gli effetti della noradrenalina. Inoltre, la fentolamina e l'alprenololo diminuiscono l'attività spontanea dell'epididimo. L'acetilcolina produce effetti simili a quelli della noradrenalina. Questi effetti sono bloccati dall'atropina. I risultati descritti indicherebbero la presenza di i due recettori, alfa e beta, e che entrambi sono mediatori di effetti stimolatori.
Attività alfa-adrenergica della N,N-dimetildopamina (DMDA).L'attività autonomica e cardiovascolare della N,N-dimetildopamina (DMDA) è stata studiato nel cane e nel coniglio. Il DMDA sembra essere un agonista simpatico postgangliare degli alfa-adrenorecettori poiché ha costantemente causato vasocostrizione in diversi letti vascolari isolati, anche in presenza di blocco gangliare. L'attività pressoria del DMDA è stata attenuata dall'antagonista alfa-adrenergico fentolamina. I valori di pA2 calcolati per la fentolamina contro DMDA e noradrenalina nelle arterie isolate di coniglio erano in stretto accordo. Il DMDA inibisce le risposte cronotrope indotte dalla stimolazione del nervo cardioacceleratore mediante un meccanismo che sembra essere alfa-adrenergico nel cane.
Analisi cinetica di un sito di legame catecolo-specifico nella frazione microsomiale dell'aorta di coniglio.(-)-3/-Norepinefrina (3H -NE) è stato studiato il legame alla frazione microsomiale dell'aorta di coniglio. Il legame sembra aumentare linearmente con il tempo fino ad almeno 30 min, non mostra evidenza di stereoselettività e può essere inibito solo da composti che possiedono il catecolo o 3-metossi- frazioni 4idrossifenile, con quest'ultimo 100 volte meno efficace. Il legame 3H-NE è saturabile con un Km di 8,5 X 10(-8) M e V max di 28 pmoli/mg di proteina. Un grafico di Hill indica che il legame non è cooperativo mentre un diagramma di Scatchard suggerisce che potrebbero essere presenti due siti. Il legame non sembra richiedere concentrazioni fisiologiche di Ca2+ o Mg2+ ed è inibito in modo significativo da EDTA e metabisolfito di sodio. Inoltre, il legame è notevolmente migliorato da valori di pH bassi e alti. Questo legame è anche inibito dal metabisolfito di sodio che suggerisce che a n forma ossidata della catecolamina è la specie legante attiva. Esperimenti con diversi reagenti specifici del gruppo indicano che il legame può richiedere un gruppo sulfidrilico libero ma non una funzione carbossilica. Il processo di legame richiede un'energia di attivazione di 14,8 kcal/mole la cui grandezza può essere in parte spiegata, con l'ausilio di spettri di dispersione rotatoria ottica, da un cambiamento conformazionale non stereoselettivo della struttura proteica indotto dall'ammina. Le caratteristiche dei siti di legame 3H-NE osservati nella frazione microsomiale dell'aorta di coniglio sembrano essere diverse da quelle attese se il legame fosse agli adrenorecettori. Viene presentato un possibile meccanismo per il legame delle catecolamine ai gruppi sulfidrilici liberi sulle proteine.
Risposte ipotensive a seguito di somministrazione orale di farmaci beta-bloccanti adrenergici al gatto cosciente.Alla somministrazione orale, i farmaci beta-bloccanti non selettivi (+/-)-bufuralolo, (-)-bufuralolo, propanololo, oxprenololo, pindololo e alprenololo hanno prodotto risposte ipotensive nel gatto cosciente; (+)-bufuralolo non ha avuto effetto. I farmaci bloccanti beta-adrenergici selettivi practololo e atenololo non hanno avuto effetto sulla pressione sanguigna ma il tolamololo ha suscitato una risposta ipotensiva. Tutti i farmaci testati hanno ridotto la tachicardia dovuta all'isoprenalina per via endovenosa nel gatto cosciente; tuttavia, non tutte le dosi di questi farmaci hanno ridotto la pressione sanguigna. (+)-Il bufuralolo era privo di beta-adrenocettivi attività bloccante. Solo il tolamololo ha ridotto la risposta pressoria alla fenilefrina ev nel gatto cosciente, indicando che l'attività di blocco alfa-adrenocettivo può contribuire alla sua azione ipotensiva. I risultati suggeriscono che il blocco beta-adrenocettivo l'attività è necessaria per le risposte ipotensive di questi farmaci. Tuttavia, per i diversi farmaci, non vi era alcuna correlazione tra l'attività di blocco beta-adrenocettivo periferico e la risposta ipotensiva.
Effetto del propranololo sulle risposte vascolari alla stimolazione del nervo simpatico e all'attività della renina plasmatica nei cani meticci.somministrazione endovenosa di propranololo (0,2 mg/kg e 1,0 mg/kg) ai cani anestetizzati con pentobarbital ha prodotto il blocco dei beta-recettori cardiaci e una significativa diminuzione della frequenza cardiaca. Tuttavia, solo la dose più elevata di propranololo ha dimostrato un significativo effetto ipotensivo. Inoltre, questa azione ipotensiva del propranololo non è stata associata né a blocco del neurone adrenergico o alterazioni dell'attività della renina plasmatica. Questi risultati indicano che l'azione ipotensiva iniziale del propranololo nei cani meticci non è dovuta al blocco dei recettori beta, ad alterazioni della trasmissione nervosa simpatica periferica o all'attività della renina plasmatica. l'azione che il propranololo è segnalato per avere all'interno del sistema centrale può svolgere un ruolo importante nel tenere conto dell'azione di abbassamento della pressione sanguigna acuta del composto in mon cani grel.
Il sistema di generazione di AMP ciclico noradrenergico nel proencefalo limbico: caratterizzazione farmacologica in vitro e possibile ruolo dei meccanismi noradrenergici limbici nel meccanismo d'azione degli antipsicotici.Il sistema di generazione di AMP ciclico in fette del proencefalo limbico di ratto è stato studiato. In consiste di: (u) Un sistema noradrenergico che risponde alla noradrenalina (NE) e all'isoproterenolo. Sebbene l'aumento del nucleotide suscitato dall'isoproterenolo sia più rapido di quello causato da NE, l'effetto massimo è inferiore alla metà di quello indotto da NE; (2) un sistema adenosina-dipendente Il sistema di generazione di AMP ciclico noradrenergico nel proencefalo limbico mostra una serie di proprietà di un recettore centrale di NE: sviluppa la supersensibilità a NE e isoproterenolo a seguito di prolungata privazione di NE a livello postsinaptico (trattamento cronico con reserpina o chemiosimpatictomia con 6-idrossidopamina). Quando i terminali noradrenergici sono protetti da 6- idrossidopamina dalla desmetilimipramina, le risposte a NE non sono migliorate. Le risposte a NE sono bloccate sia dal propranololo che dalla fentolamina, mentre le risposte all'isoproterenolo sono bloccate dal propranololo ma non dalla fentolamina. Il sistema adenosina-dipendente non sviluppa supersensibilità dopo chemiosimpaticectomia centrale e non è bloccato né da alfa né da beta-antagonisti. Pur non alterando il livello basale del nucleotide, i farmaci antipsicotici clinicamente efficaci hanno causato un'inibizione dose-dipendente della risposta dell'AMP ciclico noradrenergico limbico con clozapina e pimozide particolarmente potenti (IC50 0,06 e 0,08 muM, rispettivamente). I farmaci antipsicotici, tuttavia, non influenzano le risposte AMP cicliche suscitate dall'adenosina. I risultati sono compatibili con l'idea che il recettore centrale NE sia strettamente correlato o possa essere parte integrante di un sistema adenilato ciclasi e che il suo blocco nel proencefalo limbico da parte di farmaci antipsicotici possa contribuire alla loro azione terapeutica.
Interesse dell'isoproterenolo nel trattamento dello shock emorragico nei cani.Quattro gruppi di esperimenti si sono concentrati su due problemi: primo, la sostituzione del sottratto quantità di sangue, e in secondo luogo, la correzione delle reazioni periferiche alla cospicua perdita di sangue, vale a dire vasocostrizione e acidosi. Abbiamo seguito un piano semplice nei nostri esperimenti: il sangue perso è stato interamente raccolto e ritrasfuso. In 26 casi su 37, abbiamo usato isoproterenolo cloridrato (Isuprel - WINTHROP) per aprire il letto vascolare periferico. In sei diversi gruppi, abbiamo seguito la risposta alle variazioni di ritrasfusione e somministrazione di isoproterenolo. Sono stati studiati diversi parametri: pressione arteriosa, pressione venosa centrale, temperatura rettale e pH. L'associazione della trasfusione di sangue con l'iniezione di isoproterenolo, in quantità adeguate per correggere l'ipovolemia e prevenire la vasocostrizione, è senza dubbio il miglior trattamento dello shock emorragico.
Purificazione e proprietà della 3-esulosofosfato sintasi da Methylomonas M 15.La 3-esulosofosfato sintasi, il primo enzima del ciclo del ribulosio monofosfato, è stata purificata 15 volte da Methylomonas M 15 coltivato con metanolo. La procedura di purificazione prevedeva la cromatografia su DEAE-cellulosa, Sephadex G-75 e DEAE-Sephadex A-50. L'enzima purificato era puro oltre il 95% come giudicato dall'elettroforesi analitica su gel di poliacrilammide Il peso molecolare è stato calcolato essere 43000 da esperimenti di equilibrio di sedimentazione. L'elettroforesi in gel di sodio dodecilsolfato ha dato una singola banda corrispondente ad un peso molecolare di 22000. L'enzima catalizza specificamente la formaldeide di condensazione con ribulosio 5-fosfato per dare D-arabino-3 -esulosio 6-fosfato. I valori di Km sono risultati essere 1,1 mM per la formaldeide e 1,6 mM per il ribulosio 5-fosfato. Un catione bivalente è essenziale per l'attività e la stabilità dell'enzima, Mg2+ e Mn2+ servono per essere st per questo scopo. L'optimum del pH per l'attività enzimatica è 7,5--8,0.
Antigeni somatici di shigella. Indagine strutturale sulla catena polisaccaridica O-specifica del lipopolisaccaride di tipo 1 di Shigella dysenteriae.Il polisaccaride O-specifico ottenuto dal lipopolisaccaride di Shigella dysenteriae tipo 1 (Shigella shiga) mediante blanda idrolisi acida seguita da frazionamento su Sephadex G-50 è risultato identico a quello descritto dal gruppo Morgan\'s ed era composto da L-ramnosio, D-galattosio e N-acetile -D-glicosamina in rapporto 2:1:1 Sulla base dei dati dell'analisi di metilazione il polisaccaride è risultato essere una catena lineare di residui di monosaccaridi in forme piranosiche sostituite in posizione 3, ad eccezione di quella del galattosio sostituito in posizione 2. La scissione selettiva, basata sulla reazione di N-deacetilazione del polimero, insieme alla determinazione delle configurazioni di legame mediante ossidazione dell'anidride cromica ha mostrato che il polisaccaride O-specifico è costituito da unità tetrasaccaridiche ripetute la cui proposta la struttura ed è data sotto -3)-alpha-L-Rhap (1-3)-alpha-L-Rhap(1-2)-alpha-D-Galp(1-3)-alphapD-GlcNAcp(1- dove RHAP = ramnopiranosio, Galp = galattopiranosio e GlcNAcp = N-acetil-glucosamina. I risultati attuali hanno confermato le considerazioni di Heidelberger sui modelli di sostituzione dei residui di L-ramnosio e D-galattosio dai risultati degli studi sierologici.
Cromatografia di affinità e studi di legame su 5\'-monofosfato immobilizzato e adenosina 2\',5\'-bisfosfato di nicotinammide nucleotide transidrogenasi da Pseudomonas aeruginosa.1. La transidrogenasi del nucleotide nicotinammide da Pseudomonas aeruginosa è stata purificata fino all'apparente omogeneità con un metodo migliorato impiegando la cromatografia di affinità su N6-(6aminoesil)-adenosina 2\',5\'-bisfosfato-Sepharose 4B. 2. Elettroforesi su gel di poliacrilammide del transidrogenasi purificata effettuata in presenza di sodio dodecil solfato, indicava un peso molecolare minimo di 55000 +/- 2000. 3. Le proprietà cinetiche e regolatorie della transidrogenasi purificata assomigliavano a quelle dell'enzima grezzo, cioè NADPH, adenosina 2\' -monofosfato e Ca2+ erano attivatori mentre NADP+ era inibitorio 4. Rilascio specifico del nucleotide della nicotinammide del legame della transidrogenasi a N6-(6-amminoesil)-adenosina-2\',5\'-bisph l'osphate-Sepharose e l'N6-(-aminohexyl)-adenosine-5\'-monophosphate-Sepharose suggeriscono la presenza di almeno due siti di legame separati per i nucleotidi della nicotinammide, uno specifico per NADP(H) e uno che lega entrambi i NAD( H) e NADP(H). 5. Il legame della transidrogenasi a N6-)6-amminoesil)-adenosina-2\',5\'-bisfosfato-sefarosio e l'attivazione dell'enzima da parte dell'adenosina-2\',5\'-bisfofato hanno mostrato una marcata dipendenza dal pH. Al contrario, l'inibizione dell'enzima attivato dal Ca2+ da parte dell'adenosina 2\',5\'-bisfosfato era virtualmente costante a vari valori di pH. Questa discrepanza è stata interpretata per indicare l'esistenza di un separatore effettore legante nucleotidi e siti attivi.
Esochinasi di lievito: associazione indotta da substrato-reazioni di dissociazione nel legame del glucosio all'esochinasi P-II.Un metodo è descritto per la purificazione delle esochinasi native PI e P-II dal lievito utilizzando la focalizzazione isoelettrica preparativa per separare gli isoenzimi. Il legame del glucosio all'esochinasi P-II e l'effetto di questo sulla reazione di dissociazione dell'associazione monomero-dimero-sono stati studiati quantitativamente da una combinazione di titolazioni di fluorescenza proteica intrinseca e ultracentrifugazione all'equilibrio. Le costanti di associazione per la reazione monomero-dimero diminuiscono con l'aumentare del pH, della forza ionica e della concentrazione di glucosio. La saturazione delle concentrazioni di glucosio non ha portato alla dissociazione completa dell'enzima, mostrando che entrambi i siti erano occupata nel dimero A pH 8.0 e ad alta forza ionica, dove l'enzima esisteva come monomero, la costante di dissociazione del complesso enzima-glucosio era 3 X 10(-4) mol 1(-1) ed era indipendente dalla concentrazione dell'enzima. Anche il legame alla forma dimerica a basso pH e forza ionica (I=0.02 mol 1(-1), pH inferiore a 7,5) era indipendente dalla concentrazione dell'enzima (nell'intervallo 10-1000 mug ml-1) ma era molto più debole. Il processo potrebbe essere descritto da una singola costante di dissociazione, mostrando che i due siti disponibili sul dimero erano equivalenti e non cooperativi; i valori della costante di dissociazione intrinseca variavano da 2,5 X 10 (-3) mol 1 (-1) a pH 7,0 a 6 X 10 (-3) a pH 6,5. In condizioni intermedie (pH 7,0, forza ionica=0,15 mol 1(-1)), dove coesistevano monomero e dimero, il legame del glucosio mostrava un debole positivo in modo cooperativo (coefficiente di Hill 1,2); inoltre, il legame dipendeva dalla concentrazione dell'enzima nella direzione di un legame più forte a concentrazioni inferiori. I risultati mostrano che il fenomeno della reattività dei semisiti osservato nel legame del glucosio all'esochinasi cristallina P-II non si verifica in soluzione; la spiegazione più semplice della nostra scoperta che i due siti sono equivalenti è che il dimero risulta dall'associazione omologa di due subunità identiche.
Sul trasporto di antibiotici tripeptidici nei batteri.I due antibiotici tripeptidici L-2-amino-4-metilfosfinobutirril-alanil-alanil-alanina ( L-fosfinotricil-alanil-alanina) e L-(N5-fosfono)metionina-S-sulfoximinil-alanil-alanina, entrambi inibitori della glutammina sintetasi, sono trasportati nella cellula di Escherichia coli K 12 attraverso il sistema di trasporto degli oligopeptidi. l'assorbimento da parte di questo sistema è dimostrato innanzitutto dalla resistenza crociata con la tri-L-ornitina utilizzando mutanti deficienti nel trasporto di oligopeptidi, e in secondo luogo da test di antagonismo che dimostrano l'inversione competitiva dell'azione dell'antibiotico da parte di diversi peptidi che hanno dimostrato di essere trasportato attraverso il sistema di trasporto degli oligopeptidi, ad es. tri-L-alanina, tetra-L-alanina, tri-L-lisina, tri-L-serina, tri-glicina, glicil-glicil-L-alanina e il tripeptide sintetico L-azadenil -aminoesanoil-alanil-alanina, invece, non vi è alcun effetto sull'azione dell'antibiotico in test di antagonismo con composti che utilizzano diversi sistemi di trasporto, come L-alanil-alanina, L-lisil-lisina, glutatione e l'aminoacido sintetico acido azaadenilamminoesanoico, ovvero 2-ammino-6-(7-ammino-3H-v-triazolo Acido -[4,5-d]-pirimidin-3-il)esanoico. Un altro inibitore della glutammina sintetasi, L-metionina-S-diossido (metioninsulfone) potrebbe essere convertito in una forma tripeptide mediante legame con L-alanil-alanina analogamente agli antibiotici tripeptidi descritti sopra. Mentre la L-metionina-S-diossido libera sembra essere trasportata attraverso il sistema di trasporto della metionina, la forma tripeptide viene trasportata attraverso il sistema di trasporto dell'oligopeptide. Pertanto, questo inibitore della glutammina sintetasi può essere assorbito dalla cellula attraverso due diversi meccanismi di trasporto. I nostri risultati indicano che ciò potrebbe fornire un effetto sinergico. Le sintesi dei nuovi tripeptidi L-azaadenylaminoesanoil-alanil-alanina e L-metionina-S-dioxidil-alanil-alanina sono state eseguite mediante accoppiamenti di dicicloesilcarbodiimmide degli insoliti L-alfa-amminoacidi N-protetti azaadenilamminoesanoico e L-metionina -diossido a L-alanil-alanina-terz-butil estere seguito da comuni passaggi di deprotezione. La tri-L-ornitina è stata sintetizzata senza protezione carbossilica tramite due accoppiamenti successivi di esteri idrossibenzotriazolici di Nalfa-butossicarbonil-Ndelta-benzilossicarbonil-L-ornitina.
Relazioni della vena femorale [K+], PO2, osmolalità e [ortofosfato) con la frequenza cardiaca, la ventilazione e il flusso sanguigno delle gambe durante l'esercizio in bicicletta in atleti e non atleti. La relazione tra venosa femorale [K+], [H+], osmolalità (OSM), PO2 e [fosfato inorganico] ([Pi]) con frequenza cardiaca (HR), ventilazione (VE) e Il flusso sanguigno alle gambe calcolato (Q) è stato studiato durante l'esercizio in bicicletta in soggetti di test di resistenza (TR) e non allenati (UT) A un dato VO2 gli aumenti di [K+], OSM, [Pi] e la diminuzione di PO2 erano significativamente inferiori in TR che in UT. Nella stessa proporzione gli aumenti di HR, VE e Q erano diminuiti. Quindi in TR e UT linee di regressione identiche e altamente significativamente correlate di [K+], [H+], OSM, [Pi] e PO2 con HR, VE e Q. Questi costituenti sono cambiati nella stessa proporzione del VO2 relativo in TR e UT. Non sono state trovate relazioni con [Na+], [Ca++] e [Mg++]. Per mezzo di un reg multiplo analisi della ressione è stata stimata l'influenza parziale di K+, H+, OSM, PO2 e Pi sulla variazione totale di HR, VE e Q da confrontare con i dati degli esperimenti di infusione. I risultati sono stati discussi in vista dell'ipotesi che questi candidati possano fornire un collegamento tra eventi metabolici, aggiustamenti circolatori e ventilatori durante il lavoro.
Enzimi che metabolizzano gli aminoacidi nella ghiandola sottomascellare di ratto, normale o neoplastica, e nel pancreas.Le attività di 12 enzimi, molti dei quali legati al metabolismo dell'ornitina, sono stati misurati nella ghiandola sottomascellare del ratto, nei tumori della ghiandola sottomascellare e nel pancreas. Nella ghiandola sottomascellare, le attività di arginasi, ornitina aminotransferasi, pirrolina-5-carbossilato reduttasi e glutammina sintetasi erano elevate, ma non è stato possibile rilevare ornitina transcarbamilasi o prolina ossidasi. ghiandola sottomascellare fetale, l'arginasi era a livelli quasi adulti mentre l'ornitina aminotransferasi ha raggiunto il 50% del suo valore adulto postnatale. gli enzimi che metabolizzano la pirrolina-5-carbossilato erano alti come nel fegato o nella ghiandola sottomascellare. Le attività eccezionali erano quelle della gamma-glutamil transpeptidasi e glutammato deidrogenasi. Sebbene le attività dell'arginasi nella ghiandola sottomascellare e nel pancreas fossero quantitativamente simili, differivano qualitativamente: la ghiandola sottomascellare conteneva la stessa variante del fegato mentre gli isoenzimi pancreatici assomigliavano a quelli di altri tessuti non epatici.
Stima della capacità di legame del testosterone nel siero con resina idrofoba.Un metodo per la stima della capacità di legame del testosterone nel siero (TeBC) utilizzando resina idrofoba , è stato sviluppato Amberlite XAD-2. Il siero è stato incubato con una quantità saturante di testosterone-1,2(-3)H a 15 gradi C, il testosterone non legato è stato adsorbito alla resina e la radioattività 3H è rimasta nel liquido surnatante è stato contato. In queste condizioni, i livelli normali e le loro deviazioni standard erano rispettivamente 15,08 +/- 3,39 ng/ml (n=7) per i maschi e 35,06 +/- 3,56 ng/ml (n=6) per le femmine. il metodo era del 6,29%. Il TeBC nel terzo mese di gravidanza era circa 1,5 volte superiore a quello delle donne non gravide e circa da 3 a 5 volte nel decimo mese.
Inattivazione della calcitonina suina da parte del microsoma di rene di ratto.L'attività biologica della calcitonina suina è stata inattivata più attivamente dall'omogenato di rene di ratto che da altri omogenati di tessuto. Tra le varie frazioni subcellulari dell'omogenato di rene di ratto esaminate, la frazione del microsoma era più attiva nell'inattivazione in vitro della calcitonina suina. L'inattivazione della calcitonina suina da parte del microsoma del rene di ratto dipendeva dal pH e dalla temperatura. L'attività inattivante del microsoma del rene di ratto era inibito da 1 X 10(-3) M monoiodoacetato e 1 X10(-5) M p-cloromercuribenzoato. Questi risultati suggeriscono che la calcitonina suina è probabilmente inattivata da un enzima SH nei microsomi del rene di ratto. Tuttavia, la partecipazione di altri enzimi non può essere esclusa, poiché l'attività inattivante della frazione del microsoma del rene di ratto è inibita anche da 1 X 10(-4) M diisopropilfuorofosfato.
[Studi sull'ottimizzazione dei test sugli inibitori dell'emoagglutinazione del virus della rosolia].Studi immunoelettroforetici e sierologici sono stati intrapresi per caratterizzare l'inibitore sierico non specifico di emoagglutinazione della rosolia. La maggior parte di tali effetti inibitori proviene dalle beta (1)-lipoproteine. Inoltre, in alcuni sieri sono stati osservati piccoli effetti inibitori dovuti alle alfa (1)-lipoproteine. Il risultato dei test è influenzato meno da rimozione dell'inibitore che dalle condizioni di incubazione della miscela siero-antigene, in particolare il pH. Il test è più sensibile se non viene eseguito a pH ottimale per l'emoagglutinazione.
[Trattamento della cardiomiopatia ipertrofica ostruttiva con verapamil, un calcioantagonista (autore\'s trad.)].Cateterismo cardiaco con misurazioni della pressione, ventricolare sinistro la cine-angiografia e l'angiografia coronarica selettiva hanno confermato la diagnosi di cardiomiopatia ipertrofica ostruttiva in 20 pazienti. Dopo un periodo medio di osservazione di 20 mesi durante il quale la maggior parte di essi è stata trattata con beta-bloccanti, è stato somministrato verapamil, 480 mg per via orale, per una media di 12 mesi. C'è stato un impressionante miglioramento dei sintomi, rispetto allo stato in trattamento con beta-bloccanti. C'è stata una significativa riduzione dei segni ECG di ipertrofia ventricolare sinistra e del volume cardiaco misurato radiologicamente. Trattamento di questa condizione con verapamil sembrava essere superiore a quello dei beta-bloccanti.
Effetto della dose di metadone sull'escrezione biliare dei metaboliti del metadone nel ratto.L'effetto di tre diverse dosi di 14C-metadone (0.08, 1.0 e 2,5 mg/kg) sull'escrezione biliare dei metaboliti del metadone è stato studiato nel ratto. Dopo la somministrazione delle dosi di 0,08 e 1,0 mg/kg di 14C-metadone non vi era alcuna differenza nella percentuale di 14C somministrato escreto nella bile con Tuttavia, dopo la dose di 2,5 mg/kg è stato osservato un aumento significativo della percentuale di 14C somministrato escreto nella bile. L'analisi dei campioni di bile ha mostrato che questo aumento era dovuto all'aumento dell'escrezione biliare di due dei principali metaboliti di metadone. Diversi meccanismi potrebbero essere responsabili di questo aumento sproporzionato dell'escrezione biliare dei metaboliti del metadone dopo alte dosi di metadone. È stato riscontrato che l'effetto di alte dosi di metadone sull'escrezione biliare dei suoi metaboliti è stato quasi eliminato quando studiato in phe ratti pretrattati con nobarbital (PB). Il pretrattamento dei ratti con PB aumenta l'escrezione biliare dei metaboliti del metadone, principalmente aumentando i tassi di metabolismo del metadone. La mancanza di additività dell'effetto dell'alta dose di metadone e del pretrattamento con PB sull'escrezione biliare dei metaboliti del metadone suggerisce che un'alta dose di metadone stimola anche il metabolismo del metadone, che si traduce nell'aumentata percentuale osservata della dose somministrata escreta nella bile.
Effetto del pretrattamento con 3-metilcolantrene sulla biodisponibilità della fenacetina nel ratto.Viene descritta una procedura cromatografica su strato sottile per la determinazione quantitativa della fenacetina e paracetamolo nel plasma di ratto. Il metodo è stato utilizzato per determinare l'effetto del 3-metilcolantrene (3-MC) sulla disposizione e sulla biodisponibilità della fenacetina dopo la sua somministrazione orale e ev ai ratti. Il pretrattamento con 3-MC ha ridotto l'emivita plasmatica di fenacetina, dopo somministrazione ev, da 28 min a 4,5 min e ha ridotto la biodisponibilità sistemica di fenacetina, dopo somministrazione orale, dal 45% nei ratti di controllo al 6% nei ratti trattati con 3-MC. Confrontando i livelli plasmatici di fenacetina in la circolazione portale con quelle della circolazione periferica, a seguito della somministrazione orale di fenacetina, si è concluso che la riduzione di 7 volte della biodisponibilità della fenacetina osservata nei ratti trattati con 3-MC è stata causata da un marcato aumento i n il metabolismo della fenacetina durante il suo primo passaggio attraverso il fegato.
Disposizione fisiologica e destino metabolico di un nuovo agente antiaritmico, alfa, alfa-dimetil-4-(alfa, alfa, beta, beta-tetrafluorofenetil) benzilammina nel ratto, cane , scimmia, babbuino e uomo.La disposizione fisiologica di un nuovo farmaco antiaritmico attivo per via orale, alfa, alfa-dimetil-4-(alfa, alfa, beta, beta-tetrafluorofenetil)benzilammina (MK-251 ) è stato studiato nel ratto, nel cane, nella scimmia rhesus, nel babbuino e nell'uomo. MK-251 è stato ampiamente assorbito dopo somministrazione orale in tutte le specie. L'escrezione fecale era la principale via di eliminazione del tracciante nel ratto (70%) e nel cane (80 %), mentre la scimmia, il babbuino e l'uomo espellevano la maggior parte della dose attraverso le urine (40-80%). L'MK-251 e/o i suoi metaboliti erano ampiamente distribuiti nei tessuti di ratto e mostravano rapporti tessuto/plasma maggiori di uno nella maggior parte dei casi. Il polmone, il fegato e il rene possedevano un'elevata affinità tissutale per farmaci e metaboliti. Il profilo plasmatico e urinario della radioattività ità indicava un esteso metabolismo di MK-251 in tutte le specie. Meno del 5% della radioattività plasmatica e urinaria è stata identificata come farmaco immodificato. Nonostante le estese trasformazioni metaboliche, una caratteristica notevole di questo farmaco è la sua persistenza nel plasma per lunghi periodi di tempo. Si pensa che ciò sia dovuto all'affinità dei tessuti. Il pattern metabolico per MK-251 era essenzialmente lo stesso in tutte le specie. I principali metaboliti presenti nel plasma e nelle urine sono stati identificati come l'analogo carbinolo di MK-251, 2-[4-(alfa, alfa, beta, beta-tetrafluorofenetil)fenil]-2-propanolo (I), e il suo glucuronide coniugare. Altri metaboliti caratterizzati nelle urine e nel plasma sono stati: l'N-glucuronide di MK-251, 2-[4-(alfa, alfa, beta, beta-tetrafluorofenetil)fenil]propene (II), 2-nitro-2-[4 -(alfa, alfa, beta, beta-tetrafluorofenetil)fenil]propano (III), alfa, alfa-dimetil-4-(alfa, alfa, beta, beta-tetrafluorofenetil)benzil metil etere (IV-1) e 4-( alfa, alfa, beta, beta-tetrafluorofenetile), acetofenone (IV-2). Due metaboliti urinari minori sono stati identificati provvisoriamente come l'analogo N-idrossi di MK-251 e l'analogo glicolico di carbinolo I. La formazione in vivo dell'etere metilico rappresenta il primo rapporto di alchilazione di un alcol terziario.
Disposizione e metabolismo della 3-(3-clorofenossi)-N-metilpirrolidina [14C]-carbossammide nel ratto, cane e uomo.Studi con un campione marcato con 14C hanno dimostrato che il composto del titolo A viene prontamente assorbito ed escreto molto rapidamente dal ratto, dal cane e dall'uomo. I metaboliti risultano dall'idrossilazione dell'anello aromatico, dall'ossidazione e dalla dealchilazione del gruppo metilico dell'urea e dall'ossidazione apertura dell'anello pirrolidinico I metaboliti del ratto erano 3-(3-cloro-4-idrossifenossi)-N-metil-l-pirrolidina carbossammide (C) 3-(3-cloro-4-idrossifenossi)-1-pirrolidina carbossammide (D) , acido 3-(3-cloroidrossifenossi)-1-pirrolidinacarbossammide (E), 3-(3-clorofenossi)-4([(metilammino)-carbonil]ammino)butanoico (G), 3-(3-clorofenossi)-4 [(aminocarbonil)ammino]acido butanoico (H). I metaboliti del cane erano C, D, G e H. I metaboliti umani erano 3-(3-cloro-4-idrossifenossi)-N-formil-l-pirrolidinacarbossammide (F), C, D, G e H. Un'analisi gascromatografica a cattura di elettroni per la paren t composto è descritto. Gli autoradiogrammi di tutto il corpo di fette di ratto e i dati sui residui tissutali di queste sezioni sono riportati e indicano una rapida diminuzione della radioattività nei tessuti.
Metabolismo della tripelennamina nell'uomo.Quattro metaboliti polari sono stati isolati dalle urine di soggetti umani trattati per via orale con tripelennamina e le loro strutture sono state chiarite da varie sostanze chimiche e metodi fisici. Uno dei metaboliti, che è minore, è stato identificato come N-ossido di tripelennamina, e gli altri tre come coniugati glucuronidi. A uno dei coniugati, che è un metabolita maggiore, è stato assegnato un unico quaternario ammonio N-glucuronide struttura, poiché ha dato tripelennamina e acido D-glucuronico in incubazione con beta-glucuronidasi. L'N-ossido, che è stato anche preparato sinteticamente, è rimasto invariato su un trattamento simile. Gli altri due coniugati erano O-glucuronidi di idrossilato derivati, il glucuronide dell'idrossitripelennamina è il metabolita principale. Tuttavia, non è stata trovata desmetiltripelennamina nelle urine. In entrambi i casi si è verificata idrossilazione nell'anello piridinico.
3-(Hydroxymethyl)-8-metoxychromone e metaboliti non coniugati nel plasma di ratto. Identificazione delle specie biologicamente attive.Dopo la somministrazione di 3 marcato con 14C -(idrossimetil)-8-metossicromone ai ratti mediante sonda gastrica, è stato riscontrato che il plasma contiene un composto immodificato e tre metaboliti non coniugati. Questi metaboliti sono stati identificati come 3-carbossi-8-metossicromone, 8-metossicromone e 2-idrossi-3-metossiactofenone I livelli plasmatici di tutti e quattro i composti marcati sono stati determinati da 30 min a 48 ore dopo la somministrazione del farmaco. Solo i livelli di 3-(idrossimetil)-8-metossicromone e 3-carbossi-8-metossicromone correlavano con l'espressione dell'attività antiallergica in il ratto, e solo questi composti sono risultati attivi in vivo. Tuttavia, un sistema di test per l'inibizione del rilascio anafilattico di istamina in vitro ha mostrato attività solo per il 3-carbossi-8-metossicromone.
Metabolismo del 2,4,5,2\',5\'-pentaclorobifenile nel ratto. Aspetti qualitativi e quantitativi.Il metabolismo di Nel ratto maschio è stato studiato il 2,4,5,2\',5\'-pentacloro [14C]bifenile (5-CB) Dopo somministrazione ev di 5-CB (0,6 mg/kg), l'84% del totale La dose è stata escreta entro 7 giorni e l'89% della radioattività escreta era sotto forma di metaboliti 5-CB Per identificare i metaboliti sono stati utilizzati analisi spettrali di massa e risonanza magnetica nucleare protonica o metodi chimici in combinazione con l'analisi spettrale di massa. è stato identificato come 3\'-idrossi 5-CB. Un metabolita minore è stato identificato come 3\',4\'-diidrodiolo di 5-CB e un secondo metabolita minore è stato identificato provvisoriamente come 3\',4\'-diidrossi -5-CB. Sono state determinate anche le quantità relative di 5-CB e dei suoi metaboliti escreti nelle urine e nelle feci.
Metabolismo dei dialogometani in formaldeide e alogenuro inorganico. I. Studi in vitro.Il metabolismo dei dialogometani da parte delle frazioni del citosol di fegato di ratto ha prodotto formaldeide e alogenuro inorganico come prodotti. La perdita di attività metabolica derivante dalla dialisi del citosol è stata ripristinata con glutatione. La cisteina non può sostituire il GSH. Nessun altro cofattore è stato trovato per l'attività. Le condizioni ottimali per questa biotrasformazione rispetto al tempo, alla temperatura, alla concentrazione proteica e il pH sono stati determinati. Le velocità di metabolismo dei dialogometani hanno mostrato il seguente ordine: CH2i2 maggiore di CH2Br2 congruente a CH2BrCi maggiore di CH2Ci2 La somministrazione dell'induttore enzimatico, fenobarbital, ai ratti non ha alterato questa via metabolica né la somministrazione ripetuta di CH2Br2 o CH2Ci2 modifica la velocità del metabolismo L'enzima che catalizza questa reazione è stato localizzato nel fegato Composti noti per servire come substrati per vari GSH t le ransferasi hanno inibito la reazione così come quelle capaci di interagire con i gruppi sulfidrilici.
5,5-bis(3-idrossifenil)idantoina, un metabolita minore della difenilidantoina (dilantin) nel ratto e nell'uomo.5,5 -Bis(4-idrossifenil)idantoina è stata identificata come un metabolita minore della difenilidantoina (DPH) nel ratto e nell'uomo. Questo metabolita è stato sintetizzato in laboratorio dal 4,4\'-diidrossibenzofenone. Confronto gascromatografico e spettrometrico di massa del composto sintetico permetilato con il derivato permetilato del metabolita ottenuto da fonti biologiche ha mostrato che erano identici. Il metabolita è stato escreto come glucuronide e rappresentava circa l'1% del totale dei metaboliti idrossilati di DPH nell'urina umana e nella bile di ratto. Quando il composto sintetico permetilato standard è stato aggiunto al perfusato ricircolante del fegato di ratto perfuso isolato, nella bile sono stati identificati un monoglucuronide, un triidrossi-DPH glucuronide e un diidrossimetossi-DPH glucuronide.
Catalisi tampone della reazione di racemizzazione di alcune 5-fenilidantoine e sua relazione con il metabolismo in vivo dell'etotoina.Evidenza presentata per dimostrare che un isomero ottico della 5-fenilidantoina è soggetto a racemizzazione (interconversione) in diversi sistemi tampone. Con tamponi fosfato nell'intervallo di pH di 6,0-7,5, sembra che la reazione di racemizzazione catalizzata da tampone sia dovuta esclusivamente alla catalisi da fosfato bivalente (base generale catalisi). Altri tamponi studiati includono arsenato, imidazolo, trietanolamina e pirofosfato. Quando la 5-fenilidantoina, il metabolita N-de-etilato dell'etotoina, è stata somministrata ai cani in una precedente indagine, è stata osservata che un po' più del teorico quantità (50 moli percento della dose) delle sostanze recuperate dalle urine aveva la configurazione R. Il metabolita principale era l'acido (R)-(-)-2-fenilidantoico, formato stereo-specificamente in una reazione di apertura dell'anello di ( R)-5-p ienilidantoina dalla diidropirimidinasi (EC 3.5.2.2). I risultati del presente studio in vitro supportano l'ipotesi che in vivo l'interconversione degli isomeri ottici della 5-fenilidantoina possa essere catalizzata da componenti tampone del sistema fisiologico dei mammiferi e che le attività catalitiche dei componenti tampone endogeni possano spiegare la racemizzazione e metabolismo finale dell'isomero (S) della 5-fenilidantoina da parte della diidropirimidinasi.
Inversione della configurazione ottica dell'acido alfa-metilfluorene-2-acetico (cicloprofene) in ratti e scimmie.Un metodo radiometrico semplice e sensibile per determinare sono stati sviluppati i singoli enantiomeri del cicloprofene. Il 14C-cicloprofene è stato convertito nei suoi diastereoisomeri L-leucina, che sono stati separati mediante cromatografia su strato sottile e quantificati misurando la radioattività nell'area corrispondente a ciascun singolo diastereoisomero. Questa tecnica è stata utilizzata anche per misurare gli enantiomeri del cicloprofene non marcato mediante condensazione con L-leucina marcata con 14 C. Utilizzando il metodo radiometrico, un processo di biotrasformazione unico, l'inversione del (-)-enantiomero dell'acido alfa-metilfluorene-2-acetico al suo (+ )-enantiomero, è stato dimostrato nel ratto e nella scimmia. La velocità di inversione da (-)- a (+) è risultata essere più rapida nel ratto che nella scimmia. Dopo somministrazione orale singola o ripetuta della modifica racemica o il (-)-enant iomero del cicloprofene in entrambe le specie, il rapporto tra (+)- e (-)-enantiomeri del cicloprofene nel plasma, nelle urine o nella bile aumentava con il tempo. A 5, 22 e 48 ore dopo la somministrazione orale di una singola dose di 50 mg/kg dell'enantiomero (-) il 14C-cicloprofene nel plasma di ratto conteneva rispettivamente il 20, 50 e 79% del (+) -enantiomero. Dopo aver ricevuto la stessa dose di (-)-enantiomero, il plasma di scimmia conteneva il 16,5% e il 32% di (+)-enantiomero rispettivamente a 8 e 24 ore. Dopo somministrazione orale di una singola dose di 50 mg/kg dell'enantiomero (+) del 14C-cicloprofene a ratti e scimmie, la percentuale di enantiomero (-) nel plasma variava dal 2 al 15%. Poiché l'enantiomero (+) somministrato conteneva il 4% di (-)-enantiomero e l'enantiomero (+) veniva escreto a una velocità maggiore rispetto al suo (-)-antipode dai ratti o dalle scimmie, non è noto se un piccolo occasionale l'aumento percentuale dell'enantiomero (-) nel plasma derivava dall'inversione (+)-a-(-), o dalla più rapida eliminazione dell'enantiomero (+). Tuttavia, se l'inversione (+)-to-(-) si verifica in queste due specie, la velocità è molto più lenta rispetto all'inversione (-)-to-(+).
Legame stereospecifico del timololo, un agente bloccante beta-adrenergico.Anche l'agente bloccante beta-adrenergico, timololo, sembra essere legato allo stereospecifico. come siti non specifici nella frazione di particolato (8500 g di pellet) del cuore, dei polmoni e del cervello, mentre l'isomero d del timololo era legato solo a siti non specifici. Il timololo è scomparso dalla frazione del particolato a una velocità inferiore rispetto al suo isomero ottico. A 1 ora dopo una dose di 0,1 mg/kg, la concentrazione della forma l nel polmone era 1,8 volte quella dell'isomero d e a 3 e 4 ore la differenza era almeno 33 volte. La concentrazione di 14C -timololo nella frazione particolato dei tessuti di ratto è stato inibito dal timololo somministrato iv e dall'isomero l del propanololo, ma non dalle loro corrispondenti forme D. La competizione per i siti di legame era dose dipendente. Pretrattamento con timololo a 0,1 e 5,0 mg/ kg ha ridotto il legame del 14C-timololo (dose, 0,1 mg/kg) al tessuto polmonare del 41% e dell'86%, res pectoriosamente. Nel tessuto cardiaco e polmonare dei ratti, timololo racemico, propranololo, bunololo e bunitrololo erano approssimativamente ugualmente efficaci nel competere per i siti di legame del 14C-timololo. Practolol e sotalolo e l'agente beta 2-selettivo butoxamina non hanno inibito significativamente il legame del 14C-timololo. Una concorrenza simile è stata osservata anche nell'intero cervello dei ratti. Questo rapporto suggerisce che il legame stereospecifico del timololo può essere correlato al processo dei recettori beta-adrenergici.
Studi sul meccanismo di tossicità e di sviluppo della tolleranza alla tossina polmonare alfa-naftiltiourea (ANTU).La somministrazione in vivo del la tossina polmonare radiomarcata alfa-naftiltiourea (ANTU) ai ratti porta al legame covalente della radioattività alle macromolecole del polmone e del fegato Al contrario, pochissima radioattività è legata in questi organi quando una quantità uguale dell'analogo dell'ossigeno marcato con 14C di Viene somministrato ANTU, 14C-alfa-naftilurea (ANU). Inoltre, ANU è essenzialmente non tossico per i ratti. ANTU viene metabolizzato in vitro dai microsomi polmonari e epatici ad un intermedio che si lega covalentemente alle macromolecole dei microsomi. Questo legame covalente , che richiede NADPH, porta ad una diminuzione dell'attività ossidasi a funzione mista e ad una diminuzione del livello di citocromo P-450 rilevabile come suo complesso monossido di carbonio Incubazione di microsomi con ANTU in assenza di NADPH o con ANU in presenza di NA DPH, non ha effetto su questi parametri. Il pretrattamento dei ratti con piccole dosi non letali di ANTU al giorno per 5 giorni determina una diminuzione dell'attività del sistema enzimatico dell'ossidasi a funzione mista nel polmone che metabolizza il paration. Inoltre, questo pretrattamento riduce la tossicità dell'ANTU e porta a una diminuzione della quantità di radioattività legata alle macromolecole del polmone quando agli animali viene somministrata una dose letale di 35S-ANTU. Questi dati suggeriscono che la tossicità polmonare dell'ANTU è determinata dalla sua attivazione metabolica e dal legame covalente alle macromolecole polmonari.
Legame lipidico di un metabolita dell'alotano. Relazione con la perossidazione lipidica in vitro.L'incubazione di microsomi di fegato di ratto con 14C-alotano in atmosfera di azoto determina un'elevata correlazione tra la formazione di dieni coniugati e il legame di un metabolita dell'alotano ai fosfolipidi. Sia il legame che la formazione dei dieni coniugati richiedevano NADPH, erano inibiti dal monossido di carbonio e aumentavano con la durata dell'incubazione e con la concentrazione di proteine. L'alotano [36Cl] e l'alotano [14C] hanno mostrato un modello simile di legame ai fosfolipidi microsomiali, suggerendo che l'atomo di cloro è trattenuto dal metabolita che si lega. il metabolita dell'alotano provoca la distruzione del citocromo P-450.
Ph del liquido pleurico nei versamenti parapneumonici.Il pH e la tensione di anidride carbonica sono stati misurati in 24 versamenti parapneumonici consecutivi, insieme alla conta leucocitaria, differenziale leucocitario conta e livelli di glucosio e proteine. Sono state caratterizzate tre categorie di versamenti parapneumonici: (1) empiemi; (2) versamenti benigni (non loculati); e (3) versamenti loculati. Un pH maggiore di 7,30 era presente in tutti e dieci i versamenti benigni , e la risoluzione spontanea si è verificata in ogni caso. Tutti e dieci gli empiemi e i quattro versamenti loculati avevano un pH inferiore a 7,30. Tutti e quattro i versamenti loculati richiedevano il drenaggio con un tubo toracico per la risoluzione. Il pH del liquido pleurico da solo separava gli empiemi e i versamenti loculati da versamenti benigni Appare utile la separazione precoce dei versamenti parapneumonici sulla base del liquido pleurico Se il pH è maggiore di 7,30 è presente un versamento benigno ed è probabile la risoluzione spontanea Se il pH è meno di 7,30, la loculazione dello spazio pleurico può verificarsi indipendentemente dal fatto che il versamento soddisfi i criteri per l'empiema.
AMP ciclico e GMP ciclico in fisiologia e fisiopatologia epidermica.I secondi messaggeri AMP ciclico e GMP ciclico in diversi organi sembrano coordinare quegli eventi molecolari che sono responsabili della funzione specializzata degli organi. Come risultato di una proliferazione e specializzazione cellulare equilibrata, l'epidermide funziona per specializzazione terminale che fornisce una barriera tra l'uomo e l'ambiente. Poiché la componente epidermica della psoriasi è un classico esempio di omeostasi epidermica squilibrata, che ha una bassa livello di AMP ciclico e un alto livello di GMP ciclico, sembra ragionevole che il riequilibrio di questi nucleotidi ciclici possa in definitiva essere una terapia sicura ed efficace per la psoriasi e altre malattie cutanee proliferative.
Gestione telefonica degli avvelenamenti con sciroppo di ipecac.Settecentosettantasei casi sono stati studiati durante un periodo di sei mesi per vedere se l'induzione di l'emesi poteva essere gestita con successo a casa telefonicamente L'emesi ha avuto successo nel 98,8% dei casi Nel 6,7% di tutti i casi sono stati riscontrati sintomi a 4 ore di follow-up riferibili all'ingestione, ma tutti sono stati considerati di conseguenza minore. Non si sono verificate complicanze di vomito. L'indagine di follow-up a 24 ore non ha indicato complicanze significative di induzione di vomito o complicazioni derivanti dalla gestione telefonica del paziente. È nostra conclusione che, con un'adeguata supervisione telefonica, l'emesi domiciliare di ingestioni che si prevede producano sintomi da lievi a moderati è efficace quanto la gestione dei casi al pronto soccorso o all'ambulatorio medico. questa forma di gestione è abbastanza sicura.
Eterogeneità acido-base intracellulare negli eritrociti aviari nucleati.1. L'attività intracellulare degli ioni idrogeno, [H+]i, è stata stimata negli eritrociti umani e in eritrociti aviari nucleati dalle misurazioni della distribuzione dell'ammoniaca e del 5,5\'-dimetilossazolidina-2,4\'-dione (DMO) tra fluido intracellulare ed extracellulare 2. Negli eritrociti umani non c'era differenza tra i valori di [H+] i derivato da misurazioni di DMO o ammoniaca. 3. Negli eritrociti aviari, [H+]i(ammoniaca) era costantemente maggiore di [H+]i(DMO), indicando una significativa eterogeneità acido-base dell'acqua intracellulare. Il grado di eterogeneità è stata valutata facendo riferimento a un modello teorico di due compartimenti di uguale dimensione. 4. Esperimenti con nuclei isolati da eritrociti aviari hanno suggerito che il DMO non è legato alle nucleoproteine e che il nucleo può essere più acido del citoplasma.
Effetto dell'età sul legame dell'ossigeno in soggetti umani normali.1. Legame dell'ossigeno, pH plasmatico e intra-eritrocitario ed emoglobina, 2 Le concentrazioni di ,3-difosfoglicerato e fosfato inorganico sono state misurate in sessantadue non fumatori sani di età compresa tra 18 e 89 anni 2. P50 (tensione di ossigeno al 50% di saturazione di ossigeno) espressa a pH plasmatico 7-40 e PCO2 5-33 kPa ha mostrato una correlazione positiva con l'età. 3. Questa correlazione di P50 con l'età era più stretta quando P50 era espresso a pH intra-eritrocitario costante 7-20. In media P50 a pH intra-eritrocitario 7-20 aumentava da 3-59 kPa a Da 20 anni a 3-96 kPa a 90 anni. 4. Le concentrazioni medie di 2,3-difosfoglicerato, fosfato inorganico, emoglobina ed emoglobina corpuscolare non erano correlate con la P50 o con l'età.
Farmacocinetica clinica del lorazepam. I. Assorbimento e smaltimento del 14C-lorazepam orale.Otto soggetti maschi sani hanno ricevuto dosi orali singole di 2 mg di lorazepam contenente 24 muCi/mg di 2-14 C-lorazepam. Sono stati prelevati più campioni di sangue venoso durante le prime 96 ore dopo la dose e tutte le urine e le feci sono state raccolte per 120 ore dopo la somministrazione. Le concentrazioni di lorazepam e dei suoi metaboliti nei fluidi corporei sono state determinato mediante tecniche analitiche appropriate. Dopo un tempo di ritardo, il lorazepam è stato assorbito con un'emivita apparente di primo ordine di 15 minuti. La concentrazione plasmatica di picco è stata di 16,9 ng/ml, misurata nel campione aggregato prelevato 2 ore dopo la dose. corrispondeva al momento in cui gli effetti clinici sembravano essere massimi. L'emivita apparente di eliminazione del lorazepam era di circa 12 ore. La biotrasformazione in un metabolita glucuronide farmacologicamente inattivo sembrava essere il meccanismo principale della clearance del lorazepam. Una media dell'88% di admi la radioattività registrata è stata ritrovata nelle urine e il 7% nelle feci. Il lorazepam glucuronide comprendeva l'86% della reattività urinaria; la sua clearance renale era 37 ml/min. Altri metaboliti identificati includevano idrossilorazepam, un derivato del chinazolinone e un acido carbossilico di chinazolina; tutti questi erano quantitativamente minori.
Azione antiipertensiva del propranololo nell'uomo: mancanza di evidenza di un effetto depressivo neurale.L'ipotesi che un'azione depressiva neurale sia correlata agli effetti antipertensivi dei betabloccanti è stata valutata in 14 pazienti maschi ipertesi essenziali attraverso la risposta circolatoria a stimoli nocivi. La reazione pressoria all'aritmetica mentale era principalmente mediata dalla stimolazione cardiaca (attivazione dei recettori beta), quella al freddo dalla vasocostrizione (attivazione dei recettori alfa). e freddo sono stati testati per separare gli effetti del beta blackade periferico da possibili influenze neurali e di altro tipo. Dopo propanololo (320 mg al giorno per 3 settimane): (1) la pressione di base è stata ridotta; (2) comparsa, picco e tempo di scomparsa della reazione circolatoria a entrambi gli stimoli non è stato alterato; (3) l'effetto pressorio dell'aritmetica è stato ridotto in misura proporzionale al ridotto aumento della gittata cardiaca; e (4) la pressione durante il freddo r ciascuno dei livelli di pretrattamento attraverso un aumentato aumento delle resistenze vascolari. I nostri risultati indicano che il propranololo deprime solo le reazioni circolatorie mediate dall'attivazione dei recettori beta e non forniscono prove di effetti diversi dal beta blocco.
Acidemie organiche.Le acidemie organiche ereditarie sono un gruppo di disordini metabolici attualmente in fase di descrizione e indagine mentre la gascromatografia viene applicata a malattie inspiegabili dell'infanzia e infanzia. Le presentazioni cliniche comuni includono attacchi di chetoacidosi, acidosi metabolica inspiegabile, fallimento del normale sviluppo, convulsioni e altre anomalie neurologiche. Iperglicinemia, iperammoniemia e ipoglicemia sono altri reperti di laboratorio frequentemente presenti. La diagnosi dipende dall'esame delle urine e talvolta del sangue , mediante cromatografia gas-liquido per misurare le concentrazioni di acidi organici e derivati di acidi organici. La prognosi in molti casi è eccellente se la diagnosi è pronta e l'acidosi metabolica può essere invertita. È stata osservata frequentemente la guarigione da deficit neurologici. La terapia a lungo termine è generalmente dipendente dai precursori restrittivi dell'acido organico tossico che si accumula come conseguenza dell'enzima carenza. Se viene trattenuta un'attività enzimatica o se esistono vie metaboliche alternative, è probabile che la terapia abbia successo.
Calcificazione della cartilagine della cartilagine di accrescimento con particolare riferimento agli studi sui fluidi da micropuntura.Nessuna ipotesi completa finale della catena di eventi coinvolti nell'inibizione della calcificazione può essere costruito al momento. Il diagramma di flusso in Figura 1 è presentato solo come ipotesi di lavoro attualmente utilizzata dagli autori. Nella misura in cui il Cfl è rappresentativo di fattori nativi nei siti di calcificazione, nessuna delle principali teorie sulla natura della formazione dei minerali al momento sembrano esclusi. Come nei campi della coagulazione e delle vie del complemento, dove sembrano operare sistemi di backup, non c'è da stupirsi se più di un sistema opera nella calcificazione cartilaginea.
Aumento dei tempi di sopravvivenza dei topi ibridi neozelandesi immunosoppressi da reazioni del trapianto contro l'ospite.I topi neozelandesi sviluppano una malattia autoimmune solitamente accompagnata da glomerulonefrite. A La reazione del trapianto contro l'ospite è stata indotta in topi ibridi F1 New Zealand Black X New Zealand White mediante somministrazione di cellule della milza New Zealand White. antigene (DNA nativo). Avevano molto meno glomerulonefrite e tempi di sopravvivenza maggiori rispetto ai controlli non manipolati, apparentemente a causa dell'immunosoppressione. Topi ibridi simili trattati con alte dosi di ciclofosfamide (70 mg/kg/settimana) erano più immunodepressi rispetto ai topi con trapianto contro -host reazioni e ha avuto tempi di sopravvivenza ancora maggiori.
Ipertrigliceridemia indotta da estrogeni: ruolo della corteccia surrenale.Ruolo della corteccia surrenale nella patogenesi dell'ipertrigliceridemia associata all'assunzione di contraccettivi orali contenente estrogeni è stata studiata nei ratti. L'adrenalectomia bilaterale ha ridotto l'attività degli enzimi epatici che regolano la lipogenesi (acetil CoA carbossilasi, sintetasi degli acidi grassi) e ha diminuito le concentrazioni plasmatiche di trigliceridi. D'altra parte, la somministrazione di corticosterone ad alto dosaggio ha indotto l'attività degli enzimi epatici con conseguente aumento dei livelli sierici di trigliceridi. Negli animali con ghiandole surrenali intatte la somministrazione di estradiolo: (a) ha aumentato i livelli plasmatici di trigliceridi, (b) ha aumentato l'attività degli enzimi epatici e (c) ha aumentato il rapporto corteccia surrenale:peso corporeo. gli effetti (a) e (b) non sono stati osservati quando entrambe le ghiandole surrenali sono state rimosse prima della terapia con estrogeni. essere essenziale affinché l'estradiolo produca i suoi effetti sugli enzimi epatici e sui livelli plasmatici di trigliceridi. I risultati suggeriscono un ruolo regolatore della corteccia surrenale nell'omeostasi della concentrazione plasmatica di trigliceridi e che l'ipertrigliceridemia indotta dai preparati contenenti estrogeni potrebbe essere secondaria ad alterazioni della funzione corticosurrenale.
Idrolasi acide dei leucociti umani: caratterizzazione di undici enzimi lisosomiali e studio delle condizioni di reazione per la loro analisi automatizzata.Le condizioni di reazione ottimali e le proprietà cinetiche di undici Vengono descritte le idrolasi acide leucocitarie determinate con l'uso di derivati fluorogenici del 4-metil-umbelliferone Gli enzimi studiati sono fosfatasi acida, aril solfatasi, alfa e beta glucosidasi, alfa e beta galattosidasi, alfa mannosidasi, N-acetil -beta-glucosaminidasi, N-acetil-beta-galattosaminidasi, beta-glucuronidasi e alfa-fucosidasi Più del 90% dell'attività di ciascun enzima è stata rilasciata in un supernatante di 27.000 X g mediante una procedura di doppia sonicazione che impiega cloruro di sodio allo 0,9% e 0,1% Triton X-100. I valori di Km ottenuti erano simili a quelli precedentemente riportati per i subtrati cromogeni. Non è stato possibile derivare un singolo valore di Km per la beta-galattosidasi perché il suo doppio grafico reciproco non era lineare. Tutti gli enzimi potrebbero d essere misurato con meno di 10 tazze di proteine entro 15 min. Gli attivatori e gli inibitori studiati includevano i sali cloruri di Na+, K+, Zn2+, Ca2+, Mg2+, Hg2+ e Fe2+ nonché p-cloromercurifenisolfonato, glutatione, BAL, EDTA, EGTA, Triton X-100 e sodio taurocolato. Le condizioni di reazione descritte in questo rapporto possono essere utilizzate per la diagnosi di varie malattie da accumulo lisosomiale e dovrebbero facilitare lo sviluppo di procedure automatizzate per l'analisi di queste undici attività enzimatiche con piccole quantità di sangue.
Analisi cromatografica liquida in fase inversa dell'emodializzato da pazienti uremici.Con la cromatografia liquida ad alta prestazione in fase inversa abbiamo effettuato una separazione rapida ed efficiente di metaboliti presenti nel liquido emodializzato da pazienti uremici sul rene artificiale. Con un gradiente acquoso di acetato di sodio/metanolo come fase mobile, più di 50 costituenti che assorbono l'ultravioletto sono stati risolti in un cromatogramma di 70 minuti di un campione di 100 µl di dialisato. dei metaboliti potrebbe essere rilevato in concentrazioni inferiori a 0,1 mg/litro. Dai risultati dell'analisi spettrofotometrica ultravioletta e dalle proprietà gas- e liquido-cromatografiche degli standard, metà dei picchi cromatografici osservati sono stati caratterizzati o identificati. Il metodo ha dimostrato di essere più di 10 volte più veloce di separazioni comparabili mediante tecniche di scambio ionico.
Diagnosi dell'epatite infettiva mediante analisi multicomponente con uso della spettrometria di massa a ionizzazione di campo.La spettrometria di massa a ionizzazione di campo è stata applicata all'analisi multicomponente dei metaboliti nell'uomo urina per la diagnosi di disordini metabolici, qui esemplificati da epatite infettiva. I profili di peso molecolare degli acidi carbossilici e dei metaboliti "neutri" nelle urine di pazienti con epatite infettiva sono stati confrontati con quelli nelle urine dei soggetti normali. "metaboliti hanno mostrato 24 differenze spettrali caratteristiche nell'intervallo da 68 a 215 unità di massa atomica, che hanno fornito diagnosi corrette nel 100% dei casi e un "potere diagnostico" di unità. Questi risultati sono ancora più incoraggianti di quelli ottenuti in precedenza con i metaboliti acidi, dove sono stati trovati 11 numeri di massa nello stesso range di massa utili per diagnosi corrette nel 91% dei casi. Le misurazioni sono state eseguite su campioni di urina pre-estratti su Am colonne berlite XAD-2. Abbiamo utilizzato uno spettrometro di massa a quadrupolo interfacciato con un analizzatore multicanale per analisi di massa.
Cromatografia in fase inversa di sostanze biologiche polari: separazione di composti catecolici mediante cromatografia liquida ad alta prestazione.Le catecolamine e i loro metaboliti sono stati separati isocraticamente da cromatografia in fase inversa con eluenti acquosi (senza solventi organici aggiunti) A differenza della cromatografia a scambio ionico o a coppia ionica, le miscele di sostanze sia acide che basiche possono essere separate in un'unica corsa cromatografica, poiché la ritenzione è governata da interazioni idrofobiche tra le frazione apolare delle molecole di soluto e della fase stazionaria ottadecil-silice. I relativi valori di ritenzione dipendono fortemente dal pH dell'eluente, che regola il grado di dissociazione dei soluti ionogenici. La riproducibilità dei risultati e la stabilità e l'efficienza del cromatografico sistemi rendono questo approccio particolarmente interessante per l'uso nell'analisi clinica.
L'associazione tra i trigliceridi sierici e l'attività della gamma glutamil transpeptidasi nel diabete mellito.Uno studio condotto su 228 pazienti diabetici ha mostrato una significativa associazione positiva tra il siero I livelli di gamma-glutamil transpeptidasi (GGT) e di trigliceridi diminuiscono entrambi con il trattamento, la riduzione più marcata che si verifica nei pazienti in terapia con insulina. i diabetici possono riflettere l'induzione degli enzimi microsomiali epatici degli enzimi che limitano la velocità della sintesi dei trigliceridi. La GGT sierica non sembra correlare con l'epatomegalia nel diabete mellito.
Proprietà enzimatiche della miosina cardiaca nativa e modificata con N-etilmaleimmide da conigli normali e tireotossici.La miosina cardiaca da animali tireotossici (miosina-T) mostra elevata attività Ca2+ -ATPasi che è resistente a un'ulteriore stimolazione mediante modificazione sulfidrilica. Nel presente studio, abbiamo confrontato le proprietà enzimatiche della miosina-T con quelle della miosina di conigli eutiroidei (miosina-N) e dei derivati della miosina-T e miosina-N formata bloccando la classe di tioli a reazione più rapida (SH1) con N-etilmaleimmide (NEM). Vmax per Ca2+ -ATPasi della miosina-T era circa il 250% maggiore della miosina-N ed era quasi uguale a NEM- miosina-N modificata I valori per il Km apparente di miosina-T e miosina-N modificata con NEM erano del 200% maggiori del valore per la miosina-N non modificata Vmax e Km per l'attività K+ (EDTA)-ATPasi della miosina modificata con NEM -T e miosina-N erano identiche Le curve di saturazione del Ca2+, pH e dipendenza dal sale per l'attività dell'ATPasi di miosina-T erano parallele alle curve per miosina-N e differivano da quelle per le miosine modificate con NEM. Miosina-T ha mostrato un aumento del tasso di idrolisi di ATP, CTP e UTP sia in un mezzo di KCl basso (0,05 m) che alto (0,5 m). La miosina-N modificata con NEM ha mostrato un aumento dell'idrolisi di ATP e CTP in un mezzo a basso KCl e un'aumentata idrolisi di ATP, CTP e UTP in un mezzo ad alto contenuto di KCl. Questi risultati supportano l'ipotesi che il comportamento enzimatico della miosina-T possa essere causato da un'alterazione nel sito attivo vicino all'SH, i tioli. Le proprietà enzimatiche uniche della miosina-T non sembravano essere il risultato di un importante cambiamento nella struttura. Il pattern elettroforetico delle catene leggere da miosina-T e miosina-N era lo stesso nei gel di poliacrilammide contenenti urea 8 M a pH 8,6 o sodio dodecilsolfato. Inoltre, la miosina-T aveva una normale composizione di amminoacidi e mancava di 3-metil-istidina e fosfato acido-stabile caldo.
Resistenza del DNA alchilato alla degradazione da parte della desossiribonucleasi II a pH neutro e acido.Metilazione di un substrato di DNA del timo di vitello da parte di dimetilsolfato (DMS) conduce ad un'inibizione dell'attività della desossiribonucleasi II che viene gradualmente persa nel tempo. L'entità di questa inibizione iniziale è correlata linearmente alla quantità di prodotti metilati nel DNA e sono stati riscontrati effetti quantitativamente simili quando l'enzima è stato utilizzato in condizioni acide o neutre. II ha dimostrato di produrre terminali 3\'-fosfato sia in condizioni acide che neutre e quindi, indipendentemente dalle condizioni ioniche per l'azione di questo enzima in vivo, gli effetti qui dimostrati sono di potenziale significato. La denaturazione locale del DNA metilato può essere parzialmente responsabile di questi effetti inibitori, ma è probabile che anche le metilpurine svolgano un ruolo più diretto.
L'azione di un detergente binario non ionico su una frazione di membrana renale.La distruzione di una preparazione della membrana microsomiale della corteccia renale da parte di un detergente binario non ionico, è stato seguito utilizzando come marcatori le variazioni del contenuto proteico totale e (Na+, K+)-ATPasi in una frazione surnatante. Entrambi i marcatori hanno risposto in modo simile alle variazioni di pH, concentrazione dei microsomi e concentrazione del detergente, ma hanno risposto in modo diverso per gli studi dipendenti dal tempo L'attività (Na+, K+)-ATPasi è stata aumentata di 2,2 volte (76,1 mumoli Pi/mg proteina/h, 95% sensibile all'ouabaina) con un singolo trattamento detergente e 3,5 volte (92% sensibile all'ouabaina) con un sequenziale trattamento detergente. Sono state osservate variazioni nella concentrazione critica delle micelle (cmc) per diverse concentrazioni di detersivo e proteine, che suggeriscono interazioni del detergente monomerico con la membrana. Il picco dell'attività (Na+, K+)-ATPasi si è verificato al di sopra del cmc che suggerisce la partecipazione di micelle in rilascio l'enzima dalle membrane. I grafici di collina della proteina rilasciata quando la concentrazione del detergente è stata variata hanno mostrato un cambiamento nella pendenza vicino al cmc che indica un aumento di quattro volte nel legame del detergente alle membrane quando la concentrazione del detergente è aumentata al di sopra del cmc. Questi risultati suggeriscono che la rottura delle membrane da parte del detergente comporta il legame dei monomeri del detergente alla membrana seguita dalla formazione di co-micelle del detergente con segmenti della membrana per completare il processo di separazione.
L'effetto dei composti allilici sull'ossidazione a funzione mista microsomiale epatica e sulla porfirogenesi.Le attività della 5-aminolevulinato (5-ALA) sintetasi e di vari Gli enzimi microsomat che metabolizzano i farmaci sono stati determinati nel fegato di ratti pretrattati con diversi farmaci e sostanze chimiche contenenti il gruppo allilico Safrolo, isosafrolo e secobarbital hanno dato luogo a lievi aumenti della 5-ALA sintetasi, mentre alclofenac e triallil cianurato hanno quasi raddoppiato l'attività enzimatica e i noti agenti porfirogeni, allilisopropilacetamide (AIA) e allobarbital hanno causato aumenti rispettivamente di 1,5 e 2,5 volte L'allobarbital ha indotto gli enzimi microsomiali che metabolizzano i farmaci mentre il secobarbital ha avuto solo un effetto debole e l'alclofenac e il triallil cianurato non hanno avuto alcun effetto. Da questi risultati si suggerisce che l'induzione della sintesi del citocromo P-450 non è dipendente dalla velocità della sintesi dell'eme e dall'induzione della biosintesi della porfirina.
Legami incrociati naturali nel DNA cromosomico di lievito.Molecole di DNA di lievito di dimensioni cromosomiche con un peso molecolare medio numerico (Mn) di 3-4 X 10(8) sono stati isolati da gradienti di saccarosio dopo sedimentazione di sferoplasti di lievito lisati. La risedimentazione ha mostrato che le molecole sono state isolate senza introdurre apprezzabili rotture a singolo o doppio filamento. La presenza di legami incrociati in queste molecole è stata suggerita dall'osservazione che l'apparente Mn negli alcali era maggiore del previsto per i singoli filamenti separati. Poiché le molecole reticolate avrebbero filamenti che non riescono a separarsi dopo la denaturazione, questo è stato testato più direttamente. La neutralizzazione delle condizioni di denaturazione alcalina ha portato fino al 70% dell'intatto molecole che riformano rapidamente le strutture duplex, come mostrato dalle bande di equilibrio in CsCI. Esperimenti con molecole di DNA di E. coli più grandi (Mn = 5,2 X 10(8)) hanno indicato che le condizioni utilizzate erano sufficienti per denaturare com molte molecole di queste dimensioni. I risultati dei trattamenti enzimatici suggeriscono che i legami incrociati non sono RNA o proteine. Esperimenti con molecole di DNA di lievito marcate con densità hanno mostrato che la rapida riformazione del DNA duplex non è la conseguenza né di una reazione bimolecolare tra filamenti di DNA separati né della rinaturazione intrafilamento. I dati indicano che quando le molecole di DNA del lievito sono completamente denaturate, i filamenti non riescono a separarsi. Quindi devono essere reticolati. Gli esperimenti con il DNA tagliato mostrano che c'è un piccolo numero di legami incrociati, da uno a quattro, permolecola.
Recettori di membrana per virus della leucemia murina: caratterizzazione utilizzando la glicoproteina purificata dell'involucro virale, gp71.La glicoproteina da 71.000 dalton (gp71) purificata dalla leucemia murina di Rauscher virus (R-MuLV) mediante cromatografia di affinità si lega specificamente alle cellule murine ma non ad altre cellule di mammifero in coltura. Il legame è impedito da attacchi specifici dell'antisiero alla gp71 (anti-gp71). Il saggio di legame come descritto in questo rapporto può rilevare i recettori su pochi come 300 cellule murine, e con 1 X 10(5) cellule dà un legame significativo con 30 sec. I risultati mostrano che la glicoproteina purificata retins attività biologica e può formare un complesso stabile con recettori specifici sulle membrane cellulari dei topi. Il test può quindi essere utilizzato per caratterizzare la natura dei recettori cellulari che sono essenziali per l'infezione da virus della leucemia. Il legame gp71 purificato alle cellule di topo viene impedito se le cellule stanno attivamente producendo virus ecotropici di tipo C correlati, presumibilmente bec ause i recettori sono occupati e non sono disponibili per legare esogenamente applicata gp71. Il legame di gp71 alle cellule murine è potenziato dalla presenza di ioni calcio e da un pH basso. Gli studi di legame eseguiti utilizzando un eccesso di 125I-gp71 indicano che le cellule NIH/3T3 legano circa 5,3 X 10(5) molecole di 125I-gp71 per cellula.
Modifica e degradazione della glutammina sintetasi nelle cellule di coltura tissutale di epatoma stimolata dalla glutammina.Effetti della glutammina sull'attività della glutammina sintetasi (GS) della coltura tissutale di epatoma (HTC) sono state studiate con l'ausilio di un siero specifico di capra anti-ratto GS. I test di immunodiffusione e immunoelettroforetico mostrano che il fegato di ratto GS e la cellula HTC GS sono immunologicamente simili ma non identici. Le immunotitrazioni di estratti di cellule HTC dimostrano che nelle cellule incubate in alte concentrazioni (5 mM) di glutammina, una forma di GS a reazione crociata con una ridotta attività enzima-specifica si accumula. In caso di incubazione prolungata di cellule in alta glutammina, si verifica una netta degradazione di GS per formare prodotti immunologicamente inattivi. Esperimenti di radio-immunoprecipitazione mostrano che la glutammina agisce accelerando la degradazione del GS preformato.
Il meccanismo d'azione di ppGpp sulla sintesi di rRNA in vitro.Abbiamo studiato il meccanismo dell'inibizione specifica della sintesi di RNA ribosomiale da parte di ppGpp in un sistema purificato utilizzando come modelli il DNA di E. coli e il DNA di lambdad5ilv, che trasporta un rRNA cistrone di E. coli. La sintesi dell'RNA ribosomiale, così come la sua inibizione da parte di ppGpp, sono criticamente dipendenti dal sale. Di un certo numero di guanosina fosfati testati, solo pppGpp (MS II) ha imitato l'azione di ppGpp, stabilendo la specificità di ppGpp. I due modelli hanno dato risultati simili per la sintesi di rRNA in tutti gli esperimenti. Utilizzando l'inibitore di iniziazione rifampicina, potremmo dimostrare che l'inibizione specifica della sintesi di rRNA da parte di ppGpp è dovuto al suo effetto sull'inizio dell'rRNA. L'inibizione alquanto variabile della sintesi dell'RNA in generale da parte di ppGpp è principalmente o interamente una conseguenza della terminazione prematura della catena. Proponiamo che ppGpp inibisca specificamente la sintesi dell'rRNA agendo sulla formazione del cosiddetto "complesso promotore chiuso".
Struttura fine di ocelli complessi di un cubomedusan, Tamoya bursaria Haeckel.La retina degli ocelli del complesso lenticolare distale e prossimale è composta da pigmenti cellule sensoriali e cellule pigmentate lunghe. Una guaina ciliare da ciascuna cellula sensoriale, insieme ai processi delle cellule pigmentate lunghe, si estende attraverso lo strato vitreo fino alla capsula che avvolge il cristallino. Ogni guaina ciliare ha diversi rigonfiamenti simili a palloncini e il i microtubuli ciliari, disposti secondo uno schema 9+2 nella parte prossimale, sono marcatamente disorganizzati distalmente nelle parti rigonfie, dalle quali si estende la maggior parte dei microvilli nello strato vitreo. Si suggerisce che alcuni dei microvilli possano avere origine in vescicole che sono costrette dalla superficie delle cellule sensoriali pigmentate. I microvilli strettamente imballati corrono in parallelo in brevi fasci. Oltre alle giunzioni caratteristiche tra le cellule sensoriali, giunzioni che sono presumibilmente sinaptiche e, di nuova ty pe nei celenterati, si osservano tra le cellule sensoriali e le terminazioni nervose.
Lavoro muscolare e rilascio di sostanze simili alle prostaglandine.Prove sperimentali per il rilascio di sostanze simili alle prostaglandine, principalmente di tipo E, in viene descritto il deflusso venoso dai muscoli scheletrici attivi nel cane. L'esercizio muscolare dell'arto posteriore prodotto dalla stimolazione del nervo sciatico ha evocato il rilascio di sostanze simil-prostaglandine rilevate nel sangue venoso femorale con il metodo del dosaggio biologico. Questo rilascio si è verificato durante e dopo il muscolo lavoro, è stato abolito dall'indometacina e non era presente nei cani trattati con gallamina. I risultati suggeriscono che le prostaglandine vasodilatatrici endogene rilasciate durante e dopo il lavoro muscolare possono contribuire alla risposta iperemica locale durante e, soprattutto, dopo l'attività muscolare.
Comprensione dei neurotrasmettitori e dei farmaci correlati.Le sostanze chimiche dei neurotrasmettitori vengono rilasciate ai terminali degli assoni del sistema nervoso centrale, autonomo e periferico del corpo umano I neurotrasmettitori più noti sono l'acetilcolina, la noradrenalina, la dopamina e la serotonina, sostanze che facilitano la conduzione degli impulsi nervosi in tutto il corpo, consentendo il coordinamento delle funzioni corporee e consentendo la risposta all'ambiente. dei neurotrasmettitori fa la differenza tra stato di salute e stato di malattia. La comprensione da parte di un infermiere dei neurotrasmettitori e di molti farmaci comuni che influenzano la loro funzione è essenziale per una pratica infermieristica sicura.
Tumore maligno a cellule germinali in situ in un testicolo criptorchide.Un caso di tumore maligno indifferenziato a cellule germinali in situ di un testicolo ritenuto diagnosticato con ago viene descritta la biopsia. Finora sono stati registrati in letteratura quattro casi simili, tutti in uomini infertili con testicoli discendenti normalmente discendenti. Due di loro hanno sviluppato carcinoma embrionale del testicolo 4 1/2 dopo e uno ha avuto un seminoma concomitante. In un gruppo di pazienti ad alto rischio (testicolo atrofico, criptorchidismo), una biopsia con ago di un testicolo può scoprire la malignità nella sua fase iniziale di sviluppo (stadio 0), momento in cui un'orchiectomia da sola può essere un trattamento curativo.
Sepsi postsplenectomia dovuta a viremia influenzale e pneumococcemia.Un uomo di 31 anni, che era stato sottoposto a splenectomia 18 mesi prima a causa di sferocitosi ereditaria, si ammalò improvvisamente, con febbre, vomito, dolore epigastrico e shock, e morì 10 ore dopo l'insorgenza dei suoi sintomi. L'autopsia mostrò viremia influenzale, pneumococcemia ed emorragia surrenalica bilaterale. Il rapido decorso della malattia del paziente sottolinea il grave rischio di sepsi per gli individui che hanno subito una splenectomia. In tali pazienti dovrebbe essere presa in considerazione l'immunizzazione anti-influenzale.
Il blocco delle contrazioni indotte dall'istamina dell'ileo di cavia da parte di beta-aloalchilamine.Nella striscia muscolare longitudinale dell'ileo di cavia si produce fenossibenzamina (POB) uno spostamento parallelo massimo di 0,7 unità log nella curva dose-risposta all'istamina In presenza di tiosolfato di sodio nel fluido di lavaggio lo spostamento parallelo con ritenzione della risposta massima aumenta a circa 2 unità log, e un valore simile si ottiene per il Nettile -N-(2-bromoetil)-1-naftilamina. L'agente N-etil-N- (2-cloroetil)benzilammina produce uno spostamento significativamente più piccolo della curva dose-risposta di 1,53 unità log prima che la risposta massima si abbassi. la depressione specifica del recettore della risposta massima prodotta da dosi più elevate di POB è invertita dal tiosolfato di sodio e dall'albumina sierica bovina, mentre lo spostamento parallelo della curva dose-risposta non è influenzato da entrambi i trattamenti. Questi risultati possono essere spiegati da un'ipotesi che coinvolga l'interazione di 2-hal oalchilammine in due siti.
Movimenti epatici del potassio indotti dall'adrenalina prima e dopo il blocco adrenergico.La perdita indotta dall'adrenalina e il successivo assorbimento di K+ da parte del fegato sono stati studiati misurando differenze di K+ artero-venoso epatico e flusso sanguigno splancnico in cani anestetizzati con cateteri nella vena porta impiantati cronicamente e sonde di flusso dell'arteria celiaca e mesenterica superiore Quando l'adrenalina è stata somministrata per via intraportuale, né il blocco alfa- né beta-adrenergico, singolarmente o in combinazione, ha avuto un significativo effetti sulla fase iperkaliemica o ipokaliemica sia nel sangue venoso epatico che in quello arterioso sistemico. Si è concluso che i movimenti di K+ in entrata e in uscita dal fegato causati dall'adrenalina non sono mediati dai classici recettori adrenergici come definiti dall'inibizione da parte di specifici agenti bloccanti.
Effetti dell'isoproterenolo sul metabolismo dell'AMP ciclico nella prostata ventrale di ratto.La stimolazione beta-adrenergica del sistema dell'AMP ciclico della prostata ventrale è stata studiata esaminando l'influenza dell'isoproterenolo sui livelli di AMP ciclico endogeno, nonché sulle attività dell'adenilato ciclasi CEC 4.6.1.1) e delle protein chinasi indipendenti e dipendenti dall'AMP ciclico (EC 2.7.1.37). La somministrazione di isoproterenolo (1 mg/kg, ip) ha determinato un rapido aumento dell'attività dell'adenilato ciclasi (119%) e dei livelli di AMP ciclico (593%). dopo il trattamento con questo agonista beta-adrenergico. Gli aumenti dell'adenilato ciclasi prostatica e dell'AMP ciclico erano correlati anche alla dose di isoproterenolo somministrato e il massimo miglioramento di questi parametri è stato osservato con una dose di 1 mg/kg dell'agonista. Mentre il pretrattamento dei ratti con pro il pranololo (3mg/kg, ip) ha parzialmente invertito queste alterazioni, la somministrazione di un antagonista alfa-adrenergico, la fentolamina, anche alla dose di 5 mg/kg, non ha prodotto alcun effetto apprezzabile. La stimolazione della protein chinasi solubile prostatica da parte dell'isoproterenolo è stata associata a una diminuzione (33%) dell'attività della protein chinasi AMP ciclico-dipendente con un concomitante aumento (25%) di quella dell'enzima indipendente. Mentre la capacità dell'enzima di legare l'AMP ciclico (3H) in vitro è diminuita (54%) dopo il trattamento con isoproterenolo, il rapporto di attività della protein chinasi (AMP-ciclico/+AMP ciclico) è stato significativamente elevato da 0,51+/0,05 a 0,95+/0,08. Sebbene il propranololo da solo abbia avuto un effetto scarso o nullo su questi parametri, ha inibito parzialmente le alterazioni indotte dall'isoproterenolo nella proteina chinasi dipendente dall'AMP ciclico e la capacità di legame dell'AMP ciclico. Il trattamento con propranololo ha anche bloccato gli aumenti del rapporto di attività della chinasi e dell'attività dell'enzima ciclico-AMP-indipendente osservati con l'isoproterenolo. I dati suggeriscono che la concentrazione di AMP ciclico prostatico ventrale, nonché le attività dell'adenilato ciclasi e della forma indipendente e dipendente dall'AMP ciclico di protein chinasi sono soggette a modulazione mediante stimolazione beta-adrenergica.
Pressione di apertura critica e reattività dei vasi della coda in ratti ipertesi coscienti.Il possibile ruolo dell'aumentata reattività vascolare nel meccanismo dell'ipertensione sperimentale è stato studiato da misurazioni della pressione critica di apertura (COP) dei vasi della coda in ratti coscienti Nell'ipertensione indotta dalla somministrazione di desossicorticosterone acetato (DOCA) e sostituzione dell'acqua potabile con una soluzione di NaCl all'1% (ipertensione DOCA-NaCl), e in un rene Ipertensione renovascolare Goldblatt, l'aumento del livello della pressione sanguigna è stato associato ad un aumento del COP dei vasi della coda quando misurato sia prima che dopo il blocco gangliare. Nei ratti trattati con solo DOCA o solo 1% NaCl non si è verificato un aumento significativo della pressione sanguigna sistolica (SBP) o COP rispetto ai corrispondenti controlli. In tutte e quattro le serie sperimentali l'infusione endovenosa di angiotensina o noradrenalina in ratti coscienti con blocco del ganglio ha prodotto dose-d aumenti dipendenti di SBP e COP. Nei ratti ipertesi DOCA-NaCl ma non negli ipertesi renovascolari, né nei ratti trattati con solo DOCA o solo NaCl 1%, l'aumento del COP per un dato incremento della dose di angiotensina o noradrenalina era significativamente maggiore rispetto ai ratti di controllo. Si conclude che nell'ipertensione DOCA-NaCl vi è un vero aumento della reattività della muscolatura liscia dei vasi di resistenza all'angiotensina e alla noradrenalina. Nell'ipertensione renovascolare questo non è il caso e altri fattori devono quindi essere coinvolti nel causare l'aumento della pressione sanguigna e della COP.
Effetti delle catecolamine iniettate nell'area settale del cervello di ratto su natriuresi, kaliuresi e diuresi.Produzione urinaria di Na+ e K+ e volume di urine sono state studiate in ratti maschi coscienti, non immobilizzati, carichi d'acqua dopo l'iniezione intrasettale di catecolamine. Natriuresi e kaliuresi aumentavano dopo l'iniezione di noradrenalina (NA), l'intensità essendo correlata alla dose. La curva dose-risposta suggerisce che si verifica un'interazione monomolecolare tra NA e recettori farmacologici presenti nell'area del setto. Nessun cambiamento è stato osservato nella diuresi. La mappatura sistematica dell'area del setto ha prodotto circa gli stessi risultati per tutti i siti tranne una zona situata nel nucleo laterale che era più sensibile. Un alfa-bloccante (dibenamina ), iniettato per via intrasettale prima di NA, ha mostrato un effetto inibitorio mentre un beta-bloccante (propranololo) ha prodotto un effetto di potenziamento. Questi stessi effetti degli agenti bloccanti sono stati osservati quando l'adrenalina w come usato al posto di NA. La lidocaina, che inibisce la ricaptazione di NA, ha mostrato un potenziamento dell'effetto natriuretico e caliuretico di NA, e lo stesso effetto è stato osservato quando la distruzione enzimatica di NA è stata prevenuta dalla nialamide, un inibitore della monoaminossidasi. La dopamina ha mostrato un effetto natriuretico, ma non è stato osservato alcun effetto sul K+ e sulla diuresi. La serotonina non ha avuto azione su natriuresi, kaliuresi e diuresi.
Effetto dell'ipotiroidismo sulla risposta alla stimolazione beta-adrenergica.La somministrazione cronica di aminotriazolo (0,5 g/kg di cibo) ai ratti è stata accompagnata da una ridotta risposta alla somministrazione acuta dell'agonista beta-adrenergico, l-isoproterenolo (50-100 mug/kg, sc). Le risposte testate includevano assunzione di acqua, variazione della frequenza cardiaca nel ratto anestetizzato e non, variazione della pressione sanguigna media e variazione della concentrazione di glucosio nel sangue. Inoltre, l'aumento della temperatura della pelle della coda che accompagna la somministrazione di epinefrina (1 mg/kg, sc) è stato significativamente ridotto nel gruppo ipotiroideo Somministrazione di l-tiroxina (25 mug/kg al giorno, ip) ai ratti trattati con aminotriazolo ha impedito la riduzione della risposta alla stimolazione beta-adrenergica, quindi sembra esistere un'interazione tra il livello di attività tiroidea e la risposta agli agonisti beta-adrenergici nei ratti.
Effetti del blocco alfa-adrenergico sull'escrezione di sodio nei cani con ritenzione salina normale e cronica.È stato somministrato l'agente bloccante alfa-adrenergico (PBA) per via endovenosa (10 mug kg-1 min-1) durante una diuresi acquosa allo stato stazionario in anestesia pentotale a sei cani normali, sei cani con costrizione cronica della vena cava inferiore e ascite (cani cavali) e sette cani cronicamente impoveriti di sodio per restrizione di sodio e somministrazione di furosemide Nei cani normali l'escrezione urinaria di sodio è aumentata significativamente da 265+/56 (SEM) a 370+/65 muequiv. /min, mentre non è stato osservato alcun aumento dell'escrezione di sodio né nei cani caval né negli animali depleti di sale dopo PBA. il volume delle urine di tre gruppi, la clearance frazionata dell'acqua libera e il carico distale di sodio non sono cambiati in modo significativo Nei cani normali, il riassorbimento tubulare di sodio è diminuito significativamente da 73,4+/2,8% a 63,1+/4,0%, mentre non è stato osservato alcun cambiamento in cava o depleto di sale d og. La pressione sanguigna e l'emodinamica renale non sono state significativamente alterate dalla somministrazione di PBA in nessun gruppo. Questi dati dimostrano un effetto natriuretico del blocco alfa-adrenergico nei cani normali con l'effetto maggiore nel segmento di schiarimento dell'acqua del nefrone. L'assenza di qualsiasi effetto nei cani cavali cronici o depleti di sale suggerisce che l'aumento dell'attività alfa-adrenergica non gioca un ruolo significativo nella ritenzione di sodio di questi animali.
L'influenza degli antagonisti beta-adrenergici sulle risposte adrenergiche dei dotti deferenti del ratto.L'influenza degli antagonisti beta-adrenergici (propranololo, pronethalolo, sono stati studiati alprenololo, isopropilmetoxamina, H 35/25, sotalolo e practololo) sulle risposte contrattili isotoniche alla noradrenalina (NE). Tutti i farmaci hanno causato un aumento delle risposte massime mentre gli effetti depressivi sono stati osservati solo con dosi elevate di propranololo, pronetalolo e alprenololo. Il miglioramento delle risposte a NE era considerevolmente maggiore a basse concentrazioni di calcio (0,5-1,0 mM) rispetto a concentrazioni elevate (8 mM). Gli effetti inibitori di propranololo, pronetalolo e alprenololo erano diminuiti ma non completamente superati dall'aumento delle concentrazioni di calcio da 1,8 a 8 mM. Le curve dose-risposta cumulative di calcio non hanno mostrato alcun aumento delle risposte massime sebbene le risposte a basse concentrazioni di calcio siano state aumentate da sotalolo e practololo. L'evidenza suggerisce th gli effetti potenzianti di questi farmaci possono essere dovuti al loro effetto facilitatore sulla mobilizzazione del calcio a seguito dell'attivazione dei recettori alfa-adrenergici, mentre le loro proprietà depressive riflettono probabilmente le loro proprietà stabilizzanti della membrana.
Metabolismo del (4-14C)estrone da parte degli eritrociti di pecora intorno al momento del parto.Il metabolismo del [4-14C]estrone in vitro da parte di sono stati studiati i globuli rossi di pecore alla fine della gravidanza e dopo il parto. [14C]estrone (600 ng) è stato incubato con 0,5 ml di eritrociti più 0,5 ml di tampone fosfato di Krebs-Ringer, pH 7,4, per 2 ore a 37 gradi C in un'atmosfera d'aria. Dopo l'incubazione, gli [3H] estrogeni sono stati aggiunti al mezzo di incubazione come standard interni per l'identificazione e per la correzione delle perdite procedurali. I metaboliti sono stati isolati e purificati mediante cromatografia, formazione di derivati dell'acetato e ricristallizzazione a una temperatura costante di 3H/14C Circa il 20% e il 2% dell'estrone aggiunto sono stati convertiti rispettivamente in 17beta-estradiolo e 17 alfa-estradiolo. Il resto è stato recuperato invariato. Misurazioni giornaliere dell'attività della 17 beta-idrossisteroide deidrogenasi negli eritrociti di cinque pecore, nel periodo 8 giorni prima del parto a 4 giorni pos tpartum, non ha mostrato cambiamenti significativi nell'attività.
Osteopetrosi di topi microftalmici -- un difetto della cellula staminale ematopoietica.?I geni recessivi mi e gl nello stato omozigote determinano, tra l'altro effetti fenotipici, osteopetrosi nel topo domestico. Da un ceppo portante mi derivato da Grüneberg (1963) il gene mi è stato incrociato nel ceppo consanguineo standard CBA/H. I topi microftalmici di questi due ceppi e dei loro ibridi sono stati trattati come neonati mediante iniezione intraperitoneale e allo svezzamento o alla maturità mediante iniezione endovenosa di sospensioni cellulari contenenti cellule staminali ematopoietiche da topi fenotipicamente normali La risoluzione di gran parte dell'osteopetrosi ma non degli altri effetti fenotipici si è verificata entro pochi mesi nella maggior parte dei casi, purché singenici o compatibili con H-2 sono state somministrate cellule allogeniche: non si è verificato spontaneamente o somministrando cellule H-2 incompatibili o somministrando materiale compatibile per via inappropriata. I risultati concordano con l'ipotesi che (1) l'osteoclasi di l'osso intrecciato tipo scaffold è compromesso in mi mi, (2) che le cellule osteoclastiche derivano da monociti circolanti da cellule staminali ematopoietiche, e (3) in mi mi questo difetto può essere superato da un trapianto di cellule staminali emopoietiche normali.
Rilascio evocato dalla luce di glicina dalla retina di gatto e coniglio.Il rilascio evocato dalla luce di [3H]glicina dalla retina nel gatto (in vivo ) dopo perfusione pre-retinica e nel coniglio (in vitro) dopo iniezione intravitreale. Il sito di assorbimento della [3H]glicina nella retina è stato controllato mediante autoradiografia ed è risultato essere quasi esclusivamente in un tipo di cellule amacrine. Se il retina caricata con [3H]glicina è stata stimolata da lampi di luce il rilascio è aumentato significativamente sia in esperimenti in vivo che in vitro. Quando la luce lampeggiante è stata scambiata con luce continua non si è verificato alcun cambiamento nell'efflusso spontaneo di radioattività. Esperimenti cromatografici hanno mostrato che la la parte principale della radioattività rilasciata dalla luce era la glicina. Il rilascio di glicina evocato dalla luce dalla retina dipendeva dalla temperatura e dal Ca2+. La bassa temperatura (da +2 a +4 gradi C) aboliva il rilascio aumentato. Se Ca2+ veniva omesso dalla perfusione medio e EDTA era aggiunto che non vi era alcun cambiamento inducibile dalla luce nell'efflusso di radioattività nelle retine caricate con [3H]valina. I risultati attuali, che la stimolazione luminosa rilascerà glicina dalla retina sia in vivo che in vitro, sono un ulteriore criterio per utilizzarla come neurotrasmettitore.
Effetto dell'atenololo sulla funzione respiratoria e cardiaca nell'asma.Gli effetti sulla funzione ventilatoria e cardiaca dell'atenololo, un nuovo agente bloccante cardioselettivo dei beta-adrenocettori , sono stati confrontati con quelli del practololo in uno studio in doppio cieco su 12 pazienti con asma. Entrambi i farmaci hanno compromesso la funzione ventilatoria - atenololo in modo insignificante e practololo in modo significativo. L'atenololo era semmai più cardioselettivo del practololo. Nessuno dei due farmaci ha interferito significativamente con la risposta del broncodilatatore al isoprenalina per via inalatoria L'atenololo è adatto per l'uso in pazienti per i quali in precedenza sarebbe stato scelto il practololo a causa della sua cardioselettività.
Confronto tra propranololo, metoprololo e acebutololo sull'ipoglicemia indotta da insulina.Metoprololo e acebutololo, due agenti bloccanti dei recettori beta-adrenergici presumibilmente cardio-selettivi , sono stati testati in volontari sani contro il propranololo, un farmaco non selettivo, per il loro effetto sui livelli di glucosio nel sangue durante l'ipoglicemia indotta da insulina. Non c'era differenza significativa tra propranololo e metoprololo, che entrambi potenziavano l'azione ipoglicemizzante iniziale dell'insulina e ritardavano il ritorno alla normoglicemia. L'acebutololo, pur potenziando l'ipoglicemia iniziale, non ha avuto un effetto ritardante significativo. Un simile studio dovrebbe essere intrapreso nei diabetici per determinare con certezza la sicurezza di tali farmaci nel diabete mellito.
Trapianto di midollo osseo riuscito contro la barriera della coltura di linfociti misti.Se il trapianto di midollo osseo deve diventare ampiamente applicabile nel trattamento di pazienti con leucemia e anemia aplastica , la necessità di avere un donatore perfettamente istocompatibile deve essere superata nel tentativo di definire i ruoli del tipo HL-A e della reattività delle colture linfocitarie miste (MLC) nella determinazione del successo dell'attecchimento e dell'insorgenza della malattia del trapianto contro l'ospite (GVHD) , abbiamo tentato il trapianto di un bambino con leucemia mieloblastica acuta (AML) utilizzando un donatore fratello HL-A identico, reattivo a MLC. L'attecchimento è stato realizzato con successo, come documentato dalla comparsa di più marcatori genetici del donatore nel ricevente. nessuna evidenza di grave GVHD. Il ricevente è vivo, senza evidenza di leucemia, ed è tornato alla piena attività 9 mesi dopo il trapianto. Il ricevente ora produce linfociti, che hanno la reattività MLC ità che caratterizzano i linfociti del donatore, piuttosto che quella dei suoi linfociti pretrapianto. Questa esperienza dimostra che il trapianto di midollo osseo di successo in pazienti con leucemia può essere realizzato nonostante la reattività della MLC.
[Differenze genetiche nella reattività del tessuto linfoide durante la rigenerazione epatica in topi di diverse linee].Il trasferimento di linfociti insieme a eritrociti di pecora da topi parzialmente epatectomizzati a topi singenici irradiati letalmente (CAB e C57BL) ha aumentato il numero di cellule che formano anticorpi nella milza ricevente. I linfociti dei topi CBA hanno acquisito questa capacità molto prima dopo l'operazione (in 4 ore) rispetto a quelli dei topi C57BL (in 17 ore). Dopo il trasferimento dei linfociti nel sistema semisingeno si è verificata una diminuzione delle cellule formanti anticorpi durante la successiva immunizzazione del ricevente con eritrociti di pecora; questo è stato il risultato della reazione del trapianto contro l'ospite. Quest'ultima reazione è stata meno marcata nel operati rispetto ai topi di controllo. Questi cambiamenti si sono verificati anche prima dopo l'operazione nel CBA rispetto ai topi C57BL.
[Attività ribonucleasica nelle preparazioni di interferone leucocitario umano].Le preparazioni di interferone leucocitario umano ottenute mediante procedura di purificazione a più stadi hanno mostrato attività ribonucleasica con l'ottimale a pH 7,0--7,5. L'enzima possedeva il meccanismo d'azione delle endonucleasi. La maggior parte delle sostanze studiate per il loro effetto sull'attività RNA-asi nelle preparazioni di interferone umano hanno mostrato che molte di esse agiscono sull'enzima allo stesso modo delle altre ribonucleasi. Tuttavia , dithioerythritie, un agente riducente per i legami disolfuro, ha attivato la ribonucleasi nella preparazione di interferone, a differenza della ribonucleasi pancreatica, che è stata inibita da questa preparazione. I modelli di distribuzione della proteina e dell'RNA-asi sono stati ottenuti mediante elettroforesi in gel di poliacrilammide.
["Linfonodo" forma di reazione del trapianto contro l'ospite nei topi].Tipo locale della reazione del trapianto contro l'ospite è stato indotto in topi ibridi adulti (CBA X C57BL) F1 mediante il trasferimento di cellule CBA spleniche, timo e midollo osseo per via sottocutanea nella zampa posteriore destra. L'aumento di peso del linfonodo regionale del ginocchio e l'accumulo di blasti in esso 7 giorni dopo sono stati utilizzati come indici dell'attività del trapianto contro l'ospite. Dopo il trasferimento di 5 e 20 x 10(6) cellule spleniche il peso assoluto del linfonodo regionale era 8-10 volte superiore a quello del controllo controlaterale ed era anche significativamente maggiore rispetto ai controlli che ricevevano cellule morte vive singeniche o semiallogeniche dalla stessa fonte Contrariamente ai controlli, nel caso delle cellule vive si poteva osservare una dipendenza diretta dose-effetto L'aumento di peso dei linfonodi era accompagnato da un regolare accumulo di immunoblasti L'effetto del timo e delle cellule del midollo osseo era meno pronunciato che n quello delle cellule spleniche.
Rigenerazione continua di NAD(P)+ da parte di flavine legate in modo covalente a sepharose.Varie flavine, FMN, FAD e acriflavina, sono state immobilizzate a Sepharose utilizzando diversi metodi di accoppiamento. L'unico prodotto abbastanza stabile da consentire studi estesi era l'acriflavina accoppiata al Sepharose epossi-sostituito. È stata studiata la capacità ossidante non enzimatica nei confronti del NAD(P)H e un'attività specifica del 25%, rispetto a quella dell'acriflavina libera, L'acriflavina ridotta è stata immediatamente auto-riossidata in aria e potrebbe quindi essere riutilizzata È stato dimostrato che i preparati di acriflavina-sefarosio funzionano come agenti ossidanti di NAD(P)H in una serie di diversi sistemi di deidrogenasi tra cui la lattato deidrogenasi (LDH), alcol deidrogenasi (ADH), malato deidrogenasi (MDH), alanina deidrogenasi (alaDH) e glutammato deidrogenasi (GDH). La quantità di coenzima costoso necessario per un'elevata formazione di prodotti di tali sistemi è stata quindi notevolmente ridotta.
Formazione di microsfere proteinoidi in atmosfere prebiotiche simulate e singoli gas.La formazione di microsfere da proteinoidi acidi e basici è stata tentata in atmosfere prebiotiche simulate e costituenti gas della stessa. Entrambi i tipi di proteinoidi hanno prodotto microsfere sotto anidride carbonica, monossido di carbonio, metano, idrogeno solforato, idrogeno, azoto e ossigeno (testati separatamente) e anche in atmosfere di azoto-anidride carbonica. proteinoide basico Nessuno dei due tipi di proteinoide ha formato sfere dopo 10 minuti di esposizione ad ammoniaca o ad atmosfere metano-idrogeno-ammoniaca (una breve esposizione ha prodotto sfere di proteinoide basico). dovuto al pH, piuttosto che al gas specifico (o ione). I risultati suggeriscono che il modello di microsfere proteinoidi per le protocelle è applicabile sotto un va serie di possibili atmosfere prebiotiche, con alcune restrizioni imposte dal pH.
Interazioni elettrostatiche sulle membrane lipidiche cariche. I. Effetti del pH e dei cationi univalenti sulla struttura della membrana.Le interazioni elettrostatiche sulle membrane lipidiche cariche danno un contributo significativo all'energia libera del sistema e può essere variata entro un ampio intervallo mediante alterazione della densità di carica superficiale della membrana o della concentrazione di elettroliti nel mezzo circostante. Cambiamenti nella struttura della membrana caricata, come il ordinato in equilibrio fluido transizione di fase, può quindi essere indotto a temperatura costante da variazioni di pH e concentrazione salina. Un'adeguata descrizione quantitativa di questi fenomeni si ottiene dalla teoria di Gouy-Chapman. Il buon accordo tra teoria ed esperimento conferma che l'espressione L'espressione classica derivata per l'energia libera elettrostatica, specialmente in relazione al suo segno positivo, è corretta. aspetto del suo segno positivo, è corretto. L'espressione classica per l'"energia libera del doppio strato" derivata da Verwey e Overbeek, che ha un segno negativo, non è applicabile alle membrane lipidiche con gruppi polari ionizzabili.
Biosintesi della lecitina polmonare nel feto di primati non umani: determinazione della via primaria in vivo.Le due vie per la biosintesi de novo della lecitina (fosfatidilcolina), l'incorporazione di colina (1) e la metilazione della fosfatidiletanolamina (II), sono state esaminate simultaneamente nei polmoni e in altri tessuti di feti di scimmie Rhesus. L'incannulazione dei vasi fetali interplacentari ha consentito studi sul feto intrauterino senza interruzione dell'integrità anatomica del liquido fetale-placentare-materno-amniotico. Contrariamente alle osservazioni con tecniche indirette nella stessa specie, la misurazione diretta dell'incorporazione di precursori isotopici (3H-colina e 14C-etanolamina) nella lecitina ha indicato che la via I predomina di 100 volte rispetto alla metilazione del PE nella sintesi della lecitina polmonare. , cervello e reni hanno anche mostrato 10--70-oro maggiore incorporazione di colina che l'attività di metilazione. Misurazione della produzione di fosfatidilcolina polmonare tramite il tw o le vie nei feti acidi (pH venoso ombelicale inferiore a 7,20) hanno dimostrato una marcata inibizione della via I, ma non della II. Si conclude che la via della colina è il principale meccanismo di sintesi della lecitina polmonare nei primati fetali e che questa via è sensibile al pH in vivo.
Pressione positiva continua delle vie aeree nasali. Miglioramento dell'ossigenazione arteriosa nella malattia della membrana ialina.Pressione positiva continua delle vie aeree (CPAP) è stata impiegata utilizzando rebbi nasali in 30 neonati con malattia della membrana ialina (HMD). Si è verificato un miglioramento significativo della PaO2 media (da 47 a 80 mmHg; p inferiore a 0,001) senza variazioni significative della PaCO2 o del pH entro una media di 36 min di terapia. L'uso della tecnica ha consentito riduzione della FiO2 a meno di 0,60 in meno di 20 ore in 18 bambini. I bambini trattati entro 24 ore dalla nascita hanno avuto miglioramenti significativamente maggiori della PaO2. Le complicanze erano rare e solo 3 bambini su 30 hanno sviluppato un pneumotorace durante la CPAP nasale. Solo 1 dei i 23 sopravvissuti hanno richiesto la ventilazione meccanica oltre alla CPAP nasale.
pH e livello di calcio nel sangue di ratti albini fetali e neonatali.I feti di ratto a breve termine in utero sono acidotici e ipossici, e hanno livelli elevati di calcio sierico totale. Nella prima ora di vita postnatale, pO2 e pH aumentano e pCO2 e calcio diminuiscono. Tra 1 e 4 ore dopo la nascita, i gas respiratori variano poco, mentre il pH continua ad aumentare e il calcio diminuisce ulteriormente. 4 h, i neonati raggiungono livelli di pH normali ma sono marcatamente ipocalcemici. Si suggerisce che l'\'ipercalcemia\' della vita intrauterina sia correlata all'acidosi in utero, e che dopo la nascita, la caduta iniziale del calcio sierico sia associata alla fuoriuscita di CO2 e un concomitante aumento del pH. La successiva diminuzione del calcio circolante è indipendente dalle alterazioni dei gas respiratori e si riferisce direttamente alla correzione finale dell'acidosi neonatale.
[Studio spettroscopico delle modificazioni strutturali dell'emocianina di scorpione, indotte da variazioni di pH e aggiunta di vari sali].Modifiche strutturali dell'emocianina di scorpione indotte mediante variazioni di pH e aggiunta di sale sono studiati mediante assorbimento UV, fluorescenza, dicroismo circolare e diffusione della luce. La fluorescenza dell'emocianina è dovuta sia agli amminoacidi aromatici tirosina che al triptofano. La deossigenazione o la denaturazione portano ad un aumento di quattro volte della sua intensità. A pH acido il il sito attivo viene modificato e la proteina si dissocia, ma a pH alcalino l'emocianina si aggrega. L'aggiunta di diversi sali (citrato di sodio, bromuro di potassio e ioduro... ) comporta la dissociazione della proteina, la cui ampiezza dipende dall'anione. Ma il pH le variazioni e l'aggiunta di sale non modificano la struttura secondaria dell'emocianina come mostrato dal dicroismo circolare. Lo spettro CD dell'emocianina dello scorpione mostra le bande caratteristiche di Arthropo d emocianina.
La reazione dei residui istidinici dell'ormone luteinizzante con l'anidride etossiformilica.Ormoni luteinizzanti bovini e suini (B-LH, P-LH) e loro le subunità sono state trattate con anidride etossiformilica. L'acilazione dei residui di istidina è stata seguita dall'esame dello spettro di assorbanza. Tutti i residui di istidina della molecola dell'ormone luteinizzante possono essere modificati a pH5. Tuttavia 2 His in B-LH e 1 in P-LH sembrano essere molto meno reattivi a pH 5 rispetto agli altri e i loro imidazoli acilati più labili allo stesso pH. A pH neutro, 2 istidine in B-LH (e 1 in P-LH) diventano non reattive. Nel caso delle subunità , 1 istidina diventa non reattiva in ciascuna subunità a pH neutro. Questi residui di istidina non reattiva a pH neutro sono probabilmente quelli che sembrano essere scarsamente reattivi a pH 5. Il confronto dei risultati ottenuti con B-LH e P-LH suggerisce quello dei 2 residui di istidina presenti in B-LH e assenti in P-LH (beta 60, beta 112), o solo uno mostra una bassa reattività. L'acilazione di 4 His in B-LH non provoca la dissociazione in subunità della molecola ma sopprime il 95% dell'attività biologica.
[Cinetica dell'ATPasi C2+ o Mg2+ attivata dalle membrane plasmatiche dei linfociti].Lo studio cinetico dell'attività dell'ATPasi C2+ del plasma dei linfociti le membrane hanno permesso di evidenziare alcune proprietà di questo enzima. L'idrolisi dell'ATP attivata dal Ca2+ è indipendente da una fosfatasi alcalina non specifica. Il substrato dell'attività dell'ATPasi è il chelato Ca2+-ATP. Mg2+ può sostituire il Ca2+ sia come ione chelante e come ione attivante. Diversi risultati suggeriscono che abbiamo una sola ATPasi, attivata o da Ca2+-, o da Mg2+ con minore efficienza; entrambi i chelati hanno lo stesso Km; i valori di pH per la massima attività e le temperature di transizione sono identici; gli effetti della libera anche gli ioni sono gli stessi, attivazione a bassa concentrazione e inibizione ad alta concentrazione.
Effetti degli attivatori sull'esochinasi di lievito chimicamente modificata.Gli studi enzimatici condotti con l'esochinasi di lievito chimicamente modificata (ATP: D-esoso-6-fosfotransferasi) confermano risultati precedenti indicavano che il sulfidrile, l'imidazolo e la maggior parte dei gruppi amminici reattivi non sembrano essere direttamente implicati nel sito attivo dell'enzima D'altra parte la modifica di questi gruppi funzionali dell'enzima non influenza la transizione tra l'acido inattivo forma ad una forma enzimatica attiva dopo la deprotonazione. Le forme chimicamente modificate di esochinasi e l'enzima nativo sono influenzate allo stesso modo dagli attivatori (citrato, D-malato, 3-fosfoglicerato e Pi) quando l'attività è stata misurata a pH 6,6. la perdita di attività enzimatica osservata nel corso delle modificazioni chimiche è accompagnata da un aumento dell'effetto di attivazione Tale aumento deve essere correlato ad una certa riorganizzazione del sito attivo dell'enzima in presenza di t effettori, poiché lo stesso effetto è stato osservato quando l'esochinasi è stata denaturata con urea 3M a pH 7,5. Tuttavia non è stato osservato alcun aumento dell'effetto di attivazione quando la denaturazione è stata effettuata a pH 6,5 A questo pH la perdita di attività e il cambiamento di assorbimento ottico a 286 nm erano molto più lenti che a pH 7,5, il che indica una grande differenza nella proteina struttura tra questi pH.