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Fosfolipasi A1 e A2 delle membrane plasmatiche del fegato di ratto; meccanismo d'azione.Mentre i grafici V/S della fosfolipasi A1 mostrano una transizione di fase, comportamento cinetico della fosfolipasi A2 che agisce nello stesso intervallo di concentrazione è iperbolica. Tuttavia, dopo che la fosfolipasi A2 è stata solubilizzata dalle membrane plasmatiche con 1 M NaCl, la curva V/S mostra una transizione di fase. La fosfolipasi A1 legata alla membrana mostra un pH ottimale stretto a 8,5 -9, mentre l'attività della fosfolipasi A2 presenta solo piccole variazioni tra pH 7 e 9,5. Nei confronti dei fosfolipidi esogeni al pH ottimale 8,5 della fosfolipasi A1, l'attività specifica di quest'ultima è 3 volte superiore all'attività specifica della fosfolipasi A2. fosfolipidi endogeni, l'attività della fosfolipasi A2 è maggiore dell'attività della fosfolipasi A2 Inoltre l'idrolisi del PE endogeno marcato da parte della fosfolipasi A2 è diminuita dall'aggiunta di PE esogeno non marcato nel mezzo di incubazione. Tutti questi dati suggeriscono est che il sito attivo della fosfolipasi A1 è rivolto verso l'esterno e agisce solo su substrati esogeni: per la fosfolipasi A2 sarebbe all'interno, e i fosfolipidi esogeni potrebbero essere idrolizzati solo dopo aver penetrato la membrana.
Studi meccanicistici della glutammina sintetasi da Escherichia coli. Un meccanismo integrato per biosintesi, transferasi, reazione ATPasi.Il meccanismo di biosintetico, transferasi, ATPasi, e reazioni di transfosforilazione catalizzate dalla glutammina sintetasi non denilata da E. coli sono stati studiati complessi di attivazione coinvolti nella reazione biosintetica sono prodotti in presenza di Mg2+ o Mn2+; tuttavia, con l'inibizione dell'enzima Mn2+ da parte del prodotto, ADP, è così grande che la reazione biosintetica diretta complessiva non può essere rilevata con i metodi di analisi noti. Gli studi di legame mostrano che i substrati (ad eccezione di NH3 e NH2OH che non sono riportati qui) possono legarsi all'enzima in modo casuale e che il legame dell'ATP -glutammato, coppie ADP-Pi o ADP-arsenato è fortemente sinergico Studi di inibizione e legame mostrano che lo stesso sito di legame è utilizzato per glutammato e glutammina nelle reazioni biosintetiche e transferasi, risp. effettivamente, e che per tutte le reazioni studiate venga utilizzato un sito di legame dei nucleotidi comune. Gli studi sulla reazione biosintetica inversa e i risultati degli esperimenti di titolazione fluorescente suggeriscono che sia l'arsenato che l'ortofosfato si legano in un sito che si sovrappone al sito gamma-fosfato del nucleoside trifosfato. Nelle reazioni biosintetiche inverse e transferasi, l'ATP funge da substrato per l'enzima Mn2+ ma non per l'enzima Mg2+. L'attività transferasi supportata dall'ATP dell'enzima Mn2+ è probabilmente facilitata dalla generazione di ADP attraverso l'idrolisi dell'ATP. Quando l'AMP è stato l'unico substrato nucleotidico aggiunto, è stato convertito in ATP con la formazione concomitante di due equivalenti di glutammato, nelle condizioni di reazione biosintetica inversa, e non è stato rilevato alcun ADP. È stata confermata la reversibilità del trasferimento di 180 tra l'ortofosfato e il gruppo gamma-acilico del glutammato. L'attività dell'ATPasi degli enzimi Mg2+ e Mn2+ non denilati è circa la stessa. Entrambe le forme di enzimi catalizzano le reazioni di transfosforilazione tra vari nucleosidi trifosfati purinici e difosfati nucleosidici in condizioni di reazione biosintetica. I dati sono coerenti con l'ipotesi che venga utilizzato un unico centro attivo per tutte le reazioni studiate. Vengono discussi due meccanismi graduali che potrebbero spiegare i risultati.
Ruolo del lysyl-tRNA nella regolazione della biosintesi della lisina in Escherichia coli K12.Un mutante della lisil-tRNA sintetasi è stato isolato in Escherichia coli K12. Con questo ceppo il Kmapp per la lisina è 25 volte superiore rispetto al ceppo parentale. La percentuale di tRNAlys carico in vivo è solo del 7% (contro il 65% con HFR H). In queste condizioni non c'è derepressione della sintesi osservata per tre enzimi biosintetici della lisina (AK III, ASA-deidrogenasi, DAP-decarbossilasi), si ottiene una parziale derepressione nel caso della dhdp-reduttasi, quindi la lisina-tRNA non agisce come unica molecola corepressor nel regulone della lisina.
Proprietà della guanilato ciclasi nel fegato di ratto adulto e diversi epatomi di Morris.Guanilato ciclasi (GTP pirofosfato-liasi (ciclizzazione), EC 4.6.1.2) l'attività è stata esaminata in preparazioni da fegato di ratto normale e da una serie di epatomi di Morris. Le attività omogenate di gianilato ciclasi erano 3,2, 1,6 e 1,2 nmol di GMP ciclico formate per min/g di tessuto gli analoghi non substrato di IMP erano deboli inibitori di questo enzima, GMP e quattro dei suoi analoghi avevano valori Ki compresi tra 30 e 80 muM. Gli analoghi GMP (8-azaGMP, 7-deaza-8-azaGMP, 2\'-dGMP e beta-D-arabinosylGMP) e GMP erano inibitori competitivi rispetto a GTP.
Indagini chimiche sull'aminoacilasi del rene di maiale.1. ottenuto mediante cromatografia Sephadex e DEAE-cellulosa in forma omogenea come giudicato mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide e immunoelettroforesi 2. Il peso molecolare apparente dell'enzima, determinato mediante filtrazione su gel, era di circa 86 000. Dopo trattamento con mercaptoetanolo, acido performico o sodio dodecile solfato una banda con un peso molecolare apparente di circa 43 000 è stata osservata in gel di poliacrilammide contenenti sodio dodecilsolfato. Pertanto, l'aminoacilasi del rene di maiale sembra essere composta da due subunità. 3. È stata determinata la composizione amminoacidica dell'enzima. L'aminoacilasi contiene 772 amminoacidi acidi, che corrisponde ad un peso molecolare di 85 500. Sono stati trovati 12 residui di triptofano e 12 semicistina 4. Ogni subunità dell'enzima contiene due gruppi -SH di diversa reazione vità e due ponti disolfuro di cui uno facilmente scisso dai composti -SH, il secondo solo dall'ossidazione dell'acido performico. 5. La modificazione chimica di due gruppi -SH abolisce l'attività catalitica dell'aminoacilasi. Anche la scissione di due ponti disolfuro inattiva l'enzima. Si suggerisce che l'enzima abbia due siti attivi ciascuno contenente un gruppo -SH essenziale e un legame disolfuro. Si presume che un sito attivo faccia parte di ciascuna subunità.
Adenosina trifosfatasi HCO-3-attivata nella mucosa intestinale dell'anguilla.Un'ATPasi HCO-3-attivata e inibita da SCN (ATP fosfoidrolasi , EC 3.6.1.3) riscontrato negli omogenati della mucosa intestinale dell'anguilla è stato solubilizzato da Triton X-100. La concentrazione ottimale di HCO-3 e il pH per l'enzima erano rispettivamente di 25 mM e 8,7. Attività di HCO-3-ATPasi in entrambi preparati omogeneizzati e solubilizzati sono aumentati dopo l'adattamento all'acqua di mare. Questo aumento adattativo dell'attività enzimatica è stato osservato anche nelle branchie e nel rene. L'HCO-3-ATPasi sembra essere correlato ai meccanismi di trasporto, specialmente per Cl-, nelle superfici osmoregolatrici dell'anguilla.
Trasferimento protonico a un colorante carico legato al sito attivo dell'alfa-chimotripsina studiato mediante fotolisi laser.La fotolisi laser pulsata è stata utilizzata per studiare rapido rilassamento del complesso dell'alfa-chimotripsina (EC 3.4.21.1) con l'inibitore colorato Biebrich Scarlet L'assorbimento della luce provoca la dissociazione del protone nell'anello naftolico del colorante e siamo in grado di seguire il processo di ricombinazione in condizioni di diversa ionica forza e pH. La ricombinazione è marcatamente influenzata dal pH intorno a pH 7. I dati suggeriscono l'esistenza di interazioni rilevanti nell'area del sito attivo tra il sito di legame idrofobico e il sistema di relè protonico dell'enzima.
Purificazione e proprietà di una nuova aminopeptidasi da Escherichia COLI K12.Una aminopeptidasi (EC 3.4.11. -) in grado di idrolizzare L-alanil- la beta-naftil-ammide e alcuni altri aminoacil beta-naftilammidi sono stati purificati fino all'omogeneità da estratti di Exherichia coli K-12. L'enzima, denominato aminopeptidasi II, è una proteina monomerica di peso molecolare 100.000. Presenta un ampio pH ottimale nell'intervallo pH 7,0--9,0. Sebbene Zn2+, Fe3+ e Cr3+ siano forti inibitori dell'attività enzimatica, non è stato possibile stabilire con fermezza un requisito di metallo per la catalisi. Né i reagenti sulfidrilici né gli inibitori della serina proteasi hanno influenzato l'attività enzimatica.
Attività alfa-mannosidasi neutra nel siero umano.Due tipi di alfa-mannosidasi (alfa-D-mannoside mannoidrolasi, EC 3.2.1.24) con Nel siero esistono ottimi a pH neutro. L'attività con un ottimo tra pH 6,0 e 6,4 è simile all'alfa-mannosidasi C, descritta in precedenza nei tessuti. La seconda attività, con un pH ottimale tra pH 5,2 e 5,8 è la forma dominante nel siero. Queste due forme possono essere differenziate tra loro mediante gel-filtrazione, cromatografia su DEAE-cellulosa o cromatografia su Concanavalina-A Sepharose Utilizzando le tecniche cromatografiche, l'attività neutra di tipo sierico co-eluisce con le forme acide dell'enzima. queste due forme possono essere facilmente distinte per effetto del pH, riscaldamento o inibizione da parte del substrato metil-alfa-D-mannopiranoside. La presenza dell'attività sierica di tipo alfa-mannosidasi è discussa rispetto alla mannosidosi, una malattia da accumulo lisosomiale.
Purificazione e proprietà dell'alfa-glucosidasi extracellulare di un termofilo, Bacillus thermoglucosidus KP 1006.Un'alfa-glucosidasi extraceculare (alfa-D-glucoside glicoidrolasi , EC 3.2.1.20) di un termofilo, Bacillus thermoglucosidius KP 1006, è stato purificato di circa 350 volte. L'enzima purificato aveva un'attività specifica di 164 mumolo di p-nitrofenil-alfa-D-glucopiranoside idrolizzato al minuto a 60 gradi C e pH 6,8 per mg di proteine. Il peso molecolare è stato stimato a 55.000. Il pH e la temperatura ottimali per l'attività erano rispettivamente 5,0--6,0 e 75 gradi C. Al di sotto dei 40 gradi C, l'attività era inferiore al 4,5% dell'ottimim L'enzima ha mostrato un'elevata specificità per l'alfa-D-glucopiranoside La massima velocità di idrolisi per substrato è diminuita nell'ordine: fenil-alfa-D-glucopiranoside, p-nitrofenil-alfa-D-glucopiranoside, isomaltosio, metil-alfa-glicopiranoside I rispettivi valori di Km erano 3.0, 0.23, 3.2 e 27 mM vity era traccia per turanosio e non rilevabile per saccarosio, trealosio, raffinosio, melezitosio, maltosio, maltotriosio, fenil-alfa-D-maltoside, destrano, destrina e amido. Tris, p-nitrofenil-alfa-D-xilopiranoside, glucosio e glucono-delta-lattone bloccano competitivamente l'enzima rispetto al p-nitrofenil-alfa-D-glucopiranoside. I valori di Ki erano rispettivamente 0,12, 0,14, 2,2 e 2,4 mM. L'attività è stata influenzata da ioni di metalli pesanti, ma insensibile a EDTA, p-cloromercuribenzoato e iodoacetato. L'enzima era stabile fino a 60 gradi C e si inattivava rapidamente a temperature oltre i 72 gradi C. L'intervallo di pH per la stabilità era 4,0--11,0 a 31 gradi C e 6,0--8,5 a 55,5 gradi C. A 25 gradi C, l'enzima non è stato inattivato nel 45% di etanolo, in 7,2 M di urea e nello 0,06% di sodio dodecilsolfato, ma la tolleranza era estremamente ridotta a 60 gradi C.
Titolazioni spettrofotometriche del pH e nitrazione con tetranitrometano dei residui tirosile nella fosfoglicerato chinasi di lievito.Le titolazioni spettrofotometriche del pH della fosfoglicerato chinasi (EC 2.7.2.3) rivelano sette residui tirosile. Nello stato nativo un residuo tirosile ha pKapp pari a 9,3, un altro ha pKapp di circa 12,9 e cinque hanno valori pKapp prossimi a 11,0. La titolazione sopra pH 10 provoca una concomitante riduzione dell'attività catalitica. Si verifica la riattivazione dell'enzima durante lo stoccaggio a pH 7,8. In 6 M guanidina - HCl compaiono sette residui di tirosile con valori di pKapp pari a 10,0. La nitrazione di tre residui di tirosile avviene facilmente quando si usa in eccesso il tetranitrometano. Quattro residui di tirosile sembrano essere mascherati o sepolti. Il residuo di tirosile avendo pKapp pari a 9,3 può essere nitrato selettivamente Contemporaneamente l'enzima perde il 40% della sua attività catalitica Nessuna variazione del valore di Km per l'uno o l'altro dei due substrati, MgATP o 3-phos pho-D-glicerato, è stato osservato nell'enzima mononitrato. D'altra parte MgATP protegge il residuo tirosile dalla nitrazione mentre il 3-fosfo-D-glicerato in condizioni corrispondenti appare innocuo. Questi risultati suggeriscono che il residuo tirosile a bassa ionizzazione sia situato vicino al sito di legame di MgATP, possibilmente in una tasca appena dietro. Le misurazioni del dicroismo circolare hanno indicato che piccoli cambiamenti successivi si verificano nella struttura secondaria, principalmente la struttura beta, quando l'enzima viene nitrato. È ragionevole pensare che questi cambiamenti strutturali, possibili in combinazione con l'ingombro sterico, siano responsabili della diminuzione dell'attività catalitica. La dimerizzazione dell'enzima avviene se il singolo gruppo tiolico non è mascherato prima del trattamento con tetranitrometano.
Glutatione reduttasi umana. I. Purificazione e proprietà.1. Glutatione reduttasi (NAD(P)H: glutatione ossidoreduttasi ossidata, EC. 1.6.4.2) da eritrociti umani è stato purificato 49000 volte con una resa complessiva del 15% e un rapporto di assorbanza di 280/460 nm di 6,03. La procedura utilizzata è stata il metodo di Worthington e Rosemeyer modificato mediante aggiunta di riscaldamento e ricristallizzazione.2 Si è concluso dai risultati degli studi di purificazione, elettrofocalizzazione e inibizione che la glutatione reduttasi è un singolo enzima che utilizza sia NADPH che NADH come donatori di idrogeno 3. L'apoenzima reagisce crociata con l'anticorpo all'oloenzima ma ha un'affinità leggermente ridotta per l'anticorpo. L'apoenzima può essere rimosso dall'emolisato mediante riscaldamento e centrifugazione senza perdita di oloenzima. 4. L'analisi immunologica indiretta dell'attività specifica della glutatione reduttasi eritrocitaria è possibile nell'enzima saturato con FAD.
Isocitrato deidrogenasi specifico per NADP+ di Excherichia coli. III. Purificazione in due fasi mediante cromatografia di affinità.Isocitrato deidrogenasi specifico per NADP+ (treo-DS -isocitrato:NADP+ ossidoreduttasi (decarbossilante), EC 1.1.1.42) di Excherichia coli è stato purificato all'omogeneità elettroforetica mediante una procedura di purificazione in due fasi che impiega cromatografia di affinità. La resa complessiva dell'enzima è stata del 30% con attività specifica 125 mumol/min per proteina ng. L'omogeneità elettroforetica dell'isocitrato deidrogenasi è stata determinata in gel analitici di poliacrilammide in un sistema tampone Tris/acetato/EDTA a pH 7,5 e in un sistema tampone citrato/fosfato a pH 6,0.
Adenilato ciclasi delle cellule adipose umane. Caratterizzazione degli enzimi ed effetti dei nucleotidi guanina sulla reattività dell'adrenalina nelle membrane cellulari.Adenilato ciclasi umana (ATP pirofosfato-liasi (ciclizzazione) ). l'enzima è stato attivato 6 volte dall'epinefrina in presenza dell'analogo GTP, 5\'-guanylyl-imidodiphosphate [GMP-P(NH)P] (Cooper, B. et al. (1975) J. Clin. Invest. 56 , 1350-1353). L'attività basale era più alta durante i primi 2 minuti di incubazione, quindi rallentava ed era lineare per almeno i successivi 18 minuti. L'adrenalina, aggiunta da sola, era spesso senza effetto, ma a volte manteneva l'alto tasso iniziale di attività basale GMP-P(NH)P da solo ha prodotto l'inibizione ("lag") dell'enzima basale all'inizio dei periodi di incubazione. Aumento dell'effetto dell'epinefrina da parte del GMP-P(NH)P, che ha proceduto anche dopo un breve periodo di latenza (2 min), è stato osservato su un'ampia gamma di concentrazioni di substrato (ATP). GTP ha inibito i livelli basali dell'enzima di circa il 50%. La GTP ha anche permesso l'espressione di un effetto epinefrina, ma solo nel senso che l'ormone ha abolito l'inibizione da parte della GTP. Occasionalmente è stato osservato un leggero effetto stimolante sull'azione dell'adrenalina con GTP. Ad alta concentrazione di Mg2+ (maggiore di 10 mM) o temperature elevate (maggiori di 30 gradi C) GMP-P(NH)P da solo ha attivato l'enzima. L'attività massima dell'adenilato ciclasi delle cellule adipose umane è stata osservata a 50 mM Mg2+, 1,0 mM ATP, pH 8,2 e 37 gradi C in presenza di 10(-4) M GMP-P(NH)P; in queste condizioni l'aggiunta di adrenalina non ha ulteriormente potenziato l'attività. L'adenilato ciclasi delle cellule adipose umane degli adulti era insensibile all'ACTH e al glucagone anche in presenza di GMP-P(NH)P.
Studi allo stato stazionario dell'attività dell'adenosina trifosfatasi attivata dall'actina della miosina.Actomiosina ricostituita (ATP fosfoidrolasi, EC 3.6.1.3) (0,400 mg F-actina/mg miosina) in 10,0 muM L'ATP perde il 96% della sua attività specifica di ATPasi quando la sua concentrazione di reazione viene ridotta da 42,0 mug/ml a 0,700 mug/ml. La perdita di attività specifica a concentrazioni di enzima molto basse viene prevenuta mediante l'aggiunta di più F-actina a 17,6 mug/ml. Si conclude che a basse concentrazioni di actomiosina il complesso si dissocia in miosina libera con un'attività ATPasi specifica molto bassa e F-actina libera senza ATPasi. La dissociazione del basso essenziale subunità di peso molecolare della miosina dalle catene pesanti a concentrazioni di actomiosina molto basse possono essere un fattore che contribuisce. L'actomiosina ha la sua massima attività specifica a pH 7,8-8,2. Il Km per l'ATP è 9,4 muM, che è almeno 20 volte maggiore della miosina \' Km per ATP. L'ATPasi attivato dall'actina di la miosina segue la cinetica iperbolica con concentrazioni variabili di F-actina. I valori Km per F-actina sono 0,110 muM (4,95 mug/ml) a pH 7,4 e 0,241 muM (10,8 mug/ml) a pH 7,8. I numeri massimi di turnover attivato dall'actina per la miosina sono 9,3 s-1 a pH 7,4 e 11,6 s-1 a pH 7,8. L'actomiosina ATPasi è inibita da KCl. Questa inibizione di KCl non è competitiva rispetto alla F-actina e non è una semplice forma di inibizione non competitiva.
Purificazione e caratterizzazione delle due forme molecolari della proteasi acida di Aspergillus oryzae.L'isolamento e la caratterizzazione parziale delle proteasi acide A1 e A2 (EC3. 4.23.6) da Aspergillus oryzae cresciuto su coltura solida di crusca. I preparati purificati erano essenzialmente omogenei secondo diversi criteri tra cui l'analisi di sedimentazione e l'elettroforesi su gel di poliacrilammide. Le proprietà fisico-chimiche delle proteasi A1 e A2 erano le seguenti (nell'ordine: A1 , A2): peso molecolare: 63 000 \& 32 000; coefficiente di sedimentazione s20, w: 3,93 e 3,16 S; costante di diffusione D20, w, 5,63 - 10(-7) e 8,61 - 10(-7) CM2/S, volume specifico parziale, v: 0,73 ml/g per entrambi; contenuto di azoto: 16,30 e 13,42%; E1% 1 cm a 280 nm: 5,9 e 11,1 I due enzimi avevano lo stesso pH ottimale nell'intervallo di pH acido ed entrambi si attivavano tripsinogeno pancreatico bovino. Gli enzimi erano essenzialmente della stessa composizione amminoacidica e immunologica alleato hanno cross-reagito tra loro. La proteasi A2 conteneva pochi o nessun carboidrato, mentre la proteasi A1 era glicoproteina, contenente il 49% di carboidrati comprendenti glucosio, mannosio e galattosio. Questi risultati suggeriscono che la porzione proteica della proteasi acida A1 è la stessa della proteasi acida A2.
Denaturazione della subtilisina BPN\' e dei suoi derivati in soluzioni acquose di guanidina cloridrato.La denaturazione della subtilisina BPN\' (EC 3.4.21.14) in guanidina cloridrato è stato studiato per trovare possibili ragioni per l'eccezionale stabilità di questo enzima contro l'azione di agenti denaturanti tra cui guanidina cloridrato. Subtilisina chimicamente modificata, cioè, fenilmetansolfonilsubtilisina e tio-subtilisina, sono stati completamente denaturati in 2 M guanidina cloridrato a pH 7 senza autolisi ma erano stabili in cloridrato di guanidina 0,5 M per almeno 60 ore. D'altra parte, una volta completamente denaturato, le subtilisina rimanevano inattive e in conformazioni molto dispiegate per 60 ore o più dopo il trasferimento in soluzione di guanidina 0,5 M a pH 7 o 9. Nessuna attività enzimatica è stata riacquistata quando la concentrazione di guanidina è stata abbassata quasi a zero Abbiamo concluso da questi e altri risultati descritti in questo articolo che questo enzima era termodinamicamente instabile in guanidina cloridrato 2 M a 20 gradi C e a pH 7. Desideriamo sottolineare la possibilità che la denaturazione di questo enzima possa effettivamente essere irreversibile.
Inibizione specifica irreversibile della beta-glucosidasi delle mandorle dolci da parte di alcuni beta-glicopiranosilepossialcani e beta-d-glucopiranosil isotiocianato.beta-D-glucopiranosil- (1S e 1R)-epossietani (I e II), 1-(beta-D-glucopiranosil)-(2R e 2S)-2,3-epossipropani (III e IV), beta-D-glucopiranosil isotiocianato (V) e i beta-D-galattopiranosilepossietano (VI) sono inibitori irreversibili diretti al sito attivo della beta-glucosidasi B della mandorla dolce (beta-D-glucoside glucoidrolasi, EC 3.2.1.21) La formazione del legame covalente è preceduta dal legame di questi inibitori nel sito attivo dell'enzima. Ciò è testimoniato dal carattere competitivo dell'inibizione della beta-glucosidasi componente B da parte dei composti I-VI nel periodo iniziale e dalla protezione dell'enzima dall'inattivazione da parte dei suoi inibitori competitivi D-glucosio e 1,5-D-gluconolattone Gli epossidi I-IV sono legati covalentemente con il componente B in un rapporto molare 1 : 1 come mostrato con l'ausilio di 14C-la inibitori belli. Il rilascio del marcatore dall'enzima modificato (E-I covalente) mediante trattamento con idrossilammina suggerisce la formazione di un legame estere tra gli inibitori I-IV e il gruppo carbossilico del sito attivo dell'enzima. La curva di dipendenza dal pH del tasso di inattivazione della beta-glucosidasi B è a forma di campana per V e di carattere sigmoideo per I-IV e indica il coinvolgimento dei gruppi del sito attivo con pKa 5,6-5,9 e 4,2-4,4.
Un residuo lisile nel sito di legame NADP della ferredossina-NADP reduttasi.Dansil cloruro, a basso rapporto molare, inattiva la ferredossina-NADP reduttasi (NADPH :ferredoxin ossidoreduttasi, EC 1.6.7.1). La protezione completa offerta da NADP o NADPH suggerisce un coinvolgimento diretto del sito attivo. Esperimenti con [Me-14C] dansil cloruro hanno mostrato che circa 1,5 residui per flavina erano dansilati: mediante etichettatura differenziale esperimenti utilizzando NADP, è stato dimostrato che l'inattivazione enzimatica è dovuta alla dansilazione di un residuo. Il gruppo modificato è stato identificato come il gruppo epsilon-ammino di una lisina. Il profilo di inattivazione del pH indica che questo gruppo essenziale ha un pKa apparente di 8.7. La flavoproteina dansilata sembra mantenere la sua conformazione nativa, mostra un cromoforo fluorescente con un picco a 335 nm. L'enzima modificato ha perso la capacità di formare un complesso con NADP, tuttavia interagisce normalmente con la ferredossina. È c incluso che la perdita di attività catalitica che è parallela alla dansilazione di un residuo lisile si verifica perché questo residuo è essenziale per il legame del substrato nucleotidico piridinico. Esperimenti di protezione con una serie di analoghi del coenzima indicano inoltre che questo residuo lisile interagisce, molto probabilmente, con la frazione 2\'-fosfato di NADP(H).
Studi sulla produzione e valutazione dell'istidinemia sperimentale nel ratto.La somministrazione intraperitoneale ai ratti di acido D- o DL-alfa-idrazinoimidazolilpropionico è stata trovata produrre una sostanziale inattivazione dell'istidina ammoniaca-liasi epatica (EC 4.3.1.3) in vivo. I ratti in cui l'attività epatica dell'istidina ammoniaca-liasi è stata ridotta dall'iniezione di acido DL-idrazinoimidazolilpropionico o aumentata mediante una dieta ricca di proteine, hanno mostrato tassi proporzionalmente alterati di rilascio di 3H2O nell'acqua plasmatica dopo somministrazione di L-[3-3H] istidina. -La clearance dell'istidina dopo il caricamento con questo amminoacido è stata similmente influenzata da questi trattamenti. È stato anche riscontrato che la somministrazione di acido DL-alfa-idrazinoimisazolilproprionico ai ratti inattiva l'enzima piridossal 5-fosfato non specificamente es in vivo; l'iniezione di piridossina è stata trovata per invertire l'inattivazione indotta dall'acido DL-alfa-idrazinoimidazolilpropionico dell'aspartato aminotransferasi epatica (EC 2.6.1.1) in vivo, ma non quella dell'istidina ammoniaca-liasi epatica. Questi risultati dimostrano che l'istidina ammoniaca-liasi è il fattore limitante nella degradazione della L-istidina nel ratto. Viene discussa la potenziale utilità dell'acido DL-idrazinoimidazolilproprionico nella produzione di un modello animale per l'istidinemia (deficit ereditario di istidina ammoniaca-liasi).
Fotoossidazione della metionina con blu di metilene immobilizzato come fotoossidante.Il blu di metilene immobilizzato su perle di vetro porose è stato utilizzato per catalizzare la fotoossidazione della sola metionina e della metionina residui di lisozima Una soluzione di metionina 2 mM in acido acetico al 50% è stata ossidata a solfossido di metionina in presenza di blu di metilene immobilizzato dopo 6 ore di fotoossidazione a 37 gradi C. La fotoossidazione selettiva dei residui di metionile nel lisozima è stata ottenuta dopo 26 ore di reazione in acido acetico 84% a 4 gradi C. L'attività specifica del lisozima esposto alla luce in presenza di blu di metilene è diminuita del 94%, mentre quella di una soluzione di lisozima in presenza di blu di metilene non esposto alla luce è diminuita del 21 %. La soluzione di lisozima esposta alla luce ma non contenente le perle di blu di metilene ha perso il 33% della sua attività specifica dopo lo stesso periodo di fotoossidazione. È stato dimostrato che la diminuzione dell'attività enzimatica era n ot causato dall'adsorbimento dell'enzima sulle sfere.
L'effetto degli agenti bloccanti beta-adrenergici sulla porfiria sperimentale indotta da 3,5-dietossicarbonil-1,4-diidrocollidina (DDC) in vivo e in vitro.È stato studiato l'effetto del DL-propranololo sulla porfiria sperimentale indotta da 3\',5\'-dietossicarbonil-1,4-diidrocollidina. Il DL-propranololo, un agente bloccante beta-adrenergico con effetti di membrana non specifici, ha parzialmente inibito l'attività delta-aminolevulinato sintetasi indotta dalla 3\',5\'-dietossicarbonil-1,4-diidrocollidina sia nei ratti che nelle cellule epatiche di embrioni di pollo in coltura Nei ratti, il DL-propranololo ha ridotto il delta-aminolevulinato urinario e il porfobilinogeno, ma nessun cambiamento si è verificato nell'escrezione urinaria delle porfirine totali nelle 24 ore e nella concentrazione di porfirine nel fegato In colture di cellule epatiche di embrione di pollo trattate con 3\',5\'-dietossicarbonil-1,4-diidrocollidina, DL-propranololo diminuzione dell'accumulo di porfirine nel mezzo D-propranololo, oxprenololo e qu l'inidina ha agito come DL-propranololo nelle cellule epatiche di embrioni di pollo in coltura trattate con 3\',5\'-dietossicarbonil-1,4-diidrocollidina. Pindolol, practolol e lidocaina non hanno avuto effetto. Il fenobarbitale ha avuto un effetto sinergico sull'induzione della delta-aminolevulinato sintetasi da parte della 3\',5\'-dietossicarbonil-1,4-diidrocollidina in colture di cellule epatiche di embrione di pollo. Questa induzione è stata parzialmente inibita dal propranololo. Tuttavia, l'aumento dell'accumulo di porfirine nel terreno causato dalla 3\',5\'-dietossicarbonil-1,4-diidrocollidina è stato inibito dall'aggiunta di fenobarbital. Questa induzione inibita è stata ulteriormente ridotta dal propranololo. La maggior parte dei nostri risultati indica che i farmaci testati agiscono principalmente in base ai loro effetti sulle membrane.
Specificità Phrmonale dell'adenilato ciclasi sensibile alla melanotropina del melanoma di topo ed effetto dell'AMP ciclico sull'attività della tirosinasi delle cellule di melanoma di topo, in vitro.I melanomi di topo trapiantati possiedono un sistema adenilato ciclasi sensibile alla melanotropina che è sensibile all'alfa-melanotropina, alla beta-melanotropina, all'adrenocorticotropina (ACTH) e alla prostaglandina E1. È stato scoperto che la sensibilità all'ACTH non era diretta verso l'attività dell'ACTH ma verso la melanotropina intrinseca attività della molecola di ACTH. Pertanto, il sistema adenilato ciclasi sensibile alla melanotropina è ormonalmente specifico per l'attività intrinseca della melanotropina degli ormoni peptidici ed è unico nel tessuto del melanoma. Il significato della sensibilità alla prostaglandina E1 è attualmente oscuro. La melanotropina- l'adenilato ciclasi sensibile richiede la presenza di Mg2+ o Mn2+, per la sua attività enzimatica. Ca2+ inibisce l'enzima in presenza di un ampio range di concentrazione ns di Mg2+. L'attività enzimatica è dipendente dalla concentrazione di ATP e la concentrazione di saturazione sembra essere 1 mM. L'enzima è molto labile negli omogenati tumorali non frazionati. Una frazione di particolato lavata di 11000 X g, che rappresenta circa il 30-60% dell'attività enzimatica totale, è risultata più stabile e poteva essere conservata a 5 gradi C per 2 ore senza perdita apprezzabile dell'attività. Questa frazione ha mantenuto la sensibilità alla melanotropina, alla prostaglandina E1 e al NaF. Circa il 20% dell'attività dell'omogenato tumorale non può essere sedimentato mediante centrifugazione a 105000 X g per 60 min. Questa frazione "solubile" non rispondeva a melanotropina, prostaglandina E1 e NaF e potrebbe essere un prodotto degradativo prodotto dal frazionamento. L'AMP ciclico e l'alfa-melanotropina sono stati in grado di aumentare l'attività della tirosinasi delle cellule di melanoma di topo isolate in vitro nelle stesse condizioni.
Accoppiamento nel trasporto secondario. Effetto dei potenziali elettrici sulla cinetica del co-trasporto legato a ioni.In un articolo precedente equazioni cinetiche del trasporto attivo secondario per cotrasporto sono state derivate. Nel presente lavoro queste equazioni sono state ampliate includendo l'effetto di una differenza di potenziale elettrico al fine di renderle applicabili ai più realistici sistemi di trasporto attivo secondario guidati dai gradienti di Na+ o H+. differenza di potenziale elettrico è come una forza motrice completamente scambiabile con una differenza di potenziale chimico equivalente. Questo non è necessariamente così per la cinetica del co-trasporto. Non è sempre lo stesso se una data differenza nell'attività elettrochimica dello ione pilota è principalmente osmotica , cioè a causa della differenza di concentrazione, o elettrico, cioè a causa di una differenza nel coefficiente di attività elettrochimica Nella maggior parte dei casi una differenza di concentrazione è più effe attiva nella guida del co-trasporto rispetto a una differenza equivalente di potenziale elettrico che porta alla stessa differenza di attività elettrica. L'efficacia di quest'ultimo dipende fortemente dal modello, che sia del tipo per affinità o del tipo a velocità, ma anche dal fatto che il vettore caricato o scarico porti una carica elettrica. Con la stessa differenza di potenziale elettrico il co-trasporto è di regola più veloce se viene caricato il complesso ternario anziché il vettore vuoto. Anche i "parametri standard", (vedi Glossario, pag. 62) Jmax e Km, del trasporto complessivo rispondono in modo diverso all'introduzione di una differenza di potenziale elettrico, a seconda del modello. Quindi una differenza di potenziale elettrico influenzerà principalmente Km se la portante carica è ionica, e principalmente Jmax se la portante vuota è ionica, a condizione che la mobilità della portante carica sia maggiore di quella di quella vuota. D'altra parte, i criteri distintivi tra i modelli di tipo di affinità e di tipo di velocità sono in parte influenzati da una differenza di potenziale elettrico. Se le fasi di traslocazione del vettore carico e scarico non sono più limitanti per il trasporto complessivo, gli effetti elettrici sulla velocità di trasporto sono destinati a svanire così come l'attivazione tramite co-trasporto.
Effetto dell'anastomosi portacaval sulle attività degli enzimi epatici correlati al metabolismo del colesterolo e degli acidi biliari nei ratti.1. L'effetto di un'anastomosi portacaval su l'attività degli enzimi epatici correlati al metabolismo del colesterolo è stata studiata nei ratti 2. L'anastomosi portacaval ha portato a una diminuzione del peso corporeo e del rapporto peso fegato/peso corporeo e ad un aumento delle attività dell'idrossimetilglutaril-CoA reduttasi e della colesterolo 7alfa-idrossilasi per g di fegato L'effetto netto è stato quello di mantenere una normale attività di entrambi gli enzimi per 100 g di ratto Il ritmo diurno nelle attività di entrambi gli enzimi è stato mantenuto dopo anastomosi portacaval 3. Il tasso di escrezione degli acidi biliari totali, per 100 g di ratto, nei ratti con fistola biliare non è stato significativamente ridotto dall'anastomosi portacaval.
Attività e proprietà del CTP: colinefosfato citidililtransferasi nel polmone di ratto adulto e fetale.Colinefosfato citidililtransferasi (CTP: colinefosfato citidililtransferasi, EC 2.7.7.15) è localizzato sia nella frazione microsomiale che sopranatante del polmone adulto quando il tessuto è omogeneizzato in 0,145 M NaCl. L'attività si trova prevalentemente nella frazione sopranatante nel polmone fetale. La colinefosfato citidililtransferasi nel surnatante dal polmone fetale è stimolata da 4 a 6 volte dall'aggiunta di lipidi polmonari totali. I fosfogliceridi di serina e i fosfogliceridi di inositolo causavano specificamente la stimolazione mentre i fosfogliceridi di colina e i fosfogliceridi di etanolamina non producevano stimolazione. La lisofosfatidilcolina causano una certa stimolazione, ma solo ad alte concentrazioni. Sono stati studiati un certo numero di detergenti. Tutti hanno prodotto inibizione tranne il detergente anfolitico, miranol H2M che non era inibente. Nessuno dei detergenti prodotto alcuno stimolo all'attività. L'attività della citidililtransferasi nel polmone fetale quando viene valutata in assenza di lipidi è circa il 25% dell'adulto. L'attività misurata in presenza di lipidi è uguale o leggermente superiore ai livelli dell'adulto. L'attività, misurata senza fosfolipidi aggiunti, aumenta da 5 a 6 volte entro 12 ore dalla nascita, a valori superiori a quelli dell'adulto. L'attività, misurata in presenza di fosfolipidi, è aumentata quasi linearmente da -2 giorni fino a +1 giorni. Esiste una relazione inversa tra la concentrazione di fosfolipidi nel surnatante polmonare fetale e il grado di stimolazione lipidica. Esperimenti cromatografici con colonne Biogel A 1.5 hanno dimostrato che la citidililtransferasi può esistere in due dimensioni molecolari, una piccola dimensione molecolare che richiede fosfolipidi per l'attività e una specie di peso molecolare maggiore che non richiede l'aggiunta di fosfolipidi per l'attività. Il polmone fetale ha una proporzione maggiore della forma a basso peso molecolare rispetto al polmone adulto. Le specie a piccolo peso molecolare possono essere convertite nella forma a peso molecolare maggiore mediante l'aggiunta di fosfolipidi.
La formazione di cis-3-nonenale, trans-2-nonenale ed esanale da isomeri di idroperossido di acido linoleico da parte di un sistema enzimatico di scissione dell'idroperossido nei frutti del cetriolo (Cucumis sativus)." 1. Una frazione enzimatica particellare e una preparazione in polvere di acetone dai frutti del cetriolo scindevano gli acidi 9- e 13-idroperossiottadecadienoici per formare aldeidi volatili e frammenti di ossaacidi. 2. Dal 9-idroperossido, i principali frammenti volatili erano cis -3-nonenale e trans-2-nonenale utilizzando rispettivamente preparazioni di enzima particolato e acetone in polvere 3. L'esanale era l'unico frammento volatile significativo dall'idroperossido 13. 4. Il sistema enzimatico particolato era ugualmente efficace sia su 9- che su 13 -idroperossido isomeri ed era pienamente attivo in condizioni anaerobiche e a pH 6.4 5. Una via enzimatica per la biogenesi di esanale, cis-3- e trans-2-nonenale (componenti dei caratteristici volatili dal sapore del cetriolo) dall'acido linoleico è proposto. Questo inv olve l'attività sequenziale della lipossigenasi, della scissione dell'idroperossido e degli enzimi cis-3-: trans-2-enale isomerasi.
Acido citidina-5\'-monofosfo-N-acetilneuraminico galattosil-N-acetilgalattosaminil-(N-acetilneuraminil)-galattosil-glucosilceramide sialiltransferasi nella neuroipofisi del coniglio." 1. Acido citidina-5\'-monofosfo-N-acetilneuraminico: (galattosil-N-acetil-galattosaminil-(N-acetilneuraminil)-galattosil-glucosilceramide sialiltransferasi (CMP-NAcNeuiltransferasi: monosialogangliosidico) ) è stata dimostrata un'attività nella neuroipofisi del coniglio 2. L'attività ottimale si è verificata a pH 6,5 e ha richiesto la presenza di galattosil-N-acetilgalattosaminil-(N-acetilneuraminil)-galattosil-glucosilceramide (ganglioside GM1) esogeno, detergente (Triton X- 100) e catione bivalente (Mn2+, Mg2+ o Ca2+) 3. Il prodotto della reazione è stato caratterizzato come N-acetilneuraminil-galattosil-N-acetilgalattosaminil-(N-acetilneuraminil)-galattosil-glucosilceramide (GD1a) mediante sottile- cromatografia su strato 4. Stimolazione fisiologica di vasopre la secrezione di ssina, sostituendo il 2,2% di NaCl all'acqua potabile per 14 giorni, non ha avuto alcun effetto sull'attività enzimatica o sul contenuto di gangliosidi del tessuto.
ATPasi legata alla membrana nei cloroplasti di Euglena gracilis.Sono state esaminate le attività dell'ATPasi legata alla membrana nei cloroplasti di Euglena. Attività dipendenti da Ca2+ e Mg2+ erano relativamente alti nelle preparazioni di membrana e non potevano essere ulteriormente attivati da una serie di procedure. L'enzima è risultato essere altamente specifico per i nucleotidi purinici ed è stato inibito dai soliti inibitori della fotofosforilazione. I valori Km di Ca2+ e Mg2+ ATPasi per l'ATP erano 2,5 e 2,1 mM, rispettivamente. Entrambe le attività sono state inibite in modo competitivo dall'ADP e dal fosfato inorganico. È stata trovata una relazione tra le attività dell'ATPasi Ca2+ o Mg2+ dipendenti e la completezza dei cloroplasti. Le possibilità che queste attività derivino da un enzima a seconda di Ca2+ o Mg2+ o da vengono discussi due diversi enzimi.
Cambiamenti di assorbimento indotti da flash del donatore primario del fotosistema II a 820 nm in cloroplasti inibiti da un basso pH o trattamento tris.Uno studio comparativo avviene, a 15 gradi C, di variazioni di assorbimento indotte dal flash intorno a 820 nm (attribuito ai donatori primari di Fotosistemi I e II) e 705 nm (solo Fotosistema I), nei cloroplasti normali e nei cloroplasti dove l'evoluzione di O2 è stata inibita da pH basso o per trattamento Tris. A pH 7.5, con cloroplasti non trattati, le variazioni di assorbimento intorno a 820 nm si dimostrano dovute al solo P-700. Qualsiasi contributo del donatore primario di Fotosistema II dovrebbe essere in tempi inferiori a 60 mus Quando i cloroplasti sono inibiti sul lato donatore del fotosistema II da un pH basso, appare un'ulteriore variazione di assorbimento a 820 nm con un'ampiezza che, a pH 4.0, è leggermente superiore al segnale dovuto al P-700 ossidato. Questo segnale aggiuntivo è attribuito al donatore primario del Fotosistema II. Decade (t 1/2 abo ut 180 mus) principalmente per controreazione con l'accettore primario e in parte per riduzione da parte di un altro donatore di elettroni. I cloroplasti lavati con acido risospesi a pH 7,5 presentano ancora il segnale dovuto al Fotosistema II (t 1/2 circa 120 mus). Ciò dimostra che l'inibizione acida del primo donatore secondario di Photosystem II è irreversibile. Nei cloroplasti trattati con Tris si osservano anche variazioni di assorbimento a 820 nm dovute al donatore primario del Fotosistema II, ma in misura minore e solo dopo un certo accumulo di carica sul lato donatore. Decompongono con un tempo di dimezzamento di 120 mus.
Trasporto fotosintetico di elettroni ed effetti elettrocromici a temperature sotto lo zero.I cloroplasti di spinaci, sospesi in un mezzo liquido contenente glicole etilenico, hanno mostrato variazioni di assorbanza reversibili vicino a 700 e 518 nm a causa di P-700 e "P-518" nella regione da -35 a -50 gradi C all'illuminazione. La cinetica era la stessa a entrambe le lunghezze d'onda, a condizione che i cambiamenti di assorbanza dovuti al fotosistema II fossero soppressi. entrambe le lunghezze d'onda, il decadimento è stato notevolmente rallentato, non solo dal metil viologeno, accettore di elettroni del Sistema I, ma anche dal silicomolibdato. L'effetto di quest'ultimo composto probabilmente non è dovuto all'ossidazione dell'accettore ridotto del fotosistema I da parte del silicomolibdato, ma alla maggiore accessibilità dell'accettore a qualche altro ossidante. In presenza sia di un donatore di elettroni che di un accettore per il Sistema I, è stata osservata una forte stimolazione dell'entità dell'aumento dell'assorbanza indotto dalla luce a 518 nm. ve donatore testato è stato ridotto di N-metilfenazonio metosolfato (PMS). Lo spettro di differenza indotto dalla luce era simile agli spettri ottenuti in precedenza a temperatura ambiente e indicava spostamenti di banda elettrocromici delle clorofille a e b e dei carotenoidi, a causa di un grande potenziale sulla membrana tilacoide, causato dal trasporto di elettroni sostenuto. È stato stimato che in questo modo sono stati ottenuti potenziali in regime stazionario fino a quasi 500 mV; i potenziali si sono invertiti solo lentamente al buio, indicando una bassa conduttanza della membrana. Questo decadimento è stato accelerato dalla gramicidina D. Le variazioni di assorbanza sono state linearmente proporzionali al potenziale di membrana.
Studi di risonanza magnetica nucleare al fluoro di derivati della trifluoroacetilinsulina. Effetti di sali e denaturanti.La spettroscopia di risonanza magnetica nucleare 19F è stata utilizzata per studiare gli effetti dei sali e denaturanti sulla struttura e le proprietà di aggregazione di diversi trifluoroacetil derivati dell'insulina. Questa tecnica ha dimostrato di essere un potente strumento nello studio di siti specifici sulla molecola proteica. Sono stati inoltre effettuati studi dicroico circolare e velocità di sedimentazione per aiutare nella interpretazione dei dati di risonanza magnetica A pH 6.8 Zn2+ non ha avuto alcun effetto sullo spettro di risonanza magnetica 19F, tuttavia, gli ioni citrato e acetato hanno significativamente acuito il segnale dalla sonda trifluoroacetile all'estremità N-terminale (glicina A-1) dell'insulina Una catena Non sono state osservate alterazioni nel valore S20,W degli spettri dicroici circolari, suggerendo che la sonda aveva guadagnato un considerevole grado di libertà di movimento senza cambiamenti i n proprietà di aggregazione o conformazionali. In assenza di perturbanti il gruppo trifluoroacetile sulla glicina A-1 ha mostrato una libertà di movimento considerevolmente maggiore rispetto alla fenilalanina B-1. Guanidina cloridrato e sodio dodecil solfato sono stati utilizzati per studiare lo sviluppo di diversi derivati della trifluoroacetilinsulina. I risultati hanno suggerito alterazioni differenziali negli ambienti delle sonde situate a glicina A-1, fenilalanina B-1 e lisina B-29 nella molecola di insulina all'aumentare della concentrazione di perturbante.
Fluorescenza e struttura delle proteine. XXI. Fluorescenza dei residui aminotirosilici in peptidi e proteine elicoidali.1. Cinque peptidi contenenti tirosina sono stati convertiti nel peptidi 3-aminotirosilici mediante nitrazione con tetranitrometano e successiva riduzione dei gruppi nitro a gruppi amminici. La fluorescenza di questi residui amminotirosilici è risultata essere abbastanza simile a quella della 3-aminotirosina e si conclude che la fluorescenza non è sensibile all'incorporazione di 2. La fluorescenza dei derivati 3-aminotirosinici era sensibile, tuttavia, alla natura del solvente, poiché la costante dielettrica diminuiva, la fluorescenza aumentava di dieci volte e il massimo di emissione si spostava da 350-370 nm valore in soluzione acquosa a 320 nm. Si prevede che differenze simili potrebbero essere previste per i residui di aminotirosile esposti e sepolti in una proteina 3. Residui di tirosile esposti sulla proteina elicoidale tropo miosina e un segmento elicoidale di paramiosina sono stati aminati in parte (39% e 34% dei residui di tirosile totale, rispettivamente). La fluorescenza dei residui di tirosile amminato su queste proteine era simile a quella dei peptidi amminotirosilici in un mezzo acquoso. Sebbene l'efficienza di fluorescenza di un residuo di aminotirosile fosse molto inferiore a quella di un residuo di tirosile, era facile distinguere la fluorescenza dei residui di aminotirosile (350-355 nm) sulla proteina da quella derivante da residui di tirosile non modificati (305 nm).
Isolamento e caratterizzazione di una emoagglutinina da Anfitrite ornata, un anellide policheto.Estratti di anellide policheto marino, Anfitrite ornata, agglutinato di ratto, coniglio, pollo e eritrociti umani e in altri lavori hanno dimostrato di inibire la crescita dei tumori dell'ascite di Ehrlich nei topi. Il frazionamento degli estratti su Sephadex G-100 ha fornito tre frazioni attive con pesi molecolari di 30 000, 54 000 e 100.000. la frazione dalton (B) è stata purificata 72 volte mediante precipitazione di solfato di ammonio, filtrazione su gel ed elettroforesi su gel preparativa su disco. L'emoagglutinina purificata, anfitritina, era omogenea sull'elettroforesi su gel analitica su disco a quattro diversi valori di pH e ha dato un netto confine nella velocità di sedimentazione ultracentrifugazione Le tre frazioni hanno mostrato specificità parallela verso gli eritrociti di ratto e pollo, il primo dando il titolo più alto L'agglutinina purificata era attiva verso i gruppi sanguigni umani A, B a nd O e ha mostrato un'attività 4 volte superiore verso il gruppo A. Il titolo di emoagglutinina contro i globuli rossi di ratto è stato abbassato solo dalla N-acetilgalattosamina, il residuo zuccherino terminale del determinante del gruppo A. Nessuno dei saccaridi testati ha inibito l'agglutinazione degli eritrociti di pollo. L'attività dell'emoagglutinina è risultata insensibile alla dialisi o al trattamento con EDTA. L'attività non è stata influenzata dalla digestione con tripsina o pronasi, ma è stata distrutta dall'estrazione con fenolo. L'elettroforesi su gel del disco analitico ha mostrato una banda proteica con elevata mobilità anodica a pH 8,5, che non è stata influenzata dagli enzimi proteolitici ma è stata rimossa dal fenolo. L'attività non è stata influenzata dal riscaldamento a 70 gradi C per 30 minuti, ma è stata distrutta da un trattamento simile a 85 gradi C. L'attività era al massimo a pH 7-9 ed è diminuita in modo reversibile fino a pH 4, a quel punto è stata irreversibilmente inattivata. L'agglutinina a peso molecolare più elevato (A1) potrebbe essere dissociata per dare anfitritina mediante trattamento con urea 6M di precipitazione in 55% (NH4)2SO4. Questa dissociazione non è stata annullata dalla dialisi. L'anfitritina è una glicoproteina con un peso molecolare determinato mediante filtrazione su gel di 30 000 e mediante approccio alla sedimentazione all'equilibrio di 32 000. L'analisi degli aminoacidi ha mostrato una preponderanza di acidi aspartico e glutammico e quantità relativamente elevate di glicina, prolina, alanina, valina e cisteina. La frazione di carboidrati che rappresentava il 12,8% della molecola, conteneva mannosio, galattosio, glucosamina e acido sialico. L'anfitritina è la prima emoagglutinina ad essere isolata da un anellide policheto.
Interazione ceruloplasmina-anione. Uno studio spettroscopico di dicroismo circolare.L'effetto del legame dell'anione alla ceruloplasmina è stato studiato utilizzando dati spettrali di assorbimento e dicroismo circolare. A rapporti molari anione-ceruloplasmina prossimi all'infinito, OCN-, N3- e SCN- si legano alla ceruloplasmina dando luogo ad alterazioni simili negli spettri di dicroismo circolare e di assorbimento Le bande positive a 610 e 520 nm negli spettri di dicroismo circolare scompaiono, appare una negativa a 600 nm e il picco a 450 nm è solo leggermente modificato. C'è una nuova banda negativa a 410 nm ben definita negli spettri OCN-ceruloplasmina. La diminuzione dell'assorbimento a 610 nm è attribuita alla rottura di un Cu- Legame S (cisteina) dovuto presumibilmente ai cambiamenti indotti dagli anioni nella struttura secondaria della proteina. La nuova banda a 410 nm è assegnata a una transizione di trasferimento di carica dal ligando che sostituisce la cisteina nel suo sito di legame. Sia l'assorbimento che il dich circolare Gli spettri roism mostrano punti isobestici che indicano che il legame dell'anione all'enzima, la rottura di uno dei due legami Cu-S di tipo I e il coordinamento di questo Cu con un altro residuo proteico avvengono simultaneamente.
Lisilossidasi: un enzima ipofisario dipendente dall'ormone.Collagene non reticolato con deficit di aldeide ottenuto da ratti latiritici e collagene da ratti trattati con penicillamina, che non è carente di aldeidi ma la cui reticolazione è anche inibita, sono stati impiantati nella cavità peritoneale di ratti ipofisectomizzati utilizzando la tecnica della camera di diffusione. L'enzima lisil ossidasi che catalizza la formazione di aldeide in alcuni residui lisilici di collagene ed elastina è stato estratto da l'attività dell'enzima è stata determinata dopo la sua incubazione con un substrato di elastina marcato con L-[4,5-3H] lisina preparato dall'aorta di embrioni di pollo di 17 giorni. Il risultato ha mostrato che l'aldeide il collagene carente non si è reticolato mentre nell'animale ipofisectomizzato indicando la mancanza di lisil ossidasi attiva nei ratti L'attività enzimatica nella pelle degli animali ipofisettati è stata notevolmente ridotta rispetto d con i controlli che indicano direttamente la dipendenza dell'attività della lisil ossidasi dagli ormoni della ghiandola pituitaria.
Conformazione elicoidale di poli(L-lisina) indotta da tricloroacetato di sodio.Tricloroacetato di sodio che è stato segnalato in precedenza come un efficace reagente di denaturazione per le proteine è stato applicato a poli(L-lisina) e poli(L-acido glutammico) per vedere i suoi effetti su una transizione bobina-elica e sulle reattività chimiche del gruppo xi-amminico di poli(L-lisina). il tricloroacetato di sodio a poli(L-lisina) ha indotto una conformazione elicoidale anche a pH neutro dove il gruppo xi-amminico del polimero è stato protonato. D'altra parte, scarso effetto è stato osservato sulla transizione bobina-elica di poli(L -acido glutammico). Il gruppo xi-amminico della poli(L-lisina) ha una reattività anormalmente elevata con il naftochinone 4,6-disolfonato caricato negativamente. Il tricloroacetato di sodio ha inibito la reazione del gruppo xi-amminico con questo reagente, mentre il tricloroacetato di sodio ha migliorato leggermente la reazione del gruppo xi-amminico della poli(L-lisina) con il diazon ium-1-H-tetrazolo che trasporta una carica positiva.
Emoglobina Atene-Georgia, o alfa 2 beta 2 40(C6)Arg sostituita da Lys, una variante dell'emoglobina con una maggiore affinità per l'ossigeno.A Una nuova variante dell'emoglobina, denominata emoglobina Athens-Georgia, è stata trovata in una studentessa caucasica di 23 anni e in tre membri della sua famiglia. La mobilità elettroforetica di questa variante a pH 9,0 è leggermente inferiore a quella dell'emoglobina-A. in posizione 40 della catena beta, corrispondente alla posizione 6 dell'elica C, è stato sostituito da un residuo lisilico. Questa sostituzione amminoacidica è a contatto alfa1-beta2 e influisce leggermente sulle proprietà di legame dell'ossigeno della molecola di emoglobina. Emoglobina Atene -La Georgia ha una maggiore affinità per l'ossigeno, una normale interazione eme-eme e un normale effetto Bohr. Le anomalie ematologiche non sono associate a questa variante.
Derivati fluorescenti specifici di macromolecole. Reazione di dansil fluoruro con proteinasi di serina.Il 5-dimetilamminonaftalene-1-solfonil fluoruro è stato valutato come reagente per la etichettatura selettiva delle proteine. In uno studio comparativo con Dns-cloruro è stata riscontrata una selettività notevolmente aumentata del fluoruro con un certo numero di proteine. La reazione di Dns-fluoruro con alfa-chimotripsina, subtilisina Carlsberg e tripsina è risultata altamente specifica, con conseguente incorporazione stechiometrica del marcatore Dns con concomitante perdita di attività enzimatica. La reazione del Dns-cloruro con le stesse proteinasi è aspecifica. Sono state ottenute prove per indicare che la reazione delle serine esterasi con Dns-fluoruro avviene esclusivamente alla serina attiva residuo. È stata studiata la stabilità della chimotripsina marcata con Dns-fluoruro. Il coniugato è risultato essere abbastanza stabile nell'intervallo di pH da 3 a 9 a 25 gradi C ed è quindi adatto per le indagini di fluorescenza del sito attivo della chimotripsina. I coefficienti di estinzione molare per le proteinasi di serina marcate con Dns sono stati determinati utilizzando la marcatura radiocativa.
Purificazione e caratterizzazione del principio fibrinolitico di Agkistrodon acutus venom.Per mezzo di cromatografia su colonna DEAE-Sephadex A-50, il veleno di Agkistrodon acutus è stato separato in dodici frazioni. L'attività fibrinolitica è stata concentrata nella frazione 9. Questa frazione è stata ricromatografata su Sephadex G-75 tre volte e si è ottenuto un singolo picco. Anche i modelli di elettroforesi a microzona e su disco hanno mostrato una singola banda. Un singolo confine simmetrico con per ultracentrifugazione è stato ottenuto un valore di 2,44 S, il cui peso molecolare è stato stimato essere 24 100 e il punto isoelettrico 3,8. L'attività specifica era quattro volte superiore a quella del veleno grezzo. Il valore di pH ottimale alla fibrinolisi era 7,4. Oltre all'attività fibrinolitica, il principio purificato aveva anche attività fibrinogenolitica e caseinolitica. Il principio fibrinolitico purificato aveva un'azione specifica sulla subunità della catena a(A) del fibrinogeno, lasciando th e la catena beta(B) e la catena gamma inalterate.
Urea amidolyase of Candida utilis. Caratterizzazione delle reazioni di scissione dell'urea.Viene presentata la prova che gli enzimi che catalizzano le tre reazioni coinvolte nella scissione dell'urea nella Candida utilis, la carbossilazione della biotina, la carbossilazione dell'urea e l'idrolisi dell'allofanato si verificano come un complesso di enzimi. L'attività di idrolisi dell'allofanato non può essere separata dall'attività di scissione dell'urea utilizzando metodi comuni di purificazione delle proteine. Inoltre, le attività di scissione dell'urea e di idrolisi dell'allofanato sono indotte coordinatamente in cellule cresciute su varie fonti di azoto. Le reazioni coinvolte nella scissione dell'urea possono essere distinte l'una dall'altra sulla base della loro sensibilità a (a) calore, (b) pH e (c) inibitori chimici. prodotto della prima reazione nella scissione dell'urea, carbossilazione della biotina La produzione dell'enzima carbossilato è dipendente dall'ATP e sensibile all'avidina L'enzima carbossilato non si osserva in presenza di 1 mM urea.
Nuova attività della pirofosfatasi nucleotidica della patata.La procedura classica di Kornberger-Pricer per la purificazione della pirofosfatasi nucleotidica della patata (EC 3.6.1.9) è stata modificata per producono una preparazione purificata di 2500 volte. Oltre alla nota attività contro i legami pirofosfato nei pirofosfati situati al 5\'-OH dei nucleosidi e i legami fosfodiestere negli esteri arilici dei nucleosidi-5\'-fosfati, l'enzima è stato ora dimostrato di catalizzare la scissione di: (a) esteri arilici di nucleoside-3\'-fosfati e ortofosfati, (b) legami nucleotidici pirofosfato del tipo (3\')-pp-(3\') e (c) pm7G da frammenti m7GpppGm-terminati di mRNA virale È stato dimostrato che le attività contro gli esteri arilici dei nucleosidi-3\'- e 5\'-fosfati e NAD sono dovute alla stessa proteina in base a tre criteri: (a) rapporto costante di attività durante la purificazione e l'elettroforesi su gel, (b) proprietà cromatografiche identiche in var ioni e (c) somiglianze nella dipendenza dal pH, inattivazione al calore e gli effetti di cationi e altre sostanze. Poiché il nucleotide pirofosfatasi della patata non mostra attività di esonucleasi o fosfatasi contro i substrati naturali per questi ultimi enzimi, ma scinde gli esteri arilici sintetici dei nucleotidi-3\'- e 5\'-fosfati e dell'ortofosfato, ne consegue che questi substrati non sono adatti per il rilevamento di tali attività nelle piante superiori.
Purificazione e alcune proprietà di una proteasi neutra da granuli di leucociti umani e suo confronto con l'elastasi pancreatica.1. Una proteasi cationica è stata purificata dal frazione granulare di leucociti donatori di sangue mediante un metodo preparativo comprendente precipitazione mediante acetone e cromatografia su Bio-Gel A 1,5 m, CM-Sephadex C-50 e Sephadex GG-75 2. Il pH ottimale contro l'emoglobina bovina denaturata è 7,4. cromatografia indicava un peso molecolare vicino a 23 000. 3. Questa proteasi neutra (EC 3.4. -. -) è in grado di scindere gli esteri sintetici Z-Ala-NPh e AcAla3OMe, la sua attività sul primo substrato è 2,2 volte maggiore di quella di elastasi pancreatica, su quest'ultimo lo stesso. Differisce in modo cruciale dall'elastasi pancreatica per avere una piccola attività elastinolitica 4. Nell'elettroforesi su disco cationico, la proteasi neutra si risolve in tre bande proteiche con mobilità inferiore rispetto al lisozima: tutte le bande mostrano attività esterolitica contro 2 -acido acetossi-3-naftoico o-toluidide, suggerendo fortemente che rappresentino isoenzimi. 5. L'enzima è completamente inibito dall'iPr2P-F, parzialmente dall'inibitore della tripsina di soia e dal Trasylol. Cisteina, EDTA e TosLysCH2Cl non hanno alcun effetto. 6. Durante la cromatografia su CM-Sephadex C-50 è stato identificato uno o più enzimi caricati positivamente. Questo aveva attività emoglobinolitica a pH 7,4 ma solo un piccolo effetto esterolitico su Z-Ala-NPh; ha mostrato solo tracce di attività contro AcAla3OMe.
Purificazione e caratterizzazione della beta-glucuronidasi microsomiale del fegato di ratto.La beta-glucuronidasi (EC 3.2.1.31) è stata isolata da microsomi di fegato di ratto mediante un nuovo metodo cromatografico che impiega anticorpi contro la beta-glucuronidasi della ghiandola prepuziale di ratto accoppiata a Sepharose. L'enzima purificato, omogeneo con diversi metodi, è stato purificato circa 1700 volte. La beta-glucuronidasi microsomiale è stata caratterizzata rispetto alla catalisi, alla stabilità e alla capacità molecolare peso. L'enzima purificato è un tetramero di 290 000 dalton. Studi comparativi con la beta-glucuronidasi lisosomiale indicano che mentre questi due enzimi sono elettroforeticamente distinti, sono cataliticamente e immunologicamente identici e hanno dimensioni molecolari indistinguibili. I risultati suggeriscono che la beta microsomiale e lisosomiale -glucuronidasi sono isomeri di carica.
Degradazione dell'insulina e del glucagone da parte del rene. II. Caratterizzazione dei meccanismi a pH neutro.Esame della degradazione dell'insulina e del glucagone da parte di frazioni subcellulari di rene di ratto ha rivelato che la maggior parte dell'attività degradante era localizzata nelle frazioni del pellet da 100.000 X g e del surnatante da 100.000 X g. Un'ulteriore caratterizzazione delle attività di degradazione del pellet e del surnatante da 100.000 X g ha suggerito che a pH neutro erano presenti tre tipi di attività enzimatica. Dal citosol è stato purificato un enzima con caratteristiche dell'insulina glucagone proteasi del muscolo scheletrico, enzima che sembrava essere responsabile della degradazione dell'insulina da parte del rene a concentrazioni fisiologiche di insulina, anche questo enzima contribuiva alla degradazione del glucagone ma non era il meccanismo più attivo per questo. Nel pellet da 100.000 X g erano presenti almeno due attività enzimatiche separate. Una di queste aveva proprietà coerenti con quelle descritte per il glutathi una insulina transidrogenasi e sembrava essere responsabile della degradazione dell'insulina ad alta concentrazione di insulina. L'altro enzima era associato al bordo del pennello e aveva proprietà coerenti con la proteasi neutra del bordo del pennello. Questo enzima sembrava responsabile della degradazione del glucagone a concentrazioni di substrato sia basse che alte. È stato notato un evidente sinergismo marcato tra il pellet da 100.000 X g e il surnatante da 100.000 X g per la degradazione dell'insulina a concentrazioni fisiologiche di insulina. Per questo erano necessarie attività di degradazione del glucagone in pellet e attività di degradazione dell'insulina solubile. Il meccanismo è risultato essere una degradazione dell'insulina limitata da parte dell'enzima solubile che porta a frammenti solubili in acido tricloroacetico precipitabili in acido tricloroacetico seguiti da un'ulteriore degradazione dei frammenti da parte dell'enzima di degradazione del glucagone con conseguente aumento aggiuntivo dei prodotti solubili in acido tricloroacetico.
Ribonucleasi di tipo pancreatico umano con attività contro gli acidi ribonucleici a doppio filamento.Ribonucleasi termostabile acida purificata (Ribonucleato 3\'-pirimidino-oligonucleotidoidrolasi, EC 3.1.4.22) dal pancreas umano degrada l'RNA a doppio filamento al 2% della velocità dell'RNA a filamento singolo. È stato dimostrato che le attività contro l'RNA a filamento singolo e l'RNA a doppio filamento sono dovute a un singolo enzima con proprietà simili a quelle bovine RNAasi pancreatica A. A scopo di confronto sono state analizzate le attività contro l'RNA a doppio filamento delle ribonucleasi cristalline della balena, del ratto e della mucca e sono risultate essere rispettivamente lo 0,4%, 0,03% e 0,003% delle loro attività contro l'RNA a filamento singolo Sia il siero umano che l'urina contengono componenti di RNAsi di origine pancreatica che idrolizzano l'RNA a doppio filamento rispettivamente al 2% e allo 0,4% dei tassi contro l'RNA a singolo filamento. Al contrario, le RNAasi termostabili acide purificate dalla milza e dal fegato umani idrolizzanoRNA a doppio filamento almeno 20 volte più lentamente della RNAasi pancreatica umana, rispetto ai tassi corrispondenti contro l'RNA a filamento singolo. Gli enzimi pancreatici e sierici umani mostrano un'attività apprezzabile contro il componente poli(C) del poli(I)-poli(C) a doppio filamento; attaccano anche il poli(C) stesso a circa 25 volte la velocità del poli(U) e più di 50 volte la velocità dell'RNA a filamento singolo.
Degradazione dell'insulina e del glucagone da parte del rene. I. Distribuzione subcellulare in diverse condizioni di dosaggio.La degradazione dell'insulina e del glucagone da parte degli omogenati e delle frazioni subcellulari di rene di ratto è stata esaminata in una varietà di condizioni, comprese alte e basse concentrazioni di substrato, a pH 4 e pH 7, con e senza glutatione Ad alta concentrazione di insulina (4,1 - 10(-5) M) la degradazione dell'insulina da parte dell'omogenato era maggiore a pH 4 ma a bassa concentrazione di insulina (1 - 10(-10) M) la degradazione dell'insulina era maggiore a pH 7. Ad alta o bassa concentrazione di glucagone la degradazione del glucagone da parte dell'omogenato era massima a pH 7. Il glutatione a pH 7 stimolava la degradazione dell'insulina ad alta insulina concentrazioni e inibizione della degradazione dell'insulina a basse concentrazioni; La degradazione del glucagone a pH 7 è stata inibita sia ad alte che a basse concentrazioni di glucagone dalla glutationemseparazione del rene nella corteccia e nel midollo prima dell'omogeneizzazione ha prodotto un pat terna di degradazione dell'insulina e del glucagone identica all'intero omogenato, ma la degradazione del glucagone da parte del midollo era maggiore che da parte della corteccia. L'esame della degradazione da parte delle frazioni subcellulari ha rivelato che ad alta concentrazione a pH neutro la maggior parte dell'insulina è stata degradata dal pellet da 100.000 X g, ma a basse concentrazioni di insulina oltre il 90% dell'attività era nel surnatante di 100.000 X g; A pH 7, sia ad alte che a basse concentrazioni, la maggior parte dell'attività di degradazione del glucagone era nel pellet da 100.000 X g, sebbene anche il citosol avesse attività; A pH 4 la maggior parte della degradazione si è verificata nelle frazioni lisosomiali. La separazione nella corteccia e nel midollo ha mostrato di nuovo una distribuzione dell'attività simile a quella dell'intera ghiandola con il midollo che ha più attività di degradazione del glucagone rispetto alla corteccia. Con basse concentrazioni di insulina, il surnatante della corteccia 100.000 X g aveva attività specifiche relative più elevate rispetto al surnatante del midollo. L'esame dei recuperi dell'attività enzimatica ha rivelato che le frazioni subcellulari avevano costantemente un'attività di degradazione dell'insulina notevolmente inferiore rispetto all'omogenato originale. Questa perdita di attività era percepibile solo quando la degradazione dell'insulina veniva eseguita a pH 7 a basse concentrazioni di substrato. Non sono state osservate perdite comparabili di attività di degradazione del glucagone.
Proprietà dell'alfa-galattosidasi di topo.l'alfa-galattosidasi è stata esaminata in vari tessuti murini utilizzando il substrato 4-metilumbelliferil-alfa-galattoside. il fegato sembra contenere una singola forma principale dell'enzima, come giudicato dalla cromatografia e dall'elettroforesi. L'enzima è stato purificato 467 volte con una resa di circa il 40% con un metodo che prevede la cromatografia su Concanavalina A-Sepharose. Ha la massima attività a pH 4.2, un valore di Km di 1.4 mM e un'energia di attivazione di 16 400 cal/mol e un peso molecolare di 150 000 a pH 5.2 È inibito ad alte concentrazioni di mioinositolo e sembra contenere acido N-acetilneuraminico. In questi caratteristiche assomiglia all'alfa-galattosidasi umana A. L'enzima di vari tessuti differisce nella mobilità elettroforetica. Dopo il trattamento con neuraminidasi, tuttavia, l'enzima di tutti i tessuti comigra come un'unica banda di attività. Con questo criterio l'alfa-galattosidasi del fegato è più h evily sialylated e quello dal rene il minimo. Come stimato dalla filtrazione su gel, l'enzima del fegato e dei reni esiste come specie di peso molecolare 320 000, 150 000 e 70 000, a seconda del pH e della forza ionica. Questo sembra essere il risultato dell'aggregazione dell'enzima, poiché le forme sono interconvertibili e in alcune condizioni si osserva una singola specie di peso molecolare. L'enzima epatico è principalmente lisosomiale, mentre l'enzima renale è distribuito approssimativamente equamente tra le frazioni lisosomiali e microsomiali.
Il controllo ionico della sintesi della 1,25-diidrossivitamina D-3 nei mitocondri renali di pollo isolati. Il ruolo del potassio.In studi precedenti era hanno scoperto che il cambiamento nelle concentrazioni di Ca2+, H+ e HPO2-4 nel mezzo di incubazione alterava i tassi di sintesi della 1,25-diidrossivitamina D-3 (1,25(OH)2D-3) da parte dei mitocondri renali isolati ottenuti da Pulcini con deficit di D. I presenti studi dimostrano che l'aumento della concentrazione media di K+ da 1 a 50 mM porta ad un aumento di 6 volte della velocità di sintesi della 1,25(OH)2D-3 da parte dei mitocondri isolati dei pulcini; che la grandezza di questa stimolazione K+-dipendente è potenziata da concentrazioni ottimali di calcio (pCa = 5) e fosfato (pPi = 3) (3 mM) ma non dal pH (da 6,8 a 7,4); che l'effetto non è prodotto da cambiamenti simili in media concentrazione di Na+; e che l'effetto stimolante del K+ non è bloccato dal rosso rutenio e inibitore del trasporto del calcio e della sti calcio-dipendente mulazione della sintesi mitocondriale della 1,25(OH)2D-3. È stato anche scoperto che la valinomicina, uno ionoforo specifico per il K+, aumenta la sensibilità dell'attività mitocondriale dell'1 alfa-idrossilasi al K+. In presenza di valinomicina, un aumento di pK+ a 3 è stato sufficiente a provocare una significativa stimolazione della sintesi della 1,25(OH)2D-3. Si è concluso che i cambiamenti nel contenuto di ioni dello spazio della matrice mitocondriale regolavano l'attività della 1 alfa-idrossilasi.
Meccanismo di inibizione della crescita del cromo D da parte della L-metionina. Regolazione della biosintesi della L-treonina da parte del livello intracellulare di S-adenosilmetionina.(1 ) Un insolito accumulo di S-adenosil-L-metionina nel cromo D è stato associato a una marcata inibizione della crescita da parte della L-metionina. L'inibizione è stata superata da L-isoleucina, L-leucina, L-fienilalanina, L-treonina, L- valina e putrescien. In base ai loro effetti, questi composti sono classificati in 3 tipi. (2) L-Isoleucina, L-leucina, L-fenilalanina e L-valina (Tipo I) hanno inibito l'assorbimento di L-metionina e di conseguenza hanno prevenuto il batterio dall'insolito accumulo di S-adenosil-L-metionina anche in presenza di L-metionina nel terreno La putrescina (Tipo II) ha stimolato il consumo di S-adenosil-L-metionina, ma non ha influenzato l'assorbimento di L-metionina Quindi, l'effetto della putrescina sarebbe spiegato dall'azione di diminuire il livello intracellulare di S-adenosil-L- metionina. La L-treonina (Tipo III) non ha inibito l'assorbimento della L-metionina né ha influenzato il contenuto di S-adenossil-L-metionina a causa dell'aggiunta di L-metionina. (3) L'attività specifica dell'omoserina chinasi (EC 2.7.1.39) è stata notevolmente ridotta dall'aggiunta di L-metionina in condizioni in cui il cromo D accumula insolitamente S-adenossil-L-metionina. L'attività dell'omoserina deidrogenasi (EC 1.1.1.3) è stata inibita dalla S-adenosil-L-metionina (indice di inibizione del 50%, 3,5 mM). Questi fatti suggeriscono fortemente che l'inibizione della crescita da parte della L-metionina è associata alla carenza di L-treonina causata dall'insolito accumulo di S-adenosil-L-metionina.
Aminoacidi come repressori della biosintesi della nitrogenasi in Klebsiella pneumoniae.Biosintesi della nitrogenasi in Klebsiella pneumoniae inclusi ceppi mutanti, che producono nitrogenasi in presenza di NH+ 4 (Shanmugam, KT, Chan, Irene e Morandi, C. (1975) Biochim. Biophys. Acta 408, 101--111) viene represso da una miscela di amminoacidi L. L'analisi biochimica mostra che l'attività della glutammina sintetasi nei ceppi Anche SK-24, SK-28 e SK-29 sono repressi dagli amminoacidi, senza alcun effetto rilevabile sulla glutammato deidrogenasi. Tra i vari amminoacidi, è stato scoperto che la L-glutammina in combinazione con L-aspartato reprime completamente la biosintesi della nitrogenasi. In presenza di elevate concentrazioni di glutammina (1 mg/ml) anche NH+4 ha represso la biosintesi della nitrogenasi nei ceppi SK-27, SK-37, SK-55 e SK-56. In queste condizioni, è stata anche aumentata l'attività della glutammato deidrogenasi Gli studi fisiologici mostrano che i ceppi derepressi della nitrogenasi non sono in grado di utilizzare NH+4 come unica fonte di azoto per la biosintesi del glutammato per la biosintesi del glutammato, mentre le retromutazioni che portano all'utilizzo di NH+4 determinano una sensibilità alla repressione da parte di NH+4. Questi risultati suggeriscono che gli amminoacidi svolgono un ruolo importante come regolatori della fissazione dell'azoto.
Regolazione della fissazione dell'azoto da parte di Rhizobia. Esportazione di N2 fisso come NH+4.Il destino metabolico dell'azoto gassoso (15N2) fissato da sono state seguite colture viventi di Rhizobia (batteri noduli radicali) indotte per il loro sistema di fissazione dell'N2. È stato riscontrato che la maggior parte del 15N2 fissato viene esportato nel surnatante cellulare. Ad esempio, fino al 94% del 15N2 fissato da Rhizobium japonicum (simbionte di soia) è stato recuperato come 15NH+4 dal surnatante cellulare in seguito a diffusione alcalina. Diverse specie di batteri noduli radicali hanno anche esportato grandi quantità di NH+4 dalla L-istidina. Viene presentata la prova che la sovrapproduzione e l'esportazione di NH+4 da -living Rhizobia può essere strettamente legato al controllo di diversi enzimi chiave dell'assimilazione di NH + 4. Ad esempio, è stato scoperto che NH + 4 reprime la glutammina sintetasi mentre L-glutammato reprime la glutammato sintasi. Assimilazione di NH + 4 come fonte di azoto per la crescita di Rhizobia è stato inibito dal glutammato. Il meccanismo viene discussa la regolazione della produzione di NH+4 da parte dei batteri noduli radicali.
Conformazione in mezzo acquoso delle forme neutre, protonate e anioniche della 9-beta-D-arabinofuranosyladenine.La spettroscopia di risonanza magnetica protonica è stata impiegata per studiare le conformazioni in soluzione delle forme neutre, protonate e dissociate della 9-beta-D-arabinofuranosiladenina (araA) terapeuticamente attiva. In particolare, in un mezzo fortemente basico, l'aumento dell'alcalinità ha portato a cambiamenti pronunciati negli spostamenti chimici e nelle costanti di accoppiamento di alcuni protoni pentosi , a causa della ionizzazione degli idrossili pentosi, in particolare del 2\'-OH. La forma neutra di araA può essere caratterizzata come circa il 25% C(2\') endo e circa il 60% gauche-gauche, quindi leggermente diversa da quella della 1-beta-D-arabinofuranosilcitosina (araC) terapeuticamente attiva. Al contrario, le conformazioni delle forme anioniche di entrambe sono identiche, prevalentemente (superiore all'80%) C(2\')endo e gauche-gauche Con l'aiuto dei derivati 3\'-O-metil o f araA e araC, dove solo il 2\'-OH ionizza, e i cambiamenti conformazionali che l'accompagnano sono simili, ne consegue che la conformazione C(2\')endo e gauche-gauche per tutte le precedenti è vincolata a questa forma tramite un forte legame idrogeno intramolecolare, vale a dire. O(5\')H... O(2\')(-). L'influenza del suddetto legame idrogeno sugli spostamenti chimici dell'adenina H(8) nell'anione araA indica l'esistenza di quest'ultimo nella forma anti. Un effetto simile del gruppo fosfato doppiamente ionizzato su H(8) in 5\'-araAMP mostra che il nucleotide preferisce anche la forma anti, come precedentemente dimostrato per 5\'-AMP. Le conformazioni degli anelli zuccherini delle forme neutre di araA e adenosina in ambiente acquoso differiscono sensibilmente, mentre allo stato solido sono molto simili. La spettroscopia PMR si è dimostrata un metodo efficace per seguire la dissociazione dell'idrossile dello zucchero. L'entità della ionizzazione di un dato idrossile è fornita dai risultanti spostamenti chimici dei protoni vicini (geminali e vicinali). Quando la ionizzazione è accompagnata da un cambiamento di conformazione, il processo può essere seguito anche da cambiamenti nelle costanti di accoppiamento vicinale protone-protone.
Struttura e fluttuazione di un inibitore della subtilisina Streptomyces.La cinetica della reazione di scambio idrogeno-deuterio in un inibitore della subtilisina da Streptomyces albogriseolus è stata esaminata da misura dell'assorbimento infrarosso in soluzioni acquose a vari valori di pH e temperature Nell'analisi di ogni dato cinetico, si è ipotizzato che i 104 atomi di idrogeno peptidici totali siano classificati in tre classi cinetiche A, B1 e B2 e che le dimensioni di queste classi sono rispettivamente 72, 15 e 17, rispettivamente ad ogni pH e ad ogni temperatura esaminata Sulla base della posizione di picco determinata per la banda dell'ammide II in ogni fase della reazione di scambio, è stata suggerita un'assegnazione approssimativa della A , B1 e B2 rispettivamente a una struttura non ordinata, una struttura beta e una struttura alfa-elica nella molecola. Questa assegnazione è stata supportata dalla misurazione dell'assorbimento infrarosso di un film di questa proteina e da perno dicroico circolare y delle soluzioni. Sulla base dell'effetto della temperatura sulle costanti della velocità di scambio dell'idrogeno e sulla base dello studio dell'assorbimento dell'ultravioletto nella regione della temperatura più alta (da 40 a 90 gradi C), è stata fatta una discussione sulla natura della fluttuazione della struttura molecolare di questa proteina.
Effetto della temperatura sulla fluorescenza del triptofano della beta-lattoglobulina B.L'effetto del calore sulla conformazione della beta-lattoglobulina bovina è stato studiato utilizzando spettroscopia di fluorescenza Le variazioni dell'intensità, della lunghezza d'onda dell'emissione massima e dell'ampiezza del picco di emissione a metà altezza della fluorescenza del triptofano nell'intervallo 15-90 gradi C a pH 6,4-6,5 hanno consentito di discriminato. A 20 gradi C entrambi i triptofani sono in ambienti idrofobici. All'aumentare della temperatura la conformazione cambia in modo tale che a circa 50 gradi C uno dei triptofani viene trasferito in un ambiente più polare accessibile al solvente. I cambiamenti conformazionali sembrano essere reversibili se la proteina viene raffreddata a 20 gradi C dopo trattamenti termici fino a 70 gradi C. Sopra i 70 gradi C il secondo residuo di triptofano viene esposto al solvente L'esposizione completa di un residuo avviene a 80 gradi C mentre l'altro è ancora parzialmente sepolto anche a 90 gradi C. Quando la proteina viene poi raffreddata a 20 gradi C i cambiamenti conformazionali sembrano essere irreversibili con un solo residuo di triptofano che ritorna all'interno idrofobo della molecola.
I cromofori aromatici ed eme dell'emopessina di coniglio. Spettri di fluorescenza e di assorbimento delle differenze.Tecniche spettrofotometriche e fluorimetriche sono state impiegate per caratterizzare l'ambiente del cromoforo eme dell'emopessina di coniglio e per monitorare i cambiamenti nell'ambiente dei residui di amminoacidi aromatici indotti dall'interazione dell'emopessina con porfirine e metalloporfirine. Gli spettri di differenza hanno mostrato massimi a 292 e 285 nm quando l'emopessina si lega all'eme o al deuteroeme ma non alla deuteroporfirina. Questi massimi sono attribuiti a alterazioni nell'ambiente locale dei residui di triptofano e tirosina Le titolazioni spettrofotometriche dei residui di tirosina di emopexina, eme-emopessina ed emopessina in 8 M urea hanno mostrato valori di pK apparenti rispettivamente a 11,4, 11,7 e 10,9. % v/v di glicole etilenico sono coerenti con l'esposizione di 6-8 dei 14 residui di tirosina e 6-8 dei 15 residui di triptofano s di emopessina di coniglio a questo perturbante. Sono state trovate solo piccole differenze tra gli spettri di perturbazione dell'apo- e dell'eme-emopessina vicino a 290 nm, suggerendo che si verificano cambiamenti lievi o compensativi nell'esposizione al solvente dei cromofori del triptofano. Nella regione spettrale di Soret, l'esposizione dell'eme nel complesso eme-emopessina al glicole etilenico era di 0,7, rispetto al peptide eme completamente esposto del citocromo c. Le rese quantiche di fluorescenza dell'apo- ed eme-emopessina di coniglio sono state stimate rispettivamente di 0,06 e 0,03, rispetto a una resa di 0,13 per L-triptofano. Lo ioduro ha spento il 50% della fluorescenza del complesso deuteroeme-emopessina. Il cesio non era un dissetante efficace. La modifica di circa 4 residui di triptofano con N-bromosuccinimide ha anche ridotto la fluorescenza relativa dell'apo-emopessina del 50% e contemporaneamente ha ridotto del 70% la capacità di legame dell'eme della proteina. L'esistenza di residui di triptofano stericamente non ostacolati in entrambe le apo-eme-emopessina è improbabile poiché non sono stati rilevati compelx di trasferimento di carica tra queste proteine e N-metilnicotinammide.
La decomposizione catalizzata da ioni metallici di zuccheri nucleosidici difosfato.La decomposizione catalizzata da ioni metallici degli zuccheri nucleotidi difosfato, glucosio uridina difosfato, uriding difosfato galattosio, uridina difosfato N-acetilglucosamina, guanosina difosfato mannosio e guanosina difosfato fucosio (UDPGlc, UDPGal, UDPGlc-NAc, GDPMan e GDPFuc, rispettivamente), sono stati studiati in funzione del pH. UDPDlc e UDPGal si decompongono facilmente in a,2 -derivato fosfato del ciclo dello zucchero e dell'uridina 5\'-acido fosforico (UMP) in presenza di Mn2+. In tutte le condizioni testate, UDPGal si decompone da due a tre volte più rapidamente di UDPGlc. GDPFuc viene degradato lentamente a fucosio libero in condizioni simili condizioni; gli altri zuccheri nucleotidi difosfato sono stabili. La velocità di reazione aumenta con l'aumentare della concentrazione di ioni idrossido da pH 6,5 a 7,9 e con concentrazione di ioni metallici da 10 a 200 mm. Diversi ioni metallici sono efficaci catalizzatori; a pH 7,5 CON UDPGal 20 mM e ione metallico 20 mM, sono state ottenute le seguenti costanti di velocità apparenti del primo ordine (min-1 x 10(4)): Eu3+ 700; Mn2+, 70; Co2+ 27; Zn2+, 22; Ca2+, 3.0; Cu2+, 2,4; e Mg2+, 0. Sembra che le concentrazioni di Mn2+ che sono state utilizzate negli studi con zuccheri nucleotidi difosfato a pH neutro possano catalizzare una decomposizione significativa che porta a un'errata interpretazione degli esperimenti cinetici e di incorporazione.
Evidenza di più di un meccanismo di trasporto del Ca2+ nei mitocondri.Il trasporto attivo e il legame interno dell'analogo del Ca2+ Mn2+ da parte dei mitocondri del fegato di ratto sono stati monitorati con risonanza paramagnetica elettronica. Il legame di Mn2+ trasportato dipendeva fortemente dal pH interno nell'intervallo 7,7-8,9. I gradienti di Mn2+ libero sono stati confrontati con i gradienti di K+ misurati su campioni trattati con valinomicina. Allo stato stazionario, l'attività elettrochimica di Mn2+ era maggiore all'esterno di all'interno dei mitocondri. I gradienti osservati di Mn2+ libero e di H+ non possono essere spiegati da un singolo meccanismo "passivo" uniporto o antiporto del trasporto di cationi bivalenti. Questa conclusione è stata ulteriormente confermata dai cambiamenti osservati nelle distribuzioni di Ca2+ e Mn2+ allo stato stazionario indotto da La3+ e rosso rutenio. Il rosso rutenio ha ridotto l'assorbimento totale di Ca2+ o Mn2+ ed entrambi gli inibitori hanno causato il rilascio di cationi bivalenti dai mitocondri precaricati. Viene proposto un modello in cui div i cationi alent sono trasportati da almeno due meccanismi: (1) un uniport passivo e (2) e una pompa attiva, un antiport del catione o un symport anionico. Il primo è più sensibile a La3+ e al rosso rutenio. In condizioni di regime stazionario energizzato, il flusso netto di Ca2+ o Mn2+ è interno su (1) e esterno su (2). Viene discussa la necessità di più di un sistema di trasporto che inregola il Ca2+ citoplasmatico.
Ricerca della modifica del bromuro di fenacile dell'alfa-chimotripsina.La modifica dell'alfa-chimotrisina con il bromuro di fenacile è stata riesaminata su un ampio intervallo di pH. Vengono presentate prove che indicano che la natura degli enzimi fenacil-modificati preparati da questa reazione dipende dal pH del mezzo di reazione. La fenacil alfa-chimotripsina prodotta a basso pH è molto probabilmente il sale di fenacilsolfonio Met-192, come proposto in precedenza , poiché subisce prontamente la dealchilazione utilizzando 2-mercaptoetanolo. Tuttavia, il fenacil-enzima preparato a pH neutro possiede un'attività enzimatica molto ridotta e non reagisce con il 2-mercaptoetanolo per rigenerare l'alfa-chimotripsina nativa. Inoltre, l'incubazione del Met- 192 phenacil solfonio enzima a pH neutro provoca un cambiamento irreversibile regolare al nuovo fenacil-enzima come monitorato da cambiamenti nell'attività enzimatica, suscettibilità alla dealchilazione utilizzando 2-mercaptoetanolo e ul proprietà spettrali di assorbimento della differenza travioletta. Le stechiometrie di entrambe le reazioni di modificazione del pH basso e neutro sono state determinate, utilizzando [carbonil-14C]fenacil bromuro, come 1 gruppo fenacilico/molecola enzimatica. Nel tentativo di ottenere informazioni sulla natura e sul meccanismo di formazione della fenacil alfa-chimotripsina prodotta a pH neutro, le reazioni di alchilazione delle alfa-chimotripsine modificate prodotte dalla funzionalizzazione di His-57 con tosilfenilalanina clorometilchetone e dall'ossidazione di Met-192 al solfossido hanno stato indagato. I risultati combinati di questi studi sono stati inizialmente interpretati in termini di pH neutro, modifica del bromuro di fenacile con conseguente formazione di un nuovo enzima modificato tramite il sale di solfonio Met-192.
Ruolo degli ioni calcio legati negli enzimi proteolitici termostabili. Separazione dei contributi intrinseci e degli ioni calcio alla stabilità termica cinetica.La stabilità termica cinetica totale di una molecola proteica, espressa come energia libera totale di attivazione nelle reazioni di denaturazione termica, può essere separata in un contributo intrinseco della catena polipeptidica e un contributo dovuto al legame degli ioni calcio. La teoria per questa procedura è applicata alla denaturazione termica dati, ottenuti al pH di stabilità ottimale, per i tipi di serina proteasi, termomicolasi e subtilisina Carlsberg e BPN\', e per le metalloendopeptidasi di zinco, termolisina e proteasi neutra A. I risultati, ottenuti dai grafici di Arrhenius ad alto e basso calcio libero concentrazioni di ioni, rivelano una notevole variazione nel contributo degli ioni calcio alla stabilità termica cinetica totale dei vari enzimi. Nel gruppo della serina proteasi, a 70 gradi C , la stabilità è maggiore per la termomicolasi, principalmente a causa di un contributo intrinseco relativamente elevato. Per le metalloendopeptidasi la stabilità termica cinetica totale è maggiore per la termolisina, la differenza tra la termolisina e la proteasi neutra A è dominata dai contributi di ioni calcio legati. La stabilità termica cinetica intrinseca della catena polipeptidica della termolisina è considerevolmente inferiore a quella di qualsiasi proteasi serina ed è probabilmente dello stesso ordine di grandezza di quella della proteasi neutra A. Pertanto, la ben nota stabilità termica cinetica totale della termolisina è dovuto principalmente ad un singolo ione calcio (Voordouw, G. , e Roche, RS (1975), Biochemistry 14, 4667) che si lega con elevata affinità anche a temperature molto elevate (K congruente a 6 X 10(7) M-1 a 80 gradi C).
Più acil-coenzima A carbossilasi in Pseudomonas citronellolis.È stato dimostrato che Pseudomonas citronellolis contiene quattro diverse acil-coenzima A carbossilasi, tra cui acetil-, propionil -, 3-metilcrotonil- e geranil-CoA carbossilasi, quando coltivate su fonti di carbonio appropriate. L'attività dell'acetil-CoA carbossilasi negli estratti grezzi è stata stimolata di circa 40 volte dall'inclusione di solfato di ammonio 0,4-0,5 M nel test. livelli di attività propionil-CoA carbossilasi, stimolata anche dal solfato di ammonio, sono stati trovati in cellule coltivate con acetato. Che queste attività acetil- e propionil-CoA carbossilasi fossero dovute a diversi enzimi è stato dimostrato dalla loro risoluzione durante la purificazione mediante una procedura che ha stabilizzato l'acetile -CoA carbossilasi come propionil-CoA carbossilasi complessa e separata in due frazioni proteiche richieste. Le cellule cresciute con propionato o valina contenevano un'attività propionil-CoA carbossilasi fortemente inibita da un solfato di ammonio nel dosaggio e che può rappresentare una forma inducibile dell'enzima. Le carbossilasi geranil- e 3-metilcrotonil-CoA che catalizzano la carbossilazione dei gruppi 3-metil degli omologhi accettori acil-CoA, sono state indotte dalla crescita sui monoterpeni, acido citronellico o geranoico; solo la 3-metilcrotonil-CoA carbossilasi è stata indotta dalla crescita su leucina o acido isovalerico. L'induzione di entrambe le carbossilasi è stata associata alla comparsa di proteine simili ad alto peso molecolare, contenenti biotina, misurate mediante filtrazione su gel. Queste due carbossilasi sono probabilmente enzimi distinti poiché la 3-metil-crotonil-CoA carbossilasi dalle cellule cresciute con isovalerato non carbossila il geranil-CoA, mentre la geranil-CoA carbossilasi carbossila entrambi gli omologhi acil-CoA. P. citronellolis sembra essere un sistema utile per studiare gli aspetti strutturali di coppie di acil-CoA carbossilasi omologhe.
dipendenza dal pH dello scambio di trizio con i protoni C-2 delle istidine nella tripsina bovina.A pH 8,9 e 37 gradi C i tempi di dimezzamento per lo scambio di trizio con i protoni C-2 delle istidine della tripsina sono 73 giorni per His-57 e maggiori di 1000 giorni per His-40 e His-91. Questi tempi di dimezzamento sono molto più lunghi dell'emivita di scambio per il protone C-2 dell'istidina libera (2,8 giorni a pD 8,2) e più lungo di qualsiasi tempo di dimezzamento di scambio precedentemente riportato a pH maggiore di 8. Questi tassi di scambio molto bassi sono discussi con riferimento alla struttura raffinata della tripsina Lo scambio di trizio di His-57 dipende da un pKa apparente di 6,6. Questo pKa può rappresentare il pKa dell'imidazolo di His-57 in una conformazione inattiva dell'enzima.
Legame della fosforilcolina a una IgM Waldenström come studiato mediante spettroscopia a fluorescenza e dicroismo circolare.Le caratteristiche di legame di una IgM Waldenström(FR) per il ligando la fosforilcolina è stata studiata mediante spettroscopia di fluorescenza. Dopo l'aggiunta di fosforilcolina, IgM FR ha mostrato un aumento dell'83% della fluorescenza del triptofanile, che era associato a uno spostamento verso il rosso del massimo di emissione (5 nm). Le stesse proprietà sono state osservate con le subunità 7S IgM. la costante di associazione KA per la fosforilcolina era 6X10(4) M-1 PER IgM FR e la subunità 7S, come determinato mediante titolazione in fluorescenza, un valore in accordo con quello ottenuto dalla dialisi di equilibrio. Non è stata riscontrata alcuna diminuzione significativa del valore di KA in presenza di 3 M urea; in 6 M urea, l'aumento dell'intensità di fluorescenza è stato del 36% del valore ottenuto in assenza di agente denaturante. Al contrario, solo il 4% di miglioramento della fluorescenza è stato notato al legame in 3 M GuHC1 a e non è stato possibile osservare alcun miglioramento quando la concentrazione di GuHC1 è stata aumentata a 5 M, suggerendo così il completo dispiegamento della proteina e la successiva perdita di attività di legame. Lo studio della dipendenza dal pH del legame della fosforilcolina con IgM FR non ha indicato differenze significative nell'aumento della fluorescenza tra pH 5 e 8, mentre a valori di pH più acidi o alcalini, l'aumento è diventato più piccolo. A pH 3.0 e 10.0, non è stato osservato alcun miglioramento che suggerisse l'assenza di legame del ligando, un fatto confermato indipendentemente dalla dialisi di equilibrio. Quando le proprietà spettroscopiche dell'IgM FR sono state confrontate con quelle delle proteine del mieloma murino che legano lo stesso ligando, sono state registrate grandi differenze nell'ampiezza del potenziamento della fluorescenza indotto dalla fosforilcolina e nello spostamento della lunghezza d'onda massima di emissione.
Lo studio della fluorimetria a impulsi del glutammato deidrogenasi del fegato di manzo ha ridotto i complessi di nicotinammide adenina dinucleotide fosfato.Per studiare i due complessi ternari GDH-GTP-NADPH e GDH-L-glutammato-NADPH e il complesso quaternario GDH-GTP-L-glutammato-NADPH Il decadimento della fluorescenza del NADPH legato all'enzima non è monoesponenziale in nessuno di questi complessi. non sembra dipendere dalla concentrazione del coenzima. Le curve sperimentali possono essere adattate in modo soddisfacente con la somma di due esponenziali, le cui ampiezze relative dipendono significativamente dal complesso studiato. Pertanto, per la diidronicotinammide potrebbero esistere due possibili ambienti nell'enzima attivo siti. È anche dimostrato che i tempi di decadimento della fluorescenza dell'enzima sono ridotti dal NADPH legato.
Studi sul decadimento della fluorescenza di nicotinammide adenina dinucleotide ridotto in soluzione e legato all'alcol deidrogenasi del fegato.La tecnica di conteggio dei monofotoni è stata utilizzata per ottenere la cinetica del decadimento della fluorescenza di NADH (diidronicotinammide adenina dinucleotide) legato a LADH (HORSE LIVER ALCOHOL DEHYDROGENAS). Si è riscontrato che il decadimento della fluorescenza del complesso enzimatico non seguiva una singola legge di decadimento esponenziale ma che i dati potevano essere ben descritti come somma di due esponenziali I parametri di decadimento del complesso enzimatico non dipendono dal grado di saturazione del sito di legame. Questi risultati sono interpretati in termini di una reazione allo stato eccitato reversibile che forma un prodotto non fluorescente. Le cinetiche di decadimento della fluorescenza sono riportate anche per NADH e molecole correlate in soluzione. I parametri di decadimento, i massimi di emissione di fluorescenza e le intensità di fluorescenza dipendono dalla polarità e dalla viscosità del solvente.
dipendenza dal pH dell'idrolisi degli esteri dell'acido ippurico da parte della carbossipeptidasi A.La dipendenza dal pH (pH 4,5-10,5) dell'idrolisi dell'acido sette ippurico esteri (C6H5CONHCH2C-O2CR1R2CO2H: 1a: R1 = R2 = H; 1b: R1 = R2 = CH3; 1c: R1 = H, R2 = p-ClC6H4; 1d: R1 = H, R2 C2H5; 1e: R1 = H, R2 = (CH3)2CHCH2; 1f: R1 = H, R2 = C6H5; 1g: R1 = H, R2 = C6H5CH2) da parte della carbossipeptidasi A bovina è stata studiata e sono state confrontate la dipendenza dal pH dell'attivazione del substrato di 1a-c e l'inibizione del substrato di 1d-g. Per tutti e sette gli esteri il legame cataliticamente produttivo della prima molecola di substrato dipende dai valori di pKa enzimatico di 6.0 e 9.1. Per 1d, 1e , e 1g la velocità di idrolisi (k2app) di questo complesso è indipendente dal pH, mentre per 1f k2app dipende da un pKa di 5,9. La velocità di idrolisi (k3app) del complesso enzima-substrato 1:2 (ES2) è indipendente dal pH per 1d-g, ma f oppure 1a-c k3app dipende dai seguenti valori di pKa: 1a, 6.1 e 9.1; 1b, 5.4; 1c, 6.6. Le dipendenze dal pH di k2app per 1f e k3app per 1c sono razionalizzate dalla presenza di specie cataliticamente non produttive. Si ritiene che le specie equivalenti ES2 siano produttive per 1c-g; tuttavia, la specie produttiva ES2 per 1b deve essere molto diversa.
Ruolo delle RNA metilasi ribosomiali nella regolazione della produzione di ribosomi nelle cellule di mammifero.L'attività delle RNA metilasi è stata stimolata da precursori ad alta energia dell'RNA (ribonucleosidi trifosfati) e inibito dai prodotti di degradazione dell'RNA (ribonucleotidi e oligoribonucleotidi). La risposta delle metilasi del tumore dell'ascite di Novikoff di ratto e del fegato a questi metaboliti è stata sorprendentemente diversa. Gli enzimi tumorali altamente attivi hanno risposto preferenzialmente all'inibizione da parte dei metaboliti catabolici, mentre il gli enzimi epatici meno attivi hanno risposto esclusivamente alla stimolazione da parte dei metaboliti anabolici. Quando l'attività delle rRNA metilasi è stata saggiata in risposta all'aumento della concentrazione di S-adenosilmetionina, gli enzimi tumorali hanno risposto con una curva di dipendenza dal substrato iperbolico e gli enzimi epatici con una curva sigmoidale. presenza di un dinucleotide inibitorio, ApA, gli enzimi tumorali hanno risposto con una curva sigmoidale; in presenza di uno stimolatore, l'adenosina 5\'-trifosfato, gli enzimi epatici hanno risposto con una curva di concentrazione del substrato iperbolico. Quando i ratti normali erano soggetti a una serie di trattamenti con tioacetamide, un epatocancerogeno, le metilasi dell'rRNA nucleolare epatico diventavano sensibili all'inibizione da parte dell'ApA e relativamente insensibili alla stimolazione dell'adenosina 5\'-trifosfato. Quando ratti portatori di tumore sono stati trattati con poliinosinato:policitidilato, un agente antitumorale, le metilasi dell'rRNA nucleolare tumorale sono diventate insensibili all'inibizione da parte dell'ApA e più sensibili alla stimolazione da parte dell'adenosina 5\'-trifosfato. È stata notata una correlazione tra una maggiore efficienza di metilazione in vivo e una maggiore stabilità dell'RNA nucleolare durante l'incubazione in vitro, o viceversa. Questi risultati sono interpretati per indicare che le rRNAmetilasi sono regolate dai metaboliti cellulari durante la biosintesi nucleolare dei ribosomi e che le rRNA metilasi possono fornire un sito favorevole per l'azione selettiva degli agenti chemioterapici del cancro.
Effetti sterici sulla sintesi del peptidoglicano sensibile alla penicillina in un sistema membrana-parete Gaffkya homari.Residui 4 e 5 della frazione pentapeptidica, R-Ala1 -DGlu2-Lys3-DAla4-DAla5, di peptidoglicano giocano un ruolo importante nella fase donatrice della sintesi di glicani reticolati Per valutare il ruolo di questi residui in questa fase, una serie di peptidi UDP-MurNAc sono stati biosintetizzati con residui 4 e 5 sostituiti singolarmente da acido D-alfa-ammino-n-butirrico, D-norvalina o D-valina. I sei nucleotidi sono stati confrontati con UDP-MurNAc-Ala-DGlu-Lys-DAla-DAla (riferimento) in nascente (insensibile alla penicillina) sintesi del peptidoglicano e nella sintesi del peptidoglicano sensibile alla penicillina La sintesi del peptidoglicano sensibile alla penicillina è catalizzata da pareti di membrana isolate da Gaffkya homari e sembrerebbe richiedere l'azione concertata della transglicosilasi e della transpeptidasi. mostra un alto grado di discriminazione per i sub sterici tituenti, -CH3 e -CH2CH3, nel residuo 4. Ad esempio, per UDP-MurNAc-Ala-DGly-Lys-DAbu-DAla e -Ala-DGlu-Lys-DAla-DAbu, Vmax/km è 0,19 e 0,95 e Vmax è 0,03 e 0,52, rispettivamente, del valore del nucleotide di riferimento. Al contrario, per la sintesi del peptidoglicano nascente con questi nucleotidi Vmax/Km è 0,75 e 0,80 e Vmax è rispettivamente 0,71 e 1,0 del valore per il nucleotide di riferimento. Questa tendenza è stata illustrata anche con gli altri nucleotidi negli esperimenti nel corso del tempo. Questi risultati indicano che l'enzima o gli enzimi sensibili alla penicillina, presumibilmente la transpeptidasi, ha un grado di specificità maggiore nella fase donatrice per la D-alanina nel residuo 4 rispetto alla D-alanina nel residuo 5 nella fase di reticolazione del peptidoglicano sintesi.
Proprietà della nicotinammide adenina dinucleotide fosfato-adrenodossina reduttasi cristallina ridotta dai mitocondri adrenocorticali bovini. II. Residui istidilici e cisteinici essenziali nel sito di legame NADPH della NADPH-adrenodossina reduttasi.", Il sito di legame di NADPH nella NADPH-adrenodossina reduttasi è stato esaminato utilizzando l'enzima cristallino dai mitocondri corticosurrenali bovini mediante studi sugli effetti della fotoossidazione e sulle modificazioni chimiche dei residui di amminoacidi nella reduttasi. (1) La fotossicazione ha ridotto l'attività enzimatica della NADPH-adrenodossina reduttasi. La fotoossidazione della reduttasi è stata impedita da NADP+, adrenodossina o glutatione ridotto, ma non da NAD+. La fotoinattivazione ha causato la perdita di un residuo istidilico, ma non di tirosile, triptofanile, cisteinile o residui metionile della reduttasi. non ha influenzato in modo apprezzabile lo spettro di dicroismo circolare della reduttasi (2) L'attività della NADPH-adrenodossina reduttasi è stata inibita dalla dieta yl pirocarbonato e l'inibizione è stata parzialmente invertita mediante l'aggiunta di idrossilammina. L'inibizione è stata prevenuta da NADP+, ma non da NAD+. (3) L'attività della NADPH-adrenodossina reduttasi è stata inibita dal 5,5\'-ditiobis(2-nitrobenzoato) e l'inibizione è stata annullata dalla riduzione del glutatione. Era anche protetto da NADP+, ma non da NAD+. I risultati indicano che un residuo istidilico e un residuo cisteinico della NADPH-adrenodossina reduttasi sono essenziali per il legame di NADPH da parte della reduttasi.
Vinylglycine and proparglyglycine: substrati suicidi complementari per L-aminoacido ossidasi e D-aminoacido ossidasi.Proparglyglycine (2-amino-4-pentynoate ) e la vinilglicina (2-ammino-3-butenoato) sono stati esaminati come substrati e possibili inattivatori di due flavo enzimi, la D-aminoacido ossidasi dal rene di maiale e la L-aminoacido ossidasi dal veleno di Crotalus adamanteus. La vinilglicina viene rapidamente ossidata da entrambi enzimi ma solo l'aminoacido ossidasi L è inattivato in condizioni di saggio. La perdita di attività probabilmente comporta la modifica covalente di un residuo del sito attivo piuttosto che il coenzima flavina adenina dinucleotide e si verifica una volta ogni 20000 turnover. Abbiamo confermato la recente osservazione (Horiike, K, Hishina, Y. , Miyake, Y. e Yamano, T. (1975) J, Biochem. (Tokyo), 78, 57) che la D-proparglicina viene ossidata con una perdita di attività dipendente dal tempo da parte del D-ammino ossidasi acida e hanno esaminato alcuni aspetti meccanicistici di questa inattivazione, L'entità dell'attività ossidasi residua, insensibile a un'ulteriore inattivazione, è di circa il 2%, a quel punto sono state introdotte 1,7 etichette/subunità con propargly[2-14C]glicina come substrato. La L-proparglicina è un substrato ma non un inattivatore della L-amminoacido ossidasi e il prodotto che si accumula nel tampone non nucleofilo dell'acido N-2-idrossietilpiperazina-N\'-2-etansolfonico è l'acetopiruvato. In presenza di butilammina HCl, si accumula una specie con lambdaman 317 nm (epsilon = 15 000) che potrebbe essere un addotto eneammino coniugato. La stessa specie si accumula dall'ossidazione della D-amminoacido ossidasi della D-propargilglicina prima dell'inattivazione; l'apo D-amminoacido ossidasi inattivato ha un nuovo picco a 317 nm che è probabilmente un'eneammina simile. Una probabile specie inattivante è il 2-cheto-3,4-pentadienoato derivante da un facile riarrangiamento del prodotto iniziale previsto 2-cheto4 pentynoato. La vinilglicina e la proparglicina mostrano specificità di inattivazione, quindi, rispettivamente per L-e D-amminoacido ossidasi.
Meccanismi di trasferimento di elettroni da solfito di rafano composti perossidasi-idroperossido.", utilizzando uno spettrofotometro rapido scan provvisto di un apparecchio stopped flow, reazioni di solfito con composti I e II di due rafano perossidasi isoenzimi a e C sono stati studiati. la diretta riduzione a due elettroni del composto perossidasi I con solfito verificato a pH acido, ma il meccanismo gradualmente cambiata alla riduzione in due fasi con la formazione intermedia del composto II come il pH aumentato. il pH di variazione uno e due elettroni è verificato alla stessa velocità era 4.5 per perossidasi a e 7.7 per perossidasi C. Un nuovo perossidasi intermedio è stato trovato nella reazione tra il composto II perossidasi e solfito. solfito mostrava una banda di assorbimento caratteristico a 850 nm e lo spettro ottico era simile a quello di isoporphyrins ma era molto diverso da quello della sulfhemoproteins. il tasso (k) della conversione del sul Fite-composto II complesso al solfito era proporzionale alla concentrazione di H + e il registro k trama vs. pH per la perossidasi A spostato sul lato acido 1,1 unità di pH da quello per perossidasi C.
Analisi strutturale di O2\'-metil-5-carbamoilmetiluridina, un costituente recentemente scoperto dell'RNA di trasferimento del lievito.Un composto identificato provvisoriamente come O2- la metil-5-carbossimetiluridina (cm5Um) è stata recentemente isolata in questo laboratorio dall'RNA di trasferimento di lievito di massa (Gray, MW (1975), Can, J. Biochem. 53, 735-746). L'idrolisi alcalina del tRNA di lievito rilascia questo nucleoside come parte di un dinucleotide stabile agli alcali, cm5Um-Ap, da cui è stato preparato cm5Um sufficiente nella presente indagine per un esame dettagliato delle sue proprietà Gli spettri di assorbimento dell'ultravioletto e le proprietà cromatografiche ed elettroforetiche di cm5Um erano coerenti con la struttura proposta, che è stata confermata mediante la caratterizzazione delle parti base e zuccherine come 5-carbossimetiluracile e 2-O-metilribosio, rispettivamente. L'idrolisi del veleno di serpente del tRNA di lievito rilascia cm5Um sotto forma di un nucleotide 5\' carbossi-bloccato, designato pU-2. il Il gruppo bloccante alcali-labile in pU-2 come ammide si basava sul dosaggio quantitativo dell'ammoniaca rilasciata per idrolisi acida del corrispondente nucleoside, U-2, e sul confronto cromatografico dell'U-2 con l'estere metilico semisintetico e i derivati ammidici di cm5Um (rispettivamente mcm5Um e ncm5Um). L'analisi quantitativa ha indicato che ncm5Um può essere confinato a una singola specie di tRNA di lievito. In considerazione della localizzazione unica (la posizione "Wobble" della sequenza dell'anticodone) e delle proprietà di codifica (accoppiamento con A ma non con G) di altri derivati cm5U nell'RNA di trasferimento, il dinucleotide cm5Um-Ap può essere derivato dal primo due posizioni della sequenza anticodone di una specie di tRNA di lievito che riconosce un codone NUA. Ciò predice che l'O2-metil-5-carbamoilmetiluridina si troverà in un isoaccettore di isoleucina, leucina o valina.
Interazioni istoniche in soluzione e suscettibilità alla denaturazione.Le interazioni istoniche in soluzione possono dipendere dai trattamenti utilizzati per la purificazione. Dispersione ottica rotatoria e misurazioni della velocità di sedimentazione sono stati effettuati in un solvente di riferimento, prima e dopo l'esposizione a vari trattamenti, per studiare la suscettibilità degli istoni alla denaturazione irreversibile. Alcune condizioni acide e soluzioni di urea e guanidina possono denaturare. Gli studi di interazione eseguiti su istoni non denaturati indicano che il dimero, (H4)( H3), e il tetramero, (H4)2(H3)2, si dissociano in monomeri a bassa forza ionica. Gli esperimenti sulla velocità di sedimentazione suggeriscono un modello per il tetramero (H4)2(H3)2, con un centro semisferico compatto e quattro sporgenti regioni ammino-terminali Le frazioni H2a e H2b interagiscono per formare il dimero misto in equilibrio con i monomeri La frazione H2a si autoassocia facilmente a dimeri, tetrameri e ottameri, mentre la frazione H1 si associa solo debolel y per formare dimeri.
Caratterizzazione del componente 20S nella tubulina del cervello di mammifero.La tubulina del cervello suino, purificata da almeno due cicli di montaggio e smontaggio, è stata caratterizzata a diversi valori di pH mediante analisi della velocità di sedimentazione e misure turbidimetriche A pH 6.4 il materiale depolimerizzato era composto da due specie maggiori sedimentanti con valori di so20,w di 6 e 36 e una minore di 20S. Alzando il pH, la quantità di 20S il componente è aumentato e quello del 36S è diminuito, mentre quello del 6S è rimasto inalterato. A pH 7,6 la miscela conteneva componenti 20S e 6S ma quasi nessun 36S. Le specie 20S possono essere separate da quelle 6S mediante gel filtrazione su agarosio A- 15 m a pH 7,6. All'esame microscopico elettronico questa preparazione contiene molti meno anelli doppi rispetto al materiale a pH 6,4, ma spesso si potevano vedere anelli singoli. L'elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato dei componenti 20S e 36S ha mostrato che con sono costituiti quasi interamente da tubulina e da alcune frazioni a peso molecolare più alto e più basso. Le misurazioni della torbidità hanno mostrato che la concentrazione proteica minima necessaria per la polimerizzazione aumenta con l'aumento del pH. Il plateau di torbidità raggiunto ad un dato pH può essere aumentato diminuendo il pH. Da questi risultati si suggerisce che il componente 20S sia un intermedio della specie 36S. I risultati indicano inoltre l'esistenza di un equilibrio pH-dipendente tra le specie 20S e i 36Soligomeri.
Energetica dei processi primari nell'eccitazione della visula: fotocalorimetria della rodopsina nelle membrane del segmento esterno dei bastoncelli.Una tecnica sensibile per la determinazione calorimetrica diretta dell'energia di Vengono descritte le reazioni fotochimiche a bassi livelli di illuminazione e la sua applicazione allo studio dei processi primari nell'eccitazione della visula. Sono riportate le enthlpie per vari passaggi nello sbiancamento della rodopsina nelle membrane del segmento esterno del bastoncino intatto, insieme ai calori delle reazioni modello appropriate. I cambiamenti di protonazione sono anche determinati calorimetricamente mediante l'uso di tamponi con diversi calori di ionizzazione protonica. Lo sbiancamento della rodopsina è accompagnato da un significativo assorbimento di energia termica, ampiamente superiore all'energia richiesta per la semplice isomerizzazione del cromoforo retinico. La formazione di metarodopsina I coinvolge la assorbimento di circa 17 kcal/mol e nessuna variazione netta nella ionizzazione protonica del sistema La formazione di metarodopsina II richiede un'energia aggiuntiva di circa 10 kcal/mol e comporta l'assorbimento di uno ione idrogeno dalla soluzione. L'energia della reazione di fotolisi complessiva, la rodopsina porta a opsina + tutto trans-retinico, dipende dal pH e comporta l'esposizione di un gruppo titolante aggiuntivo sull'opsina. Questo gruppo ha un calore di ionizzazione protonica di circa 12 kcal/mal, caratteristico di un'ammina primaria, ma un pKa nella regione di neutralità. Suggeriamo che questo gruppo sia la lisina base di Schiff del sito di legame del cromoforo della rodopsina che viene esposta alla fotolisi. Il basso pKa per questa lisina attiva comporterebbe un legame retina-opsina più stabile e potrebbe essere indotto da un vicino gruppo caricato positivamente sulla proteina (arginina o un secondo residuo di lisina). Questo porta a un modello che coinvolge la protonazione intramolecolare dell'azoto base di Schiff nel legame retina-opsina della rodopsina, che è coerente con le proprietà termodinamiche e spettroscopiche del sistema. Proponiamo inoltre che la metarodopsina I porti alla fase II della metarodopsina nella sequenza di sbiancamento che implichi l'idrolisi reversibile del legame di base di Schiff nel sito di legame del cromoforo e che i passaggi successivi siano il risultato della migrazione del cromoforo da questo sito.
Chiarimento strutturale e proprietà dell'8alfa-(N1-istidil)riboflavina: la componente flavina della tiamina deidrogenasi e della beta-ciclopiazonato ossidociclasi.Oltre a L'8alfa-(N3-istidil)riboflavina, l'8alfa-(N1-istidil)riboflavina si forma anche durante la reazione dell'istidina Nalfa-bloccata con l'8alfa-bromotetraacetilriboflavina in una resa del 20-25% della frazione istidilflavina totale. -(N1-istidil)riboflavina sono indirette con quelle dell'istidilflavina isolata dalla tiamina deidrogenasi e dalla beta-ciclopiazonato ossidociclasi ma differiscono da quelle dell'8alfa-(N3-istidil)riboflavina. Queste proprietà includono pKa di spegnimento della fluorescenza, mobilità elettroforetica a pH 5,0 , stabilità all'immagazzinamento e riduzione da parte di NaBH 4. La prova della sostituzione 8alfa è mostrata dalla risonanza paramagnetica elettronica e dagli spettri di doppia risonanza elettrone-nucleare della forma semichinonica cationica, nonché dalla risonanza magnetica protonica spettro della forma ossidata. Il sito di sostituzione dell'istidina da parte dell'8alfa-metilene della frazione flavina è stato mostrato mediante metilazione dell'anello imidazolico con ioduro di metile, scissione del legame metilistidina-flavina mediante idrolisi acida a 150 gradi C e identificazione dell'isomero metilistidina mediante elettroforesi. La 3-metilistidina è il prodotto dell'isomero N1-istidilflavina, mentre la 1-metilistidina è prodotta dall'isomero N3. Il prodotto della flavina dalla scissione riduttiva di Zn di entrambi gli isomeri è stato identificato come riboflavina. Il composto ottenuto per trattamento acido dell'8alfa-(N3-istidil)riboflavina (precedentemente ritenuto l'isomero N1) differisce dal composto progenitore solo nella catena laterale ribitilica, poiché studi di degradazione chimica mostrano come prodotto 1-metilistidina e una flavina prodotto che differisce dalla riboflavina solo nella mobilità nella cromatografia su strato sottile, ma non nelle proprietà spettrali di assorbimento, fluorescenza e risonanza paramagnetica elettronica. La prova che la modificazione acida coinvolge solo la catena ribitile è venuta dalle osservazioni che l'irradiazione alcalina di questa flavina produce lumiflavina, che lo spettro di risonanza magnetica protonica del composto differisce da quello della riboflavina nella regione della risonanza protonica ribitile, e che il suo periodato il titolo è inferiore a quello della riboflavina autentica. L'identità dell'8alfa-(N1-istidil)riboflavina con l'istidilflavina della tiamina deidrogenasi e della beta-ciclopiazonato ossidociclasi mostra che entrambe le forme isomeriche dell'8alfa-istidilflavina sono presenti in natura.
Effetto del 17-beta-estradiolo orale sul fegato nelle donne con colestasi intraepatica (epatosi) durante una precedente gravidanza.Gli effetti del 17-beta -estradiolo in 14 donne che avevano avuto colestasi intraepatica della gravidanza (epatosi). Questo estrogeno naturale è stato somministrato per via orale in una dose giornaliera di 5 mg per due periodi di 20 giorni con un intervallo di 7 giorni tra i corsi. La bromsulftaleina (BSP ) la ritenzione è aumentata durante il trattamento, ma solo occasionalmente a livelli superiori al limite superiore della norma. Altri test di funzionalità epatica convenzionali di solito non hanno mostrato anomalie. In una precedente indagine sullo stesso tipo di pazienti, abbiamo studiato gli effetti del mestranolo (un sintetico estrogeno 17-alchilato) in una dose giornaliera di 0,1 mg con lo stesso schema posologico della presente indagine e il 17-beta-estradiolo sembrava alterare la funzionalità epatica meno del mestranolo. Potrebbe quindi essere più sicuro usare il 17-beta-estradiolo come un agente terapeutico.
Il ruolo dei cationi bivalenti nell'epidermolisi.In esperimenti volti a chiarire il ruolo dei cationi bivalenti nel mantenimento dell'integrità dell'epidermide, pelle di topo neonato è stato incubato in acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) o acido etilenglicole tetraacetico (EGTA). In EDTA, l'epidermolisi si è verificata ed è stata confermata strofinando il campione per dimostrare che un foglio di epidermide potrebbe essere diviso. Dopo 30 minuti di incubazione in 0-01 mol/EDTA la scissione si è verificata nello strato inferiore granulare-spinoso superiore, dopo 45 minuti era in una posizione spinoso-soprabasilare e dopo 60 minuti e successivamente alla giunzione dermo-epidermica Ultrastrutturalmente, si è verificata una zona chiara di apparente edema intracellulare lungo le membrane cellulari. La scissione si è quindi verificata per via intracitoplasmatica attraverso questa zona chiara e la membrana cellulare adiacente è stata persa. Poiché l'incubazione in EGTA a pH 7-4 non ha provocato epidermolisi, suggeriamo che la rimozione del magnesio piuttosto che ca lcium è responsabile dell'epidermolisi. Trenta minuti dopo l'aggiunta di calcio o magnesio ai campioni trattati con EDTA, non è stato più possibile dimostrare l'epidermolisi.
Studi clinici su agenti di induzione XLIII: Flunitrazepam.Flunitrazepam (Ro 5-4200) è stato studiato come agente di induzione in 220 volontari o pazienti. Si presumeva che fosse 10 volte più potente del diazepam. L'effetto soporifero massimo non si verificava fino a 90-120 s dopo l'iniezione. C'era una grande variazione individuale nella risposta al flunitrazepam e alcuni pazienti non perdevano conoscenza anche dopo aver ricevuto 6 mg (circa 0,1 mg/kg). La premedicazione con oppiacei ha potenziato la sua azione, ma ha ritardato il recupero. C'è stato un aumento correlato alla dose di disturbi respiratori minori con flunitrazepam in pazienti non premedicati e un'alta frequenza di ipotensione arteriosa a seguito di grandi dosi somministrate a pazienti che avevano ricevuto premedicazione con oppiacei Le sequele venose non erano più frequenti che dopo dosi comparabili di diazepam. Il flunitrazepam non era un farmaco molto soddisfacente per l'induzione dell'anestesia e il recupero era troppo prolungato per l'uso di routine.
Effetti di alcuni derivati delle benzodiazepine sull'iperlipidemia indotta da Triton WR-1339 nei ratti.Somministrazione orale delle benzodiazepine (diazepam, lorazepam, clordiazepossido, bipotassio) clorazepato) nell'iperlipidemia indotta da Triton WR-1339 (200 mg/kg, prelievo di sangue 18 ore dopo) nei ratti ha provocato una marcata diminuzione dei lipidi totali sierici, dei livelli di colesterolo totale e di trigliceridi e alterazioni del contenuto di acidi grassi liberi e di glicerolo libero. le dosi ottimali di diazepam, lorazepam, clordiazepossido e bipotassio clorazepato sono state stimate pari a 5 mg/kg. Altre benzodiazepine, vale a dire oxazepam, medazepam e nitrazepam, hanno provocato solo lievi variazioni nei livelli sierici di lipidi, mentre con grandaxin non è stata osservata alcuna variazione. diazepam e lorazepam hanno determinato le stesse modifiche nel contenuto sierico lipidico del clofibrato (90 mg/kg, PO). Se diazepam, lorazepam, clordiazepossido e bipotassio clorazepato sono stati somministrati a dosi di 5 mg/kg nei ratti trattati con Triton WR-1339 (prelievo di sangue effettuato 3 ore dopo), è stata osservata una significativa diminuzione dei livelli di lipidi e trigliceridi totali. Il livello di glicerolo libero si è alterato solo dopo la somministrazione di clordiazepossido, che ha determinato una significativa riduzione.
Ipercolesterolemia neurogena: influenza dei farmaci autonomi.Undici sostanze in grado di aumentare o ridurre le capacità alfa e beta adrenergiche del sistema nervoso autonomo sono stati somministrati a ratti che presentavano ipercolesterolemia ipotalamica e a controlli normali. Solo gli agenti bloccanti beta-adrenergici propranololo e possibilmente 6-OH dopamina sono stati osservati alterare (aumentare) la concentrazione di colesterolo sierico, e ciò si è verificato sia negli animali sperimentali che in quelli di controllo. è stato osservato che l'atropina, né l'agente che riduce la serotonina, la rho-clorofenilalanina, né l'antagonista della serotonina ciproeptadina, alterano i livelli sierici di colesterolo Tale assenza di effetto è stata osservata anche con metaraminolo, fenossibenzamina, isoproterenolo, epinefrina, reserpina e alfa-metil tirosina.
Purificazione e caratterizzazione della lipoproteina lipasi dal cuore umano.La lipoproteina lipasi del cuore umano è stata purificata mediante cromatografia di affinità su eparina-Sepharose 4B. Quando estratti grezzi di la polvere di acetone del cuore è stata applicata alla colonna, circa il 40% dell'attività totale della lipasi è stata legata al gel e quindi eluita con NaCl 1,5 M. A questo punto l'enzima eluito è stato purificato 1900 volte. attività lipolitica. Il peso molecolare minimo della proteina era di 60.000 come determinato mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide in presenza di sodio dodecil solfato. L'enzima purificato era altamente instabile; tuttavia, la sua attività potrebbe essere parzialmente stabilizzata a --20 ° C dall'albumina sierica bovina, glicerolo , o glicole etilenico. L'attività dell'enzima purificato (i) aveva un pH ottimale tra 7,8 e 8,0; (ii) richiedeva siero per la piena attività enzimatica; apoC-II poteva essere sostituito dal siero; (iii) era inibito attivato da apoC-I in presenza di substrato attivato; (iv) è stato marcatamente inibito da NaCl; e (v) è stato stimolato dall'eparina.
Azioni dei narcotici sul metabolismo cerebrale della dopamina e loro rilevanza per gli effetti "psicomotori".Viene fornita una rassegna sugli effetti degli analgesici narcotici, in particolare della morfina, sul metabolismo della dopamina nel corpo striato e sulle relazioni di questi effetti con la motilità e i fenomeni "psicomotori". Nei ratti, dosi acute di morfina riducono la neurotrasmissione dopaminergica nel cervello, senza bloccare i recettori dopaminergici postsinaptici. il trattamento dei ratti con la morfina inverte questi effetti acuti della morfina e induce i sintomi di un aumento della neurotrasmissione dopaminergica nel cervello. Nei topi e nei gatti, d'altra parte, le dosi acute di morfina sembrano aumentare la neurotrasmissione dopaminergica. Gli effetti della morfina sul metabolismo della dopamina striatale sembrano essere un modello adatto per studiare gli effetti specifici degli oppioidi a livello cellulare Inoltre, potrebbero anche essere responsabili di alcuni effetti specifici dei narcotici sul comportamento obs erved negli animali e nell'uomo.
Deacetilazione metabolica: studi in vitro e in vivo nell'uomo, nel ratto, nel cane e nella scimmia rhesus con derivati isomerici del tetraidroisochinolile del 3,4-dimetilbenzil acetato.Le attività farmacologiche di una miscela racemica di derivati tetraidroisochinolilici di 3,4-dimetilbenzil acetato, (+/-) Ro 03-4661 e i corrispondenti isomeri risolti (+) Ro 03-4661 e (-) Ro 03-4661 hanno stato studiato nel ratto e nella scimmia rhesus. Il racemo e l'isomero (-) hanno mostrato attività analgesica narcotica per via orale in entrambe le specie. Gli studi sul metabolismo dei farmaci hanno indicato che l'attività era probabilmente dovuta alla deacetilazione metabolica al corrispondente carbinolo Ro 03-4632 la deacetilazione non si è verificata nel cane, ma è stata osservata nel ratto e nella scimmia rhesus. In entrambe queste specie l'idrolisi è stata più estesa dopo somministrazione orale che parenterale. Gli studi in vitro hanno anche mostrato una notevole variazione delle specie nella capacità delle esterasi ematiche e tissutali idro lisare i diversi isomeri stereochimici.
Proprietà farmacologiche generali di un nuovo antitosse non oppiaceo: zipeprol (3024 CERM). I. Azione sulla funzione respiratoria e sulla tossicità acuta.1- Il (2-metossi-2-fenil)-etil-4-(2-idrossi-3-metossi-3-fenil)-propil-iperazina-dicloridrato (zipeprol, Respilene) è una sostanza a struttura chimica non fenantrenica. gatto, antagonizzava la tosse indotta dalla stimolazione del nervo laringeo superiore o dall'eccitazione meccanica diretta dei recettori tracheo-bronchiali sensibili. L'efficacia di zipeprol dopo somministrazione enterale ha permesso sia di stabilire un buon assorbimento intestinale sia di classificarlo favorevolmente in relazione alcuni dei principali prodotti antitosse di riferimento; codeina, codetilina, destrometorfano, difenidramina e pentossiverina. L'attività di zipeprol era superiore o uguale a quella di tutte queste sostanze, ad eccezione della codeina. Le proprietà antitosse sembravano essere dovute ad un'azione centrale. Altre proprietà sono state dimostrazione ated che suggeriscono almeno un meccanismo supplementare nell'inibizione della tosse, oltre all'azione centrale. Questi consistevano in leggere proprietà antistaminiche e anticolinergiche, marcata potenza anestetica locale e attività broncospasmolitica. Quest'ultima proprietà è stata dimostrata dall'inibizione del broncospasmo indotto da istamina e serotonina nella cavia. In vitro, utilizzando espettorato umano, zipeprol ha avuto un'azione mucolitica, dimostrata da una diminuzione della viscosità dell'espettorato e dalla lisi delle fibrille di DNA e AMPS. Nel cane, a dosi elevate, zipeprol a differenza della codeina, non ha inibito la stimolazione centrale della respirazione da parte dell'ipercapnia, inoltre non è stata osservata alcuna modifica della dinamica ventilatoria o dell'emogasanalisi. Sulla base di questi risultati, si può ritenere che zipeprol non possieda alcun effetto depressivo respiratorio anche nelle gamme superiori delle sue dosi antitosse.
[Attività broncospasmolitica di aerosol acquosi in cani anestetizzati (autore\'s trad.)].Viene descritta una modifica del metodo di Konzett e Rössler. Questa modifica consente la somministrazione di soluzioni farmaceutiche atomizzate ai cani anestetizzati. Si ottengono così informazioni sull'attività broncodilatatoria di un farmaco e sull'inizio e la durata dell'effetto. Due anticolinergici (atropinsolfato e ipratropiobromuro) e tre stimolanti beta-adrenergici (isoprenalina, orciprenalina e salbutamolo) sono stati studiati. Dopo la somministrazione locale come aerosol, gli anticolinergici si sono dimostrati potenti quanto o addirittura più degli stimolanti dei recettori beta-adrenergici.
Eteri basici di cicloesilfenoli con attività beta-bloccante: sintesi e studio farmacologico dell'exaprololo.Il lavoro descrive la preparazione e lo studio delle proprietà farmacologiche di una serie di derivati con formula generale. (vedi articolo) dove R è un radicale cicloesile o cicloesenilico e R1 è un idrogeno, metile o cicloesile. I composti con un solo radicale cicloalifatico orto alla catena basica, ed in particolare quello con un cicloesile (exaprololo), si sono rivelati particolarmente attivi nel bloccare i recettori beta-adrenergici, come antiaritmici e anestetici locali, mentre l'introduzione di un secondo radicale o lo spostamento del radicale cicloalifatico in posizione meta o para ha determinato le dette attività farmacologiche scomparire quasi del tutto, ad eccezione dell'azione anestetica locale.
La regolazione dell'attività della triptofano pirrolasi nel fegato di ratto mediante ridotta nicotinammide-adenina dinucleotide (fosfato). Esperimenti con glucosio e nicotinamide.1. Somministrazione cronica di il glucosio o la nicotinammide nell'acqua da bere inibiscono l'attività della triptofano pirrolasi del fegato di ratto, e la successiva astinenza ne provoca un potenziamento. L'attività enzimatica è inoltre inibita dalla somministrazione nell'acqua da bere di saccarosio, ma non di fruttosio, che è in grado di prevenire l'effetto glucosio.2 L'inibizione da parte del glucosio o della nictinamide non è dovuta a una sintesi difettosa dell'apoenzima né a una ridotta disponibilità di cofattori 3. L'inibizione da parte della nicotinammide è invertita dalla rigenerazione di NAD+ e NADP+ epatici in vivo mediante somministrazione di fruttosio, piruvato o fenazina metosolfato. il glucosio è anche invertito dai suddetti agenti e da NH4Cl. L'inversione dell'inibizione da parte del glucosio o della nicotinammide si ottiene anche in vitro mediante l'aggiunta di NAD+ o NADP+. 4. Il glucosio o la nicotinamide aumentano il fegato [NADPH]. [NADP+] è anche aumentato dalla nicotinamide. [NADPH] è anche aumentato dal saccarosio, ma non dal fruttosio, che impedisce l'effetto del glucosio. Il metosolfato di fenazina previene l'aumento di [NADPH] causato sia dal glucosio che dalla nicotinamide. 5. Si suggerisce che l'inibizione dell'attività della triptofano pirrolasi da parte del glucosio o della nicotinammide sia mediata sia da NADPH che da NADH.
Gli effetti della digestione proteolitica da parte della tripsina sulla struttura e le proprietà catalitiche della ridotta nicotinammide-adenina dinucleotide deidrogenasi dai mitocondri del cuore bovino.1. Alle 21 l'incubazione di gradi C della NADH-ubichinone-1 reduttasi (Complesso 1) con tripsina ha causato l'inibizione selettiva dell'attività del nucleotide transidrogenasi della nicotinammide La riduzione di K3Fe(CN)6 da parte di NADH o NADPH non è stata influenzata, ma una lenta diminuzione del tasso di riduzione di ubiquinone-1 mediante NADH 2. La dipendenza dal pH dell'attività del nucleotide transidrogenasi della nicotinammide differiva nel Complesso I e nel Complesso I trattato con tripsina. aveva un pH ottimale di circa 5,5 o meno 3. L'attività della tripsinlabile transidrogenasi è stata specificamente inibita dal butanedione o dal fenilgliossale ed è stata identificata con l'enzima che catalizza l'attività della transidrogenasi legata all'energia in submitoc particelle hondrial. 4. L'elettroforesi su gel di poliacrilammide in presenza di sodio dodecil solfato ha rivelato che la tripsina ha causato la degradazione di un polipeptide di peso molecolare 20500 in parallelo con la perdita dell'attività della transidrogenasi. 5. A 30 gradi C e concentrazioni di tripsina superiori, la velocità di riduzione di K3Fe(CN)6 da parte di NADH o NADPH è diminuita lentamente. È stata osservata un'aumentata labilità dell'attività della NADH-K3Fe(CN)6 reduttasi alla tripsina quando il fosfolipide endogeno del complesso I è stato esaurito dal detergente o dal trattamento con fosfolipasi A. 6. L'elettroforesi su gel di poliacrilammide ha indicato che la rimozione del fosfolipide ha consentito una degradazione molto più estesa dei polipeptidi costituenti da parte della tripsina. Le subunità della deidrogenasi a basso peso molecolare (tipo II) (53000 e 26000 mol. wt. ) erano, tuttavia, relativamente resistenti alla tripsina anche nei preparati impoveriti di fosfolipidi.
La via di secrezione del procollagene. L'influenza di alfaalfa\'-bipiridile, colchicina e antimicina A sul processo di secrezione nelle cellule del tendine e della cartilagine di pulcino embrionale.I. Le cellule del tendine del pulcino embrionale sono state etichettate con impulsi per 4 minuti con [14C] prolina e i polipeptidi etichettati con 14C sono stati inseguiti con prolina non etichettata per un massimo di 30 minuti. Isolamento delle frazioni subcellulari durante il periodo di inseguimento e il loro analisi successive per peptidi marcati con 14C sensibili alla collagenasi batterica hanno dimostrato il trasferimento di polipeptidi procollagene dalle frazioni microsomiali ruvide a quelle lisce e quindi al mezzo extracellulare Analisi parallele delle frazioni arricchite di Golgi hanno indicato il coinvolgimento di questo organello nella via di secrezione del procollagene. L'elettroforesi su gel di sodio dodecilsolfato/poliacrilammide dei polipeptidi marcati con 14C presenti nelle frazioni arricchite di Golgi ha dimostrato che i polipeptidi del procollagene erano tutti presenti a s componenti pro-gamma legati al disolfuro. 2. Quando studi cinetici simili sul trasporto intracellulare del procollagene sono stati condotti con cellule cartilaginee di pulcino embrionale, sono stati ottenuti risultati quasi identici, ma il tasso di traslocazione del procollagene cartilagineo era significativamente più lento di quello osservato per il procollagene tendineo. 3. Quando l'idrossilazione dei polipeptidi del procollagene è stata inibita dall'alfaalfa\'-bipiridile, i polipeptidi nascenti si sono accumulati nella frazione microsomiale ruvida. 4. Quando le cellule sono state marcate a impulsi per 4 minuti con [14C)prolina e il marcatore è stato inseguito in presenza di colchicina, la secrezione di procollagene è stata inibita e nelle frazioni arricchite di Golgi è stato osservato un accumulo intracellulare di polipeptidi marcati con 14C di procollagene. 5. L'energia-dipendenza del trasporto intracellulare del procollagene è stata dimostrata in esperimenti in cui si è scoperto che l'antimicina A inibisce il trasferimento dei polipeptidi del procollagene dal reticolo endoplasmatico ruvido a quello liscio. 6. Si conclude che il procollagene segue la classica via di secrezione presa da altre proteine extracellulari.
Studi di titolazione di ioni idrogeno sulle membrane degli eritrociti.1. La titolazione H+ è stata utilizzata per rilevare la presenza di gruppi ionizzabili sulle membrane plasmatiche degli eritrociti umani. Tra pH 2,9 e 11,3, due picchi significativi di associazione/dissociazione H+ si verificano nel differenziale da della curva di titolazione, uno a pH 3. 1. E l'altro a pH 10, 3. 2. Dopo l'interruzione della struttura della membrana per esposizione a pH elevato o mediante l'aggiunta di sodio dodecil solfato, sono stati osservati massimi di associazione/dissociazione H+ a pH 3,1, 4,3, 6,5, 10,3 e 10. 3. Sono stati utilizzati saggi spettrofotometrici e trattamenti chimici selettivi per identificare molti dei residui titolabili. 4. Il grado di interazione elettrostatica tra gruppi carichi titolabili è stato studiato confrontando le caratteristiche di titolazione delle membrane prima e dopo la modifica della struttura della membrana.
Modifiche correlate all'autofagia delle arilsolfatasi A e B nei lisosomi epatici di ratto.L'attività totale dell'arilsolfatasi e le relative attività delle arilsolfatasi lisosomiali A e B sono state misurata nel fegato di ratti di controllo e ratti sottoposti a trattamenti che provocano autofagocitosi epatica L'attività totale dell'arilsolfatasi epatica è risultata aumentata nei ratti affamati e affamati trattati con glucagone, ma non nei ratti operati con finta ed epatectomizzati. -frazione lisosomiale (ML) sono state separate mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide a pH 8,8, sono state rese visibili incubando i gel con p-nitrocatecolo solfato come substrato e misurate mediante densitometria quantitativa Nei controlli non trattati, le arilsolfatasi A e B erano 41,4 + /- 0,5% e 58,6 +/- 0,5% dell'attività arilsolfatasi totale rispettivamente; il rapporto attività arilsolfatasi A/arilsolfatasi B era 0,71. Tutti i trattamenti sperimentali hanno prodotto un significativo t diminuzione della percentuale di arilsolfatasi lisosomiale presente come forma A e aumento di quella presente come forma B, e si riduce il rapporto di attività arilsolfatasi A/arilsulfatasi B. L'entità di questi cambiamenti è aumentata nella seguente direzione: fame per 24h=sham epatectomia inferiore a glucagone + fame inferiore a epatectomia subtotale. Questi risultati indicano che il rapporto di attività arilsulfatasi A/arilsulfatasi B nei lisosomi epatici di ratti normali è mantenuto entro limiti piuttosto ristretti e questo rapporto diminuisce durante l'aumentata autofagocitosi. Questi risultati, insieme alle osservazioni che suggeriscono che l'arilsolfatasi B possa essere una forma parzialmente degradata dell'arilsolfatasi A, sono coerenti con l'idea che la forma A sia convertita più rapidamente nella forma B durante l'autofagia, a causa dell'attività digestiva dell'altro lisosomiale. idrolasi presenti nei vacuoli autofagici.
Attività della citrato sintasi e dell'isocitrato deidrogenasi legata a NAD+ e NADP+ nei muscoli di vertebrati e invertebrati.1. Le attività della citrato sintasi, L'isocitrato deidrogenasi legato al NAD+ e al NADP+ è stato misurato nei muscoli di un gran numero di animali, al fine di fornire qualche indicazione sull'importanza del ciclo dell'acido citrico in questi muscoli. diviso in tre classi. Innanzitutto, in un certo numero di muscoli sia vertebrati che invertebrati, le attività di tutti e tre gli enzimi sono molto basse. Si suggerisce che i muscoli utilizzino energia a un ritmo molto basso o si basino in gran parte sulla glicolisi anaerobica per una maggiore velocità di formazione di energia. In secondo luogo, la maggior parte dei muscoli del volo degli insetti contiene elevate attività di citrato sintasi e isocitrato deidrogenasi legata al NAD+, ma le attività dell'enzima legato al NADP+ sono molto basse. Le attività elevate indicano il de dipendenza del volo degli insetti dall'energia generata attraverso il ciclo dell'acido citrico. I muscoli del volo dei coleotteri studiati contengono elevate attività di entrambe le isocitrato deidrogenasi. In terzo luogo, altri muscoli sia dei vertebrati che degli invertebrati contengono elevate attività di citrato sintasi e isocitrato deidrogenasi NADP+-liniked. Molti, se non tutti, questi muscoli sono in grado di sostenere periodi prolungati di attività meccanica (ad esempio muscolo cardiaco, muscoli pettorali di alcuni uccelli). Di conseguenza, per supportare questa attività, il carburante deve essere fornito continuamente al muscolo attraverso il sistema circolatorio che, nella maggior parte degli animali, trasporta anche ossigeno in modo che l'energia possa essere generata dalla completa ossidazione del carburante. Si suggerisce che la bassa attività dell'isocitrato deidrogenasi legata al NAD+ in questi muscoli possa essere coinvolta nell'ossidazione dell'isocitrato nel ciclo quando i muscoli sono a riposo. 2. Un confronto delle attività massime degli enzimi con il flusso massimo attraverso il ciclo suggerisce che, nel muscolo di volo degli insetti, l'isocitrato deidrogenasi legata al NAD+ catalizza una reazione di non equilibrio e la citrato sinteasi catalizza una reazione di quasi equilibrio. In altri muscoli, i dati sull'attività enzimatica suggeriscono che sia la reazione della citrato sintasi che quella dell'isocitrato deidrogenasi sono quasi all'equilibrio.
La purificazione e le proprietà della glutammina sintetasi dal citosol dei noduli di radice di soia.La parte principale dell'attività della glutammina sintetasi nei noduli radicali di piante di soia è associata con il citosol piuttosto che con batterioidi Rhizobium japonicum La glutammina sintetasi rappresenta circa il 2% della proteina solubile totale nel citosol nodulo La glutammina sintetasi dal citosol nodulo è stata purificata mediante una procedura che prevede il frazionamento con solfato di protamina, ammonio solfato e glicole polipropilenico, cromatografia su DEAE-Bio-Gel A e Bio-Gel A-5m e cromatografia di affinità su colonne di glutammato-agarosi. Il preparato purificato è apparso omogeneo nell'ultracentrifuga analitica. Da esperimenti di sedimentazione-equilibrio un peso molecolare. di circa 376000 è stato determinato per l'enzima nativo e 47300 per l'enzima nel cloruro di guanidinio. Da questi dati e misurazioni di micrografie elettroniche, abbiamo concluso che g la lutamina sintetasi dal citosol nodulo consiste di otto subunità disposte in due serie di tetrameri planari che formano una configurazione cubica con dimensioni di circa 10 nm (100 A) su ciascun lato. La glutammina sintetasi dal citosol nodulo ha un contenuto più elevato di glicina e prolina e un contenuto inferiore di fenilalanina rispetto alla glutammina sintetasi che è stata preparata dai semi di pisello. L'enzima citosol contiene quattro molecole di semicistina per subunità, che è in contrasto con due riportate per l'enzima dai semi di pisello. L'attività enzimatica è sorprendentemente influenzata dalla proporzione relativa di Mg2+ e Mn2+ nel mezzo di analisi. L'attività è inibita dagli inibitori del feedback ed è influenzata dalla carica energetica.
Nefropatia da analgesici.La nefropatia da analgesici si verifica più comunemente in Australia, dove è la seconda causa più frequente di insufficienza renale. Mentre le ragioni di un abuso diffuso degli analgesici sono poco conosciuti, le conseguenze dell'abuso sono ora ben riconosciute. Viene posta un'enfasi crescente sulla sindrome analgesica e sull'aterosclerosi accelerata osservata in questi pazienti. L'attenzione nell'articolo è rivolta ai modi in cui la sindrome analgesica può essere riconosciuta e l'abuso di analgesici è cessato. Viene presentato un approccio terapeutico che consente il successo della sospensione dell'analgesico in quasi tutti i pazienti.
Un caso di tiflite pneumococcica.Un uomo di 29 anni ha avuto dolori addominali da 24 ore. Questo e i risultati di un esame addominale sono stati tipico dell'appendicite acuta. Soffriva di sinusite da due settimane. Al momento dell'operazione, l'appendice era normale; c'era un ascesso nella parete cecale, dal cui essudato crescevano pneumococchi. È stata eseguita un'appendicectomia incidentale e il paziente è stato trattato con successo con lincomicina cloridrato , e più tardi, cefalexina monoidrato. È possibile che la tiflite fosse secondaria all'infezione delle vie respiratorie superiori.
Paragangliomatosi associata ad adenomi endocrini multipli.Una donna di 19 anni aveva paragangliomi extra-surrenalici multipli funzionanti, un adenoma ipofisario associato ad acromegalia, iperplasia paratiroidea e anomalie pigmentarie. Questo caso differisce dai casi descritti in precedenza di adenomatosi endocrina multipla (MEA) e presenta caratteristiche che collegano le classiche sindromi MEA di tipo 1 e 2 e forse la malattia di Von Recklinghausen. La coesistenza di feocromocitoma con acromegalia è estremamente rara, e l'associazione con paragangliomi extra-surrenalici sembra essere unica. La proliferazione delle cellule parafollicolari tiroidee non può essere dimostrata da studi immunoistochimici o al microscopio elettronico. Il grande numero e l'ampia distribuzione di paragangliomi, che vanno dal collo al bacino, è un'altra caratteristica unica di questo caso Il concetto di neurocrestopatia o di un sistema cellulare di polipeptidi endocrini (APUD) può offrire una spiegazione per l'in relazione di queste diverse escrescenze.
Arterite di Takayasu. Una correlazione arteriografico-patologica.Riportiamo una correlazione aortografico-patologica in un paziente con arterite di Takayasu. L'attività infiammatoria nell'arterite di Takayasu gradualmente diminuisce e, di conseguenza, l'aspetto istologico passa attraverso un ciclo di cambiamenti, che vanno dall'infiammazione florida acuta a un vecchio vaso sfregiato. A un esame patologico macroscopico, l'intima aortica mostra frequentemente rughe longitudinali e abbaiare di alberi indistinguibili dall'aortite sifilitica. , l'aterosclerosi secondaria oscura totalmente i cambiamenti sottostanti dell'aortite. In tali casi, una ricerca ravvicinata a vari livelli dell'aorta può scoprire focolai persistenti di arterite e quindi consentire l'identificazione dei cambiamenti patologici come secondari a un'aortite precedente.
Farmacocinetica della fenotiazina dei globuli rossi ed effetti clinici. Reazioni distoniche acute.La farmacocinetica della fenotiazina, butaperazina, è stata studiata in relazione alle reazioni distoniche acute Le distonie sono apparse sulla diminuzione delle concentrazioni del farmaco, più di un'emivita dopo il picco delle concentrazioni plasmatiche e dei globuli rossi (RBC) di butaperazina. non lo hanno fatto. Concludiamo che i livelli di fenotiazina nei globuli rossi possono riflettere più chiaramente la concentrazione del farmaco in siti cerebrali critici rispetto ai semplici livelli plasmatici del farmaco. Inoltre, le reazioni distoniche possono essere il risultato della sensibilità differenziale di due o più sistemi recettoriali al blocco del recettore da parte di agenti antischizofrenici.
Dose comparate e costi dei farmaci antipsicotici.Clinicamente è utile avere una tabella che elenchi le dosi equivalenti dei vari neurolettici ad uno standard, come come clorpromazina. Questo articolo deriva tali dati rivedendo studi controllati in doppio cieco che utilizzavano uno schema di dosaggio flessibile di neurolettici nel trattamento di pazienti schizofrenici. Ciascun neurolettico viene quindi convertito in equivalenti di clorpromazina da 100 mg. Questa tabella di comparabilità del dosaggio derivata empiricamente viene confrontata con una tabella simile derivata dalle opinioni di esperti. Poiché queste dosi comparabili producono quantità equivalenti di attività antipsicotica, è stato quindi calcolato il costo per fornire tale farmaco ed è stata costruita una tabella di confronto dei costi dei diversi neurolettici. In valori assoluti, le differenze di costo tra i farmaci sono piccoli. Tuttavia, per qualsiasi farmaco, si ottengono grandi risparmi quando si preme la capsula o compressa più grande possibile per raggiungere la dose desiderata cullato.