Split (1)

train · 17.2M rows

text stringlengths 9 6.27k
Peptidasi di membrana del bordo a spazzola intestinale di ratto. II. Proprietà enzimatiche, immunochimica e interazioni con le lectine di due diverse forme dell'enzima.Le proprietà di sono state studiate due peptidasi purificate derivate dalla membrana del bordo a spazzola intestinale del ratto. Il pH ottimale, la stabilità al calore, le specificità del substrato e il fabbisogno di ioni metallici dei due enzimi e gli effetti degli inibitori sulle loro attività erano quasi identici. Gli isoenzimi catalizzati l'idrolisi di un'ampia gamma di peptidi contenenti da 2 a 8 residui amminoacidici. Gli enzimi sono aminopeptidasi;non è stata trovata evidenza di attività carbossipeptidasi o endopeptidasi. Per l'idrolisi, sembra esserci un requisito assoluto di un L-amminoacido al NH2-terminale del substrato peptidico. C'era un requisito simile ma meno assoluto per il penultimo amminoacido NH2-terminale. Quindi, sebbene i peptidi del tipo L-amminoacil-L-prolina, L-am inoacil-L-prolil-(L-amminoacido)n, o L-amminoacil-D-amminoacido non sono stati idrolizzati, la L-leucil-beta-naftilamide potrebbe essere utilizzata come substrato. Gli enzimi sembravano essere metalloenzimi in quanto gli agenti chelanti ioni metallici potrebbero inibire le loro attività. La Co2+ ha parzialmente ripristinato le attività perse per chelazione. Gli studi di immunodiffusione hanno mostrato che i due enzimi erano immunologicamente identici. Gli antisieri antipeptidasi erano specifici per gli enzimi e non reagivano con altri costituenti della cellula intestinale. Entrambi gli enzimi hanno siti di legame per la lectina fitoemoagglutinina che riconosce i residui di N-acetilgalattosamina situati in corrispondenza o vicino alle posizioni terminali delle catene di carboidrati glicoproteici. Sia la lectina che gli anticorpi hanno inibito le attività enzimatiche, ma i meccanismi di inibizione sembravano essere diversi.
Attivazione della guanilato ciclasi dei linfociti splenici di topo da parte dello ione calcio.Il livello di guanosina 3\',5\'-monofosfato ciclico (cGMP) nel i linfociti splenici di topo erano aumentati di circa 2-3 volte dalla concanavalina A. Questo aumento era completamente dipendente dalla presenza di Ca2+ nel mezzo Gli omogenati di linfociti splenici di topo contenevano una significativa attività della guanilato ciclasi [EC 4.6.1.2] in entrambi i 105.000 X g (60 min) di particolato e surnatante ed entrambe le frazioni hanno richiesto Mn2+ per la piena attività Lo ione calcio (3 mM) ha attivato la guanilato ciclasi solubile 3 volte a una concentrazione relativamente bassa di Mn2+ (meno di 1 mM) ma ha inibito leggermente l'enzima particolato a tutte le concentrazioni di Mn2+ testate. La stessa concanavalina A non ha stimolato nessuna delle due frazioni di guanilato ciclasi. Pertanto questi risultati suggeriscono che l'aumento del livello di cGMP nei linfociti da parte della concanavalina A potrebbe essere determinato dalla stimolazione dell'assorbimento e dall'attivazione del Ca2+. n di guanilato ciclasi solubile da parte di quest'ultima.
Trinitrofenilazione degli acidi nucleici e dei loro costituenti.1. In condizioni relativamente blande, gli acidi nucleici e i loro costituenti sono stati trinitrofenilati con 2,4,6- trinitrobenzensolfonato (TNBS) in soluzione acquosa (pH 8-11), che dà i derivati trinitrofenilici (TNP) di colore rosso-arancio. \'- e 3\'-gruppi ossidrile delle porzioni ribosio di nucleosidi o nucleotidi sono stati trinitrofenilati per formare complessi di Meisenheimer 2. La preparazione di derivati TNP (N2-TNP-guanina, -guanosina, N2, O-bis-TNP- guanosina, O-TNP-guanosina, -adenosina, -citidina e -uridina), i loro tassi di formazione, spettri di assorbimento (UV, visibile e infrarosso), coefficienti di estinzione molare, valore Rf, mobilità elettroforetica e stabilità in acido o soluzione alcalina, sono presentati 3. Trinitrofenilazione di diversi tipi di acidi nucleici d è stato indagato. Il DNA del timo di vitello e l'RNA di trasferimento del lievito hanno mostrato una resistenza alla trinitrofenilazione rispetto alla guanosina 3\'(2\')-fosfato, all'RNA di lievito o al DNA del timo di vitello denaturato. Il TNP-RNA ha mostrato resistenza all'azione delle ribonucleasi T1 e T2 [EC 3.1.4.8 e 3.1.4.23]. 4. Le reazioni di trinitrofenilazione utilizzando 2,4,6-trinitroclorobenzene e 2,4,6-trinitrofluorobenzene sono state confrontate con quelle utilizzando TNBS per quanto riguarda la specificità e la velocità di reazione.
Formazione di acido piridinico-2,6-dicarbossilico (acido dipicolinico) in Bacillus subtilis. II Formazioni non enzimatiche ed enzimatiche di acido dipicolinico da alfa, acido epsilon-dichetopimelico e ammoniaca .La formazione non enzimatica di acido dipicolinico (DPA) da acido dichetopimelico e ammoniaca è stata chiaramente dimostrata utilizzando un nuovo metodo per l'analisi del DPA. Le velocità di reazione della formazione di DPA erano quasi le stesse in condizioni aerobiche e anaerobiche. Quantità quasi equimolecolari di DPA e acido tetraidrodipicolinico sono state rilevate nella miscela di reazione spontanea. La reazione spontanea sembrava essere dovuta alla dismutazione dell'acido diidrodipicolinico, con conseguente DPA e acido tetraidrodipicolinico. Il pH apparente ottimale della reazione spontanea era 8,2 e la velocità massima di La formazione di DPA è stata osservata con un rapporto molare di 1 : 4 tra acido dichetopimelico e ammoniaca La velocità della reazione spontanea è stata stimolata da solfato ferroso, FMN e riboflavina. la dipicolinato reduttasi catalizza la riduzione del diidrodipicolinato, preparato dal piruvato e dalla beta-semialdeide aspartica, con NADPH come riducente. La reduttasi è stata isolata da Bacillus subtilis e si è scoperto che stimola la formazione di DPA dall'acido dichetopimelico e dall'ammoniaca. La formazione enzimatica di DPA era assolutamente dipendente dall'ossigeno e il pH ottimale era 6,4. L'azione catalitica dell'enzima era simile a quella dell'ossidasi. Vengono proposti possibili meccanismi di formazione di DPA dall'acido dichetopimelico e dall'ammoniaca.
Studi sulle fosfolipasi da Streptomyces. II. Purificazione e proprietà di Streptomyces hachijoensis fosfolipasi D.1. Fosfolipasi D [EC 3.1.4.4] da Streptomyces hachijoensis è stato purificato circa 570 volte mediante cromatografia su colonna su DEAE-cellulosa e Sephadex G-50 seguita da focalizzazione isoelettrica 2. La preparazione purificata è risultata omogenea sia mediante immunodiffusione che elettroforesi su gel di poliacrilammide 3. È stato trovato il punto isoelettrico essere intorno a pH 8,6 e il peso molecolare era di circa 16.000. 4. L'enzima ha un'attività massima a pH 7,5 a 37 gradi. La temperatura ottimale è di circa 50 gradi a pH 7,5, utilizzando un'incubazione di 20 minuti. 5. L'enzima era stabile a 50 gradi per 90 minuti A pH neutro, tra 6 e 8, l'enzima ha mantenuto più del 95% della sua attività su 24 ore di incubazione a gradi 25. Tuttavia, l'enzima ha perso l'80% della sua attività nelle stesse condizioni a pH 4.0 6. L'enzima è stato leggermente stimolato da Ca2+, Mn2+ e Co2+, e significativamente da Triton X-100 ed etere etilico. È stato inibito da Sn2+, Fe2+, Fe3+, Al3+, EDTA, sodio dodecil solfato, sodio colato e cetilpiridinio cloruro. 7. Questa fosfolipasi D idrolizza fosfatidiletanolammina, fosfatidilcolina, cardiolipina, sfingomielina, fosfatidilserina e lisofosfatidilcolina, liberando le basi corrispondenti. 8. Il valore Km era 4 mM, determinato con fosfatidiletanolammina come substrato.
Studi cinetici e di equilibrio su ricombinazioni autologhe ed eterologhe di catene pesanti e leggere di proteine del mieloma.1. La cinetica della reazione di ricombinazione eterologa di proteine alchilate Le catene H di una proteina del mieloma (Jo) con le catene L alchilate di un'altra proteina del mieloma (Ita) sono state studiate seguendo le variazioni nel tempo del dicroismo circolare a 235 nm e i risultati sono stati confrontati con quelli della ricombinazione autologa delle catene Jo-H con catene Jo-H riportate in precedenza (T. Azuma et al. (1975) J. Biochem. 77, 473-479 e il documento precedente). Anche la reazione eterologa ha seguito una cinetica di secondo ordine. La costante di velocità di secondo ordine (kapp ) per la ricombinazione eterologa era circa sette volte inferiore a quella per la ricombinazione autologa a pH 5,5, mentre erano simili tra pH 4,2 e 4,7 2. Le costanti di associazione apparente (Kapp) per la reazione, H2+L2=H2L2, sono state determinate da misurando le ellitticità a 235 nm di miscele di catene H e L in vari rapporti. I valori di Kapp per le ricombinazioni autologhe ed eterologhe erano entrambi dipendenti dal pH e cambiati da 10 (6) M-1 a pH 3,9 a 108 M-1 a pH 4,3. Utilizzando questi valori di kapp e Kapp, l'intervallo di tempo per la dissociazione di H2L2 autologo in H2 e L2 a pH 4,3 è stato stimato in 80 ore.
Legame di N-acetil-chitotriosio al lisozima umano.L'interazione di N-acetil-chitotriosio ((GlcNAc)3) con il lisozima umano [ EC 3.2.1.17] è stato studiato a vari valori di pH misurando i cambiamenti nella banda dicroica circolare (CD) a 294 o 255 nm e i dati sono stati confrontati con i risultati per i lisozimi di gallina e tacchino riportati in precedenza (Kuramitsu et al. (1974) J. Biochem.76, 671-683; Kuramitsu et al. (1975) J. Biochem. 77, 291-301). La dipendenza dal pH della costante di legame di (GlcNAc)3 al lisozima umano era diversa da quella di gallina e lisozimi di tacchino I carbossili catalitici del lisozima umano, Asp 52 e Glu 35, non sono stati perturbati dal legame di (GlcNAc) 3. Ciò è coerente con le precedenti scoperte secondo cui i valori di pK macroscopici di Asp 52 e Glu 35 del lisozima umano sono 3,4 e 6.8 a 0.1 forza ionica e 25 gradi ed erano invariati sulla complessazione con (GlcNAc) 3. Un gruppo ionizzabile con pK 4.5, che partecipa al legame di (GlcNAc )3 al lisozima di gallina ed è stato assegnato come Asp 101, non ha partecipato al legame del saccaride al lisozima umano. Tra pH 9 e 11, le costanti di legame di (GlcNAc)3 al lisozima di gallina sono rimaste invariate, mentre per il lisozima umano è stata osservata la perturbazione di un gruppo ionizzabile con pK da 10,5 a 10,0. Questo gruppo potrebbe essere Tyr 62 nella fessura del sito attivo. Le costanti di legame del (GlcNAc)3 a molecole di lisozima umano aventi diverse forme di protonazione microscopica, rispetto ai carbossili catalitici, sono state stimate utilizzando le costanti di legame ottenute nei presenti esperimenti e le costanti di ionizzazione microscopica dei carbossili catalitici ottenuti in precedenza. Tutte e quattro le specie di lisozima umano avevano costanti di legame simili a (GlcNAc)3. Questo risultato è diverso da quelli dei lisozimi di gallina e tacchino.
Studi enzimatici su un sistema cellulasi di Trichoderma viride. III. Proprietà di transglicosilazione di due componenti di cellulasi di tipo random.Due cellulasi altamente purificate [EC 3.2 .1.4], II-A e II-B, sono stati ottenuti dal sistema cellulasi di Trichoderma viride. Entrambe le cellulasi scindono il cellopentasio mantenendo la configurazione beta degli atomi di carbonio anomerici nei prodotti di idrolisi sia a pH 3.5 che a 5.0. i valori delle cellulasi II-A e II-B per il cellotetraose erano diversi, ma i loro valori di Vmax erano simili e quelli per i cellooligosaccaridi aumentavano parallelamente alla lunghezza della catena. Entrambe le cellulasi producevano prevalentemente cellobiosio e glucosio da vari substrati cellulosici e da cellooligosaccaridi superiori. La cellulasi II-A ha attaccato preferenzialmente il legame olosidico del rho-nitrofenil beta-D-cellobioside, mentre la cellulasi II-B ha attaccato principalmente il legame aglicone di questo cellobioside. yze la sintesi di cellotriosio da rho-nitrofenil beta-D-cellobioside mediante trasferimento di un residuo di glucosile, eventualmente a cellobiosio prodotto nella miscela di reazione. È stato anche scoperto che catalizzano la rapida sintesi di cellotetraose dal cellobiosio, con la formazione di accompagnamento di cellotriosio e glucosio, che sembravano essere prodotti dall'idrolisi casuale secondaria del cellotetraose prodotto. La capacità di sintetizzare il cellotetraosio dal cellobiosio sembrava essere maggiore con la cellulasi II-B che con la cellulasi II-A.
Purificazione di diversi enzimi batteriolitici mediante cromatografia di affinità su lisozima-lisato di parete cellulare di Micrococcus lysodeikticus accoppiato con sepharose.Utilizzo di lisozima-lisato di cellule di Micrococcus lysodeikticus accoppiati con Sepharose, diversi enzimi batteriolitici sono stati purificati da preparazioni grezze di origine animale e microbica. Albume di quaglia, latte umano e lisozimi salivari [EC 3.2.1.17] sono stati adsorbiti sull'adsorbente a pH 5-7 ed eluiti con NaCl 2M a pH 10. Mediante questi trattamenti i lisozimi sono stati purificati 20-250 volte con recuperi di attività del 60-80% e il lisozima di quaglia così purificato si è dimostrato discelettroforeticamente omogeneo. Alcuni enzimi batteriolitici di origine microbica sono stati anche altamente purificati da utilizzando questo adsorbente per affinità. Un lisozima batterico da Bacillus sp. ML-208 ha mostrato un'elevata affinità per il ligando e non è stato eluito nelle condizioni sopra menzionate, ma è stato recuperato mediante eluizione con guanide 2M ine-HCl a pH 5,8, con conseguente aumento di 500 volte dell'attività specifica. Un enzima Pseudomonas-litico da Streptomyces sp. P-51 è stato facilmente rilasciato dall'adsorbente mediante eluizione con NaCl 0,5 M a pH 5,0. Un enzima stafilolitico F2 di S. griseus S-35 e una chitinasi [EC 3.2.1.14] di igname, entrambi completamente inerti verso la parete cellulare di M. lysodeikticus, sono passati attraverso la colonna adsorbente. Un ligando modificato, in cui i residui di acido muramico e glucosamina erano N,O-acetilati, non è riuscito ad adsorbire nessuno di questi lisozimi animali e batterici. Alcune delle proprietà enzimatiche e degli spettri di azione batteriolitica di questi enzimi purificati sono anche descritti in questo articolo rispetto a quelli del lisozima dell'albume d'uovo di gallina.
Trans-eliminasi dell'acido poligalatturonico nel fluido da shock osmotico di Erwinia rubrifaciens: caratterizzazione dell'enzima purificato e del suo effetto sulle cellule vegetali.Un acido endopoligalatturonico la trans-eliminasi (EC 4.2.2.2), rilasciata dallo shock osmotico delle cellule di Erwinia rubrifaciens, è stata purificata fino alla quasi omogeneità (3, 100 volte) mediante cromatografia su colonna su dietilamminoetilcellulosa, fosfocellulosa e idrossiapatite-cellulosa seguita da focalizzazione isoelettrica Ha un peso molecolare di 41.000, s20,w di 3,09S, un punto isoelettrico di pH 6,25, un valore di pH ottimale di 9,5 e una temperatura ottimale di 37 C e richiede Ca2+ con una concentrazione ottimale da 0,5 a 1,0 mM. non sostituisce il Ca2+. I residui di tirosinile sembrano essenziali per la catalisi enzimatica basata sulla rapida inattivazione da parte del tetranitrometano. L'enzima preferisce l'acido poligalatturonico non metilato come substrato, scindendo casualmente i legami alfa-1,4-glicosidici per formare galacturon insaturo ide ad un Vmax di 1.166 mumol di prodotto/min per mg di proteine e un Km di 5 mg di acido poligalatturonico per ml. Oltre il 90% dell'attività enzimatica viene rilasciato dalle cellule di E. rubrifaciens sottoposte a shock osmotico. A differenza di E. rubrifaciens, la transeliminasi non viene rilasciata dalle cellule di Erwinia carotovora mediante trattamento shock osmotico, ma l'attività enzimatica viene rilevata nel terreno di coltura. Il rilascio dell'enzima viene quintuplicato dall'aggiunta di dibutirril adenosina ciclica 5\'-monofosfato. La reazione ipersensibile nelle foglie di tabacco è stata indotta entro 60 minuti dall'iniezione di meno di 1 tazza di E. rubrifaciens trans-eliminasi purificata. Le singole cellule di tabacco in coltura in sospensione vengono prontamente uccise dall'enzima, mentre i protoplasti del tabacco rimangono inalterati se trattati allo stesso modo. Questi risultati indicano che la transeliminasi dell'acido endopoligalatturonico è un enzima costitutivo possibilmente localizzato nello spazio periplasmatico della cellula di E. rubrifaciens e rilascia l'enzima nel mezzo di coltura in presenza di substrato. Il rilascio dell'enzima nel tessuto del tabacco e la scissione trans-eliminativa dei componenti della parete cellulare delle piante possono essere passaggi che portano all'ipersensibilità del tessuto del tabacco.
Metabolismo del polisaccaride di riserva di Streptococcus mitior (mitis): esiste una seconda alfa-1,4-glucano fosforilasi?L'alfa-1 La ,4-glucano fosforilasi (alfa-1,4-glucano: ortofosfato glucosiltransferasi; EC 2.4.1.1) associata alla frazione cellulare del particolato di Streptococcus mitior ceppo S3 è stata confrontata con la maltodestrina fosforilasi solubile che era stata precedentemente isolata dallo stesso organismo ( Walker et al. , 1969). L'enzima particolato era più sensibile al contenuto di glicogeno della cellula rispetto all'euzima solubile; la sua attività era massima quando le cellule venivano coltivate in condizioni che favorivano un elevato accumulo di glicogeno. Specificità del substrato dei due glicogeno endogeno, mentre le maltodestrine a basso peso molecolare erano i substrati preferiti per la fosforilasi solubile. La purificazione della fosforilasi particolato comprendeva l'incubazione della frazione particolata in sodio fosfato-10 mM 160 mM um citrato-0,1% (peso/vol) tampone Triton X-100 (pH 6,7) e cromatografia a scambio ionico su dietilammino-etil-Sephadex A-50. L'enzima purificato era completamente solubile. Il valore per il fattore di purificazione era variabile e dipendeva da (i) il substrato utilizzato e (ii) se si stava misurando la reazione sintetica o degradativa. La solubilizzazione ha comportato notevoli cambiamenti nelle proprietà della fosforilasi: il pH ottimale per l'attività è stato aumentato da 6,0 a 7,0-7,5 e la specificità del substrato è stata alterata. Di conseguenza, l'enzima purificato presentava una maggiore somiglianza con la maltodestrina fosforilasi solubile. I risultati riportati sono meglio spiegati in termini di una singola fosforilasi, la specificità che è determinata dal suo stato di legame nella cellula. L'enzima agisce come glicogeno fosforilasi allo stato particolato e come maltodestrina fosforilasi quando solubile. L'equilibrio tra le due forme è legato al contenuto di glicogeno delle cellule.
Caratterizzazione di mutanti di Escherichia coli K-12 resistenti alla colicina di gruppo B: resistenza alla colicina e ruolo dell'enterochelina.Nove classi di colicina di gruppo B mutanti resistenti sono stati esaminati per studiare il ruolo dell'enterochelina nella resistenza alla colicina Quattro dei mutanti studiati (cbt, exbC, exbB e tonB) hanno ipersecreto l'enterochelina L'ipersecrezione dell'enterochelina era apparentemente responsabile della resistenza del mutante exbC alle colicine G e H e per la resistenza del mutante exbB alle colicine G, H, Ia, Ib, S1 e V. Tutti e quattro i mutanti sono stati classificati come tolleranti alla colicina B, anche in assenza di sintesi di enterochelina. pesano i polipeptidi della membrana esterna quando cresciuti in condizioni di ferro limitanti. La presenza di questi polipeptidi è stata correlata con l'aumento dell'attività neutralizzante della colicina B nelle preparazioni della membrana esterna.
Proprietà cinetiche di Serratia marcescens adenosina 5\'-difosfato glucosio pirofosforilasi.Le proprietà regolatorie dell'adenosina 5\'-difosfato-(ADP) parzialmente purificata ) è stata studiata la glucosio pirofosforilasi da due ceppi di Serratia marcescens (ATCC 274 e ATCC 15365). È stata osservata una leggera o trascurabile attivazione da parte del fruttosio-P2, piridossalfosfato o ridotta nicotinammide adenina dinucleotide fosfato (NADPH). essere potenti attivatori delle pirofosforilasi dell'ADPglucosio dagli enterici, Salmonella typhimurium, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Citrobacter freundii, Escherichia aurescens, Shigella dysenteriae ed Escherichia coli. -fold ma non ha influenzato i valori S0.5 (concentrazione del substrato richiesta per la stimolazione massima del 50%) del subst tariffe, alfa-glucosio-1-fosfato e adenosina 5 \ '-trifosfato. L'adenosina 5\'-monofosfato (AMP), un potente inibitore della pirofosforilasi enterica ADPglucosio, è un efficace inibitore dell'enzima S. marcescens. Anche l'ADP inibisce ma non è efficace quanto l'AMP. Attivatori dell'enzima enterico contrastare l'inibizione causata da AMP. Ciò è in contrasto con quanto osservato per l'enzima S. marcescens. Né il fosfoenolpiruvato, il fruttosio-difosfato, il piridossal-fosfato, il NADPH, il 3-fosfoglicerato, il fruttosio-6-fosfato, né il piruvato hanno effetto sull'inibizione causata dall'AMP. Le proprietà del ceppo S. marcescens HY e della Serratia liquefaciens ADPglucose pyrophosphorylase sono risultate simili ai due suddetti enzimi S. marcescens per quanto riguarda l'attivazione e l'inibizione. Queste osservazioni forniscono un altro esempio in cui le proprietà di un enzima presente nel genere Serratia sono risultate diverse dalle proprietà dello stesso enzima presente nei generi enterici Escherichia, Salmonella, Shigella, Citrobacter e Enterobacter.
Regolazione della formazione di enzimi in Klebsiella aerogenes da parte della glutammina sintetasi episomica di Escherichia coli.Abbiamo studiato la fisiologia delle cellule di Klebsiella aerogenes contenenti il gene strutturale per glutammina sintetasi (glnA) di Escherichia coli su un episoma La glutammina sintetasi di E. coli ha funzionato nelle cellule di K. aerogenes in maniera simile a quella dell'enzima K. aerogenes: ha permesso di aumentare il livello di istidasi e quello di glutammato deidrogenasi per diminuire durante la crescita limitata dall'azoto. Il fenotipo delle mutazioni nel sito glnA è stato riportato alla normalità con l'introduzione del gene episomico glnA+. Questi risultati sono coerenti con l'ipotesi che la glutammina sintetasi regoli la funzione del proprio gene strutturale".
Sintesi di adenosina 5\'-trifosfato energizzata da un potenziale di membrana imposto artificialmente nelle vescicole di membrana di Escherichia coli.Adenosina 5\'-trifosfato (ATP ) è stata studiata la sintesi guidata da un potenziale di membrana imposto artificialmente in vescicole di membrana di Escherichia coli di lato destro. Le vescicole di membrana preparate in presenza di adenosina difosfato sono state caricate con K+ mediante incubazione con fosfato di potassio 0,5 M. L'aggiunta di valinomicina ha portato sintesi di 0,2-0,3 nmol di ATP/mg di proteina di membrana, mentre non è stata osservata sintesi dopo l'aggiunta di nigericina. L'aggiunta di K+, dicicloesilcarbodiimmide, carbonilcianuro p-trifluorometossifenilidrazone o azide al tampone del dosaggio ha inibito la sintesi di ATP. Adenosina difosfato e Mg2+ erano il Ca2+, che può sostituire Mg2+ per l'attività idrolitica della Mg2+-adenosina trifosfatasi (ATPasi) (EC 3.6.1.3), non può sostituire Mg2+ nel reazione sintetica e, di fatto, inibiva la sintesi di ATP anche in presenza di Mg2+. Il ceppo NR-70, un mutante privo di Mg2+-ATPasi, non è stato in grado di sintetizzare ATP utilizzando un potenziale di membrana imposto artificialmente. Inoltre, è stato riscontrato che la Mg2+-ATPasi contiene ATP strettamente legato.
Glutamato deidrogenasi: mappatura genetica e isolamento di mutanti regolatori di Klebsiella aerogenes.Il gene per la glutammato deidrogenasi (gdhD) è stato mappato in Klebsiella aerogenes da Trasduzione P1. È legato a pyrF e trp con l'ordine pyrF-trp-gdh. L'analisi di complementazione utilizzando episomi F\' da Escherichia coli suggerisce una localizzazione analoga in E. coli. Due mutanti in grado di produrre glutammato deidrogenasi in presenza di elevata sono stati isolati livelli di glutammina sintetasi. Uno, strettamente legato alla gdhD, mostra il normale controllo della repressione da parte della glutammina sintetasi ma produce quattro volte l'attività della glutammato deidrogenasi rispetto al wild type in tutte le condizioni testate. L'altro revertant non è legato alla gdhD o glnA.
Ruolo dell'acido poliadenilico in una frazione di membrana dell'acido desossiribonucleico estratta da pneumococchi.Dopo l'aggiunta di acido poliadenilico radioattivo a sospensioni cellulari di pneumococchi, parte della radioattività si associa a una frazione di membrana dell'acido desossiribonucleico (DNA) estratta dalle cellule. Una varietà di tecniche mostrano che una parte di questa radioattività associata può rappresentare oligoadenilati complessati al DNA, probabilmente come parte di un componente di acido ribonucleico (RNA) L'acido poliadenilico, che in precedenza aveva dimostrato di aumentare la sintesi del DNA nelle sospensioni cellulari (Firshein e Benson, 1968), aumenta anche l'entità della sintesi del DNA da parte della frazione di membrana del DNA in vitro in condizioni specifiche di concentrazione e conformazione. l'azione di questo potenziamento può essere correlata alla capacità degli oligoadenilati di aumentare il numero di siti di inizio per la replicazione del DNA stimolando la produzione di un primer di RNA, quindi fornendo ulteriori gruppi 3\'-OH con cui la DNA polimerasi può reagire.
Influenza del pH sulla velocità di sintesi dell'acido ribonucleico ribosomiale durante la sporulazione in Saccharomyces cerevisiae.La velocità di sintesi dell'RNA ribosomiale (rRNA) è molto più lento durante la sporulazione che durante la crescita vegetativa del lievito. Se le cellule sporulanti vengono trasferite dalle normali condizioni di incubazione a pH 8,8 allo stesso mezzo regolato a pH 7,0, la velocità di sintesi dell'rRNA aumenta per avvicinarsi a quella osservata nelle cellule vegetative. La risposta al pH il cambiamento è abbastanza rapido, si verifica entro 10 minuti. IL passaggio PH-dipendente e limitante sembra essere nell'elaborazione dell'RNA precursore ribosomiale 35S nelle specie finali di RNA 26S e 18S. Un effetto pH simile è stato trovato anche per il tasso di sintesi proteica. Tuttavia, non è stato osservato alcun cambiamento nella respirazione quando il pH è stato abbassato. Questi risultati indicano che le differenze osservate nel tasso di sintesi dell'rRNA nelle cellule vegetative e sporulanti sono una conseguenza del pH e non sono intrinseche allo sporulat ione. I risultati supportano anche la correlazione tra elaborazione dell'rRNA e sintesi proteica.
Regolazione della sintesi dell'istidasi in ibridi intergenerici di batteri enterici.Regolazione dell'espressione dell'istidasi codificata da hutk di Klebsiella aerogenes in Salmonella typhimurium e in È stato studiato Escherichia coli e dell'espressione dell'istidasi codificata da capanne di S. typhimurium in E. coli L'istidasi hutk è risultata sensibile alla repressione dei cataboliti in K. aerogenes e in E. coli, ma insensibile alla repressione dei cataboliti in S. typhimurium; l'istidasi huts ha già dimostrato di essere sensibile ai cataboliti in tutti e tre gli organismi. L'espressione dell'istidasi hutk e huts in E. coli è stata attivata dalla carenza di azoto. Apparentemente, la glutammina sintetasi di E. coli può attivare la formazione di alcuni enzimi che producono glutammato e ammoniaca.
Cambiamenti indotti dalla temperatura nello stato acido-base del sangue: Donnan rCl e volume dei globuli rossi.Il rapporto di Donnan per lo ione cloruro (rCl) è stato determinato per i globuli rossi umani nel plasma utilizzando 36Cl. L'effetto della PCO2 alterata e del pH su rCl è stato seguito in due modi. La pressione parziale di CO2 è stata variata (1-1,5% CO2 in O2; intervallo di pH 7,1-7,9) a 37,5 gradi C (isoterma ); PCO2 e pH sono stati modificati anche alterando la temperatura (intervallo 5-45 gradi C) a contenuto costante di CO2 (temperatura indotta). A pH 7,4 e 37,5 gradi C, rCl era 0,631 +/- 0,0269 (SE, N = 5 ); isotermico drcl/dpH = -0,306 +/- 0,0234. Quando misurato in condizioni di temperatura variabile a contenuto costante di CO2 (intervallo di pH 7,3-7,9), drcl/dpH = .018 +/- 0,0232, significativamente diverso dall'isotermico risposta (P inferiore a 0,001) Cambiamenti dell'ematocrito (H) con pH per condizioni di H iniziale (7,4) di 0,45, in queste condizioni sono state anche determinate: isoterma dH/dpH = -0,031 +/- 0,0019; temperatura indotta, -0,004 +/- 0,0009. Il solo cambiamento di temperatura a contenuto costante di anidride carbonica non produce alcun cambiamento significativo nella distribuzione degli ioni cloruro o dell'acqua tra i compartimenti eritrocitari e plasma.
Cambiamenti indotti dalla temperatura nello stato acido-base del sangue: pH e PCO2 in un tampone binario.Equazioni per gli equilibri protonici di un binario monofase sistema tampone sono stati applicati alle variazioni indotte dalla temperatura di pH e PCO2 del plasma di cane separato a contenuto costante di anidride carbonica Comportamento previsto, misurato come deltapH/deltaT e deltalog PCO2 /deltaT, e pH e PCO2 in funzione della temperatura (intervallo 8 -45 gradi C), sono in ragionevole accordo con la teoria. La teoria prevede e i dati confermano che le funzioni deltapH/delta T e deltalog PCO2/deltaT della temperatura; nessun singolo "fattore di correzione della temperatura" è applicabile. Confronto di sangue intero con binario le equazioni tampone mostrano anche un accordo accettabile tra teoria ed esperimento. Il sangue e il plasma separato mostrano risposte simili in deltapH/deltaT e deltalog PCO2/delta T se confrontati su intervalli di temperatura identici. Per sangue o plasma con valori di pH iniziale (AT 37,5 GRADI C) in ns I valori dell'intervallo 7,53-7,45 deltapH/delta T (u/ gradi C) sono -0,0139 (37,5-27,5 gradi C) e -0,0192 (19-7 gradi C); i valori deltalog PCO2/deltaT comparabili sono 0,0195 (37,5-27,5 gradi C) e 0,0240 (19-7 gradi C). Lo stato di carica dei componenti proteici in questo sistema rimane pressoché costante al variare della temperatura.
Sensori a membrana polimerica per il monitoraggio intravascolare continuo del pH del sangue.Un nuovo tipo di sensore di pH adatto all'impianto intravascolare cronico grazie alle sue piccole dimensioni, flessibilità e robustezza sono state costruite e valutate. L'elemento sensibile al pH era un film sottile di un polimero elastomerico reso permselettivo degli ioni ai proteoni aggiungendo un vettore lipofilo specifico di ioni H+. Questo è stato rivestito su fili d'argento di piccolo diametro per formare sensori. In prove preliminari su cani anestetizzati, i sensori hanno consentito una misurazione del pH del sangue in vivo continua e accurata con una risposta rapida (meno di 0,1 s).
Valutazione di un sensore di pH e PCO2 in vivo a doppia funzione.In questo studio è stato valutato un sensore di pH e PCO2 a doppia funzione di nuova concezione I sensori sono stati posizionati nelle arterie femorali di cani anestetizzati con sodio pentobarbital Sono stati effettuati confronti tra pH arterioso sistemico e PCO2 misurati utilizzando il sensore e quelli misurati da campioni di sangue prelevati a intervalli di 15 minuti su un periodo di 7 ore utilizzando un banco Il pH medio delle misurazioni dello strumento da banco era 7,43. La differenza media delle misurazioni del sensore dalle misurazioni dello strumento da banco per 207 confronti era 0,0003 pH +/- 0,061 SD. La PCO2 media delle misurazioni dello strumento da banco era di 40 mmHg. la differenza media delle misurazioni del sensore da quelle dello strumento da banco per 212 confronti è stata di -1,43 mmHg +/- 5,17 SD. I sensori hanno funzionato ugualmente bene in presenza di acidosi e alcalosi metabolica o respiratoria. I sensori a doppia funzione valutati in questo studio sono utili per il monitoraggio dell'andamento del pH e della PCO2 per almeno un periodo di 7 ore senza ricalibrazione. Con il miglioramento della consistenza della costruzione dei sensori, questi sensori saranno affidabili dispositivi di rilevamento in vivo per il pH del sangue e la PCO2 e quindi preziosi strumenti di ricerca e clinici.
Effetti della ventilazione continua a pressione positiva nell'edema polmonare sperimentale.Abbiamo confrontato gli effetti della ventilazione continua a pressione positiva (CPPV), utilizzando 10 cmH2O pressione positiva di fine espirazione (PEEP), con ventilazione a pressione positiva intermittente (IPPV), sul volume idrico extravascolare polmonare (PEWV) e sulla funzione polmonare nei cani con edema polmonare causato da elevata pressione atriale sinistra e diminuzione della pressione osmotica colloidale. misurati con metodi gravimetrici e di diluizione con indicatore a doppio isotopo. Sono stati studiati animali con pressione atriale sinistra (Pla) elevata (22-33 mmHg), moderatamente elevata (12-20 mmHg) e normale (3-11 mmHg). entrambi i metodi erano significativamente aumentati nei gruppi Pla alto e moderato, il primo maggiore del secondo (P inferiore a 0,05). Non c'era differenza nel PEWV tra gli animali che ricevevano CPPV e quelli che ricevevano IPPV nei gruppi Pla sia alto che moderatamente elevato Tuttavia, in animali con alto Pla, la PaO2 veniva mantenuta significativamente meglio e la pressione di gonfiaggio richiesta per erogare un volume corrente di 12 ml/kg era significativamente inferiore con l'uso di CPPV che con IPPV. Concludiamo che nell'edema polmonare associato ad alti livelli di Pla, la PEEP non riduce la PEWV ma migliora la funzione polmonare.
Teoria del doppio contributo della regolazione dell'HCO3 del liquido cerebrospinale nell'acidosi respiratoria.La regolazione dell'HCO3 del liquido cerebrospinale nell'acidosi respiratoria è stata studiata alla luce della "doppia teoria del contributo," che proponeva l'esistenza di due fonti per l'aumento di HCO3 nel liquido cerebrospinale: 1) HCO3 per diffusione dal plasma e 2) HCO3 generato nel SNC e catalizzato dall'anidrasi carbonica locale (J. Appl. Physiol. 38: 504-512, 1975). In cani anestetizzati con un aumento di Paco2 di 30 mmHg per 4 h, l'HCO3 plasmatico è aumentato di 2 meq/1 e il liquor di 6 meq/1. Nell'acidosi respiratoria e metabolica combinata, l'HCO3 plasmatico non aumento ma aumento di HCO3 nel liquido cerebrospinale di 6 meq/1 Nell'acidosi combinata e nelle iniezioni intraventricolari di acetazolamide non si è verificato alcun aumento dell'HCO3 plasmatico o nel liquido cerebrospinale Nell'acidosi respiratoria combinata e alcalosi metabolica e acetazolamide intraventricolare, aumento dell'HCO3 plasmatico di 15 meq/1 ma nel liquido cerebrospinale HCO3-aumento 6 meq / 1. L'ammoniaca nel cervello e nel liquido cerebrospinale è aumentata in modo lineare e selettivo con il aumento del contributo relativo dell'aumento di HCO3 del SNC. Pertanto, la regolazione dell'acidosi respiratoria di HCO3 nel liquido cerebrospinale dipende da entrambi i componenti della teoria del doppio contributo, in cui ciascun componente può fornire l'aumento totale di HCO3 nel liquido cerebrospinale in condizioni sperimentali appropriate. Il meccanismo di controllo può essere sensibile ai cambiamenti di [H+] sul lato cerebrale della barriera ematoencefalica.
Effetti circolatori di ipossia prolungata prima e durante l'antistaminico.Cinque cani sani cronicamente strumentati sono stati esposti a un periodo di 5 giorni di respirazione di ossigeno al 10% in una camera. La risposta all'ipossia è risultata essere dipendente dal tempo. Durante le prime 24 h di ipossia la risposta circolatoria è stata caratterizzata da aumenti della gittata cardiaca, della frequenza cardiaca, della pressione arteriosa polmonare e sistemica e della resistenza vascolare polmonare. Resistenza vascolare sistemica aumento; pressione atriale sinistra diminuita. Durante la prima parte dell'ipossia gli animali sono diventati ipocapnici; il pH del sangue arterioso è aumentato significativamente. Durante il resto del periodo ipossico la gittata cardiaca, la frequenza cardiaca e il pH del sangue arterioso sono tornati ai valori di controllo; le pressioni arteriose sistemiche e le resistenze vascolari polmonari sono rimaste significativamente elevate. Le resistenze vascolari sistemiche sono aumentate;la pressione atriale sinistra è rimasta al di sotto del controllo. Questa risposta all'ipossia è stata n o sostanzialmente modificato quando l'esperimento è stato ripetuto durante la somministrazione dell'antistaminico prometazina, un agente bloccante il recettore H1, in una dose che ha bloccato la risposta vasocostrittrice polmonare a piccole dosi di istamina esogena. La risposta circolatoria all'ipossia acuta in cinque cani anestetizzati non è stata modificata dalla somministrazione endovenosa di metiamide, un agente bloccante i recettori H2.
Il fallimento degli antagonisti dell'istamina nel prevenire la vasocostrizione polmonare ipossica nei cani.Il ruolo dell'istamina come mediatore della vasocostrizione polmonare ipossica è stato esaminato in cani anestetizzati intatti L'antagonismo dei recettori vasocostrittori dell'istamina (H1) con un farmaco antistaminico classico (clorfeniramina) non è riuscito a prevenire o modificare le risposte vascolari polmonari all'ipossia (10% O2) Blocco dei recettori vasodilatatori dell'istamina (H2) con un agente bloccante di nuova sintesi (metiamide ) ha potenziato la vasocostrizione indotta dall'ipossia e ha impedito il normale aumento della frequenza cardiaca. Anche il blocco combinato dei recettori H1 e H2 non ha impedito o ridotto la risposta pressoria polmonare ipossica, sebbene abbia effettivamente abolito le azioni cardiovascolari dell'istamina infusa. cani, l'istamina infusa (3,6 mug/kg al minuto) durante l'ipossia ha attenuato la vasocostrizione polmonare indotta dall'ipossia. I risultati implicano che, nel cane, l'istamina il mio non media la vasocostrizione polmonare ipossica. Tuttavia, l'istamina sembra essere rilasciata durante l'ipossia e può svolgere un ruolo nel modulare le risposte vascolari polmonari all'ipossia opponendosi alla vasocostrizione indotta dall'ipossia. I risultati implicano anche che l'istamina può essere responsabile dell'aumento della frequenza cardiaca durante l'ipossia.
Curva di dissociazione dell'ossigeno per sangue capillare corioallantoico di embrioni di pollo.Curve di dissociazione dell'ossigeno per sangue nel capillare corioallantoico di embrioni di pollo sono state determinate utilizzando un apparato microfotometrico realizzato per misurare la velocità di reazione di un globulo rosso con ossigeno e monossido di carbonio. Le equazioni di Hill\' modificate che esprimono la curva di dissociazione durante lo sviluppo sono state calcolate con due metodi. P50\'s a pH di 7,4 sono risultati essere 60,0, 54,4, 46,2, 33,1 e 28,6 mmHg rispettivamente per 10, 12, 14, 16 e 18 giorni di incubazione Sebbene il fattore di Bohr non mostrasse una chiara relazione con l'età, l'affinità e la capacità dell'ossigeno tendevano ad aumentare con il passare del tempo. giorni e il potere dell'interazione eme-eme, per diminuire con l'età. I risultati implicano che c'è un adattamento respiratorio degli embrioni durante lo sviluppo.
Attività comparativa in vitro delle cefalosporine.L'attività in vitro di cefalexina, cefaloridina, cefalotina, cefapirina, cefoxitina, cefamicina C, cepharadina e cefazolina è stata determinata contro 443 isolati di batteri. A una concentrazione di 12,5 mug/ml, tutte le cefalosporine hanno inibito più del 60% degli isolati di Klebsiella pneumoniae. Alla stessa concentrazione, cefalexina, cefaloridina, cefalotina, cefapirina, cefamicina C e cefazolina hanno inibito più del 90% degli isolati di proteus mirabilis. Tutte le cefalosporine tranne la cefalotina e la cefapirina hanno inibito oltre il 60% degli isolati di Escherichia coli a una concentrazione di 12,5 mug/ml. La cefoxitina era la cefalosporina più attiva contro i bacilli gram-negativi. differenze sostanziali nell'attività delle cefalosporine contro i cocchi gram-positivi. La cefaloridina era la cefalosporina più attiva contro questi organismi. C'era una notevole fluttuazione nella proporzione di isolati di bacilli gram-negativi sensibili a queste cefalosporine di anno in anno, ma non c'erano prove che suggerissero che il numero di isolati resistenti fosse in aumento.
Modifica chimica della streptovaricina C I. damavaricina C 19-O-sostituitaLa damavaricina C, un derivato degradativo della streptovaricina C, ha ridotto l'attività antibiotica rispetto alla streptovaricina C. Ha, tuttavia, un nuovo gruppo ossidrile fenolico nella posizione C-19 dell'anello naftochinone su cui vari gruppi possono essere sostituiti attraverso un legame etereo. Una serie di derivati 19-O-sostituiti della damavaricina C ha stato sintetizzato. Sono riportati la preparazione di questi derivati, le loro attività antibatteriche in vitro, l'inibizione in vitro della RNA polimerasi di E. coli e l'attività letale sui mutanti di membrana di E. coli. Si ritiene che l'attività biologica originale della damavaricina C viene mantenuto e che l'introduzione dei gruppi funzionali nella posizione C-19 ha aumentato la diffusibilità di membrana della molecola.
[Dosaggio ottimale nella terapia orale dell'acne con vitamina A palmitato].Una terapia orale di successo con vitamina A palmitato nell'acne vulgaris richiede 150.000-200.000 UI Gli effetti collaterali sono stati valutati in 22 pazienti e inoltre in 54 pazienti trattati rispettivamente con 400.000 e 300.000 UI per 3-4 settimane (SGPT, GGPT, Quick, elettroforesi, creatinina, escrezione di bromosulftaleina). 32 pazienti che avevano ricevuto 150.000-200.000 UI di vitamina A al giorno per almeno sei mesi L'esperienza clinica e i dati presentati consentono le seguenti conclusioni:. Dosi superiori a 300.000 UI sono accompagnate da danno epatico. Durante il trattamento a lungo termine, il test y-GT deve essere eseguito regolarmente. Si raccomandano consigli contraccettivi.
Il sistema fetale renina-angiotensina nella gravidanza normale e ipertensiva.L'angiotensina II plasmatica è stata misurata nel sangue arterioso e/o venoso del cordone ombelicale di 54 bambini nati per via vaginale e in 12 nati con taglio cesareo elettivo del segmento inferiore. L'angiotensina II è stata misurata anche nel sangue venoso periferico di 51 delle madri. I livelli medi di angiotensina II al momento del parto erano più alti nel sangue venoso del cordone ombelicale dei neonati nati da ipertesi che da madri normotesi. I livelli di angiotensina II venosa cordonale erano sempre superiori a quelli della madre e c'era una relazione fortemente positiva tra angiotensina II materna e fetale. La durata della seconda fase del travaglio è risultata significativamente influenzare i livelli di angiotensina II fetale, il travaglio prolungato essendo associato a livelli elevati. Se questo è stato preso in considerazione, c'era una relazione positiva altamente significativa tra il peso corporeo dei neonati e l'angiotensina II le venosa cordonale vel. C'era una relazione inversa tra pH venoso del cordone ombelicale e livelli di angiotensina II. I bambini partoriti da taglio cesareo del segmento inferiore avevano livelli di angiotensina II molto più bassi di quelli partoriti per via vaginale. I livelli erano, tuttavia, due volte più alti di quelli dell'adulto non gravido.
Sensibilità alla temperatura dipendente dal pH della fosfofruttochinasi del cristallino di ratto.La fosfofruttochinasi del cristallino di ratto (PFK) è risultata labile al freddo a pH acido, anche in presenza di solfato e fosfato inorganico, due noti effettori positivi. L'inattivazione sembra essere un processo irreversibile, ma può essere prevenuto includendo ATP nei terreni di incubazione. L'enzima è relativamente stabile a pH 8,2 incubato a 0-4 gradi, 25 gradi, o 37 gradi C. in assenza degli effettori, ma è estremamente termolabile se il pH viene abbassato a 7,30 o meno. La termolabilità è contrastata da molti effettori, tra i quali il solfato e l'ATP sono i più efficaci. Il significato fisiologico dell'instabilità PFK e della protezione dell'effettore nella lente.
Diminuzione della pressione intraoculare in volontari normali dopo soluzione oftalmica di timololo.Soluzioni oftalmiche di timololo 0,5 per cento, 1,0 per cento e 1,5 per cento hanno abbassato la pressione intraoculare significativamente in volontari umani normali. Il massimo abbassamento delle pressioni intraoculari è stato raggiunto a due ore con la soluzione di timololo allo 0,5 percento e a un'ora con le soluzioni oftalmiche di timololo all'1,0 percento e all'1,5 percento. L'effetto è durato per tutte le sette ore di osservazioni. Nessuna prova oggettiva o soggettiva di irritazione oculare potrebbe essere attribuita al farmaco. Una singola dose di timololo applicata localmente agli occhi di volontari umani normali non ha avuto effetto sulla dimensione pupillare, sull'acuità visiva, sulla pressione sanguigna o sulla frequenza cardiaca.
Percorsi della risposta dell'occhio alla mostarda azotata topica.Abbiamo studiato l'effetto di una precedente infezione corneale da herpes simplex con la sua conseguente ipoestesia corneale sul risposta irritativa dell'occhio del coniglio alla senape azotata topica Sia la miosi che la rottura della barriera emato-acquosa che seguono l'applicazione della senape azotata topica erano diminuite negli occhi infettati tre settimane prima con il virus dell'herpes simplex. la risposta. Ciò suggerisce ancora che un riflesso assonale che richiede innervazione sensoriale intatta media la risposta alla mostarda azotata. Il pretrattamento di conigli normali (non infetti) con antistaminici H1 e H2 sistemici, scopolamina idrobromuro topica o corticosteroidi topici e sistemici era inefficace nel bloccare la miosi o aumento delle proteine nell'umore acqueo in seguito alla mostarda azotata topica.
Inattivazione di tripsina e chimotripsina con una sonda fotosensibile.L'inattivazione fotosensibile di tripsina e chimotripsina mediante 4-fluoro-3-nitrofenil azide (FNPA) viene descritta. Un'inibizione oscura è stata osservata a concentrazioni elevate della sonda ed era reversibile. Gli enzimi erano stabili alla fotolisi in assenza di sonda. L'inattivazione fotolitica di tripsina e chimotripsina con FNPA è risultata irreversibile e si verifica in pochi minuti a concentrazioni di FNPA dove l'inibizione al buio è trascurabile. La fotosonda era ugualmente efficace a pH 3 o pH 8. L'inattivazione aspecifica sembra essere bassa, come evidenziato dalla stabilità della glucosio ossidasi e della perossidasi alla fotolisi con FNPA.
Accoppiamento covalente tra bilirubina e albumina.Viene descritto un metodo per l'accoppiamento covalente tra bilirubina e albumina. Complesso 1:1 di albumina-bilirubina umana ) è stata trattata con carbodiimmide solubile in acqua per ottenere l'accoppiamento covalente della bilirubina all'albumina. Le condizioni di reazione sono state variate rispetto a pH, tempo di reazione e concentrazione del reagente per ottenere l'accoppiamento ottimale. Sono stati studiati i composti albumina-bilirubina preparati mediante spettrofotometria, filtrazione su gel ed elettroforesi su gel per accertare la natura covalente del legame e caratterizzare ulteriormente i prodotti. L'elettroforesi su gel e la filtrazione su gel hanno mostrato che era possibile preparare una frazione monomerica e questa frazione era un materiale adatto per ulteriori studi.
Intermedi attivi deamidati nella denaturazione acida irreversibile della ribonucleasi-A.E' stato effettuato uno studio sui cambiamenti nell'attività enzimatica della ribonucleasi-A **-(RNasi-A) esposta ad un ambiente acquoso altamente acido (pH inferiore a 1) Sono state osservate alterazioni irreversibili dell'attività quando la proteina è stata esposta a un mezzo acido per un lungo periodo (da 20 a 60 h). questi cambiamenti nell'attività è stato scoperto che l'RNasi-A forma intermedi che avevano quasi la stessa attività della proteina nativa. Il processo primario nella denaturazione acida dell'RNasi-A è stato osservato essere la deammidazione della proteina che porta alla formazione di cromotograficamente attivo derivati distinti. Il prodotto iniziale della deammidazione, un derivato monodeamidato, è stato isolato mediante cromatografia su Amberlite XE-64. Questa prima reazione di deammidazione procede con una specificità molto elevata. La successiva reazione di deammidazione è relativamente più lenta, cosicché n il 50% iniziale della proteina nativa poteva essere convertito in questo derivato prima che avesse luogo qualsiasi successiva deammidazione. Questo derivato monodeamidato è stato designato RNase-Aa1. La conversione di RNasi-A in RNasi-Aa1 non è stata accompagnata da alcun cambiamento nella struttura primaria diverso dalla deamidazione osservata. A parte le differenze nella mobilità cromatografica ed elettroforetica, è stato scoperto che la RNasi-Aa1 ha quasi la stessa attività e proprietà fisico-chimiche dell'enzima nativo. Vengono discussi il significato di questa specifica e più rapida deammidazione dell'RNasi-A in questo mezzo denaturante, nonché il significato biologico di tali reazioni di deammidazione delle proteine.
Comportamento insolito di una proteina: precipitazione quantitativa reversibile della delta-emolisina stafilococcica mediante basse concentrazioni di alcuni solventi organici.La delta-emolisina stafilococcica è precipitata da soluzioni acquose da basse concentrazioni di cloroformio. L'effetto su questa precipitazione di pH, tipo e concentrazione di sali, e concentrazione e tempo di esposizione al cloroformio sono stati studiati. Alcuni ma non tutti gli altri solventi testati causano una precipitazione simile. L'attività emolitica non viene distrutta e in condizioni appropriate la precipitazione è quantitativa. La lisina secca occuperà quasi il doppio del suo peso di cloroformio quando esposta al vapore. Parte è fortemente legata.
Studi cinetici della mesentericopeptidasi alcalina. Studio sulla topografia del centro attivo della mesentericopeptidasi alcalina mediante inibizione reversibile bifunzionale.L'effetto inibitorio degli acidi alchilboronici È stato studiato H(CH2)nB(OH)2(n=2-8) e Ph(CH2)nB(OH)2, (n=0-4), sull'idrolisi alcalina catalizzata da mesentericopeptidasi di substrati sintetici. dimostrato che gli acidi alchilboronici agiscono come inibitori reversibili bifunzionali. Il gruppo borato interagisce con un gruppo ionogenico dell'enzima con un pKa di circa 6,9-7,0. Quest'ultimo è probabilmente l'imidazolo cataliticamente attivo del centro attivo. Anche la parte idrocarburica della molecola prende parte alla formazione del complesso enzima-inibitore. La dipendenza del grado di formazione del complesso enzima-inibitore dalla lunghezza della catena laterale dell'inibitore indica la presenza di due siti di legame sulla molecola dell'enzima.
Colonne immunoadsorbenti dietilamminoetilcellulosa-cellule batteriche: preparazione di globuline sierotipo-specifiche e coniugati immunofluorescenti per Streptococcus mutans sierotipi a e d.Dietilaminoetile (DEAE) )-cellulosa è stata utilizzata come materiale di supporto per la preparazione di colonne di cellule batteriche. Il pretrattamento delle cellule batteriche con formalina è stato essenziale per ottenere un'aderenza soddisfacente delle cellule alla DEAE-cellulosa. Gli anticorpi a reazione crociata sono stati rimossi dalle preparazioni anticorpali contro i ceppi di Streptococcus mutans sierotipi a e d mediante adsorbimento su colonne di cellule batteriche appropriate. Il sierotipo D di S. mutans è stato ulteriormente suddiviso in due sottotipi sulla base della colorazione immunofluorescente con coniugati di immunoglobulina G adsorbita immunospecificamente. Le colonne di cellule batteriche DEAE-cellulosa sono state rigenerate dopo l'uso da desorbendo gli anticorpi a reazione crociata con tampone a basso pH e sono stati utilizzati ripetutamente per un periodo di 18 mesi senza rilevamenti ble perdita di efficacia.
Trasporto di zuccheri e aminoacidi nelle cellule animali.Le basi molecolari del metabolismo intracellulare dei nutrienti e il suo controllo sono abbastanza ben comprese nelle cellule animali. Paragonabile mancano ancora le conoscenze sull'ingresso dei soluti nelle cellule, in quanto, contrariamente al metabolismo, nessuna reazione chimica sembra essere direttamente associata al noto trasporto di nutrienti, tuttavia le traslocazioni di zuccheri e amminoacidi attraverso la membrana plasmatica sono processi specifici e controllati, biologicamente oltre che chimicamente. I recenti progressi nelle tecniche per l'isolamento delle membrane plasmatiche hanno reso possibile studiare le proprietà di trasporto delle cellule animali senza le complicazioni riscontrate nelle cellule vitali. Questo approccio è stato applicato al trasporto di zuccheri e aminoacidi nelle membrane plasmatiche di diversi tessuti sono stati dimostrati sistemi di trasporto intatti per D-glucosio, D-fruttosio, L-amminoacidi neutri e dipeptidi. tems in un ambiente in vitro compie il primo passo nella direzione dell'isolamento molecolare dei sistemi di trasporto. Inoltre, le informazioni ottenute sul meccanismo di trasporto catalizzato da alcuni sistemi hanno risolto controversie sul trasporto attivo dei nutrienti. Ad esempio, è stato dimostrato che il cotrasporto elettrogenico di sodio e D-glucosio o di sodio e L-amminoacidi neutri costituisce la base per l'assorbimento attivo e sodio-dipendente di questi nutrienti. Una conseguenza di questo tipo di meccanismo è l'interazione tra il trasporto di zucchero e amminoacidi attraverso il cosubstrato sodico caricato comune. Inoltre, sono stati dimostrati diversi tipi di sistemi di trasporto per lo stesso substrato nelle regioni luminale e controluminale della membrana plasmatica delle cellule epiteliali, il che spiega il trasporto transepiteliale unidirezionale. La membrana luminale contiene sistemi di trasporto attivo dipendenti dal sodio e la membrana controluminale passiva, sistemi di diffusione facilitata. In vivo, il potenziale di sodio intracellulare inferiore comporterebbe un assorbimento concentrativo di nutrienti dal lume, ma non influenzerebbe l'uscita dal lato controluminale. Le variazioni nelle componenti elettriche del potenziale del sodio, che non sono state misurate, possono spiegare risultati apparentemente contraddittori sul trasporto di zucchero attivo e amminoacidi con varie preparazioni tissutali.
[Indagini sulla distribuzione, la causa e la prevenzione della morbilità perinatale precoce (autore\'s trad.)].Queste indagini sono state progettate per individuare le cause di morbilità perinatale precoce al fine di sviluppare metodi per diminuire la morbilità perinatale nella nostra unità Dall'ottobre 1972 al dicembre 1974 sono stati codificati i più importanti dati prenatali, intrapartum e postpartum su 2210 parti. Nel 98% dei casi è stato eseguito un monitoraggio fetale continuo. Per rilevare la morbilità perinatale precoce è stato misurato l'equilibrio acido-base di tutti i parti dai vasi ombelicali e il punteggio di Apgar è stato determinato a 1,5 e 10 minuti. I dati mostrano che un'ulteriore diminuzione dell'incidenza di acidosi e punteggi di Apgar bassi è solo possibile in modo limitato. Del 13% dei parti con valori di pH inferiori/o a 7,15 o punteggi di Apgar inferiori/o inferiori a 6 a 1 minuto, solo il 5% sembrava essere evitabile in questo studio retrospettivo. L'incidenza di acidosi grave decreta è sceso dal 2,3% nel 1972 all'1,3% nel 1974. Un confronto tra gli anni 1973 e 1974 ha mostrato un miglioramento. I punteggi di Apgar di 6 o meno a un minuto sono diminuiti dal 16 al 10% e l'acidosi grave con valori di pH inferiori a 7,10 è diminuito dal 2,7% all'1,8%. Nei parti operatori vaginali, l'incidenza di acidosi grave è stata ridotta dall'8,5% all'1,1%.
Valutazione dei test esofagei nella diagnosi di esofagite da reflusso.La sensibilità e la specificità di ciascuno dei cinque test esofagei utilizzati nella diagnosi di esofagite da reflusso sono state confrontati con quelli di sei combinazioni di due test, uno indicante esofagite e l'altro indicante insufficienza sfinterica. I test esofagei sono stati eseguiti in pazienti con sintomi da reflusso, dolore toracico ed esofagite senza sintomi da reflusso. I dati di controllo sono stati ottenuti da soggetti normali (controllo negativo ) e pazienti con ulcera duodenale (controllo positivo). I risultati indicano che il test di infusione acida e la biopsia esofagea combinati con lo studio del pH esofageo dopo HC1 hanno una sensibilità simile e una maggiore specificità rispetto a qualsiasi test da solo. Nei soggetti normali, l'incidenza cumulativa di anomalie con l'esofago test da soli era del 30%, ma con combinazioni di due test era solo del 5% L'uso di criteri (esofagite simultanea e incompetenza sfinterica) w che stabilire la diagnosi di esofagite da reflusso aiuta a risolvere i risultati contrastanti ottenuti con i singoli test. La combinazione di test più sensibile e specifica per la diagnosi di esofagite da reflusso sembra essere la biopsia esofagea con lo studio del pH esofageo dopo HC1.
Ruolo della cattiva digestione dei grassi nella patogenesi della steatorrea nella resezione ileale. Digestione dei grassi dopo due pasti di prova sequenziali con e senza colestiramina.Chiarire il ruolo di cattiva digestione dei grassi nella patogenesi della steatorrea in pazienti con resezione ileale le concentrazioni di fase acquosa e totale di acidi biliari e acidi grassi sono state caratterizzate in 8 di questi pazienti (5 pazienti con resezione ileale piccola, diarrea da acidi biliari e steatorrea meno di 20 g al giorno ; 3 pazienti con resezione ileale di grandi dimensioni, diarrea da acidi grassi e steatorrea superiore a 20 g al giorno) e 4 soggetti sani di controllo dopo un pasto di prova liquido mattutino e pomeridiano. Lo studio è stato quindi ripetuto con colestiramina, somministrando 4 g prima di ogni pasto per indurre la cattiva digestione dei grassi. Dopo un pasto di prova convenzionale, i pazienti con ampie resezioni e grave steatorrea avevano concentrazioni di acidi biliari (e acidi grassi) nella fase acquosa significativamente inferiori rispetto ai pazienti ts con resezioni più piccole o soggetti di controllo, spiegati in parte dalla precipitazione intraluminale di circa la metà degli acidi biliari durante la digestione. Quando la colestiramina è stata somministrata prima del pasto, le concentrazioni di acidi biliari in fase acquosa sono diminuite in tutti i pazienti, compresi i soggetti normali di controllo; il grado di cattiva digestione dei grassi indotto nei pazienti con resezioni piccole (e nei soggetti di controllo) è diventato simile a quello presente dopo il pasto di prova convenzionale nei pazienti con resezioni grandi. Poiché la steatorrea è aumentata poco nei pazienti con piccole resezioni quando la colestiramina è stata somministrata continuamente, i dati suggeriscono che la cattiva digestione dei grassi di per sé non induce un grave malassorbimento dei grassi nei pazienti con sufficiente riserva anatomica, perché tali pazienti possono assorbire il grasso in modo efficiente utilizzando l'intestino tenue distale. . Nei pazienti con resezioni ileali estese, la steatorrea grave è spiegata in parte dalla combinazione di cattiva digestione dei grassi e diminuzione della superficie. Si ipotizza inoltre che la steatorrea che si verifica in pazienti con piccole resezioni e digestione dei grassi relativamente normale durante due pasti di prova possa essere spiegata da una ridotta digestione dei grassi che si verifica durante l'ultimo pasto della giornata, che spesso è il pasto più abbondante.
L'effetto della cimetidina, un nuovo antagonista del recettore H2 dell'istamina, sulla secrezione acida stimolata dai pasti, sulla gastrina sierica e sullo svuotamento gastrico in pazienti con ulcera duodenale.La secrezione acida stimolata dal pasto, misurata mediante titolazione intragastrica in vivo, è stata progressivamente inibita aumentando le dosi orali di cimetidina (da 25 a 400 mg). Quattrocento milligrammi hanno soppresso la secrezione acida del 73% per le prime 3 ore dopo il pasto, considerando che ha inibito la secrezione acida del 94% durante il periodo di massima inibizione di 30 minuti. La dose di cimetidina necessaria per sopprimere la secrezione di acido del 50% durante il periodo di massima inibizione di 30 minuti era di 25 mg. La durata d'azione di un 300 -mg era di almeno 7 ore La cimetidina era ugualmente efficace nell'inibire la secrezione acida stimolata dai pasti a due livelli fisiologici di pH intragastrico (5,0 e 2,5). La cimetidina non ha avuto effetto sulla concentrazione di gastrina sierica quando il pH intragastrico è stato mantenuto a 5,0, ma quando Il pH è stato permesso di cercare proprio livello, la concentrazione di gastrina sierica era più alta dopo cimetidina che dopo placebo. La cimetidina non ha avuto effetto sullo svuotamento gastrico. Non sono stati rilevati effetti collaterali in nessun paziente.
Influenza delle proprietà degli allotrapianti cutanei sull'"effetto di promozione della sopravvivenza del trapianto" del siero antilinfocitario.Cambiamenti nelle proprietà dei non-H -2 allotrapianti cutanei non compatibili, risultanti dal trattamento dei donatori di innesti con irradiazione su tutto il corpo, siero antilinfociti, ciclofosfamide, idrocortisone, amethopterina e azatioprina, hanno influenzato in modo diverso la loro sopravvivenza nei riceventi pretrattati con siero normale e antilinfocita. gli innesti modificati hanno mostrato la tendenza ad una sopravvivenza prolungata, nei riceventi pretrattati con SLA sopravvivevano per un tempo più breve rispetto agli alloinnesti normali. Nei riceventi pretrattati con SLA, anche allotrapianti da chimere radioattive, il cui sistema ematopoietico era del genotipo del ricevente , è sopravvissuto peggio dei normali allotrapianti e innesti dalle chimere di radiazioni singeniche del donatore. I risultati indicano che un normale stato fisiologico dell'innesto è necessario per l'induzione di un d funzionamento dei componenti protettivi della reazione di allotrapianto coinvolti nell'effetto di promozione della sopravvivenza del trapianto della SLA. Viene discusso il significato dei leucociti passeggeri e delle proprietà funzionali dell'innesto, in particolare dei processi riparativi cellulari ed extracellulari.
[L'effetto cronotropo dello stress massimo sul cuore e la sua regolazione].La bradicardia riflessa che si verifica al massimo sforzo isometrico cardiaco prodotto dal clampaggio di l'aorta ha dimostrato di essere meno intensa se la frequenza cardiaca prima dell'esperimento era stata bassa. La vagotomia preveniva o diminuiva la bradicardia. Il blocco dei recettori beta-adrenergici con inderal riduceva significativamente la bradicardia, mentre il blocco dei recettori alfa-adrenergici con tropafene l'aumentava. è stato discusso il ruolo importante della relazione tra regolazione adrenergica e colinergica del cuore nello sviluppo della bradicardia.
[Meccanismi delle risposte dell'arteria piale nell'ipo- e nell'ipertensione].Studio simultaneo delle risposte dell'arteria piale e dei cambiamenti quantitativi della pressione arteriosa sistemica, così come della PO2, pH e PCO2 sulla superficie cerebrale, non hanno mostrato alcuna correlazione tra i valori e il tempo di variazione dei parametri sopra indicati nei conigli. Le risposte vascolari si concludono per non essere causate dall'azione diretta né delle variazioni di la pressione intravascolare, o dei citati metaboliti sulle pareti arteriose, ma piuttosto da un altro meccanismo di feedback, probabilmente nervoso.
[Partecipazione dell'apparato genetico alla memoria e ai fenomeni di apprendimento].La prima serie di esperimenti ha mostrato che l'inibizione della sintesi proteica seguita da disturbi della memoria , si è riflesso nella diminuzione della frazione delle proteine sinaptosomiali che è stata identificata come proteina del recettore del colino. Un'altra serie di esperimenti: l'addestramento di ratti per usare la zampa non preferita, ha mostrato che il sistema acetilcolina-acetilcolinesterasi è direttamente collegato con i fenomeni di memoria, e la sintesi di questo enzima da indurre dall'apparato genetico. La terza serie di esperimenti ha mostrato che l'alimentazione di ratti con piccole dosi di aminoacidi per lungo tempo porta a cambiamenti regolari nella distribuzione sia degli aminoacidi che delle monoamine. Gli aminoacidi che aumentano l'attività cerebrale sono risultati attivano la produzione di acido ciclo-adenilico Quegli aminoacidi che inibiscono l'attività cerebrale, diminuiscono la produzione di AMP ciclico Tranquillanti che riducono la livello di monoamine e inibiscono l'attività cerebrale, inoltre diminuiscono la produzione di AMP ciclico. Gli antidepressivi che inibiscono le MAO e aumentano il livello di monoamine nel cervello, attivano la produzione di AMP ciclico. Poiché le monoamine agiscono tramite l'AMP ciclico e quest'ultimo partecipa alla soppressione del DNA, diventa più evidente il meccanismo di coinvolgimento dell'apparato genetico nella regolazione dei fenomeni di memoria e di apprendimento.
Criptorchidismo nel maschio subfertile.Si possono trarre alcune conclusioni dalla presente revisione e dalla presentazione di nuovi dati riguardanti il paziente unilateralmente criptorchide e la possibile subfertilità: 1. Il testicolo veramente ritenuto – non il testicolo retrattile dell'infanzia – non scenderà spontaneamente dopo 1 anno di età 2. La qualità seminale del paziente unilateralmente criptorchide è decisamente compromessa, sebbene non resa sterile, nella grande maggioranza dei pazienti indipendentemente dal momento dell'intervento chirurgico. 3. La posizione distopica del testicolo mal disceso sembra sovrapporre un secondo insulto a quella che molto probabilmente potrebbe essere un'anomalia intrinseca del testicolo criptorchide, quest'ultima spiegando, forse, la sua anormale posizione extrascrotale.4 L'orchiopessia prima dei 5 anni sembra consigliabile per garantire alterazioni istologiche minime che possono essere secondarie all'aumentata esposizione del testicolo a temperatura extrascrotale elevata 5. Il testicolo criptorchide s sarà di dimensioni più piccole indipendentemente dall'intervento chirurgico e di solito è correlato a una significativa patologia testicolare. 6. È probabile che i livelli basali di gonadotropine, in particolare dell'ormone follicolo-stimolante, siano elevati, ma ciò non implica necessariamente un danno testicolare schiacciante. La produzione di androgeni non dovrebbe essere influenzata. 7.
Studi sulla transcortina umana a diversi pH: dicroismo circolare, polimerizzazione e affinità di legame.La transcortina che abbiamo usato in questo lavoro è estremamente pura. è stato dimostrato dalla polimerizzazione osservata a pH 4. Questa polimerizzazione non si osserva mai con una forma impura di transcortina [4] Inoltre, poiché è noto che la presenza di cortisolo nel sito di legame è condizione essenziale per l'attività della transcortina purificata [5], sembra che esista una correlazione tra la struttura secondaria e l'attività biologica della transcortina I risultati che abbiamo ottenuto sono riassunti di seguito: (1) L'inibizione della capacità di legame della transcortina avviene essenzialmente tra pH 5 e 4. (2) Si osserva una riorganizzazione della struttura della frazione proteica tra pH 6.5 e 5.9 (3) Si osserva una diminuzione del rapporto di elicità tra pH 5 e 4. Appare quindi che, nei limiti di accuratezza sperimentale di CD misure per determinare la quantità di struttura beta, non si verifica alcun cambiamento apprezzabile dell'attività di legame dopo la comparsa di una grande percentuale di struttura beta tra pH 6,5 e 6. D'altra parte, l'improvvisa diminuzione dell'attività proteica a pH basso è verosimilmente da correlare con la scomparsa di una ben definita regione elicoidale. Sarebbero ovviamente necessari altri esperimenti biochimici e fisici, al fine di precisare questa prima osservazione di una relazione struttura-funzione nella transcortina.
Farmaci e attività enzimatica mitocondriale cerebrale durante lo sviluppo postnatale nel ratto.Le attività enzimatiche di due enzimi mitocondriali, ovvero succinato deidrogenasi e NADH-citocromo c reduttasi sono stati studiati nel cervello di ratti a diversi stadi di sviluppo postnatale, inoltre è stato valutato l'effetto del trattamento farmacologico con due farmaci, nicergolina e bametano, in grado di interagire rispettivamente con i recettori alfa o beta. I risultati mostrano che entrambe le attività enzimatiche aumentano rapidamente nei primi giorni di vita extrauterina, indicando così un adattamento dei processi ossidativi mitocondriali alle condizioni ambientali postnatali. Il trattamento farmacologico con i due farmaci non induce alcuna alterazione del sistema enzimatico attività testate.
[Effetto degli analgesici narcotici sul processo di controllo corticale della trasmissione degli impulsi nelle vie afferenti del nervo sciatico].L'effetto prodotto dagli analgesici narcotici con la loro somministrazione endovenosa sul processo di controllo corticale sulla trasmissione degli impulsi lungo specifiche vie del nervo sciatico. La stimolazione condizionante della corteccia è stata effettuata utilizzando un elettrodo monopolare tramite singoli impulsi elettrici. L'intervallo tra condizionamento e test ( sul nervo sciatico) gli impulsi erano di 80-120 ms Morfina (1-2 mg/kg), promedolo (trimeperidina) (1-2 mg/kg) e fentanil (100 gamma/kg) hanno potenziato l'inibizione dei potenziali evocati nel nucleo gracile e in VPL, osservata in seguito a stimolazione della corteccia dei lobi ottici. L'intensificazione dei meccanismi inibitori corticifughi che si verificano sotto l'effetto di analgesici narcotici avviene sia a livello del midollo allungato che del talamo uno.
[Effetto di izadrin, inderal e netalid sull'attività periodica del miometrio di coniglio].È stata studiata la contrattilità di un utero di coniglio isolato. è stato riscontrato che l'isoprenalina, se utilizzata a basse concentrazioni (1,10(-9)-1,10(-7) g/ml), stimolando i beta-adrenorecettori dell'utero, ne inibisce le contrazioni, mentre ad alte concentrazioni (1,10(6)- 1,10(-5) g/ml) è in grado di intensificare le contrazioni uterine grazie alla stimolazione degli alfa-adrenorecettori uterini La diidroergotossina (1,10(-6) g/ml), agente bloccante degli alfa-adrenorecettori, previene ed elimina la effetto stimolante dell'isoprenalina sull'utero. Propranololo e netalide, agenti bloccanti dei beta-adrenorecettori, aboliscono l'azione depressiva già sviluppata dell'isoprenalina sull'attività contrattile dell'utero, ma non riescono a prevenire questo effetto con la loro applicazione preliminare.
[Effetto della analgestics e narcotici sulle potenzialità delle radici posteriori evocata dalla stimolazione del sensomotorio corteccia].", Gli esperimenti allestiti sulla anestetizzato, curarizzazione gatti hanno dimostrato che oxybutyrate sodio in dosi di 75--200 mg / kg e nembutal in dosi di 5--20 mg / kg prolungare la durata di corticospinali radici posteriori potenziali (PRP). l'effetto iniziale della morfina e promedol in dosi di 1 --3 e 0.5--1 mg / kg, rispettivamente non era solo una durata più lunga (da 30--40 msec), ma anche una maggiore ampiezza del PRP, evocata dalla stimolazione della corteccia sensomotoria. Phentanyl utilizzato in un dosaggio nell'intervallo da 0,01 a 0,06 mg / kg non ha prodotto alcun cambiamento nel PRP discendente. antidolorifici (oxybutyrate sodio, nembutal, etere) e analgesici (morfina, phenadon) ha inibito il PRP corticospinale, se usato in grandi dosi.
[Contenuto di neuromediatori nelle vescicole sinaptiche dei nervi adrenergici di ratto in alcune azioni farmacologiche].La microscopia elettronica citochimica è stata impiegata per studiare il contenuto di neurotrasmettitori in le vescicole sinaptiche delle fibre nervose adrenergiche dei vasi deferenti del ratto a seguito di esaurimento delle riserve del mediatore da parte della tiramina e successivo accumulo di noradrenalina esogena. Oggetto di indagine è stato anche l'effetto degli antidepressivi (ftoracizina e imipramina) sull'accumulo di noradrenalina esogena nelle vescicole sinaptiche È dimostrato che la ftoracizina e l'imipramina (1 e 10 gamma/ml) bloccano l'accumulo di noradrenalina nelle vescicole, quando il mediatore viene introdotto in una concentrazione di 0,5 gamma/ml, e non ostacolano questo processo , se la concentrazione del mediatore viene aumentata a 30 gamma/ml.
[Caratteristiche comparative del metabolismo della fluorasizina in diverse specie di animali e uomo].Il processo della ftoracizina (10-(beta-dietilaminopropiniolo)-2 -triftormetilfenotiazina cloridrato) il processo di trasformazione in varie specie animali e nell'uomo è grosso modo simile alla biotrasformazione della clorpromazina e di composti a quest'ultima, tra cui solfossidazione, dealchilazione nella catena laterale dell'azoto, idrossilazione, glucoronoconiugazione e formazione di prodotti con la degradazione della catena laterale. Contemporaneamente si può notare una differenza che trova la sua espressione nello sviluppo di una grande quantità di metaboliti della ftoracizina accompagnati dalla distruzione della catena laterale, nonché dei prodotti idrossilati solfossidati della sua trasformazione. Nel ratto , più che in conigli e topi, lo spettro dei metaboliti della phthoracizine è più vicino ai prodotti della sua biotrasformazione passati con l'urina umana.
[Effetto dei preparati psicotropi e anticonvulsivanti sull'ATPasi di trasporto nei tubuli renali della cavia].L'effetto di 4 gruppi di agenti medicamentosi, vale a dire neorulettici, antidepressivi triciclici, sonnifici e antiepilettici - sull'attività del trasporto ATPasi e p-nitrofenilfosfatasi dai tubuli renali della cavia è stato studiato. Usato in alte concentrazioni i neurolettici sopprimono quasi completamente l'attività dell'enzima, ma in piccole le dosi influenzano poco quella della p-nitrofenilfosfatasi. I derivati butirrofenonici hanno un lieve effetto sull'attività della p-nitrofenilfosfatasi ea basse concentrazioni la stimolano. L'effetto degli antidepressivi triciclici si avvicina molto a quello prodotto dai neurolettici-fenotiazini. Litio il carbonato lascia intatto l'enzima. I barbiturici e gli agenti antiepilettici inibiscono ma debolmente questi enzimi.
[Effetto degli anestetici non inalanti sulla conduzione dell'eccitazione nelle colonne ventrolaterali del midollo spinale del gatto].Sono stati istituiti test acuti sui gatti spinali indagare l'effetto prodotto da ossibutirrato di sodio, esobarbital sodico e viadril utilizzati in dosi anestetiche sulle risposte evocate nelle colonne ventrolaterali del midollo spinale a seguito di stimolazione della cute e dei nervi pelvici con stimoli singoli e accoppiati ad un intervallo di 100 msec. L'ossibutirrato di sodio forza l'ampiezza di entrambe le risposte evocate dopo la stimolazione accoppiata al di sotto del livello iniziale del 40-70%. L'esobarbital sodico e il viadril, senza modificare sensibilmente l'ampiezza della prima risposta, sono strumentali nel ridurre la seconda di tanto come 30-40 per cento. Le risposte ottenute sulla stimolazione del nervo pelvico sono più sensibili alle sostanze in esame rispetto a quelle evocate dalla stimolazione del nervo cutaneo.
[Valutazione comparativa dell'attività antitossica degli analettici del sistema nervoso centrale e delle loro combinazioni nell'avvelenamento da barbamile].Test condotti su ratti avvelenati con dosi sempre più letali di sodio amytal ha dimostrato che l'attività antitossica di una miscela analeptica è superiore a quella di picrotossina, stricnina, corasolo e caffeina che entrano nella sua composizione e anche all'attività della bemegride. Per quanto riguarda il grado di attività antitossica nell'avvelenamento di topi con sodio amytal (uno LD50) gli analettici del SNC sono disposti nel seguente ordine discendente della loro azione: miscela analeptica, picrotossina, bemegride, corasolo, stricnina Nell'avvelenamento con dosi più elevate di sodio amytal (LD84) corasolo, stricnina e caffeina sono inefficaci, i più produttivo essendo miscela analettica e picrotossina. Bemegride si dimostra efficace solo in una singola dose di 2,8 LD50 per animali interi.
[Rilevazione e stima quantitativa della morfina nelle urine di tossicodipendenti mediante cromatografia e spettrofluorimetria combinate bidimensionali su strato sottile].Dopo l'estrazione da urina e cromatografia bidimensionale su strato sottile, la macchia sospetta di morfina viene localizzata mediante esame UV a 350 nm ed eluita con metanolo mediante l'apparecchiatura "Eluchrom". Il residuo essiccato viene quindi sottoposto ad analisi spettrofluorimetrica, in condizioni definite. Questo La procedura può essere utilizzata per confermare l'identificazione dell'alcaloide e per ottenere la sua stima. Sono stati determinati la sensibilità e i recuperi di varie quantità di morfina aggiunta all'urina.
Modifica e caratterizzazione della simpatectomia permanente prodotta dalla somministrazione di guanetidina a ratti neonati.La somministrazione di guanetidina a ratti neonati ha dimostrato di produrre una simpatectomia permanente con potenziali vantaggi rispetto all'immunosimpatectomia e alla simpatectomia chimica indotta da 6-idrossidopamina. In questo documento, riportiamo un regime di trattamento rivisto che prevede l'inizio del trattamento (50 mg/kg/giorno) il giorno 7 dopo la nascita e continuazione per 3 settimane Gli animali trattati con questo protocollo hanno un basso tasso di mortalità (circa il 10% sopra i controlli trattati con soluzione salina) e nessun deficit di crescita permanente L'analisi dell'attività della tirosina idrossilasi e l'esame al microscopio ottico dei gangli cervicali superiori degli animali trattati con guanetidina indicano una completa distruzione dei neuroni simpatici entro la fine della seconda settimana di trattamento Durante e dopo il trattamento non ci sono diminuzioni della noradrenalina nell'intero cervello del trattamento ed animali. I livelli di noradrenalina nei tessuti periferici sono notevolmente ridotti sia a 9 che a 16 settimane di età. La stimolazione del deflusso vasomotorio non produce aumento della pressione sanguigna nei ratti trattati con guanetidina a 9 o 26 settimane di età, indicando una denervazione funzionale completa e permanente del sistema vascolare. Le ghiandole surrenali degli animali trattati con guanetidina non vengono distrutte, ma piuttosto rispondono, apparentemente per induzione transsinaptica, con aumenti della tirosina idrossilasi e del contenuto di epinefrina. È interessante notare che, nonostante la continua privazione di un sistema nervoso simpatico periferico in questi animali. i livelli di tirosina idrossilasi ed epinefrina surrenali tornano ai livelli di controllo entro le 10 settimane di età. Questi dati indicano che la somministrazione di guanetidina a ratti neonati produce una simpatectomia molto completa e permanente con vantaggi significativi rispetto all'immunosimpaticectomia e alla simpatectomia chimica indotta da 6-idrossidopamina.
Studi sul meccanismo degli effetti cardiovascolari della metildopa.Somministrazione orale di metildopa (100 mg/kg, due volte al giorno per 3 giorni) a meticcio i cani hanno prodotto una significativa diminuzione della pressione sanguigna e della frequenza cardiaca. Il trattamento farmacologico non ha influenzato né il tono venoso a riposo né la gittata cardiaca. Pertanto, l'effetto ipotensivo del farmaco era principalmente dovuto a una riduzione della resistenza periferica totale. Risposte vasocostrittrici del rene vascolare alla stimolazione del nervo simpatico erano significativamente compromesse dopo la metildopa a tutte le frequenze, mentre le risposte vasocostrittrici mesenteriche alla stimolazione del nervo simpatico erano compromesse solo alle frequenze di stimolazione più basse. Inoltre, la metilnorepinefrina era un vasocostrittore significativamente meno potente della noradrenalina nel sistema vascolare renale, ma era equipotente alla noradrenalina nel mesentere. Il riscontro di una riduzione della resistenza vascolare renale di metildopa-trea cani ted, senza tale alterazione nella resistenza vascolare mesenterica, è coerente con gli studi di stimolazione nervosa. Pertanto, i risultati della presente indagine indicano che oltre alle prove esistenti a favore di un sito d'azione centrale per la metildopa, anche la compromissione della funzione neuronale simpatica periferica è importante nel tenere conto delle alterazioni emodinamiche osservate dopo il trattamento con metildopa.
Proprietà di stimolo discriminatorio di benzodiazepine, barbiturici e farmaci farmacologicamente correlati; relazione con alcuni effetti intrinseci e anticonvulsivanti.Utilizzo di un operante a due leve rinforzato con alimenti metodo, i ratti (n = 12) sono stati addestrati a discriminare il clordiazepossido (5 mg/kg, po) dal solvente (po). Con i ratti così addestrati come soggetti, sono stati condotti esperimenti di generalizzazione con varie benzodiazepine, barbiturici e composti correlati e due farmaci neurolettici. La capacità di questi farmaci di indurre un complesso di stimolo discriminativo simile a quello indotto dal clordiazepossido, è stata quindi confrontata con alcuni effetti intrinseci e anticonvulsivanti degli stessi farmaci. È stato riscontrato che le proprietà di stimolo discriminante di benzodiazepine, barbiturici e composti correlati correlano con la capacità di questi farmaci di indurre atassia, nonché con parte della loro attività anticonvulsivante Tuttavia, le proprietà di stimolo di questi farmaci, come definiti dalla procedura descritta, non si basano né sul loro effetto atassico, né sulla loro generale azione depressiva o sedativa. Si conclude che queste proprietà costituiscono un fenomeno farmacologicamente altamente specifico.
Studi sull'attività ipotensiva mediata centralmente del guanabenz.Studi precedenti hanno dimostrato che il guanabenz riduce la pressione sanguigna sistemica inibendo il deflusso simpatico centrale e adrenergico blocco neuronale. I potenziali meccanismi responsabili della riduzione dell'attività simpatica efferente sono stati esaminati nella presente serie. Guanabenz non è riuscito a modificare l'attività del nervo del seno carotideo in una preparazione perfusa del seno. Ha ridotto il deflusso simpatico, la frequenza cardiaca e la pressione sanguigna nei gatti debuffered indicando che la sua azioni non sono mediate principalmente da meccanismi barocettori. Il blocco alfa-adrenergico ha notevolmente attenuato la risposta suggerendo che l'effetto simpatoinibitorio centrale del guanabenz deriva dall'attivazione del recettore alfa-adrenergico. Solo un'alta dose del composto ha attenuato l'aumento dell'attività del nervo simpatico prodotto dalla stimolazione dell'ipotalamo posteriore. Questi esperimenti portano alla conclusione generale sione che il guanabenz agisce principalmente nei siti che regolano il livello basale del deflusso simpatico.
Ossidazione competitiva della 6-idrossidopamina mediante ossigeno e perossido di idrogeno.L'elettrodo a ossigeno simultaneo e le misurazioni polarografiche convenzionali mostrano la concentrazione netta di perossido di idrogeno prodotta dall'aria l'ossidazione della 6-idrossidopamina è considerevolmente inferiore a quella prevista dalla nota stechiometria della reazione. Ciò è dovuto all'ossidazione competitiva della 6-idrossidopamina da parte del perossido di idrogeno generato. La presenza di acido ascorbico in questa reazione comporta anche significative diminuzioni di idrogeno perossido nella maggior parte delle condizioni. Vengono discusse le implicazioni di questi risultati sul meccanismo molecolare della neurotossicità della 6-idrossidopamina.
Alpha-Adrenoceptors nel miocardio ventricolare: clonidina, nafazolina e metoxamina come alfa-agonisti parziali che esercitano un dualismo competitivo nell'azione della fenilefrina.Tha alfa -agonisti simpaticomimetici, clonidina, nafazolina, metoxamina, ossimetazolina e fenilefrina sono stati utilizzati per caratterizzare ulteriormente gli alfa-adrenocettori che mediano l'effetto inotropo positivo nel muscolo papillare isolato del cuore di coniglio. Gli effetti inotropi massimi di queste ammine sono stati confrontati con l'effetto di isoprenalina ed è stato esaminato se queste ammine competono o meno per gli alfa-adrenocettori. Sul muscolo papillare stimolato a 0,5 Hz, la fenilefrina ha mostrato un'elevata affinità (valore pD2=6.13) e ha prodotto l'attività intrinseca più pronunciata dell'alfa-simpaticomimetico ammine. Pertanto, l'attività intrinseca della fenilefrina, in presenza di prindololo (3 X 10(-8) M), è stata utilizzata per il confronto con quelle degli altri alfa-agonisti. Clo la nidina determinava un effetto inotropo positivo: l'attività intrinseca era pari a 0,32 di quella della fenilefrina; l'affinità era la più alta tra le ammine testate (valore pD2=6,46); il suo effetto è stato inibito dalla fentolamina 10(-6) M. L'affinità e l'attività intrinseca della nafazolina erano leggermente inferiori a quelle della clonidina. La metoxamina ha mostrato un'attività intrinseca relativamente alta (0,56) ma l'affinità più bassa (4,68). L'ossimetazolina non ha causato alcun effetto inotropo positivo. La clonidina, la nafazolina e l'ossimetazolina hanno antagonizzato l'effetto inotropo positivo della fenilefrina, mediato dagli alfa-adrenocaptori in presenza di 3 X 10(-8) M prindololo, in modo competitivo. Questa osservazione suggerisce che queste ammine alfa-simpaticomimetiche competono con la fenilefrina per lo stesso sito recettore. Pertanto i risultati attuali forniscono ulteriori prove per gli alfa-adrenocettori che mediano le azioni inotrope positive delle ammine simpaticomimetiche nel muscolo papillare del coniglio.
Influenza della metanfetamina sull'attività della tirosina idrossilasi nigrale e striatale e sui livelli di dopamina striatale.In precedenti rapporti, è stato dimostrato che la metanfetamina deprime la tirosina idrossilasi (TH ) attività nel corpo striato di ratto. Per valutare ulteriormente il meccanismo di questa diminuzione dell'attività del TH, è stata misurata l'attività enzimatica nel corpo striato e nella substantia nigra di ratto dopo somministrazione ripetitiva e monodose di metanfetamina. In seguito a dosi ripetute di metanfetamina, attività di nigral TH è diminuita e ha raggiunto il 45% dei controlli a 12 ore ed è tornata alla normalità a 60 ore L'attività del TH striatale è diminuita al 40% del controllo a 36 ore ed è tornata alla normalità a 60 ore Quando la metanfetamina è stata somministrata ogni 6 ore per 30 ore e poi interrotta, l'attività di nigral TH è tornata ai livelli di controllo 4 giorni prima del recupero dell'attività di TH striatale. La metanfetamina inizialmente ha aumentato i livelli di dopamina striatale a 6 ore (170% del controllo). i livelli sono poi diminuiti parallelamente all'attività del TH striatale, ma non sono aumentati quando l'enzima si è ripreso. La somministrazione concomitante di clorpromazina con metanfetamina ha impedito la diminuzione indotta dalla metanfetamina dell'attività TH nigrale e striatale e dei livelli di dopamina striatale. I risultati indicano che la depressione indotta dalla metanfetamina dell'attività del TH striatale e nigrale può essere correlata all'aumento della stimolazione dei recettori della dopamina nello striato.
Effetti di agonisti e antagonisti dei recettori alfa-adrenergici sugli alfa-adrenocettori localizzati pre e postsinaptici.Sono stati esaminati gli effetti degli agonisti e antagonisti dei recettori alfa-adrenergici pre e post-sinaptici alfa-adrenocettori nel ratto snodato. I recettori presinaptici erano quelli situati alle terminazioni nervose simpatiche cardiache e i recettori postsinaptici erano quelli presenti nella muscolatura liscia vascolare. La clonidina era approssimativamente equipotente a pre e post- alfa-adrenergici sinaptici, mentre LSD e BAY-1470 erano più attivi nei siti pre- che post-sinaptici. Ossimetazolina, nafazolina, metoxamina e fenilefrina erano tutti molto più attivi nei recettori alfa-adrenergici postsinaptici. La fentolamina era l'antagonista più potente sia pre- che post-sinaptici alfa-adrenocettori. Piperoxan, yohimbina e tolazolina erano circa 3-7 volte meno potenti della fentolamina in entrambi i siti. La timoxamina era circa 10 volte meno potente di p hentolamina sui recettori alfa-adrenergici postsinaptici ma circa 1000 volte meno attiva sui recettori presinaptici. Le azioni differenziali sia degli agonisti che degli antagonisti sui recettori alfa-adrenergici pre e post-sinaptici suggeriscono che i recettori possono essere di tipi diversi.
Proprietà enzimatiche e molecolari delle parti della piastra di base del batteriofago P22.Utilizzo di cellule batteriche di Salmonella marcate con 14C come substrato, le proprietà enzimatiche e molecolari delle parti della piastra base del fago P22. La parte della piastra base consisteva in una singola specie proteica che scindeva ampiamente l'antigene O di Salmonella typhimurium, Salmonelly schottmuellerie e con una velocità leggermente inferiore a quella di Salmonella typhi, rilasciando oligosaccaridi prodotti con ramnosio all'estremità riducente. È stata osservata una scissione molto minore con un ceppo di S. typhimurium lisogeno per P22 e nessuna reazione significativa con Salmonella anatum, Salmonella newington e Salmonella minneapolis. L'enzima della parte della piastra base era molto stabile al calore proteina e solo il 10-20% di perdita è stata osservata dopo il trattamento a 85 gradi C per 5 minuti Il pH ottimale dell'enzima era di circa 7,5 e l'attività della glicosidasi non è stata influenzata dalla forza ionica (25-250 mM( del mezzo mo la presenza di Mg2+. Il peso molecolare della parte della piastra di base era di 320.000 per equilibrio di sedimentazione. L'elettroforesi su gel di dodecilsolfato-acrilammide ha rivelato una singola banda di peso molecolare 77.000, indicando che una singola parte della piastra di base corrisponde a un tetramero di subunità identiche. Gli spettri di dicroismo circolare delle parti della piastra di base P22 hanno mostrato un importante contributo della struttura beta. La proteina era ricca di aminoacidi acidi, glicina e serina.
Il trasporto di S-adenosil-L-metionina in vacuoli e sferoplasti di lievito isolati.1. Le proprietà della S-adenosil-L-metionina viene descritto il sistema di accumulo sia per i vacuoli che per gli sferoplasti. I vacuoli di lievito sono stati ottenuti mediante una procedura di lisi metabolica modificata da sferoplasti di Saccharomyces cerevisiae 2. I vacuoli isolati accumulano S-adenosil-L-metionina per mezzo di un sistema di trasporto altamente specifico come indicato dalla concorrenza esperimenti con analoghi strutturali della S-adenosil-L-metionina Il sistema di trasporto della S-adenosil-L-metionina mostra una cinetica di saturazione con un Km apparente di 68 muM nei vacuoli e 11 muM negli sferoplasti 3. S-Adenosil-L-metionina l'accumulo nei vacuoli non richiede glucosio, acido fosfoenolpiruvico, ATP, ADP né altri nucleotidi tri- o di-fosforilati È insensibile all'azide e al 2,4-dinitrofenolo che inibiscono fortemente l'accumulo glucosio-dipendente di S-adenosil-L -metionina in sfero plasti. 4. Il trasporto di S-adenosil-L-metionina nei vacuoli è ottimale a pH 7,4 ed è insensibile alla nistatina mentre l'assorbimento di S-adenosil-L-metionina negli sferoplasti è ottimale a pH 5,0 ed è fortemente sensibile alla nistatina. Su questa base è stato così possibile misurare sia il pool intracitoplasmatico che quello intravacuolare di S-adenosil-L-metionina. 5. I nostri risultati indicano l'esistenza di un sistema di trasporto di S-adenosil-L-metionina altamente specifico nella membrana vacuolare che è chiaramente diverso da quello presente nella membrana plasmatica delle cellule di lievito.
Proprietà della prostaglandina sintetasi del midollo del rene di coniglio.La formazione in vitro di prostaglandine E2, D2 e F2alfa dall'acido arachidonico da parte dell'omogenato del midollo di rene di coniglio o frazione microsomiale è marcatamente influenzata dalla composizione del mezzo di incubazione impiegato. La biosintesi ottimale si ottiene in tampone fosfato di potassio 0,1 M, con il pH ottimale di 8,0-8,8. In queste condizioni la formazione di prostaglandine è lineare fino a una concentrazione di acido arachidonico di 30 muM. Il tasso iniziale di formazione della prostaglandina E2 + prostaglandina D2 è 3-4 volte superiore a quello della prostaglandina F2alfa. Il glutatione ridotto (1 mM) non ha influenzato la biosintesi da parte dell'omogenato midollare e ha prodotto solo una piccola stimolazione della biosintesi da parte dei microsomi polvere. L'idrochinone ha prodotto una piccola stimolazione a una bassa concentrazione di 0,005 mM e una forte inibizione a concentrazioni di 0,1 mM o superiori. Aggiunta di albumina di siero bovino (0,1%) redu ha ridotto la biosintesi microsomiale delle prostaglandine di circa l'80%. L'aggiunta di omogenato bollito o surnatante bollito di 140 000 X g ha prodotto una piccola stimolazione della biosintesi microsomiale, mentre il surnatante di 140 000 X g (non bollito) ha causato una piccola inibizione non correlata alla dose. Sembra che la prostaglandina-sintetasi del rene di coniglio converta l'acido arachidonico in prostaglandine E2 e F2alfa in quantità comparabili, senza apparente necessità di un cofattore solubile nel citoplasma o di agenti riducenti specifici.
Studi sul sito attivo dell'esochinasi del lievito. Fosforilazione specifica di un residuo di serina indotta da D-xilosio e ATPMg.Esochinasi di lievito A(ATP: La D-esoso 6-fosfotransferasi) viene inattivata quando incubata in presenza di xilosio e ATPMg, o in presenza di D-lissosio in un mezzo di reazione in cui l'ATPMg viene continuamente rigenerato (fosfoenolpiruvato e piruvato chinasi). la forforilazione della proteina. È stata osservata una relazione lineare tra l'inattivazione e l'incorporazione di 32P da [gamma-32P] ATP. Tutta l'attività di esochinasi e ATPasi dell'enzima viene persa quando un gruppo fosforilico viene incorporato per subunità enzimatica (peso molecolare 51.000 ). Il gruppo fosforile è legato covalentemente da un legame estere con un residuo di serina della proteina.
Nicotinamide--adenina dinucleotide glicoidrolasi. Purificazione della solubilizzazione e proprietà dell'enzima.La glicoidrolasi NAD della milza di vitello è stata solubilizzata con lipasi pancreatica e purificato circa 800 volte ad un'attività specifica di 7 unità/mg di proteina mediante successiva cromatografia DEAE-cellulosa e carbossimetilcellulosa. L'enzima purificato ha un peso molecolare di 24.000 ed è caratterizzato da una doppia banda su gel elettroforesi su disco. Alcune cinetiche proprietà dell'idrolsi catalizzata da NAD-glicoidrolasi di NAD sono state esaminate utilizzando un saggio titrimetrico per l'attività enzimatica. La reazione è soggetta ad inibizione da eccesso di substrato, che scompare ad alta forza ionica e basso pH. A un pH inferiore a 5 la cinetica mostra un'apparente attivazione da parte del substrato. Gli effetti del pH (4,5-9,0) sui parametri cinetici non rivelano un gruppo ionizzabile essenziale nel processo catalitico.
Acetil-CoA carbossilasi durante lo sviluppo di plastidi in piantine di orzo selvatico e mutante.Acetil-CoA carbossilasi solubile in omogenati di foglie da piante selvatiche è stato studiato piantine di orzo tipo. La centrifugazione dell'omogenato a 150.000 X g non ha ridotto l'attività totale, ma ha aumentato l'attività specifica. Durante lo sviluppo dei cloroplasti nelle piantine allevate alla luce o durante l'inverdimento dipendente dalla luce delle foglie cresciute al buio, sia il l'attività totale della carbossilasi per pianta e l'attività specifica per mg di proteina negli omogenati delle piantine sono aumentate rapidamente. La carbossilasi fogliare solubile è stata studiata in un certo numero di mutanti dell'orzo con lesioni nello sviluppo dei cloroplasti. In un gruppo di tre mutanti la luce ha suscitato un aumento dell'attività dell'acetil-CoA carbossilasi come nel wild-type. In due mutanti la luce ha causato una diminuzione dell'attività. Le foglie scure dell'albina-f17 mutante contenevano livelli di acetil-CoA carbossilasi solubile raggiunti solo alla luce del wild-type, mentre le piantine di albina-f17 cresciute alla luce mancavano di attività carbossilasi. Viene discussa la possibilità che le cellule fogliari contengano due forme di acetil-CoA carbossilasi, una solubile con posizione sconosciuta e una forma dissociabile situata nel cloroplasto.
N-acetilbenzotriazolo come reagente proteico. Comportamento specifico nei confronti della delta-chimotripsina.Quando N-[14C] acetilbenzotriazolo, presentato qui come nuovo agente per l'acetilazione delle proteine, ha reagito a pH 8 e 25 gradi C con delta-chimotripsina, 15 gruppi amminici (i gruppi epsilon-amminici dei residui di lisi e il terminale alfa-amminico della semicistina-1) e due gruppi fenolici (quelli dei due residui di tirosina esposti) sono stati acetilati con rispettive pseudo costanti del primo ordine di 0,056 +/- 0,003 e 0,15 +/- 0,03 min(-1) Sorprendentemente, in contrasto con la reazione di anidride acetica, il gruppo alfa-amminico di Ile-16 è risultato non acetilato come dimostrato dalla determinazione dell'N-terminale e dalle misurazioni dell'attività: la delta-chimotripsina modificata (o delta-chimotripsina acetilata) era completamente attiva dopo la dialisi neutra. Solo un'inattivazione transitoria dovuta all'incorporazione di uno [ 14C] gruppo acetile per mole di sito catalitico è stata osservata La cinetica c L'istante trovato per la riattivazione a pH 8,5 era 0,315 +/- 0,005 min(-1) a 25 gradi C. L'idrolisi catalizzata da enzimi dell'N-acetilbenzotriazolo è stata descritta da un valore ak(cat) di 0,093 +/- 0,005 min(-1 ) a pH 7 e 25 gradi C. Cambiamenti di dicroismo circolare osservati a 230 nm durante la reazione a pH 8,5, della delta-chimotripsina acetilata con N-acetilbenzotriazolo indicavano una conversione totale della quantità di molecole di enzima che erano nel \'inattivo\' o \'alcalina\' a questo pH, in quella \'attivo\' o \'neutro\'. Il benzotriazolo da solo non è stato in grado di indurre un tale cambiamento conformazionale. La costante di velocità del processo strutturale inverso dalla conformazione \'neutra\' alla conformazione \'alcalina\' era 0,32 +/- 0,02 min(-1): identica a quella della deacetilazione del sito catalitico. Pertanto, l'insolita mancanza di acetilazione del gruppo alfa-amminico Ile-16 durante il trattamento con delta-chimotripsina con N-acetilbenzotriazolo viene interpretata come una stabilizzazione della conformazione enzimatica \'neutra\' in cui è sepolto il gruppo alfa-amminico Ile-16, quindi inaccessibile al reagente. Le proprietà della modifica della delta-chimotripsina mediante N-acetilbenzotriazolo hanno portato a usi pratici: titolazione spettrofotometrica diretta della normalità operativa della chimotripsina a pH 7 e preparazione rapida della delta-chimotripsina acetilata. Come reagente proteico, l'N-acetilbenzotriazolo è particolarmente interessante per la sua reattività verso i gruppi amminici e fenolici dei residui amminoacidici, la sua stabilità a pH acido, cioè k(idrolisi=7.38 X 10(-3) min(-1 ) a 25 gradi C [Ravaux et al. (1971) Tetrahedron Letters, 4013-4015] e la sua aromaticità, responsabile delle proprietà ottiche.
Exo-beta-N-acetilmuramidase--una nuova esosaminidasi. Produzione da Bacillus subtilis B, purificazione e caratterizzazione.Exo-beta-N- acetilmuramidasi, o beta-2-acetamido-3-O-(D-1-carbossietil)-2-deossi-D-glucoside acetamidodeossiglucoidrolasi, è prodotta da Bacillus subtilis B, crescendo in un mezzo succinato/peptone/sali, alla fine di crescita esponenziale e si verifica in parte nel mezzo e in parte legato alle cellule Un lisozima digerito delle pareti cellulari di Micrococcus lysodeikticus, O-2-acetamido-2-deossi-beta-D-glucopiranosil-(1 porta a 4)-2- acetamido-3-O-(D-1-carbossietil)-2-deossi-D-glucosio e O-[2-acetammide-3-O-(D-1-carbossietil)-2-deossi-beta-D-glucopiranosile ]-(1 porta a 4)-2-acetamido-2-deossi-D-glucosio in ordine decrescente di efficienza, induce l'enzima ma O-2-acetamido-2-deossi-beta-D-glucopiranosil-(1 porta a 4)-2-acetamido-2-deossi-D-glucosio non lo fa L'enzima è stato purificato dal mezzo di crescita, dopo la rimozione delle cellule mediante c filtrazione, per precipitazione di solfato di ammonio, filtrazione continua su membrane XM-300 (per rimuovere il materiale ad alto peso molecolare che rende l'enzima sedimentabile in soluzioni a bassa forza ionica), diafiltrazione su membrane PM-30 e cromatografia a scambio ionico su DEAE-Sephadex e CM-Sephadex. Sono stati ottenuti due picchi di attività. Il picco A è stato purificato 1800 volte ed è risultato omogeneo sull'elettroforesi su gel di poliacrilammide. È stata inoltre raccolta una seconda frazione eterogenea (picco B). L'exo-beta-N-acetilmuramidasi è più stabile a pH 8,0 e ha un peso molecolare di circa 90000. Vengono forniti i risultati degli studi sulla sua capacità di attaccare diversi substrati sintetici e naturali. I valori di Km e V per 4-metilumbelliferil-2-acetamido-3-O-(D-1-carbossietil)-2-deossi-beta-D-glucosio e O-[2-acetamido-3-O-(D- 1-carbossietil)-2-deossi-beta-D-glucopiranosil]-(1 porta a 4)-2-acetamido-2-deossi-D-glucosio sono rispettivamente 0,19 e 0,65 mM e 1,50 e 16,29 mumol min(-1) mg(-1). Da questi risultati e da quelli degli studi di inibizione si conclude che l'enzima è specifico per substrati con terminali non riducenti dell'acido N-acetilmuramico. Vengono discussi i possibili ruoli di questo enzima.
Rimozione di Mn dai cloroplasti di spinaci mediante cianuro di sodio e legame di Mn2+ a cloroplasti impoveriti di Mn.Il manganese e il rame sono stati rilasciati dai cloroplasti di spinaci da Trattamento con NaCN, sebbene il ferro non sia stato influenzato. Anche l'attività di reazione di Hill è stata inibita da questo trattamento, ma è stata parzialmente recuperata dall'aggiunta di Mn2+ o Cu2+, ma non di Fe3+. L'interazione di Mn2+ con cloroplasti impoveriti di manganese da parte di NaCN -il trattamento è stato studiato utilizzando 54Mn2+. Un grafico di Scatchard mostra i siti di legame ad alta e bassa affinità di Mn2+ sulla membrana del cloroplasto trattato con NaCN; il legame ad alta affinità è specifico per il cloroplasto trattato con NaCN con una costante di legame, KH, di 1,9 X 10(5 ) M-1, e un numero massimo di legame, NH, di 0,0016 g-atomo per mole di clorofilla. Il sito di basso legame è stato trovato anche su cloroplasti non trattati, la sua costante di legame, KL, essendo 1,2 X 10(4) M-1 , e il suo numero massimo di legame, NL, di 0,0112 g-atomo per mole di clorofilla l a pH 8,2 NH era proporzionale al grado di rimozione di Mn mediante trattamento con NaCN ed era costante a pH 4-9. NL è notevolmente aumentato a un pH elevato con un punto medio di pH 7,9 indicando l'esposizione di un nuovo sito di legame simile. L'illuminazione leggera ha parzialmente inibito il legame di Mn2+. Entro 1 minuto al buio la reazione di legame ha raggiunto l'equilibrio in assenza di pirofosfato, tuttavia sono stati necessari 20 minuti per trasformarsi in una forma resistente al pirofosfato. La dipendenza dal pH del legame di Mn2+ con pKa 7.2 e l'inefficacia del p-cloromercuribenzoato suggeriscono che il possibile ligando di Mn2+ è l'azoto imidazolico del residuo di istidina.
Superossido dismutasi bovina di cobalto. Reattività del cromoforo di cobalto nell'enzima contenente rame e in quello privo di rame.1. La reattività del sito zinco della superossido dismutasi bovina è stato sondato osservando variazioni di risonanza paramagnetica ottica ed elettronica, in diverse condizioni, della proteina Co(II)-sostituita 2. Solo in assenza di rame gli spettri di risonanza paramagnetica ottica ed elettronica del cromoforo cobalto influenzato sensibilmente dal pH alcalino o dal cianuro. Con entrambi i reagenti la reazione con la proteina contenente rame sembra coinvolgere la molecola d'acqua legata al rame e non pregiudica l'accoppiamento magnetico tra rame e cobalto. 3. La reazione del cianuro con la proteina Co(II) esente da rame porta ad un lento distacco del cobalto dalla proteina come pentacianocobalto Nell'aria si forma un addotto di ossigeno, analogo a quello descritto in Co(II) anidrasi carbonica (Haffner, PH e Coleman, JE (1975) J. Biol. chimica. 250, 996--1005. ) 4. La titolazione acida modifica gli spettri Co(II) allo stesso modo nella proteina contenente Cu e in quella priva di Cu e determina il disaccoppiamento del Co(II)--Cu(II ) sistema. Si suggerisce la protonazione dell'istidina-61 sull'azoto rivolto verso lo zinco. 5. H2O2 modifica il cromoforo cobalto solo in presenza di rame. L'accoppiamento magnetico tra Cu(II) e Co(II) sembra essere ancora presente dopo l'inattivazione dell'enzima con H2O2.
La sintesi enzimatica di due glicolipidi contenenti fucosio con fucosiltransferasi del siero umano.Lacto-N-neotetraosilceramide incubata con preparazioni di fucosiltransferasi del siero umano ha dato origine a due fucoglycolipidi Il fucoglycolipid I a migrazione più rapida sulla base della sua mobilità cromatografica su strato sottile, suscettibilità all'alfa(1 conduce a 2) fucosidasi da Trichomonas feto, radio-immunoprecipitazione con lectina Ulex europeus e studi con sieri Oh (Bombay) è stato identificato come Glicolipide H-attivo (HI). La struttura più probabile del fucoglicolipide II dovrebbe essere quella con alfa legato al fucosio (1 porta a 3) a N-acetilglucosamina. Lattosilceramide, ceramide trihexoside e globoside non erano substrati per le fucosiltransferasi sieriche umane. -neotetraosil ceramide è servito come accettore di fucosio per tutte le preparazioni di siero testate mentre l'asialoganglioside era un substrato solo quando le preparazioni di siero contenenti alfa-2-L-fucosile dipendente dal gene H sono state utilizzate transferasi. Con l'asialoganglioside si è formato un solo prodotto di reazione radioattivo.
Alcool ossidasi di Kloeckera sp. e Hansenula polymorpha. Proprietà catalitiche e strutture delle subunità.1. Alcool ossidasi (alcohol: ossigeno ossidoriduttasi) di un termofilo lievito che utilizza metanolo, Hansenula polymorpha DL-1, è stato isolato in forma cristallina 2. Questa alcol ossidasi di H. polymorpha era più stabile al calore rispetto all'enzima di Kloeckera sp. Questa differenza di stabilità al calore è compatibile con la differenza di temperature di crescita per entrambi i lieviti 3. Gli alcol ossidasi cristallini di entrambi i lieviti hanno ossidato gli alcoli primari inferiori (da C-2 a C-4) e il metanolo I valori Km apparenti per il metanolo degli enzimi Kloeckera e H. polymorpha erano 0,44 e 0,23 mM, rispettivamente. Gli enzimi potrebbero anche ossidare la formaldeide a formiato e sono stati inattivati da concentrazioni relativamente basse di perossido di idrogeno. 4. Il peso molecolare per entrambi gli enzimi è stato calcolato essere circa 670000. Ciascun enzima è composto da otto subu identici nits (peso molecolare 83000) e contiene otto moli di FAD come gruppo prostetico. Gli amminoacidi NH2-terminale e COOH-terminale dell'enzima H. polymorpha sono stati identificati rispettivamente come alanina e fenilalanina. Il modello delle subunità ottameriche di ciascun enzima è stato confermato da micrografie elettroniche, che hanno mostrato un aggregato di ottadi, composto da due tetragoni faccia a faccia.
Purificazione e proprietà della D-gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi da un ceppo termofilo estremo, Thermus thermophilus HB 8.1. D-Glyceraldehyde- La 3-fosfato deidrogenasi da un termofilo estremo, il ceppo di T. thermophilus HB8, è stata purificata e cristallizzata 2. L'enzima è risultato possedere una notevole stabilità al calore, essendo lentamente inattivato a 90 gradi C. 3. Sono riportate le costanti cinetiche di base e il profilo del pH L'enzima è stato attivato 25 volte da 90 mM NH4Cl e anche da etanolo fino a 5 volte a 30 gradi C. 4. L'enzima è risultato essere molto più resistente all'urea o al sodio dodecilsolfato rispetto all'enzima di coniglio. L'enzima ha dimostrato di essere un tetramero di peso molecolare 130000--135000. L'analisi della composizione degli amminoacidi non ha rivelato caratteristiche insolite. Gli spettri dicroici circolari hanno suggerito che i contenuti della struttura ordinata dell'enzima termofilo sono simili a quelli dell'enzima di coniglio.6 Le altre proprietà catalitiche del gli enzimi termofili sono discussi rispetto a quelli degli enzimi provenienti da altre fonti.
Effetto del pH sulla riduzione transitoria della benzilammina ossidasi nel plasma suino da parte dei derivati della benzilammina.1. La cinetica transitoria di riduzione dei 470-nm bande di assorbimento in benzilammina ossidasi da substrato a diversi valori di pH tra 6 e 10 sono state studiate mediante tecniche a flusso interrotto e sono stati esaminati gli effetti dei sostituenti sui parametri cinetici per il processo di riduzione utilizzando una serie di derivati benzilamminici sostituiti ad anello come substrati. 2. La riduzione dell'enzima per substrato avviene in due stadi cineticamente distinguibili, con la formazione intermedia di un complesso enzima-substrato in cui il substrato appare legato covalentemente tramite il suo gruppo amminico al gruppo prostetico dell'enzima, eventualmente nel forma di una base di Schiff ammina-piridossale 3. L'apparente stabilità del complesso enzima-substrato non mostra una dipendenza evidente dalle proprietà elettroniche dei substrati amminici, ma è fortemente dipendente dal pH in un modo che suggerisce che il legame al substrato coinvolge esclusivamente le ammine non protonate e richiede la presenza della forma acida di un gruppo ionizzante nell'enzima con pKa apparente di 8,8. 4. La riduzione del cromoforo enzimatico da 470 nm e il rilascio del prodotto aldeidico del processo catalitico sono limitati in velocità dalla stessa fase di reazione monomolecolare che coinvolge il complesso enzima-substrato. Le costanti di velocità per la reazione di limitazione della velocità non mostrano alcuna dipendenza significativa dal pH tra 6 e 10, ma sono correlate ai valori sigma di Hammett per i derivati benzilamminici sostituiti con anello testati, ottenendo un valore phi di + 0,3.
Captazione della bromosulfoftaleina da parte di cellule epatiche isolate.La captazione del colorante epatodiagnostico bromosulfoftaleina negli epatociti isolati è stata studiata con particolare riguardo alla cinetica di trasporto. sono stati ottenuti i seguenti risultati: 1. L'assorbimento della bromosulfoftaleina segue la cinetica di Michaelis-Menten solo a basse concentrazioni di substrato con un Km=7 +/- 2 muM apparente e V=2.6 +/- 1,7 nmol X mg di proteina -1 X min -1. A concentrazioni più elevate di bromosulfoftaleina si osserva un secondo meccanismo di assorbimento, come indicato dalla deviazione dalla linearità nel grafico Lineweaver-Burk. 2. L'energia di attivazione dell'assorbimento è risultata essere di 11 kcal/mol a 10 muM di bromosulfoftaleina. 3. La captazione è indipendente dall'energia metabolica e dal gradiente di Na+ attraverso la membrana 4. Il taurocolato non inibisce la captazione mentre il verde indocianina inibisce competitivamente a basse concentrazioni di bromosulfoftaleina e attiva la captazione ad alta concentrazione di bromosulfoftaleina zioni (maggiori di 20 muM). 5. I reagenti di amminoacidi, come dinitrofluorobenzene, mersalyl, N-etilmaleimmide e ditionitrobenzene, che modificano gruppi funzionali specifici, non hanno influenzato l'assorbimento a una concentrazione di 100 muM. 6. Non è stato osservato alcun pH ottimale per l'assorbimento della bromosulfoftaleina nell'intervallo di pH fisiologico. 7. L'adsorbimento della bromosulfoftaleina alla membrana cellulare del fegato ha due siti distinguibili con affinità K1=5.7 X 10(-6) M e K2=7 X 10(-5) M e capacità di legame n1=1.2 nmol/mg proteine e n2=7 nmol/mg di proteine. L'adsorbimento è inibito dal verde indocianina. I risultati non indicano la mediazione dell'assorbimento della bromosulfoftaleina da parte di una proteina trasportatrice e sono coerenti con l'ipotesi che la bromosulfoftaleina sia legata in un processo che consuma energia a un sito di traslocazione, possibilmente in forma non dissociata o come coppia ionica. Il trasferimento consecutivo attraverso la membrana sembra richiedere poca energia aggiuntiva.
Conformazione del tRNA II dell'acido glutammico di Escherichia coli come studiato dallo scambio idrogeno-trizio catalizzato dall'estere metilico della cisteina.Incubazione di CMP in 2H2O con 0.5M l'estere metilico della cisteina a p2H 5 e 37 gradi C per 24 h ha provocato lo scambio del 43% di 5-H a 5-2 H. Durante questo trattamento non è stata osservata alcuna deaminazione del nucleo della citosina. Campioni di DNA nativo e denaturato dal timo di vitello sono stati trattati in 3H2O con estere metilico di cisteina a pH 5 e 37 gradi C per 24 ore e l'incorporazione di trizio in ciascuna base di DNA è stata determinata mediante digestione enzimatica del DNA trattato. L'ordine della radioattività specifica trovata era citosina maggiore di guanina maggiore di adenina maggiore di timina per il DNA denaturato e guanina maggiore dell'adenina approssimativamente citosina maggiore della timina per il DNA nativo. Il rapporto di radioattività per il DNA denaturato/nativo era 11,6 per la citosina, 1,5 per la guanina, 1,8 per l'adenina e 1,1 per la timina. Da qui l'incorporazione in citos ine nelle condizioni di reazione è preferenziale per regioni di DNA a filamento singolo, non elicoidali. Il tRNA II dell'acido glutammico di Escherichia coli è stato trattato in 3H2O con 1,24 M di cisteina metil estere a pH 5 e 37 gradi C. Il tRNA trattato per 24 ore è stato digerito con ribonucleasi T1 e i frammenti sono stati frazionati. Ciascun frammento è stato quindi digerito con ribonucleasi T2 in mononucleotidi ed è stata determinata la distribuzione della radioattività tra le basi. La radioattività media trovata per ciascuna delle basi dei quattro principali nucleotidi era citosina maggiore di guanina circa adenina maggiore di uracile. La radioattività nella citosina varia notevolmente tra i frammenti di RNasi T1, il rapporto tra la radioattività più alta e quella più bassa è 18,7. Il valore corrispondente per la guanina era 11,1, per l'adenina 4,73 e per l'uracile 3,64. Sulla base dei dati ottenuti, è stato dedotto che in questo tRNA l'ansa dell'anticodone, l'ansa della diidrouridina e l'ansa extra erano "esposti" nelle condizioni impiegate per la marcatura. La citosina 5\'-terminale dell'ansa dell'anticodone era in uno stato "non esposto", una situazione simile a quella precedentemente riportata per il tRNA tirosina di E. coli [Cashmore, AR, Brown, DM \& Smith, JD ( 1971) J. Mol. Biol. 59, 359-373] e per E. coli formilmetionina tRNA [Goddard J. P. +Schulman L. H. (1972) J. Biol. chimica. 247, 3864-3867]. Sia la citosina 48, situata al terminale 3\' dell'ansa extra, sia la guanina 15 nell'ansa diidrouridina, erano in uno stato "imposto". Questa scoperta non concorda con un modello di tRNA in cui questa coppia di citosina e guanina, che si trova comunemente nelle sequenze di tRNA, forma legami idrogeno. Le posizioni 30--32, 61--64 e 71, che si trovano nei gambi, sono risultate essere fortemente "sepolte".
Caratterizzazione dello scambio di fosfato ATP-ADP nel reticolo sarcoplasmatico cardiaco e fosforilazione dell'adenosina trifosfatasi di trasporto del calcio.1. Il fosfato terminale di (gamma-32P ) L'ATP viene rapidamente incorporato nelle membrane del reticolo sarcoplasmatico cardiaco (0,7--1,3 mumol/g di proteine) in presenza di calcio e magnesio. Le membrane del reticolo sarcoplasmatico cardiaco catalizzano uno scambio di fosfato ATP-ADP in presenza di calcio e magnesio. 2. Metà -la massima attivazione della formazione di fosfoproteine e dello scambio di fosfato ATP-ADP viene raggiunta ad una concentrazione di calcio ionizzato di circa 0,3 muM. I coefficienti di Hill sono 1,3. 3. La transfosforilazione e lo scambio di fosfato ATP-ADP richiedono magnesio e sono attivati al massimo a concentrazioni di magnesio vicino uguale o uguale alla concentrazione di ATP 4. Il livello di fosfoproteina si riduce a circa il 45% con un rapporto ADP/ATP di 0,1 Il tasso di scissione dell'ATP calcio-dipendente diminuisce, mentre il tasso dello scambio di fosfato ATP-ADP calcio-dipendente aumenta quando il rapporto ADP/ATP viene variato da 0,1 a 1. La somma di entrambi, la velocità di scissione dell'ATP e la velocità di scambio di fosfato ADP-ATP rimane costante. 5. La formazione di fosfoproteine e lo scambio di fosfato ATP-ADP non sono influenzati da azide, dinitrofenolo, dicicloesil carbodiimmide e oubaina, mentre entrambe le attività sono ridotte dal blocco dei gruppi -SH localizzati all'esterno della membrana del reticolo sarcoplasmatico. 6. La fosfoproteina isolata è acido stabile. Il complesso di membrana marcato con 32P denaturato con acido tricloroacetico è defosforilato da idrossilammina, il che potrebbe indicare che la proteina fosforilata è un acil-fosfato. 7. L'elettroforesi su gel di poliacrilammide (eseguita con fenolo/acido acetico/acqua) di frazioni del reticolo sarcoplasmatico fosforilato dimostra che l'incorporazione del 32P avviene in una proteina di circa 100000 peso molecolare. 8. Si suggerisce che la fosfoproteina rappresenti un intermedio fosforilato dell'ATPasi calcio-dipendente la cui formazione avviene come una fase iniziale nella sequenza di reazione della traslocazione del calcio da parte del reticolo sarcoplasmatico cardiaco simile a quella del muscolo scheletrico.
Degradazione fotochimica e biologica di FWA idrosolubili.È stato effettuato uno studio sulla degradazione fotochimica e biologica di due agenti sbiancanti fluorescenti idrosolubili ( FWA): il disodio 4,4\'-bis(2-solfostyryl)-bifenil (1) e il disodio 4,4-bis ([4-anilino-6-(N-metil-N-2-idrossietil)ammino 1,3,5-triazin-2-il]ammino)stilbene-2,2\'-disolfonato (2). Ciascuno rappresenta un'importante classe di agenti sbiancanti fluorescenti detergenti. La degradazione fotochimica di (1) è stata studiata irradiando diluito soluzioni acquose di questo composto con una lampada a vapori di mercurio ad alta pressione a bassa intensità. Dal prodotto di fotodegradazione intermedio e finale isolato, si può dedurre che la fotodegradazione di (1) ha seguito lo schema proposto. La degradazione biologica di (1) e (2) da fanghi attivi in condizioni aerobiche è stato studiato utilizzando apparecchiature simili a quelle proposte dall'OCSE per determinare la biodegradazione di tensioattivi sintetici anionici. Nelle condizioni applicate, entrambi gli FWA sono stati lentamente biodegradati, entro 30 giorni, mentre i prodotti di fotodegradazione di (1) sono stati completamente biodegradati entro 14 giorni.
Metabolismo steroideo nelle gonadi di una paziente con femminilizzazione testicolare. I. Metabolismo in vitro di colesterolo, pregnenolone, progesterone e deidroepiandrosterone.Il metabolismo di colesterolo-4-14C, pregnenolone-4-14C, progesterone-4-14C e deidroepiandrosterone-4-14C in un testicolo addominale destro e in uno inguinale sinistro di una paziente con femminilizzazione testicolare è stato studiato in vitro con un metodo a doppio isotopo. il principale metabolita riscontrato in tutte le incubazioni è stato il testosterone, mentre nelle incubazioni con colesterolo sembra essere preferita la via delta 4. Il tasso di conversione del colesterolo in testosterone nel testicolo destro è stato dell'1,27% e nel testicolo sinistro del 4,90%. Il pregnenolone è stato convertito in testosterone nel testicolo destro ad un tasso del 6,61% e nel testicolo sinistro ad un tasso del 3,23% La conversione del testosterone utilizzando il progesterone come precursore è stata rispettivamente del 13,19% e del 3,88% e l'11,97% di deidroepiandrosterone è stato convertito in testoster uno nel testicolo destro e il 12,32% nel testicolo sinistro. Questi risultati vengono confrontati con i dati della letteratura e vengono tratte conclusioni.
Cambiamenti nell'incorporazione della (3H)leucina nelle proteine pineali in seguito alla somministrazione di estradiolo o testosterone: coinvolgimento del ganglio cervicale superiore simpatico.Denervazione pineale da parte della cervice superiore ganglionectomia (Gx) ha ridotto il legame ad alta affinità dell'estradiolo (E2) al citosol pineale delle femmine di ratto e del testosterone al citosol dei ratti maschi del 40 e 26% e del 75 e 80%, 5 e 14 giorni dopo l'intervento chirurgico; legame ormonale è rimasto invariato fino a 24 ore dopo l'intervento. Il legame alla frazione nucleare è diminuito significativamente entro 2 settimane dall'incorporazione della leucina (3H) nelle proteine pineali in Gx. Una singola iniezione di E2 (mug) al propionato di testosterone (TP) (500 mug) non è riuscito ad aumentare i ratti Gx quando iniettato 1 o 5 giorni dopo l'intervento chirurgico. Sono stati osservati aumenti significativi nei controlli operati in modo simulato o nei ratti sottoposti a decentralizzazione bilaterale dei gangli; tuttavia al 5° giorno è stata osservata una compromissione della capacità ormonale di potenziare ce [3H] incorporazione di leucina nei ratti decentralizzati. La somministrazione di isoproterenolo 19 e 3 ore prima del sacrificio ha ripristinato i siti di legame della pineale per E2 e testosterone nei ratti Gx, ma non è riuscita a ripristinare la reattività della pineale denervata alla somministrazione dell'ormone. Inoltre, il trattamento con E2 o TP ha bloccato l'aumento dell'incorporazione di aminoacidi marcati nelle proteine causato dall'isoproterenolo di per sé. La somministrazione di propranololo 2 e 7 ore dopo l'iniezione dell'ormone ha ridotto la capacità di E2 e TP di aumentare l'incorporazione di [3H]leucina rispettivamente del 55 e del 41%. L'attività della tirosina idrossilasi dei gangli cervicali superiori è diminuita del 36 e 41% 6 ore dopo la somministrazione di E2 o TP e del 43 e 47% dopo 3 iniezioni giornaliere degli ormoni, mentre la tirosina idrossilasi pineale è rimasta invariata. Il trattamento ormonale per 3 giorni ha aumentato l'assorbimento in vitro della noradrenalina da parte dei gangli, ma non ha influenzato l'assorbimento nella ghiandola pineale. Questi dati indicano che l'integrità dei neuroni dei gangli cervicali superiori è un requisito assoluto per E2 e testosterone per migliorare l'incorporazione della [3H]leucina nelle proteine pineali nei ratti.
L'effetto delle lesioni bilaterali del fascio noradrenergico ventrale sui cambiamenti indotti dal sistema endocrino della tirosina idrossilasi nell'eminenza mediana del ratto.Con il metodo di microdissezione di Palkovits, i singoli nuclei ipotalamici sono stati rimossi dal cervello di ratti maschi adulti e l'attività della tirosina idrossilasi (TH) di ciascun nucleo è stata determinata 7 giorni dopo la gonadectomia o la tiroidectomia. Dopo la gonadectomia, l'attività della TH è aumentata significativamente nell'eminenza mediana senza alcun cambiamento nella i nuclei periventricolare (NPV), arcuato (NARC) e dorsomediale (NDM), o fascio proencefalo mediale (MF). Dopo tiroidectomia, l'attività del TH è aumentata significativamente in tutti e 5 i nuclei ipotalamici esaminati. È risultato il posizionamento di lesioni bilaterali nei fasci ventrali di noradrenalina in una diminuzione superiore all'85% dell'attività della dopamina-beta-idrossilasi dell'eminenza mediana, del nucleo arcuato e del nucleo ventromediale, ma non ha avuto effetto sull'attività della tirosina idrossilasi misurata in quelle stesse aree. Inoltre, il posizionamento di tali lesioni non ha avuto alcun effetto sugli aumenti indotti dal sistema endocrino dell'attività TH riscontrati nell'eminenza mediana dopo gonadectomia e tiroidectomia, ma ha impedito l'aumento dell'attività TH riscontrato nel NPV, NDM e MFB dopo tiroidectomia. Tre conclusioni sembrano essere giustificate: (a) assoni noradrenergici che innervano l'eminenza mediana, l'arco arcuato e il decorso dei nuclei ventromediali nei fasci ventrali della noradrenalina; (b) il contenuto di TH dei neuroni noradrenergici nell'eminenza mediana, nel nucleo arcuato e nei nuclei ventromediali è piuttosto piccolo; e (c) la maggior parte, se non tutti, i neuroni catecolaminergici endocrino-sensibili nell'eminenza mediana sono dopaminergici.
[Studio del triptofano libero e totale nel plasma. Valore in psichiatria].Il dosaggio del triptofano intero e del triptofano libero è stato condotto in 16 soggetti normali per stabilire i valori di riferimento e in 12 soggetti schizofrenici di cui 7 in trattamento e 5 no. Il metodo di dosaggio è effettuato mediante spettrofluorimetria aumentando la fluorescenza nativa del triptofano. I risultati danno valori medi per il triptofano libero e per il rapporto tra triptofano libero e triptofano intero valori che sono più elevati negli schizofrenici rispetto ai soggetti normali presi a riferimento, mentre il triptofano intero sembra essere poco modificato, aumento che è più evidente negli schizofrenici in trattamento. numero limitato dei casi studiati non consente ancora di stabilire correlazioni tra l'aumento del triptofano libero riscontrato in alcuni casi e la natura della schizofrenia, la sua età e la sua evolutività o addirittura il cli risposta nica al trattamento. Tuttavia, alcune cifre per il triptofano libero che è molto più alto del valore medio in alcuni schizofrenici, suggeriscono modi di ricerca per comprendere la patogenesi della schizofrenia e i meccanismi dell'azione terapeutica degli psicofarmaci.
[Benzamidi sostituiti].Il confronto degli effetti terapeutici di tre molecole appartenenti alla famiglia delle benzamidi sostituite permette le seguenti osservazioni: --i tre i prodotti sono generalmente ben tollerati dall'organismo; - a dosi sufficienti agiscono come un importante tranquillante: - la sulpiride è principalmente un disinibitore ma ha anche proprietà antipsicotiche; - la sultopride è dapprima un po' sedativa, specialmente se somministrata per via parenterale, poi antipsicotica, e a poco a poco disinibire; -GRI 16-65 è "calmante", "euforizzante", "socializzante", oltre che antipsicotico. L'effetto di reintegrazione in realtà sembra costituire una caratteristica comune di questi tre prodotti.
Il trattamento dell'ipertensione resistente.L'ipertensione resistente può essere definita in termini di mancanza di risposta pressoria agli agenti ipotensivi, ma potrebbe esserci un grande differenza tra i livelli di pressione sanguigna in posizione eretta e sdraiata. In generale il danno agli organi bersaglio e il papilledema migliorano se la pressione sanguigna in piedi è controllata; tuttavia, la progressione può essere occasionalmente documentata quando solo la pressione sanguigna supina rimane incontrollata. L'ipertensione resistente era un fenomeno frequente quando il blocco gangliare agenti ipotensivi efficaci e l'idrallazina erano gli unici agenti ipotensivi efficaci. Con l'avvento dei tiazidici, il controllo efficace della pressione sanguigna divenne l'eccezione piuttosto che la regola; tuttavia, fu solo con l'avvento degli agenti bloccanti adrenergici che la riduzione della pressione sanguigna in posizione supina fu regolarmente raggiunto. L'aggiunta di idrallazina o prazosina a una combinazione di un tiazidico e di un agente bloccante beta-adrenergico produce un ulteriore si notevole caduta della pressione sanguigna sdraiata e in piedi. Questa combinazione controllerà la pressione sanguigna nella maggior parte dei pazienti, ma alcuni rimangono refrattari alle dosi massime e richiederanno un trattamento con diazossido orale o minoxidil. Entrambi questi potenti vasodilatatori sono molto efficaci nell'ipertensione resistente. Il diazossido orale consente un eccellente controllo e consente una riduzione di 10 volte delle dosi di altri agenti. Il minoxidil di solito deve essere combinato con dosi moderate di agenti beta-bloccanti per ridurre la marcata tachicardia riflessa. Solo una riduzione del 50% di altri agenti ipotensivi è stata ottenuta nei pazienti trattati con minoxidil e due pazienti si sono dimostrati resistenti al minoxidil, ma successivamente hanno risposto al diazossido orale.
Reazioni avverse da farmaci durante il trattamento dell'ipertensione.Le reazioni avverse da farmaci (ADR) possono essere generalmente classificate come "fastidiose" o " pericolo di vita". I sistemi di segnalazione volontaria accumulano gradualmente un elenco piuttosto impressionante di sospette ADR con farmaci antipertensivi man mano che il loro uso si diffonde. Tali dati non forniscono alcun indizio sull'incidenza reale o relativa. L'incidenza assoluta e comparativa delle ADR può essere determinata solo in modo equo da un sistema di raccolta imparziale di dati generali sulle ADR da cui vengono poi selezionati i dati per i farmaci antipertensivi. Il Boston Collaborative Drug Surveillance Program fornisce una tale fonte di informazioni. I dati del Boston Program rivelano che la maggior parte delle ADR elencate con farmaci antipertensivi si verificano molto raramente, che le ADR "fastidiose" si verificano nel 10-29% dei pazienti in cui vengono utilizzate e che le ADR "pericolose per la vita" si verificano in meno dell'1%. Le ADR tendono a scoraggiare la compliance del paziente con me obiettivi di cazione. Nella scelta della terapia antipertensiva specifica il medico deve essere consapevole non solo della gravità dell'ipertensione da trattare, ma anche della natura, del tipo e della gravità delle potenziali ADR, della personalità e della probabile complicanza del paziente e della necessità del paziente. educazione sugli effetti dei farmaci, sui possibili effetti indesiderati e sulle misure da adottare quando si verificano ADR.
La terapia renale e antipertensiva.Le malattie renali e l'ipertensione rappresentano una sfida continua per il nefrologo. Attualmente ci sono pochi metodi efficaci per affrontare la malattie renali comuni come la glomerulonefrite, ma fortunatamente ora esiste un'ampia selezione di potenti agenti antipertensivi. L'ipertensione farmacoresistente dovrebbe essere una rarità nella pratica clinica. L'ipertensione maligna rimane un'emergenza terapeutica. Se un paziente con ipertensione ha un'insufficienza renale funzionale è essenziale per abbassare la pressione sanguigna alla normalità. In presenza di insufficienza renale questo deve essere fatto con cautela per evitare un ulteriore deterioramento della velocità di filtrazione glomerulare. Tuttavia, se la pressione sanguigna è controllata e soprattutto se l'insufficienza renale è una conseguenza della sola ipertensione, la funzione renale può stabilizzarsi o addirittura migliorare, spesso in modo drammatico.
Effetto dei beta-bloccanti sulla frequenza cardiaca e sulla pressione sanguigna nell'esercizio dinamico e isometrico.Studi precedenti sugli effetti sulla frequenza cardiaca e sulla pressione sanguigna in pazienti normali e ipertesi durante l'esercizio dinamico (ergometro in bicicletta o camminata su tapis roulant) e l'esercizio isometrico (impugnatura sostenuta) sono rivisti In uno studio che utilizzava l'esercizio sub-massimale in bicicletta negli ipertesi, c'è stato un aumento del 43% della frequenza cardiaca per un 33% aumento della pressione sistolica e diminuzione del 5% della pressione diastolica. Il blocco dei recettori beta-adrenergici ha ridotto il livello della frequenza cardiaca dal 18 al 19% per una diminuzione del livello della pressione sanguigna sistolica dal 4 all'11%, mentre il livello della pressione diastolica non è stato influenzato. Un protocollo viene descritto utilizzando una macchina per la registrazione della pressione sanguigna indiretta alla cieca ("Auto-Manometer") con la quale il gonfiaggio e lo sgonfiaggio del bracciale sono automatici e costanti e i valori della pressione sanguigna memorizzati in adeguate fasi sonore di Korotkov. registra la frequenza cardiaca. Con questo metodo è stato studiato l'esercizio isometrico al 50% della massima contrazione volontaria (impugnatura sostenuta) in soggetti normali e ipertesi fuori e sotto diversi trattamenti. Sia negli ipertesi normali che in quelli stabilizzati, c'è stato un aumento di circa il 25% della pressione sanguigna sistolica durante l'esercizio isometrico per un aumento di circa il 22% della pressione sanguigna diastolica e un aumento del 26% della frequenza cardiaca. Le donne normotesi hanno avuto l'aumento più basso della pressione sanguigna e il più alto aumento della frequenza cardiaca. Gli agenti bloccanti i beta-adrenorecettori hanno abbassato la frequenza cardiaca durante l'esercizio isometrico dal 15 al 20%, ma non hanno influenzato il livello di pressione sanguigna. Poiché i livelli di pressione sanguigna a riposo sono diminuiti, l'aumento percentuale della pressione è stato aumentato in seguito ai beta-bloccanti. Una combinazione di un beta-bloccante, clonidina e/o un vasodilatatore ha prodotto una riduzione sia della pressione sistolica (24%) che diastolica (12%), nonché della frequenza cardiaca (18%), durante l'esercizio isometrico.
Uso di beta-bloccanti in combinazione con beta-stimolatori in pazienti con malattia polmonare ostruttiva.La funzione polmonare può essere ridotta non solo da un -beta-bloccante selettivo ma anche da un bloccante selettivo dei recettori beta 1. Se entrambi i tipi di farmaci sono privi di attività simpaticomimetica intrinseca, l'effetto del farmaco non selettivo è più pronunciato di quello di un farmaco selettivo dei recettori beta1 in condizioni basali. L'effetto di un farmaco stimolante del recettore beta2 sui bronchi è inibito da un farmaco non selettivo, ma molto meno da un bloccante selettivo del recettore beta 1. Un bloccante selettivo del recettore beta1 può essere utilizzato negli asmatici quando è combinato con un anti -terapia asmatica, mentre un farmaco non selettivo è controindicato nei pazienti con malattie bronco-ostruttive È necessario indurre la broncodilatazione (ad es. con un beta2-stimolatore) per verificare se un beta-bloccante può essere utilizzato o meno nella malattia bronco-ostruttiva.
Effetti dei farmaci bloccanti i beta-adrenorecettori sul volume plasmatico. Renina e aldosterone come componenti della loro azione antiipertensiva.Nei giovani maschi con ipertensione essenziale, propranololo e pindololo a piccole dosi hanno causato una significativa espansione del volume plasmatico (PV) dopo un mese che non ha impedito una riduzione della PA. Con dosi più elevate, i cambiamenti nel PV erano incoerenti e le riduzioni dell'attività della renina plasmatica (PRA) e dell'escrezione di aldosterone nelle 24 ore (AE) non strettamente correlato ai cambiamenti della pressione arteriosa. Gli effetti dei farmaci bloccanti i beta-adrenorecettori su PV, PRA e AE non sembrano essere componenti importanti della loro azione antipertensiva.
Esperienza con i beta-bloccanti nell'ipertensione.Presso la Dunedin Hypertension Clinic i beta-bloccanti sono i farmaci di scelta per la maggior parte dei pazienti ipertesi, di solito in associazione con diuretici (soprattutto nei soggetti anziani) e spesso con altri farmaci nei casi più gravi. Tutti i beta-bloccanti hanno un effetto antipertensivo, indipendentemente da altre caratteristiche (es. cardioselettività, effetto simpaticomimetico intrinseco, o attività di membrana). Il propranololo non ha effetti significativi sulla pressione sanguigna. I beta-bloccanti non prevengono gli aumenti della pressione sanguigna indotti dallo stress (aritmetica mentale) nei soggetti ipertesi perché il livello di pressione sanguigna raggiunto durante lo stress tende ad essere più basso perché la linea di base è più bassa. -il dosaggio giornaliero dei beta-bloccanti è generalmente soddisfacente.