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Effetti dei farmaci bloccanti i recettori beta-adrenergici sulla trasmissione adrenergica.Sono state riviste le azioni periferiche degli antagonisti dei recettori beta-adrenergici sui meccanismi dei trasmettitori adrenergici. Inoltre al blocco del recettore, gli antagonisti dei recettori beta-adrenergici possono in alte concentrazioni inibire la captazione neuronale della noradrenalina, inibire la monoamino ossidasi, inibire la captazione della noradrenalina nelle vescicole di deposito del trasmettitore e inibire la captazione extraneuronale della noradrenalina. Alte concentrazioni di antagonisti dei recettori beta-adrenergici (soglia di circa 30 muM) rilasciano anche noradrenalina dalle riserve intraneuronali; tuttavia, la loro attività simpaticomimetica intrinseca è generalmente attribuita alla loro proprietà di agonista parziale. Gli antagonisti dei recettori beta-adrenergici possiedono attività di blocco dei neuroni adrenergici e attività anestetica simile alla chinidina o locale. L'esistenza di un meccanismo di feedback positivo che coinvolge si discute dei beta-adrenorecettori pregiunzionali ha affermato che la bradicardia prodotta dagli antagonisti dei beta-adrenorecettori è dovuta al blocco dell'azione delle catecolamine circolanti o della noradrenalina trasmittente nei siti cardiaci extragiunzionali dei beta-adrenorecettori.
Il ruolo della renina nell'azione antipertensiva degli agenti bloccanti i beta-adrenorecettori.Dal momento che i rapporti originali suggeriscono che l'azione antipertensiva dei beta-bloccanti adrenergici farmaci è correlata alla loro azione inibitoria sul rilascio di renina, molte prove sono state avanzate sia per confutare e supportare questa ipotesi. I nostri studi sugli effetti acuti e cronici del trattamento con propranololo in pazienti ipertesi hanno mostrato che l'azione antipertensiva del farmaco era di insorgenza più tardiva rispetto agli effetti cardio-depressivi e renina-soppressivi iniziali e aveva poca relazione con i livelli pre-trattamento dei cambiamenti indotti dal trattamento nell'attività della renina plasmatica (PRA). Quando il pindololo è stato sostituito dal propranololo in questi studi, il PRA è aumentato, ma il sangue il controllo della pressione era indisturbato Ancora una volta, negli esperimenti sugli animali, sebbene una gamma di diversi agenti bloccanti i beta-adrenorecettori inducesse diminuzioni sia della pressione sanguigna che della PRA, l'ipotensivo Gli effetti del pindololo sono stati associati a un aumento della PRA. Inoltre, la PRA si è rivelata una scarsa guida all'efficacia terapeutica nel trattamento di una popolazione non selezionata di pazienti ipertesi con propranololo. Si conclude che l'azione antipertensiva degli agenti bloccanti i beta-adrenorecettori, come classe, non dipende dalla soppressione del PRA.
Effetti emodinamici dei beta-bloccanti adrenergici nell'ipertensione.Viene discusso il pattern di effetti emodinamici dei beta-bloccanti nell'ipertensione. La curva temporale dell'antiipertensivo effetto differisce da quello del beta-blocco cardiaco. L'effetto antipertensivo è caratterizzato da un inizio più lento all'inizio del trattamento e una scomparsa più graduale quando la terapia viene sospesa. Sembra che l'effetto cruciale dei beta-bloccanti nell'ipertensione sia un graduale sviluppo riduzione delle resistenze vascolari periferiche totali. Il meccanismo di questa apparente azione vasodilatatrice è sconosciuto. Sono citati vari possibili fattori coinvolti. Uno è una ridotta efficienza del rilascio del trasmettitore dal neurone adrenergico periferico. Tale azione può contribuire all'effetto antipertensivo, come giudicato dai risultati degli esperimenti sugli animali descritti.
Alcuni aspetti della farmacologia dei beta-bloccanti.Le proprietà farmacodinamiche di un beta-bloccante sono determinate principalmente dalla sua affinità con beta1 e beta2 -recettori rispettivamente e per la sua attività intrinseca. Si suggerisce che non vi sia una separazione organica assoluta dei due sottotipi di recettori. Invece entrambi i recettori beta1 e beta2 sono coinvolti nella mediazione dello stesso effetto. Il rapporto di distribuzione di frequenza di beta1 I recettori /beta2 variano notevolmente tra le varie risposte degli effettori. Un bloccante non selettivo e un bloccante beta1-selettivo possono avere effetti emodinamici diversi quando i livelli di adrenalina circolante sono elevati, a causa della loro potenza notevolmente diversa nell'inibire l'effetto vasodilatatore beta2-mediato di adrenalina. Vengono presentati dati che suggeriscono l'esistenza di un recettore beta1 presinaptico che media un meccanismo di feedback positivo sul rilascio neuronale di noradrenalina.
Farmacocinetica clinica dei beta-bloccanti.i beta-bloccanti sono completamente e rapidamente assorbiti dal tratto gastrointestinale. Nel loro primo passaggio attraverso il fegato sono metabolizzati in misura variabile - il cosiddetto effetto di primo passaggio. Per il propranololo e l'alprenololo questa degradazione è in parte compensata dalla formazione di metaboliti attivi, i derivati 4-OH. L'effetto beta-bloccante è correlato linearmente con la concentrazione plasmatica logaritmica dei farmaci Sebbene esista anche una relazione tra l'effetto antipertensivo dei farmaci e la loro concentrazione plasmatica logaritmica, sembra avere un valore limitato determinare i livelli plasmatici dei farmaci al fine di aggiustare la dose terapeutica. Ciò è dovuto alle grandi differenze interindividuali della relazione concentrazione plasmatica-effetto antipertensivo. È essenziale indagare se si formano metaboliti farmacologicamente attivi. Questi possono non solo in influenza la relazione tra concentrazione plasmatica ed effetto terapeutico ma può anche modificare il profilo farmacologico del farmaco. I livelli plasmatici, e quindi gli effetti dei farmaci, possono essere modificati da altri farmaci e malattie. Pertanto il practololo, che viene eliminato principalmente per via renale, ha un'emivita plasmatica più lunga nei pazienti con insufficienza renale. Il plasma del propranololo, che viene eliminato dall'organismo mediante biotrasformazione nel fegato, non viene prolungato nei pazienti con insufficienza renale, ma i suoi metaboliti vengono escreti a una velocità inferiore in tali pazienti. Sebbene la maggior parte dei beta-bloccanti abbia un'emivita plasmatica relativamente breve (da 2 a 5 ore), i farmaci possono essere somministrati due volte al giorno nella pratica clinica. Ciò è dovuto al fatto che l'effetto decresce secondo cinetiche di ordine zero mentre l'eliminazione del farmaco segue cinetiche di primo ordine. È auspicabile che tutti questi fattori siano chiariti prima che un farmaco venga utilizzato nella pratica clinica poiché tutti avranno un'influenza sul suo regime di dosaggio. La responsabilità di ciò deve essere dell'azienda farmaceutica, che deve essere in grado di informare i medici non solo sul dosaggio standard del farmaco, ma anche su come altri farmaci e malattie possono modificare le risposte individuali al farmaco.
Effetti metabolici dei beta-bloccanti.Gli effetti del beta-blocco sul metabolismo del glucosio sono complessi. Alcuni pazienti con ridotta tolleranza al glucosio durante l'assunzione di un beta-bloccante non selettivo, ha mostrato un certo miglioramento della tolleranza al glucosio quando la terapia è stata cambiata con un beta1-bloccante (metoprololo). I valori sierici di K+ tendono ad aumentare leggermente con la terapia beta-bloccante; si verificano anche piccoli aumenti dell'urea sierica e della creatinina. è stato osservato un aumento dei trigliceridi plasmatici nei pazienti che iniziavano una terapia con beta-bloccanti; questo effetto sembrava essere più marcato con il metoprololo che con i beta-bloccanti non selettivi.
Medicazione per bambini ipercinetici.La sindrome ipercinetica è un complesso di sintomi di iperattività, capacità di attenzione ridotta, distraibilità, impulsività, difficoltà di apprendimento, altri problemi comportamentali e segni neurologici \'equivoci\'. Tuttavia, nessuno di questi termini è mai stato definito oggettivamente e attualmente la diagnosi è in gran parte una questione di giudizio clinico. Nella gestione del disturbo, i farmaci hanno un posto ma la decisione di usare i farmaci è una procedura diagnostica e terapeutica complessa che richiede la massima competenza clinica e supervisione medica. Il farmaco più utile attualmente è il gruppo di farmaci stimolanti, in particolare destroanfetamina e metilfenidato. Gli antipsicotici sono talvolta utili ma comportano il rischio di deprimere le funzioni superiori del SNC come come attenzione e cognizione. Altri farmaci che hanno dimostrato di essere di valore includono antidepressivi triciclici (sebbene il loro effetto sia meno p ridicolabile e meno appariscente di quella degli stimolanti) e pemolina.
Correlazione della distribuzione nel tessuto murino dell'arabinosilcitosina in vivo con le attività enzimatiche in vitro.La distribuzione dell'arabinosilcitosina (ara-C) e dei suoi metaboliti è stata misurato nel fegato, nell'intestino tenue, nella milza e nel rene di topi inoculati ip 5-6 giorni prima con cellule leucemiche L1210. Sono stati trovati due principali metaboliti nei tessuti: i nucleotidi e il prodotto inattivo deaminato, arabinosiluracile (ara-U) La curva di decadimento di ara-C nella maggior parte di questi tessuti era curvilinea, le emivite di ara-C stimate dalle fasi terminali erano 8, 11, 12 e 12 ore rispettivamente per i tessuti della milza, dei reni, dell'intestino e del fegato L'emivita dell'ara-C non era correlata con l'attività della deossicitidina deaminasi nei tessuti, tuttavia l'attività della deaminasi in vitro era ben correlata con la quantità di ara-U presente in vivo Analisi simili sono state effettuate per le cellule leucemiche L1210 e per l'ascite fluido. Nelle cellule è stato trovato un livello elevato di nucleotidi e una quantità significativa di nucleotidi era anche identificabile nel fluido ascite. Le attività della deossicitidina chinasi, ma non della deossicitidina deaminasi, nei tessuti ospiti di topi inoculati con cellule leucemiche L1210 sensibili all'ara-C erano maggiori rispetto a quelle dei topi normali. Le attività fosforilanti in vitro erano correlate con la quantità di nucleotide presente in vivo nei topi portatori di cellule leucemiche L1210. Tuttavia, l'infiltrazione di cellule leucemiche contenenti elevate attività chinasiche nei tessuti ospiti rappresentava la maggior parte, se non la totalità, del livello di nucleotidi in questi tessuti. Ciò è ulteriormente evidenziato dal fatto che l'inoculazione di topi con cellule leucemiche L1210 resistenti all'ara-C non ha alterato l'attività della chinasi oi livelli di nucleotidi dei tessuti ospiti; queste cellule resistenti contengono quantità trascurabili di attività di fosforilazione dell'ara-C.
Cinetica di Mirex nella scimmia rhesus. I. Disposizione ed escrezione.A tre femmine di scimmia rhesus è stato somministrato 14C-Mirex (5,23 mCi/mmol) iv (due animali) o PO (un animale) in una dose di circa 1 mg/kg allo scopo di determinare la distribuzione e l'escrezione di questo insetticida perclorurato policiclico. Campioni di sangue, plasma, urina, feci e tessuti sono stati analizzati per il contenuto di 14C. Le scimmie sono state sottoposte ad autopsia 23, 106 e 388 giorni dopo aver ricevuto 14C-Mirex. Dopo la somministrazione endovenosa, il 14C plasmatico ha mostrato una rapida diminuzione nelle prime ore dai livelli iniziali elevati. Nella scimmia a cui è stato somministrato il composto per via orale, il 14C è apparso per la prima volta in il plasma a 2 ore e ha raggiunto un massimo a 5 ore. Successivamente, il declino della radioattività plasmatica è stato parallelo a quello riscontrato negli animali trattati iv Dopo 2 settimane, il tasso di declino in tutti gli animali è stato molto lento. L'escrezione e la distribuzione tissutale di Mirex sono state essenzialmente lo stesso se il composto è stato dato po o iv. Less nelle urine è stato trovato più dello 0,6% della dose. Il 14C è stato escreto nelle feci per tutta la durata dell'esperimento con un'escrezione cumulativa massima del 7% dopo 388 giorni. All'autopsia tutti i tessuti analizzati contenevano 14C. La più alta concentrazione di 14C è stata trovata nel grasso (stimato per contenere almeno l'80% della dose), seguito da surrene, nervo periferico, tiroide e pelle. L'analisi chimica della natura della radioattività nel grasso e nelle feci ha mostrato che almeno il 95% ed era presente come Mirex invariato. C'era una piccola quantità di un composto più polare di Mirex nelle feci, contenente meno del 3% della radioattività fecale.
Disposizione di (15,16-3H)naltrexone nel sistema nervoso centrale del ratto.Dopo l'iniezione di (15,16-3H) naltrexone (10 mg/kg sc) nei ratti Wistar maschi, le concentrazioni massime del farmaco si sono verificate nel cervello e nel plasma entro 0,5 ore. I livelli di naltrexone sono stati mantenuti nel cervello tra 2 e 24 ore ed erano appena rilevabili a 48 ore. Quantità significative di metaboliti erano presenti nel cervello e nel plasma in periodi di tempo più lunghi. Il t1/2 di naltrexone nel cervello e nel plasma era rispettivamente di circa 8,0 e 11,4 ore. I rapporti cervello/plasma di naltrexone in tempi precedenti (0,5-1 ora) erano superiori a quelli Il legame del naltrexone in vitro con le proteine plasmatiche di ratto in concentrazioni di 1-10 mug/ml variava tra il 41 e il 59% 6beta-Naltrexolo era presente in quantità molto piccole nel cervello ma non nel plasma. 8-diidro-14-idrossinormofinone e 7,8-diidro-14-idrossinormofina, sono state ottenute prove provvisorie per altri tre metaboliti s di naltrexone nel cervello. Questi metaboliti erano presenti anche nel plasma oltre al naltrexone libero e coniugato e ai suoi metaboliti N-dealchilati.
Cinetica di Mirex nella scimmia rhesus. II. Modello farmacocinetico.Il 14C-Mirex è stato somministrato iv e po a scimmie rhesus femmine (Macaca mulatta) e la radioattività è stata misurata nel plasma, nelle urine e nelle feci ad intervalli dopo la somministrazione e nei tessuti quando gli animali sono stati uccisi. L'analisi grafica dei grafici del logaritmo della concentrazione plasmatica in funzione del tempo è stata utilizzata per fornire stime dei valori delle costanti di velocità di primo ordine richiesto dai modelli farmacocinetici proposti. Un programma in linguaggio BASIC, FITKIN, è stato utilizzato per ottenere soluzioni numeriche alle equazioni differenziali per ciascun modello e per regolare le stime per ottenere un adattamento normalizzato ai minimi quadrati. Dei diversi modelli postulati, un mammillare, modello a quattro compartimenti, sistema aperto, che prevedeva l'escrezione urinaria di Mirex da un compartimento "centrale" e l'escrezione fecale di Mirex da un compartimento tissutale "rapido", ha fornito dati teorici in accordo con i valori osservati. Questo modello predico ted che l'accumulo di Mirex nel grasso sarebbe ritardato dalla presenza di un compartimento tissutale "lento" in modo che l'equilibrio di distribuzione richiederebbe circa sei mesi. Da quel momento fino alla fine di una proiezione di 5 anni, era previsto un calo minimo delle quantità di Mirex per ogni comparto. Il sequestro nel grasso e la mancanza di metabolismo erano responsabili della lunga emivita biologica di Mirex nella scimmia rhesus.
In vivo metaboliti fenolici delle N-alchilamphetamine nel ratto. Evidenze a favore della formazione di catecolo.I principali metaboliti in vivo dell'1-fenil- 2-(n-propilammino)propano (Nn-propillamphetamina) nel ratto erano composti fenolici, identificati come 1-(4-idrossifenil)-2-(n-propilammino)-propano (metabolita A) e 1-(4-idrossi -3-metossifenil)-2-(n-propilammino)propano (metabolita B) mediante gascromatografia-spettrometria di massa e per confronto con campioni sintetici autentici di A e B. I metaboliti A e B si sono formati dal substrato nel 18,3% e Il 3,3% rende, rispettivamente, e viene escreto nelle urine principalmente in forma coniugata. Il metabolismo in vivo nel ratto dell'omologo, 1-fenil-2-(n-butilammino)propano (Nn-butillamphetamina) ha portato alla formazione di due metaboliti omologhi con rese simili, che sono stati identificati provvisoriamente, dal loro comportamento gascromatografico e spettrometrico di massa (metabolita A) e 1-(4-idrossi-3-metossifenil)-2 -(n-propilammino)propano (metaboior e per confronto con i metaboliti A e B, come 2-(n-butilammino)-1-(4-idrossifenil)propano (metabolita C) e 2-(n-butilammino)-1- (4-idrossi-3-metossifenil)propano (metabolita D). Si suggerisce che i metaboliti metilati B e D si siano formati dai metaboliti A e C, rispettivamente, tramite intermedi di catecolamine.
Disposizione della betanidina, N-benzil-N\',N\'\'-dimetilguanidina, nel ratto, cane e uomo.Bethanidine viene metabolizzato in misura significativa nel ratto e nel cane in N-benzil-N\'-metilguanidina, N-benzilguanidina, N-idrossibenzil-N\'-metilguanidina, N-metilguanidina, N-idrossibenzil-N\',N\ '\'-di-metilguanidina, e acido benzoico, mentre nell'uomo il farmaco non viene metabolizzato. E' prontamente assorbito in tutte e tre le specie. La cinetica di eliminazione nell'uomo mostra una differenza tra la velocità di escrezione urinaria e la velocità di diminuzione della sangue. Gli autoradiogrammi di tutto il corpo hanno mostrato un'alta concentrazione di farmaco nei tessuti di ratto ricchi di terminali nervosi adrenergici, ma una penetrazione insignificante, se del caso, della barriera emato-encefalica.
Biotrasformazione di mazindolo. I. Isolamento e identificazione di alcuni metaboliti dall'urina di ratto.Tre metaboliti di mazindolo marcato con trizio sono stati isolati dall'urina di ratto mediante la tecnica di diluizione isotopica inversa in cui i metaboliti marcati sono stati sintetizzati da un secondo gruppo più piccolo di ratti. Questi metaboliti sono stati isolati mediante cromatografia con Amberlite XAD-2 e colonna di gel di silice e cromatografia preparativa su strato sottile. Il metabolita principale (II) è stato mostrato dalla spettrometria di massa del suo derivato trimetilsilile. Spettroscopia NMR e studi di degradazione per essere 5-(p-clorofenil)-2,5-diidro-5-idrossi-3H-imidazolo(2,1-a)isoindol-3-one Un confronto del suo spettro di massa con quello di un campione autentico preparato da 1-(p-clorofenil)-3-etossi-1-metossi-1H-isoindolo e glicina etil estere ha confermato l'assegnazione. Il metabolita III è stato mostrato dal suo spettro di massa , spettro NMR, degradazione e analogia con il metabolita II come 5-(p-clorofenil)-2,5- diidro-2,5-diidrossi-3H-imidazo (2,1-a)isoindol-3-one. Solo una piccola quantità di metabolita IV è stata isolata come artefatto, 3-(p-clorofenil)-2-glicil-3-metossi-1-isoindolinone, come mostrato dal suo spettro di massa e dalla degradazione a 2-(p-clorobenzoy)benzoico acido. Si ritiene che il metabolita IV sia il corrispondente composto 3-idrossi. La sintesi di IV mediante idrolisi catalizzata dalla base del metabolita II supporta l'assegnazione strutturale. Inoltre, è stata osservata anche la facile conversione dell'IV sintetico nel corrispondente 3-metossi derivato mediante metanolo acido.
Inibizione, induzione e formazione del complesso SKF 525-A.Dopo la somministrazione di SKF 525-A ai ratti una porzione del citocromo P-450 nei microsomi epatici è stato trovato in forma ridotta come un complesso stabile che assorbe a 452 nm Fino al 40% del citocromo totale P-450 è stato legato in forma complessata dopo una singola somministrazione di SKF 525-A. l'aggiunta di ferricianuro di potassio (50 muM) ai microsomi epatici di ratti trattati con SKF 525-A ha distrutto il complesso e ha reso disponibile il citocromo P-450 totale per il legame del monossido di carbonio. del citocromo P-450 complessato era il massimo, le attività ossidasi a funzione mista (formazione del complesso p-nitroanisolo O-demetilasi e norbenzfetamina 455 nm) erano notevolmente inibite. le attività della funzione ossidasi sono tornate gradualmente e hanno raggiunto i valori di controllo in circa 48 ore. L'induzione con dosi giornaliere di SKF 525-A per diversi giorni ha aumentato il contenuto totale di citocromo P-450 fino a 5 volte, che era più dell'induzione con fenobarbital, ma questo era evidente solo dopo la distruzione del complesso con ferricianuro. L'aumento massimo del citocromo P-450 non complessato è stato solo di 2 volte. Trattamento di queste sospensioni microsomiali con ferricianuro potenziato etilmorfina N-demetilasi, p-nitroanisolo O-demetilasi e formazione del complesso norbenzfetamina 455 nm.
Riduzione ossisurana mediante preparazioni di tessuti di coniglio.Oxisuran, 2-((metilsulfinil)acetil)piridina viene ridotta ad alfa-((metilsulfinil)metil- 2-piridinemetanolo, ossisuranolo, dagli enzimi citoplasmatici del fegato, dei reni, del cervello, dell'intestino e del polmone di coniglio. L'enzima citoplasmatico del fegato dipende dal NADPH come cofattore e ha un pH ottimale di 6,0. L'attività enzimatica è presente anche nei mitocondri epatici ma ad un'attività specifica inferiore. Gli estratti citoplasmatici catalizzano la formazione di due prodotti ossisuranolici, presumibilmente i diastereoisomeri descritti da Di Carlo e associati da studi in vivo. La verifica del prodotto come ossisuranolo è stata effettuata mediante cromatografia su strato sottile e spettrometria di massa.
Diminuzione dell'attività degli enzimi che metabolizzano i farmaci del fegato di ratto in seguito alla somministrazione di tilorone cloridrato.Tilorone cloridrato, 2,7-bias( 2-(dietilammino)etossi(fluoren-9-one dicloridrato, è stato studiato per determinarne l'effetto sugli enzimi che metabolizzano i farmaci nel fegato di ratti maschi del ceppo Charles River CD. Dosi singole e multiple di tilorone-HCl, 100 mg/ kg/giorno PO. La maggior parte degli esperimenti è stata eseguita 24 ore dopo l'ultima dose, ad eccezione di uno studio 5 ore dopo la somministrazione e quelli in cui è stata determinata la durata degli effetti del tilorone cloridrato. Il tempo di sonno dell'esobarbital è stato prolungato dopo entrambi dosi singole e quattro dosi di tilorone cloridrato. Il regime a 4 dosi ha prolungato il tempo di paralisi della zoxazolamina, ma la dose singola no. È stata osservata una diminuzione della proteina microsomiale dopo i regimi a dose singola e a 4 dosi ma non dopo 21 dosi giornaliere di tilorone -HCl Contenuto di citocromo P-450 dei microsomi è stata ridotta dalle singole dosi, 100 e 250 mg/kg PO, e da 4 e 21 dosi da 100 mg/kg/die PO. Anche le attività dell'aminopirina demetilasi e dell'esobarbital ossidasi sono state diminuite dai suddetti regimi, ma l'attività dell'esobarbital ossidasi è stata influenzata in modo più marcato. Le micrografie elettroniche del fegato di ratto, dopo trattamento con tilorone-HCl, 100 mg/kg/die per 21 giorni, hanno rivelato molte strutture membranose sotto forma di spirali.
Depressione del sistema epatico citocromo P-450 mono-ossigenasi da tilorone somministrato (2,7-bis(2-(dietilammino)etossi)fluoren-9-one dicloridrato) .La somministrazione orale dell'agente antivirale, tilorone-HCl (50 mg/die per 4 giorni) ai ratti ha causato perdite di attività microsomiali epatiche di etilmorfina N-demetilasi, benzo(a)pirene idrossilasi e anilina idrossilasi del 50, 44 e 22%, rispettivamente. I livelli microsomiali di citocromo P-450 e NADPH-citocromo c reduttasi sono stati ridotti rispettivamente del 40 e 20%, ma i livelli di citocromo b5 e NADH-citocromo c reduttasi sono rimasti invariati. Dopo una singola somministrazione orale dose di tilorone-HCl (50 mg/kg) è stata osservata una perdita del 38% del citocromo microsomiale P-450 e del 25% dell'attività dell'etilmorfina N-demetilasi entro 24 ore, il recupero è stato completo entro 8-10 giorni. volte e i livelli ematici erano elevati dopo la somministrazione di tilorone (20 o 50 mg/kg/die per 4 giorni). In vitro, tilorone-H Cl non ha mostrato alcun effetto inibitorio sul metabolismo dei farmaci microsomiali, ha influenzato il contenuto di citocromo P-450 dei microsomi. La velocità di incorporazione dell'acido delta-amino(3H)levulinico nel citocromo P-450 non è stata influenzata dal tilorone-HCl.
Confronto dei sistemi di metabolizzazione dei farmaci microsomiali epatici di ratti alimentati con diete grezze e purificate.Sono stati confrontati i microsomi epatici di ratti alimentati con una dieta grezza o purificata misurando il loro contenuto di proteine, citocromo P-450 e citocromo b5, i loro tassi di attività di NADPH- e NADH-citocromo c reduttasi, NADPH-citocromo P-450 reduttasi, NADPH ossidasi, perossidasi lipidica, etilmorfina N-demetilasi, anilina idrossilasi, benzpirene idrossilasi e i loro spettri che legano il substrato (etilmorfina, esobarbital, anilina ed etil isoyanide). Ad eccezione dell'attività della perossidasi lipidica, che era molto più elevata nei microsomi di animali alimentati con la dieta grezza, una dieta poco o nulla consistente. differenze correlate in queste misurazioni sono state osservate in un periodo sperimentale di 4 settimane, né i risultati sono stati significativamente meno variabili con l'una o l'altra dieta. Non sono state osservate differenze significative coerenti con due ceppi di ratti. l'attività dell'erossidasi osservata con la dieta purificata sembrava essere dovuta all'elevato apporto di vitamina E quando veniva impiegata quella dieta; ratti alimentati con la dieta grezza e un supplemento orale di alfa-tocoferolo ha prodotto microsomi con basse attività di perossidasi lipidica simili a quelli osservati nei microsomi di ratti alimentati con dieta purificata. Con entrambe le diete è stato osservato un graduale aumento temporale dell'attività della benzpirene idrossilasi. Questo è stato interpretato come dovuto ad agenti ambientali che inducono diversi da quelli presenti nella dieta.
Proprietà biochimiche di alcuni enzimi metabolizzanti xenobiotici microsomiali nell'intestino tenue di coniglio.Il confronto di enzimi metabolizzanti xenobiotici nelle frazioni microsomiali epatiche e dell'intestino tenue di coniglio ha mostrato principalmente differenze quantitative; la maggior parte delle attività erano da due a sette volte superiori nel fegato che nell'intestino. Tuttavia, l'attività dell'UDP-glucuroniltransferasi era più alta nell'intestino che nel fegato. L'apparente assenza di benzene idrossilasi nell'intestino tenue era l'unica differenza qualitativa rilevata. L'anilina idrossilasi, l'aminopirina N-demetilasi e l'aril idrocarburo didrossilasi sono state caratterizzate nei microsomi intestinali e confrontate con quelle del fegato. La distribuzione di questi enzimi lungo l'intera lunghezza dell'intestino tenue ha mostrato che le attività massime degli enzimi erano presenti nei 60 cm prossimali di l'intestino Tutti gli enzimi in entrambi i tessuti hanno richiesto NADPH e O2 per la massima attività e sono stati inibiti dal citocromo c, SKF 525-A e CO. L'aggiunta in vitro di substrati di farmaci alle frazioni microsomiali di entrambi i tessuti ha prodotto i tipici spettri di legame di tipo I e di tipo II. Il confronto delle relazioni tra attività e pH, durata dell'incubazione e concentrazione di substrato e proteine ha suggerito che gli enzimi metabolizzanti xenobiotici intestinali ed epatici del coniglio studiati hanno caratteristiche simili.
Uno studio completo sul metabolismo dei farmaci in vitro in diverse specie di laboratorio.La carenza di scimmie rhesus da utilizzare negli studi di tossicità dei farmaci ha reso necessario ricerca di una potenziale specie sostitutiva in caso di necessità in un prossimo futuro. A tal fine, sono stati esaminati 14 parametri del metabolismo dei farmaci nelle frazioni microsomiali e solubili epatiche in preparati di scimmie rhesus maschi e femmine adulte, scimmie scoiattolo, Hanford maialini in miniatura, toporagni comuni e ratti Sprague-Dawley. Sono stati utilizzati substrati modello e sono stati effettuati confronti su base quantitativa. Tutte le specie testate hanno dimostrato attività in tutti i test tranne uno e tutti hanno mostrato qualche somiglianza con il rhesus. Nessuna delle specie , tuttavia, era totalmente paragonabile al rhesus nella capacità di metabolizzare i farmaci. La scimmia scoiattolo mostrava la minore somiglianza con il reso e il maiale in miniatura era il più simile. Ad eccezione della differenza prevista s nel ratto, il toporagno albero ha dimostrato l'unica differenza sessuale nel metabolismo dei farmaci, le attività enzimatiche delle femmine sono superiori a quelle del maschio in diversi percorsi. I dati suggeriscono che una qualsiasi delle quattro specie testate potrebbe essere un sostituto adatto per il reso negli studi sul metabolismo dei farmaci in vitro.
Attività ossidasi a funzione mista in un marsupiale. Il quokka (Seton;x brachyurus).Componenti della via del citocromo P-450 e tassi di ossidazione metabolismo epatico dei substrati, etilmorfina, 3,4-benzpirene e anilina, sono stati studiati in un marsupiale (il quokka, Setonix brachyurus) e confrontati con quelli del ratto. In generale il quokka aveva tassi di metabolismo del farmaco inferiori e maggiori Valori di KM rispetto a quelli trovati nel ratto. Differenze di sesso in Vmax e KM sono state trovate anche per il quokka. Queste specie e differenze di sesso nel metabolismo ossidativo dei farmaci non erano correlate con le concentrazioni misurate di citocromi P-450 o b5 o con NADPH-citocromo c reduttasi e sono state attribuite a differenze nei valori di KM e Vmax.
Polifarmacia nel trattamento psichiatrico dei pazienti anziani ospedalizzati: un'indagine su 12 Veterans Administration Hospitals.La polifarmacia con farmaci psicoattivi è stata censita in 1276 pazienti psichiatrici anziani da 12 ospedali della Veterans Administration. Un paziente su sei ha ricevuto due o più agenti psicoattivi. Nessuna combinazione specifica di farmaci era eccessivamente popolare. Le combinazioni somministrate più frequentemente, tioridazina più fenobarbital e clorpromazina più fenobarbital, sono state somministrate a soli 13 pazienti ciascuna ( 1% del campione). La grande maggioranza delle combinazioni riguardava agenti antipsicotici. Un farmaco antipsicotico, la tioridazina, era un componente di quasi un terzo delle combinazioni. Gli abbinamenti più frequenti erano un farmaco antipsicotico più e un antidepressivo, due farmaci antipsicotici , e un farmaco antipsicotico più un agente ansiolitico o sedativo-ipnotico. L'uso della polifarmacia era significativamente correlato al paziente nt età. Un paziente su quattro di età compresa tra 60 e 65 anni ha ricevuto due o più farmaci psicoattivi rispetto a solo uno su otto di età superiore ai 75 anni. Vengono discusse le implicazioni di questi risultati per il trattamento e la ricerca.
Salicilato del sistema nervoso centrale.La scarsa correlazione tra la tossicità clinica del salicilato e i livelli ematici sierici viene riavvicinata alla luce delle recenti prove che collegano la gravità clinica al volume iniziale di distribuzione (Vd). È noto che due variabili alterano il salicilato Vd in modo tale che i livelli sierici di salicilato sono fuorvianti (quindi, la variazione di Vd non viene rilevata dai metodi attuali). Queste variabili sono il legame alle proteine sieriche e il pH-dipendente rapporto ionizzato/non ionizzato nella frazione salicilato non legato. Le misurazioni della concentrazione di salicilato nel liquido cerebrospinale (CSF) eluderebbero queste variabili, ma sarebbero clinicamente impraticabili. Pertanto, si cerca un'alternativa ai livelli sierici totali inesatti di salicilato e al livelli di salicilato nel liquido cerebrospinale impraticabili per la valutazione della gravità dell'avvelenamento da salicilato Questo studio indica che, nei cani, i livelli sierici di salicilato non legato riflettono strettamente i livelli di salicilato nel liquido cerebrospinale, anche poiché è in corso una diminuzione del legame alle proteine sieriche. Tuttavia, la concentrazione sierica di salicilato non legato non riflette la concentrazione di salicilato nel liquido cerebrospinale poiché viene provocata una diminuzione del pH sierico (il salicilato nel liquido cerebrospinale è effettivamente aumentato quando il salicilato non legato nel siero è diminuito). D'altro canto, la misurazione del salicilato sierico non legato sembrerebbe preferibile alle misurazioni del salicilato sierico totale ora utilizzate in quanto il valore totale è diminuito notevolmente poiché sia il cambiamento del legame proteico che l'acidosi hanno prodotto un cambiamento nella distribuzione e il conseguente aumento del salicilato nel liquido cerebrospinale.
Determinazione del calcio ionizzato nel siero che è stato esposto all'aria.Abbiamo esaminato i cambiamenti nella concentrazione di calcio ionizzato nel siero dopo la sua esposizione all'aria. Campioni con concentrazioni di proteine totali comprese tra 50 e 90 g/litro sono state equilibrate con CO2 in azoto (5/95, in volume) o CO2 da sola, per produrre valori di pH da 7,0 a 8,0. Il calcio ionizzato è stato quindi misurato con un flussometro Orion sistema di elettrodi. Le curve relative al pH e alla concentrazione di calcio ionizzato avevano pendenze statisticamente identiche indipendentemente dalla concentrazione di proteine. È stato derivato un fattore, basato sulla variazione del pH, per correggere i valori del calcio ionizzato nel siero esposto all'aria e la sua validità è stata confermata confrontando i valori corretti per campioni lasciati a riposo a temperatura ambiente (23 gradi C) senza precauzioni anaerobiche con valori inizialmente ottenuti su aliquote anaerobiche degli stessi campioni.
Alcune proprietà della monoamino ossidasi piastrinica umana nell'anemia sideropenica.1. Attività della monoamino ossidasi nelle piastrine preparate dal sangue di pazienti con l'anemia da carenza era significativamente ridotta rispetto a quella delle piastrine di soggetti normali 2. I valori di Km dell'enzima piastrinico per i substrati dopamina, 5-idrossitriptamina, feniletilamina e chinuramina erano simili per l'enzima piastrinico dei gruppi ferro-carenti e normali. 3. Gli studi sul calore in attivazione hanno mostrato che la monoamino ossidasi piastrinica di soggetti con carenza di ferro era più labile a questo trattamento, rispetto all'enzima piastrinico di soggetti normali 4. La sensibilità della monoamino ossidasi piastrinica agli inibitori, alla clorgilina e deprenil, è stato aumentato nell'anemia sideropenica 5. Studi di legame con l'inibitore irreversibile della monoamino ossidasi che lega il 14C, deprenil, hanno mostrato che la quantità di enzima in grado di legare questo inibitore è stata ridotta del 48% nelle piastrine di pazienti con carenza di ferro rispetto alle piastrine di soggetti normali. 6. I risultati mostrano che c'è una quantità ridotta di enzima attivo nelle piastrine di soggetti carenti di ferro. Si suggerisce che il ferro sia necessario per la sintesi dell'apoenzima della monoamino ossidasi o che sia un cofattore per un enzima che lega covalentemente flavina-adenina dinucleotide all'apoenzima della monoamino ossidasi.
Effetto del fenobarbitale sui lipidi plasmatici in soggetti normali.1. Il fenobarbitale alla dose di 180 mg al giorno è stato somministrato a dieci soggetti normali per 3 settimane Si è verificato un aumento significativo del colesterolo plasmatico totale, del colesterolo delle lipoproteine a bassa densità plasmatica, dei trigliceridi delle lipoproteine a bassa densità (LDL) plasmatiche e delle proteine LDL plasmatiche. L'aumento del colesterolo LDL plasmatico ha rappresentato l'aumento del colesterolo plasmatico totale. è stata una riduzione significativa nel rapporto tra colesterolo LDL e proteina LDL 2. Non sono stati osservati cambiamenti significativi nei trigliceridi plasmatici totali, nei trigliceridi plasmatici delle lipoproteine a densità molto bassa (VLDL), nel colesterolo VLDL plasmatico o nella proteina VLDL plasmatica. 3. Evidenza che gli enzimi che metabolizzano i farmaci sono stati indotti dal fenobarbitale è stato fornito da un aumento della clearance dell'antipirina. Non è stata osservata alcuna relazione tra le variazioni del colesterolo plasmatico e le variazioni della clearance dell'antipirina. Gamma-glutamil transpeptidasi sierica wa s è aumentato anche dopo la somministrazione di fenobarbital, l'aumento non è correlato ai cambiamenti nella clearance dell'antipirina o nel colesterolo plasmatico.
Studi analitici di frazionamento subcellulare su fegato di ratto e su enterociti digiunali isolati con particolare riferimento alla separazione di lisosomi, perossisomi e mitocondri.1. Gli enterociti sono stati isolati dal digiuno di ratto e caratterizzati morfologicamente 2. I tentativi di separare gli organelli subcellulari degli enterociti, caratterizzati dai loro enzimi marcatori, con centrifugazione isopicnica non hanno avuto successo, ma una buona separazione di perossisomi, lisosomi e mitocondri è stata ottenuta mediante sedimentazione attraverso un gradiente di densità di saccarosio poco profondo con un gradiente inverso sovrapposto di destrano a basso peso molecolare. 3. Sono state confrontate le proprietà e le attività enzimatiche dei principali organelli subcellulari nelle cellule epatiche di ratto e negli enterociti.
La risposta ventilatoria nell'acidosi metabolica grave.1. La risposta ventilatoria nell'acidosi metabolica grave è stata studiata misurando la tensione arteriosa di anidride carbonica e il pH in sessantasette pazienti con pH ematico inferiore a 7-10, nessuno dei quali presentava ipercapnia, edema polmonare o insufficienza polmonare cronica. I risultati sono stati confrontati con quelli precedentemente riscontrati in pazienti con chetoacidosi diabetica non complicata. 2. Con tale confronto, cinquanta- due dei sessantasette pazienti con pH del sangue inferiore a 7-10 sono stati giudicati avere "ipocapnia appropriata", e quindici avevano "ipocapnia submassimale". Tredici degli ultimi quindici avevano insufficienza circolatoria e/o ipossia acuta, e sette su nove in cui è stato misurato avevano lattato plasmatico maggiore di 9 mmol/1. 3. L'iperventilazione era quindi generalmente ben sostenuta in questi pazienti con grave acidosi metabolica, tranne nella maggior parte di quelli con ipossia tissutale acuta. insufficienza nt tempo per raggiungere la massima iperventilazione in risposta alla loro acidosi, o forse la loro ipercapnia submassimale presagiva un imminente fallimento della risposta iperventilatoria.
Studi di laboratorio del sonno sul flurazepam: un modello per la valutazione dei farmaci ipnotici.I risultati di sei valutazioni separate del flurazepam 30 mg nel laboratorio del sonno sono stati combinati per determinare l'efficacia del farmaco nell'indurre e mantenere il sonno e i suoi effetti sulle fasi del sonno in un ampio campione di soggetti insonni. Gli studi combinati forniscono un modello da cui un profilo dettagliato degli effetti di un farmaco ipnotico a breve, intermedio- , e le condizioni a lungo termine possono essere valutate a fondo. Sebbene il sonno sia significativamente migliorato durante la prima notte di somministrazione di flurazepam, il picco di efficacia del farmaco non si è verificato fino alla seconda e alla terza notte consecutiva del farmaco. Il flurazepam ha continuato ad essere efficace nell'indurre e mantenere dormire con l'uso di farmaci a medio e lungo termine con solo una leggera perdita di efficacia con l'uso a lungo termine. Il sonno è stato inoltre notevolmente migliorato durante la prima e la seconda notte di sospensione del farmaco. Viene discussa l'efficacia di riporto dei metaboliti attivi del flurazepam da una notte di trattamento alla successiva notte di trattamento e alle notti di astinenza. Le implicazioni cliniche sono discusse per quanto riguarda il momento della massima efficacia del farmaco, le raccomandazioni sul dosaggio e il programma, la riduzione al minimo dei possibili effetti del farmaco sulle prestazioni diurne e il razionale e il metodo per utilizzare le vacanze farmacologiche nel regime di trattamento. Con questo profilo completo delle azioni del farmaco, il medico è in grado di utilizzare il farmaco in modo più razionale ed efficace nel trattamento del paziente insonne. Con la somministrazione a breve termine, il flurazepam ha prodotto una leggera diminuzione del sonno REM (Rapid Eye Movement) e un aumento della latenza REM. Questi effetti erano molto più pronunciati con la somministrazione del farmaco a medio termine, ancora una volta probabilmente a causa dell'accumulo di metaboliti attivi. Dopo il ritiro non c'era nessun rimbalzo nel sonno REM. Gli stadi 3 e 4 del sonno sono diminuiti progressivamente attraverso la somministrazione di farmaci brevi e intermedi. Con il ritiro iniziale, c'è stato un leggero recupero in entrambe le fasi del sonno.
Attività antibatterica e farmacocinetica di bacampicillina e ampicillina.Dosi orali equimolari singole di bacampicillina e ampicillina sono state somministrate a 9 soggetti sani su base randomizzata crossover. I dati sono stati interpretati in termini di un modello farmacocinetico aperto a 3 compartimenti. L'assorbimento intestinale della bacampicillina è risultato essere più rapido e completo di quello dell'ampicillina, determinando un aumento della biodisponibilità dal 30% al 40% misurato dall'area sotto i livelli sierici curva, l'escrezione urinaria e le costanti di velocità di assorbimento. Dopo la somministrazione di bacampicillina, nel siero e nell'acqua del "tessuto" sono stati raggiunti picchi molto più alti e nitidi rispetto alla somministrazione di ampicillina. La massima diluizione battericida (MBD) di i campioni di siero prelevati 1 ora dopo la somministrazione degli antibiotici contro 10 ceppi di Diplococcus pneumoniae erano più alti dopo la bacampicillina (p inferiore a 0,01), così come il MBD del periodo compreso tra 0 e 2 ore campioni di urina contro 10 ceppi di Escherichia coli. Sono necessari ulteriori studi clinici per valutare con precisione la possibile maggiore efficacia terapeutica della bacampicillina rispetto all'ampicillina.
Effetti del blocco cardioselettivo dei beta-adrenocettori sulla resistenza specifica delle vie aeree in soggetti normali e in pazienti con asma bronchiale.Gli effetti di singole dosi orali del cardioselettivo I farmaci beta-bloccanti adrenergici, metoprololo e tolamololo, sulla resistenza specifica delle vie aeree (SRaw) sono stati confrontati con quelli di propranololo e practololo in 6 volontari sani e in 12 pazienti con asma bronchiale. La pletismografia total body è stata utilizzata per misurare SRaw e la potenza di blocco di diversi antagonisti valutati dal grado di inibizione della tachicardia da esercizio su tapis roulant. Le variazioni correlate ai livelli plasmatici del farmaco. Propranololo e practololo sono stati misurati fluorometricamente e metoprololo mediante cromatografia gas-liquido a cattura di elettroni. In soggetti normali, riduzione di circa il 30% nella tachicardia indotta dall'esercizio risultava da dosi singole di 80 mg di propranololo (livelli plasmatici, 50,3, DS, da 29,5 a 60,8, DS, 26 ng/ml), 250 mg di practololo ( livelli plasmatici, 1,05, SD, da 0,32 a 1,10, SD, 0,55 mug/ml), 100 mg di metoprololo (livelli plasmatici, 137, SD, da 111 a 152, SD, 100 ng/ml) e 100 mg di tolamololo. Nei pazienti, queste dosi dei farmaci hanno prodotto aumenti significativi di SRaw. Questi aumenti sono stati maggiori di quelli dopo il placebo, ma in modo significativo solo durante l'effetto di picco 1 ora dopo il propranololo. Rispetto ai cambiamenti dopo il placebo, sono stati riscontrati anche effetti significativi su SRaw in 3 pazienti trattati con 200 mg di tolamololo. Nessuno dei farmaci ha avuto un effetto significativo su SRaw in soggetti normali. Si conclude che il metoprololo, il practololo e il tolamololo possono compromettere la funzione ventilatoria negli asmatici meno del propranololo e che ad alte dosi questa differenza potrebbe non essere dimostrabile.
Aspetti chirurgici dell'infertilità.Queste procedure chirurgiche che sono state utilizzate nella gestione dell'infertilità maschile sono state recentemente oggetto di revisione critica. In un recente studio (Getzoff, 1973) progettato per riassumere l'esperienza di 150 urologi nel trattamento chirurgico dell'infertilità maschile, sono stati rivelati diversi punti di vista preziosi. 1. È necessario stabilire criteri per etichettare un'operazione come \'successo\'. In questo gruppo, il 42% ha definito un'operazione di successo come l'aspetto postoperatorio di una normale analisi dello sperma nell'uomo azoospermico o oligospermico, indipendentemente dal fatto che sua moglie non riesca a concepire. Il 30% era più rigoroso e richiedeva che la moglie rimanesse incinta e portasse a termine un neonato normale e vitale 2. I prerequisiti per la selezione di candidati idonei per l'intervento chirurgico erano evidenti 3. L'importanza di stabilire tecniche operative di base efficaci è evidente 4. L'importanza di sottolineando i limiti della gestione chirurgica della fertilità ridotta.
Radioiodurazione migliorata del glucagone con il metodo della lattoperossidasi. Influenza del pH sulla sostituzione dello iodio.Per produrre un glucagone marcato con 125I adatto per saggi di radioleganti, abbiamo hanno studiato l'influenza delle variazioni nel metodo di iodurazione della lattoperossidasi. Sia il grado di sostituzione dello iodio che la formazione di monoiodo- o diiodo-tirosine erano dipendenti dal pH. La sostituzione aumentava e il rapporto diiodo-/monoiodotirosina diminuiva quando il pH aumentava. Questi due fattori influenzavano l'immunoreattività dello iodoglucagone in modo relativamente indipendente l'uno dall'altro. Si è riscontrato che la iodurazione a pH 10,0 con una media di 0,3 gatom I/mol di glucagone ha prodotto glucagone marcato con 125I con una maggiore immunoreattività e stabilità rispetto a quella prodotta a pH 7,5 e 8,5 convenzionali.
Arilamidasi nel muscolo umano normale e malato.È stato scoperto che gli omogenati del muscolo scheletrico umano contengono enzimi che catalizzano l'idrolisi delle beta-naftilammidi di leucina, arginina e lisina, noti substrati per arilamidasi neutre e basiche. Contenevano anche una traccia di attività verso l'alfa-aspartil-beta-naftilamide. Le arilamidasi muscolari sono risultate inibite da p-cloromercuribenzoato, Hg2+ e puromicina. Leucyl, arginyl e lysysl arylamidase sono stati leggermente attivati dagli ioni cobalto. Rispetto ai controlli, non sono state osservate differenze significative nelle attività dell'arilamidasi muscolare nei pazienti con distrofie muscolari e alcune malattie denervanti.
[Separazione di metanefrina e normetanefrina dall'urina per la determinazione di routine automatizzata fluorimetrica (autore\'s trad.)].È possibile separare metanefrina e normetanefrina da urina per la determinazione fluorimetrica automatizzata di routine mediante combinazione di partizione liquido-liquido con acetato di etile e purificazione dell'estratto tramite Amberlite XAD-4 La determinazione fluorimetrica differenziata si basa sull'ossidazione con esacianoferrato di potassio (III) nel presenza di ioni zinco e diversi valori di pH in un autoanalizzatore. Non sono stati osservati effetti di spegnimento. Le rese di recupero erano nell'intervallo del 60%, la deviazione standard relativa era inferiore al 10%.
[Efficienza comparata del volume corpuscolare medio (MCV) e della gamma-glutamiltransferasi sierica (gamma-GT) come test di screening per i bevitori di etanolo in eccesso (autore\' trad.)]. Il 53% dei bevitori di etanolo aveva, prima della disintossicazione, un gamma-GT superiore al limite superiore dell'intervallo di riferimento al livello di rischio del 2,5% (36 mU/ml). Il 44% aveva un volume corpuscolare medio (MCV) superiore al limite (99,2 mum3). Negli alcolisti non precedentemente "svezzati" durante una cura di riposo o in ospedale la proporzione diventa del 67 percento per gamma-GT ma rimane al 44 percento per MCV. gamma-GT quindi sembra un test migliore per lo screening di un'eccessiva assunzione di etanolo rispetto a MCV, specialmente quando il soggetto non è stato precedentemente svezzato.
Determinazione del folato eritrocitario mediante saggio di legame proteico competitivo preceduto da estrazione.La determinazione della concentrazione di folato eritrocitario mediante saggio di legame proteico competitivo dipende in modo critico sulla procedura di estrazione applicata. I risultati saranno influenzati da fattori variabili come l'età in vitro dei campioni di sangue, il grado di emolisi, la presenza di acido ascorbico, e il pH durante l'estrazione e l'eliminazione delle proteine. Il radiodosaggio è fortemente influenzato dal pH della miscela di reazione finale, dal metodo utilizzato per separare le molecole libere da quelle legate alle proteine e dalla configurazione molecolare dei folati presenti. Sulla base dei risultati sperimentali presentati, descrivo un metodo per la determinazione del folato eritrocitario.
Modifiche in vitro della concentrazione di P50 e eritrocitaria 2,3-difosfoglicerato.Abbiamo studiato le variazioni in vitro di P50 e di 2,3-difosfoglicerato eritrocitario concentrazione che si verifica nel sangue da 2 a 8 ore dopo la venipuntura. Quando il sangue è stato incubato a 37 gradi C, sono state osservate diminuzioni significative di P50 a 2, 4 e 8 ore. Tale cambiamento era significativamente inferiore quando il sangue veniva mantenuto a 4 gradi C. Il tasso di diminuzione di P50 non è stato modificato quando il pH è stato alterato aggiungendo acido lattico o bicarbonato di sodio al sangue prima dell'incubazione a 37 gradi C per 2 ore. La concentrazione di eritrociti 2,3-difosfoglicerato del sangue incubato a 37 gradi C ha fatto non cambia di 2 ore, ma è significativamente diminuito di 4 ore. Per evitare cambiamenti in vitro, si consiglia di determinare la P50 il prima possibile per il prelievo di sangue.
Fosfatasi alcalina. I. Cinetica e inibizione da parte del levamisolo di isoenzimi purificati dall'uomo.Ho studiato la cinetica e la sensibilità all'inibizione da parte del levamisolo e dell'R 8231 dei più importanti isoenzimi della fosfatasi alcalina umana. L'N-etilaminoetanolo si è dimostrato superiore all'ormai ampiamente utilizzato tampone dietanolamina, soprattutto per gli enzimi dell'intestino e della placenta, comportandosi come un attivatore non competitivo. Il pH ottimale dipende in gran parte dalla concentrazione del substrato. L'aggiunta di Mg2+ non ha alcun effetto sulle attività. Il significato dei valori di Km per la fosfatasi alcalina è in dubbio. Gli isoenzimi del fegato, delle ossa, dei reni e della milza umani sono fortemente inibiti dal levamisolo o dall'R 8231 a concentrazioni che influenzano appena gli enzimi dell'intestino o placenta. L'inibizione è stereospecifica, non competitiva e non modificata dal Mg2+. L'inibizione è contrastata dall'aumento delle concentrazioni di N-etilaminoetanolo. Il meccanismo di inibizione si suggerisce che lo ione sia la formazione di un complesso con il fosfoenzima.
Abuso di diazepam: incidenza, screening rapido e metodi di conferma.Abbiamo studiato 2500 pazienti sospettati di essere vittime di overdose. I campioni di sangue sono stati sottoposti a screening quantitativo per i farmaci più comunemente abusati, incluso il diazepam. Di questi, il 61% ha avuto risultati positivi, incluso il diazepam in circa uno su quattro. Un nuovo metodo gascromatografico rapido, semplice e quantitativo per l'analisi simultanea di diazepam e sedativi (in due strumenti). Viene utilizzata una singola estrazione a pH basso, preservando l'equilibrio del campione da utilizzare per confermare i metodi tramite spettrofotometria ultravioletta e cromatografia su strato sottile. Viene anche elencata la prevalenza di altri risultati positivi e i risultati per il diazepam sono classificati per età.
Effetti di condizioni simili al tumore, radiazioni lonizzanti e ipertermia sulla lisi immunitaria delle cellule tumorali da parte dei linfociti T citotossici.Linfociti T citotossici (CTL\'s) raccolti da colture miste di linfociti splenici (DBA/2 + C57BL) sono stati testati per la loro capacità di lisare cellule di mastocitoma P815 allogenico in varie condizioni di analisi simili a tumori, con o senza precedente esposizione a radiazioni ionizzanti o ipertermia (43 gradi C'è stata poca o nessuna diminuzione della citolisi immunitaria quando i CTL\' sono stati dosati dal rilascio di 51Cr in condizioni simili al tumore (cellule bersaglio in fase plateau, pH basso o anossia) o dopo irradiazione, ma l'attività citolitica è stata notevolmente ridotta quando CTL \' sono stati esposti al calore; 45 minuti di trattamento ipertermico hanno ridotto l'attività di maggiore o uguale al 99% riducendo la vitalità cellulare apparente (come indicato dall'esclusione del tripan blue) solo del 30%. Quando le cellule bersaglio P815 anziché il CTL \'s sono stati esposti t o calore la loro suscettibilità alla lisi immunitaria non è stata influenzata anche dopo tempi di trattamento letali per le cellule tumorali. Nonostante la diversa sensibilità al calore delle cellule CTL e P815, le curve dose-risposta per l'inibizione della sintesi proteica mediante calore, come indicato dall'incorporazione di [3H]leucina, erano simili per entrambi i tipi di cellule: né la depressione della sintesi proteica nel CTL riscaldato\ 's né la ridotta capacità citolitica di queste cellule è stata invertita entro 3 ore. Quando le cellule P815 irradiate o riscaldate sono state incubate con CTL\', le curve di sopravvivenza risultanti erano sempre additivi, indicando che né l'irradiazione né il trattamento termico hanno influenzato la suscettibilità delle cellule tumorali all'attacco immunitario. L'estrema sensibilità al calore dei linfociti T citotossici solleva importanti interrogativi sui possibili effetti del trattamento ipertermico sulla competenza immunitaria dei pazienti oncologici.
Effetto di timololo versus propranololo su ipertensione ed emodinamica.L'effetto di timololo versus propranololo su ipertensione, emodinamica e attività della renina plasmatica è stato valutato in 20 uomini. Dopo due settimane di placebo, 11 uomini hanno ricevuto timololo da 30 a 60 mg al giorno e nove uomini hanno ricevuto propranololo, da 240 a 480 mg al giorno, per cinque settimane in uno studio randomizzato in doppio cieco. I 20 uomini hanno poi ricevuto di nuovo il placebo per due settimane. Il cateterismo cardiaco destro è stato eseguito in tutti e 20 i pazienti dopo due settimane dal primo placebo e dopo cinque settimane di timololo o propranololo. Dosi equipotenti di timololo e propranololo erano ugualmente efficaci nell'abbassare significativamente la pressione sanguigna sistolica e diastolica in posizione supina e verticale e la frequenza cardiaca registrati su base ambulatoriale. Dosi equipotenti di timololo e propranololo hanno causato effetti emodinamici simili, inclusa una simile diminuzione significativa dell'indice cardiaco. Dosi equipotenti di timololo e propranololo hanno causato simi lar marcata depressione dell'attività della renina plasmatica. L'azione ipotensiva del timololo e del propranololo non era correlata al loro effetto sull'attività della renina plasmatica.
Determinazione di clomipramina e desmetil-clomipramina nel plasma o nelle urine mediante la tecnica del doppio derivato radioisotopico.Per la determinazione è stato sviluppato un metodo del doppio derivato radioisotopico di clomipramina e desmetil-clomipramina nel plasma o nelle urine. Dopo l'aggiunta di clomipramina marcata con 14C e desmetil-clomipramina come standard interni e l'isolamento estrattivo di entrambi i composti, la desmetil-clomipramina viene acetilata con [3H]anidride acetica. La [3H]acetammide è separato dalla clomipramina mediante cromatografia su strato sottile e misurata la sua radioattività. La clomipramina, estratta dal gel di cilice, viene fatta reagire con tricloroetil cloroformiato. L'uretano viene saponificato e decarbossilato. La desmetil-clomipramina risultante viene acetilata con [3H]anidride acetica. La La [3H]acetamide viene purificata mediante cromatografia su strato sottile e ne viene misurata la radioattività. La sensibilità del metodo è di 15 mug/litro per la clomipramina e 2 mug/lit er per desmetil-clomipramina. La sua specificità è stata accertata da un controllo incrociato con una tecnica di gascromatografia-spettrometria di massa.
La forma e la funzione delle spirocisti cnidari. 1. Ultrastruttura dell'esterno della capsula e relazione con la superficie sensoriale dei tentacoli.Il più comune organello intracellulare caratteristico di il Phylum Cnidaria o Coelenterata (Sottoclasse Zoantharia) è la spirocisti Sulla base della microscopia elettronica a scansione e trasmissione dei tentacoli di anemoni di mare e coralli, sembra che la punta della spirocisti sia esposta all'ambiente o ricoperta da una sottile membrana plasmatica e spesso ha un aspetto sassoso o nodoso. Intorno alla punta della spirocisti c'è una struttura ad anello che sembra formata dalla giunzione della cellula che la racchiude (lo spirocita) e la punta della spirocisti. Il filo della spirocisti è continuo con la capsula parete ed emerge dall'interno dell'anello apicale durante lo scarico. Nessuna struttura ciliare sembra essere associata a spirocisti. Sono invece stati trovati due diversi tipi di microvilli: microvilli corti sullo spiro cyte stesso e lunghi microvilli forniti dalla cellula o dalle cellule che circondano lo spirocita. Il significato di questi risultati è discusso in relazione alla ricezione di stimoli per lo scarico della spirocisti.
Distribuzione differenziale della transglutaminasi nel fegato normale di ratto e nell'epatoma di ratto.La distribuzione dell'attività della transglutaminasi è stata determinata nel fegato normale di ratto, un 3\'-metil- Epatoma primario indotto da 4-dimetilaminoazobenzene e epatoma di Novikoff Oltre il 90% dell'attività enzimatica totale è stata trovata nel surnatante di 105.000 X g del fegato normale, mentre solo il 30% è stato trovato in questa frazione degli epatomi, il resto è stato trovato nella frazione particolata. Il modello di distribuzione di is non è correlato alla distribuzione delle proteine né è cambiato durante la proliferazione cellulare, poiché la rigenerazione del fegato e del tessuto embrionale ha avuto lo stesso modello del fegato normale. La proteina cellulare era un substrato accettore adatto per l'enzima. Analisi cinetiche hanno mostrato che gli enzimi del fegato e dell'epatoma avevano Km e Vmax simili per l'incorporazione della putrescina nella proteina cellulare. l'enzima può anche agire come molecola accettore.
Condizioni di coltivazione richieste per la formazione di emicisti in vitro da carcinoma della vescica di ratto R-4909.Il carcinoma della vescica urinaria di ratto R-4909 è cresciuto facilmente in in vitro. Nelle aree in cui si è verificata la densità di saturazione nelle colture, sono state osservate emicisti occasionali. Una modifica della tecnica che produce "colture imballate " ha provocato la comparsa di un numero maggiore di emicisti. Quattro isolati clonali di R-4909 sono stati studiati anche in colture confezionate Il clone B ha formato emicisti in abbondanza Il clone D ha prodotto emicisti occasionali simili alla linea del ceppo genitore Non sono state osservate emicisti nelle colture del clone A o del clone C. Il numero di emicisti formate dal clone B nella coltura compatta rispondeva al rapporto tra numero di cellule e volume del terreno, alla concentrazione sierica nel terreno e al pH del terreno. Quest'ultimo era di particolare interesse poiché un pH di 7,8 aumentava e un pH di 6,6 inibiva la formazione di emicisti. Gli effetti erano tutti reversibili. Su scanni ng microscopia elettronica, abbiamo trovato strutture di membrana cellulare ben sviluppate tra cellule contigue. In terreni con siero sufficiente per la formazione di emicisti, le articolazioni tra le cellule erano prominenti. Con basse concentrazioni sieriche, non si formavano emicisti e le articolazioni intercellulari erano meno distinte. Interpretiamo la formazione di emicisti come espressione del trasporto di fluidi da parte degli epiteli, una funzione che richiede una costellazione di caratteristiche differenziate all'interno delle cellule e nel loro livello di associazione integrata.
Inibizione transitoria della proliferazione cellulare in colture monostrato di glioma di ratto da parte del cortisolo.L'effetto del cortisolo 3 muM sulla proliferazione cellulare nel glioma di ratto (ceppo C6) sono state studiate colture monostrato. Le misurazioni della densità cellulare hanno mostrato che le cellule C6 trattate con cortisolo hanno continuato a proliferare ai massimi tassi di fase logaritmica per 1 o 2 giorni. Quindi la proliferazione cellulare è cessata mentre la crescita nelle colture di controllo continuava nella fase stazionaria. Un periodo di crescita di 2 giorni è seguita l'inibizione durante la quale le densità cellulari erano inferiori del 30-50% rispetto ai controlli. La crescita è ripresa successivamente e le densità cellulari finali erano simili a quelle dei controlli. La presenza di epicortisolo (l'isomero biologicamente inattivo del cortisolo) nel terreno di coltura non ha alterato il tasso di crescita della fase logaritmica rispetto ai controlli. Durante il periodo iniziale di crescita continua dopo l'esposizione al cortisolo, il pH del terreno è diminuito alla stessa velocità nelle colture di controllo e trattate. Durante il periodo di inibizione della crescita, il colorante eritrosina B è stato escluso ugualmente bene (superiore al 94%) dalle cellule di controllo e trattate e non sono state rilevate differenze morfologiche mediante microscopia a contrasto di fase. Quando il terreno di coltura veniva sostituito giornalmente, le cellule di controllo a densità elevate continuavano a proliferare a una velocità ridotta. Nelle colture trattate con cortisolo, il periodo di inibizione della crescita è iniziato 3 giorni dopo che le cellule sono state inizialmente esposte al cortisolo. È seguito un periodo di inibizione della crescita di 2 giorni durante il quale il pH dei terreni di 1 giorno di età sia dalle colture di controllo che da quelle trattate è diminuito da 7,4 a 6,9. La crescita è ripresa successivamente nelle colture trattate per produrre densità cellulari elevate simili a quelle dei controlli. Questi risultati dimostrano che il cortisolo a concentrazioni considerate chemioterapiche in vivo esercita un effetto inibitorio transitorio sulla proliferazione delle cellule di glioma C6.
Una valutazione dell'L-glutammato come trasmettitore rilasciato dai terminali del nervo ottico del piccione.È stata studiata la possibilità che l'acido L-glutammico sia il trasmettitore eccitatorio rilasciato dalle terminazioni del nervo ottico del tetto ottico del piccione. (1) Gli strati superficiali del tetto contengono alti livelli di glutammato endogeno e L-[3H] glutammato accumulato mediante un processo di assorbimento ad alta affinità. (2) Studi subcellulari e autoradiografici indicavano che il 10-30% del L-[3H]glutammato accumulato esogenamente era localizzato all'interno dei sinaptosomi e che l'11-15% dei sinaptosomi era stato marcato. (3) I sinaptosomi accumulatori di glutammato si sono sedimentati alla stessa densità isopicnica di quelli pizzicati a nuovamente discusso in relazione a un possibile ruolo dell'L-glutammato come \'trasmettitore del nervo ottico\' e nel contesto di prove precedenti che implicano il glutammato come trasmettitore eccitatorio.
beta-Galactosidase from Bacillus stearothermophilus.Diversi ceppi di bacilli sporigeni aerobi termofili sintetizzano costitutivamente la beta-galattosidasi (EC 3.2.1.23). la costitutività non è apparentemente il risultato di un repressore sensibile alla temperatura. La beta-galattosidasi di un ceppo, studiata in estratti privi di cellule, ha un pH ottimale tra 6,0 e 6,4 e una dipendenza del pH molto netta dal lato acido del suo ottimale. La temperatura ottimale per questo enzima è di 65 gradi C e l'energia di attivazione di Arrhenius è di circa 24 kcal/mol al di sotto di 47 gradi C e 16 kcal/mol al di sopra di tale temperatura. A 55 gradi C il Km è 0,11 M per il lattosio e 9,8 X 10( -3) M per 9-nitrofenil-beta-D-galattopiranoside. L'enzima è fortemente prodotto inibito dal galattosio (Ki è uguale a 2,5 X 10(-3) M). È relativamente stabile a 50 gradi C, perdendo solo la metà di la sua attività dopo 20 giorni a questa temperatura. A 60 gradi C si perde più del 60% dell'attività tra 10 minuti Tuttavia, l'enzima è in qualche modo protetto dall'inattivazione termica da parte delle proteine e in presenza di 4 mg/ml di albumina sierica bovina l'enzima viene inattivato solo per il 18% in 10 min a 60 gradi C. Il suo peso molecolare, stimato mediante elettroforesi su gel su disco , è 215.000.
La regolazione dell'acetil-CoA sintetasi di Saccharomyces cerevisiae.L'attività dell'acetil-coenzima A sintetasi (EC 6.2.1.1) di Saccharomyces cerevisiae è stata determinata da un procedura di analisi radioattiva. L'attività in vitro è stata inibita in modo significativo da NADPH, NADH o AMP e in misura minore da NADP, NAD o ADP. L'acido glutammico e l'acido alfa-chetoglutarico non erano inibitori. Il livello dell'enzima è stato represso quando le cellule sono stati coltivati in un mezzo nutritivo complesso rispetto al mezzo minimo. Tuttavia, un acido glutammico auxotroph glul, quando cresciuto in un eccesso di acido glutammico, ha dimostrato un aumento di cinque volte dell'acetil-CoA sintetasi.
Inibizione della crescita, ossidazione del ferro e dello zolfo in Thiobacillus ferrooxidans da parte di semplici composti organici.Ossidazione del ferro e dello zolfo da parte di Thiobacillus ferrooxidans e crescita su ferro ferroso sono stati inibiti da una varietà di composti organici a basso peso molecolare. Le influenze della struttura chimica degli inibitori organici, il pH, la temperatura, il trattamento fisico delle cellule e l'aggiunta di ioni inorganici inibitori o stimolatori e l'ossidazione del ferro suggeriscono che un fattore importante che contribuisce a gli effetti inibitori sull'ossidazione del ferro sono l'elettronegatività relativa della molecola organica. I dati suggeriscono anche che i composti organici inibitori possono (i) influenzare direttamente il sistema enzimatico ferro-ossidazione, (ii) reagire in modo abiologico con il ferro ferroso all'esterno della cellula, (iii ) interferiscono con i ruoli di fosfato e solfato nell'ossidazione del ferro e (iv) distruggono in modo non selettivo l'involucro o la membrana cellulare.
Adsorbimento, desorbimento e attività della glucosio ossidasi su specie di argilla selezionate.L'adsorbimento dell'enzima glucosio ossidasi (EC 1.1.3.4) alle argille seguiva lo schema descritto per altre proteine come dipendenti dal pH. L'adsorbimento massimo si è verificato al punto isoelettrico o al di sotto del punto isoelettrico dell'enzima. La quantità di enzima adsorbito all'argilla è stata influenzata dal tipo di argilla utilizzata e anche dai cationi saturanti. mostravano basse attività specifiche, e quando le quantità di enzima adsorbito si avvicinavano alla massima staturazione dell'argilla, le attività specifiche aumentavano avvicinandosi a quella determinata per l'enzima libero. L'adsorbimento della glucosio ossidasi implicava un meccanismo di scambio cationico indipendente dalla temperatura e l'enzima adsorbito sulle superfici di argilla poteva essere desorbito in forma attiva dall'innalzamento del pH della soluzione di sospensione. Questo è stato seguito da una fissazione dipendente dalla temperatura più lenta, probabilmente dal legame idrogeno, che ha portato all'irreversibilità della proteina. ly adsorbito su superfici argillose. Si propone che all'adsorbimento della glucosio ossidasi sulle superfici argillose si sia verificato il disfacimento della struttura proteica, che ha permesso la penetrazione della proteina negli spazi interlamellari della montmorillonite. Questa proposta si basava sull'espansione osservata della montmorillonite a 23 A e sulla diminuzione della quantità di un lisozima della seconda proteina adsorbito con tempi di incubazione prolungati dei complessi glucosio ossidasi - argilla a pH 4,5.
Arricchimento selettivo di Shigella in presenza di Escherichia coli mediante l'uso di 4-cloro-2-ciclopentilfenil beta-D-galattopiranoside.Una procedura che coinvolge è stato sviluppato l'uso di brodo di lattosio tamponato con citrato (pH 6,5) contenente un analogo di un beta-galattoside (4-cloro-2-ciclopentilfenil beta-D-galattopiranoside) per l'arricchimento di Shigella in competizione con un popolazione di Escherichia coli Il sistema sfrutta l'attività beta-galattosidasica di E. coli che idrolizza il derivato fenolico del beta-galattoside a galattosio e una frazione aglicone (4-cloro-2-ciclopentilfenolo) che è tossica per E. coli ma è tollerato da Shigella. La procedura è particolarmente efficace nell'arricchimento di S. sonnei e S. flexneri; S. dynsenteriae e S. boydii sono arricchiti in misura minore.
L'effetto del pH sulla risposta atriale del coniglio all'istamina.La risposta corontropica degli atri di coniglio isolati nel normale terreno Tyrode\'s aumenta in modo monotono con l'aumentare delle dosi di istamina (9 X 10-7 -9 X 10-4 M). I grafici dell'inverso della risposta contro l'inverso della concentrazione erano lineari e da questi grafici sono stati derivati i valori della risposta massima teorica alla dose \'infinita\' e per la concentrazione di istamina del pH richiesta per evocare una risposta massima dimezzata. L'alterazione del pH modificando (HCO3-) a pCO2 costante, (Na) e l'ossolalità non hanno influenzato in modo apprezzabile la risposta all'istamina nell'intervallo pH 7,0-7,6. pH inferiore a 7,0 l'entità della risposta all'istamina è stata ridotta a tutte le concentrazioni di istamina testate. Nell'intervallo di pH 7,0-7,6, le aggiunte di NaHCO3 a pCO2 costante hanno aumentato la velocità spontanea degli atri di coniglio (in assenza di istamina); tuttavia, c'era scarso effetto della variazione del pH (in questo intervallo) alterando (HCO3-) a pCO2 costante quando (Na+) e osmolaità sono state mantenute costanti. L'immersione in soluzioni a pH\' inferiori a 7,0 ha portato alla diminuzione della velocità spontanea e alla contrazione della forza. È probabile che la depressione dell'attività dell'adenil ciclasi piuttosto che un cambiamento specifico nella ionizzazione del recettore dell'istamina sia responsabile di una ridotta risposta all'istamina a pH 6,9.
Metabolismo dell'etanolo da parte del cuore di ratto e attività dell'alcol deidrogenasi.Cuori di ratto perfusi con tampone ossigenato contenente [1-14C]etanolo metabolizzato piccole quantità di etanolo in anidride carbonica. Sono necessarie tecniche molto sensibili per separare la 14CO2 risultante dall'etanolo. Questo metabolismo non è inibito dai livelli di pirazolo che inibiscono notevolmente l'alcol deidrogenasi epatica NAD dipendente (EC 1.1.1.1). Studi in vitro suggeriscono che NADP funzioni come cofattore per l'attività dell'alcol deidrogenasi del cuore di ratto degli omogenati cardiaci grezzi. I parametri cinetici, l'attività specifica e la dipendenza dal pH dell'attività enzimatica misurata in questi esperimenti suggeriscono che potrebbe avere un ruolo minore nel metabolismo dell'etanolo da parte del ratto.
Catabolismo delle purine nell'uomo: caratterizzazione della 5\'-nucleotidasi microsomiale placentare.5\'-nucleotidasi microsomiale placentare umana (EC 3.1.3.5) è stato preparato privo di fosfatasi alcalina mediante focalizzazione isoelettrica. Durante la preparazione di sei placente sono state isolate un totale di sette varianti elettroforetiche. Solo da tre a sei varianti sono state trovate in una singola placenta. I pH isoelettrici erano 6,70, 6,44, 6,23, 6,02 , 5.76, 5.63 e 5.44. Questi sono risultati essere composti da quantità variabili di una forma a peso molecolare grande, medio e basso. I pesi molecolari apparenti della forma media e leggera dell'enzima erano rispettivamente 86 500 e 43 500, come stimata dal raggio di Stokes e dalle determinazioni della velocità di sedimentazione. Le varianti elettroforetiche non erano distinguibili rispetto all'attività specifica e alle costanti di Michaelis per AMP, GMP o CMP o inibizione da parte di ATP, CTP o adenosina. Queste varianti elettroforetiche sembravano essere pse udoisoenzimi basati su diversi stati di aggregazione di una sequenza primaria comune. C'era un'ampia gamma di specificità di substrato tra i nucleosidi 5\'-monofosfati che includevano i composti di 2-desossiribosio. Con AMP pari a 100, l'attività del substrato era: CMP, 122; NMN, 74; GMP, 68: IMP, 63; XMP, 28 e UDP-glucosio, 68. Le costanti di Michaelis per AMP, GMP e CMP variavano rispettivamente da 12-18 muM, da 33-67 muM e da 170-250 muM. Sebbene la 5\'-nucleotidasi fosse attiva in assenza di catione bivalente, 5 mM MgCl2 stimolava l'attività enzimatica al 234% del controllo e spostava il pH ottimale di 9,8 a un plateau da pH 7,4-9,8.
5\'-nucleotidi modificati resistenti alla 5\'-nucleotidasi: isolamento di 3-(3-ammino-3-carbossipropil) uridina 5\'-fosfato e N2, N2-dimetilguanosina 5\'-fosfato da veleno di serpente idrolizzati di transfer RNA.In questo laboratorio è stata recentemente sviluppata una procedura per la misurazione quantitativa dei costituenti O2\'-metilnucleosidi dell'RNA (Gray, MW Can. J. Biochem. 53, 735-746 (1975)). Questo metodo di analisi si basa sulla resistenza dell'O2\'-metilnucleoside 5\'-fosfati (pNm) (generato dall'idrolisi della fosfodiesterasi dell'RNA) alla successiva defosforilazione mediante veleno 5\'-nucleotidasi (EC 3.1.3.5). Nella presente indagine, sono stati identificati due 5\'-nucleotidi con base modificata, ciascuno dei quali mostrava un'insolita resistenza alla 5\'-nucleotidasi. Questi composti sono stati caratterizzati da una varietà di tecniche come N2, N2-dimetilguanosina 5\'-fosfato (pm2/2G) e 3-(3-ammino-3-carbossipropil)uridina 5 \'-fosfato (p4abu3U). A causa della loro resistenza alla 5\'-nucleotidasi, pm2/2G e p4abu3U sono isolati insieme al pNm nella frazione mononucleotidica degli idrolizzati veleniferi dell'RNA di trasferimento. In condizioni di idrolisi, la stabilità di p4abu3U è paragonabile a quella di un pNm, consentendo l'analisi quantitativa del nucleotide. La proporzione (media +/- SD) di p4abu3U negli idrolizzati di veleno dell'embrione di grano e del tRNA di Escherichia coli è stata determinata essere 0,35 +/- 0,03 (n=5) e 0,14 +/- 0,02 (n=4) mol%, rispettivamente. L'assenza di p4abu3U negli idrolizzati di veleno del tRNA di lievito implica l'assenza del corrispondente nucleoside nel tRNA di lievito, in accordo con i dati esistenti. Il recupero variabile di pm2/2G dagli idrolizzati di veleno di embrione di frumento e tRNA di lievito indica che in condizioni di idrolisi, questo nucleotide modificato in base è solo parzialmente resistente alla 5\'-nucleotidasi. La completa assenza di pm2/2G negli idrolizzati di veleno del tRNA di E. coli è coerente con la nota assenza di N2, N2-dimetilguanosina in questo RNA. Queste osservazioni dimostrano che la resistenza alla 5\'-nucleotidasi è un criterio necessario ma non sufficiente per concludere che un 5\'-nucleotide è O2\'-metilato. Quando applicati all'RNA ribosomiale di embrioni di grano, i metodi analitici descritti in questo rapporto non sono riusciti a rivelare alcun composto avente le proprietà di carica distintive di p4abu3U. Sembra quindi che la 1-metil-3-(3-ammino-3-carbossipropil)pseudouridina, recentemente caratterizzata come costituente del 18 S rRNA delle cellule di criceto cinese (Saponara, AG \& Enger, MD Biochim. Biophys. Acta 349 , 61-77 (1974)), potrebbe non essere presente nell'RNA ribosomiale dell'embrione di frumento.
Effetto cinetico di alcune ammine alifatiche sull'alcol deidrogenasi di lievito.Gli studi sulla velocità iniziale dell'ossidazione dell'etanolo catalizzata dall'alcol deidrogenasi di lievito (EC 1.1.1.1) sono stati eseguita in presenza di concentrazioni variabili di ammine alifatiche nell'intervallo di pH da 8,0 a 10,5. Le ammine alifatiche attivano o inibiscono l'enzima a seconda che il pH sia maggiore o minore di 9,5, suggerendo che le ammine protonate si attivano e le ammine non protonate inibiscono l'enzima. Le ammine alifatiche attivano l'alcol deidrogenasi del lievito diminuendo Kb mentre inibiscono l'enzima aumentando sia Ka che Kia. Quando in soluzione sono presenti ammine sia protonate che non protonate, si osserverà attivazione o inibizione complessiva a seconda della concentrazione relativa dell'enzima. due specie di ammine.
Modifica delle proprietà regolatorie della piruvato chinasi di Neurospora mediante crescita a temperature elevate.La piruvato chinasi (EC 2.7.1.40) è stata isolata da Neurospora crassa micelio cresciuto a 28 gradi C (PK-28) ea 42 gradi C (PK-42) Le proprietà regolatorie, in particolare la risposta verso l'effettore allosterico fruttosio 1,6-difosfato (FDP), erano diverse nei due enzimi. PK-28 ha mostrato un'attivazione da parte di FDP ma PK-42, in condizioni comparabili, sembrava essere attivato da basse concentrazioni di FDP e inibito da altre. Per PK-28, la formazione di complessi con FDP comporta un abbassamento del punto isoelettrico da 6,40-5,50, che rappresentano rispettivamente il pI dell'enzima non legato e quello del complesso Al contrario, PK-42 mostra un debole legame con FDP come suggerito dalla mancanza di diminuzione del punto isoelettrico durante il trattamento con concentrazioni comparabili di FDP Studi con quenching di residui aromatici fluoresc enza di PK-28 e PK-42, dopo il legame di FDP, indicano che sebbene questo ligando si leghi a entrambi i tipi di enzimi, l'affinità per i due è molto diversa. Costanti di dissociazione di 9,3 muM e 0,1 mM sono state calcolate per il legame di FDP a PK-28 e PK-42, rispettivamente. Si conclude che la crescita a temperature elevate ha indotto un cambiamento conformazionale nella piruvato chinasi che porta a una parziale desensibilizzazione del sito allosterico. La natura del/i fattore/i responsabile/i di questo cambiamento non è al momento chiara.
Colina acetiltransferasi, glutammato decarbossilasi e tirosina idrossilasi nella coclea e nel nucleo cocleare della cavia.Attività della colina acetiltransferasi (ChAC), glutammato decarbossilasi (GAD) e tirosina idrossilasi (TH), enzimi che catalizzano la sintesi di acetilcolina (ACh), acido gamma-aminobutirrico (GABA) e catecolamine, rispettivamente, sono stati misurati nella coclea e nel nucleo cocleare della cavia. di Corti, terzo turno, era di 1270 pmole ACh formata/min/mg proteina (ChAc, 1270) ed era superiore a quella del turno 4 (ChAc, 543). L'attività di ChAc era maggiore quando la preparazione includeva la regione delle cellule ciliate interne rispetto a quando non L'attività GAD nei campioni di turno 3 e 4 combinati era bassa, 0,17 nmole GABA formato/min/mg proteina (GAD, 0,17) Tutti e 3 gli enzimi erano bassi nel nervo uditivo: ChAc, 1,7, GAD, 0,10 e TH, 1,0 pmole DOPA formata/min/mg proteina Nel nucleo cocleare i valori erano: ChAc, 129, GAD, 1,70 e TH, 2.7. I risultati sulla distribuzione dell'attività di ChAc nell'organo di Corti si adattano all'ipotesi che le fibre nervose olivocleari siano colinergiche. A causa del basso GAD nella coclea, è improbabile che il GABA sia trasmettitore nell'organo di Corti. Allo stesso modo, è improbabile che ACh, GABA o una catecolamina siano un trasmettitore tra il nervo uditivo e il nucleo cocleare.
La stimolazione dell'attività della tirosina idrossilasi da parte dell'AMP ciclico nei sinaptosomi e nelle preparazioni di enzimi striatali solubili.Dibutyryl AMP ciclico (dB-cAMP) provoca una concentrazione- stimolazione dipendente dell'attività della tirosina idrossilasi nei sinaptosomi striatali e mesolimbici La percentuale di stimolazione è significativamente più alta nei sinaptosomi mesolimbici rispetto ai sinaptosomi striatali dB-cAMP e agenti depolarizzanti (ouabaina o veratridina) hanno un effetto additivo sulla tirosina idrossilasi sinaptosomiale attività, indicando che stimolano l'attività della tirosina idrossilasi mediante meccanismi diversi. Il cAMP non stimola l'attività della tirosina idrossilasi striatale solubile a meno che non venga aggiunto in combinazione con ATP e Mg2+, composti necessari per l'attività della proteina chinasi cAMP-dipendente. Il cAMP ha suscitato la percentuale la stimolazione dell'attività della tirosina idrossilasi solubile dipende dalla concentrazione della proteina chinasi aggiunta e dal pH del reazione. dB-cAMP ha lo stesso effetto sullo stato cinetico della tirosina idrossilasi nei sinaptosomi del cAMP sulla tirosina idrossilasi solubile. Il nucleotide non altera il Km apparente per la tirosina, riduce il Km per il cofattore pteridina e aumenta il Ki per la dopamina. Pertanto, il cAMP aumenta l'affinità della tirosina idrossilasi per il cofattore pteridina e diminuisce contemporaneamente l'affinità per l'inibizione del prodotto finale.
Depressione sinaptica in una sinapsi in Aplysia californica: analisi in termini di un modello di flusso materiale del neurotrasmettitore.Quando una coppia di stimoli separati da un appropriato è dato al connettivo visceropleurico destro di Aplysia californica l'ampiezza del secondo EPSP suscitato nella cellula R15 è solitamente inferiore all'ampiezza del primo EPSP Nel presente lavoro mostriamo che questo fenomeno, la depressione sinaptica, può essere analizzato in termini del modello del flusso di materiale dell'economia dei neurotrasmettitori sviluppato nelle nostre precedenti pubblicazioni. Mostriamo specificamente come i cambiamenti nei 4 parametri del modello; A, il pool disponibile di trasmettitore; F, la frazione del pool disponibile rilasciato da un potenziale d'azione presinaptico; M, il tasso di mobilizzazione del trasmettitore nel pool disponibile e D, la costante di velocità di smobilitazione del trasmettitore dal pool disponibile, tutti influiscono sulla depressione sinaptica. Inoltre, mostriamo come i cambiamenti transitori nella F e M, che si osservano immediatamente e per secondi dopo uno stimolo, influenzano l'andamento temporale della depressione sinaptica. Usando questa analisi abbiamo quindi testato le nostre precedenti deduzioni sui cambiamenti nei parametri del modello prodotti da manipolazioni farmacologiche o stimolazione ripetitiva, confrontando gli effetti osservati di queste manipolazioni sulla depressione sinaptica con le previsioni teoriche. I risultati teorici e sperimentali concordavano, rafforzando così sia le nostre precedenti conclusioni sulla modalità di azione di queste manipolazioni sia il modello stesso.
Differenziazione biochimica del cervello di mammifero dissociato meccanicamente in coltura cellulare aggregante.Le cellule cerebrali di topo e ratto sono state dissociate mediante una semplice tecnica di setacciatura meccanica e studiate in coltura per la formazione di aggregati e le attività di colina acetiltransferasi, acetilcolinesterasi, acido glutammico decarbossilasi, tirosina 3-monoossigenasi, L-aminoacido decarbossilasi aromatica, catecol metiltransferasi e monoamino ossidasi. Le cellule del tessuto fetale e neonatale formavano aggregati ma non cellule dai tessuti più di due giorni dopo la nascita. Il modello di sviluppo delle attività enzimatiche in questi aggregati variava con l'età del tessuto di partenza. I livelli più alti di attività specifica per gli enzimi neurone-specifici sono stati trovati dopo 3-4 settimane in coltura per aggregati di cellule derivato da cervelli relativamente non sviluppati.
Valori a riposo e stimolati dei parametri del modello che regolano il rilascio del trasmettitore in una sinapsi in Aplysia californica.Il rilascio del trasmettitore (R) in una sipasi in Aplysia californica può essere analizzato in termini di un modello con i seguenti parametri: A, il pool disponibile del trasmettitore; F, la frazione del pool disponibile rilasciato da un potenziale d'azione presinaptico; M, il tasso di mobilitazione del trasmettitore nel pool disponibile; D, il tasso costante di smobilitazione del trasmettitore dal pool disponibile. Nel presente articolo mostriamo che: (1) iniziando con un'analisi del recupero dalla depressione del secondo di una coppia di EPSP isolati separati da una serie di intervalli di circa 10-60 sec, e supponendo che il recupero sia dovuto al riempimento di un A esaurito, è possibile stimare i valori di equilibrio a riposo di questi parametri; (2) cambiamenti di questi parametri quando viene raggiunto un nuovo stato di equilibrio dopo una stimolazione prolungata (ad es. 300 stimoli a 1/sec) può quindi essere determinato quantitativamente; (3) l'aumento della velocità di rilascio del trasmettitore osservato durante e dopo la stimolazione ripetitiva è la conseguenza di aumenti di F e M con cambiamenti di A che seguono passivamente; e (4) ci sono correlazioni significative tra certi parametri a riposo e tra i valori di certi parametri a riposo e questi parametri dopo stimolazione. Le preparazioni con una grande F a riposo tendono ad avere una relativamente piccola A a riposo. Le preparazioni con una grande F o M a riposo tendono ad aumentarle meno con la stimolazione rispetto alle preparazioni con valori di riposo più piccoli di questi parametri. I preparati con grandi aumenti di F dipendenti dallo stimolo tendono ad avere grandi aumenti di M dipendenti dallo stimolo.
Variazioni nel corso del tempo dell'attività della tirosina idrossilasi nel locus coeruleus del ratto dopo la distruzione elettrolitica dei nuclei del rafe dorsale o centrale.Variazioni nel corso del tempo dell'attività della tirosina idrossilasi sono stati misurati nel locus coeruleus del ratto albino dopo coagulazione elettrolitica del nucleo del rafe dorsale o del nucleo del rafe centrale Aumenti altamente significativi sono stati misurati 4 giorni dopo la lesione del rafe dorsale (30,33%) e del rafe centralis (81,55%) rispetto ai valori di controllo, mentre l'attività nei gruppi A9 e A10 era invariata a questo punto. Insieme ad altre evidenze sperimentali, viene proposta l'ipotesi che i neuroni catecolaminergici situati nel locus coeruleus siano direttamente e/o o indirettamente controllato dai neuroni contenenti serotonina situati nei nuclei del sistema rafe anteriore.
Prova che il legame rapido della noradrenalina appena accumulata all'interno dei sinaptosomi coinvolge le vescicole sinaptiche.Quando i sinaptosomi del cervello di ratto sono stati incubati con [3H]noradrenalina per 1 min e quindi esposto a shock osmotico, è stato rilasciato solo circa il 20% della noradrenalina [3H] appena accumulata. sinaptosoma. Anche la [3H]dopamina e la [3H]5-idrossitriptamina si legavano rapidamente all'interno dei sinaptosomi, ma la [3H]glicina e l'acido [3H]gamma-aminobutirrico non lo erano. Solo la reserpinizzazione (5 mg/kg, ip, 24 h prima della preparazione) ha leggermente ridotto il tasso iniziale di captazione della [3H]noradrenalina da parte dei sinaptosomi. Tuttavia, quando i sinaptosomi reserpinizzati sono stati sottoposti a shock osmotico, la maggior parte della radioattività appena accumulata è stata rilasciata; questa radioattività è stata identificata cromatograficamente come [3H]noradrenalina. Sulla base dei risultati con preparati riserpinizzati, sembra probabile che (1) il rapido legame intrasinaptosomiale coinvolga le vescicole sinaptiche e (2) il sistema di trasporto della membrana neuronale stesso possa essere in grado di guidare l'assorbimento della noradrenalina da parte dei terminali nervosi. Il rapido legame vescicolare osservato potrebbe non essere essenziale per l'accumulo dell'ammina da parte dei terminali presinaptici durante brevi esposizioni.
Studi istologici ed enzimatici delle vie serotoninergiche mesolimbiche e mesostriatali.Lesioni selettive della dorsale (B7), mediana (B8) o laterale ( B9) I nuclei di rafe sono stati realizzati stereotassicamente in ratti maschi 4 settimane prima del sacrificio L'entità del danno a ciascun nucleo di rafe è stata quantificata istologicamente mediante un metodo istochimico semplificato con formaldeide per la visualizzazione della serotonina in sezioni al criostato Una mappatura dettagliata della distribuzione del Il perikarya del rafe giallo fluorescente ha fornito la base per la quantificazione. L'attività dell'idrossilasi del triptofano è stata misurata in 6 regioni del proencefalo di ciascun animale e i risultati sono stati correlati con la percentuale di danno a ciascun nucleo del rafe. In 5 di queste regioni è stata anche saggiata la tirosina idrossilasi; non è stato significativamente influenzato da nessuna delle lesioni del rafe. Le lesioni dorsali del rafe hanno ridotto l'attività della triptofano idrossilasi nello striato, nel talamo, nella corteccia e nell'ipotalamo, ma non nel sett tal nuclei o ippocampo. Il danno a B8 ha provocato decrementi in questo enzima serotoninergico nei nuclei del setto, nell'ippocampo, nella corteccia e nell'ipotalamo, ma non nello striato o nel talamo. Lesioni delle cellule B9 sparse non hanno avuto effetti significativi sull'attività enzimatica in nessuna regione esaminata. Questi dati suggeriscono che i nuclei del rafe dorsale e mediano forniscono due distinti, anche se forse sovrapposti, sistemi serotoninergici che innervano parti diverse del proencefalo: una via mesostriatale originata da B7 e un sistema mesolimbico derivato da B8. Gli studi comportamentali sugli animali, presentati in un documento complementare, hanno indicato che il danno al nucleo mediano è responsabile di molti degli effetti comportamentali precedentemente riportati dopo le lesioni combinate di entrambi i principali nuclei del rafe.
Fenomeno di Raynaud come effetto collaterale dei beta-bloccanti nell'ipertensione.Una serie di 102 pazienti ipertesi è stata valutata per la frequenza dei sintomi di Raynaud fenomeno e polso periferico assente. Su 21 pazienti trattati con metildopa da sola solo uno aveva mani e piedi freddi mentre tra i pazienti trattati con beta-bloccanti l'incidenza era del 50%. La frequenza sia dei sintomi che dei polsi assenti era più alta nei pazienti che assumevano propranololo rispetto con quelli che assumevano atenololo o oxprenololo. I pazienti senza polso avevano molte più probabilità di avere le mani fredde. Un cambiamento da propranololo a oxprenololo in alcuni pazienti sintomatici ha determinato un miglioramento. In due pazienti la temperatura cutanea è scesa dopo una dose di 80 mg di propranololo. Il meccanismo con cui i beta-bloccanti inducono il fenomeno di Raynaud non è ancora chiaro.
Torsione del testicolo e condizioni affini.In 15 anni a Bristol si sono verificati 293 casi di torsione del testicolo, 55 casi di torsione del un'appendice testicolare e 5 casi di ischemia testicolare per altre cause. Il rischio che un maschio sviluppi una torsione del testicolo o della sua appendice all'età di 25 anni è di circa 1 su 160. Entrambe le condizioni si sono verificate principalmente negli adolescenti, ma tra i ragazzi in età prepuberale di un'appendice era comune quanto la torsione di un testicolo normalmente disceso. C'era una leggera preponderanza del lato sinistro nella torsione testicolare, più marcata nella torsione delle appendici; l'incidenza della torsione bilaterale era rispettivamente del 2-0 e dell'1-8 per cento Vengono confrontate le caratteristiche cliniche e la diagnosi differenziale delle due condizioni. La torsione di un'appendice testicolare è la lesione scrotale più comunemente diagnosticata erroneamente, la diagnosi preoperatoria è corretta solo nell'11% dei casi rispetto al 90% per la torsione del testicolo. due 41 casi di torsione ricorrente sono stati sottoposti a profilassi orchipessia bilaterale. Ci sono stati 20 casi di torsione dei testicoli ritenuti, con un tasso di salvataggio di solo il 20%. Il tasso di sopravvivenza testicolare globale è stato del 55-3 per cento. La vitalità dipende dalla possibilità di riduzione spontanea, dal ritardo preoperatorio dopo l'insorgenza dei sintomi, dal grado di torsione del midollo e dalla durata del follow-up nei casi dubbi. L'esplorazione scrotale urgente è consigliata in ogni caso di dolore testicolare acuto a meno che non vi siano prove schiaccianti di epididimoorchite. L'esplorazione del lato opposto è obbligatoria nella torsione del testicolo e consigliabile nella torsione di un'appendice.
[Effetto dell'acido poliinosinico-policitidilico sulla capacità di formare colonie delle cellule staminali ematopoietiche in condizioni di inibizione allogenica].Si è riscontrato che il la capacità di formazione di colonie del trapianto di midollo osseo parentale (C57BL/6) è stata parzialmente ripristinata nel ricevente ibrido (CBA X C57BL/6) irradiato con 800 rad quando è stata iniettata la preparazione poli I - poli C. L'effetto di poli I - l'iniezione di poli C sulla formazione della colonia era equivalente all'aggiunta delle cellule del timo singeniche con il midollo. In entrambi i casi il numero di colonie spleniche era più del doppio rispetto al controllo. D'altra parte, si è riscontrato che in un sistema il numero di colonie spleniche non è stato influenzato dalle cellule del timo e dalla preparazione di poli I - poli C. Dosi di poli I - poli C che vanno da 50 a 100 mug e dosi di cellule di timo che vanno da 4-10(6) a 8- 10(6) non ha aumentato l'efficienza della formazione di colonie con un dosaggio stabile del midollo osseo tra trapianto.
[Proliferazione e differenziazione delle cellule staminali emopoietiche in ipocinesia].Utilizzo del metodo di clonazione esogena in vivo delle cellule staminali emopoietiche del midollo osseo e milza nel femore e nella milza dei topi è stato dimostrato che durante l'ipocinesia la cinetica delle cellule staminali differiva in entrambi gli organi (milza e midollo osseo). La differenziazione delle cellule staminali trapiantate da fonti diverse era invariata nella milza, ma le cellule staminali del midollo osseo che seminano nel femore hanno cambiato il carattere della loro differenziazione nella direzione dell'aumento della funzione eritropoietica, mentre le cellule staminali della milza non sono riuscite ad alterare la direzione della differenziazione.
[Effetto dei neurolettici sulla tirosina idrossilasi dai sinaptosomi dell'ipotalamo di ratto].È stato condotto uno studio sull'effetto di un certo numero di neurolettici di varia struttura chimica di tirosina-idrossilasi isolata dai sinaptosomi dell'ipotalamo di ratto. È stato utilizzato un metodo spettrofotometrico diretto di determinazione dell'attività dell'enzima basato sulla misura dell'assorbanza a 335 nm (al punto isobestico per le forme ossidate di un cofattore sintetico 6,7-dimetil-5,6,7,8-tetraidropterina) Alla concentrazione di tirosina di 0,15 muM è stato riscontrato che aloperidolo, aloanizon e fluorofenazina aumentano e triperidolo, droperidolo e carbidina riducono il tasso iniziale di tirosina idrossilasi. reazione. Tutti i neurolettici studiati si sono dimostrati in grado di eliminare l'inibizione del substrato dell'enzima che si verifica con un aumento della concentrazione di tirosina a 0,3 mM. Il valore di KM per la tirosina non è riuscito ad alterarsi con l'azione dei neurolettici. Si presumeva che l'effetto dei neurolettici fosse di natura allosterica.
[Eliminazione dell'inibizione allogenica delle cellule staminali ematopoietiche mediante trattamento dei topi riceventi con ciclofosfano].Gli esperimenti hanno dimostrato che il pretrattamento del ricevente irradiato letale ( CBA X C57BL/6) Topi ibridi F1 con ciclofosfamide (200 mg/kg di peso corporeo) il giorno prima del trapianto di midollo osseo (4 ore dopo l'irradiazione) hanno soppresso al 24% l'inibizione allogenica delle cellule staminali ematopoietiche (mentre l'inibizione nel animali non trattati era del 92,5%. Si suggerisce che la ciclofosfamide agisse sulle cellule linfoidi radioresistenti del ricevente, effettuando l'inibizione allogenica delle cellule staminali.
[Meccanismo dell'effetto analgesico degli analgesici narcotici].È stato effettuato uno studio sull'effetto di morfina, promedolo, fentanil, pentazacina e psicostimolante d ,l-anfetamina sulla soglia della sensibilità al dolore e autostimolazione dell'ipotalamo e del setto nei ratti La stimolazione elettrica dei sistemi di rinforzo positivo dell'ipotalamo e del setto, e anche gli analgesici hanno aumentato la soglia della sensibilità al dolore, mentre d ,l-amfetamina non è riuscita a influenzarlo. D,l-anfetamina e morfina hanno facilitato, promedolo non ha influenzato, fentanil è diminuito e pentazacina ha completamente depresso l'autostimolazione ipotalamica. L'autostimolazione settale è rimasta inalterata sotto l'effetto di morfina, promedolo, fentanil, ma è diminuito sotto l'effetto della pentazacina e aumentato sullo sfondo della d,l-anfetamina. Si è giunti alla conclusione che l'azione analgesica e l'attivazione dell'emozione positiva erano indipendenti effetti degli agenti psicotropi.
[Effetto dell'ipercapnia sul metabolismo della tirosina e del triptofano].Sono stati condotti esperimenti su ratti albini; è stato rivelato che un aumento del contenuto di CO2 nel aria inspirata (3,8%) ha provocato disturbi nel metabolismo della tirosina e del triptofano. L'attività della tirosina-aminotransferasi e della triptofano-ossigenasi si è rivelata aumentata nel fegato, il siero del sangue ha mostrato una ridotta concentrazione di tirosina libera e triptofano libero totale, ma il livello di il triptofano libero ottenuto dalla dialisi ha dimostrato di aumentare. Viene discusso un possibile significato di queste deviazioni nella blastomogenesi endogena.
[Attività della deidrogenasi citoplasmatica surrenale dopo somministrazione prolungata di ACTH].L'attività delle deidrogenasi citoplasmatiche delle cellule surrenali è stata esaminata durante le iniezioni prolungate di ACTH ai ratti Wistar. Gli indici della funzione specifica di sintesi degli steroidi delle ghiandole sono rimasti relativamente alti nel corso dell'intero esperimento. I cambiamenti nei ratti della sintesi del corticosterone e delle attività deidrogenasi erano di carattere fasico; includevano un'attivazione sincronica iniziale nei primi due giorni con la sua successiva diminuzione (7 giorni di iniezioni di ACTH). La prevalenza delle attività delle deidrogenasi NADP-dipendenti in combinazione con la riattivazione della steroidogenesi è stata marcata durante la fase conclusiva (13 giorni) dell'esperimento. Una possibilità del ruolo adattativo dell'attivazione selettiva di enzimi NADP-dipendenti nel mantenimento di un alto livello di biosintesi ormonale in condizioni di stimolazione prolungata dell'ACTH D.
[Mg, ATP-asi Ca-attivata dei corpuscoli di Pacini].Adenosina trifosfatasi (ATPasi) attivata da ioni Mg2+ o Ca2+ è stata rilevata in singoli meccanocettori (corpuscoli di Pacini) di gatto; l'aggiunta di Ca2+ (10(-5)M) alla Mg-ATP-asi ha aumentato l'attività del fattore 1,6. L'attività ottimale di Mg- o Co-ATPasi era nell'ambiente alcalino Zona pH. È stata dimostrata un'elevata specificità del substrato di Mg, Ca-ATPasi. Il paracloromercurio-benzoato (5muM) ha ridotto considerevolmente l'attività di Mg, Ca-ATPasi, mentre l'oubain (10(-5)M) non è riuscito a influenzarlo in modo significativo. si suppone che Mg, Ca-ATPasi dei corpuscoli di Pacini\'s fosse vicino a proteine simili all'actomiosina.
[Attività degli isoenzimi della malato deidrogenasi NAD- e NADP-dipendenti nel miocardio di conigli con diabete allossanico].Gli isoenzimi NAD- e NaDP MDH erano rilevata nel muscolo cardiaco dei conigli mediante elettroforesi su disco in gel di poliacrilammide. Il diabete allossanico si è dimostrato accompagnato da una significativa riduzione dell'attività del NADP MDH mitocondriale (nella reazione di decarbossilazione malica) e dal suo aumento del citozolo. L'attività del NAD- MDH (nella reazione di riduzione oxyacetate) era anche diminuita in vari isoenzimi nel miocardio (particolarmente nei mitocondri) nel diabete. insulina ripristinata la correlazione delle attività degli isoenzimi NAD- e NADP-MDH nelle cytostructures del miocardio disturbato nel diabete.
[Effetto della noradrenalina sulle proprietà elettriche e contrattili delle cellule muscolari lisce nell'arteria polmonare].Sono stati eseguiti esperimenti sulle cellule muscolari lisce di coniglio a. pulmonalis utilizzando la tecnica dei microelettrodi. Nessuna attività elettrica o meccanica spontanea è stata registrata nella normale soluzione di Krebs. La relazione corrente-tensione in queste cellule muscolari lisce ha mostrato una marcata rettifica. Non sono state osservate variazioni nella tensione isometrica dovute all'anodale o al catodo correnti stimolanti. La forte depolarizzazione delle cellule muscolari ha prodotto solo potenziali locali sul catelectrotone che non si sono mai sviluppati in uno spike. La noradrenalina (10(-8) g/ml) ha causato la depolarizzazione dei 5-7 mV nella membrana delle cellule muscolari e un notevole contrazione anche della fascia muscolare. In tali condizioni l'apparato contrattile delle cellule muscolari diventa sensibile al livello del potenziale di riposo. La stimolazione anodica è stata accompagnata dal rilassamento di t egli striscia muscolare, mentre la stimolazione catodica - dalla sua contrazione. L'agente alfa-adrenobloccante (fentolamina) ha bloccato l'effetto della noradrenalina evidenziando il fatto che la noradrenalina esercitava la sua azione eccitatoria sulle cellule muscolari lisce dell'a. pulmonalis attraverso gli alfa-adrenorecettori.
[L'effetto di sostanze psicotrope (aminazin, majeptil, trisedil) sulla sintesi proteica in diverse regioni del cervello di ratto].Gli esperimenti sono stati condotti su ratti; è stato condotto uno studio sull'incorporazione della metionina S35 nella somma totale delle proteine isolate da varie parti del cervello dopo una singola somministrazione di clorpromazina, majeptil e tricedil. Una depressione generalizzata della sintesi proteica in tutte le strutture, ad eccezione del midollo allungato, è seguita da clorpromazina somministrazione in una e tre ore. Un effetto stimolante è caratteristico del majeptil nella maggior parte delle porzioni cerebrali. L'azione del tricedil è stata accompagnata da una riduzione dell'incorporazione della metionina-S35 nelle proteine della maggior parte delle strutture cerebrali e da un aumento la sua incorporazione nei lobi olfattivi. Come supposto, i cambiamenti nella sintesi proteica nelle singole strutture del cervello sono serviti come un collegamento importante nel meccanismo d'azione della psiche preparazioni otropiche sull'organismo.
[Clonazione di cellule staminali nel midollo osseo di topi irradiati].Diversa quantità di midollo osseo intatto o irradiato da donatori singe è stata somministrata a topi irradiati con una dose letale. È stata rilevata una dipendenza lineare del numero delle colonie di 8-9 giorni cresciute nel midollo osseo del femore dalla quantità di cellule somministrate, ed una dipendenza esponenziale dalla dose di irradiazione. Regolarità della la clonazione di cellule staminali nel midollo osseo era analoga a quella nella milza. La radiosensibilità delle unità formanti colonia (CFU) differiva a seconda del sito (la milza, il midollo osseo) della loro formazione di colonie. La CFU che si depositava nel midollo si è dimostrata essere più radioresistente (D(0) pari a 160-200 P) rispetto alle CFU che si depositano nella milza (D(0) costituivano 80-100 P. Si suppone che una diversa radiosensibilità delle CFU sia stata causata dal presenza di popolazione eterogenea delle cellule staminali e anche da specificità specifiche legami dell'organo (milza, midollo osseo) in cui si sono formate le colonie.
Cambiamenti nel vettore del dipolo elettrico dell'albumina sierica umana a causa della complessazione con acidi grassi.La grandezza del vettore del dipolo elettrico dell'albumina sierica umana, misurato dall'incremento dielettrico della soluzione isoionica, risulta essere un indicatore sensibile e monotono del numero di moli (fino ad almeno 5) di acido grasso a catena lunga complessati. La sensibilità è circa tre volte maggiore di quella nell'albumina bovina. Sono stati sviluppati nuovi metodi di analisi della dispersione di frequenza della costante dielettrica per accertare se i cambiamenti di forma molecolare accompagnano anche la complessazione con acido grasso. L'analisi della costante di diffusione rotante a due componenti diretta è risultata essere troppo fortemente influenzata dalla modulazione incrociata tra piccoli errori sistematici e componenti di dati fisicamente significativi per essere una misura affidabile della modifica strutturale. I profili di rilassamento multicomponente sono più utili come modelli di riconoscimento per i confronti strutturali, ma il le equazioni coinvolte sono mal condizionate e le soluzioni basate sulla regressione standard dei minimi quadrati contengono artefatti matematici che mascherano lo spettro fisicamente significativo. Vincolando la soluzione a coefficienti non negativi, la grandezza degli artefatti viene ridotta ben al di sotto delle grandezze delle componenti spettrali. I profili calcolati in questo modo non mostrano alcuna evidenza di una significativa direzione del dipolo o di un cambiamento di forma molecolare poiché l'albumina è complessata con 1 mole di acido grasso. In questi esperimenti l'albumina è stata sgrassata mediante incubazione con tessuto adiposo a pH fisiologico, che evita il passaggio della proteina attraverso il pH della transizione N-F normalmente richiesta nella sgrassatura. L'aggiunta di acido grasso dalla soluzione in piccole quantità di etanolo sembra formare un complesso indistinguibile dal complesso "nativo".
Evidenza della funzione delle cellule staminali dei linfociti del midollo osseo a riposo identificati con il metodo completo di marcatura della 3H-timidina.Linfociti del midollo osseo a riposo, riconosciuti come piccoli linfociti al microscopio ottico, sono state marcate con la tecnica completa di marcatura della 3H-timidina, arricchita per frazionamento su un gradiente di albumina discontinua e studiate per le loro proprietà delle cellule staminali mediante coltura in camere di diffusione Frazione 3, con il più alto arricchimento di piccoli linfociti marcati e leggero arricchimento di altre cellule marcate (reticolo e cellule endoteliali), ha prodotto una crescita sostanziale, in contrasto con la frazione 4, senza arricchimento di queste cellule. Il numero di piccoli linfociti marcati per camera nella frazione 3 è rimasto costante o tendeva ad aumentare. essere un'indicazione di un certo grado di auto-replicazione nella piccola popolazione di linfociti. Poiché, tuttavia, la loro intensità di etichettatura è diminuita solo lentamente, deve essere ulteriormente con ha concluso che una parte della popolazione di piccoli linfociti marcati probabilmente è rimasta a riposo. Alcune cellule transizionali e blastiche marcate sono apparse prima dello sviluppo di precursori mielopoietici ed eritropoietici riconoscibili e di megacariociti, in accordo con il concetto che i piccoli linfociti si trasformano in cellule transizionali durante lo sviluppo della normale empopiesi.
[Proprietà catalitiche dell'alfa-chetoglutarato decarbossilasi dal cervello bovino].Indagine sull'effetto di diversi sistemi tampone sul tasso di alfa-chetoglutarato decarbossilasi reazione hanno dimostrato che il pH ottimale è 6,8 in tampone tris-maleico, tris-H3PO4 e KH2PO4-KOH ed è 7,5 in tampone imidazolo. La velocità di reazione più alta è stata osservata quando si utilizzano tamponi contenenti fosfato. L'aumento della concentrazione di fosfato è aumentato considerevolmente la velocità della reazione dell'alfa-chetoglutarato decarbossilasi. È stato dimostrato che Mg2+ e Ca2+ influenzano leggermente la velocità di reazione. Co2+ e Ag+ hanno leggermente inattivato l'enzima. Cu2+ si è rivelato un inibitore molto efficiente della reazione dell'alfa-chetoglutarato decarbossilasi. Le costanti apparenti di Mikhaelis sono determinate a essere 1,6-10(-3) M per l'acido alfa-chetoglutarico e 1,7-10(-2) M per 2,6-diclorofenolindofenolo.
[Purificazione e proprietà della riboflavina chinasi del lievito Pichia guilliermondii].La riboflavina chinasi (EC2.7.1.26) è stata isolata dalle cellule di il lievito Pichia guilliermondii. L'enzima è stato purificato 680 volte mediante frazionamento di solfato di ammonio, cromatografia su DEAE-Sephadex A-50 e CM-Sephadex C-50 e filtrazione su gel attraverso Sephadex G-75. La preparazione enzimatica purificata era priva di fosfatasi e FAD-sintetasi. Il pH ottimale era 8,7, la temperatura ottimale -45 gradi C. L'enzima è stato attivato dagli ioni Zn2+, Mg2+ e Co2+. Km per riboflavina era 1,0x10(-5) M, per ATP -- 6 ,7X10(-6) M. La riboflavina chinasi ha catalizzato la fosforilazione degli analoghi della riboflavina con la sostituzione dei gruppi metilici nelle posizioni 7 e 8. UTP, GTP, ADP e CTP, oltre all'ATP, erano donatori di fosfato. L'AMP ha inibito l'attività enzimatica. il peso dell'enzima era 28000, come stimato mediante gel-filtrazione attraverso Sephadex G-150. Riboflavina chinasi purificata era stabile sotto l'archiviazione.
[Studio della struttura dell'istidina decarbossilasi di Micrococcus sp. n. con il metodo del dicroismo circolare].Spettri di dicroismo ad anello (RD) di istidina decarbossilasi (HDC) da Micrococcus sp. n. alle regioni di assorbimento dei legami peptidici (200-240 nm) e degli amminoacidi aromatici (250-300 nm) vengono studiati il trattamento degli spettri RD secondo i metodi di Greenfield-Fasman , Saksena-Vetlaufer e Mayer permette di concludere che nel range di pH compreso tra 4-8 il contenuto di strutture ordinate di tipo alfa-elica comprende il 20%, quello di tipo beta-struttura-40%, mentre il restante 40% è rappresentato con catena polipeptidica in uno stato globulare disordinato Al variare del pH da 1 a 12 il contenuto di alfa-eliche diminuisce dal 17 al 5% Vi sono due distinte bande dicroiche nello spettro di assorbimento dei cromofori aromatici (a 270 e 290 nm) , la prima contenente residui di tirosina, triptofano e fenilalanina e la seconda indotta con triptofano residui. Lo studio degli spettri HDC RD nelle regioni di legame peptidico e di assorbimento degli acidi aromatici a diverse temperature ha mostrato che una parte dei residui di triptofano, tirosina e fenilalanina si trova in una struttura ordinata di tipo alfa-elica. L'HDC subisce cambiamenti irreversibili sotto riscaldamento a 70 gradi e in 8 M di urea. Il cloruro di guanidina 5 M elimina la struttura ordinata dell'HDC, mentre il dodecilsolfato di sodio a concentrazioni fino all'1% non influisce sulla struttura enzimatica.
[Isolamento e diverse proprietà di Streptomyces griseus carbossipeptidasi].Sono studiate le proprietà enzimatiche e fisico-chimiche della preparazione omogenea di carbossipeptidasi da Streptomyces griseus. pH -Optimum risulta essere 7.9 e 8.2 sotto l'idrolisi di cbs-Gly-Leu e hyppuryl-arg rispettivamente, temperatura ottimale --60 gradi C. L'enzima scinde in modo più efficiente gli amminoacidi basici e la leucina dai dipeptidi protetti dall'N-terminale. Lo Str. griseus carbossipeptidasi è attivato da agenti riducenti (NaCN, cisteina, acido ascorbico), è inibito da KMnO4 e non appartiene agli enzimi di tipo "serina". I gruppi SH sono essenziali per l'attività enzimatica. Nessun effetto significativo di ioni metallici sull'attività enzimatica. L'effetto inibitorio dell'EDTA si sviluppa solo dopo il trattamento prolungato. L'enzima ha un gruppo N-terminale (alanina), che evidenzia la presenza di una catena polipeptidica nella molecola dell'enzima.
[Isolamento del DNA mitocondriale, purificato dal DNA nucleare, da tessuti animali (grado di metilazione e livello di clustering dei nucleotidi pirimidinici--criteri di purezza)].È stato sviluppato un metodo di preparazione dei mitocondri privi di DNA nucleare e dei suoi frammenti mediante trattamento dei mitocondri con DEAE-cellulosa. Questo metodo si basa sul legame di acidi nucleici nucleari e nucleoproteine a particelle di DEAE-cellulosa nei mezzi utilizzati per l'isolamento dei mitocondri. Il trattamento con DEAE-cellulosa nelle condizioni descritte non induce alcuna degradazione visibile dei mitocondri e del DNA mitocondriale. Le preparazioni di DNA mitocondriale ottenute da fegato di manzo e di ratto sono rappresentate con molecole circolari chiuse di lunghezza di contorno di circa 5,5 mu. Il 5- Il contenuto di metilcitosina nel DNA mitocondriale di manzo e di ratto (3,03 e 2,0 moli %, rispettivamente) è doppio rispetto al corrispondente DNA nucleare. Inoltre, il DNA mitocondriale differisce fortemente da quello nucleare s da un grado inferiore di clustering pirimidinico: la quantità di frammenti mono- e dipirimidinici (circa 32 moli %) nel DNA mitocondriale è 1,5 volte maggiore e il contenuto di lunghi cluster pirimidinici (esa- e altri) è 2--4 volte bassi quanto quelli nel DNA nucleare. Il livello di metilazione e il grado di raggruppamento pirimidinico possono essere utilizzati come criteri per la purezza del DNA mitocondriale dal DNA nucleare.
[Anidrasi carbonica dell'alga blu-verde Spirulina platensis].Carboanidrasi (carbonato-idroliasi EC 4.2.1.1. ) si trova nell'estratto di Cellule di Spirulina platensis Una dipendenza lineare dell'attività enzimatica dalla concentrazione proteica; il pH ottimale è risultato essere 8,0 L'attività specifica della carboanidrasi è 3 muM/min-mg di proteina sotto la concentrazione di CO2 di 4-10(-3) M, che appare costante di Michelis essendo 4.9-10(-3) M. L'enzima è stato stabilizzato con 10 mM di cisteina, la sua attività è stata inibita del 50% con sulfanilamide (1-10(-5) M), acetazolamide (8-- 10(-7) M) e ioni Cl- (5-10(-2) M). L'attività della carboanidrasi, così come la velocità di fissazione di NaH14CO3, dipendeva dal valore del pH del terreno di coltura.
[Regolazione dell'attività del lievito alimentare Candida tropicalis glutammina sintetasi da parte dei prodotti finali del metabolismo della glutammina].Effetto di diversi prodotti del metabolismo della glutammina sull'attività della glutammina sintetasi in presenza di Mg2+ e Mn2+ e Co2+ come cofattori si studiano tutti i metaboliti studiati inibiscono l'attività della glutammina sintetasi in presenza di qualsiasi catione elencato Il grado e il carattere dell'inibizione da parte dell'uno o dell'altro metabolita dipendeva in misura considerevole dalla natura del catione presentato nella miscela di reazione (Mg2+, Mn2+ o Co2+). Il meccanismo dell'effetto cumulativo dei retroinibitori sotto il cambiamento di Mg2+ o Mn2+ nella miscela di reazione era lo stesso.
[Studio comparativo dell'attività endogena della RNA-polimerasi dei nuclei cellulari e dei cloroplasti delle foglie di pisello].L'attività endogena della RNApolimerasi dei nuclei cellulari isolati e sono stati studiati i cloroplasti delle giovani piante di pisello (Pisum sativum). Per la reazione è necessaria la presenza di tutti e quattro i nucleosidi trifosfati e degli ioni Mg2+. La mancanza di uno di questi nucleotidi dalla miscela di reazione, in particolare l'ATP, diminuisce drasticamente la trascrizione. sintetizzare l'RNA per unità di DNA più intensamente rispetto ai nuclei. In primavera tale predominanza è particolarmente pronunciata. La massima sintesi di RNA si osserva a pH 8,3 sia nei nuclei che nei cloroplasti. La massima trascrizione è stata osservata a 25 gradi nei cloroplasti e a 30--35 gradi nei nuclei L'actinomicina D ha inibito il processo di trascrizione sia nei nuclei che sono state osservate alcune stimolazioni nei cloroplasti, quando è stata aggiunta la rifamicina B. Si suggerisce che ci siano differenze nei nuclei r e cloroplasti forme di RNA polimerasi.
[Relazione tra l'ampiezza del Km e il pH della L-asparaginasi].La dipendenza del tasso di idrolisi della L-asparagina dalla concentrazione di L-asparagina in la presenza di L-asparaginasi da E. coli e Erw. carotovora viene studiata in un ampio intervallo di pH. I valori di Km sono calcolati dai dati ottenuti. Si trova che Km dipende in modo insignificante dal valore di pH con l'intervallo di pH di 5-9 per entrambe le asparaginasi. Sharp Km massimo si osserva a pH maggiore di 9. In entrambi i casi la posizione massima non coincide con i punti isoelettrici dell'enzima e con la regione di transizione del substrato dalla forma zwitterionica a quella anionica.
[Biosintesi di acidi grassi nei mitocondri del cervello di topo in presenza di malonil-CoA o acetil-CoA].Incorporazione di malonil-CoA o acetile -CoA è studiato negli acidi grassi mitocondriali del cervello di topo. È necessaria la rottura dei mitocondri; Triton X-100 dà il miglior risultato. Altri detergenti o sonicazione sono di minore efficacia. Sono stati studiati i requisiti dei cofattori: sono stati testati NADH e NADPH; ATP aumenta biosintesi e CoA provoca un'inibizione. Sono coinvolti due sistemi di biosintesi: -- Uno è un sistema de novo che utilizza malonil-CoA. Il solo malonil-CoA è incorporato e sintetizza principalmente C16, indicando l'esistenza di una decarbossilasi malonly-CoA sebbene l'allungamento di gli acidi grassi a catena corta non possono essere esclusi. L'aggiunta di acetil-CoA aumenta la biosintesi e il palmitil-CoA quando aggiunto provoca un'inibizione. -- L'altro sistema, utilizzando acetil-CoA, allunga il palmitil-CoA esogeno; gli acil-CoA endogeni non sono allungati di acetil-C oA. Tutti questi risultati sono confermati da studi radiogascromatografici dei prodotti di reazione.
[Purificazione parziale e studio della gamma-glutamil transpeptidasi dai capillari cerebrali di pecora].La gamma-glutamil transpeptidasi è stata purificata 53 volte dai capillari della corteccia cerebrale di pecora Alla filtrazione su gel appare omogeneo con un MW = 350 000. L'enzima è probabilmente una glicoproteina, le cui proprietà sono vicine alla gamma-glutamil transpeptidasi del rene di maiale; la formazione dell'amminoacido gamma-glutamil viene analizzata elettroforeticamente. I risultati ottenuti utilizzando diversi gli aminoacidi sono a favore dell'esistenza di diverse unità, specifiche di ciascun gruppo di aminoacidi; insieme ai dati degli analoghi strutturali, supportano l'ipotesi che la gamma-glutamil transpeptidasi partecipi al trasporto degli aminoacidi attraverso la barriera ematoencefalica.
Stimolazione amminoacidica della scissione dell'ATP da parte di due preparati della membrana cellulare di Ehrlich in presenza di ouabaina.Due frazioni di membrana preparate dalla cellula tumorale dell'ascite di Ehrlich mostrano risposte stimolatorie non identiche a determinati amminoacidi nella loro attività Mg+2 -dipendente per scindere ATP, nonostante la presenza di ouabaina e l'assenza di Na+ o K+ Il primo di questi, precedentemente descritto, mostra poco (Na+ + K+) -Attività ATPasica, ed è caratteristicamente stimolata dalla presenza di alcuni diamminoacidi con pK2 basso e a valori di pH che suggeriscono che le forme cationiche di questi amminoacidi sono efficaci. L'evidenza indica che questi effetti non sono ottenuti attraverso l'occupazione del cineticamente discernibile sito recettore che serve in modo caratteristico per il trasporto in salita di questi amminoacidi nella cellula di Ehrlich. La seconda preparazione della membrana è stata purificata con l'obiettivo di concentrare l'attività (Na+ +K+)-ATPasi. Inoltre è stimolata dal modello diamminoacido, acido 4-ammino-1-metilpiperidina-4-carbossilico e diversi amminoacidi ordinari. I diamminoacidi erano più efficaci a valori di pH in cui le forme zwitterioniche neutre potrebbero essere responsabili. Tra gli amminoacidi otticamente attivi testati, gli effetti dell'ornitina e della leucina erano sostanzialmente più forti per gli isomeri L che per gli isomeri D. L'elenco degli amminoacidi stimolatori corrisponde ancora scarsamente ad ogni singolo sistema di trasporto, sebbene non sia stata esclusa la possibilità che la stimolazione possa verificarsi per entrambe le preparazioni mediante l'occupazione di un sito di membrana che normalmente è cineticamente silenzioso nella sequenza di trasporto. L'elevata sensibilità al desossicolato e alla dicicloesilcarbodiimmide dell'attività idrolitica prodotta dalla presenza di L-ornitina e acido 4-ammino-1-metil-piperidina-4-carbossilico suggerisce che l'effetto stimolante non è semplicemente un'intensificazione generale del fondo Mg+ -attività idrolitica dipendente.
Attività della fosfatasi dell'acido fosfatidico e della fosfolipdasi A nelle membrane plasmatiche delle cellule muscolari fuse.La membrana plasmatica della fusione delle cellule muscolari embrionali è stata saggiata per l'attività della fosfolipasi A a determinare se questo enzima svolge un ruolo nella fusione cellulare. Le membrane sono state saggiate in una varietà di condizioni con fosfatidilcolina come substrato e non è stata trovata alcuna attività di fosfolipasi A. Le membrane plasmatiche contenevano una fosfatasi dell'acido fosfatidico che era ottimamente attiva in presenza di Triton X-100 e glicerolo. L'attività enzimatica era costante da pH 5,2 a 7,0, e non richiedeva cationi bivalenti. Oltre il 97% dell'attività fosfatasi dell'acido fosfatidico era nella frazione particolata. La distribuzione subcellulare della fosfatasi dell'acido fosfatidico era il come le distribuzioni dei marcatori della membrana plasmatica, (Na+ + k+)-ATPasi e del recettore dell'acetilcolina, il che indica che questa fosfatasi è localizzata esclusivamente in le membrane plasmatiche. Non c'era alcuna differenza rilevabile nelle attività della fosfatasi dell'acido fosfatidico delle membrane plasmatiche dalle cellule fondenti e non fondenti.
Interazioni lipido-proteina in modelli di membrana. Studio di polarizzazione della fluorescenza dei complessi citocromo b5-fosfolipidi.Secondo autori precedenti, il citocromo b5, quando estratto da fegato bovino con un metodo detergente, è chiamato citocromo d-b5, mentre la proteina ottenuta dopo l'azione della tripsina, che elimina un peptide idrofobo di circa 54 residui, è chiamata citocromo t-b5 Polarizzazione di fluorescenza della sonda dansil fosfatidiletanolammina inserito nelle vescicole fosfolipidiche è molto sensibile al legame delle proteine, quindi è un metodo utile per studiare le interazioni lipidi-proteine. La mobilità cromoforo, R, diminuisce notevolmente quando le vescicole dipalmitoil fosfatidilcolina sono incubate con citocromo d-b5, mentre R non cambiamento per citocromo c e citocromo t-b5. Questo può essere interpretato come un rafforzamento del doppio strato, solo a causa dell'interazione della coda peptidica idrofoba Interazione di dipalmitoly phosphati vescicole di dilcolina con citocromo d-b5 si verifica al di sotto o al di sopra della temperatura di fusione delle catene alifatiche (41 gradi C). Anche per un elevato rapporto molare tra proteine e lipidi (1 molecola di proteina per 40 molecole di fosfolipidi), la temperatura di fusione è apparentemente inalterata. La fosfatidilserina e il fosfatidilinositolo non interagiscono a pH 7,7 con il citocromo d-b5, perché le forze elettrostatiche impediscono la formazione di complessi. A pH basso, si verifica l'interazione con la proteina, ma il legame è principalmente di natura elettrostatica.
Effetti di un aumento della capacità di tamponamento del pH intracellulare sulla risposta alla luce del fotorecettore ventrale Limulus.Aspetti di un possibile coinvolgimento degli ioni idrogeno nelle risposte elettrofisiologiche sono stati studiati i fotorecettori ventrali di Limulus. Una soluzione 1 M di un tampone a pH ionico zwitter o di una sostanza di controllo debolmente tampone è stata iniettata a pressione attraverso una micropipetta in una cellula fotorecettore ventrale. Per stimare la quantità iniettata, 35SO4 è stato incluso in la soluzione. Le correnti di membrana indotte da lampi di luce sono state misurate mediante una tecnica di clampaggio della tensione. La micropipetta riempita di tampone ha passato la corrente e una micropipetta riempita di 3M KCl ha monitorato la tensione di membrana. La sensibilità (corrente di picco indotta dalla luce/energia dello stimolo) è stata misurata, dopo l'adattamento al buio, prima e dopo l'iniezione. Le iniezioni di tamponi, pH 6,3-7,2, a concentrazioni intracellulari di almeno 40-200 mM hanno prodotto solo una piccola diminuzione media della sensibilità , approssimativamente uguale a quello causato dalle iniezioni di sostanze di controllo. L'eccitazione, quindi, apparentemente non è mediata da un cambiamento nel pH intracellulare. Sono stati iniettati anche tamponi con valori di pH 5,4-8,4. Il tempo di picco della risposta dipendeva dal pH, essendo accorciato fino al 20% a valori di pH inferiori a 7,7 e allungato a valori di pH più elevati. Il tempo per raggiungere il picco della risposta sembrava essere ridotto da un aumento della capacità di tamponamento del pH intracellulare anche quando non vi era alcun cambiamento nel pH intracellulare.
Un effetto inibitorio non specifico del tRNA sull'attività della 3-desossi-D-arabino-eptulosonato-7-fosfato sintasi da Saccharomyces cerevisiae.Il L'effetto inibitorio del tRNA sulla sintasi 3-desossi-D-arabino-eptulosonato-7-fosfato (DAHP) di lievito (EC 4.1.2.15) è stato riesaminato. Da studi precedenti l'inibizione da parte del tRNAPhe sembrava essere abbastanza specifica. Questo studio mostra che tRNAPhe è infatti un potente inibitore, ma lo è anche il tRNA non frazionato, così come l'RNA ribosomiale e l'eparina. la loro capacità di chelare il Co2+.