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[Differenziazione isoenzimatica della gamma-glutamiltransferasi mediante concanavalina A e Con-A-Sepharose (transl.autore\'s)].In questa indagine un nuovo La possibilità di differenziazione isoenzimatica della gamma-glutamil-transferasi (GGT) (EC Nr.2.3.2.2. ) è stata dimostrata da Concanavalina A e Con A-Sepharose A causa del diverso contenuto di zucchero delle glicoproteine, la distinzione tra fegato e rene -GGT è possibile. Inoltre è stato possibile per la prima volta mostrare un diverso comportamento di precipitazione di una glicoproteina rispetto a Concanavalina A. In caso di epatite alcolica GGT perde la sua affinità con Concanavalina A a causa dell'aumento della concentrazione di acido neuraminico. vengono discusse le ragioni del diverso comportamento all'affinità di legame di Con A e Con A-Sepharose e GGT, nonché l'uso aggiuntivo per la differenziazione enzimatica mediante cromatografia di affinità Con A-Sepharose.
Indagini sulla funzione del prestomaco di ratto.Sono state studiate le funzioni del prestomaco di ratto e del tratto digerente superiore. I valori di pH, alfa-amilasi attività, stime quantitative di microrganismi e tassi di svuotamento erano più elevati nel prestomaco rispetto allo stomaco ghiandolare. I ratti con prestomaco rimosso chirurgicamente hanno vissuto senza complicazioni per più di 1 anno. La loro iperglicemia alimentare era più alta e più breve rispetto ai controlli. non è nota la microflora presente nel prestomaco convenzionale, sebbene in questa funzione si sia discusso tra uomo e ruminanti.
[Trattamento dell'insufficienza respiratoria acuta in cardiochirurgia].Un'analisi delle principali cause di insufficienza respiratoria acuta come complicanza grave e frequentemente osservata di viene presentato il primo periodo postoperatorio dopo la chirurgia a cuore aperto. Per consentire un impiego differenziato delle misure di rianimazione respiratoria, sono state distinte, sulla base di dati clinici e di laboratorio, le forme subcompensate e scompensate di insufficienza respiratoria postoperatoria acuta. I metodi più efficaci di trattamento di questa complicanza sono descritti, compreso l'impiego di elio, inalatore ultrasonico, intubazione terapeutica, broncoscopia, ventilazione polmonare artificiale automatizzata a lungo termine. Un impiego combinato dei metodi modificati di rianimazione respiratoria ha permesso di migliorare il decorso dell'insufficienza respiratoria acuta e di ridurre quasi la mortalità triplice.
Cambiamenti nella contrattilità e nel legame con il calcio della taenia coli della cavia mediante trattamento con enzimi che idrolizzano l'acido sialico.Gli effetti della neuraminidasi e della fosfolipasi C sulla sono stati studiati la contrattilità e il legame del Ca++ della taenia coli della cavia. La contrattura del potassio o la contrattura della taenia coli indotta dall'istamina è stata inibita dal trattamento con neuraminidasi, mentre la contrattura indotta dall'acetilcolina non lo era. Il trattamento con fosfolipasi C ha inibito notevolmente la contrattura indotta da isotonico potassio, istamina o acetilcolina. Per trattamento con neuraminidasi per 4 ore, da taenia coli sono state rilasciate circa 40 mumol/100 mg in peso di acido sialico. Ciò corrispondeva a due quinti del contenuto totale di acido sialico. Per trattamento con fosfolipasi C per 2 ore, è stata rilasciata una quantità di acido sialico simile a quella prodotta dal trattamento con neuraminidasi. Il diagramma di Scarchard del legame di Ca++ era un modello bifasico che indicava la presenza di due ty pes del sito di legame del Ca++ con diverse costanti di affinità. La neuraminidasi ha prodotto una diminuzione del 57% della quantità di Ca++ legato. Il diagramma di Scatchard del legame del Ca++ è cambiato in un modello monofasico che indica la scomparsa del sito di legame del Ca++ di bassa affinità. La fosfolipasi C ha causato una diminuzione del 59% del Ca++ legato. Il diagramma di Scatchard indicava anche la scomparsa del sito di legame del Ca++ a bassa affinità. Da questi risultati, abbiamo ipotizzato che il residuo di acido sialicatico della membrana superficiale della cellula muscolare fosse il primo sito nel meccanismo di afflusso di Ca++.
Effetti della variazione dei livelli di glucocorticosteroidi sull'esposizione al calore nel coniglio.Conigli esposti per un'ora a una temperatura di 40 gradi e 35-37% di umidità hanno mostrato osmolalità e pH plasmatici elevati La maggior parte degli animali non è stata in grado di resistere al calore I conigli trattati con desametasone nelle stesse condizioni hanno resistito meglio al calore e il pH e l'osmolalità del plasma sono rimasti costanti I conigli trattati con metopirone hanno resistito al calore e hanno mostrato un aumento nell'osmolalità plasmatica e una leggera variazione del pH plasmatico. Il più alto aumento della temperatura rettale è stato osservato nei conigli trattati con metopirone. Solo gli animali non trattati non sono stati in grado di recuperare la temperatura rettale pre-esposizione. I risultati suggeriscono che alti livelli di glucocorticosteroidi aumentano l'attività neurogena e meccanismi metabolici che hanno funzioni protettive durante l'esposizione acuta al calore.
[Sensibilità alla gentamicina di vari patogeni isolati da materiali clinici].Abbiamo studiato l'attività antibatterica della gentamicina contro vari patogeni isolati da materiali clinici principalmente isolati durante il 1974 e il 1975, confrontandoli con altri antibiotici. Streptococchi beta emolitici, pneumococchi ed enterococchi sono meno sensibili alla gentamicina rispetto agli stafilococchi Stafilococco, aureus e Staph. epidermidis resistenti a vari antibiotici sono molto sensibili alla gentamicina e nessun ceppo resistente a questo farmaco è stato trovato. Haemophilus influenzae, H. parainfluenzae e H. parahaemolyticus sono molto sensibili alla gentamicina e non esiste un ceppo resistente a questo farmaco. Escherichia coli, Klebsiella, Citrobacter, Serratia e cinque specie di Proteus sono più sensibili alla gentamicina e alla tobramicina rispetto dibekacin e amikacin Alcuni ceppi resistenti o meno sensibili alla gentamicina si trovano in E. coli, Citrobacerr, Serratia, Pr. morganii e Pr. rettgeri. Pr. inconstans è meno sensibile alla gentamicina rispetto ad altre specie di Proteus. L'attività antibatterica della gentamicina contro Pseudomonas aeruginosa è molto forte, ma la dibekacina e la tobramicina sono più forti. I ceppi di Pseudomonas aeruginosa resistenti alla gentamicina sono ora piuttosto pochi.
[Effetti del pH sui processi di accoppiamento eccitazione-contrazione dell'atrio della rana toro (transl.autore\'s)].È stato a lungo dimostrato che nel muscolo cardiaco le alterazioni del pH extracellulare mostrano un notevole effetto inotropo, mentre il meccanismo preciso non è ancora completamente chiarito nonostante molte storie associate. Negli ultimi anni, tuttavia, abbondanti informazioni sui processi di accoppiamento eccitazione-contrazione (accoppiamento EC) di muscolo cardiaco. Di conseguenza, i meccanismi di azione inotropa del pH sui muscoli cardiaci devono essere riesaminati anche sulla base di queste teorie di accoppiamento EC recentemente sviluppate. Nel presente esperimento, quindi, abbiamo tentato di chiarire i fondamentali meccanismo di azione del pH su diversi processi di accoppiamento EC utilizzando l'atrio della rana toro i cui processi di accoppiamento EC sono stati abbastanza ben noti...
Proprietà comparative del batteriofago phi6 e phi6 nucleocapside.Trattamenti con detergenti non ionici hanno rilasciato un nucleocapside dal batteriofago avvolto phi6. Il nucleocapside si è sedimentato quasi alla stessa velocità come l'intero fago in gradienti di densità di saccarosio, ma la densità di galleggiamento in Cs2S04 è cambiata da 1,22 g/cm3 per l'intero fago a 1,33 g/cm3 per il nucleocapside Il detergente ha completamente rimosso il lipide e 5 delle 10 proteine dal fago. L'etichettatura superficiale del fago e del nucleocapside con 125I ha rivelato che la proteina P3 era sulla superficie esterna dell'intero fago e la P8 era sulla superficie del nucleocapside. Sia il fago che il nucleocapside erano stabili tra pH 6,0 e 9,5. Basse concentrazioni di EDTA (10-4 M) ha dissociato il nucleocapside ma non ha avuto alcun effetto sull'intero fago. Il nucleocapside conteneva tutti e tre i segmenti di RNA a doppio filamento, nonché l'attività della RNA polimerasi.
Isolamento e proprietà della replicasi del virus dell'encefalomiocardite.La RNA polimerasi RNA-dipendente (replicasi) del virus dell'encefalomiocardite (EMC) è risultata essere strettamente associato con le membrane lisce delle cellule BHK-21 infette Una replica EMC RNA-dipendente è stata estratta dalle membrane con 0,15% di sodio dodecil solfato (SDS) e 1,1,2-triclorotri-fluoroetano (Genetron 113) e ulteriormente purificata mediante separazione di fase ad alto contenuto di sale destrano-polietilenglicole, cromatografia sievorptive e sedimentazione in gradiente di glicerolo. L'enzima non manifesta una specificità rigorosa verso il modello di RNA EMC. Può utilizzare anche Qbeta RNA, rRNA di cellule BHK o poli(C). SDS -l'elettroforesi su gel di poliacrilammide della replicasi EMC purificata marcata con metionina radioattiva ha rivelato che, di tutte le proteine EMC stabili, l'enzima contiene prevalentemente il polipeptide 56.000-dalton (E).
Controllo neuronale della biosintesi dei neurotrasmettitori durante lo sviluppo.Studi sui meccanismi di controllo neuronale della biosintesi dei neurotrasmettitori durante lo sviluppo delle sinapsi autonome periferiche e centrali. Particolare l'accento è posto sulle indagini sullo sviluppo dei gangli simpatici periferici e sul cervello nell'embrione e nel pulcino di pollo. Sono riportati studi sullo sviluppo di neuroni autonomi e sinapsi in diverse condizioni farmacologiche. Principalmente l'effetto di a) la somministrazione di farmaci e precursori come L- dopa, 3H-dopa, 6-OH dopa b) la somministrazione prenatale di reserpina c) il blocco dei recettori colinergici d) viene analizzato il fattore di crescita nervoso (NGF) Vengono riassunti i risultati degli studi di sviluppo sui gangli ciliari dei pulcini. La revisione sottolinea in particolare l'importanza di combinare l'uso di metodi microchimici sensibili a strumenti farmacologici nell'esplorazione dello sviluppo di m regolatori meccanismi a livello cellulare.
Biotrasformazione, ormoni sessuali e tossicità di due anestetici volatili nei topi.Topi DBA 11 maschi e femmine recuperati da 1 ora di anestesia con cloroformio di fluoroxene apparentemente illeso. Tuttavia, molti degli animali sono morti entro 24-48 ore dopo l'anestesia. Il pretrattamento con fenobarbital è aumentato, mentre il pretrattamento con una piccola dose di tetracloruro di carbonio è diminuito, questa tossicità. Relativamente più maschi che femmine morirono. Pretrattamento con estradiolo nei maschi e testosterone nelle femmine hanno invertito questo rapporto. Concludiamo che la tossicità murina del cloroformio e del fluoxene dipende dalla biotrasformazione da parte degli enzimi microsomiali epatici e che il testosterone aumenta la tossicità post-anestetica di questi agenti.
sulfonanilidi adrenergici. 4. Agonisti beta-adrenergici attivi a livello centrale.Le attività del sistema nervoso centrale (SNC) di un certo numero di analoghi del soterenolo sono state studiate , e molti di questi composti possedevano potenti proprietà antagoniste della morfina e anoressizzanti. L'attività sul SNC di questi composti è stata potenziata da alcuni sostituenti azotati lipofili [ad esempio, 1,1-dimetil-2-fenetile (43) o ciclopropile (40 e 44)] ; tuttavia, piccoli cambiamenti strutturali sulle frazioni aromatiche o sulla catena laterale hanno ridotto drasticamente l'attività centrale. La tossicità in questa serie era correlata alla componente stimolante alfa-adrenergica inerente (diretta o indiretta).
Il flusso sanguigno renale e la velocità di filtrazione glomerulare dei cani anestetizzati durante i cambiamenti acuti della concentrazione plasmatica di sodio.1. Gli effetti dei cambiamenti acuti nel plasma La concentrazione di Na (P(Na)) sul flusso sanguigno renale (RBF) e la velocità di filtrazione glomerulare (GFR) sono state studiate in levrieri anestetizzati. La soluzione fisiologica è stata infusa a una velocità costante (0,1 ml. kg(-1) min(-1)) in un'arteria renale o in una vena sistemica La concentrazione plasmatica di Na è stata alterata variando la concentrazione di Na della soluzione salina infusa da 0,154 a 0,077, 0,616 o 1,232 M. 2. Pressione sanguigna (BP), volume di cellule impacchettate (PCV), sono state misurate la concentrazione plasmatica dei solidi (PS) e la concentrazione plasmatica degli ioni H(+) e K (P(K)), ma non è stato fatto alcun tentativo di contenere la loro fluttuazione.3. ad un aumento omolaterale di RBF per 5-15 min, seguito da una diminuzione progressiva. Complessivamente, i valori medi di RBF sono diminuiti con P(Na) durante tutto il intervallo studiato (120-190 m-mole l. (-1)). La velocità di filtrazione glomerulare è aumentata con P(Na) fino a raggiungere valori massimi a livelli di P(Na) di 140-160 m-mole l. (-1), ma successivamente è diminuita. La caduta combinata di RBF e GFR, senza variazione della frazione di filtrazione, a valori di P(Na) superiori a 160 m-mole l. (-1) è coerente con un'alterazione della resistenza arteriolare afferente. La diminuzione del GFR nonostante un aumento di RBF osservato quando il P(Na) è stato ridotto al di sotto di 140 m-mole l. (-1) richiede un'ulteriore spiegazione.4. Il flusso sanguigno renale era indipendente da P(K); era inversamente correlato a [H(+)] e direttamente correlato a PS. La velocità di filtrazione glomerulare era indipendente da PCV e P(K). Era anche inversamente correlato a [H(+)] e direttamente correlato a PS fino a un valore di 6 g 100 g(-1) di plasma, dopo di che il rapporto è stato invertito. Questi risultati suggeriscono che le risposte vascolari renali ai cambiamenti acuti di P(Na) possono essere mediate in parte, almeno, da un cambiamento simultaneo di PS e [H(+)].
Potenziamento della contrazione del muscolo scheletrico da parte della fisostigmina a pH diverso.Questo rapporto estende le ricerche precedenti, fatte con mezzi esterni a pH 7,2, a nuovi studi a pH 6.4 e 8.4 e 7.2, per determinare i ruoli delle forme protonate e neutre della fisostigmina (una base debole con pKalpha = 8.2) nel causare il potenziamento della contrazione del muscolo sartorio della rana. Fisostigmina, specialmente a pH relativamente alto (8,4 ) e concentrazione (1,5 mM), bloccano notevolmente l'eccitazione. Tuttavia, i risultati mostrano in generale che il potenziamento della fisostigmina aumenta il tempo di contrazione del picco e quindi indica che il potenziamento sta avvenendo in termini di prolungamento dello stato attivo. A pH 6,4 e 8,4, 1 mM la fisostigmina non provoca alcun cambiamento nella soglia meccanica delle contratture di depolarizzazione del K dei muscoli delle dita dei piedi, come riscontrato in precedenza a pH 7,2. La fisostigmina prolunga sempre più il potenziale d'azione all'aumentare del pH, cioè in correlazione positiva con la contrazione potenziamento, indicando così che questo cambiamento elettrico è il primo determinante del potenziamento.
Effetti del calcio sulla soppressione anestetica locale delle conduttanze ioniche nelle membrane degli assoni dei calamari.Gli effetti della variazione della concentrazione esterna di calcio sulla soppressione della membrana Le conduttanze ioniche di procaina e benzocaina sono state esaminate in condizioni di tensione bloccata. La soppressione della conduttanza di picco e della conduttanza allo stato stazionario da parte della procaina o della benzocaina applicata esternamente o internamente non è stata influenzata dalla variazione della concentrazione di calcio esterna tra 10 e 100 mM. la concentrazione di calcio è stata abbassata al di sotto di 10 mM (5 o 2 mM), l'effetto della procaina è stato leggermente potenziato. Questo aumento non può essere attribuito ad un'accelerazione nella velocità di penetrazione della procaina nell'assone in soluzioni a basso contenuto di calcio. La conduttanza di membrana a riposo è stata leggermente diminuito dalla procaina in modo indipendente dalla concentrazione esterna di calcio. Il massimo effetto della procaina sulle conduttanze a riposo è stato ottenuto a un concen trazione molto inferiore a quella richiesta per la massima soppressione delle conduttanze di picco e di stato stazionario. I risultati attuali non sono compatibili con l'ipotesi che il calcio compete con gli anestetici locali per un sito caricato negativamente sulla membrana. Si suggerisce che le interazioni idrofobiche delle molecole di anestetico locale con la membrana influenzino la conduttanza della membrana a riposo, mentre le interazioni coulombiane sono responsabili dei cambiamenti di conduttanza osservati durante l'attività nervosa.
Aminopiridine e sparteina come inibitori della conduttanza del potassio di membrana: effetti sugli assoni giganti di Myxicola e sulla giunzione neuromuscolare dell'aragosta.Gli effetti dei composti 2-, La 3- e 4-aminopiridina e la sparteina sui cambiamenti di conduttanza di membrana sono state esaminate utilizzando sia gli assoni Myxicola tensionati che la giunzione neuromuscolare dell'aragosta. qualsiasi effetto apparente del potenziale di membrana a riposo. Erano necessarie concentrazioni superiori a 5 mM per inibire notevolmente la conduttanza del sodio. Le curve di conduttanza del potassio-tensione sono state spostate nella direzione depolarizzata lungo l'asse della tensione senza cambiamenti significativi nella forma. Ci sono stati solo cambiamenti minori nella cinetica dell'attivazione del potassio. In soluzioni ad alto contenuto di potassio, sia le correnti di potassio verso l'interno che verso l'esterno erano ugualmente sensibili all'aminopiridina es. La sparteina è stata, in generale, ritenuta un inibitore più potente, ma un po' meno specifico, della conduttanza del potassio. Contrariamente alle aminopiridine, la sparteina era più efficace se applicata a pH basico e inoltre tendeva a produrre un notevole grado di inattivazione del potassio. Quando applicati alla giunzione neuromuscolare dell'aragosta, la 2-aminopiridina e la sparteina hanno aumentato drasticamente l'ampiezza dei potenziali postgiunzionali sia eccitatori che inibitori, con variazioni minime o nulle del potenziale di riposo, della conduttanza di ingresso a riposo, del potenziale di inversione o dell'ampiezza o frequenza del potenziale di placca terminale in miniatura. Il contenuto quantico per fibra è stato aumentato di circa un fattore 3 per le risposte eccitatorie.
Uno studio in vitro sul meccanismo di trasporto della difenilidantoina nella ghiandola sottomascellare di ratto.Studi in vitro eseguiti su sezioni di ghiandola sottomascellare di ratto con difenilidantoina ( 6 X 10(-6) M) hanno mostrato che le variazioni del pH extracellulare (pHe) non hanno avuto effetti significativi sull'assorbimento e solo lievi effetti sull'efflusso (abbassando il pHe diminuiva leggermente i tassi di efflusso, mentre aumentando il pHe aumentava leggermente i tassi di efflusso). concentrazione diminuiva significativamente l'assorbimento e aumentava leggermente la velocità di efflusso L'assorbimento di 14C-difenilidantoina era significativamente diminuito rispetto alle condizioni di controllo (pH 7,40, 37 gradi C, aerazione 100% O2, 6 X 10 (-6) M) dal seguente alterazioni: aerazione del mezzo di incubazione con N2 invece di O2, diminuzione della temperatura del bagno da 37 gradi C a 5 gradi C e aggiunta dei seguenti inibitori metabolici: acido iodoacetico (10(-3)M), 2,4-dinitrofenolo ( 10(-3)M) e cianuro ( 10(-3) M). Il probenecid (10(-3)M) non ha avuto effetti significativi sull'assorbimento della difenilidantoina rispetto ai valori di controllo. Nessuna prova di biotrasformazione salivare della difenilidantoina è stata osservata nel sistema in vitro utilizzando la cromatografia su strato sottile. Questi dati in vitro suggeriscono un processo di trasporto attivo che dipende dalla concentrazione con un possibile sito di legame saturabile sulla membrana o all'interno della cellula.
Proprietà legante i cationi del peptide IIF del plesso coroideo.I preparati del peptide melanotropico-lipolitico IIF del plesso coroideo bovino contengono 3% Ca, 1% Mg e meno dello 0,1% di Na e K. Ca e Mg sono stati rimossi mediante filtrazione su gel su Sephadex G-10 in acido acetico 1 N. La capacità del peptide privo di cationi risultante di legare Ca++, Mg++, Na+ e K+ è stata esaminata con il metodo di Hummel e Dreyer (Biochim. Biophys. Acta 63: 530-532, 1962). Il peptide IIF ha legato un massimo di 3,7-4,4 mEq di Ca++, Mg++, Na+ o K+ per g di peptide. Per ogni catione, diagramma lineare di Scatchard indicava una classe di siti di legame. Le costanti di associazione (litri per mole) erano Ca++, 4,3 X 10(4); Mg++, 3,6 X 10(4); Na+, 4,8 X 10(2), K+, 1,9 X 10(2). Esperimenti di legame competitivi hanno mostrato che tutti e quattro i cationi occupavano la stessa classe di siti di legame.
Caratterizzazione farmacologica dei recettori adrenergici di un'arteria cerebrale di coniglio in vitro.Alla luce della controversia sul significato funzionale dell'abbondante innervazione simpatica di grandi vasi sanguigni cerebrali, è stata intrapresa un'analisi in vitro dei recettori adrenergici che mediano gli effetti contrattili nell'arteria basilare del coniglio. La curva dose-risposta l-NE poteva essere risolta in due componenti curve a forma di S: la prima aveva una ED50 DI 10(-5) M e raggiungeva un plateau a 10(-4) M; la seconda componente continuava sopra 10(- 3) M senza raggiungere un plateau. Anche le curve dose-risposta di fenilefrina ed epinefrina erano bifasiche; le risposte d-NE corrispondevano alla seconda fase della curva l-NE. Le potenze relative per le due componenti erano diverse. Per la prima componente, queste erano 1:0.23:0.18:0. 03 per l-NE, epinefrina, fenilefrina e d-NE, rispettivamente; le potenze relative per la seconda componente della curva erano 1:1:0.11:0.23. Le costanti di dissociazione della fentolamina sono state analizzate separatamente per ciascun componente. Il valore per basse concentrazioni di l-NE era 5 X 10 (-8) M e, per concentrazioni più elevate, era 3 X 10 (-6). L'insensibilità del recettore alfa adrenergico e la scarsa reattività del muscolo alla sua attivazione con concentrazioni di agonisti inferiori a 10(-4) M possono probabilmente spiegare le piccole risposte contrattili alla stimolazione nervosa delle grandi arterie piali nonostante la loro abbondante innervazione".
Un test per l'attività antinocicettiva di analgesici narcotici e antagonisti narcotici nella cavia.L'acido etilendiamminotetracetico (EDTA) è stato utilizzato come stimolo nocicettivo per via intradermica nella cavia. Le risposte evocate dall'EDTA includevano vocalizzazione, morsi e graffi nel sito di iniezione e comportamento di fuga. È stato dimostrato che la nocicezione da parte dell'EDTA è il risultato della sua attività chelante dei cationi. La soppressione delle risposte indotte dall'EDTA si è rivelata essere un test antinocicettivo rapido ed efficace. Gli analgesici narcotici morfina, codeina, meperidina e metadone e gli analgesici antagonisti narcotici ciclazocina, ciclorfano, nalorfina e pentazocina erano attivi. Le pendenze delle curve dose-risposta degli analgesici antagonisti narcotici erano significativamente inferiori a quelle degli analgesici narcotici. Il test era altamente specifico per questi analgesici. Gli analgesici antipiretici e vari farmaci non analgesici erano inattivi.
Uso dell'irradiazione a microonde di 300 msec per l'inattivazione degli enzimi: uno studio sugli effetti del sodio pentobarbital sulla concentrazione di acetilcolina nelle regioni del cervello di topo.Irradiazione a microonde di 6 kw a 2450 MHz per 300 msec erano sufficienti per inattivare completamente la colinesterasi cerebrale di topo e la colina acetiltransferasi. Dopo questo metodo di sacrificio, il contenuto di acetilcolina delle regioni del cervello di topo, espresso in nanomoli per grammo, è risultato essere: striato, 81; midollo -pons, 44; diencefalo-mesencefalo, 34; ippocampo, 31; corteccia cerebrale, 26 e cervelletto, 17. Il pentobarbital di sodio ha causato un aumento dose-dipendente dell'acetilcolina cerebrale totale. Un aumento massimo dell'81% nell'intero cervello è stato osservato a 15 minuti con 80 mg/kg di sodio pentobarbital. L'aumento di acetilcolina dopo il trattamento con sodio pentobarbital non è stato causato da anossia da depressione respiratoria o da ipotermia. Tutte le regioni del cervello tranne il cervelletto hanno mostrato un aumento di acetilcoli ne dopo il trattamento con pentobarbital. Quindici minuti dopo il trattamento, l'acetilcolina cerebellare era significativamente ridotta. Tuttavia, nel momento in cui metà degli animali aveva riacquistato il riflesso di raddrizzamento, i topi incoscienti mostravano un aumento dell'acetilcolina cerebellare che era statisticamente significativo rispetto al controllo. Il tasso di accumulo relativo di acetilcolina calcolato per la corteccia cerebrale e l'ippocampo era superiore a quello per lo striato sebbene il tasso assoluto di accumulo di ACh fosse più elevato nello striato. Pertanto, dopo il trattamento con sodio pentobarbital, la corteccia cerebrale e l'ippocampo mostrano una risposta colinergica maggiore rispetto allo striato.
Rapida determinazione GLC dell'acido fusarico nei fluidi biologici.È stato sviluppato un test GLC semplice e sensibile per l'acido fusarico, il metabolita attivo della bupicomide, per seguire la disposizione di questo agente antipertensivo sperimentale nei pazienti sottoposti a terapia. L'acido fusarico viene estratto in modo efficiente da campioni biologici, derivatizzato mediante metilazione in colonna e cromatografato mediante rilevamento a ionizzazione di fiamma. Viene utilizzato uno standard interno per quantificare i risultati. La procedura è rapida e specifico per l'acido fusarico e ha un limite inferiore di sensibilità di 0,1 mug/ml. Il metodo è adatto per supportare studi farmacocinetici di bupicomide a seguito di dosi terapeutiche negli animali e nell'uomo.
Sintesi e attività alfa-adrenolitica di beta-aloetilammine chirali.Diverse serie di N,N-diaralchil- e N-arilossialchil-N-aralchile -beta-aloetilammine sono state sintetizzate contenenti centri di chiralità nel sostituente aralchilico e nella frazione beta-aloetilica per studiare la stereoselettività dell'attività alfa-adrenolitica delle beta-aloetilammine Questi composti sono stati sintetizzati da materiali di partenza di configurazione assoluta nota tramite schemi sintetici che non ha alterato l'integrità stereochimica dei centri chirali. La valutazione delle attività alfa-adrenolitiche di queste beta-aloetilammine sui vasi deferenti di ratto ha indicato un grado variabile di stereoselettività del blocco adrenergico, che viene interpretato in termini di interazioni farmaco-recettore.
Inattivazione dell'acido gastrico dell'eritromicina stearato in forme di dosaggio solide.L'effetto dell'acido cloridrico a pH 1,2-3,2 SULL'ERITROMICINA STEARATO E SULLE FORME DI DOSAGGIO COMMERCIALI DI È stato studiato l'eritromicina stearato. In tutte le condizioni esaminate, l'eritromicina è stata prontamente dissolta dallo stearato come cloridrato e ha perso rapidamente la sua attività biologica in soluzione. L'inclusione della pepsina nei sistemi di test non ha influenzato i risultati. Sebbene le differenze di formulazione abbiano in qualche modo influenzato il tasso di distruzione, la labilità acida è stata mostrata da tutti i prodotti esaminati, ad eccezione delle compresse con rivestimento enterico. Le quantità di acido considerate normali nel contenuto dello stomaco a digiuno degli adulti durante il periodo in cui una dose rimane nello stomaco hanno causato una distruzione del 70-90% entro 15 minuti dopo che i gusci hanno iniziato a rompersi Quantità di acido cloridrico sensibilmente inferiori a 1 mEq, che rappresentano quantità anormalmente piccole anche a digiuno, hanno causato la distruzione variando dal 30 al 70% delle dosi in 15 min. Questi risultati non sono conciliabili con le affermazioni pubblicate secondo cui la sensibilità dell'eritromicina all'acido gastrico viene superata fornendo l'antibiotico sotto forma di sale stearato.
Livelli plasmatici materni e fetali di corticosteroidi liberi nei parti patologici.L'acidosi intrauterina induce un aumento della secrezione di steroidi. La concentrazione di steroidi liberi (CS) aumenta nel plasma sia fetale che materno durante il travaglio e il parto. I livelli fetali sono più alti dopo il taglio vaginale che dopo il taglio cesareo. Queste differenze possono indicare un ruolo importante della ghiandola surrenale fetale nell'induzione del travaglio o possono riflettere semplicemente la risposta fetale allo stress del parto. Durante lo stress intrauterino aumentato la secrezione di steroidi è aumentata come mostrato qui. Abbiamo esaminato 41 madri e i loro bambini durante il travaglio patologico. La patologia è stata valutata dall'acidosi fetale e/o da una malattia clinicamente ostetrica della madre o del feto. I 41 casi includevano 9 taglio cesareo, 8 parti con pinza, 24 parti spontanei di cui 7 prematuri Al momento del parto sono stati determinati il pH e il livello di CS nei vesci materni e ombelicali vende in tutti i casi. Durante il travaglio spontaneo sono stati prelevati anche campioni di sangue durante le diverse fasi del travaglio. È stato utilizzato un saggio di legame proteico competitivo con transcortina senza frazionamento degli steroidi. Il progesterone è stato determinato con lo stesso dosaggio. Il livello di questo ormone, tuttavia, rimane invariato e quindi qualsiasi cambiamento riflette i cambiamenti nel CS. I livelli di CS sono stati correlati con i valori di pH e confrontati con i valori normali precedentemente ottenuti. Durante i parti patologici i livelli di CS sia nella madre che nel feto sono normali finché non c'è acidosi (Fig. 1). Se è presente acidosi, il livello di CS nell'arteria ombelicale è solitamente più alto del normale. In 13 parti vaginali su 18 il livello di CS era al di sopra della norma, negli altri 5 al limite superiore della norma (Fig. 1 e 2). Allo stesso tempo la differenza a-v diventa più piccola e talvolta anche negativa. Non sono state osservate alterazioni nel sangue venoso materno e ombelicale (Tab. I e II). Analoga dipendenza dal pH è stata riscontrata per il taglio cesareo (Tab. III). Nei parti prematuri senza acidosi nell'arteria ombelicale i livelli di CS erano più bassi sia nella madre che nel feto (Tab. I). Questi risultati indicano che la ghiandola surrenale fetale reagisce all'acidosi, cioè allo stress intrauterino, con un aumento della secrezione di corticosteroidi. Questo aumento dipende dal pH del sangue fetale e non dal tipo di parto (Fig. 3).
Mannosidosi: fenotipo di un bambino gravemente affetto e caratterizzazione dell'attività dell'alfa-mannosidasi in colture di fibroblasti del paziente e dei suoi genitori.A tre anni -il ragazzo ha tratti facciali grossolani, congestione delle vie respiratorie superiori, ritardo mentale profondo, epatosplenomegalia, aumento dell'altezza e della circonferenza cranica, cataratta, deformità del gibbo, alterazioni radiografiche della disostosi multipla e linfociti periferici vacuolizzato. Questi risultati sono le caratteristiche cliniche più comunemente riportate nei pazienti con mannosidosi precedentemente descritti. Il nostro paziente ha una grave carenza e i suoi genitori hanno livelli intermedi della componente acida dell'alfa-mannosidasi nei loro fibroblasti coltivati.
Aneurisma coronarico rotto e valvulite in un bambino con poliarterite nodosa.Questo rapporto descrive un bambino di 4 mesi con poliarterite nodosa che ha avuto un rapido decorso fatale con la diagnosi che alla fine è stata fatta alla necroscopia. Le lesioni patologiche consistevano in una malattia arteriosa diffusa con grave coinvolgimento coronarico e ulteriori caratteristiche insolite includevano un aneurisma dell'arteria coronaria rotto e una valvulite delle valvole mitrale e aortica simile a quella osservata nella febbre reumatica L'eziologia della poliarterite viene brevemente riassunta e viene considerata la possibilità di una reazione immunitaria ad antigeni estranei, come farmaci o virus.
Ricerca di un inibitore della tripsina negli esocarpi di melanzane.Un inibitore della tripsina è stato estratto dagli esocarpi delle melanzane con diversi tamponi. Il tampone acetato 0,1 M, pH 5,5. l'estratto aveva la più alta attività specifica. L'inibitore grezzo, ottenuto mediante trattamento termico e salatura dall'estratto tampone acetato, conteneva il 4,5% di azoto e il 22,6% di esoso. L'isoelettrofocalizzazione ha dimostrato che questo inibitore grezzo nell'esocarpo delle melanzane era composto almeno da tre forme, una delle quali differiva nel suo punto isoelettrico. La forma a pH 4,7 aveva l'attività più forte. I pesi molecolari di questi inibitori sono stati stimati tra 5.000-10.000 mediante filtrazione su gel.
Effetto della sostanza sintetica P sui meccanismi monoaminergici nel cervello.Sostanza sintetica P è stata scoperta per stimolare significativamente la formazione di dopa nel limbico, striato , regioni dell'emisfero e del diencefalo del cervello e del tronco cerebrale inferiore. Non è stato riscontrato alcun effetto sulla formazione di 5-idrossitriptofano o sui livelli di triptofano o tirosina. Dopo l'inibizione della sintesi delle monoamine da parte di N\'-(DL-SERYL)-N2-(2 , 3, 4-triidrossibenzil)idrazina, la sostanza P ha accelerato significativamente la scomparsa di dopamina, noradrenalina e 5-idrossitriptamina. La sostanza P sembra stimolare i neuroni monoaminergici nel cervello e fungere da trasmettitore eccitatorio nei terminali nervosi che interferiscono con i corpi cellulari dopaminergici. Una stimolazione simile della noradrenalina e della 5-idrossitriptamina indica un ruolo di trasmettitore simile per i neuroni noradrenergici e serotoninergici Questi dati rafforzano le domande sulla possibile influenza clinica della sostanza P in stati patologici che coinvolgono meccanismi monoaminergici tra cui parkinsonismo e schizofrenia.
Interazione tra la floretina e la membrana dei globuli rossi.Il legame della floretina ai componenti dei globuli rossi è stato caratterizzato a pH6, dove il legame e la potenza inibitoria sono massimo. Il legame ai globuli rossi intatti e all'emoglobina purificata sono processi non saturi approssimativamente uguali in grandezza, il che suggerisce fortemente che la maggior parte del legame dei globuli rossi può essere attribuita all'emoglobina. Questa conclusione è supportata dal fatto che i fantasmi di globuli rossi privi di omoglobina possono legano solo il 10% in più di floretina rispetto a un numero equivalente di globuli rossi. La permeabilità della membrana dei globuli rossi alla floretina è stata determinata mediante misurazione diretta nel tempo di assorbimento della floretina. A un ematocrito del 2%, il tempo di dimezzamento per l'assorbimento della floretina è 8,7 s, corrispondente a un coefficiente di permeabilità di 2 x 10 (-4) cm/s. La dipendenza dalla concentrazione del legame ai fantasmi rivela due componenti saturabili. La floretina si lega con alta affinità (K diss = 1,5 mu M) a circa 2,5 x 10(6) siti per cella; si lega anche con minore affinità (Kdiss = 54 muM) a un secondo (5,5 x 10 (7) per cella) insieme di siti. Negli estratti lipidici totali sonicati di fantasmi di globuli rossi, il legame alla floretina consiste in un singolo componente saturabile. La sua affinità e il numero totale di siti non sono significativamente differenti da quelli del processo di legame a bassa affinità nei fantasmi. Nessun legame ad alta affinità della floretina è esibito dagli estratti lipidici dei globuli rossi. Pertanto, i siti di legame della floretina ad alta affinità sono correlati alle proteine di membrana e i siti a bassa affinità derivano dal legame della floretina ai lipidi. L'identificazione di questi due tipi di siti di legame consente di distinguere gli effetti della floretina sui processi di trasporto mediati da proteine dagli effetti sulla regione lipidica della membrana.
Attività neurotrofica degli estratti cerebrali nella rigenerazione dell'arto anteriore dell'urodele, Triturus.La perdita di sintesi proteica che subisce l'arto anteriore rigenerante del tritone dopo la denervazione può essere recuperato infondendovi un estratto di proteina cerebrale solubile di tritone. Inoltre, la sintesi della proteina basica mostra una risposta maggiore al principio attivo cerebrale rispetto a quella della proteina acida. L'agente attivo del tessuto nervoso viene distrutto dal calore e digestione della tripsina Gli estratti di fegato e milza, preparati in modo simile, non evocano il recupero della sintesi proteica persa Gli estratti sinaptosomiali del cervello di rana causano anche il recupero della sintesi proteica nel rigenerato denervato, dimostrando la probabilità che l'agente attivo non sia specie-specifico all'interno di questi anfibi, che è un costituente della frazione neuronale del tessuto nervoso e che è presente nei terminali assonali. Ulteriori esperimenti hanno dimostrato che l'agente nervoso è l probabilmente una proteina di base e che la quantità di proteine infuse è dell'ordine di solo l'1,0% della proteina rigenerata totale. Il significato dei risultati è discusso in relazione alla natura dell'effetto sulla sintesi proteica e alla natura del principio attivo.
[LP-X nei neonati: aumento dell'incidenza di test positivi senza colestasi (trad.autore\'s)].L'indagine su 194 neonati ha dimostrato che durante le prime settimane di vita la lipoproteina-X anormale (LP-X) era presente nel siero di quasi il 50% dei bambini, senza evidenza clinica chimica di colestasi. La percentuale di test positivi per LP-X era ancora più alta nei il gruppo dei neonati immaturi (65%). Non c'era correlazione tra la concentrazione di bilirubina e la rilevazione di LP-X. Le attività della leucina arilamidasi (EC 3.4.1.1) e gamma-glutamiltransferasi (EC 2.3.2.2) così come le concentrazioni di colesterolo totale e libero non differivano nei neonati positivi e negativi LP-X. Tranne in un caso, LP-X non è mai stato rilevabile il primo giorno di vita. La prima data di comparsa è stata il secondo giorno. Nel siero di alcuni bambini, che erano LP-X positivi poco dopo la nascita, la lipoproteina poteva ancora essere trovata all'età di 2-3 mesi. L'incidenza di LP-X non era maggiore nei neonati con incompatibilità di gruppi sanguigni rispetto ai neonati con iperbilirubinemia aspecifica. Dopo le trasfusioni di scambio LP-X è scomparso nella maggior parte dei casi, ma in seguito potrebbe essere spesso rilevato di nuovo. In alcuni neonati, che erano LP-X negativi pochi giorni dopo la nascita, l'LP-X è stato rilevato per la prima volta all'età di 2-3 mesi. Il test LP-X non è utile per la diagnosi di colestasi nei neonati. Il test è specifico per la colestasi solo dopo il primo anno di vita. L'aumento dell'incidenza di test LP-X positivi nei neonati è discusso come conseguenza della funzionalità epatica immatura.
Proprietà fisiologiche dell'emoglobina dell'anguilla: acclimatazione ipossica, effetti fosfatici e molteplicità.A differenza dell'affinità per l'ossigeno di tutto il corpo, che si adatta facilmente alle tensioni ambientali dell'ossigeno, le emoglobine, preparate da anguille normossiche e ipossiche acclimatate (Anguilla anguilla) non mostrano variazioni adattative nelle proprietà di ossigenazione o nella molteplicità. L'acclimatazione ipossica è, tuttavia, accompagnata da una forte diminuzione dei nucleosidi trifosfati eritrocitari, in particolare del guanosina trifosfato (GTP), che deprime l'affinità all'ossigeno delle emoglobine composite e componenti più fortemente del concorrente ATP Vengono riportati gli effetti del pH, della temperatura e dei sali sulle proprietà di ossigenazione delle emoglobine (isolate), discusse in relazione alle diverse condizioni ambientali incontrate dalle anguille , e confrontati con i dati sulle anguille americane e giapponesi (rispettivamente A. rostrata e A. juponica.
Connessioni tra le afferenze della placca pilifera e i motoneuroni nella gamba dello scarafaggio.1. Le afferenze della placca trocanterale nella gamba metatoracica dello scarafaggio, Periplaneta americana, sono stati stimolati elettricamente e allo stesso tempo sono state effettuate registrazioni intracellulari da motoneuroni, interneuroni o terminali afferenti all'interno del ganglio metatoracico 2. L'attività nelle afferenti della piastra dei capelli ha evocato potenziali postsinaptici eccitatori a breve latenza (EPSP) nei motoneuroni dei flessori del femore La latenza degli IPSP era in media 1-8 ms più lunga della latenza degli EPSP 3. Le registrazioni intracellulari dai rami terminali delle afferenze della piastra dei capelli hanno mostrato che il ritardo tra il picco dello spike terminale afferente e l'inizio del EPSP è di circa 0,4 ms Questo risultato, insieme alle osservazioni che l'ampiezza degli EPSP è aumentata dal passaggio di corrente iperpolarizzante e diminuita a seguito di stimolazione ad alta frequenza n, indica che gli EPpSP sono evocati tramite giunzioni sinaptiche chimiche monosinaptiche. 4. Le osservazioni sulla lunga latenza delle IPSP, la necessità che un certo numero di afferenti siano contemporaneamente attive per essere evocate e l'occasionale variabilità della latenza, indicano tutte che le IPSP sono evocate attraverso una via disinaptica...
Equilibrio acido-base nella trota iridea (Salmo gairdneri) sottoposta a stress acidi.1. Le proprietà respiratorie del sangue di trota arcobaleno sono state studiate in pesce stressato dall'acido. Nel primo gruppo l'acido è stato introdotto nel flusso sanguigno e nel secondo è stato aumentato il contenuto di anidride carbonica dell'acqua ambientale.2. Inizialmente l'introduzione di acido nel sangue ha causato una diminuzione del pH del sangue e del bicarbonato, e aumento dell'assorbimento di ossigeno e del volume di ventilazione. Dopo 2-3 h questi valori erano tornati ai livelli di controllo 3. La trota sottoposta ad alta CO2 ambientale (circa 10 mmHg) ha mostrato una diminuzione del pH del sangue mentre la PCO2 e il bicarbonato sono aumentati. Dopo 8 h la trota ha iniziato a mostrare segni di compensazione all'acidosi 4. In ogni esperimento la PO2 ematica era poco modificata ma il contenuto di O2 nel sangue era diminuito e tendeva a non riprendere il valore di controllo anche dopo diverse ore 5. I risultati sono discussi in termini dei vari meccanismi acido-base tu dovrebbe essere a disposizione del pesce. Questi includono gli scambi ionici branchiali e i possibili ruoli tampone dei fluidi extracellulari e intracellulari.
Purificazione della prolattina canina mediante isotacoforesi preparativa.L'isotacoforesi preparatoria in gel di poliacrilammide utilizzando anfoliti vettori come \'spacers\' è stata utilizzata per purificare la prolattina dal cane estratti pituitari. Usando Ampholine pH 5-8 come spaziatori, è stata ottenuta una frazione di prolattina che era sostanzialmente omogenea secondo i criteri dell'elettroforesi del disco e della focalizzazione isoelettrica. L'analisi degli amminoacidi ha indicato una stretta somiglianza tra la prolattina canina e quella ovina. Una frazione dell'ormone della crescita , identificata dalla sua mobilità elettroforetica, è stata ottenuta anche se questa era eterogenea nell'elettroforesi del disco a pH alcalino.
Effetto su vari presunti neurotrasmettitori sulla secrezione dell'ormone di rilascio della corticotropina dall'ipotalamo di ratto in vitro-un modello dei neurotrasmettitori coinvolti.L'effetto di incubare l'ipotalamo di ratti maschi adulti con vari neurotrasmettitori dopo il rilascio dell'ormone di rilascio della corticotropina (CRH) è stata valutata l'attività del CRH nel mezzo di incubazione in ratti con lesioni ad eminenza mediana di 48 ore e la corticosteroidogenesi delle ghiandole surrenali asportate in vitro è stato utilizzato come punto finale. La 5-idrossitriptamina (100 pg/ml-10ng/ml) ha causato un rilascio dose-dipendente di CRH che è stato antagonizzato dalla metisergide (30-100 ng/ml). La risposta alla 5-idrossitriptamina è stata inibito anche da esametonio e atropina che indicavano che stava agendo attraverso un interneurone colinergico. La melatonina (10 ng) non alterava il rilascio basale di CRH ma inibiva l'azione sia della 5-idrossitriptamina (10 ng) che dell'acetilcolina (3 pg). Così app orecchie che sia la 5-idrossitriptamina che la melatonina svolgono un ruolo nel controllo del rilascio di CRH. La noradrenalina ha bloccato il rilascio di CRH indotto sia dall'acetilcolina che dalla 5-idrossitriptamina e presumibilmente questa inibizione è stata causata dall'azione diretta sul neurone CRH. Anche l'acido gamma-aminobutirrico (GABA) ha inibito il rilascio di CRH e può anche essere coinvolto nella regolazione della secrezione di CRH. I neurotrasmettitori inibitori, noradrenalina, GABA e melatonina, agiscono tramite meccanismi recettoriali indipendenti. Viene presentato un modello basato sui dati di cui sopra.
Biosintesi di gangliosidi. Caratterizzazione dell'uridina difosfato galattosio: galattosiltransferasi GM2 nell'apparato del Golgi dal fegato di ratto.Un enzima che trasferisce il galattosio dall'UDP-Gal al ganglioside GM2 (ganglioside di Tay-Sachs) è stato concentrato 50 volte nell'apparato di Golgi da fegato di ratto rispetto agli omogenati totali. Questo enzima richiedeva detergenti o fosfolipidi come agenti disperdenti. Tra i numerosi detergenti testati, il taurocolato di sodio e il Triton CF-54 erano i più efficaci nello stimolare la reazione. La sola cardiolipina era più efficace di qualsiasi altro detergente testato nello stimolare l'attività enzimatica. Il pH ottimale per la reazione variava con la natura dell'agente disperdente. Con sodio taurocolato, Triton CF-54 e cardiolipina, il pH ottimale era 6,2 , 5.9 e 5.6, rispettivamente. L'enzima aveva un fabbisogno quasi assoluto di Mn2+, con l'attività massima raggiunta a una concentrazione di 15 mM Mn2+. Altro catione bivalente o trivalente s erano meno efficaci di Mn2+ o inibivano la reazione della transferasi. I valori Km calcolati per UDP-Gal e GM2 erano 1,1 X 10 (-4) M e 9,9 X 10 (-5) M, rispettivamente. L'enzima non può essere dissociato dalle frazioni dell'apparato di Golgi mediante trattamento con ultrasuoni, indicando che è strettamente associato alla membrana e non fa parte del contenuto luminale. Il GM2 appena sintetizzato, il prodotto della reazione, è stato incorporato o è diventato strettamente associato alle membrane dell'apparato di Golgi.
Granuloma letale della linea mediana: uno spettro patologico.Il granuloma letale della linea mediana è un termine clinico non specifico utilizzato per diverse entità patologiche che spesso presentano una qualche parvenza a ciascuna altri in quanto si trovano lungo uno spettro istologico. Tuttavia, ogni entità ha uno specifico pattern diagnostico. Si evidenzia il quadro istologico con caratteristiche distintive di ogni specifico tipo. Si insiste sull'uso di biopsie ripetute fino a quando non si può fare la diagnosi istologica specifica in modo che il trattamento specifico, come brevemente delineato, possa essere effettuato per assicurare la migliore prognosi.
L'effetto del livello di bicarbonato plasmatico sul riassorbimento di sodio del tubulo prossimale nei cani carichi di NH4Cl.Nel tentativo di esaminare gli effetti di lievi e gravi acidosi metabolica cronica al riassorbimento di sodio del tubulo prossimale, a 6 cani sono stati somministrati 10 mEq per chilogrammo al giorno e a 5 cani sono stati somministrati 20 mEq per chilogrammo al giorno di cloruro di ammonio per 3 giorni e confrontati con 12 cani normali durante una diuresi idrica allo stato stazionario e in seguito alla somministrazione di acido etacrinico (EA) per via endovenosa (2 mg. per chilogrammo) utilizzando la metodologia di clearance standard, Nel gruppo gravemente acidotico (la diminuzione del pH è maggiore di 0,2) il pH plasmatico era 7,08 +/- 0,06 e il bicarbonato plasmatico era 6,3 + /- 1.0 Eq. per litro rispetto a un pH di 7,33 +/- 0,02 e bicarbonato di 13,4 +/- 0,7 in acidosi lieve (la diminuzione del pH è inferiore a 0,2). Durante una diuresi dell'acqua allo stato stazionario il flusso di urina è stato di 14,2 +/- - 0,9 in acidosi grave rispetto a 10,5 +/-0,7 ml al minuto per 100 ml di glomeru lar filtrazione (GFR) nei cani normali (p è inferiore a 0,01). Dopo EA la clearance del sodio è aumentata di 38,4 +/- 3,5 nei cani gravemente acidotici e di 27,6 +/- 2,0 ml. al minuto per 100 ml. GFR nei cani normali (p è inferiore a 0,02). Nell'acidosi lieve, il flusso frazionario di urina allo stato stazionario e l'aumento della clearance frazionata del sodio dopo EA non erano significativamente differenti rispetto ai cani normali. Concludiamo che l'acidosi metabolica cronica porta ad un aumento del carico di soluti distali e ad un maggiore effetto natriuretico dell'EA secondario a una diminuzione del riassorbimento di sodio del tubulo prossimale che può dipendere dal grado di riduzione del livello di bicarbonato plasmatico.
Interferenza batterica come fattore nell'infezione renale.Questi esperimenti hanno studiato il ruolo dell'interferenza batterica come determinante nell'epidemiologia dell'infezione renale. Due sono stati utilizzati ceppi non correlati di Escherichia coli, E. coli 08 e 075, isolati da casi di pielonefrite clinica. Anche se entrambi i ceppi avevano morfologia identica su terreni convenzionali, potevano essere differenziati utilizzando marcatori geneticamente stabili per la resistenza alla streptomicina e l'utilizzo dell'arabinosio. Quando i 2 ceppi di E. coli sono stati introdotti nel rene simultaneamente mediante inoculazione diretta, infezioni miste sono state prontamente stabilite. D'altra parte, sebbene entrambi i ceppi di E. coli fossero ugualmente invasivi come singoli agenti patogeni, la pielonefrite, quando indotta utilizzando un challenge retrogrado con una coltura mista degli stessi organismi è stato quasi invariabilmente causato dal solo ceppo 08. Ulteriori esperimenti hanno dimostrato che si è verificata un'interferenza batterica all'interno del bambino ney e determinato il modello di infezione. Quando sono state stabilite infezioni renali unilaterali con E. coli 08 e gli animali successivamente sono stati sottoposti a test con E. coli 075, è stato riscontrato che l'infezione da E. coli 075 non si è mai verificata nei reni infettati da E. coli 08 ma l'infezione è stata stabilita nel rene controlaterale. Gli esperimenti hanno dimostrato che l'infezione renale mista con E. coli è rara anche quando entrambi i patogeni sono ugualmente nefropatogeni e vengono introdotti contemporaneamente nella vescica.
Determinanti della falciatura eritrocitaria. Effetti della variazione del pH e dell'aumento della concentrazione di emoglobina intracellulare per ritiro osmotico.Gli effetti della variazione del pH e dell'aumento della concentrazione intracellulare La concentrazione di emoglobina (Hb) sulla falciforme eritrocitaria e l'affinità dell'ossigeno sono state studiate nel sangue intero di persone con anemia falciforme (SS) e tratto falciforme (SA). Il pH del sangue SA ha promosso la falcezzatura molto più di quanto rappresentato dall'effetto Bohr. Il comportamento della falce è correlato con le concentrazioni minime di gelificazione (MGC) di emolisati deossigenati senza 2,3-difosfoglicerato. I valori di MGC sono diminuiti drasticamente quando il pH è stato abbassato da 7,25 a 7,15 per HbS e da 7,15 a 6,90 per gli emolisati SA, suggerendo effetti su specifiche interazioni ioniche coinvolte nella gelificazione dell'Hb. Possibili controparti cliniche sono l'acidosi metabolica acuta e l'alcalosi (prima del cambiamento nel 2,3-difosfog degli eritrociti lycerate), dove l'effetto Bohr e gli effetti indipendenti dall'affinità dell'ossigeno delle alterazioni del pH sulla falcezione sarebbero additivi. Il restringimento osmotico dei globuli rossi contenenti HbS ha prodotto una forte diminuzione dell'affinità per l'ossigeno e un marcato aumento della falciatura indipendentemente da tale caduta. L'affinità all'ossigeno e le proprietà falciformi delle cellule SA il cui MCHC è stato aumentato al 40% assomigliava a quelle delle cellule SS inalterate, supportando una relazione tra aggregazione molecolare di Hb e bassa affinità per l'ossigeno. La falciatura delle cellule SS aerate nella soluzione salina ipertonica dipendeva dalla desaturazione parziale dell'Hb dovuta alla ridotta affinità per l'ossigeno. Così il restringimento osmotico delle cellule contenenti HbS agisce in sinergia con la parziale deossigenazione per promuovere la falciatura. Queste condizioni sono presenti nel midollo renale, ma possono verificarsi altrove in gravi stati iperosmolari.
Reazioni trapianto contro ospite in topi F1 indotte da cellule linfoidi parentali: natura delle cellule F1 reclutate.Reattività trapianto contro ospite (GVH) di cellule linfonodali parentali (LN) sono state saggiate mediante misurazioni dell'incorporazione di 3H-timidina in vivo. Il trattamento con mitomicina (Mit. ) delle cellule parentali ha abolito la loro attività proliferativa, ma la combinazione di tali cellule parentali trattate con Mit. maggiore proliferazione di una sola popolazione. Questo reclutamento nella proliferazione delle cellule F1 era prominente nei giorni 3 e 4 dopo l'iniezione cellulare e ammontava al 35-51% dell'attività totale osservata dopo l'iniezione delle sole cellule parentali non trattate. La cellula F1 sensibile a reclutamento era resistente al trattamento anti-Thy 1.2, non è stato rimosso dalla separazione del ferro carbonile-magnete e non era presente nel timo. La cellula parentale che induce il reclutamento era, tuttavia, sensibile all'anti-Thy 1.2. Quando le cellule della milza da aptene immuni F1 i donatori erano i Iniettato insieme a cellule LN parentali trattate con Mit. e potenziato con aptene su un altro portatore, è stato osservato un tipico "effetto allogenico" nella risposta immunitaria anti-aptene. Si è concluso che le cellule T parentali trattate con Mit. hanno esercitato un effetto mitogeno sulle cellule F1 B con conseguente ampio reclutamento simile a quello osservato nelle reazioni dei linfociti misti murini.
Infezione neonatale da virus timico di topo: effetti sulle cellule che regolano la risposta anticorpale al polisaccaride pneumococcico di tipo III.Topi infettati neonatalmente da virus timico di topo (TA ) sono stati valutati a diverse età per quanto riguarda la loro capacità di dare una risposta delle cellule formanti placca (PFC) al polisaccaride pneumococcico di tipo III (SSS-III), nonché il grado di attività delle cellule timo-derivate (T) amplificatori e soppressori L'attività delle cellule B è maturata rapidamente da 2 a 4 settimane di età e non è stata influenzata dall'infezione da TA L'attività delle cellule T dell'amplificatore è maturata progressivamente nelle prime 8 settimane di vita ed è stata transitoriamente soppressa nei topi con infezione da TA a 4 settimane di età. L'attività delle cellule T soppressore misurata a 2,4 e 6 settimane di età non è stata influenzata dall'AT. I risultati suggeriscono che l'AT è altamente tropico per le cellule T e ha effetti selettivi sulle sottopopolazioni di cellule T.
Il legame del complemento da parte di complessi formati tra un anticorpo di coniglio e oligosaccaridi di dimensioni crescenti.Immunocomplessi formati tra un anticorpo di coniglio omogeneo per pneumococco di tipo III polisaccaride e una serie di oligosaccaridi di varia grandezza derivati da esso sono stati preparati e testati per la loro capacità di fissare il complemento emolitico di cavia. Anticorpo e tetra-, esa- o ottasaccaride formavano solo complessi monomerici anticorpo-aptene e non mostravano alcun complemento Un dodecasaccaride e un oligomero di 16 residui di zucchero hanno formato immunocomplessi dimeri e trimeri. Questi complessi non erano inoltre in grado di fissare il complemento. Tuttavia, poiché la dimensione degli oligomeri di zucchero è stata aumentata a circa 21 residui di zucchero per molecola di oligosaccaride o più, il i complessi risultanti hanno mostrato un legame sostanziale con il complemento, in concomitanza con la formazione di aggregati antigene-anticorpo superiori ai trimeri. D'altra parte, uno studio indipendente effettuata con lo stesso materiale ha suggerito cambiamenti nella conformazione della frazione Fc nella molecola dell'anticorpo dopo l'aggiunta di ligandi oligosaccaridici piccoli come unità di 16 residui. Poiché i complessi risultanti difficilmente hanno inibito qualsiasi legame con il complemento, i cambiamenti conformazionali indotti dal ligando nella parte Fc della molecola anticorpale sembrano essere una condizione insufficiente di per sé per innescare la fissazione del complemento.
I cromosomi di quattro specie del complesso nasuta di Drosophila. I. Mappe cromosomiche e polimorfismo di inversione.I cromosomi salivari di quattro specie di nasuta sono stati studiati complessi di Drosophila, D. sulfurigaster albostrigata, D, kohkoa, D. albomicans e D. kepulauana e sono state presentate mappe cromosomiche di ciascuna specie; le mappe di queste ultime tre specie sono basate sulla mappa di D. sulfurigaster albostrigata. Tre delle specie D. sulfurigaster albostrigata, D. albomicans e D. kohkoa hanno dimostrato di essere altamente polimorfiche per le inversioni cromosomiche, mentre le prove disponibili indicano che D. kepulauana è molto meno polimorfica. Questi fatti sono correlati alla distribuzione geografica del specie. L'omoselezione di transizione non è stata completa nell'evoluzione di tre delle specie poiché D. sulfurigaster albostrigata, D. kohkoa e D. albomicans hanno un certo numero di polimorfismi naturali in comune.
Farmacoterapia nei pazienti anziani depressi.Il trattamento della depressione nei pazienti anziani non è genericamente diverso dal trattamento della depressione nelle coorti di età più giovane. A causa di una certa età fattori fisici, fisiologici e biochimici correlati, tuttavia, la prescrizione di farmaci per i pazienti geriatrici deve essere modificata sotto diversi aspetti. Gli antidepressivi triciclici sono i principali agenti nel trattamento, ma i loro effetti collaterali tendono ad essere amplificati negli anziani. Il dosaggio dovrebbe essere inizialmente inferiore rispetto ai pazienti più giovani e aumentati con incrementi graduali. Litio, inibitori MAO e neurolettici sono appropriati in alcuni casi, ma sono necessarie precauzioni aggiuntive. Poiché gli anziani sono soggetti a scompenso multiplo del sistema, è probabile che vengano prescritti più agenti farmacologici. -le interazioni farmacologiche che coinvolgono farmaci antidepressivi presentano una varietà di problemi terapeutici e possono minacciare la vita. La depressione in tarda età può essere trattati farmacologicamente, ma sia le attività terapeutiche che quelle deleterie dei farmaci possono essere alterate da sistemi di organi compromessi.
Prossemica, locus of control, ansia e tipo di movimento in ragazzi emotivamente disturbati e normali.Al fine di determinare i requisiti di distanziamento interpersonale per bambini normali e disturbati e per indagare la relazione del locus of control e dell'ansia con lo spazio interpersonale, a 20 ragazzi emotivamente disturbati e 20 ragazzi normali è stato richiesto casualmente di avvicinarsi a una persona oggetto e di lasciare che la persona oggetto si avvicinasse a loro finché non si sentivano a disagio. indicava che i ragazzi emotivamente disturbati richiedevano più spazio dei normali, che i soggetti si avvicinavano più vicino di quanto consentissero alla persona oggetto di avvicinarsi a loro e che gli esterni richiedevano più spazio degli interni. Non c'erano differenze significative tra i soggetti con ansia alta e bassa, né tra bambini emotivamente disturbati diagnosticamente classificati come reazione ansiosa e quelli con altre diagnosi Infine, né ansia né locus of control ha spiegato le differenze significative nei requisiti di spazio normale-emotivamente disturbati. Sono state discusse le implicazioni teoriche e pratiche, nonché il rapporto tra la ricerca presente e quella precedente.
Riduzione della solubilità dello smalto da parte del monofosfato di sodio.La preponderanza delle prove indica che il monofluorofosfato di sodio esercita un effetto altamente benefico sull'incidenza della carie dentale e sulla solubilità dello smalto. Gli effetti ottimali si ottengono con una concentrazione di fluoruro di 4 X 10(3) ppm, con un'applicazione di quattro minuti e regolando il pH a 4.0. La reazione del monofluorofosfato di sodio con lo smalto non dipende dalla temperatura. Il monofluorofosfato di sodio è significativamente più protettivo del fluoruro di sodio in soluzioni acquose a tutte le concentrazioni di fluoruro equivalenti e in paste a concentrazioni superiori a 8 X 10(3) ppm di fluoruro.
Proprietà della guanilato ciclasi dalla corteccia renale di ratto e dai tumori renali trapiantati.La distribuzione subcellulare e le proprietà della guanilato ciclasi sono state esaminate in preparazioni di rene di ratto normale corteccia e tumori renali di Morris MK2 e MK3. l'enzima particolato nella corteccia renale e nei tumori era associato a tutte le frazioni particellari. Triton X-100 aumentava l'attività di tutti i preparati. Tutti i preparati preferivano Mn2+ come unico catione. Gli effetti stimolatori del Ca2+ sull'enzima solubile e gli effetti inibitori sull'attività del particolato erano simili con preparazioni di corteccia renale e tumori L'ATP ha inibito tutte le preparazioni Le guanilato ciclasi solubili e particolate della corteccia renale sono state attivate d più volte con 1 mM NaN3. I preparati di enzimi tumorali non hanno risposto a NaN3. Pertanto, rispetto alla normale corteccia renale, la distribuzione subcellulare della guanilato ciclasi e alcune delle sue proprietà sono alterate nelle preparazioni di tumori renali.
Contenuto ciclico di AMP e regolazione della tirosina-3-mono-ossigenasi nello striato di ratto.La transezione unilaterale degli assoni dopaminergici nigro striatali ha prodotto un (15-30 min) aumento dell'affinità della tirosina 3-mono-ossigenasi striatale (TH), per un cofattore pteridina sintetica (DMPH4). I cambiamenti cinetici del TH striatale sono stati paralleli ad un aumento del contenuto di cAMP striatale. Apomorfina (10 mg/kg ip) non è riuscito a bloccare l'attivazione del TH mediante emisezione cerebrale. Anche l'aloperidolo (5 mg/kg ip) e la reserpina (5 mg/kg ip) hanno provocato un cambiamento improvviso e simile nell'attività del TH striatale, ma questa risposta si è verificata senza un aumento del contenuto di cAMP ed è durato per più di 2 ore. Se l'emisezione della via nigrostriatale è stata eseguita dopo l'iniezione di aloperidolo o reserpina l'attivazione del TH prodotta da questi due farmaci è stata invertita rapidamente (circa 30 minuti). Pretrattamento con aloperidolo o reserpina prevenuto l'aumento di striato al cAMP dopo emisezione cerebrale. Inoltre, l'aloperidolo iniettato 30 minuti dopo l'emisezione cerebrale non è riuscito a modificare le proprietà cinetiche del TH nello striato omolaterale alla lesione, ma ha modificato il TH striatale nel lato controlaterale alla lesione. Questi risultati suggeriscono che l'aumento dell'affinità del TH striatale per il cofattore pteridina indotto dall'emisezione cerebrale non è correlato alla mancanza di stimolazione degli autorecettori DA. Inoltre questi esperimenti forniscono una prova che i recettori dopaminergici postsinaptici giocano un ruolo nell'attivazione del TH striatale suscitato dall'aloperidolo.
Un metodo rapido per il dosaggio della guanilato ciclasi.Un test estremamente rapido e sensibile per la guanilato ciclasi che utilizza [alpha-32P]-GTP è stato Implica l'incubazione di 5-100 tazze di proteina enzimatica con 1 mM [alfa-32P]-GTP in tampone Tris HC1 40 mM (pH 7,4) contenente 3-3 mM MnSO2, 10 mM teofillina e 1 mM GMP ciclico. la reazione viene terminata con l'aggiunta di EDTA e il [32P]-GMP ciclico formato viene isolato mediante cromatografia sequenziale su Dowex-50-H+ e allumina Recupero del 75-85% di [3H]-GMP ciclico e un bianco di 0,001-0,003 La % di [32P]-GTP aggiunta è stata ottenuta di routine. La radioattività [32P] isolata ha dimostrato di essere GMP ciclico con una varietà di tecniche. Il test ha anche dimostrato di essere applicabile a una varietà di tessuti.
Secrezione enzimatica lisosomiale da neutrofili umani mediata da CMP ciclico: inibizione dell'accumulo di GMP ciclico e della funzione dei neutrofili da parte dei glucocorticosteroidi.Gli effetti di diversi glucocorticosteroidi su cicli Nei neutrofili umani sono stati studiati l'accumulo di GMP, l'attività della guanilato ciclasi, l'afflusso di calcio, la secrezione di enzimi lisosomiali e la fagocitosi. Il contatto tra neutrofili e particelle di zimosano trattate con siero, in presenza di calcio a pH 7,4, ha innescato questi eventi cellulari entro cinque minuti. di queste funzioni dei neutrofili è stata marcatamente inibita da metilprednisolone sodio succinato, triamcinolone acetonide emisuccinato e parametasone acetato, ma non è stata influenzata da due mineralcorticosteroidi L'attività della guanilato ciclasi solubile nei neutrofili umani non è stata modificata dai glucocorticoidi. , i neutrofili da glucocorticosteroidi possono essere il risultato di una riduzione del ciclo ic accumulo di GMP all'interno di queste cellule. I dati suggeriscono che i glucocorticosteroidi inibiscono l'accumulo di GMP ciclico nei neutrofili riducendo l'afflusso di calcio extracellulare nelle cellule, limitando così la disponibilità di calcio intracellulare per i processi metabolici associati all'accumulo di GMP ciclico.
Requisito per un fattore macromolecolare per l'attivazione della sodio azide della guanulato ciclasi.Sodio azide, un agente altamente nucleofilo e un potente inibitore metabolico, guanilato notevolmente aumentato attività della ciclasi da frazioni surnatante di omogenati di fegato di ratto. L'effetto della sodio azide non è stato osservato con la guanulato ciclasi parzialmente purificata dal fegato o con la guanilato ciclasi solubile grezza dalla corteccia cerebrale. Tuttavia, l'effetto della sodio azide potrebbe essere ripristinato dalla riaggiunta di una frazione isolato da omogenati di fegato di ratto. Il fattore macromolecolare richiesto per l'effetto della sodio azide è stato separato dalla guanilato ciclasi solubile del fegato di ratto con cromatografia su colonna di DEAE-cellulosa e sono state esaminate alcune delle sue proprietà. Il fattore era non dializzabile e labile al calore.
Uso della Counter e dell'immunoelettroforesi missilistica nelle infezioni respiratorie acute dovute a Streptococcus pneumoniae.L'uso della Counter immunoelettroforesi (CIE) per la rilevazione di pneumococco capsulare viene descritto l'antigene nell'espettorato e nel siero di pazienti affetti da infezioni respiratorie acute. La CIE dell'espettorato ha dato risultati positivi in 224 (99%) dei 225 campioni in cui lo Streptococcus pneumoniae è stato isolato con tecniche colturali, e in 23 (9%) su 262 campioni in cui non erano stati isolati agenti patogeni o altri potenziali. Nel rilevamento dell'antigene capsulare nel siero, la CIE è risultata positiva in 32 (35%) dei 92 casi di polmonite ed è stata associata ad un aumento della mortalità.
Influenza della L-prolil-L-leucil-glicina ammide sulla secrezione dell'ormone della crescita in soggetti normali e acromegalici.Peptide inibitore del rilascio di melanociti (MRIP) -I) non ha influenzato i livelli circolanti di ACTH, LH, FSH, TSH, ORL, betaMSH e insulina quando infuso ev (5,0 mg in 5 min più 0,4 mg/min per 70-115 min), mentre riduceva significativamente la risposta sierica del GH all'ipoglicemia nei soggetti normali e all'abbassamento dei livelli sierici di GH negli acromegalici. Non vi era alcuna correlazione tra la caduta del GH sierico dopo RMIP e dopo farmaci dopaminergici in acromegalia. Questi dati sono compatibili sia con un'azione soppressiva diretta esercitata da MRIP-I a livello ipofisario o un effetto extra-ipofisario che non coinvolga le vie dopaminergiche. Si può ipotizzare che poiché la MRIP-I marcata si accumula nella pineale e la melatonina smussa la risposta del GH all'ipoglicemia, la ghiandola pineale potrebbe essere coinvolta nella soppressione di MRIP-I-indotta di secrezione di GH.
Metodo cromatografico su strato sottile per la determinazione dell'acebutololo e del suo principale metabolita nel siero.Metodo cromatografico su strato sottile sensibile e specifico per la determinazione simultanea di acebutololo [DL-1-(2-acetil-4-n-butiramidefenossi)-2-idrossi-3-isopropilamminopropano] e del suo principale metabolita [DL-1-(2-acetil-4-acetamidofenossi)-2- idrossi-3-isopropilamminopropano] Si estrae un volume di 2 ml di siero con 350 ng di chinidina come standard interno a pH 10, si evapora il solvente e si scioglie il residuo in 50 μm di metanolo. volume della soluzione è stato macchiato su una piastra a strato sottile e dopo eluizione (acetato di etile-metanolo-ammoniaca, 75:20:5) la piastra è stata essiccata a 90 per 15 min e, dopo raffreddamento, immersa in una cera di paraffina al 10% soluzione La fluorescenza è stata misurata utilizzando uno spettrofluorimetro con un accessorio di scansione a strato sottile I rapporti picco-altezza di acebutololo rispetto allo standard interno e al metabolita ite allo standard interno sono stati usati per quantificare rispettivamente l'acebutololo e il metabolita.
Risoluzione in cromatografia di affinità. L'effetto dell'eterogeneità dell'inibitore della tripsina di soia immobilizzato sulla separazione delle proteasi pancreatiche.Per cromatografia di affinità, tripsina e chimotripsina gli omogenati del pancreas di topo sono stati separati utilizzando un inibitore della tripsina di soia immobilizzato su Sepharose. Gli effetti dell'eterogeneità funzionale dell'adsorbente sono stati studiati in termini di risoluzione ottenuta. L'eterogeneità dell'adsorbente è stata studiata in termini di risoluzione ottenuta. L'eterogeneità ha stato trovato originare dalle seguenti fonti: eterogeneità del ligando prima dell'immobilizzazione; alterazione del ligando per immobilizzazione; e modifica del ligando dopo l'immobilizzazione da parte di molecole da frazionare. Solo quando l'eterogeneità dell'adsorbente è stata ridotta al minimo, la risoluzione di specie enzimatiche correlate. Le condizioni di eluizione per i diversi enzimi dipendevano sulla quantità di enzima applicato, poiché non è stato possibile ottenere una completa omogeneità. Inoltre, è stato scoperto che l'adsorbente è stato parzialmente degradato dall'estratto di pancreas, riducendo la sua capacità di frazionamento.
Cromatografia liquida ad alta pressione di farmaci. II. Valutazione di una colonna a scambio cationico microparticolato.È stata valutata una colonna a scambio cationico microparticolato per la cromatografia di trenta composti selezionati come rappresentativi di un'ampia varietà di sostanze farmacologiche. Sebbene la colonna abbia mostrato un forte effetto di partizione oltre al meccanismo di scambio ionico previsto, la ritenzione dei farmaci potrebbe essere prevedibilmente influenzata dalla variazione della forza ionica dell'eluente e dalla contenuto di solvente. Per i farmaci acidi la colonna ha mostrato poca selettività (sebbene un effetto di salatura abbia aumentato la ritenzione ad elevate forze ioniche dell'eluente), ma per le sostanze basiche Partisil SCX può fornire un utile mezzo separatore che offre una ragionevole efficienza cromatografica (HETP è di circa 0,1 mm). La longevità della colonna, tuttavia, è attualmente discutibile.
Un metodo cromatografico su strato sottile in fase inversa per la determinazione dei coefficienti di ripartizione relativi di composti molto lipofili.Un metodo cromatografico su strato sottile in fase inversa è stato sviluppato un metodo per la determinazione dei coefficienti di partizione È stata scelta una fase di supporto, a seguito di indagini sulla mancanza di proprietà adsorbenti, che ha un effetto minimo sul pH del sistema tampone È stata scelta una fase stazionaria per dare valori deltaRm della stessa entità dei valori pi di Hansch per una serie di fenotiazine. Il metodo può essere applicato a molecole di un'ampia gamma di lipofilia previa indagine preliminare di opportuni rapporti fase-volume e del pH e composizione della fase mobile binaria, fornendo adsorbimento sulla fase di supporto è escluso.
Stimolazione dell'attività dell'ornitina decarbossilasi nei fibroblasti di pollo mediante attività insulino-simile non insopprimibile (NSILA), insulina e siero.Un fattore isolato dall'uomo Il siero (attività insulino-simile non soppressibile, NSILA) stimola la moltiplicazione dei fibroblasti di embrioni di pollo deprivati di siero e stimola l'attività dell'ornitina decarbossilasi (ODC) Dosi fisiologiche di NSILA (200 muU/ml) e dosi farmacologiche di insulina (200 mU/ml) stimolare l'ODC 4-5 volte, il 10% del siero fetale di vitello circa 18 volte. L'aggiunta combinata di NSILA e insulina non determina attività più elevate, suggerendo un meccanismo d'azione comune. L'aumento del numero di cellule ottenuto con NSILA, insulina o siero parallela al grado di stimolazione dell'ODC. Il trattamento delle cellule con pronasi stimola anche l'attività dell'ODC. Un forte aumento dell'attività dell'ODC si verifica tra 2, 5 e 5,0 ore dopo l'aggiunta dei fattori di crescita con un picco a 4,0-4,5 ore ("periodo di attivazione "). Quando le cellule lasciano G1 ph Pertanto, l'attività dell'ODC diminuisce rapidamente. Per ottenere la massima attività dell'ODC, i fattori di crescita devono essere presenti durante l'intero "periodo di attivazione". Il potenziale di riattivazione dell'ODC diminuisce quando le cellule passano attraverso la fase S. I risultati ottenuti utilizzando la cicloesimide suggeriscono che l'ODC viene tradotto solo nella seconda metà del "periodo di attivazione". Vengono discussi i dati sugli effetti di dbcAMP e dbcGMP sull'attivazione dell'ODC da parte del siero.
L'interazione di soluzioni macromolecolari con monostrati macromolecolari adsorbiti su una superficie idrofoba.Al fine di chiarire i modelli generali delle interazioni superficiali intermacromolecolari che possono essere coinvolte nei fenomeni di emocompatibilità, monostrati di macromolecole rappresentative su una superficie di vetro ottadecilsililata sono stati esposti a soluzioni di altre macromolecole e i cambiamenti nella composizione interfacciale sono stati caratterizzati da curve di titolazione potenziale zeta-pH, misurate mediante analisi di flusso di corrente alternata e, in alcuni casi , mediante marcatura con radiotracciante. Esperimenti con poli(vinilpirrolidone) (PVP), un polimero lineare compatibile con il sangue, albumina sierica bovina (BSA), una proteina sierica rappresentativa, siero umano intero (HS), una miscela complessa di proteine e superficie degli eritrociti glicoproteina (GP), un anfifilo macromolecolare a catena estesa, ha mostrato quanto segue: 1) La penetrazione del monostrato originale si è verificata entro 24 ore in 9 dei 12 casi possibili; non si è verificato per monostrati BSA o HS esposti a PVP, e probabilmente non per PVP esposto a GP. 2) In tutti i casi, la penetrazione è stata accompagnata da uno spostamento non più che parziale del monostrato originale, generando così un monostrato misto. Ciascuno dei sei possibili monostrati binari misti potrebbe essere ottenuto mediante almeno una delle due possibili sequenze di miscelazione. 3) Nei tre sistemi binari contenenti BSA, la formazione del monostrato misto potrebbe essere correlata ad un aumento dell'adsorbimento nel sistema a due componenti. 4) I due componenti dei monostrati misti non erano equamente distribuiti tra i loro spessori: quindi, le superfici esterne del PVP-BSA e (a pH neutro) i monostrati misti PVP-HS contenevano solo PVP; quello delle miscele BSA-HS solo HS. Nel PVP-HS, e probabilmente nei monostrati misti GP-BSA e GP-HS, la composizione della superficie esterna appariva dipendente dal pH. Il potenziale zeta risultante rispetto ai profili di pH negli ultimi due casi assomigliava a quello delle cellule del sangue intatte. I risultati suggeriscono che né i monostrati compatti di proteine globulari né i monostrati diffusi di polimeri idrosolubili arrotolati casualmente possono, mediante il loro precedente adsorbimento su una superficie sintetica, impedire il successivo adsorbimento di altre macromolecole globulari. È possibile che i polimeri arrotolati casualmente possano impedire l'adesione delle piastrine al substrato poiché i risultati indicano che l'adsorbimento di tali polimeri provoca uno spostamento del piano di taglio.
Purificazione e proprietà di una proteina chinasi virionica.La proteina chinasi associata ai virioni del virus della rana 3 è stata purificata all'apparente omogeneità mediante cromatografia a scambio ionico e filtrazione su gel. La proteina enzimatica è apparsa come un singolo polipeptide di peso molecolare da 50.000 a 55.000 come determinato mediante filtrazione su gel, sedimentazione in gradiente di glicerolo ed elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato-poliacrilammide e comprendeva circa lo 0,4% della proteina virionica totale. L'attività è stata classificata come proteina chinasi ciclica indipendente dal nucleotide poiché non è stata influenzata da adenosina ciclica 3\':5\'-monofosfato, guanosina ciclica 3\':5\'-monofosfato o inibita da un inibitore della proteina chinasi ciclica nucleotide-dipendente proteina, e utilizzato GTP e ATP come donatore di fosfato. I maggiori tassi di fosforilazione sono stati ottenuti con substrati fosfoproteici acidi come caseina o fosvitina, sebbene potenziale fisiolo substrati gici per questa attività includevano specifici polipeptidi virionici del virus della rana.
Associazione della glicogenolisi con il reticolo sarcoplasmatico cardiaco.Frammenti di reticolo sarcoplasmatico isolati dal muscolo cardiaco del cane possiedono un sistema di accumulo di calcio associato a una serie di enzimi collegati alla glicogenolisi Questi enzimi includono: adenilato ciclasi, proteina chinasi ciclica AMP-dipendente, fosforilasi b chinasi, fosforilasi (b/a, 30/1), enzima "debrancher" e glicogeno (da 0,3 a 0,7 mg/mg di proteina La preparazione del reticolo sarcoplasmatico ha prodotto glucosio 1-fosfato e glucosio dal glicogeno endogeno o esogeno. Sia gli enzimi accumulatori di calcio che glicogenolitici sedimentano in un singolo picco al 33% di saccarosio su un gradiente di densità di saccarosio continuo lineare e il complesso rimane intatto durante ripetuti lavaggi Le particelle di glicogeno sembrano essere associate al reticolo sarcoplasmatico in situ così come nella frazione microsomiale isolata Il complesso reticolo sarcoplasmatico-glicogenolitico, monitorato da un linke d saggio spettrofotometrico enzimatico, mostra diverse caratteristiche: (a) l'attivazione dell'attività della fosforilasi alla velocità di picco avviene in un andamento temporale molto rapido che non può essere duplicato utilizzando combinazioni di enzimi purificati; (b) l'attivazione è inibita dall'inibitore della protein chinasi; (c) la fosforilasi b funziona come nella forma purificata rispetto all'AMP (Km, 0,3 mM); (d) in presenza di quantità limitanti di glicogeno, l'attività ottimale della fosforilasi b nel reticolo sarcoplasmatico richiede la presenza di debrancher, e l'attività è sensibile agli inibitori di quell'enzima come Tris, il che suggerisce la possibilità che gli enzimi abbiano uno specifico relazione strutturale con il glicogeno presente. La fosforilasi b porta ad un'attivazione nel reticolo sarcoplasmatico era completamente resistente all'acido etilenglicole bis(beta-amminoetil)-N,N\'-tetraacetico (EGTA). L'inibizione dell'accumulo di calcio da parte o il rilascio di calcio legato dal reticolo sarcoplasmatico da parte di X537A (RO 2-2985) non ha alterato la resistenza all'EGTA. Questi risultati suggeriscono che il reticolo sarcoplasmatico cardiaco è un organello complesso contenente funzioni che possono essere correlate all'accoppiamento eccitazione-contrazione e al metabolismo intermedio.
Purificazione e caratterizzazione di una fosfatasi alcalina repressibile da Thermus aquaticus.Una fosfatasi alcalina repressibile è stata isolata dal termofilo batterico estremo, Thermus aquaticus. Il l'enzima può essere decompresso più di 1.000 volte facendo morire di fame le cellule per il fosfato. Nelle cellule derepresse, quasi il 6% della proteina totale in una preparazione enzimatica priva di cellule è fosfatasi alcalina. L'enzima è stato purificato fino all'omogeneità come giudicato dall'elettroforesi su disco di acrilammide e sodio dodecil solfato elettroforesi. Mediante centrifugazione in gradiente di saccarosio è stato stabilito che l'enzima ha un peso molecolare approssimativo di 143.000 e consiste di tre subunità, ciascuna con un peso molecolare di 51.000. Il tampone Tris stimola l'attività dell'enzima, che ha un pH ottimale di 9.2 L'enzima ha un ampio intervallo di temperatura con un ottimale di 75-80 gradi L'enzima catalizza l'idrolisi di un'ampia varietà di composti fosforilati così come molte delle fosfatasi alcaline mesofile. La costante di Michaelis (Km) per l'enzima è 8,0 X 10 (-4) M. L'analisi degli amminoacidi della proteina ha rivelato poco nella composizione amminoacidica per separarla da altri enzimi mesofili che sono stati precedentemente studiati.
Etichettatura di affinità di un residuo lisilico essenziale precedentemente non rilevato nell'aldolasi di fruttosio bisfosfato di classe I.È stata utilizzata l'etichetta di affinità N-bromoacetiltanolammina fosfato (BrAcNHEtOP) precedentemente a pH 6,5 per identificare His-359 dell'aldolasi muscolare di coniglio come residuo del sito attivo. Ora troviamo che la specificità del reagente è dipendente dal pH. A pH 8,5, l'alchilazione con BrAcNHEtOP marcato con 14C abolisce sia il fruttosio-1,6 -Attività di scissione P2 e attività transaldolasi. La stechiometria di incorporazione, la cinetica di inattivazione e la protezione contro l'inattivazione offerta da un inibitore competitivo o diidrossiacetone fosfato sono coerenti con il coinvolgimento di un residuo del sito attivo. Un confronto dei profili 14C ottenuti dalla cromatografia sull'analizzatore di amminoacidi di idrolizzati acidi di campioni inattivati e protetti rivela che l'inattivazione deriva dall'alchilazione dei residui di lisile. Il principale peptide nello scavo triptico ests dell'enzima inattivato è stato isolato. In base alla sua composizione amminoacidica e alla sequenza nota dell'aldolasi, Lys-146 è il residuo preferenzialmente alchilato dal reagente. L'aldolasi modificata a His-359 è ancora soggetta ad alchilazione della lisina; quindi Lys-146 e His-359 non sono siti che si escludono a vicenda. Tuttavia, l'aldolasi modificata a Lys-146 non è soggetta ad alchilazione dell'istidina. Una spiegazione di queste osservazioni è che la modifica di Lys-146 abolisce la capacità di legame dell'aldolasi per i substrati e gli analoghi del substrato (BrAcNHEtOP), mentre la modifica di his-359 no. Coerente con questa spiegazione è la capacità dell'aldolasi modificata a His-359 di formare una base di Schiff con il substrato e l'incapacità dell'aldolasi modificata a Lys-146 di farlo. Pertanto, Lys-146 potrebbe essere uno dei gruppi cationici che funziona nel legame elettrostatico dei gruppi fosfato del substrato.
Il meccanismo di generazione dell'anione superossido mediante l'interazione della fenilidrazina con l'emoglobina.Il meccanismo mediante il quale l'anione superossido viene generato dall'interazione della fenilidrazina con è stata studiata l'ossi- o metaemoglobina. Piuttosto che la generazione di anione superossido risultante da un'autoossidazione accelerata dell'ossiemoglobina, è stato scoperto che sia l'ossi- che la metaemoglobina funzionano come perossidasi verso la fenilidrazina con la risultante ossidazione di questo composto a fenildiazina. Generazione di fenildiazina dall'ossidazione di fenilidrazina da parte dell'emoglobina o per idrolisi e successiva decarbossilazione del metil fenilazoformiato (C6H5N=NCOOCH3) ha portato alla produzione di anione superossido. Si suggerisce che in determinate condizioni l'emoglobina possa funzionare come perossidasi che metabolizza i farmaci.
Legame della (3H)prostaglandina E1 a recettori putativi legati all'adenilato ciclasi di cloni cellulari in coltura.Un metodo per valutare il legame di 3H-marcati la prostaglandina E1 ([3H]PGE1) alle membrane cellulari è stata sviluppata e utilizzata per studiare l'interazione di [3H]PGE1 con le membrane di cellule di mammifero coltivate. I siti recettoriali sono stati identificati dalla correlazione della potenza di una serie di composti per competere per [ siti di legame 3H]PGE1 e per stimolare l'attività dell'adenilato ciclasi, mediante correlazione dei tassi di legame e cambiamento nell'attività enzimatica e dalla corrispondenza dell'attività di legame [3H]PGE1 con la presenza o l'assenza di adenilato ciclasi sensibile alla PGE1 in diversi cloni Nel clone B82, una cellula L murina, [3H]PGE1 si lega con un'energia di attivazione di 14 kcal/mol a una classe di siti con un'affinità di 0,5 X 10(8) M-1 e una capacità di 150 fmol/ mg di proteina Dipendenza dalla concentrazione dell'attivazione dell'adenilato ciclasi da parte di PGE1 (KD =30 nM) e kinet l'analisi ic del legame [3H]PGE1 (k1 = 4 X 10(6) litri/mol/min, k-1 0,15/min) verifica questa affinità. La dipendenza dalla concentrazione e la specificità del legame e dell'attivazione delle adenilato ciclasi nel clone di neuroblastoma N4TG1 e N18TG2 confermano il metodo. In diversi cloni privi di adenilato ciclasi responsiva alla PGE1, non è rilevabile alcun legame specifico [3H]PGE1.
Glocoproteine antigelo da pesci antartici. Inattivazione da borato.Glicoproteine antigelo, che in precedenza si è dimostrata inattiva in presenza di borato, migrano elettroforeticamente come il complesso borato, presumibilmente attraverso la formazione di complessi borato con gruppi ossidrilici sulle catene laterali dello zucchero. La glicoproteina antigelo (5 mg/ml) è risultata essere completamente attiva in presenza di borato 0,1 M a pH 7, ma inattiva a pH 9. Una curva di titolazione del pH rispetto all'attività antigelo della glicoproteina (5 mg/ml) in borato 0,1 M ha mostrato una diminuzione progressiva dell'attività antigelo all'aumentare del pH. In concomitanza con la diminuzione dell'attività si sono verificati aumenti del legame del borato. 9.0, quasi 2 moli di borato sono state complessate per glicotripeptide. Le analisi ultracentrifuga hanno mostrato pesi molecolari simili e la diffusione quasi elastica della luce laser ha mostrato diffusioni simili a pH 7.0 e 9.0 in borato e in assenza di borato. Il bi Il ritrovamento del borato, più che un cambiamento di conformazione, è quindi direttamente correlato alla perdita di attività antigelo. Il borato alcalino ha anche ridotto l'attività emoagglutinante della lectina arancione di Osage e ha ridotto l'inibizione dell'attività da parte delle glicoproteine antigelo.
Studi sui residui di tirosina nell'adenilato chinasi del muscolo suino. Spettri di dicroismo circolare e modificazione chimica con tetranitrometano.Cambio conformazionale indotto dal substrato dell'adenilato chinasi del muscolo suino (EC 2.7.4.3) è evidenziato da un cambiamento negli spettri di dicroismo circolare nel vicino ultravioletto. In assenza di triptofano nell'adenilato chinasi del muscolo suino, il cambiamento spettrale può essere assegnato a una perturbazione del/i cromoforo/i tirosina. era specifico per il legame del nucleotide dell'adenina ed era maggiore con l'ATP che con l'AMP. Nel modello a raggi X, Tyr153 e Tyr154 si trovano in una regione cerniera di due domini che formano una fessura profonda del sito attivo e sono quindi suscettibili di cambiamento conformazionale sul substrato L'adenilato chinasi è stata trattata con tetranitrometano equimolare Il prodotto di colore giallo, separato dall'enzima non modificato mediante eluizione in gradiente di substrato su una colonna di fosfocellulosa, aveva circa 1 mole di nit la rotirosina per mole dell'enzima mediante analisi degli amminoacidi e ha mostrato un valore Km leggermente superiore rispetto all'enzima nativo per l'ADP (Km = 0,50 mM rispetto a 0,25 mM per l'adenilato chinasi nativa). La titolazione spettrofotometrica della nitrodenilato chinasi ha fornito pKa 8,4 per la costante di dissociazione del gruppo nitrotirosil idrossile. Quando si lega l'ATP, il valore di pKa è aumentato a 9,0 mentre il legame con l'AMP ha causato pochissimi cambiamenti. Mediante mappatura peptidica del prodotto di digestione della carbossipeptidasi, sono state rilevate 0,70 moli di gruppo nitro per mole di adenilato chinasi su Tyr153 e una piccola quantità di gruppo nitro è stata trovata anche su Tyr95. Da questi risultati si propone che Tyr153 sia direttamente o indirettamente coinvolto nel legame dell'ATP.
Varianti genetiche dell'eritrocita glucosio-6-fosfato deidrogenasi. Parametri cinetici e termodinamici delle varianti A, B e A- in relazione alla struttura quaternaria.I valori di Vmax e Km per le tre varianti genetiche A, B e A- dell'eritrocita glucosio-6-fosfato deidrogenasi sono stati determinati a 10 diversi valori di pH nell'intervallo da 5,5 a 9,5, e a quattro diverse temperature in l'intervallo da 18,5 a 40,0 gradi. La curva log Vmax in funzione del pH per ciascuno degli enzimi mostra un aumento monotono tra pH 5,5 e 7 e un plateau da pH 7,5 in su. Queste curve e la loro dipendenza dalla temperatura sono compatibili con la presenza di un singolo gruppo ionizzabile che, nella sua forma acida coniugata, rende inattivo il complesso enzima-substrato. Il pK di questo gruppo è 6,94 a 18,5 gradi e la sua entalpia di ionizzazione è 7,0 kcal mol-1. mostrano un ampio plateau tra pH 6.2 e 8.2, interrotto da un netto min imum a pH 7,2 per la variante B, mentre le varianti A e A- mostrano massimi acuti a pH 7,2 e 7,45, rispettivamente. Si propone che questo comportamento insolito dipenda dalla dissociazione dell'enzima tetramerico in dimeri in questa regione di pH. In particolare, è dimostrato che un forte massimo o minimo di Km può sorgere se l'assorbimento cooperativo o il rilascio di protoni è legato alla formazione di dimeri e se il grado di cooperatività è diverso per l'enzima libero rispetto al complesso enzima-substrato. La dipendenza dal pH dell'equilibrio tra la forma tetramerica e dimerica dell'enzima è stata determinata mediante filtrazione su gel per le stesse tre varianti genetiche B, A e A-. In accordo con i precedenti dati sull'ultracentrifuga, l'enzima è un tetramero in soluzione acida e un dimero in soluzione alcalina. Il pH al quale metà dell'enzima è in forma dimerica, nelle nostre condizioni sperimentali, è 7,15 +/- 0,05 per le varianti A e B e 7,35 +/- 0,05 per la variante A-. Questi valori di pH corrispondono strettamente, per tutte e tre le varianti, agli estremi acuti nella dipendenza dal pH dei loro valori di Km per il glucosio 6-fosfato. Dagli equilibri di dissociazione misurati, si può dedurre che la transizione tetramero-dimero comporta il rilascio cooperativo di protoni. Il grado di cooperatività stimato da questi dati concorda strettamente con la stima indipendente basata sulla dipendenza dal pH di Km.
Inibizione della fruttosio-1,6-difosfatasi epatica bovina da parte degli analoghi del substrato.Fruttosio-1,6-difosfatasi epatica bovina purificata, che mostra il massimo l'attività a pH neutro, è inibita in modo competitivo da diversi analoghi del suo substrato, il fruttosio 1,6-difosfato, tra cui glucosio 1,6-difosfato (Ki = 9,4 X 10(-5) M), esitolo 1,6-difosfato (Ki = 2,3 X 10(-4) M) e 2,5-anidro-D-mannitolo 1,6-difosfato (Ki = 3,3 X 10(-8) M) e 2,5-anidro- D-glucitolo 1,6-difosfato (Ki = 5,5 X 10(-7) M) I valori di Ki sia per 2,5-anidro-D-mannitolo 1,6-difosfato che per 2,5-anidro-D- glucitolo 1,6-difosfato sono inferiori al Km di 1,4 X 10(-6) M per il fruttosio 1,6-difosfato, poiché 2,5-anidro-D-mannitolo 1,6-difosfato è un analogo dell'anomero beta di fruttosio 1,6-difosfato e 2,5-anidro-D-glucitolo 1,6-difosfato è un analogo dell'anomero alfa, il Ki inferiore per l'analogo del mannitolo può indicare che l'anomero beta del frutto ose 1,6-difosfato, che predomina in soluzione, è il vero substrato. L'analogo del substrato 1,5-pentandiolo difosfato inibisce leggermente (K0,5 = 5 X 10(-3) M), ma 1,4-cicloesildiolo difosfato no. Il Ki per l'inibizione del prodotto da parte del fosfato di sodio è 9,4 X 10(-3) M. 2,5-Anidro-D-mannitolo 1,6-difosfato e alfa-D-glucosio 1,6-difosfato sono substrati a pH 9,0, ma non a pH 6,5.
Studi di legame di ormoni polipeptidici alle neurofisine bovine.Isoterme sperimentali di legame di [9-glicinamide-1-(14)C]ossitocina e [9 -glicinamide-1-(14)C]arginina vasopressina alle neurofisine purificate I e II a pH = 4,4, 5,4, 6,5, 7,4 e 8,5 e 6 gradi, 22 gradi e 37 gradi in tamponi acquosi. di confronto, isoterme di legame per [4-glicina-1-(14)C]ossitocina alla neurofisina II e I in tampone acquoso e [9-glicinamide-1-(14)C]ossitocina alla neurofisina II in dimetilsolfossido in condizioni selezionate vengono anche riportati. Una breve discussione sull'interpretazione delle isoterme di legame viene inserita e vengono derivate le costanti di legame apparenti. I risultati indicano che le interpretazioni presentate in letteratura fino ad ora sono troppo semplici. Ci sono, al contrario, più siti di legame di ossitocina e vasopressina alle neurofisine e grandi dipendenze dalla temperatura del numero di siti e del loro bindi ng costanti. Troviamo, infatti, che a 37 gradi il legame degli ormoni neuroipofisari alle supposte proteine di deposito è piuttosto debole anche al pH di massimo legame.
Trigliceride, digliceride, monogliceride e colesterolo estere idrolasi nel tessuto adiposo di pollo attivate dall'adenosina 3\':5\'-protein chinasi monofosfato-dipendente. Risoluzione cromatografica e differenziazione immunochimica dalla lipoproteina lipasi.La lipasi ormone-sensibile e l'idrolasi dell'estere del colesterolo del tessuto adiposo di pollo sono state notevolmente attivate dalla protein chinasi adenosina 3\':5\'-monofosfato (cAMP)-dipendente (in media, 235 al 275%; occasionalmente fino al 1000%). Sono state attivate anche digliceridi e monogliceridi idrolasi, ma in misura minore (dal 60 all'87%). proteina chinasi esogena Dopo l'attivazione da parte della proteina chinasi cAMP-dipendente, tutte e quattro le idrolasi sono state disattivate in una reazione Mg2+-dipendente e quindi riattivate ai livelli iniziali o vicini all'incubazione con cAMP e Mg2+-ATP. si presume che la disattivazione bile rifletta l'attività di una o più proteine fosfatasi. L'attivazione massima ottenibile per le quattro idrolasi diminuiva quando il tessuto era stato precedentemente esposto al glucagone, indicando che l'attivazione indotta dal glucagone era probabilmente simile o identica all'attivazione dimostrata nelle preparazioni prive di cellule. Il pH ottimale per le quattro attività dell'idrolasi era simile (da 7,13 a 7,38). Sebbene le attività assolute e i relativi gradi di attivazione della chinasi differiscano a seconda dei particolari substrati emulsionati utilizzati, i risultati non escludono la possibilità che tutte e quattro le attività idrolasiche siano riferibili ad una singola idrolasi ormone-sensibile. Le acilidrolasi ormone-sensibili sono state separate dalla lipoproteina lipasi mediante cromatografia di affinità eparina-sefarosio. La lipoproteina lipasi era attiva contro la trioleina, la dioleina e la monooleina, ma non il colesterolo oleato. L'incubazione della lipoproteina lipasi con protein chinasi esogena, cAMP e Mg2+ATP non ha avuto effetto su nessuna delle tre attività dell'idrolasi. La lipoproteina lipasi è stata ulteriormente purificata fino all'omogeneità e utilizzata per preparare l'antisiero nei conigli. La frazione di immunoglobina G di questi antisieri ha inibito completamente la lipoproteina lipasi eluita dalle colonne eparina-sefarosio. Tuttavia, le attività dell'idrolasi ormone-sensibile (non mantenute sulla cromatografia di affinità eparina-sefarosio) non sono state inibite dall'immunoglobina G anti-lipoproteina lipasi e l'immunoglobina G anti-lopoproteina lipasi non ha influenzato il processo di attivazione nelle frazioni grezze. Pertanto, la lipasi ormone-sensibile e la lipasi lipoproteica, enzimi funzionalmente distinti, sono state risolte fisicamente e distinte immunochimicamente. Apparentemente l'attività della lipoproteinlipasi non è regolata, almeno direttamente, dalla protein chinasi cAMP-dipendente.
Ph interno delle vescicole cromaffini isolate.Sono stati misurati la permeabilità passiva delle vescicole cromaffini isolate all'H+ e il pH interno delle vescicole in varie condizioni. Le misurazioni potenziometriche dei flussi K+ e H+ in presenza di ionofori e disaccoppiatori selezionati hanno indicato che la membrana è altamente impermeabile sia ai protoni che al potassio. Il deltapH attraverso la membrana dei granuli cromaffini è stato misurato mediante la distribuzione di [14C] metilammina. A pH 6,85, il deltapH era 1.16 CON LO SPAZIO INTRAVESICOLARE RITROVATO ACIDO. Variando il pH esterno si produceva una variazione equivalente del deltapH, CON ESTRAPOLAZIONE A ZERO DELtapH dando un valore di pH 5,5, CHE VIENE PRESO COME INDICAZIONE DEL PH dello spazio intravescicolare. Il gradiente di pH potrebbe essere potenziato o collassato mediante l'aggiunta di ionofori e disaccoppiatori in condizioni ioniche variabili. deltapH era costante per i granuli sospesi in vari mezzi ionici, suggerendo che il de ltapH non è sorto secondariamente per l'instaurarsi di un equilibrio di Donnan. Il significato dell'impermeabilità protonica e del deltaph è discusso in termini di regolazione dell'assorbimento e stoccaggio delle catecolamine nei granuli cromaffini bovini.
Inibizione in vivo della superossido dismutasi nei topi da parte del dietilditiocarbammato.La superossido dismutasi è stata saggiata con un metodo che sfrutta l'azione inibitoria della superossido dismutasi ( o tessuti che contengono superossido dismutasi) sulla velocità di autoossidazione della 6-idrossidopamina. L'incubazione della superossido dismutasi pura di omogenati del cervello o del fegato con 10(-3) M dietilditiocarbammato per 1,5 ore ha determinato la perdita totale dell'attività della superossido dismutasi. La superossido dismutasi non è stata invertita dalla dialisi, ma dopo la dialisi, l'attività enzimatica è stata ripristinata con CuSO 4. Quando 1,5 g di dietilditiocarbammato/kg sono stati iniettati nei topi, l'attività della superossido dismutasi a 3 ore è stata ridotta dell'86%, 71% e 48% , rispettivamente, nel sangue intero, nel fegato e nel cervello. Una dose di 0,5 g di dietilditiocarbammato/kg ha abbassato l'attività della superossido dismutasi del 42% nel fegato a 3 ore. Uno studio sul decorso temporale per l'inibizione del superox ide dismutasi nel fegato dopo 1,5 g di dietilditiocarbammato/kg, ha mostrato una diminuzione massima (81%) entro 1 ora, con un lento ritorno al 64% della norma entro 24 ore. L'inibizione della superossido dismutasi in vivo e in vitro è stata confermata con altri sistemi di dosaggio basati sull'autoossidazione del pirogallolo o dell'epinefrina o sulla riduzione del citocromo c o del tetrazolio intro blu. Il trattamento degli animali con dietilditiocarbammato può fornire un utile modello sperimentale per studiare il ruolo della superossido dismutasi in vari tessuti.
Regolazione della secrezione dalla midollare del surrene. Evidenza dell'attività dell'adenilato ciclasi nelle membrane delle vescicole secretorie.L'attività dell'adenilato ciclasi è stata trovata nelle membrane purificate delle vescicole secretorie dalla midollare del surrene. L'attività è stata rilevata sia dalla formazione di cAMP radioattivo da [alfa-32P]ATP sia dal saggio di legame proteico competitivo per il cAMP. L'attività era massima a pH 8,0-8,5 ed è stata stimolata da fluoruro di sodio e GppNHp, un Analogo del GTP noto per stimolare l'attività dell'adenilato ciclasi nelle preparazioni della membrana plasmatica. La velocità di reazione era fortemente dipendente dal rapporto molare di Mg2+:ATP nel sistema. Questa è la prima dimostrazione dell'adenilato ciclasi in una membrana di vescicole secretorie.
Purificazione e proprietà di una glutaminasi-asparaginasi altamente potente antitumorale da Pseudomonas 7Z.Glutaminasi-asparaginasi cristallina che è efficace contro i tumori solidi e ascite è stato preparato dall'organismo isolato del suolo Pseudomonas 7A. Questo enzima ha una razione di Vmax per L-glutammina e L-asparagina di 2.0 La presenza di acido glutammico nel mezzo di crescita è essenziale per la produzione ottimale di enzimi e il glucosio inibisce la produzione di glutaminasi- asparaginasi. La procedura di purificazione fornisce una resa complessiva dal 40 al 45% dall'estratto cellulare grezzo alla glutaminasi-asparaginasi omogenea ed è adattabile alla produzione su larga scala dell'enzima. L'attività specifica dell'enzima omogeneo è di 160 +/- 15 ui/mg di proteina e l'E1% 280 è 9,8. Nessun gruppo disolfuro o sulfidrilico sembra essere presente sull'enzima. Il punto isoelettrico della glutaminasi-asparaginasi mediante focalizzazione isoelettrica su piastre di gel di poliacrilammide anfolina è 5.8. I valori Km per L-glutammina e L-asparagina sono rispettivamente 4,6 e 4,4 X 10(-6) M. L'enzima catalizza l'idrolisi degli isomeri D di glutammina e asparagina all'87 e al 69% della velocità dei rispettivi isomeri L. L'acido L-glutammico gamma-monoidrossamato viene idrolizzato approssimativamente alla stessa velocità della L-glutammina. L'enzima non è inibito da etilendiamminotetraacetato (0,1 mM), L-glutammato (30 mM) o L-aspartato (30 mM). Il solfato di ammonio (10 mM) inibisce l'attività enzimatica. L'emivita plasmatica di Pseudomonas 7A glutaminasi-asparaginasi è di 13 ore nei topi normali e di 43 ore nei topi infettati dal virus che aumenta la lattato deidrogenasi.
Attacco enzimatico sulle catene laterali di polimeri sintetici. Idrolisi catalizzata da chimotripsina di specifici gruppi di substrati attaccati a copolimeri di acrilammide o acido acrilico.Tre vinilici monomeri, M-1, M-3 e M-5, in cui la L-fenilalanina p-nitroanilide è stata acilata con CH2==CHCONH(CH2)nCO--(n = 1, 3, 5). Sono stati copolimerizzati con un grande eccesso di acrilammide (copolimeri PAm-1, PAm-3 e PAm-5) e con un grande eccesso di acido acrilico (copolimeri PAc=1, PAc-3 e PCc -5). Inoltre, M-5 è stato copolimerizzato con acrilammide contenente il 2,8 % in moli del monomero idrofobo N-acrilil-1-naftilamina (copolimero PAm-5N). Le velocità di idrolisi catalizzata da chimotripsina del gruppi nitroanilidi di M-5 e dei vari copolimeri sono stati determinati su un intervallo di pH. Per alcuni dei sistemi sono stati ottenuti dati anche su un intervallo di concentrazioni di substrato per derivare valori per Vmax e Km. Risultati ottenuti con PAm- 5 sono risultati indipendenti dalla lunghezza della catena del copolimero. A pH 7, 25 gradi e con l'enzima 2,7 X 10(-6) M, i valori Vmax per M-5, PAm-k, PAm-5N e PAc-5 erano 5,5, 5,5, 10 e 3,6 X 10(- 8) M/S, mentre i valori di Km erano rispettivamente 8,5, 16,5, 10 e 2,2 X 10(-5), Con PAc-5 il profilo di attività del pH è stato spostato ad acidità più elevate rispetto ai profili ottenuti con M- 5 e PAm-5. La suscettibilità dei copolimeri all'attacco della chimotripsina diminuisce bruscamente con una distanza decrescente del residuo p-nitroanilide di L-fenilalanina dallo scheletro delle catene polimeriche.
Acetil coenzima A carbosilasi. Studi di dicroismo circolare della proteina trasportatrice di biotina carbossile di Escherichia coli.Il componente della proteina trasportatrice di biotina carbossile (BCCP) di Escherichia coli acetile Il coenzima A carbossilasi e tre peptidi derivati dal BCCP per digestione proteolitica sono stati esaminati mediante spettroscopia di dicroismo circolare Il BCCP, che ha un peso molecolare peptidico di 22.500, ha uno spettro tipico delle proteine globulari con estremi negativi a 222 nm e 208 nm. peptidi più piccoli, BCCP(SC) e BCCP(9,100), con pesi molecolari rispettivamente di 8,900 e 9,100, mostrano insolite bande CD positive centrate a 237 nm e 220 nm. BCCP(10,400), con un peso molecolare di 10,400, ha un Spettro CD intermedio tra BCCP e quello dei peptidi più piccoli Poiché la d-biotina mostra una banda CD positiva a 233 nm, si sospettava che il gruppo prostetico della biotina potesse essere il cromoforo responsabile della banda CD a 237 nm osservata in BCCP (SC) e BC PC (9.100). La carbossilazione enzimatica di BCCP (SC) per formare CO2-BCCP (SC) ha causato la modifica dello spettro CD con uno spostamento della banda da 237 nm a 232 nm. La banda CD positiva a 220 nm non è stata influenzata dalla carbossilazione del gruppo prostetico della biotina. Queste date suggeriscono che il segnale a 237 nm può essere dovuto o alla biotina che agisce direttamente come cromoforo o ad un cromoforo che è perturbato dalla carbossilazione della biotina. È stata effettuata una titolazione spettropolarimetrica per studiare il possibile contributo del singolo residuo di tirosina del BCCP(SC) allo spettro CD di questo peptide. A valori di pH superiori a 9 lo spettro CD è cambiato con la scomparsa della banda 237 nm, suggerendo che la tirosina potrebbe contribuire a questa banda CD. La denaturazione di BCCP(SC) o BCCP(9,100) con 8 M urea di 6 M guanidina HCl ha abolito le bande CD positive e ha prodotto spettri tipici di una bobina casuale, mentre il trattamento di BCCP(SC) con sodio dodecilsolfato 1% ha abolito il bande positive e hanno lasciato uno spettro che mostra una spalla a 222 nm e una banda negativa a 205 nm, indicativa di un alto grado di struttura ordinata. Si conclude che la banda CD a 237 nm in BCCP(SC) e BCCP(9,100) è probabilmente dovuta a un'interazione non covalente della biotina con uno o più residui amminoacidici della proteina. Si suggerisce che il gruppo prostetico della biotina sia parzialmente sepolto nella superficie della proteina, piuttosto che oscillare liberamente all'estremità della catena laterale della lisina attraverso la quale è legato covalentemente alla proteina, per consentire questa interazione.
Regolazione del livello allo stato stazionario della sintesi del fosfoenzima e dell'ATP nelle vescicole del reticolo sarcoplasmatico durante l'inversione della pompa del Ca2+.Il ruolo del gradiente di concentrazione del Ca2+ nella La sintesi di ATP e la fosforilazione di membrana da parte del Pi sono state studiate in vescicole del reticolo sarcoplasmatico isolate dal muscolo scheletrico di coniglio. La concentrazione di Pi richiesta per raggiungere il 50% della massima fosforilazione di membrana varia significativamente nell'intervallo di pH compreso tra 5,5 e 4,5, il valore ottimale è a pH 6,0. Nell'intervallo di pH compreso tra 6,0 e 7,0, questa concentrazione di Pi era da 4 a 10 volte superiore nelle vescicole vuote rispetto alle vescicole caricate con fosfato di calcio, cioè con gradiente di concentrazione di Ca2+ transmembrana. ATP, ADP e Ca2+ inibiscono la fosforilazione della membrana Pi, l'inibizione è maggiore a pH 7,0 rispetto a pH 6,0 Il profilo del pH per la sintesi di ATP mostra un ottimale più elevato rispetto alla fosforilazione di membrana Il pH ottimale per la sintesi, ma non per la fosforilazione dipende s sul fatto che le vescicole siano state precedentemente caricate con fosfato di calcio o con ossalato di calcio. L'aggiunta di Ca2+ al mezzo di analisi inibisce l'entità della fosforilazione di membrana e la velocità di sintesi dell'ATP in misura diversa. Viene presentata la prova che la velocità di fosforilazione della membrana da parte del Pi è superiore alla velocità con cui la fosfoproteina trasferisce il suo fosfato all'ADP per la sintesi dell'ATP.
Studio cinetico dell'azione della fosfolipasi A2 del veleno di serpente sulla lipoproteina 3 ad alta densità del siero umanoL'idrolisi dei fosfolipidi del siero umano intatto ad alta densità La lipoproteina 3 (HDL3) mediante alfa-fosfolipasi A2 pura da Crotalus adamanteus è stata studiata mediante titolazione pH-stat. L'enzima ha idrolizzato quantitativamente fosfatidilcolina e fosfatidiletanolammina e ha lasciato intatta la sfinogomielina, producendo un HDL modificato stabile e solubile in acqua. i prodotti dell'idrolisi, sono rimasti nella lipoproteina Quando 1 mole di albumina di siero bovino sgrassato/mole di fosfolipidi substrato è stata aggiunta alla miscela di reazione, fino al 60% degli acidi grassi e l'85% dei lisofosfolipidi sono stati rimossi dalla lipoproteina modificata La reattività immunologica delle HDL idrolizzate è rimasta inalterata sia in presenza che in assenza di albumina I cambiamenti nelle proprietà fisiche della lipoproteina durante l'idrolisi sono stati r altri piccoli, il più notevole è un aumento della densità idratata e della mobilità elettroforetica nei tamponi alcalini. L'idrolisi ha seguito un apparente decorso temporale del primo ordine con inibizione del prodotto (KI) e ha prodotto valori di kcat/Km = 7 X 10(5 M(-1)s(-1) e KI congruente a 1 X 10(-4) M. L'aggiunta di albumina alla miscela di reazione ha alleviato l'inibizione del prodotto senza alcuna alterazione dei parametri cinetici. Alte concentrazioni di albumina hanno protetto alcuni fosfolipidi del substrato dall'idrolisi, presumibilmente attraverso la complessazione alla lipoproteina. Il grafico di Arrhenius per il tasso sperimentale del primo ordine costante in assenza di albumina (kexp = kcat (KI/Km)) era lineare tra 15 gradi e 47 gradi, indicando l'assenza di transizioni di fase fosfolipidiche e producendo un'energia di attivazione di 15,2 kcal/mol. Dall'accessibilità del fosfolipidi HDL alla fosfolipasi A2 si conclude che la fosfatidilcolina e la fosfatidiletanolammina si trovano o sono in rapido equilibrio con la superficie di questa lipoproteina. Sembra anche che questi fosfolipidi non siano t essenziale per il mantenimento delle proprietà supramolecolari della lipoproteina in vitro. Quindi lo studio dell'Hdl modificato dovrebbe fornire preziose informazioni sulla struttura e la funzione di questa lipoproteina in particolare per quanto riguarda il ruolo svolto dalla shiingomielina.
Gcogeno sintasi del muscolo scheletrico di coniglio. II. Stato di fosforilazione degli enzimi e concentrazioni di effettori come parametri di controllo interagenti.Gli effetti di diversi inibitori (ATP, ADP, AMP, UDP e P1) e attivatori (Mg2+, glucosio-6-P) della glicogeno sintasi muscolare di coniglio (UDP-glucosio:glicogeno 4-alfa-glucosiltransferasi, EC 2.4.1.11) sono stati studiati in relazione allo stato di fosforilazione del enzima purificato. Tutti i modificatori hanno avuto effetti crescenti con l'enzima di aumento del contenuto di fosfato alcali-labile. Negli esperimenti in cui erano presenti combinazioni di effettori, era evidente che (a) le concentrazioni di modificatori nell'intervallo fisiologico potrebbero essere significative nel determinare l'attività enzimatica e (b) la sensibilità della velocità di reazione ai cambiamenti nello stato di fosforilazione dipendeva in modo critico dalla concentrazione delle piccole molecole. Cambiamenti nella fosforilazione dell'enzima corrispondenti ai cambiamenti nell'attività %I riportati nel letteratura per studi in vivo erano in grado di produrre grandi alterazioni nell'attività della glicogeno sintasi. Poiché l'entità di tali cambiamenti dipendeva dalle concentrazioni degli effettori, potrebbe esserci un'integrazione del controllo cellulare locale, attraverso effetti di piccole molecole, con il controllo ormonale, attraverso lo stato di fosforilazione della glicogeno sintasi.
Interazioni sito-sito tra i recettori dell'insulina. Caratterizzazione della cooperatività negativa.Studiando la dissociazione dell'insulina 125I dai suoi recettori in assenza e tipo cooperativo negativamente per i recettori dell'insulina. Nel presente studio estendiamo oy membrane epatiche di topo e ratto purificate, nonché nei monociti circolanti umani e nei linfociti umani coltivati ha dimostrato una cooperatività negativa che era straordinariamente simmmmn più lentamente di quanto non faccia dai suoi recettori su cellule intere. La dissociazione di una piccola percentuale dei siti recettoriali (da 1 a 5%), è sufficiente per accelerare la dissociazione dell'ormone dal recettore. A queste concentrazioni di insulina l'insulina è interamente monomerica, ed infatti a concentrazioni più elevate di insulina (maggiori di 10 (-7) M) dove predominano i dimeri di insulina, si perde progressivamente l'effetto di cooperatività. Il tasso di dissociazione della sola insulina 125I (cioè a una saturazione frazionata molto bassa di recettori) è stata notevolmente accelerata facendo gocciolare il pH da 8,0 a 5,0, mentre la dissociazione dell'insulina 125I ad alta occupazione del recettore è stata solo leggermente accelerata dalla caduta del pH. Il tasso di dissociazione era direttamente correlato alla temperatura, ma il tasso di dissociazione dell'insulina 125I a bassa occupazione del recettore era molto più influenzato dalla riduzione della temperatura e mostrava una netta transizione a 21 gradi. L'urea a concentrazioni di appena 1 M ha prodotto una marcata accelerazione della dissociazione dell'insulina 125I. I cationi bivalenti (calcio e magnesio) sembrano stabilizzare l'interazione recettore-insulina, poiché erano necessari gradi più elevati di occupazione del recettore per raggiungere un dato tasso di dissociazione dell'insulina 125I. Questi dati rendono probabile che i recettori dell'insulina esistano come strutture oligomeriche o cluster nella membrana plasmatica. I siti dei recettori dell'insulina sembrano passare da uno stato di "dissociazione lenta" a uno stato di "dissociazione rapida" quando la loro occupazione aumenta; la proporzione di siti in ciascuno stato è una funzione dell'occupazione dei siti recettori da parte del monomero di insulina e dell'ambiente fisico-chimico. Altri modelli che potrebbero spiegare un'apparente cooperatività negativa oltre alle interazioni sito-sito, cioè la polimerizzazione dell'ormone, l'impedimento sterico o elettrostatico dovuto alle interazioni ligando-ligando, o strati non agitati (Noyes-Whitney) sono considerati improbabili nel caso dei recettori dell'insulina su entrambi basi sperimentali e teoriche.
Emoglobina spot. Studi sull'emoglobina effetto radice di un teleosteo marino.La macchia, Leiostomus xanthrus, ha una singola emoglobina tetramerica. Studi strutturali indicano la presenza di catene di tipo alfa e beta con sequenze COOH-terminali di --Arg e --TYR-His, rispettivamente, le stesse che si trovano nell'emoglobina umana L'emoglobina spot possiede un effetto Root: un meccanismo di controllo eterotropico come il Effetto Bohr ma con una dipendenza dal pH più estrema negli equilibri e nella cinetica del legame di O2 e CO. L'effetto Root sembra essere un adattamento molecolare, in quanto le emoglobine sensibili al pH e agli anioni possono aiutare i pesci a raggiungere un assetto neutro facilitando la consegna di O2 al vescica natatoria. I cambiamenti nella cinetica di entrambi i processi "on" e "off" contribuiscono alla grande diminuzione dell'affinità del ligando dell'emoglobina Spot a pH basso. L'andamento temporale della combinazione di ligandi a pH basso è bifasico e dipendente dalla lunghezza d'onda, suggerendo un effetto differenziale del pH su t ha catene simili a alfa e beta. Il cambiamento nella forma della curva di legame del ligando con il pH può essere interpretato in termini di una transizione protone-dipendente tra conformazioni a bassa (T) e alta (R) affinità. Tuttavia, questo potrebbe non essere l'unico meccanismo, poiché anche gli effetti del pH differenziale sui due tipi di catene possono contribuire alla dipendenza dal pH osservata.
Fluoro-19 come sonda di risonanza magnetica diretta al sito attiva covalente nell'aspartato transaminasi.La fosfipiridossil trifluoroetilammina è stata sintetizzata come 19F diretto al sito attivo Sonda NMR per l'aspartato transaminasi. Questo derivato del coenzima si aggiunge stechiometricamente all'apotransaminasi come osservato sia dalle misurazioni della fluorescenza che dal dicroismo circolare. Il derivato della fosfiridossamina fluorurato, quando legato all'apotransaminasi, non si dissocia in caso di dialisi estesa o passaggio attraverso Sephadex G-25. si comporta come un derivato piridossamina fosfato e non come un complesso coenzima-substrato, poiché sia gli anioni concorrenti che gli inibitori dell'acido dicarbossilico si legano ancora all'enzima fosfopiridossil trifluoroetilammina Gli spettri 19F NMR del fosfopiridossil trifluoroetilammina legato all'enzima sono stati misurati in funzione del pH , forza ionica e temperatura. L'MNR 19F del derivato del coenzima legato all'enzima ha rivelato no asimmetria predeterminata nelle subunità dell'insoluzione di aspartato transaminasi in termini di differenze nello spostamento chimico o nella forma della linea di risonanza tra i due ambienti. È stato osservato un cambiamento di spostamento chimico dipendente dal pH della singola risonanza 19F, che è coerente con l'influenza di una singola ionizzazione con un pKa apparente di 8,4 in 0,10 M KCl a 30 gradi. L'aumento della forza ionica ha comportato un aumento dei valori per il pKa osservato, il valore più alto registrato è stato di 9,1 in 3,0 M KCl. La dipendenza dalla temperatura della titolazione del pH dello spostamento chimico dà un deltaH\' di ionizzazione di 10,5 kcal/mol. L'evidenza suggerisce un possibile gruppo epsilon-amino, elettrostaticamente influenzato da cariche positive, responsabile dell'effetto di titolazione del derivato del fluoro legato al sito attivo della piridossamina fosfato.
Interazione di ciclodestrine con sonde fluorescenti e sua applicazione a studi cinetici dell'amilasi.È stato riscontrato che il 6-p-toluidinilnaftalen-2-solfonato ( TNS) ha mostrato un pronunciato miglioramento della fluorescenza quando è stato aggiunto a soluzioni di alfa-, beta- e gamma-ciclodestrina 2. I seguenti risultati sono stati ottenuti dallo studio quantitativo delle interazioni di tre tipi di ciclodestrine con TNS seguendo la fluorescenza di TNS a pH5. 3. e 25 gradi. i) le alfa-ciclodestrine formano un complesso al : l con TNS. ii) le beta- e gamma-ciclodestrine formano i complessi 1 : 1 e anche 2 : 1; in quest'ultimo due molecole di ciclodestrina si legano ad una molecola di TNS. iii) Le costanti di dissociazione dei complessi ciclodestrina-TNS sono state determinate essere 54,9 mM per l'alfa-ciclodestrina, 0,65 mM per la beta-ciclodestrina e 0,66 mM per la gamma-ciclodestrina nel complesso 1: 1 e le costanti di dissociazione secondarie nel 2: 1 complesso era 71,4 mM per la beta-ciclodestrina nell'1 : 1 c omplex e le costanti di dissociazione secondaria nel complesso 2: 1 erano 71,4 mM per la beta-ciclodestrina e 32,6 mM per la gamma-ciclodestrina. IV)...
L'isolamento e alcune proprietà della NAD+ reduttasi del batterio fotosintetico verde Prosthecochloris aestuarii.La NAD+ reduttasi del batterio fotosintetico verde Prosthecochloris aestuarii è stata isolata e purificata da frazionamento del solfato di ammonio, cromatografia su colonna di cellulosa DEAE e filtrazione su gel di Sephadex G-200. Questo enzima è una flavoproteina contenente FAD e ha massimi di assorbimento a 485 (spalla0 452, 411 e 385 nm (la banda di 411 nm è dovuta al citocromo Il peso molecolare dell'enzima determinato mediante filtrazione su gel utilizzando Sephadex G-200 è 119.000. L'enzima catalizza la riduzione di NAD+ e NADP+ mediante ferredossina di spinaci fotoridotta o benzil viologeno ridotto...
Studi su un metodo microchimico per la determinazione del grado di polimerizzazione di oligo- e polisaccaridi neutri. I. Separazione quantitativa di tracce di alditoli da miscele con un grande eccesso di monosaccharides.È stato ideato un metodo per la separazione quantitativa di tracce di alditoli da miscele con grandi quantità di monosaccaridi, utilizzando una resina a scambio ionico fortemente basica. Dieci tipi di comuni monosaccaridi riducenti utilizzati sono stati fortemente mantenuti da una resina a scambio anionico molto basica in forma ossidrile, mentre i corrispondenti alditoli non hanno mostrato affinità significativa per la resina basica. 1X10(3) TO 1 : 1X10(4) (in peso). L'applicazione di questa procedura ai destrani dopo la riduzione e l'idrolisi ha portato alla separazione quantitativa dell'alditolo terminale.
Purificazione e caratterizzazione della fosfatasi alcalina dal rene di ratto.La fosfatasi alcalina [EC 3.1.3.1. ] è stata purificata circa 250 volte dal rene di ratto, e le sue proprietà enzimatiche sono state studiate. L'omogenato renale è stato estratto con n-butanolo, passato attraverso Sephadex G-200 e cromatografato su una colonna di cellulosa DEAE. Il picco della colonna di cellulosa DEAE è stato sottoposto a focalizzazione isoelettrica e l'attività di fosfatasi alcalina è stato separato in due picchi. I pesi molecolari della fosfatasi alcalina in questi picchi erano 4,8 X 10 (4) e 1,0 X 10 (5), come determinato mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide SDS. È stato preparato un antisiero contro la fosfatasi alcalina dal rene di ratto, ed è stato dimostrato che neutralizza l'attività di reni, fegato o ossa, ma non quella dell'intestino.
Legame di analoghi del substrato ai siti secondari D, E e F del lisozima di albume d'uovo di gallina.La dipendenza dal pH del legame del colorante, Beibrich Il lisozima scarlatto, al bianco d'uovo di gallina[EC 3.2.1.17] è stato studiato a forza ionica 0.3 e 25 gradi seguendo bande dicroiche circolari (CD) originate dal colorante legato. Questo legame ha coinvolto uno dei gruppi catalitici, Glu 35. è stato studiato anche l'effetto del legame della N-acetilglucosamina (GlcNAc), il suo dimero o trimero sul legame di questo colorante a pH 7,5 misurando i cambiamenti nelle bande CD del colorante legato al lisozima. È stato dimostrato che ci sono due siti per il legame simultaneo di questi saccaridi nella molecola del lisozima. Il legame più forte del saccaride era non competitivo e il legame più debole era competitivo con il legame del colorante. Le costanti di legame per il sito di legame più forte (la porzione superiore della fessura del lisozima) erano in buon accordo con quelli precedentemente determinati in seguito a modifiche nel tentativo bande CD ptofile del lisozima. Le costanti di legame al sito più debole erano circa 1,1 x 10(-4), 5 x 10(2) e 5M(-1) rispettivamente per il trimero, il dimero e il monomero di GlcNAc. Supponendo che trimero, dimero e monomero occupino i sottositi D, E e F; E e F; ed E, rispettivamente, le energie libere unitarie del legame dei saccaridi sono state stimate in circa -1,9, -3,3 e -2,7 kcal/mole rispettivamente per D, E e F.
Effetti degli indicatori di pH sulle varie attività dei cromatofrodi di Rhodospirillum rubrum.1. Gli effetti degli indicatori di pH sulle attività per l'idrolisi dell'ATP al buio e Lo scambio di ATP-Pi al buio è stato esaminato con cromatofori da Rhodospirillum rubrum Di trentuno indicatori di pH testati, undici (giallo di metanil, 2, 4-dinitrofenolo, arancio etilico, verde di bromocresolo, resazurina, rosso neutro, blu di bromotimolo, naftolftaleina, o-cresolftaleina, fenolftaleina e alizarina gialla G) hanno inibito quasi completamente le attività di formazione di ATP e di scambio ATP-Pi a concentrazioni di 1 mM, e sono stati studiati in dettaglio 2. Degli undici indicatori di pH, quelli diversi dall'alfa -naftolftaleina, o-cresolftaleina e fenolftaleina, se dosate a concentrazioni appropriate, inibivano lo scambio di ATP-Pi, ma non l'idrolisi dell'ATP. Nello scambio di ATP-Pi, questi otto indicatori di pH alle concentrazioni sopra descritte erano competitivi contro Pi, e non -competitiva contro l'ATP. I restanti tre tipi di indicatori di pH erano non competitivi contro Pi o ATP, quando analizzati a concentrazioni dei coloranti che inibivano entrambe le attività. 3. Sono state misurate le quantità di indicatori di pH legati con i cromatofori. Non è stata trovata alcuna correlazione tra le quantità dei coloranti legati e l'entità della loro inibizione della formazione di ATP o dello scambio di ATP-Pi. 4. L'arancia etile (pKa=4.1) e il 2, 4-dinitrofenolo (pKa=3.9) hanno stimolato nella massima misura l'idrolisi dell'ATP. Quest'ultimo colorante era difficilmente legato con i cromatofori. 5. Gli effetti stimolatori degli indicatori di pH sull'idrolisi dell'ATP sono stati difficilmente influenzati dall'estrazione dei chinoni dai cromatofori. 6. La maggior parte degli indicatori di pH ha stimolato le riduzioni sia del succinato-citocromo c2 che del NADH-citocromo c2 al buio. 7. Vengono discussi il meccanismo di disaccoppiamento del sistema di trasferimento degli elettroni e il sistema di fosforilazione mediante indicatori di pH e il meccanismo di accoppiamento.
D-alfa-idrossiglutarato deidrogenasi di Rhodospirillum rubrum.D-alfa-idrossiglutarato deidrogenasi di R. rubrum cresciuto anaerobicamente alla luce è stata parzialmente purificata e alcune proprietà sono state studiate 1. L'enzima catalizza stechiometricamente la reazione di deidrogenazione del D-alfa-idrossiglutarato in alfa-ossoglutarato, accoppiata alla riduzione del 2,6-diclorofenolindofenolo 2. Il citocromo c2, il citocromo c e il ferricianuro sono efficaci come elettroni accettori con l'enzima grezzo ma non con quello purificato, mentre NAD+ e NADP+ sono completamente inefficaci. Si pensa che l'enzima svolga un ruolo nel sistema di trasporto degli elettroni dell'organismo. 3. Il D-alfa-idrossiglutarato è praticamente l'unico substrato per Si presume che l'attività apparente contro l'L-alfa-idrossiglutarato sia dovuta alla contaminazione del campione dell'isomero L con l'isomero D. L'enzima mostra un'attività appena rilevabile contro entrambi gli isomeri di malato e praticamente nessuna attività contro DL-lattato e glicolato. 4. Entrambi gli isomeri del malato e dell'ossalato, che sono presumibilmente analoghi del substrato, inibiscono l'attività enzimatica. 5. L'enzima non è un enzima inducibile ma piuttosto è un enzima costitutivo per R. rubrum, a differenza dell'enzima di Pseudomonas putida che è un enzima inducibile per il catabolismo della lisina.
Isolamento e caratterizzazione di una proteinasi dal sarcocarpo del frutto del melone.Una proteinasi dal sarcocarpo del melone (Cucumis Melo L. var. Prince) è stato purificato mediante una procedura in tre fasi che prevedeva un trattamento discontinuo con fibre di cellulosa CM, cromatografia su colonna su polvere di cellulosa CM e filtrazione su gel su Sephadex G-75. La preparazione enzimatica finale era omogenea su elettroforesi su gel di acrilammide. Il suo peso molecolare era stimata con due metodi diversi in circa 50.000. Le analisi hanno indicato la presenza di 475 residui di amminoacidi e almeno 7 moli di esoso. L'attività massima è stata riscontrata nella regione del pH alcalino contro la caseina come substrato. La temperatura ottimale contro la caseina era di 70 gradi a pH 7,1. L'enzima è stato fortemente inibito dal diisopropil fluorofosfato, parzialmente inibito da HgCl2 e non inibito dall'EDTA, acido p-cloromercuribenzoico, N-tosil-L-lisina clorometilchetone, N-tosil-L-fenilalanina clorometilchetone e, e inibitore della tripsina di soia. La catena B dell'insulina ridotta e carbossimetilata è stata scissa ai legami peptidici di Asn3-Gln4, Cm-Cys7-Gly8, Glu13-Ala14, Leu15-Tyr16, Cm-Cys19-Gly20, Phe25-Tyr26, Pro28-Lys29 e Lys29- Ala30 dall'enzima.
Isolamento di un frammento attivo a basso peso molecolare dell'inibitore della proteinasi della patata IIb.Un frammento attivo a basso peso molecolare dell'inibitore della proteinasi della patata IIPB è stato ottenuto mediante incubazione l'inibitore con una quantità equimolare di tripsina [EC 3.4.21.4] a pH 8 e 30 gradi per 16 ore, seguita da gel filtrazione tramite Sephadex G-50, trattamento con acido tricloroacetico e cromatografia CM-cellulosa. Il frammento attivo purificato consisteva di una singola catena peptidica con un peso molecolare di 4.300, comprendente 39 residui amminoacidici. Ha mantenuto un'attività inibitoria molto forte contro la chimotripsina [EC 3.4.21.1] e la subtilisina [EC 3.4.21.14]. Tuttavia, la resa di questo frammento attivo è stata piuttosto basso ed era variabile. Dopo un'ulteriore incubazione con tripsina, è stato convertito in peptidi inattivi più piccoli.
Studio di titolazione del lisozima acetilato.Studiare l'interazione tra gruppi carbossilici e gruppi amminici nel lisozima nativo [EC 3.2.1.17] e identificare le posizioni e i valori di pK dei gruppi carbossilici anormali, è stato preparato lisozima N-acetilato. L'acetilazione non ha influenzato la forma molecolare dell'enzima, ma ha cambiato sei gruppi amminici in una forma non ionizzabile, lasciando libero un gruppo amminico; questo è stato determinato essere Lys 33. Inoltre, la titolazione del pH del lisozima acetilato in soluzione acquosa 0,2 o 0,02 M KCl ha indicato un minor numero di gruppi titolabili con pK(int) di 7,8 o 10,4 rispetto alla proteina nativa, sebbene il numero di gruppi carbossilici titolabili non è stato influenzato dall'acetilazione. Dai risultati della titolazione del pH e dalle considerazioni strutturali, i gruppi carbossilici unificabili sono stati suggeriti come Asp 48, Asp 66 e Asp 87. D'altra parte, la titolazione spettrofotometrica in 0,2 M KCl ha mostrato che tutti e tre i tirosina i residui sono t itrabile nella proteina acetilata, sebbene allo stato nativo esista un residuo di tirosina anomalo. Tyr 20 è stato suggerito di non essere titolabile nell'intervallo di pH di 8-12,6.
La modifica dei gruppi sulfidrilici della glutammina sintetasi da Bacillus stearothermophilus con 5, 5\'-ditiobis(acido 2-nitrobenzoico).I gruppi SH di glutammina sintetasi [EC 6.3.1.2] da Bacillus stearothermophilus sono stati modificati con acido 5, 5\'-ditiobis(2-nitrobenzoico) per determinare il numero di gruppi SH nella molecola e l'effetto della modifica sulla attività enzimatica Tre gruppi SH per subunità sono stati rilevati dopo completa denaturazione dell'enzima con 6 M di urea, uno dei quali era essenziale per l'attività enzimatica vista la sua reattività con 5,5\'-ditiobis(acido 2-nitrobenzoico) su aggiunta di MgCl2 con perdita dell'attività. Gli spettri CD dell'enzima modificato nella regione del vicino ultravioletto sono cambiati da quello dell'enzima nativo, indicando che i residui di amminoacidi aromatici sono stati influenzati dalla modifica del gruppo SH. La fluorescenza derivata dal residuo triptofanile (s) è stato estinto dependi ng sull'entità della modificazione del gruppo SH, suggerendo che il residuo/i residuo/i di triptofanile era localizzato in prossimità del gruppo SH. La termostabilità dell'enzima è stata notevolmente ridotta dalla modifica del gruppo SH.
Due forme molecolari di timidina chinasi nel citosol del fegato rigenerante di ratto.Due forme (picco A e picco B) di timidina chinasi [EC 2.7 .1.75] dal citosol rigenerante del fegato di ratto sono stati risolti e parzialmente purificati mediante cromatografia con Deae-cellulosa. Entrambe le frazioni erano identiche per quanto riguarda il loro requisito di substrato, pH ottimale, requisiti di metallo e peso molecolare, come giudicato dalla loro sedimentazione nella centrifugazione in gradiente di densità di saccarosio Il picco B differiva dal picco A nella sensibilità al calore, nell'inibizione da dCTP e Km per timidina e ATP. L'enzima picco B era l'unico enzima trovato nel normale fegato adulto e l'enzima picco A era la forma che aumentava prevalentemente nel fegato rigenerante.
Il controllo dell'attività del fruttosio-1,6-difosfatasi nel fegato di coniglio da parte degli ioni magnesio.EDTA a una concentrazione di 1 muM ha prodotto un effetto soglia nel attivazione della fruttosio-1,6-difosfatasi purificata del fegato di coniglio [EC 3.1.3.11] in presenza di 5 mM Mg2+ a pH 7,2. Senza EDTA, le curve di attivazione bifasica sono state prodotte da Mg2+. Un grafico doppio reciproco dei dati ha fornito il Valori di Km corrispondenti alle due regioni lineari, che erano 0,19 e 0,83 mM a pH 7,5 e 0,055 e 0,83 mM a pH 9,1. In presenza di EDTA 5muM è stata ottenuta una curva sigmoidale per l'attivazione di Mg2+ nell'intervallo di concentrazioni non inibitorie di Mg2+ a pH 7,2. Il valore Km apparente per Mg2+ era 0,15 mM e il coefficiente di Hill era 2,0. A pH 9,1 la cooperatività tra i siti Mg2+ scompariva e il valore Km apparente per Mg2+ era 0,055 mM. Questi valori Km a pH 7,2 o 9,1 corrispondevano al minore dei valori di Km bifasici ottenuti senza EDTA In assenza di EDTA, no in l'inibizione da parte di Mg2+ è stata osservata nell'intervallo di concentrazione di Mg2+ inferiore a 10 mM. In presenza di EDTA, l'enzima era marcatamente inibito da Mg2+ a concentrazioni superiori a 0,5 mM a pH 7,2 ed era più sensibile all'inibizione a pH 9,1. Gli effetti del pH sul valore di Km per l'attivazione di Mg2+ e sull'inibizione di Mg2+ hanno contribuito a un apparente spostamento del pH ottimale per l'attività indotta dall'EDTA. L'interazione cooperativa tra i siti di fruttosio-1,6-difosfato è stata osservata per l'enzima in presenza di EDTA. Il coefficiente di Hill era approssimativamente 1,8 e il valore Km apparente per il substrato era 0,74 muM. L'EDTA sembra rendere la fruttosio-1,6-difosfatasi epatica molto sensibile a vari effettori. Si suggerisce che Mg2+ funga da regolatore per l'attività enzimatica.
Cambiamenti evolutivi nella struttura e nelle proprietà cinetiche della miosina adenosinetrifosfatasi del muscolo scheletrico veloce di coniglio.Cambiamenti strutturali e funzionali nella miosina dei muscoli veloci durante il primo post -sviluppo natale sono stati studiati per cercare correlazioni con ben noti cambiamenti fisiologici nella velocità di contrazione. I risultati sono stati i seguenti: 1. È noto che la miosina muscolare veloce fetale contiene tre tipi di catene leggere. È stato confermato che i loro pesi molecolari erano gli stessi di quelli della miosina muscolare veloce dell'adulto, ma diversi da quelli della miosina del muscolo lento dell'adulto. È stato confermato che la quantità della catena leggera più piccola, g3, aumenta notevolmente durante il periodo postnatale. 2. L'ATPasi [EC3.6.1.3 ] l'attività della miosina muscolare veloce fetale (-1 giorno) è risultata essere circa il 50% di quella della miosina adulta. La curva di pH-attività della miosina fetale ATPasi è stata confermata simile a quella della miosina adulta. 3. Il tasso di formazione della miosina reattiva È stato riscontrato che il complesso fosfato-ADP, MADPP, non cambia durante lo sviluppo postnatale. 4. È stato riscontrato che il tasso di decomposizione di MADPP in presenza di F-actina aumentava notevolmente durante il periodo postnatale e che il tasso di decomposizione del complesso di mysoin fetale era solo da 1/6 a 1/4 di quello della miosina adulta. Il cambiamento nell'attività dell'actomiosina ATPasi è risultato essere strettamente correlato con l'aumento del contenuto di g3 durante lo sviluppo.