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Studi cinetici della carbossipeptidasi Y. III. Azione su substrati esteri, ammidici e anilidici e gli effetti di alcuni fattori ambientali.Parametri cinetici della carbossipeptidasi Y sono dati per l'idrolisi di substrati esteri, ammidici e anilidici. I valori di kcat/Km erano compatibili con quelli della chimotripsina [EC 3.4.21.1] con poche eccezioni. Un gruppo ionizzabile con un pK di circa 5,8 è stato suggerito di essere coinvolto nell'enzima libero nell'idrolizzare tutti i substrati, compresi i substrati peptidici. Inoltre, l'idrossilamminolisi e gli effetti isotopici cinetici dell'ossido di deuterio hanno indicato, con alcune riserve, un meccanismo di reazione che procede attraverso la formazione di un intermedio acilico.
Processi elementari nell'interazione della serina proteasi con un possibile analogo dello stato di transizione. Sistema subtillisina-acido benzeneboronico.L'interazione dell'acido benzenboronico (BBA) , un possibile analogo dello stato di transizione, con subtilisina BPN\' [EC 3.4.21.14] è stato studiato con il metodo del salto di temperatura a vari pH\', temperature e in D2O e H2O. Dall'analisi della dipendenza dalla concentrazione del rilassamento volte, è stato suggerito che le interazioni subtillsin-BBA consistono in almeno due passaggi elementari, un'associazione bimolecolare veloce seguita da un lento processo unimolecolare. Una simile dipendenza dalla concentrazione è stata osservata a pH 6,1-6,7 a 25 gradi. Tuttavia, in D2O il rilassamento reciproco tempi generalmente diminuiti rispetto a quelli in H2O e divenuti indipendenti dalla concentrazione al di sotto di pD 6.5. I tempi di rilassamento sono stati influenzati notevolmente dalla temperatura. Da questi risultati, il lento processo unimolecolare è stato assegnato al interconversione trigonale-tetraedrica di BBA nel sito attivo dell'enzima.
dipendenza dal pH delle costanti di legame dei monomeri di N-acetilglucosamina ai lisozimi dell'albume di gallina e tacchino.Le costanti di legame della N-acetilglucosamina (G1cNAc ) e i suoi metil alfa e beta glicosidi ai lisozimi dell'albume di gallina e tacchino [EC 3.2.1.17], in quest'ultimo dei quali Asp 101 è sostituito da Gly, sono stati determinati a vari valori di pH misurando le variazioni del (DC) a 295 nm Il legame del beta-metil-G1cNAc ai lisozimi di tacchino e di gallina ha perturbato il valore di pK di Glu 35 da 6,0 a 6,5, il valore di pK di Asp 52 da 3,5 a 3,9 e il valore di pK di Asp 66 da 1,3 a 0,7. Inoltre, nel legame di questo saccaride al lisozima di gallina è stata osservata una perturbazione del valore di pK di Asp 101 da 4,4 a 4,0. Il legame di alfa-metil-GlcNAc a lisozimi di gallina e tacchino ha perturbato il valore di pK di Glu 35 sul lato alcalino di circa 0,5 unità di pH, il valore pK di Asp 66 sul lato acido di circa 0,5 unità di pH e il valore di pK (4.4) di un gruppo ionizzabile al lato acido di circa 0,6 unità di pH. L'ultimo gruppo ionizzabile è stato provvisoriamente assegnato ad Asp 48. Il valore pK di Asp 52 non è stato alterato dal legame di questo saccaride. Le curve di dipendenza dal pH per il legame di GlcNAc ai lisozimi di gallina e tacchino erano molto simili ed è stato suggerito che Asp 48, oltre ad Asp 66, Asp 52 e Glu 35, sia perturbato dal legame di GlcNAc.
Denaturazione termica e rigenerazione della perossidasi di rafano giapponese.La denaturazione termica della perossidasi di ravanello giapponese [EC 1.11.1.7] è stata studiata rispetto alla sua proprietà spettrofotometriche ed effetto sull'attività enzimatica L'inattivazione della perossidasi è avvenuta a temperature superiori a 60 gradi e ha coinvolto tre processi, ovvero la dissociazione della protoemina dall'oloperossidasi, un cambiamento di conformazione nell'aperossidasi e la modifica o degradazione della protoemina. processo di protoemina da oloperossidasi seguito dal cambiamento nello spettro di assorbimento ad alte temperature ha coinciso con lo sgrassaggio nell'attività, ed è risultato essere almeno bifasico. La rigenerazione della perossidasi per raffreddamento a temperatura ambiente era essenzialmente reversibile a pH neutro , mentre a pH 5 e pH 9 questi processi erano irreversibili. L'irreversibilità a pH acido era principalmente dovuta a un cambiamento irreversibile nella conf formazione dell'apoenzima. Lo spettro di differenza dell'apoperossidasi trattata termicamente ha mostrato un blueshift di denaturazione con massimi negativi a 287 e 294 nm e la resa quantica della fluorescenza della proteina totale. qproteina, aumentata del 20% rispetto a quella dell'apoenzima non trattato. D'altra parte, l'irreversibilità a pH alcalino era in gran parte attribuibile alla modifica della protoemina. L'apoperossidasi era più resistente alla denaturazione termica, ma la modifica o la degradazione della protoemina nell'enzima riscaldato era maggiore a pH alcalino che a pH acido. Lo spettro piridina-ferroemocromo della perossidasi ha mostrato lievi spostamenti dei massimi della banda alfa a lunghezze d'onda più corte durante il trattamento termico e il cromatogramma su carta ha mostrato la presenza di un nuovo derivato diverso dalla protoemina. Il prodotto modificato è probabilmente (2(4)-vinil-4(2)-idrossietildeuteroemina.
Studi sulle fosfolipasi da Streptomyces. III. Purificazione e proprietà di Streptomyces hachijoensis fosfolipasi C.La denaturazione termica della perossidasi di ravanello giapponese [EC 1.11.1.7] è stata studiata rispetto alla sua proprietà spettrofotometriche ed effetto sull'attività enzimatica L'inattivazione della perossidasi è avvenuta a temperature superiori a 60 gradi e ha coinvolto tre processi, ovvero la dissociazione della protoemina dall'oloperossidasi, un cambiamento di conformazione nell'aperossidasi e la modifica o degradazione della protoemina. processo di protoemina da oloperossidasi seguito dal cambiamento nello spettro di assorbimento ad alte temperature ha coinciso con lo sgrassaggio nell'attività, ed è risultato essere almeno bifasico. La rigenerazione della perossidasi per raffreddamento a temperatura ambiente era essenzialmente reversibile a pH neutro , mentre a pH 5 e pH 9 questi processi erano irreversibili. L'irreversibilità a pH acido era principalmente dovuta a un cambiamento irreversibile nella conf formazione dell'apoenzima. Lo spettro di differenza dell'apoperossidasi trattata termicamente ha mostrato un blueshift di denaturazione con massimi negativi a 287 e 294 nm e la resa quantica della fluorescenza della proteina totale. qproteina, aumentata del 20% rispetto a quella dell'apoenzima non trattato. D'altra parte, l'irreversibilità a pH alcalino era in gran parte attribuibile alla modifica della protoemina. L'apoperossidasi era più resistente alla denaturazione termica, ma la modifica o la degradazione della protoemina nell'enzima riscaldato era maggiore a pH alcalino che a pH acido. Lo spettro piridina-ferroemocromo della perossidasi ha mostrato lievi spostamenti dei massimi della banda alfa a lunghezze d'onda più corte durante il trattamento termico e il cromatogramma su carta ha mostrato la presenza di un nuovo derivato diverso dalla protoemina. Il prodotto modificato è probabilmente (2(4)-vinil-4(2)-idrossietildeuteroemina.
Studi sul metabolismo del D-tetrosio. VI. Cristallizzazione e alcune proprietà della D-eritrulosio reduttasi dal fegato di manzo.D-eritrulosio reduttasi dal fegato di manzo è stato cristallizzato da una soluzione di solfato di ammonio a pH 8,17. I cristalli sono a forma di ago. La proteina enzimatica contiene 851 residui di amminoacidi per mole dell'enzima: Lys28, His11, Arg52, Asp79, Thr58, Ser56, Glu68, Pro20, Gly80, Ala107 , Val112, Met24, Ile31, Leu88, Tyr7, Phe22, Trp4 e Cys4. L'enzima viene inattivato dall'esposizione a temperature inferiori a 12 gradi. L'inattivazione viene accelerata aumentando la concentrazione di sale e diminuendo la concentrazione di enzima. Anche il pH del mezzo ha un effetto pronunciato, la massima stabilità dell'enzima si ottiene a pH 8,5. NADP+ ha protetto l'enzima dall'inattivazione a freddo in tutte le fasi del processo e ha anche offerto protezione contro l'inattivazione da calore e pH. L'inattivazione a freddo dell'enzima è accompagnata da dissociazione del proteina enzimatica in subunità.
Purificazione e proprietà di un componente eso-cellulasi di tipo nuovo da Trichoderma miride.Un estratto enzimatico da Cellulase-Onozuka, un prodotto commerciale di Trichoderma viride, è stato frazionato mediante cromatografia su colonna Amberlite CG-50 in tre gruppi di cellulasi [EC 3.2.1.4], picchi da I a III. Un enzima noval, che ha sia beta-glucosidasi [EC 3.2.1.21] che eso-carbossimetil-cellulasi ( exo-CMCase) è stato ottenuto dal picco III mediante un'ampia purificazione tramite cromatografia su colonna consecutiva. L'enzima era omogeneo su ultracentrifugazione, elettroforesi su SDS-gel e film di acetato di cellulosa e cromatografia su setaccio molecolare su Bio-Gel P-150. Il peso molecolare di questo enzima è stato stimato essere 53.000. L'enzima sembrava rilasciare residui di cellobiosio uno per uno dall'estremità non riducente di cellooligosaccaridi superiori e CM-cellulosa (CMC), ma per rilasciare residui di glucosile dal cellotriosio ridotto e dal beta-cellobioside, somiglianti ng una beta-glucosidasi in questo senso. Inoltre, questo exo-CMCase ha attaccato anche lo xilano exo-wise per produrre molecole di xilobiosio una per una, ma ha attaccato appena la cellulosa insolubile, ad eccezione di una cellodestrina apparentemente ricca di struttura amorfa.
Purificazione e proprietà di due ribonucleasi in diversi compartimenti intracellulari nel tessuto della radice di pisello.Due RNasi in forme legate associate alla membrana microsomiale e ai ribosomi o particelle sconosciute nel tessuto della radice di pisello sono state solubilizzate sottoponendo la membrana ad oscillazione sonica in presenza di EDTA e KC1 e trattando le particelle con EDTA, rispettivamente. Le RNasi sono state quindi purificate mediante cromatografia su colonna DEAE-cellulosa e Sephadex G-75. I profili di eluizione delle RNasi dalle colonne erano molto simili. Non sono state osservate differenze significative nella loro mobilità elettroforetica nei gel di poliacrilammide, nel peso molecolare, nell'attivazione da parte di ioni inorganici, urea o micelle fosfolipidiche o nella dipendenza della loro attività dal pH. le RNASI purificate non erano diverse dagli enzimi legati per quanto riguarda l'attivazione da parte di ioni inorganici e urea e la dipendenza dell'attività dal pH. Triton X-100 stimolato t ha attività solo se la RNasi era in una forma legata associata alla membrana microsomiale. Proponiamo che le due RNasi possano essere la stessa specie molecolare e differiscano solo nella forma dell'associazione con le strutture intracellulari.
Ph intracellulare (pHi) dei globuli rossi conservati in terreno acido citrato destrosio. Effetti della temperatura e degli anioni citrato.Il pH intracellulare (pHi) di globuli rossi conservati in mezzo acido citrato destrosio (ACD) è stato stimato con il metodo 5,5\'-dimetilossazoldina,-2,4-dione (DMO). Il pHi iniziale a 4 gradi era di circa 7,6 ed era superiore al pH extracellulare ( pHe) a 4 gradi. Durante la conservazione, sia il pHi che il pHe diminuivano, ma il primo era sempre più alto del secondo e il primo diminuiva più lentamente del secondo. L'alto pHi del sangue ACD era il risultato della temperatura alla quale il pHe e il sono stati misurati il pHi (4 gradi) e la presenza di anioni citrato nel mezzo, e potrebbe essere spiegata dall'applicazione dell'equilibrio di Donnan-Gibbs. ATP e 2,3-difosfoglicerato (DPG) erano ben mantenuti nel sangue eparinizzato quando era acidificato e pHe e pHi a 4 gradi erano entrambi circa 7,4, il che suggerisce che il miglioramento della conservazione del sangue on può essere ottenuto mediante un'adeguata regolazione del pHi e del pHe del sangue.
Idrolisi alfa-chimotriptica di derivati dei substrati specifici con sostituenti nel nucleo.Studi cinetici allo stato stazionario dell'alfa-chimotripsina [EC 3.4.21.1 L'idrolisi ]-catalizzata dei derivati nucleo-sostituiti dei substrati specifici è stata effettuata a pH 6,5 e 7,8 Ac-Trp(NCps)-OMe è stato idrolizzato più facilmente di Ac-Trp-OMe a causa del suo valore di Km inferiore. Ac-Trp(CHO)-OMe e Ac-Tyr(3-no2)-ome erano superiori a quelli dei corrispondenti substrati non modificati, suggerendo che i derivati con un sostituente grande quanto un gruppo formile o nitro nella posizione epsilon sono stereochimicamente favorevoli al processo catalitico Derivati di Ac-Phe-OMe con una catena di quattro atomi in posizione 3 o 4 del nucleo fenilico e 2,3-diidropirrolo[2,3-b]indoli derivati da Ac-Trp- OMe non sono stati affatto idrolizzati.
Inibizione della sintesi polipeptidica da parte di frazioni di tRNA in sistemi privi di cellule di fegato di ratto.Il meccanismo di inibizione della sintesi polipeptidica mediante l'aggiunta di una frazione di tRNA in un sistema privo di cellule di fegato di ratto è stato scoperto che l'inibizione si verifica nella fase del legame dell'aminoacil-tRNA ai ribosomi, in cui gli aminoacil-tRNA\' erano i principali responsabili dell'inibizione. inibizione da parte della frazione tRNA La frazione tRNA ha inibito la sintesi polipeptidica in un sistema polisoma-S100 in condizioni in cui le sintesi polipeptidiche dipendenti da poli U e poli A non sono state inibite La possibilità che l'attività inibitoria dell'aminoacil-tRNA funzioni attraverso un legame improprio a vengono discussi i ribosomi nel sistema polisoma-S100.
Ulteriore conferma della carbossipeptidasi Y come enzima privo di metalli con un residuo di serina reattivo.Il contenuto di metallo della carbossipeptidasi Y è stato analizzato mediante assorbimento atomico Dopo un'esaustiva dialisi contro una soluzione di EDTA, l'enzima non ha mostrato alcuna perdita di attività né alcun contenuto significativo di metalli (Zh,Mg,Ca,Cu,Mn,Ni,Fe e Co). L'attività era, tuttavia, piuttosto sensibile alla preincubazione con vari metalli. È stata anche rivalutata la reattività di un residuo di serina dell'enzima. Il diisopropil fluorofosfato (DFP) e il fenilmetansolfonil fluoruro (PMSF) hanno inibito stechiometricamente e irreversibilmente l'enzima. La velocità di inattivazione con DFP è stata molto più veloce di quella per la tipsina [EC 3.4.21.4] e chimotripsina [EC 3.4.21.1. ], mentre il tasso con PMSF era un quindicesimo di quello per la chimotripsina. La dipendenza dal pH dell'inattivazione da parte della DFP era simile a quella dell'idrolisi enzimatica dell'acetilfenilalanina etile estere Il presente r i risultati indicano che la carbossipeptidasi Y è priva di metalli e ha un residuo di serina con un ruolo vitale nel processo catalitico, sebbene il ruolo funzionale di questo gruppo SH resti da chiarire.
Specificità del substrato della carbossipeptidasi dall'anguria.La specificità del substrato della carbossipeptidasi (F-II) purificata dall'anguria per vari peptidi ed esteri sintetici è stata esaminata cineticamente L'enzima ha mostrato un'ampia specificità di substrato contro vari carbobenzossi e benzil dipeptidi. I peptidi contenenti glicina o prolina sono stati idrolizzati lentamente dall'enzima. I peptidi contenenti aminoacidi idrofobici sono stati idrolizzati rapidamente. La presenza di residui di aminoacidi idrofobici, non solo al La posizione C-terminale ma anche la seconda posizione e probabilmente la terza posizione dal C-terminale ha determinato un aumento della velocità di idrolisi. Gli studi di inibizione con diisopropilfluorofosfato e diastereomeri di carbobenzossi-Phe-Ala hanno dimostrato che le attività della peptidasi e dell'esterasi dell'enzima sono entrambi catalizzati dallo stesso sito della molecola enzimatica, ma i siti di legame per peptidi ed esteri sembrano non essere gli stessi e. L'enzima aveva anche un'attività amidasica, che era ottimale a pH 7,0.
Studi su una fosfolipasi B da Penicillium notatum. Purificazione, proprietà e meccanismo d'azione.1. Fosfolipasi B che idrolizza entrambi i legami acil estere diacilfosfolipidi (diacil-idrolasi) e il legame acil estere di monoacilfosfolipidi o lisofosfolipidi, [monoacil-idrolasi o lisofosfolipasi, EC 3.1.1.5] è stato purificato da Penicillium notatum circa 2000 volte rispetto all'estratto grezzo. La preparazione finale era omogenea su disco elettroforesi. Il peso molecolare apparente, determinato mediante gel filtrazione su Sephadex G-200, era di circa 116.000. Il punto isoelettrico era pH 4.0. 2. L'enzima purificato era una glicoproteina. Il contenuto di carboidrati era di circa il 30%, costituito da mannosio, glucosio , e glucosamina. È stata determinata anche la composizione amminoacidica. 3. Il rapporto tra le attività di monoacil-idrolasi e diacil-idrolasi è stato influenzato dallo stato fisico del substrato nel sistema di analisi. Era circa 1 : 1 o 100 : 1 i n la presenza di assenza di Triton X-100, rispettivamente, e quest'ultimo valore è rimasto costante durante le procedure di purificazione. 4. Entrambe le attività enzimatiche avevano lo stesso pH ottimale, 4.0, ed erano termolabili. Nessuno dei metalli testati ha avuto alcun effetto su nessuna delle due attività ad eccezione di Fe2+ e Fe3+. Il diisopropil fluorofosfato a concentrazioni relativamente elevate ha inibito completamente entrambe le attività enzimatiche. 5. Le costanti di Michaelis-Menten (Km) dell'enzima per la lecitina d'uovo erano rispettivamente di circa 1,5 e 25 mM in assenza e presenza di Triton X-100. Il valore Km per la dicaproyllecitina era di 9,8 mM in assenza di Triton X-100. 6. Utilizzando una miscela di 1-[14C]stearoil-lecitina e 2-[14C]oleoil-lecitina in presenza di Triton X-100 come substrato, si è scoperto che la fosfolipasi B di P. notatum attacca i legami acil estere in sequenza, prima i gruppi 2-acile e poi 1-acile.
Determinazione quantitativa di forme anomeriche di zucchero prodotte da amilasi. V. Forme anomeriche di maltosio prodotte nella reazione idrolitica di fenil alfa-maltosidi sostituiti catalizzata da alfa-amilasi saccarificante da B subtilis.1. Idrolisi del fenil alfa-maltoside e dei suoi derivati con vari sostituenti (p-NO2, p-C1, p-CH3, p-C2H5 e pC(CH3)3) catalizzata da l'alfa-amilasi saccarificante da B. subtilis3 [EC 3.2.1.1] sono state studiate in condizioni tali che i prodotti fossero solo maltosio e i corrispondenti fenoli (1), al fine di determinare quantitativamente la forma anomerica dello zucchero prodotto da ciascun substrato.2 Al pH ottimale di questo enzima (pH-5,4), il maltosio rilasciato da tutti i substrati sostituiti studiati era interamente in forma beta. Questi risultati sono in notevole contrasto con la precedente scoperta che l'alfa-maltosio è prodotto esclusivamente da fenile non sostituito alfa-maltoside da questo enzima (2) 3. A pH 6 .18 e 6.73, il maltosio prodotto da fenil alfa-maltoside non sostituito (øM) o p-tert-butilfenil alfa-maltoside (PTBøM) era una miscela di alfa e beta-anomeri, il rapporto essendo dipendente dal pH come segue: Per øM , la percentuale di alfa-anomero era 100% (pH 5,4), 80 (pH 6,18) e 55% (pH 6,73), mentre per PTBøM, la percentuale di beta-anomero era 100% (pH 5,4), 75% ( pH 6,18) e 60% (pH 6,73).
Purificazione e caratterizzazione della piruvato decarbossilasi dalle radici della patata dolce.La piruvato decarbossilasi [2-ossiacido carbossi-liasi, EC 4.1.1.1] è stata isolata da radici di patata dolce ed è stato parzialmente purificato da tessuti sani e malati. Non vi era alcuna differenza apprezzabile nelle proprietà tra gli enzimi di tessuti sani e malati. Il peso molecolare dell'enzima è risultato essere di 240.000 mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide. Poiché sodio dodecilsolfato l'elettroforesi su gel di poliacrilammide ha dato un peso molecolare di 60.000 per la forma monomerica dell'enzima, è probabile che la piruvato decarbossilasi della patata dolce contenga catene polipeptidiche singole 4. Il pH ottimale della reazione di decarbossilazione era 6.1--6,6. Il doppio reciproco di Lineweaver-Burk trama curva verso l'alto e il coefficiente di Hill era maggiore di 1, con basse concentrazioni di piruvato. L'enzima è stato localizzato nella frazione del citosol. L'attività dell'enzima è aumentata i n risposta all'infezione del fungo del marciume nero, ma è diminuita in risposta al taglio.
Studi sui perossisomi. V. Effetto dell'etil p-clorofenossiisobutirrato sul comportamento centrifugo dei perossisomi di fegato di ratto.Dopo che i ratti maschi Wistar sono stati nutriti con una dieta contenente lo 0,25% di etil p-clorofenossiisobutirrato (CPIB) per 28 giorni, sono stati studiati i cambiamenti nelle attività enzimatiche e il comportamento centrifugo dei perossisomi di fegato di ratto. (1) Rispetto ai ratti di controllo alimentati con la dieta di base, la catalasi [EC 1.11 .1.6] l'attività del fegato di ratto dopo la somministrazione di CPIB è aumentata di circa 2,5 volte, mentre l'attività dell'urato ossidasi [EC 1.7.3.3] non è cambiata in modo significativo. un sesto del controllo, l'attività della L-alfa-idrossiacido ossidasi [EC 1.1.3.15], un enzima della flavina come la D-aminoacido ossidasi, non è stata influenzata in modo significativo dopo la somministrazione di CPIB. le cellule dei ratti trattati con CPIB sono state frazionate mediante centrifugazione differenziale, la maggior parte dell'aumento dell'attività catalasi è apparso nella frazione surnatante. In tutte le frazioni è stata osservata una diminuzione dell'attività epatica dell'aminoacido D-ossidasi dei ratti trattati con CPIB. Per quanto riguarda la distribuzione subcellulare degli enzimi legati alle particelle, le attività specifiche sia della catalasi che dell'urato ossidasi dei fegati di ratto trattati con CPIB erano più elevate nella frazione mitocondriale leggera rispetto ad altre frazioni. (3) I modelli di sedimentazione in un gradiente di densità di saccarosio non hanno mostrato alcuna differenza tra i perossisomeri normali e quelli trattati con CPIB. (4) Nel caso dei ratti trattati con CPIB, gli studi sui loro schemi di sedimentazione mediante centrifugazione in gradiente di densità Ficoll hanno mostrato due principali picchi di particolato contenenti sia catalasi che urato ossidasi, sebbene sia stato osservato un solo picco nel caso dei ratti di controllo.
Purificazione e caratterizzazione della pirofosfatasi inorganica da Bacillus stearothermophilus.La pirofosfatasi inorganica [EC 3.6.1.1] è stata purificata da Bacillus stearothermophilus allo stato omogeneo sia ultracentrifugamente ed elettroforeticamente. L'analisi ultracentrifuga ha rivelato che il peso molecolare dell'enzima è 122.000 e il coefficiente di sedimentazione (S0,34%/20, W) è 5,2 S. La molecola dell'enzima in soluzione di dodecilsolfato di sodio allo 0,1% contenente 1 mM di 2-mercaptoetanolo aveva un peso molecolare stimato di 70.000 sulla base dei risultati dell'elettroforesi su gel di poliacrilammide SDS, che indica che l'enzima può essere costituito da due subunità. Per l'attività enzimatica sono necessari cationi bivalenti come Mg2+, Mn2+ e Co2+. Il pirofosfato è l'unico substrato per l'enzima. L'ATP e il p-cloromercuribenzoato inibiscono notevolmente la reazione enzimatica.
Luminescenza e attività respiratoria di Photobacterium phosphoreum. Competizione per potere riducente cellulare.Cambiamenti nella luminescenza in vivo, attività respiratorie, contenuto di citocromi, estraibili luciferasi e NAD(P)H-FMN reduttasi durante la crescita del ceppo selvatico (brillante) di Photobacterium phosphoreum e del suo mutante debole sono state determinate. L'intensità della luminescenza in vivo per cellula è aumentata di 10 volte nel ceppo selvatico e di 750 volte nel debole ceppo durante la crescita logaritmica, mentre il contenuto di luciferasi e NAD(P)H-FMN reduttasi è rimasto quasi costante. Si suggerisce che un cambiamento caratteristico nella modalità di competizione del sistema di reazione di luminescenza con un'altra catena di trasferimento di elettroni che coinvolge citocromi per NAD (P)H avvengono durante la crescita di questo batterio.
Confronto tra l'agar al destrosio di patate modificato con antibiotici e l'agar al destrosio di patate acidificato come substrati di crescita per i funghi.Quindici specie fungine, tutte isolate dal cibo, sono state confrontate per le loro capacità di crescita su agar destrosio di patate acidificato a pH 3,5 e su agar destrosio di patate non acidificato modificato con 40 ppm di clortetraciclina cloridrato. I confronti sono stati effettuati a 16, 21, 26, 32 e 37 gradi C. Delle 15 specie, solo Il Penicillium expansum ha mostrato una crescita migliore sul terreno acidificato rispetto al terreno antibiotico non acidificato, mentre 9 specie sono cresciute meglio sul terreno antibiotico non acidificato. Cinque specie sono cresciute ugualmente bene su entrambi i terreni.
Telemetria simultanea del pH e del fluoro. È stata utilizzata una relazione supplementare.È stata utilizzata la telemetria simultanea del fluoruro salivare e del pH interprossimale della placca all'ingresso di uno spazio interprossimale per studiare gli effetti delle compresse di fluoruro contenenti saccarosio che si dissolvono nelle vicinanze dei sensori di fluoruro e pH. La dissoluzione di compresse di saccarosio da 1,0 mg di fluoruro-42 mg ha causato solo lievi depressioni del pH comprese tra 6,7 e 6,0 con aumenti concomitanti di F salivare a come fino a 190 ppm. La formazione di acido nella placca interprossimale da parte di compresse di placebo contenenti saccarosio e prive di fluoro ha ridotto il pH a 4,2.
Psicofisiologia del dolore.La letteratura recente sugli stati dolorosi mostra: le soglie del dolore sono relativamente costanti per un individuo, ma la tolleranza al dolore è influenzata dallo stato psicologico ; l'espressione del dolore è una funzione in parte dell'appartenenza etnica e del grado di estroversione; i disturbi del dolore sono determinati anche da fattori culturali ed estroversi, e anche dal grado di nevroticismo. Gli studi sui pazienti con dolore rivelano che quelli con dolore acuto tendono a mostrare una personalità normale profili, ma il grado di dolore sperimentato è correlato al grado di ansia presente. La maggior parte dei pazienti con dolore cronico, come quelli con dolore psicogeno, mostra preoccupazioni somatiche e depressione reattiva. Il trattamento e/o la riabilitazione dei pazienti con dolore si è sviluppato in tre aree. Nei casi di neuropatia periferica e alcune lesioni del midollo spinale, la stimolazione elettrica con "pacemaker neurali" può spesso "chiudere il cancello" ai segnali di dolore e fornire una significativa riduzione o abolizione del dolore. I farmaci psicotropi, in particolare gli antidepressivi triciclici, a volte in combinazione con fenotiazine e antistaminici, sono efficaci in molti casi di dolore centrale e aiutano ad aumentare la tolleranza al dolore e a diminuire la necessità di narcotici in altri stati dolorosi. Il condizionamento operante, compreso l'uso del biofeedback, estingue il comportamento del dolore e aumenta i comportamenti incompatibili con il dolore, con buoni risultati a lungo termine.
Biofeedback e autocontrollo delle funzioni fisiologiche: applicazioni cliniche.Sono menzionati i parametri suscettibili di apprendimento del biofeedback, tra cui onde cerebrali, tensione muscolare, temperatura, il sistema cardiovascolare, e altri. Segue una discussione sull'applicazione clinica del biofeedback nel trattamento di disturbi quali cefalea tensiva, rieducazione neuromuscolare, epilessia, "disponesi", aritmie cardiache, pressione sanguigna ed emicranie. L'utilità di il biofeedback è stato dimostrato anche nel campo della psicoterapia a fini di desensibilizzazione, nel trattamento di pazienti ansiosi, nell'incoraggiamento di specifici cambiamenti di personalità e nell'indicazione di stress ai pazienti.
Caratterizzazione di una subtilopeptidasi alcalina tipo Pfizer.Le proprietà fisico-chimiche, la composizione amminoacidica e il profilo dei peptidi triptici per una subtilopeptidasi alcalina tipo Pfizer hanno L'enzima è stabile nell'intervallo di pH da 5 a 10, ha un pH ottimale da 9,5 a 10 ed è relativamente stabile per un periodo di 2 ore fino a una temperatura di 50 °C. L'omogeneità è stata dimostrata mediante tecniche elettroforetiche e mobilità indicata sul punto isoelettrico di 8,7. Il peso molecolare è risultato pari a 25.000 mediante filtrazione su gel. La composizione amminoacidica è risultata essere Ala32, Arg4, Aspgamma8, Glu15, Gly29, His4, Ile9, Leu13, Lys11, Met5, Phe4, Pro14, Ser31, Thr17, Tyr9, Val22, per un totale di 247 residui di amminoacidi. L'enzima non contiene né legami disolfuro né cisteina e manca anche di triptofano. Il residuo del gruppo terminale N-terminale è l'alanina: il C-terminale l'aminoacido è l'arginina Idrolisi triptica dell'enzima prodotto ced 15 peptidi che sono stati separati mediante eluizione in gradiente su Dowex 50-X2. È stata stabilita la composizione amminoacidica di ciascun peptide triptico opportunamente purificato.
Studi di risonanza paramagnetica elettronica sulla marcatura con spin della pepsina: effetti della temperatura, del pH e dell'urea sulla sua conformazione.La pepsina è stata marcata con lo spin con N -(1-ossil-2,2,6,6-tetrametil-4-piperidil) bromoacetammide, possibilmente nel sito attivo, in corrispondenza di un gruppo beta-catossilico di un acido aspartico reattivo Lo spettro della pepsina marcata con spin ha mostrato che la sonda di spin è stata fortemente immobilizzata (il tempo di correlazione è maggiore o uguale a 10(-8) sec). La pepsina marcata con spin è stata denaturata termicamente a varie temperature e gli spettri di risonanza paramagnetica elettronica (epr) sono stati presi a vari tempi. stimata dagli spettri epr a varie temperature ha mostrato che l'entalpia e l'entropia della denaturazione termica della pepsina marcata con spin a pH 3,5 erano rispettivamente di 48,0 +/- 4,9 kcal/mole e 214,7 +/- 14,5 eu. Il tampone macetato a pH 6.0 ha affinato gli spettri epr della pepsina marcata con spin, indicando che la sonda di spin è stata mobilitata dalla denaturazione alcalina. L'aggiunta di urea ha causato un dispiegamento della proteina che è aumentato con la concentrazione di urea, sebbene sia stata osservata solo una leggera transizione di cambiamenti conformazionali nell'e. p. r. spettri.
Interazione della tossina del colera e dei derivati della tossina con i linfociti. II. Effetti modulatori della tossina del colera sulle risposte immunitarie umorali e cellulari in vivo.L'in vivo sono stati studiati gli effetti della tossina del colera sulla struttura e la funzione degli organi linfoidi nei topi. È stato riscontrato che entro un giorno dall'iniezione endovenosa di 1 tazza di tossina, il peso del timo e della milza diminuivano ma gli animali rimanevano sani. Gli studi istologici suggerivano che l'involuzione degli organi linfoidi era dovuta alla morte cellulare. L'iniezione della tossina del colera in topi adrenalectomizzati era letale entro 36 ore. In questi animali non è stata osservata alcuna diminuzione del peso degli organi linfoidi. Le cellule del timo di topi trattati con tossina sono risultate molto inferiori ai timociti di animali non trattati nella loro risposta in vitro a Concanavalina A, mentre la risposta delle cellule della milza degli animali trattati con la tossina ai mitogeni era leggermente aumentata.1 tazza di tossina del colera ha aumentato il formato dell'anticorpo primario ione quando somministrato a topi insieme all'antigene (eritrociti di pecora) e ridotta formazione di anticorpi primari quando somministrato prima o dopo l'antigene. La tossina ha anche aumentato la formazione di anticorpi secondari quando iniettata contemporaneamente o dopo la dose di antigene di richiamo e ha diminuito la formazione di anticorpi quando somministrata pochi giorni prima dell'iniezione di richiamo. È stato scoperto che il trattamento dei topi con la tossina aumenta la capacità delle cellule della milza di questi animali di indurre l'effetto parentale sulla formazione di anticorpi e di indurre reazioni del trapianto contro l'ospite. Vengono discussi i meccanismi alla base degli effetti osservati. Si suggerisce che la tossina del colera colpisca diversi tipi di cellule coinvolte nelle risposte immunitarie principalmente tramite un'azione inibitoria diretta sulla proliferazione cellulare ma anche indirettamente causando il rilascio di ormoni della ghiandola surrenale.
Ulteriori studi sulle proprietà fisiche e metaboliche dei mutanti sensibili alla temperatura del virus dell'afta epizootica.Tre mutanti sensibili alla temperatura (ts) del virus dell'afta epizootica sono stati classificati come negativi all'acido ribonucleico e come appartenenti allo stesso gruppo di complementazione quando misurati dalla resa del virus e dall'incorporazione di [3H] uridina in infezioni accoppiate e miste alla temperatura non permissiva (38,5 °C). 22, l'unico mutante in grado di produrre placche a 38,5 °C, era più sensibile all'acido rispetto ai virus parentali wild-type o ad altri virus mutanti. Il dietilamminoetil-destrano non ha potenziato la capacità di formare placche dei virus mutanti a 38,5 °C. dei virus ha inibito la sintesi proteica della cellula ospite sia a temperature permissive (33°C) che non permissive (38,5°C).
Purificazione parziale e proprietà dell'enterotossina termostabile di Enterobacter cloacae.Preparazioni cell free del lisato di cellule intere e delle frazioni di ultrafiltrazione (UF) del brodo colture di un ceppo di Enterobacter cloacae, isolato da un portoricano con sprue tropicale, sono state testate per la loro capacità di indurre in vivo la secrezione di acqua netta nel digiuno di ratto. Il lisato di cellule intere e il retentato di UM-10 delle colture in brodo erano inattivi. Il retentato e il filtrato UM-2 erano attivi ad una concentrazione di 100 mug/ml o più; l'attività tossigenica è stata interamente trattenuta, e aumentata a 1 mug/ml, da una membrana UM-05; il lavaggio di questo retentato ha prodotto una frazione con un attività di 10 ng/ml. Le condizioni di coltura aerobiche stazionarie hanno prodotto le frazioni UF più attive quando il solfato di ammonio è stato utilizzato come agente precipitante, mentre le condizioni di coltura anaerobica hanno prodotto le frazioni più attive nelle colture in brodo precipitate dall'acetone. Passaggio dell'asso attivo le frazioni di UF precipitate con toni attraverso una colonna Sephadex G-25 hanno prodotto pool di eluato con attività tossigenica potenziata nel volume vuoto o adiacente a esso, ma l'attività massima del retentato UM-05 precipitato con solfato di ammonio eluita a un Kav compreso tra 0,38 e 0,52. Nessuna delle frazioni di eluizione di gel filtrazione più attive dei retentati UM-05 conteneva carboidrati rilevabili, suggerendo che la tossina non è associata all'endotossina. L'attività tossica è stata inalterata dall'esposizione a una temperatura di 100°C per 30 minuti, abbassando il pH a 1, o dall'incubazione con pronasi o tripsina. Queste osservazioni indicano che il ceppo di E. cloacae in studio elabora un'enterotossina termostabile htat ha approssimativamente lo stesso peso molecolare e condivide molte delle caratteristiche dell'enterotossina termostabile prodotta da alcuni ceppi di Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae.
Germinazione di Candida albicans indotta da prolina.Blastospore di Candida albicans germinate in terreno tampone prolina-biotina incubato a 37 C. Alcuni altri amminoacidi anche nelle famiglie del glatamato, dell'asparato e del piruvato hanno favorito la germinazione, ma generalmente in misura minore rispetto alla prolina. La L-cisteina, la D-prolina e alcuni analoghi strutturali della L-prolina hanno inibito la germinazione stimolata dalla prolina. era cruciale per la germinazione stimolata dagli amminoacidi di C. albicans. Gli isolati clinici e le colture stock variavano nella loro risposta all'attività di induzione del tubo germinale della prolina o di altri amminoacidi. Il mezzo tampone prolina non può essere utilizzato in un test diagnostico per la produzione di tubi germinali da isolati di lieviti.
Attività battericida non specifica del sistema lattoperossidasi-tiocianato-perossido di idrogeno del latte contro Escherichia coli e alcuni patogeni gram-negativi.Due ceppi di Escherichia coli e un ceppo ciascuno di Salmonella typhimurium e Pseudomonas aeruginosa sono stati uccisi dall'attività battericida del sistema lattoperossidasi-tiocianato-perossido di idrogeno nel latte e in un mezzo sintetico. H2O2 è stato fornito esogenamente dalla glucosio ossidasi e il glucosio è stato prodotto a un livello che è stato Sono state distinte due fasi: la prima fase dipendeva dall'ossidazione di SCN(-) da parte della lattoperossidasi e H2O2, che è stata invertita dall'agente riducente, e la seconda fase dipendeva dalla presenza di H2O2 accumulata, che è stata invertita da catalasi. Quest'ultimo enzima potrebbe anche invertire la prima fase, ma solo quando presente in livelli eccessivi e non fisiologici. L'attività battericida era massima a pH 5 e inferiore, e d dipendeva dalla concentrazione del SCN(-) e dal numero di organismi. Poiché il latte crudo o riscaldato neutralizza la barriera acida contro le infezioni nello stomaco, il sistema battericida discusso può contribuire alla prevenzione delle infezioni enteriche nei neonati.
Proprietà biologiche di un preparato immunogenico pneumococcico subcellulare.Viene descritta una frazione subcellulare, denominata PSP-3R, preparata da Streptococcus pneumoniae di tipo 3R grezzo, che offre un'eccellente protezione ai topi contro il challenge con organismi lisci del sierotipo omologo 3S e una protezione significativa contro il challenge eterologo con i sierotipi 1S e 2S. L'adiuvante migliora la capacità protettiva del vaccino ma non è necessario per l'immunogenicità. La protezione indotta da PSP-3R può essere trasferita passivamente a topi normali con siero proveniente da animali attivamente immunizzati La capacità protettiva può essere completamente assorbita con organismi di tipo 3 ruvido o liscio ma non con cellule di tipo 1R o 2R ruvide Il siero immunitario PSP-3R è stato testato in un test di emoagglutinazione passiva contro gli eritrociti rivestiti di polisaccaride capsulare di tipo 3 e si è scoperto che non hanno anticorpo anticapsulare rilevabile. La possibile identità dell'immunogeno (s) in th Il vaccino è discusso.
Adesione delle cellule epiteliali batteriche alle vaginali.Le cellule epiteliali vaginali di donne sane sono state lavate e incubate in terreno di coltura tissutale con batteri appena isolati dell'indigeno flora vaginale e con batteri di specie che sono state discusse in relazione alle infezioni genitali. Dopo l'incubazione e il lavaggio, è stato determinato il numero di batteri che hanno aderito per cellula. L'influenza sul tasso di attaccamento di fattori quali variazioni nella procedura di lavaggio, batteri è stata valutata la densità e il tempo di incubazione. Lactobacillus acidophilus e altre specie batteriche che si verificano nel tratto genitale inferiore di donne sane, ad esempio, alcune specie strettamente anaerobiche, hanno aderito a numeri per cellula significativamente inferiori rispetto a Neisseria gonorrhoeae, streptococchi di gruppo B e Corynebacterium vaginale Significativamente più gonococchi appena isolati aderivano per cellula rispetto ai gonococchi che erano stati fatti passare su un terreno artificiale. occi aumenta con l'aumentare dell'acidità del mezzo di prova.
[Levamisole, una sostanza chimicamente definita con potenziale immunostimolante - una recensione].A differenza dell'immunosoppressione, l'immunostimolazione è ancora in una fase iniziale di sviluppo. Levamisole è la prima sostanza chimicamente definita con potenziale immunostimolante che può essere applicata per via sistemica. Dopo una breve considerazione della chimica e farmacologia del Levamisole, vengono discussi in dettaglio il suo effetto in diversi modelli sperimentali animali di immunità umorale e cellulo-mediata. Inoltre , la seguente review tratta dell'influenza del levamisolo su diversi parametri immunologici nell'uomo. Infine, vengono riportati i risultati terapeutici raggiunti fino ad ora da diverse indicazioni cliniche.
[Morbus Crohn (enterite regionalis)].La malattia di Crohn (enterite regionale) è una malattia infiammatoria intestinale cronica non specifica di eziologia sconosciuta Più comunemente è coinvolto l'ileo terminale, piuttosto caratteristico è un coinvolgimento segmentario della parete intestinale. I sintomi principali sono dolori addominali ricorrenti, febbre, diarrea e calo ponderale. L'esame radiologico ed endoscopico conferma la diagnosi, i granulomi nel campione bioptico sono patognomonici. Nella diagnosi differenziale devono essere escluse la colite ulcerosa e ischemica. La terapia conservativa con prednisolone e salazopirina è il metodo di scelta, tuttavia, complicanze come l'ostruzione dell'intestino tenue, il megacolon tossico e le fistole richiedono un intervento chirurgico.
Lesioni orali causate da abitudini.Lesioni orali causate da abitudini possono essere solo dei denti, dei denti e dei tessuti molli della bocca o possono essere solo dei tessuti molli Le lesioni dei denti sono permanenti e possono rimanere anche in caso di distruzione totale dei tessuti molli Il riconoscimento di lesioni dovute ad abitudini come la masticazione del betel, il tabacco da fiuto, il fumo di pipa e alcune pratiche sessuali può aiutare a stabilire il sesso, il gruppo etnico o anche il luogo di origine di una persona o dei suoi resti. Alcuni cambiamenti dentali e gengivali possono indicare le condizioni lavorative di una persona e persino il tipo di trattamento ricevuto.
Inibizione della secrezione acida gastrica stimolata dal cibo da parte della cimetidina.Stimolato l'effetto della cimetidina, un nuovo antagonista del recettore H2 dell'istamina, sulla secrezione acida gastrica con un pasto omogeneizzato è stato studiato in sei volontari normali utilizzando una tecnica di titolazione intragastrica in vivo. I soggetti sono stati studiati due volte, a non più di 48 h di distanza, ricevendo cimetidina 200 mg o placebo in ordine casuale. La cimetidina somministrata o 32 uomini prima (tre soggetti) o con il pasto (tre soggetti) ha inibito significativamente la secrezione acida gastrica in tutti i soggetti durante il periodo di studio; 96 min dopo il pasto, la secrezione acida totale è diminuita rispettivamente del 67 e del 57%. Quando il farmaco è stato assunto con l'assorbimento del pasto era più lento (livello ematico di picco medio 2-34 mumol/l, 80-128 min dopo la somministrazione) rispetto a quando somministrato a stomaco vuoto (livello ematico di picco medio 5-08 mumol/l, 48-64 min dopo la somministrazione). concentrazione correlata significativamente (P le ss di 0-01) con percentuale di inibizione della produzione di acido e la concentrazione calcolata risultante in un'inibizione del 50% della secrezione acida gastrica (IC50) era 1-6 mumol/l. La secrezione di gastrina in risposta al cibo non è stata influenzata dalla cimetidina. I risultati suggeriscono che 200 mg di cimetidina inibiscono efficacemente la secrezione acida stimolata dal cibo e che la biodisponibilità del farmaco può essere influenzata dai tempi di dosaggio in relazione ai pasti. Non sono stati osservati effetti indesiderati.
[Controllo genetico dell'inibizione allogenica delle cellule staminali ematopoietiche].Topi adulti di C57BL/6, CBA (CBA X C57BL/6) F1, (CBA X C57BL/6) I ceppi F2, F1 X CBA e F1 X C57BL/6 sono stati irradiati in modo letale e ricostituiti con una dose costante di 3-10(5) C57BL/6 cellule del midollo osseo Al 9° giorno dopo il midollo osseo trapianto la conta delle colonie è stata eseguita nella milza dei riceventi irradiati Nella milza dei topi F1, CBA e C57BL/6 sono stati registrati un numero basso (0--8, intermedio (6--18) e alto (22-40) di colonie rispettivamente. I rapporti di segregazione nella progenie F2 erano vicini a 2 (basso): 1 (intermedio): 1 (alto). I rapporti di segregazione in backcross (F1 X CBA) erano vicini a 1 (basso): 1 (intermedio) colonie. I retroincroci (F1 X C57BL/6) sono stati distribuiti a un numero basso e alto di colonie con un rapporto 1: 1. Il numero di colonie di milza di maschi e femmine era lo stesso in tutta la progenie segregante. I risultati dell'analisi ibrida suggeriscono che un una singola coppia di geni allelici è coinvolta nel controllo genetico dell'inibizione allogenica e che la resistenza (manifestazione dell'inibizione) alle cellule staminali C57BL/6 è conferita dall'allele dominante.
[L'interrelazione tra l'attività inibitoria del latte con diversi tipi di beta-lattoglobuline e la resistenza dei bovini alle mastiti].Nel corso di l'indagine sui bovini pezzati (bianco-neri) ha rilevato che il 17,62% degli animali produce il tipo AA beta-lattoglobulina, il 49,52% - il tipo AB e il 32,86% - il tipo BB. è stata riscontrata l'attività del latte con la beta-lattoglobulina di tipo BB che si è mantenuta nella diluizione 1 : 32. La flora totale del latte del capezzolo, delle cisti e del parenchima degli animali con la beta-lattoglobulina di tipo BB e i batteri Enterococcus erano molto inferiori a quelli del latte di vacche con forma omogenea di tipo AA. Gli animali con il primo tipo di proteine del latte avevano mastite più raramente rispetto a quelli con il secondo tipo. Gli animali con forma eterogenea di beta-lattoglobulina avevano valori intermedi nella maggior parte delle loro caratteristiche.
[Descrizione di nuove forme mutanti dell'eritrocita glucosio-6-fosfato deidrogenasi nell'uomo].9 varianti dell'eritrocita glucosio-6-fosfato deidrogenasi umana (G6PD) sono stati isolati da eritrociti di pazienti con deficit di G6PD e parzialmente purificati secondo il programma dell'OMS per la stanartizzazione dei metodi per lo studio di G6PD. I risultati dello studio fisico-chimico di questi enzimi (determinazione della mobilità elettroforetica, kappaM per G6P e NADP, pH ottimale e termostabilità) consentono di considerare 5 di esse come nuove mutazioni di G6PD precedentemente non descritte in letteratura. Viene discussa l'elevata eterogeneità osservata delle varianti di G6PD in Azerbaigian.
Genetica dell'arisulfatasi renale e epatica murina b.Sono stati esaminati topi di 12 ceppi consanguinei per la variazione dei livelli di arilsulfatasi renale e epatica. La variazione renale era dovuta alle differenze nell'attività dell'arilsulfatasi B. Attività due volte più elevate dell'arilsulfatasi B nel rene SWR/J rispetto al rene A/HeJ sono state determinate da un gene autosomico che può essere identico al gene strutturale per l'arilsulfatasi B poiché l'enzima SWR/J è stato più stabile al calore rispetto all'enzima A/HeJ. I topi C57BL/6J possedevano livelli di arilsulfatasi epatica due volte più elevati rispetto ai topi A/HeJ. La maggior parte di questa variazione potrebbe essere attribuita a differenze nell'arilsulfatasi B e sembrava essere ereditata in modo autosomico. Anche se alcune prove supportano l'esistenza di un importante locus che influenza l'attività dell'arilsulfatasi epatica, ciò deve essere confermato da ulteriori studi. Qualunque sia la natura dei fattori genetici coinvolti, non sembrano coinvolgere geni strutturali poiché non sono state rilevate differenze tra gli enzimi dei due ceppi rilevanti per Km, stabilità al calore, mobilità elettroforetica, pH ottimale, energia di attivazione o risposta a diversi inibitori. Inoltre, l'ordinamento dei ceppi sulla base dell'attività dell'arilsulfatasi renale differiva notevolmente da quello relativo all'attività epatica. I livelli di arilsulfatasi renale, ma non le attività di arilsolfatasi del cervello o del fegato, sembrano soggetti a influenze androgene.
Effetti dell'istamina sulla permeabilità all'H+ da parte della mucosa gastrica isolata.Questo studio esamina gli effetti dell'istamina sulla permeabilità della mucosa all'acido da parte dello stomaco isolato dei conigli. Istamina (9 X 10 (-5) M) ha diminuito la perdita di acido luminale antrale che non può essere spiegata dalla secrezione attiva di H+ o dalla comparsa di acido organico. L'istamina ha anche aumentato la resistenza elettrica antrale e ha diminuito il flusso unidirezionale da luminale a sieroso (Jls) di ( 14)c-eritritolo. Istamina, teofillina e N(6),O(2)-dibutirril adenosina 3\',5\'-monofosfato non hanno alterato significativamente la secrezione del fondo in presenza di salicilato (5 X 10(- 3)M). Tuttavia, dopo la rimozione del salicilato, questi agenti hanno stimolato la secrezione acida. L'istamina ha diminuito la perdita di acido luminale sia dall'antro che dal fondo trattati con salicilato, ha aumentato la resistenza elettrica di questi tessuti e ha diminuito l'eritritolo della mucosa fundica. 1 X 10(-3) M) ha inibito la permeabilità e effetti dell'istamina sull'antro e sul fondo. I dati indicano che l'istamina diminuisce la permeabilità della mucosa antrale spontanea e l'aumento indotto dal salicilato della permeabilità della mucosa sia dell'antro che del fondo. Gli effetti della burimamide suggeriscono che l'antro contenga siti recettori H2 correlati alla secrezione acida e che il fondo contenga siti recettori H2 che regolano anche la permeabilità ma sono indipendenti da quelli correlati alla secrezione acida.
Qualità, efficienza e costo di un sistema di protocollo medico-assistente per la gestione del diabete e dell'ipertensione.Assistenza medica brevemente addestrata che utilizza protocolli (clinici algoritmi) per il diabete, l'ipertensione e le relative cardiopatie arteriosclerotiche e ipertensive croniche hanno estratto le informazioni dalla cartella clinica e ottenuto dati sull'anamnesi e sull'esame obiettivo su ogni visita del paziente a una clinica per malattie croniche dell'ospedale cittadino per un periodo di 18 mesi. dal sistema protocollare è stato confrontato con le cure rese da un sistema "tradizionale" nella stessa clinica in cui i medici delegavano pochi compiti clinici. L'accresciuta accuratezza nella raccolta dei dati clinici nel sistema protocollare ha portato ad un aumento del riconoscimento di nuove patologie. I criteri di esito riflettevano una qualità equivalente dell'assistenza in entrambi i gruppi. Gli studi sull'efficienza tempo-movimento hanno dimostrato un risparmio del 20% nel tempo del medico con il sistema del protocollo. Coct esti compagni, sulla base del tempo trascorso con i pazienti dai vari fornitori e sui modelli di ordinazione dei test di laboratorio, hanno dimostrato costi equivalenti dei due sistemi, dati i modelli ottimali di personale. I test di laboratorio erano un elemento importante del costo della cura del paziente e la resa clinica per costo unitario dei diversi test variava ampiamente.
Mancanza di relazione tra livelli di nucleotidi ciclici e funzione spermatozoaria nel seme umano.Adenosina ciclica 3\':5\'-monofosfato (AMP ciclico) sono stati determinati in 103 campioni di sperma umano e raggruppati in base al numero di spermatozoi nell'eiaculato. Non è stata trovata alcuna correlazione tra le concentrazioni di AMP ciclico e il numero, la motilità e la morfologia degli spermatozoi o il contenuto di fruttosio, il pH e il volume di l'eiaculato. Risultati simili sono stati ottenuti con livelli di guanosina ciclica 3\':5\'-monofosfato in 24 campioni di sperma umano. Pertanto, i livelli di nucleotidi ciclici nel seme umano sembrano derivare da fonti diverse dall'adenile spermatozoico o dalla guanilil ciclasi".
Recettori cardiaci dell'istamina.Vengono esaminate le attuali prove pertinenti all'identificazione dei recettori cardiaci dell'istamina nella cavia. La caratterizzazione farmacologica è stata aiutata dall'uso di agonisti e antagonisti selettivi per entrambi i tipi di recettori dell'istamina Sembra che sia i recettori H1 che H2 mediano gli effetti cardiaci dell'istamina I recettori H2 dell'istamina mediano gli effetti cronotropi e ventricolari positivi I recettori H1 mediano l'effetto dromotropico negativo dell'istamina e possibilmente l'effetto inotropo atriale. Le aritmie indotte dall'istamina coinvolgono i recettori H1 (aritmie di conduzione) o i recettori H2 (aritmie di automaticità), o entrambi. I recettori che mediano l'aumento del flusso coronarico indotto dall'istamina non sono così chiaramente definiti: sia H1 che H2 i recettori potrebbero essere implicati.
Identificazione e blocco dei recettori vascolari H2.Sono stati condotti esperimenti in cani anestetizzati per determinare la natura dei recettori che mediano le azioni vascolari dell'istamina. l'istamina del muscolo gracile ha causato vasodilatazione che è stata in parte attenuata dalla mepiramina, un bloccante del recettore H1. La metiamide, un bloccante H2, somministrata da sola non ha avuto effetto sulla dilatazione. Tuttavia, la combinazione di mepiramina e metiamide ha provocato una grande attenuazione della dilatazione. ha causato la costrizione della vena safena perfusa che è stata totalmente bloccata dalla mepiramina suggerendo che la venocostrizione da parte dell'istamina coinvolge solo i recettori H1. L'infusione di istamina ha causato una caduta della pressione arteriosa e una forte riduzione delle resistenze periferiche. Il blocco combinato dei recettori H1 e H2 ha in gran parte eliminato gli effetti dell'infusione di istamina documentando ulteriormente l'esistenza di H 1 e recettori H2. Sono stati esaminati gli effetti degli antistaminici H1 e H2 su una varietà di risposte vasodilatatrici fisiologiche. Sono state ottenute prove per indicare che i recettori H1 e H2 dell'istamina sono coinvolti nel componente attivo della vasodilatazione riflessa mediata dai barocettori, vasodilatazione post-stimolazione, vasodilatazione simpatica nel cane trattato con guanetidina e risposte vasodilatatrici in seguito al composto 48/80. Non è stata trovata alcuna prova della partecipazione dei recettori dell'istamina H1 o H2 nell'iperemia reattiva o nella dilatazione che accompagna l'esercizio. Si conclude che nel cane sia l'istamina endogena che quella esogena esercitano effetti vascolari mediante l'attivazione di entrambi i recettori H1 e H2.
La farmacologia di burimamide e metiamide, due antagonisti del recettore H2 dell'istamina.Burimamide e metiamide sono due antagonisti del recettore H2 dell'istamina. Viene presentata la prova che indica la natura competitiva e la specificità dell'antagonismo. La metiamide è circa dieci volte più potente della burimamide ed è anche più efficace della burimamide quando somministrata per via orale. Entrambi i composti inibiscono la secrezione gastrica e l'evidenza è coerente con questa inibizione dovuta all'antagonismo competitivo di Recettori H2 nella mucosa gastrica. La burimamide, a differenza della metiamide, provoca il rilascio di catecolamine anche a dosi appena sufficienti a produrre un antagonismo del recettore H2. La burimamide, ma non la metiamide, ha un'attività di blocco dei recettori alfa-adrenergici. In alcuni modelli di infiammazione, in particolare l'edema della zampa di ratto indotto dal composto 48/80, la burimamide in combinazione con l'antagonista del recettore H1 mepiramina mostra attività antinfiammatoria. rt, essere associato alle proprietà di rilascio di catecolamine del composto. La metiamide è meno attiva in questo senso.
Alcuni aspetti chimici degli antagonisti del recettore H2 dell'istamina.Alcune proprietà chimiche, che possono determinare le azioni biologiche degli antagonisti del recettore H2 dell'istamina recentemente scoperti burimamide e metiamide, sono identificate, in parte considerando la derivazione di questi antagonisti. Sono forniti esempi di tentativi di progettare antagonisti utilizzando l'istamina come punto di partenza. Un agonista parziale è stato infine ottenuto modificando la catena laterale dell'istamina ma mantenendo l'anello imidazolico. gli sviluppi hanno portato alla sintesi di analoghi del tioureido senza carica e alla scoperta dell'antagonista, la burimamide La considerazione della concentrazione relativa di tautomeri dell'imidazolo ha portato alla sostituzione di un gruppo metilene (-CH2-) con un legame isosterico tioetere (-S-) nella catena laterale e l'incorporazione di un gruppo metilico nell'anello imidazolico; questi cambiamenti hanno permesso la metiamide, un antagonista attivo per via orale. Questi sviluppi enfatizzano tha t l'anello imidazolico sembra avere un'importanza speciale sui recettori H2. Burimamide e metiamide sono molecole idrofile che assomigliano all'istamina per avere un anello imidazolico ma differiscono per la catena laterale che, sebbene polare, non è carica. Al contrario, i farmaci antistaminici del recettore H1 sono molecole lipofile; la loro somiglianza con l'istamina sta nell'avere una catena laterale di ammonio carica positivamente. Queste sostanziali differenze chimiche tra i rispettivi antagonisti determinano probabilmente la loro selettività nel distinguere i due tipi di recettore dell'istamina. Inoltre, le bassissime lipofilie di questi antagonisti del recettore H2 probabilmente spiegano la mancanza del sistema nervoso centrale e degli effetti anestetici locali normalmente associati all'uso di farmaci antistaminici.
La risposta dei potenziali d'azione mediati dal calcio e dell'attività contrattile nel miocardio ventricolare di mammifero verso l'alcalosi.Alcalosi (pH 7,8) prodotta dalla riduzione della concentrazione di CO2 ha aumentato sia la velocità di salita dei potenziali d'azione del Ca che la forza contrattile isometrica del muscolo cardiaco dei mammiferi. Se l'aumento del pH a 7,8 è stato ottenuto da un aumento della concentrazione di HCO3 (con simultanea riduzione della concentrazione di CO2), la risposta inotropa positiva non è stata accompagnata da un aumento della corrente di Ca. Ovviamente, il noto effetto inotropo positivo dell'alcalosi non dipende solo dall'aumento dell'afflusso di Ca transmembrana durante l'eccitazione, ma può essere mediato da solo influenzando anche i movimenti intracellulari di Ca.
Dipendenza differenziale dalle concentrazioni di NADPH di due reazioni di 21-idrossilazione del corticosteroide microsomiale.La dipendenza dalle concentrazioni di NADPH della corteccia surrenale bovina della 21-idrossilazione microsomiale di è stato studiato il progesterone e del 17-idrossiprogesterone. Il Km medio di NADPH nella 21-idrossilazione del progesterone è 10,4 muM mentre quello per la 21-idrossilazione del 17-idrossiprogesterone è 0,6 muM. Le concentrazioni ottimali di NADPH per queste due idrossilazioni sono, in media, un ordine di grandezza a parte. Le diverse affinità delle due attività 21-idrossilanti rispetto al NADPH possono indicare la presenza di reazioni di 21-idrossilazione indipendenti per questi due substrati steroidei. Questa evidenza è coerente con i dati genetici osservati in congeniti umani iperplasia surrenalica.
Studi sul metabolismo del paration con una preparazione apparentemente omogenea di citocromo P-450 di fegato di coniglio.Il metabolismo del paration è stato esaminato mediante l'uso di un sistema enzimatico ossidasi a funzione mista ricostituito isolato dal fegato di conigli pretrattati con fenobarbital. Il citocromo P-450 utilizzato in questi studi era apparentemente omogeneo come determinato dall'elettroforesi su gel di poliacrilammide di sodio dodecilsolfato e dal dosaggio del preparato per contaminare gli enzimi microsomiali e attività enzimatica. Questi studi hanno rivelato che la preparazione apparentemente omogenea del citocromo P-450, in presenza degli opportuni cofattori, può catalizzare le conversioni di paration sia in paraoxon che in acido dietilfosforotioico. I presenti studi hanno anche dimostrato che il paration viene metabolizzato da il sistema enzimatico ossidasi a funzione mista ricostituito ad acido dietilfosforico, un prodotto che, in studi precedenti con microso mes, si pensava derivi esclusivamente dall'idrolisi del paraoxon da parte di una esterasi microsomiale. I dati disponibili suggeriscono che tutti e tre i prodotti del metabolismo del paration da parte del sistema enzimatico ossidasi a funzione mista ricostituito, vale a dire, paraoxon, acido dietilfosforotioico e acido dietilfosforico, sono formati in modo non enzimatico dalla rottura per vie diverse di un comune enzimaticamente. formato intermedio. Si pensa che questo intermedio comune sia il derivato solfinico del paration formato nell'aggiunta catalizzata dall'ossidasi a funzione mista di un atomo di ossigeno a una delle coppie di elettroni non condivise dell'atomo di tiono-zolfo.
Sistema enzimatico microsomiale epatico ricostituito che idrossila farmaci, altri composti estranei e substrati endogeni. IX. Formazione di un complesso metabolita-citocromo P-450 di 455 nm.", Il sistema di idrossilazione microsomiale del fegato ricostituito è stato utilizzato per studiare la formazione di un complesso metabolita-citocromo P-450 che assorbe al massimo a 455 nm, con benzfetamina e N-idrossianfetamina come substrati. La formazione del complesso richiedeva la presenza di NADPH, substrato , NADPH-citocromo c reduttasi, lipidi e citocromo P-450, indicando che il metabolismo del substrato è essenziale In presenza di quantità fisse di lipidi e NADPH-citocromo c reduttasi, la velocità di formazione del complesso con il citocromo P-450 isolato da ratti trattati con fenobarbital era molto maggiore di quello osservato con il citocromo P-48 da ratti o conigli trattati con 3-metilcolantrene Questi risultati sono coerenti con studi recenti che indicano che diverse forme di citocromo P-450 con proprietà spettrali, catalitiche e immunologiche distinte esistono nei microsomi epatici.
Identificazione dei metaboliti urinari del 14C-bumetanide nel ratto e loro escrezione da parte di ratti e cani.Bumetanide invariato, 3-(n-butilammino )-4-fenossi-5-sulfamoilbenzoico e cinque metaboliti sono stati escreti nelle urine di ratti a cui sono stati somministrati 50 mg di farmaco marcato con 14 C per kg per via endovenosa. I metaboliti, che sono stati identificati mediante spettrometria di massa e/o spettroscopia di risonanza magnetica nucleare, sono sorti per alterazione metabolica della catena laterale n-butile Nei metaboliti IV, il gruppo butilamminico è stato convertito in -NHCH2CH2CH2COOH, -NHCH2CH2CH2CH2OH,, -NHCH2CH2CHOHCH3, -NHCH2CH2CHOHCH2OH e -NH2, rispettivamente. dopo somministrazione endovenosa e orale di 14C-bumetanide è stata stimata nei cani trattati con 0,5 mg/kg e nei ratti trattati con 5 mg/kg Nel cane, il prodotto di escrezione primario era farmaco immodificato, sebbene sia stata ottenuta evidenza che l'acil glucuronide del bumetanide era secreto nella bile del cane il principale metabolita escreto dal ratto era I, e quantità trascurabili di farmaco intatto sono state escrete nelle urine dopo somministrazione orale o endovenosa. L'attività ottica è stata trovata per i due metaboliti che contenevano un centro chirale (III e IV), indicando che erano formati da un'idrossilazione stereoselettiva.
Fato metabolico qualitativo della fenossibenzamina nel ratto, nel cane e nell'uomo. Uso della marcatura 15N.Somministrazione di una miscela equimolare di non marcata e 15N- fenossibenzamina marcata a ratti e cani ha facilitato l'identificazione dei metaboliti urinari mediante gascromatografia/spettrometria di massa a ionizzazione chimica in virtù delle cospicue coppie di ioni di uguale intensità prodotte. Utilizzando questa tecnica N-benzil-N-fenossiisopropilammina (III), N -benzil-N-(p-idrossi-fenossiisopropil)ammina (IV) e 2-benzilammino-1-propanolo (VI) sono stati identificati come metaboliti nei ratti, mentre nei cani sono stati identificati fenossiisopropilammina (V), III e IV. Il composto IV è stato identificato negli esseri umani sottoposti a trattamento clinico con fenossibenzamina. I metaboliti sono stati sottoposti a screening per l'attività cardiovascolare nei ratti. Il composto III aveva una debole attività di blocco alfa-adrenergico e V ha suscitato una risposta ipertensiva.
Metabolismo del trans-stilbene in conigli e ratti.La biotrasformazione del trans-stilbene marcato con 14C somministrato per via intramuscolare è stata studiata sia nei conigli che nei ratti. Nei conigli la radioattività è stata escreta (78,8% in 17 giorni) quasi esclusivamente nelle urine. Nei ratti, le feci rappresentano più della metà dell'escrezione totale (80,3% in 19 giorni). I metaboliti idrossilati nelle urine e nelle feci sono stati identificati da sottili cromatografia su strato e quantificati mediante conteggio in scintillazione liquida. Erano 4-idrossi e 4,4\'-diidrossistilbene e i due eteri monometilici di 3,4-diidrossistilbene e 4,4\'-diidrossibibenzile. Inoltre, quattro metaboliti poliidrossilati di stilbene e bibenzile sono stati identificati nell'urina di ratto confrontando i tempi di ritenzione della gas-cromatografia liquida dei loro derivati sililici con composti sintetici di riferimento: 3,4,4\'-triidrossistilbene e 3,4-diidrossi-, 3,4, 4\'=triidrossi- e 3,4,3\',4 \'-tetraidrossibibenzile. La scissione ossidativa del trans-stilbene ad acido benzoico e dell'acido 4-idrossi- e 3,4-diidrossibenzoico è stata stabilita dalla presenza sia degli acidi liberi che dei coniugati di questi composti sia nell'urina di coniglio che di ratto. I loro coniugati di glicina sono stati identificati mediante cromatografia su strato sottile e quantificati mediante procedure di diluizione isotopica inversa da urine di coniglio e ratto non idrolizzate. Le percentuali ottenute indicano che la scissione del trans-stilbene è più estesa nei conigli (9,5%) che nei ratti (2,7%).
Metabolismo ossisurano nei suini.Il destino dell'ossisurano nei suini è stato studiato con un farmaco marcato con 14C per quantificarne la biotrasformazione e la disposizione. Nonostante le differenze interanimali , era chiaro che il composto si assorbiva rapidamente e si biotrasformava ampiamente in metaboliti che venivano escreti principalmente nelle urine piuttosto che nelle feci. Gli attacchi diretti all'ossisurano comportavano la riduzione a solfossidi di alcol ossisurano diastereo-isomerico e l'ossidazione a solfone di ossisurano. sono stati ridotti a un solfuro e ossidati a un solfone. Le reazioni di fase II sembravano essere limitate alla solfatazione di solfossidi di alcol ossisurano e solfone di alcol ossisurano. La farmacocinetica è stata studiata per l'ossisurano e i suoi metaboliti.
(14C)Metilfenidato cloridrato. Studi sulla disposizione nel cervello di ratto.Studi con [14C]metilfenidato-HCl sono stati condotti in ratti a cui è stato somministrato il farmaco per via endovenosa o intraperitoneale. I livelli di radioattività totale e del farmaco progenitore sono stati misurati nel plasma, nel cervello e in alcune regioni del cervello fino a 6 ore dopo la somministrazione. La via di somministrazione endovenosa era caratterizzata da un rapido ingresso nel cervello; durante la prima mezz'ora, i livelli cerebrali erano da 3 a 6 volte superiori a quelli ottenuti per via intraperitoneale. In periodi di tempo successivi, le concentrazioni nel cervello e nel plasma per entrambe le vie erano comparabili e il declino delle concentrazioni di farmaco nel cervello era parallelo a quello nel plasma. Non è stata trovata alcuna variazione significativa in distribuzione regionale del farmaco nel cervello. Mentre la frazione maggiore del farmaco circolante era costituita da metaboliti, il farmaco prevalentemente immodificato è stato trovato nel cervello. Dopo l'iniezione endovenosa di acido [14C]ritalinico (il principale metabolita di me tilfenidato), non sono state trovate concentrazioni sostanziali nel cervello.
L'assorbimento, la distribuzione e l'escrezione nei topi di un antimalarico chinolinemetanolo, 2,8-bis(trifluorometil)-4-(1-idrossi-3-(Nt-butilammino )propil)chinolina fosfato (WR 184.806).Circa il 75% della radioattività derivata da WR 184806-14C è stata escreta nelle feci con il resto nelle urine dopo somministrazione PO. Almeno il 77-85% della dose è stata assorbita da 2-8 ore; polmoni, fegato, muscolo scheletrico, reni, intestino tenue (meno contenuto) e carcassa residua erano i principali siti di deposito di radioattività totale. All'interno di questi tessuti la radioattività presente era prevalentemente come WR 184.806 piuttosto rispetto ai suoi metaboliti. I livelli plasmatici di picco di WR 184.806 si sono verificati a 2-4 e 7-10 ore. Il livello di picco negli eritrociti di WR 184.806 si è verificato a 6 ore. La presenza nelle urine e nelle feci di WR 184.806 immodificato è stata confermata da cromatografia su strato e diluizione isotopica inversa.
Assorbimento e disposizione di bifenili clorurati da parte di fegato di ratto perfuso isolato.La disposizione epatica di quattro bifenili clorurati è stata studiata in preparazioni isolate di fegato di ratto perfuso perfuso con 30% di sangue di ratto Escrezione biliare di 4-clorobifenile (1-CB) marcato con 14C: 4,4\'-diclorobifenile (2-CB): 2,4,5,2\',5\'-pentaclorobifenile (5 -CB) e 2,4,5,2\',5\'-esaclorobifenile (6-CB) sembravano essere inversamente correlati all'aumento della clorurazione Ciascuno dei composti veniva rapidamente assorbito dal fegato dal perfusato circolante. 4 ore di perfusione, l'escrezione biliare di 14C da 1-CB, 2-CB, 5-CB e 6-CB era rispettivamente di 48,2, 29,6, 20,5 e 1,3% della dose totale. l'eliminazione biliare rappresenta un rapporto perfusato/bile massimo di 107. Circa il 97% della marcatura nella bile da esperimenti 1-CB era sotto forma di metaboliti. L'escrezione biliare di 1-CB era bifasica: una fase iniziale rapida (t1/ 2 = 1 3 min) è stata seguita da una seconda fase più lenta (t 1/2 = 122 min). Quando i metaboliti dell'1-CB sono stati aggiunti al perfusato, l'escrezione biliare di questi metaboliti era monofasica; t 1/2 = 120 min, che corrispondeva alla fase più lenta osservata quando il composto genitore veniva presentato al fegato. 1-CB è scomparso dal perfusato attraverso un processo bifasico. I metaboliti dell'1-CB effuso nel perfusato immediatamente dopo l'iniziale rapido assorbimento dell'1-CB da parte del fegato, e il pool di metaboliti in ricircolo è stato eliminato nella bile dalla lenta fase postsintetica dell'eliminazione biliare. Meno del 2% di 1-CB era presente come composto progenitore nel sistema di perfusione dopo 4 ore di perfusione. Questi risultati indicano che il metabolismo dell'1-CB non è il fattore limitante nella disposizione epatica dell'1-CB e che i metaboliti circolanti dell'1-CB che si riversano dal fegato potrebbero essere la principale fonte di escrezione urinaria.
Legame della radioattività da (14C)tiourea alla proteina polmonare di ratto.Il legame della radioattività da [14C]tiourea (TU) alla proteina polmonare di ratto è stato riscontrato in vitro. Sono presenti due siti di legame. Uno possiede bassa affinità/alta capacità mentre l'altro è caratterizzato da alta affinità/bassa capacità. Il legame in vitro di [14C]TU alla proteina polmonare può essere antagonizzato dalla presenza di entrambi congeneri non marcati (alfa-naftiltiourea o feniltiourea) o composti contenenti tiolo (cisteina, glutatione ridotto). Al contrario, l'esaurimento del glutatione ridotto dal polmone mediante la somministrazione di dietil maleato determina un elevato legame proteico. dose di TU (che rende tolleranza a una successiva dose letale in vivo) determina una diminuzione del legame in vitro della radioattività da [14C)TU alla proteina polmonare. Inoltre, i ratti immaturi, che sono meno sensibili all'effetto edematogeno di TU , legano meno radioattività da m [14C]TU alla proteina polmonare quando il farmaco viene somministrato in vivo. Questi risultati suggeriscono una correlazione tra il legame del [14C]TU alla proteina polmonare e l'effetto fisiopatologico del farmaco nel polmone.
Prodotti di distribuzione ed escrezione biliare del di-2-etilesilftalato nella trota iridea.Dopo 24 ore di esposizione della trota iridea a 0,5 ppm di di -2-etilesil [14C]ftalato, metà della radioattività presente nel pesce è stata localizzata nella bile. La bile è stata raccolta e frazionata mediante estrazione selettiva con solvente prima e dopo l'idrolisi della beta-glucuronidasi. I singoli composti radioattivi sono stati ulteriormente separati e caratterizzata da cromatografia su strato sottile. La gascromatografia-spettrometria di massa è stata utilizzata per confermare i risultati dell'analisi cromatografica su strato sottile. Queste procedure hanno dimostrato che la bile conteneva un certo numero di metaboliti del DEHP, ma solo circa l'1% di DEHP immodificato. Il metabolita principale, il mono-2-etilesil ftalato glucuronide rappresentava il 72% della radioattività biliare totale, mentre la restante radioattività biliare era presente come glucuronide di acido ftalico, mono-2-etilesil ftalato e due pol parzialmente caratterizzati. metaboliti ar.
Effetto di nafenopin (SU-13437) sulla funzionalità epatica. Influenza sul trasporto epatico di fenolftaleina glucuronide e clorotiazide.In ratti trattati con ipolipidemizzante farmaco, nafenopin (NP), per 2 giorni l'escrezione biliare della fenolftaleina glucuronide (PPG) è stata notevolmente ridotta, mentre è stata aumentata quella della clorotiazide (CTZ), il che suggerisce l'esistenza di meccanismi di trasporto epatico indipendenti per questi due anioni. entrambe le curve di scomparsa del sangue PPG e CTZ hanno mostrato una prima fase rapida seguita da una seconda fase lenta. La fase rapida per entrambi i composti è influenzata solo leggermente dal pretrattamento con NP. Pertanto, si deduce che la soppressione dell'escrezione biliare era attribuibile principalmente a compromissione del processo di trasporto fegato-bile. L'aumento del flusso biliare indotto dal trattamento con NP è stato precedentemente dimostrato essere correlato all'escrezione biliare di NP e dei suoi metaboliti. L'inibizione della coleresi NP da parte del PPG può in vove concorrenza per il trasporto biliare di questi composti. La marcata epatomegalia e la coleresi osservate dopo il pretrattamento con NP erano più evidenti nei ratti maschi che nelle femmine.
Effetto degli agonisti beta-adrenergici aerosolizzati dal propellente freon sulla velocità della mucosa tracheale e sulla gittata cardiaca.Il presente studio è stato progettato per valutare gli effetti di due agonisti beta-adrenergici, isoproterenolo solfato e carbuterolo cloridrato e propellente Freon aerosolizzato (una miscela di Freon II, Freon 12 e Freon 114) sulla velocità della mucosa tracheale e sulla gittata cardiaca nei cani anestetizzati. Cinque gruppi di dieci animali hanno ricevuto ciascuno i seguenti dosaggi di aerosol: Freon, 20 soffi; isoproterenolo, quattro soffi; carbuterolo, quattro soffi; isoproterenolo, 20 soffi e carbuterolo, 20 soffi. Il soffio è stato erogato da un aerosol dosato standard; ogni tiro di spray di isoproterenolo conteneva 75 tazze di isoproterenolo solfato , e ogni sbuffo di spray al carbuterolo conteneva 100 tazze di carbuterolo cloridrato. La velocità della mucosa tracheale non è stata modificata dalla ricezione del freon, ma la somministrazione sia di isoproterenolo che di carbuterolo ha causato un aumento significativo di thi s misurazione, con aumenti di picco che vanno dal 74 al 111% al di sopra dei valori di controllo. La durata dell'azione per quattro e 20 erogazioni di isoproterenolo e per quattro erogazioni di carbuterolo è stata di due ore. Venti boccate di carbuterolo hanno aumentato la velocità della mucosa tracheale per tre ore. La somministrazione di carbuterolo ha determinato un aumento leggermente maggiore della gittata cardiaca rispetto all'isoproterenolo. La durata dell'azione per l'aumento della gittata cardiaca è stata inferiore alla durata dell'azione per l'aumento della velocità della mucosa tracheale. Questi studi indicano che gli agonisti beta-adrenergici possono avere un ruolo importante nel migliorare il trasporto mucoso nei pazienti con malattia polmonare ostruttiva cronica in cui la clearance mucociliare è ridotta.
Soppressione dell'encefalomielite allergica sperimentale nelle cavie con poli-L-lisina.Poli-L-lisina (PLL) somministrato per via sottocutanea in una dose di 3 mg/die sopprime l'encefalomielite allergica sperimentale nelle cavie. L'effetto soppressivo del PLL può ancora essere dimostrato quando la somministrazione è iniziata 8 giorni dopo l'immunizzazione. L'effetto è specifico della malattia e della specie poiché PLL (3 mg/die) non sopprime l'orchite allergica sperimentale nelle cavie, né sopprime l'EAE nei ratti (1-5 mg/giorno). Il PLL (0-2 mg/giorno) non riduce la gravità della malattia del trapianto contro l'ospite (GVH ) nei topi come giudicato dal test di milza/peso corporeo.
Reazioni alle sigarette in funzione di nicotina e "catrame".Esperimenti effettuati per esaminare gli effetti di nicotina e "catrame\ " sull'entità e le reazioni soggettive al fumo di sigaretta. È stato confermato che i fumatori considerano le sigarette commerciali a basso contenuto di nicotina meno "forti" e meno "soddisfacenti" delle loro marche abituali. Poiché tali sigarette forniscono quantità ridotte di catrame e nicotina, un esperimento per distinguere tra i due è stato condotto con sigarette speciali. Le valutazioni di "forza" erano direttamente correlate alla nicotina ma non erano influenzate dal catrame. Il numero di sigarette fumate è diminuito leggermente poiché il loro valore stimato la somministrazione di nicotina è aumentata, ma il catrame non ha avuto effetto su questo indice. L'escrezione urinaria di nicotina è stata correlata con le rese nominali di nicotina per le diverse sigarette, ma c'era anche evidenza che i soggetti tendessero ad aggiustare il loro modo di fumare in modo da titolare le loro dosi di nicotina I risultati sono interpretati come indicanti un ruolo della nicotina, ma non per il catrame, nel mantenimento del comportamento del fumo di sigaretta, e come supporto per l'idea che le sigarette meno dannose dovrebbero avere un alto contenuto di nicotina rispetto al catrame.
Un metodo colorimetrico automatizzato sensibile per la determinazione della gamma-glutamil transpeptidasi sierica.È stato sviluppato un metodo automatizzato altamente sensibile e accurato che utilizza un Technicon Autoanalyzer AAII per la determinazione della gamma-glutamil transpeptidasi sierica umana. La gamma-L-glutamil-p-nitroanilide aggiunta come substrato è stata divisa in p-nitroanilina e il gruppo gamma-glutamile è stato intrappolato dalla glicilglicina nella soluzione tampone Ammediol/HC1. è stato diazotato e convertito dal reagente di Tsuda (N,N-(dietil)-N\'-(1-naftil) etilendiammina) in un colorante azoico con un massimo di assorbanza a 550 nm. Questo nuovo metodo di determinazione, utilizzando la conversione di La p-nitroanilina al colorante azoico è risultata 7 volte più sensibile rispetto al metodo convenzionale di determinazione diretta della p-nitroanilina [1]. Questo metodo richiede solo 0,1 ml di lerum e consente 60 determinazioni all'ora.
Somministrazione di vasodilatatori in presenza di blocco beta-adrenergico.Esplorare la possibilità che la presenza di blocco beta-adrenergico indotto da propranololo possa avere un L'effetto negativo sui riflessi circolatori omeostatici attivati dalla somministrazione di un potente agente vasodilatatore, la pressione arteriosa e la risposta della frequenza cardiaca all'iniezione endovenosa rapida di diazossido sono stati monitorati prima e dopo il pretrattamento con propranololo in dieci pazienti ipertesi. effetto clinicamente significativo sull'entità dell'ipotensione o sul grado di accelerazione della frequenza cardiaca indotta dalla somministrazione del potente vasodilatatore diazossido. Questa accelerazione cardiaca riflessa indotta dal vasodilatatore dopo la somministrazione di propranololo potrebbe essere il risultato di un blocco incompleto del neurotrasmettitore rilasciato endogeno, inibizione di il sistema nervoso parasimpatico, o un'azione farmacologica diretta del diazossido la somministrazione di azossido a pazienti ipertesi in presenza di blocco beta-adrenergico non è stata associata ad alcuna conseguenza emodinamica clinicamente significativa.
Purificazione parziale di una renina ad alto peso molecolare dal rene di maiale.Precedenti ricercatori hanno riferito di aver trovato una renina ad alto peso molecolare (HMW) in varie specie che viene attivato dall'acidificazione. Due laboratori hanno riferito che una diminuzione del peso molecolare della renina accompagna la fase di acidificazione. Questo rapporto descrive la purificazione parziale di una renina HMW da estratti di rene di maiale che erano stati precedentemente acidificati a pH 2,5. La renina HMW, con un peso molecolare di 57.000-59.000, costituisce solo una piccola frazione relativamente costante della renina totale isolata L'omissione della fase di acidificazione o l'acidificazione iniziale a pH 1,6 non modifica significativamente la quantità di renina HMW La renina HMW attacca la proteina substrato per produrre angiotensina a circa un quarto della velocità prevista, in base alla velocità con cui scinde il substrato tetradecapeptide o un substrato modello non apeptidico. rum a renina di rene di maiale preparata nei cani. È meno stabile della renina di maiale se conservata a 0 gradi C. La renina HMW ha un pH ottimale tra 6,5 e 7,0. Non viene attivato dall'acidificazione a pH 3, né dalla digestione triptica o peptica. Non siamo stati in grado di attivare la renina HMW o di modificarne il peso molecolare mediante procedure riportate da altri ricercatori e pertanto concludiamo che la renina HMW differisce dal materiale precedentemente riportato e potrebbe essere un isoenzima della renina.
Base cellulare per una maggiore sensibilità della muscolatura liscia vascolare in ratti spontaneamente ipertesi.Vi sono prove che l'ipersensibilità della muscolatura vascolare ai neurotrasmettitori contribuisce allo sviluppo di Il confronto delle arterie caudali di ratti spontaneamente ipertesi (SHR) e dei loro ratti normotesi di controllo Kyoto-Wistar (KNR) geneticamente correlati ha mostrato che sebbene non vi sia alcuna differenza nel potenziale di membrana in condizioni non stimolate, una maggiore depolarizzazione delle cellule muscolari vascolari SHR da parte la noradrenalina si verifica a concentrazioni che causano una maggiore contrazione. Il meccanismo per l'aumento della depolarizzazione e il conseguente aumento della contrazione sembra essere una minore attività intracellulare dello ione potassio nelle cellule muscolari vascolari SHR, che si traduce in un minor contributo del gradiente di potassio al potenziale di membrana. determinare la sensibilità dei vasi onfalomesenterici isolati e dispersi del pulcino le cellule muscolari ai neurotrasmettitori hanno mostrato soglie notevolmente basse per i neutrotrasmettitori noradrenalina, serotonina e acetilcolina, ma non il cloruro di potassio. L'elevata sensibilità delle cellule isolate ai neurotrasmettitori suggerisce che i fattori nel vaso intatto possono causare soglie elevate, il che potrebbe implicare che alterazioni in un meccanismo neurotrofico potrebbero essere responsabili di cambiamenti nella sensibilità muscolare vascolare in situ.
Meccanismi adrenergici spinali che regolano il deflusso simpatico ai vasi sanguigni.È stato esaminato il ruolo delle fibre discendenti contenenti catecolamine spinali (CA) nella regolazione cardiovascolare. Monoamine -Le fibre contenenti CA sono state visualizzate mediante metodi istochimici a fluorescenza ai segmenti spinali cervicali, toracici e lombari. Due gruppi principali di assoni discendenti contenenti CA erano situati nel funicolo laterale a livello spinale mediocervicale. Ai segmenti spinali toracolombari contenenti CA terminali erano concentrate principalmente intorno alle cellule del nucleo intermediolaterale. Inoltre è stato osservato un distinto fascicolo contenente CA a livello del nucleo simpatico che sembrava dirigersi verso il sito opposto del cordone. Per valutare il ruolo delle fibre efferenti contenenti CA , i cambiamenti nella frequenza cardiaca, la pressione arteriosa, il flusso sanguigno femorale e la resistenza vascolare di picco calcolata sono stati suscitati dalla stimolazione elettrica di siti selezionati nel midollo spinale mediocervicale. Sebbene i cambiamenti nel flusso femorale e nella pressione arteriosa siano stati evocati da molti siti midcervicali, c'era una correlazione distinta tra l'entità dell'elevazione di picco della resistenza femorale e la densità degli assoni contenenti CA attivati. Inoltre, il deflusso efferente del vasocostrittore spinale agli arti posteriori attraversa il livello cervicale. Questa osservazione è in buon accordo con gli studi di microscopia a fluorescenza che rivelano fibre contenenti CA che sembrano decussare. Sono stati inoltre intrapresi studi farmacologici per valutare la trasmissione nelle vie dei vasopressori spinali. In questi studi gli antagonisti e gli agonisti dei recettori alfa-adrenergici sono stati perfusi nello spazio subaracnoideo spinale. La frequenza cardiaca, la pressione arteriosa, il flusso femorale e le risposte di resistenza femorale suscitate dalle vie spinali efferenti sono state significativamente attenuate in seguito alla superfusione del midollo spinale con gli alfa-antagonisti BE-2254 (HEAT) e la fentolamina. È stato dimostrato che l'inibizione delle risposte evocate centralmente era dovuta alle azioni degli alfa-antagonisti in un locus spinale e non al blocco dei recettori alfa vascolari periferici. La perfusione spinale con l'agonista del recettore alfa noradrenalina ha potenziato le risposte cardiovascolari. Allo stesso modo, il caricamento con il precursore della noradrenalina 3,4-diidrossi-L-fenilalanina (L-dopa) ha potenziato le risposte vasocostrittrici evocate nell'arto posteriore perfuso in modo incrociato di gatti pretrattati con p-clorofenilalanina. Queste osservazioni supportano l'idea che le fibre bulbospinali contenenti CA trasmettano impulsi eccitatori ai neuroni vasocostrittori pregangliari e che l'attivazione del recettore alfa-adrenergico spinale sia necessaria per la trasmissione di queste informazioni.
Controllo della permeabilità ionica nel cuore normale e ischemico.Sono descritte le principali conduttanze ioniche alla base dell'attività elettrica nei tessuti cardiaci. La partecipazione del trasporto attivo elettrogenico nel fenomeno elettrico e l'influenza dell'inibizione metabolica sui potenziali d'azione cardiaci sono brevemente riassunti. Sono descritti alcuni effetti elettrofisiologici del lattato e dell'acidosi, come quelli che potrebbero essere indotti dall'ischemia. Nelle fibre di Purkinje del cane, il lattato (20 mM pH 7.0) può indurre periodi transitori di aritmie L'acidosi riduce la rapida conduttanza del sodio, la lenta conduttanza calcio-sodio e le rettifiche anomale e ritardate nelle fibre atriali di rana L'acidosi indotta da CO2 (20% CO2, pH 6,6) può alterare la fase di ripolarizzazione del potenziale d'azione nel cane Fibre di Purkinje, presumibilmente perché diminuisce la conduttanza del potassio. Le alterazioni consistono in depolarizzazioni parziali (gobbe) che provocano la rieccitazione delle fibre e portano a un ma depolarizzazione persistente. Si propone che l'acidosi induca una diminuzione della conduttanza del potassio che può essere responsabile di focolai ectopici che causano aritmie durante l'ischemia.
Rasodilatazione cutanea e muscolare nell'arto posteriore canino evocata dalla stimolazione centrale.Utilizzando procedure stereotassiche, abbiamo stimolato elettricamente siti specifici nell'ipotalamo e nel mesencefalo di pazienti anestetizzati cani pretrattati con guanetidina e atropina metonitrato. È stato identificato un tratto in cui la stimolazione ha causato risposte dilatatori non colinergici negli arti posteriori. Il corso di questo tracciato era diverso da quello che subisce vasodilatazione colinergica nella muscolatura degli arti posteriori. In una serie di esperimenti abbiamo studiato la distribuzione proporzionale del flusso sanguigno alla gamba e alla zampa. Le risposte limitate alla zampa sono state considerate come avvenute principalmente nei vasi cutanei; quelle limitate alla gamba sono state considerate come avvenute principalmente nei vasi muscolari scheletrici. Alcune risposte dilatatorie in entrambi i letti sono state abolite per via intra-arteriosa somministrazione di antistaminici: altre risposte dilatatorie sono state abolite da iniezioni intra-arteriose di antagonisti della dopamina. La dilatazione evocata centralmente dei vasi delle gambe e delle zampe da parte di vie non colinergiche suggerisce ruoli fisiologici per queste fibre nella regolazione della funzione cardiovascolare.
Effetti dell'ischemia regionale sul metabolismo del glucosio e degli acidi grassi. Tassi relativi di produzione di energia aerobica e anaerobica durante l'infarto del miocardio e confronto con gli effetti dell'anossia.La velocità del flusso coronarico che raggiunge il cuore ossigenato sembra essere cruciale nel determinare la risposta metabolica del tessuto miocardico. La risposta metabolica del tessuto all'anossia, ben studiata nei cuori perfusi con mezzi anossici, differisce in molti modi importanti dalla risposta all'ischemia Nell'ischemia regionale (infarto in via di sviluppo) c'è ancora un assorbimento residuo di ossigeno che è ridotto all'incirca nella stessa misura dell'erogazione di O2, vi è anche una diminuzione dell'erogazione di substrati e una diminuita rimozione di CO2, H+ e lattato, con concentrazioni aumentate di questi metaboliti Il contenuto di esoso monofosfati aumenta invece di diminuire nell'anossia Le misurazioni degli intermedi glicolitici mostrano un'esplosione iniziale del flusso glicolitico accelerato che dura meno di 1 minuto dopo la legatura dell'arteria coronaria; successivamente le velocità di flusso diminuiscono per controllare i valori o anche meno a 120 minuti. L'inibizione relativa dell'attività della fosfofruttochinasi (PFK) può essere spiegata da una lenta velocità di caduta dell'ATP e da un'acidosi intracellulare in via di sviluppo. In questo modello, il glucosio rappresenta una parte maggiore del metabolismo ossidativo residuo rispetto agli acidi grassi liberi (FFA).
Evidenza di un recettore alfa-adrenergico renale che inibisce il rilascio di renina.Il meccanismo mediante il quale la clonidina sopprime il rilascio di renina è stato studiato in ratti coscienti. Questa soppressione è stata studiata mediante interventi autonomici selezionati in concomitanza con i cambiamenti nell'equilibrio del sodio. L'attività della renina sierica e la pressione arteriosa diretta sono state monitorate. La somministrazione di clonidina ha soppresso il sistema nervoso basale (del 68-85%), indotto dai diuretici (dell'89%) e simpatico -mediata (dal 75-100%) rilascio di renina. Il blocco neuronale simpatico colinergico, gangliare e periferico non ha impedito questo effetto inibitorio della clonidina. Questi risultati indicano un sito d'azione periferico per la soppressione del rilascio di renina da parte della clonidina. Gli alfa-adrenergici il farmaco bloccante la fentolamina ha impedito la soppressione della clonidina del rilascio di renina nei ratti impoveriti di sodio ed è stata parzialmente efficace nei ratti normali. La fentolamina ha bloccato la diminuzione della renina causata dalla clonidina nel ganglio ratti n-bloccati. La clozapina, un nuovo agente neurolettico con attività di blocco alfa-adrenergico, o la fenossibenzamina, hanno bloccato l'effetto della clonidina sul rilascio di renina sia nei ratti depleti di sodio che in quelli normali. Dopo il blocco gangliare nei ratti impoveriti di sodio, la clonidina ha causato una soppressione significativamente maggiore del rilascio di renina rispetto a una dose equipressor di metoxamina. Questi dati, combinati con i correlati emodinamici, suggeriscono che la clonidina inibisce il rilascio di renina mediante l'attivazione di un recettore alfa-adrenergico intrarenale.
[Svantaggi della precipitazione acida delle proteine durante il dosaggio della glicemia da parte del sistema enzimatico glucosio ossidasi-perossidasi].Nella procedura enzimatica per il sangue zucchero mediante glucosio ossidasi, precipitazione proteica acida del sangue mediante acido perclorico o sostanze ossidanti liberate acido tricloroacetico, che aumentavano la densità di colorazione nell'ossidazione del cromogeno ridotto della miscela di reazione, indipendentemente dal perossido di idrogeno generato dal glucosio, e darebbero false valori elevati di glicemia, se non fossero state prese ulteriori precauzioni. Queste sostanze, aumentando notevolmente con i tempi e la temperatura di conservazione del sangue, sarebbero di natura perossidica, e si accumulerebbero nei globuli rossi durante la loro esposizione all'aria.
Attività antitumorale dell'equinatossina.L'equinatossina, una proteina altamente basica estratta da Actinia equina, provoca un aumento del tempo di sopravvivenza dei topi portatori della forma ascitica di carcinoma di Ehrlich, mentre non ha effetto sulla leucemia L1210. Quando testato per la citotossicità in vitro con il test di esclusione del colorante, mostra una potente attività su entrambe le linee cellulari tumorali, con ED50 di pochi ng/ml. lisi delle cellule. Gli effetti citotossici dell'equinatossina sono inibiti dai fosfolipidi, suggerendo così che il suo meccanismo d'azione può essere correlato alle interazioni con i lipidi o altri componenti carichi della membrana cellulare. La mancanza osservata di attività in vivo contro la leucemia L1210 è presumibilmente dovuta a scarso assorbimento sistemico della proteina e/o neutralizzazione da parte di fattori sierici.
Attività della xilanasi (emicellulasi) nel fluido ruminale privo di cellule.È stato dimostrato che esiste attività di emicellulasi (xilanasi) nei filtrati privi di cellule di liquor ruminale. Questa attività cambia durante il ciclo di alimentazione. Sono stati trovati il pH e la temperatura ottimali per questa attività, così come i rapporti substrato-enzima. Molti reagenti, in particolare ioni di metalli pesanti e fenoli, inibiscono l'attività, ma il l'attività è potenziata da agenti riducenti Non è stata trovata alcuna attività verso monosaccaridi, disaccaridi o glicosidi Il componente xilanasi non era stabile, a causa degli enzimi proteolitici nel liquore ruminale, ma potrebbe essere purificato con una varietà di metodi per dare enzimi più stabili.
Metabolismo dell'aflatossina B1 in aflatossicolo e derivati letali per Bacillus subtilis GSY 1057 da parte del fegato della trota iridea (Salmo gairdneri).Aflatossicolo, R0, è stato isolato da Trota iridea del ceppo di Mt. Shasta (Salmo gairdneri) e omogenati di fegato sono stati incubati con aflatossina B1 La sua identità è stata confermata mediante spettrometria di massa, infrarossa e ultravioletta. La struttura era identica a uno dei diastereomeri preparati mediante riduzione chimica dell'aflatossina B1. Apparentemente aflatossicolo era formato da un ridotto enzima solubile nicotinammide adenina dinucleotide fosfato-dipendente del supernatante 105.000 xg della trota iridea. Aflatossicolo non era letale nel tampone fosfato per Bacillus subtilis GSY 1057 (metB4, hisA1, uvr-1) né lo erano le aflatossine B1, Q1 e B2 In presenza di ridotta nicotinammide adenina dinucleotide fosfato e microsomi di fegato di trota, l'aflatossicolo ha ridotto la vitalità di B. subtilis L'aflatossina B2, che manca dell'etere vinilico presente nel altri composti, non possono essere attivati. Il prodotto dell'attivazione dell'aflatossina B1 da parte dei microsomi del fegato di trota è stato ricercato dopo l'incubazione dell'aflatossina B1 marcata con 14C. La radioattività è stata trovata nell'aflatossina B1 inalterata e in tre metaboliti estremamente polari. La quantità dei nuovi metaboliti e il livello di letalità microbica sono stati ridotti mediante l'aggiunta di citosina e cisteina al mezzo di incubazione. La configurazione dell'etere vinilico era un requisito strutturale per l'attivazione e questa scoperta e la natura della reazione enzimatica erano coerenti con l'ipotesi che i composti fossero metabolizzati in prodotti elettrofili altamente reattivi e instabili che si legavano a nucleofili come la citosina ed erano letali per B. subtile. La formazione di aflatossicolo come principale prodotto del metabolismo epatico delle trote è di grande importanza considerando che potrebbe essere attivato a un composto letale e che la trota iridea è una delle specie più sensibili al carcinoma indotto dall'aflatossina B1.
Resistenza intrinseca al metotrexato di cellule di mammifero coltivate in relazione alla cinetica di inibizione delle loro diidrololato reduttasi.Quattro linee cellulari di mammifero coltivate, che differiscono per resistenza intrinseca al metotrexato su un intervallo di 70 volte, sono stati confrontati rispetto a diversi fattori biochimici che potrebbero influenzare la risposta al farmaco L'attività cellulare degli enzimi diidrofolato reduttasi e timidilato sintetasi e i livelli totali di cofattori folati non variavano di più di un fattore di 2 tra le linee cellulari. Tutti i tipi di cellule sono stati in grado di trasportare il metotrexato extracellulare in modo efficiente attraverso la membrana cellulare e a velocità comparabili. Uno studio cinetico delle diidrofolato reduttasi altamente purificate dalle quattro fonti ha rivelato piccole differenze nei valori di Km per il diidrofolato e ridotto nicotinammide adenina dinucleotide fosfato. È stato condotto uno studio sull'inibizione delle quattro diidrofolato reduttasi da parte del metotrexato, un I valori di Ki sono stati ottenuti adattando l'equazione della Zona B di Goldstein (Goldstein, A. , J. Gen. Physiol. , 27: 529-580, 1944) ai dati risultanti. I valori Ki determinati con questo metodo erano correlati alla resistenza intrinseca delle linee cellulari e mostravano un intervallo di 25 volte dalla linea più sensibile a quella più resistente. Si conclude che la risposta di una cellula al metotrexato è significativamente influenzata dalla costante di dissociazione del suo complesso diidrofolato reduttasi-metotrexato.
L'attivazione metabolica del cancerogeno 1\'-idrossisafrolo in vivo e in vitro e le reattività elettrofile di possibili cancerogeni finali.Somministrazione di [2 \',3\'-3H]-1\'-idrossisafrolo a ratti o topi ha provocato la formazione di DNA epatico, RNA ribosomiale e derivati 3H legati alle proteine. La digestione alcalina della proteina 3H rilasciata da 0,1 a 0,3 % del 3H come un derivato identificato come 3\'-metilmercaptoisosafrolo mediante la sua cocromatografia in cinque sistemi solventi con il composto sintetico. 1\'-idrossisafrolo è stato metabolizzato a bassa velocità dai citosol epatici di ratto e topo in un 3\' -fosfoadenosina 5\'-fosfosolfato-dipendente reazione a un derivato (presumibilmente l'estere dell'acido solforico) che è stato catturato dalla sua reazione con l'RNA Allo stesso modo, 1\'-idrossisafrolo è stato ossidato a bassa velocità da microsomi di fegato di ratto e topo a 1 \'-idrossisafrolo-2\',3\'-ossido in un ridotto nicotinami reazione de adenina dinucleotide fosfato-dipendente. Entrambi questi metaboliti elettrofili sono candidati cancerogeni definitivi derivati dell'1\'-idrossisafrolo. Le reattività elettrofile di vari derivati del safrolo con nucleosidi sono state determinate nell'ordine di 1\'-ossosafrolo maggiore di 1\'-acetossisafrolo maggiore di 1\'-acetossisafrolo-2\',3\'-ossido maggiore di 1\ '-idrossisafrolo-2\',3\'-ossido maggiore di safrolo-2\',3\'-ossido maggiore o uguale a 1\'-ossosafrolo-2\',3\'-ossido. Le principali reazioni sono state generalmente osservate con la guanosina. Un importante prodotto di reazione di 1\'-acetossisafrolo e guanosina 5\'-monofosfato ha prodotto 3\'-idrossiisosafrolo in condizioni acide molto blande. Questi dati confermano ulteriormente la precedente caratterizzazione di questo prodotto di reazione come acido O-6-(isosafrol-3\'-il)guanilico. Le sintesi di 1\'-oxosafrolo, 2\',3\'-deidrosafrolo, [2\',3\'-3H]-1\'-idrossisafrolo e 2\',3\'-oxed.
Alcune proprietà dell'acetilcolinesterasi dalla retina di ratto.Acetilcolinesterasi (AChE, EC 3.1.1.7) della retina di ratto è stata studiata rispetto alla sua cinetica e altri proprietà, ed è stato effettuato un confronto con l'enzima del cervello. La distribuzione subcellulare dell'AChE retinico ha mostrato che l'enzima era concentrato nella frazione sinaptosomiale-mitocondriale sebbene nel cervello l'AChE fosse distribuito in modo più uniforme tra le frazioni studiate. sia la retina che il cervello sono stati facilmente solubilizzati e hanno mostrato un Km dell'ordine di 10(-4) M. Il pH ottimale era 8,3-8,6 per l'AChE da entrambi i tessuti sia per l'enzima solubile che per quello particolato.
Proteasi acide da specie di Mucor. IV. Scambio idrogeno-trizio della proteasi Mucor miehei.La cinetica dello scambio idrogeno-trizio è stata studiata nel range pH-3 sia per la proteina completamente e parzialmente triziata. Sono state determinate le costanti di scambio per una classe intermedia e una classe lenta di idrogeni e si è scoperto che forniscono una curva parabolica caratteristica della catalisi acida e basica intorno al pHmin osservato di 4,03. Il ritardo anomalo della velocità sulla porzione acida della curva è stata attribuita alle interazioni elettrostatiche che potrebbero essere valutate quantitativamente dai dati di titolazione. Esperimenti di tritazione parziale e di cross-over del pH hanno indicato che l'ordine dei ranghi era indipendente dal pH, eliminando così la possibilità di un importante cambiamento conformazionale. , i dati sono molto probabilmente spiegabili in termini di accessibilità limitata ai solventi.
La distribuzione subcellulare e le proprietà delle idrolasi di Crithidia sp. con particolare riferimento alle fosfoidrolasi pirofosfato e ortofosfato monoestere.È stato sviluppato uno schema di frazionamento cellulare per studiare la distribuzione di alcune idrolasi, in particolare fosfoidrolasi in una specie di Crithidia (Trypanosomatidae). Mentre tra il 26-56% delle attività idrolasi cellulari totali erano solubili (probabilmente di origine della tasca flagellare), una certa percentuale, 5-40%, era sedimentabile. Una frazione particellare ottenuta dopo centrifugazione in gradiente di densità isopicnica (p = 1,187-1,241), denominata frazione FA/FB, è stata arricchita in varie idrolasi acide (attività specifiche relative 1,33-6,24) e ha mostrato attività fosfoidrolasi latenti. Le distribuzioni del gradiente di densità di questo gli enzimi idrolitici sono stati confrontati tra loro e la malato deidrogenasi (marker mitocondriale) Dai risultati ottenuti risulta che il sedimentab le idrolasi acide di Crithidia sono associate ad una popolazione eterogenea di particelle subcellulari. Le osservazioni citochimiche sulla frazione FA/FB hanno confermato questa scoperta e hanno rivelato l'associazione del prodotto della reazione della fosfatasi acida con elementi subcellulari che assomigliano a corpi multivescicolari.
Studio della sostanza antistaminica naturale nella bile nei mammiferi.È stata studiata una sostanza antistaminica naturale (NAS) presente nella bile. È stata hanno scoperto che l'attività antistaminica non era dovuta a proteine, lipidi, pigmenti o amminoacidi. Nella cromatografia a scambio ionico e nella cromatografia su strato sottile, questa attività era associata agli acidi biliari. Molti acidi biliari potrebbero, in vari gradi, inibire questa istamina indotta contrazione dell'ileo di cavia, l'acido desossicolico è il più potente. Tuttavia l'attività del NAS potrebbe essere separata dagli acidi biliari e dai loro coniugati utilizzando un diverso sistema solvente. Inoltre, il NAS ha mostrato una maggiore attività antistaminica rispetto agli acidi biliari. Questa sostanza sembra essere responsabile di 15 -20% dell'attività della bile intera. La sostanza non è stata ancora identificata.
Proprietà della cisteina sulfinato decarbossilasi solubile e particolato dell'adulto e del cervello di ratto in via di sviluppo.Sono state studiate alcune proprietà dell'attività della cisteina sulfinato decarbossilasi (CSD) nel pellet e nel surnatante di una centrifugazione di 18.000 X g di omogeneizzati di cervello di ratto di saccarosio isotonico Circa il 50% dell'attività enzimatica è stata trovata associata alla frazione particolata e il 16% dell'attività è rimasta legata alle particelle dopo shock ipo-osmotico del 18.000 X g pellet. L'attività del surnatante 18.000 X g ha mostrato una minore dipendenza dal piridossalfosfato esogeno (PLP) rispetto all'attività nella frazione particolato. L'attività CSD di queste frazioni differiva anche nel pH ottimale e nelle costanti cinetiche apparenti. L'enzima associato alle particelle ha mostrato il Vmax più alto e il Km più basso L'attività e le caratteristiche cinetiche del CSD sono state studiate durante lo sviluppo postnatale del cervello Nel cervello del neonato solo una piccola quantità dell'enzima l'attività è stata trovata associata al pellet da 18.000 X g. La CSD negli omogenati cerebrali di ratti immaturi era meno dipendente dal PLP libero e mostrava un Km più alto e un Vmax più basso rispetto all'enzima nel cervello adulto. Tra la nascita e l'età adulta l'attività enzimatica è aumentata di oltre 10 volte nella frazione particolato e di 2 volte nella frazione solubile. Si conclude che le differenze osservate nell'attività della CSD tra il cervello del neonato e quello dell'adulto sono dovute ad un aumento della forma particellare dell'enzima durante lo sviluppo postnatale.
Un confronto quantitativo della formazione di sinapsi nel ganglio simpatico cervicale superiore di ratto da parte sua e da fibre nervose estranee.Il simpatico cervicale superiore di ratto ganglio (SCG) ha circa 36.000 neuroni in un volume di circa 1 mm cubi Ci sono circa 8,8 X 10 (6) sinapsi e 6000-9000 assoni pregangliari La sezione della catena pregangliare provoca una perdita del 93% delle sinapsi Nell'SCG denervato sono rimaste 0,6 X 10(6) sinapsi (\'intrinsic\') e una parte dei siti sinaptici è identificabile come ispessimenti sinaptici vuoti (3 X 10(6) per SCG, rispetto a 0,5 X 10(6) nel normale SCG intatto). Dopo aver dedotto le sinapsi intrinseche, questo indica che ogni assone pregangliare forma circa 1100 (900-1400) sinapsi. Dopo aver congelato la catena pregangliare, la successiva rigenerazione assonale ripristina il numero di sinapsi all'85% del normale (7,5 X 10(6) sinapsi per SCG). Dopo riparazione anastomotica mediante sutura del cu t estremità della catena pregangliare (un controllo necessario per le anastomosi del nervo estraneo), l'SCG contiene solo il 60% del normale complemento di sinapsi (5,2 X 10(6) sinapsi per SCG). I risultati di questa anastomosi sono molto variabili. Tuttavia, nei singoli gangli il numero di sinapsi è direttamente correlato al numero di assoni che raggiungono l'SCG. Dopo aver dedotto le sinapsi intrinseche si può calcolare che ogni assone forma circa 700 sinapsi. Questa è probabilmente una sottostima dei numeri che si otterrebbero con tempi di sopravvivenza più lunghi. Dopo l'anastomosi del nervo vagale nell'SCG denervato ci sono circa 4,4 X 10(6) sinapsi per SCG. Morfologicamente la maggior parte ha terminali assoni con grandi vescicole a nucleo denso, ed è probabile che questi appartengano agli assoni dei neuroni pregangliari parasimpatici nel nucleo motore dorsale del vago. Una popolazione più piccola di terminali assoni è priva di grandi vescicole con nucleo denso; la loro origine è sconosciuta. Il nucleo motore dorsale del vago ha tra 1000 e 2000 neuroni. Dopo aver dedotto le sinapsi intrinseche, questo indica che ogni assone può formare fino a 1900-3800 sinapsi. Nella misura in cui anche altre fibre vagali non identificate contribuiscono alle sinapsi trovate dopo questa anastomosi, questa cifra è una sopravvalutazione. Dopo l'anastomosi del nervo ipoglosso nell'SCG denervato, ci sono 1,5 X 10(6) sinapsi per SCG. Viene trovato un tipo morfologicamente distintivo di terminale assonale e si sostiene che questo possa appartenere a una categoria speciale di neuroni scheletromotori situati nella parte caudoventrale del nucleo ipoglosso e distinti dalla colorazione con pseudocolinesterasi. Ci sono circa 600 di questi neuroni, il che indicherebbe che formano circa 1500 sinapsi per assone (dopo aver dedotto il numero di sinapsi intrinseche). La maggior parte dei neuroni ipoglossi non forma sinapsi intragangliari; ciò suggerisce che sebbene il possesso di un meccanismo colinergico possa essere necessario affinché gli assoni siano in grado di formare sinapsi gangliari, non è di per sé sufficiente. Per ciascuno dei tipi di anastomosi, il numero di addensamenti vacante è inversamente proporzionale al numero di sinapsi...
Gli effetti di presunti neurotrasmettitori sul potenziale di membrana a riposo dei neuroni cerebrali dissociati in coltura.Le colture stabilite da cervelli di topi neonatali dissociati meccanicamente sono risultati essere adatto per lo studio elettrofisiologico dell'azione dei farmaci. Durante la coltura la maggior parte delle cellule sono state aggregate in regioni monostrato o spesse corde che uniscono regioni monostrato. Alcune cellule sono rimaste isolate. I neuroni nelle regioni monostrato sono stati distinti dalle cellule gliali mediante colorazione differenziale e sono stati trovati essere il miglior soggetto per la registrazione intracellulare. La frequenza dei potenziali di membrana a riposo di queste cellule si è rivelata riproducibile in colture della stessa età, ed è stato un utile indice di sensibilità ai farmaci applicati al bagno. Acetilcolina, dopamina, istamina, serotonina e noradrenalina hanno depolarizzato vari neuroni; GABA ha causato iperpolarizzazione, mentre glutammato e glicina non hanno avuto effetti significativi. Antagonismo della risposta s ad acetilcolina, dopamina, serotonina e GABA è stato osservato utilizzando rispettivamente atropina, pimozide, metisergide e bicucullina. Si conclude che i neuroni cerebrali dissociati in coltura mostrano chemiosensibilità e possono essere utili in ulteriori studi farmacologici.
Effetti dell'assotomia sulla regolazione transsinaptica dell'attività enzimatica nei gangli cervicali superiori di ratto adulto.Gli effetti della resezione chirurgica del tronco nervoso postgangliare del ganglio cervicale superiore sul contenuto proteico totale e sui livelli degli enzimi tirosina idrossilasi, DOPA decarbossilasi e colina acetiltransferasi sono stati studiati nel ratto adulto Si riscontra una lieve diminuzione delle attività totali di questi 3 enzimi accompagnata da un forte aumento della il contenuto proteico totale del ganglio L'induzione transsinaptica dell'enzima tirosina idrossilasi da parte della reserpina non è influenzata dall'assotomia postgangliare L'aumento dell'attività mediata dalla reserpina non ha causato alcun cambiamento nelle attività totali della DOPA decarbossilasi o della colina acetiltransferasi Effetti osservati in precedenza dell'assotomia postgangliare sulla prevenzione della trasmissione attraverso il ganglio vengono confrontati con questi risultati e i possibili meccanismi con cui trans-s l'induzione ynaptica può verificarsi.
Studi sulla natura chimica della chemiluminescenza urinaria.Sono stati condotti studi sulla natura delle sostanze chimiche responsabili della chemiluminescenza urinaria. La chemiluminescenza urinaria può essere aumentata leggermente dalla solfatasi, più dalla glucuronidasi ma soprattutto facendo bollire per 1 ora a pH 1. Si suggerisce che la maggior parte delle sostanze chimiche responsabili della chemiluminescenza urinaria siano legate come precursori non chemiluminescenti al solfato, all'acido glucuronico e in altri modi. Sia il materiale chemiluminescente che i precursori inattivi sono liberamente ultrafiltrabili con pesi molecolari inferiori a 500. Un'indagine su varie sostanze chimiche ha rivelato una notevole chemiluminescenza in alcuni metaboliti delle naftilamine e noti per causare il cancro della vescica, ma poca o nessuna chemioluminescenza nei metaboliti del triptofano che si pensava causare il cancro alla vescica.
Un metodo per la stima di acetanilide, paracetamolo e fenacetina nel plasma e nelle urine mediante frammentazione di massa.La fenacetina, il paracetamolo e l'acetanilide possono essere determinati in un campione di plasma o di urina mediante l'uso di analoghi marcati con deuterio. Questi sono prodotti dalla reazione dell'anidride esadeuterioacetica con l'ammina aromatica appropriata. Il gruppo -NHCOCD3 è stabile allo scambio di idrogeno al di sotto di pH 8. Lo standard interno viene aggiunto al plasma o alle urine dopo L'idrolisi enzimatica dei coniugati con paracetamolo e un estratto di acetato di etile a pH 5 viene evaporato sotto azoto e il residuo derivatizzato con N,O-bis-(trimetilsilil)-acetammide, un'aliquota di questa soluzione viene iniettata in un sistema gcms e uno ione caratteristica del materiale in esame e lo ione dell'analogo del deuterio (3 unità di massa maggiori) vengono monitorati mediante una tecnica di commutazione di tensione. Nel caso della fenacetina, ad esempio, vengono monitorati gli ioni a 251 e 254. Le curve di calibrazione relativi diversi rapporti in peso dei composti di idrogeno e deuterio al loro rispettivi segnali dello spettrometro di massa gascromatografia vengono utilizzati per calcolare la quantità di un composto in un campione particolare. Questi metodi sono stati sviluppati per studiare l'ossidazione dell'acetanilide a paracetamolo e la de-etilazione della fenacetina a paracetamolo. Verranno discussi i risultati preliminari degli esperimenti con la fenacetina.
Studi sul sistema rame-acetilglicina.Qui vengono riportati studi sul sistema rame-acetilglicina in funzione del pH e del rapporto molare tra il legante e lo ione paramagnetico, applicando tecniche di titolazione potenziometrica, risonanze magnetiche (esr e nmr) e spettrofotometriche. I risultati indicano che a seconda del pH delle soluzioni esistono tre regioni distinte caratterizzate da specie e comportamenti differenti. Nella regione I (pH meno maggiore di 6,5), il rame è legato al gruppo carbossilato della molecola del ligando (il complesso "blu". La precipitazione del rame avviene nella regione II (pH-7). Nella regione III (pH maggiore di 9), in presenza di un eccesso di ligando, il rame si ridiscioglie formando complessi in cui lo ione rame centrale si lega alla molecola peptidica, attraverso gli azoti dei gruppi peptidici deprotonati, e agli ioni ossidrile La sostituzione reciproca dei gruppi peptidici dell'AcGlyGly chelato mediante Oh e si discutono i cambiamenti nelle strutture dei complessi.
Pomerizzazione dell'albumina umana indotta dal rame (II) e sua depolimerizzazione da parte di diglicil-L-istidina: uno studio sul pH statico e ultracentrifugazione.Rame ( II) gli ioni inducono successivamente dimeri e tetrameri dell'albumina sierica umana (L) quando la concentrazione di Cu (II) viene estesa oltre quella di 200 muM. Ciò è dimostrato dalle titolazioni emf e da esperimenti di ultracentrifugazione. Le titolazioni emf, che comportano un nuovo pH statico, sono stati eseguiti a 25 gradi, in un mezzo NaCIO4 0,5 M a pH 6,59, utilizzando elettrodi di amalgama di vetro e rame La concentrazione totale di Cu(II) variava da 0,14 a 2,2 mM e la concentrazione di albumina da 0,05 a 0,7 mM. Al fine di valutare la formula dei principali complessi, senza ricorrere ad ipotesi a priori circa la loro composizione, è stata utilizzata una dettagliata procedura grafica I risultati, sotto forma di costanti di equilibrio per le specie principali, sono stati affinati mediante l'utilizzo di un programma per computer dei minimi quadrati i dati rimentali sono risultati coerenti con la formazione delle specie monomeriche CuL, Cu5L e Cu6L e delle specie dimeriche Cu3L2, Cu4L, Cu6L e Cu8L2. Inoltre, c'è qualche indicazione per una specie minore, molto probabilmente il tetramero Cu12L4. I risultati del pH statico concordano qualitativamente con i risultati ottenuti dall'ultracentrifugazione. Come indicato da bande distinte e dai loro valori S, gli esperimenti di ultracentrifugazione mostrano non solo specie monomeriche e dimeriche di albumina, ma anche specie tetrameriche. La polimerizzazione dell'albumina è reversibile, poiché la diglicil-L-istidina, un peptide progettato per imitare il sito di trasporto del Cu (II) dell'albumina, depolimerizza i polimeri dell'albumina Cu (II).
Sonde magnetiche e spettroscopiche per legami FeOFe in sistemi emine.Proprietà magnetiche e spettroscopiche di mu-oxo-bis-emine da porfirine naturali e strutturalmente correlate sono state studiate come sonde per accertare la presenza o l'assenza di legami FeIII-O-FeIII tra porzioni di emine di emeproteine Sono state studiate suscettibilità magnetiche di solidi da 2,2 a 293 gradi K. I dati si adattano alle variazioni di temperatura previste per una coppia di S accoppiati antiferromagneticamente = 5/2, porfirine di ferro (III) con valori J di 175, 190, 195, 205 e 210 gradi K per deuteroemine con idrogeno, vinile, 2\'-etossicarbonilciclopropile, acetile, propionile ed etile 2,4- sostituenti, rispettivamente. Questo carattere magnetico si riflette negli spettri PMR che mostrano risonanze con molto meno ampliamento e spostamento paramagnetico rispetto al caso delle emine monomeriche ad alto spin. Solo le impurità si vedono negli spettri EPR, che servono efficacemente nel monitor la purezza magnetica dei preparati. Una frequenza di allungamento asimmetrico attivo infrarosso caratteristica del legame FeOFe può essere identificata sostituendo 160 per 180. Gli spettri elettronici sono altamente caratteristici con bande di assorbimento scarsamente risolte. I sostituenti sull'anello porfirinico esercitano effetti elettronici e sterici significativi, ma di solito non grandi, su queste proprietà. Gli effetti del solvente erano relativamente piccoli e non è stata trovata alcuna prova certa del legame dei ligandi trans all'ossigeno a ponte. L'unicità di queste proprietà fisiche e la loro bassa sensibilità ai cambiamenti nella struttura della porfirina o nel mezzo facilita l'identificazione del legame mu-oxo nelle emine o nelle emeproteine ossidate.
Controllo della formazione di ribonucleasi extracellulare in Neurospora crassa.È stato scoperto che una specie di ribonucleasi viene rilasciata nei terreni di coltura miceliali quando un animale selvatico -tipo ceppo di Neurospora crassa è stato coltivato su quantità limitanti di fosfato. L'attività della ribonucleasi nello stato completamente derepresso si estende a circa 60-100 volte di quella nello stato represso. La sintesi della ribonucleasi è stata inibita dall'aggiunta di rifampicina, cicloesimide o ortofosfato. Sono state trovate tre specie molecolari della ribonucleasi. Due frazioni enzimatiche che mostrano pesi molecolari maggiori sono state sospettate di essere aggregati contenenti l'enzima che mostra il peso molecolare più piccolo (peso molecolare di 10 300). Tutte e tre le frazioni hanno mostrato un pH ottimale di circa 7, idrolisi preferenziale dell'acido poliguanilico e scarsa idrolisi della guanosina 2\',3\',-monofosfato ciclico Queste caratteristiche erano le stesse della ribonucleasi N1, ed era suggerito che la ribonucleasi N1 è un enzima extracellulare reprimibile. Le mutazioni nei geni nuc-1 e nuc-2 hanno causato la perdita della capacità di deprimere questo enzima, ma l'eterocaryon tra di loro ha parzialmente ripristinato la capacità. La mutazione nuc-1 era epistatica agli alleli nuc-2 che sono in parte costitutivi nella produzione di ribonucleasi.
L'effetto delle proteine solubili del fegato di ratto sull'attività della stearoil-CoA microsomiale e della linoleoil-CoA desaturasi.1. L'influenza dell'albumina sierica bovina e proteine solubili del fegato di ratto sull'attività delle desaturasi microsomiali delta9 e delta6 del fegato di ratto 2. In assenza di albumina sierica bovina, la delta9 desaturasi che converte lo stearoil-CoA in oleoil-CoA, mostra una correlazione non lineare tra attività enzimatica e concentrazione proteica 3. Le concentrazioni ottimali di albumina sierica bovina hanno tre effetti principali sull'attività enzimatica: (i) stabilisce una relazione lineare tra attività enzimatica e concentrazione proteica, (ii) stimola l'attività enzimatica 2-3 volte e (iii) aumenta la concentrazione ottimale del substrato da 10 a 100 muM. 4. Una proteina epatica solubile altamente purificata di peso molecolare 24 000 stimolava anche l'attività enzimatica e determinava una relazione lineare tra attività enzimatica e concentrazione proteica zione. 5. Si è concluso che la cinetica non lineare era dovuta a quantità limitate di proteina legante il substrato nelle preparazioni microsomiali. 6. La delta6 desaturasi che converte il linoleoil-CoA in gamma-linolenoil-CoA è stata stimolata anche dall'albumina sierica bovina e dalle proteine epatiche solubili. 7. Viene discusso il significato delle proteine che legano gli acidi grassi.
Idrolisi di gliceridi neutri da parte di lipasi di microsomi di cervello di ratto.L'idrolisi di monoacilglicerolo e diacilglicerolo da parte di microsomi di cervello di ratto è stata seguita misurando il rilascio di glicerolo e monooleilglicerolo da dispersioni di esteri glicerillici insolubili in acqua dell'acido oleico. I microsomi hanno mostrato tre attività lipolitica. Una attività, ottimale a pH 4,8, catalizzava l'idrolisi del diacilglicerolo ma non del monoacilglicerolo. Altre due attività lipolitica,ottimale a pH 8,0-8,6, catalizzavano l'idrolisi sia del diacilglicerolo che del monoacilglicerolo. Le attività a pH 8,0-8,6 erano sensibili al calore e ai reagenti SH. I detergenti erano inibitori in tutti i casi. L'estrazione dei microsomi con KCl, KSCN, urea o Triton X-100 non ha modificato il rapporto dell'idrolisi del diacilglicerolo a pH 4,8 e 8,0. I risultati degli studi di frazionamento subcellulare hanno mostrato che non vi era alcun arricchimento significativo della lipasi acida in nessuna frazione.
Inibizione del fluoro della pirofosfatasi inorganica. I. Studi cinetici in un sistema Mg2+-PPi utilizzando un nuovo dosaggio enzimatico continuo.Inibizione reversibile dei fornai\' la pirofosfatasi inorganica di lievito (EC 3.6.1.1) da fluoruro è stata studiata in funzione del substrato, delle concentrazioni di attivatore e inibitore di ioni metallici e del pH utilizzando un nuovo dosaggio enzimatico continuo con un analizzatore di fosfato automatico. stretto legame del fluoruro da parte di due complessi enzima-substrato cataliticamente attivi La reazione tra pirofosfatasi e fluoruro è relativamente lenta, così che le costanti di velocità per il legame e il rilascio dell'inibitore sono state derivate dalle curve di formazione del fosfato misurate sulla scala temporale dei saggi enzimatici La dipendenza dal pH della reazione di inibizione nel mezzo alcalino indica che sia l'interazione fluoruro-enzima che la fase catalitica della reazione pirofosfatasi sono controllate dallo stesso gruppo sulla proteina. Nel mezzo acido, l'inibizione è notevolmente aumentata, presumibilmente a causa della protonazione di un altro gruppo enzimatico.
Fotocontrollo dell'attività della membrana ureasi-collagene.(1) L'ureasi (EC 3.5.1.5. ) è stata modificata con beta-1-[3, 3-dimetil-6\'-nitrospiro-(indoline-2,2\'-2H-benzopirene)] anidride propionica Tre residui amminoacidici dell'ureasi sono stati modificati dall'anidride ad un rapporto molare di 2000. (2) L'attività di ureasi modificata è stata diminuita con l'irradiazione ultravioletta e quindi ripristinata all'attività iniziale con l'irradiazione di luce visibile (3) L'ureasi modificata è stata utilizzata per preparare una membrana ureasi-collagene La costante di Michaelis apparente (Km) della membrana ureasi-collagene modificata ultravioletta la luce era identica a quella della membrana sotto luce visibile. (4) Il pH ottimale della membrana ureasi-collagene modificata è stato spostato verso valori di pH più bassi con l'irradiazione ultravioletta. A forza ionica più elevata, la curva di attività del pH della membrana è stata spostata verso valori di pH più elevati. (5) La termostabilità dell'ureasi è stata aumentata con la sua modifica.
Preparazione e proprietà enzimatiche della subtilisina Novo attaccata chimicamente al DEAE-destrano solubile e al DEAE-sephadex insolubile.Derivati analoghi solubili e insolubili della subtilisina Novo ( EC 3.4.21.14) sono stati preparati accoppiando l'enzima a DEAE-destrano attivato da CNBr e DEAE-Sephadex, rispettivamente. Il DEAE-destrano-subtilisina ha mostrato valori di pH ottimali e Km per l'idrolisi dell'estere simili alla subtilisina, mentre il pH rispetto ai profili di attività ottenuti con DEAE-Sephadex-subtilisina sono stati spostati verso la regione del pH alcalino e i valori di Km sono stati aumentati. estere, p-tosil-L-arginina metil estere e benzilossicarbonil-glicil-L-tirosinamide e le sue velocità massime per la digestione di caseina e clupeina ammontavano anche al 40-60% dei valori di subtilisina. Con Deae-sephadex-subtilisina, al contrario , la velocità massima di l'idrolisi è diminuita in misura maggiore per i substrati polipeptidici rispetto ai substrati estere. I risultati attuali indicano che la natura chimica di un supporto può influenzare le proprietà intrinseche di un enzima legato alla matrice oltre agli effetti sterici e di diffusione solitamente osservati con gli enzimi legati ai polimeri.
Lievito aminopeptidasi I. Composizione chimica e proprietà catalitiche.Un'aminopeptidasi (alfa-aminoacil L-peptide idrolasi, EC 3.4.11.1) è stata purificata a omogeneità da autolisati di lievito di birra. L'enzima responsabile della maggior parte dell'attività aminopeptidasi delle cellule di lievito è una glicoproteina contenente circa il 12% di carboidrati coniugati e lo 0,02% di Zn2+ e avente una struttura quaternaria complessa. La specie attiva ha una peso molecolare di circa 600000 e punto isoelettrico di 4,7. L'enzima è notevolmente stabile, anche in soluzioni diluite. Tutti i tipi di L-amminoacidi e derivati peptidici contenenti un terminale amminico libero vengono attaccati, comprese le ammidi e gli esteri di amminoacidi. per la sua specificità di substrato, l'enzima appartiene alle cosiddette leucina-aminopeptidasi, è fortemente e specificamente attivato da Zn2+ e Cl- (o Br-) e inattivato da agenti chelanti dei metalli. L'attivazione da parte di Zn2+ sembra essere mediata da una transizione conformazionale che interessa esclusivamente V e porta ad una forma dell'enzima che aumenta la stabilità al calore. Gli anioni alogenuri, d'altra parte, agiscono come effettori allosterici positivi, modulando sia V che Km.
Isolamento e caratterizzazione parziale di una proteasi da Agave americana variegata.Una nuova proteasi è stata isolata da un estratto di foglie di Agave americana variegata. La proteasi (EC 3.4. -) è stato purificato 565 volte con una resa del 39,5%. L'enzima da 43,8 mg aveva un'attività specifica di 0,44 unità/mg. Secondo le caratterizzazioni elettroforetiche, ultracentrifuga e altre caratterizzazioni fisiche l'enzima era omogeneo. L'enzima aveva una MR di 57000, un valore S20,W di 4,37 S, un D20, valore W di 6,8-7,0 - 10(-7) cm2sec-1, un raggio di Stokes di 3,18 nm, un volume specifico parziale di 0,735 cm3g-1 , un rapporto di attrito di 1,25, un indice di assorbimento molecolare a 280 nm di 5,773-10 (4), un punto isoelettrico di 5,25 e conteneva dall'8 al 10% di carboidrati. L'enzima non conteneva cisteina. La proteasi di agave potrebbe idrolizzare una varietà di substrati proteici sebbene avesse una specificità limitata. Non è una sulfidril proteasi ma sembra essere una proteasi "serina" alcalina con un o Il pH ottimale di 7,8-8,0 proteasi di agave aveva una marcata attività esterolitica e con Cbz-Tyr-ONp aveva un'apparente costante di Michaelis di 0,0345 -10(-3) M e un V di 1,24 mol di substrato/mol enzima per sec. L'enzima non aveva bisogno di ioni metallici per un'attività ottimale, i cationi monovalenti non ne influenzavano i parametri cinetici, ma era inibito da cobalto, pC1HgBzO- e TosPheCH2C1. Per quanto riguarda la sua specificità primaria, così come la sua dipendenza dal pH, c'era una somiglianza con la chimotripsina, sebbene il tasso di idrolisi della proteasi di Agave sia molto più basso.