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[Un caso di cancro colorettale metastatico con metastasi cerebrali trattato con terapia combinata TFTD e bevacizumab].Una donna di 70 anni ha confermato di presentare metastasi multiple epatiche e polmonari da carcinoma del colon trasverso. Dopo aver subito la resezione della lesione primaria, è stata ottenuta una risposta parziale (PR) dopo aver subito il primo regime (sLV5FU2 e bevacizumab [Bmab]); pertanto è stata eseguita epatectomia parziale. È stata somministrata chemioterapia adiuvante per 7 mesi, ma sono state confermate recidive di metastasi epatiche, metastasi polmonari multiple e metastasi cerebrali. Poiché la metastasi cerebrale era una singola lesione ed era accompagnata da sintomi, è stata eseguita la resezione della lesione. È stato iniziato il trattamento con regorafenib, ma di grado 3 grave è stato rilevato eritema multiforme e il trattamento ha dovuto essere interrotto. Pertanto, la terapia combinata TFTD e Bmab è stata avviata come terzo regime. Le metastasi epatiche e polmonari sono state mantenute come stabili. e malattia (SD), e il trattamento è stato continuato per circa 1 anno insieme alla radioterapia stereotassica per la lesione metastatica del cervello. L'utilità della terapia combinata TFTD e Bmab è stata riportata in uno studio di fase II ed è stato anche indicato che Bmab è efficace per ridurre l'edema cerebrale. Poiché questo trattamento è stato efficace in questo caso, ne parleremo insieme a una discussione della letteratura.
L'impatto del tipo di pavimento sulla zoppia e sulla salute degli zoccoli dei tori di origine lattiero-casearia.Questo studio mirava a valutare l'effetto dell'uso di diversi tipi di pavimento per adattarsi allevamento e finissaggio di bovini da carne su zoppia. In tutto, 80 tori di origine da latte sono stati bloccati in base al peso vivo e allevati in 20 gruppi, e assegnati casualmente all'interno dei gruppi a uno dei quattro trattamenti. I tipi di pavimento studiati erano completamente fessurati durante l'intera sperimentazione periodo (CS); pavimento completamente fessurato ricoperto da strisce di gomma per tutto il periodo sperimentale (RS); pavimento completamente fessurato durante il periodo di crescita e poi spostato su un pavimento solido ricoperto di lettiera di paglia durante il periodo di finitura (CS-S) e completamente pavimentazione a listelli durante il periodo di crescita e poi si è passati a una pavimentazione completamente a listelli ricoperta da strisce di gomma durante il periodo di finitura (CS-RS). La durata totale dello studio è stata di 204 giorni. I primi 101 giorni sono stati definiti come la crescita p periodo, con il resto dello studio definito come il periodo di finitura. Durante il periodo di crescita, c'era una tendenza per i tori sistemati su CS ad avere un punteggio di locomozione più alto rispetto a quelli ospitati su RS (P=0.059). Tuttavia, il tipo di pavimento non ha avuto effetti significativi sul punteggio di locomozione durante il periodo di finitura. Non c'è stato inoltre alcun effetto significativo del tipo di pavimento sulla dermatite digitale sia durante il periodo di crescita che di finitura. Il tipo di pavimento non ha avuto effetti significativi sul gonfiore alle articolazioni delle gambe alla fine del periodo di rifinitura. I tori sistemati su RS avevano la minima probabilità di suole ammaccate sia durante il periodo di crescita che di finitura (P<0.01). I tori in crescita sistemati su CS hanno avuto una crescita netta dell'altezza del tallone anteriore significativamente maggiore rispetto a quelli ospitati su RS (P<0.05). Tuttavia, i tori sistemati su RS avevano la tendenza ad avere una maggiore crescita netta della punta anteriore rispetto a quelli ospitati su CS (P=0.087). I tori finali accomodati su CS-RS hanno avuto la maggiore crescita netta della punta anteriore (P<0.001). La crescita netta dell'altezza del tallone è stata maggiore nei tori sistemati su CS-S (P<0.001). Il tipo di pavimento non ha avuto effetti significativi sulla temperatura media massima dello zoccolo durante il periodo di crescita. I tori finali alloggiati su CS-S avevano una temperatura media massima dello zoccolo significativamente più bassa rispetto a quelli alloggiati su qualsiasi altro tipo di pavimento (P<0.001). Lo studio ha concluso che la pavimentazione in gomma è un'alternativa adeguata alla pavimentazione completamente fessurata, riducendo la prevalenza di suole ammaccate. Nonostante una maggiore crescita netta delle dita nei tori sistemati su pavimenti in gomma, non vi è stato alcun effetto del tipo di pavimento sul punteggio di locomozione, suggerendo che l'aumento della crescita netta delle dita non influisce negativamente sulla capacità di deambulazione. Inoltre, sebbene la temperatura media massima dello zoccolo fosse più bassa nei tori allevati su lettiera di paglia, non c'erano prove che suggerissero che ciò fosse indicativo di una migliore salute dello zoccolo.
Il concetto di alfa-sinucleina come proteina simile al prione: dieci anni dopo.La malattia di Parkinson è caratterizzata dalla perdita di dopaminergico nigrostriatale segnalazione e la presenza di aggregati di alfa-sinucleina (chiamati anche corpi di Lewy e neuriti) in tutto il cervello. Nel 2003, Braak e colleghi hanno creato un sistema di stadiazione per la malattia di Parkinson che descrive la connessione tra la patologia dell'alfa-sinucleina e la gravità della malattia. , hanno suggerito che la patologia potrebbe inizialmente essere innescata da insulti esogeni mirati all'intestino e al sistema olfattivo. Nel 2008, noi e altri gruppi abbiamo documentato la patologia di Lewy nei neuroni trapiantati in persone con malattia di Parkinson che erano state trapiantate oltre un decennio prima dell'autopsia. Abbiamo proposto che la patologia di Lewy nei neuroni innestati fosse il risultato di modelli permissivi o diffusione di tipo prionico della patologia alfa-sinucleina dai neuroni nell'ospite a quelli negli innesti. Durante il fo Dopo dieci anni, diversi studi hanno descritto la trasmissione della patologia dell'alfa-sinucleina tra i neuroni, sia nelle colture cellulari che negli animali da esperimento. Recenti ricerche hanno anche iniziato a identificare i meccanismi molecolari sottostanti. Nel loro insieme, questi studi sperimentali supportano provvisoriamente l'idea che la progressione da uno stadio di Braak al successivo sia la conseguenza della propagazione di tipo prionico della patologia di Lewy. Tuttavia, la prova definitiva che la propagazione intercellulare della patologia alfa-sinucleina si verifica nei casi di malattia di Parkinson si è rivelata difficile da ottenere. In questa recensione, mettiamo in evidenza diverse questioni aperte che attualmente ci impediscono di concludere con certezza che il trasferimento di alfa-sinucleina simile a un prione contribuisce alla progressione della malattia di Parkinson.
Linea di cellule staminali pluripotenti indotte (UNIPDi003-A) da un paziente affetto da sindrome EEC portatrice della mutazione R279H nel gene TP63.Stelo epiteliale della mucosa orale cellule di un paziente affetto da sindrome di Ectrodattilia-Displasia Ectodermica-Clefting (EEC) portatrici della mutazione R279H nel gene TP63 sono state riprogrammate in cellule staminali pluripotenti indotte umane (hiPSC) con vettori episomici. La linea UNIPDi003-A-hPSC generata ha mantenuto la mutazione delle cellule parentali e ha mostrato un cariotipo normale su coltura a lungo termine. L'analisi dell'espressione dei transgeni residui ha mostrato che i vettori episomali sono stati eliminati dalla linea cellulare. UNIPDi003-A-hiPSCs esprimeva la fosfatasi alcalina marcatore di stato indifferenziato insieme a un pannello di marcatori di pluripotenza , e hanno formato corpi embrioidi in grado di esprimere marcatori appartenenti a tutti e tre gli strati germinali.
Generazione di una linea di cellule staminali pluripotenti indotte umane (iPSC) da una donna di 51 anni con disturbo da deficit di attenzione/iperattività (ADHD) portatrice di una duplicazione di SLC2A3. I fibroblasti sono stati isolati da una biopsia cutanea di una paziente femminile di 51 anni con disturbo da deficit di attenzione/iperattività (ADHD) diagnosticata clinicamente portatrice di una duplicazione di SLC2A3, un gene che codifica per il trasportatore neuronale del glucosio-3 (GLUT3 I fibroblasti dei pazienti sono stati infettati con il virus Sendai, un virus a RNA a filamento singolo, per generare cellule staminali pluripotenti indotte umane (iPSC) prive di transgene. Le SLC2A3-D2-iPSC hanno mostrato l'espressione di marcatori associati alla pluripotenza, erano in grado di differenziarsi in cellule dei tre strati germinali in vitro e presentava un normale cariotipo femminile. Questo modello cellulare in vitro può essere utilizzato per studiare il ruolo dei geni di rischio nella patogenesi dell'ADHD, in modo specifico per il paziente.
Effetti dell'anestetico topico e del meloxicam buccale sull'aumento medio giornaliero, sul comportamento e sull'infiammazione dei vitelli da carne non svezzati dopo la castrazione chirurgica.Sebbene il dolore causato dalla castrazione dei vitelli è un problema significativo per il benessere degli animali per l'industria della carne bovina, l'analgesia non è sempre utilizzata per questa procedura, in gran parte a causa delle limitazioni pratiche associate alle forme iniettabili di sollievo dal dolore. Ora sono state sviluppate nuove formulazioni analgesiche per il bestiame per consentire la somministrazione topica e buccale , offrendo opzioni pratiche per migliorare il benessere del bestiame se dimostrato di essere efficace Per valutare gli effetti dell'anestetico topico (TA) e del meloxicam buccale (BM) sull'aumento medio giornaliero (ADG), sul comportamento e sull'infiammazione dopo la castrazione chirurgica dei vitelli da carne, un totale di 50 vitelli non svezzati sono stati assegnati in modo casuale a: (1) castrazione simulata (SHAM, n=10); (2) castrazione chirurgica (C, n=10); (3) castrazione chirurgica con pre-operatorio meloxicam buccale (CBM, n=10); (4) castrazione chirurgica con anestetico topico postoperatorio (CTA, n=10); e (5) castrazione chirurgica con meloxicam buccale preoperatorio e anestetico topico postoperatorio (CBMTA, n=10). I vitelli sono stati registrati su video per 5 ore dopo il trattamento e la frequenza e la durata dei comportamenti specifici mostrati da ciascun animale sono stati successivamente osservati per 5 minuti ogni ora (per un totale di 25 minuti). Il guadagno medio giornaliero è stato calcolato 1, 2 e 6 giorni dopo il trattamento. Le misurazioni del diametro scrotale e le fotografie delle ferite sono state raccolte da tutti i vitelli castrati 1, 2 e 6 giorni dopo il trattamento per valutare l'infiammazione e la guarigione della ferita. Le fotografie a infrarossi sono state utilizzate per identificare la temperatura massima dello scroto. Sono state utilizzate fotografie digitali per valutare visivamente le ferite su una scala di valutazione numerica da 1 a 5, con segni di infiammazione in aumento e segni di guarigione in diminuzione con punteggi progressivi. I vitelli di castrazione simulata mostravano significativamente meno e i vitelli C mostravano significativamente più impronte di piedi rispetto a tutti gli altri vitelli (P=0.005). Le osservazioni sulla durata del tempo in cui i vitelli hanno mostrato una locomozione ipometrica \'rigida\', hanno indicato che i vitelli SHAM tendevano a non perdere tempo, i vitelli C tendevano a trascorrere il tempo maggiore e tutti gli altri vitelli tendevano a trascorrere un tempo intermedio mostrando questo comportamento ( P=0.06). Le temperature massime dello scroto erano inferiori nei vitelli CBM e CBMTA rispetto ai vitelli C e CTA 2 giorni dopo il trattamento (P=0.004). Non vi è stato alcun effetto significativo del trattamento su ADG (P=0.7), diametro scrotale (P=0.09) o punteggio morfologico della ferita (P=0.5). Questi risultati suggeriscono che TA e BM, da soli o in combinazione, hanno ridotto il dolore e BM ha ridotto l'infiammazione dopo la castrazione chirurgica dei vitelli.
Cyanidin-3-rutinoside riduce la fibrillazione insulinica e attenua l'emolisi ossidativa degli eritrociti umani indotta dalle fibrille insuliniche.L'insulina è in grado di formare fibrille simili all'amiloide , un processo di misfolding mediante il quale le molecole di insulina interagiscono tra loro per formare aggregati e deposizione patologica di amiloide. L'inibizione dell'aggregazione amiloide mediante prodotti naturali è proposta come una nuova strategia per vietare lo sviluppo di malattie amiloidi. Qui, abbiamo dimostrato l'effetto inibitorio della cianidina -3-rutinoside (C3R), un antocianina naturale con molteplici attività biologiche, contro la fibrillazione amiloide insulinica. I risultati hanno mostrato che l'aumento della concentrazione di insulina ha determinato una crescita più rapida e una maggiore quantità di fibrille di insulina. C3R (10,6-170μM) concentrazione diminuita in modo dipendente dalla fibrillazione insulinica crescita e ha aumentato la durata del tempo di latenza della formazione di fibrille di insulina Inoltre, C3R ha diminuito direttamente la transizione della struttura secondaria da α-h elix alla struttura del foglio. C3R (0,31-5μM) ha attenuato l'emolisi ossidativa indotta dalle fibrille di insulina degli eritrociti umani in modo concentrazione-dipendente. Inoltre, C3R ha ridotto la distruzione della membrana eritrocitaria indotta dalle fibrille di insulina attraverso l'inibizione della generazione di specie reattive dell'ossigeno (ROS). I risultati suggeriscono anche che C3R ha ridotto la perossidazione lipidica di membrana indotta dalle fibrille mantenendo l'attività della catalasi e il contenuto di glutatione ossidato/ridotto (GSH/GSSH) negli eritrociti. Questi risultati suggeriscono che C3R può fungere da potenziale agente inibitorio contro la formazione di fibrille amiloidi e l'emolisi ossidativa indotta da fibrille di insulina.
Partecipazione dei pazienti ai turni di degenza nei reparti di medicina ospedaliera per acuti: uno studio descrittivo.La collaborazione significativa con i pazienti è sostenuta per migliorare l'erogazione delle cure. Poco è sapere come questo viene reso operativo al punto di cura durante i turni di reparto ospedaliero, dove si verifica frequentemente il processo decisionale relativo alla cura del paziente. Descrivere la partecipazione dei pazienti, con diverse preferenze per la partecipazione, durante i turni di reparto nei servizi di ricovero per acuti. Progettazione naturalistica e multimetodo I dati sono stati raccolti utilizzando sondaggi e osservazioni di turni di reparto presso due ospedali di Melbourne, in Australia. Utilizzando il campionamento di convenienza, è stato reclutato un campione stratificato di pazienti di medicina generale acuta. Prima dell'osservazione e dell'intervista, le risposte dei pazienti alla Control Preference Scale sono state utilizzate per stratificarli in tre gruppi che rappresentano diverse preferenze di partecipazione: controllo attivo in cui il paziente prende le decisioni; con trol dove il paziente preferisce prendere decisioni insieme ai medici; e il controllo passivo dove il paziente preferisce che i medici prendano decisioni. , che hanno contribuito alla partecipazione o meno dei pazienti ai turni di reparto. La partecipazione ai turni di reparto è stata simile per i pazienti, indipendentemente dalla preferenza di controllo. Questo studio dimostra la necessità di comprendere meglio i ruoli dei medici nel supportare le strategie che promuovono la partecipazione dei pazienti nelle cure ospedaliere quotidiane.
La ventilazione meccanica induce la desensibilizzazione dei recettori polmonari Axl tirosin-chinasi.Volumi correnti inferiori sono sempre più utilizzati nella sindrome da distress respiratorio acuto, ma la mortalità è cambiata poco in negli ultimi 20 anni. Pertanto, oltre alle impostazioni del ventilatore, è importante mirare ai mediatori molecolari del danno. La sepsi e altri stati infiammatori aumentano le concentrazioni circolanti di Gas6, un ligando per il recettore antinfiammatorio Axl, e di una forma esca solubile di Axl Abbiamo studiato gli effetti dell'allungamento polmonare sulla segnalazione di Axl Abbiamo utilizzato un modello murino di lesione precoce da alto volume corrente e valutato gli effetti dell'inibizione di Axl sulla lesione polmonare in vivo (utilizzando un antagonista R428, n = 4/gruppo). Abbiamo ulteriormente determinato gli effetti dell'allungamento sull'attivazione di Axl utilizzando cellule endoteliali polmonari in vitro. L'elevato volume corrente ha causato lievi lesioni (la conformità è diminuita del 6%) come previsto e lo spargimento del recettore Axl (Axl solubile nel bronco il liquido alveolare è aumentato del 77%). L'antagonista Axl R428 ha bloccato il principale bersaglio Axl a valle (soppressore della segnalazione 3 delle citochine [SOCS3]) ma non ha peggiorato la fisiologia polmonare o l'infiammazione. L'allungamento ciclico in vitro ha fatto sì che Axl diventasse insensibile all'attivazione da parte del suo agonista, Gas6. Infine, le risposte Axl in vitro sono state salvate bloccando i canali del calcio attivati dall'allungamento (usando il cloruro di guanidinio [GdCl3]) e la ionomicina dello ionoforo del calcio ha replicato l'effetto dell'allungamento. Questi dati suggeriscono che la sovradistensione delle cellule endoteliali polmonari attiva i canali ionici e l'afflusso risultante di Ca inattiva Axl. Non era prevista l'inattivazione a valle di Axl per tratto; prevenirlo sarebbe necessario per sfruttare i recettori Axl nel ridurre il danno polmonare.
L'analisi filogenetica di Histoplasma capsulatum var duboisii nei babbuini da tessuti archiviati fissati in formalina e inclusi in paraffina.Le infezioni da Histoplasma capsulatum var. duboisii (Hcd) hanno stato ben documentato per causare la malattia granulomatosa cronica, che coinvolge principalmente la pelle dei babbuini e degli esseri umani principalmente nei paesi africani. Questo studio retrospettivo ha classificato le sottospecie di Histoplasma e ha sviluppato un albero filogenetico utilizzando sequenze di DNA estratte da tessuti fissati in formalina e inclusi in paraffina (FFPE) da 9 babbuini da una colonia di ricerca in Texas istologicamente diagnosticata con Hcd. Sulla base dell'analisi della sequenza di ITS-2, Tub-1 e ARF, l'Hcd isolato dai campioni archiviati si allinea strettamente con il clade africano e ha un'omologia di sequenza dell'88% con un campione isolato da un individuo in Senegal.
Il piccolo carcinoma papillare della tiroide con estensione extratiroidea minima dovrebbe essere gestito come tumore ATA a basso rischio.Secondo le linee guida dell'American Thyroid Association (ATA), papillare il cancro della tiroide (PTC) con estensione extratiroidea minima (mETE) è classificato a "rischio intermedio" di malattia persistente/ricorrente. Tuttavia, l'impatto della mETE di per sé sull'esito dei pazienti non è completamente compreso. Lo scopo del nostro studio è stato quello di valutare il significato prognostico di mETE in pazienti con PTC non sottoposti a dissezione linfonodale terapeutica o profilattica, in base alle dimensioni del tumore e ad altri fattori prognostici. Abbiamo valutato retrospettivamente un totale di 514 pazienti con PTC: 127 (24,7%) avevano mETE (pT3Nx ) e 387 (75,3%) avevano margini negativi (pT1-2Nx). A un follow-up mediano di 9,1 anni, i pazienti sono stati divisi in due gruppi: pazienti con "buon esito" (nessuna evidenza di malattia) e pazienti con "scarso esito" (malattia strutturale persistente o recu malattia in corso o morte per tumore). Il tasso di pazienti con "esito scarso" era significativamente più alto nei pazienti con mETE rispetto ai pazienti con margini negativi (11,8 contro 5,1%; OR 2,4576, IC 95% 1,2178-4,9594, p = 0,01). Tuttavia, la mETE era significativamente associata a un esito sfavorevole solo nei pazienti con tumori di dimensioni superiori a 1,5 cm. mETE è un fattore prognostico sfavorevole nei tumori più grandi di 1,5 cm, suggerendo che, in assenza di altre caratteristiche sfavorevoli, i tumori più piccoli con mETE dovrebbero essere classificati e gestiti come tumori a "basso rischio".
Programmazione di dispositivi clinicamente orientati nel paziente bradicardico: parte 2 (blocchi atrioventricolari e sincope neuromediata). Proposte dell'AIAC (Associazione Italiana di Aritmologia e Stimolazione Cardiaca).: Lo scopo di questo documento di consenso in due parti è fornire suggerimenti specifici (basati su un'ampia revisione della letteratura) sull'impostazione appropriata del pacemaker in relazione alle caratteristiche cliniche dei pazienti. Nella parte 2, i criteri per la scelta e la programmazione del pacemaker in vengono proposti blocchi atrioventricolari e sincope neuromediata. I blocchi atrioventricolari possono essere parossistici o persistenti, isolati o associati a malattia del nodo del seno. La sincope neuromediata può essere correlata alla sindrome del seno carotideo o alla sincope vasovagale cardioinibitoria. In ritmo sinusale, con blocco atrioventricolare persistente, abbiamo ritenuto opportuna l'attivazione di algoritmi di mode-switch, e algoritmi per la gestione autoadattativa dell'uscita di stimolazione ventricolare. Se il blocco atrioventricolare è parossistico, oltre agli algoritmi sopra menzionati, dovrebbero essere attivati algoritmi per massimizzare la conduzione atrioventricolare intrinseca. Quando la malattia del nodo del seno è associata al blocco atrioventricolare, è appropriata l'attivazione della funzione rate-responsive nei pazienti con insufficienza cronotropa. Nella fibrillazione atriale permanente con blocco atrioventricolare, devono essere attivati algoritmi per la gestione autoadattativa dell'uscita di stimolazione ventricolare. Se il blocco atrioventricolare è persistente, è opportuna l'attivazione della funzione rate-responsive. Nella sindrome del seno carotideo, deve essere programmata un'isteresi di frequenza adeguata. Nella sincope vasovagale, dovrebbero essere attivati algoritmi specializzati di sensing e stimolazione progettati per la prevenzione della sincope riflessa.
Programmazione di dispositivi clinicamente orientati nei pazienti bradicardici: parte 1 (malattia del nodo del seno). Proposte AIAC (Associazione Italiana di Aritmologia e Stimolazione Cardiaca).: I moderni pacemaker dispongono di un numero sempre maggiore di parametri programmabili e di algoritmi specifici studiati per ottimizzare la terapia di stimolazione in relazione alle caratteristiche individuali dei pazienti. Nella scelta del tipo e della programmazione di pacemaker più appropriati, devono essere prese in considerazione le seguenti variabili: il tipo di bradiaritmia al momento dell'impianto del pacemaker; la camera cardiaca che richiede stimolazione e la percentuale di stimolazione effettivamente necessaria per correggere il disturbo del ritmo; la possibile associazione di più disturbi del ritmo e malattie della conduzione; l'evoluzione dei disturbi della conduzione durante il follow-up. Gli obiettivi di la programmazione del dispositivo è quella di preservare o ripristinare la risposta della frequenza cardiaca alle richieste metaboliche ed emodinamiche, mantenere la conduzione fisiologica; massimizzare la longevità del dispositivo; per rilevare, prevenire e trattare l'aritmia atriale. Nei pazienti con malattia del nodo del seno, la modalità di stimolazione ottimale è DDDR. Sulla base di tutte le evidenze disponibili, in questo contesto, riteniamo opportuna l'attivazione dei seguenti algoritmi: funzione rate responsive in pazienti con incompetenza cronotropa; algoritmi per massimizzare la conduzione atrioventricolare intrinseca in assenza di blocchi atrioventricolari; algoritmi di cambio di modalità; algoritmi per la gestione autoadattativa dell'uscita di stimolazione atriale; algoritmi per la prevenzione e il trattamento delle tachiaritmie atriali nel sottogruppo di pazienti con tachiaritmie atriali/fibrillazione atriale. Lo scopo di questo documento di consenso in due parti è fornire suggerimenti specifici (basati su un'ampia revisione della letteratura) sull'impostazione appropriata del pacemaker in relazione alle caratteristiche cliniche dei pazienti.
L'acido urico sierico elevato influenza la riperfusione miocardica e le dimensioni dell'infarto in pazienti con infarto miocardico con sopraslivellamento del tratto ST sottoposti a intervento coronarico percutaneo primario.Acido urico sierico elevato (eSUA) è stato associato a un esito sfavorevole nei pazienti con infarto miocardico con sopraslivellamento del tratto ST (STEMI). Tuttavia, l'effetto di eSUA sul danno da riperfusione miocardica e sulle dimensioni dell'infarto è stato scarsamente studiato. Il nostro obiettivo era di correlare l'eSUA con le dimensioni dell'infarto, l'infarto restringimento dimensionale, grado di riperfusione miocardica e mortalità a lungo termine nei pazienti con STEMI sottoposti a intervento coronarico percutaneo primario Abbiamo eseguito un'analisi post-hoc a livello di pazienti di due studi randomizzati controllati, testando strategie per la protezione da ischemia miocardica/riperfusione. (3-5 giorni) e follow-up (4-6 mesi) risonanza magnetica cardiaca. La dimensione dell'infarto e la riduzione della dimensione dell'infarto erano risultati di interesse. hanno valutato l'edema pesato in T2, il grado di arrossamento del miocardio (MBG), la trombolisi corretta nell'infarto miocardico Frame Count, la risoluzione del segmento ST e la mortalità per tutte le cause a lungo termine. Sono stati inclusi un totale di 101 (86,1% anteriori) pazienti STEMI; eSUA è stata trovata in 16 (15,8%) pazienti. La dimensione dell'infarto era maggiore nei pazienti eSUA rispetto ai pazienti non eSUA (42,3 ± 22 vs 29,1 ± 15 ml, P = 0,008). Dopo l'aggiustamento per le covariate, la dimensione dell'infarto era 10,3 µl (intervallo di confidenza 95% 1,2-19,3 µl, P = 0,001) maggiore nell'eSUA. Tra i pazienti con infarto miocardico anteriore è stata mantenuta la differenza nel potenziamento ritardato tra i gruppi (rispettivamente 42,3α 22,4 vs 29,9α 15,4 ml, P = 0,015). Il restringimento delle dimensioni dell'infarto era simile tra i gruppi. Rispetto ai pazienti non eSUA, i pazienti eSUA avevano un edema ponderato in T2 più grande (53,8 contro 41,2 ml, P = 0,031) e MBG meno favorevole (MBG < 2: 44,4 contro 13,6%, P = 0,045). La trombolisi corretta nell'infarto miocardico Il conteggio dei fotogrammi e la risoluzione del segmento ST non differivano significativamente tra i gruppi. A un follow-up mediano di 7,3 anni, la mortalità per tutte le cause era più alta nel gruppo eSUA (18,8 vs 2,4%, P = 0,028). L'eSUA può influenzare la riperfusione miocardica nei pazienti con STEMI sottoposti a intervento coronarico percutaneo ed è associata a dimensioni dell'infarto più grandi e mortalità a lungo termine più elevata.
Ruolo dell'imaging cardiovascolare nella terapia di resincronizzazione cardiaca: una revisione della letteratura.: La terapia di resincronizzazione cardiaca (CRT) è un trattamento consolidato in pazienti con farmaci sintomatici -insufficienza cardiaca refrattaria e complesso QRS ampio sull'ECG di superficie Nonostante la presenza di dissincronia meccanica o miocardio vitale nel sito in cui la stimolazione ventricolare sinistra sia condizioni necessarie per una CRT di successo, la loro valutazione diretta mediante tecniche di imaging cardiovascolare, sebbene fattibile , non è raccomandato nella pratica clinica dalle attuali linee guida. Infatti, anche se c'è un numero crescente di dati che forniscono evidenza del valore aggiuntivo di un approccio basato sull'immagine rispetto all'approccio di routine nel migliorare la risposta alla CRT, questi risultati dovrebbero essere confermati in studi multicentrici prospettici e di grandi dimensioni prima che venga preso in considerazione il loro impatto sulle linee guida CRT.
Neuroinfiammazione e sensibilizzazione centrale nel dolore cronico e diffuso.Il dolore cronico è mantenuto in parte dalla sensibilizzazione centrale, un fenomeno di plasticità sinaptica, e da un aumento neuronale risposta nelle vie centrali del dolore dopo insulti dolorosi. Evidenze crescenti suggeriscono che la sensibilizzazione centrale è anche guidata dalla neuroinfiammazione nel sistema nervoso periferico e centrale. Una caratteristica della neuroinfiammazione è l'attivazione delle cellule gliali, come la microglia e gli astrociti, nel midollo spinale e cervello, portando al rilascio di citochine e chemochine proinfiammatorie. Recenti studi suggeriscono che le citochine e le chemochine centrali sono potenti neuromodulatori e svolgono un ruolo sufficiente nell'indurre iperalgesia e allodinia dopo la somministrazione del sistema nervoso centrale. Aumento sostenuto di citochine e chemochine nel sistema nervoso centrale il sistema promuove anche il dolore cronico diffuso che colpisce più siti del corpo S. Pertanto, la neuroinfiammazione guida il dolore cronico diffuso attraverso la sensibilizzazione centrale. Discutiamo anche della segnalazione gliale/immune dipendente dal sesso nel dolore cronico e di nuovi approcci terapeutici che controllano la neuroinfiammazione per la risoluzione del dolore cronico.
Tubercolosi latente nell'infanzia: tollerabilità di due diversi approcci terapeutici.Monoterapia con isoniazide per sei o nove mesi e combinazione di isoniazide e rifampicina per tre o quattro mesi sono i regimi più utilizzati per il trattamento della tubercolosi latente. L'obiettivo principale di questo studio retrospettivo è valutare la sicurezza del trattamento della tubercolosi latente analizzando gli effetti collaterali in entrambi i regimi. Sono stati inclusi bambini con tubercolosi latente e trattati con isoniazide o isoniazide e rifampicina Sono state effettuate valutazioni periodiche con valutazione clinica ed esami del sangue per rilevare qualsiasi reazione avversa, comprese le transaminasi sieriche elevate. Sono stati inclusi 441 bambini, il 14,5% trattati con isoniazide e l'85,5% con isoniazide e rifampicina. Cinque pazienti sottoposti a trattamento combinato hanno sviluppato epatotossicità all'interno del primo mese. Nessuno dei pazienti in monoterapia con isoniazide ha presentato epatotossicità. Un leggero aumento delle transaminas es è stato riscontrato in entrambi i gruppi (18,7% nei gruppi isoniazide e 10,3% rispettivamente nei gruppi isoniazide/rifampicina) senza provocare l'interruzione del trattamento, con normalizzazione dei valori ai successivi controlli. Entrambi i regimi sono risultati sicuri. L'epatotossicità si è verificata raramente ed entro il primo mese. Per questo motivo può essere opportuno eseguire i test di funzionalità epatica dopo circa un mese dall'inizio della terapia per evitare ritardi diagnostici.
Gli acidi grassi promuovono la differenziazione delle cellule satellite del muscolo scheletrico bovino regolando l'espressione di ELOVL3.Gli acidi grassi (FA) svolgono un ruolo essenziale nella regolazione della differenziazione e della proliferazione influenzando espressione genica in vari tipi di cellule. Tuttavia, le loro potenziali funzioni nelle cellule bovine rimangono poco chiare. Qui, esaminiamo la differenziazione e la proliferazione delle cellule satellite derivate dal muscolo scheletrico bovino (MDSCs) dopo l'incubazione con tre tipi di AF rappresentativi (acido palmitico, oleico acido e acido docosaesaenoico) mediante western blotting, saggi di immunofluorescenza, analisi di citometria a flusso e saggi di incorporazione di EdU. La velocità di fusione del miotubo, la lunghezza del miotubo e i livelli di espressione della miogenina del gene correlato alla differenziazione muscolare (MYOG) e della catena pesante 3 della miosina (MYH3) sono aumentati significativamente , sebbene gli FA non abbiano influenzato la proliferazione Inoltre, la differenziazione di MDSC bovina indotta da FA ha aumentato l'espressione di ELOVL3 e la rilocazione di ELOVL3 alle goccioline lipidiche citoplasmatiche nella differenziazione delle MDSC bovine. Inoltre, l'effetto degli AF sulla differenziazione delle MDSC bovine è stato inibito sulla downregulation di ELOVL3. Nel loro insieme, questi dati indicano che gli AF promuovono la differenziazione delle MDSC bovine regolando l'espressione di ELOVL3.
Associazioni dinamiche tra disturbo borderline di personalità ed eventi di vita stressanti nell'arco di cinque anni negli anziani.Il decorso temporale del disturbo borderline di personalità (BPD) è lontano più variabile di quanto tradizionalmente presupposto. Si ipotizza che le mutevoli condizioni ambientali spieghino, almeno in parte, le fluttuazioni nella presentazione dei sintomi nel tempo. Nel presente studio, abbiamo valutato le influenze reciproche di eventi di vita stressanti e patologia borderline in un campione rappresentativo di comunità di 1.630 anziani valutati 3 volte in 5 anni. Un modello autoregressivo cross-lag ha rivelato una forte, ma imperfetta, stabilità dei sintomi di BPD nel periodo di studio. Dopo aver aggiustato per questa continuità nel BPD, l'effetto potenziale dello stress della vita sulla patologia borderline era praticamente nullo, contrariamente alle aspettative. D'altra parte, la patologia borderline era prospetticamente correlata al successivo evento dipendente (cioè, fattori di stress a cui indi individui possono aver contribuito), ma non un evento indipendente (cioè fattori di stress fatali), l'esposizione. Questo modello di associazioni era coerente con un effetto di generazione di stress. Concludiamo che gli eventi di vita stressanti non reindirizzano sostanzialmente la traiettoria del BPD negli anziani, probabilmente a causa dell'inerzia della patologia borderline in questa fase dello sviluppo. Invece, i sintomi del disturbo borderline sembrano promuovere l'esposizione allo stress, ponendo così le basi per una compromissione sociale continua e problemi psichiatrici comorbidi. (PsycINFO Database Record (c) 2018 APA, tutti i diritti riservati).
Effetti della distanza e del tempo di soccorso alle strutture mediche sulla mortalità da traffico utilizzando il GIS.Sebbene supportato da poche prove scientifiche, il concetto di \'golden hour, \' che afferma che la mortalità per i pazienti traumatizzati aumenta significativamente nel tempo di soccorso, svolge un ruolo vitale nella progettazione del nostro attuale sistema traumatologico. Solo i risultati contrari possono essere trovati utilizzando i dati del Fatality Analysis Reporting System dal 2010 al 2012. I risultati di la regressione logistica ha mostrato che intervalli di tempo totali più lunghi erano associati a una minore mortalità da traffico, con un odds ratio (OR) di 0,993 al minuto. Utilizzando il risolutore della struttura più vicino nel Sistema informativo geografico, l'effetto di \'causa inversa\' e la differenza tra sono stati discussi il centro traumatologico e il centro non traumatologico sulla relazione tempo-mortalità Inoltre, sulla base dei dati Kentucky Collision Analysis for the Public dal 2010 al 2012, i risultati della logistica la regressione ha mostrato che la mortalità aumentava con ogni miglio aggiuntivo al centro traumatologico con un OR di 1.011 per miglio.
Sviluppo precoce e durata della vita riproduttiva delle femmine di coniglio: implicazioni del tasso di crescita, della dieta di allevamento e delle condizioni fisiche al primo accoppiamento.Fattori che influenzano lo sviluppo precoce come peso alla nascita, competizione al nido e dieta ricevuta durante l'allevamento sono stati proposti come elementi condizionanti la futura performance riproduttiva delle femmine di coniglio europeo (oryctolagus cuniculus) Per valutarne gli effetti, abbiamo seguito la vita di 1513 femmine dalla nascita alla morte, abbattimento o censura (animali vivi a data fissa). Tra 0 e 63 giorni di età morirono 353 femmine. Delle restanti 1160 femmine, 864 furono scelte in base al loro peso alla nascita per essere trasferite dalla selezione all'allevamento di produzione. allevamento, 431 femmine hanno ricevuto la dieta di controllo (184 g di CP, 381 g di NDF e 11,8 MJ di DE per kg di DM), mentre le altre 433 hanno ricevuto la dieta fibrosa (134 g di CP, 436 g di NDF e 10,0 MJ di DE per kg DM) Durante tutto il periodo di allevamento od, abbiamo controllato il peso vivo individuale e la condizione corporea (spessore del grasso perirenale) alla prima inseminazione artificiale. La durata della vita riproduttiva è stata definita come il numero di giorni tra il primo parto e il momento della morte, dell'abbattimento o della censura. Il peso alla nascita ha influenzato la sopravvivenza delle neonate durante l'allattamento e la presenza di una macchia di latte alla nascita (correlata alla competizione del nido) ha aumentato la sopravvivenza dei neonati che pesavano <45 g (P<0.001). La dieta di allevamento ha alterato la curva di crescita delle femmine e le loro condizioni fisiche alla prima inseminazione. La dieta ha anche alterato il rischio relativo di morte durante il periodo di allevamento, che era più basso tra le femmine alimentate con la dieta fibrosa (-12,5%; P<0.001). Pertanto, un numero maggiore di femmine alimentate con questa dieta ha raggiunto la loro vita riproduttiva, influenzando direttamente la produttività misurata per femmina ospitata. Le femmine più grasse alla prima inseminazione avevano cucciolate più piccole e un rischio maggiore di essere abbattute rispetto a quelle magre (P<0.05). In generale, la dieta fibrosa ha ridotto il rischio di lasciare la mandria all'inizio dell'allevamento e sia il peso alla nascita che lo spessore del grasso perirenale hanno influito sulla durata della vita riproduttiva delle femmine. Un eccesso di grasso (cambiamento positivo in un'unità di grasso perirenale) alla loro prima inseminazione ha rappresentato un aumento del rischio di morte o eliminazione del 13%.
Matrici di corpi embrionali: criosezione parallela di campioni di corpi sferoidi/embrioidi per l'analisi del throughput medio.La coltura tridimensionale (3D) di cellule di mammifero è emergendo come un nuovo potente strumento per comprendere l'organogenesi e servire come modelli per malattie con implicazioni per la valutazione terapeutica. Le colture 3D sono indicate in vari modi come sferoidi, organoidi o corpi embrioidi. Mentre esistono molti metodi per la produzione su larga scala di corpi embrioidi o altri aggregati di cellule sferoidi, sia a dimensioni controllate utilizzando piastre micropozzetti/micromodelli o dimensioni incontrollate in piastre di sospensione, esistono pochissimi protocolli per l'analisi di differenziazione a medio rendimento a livello istologico Abbiamo sviluppato un metodo che consente l'elaborazione parallela, il sezionamento e l'analisi di più campioni 3D (ad es. fissati in punti temporali diversi, trattati con diversi farmaci/fattori di crescita, generati da diverse linee cellulari ecc. ) mediante double-em blocchi da letto in un formato array più grande. Il nostro protocollo ha poche barriere per l'uso e richiede solo materiali che si trovano comunemente in qualsiasi laboratorio che attualmente utilizza materiali di inclusione per il criosezionamento. Il sezionamento in parallelo consente di eseguire contemporaneamente tecniche istologiche (come istochimica, immunocolorazione o ibridazione in situ) su più campioni su un singolo vetrino. Ciò riduce la variazione da vetrino a vetrino e richiede meno reagenti, meno materiali di consumo con tempi e requisiti di manodopera inferiori rispetto ai campioni incorporati singolarmente.
La subunità GluN2B rappresenta un importante determinante funzionale dei recettori NMDA nei neuroni corticali derivati da cellule staminali pluripotenti umane indotte.Vie di segnalazione anormali mediate da N- I recettori del metil-d-aspartato (NMDAR) sono stati implicati nella patogenesi di vari disordini del SNC e sono stati a lungo considerati come punti promettenti di intervento terapeutico Tuttavia, pochi sforzi sono stati descritti in precedenza riguardo alla valutazione dei modulatori terapeutici dei NMDAR e delle loro vie a valle in neuroni umani con espressione endogena di NMDAR. Nel presente studio, abbiamo valutato l'espressione, la funzionalità e la composizione delle subunità di NMDAR endogeni in neuroni corticali derivati da cellule staminali pluripotenti indotte umane (hiPSC) (iCell Neurons e iCell GlutaNeurons). Inizialmente abbiamo confermato la risposta farmacologica attesa di iCell Neurons e iCell GlutaNeurons a NMDA mediante registrazioni di patch-clamp Interrogazione farmacologica successiva l'utilizzo di antagonisti selettivi della subunità GluN2 ha rivelato la predominanza di GluN2B sia in iCell Neurons che in iCell GlutaNeurons. Questa osservazione è stata supportata anche da analisi qRT-PCR e Western blot dell'espressione della subunità GluN2, nonché da esperimenti farmacologici utilizzando modulatori allosterici positivi con selettività della subunità GluN2 distinta. Concludiamo che iCell Neurons e iCell GlutaNeurons esprimono NMDAR funzionali contenenti GluN2B e potrebbero fungere da sistema prezioso per lo sviluppo e la convalida di agenti farmaceutici modulanti GluN2B.
Distanza sociale negli studenti e professionisti di psicologia e assistenza sociale lituani.Questo studio trasversale mirava a confrontare il desiderio di distanza sociale da parte di persone con malattie mentali nelle discipline del lavoro sociale e della psicologia, e tra studenti e professionisti con diverse esperienze professionali. 948 intervistati (715 studenti e 233 professionisti) provenienti da istituzioni educative e di salute mentale lituane hanno partecipato a un sondaggio anonimo. La distanza sociale è stata misurata utilizzando il Social lituano Distance Scale creata per questo studio. I partecipanti hanno anche risposto a domande sulla familiarità con la malattia mentale. Il bias di desiderabilità sociale è stato misurato utilizzando l'inventario bilanciato delle risposte desiderabili. Una serie di analisi ANCOVA ha rivelato che i master in psicologia e assistenza sociale e gli studenti di dottorato hanno riferito minore distanza sociale dalle persone con malattie mentali rispetto agli studenti di laurea y con malattia mentale era significativamente correlato a una minore distanza sociale nel campione di studenti, ma non nel campione di professionisti\'. Il più forte desiderio di distanza sociale nel campione di professionisti\' è stato osservato negli assistenti sociali con meno di 5 anni di pratica professionale e negli psicologi più esperti con più di 10 anni di pratica professionale. La distanza sociale dalle persone con malattie mentali diminuisce nel corso degli anni di studio; tuttavia, i risultati di psicologi professionisti e assistenti sociali illustrano diverse traiettorie nella distanza sociale attraverso la carriera professionale. I risultati di questo studio supportano la necessità di programmi e iniziative anti-stigma orientati ai professionisti della salute mentale.
Murepavadin: una nuova classe di antibiotici in cantiere.Con l'aumento della P. aeruginosa multiresistente, antimicrobici con un nuovo meccanismo d'azione sono necessari che possono colpire queste infezioni. Aree coperte: la murepavadina endovenosa è in fase di sviluppo 3 per il trattamento di HABP/VABP dovuta a P. aeruginosa. Questo documento riassume le informazioni disponibili sulla scoperta, l'attività in vitro, le proprietà farmacocinetiche e farmacodinamiche e la farmacologia clinica della murepavadina fino ad oggi. Commento dell'esperto: P. aeruginosa ha una resistenza intrinseca a molti antibiotici a causa dell'elevata impermeabilità cellulare e degli efficienti meccanismi di efflusso dei farmaci, e il recente aumento della prevalenza di infezioni da P. aeruginosa multiresistenti sono particolarmente minacciose nelle impostazioni di terapia intensiva. La murepavadina è un peptidomimetico antimicrobico specifico per i patogeni con un nuovo meccanismo d'azione non litico ed è il primo della classe di proteine della membrana esterna mirati agli antibiotici in via di sviluppo. La murepavadina mostra una potente attività in vitro che include P. aeruginosa, produttore di carbapenemasi e resistente alla colistina. La murepavadina è attiva in modelli animali preclinici, comprese le infezioni da isolati XDR. La farmacocinetica è ben caratterizzata includendo soggetti con funzionalità renale compromessa e pazienti con VABP. La murepavadina endovenosa è attualmente in fase di sviluppo clinico per il trattamento dell'HABP/VABP dovuta all'infezione da P. aeruginosa.
Proteasoma 20S nel plasma sanguigno di ragazzi con criptorchidismo.Valutare la concentrazione del proteasoma 20S nel plasma sanguigno di ragazzi con criptorchidismo. Pazienti- 50 ragazzi di età compresa tra 1 e 4 anni (mediana = 2,4 anni) con criptorchidismo unilaterale. Il gruppo di controllo: 50 ragazzi sani di pari età (età 1-4 anni, mediana = 2,1 anni), ammessi per erniotomia pianificata. Abbiamo utilizzato una nuova tecnica di Surface PLASMON RESONANCE Imaging. La concentrazione mediana di proteasoma 20S nel plasma sanguigno dei ragazzi con criptorchidismo era 2,5 volte superiore rispetto ai ragazzi con ernia inguinale. Abbiamo notato una differenza statisticamente significativa tra i livelli di proteasoma 20S nei ragazzi con criptorchidismo fino a 2 anni e oltre i 2 anni. Riteniamo che le concentrazioni di proteasoma 20S nel plasma sanguigno dei ragazzi con criptorchidismo riflettano l'apoptosi indotta dal calore delle cellule germinali.
Decompressione orbitale riabilitativa per l'orbita di Graves\': risultati di uno studio clinico randomizzato.La decompressione orbitale (OD) è una procedura consolidata per il trattamento di esoftalmo nell'orbita di Graves\' (GO). L'efficacia delle varie procedure rimane poco chiara a causa della variabilità delle tecniche utilizzate. Per affrontare questo problema, abbiamo eseguito uno studio clinico randomizzato per confrontare l'efficacia di due tecniche chirurgiche. L'endpoint primario era la riduzione della proptosi. Obiettivi secondari erano il rischio di diplopia post-operatoria (POD) nello sguardo primario e altre complicanze chirurgiche. 38 pazienti (76 orbite) affetti da GO sono stati arruolati e randomizzati in decompressione laterale singola (LD) (n \ = 19) o decompressione bilanciata della parete mediale più laterale (n = 19). Dopo l'intervento chirurgico, i pazienti sono stati visitati per una valutazione oftalmologica di follow-up a 6 mesi. Diplopia preoperatoria nello sguardo secondario era presente in 13/38 pazienti (34,2%, 8/19 trattati con LD e 5/19 trattati con MLD). La riduzione dell'esoftalmo è stata maggiore nei pazienti trattati con MLD (5,1 ± 1,5 mm, intervallo 2-8 mm) rispetto a quelli trattati con LD (3,5 ± 1,3 mm, intervallo 1-6,5 mm) (p = 0,01). L'incidenza complessiva di POD nello sguardo primario era 5/38 (13,2%) e tutti questi pazienti avevano diplopia preoperatoria nello sguardo secondario (5/13, 38,5%, vs pazienti senza diplopia preoperatoria p = 0,005). Due dei 19 pazienti (10,5%) trattati con LD e 3/19 (15,8%) trattati con MLD, hanno sviluppato POD nello sguardo primario, senza differenze statistiche tra le due tecniche. La MLD fornisce un risultato migliore in termini di riduzione della proptosi rispetto alla LD. Le due tecniche qui utilizzate sembrano avere un profilo di sicurezza simile in termini di POD. La diplopia preoperatoria nello sguardo secondario rimane un importante fattore di rischio per lo sviluppo di POD.
Neurodegenerazione associata a C9orf72 nella SLA-FTD: nuove scoperte nell'RNA ribosomiale e nella disfunzione nucleolare.Sclerosi laterale amiotrofica (SLA) e degenerazione frontotemporale ( FTD) sono malattie neurodegenerative con aspetto clinico distinto. Tuttavia, entrambi condividono come principale fattore di rischio genetico un'espansione esanucleotidica intronica del locus C9orf72. Le vie patogene associate alla tossicità neuronale dipendente dall'espansione sono ancora poco conosciute. Recenti sforzi per identificare i fili comuni di neuronale disfunzione hanno indicato deficit della biogenesi dell'RNA ribosomiale (rRNA) e perdita di integrità nucleolare, una condizione nota come stress nucleolare che è una caratteristica condivisa emergente tra le malattie neurodegenerative. Intrigante, la mutazione C9orf72 in ALS-FTD interferisce con la funzione del nucleolo da trascrizioni e ripetizioni dipeptidiche (DPR) prodotte dall'espansione dell'esanucleotide. Le discrepanze sperimentali hanno dato origine a diverse ipotesi per quanto riguarda la connessione di C9orf72 e l'attività nucleolare. In questa recensione, presentiamo e discutiamo concetti emergenti riguardanti l'impatto dell'espansione C9orf72 sulla biologia nucleolare. Inoltre, discutiamo l'"ipotesi dello stress nucleare", secondo la quale il malfunzionamento nucleolare accompagna, esacerba o potenzialmente innesca un fenotipo degenerativo. La prossima consapevolezza del coinvolgimento dello stress nucleolare nella SLA-FTD C9orf72 potrebbe far luce sulla sua patogenesi, consentendo potenziali opzioni di trattamento volte a schermare un "tallone d'Achille\'" di neuroni.
Miglioramento della proliferazione e ottimizzazione delle condizioni di coltura per le cellule stromali del midollo osseo umano utilizzando l'ipossia e il fattore di crescita dei fibroblasti-2.Questo studio mirava a determinare la caratteristiche e comportamenti delle cellule stromali del midollo osseo umano (hBMSC) espanse nei media in una condizione ipossica o normossica e con o senza trattamento con fattore di crescita dei fibroblasti-2 (FGF-2). Le hBMSC isolate dal corpo vertebrale ed espanse in questi quattro gruppi sono state valutati per la proliferazione/migrazione cellulare, le unità formanti colonie, la caratterizzazione della superficie cellulare, la differenziazione in vitro, il trapianto in vivo e l'espressione genica. La coltura di hBMSCs utilizzando un particolare fattore ambientale (ipossia) e con l'aggiunta di FGF-2 ha aumentato la capacità cellulare tasso di proliferazione migliorando il potenziale rigenerativo, modulato i processi correlati alla multipotenza (processi/osteogenesi migliorati correlati alla condrogenesi, ma ridotta adipogenesi) e aumentato c migrazione ellittica e formazione di collagene. I livelli di espressione genica nei campioni sperimentali hanno mostrato l'attivazione della via del fattore-1 inducibile dall'ipossia e della glicolisi nella condizione ipossica, senza che ciò fosse influenzato dall'aggiunta di FGF-2. L'applicazione simultanea di ipossia e FGF-2 potrebbe fornire una condizione favorevole per la coltura di hBMSC da utilizzare in applicazioni cliniche associate all'ingegneria del tessuto osseo, grazie al miglioramento della proliferazione cellulare e del potenziale rigenerativo.
L'esposizione all'inibitore ROCK fasudil promuove la gliogenesi delle cellule staminali neurali in vitro.Fasudil è un inibitore della proteina chinasi Rho-associata (ROCK) clinicamente approvato che è stato ampiamente utilizzato per trattare le conseguenze cerebrali dell'emorragia subaracnoidea. È noto per avere un effetto positivo su modelli animali di disturbi neurologici tra cui il morbo di Parkinson e l'ictus. Tuttavia, il suo effetto cellulare sulle popolazioni progenitrici e sulla differenziazione non è chiaramente compreso. Mentre studi recenti suggeriscono che il fasudil promuove la mobilizzazione delle cellule staminali neurali (NSC) dalla zona subventricolare in vivo e promuove la differenziazione della linea di neuroprogenitori cerebellari C17.2 in vitro, non è chiaro se il fasudil sia coinvolto nella differenziazione delle NSC primarie Qui, abbiamo testato l'effetto di fasudil sulle NSC di topo in vitro e abbiamo osservato un aumento della gliogenesi nelle NSC derivate dai ventricoli laterali. caratteristiche della neurogenesi inclusi cambiamenti fenotipici nella crescita neurale e movimenti intercinetici simili al nucleare come risposta immediata, mentre l'espressione di Sox2 è stata mantenuta e l'espressione di GFAP è aumentata. Inoltre, la risposta gliogenica al mezzo di fasudil è stata osservata nelle colture di NSC sia postnatali che adulte. Presi insieme, i nostri risultati mostrano che fasudil promuove la differenziazione delle NSC in linee astrogliali, suggerendo che potrebbe essere utilizzato per sviluppare nuovi modelli di gliogenesi in vitro e regolare la differenziazione per la riparazione neurale.
Analisi genetica di CLDN14 nella popolazione cinese affetta da ipoacusia non sindromica.Il gene CLDN14, che codifica per la proteina a giunzione stretta Claudin-14, è stato proposto come gene causativo candidato che colpisce l'ipoacusia autosomica recessiva non sindromica (ARNSHL). L'analisi genetica delle variazioni di singolo nucleotide non sinonime (nsSNVs) in CLDN14 è stata eseguita in diverse popolazioni. Il ruolo di CLDN14 nsSNVs nel contribuire alla perdita dell'udito nelle popolazioni cinesi sarebbe stato studiato in questo studio. Lo screening target per le variazioni di CLDN14 è stato condotto in 500 pazienti non imparentati con diagnosi di ipoacusia non sindromica (NSHL). In questo studio non sono stati rilevati nsSNV di CLDN14 patogeni in eterozigoti o omozigoti, tuttavia, noi identificato 4 nsSNV eterozigoti [c.11C > T, p. (Thr4Met); c.16G > A, p. (Val6Met); c.68T > C, p. (Ile23Thr); c.367A > C , p. (Thr123Pro)] in CLDN14. I 4 nsSNV si trovano a claudin- 14 domini transmembrana, ma valutati come scarsamente conservativi e non patogeni tramite algoritmi multipli in silico. L'analisi basata sulla struttura ha anche suggerito che i 4 nsSNV avevano un impatto strutturale e funzionale minore sulla claudina-14. I nostri risultati hanno indicato che CLDN14 potrebbe non essere un gene causale principale per NSHL nelle popolazioni cinesi, il che contribuirebbe a comprendere appieno la causa genetica dell'NSHL nelle popolazioni dell'Asia orientale.
Esperienze insolite del sonno e dissociazione come mediatori tra la qualità del sonno e la predisposizione alle allucinazioni in un campione di popolazione non clinica: uno studio preliminare.Lo scopo di questo studio era quello di esaminare la relazione tra la qualità del sonno e la propensione alle allucinazioni e il ruolo di mediazione della dissociazione e delle esperienze di sonno insolite in un campione non clinico. Centosettantasette partecipanti hanno completato un questionario sulla qualità del sonno, una scala delle esperienze dissociative, un'esperienza del sonno insolita scala e una scala di propensione alle allucinazioni. I risultati hanno mostrato una significativa associazione positiva tra la qualità del sonno e la propensione alle allucinazioni, la dissociazione e le esperienze di sonno insolite, e che la dissociazione e le esperienze di sonno insolite sono completamente mediate tra la qualità del sonno e la propensione alle allucinazioni. Il nostro studio evidenzia l'importanza di variabili relative alla qualità del sonno e a esperienze di sonno insolite e dissociazione in sotto allucinazioni in piedi e l'importanza di prendere in considerazione queste variabili nella progettazione di interventi diretti a ridurre il disagio causato dalle allucinazioni.
La cognizione sociale nel corso della psicosi e la sua correlazione con i biomarcatori in una coorte maschile.I pazienti con diagnosi di schizofrenia mostrano deficit nella teoria della mente (ToM ) ed Emozione Percezione (EP) anche prima della comparsa della sintomatologia conclamata Abbiamo valutato ToM ed EP in una coorte maschile composta da 25 First Episode Psychosis (FEP) e 16 pazienti schizofrenici recidivanti (CHRON) rispetto a 12 soggetti in Ultra- ad alto rischio (UHR) e 23 controlli sani (CTR). Inoltre, abbiamo misurato i livelli di cortisolo, fattore di crescita insulino-simile (IGF-1), TNF-a, TNF-b e diverse interleuchine come potenziali biomarcatori. La toM è stata trovata nei pazienti FEP, CHRON e nei soggetti con UHR rispetto al CTR. Le menomazioni in questi due domini sembrano seguire modelli diversi nel corso della psicosi. L'EP era più compromessa nei soggetti con una storia più lunga di sintomatologia mentre non c'era statisticamente significativo differenza riguardo a ToM. D'altra parte IL-4 era l'unico biomarcatore correlato ai punteggi di ToM e EP in due diversi campioni del nostro studio. I domini della cognizione sociale (SC) sono compromessi nei pazienti con psicosi e nei soggetti UHR rispetto ai controlli sani. Ci sono differenze nell'andamento dei deficit di ToM e EP nel corso della psicosi. Le interleuchine come IL-4 potrebbero essere correlate a SC.
La sfida di convertire i composti solo Gram-positivi in antibiotici ad ampio spettro.Le infezioni batteriche Gram-negative multiresistenti sono in aumento e mancano nuove classi di farmaci per il trattamento di questi agenti patogeni. Questa carenza di farmaci è in gran parte dovuta alla sfida di trovare antibiotici in grado di permeare e persistere all'interno delle specie Gram-negative. Gli sforzi per comprendere le proprietà molecolari che consentono a determinati composti di accumularsi in I batteri Gram-negativi basati su studi retrospettivi su antibiotici noti non sono stati generalmente perseguibili nello sviluppo di nuovi antibiotici. Una recente valutazione della capacità di >180 diverse piccole molecole di accumularsi in Escherichia coli ha portato a linee guida predittive per l'accumulo di composti in E. coli. Queste "regole di ingresso" affermano che i composti hanno maggiori probabilità di accumularsi se contengono un azoto ionizzabile non stericamente ingombrato (le ammine primarie sono le migliori), hanno un basso Th re-dimensionalità (globularità ≤ 0,25), e sono relativamente Rigidi (legami rotabili ≤ 5). In questa recensione, guardiamo indietro attraverso oltre 50 anni di ricerca antibatterica e migliaia di derivati e valutiamo questo set di dati storici attraverso la lente di queste linee guida predittive. I risultati sono coerenti con le regole eNTRy, suggerendo che le regole eNTRy possono fornire una tabella di marcia generale e attuabile per la conversione dei composti solo Gram-positivi in antibiotici ad ampio spettro.
Tendenze spaziali in un contaminante biomagnificante: applicazione dell'analisi degli isotopi di azoto stabili specifici di un composto amminoacidico all'interpretazione dei livelli di mercurio degli uccelli.Valori N e posizione trofica dallo stesso campione. Nel presente studio, uova (n = 428) di California (Larus californicus), aringhe (Larus argentatus smithsonianus) e gabbiani dal becco ad anello (Larus delawarensis) sono state utilizzate per valutare i modelli spaziali nel mercurio (Hg) disponibilità in 12 laghi canadesi occidentali situati oltre 14 gradi di latitudine, con regolazione dell'analisi isotopica stabile specifica del composto amminoacidico dei livelli di mercurio delle uova per la posizione trofica Livelli medi di mercurio delle uova aggiustati per la posizione trofica (microgrammi per grammo, peso secco) erano maggiori nei siti nelle acque riceventi del fiume Athabasca (X¯ = 0.70) rispetto alle regioni meridionali (X¯ = 0.39) e settentrionali (X¯ = 0.50). La ricerca è necessaria per indagare sui fattori (ad es. Hg locale rilasciato a seguito di attività umana s, processi che influenzano la metilazione del mercurio) che possono essere responsabili di una maggiore disponibilità di mercurio nel bacino inferiore del fiume Athabasca. Tuttavia, è chiaro che l'analisi degli isotopi stabili specifici del composto amminoacidico è uno strumento prezioso per valutare i modelli spaziali dei contaminanti. Environ Toxicol Chem 2018;37:1466-1475.
Associazione del livello di lattato deidrogenasi salivare con infiammazione sistemica in una popolazione giapponese.Lattato deidrogenasi salivare (LDH) è stato segnalato come un parametro utile per la screening della malattia parodontale Abbiamo eseguito uno studio trasversale per verificare l'utilità della LDH salivare come biomarcatore della parodontite e per indagare l'associazione della gravità della parodontite con l'infiammazione sistemica misurando la LDH salivare e la proteina C-reattiva sierica altamente sensibile (hs -CRP) in una popolazione di mezza età e anziana basata sulla comunità in Giappone. ) è stato testato utilizzando il termine del prodotto incrociato di LDH salivare continua trasformata in log e stato di sovrappeso. L'analisi della covarianza aggiustata per potenziali fattori confondenti ha rivelato forti associazioni tra salivare Livello di LDH e indicatori della condizione parodontale (P < .01) sia negli uomini che nelle donne Valori medi di hs-CRP aggiustati per sesso ed età in base ai quartili di LDH salivare erano 0,40, 0,45, 0,45 e 0,50 mg/L (P per trend <.01). Sebbene l'associazione sia stata attenuata dopo ulteriori aggiustamenti per indice di massa corporea, ipertensione, diabete mellito, dislipidemia, assunzione di alcol, fumo e attività fisica. Quando stratificata per stato di sovrappeso, l'associazione è rimasta significativa negli individui in sovrappeso (P = .03). L'odds ratio aggiustato multivariabile del livello di hs-CRP di ≥1 mg/L per il quartile più alto rispetto a quello più basso di LDH salivare era 1,93 (IC 95%, 1,01-3,69) negli individui in sovrappeso, ma non significativo negli individui non in sovrappeso. LDH salivare sembra essere un biomarcatore promettente per lo screening di massa della parodontite nelle strutture sanitarie della comunità locale. Livelli elevati di LDH nella saliva, in particolare negli individui in sovrappeso, potrebbero contribuire alla prevenzione delle malattie cardiovascolari, misurando i carichi infiammatori sistemici e i tradizionali fattori di rischio cardiovascolare.
Eliminazione continua e sostenuta della carenza di iodio: un quarto di secolo di successi nella Repubblica islamica dell'Iran.La carenza di iodio e i disturbi correlati erano molto comuni in Iran prima del 1996, quando fu implementata la iodizzazione universale del sale (USI) e nel 2000 l'Iran fu dichiarato libero da disturbi da carenza di iodio (IDD). Lo scopo di questo studio era valutare l'adeguatezza dell'assunzione di iodio da parte delle famiglie iraniane in tutte le 30 province dell'Iran , un quarto di secolo dopo l'intervento. Un totale di 18.000 bambini in età scolare (8-10 anni con una media di 8,7 ± 1 anno) sono stati inclusi in questo studio. Sono stati raccolti campioni di urina da tutti i bambini per la misurazione dell'escrezione urinaria di iodio e 1800, 210 e 3000 campioni di sale sono stati raccolti casualmente dalla cucina di famiglia, dal sito di produzione di 73 fabbriche di sale e dai circoli di distribuzione di 30 province, rispettivamente. La concentrazione mediana di iodio urinario (UIC) dei partecipanti era di 161 μg/L. La proporzione di ch idren con UIC di, 20-49, 50-99 e ≥ 100 μg/L erano rispettivamente 10,3, 15,9 e 73,7%. I valori medi (± DS) e di iodio salino medi erano 28,2 (± 12,6) e 31,7 ppm, nel sito di produzione, e 31,5 (± 13,6) e 29,6 ppm nei circoli di distribuzione, rispettivamente. Circa l'80% dei sali di fabbrica conteneva più di 20 ppm di iodio. Il 98% delle famiglie consumava sale iodato, l'80% aveva un'adeguata conservazione del sale e l'83% dei sali domestici conteneva ≥ 20 ppm. Sulla base dei risultati di questo studio, le popolazioni iraniane consumano un'adeguata quantità di iodio. Il programma USI ben mantenuto e monitorato ha migliorato l'assunzione di iodio nella dieta della popolazione e il paese ha raggiunto tutti i criteri di un programma IDD ben controllato.
Prestazioni di crescita, caratteristiche di carcassa e non carcassa e qualità della carne di agnelli Barbarine alimentati con residui di distillazione di rosmarino.Lo scopo di questo esperimento era studiare l'effetto di sostituzione totale del fieno di avena con residui di distillazione del rosmarino (RR) sulla crescita, le caratteristiche della carcassa e la qualità della carne degli agnelli Barbarine. Un totale di 21 agnelli sono stati suddivisi in tre gruppi. Al gruppo di controllo (C) sono stati offerti 600 g di fieno di avena; I gruppi RR87 e RR60 hanno ricevuto 600 g di pellet contenenti rispettivamente l'87% e il 60% di RR. Il contenuto di CP era rispettivamente del 9% e del 14% per RR87 e RR60. Tutti gli animali sono stati integrati con 600 g di concentrato. Dopo 77 giorni di all'ingrasso, gli agnelli venivano macellati. L'assunzione di DM e CP era significativamente aumentata con le diete RR. L'aumento medio giornaliero era più alto (P<0.001), mentre il tasso di conversione del mangime era inferiore per RR60 e RR87 rispetto al gruppo C. La percentuale di medicazione era simile per tutti i gruppi. I tessuti (muscolo, grasso e ossa) e) e la composizione regionale della carcassa (zampa, spalla, ecc. ) non differiva tra i gruppi. Gli organi ossei e il peso dell'intestino erano simili tra i gruppi, mentre quelli funzionali (pelle, fegato, reni e testicoli) erano significativamente più pesanti per entrambi i gruppi RR rispetto al controllo. Il pH finale, la perdita di cottura dell'acqua e le variabili del colore erano simili tra i gruppi e la composizione chimica (proteine, grassi, mioglobina, collagene e ferro) non differiva anche tra i gruppi. Questi risultati hanno rivelato l'opportunità dell'uso di RR negli agnelli da ingrasso senza effetti negativi sulle caratteristiche della carcassa e della carne. Inoltre, il 9% di CP in pellet RR è sufficiente data la stessa performance di crescita registrata come quella di RR con il 14% di CP.
Aumento del rischio di malattia arteriosa periferica nei pazienti con aneurisma dell'aorta addominale: uno studio di coorte retrospettivo (versione 5).Studi che valutano il rischio di arterioso periferico malattia (PAD) nei pazienti con aneurisma dell'aorta addominale (AAA) sono limitati. Abbiamo utilizzato i dati sui sinistri assicurativi di Taiwan per stabilire una coorte di 6590 pazienti con AAA di nuova diagnosi dal 2000 al 2008 e 6590 controlli senza AAA abbinati per punteggio di propensione. i tassi di densità di incidenza della PAD sono stati stimati in entrambe le coorti entro la fine del 2011 e la coorte AAA rispetto ai rapporti di rischio (HR) della coorte non AAA della PAD sono stati calcolati utilizzando i modelli di rischio proporzionale di Cox. era 3,7 volte maggiore di quello nella coorte non AAA (14,1 vs 3,66 per 1000 anni-persona) con un HR aggiustato di 3,56 (intervallo di confidenza 95% [CI] = 2,89-4,39). nella coorte AAA era 7,4 volte maggiore di quello nella coorte non AAA (12,0 vs 1,61 per 1000 anni-persona) con un HR aggiustato di 6,70 (IC 95% = 4,43-10,1). L'incidenza di PAD nei pazienti con rottura di AAA era inferiore a quella nei pazienti senza rottura (6,95 vs 15,0 per 1000 anni-persona). Questo studio dimostra che i pazienti con AAA corrono un rischio maggiore di sviluppare PAD.
Ricostruzione dell'angolo posterolaterale utilizzando la tecnica dell'innesto anatomico a due code: esiti clinici nel ginocchio con lesioni multilegamentose.Lesione all'angolo posterolaterale (PLC) di il ginocchio può portare sia al varismo che all'instabilità rotazionale. Sono state descritte più tecniche di ricostruzione PLC, tra cui l'innesto a una coda (costrutti basati su perone) o l'innesto a due code (costrutti combinati a base di fibula e tibia). studio è stato quello di valutare gli esiti clinici della ricostruzione anatomica con innesto a due code del PLC nel contesto di lesioni multilegamentose del ginocchio (MKLI) con instabilità in varo di grado III. I pazienti sono stati identificati attraverso un database prospettico MLKI tra il 2004 e il 2013. Pazienti che hanno ricevuto perone Sono state incluse le ricostruzioni del legamento collaterale e del PLC utilizzando un innesto a due code e con un follow-up minimo di 2 anni. I pazienti sono stati valutati per grado di lassità clinica, range di movimento e risultati funzionali utilizzando i punteggi di Lysholm e International Knee Documentation Committee (IKDC). Sono stati inclusi 20 pazienti (16 maschi, 4 femmine) con un'età media di 30,7 (range: 16-52) e un follow-up medio di 52,2 mesi (range: 24-93 mesi). I gradi di lussazione del ginocchio (KD) includevano: 4 KD-1, 10 KD 3-L, 5 KD-4 e 1 KD-5. Nessun paziente ha riportato lesioni da PLC isolate. Il punteggio medio di IKDC e Lysholm era 73,1α 25,8 e 78α 26, rispettivamente. L'intervallo di movimento medio era compreso tra -1,1 e 122,8. In piena estensione, due pazienti (10%) presentavano una lassità di grado 1 allo stress in varo. A 30 gradi di flessione del ginocchio, cinque (25%) pazienti avevano una lassità di grado 1 e due (10%) una lassità di grado 2. La ricostruzione anatomica del PLC a due code può ripristinare in modo affidabile la stabilità in varo se eseguita su pazienti con MLKI e instabilità posterolaterale di tipo C con deformità recurvatum in iperestensione e rotazione esterna. Nella maggior parte dei pazienti sono stati raggiunti punteggi di esito funzionale soddisfacenti. Questo studio supporta l'uso di una ricostruzione anatomica PLC a due code nel ginocchio leso multilegamento. Il livello di evidenza è IV, serie di casi.
Artroplastica totale di ginocchio con allineamento cinematico o artroplastica totale di ginocchio con allineamento meccanico.= 0.0001), tutti statisticamente significativamente diversi. Risultati clinici migliori sono stati ottenuti in KATKA e il posizionamento dei componenti in KATKA è significativamente diverso da quello in MATKA. Non c'è stato alcun aumento di pazienti con scarsi risultati clinici a causa della posizione dell'impianto, specialmente per il posizionamento in varo del componente tibiale. Questa revisione sistematica di cinque RCT suggerisce che KATKA è un potenziale metodo alternativo a MATKA poiché il rischio di revisione per mobilizzazione tibiale è trascurabile rispetto a MATKA per lo stesso periodo di follow-up.
Errore diagnostico nelle cause dell'ictus e soluzioni proposte.Discutiamo la frequenza delle diagnosi errate di ictus e identifichiamo i sottogruppi di ictus ad alto rischio di errori diagnostici specifici Inoltre, esaminiamo i motivi comuni di diagnosi errate e proponiamo soluzioni per ridurre l'errore. Secondo un recente rapporto della National Academy of Medicine, è probabile che la maggior parte delle persone negli Stati Uniti subisca un errore diagnostico durante la propria vita. Quasi la metà di tali errori portare a grave disabilità e morte. La diagnosi errata di ictus è una delle principali preoccupazioni sanitarie, con una diagnosi errata iniziale stimata che si verifica nel 9% di tutti i pazienti con ictus nel contesto di emergenza. La diagnosi errata o mancata (falso negativo) dell'ictus può portare a pazienti avversi esiti dovuti alla preclusione di trattamenti acuti e al mancato avvio di strategie di prevenzione secondaria. D'altra parte, la sovradiagnosi di ictus può comportare un trattamento inadeguato, un'identificazione ritardata o f effettiva malattia di base e aumento dei costi sanitari. I pazienti giovani, le donne, le minoranze e i pazienti che presentano sintomi aspecifici, transitori o di ictus della circolazione posteriore sono a maggior rischio di diagnosi errate. Le strategie per ridurre l'errore diagnostico nell'ictus si sono in gran parte concentrate sulla diagnosi precoce dell'ictus tramite strategie di esame al letto del paziente e regole di decisione clinica. Sono necessari interventi mirati per migliorare l'accuratezza diagnostica della diagnosi di ictus tra i gruppi ad alto rischio, nonché supporti decisionali clinici specifici per i sintomi. Ci sono una serie di domande aperte nello studio della diagnosi errata di ictus. Per migliorare gli esiti dei pazienti, le strategie esistenti per migliorare l'accuratezza diagnostica dell'ictus dovrebbero essere adottate in modo più ampio e nuovi interventi ideati e testati per ridurre gli errori diagnostici.
Un nuovo modello animale della malattia di Parkinson che utilizza l'optogenetica: rappresentazione di vari stadi della malattia modulando il parametro di illuminazione.Il classico modello animale di Parkinson La malattia (PD) che utilizza la neurotossina può solo simulare fasi fisse della malattia causando danni irreversibili al sistema nigrostriatale Sviluppare un modello optogenetico di PD in grado di modulare la gravità della malattia mediante stimolazione ottica introducendo il gene dell'alorodopsina (NpHR) in la substantia nigra compacta. Quindici ratti hanno ricevuto iniezioni di AAV ingegnerizzato con il gene NpHR-YFP nella substantia nigra. Sono stati quindi sottoposti a illuminazione di lunghezze d'onda della luce di 590 nm con 3 condizioni di stimolazione ottica, vale a dire, larghezza di frequenza: 5 Hz-10 ms (n = 5), 5 Hz-100 ms (n = 5) e 50 Hz-10 ms (n = 5). Undici ratti hanno ricevuto iniezioni di 6-idrossidopamina per stabilire il modello PD convenzionale. I modelli optogenetici ha mostrato la caratteristica P D manifestazioni, simili a quelle dei modelli convenzionali; la gravità dell'acinesia degli arti anteriori era correlata al valore di illuminazione totale (frequenza × larghezza). Il gruppo con un valore di illuminazione basso (5 Hz-10 ms) era paragonabile al modello parziale convenzionale mentre i gruppi con valori di illuminazione elevati (5 Hz-100 ms e 50 Hz-10 ms) erano simili al modello completo convenzionale. Un modello optogenetico di PD ha il vantaggio di rappresentare in modo più appropriato vari stadi di PD controllando i parametri di illuminazione.
Generazione di una linea di cellule staminali pluripotenti indotte (ZZUi004-A) da un campione di urina di un paziente con atassia spinocerebellare di tipo 3.Atassia spinocerebellare di tipo 3 ( SCA3) è una malattia neurodegenerativa ereditaria dominante causata da un'espansione della ripetizione CAG nella regione del gene ATXN3. La caratteristica principale di SCA3 è l'atassia progressiva, che colpisce l'equilibrio, l'andatura e la parola. Le cellule urinarie (UC) di un paziente SCA3 sono state tradotte con successo in cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC) utilizzando il sistema di somministrazione del virus Sendai. La linea cellulare ZZUi004-A può fornire una solida piattaforma per ulteriori studi sulla patogenesi della SCA3, nonché per test sui farmaci e ricerca sulla terapia genica.
Identificazione e isolamento di nuovi materiali protettivi per RNA simili allo zucchero: glicilglicerina da cellule staminali pluripotenti.Le cellule staminali pluripotenti sono un prezioso scrigno per la medicina rigenerativa Contengono una grande varietà di nuovi materiali utili per progettare e sviluppare nuovi farmaci e terapie diretti contro molti disturbi degenerativi associati all'invecchiamento, tra cui il morbo di Alzheimer, il morbo di Parkinson, l'ictus, il diabete, l'osteoporosi e i tumori. di questi nuovi materiali specifici per le cellule staminali è una delle principali scoperte nel campo della ricerca sulle cellule staminali In particolare, dalla scoperta delle cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC) nell'anno 2006, i metodi di derivazione iPSC forniscono inoltre una risorsa illimitata per lo screening , isolando e persino producendo in vitro tesi nuovi materiali specifici per le cellule staminali Usando le iPSC, ora possiamo preparare alta qualità e quantità di pura agenti per testare le loro funzioni terapeutiche nel trattamento di varie malattie. Questi nuovi agenti specifici delle cellule staminali sono divisi in quattro categorie principali, tra cui proteine, saccaridi, acidi nucleici e piccole molecole (sostanze chimiche). In questo articolo, divulghiamo qui una delle metodologie per isolare e purificare le glicilglicerine, un gruppo di alcoli di zucchero glicilati che proteggono i precursori di microRNA simili a forcine (pre-miRNA) e alcuni dei tRNA nelle cellule staminali pluripotenti. In considerazione di una tale caratteristica unica di protezione dell'RNA, le glicilglicerine possono essere utilizzate per preservare e fornire piccoli RNA funzionali, come pre-miRNA e piccoli RNA interferenti (siRNA), nelle cellule umane per suscitare i loro effetti specifici di interferenza dell'RNA (RNAi), che potrebbe far avanzare notevolmente l'uso della tecnologia RNAi per il trattamento delle malattie umane.
L'induzione di cellule staminali pluripotenti mediata da miR-302 (iPSC): meccanismi di riprogrammazione sinergica multipla.La pluripotenza rappresenta una caratteristica unica delle cellule staminali embrionali (ESC). Per generare cellule staminali pluripotenti indotte da ESC (iPSC) derivate da cellule somatiche, il genoma cellulare deve essere ripristinato e riprogrammato per esprimere il trascrittoma specifico dell'ESC. Numerosi studi hanno dimostrato che la demetilazione del DNA genomico è necessaria per riprogrammazione epigenetica dei nuclei delle cellule somatiche per formare iPSC; tuttavia, il meccanismo rimane in gran parte poco chiaro Nelle ESC, il processo di riprogrammazione passa attraverso due fasi critiche: demetilazione della linea germinale e zigotica, entrambe le quali cancellano i siti di metilazione del DNA genomico e quindi consentono una diversa espressione genica modelli da ripristinare in uno stato pluripotente. Recentemente, miR-302, un microRNA ESC-specifico (miRNA), è stato trovato per svolgere un ruolo essenziale in quattro aspetti di questo meccanismo di riprogrammazione-(1) iniziando gen globale demetilazione del DNA omico, (2) attivazione dell'espressione genica specifica per ESC, (3) inibizione della segnalazione dello sviluppo e (4) prevenzione della tumorigenicità delle cellule staminali. In questa recensione, riassumeremo le funzioni del miR-302 in tutti e quattro gli aspetti di riprogrammazione e discuteremo ulteriormente di come questi risultati possono migliorare l'efficienza e la sicurezza dell'attuale tecnologia iPSC.
Meccanismo e metodo per generare cellule iPS prive di tumore utilizzando l'induzione intronica di miR-302 di microRNA.Oggi i ricercatori che generano cellule staminali pluripotenti indotte (iPS) cellule o iPSC) di solito considerano la loro pluripotenza piuttosto che la potenziale tumorigenicità. Fattori oncogeni come c-Myc e Klf4 sono frequentemente utilizzati per aumentare la sopravvivenza e i tassi di proliferazione delle iPSC, creando un inevitabile problema di tumorigenicità che ostacola l'utilità terapeutica di queste iPSC. Per prevenire la tumorigenicità delle cellule staminali, abbiamo esaminato i meccanismi mediante i quali i geni del ciclo cellulare sono regolati nelle cellule staminali embrionali (ESC). Naturalmente, le ESC possiedono due proprietà staminali uniche: differenziazione pluripotente in quasi tutti i tipi di cellule e auto-rinnovamento illimitato senza il rischio di formazione del tumore. Queste due caratteristiche sono importanti anche per l'uso di ESC o iPSC in terapia. Attualmente, nonostante i rapporti schiaccianti che descrivono la pluripotenza iPSC, non c'è n o segnalazione di qualsiasi meccanismo di prevenzione del tumore negli ESC o negli iPSC. A questo, i nostri studi hanno rivelato per la prima volta che un microRNA (miRNA) specifico per l'ESC, miR-302, regola la tumorigenicità dell'iPSC umana attraverso la cosoppressione sia della ciclina E-CDK2 che della ciclina D-CDK4/6 percorsi del ciclo cellulare durante G1- Transizione di fase S. Inoltre, miR-302 silenzia anche BMI-1, un marcatore genico delle cellule staminali del cancro, per promuovere l'espressione di due geni oncosoppressori associati alla senescenza, p16Ink4a e p14/p19Arf. Insieme, gli effetti combinati dell'inibizione della transizione del ciclo cellulare G1-S e dell'aumento dell'espressione di p16/p14(p19) determinano una velocità del ciclo cellulare attenuata simile a quella delle cellule embrionali dello stadio da 2 a 8 cellule nei primi zigoti (20- 24 h/ciclo), che è tuttavia più lento del rapido tasso di proliferazione delle iPSC indotto dai quattro fattori definiti Oct4-Sox2-Klf4-c-Myc (12-16 h/ciclo). Questi risultati forniscono un mezzo per controllare la tumorigenicità delle iPSC e migliorare la sicurezza delle iPSC per l'uso terapeutico. In questo capitolo, esaminiamo il meccanismo alla base della soppressione del tumore mediata da miR-302 e quindi dimostriamo come applicare questo meccanismo per generare iPSC senza tumore. La stessa strategia può essere utilizzata anche per prevenire la tumorigenicità delle ESC.
Applicazione dell'approccio basato su TALE per la dissezione di microRNA-302/367 funzionali nella riprogrammazione cellulare.I microRNA sono piccoli non codificanti a singolo filamento di 18-24 nt Molecole di RNA coinvolte in molti processi biologici, tra cui il mantenimento della staminalità e la riprogrammazione cellulare. I metodi attuali utilizzati negli studi sulla perdita di funzione dei microRNA hanno diverse limitazioni. Qui, descriviamo un nuovo approccio per la dissezione delle funzioni di miR-302/367 mediante attivatore di trascrizione- come effettori (TALE), che sono proteine effettrici naturali secrete dai batteri Xanthomonas e Ralstonia Il knockdown del cluster miR-302/367 utilizza il dominio del repressore della scatola associato a Kruppel fuso con TALE specifici progettati per legare il promotore del cluster miR-302/367 Il knockout del cluster miR-302/367 utilizza due coppie di nucleasi TALE (TALENs) per eliminare il cluster miR-302/367 nelle cellule primarie umane Insieme, sia il repressore trascrizionale basato su TALE che i TALEN sono due approcci promettenti per studi sulla perdita di funzione di cluster di microRNA nelle cellule primarie umane.
Modelli animali simili al transgene che utilizzano microRNA intronici.I modelli animali transgenici sono strumenti preziosi per testare le funzioni geniche e i meccanismi dei farmaci in vivo. Sono anche i migliore similitudine per un corpo umano per la ricerca eziologica e patologica delle malattie. Tutti i farmaci sviluppati a livello farmaceutico devono essere dimostrati sicuri ed efficaci negli animali prima dell'approvazione da parte della Food and Drug Administration (FDA) per essere utilizzati negli studi clinici. A tal fine, i modelli animali transgenici di malattie fungono da prima linea nella valutazione dei farmaci. Tuttavia, attualmente non esiste un modello animale transgenico per la ricerca relativa ai microRNA (miRNA). MiRNA, piccoli RNA regolatori a filamento singolo in grado di silenziare le trascrizioni geniche intracellulari (mRNA) che contengono complementarietà completa o parziale al miRNA, sono utili per la progettazione di nuove terapie contro il polimorfismo del cancro e la mutazione virale. Recentemente, sono state trovate varietà di miRNA naturali per b e derivato da precursori di RNA simili a forcine in quasi tutti gli eucarioti, inclusi lievito (Schizosaccharomyces pombe), piante (Arabidopsis spp. ), nematodi (Caenorhabditis elegans), mosche (Drosophila melanogaster), pesci, topi e umani, che coinvolgono la difesa intracellulare contro i virus infezioni e regolazione di alcune espressioni geniche durante lo sviluppo. Per facilitare la ricerca sui miRNA in vivo, abbiamo sviluppato una strategia transgenica all'avanguardia per silenziare geni specifici in zebrafish, pollo e topo, utilizzando miRNA intronici. Mediante l'inserimento di una struttura pre-miRNA simile a una forcina nella regione dell'introne di un gene, abbiamo scoperto che i miRNA maturi sono stati trascritti con successo dalle RNA polimerasi di tipo II (Pol-II), coespressi con le trascrizioni del gene codificante ed eliminati dei trascritti genici codificanti mediante processi di splicing e processamento dell'RNA intracellulare. In concomitanza con la trasfezione retrovirale, il costrutto pre-miRNA a forma di forcina è stato anche posizionato nelle regioni introniche di un gene cellulare per l'espressione tessuto-specifica, specificamente regolato dal promotore del gene di interesse. Poiché i vettori retrovirali sono integrati nel genoma delle sue cellule ospiti, possiamo selezionare e propagare gli animali transgenici più efficaci per formare una linea modello stabile per ulteriori ricerche. Qui, abbiamo dimostrato per la prima volta che modelli animali simili al transgene sono stati generati utilizzando il sistema di espressione di miRNA intronico riportato in precedenza, che si è dimostrato utile per studiare la funzione del miRNA e la relativa regolazione genica in vivo.
Microdissezione laser dell'epitelio da un modello di guarigione delle ferite per l'analisi dei microRNA.I microRNA sono RNA non codificanti lunghi circa 22 nucleotidi che influenzano molti processi cellulari (compresi guarigione della ferita) per le loro funzioni regolatorie sull'espressione genica. La capacità di analizzare i microRNA in diverse cellule nel sito della ferita è essenziale per comprendere il ruolo oi ruoli critici dei microRNA durante le varie fasi della guarigione della ferita. Micro-dissezione con cattura laser (LCM) è un metodo efficace per distinguere tra cellule o tessuti rilevanti e non rilevanti e consente al ricercatore di ottenere campioni omogenei e ultra puri da materiale di partenza eterogeneo. Presentiamo qui il nostro protocollo per procurare cellule epiteliali da un modello di guarigione di ferite di topo utilizzando una Leica Il sistema di microdissezione laser LMD7000, nonché l'isolamento dell'RNA e l'analisi del microRNA a valle. Utilizzando questo metodo, i ricercatori possono analizzare selettivamente e di routine le regioni di interesse d possedere singole celle per ottenere risultati pertinenti, riproducibili e specifici.
Manipolazione genica con micro RNA in una singola cellula cancerosa umana.I micro RNA (miRNA) sono piccoli RNA elaborati da trascritti precursori di RNA più lunghi che possono ripiegarsi torna su se stesso per formare strutture a forcina accoppiate Watson-Crick. Una volta elaborato dalla molecola più lunga, il piccolo RNA è troppo corto per codificare per le proteine, ma può svolgere altri ruoli molto importanti, come la regolazione genica. Il fenomeno dell'interferenza dell'RNA è stato inizialmente osservato da Napoli e Jorgensen in fiori di petunia transgenici, dove è stata osservata la soppressione genica dopo l'introduzione di un transgene della calcone sintasi (CHS) appartenente alla via di biosintesi dei flavonoidi. ruoli anche nel cancro. Il miRNA può anche essere usato per manipolare i geni per lo studio della carcinogenesi. Gli studi sul profilo del trascrittoma a cellula singola nel nostro laboratorio suggeriscono che la carcinogenesi spesso è il risultato del malfunzionamento di più membri di un percorso molecolare. Qui descriviamo un protocollo per manipolare più geni correlati al cancro in una singola cellula umana per studiare come interagiscono più geni durante la carcinogenesi.
Isolamento, coltura e determinazione dei cardiomiociti neonatali di ratto\' effetti sulla proliferazione dei microRNA.La perdita dei cardiomiociti è una delle principali cause di molte malattie cardiovascolari, compreso il cuore insufficienza cardiaca e infarto miocardico Sebbene estremamente limitato, i cardiomiociti adulti sono in grado di proliferare Comprendere i meccanismi molecolari che controllano la proliferazione dei cardiomiociti è estremamente importante per migliorare la proliferazione dei cardiomiociti per promuovere la rigenerazione e la riparazione cardiaca I microRNA (miRNA, miR) sono potenti controllori di molti elementi biologici essenziali processi, inclusa la proliferazione cellulare. Qui, abbiamo descritto in dettaglio un protocollo per l'isolamento e la coltura di cardiomiociti neonatali di ratto e la determinazione degli effetti dei miRNA\' nella proliferazione sulla base di due metodi consolidati tra cui le colorazioni immunofluorescenti EdU e Ki67.
Screening di miRNA per il significato funzionale mediante il sistema di coltura cellulare 3D.Saggi basati su cellule svolgono un ruolo importante nella biologia cellulare e nella scoperta di farmaci. Coltura cellulare 3D, che consente alle cellule di crescere o interagire con l'ambiente circostante in tutte e tre le dimensioni, fornisce più informazioni fisiologiche per i test in vivo. Qui, descriviamo un sistema di coltura cellulare 3D a base di collagene sintonizzabile basato su materiale di collagene reticolato con transgluminasi, per studiare la funzione di miR. Vengono descritti metodi tra cui manipolazione del gel, saggi di proliferazione, espressioni geniche e proteiche in un ambiente 3D.
Misurazione completa del silenziamento genico che coinvolge i microRNA endogeni nelle cellule di mammifero.I microRNA (miRNA) sono piccoli RNA non codificanti funzionali che funzionano come mediatori nel silenziamento genico e che svolgono un ruolo importante nella regolazione genica. Sono stati trovati numerosi miRNA e i loro profili di espressione sono stati esaminati per mezzo di vari sistemi di microarray e sistemi di reazione a catena della polimerasi in tempo reale (PCR). I microarray convenzionali e la PCR in tempo reale sono in grado di rilevare i miRNA esistenti, in cui possono essere contenuti anche miRNA inattivi che difficilmente contribuiscono al silenziamento genico. Qui, descriviamo un sistema completo di biodosaggio di miRNA con geni reporter per il rilevamento di miRNA attivi che sono presenti nei complessi di silenziamento indotti da RNA, e lavorando effettivamente come mediatori nel silenziamento genico.
Isolamento e identificazione di microRNA gene-specifici.La programmazione informatica ha identificato centinaia di sequenze genomiche a forcina, molte con funzioni ancora da determinare. Perché la trasfezione di precursori di microRNA simili a forcine (pre-miRNA) nelle cellule di mammifero non è sempre sufficiente per innescare l'assemblaggio del complesso di silenziamento genico indotto da RNA (RISC), un passaggio chiave per indurre il silenziamento genico correlato all'interferenza dell'RNA (RNAi), abbiamo sviluppato un sistema intronico di espressione di miRNA per superare questo problema inserendo una struttura pre-miRNA simile a una forcina nella regione intronica di un gene, e quindi aumentare con successo l'efficienza e l'efficacia dell'induzione di RNAi associata ai miRNA in vitro e in vivo. Questa biogenesi intronica di miRNA è stato scoperto che il meccanismo dipende da un'interazione accoppiata tra la trascrizione dell'RNA messaggero nascente e l'escissione dell'introne all'interno di una specifica regione nucleare prossimale alle fibrille di pericrotina genomica. ained viene trascritto dalle RNA polimerasi di tipo II, coespresso all'interno di una trascrizione genica primaria e quindi escisso dalla trascrizione genica mediante splicing intracellulare dell'RNA e macchinari di elaborazione. Successivamente, le endonucleasi della ribonucleasi III (RNasiIII) elaborano ulteriormente gli introni giuntati in miRNA maturi. Usando questo sistema di espressione di miRNA intronico, abbiamo dimostrato per la prima volta che i miRNA derivati dagli introni sono in grado di suscitare forti effetti RNAi non solo nelle cellule umane e di topo in vitro, ma anche in zebrafish, embrioni di pollo e topi adulti in vivo. Abbiamo anche sviluppato un protocollo di isolamento dei miRNA, basato sulla complementarità tra il miRNA progettato e la sua sequenza genica mirata, per purificare e identificare i miRNA maturi generati. Di conseguenza, sono state confermate diverse identità e strutture di miRNA intronici. Secondo questa metodologia di prova del principio, ora abbiamo la piena conoscenza per progettare vari inserti intronici pre-miRNA che sono più efficienti ed efficaci per indurre specifici effetti di silenziamento genico in vitro e in vivo.
Metodi in vitro per analizzare i ruoli dei miRNA nella proliferazione, invasione e metastasi delle cellule cancerose.I microRNA (miRNA) sono piccoli RNA non codificanti a filamento singolo costituito da 20-24 nucleotidi (Bartel, Cell 116:281-297, 2004), che regolano l'espressione dei geni bersaglio interagendo con regioni 3\'-non tradotte (3\'-UTR) di mRNA bersaglio, portando alla repressione della traduzione o mRNA degradazione (Filipowicz et al. , Nat Rev Genet 9:102-114, 2008; Nilsen, Trends Genet 23:243-249, 2007) L'accumulazione di prove li ha chiariti come oncogeni o soppressori tumorali in tumori come il carcinoma epatocellulare, il cancro al seno , e cancro ai polmoni (Liu et al. , Gastroenterology 136:683-693, 2009; Yu et al. , Cell 131:1109-1123, 2007; Zhou et al. , Sci Rep 7:42680, 2017; Iorio e Croce, Carcinogenesi 33:1126-1133, 2012). I miRNA sono coinvolti in vari processi biologici, inclusa la proliferazione cellulare (Liu et al. , Mol Cancer Res 11:1314-1325, 2013), differenziano (Liu et al. , Mol Cancer Res 11:1314-1325, 2013), apoptosi (Pan et al. , Oncol Res 24:429-435, 2016), invasione e metastasi (Liu et al. , Nat Commun 8: 14270, 2017). Comprendere il ruolo dei miRNA nel tumore offre una nuova prospettiva sulla diagnosi e la terapia del cancro (Rupaimoole and Slack, Nat Rev Drug Discov 16:203-222, 2017; Berindan-Neagoe et al. , CA Cancer J Clin 64:311-336, 2014 ). Questo capitolo si concentrerà sui metodi in vitro per identificare i ruoli dei miRNA nella proliferazione cellulare, nell'invasione e nella metastasi nello sviluppo del tumore, che include il saggio CCK-8, il saggio di guarigione delle ferite e il saggio Transwell.
Quantum Language of MicroRNA: Application for New Cancer Therapeutic Targets.MicroRNA (miRNA) è il gene non codificante: quindi, il gene miRNA controlla ereditariamente la proteina espressione genica attraverso livelli trascrizionali e post-trascrizionali L'espressione aberrante dei geni miRNA causa varie malattie umane, in particolare i tumori Sebbene il cancro sia una malattia complessa, l'implicazione cancro/miRNA è stata ancora compresa dal punto di vista del profilo miRNA al letto del letto. è l'elemento genetico mobile, la verifica clinica del miRNA nella microvescicola del sangue è troppo difficile per prevedere potenziali associazioni cancro/miRNA senza il calcolo bioinformatica. Inoltre, l'indagine sperimentale sui percorsi miRNA/cancro è costosa e richiede tempo. Mentre i dati accumulati (big data) dei profili di miRNA è stato on line poiché i database sui tumori, utilizzando gli algoritmi del database per la previsione del target di miRNA, hanno ridotto il tempo richiesto per c esperimenti convenzionali e hanno ridotto i costi. La previsione computazionale di miRNA/mRNA bersaglio ha mostrato numerosi risultati significativi che non sono ottenibili solo con approcci sperimentali. Tuttavia, l'ID del miRNA nell'annotazione è un numero arbitrario e l'ID non è correlato alle sue funzioni del miRNA. Pertanto, non è stato dimostrato dal punto di vista fisico-chimico perché più miRNA nel sangue o nei tessuti siano utili per la diagnosi e la porgnosi delle malattie umane o perché la funzione di un singolo miRNA nel cancro sia resa oncomir o soppressore del tumore. Inoltre, è meno chiaro il motivo per cui i fattori ambientali, come la temperatura, le radiazioni, gli agenti terapeutici antitumorali immunitari o chimici possono alterare l'espressione dei miRNA nella cellula. La teoria del ceRNA non sarebbe sufficiente per l'indagine di tali soggetti. Dati gli strumenti di previsione miRNA/target, per chiarire tali problemi con la simulazione al computer, abbiamo precedentemente introdotto l'interazione quantistica miRNA/miRNA come nuovo punteggio utilizzando un grande database. Il punteggio quantistico è stato implicato nelle sinergie di miRNA nel cancro e ha partecipato all'interazione miRNA/bersaglio sulle malattie umane. D'altra parte, l'RNA ribosomiale (rRNA) è la specie di RNA dominante delle cellule. È noto che le ribosomopatie, come l'anemia di Diamond-Blackfan, la discheratiosi congenita, la sindrome di Shwachman-Diamond, la sindrome 5q-mielodisplastica, la sindrome di Treacher Collins, l'ipoplasia della cartilagine-capelli, la cirrosi infantile degli indiani d'America, l'asplenia congenita isolata, la sindrome di Bowen-Conradi e il cancro sono causati dall'espressione alterata delle proteine ribosomiali o dei geni rRNA. Abbiamo proposto l'ipotesi che l'interazione tra miRNA da rRNA e/o altri miRNA cellulari sarebbe coinvolta nel cancro come ribosomopatia. Successivamente, abbiamo trovato miRNA derivati da rRNA (rmiRNA) utilizzando la ricerca per omologia di sequenza (miPS) con database di miRNA (miRBase). Inoltre, il percorso correlato al cancro tra rmiRNA/gene della proteina bersaglio è stato previsto dall'algoritmo di ordinamento del bersaglio (METS) di entanglement del miRNA. In questo capitolo, descriviamo l'uso del programma di identificazione di miRNA in silico, la ricerca di predizione di miRNA/bersaglio attraverso il database e il linguaggio quantistico di miRNA da parte del METS e l'analisi dell'ontologia. In particolare, l'algoritmo METS secondo il valore quantistico sarebbe utile simulatore per scoprire un nuovo bersaglio terapeutico contro il cancro. Può anche contribuire in parte alla delucidazione di meccanismi complessi e allo sviluppo di agenti antitumorali.
Analisi quantitativa dei microRNA precursori e dei rispettivi microRNA maturi negli esosomi cancerosi nel tempo.Gli esosomi sono un sistema di comunicazione cellula-cellula che trasporta informazioni a cellule vicine e/o distanti. Il loro contenuto è composto da lipidi, proteine, RNA e DNA. Il ruolo degli esosomi rilasciati dalle cellule tumorali nella progressione della malattia è stato ampiamente studiato. Qui riportiamo un protocollo dettagliato per quantificare i microRNA precursori e maturare microRNA straordinari negli esosomi delle cellule tumorali. Quei microRNA precursori che sono impacchettati insieme alle proteine RISC verranno ulteriormente elaborati negli esosomi e si verificherà un accumulo della forma matura dei microRNA.
Estrazione di microRNA esosomiali da cardiomiociti derivati da cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo per la rigenerazione cardiaca.L'infarto miocardico è la principale causa di morbilità e mortalità in tutto il mondo. I recenti progressi nella terapia rigenerativa cardiaca hanno consentito nuove modalità per ricostituire il miocardio danneggiato. Tuttavia, lo scarso attecchimento a lungo termine e la sopravvivenza delle cellule trapiantate hanno in gran parte precluso un'efficace sostituzione cellulare. In alternativa alla sostituzione diretta delle cellule, il rilascio di fattori protettivi paracrini può essere un effettore più plausibile per la cardioprotezione che può essere parzialmente mediata dalla secrezione di microvescicole, o esosomi, che contribuiscono alla comunicazione cellula-cellula In questo capitolo, descriviamo l'isolamento di esosomi da cardiomiociti derivati da cellule staminali pluripotenti indotte per successivi microRNA profiling per una migliore comprensione del carico biologico contenuto negli esosomi.
Silenzio genico in vitro e in vivo mediante microRNA intronici.MicroRNA (miRNA), piccoli RNA regolatori a filamento singolo in grado di interferire con gli RNA messaggeri intracellulari (mRNA) che contengono complementarietà completa o parziale, sono utili per la progettazione di nuove terapie contro il polimorfismo del cancro e la mutazione virale. È stato riportato che numerosi miRNA inducono l'interferenza dell'RNA (RNAi), un meccanismo di silenziamento genico post-trascrizionale. Evidenze recenti indica anche che sono coinvolti nella regolazione trascrizionale delle attività del genoma. Sono stati scoperti per la prima volta in Caenorhabditis elegans come frammenti di RNA nativi che modulano un'ampia gamma di percorsi di regolazione genetica durante lo sviluppo embrionale e ora sono riconosciuti come piccoli silenziatori genici trascritti dal non codificante regioni di un genoma Negli esseri umani, quasi il 97% del genoma è DNA non codificante, che varia da un individuo all'altro, e i cambiamenti in queste sequenze sono frequentemente notato per manifestarsi in disfunzioni cliniche e circostanziali; per esempio, la distrofia miotonica di tipo 2 e la sindrome dell'X fragile sono risultate associate a miRNA derivati da introni. Il miRNA intronico è una nuova classe di miRNA derivati dall'elaborazione di regioni non codificanti proteine di trascritti genici. I miRNA intronici differiscono in modo univoco dai miRNA intergenici precedentemente descritti nel requisito della RNA polimerasi (Pol)-II e dei componenti spliceosomiali per la sua biogenesi. Diversi tipi di miRNA intronici sono stati identificati in C. elegans, topo e cellule umane; tuttavia, le loro funzioni e applicazioni non sono state segnalate. Qui, mostriamo per la prima volta che il miRNA derivato da introni non solo è in grado di indurre RNAi nelle cellule di mammifero ma anche in cellule di pesce, embrioni di pollo e topi adulti, dimostrando la conservazione evolutiva di questo sistema di regolazione genica in vivo. Questi modelli animali mediati da miRNA forniscono mezzi artificiali per riprodurre i meccanismi della malattia indotta da miRNA in vivo e getteranno ulteriore luce sulle terapie correlate ai miRNA.
Come esplorare la funzione e l'importanza dei microRNA: profilo di espressione dei microRNA e la loro previsione di target/percorso nelle cellule ovariche bovine.Micro RNA (miRNA) sono componenti integrali delle reti regolatorie genetiche e agiscono legandosi alle trascrizioni dei loro geni bersaglio corrispondenti, portando a una diminuzione dei livelli di produzione di proteine sia per degradazione dell'mRNA o per repressione traslazionale. Mentre il ruolo dei miRNA è onnipresente, hanno una particolare importanza per quanto riguarda la differenziazione cellulare. L'interazione miRNA-mRNA bersaglio ha un impatto significativo su molte vie di segnalazione e il cross-talk tra di loro;svolgendo un ruolo regolatore in una varietà di diversi processi fisiologici all'interno delle cellule. Lo sviluppo del follicolo ovarico è un processo fisiologico che non è completamente compreso per quanto riguarda la regolazione dei miRNA, ci sono molte domande che rimangono riguardo alla regolazione molecolare di questo importante processo. le cellule follicolari sono un buon modello sperimentale per lo studio di questi meccanismi, avendo implicazioni dirette sulla salute riproduttiva nell'uomo. Questo capitolo descrive come vengono identificati i miRNA differenzialmente espressi nelle cellule della granulosa e della teca dei follicoli ovarici bovini dominanti e subordinati e l'identificazione dei loro bersagli e percorsi associati. Questo capitolo descrive sistematicamente come le cellule della granulosa e della teca vengono sezionate dai follicoli ovarici. Successivamente, presentiamo un protocollo dettagliato per l'estrazione di miRNA, basato su un metodo di pulizia combinato reagente/colonna TRI e anche il profilo di espressione di miRNA utilizzando sia microarray che RT-qPCR. Inoltre, viene fornito uno schema dell'analisi bioinformatica che consente la previsione dei bersagli dei miRNA. Anche i percorsi associati ai miRNA differenzialmente espressi vengono chiariti utilizzando il software DIANA-miRPath.
Identificazione e convalida della regolazione del potenziale miRNA differenziale tramite poliadenilazione alternativa.I miRNA controllano l'espressione genica tramite il riconoscimento di sequenze specifiche nella regione non tradotta 3\' di geni bersaglio, portando alla degradazione dell'mRNA e di conseguenza alla repressione traduzionale. L'impatto regolatorio dei miRNA non dipende solo dai loro livelli di espressione, ma anche dalla configurazione dell'mRNA bersaglio\'. Tramite la poliadenilazione alternativa vengono create isoforme di mRNA che possono o meno contenere rispettiva sequenza bersaglio di miRNA, attivando o disattivando la regolazione tra questi due. Nel seguente articolo, descriviamo il nostro protocollo su come combinare una valutazione bioinformatica di una potenziale interazione del gene bersaglio del miRNA utilizzando il framework web pubblico miRIAD con 5\' rapid amplificazione delle estremità del cDNA (5\'-RACE) al fine di esplorare la regolazione genica differenziale da parte dei miRNA attraverso la poliadenilazione alternativa.
MicroRNA esosomiali come potenziali biomarcatori nei disturbi neuropsichiatrici.Questo capitolo discuterà il potenziale uso dei microRNA, in particolare quelli che si trovano negli esosomi isolati perifericamente, come biomarcatori nei disturbi neuropsichiatrici Queste vescicole extracellulari vengono rilasciate come una forma di comunicazione cellula-cellula e possono mediare la trasmissione soma-linea germinale di informazioni rilevanti per il cervello, contribuendo così potenzialmente alla trasmissione inter o transgenerazionale di tratti comportamentali. Nuovi metodi recenti consentono l'arricchimento degli esosomi periferici rilasciati specificamente da neuroni e astrociti e possono fornire preziose biofirme della malattia rilevanti per il cervello.
Profilazione dei microRNA nei biofluidi delle specie di bestiame.Il valore dei microRNA circolanti (miRNA) come biomarcatori non invasivi della malattia umana è stato ampiamente dimostrato. Esiste un potenziale significativo anche in altre specie, in particolare in relazione al controllo delle malattie veterinarie e alla selezione/monitoraggio dei caratteri produttivi nel bestiame. Anche se sono stati sviluppati protocolli robusti per la profilazione dei miRNA dei biofluidi umani, potrebbe essere necessaria un'ottimizzazione significativa prima che questi possano essere applicati a altre specie. In questo capitolo, descriviamo i protocolli per il sequenziamento del piccolo RNA e le analisi RT-qPCR di campioni di plasma da specie di bestiame. Inoltre, forniamo brevi protocolli di analisi dei dati per il sequenziamento del piccolo RNA e i dati RT-qPCR. evidenziare importanti considerazioni per questi protocolli come bassa resa di RNA, bias specifici della piattaforma e approcci di normalizzazione ottimali.
Isolamento e analisi di microRNA esosomiali dal fluido follicolare ovarico.La crescita follicolare ovarica dei mammiferi è caratterizzata dallo sviluppo di un grande antro pieno di liquido che separa la granulosa murale cellule e cellule cumuliformi Un'ampia comunicazione tra i diversi tipi di cellule è necessaria per la maturazione di un ovocita competente per lo sviluppo Qui, descriviamo un approccio per l'isolamento di esosomi secreti dalle cellule dal fluido follicolare ovarico, identificazione di piccoli RNA (cioè microRNA) negli esosomi, etichettatura degli esosomi ed esame dell'assorbimento cellulare degli esosomi da parte delle cellule follicolari.
Isolamento di regioni cerebrali infette da virus per il profilo di miRNA da tessuti fissati in formalina e inclusi in paraffina mediante microdissezione laser.Il cervello è un organo altamente eterogeneo con numerosi strati di cellule specializzate. L'infezione virale aggiunge ulteriore complessità all'analisi a valle perché solo una sottopopolazione del cervello è infetta. In questi casi, i cambiamenti molecolari che si verificano all'interno delle cellule infette non si riflettono veramente quando l'intero tessuto viene utilizzato per l'analisi a valle. cattura microdissezione (LCM) è uno strumento che consente la selezione e l'isolamento di cellule o regioni di interesse come determinato dall'osservazione microscopica Fornisce una piattaforma per selezionare visivamente il tessuto che rappresenta veramente il materiale che si desidera studiare, come ad esempio l'infezione virale cellule. Il tessuto infetto da virus incluso in paraffina fissato in formalina consente una manipolazione e un'elaborazione sicure da parte di LCM. Qui, descriviamo un metodo in base al quale le regioni infette da virus di t Il cervello è stato specificamente isolato mediante LCM dal resto del tessuto FFPE. Le regioni isolate sono state quindi utilizzate per estrarre l'RNA per la profilazione dei microRNA. Questo approccio può essere applicato per studiare i cambiamenti del microRNA da qualsiasi infezione virale in un dato tessuto.
Biogenesi target guidata da mRNA di microRNA affini in vitro.i miRNA sono RNA non codificanti lunghi 20-22 nucleotidi che agiscono come regolatori post-trascrizionali del gene espressione che controlla più della metà dei geni codificanti proteine nell'uomo. Essendo i modulatori critici del processo di traduzione dell'mRNA, la biogenesi, la funzione e il turnover di questi piccoli RNA sono strettamente regolati nelle cellule. Abbiamo riportato che gli mRNA bersaglio inducono una maggiore biogenesi dei miRNA affini da pre-miRNA dall'aumentata attività dell'endonucleasi Dicer associata ad Ago che elabora i miRNA precursori alla loro forma matura. In questo capitolo, discutiamo come il caricamento RISC guidato dall'mRNA bersaglio può essere monitorato in vitro utilizzando miRISC purificato per affinità o AGO2 ricombinante e proteine DICER1 e punteggio della processività di DICER1 associato ad AGO2 in vitro.
The MicroRNA.MicroRNA (miRNA), piccoli geni regolatori di RNA ampiamente distribuiti, mirano sia alla degradazione dell'RNA messaggero (mRNA) che alla soppressione della traduzione proteica basato sulla complementarità di sequenza tra il miRNA e il suo mRNA mirato. Sono stati usati nomi diversi per descrivere vari tipi di miRNA. Durante l'evoluzione, retrovirus o transgeni a RNA hanno invaso il genoma eucariotico e si sono inseriti nelle regioni non codificanti del DNA, agendo presumibilmente come trasposone -come i geni che saltano, fornendo difesa dall'invasione virale e messa a punto dell'espressione genica come livello secondario di modulazione genica negli eucarioti. Quando un trasposone viene inserito nell'introne, diventa un miRNA intronico, sfruttando il meccanismo di sintesi proteica, cioè, la trascrizione e lo splicing dell'mRNA, come mezzo per l'elaborazione e la maturazione. È stato scoperto che i miRNA svolgono un ruolo importante, ma non pericoloso per la vita, nello sviluppo embrionale. Potrebbero svolgere un ruolo chiave ruolo in diversi sistemi biologici in vari organismi, facilitando una risposta rapida e un accurato tracciamento della fisiologia e delle strutture corporee. Sulla base di queste proprietà uniche, sono stati sviluppati miRNA intronici fabbricati per la valutazione in vitro della funzione genica, la terapia genica in vivo e la generazione di modelli animali transgenici. In questo capitolo vengono presentate la biogenesi dei miRNA, i miRNA circolanti, i miRNA e il cancro, le iPSC e le malattie cardiache, mettendo in evidenza alcuni studi recenti su questi argomenti.
i geni come principali cause di disabilità uditiva nel villaggio di Dhadkai, Jammu \& Kashmir, India.Un'alta incidenza di disabilità uditiva è stata segnalata nel villaggio di Dhadkai nello stato di Jammu e Kashmir, in India. La prevalenza dell'endogamia in questa comunità ha suggerito una base genetica comune per il disturbo. È stato intrapreso uno studio genetico per accertare la base dell'elevata incidenza di problemi di udito in questa regione. In due -approccio graduale per identificare la/e mutazioni causali, è stata effettuata un'analisi di collegamento basata sull'intero genoma di una famiglia estesa di 45 membri, che includeva 23 membri affetti e 22 membri non affetti. L'analisi mutazionale per i geni candidati della sordità ha aiutato a rivelare le mutazioni causali nella famiglia. Inoltre, sette geni che causano la sordità, Cx26, SLC26A4, CLDN14, TMPRSS3, TMC1, TMIE e USH1C, sono stati analizzati in famiglie più piccole con problemi di udito. Nella famiglia estesa di 45 membri, la regione cromosomica critica è stata mappata a 2p24-p22. La mutazione c.2122C>T (p. R708X) in OTOF in 2p24-p22 è stata identificata come il cambiamento causale. Il legame al locus 2p24-p22 non è stato osservato in un particolare ramo di questa famiglia estesa. L'analisi di sette geni noti che causano la sordità in questo ramo ha rivelato una mutazione, c.254T>A (p. V85D), in CLDN14. Tra sette piccole famiglie non imparentate con la famiglia allargata di 45 membri, la perdita dell'udito era attribuibile a p. R708X in OTOF in tre famiglie ea p. V85D in CLDN14 in una famiglia; una nuova mutazione c.1668T>A (p. Y556X) SLC26A4 è stata identificata in due famiglie e non è stato possibile identificare il cambiamento causale in una famiglia. Questo studio ha suggerito una notevole eterogeneità genetica nella causa della perdita dell'udito a Dhadkai. Sono state osservate mutazioni recessive in almeno tre geni che causano la perdita dell'udito: OTOF (p. R708X), SLC26A4 (p. Y556X) e CLDN14 (p. V85D). La mutazione p. R708X sembrava essere la principale causa di problemi di udito a Dhadkai.
Effetto inibitorio della colinesterasi e analisi in silico di alcaloidi da bulbi di specie Hieronymiella.In Argentina, la famiglia delle Amaryllidaceae (59 specie) comprende un'ampia varietà di generi, solo poche specie sono state studiate come potenziale fonte di inibitori delle colinesterasi per il trattamento della malattia di Alzheimer (AD). Per studiare l'attività inibitoria dell'acetilcolinesterasi (AChE) e della butirrilcolinesterasi (BChE) degli estratti basici di diclorometano (E) da Hieronymiella aurea, H. caletensis, H. clidanthoides, H. marginata e H. speciosa specie, nonché i composti isolati da questi estratti vegetali. Le attività inibitorie di AChE e BChE sono state valutate con il metodo spettrofotometrico di Ellman\'s. La composizione degli alcaloidi da gli E sono stati ottenuti mediante gascromatografia-spettrometria di massa (GC-MS). Gli E sono stati successivamente cromatografati su colonna di gel di silice e permeati su colonna Sephadex LH-20 per fornire i principali alcaloidi identificati d mediante dati spettroscopici. Inoltre, è stato effettuato uno studio in silico. =1.84 - 15,40µg/ml) e moderata attività inibitoria di BChE (IC50=23,74 - 136,40µg/ml) sono state mostrate dagli estratti. Tra gli alcaloidi isolati, solo la sanguinina e la chlidanthine (alcaloidi di tipo galantamina) hanno dimostrato attività inibitoria verso entrambi gli enzimi. Lo studio QTAIM suggerisce che la sanguinina ha la più forte affinità con AChE, attribuita a un'ulteriore interazione con Ser200 e interazioni molecolari più forti Glu199 e His440. Questi risultati hanno permesso di differenziare il comportamento molecolare nel sito attivo tra alcaloidi che possiedono diversi inibitori in vitro attività. Le specie Hieronymiella che crescono in Argentina rappresentano una fonte ricca e diffusa di galantamina e altri alcaloidi inibitori di AChE e BChE. Inoltre, la nuova tendenza verso l'uso di estratti naturali come prodotti farmaceutici piuttosto che come farmaci puri apre un percorso per lo sviluppo di una fitomedicina derivata da estratti di Hieronymiella spp.
Pratiche di gestione associate alle prestazioni riproduttive nelle vacche Holstein in grandi allevamenti commerciali.Come risultato dell'aumento delle dimensioni della mandria e dell'intensificazione della produzione , la complessità della gestione riproduttiva è aumentata nelle mandrie da latte. Lo scopo del nostro studio era di esaminare le associazioni tra pratiche di gestione e prestazioni riproduttive nelle vacche Holstein in grandi allevamenti commerciali. Le pratiche di gestione applicate alle vacche sono state esaminate tra il 22 maggio e il 6 maggio. novembre 2015 in 34 grandi mandrie da latte Holstein-Friesian in Ungheria. Sono stati raccolti i dati individuali di 23 784 vacche che hanno partorito tra il 1 gennaio 2014 e il 31 dicembre 2014 nelle mandrie censite. Le associazioni tra le pratiche di gestione e i parametri riproduttivi sono state analizzate con effetti misti Per quanto riguarda l'abbattimento del calore, abbiamo scoperto che la ventilazione con irrigatori era associata all'intervallo di riproduzione più breve (P0.05) risultati alla mancanza di stress da calore s protezione. È stato anche rivelato che la mancanza di un periodo di attesa volontario ben definito (VWP) o di un VWP inferiore a 50 giorni era associata a meno giorni per il primo servizio (P<0.01), intervallo di riproduzione più breve (P<0.01 ) e dall'intervallo tra il parto e il concepimento (P<0.05), nonché maggiori probabilità di portare un vitello nel latte di 200 giorni (P<0.01) rispetto a quelli che utilizzano un VWP di almeno 50 giorni. Gli allevamenti che hanno applicato l'ecografia transrettale avevano maggiori probabilità di utilizzare la ventilazione con sprinkler (P<0.05), la sincronizzazione ormonale (P<0.01) e di eseguire una diagnosi precoce della gravidanza seguita da un riesame della gravidanza (P<0.05). L'applicazione dell'ecografia transrettale con una delle suddette pratiche è stata associata a giorni ridotti al primo servizio (P<0.05), intervallo di riproduzione più breve (P<0.05) e maggiori probabilità di gravidanza a 200 giorni nel latte (P<0.05). Il nostro studio mette in evidenza le pratiche di gestione più strettamente legate al miglioramento delle prestazioni riproduttive, che si suggerisce pertanto di applicare negli allevamenti da latte, considerando le circostanze locali delle singole aziende agricole.
Ontogenesi dei tratti comportamentali nelle scrofe commerciali.Con l'aumento del numero di scrofe gestanti allevate in stabulazione collettiva, è necessaria una migliore comprensione dei tratti comportamentali per negoziare queste interazioni sociali più complesse promettono di aumentare il benessere e la produttività degli animali. Tuttavia, si sa poco delle diverse strategie comportamentali o degli stili di coping nelle scrofe, e ancora meno si sa della loro ontogenesi. Per studiare lo sviluppo degli stili di coping nelle scrofe adulte in gestazione,36 scrofe della stessa linea di tori e della stessa genetica materna commerciale sono state seguite dalla nascita fino alla loro seconda parità. Ogni animale è stato osservato in una serie di test comportamentali legati allo stress a 5 settimane e 3 mesi di età e 24 ore dopo il parto come scrofa di parità 1, e durante l'introduzione al successivo periodo di gestazione in stabulazione di gruppo. I test a diverse età includevano la risposta alla manipolazione, l'esplorazione in campo aperto, l'interazione umana, la gestione della lettiera e l'ambiente sociale interazioni con conspecifici. Molti dei comportamenti osservati sono stati correlati durante lo stesso periodo di vita dell'animale e hanno fornito la motivazione per un'analisi delle componenti principali per età. Utilizzando l'analisi delle componenti principali, sono stati determinati più tratti in ogni punto di età; a 5 settimane: attivo, non esplorativo e prudente spiegava l'82,5% della varianza; a 3 mesi di età: la paura attiva, non esplorativa e bassa dell'uomo spiega l'87,7% della varianza; e come scrofe primipare: attive, aggressive/dominanti e sottomesse spiegavano l'82,0% della varianza. Diversi comportamenti giovanili individuali sono stati associati a tratti comportamentali adulti. Ad esempio, la risposta alla manipolazione a 5 settimane era significativamente predittiva (β=0.4; P<0.05) del tratto aggressivo/dominante delle scrofe di parità 1. Presi insieme, i risultati qui presentati suggeriscono che le prime risposte comportamentali delle scrofette in età prepuberale durante specifici casi di elevato stress ambientale o sociale possono predire la futura risposta comportamentale delle scrofe gestanti.
La stimolazione talamica profonda del cervello salva la talamomia a ultrasuoni focalizzati fallita per il tremore essenziale: un caso clinico.Un recente studio randomizzato controllato che indaga su ultrasuoni focalizzati unilaterali guidati da risonanza magnetica (FUS) per il tremore essenziale ha dimostrato l'efficacia. La durata a lungo termine di questa talamotomia, tuttavia, è sconosciuta. Inoltre, la fattibilità di stimolare un bersaglio precedentemente lesionato come il nucleo talamico ventralis intermedius (Vim) è poco conosciuta. Riportiamo un caso di recidiva del tremore, a seguito di una talamotomia FUS inizialmente riuscita, in cui è stato successivamente utilizzato Vim-DBS per riguadagnare il controllo del tremore. Una donna destrimane di 81 anni con tremore essenziale clinicamente refrattario (a Clinical Rating Scale for Tremor [CRST] valore di 73) è stato sottoposto a talamotomia FUS sinistra con iniziale abolizione del tremore dell'estremità superiore destra. Ai 6 mesi di follow-up, si è verificata una completa recidiva del tremore (un valore CRST di 76). ent successivamente è stato sottoposto a Vim-DBS sul lato sinistro. Vim-DBS ha fornito un miglioramento clinico con un valore CRST di 42 al follow-up di 3 mesi; il paziente continua a fare clinicamente bene al follow-up di 6 mesi. Questo risultato rispecchia i precedenti casi di stimolazione segnalati a seguito di radiofrequenza e lesioni con gamma-knife. La nostra revisione della letteratura evidenzia diverse ragioni per il declino del beneficio clinico osservato con le procedure lesionali. Questo caso dimostra che la DBS talamica può salvare una talamotomia FUS fallita e anche la fattibilità di stimolare un bersaglio precedentemente lesionato.
Monitoraggio dell'identità della linea cellulare in raccolte di cellule staminali pluripotenti indotte umane.La capacità di riprogrammare le cellule somatiche in cellule staminali pluripotenti indotte (hiPSC) ha portato alla generazione di grandi collezioni di linee cellulari da migliaia di individui con fenotipi specifici, molti dei quali saranno condivisi tra diversi gruppi di ricerca come strumenti inestimabili per la ricerca biomedica. Poiché la ricerca basata su hiPSC coinvolge un'ampia coltura di molte linee cellulari, il problema periodico l'identificazione della linea cellulare è particolarmente importante per garantire che l'identità della linea cellulare rimanga accurata. Qui abbiamo analizzato i diversi metodi di genotipizzazione disponibili in commercio considerando la facilità di genotipizzazione interna, il costo e l'informatività e ne abbiamo applicato uno nel nostro flusso di lavoro per la generazione di hiPSC. che il metodo STR scelto è stato in grado di stabilire un profilo DNA univoco per ciascuno dei 35 individui/linee hiPSC nei siti esaminati, nonché di identificare due dis crepacci derivanti da campioni scambiati inavvertitamente. I nostri risultati evidenziano l'importanza della genotipizzazione della linea hiPSC mediante un metodo interno che consente l'identificazione periodica della linea cellulare e dimostrano che STR è un approccio utile per integrare il cariotipo meno frequente e le valutazioni epigenetiche.
La rapida induzione dell'espressione da parte di LPS è accompagnata dalla cromatina favorevole e dal rapido legame di c-Jun.La risposta all'infezione è gestita nei mammiferi da un risposta immunitaria coordinata. Le risposte innate sono rapide e cablate e hanno dimostrato di essere regolate a livello di accessibilità della cromatina. Questo studio ha esaminato le risposte primarie dei monociti umani all'LPS come modello di risposte innate ai batteri. Abbiamo utilizzato inibitori degli enzimi che modificano la cromatina per comprendere le interrelazioni dei complessi cromatinici che regolano la trascrizione. Il rilevamento di geni digitali multiplex è stato utilizzato per quantificare i cambiamenti nei livelli di mRNA per i geni indotti da LPS. Nei primi 30 minuti, i geni altamente indotti da LPS come gruppo hanno mostrato un effetto minimo degli inibitori chimici delle modificazioni della cromatina. A 60 min, i geni più espressi erano nettamente più inibibili. Gli effetti degli inibitori erano quasi del tutto concordanti in nonostante i diversi meccanismi di azione. Due focus group di geni con elevata inducibilità LPS a 30 min o alta inducibilità LPS a 60 min (ma non a 30 min) sono stati ulteriormente esaminati dal saggio ChIP. Il legame di NFκB p65 è stato aumentato in modo equivalente ai promotori di geni altamente inducibili da 30 e 60 minuti. Il legame di c-Jun è stato aumentato dopo LPS nel set di geni inducibili di 30 minuti ma non nel set di geni inducibili di 60 minuti. H3K4me3 e H4ac non sono stati alterati in modo rilevabile dalla stimolazione LPS. H3K4me3 e H4ac al basale erano più alti nel set di geni altamente inducibile di 30 minuti rispetto al set di geni altamente inducibile di 60 minuti. Gli inibitori di NFκB e JNK hanno portato a una diminuzione dell'H4ac dopo LPS. Gli effetti di DRB e C646 erano maggiori per la trascrizione di IL6 indotta da LPS a 30 minuti e H4ac stimolato da LPS rispetto al TNF, dove la trascrizione non era in gran parte influenzata dagli inibitori. In conclusione, i geni con espressione indotta molto rapidamente dopo LPS hanno mostrato caratteristiche della cromatina più favorevoli al basale ed erano meno inibibili rispetto ai geni indotti in momenti successivi.
Risultati a lungo termine e predittori di recidiva dopo isolamento della vena polmonare con catetere per ablazione multielettrodi in pazienti con fibrillazione atriale.Nonostante varie tecniche utilizzate nella fibrillazione atriale ablazione, la recidiva di aritmie atriali costituisce ancora un problema clinico. Lo scopo di questo studio era di documentare gli esiti a lungo termine dell'isolamento della vena polmonare con un catetere di ablazione a forma di anello (PVAC). Tutti i pazienti consecutivi che presentano fibrillazione atriale parossistica o persistente (pxAF o perAF, rispettivamente) trattati con PVAC (prima generazione) sono stati arruolati. Dopo il follow-up standard durante il primo anno, tutti i pazienti sono stati contattati per un follow-up a lungo termine. Oltre all'anamnesi del paziente, 3 è stato eseguito il monitoraggio Holter di un giorno. Gli endpoint erano sintomi correlati alla fibrillazione atriale, documentazione ECG di fibrillazione atriale o altre aritmie atriali sinistre e riablazione. In totale, 125 pazienti (78% con pxAF) sono stati arruolati. Tutte tranne due vene polmonari (0,4% di 485 vene polmonari) potrebbero essere isolate con successo. A 12 mesi, l'83% dei pazienti nel gruppo pxAF e il 53% dei pazienti nel gruppo perAF erano liberi da sintomi. Il follow-up medio a lungo termine è stato di 51α 14 mesi. Per quanto riguarda l'efficacia a lungo termine, il 56% dei pazienti nel gruppo pxAF e il 28% dei pazienti nel gruppo perAF erano esenti da recidive a 72 mesi. I predittori indipendenti di sopravvivenza libera da eventi erano perAF (rapporto di rischio 2,76, P = 0,001) e l'esistenza di malattia valvolare lieve (rapporto di rischio 2,69, P = 0,001). Non si sono verificate complicanze significative dovute al PVAC, in particolare nessun ictus ischemico. Follow-up a lungo termine indicato per la prima volta in una coorte così considerevole che l'isolamento della vena polmonare con PVAC è un metodo sicuro e molto efficiente per il trattamento della pxAF, nonostante noti problemi di microembolia. I pazienti con perAF ricevono meno benefici dal PVAC e la terapia di ablazione dovrebbe essere riservata a pxAF. Significativamente, anche una malattia valvolare lieve era un predittore indipendente di recidiva della fibrillazione atriale.
Trattamento della malattia coronarica con un palloncino rivestito di farmaco di nuova generazione: risultati finali del rEgistry italiano Elutax SV-DCB-RISE.Droga I palloncini rivestiti (DCB) sono un'alternativa riconosciuta agli stent per il trattamento della restenosi nello stent (ISR), e vi sono alcune prove cliniche iniziali sulla loro efficacia per il trattamento dei piccoli vasi coronarici. I DCB di nuova generazione sono stati sviluppati per superare la ridotta erogabilità della generazione precedente, che garantisce anche una somministrazione più efficace del farmaco alla parete del vaso. Tuttavia, la stragrande maggioranza dei DCB di nuova generazione manca ancora di affidabilità a causa della scarsità di dati clinici. Tra il 2012 e il 2015, tutti i pazienti trattati con Elutax In questo registro retrospettivo sono stati arruolati SV DCB (Aachen Resonance, Germania) in nove centri italiani. L'esito primario era il verificarsi di rivascolarizzazione della lesione target (TLR) al più lungo follow-up disponibile. Gli endpoint secondari erano il successo procedurale e occorrenza di eventi cardiovascolari avversi orientati al dispositivo, tra cui morte cardiaca, infarto miocardico del vaso bersaglio, ictus e TLR. Era richiesto un follow-up clinico minimo di 6 mesi. Abbiamo arruolato 544 pazienti consecutivi trattati in 583 siti. Il 53% dei pazienti aveva ISR e il resto malattia coronarica dei vasi nativi. Il successo procedurale si è verificato nel 97,5%. Al follow-up clinico più lungo disponibile (media 13,3α 7,4 mesi), il 5,9% dei pazienti ha subito un TLR e il 7,1% un evento cardiovascolare avverso orientato al dispositivo. Non abbiamo registrato casi di occlusione improvvisa del vaso bersaglio. All'analisi multivariata, la grave calcificazione nel sito della lesione è stata il primo fattore determinante per l'insorgenza di TLR. Questo registro sulle prestazioni di un DCB di nuova generazione mostra un profilo adeguato di sicurezza ed efficacia al follow-up clinico a medio termine.
Cryoballoon vs. ablazione con forza di contatto a radiofrequenza per la fibrillazione atriale parossistica: un'analisi del punteggio di propensione.Radiofrequenza e crioballoon isolamento della vena polmonare sono approcci comuni per atriale parossistica trattamento della fibrillazione, mostrando risultati simili in recenti studi multicentrici, inclusi strumenti e protocolli eterogenei. Lo scopo di questo studio è confrontare prospetticamente in un unico centro ad alto volume l'esito dell'ablazione parossistica della fibrillazione atriale eseguita specificamente con crioballoon di seconda generazione o contatto ablazione forzata con radiofrequenza. I pazienti consecutivi in attesa di ablazione transcatetere di fibrillazione atriale parossistica sono stati inclusi e seguiti prospetticamente. Al fine di ridurre i potenziali bias derivanti dalle caratteristiche di base, è stata eseguita un'analisi di corrispondenza del punteggio di propensione per analizzare gli esiti di sicurezza ed efficacia. Su pazienti consecutivi sottoposti a fibrillazione atriale transcatetere tra gennaio 2015 e dicembre 2016, 46 pazienti avvicinati mediante crioablazione sono stati abbinati 1 : 1 per punteggio di propensione a una popolazione simile trattata con ablazione con radiofrequenza di ultima generazione. La libertà dalla fibrillazione atriale dopo 12 mesi (76 contro 78%, P = 0.804) e l'incidenza di complicanze (4 contro 6%, P = 0,168) non differivano tra i due gruppi. L'esposizione radiologica era più alta per il gruppo del crioballoon (11 vs. 4 min, P < 0.001), mentre la durata della procedura non differiva (P = 0.174). Con l'obiettivo di valutare il potenziale impatto di una curva di apprendimento nei pazienti sottoposti a crioablazione, il primo terzo dei pazienti (n = 15) è stato confrontato con il restante, riportando un'esposizione radiologica più lunga (P < 0.001), ma sicurezza ed efficacia simili. In questa analisi del punteggio di propensione, i cateteri a crioballoon e a radiofrequenza di ultima generazione per l'ablazione della fibrillazione atriale presentano un'efficacia e una sicurezza simili. La crioablazione richiede un'esposizione alla fluoroscopia più lunga rispetto alla radiofrequenza, anche se questa viene ridotta dall'aumento dell'esperienza.
Rimodellamento associato allo stadio vitale della regolazione del metabolismo lipidico nel salmone atlantico.Il salmone atlantico migra dai fiumi al mare per nutrire, crescere e sviluppare le gonadi prima ritorno a deporre le uova in acqua dolce. La transizione verso gli habitat marini è associata a drammatici cambiamenti nell'ambiente, tra cui la salinità dell'acqua, l'esposizione agli agenti patogeni e il cambiamento nella disponibilità di lipidi nella dieta. Molti cambiamenti nella fisiologia e nel metabolismo si verificano durante questa transizione della fase della vita, ma poco è noto circa la natura molecolare di questi cambiamenti. Qui, usiamo un esperimento di alimentazione a lungo termine per studiare la regolazione trascrizionale del metabolismo lipidico nell'intestino e nel fegato del salmone atlantico sia in acqua dolce che salata. Troviamo che il metabolismo lipidico diventa significativamente meno plastico per differenze nella composizione dei lipidi nella dieta quando il salmone passa all'acqua salata e sperimenta una maggiore disponibilità di lipidi nella dieta Espressione di geni nel fegato relativi alla lipogenesi e al trasporto lipidico nsport diminuisce complessivamente e diventa meno sensibile alla dieta, mentre i geni per l'assorbimento dei lipidi nell'intestino diventano più altamente espressi. Infine, le analisi delle conseguenze evolutive della duplicazione dell'intero genoma specifico del salmonide sul metabolismo lipidico rivelano diversi percorsi con ritenzione duplicata significativamente diversa (p < .05) o conservazione regolatoria duplicata. Troviamo anche un numero limitato di casi in cui la duplicazione dell'intero genoma ha determinato un aumento del dosaggio genico. In conclusione, troviamo effetti variabili e specifici del percorso della duplicazione del genoma del salmone sui geni del metabolismo lipidico. È evidente un chiaro cambiamento associato allo stadio della vita nella regolazione del metabolismo lipidico e ipotizziamo che questo sia, almeno in parte, guidato da fattori non dietetici come il rimodellamento preparatorio della regolazione genica e della fisiologia prima della migrazione in mare.
Hotspot di incidenti stradali in un'area di riqualificazione di Shanghai.Per identificare le posizioni ad alto rischio (hotspot) di incidenti stradali (RTC) in un'area di riqualificazione di Shanghai, per formulare contromisure rilevanti in aree simili. Dopo aver geocodificato le posizioni degli incidenti sulla mappa elettronica, la valutazione del raggruppamento spaziale degli incidenti e delle densità spaziali degli hotspot è stata condotta seguendo il metodo Moran\'s I, la stima della densità del kernel, il Ripley\ 's K-function e la stima della densità del kernel basata sulla rete (NKDE). Un totale di 21.679 incidenti RTC con 24.147 vittime sono stati registrati dal 2010 al 2012. Gli RTC tendevano a verificarsi tra i maschi (81,8%) di età compresa tra 20 e 49 anni ( 84,9%) in autobus (60,1%) o biciclette elettriche (16,1%) durante l'orario di lavoro (15%). incroci rispetto a tratti stradali questa ricerca può aiutare le autorità a sviluppare programmi efficienti per colpire luoghi ad alto rischio e specifiche popolazioni vulnerabili.
Generazione di una linea di cellule staminali embrionali umane, NERCe003-A-1, con sovraespressione CTNNB1 inducibile mediata da vettori di lentivirus.La cellula staminale embrionale umana (hESC) NERCe003-A-1 è stata generata introducendo l'espressione di -catenina inducibile dalla tetraciclina mediata da vettori lentivirali in una normale linea hESC, NERCe003-A. La linea cellulare risultante può sovraesprimere la proteina β-catenina, codificata dal Gene CTNNB1, dopo esposizione a doxiciclina (Dox). L'espressione del gene CTNNB1 è stata confermata mediante PCR quantitativa (qPCR) e saggi di immunofluorescenza. Ulteriori caratterizzazioni hanno confermato che la linea cellulare NERCe003-A-1 esprime i tipici marcatori di pluripotenza e ha la capacità di formare i tre strati germinali sia in vitro che in vivo.
Generazione di cellule staminali pluripotenti indotte specifiche per il paziente dalla neuropatia ottica ereditaria di Leber\'.La neuropatia ottica ereditaria di Leber\' (LHON) è una malattia materna malattia mitocondriale ereditaria causata da mutazioni puntiformi omoplasmiche nei geni della subunità del complesso I del DNA mitocondriale. In questo rapporto, abbiamo generato una linea di cellule staminali pluripotenti indotte (iPSCs), TVGH-iPSC-010-09, dalle cellule mononucleate del sangue periferico di una femmina paziente con neuropatia ottica ereditaria di Leber\'s (LHON) utilizzando il sistema di somministrazione del virus Sendai. Le iPSC risultanti hanno mantenuto la mutazione del DNA mitocondriale che causa la malattia, hanno espresso marcatori pluripotenti e potrebbero differenziarsi nei tre strati germinali. Riteniamo che la LHON sia specifica per il paziente Le iPSC forniscono un potente modello in vitro per valutare i fenotipi patologici della malattia.
Il sequenziamento dell'RNA a cellula singola rivela l'eterogeneità della metallotioneina durante la differenziazione delle hESC verso l'endoderma definitivo.La differenziazione delle cellule staminali pluripotenti umane verso l'endoderma definitivo (DE) è il primo passo fondamentale per la generazione di cellule che comprendono organi come intestino, fegato, pancreas e polmone. Questo processo di differenziazione in vitro genera una popolazione eterogenea con una percentuale di cellule che non riescono a differenziarsi correttamente e mantengono l'espressione di fattori di pluripotenza come Oct4. di singole cellule raccolte in quattro momenti durante una differenziazione DE di 4 giorni ha identificato un'elevata espressione di geni metallotioneina nelle cellule residue Oct4-positive che non sono riuscite a differenziare in DE. Utilizzando la microscopia a fluorescenza a raggi X e la spettrometria di massa multi-isotopi, abbiamo scoperto che l'alto livello di zinco intracellulare corrisponde all'espressione persistente di Oct4 e all'incapacità di differenziare. Questo studio migliora la nostra comprensione g dell'eterogeneità cellulare durante la differenziazione diretta in vitro e fornisce una risorsa preziosa per migliorare l'efficienza della differenziazione DE.
L'espressione dell'intero genoma rivela molteplici effetti sistemici associati alla rilevazione di veleni anticoagulanti nelle linci rosse (Lynx rufus).I rodenticidi anticoagulanti (AR) sono tossici indiscriminati che minacciano le specie predatorie e spazzine non bersaglio attraverso l'avvelenamento secondario. L'accumulo di prove suggerisce che l'esposizione all'AR può avere conseguenze subletali dirompenti sugli individui che possono influenzare la forma fisica. Abbiamo valutato gli effetti correlati all'AR sui modelli di espressione dell'intero genoma in una popolazione di linci rosse nel sud della California. Identifichiamo l'espressione differenziale dei geni coinvolti nel metabolismo xenobiotico, la risposta allo stress del reticolo endoplasmatico, l'integrità epiteliale e la funzione immunitaria sia adattativa che innata. Inoltre, troviamo che l'espressione differenziale dei geni correlati al sistema immunitario può essere attribuibile agli effetti correlati all'AR sulla differenziazione dei leucociti. Nel complesso, i nostri risultati forniscono una comprensione senza precedenti degli effetti subletali dell'esposizione all'AR re su un carnivoro selvatico. Questi risultati evidenziano i potenziali effetti dannosi degli AR su un'ampia varietà di specie in tutto il mondo che possono consumare roditori avvelenati e indicano la necessità di indagare sugli effetti dell'espressione genica di altri agenti tossici aggiunti agli ambienti naturali dagli esseri umani.
I cambiamenti nei tassi di diversificazione e nelle frequenze di salto dell'ospite hanno modellato la diversità della gamma di ospiti tra i patogeni delle piante fungine delle Sclerotiniaceae.La gamma di ospiti che un parassita può infettare in natura è un tratto determinato dalla propria storia evolutiva e da quella dei suoi potenziali ospiti. Tuttavia, spesso mancano conoscenze sulla diversità e sull'evoluzione della gamma di ospiti a livello familiare. Qui, indaghiamo la variazione della gamma di ospiti e le tendenze di diversificazione all'interno delle Sclerotiniaceae, un famiglia di funghi Ascomiceti. Utilizzando un quadro filogenetico, associamo i tassi di diversificazione, la frequenza degli eventi di salto dell'ospite e la variazione dell'intervallo dell'ospite durante l'evoluzione di questa famiglia. Le variazioni del tasso di diversificazione durante l'evoluzione delle Sclerotiniaceae definiscono tre principali regimi macro-evolutivi con proporzioni contrastanti di specie che infettano un'ampia gamma di ospiti Analisi cofilogenetiche ospite-parassita indicavano radiazioni parassitarie su ospiti distanti lon g dopo la speciazione dell'ospite (salto dell'ospite o eventi di duplicazione) come modalità di associazione dominante con le piante nelle Sclerotiniaceae. Il regime macroevolutivo intermedio ha mostrato un basso tasso di diversificazione, un'alta frequenza di eventi di duplicazione e la più alta percentuale di specie di un'ampia gamma di ospiti. I nostri risultati suggeriscono che l'emergere di patogeni fungini ad ampia gamma di ospiti deriva in gran parte dai salti dell'ospite, come precedentemente riportato per i parassiti oomiceti, probabilmente combinato con bassi tassi di speciazione. Questi risultati hanno importanti implicazioni per la nostra comprensione dell'evoluzione dei parassiti fungini e sono di particolare rilevanza per la gestione duratura delle epidemie.
Effetti del campionamento fiscale sulla quantificazione e il confronto della diversità filogenetica della comunità.Gli ecologisti fanno sempre più uso delle filogenesi molecolari, specialmente nei campi dell'ecologia di comunità e conservazione. Tuttavia, queste filogenesi sono spesso utilizzate senza un pieno apprezzamento delle loro ipotesi e incertezze sottostanti. Una pratica frequente negli studi ecologici è inferire una filogenesi con dati molecolari da taxa solo all'interno della comunità di interesse. Queste "filogenesi comunitarie dedotte" sono intrinsecamente distorti nel loro campionamento di taxon. Nonostante l'importanza del campionamento completo nella costruzione di filogenesi, le implicazioni dell'utilizzo di filogenesi di comunità dedotte negli studi ecologici non sono state esaminate. Qui, valutiamo come il campionamento di taxon influenzi la quantificazione e il confronto della diversità filogenetica della comunità utilizzando set di dati sia simulati che empirici. Dimostriamo che gli alberi di comunità dedotti gre sottovalutare adeguatamente la diversità filogenetica e che la probabilità di classificare in modo errato la diversità di comunità può arrivare fino al 25%, a seconda dei metodi di datazione impiegati. Sosteniamo che per raggiungere conclusioni affidabili, gli studi ecologici devono migliorare il campionamento dei loro taxon e generare la migliore filogenesi possibile.
Dolore al ginocchio e uso di vari tipi di calzature-A Review.Il dolore al ginocchio è una condizione molto diffusa negli Stati Uniti con eziologie multiple, due delle fonti più comuni sono l'osteoartrite (OA) e il dolore femoro-rotuleo (PFP). Queste condizioni possono portare a una ridotta funzionalità fisica e a una scarsa qualità della vita. Sono state utilizzate varie modalità per ridurre la quantità di dolore al ginocchio che gli individui\' esperienza; tuttavia, non sempre hanno successo e possono essere costose. Diversi studi hanno riportato su calzature specializzate per l'alleviamento sintomatico delle condizioni che colpiscono il ginocchio, questo perché è stato teorizzato che determinate calzature possono alterare le forze esercitate dai muscoli sui muscoli inferiori -articolazioni e può potenzialmente alleviare il dolore riducendo il carico posto sull'articolazione. Pertanto, lo scopo di questo studio è stato quello di rivedere la letteratura attuale sull'uso di vari tipi di calzature utilizzate in pazienti che soffrono di m dolore al ginocchio. Nello specifico, abbiamo valutato: (1) OA del ginocchio e (2) PFP e l'effetto che le diverse calzature hanno sui sintomi dei pazienti. Diversi tipi di calzature e ortesi sono stati utilizzati per il trattamento di pazienti con dolore cronico al ginocchio. Tuttavia, i risultati dei risultati riportati da diversi studi sono contrastanti, il che giustifica ulteriori studi. Tuttavia, ci sono abbastanza risultati positivi per considerare questa come una potenziale modalità principale da utilizzare per il trattamento dell'osteoartrosi del ginocchio.
Ricostruzione a fascio singolo all-inside del legamento crociato anteriore con la metà anteriore del tendine peroneo lungo rispetto al tendine semitendinoso: uno studio di follow-up di due anni. È stato riportato che la metà anteriore del tendine peroneo lungo (AHPLT) è accettabile per la ricostruzione del legamento in termini di resistenza e sicurezza. Tuttavia, ci sono poche informazioni sui risultati clinici dopo l'uso dell'AHPLT rispetto a altri tendini dell'innesto autologo Uno studio prospettico randomizzato controllato è stato eseguito per confrontare i risultati di 62 casi di ricostruzione del legamento crociato anteriore (LCA) a fascio singolo anatomico all-inside utilizzando l'AHPLT e 62 casi utilizzando l'innesto di semitendinoso con una media di 30.0α 3.6 mesi \' follow-up. I posizionamenti del tunnel dei casi arruolati sono stati misurati mediante tomografia computerizzata (TC) tridimensionale (3D) e imaging a raggi X. La stabilità del ginocchio è stata valutata utilizzando il test del cassetto anteriore, spostamento del perno prova e KT-1000. Il punteggio soggettivo 2000 dell'International Knee Documentation Committee (IKDC) è stato utilizzato per valutare i risultati funzionali. L'American Orthopaedic Foot and Ankle Score (AOFAS) e la valutazione della forza muscolare di eversione sono stati eseguiti per valutare la funzione del sito donatore della caviglia. Le posizioni del tunnel, che sono state confermate con la TC 3D, erano nelle posizioni anatomiche. Al follow-up finale, non c'erano differenze significative tra il gruppo semitendinoso e il gruppo AHPLT nel punteggio IKDC (90,4 α 7,1 contro 89,3 α 8,4), misurazioni KT 1000 (1,71 α 0,57 contro 1,85 ± 0,77), test dello spostamento del perno e scala analogica visiva (VAS) (0,15 ± 0,36 rispetto a 0,10 ± 0,30). A 24 mesi non sono state riscontrate complicanze evidenti nella sede della caviglia. Il punteggio medio AOFAS del gruppo AHPLT era paragonabile a quello del gruppo tendine semitendinoso (99,1α 1.40 vs. 99,5α 1.21). Non c'era alcuna differenza significativa nei risultati clinici o nella stabilità del ginocchio tra il gruppo semitendinoso e il gruppo AHPLT al follow-up di 2 anni. Un autotrapianto AHPLT può essere una buona alternativa per la ricostruzione del LCA all-inside per quanto riguarda la sua forza, sicurezza e morbilità del sito donatore.
Un nuovo ingresso nel portafoglio di inibitori dell'α-glucosidasi come potenti terapie per il diabete di tipo 2: progettazione, biovalutazione e sintesi multicomponente one-pot di cumarinil ossadiazolo a ponte diammina coniugati.valore di 0,08±0,002μM. Sono stati eseguiti esperimenti cinetici di Michaelis-Menten per esplorare il meccanismo di inibizione. Sono stati eseguiti studi di docking molecolare della libreria sintetizzata di strutture ibride contro l'enzima glucosidasi per descrivere ligando-proteina interazioni a livello molecolare che hanno fornito una panoramica delle proprietà biologiche dei composti analizzati. I risultati hanno suggerito che gli inibitori potrebbero essere stabilizzati nel sito attivo attraverso la formazione di interazioni multiple con residui catalitici in modo cooperativo. Inoltre, forti interazioni di legame dei composti con i residui di amminoacidi sono stati efficaci per l'identificazione di successo degli inibitori dell'α-glucosidasi.
NO inibitori funzionano come potenziali agenti anti-neuroinfiammatori per l'AD dai fiori di Inula japonica.Gli ampi studi patologici hanno rivelato che la malattia di Alzheimer ( AD) è strettamente correlato alla neuroinfiammazione e gli agenti antinfiammatori possono essere potenzialmente utili per il trattamento dell'AD. L'Inula japonica è un membro della famiglia delle piante delle Asteraceae e i suoi fiori sono stati usati come tè salutare e come medicina tradizionale cinese. ricerca di nuove sostanze inibitorie dell'ossido nitrico (NO) come agenti anti-neuroinfiammatori per l'AD ha portato all'isolamento di due nuovi sesquiterpeni e dieci terpeni noti dai fiori di I. japonica. Le loro strutture sono state stabilite sulla base di un'ampia analisi di NMR e Dati spettroscopici MS, nonché spettri di dicroismo circolare elettronico (ECD) calcolati e sperimentali. Tra questi isolati, il composto 1 è un nuovo sesquiterpene con un raro scheletro triciclico fuso e 2 pr ocesses uno scheletro di 1,10 secondi-eudesmane. Gli effetti anti-neuroinfiammatori sono stati esaminati inibendo il rilascio di NO nelle cellule BV-2 della microglia murina indotta da LPS. Il possibile meccanismo di inibizione dell'NO è stato studiato anche utilizzando il docking molecolare, che ha rivelato le interazioni dei composti bioattivi con la proteina iNOS. Il presente studio ha rivelato che i fiori di I. japonica come tè salutare sono potenzialmente utili per l'AD e le malattie neuroinfiammatorie correlate.
I profili del trascrittoma del girasole rivelano il ruolo potenziale dei microsatelliti nella divergenza dell'espressione genica.I meccanismi con cui le popolazioni naturali generano variazioni genetiche adattative non sono ben compresi Alcuni studi suggeriscono che i microsatelliti possono funzionare come fattori di variazione adattativa. Qui, abbiamo testato un ruolo potenzialmente adattivo per i microsatelliti trascritti con popolazioni naturali del girasole comune (Helianthus annuus L. ) valutando l'arricchimento dei microsatelliti nei geni che mostrano divergenza di espressione attraverso le latitudini. I semi raccolti da sei popolazioni a due latitudini distinte in Kansas e Oklahoma sono stati piantati e coltivati in un giardino comune. Le misurazioni morfologiche del giardino comune hanno dimostrato che la variazione fenotipica tra le popolazioni è in gran parte spiegata dalla variazione genetica sottostante. Un esperimento RNA-Seq è stata condotta con 96 degli individui cresciuti nell'orto comune e differenzialmente sono state identificate le trascrizioni espresse (DE) tra le due latitudini. È stato identificato un numero totale di 825 trascrizioni DE. Le trascrizioni DE e le trascrizioni espresse in modo non differenziale (NDE) sono state quindi scansionate per i microsatelliti. È stata stimata l'abbondanza di diverse lunghezze e tipi di motivi in entrambi i gruppi. I nostri risultati indicano che le trascrizioni DE sono significativamente arricchite con ripetizioni mononucleotidiche e significativamente depauperate nelle ripetizioni trinucleotidiche. Inoltre, il motivo di ripetizione mononucleotidico standardizzato A e il motivo di ripetizione dinucleotidico AG sono stati significativamente arricchiti all'interno delle trascrizioni DE mentre i tipi di motivo, C, AT, ACC e AAC nelle trascrizioni DE, sono significativamente differenziati nella lunghezza del tratto microsatellite tra le due latitudini. La differenziazione della lunghezza del tratto a specifici tipi di motivi microsatelliti a diverse latitudini e il loro arricchimento all'interno delle trascrizioni DE indicano un potenziale ruolo funzionale per i microsatelliti trascritti nella divergenza dell'espressione genica nel girasole.
L'orchidea micoeterotrofa gigante Erythrorchis altissima è associata principalmente a un insieme divergente di funghi marciumi.L'orchidea rampicante Erythrorchis altissima è la più grande micoeterotrofa in il mondo. Sebbene precedenti lavori in vitro suggeriscano che E. altissima abbia una simbiosi unica con i funghi che decompongono il legno, si sa poco su come questa orchidea gigante soddisfi le sue esigenze di carbonio e nutrienti esclusivamente tramite funghi micorrizici. In questo studio, i funghi micorrizici di E. altissima è stata identificata a livello molecolare utilizzando campioni di radici di 26 individui. Inoltre, sono state esaminate la germinazione simbiotica in vitro con cinque funghi e le composizioni isotopiche stabili in cinque E. altissima in un sito. In totale, 37 unità tassonomiche operative fungine (OTU) appartenenti a nove ordini in Basidiomycota sono stati identificati dalle radici dell'orchidea. La maggior parte delle OTU fungine erano funghi che decompongono il legno, ma le radici sotterranee avevano Russula ectomicorrizica. Due isolati fungini da le radici micorrize hanno indotto la germinazione dei semi e il successivo sviluppo delle piantine in vitro. La misurazione dell'abbondanza di isotopi stabili di carbonio e azoto ha rivelato che E. altissima è un micoeterotrofo completo il cui carbonio proviene principalmente da funghi che decompongono il legno. Tutti i risultati mostrano che E. altissima è associata a un'ampia gamma di funghi che popolano il legno e il suolo, la maggior parte dei quali sono taxa di decomposizione del legno. Questa associazione generalista consente a E. altissima di accedere a un grande pool di carbonio nei detriti legnosi ed è stata la chiave per l'evoluzione di un micoeterotrofo così grande.
Migrazione pervasiva attraverso le popolazioni della foresta pluviale e della pianura costiera sabbiosa di Aechmea nudicaulis (Bromeliaceae) nonostante condizioni ambientali contrastanti.Comprendere la colonizzazione di habitat marginali estremi e la relativa Il ruolo dello spazio e dell'ambiente nel mantenimento delle popolazioni periferiche rimane impegnativo. Qui, sfruttiamo un sistema di coppie di comunità di foreste pluviali e pianure costiere sabbiose che ci consentono di disaccoppiare gli effetti spaziali e ambientali nella struttura della popolazione e nei tassi di migrazione della bromelia Aechmea nudicaulis. e il flusso genico tra le popolazioni sono stati stimati da clustering bayesiano e modelli di migrazione basati su coalescenti applicati alla sequenza dei cloroplasti e ai dati dei microsatelliti nucleari Contrariamente alle nostre aspettative iniziali, il forte gradiente ambientale tra la foresta pluviale e le pianure sabbiose non sembra aver influenzato la colonizzazione e la migrazione dinamiche in A. nudicaulis. Le nostre analisi rivelano perv flusso genico attivo tra gli habitat vicini sia nei dati relativi ai cloroplasti che al nucleare, nonostante le notevoli differenze nelle condizioni ambientali. Questo risultato è coerente con uno scenario di colonizzazione ripetuta delle pianure costiere sabbiose da parte delle popolazioni forestali attraverso la dispersione dei semi, nonché il mantenimento del flusso genico tra gli habitat attraverso l'impollinazione. Abbiamo anche recuperato un'ampia struttura di popolazione nord/sud che è stata trovata in altri gruppi della foresta pluviale atlantica e che forse riflette le dinamiche filogeografiche più antiche.
Le riduzioni della complessità dei genomi mitocondriali nei funghi che formano licheni fanno luce sull'architettura del genoma delle simbiosi obbligate.Le simbiosi tra i taxa co-evoluzione sono spesso contrassegnate da riduzioni del genoma come una perdita di geni codificanti proteine in almeno uno dei partner come mezzo per ridurre la ridondanza o il conflitto intergenomico. Per esplorare questo fenomeno in un gruppo iconico ma poco studiato di organismi simbionti obbligati, genomi mitocondriali di 22 specie recentemente sequenziate e annotate di funghi lichenizzati sono state confrontate con 167 genomi mitocondriali di funghi non lichenizzati. I nostri risultati dimostrano la prima perdita su larga scala di atp9 dai mitocondri di funghi lichenizzati. Nonostante le funzioni chiave nella produzione di energia mitocondriale, mostriamo che atp9 è stato indipendente perso in tre diversi lignaggi che abbracciano 10 delle 22 specie studiate. Una ricerca di copie funzionali previste di atp9 tra genomi di altri simbionti coinvolti in ciascun lichene hanno rivelato le copie complete, presumibilmente funzionali, di atp9 nel partner algale fotosintetico o in altri funghi simbionti in tutti e 10 i casi. Insieme, questi dati forniscono prove di una relazione simbiotica obbligata in cui i processi genomici fondamentali sono stati semplificati, probabilmente a causa della coevoluzione.
Le condizioni di allevamento e la storia della vita influenzano il progresso della gametogenesi e le prestazioni riproduttive nei maschi e nelle femmine di lucioperca.Il lucioperca (Sander lucioperca) è un pesce di grande valore in Europa. Tuttavia, lo sviluppo dell'acquacoltura del lucioperca è molto limitato a causa della stagionalità della produzione. Ciò può essere superato dalla riproduzione controllata dei pesci domestici. Le prime fasi del processo di domesticazione possono indurre cambiamenti a livello anatomico, fisiologico e molecolare, influenzando così una varietà di funzioni biologiche. Sebbene vi sia un'abbondante letteratura sui loro effetti sullo stress e sulla crescita, ad esempio, questi effetti sulla riproduzione hanno ricevuto un'attenzione limitata, in particolare nel lucioperca, un candidato promettente per lo sviluppo dell'acquacoltura. Per rispondere alla domanda su questa storia di vita effetto sulla riproduzione del lucioperca, abbiamo confrontato due gruppi (peso: 1 kg) originari della Repubblica Ceca e con lo stesso livello di addomesticamento (F0). Il primo gruppo era un gruppo di allevamento acquatico a ricircolo (2 anni, precedentemente alimentato con dieta artificiale, mai esposto a variazioni naturali delle condizioni di temperatura/fotoperiodo) e il secondo gruppo era un gruppo di allevamento in stagno (da 3 a 4 anni, allevato con alimentazione naturale e temperatura/fotoperiodo). Il gruppo selvatico si è generato con successo, mentre quello di allevamento non si è generato affatto. Durante il programma, gli indici gonadosomatici sia dei maschi che delle femmine erano significativamente più alti per il pesce selvatico, così come per gli steroidi sessuali. L'analisi dell'espressione genica ha rivelato livelli di trascrizione di LH significativamente più bassi a livello ipofisario per le femmine allevate e livelli di trascrizione FSH più bassi a livello ipofisario per i maschi. In conclusione questo studio ha mostrato che le precedenti condizioni di allevamento (es. sistema di allevamento, età, dieta, ecc. ) alterano l'ulteriore progresso della gametogenesi e le prestazioni riproduttive in risposta al programma fototermico controllato per entrambi i sessi nel lucioperca.
Caratteristiche di sicurezza dei segmenti di tessitura dell'autostrada senza pedaggio con una corsia per veicoli ad alta occupazione (HOV) separata dal buffer.Questo documento esamina la distribuzione del tasso di incidenti dei segmenti di tessitura dell'autostrada con una corsia per veicoli ad alta occupazione separata dal buffer. A tal fine, i dati relativi a incidenti, traffico e geometria sono stati estratti da varie fonti. Questi dati estratti sono stati abbinati spazialmente o spaziotemporalmente tra loro e utilizzati per entrambi Analisi descrittive e model-based L'analisi descrittiva ha rivelato che le distribuzioni del tasso di crash dei segmenti di tessitura dipendono non solo dalla classe dell'autostrada in oggetto, ma anche dalla presenza di un punto di accesso. Questo risultato è stato statisticamente confermato dai modelli di frequenza degli incidenti. In particolare, sia le analisi descrittive che quelle basate su modelli hanno mostrato che i segmenti di tessitura con un punto di accesso tendono a mostrare tassi di crash inferiori rispetto alle controparti senza uno. Si potrebbe attribuire questo fenomeno controintuitivo a un certo tendenza sottostante alla quale generalmente seguono gli ingegneri del traffico o i pianificatori nella scelta delle posizioni di un punto di accesso lungo l'autostrada. Sono necessarie ulteriori ricerche per risolvere tale congettura.
DBStar: un kit di strumenti open source per l'analisi di immagini con piattaforme di stimolazione cerebrale profonda personalizzate per il paziente.Per creare un metodo open source per la ricostruzione Le coordinate degli elettrodi di registrazione del microelettrodo (MER) e di stimolazione cerebrale profonda (DBS) lungo più traiettorie parallele con piattaforme di impianto DBS specifiche per il paziente per facilitare la ricerca DBS Abbiamo combinato la geometria chirurgica (estratta da WayPoint Planner), calcolata pre/intra/postoperatoria immagini di tomografia (TC) e/o risonanza magnetica (RM) e integrate nell'ambiente di analisi di neuroimaging Analysis of Functional NeuroImages (AFNI) utilizzando funzioni scritte in Python. Le coordinate degli elettrodi sono state calcolate dalle superfici degli elettrodi basate su immagini e registrando i valori di profondità della traiettoria Le coordinate sono state tradotte in traiettorie appropriate e sono state testate per la vicinanza a strutture anatomiche specifiche del paziente o basate su atlante. Coordinate finali dell'elettrodo DBS per 3 sono state calcolate le popolazioni di pazienti (nucleo intermedio ventrale [VIM], nucleo subtalamico [STN] e globus pallidus pars interna [GPi]). Per i casi STN, sono state quindi analizzate le coordinate del sito MER per vedere se si trovavano all'interno o all'esterno del STN. Le coordinate finali degli elettrodi DBS sono state descritte per le popolazioni di pazienti VIM, STN e GPi. 115/169 (68%) I siti STN MER erano entro 1 mm dal STN nell'atlante AFNI di Talairach e Tournoux (TT). DBStar è un robusto kit di strumenti per comprendere la posizione anatomica e il contesto delle posizioni degli elettrodi e può essere facilmente utilizzato per analisi di imaging, comportamentali o elettrofisiologiche.
Analisi dell'ambiente costruito per i punti critici del traffico stradale a Moshi, in Tanzania.Gli incidenti stradali (RTI) causano morbilità e mortalità significative nei paesi bassi e medi a reddito. L'indagine sulle aree ad alto rischio per gli RTI è necessaria per guidare i miglioramenti. Questo studio fornisce un'analisi ambientale integrata dei punti critici di incidenti stradali all'interno di Moshi, in Tanzania. L'analisi spaziale dei dati della polizia ha identificato 36 punti critici. L'analisi comparativa qualitativa ha rivelato il 40% degli incidenti i siti erano su strade locali senza illuminazione notturna e maggiore densità di motociclette. Le strade strette asfaltate rappresentavano il 26% degli hotspot e il 13% erano strade non asfaltate con bordi stradali irregolari. Le irregolarità stradali erano più predominanti a basso rischio [n = 19, (90,5%)] rispetto ai siti ad alto rischio [n = 7 (46,7%)]. Sia i siti a basso [n = 6 (28,6%)] che quelli ad alto rischio [n = 1 (6,7%)] avevano una segnaletica minima. Tutti i siti avevano pedoni informali percorsi. Poca variabilità tra i siti a rischio suggerisce s condizioni pericolose sono diffuse. I risultati suggeriscono che è necessario migliorare le infrastrutture municipali, la segnaletica e l'applicazione per ridurre l'onere di RTI.
Generazione di una linea di cellule staminali embrionali umane che esprimono la proteina fluorescente verde tetramerica di Zoanthus sp.: NERCe002-A-1.La cellula staminale embrionale umana ( La linea hESC NERCe002-A-1 è stata generata attraverso la trasduzione lentivirale della linea hESC originale NERCe002-A-1 con la proteina fluorescente verde Zoanthus sp. rispetto a quello delle cellule che esprimevano una proteina fluorescente verde potenziata. La linea fluorescente hESC può aiutare nell'identificazione delle caratteristiche biologiche in vitro e in vivo monitorando la crescita, la migrazione e la differenziazione delle cellule. I test caratteristici hanno confermato che la linea cellulare NERCe002-A-1 esprimeva tipici marcatori di pluripotenza e aveva la capacità di formare i tre strati germinali in vivo.
Generazione di una linea di cellule staminali pluripotenti indotte (CSC-41) da un paziente affetto da malattia di Parkinson portatore di una mutazione p.G2019S nel gene LRRK2.La mutazione p. G2019S della chinasi ripetuta 2 (LRRK2) ricca di leucina è la causa genetica più comune della malattia di Parkinson (PD). Una linea di cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC) CSC-41 è stata generata da un paziente anziano con diagnosi di PD causato da una mutazione p. G2019S in LRRK2. espressione di comuni marcatori di pluripotenza, si differenzia nei tre strati germinali e ha un cariotipo normale. La linea iPSC può essere utilizzata per esplorare l'associazione tra mutazione LRRK2 e PD.