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Generazione di una nuova linea di cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC) da un paziente di 16 anni con sialidosi con mutazione del gene NEU-1.La sialidosi è una rara malattia autosomica recessiva che colpisce il catabolismo intralisosomiale dei glicoconiugati sialilati ed è coinvolta nella risposta immunitaria cellulare Mutazioni in NEU1, che codifica per l'enzima sialidasi, provocano sialidosi La sialidosi è caratterizzata dal progressivo accumulo lisosomiale di glicopeptidi e oligosaccaridi sialilati. In questo studio, abbiamo utilizzato la riprogrammazione del virus Sendai per generare una linea di cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC) portatrice della mutazione A544G combinata con la delezione 667-679 del gene NEU1 da un paziente con sialidosi. Le iPSC specifiche del paziente esprimevano marcatori pluripotenti, possedevano un cariotipo normale e ha mostrato la capacità di differenziarsi in tre strati germinali.
Imatinib-mesylate migliora il mantenimento del potenziale delle cellule staminali della leucemia mieloide cronica in assenza di glucosio.L'introduzione degli inibitori della tirosin-chinasi BCR/Abl ( TKI), come l'imatinib-mesilato (IM), ha rivoluzionato il trattamento della leucemia mieloide cronica (LMC). Tuttavia, sebbene estremamente efficace nell'indurre la remissione della LMC, l'IM non è in grado di eliminare le cellule staminali leucemiche (LSC). Ciò è in gran parte dovuto alla soppressione della proteina BCR/Abl, guidata dalla riduzione dell'apporto energetico a causa della carenza di ossigeno o glucosio, nelle nicchie delle cellule staminali del midollo osseo Qui, abbiamo studiato se, nelle colture di cellule LMC K562 e KCL22, la carenza di glucosio induce refrattarietà di potenziale delle cellule staminali per IM. In assenza di glucosio, IM, pur mantenendo il suo effetto dannoso sulla massa cellulare LMC, ha effettivamente migliorato la capacità di formazione di colonie e il potenziale delle cellule staminali. Ciò è stato accompagnato da una maggiore espressione delle cellule staminali Nanog e Sox-2 marcatori Questi e I documenti sottolineano ulteriormente l'importanza di sviluppare strategie alternative al TKI in grado di colpire l'LSC di CML.
Generazione di una linea di cellule staminali embrionali umane con delezione eterozigote di RB1 da parte di CRIPSR/Cas9 nickase.Il soppressore tumorale del retinoblastoma 1 (RB1), un membro di la famiglia del gene del retinoblastoma, funziona come una proteina tascabile per il legame funzionale dei fattori di trascrizione E2F. Circa 1/3 dei pazienti con retinoblastoma ospita una mutazione o delezione RB1 della linea germinale, che porta allo sviluppo del retinoblastoma. Qui, dimostriamo la generazione di una delezione eterozigote del gene RB1 nella linea di cellule staminali embrionali umane H1 utilizzando l'editing del genoma della nickasi CRISPR/Cas9. La linea di cellule H1 knockout eterozigoti RB1 mostra un cariotipo normale, mantiene uno stato pluripotente ed è in grado di differenziarsi ai tre strati germinali.
Generazione di GZKHQi001-A e GZWWTi001-A, due linee di cellule staminali pluripotenti indotte derivate da cellule mononucleate del sangue periferico di pazienti con distrofia muscolare di Duchenne.Duchenne la distrofia muscolare (DMD) è una malattia legata all'X causata da mutazioni nel gene DMD, che si estende per circa 2,4 Mb di sequenza genomica nel locus Xp21. Questa mutazione provoca la perdita della proteina distrofina. I pazienti con DMD muoiono nel secondo o terzo dieci anni a causa di insufficienza respiratoria o cardiomiopatia, poiché l'assenza di distrofina porta a fragilità e necrosi della membrana delle miofibre, con conseguente atrofia muscolare e contratture Attualmente, non esiste un trattamento efficace per la DMD, pertanto le cellule staminali pluripotenti indotte da pazienti con DMD sarebbero un potente strumento per studiare i meccanismi della malattia.
Generazione di cellule staminali pluripotenti indotte da un paziente con distrofia muscolare Becker che porta una delezione degli esoni 45-55 del gene della distrofina (CCMi002BMD-A-9 ∆45-55). La distrofia muscolare di Becker (BMD) è una distrofinopatia causata da mutazioni nel gene della distrofina sul cromosoma Xp21. Le mutazioni della BMD determinano isoforme distrofina semifunzionali troncate. Di conseguenza, i sintomi clinici meno gravi si manifestano più tardi nella vita rispetto alla distrofia muscolare di Duchenne. I fibroblasti dermici di un paziente con BMD sono stati elettroporati con plasmidi episomiali contenenti fattori di riprogrammazione per creare la linea di cellule staminali pluripotenti indotte: CCMi002BMD-A-9 che mostravano marcatori pluripotenti, erano cariotipicamente normali e capaci di differenziazione trilineare. sul DNA estratto da CCMi002BMD-A-9 ha mostrato una delezione in-frame degli esoni da 45 a 55 (CCMi002BMD-A-9 45-55).
Generazione e caratterizzazione della linea iPSC umana IDISi001-A isolata da cellule del sangue di un paziente CADASIL portatore di una mutazione NOTCH3.Arteriopatia cerebrale autosomica dominante con infarto sottocorticale e leucoencefalopatia (CADASIL) è la forma più comune di disturbo ereditario da ictus. È causato da mutazioni in NOTCH3 che portano alla degenerazione progressiva delle cellule muscolari lisce nei vasi sanguigni. Attualmente non esiste un trattamento per questo disturbo. Abbiamo riprogrammato per cellule mononucleate del sangue pluripotenza isolate da un paziente portatore di una mutazione NOTCH3 utilizzando un sistema non integratore disponibile in commercio. Il successo nella generazione di questa linea iPSC (IDISi001-A) suggerisce che la mutazione NOTCH3 non ha limitato la riprogrammazione cellulare e offre un senza precedenti opportunità di studio e modellazione della patologia CADASIL.
Istituzione e caratterizzazione di una linea di cellule staminali embrionali umane, NERCe002-A-3, con sovraespressione inducibile di 14-3-3ζ.NERCe002-A -3 cellule sono state generate dalla normale linea di cellule staminali embrionali umane NERCe002-A. Le cellule NERCe002-A-3 hanno sovraespresso 14-3-3ζ dopo l'esposizione alla doxiciclina. La proteina 14-3-3ζ ha la capacità di legare una moltitudine di funzioni diverse proteine di segnalazione. La linea cellulare NERCe002-A-3 è considerata un modello per gli studi funzionali della proteina 14-3-3ζ nell'auto-rinnovamento delle hESC e nella differenziazione cellulare. Le cellule NERCe002-A-3 trattate con doxiciclina hanno mostrato una >27 volte aumento dell'espressione relativa di 14-3-3ζ rispetto alle cellule non indotte. I saggi di caratterizzazione hanno dimostrato che le cellule NERCe002-A-3 esprimono i tipici marcatori di pluripotenza e hanno la capacità di formare i tre strati germinali in vivo.
Migliore accuratezza diagnostica della neuropatia nell'obesità: una nuova sfida per i neurologi.Per determinare le caratteristiche diagnostiche comparative delle misure di neuropatia in una popolazione obesa. Noi reclutati partecipanti obesi dal programma di gestione del peso dell'Università del Michigan. L'analisi delle caratteristiche operative del ricevitore ha determinato l'area sotto la curva (AUC) delle misure di neuropatia per la polineuropatia simmetrica distale (DSP), la neuropatia delle piccole fibre (SFN) e la neuropatia autonomica cardiovascolare ( CAN). Le migliori combinazioni di test sono state determinate utilizzando modelli di selezione del sottoinsieme graduale e punteggio. Abbiamo arruolato 120 partecipanti obesi. Per il DSP, sette su 42 misurazioni della neuropatia (Utah Early Neuropathy Score (UENS, N=62), Michigan Neuropathy Screening Instrument ( MNSI) indice combinato ridotto, esame MNSI, densità delle fibre nervose (NFD) gamba, risposta F tibiale, questionario MNSI, latenza motoria distale peroneale) avevano AUC ≥ 0,75. Tre su 19 sma Tutte le misurazioni del nervo in fibra per SFN (UENS, gamba NFD, piedi sudoscan (N=70)) e zero di 16 misurazioni CAN avevano AUC ≥ 0,75. Combinazioni di test eseguite meglio dei singoli test con AUC di 0,82 per DSP (due parametri) e 0,84 per SFN (tre parametri). Molte misure di neuropatia dimostrano buone prestazioni del test per DSP nei partecipanti obesi. Selezionare poche misure di nervi a piccole fibre che hanno funzionato bene per SFN e nessuna per CAN. Per gli studi di ricerca dovrebbero essere utilizzate combinazioni specifiche di test per massimizzare le prestazioni diagnostiche nelle coorti obese.
Generazione di 2 linee di cellule staminali pluripotenti indotte derivate da pazienti con malattia di Parkinson portatori della variante LRRK2 G2385R.La chinasi ripetuta ricca di leucina (LRRK2) è la causa genetica più diffusa per la malattia di Parkinson. LRRK2 p. G2385R è un fattore di rischio genetico specifico asiatico per la malattia di Parkinson sporadica. Abbiamo generato due cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC), IBMS-iPSC-018-09 e IBMS- iPSC-020-01, dalle cellule mononucleate del sangue periferico di due pazienti portatori della variante LRRK2 p. G2385R utilizzando il sistema di somministrazione del virus Sendai. Queste iPSC avevano un cariotipo normale e mostravano pluripotenza, come una morfologia simile alle cellule staminali embrionali, espressione di marcatori pluripotenti e capacità di differenziarsi in tre strati germinali. Questo modello cellulare fornirà una piattaforma per studi fisiopatologici della neurodegenerazione nella malattia di Parkinson.
L'utilità dei metodi di stima del numero di unità motorie rispetto all'analisi quantitativa del potenziale delle unità motorie nella diagnosi della SLA.Per confrontare l'utilità diagnostica della stima del numero di unità motorie (MUNE) per l'analisi del potenziale delle unità motorie (MUP) nella sclerosi laterale amiotrofica (SLA) Sono stati inclusi prospetticamente 25 pazienti (1 definita, 11 probabile, 9 possibile SLA e 4 atrofia muscolare progressiva) e 22 controlli sani. analisi e tre metodi MUNE: Multiple Point Stimulation MUNE (MPS), Motor Unit Number Index (MUNIX) e MScanFit MUNE (MScan) sono stati eseguiti nel muscolo abduttore breve del pollice. Le sensibilità sono state confrontate con il test chi-quadrato McNemar. MUNE, MUP e I parametri rivisti della scala di valutazione funzionale ALS (ALSFRS-R) sono stati correlati dall'analisi di regressione. Le sensibilità di MPS (76%) e MScan (68%) erano superiori alla durata MUP (36%) e all'ampiezza (40%) nel rilevamento dell'unità motoria perdita (p<0.05). Metodo MUNE s ha aumentato la probabilità categorica da SLA possibile a probabile in 4 pazienti (16%). C'era solo una correlazione significativa tra ALSFRS-R e MScan (r=0.443, p=0.027) tra i test elettrofisiologici. I metodi MUNE non erano correlati ai parametri MUP. I metodi MUNE sono più sensibili nel mostrare anomalie rispetto all'analisi MUP. I metodi MUNE, in particolare MScan, possono avere il potenziale per essere implementati nella pratica clinica per la diagnosi e il follow-up dei disturbi neuromuscolari, in particolare della SLA.
Attività EEG epilettiformi e periodiche indotte dall'induzione rapida dell'anestesia con sevoflurano.Lo scopo dello studio era confrontare i risultati dell'EEG e i parametri emodinamici del maschio adulto pazienti durante l'induzione con maschera con anestesia con sevoflurano con iperventilazione controllata (CH) o respirazione spontanea (SB).20 pazienti di sesso maschile, di età compresa tra 23 e 52 anni (media 42) anni sono stati anestetizzati in modo casuale con respirazione spontanea o lieve iperventilazione controllata tramite maschera. è stato registrato utilizzando un set completo di 10-20 elettrodi. L'induzione dell'anestesia con alte concentrazioni inalate di sevoflurano ha prodotto diversi modelli EEG epilettiformi e periodici. CH ha raddoppiato la quantità di questi modelli EEG rispetto a SB. Una frequenza cardiaca più elevata è stata registrata nel gruppo CH. Noi descrivono un'alta incidenza di attività EEG parossistica: scariche periodiche epilettiformi e generalizzate (GPD) durante sevoflurano rapido nell'induzione della maschera di protossido di azoto-ossigeno in hy pazienti di sesso maschile perventilati. Tuttavia queste attività non hanno alcun effetto sulla frequenza cardiaca o sulla pressione arteriosa media. Il monitoraggio dei GPD e dei modelli di soppressione del burst durante l'induzione rapida dell'anestesia con sevoflurano offre la possibilità di studiare gli effetti degli anestetici volatili nel cervello sano. Per analizzare le diverse fonti di pattern EEG è necessaria una registrazione EEG multicanale a banda larga.
Le misure di sincronizzazione EEG predicono le fluttuazioni BOLD-fMRI correlate all'epilessia meglio delle metriche univariate comunemente usate.Ipotizziamo che l'ipersincronizzazione associata all'attività epilettica sia la migliore descritto dalle misure di sincronizzazione EEG e proponiamo di utilizzarli come predittori di fluttuazioni BOLD correlate all'epilessia. Abbiamo calcolato l'indice di sincronizzazione di fase (PSI) e la sincronizzazione di campo globale (GFS), all'interno di due bande di frequenza, una banda larga (1-45Hz) e una banda più stretta focalizzata sulla presenza di attività epilettica (3-10Hz). Le reti epilettiche associate sono state confrontate con quelle ottenute utilizzando regressori unitari convenzionali e due metriche di potenza ponderata (potenza totale e frequenza quadratica media), su nove simultanee Set di dati EEG-fMRI da quattro pazienti con epilessia, che mostrano scariche epilettiformi inter-ictali (IED). Il PSI medio entro 3-10 Hz ha ottenuto le migliori prestazioni in diverse misure che riflettono l'affidabilità ità in tutti i set di dati. I risultati sono stati convalidati in modo incrociato attraverso l'imaging della sorgente elettrica degli IED. L'applicabilità del PSI quando non sono registrati IED sull'EEG è stata valutata su altri tre pazienti, producendo reti parzialmente plausibili in tutti i casi. Le reti epilettiche possono essere mappate in base alla metrica EEG PSI all'interno di una banda di frequenza specifica dell'IED, con prestazioni migliori rispetto alle metriche EEG comunemente utilizzate. Questo è il primo studio a studiare le misure di sincronizzazione EEG come potenziali predittori delle fluttuazioni BOLD legate all'epilessia.
Il focus corticale nell'epilessia con assenza infantile; evidenza dall'analisi non lineare delle registrazioni EEG del cuoio capelluto.Per determinare l'origine e le caratteristiche dinamiche dell'ipertrofia generalizzata scariche sincrone a picco e onde (SW) nell'epilessia con assenza infantile (CAE). Abbiamo applicato agli elettroencefalogrammi (EEG) metodi non lineari, il test di causalità del rapporto di riduzione dell'errore (ERR) e l'analisi della frequenza incrociata, con un modello esogeno autoregressivo non lineare (NARX). ) da CAE, selezionati con rigorosi criteri elettroclinici (17 casi, 42 assenze). Abbiamo analizzato la forza di associazione pre-ictale e ictale tra derivazioni EEG omologhe ed eterologhe e stimato la direzione della sincronizzazione e i corrispondenti ritardi. l'insorgenza fronto-centrale delle assenze è rilevata in 13 dei 17 casi con la più alta forza ictale di associazione tra aree frontali omologhe seguite da aree centro-temporali e fronto-centrali. ly superiori a 4 ms si verificano proprio all'inizio tra queste regioni, rapidamente seguiti dall'emergere della sincronizzazione "isocrona" (0-2 ms), ma durante le scariche SW si verificano cambiamenti dinamici del ritardo temporale. In assenza di un'iniziale diffusione cortico-corticale porta a cambiamenti di ritardo dinamico per includere periodi di sincronizzazione interemisferica isocrona, che ipotizziamo sia mediata dal talamo. Le assenze da CAE mostrano dinamiche di rete epilettica ictale notevolmente simili a quelle osservate nei ratti WAG/Rij che hanno guidato la formulazione della teoria del focus corticale.
Riabilitazione postoperatoria dopo un intervento di stimolazione cerebrale profonda per disturbi del movimento.La stimolazione cerebrale profonda (DBS) è una terapia altamente efficiente e basata sull'evidenza per un set di condizioni neurologiche e psichiatriche e in particolare disturbi del movimento come il morbo di Parkinson, tremore essenziale e distonia. I recenti sviluppi hanno migliorato la tecnologia DBS. Tuttavia, finora non esistono algoritmi univoci per un'assistenza postoperatoria ottimizzata. Lo scopo di questa revisione è quello di fornire una sinossi della pratica clinica attuale e proporre linee guida per l'assistenza postoperatoria e riabilitativa dei pazienti sottoposti a DBS. È importante un work-up standardizzato nei centri DBS adattato allo stato clinico e alle esigenze di ciascun paziente, compresa una valutazione meticolosa miglioramento clinico e sintomi residui con definizione degli obiettivi per la neuroriabilitazione È essenziale un trasferimento efficiente e completo delle informazioni ai successivi caregiver. È necessaria una terapia coordinata all'interno di un team multidisciplinare (addestrato in disturbi del movimento e DBS) per raggiungere la massima efficienza a lungo termine. Un quadro postoperatorio ottimizzato potrebbe in definitiva portare a risultati più efficaci della DBS.
Potenziali evocati da calore da contatto: acquisizione affidabile dagli arti inferiori.Per indagare sull'affidabilità del test-retest dei potenziali evocati dal calore da contatto (CHEP) dagli arti inferiori utilizzando due diversi protocolli di stimolazione, vale a dire, temperatura basale normale e aumentata. Sono stati inclusi un totale di 32 soggetti normodotati ed è stato ritestato un sottoinsieme (N=22). I CHEP sono stati registrati da tre diversi dermatomi dell'arto inferiore (cioè, L2 , L5 e S2). È stata analizzata l'affidabilità test-retest dell'acquisizione di CHEP dopo la simulazione in vari dermatomi degli arti inferiori utilizzando diversi protocolli di stimolazione. Lo studio ha rivelato una migliore acquisizione di CHEPS utilizzando il protocollo di base aumentato, in particolare quando si stimolano siti più distali, cioè , dermatomo L5 e S2 Sulla base dei coefficienti di ripetibilità, la latenza CHEP (potenziale N2) è emerso come il parametro CHEP più robusto, sebbene le ampiezze CHEP (complesso N2P2) e le valutazioni del dolore fossero diminuite nel nuovo test, le ampiezze mostravano ancora coefficienti di correlazione intraclasse da discreti a eccellenti utilizzando rispettivamente una temperatura di base normale o un aumento della temperatura di base. Questo è il primo studio a dimostrare che l'acquisizione di CHEP dalle estremità inferiori è migliorata aumentando la temperatura di base del termode. Questo studio evidenzia l'usabilità dei CHEP come metodo diagnostico praticabile per studiare l'integrità delle piccole fibre.
Previsione dell'esito del linguaggio postoperatorio utilizzando fMRI prechirurgica, MEG, TMS e ECoG ad alta gamma.Per prevedere l'esito del linguaggio postoperatorio utilizzando la regressione del vettore di supporto ( SVR) e risultati della mappatura linguistica prechirurgica multimodale. -1) Modelli SVR considerando l'estensione delle aree linguistiche resecate identificate da tutti i sottoinsiemi di quattro modalità come vettore di caratteristiche di input e l'esito del linguaggio postoperatorio come output. Abbiamo addestrato e validato in modo incrociato i modelli SVR , e confrontato gli errori di convalida incrociata (CV) di tutti i modelli per la previsione dell'esito del linguaggio. Sette pazienti hanno avuto un certo livello di declino del linguaggio postoperatorio e due di loro hanno avuto un significativo declino postoperatorio nella denominazione. Alcune parti delle aree linguistiche identificate da quattro modalità sono state asportato in questi pazienti Abbiamo scoperto che un modello SVR costituito da fMRI, MEG e hgECoG ha fornito un errore CV minimo, sebbene un modello SVR costituito da fMRI e MEG fosse il modello ottimale che facil itato il miglior compromesso tra la complessità del modello e l'accuratezza della previsione. Un SVR multimodale può essere utilizzato per prevedere il risultato linguistico. I modelli SVR multimodali sviluppati in questo studio possono essere utilizzati per calcolare i risultati linguistici di diversi piani di resezione prima dell'intervento chirurgico e selezionare il piano chirurgico ottimale.
Il cortisolo dei capelli e la relazione con il dolore cronico e la qualità della vita nelle pazienti con endometriosi.L'endometriosi è una malattia cronica estrogeno-dipendente in cui il dolore pelvico è il sintomo dominante. Gli effetti negativi dell'endometriosi sulla vita delle donne con questa malattia possono essere causa di stress. I livelli di stress possono essere misurati in modi diversi, per lo più riflettendo risposte acute allo stress. Le misurazioni del cortisolo dei capelli sono un riflesso della sistematica a lungo termine livelli di cortisolo. In questo studio viene effettuato un primo tentativo di misurare i livelli di cortisolo nei capelli di pazienti con endometriosi rispetto ai controlli sani. Inoltre, viene esplorato se i sintomi del dolore cronico e i diversi aspetti della qualità della vita correlata alla salute (HRQoL) sono associati ai livelli di cortisolo dei capelli nelle donne con endometriosi. I risultati mostrano che il livello medio di cortisolo dei capelli è significativamente più alto nelle donne con endometriosi rispetto ai controlli sani (p=0.018). Esiste una correlazione positiva tra il livello di cortisolo dei capelli e HRQoL nei pazienti ma non nei controlli (Rho 0,426). Il livello di cortisolo dei capelli non è correlato con l'intensità del dolore riportata nei pazienti (Rho -0,082). Questi risultati sono indicativi di un'alterata funzione dell'asse HPA nei pazienti con endometriosi, probabilmente causata da un livello di stress cronico più elevato in questi pazienti. Inoltre, una potenziale spiegazione per la correlazione positiva del cortisolo con l'HRQoL in questi pazienti è che i pazienti con un'alta HRQoL hanno un'adeguata risposta allo stress aumentando i loro livelli di cortisolo come risposta allo stress fisico ed emotivo indotto dall'endometriosi.
Il polimorfismo funzionale TSPO predice la variazione del ritmo diurno del cortisolo nel disturbo bipolare.Lo stress psicosociale contribuisce all'insorgenza/esacerbazione di episodi di umore e consumo di alcol, suggerendo i ritmi diurni di cortisolo disregolati sono alla base delle esacerbazioni episodiche nel disturbo bipolare (BD). Tuttavia, i meccanismi alla base dei ritmi HPA disregolati nella BD e nei disturbi da uso di alcol (AUD) sono poco studiati. La conoscenza dei fattori di varianza associati ha un grande potenziale di traduzione clinica facilitando lo sviluppo di strategie per ridurre ricaduta correlata allo stress in BD e AUD. L'evidenza suggerisce cambiamenti strutturali alla proteina traslocatore mitocondriale (TSPO) (un regolatore della sintesi degli steroidi) dovuti al polimorfismo a singolo nucleotide rs6971, può spiegare gran parte di questa varianza. Tuttavia, se rs6971 è associato a anomalie I ritmi HPA e l'esacerbazione clinica nell'uomo sono sconosciuti Per dimostrare che questo comune polimorfismo TSPO influisce sui ritmi HPA in BD, abbiamo testato se rs6971 (dicotomizzato: presenza/assenza di polimorfismo) prediceva la varianza nel ritmo diurno del cortisolo (saliva: mattina e sera per 3 giorni) in 107 BD (50 con e 57 senza AUD) e 28 volontari sani di età ed etnia simili distribuzione demografica. =2.8, p=0.017). Abbiamo identificato differenze nel ritmo diurno del cortisolo a seconda della presenza/assenza del comune polimorfismo TSPO nei volontari BD con o senza AUD e nei volontari sani. Questi risultati hanno implicazioni ad ampio raggio, ma è necessaria un'ulteriore convalida prima di una traduzione clinica ottimale.
Rilascio di cortisolo e schizotipia indotti dallo stress.Il cortisolo è coinvolto nella preparazione della risposta del corpo allo stress. Tuttavia, in coloro che sono a rischio per la salute mentale problemi, è stato segnalato rilascio anomalo di cortisolo a seguito di stress. In particolare, dobbiamo ancora comprendere appieno come lo stress porti ad un esacerbazione dei sintomi e alla progressione del rischio in coloro che esprimono propensione alla psicosi o schizotipia. Utilizzando il Trier Social Stress Test, abbiamo esaminato l'effetto dello stress psicosociale indotto sperimentalmente sul rilascio di cortisolo in individui altrimenti sani con tratti schizotipici. Questo studio trasversale ha incluso 58 individui (32,76% maschi, età media 22,43). La schizotipia è stata valutata dal punteggio totale dello Schizotypal Personality Questionnaire e abbiamo inoltre acquisito le valutazioni di stress soggettivo. Il cortisolo salivare è stato raccolto in sei punti temporali distribuiti prima e dopo l'induzione dello stress ed era disponibile per l'analisi in 39 individui (28. 21% maschi, età media 22,77). Quelli con tratti schizotipici elevati hanno mostrato livelli di cortisolo basale più elevati (5,18 nmol vs 3,71 nmol). Tuttavia, quelli con tratti schizotipici elevati hanno anche mostrato un rilascio medio di cortisolo ridotto (2,02 nmol vs 5,11 nmol) e hanno avuto un picco di rilascio di cortisolo ritardato a seguito di stress psicosociale. Questi risultati indicano che quelli con tratti schizotipici elevati non mostrano prontezza fisiologica a seguito di fattori di stress psicosociali, forse a causa di un sistema di stress già tassato.
Associazioni di infiammazione con carico di sintomi in pazienti con leucemia mieloide acuta.Lo scopo dello studio era valutare l'associazione tra infiammazione e carico di sintomi nei pazienti con leucemia mieloide acuta (LMA), valutata prima e durante la chemioterapia di induzione della remissione (CI). I pazienti con LMA (n=95) sono stati seguiti dal basale (prima della CI) fino alla terza settimana di CI per la gravità dei sintomi somatici auto-riferiti (valutato con il MD Anderson Symptom Inventory) e livelli plasmatici di 13 biomarcatori correlati all'infiammazione (n=64). Un punteggio composito di gravità del carico dei sintomi è stato calcolato come il punteggio medio dei sei sintomi somatici più gravi, ovvero affaticamento, sonno disturbato , sonnolenza, secchezza delle fauci, mancanza di appetito e dolore. I risultati delle analisi trasversali hanno mostrato che l'infiammazione era debolmente associata al carico dei sintomi prima dell'IC (modello di regressione multipla, varianza spiegata=10%) ma questa associazione è diventata più forte durante IC (la settimana 3 spiega la varianza=35%). Circa la metà del campione ha mostrato un cambiamento nel tempo nella gravità dei sintomi. Questi cambiamenti non si sono riflessi in cambiamenti simili nel tempo nei marcatori infiammatori, suggerendo che è la concentrazione assoluta di un dato marcatore infiammatorio in un dato momento piuttosto che il suo cambiamento relativo nel tempo che è importante. In conclusione, l'infiammazione è stata fortemente associata al carico dei sintomi solo durante l'IC, probabilmente perché l'espressione delle citochine solo allora diventa rilevante per la regolazione del carico dei sintomi. Sebbene l'attuale studio non consenta di determinare la causalità, i risultati suggeriscono che i pazienti con LMA potrebbero beneficiare di interventi antinfiammatori durante il trattamento per alleviare l'esperienza dei sintomi somatici.
Risposta proteica non ripiegata e alterazioni associate nell'espressione e nell'interazione dei recettori toll-like nell'ippocampo dei ratti di contenimento.Evidenze recenti suggeriscono che la risposta cellulare a lo stress spesso suscita la risposta proteica dispiegata (UPR), che ha un ruolo attivo nella depressione maggiore in regioni emotivamente rilevanti del cervello, come l'ippocampo. Molta dell'attività UPR è stata trovata per essere coalizzata con l'ambiente pro-infiammatorio di il cervello depresso. In particolare, le trascrizioni a valle di citochine pro-infiammatorie e una maggiore regolazione dei mediatori infiammatori candidati, come i recettori toll-like (TLR), sono promossi dall'UPR. Il presente studio ha esaminato il profilo di espressione associato all'ippocampo dei geni Tlr e la loro interazione con il chaperone UPR GRP94 nel modello di depressione dei roditori indotto da stress (modello di stress da ritenuta) Inoltre, lo stato di espressione dei geni correlati all'UPR è stato valutato nell'ippopotamo campus utilizzando lo stesso modello. I livelli di mRNA e proteine dei geni associati a Tlr e UPR sono stati esaminati rispettivamente mediante qRT-PCR e Western blot. Il metodo di co-immunoprecipitazione (Co-IP) è stato utilizzato per determinare l'interazione diretta tra i TLR con GRP94 nel cervello di ratto depresso. I risultati hanno mostrato che entrambi i geni UPR (Xbp-1, la sua variante giuntata sXbp-1, Atf-6, Chop e Grp94) e Tlr (2, 3, 4, 7 e 9) erano significativamente sovraregolati nell'ippocampo dei ratti che sono stati esposti a stress da costrizione. Una sovraregolazione simile è stata osservata nei livelli proteici dei suddetti TLR e della proteina chaperone UPR GRP94, nonché nelle forme totali e fosforilate delle proteine sensore IRE1α e PERK. Inoltre, è stata osservata un'interazione significativamente maggiore tra GRP94 e le proteine TLR attivate. Poiché, l'aumento dell'attività infiammatoria in aree vulnerabili come l'ippocampo è coerentemente associata a un cervello depresso; i nostri dati attuali suggeriscono che l'UPR può essere parte integrante dell'aumento dell'attività delle regolazioni infiammatorie nella depressione.
Effetti della glicemia sullo sconto sul ritardo, sull'assunzione di cibo e sulla controregolazione negli uomini magri e obesi.È stato dimostrato che lo sconto sul ritardo come misura dell'impulsività essere più elevato nell'obesità con un'associazione di aumento dell'assunzione di cibo. Inoltre, gli esseri umani obesi hanno mostrato un desiderio maggiore di alimenti ipercalorici rispetto agli uomini magri quando le concentrazioni di glucosio nel sangue erano basse. I primi studi che collegavano i livelli di glucosio nel sangue per ritardare l'attualizzazione hanno prodotto risultati contrastanti. Abbiamo ipotizzato che le persone obese - rispetto agli uomini magri - hanno una relativa mancanza di energia, specialmente quando i livelli di glucosio nel sangue sono bassi, il che si traduce in livelli più elevati di sconto sul ritardo, assunzione di cibo e controregolazione ormonale. Abbiamo studiato 20 giovani sani magri e 20 obesi in un disegno cross-over bilanciato in singolo cieco. Con una tecnica standardizzata di clamp con glucosio, i soggetti hanno subito uno stato ipoglicemico in una condizione e uno stato euglicemico nella condizione di controllo. Regolarmente, il sangue è stato campionati per la valutazione dello stato ormonale e sono stati compilati questionari per valutare l'attualizzazione del ritardo e la consapevolezza dei sintomi. Dopo aver normalizzato le concentrazioni di glucosio nel sangue, i soggetti erano liberi di mangiare da un buffet di prova standardizzato, seguito da uno spuntino di prova. Lo sconto sul ritardo era più alto negli obesi che negli uomini magri durante gli esperimenti (p<0.03). Tuttavia, non abbiamo osservato differenze di sconto significative tra le condizioni di glucosio (p>0.1). Inoltre, le prestazioni di sconto non erano correlate all'assunzione di cibo dal buffet di prova o dal test dello spuntino (p>0.3). In risposta all'ipoglicemia, la controregolazione ormonale è stata pronunciata in entrambi i gruppi di peso (p<0.03), ma le risposte di ACTH, norepinefrina e glucagone erano più forti negli obesi rispetto agli uomini magri (p<0.03). Inoltre, l'assunzione dal buffet ipercalorico dopo l'ipoglicemia rispetto all'euglicemia era maggiore nei soggetti obesi (p<0.02) ma paragonabile negli uomini magri (p>0.5). I nostri dati suggeriscono che lo sconto del ritardo aumentato è una caratteristica robusta nell'obesità che non è collegata ai livelli di glucosio o all'effettiva assunzione di cibo. Con il nostro approccio sistematicamente controllato, che combina le prestazioni nell'attualizzazione del ritardo in relazione a distinti livelli di glucosio nel sangue, diversi gruppi di peso, comportamento controregolatorio e assunzione di cibo, i nostri risultati implicano che l'attualizzazione del ritardo non è suscettibile alle fluttuazioni della glicemia e non supportano l'ipotesi che un basso contenuto energetico del corpo porta ad un aumento dell'impulsività. Per corroborare i nostri dati sono necessarie ulteriori repliche, comprese le donne e campioni di dimensioni maggiori.
Relazione dei modelli a lungo termine nell'attività di assistenza e dei sintomi depressivi con la lunghezza dei telomeri nelle donne anziane.La ricerca collega lo stress psicologico all'invecchiamento cellulare accelerato. Qui abbiamo esaminato se i modelli a lungo termine di depressione e carico assistenziale, forme di stress psicologico cronico, fossero associati a una lunghezza più corta dei telomeri, un biomarcatore dell'invecchiamento cellulare. Lo studio ha incluso 1250 donne anziane sane (media: 68,0; intervallo: 60-81 anni ) nel Nurses\' Health Study. I modelli a lungo termine nei sintomi depressivi e nell'attività di assistenza (separati in cura di bambini/nipoti rispetto a familiari/altri malati o disabili) hanno incorporato i dati del questionario tra il 1992 e il 2000; lunghezze relative dei telomeri dei leucociti ( LTL) sono stati misurati nel periodo 2000-2001. I minimi quadrati significano che gli z-score LTL sono stati calcolati attraverso le categorie di modelli di depressione e intensità del caregiving. Sei classi latenti di traiettorie dei sintomi depressivi derivate empiricamente sono stati identificati: minimo-stabile (63,7%), lieve peggioramento (3,9%), miglioramento sottosoglia (22,8%), peggioramento sottosoglia (2,7%), miglioramento depressivo del range clinico (6,2%) e depressivo del range clinico- persistente (0,6%). Dopo aver compresso i modelli di traiettoria in 4 gruppi (combinando quelli con sintomi minimi e lievi in un gruppo e quelli con sintomi depressivi del range clinico in un gruppo) a causa di dimensioni del campione molto piccole in alcuni gruppi, abbiamo osservato associazioni marginali (p=0.07): ad esempio, i minimi quadrati indicano che i punteggi z LTL erano più bassi (-0,08; 95% CI: da -0,22 a 0,06) per il gruppo dei sintomi depressivi del range clinico e più alti (0,12; 0,04-0,20) per il gruppo che migliorava la sottosoglia (Tukey \'s post-hoc a coppie p=0.07). Con sei traiettorie di sintomi depressivi, non sono state osservate associazioni significative per quanto riguarda le lunghezze dei telomeri. Non c'erano associazioni significative tra intensità del caregiving e LTL. Non c'erano associazioni tra i modelli a lungo termine del carico di cura e la lunghezza dei telomeri tra le donne anziane. Eventuali differenze nella lunghezza dei telomeri in base ai tipi di traiettorie dei sintomi depressivi a lungo termine potrebbero richiedere ulteriori indagini.
Il controllo delle risposte cardiovascolari allo stress da parte dell'IRC nel nucleo del letto della stria terminalis è mediato dalla segnalazione locale NMDA/nNOS/sGC/PKG.Il Gli obiettivi del presente studio erano di valutare un'interazione della neurotrasmissione del fattore di rilascio della corticotropina (CRF) all'interno del nucleo del letto della stria terminalis (BNST) con la segnalazione nitrergica locale, nonché di indagare un coinvolgimento dell'attivazione del recettore locale del glutammato NMDA e segnalazione di ossido nitrico (NO) nel controllo delle risposte cardiovascolari allo stress da contenzione acuto da parte della neurotrasmissione di CRF BNST nei ratti Abbiamo osservato che la microiniezione di CRF nel BNST aumentava il rilascio locale di NO durante lo stress di contenzione. Inoltre, la microiniezione bilaterale di CRF nel BNST migliorava sia la aumento della pressione arteriosa e della frequenza cardiaca evocati dallo stress di contenzione, ma senza influenzare la vasocostrizione cutanea mediata dal simpatico. La facilitazione delle risposte sia pressorie che tachicardiche per limitare lo stress evocato dal trattamento con BNST con CRF sono stati completamente inibiti dal pretrattamento locale con l'antagonista selettivo del recettore del glutammato NMDA LY235959, l'inibitore selettivo neuronale dell'ossido nitrico sintasi (nNOS) Nω-propil-l-arginina (NPLA), la guanilato ciclasi solubile (sGC) inibitore 1H-[1,2,4]Oxadiazolo[4,3-a]chinoxalin-1-one (ODQ) o l'inibitore della protein chinasi G (PKG) KT5823. Presi insieme, questi risultati forniscono la prova che la neurotrasmissione CRF di BNST facilita la neurotrasmissione glutamatergica mediata da NMDA locale e attiva la segnalazione nitrergica, e questa via è coinvolta nel controllo delle risposte cardiovascolari allo stress.
Associazioni di stress da lavoro con concentrazioni di cortisolo nei capelli - risultati iniziali di uno studio prospettico.Esistono ampie prove a sostegno del legame tra stress sul posto di lavoro e salute fisica e mentale. Uno dei percorsi potenzialmente mediatori di tali associazioni può coinvolgere l'asse ipotalamo-ipofisi-surrene (HPA), con il cortisolo come prodotto finale. Sebbene teoricamente plausibili, i risultati sull'associazione dello stress da lavoro auto-riferito con il cortisolo dei capelli concentrazioni (HCC) sono inconcludenti, essendo potenzialmente distorte da fattori pertinenti omessi. Questo problema può essere affrontato, tra l'altro, eliminando i fattori tempo-invarianti attraverso la considerazione della variazione all'interno delle persone nel tempo. A tal fine, il presente studio ha esaminato l'associazione tra variazione dell'HCC e dello stress lavorativo percepito - come valutato dal modello Effort-Reward-Imbalance (ERI) - tra due momenti (t1 e t2) nell'arco di un anno in un campione di 40 fattori maschili y lavoratori. Non è stata osservata né un'associazione trasversale, né un legame tra il cambiamento nei livelli di ERI e HCC a t2. C'era tuttavia una solida associazione del cambiamento di ERI con il cambiamento di HCC. Questo effetto era indipendente dall'HCC di base e da altri fattori confondenti (Beta=0.414, S. E. =0.155, p=0.012). Di conseguenza, questo è il primo studio che rivela prove prospettiche per le associazioni di stress da lavoro con HCC, escludendo fattori confondenti potenzialmente stabili nel tempo, come fattori genetici o colore fenotipico dei capelli.
Effetti della dose di testosterone sulla memoria spaziale tra ratti maschi adulti castrati.Ricerche precedenti sugli effetti di attivazione del testosterone sulla memoria spaziale hanno prodotto risultati contrastanti, forse perché tali effetti sono dose-dipendenti. Abbiamo testato un'ampia gamma di dosi di testosterone utilizzando due compiti di memoria spaziale: una versione di memoria di riferimento di lavoro del labirinto del braccio radiale (RAM) e un compito di memoria di posizione dell'oggetto (OLMT). I ratti Sprague-Dawley sono stati castrati o castrati simulatamente e hanno ricevuto iniezioni giornaliere di veicolo farmacologico (Oil Sham e Oil GDX) o una delle quattro dosi di propionato di testosterone (0,125, 0,250, 0,500 e 1.000 mgT) a partire da sette giorni prima del primo giorno di test comportamentali e continuando per tutto il test. Per la RAM, quattro bracci del labirinto sono stati costantemente innescati in ogni giorno di test. Il testosterone ha avuto un effetto significativo sulla memoria di lavoro sulla RAM, con Oil Sham, 0.125mgT e 0.500 gruppi mgT con prestazioni migliori t han il gruppo Oil GDX. Al contrario, non c'era alcun effetto significativo del testosterone sulla memoria di riferimento spaziale sulla RAM. Per l'OLMT, abbiamo testato la memoria a lungo termine utilizzando un intervallo tra le prove di 2 ore tra la prima esposizione a due oggetti identici e la riesposizione dopo che un oggetto era stato spostato. Solo i gruppi 0,125 e 0,500 mgT hanno mostrato un aumento significativo nell'esplorazione dell'oggetto spostato durante le prove di test, indicando una memoria migliore rispetto a tutti gli altri gruppi. La sostituzione del testosterone ha ripristinato la memoria spaziale tra i ratti maschi castrati su entrambi i compiti comportamentali, ma c'era una complessa relazione dose-risposta; pertanto, il valore terapeutico del testosterone è probabilmente sensibile alla dose.
I livelli di BDNF sono associati a tratti autistici nella popolazione generale.L'evidenza supporta l'idea che i sintomi e i comportamenti autistici dovrebbero essere considerati come tratti dimensionali. Il presente studio mirava a indagare il ruolo della vasopressina (AVP), del fattore neurotrofico derivato dal cervello (BDNF) e dell'ossitocina (OXT) come potenziali correlati biochimici dei tratti autistici subclinici in una coorte di giovani adulti sani. 80 maschi, 73 femmine). I partecipanti hanno completato l'Autism Spectrum Quotient (AQ), una misura ampiamente utilizzata per l'identificazione dei tratti autistici nella popolazione generale. Inoltre, sono stati prelevati campioni di sangue da tutti i partecipanti alla stessa ora del giorno per controllare la variazione circadiana. Abbiamo condotto un'analisi di regressione multipla utilizzando il punteggio AQ come variabile dipendente e i livelli di età, sesso, AVP, BDNF e OXT come variabili indipendenti. Il modello ha spiegato approssimazione ly il 22% della varianza del punteggio AQ. Tra i parametri inclusi nell'analisi, solo i livelli di BDNF erano predittori indipendenti del punteggio AQ.
Sequenziamento del DNA ad alta produttività del legno antico.Ricostruire la colonizzazione e le dinamiche demografiche che hanno dato origine alle foreste esistenti è essenziale per prevedere le risposte delle foreste a cambiamenti ambientali. Gli approcci classici per mappare come la popolazione di alberi è cambiata attraverso lo spazio e il tempo si basano in gran parte sui modelli di distribuzione del polline, con solo un numero limitato di studi che sfruttano le molecole di DNA conservate nei resti archeologici e subfossili di alberi in legno. Qui, avanziamo tali analisi applicando Sequenziamento del DNA ad alto rendimento (HTS) in materiale archeologico e subfossile del legno per la prima volta, utilizzando un campione completo di 167 resti impregnati d'acqua di quercia bianca europea che coprono un'ampia gamma temporale (da 550 a 9.800 anni) e geografica in tutta Europa. del DNA endogeno e del DNA microbico esogeno di 140 (~83%) campioni hanno aiutato l'identificazione delle condizioni ambientali che favoriscono il DNA a lungo termine p riserva nei resti del legno e ha iniziato a svelare le prime tendenze nel processo di decadimento del DNA nel materiale legnoso. Inoltre, gli aplotipi di cloroplasti ereditati dalla madre di 21 campioni provenienti da tre periodi di uso antropico della foresta (Neolitico, Età del Bronzo e Medioevo) sono risultati coerenti con quelli delle popolazioni moderne che crescono nelle stesse aree geografiche. Il nostro lavoro apre la strada a ulteriori studi volti a utilizzare il DNA antico conservato nel legno per ricostruire la risposta microevolutiva degli alberi ai cambiamenti climatici e alla gestione umana delle foreste.
L'ampia variazione trascrizionale pone una sfida allo sviluppo di biomarcatori di stress termico per i coralli in via di estinzione.Con i cambiamenti climatici, le anomalie della temperatura della superficie del mare che influiscono negativamente sugli organismi della barriera corallina continuano ad aumentare in frequenza e intensità. Tuttavia, nonostante la diffusa mortalità dei coralli, la diversità genetica rimane elevata anche nelle specie di corallo elencate come minacciate. Sebbene questa sia una buona notizia per molti versi, rappresenta una sfida per lo sviluppo di biomarcatori in grado di identificare resilienti Sfruttando tre vivai di restauro di coralli in Florida che servono come esperimenti di giardino comune a lungo termine, abbiamo esposto oltre 30 colonie di Acropora cervicornis geneticamente distinte a sbalzi di temperatura caldi e freddi stagionalmente e misurato le risposte di espressione genica in pool utilizzando RNAseq. sottoinsieme di 20 geni, abbiamo progettato un array qPCR ad alto rendimento per quantificare l'espressione in tutti gli individui separatamente sotto ogni trattamento con l'obiettivo di identificare biomarcatori di stress termico predittivi e/o diagnostici. Abbiamo osservato un'ampia variazione trascrizionale nella popolazione, suggerendo che è disponibile un'abbondante materia prima per l'adattamento tramite la selezione naturale. Tuttavia, questa elevata variazione ha reso difficile correlare i cambiamenti dell'espressione genica con le metriche delle prestazioni della colonia come la crescita, la mortalità e la suscettibilità allo sbiancamento. Tuttavia, abbiamo identificato diversi promettenti biomarcatori diagnostici per lo stress termico acuto che potrebbero migliorare il ripristino dei coralli e gli sforzi di mitigazione dei cambiamenti climatici in futuro.
I crash del traffico stradale e l'analisi dell'ambiente costruito degli hotspot di crash basati sui dati della polizia locale a Galle, Sri Lanka.Gli incidenti stradali (RTC) sono un principale causa di morte e disabilità. Nei paesi a basso e medio reddito, gli utenti della strada vulnerabili sono comunemente coinvolti in RTC dannosi. Questo studio descrive l'analisi epidemiologica e dell'ambiente costruito (BEA) di Galle, Sri Lanka. Dopo il permesso etico e della polizia, sono stati raccolti i dati della polizia e sono state tabulate statistiche descrittive. L'analisi spaziale ha identificato i punti caldi ed è stata condotta la BEA in ogni luogo. Sono stati raccolti settecentocinquantadue dati sulle vittime da 389 RTC segnalati. La maggior parte delle vittime erano uomini (91%) 21-50 anni di età (>70%). Il 49% degli RTC erano non gravi. Gli incidenti includevano comunemente motocicli (33,9%), veicoli a tre ruote (18,3%) o automobili (14,4%). La maggior parte delle vittime erano conducenti (33,4%) o pedoni (21,3%). I fattori che contribuiscono agli RTC includono la guida aggressiva (44 0,5%) o eccesso di velocità (42,7%). Tutti gli hotspot si trovavano in aree urbane e la maggior parte si trovava agli incroci (63%). È necessaria un'ulteriore analisi dei punti caldi per identificare le aree di intervento.
Into the wild-WAMBAM va in Canada.Il sesto meeting semestrale di modelli di animali selvatici si è tenuto a luglio 2017 in Québec, con 42 partecipanti Questo rapporto documenta l'evoluzione delle domande poste e degli approcci utilizzati negli studi genetici evoluzionistici quantitativi delle popolazioni selvatiche negli ultimi decenni e come queste domande e approcci sono stati rappresentati nel recente incontro. Esploriamo come le idee dei precedenti incontri di questa serie si sono sviluppate per loro stati attuali, e considerare come il formato degli incontri può essere particolarmente utile per favorire il rapido sviluppo e la proliferazione di idee e approcci.
Valutazione del partizionamento di nicchia delle specie di pipistrelli fratelli coesistenti mediante metabarcoding del DNA.= 0.83) a causa del consumo delle stesse falene comuni e diffuse Quelle differenze dietetiche che abbiamo rilevato potrebbero essere correlate a divergenze nella disponibilità di prede tra gli habitat di foraggiamento, che il monitoraggio radio precedente sulla stessa popolazione ha mostrato che sono utilizzate e selezionate in modo diverso quando entrambe le specie si verificano insieme. Questa minore segregazione alimentare nella simpatria potrebbe essere il risultato di foraggiamento sugli stessi tipi di prede e potrebbe contribuire a ridurre potenziali interazioni competitive (ad esempio, per la preda, spazio acustico). I nostri risultati evidenziano la necessità di valutare la dimensione spaziale della nicchia nel mediare la co-occorrenza di specie simili di pipistrelli insettivori, un fattore di nicchia probabilmente coinvolto nei processi di coesistenza delle specie di pipistrelli.
Il ruolo dell'ibridazione durante la divergenza ecologica del pino bianco sudoccidentale (Pinus strobiformis) e del pino agile (P. flexilis).Interazioni tra fattori estrinseci, come la selezione distruttiva e fattori intrinseci, come le incompatibilità genetiche tra loci, spesso contribuiscono al mantenimento dei confini delle specie. I ruoli relativi di questi fattori nell'instaurazione dell'isolamento riproduttivo possono essere esaminati utilizzando coppie di specie caratterizzate dal flusso genico durante la loro storia di divergenza Abbiamo studiato il processo di speciazione e il mantenimento dei confini di specie tra Pinus strobiformis e Pinus flexilis Utilizzando modelli di nicchia ecologica, modelli demografici e analisi di cline genomiche, abbiamo illustrato una storia di divergenza con flusso genico continuo. I nostri risultati hanno supportato un'abbondanza di generazione avanzata ibridi e una mancanza di loci che mostrano una ripida transizione nella frequenza degli alleli attraverso la zona ibrida solo, abbiamo trovato prove per la variazione associata al clima nell'indice ibrido e la divergenza di nicchia tra le specie parentali e la zona ibrida. Questi risultati sono coerenti con fattori estrinseci, come il clima, essendo un importante meccanismo di isolamento. È evidente anche un accumulo di incompatibilità intrinseche e di complessi genici coadattati, sebbene questi sembrino essere nelle prime fasi dello sviluppo. Ciò supporta il lavoro precedente nelle specie di conifere che dimostra l'importanza dei fattori estrinseci nel facilitare la speciazione. Nel complesso, i nostri risultati supportano l'ipotesi che la variazione della forza e della direzione delle pressioni selettive durante le lunghe durate di vita delle conifere, in combinazione con gli altri tratti della loro storia di vita, ritardi l'evoluzione di forti incompatibilità intrinseche.
Relazione tra 25 idrossivitamina D e profilo lipidico negli scolari libanesi.Sono disponibili informazioni limitate sull'associazione tra vitamina D e profilo lipidico nelle popolazioni pediatriche L'obiettivo di questo studio trasversale è determinare la prevalenza della carenza di vitamina D in un ampio campione di scolari libanesi e valutare la relazione tra vitamina D e profilo lipidico.969 scolari libanesi (505 ragazzi e 464 ragazze) di età compresa tra 8 e 8 anni. Sono stati reclutati 18 anni da 10 scuole di diverso stato socioeconomico (SES). Sono stati misurati il colesterolo totale non a digiuno, i trigliceridi e il colesterolo HDL (HDL-C). È stato calcolato il non-HDL-C. La prevalenza di 25(OH)D (livello inferiore a 20 ng/ml) è del 56,6% (48,1% nei ragazzi, 65,7% nelle ragazze). Non esiste una relazione significativa tra i livelli di 25(OH)D e l'età. Il 25(OH)D è inversamente correlato con l'IMC in la popolazione totale e nei ragazzi e nelle ragazze (p < 0.0001, p = 0,001 e p = 0,001, rispettivamente) ed è maggiore nei bambini delle scuole superiori SES e durante la stagione estiva (p < 0,0001 in entrambi i casi). 25(OH)D è inversamente correlato con trigliceridi e non-HDL-C nella popolazione totale e nei ragazzi e nelle ragazze (p < 0,0001 per tutti), e correlato positivamente con HDL-C nella popolazione totale e nei ragazzi ma non nelle ragazze (p = 0.001, p < 0.0001 e p = 0.1, rispettivamente). In un'analisi di regressione multilineare, nella popolazione complessiva, il 25(OH)D è associato indipendentemente a sesso, stagione, SES scolastico, BMI, trigliceridi e non-HDL-C. Nei ragazzi, l'associazione con BMI e stagione non è significativa. Si osserva una relazione indipendente tra 25(OH)D e fattori di rischio cardiometabolico nella popolazione pediatrica libanese Sono necessari ulteriori studi per valutare le conseguenze a lungo termine di questa relazione.
Integrazione di dati genomici e fenotipici per valutare ipotesi filogenetiche alternative e di delimitazione delle specie in una recente radiazione evolutiva di cavallette.Sebbene risolva relazioni filogenetiche e stabilisca limiti di specie sono obiettivi primari della sistematica, questi compiti rimangono impegnativi sia a livello concettuale che analitico. Qui, abbiamo integrato dati genomici e fenotipici e impiegato una suite completa di analisi basate su coalescenti per sviluppare e valutare ipotesi filogenetiche e di delimitazione delle specie concorrenti in una recente radiazione evolutiva di cavallette (gruppo Chorthippus binotatus) composto da due specie e otto sottospecie putative. Per risolvere le relazioni evolutive all'interno di questo complesso, abbiamo prima valutato ipotesi filogenetiche alternative derivanti da molteplici schemi di elaborazione dei dati genomici e inferenze su base genetica contrapposte con diverse fonti di fenotipi informazioni. In secondo luogo, esponiamo ha valutato l'importanza del numero di loci, dei precedenti demografici, del numero e del tipo di caratteri fenotipici e della variazione dei tratti basata sul sesso per lo sviluppo di ipotesi alternative di delimitazione delle specie. La topologia meglio supportata era ampiamente compatibile con i dati fenotipici e mostrava la presenza di due cladi corrispondenti ai gruppi di specie nominative, uno comprendente tre lignaggi ben risolti e l'altro comprendente una politomia a quattro lignaggi e un sister taxon ben differenziato. Le analisi integrative di delimitazione delle specie hanno indicato che il numero di loci impiegati ha avuto un impatto limitato sulle inferenze ottenute ma ha rivelato la maggiore potenza fornita da un numero crescente di caratteri fenotipici e l'utilità di valutare il loro contenuto di informazioni filogenetiche e le differenze tra i sessi nella variazione dei tratti tra taxa. Nel complesso, il nostro studio evidenzia l'importanza di integrare più fonti di informazioni per testare ipotesi filogenetiche in competizione e chiarire la storia evolutiva dei complessi di specie che rappresentano le prime fasi della divergenza in cui le inferenze contrastanti sono più inclini a comparire.
Livelli e distribuzione di cobalto e nichel nelle macrofite acquatiche trovate nel lago di Scutari, Montenegro.Le macrofite reagiscono ai cambiamenti della qualità dell'ambiente in in cui vivono (acqua/sedimento), e sono buoni bioindicatori delle condizioni delle acque superficiali. Nel presente studio, il contenuto dei metalli cobalto (Co) e nichel (Ni) è stato determinato nel sedimento, nell'acqua e in diversi organi di macrofite provenienti da sei località intorno al lago di Scutari, in quattro diverse stagioni dell'anno. Le macrofite acquatiche che sono state utilizzate come specie bioindicatrici in questo studio sono Phragmites australis (una specie emersa), Ceratophyllum demersum (una specie sommersa) e Lemna minor ( una specie galleggiante). Lo scopo di questo studio era di determinare la distribuzione dei metalli nei tessuti delle macrofite e anche di scoprire il grado di bioaccumulo dei metalli indagati, a seconda sia della posizione che della stagione. Il contenuto di Co e Ni inle parti esaminate delle macrofite erano nell'intervallo 0,04-8,78 e 0,30-28,5 ppm, rispettivamente. Il maggior contenuto del metallo studiato negli organi di P. australis e C. demersum è stato registrato all'inizio e durante la stagione vegetativa. Maggiori concentrazioni di metalli nel tessuto di L. minor sono state osservate alla fine della stagione vegetativa.
Recurrence.Per rivedere la farmacologia, la farmacocinetica, la farmacodinamica, l'efficacia clinica, la tollerabilità, il dosaggio e la somministrazione di bezlotoxumab (BEZ), nonché il suo ruolo nella prevenzione delle recidive dell'infezione da Clostridium difficile (CDI). Una ricerca di PubMed e Google Scholar utilizzando i termini "bezlotoxumab," "CDB1," "MDX-1388," e "MK-6072 " è stato eseguito. Anche il sito Web del produttore è stato rivisto per identificare ulteriormente le informazioni pertinenti. Tutti gli articoli in lingua inglese dal 2006 al maggio 2017 che compaiono in queste ricerche sono stati rivisti per la pertinenza a questo documento. Inoltre, le loro bibliografie sono state riviste per identificare qualsiasi articolo non identificato nelle ricerche. BEZ è un anticorpo monoclonale umano che si lega alla tossina B di Clostridium difficile. È approvato dalla Food and Drug Administration per ridurre le recidive di CDI in pazienti adulti che stanno ricevendo una terapia antibiotica per CDI e sono ad alto rischio per recidiva CDI. Viene somministrato in dose singola di 10 mg/kg tramite infusione endovenosa. Viene eliminato dal catabolismo. Gli studi clinici di fase III hanno dimostrato che la BEZ era associata a tassi significativamente più bassi di recidiva di CDI, rispetto al placebo. Gli eventi avversi più comuni riportati durante gli studi clinici sono stati diarrea e nausea. C'è un avvertimento riguardo all'uso di BEZ in pazienti con una storia di insufficienza cardiaca congestizia. Le reazioni avverse più comuni associate alla BEZ sono nausea, piressia e cefalea. BEZ si è dimostrato sicuro ed efficace nel prevenire le recidive di CDI. Dato il suo costo elevato, dovrebbe essere riservato ai pazienti ad alto rischio di recidiva di CDI.
Lesione prelemniscale per il miglioramento selettivo del tremore della malattia di Parkinson.Può essere necessario un miglioramento selettivo dei sintomi quando si trattano pazienti con malattia di Parkinson (PD) con una malattia prevalentemente monosintomatica quadro clinico. Definire un target nelle fibre di radiazione prelemniscale (Raprl) correlato alla fisiopatologia del tremore evidenziata dalla trattografia. Segnaliamo un paziente con riposo unilaterale predominante e tremore posturale, diagnosticato come PD sulla base di un miglioramento dell'80% indotto dalla somministrazione di L -DOPA/carbidopa, successivamente complicata da fluttuazioni motorie, discinesia L-DOPA e un periodo ON ridotto È stata eseguita una lesione stereotassica a radiofrequenza per il controllo del tremore e l'imaging pesato in diffusione (DWI) postoperatorio ha dimostrato la posizione precisa e l'estensione della lesione con la medicazione OFF del paziente si è ottenuto un perfetto controllo del tremore, che dura da 5 anni, senza ipotonia alle estremità trattate. aled una lesione di 3,0 mm alla base del nucleo ventralis intermedius (Vim) interrompendo le fibre cerebellari-Vim risparmiando il componente del nucleo posteriore del ventrale cerebellare oralis. Il miglioramento selettivo dei sintomi è possibile nei pazienti con una presentazione clinica prevalentemente monosintomatica.
Stent ureterici metallici nell'ostruzione ureterica maligna: una revisione sistematica.L'efficacia degli stent metallici nella gestione dell'ostruzione ureterale maligna non è chiara. Questa sistematica La revisione valuta l'uso di 4 stent metallici disponibili in commercio (Resonance, Memokath 051, Uventa e Allium URS). Ventuno studi hanno soddisfatto i criteri di ammissibilità. Le percentuali di successo complessive variavano dall'88% per lo stent Allium al 65% per Memokath 051. Risonanza ha dimostrato il tasso di migrazione più basso (1%). Uventa ha avuto il tasso di ostruzione più basso (6%). Gli stent ureterici metallici offrono una valida alternativa nella gestione dell'ostruzione ureterale maligna Sono necessari ulteriori studi di alta qualità per valutare l'efficacia dei costi e perfezionare le indicazioni specifiche in base all'eziologia e al livello dell'ostruzione ureterale.
Sviluppo di cellule amacrine colinergiche ON e OFF nella retina fetale umana.Cellule amacrine della retina che esprimono colina acetiltransferasi (ChAT) sono presenti nei vertebrati. Questi gli interneuroni svolgono un ruolo importante nello sviluppo delle proiezioni retiniche al cervello e nel rilevamento del movimento, in particolare nella generazione di risposte selettive sulla direzione agli stimoli in movimento. Le cellule amacrine ChAT comprendono tipicamente due popolazioni spazialmente segregate che formano circuiti nel \'ON\' o \'OFF \' strati sinaptici della retina interna Questa disposizione stereotipata si trova anche attraverso la retina umana adulta, con la notevole eccezione che l'espressione di ChAT è evidente nello strato ON ma non OFF della fovea, una regione specializzata per la visione ad alta acutezza. Abbiamo quindi studiato se la fovea umana mostra un percorso di sviluppo per le cellule ChAT ON e OFF che è specifico della posizione retinica. La nostra analisi mostra che in ogni posizione retinica, l'uomo Le cellule ChAT ON e OFF si differenziano, formano i loro strati sinaptici separati e stabiliscono mosaici non casuali all'incirca nello stesso momento. Tuttavia, a differenza della fovea adulta, l'immunocolorazione ChAT è inizialmente robusta sia nelle popolazioni ON che OFF, almeno fino a metà gestazione. L'espressione di ChAT nello strato OFF nella fovea è quindi significativamente ridotta dopo la metà della gestazione. Le cellule OFF ChAT nella fovea umana e nella periferia retinica seguono quindi percorsi maturativi distinti.
L'elettroisterografia nella diagnosi del parto pretermine: una revisione.Il parto pretermine (PTB) è una delle complicanze più comuni e gravi della gravidanza. Ogni anno nascono 15 milioni di neonati pretermine, con rapporti del 10-15% sul totale delle nascite. Nei paesi industrializzati, il parto pretermine è responsabile del 70% della mortalità e del 75% della morbilità nel periodo neonatale. Mezzi diagnostici per la sua tempestiva valutazione del rischio sono carenti e i meccanismi fisiologici sottostanti non sono chiari. La registrazione superficiale dell'attività mioelettrica uterina (elettroisterogramma, EHG) è emersa come una tecnica di monitoraggio della dinamica uterina migliore rispetto alle tradizionali registrazioni della pressione superficiale e fornisce informazioni sulla condizione del muscolo uterino in diversi scenari ostetrici con enfasi sulla previsione di parti pretermine. È stata eseguita una revisione completa della letteratura sugli studi relativi all'uso dell'elettroisterogramma nel contesto PTB. Questo r eview presenta e discute i risultati in base ai diversi tipi di parametri (temporali e spettrali, non lineari e bivariati) utilizzati per la caratterizzazione EHG. L'analisi dell'elettroisterogramma rivela che i cambiamenti elettrofisiologici uterini che precedono il travaglio spontaneo pretermine sono associati a contrazioni di maggiore intensità, contenuto di frequenza più elevato, attività propagata più rapida e organizzata e accoppiamento più forte di diverse aree uterine. Le analisi EHG temporali, spettrali, non lineari e bivariate forniscono quindi informazioni utili e complementari. Sono state sviluppate tecniche di classificazione di diverso tipo e complessità variabile per diagnosticare la PTB. Le informazioni derivate da questi diversi tipi di parametri EHG, singolarmente o in combinazione, sono in grado di fornire previsioni più accurate di PTB rispetto agli attuali metodi clinici. Tuttavia, per estendere l'EHG alle applicazioni cliniche, l'impostazione della registrazione dovrebbe essere semplificata, essere meno intrusiva e più robusta e l'analisi del segnale dovrebbe essere automatizzata senza richiedere molta supervisione e produrre risultati fisiologicamente interpretabili. Questa recensione fornisce uno sfondo generale alla PTB e descrive come l'EHG può essere utilizzato per comprendere meglio i suoi meccanismi fisiologici sottostanti e migliorare la sua previsione. I risultati aiuteranno i futuri ricercatori a decidere le funzionalità EHG più appropriate da utilizzare nelle loro analisi e faciliteranno le future applicazioni cliniche EHG al fine di migliorare la previsione della PTB.
Accuratezza prognostica della valutazione sequenziale rapida dell'insufficienza d'organo per la mortalità nei pazienti con sospetta infezione: una revisione sistematica e una meta-analisi.L'organo sequenziale rapido La valutazione del fallimento (qSOFA) è stata proposta per la previsione della mortalità nei pazienti con sospetta infezione, per riassumere e confrontare l'accuratezza prognostica di qSOFA e i criteri della sindrome da risposta infiammatoria sistemica (SIRS) per la previsione della mortalità in pazienti adulti con sospetta infezione. dall'inizio fino a novembre 2017. Studi in lingua inglese che utilizzano qSOFA per la previsione della mortalità (in ospedale, 28 giorni o 30 giorni) in pazienti adulti con sospetta infezione nell'unità di terapia intensiva (ICU), dipartimento di emergenza (ED) , o reparti ospedalieri. Due ricercatori hanno estratto indipendentemente i dati e valutato la qualità dello studio utilizzando criteri standard. Sono stati inclusi trentotto studi (n = 385 333). qSOFA è stato associato a un pool di sensori un'attività del 60,8% (IC 95%, dal 51,4% al 69,4%) e una specificità aggregata del 72,0% (IC, dal 63,4% al 79,2%) per la mortalità. I criteri SIRS erano associati a una sensibilità aggregata dell'88,1% (IC, dall'82,3% al 92,1%) e una specificità aggregata del 25,8% (IC, dal 17,1% al 36,9%). La sensibilità aggregata di qSOFA era più alta nella popolazione ICU (87,2% [IC, dal 75,8% al 93,7%]) rispetto alla popolazione non ICU (51,2% [IC, 43,6% al 58,7%]). La specificità aggregata di qSOFA era maggiore nella popolazione non in terapia intensiva (79,6% [IC, 73,3%-84,7%]) rispetto alla popolazione ICU (33,3% [IC, 23,8%-44,4%]). Potenziale rischio di bias negli studi inclusi a causa dell'interpretazione di qSOFA e della selezione dei pazienti. qSOFA aveva scarsa sensibilità e moderata specificità per la mortalità a breve termine. I criteri SIRS avevano una sensibilità superiore a quella di qSOFA, supportandone l'uso per lo screening dei pazienti e come suggerimento per l'inizio del trattamento. Associazione canadese dei medici di emergenza. (PROSPERO: CRD42017075964).
Profilazione dei metaboliti di ADB-FUBINACA, un nuovo cannabinoide sintetico.La profilazione dei metaboliti di nuove sostanze psicoattive (NPS) è fondamentale per documentare il consumo di droghe. N -(1-ammino-3,3-dimetil-1-ossobutan-2-il)-1-(4-fluorobenzil)-1H-indazolo-3-carbossammide (ADB-FUBINACA) è un cannabinoide sintetico emergente le cui proprietà tossicologiche e metaboliche i dati non sono attualmente disponibili. Abbiamo mirato a determinare i marcatori ottimali per identificare l'assunzione di ADB-FUBINACA. La stabilità metabolica è stata valutata con incubazioni di microsomi epatici umani. I metaboliti sono stati identificati dopo 1 e 3 h di incubazione con pool di epatociti umani, cromatografia liquida-spettrometria di massa ad alta risoluzione in modalità a ioni positivi (5600+ TripleTOF®, Sciex) e diversi approcci di data mining (MetabolitePilot™, Sciex). La separazione dei metaboliti è stata ottenuta su una colonna Ultra Biphenyl (Restek®), TOF-MS full-scan e MS di acquisizione dipendente dalle informazioni /MS sono stati acquisiti i dati ADB-FUBINACA microsomiale h l'alfa-vita era di 39,7 min, con una clearance epatica prevista di 9,0 ml/min/kg e un rapporto di estrazione di 0,5 (farmaco a clearance intermedia). Sono stati identificati 23 metaboliti. Le principali vie metaboliche erano l'idrossilazione di alchil e indazolo, l'idrolisi dell'ammide terminale, le successive coniugazioni del glucuronide e la deidrogenazione. Raccomandiamo i metaboliti ADB-FUBINACA idrossialchile, idrossideidroalchile e idrossilindazolo come marcatori di assunzione di ADB-FUBINACA. I metaboliti N-dealchilati non sono metaboliti ADB-FUBINACA specifici e non devono essere utilizzati come marcatori definitivi di consumo. Questo è il primo studio sul metabolismo in vitro di ADB-FUBINACA; per confermare i nostri risultati sono necessari esperimenti in vivo che consentano studi di farmacocinetica e farmacodinamica o urine di casi clinici/forensi autentici.
Prestazioni, redditività ed emissioni di gas serra di strategie di finitura alternative per tori e manzi Holstein-Friesian.La modifica delle strategie di finitura all'interno dei sistemi di produzione consolidati ha il potenziale per aumentare la produzione di carne bovina e il profitto dell'allevamento riducendo le emissioni di gas serra (GHG). Pertanto, gli obiettivi di questo studio erano di indagare gli effetti della durata del finissaggio sulle prestazioni degli animali di tori e manzi Holstein-Friesian (HF) e valutare la redditività e i gas serra emissioni di queste strategie di finissaggio. Un totale di 90 vitelli HF sono stati assegnati a un disegno completo di blocchi randomizzati;tre strategie di finitura di tori e tre manzi. I vitelli sono stati pascolati a rotazione in un sistema paddock per la prima stagione al pascolo, alloggiati e offerti insilato d'erba e libitum più 1,5 kg DM di concentrato pro capite al giorno per il primo inverno e tornati al pascolo per una seconda stagione I tori sono stati macellati a 19 mesi di età e finito al chiuso su concentrati ad libitum per 100 giorni (19AL), finito al pascolo integrato con 5 kg DM di concentrato pro capite al giorno per 100 (19SP) o 150 giorni (19LP). I manzi sono stati macellati a 21 mesi di età e finiti al pascolo, integrati con 5 kg DM di concentrato pro capite al giorno per 60 (21SP) e 110 giorni (21LP) o macellati a 24 mesi di età e finiti al chiuso durante il secondo inverno su erba insilato ad libitum più 5 kg DM di concentrato pro capite al giorno (24MO). Il modello Grange Dairy Beef Systems e il modello Beef Systems sulle emissioni di gas serra sono stati utilizzati per valutare rispettivamente la redditività e le emissioni di gas serra. Il guadagno medio giornaliero durante il periodo di finitura (P<0.001), il peso vivo al macello (P<0.01), il peso della carcassa (P<0.05) e il punteggio grasso (P<0.001) erano maggiori per 19AL rispettivamente di 19SP e 19LP. Allo stesso modo, l'assunzione di sostanza secca concentrata era maggiore per 19AL rispetto a 19SP; 19LP era intermedio (P<0.001). Il peso vivo alla macellazione (P<0.001), il peso della carcassa (P<0.001), il punteggio di conformazione (P<0.05) e il punteggio grasso (P<0.001) erano maggiori per 24MO rispetto a 21SP e 21LP, rispettivamente. Durante il periodo di finitura l'assunzione di sostanza secca concentrata è stata maggiore per 21LP rispetto a 21SP con 24MO intermedio; 542, 283 e 436 kg DM, rispettivamente. Sebbene le strategie di rifinitura basate sul pascolo avessero valori di produzione lorda inferiori, anche i costi dei mangimi concentrati erano ridotti, quindi il margine netto era maggiore rispetto alle strategie di rifinitura indoor. La riduzione dell'input di concentrato ha aumentato le emissioni di gas a effetto serra rispettivamente per tori e manzi macellati alla stessa età. Sebbene il prolungamento della durata dell'allevamento abbia ridotto le emissioni di gas a effetto serra per i sistemi di produzione di tori e manzi, l'affinamento di tori e manzi per un periodo più lungo al pascolo non ha migliorato le prestazioni e il profitto degli animali.
Il recettore 1 della sfingosina-1-fosfato media l'elevata segnalazione di IL-6 per promuovere l'infiammazione cronica e il danno multitissutale nell'anemia falciforme.Sfingosina-1- Il fosfato (S1P) è un biolipide coinvolto nell'infiammazione cronica in diversi disturbi infiammatori. Recenti studi hanno rivelato che un S1P elevato contribuisce alla falciatura nell'anemia falciforme (SCD), una devastante malattia emolitica, genetica associata a grave infiammazione cronica e danno tissutale. Abbiamo valutato l'effetto dell'elevata S1P nell'infiammazione cronica e nel danno tissutale nella SCD e nei meccanismi sottostanti. In primo luogo, abbiamo dimostrato che l'interferenza con la segnalazione del recettore S1P da parte di FTY720, un farmaco approvato dalla Food and Drug Administration statunitense, riduce significativamente l'infiammazione sistemica locale e il danno tissutale senza Questi risultati ci hanno portato a scoprire che l'attivazione del recettore S1P porta a livelli di IL-6 locali e sistemici sostanzialmente elevati nei topi SCD. di IL-6 nei topi SCD ha ridotto significativamente l'infiammazione locale e sistemica, il danno tissutale e la disfunzione renale. A livello cellulare, abbiamo determinato che l'IL-6 elevata è una citochina chiave che funziona a valle dell'elevata S1P, che contribuisce all'aumento dell'espressione genica del recettore S1P 1 (S1pr1) nei macrofagi di diversi tessuti nei topi SCD. Meccanicisticamente, abbiamo rivelato che S1P-S1PR1 segnala l'espressione del gene IL-6 reciprocamente up-regolata nei macrofagi primari di topo in modo JAK2-dipendente. Complessivamente, abbiamo rivelato che S1P elevato, accoppiato con il macrofago S1PR1 che induce reciprocamente l'espressione di IL-6, è una rete di segnalazione chiave che funziona come un loop dannoso, positivo, feed-forward per sostenere l'infiammazione e promuovere il danno tissutale nella SCD. I nostri risultati evidenziano immediatamente nuove possibilità terapeutiche. -Zhao, S. , Adebiyi, MG, Zhang, Y. , Couturier, JP, Fan, X. , Zhang, H. , Kellems, RE, Lewis, DE, Xia, Y. Sphingosine Il recettore -1-fosfato 1 media l'elevata segnalazione di IL-6 per promuovere l'infiammazione cronica e il danno multitissutale nell'anemia falciforme.
MMP14 è un nuovo bersaglio della segnalazione del PTH negli osteociti che controlla il riassorbimento regolando la produzione di RANKL solubile.topo o indotto da aumento cronico di PTH e diminuzione dell'osso riassorbimento ma ha consentito la piena stimolazione della formazione ossea indotta dalle iniezioni di PTH, potenziando così il guadagno osseo. Quindi, MMP14 è un nuovo membro dell'intricata rete genica attivata in Ots dalla segnalazione PTH1R che può essere mirata per regolare le risposte scheletriche al PTH a favore di conservazione delle ossa. -Delgado-Calle, J. , Hancock, B. , Likine, EF, Sato, AY, McAndrews, K. , Sanudo, C. , Bruzzaniti, A. , Riancho, JA, Tonra, JR, Bellido, T MMP14 è un nuovo bersaglio della segnalazione del PTH negli osteociti che controlla il riassorbimento regolando la produzione di RANKL solubile.
Staphylococcus aureus innesca un passaggio dall'apoptosi indotta dal virus dell'influenza alla morte delle cellule necrotiche.Le superinfezioni da Staphylococcus aureus sono una delle principali complicanze della malattia influenzale, causando eccessiva infiammazione e danno tissutale. Questo maggiore effetto dannoso per le cellule si osserva anche nelle colture di tessuti superinfetti, portando a una forte diminuzione della vitalità cellulare complessiva. Nella nostra analisi dei meccanismi molecolari sottostanti, abbiamo osservato che, nonostante l'aumento del danno cellulare nella superinfezione, S. aureus non ha aumentato, ma piuttosto inibito l'apoptosi indotta dal virus dell'influenza (IV) nelle cellule a livello di attivazione della procaspasi 8. Questa apparente contraddizione è stata risolta quando abbiamo osservato che S. aureus mediava un passaggio dall'apoptosi alla morte cellulare necrotica di cellule infettate da IV, un meccanismo che dipendeva dal locus del regolatore del gene accessorio batterico (agr) che promuove la sopravvivenza e la diffusione dei batteri. Questa azione finora sconosciuta potrebbe essere un strategia batterica per migliorare la diffusione di S. aureus intracellulare e può quindi contribuire ad aumentare il danno tissutale e la gravità della malattia. -Van Krüchten, A. , Wilden, JJ, Niemann, S. , Peters, G. , Löffler, B. , Ludwig , S. , Ehrhardt, C. Staphylococcus aureus innesca uno spostamento dall'apoptosi indotta dal virus dell'influenza alla morte cellulare necrotica.
Le cellule scheletriche YAP e TAZ promuovono in modo combinato lo sviluppo osseo.Le funzioni dei coattivatori trascrizionali paraloghi Proteina associata al Sì (YAP) e coattivatore trascrizionale con PDZ -binding motivi (TAZ) nell'osso sono controversi. Ciascuno è stato osservato per promuovere o inibire l'osteogenesi in vitro, con segnalazioni di funzioni sia equivalenti che divergenti. I loro ruoli combinatori nella fisiologia ossea sono sconosciuti. Segnaliamo che la delezione combinatoria di YAP/TAZ da cellule del lignaggio scheletrico, utilizzando Osterix-Cre, hanno causato un fenotipo simile all'osteogenesi imperfetta con gravità dipendente dalla dose allelica e una maggiore espressività fenotipica con ablazione TAZ omozigote rispetto a YAP. contenuto e organizzazione Questi difetti strutturali e materiali hanno prodotto fratture spontanee, in particolare nei topi con delezione omozigote di TAZ e causato neon letalità atale nei knockout doppi omozigoti. A livello cellulare in vivo, l'ablazione YAP/TAZ ha ridotto l'attività degli osteoblasti e ha aumentato l'attività degli osteoclasti, in modo allele dose-dipendente, compromettendo l'accumulo e il rimodellamento osseo. Trascrizionalmente, la delezione di YAP/TAZ e l'inibizione da parte di piccole molecole dell'interazione di YAP/TAZ con il coeffettore trascrizionale TEAD hanno ridotto l'espressione genica osteogenica e correlata al collagene, sia in vivo che in vitro. Questi dati dimostrano che YAP e TAZ promuovono in modo combinatorio lo sviluppo osseo attraverso la regolazione dell'attività degli osteoblasti, della qualità della matrice e del rimodellamento osteoclastico. -Kegelman, CD, Mason, DE, Dawahare, JH, Horan, DJ, Vigil, GD, Howard, SS, Robling , AG, Bellido, TM, Boerckel, JD Skeletal cell YAP e TAZ promuovono in modo combinatorio lo sviluppo osseo.
L'argininosuccinato sintetasi 1 contribuisce all'invasione e alla progressione del cancro gastrico modulando l'autofagia.L'argininosuccinato sintetasi 1 (ASS1) è un enzima a velocità limitata nella biosintesi dell'arginina Il potenziale oncogenico di ASS1 in termini di prognosi e metastasi del cancro nel carcinoma gastrico prototrofico dell'arginina (GC) rimane al momento poco chiaro Identifichiamo proteine differenzialmente espresse in cellule tumorali GC microdissezionate rispetto agli epiteli adiacenti non tumorali mediante tag di massa isobarica per la quantificazione relativa e assoluta analisi proteomica. Le cellule GC con espressione stabile o deplezione di ASS1 sono state ulteriormente analizzate per identificare le molecole a valle. Abbiamo studiato i loro effetti sulla chemioresistenza e sull'invasione cellulare in presenza o assenza di arginina. ASS1 era altamente espresso in GC e correlato positivamente con l'aggressività del GC e scarso esito. L'esaurimento di ASS1 ha portato all'inibizione della crescita del tumore e alla diminuzione dell'invasione cellulare attraverso l'induzione di f macchinario autofagico-lisosoma, con conseguente degradazione di -catenina attiva, Snail e Twist. L'espressione ectopica di ASS1 nelle cellule GC ha invertito questi effetti e ha protetto le cellule tumorali dall'apoptosi indotta da farmaci chemioterapici tramite l'attivazione del bersaglio AKT-mammifero della via di segnalazione della rapamicina. ASS1 contribuisce alla progressione della GC migliorando il potenziale aggressivo derivante dall'accumulo attivo di β-catenina, Lumaca e Twist. I nostri risultati suggeriscono che ASS1 potrebbe contribuire alla metastasi GC e supportare la sua utilità come predittore prognostico di GC. -Tsai, C. -Y. , Chi, H. -C. , Chi, L. -M. , Yang, H. -Y. , Tsai, M. -M. , Lee, K. -F. , Huang, H. -W. , Chou, L. -F. , Cheng, A. -J. , Yang, C. -W. . , Wang, C. -S. , Lin, K. -H. L'argininosuccinato sintetasi 1 contribuisce all'invasione e alla progressione del cancro gastrico modulando l'autofagia.
Ganetespib limita la ciliazione e la cistogenesi nella malattia renale policistica autosomica dominante (ADPKD).La malattia renale policistica autosomica dominante (ADPKD) è associata a progressiva formazione di cisti renali, ingrossamento renale, ipertensione e malattia renale tipicamente allo stadio terminale Nell'ADPKD, le mutazioni ereditarie interrompono la funzione delle policistine (codificate da PKD1 e PKD2), causando così la perdita di un segnale di repressione della cisti proveniente dal ciglio renale. Studi genetici hanno suggerito che il mantenimento ciliare è essenziale per la patogenesi dell'ADPKD. I client Heat Shock Protein 90 (HSP90) includono più proteine legate al mantenimento ciliare. Abbiamo determinato che ganetespib, un inibitore clinico HSP90, inibisce la repressione proteasomica di NEK8 e l'attivatore Aurora-A trichoplein, attivando rapidamente la chinasi Aurora-A e causando la perdita ciliare in vitro Utilizzando modelli murini condizionali per ADPKD, abbiamo eseguito esperimenti di dosaggio a lungo termine (10 o 50 settimane) che dimostrano L'inibizione di HSP90 ha causato una perdita durevole di ciglia in vivo, una crescita cistica controllata e un miglioramento dei sintomi indotti dalla perdita di Pkd1 o Pkd2. L'efficacia di Ganetespib non è stata aumentata dalla combinazione con 2-desossi-d-glucosio, un inibitore della glicolisi che mostra qualche promessa per l'ADPKD. Questi studi identificano una nuova attività biologica per HSP90 e supportano un meccanismo basato sulle ciglia per la repressione delle cisti. -Nikonova, AS, Deneka, AY, Kiseleva, AA, Korobeynikov, V. , Gaponova, A. , Serebriiskii, IG, Kopp, MC , Hensley, HH, Seeger-Nukpezah, TN, Somlo, S. , Proia, DA, Golemis, EA Ganetespib limita la ciliazione e la cistogenesi nella malattia del rene policistico autosomico dominante (ADPKD).
La disregolazione della sintesi degli acidi biliari e la disbiosi sono implicate nell'infiammazione sistemica indotta dalla dieta occidentale, nell'attivazione della microglia e nella ridotta neuroplasticità.L'obiettivo di questo studio era per identificare i collegamenti intrinseci che spiegano l'effetto di una dieta occidentale (WD) sulla disfunzione cognitiva. Topi wild-type specifici privi di patogeni sono stati alimentati con una dieta di controllo (CD) o con un WD ad alto contenuto di grassi e saccarosio dopo lo svezzamento e sono stati soppressi a 10 mesi di età per studiare i percorsi che influenzano la salute cognitiva. I risultati hanno mostrato che l'assunzione di WD a lungo termine ha ridotto la plasticità sinaptica dell'ippocampo e il livello di mRNA del fattore neurotrofico derivato dal cervello nel cervello e nella microglia isolata. attivato ERK1/2 e ridotto la densità postsinaptica-95 nel cervello, suggerendo un danno postsinaptico. Inoltre, i topi alimentati con WD avevano aumentato la segnalazione infiammatoria nel cervello, nell'ileo, nel fegato, nel tessuto adiposo e nella milza, che era accompagnata dall'attivazione della microglia. il reggiseno in, così come nel tratto digestivo, un WD ha ridotto la segnalazione regolata dall'acido retinoico e dagli acidi biliari (BA), i cui recettori formano eterodimeri per controllare il metabolismo e l'infiammazione. Inoltre, un'assunzione di WD ha causato disbiosi e sintesi di BA disregolata con ligandi endogeni ridotti per i recettori BA, cioè il recettore farnesoide X e il recettore degli acidi biliari accoppiato a proteine G nel fegato e nel cervello. Insieme, la sintesi di BA disregolata e la disbiosi sono state accompagnate da infiammazione sistemica, attivazione della microglia e ridotta neuroplasticità indotta da WD. -Jena, PK, Sheng, L. , Di Lucente, J. , Jin, L. -W. , Maezawa, I. , Wan, Y. -J. Y. La disregolazione della sintesi degli acidi biliari e la disbiosi sono implicate nell'infiammazione sistemica indotta dalla dieta occidentale, nell'attivazione della microglia e nella ridotta neuroplasticità.
L'attivazione di JAK/STAT3 ripristina la funzione delle cellule NK e migliora la difesa immunitaria dopo l'ischemia cerebrale.La soppressione immunitaria indotta da ictus predispone l'ospite alle infezioni e può contribuire ad un'elevata morbilità e mortalità nei pazienti con ictus Poiché l'ictus ischemico ha un profondo effetto sulla risposta immunitaria sistemica, il che può spiegare l'aumentata suscettibilità dei pazienti con ictus alle infezioni, persiste l'urgente necessità di una migliore comprensione dei meccanismi associati alla soppressione immunitaria ; possono quindi essere identificati nuovi ed efficaci trattamenti per l'ictus. Le cellule NK svolgono un ruolo chiave nella difesa precoce dell'ospite contro i patogeni uccidendo le cellule infette e/o producendo citochine come l'IFN-γ. Poiché il fenotipo e la funzione delle cellule NK periferiche sono state ampiamente studiato nell'ictus ischemico, nCounter Inflammation Gene Array Analysis è stato utilizzato per costruire profili genici immuno-correlati delle cellule NK per analizzare in modo completo la firma molecolare di Cellule NK dopo lesione cerebrale ischemica. Abbiamo osservato profili di espressione genica distinti che riflettono diversi fenotipi delle cellule NK spleniche e proprietà funzionali nel corso del tempo dell'occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media (MCAO). Sulla base dell'espressione genica e dell'analisi della rete di vie, sono stati osservati livelli di espressione più bassi del trasduttore di segnale e dell'attivatore della trascrizione-3 (STAT3) negli animali con MCAO rispetto agli animali di controllo fittizi. L'attivazione genetica di STAT3 attraverso l'introduzione del plasmide di brevi ripetizioni palindromiche (CRISPR) raggruppate regolarmente interspaziate in STAT3 ha impedito la perdita della produzione di IFN-γ derivata dalle cellule NK dopo MCAO, insieme a una ridotta carica batterica e mortalità. I nostri dati suggeriscono che l'ischemia cerebrale altera la difesa immunitaria mediata dalle cellule NK nella periferia, almeno in parte attraverso la via JAK-STAT3, che può essere indirizzata modulando lo stato di attivazione di STAT3. -Jin, W. -N. , Ducruet, AF, Liu, Q. , Shi, SX-Y. , Waters, M. , Zou, M. , Sheth, KN, Gonzales, R. , Shi, F. -D. L'attivazione di JAK/STAT3 ripristina la funzione delle cellule NK e migliora la difesa immunitaria dopo l'ischemia cerebrale.
Percezione dei genitori sul collocamento dei bambini all'interno dei veicoli: uno studio di focus group.Sebbene i bambini seduti dietro nei veicoli a motore provochino meno lesioni e decessi a motore incidenti stradali, molti bambini continuano a essere seduti davanti. Questo studio cerca di identificare le barriere genitoriali per i bambini seduti dietro nei veicoli a motore e le strategie per aumentare il posizionamento dei sedili posteriori dei bambini. Sono stati condotti focus group con i genitori di bambini di 12 anni o più giovani per determinare le barriere al sedile posteriore e strategie per aumentare il posizionamento del sedile posteriore del bambino. Gli ostacoli al posizionamento del sedile posteriore individuati includono la logistica del trasporto di più bambini con disponibilità limitata del sedile posteriore, la possibilità che i bambini si feriscano se siedono sul sedile posteriore e la pressione dei coetanei. non dovrebbe essere un'opzione per sedersi altrove all'interno del veicolo per aiutare a normalizzare i sedili posteriori Interventi di successo per aumentare il posizionamento del sedile posteriore dei bambini dovrebbero concentrarsi sulle barriere dei genitori far accomodare i propri figli nei veicoli, inclusa la normalizzazione del posizionamento dei sedili posteriori e la determinazione degli approcci per rendere semplice il posizionamento dei sedili posteriori con più bambini.
Un approccio multicomponente alla scoperta degli inibitori dell'indoleamina 2,3-diossigenasi 1: sintesi, indagine biologica e studi di docking.valore di 0,81µM in il test basato su IDO1, una piena biocompatibilità a 10µM, insieme a una modesta attività inibitoria nelle cellule A375. Gli studi di docking molecolare mostrano che sia 7d che 6o mostrano una modalità di legame unica nel sito attivo IDO1, con la catena laterale che sporge in un'ulteriore tasca C, dove si forma un legame idrogeno cruciale con Lys238. Nel complesso, questo lavoro descrive un approccio multicomponente a base di isocianuro come uno strumento semplice e versatile per accedere rapidamente agli inibitori IDO1, fornendo una nuova direzione per il loro futuro design e sviluppo.
Fattori associati alla gravità degli incidenti stradali urbani non mortali.Questo documento riporta i fattori associati alla gravità degli incidenti stradali urbani non mortali. I dati sugli incidenti sono stati raccolti dalla Polizia Stradale del Comune di Palermo, una delle sei città più popolose d'Italia. I risultati di un modello di regressione logistico ad effetti misti suggeriscono che la gravità dell'incidente aumenta quando sono coinvolti due giovani conducenti, la circolazione stradale le condizioni sono leggere/normali e quando i veicoli si schiantano su una strada a doppio senso o su una carreggiata. È più probabile che l'eccesso di velocità provochi lesioni lievi o gravi anche rispetto a un veicolo che si muove nel senso di marcia opposto. È più probabile un incidente durante l'estate provocare un infortunio lieve o grave rispetto a un incidente durante l'inverno, il che è in linea con l'evidenza dell'Europa meridionale e del Medio Oriente Infine, la gravità degli incidenti non mortali in un'area urbana dell'Europa meridionale è stata significativa y associato all'eccesso di velocità, all'età del conducente e alla stagionalità.
Razza ed etnia hanno un'influenza significativa sull'ossido nitrico espirato frazionato.Razza ed etnia hanno dimostrato di influenzare l'ossido nitrico esalato frazionato (FeNO). è necessario indagare sui punti limite per diverse razze ed etnie per migliorare l'applicazione clinica. Per indagare sui punti limite per diverse razze ed etnie analizzando i dati FeNO raccolti dal National Health and Nutrition Examination Survey dal 2007 al 2012. Questo studio ha incluso 23.433 partecipanti Dopo aver escluso i partecipanti con fattori di confondimento, 11.084 partecipanti erano eleggibili per l'analisi dei dati. In base all'età e alla probabilità di avere un'infiammazione allergica delle vie aeree, i partecipanti sono stati divisi in gruppi 4. La media geometrica e il 5°, 50° e 95° percentile di FeNO in ispanico , bianco, nero e altre razze sono state analizzate in tutti i gruppi. Rispetto ai partecipanti bianchi, la media geometrica per FeNO nei partecipanti neri era dal 36% al 41% h maggiore nei bambini e dal 5% all'8% negli adulti. I bambini ispanici avevano valori di FeNO significativamente più alti (dal 14% al 19%) rispetto ai bambini bianchi non ispanici; tuttavia, tali differenze non erano significative negli adulti. Altre razze avevano valori di FeNO significativamente più alti nei bambini (24-54%) e negli adulti (9-29%) rispetto ai partecipanti bianchi. Inoltre, per i bambini neri sani normali, il 95° percentile era di 40,2 parti per miliardo (ppb), che è significativamente più alto del punto limite raccomandato dalle attuali linee guida. Sebbene vi siano differenze significative nei valori di FeNO tra razze ed etnie, l'attuale punto di cutoff a 50 ppb è sufficiente per separare le popolazioni sane da quelle asmatiche negli adulti. Tuttavia, per i bambini neri, suggeriamo di aumentare il punto di cutoff da 35 a 40 ppb per evitare diagnosi e trattamenti non necessari.
Testosterone prenatale e teoria dello sviluppo mentale: risultati dei disturbi dello sviluppo sessuale.Le donne in media ottengono risultati migliori degli uomini nella "Lettura della mente in the Eyes" test (RMET) che è una misura della Teoria della Mente (ToM). Lo scopo di questo studio era di valutare se queste differenze di sesso sono influenzate dalle differenze nei livelli di testosterone prenatale attraverso uno studio su individui con disturbi del sesso Sviluppo e controlli abbinati Le prestazioni della toM sono state esaminate utilizzando l'RMET in individui assegnati a donne alla nascita con aumentata esposizione prenatale al testosterone (iperplasia surrenalica congenita (CAH) e deficit di 5-alfa reduttasi di tipo 2 (5α-RD-2)) , individui assegnati alla nascita di sesso femminile con insensibilità al testosterone (sindrome da insensibilità completa agli androgeni (CAIS)) e i loro parenti maschi e femmine non affetti di pari età. Un numero totale di 158 individui ha partecipato allo studio; 19 con 5α-RD- 2, 17 con CAH, 18 donne con CAIS , 52 uomini non affetti abbinati e 52 donne non affette abbinate. Tutti i sottogruppi avevano circa 20 anni. Le donne con CAH hanno ottenuto punteggi significativamente più bassi su RMET rispetto alle donne di controllo e agli individui CAIS. Gli individui CAIS hanno ottenuto punteggi significativamente più alti rispetto agli uomini di controllo e ai partecipanti con 5α-RD. Statisticamente, le prestazioni degli individui CAIS su RMET erano simili alle donne di controllo, le donne con CAH non differivano significativamente dagli uomini di controllo e gli individui 5α-RD-2 hanno ottenuto punteggi significativamente inferiori rispetto agli uomini di controllo. Questi risultati, che sono in linea con le teorie precedenti, illustrano che le prestazioni sull'RMET, come indice di ToM, possono essere influenzate dalle variazioni dei livelli di androgeni prenatali.
I selettori chirali di glicopeptidi macrociclici legati alle particelle core-shell consentono l'analisi dell'enantiopurità dell'intera via sintetica del verubecestat.O/ACN e acetato di trietilammonio: a base di metanolo eluenti a diverse composizioni isocratiche hanno permesso una buona enatiseparazione di tutti gli intermedi del verubecestat. La determinazione dell'EE di verubecestat è facilmente eseguita su NicoShell, un altro selettore chirale di glicopeptidi macrociclici legato a particelle superficialmente porose di 2,7μm. Questo approccio consente un'analisi dell'enantiopurità rapida e affidabile dell'intera via sintetica del verubecestat utilizzando solo due colonne chirali e fasi mobili su un sistema HPLC convenzionale, semplificando la preparazione del pacchetto tecnico, la convalida del metodo e il trasferimento agli impianti di produzione.
Strategie native dei tessuti per la riparazione e la rigenerazione del menisco.Le lesioni del menisco sembrano diventare sempre più comuni e rappresentano una sfida per i chirurghi ortopedici. Tuttavia, non esiste un approccio curativo per trattare i difetti nella regione del menisco interno a causa della sua natura avascolare. Sono state applicate numerose strategie per rigenerare e riparare i difetti del menisco e le strategie basate sui tessuti nativi hanno ricevuto molta attenzione. Il tessuto nativo di solito ha una buona biocompatibilità, eccellente proprietà meccaniche e un microambiente adatto per la crescita cellulare, l'adesione, il ridifferenziamento, la deposizione e il rimodellamento della matrice extracellulare. Classicamente, le strategie basate sui tessuti nativi per la riparazione e la rigenerazione del menisco sono suddivise in trapianto di tessuto autogeno ed eterogeneo. Il trapianto di tessuto autogeno viene eseguito più ampiamente di quello eterogeneo trapianto di tessuto perché non c'è rigetto immunologico e il su le tariffe di accesso sono più alte. Questa recensione discute prima la struttura e la funzione del menisco nativo e poi si concentra sull'uso del tessuto autogeno per la riparazione e la rigenerazione del menisco. Infine, riassume i vantaggi e gli svantaggi del trapianto di tessuti eterogenei. Ci auguriamo che questa recensione fornisca alcuni suggerimenti per la progettazione futura delle strategie di riparazione e rigenerazione del menisco.
Il terapista nascosto: prove del ruolo centrale della musica nella terapia psichedelica.Studi recenti hanno supportato la sicurezza e l'efficacia della terapia psichedelica per i disturbi dell'umore e dipendenza. La musica è considerata una componente importante nel modello di trattamento, ma sono state fatte poche ricerche empiriche per esaminare l'entità e la natura del suo ruolo terapeutico. Il presente studio ha valutato l'influenza della musica sull'esperienza acuta e sugli esiti clinici della terapia psichedelica Interviste semi-strutturate hanno indagato sui diversi modi in cui la musica ha influenzato l'esperienza di 19 pazienti sottoposti a terapia psichedelica con psilocibina per la depressione resistente al trattamento. Ai dati dell'intervista è stata applicata un'analisi fenomenologica interpretativa per identificare i temi salienti. Inoltre, sono state fornite valutazioni per ogni paziente per la misura in cui ha espresso "piacere", "risonanza" (la musica viene vissuta come "armonica" con il stato emotivo dell'ascoltatore) e "apertura" (accettazione dell'esperienza evocata dalla musica). Le analisi delle interviste hanno rivelato che la musica ha avuto influenze sia "benvenute" che "non gradite" sulle esperienze soggettive dei pazienti. Le influenze di benvenuto includevano l'evocazione di emozioni e immagini mentali personalmente significative e terapeuticamente utili, un senso di guida, apertura e la promozione della calma e un senso di sicurezza. Al contrario, le influenze sgradite includevano l'evocazione di emozioni e immagini spiacevoli, un senso di sviamento e resistenza. Le analisi di correlazione hanno mostrato che l'esperienza dei pazienti con la musica era associata al verificarsi di "esperienze mistiche" e "intuizione". Fondamentalmente, la natura dell'esperienza musicale era significativamente predittiva di riduzioni della depressione 1 settimana dopo la psilocibina, mentre l'intensità generale del farmaco non lo era. Questo studio indica che la musica svolge una funzione terapeutica centrale nella terapia psichedelica.
La fosforilazione di Drp1 da parte di MAPK1 causa disfunzione mitocondriale nel modello di coltura cellulare della malattia di Huntington.La disfunzione mitocondriale è una delle principali citopatologie nella malattia di Huntington ( HD), una malattia neurodegenerativa fatale ed ereditaria. Tuttavia, i meccanismi molecolari attraverso i quali il gene che causa la malattia, l'huntingtina mutante (mtHtt), influenza la funzione mitocondriale rimangono sfuggenti. Questo studio mira a determinare il ruolo che la proteina chinasi 1 attivata dal mitogeno ( MAPK1) gioca nell'eccessiva attivazione della proteina 1 correlata alla Dynamin (Drp1), la proteina di fissione mitocondriale, che porta alla disfunzione mitocondriale e alla neurodegenerazione osservate nella MH. Mostriamo che MAPK1 si lega e fosforila Drp1 in vitro. Fosforilazione di Drp1 a serina 616 è aumentato nelle cellule striatali derivate da topi knock-in HD, che viene abolito dal trattamento con U0126, un potente inibitore di MEK1 / 2. Un mutante carente di fosforilazione di Drp1, Drp1S616A, corregge i mitocondri frammentazione totale associata alla MH. Il trattamento con U0126 riduce anche la frammentazione mitocondriale, ma non ha alcun effetto aggiuntivo nella correzione della morfologia mitocondriale aberrante nelle cellule che esprimono Drp1S616A. Infine, il trattamento con U0126 riduce la depolarizzazione mitocondriale e la produzione di superossido mitocondriale nelle cellule striatali mutanti HD rispetto alle cellule di tipo selvatico. Questo studio suggerisce che nella MH, l'attivazione di MAPK1 porta alla fissione mitocondriale aberrante e alla funzione mitocondriale fosforilando Drp1. Pertanto, l'inibizione dell'eccessiva fissione mitocondriale mediata da Drp1 potrebbe essere una strategia per lo sviluppo di una terapia per il trattamento della MH.
Nuclei del letto anteroventrale del neurocircuito della stria terminalis: verso un'integrazione della modulazione dell'asse HPA con comportamenti di coping - Curt Richter Award Paper 2017.Una rete di gruppi di cellule interconnesse nel proencefalo limbico regolano l'attivazione dell'asse ipotalamo-ipofisi-surrene (HPA) e le risposte comportamentali alle esperienze emotivamente stressanti, e l'interruzione cronica di questi sistemi è implicata cronicamente nella patogenesi delle malattie psichiatriche. Una sfida significativa è stata quella di svelare il circuiti e meccanismi che forniscono la regolazione dell'attività HPA, poiché queste regioni limbiche del proencefalo non forniscono alcuna innervazione diretta dei gruppi di cellule effettrici HPA nell'ipotalamo paraventricolare (PVH). Inoltre, le informazioni su come le risposte endocrine e comportamentali sono integrate sono rimaste oscure. Qui riassumiamo il lavoro del nostro laboratorio che mostra che i nuclei del letto anteroventrale (av) della stria terminalis (BST) agiscono come un punto di convergenza tra il proencefalo limbico e PVH, ricevendo e coordinando le influenze a monte e limitando l'uscita dell'asse HPA in risposta a fattori di stress inevitabili. Studi recenti evidenziano un ruolo modulatorio più ampio per avBST come uno che coordina le influenze inibitorie dell'HPA sopprimendo contemporaneamente le risposte comportamentali passive attraverso percorsi divergenti. avBST è posizionato in modo univoco per trasmettere alterazioni endocrine e comportamentali derivanti dall'esposizione allo stress cronico, come l'iperattività dell'asse HPA e l'aumento delle strategie di coping passive, che possono derivare dalla riorganizzazione sinaptica nelle regioni corticali limbiche a monte. Discutiamo di come questi studi forniscano nuove intuizioni sulla comprensione dell'organizzazione a livello di sistema dei circuiti di risposta allo stress, la neurobiologia degli stili di coping e la disfunzione del circuito BST nei disturbi psichiatrici legati allo stress.
Endofenotipi concettuali: una strategia per far progredire l'impatto della psiconeuroendocrinologia nella medicina di precisione.La ricerca psicobiologica ha generato un'enorme quantità di scoperte sul piano psicologico, neuroendocrino processi molecolari e ambientali che sono direttamente rilevanti per la salute mentale e fisica, ma hanno sopraffatto la nostra capacità di assorbire, integrare e utilizzare in modo significativo questa base di conoscenza. Qui, riflettiamo sulle strategie adatte per migliorare il successo traslazionale della ricerca psiconeuroendocrinologica nell'era della medicina di precisione. Seguendo una strategia sostenuta dal Consiglio Nazionale delle Ricerche e la tradizione della ricerca basata sugli endofenotipi, avanziamo qui un nuovo approccio, chiamato "endofenotipi concettuali". Definiamo i criteri contestuali e formali degli endofenotipi concettuali, delineando i criteri per filtrare e selezionare le informazioni e descrivere come gli endofenotipi concettuali possono essere convalidati e influenzati lementò al capezzale. Come prova del concetto, descriviamo alcuni dei nostri risultati dalla ricerca che ha adottato questo approccio nel contesto dei disturbi legati allo stress. Sosteniamo che gli endofenotipi concettuali costruiscono un ponte tra la panca e il capezzale. Questo approccio si presta facilmente ad essere continuamente sviluppato e implementato. I recenti progressi metodologici, tra cui la fenotipizzazione digitale, l'apprendimento automatico, la collaborazione di base e un sistema sanitario per l'apprendimento, possono accelerare lo sviluppo e l'implementazione di questo approccio concettuale all'endofenotipo.
L'esposizione al dolore si associa all'erosione della lunghezza dei telomeri nei neonati molto prematuri.I neonati molto prematuri (VPT) (età gestazionale<32 settimane) richiedono lunghe ospedalizzazione duratura nell'unità di terapia intensiva neonatale (TIN), anche in assenza di gravi morbilità. Durante la degenza in terapia intensiva neonatale, si verificano interventi salvavita e comprendono procedure invasive e dolorose di rottura della pelle (stress da terapia intensiva neonatale), che costituiscono un importante evento avverso precoce esperienza per i neonati VPT. I telomeri sono sequenze ripetute alla fine dei cromosomi, che si accorciano con l'età e sono altamente suscettibili alle avversità della vita: l'esposizione a esperienze avverse precoci è associata a una lunghezza dei telomeri (TL) più corta. Tuttavia, la ricerca precedente non valutare longitudinalmente l'associazione tra stress correlato alla terapia intensiva neonatale e TL nei neonati VPT Nel presente studio, il TL leucocitario è stato valutato dal sangue del cordone ombelicale alla nascita in 46 neonati VPT e in un gruppo di 31 neonati a termine (FT), nonché alla NICU scarico solo nei VPT. Lo stress correlato alla terapia intensiva neonatale è stato misurato come il numero di procedure di rottura della pelle che si verificano durante la degenza in terapia intensiva neonatale. È emersa una differenza significativa per TL tra i neonati VPT e le controparti FT alla nascita. TL è diminuito dalla nascita alla dimissione nei neonati VPT, sebbene il cambiamento non fosse significativo nel gruppo nel suo insieme. La quantità di stress correlato alla terapia intensiva neonatale è emersa come il principale predittore dell'erosione del TL nei neonati VPT, anche controllando i fattori confondenti neonatali e clinici. Inoltre, i neonati VPT esposti a stress da terapia intensiva neonatale elevato hanno mostrato una marcata e significativa diminuzione del TL, mentre VPT esposti a stress da terapia intensiva neonatale basso hanno mostrato un aumento non significativo. Il presente studio conferma la precedente evidenza di telomeri più lunghi nei neonati VPT alla nascita rispetto ai controlli FT. Inoltre, lo stress correlato alla terapia intensiva neonatale è emerso come un regolatore chiave dell'erosione del TL dalla nascita alla dimissione nei neonati VPT. La ricerca futura è giustificata per esplorare ulteriormente l'erosione del TL nei neonati VPT e i fattori associati alle differenze individuali nella suscettibilità allo stress da terapia intensiva neonatale a livello epigenetico.
Effetto teorico della DBS sulle fibre di passaggio assonale: velocità di scarica, entropia e contenuto informativo.La stimolazione cerebrale profonda (DBS) ha effetti sugli assoni che originano e terminano al di fuori dell'area target della DBS. Abbiamo ipotizzato che la DBS generi potenziali d'azione (AP) in entrambe le direzioni negli "assoni di passaggio", alterando il loro contenuto informativo e quello di tutte le cellule e i circuiti a valle, e cercato di quantificare il cambiamento nel contenuto delle informazioni sulla fibra. Abbiamo incorporato i parametri DBS (frequenza di attivazione della fibra e tempo refrattario e posizione di inizio AP lungo la fibra e velocità di propagazione) in una funzione di filtraggio che determina la frequenza AP che raggiunge la cella postsinaptica. Utilizzando un software di simulazione dei circuiti neurali, abbiamo studiato la capacità della funzione di filtraggio di prevedere la frequenza di scarica degli AP che raggiungono i neuroni presi di mira dagli assoni di passaggio Abbiamo calcolato la loro entropia con e senza DBS e con l'elettrodo applicato a v arie distanze dal corpo cellulare. La prevedibilità della funzione di filtraggio ha superato il 98%. I calcoli dell'entropia hanno mostrato che il rapporto di entropia "senza DBS" a "con DBS" era sempre >1.0, quindi DBS riduce l'entropia della fibra. (1) I risultati implicano che gli effetti DBS sono dovuti alla riduzione dell'entropia all'interno delle fibre, cioè una riduzione delle loro informazioni. (2) Laddove le fibre di passaggio non terminano nelle regioni bersaglio, la DBS può avere effetti collaterali sui circuiti non mirati.
Modellazione di glioma con linee neurali derivate da cellule staminali embrionali umane.I gliomi sono tumori primari maligni del sistema nervoso centrale. La loro cellula di origine è pensato per essere un progenitore neurale o cellula staminale che acquisisce mutazioni che portano alla trasformazione oncogenica Grazie ai progressi nella biologia delle cellule staminali umane, è diventato possibile derivare tipi di cellule umane che rappresentano cellule presunte di origine in vitro e modellare la gliomagenesi processo introducendo sistematicamente alterazioni genetiche in queste cellule umane. Qui, presentiamo metodi per derivare cellule staminali neurali umane (NSC) da cellule staminali embrionali umane (hESC). Poiché queste NSC sono geneticamente non modificate al basale, possono essere utilizzate come cellule piattaforma per studiare gli effetti dei singoli colpi oncogeni in modo ben controllato sullo sfondo di un background genetico umano Presentiamo anche alcune applicazioni chiave di queste NSC, che includono la loro trasduzione con lentivirali vettori, la loro differenziazione neurogliale e metodi di xenotrapianto in topi immunocompromessi per valutare il comportamento in vivo.
Identificazione citometrica a flusso di linfociti infiltranti il tumore da glioblastoma.Descriviamo un metodo di isolamento dei linfociti infiltranti il tumore (TIL) da tumori del glioblastoma per il scopo dell'analisi mediante citometria a flusso. Questo protocollo è unico da molti altri in quanto non viene utilizzato l'uso di una procedura di isolamento selettivo dei linfociti, come un gradiente di Ficoll o Percoll. Troviamo che la colorazione dei TIL e l'analisi mediante citometria a flusso non sono colpiti dalla presenza di popolazioni eterogenee, mentre altre procedure di isolamento selettivo possono ridurre significativamente la produzione di linfociti da popolazioni già rare.
Valutazione della vascolarizzazione, della perfusione sanguigna e della tensione di ossigeno negli xenotrapianti tumorali con microscopia a fluorescenza.L'eterogeneità istologica nel glioblastoma (GBM) è evidenziata dalla variabilità regionale nella densità vascolare. Aree di iperplasia vascolare sono intervallate da territori avascolari, in cui la necrosi è circondata da una zona di cellule tumorali ipossiche che esprimono marcatori di cellule staminali, un fenomeno noto come necrosi pseudopalisante. Questa eterogeneità vascolare suggerisce gradienti di ossigeno intratumorale, che regolano adattamenti metabolici nelle cellule tumorali. La quantificazione della vascolarizzazione del tumore, della perfusione sanguigna e dell'ossigenazione è quindi fondamentale. In questo capitolo, descriviamo tre diversi metodi, che coinvolgono tutti la microscopia per analizzare questi parametri negli xenotrapianti tumorali. Presentiamo protocolli dettagliati per l'analisi del tumore endotelio mediante marcatori endoteliali, perfusione sanguigna mediante infusione sistemica di Evans Blue e tensione di ossigeno mediante iniezione di pimonidazolo, seguita da immunocolorazione.
Imaging bioluminescente in vivo di xenotrapianti di glioblastoma ortotopico nei topi.Gli xenotrapianti ortotopici di roditori sono uno strumento essenziale per lo studio del glioblastoma in vivo. La crescita dello xenotrapianto in funzione di tempo può essere monitorato solo mediante imaging non invasivo. Questo capitolo descrive in dettaglio come valutare le dimensioni e la crescita dello xenotrapianto utilizzando l'imaging bioluminescente con IVIS (sistema di imaging in vivo). Questa forma di imaging (a) può essere eseguita senza l'aiuto di un esperto tecnico, (b) è una procedura molto rapida, che consente l'imaging simultaneo di un massimo di cinque animali per una durata sperimentale totale di 15 minuti, e (c) è più economica delle alternative (RMI o TC di piccoli animali). Questa tecnica si basa sul espressione stabile della luciferasi da parte delle cellule GBM xenotrapiantate Luciferin, il substrato della luciferasi, che viene iniettato nei topi ospiti per via intraperitoneale, si distribuisce in tutto il corpo del topo e attraversa la barriera ematoencefalica Luciferasi espressa dallo xenograf cellule ted utilizza questo substrato in una reazione catalitica, che porta all'emissione di luce visibile, che viene rilevata dalla telecamera CCD del sistema di imaging IVIS. L'intensità di questa luce emessa è correlata alla dimensione di un dato xenotrapianto e consente il confronto delle dimensioni dello xenotrapianto tra diversi animali, nonché all'interno dello stesso animale in diversi momenti.
Xenotrapianti di glioblastoma derivato da pazienti ortotopici nei topi.Xenotrapianti di derivazione da pazienti (PDX) forniscono modelli di glioblastoma (GBM) in vivo che ricapitolano i tumori reali. Gli xenotrapianti di tumore ortotopico all'interno del cervello di topo sono ottenuti mediante iniezione di cellule staminali simili a GBM derivate da campioni chirurgici freschi. Questi xenotrapianti riproducono la complessità istologica del GBM e i comportamenti biologici caratteristici, come l'invasione del cervello, l'angiogenesi e la resistenza alla terapia. Questo metodo è diventato essenziale per analizzare i meccanismi di tumorigenesi e testare l'effetto terapeutico degli agenti candidati in ambito preclinico. Qui, descriviamo un protocollo per stabilire xenotrapianti di tumori ortotopici nel cervello di topo con cellule GBM umane.
Evaluation of Radioresponse and Radiosensitizers in Glioblastoma Organotypic Cultures.Glioblastoma (GBM), un tumore maligno cerebrale primario mortale, manifesta una pronunciata radioresistenza. Identificazione di agenti che migliorano la sensibilità del tessuto tumorale alla radioterapia è fondamentale per migliorare gli esiti del paziente. La risposta alle radiazioni ionizzanti è regolata da meccanismi sia intrinseci che estrinseci della cellula. In particolare, è noto che il microambiente tumorale promuove la radioresistenza nel GBM. Pertanto, i sistemi modello utilizzati per testare agenti radiosensibilizzanti è necessario tenere conto del microambiente tumorale. Abbiamo recentemente dimostrato che le colture di espianti GBM rappresentano una piattaforma adattabile ex vivo per test rapidi e personalizzati dei radiosensibilizzanti. Questi espianti preservano la composizione cellulare e l'architettura tissutale dei tumori dei pazienti parentali e quindi catturano il contesto microambientale che determina in modo critico la risposta alla radioterapia capitolo si concentra sul protocollo dettagliato per testare agenti radiosensibilizzanti candidati negli espianti GBM.
Sequenziamento dell'RNA a cellula singola di cellule di glioblastoma.Il sequenziamento dell'RNA a cellula singola (sc-RNASeq) è una tecnica di recente sviluppo utilizzata per valutare il trascrittoma di singole cellule. A differenza del convenzionale RNASeq in cui intere popolazioni sono sequenziate alla rinfusa, sc-RNASeq può essere utile quando si cerca di comprendere meglio i modelli di espressione genica in popolazioni di cellule marcatamente eterogenee o quando si cerca di identificare le firme trascrizionali di cellule rare che possono essere sottorappresentato quando si utilizza bulk RNASeq convenzionale. In questo metodo, descriviamo la generazione e l'analisi di librerie di cDNA da cellule di glioblastoma derivate da un singolo paziente utilizzando il sistema C1 Fluidigm. Il protocollo descrive in dettaglio l'uso del circuito integrato di fluidica C1 (IFC) per l'acquisizione , imaging e lisi delle cellule, esecuzione della trascrizione inversa e generazione di librerie di cDNA pronte per il sequenziamento e l'analisi.
Preparazione del campione per la quantificazione relativa delle proteine mediante tag di massa tandem (TMT) e spettrometria di massa (MS).L'analisi quantitativa del proteoma consente il confronto di proteine o livelli di fosfoproteina attraverso più tipi di cellule o condizioni. Sono stati descritti numerosi approcci sperimentali verso la proteomica quantitativa. In questo capitolo, ci concentriamo sull'etichettatura isobarica dei peptidi con Tandem Mass Tag (TMT) per la quantificazione globale e relativa di proteine e fosfopeptidi. Fino ad oggi , non è stato pubblicato alcun protocollo che descriva l'etichettatura chimica di piccole quantità di peptidi specificamente estratti da campioni di piccoli tumori, per i quali è necessaria una rigorosa preparazione del campione per garantire un'etichettatura TMT riproducibile.
Analisi metabolomica di cellule di glioma mediante cromatografia liquida a flusso nanometrico-spettrometria di massa tandem.Le tecniche basate sulla spettrometria di massa (MS) hanno trovato utilità quanto sensibili, strumenti di analisi dei metaboliti ad alto rendimento per campioni biologici complessi. Descriviamo qui un sistema di spettrometria di massa tandem di cromatografia liquida a flusso nanometrico (nano-LC-MS/MS) che abbiamo sviluppato e applicato alla profilazione metabolica delle cellule umane. I metaboliti vengono estratti dalle cellule utilizzando metanolo, e filtrati attraverso uno StageTip C18 per rimuovere le particelle di grandi dimensioni. I campioni di metaboliti vengono separati mediante HPLC a una velocità di flusso di 400-500 nl/min, quindi analizzati in modalità di ioni positivi e negativi in un MS LTQ-Orbitrap. Identificazione dei metaboliti e analisi differenziale vengono eseguiti utilizzando software commerciale o open source. I protocolli delineati in questo capitolo descrivono come la nano-LC-MS può essere applicata per studiare il profilo metabolico con una quantità di biomassa limitata.
Targeting selettivo di cellule staminali di glioblastoma che esprimono CD133 utilizzando vettori lentivirali.Diverse linee di evidenza suggeriscono una gerarchia cellulare nel glioblastoma (GBM). In questo gerarchia, le cellule staminali simili a GBM (GSC) svolgono un ruolo fondamentale nella progressione e nella recidiva del tumore, in virtù del loro robusto potenziale di propagazione del tumore e della resistenza alla chemioradioterapia convenzionale. Pertanto, il targeting delle GSC ha una significativa promessa terapeutica. Espressione di CD133 (PROM1), una glicoproteina della superficie cellulare, è stata associata al fenotipo GSC e utilizzata come marcatore GSC. Qui, descriviamo un protocollo che consente la trasduzione lentivirale selettiva di cellule GBM che esprimono CD133. Questa selettività è conferita pseudotipendo l'involucro lentivirale con un singolo anticorpo a catena contro un epitopo extracellulare su CD133. Abbiamo precedentemente dimostrato l'efficacia e la specificità di questo vettore lentivirale utilizzando colture GBM derivate dal paziente. Questo capitolo delinea la preparazione del vettore e la trasduzione di cellule GBM umane.
Trasduzione lentivirale di colture primarie di glioblastoma umano.Questo capitolo fornisce istruzioni dettagliate passo passo per la produzione di particelle lentivirali e la trasduzione di colture di glioblastoma umano I lentivirus trasducono stabilmente sia le cellule in divisione che quelle non in divisione, come le popolazioni di cellule staminali del cancro quiescenti L'involucro virale è pseudotipizzato con la glicoproteina G dell'involucro del virus della stomatite vescicolare (VSV-G), che rende le particelle lentivirali pantropiche, quindi che possono infettare teoricamente tutti i tipi di cellule. Il sistema di confezionamento di terza generazione utilizzato in questo protocollo produce lentivirus con importanti caratteristiche di sicurezza, tra cui l'incompetenza della replicazione e l'autoinattivazione (SIN). Il protocollo che descriviamo qui porta alla trasduzione di colture primarie di glioblastoma umano con efficienze fino al 90%.
Isolamento di cellule staminali di glioblastoma con citometria a flusso.Questo capitolo descrive un metodo semplice per isolare cellule staminali di glioblastoma (GSC) da colture di tessuti in vitro tramite smistamento cellulare attivato dalla fluorescenza (FACS) utilizzando CD133 come marker di superficie. L'uso di un anticorpo direttamente coniugato a un fluoroforo APC contro la molecola CD133 fornisce un rilevamento sufficiente e chiaro di cellule positive dal resto della popolazione. Questa strategia evita un'inutile fase di incubazione dell'anticorpo secondario, riducendo così al minimo la perdita e aumentando la resa. Lo stesso protocollo può essere applicato ad altri marcatori di superficie GSC. Il metodo descritto consente una purificazione rapida ed efficiente delle GSC, che possono quindi essere utilizzate in diverse applicazioni a valle.
Stabilishing Primary Human Glioblastoma Tumorsphere Cultures from Operative Specimens.La propagazione in vitro di cellule di glioblastoma derivato dal paziente (GBM) può essere ottenuta mediante monostrato aderente coltura, già descritta nel capitolo 3, o mediante coltura di sfere tumorali in sospensione. Qui, forniamo un protocollo dettagliato per stabilire colture di sfere tumorali derivate dal paziente. Tali colture sono arricchite per cellule staminali GBM (GSC) e possono essere utilizzate per generare xenotrapianti tumorali ortotopici nel cervello di topi immunocompromessi. Segnaliamo anche sfumature nel protocollo che possono aumentare la resa di colture di successo da campioni operativi.
Istituzione di colture aderenti di glioblastoma umano primario da campioni operativi.Questo capitolo descrive un metodo per l'isolamento, il mantenimento e la propagazione delle cellule di glioblastoma primario (GBM) in colture monostrato aderenti da campioni tumorali di pazienti. Questo metodo consente la creazione di colture GBM con caratteristiche di cellule staminali o progenitrici, tra cui capacità di autorinnovamento, differenziazione lungo linee neurali ristrette e potenziale di avvio del tumore quando iniettate ortotopicamente in topi immunocompromessi. Questo sistema modello sperimentalmente trattabile è quindi adatto per un'ampia varietà di analisi in vitro e in vivo. Vengono descritti anche esempi chiave di analisi biologiche che possono essere eseguite utilizzando queste cellule.
Scoperta di varianti strutturali nel glioblastoma basata sul sequenziamento dell'intero genoma.Le tecnologie di sequenziamento del DNA di nuova generazione (NGS) sono attualmente applicate sia nella ricerca che impostazioni cliniche per la comprensione e la gestione della malattia. L'obiettivo è utilizzare il sequenziamento ad alto rendimento per identificare varianti specifiche che guidano la tumorigenesi all'interno del profilo genomico del tumore di ogni individuo. L'importanza del numero di copie e delle varianti strutturali nel glioblastoma rende essenziale ampliare la ricerca oltre le varianti oncogene a singolo nucleotide verso i profili dell'intero genoma di aberrazioni genetiche che possono contribuire alla progressione della malattia. L'eterogeneità del glioblastoma e la sua variabilità delle mutazioni del driver del cancro richiedono un esame più robusto del genoma del tumore di un paziente. Qui presentiamo il paziente informazioni sul sequenziamento dell'intero genoma (WGS) per identificare varianti strutturali oncogene che possono contribuire al patogeno del glioblastoma esi. Forniamo protocolli WGS e approcci bioinformatici per identificare il numero di copie e le variazioni strutturali in 41 campioni di pazienti con glioblastoma. Presentiamo come WGS può identificare la diversità strutturale all'interno dei campioni di glioblastoma. Mostriamo in particolare come applicare gli attuali strumenti bioinformatici per rilevare varianti di EGFR e altre aberrazioni strutturali dal sequenziamento dell'intero genoma del DNA e come convalidare tali varianti all'interno del laboratorio. Questi protocolli WGS completi possono fornire informazioni aggiuntive indirizzando opzioni terapeutiche più precise nel trattamento del glioblastoma.
Rivascolarizzazione chirurgica del miocardio precoce dopo infarto miocardico con sopraslivellamento del tratto ST nella malattia coronarica multivasale: la terapia ponte è la soluzione?Molti infarto miocardico con sopraslivellamento del tratto ST (STEMI) i pazienti hanno una malattia multivasale che inizialmente richiede un intervento coronarico percutaneo (PCI) del vaso colpevole, ma successivamente può richiedere un bypass coronarico (CABG) dei vasi non responsabili. L'evidenza supporta la rivascolarizzazione graduale, ma l'identificazione di strategie ottimali (percutanea o chirurgico), la tempistica e la gestione della terapia antiaggregante dopo recente PCI con stent sono oggetto di grandi controversie. Nel nostro registro retrospettivo, abbiamo arruolato 21 pazienti con STEMI e malattia multivasale, sottoposti a PCI del solo vaso colpevole e poi a CABG di vasi non responsabili. Risultati demografici, clinici, ecocardiografici, angiografici, punteggio preoperatorio, dati chirurgici e sono state raccolte complicanze perative. A 21,6α 15,6 mesi di follow-up sono stati registrati morte, reinfarto e/o eventi cardiovascolari e non cardiovascolari. I pazienti avevano 62 ± 9 anni e nella maggior parte dei casi avevano una buona frazione di eiezione. All'angiografia, la lesione colpevole era l'arteria coronaria destra in 16 pazienti (76%). Le caratteristiche angiografiche escludevano un PCI stadiato (punteggio SYNTAX = 31,6 ± 7,4) e il Sistema europeo per la valutazione del rischio operativo cardiaco II è risultato basso (1,46 ± 1,01). A seguito dell'indicazione alla cardiochirurgia dopo la discussione dell'Heart Team, è stata pianificata la sospensione dell'inibitore P2Y12 orale ed è stato avviato il tirofiban per via endovenosa. Il CABG off-pump è stato eseguito dopo 7,2 α 3,2 giorni. Al follow-up non si sono verificati decessi, reinfarto e/o eventi cardiovascolari e non. Possiamo concludere che un'attenta selezione preoperatoria è obbligatoria per un buon decorso postoperatorio e una sopravvivenza a lungo termine e che il CABG in fase iniziale può, tuttavia, essere eseguito utilizzando la terapia ponte, anche dopo STEMI.
Lomitapide nell'ipercolesterolemia familiare omozigote: prospettiva cardiologica da un'esperienza monocentrica.L'ipercolesterolemia familiare omozigote (HoFH) è una dislipidemia genetica caratterizzata da livelli elevati di colesterolo lipoproteico a bassa densità (LDL-C) e aterosclerosi accelerata. Spesso, la terapia ipolipemizzante tradizionale è inefficace in questi pazienti ed è necessaria l'aferesi delle lipoproteine. Lomitapide è stato recentemente approvato per HoFH. Abbiamo riportato la nostra esperienza in pazienti con HoFH trattati con lomitapide, valutandone l'efficacia e il profilo di sicurezza. I probandi sospettati di ipercolesterolemia familiare sono stati estrapolati dal registro dei pazienti ricoverati nel nostro dipartimento di cardiologia. Sono stati adottati i criteri della Dutch Lipid Clinic Network (DLCN) per diagnosticare clinicamente l'ipercolesterolemia familiare. Individui che ricevono un accertato o probabile diagnosi di ipercolesterolemia familiare è stata sottoposta a screening a cascata familiare e ge prova netica. I pazienti con diagnosi genetica di HoFH sono stati trattati con lomitapide e monitorati con visite di follow-up seriali. Entro 1 anno dallo screening, da una popolazione di 3250 pazienti ricoverati nel nostro reparto di cardiologia, sono stati selezionati sette probandi con un punteggio DLCN maggiore di 5. Un totale di due pazienti è risultato geneticamente omozigote per ipercolesterolemia familiare e ha iniziato la lomitapide. In entrambi i pazienti in trattamento con lomitapide si è verificata una marcata riduzione del C-LDL (riduzione del 78% nel paziente 1 e dell'86% nel paziente 2 già in aferesi delle lipoproteine, rispetto al C-LDL basale), consentendo l'interruzione del trattamento di aferesi nel secondo caso. Lomitapide è stato ben tollerato ed entrambi i pazienti hanno manifestato solo lievi eventi gastrointestinali. Lomitapide è un farmaco ipocolesterolemizzante efficace e ben tollerato approvato per il trattamento dei pazienti con HoFH. Sarebbe utile somministrarlo precocemente a questi pazienti per ridurre il colesterolo LDL ed evitare lo sviluppo di complicanze cardiovascolari fatali.
Radioterapia e rischio di malfunzionamento del cardioverter-defibrillatore impiantabile: dati sperimentali da esposizione diretta a dosi crescenti.Durante la radioterapia, in pazienti con cardioverter-defibrillatore impiantabile (ICD) i malfunzionamenti sono considerati più probabili se dosi superiori a 2 Gy raggiungono il sito dell'ICD, tuttavia, la maggior parte dei malfunzionamenti si verifica con radiazioni ad alta energia (>10 MV) e il rischio è meno definito utilizzando acceleratori lineari da 6 MV. dello studio è quello di valutare sperimentalmente il verificarsi di malfunzionamenti in ICD irradiati con un acceleratore lineare da 6 MV a dosi di fotoni crescenti. Sono stati valutati 32 ICD di tutti i produttori (31 espiantati e uno demo), tutti i dispositivi con una carica della batteria sufficiente sono stati sottoposti a radiazioni multiple con un fascio di fotoni da 6 MV raggiungendo una dose cumulativa al sito ICD di 0,5, 1, 2, 3, 5 e 10 Gy e interrogati dopo ogni sessione. Tutte le terapie antitachicardiche sono state lasciate abilitate, due ICD sono stati co collegato a un simulatore di ritmo (uno che simula un blocco atrioventricolare completo senza attività ventricolare) e monitorato visivamente dall'ECG esterno e dal programmatore ICD durante la radiazione. Tredici ICD sono stati esclusi prima delle radiazioni a causa dell'esaurimento della batteria; dopo radiazioni fino alla dose cumulativa presso il sito del dispositivo elettronico impiantabile cardiaco di 10 Gy, nei restanti 19 dispositivi, la programmazione e la carica della batteria sono rimaste invariate e non è stato osservato alcun passaggio alla modalità di sicurezza; oversensing, inibizione della stimolazione o terapia antitachicardica inappropriata non sono state né registrate né osservate visivamente durante le radiazioni. Con un acceleratore a bassa energia non sono stati rilevati né malfunzionamenti né interferenze elettromagnetiche irradiando gli ICD a dosi che normalmente raggiungono la tasca dell'ICD durante le sessioni di radioterapia. In questo contesto, l'applicazione del magnete per evitare l'oversensing e la terapia inappropriata sembra, quindi, inutile.
La neurobiologia dei disturbi del controllo degli impulsi nella malattia di Parkinson: dai neurotrasmettitori alle reti neurali.I disturbi del controllo degli impulsi (ICD) sono comuni disturbi neuropsichiatrici che può insorgere nei pazienti con malattia di Parkinson (MdP) dopo l'inizio della terapia sostitutiva della dopamina. Circa il 15% di tutti i pazienti sviluppa questi disturbi e molti altri mostrano sintomi subclinici di impulsività. Si pensa che l'ICD si sviluppi a causa di un'interazione tra l'uso di farmaci dopaminergici e una vulnerabilità neurobiologica ancora sconosciuta che o preesisteva prima dell'insorgenza del PD (possibilmente genetica) o è associata ad alterazioni neurali dovute alla patologia del PD Questa recensione discute i geni, i neurotrasmettitori e le reti neurali che sono stati implicati nella fisiopatologia dell'ICD in PD Sebbene la dopamina e il relativo sistema di ricompensa siano stati l'obiettivo principale della ricerca, di recente, gli studi hanno iniziato a guardare oltre quei sistemi per trovare d nuovi indizi sulle basi neurobiologiche dell'ICD e trovare nuovi possibili bersagli per il trattamento. Attualmente mancano studi sul connettoma cerebrale intero per indagare le alterazioni globali dovute allo sviluppo dell'ICD. Inoltre, c'è un disperato bisogno di studi longitudinali che siano in grado di districare i contributi dei tratti individuali (genetici) e degli effetti secondari della patologia del PD e della terapia sostitutiva cronica della dopamina allo sviluppo dell'ICD nel PD.
miR15a e miR16 in pazienti cileni con diabete di tipo 1: possibile associazione con marcatori di apoptosi, infiammatori o autoimmunità.Il diabete mellito di tipo 1 (T1D) è una malattia autoimmune caratterizzata dalla progressiva distruzione delle cellule β, mediata dall'interazione tra cellule T e diverse citochine. La patogenesi del T1D ha stabilito la sua possibile relazione con i miRNA. In questo studio, analizziamo il profilo di espressione di miR-15a e miR -16 nelle cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) e la loro possibile associazione con apoptosi, infiammazione o marcatori di autoimmunità. Sono stati reclutati 38 pazienti con T1D e 41 soggetti di controllo. Gli mRNA sono stati analizzati mediante sonde qPCR e TaqMan. I PBMC sono stati trattati con diverse concentrazioni di glucosio (basale, 11 e 25 mM) con o senza uno stimolo infiammatorio come TNF-α (10 ng/ml). Si osserva una diminuzione dei livelli di espressione di miR-15a in condizioni basali nei pazienti con T1D rispetto a soggetti di controllo sani (unità relative 0,5 vs 1,8, p < 0,05). Questo cambiamento in miR-15a e miR-16 non è influenzato dall'aggiunta di TNF-α. Nessuna associazione è stata osservata con marcatori infiammatori (IL-6, TNF-α, vCAM) o apoptosi (espressione di bcl2). La relazione con i marcatori immunologici mostra un effetto di interazione tra miR16 e IA-2 (p < 0,03). Il TNF-α non influenza il profilo di espressione di miR-15a e miR16 nelle PBMC. Si osserva una debole correlazione tra miR-16 e con il profilo di autoimmunità (autoanticorpi IA-2).
Una dieta equilibrata ricca di grassi riduce il rischio cardiovascolare nelle donne obese sebbene i cambiamenti nel tessuto adiposo, nelle lipoproteine e nell'insulino-resistenza differiscano in base alla razza.In precedenza abbiamo riportato che consumare una dieta equilibrata ricca di grassi (BHFD) in cui il grasso saturo totale è stato ridotto e il grasso insaturo totale è aumentato bilanciando proporzionalmente il tipo di grasso (1/3 saturo, 1/3 monoinsaturo, 1/3 polinsaturo) ha portato a miglioramenti significativi del carico infiammatorio , pressione sanguigna e funzione vascolare nelle donne obese in premenopausa europee americane (EA) e afroamericane (AA). Qui abbiamo confrontato i cambiamenti nel tessuto adiposo, nelle lipoproteine, nella resistenza all'insulina e nel rischio cardiovascolare tra le donne con EA e con AA. Assunzioni dietetiche, grassi plasmatici acidi, lipidi, apolipoproteine, lipoproteine, rischio HOMA-IR e ASCVD è stato misurato in 144 donne che hanno consumato BHFD per 16 settimane. d maggiori riduzioni del tessuto adiposo viscerale. Solo le donne EA hanno avuto riduzioni significative dei livelli di insulina a digiuno (↓24,8%) e dei punteggi HOMA-IR (↓29%). Nelle donne con EA, i miglioramenti più significativi si sono verificati nella dimensione delle particelle VLDL (↑), nei livelli di apolipoproteina B (↑), nei TG sierici (↓), nel numero di particelle LDL plasmatiche (↓) e nel colesterolo LDL (↓). Nelle donne AA, si sono verificati miglioramenti significativi nella dimensione delle particelle HDL (↑), nel numero di particelle HDL grandi (↑) e nei livelli di apolipoproteina AI (↑). Di conseguenza, entrambi i gruppi avevano punteggi di rischio ASCVD migliorati (↓5,5%). Il consumo di una dieta equilibrata ricca di grassi ha portato a una significativa riduzione dei fattori di rischio cardiovascolare in entrambi i gruppi. Tuttavia, il modello di risposta al BHFD differiva con le donne EA che rispondevano di più nei componenti del percorso dell'apolipoproteina B rispetto alle donne AA che rispondevano di più nei componenti del percorso dell'apolipoproteina AI.
Precisione chirurgica di un sistema di strumentario per impianto di ginocchio di intervento precoce.L'accuratezza dell'allineamento dei componenti e degli arti sono parametri critici per il successo a lungo termine del ginocchio monocompartimentale impianti. In questo studio, abbiamo eseguito una valutazione di laboratorio di un sistema di strumentazione progettato per un tipo di intervento precoce (EI) di ginocchio monocompartimentale. L'accuratezza dell'adattamento è stata valutata mediante l'impianto in 20 modelli full leg di sawbones. L'allineamento complessivo del l'arto è stato confrontato prima e dopo l'intervento. È stata misurata l'accuratezza del posizionamento di ciascun componente sul suo osso. L'angolo di allineamento complessivo medio sul piano frontale era entro 1° dal target con una deviazione standard inferiore a 1°. I componenti sono stati posizionati in posizione frontale e piani sagittali con errori massimi di 2° La precisione angolare era migliore rispetto agli studi riportati in letteratura per gli strumenti manuali, e si avvicinava quasi alla precisione dei sistemi assistiti da computer. La posizione della componente femorale nell'incavo era nella maggior parte dei casi entro 1 mm, ma l'angolo di flessione sagittale era variabile con una deviazione standard di 6°. La valutazione di una tecnica chirurgica in questo modo era un metodo prezioso per determinare l'accuratezza e per evidenziare eventuali carenze del sistema che potevano essere corrette.
[Sintesi della vitamina K2 mediante isopentenil transferasi NovA in Pichia pastoris Gpn12].L'effetto dell'aggiunta di metanolo sull'espressione eterologa dell'isoprenil transferasi NovQ è stato studiato in Pichia pastoris Gpn12, con menadione e isopentenolo come precursori per catalizzare la sintesi della vitamina K2 (MK-3) L'espressione di NovQ è aumentata del 36% quando è stato aggiunto il 2% di metanolo ogni 24 h. L'influenza del pH iniziale, della temperatura, del metanolo Inoltre, l'aggiunta di precursori (menadione, isopentenolo), il tempo catalitico e l'aggiunta di cetiltrimetil-ammonio bromuro (CTAB) sono stati esplorati nel processo di sintesi catalitica a cellule intere di P. pastoris di MK-3 in un pallone agitato. Tre fattori significativi sono stati quindi studiati dalla risposta metodo di superficie. Le condizioni catalitiche ottimali ottenute erano le seguenti: temperatura catalitica 31,56 , menadione 295,54 mg/L, tempo catalitico 15,87 h. Coerentemente con i risultati di previsione della superficie di risposta, la resa ottimizzata di MK-3 ha raggiunto 98,47 mg/L nell'agitatore, 35% in più rispetto a quello del gruppo di controllo. Su questa base, la produzione in un fermentatore da 30 L ha raggiunto i 189,67 mg/L quando è stato utilizzato il catalizzatore cellulare di 220 g/L (peso secco) per catalizzare la sintesi per 24 h. Questo metodo ha posto le basi per la produzione su larga scala di MK-3 di P. pastoris Gpn12.
[Espressione in tandem e determinazione dell'attività del peptide antibatterico Spinosan-C da Paa spinosa].Il peptide antibatterico può essere facilmente degradato dalla proteasi e ha il letale effetto sull'ospite Escherichia coli. Per risolvere questi problemi e migliorare ulteriormente la capacità di espressione del sistema Escherichia coli, è stato studiato il peptide antimicrobico Spinosan-C di Paa spinosa. In primo luogo, il codone di Spinosan-C è stato ottimizzato secondo E. coli frequenza di utilizzo del codone. Quindi, il gene multimerico 8 Spinosan-C (8 × Spinosan-C) è stato sintetizzato e clonato nel vettore di espressione procariotica pET-28a. Il peptide antimicrobico di fusione 8 × Spinosan-C è stato ulteriormente espresso in Escherichia coli ceppo Rosetta. La proteina 8×Spinosan-C ricombinante è stata quindi purificata e scissa appositamente con acido formico per generare il monomero Spinosan-C. Il test antibatterico in vitro ha suggerito che il monomero Spinosan-C scisso aveva bioattività antibatterica contro il tes batteri. Questo studio fornisce un riferimento tecnico per la preparazione su larga scala di peptidi antimicrobici di rana.
[Annotazione dei mobilomi di nove specie di teleostei].In questo studio, i mobilomi di nove specie di teleostei sono stati annotati con metodi bioinformatici. Entrambi la dimensione e la costituzione del mobilome hanno mostrato una differenza significativa in 9 specie di pesci teleostei. Le specie di contenuto di mobilome classificate da alto a basso erano zebrafish, medaka, tilapia, ceelacanth, platyfish, merluzzo, spinarello, tetradon e fugu. Contenuto di mobilome e dimensione del genoma erano correlati positivamente. I trasposoni del DNA mostravano una maggiore diversità e una maggiore variazione nel teleosteo (da 0,50% a 38,37%), era una delle principali determinanti delle differenze nei mobilomi dei teleostei, e hAT e la superfamiglia Tc/Mariner erano i principali trasposoni del DNA nei teleostei. hanno anche mostrato un'elevata diversità nei teleostei, i trasposoni LINE rappresentavano dallo 0,53% al 5,75% di sequenze genomiche dei teleostei e sono state rilevate 14 superfamiglie. I retrotrasposoni L1, L2, RTE e Rex hanno ottenuto un'amplificazione significativa. hanno giocato una bassa amplificazione nella maggior parte dei teleostei con meno del 2% di copertura del genoma, tranne che nello zebrafish e nello spinarello, dove LTR raggiunge rispettivamente il 5,58% e il 2,51% della copertura del genoma. E 6 superfamiglie LTR (Copia, DIRS, ERV, Gypsy, Ngaro e Pao) sono state rilevate nel teleosteo e Gypsy mostra un'ovvia amplificazione tra di loro. Mentre il SINE rappresenta i tipi di amplificazione più deboli nei teleostei, solo all'interno di zebrafish e celacanto, rappresenta il 3,28% e il 5,64% delle coperture del genoma, negli altri 7 teleostei occupa meno dell'1% dei genomi e famiglie tRNA, 5S e MIR di SINE hanno un certo grado di amplificazione in alcuni teleostei. Questo studio mostra che i teleostei mostrano un'elevata diversità e una grande variazione del mobiloma, esiste una forte correlazione con le variazioni dimensionali dei genomi e il contenuto del mobiloma nel teleosteo, il mobiloma è un fattore importante nel determinare la dimensione del genoma del teleosteo.
[Costruzione di linee cellulari di silenziamento genico CD36 mediante interferenza dell'RNA mediata da lentivirus ed effetto sull'espressione proteica della caveolina-1].CD36, il principale recettore scavenger, è intimamente coinvolto nell'assorbimento di oxLDL nei macrofagi. Per studiare ulteriormente la funzione di CD36 nei macrofagi, abbiamo costruito linee cellulari di silenziamento del gene CD36 (J774A.1) mediante tecnica di interferenza dell'RNA mediata da lentivirus e analizzato l'effetto di CD36 nell'espressione della proteina caveolina 1. Inizialmente, 5 frammenti di shRNA sono stati progettati e sintetizzati secondo la regione della sequenza codificante (CDS) del gene CD36. Successivamente, il CD36-shRNA è stato inserito nel vettore lentivirale per produrre pLKO.1-CD36- plasmide shRNA. Dopo il sequenziamento del DNA, il plasmide pLKO.1-CD36-shRNA e psiCHECK-II-CD36 sono stati co-trasfettati nelle cellule 293T per schermare l'efficiente CD36-shRNA. L'efficiente plasmide CD36-shRNA e il plasmide helper sono stati co -trasfettato nelle cellule 293T per impacchettare il lentivirus, e quindi inf ha attivato le celle J774A.1. Dopo lo screening con puromicina, sono state stabilite linee cellulari di silenzio del gene CD36 (J774A.1). I risultati del Western blotting e della microscopia a fluorescenza confocale hanno mostrato che l'efficienza di silenziamento del CD36 nella linea cellulare del silenzio genico era del 90%. Accompagnato da una diminuzione della proteina CD36 sulla superficie cellulare, il legame di oxLDL al CD36 è stato significativamente inibito, indicando che la linea cellulare del silenzio del gene CD36 è stata stabilita con successo. Infine, i risultati degli esperimenti di stimolazione e inibizione di oxLDL hanno mostrato che il knockdown di CD36 sopprime significativamente la fosforilazione di JNK ed ERK, inibendo così l'espressione della proteina caveolina-1 indotta da oxLDL, dimostrando che CD36 modula l'espressione della proteina caveolina-1 attraverso il JNK/ERK -trasduzione del segnale mediata.
[Preparazione e identificazione di anticorpi policlonali contro Moraxella catarrhalis UspA1].Preparazione di anticorpi policlonali (PcAb) contro UspA1 di Moraxella catarrhalis (Mc), abbiamo utilizzato l'analisi bioinformatica per determinare la regione di superficie esposta in questa proteina che contiene gli epitopi dell'antigene. Quindi le sequenze codificanti corrispondenti per questo frammento sono state sintetizzate artificialmente secondo l'utilizzo del codone di Escherichia coli. Il frammento genico è stato quindi subclonato nel vettore di espressione procariotica pET-28a(+) ed espresso in E. coli rosseta (DE3), quindi le proteine ricombinanti UspA1-His sono state purificate. Due conigli bianchi della Nuova Zelanda sono stati immunizzati con questa proteina per preparare l'antisiero. Il PcAb risultante è stato quindi purificato dal antisiero con colonna di affinità per la proteina A. I risultati del test di fluorescenza degli anticorpi, del test di immunoassorbimento enzimatico e dell'analisi Western blotting hanno mostrato che il PcAb potrebbe riconoscere specificamente il s regione di superficie esposta di UspA1 su Mc. La preparazione del PcAb ha posto le basi per un ulteriore sviluppo della tecnica di rilevamento rapido per M. catarrhalis.
[Effetto della ciclofilina A extracellulare sulla risposta infiammatoria e sull'attività antinfiammatoria dell'anticorpo contro la ciclofilina A].La ciclofilina A (CypA) è un membro della famiglia delle peptidil prolisomerasi (PPIase). CypA è meglio conosciuta come una proteina intracellulare distribuita ubiquitariamente. È stato anche dimostrato che viene secreta dalle cellule in risposta a stimoli infiammatori e stress ossidativo. CypA extracellulare (eCypA) interagisce con CD147 per avviare risposte infiammatorie attraverso il reclutamento di leucociti nel tessuto infiammato. La CypA ricombinante è stata espressa in Escherichia coli e quindi purificata utilizzando Superdex 75™ 16/60. I risultati di Real-time PCR ed ELISA hanno mostrato che i livelli di espressione di citochine proinfiammatorie, come IL-1β, secrete da eCypA stimolato BMDM erano significativamente up-regolati, indicando che eCypA ha svolto un ruolo importante nella promozione delle risposte infiammatorie Inoltre, l'anticorpo anti-CypA è stato preparato utilizzando la proteina CypA purificata per valutazione terapeutica in un modello murino di infiammazione polmonare acuta indotta da LPS. I topi trattati con anticorpi hanno mostrato un danno polmonare ridotto e i livelli di espressione di IL-1β nel tessuto polmonare e nel sangue sono stati ridotti in modo significativo, indicando che l'anticorpo anti-CypA ha esercitato una potente attività antinfiammatoria. I nostri risultati forniscono un potenziale anticorpo terapeutico per le malattie mediate dall'infiammazione.
[Espressione e caratterizzazione del gene della proteina legante l'ormone giovanile Bmtol nel baco da seta, Bombyx mori].La testa del baco da seta è un centro nervoso e un organo di senso, contiene antenne e capelli sensoriali, sente il segnale esterno e risponde al segnale esterno consegnato al cervello. L'ormone giovanile è principalmente sintetizzato e secreto dai corpi allata e deve essere giocato con l'aiuto della proteina legante l'ormone , poiché la proteina legante l'ormone giovanile è il trasportatore del trasporto dell'ormone giovanile e svolge un ruolo funzionale in vivo, hanno una funzione estremamente importante negli insetti. L'obiettivo di questo studio è quello di schermare e identificare una nuova proteina BmTOL che ha una struttura conservata della famiglia delle proteine leganti l'ormone giovanile da SilkDB e dal database NCBI. Il suo numero di gene codificante è BGIBMGA003404 (GenBank Accession No. KY681053). Abbiamo anche espresso la proteina ricombinante utilizzando il sistema di espressione procariotica e quindi purificato con successo la proteina ricombinante mediante colonna cromatografica Ni-NTA per generare gli anticorpi policlonali. L'analisi dei pattern di espressione in vari tessuti ha mostrato che sia a livello trascrizionale che proteico il Bmtol era più espresso nella testa. Inoltre, il livello di espressione del gene Bmtol era più alto nel baco da seta appena esuviato e il livello di espressione del gene Bmtol era più basso da 3 giorni di 5a instar a 7 giorni di pupa, che ha cominciato ad aumentare dopo la falena. L'immunoistochimica ha mostrato che la proteina BmTOL era localizzata nella corteccia, nelle antenne e nel cervello della testa, può essere correlata alla trasmissione delle informazioni della testa e fornisce un'importante fonte di informazioni per la crescita e lo sviluppo del baco da seta.
[Una xilanasi GH11 altamente attiva da Penicillium sp. L1 con potenziali applicazioni nella produzione di xilo-oligosaccaridi].La xilanasi è una glicoside idrolasi di alto profilo con applicazioni nelle industrie della birra, dei mangimi, delle farmacie e delle bioenergie, ma la maggior parte delle xilanasi sono attive al di sotto dei 30 ℃. Per ottenere la xilanasi attiva a bassa temperatura, un gene della xilanasi, XYN11A, è stato clonato da Penicillium sp. L1 ed espresso in Pichia pastoris GS115. Dopo la purificazione e l'analisi enzimatica, il pH e la temperatura ottimali sono stati determinati da 3,5 a 4,0 e 55. Questo enzima era stabile in condizioni acide e neutre (pH da 1,0 a 7,0) o sotto il trattamento di 40 per 1 ora. la xilanasi ha mostrato una forte resistenza a tutti gli ioni e le sostanze chimiche testate. Degno di nota, XYN11A ha mantenuto un'attività più elevata di 6 700 U/mg rispetto a un sacco di xilanasi GH11 e ha dimostrato un'attività più elevata (dal 24% al 58%) a temperature inferiori da 20 a 40 ℃ Dopo l'idrolisi dello xilano in legno di faggio per 16 h, l'hy i drolisati consistevano principalmente di xilobiosio, xilotrioso e xilotetraosio e appena di xilosio, quindi XYN11A poteva essere utilizzato per la produzione di xilooligosaccaride prebiotico. Possedendo le caratteristiche di acidofilo, altamente attivo a temperature più basse e produzione di oligosaccaridi, XYN11A ha dimostrato un grande potenziale nell'industria alimentare e dei mangimi.
[Effetto della delezione di MIG1 e SNF1 sull'utilizzo simultaneo di glucosio e xilosio da parte di Saccharomyces cerevisiae].Mig1 e Snf1 sono due fattori regolatori chiave coinvolti in repressione del glucosio di Saccharomyces cerevisiae Per migliorare l'utilizzo simultaneo di glucosio e xilosio da parte di S. cerevisiae ingegnerizzato, sono stati costruiti ceppi di delezione singola e doppia di MIG1 e SNF1. sono stati chiariti i geni che regolano gerarchicamente i differenziali espressi che potrebbero influenzare l'utilizzo simultaneo di glucosio e xilosio. La delezione MIG1 non ha mostrato alcun effetto significativo sulla co-utilizzazione di zuccheri misti. La delezione SNF1 ha facilitato il consumo di xilosio negli zuccheri misti così come la co-utilizzazione di glucosio e xilosio, che potrebbe essere dovuto al fatto che la delezione di SNF1 ha provocato la de-repressione di alcuni geni sotto la repressione dei cataboliti dell'azoto, quindi favorabl e all'utilizzo del nutriente azotato. Un'ulteriore delezione del gene MIG1 nel ceppo di delezione SNF1 ha portato alla de-repressione di più geni sotto la repressione dei cataboliti dell'azoto e alla sovraregolazione dei geni coinvolti nel metabolismo centrale del carbonio. Rispetto al ceppo di tipo selvatico, il ceppo a doppia delezione MIG1 e SNF1 potrebbe co-utilizzare glucosio e xilosio e accelerare l'accumulo di etanolo, sebbene questo ceppo consumasse glucosio più velocemente e xilosio più lentamente. Prese insieme, le delezioni di MIG1 e SNF1 hanno portato a un aumento della regolazione dei geni sotto la repressione dei cataboliti dell'azoto, che potrebbe essere utile per l'utilizzo simultaneo di glucosio e xilosio. Mig1 e Snf1 potrebbero essere coinvolti nella rete regolatoria gerarchica dei geni sotto la repressione dei cataboliti dell'azoto. La dissezione di questa rete normativa potrebbe fornire ulteriori informazioni su nuovi obiettivi per migliorare il co-utilizzo di glucosio e xilosio.
[Sviluppo di un ELISA per l'identificazione di antigeni proteici immunodominanti di Mycoplasma hyopneumoniae].Abbiamo sviluppato un metodo per identificare l'antigene proteico immunodominante umorale sierologico di Mycoplasma hyopneumoniae (Mhp). Dopo aver costruito il plasmide ricombinante pGEX-6P-1-mhp366 e averlo trasformato in Escherichia coli BL21(DE3), la proteina ricombinante GST-Mhp366 è stata espressa con successo. I lisati del ricombinante GST-Mhp366 e l'ingegneria genetica GST sono stati aggiunti in piastre rivestite di glutatione e hanno reagito con 17 sieri positivi o 13 sieri negativi. Nel frattempo, è stata determinata l'ottimizzazione delle condizioni sperimentali, inclusi antigene rivestito, tampone bloccante, diluizioni di sieri e secondo anticorpo. La concentrazione ottimale dell'antigene rivestito è stata la i batteri originali lisati senza diluizione e il tampone bloccante ottimale conteneva il 10% di FBS e il 2,5% di latte scremato in PBS. Inoltre, la concentrazione di lavoro dei campioni di siero e d l'anticorpo secondario anti-IgG di coniglio marcato con HRP era 1:500 e 1:40 000, rispettivamente. Pertanto, è stato stabilito un ELISA indiretto per l'identificazione di antigeni proteici immunodominanti di Mhp. Nel frattempo, questo metodo è stato confermato dall'antigene proteico immunodominante umorale sierologico identificato Mhp156 e Mhp364. Questo metodo può essere utilizzato per l'identificazione degli antigeni del vaccino candidati su scala genomica. Inoltre, può gettare le basi per identificare gli antigeni vaccinali candidati attraverso il colostro e le secrezioni della mucosa nasale.
[Stato e progressi del fattore ad azione prolungata Ⅷ].L'attuale trattamento per l'emofilia A si basa sulla terapia sostitutiva che è il metodo più efficace di utilizzando il fattore di coagulazione ricombinante FⅧ (rFⅧ). Sebbene la sicurezza e l'efficacia della terapia sostitutiva siano state dimostrate dalla pratica clinica negli ultimi decenni, i prodotti FⅧ sono temporaneamente limitati a causa della breve emivita e richiedono frequentemente iniezioni profilattiche per la maggior parte dei pazienti, di solito tre volte alla settimana o a giorni alterni. Frequenti iniezioni endovenose non solo provocano dolore fisico al paziente, ma producono anche anticorpi FⅧ che influiscono gravemente sull'effetto del trattamento. In questo articolo, esaminiamo lo stato attuale, i progressi della ricerca e i principali problemi del fattore ricombinante a lunga durata d'azione Ⅷ.
[Progressi nell'ingegneria metabolica per la produzione microbica di terpeni naturali-limonene e bisabolene: una mini recensione].Limonene (C₁₀H₁₆) e bisabolene (C₁₅H₂₄) sono entrambi terpeni presenti in natura nelle piante. A seconda del numero di unità C₅, limonene e bisabolene sono riconosciuti rispettivamente come monoterpeni e sesquiterpeni rappresentativi. Limonene e bisabolene sono importanti prodotti farmaceutici e nutraceutici utilizzati nella prevenzione e nel trattamento del cancro e molte altre malattie. Inoltre, possono essere utilizzati come materiali di partenza per produrre una gamma di prodotti di valore commerciale, come prodotti farmaceutici, nutraceutici, cosmetici e biocarburanti. La bassa abbondanza o resa di limonene e bisabolene nelle piante rende il loro isolamento dalla pianta fonti non economicamente praticabili L'isolamento di limonene e bisabolene dalle piante soffre anche di bassa efficienza e spesso richiede condizioni di reazione dure, prolon tempi di reazione ridotti e costo dell'attrezzatura costoso. Recentemente, i rapidi sviluppi nell'ingegneria metabolica dei microbi forniscono un promettente percorso alternativo per la produzione di questi prodotti naturali vegetali. Pertanto, la produzione di limonene e bisabolene mediante l'ingegnerizzazione di cellule microbiche in fabbriche microbiche sta diventando un approccio alternativo interessante in grado di superare i colli di bottiglia, rendendolo più sostenibile, rispettoso dell'ambiente ed economicamente competitivo. Qui, abbiamo esaminato lo stato dell'ingegneria metabolica dei microbi che producono limonene e bisabolene, inclusi ospiti microbici, enzimi chiave, vie metaboliche e ingegneria della biosintesi di limonene/bisabolene. Inoltre, sono state discusse le sfide chiave e le prospettive future.
[Ingegneria metabolica dei geni (E)-β-farnesene sintasi per piante geneticamente modificate resistenti agli afidi].Gli afidi sono i principali parassiti agricoli che causano significative perdite di resa delle colture ogni anno. (E)-β-farnesene (EβF), come componente principale dei feromoni di allarme afidi, può interrompere l'alimentazione degli afidi e causare l'agitazione o la dispersione di altre conspecie nelle vicinanze dalla loro pianta ospite. Inoltre, EβF può funzionare come un cairomone nell'attrarre predatori di afidi. I geni EβF sintasi, che codificano per enzimi che convertono il farnesil difosfato (FPP) nel sesquiterpene aciclico EβF, sono stati isolati e caratterizzati dalla menta piperita (Mentha × piperita e Mentha asiatica), Yuzu (Citrus junos), abete di Douglas (Pseudotsuga menziesii), assenzio dolce (Artemisia annua) e camomilla (Matricaria recutita), rispettivamente. La pianta transgenica che sovraesprime i geni EβF sintasi è stata una delle strategie più efficaci per la gestione degli afidi. w, sono stati riassunti gli stati attuali delle piante transgeniche progettate per la resistenza agli afidi. Sono stati esaminati i geni della sintasi EβF di origine vegetale con i loro potenziali ruoli nella gestione degli afidi tramite approcci geneticamente modificati (GM). È stato discusso il problema esistente nelle piante geneticamente modificate con il gene EβF sintasi, come la bassa emissione di EβF rilevata nella pianta transgenica, ed è stata proposta la direzione di sviluppo in quest'area.