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Diversità delle disposizioni dei fotorecettori nei lemuri malgasci notturni, catemerali e diurni.I lemuri del Madagascar (Primates: Lemuriformes) sono un gruppo monofiletico che ha vissuto in isolamento da altri primati per circa 50 milioni di anni. I lemuri si sono diversificati in specie con diversi modelli di attività quotidiana e adattamenti visivi corrispondentemente diversi. Abbiamo valutato le disposizioni dei fotorecettori a cono e bastoncello retinici in sei specie di lemuri notturni, tre catemerali e due diurni e quantificato parametri diversi in sei specie. L'analisi ha rivelato densità di coni inferiori e densità di bastoncelli più elevate nelle specie notturne rispetto alle specie catemerali e diurne. Le densità dei fotorecettori nel Propithecus verreauxi diurne indicano una retina meno "diurna" rispetto a quella riscontrata in altre primati diurni L'immunomarcatura per le opsine dei coni ha mostrato la presenza sia di coni sensibili alle onde medio-lunghe (M/L) che sensibili alle onde corte (S) in la maggior parte delle specie, indicando almeno una visione dicromatica dei colori. I coni S erano assenti in Allocebus trichotis e Cheirogaleus medius, indicando la monocromia dei coni. Nella specie Microcebus, i coni S avevano una topografia inversa con densità molto basse nella retina centrale e densità più alte nella retina periferica. I coni S nelle altre specie e i coni M/L in tutte le specie avevano una topografia convenzionale con densità di picco nell'area centrale. Ad eccezione della specie catemerale Eulemur, gli occhi di tutti i taxa studiati, compreso il Propithecus diurno, possedevano un tapetum lucidum, una caratteristica che si trova solo tra i mammiferi notturni e crepuscolari.
Studio dell'o-allilazione utilizzando reagenti a base di triazina.Reagente di allilazione acido-catalizzato 2,4,6-tris(allilossi)-1, Sono stati sviluppati 3,5-triazina (TriAT-allile) e suoi derivati sostituiti La reazione di alcoli acidi e alcali-labili con questi reagenti in presenza di una quantità catalitica di acido trifluorometansolfonico (TfOH) ha fornito i corrispondenti eteri allilici con buone rese. Le reazioni che utilizzano questi reagenti con un gruppo allilico regioisometrico sostituito in modo asimmetrico hanno suggerito che sarebbe stata coinvolta una singola specie di catione allilico isometrico.
Valutazione preclinica dell'inibitore MET INC-280 con o senza l'inibitore del recettore del fattore di crescita epidermico Erlotinib nel carcinoma polmonare non a piccole cellule.Sebbene il L'inibitore del recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) erlotinib è inizialmente efficace nei pazienti con carcinoma polmonare non a piccole cellule (NSCLC) con tumori che ospitano mutazioni attivanti dell'EGFR, la maggior parte successivamente sviluppa una resistenza acquisita. Un meccanismo di resistenza riconosciuto si verifica attraverso l'attivazione della segnalazione di bypass tramite il via del fattore di crescita degli epatociti (HGF)-MET. INC-280 è un inibitore della chinasi a piccola molecola di MET. Abbiamo cercato di dimostrare l'attività di INC-280 su linee cellulari selezionate di NSCLC sia come singolo agente che in combinazione con erlotinib utilizzando HGF esogeno per simulare l'up-regolazione di MET. Quattro linee cellulari di NSCLC (HCC827, PC9, H1666 e H358) sono state trattate con INC-280 come agente singolo o in combinazione con erlotinib con o senza HGF. L'attività dei trattamenti farmacologici è stata di m facilitato da saggi di vitalità cellulare. L'immunoblotting è stato utilizzato per monitorare l'espressione di EGFR/pEGFR, MET/pMET, GAB1/pGAB1, AKT/pAKT e ERK/pERK, nonché marcatori di apoptosi (PARP e scissione della capasi-3) in H1666, HCC827 e PC9. Come singolo agente, INC-280 ha mostrato una citotossicità minima nonostante la potente inibizione dell'attività della chinasi MET a concentrazioni fino a 10 nM. L'aggiunta di HGF ha impedito la morte cellulare indotta da erlotinib. L'aggiunta di INC280 a modelli resistenti a erlotinib mediati da HGF ha ripristinato la sensibilità a erlotinib per tutte le linee cellulari testate, associata alla scissione di PARP e caspasi-3. In questi modelli, il trattamento con INC-280 è stato sufficiente per ripristinare l'inibizione indotta da erlotinib di MET, GAB1, AKT ed ERK in presenza di HGF. Sebbene l'inibitore MET INC-280 da solo non abbia avuto effetti riconoscibili sulla crescita cellulare, è stato in grado di ripristinare la sensibilità a erlotinib e promuovere l'apoptosi nei modelli NSCLC resi resistenti a erlotinib da HGF. Questi dati forniscono un razionale preclinico per uno studio clinico di fase 1 in corso su erlotinib più INC-280 nel NSCLC con mutazione di EGFR.
INPP5E Preserva la stabilità genomica attraverso la regolazione della mitosi.nelle cellule umane e murine altera il punto di controllo dell'assemblaggio del fuso, il centrosoma e la funzione del fuso e il mantenimento del cromosoma integrità. Coerentemente con un ruolo regolatore del ciclo cellulare, abbiamo scoperto che l'espressione di INPP5E è dipendente dal ciclo cellulare, con un picco all'ingresso mitotico. INPP5E si localizza nei centrosomi, nei cromosomi e nei cinetocori nella mitosi precoce e si sposta verso il fuso della zona mediana all'uscita mitotica. I nostri risultati identificano il ruolo essenziale e precedentemente sconosciuto di INPP5E nella mitosi e nella prevenzione dell'aneuploidia, fornendo una nuova prospettiva sulla funzione di questa fosfoinositide fosfatasi nella salute e nello sviluppo.
Il targeting terapeutico dei mitocondri avvia un'eccessiva produzione di superossido e la depolarizzazione mitocondriale causando una diminuzione dell'integrità del mtDNA.La disregolazione mitocondriale è strettamente associata a specie reattive dell'ossigeno eccessive (ROS ) L'omeostasi redox alterata è stata implicata nell'insorgenza di diverse malattie tra cui il cancro. Il DNA mitocondriale (mtDNA) e le proteine sono particolarmente sensibili ai ROS poiché sono in stretta vicinanza alla catena respiratoria (RC). Mitochinone (MitoQ), un L'agente redox mirato ai mitocondri, danneggia selettivamente le cellule del cancro al seno probabilmente attraverso danni indotti tramite una maggiore produzione di ROS Tuttavia, gli effetti di MitoQ e di altri agenti coniugati con trifenilfosfonio (TPP+) sull'omeostasi mitocondriale del cancro rimangono sconosciuti. L'obiettivo principale di questo studio era determinare l'impatto dell'agente mirato ai mitocondri [(MTA) coniugato a TPP+: mitoTEMPOL, mitochinone e mitocromanolo-acetato e] sulla fisiologia mitocondriale e sull'integrità del mtDNA nelle cellule tumorali della mammella (MDA-MB-231) e del polmone (H23). L'integrità del mtDNA è stata valutata quantificando il grado di frammentazione del mtDNA e il numero di copie, nonché misurando le proteine mitocondriali essenziali per la stabilità e il mantenimento del mtDNA (TFAM, SSBP1, TWINKLE, POLG e POLRMT). Lo stato mitocondriale è stato valutato misurando la produzione di superossido, la depolarizzazione della membrana mitocondriale, il consumo di ossigeno, l'acidificazione extracellulare ei livelli di mRNA o proteine dei complessi RC insieme all'attività del ciclo TCA. In questo studio, abbiamo dimostrato che tutti gli MTA studiati compromettono la salute mitocondriale e diminuiscono l'integrità del mtDNA nelle cellule MDA-MB-231 e H23. Tuttavia, le differenze nel grado di danno mitocondriale e di degradazione del mtDNA suggeriscono proprietà uniche tra ciascun MTA che possono essere dipendenti dalla linea cellulare, dalla dose e dal tempo. Nel complesso, il nostro studio indica il potenziale per le molecole coniugate di TPP+ di danneggiare le cellule del cancro al seno e ai polmoni prendendo di mira l'omeostasi mitocondriale.
I derivati della vitamina D3, da soli o in combinazione con glucocorticoidi, sopprimono la proliferazione delle cellule mononucleate del sangue periferico stimolata dall'enterotossina pirogenica streptococcica in pazienti con psoriasi.La colonizzazione batterica sulla pelle o sulle tonsille può influenzare la risposta clinica dei pazienti con psoriasi ai farmaci immunosoppressori. Tuttavia, pochi studi hanno studiato gli effetti dei superantigeni batterici sulla terapia in questi pazienti. Recentemente, la terapia di combinazione con glucocorticoidi topici (GC) e vitamina D3 ( VD3) sembra essere più efficace della monoterapia GC o VD3 per la psoriasi. Abbiamo valutato gli effetti soppressivi del betametasone butirrato propionato (BBP), tre derivati VD3 (calcipotriolo, maxacalcitolo e tacalcitolo), ciclosporina e BBP più VD3, su concanavalina A (ConA )- o proliferazione stimolata dall'enterotossina pirogenica A streptococcica (SPEA) delle cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) ottenute da 35 pazienti affetti da psoriasi ts. Sono state stimate le concentrazioni di farmaco che esercitano una concentrazione di inibizione del 50% della proliferazione di PBMC stimolata da ConA o SPEA. I livelli di citochine del fattore di necrosi tumorale-α, -interferone, interleuchina-1b, -2, -4, -5, -6, -8 -10 e -12p70 nei surnatanti di coltura di PBMC sono stati misurati con procedure a matrice di sfere. La soppressione della proliferazione delle PBMC da parte della BBP era significativamente inferiore quando le PBMC erano stimolate da SPEA rispetto a quando stimolate da ConA. Al contrario, gli effetti soppressivi del calcipotriolo e del tacalcitolo sono aumentati significativamente quando PBMC sono stati stimolati da SPEA rispetto a quando stimolati da ConA. L'effetto soppressivo della BBP sulla proliferazione di PBMC stimolata da SPEA è stato migliorato significativamente con l'aggiunta di calcipotriolo 1-1000 ng/mL, rispetto alla sola BBP. I livelli di citochine nei surnatanti di coltura di PBMC non erano significativamente differenti tra PBMC stimolati con ConA e SPEA. Calcipotriolo e BBP in combinazione hanno marcatamente soppresso la proliferazione di PBMC stimolata da SPEA. La SPEA prodotta dalla colonizzazione di streptococchi emolitici può ridurre l'efficacia della BBP ma non dei derivati VD3 nel trattamento della psoriasi.
Rapida determinazione degli alcaloidi ossindolici nell'artiglio di gatto mediante HPLC mediante estrazione assistita da microonde a base di liquido ionico e colonna monolitica di silice.colonna (100 × 4,6 mm) consente di separare questi analiti a una velocità quasi doppia rispetto a una colonna di particolato convenzionale (~16 vs ~30 min) con limiti di quantificazione e rilevamento rispettivamente di 0,5 e 0,15µg/mL. Le condizioni ILMAE sono state ottimizzate da il design dell'array ortogonale Taguchi. Rispetto all'estrazione convenzionale con acqua bollente, ILMAE offre rese quasi quattro volte superiori in un tempo di estrazione estremamente breve. L'HPLC sviluppato accoppiato con il metodo ILMAE potrebbe essere efficiente e pratico per la determinazione rapida di alcaloidi ossindolici in cat\'s artiglio.
Indagine sulla morfologia delle cellule gangliari retiniche negli uistitì.Nella retina dei primati, le popolazioni di nani, parasole e piccole cellule bistratificate formano la grande maggioranza del ganglio Inoltre, c'è una varietà di tipi di cellule gangliari a campo largo a bassa densità che sono meno ben caratterizzati. Qui abbiamo studiato le cellule gangliari retiniche nell'uistitì comune, Callithrix jacchus, utilizzando il trasferimento genico mediato da particelle. Le cellule gangliari sono state trasfettate con un plasmide di espressione per la proteina fluorescente verde postsinaptica densità 95. Le retine sono state processate con marcatori immunoistochimici stabiliti per le cellule bipolari e/o amacrine per determinare la stratificazione dendritica delle cellule gangliari In totale oltre 500 cellule gangliari sono state classificate in base alla loro dimensione del campo dendritico , morfologia e stratificazione nello strato plessiforme interno. Sono stati distinti oltre 17 tipi, tra cui nano, parasole, largo spinoso, piccolo bistratificato, grande bistratificato, ricorsivo ve cellule gangliari bistratificate, ricorsive monostratificate, strette spinose, lisce monostratificate, grandi sparse, giganti sparse (melanopsina), e un gruppo che può contenere diversi tipi non ancora caratterizzati. Supponendo che ogni tipo caratterizzato formi un mosaico esagonale, le cellule midget e parasole rappresentano oltre l'80% di tutte le cellule gangliari nella retina centrale, ma solo il 50% delle cellule nella retina periferica (>2 mm). Concludiamo che la fovea è dominata da cellule nane e parasole, ma al di fuori della fovea la diversità delle cellule gangliari nell'uistitì è probabilmente grande come quella riportata per le retine dei non primati. Presi insieme, i tipi di cellule gangliari nella retina degli uistitì assomigliano a quelli descritti in precedenza nella retina dei macachi per quanto riguarda la morfologia, la stratificazione e il cambiamento di proporzione attraverso la retina.
Un metodo sicuro e accurato per eseguire la chirurgia estetica del contorno mandibolare per gli asiatici dell'Estremo Oriente.Un contorno mandibolare affusolato è popolare tra gli asiatici dell'Estremo Oriente. Questo studio descrive un metodo sicuro e accurato per utilizzare la pianificazione chirurgica virtuale (VSP) preoperatoria e una guida per l'osteectomia intraoperatoria per massimizzare i risultati estetici della simmetria e della rastremazione mandibolari, mitigando al contempo le lesioni al nervo alveolare inferiore (IAN). Dodici soggetti con disturbi principali di un'ampia e la faccia inferiore quadrata sono stati sottoposti a questo protocollo da gennaio a giugno 2015. VSP è stato utilizzato per confermare la simmetria e preservare l'IAN, massimizzando la capacità del chirurgo di assottigliare la faccia inferiore tramite ostectomia del bordo inferiore mandibolare. L'accuratezza di questo metodo è stata confermata dalla sovrapposizione delle scansioni di tomografia computerizzata perioperatoria in tutti i soggetti Nessun soggetto ha lamentato parestesie prolungate dopo 3 mesi Un protocollo sicuro e accurato per ottenere un e viene descritta la faccia inferiore estetica negli individui indicati dell'Estremo Oriente.
Efficacia di simtuzumab rispetto al placebo in pazienti con fibrosi polmonare idiopatica: uno studio randomizzato, in doppio cieco, controllato, di fase 2.Lisil ossidasi-simile 2 (LOXL2) catalizza il cross-linking del collagene ed è implicato nella patogenesi della fibrosi polmonare idiopatica (IPF). Lo scopo di questo studio era di valutare l'efficacia e la sicurezza di simtuzumab, un anticorpo monoclonale contro LOXL2, in pazienti con IPF. questo studio randomizzato, in doppio cieco, di fase 2, abbiamo reclutato pazienti di età compresa tra 45 e 85 anni con IPF definita diagnosticata prima di 3 anni di screening da 183 ospedali e cliniche respiratorie in 14 paesi. Pazienti eleggibili, stratificati per capacità vitale forzata al basale (FVC ), le concentrazioni sieriche di LOXL2 (sLOXL2) e l'uso di pirfenidone e nintedanib sono stati assegnati in modo casuale (1:1) a iniettare 125 mg/mL di simtuzumab o placebo per via sottocutanea una volta alla settimana. Gli endpoint primari erano la sopravvivenza libera da progressione, definita come il tempo morte per tutte le cause r una diminuzione categorica rispetto al basale della % di FVC prevista, nella popolazione intent-to-treat, in pazienti con concentrazioni di sLOXL2 nel 50° percentile o superiori e in pazienti con concentrazioni di sLOXL2 nel 75° percentile o superiori. La durata del trattamento è stata guidata dagli eventi e le analisi ad interim sono state pianificate e condotte dopo che si sono verificati, rispettivamente, circa 120 e 200 eventi di sopravvivenza libera da progressione. Abbiamo confrontato i gruppi di trattamento con il test log-rank stratificato. Questo studio è registrato con ClinicalTrials. gov, numero NCT01769196. I pazienti con IPF sono stati reclutati tra il 31 gennaio 2013 e il 1 giugno 2015. La popolazione intention-to-treat includeva 544 pazienti assegnati in modo casuale (272 pazienti in entrambi i gruppi) e la popolazione di sicurezza includeva 543 pazienti assegnati in modo casuale che hanno ricevuto almeno una dose del farmaco in studio. Lo studio è stato terminato quando la seconda analisi ad interim ha soddisfatto i criteri prespecificati di arresto della futilità nella popolazione intention-to-treat. Non abbiamo notato differenze nella sopravvivenza libera da progressione tra simtuzumab e placebo nella popolazione intent-to-treat (tempi di sopravvivenza liberi da progressione mediani di 12,6 mesi e 15,4 mesi rispettivamente per simtuzumab e placebo; HR stratificato 1,13, 95% CI 0,88-1,45; p=0·329) e nei pazienti con sLOXL2 al basale nel 50° percentile o superiore (sopravvivenza libera da progressione mediana 11,7 mesi e 14,3 mesi rispettivamente per simtuzumab e placebo ; HR stratificato 1,03, 95% CI 0,74-1,43; p=0,851), o nel 75° percentile o superiore (sopravvivenza libera da progressione mediana 11,6 mesi e 16,9 mesi per simtuzumab e placebo, rispettivamente; HR stratificato 1,20, 95% CI 0,72-2,00; p=0·475). L'incidenza di eventi avversi e di eventi avversi gravi è risultata simile tra i gruppi di trattamento. Gli eventi avversi più comuni in entrambi i gruppi simtuzumab e placebo sono stati dispnea, tosse, infezione del tratto respiratorio superiore e peggioramento dell'IPF; e gli eventi avversi di grado 3 o 4 più comuni sono stati il peggioramento dell'IPF, la dispnea e la polmonite. Simtuzumab non ha migliorato la sopravvivenza libera da progressione in una popolazione ben definita di pazienti con IPF. I nostri dati non supportano l'uso di simtuzumab per i pazienti con IPF. Gilead Sciences Inc.
Sintesi di Verubecestat, un inibitore BACE1 per il trattamento della malattia di Alzheimer.Verubecestat è un inibitore della β-secretasi in fase di valutazione per il trattamento della malattia di Alzheimer. Il percorso di prima generazione si basa su un accoppiamento ammidico con un'anilina funzionalizzata, la cui preparazione introduce inefficienze sintetiche. Il percorso di seconda generazione lo sostituisce con un accoppiamento CN catalizzato da rame, consentendo un accesso più diretto a l'obiettivo. Altre caratteristiche del nuovo percorso includono un'aggiunta diastereoselettiva di tipo Mannich in una sulfinil chetimina di Ellman e una guanidinilazione in fase avanzata.
Scoperta del 3-Imino-1,2,4-tiadiazinane 1,1-diossido derivato Verubecestat (MK-8931)-A -sito dell'enzima precursore dell'amiloide che taglia la proteina 1 Inibitore per il trattamento della malattia di Alzheimer.Verubecestat 3 (MK-8931), un derivato 3-imino-1,2,4-tiadiazinanico 1,1-diossido sostituito con diaril ammide, è un inibitore dell'enzima 1 (BACE1) precursore della proteina precursore dell'amiloide ad alta affinità attualmente in fase di valutazione clinica di fase 3 per il trattamento della malattia di Alzheimer da lieve a moderata e prodromica. elevata selettività per BACE1 rispetto ad altre aspartil proteasi chiave, in particolare la catepsina D, e abbassa profondamente i livelli di CSF e Aβ nel cervello nei ratti e nei primati non umani e i livelli di CSF Aβ negli esseri umani. In questa annotazione, descriviamo la scoperta di 3, tra cui progettazione, convalida, e SAR selezionato attorno al nuovo nucleo di biossido di iminotiadiazina e a aspetti della sua caratterizzazione preclinica e clinica di Fase 1.
Identificazione degli inibitori dell'associazione di ZAP-70 con il recettore delle cellule T mediante screening ad alto rendimento.ZAP-70 è una molecola critica in la trasduzione della segnalazione del recettore dell'antigene delle cellule T e l'attivazione delle cellule T. Dopo l'attivazione del recettore dell'antigene delle cellule T, ZAP-70 viene reclutato nelle catene ζ intracellulari del recettore delle cellule T, dove ZAP-70 viene attivato e colocalizzato con suoi substrati. Gli inibitori di ZAP-70 potrebbero potenzialmente funzionare come trattamenti per malattie autoimmuni o trapianti di organi. In questo lavoro, presentiamo la progettazione, l'ottimizzazione e l'implementazione di uno schermo per gli inibitori che interromperebbero l'interazione tra ZAP-70 e il T recettore dell'antigene cellulare. Lo schermo si basa su un saggio di polarizzazione a fluorescenza per il legame del peptide a ZAP-70.
Un saggio ad alto contenuto semplice e sensibile per la caratterizzazione di anticorpi terapeutici antiproliferativi.Gli anticorpi monoclonali (mAb) sono diventati una classe centrale di agenti terapeutici in particolare come composti antiproliferativi. Le loro modalità d'azione spesso complesse richiedono saggi sensibili durante la caratterizzazione funzionale precoce. Gli attuali saggi di proliferazione cellulare spesso rilevano metaboliti che sono indicativi dell'attività metabolica ma non rappresentano direttamente la proliferazione cellulare. Misurazione della replicazione del DNA per incorporazione di analoghi di base come 5-bromo-2\'-deossiuridina (BrdU) colma questa lacuna analitica, ma in precedenza era limitato alla caratterizzazione dell'effetto di massa nei formati di test di immunoassorbimento enzimatico. Qui, descriviamo un formato di test basato su cellule per la caratterizzazione di mAb antiproliferativi per quanto riguarda la potenza e la modalità d'azione in un singolo esperimento. Il test utilizza un'analisi ad alto contenuto basata su singole cellule ( HCA) per la quantificazione affidabile delle cellule replicanti e del contenuto di DNA tramite 5-etinil-2\'-deossiuridina (EdU) e 4\',6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI), rispettivamente, come misure sensibili dell'attività antiproliferativa dei mAb. Abbiamo utilizzato trastuzumab, un anticorpo terapeutico antiproliferativo che interferisce con la trasduzione del segnale di crescita mediata dal recettore della superficie cellulare HER2 e le linee cellulari con sovraespressione di HER2 BT474 e SKBR3 per dimostrare rapporti segnale-sfondo (S/B) fino a 10 volte per i pazienti trattati rispetto a quelli trattati. cellule non trattate e uno spostamento nei profili del ciclo cellulare che indica l'arresto del ciclo cellulare indotto da anticorpi. Il test è semplice, economico e sensibile e fornisce un formato cellulare per la caratterizzazione preclinica di mAb terapeutici.
Una strategia di screening ad alto rendimento per lo sviluppo di inibitori dell'interazione proteina-proteina RNF8-Ubc13.Il sistema ubiquitina-proteasoma svolge un ruolo essenziale in un ampia gamma di vie di segnalazione cellulare. L'ubiquitinazione è una modificazione proteica post-traduzionale che coinvolge l'azione di una cascata enzimatica (enzimi E1, E2 ed E3) per l'attacco covalente dell'ubiquitina alle proteine bersaglio. La conoscenza emergente dei meccanismi molecolari e della correlazione di La deregolamentazione del sistema dell'ubiquitina nelle malattie umane sta scoprendo nuove opportunità per lo sviluppo terapeutico. La ligasi E3 RNF8 agisce in cooperazione con l'enzima eterodimerico E2 Ubc13/Uev1a per generare coniugati di ubiquitina ai lati delle rotture del doppio filamento del DNA, e recenti scoperte suggeriscono RNF8 come potenziale bersaglio terapeutico per il trattamento del cancro al seno. Qui, presentiamo un nuovo test compatibile con lo screening ad alto rendimento (HTS) basato sulla tecnologia AlphaScreen ology per identificare gli inibitori dell'interazione proteina-proteina RNF8-Ubc13, insieme a una strategia di follow-up per la successiva validazione. Abbiamo adattato il test AlphaScreen a un formato a 384 pozzetti e ne abbiamo dimostrato l'affidabilità, la riproducibilità e l'idoneità per le campagne HTS automatizzate. Inoltre, abbiamo stabilito un test di fluorescenza risolta nel tempo omogenea ortogonale biochimica (HTRF) in formato HTS e un test basato sulla microscopia cellulare che consente la verifica degli hit primari. Questa strategia sarà utile per i programmi di screening dei farmaci mirati alla modulazione di RNF8-Ubc13.
Jenkins-CI, un sistema di integrazione continua open source, come piattaforma di elaborazione di dati e immagini scientifiche.Lo screening ad alta produttività genera grandi volumi di dati eterogenei che richiedono una serie diversificata di strumenti di calcolo per la gestione, l'elaborazione e l'analisi. La creazione di flussi di lavoro di calcolo integrati, scalabili e robusti per tali applicazioni è impegnativa ma di grande valore. L'integrazione e il pipelining dei dati scientifici facilitano l'elaborazione dei dati standardizzata, la collaborazione e riutilizzo delle migliori pratiche Descriviamo come Jenkins-CI, un sistema di integrazione continua "off-the-shelf", open-source, viene utilizzato per creare pipeline per l'elaborazione di immagini e dati associati dallo screening ad alto contenuto (HCS). Jenkins-CI fornisce numerosi plug-in per attività di elaborazione standard e il suo design consente la rapida integrazione di applicazioni scientifiche esterne. Utilizzando Jenkins-CI, abbiamo integrato CellProfiler, una piattaforma di elaborazione delle immagini open source, w con varie utility HCS e un cluster Linux ad alte prestazioni. La piattaforma è accessibile dal Web, facilita l'accesso e la condivisione di risorse di elaborazione ad alte prestazioni e automatizza i dati precedentemente ingombranti e le attività di elaborazione delle immagini. Le pipeline di imaging sviluppate utilizzando il client desktop CellProfiler possono essere gestite e condivise tramite un repository Jenkins-CI centralizzato. Le pipeline e i dati gestiti vengono annotati per facilitare la collaborazione e il riutilizzo. Le limitazioni con Jenkins-CI (principalmente intorno all'interfaccia utente) sono state risolte attraverso la selezione di plugin di supporto dalla comunità Jenkins-CI.
Screening spettrale e FRET ad alto rendimento in cellule viventi per identificare effettori di piccole molecole di SERCA.Un robusto screening ad alto rendimento ( La strategia HTS) è stata sviluppata per scoprire effettori di piccole molecole mirati all'ATPasi di calcio del reticolo sarco/endoplasmatico (SERCA), basata su un lettore di micropiastre a fluorescenza che registra sia la forma d'onda di decadimento in nanosecondi (modalità a vita) sia lo spettro di emissione completo (modalità spettrale) , con elevata precisione e velocità. Questo lettore di piastre spettrali unmixing (SUPR) è stato utilizzato per schermare librerie di piccole molecole con un biosensore di trasferimento di energia di risonanza di fluorescenza (FRET) espresso in cellule viventi. Il legame del ligando è stato rilevato da FRET associato a riarrangiamenti strutturali del verde proteina fluorescente (GFP, donatore) e proteina fluorescente rossa (RFP, accettore) fuse all'isoforma SERCA2a specifica per il cuore I risultati dimostrano una quantificazione accurata di FRET insieme ad un'elevata precisione di h esso identificazione. L'analisi della durata della fluorescenza ha risolto i distinti stati strutturali di SERCA, fornendo un metodo per classificare i chemiotipi di piccole molecole sulla base del loro effetto strutturale sul bersaglio. L'analisi spettrale è stata applicata anche per segnalare l'interferenza di composti fluorescenti. Gli hit FRET sono stati ulteriormente valutati per gli effetti funzionali sull'attività dell'ATPasi di SERCA\' tramite un test di enzima accoppiato e un sensore di calcio basato su FRET. Le curve concentrazione-risposta hanno indicato un'eccellente correlazione tra FRET e funzione. Questi metodi di rilevamento FRET spettrali e a vita complementari offrono un'interessante combinazione di precisione, velocità e risoluzione per HTS.
Lettore di piastre senza miscelazione spettrale: analisi FRET ad alta produttività e alta precisione in cellule viventi.Abbiamo sviluppato un lettore di micropiastre che registra un'alta spettro di emissione di fluorescenza di qualità su una base pozzetto in condizioni reali di screening ad alto rendimento (HTS). Il tempo di lettura per un'intera piastra da 384 pozzetti è inferiore a 3 minuti. Questo strumento è particolarmente adatto per analisi basate su Trasferimento di energia di risonanza di fluorescenza (FRET). I biosensori di proteine intramolecolari con donatore di proteina fluorescente verde (GFP) codificata geneticamente e tag accettore di proteina fluorescente rossa (RFP) in posizioni sensibili ai cambiamenti strutturali sono stati stabilmente espressi e studiati nelle cellule HEK viventi. Quantificazione accurata di FRET è stato ottenuto scomponendo ogni spettro osservato in una combinazione lineare di quattro componenti (base) spettri (emissione GFP, emissione RFP, acqua Raman e autofluorescenza cellulare). L'eccitazione e il rilevamento sono entrambi condotti da th e superiore, consentendo il controllo termoelettrico della temperatura del campione dal basso. Questo lettore di piastre spettrali unmixing (SUPR) offre una combinazione senza precedenti di velocità, precisione e accuratezza per lo studio del FRET mediato dall'ensemble nelle cellule viventi. Completa il nostro lettore di lastre a vita di fluorescenza precedentemente riportato, che offre la caratteristica di risolvere più popolazioni FRET all'interno dell'ensemble. La combinazione di queste due tecnologie di registrazione diretta della forma d'onda migliora notevolmente la precisione e il contenuto informativo per HTS nella scoperta di farmaci.
Traiettorie dei sintomi depressivi nei primi 10 anni di diagnosi del diabete: fattori antecedenti e legame con la futura disabilità a Taiwan.Questo studio ha identificato le traiettorie dei sintomi depressivi in negli anni successivi alla diagnosi del diabete, abbiamo esaminato i fattori che predicono la probabilità per le persone di seguire una traiettoria specifica e studiato come le traiettorie sono associate alla successiva disabilità Abbiamo tratto i dati da un sondaggio rappresentativo a livello nazionale a Taiwan per identificare gli adulti di età pari o superiore a 50 anni con diagnosi di diabete Sono stati inclusi 487 pazienti con nuova diagnosi di diabete nel periodo 1996-2007. L'asse temporale è stato impostato su zero quando il diabete è stato segnalato per la prima volta in una data ondata del sondaggio e sono stati registrati i dati relativi ai sintomi depressivi successivi. Abbiamo utilizzato semi -modelli di miscela parametrica per identificare le traiettorie dei sintomi depressivi e regressioni logistiche multinomiali per esaminare i fattori associati alle traiettorie. I pazienti con nuova diagnosi di diabete a Taiwan seguono nel tempo diverse traiettorie dei sintomi depressivi. Essere donne, meno istruite, non sposate/compagnate, con condizioni di salute inferiori, ricoveri ospedalieri, maggiori limitazioni nella funzione fisica, esercizio fisico meno regolare prima della diagnosi e non usare regolarmente farmaci antidiabetici all'inizio della diagnosi erano fattori associati a traiettorie dei sintomi depressivi crescenti o stabili. Coloro che hanno manifestato sintomi depressivi elevati avevano maggiori probabilità rispetto agli individui con sintomi depressivi stabili di avere limitazioni fisiche nell'ultima intervista di follow-up. Le traiettorie dei sintomi depressivi dopo la diagnosi di diabete erano associate a fattori sociodemografici, di salute e di stile di vita selezionati prima della diagnosi e prevedevano anche la successiva disabilità. I gruppi di rischio identificati nel presente studio possono essere utilizzati per la cura del diabete personalizzata che prevenga il disagio correlato al diabete e la futura disabilità.
Lo schermo di sovraespressione dell'intero genoma identifica i geni in grado di bypassare la senescenza mediata da p16 nel melanoma.I melanomi maligni spesso derivano dai nevi, che derivano dall'oncogene iniziale -iperproliferazione indotta di melanociti che sono mantenuti in uno stato senescente mediato da CDKN2A/p16. Pertanto, i geni che possono bypassare questa barriera di senescenza possono contribuire allo sviluppo del melanoma. Abbiamo eseguito uno schermo di guadagno di funzione di 17.030 umani espressi lentivirali open reading frame (ORF) in una linea cellulare di melanoma contenente un costrutto p16 inducibile per identificare tali geni Geni noti per bypassare l'arresto della senescenza indotto da p16, incluso il gene del papilloma virus umano 18 E7 (HPV18E7) e geni come il p16- Sono stati identificati il legame di CDK6 con funzioni attese, nonché un pannello di nuovi geni, tra cui proteine HMGB (high-mobility group box), alcune di queste sono state ulteriormente convalidate in altri due modelli di senescenza indotta da p16. la noistochimica ha dimostrato livelli più elevati di CDK6 nei melanomi primari rispetto alla pelle normale e ai nevi. La riduzione dei livelli di CDK6 ha spinto le cellule del melanoma ad esprimere la p16 funzionale nella senescenza, dimostrando il suo contributo per bypassare la senescenza.
Il risequenziamento mirato dei geni della sordità rivela una variante fondatrice di MYO15A nel nord-est del Brasile.Identificare l'eziologia genetica in una persona con perdita dell'udito (HL) è una sfida a causa dell'estrema eterogeneità genetica nel HL e della variabilità specifica della popolazione. In questo studio, dopo aver escluso le varianti GJB2, il risequenziamento mirato di 180 geni correlati alla sordità ha rivelato le varianti causali in 11 su 19 (58%) probandi brasiliani con HL autosomico recessivo Le varianti patogene identificate erano in MYO15A (10 famiglie) e CLDN14 (una famiglia) Sorprendentemente, la variante MYO15A p. (Val1400Met) è stata identificata in otto famiglie della città di Monte Santo nella regione nord-orientale del Brasile. era coerente con un unico fondatore. Nessun altro caso con questa variante è stato rilevato tra 105 casi simplex di altre città del Brasile nord-orientale, suggerendo che questa variante è confinata a una regione geografica. Questo studio suggerisce ritiene che sia possibile sviluppare uno screening specifico della popolazione per le varianti della sordità una volta identificate le varianti causali in diversi gruppi geografici.
Regolazione della biosintesi della chinurenina durante l'infezione da virus dell'influenza.I virus dell'influenza A (IAV) rimangono gravi minacce per la salute pubblica a causa della carenza di mezzi efficaci di controllo. Lo sviluppo di modalità di controllo del virus più efficaci richiede una migliore comprensione delle interazioni virus-ospite. È stato precedentemente dimostrato che l'IAV induce la produzione di chinurenina, che sopprime le risposte delle cellule T, migliora l'ipersensibilità al dolore e disturba il comportamento negli animali infetti. La regolazione della biosintesi della chinurenina durante l'infezione da IAV rimane elusiva. Qui abbiamo dimostrato che l'infezione da IAV induceva l'espressione di interferoni (IFN), che aumentavano la produzione di indoleamina-2,3-diossigenasi (IDO1), che catalizzava la biosintesi della chinurenina. Inoltre, l'IAV attenuava la L'espressione di IDO1 e la produzione di chinurenina attraverso la sua proteina NS1 È interessante notare che l'inibizione della replicazione virale prima dell'induzione dell'IFN ha limitato l'exp di IDO1 resione, mentre l'inibizione dopo no. Infine, abbiamo dimostrato che la biosintesi della chinurenina è stata attivata nei macrofagi in risposta ad altri stimoli, come il virus dell'influenza B, il virus dell'herpes simplex 1 e 2, nonché i lipopolisaccaridi batterici. Pertanto, la stretta regolazione della biosintesi della chinurenina da parte della cellula ospite e, forse, del patogeno potrebbe essere una firma fondamentale di un'ampia gamma di interazioni ospite-patogeno, che dovrebbe essere presa in considerazione durante lo sviluppo di nuovi farmaci antivirali e antibatterici.
Determinazione di BPA, BPB, BPF, BADGE e BFDGE nelle bevande energetiche in lattina mediante pulizia di polimeri a stampa molecolare e UPLC con rilevamento della fluorescenza.Un nuovo Viene descritto il metodo per la determinazione simultanea di cinque bisfenoli nelle bevande energetiche in lattina mediante UPLC con rilevamento a fluorescenza, dopo la pulizia su polimeri a stampa molecolare. Il metodo è stato convalidato a due livelli di concentrazione, calcolando l'accuratezza, la ripetibilità e la riproducibilità all'interno del laboratorio, linearità della risposta del rivelatore, i limiti di quantificazione e i limiti di rilevazione per ciascun bisfenolo Il metodo è specifico, affidabile e molto sensibile, consentendo la determinazione di bisfenolo F diglicidil etere (BFDGE), bisfenolo A (BPA), bisfenolo B (BPB) ), bisfenolo F (BPF) e bisfenolo A diglicidil etere (BADGE) fino a 0,50 ng/mL; è stato impiegato per determinare i livelli di contaminazione da questi bisfenoli in quaranta bevande energetiche di marche diverse, coll ricavato dal mercato di Napoli. Il BPA è stato rilevato in 17 campioni su 40 (42,5%); in alcune bevande energetiche sono stati determinati anche BPF, BADGE e BFDGE.
Una variante comune in CLDN14 causa una precipitosa perdita dell'udito neurosensoriale prelinguale in più famiglie a causa dell'effetto fondatore.Gli isolati genetici forniscono opportunità senza precedenti per identificare le mutazioni patogene ed esplorare l'intera storia naturale di fenotipi clinicamente eterogenei come la perdita dell'udito. Abbiamo notato un profilo audio unico, caratterizzato da prelinguale e rapido deterioramento delle soglie uditive alle frequenze >0,5 kHz in diversi adulti di famiglie non imparentate della popolazione dell'isola di Terranova. Il sequenziamento seriale mirato di Sanger dei probandi per gli alleli della sordità (n = 23) che abbiamo precedentemente identificato in questa popolazione fondatrice è risultato negativo. Il sequenziamento dell'intero esoma in quattro membri della famiglia più grande (R2010) ha identificato una variante CLDN14 (DFNB29) [c.488C >T; p. (Ala163Val)], probabile patogeno, ipoacusia neurosensoriale, autosomica recessiva. Anche se non associato a sordità o malattia, CLDN14 p. (Ala1 63Val) è stato precedentemente riportato come una variante di significato incerto (VUS). Il sequenziamento mirato di 169 probandi di sordità ha identificato un portatore omozigote e un eterozigote. Gli studi genealogici, il sequenziamento a cascata e l'analisi dell'aplotipo in quattro famiglie non imparentate hanno mostrato che tutti i soggetti con l'audioprofilo unico (n = 12) erano anche omozigoti per p. (Ala163Val) e condividevano un aplotipo associato a DFNB29 da 1,4 Mb sul cromosoma 21. Più significativamente, il sequenziamento di 175 controlli di popolazione ha rivelato che l'1% della popolazione è eterozigote per CLDN14 p. (Ala163Val), coerentemente con un importante effetto fondatore in Terranova. Il più giovane CLDN14 [c.488C>T; p. (Ala163Val)] l'omozigote ha superato lo screening neonatale e aveva soglie uditive normali fino a 3 anni di età, che poi si sono deteriorate fino a una perdita precipitosa >1 kHz durante la prima decade. Il nostro studio suggerisce che i test genetici potrebbero essere necessari per identificare i bambini a rischio in tempo per prevenire il linguaggio, il linguaggio e il ritardo dello sviluppo.
L'antiossidante MitoQ mirato ai mitocondri modula lo stress ossidativo, l'infiammazione e le interazioni leucociti-endotelio nei leucociti isolati da pazienti con diabete di tipo 2.Non è noto se gli antiossidanti mirati ai mitocondri come il mitochinone (MitoQ) possono modulare lo stress ossidativo e le interazioni leucociti-endotelio nei pazienti con diabete di tipo 2. Abbiamo mirato a valutare l'effetto benefico di MitoQ sui parametri dello stress ossidativo e sulle interazioni tra leucociti e endotelio nei leucociti dei pazienti con diabete di tipo 2. La popolazione dello studio era composta da 98 pazienti affetti da diabete di tipo 2 e 71 soggetti di controllo. Abbiamo valutato i parametri metabolici e antropometrici, la produzione di specie reattive dell'ossigeno mitocondriale (ROS), la glutatione perossidasi 1 (GPX-1), NFκB-p65, TNFα e le interazioni tra leucociti-endotelio. hanno mostrato peso, BMI, circonferenza della vita, SBP, DBP, glucosio, insulina, HOMA-IR, HbA1c, trigliceridi, hs-CRP e HDL-c più elevati rispetto ai controlli. la produzione di ROS ondriale è stata migliorata nei pazienti con T2D e diminuita da MitoQ. L'antiossidante ha anche aumentato i livelli di GPX-1 e la velocità di rotolamento del PMN e ha diminuito il flusso di rotolamento del PMN e l'adesione del PMN nei pazienti con T2D. NFκB-p65 e TNFa sono stati aumentati in T2D e sono stati entrambi ridotti dal trattamento con MitoQ. I nostri risultati supportano che l'antiossidante MitoQ ha un'azione antinfiammatoria e antiossidante nei leucociti dei pazienti con T2D diminuendo la produzione di ROS, le interazioni tra leucociti-endotelio e TNFα attraverso l'azione di NFκB. Questi dati suggeriscono che gli antiossidanti mirati ai mitocondri come MitoQ dovrebbero essere studiati come un nuovo mezzo per prevenire gli eventi cardiovascolari nei pazienti con diabete di tipo 2.
Prestazioni in declino degli atleti master: sagome della traiettoria dell'invecchiamento umano sano?L'analisi delle prestazioni dei record mondiali degli atleti master suggerisce un declino essenzialmente lineare con età fino all'ottava decade circa, dopo la quale il declino delle prestazioni accelera. Poiché questi record sono ottenuti da individui altamente qualificati, possono essere visti come il riflesso della diminuzione della capacità fisiologica integrativa che si verifica esclusivamente a causa dell'invecchiamento, non influenzata dagli effetti confondenti di inattività. Si può anche sostenere che questi profili prestazionali rispecchiano e forniscono uno spaccato della traiettoria della fisiologia del processo di invecchiamento umano. Qui proponiamo una teoria del set point che ipotizza che una data soglia di attività fisica sia necessaria per invecchiare in modo ottimale e per massimizzare il \'healthspan\'. L'esercizio a livelli inferiori al set point risulterà nell'invecchiamento contaminato dall'imprevedibile e effetti patologici dell'inattività. L'esercizio al di sopra di questa soglia stimola gli adattamenti verso la massimizzazione delle prestazioni atletiche, ma è improbabile che abbia ulteriori effetti benefici sulla salute. Quindi la diminuzione controllata e decennale delle prestazioni atletiche non dovrebbe essere vista come un processo patologico. Il processo di invecchiamento è separato e indipendente dai processi mediati dall'esercizio che mantengono o adattano la funzione fisiologica. Se la comprensione di questi meccanismi aiuterà anche a scoprire i meccanismi alla base del processo di invecchiamento stesso è discutibile. Tuttavia, qualsiasi modello che non tenga conto degli effetti dell'attività non descriverà adeguatamente il processo di invecchiamento intrinseco.
L'inibitore del BACE1 verubecestat (MK-8931) riduce la -amiloide del SNC in modelli animali e nei pazienti con malattia di Alzheimer.β-amiloide ( Si ritiene che i peptidi Aβ) siano coinvolti in modo critico nell'eziologia della malattia di Alzheimer (AD). L'enzima 1 (BACE1) precursore della proteina precursore dell'amiloide del sito β dell'aspartil proteasi è necessario per la produzione di Aβ e l'inibizione di BACE1 è quindi un bersaglio attraente per il trattamento dell'AD. Mostriamo che il verubecestat (MK-8931) è un inibitore BACE1 potente, selettivo e strutturalmente unico che riduce le concentrazioni plasmatiche, nel liquido cerebrospinale (CSF) e nel cervello di Ap40, Ap42 e sAPPβ (un diretto prodotto dell'attività enzimatica BACE1) dopo somministrazione acuta e cronica a ratti e scimmie. Il trattamento cronico di ratti e scimmie con verubecestat ha raggiunto esposizioni >40 volte superiori a quelle testate negli studi clinici su pazienti con AD, ma non ha suscitato molti degli effetti avversi precedentemente attribuito a BA Inibizione CE, come ridotta mielinizzazione nervosa, neurodegenerazione, alterata omeostasi del glucosio o epatotossicità. Ipopigmentazione del pelo è stata osservata nei conigli e nei topi, ma non nelle scimmie. Dosi singole e multiple sono state generalmente ben tollerate e hanno prodotto riduzioni di Ap40, Ap42 e sAPPβ nel liquido cerebrospinale sia di soggetti umani sani che di pazienti con AD. I dati umani erano adatti a un modello di percorso dell'amiloide che ha fornito informazioni sui pool di Aβ colpiti dall'inibizione di BACE1 e ha guidato la scelta delle dosi per i successivi studi clinici.
Effetto di un nuovo agente chemioterapico orale contenente una combinazione di trifluridina, tipiracil e il nuovo triplo inibitore dell'angiochinasi nintedanib, su xenotrapianti di cancro del colon-retto umano.Trifluridina /tipiracil (TFTD) è un farmaco combinato utilizzato per il trattamento del cancro del colon-retto metastatico ed era precedentemente noto come TAS-102. È una combinazione di due composti farmaceutici attivi, trifluridina, un analogo nucleosidico antineoplastico a base di timidina e tipiracil , che migliora la biodisponibilità della trifluridina in vivo. TFTD è utilizzato per il trattamento di pazienti con cancro del colon-retto avanzato o ricorrente non resecabile resistente alle terapie standard. Nel presente studio, gli effetti antitumorali della trifluridina in combinazione con nintedanib, un triplo orale Inibitore dell'angiochinasi, su linee cellulari di cancro del colon-retto umano sono stati studiati La citotossicità contro linee cellulari DLD-1, HT-29 e HCT116 è stata determinata dal cr metodo di colorazione del violetto istalico. La combinazione di trifluridina e nintedanib ha esercitato un effetto additivo sull'inibizione della crescita delle cellule DLD-1 e HT-29 e un effetto sub-additivo sulle cellule HCT116, come determinato dalle analisi dell'isobologramma. Successivamente, le linee cellulari di cancro del colon-retto umano sono state impiantate per via sottocutanea in topi nudi per consentire la valutazione degli effetti inibitori della crescita tumorale in vivo della terapia combinata con TFTD e nintedanib. TFTD (150 mg/kg/giorno) e/o nintedanib (40 mg/kg/giorno) sono stati somministrati per via orale ai topi due volte al giorno dal giorno 1 al giorno 14. L'inibizione della crescita del tumore con la terapia di combinazione era 61,5, 72,8, 67,6 e 67,5% rispettivamente per gli xenotrapianti DLD-1, DLD-1/5-FU, HT-29 e HCT116. Questo era significativamente (P<0.05) superiore agli effetti della monoterapia con TFTD o nintedanib. Questi risultati hanno dimostrato l'efficacia della combinazione di TFTD e nintedanib nel trattamento degli xenotrapianti di cancro del colon-retto. La concentrazione di trifluridina incorporata nel DNA nei tumori HT-29 e HCT116 è stata determinata mediante cromatografia liquida-spettrometria di massa tandem. I livelli di incorporazione dopo il trattamento con TFTD e nintedanib per 14 giorni consecutivi erano superiori a quelli associati al solo trattamento con TFTD. I risultati preclinici indicano che la terapia di combinazione con TFTD e nintedanib è un'opzione di trattamento promettente per il cancro del colon-retto.
Confronto dei meccanismi di regolazione di cinque ingredienti di gelso sulla secrezione di insulina sotto stress ossidativo.indotta da cellule MIN 6, in particolare DNJ, C3G e C3R, mentre RES e OXY hanno mostrato effetti modesti a basse dosi (12,5 μM). I meccanismi sono stati dimostrati nella via del segnale che dopo il trattamento con DNJ, C3G e C3R, le espressioni della glucochinasi (GK) erano up-regolate, portando all'accumulo intracellulare di ATP e la secrezione di insulina. Si sono anche legati al recettore del peptide-1 simile al glucagone (GLP-1R), hanno migliorato l'espressione del GLP-1R, dell'omeobox duodenale 1 (PDX-1) e hanno stimolato la secrezione di insulina. Inoltre, la produzione di ROS è stata inibita, seguito da un tasso di apoptosi decrescente, mentre RES e OXY hanno accelerato l'apoptosi ad alte dosi (50 μM). Questo lavoro ha esposto i potenziali meccanismi degli ingredienti del gelso sulla secrezione di insulina, indicando la potenziale applicazione nell'intervento contro l'iperglicemia.
Terapie nuove ed emergenti per l'infezione da Clostridium difficile.L'infezione da Clostridium difficile ha raggiunto un'elevata importanza data la sua prevalenza e il suo impatto sui pazienti e sulle istituzioni sanitarie. Molteplici nuove approcci alla prevenzione e al trattamento dell'infezione da C. difficile (CDI) sono in fase di sperimentazione clinica Bezlotoxumab è un anticorpo monoclonale contro la tossina B che ha completato con successo studi di fase III, dimostrando una significativa riduzione delle CDI ricorrenti quando somministrato con antibiotici standard di cura. Gli antibiotici in fase di sviluppo includono cadazolid e ridinilazolo, mentre la surotomicina ha avuto risultati deludenti in fase 3. Sono in fase di sviluppo diversi bioterapeutici vivi, tra cui versioni congelate e incapsulate del trapianto di microbiota fecale per migliorare la praticità del trattamento di pazienti con CDI ricorrente. , che mirano a migliorare la sicurezza, compresa un'azione microbica sospensione, RBX2660, e una complessa formulazione di spore, SER-109, sono passati a studi di fase II. Anche un ceppo di C. difficile non tossico si è dimostrato promettente per prevenire le CDI ricorrenti. Inoltre, tre vaccini per C. difficile sono passati a studi clinici di fase II/III. I diversi approcci al trattamento e alla prevenzione delle CDI offrono una sostanziale promessa che presto emergeranno nuove opzioni di trattamento, in particolare quelle che riducono il rischio di recidive.
Il saccarosio ritarda la senescenza e preserva i composti funzionali in Asparagus officinalis L.L'alto tasso metabolico delle asparagi raccolte (Asparagus officinalis L. ) causa un rapido deterioramento Per prolungare la durata di conservazione, abbiamo studiato l'effetto del trattamento con saccarosio sugli asparagi durante la conservazione. Le punte di asparagi sono state trattate con 3%, 5% e 10% di saccarosio e conservate a 2°C per 20 ore. La respirazione cellulare è diminuita, ma altri processi sono stati inalterati dal saccarosio esogeno. L'aspetto complessivo degli asparagi trattati con saccarosio al 3% e conservati a 2°C per 18 giorni è stato valutato come buono ed eccellente, a differenza di quello delle lance non trattate. Gli asparagi trattati con saccarosio hanno mantenuto la compattezza per 15 giorni, mentre non trattati le lance hanno perso compattezza e hanno mostrato un aumento del contenuto di pectina solubile in acqua durante la conservazione. I livelli di carboidrati erano anche più alti nei campioni trattati con saccarosio rispetto ai campioni di controllo. I livelli di trascrizione dei geni correlati alla parete cellulare, incluso l'endotransglico xiloglucano osylase (XET)1, XET2 e perossidasi (prx)1, prx2 e prx3 sono stati sovraregolati dal saccarosio. I livelli di cianidina 3-O-rutinoside e rutina sono aumentati immediatamente dopo l'aggiunta di saccarosio e sono rimasti elevati rispetto al controllo durante la conservazione. Pertanto, il saccarosio modula i componenti della parete cellulare degli asparagi e mantiene la funzionalità di composti importanti durante la conservazione, prolungando così efficacemente la durata di conservazione.
fattore di trascrizione BcBot6.putativo fattore di trascrizione è stato identificato come una proteina nucleare e il principale regolatore positivo della biosintesi dei BOT. Inoltre, il fenotipo del Il mutante ΔBcbot6 ha indicato che BcBot6 e quindi BOT sono superflui per lo sviluppo, la patogenicità e la risposta agli stress abiotici nel ceppo B. cinerea B05.10 Infine, i nostri dati hanno rivelato che B. pseudocinerea, che è anche polifago e vive in simpatia con B. . cinerea, non ha la capacità di produrre BOT. L'identificazione di BcBot6 come il principale regolatore della sintesi BOT è il primo passo verso una comprensione completa della rete di regolazione completa della sintesi BOT e del suo ruolo ecologico nel ciclo di vita di B. cinerea.
Farmaci emergenti per ridurre la proteina -amiloide anormale nei pazienti con malattia di Alzheimer.Farmaci attualmente disponibili contro la malattia di Alzheimer (AD) mirano al colinergico e neurotrasmissioni glutamatergiche senza alterare il processo patologico sottostante. I presunti farmaci modificanti la malattia sono in fase di sviluppo e prendono di mira il peptide β-amiloide (Aβ) e la proteina tau, i principali segni neuropatologici della malattia. Aree coperte: studi clinici di fase III su I farmaci Aβ per il trattamento dell'AD sono stati ricercati nei registri degli studi clinici degli Stati Uniti e dell'UE e nella letteratura medica fino a maggio 2016. Opinione di esperti: i farmaci in fase III di sviluppo clinico per l'AD includono un inibitore dell'enzima di scissione della β-secretasi (BACE) ( verubecestat), tre anticorpi monoclonali anti-Aβ (solanezumab, gantenerumab e aducanumab), un inibitore del recettore per i prodotti finali della glicazione avanzata (RAGE) (azeliragon) e la combinazione di sodio cromoglicato e ibuprofene (ALZT-OP1). Questi farmaci vengono principalmente testati in soggetti durante le prime fasi di AD o in soggetti in fase preclinica di AD familiare o anche in soggetti asintomatici ad alto rischio di sviluppare AD. La speranza è di intervenire nel processo patologico quando non è troppo tardi. Tuttavia, i precedenti fallimenti clinici con i farmaci anti-Aβ e la mancanza di una piena comprensione del ruolo fisiopatologico dell'Aβ nello sviluppo dell'AD, mettono i nuovi farmaci a rischio sostanziale di fallimento.
Fattori che influiscono sull'interesse degli studenti di medicina e del personale domestico nelle specialità legate al cervello.C'è una carenza nazionale di medici in specialità correlate al cervello (neurologia , neurochirurgia e psichiatria), con un minor numero di studenti che studiano in queste specialità. Questo studio ha esplorato i fattori socioeconomici ed esperienziali che hanno determinato l'interesse dei tirocinanti medici per le specialità correlate al cervello. Gli studenti di medicina e il personale domestico di una scuola di medicina dell'università statale hanno completato un 46 -item questionario inviato come sondaggio e-mail anonimo. Il tasso di risposta al sondaggio è stato del 22% (n=258). Ottantotto (34,1%) i tirocinanti erano interessati alle specialità relative al cervello. Esperienza precedente in neuroscienze (29,6%) e corsi di neuroscienze della scuola di medicina efficaci (23,9%) sono stati identificati come importanti da coloro che sono interessati alle specialità correlate al cervello, mentre "neurofobia" è stato segnalato dal 30% di coloro che non sono interessati. Il modello di regressione multivariata ha mostrato che colleg efficace Il corso di neuroscienze ha aumentato la probabilità di interesse per le specialità correlate al cervello (OR=2.28, 95% CI 1.22, 4.28). I fattori che hanno diminuito la probabilità includevano il possesso di un titolo professionale da parte dei genitori (OR=0.37, 95% CI 0.17, 0.80), reddito annuo personale> $ 50.000 (OR= 0,40, 0,18, 0,87) e livello di debito corrente ≥ $ 100.000 (O=0.33, 0.17, 0.64). La percentuale di tirocinanti interessati alle specialità correlate al cervello è diminuita dal 51,7% (studenti di medicina del primo anno) al 27% (studenti del quarto anno) e al 25,3% tra il personale domestico (χ(2) test di tendenza p=0.001). Fattori socioeconomici (debito personale attuale e reddito annuo) ed esperienziali (corso universitario di neuroscienze) influenzano l'interesse di un tirocinante medico per le specialità legate al cervello. L'orientamento professionale e un'esposizione migliore, migliore e precoce alle neuroscienze possono aiutare a mitigare la tendenza al calo dell'interesse per le specialità legate al cervello.
Interleuchine 17 e 10 in un campione di pazienti egiziani con sclerosi multipla recidivante-remittente.Le citochine contribuiscono in modo determinante alla distruzione immunitaria nella sclerosi multipla (SM) Valutazione delle citochine proinfiammatorie (IL-17A) e antinfiammatorie (IL-10) in pazienti con SM recidivante-remittente (RR) al momento della recidiva e durante la remissione. Uno studio caso-controllo comprendente 30 pazienti con SMRR e 15 controlli. sono stati reclutati dall'unità di ricerca Kasr Al-Ainy MS (KAMSU), Università del Cairo, Egitto. I livelli di IL-17A e IL-10 sono stati valutati nei sieri dei pazienti\', durante la recidiva e 30 giorni dopo IV metilprednisolone, e nei soggetti di controllo utilizzando test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA). IL-17 era più alto nei pazienti durante le fasi di recidiva e remissione rispetto ai controlli (P=0.001), mentre IL-10 era più alto nei pazienti durante la remissione ma normale durante la recidiva (P\ =0.01; 0,86 rispettivamente). IL-17 è aumentato durante le recidive (P=0.001) mentre IL-10 è aumentato durante le remissioni (P=0.028). Non sono state trovate correlazioni significative tra le interleuchine e l'età di esordio; durata della malattia, numero di recidive; o EDSS. I pazienti con SMRR possono avere uno squilibrio normativo tra le citochine sia pro che antinfiammatorie, che potrebbe essere un obiettivo per le strategie di trattamento piuttosto che concentrarsi su una singola citochina.
Le mutazioni di SGO2 e CLDN14 causano collettivamente la sindrome di Perrault coincidente.La sindrome di Perrault (PS) è una malattia geneticamente eterogenea caratterizzata da insufficienza ovarica primaria (POI) nelle femmine e ipoacusia neurosensoriale nei maschi e nelle femmine. In molti soggetti PS, non sono state trovate varianti causali nei cinque geni PS riportati. L'obiettivo di questo studio era identificare la causa genetica della PS in una famiglia consanguinea estesa con sei sordi Il sequenziamento dell'intero esoma (WES) è stato completato su quattro membri affetti di una grande famiglia e le varianti e la co-segregazione sono state confermate dal sequenziamento di Sanger. Tutti gli individui con problemi di udito, incluso il probando, sono omozigoti per una variante patogena di CLDN14, ma questo spiega solo la sordità. Il probando PS è anche omozigote per una variante frameshift (c.1453_1454delGA, p. (Glu485Lysfs*5)) nell'esone 7 di SGO2 che codifica shugoshin 2, che è la probabile causa del suo concordare affitto insufficienza ovarica. Nel topo, Sgol2a che codifica 2a simile allo shugoshin è necessario durante la meiosi in entrambi i sessi per mantenere l'integrità del complesso di coesione che lega i cromatidi fratelli. L'SGO2 umano non è stato precedentemente implicato in alcun disturbo, ma in questo caso di POI e forse altri, è un candidato per l'infertilità inspiegabile.
Basi strutturali dell'inibizione non competitiva dei recettori ionotropici del glutammato del sottotipo AMPA da parte di farmaci antiepilettici.La neurotrasmissione eccitatoria svolge un ruolo chiave nell'epilettogenesi. Di conseguenza, AMPA- I recettori del sottotipo ionotropico del glutammato, che mediano la maggior parte della neurotrasmissione eccitatoria e contribuiscono alla generazione e diffusione delle crisi epilettiche, sono emersi come bersagli promettenti per la terapia dell'epilessia. Gli inibitori del recettore AMPA più potenti e ben tollerati agiscono tramite un meccanismo non competitivo, ma molti di loro producono effetti collaterali negativi. La progettazione di farmaci migliori è ostacolata dalla mancanza di una comprensione strutturale dell'inibizione non competitiva. Qui, riportiamo le strutture cristalline del recettore GluA2 del sottotipo AMPA di ratto in complesso con tre inibitori non competitivi. Gli inibitori si legano a un nuovo legame sito, completamente conservato tra ratto e umano, all'interfaccia tra il canale ionico e i linker che lo collegano al ligand-bin domini. Proponiamo che gli inibitori stabilizzino lo stato chiuso del recettore AMPA agendo come cunei tra i segmenti transmembrana, prevenendo così i riarrangiamenti del gating necessari per l'apertura del canale ionico.
Mappatura del recettore della serotonina 5-HT1A dell'uistitì con una sonda PET agonista polarizzata 18F-F13714: confronto con un tracciante antagonista 18F-MPPF in stato di veglia e anestetizzato."F13714 marcato con F è una sonda per tomografia a emissione di positroni agonista distorta sviluppata di recente che si rivolge preferenzialmente a sottopopolazioni di recettori della serotonina 1A nel loro "stato attivo", ma il suo modello di marcatura del cervello in primati non umani non è stato descritto. Inoltre, un potenziale confusione nella traducibilità dei dati PET tra animali non umani e umani derivano dall'uso di anestetici che possono modificare i profili di legame dei recettori bersaglio. F-MPPF. Gli esperimenti su ciascun animale sono stati eseguiti sia in condizioni di coscienza che di anestesia con isoflurano. F- MPPF, con marcate differenze individuali e specifiche della regione in condizioni coscienti vs anestetizzate con isoflurano F-F13714, che può mirare preferibilmente a sottopopolazioni di recettori della serotonina 1A in specifici re del ioni di primati non umani come agonisti di parte.
MD1003 (biotina ad alte dosi) per il trattamento della sclerosi multipla progressiva: uno studio randomizzato, in doppio cieco, controllato con placebo.Trattamento con MD1003 (biotina ad alte dosi) ha mostrato risultati promettenti nella sclerosi multipla progressiva (SM) in uno studio pilota in aperto. Per confermare l'efficacia e la sicurezza di MD1003 nella sclerosi multipla progressiva in uno studio in doppio cieco, controllato con placebo. Pazienti (n = 154) con un punteggio EDSS (Expanded Disability Status Scale) al basale di 4,5-7 e l'evidenza di un peggioramento della malattia nei 2 anni precedenti sono stati randomizzati a MD1003 a 12 mesi (100 mg di biotina) o a placebo tre volte al giorno, seguiti da 12- mese MD1003 per tutti i pazienti. L'endpoint primario era la percentuale di pazienti con inversione della disabilità al mese 9, confermata al mese 12, definita come una diminuzione dell'EDSS di 1 punto (⩾0,5 per EDSS 6-7) o una diminuzione ⩾20% nel tempo di camminata a tempo di 25 piedi rispetto alla migliore linea di base tra le visite di screening o di randomizzazione. Un totale di 13 (12,6%) i pazienti trattati con MD1003 hanno raggiunto l'endpoint primario rispetto a nessuno dei pazienti trattati con placebo (p = 0,005). Il trattamento con MD1003 ha anche ridotto la progressione dell'EDSS e migliorato l'impressione clinica di cambiamento rispetto al placebo. L'efficacia è stata mantenuta durante il follow-up e il profilo di sicurezza di MD1003 era simile a quello del placebo. MD1003 ottiene un'inversione sostenuta della disabilità correlata alla SM in un sottogruppo di pazienti con SM progressiva ed è ben tollerato.
Modifica della superficie delle membrane di purificazione dell'acqua.Le membrane polimeriche sono un mezzo efficiente dal punto di vista energetico per purificare l'acqua, ma soffrono di incrostazioni durante la filtrazione. Modifica di la superficie della membrana è una via per mitigare l'incrostazione della membrana, poiché aiuta a mantenere elevati livelli di produttività dell'acqua. Qui, vengono esaminate una serie di tecniche comuni per la modifica della superficie della membrana, tra cui rivestimento superficiale, innesto e varie tecniche di trattamento come trattamento chimico, irradiazione UV e trattamento al plasma. Viene fornito anche il background storico sullo sviluppo della membrana e la modifica della superficie. Infine, la polidopamina, un materiale emergente che può essere facilmente depositato su un'ampia varietà di substrati, viene discusso nel contesto della modifica della membrana. Viene anche descritto un breve riassunto della chimica della polidopamina, in particolare per quanto riguarda lo sviluppo della membrana.
Trifluridine/Tipiracil: A Review in Metastatic Colorectal Cancer.Trifluridine/tipiracil (Lonsurf(®)) è un nuovo agente antimetabolita attivo per via orale composto da trifluridina, un analogo nucleosidico a base di timidina, e tipiracil, un potente inibitore della timidina fosforilasi. La trifluridina è incorporata nel DNA tramite fosforilazione, inibendo infine la proliferazione cellulare. Tipiracil aumenta l'esposizione sistemica di trifluridina quando co-somministrato. Trifluridina/tipiracil è stato recentemente approvato per il trattamento di pazienti adulti con cancro del colon-retto metastatico (mCRC) che sono refrattari o non sono considerati candidati per l'attuale chemioterapia standard e terapia biologica nell'UE e negli Stati Uniti e in CRC avanzato o ricorrente non resecabile in Giappone. -trifluridina/tipiracil quotidiano (35 mg/m(2) due volte al giorno nei giorni 1-5 e 8-12 di ciascun ciclo di 28 giorni) ha migliorato significativamente la sopravvivenza globale e la sopravvivenza libera da progressione sopravvivenza ed è stato associato a un tasso di controllo della malattia significativamente più elevato rispetto al placebo quando aggiunto alla migliore terapia di supporto nello studio multinazionale di fase III (RECOURSE) e in uno studio giapponese di fase II. Trifluridina/tipiracil è stato associato a un profilo di tollerabilità accettabile, con eventi avversi generalmente gestiti con riduzioni della dose, interruzioni temporanee del trattamento o somministrazione di fattore stimolante le colonie di granulociti. Gli eventi avversi di grado 3-4 più comuni (≥10%) sono stati anemia, neutropenia, trombocitopenia e leucopenia. In conclusione, trifluridina/tipiracil è un'utile opzione di trattamento aggiuntiva per la gestione dell'mCRC in pazienti che sono refrattari o non sono considerati candidati alle terapie attualmente disponibili.
Espressione omologa ed eterologa della E-(β)-cariofillene sintasi della vite (VvGwECar2).rispettivamente. Quindi, abbiamo sovraespresso il gene nel citoplasma di due specie vegetali, Arabidopsis thaliana e l'ospite nativo Vitis vinifera. In Arabidopsis l'enzima ha modificato il rilascio dello spazio di testa della pianta, mostrando una maggiore selettività per l'E-(β)-cariofillene, ma anche la produzione di tujopsene al posto del germacrene D. Complessivamente le piante hanno aumentato l'emissione di E-(β)-cariofillene nella raccolta dello spazio di testa di 8 volte rispetto alle piante di controllo Col-0. attività genica e quantità di sesquiterpeni, suggerendo un ruolo chiave da parte del meccanismo di regolazione delle piante.
La somministrazione a lungo termine del mitochinone mesilato antiossidante mirato ai mitocondri non riesce ad attenuare il danno ossidativo legato all'età o a salvare la perdita di massa muscolare e funzione associata all'invecchiamento del muscolo scheletrico. La disfunzione del muscolo scheletrico correlata all'età è la causa alla base della morbilità che colpisce fino alla metà della popolazione di età pari o superiore a 80 anni. Prove considerevoli indicano che il danno ossidativo e la disfunzione mitocondriale contribuiscono al fenotipo sarcopenico che si verifica con l'invecchiamento. Per esaminare questo, abbiamo somministrato il mitochinone mesilato antiossidante mirato ai mitocondri {[10-(4,5-dimetossi-2-metil-3,6-diosso-1,4-cicloesadien-1-il)decil] trifenilfosfonio; 100 μM } a topi C57BL/6 wild-type per 15 settimane (da 24 a 28 mesi di età) e ha studiato gli effetti sulla perdita di massa muscolare e funzione legata all'età, i cambiamenti nell'omeostasi redox e l'integrità e la funzione degli organelli mitocondriali. quel trattamento mesilato di mitochinone ent non è riuscito a prevenire la perdita dipendente dall'età della massa muscolare scheletrica associata all'atrofia delle miofibre o ad alterare una varietà di analisi della funzione muscolare in situ ed ex vivo, tra cui la massima forza tetanica isometrica, il declino della forza dopo un protocollo di affaticamento tetanico e forza specifica. Abbiamo anche trovato prove che la somministrazione di mitochinone mesilato a lungo termine non ha ridotto le specie reattive dell'ossigeno mitocondriale o indotto cambiamenti significativi nell'omeostasi redox muscolare, come valutato dai cambiamenti negli addotti proteici 4-idrossinonenali, nel contenuto di carbonile proteico, nella nitrazione proteica e nel danno al DNA determinato da il contenuto di 8-idrossideossiguanosina. Il potenziale, l'abbondanza e la respirazione della membrana mitocondriale valutati nelle miofibre permeabilizzate non sono stati significativamente alterati in risposta al trattamento con mitochinone mesilato. Collettivamente, questi risultati dimostrano che la somministrazione di mitochinone mesilato mirata ai mitocondri a lungo termine non è riuscita ad attenuare il danno ossidativo correlato all'età nel muscolo scheletrico di topi anziani o a fornire alcun effetto protettivo nel contesto dell'invecchiamento muscolare. -Sakellariou, GK, Pearson, T. , Lightfoot, AP, Nye, GA, Wells, N. , Giakoumaki, II, Griffiths, RD, McArdle, A. , Jackson, MJ La somministrazione a lungo termine del mitochinone mesilato antiossidante mirato ai mitocondri non riesce ad attenuare il danno ossidativo legato all'età o salvare la perdita di massa muscolare e funzione associata all'invecchiamento del muscolo scheletrico.
Il nuovo inibitore di c-Met capmatinib mitiga il danno epatico acuto della dietilnitrosamina nei topi.Il fattore di transizione mesenchimale-epiteliale del recettore tirosina chinasi (c-Met) si trova all'interfaccia tra la divisione cellulare controllata dell'organogenesi e la divisione cellulare incontrollata della carcinogenesi. Il contributo di c-Met alle fasi iniziali del danno epatico e dell'infiammazione non è ancora stato risolto. Qui, abbiamo studiato l'intervento farmacologico selettivo di c-Met da parte di capmatinib ( precedentemente noto come INC280) nel modello di danno epatico acuto della dietilnitrosamina (DEN) nei topi. L'inibizione di c-Met da parte di capmatinib ha ridotto l'aumento indotto da DEN delle citochine pro-infiammatorie TNF-α, IL-1β, IL-17A, IL-23 (p19/40) e IFN-γ, che correlavano bene con i marcatori sierici di danno epatocellulare (ALT, AST e LDH). Gli effetti protettivi posseduti da capmatinib erano principalmente mediati dall'inibizione dell'infiltrazione delle cellule infiammatorie nel fegato. Tuttavia, l'ematossilina- Le colorazioni immunoistochimiche con eosina e bax hanno rivelato che capmatinib (alla dose di 10, ma non di 5 mg/kg) ha aggravato rispettivamente il rigonfiamento epatocellulare indotto da DEN e l'apoptosi. Questi effetti erano concordanti con la sovraespressione epatocellulare del trasportatore di aminoacidi CD98. Tali effetti di capmatinib derivavano principalmente dall'esagerazione dell'elevazione del perossido lipidico mutageno 4-HNE insieme all'MDA che aumentava la proliferazione compensatoria indotta da DEN evidenziata dall'espressione di PCNA. In conclusione, l'inibizione dell'attivazione di c-Met da parte di capmatinib può fornire protezione contro il danno epatico, ma può innescare un aumento indesiderato del 4-HNE mutageno.
Progressione e risoluzione della malattia in modelli di roditori di infezione da Clostridium difficile e impatto di anticorpi antitossina e vancomicina.Clostridium difficile provoca infezioni del colon in pazienti suscettibili In particolare, la disbiosi intestinale indotta dal trattamento con antibiotici ad ampio spettro facilita la germinazione delle spore di C. difficile ingerite, l'espansione delle cellule vegetative e la produzione di tossine TcdA e TcdB che causano sintomi. L'attuale standard di cura per le infezioni da C. difficile (CDI ) consiste nella somministrazione di antibiotici come la vancomicina che colpiscono il batterio ma perpetuano anche la disbiosi intestinale, che spesso porta alla recidiva della malattia. Gli anticorpi antitossina monoclonali actoxumab (anti-TcdA) e bezlotoxumab (anti-TcdB) sono attualmente in fase di sviluppo per la prevenzione di CDI ricorrenti In questo studio, sono stati valutati gli effetti del trattamento con vancomicina o actoxumab/bezlotoxumab sulla progressione e la risoluzione della CDI in topi e prosciutti ster. I modelli di CDI nei roditori sono caratterizzati da una fase iniziale grave di malattia sintomatica, associata ad alti tassi di morbilità e mortalità; alto carico intestinale di C. difficile; e un microbiota intestinale disturbato. Questo è seguito negli animali sopravvissuti dal graduale recupero del microbiota intestinale, associato alla clearance del C. difficile e alla risoluzione dei sintomi della malattia nel tempo. Il trattamento con vancomicina previene inizialmente la malattia inibendo la crescita di C. difficile, ma ritarda anche il recupero del microbiota, portando alla ricaduta della malattia dopo l'interruzione della terapia. Al contrario, il trattamento actoxumab/bezlotoxumab non influisce sul carico di C. difficile, ma piuttosto previene la comparsa di sintomi tossicodipendenti durante la fase iniziale grave della malattia, prevenendo efficacemente la malattia fino al microbiota (la difesa naturale dell'organismo contro C. difficile ) si è completamente ripreso. Questi dati forniscono informazioni sul meccanismo di recidiva dopo la somministrazione di vancomicina e sul meccanismo di prevenzione delle recidive osservato clinicamente con actoxumab/bezlotoxumab.
Le proteine SEDS sono una famiglia diffusa di polimerasi della parete cellulare batterica.L'allungamento dei batteri a forma di bastoncino è mediato da un meccanismo dinamico di sintesi del peptidoglicano chiamato Complesso di bastoncini Qui riportiamo che, in Bacillus subtilis, questo complesso è funzionale in assenza di tutte le peptidoglicano polimerasi conosciute. Le cellule prive di questi enzimi sopravvivono inducendo una risposta allo stress dell'involucro che aumenta l'espressione di RodA, un componente principale ampiamente conservato del Complesso di bastoncini RodA è un membro della famiglia di proteine SEDS (forma, allungamento, divisione e sporulazione), che hanno ruoli essenziali ma mal definiti nella biogenesi della parete cellulare durante la crescita, la divisione e la sporulazione. Le nostre analisi genetiche e biochimiche indicano che SEDS proteine costituiscono una famiglia di polimerasi peptidoglicano. Pertanto, B. subtilis e probabilmente la maggior parte dei batteri utilizzano due classi distinte di polimerasi per sintetizzare il loro esoscheletro. I nostri risultati indicano che SEDS fami Le proteine sono sintasi della parete cellulare del nucleo del meccanismo di allungamento e divisione cellulare e rappresentano bersagli interessanti per lo sviluppo di antibiotici.
Basi genetiche e molecolari della biosintesi botrydial: collegamento dei geni codificanti il citocromo P450 agli intermedi biosintetici.Oltre duecento specie di piante possono essere infettate dal fungo fitopatogeno Botrytis cinerea in una serie di diverse condizioni ambientali. In risposta a queste, il fungo produce metaboliti terpenoidi e polichetidi unici. Parti delle piante possono essere uccise dalla fitotossina botrydial, consentendo al fungo di nutrirsi delle cellule morte. In questo documento, descriviamo le basi genetiche e molecolari della biosintesi botrydia e la funzione dei cinque geni del genoma di B. cinerea che insieme costituiscono il cluster di geni biosintetici botrydia. I geni BcBOT3 e BcBOT4, che codificano per due monoossigenasi del citocromo P450, sono stati inattivati da omologhe ricombinazione e hanno dimostrato di catalizzare idrossilazioni regio- e stereospecifiche ai carboni C-10 e C-4, rispettivamente, dello scheletro del presilphiperfolan-8β-olo. I mutanti null, bcbot3Δ e bcbot4Δ, hanno accumulato intermedi chiave nella biosintesi del botrydia consentendo di stabilire le basi genetiche e molecolari complete della via di biosintesi del botrydia. Inoltre, il mutante bcbot4Δ ha sovrapprodotto un numero significativo di polichetidi, che includevano, oltre alle note botcinine, botrylactones e cinbotolide A, due nuovi botrylactones e due nuovi cinbotolides, cinbotolides B e C.
Self-Reported Adherence to Trifluridine and Tipiracil Hydrochloride for Metastatic Colorectal Cancer: A Retrospective Cohort Study.Un nuovo agente orale costituito da trifluridina e tipiracil cloridrato (TFTD) è stato stabilito come trattamento di salvataggio per il cancro del colon-retto metastatico (mCRC). L'adesione al TFTD è fondamentale per mantenere effetti curativi appropriati. Questo studio ha cercato di chiarire l'adesione al TFTD e identificare i fattori candidati che deteriorano l'adesione presso il nostro istituto. A In questo studio è stato analizzato un totale di 50 pazienti con mCRC consecutivi che hanno ricevuto TFTD in monoterapia tra il 1 giugno 2014 e il 31 luglio 2015. L'aderenza al TFTD è stata verificata dai farmacisti utilizzando un diario di trattamento auto-riferito e intervistando i non aderenti presso un ambulatorio farmaceutico. il tasso di aderenza è stato definito come il numero di assunzioni del paziente per 20 assunzioni programmate in un ciclo Abbiamo esaminato retrospettivamente i fattori dal paziente elettronico t record associato a ridotta aderenza. Abbiamo misurato l'intensità della dose relativa, definita come l'intensità della dose divisa per la dose iniziale (ciascuna in milligrammi per metro quadrato a settimana). Le caratteristiche dei pazienti erano le seguenti: maschi/femmine, 20/30; età media, 61 anni (range, 34-83 anni); stato di prestazione 0/1, 37/13. L'intensità della dose relativa mediana di TFTD è stata del 91,0%. I tassi di aderenza sono stati del 95,0% per il primo ciclo di TFTD, del 97,3% per il secondo ciclo, del 98,0% per il terzo ciclo e del 98,2% per il quarto ciclo. I fattori associati a una deteriorata aderenza al TFTD sono stati nausea/vomito/diminuzione dell'appetito (27,1%, 23 casi), dolore (25,9%, 22 casi), neutropenia (11,8%, 10 casi) e mancata dose (4,7%, 4 casi). L'aumento della non aderenza al TFTD era associato al performance status 1 dell'Eastern Cooperative Oncology Group, mentre l'aumento dell'aderenza al TFTD nel primo ciclo era associato a regimi precedenti ≥4. L'elevata frequenza di disturbi gastrointestinali correlati al trattamento è il principale fattore che influenza l'aderenza al TFTD. La terapia intensiva di supporto nella gestione di questi sintomi potrebbe aiutare un'adeguata aderenza al TFTD nei pazienti con mCRC.
La tetraidroberberrubina attenua il danno polmonare acuto indotto dai lipopolisaccaridi mediante la riduzione delle vie di segnalazione di MAPK, AKT e NF-κB.Danno polmonare acuto (ALI) è una sindrome pericolosa per la vita caratterizzata da un'eccessiva infiammazione polmonare e aumento della permeabilità microvascolare, che causa un'elevata mortalità in tutto il mondo. Qui, abbiamo studiato l'effetto protettivo della tetraidroberberrubina (THBru), un derivato della berberina, su un modello murino di lipopolisaccaride (LPS danno polmonare acuto indotto da ) che è stato stabilito nei nostri studi precedenti. I risultati hanno mostrato che una singola somministrazione orale di THBru ha ridotto significativamente il rapporto peso umido/peso secco (W/D) polmonare a dosi di 2, 10 e 50 mg/kg somministrate 1 ora prima del challenge con LPS (30 mg/kg, iniezione endovenosa). Anche i cambiamenti istopatologici, come edema polmonare, infiltrazione di cellule infiammatorie e coagulazione, sono stati attenuati dal THBru. Inoltre, il THBru ha notevolmente ridotto il totale conta cellulare, proteine totali e contenuto di nitrati/nitriti nel liquido di lavaggio broncoalveolare (BALF), hanno ridotto significativamente il fattore di necrosi tumorale-α (TNF-α) e il contenuto di nitrati/nitriti nel plasma e hanno ridotto l'attività della mieloperossidasi (MPO) nel polmone tessuti. Inoltre, THBru (10μM) ha ridotto significativamente il contenuto di TNF-α e ossido nitrico (NO) nelle cellule THP-1 indotte da LPS in vitro. Inoltre, THBru ha significativamente soppresso l'attivazione delle MAPK JNK e p38, AKT e della subunità NF-κB p65 nelle cellule THP-1 indotte da LPS. Questi risultati confermano che il THBru attenua il danno polmonare acuto indotto da LPS inibendo il rilascio di citochine infiammatorie e sopprimendo l'attivazione di MAPK, AKT e vie di segnalazione NF-κB, il che lo implica come potenziale agente terapeutico per l'ALI o la sepsi.
Estratti da plastrum testudinis invertire l'osteoporosi spinale indotta da glucocorticoidi di ratti mirando a marcatori osteoblastici e osteoclastici.Estratti da plastrum testudinis (PTE), un importante medicina tradizionale cinese, hanno dimostrato la promozione della funzione osteoblastica in vitro. Questo studio mira a indagare l'effetto protettivo della PTE sull'osteoporosi indotta da glucocorticoidi (GIOP) in vivo e analizzare i bersagli terapeutici della PTE su GIOP. I ratti SD sono stati assegnati in modo casuale a due esperimenti: esperimenti preventivi e terapeutici, in cui i ratti hanno ricevuto rispettivamente PTE orale contemporaneamente all'iniezione di glucocorticoidi o dopo iniezione di glucocorticoidi che induce osteoporosi. Sono stati valutati BMD, microarchitettura, biomeccanica, marcatori del metabolismo osseo e istomorfologia. mRNA e espressione proteica di OPG, Runx2 , CTSK e MMP9 sono stati esaminati. I risultati hanno mostrato che la qualità dell'osso e la quantità dell'osso erano significativamente aumentate dalla PTE. la misurazione ha mostrato trabecolari ossei più spessi e più densi e più osteoblasti e meno osteoclasti nel gruppo di intervento PTE. L'espressione dell'mRNA di OPG era significativamente sovraregolata mentre l'espressione di CTSK era significativamente sottoregolata in diversi gruppi di intervento PTE. Immunocolorazione più forte per Runx2 e immunocolorazione più debole per CTSK sono stati osservati in gruppi di intervento PTE. Ciò ha dimostrato che la PTE può invertire la GIOP nella prevenzione e nella gestione mirando a OPG, Runx2 e CTSK nei livelli di mRNA e proteine.
Specie di frutti selvatici di Prunus come ricca fonte di composti bioattivi.Zuccheri, acidi organici, carotenoidi, tocoferoli, clorofille e composti fenolici sono stati quantificati in frutto di 4 specie di Prunus selvatiche (ciliegio selvatico, ciliegio di uccello, prugnolo e ciliegio mahaleb) utilizzando HPLC-DAD-MSn. Nel Prunus selvatico, i principali zuccheri erano glucosio e fruttosio, mentre gli acidi malico e citrico dominavano tra gli acidi organici. le classi più abbondanti di composti fenolici nelle specie di frutta analizzate erano antociani, flavonoli, derivati degli acidi cinnamici e flavanoli. Due gruppi principali di antociani misurati nei frutti di Prunus erano cianidin-3-rutinoside e cianidin-3-glucoside. I flavonoidi erano rappresentati da 19 derivati della quercetina, 10 derivati del kaempferol e 2 derivati dell'isoramnetina. Il contenuto totale di flavonoli più alto è stato misurato nella ciliegia mahaleb e nell'amarena, seguiti da prugnolo e ciliegio selvatico. Il contenuto fenolico totale varia d da 2373 (ciliegia selvatica) a 11053 mg di GAE per kg (ciliegia di uccello) e potere antiossidante riducente ferrico attività antiossidante da 7,26 a 31,54 mM di trolox equivalenti per kg di frutta.
Ruoli di UGT, P450 e microbiota intestinale nel metabolismo di Epacadostat negli esseri umani.Epacadostat (EPA, INCB024360) è il primo in- farmaco sperimentale di classe, attivo per via orale, che ha come bersaglio l'enzima indoleamina 2,3-diossigenasi 1 (IDO1). Negli studi di fase I, l'EPA ha dimostrato un'attività clinica promettente se usato in combinazione con i modulatori del checkpoint. Quando il metabolismo dell'EPA è stato studiato negli esseri umani, sono stati rilevati e caratterizzati tre principali metaboliti plasmatici circolanti inattivi per IDO1: M9, un O-glucuronide diretto dell'EPA, M11, un'amidina e M12, M11 N-dealchilato. La glucuronidazione dell'EPA per formare M9 è la via metabolica dominante, e in vitro, questo metabolita è formato da UGT1A9. Tuttavia, quantità trascurabili di M11 e M12 sono state rilevate quando l'EPA è stato incubato con un pannello di microsomi umani da più tessuti, epatociti, citocromo umano ricombinante P450 (P450) ed enzimatico non P450 data la natura riduttiva di M11 formazione e l'incapacità di definire la sua fonte, è stato studiato il ruolo del microbiota intestinale. L'analisi del plasma di topi trattati con EPA dopo il pretrattamento con antibiotico (ciprofloxacina) per inibire i batteri intestinali o 1-aminobenzotriazolo (ABT) per inibire sistemicamente i P450 ha dimostrato che il microbiota intestinale è responsabile della formazione di M11. Le incubazioni di EPA nelle feci umane hanno confermato il ruolo dei batteri intestinali nella formazione di M11. Inoltre, le incubazioni di M11 con P450 ricombinanti hanno mostrato che M12 si forma tramite N-dealchilazione di M11 da parte di CYP3A4, CYP2C19 e CYP1A2. Pertanto, nell'uomo sono stati caratterizzati tre principali metaboliti plasmatici dell'EPA: due metaboliti primari, M9 e M11, formati direttamente dall'EPA tramite UGT1A9 e microbiota intestinale, rispettivamente, e M12 formato come metabolita secondario tramite P450 da M11.
Connettoma incrociato bastoncello-cono di cellule bipolari di mammifero.La base della soppressione incrociata tra i canali bastoncellari e conici è stata a lungo un enigma. Usare il coniglio connettoma retinico RC1, mostriamo che tutte le classi di cellule bipolari a cono (BC) inibiscono i BC a bastoncello tramite motivi di cellule amacrine (AC) (C1-6); che tutte le classi di BC a cono sono a loro volta inibite da motivi AC (R1-5, R25) guidati da BC a bastoncino Un motivo AC simmetrico sparso (CR) è presinaptico e postsinaptico sia per BC a cono che a bastoncello I BC cono ON di tutte le classi determinano l'inibizione dei BC a bastoncello tramite il motivo C1 ad ampio campo di CA GABAergici (γAC) e il motivo C2 a campo stretto Glicinergici ON AC (GAC). Ogni BC a bastoncino riceve ≈10 sinapsi AC crossover e ogni BC cono ON può mirare a ≈10 o più BC a bastoncello tramite processi AC separati. I BC cono OFF mediano l'inibizione monosinaptica dei BC a bastoncello tramite il motivo C3 guidato da OFF γAC e GAC e inibizione disinaptica tramite i motivi C4 e C5 guidati rispettivamente da γAC a campo largo OFF e GAC a campo stretto. tifs C4 e C5 formano aloni di 60-100 sinapsi inibitorie sui dendriti prossimali di AI γAC. I BC dell'asta inibiscono le matrici circostanti dei BC del cono attraverso le reti AII GAC che accedono alle patch del BC del cono ON e OFF tramite i motivi R1, R2, R4, R5 e un motivo R3 ON AC unico che raccoglie gli input del BC dell'asta e prende di mira i BC del cono ON. Le sinapsi crossover per i motivi C1, C4, C5 e R3 sono 3-4 volte più grandi delle tipiche sinapsi di feedback, il che potrebbe essere una firma per gli interruttori sinaptici che prendono tutti. J. Comp. neurolo. 527:87-116, 2019.
Determinazione di epacadostat, un nuovo inibitore IDO1 nel plasma murino mediante LC-MS/MS e sua applicazione a uno studio farmacocinetico sui topi.colonna utilizzando un gradiente binario utilizzando la fase mobile A (acetonitrile) e B (acido formico allo 0,2% in acqua) a una velocità di flusso di 0,90 µl/min. L'eluizione di epacadostat e IS si è verificata rispettivamente a ~ 2,41 e 2,51 µm. Il tempo di esecuzione cromatografico totale era di 3,2 min. È stata stabilita una funzione di risposta lineare nell'intervallo di concentrazione di 1,07-533 ng/mL. L'accuratezza e la precisione intra e intergiornaliera erano rispettivamente nell'intervallo di 1,81-12.9 e 3,80-11,1%. è stato applicato a uno studio farmacocinetico sui topi.
Separazione mediante cromatografia liquida del profarmaco chirale eslicarbazepina acetato e dei suoi principali metaboliti in modalità organica polare. Applicazione alla loro analisi dopo metabolismo in vitro.A LC è stato sviluppato un metodo che utilizza una fase stazionaria chirale (CSP) con tris (3-cloro-4-metilfenilcarbammato) di cellulosa come selettore chirale in modalità organica polare (POM) per la separazione del profarmaco chirale di classe II del sistema di classificazione biofarmaceutica (BCS) eslicarbazepina acetato (ESL) e i suoi principali metaboliti, vale a dire eslicarbazepina, il suo antipodo ottico, (R)-licarbazepina e l'oxcarbazepina achirale (OXC). La percentuale di metanolo (MeOH) nella fase mobile contenente acetonitrile (ACN) come solvente principale è stata trovato per influenzare significativamente la ritenzione e la risoluzione dell'analita. È stata osservata un'inversione dell'ordine di eluizione di OXC e (R)-licarbazepina, a seconda della percentuale di MeOH nella fase mobile. La fase mobile ottimizzata consisteva in ACN/MeOH/ac acetico id/dietilammina (95/5/0.2/0.07; v/v/v/v). Il potenziale di questo metodo LC chemio ed enantioselettivo combinato con l'estrazione in fase solida (SPE) è stato quindi valutato per studi sul metabolismo in vitro utilizzando l'ESL come caso modello. Solo l'eslicarbazepina è stata rilevata dopo l'incubazione di ESL nei sistemi di microsomi epatici umani.
I topi knockout Brn3a e Brn3b mostrano una struttura fine della retina invariata nonostante le principali alterazioni morfologiche e numeriche delle cellule gangliari.Cellule gangliari (GC), l'output retinico neuroni, ricevono input sinaptici dalle cellule bipolari e amacrine nello strato plessiforme interno (IPL) e inviano informazioni ai nuclei del cervello attraverso il nervo ottico. Anche se i GC costituiscono meno dell'1% delle cellule retiniche totali, si verificano in numerosi tipi e sono i primi neuroni si sono formati durante lo sviluppo della retina. Utilizzando topi mutanti Brn3a e Brn3b in cui il gene della fosfatasi alcalina è stato inserito (Badea et al. [Neuron] 2009;61:852-864; Badea e Nathans [Vision Res] 2011;51 :269-279), abbiamo studiato gli effetti generali dopo la rimozione del gene sul neuropilo retinico insieme alle conseguenze del mancato sviluppo di un gran numero di GC sui restanti neuroni retinici della stessa classe. Abbiamo analizzato la morfologia, il numero e architettura di vari neu i tipi ronali presinaptici ai GC, alla ricerca di cambiamenti secondari al decremento del numero dei loro partner postsinaptici, nonché della morfologia e distribuzione degli astrociti retinici, per la loro forte relazione topografica con i GC. Abbiamo scoperto che, nonostante le perdite di GC, l'organizzazione della retina nei topi null Brn3 è notevolmente simile a quella dei controlli wild-type. J. Comp. neurolo. 527:187-211, 2019.
Le cellule amacrine accoppiate alle cellule gangliari tramite giunzioni gap sono altamente vulnerabili nelle retine di topi glaucomatosi.Abbiamo determinato se l'integrità strutturale e funzionale delle cellule amacrine ( ACs), la più grande coorte di neuroni nella retina dei mammiferi, sono affetti da glaucoma. L'iniezione intraoculare di microsfere è stata effettuata negli occhi di topo per elevare la pressione intraoculare come modello di glaucoma sperimentale. Sono stati utilizzati marcatori immunocitochimici specifici per identificare AC e sfollati (d )ACs rispettivamente negli strati nucleari interni e delle cellule gangliari, e per distinguerle dalle cellule gangliari retiniche (RGC). Le cellule immunoreattive (IR) della calretinina e dell'acido γ-aminobutirrico (GABA) erano altamente vulnerabili al danno glaucomatoso, considerando che i sottotipi AC colina acetiltransferasi (ChAT)-positivi e glicinergici non sono stati interessati. La perdita di AC è iniziata 4 settimane dopo l'iniezione iniziale di microsfere, corrispondente al decorso temporale della perdita di RGC. dei potenziali oscillatori dell'elettroretinogramma (ERG) e delle risposte di soglia scotopica, che riflettono l'attività di AC e RGC, sono stati significativamente attenuati negli occhi glaucomatosi seguendo un andamento temporale che corrispondeva a quello della perdita di AC e RGC. Inoltre, abbiamo scoperto che erano gli AC accoppiati agli RGC tramite giunzioni gap che si perdevano nel glaucoma, mentre gli AC disaccoppiati erano in gran parte inalterati. I nostri risultati suggeriscono che la perdita di AC nel glaucoma si verifica secondariamente alla morte di RGC attraverso l'effetto spettatore mediato dalla giunzione gap. J. Comp. neurolo. 527:159-173, 2019.
Valutazione di marcatori molecolari e metodi analitici che documentano la presenza di gas mostarda e agenti di guerra all'arsenico nel suolo.Gli agenti di guerra chimica (CWA) sono un classe di molecole estremamente tossica ampiamente prodotta in molti paesi industrializzati per decenni, questi composti contenevano frequentemente arsenico Gli impianti dove sono stati prodotti i CWA o gli impianti dove sono stati smilitarizzati dopo la seconda guerra mondiale con tecniche inaccettabili possono rappresentare un grave problema ambientale Gli standard CWA sono difficili da trovare sul mercato, quindi nel lavoro attuale è stato proposto un metodo di valutazione ambientale basato su marcatori. Trifenilarsina, ossido di fenilarsina e tiodiglicole sono stati selezionati come marcatori. Sono stati proposti tre metodi analitici affidabili basati sulla gascromatografia e sul rilevamento di massa e testati per l'analisi quantitativa dei marcatori Le prestazioni dei metodi sono state valutate testando incertezza, linearità, limiti di recupero e rilevamento e anche confrontare i limiti di rilevamento con i limiti di esposizione dei CWA di riferimento. I metodi di valutazione proposti sono stati applicati a un caso di studio di un ex impianto industriale situato in un'area caratterizzata da un elevato background di arsenico minerale.
La proteomica quantitativa rivela il meccanismo molecolare della gamabufotalina e la sua potenziale inibizione su Hsp90 nel cancro del polmone.La gamabufotalin (CS-6) è un importante bufadienolide di Chansu , che mostra una stabilità metabolica desiderabile e un effetto meno negativo nella terapia del cancro. Il trattamento con CS-6 ha inibito la proliferazione di NSCLC in un intervallo nanomolare. E CS-6 potrebbe indurre l'arresto del ciclo cellulare G2 / M e l'apoptosi nelle cellule A549. Tuttavia, la sua molecola Il meccanismo dell'attività antitumorale rimane poco compreso. Abbiamo impiegato un approccio di proteomica quantitativa per identificare i potenziali bersagli cellulari di CS-6 e abbiamo trovato 38 possibili proteine correlate al bersaglio. Tra queste, 31 proteine erano strettamente correlate nella rete di interazione proteina-proteina. Uno dei nodi regolatori nei percorsi chiave era occupato da Hsp90. L'attracco molecolare ha rivelato che CS-6 interagiva con i siti di legame dell'ATP di Hsp90. Inoltre, CS-6 inibiva la funzione di chaperone di Hsp90 e riduceva l'espres sione di proteine client Hsp90-dipendenti. Inoltre, CS-6 ha ridotto notevolmente il livello proteico di Hsp90 nei tessuti tumorali dei topi xenotrapiantati. Presi insieme, i nostri risultati suggeriscono che CS-6 potrebbe essere un nuovo inibitore di Hsp90 ed è stata costruita la possibile rete associata alle proteine correlate al bersaglio CS-6, che ha fornito prove sperimentali per il valore preclinico dell'utilizzo di CS-6 come efficace agente antitumorale nel trattamento del NSCLC.
Sintesi semplice di sakuranetina e selinone tramite un intermedio comune, utilizzando la regioselettività complementare nella deacetilazione del triacetato di naringenina.Sakuranetina e selinone sono stati sintetizzati con successo utilizzando il deacetilazione regioselettiva del naringenina triacetato. La deacetilazione di quest'ultimo a C-7 con imidazolo in 1,4-diossano a 40°C ha fornito il corrispondente diacetato con una resa dell'80%. Metilazione del gruppo idrossi libero ottenuto e successiva rimozione dei restanti due acetile gruppi hanno dato sakuranetin, che era stato precedentemente isolato come fitoalessina contro il fungo della malattia blastica del riso, Pyricularia oryzae, con una resa complessiva del 71%. Lo stesso intermedio, naringenina triacetato, è stato sottoposto a transesterificazione con 2-propanolo in tetraidrofurano, catalizzato da Candida antarctica lipasi B È stata osservata una preferenza regioselettiva contrastante per la deacetilazione C-4\', dando un diacetato isomerico con una resa dell'82%. Il gruppo idrossi libero in condizioni di Mitsunobu e la successiva deprotezione hanno fornito selinone, che era stato precedentemente isolato da Monotes engleri e mostra attività antimicotica contro Candida albicans, con una resa complessiva del 55%.
Un cluster di geni per la biosintesi degli antibiotici della famiglia delle moenomicine nel genoma del produttore di teicoplanina Actinoplanes teichomyceticus.Le moenomicine sono antibiotici fosfoglicolipidi noti per la loro estrema potenza, modalità d'azione unica e comprovata esperienza nell'alimentazione animale senza selezione per la microflora resistente. C'è un vivo interesse nella manipolazione delle strutture delle moenomicine al fine di comprendere meglio le loro relazioni struttura-attività e generare analoghi migliorati. Solo due quasi identici I cluster di geni biosintetici della moenomicina sono noti, limitando la nostra conoscenza dell'evoluzione dei percorsi della moenomicina e la nostra capacità di diversificarli geneticamente. Qui, riportiamo un nuovo cluster di geni (tchm) che dirige la produzione del fosfoglicolipide teicomicina in Actinoplanes teichomyceticus. La sua architettura genetica complessiva è significativamente diverso da quello dei cluster di geni di biosintesi della moenomicina (moe) di Streptomy ces ghanaensis e Streptomyces clavuligerus, con riarrangiamenti genici multipli e due nuovi geni strutturali. Il coinvolgimento del cluster tchm nella biosintesi della teicomicina è stato confermato tramite la co-espressione eterologa dei geni amidotransferasi tchmH5 e moe. Il nostro lavoro pone le basi per un'ulteriore ingegneria delle moenomicine e per indagini più approfondite sull'evoluzione di questo affascinante percorso biosintetico.
Tricoteceni e aspinolidi prodotti da Trichoderma arundinaceum regolano l'espressione dei geni di Botrytis cinerea coinvolti nella virulenza e nella crescita.Trichoderma arundinaceum (Ta37) e Botrytis cinerea (B05 .10) producono rispettivamente i sesquiterpenoidi harzianum A (HA) e botrydial (BOT), TaΔTri5, un mutante non produttore di HA, produce alti livelli dei composti polichetidici aspinolidi (Asp) B e C. Abbiamo analizzato il ruolo di HA e Asp nell'interazione B. cinerea-T. arundinaceum, compresi i cambiamenti nella produzione di BOT, nonché i cambiamenti trascrittomici dei geni BcBOT coinvolti nella biosintesi dei BOT, e anche dei geni associati alla virulenza e alla biosintesi dell'ergosterolo. l'espressione del BcBOT e di tutti i geni di virulenza analizzati quando B. cinerea è stato coltivato da solo, tuttavia è stata osservata una diminuzione della quantità di BOT e una down-regulation dell'espressione del gene BcBOT nella zona di interazione di B05.10-Ta37 culture duali, rispetto a TaΔTri5. Pertanto, il confronto con T. arundinaceum si traduce in una sovraregolazione della maggior parte dei geni di B. cinerea coinvolti nella virulenza, tuttavia la presenza di metaboliti secondari di T. arundinaceum, HA e AspC, agiscono separatamente e insieme per sottoregolare il B. cinerea analizzati. Il presente lavoro sottolinea l'esistenza di una cross-regolazione chimica tra B. cinerea e T. arundinaceum e contribuisce a comprendere come un fungo di biocontrollo e la sua preda interagiscono tra loro.
Imaging dell'impatto della ciclosporina A e del dipiridamolo sulla funzione della glicoproteina P (ABCB1) alla barriera ematoencefalica: A [(11)C]-N-desmetil-loperamide Studio PET su primati non umani.La ciclosporina A (CsA) e il dipiridamolo (DPy) sono potenti inibitori della glicoproteina P (P-gp; ABCB1) in vitro. La loro efficacia nell'inibire la P-gp a livello barriera emato-encefalica (BBB) è difficile da prevedere. Sono necessari inibitori della P-gp efficienti e prontamente disponibili (cioè commercializzati) come sonde per studiare il ruolo della P-gp nella BBB umana. In questo studio, l'inibizione della P-gp la potenza alla BBB di dosi terapeutiche di CsA o DPy è stata valutata nei babbuini utilizzando l'imaging con tomografia a emissione di positroni (PET) con [(11)C]-N-desmetil-loperamide ([(11)C]dLop), un P- radiomarcato gp substrato. La preparazione di dLop come standard autentico e [(11)C]dLop come radiotracciante sono stati rivisitati in modo da migliorare i loro rendimenti produttivi. [(11)C]dLop L'imaging PET è stato eseguito in assenza (n= 3, condizione basale) e la presenza di CsA (15 mg/kg/h i. v. , n=3). Tre animali sono stati iniettati con i. v. DPy a 0,56 o 0,96 o 2 mg/kg (n=1), corrispondenti rispettivamente alla dose abituale, massima e doppia rispetto alla dose massima nei pazienti, somministrati immediatamente prima della PET. La cinetica cerebrale di [(11)C]dLop, così come la cinetica del [(11)C]dLop e i radiometaboliti nel plasma arterioso sono stati misurati per calcolare l'area [(11)C]dLop sotto la curva tempo-attività da 10 a 30 minuti nel cervello (AUCbrain) e nel plasma (AUCplasma). [(11)C]dLop assorbimento cerebrale è stato descritto da AUCR=AUCbrain/AUCplasma. CsA e DPy non hanno influenzato in modo misurabile la cinetica e il metabolismo plasmatici di [(11)C]dLop. L'AUCR basale (0,85±0,29) è stato notevolmente migliorato in presenza di CsA (AUCR=10,8±3,6). L'iniezione della dose farmacologica di DPy non ha aumentato la distribuzione del [(11)C]dLop nel cervello con AUCR pari a 1,2, 0,9 e 1,1 dopo la somministrazione di dosi rispettivamente di 0,56, 0,96 e 2 mg/kg di DPy. Abbiamo utilizzato l'imaging PET [(11)C]dLop nei babbuini, un modello in vivo rilevante della funzione della P-gp alla BBB, per mostrare la potenza di inibizione della P-gp della dose terapeutica CsA. Nonostante la potenza di inibizione della P-gp in vitro, è improbabile che le dosi abituali di DPy inibiscano la funzione della P-gp alla BBB.
Intervista ad Alfredo Falcone e Lisa Salvatore: RECOURSE e trifluridina/tipiracil nel cancro del colon-retto metastatico.Il professor Alfredo Falcone e la dottoressa Lisa Salvatore parlano con Roshaine Gunawardana, Managing Commissioning Editor: il Professor Alfredo Falcone è il Direttore del Dipartimento di Oncologia e della Scuola di Specializzazione presso l'Ospedale Universitario di Pisa, Italia, si è formato a Pisa e Genova, Italia, e ha ricoperto importanti posizioni in oncologia italiana dal 2000. Attualmente ha più di 300 pubblicazioni, tra cui articoli su riviste internazionali e nazionali peer-reviewed, capitoli di libri e più di 600textdi presentazioni a conferenze internazionali e nazionali. La maggior parte dei suoi lavori riguarda la ricerca clinica e traslazionale, con un focus particolare sul cancro colorettale metastatico. La Dott. ssa Lisa Salvatore è medico oncologo presso il Dipartimento di Ricerca Traslazionale e Nuove Tecnologie in Medicina e Chirurgia presso il e Università di Pisa. È stata autrice di circa 40 pubblicazioni nelle principali pubblicazioni peer-reviewed e ha effettuato numerose presentazioni a convegni nazionali e internazionali. Il suo interesse principale è focalizzato sulla ricerca clinica e traslazionale nel cancro del colon-retto metastatico.
Trattamento con simtuzumab della fibrosi epatica avanzata negli adulti con infezione da HIV e HCV: risultati di uno studio di sicurezza in aperto di 6 mesi.Danno epatico cronico può provocare fibrosi che può progredire nel corso degli anni fino alla malattia epatica allo stadio terminale. La terapia antifibrotica più efficace è il trattamento della malattia sottostante, tuttavia quando non è possibile, sono necessari interventi per invertire o rallentare la progressione della fibrosi. Lo scopo di questo studio sia per studiare la sicurezza e la tollerabilità di simtuzumab, un anticorpo monoclonale diretto contro lysyl ossidasi-like 2 (LOXL2) enzima, in soggetti con virus dell'epatite C (HCV), il virus dell'immunodeficienza umana (HIV), o HCV-HIV co-infezione e malattia epatica avanzata Diciotto soggetti con fibrosi epatica avanzata hanno ricevuto simtuzumab 700 mg per via endovenosa ogni 2 settimane per 22 settimane Durante lo screening e alla fine del trattamento sono state eseguite biopsie epatiche transgiugulari per misurare il gradiente di pressione venosa epatica (HVPG) e per stadiare i fibros è. Il trattamento è stato ben tollerato senza interruzioni dovute a eventi avversi. Non sono stati osservati cambiamenti significativi nell'HVPG o nel punteggio della fibrosi della biopsia epatica dopo il trattamento. La profilazione esplorativa trascrizionale e proteica utilizzando biopsia epatica pre e post-trattamento accoppiata e campioni di siero ha suggerito un aumento della regolazione delle vie di TGF-β3 e IL-10 con il trattamento. In questo studio clinico pilota in aperto, il trattamento con simtuzumab è stato ben tollerato in soggetti con infezione da HCV e HIV con malattia epatica avanzata. Putativo modulazione delle vie di TGF-p3 e IL-10 nel corso simtuzumab indagine meriti di trattamento in studi futuri.
Uno studio farmacocinetico che confronta eslicarbazepina acetato somministrata per via orale come compressa schiacciata o intatta in volontari sani.La bioequivalenza relativa di eslicarbazepina acetato intatta rispetto a quella frantumata (ESL) ) compresse (800 mg) somministrate per via orale in adulti sani è stato valutato in uno studio crossover in aperto, randomizzato, di 2 periodi con un washout di 5 giorni tra i trattamenti. Sono stati determinati i livelli ematici di campioni di eslicarbazepina e (R)-licarbazepina; farmacocinetica sono stati derivati i parametri per eslicarbazepina. La bioequivalenza è stata stabilita se gli intervalli di confidenza (CI) del 90% per i rapporti medi geometrici di trattamento dell'AUC(0-∞) e della Cmax di eslicarbazepina erano compresi nell'intervallo prestabilito 80%-125%. Ventisette soggetti in la popolazione intent-to-treat (n = 28) ha completato entrambi i periodi di trattamento. Le misure di esposizione all'eslicarbazepina erano simili per le compresse ESL frantumate rispetto a quelle intatte: Cmax media, 11 700 rispetto a 11 500 ng/mL; AUC(0-∞), 225 00 0 contro 234 000 ng·h/mL; AUC(0-ultimo), 222 000 contro 231 000 ng·h/mL, rispettivamente. I rapporti medi geometrici dei minimi quadrati (IC 90%) che confrontano le misure di esposizione all'eslicarbazepina erano compresi nell'intervallo 80%-125% (Cmax , 102,63% [97,07%-108,51%]; AUC(0-∞), 96,72% [94,36%-99,13 %]; AUC0-ultimo, 96,69% [94,24%-99,21%]). In conclusione, le ESL somministrate per via orale come compresse frantumate cosparse di salsa di mele, o intatte, erano bioequivalenti in soggetti sani. La biodisponibilità di eslicarbazepina non è stata significativamente alterata dalla frantumazione, il che indica che le compresse di ESL possono essere somministrate intatte o frantumate.
Produzione indotta di 6,9-dibromoflavasperone, un nuovo naftopiranone antiradicalico nel fungo Aspergillus niger derivato dai fanghi marini.L'aggiunta di metallo bromuri (NaBr e CaBr2) durante la fermentazione del fungo Aspergillus niger, derivato dai fanghi marini, ha indotto la produzione di un nuovo naftopiranone bromurato antiradicalico, 6,9-dibromoflavasperone (1); e tre noti monomeri di nafto-γ-piranone, flavasperone (2 ), TMC-256A1 (3) e fonsecina (4) e un dimero nafto-γ-piranone, aurasperone B (5). La struttura del 6,9-dibromoflavasperone (1) è stata assegnata attraverso la combinazione di analisi dei dati spettroscopici e confronto con i dati spettrali del flavasperone (2). I composti 1-5 hanno mostrato una potente attività di scavenging dei radicali contro 2,2-difenil-1-picrylhydrazyl, con valori IC50 di 21, 25, 0,3, 0,02 e 0,01 μM, rispettivamente, e 3-5 erano più potenti del controllo positivo, acido ascorbico (IC50, 20,0 μM).
Ingegneria metabolica degli antociani nelle varietà di tabacco scuro.peso fresco (FW). L'analisi di cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC) ha mostrato che uno dei principali antociani La molecola rappresentava circa il 98% degli antociani totali. L'analisi MS/MS in tandem mediante HPLC accoppiata a ionizzazione elettrospray e spettrometria di massa a tempo di volo a quadrupolo ha identificato l'antocianina principale come cianidina 3-O-rutinoside, un importante antocianina medicinale. tasso di fotosintesi, clorofilla e contenuto di carotenoidi non hanno mostrato differenze tra piante transgeniche rosse/viola e di controllo, indicando che questa ingegneria metabolica non ha alterato i tratti fisiologici fotosintetici Questo studio mostra che AtPAP1 è di importanza per l'ingegneria metabolica degli antociani nelle piante coltivate per il valore- tratti aggiunti.
Cyanidin-3-rutinoside attenua la glicazione della proteina indotta dal metilgliossale e il danno al DNA tramite la capacità di intrappolamento del carbonile e l'eliminazione delle specie reattive dell'ossigeno.Prodotti finali della glicazione avanzata (AGE) svolgono un ruolo significativo nello sviluppo e nella progressione delle complicanze vascolari nel diabete. E' stato recentemente segnalato che gli antociani possiedono un'attività antiglicante. Questo studio mirava a determinare se un antocianina naturale, la cianidina-3-rutinoside (C3R) inibisce il metilgliossale ( MG) ha indotto la glicazione delle proteine e il danno ossidativo alle proteine e al DNA. C3R (0,125-1 mM) è stato incubato con albumina sierica bovina e MG (1 mM) per 2 settimane. La formazione di AGE fluorescenti è stata misurata mediante spettrofluorimetro e il contenuto di gruppi tiolici è stato utilizzato per rilevare il danno ossidativo proteico. L'elettroforesi su gel è stata utilizzata per determinare se C3R (0,125-1 mM) ha ridotto la rottura del filamento di DNA in un modello di glicazione comprendente lisina, MG e/o Cu(2+). La generazione o f anioni superossido e radicali idrossilici sono stati rilevati dal saggio di riduzione del citocromo c e dal saggio delle sostanze reattive dell'acido tiobarbiturico. La capacità di intrappolamento di MG è stata valutata mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC). C3R (0,25-1 mM) ha ridotto la formazione di AGE fluorescenti e gruppi tiolici proteici impoveriti nell'albumina sierica bovina mediata da MG. A 1 mM C3R ha inibito il danno ossidativo al DNA nel modello di glicazione (p < 0.05) e a 0,5-1 mM ha impedito la rottura del filamento di DNA indotta da Cu(2+) in presenza di lisina e MG. I risultati hanno mostrato che C3R ha ridotto la formazione di anione superossido e radicali idrossili durante la reazione di glicazione di MG con lisina. C3R ha intrappolato direttamente MG in modo dipendente dalla concentrazione e dal tempo (entrambi p < 0.001). Questi risultati suggeriscono che C3R protegge dalla glicazione proteica indotta da MG e dal danno ossidativo alle proteine e al DNA eliminando i radicali liberi e intrappolando la MG.
L'inibitore selettivo IDO1 epacadostat migliora l'immunogenicità delle cellule dendritiche e la capacità litica delle cellule T specifiche dell'antigene tumorale.Epacadostat è un nuovo inibitore dell'indoleamina-2 ,3-diossigenasi-1 (IDO1) che sopprime il catabolismo sistemico del triptofano ed è attualmente in fase di valutazione in studi clinici in corso Abbiamo studiato gli effetti di epacadostat su (a) cellule dendritiche umane (DC) rispetto alla maturazione e alla capacità di attivare il tumore umano linee di cellule T citotossiche antigene-specifiche (CTL) e successiva lisi delle cellule T delle cellule tumorali, (b) cellule T regolatorie umane (Tregs) e (c) cellule mononucleate del sangue periferico umano (PBMC) in vitro. con epacadostat e IFN-γ più lipopolisaccaride (LPS) non ha modificato il fenotipo delle DC umane mature e, come previsto, ha diminuito la degradazione del triptofano e la produzione di chinurenina. FN-γ, TNFa, GM-CSF e IL-8 se i DC sono stati trattati con epacadostat. Queste cellule T hanno anche mostrato livelli più elevati di lisi delle cellule tumorali su base cellulare. Epacadostat ha anche ridotto significativamente la proliferazione Treg indotta dalla produzione di IDO da DC umane maturate con IFN-γ più LPS, sebbene il fenotipo Treg non sia cambiato. La citometria a flusso multicolore è stata eseguita su PBMC umane trattate con epacadostat; l'analisi di 123 sottoinsiemi di cellule immunitarie discreti non ha rivelato cambiamenti nei principali tipi di cellule immunitarie, un aumento delle DC convenzionali CD83+ attivate e una diminuzione delle cellule NK Tim3+ attivate immature. Questi studi mostrano per la prima volta diversi effetti di epacadostat sui DC umani, e successivi effetti su CTL e Tregs, e forniscono un razionale su come epacadostat potrebbe potenzialmente aumentare l'efficacia degli immunoterapici, compresi i vaccini contro il cancro.
CLDN14 è epigeneticamente silenziato da H3K27ME3 mediato da EZH2 ed è un nuovo biomarcatore prognostico nel carcinoma epatocellulare.Trimetilazione della lisina 27 sull'istone H3 (H3K27ME3) è un marchio istonico soppressore della trascrizione mediato dal potenziatore dell'omologo zeste 2 (EZH2). In precedenza abbiamo suggerito che H3K27ME3 mediato da EZH2 svolge un ruolo oncogenico critico nell'aggressività del carcinoma epatocellulare umano (HCC). Tuttavia, i bersagli diretti a valle di EZH2- H3K27ME3 e i meccanismi molecolari con cui regola la patogenesi dell'HCC rimangono poco chiari. In questo studio, abbiamo utilizzato l'immunoprecipitazione della cromatina insieme al sequenziamento ad alto rendimento (ChIP-seq) e al profilo di espressione genica mediante analisi di microarray per valutare l'occupazione della cromatina a livello di genoma di H3K27ME3 nell'HCC cellule. Abbiamo identificato che claudin14 (CLDN14) è un bersaglio potenzialmente diretto per H3K27ME3 mediato da EZH2 nell'HCC. In un'ampia coorte di tessuti clinici dell'HCC, abbiamo scoperto che la bassa espressione di CL DN14 era significativamente associato allo stadio avanzato del tumore e determinato come predittore indipendente di sopravvivenza ridotta dei pazienti con HCC. Successivamente, l'esperimento funzionale ha dimostrato che l'esaurimento di CLDN14 ha sostanzialmente ripristinato la motilità delle cellule HCC silenziate da EZH2 e le capacità invasive e ha supportato la transizione epitelio-mesenchimale cellulare (EMT). Inoltre, la downregulation di CLDN14 ha notevolmente migliorato l'attività di segnalazione wnt/β-catenina nelle cellule di HCC silenziate con EZH2 aumentando i livelli di -catenina attiva e promuovendo la localizzazione nucleare di β-catenina. Questi risultati, collettivamente, rivelano che CLDN14 è un nuovo bersaglio diretto di H3K27ME3 mediato da EZH2 e forniscono una spiegazione per la natura aggressiva dell'HCC con downregulation di CLDN14 e il meccanismo sottostante che collega il soppressore del tumore CLDN14 al wnt/β-catenina via di segnalazione.
Claudine e metabolismo minerale.La conduttanza di giunzione stretta costituita dal canale paracellulare a base di claudina è importante nella regolazione del riassorbimento di calcio e magnesio nel Questa recensione descrive i recenti risultati della struttura, della funzione e della regolazione fisiologica dei canali claudina-14, claudina-16 e claudina-19 che attraverso le interazioni proteiche conferiscono permeabilità al calcio e al magnesio alla giunzione stretta. geni di giunzione - claudina-16 e claudina-19 - causano la malattia renale ereditaria ipomagnesemia familiare con ipercalciuria e nefrocalcinosi. Un recente studio di associazione su tutto il genoma ha identificato la claudina-14 come un gene di maggior rischio di nefrolitiasi ipercalciurica. La struttura cristallina della claudina- 19 è stato recentemente risolto consentendo la ricostruzione di un modello di assemblaggio claudina da cis-dimeri costituiti dall'interazione claudina-16 e claudina 19. I microRNA sono stati identificati come nuovi r regolatori del gene claudina-14. L'operone microRNA-claudin-14 è regolato direttamente dal gene del recettore sensibile al Ca in risposta all'ipercalcemia. La via paracellulare nel rene è particolarmente importante per il metabolismo minerale. Tre proteine claudina - claudina-14, claudina-16 e claudina-19 - contribuiscono alla struttura e alla funzione di questa via paracellulare. Le mutazioni genetiche e i cambiamenti dell'espressione genica in queste claudine possono portare ad un'alterazione della permeabilità paracellulare al calcio e al magnesio, influenzando infine il metabolismo minerale renale.
Terapia di salvataggio e mantenimento MOR208 a singolo agente in un paziente con linfoma diffuso a grandi cellule B refrattario/recidivante: un caso clinico.Diffuse large B il linfoma a cellule è il sottotipo più comune di linfoma non Hodgkin\'s. Il trattamento standard di prima linea per questo sottotipo aggressivo comprende l'anticorpo anti-CD20 rituximab combinato con ciclofosfamide, doxorubicina, vincristina e prednisone. Se i pazienti che ricevono tale trattamento hanno un recidiva precoce, o la loro malattia è inizialmente refrattaria a tale trattamento, i regimi di salvataggio standard potrebbero non essere efficaci. C'è quindi un'elevata necessità clinica insoddisfatta di nuovi agenti mirati che potrebbero migliorare l'esito per tali pazienti. CD19 è una linea di linfociti B- antigene di superficie cellulare specifico che è espresso dalla maggior parte dei linfomi non Hodgkin\' a cellule B. MOR208 è un anticorpo monoclonale umanizzato ingegnerizzato, cristallizzabile in frammenti con attività antitumorale potenziata che prende di mira il CD19 e che può contro hanno utilità clinica in questo contesto. Descriviamo il caso di un uomo caucasico di 33 anni che si è presentato con una storia di sintomi generali di 3 mesi e che è stato ricoverato nel nostro reparto di pneumologia con dispnea da polmonite e grave anemia. Un esame istopatologico di un linfonodo soprasternale destro ingrossato ha confermato una diagnosi di linfoma a grandi cellule B ricco di cellule T/istiociti, una variante morfologica non comune del linfoma diffuso a grandi cellule B. Il nostro paziente ha avuto una risposta completa al rituximab di prima linea combinato con ciclofosfamide, doxorubicina, vincristina e prednisone, ma ha avuto una recidiva precoce 5 mesi dopo la fine del trattamento. Dopo una terapia intensiva di salvataggio consolidata con un trapianto di cellule staminali autologhe, il nostro paziente ha avuto nuovamente una recidiva precoce ed è stato successivamente arruolato in uno studio di fase IIa del singolo agente MOR208. Dopo un trattamento settimanale programmato di 3 mesi, è stata confermata una risposta parziale e MOR208 è stato continuato come terapia di mantenimento, con somministrazione ogni due settimane. La tomografia computerizzata a emissione di positroni ha confermato una risposta completa 9 mesi dopo. Questa risposta è in corso, con una durata di 24 mesi. MOR208 è stato ben tollerato dal nostro paziente e la sua qualità di vita e il suo stato di prestazione rimangono elevati. Non sono stati richiesti ricoveri e il nostro paziente è stato impegnato in un lavoro a tempo pieno e in attività fisiche. La terapia di terza linea con un agente singolo con l'anticorpo CD19 MOR208 è risultata altamente efficace in questo paziente, nonostante una storia di recidive precoci dopo regimi di trattamento standard di prima e seconda linea. Questi dati forniscono supporto per futuri studi randomizzati di MOR208.
Studio meccanico e cinetico sulla formazione in fase gassosa di dinitro-naftalene da 1- e 2-nitronaftalene.Gli idrocarburi policiclici aromatici nitrati hanno ricevuto un aumento serie di considerazioni a causa dei loro mutageni più elevati rispetto agli IPA parentali. In questo articolo, la formazione di dinitro-naftalene è stata studiata meccanicamente utilizzando 1- e 2-nitronaftalene come precursori con l'ausilio di calcoli di chimica quantistica ad alta precisione. I parametri geometrici, come nonché le frequenze vibrazionali, sono state calcolate al livello BB1K/6-31+G(d,p). La molecola d'acqua svolge un ruolo importante nella formazione del dinitro-naftalene. Le costanti di velocità sono state dedotte dalla teoria canonica dello stato di transizione variazionale con contributo del tunneling di piccola curvatura nell'intervallo di temperatura di 273-333 K. Nel frattempo, le formule di Arrhenius sono state adattate per l'aggiunta di OH sia di 1- che di 2-nitronaftalene. Le costanti di velocità complessive calcolate per 1-nitronafta lene e 2-nitronaftalene a 298 K e 1 atm sono 7,43 × 10(-13) e 7,48 × 10(-13) cm(3) molecola(-1) s(-1), rispettivamente. Le costanti di velocità dell'aggiunta di NO3 a 1-nitronaftalene e 2-nitronaftalene con il metodo RRKM a 298 K e 1 atm sono 3,55 × 10(-15) e 3,47 × 10(-15) cm(3) molecola(-1) s( -1), rispettivamente. Questo studio fornisce un'indagine completa del processo di formazione dei dinitro-naftaleni, avviato dai radicali OH e NO3 e dovrebbe facilitare l'illuminazione della sua fonte atmosferica. L'ossigeno può probabilmente essere competitivo con la seconda fase di aggiunta di NO2 quando la concentrazione di NO2 è a un livello basso.
[Il mitochinone antiossidante mirato ai mitocondri protegge lo sperma umano post-scongelamento contro il danno da stress ossidativo].Indagare il potenziale effetto protettivo del mitocondrio mirato antiossidante Mitochinone (MitoQ) su sperma umano post-scongelamento Campioni di seme sono stati raccolti da 60 uomini normali fertili, ciascuno diviso in sei parti di uguale volume da incubare a 37 °C in soluzione fisiologica (G0, controllo) o nell'estensore con 2 nmol/L (G1), 20 nmol/L (G2), 200 nmol/L (G3), 2 µmol/L (G4) e 20 µmol/L di MitoQ (G5) Dopo un'ora di incubazione, il i campioni sono stati sottoposti ad analisi dello sperma computerizzata (CASA) per la motilità degli spermatozoi, citometria a flusso per specie reattive dell'ossigeno (ROS), analisi dell'acido tiobarbiturico per la concentrazione di malondialdeide (MDA) e colorazione fluorescente MitoTracker e citometria a flusso per la membrana mitocondriale dello sperma potenziale (MMP). Quindi, il seme è stato crioconservato con nessuno (B0), 200 nmol/L (B1) e 2 µmol/L di Mi toQ (B2), seguito dal rilevamento dei cambiamenti nei ROS, MDA e MMP dello sperma post-scongelamento. La percentuale di spermatozoi progressivamente mobili e il tasso totale di motilità spermatica erano significativamente più alti in G3 ([30,8 ± 10,2]% e [70,6 ± 9,0]%) e G4 ([32,7 ± 13,5]% e [70,3 ± 11,9]%) rispetto a in G0 ([17,6 ± 5,0]% e [54,9 ± 11,5]%) (P < 0,05). Il livello di ROS è diminuito notevolmente con l'aumento della concentrazione di MitoQ, 86,5 ± 31,6 in G3, 93,6 ± 42,0 in G4 e 45,1 ± 15,0 in G5, rispetto a 160,8 ± 39,7 in G0 (P < 0,05). Il contenuto di MDA era notevolmente inferiore in G3 ([0,9 ± 0,5] µmol/mg) e G4 ([0,9 ± 0,5] µmol/mg) rispetto a G0 ([1,9 ± 1,1] µmol/mg) (P < 0,05) , ma non in G5 ([1,7 ± 0,7] µmol/mg), che era persino superiore a G3 e G4 (P < 0,05). La MMP ha mostrato una significativa riduzione di G5 (1156 ± 216) rispetto a G0 (1701 ± 251) (P < 0,05) ma non ha mostrato differenze significative tra G0 e G1 (1810 ± 298), G2 (1995 ± 437), G3 (1950 ± 334), o G4 (1582 ± 314). La percentuale di spermatozoi progressivamente mobili e il tasso totale di motilità spermatica dopo congelamento-scongelamento erano significativamente diminuiti rispetto a quelli del seme fresco (P < 0,01), ma entrambi erano notevolmente più alti in B1 ([3,2 ± 2,3]% e [ 43,0 ± 9,5]%) rispetto a B0 ([0,8 ± 0,6]% e [26,5 ± 11,4]%) (P < 0,05). Il livello di ROS era significativamente più basso in B1 e B2 rispetto a B0 (34,6 ± 12,3 e 37,0 ± 10,5 vs 56,9 ± 14,3, P < 0,05), così come il contenuto di MDA ([1,4 ± 0,5] e [1,4 ± 0,6] µmol/mg vs [2,6 ± 1,0] µmol/mg, P < 0,05), ma la MMP era nettamente più alta in B1 e B2 rispetto a B0 (1010,0 ± 130,5 e 880,6 ± 128,6 vs 721,1 ± 24,8, P < 0.05). L'aggiunta di MitoQ all'estensore di congelamento a 200 nmol/L può effettivamente migliorare la qualità dello sperma umano e MitoQ è una buona dipendenza protettiva per la crioconservazione dello sperma umano.
Multicenter Investigation of Gepotidacin (GSK2140944) Agar Dilution Quality Control Determinations for Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226.Gepotidacin, un nuovo agente antibatterico triazaacenaphthylene, è il primo in una nuova classe di inibitori della topoisomerasi di tipo IIA con attività contro molte minacce biologiche e patogeni convenzionali, tra cui Neisseria gonorrhoeae Per assistere gli studi clinici in corso sulla gepotidacina per il trattamento della gonorrea, un'indagine di garanzia della qualità multilaboratorio ha determinato l'organismo di riferimento (N. gonorrhoeae ATCC 49226) controllo di qualità L'intervallo della MIC deve essere compreso tra 0,25 e 1 μg/ml (l'88,8% della MIC della gepotidacina risulta in modalità 0,5 μg/ml).
Il betametasone butirrato propionato esacerba le ulcere da pressione dopo lesione cutanea da ischemia-riperfusione.Ischemia-riperfusione (I/R) è coinvolta nello sviluppo di vari malattie d'organo. C'è stata una crescente evidenza che la lesione cutanea I/R è associata alla patogenesi delle ulcere da pressione (PU), specialmente nella fase iniziale che si presentano come eritema non sbiancabile. Tuttavia, non esiste un trattamento basato sull'evidenza per PU allo stadio. Il nostro obiettivo era valutare gli effetti dello steroide topico sullo sviluppo di PU dopo lesione cutanea I/R nei topi. L'I/R cutaneo è stato eseguito intrappolando la pelle dorsale tra due piastre magnetiche per 12 ore, seguita dalla rimozione della piastra L'applicazione topica di betametasone butirrato propionato (BBP) nelle aree I/R ha aumentato significativamente la dimensione delle UdP dopo I/R. Il numero di trombosi è stato aumentato e i vasi CD31(+) sono stati diminuiti nell'area I/R trattata con topico BBP Il numero di le cellule danneggiate dal DNA associate allo stress ossidativo e le cellule apoptotiche nell'area I/R sono state aumentate dal trattamento topico con BBP. Inoltre, il livello di mRNA della NADPH ossidasi 4 (Nox4), l'enzima essenziale che produce le specie reattive dell'ossigeno, è stato significativamente aumentato e quello del fattore 2 correlato a NF-E2 (Nrf2), un fattore di trascrizione che regola l'espressione delle proteine antiossidanti , è stato inibito nell'area I/R trattata con BBP. Anche il numero di macrofagi CD68(+) e il livello di trasformazione del fattore di crescita beta nella pelle lesionata sono stati ridotti dalla BBP. Questi risultati suggeriscono che uno steroide topico potrebbe accelerare la formazione di PU indotte dalla lesione cutanea I/R aggravando il danno tissutale indotto dallo stress ossidativo. Gli steroidi topici potrebbero non essere raccomandati per il trattamento delle ulcere da decubito in fase acuta.
Sviluppo di biomarcatori nella terapia mirata a MET.È stata implicata l'attivazione del recettore tirosin-chinasi MET da parte del suo ligando, il fattore di crescita degli epatociti (HGF). in una varietà di processi cellulari, tra cui la proliferazione cellulare, la sopravvivenza, la migrazione, la motilità e l'invasione, tutti fattori che possono essere migliorati nei tumori umani. sviluppo di nuovi trattamenti antitumorali. Sono stati condotti vari studi clinici per valutare la sicurezza e l'efficacia degli inibitori selettivi dell'HGF/MET nei pazienti oncologici. Attualmente non esiste un metodo ottimale o standardizzato per una valutazione accurata e affidabile dei livelli di MET o di altri biomarcatori che sono predittivi della risposta del paziente alle terapie mirate al MET. In questa recensione, discutiamo l'importanza di un'accurata rilevazione del segnale HGF/MET come biomarcatore predittivo per guidare la selezione del paziente per la clinica tutti gli studi di terapie mirate al MET nei tumori umani.
Terapie emergenti per la steatosi epatica non alcolica.La steatosi epatica non alcolica è la causa più comune di malattia epatica negli Stati Uniti. Non ci sono farmaci terapie approvate per il trattamento della steatoepatite non alcolica (NASH). Molteplici vie diverse sono coinvolte nella patogenesi e ciascuna può essere il bersaglio della terapia. È possibile che più di un bersaglio sia coinvolto nello sviluppo e nella progressione della malattia. Diversi studi clinici con sono in corso agenti promettenti. Poiché la NASH è una malattia lentamente progressiva e il trattamento probabilmente avrà una durata prolungata, l'accettazione e l'approvazione di qualsiasi agente richiederanno informazioni sui benefici clinici e sulla sicurezza a lungo termine.
Future terapie nella malattia di Alzheimer: stato di sviluppo degli inibitori del BACE.La malattia di Alzheimer (AD) è la causa primaria di demenza nel anziano. Rimane incurabile e rappresenta un'enorme sfida socio-economica per i paesi sviluppati con una popolazione che invecchia. L'AD si manifesta con un progressivo declino delle funzioni cognitive e alterazioni del comportamento, che sono il risultato dell'estesa degenerazione dei neuroni cerebrali. Il meccanismo patogeno dell'AD comporta l'accumulo di beta-peptide amiloide (Aβ), un frammento proteico aggregante che si autoassocia per formare fibrille neurotossiche che innescano una cascata di eventi cellulari che portano a lesioni neuronali e morte. I ricercatori del mondo accademico e dell'industria farmaceutica hanno perseguito un approccio razionale alla scoperta di farmaci per l'Alzheimer e mirato alla cascata dell'amiloide. Sono stati ideati schemi per prevenire la sovrapproduzione e l'accumulo di Aβ nel cervello. I vasti sforzi degli ultimi 20 anni orecchie sono state tradotte nel portare nuovi farmaci a sperimentazioni cliniche avanzate. Le terapie basate sul meccanismo più avanzate fino ad oggi consistono in interventi immunologici per eliminare gli oligomeri Aβ e farmaci farmacologici per inibire gli enzimi secretasi che producono Aβ, vale a dire l'enzima di scissione del precursore dell'amiloide del sito (BACE) e la -secretasi. Dopo aver fornito un aggiornamento sullo sviluppo e sullo stato attuale delle nuove terapie per l'AD, questa recensione si concentrerà sugli inibitori BACE e, in particolare, discuterà le prospettive di verubecestat (MK-8931), che ha raggiunto gli studi clinici di fase III.
Sviluppo e convalida di un metodo SFC-MS/MS enantioselettivo per la separazione e la quantificazione simultanee di oxcarbazepina e dei suoi metaboliti chirali nel plasma del cane beagle.A è stato sviluppato e convalidato un test rapido e sensibile basato su cromatografia fluida supercritica-spettrometria di massa tandem (SFC-MS/MS) per la determinazione di oxcarbazepina (OXC) e del suo metabolita chirale licarbazina (Lic) nel plasma di cani beagle utilizzando carbamazepina come standard interno L'analisi chirale in un tempo di esecuzione di soli 3 minuti è stata eseguita su una colonna ACQUITY UPC(2) ™ Trefoil™ CEL2 (3,0 × 150 mm, 2,5 μm) a 50 °C mediante eluizione isocratica con una fase mobile di anidride carbonica supercritica ( purezza ≥ 99,99%) e metanolo (60:40, v/v) a una portata di 2,3 mL/min. Il dosaggio è risultato lineare negli intervalli di concentrazione 5-1000 ng/mL per OXC e 0,5-100 ng/mL per gli enantiomeri di Lic con corrispondenti limiti inferiori di quantificazione di 5 ng/mL e 0,5 ng/mL. le precisioni ter-giornaliere erano nell'intervallo 0,78-14,14% con precisioni nell'intervallo da -10,80% a 0,42%. Il metodo è stato applicato con successo a uno studio farmacocinetico che prevedeva una singola somministrazione orale di 16 mg/kg di OXC come compresse di Trileptal(@) a cani beagle.
L'analisi della rete causale del tessuto cheloideo della testa e del collo identifica potenziali regolatori principali.Per generare nuove intuizioni e ipotesi nello sviluppo dei cheloidi da potenziali regolatori principali. Sei cheloidi freschi e sei campioni di pelle normale da 12 donatori anonimi sono stati utilizzati in uno studio prospettico di coorte. Il profilo dell'intero genoma è stato precedentemente eseguito sulla coorte utilizzando il BeadChip Infinium HumanMethylation450 (Illumina, San Diego, CA). Isole CpG tra cheloide e tessuto normale mappate su 152 geni (P < .05). I primi 10 geni statisticamente significativi (VAMP5, ACTR3C, GALNT3, KCNAB2, LRRC61, SCML4, SYNGR1, TNS1, PLEKHG5, PPP1R13-α, falsa scoperta rate <.015) sono stati caricati nel software Ingenuity Pathway Analysis\'s Causal Network Analysis (QIAGEN, Redwood City, CA). Per riflettere la direzione dell'espressione genica prevista nel contesto dei cambiamenti di metilazione, l'inverso della metilatio Per l'analisi è stato utilizzato il rapporto n tra cheloide e tessuto normale. L'analisi della rete causale ha identificato molecole regolatrici principali specifiche della malattia basate su geni specifici cheloidi espressi a valle e sulla direzionalità prevista dell'espressione (ipermetilato vs ipometilato). Il software Causal Network Analysis ha identificato quattro reti gerarchiche che includevano quattro regolatori principali (piroxamide, tributirina, PRKG2 e PENK) e 19 regolatori intermedi. L'analisi della rete causale dei dati genetici metilati differenziati del cheloide rispetto alla pelle normale ha dimostrato quattro reti causali con quattro regolatori principali. Queste reti gerarchiche suggeriscono potenziali ruoli guida per i loro bersagli del gene cheloide a valle nella patogenesi del fenotipo cheloide, probabilmente innescato a causa di perturbazioni/lesioni al tessuto normale. Laringoscopio di NA, 126: E319-E324, 2016.
Inibizione della crescita e apoptosi nelle cellule tumorali indotte da composti polifenolici di Acacia hydaspica: coinvolgimento di molteplici vie di trasduzione del segnale.Acacia hydaspica R. Parker è noto per i suoi usi medicinali in molteplici disturbi. In questo studio, abbiamo eseguito il frazionamento guidato dal dosaggio biologico di composti citotossici da A. hydaspica e studiato i loro effetti sulla crescita e sull'attività di segnalazione nelle linee cellulari di cancro alla prostata e al seno. Quattro composti polifenolici attivi sono stati identificati come 7 -O-galloil catechina (GC), catechina (C), metil gallato (MG) e catechina-3-O-gallato (CG). I quattro composti hanno inibito la crescita delle cellule PC-3 del cancro alla prostata in modo dose-dipendente, considerando che CG e MG hanno inibito la crescita delle cellule del cancro al seno MDA-MB-231. Tutti i composti testati hanno inibito la sopravvivenza cellulare e la crescita delle colonie in entrambe le linee cellulari e c'erano prove di condensazione della cromatina, restringimento cellulare e corpi apoptotici. Inoltre, arancio di acridina, bromuro di etidio , lo ioduro di propidio e la colorazione DAPI hanno dimostrato che la morte cellulare si è verificata in parte tramite apoptosi sia nelle cellule PC-3 che MDA-MB-231. Nelle cellule PC-3 il trattamento ha represso l'espressione delle molecole anti-apoptotiche Bcl-2, Bcl-xL e survivina, insieme alla down-regulation delle vie di segnalazione AKT, NFκB, ERK1/2 e JAK/STAT. Nelle cellule MDA-MB-231, il trattamento ha indotto la riduzione dell'espressione della proteina CK2α, Bcl-xL, survivina e xIAP insieme alla soppressione delle vie NFκB, JAK/STAT e PI3K. I nostri risultati suggeriscono che alcuni composti polifenolici derivati da A. hydaspica possono essere promettenti candidati chemiopreventivi/terapeutici contro il cancro.
Potenziale sottostima dell'interazione farmacologica con warfarin da studi di interazione convenzionali e mitigazione del rischio: un caso di studio con Epacadostat, un inibitore IDO1.Interazione farmacologica ( Gli studi DDI) che coinvolgono warfarin sono in genere condotti con dosi subterapeutiche di warfarin per garantire la sicurezza dei volontari. Tuttavia, questo approccio può potenzialmente avere un bias sistemico di sottovalutare l'effetto farmacodinamico (PD) DDI sul warfarin a livelli terapeutici di anticoagulazione. Dimostriamo qui il utilità della previsione DDI basata su modello per un regime di warfarin clinicamente rilevante, utilizzando l'esempio di epacadostat (INCB024360), il primo inibitore dell'indoleamina 2,3-diossigenasi 1 nello sviluppo clinico come nuova terapia immuno-oncologica attiva per via orale. I dati osservati da uno studio clinico DDI dedicato utilizzando warfarin subterapeutico hanno suggerito che la farmacocinetica del warfarin (PK), ma non la PD (anticoagulazione), è stata significativamente influenzata da concom itant epacadostat. Tuttavia, successivi modelli e simulazioni PK/PD hanno indicato un effetto DDI clinicamente importante sulla PD di warfarin a una linea di base più alta dell'INR (International Normalization Ratio) e hanno consentito di raccomandare un aggiustamento della dose di warfarin che dipende dal regime di dosaggio di epacadostat e dall'INR target.
Approccio generale e stereocontrollato alla sintesi chimica dei glucosidi cianogeni presenti in natura.Come dimostrato, è stato sviluppato un metodo efficace per la sintesi chimica dei glucosidi cianogeni dalla sintesi di durrina, taxifillina, prunasin, sambunigrina, eterodendrina ed epieterodendrina. Le cianoidrine O-trimetilsililate sono state preparate e sottoposte direttamente a glucosilazione utilizzando un donatore di glucopiranosil fluoruro completamente acetilato con trifluoruro di boro-dietil eterato come promotore per fornire una miscela cromatografica dei corrispondenti glucosidi cianogeni acetilati. Gli epimeri isolati sono stati deprotetti utilizzando un sistema acido triflico/MeOH/resina a scambio ionico senza alcuna epimerizzazione della funzione cianoidrina. Il metodo è stereocontrollato e fornisce un approccio efficiente alla sintesi chimica di altri glucosidi cianogeni naturali compresi quelli con un aglicone più complesso st rottura.
Biosintesi della moenomicina: struttura e meccanismo d'azione della preniltransferasi MoeN5.La struttura della MoeN5, una preniltransferasi unica coinvolta nella biosintesi dell'antibiotico moenomicina MoeN5 catalizza la reazione del geranil difosfato (GPP) con il gruppo cis-farnesile nel fosfoglicolipide 5 per formare il lipide 7 (C25) contenente la catena laterale moenocinile. Il GPP si lega a un sito allilico (S1) e si allinea bene con noti inibitori S1. Gli alchil glicosidi, i glicolipidi, possono legarsi sia a S1 che a un secondo sito, S2. Le catene laterali lunghe in S2 sono "piegate" e si co-locano con il substrato omoallilico isopentenil difosfato in altre preniltransferasi. Queste osservazioni supportano un MoeN5 meccanismo in cui 5 si lega a S2 con il suo gruppo C6-C11 pronto ad attaccare C1 in GPP per formare la catena laterale moenocinilica, con le regioni più distali di 5 allineandosi con il glucosio distale in decil maltoside. I risultati sono di interesse generale perché forniscono le prime strutture di MoeN5 e una base strutturale per il suo meccanismo d'azione, risultati che faciliteranno la progettazione di nuovi antibiotici.
Effetto del cibo sulla farmacocinetica di TAS-102 e sulla sua efficacia e sicurezza in pazienti con tumori solidi avanzati.TAS-102, un nuovo trattamento orale antitumorale, costituito da trifluridina e tipiracil cloridrato (rapporto molare, 1:0,5). Abbiamo studiato gli effetti del cibo su trifluridina e tipiracil cloridrato. L'efficacia e la sicurezza di TAS-102 sono state valutate in pazienti con tumori solidi avanzati. Abbiamo analizzato il farmaco farmacocinetica utilizzando un disegno cross-over randomizzato, a dose singola, a due trattamenti (alimentazione rispetto al digiuno), a due periodi, a due sequenze, seguito da somministrazione ripetuta. I pazienti hanno ricevuto dosi singole di TAS-102 (35 mg/m2 2)) nella fase farmacocinetica e ha ricevuto dosi due volte al giorno di TAS-102 in cicli di 28 giorni nella fase di somministrazione ripetuta per valutare l'efficacia e la sicurezza. Il cibo non ha mostrato alcun effetto sull'area sotto la curva da 0 a 12 ore o 0 valori h-infinito di trifluridina dopo somministrazione di TAS-102 a digiuno e le condizioni di alimentazione, mentre quelle del tipiracil cloridrato sono diminuite di circa il 40%. Le concentrazioni massime di entrambi i farmaci sono diminuite di circa il 40%, indicando che il cibo influenzava l'assorbimento e la biodisponibilità rispettivamente di trifluridina e tipiracil cloridrato. Durante la somministrazione ripetuta, è stata osservata una malattia stabile in nove pazienti con tumori del retto, del polmone a piccole cellule, della mammella, del timo, del duodeno e della prostata. Gli eventi avversi maggiori sono stati neutropenia, leucopenia, anemia e nausea. La somministrazione postprandiale è stata ottimale per TAS-102 perché l'area della trifluridina sotto la curva non è stata modificata dal cibo, indicando che la sua efficacia clinica non sarebbe stata influenzata. Inoltre, la somministrazione postprandiale era ragionevole perché la concentrazione massima di trifluridina è diminuita nei neutrofili, il che è correlato a studi precedenti. Questi risultati suggeriscono che TAS-102 sarebbe un trattamento efficace per i tumori a piccole cellule del polmone, del timo e del colon-retto. Questa sperimentazione è registrata presso il Japan Pharmaceutical Information Center (n. JapicCTI-111482).
Alchilazione enantioselettiva di derivati amminoacidici promossi da peptoidi ciclici in condizioni di trasferimento di fase.Gli effetti dei sostituenti e delle dimensioni della cavità sull'efficienza catalitica della prolina- sono stati studiati ricchi ciclopeptoidi in condizioni di trasferimento di fase. Per un ciclopeptoide esamerico alternato N-benzilglicina/L-prolina sono state osservate costanti di affinità elevate (Ka) per i cationi sodio e potassio, paragonabili a quelle riportate per gli eteri corona. catalizzare l'alchilazione di N-(difenilmetilen)glicina cumil estere in valori di enantioselettività comparabili a quelli riportati per i derivati dei sali di ammonio alcaloide di Cinchona (83-96% ee), e con carico di catalizzatore inferiore (1-2,5% mol), in la presenza di un'ampia gamma di alogenuri benzilici, allilici e alchilici.
Gamabufotalin innesca la degradazione di c-Myc tramite l'induzione di WWP2 in cellule di mieloma multiplo.Decidere una terapia appropriata per il mieloma multiplo (MM) è difficile a causa della presenza di più cambiamenti cromosomici e la natura fatale della malattia. Nel presente studio, la gamabufotalina (GBT) è stata isolata dal veleno di rospo e la sua citotossicità tumore-specifica è stata studiata nelle cellule umane di MM. Abbiamo scoperto che la GBT ha inibito la crescita cellulare e ha indotto l'apoptosi con i valori IC50 <50 nM. Studi meccanicistici che utilizzano approcci funzionali hanno identificato GBT come un inibitore di c-Myc. Ulteriori analisi hanno mostrato che GBT evocava in particolare l'ubiquitinazione e la degradazione della proteina c-Myc, reprimendo così globalmente l'espressione del bersaglio c-Myc geni. Il trattamento con GBT ha inibito i segnali ERK e AKT, stimolando l'attivazione della cascata JNK. Una ligasi ubiquitina-proteina E3, WWP2, è stata sovraregolata in seguito all'attivazione di JNK e ha svolto un ruolo importante in c-Myc ubiquitinazione e degradazione per interazione diretta proteina-proteina. L'effetto antitumorale del GBT è stato convalidato in un modello murino xenotrapianto e la soppressione dell'osteolisi indotta da MM è stata verificata in un modello SCID-hu in vivo. Nel loro insieme, il nostro studio ha identificato il potenziale della GBT come un promettente agente terapeutico nel trattamento del MM.
Le mutazioni del sito di legame steroideo cardiotonico di Na(+)/K(+)-ATPasi sono associate ad un alto livello di resistenza alla gamabufotalina in un serpente natricina.Sebbene i rospi siano difesi dalle tossine del bufadienolide, alcuni serpenti hanno sviluppato una resistenza ai bufadienolidi e si nutrono pesantemente di rospi. Abbiamo confrontato la resistenza in Nerodia rhombifer, che possiede mutazioni che conferiscono resistenza al sito bersaglio, a Pituophis catenifer, che non ha quelle mutazioni. Anche al dosaggio più alto testato, Nerodia non ha mostrato effetti, mentre la dose più bassa è stata letale per Pituophis. I nostri risultati dimostrano un sorprendente livello di resistenza ai bufadienolidi in una specie che possiede le mutazioni per la resistenza.
Una variante comune in CLDN14 è associata a cirrosi biliare primitiva e densità minerale ossea.Cirrosi biliare primitiva (PBC), una malattia epatica autoimmune cronica, è stato associato ad una maggiore incidenza di osteoporosi. Curiosamente, due loci di suscettibilità alla PBC identificati attraverso studi di associazione genome-wide sono coinvolti anche nella densità minerale ossea (BMD). Queste osservazioni ci hanno portato a studiare le varianti genetiche condivise tra PBC e BMD. Abbiamo valutato 72 SNP BMD significativi per l'intero genoma per l'associazione con PBC utilizzando due set di dati GWAS europei (n = 8392), con replica di risultati significativi in una coorte cinese (685 casi, 1152) controlli. La nostra analisi ha identificato una nuova variante nell'introne del gene CLDN14 (rs170183, Pfdr = 0.015) dopo la correzione di test multipli. Le tre varianti associate sono state seguite nella coorte cinese; un SNP rs170183 ha dimostrato una prova coerente di associazione in diversi popolazioni etniche (Pcombined = 2.43 × 10(-5)). In particolare, i dati sui loci dei tratti quantitativi di espressione (eQTL) hanno rivelato che rs170183 era correlato con un calo dell'espressione di CLDN14 sia nelle linee cellulari linfoblastoidi che nelle cellule T (Padj = 0.003 e 0.016, rispettivamente). In conclusione, il nostro studio ha identificato una nuova variante di suscettibilità alla PBC che ha dimostrato di essere fortemente associata alla BMD, evidenziando il potenziale della pleiotropia per migliorare la scoperta dei geni.
Effetto dell'omogeneizzazione ad alta pressione e del dimetildicarbonato (DMDC) sulle qualità microbiche e fisico-chimiche del succo di gelso.In questo studio, l'effetto dell'alta pressione È stata valutata l'omogeneizzazione (HPH) e il dimetildicarbonato (DMDC) sulle qualità microbiche e nutritive del succo di gelso. I risultati hanno mostrato che passaggi HPH ripetuti a 200 MPa o l'aggiunta di DMDC a 250 mg/L hanno inattivato significativamente i microrganismi indigeni nel succo di gelso (P < 0,05), mentre alcuni microrganismi sopravvissuti si sono ripresi per crescere durante la conservazione a 4 ° C. Il trattamento combinato con 3 passaggi di HPH e 250 mg/L di DMDC (HPH-DMDC) ha ridotto la popolazione di microrganismi indigeni sopravvissuti al livello raggiunto dal calore trattamento a 95 ° C per 1 min (HT) senza aumento significativo (P > 0,05) della popolazione di microrganismi durante la successiva conservazione a 4 ° C. Inoltre, nessun cambiamento significativo (P > 0,05) negli attributi fisici, compreso pH, T I valori di SS ((o) Brix), L, a e b* sono stati osservati nei campioni trattati con HPH-DMDC o con HT. Rispetto all'HT, il trattamento HPH-DMDC ha determinato un grado più elevato di ritenzione dei fenoli totali e dell'attività inibitoria dell'α-glucosidasi, sebbene il trattamento abbia portato a maggiori perdite di cianidina 3-glucoside, cianidina 3-rutinoside e capacità antiossidante. Nel complesso, il trattamento HPH-DMDC può essere un'utile alternativa alla convenzionale pastorizzazione termica del succo di gelso, considerando la sua capacità di inattivare e inibire i microrganismi indigeni.
Approfondimenti su scala atomica sulle interazioni urea-peptide in soluzione.Il meccanismo con cui le proteine vengono denaturate dall'urea non è ancora ben compreso, specialmente sul scala atomica in cui queste interazioni si verificano in vivo. In questo studio, la struttura del peptide GPG è stata studiata in soluzioni acquose di urea al fine di comprendere la combinazione di ruoli che sia l'urea che l'acqua svolgono nello sviluppo delle proteine. Utilizzando una combinazione di diffrazione di neutroni potenziato dalla sostituzione isotopica e dalle simulazioni al computer, è stato riscontrato, in contrasto con precedenti studi di simulazione, che l'urea è preferita all'acqua attorno alle porzioni polari e cariche dei peptidi Inoltre, sembra che mentre l'urea sostituisce direttamente l'acqua attorno ai gruppi azotati sul GPG che l'urea e l'acqua occupano posizioni diverse attorno ai gruppi carbonilici del legame peptidico. Ciò suggerisce che l'urea può in effetti indebolire il legame peptidico, distruggendo la spina dorsale peptidica, quindi alla fine causando la denaturazione.
Effetti neurochimici e comportamentali correlati all'abuso degli stereoisomeri del catinone e del 4-metilcatinone nei ratti.Il catinone e molti dei suoi analoghi producono effetti comportamentali promuovendo il trasportatore -rilascio mediato dei neurotrasmettitori monoamine dopamina, noradrenalina e/o serotonina. La stereoselettività è un determinante degli effetti neurochimici e comportamentali degli analoghi del catinone. Questo studio ha confrontato l'efficacia degli enantiomeri S(-) e R(+) del catinone e del 4-metilcatinone per produrre il rilascio di monoamine in vitro ed effetti comportamentali correlati all'abuso in vivo nei ratti. Per gli studi neurochimici, sono stati valutati gli effetti dei farmaci sul rilascio di monoamine attraverso i trasportatori di dopamina, noradrenalina e serotonina (DAT, NET e SERT, rispettivamente) nei sinaptosomi del cervello di ratto. Per gli studi comportamentali, sono stati valutati gli effetti del farmaco sulla risposta alla stimolazione elettrica cerebrale in una procedura di autostimolazione intracranica (ICSS). differiva nella potenza [S(-)>R(+)], ma entrambi gli enantiomeri erano >50 volte selettivi nel promuovere il rilascio di monoammine attraverso DAT vs. SERT, ed entrambi gli enantiomeri producevano facilitazione ICSS. Gli enantiomeri del 4-metilcatinone differivano anche nella potenza [S(-)>R(+)]; tuttavia, negli studi neurochimici, la diminuzione della potenza da S(-) a R(+)4-metilcatinone era inferiore per DAT rispetto a SERT e, di conseguenza, la selettività DAT vs SERT era maggiore per R(+) rispetto a S(-)4-metilcatinone (4,1 contro 1,2 volte). Inoltre, negli studi comportamentali, S(-)4-methylcathinone ha prodotto solo depressione ICSS, mentre R(+)4-methylcathinone ha prodotto facilitazione ICSS. Questo studio fornisce ulteriori prove della stereoselettività nelle azioni neurochimiche e comportamentali degli analoghi del catinone. Ancora più importante, gli effetti stereoselettivi del 4-metilcatinone su ICSS illustrano il potenziale di effetti diametralmente opposti degli enantiomeri in un'analisi comportamentale preclinica del potenziale di abuso.
Morte associata all'uso del cannabinoide sintetico ADB-FUBINACA.Negli ultimi anni sono stati trovati cannabinoidi sintetici nei prodotti a base di incenso. Noi segnalare la rapida morte di un individuo che è stato certificato come associato a cannabinoidi sintetici. Il campione di sangue dell'autopsia è stato estratto mediante un'estrazione liquido-liquido a pH 10,2 in una miscela di esano-acetato di etile e analizzato da un cannabinoide sintetico generalizzato LC-MS-MS Per questo case report, descriviamo brevemente l'analisi strumentale e i metodi di estrazione per la rilevazione di ADB-FUBINACA nel sangue post mortem, risultati tossicologici per il campione di sangue post mortem (ADB-FUBINACA, 7,3 ng/mL; THC, 1,1 ng/mL ; THC-COOH, 4,7 ng/mL), informazioni sul caso e circostanze e risultati pertinenti dell'autopsia. La causa della morte è stata certificata come trombosi dell'arteria coronaria in combinazione con l'uso di cannabinoidi sintetici. La modalità di morte è stata un incidente.
Attività in vitro della gepotidacina, un nuovo inibitore della topoisomerasi batterica del triazaacenaphthylene, contro un ampio spettro di agenti patogeni batterici.Gepotidacina inibisce la replicazione del DNA batterico attraverso una modalità diverso da quello dei fluorochinoloni. La gepotidacina e i comparatori sono stati testati mediante diluizione in brodo e agar contro isolati clinici. Le attività in vitro della gepotidacina erano comparabili con gli isolati di Staphylococcus aureus meticillino-sensibili e resistenti (MSSA e MRSA, rispettivamente) (MIC90, 0,5 μg /ml). Le MIC90 della gepotidacina erano le seguenti (in microgrammi per millilitro) per i batteri indicati: Streptococcus pyogenes, 0,25; Escherichia coli, 2; Moraxella catarrhalis, 0,06; Streptococcus pneumoniae (0,25), Haemophilus influenzae, 1; Clostridium perfringens , 0,5; e Shigella spp. , 1, compresi i sottogruppi resistenti alla levofloxacina. La gepotidacina richiede ulteriori indagini per lo sviluppo clinico.
Terapia di induzione con Eldelumab [Anti-IP-10] per la colite ulcerosa: uno studio randomizzato, controllato con placebo, di fase 2b.Interferone-γ- inducible protein-10 [IP-10] media il traffico delle cellule immunitarie dalla circolazione al colon infiammato e diminuisce la sopravvivenza delle cellule epiteliali intestinali. L'espressione di IP-10 è aumentata nei pazienti con colite ulcerosa [UC]. Riportiamo i risultati di efficacia e sicurezza da un studio di induzione con range di dose di eldelumab, un anticorpo monoclonale completamente umano anti-IP-10, in CU attiva da moderata a grave Un totale di 252 adulti con UC [punteggio Mayo ≥ 6 e sottopunteggio endoscopico ≥ 2] sono stati randomizzati 1:1:1 a placebo o eldelumab 15 o 25 mg/kg somministrato per via endovenosa nei giorni 1 e 8 e successivamente a settimane alterne L'endpoint primario era la remissione clinica [punteggio Mayo ≤ 2; nessun punteggio di sottoscala individuale > 1] alla settimana 11. Endpoint secondari chiave includevano la risposta clinica del punteggio Mayo e la guarigione della mucosa alla settimana 11. Né eldelumab 15 né 25 mg/kg hanno determinato aumenti significativi rispetto al placebo nella proporzione di pazienti che hanno raggiunto la remissione clinica alla settimana 11. I tassi di remissione e risposta sono stati del 17,6% e 47,1% con eldelumab 25 mg/kg, 13,1% e 44,0% con eldelumab 15 mg/kg e 9,6% e 31,3% con placebo. La remissione clinica e i tassi di risposta sono stati più elevati nei pazienti naïve al fattore di necrosi antitumorale [TNF] trattati con eldelumab rispetto al placebo. Il trattamento con Eldelumab è stato ben tollerato e non è stata osservata alcuna immunogenicità. L'endpoint primario non è stato raggiunto con il trattamento di induzione con eldelumab 15 o 25 mg/kg in pazienti con UC. Le tendenze verso la remissione clinica e la risposta sono state osservate nella popolazione complessiva ed erano più pronunciate nei pazienti naïve agli anti-TNF. I segnali di sicurezza di Eldelumab erano coerenti con quelli riportati in precedenza [ClinicalTrials. gov number, NCT01294410].
Gamabufotalin, un importante derivato del bufadienolide, inibisce l'angiogenesi indotta da VEGF sopprimendo la via di segnalazione del VEGFR-2.Gamabufotalin (CS-6), un principale composto attivo isolato dalla medicina cinese Chansu, ha dimostrato di inibire fortemente la crescita delle cellule tumorali e la risposta infiammatoria. Tuttavia, i suoi effetti sull'angiogenesi non sono ancora noti. Qui, abbiamo cercato di determinare gli effetti biologici di CS-6 sui meccanismi di segnalazione durante l'angiogenesi. I nostri risultati attuali dimostrano pienamente che CS-6 potrebbe inibire significativamente la proliferazione, la migrazione, l'invasione e la tubulogenesi degli HUVEC innescati da VEGF in vitro e ha bloccato la vascolarizzazione nei tappi Matrigel impregnati nei topi C57/BL6, nonché la ridotta densità dei vasi nello xenotrapianto di tumore polmonare umano impiantato in topi nudi. Le simulazioni al computer hanno rivelato che CS-6 interagiva con i siti di legame dell'ATP di VEGFR-2 utilizzando il docking molecolare. Inoltre, l'analisi western blot ha indicato che CS-6 inibisce ed la fosforilazione indotta da VEGF della chinasi VEGFR-2 e sopprime l'attività delle cascate di segnalazione mediate da VEGFR-2. Pertanto, i nostri studi hanno dimostrato che CS-6 ha inibito l'angiogenesi inibendo l'attivazione delle vie di segnalazione del VEGFR-2 e CS-6 potrebbe essere un potenziale candidato nella terapia della malattia correlata all'angiogenesi.
Associazione delle molecole di catechina nell'acqua: studio del legame quantitativo e analisi della struttura complessa.Le associazioni tra le molecole di catechina sono state studiate mediante (1) esperimenti di titolazione H NMR Otto catechine del tè verde formavano dimeri autoassemblati in acqua e le catechine di tipo gallato avevano una maggiore tendenza ad autoassociarsi rispetto alle catechine di tipo non gallato. Tutte e otto le catechine si associavano anche come complessi eterodimeri 1:1. dell'epigallocatechina-3-O-gallato (EGCg) e dell'epigallocatechina (EGC) con le altre catechine hanno mostrato che l'affinità tra EGCg e le catechine di tipo 2,3-trans-gallato era notevolmente elevata e l'affinità di legame di EGCg per ECg era anche piuttosto forte. Al contrario, l'EGC della catechina non di tipo gallato ha mostrato un'affinità di legame generalmente bassa per altre catechine. Le analisi strutturali dei complessi mediante esperimenti ROESY e calcoli della teoria del funzionale della densità hanno dimostrato che il bindi superiore Le capacità di ng delle catechine di tipo gallato sono dovute alla fornitura di interazioni intermolecolari multiple che rimangono efficaci in un ambiente acquoso, come le interazioni aromatiche/aromatiche o CH/π.
Biosensore elettrochimico per il rilevamento del DNA di Mycobacterium tuberculosis basato su una piattaforma di elettrodi array di nanotubi d'oro.La tecnica di deposizione elettrochimica assistita da modello è stata utilizzata per la sintesi di nanotubi d'oro array (AuNTsA). La struttura morfologica degli AuNTsA sintetizzati è stata osservata mediante microscopia elettronica a scansione e ha scoperto che i singoli nanotubi sono lunghi circa 1,5 μm con un diametro di 200 nm. I nanotubi sono allineati verticalmente al film spesso di Au, che si forma durante il processo di sintesi dei nanotubi. Le prestazioni elettrochimiche di AuNTsA sono state confrontate con l'elettrodo di Au nudo e hanno scoperto che AuNTsA ha una superficie di trasferimento di elettroni migliore rispetto all'elettrodo di Au nudo che è dovuto all'elevata area superficiale. Quindi, l'AuNTsA è stato utilizzato come un elettrodo per la fabbricazione del biosensore di ibridazione del DNA per la rilevazione del DNA di Mycobacterium Tuberculosis Il biosensore di ibridazione del DNA costruito da AuNTsA elecr ode è stato caratterizzato mediante tecnica di voltammetria ciclica con Fe(CN)6(3-/4-) come indicatore redox elettrochimico. La selettività del biosensore fabbricato è stata illustrata dall'ibridazione con DNA complementare e DNA non complementare con l'elettrodo AuNTsA immobilizzato con DNA della sonda utilizzando blu di metilene come indicatore di ibridazione. Il biosensore elettrochimico del DNA sviluppato mostra un buon intervallo lineare di concentrazione di DNA complementare da 0,01 ng/μL a 100 ng/μL con un alto limite di rilevamento.