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La proteina TcpC di E. coli Nissle migliora la funzione di barriera epiteliale che coinvolge la segnalazione di PKCζ ed ERK1/2 nelle cellule HT-29/B6.Il probiotico Escherichia coli Nissle 1917 (EcN) è ampiamente utilizzato per mantenere la remissione nella colite ulcerosa. Si pensa che questo sia mediato da vari effetti immunomodulatori e stabilizzanti della barriera nell'intestino. In questo studio, i meccanismi di modulazione della barriera da parte dell'EcN sono stati studiati nell'uomo modello di coltura cellulare epiteliale HT-29/B6. Il supernatante EcN ha aumentato la resistenza transepiteliale (TER) e ridotto la permeabilità al mannitolo a causa della chiusura della via di passaggio paracellulare, come rivelato dalla spettroscopia di impedenza a due vie. Questo aumento del TER è stato attribuito alla proteina TcpC di EcN. TcpC ha indotto la fosforilazione della proteina chinasi C-ζ (PKCζ) e della chinasi 1/2 (ERK1/2) regolata dal segnale extracellulare, che a sua volta ha provocato l'upregulation della proteina claudina 14 che forma la giunzione stretta. mettere a tacere dell'espressione proteica di piccoli RNA interferenti (siRNA), è stata confermata la funzione di tenuta della claudina-14. In conclusione, la proteina TcpC di EcN influenza l'immunità innata migliorando la funzione della barriera intestinale attraverso la sovraregolazione della claudina-14 tramite la segnalazione PKCζ e ERK1/2.
Evoluzione adattiva della proteina a giunzione stretta claudina-14 nelle balene ecolocalizzate.Balene dentate e pipistrelli hanno sviluppato indipendentemente un udito ultrasonico specializzato per l'ecolocalizzazione. Recenti scoperte hanno hanno suggerito che diversi geni tra cui Prestin, Tmc1, Pjvk e KCNQ4 sembrano aver subito adattamenti molecolari associati all'evoluzione di questo udito ultrasonico nei mammiferi. Qui abbiamo studiato il gene dell'udito Cldn14, che codifica per la proteina claudina-14 ed è un membro della stretta proteine di giunzione che funzionano nell'organo di Corti nell'orecchio interno per mantenere un gradiente cationico tra endolinfa e perilinfa. Particolari mutazioni nella claudina-14 umana danno origine a sordità non sindromica, suggerendo un ruolo essenziale nell'udito. I nostri risultati hanno scoperto due scoppi di selezione positiva, uno nel ramo ancestrale di tutte le balene dentate e un secondo nel ramo che conduce alle balene delfinidi, focoenidi e ziphiidi. Questi due rami sono th Sono uguali a quelli precedentemente riportati per mostrare una selezione positiva nel gene Prestin. Inoltre, come con Prestin, le frequenze uditive stimate delle balene sono significativamente correlate con il numero di sostituzioni non sinonime dei rami in Cldn14, ma non con cambiamenti sinonimi. Tuttavia, contrariamente a Prestin, non abbiamo trovato prove di selezione positiva nei pipistrelli. I nostri risultati di Cldn14, e i confronti con Prestin, implicano fortemente più loci nell'acquisizione dell'ecolocalizzazione nei cetacei, ma evidenziano anche possibili differenze nel percorso evolutivo verso l'ecolocalizzazione preso da balene e pipistrelli.
Staphylococcus aureus La proteina 2 legante la penicillina può utilizzare il lipide II Depsi derivato da ceppi resistenti alla vancomicina per la sintesi della parete cellulare.Staphylococcus aureus resistente alla vancomicina (S. aureus) (VRSA) utilizza precursori della parete cellulare modificati contenenti depsipeptide per la biosintesi del peptidoglicano. La transglicosilasi è responsabile della polimerizzazione del peptidoglicano e la proteina legante la penicillina 2 (PBP2) svolge un ruolo importante nella polimerizzazione tra diverse transglicosilasi di wild-type S. aureus. Tuttavia, non è chiaro se VRSA elabora il precursore del peptidoglicano contenente depsipeptide utilizzando PBP 2. Qui, descriviamo la sintesi totale di depsi-lipide I, un precursore della parete cellulare di VRSA. Utilizzando questa chimica, abbiamo preparato un analogo depsi-lipide II come substrato per un sistema di transglicosilazione privo di cellule. Il sistema ricostituito ha rivelato che la PBP2 di S. aureus è in grado di elaborare un intermedio depsi-lipide II come efficiente tly come il suo substrato normale. Inoltre, il sistema è stato utilizzato con successo per dimostrare la differenza nella modalità d'azione dei due antibiotici moenomicina e vancomicina.
La ionoforesi anodica di uno stimolatore della guanilato ciclasi solubile induce un aumento sostenuto del flusso sanguigno cutaneo nei ratti.Il trattamento delle ulcere digitali correlate alla sclerosi sistemica è Sebbene gli unici farmaci efficaci siano gli analoghi della prostaciclina, il loro uso è limitato dalle reazioni avverse correlate alla vasodilatazione. In questo studio, abbiamo valutato la somministrazione locale di ionoforesi di tre guanilato ciclasi solubili (A-350619 [3-[2-[(4 -clorofenil)tiofenil]-N-[4-(dimetilammino)butil]-2-propenammide cloridrato], SIN-1 [ammino-3-morfolinil-1,2,3-ossadiazolo cloruro] e CFM 1571 [3-[ 3-(dimetilammino)propossi]-N-(4-metossifenil)-1-(fenilmetil)-1H-pirazolo-5-carbossammide cloridrato]) e due agonisti del recettore della prostaglandina I2 (prostaciclina) non prostanoide (MRE-269 [[4- [(5,6-difenilpirazinil)(1-metiletil)ammino]butossi]-acido acetico] e BMY 45778 [[3-(4,5-difenil[2,4\'-biossazolo]-5\'-il) fenossi]acido acetico]) per indurre vasodilatazione sui quarti posteriori dei ratti anestetizzati. Il flusso sanguigno cutaneo è stato quantificato utilizzando l'imaging laser Doppler durante l'intera esperienza e la sicurezza è stata valutata mediante la registrazione continua della pressione sanguigna e l'esame istopatologico. La ionoforesi anodica di A-350619 (7,54 mM) ha indotto un aumento sostenuto del flusso sanguigno cutaneo (P = 0,008 rispetto al controllo). Tutti gli altri farmaci hanno mostrato scarso o nessun effetto sul flusso sanguigno della pelle. La vasodilatazione con la ionoforesi A-350619 era dipendente dalla concentrazione (7,5, 0,75 e 0,075 mM; P < 0,001, test di tendenza Jonckheere-Terpstra) e le somministrazioni ripetute non suggeriscono alcun rischio di tolleranza. Questo studio ha anche confrontato i protocolli di ionoforesi continua e intermittente. La ionoforesi anodica continua di A-350619 a 7,5 mM aumenta il flusso sanguigno cutaneo con una buona tolleranza locale. La ionoforesi degli stimolatori solubili della guanilato ciclasi dovrebbe essere studiata come potenziale terapia locale per l'ulcerazione digitale nei pazienti con sclerodermia.
Il nuovo farmaco nootropico sunifiram migliora l'efficacia sinaptica dell'ippocampo tramite il sito di legame della glicina del recettore N-metil-D-aspartato.Sunifiram è un nuovo pirrolidone nootropico farmaco strutturalmente correlato al piracetam, che è stato sviluppato per i disturbi neurodegenerativi come il morbo di Alzheimer. Sunifiram è noto per migliorare la funzione cognitiva in alcuni esperimenti comportamentali come il compito del labirinto acquatico di Morris. Per rispondere alla domanda se il sunifiram influisca sul recettore N-metil-D-aspartato (NMDAR)-dipendente funzione sinaptica nella regione CA1 dell'ippocampo, abbiamo valutato gli effetti di sunifiram sul potenziamento a lungo termine (LTP) NMDAR-dipendente mediante elettrofisiologia e sulla fosforilazione delle proteine sinaptiche mediante analisi di immunoblotting. In fettine di ippocampo di topo, sunifiram a 10 -100 nM ha aumentato significativamente l'LTP in una relazione dose-risposta a forma di campana che ha raggiunto il picco a 10 nM. L'aumento dell'LTP mediante il trattamento con sunifiram è stato inibito dall'acido 7-cloro-chinurenico (7-ClKN), un antagonista per il sito di legame della glicina di NMDAR, ma non da ifenprodil, un inibitore per il sito di poliammina di NMDAR. L'aumento di LTP da parte del sunifilam è stato associato ad un aumento della fosforilazione del recettore α-amino-3-idrossi-5-metilisozazolo-4-propionato (AMPAR) attraverso l'attivazione della proteina chinasi II calcio/calmodulina-dipendente (CaMKII) e un aumento nella fosforilazione di NMDAR attraverso l'attivazione della protein chinasi Cα (PKCα). I trattamenti con Sunifiram a 1-1000 nM hanno aumentato la pendenza dei potenziali postsinaptici eccitatori di campo (fEPSP) in modo dose-dipendente. Il miglioramento è stato associato ad un aumento della fosforilazione del recettore AMPAR attraverso l'attivazione di CaMKII. È interessante notare che, in condizioni basali, i trattamenti con sunifiram hanno aumentato le attività di PKCα (Ser-657) e della famiglia Src (Tyr-416) con la stessa curva dose-risposta a campana di quella del picco di LTP a 10 nM. L'aumento della fosforilazione di PKCα (Ser-657) e Src (Tyr-416) indotto da sunifiram è stato inibito dal trattamento con 7-ClKN. L'aumento di LTP da parte di sunifiram è stato significativamente inibito da PP2, un inibitore della famiglia Src. Infine, quando pretrattati con un'alta concentrazione di glicina (300 μM), i trattamenti con sunifiram non sono riusciti a potenziare l'LTP nella regione CA1. Presi insieme, sunifiram stimola il sito di legame della glicina di NMDAR con l'attivazione concomitante di PKCα attraverso la chinasi Src. Il potenziamento dell'attività di PKCα innesca il potenziamento della LTP dell'ippocampo attraverso l'attivazione di CaMKII.
Attività fitotossica e metabolismo della Botrytis cinerea e relazioni struttura-attività dei derivati isocaryolani.La ricerca è stata condotta sulla biotrasformazione di (8S,9R) -isocariolan-9-olo (4a) e (1S,2S,5R,8S)-8-metilene-1,4,4-trimetiltriciclo[6.2.1.0(2,5)]undecan-12-olo (5a) da il fitopatogeno fungino Botrytis cinerea. La biotrasformazione del composto 4a ha prodotto i composti 6-9, mentre la biotrasformazione del composto 5a ha prodotto i composti 10-13. E' stata valutata l'attività dei composti 4a e 5a contro B. cinerea. (8R,9R)- L'isocariolano-8,9-diolo (6), un importante metabolita del composto 4a, mostra attività rispetto al suo composto progenitore 4a, che è inattivo. L'effetto degli isocaryolani 3, 4a e 5a, insieme ai loro prodotti di biotrasformazione 6-8 , 10 e 14-17, sulla germinazione e sulla crescita delle radichette e dei germogli di Lactuca sativa (lattuga) sono stati anche determinati. I composti 7-13 sono descritti per la prima volta.
L'eterozigosi di Claudin14 stromale, ma non la delezione, aumenta la perdita di sangue del tumore senza influire sulla crescita del tumore.Il mantenimento delle giunzioni cellula-cellula endoteliale è vitale per il controllo della perdita dei vasi sanguigni ed è noto per essere importante nella crescita e nella maturazione di nuovi vasi sanguigni durante l'angiogenesi. Qui abbiamo studiato il ruolo di una molecola a giunzione stretta, Claudin 14, nella perdita dei vasi sanguigni del tumore, nell'angiogenesi e nella crescita del tumore. Utilizzando modelli tumorali singenici, i nostri risultati hanno mostrato che l'ablazione genetica di Claudin 14 non era sufficiente per influenzare la morfologia o la funzione dei vasi sanguigni tumorali Tuttavia, e sorprendentemente, i topi eterozigoti Claudin 14 mostravano diversi fenotipi correlati ai vasi sanguigni, tra cui: interruzione di ZO-1- giunzioni cellula-cellula positive nei vasi sanguigni tumorali, distribuzione anormale della laminina della membrana basale attorno ai vasi sanguigni tumorali, aumento della perdita intratumorale e diminuzione dell'ipossia intratumorale. ionalmente, sebbene il numero totale di vasi sanguigni tumorali fosse aumentato nei topi Claudin 14-eterozigoti e nell'angiogenesi stimolata da VEGF ex vivo, il numero di vasi luminati non era cambiato tra i genotipi e questo era correlato con nessuna differenza nella crescita tumorale singenica tra i genotipi selvatici. tipo, Claudin 14-eterozigoti e Claudin 14-null. Infine, Claudin 14-eterozigosi, ma non completa carenza, ha anche aumentato significativamente la proliferazione delle cellule endoteliali. Questi dati stabiliscono un nuovo ruolo per Claudin 14 nella regolazione dell'integrità dei vasi sanguigni tumorali e dell'angiogenesi che è evidente solo dopo la perdita parziale di questa molecola nei topi Claudin 14-eterozi ma non nei topi Claudin 14-null.
Colore, attività fenolica e antiossidante di mora (Rubus glaucus Benth.), mirtillo (Vaccinium floribundum Kunth.) e vini di mele dell'Ecuador.Settanta vini sono stati prodotti in Ecuador in diverse condizioni di lavorazione con frutti locali: more andine (Rubus glaucus Benth. ) e mirtilli (Vaccinium floribundum Kunth. ) e mele Golden Reinette. I vini sono stati valutati per l'attività antiossidante (AA) utilizzando la capacità di scavenging dei radicali. (DPPH), contenuto fenolico totale (TPC) utilizzando il metodo Folin-Ciocalteu, antociani monomerici totali (TMA) utilizzando il test differenziale del pH e parametri di colore utilizzando la spettrofotometria VIS. Per i vini di mora, gli ellagitannini e gli antociani sono stati analizzati anche utilizzando -cromatografia liquida ad alte prestazioni con rilevamento a serie di diodi (HPLC-DAD). I vini di mele (n = 40) avevano il TPC (608 ± 86 mg/L) e l'AA più bassi (2,1 ± 0,3 mM Trolox). I vini di mirtillo (n \ = 12) aveva un TPC elevato (1086 ± 194 mg/L ) e AA moderato (5,4 ± 0,8 mM) ma TMA molto basso (8 ± 3 mg/L), con un colore evoluto verso sfumature gialle e blu. I vini Blackberry (n = 10) avevano il TPC più alto (1265 ± 91 mg/L) e AA (12 ± 1 mM). Gli ellagitannini erano i principali fenoli (1172 ± 115 mg/L) e si correlavano bene con l'AA (r = 0,88). All'interno degli antociani (TMA 73 ± 16 mg/L), predominavano la cianidina-3-rutinoside (62%) e la cianidina-3-glucoside (15%). I vini ottenuti per cofermentazione di mele e more (n = 8) hanno mostrato caratteristiche intermedie (TPC 999 ± 83 mg/L, AA 6,2 ± 0,7 mM, TMA 35 ± 22 mg/L) tra i vini di mora e mirtillo. I risultati suggeriscono che le bacche andine, in particolare R. glaucus, sono materie prime adatte per produrre vini con una capacità antiossidante in vitro paragonabile ai vini a bacca rossa.
Ottimizzazione di una procedura GC/MS che utilizza l'analisi fattoriale parallela per la determinazione dei bisfenoli e dei loro diglicidil eteri dopo la migrazione da stoviglie in policarbonato.Bisfenolo A (BPA), bisfenolo F (BPF) e i loro corrispondenti diglicidileteri (BADGE e BFDGE) sono determinati simultaneamente utilizzando un sistema di gascromatografia/spettrometria di massa a vaporizzatore a temperatura programmata (PTV-GC/MS). policarbonato (PC), mentre BADGE e BFDGE sono per la produzione di resine epossidiche Diversi allarmi alimentari causati dalla migrazione di questo tipo di sostanze dai materiali a contatto con alimenti hanno portato all'armonizzazione della legislazione europea nel regolamento (UE) n. 2011, in vigore dal 14 gennaio 2011. Di conseguenza, l'uso del BPA è stato vietato nella fabbricazione di biberon di plastica dal 1 maggio 2011 e dal 1 giugno 2011 per quanto riguarda l'immissione sul mercato e l'importazione nel Unione. Di recente, il Parlamento francese ha decretato che sarà vietata la presenza di BPA in qualsiasi contenitore per alimenti. Allo stesso modo, non sono consentiti l'uso e/o la presenza di BFDGE. In questo lavoro è stato sviluppato un metodo GC/MS per la determinazione simultanea di BPF, BPA, BFDGE e BADGE. Per ciascuno dei campioni I che vengono analizzati, l'abbondanza dei rapporti m/z caratteristici di J viene registrata a K volte intorno al tempo di ritenzione di ciascun picco, quindi si ottiene un tensore di dati di dimensione I×J×K per ogni analita. La scomposizione di tale tensore mediante analisi fattoriale parallela (PARAFAC) consente di: (a) identificare in modo univoco ciascun analita secondo le tolleranze massime consentite per le intensità relative degli ioni, e (b) quantificare ciascun analita, anche in presenza di coeluenti. Questa identificazione, basata sullo spettro di massa e sul tempo di ritenzione, garantisce la specificità dell'analisi. Questa specificità potrebbe fallire se si considera il cromatogramma ionico totale (TIC) quando c'è una scarsa risoluzione tra alcuni picchi o se gli interferenti coeluiscono. Allo scopo di studiare l'effetto dell'accorciamento del tempo dell'analisi sulla qualità delle determinazioni mantenendo la specificità delle identificazioni, due delle rampe di riscaldamento nel programma di temperatura del forno vengono modificate secondo un disegno fattoriale a due livelli. Ciascun analita viene identificato mediante una scomposizione PARAFAC di un tensore di dati ottenuto da più livelli di concentrazione, in modo tale da calcolare cinque cifre di merito per ogni esperimento del disegno. L'analisi di queste cifre di merito per i 16 oggetti (4 composti×4 rampe di riscaldamento) utilizzando l'analisi delle componenti principali (PCA) mostra che dovrebbe essere considerato il programma di temperatura più breve, poiché questo è quello con le migliori figure di merito per BPA e BFDGE (entrambi banditi) sono raggiunti con. A queste condizioni e con probabilità di falsi positivi e falsi negativi fissati a 0,05, valori di capacità di rilevamento (CCβ) compresi tra 2,65 e 4,71 μg L(-1) quando l'acetonitrile è il solvente di iniezione e tra 1,97 e 5,53 μg L(-1 ) quando si ottiene l'acetone. Questo metodo GC/MS è stato applicato alla determinazione simultanea di BPF, BPA, BFDGE e BADGE nel simulante alimentare D1 (etanolo-H2O, 1:1 v/v), che era stato precedentemente a contatto con stoviglie per PC per 24 ore a 70 °C e quindi pretrattato con una fase di estrazione in fase solida (SPE). Viene confermata la migrazione del BPA dai nuovi contenitori di PC analizzati e sono stati stimati valori compresi tra 104,67 e 181,46 μg L(-1) (0,73 e 1,27 μg L(-1) dopo correzione) di BPA. Nessuno dei risultati ottenuti supera il limite di migrazione specifica di 600 μg L(-1) stabilito dalla legge per il BPA nei materiali alimentari plastici diversi dai biberon PC. Gravi problemi di coeluizione degli interferenti sono stati superati utilizzando le decomposizioni PARAFAC nell'analisi di questi campioni di simulanti alimentari.
Analisi del gene CLDN14 in pazienti sordi marocchini con ipoacusia non sindromica.Mutazioni nel gene CLDN14, che codifica per la proteina claudina 14 a giunzione stretta stato segnalato fino ad oggi in una forma autosomica recessiva di ipoacusia isolata DFNB29. Per identificare il contributo di CLDN14 alla sordità ereditaria nella popolazione marocchina, abbiamo eseguito un'analisi genetica di questo gene in 80 casi familiari marocchini. I nostri risultati mostrano la presenza di 7 mutazioni: 6 essendo conservativo e uno che porta a una mutazione missenso (C11T) che è stata trovata negli stati eterozigoti e omozigoti, con una frequenza generale del 6,87%. La patogenicità della risultante sostituzione T4M è in discussione. Infine, il nostro studio suggerisce che Il gene CLDN14 può essere implicato nello sviluppo della perdita dell'udito nella popolazione marocchina.
Imaging della funzione della glicoproteina P nei ratti utilizzando [(11)C]-N-desmetil-loperamide.Un meccanismo che potrebbe essere responsabile del farmaco resistenza nell'epilessia è la sovraregolazione della glicoproteina P (P-gp), una pompa di efflusso di farmaci, al fuoco epilettogeno In questo studio, abbiamo cercato di valutare il potenziale di un radiotracciante PET P-gp recentemente sviluppato, [(11) C]N-desmetil-loperamide ([(11)C]dLop), per misurare la funzione della P-gp nel cervello di ratto Il precursore del [(11)C]dLop è stato sintetizzato in due fasi da materiali di partenza disponibili in commercio e successivamente radiomarcato in un unico passaggio utilizzando [(11)C]ioduro di metile. [(11)C]dLop è stato quindi somministrato a due gruppi di ratti, controlli (n = 4) e quelli trattati con un inibitore della P-gp (n = 8). La ciclosporina A (CsA, 50 mg/kg, n = 3) e il tariquidar (TQ, 20 mg/kg, n = 5) sono stati entrambi utilizzati come inibitori della P-gp. Le scansioni cerebrali MicroPET sono state eseguite per 120 min con prelievo di sangue arterioso Un compartimento monotessuto modello è stato utilizzato per stimare il volume di distribuzione del radiotracciante come misura di esito della funzione P-gp. I livelli plasmatici del genitore [(11)C]dLop sono diminuiti rapidamente fino a <0.1 valore medio di assorbimento standardizzato (SUV) a 60 min. Nei controlli, l'assorbimento cerebrale di [(11)C]dLop era molto basso (<0.1 significa SUV). Al contrario, i SUV medi erano significativamente più alti nei ratti trattati con CsA (0,51) o TQ (0,22). La stima dei volumi di distribuzione è rimasta stabile di 70 min. I volumi di distribuzione stimati erano significativamente maggiori dopo l'inibizione della P-gp (CsA = 7.3, TQ = 4.7) rispetto ai controlli (nessun inibitore = 2.1). Il cervello di ratto dimostra un aumento significativo dell'assorbimento di [(11)C]dLop dopo l'inibizione della P-gp. [(11)C]dLop è un substrato della P-gp e servirà come promettente radiotracciante per studiare la funzione della P-gp in futuro.
Simulazione dinamica molecolare del dominio ammino terminale mGluR5: l'analisi della dinamica essenziale cattura il comportamento agonista o antagonista dei ligandi.Descriviamo l'applicazione della dinamica molecolare seguita mediante analisi delle componenti principali per studiare i movimenti inter-dominio del dominio di legame del ligando (LBD) di mGluR5 in risposta al legame di agonisti o antagonisti selezionati. I nostri risultati suggeriscono che il metodo è un'alternativa interessante agli approcci attuali per prevedere l'agonista- risposte LBD indotte o bloccate da antagonisti. Il rapporto tra gli autovalori del primo e del secondo autovettore (R1,2) è proposto anche come descrittore numerico per discriminare il comportamento del ligando come agonista o antagonista di mGluR5.
Ruoli stimolatori e inibitori del 2-arachidonoilglicerolo cerebrale nell'attivazione centrale indotta da bombesina del deflusso adrenomidollare nei ratti.2-Arachidonoylglycerol (2-AG) è riconosciuto come un potente endocannabinoide, che riduce la trasmissione sinaptica attraverso i recettori dei cannabinoidi CB(1), ed è idrolizzato dalla monoacilglicerolo lipasi (MGL) ad acido arachidonico (AA), un substrato della cicloossigenasi. Abbiamo già riportato che gli inibitori MGL e della cicloossigenasi somministrati centralmente ciascuno ha ridotto la secrezione di catecolamine surrenali indotta dalla bombesina somministrata per via intracerebroventricolare (icv), mentre un antagonista CB (1) somministrato centralmente ha potenziato la risposta, suggerendo indirettamente ruoli bidirezionali del cervello 2-AG (ruoli stimolatori e inibitori) nella risposta indotta da bombesina Nel presente studio, abbiamo esaminato separatamente questi ruoli bidirezionali utilizzando l'etere 2-AG e 2-AG (2-AG-E) (analogo 2-AG stabile per MGL) nei ratti. . c. v. ), ma non 2-AG-E (0,5 μmol/animale, i. c. v. ), catecolamine plasmatiche basali elevate con meccanismi cerebrali sensibili a JZL184 (inibitore MGL) e indometacina (inibitore della cicloossigenasi). 2-AG-E (0,1 μmol/animale, i. c. v. ) ha ridotto efficacemente l'aumento indotto dalla bombesina (1 nmol/animale, i. c. v. ) delle catecolamine plasmatiche con meccanismi cerebrali sensibili al rimonabant (antagonista CB (1)). Studi immunoistochimici hanno dimostrato l'attivazione indotta dalla bombesina dei neuroni spinali positivi di diacilglicerolo lipasi α (enzima produttore di 2-AG) nel nucleo paraventricolare ipotalamico, un centro di controllo del deflusso surrenalico centrale. Questi risultati indicano direttamente ruoli bidirezionali del cervello 2-AG, un ruolo stimolante come precursore di AA e un ruolo inibitorio come endocannabinoide, nel deflusso surrenalico centrale indotto dalla bombesina nei ratti.
L'effetto stabilizzante dei mastociti di (-)-Elema-1,3,11(13)-trien-12-olo e tujopsene da Thujopsis dolabrata è mediato dalla down-regulation della secrezione di interleuchina-4 nelle cellule RBL-2H3 indotte dall'antigene.Diversi composti isolati dalla parte legnosa di Thujopsis dolabrata sono stati valutati per i loro effetti inibitori contro la degranulazione dei mastociti indotta dall'antigene e l'interleuchina-4 (IL -4) secrezione, nonché espressione dell'mRNA e della proteina di IL-4 in cellule RBL-2H3 sensibilizzate con immunoglobuline E (IgE). Tra i cinque composti isolati, (-)-elema-1,3,11(13)-trien -12-olo (1) e tujopsene (2) hanno mostrato la potente attività inibitoria contro la degranulazione dei mastociti misurata dal rilascio di β-esosaminidasi con valori IC rispettivamente di 27,4 µM e 25,1 µM. Questi composti hanno anche inibito il rilascio di IL-4 ( valori di IC di 7,0, 6,7 µM, rispettivamente), espressione di mRNA di IL-4 (valori di IC di 16,5, 7,2 µM, rispettivamente) ed espressione di proteine IL-4 (valori di IC di 17,0, 9,6 µM, res specificatamente) in cellule RBL-2H3 sensibilizzate con IgE antigene-indotte. Questi risultati hanno suggerito che (-)-elema-1,3,11(13)-trien-12-olo (1) e tujopsene (2) inibiscono efficacemente la degranulazione dei mastociti e la produzione di IL-4, suggerendo che questi composti da Thujopsis dolabrata può essere usato come candidato per i disturbi allergici IgE-mediati.
[Determinazione dei residui di bisfenolo diglicidil etere in alimenti in scatola mediante cromatografia liquida ad alta prestazione - spettrometria di massa tandem].Una determinazione quantitativa accurata e un metodo di conferma per i residui di bisfenolo diglicidil etere, bisfenolo A diglicidil etere (BADGE), bisfenolo F diglicidil etere (BFDGE), bisfenolo A (2,3-diidrossipropil) glicidil etere (BADGE H2O), bisfenolo A bis (2,3-diidrossipropil) etere ( BADGE x 2H2O), bisfenolo A (3-cloro-2-idrossipropil) (2,3-diidrossipropil) etere (BADGE x H2O x HCl), bisfenolo A (3-cloro-2-idrossipropil) glicidil etere (BADGE x HCl ), bisfenolo A bis(3-cloro-2-idrossipropil) etere (BADGE x 2HCl), bisfenolo F bis (2, 3-diidrossipropil) etere (BFDGE x 2H2O), bisfenolo F bis (3-cloro-2-idrossipropil) etere (BFDGE x 2HCl) in alimenti in scatola mediante cromatografia liquida ad alta prestazione-spettrometria di massa tandem (HPLC-MS/MS) è stato stabilito Il campione è stato estratto con tert-butilme l'etere di til e l'estratto sono stati ripuliti e concentrati su una colonna Waters Oasis HLB. I composti target sono stati analizzati mediante HPLC-MS/MS su una colonna C18 mediante eluizione in gradiente con metanolo e 5 mmol/L di acetato di ammonio contenente 0,1% di acido formico in una modalità di scansione di monitoraggio delle reazioni multiple (MRM). Per la determinazione quantitativa sono state utilizzate soluzioni standard di matrice esterna e le curve di calibrazione hanno mostrato una buona linearità nell'intervallo di concentrazione di 10,0-2 000,0 microg/L per i nove composti target. I limiti di quantificazione dei nove composti erano 10,0 microg/kg (S/N > o = 10). I recuperi medi dei nove composti variavano dal 79,6% al 100,9% ai livelli addizionati di 10,0, 100,0, 1 000,0 microg/kg con le relative deviazioni standard (RSD) del 6,3% -12,1%. Il metodo è sensibile, accurato e adatto per la rapida determinazione dei residui di bisfenolo diglicidil etere negli alimenti in scatola.
Rilevamento sensibile del 3\'-idrossi-stanozolol glucuronide mediante cromatografia liquida-spettrometria di massa tandem.Stanozolol è uno degli steroidi anabolizzanti più frequentemente rilevati nei campioni di controllo antidoping. Questo composto viene metabolizzato in larga misura e i suoi metaboliti possono essere rilevati nelle urine molto più a lungo del composto originario. I principali metaboliti dello stanozololo sono escreti nelle urine come coniugati glucuronide e 3\'-idrossi-stanozololo glucuronide (3STANG ) è uno dei più importanti nell'urina umana. Pertanto l'idrolisi enzimatica viene solitamente applicata prima dell'estrazione. In questo articolo viene descritto un metodo per la rilevazione sensibile del 3\'-idrossi-stanozolol glucuronide, mediante cromatografia liquida e spettrometria di massa tandem Il metodo si avvale di una preparazione del campione facile e veloce basata su una singola estrazione in fase solida evitando l'idrolisi enzimatica o la derivatizzazione. Permette di rilevare l'abuso di stanozololo nell'urina umana ne a 25pgmL(-1). Il metodo è stato validato secondo le linee guida Eurachem. L'effetto matrice, espresso come potenziamento ionico, è stato di +14%. Il recupero estrattivo del metodo è stato del 93%. Il limite di rilevamento (LOD), per il quale sono soddisfatti tutti i criteri WADA in cromatografia e spettrometria di massa, è stato determinato a 50 pgmL(-1). L'applicazione del metodo a uno studio sull'escrezione ha rivelato che il 3\'-idrossi-stanozololo glucuronide può essere confermato per 10 giorni dopo la somministrazione orale di 2 mg di stanozololo, prolungando i tempi di rilevamento rispetto ad altri metaboliti e metodologie di quasi il 50%.
Analisi retrospettiva delle interazioni farmacologiche mediate dalla glicoproteina-P alla barriera ematoencefalica nell'uomo.Ad oggi, l'analisi in vitro-in correlazione in vivo (IVIVC) dell'interazione farmaco-farmaco mediata dalla glicoproteina P (P-gp) (DDI) alla barriera emato-encefalica (BBB) nei ratti ha indicato che il valore di cutoff per influenzare significativamente la penetrazione cerebrale della digossina era [I ,non legato/Ki] di 1, dove I,non legato è la concentrazione plasmatica non legata degli inibitori della P-gp Sulla base dell'IVIVC nei ratti, abbiamo ipotizzato che gli inibitori della P-gp usati clinicamente non causino DDI alla BBB umana, perché nessuno dei composti studiati era [I,non legato/Ki]>1 a dosi terapeutiche. Recentemente, studi di tomografia a emissione di positroni con substrati di P-gp, come [(11)C]verapamil, [(11)C]N- desmetil loperamide e [(11)C]loperamide, insieme a potenti inibitori della P-gp, hanno indicato che negli esseri umani sono stati osservati aumenti nella costante di velocità di afflusso per l'ingresso nel cervello. med per analizzare retrospettivamente i risultati dei DDI mediati da P-gp con saggi di inibizione della P-gp in vitro e per confermare il valore di cutoff appropriato. Saggi di inibizione della P-gp in vitro utilizzando verapamil, N-desmetil loperamide e loperamide come substrati della sonda P-gp sono stati eseguiti in cellule LLC-PK1 umane che esprimono la proteina 1 della resistenza multifarmaco. I rapporti di efflusso sono diminuiti in presenza di inibitori della P-gp e il Ki di tariquidar era 10 nmol/L, indipendentemente dai substrati della sonda. Prendendo insieme il Ki in vitro e le concentrazioni plasmatiche non legate negli studi clinici sul DDI, il criterio [I,non legato/Ki] di 1 era un limite di cutoff appropriato per osservare un DDI mediato da P-gp significativo alla BEE nell'uomo. D'altra parte, non è stata osservata alcuna DDI significativa nei casi in cui [I,non legato/Ki] era inferiore a 0,1. Questo criterio era paragonabile al precedente risultato IVIVC sui ratti.
La claudina-8 e -14 umana sono recettori in grado di veicolare gli effetti citotossici dell'enterotossina di Clostridium perfringens.L'enterotossina di Clostridium perfringens (CPE) contribuisce a diversi importanti malattie gastrointestinali umane (GI). Questa tossina e i suoi derivati sono anche in fase di studio per applicazioni traslazionali, ad esempio, terapia del cancro o somministrazione di farmaci. Alcuni, ma non tutti, i membri della famiglia claudina a 24 membri (Cldn) della giunzione stretta dei mammiferi le proteine possono fungere da recettori CPE. Tra i Cldns umani (hCldns), hCldn-3 e -4 sono noti per trasmettere la sensibilità CPE quando espressi da transfettanti dei fibroblasti. Tuttavia, altri Cldns sono espressi anche nell'intestino, dove potrebbero contribuire a malattia gastrointestinale naturale mediata da CPE e in altri organi, dove potrebbero reagire con terapie a base di CPE Pertanto, il presente studio ha valutato se due ulteriori hCldn oltre a hCldn-3 e -4 sono anche recettori CPE funzionali. I transfettanti che esprimono n, hCldn-8 e -14 hanno dimostrato di trasmettere citotossicità mediata da CPE a concentrazioni fisiopatologiche rilevanti di questa tossina, sebbene da circa 2 a 10 volte in modo meno efficiente rispetto a hCldn-4. La mutagenesi sito-diretta ha quindi dimostrato che il residuo N(146) in hCldn-14 e il residuo S(151) in hCldn-8 sono in gran parte responsabili della modulazione delle proprietà di legame CPE più deboli di hCldn-8 e -14 rispetto a hCldn-4, che amplia la comprensione delle interazioni di legame Cldn:CPE. Poiché secondo quanto riferito Cldn-8 e -14 sono espressi nell'intestino dei mammiferi, i risultati attuali supportano la possibilità che questi due hCldn contribuiscano alla malattia gastrointestinale naturale mediata da CPE e potrebbero essere bersagli terapeutici basati su CPE per i tumori che sovraesprimono quelle claudine. Tuttavia, questi risultati suggeriscono anche cautela durante l'uso terapeutico di CPE, che potrebbe innescare effetti collaterali tossici nei normali tessuti umani che producono hCldn-8 o -14, nonché in quelli che producono hCldn-3 o -4. L'enterotossina di Clostridium perfringens (CPE) è responsabile dei sintomi gastrointestinali della seconda malattia batterica di origine alimentare più comune e viene anche esplorata per l'uso come terapia del cancro o per aumentare la somministrazione di farmaci. Fino ad ora, gli unici recettori CPE umani conosciuti erano claudina-3 e -4. Questo lavoro mostra che la claudina-8 e -14 umana può anche legare CPE e trasmettere citotossicità, anche se leggermente meno efficiente della claudina-3 e -4. I residui claudina-8 e -14 responsabili di questo legame CPE più debole sono stati identificati, gettando nuova luce sulle interazioni CPE:claudina.
Effetti simil-ansiogeni dell'estratto acquoso di Uncaria tomentosa (Willd.) DC. in un test del labirinto più elevato nei topi: uno studio preliminare.Il scopo di questo studio era di esaminare l'effetto degli estratti acquosi di Uncaria tomentosa (UTE) (Willd. ex Roem. \& Schult. ) DC (Rubiaceae) somministrati per via orale durante 7, 15, 30 e 90 giorni di trattamento sull'espressione di ansia, come espresso nel test del labirinto più elevato nei topi maschi Albino Swiss. L'UTE ha rivelato un effetto ansiogeno in relazione al gruppo di controllo a 15 e 30 giorni, ma è stato invertito dopo 90 giorni di somministrazione, senza influenzare l'attività locomotoria o qualsiasi gli effetti deleteri sulle prestazioni complessive dell'animale, sia per la sua deambulazione, sia per lo stato clinico, e il peso corporeo e il peso dell'organo/peso corporeo da fegato, polmone e rene non sono stati influenzati Questi effetti bifasici sono generalmente indicativi di eterogeneità nei siti di azione dovuti alla presenza di molti alcaloidi (speciophyl linea, uncarina F ed uncarina E) e flavanoli (catechina ed epigallocatechina) identificati e isolati da UTE.
Chiarimento del regulon del regolatore di resistenza multifarmaco RarA in Klebsiella pneumoniae.RarA è un regolatore di tipo AraC in Klebsiella pneumoniae, che, quando sovraespresso, conferisce un fenotipo multiresistente a basso livello (MDR) legato alla sovraregolazione dei geni di efflusso sia acrAB che oqxAB. È stato anche dimostrato che l'aumento dell'espressione di rarA è parte integrante dello sviluppo della resistenza alla tigeciclina in assenza di ramA in K. pneumoniae. Dato il suo ruolo fenotipico nella MDR, sono state eseguite analisi di microarray per determinare il regulon RarA. L'analisi del trascrittoma è stata effettuata utilizzando ceppi Ecl8ΔrarA/pACrarA-2 (costrutto che esprime rarA) e Ecl8ΔrarA/pACYC184 (controllo solo vettoriale) utilizzando vetrini su misura per microarray costituiti da sonde derivate dalle sequenze genomiche di K. pneumoniae MGH 78578 (NC_009648.1) e Kp342 (NC_011283.1). I nostri risultati mostrano che la sovraespressione di rarA ha portato all'espressione differenziale di 66 geni (42 sovraregolati e 2 4 sottoregolato). Sotto la classificazione funzionale COG (cluster di gruppi ortologhi), la maggior parte dei geni interessati apparteneva alla categoria della biogenesi dell'involucro cellulare e della modificazione post-traduzionale, insieme ai geni che codificano per le proteine di trasporto precedentemente non caratterizzate (ad esempio, KPN_03141, sdaCB e leuE) e il porin OmpF. Tuttavia, i geni associati alla produzione e conversione di energia e al trasporto/metabolismo degli amminoacidi (ad esempio, nuoA, narJ e proWX) sono risultati downregolati. Le analisi del fenotipo biologico hanno dimostrato che la sovraespressione di rarA conferisce una maggiore crescita dell'iperespressore in presenza di diverse classi di antibiotici (cioè beta-lattamici e fluorochinoloni), il composto antimicotico/antiprotozoico cliochinolo, disinfettanti (8-idrossichinolina), inibitori della sintesi proteica (cioè, minociclina e puromicina), agenti di biogenesi di membrana (polimixina B e amitriptilina), sintesi del DNA (furaltadone) e inibitore della citochinesi (sanguinarina). Sia il nostro trascrittoma che i dati del microarray fenotipico supportano ed estendono il ruolo di RarA nel fenotipo MDR di K. pneumoniae.
Effetti neurofarmacologici in vivo e profilo fitochimico dell'estratto delle parti aeree di Heteropterys brachiata (L.) DC. (Malpighiaceae).Heteropterys brachiata è una specie vegetale che è stata utilizzata nella medicina tradizionale messicana per il trattamento dei disturbi nervosi. Per valutare gli effetti ansiolitici, anticonvulsivanti, antidepressivi e sedativi prodotti dall'estratto metanolico di Heteropterys brachiata (HbMeOH) nei topi ICR. Inoltre, determiniamo la profili di tossicità acuta dell'estratto e la presenza dei suoi principali costituenti. Gli effetti neurofarmacologici dell'estratto sono stati valutati utilizzando una varietà di modelli, come l'elevato plus labirinto (EPM), il test del nuoto forzato (FST), il test di potenziamento del pentobarbital (PTBt), test convulsivo indotto da pentilentetrazolo (PTZt) e test in campo aperto (OFT). HPLC è stato impiegato per ottenere il profilo fitochimico. HbMeOH ha prodotto un significativo effetto antidepressivo in F ST a dosi di 500 e 750 mg/kg, mentre dosi da 500 a 1500 mg/kg hanno mostrato una chiara attività ansiolitica dose-dipendente nell'EPM. Una dose di 500 mg/kg ha mostrato una significativa attività anticonvulsivante in PTZt e un'assenza di effetti di sedazione in PTBt. I principali composti di HbMeOH erano l'acido clorogenico e l'estere metilico dell'acido clorogenico, nonché composti di tipo terpenico meno abbondanti. Inoltre, l'estratto era sicuro senza decessi nei topi trattati per via orale con 2000 mg/kg. L'estratto di HbMeOH che contiene principalmente acidi idrossicinnamici e composti di tipo triterpenico, possiede proprietà antidepressive, ansiolitiche e anticonvulsive e può essere considerato sicuro o di bassa tossicità se somministrato per via orale. Questi risultati forniscono una giustificazione farmacologica all'uso tradizionale di Heteropterys brachiata nel trattamento dei disturbi nervosi.
Il nuovo farmaco nootropico sunifiram migliora i deficit cognitivi tramite l'attivazione della CaM chinasi II e della proteina chinasi C nei topi bulbectomizzati olfattivamente.Mostra la malattia di Alzheimer (AD) degenerazione del sistema colinergico nel setto mediale, provocando così una down-regulation della funzione olfattiva nei pazienti. Abbiamo precedentemente riportato che i topi bulbectomizzati olfattivi (OBX) mostrano un deterioramento della memoria dipendente dall'ippocampo come valutato da compiti comportamentali legati alla memoria e dall'ippocampo lungo -term potenziation (LTP). Nel presente studio, ci siamo concentrati sul fatto che il nuovo farmaco nootropic pirrolidone sunifiram migliora sia il deterioramento della memoria che la depressione osservati nei topi OBX. I topi OBX sono stati somministrati una volta al giorno per 7-12 giorni con sunifiram (0,01-1,0 mg /kg PO) da 10 giorni dopo l'operazione con o senza gavestinel (10mg/kg ip), che è un inibitore del sito di legame della glicina del recettore N-metil-d-aspartato (NMDAR). La memoria di riferimento spaziale valutata da Y-maz e e la memoria a breve termine valutata dal nuovo compito di riconoscimento degli oggetti sono stati significativamente migliorati dal trattamento con sunifiram nei topi OBX. Sunifiram ha anche ripristinato l'LTP dell'ippocampo danneggiato nei topi OBX senza trattamento con givestinel. Al contrario, il trattamento con sunifiram non ha migliorato i comportamenti depressivi valutati dal compito di sospensione della coda nei topi OBX. In particolare, il trattamento con sunifiram ha ripristinato l'autofosforilazione di CaMKIIα (Thr-286) e la fosforilazione di GluR1 (Ser-831) nella regione CA1 dell'ippocampo dai topi OBX ai livelli dei topi di controllo. Allo stesso modo, il trattamento con sunifiram ha migliorato l'autofosforilazione di PKCα (Ser-657) e la fosforilazione di NR1 (Ser-896) ai livelli di controllo. La stimolazione dell'autofosforilazione di CaMKII e PKC da parte del sunifiram è stata significativamente inibita dal pretrattamento con Givestinel. Tuttavia, il trattamento con sunifiram non ha influenzato la fosforilazione di CaMKIV (Thr-196) e ERK. Presi insieme, sunifiram migliora i deficit indotti da OBX dei comportamenti legati alla memoria e l'alterazione dell'LTP nella regione CA1 dell'ippocampo attraverso la stimolazione del sito di legame della glicina di NMDAR.
L'attivazione del recettore sensibile al Ca(2+) aumenta l'espressione renale di claudina-14 e l'escrezione urinaria di Ca(2+).I calcoli renali sono una condizione clinica prevalente che impone un grande onere economico al sistema sanitario. L'ipercalciuria rimane il principale fattore di rischio per lo sviluppo di calcoli contenenti Ca(2+) La capacità del rene di alterare l'escrezione di Ca(2+) in risposta ai cambiamenti nel siero Ca(2+) è in parte mediato dal recettore sensibile al Ca(2+) (CaSR). Recenti studi hanno rivelato l'espressione renale di claudina-14 (Cldn14) localizzata all'arto ascendente spesso (TAL) e la sua espressione da essere regolato tramite il CaSR. Troviamo che l'espressione di Cldn14 è aumentata da un'elevata assunzione di Ca(2+) nella dieta e da elevati livelli sierici di Ca(2+) indotti dalla somministrazione prolungata di 1,25-diidrossivitamina D3. Coerentemente con ciò, l'attivazione del CaSR in vivo tramite somministrazione di cinacalcet cloridrato calcimimetico ha portato a un aumento di 40 volte dell'mRNA di Cldn14. xpression di Cldn14 in due modelli di coltura cellulare separati diminuito paracellular Ca(2+) flusso diminuendo preferenzialmente la permeabilità cationica, aumentando così la resistenza transepiteliale. Questi dati supportano l'esistenza di un meccanismo per cui l'attivazione del CaSR nel TAL aumenta l'espressione di Cldn14, che a sua volta blocca il riassorbimento paracellulare di Ca(2+). Questo meccanismo molecolare probabilmente facilita le perdite renali di Ca(2+) in risposta a un aumento del Ca(2+) sierico. Inoltre, la disregolazione dell'asse CaSR-Cldn14 appena descritto probabilmente contribuisce allo sviluppo di ipercalciuria e calcoli renali.
Effetti di aripiprazolo, risperidone e olanzapina sui recettori 5-HT1A in pazienti con schizofrenia.Per studiare l'impatto di vari farmaci antipsicotici sui 5 -HT1A serotoninergico, abbiamo condotto uno studio PET [F]4-(2-metossifenil)-1-[2-(N-2-pirydynyl)-p-luorobenzamido]-etil-piperazina in 19 pazienti schizofrenici trattati con aripiprazolo , che ha una parziale attività agonista sui recettori 5-HT1A, o antipsicotici di seconda generazione (SGA) (olanzapina o risperidone), che non dimostrano tale proprietà Abbiamo utilizzato un modello tissutale di riferimento semplificato per generare immagini parametriche di [F]MPPF potenziale di legame (BPND). Una riduzione significativa di [F]MPPF BPND è stata trovata nei pazienti schizofrenici trattati rispetto ai soggetti sani di pari età e sesso. Queste modifiche erano principalmente localizzate nella corteccia frontale e orbitofrontale e possono riflettere sia la fisiopatologia della schizofrenia o degli effetti dei farmaci i pazienti enic trattati con aripiprazolo hanno mostrato una riduzione del [F]MPPF BPND globale rispetto ai soggetti sani e ai pazienti schizofrenici con trattamento SGA. Inoltre, rispetto ai controlli appaiati, la riduzione del [F]MPPF BPND regionale è stata più marcata nei pazienti schizofrenici trattati con aripiprazolo rispetto a quelli trattati con SGA, forse riflettendo l'agonista parziale dell'attività dell'aripiprazolo sui recettori 5-HT1A.
Il farfaraccio (Petasites): analitico e fisiologico (ri)view.Il farfaraccio (Petasites) è un'antica pianta che è stata utilizzata per scopi medici e commestibili con i suoi agenti spasmolitici. Tuttavia, il contenuto di alcaloidi tossici della pianta ne limita l'uso diretto. Il documento copre in dettaglio i temi degli alcaloidi pirrolizidinici (PA) e del farfaraccio al fine di mostrare il profilo della produzione di estratti vegetali privi di alcaloidi per scopi medici e commestibili. I PA tossici e i costituenti medicinali della pianta sono descritti con particolare attenzione all'analisi, agli effetti fisiologici e ai dati di brevetto pubblicati sulla produzione di estratti privi di alcaloidi. L'analisi si basa su diversi metodi analitici comunemente usati tra cui la cromatografia liquida-spettrometria di massa, gascromatografia-spettrometria di massa e analisi immunoenzimatica di PA e N-ossidi sulla base dei dati pubblicati in letteratura sul butterbur Le analisi dei principali costituenti medicinali del butte rbur sono dati e gli effetti fisiologici di questi composti sono stati discussi per attirare l'attenzione sull'importanza della produzione di estratti privi di alcaloidi. Le distribuzioni della concentrazione dei costituenti medicinali e dei PA tossici in diverse parti della pianta e i risultati dei dati sui brevetti pubblicati forniscono informazioni complete per la corretta selezione delle materie prime vegetali e la produzione di estratti di farfaraccio senza alcaloidi. La revisione ha lo scopo di guidare i ricercatori interessati agli estratti di piante medicinali fornendo dati completi sul butterbur delle piante medicinali e sui suoi costituenti chimici.
La variabilità fenotipica delle mutazioni CLDN14 che causano la perdita dell'udito di DFNB29 nella popolazione pakistana.La sordità ereditaria umana al locus DFNB29 sul cromosoma 21q22.1 è causata da mutazioni recessive di CLDN14, che codifica per la claudina 14. Questa proteina a giunzione stretta è una copertura tetramembrana che si localizza alle giunzioni strette apicali dell'organo delle cellule ciliate di Corti e in molti altri tessuti. In genere, il fenotipo DFNB29 è caratterizzato da ipoacusia prelinguale, bilaterale, neurosensoriale L'obiettivo di questo studio era definire l'identità e la frequenza delle mutazioni CLDN14 e dei fenotipi associati dell'orecchio interno in una coorte di 800 famiglie pakistane che segregavano la sordità. È stato scoperto che la perdita dell'udito in 15 famiglie multigenerazionali è co-segregata con STR legata a CLDN14 La sequenza dei sei esoni e delle regioni che fiancheggiano gli introni di CLDN14 in queste 15 famiglie ha rivelato cinque probabili alleli patogeni. Due sono nuove sostituzioni missenso (p. Ser87Ile e p. Ala94Val), mentre p. Arg81His, p. Val85Asp e p. Met133ArgfsX23 sono stati segnalati in precedenza. Le analisi dell'aplotipo indicano che p. Val85Asp e p. Met133ArgfsX23 sono mutazioni fondatrici. Il p. Val85Asp rappresenta circa il 67% degli alleli mutanti di CLDN14 nella nostra coorte. In combinazione con i dati precedentemente riportati, le mutazioni CLDN14 sono state identificate in 18 delle 800 famiglie pakistane (2,25; 95% CI, 1,4-3,5). La perdita dell'udito negli individui affetti omozigoti per le mutazioni CLDN14 variava da moderata a profonda. Questa variabilità fenotipica può essere dovuta a fattori ambientali (ad esempio esposizione a farmaci e rumore) e/o modificatori genetici.
L'agonista selettivo del recettore 2/3 del glutammato metabotropico MGS0028 inverte le anomalie psicomotorie e i deficit di memoria di riconoscimento nei topi privi del polipeptide che attiva l'adenilato ciclasi dell'ipofisi.Precedente studi suggeriscono che i recettori metabotropici del glutammato 2/3 sono coinvolti nei disturbi psichiatrici. In questo studio, abbiamo esaminato gli effetti dell'agonista selettivo del recettore metabotropico del glutammato 2/3 (mGlu2/3) MGS0028 sulle anomalie comportamentali nei topi privi dell'adenilato ciclasi ipofisaria- activating polypeptide (PACAP), un modello sperimentale di disturbi psichiatrici come la schizofrenia e il disturbo da deficit di attenzione/iperattività Abbiamo scoperto che i topi con deficit di PACAP hanno mostrato menomazioni nel nuovo test di riconoscimento degli oggetti e queste menomazioni sono state migliorate da MGS0028 (0,1 mg/kg Allo stesso modo, MGS0028 ha migliorato l'iperattività e i comportamenti di salto, ma non ha invertito i tempi di immobilità aumentati nel test di nuoto forzato in m PACAP-carenti Ghiaccio. Questi risultati suggeriscono che MGS0028 potrebbe essere un potenziale trattamento nuovo per i disturbi psichiatrici.
Composti fenolici e bioattività del riso pigmentato.Il riso pigmentato è stato consumato a lungo in Cina, Giappone e Corea. È stato utilizzato per rafforzare la funzione renale, trattare l'anemia, favorire la circolazione sanguigna, rimuovere la stasi del sangue, curare il diabete e migliorare la vista nella medicina tradizionale cinese. Gli estratti di riso pigmentato sono usati come coloranti alimentari naturali in pane, gelati e liquori, nonché cibo funzionale. Il riso pigmentato è principalmente riso nero, rosso e viola scuro e contiene una varietà di flavoni, tannini, fenoli, steroli, tocoli, γ-orizanoli, aminoacidi e oli essenziali. Gli antociani sono considerati i principali componenti funzionali di riso pigmentato Diversi antociani sono stati isolati e identificati dal riso pigmentato, tra cui cianidina 3-glucoside, cianidina 3-galattoside, cianidina 3-rutinoside, cianidina 3,5-diglucoside, malvidina 3-galattoside, peonidina 3-glucoside e pelargo nidina 3,5-diglucoside. Questa recensione fornisce una copertura aggiornata del riso pigmentato per quanto riguarda i costituenti bioattivi, i metodi di estrazione e analitici e le bioattività. Particolare attenzione è rivolta alle bioattività, comprese le attività antiossidanti e antiradicali liberi, antitumorali, antiaterosclerosi, ipoglicemizzanti e antiallergiche.
MitoQ attenua il danno mitocondriale e renale durante la conservazione a freddo dei reni suini.La conservazione a freddo ha notevolmente facilitato l'uso di reni cadaverici per il trapianto, ma il danno si verifica durante l'episodio di conservazione. È ben stabilito che la produzione di ossidanti aumenta durante la conservazione renale fredda e i mitocondri sono un obiettivo chiave per le lesioni. Il nostro laboratorio ha dimostrato che la conservazione a freddo delle cellule renali e dei reni di ratto porta ad un aumento dei livelli di superossido mitocondriale e danni alla catena di trasporto degli elettroni mitocondriali , e che l'aggiunta di Mitoquinone (MitoQ) alle soluzioni di conservazione ha attenuato questo danno. Per tradurre meglio gli studi sugli animali, l'inclusione di modelli animali di grandi dimensioni è necessaria per sviluppare protocolli preclinici sicuri. Pertanto, abbiamo testato l'ipotesi che l'aggiunta di MitoQ a la soluzione di conservazione a freddo preserva la funzione mitocondriale diminuendo lo stress ossidativo, portando a un minor danno tubulare renale durante la conservazione a freddo di reni suini utilizzando un modello di donatore con criteri standard. I risultati hanno mostrato che la conservazione a freddo induceva in modo significativo stress ossidativo (nitrotirosina), danno tubulare renale e morte cellulare. Utilizzando la respirazione ad alta risoluzione e biopsie di rene suino fresco per valutare la funzione mitocondriale, abbiamo dimostrato che MitoQ ha migliorato significativamente la respirazione del complesso II/III della catena di trasporto degli elettroni dopo 24 ore di celle frigorifere. Inoltre, MitoQ ha attenuato lo stress ossidativo, il danno tubulare renale e la morte cellulare dopo 48 ore. Questi risultati hanno suggerito che MitoQ ha ridotto lo stress ossidativo, il danno tubulare e la morte cellulare migliorando la funzione mitocondriale durante la conservazione a freddo. Pertanto questo composto dovrebbe essere considerato come parte integrante della soluzione per la conservazione degli organi prima del trapianto.
Prodotto di scissione del peptide-1 simile al glucagone L'ammide GLP-1(9-36) salva la plasticità sinaptica e i deficit di memoria nei topi modello della malattia di Alzheimer.Il peptide-1 simile al glucagone (GLP-1) è un peptide intestinale endogeno che migliora la secrezione di insulina stimolata dal glucosio. Il suo prodotto di scissione naturale GLP-1 (9-36) (ammide) possiede proprietà distinte e non influisce sulla secrezione di insulina Qui riportiamo che il pretrattamento delle fette di ippocampo con GLP-1 (9-36) (ammide) ha impedito il potenziamento a lungo termine (LTP) alterato e la depressione a lungo termine migliorata indotta dall'amiloide esogena peptide Aβ ((1-42)) Allo stesso modo, le alterazioni dell'LTP dell'ippocampo nei topi mutanti della proteina precursore dell'amiloide/presenilina 1 (APP/PS1) che modellano la malattia di Alzheimer (AD) sono state prevenute dal GLP-1(9-36)(ammide). Inoltre, il trattamento dell'APP / I topi PS1 con GLP-1 (9-36) (ammide) a un'età in cui mostrano una memoria di paura spaziale e contestuale compromessa ha provocato un'inversione della loro memoria def ecc. A livello molecolare, GLP-1 (9-36) (ammide) ha ridotto i livelli elevati di specie reattive dell'ossigeno derivate dai mitocondri e ripristinato la segnalazione disregolata della Akt-glicogeno sintasi chinasi-3β nell'ippocampo dei topi APP/PS1. I nostri risultati suggeriscono che il trattamento con GLP-1 (9-36) (ammide) può avere un potenziale terapeutico per l'AD e altre malattie associate a disfunzioni cognitive.
Prima scoperta di due geni della polichetide sintasi per la biosintesi dell'acido mitorubrinico e del pigmento giallo mitorubrinolo e implicazioni nella virulenza del Penicillium marneffei.Il genoma di P. marneffei , il più importante fungo dimorfico termico che causa micosi respiratoria, cutanea e sistemica in Cina e nel sud-est asiatico, possiede 23 geni di polichetide sintasi (PKS) e 2 geni di polichetide sintasi nonribosomal peptide sintasi ibrida (PKS-NRPS), che è di elevata diversità rispetto a altri funghi patogeni dimorfici termici. Abbiamo ipotizzato che il pigmento giallo sotto forma di muffa di P. marneffei potesse essere sintetizzato anche da uno o più geni PKS. Tutti i 23 geni PKS e 2 PKS-NRPS di P. marneffei sono stati sistematicamente abbattuti. la perdita del pigmento giallo è stata osservata sotto forma di muffa dei mutanti pks11 knockdown, pks12 knockdown e pks11pks12 double knockdown L'analisi della sequenza ha mostrato che PKS11 e PKS12 sono PKS fungini non riducenti. h prestazioni cromatografia liquida-rivelatore array di fotodiodi/ionizzazione electrospray-quadruplo tempo di volo-spettrometria di massa (MS) e analisi MS/MS dei filtrati di coltura di wild type P. marneffei e dei mutanti knockdown pks11, knockdown pks12 e pks11pks12 double knockdown mostrati che il pigmento giallo è composto da acido mitorubrinico e mitorubrinolo. La sopravvivenza dei topi sfidati con i mutanti pks11 knockdown, pks12 knockdown e pks11pks12 double knockdown era significativamente migliore di quelli sfidati con P. marneffei wild type (P<0.05). C'è stata anche una diminuzione statisticamente significativa della sopravvivenza dei mutanti pks11 knockdown, pks12 knockdown e pks11pks12 double knockdown rispetto al tipo selvatico P. marneffei nei macrofagi J774 e THP1 (P<0.05). Il pigmento giallo della forma di muffa di P. marneffei è composto da mitorubrinolo e acido mitorubrinico. Questa rappresenta la prima scoperta dei geni PKS responsabili della biosintesi del mitorubrinolo e dell'acido mitorubrinico. pks12 e pks11 sono probabilmente responsabili dell'uso sequenziale nella biosintesi del mitorubrinolo e dell'acido mitorubrinico. Il mitorubrinolo e l'acido mitorubrinico sono fattori di virulenza di P. marneffei migliorando la sua sopravvivenza intracellulare nei macrofagi.
La carenza del recettore sensibile al calcio nel rene causa ipocalciuria indipendente dall'ormone paratiroideo.Rare mutazioni con perdita di funzione nel recettore sensibile al calcio Il gene del recettore (Casr) porta a una diminuzione dell'escrezione urinaria di calcio nel contesto dell'ipercalcemia dipendente dall'ormone paratiroideo (PTH), ma il ruolo di Casr nel rene è sconosciuto Utilizzando animali che esprimono Cre ricombinasi guidati dal promotore Six2, abbiamo generato topi che sembrava grossolanamente normale ma aveva livelli non rilevabili di Casr mRNA e proteine nel rene. I livelli sierici di calcio, fosforo, magnesio e PTH al basale erano simili ai topi di controllo. Quando sfidati con supplementi di calcio nella dieta, tuttavia, questi topi avevano un'escrezione urinaria di calcio significativamente inferiore rispetto ai controlli (calcio urinario in creatinina, 0,31±0,03 rispetto a 0,63±0,14; P=0,001). L'analisi Western blot sui lisati dell'intero rene ha suggerito un aumento di circa quattro volte del Na(+)-K(+)- attivato 2Cl(-) cotrasportatore (NKCC2). Inoltre, gli animali da esperimento hanno mostrato una significativa downregulation di Claudin14, un regolatore negativo della permeabilità dei cationi paracellulari nell'arto ascendente spesso e una piccola ma significativa sovraregolazione di Claudin16, un regolatore positivo della permeabilità dei cationi paracellulari. Presi insieme, questi dati suggeriscono che Casr renale regola il riassorbimento del calcio nell'arto ascendente spesso, indipendentemente da qualsiasi cambiamento nel PTH, aumentando la forza motrice del lume positivo per il trasporto paracellulare di Ca(2+).
Analogici del monomero di resina epossidica diglicidil etere del bisfenolo F: effetti sulla potenza allergenica da contatto e sulla citotossicità.Diglicidil eteri del bisfenolo A (DGEBA) e il bisfenolo F (DGEBF) è ampiamente utilizzato come componenti nei prodotti termoindurenti in resina epossidica. Sono noti per causare dermatiti allergiche da contatto professionali e non. Lo scopo di questo studio è studiare gli analoghi del DGEBF per quanto riguarda l'allergia da contatto e la citotossicità. Una conoscenza completa delle caratteristiche strutturali che contribuiscono agli effetti allergenici e citotossici del DGEBF guideranno lo sviluppo di futuri nuovi sistemi di resina epossidica con rischi per la salute ridotti per coloro che entrano in contatto con essi È stato scoperto che gli effetti allergenici del DGEBF dipendevano dal suo terminale gruppi epossidici Al contrario, è stato riscontrato che la citotossicità nella coltura cellulare monostrato dipendeva non solo dalla presenza di gruppi epossidici ma anche da altre strutture caratteristiche.
Prevenzione dell'apoptosi indotta da gentamicina con il mitochinone antiossidante mirato ai mitocondri.È stato dimostrato che gli antiossidanti proteggono dalla perdita dell'udito indotta dagli aminoglicosidi. Mitochinone ( MitoQ) è un derivato mirato ai mitocondri dell'antiossidante ubichinone. MitoQ è attaccato a un catione lipofilo trifenilfosfonio (TPP), che consente il suo accumulo all'interno dei mitocondri diverse centinaia di volte rispetto all'antiossidante non mirato. Gli obiettivi di questo studio erano di determinare se MitoQ attenua l'attivazione indotta dalla gentamicina dell'attività della caspasi-3/7 come marker di apoptosi e per determinare se MitoQ influisce sull'efficacia antimicrobica degli aminoglicosidi Prospettica e controllata Efficacia antibiotica e concentrazioni minime inibitorie (MIC) di gentamicina contro tre ceppi ciascuno di Staphylococcus aureus , Haemophilus influenzae e Pseudomonas aeruginosa sono stati valutati con e senza MitoQ utilizzando metodi di diluizione in brodo. valutata dall'attività della caspasi-3/7 in cellule HEI-OC1 non trattate e cellule esposte a gentamicina 2 mM per 24 ore, con e senza preincubazione di 24 ore con 0,5 μM ciascuno di MitoQ, idebenone (un ubichinone non mirato) o decilTPP ( controllo positivo). Le MIC della gentamicina per P aeruginosa e H influenzae non sono state influenzate da MitoQ a livelli farmacologici. Le MIC per S aureus sono state potenziate da MitoQ. La vitalità cellulare era significativamente inferiore nelle cellule trattate con gentamicina. Un aumento significativo dell'attività della caspasi-3/7 è stato osservato nelle cellule trattate con gentamicina o con idebenone + gentamicina (P = .005). La preincubazione con MitoQ ha ridotto l'apoptosi indotta dalla gentamicina delle cellule HEI-OC1 in misura maggiore rispetto all'idebenone (P = .002). MitoQ attenua l'apoptosi indotta da gentamicina nelle cellule HEI-OC1 e non compromette l'efficacia dell'antibiotico della gentamicina. MitoQ è promettente come mezzo per prevenire l'ototossicità degli aminoglicosidi.
Un metodo LC-MS/MS per la determinazione di composti correlati a BADGE e BFDGE in campioni di cibo per pesci in scatola basato sulla formazione di [M+NH(4) ](+) aducts.Un nuovo e semplice metodo di spettrometria di massa tandem per cromatografia liquida per la determinazione di diversi derivati del bisfenolo A (BPA) come il bisfenolo A diglicidil etere (BADGE), il bisfenolo F diglicidil etere ( BFDGE) e i loro prodotti di reazione con acqua e acido cloridrico in diversi prodotti alimentari per pesci sono stati sviluppati la procedura di estrazione e le condizioni cromatografiche per matrici alimentari complesse come i prodotti ittici. I campioni di cibo sono stati omogeneizzati ed estratti con una soluzione 1:1 di acetonitrile-esano, il solvente è stato eliminato in un flusso N(2) e l'estratto è stato ricostituito con 0,5 mL di una soluzione 0,01 M di formiato di ammonio. La soluzione campione ottenuta è stata misurata direttamente mediante LC-MS/MS senza ulteriore purificazione in le condizioni sviluppate e l'utilizzo di una fase mobile composta da ammonio formiato-metanolo in modalità gradiente binario ha prodotto addotti [M+NH(4)](+) per i diversi BADGE e BFDGE. Queste frammentazioni degli addotti sono state impiegate per la quantificazione LC-MS/MS dei derivati del BPA in campioni di pesce in scatola. I risultati della validazione erano appropriati: il metodo era lineare per BADGE e suoi derivati idrolizzati fino a 1000μgkg(-1), per i restanti composti la linearità raggiunta fino a 100μgkg(-1). I limiti di quantificazione erano nell'intervallo 2-10μgkg(-1). La RSD (intra e intergiornaliera) è stata del 6-12% e il recupero è stato compreso tra l'89% e il 109%. Nelle condizioni ottimizzate, la separazione cromatografica è stata eseguita in 8 minuti per campione. Il metodo è stato applicato alla determinazione di BADGE, BFDGE e dei loro prodotti di reazione in diversi campioni di conserve di pesce di origine spagnola. I risultati della migrazione ottenuti erano conformi alle normative UE.
[Determinazione dei residui di virginiamicina M1 e S1 in prodotti di bestiame e pollame mediante cromatografia liquida-spettrometria di massa tandem].Una cromatografia liquida-spettrometria di massa tandem è stato stabilito il metodo per la determinazione dei residui di virginiamicina M1 e S1 nei prodotti del bestiame e del pollame. Il campione è stato estratto con una soluzione di metanolo-acetonitrile (1:1, v/v). Il surnatante è stato diluito con una soluzione di diidrogenofosfato di ammonio 0,01 mol/L , quindi purificato e concentrato su cartuccia Oasis HLB La separazione della virginiamicina M1 e S1 è stata eseguita su una colonna Luna C18 con le fasi mobili acetonitrile e soluzione acquosa di acetato di ammonio 5 mmol/L (contenente 0,1% (v/v) di acido formico ) in una modalità di eluizione in gradiente. L'identificazione e la quantificazione dei farmaci sono state effettuate mediante ionizzazione elettrospray positiva (ESI + ) nella modalità di monitoraggio delle reazioni multiple (MRM) utilizzando il metodo standard esterno. Le curve di calibrazione mostrano d buona linearità nell'intervallo 0,15-10,0 microg/L con coefficienti di correlazione (r2) superiori a 0, 999. I limiti delle quantità (LOQ) erano entrambi 0,25 microg/kg. I recuperi medi dei due farmaci addizionati a livelli di 0,25, 0,5 e 2,5 microg/kg in diverse matrici erano compresi tra il 71,2% e il 98,4% e le relative deviazioni standard (RSD) erano comprese tra il 3,6% e il 15,4%. Il metodo è semplice, rapido, sensibile e preciso. È adatto per la conferma e la quantificazione dei residui di virginiamicina M1 e S1 nei prodotti animali e avicoli.
Cambiamento nella genitorialità democratica durante la transizione all'adolescenza: i ruoli dei giovani adolescenti\' Non conformità e madri\' Influenza percepita.OBIETTIVO: questo studio ha valutato la relazione diretta tra giovani adolescenti\' non conformità regolata e madri\' pratiche democratiche di educazione dei figli, nonché il potenziale ruolo di mediazione delle madri\' influenza percepita durante la transizione all'adolescenza. DESIGN: Tre anni di non conformità adolescenziale auto-riferita, influenza percepita , e la democrazia genitoriale sono stati raccolti da 166 madri e dai loro primogeniti (55% femmine), di età compresa tra 9 e 11 anni al momento 1. RISULTATI: L'analisi del percorso longitudinale ha indicato un effetto totale tra adolescenti\' non conformità regolata e democrazia materna superiore. , l'effetto totale è stato mediato dall'influenza percepita dalle madri, in modo tale che la non conformità regolata degli adolescenti al tempo 1 fosse associata a una maggiore p ercezioni di influenza al tempo 2, che, a sua volta, era associata a una maggiore democrazia materna al tempo 3. CONCLUSIONI: Le madri con adolescenti giovani che resistono in modo relativamente maturo e regolato tendono ad avere percezioni più positive della loro influenza sui loro adolescenti emergenti \' comportamento. A loro volta, le madri che si aspettano di mantenere la loro influenza nonostante la resistenza normativa degli adolescenti hanno maggiori probabilità di utilizzare strategie genitoriali democratiche, garantendo ai loro adolescenti un maggiore input nelle decisioni.
Farmacocinetica e tollerabilità del plasma e del liquido cerebrospinale allo stato stazionario di eslicarbazepina acetato e oxcarbazepina in volontari sani.Valutare la farmacocinetica e la tollerabilità di una volta al giorno eslicarbazepina acetato (ESL) e oxcarbazepina (OXC) due volte al giorno e i loro metaboliti nel liquido cerebrospinale (CSF) e nel plasma dopo somministrazione orale ripetuta. gruppo (n = 7) ha ricevuto 600 mg nei giorni 1-3 e 1.200 mg nei giorni 4-9, una volta al giorno I volontari del gruppo OXC (n = 7) hanno ricevuto 300 mg nei giorni 1-3 e 600 mg il giorni 4-9, due volte al giorno. Il campionamento del plasma e del liquido cerebrospinale è stato eseguito dopo l'ultima dose. L'eslicarbazepina è stata la principale entità farmacologica nel plasma e nel liquido cerebrospinale, rappresentando, rispettivamente, il 93,84% e il 91,96% dell'esposizione totale nel gruppo ESL e il 78,06% e 76,42% nel gruppo OXC L'entità dell'esposizione a entità farmacologiche R- libbazepina e oxcarbazepina erano circa quattro volte superiori con OXC rispetto a ESL. C'è stata una fluttuazione relativamente piccola dal picco al minimo (rapporto) nel liquor sia per eslicarbazepina (ESL = 1.5; OXC = 1.2) che per R-licarbazepina (ESL = 1.2; OXC = 1.2). Al contrario, l'oxcarbazepina ha mostrato maggiori differenze tra picco e valle (ESL = 3.1; OXC = 6.4). Un totale di 84 e 24 eventi avversi emergenti dal trattamento (TEAE) sono stati riportati rispettivamente con OXC e ESL. Rispetto a OXC, la somministrazione di ESL ha prodotto più eslicarbazepina, meno R-licarbazepina e meno oxcarbazepina nel plasma e nel liquido cerebrospinale, che possono essere correlati al profilo di tollerabilità riportato con ESL. La minore fluttuazione da picco a valle dell'eslicarbazepina nel liquido cerebrospinale (una misura del rilascio prolungato al cervello) rispetto al plasma supporta il dosaggio giornaliero di ESL.
Proliferazione di cellule staminali miogeniche nel muscolo scheletrico umano in risposta a un allenamento di resistenza a basso carico con restrizione del flusso sanguigno.Allenamento di resistenza a basso carico con sangue È stato dimostrato che la restrizione del flusso provoca aumenti sostanziali della massa muscolare e della forza muscolare, tuttavia, l'effetto sulle cellule staminali miogeniche (MSC) e sul numero di mionuclei rimane inesplorato. Dieci soggetti maschi (22,8 ± 2,3 anni) hanno eseguito quattro serie di esercizi per gli estensori del ginocchio ( 20% 1RM) al fallimento concentrico durante la restrizione del flusso sanguigno (BFR) della coscia prossimale (100 mmHg), mentre otto controlli appaiati (21,9 ± 3,0 anni) si sono allenati senza BFR (controllo, CON). entro 19 giorni. La massima forza isometrica dell'estensore del ginocchio (MVC) è stata esaminata prima e dopo l'allenamento, mentre le biopsie muscolari sono state ottenute al basale (Pre), dopo 8 giorni di intervento (Mid8) e 3 (Post3) e 10 giorni (Post10) post-allenamento per esaminare i cambiamenti nell'area delle miofibre (MFA ), MSC e numero di mionuclei. MVC è aumentato del 7,1% (Post5) e del 10,6% (Post12)(P <0.001) con l'addestramento BFR, mentre l'MFA di tipo I e II è aumentato del 38% (Mid8), 35 – 37% (Post3) e 31 – 32 % (Post10) (P <0.001). Le MSC per miofibre sono aumentate con l'allenamento BFR da 0,10 ± 0,01 (Pre) a 0,38 ± 0,02 (Mid8), 0,36 ± 0,04 (Post3) e 0,25 ± 0,02 (Post10) (P <0.001). Allo stesso modo, i mionuclei per miofibre sono aumentati da 2,49 ± 0,07 (Pre) a 3,30 ± 0,22 (Mid8), 3,20 ± 0,16 (Post3) e 3,11 ± 0,11 (Post10), (P<0.01). Sebbene l'AMF sia aumentato in CON a Mid8, è tornato alla linea di base a Post3. Non sono stati osservati cambiamenti nel numero di MSC o mionuclei in CON. Questo studio è il primo a dimostrare che l'esercizio di resistenza a basso carico a breve termine eseguito con parziale restrizione del flusso sanguigno porta a una marcata proliferazione di cellule staminali miogeniche e alla conseguente aggiunta di mionuclei nel muscolo scheletrico umano, che è accompagnata da una sostanziale ipertrofia delle miofibre.
Fattori di rischio per il diabete di tipo 2: lezioni apprese dai giapponesi americani a Seattle.Le popolazioni giapponesi migranti negli Stati Uniti e in Brasile hanno a lungo tempo ha mostrato una maggiore prevalenza di diabete di tipo 2 rispetto ai nativi giapponesi, suggerendo un'interazione di stile di vita e predisposizione genetica nell'eziologia del diabete di tipo 2. L'obiettivo generale del Seattle Japanese American Community Diabetes Study era quello di saperne di più sull'eziologia e la patogenesi del diabete di tipo 2 nei giapponesi americani. Questo studio epidemiologico su base metabolica includeva valutazioni approfondite della sensibilità all'insulina, della risposta all'insulina e dell'adiposità con quest'ultima, comprese le misurazioni della distribuzione del grasso corporeo mediante antropometria e tomografia computerizzata. Per questo motivo, l'importanza dell'adiposità viscerale come fattore di rischio per un'anormale tolleranza al glucosio, ipertensione, malattia coronarica e sindrome metabolica zione con un esame della dieta e dei modelli di attività fisica, il risultato è stato una comprensione più chiara dell'eziologia e della patogenesi del diabete di tipo 2 nei giapponesi americani. Proponiamo che uno stile di vita che favorisca un aumento di peso, specialmente nel deposito adiposo viscerale, promuova lo sviluppo dell'insulino-resistenza che a sua volta espone una sottostante ridotta riserva di cellule beta negli individui suscettibili, con conseguente intolleranza al glucosio e infine in molti lo sviluppo del diabete. Abbiamo dimostrato che potrebbe essere possibile ritardare o prevenire lo sviluppo del diabete attraverso interventi dietetici ed esercizi fisici in individui identificati come con ridotta tolleranza al glucosio. Le lezioni apprese dallo studio del giapponese migrante a Seattle possono essere applicabili in molti modi ad altre popolazioni di origine asiatica.
Colore, ellagitannini, antociani e attività antiossidante dei vini di mora andina (Rubus glaucus Benth.).Ventotto mora ( Rubus glaucus Benth. ) i vini elaborati in diverse condizioni di lavorazione sono stati analizzati per fenoli totali, ellagitannini, antociani, colore e attività antiossidante. Gli ellagitannini erano i principali composti fenolici e il fattore più determinante nella capacità antiossidante dei vini (r = 0,980). I principali antociani erano cianidina 3-rutinoside (64 ± 6%) e cianidina 3-glucoside (19 ± 4%), seguiti da diversi composti minori (17 ± 4%). Due di loro erano antociani nativi di mora, vale a dire, cianidina 3-rutinoside- 5-glucoside e cianidina 3-xilorutinoside. I restanti sette composti erano pigmenti antociani-correlati generati durante e dopo la fermentazione alcolica, identificati come vitisine di tipo A e di tipo B e idrossifenilpiranoantociani. La presenza di solidi di frutta a contatto con il li Quid frazione durante la fermentazione e il rapporto tra acqua e frutta impiegato nella preparazione dei mosti hanno avuto un grande impatto sul contenuto di ellagitannini, fenoli totali e sull'attività antiossidante dei vini e un impatto minore sul loro colore e sulla composizione degli antociani.
Lo yin e lo yang della claudina-14 funzionano nelle malattie umane.Le claudine sono proteine di membrana integrali a giunzione stretta che sono regolatori chiave della via paracellulare. Le vie paracellulari nell'orecchio interno e nel rene sono le vie predominanti per il trasporto transepiteliale dei cationi Mutazioni nella claudina-14 causano sordità recessiva non sindromica DFNB29 Un recente studio di associazione genome-wide ha identificato la claudina-14 come un gene di maggior rischio di nefrolitiasi ipercalciurica Le analisi in vitro mostrano che la claudina-14 funziona come barriera cationica nelle cellule epiteliali. La funzione di barriera della claudina-14 è cruciale per generare il gradiente K(+) tra perilinfa ed endolinfa nell'orecchio interno. Tuttavia, né gli individui omozigoti con Mutazioni DFNB29 né topi knockout claudina-14 mostrano alcuna disfunzione renale. In questa breve recensione, discuto diversi possibili meccanismi per integrare la funzione fisiologica di claudina-14 nell'orecchio interno e il k idney.
Una nuova relazione tra l'attività di radical-scavenging dei flavonoidi e l'entalpia di formazione rivelata con i calcoli di Hartree-Fock e la deduzione termochimica.Il presente studio mira per stabilire la relazione tra le attività di scavenging dei flavonoidi riportate e alcuni cambiamenti di entalpia che possono verificarsi durante le reazioni dei flavonoidi\' con i radicali liberi. Otto flavonoidi sono stati scelti per lo studio sulla base dei loro meriti strutturali e riportato 1,1-difenile Attività di scavenging di -2-picryl-idrazil. Sono state stimate le variazioni di entalpia che accompagnano le interconversioni tra conformazioni selezionate (incluse le molteplicità di spin) e le dissociazioni omolitiche. Esiste una nuova relazione tra l'entalpia totale di reazione per l'estrazione di due atomi di idrogeno dai flavonoidi, il loro radicale riportato -attività di scavenging e l'entalpia della dissociazione omolitica della molecola di idrogeno (104,206 kcal mol(-1)). i flavonoidi che potrebbero cedere due atomi di idrogeno con variazioni di entalpia totale ben al di sotto di 104,206 kcal mol(-1) erano attivi spazzini di radicali. Facendo appello alla dinamica dell'equilibrio, abbiamo dimostrato che, affinché i flavonoidi siano in grado di donare atomi di idrogeno, la variazione di entalpia che accompagna l'estrazione di due atomi di idrogeno deve essere inferiore a 104,206 kcal mol(-1). Questa condizione non sembra essere limitata ai soli flavonoidi, ma piuttosto generalmente applicabile agli antiossidanti che rompono i chian. Le relazioni termodinamiche possono essere i fattori più importanti che regolano le reazioni di eliminazione dei radicali dei flavonoidi e forse anche di altri composti. Tuttavia, una caratterizzazione più completa degli antiossidanti richiederebbe un'analisi cinetica.
La stimolazione dei recettori CB(1) dei cannabinoidi accumbens shell da parte del noladin ether, un presunto endocannabinoide, modula l'assunzione di cibo e la selezione dietetica nei ratti.Stimolazione di È stato dimostrato che i recettori dei cannabinoidi CB(1) nel guscio del nucleo accumbens stimolano l'alimentazione e migliorano le reazioni positive di \'piacere\' al saccarosio intraorale. e preferenza alimentare in ratti ad alto contenuto di carboidrati e ad alto contenuto di grassi. Noladin etere, assunzione di cibo stimolata in modo potente e dose-dipendente rispetto al 2-arachidonoilglicerolo nei ratti alimentati liberamente. Nel paradigma della preferenza dietetica, in cui ai ratti è stato dato libero accesso a entrambe le diete ad alto contenuto di carboidrati (HC) e ad alto contenuto di grassi (HF) contemporaneamente, una somministrazione intra-accumbens di noladin etere e 2-arachidonoilglicerolo, aumento preferenziale del consumo di grassi rispetto a carboidrati idrato in entrambi i ratti che preferiscono HF e HC. Questi effetti sono stati significativamente attenuati dall'antagonista del recettore CB (1), AM 251. Questi risultati suggeriscono che gli endocannabinoidi attraverso i recettori CB (1) influiscono sull'appetito per specifici componenti della dieta. Entrambi questi agenti esercitano un'azione specifica sulla motivazione alimentare ed eventualmente sulla promozione dell'alimentazione aumentando il valore incentivante del cibo. Complessivamente, questi risultati rafforzano l'idea che il sistema cannabinoide endogeno nel guscio di accumbens possa essere importante per aumentare l'alimentazione basata sulla ricompensa attraverso la modulazione delle vie di segnalazione del recettore CB(1).
Geni trasportatori ABC dal cluster di geni biosintetici di Streptomyces ghanaensis moenomycin: ruoli nella produzione e nell'esportazione di antibiotici.Streptomyces ghanaensis ATCC14672 produce l'antibiotico moenomicina A (MmA), che possiede una forte attività antibatterica. Il controllo genetico della biosintesi di MmA è stato recentemente chiarito; tuttavia, poco si sa circa i ruoli di due coppie di geni, moeX5moeP5 e moeD5moeJ5, che codificano per i sistemi di trasporto dipendenti dall'ATP. Qui riportiamo che entrambe le coppie di geni formano unità trascrizionali attivamente espresse durante la fase di produzione di MmA. I mutanti di Streptomyces ghanaensis carenti in uno o entrambi i sistemi di trasporto sono caratterizzati da una ridotta capacità di produrre moenomicine e il mutante ΔmoeP5moeX5 ne esporta meno. Tuttavia, anche il mutante quadruplo di S. ghanaensis (ΔmoeD5moeJ5 + ΔmoeX5moeP5) rimane in grado di estrudere quantità significative di moenomicina. Risultati simili sono stati osservati in condizioni ioni di espressione eterologa del cluster moe. È probabile che geni trasportatori diversi da quelli situati nel cluster moe partecipino all'efflusso di moenomicina.
Estratti di semi d'uva e tè e catechina 3-gallati sono potenti inibitori dell'attività dell'α-amilasi e dell'α-glucosidasi.Questo studio ha valutato gli effetti inibitori di estratti vegetali (semi d'uva, tè verde e tè bianco) e dei loro monomeri costituenti flavan-3-olo (catechine) sull'attività dell'α-amilasi e dell'α-glucosidasi, due glucosidasi chiave necessarie per la digestione dell'amido nell'uomo. la potenza relativa di estratti e catechine, le loro concentrazioni richieste per il 50 e il 90% di inibizione dell'attività enzimatica sono state determinate e confrontate con l'inibitore farmacologico della glucosidasi ampiamente utilizzato, l'acarbosio. La massima inibizione enzimatica è stata utilizzata per valutare l'efficacia inibitoria relativa. I risultati hanno mostrato che i semi d'uva L'estratto inibiva fortemente sia l'attività dell'α-amilasi che dell'α-glucosidasi, rispettivamente con potenza uguale e molto più elevata dell'acarbosio. Mentre gli estratti di tè e i gallati di catechina 3 erano inibitori meno efficaci dell'α-amilasi, erano potenti inibitori dell'α-glucosidasi. Le catechine non gallate erano inefficaci. I dati mostrano che gli estratti vegetali contenenti catechina 3-gallati, in particolare l'epigallocatechina gallato, sono potenti inibitori dell'attività dell'α-glucosidasi e suggeriscono che le procianidine nell'estratto di semi d'uva inibiscono fortemente l'attività dell'α-amilasi.
Effetti bioenergetici degli analoghi del coenzima Q mirati ai mitocondri nelle cellule endoteliali.Sono in fase di sviluppo analoghi mirati ai mitocondri del coenzima Q (CoQ) per ridurre l'ossidazione danno indotto da una varietà di stati patologici. Tuttavia, è necessario comprendere gli effetti bioenergetici di questi agenti e se questi effetti sono correlati o meno alle proprietà redox, inclusi i loro noti effetti pro-ossidanti. Abbiamo esaminato gli effetti bioenergetici di due analoghi del CoQ mirati ai mitocondri nelle loro forme di chinolo, mitochinolo (MitoQ) e plastochinonil-decil-trifenilfosfonio (SkQ1), in cellule endoteliali aortiche bovine Abbiamo utilizzato un analizzatore di ossigeno extracellulare e flusso di protoni per valutare l'azione mitocondriale a livello di cellule intatte. Entrambi gli agenti, in modo dose-dipendente, hanno ridotto il tasso di consumo di ossigeno (OCR) diretto al turnover dell'ATP (OCR(ATP)) (valori di IC₅₀ di 189 ± 13 nM per MitoQ e 181 ± 7 per SKQ1; differenza non significativa) mentre non un influenzando o aumentando leggermente il consumo di ossigeno basale. Entrambi i composti hanno aumentato l'acidificazione extracellulare nello stato basale coerente con l'aumento della glicolisi. Entrambi i composti hanno potenziato la produzione di superossido mitocondriale valutata utilizzando diidroetidio mirato ai mitocondri ed entrambi hanno aumentato la produzione di H₂O₂ dai mitocondri delle cellule trattate prima dell'isolamento degli organelli. Il manganese superossido dismutasi mimetico manganese (III) tetrakis (1-metil-4-piridil) porfirina non ha alterato o effettivamente potenziato le azioni degli analoghi del CoQ mirati per ridurre l'OCR (ATP). Al contrario, la N-acetilcisteina ha mitigato questo effetto di MitoQ e SkQ1. In sintesi, i nostri dati dimostrano gli importanti effetti bioenergetici degli analoghi CoQ mirati. Inoltre, questi effetti sono mediati, almeno in parte, dalla produzione di superossido ma dipendono dalla conversione in H₂O₂. Queste azioni bioenergetiche e redox devono essere considerate poiché questi composti sono sviluppati per scopi terapeutici.
Un facile screening inibitore della proteina N del coronavirus della SARS utilizzando un oligonucleotide RNA a base di nanoparticelle.Centinaia di milioni di persone in tutto il mondo sono state infettate da sindrome respiratoria acuta grave (SARS) e il tasso di morte globale per SARS è notevolmente aumentato. Quindi, è altamente necessario lo sviluppo di trattamenti farmacologici efficaci per gli effetti biologici della SARS. Abbiamo precedentemente dimostrato che l'oligonucleotide di RNA coniugato con punti quantici (QDs) è sensibile al riconoscimento specifico della proteina nucleocapside (N) del coronavirus associato alla SARS (SARS-CoV). In questo studio, abbiamo scoperto che un biochip progettato potrebbe analizzare gli inibitori della proteina SARS-CoV N utilizzando un oligonucleotide RNA basato su nanoparticelle. composti polifenolici esaminati, (-)-catechina gallato e (-)-gallocatechina gallato hanno dimostrato una notevole attività di inibizione sulla proteina SARS-CoV N. (-)-catechina gallato e (-)-gallocatechina gallato hanno attenuato l'affinità di legame ty in modo concentrato come evidenziato dall'oligonucleotide di RNA coniugato con QDs su un biochip progettato. A una concentrazione di 0,05 μg mL(-1), (-)-catechina gallato e (-)-gallocatechina gallato hanno mostrato un'attività di inibizione superiore al 40% su un sistema di biochip di oligonucleotidi di RNA a base di nanoparticelle.
Effetti ipnotici e meccanismo GABAergico dell'estratto etanolico di liquirizia (Glycyrrhiza glabra) e del suo principale costituente flavonoide glabrol.La liquirizia (Glycyrrhiza glabra, GG) è uno dei medicinali a base di erbe più frequentemente utilizzati in tutto il mondo e le sue varie attività biologiche sono state ampiamente studiate. Si dice che il GG abbia proprietà neurologiche come effetti antidepressivi, ansiolitici e anticonvulsivanti. Tuttavia, i suoi effetti ipnotici e il meccanismo del GG e dei suoi composti attivi non sono stati ancora dimostrati. In questo studio, l'estratto di etanolo GG (GGE) ha potenziato in modo dose-dipendente il sonno indotto da pentobarbital e ha aumentato la quantità di sonno non rapido dei movimenti oculari nei topi senza diminuire l'attività delta. L'effetto ipnotico di GGE è stato completamente inibito da flumazenil, che è un noto antagonista del recettore dell'acido γ-aminobutirrico di tipo A-benzodiazepina (GABA(A)-BZD), simile ad altri agonisti del recettore GABA(A)-BZD (p. es. , diazepam e zolpidem). Il principale flavonoide glabrolo è stato isolato dalla frazione ricca di flavonoidi di GGE; ha inibito il legame del [(3)H] flumazenil ai recettori GABA(A)-BZD nella membrana della corteccia cerebrale di ratto con un'affinità di legame (K(i)) di 1,63 μM. La struttura molecolare e il modello farmacoforico di glabrol e liquiritigenina indicano che i gruppi isoprenile del glabrol possono svolgere un ruolo chiave nel legame ai recettori GABA(A)-BZD. Glabrol ha aumentato la durata del sonno e ridotto la latenza del sonno in modo dose-dipendente (5, 10, 25 e 50 mg/kg); il suo effetto ipnotico è stato bloccato anche dal flumazenil. I risultati implicano che il GGE e il suo glabrolo flavonoide inducono il sonno attraverso una modulazione allosterica positiva dei recettori GABA(A)-BZD.
Un meccanismo comportamentale alla base della divergenza ecologica nella zanzara della malaria Anopheles gambiae.La selezione dirompente mediata dalla predazione sugli stadi acquatici immaturi è stata proposta come una forza maggiore guidando la divergenza ecologica e favorendo la speciazione tra le forme molecolari M e S della zanzara africana della malaria, Anopheles gambiae Nelle savane secche dell'Africa occidentale, dove entrambe le forme molecolari si verificano, la forma S prospera in pozze temporanee piene di acqua piovana, mentre La forma M si riproduce preferenzialmente in habitat permanenti di acqua dolce dove la pressione dei predatori è maggiore. Qui, abbiamo esplorato i meccanismi prossimali attraverso i quali la predazione può contribuire alla segregazione dell'habitat tra le forme molecolari utilizzando la progenie delle zanzare femmine catturate in Burkina Faso. Mostriamo che la forma S soffre di più tassi di predazione rispetto alla forma M quando esposta contemporaneamente al predatore diffuso, Anisops jaczewskii in un'arena sperimentale. la plasticità comportamentale indotta dall'esposizione al predatore è stata osservata nella forma M, ma non nella forma S, e può in parte spiegare il suo uso dell'habitat e la divergenza ecologica dalla forma S. Discutiamo il ruolo della plasticità fenotipica adattiva nel consentire la colonizzazione di successo di una nuova nicchia ecologica da parte della forma M ed evidenziamo ulteriori aree di ricerca che devono essere affrontate per una migliore comprensione dei meccanismi ultimi alla base della speciazione ecologica in questo parassita di grande importanza medica.
Contenuto informativo del segnale di colore e l'occhio di chi guarda: un caso di studio nel macaco rhesus.La colorazione animale ha fornito molti esempi classici di entrambi naturali e selezione sessuale. I metodi per studiare i segnali cromatici vanno dalla valutazione umana ai modelli di visione del ricevitore, con misurazioni oggettive che comunemente coinvolgono la spettrometria o la fotografia digitale. Tuttavia, la valutazione del segnale da parte di un ricevitore non è oggettiva ma collegata alla percezione del ricevitore. Qui, utilizziamo standard fotografie digitali delle regioni del viso e del quarto posteriore di macaco rhesus femmina (Macaca mulatta), combinate con stime dei tempi della fase fertile femminile, per valutare come varia il colore rispetto a questo momento Confrontiamo le misure oggettive del colore (risposte del sensore della fotocamera) con i modelli della visione Rhesus (stimolazione del recettore retinico e discriminabilità visiva) A causa delle differenze nella separazione spettrale tra i sensori della telecamera e i recettori Rhesus, la telecamera misura variazione di colore immata e variazione di luminanza sottovalutata rispetto ai macachi rhesus. Di conseguenza, le misurazioni oggettive della fotocamera digitale possono produrre relazioni statisticamente significative che sono probabilmente non rilevabili per i macachi rhesus, e quindi biologicamente irrilevanti, mentre mancano variazioni nella misura che possono essere rilevanti. I modelli di discriminazione hanno fornito risultati più significativi (in quanto direttamente correlati alla percezione del ricevitore) e più facili da collegare alla fisiologia sottostante. Inoltre, ciò ha fornito nuove informazioni sulla funzione di tali segnali, rivelando cambiamenti di luminanza del segnale percettivamente salienti al di fuori della fase fertile che potrebbero potenzialmente aumentare la confusione di paternità. Il nostro studio dimostra come, anche per specie con sistemi visivi simili a quelli umani, i modelli di visione possono fornire informazioni più accurate e significative sulla forma e sulla funzione dei segnali visivi rispetto alle misurazioni oggettive del colore.
Costruire un intervento sull'attività fisica basato sulla teoria: lo sviluppo di CardiACTION!OBIETTIVI: Nonostante i benefici ampiamente riconosciuti dell'attività fisica regolare ( PA), obiettivi specifici per l'aumento dei livelli di popolazione di PA e strategie fortemente raccomandate per promuovere l'AP, non ci sono prove che suggeriscano che la prevalenza dell'AP stia migliorando. Se la ricerca sull'intervento sull'AP deve essere migliorata, la teoria dovrebbe essere utilizzata come base per lo sviluppo dell'intervento, il contesto o l'ambiente dei partecipanti dovrebbero essere considerati nel processo e dovrebbero essere implementate le caratteristiche dell'intervento che aumenteranno la probabilità di traduzione in pratica (ad esempio, facilità di implementazione, bassi costi delle risorse umane). l'implementazione dei concetti di cui sopra all'interno del processo di sviluppo dell'intervento associato a CardiACTION uno studio fattoriale randomizzato 2 × 2. in corso METODI: L'Ecolo Il Modello di Attività Fisica integrato con la Teoria della Motivazione alla Protezione è stato utilizzato per informare la progettazione degli interventi. Questo modello integrato è stato selezionato per consentire lo sviluppo di interventi di attività fisica individuali, ambientali e individuali + ambientali basati sulla teoria. Tutte le strategie di intervento sono state abbinate ai mediatori proposti del cambiamento di comportamento. Le strategie sono state quindi abbinate al canale di consegna della tecnologia interattiva più appropriata (ovvero, sessione di computer interattiva, consulenza telefonica automatizzata e mailing su misura). CONCLUSIONI: Le potenziali implicazioni di questo studio includono la determinazione dell'influenza indipendente e combinata dei meccanismi individuali e ambientali del cambiamento del comportamento sull'efficacia dell'intervento. Inoltre, tutti i modelli di intervento sono sviluppati per essere scalabili e divulgabili a un vasto pubblico a basso costo.
I modelli filogeografici della diversità genetica nelle rane d'acqua del Mediterraneo orientale sono stati determinati da processi geologici e cambiamenti climatici nel tardo Cenozoico.OBIETTIVO: I nostri obiettivi erano per valutare i modelli filogeografici della diversità genetica nelle rane d'acqua del Mediterraneo orientale e per stimare i tempi di divergenza utilizzando diversi scenari geologici. Abbiamo messo in relazione i tempi di divergenza con eventi geologici passati e abbiamo discusso la rilevanza dei nostri dati per la sistematica delle rane d'acqua del Mediterraneo orientale. regione del Mediterraneo orientale METODI: Diversità genetica e divergenza sono state calcolate utilizzando sequenze di due geni mitocondriali codificanti proteine (mt): ND2 (1038 bp, 119 sequenze) e ND3 (340 bp, 612 sequenze). I tempi di divergenza sono stati stimati in un bayesiano quadro sotto quattro scenari geologici che rappresentano storie geologiche alternative possibili per il Mediterraneo orientale. Abbiamo quindi confrontato i diversi scenari utilizzando Ba sì fattori e dati geologici aggiuntivi. RISULTATI: L'ampia diversità genetica nel mtDNA divide le rane d'acqua del Mediterraneo orientale in sei aplogruppi principali (MHG). Tre MHG sono stati identificati sulla terraferma anatolica; il MHG più diffuso con la più alta diversità è distribuito dall'Anatolia occidentale alla costa settentrionale del Mar Caspio, compresa la località tipo di Pelophylax ridibundus. Gli altri due MHG anatolici sono limitati alla Turchia sud-orientale, occupando località a ovest e ad est della catena montuosa di Amanos. Uno dei restanti tre MHG è limitato a Cipro; un secondo a Levante; il terzo è stato rinvenuto nell'areale di distribuzione delle rane lacustri europee (gruppo P. ridibundus), compresi i Balcani. CONCLUSIONI PRINCIPALI: Sulla base di prove geologiche e stime della divergenza genetica, ipotizziamo che le rane d'acqua di Cipro siano state isolate dalle popolazioni continentali dell'Anatolia dalla fine della crisi di salinità del Messiniano (MSC), cioè dal c. 5,5-5,3 Ma, mentre le nostre stime sui tempi di divergenza indicano che l'isolamento di Creta dalle popolazioni continentali (Peloponneso, Anatolia) è molto probabilmente precedente al MSC. I tassi di divergenza osservati implicano una finestra temporale di c. 1,6-1,1 milioni di anni per la diversificazione del più grande MHG anatolico; la divergenza tra gli altri due MHG anatolici potrebbe essere iniziata intorno a 3,0 Ma, apparentemente a causa del sollevamento dei monti Amanos. I nostri dati del mtDNA suggeriscono che le rane d'acqua dell'Anatolia e le rane di Cipro rappresentano diverse specie non descritte.
I farmaci mirati ai mitocondri sinergizzano con il 2-desossiglucosio per innescare la morte delle cellule del cancro al seno.È noto da tempo che le cellule tumorali mostrano un aumento della glicolisi aerobica, ma glicolitico l'inibizione non ha offerto una strategia chemioterapica praticabile in parte a causa della tossicità sistemica degli agenti antiglicolitici. Tuttavia, studi recenti suggeriscono che un'inibizione combinata della glicolisi e della funzione mitocondriale può aiutare a superare questo problema. In questo studio, abbiamo studiato l'efficacia chemioterapica dei mitocondri -farmaci mirati (MTD) in combinazione con 2-desossi-d-glucosio (2-DG), un composto che inibisce la glicolisi Utilizzando gli MTD, denominati Mito-CP e Mito-Q, abbiamo valutato gli effetti citotossici relativi e i cambiamenti bioenergetici mitocondriali in vitro. È interessante notare che sia Mito-CP che Mito-Q hanno sinergizzato con 2-DG per ridurre i livelli di ATP in due linee cellulari. Tuttavia, con il tempo, la funzione bioenergetica cellulare e la sopravvivenza clonogenica sono state ampiamente ripristinate in alcune cellule. In un modello di xenotrapianto di cancro al seno umano, il trattamento combinato di Mito-CP e 2-DG ha portato a una significativa regressione del tumore in assenza di cambiamenti morfologici significativi a livello di reni, fegato o cuore. Collettivamente, i nostri risultati suggeriscono che il doppio targeting del metabolismo bioenergetico mitocondriale con MTD e inibitori glicolitici come il 2-DG può offrire una promettente strategia chemioterapica.
Attività antiossidanti e principali antociani della prugna mirabolano (Prunus cerasifera Ehrh.).Contenuto fenolico totale, attività antiossidante totale della prugna mirabolano (Prunus cerasifera Ehrh). . ) e il contenuto di antociani nella buccia sono stati analizzati in questo articolo. Inoltre, per determinare la composizione di antociani di questo frutto è stata utilizzata la cromatografia liquida ultra-performante con rilevamento di array di fotodiodi e la spettrometria di massa tandem a ionizzazione elettrospray. La gamma di contenuto fenolico totale del testato campioni era da 1,34 a 6,11 g/kg di peso fresco (FW), e il contenuto di antociani nella buccia del frutto di prugna di Mirabolano era da 1,93 a 19,86 g/kg di buccia. I valori del potere antiossidante riducente ferrico variavano da 11,20 a 44,83 μmol di Trolox equivalente/g FW. Sono stati rilevati quattro tipi principali di antociani nella prugna mirabolano viola e 6 tipi in quelli rossi. L'articolo ha mostrato la composizione degli antociani, il contenuto fenolico e le attività antiossidanti della prugna mirabolano selvatica. La prugna mirabolano potrebbe essere sviluppata come risorsa di bevande alla frutta grazie alla sua elevata attività antiossidante e la buccia potrebbe essere utilizzata come risorsa per estrarre i pigmenti naturali.
Claudina-14 regola il trasporto renale di Ca⁺⁺ in risposta alla segnalazione di CaSR tramite una nuova via di microRNA.Il canale claudina paracellulare dell'arto ascendente spesso (TAL) di Henle è fondamentale per il riassorbimento di Ca(++) nel rene. Gli studi di associazione a livello di genoma (GWAS) hanno identificato la claudina-14 associata alla nefrolitiasi ipercalciurica. Qui, mostriamo che l'attività del promotore di claudina-14 e la trascrizione sono esclusivamente localizzato nel TAL. In condizioni dietetiche normali, le proteine claudina-14 sono soppresse da due molecole di microRNA (miR-9 e miR-374). Entrambi i microRNA mirano direttamente al 3\'-UTR dell'mRNA claudina-14; inducono il suo decadimento dell'mRNA e repressione traslazionale in modo sinergico. Attraverso l'interazione fisica, la claudina-14 blocca il canale cationico paracellulare costituito da claudina-16 e -19, fondamentale per il riassorbimento del Ca(++) nel TAL. Il trascritto e i livelli proteici di claudina-14 sono sovraregolati da una dieta ad alto contenuto di Ca(++), mentre sottoregolano d con una dieta a basso contenuto di Ca(++). Gli animali knockout Claudin-14 sviluppano ipermagnesiemia, ipomagnesiuria e ipocalciuria in condizioni dietetiche elevate di Ca(++). I livelli di trascrizione di MiR-9 e miR-374 sono regolati da Ca(++) extracellulare in modo reciproco come claudina-14. Il recettore sensibile al Ca(++) (CaSR) agisce a monte dell'asse microRNA-claudin-14. Insieme, questi dati hanno stabilito un ruolo regolatore chiave per la claudina-14 nell'omeostasi renale del Ca(++).
Noladin ether, un presunto endocannabinoide, aumenta la motivazione a mangiare dopo somministrazione sistemica acuta nei ratti.BACKGROUND E SCOPO I sistemi endocannabinoidi sono fortemente implicati nel sistema fisiologico controllo dell'appetito e del comportamento alimentare, con agonisti e antagonisti del recettore dei cannabinoidi CB(1), rispettivamente, che aumentano o diminuiscono l'assunzione di cibo. Questo studio ha esaminato le azioni acute del presunto endocannabinoide noladin ether sull'assunzione di cibo e sulla motivazione alimentare, valutando come influenza la quantità di lavoro spesa dagli animali per ottenere cibo APPROCCIO SPERIMENTALE Ratti maschi non deprivati sono stati iniettati sistemicamente con etere di noladina per valutare i suoi effetti acuti sull'alimentazione ad libitum di una dieta standard di laboratorio Inoltre, gli effetti della noladina sulla pressione della leva per cibo appetibile sono stati determinati utilizzando un paradigma operante del rapporto progressivo (PR). ct in 1 h dopo una dose di 0,5 mg·kg(-1). Nel test PR, questa dose iperfagica di noladin etere ha promosso alti tassi di risposta sostenuti e ha aumentato significativamente il numero totale di pressioni della leva e punto di rottura. Questi ultimi effetti sono stati prevenuti dal pretrattamento con 1,0 mg·kg(-1) dell'antagonista selettivo CB(1) surinabant (SR147778), che da solo non ha avuto alcun effetto sulla risposta. CONCLUSIONI E IMPLICAZIONI Questa è la prima segnalazione di iperfagia indotta dalla somministrazione acuta di noladina e la prima descrizione di azioni comportamentali nei ratti. Coerentemente con le nozioni prevalenti sul ruolo degli endocannabinoidi nell'appetito, una dose iperfagica di noladina ha notevolmente aumentato gli sforzi compiuti dagli animali per procurarsi il cibo. La noladina esercita quindi un'azione specifica sulla motivazione alimentare; possibilmente promuovendo il mangiare aumentando il valore di incentivazione del cibo.
Le proantocianidine dei semi d'uva inibiscono l'invasività delle cellule HNSCC umane prendendo di mira l'EGFR e invertendo la transizione epitelio-mesenchimale.Carcinoma a cellule squamose della testa e del collo (HNSCC) è responsabile di circa 20.000 decessi all'anno negli Stati Uniti. La maggior parte dei decessi è dovuta alle metastasi. Per sviluppare strategie più efficaci per la prevenzione delle metastasi delle cellule HNSCC, abbiamo determinato l'effetto delle proantocianidine dei semi d'uva ( GSP) sul potenziale invasivo delle cellule HNSCC e sui meccanismi alla base di questi effetti utilizzando cellule OSC19 come modello in vitro Utilizzando saggi di invasione cellulare, abbiamo stabilito che il trattamento delle cellule OSC19 con GSP ha determinato un'inibizione dose-dipendente dell'invasione cellulare. L'EGFR è sovraespresso nel 90% degli HNSCC e gli inibitori dell'EGFR, erlotinib e gefitinib, sono in fase di studio come terapie per questa malattia Abbiamo scoperto che il trattamento con GSP ha ridotto i livelli di espressione di EGFR nel cellule OSC19 oltre a ridurre l'attivazione di NF-κB/p65, un bersaglio a valle di EGFR, e l'espressione di proteine NF-κB-sensibili. Il trattamento con GSP ha anche ridotto l'attività di ERK1/2, un regolatore a monte di NF-κB e il trattamento delle cellule con acido caffeico fenetilico, un inibitore di NF-κB, ha inibito l'invasione cellulare. La sovraespressione di EGFR e l'elevata attività di NF-κB svolgono un ruolo chiave nella transizione epitelio-mesenchimale, che è di fondamentale importanza nei processi alla base delle metastasi, e abbiamo scoperto che il trattamento con GSP ha migliorato i livelli di epiteliale (E-caderina, citocheratine e desmoglein-2) e ridotto i livelli di biomarcatori mesenchimali (vimentina, fibronectina, N-caderina e Slug) nelle cellule OSC19. Questi risultati indicano che gli SPG hanno la capacità di inibire l'invasione delle cellule HNSCC e lo fanno mirando all'espressione di EGFR e all'attivazione di NF-κB, nonché inibendo la transizione epitelio-mesenchimale.
Copolimeri triblocco di ε-caprolattone, trimetilene carbonato e L-lattide: effetti dell'utilizzo di copolimero casuale come blocco rigido.Una serie di triblocco sono stati sintetizzati copolimeri comprendenti blocco terminale di PLLA modificato con PCL e copolimero casuale di PCL e PTMC come segmento morbido. I dati DSC mostrano che PCL ha interrotto la cristallinità del PLLA, rendendo il blocco rigido completamente amorfo quando il contenuto di PCL è del 50%. Di conseguenza, l'aggiunta di PCL nel blocco PLLA migliora notevolmente l'allungamento del triblocco. Per quanto riguarda l'elasticità, tuttavia, i risultati del test di scorrimento mostrano che l'aggiunta di PCL al blocco PLLA sembra ridurre il recupero di "equilibrio", mentre i risultati dei test ciclici mostra che il recupero istantaneo è aumentato significativamente con più PCL all'interno del blocco PLLA. È stato inoltre osservato che il tasso di degradazione del triblocco con l'aggiunta di PCL all'interno del PLLA era più lento rispetto al triblocco con blocco rigido PLLA puro. poliuretano, ci si aspetta che questi polimeri producano prodotti di degradazione meno dannosi e offrano più variabili per la manipolazione delle proprietà. Questi polimeri sono anche lavorabili dal fuso a temperature superiori a circa 130 °C. Prevediamo di utilizzare questi polimeri in una varietà di applicazioni, inclusi rivestimenti per stent, stent completamente degradabili e occlusori di difetti del setto interatriale.
L'agonista selettivo del recettore metabotropico 2/3 del glutammato MGS0028 inverte i comportamenti anormali indotti dall'allevamento nei topi.I comportamenti anormali indotti dall'isolamento sono utili modelli animali per valutare potenziali farmaci antipsicotici. Questo studio ha esaminato l'effetto di MGS0028, un agonista selettivo del recettore 2/3 del glutammato metabotropico, su comportamenti anormali come iperattività, aggressività e deficit di inibizione prepulse in topi allevati in isolamento. MGS0028 ha attenuato l'iperattività e comportamenti aggressivi in topi allevati in isolamento. L'agonista ha anche invertito i deficit di inibizione prepulse indotti dall'allevamento in isolamento. D'altra parte, MGS0028 non ha influenzato l'attività locomotoria e l'inibizione prepulse nei topi allevati in gruppo. Questi risultati suggeriscono che il glutammato metabotropico 2/ L'agonista dei 3 recettori, MGS0028, è un potenziale composto per il trattamento dei disturbi psichiatrici.
Abilità componenti dell'inizio della scrittura: uno studio esplorativo.Il presente studio ha esaminato le componenti della scrittura alla fine della scuola materna, utilizzando i dati di 242 bambini dell'asilo. In particolare di interesse era l'importanza dell'ortografia, della padronanza della scrittura delle lettere, della lettura e delle abilità linguistiche orali a livello di parole e sintassi nella scrittura. abilità di scrittura dopo aver tenuto conto delle abilità di lettura. L'abilità di lettura non era unicamente correlata alla scrittura una volta che il linguaggio orale, l'ortografia e la padronanza della scrittura delle lettere sono state prese in considerazione. Questi risultati sono discussi da una prospettiva di sviluppo.
Gli antibiotici della parete cellulare provocano l'accumulo di mCherry ancorato nella parete trasversale di Staphylococcus aureus.Un metodo di microscopia a fluorescenza per seguire direttamente la localizzazione di proteine definite in Staphylococcus è stato ostacolato dalla fluorescenza instabile delle proteine fluorescenti. Qui, abbiamo costruito ibridi mCherry (mCh) codificati con plasmide (pCX) a fluorescenza rossa, vale a dire mCh-cyto (nessun peptide segnale e nessuna sequenza di smistamento), mCh-sec (con segnale peptide) e mCh-cw (con peptide segnale e sequenza di smistamento della parete cellulare). I cloni di S. aureus miravano alle proteine di fusione mCh rispettivamente nel citosol, nel surnatante e nell'involucro cellulare; in tutti i casi mCherry ha mostrato una fluorescenza brillante. In stafilococchi si possono distinguere due tipi di peptidi segnale (SP): il motivo +YSIRK SP(labbro) e il motivo -YSIRK SP(sasF). Gli ibridi mCh forniti con il motivo +YSIRK SP(labbro) erano sempre espressi più alti di quelli con motivo -YSIRK SP(sasF). Per studiare il posizione del processo di ancoraggio e anche l'influenza del tipo SP, mCh-cw è stato fornito da un lato con il motivo +YSIRK (mCh-cw1) e dall'altro con il motivo -YSIRK (mCh-cw2). MCh-cw1 localizzato preferenzialmente alla parete trasversale, mentre mCh-cw2 localizzato preferenzialmente alla parete periferica. È interessante notare che, quando trattati con concentrazioni sub-letali di penicillina o moenomicina, sia mCh-cw1 che mCh-cw2 erano concentrati sulla parete trasversale. Il passaggio dalla parete periferica alla parete trasversale ha richiesto Sortase A (SrtA), poiché nel mutante srtA questo effetto è stato attenuato. L'effetto è molto probabilmente dovuto all'aumento mediato da antibiotici dei siti di ancoraggio liberi (Lipid II) sulla parete trasversale, il substrato di SrtA, che porta a un'incorporazione preferenziale di proteine ancorate sulla parete trasversale.
Ottimizzazione dell'estrazione assistita da microonde di antociani dal gelso e identificazione di antociani nell'estratto mediante HPLC-ESI-MS.Gli antociani sono composti naturali che conferire colore a frutta, verdura e piante. Questo studio mira a ottimizzare le condizioni di estrazione assistita da microonde (MAE) di antociani dal gelso (M. atropurpurea Roxb. ) utilizzando la metodologia della superficie di risposta (RSM). È stato impiegato un esperimento Box-Behnken a questo proposito. Concentrazione di metanolo, potenza delle microonde e tempo di estrazione sono stati scelti come variabili indipendenti. Le condizioni ottimizzate di MAE sono state le seguenti: 59,6% metanolo acidificato, potenza 425 W, rapporto liquido/solido 25 (v/p), e 132 s. In queste condizioni, 54,72 mg di antociani sono stati ottenuti da 1,0 g di polvere di gelso. Inoltre, 8 antociani sono stati identificati mediante cromatografia liquida ad alta prestazione-spettrometria di massa a ionizzazione elettrospray (HPLC-ESI-MS) in estratto di gelso. i risultati hanno mostrato che la cianidina-3-glucoside e la cianidina-3-rutinoside sono i principali antociani nel gelso. Inoltre, rispetto all'estrazione convenzionale, il MAE è più rapido ed efficiente per estrarre gli antociani dal gelso.
Nuove mutazioni CLDN14 in famiglie pakistane con ipoacusia autosomica recessiva non sindromica.Le mutazioni nel gene CLDN14 sono note per causare autosomica recessiva (AR) perdita dell'udito non sidromica (NSHL) nel locus DFNB29 sul cromosoma 21q22.13. Come parte di uno studio in corso per localizzare e identificare i geni NSHL, l'ARNSHL che segrega in quattro famiglie consanguinee pakistane è stato mappato alla regione 21q22.13 con uno dei due stabiliti o collegamento suggestivo. Dato il noto coinvolgimento del gene CLDN14 in NSHL, campioni di DNA da membri con problemi di udito delle quattro famiglie sono stati sequenziati per identificare potenzialmente varianti causali all'interno di questo gene. Tre nuove mutazioni CLDN14, c.167G>A (p. Trp56 ), c.242G>A (p. Arg81His) e c.694G>A (p. Gly232Arg), segregano con perdita dell'udito (HL) in tre delle famiglie. La mutazione CLDN14 precedentemente riportata c.254T>A ( p. Val85Asp) è stata osservata nella quarta famiglia Nessuna delle mutazioni è stata rilevata ct in 400 cromosomi di controllo pakistani e tutti sono stati ritenuti dannosi sulla base di analisi bioinformatiche. La mutazione non senso c.167G>A (p. Trp56) è la prima mutazione del codone di stop nel gene CLDN14 ad essere identificata per causare NSHL. Le mutazioni c.242G>A (p. Arg81His) e c.694G>A (p. Gly232Arg) sono state identificate rispettivamente all'interno del primo ciclo extracellulare e della coda carbossilica di claudina-14, il che evidenzia l'importanza dei domini extracellulari e la fosforilazione dei residui citoplasmatici della coda alla funzione della claudina all'interno dell'orecchio interno. L'HL dovuto a nuove mutazioni di CLDN14 è prelinguale, da grave a profondo con una maggiore perdita nelle alte frequenze.
La risoluzione dello stress ossidativo mitocondriale salva la crescita del collaterale coronarico nei ratti grassi obesi di Zucker.In precedenza abbiamo trovato una crescita del collaterale coronarico indotta dall'ischemia in Zucker obesi ratti grassi (ZOF) rispetto ai ratti magri Zucker (ZLN). Poiché i ratti ZOF hanno anomalie strutturali nei loro mitocondri che suggeriscono disfunzione e mostrano anche un aumento della produzione di O(2), abbiamo ipotizzato che la disfunzione mitocondriale causata dallo stress ossidativo comprometta la crescita collaterale coronarica in ZOF. Livelli aumentati di specie reattive dell'ossigeno sono stati osservati nell'endotelio aortico e nelle cellule muscolari lisce nei ratti ZOF rispetto ai ratti ZLN. I livelli delle specie reattive dell'ossigeno sono stati diminuiti dagli antiossidanti mirati ai mitocondri MitoQuinone (MQ) e MitoTempol (MT) come valutato da MitoSox Colorazione rossa e diidroetidina I perossidi lipidici (un marker di lipidi ossidati) sono aumentati in ZOF di ≈ 47% rispetto ai ratti ZLN. lo stress è stato accompagnato da un aumento degli enzimi antiossidanti, ad eccezione della glutatione perossidasi-1, e da un aumento della proteina 2 di disaccoppiamento nei ratti ZOF rispetto a ZLN. Inoltre, sono stati osservati anche tassi di respirazione elevati negli obesi rispetto ai ratti magri. La somministrazione di MQ ha normalizzato significativamente i profili metabolici e ridotto i perossidi lipidici nei ratti ZOF allo stesso livello osservato nei ratti magri. L'effetto protettivo del MQ ha anche soppresso l'induzione della proteina 2 disaccoppiamento nei ratti obesi. La risoluzione dello stress ossidativo mitocondriale mediante MQ o MT ha ripristinato la crescita collaterale coronarica alla stessa grandezza osservata nei ratti ZLN in risposta all'ischemia ripetitiva. Concludiamo che lo stress ossidativo e la disfunzione mitocondriale svolgono un ruolo chiave nell'interruzione della crescita collaterale coronarica nell'obesità e nella sindrome metabolica, e l'eliminazione dello stress ossidativo mitocondriale con MQ o MT salva la crescita collaterale.
Gli antiossidanti mirati ai mitocondri proteggono le cellule β pancreatiche dallo stress ossidativo e migliorano la secrezione di insulina nella glucotossicità e nella glicolipotossicità.Si pensa che il danno ossidativo mitocondriale svolga un ruolo ruolo chiave nell'insufficienza delle cellule β pancreatiche nella patogenesi del diabete di tipo 2. Nonostante ciò, il potenziale degli antiossidanti mirati ai mitocondri per proteggere le cellule β pancreatiche dallo stress ossidativo non è stato ancora studiato. Pertanto, abbiamo studiato se gli antiossidanti mirati ai mitocondri proteggere le cellule β pancreatiche come le cellule RINm5F e HIT-T15 dallo stress ossidativo in condizioni glucotossiche e glucolipotossiche Quando le cellule sono state incubate in queste condizioni, i livelli di espressione delle subunità del complesso della catena di trasporto degli elettroni mitocondriali, enzimi antiossidanti mitocondriali (come MnSOD e Prx3), apoptosi delle cellule , enzimi lipogenici (come ACC, FAS e ABCA1), accumulo di lipidi intracellulari, stress ossidativo, stress ER, mito la depolarizzazione della membrana condriale, l'NF-κB nucleare e la proteina legante gli elementi regolatori dello sterolo 1c (SREBP1c) erano tutti aumentati, in parallelo con la diminuzione del contenuto intracellulare di ATP, l'attività enzimatica della citrato sintasi e la secrezione di insulina stimolata dal glucosio. Questi cambiamenti erano coerenti con un elevato stress ossidativo mitocondriale e l'incubazione con gli antiossidanti mirati ai mitocondri, MitoTempol o Mitochinone (MitoQ), ha prevenuto questi effetti. In conclusione, gli antiossidanti mirati ai mitocondri proteggono le cellule β pancreatiche dallo stress ossidativo, promuovono la loro sopravvivenza e aumentano la secrezione di insulina nei modelli cellulari della glucotossicità e della glicolipotossicità associate al diabete di tipo 2.
Cambiamenti fisici e caratteristiche fisiologiche della buccia rossa e verde durante la maturazione della nettarina (cv. Hu018).Lo scopo di questo studio era determinare i cambiamenti fisici nelle nettarine e caratteristiche fisiologiche distintive legate alla buccia rossa e verde sotto stress che si verificano durante la maturazione dei frutti, su cui attualmente non sono disponibili informazioni La consistenza dei frutti è aumentata da 4 a 6 settimane dopo la fioritura (WAB) per poi diminuire da 6 WAB fino a maturazione. la buccia rossa e verde durante la maturazione delle nettarine sono state identificate mediante cromatografia liquida ad alta prestazione come cianidina 3-glucoside insieme e, a un livello molto più basso, cianidina 3-rutinoside. Le cianidine nella buccia rossa e verde sono diminuite da 4 a 8 WAB quindi aumentate da 8 a 12 WAB. Il contenuto di antociani era correlato positivamente con i valori PAL, POD, A, MDA e O2(·-) e inversamente correlato con i valori L e B. La buccia rossa e verde durante la maturazione poteva essere separata da hie cluster analysis rarchica dei dati testati. Questo studio ha fornito una panoramica delle caratteristiche della buccia rossa e verde durante la maturazione della nettarina (cv. Hu018). I valori di A, antociani, O2(·-), MDA, PAL, PPO e POD a buccia rossa erano superiori a quelli a buccia verde, mentre i valori di L, B e crominanza a buccia rossa erano inferiori a quelli a buccia verde buccia per tutta la maturazione del frutto.
Le catechine del tè verde riducono il potenziale invasivo delle cellule di melanoma umano prendendo di mira i recettori COX-2, PGE2 e la transizione epitelio-mesenchimale.Il melanoma è il tipo più grave di malattia della pelle e una delle principali cause di morte per malattia della pelle grazie alla sua capacità altamente metastatica Per sviluppare agenti chemiopreventivi più efficaci per la prevenzione del melanoma, abbiamo determinato l'effetto delle catechine del tè verde sul potenziale invasivo del melanoma umano cellule e i meccanismi molecolari alla base di questi effetti utilizzando linee cellulari di melanoma A375 (mutato BRAF) e Hs294t (non mutato BRAF) come modello in vitro Utilizzando saggi di invasione cellulare, abbiamo scoperto che gli effetti inibitori delle catechine del tè verde sul la migrazione cellulare era nell'ordine di (-)-epigallocatechina-3-gallato (EGCG)>(-)-epigallocatechina>(-)-epicatechina-3-gallato>(-)-gallocatechina>(-)- epicatechina Il trattamento delle cellule A375 e Hs294t con EGCG ha determinato una dose-de inibizione pendente della migrazione cellulare o dell'invasione di queste cellule, che era associata a una riduzione dei livelli dei recettori della cicloossigenasi (COX)-2, della prostaglandina (PG) E(2) e PGE(2) (EP2 ed EP4). Anche il trattamento delle cellule con celecoxib, un inibitore della COX-2, ha inibito la migrazione delle cellule di melanoma. EGCG inibisce 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetato-, un induttore di COX-2 e la migrazione cellulare indotta da PGE(2) delle cellule. L'EGCG ha ridotto la capacità di migrazione cellulare indotta dall'agonista EP2 (butaprost) e dall'agonista EP4 (Cay10580). Inoltre, l'EGCG ha inibito l'attivazione di NF-κB/p65, un regolatore a monte della COX-2, nelle cellule di melanoma A375, e il trattamento delle cellule con l'estere fenetilico dell'acido caffeico, un inibitore di NF-κB, ha anche inibito la migrazione cellulare. L'inibizione della migrazione delle cellule di melanoma da parte dell'EGCG è stata associata alla transizione dello stadio mesenchimale allo stadio epiteliale, che ha determinato un aumento dei livelli di biomarcatori epiteliali (E-caderina, citocheratina e desmogleina 2) e una riduzione dei livelli di biomarcatori mesenchimali (vimentina , fibronectina e N-caderina) nelle cellule di melanoma A375. Insieme, questi risultati indicano che l'EGCG, una delle principali catechine del tè verde, ha la capacità di inibire l'invasione/migrazione delle cellule di melanoma, un passaggio essenziale della metastasi, prendendo di mira l'espressione endogena dei recettori COX-2, PGE(2) e epiteliale-to -transizione mesenchimale.
Inibitori del succinato: chinone reduttasi/Complesso II regolano la produzione di specie mitocondriali reattive dell'ossigeno e proteggono le cellule normali dal danno ischemico ma inducono la morte specifica delle cellule cancerose.Succinato: chinone reduttasi (SQR) del complesso II occupa un punto centrale unico nel sistema respiratorio mitocondriale come una delle principali fonti di elettroni che guidano la produzione di specie reattive dell'ossigeno (ROS). È un bersaglio farmaceutico ideale per modulare i livelli di ROS nelle cellule normali per prevenire i danni indotti dallo stress ossidativo o, in alternativa, aumentare i ROS nelle cellule tumorali, inducendo la morte cellulare. Viene evidenziato il valore di farmaci come il diazossido per prevenire la produzione di ROS, proteggendo le cellule normali, mentre gli analoghi della vitamina E promuovono i ROS nelle cellule tumorali per ucciderle. prodotti farmaceutici questi agenti possono prevenire la malattia degenerativa e le loro modalità di azione sono attualmente completamente esplorate. L'evidenza che SDH/Complesso II è strettamente accoppiato al ratto NADH/NAD+ io in tutte le cellule, influenzate dalle forniture disponibili di intermedi del ciclo di Krebs come substrati NAD-linked essenziali, e la regolazione NAD+-dipendente di SDH/Complesso II sono riviste, così come i collegamenti alle deidrogenasi NAD+-dipendenti, Complex I e E3 diidrolipoammide deidrogenasi per produrre ROS. Questa recensione raccoglie e discute diverse fonti di informazioni relative alla produzione di ROS in diversi sistemi biologici, concentrandosi sull'evidenza per SQR come la principale fonte di produzione di ROS nei mitocondri, in particolare la sua rilevanza per la protezione dallo stress ossidativo e per i farmaci antitumorali mirati ai mitocondri (mitocani) come nuove terapie contro il cancro [corretto].
I recettori NMDA, mGluR5 e gli endocannabinoidi sono coinvolti in una cascata che porta alla depressione a lungo termine dell'ippocampo.Nella regione CA1 dell'ippocampo di ratto, Si ritiene che il recettore metabotropico del glutammato-5 (mGluR5) e i recettori dei cannabinoidi-1 (CB1R) partecipino alla depressione sinaptica a lungo termine (LTD). Il modo in cui mGluR e CB1R interagiscono per promuovere LTD rimane incerto. In questo studio, abbiamo esaminato LTD indotta da Agonisti CB1R, agonisti mGluR5 e stimolazione elettrica a bassa frequenza (LFS) della via collaterale di Schaffer Gli agonisti sintetici CB1R inducono una robusta LTD che è stata imitata dall'endocannabinoide (EC), noladin ether (NLDE), ma non dall'anandamide. 2- L'arachidonilglicerolo (2AG) ha prodotto solo un piccolo grado di LTD. Anche l'agonista selettivo mGluR5, ovvero (RS)-2-cloro-5-idrossifenilglicina (CHPG), ha indotto una robusta LTD, e CHPG e NLDE si sono occlusi a vicenda gli effetti. , CHPG e NLDE hanno occluso LTD indotta da LFS e LTD risultante da m tutti e tre i trattamenti sono stati bloccati da un antagonista CB1R. CHPG-LTD e NLDE-LTD erano insensibili al blocco del recettore N-metil-D-aspartato (NMDAR), anche se LFS-LTD richiede NMDAR. LTD indotta da LFS o CHPG, ma non da NLDE-LTD, è stata bloccata da un antagonista selettivo di mGluR5. (RS)-3,5-diidrossifenilglicina (DHPG), un agonista mGluR di gruppo I meno selettivo, ha indotto anche LTD, ma i suoi effetti non sono stati bloccati dagli antagonisti mGluR5 o CB1R. Inoltre, DHPG-LTD è stato additivo con LFS-LTD e CHGP-LTD. Questi risultati suggeriscono che NMDAR, mGluR5 e CB1R partecipano a una cascata che sta alla base di LFS-LTD e che il rilascio di un'attivazione di EC e CB1R avviene a valle di NMDAR e mGluR5. Inoltre, il DHPG induce una forma di LTD che differisce meccanicamente dalla depressione indotta da LFS.
L'efficienza idraulica compromette la resistenza alla compressione perpendicolare alla venatura del legno di abete rosso norvegese.Lo scopo di questo studio era di indagare la rigidità alla flessione e la resistenza alla compressione perpendicolare alla la venatura del legno di abete rosso norvegese (Picea abies (L. ) Karst. ) con diverse proprietà anatomiche e idrauliche. L'alburno maturo idraulicamente meno sicuro aveva diametri del lume idraulico più grandi e conducibilità idrauliche specifiche più elevate rispetto al legno novello idraulicamente più sicuro. La rigidità alla flessione (MOE) era maggiore, mentre la resistenza alla compressione radiale è inferiore nel legno maturo rispetto a quello giovanile. Un compromesso basato sulla densità tra MOE ed efficienza idraulica era evidente solo nel legno maturo. Attraverso l'età cambiale, la rigidità alla flessione non ha compromesso l'efficienza idraulica a causa della variazione della percentuale di legno tardivo e perché delle esigenze strutturali della chioma dell'albero (es. elevata flessibilità). La resistenza a compressione radiale ha compromesso, invece, il rendimento idraulico b perché era estremamente dipendente dalle caratteristiche della parte "più debole", il legno precoce altamente conduttivo. Un aumento del rinforzo della parete del condotto dei tracheidi di legno precoce sarebbe troppo costoso per l'albero. L'aumento della forza di compressione radiale mediante la modifica degli angoli delle microfibrille o del numero di cellule dei raggi potrebbe comportare una diminuzione del MOE, che influenzerebbe negativamente la capacità del tronco di sostenere la corona. Proponiamo che la resistenza alla compressione radiale potrebbe essere un parametro facilmente valutabile e altamente predittivo per la resistenza all'implosione o alla vulnerabilità alla cavitazione tra le specie di conifere, che dovrebbe essere oggetto di ulteriori studi.
L'influenza della massa di [11C]-laniquidar e [11C]-N-desmetil-loperamide sul blocco della glicoproteina P alla barriera ematoencefalica.Un rapporto precedente ha suggerito che la quantità di massa di traccianti PET potrebbe essere un fattore importante nell'assorbimento cerebrale mediato dalla glicoproteina P. Pertanto, questo studio ha studiato l'influenza della dose di massa di laniquidar, desmetil-loperamide e loperamide sulla glicoproteina P -captazione cerebrale mediata, rispettivamente, di [(11)C]-laniquidar e [(11)C]-N-desmetil-loperamide ([(11)C]-dLop). Topi wild-type (WT) sono stati iniettati per via endovenosa con soluzioni di 5,6 MBq [(11)C]-laniquidar (nessun trasportatore aggiunto o 60 mg/kg di laniquidar aggiunto) o con 5,0-7,4 MBq [(11)C]-dLop (nessun trasportatore aggiunto o 3 mg/kg desmetil loperamide). I topi sono stati uccisi e il cervello e il sangue sono stati raccolti, pesati e contati per la radioattività. Topi knockout Mdr1a (-/-) sono stati incorporati come gruppo di controllo. Iniezione di (11) C-laniquidar (nessun trasportatore aggiunto) in WT topi hanno determinato un assorbimento cerebrale statisticamente significativamente inferiore (0,7±0,2% ID/g) rispetto alla formulazione con aggiunta di trasportatore (60 mg/kg di laniquidar) (3,1±0,3% ID/g) (P=.004), mentre non è stata osservata alcuna differenza statistica tra le formulazioni di [(11)C]-dLop. Le concentrazioni ematiche di [(11)C]-laniquidar e [(11)C]-dLop non erano significativamente differenti tra le formulazioni testate nei topi WT. Negli animali di controllo, non è stato possibile dimostrare alcun effetto della quantità di massa sull'assorbimento cerebrale di entrambi i traccianti. Questi risultati dimostrano il carattere bivalente di laniquidar, che agisce come substrato a basse dosi e come agente bloccante per il trasporto della glicoproteina P nel cervello a dosi più elevate. In confronto, non è stata osservata alcuna differenza nell'assorbimento di [(11)C]-dLop tra le formulazioni con e senza vettori aggiunti, il che conferma che la desmetil-loperamide è un substrato della glicoproteina P a livello della barriera emato-encefalica.
La modulazione della citotossicità indotta dalle antracicline mirando al proteoma prenilato nelle cellule di leucemia mieloide.La deregolamentazione del segnale Ras/ERK nelle leucemie mieloidi rende questo percorso un target interessante per lo sviluppo di farmaci Linee cellulari di leucemia mieloide sono state selezionate per l'apoptosi indotta da idarubicina, la progressione del ciclo cellulare, l'attivazione della MAP chinasi chinasi (MEK-1/2) dipendente dal ciclo cellulare e l'espressione di Top2. della segnalazione di MEK/ERK è stata bloccata utilizzando l'inibitore della farnesiltransferasi (FTI) BMS-214,662 e il doppio inibitore della preniltransferasi (DPI) L-778,123 per interrompere la segnalazione di Ras. L'idarubicina ha causato un arresto del ciclo cellulare G2/M caratterizzato da elevata MEK-1/2 difosforilata e livelli di espressione Top2α. Gli FTI/DPI hanno suscitato effetti distinti sulla segnalazione di Ras, prenilazione proteica, ciclo cellulare e apoptosi. La combinazione di questi FTI/DPI con idarubicina ha inibito sinergicamente la proliferazione delle linee cellulari leucemiche, ma l'L-778, La combinazione 123+idarubicina ha mostrato un'inibizione sinergica della crescita su una gamma più ampia di concentrazioni di farmaco. È interessante notare che il trattamento combinato FTI/DPI ha inibito sinergicamente la proliferazione cellulare, indotto l'apoptosi e quasi completamente bloccato la prenilazione proteica. L'inibizione dell'espressione di K-Ras mediante interferenza dell'RNA o il blocco della sua prenilazione post-traduzionale ha portato ad un aumento dell'apoptosi indotta da BMS-214.662. I nostri risultati suggeriscono che l'inibizione quasi completa della prenilazione proteica utilizzando una combinazione FTI + DPI è il metodo più efficace per indurre l'apoptosi e per bloccare l'attivazione del segnale ERK indotta dall'antraciclina.
Reazioni di Diels-Alder intramolecolari che utilizzano acidi di Lewis di rutenio chirale e applicazione nella sintesi totale di ent-ledol.Acidi di Lewis di rutenio chirale che legano un punto incorporando il legante di fosfinite bidentato bidentato C(2)-simmetrico BIPHOP-F e un Cp o un indenyl \'roof\' può catalizzare in modo efficiente reazioni di Diels-Alder intramolecolari asimmetriche di trieni per formare addotti biciclici con induzione asimmetrica da buona a eccellente. la reazione costituisce il passaggio chiave in una sintesi totale di ent-ledol nel 96% di ee. La sintesi aiuta anche a chiarire l'assegnazione stereochimica di ledol e le incongruenze nella rotazione ottica misurata.
Il gene regolatore pleiotropico di Streptomyces ghanaensis wblA(gh) influenza la morfogenesi e la produzione di moenomicina.Il gene wblA(gh), che codifica un omologo del WhiB- famiglia di proteine, è stata identificata nel genoma sequenziato del produttore di moenomycin Streptomyces ghanaensis La delezione del gene ha bloccato la sporulazione del micelio aereo e ha causato un aumento del 230% nella produzione di moenomicine S. ghanaensis che sovraesprime SSFG-01620: un omologo dell'inibitore della proteasi extracellulare SCO0762, la cui espressione in Streptomyces coelicolor è down-regolata da wblA: ha mostrato carenze nella sporulazione simili a quelle del ceppo knockout wblA(gh) Il gene wblA(gh) di S. ghanaensis sembra giocare un ruolo negativo nel controllo della biosintesi della moenomicina e è essenziale per la sporulazione.
Il repressore della famiglia Bacillus subtilis GntR YtrA risponde agli antibiotici della parete cellulare.La fase di transglicosilazione della sintesi della parete cellulare è un obiettivo antibiotico primario perché è essenziale e specifici per i batteri. Due antibiotici, ramoplanina e moenomicina, mirano a questo passaggio legandosi rispettivamente al substrato lipidico II e all'enzima transglicosilasi. Qui, confrontiamo gli stimoli di ramoplanina e moenomicina nell'organismo modello Gram-positivo Bacillus subtilis. La Ramoplanina fortemente induce il sistema regolatorio LiaRS a due componenti, mentre la moenomicina induce quasi esclusivamente geni che fanno parte del regulon della funzione extracitoplasmatica (ECF) σ fattore σ(M). La Ramoplanina induce inoltre gli operoni ytrABCDEF e ywoBCD, che non fanno parte di un regulon antibiotico-reattivo precedentemente caratterizzato L'analisi del cluster rivela che questi due operoni sono selettivamente indotti da un sottoinsieme di antibiotici della parete cellulare che inibiscono la funzione del lipide II n o riciclaggio. La repressione di entrambi gli operoni richiede YtrA, che riconosce una ripetizione invertita davanti al proprio operone e davanti a ywoB. Questi risultati suggeriscono che YtrA è un ulteriore regolatore delle risposte allo stress dell'involucro cellulare.
La silimarina prende di mira la segnalazione della β-catenina nel bloccare la migrazione/invasione delle cellule di melanoma umano.Il melanoma metastatico è una delle principali cause di morte per malattie della pelle e è spesso associato con l'attivazione della via di segnalazione Wnt/β-catenina Abbiamo esaminato l'effetto inibitorio della silimarina, un flavonoide vegetale da Silybum marianum, sulla migrazione cellulare di linee cellulari di melanoma umano metastasi-specifiche (A375 e Hs294t) e valutato se Wnt La segnalazione di /β-catenina è l'obiettivo della silimarina Utilizzando un test di invasione in vitro, abbiamo scoperto che il trattamento delle linee cellulari di melanoma umano con silimarina ha determinato un'inibizione della migrazione cellulare dipendente dalla concentrazione, che era associata all'accumulo di -catenina citosolica, riducendo l'accumulo nucleare di -catenina (cioè, l'inattivazione di β-catenina) e riducendo i livelli di metalloproteinasi della matrice (MMP) -2 e MMP-9 che sono gli obiettivi a valle della -catenina. Silimarina potenziata: (i ) i livelli della caseina chinasi 1α, della glicogeno sintasi chinasi-3β e della -catenina fosforilata sui residui critici Ser(45), Ser(33/37) e Thr(41), e (ii) il legame di proteine contenenti ripetizioni di β-transducina (β-TrCP) con forme fosforiche di -catenina nelle cellule di melanoma. Questi eventi giocano un ruolo importante nella degradazione o inattivazione della -catenina. Per verificare se la -catenina è un potente bersaglio molecolare della silimarina, è stato determinato l'effetto della silimarina sulle cellule di melanoma -catenina-attivate (Mel 1241) e β-catenina-inattivate (Mel 1011). Il trattamento delle cellule Mel 1241 con silimarina o FH535, un inibitore della via Wnt/β-catenina, ha inibito significativamente la migrazione cellulare delle cellule Mel 1241, che è stata associata a livelli elevati di caseina chinasi 1α e glicogeno sintasi chinasi-3β, e diminuzione dell'accumulo della -catenina nucleare e inibizione dei livelli di MMP-2 e MMP-9. Tuttavia, questo effetto della silimarina e dell'FH535 non è stato riscontrato nelle cellule di melanoma Mel 1011. Questi risultati indicano per la prima volta che la silimarina inibisce la migrazione delle cellule di melanoma prendendo di mira la via di segnalazione della -catenina.
Analisi del meccanismo di inibizione dell'attività della metalloproteinasi 7 della matrice umana (MMP-7) da parte delle catechine del tè verde.Le catechine del tè verde inibiscono la metalloproteinasi della matrice umana 7 (MMP-7) attività non competitiva e il gruppo galloile è essenziale per una potente inibizione (Oneda et al. , J. Biochem. , 133, 571-576 (2003)). In questo studio, abbiamo analizzato il meccanismo di questa inibizione Nell'idrolisi di (7-metossicumarina-4-il)acetil-L-Pro-L-Leu-Gly-L-Leu-[N(3)-(2,4-dinitrofenil)-L-2, 3-diaminopropionil]-L-Ala-L-Arg-NH(2), gli effetti inibitori di (-)-epigallocatechina-3-gallato (EGCG), (-)-gallocatechina-3-gallato (GCG), (- )-epicatechina-3-gallato (ECG) e (-)-catechina-3-gallato (CG) aumentavano con l'aumento dei livelli di pH da 7,0 a 8,5. Gli effetti inibitori di EGCG e GCG erano più potenti di quelli di ECG e CG , e aumenta con l'aumento delle concentrazioni di CaCl(2) da 10 a 50 mM. La fluorescenza di EGCG e GCG diminuisce con l'aumento di CaCl (2) concentrazioni e con l'aggiunta di MMP-7, mentre quelle di ECG e CG no. I nostri risultati suggeriscono che queste differenze derivano dal fatto che nell'anello B, EGCG e GCG hanno gruppi idrossilici fenolici nelle posizioni 3\', 4\' e 5\', mentre ECG e CG li hanno nelle posizioni 3\' e 4 \' posizioni.
Effetto dell'acid blue 80, un colorante antracenedione, su fegato di trota iridea, branchie e cellule intestinali in vitro.Acid Blue 80 (AB80) è un colorante blu scuro che, come altri coloranti sintetici, può entrare nell'ambiente. Le colture di linee cellulari di trota arcobaleno sono state dosate con AB80 direttamente, il che ha comportato la miscelazione della soluzione madre di AB80 nel mezzo sopra le cellule, o indirettamente, il che ha comportato la sostituzione del mezzo nelle colture con terreno che aveva AB80. Un calo dose-dipendente della vitalità cellulare è stato riscontrato in colture con o senza siero fetale bovino (FBS) dopo dosaggio diretto. Tuttavia, per le colture FBS, il dosaggio indiretto non ha causato alcuna perdita di vitalità per 24 ore e nel lungo termine era dannoso per RTgill-W1 ma non per colture RTL-W1. Dopo 6 giorni a 50 mg/L la citotossicità era evidente e dopo 9 giorni il numero di cellule RTgill-W1 era diminuito. Eppure AB a 1 mg/L non ha suscitato cambiamenti in 9 giorni in qualsiasi linea cellulare AB80 sembra avere il potenziale per essere tossico solo a una concentrazione molto alta razioni.
Variazione dell'alcaloide pirrolizidinico nei germogli e nelle radici di ibridi segreganti tra Jacobaea vulgaris e Jacobaea aquatica.L'ibridazione può portare a nuove variazioni qualitative o quantitative del metabolita secondario (SM) espressione che può avere conseguenze ecologiche ed evolutive Abbiamo misurato l'espressione dell'alcaloide pirrolizidinico (PA) nei germogli e nelle radici di una famiglia che include un genotipo Jacobaea vulgaris e un genotipo Jacobaea aquatica (genotipi parentali), due genotipi ibridi F(1) , e 102 genotipi ibridi F(2) utilizzando cromatografia liquida-spettrometria di massa tandem (LC-MS/MS). Abbiamo rilevato 37 PA nelle radici e nei germogli di J. vulgaris, J. aquatica e gli ibridi. Le concentrazioni e le composizioni di PA differivano tra i genotipi e tra radici e germogli. Tre PA otosenina-simili che si verificavano solo nei germogli dei genotipi parentali erano presenti nelle radici degli ibridi F(2); le composizioni di PA erano talvolta nuove negli ibridi F(2) comp ared con genotipi parentali, e in alcuni casi si è verificata un'espressione PA trasgressiva. Abbiamo anche scoperto che le PA all'interno dei gruppi strutturali covariano sia nelle radici che nei germogli e che l'espressione di PA era correlata tra germogli e radici. La notevole e nuova variazione presente tra gli ibridi F(2) indica che l'ibridazione ha un ruolo potenziale nell'evoluzione della diversità di PA nel genere Jacobaea e questo sistema ibrido è utile per studiare il controllo genetico dell'espressione di PA.
VisG è essenziale per la biosintesi della virginiamicina S, un antibiotico streptogramine di tipo B, come fornitore dell'aminoacido non proteinogenico fenilglicina.A streptogramin tipo B L'antibiotico virginiamicina S (VS), è prodotto da Streptomyces virginiae, insieme a un antibiotico streptogramina di tipo A, virginiamicina M1 (VM), come sua controparte sinergica. VS è un esadepsipeptide ciclico contenente un amminoacido non proteinogenico, la Lfenilglicina (L-pheGly) , nella sua struttura centrale. Abbiamo identificato, nell'estremità sinistra del superammasso della virginiamicina, due geni che dirigono la biosintesi VS con l'incorporazione di L-pheGly. L'analisi trascrizionale ha rivelato che visF, che codifica per una sintetasi peptidica non ribosomiale, e visG, che codifica per un proteina con omologia con una idrossifenilacetil-CoA diossigenasi, sono sotto la regolazione trascrizionale del butanolide delle virginiae (VB), una piccola molecola di segnalazione diffondente che governa la produzione di virginiamicina. lo ione di visG ha portato alla completa perdita della produzione di VS senza alcun cambiamento nella produzione di VM, suggerendo che visG è necessario per la biosintesi di VS. La produzione di VS abolita nel disgregante visG è stata completamente recuperata dall'aggiunta esterna di pheGly o dalla complementazione genica, il che indica che VisG è coinvolto nella biosintesi di VS come fornitore di una molecola di L-pheGly. Un esperimento di alimentazione con analoghi di L-pheGly ha suggerito che VisF, che è responsabile dell'ultimo passaggio di condensazione, ha un'elevata specificità di substrato verso L-pheGly.
Sviluppo e convalida di un metodo enantioselettivo di cromatografia liquida/spettrometria di massa tandem per la separazione e la quantificazione di eslicarbazepina acetato, eslicarbazepina, R-licarbazepina e oxcarbazepina nel plasma umano.", Lo scopo di questo studio è stato sviluppare e convalidare un metodo enantioselettivo di cromatografia liquida/spettrometria di massa tandem (LC-MS/MS) sensibile e specifico, per la quantificazione simultanea di eslicarbazepina acetato (ESL), eslicarbazepina (S- Lic), oxcarbazepina (OXC) e R-licarbazepina (R-Lic) nel plasma umano Gli analiti sono stati estratti dal plasma umano mediante estrazione in fase solida e la separazione cromatografica è stata ottenuta utilizzando una fase mobile di 80% n-esano e 20% di etanolo /alcol isopropilico (66,7/33,3, v/v) È stata utilizzata una colonna Daicel CHIRALCEL OD-H (5 μm, 50 mm × 4,6 mm) con una velocità di flusso di 0,8 mL/min e un tempo di esecuzione di 8 min. ESL, S-Lic, R-Lic, OXC e lo standard interno, 10,11-diidrocarbamazepi ne, sono stati quantificati mediante spettrometria di massa a ionizzazione elettrospray di ioni positivi. Il metodo è stato completamente convalidato, dimostrando accuratezza, precisione, linearità e specificità accettabili in conformità con le normative FDA per la convalida dei metodi bioanalitici. La linearità è stata dimostrata nell'intervallo 50.0-1000.0 ng/mL per ESL e OXC e nell'intervallo 50.0-25.000.0 ng/mL per S-Lic e R-Lic. Il coefficiente di variazione del plasma intra e inter-giornaliero era inferiore al 9,7% per ESL, 6,0% per OXC, 7,7% per S-Lic e inferiore al 12,6% per R-Lic. L'accuratezza era compresa tra il 98,7% e il 107,2% per tutti i composti quantificati. Il limite inferiore di quantificazione (LLOQ) era 50,0 ng/mL per ESL, S-Lic, OXC e R-Lic nel plasma umano. La stabilità a breve termine nel plasma, la stabilità per congelamento-scongelamento nel plasma, la stabilità a lungo termine nel plasma congelato, la stabilità dell'autocampionatore e la stabilità della soluzione madre hanno soddisfatto tutti i criteri di accettazione. I campioni di plasma umano, raccolti da 8 volontari, hanno dimostrato che questo metodo può essere utilizzato per il monitoraggio terapeutico dell'ESL e dei suoi metaboliti negli esseri umani trattati con ESL.
Olio essenziale da parti aeree di Betonica grandiflora Willd. dall'Iran.La composizione chimica dell'olio essenziale ottenuto dalle parti aeree di Betonica grandiflora Willd. , che cresce spontaneamente in Iran, è stato analizzato per la prima volta mediante gascromatografia-spettrometria di massa. Complessivamente, sulla base delle caratteristiche degli spettri di massa e degli indici di ritenzione, sono stati identificati 40 componenti volatili in cui ledol (21,8%), mirtenil acetato ( 21,7%, eudesm-7(11)-en-4-olo (6,5%), trans-cariofillene (5,5%), α-bisabololo (4,9%) e isolongifololo (4,5%) erano i costituenti principali. Sesquiterpeni ossigenati, gli idrocarburi monoterpenici e gli idrocarburi sesquiterpenici erano i principali gruppi di composti con rispettivamente il 45,6%, 23,1% e 18,4%. L'olio era moderatamente attivo contro Bacillus subtilis e Staphylococcus aureus e inattivo contro Enterococcus faecalis e Klebsiella pneumoniae.
L'effetto antinfiammatorio intestinale della dersalazina sodica è correlato a una down-regulation nella produzione di IL-17 in modelli sperimentali di colite dei roditori.Dersalazine il sodio (DS) è una nuova entità chimica formata dalla combinazione, attraverso un legame azoico, di un potente antagonista del fattore di attivazione piastrinica (PAF) (UR-12715) con l'acido 5-aminosalicilico (5-ASA). -effetti infiammatori sulla colite indotta da acido trinitrobenzensolfonico (TNBS) nei ratti e recentemente in pazienti con UC in fase II PoC. Vi sono prove crescenti che le cellule Th17 hanno un ruolo importante nella patogenesi della malattia infiammatoria intestinale (IBD). questo studio doveva caratterizzare ulteriormente gli effetti antinfiammatori della DS. L'effetto della DS (10 o 30 mg·kg (-1) bid) sulla colite indotta da TNBS nei ratti è stato studiato dopo 2 e 7 giorni con particolare attenzione ai mediatori dell'infiammazione Inoltre, le sue proprietà antinfiammatorie sono state analizzate in due diverse modalità colite indotta da destrano sodio solfato (DSS), topi BALB/ce C57BL/6, quest'ultimo dipendente da IL-17. DS, quando somministrato per 7 giorni, ha mostrato effetti antinfiammatori intestinali nella colite indotta da TNBS; questi effetti sono stati osservati sia macroscopicamente che attraverso il profilo dei mediatori infiammatori (TNF, IL-1β, IL-6 e IL-17). Sebbene il trattamento di 2 giorni con DS non abbia indotto effetti antinfiammatori intestinali, è stato sufficiente ridurre l'espressione potenziata di IL-17. La DS ha mostrato effetti benefici sulla colite indotta da DSS nei topi C57BL/6 e ha ridotto le citochine pro-infiammatorie del colon IL-1β, IL-6 e IL-17. Al contrario, non ha esercitato effetti antinfiammatori intestinali sulla colite indotta da DSS nei topi BALB/c. La DS esercita un'attività antinfiammatoria intestinale in diversi modelli di colite nei roditori attraverso la down-regulation dell'espressione di IL-17.
Studi di configurazione di complessi di varie catechine del tè e caffeina allo stato cristallino.Cristalli dei complessi di (+)-catechina (CA) di non -catechina galloilata e (-)-catechina-3-O-gallato (Cg) di catechina galloilata con caffeina sono state preparate e le loro strutture stereochimiche e interazioni intermolecolari sono state determinate mediante analisi cristallografica a raggi X. CA ha formato un complesso 1 : 1 con caffeina da legami idrogeno intermolecolari, mentre Cg formava un complesso 1 : 2 con caffeina, che era formato da interazioni π-π faccia a faccia e offset e legami idrogeno intermolecolari. Una soluzione di due tipi di catechina non galloilata, CA e (-)-epicatechina (EC) e caffeina (rapporto molare 1 : 1 : 2) in acqua hanno fornito un complesso 1 : 1 : 2, la cui struttura cristallina aveva due strati, uno strato in cui CA e caffeina formavano linee alternate e un altro strato in cui EC e caffeina formavano linee alternate. Il complesso 1 : 1 : 2 si è formato b y offset interazioni π-π e CH-π e legami idrogeno intermolecolari.
Un metodo di cromatografia liquida chirale per la determinazione simultanea di oxcarbazepina, eslicarbazepina, R-licarbazepina e altri nuovi derivati chimici BIA 2-024, BIA 2-059 e BIA 2-265 , nel plasma e nel cervello di topo.Recentemente, sono stati sviluppati modelli in silico per prevedere la farmacocinetica dei farmaci. Tuttavia, prima dell'applicazione, devono essere convalidati e, per questo, sono necessarie informazioni su composti di riferimento strutturalmente simili. È stato sviluppato e convalidato un metodo di cromatografia liquida chirale con rilevamento dell'ultravioletto (LC-UV) per la quantificazione simultanea di BIA 2-024, BIA 2-059, BIA 2-265, oxcarbazepina, eslicarbazepina (S-licarbazepina) e R-licarbazepina in plasma e cervello di topo I composti sono stati estratti mediante una procedura di estrazione selettiva in fase solida e la loro separazione cromatografica è stata ottenuta su una colonna LiChroCART 250-4 ChiraDex utilizzando una fase mobile di acqua-metanolo (92:8, v/v) pompata a 0,7 ml/min La rilevazione UV r è stato fissato a 235 nm. Le curve di calibrazione erano lineari (r(2) ≥ 0.996) negli intervalli di concentrazione di 0,2-30 µg/mL per oxcarbazepina, eslicarbazepina e R-licarbazepina; 0,2-60 µg/mL per i restanti composti nel plasma; e 0,06-15 µg/mL per tutti gli analiti nell'omogenato cerebrale. Tenendo conto di tutti gli analiti a questi intervalli di concentrazione in entrambe le matrici, la precisione complessiva non ha superato il 9,09% e l'accuratezza era compresa tra ±14,3%. Questo metodo LC-UV è adatto per condurre studi di farmacocinetica con questi composti nel topo al fine di ottenere un quadro migliore delle loro vie metaboliche e della loro biodistribuzione.
Il botrydial sesquiterpenico prodotto dalla Botrytis cinerea induce la risposta ipersensibile sui tessuti vegetali e la sua azione è modulata dalla segnalazione dell'acido salicilico e dell'acido jasmonico.Botrytis cinerea , come fungo necrotrofico, uccide i tessuti dell'ospite e si nutre dei resti. Questo fungo è in grado di indurre la risposta ipersensibile (HR) sui suoi ospiti, sfruttando così il meccanismo di difesa dell'ospite per generare tessuti necrotici. Tuttavia, l'identità degli effettori HR prodotti da B. cinerea non è chiaro. Lo scopo di questo lavoro era determinare se il botrydial, un sesquiterpene fitotossico prodotto da B. cinerea, sia in grado di indurre l'HR sulle piante ospiti, utilizzando come modello Arabidopsis thaliana. ha indotto l'espressione del marcatore HR HSR3, deposizione di callosio e l'accumulo di specie reattive dell'ossigeno e composti fenolici Botrydial ha anche indotto l'espressione di PR1 e PDF1.2, due proteine correlate alla patogenesi coinvolte nella de risposte di difesa regolate rispettivamente dall'acido salicilico (SA) e dall'acido jasmonico (JA). A. thaliana e piante di tabacco difettose nella segnalazione di SA erano più resistenti al botrydial rispetto alle piante di tipo selvatico, al contrario delle piante di A. thaliana difettose nella segnalazione di JA, che erano più sensibili. Si può concludere che il botrydial induce l'HR sui suoi ospiti e i suoi effetti sono modulati dalle vie di segnalazione dell'ospite mediate da SA e JA.
Proprietà di autoregolazione del (+)-tujopsene e influenza delle condizioni ambientali sulla sua produzione da parte di Penicillium decumbens.Un ceppo di Penicillium decumbens è stato raccolto da un'acqua -danneggiato e la produzione di composti organici volatili microbici (MVOC) è stata studiata mediante microestrazione in fase solida nello spazio di testa, seguita da analisi GC-MS. Il ceppo è stato caratterizzato da un'elevata produzione di (+)-tujopsene. di varie temperature, valori di umidità relativa (UR), substrati e concentrazioni di inoculo sulla crescita fungina e sulla produzione di (+)-tujopsene è stata studiata. La temperatura ottimale e l'umidità relativa per la crescita di P. decumbens erano rispettivamente di 30°C e 100% UR In generale, quanto più favorevoli erano i parametri di incubazione per la crescita, tanto più rapida è stata la produzione massima (+)-tujopsene. Inoltre, l'attività antimicotica del tujopsene è stata testata su 16 ceppi fungini. La crescita di cinque dei questi ceppi fungini sono stati influenzati negativamente sia dal solo tujopsene che quando sono cresciuti a contatto con gli MVOC prodotti da P. decumbens. A seguito di questi risultati e poiché anche la crescita di P. decumbens è stata inibita dal tujopsene, è stata proposta una funzione di autoregolazione per questo composto. Pochi dati sono presenti in letteratura sulla comunicazione chimica tra funghi. La presente ricerca potrebbe, quindi, contribuire alla comprensione del metabolismo e del comportamento dei funghi negli ambienti interni.
Le proantocianidine dei semi d'uva inibiscono l'invasività delle cellule di melanoma attraverso la riduzione della sintesi di PGE2 e l'inversione della transizione epitelio-mesenchimale.Il melanoma è la principale causa di morte Abbiamo esaminato l'effetto delle proantocianidine dei semi d'uva (GSP) sulla migrazione delle cellule del cancro del melanoma e i meccanismi molecolari alla base di questi effetti utilizzando linee cellulari di melanoma umano altamente metastasi-specifiche, A375 e Hs294t. Utilizzando saggi di invasione cellulare in vitro, abbiamo osservato che il trattamento delle cellule A375 e Hs294t con GSP ha determinato un'inibizione dipendente dalla concentrazione dell'invasione o della migrazione cellulare di queste cellule, che è stata associata a una riduzione dei livelli di cicloossigenasi (COX )-2 e produzione di prostaglandine (PG) E (2). Anche il trattamento delle cellule con celecoxib, un inibitore della COX-2, o la trasfezione transitoria di cellule di melanoma con il piccolo RNA interferente COX-2, inibiscono anche ed migrazione delle cellule di melanoma. Il trattamento delle cellule con 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate, un induttore di COX-2, ha migliorato la fosforilazione di ERK1/2, una proteina della famiglia delle protein chinasi attivate da mitogeni, e successivamente la migrazione cellulare, mentre sia gli GSP che il celecoxib hanno inibito significativamente Migrazione cellulare promossa da 12-O-tetradecanoilforbolo-13-acetato e fosforilazione di ERK1/2. Anche il trattamento delle cellule con UO126, un inibitore di MEK, ha inibito la migrazione delle cellule di melanoma. Inoltre, gli SPG hanno inibito l'attivazione di NF-κB/p65, un regolatore a monte della COX-2, nelle cellule di melanoma, e il trattamento delle cellule con acido caffeico fenetilestere, un inibitore di NF-κB, ha anche inibito la migrazione cellulare. Inoltre, l'inibizione della migrazione delle cellule di melanoma da parte dei GSP è stata associata all'inversione del processo di transizione epiteliale-mesenchimale, che ha comportato un aumento dei livelli di biomarcatori epiteliali (E-caderina e citocheratine) mentre la perdita di biomarcatori mesenchimali (vimentina, fibronectina e N- caderina) nelle cellule di melanoma. Insieme, questi risultati indicano che gli SPG hanno la capacità di inibire l'invasione/migrazione delle cellule di melanoma prendendo di mira l'espressione endogena di COX-2 e invertendo il processo di transizione epitelio-mesenchimale.
L'acido botcinico fitotossico Botrytis cinerea richiede due polichetidi sintasi per la produzione e ha un ruolo ridondante nella virulenza con botrydial.Il fungo della muffa grigia Botrytis cinerea produce due principali fitotossine, il sesquiterpene botrydial, per il quale è stato precedentemente caratterizzato il cluster genico di biosintesi, e il polyketide botcinic acid Abbiamo identificato due geni codificanti per la polyketide sintasi (PKS), BcPKS6 e BcPKS9, che sono up-regolati durante l'infezione della foglia di pomodoro L'inattivazione genica e l'analisi degli spettri dei metaboliti secondari di diversi mutanti indipendenti hanno dimostrato che sia BcPKS6 che BcPKS9 sono enzimi chiave per la biosintesi dell'acido botcinico Abbiamo dimostrato che i geni BcPKS6 e BcPKS9, ribattezzati BcBOA6 e BcBO9 (per la biosintesi dell'acido botcinico di B. cinerea), si trovano in diversi loci genomici, ciascuno dei quali è adiacente ad altri presunti geni biosintetici dell'acido botcinico, denominati da BcBOA1 a BcBOA17. Presunti ortologhi di BcBOA ge nes sono presenti nel fungo strettamente correlato Sclerotinia sclerotiorum, ma l'organizzazione a grappolo non è conservata tra le due specie. Come per i geni di biosintesi botrydial, l'espressione dei geni BcBOA è co-regolata dalla subunità Gα BCG1 sia durante la crescita in vitro che in planta. La perdita di produzione di acido botcinico non influisce sulla virulenza sulle foglie di fagiolo e pomodoro. Tuttavia, i doppi mutanti che non producono acido botcinico o botrydial (bcpks6Δbcbot2Δ) mostrano una virulenza notevolmente ridotta. Quindi, è stato dimostrato un ruolo ridondante di botrydial e acido botcinico nella virulenza di B. cinerea.
Farmacocinetica di eslicarbazepina acetato allo stato stazionario in adulti con crisi a esordio parziale.Valutare la farmacocinetica di eslicarbazepina acetato (ESL) allo stato stazionario stato negli adulti con crisi epilettiche parziali che hanno assunto ESL per almeno 1 anno con uno o due farmaci antiepilettici concomitanti (AED). Sono stati prelevati campioni di sangue per la valutazione farmacocinetica prima della dose e 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12 e 24 ore dopo la somministrazione allo stato stazionario in 51 pazienti stabilizzati con trattamento cronico (oltre 1 anno) con ESL 400 mg (n=7), 800 mg (n=26) o 1200 mg (n=18) una volta- La maggior parte dei pazienti (n=29, 56,9%) stava ricevendo 2 farmaci antiepilettici concomitanti e i co-farmaci più frequenti erano carbamazepina (n=34, 66,7%) e acido valproico (n=19, 37,3%). e i suoi metaboliti eslicarbazepina, R-licarbazepina e oxcarbazepina (OXC) sono stati determinati mediante un metodo chirale convalidato mediante cromatografia liquida accoppiata a massa spettrometria. Analogamente ai risultati precedenti in soggetti sani, le concentrazioni plasmatiche di ESL erano costantemente al di sotto del limite inferiore di quantificazione (50 ng/mL). Il principale composto nel plasma era il metabolita attivo eslicarbazepina, che ha raggiunto le concentrazioni massime (C(max)) 2 ore dopo la somministrazione; successivamente, le sue concentrazioni plasmatiche sono diminuite con un'emivita media apparente di 13, 14 e 20 ore nei pazienti che ricevevano dosi di ESL rispettivamente di 400, 800 e 1200 mg una volta al giorno. La Cmax di eslicarbazepina era 9,7, 15,5 e 23,0 μg/mL e le aree sotto la curva concentrazione plasmatica-tempo durante l'intervallo di somministrazione (AUC(0-24)) erano 132,5, 205,4 e 336,1 μgh/mL nei pazienti che ricevevano dosi ESL rispettivamente di 400, 800 e 1200 mg una volta al giorno. I principali parametri farmacocinetici di eslicarbazepina (C(max) e AUC(0-24)) erano proporzionali alla dose. R-licarbazepina e OXC erano metaboliti minori. Dopo la somministrazione orale una volta al giorno di ESL 400 mg, 800 mg e 1200 mg a pazienti con epilessia trattati in concomitanza con uno o due altri farmaci antiepilettici, l'ESL è stato rapidamente convertito in eslicarbazepina, che era il principale composto attivo trovato nel plasma. L'esposizione sistemica all'eslicarbazepina era proporzionale alla dose.
Studio primario e meccanismi antitumorali dell'analogo da SC002.Per studiare i meccanismi antitumorali dell'analogo delle ascidiacee SC002. Dopo aver trattato le cellule tumorali con l'analogo dell'ascidiacea SC002, sono stati rilevati mediante Western blot i cambiamenti di una serie di molecole segnale cellulari associate al tumore, tra cui VEGF (fattore di crescita endoteliale vascolare), P53, P21 e Bcl-2 et al; inoltre l'espressione di VEGF sierico in topi portatori di tumore e l'attività di Caspasi-3, 8, 9 nel tessuto tumorale sono stati infine studiati mediante ELISA, infine l'analogo dell'ascidiacea SC002 può ovviamente indurre l'espressione di P53, mentre diminuisce l'espressione di Bcl-2 e VEGF, ma ha sull'effetto su p21 nel tessuto tumorale; ELISA ha dimostrato che SC002 può anche ridurre la concentrazione di VEGF sierico in topi portatori di tumore, ma non ha influenzato l'attività di Caspase-3, 8 e 9. SC002 ha la funzione antitumorale promuovendo la espressione del gene oncosoppressore p53, sopprimere l'espressione di Bcl-2 e VEGF. Questa fondazione fornirà un'importante teoria di base per il suo ulteriore utilizzo come nuovi farmaci antitumorali.
Effetto della cintura in varie posizioni dell'albero del tè \'Huang Zhi Xiang\' (Camellia sinensis) sul contenuto di catechine e amido in foglia fresca.Sono stati determinati i contenuti di amido e catechine nella foglia fresca di \'Huang Zhi Xiang\' alberi di tè Oolong cinto nella parte inferiore, centrale (sui rami grandi) e superiore (sui rami piccoli). Lo studio ha dimostrato che l'amido i contenuti degli alberi cinti erano significativamente più alti (p<0.05) rispetto a quelli non cinti. Inoltre, il contenuto di (-)-epicatechina (EC), (-)-epigallocatechina (EGC), catechine totali (TC) e le catechine semplici (SC) degli alberi cinti erano significativamente più alte (p<0.05) rispetto a quelle di quelli non cinti. In particolare, il contenuto di (-)-epigallocatechina gallato (EGCG), (-)-epicatechina gallato (ECG) ) e il gallato di catechina (CG) dal cinto al centro erano anche significativamente più alti (p<0.05) rispetto a quelli dal non cinto. Gli elementi erano correlati negativamente con il contenuto di (-)-gallocatechina (GC), EC, SC, TC ed EGC, mentre erano correlati positivamente con il contenuto di EGCG e CG nei germogli freschi.
Inibizione delle proteinasi derivate dall'ospite e dai batteri da parte degli antociani naturali.Si ritiene che le proteinasi derivate dall'ospite e dai batteri svolgano un ruolo critico nella progressione della parodontite Questo studio ha studiato la capacità di un estratto di ribes nero e dei suoi principali antociani (cianidina-3-O-glucoside, cianidina-3-O-rutinoside e delfinidina-3-O-rutinoside) di inibire l'attività delle metalloproteinasi della matrice (MMP), elastasi neutrofila e proteinasi del parodontopatogeno (Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia e Treponema denticola) L'inibizione enzimatica è stata rilevata mediante saggi fluorometrici e colorimetrici dopo incubazione dell'estratto di ribes nero e dei suoi principali antociani (a concentrazioni di 6,25, 12,5, 25 e 50 μg/mL) con MMP , elastasi o proteinasi batteriche, insieme ai loro substrati specifici. La degradazione del substrato è stata registrata ogni ora per un massimo di 4 ore. L'estratto di ribes nero (50 μg/mL) ha inibito tutte le proteinasi testate. MMP-1 e Le MMP-9 sono state significativamente inibite dagli antociani puri a concentrazioni comprese tra 6,25 e 50 μg/mL. L'attività dell'elastasi è stata inibita dalla cianidina-3-O-glucoside e dalla cianidina-3-O-rutinoside nell'intervallo 6,25-50 μg/mL e dalla delfinidina-3-O-rutinoside a 50 μg/mL. Anche le proteinasi di P. gingivalis, T. forsythia e T. denticola sono state significativamente inibite dagli antociani puri. In tutti i casi, l'inibizione enzimatica era dipendente dal tempo. Il nostro studio ha dimostrato che un estratto di ribes nero e i suoi principali antociani erano in grado di inibire l'attività delle proteinasi derivate dall'ospite e dai batteri. Ciò suggerisce che tali composti naturali possono rappresentare agenti promettenti per l'uso in trattamenti aggiuntivi per la parodontite.
Il blocco di ErbB-2 e l'inibizione della preniltransferasi alterano il fattore di crescita epidermico e il traffico del recettore del fattore di crescita epidermico e migliorano (111)La radioterapia con elettroni Auger In-DTPA-hEGF.La distribuzione intracellulare dei radiofarmaci emettitori di elettroni Auger è un determinante della citotossicità. Tuttavia, i meccanismi con cui questi agenti vengono instradati attraverso la cellula sono poco conosciuti. Lo scopo di questo studio era di indagare come il traffico di (111)In fattore di crescita epidermico umano marcato ((111)In-DTPA-hEGF) si riferisce a quello del recettore EGF (EGFR) e se la co-somministrazione di agenti che modulano la segnalazione di EGFR altera l'efficacia di (111)In-DTPA-hEGF. L'interazione tra AlexaFluor488-EGF (AF488-EGF) e l'anticorpo anti-EGFR coniugato con Cy3 (Cy3-anti-EGFR) è stata studiata nella linea cellulare di cancro al seno MDA-MB-468 utilizzando il trasferimento di energia di risonanza di fluorescenza e l'imaging a vita in fluorescenza a 2 fotoni (111)In interna lizzazione e saggi di frazionamento nucleare sono stati eseguiti per studiare l'effetto dell'anticorpo bloccante ErbB-2 trastuzumab e di un inibitore della preniltransferasi, L-778,123, sulla localizzazione subcellulare di (111)In-DTPA-hEGF in MDA-MB-468 (1,3 × 10(6) EGFR per cellula; ErbB-negativo) e 231-H2N (0,2 × 10(6) EGFR per cellula; 0,4 × 10(5) ErbB-2 per cellula). La citotossicità di (111)In-DTPA-hEGF (0-64 nM) più trastuzumab (0-50 μg/mL) o L-778,123 (0-22,5 μM) è stata misurata utilizzando saggi clonogenici in un pannello di linee cellulari di cancro al seno che esprimono diversi livelli di EGFR e ErB-2. I dati di sopravvivenza clonogenica sono stati utilizzati per calcolare gli indici di combinazione. L'inibizione della crescita del tumore è stata misurata in vivo in topi portatori di xenotrapianto 231-H2N trattati con (111)In-DTPA-hEGF più trastuzumab o L-788,123. Utilizzando il trasferimento di energia per risonanza di fluorescenza, abbiamo dimostrato che l'EGF interagisce con l'EGFR nel citoplasma e nel nucleo dopo l'internalizzazione del complesso ligando-recettore nelle cellule MDA-MB-468. La localizzazione nucleare di (111)In-DTPA-hEGF è potenziata da trastuzumab e L-788,123. Trastuzumab e L-788,123 hanno sensibilizzato le cellule 231-H2N a (111)In-DTPA-hEGF. La localizzazione nucleare e la citotossicità di (111)In-DTPA-hEGF sono risultate significativamente aumentate negli xenotrapianti 231-H2N mediante cotrattamento con L-788,123 (P < 0,0001). L'efficacia terapeutica di (111)In-DTPA-hEGF è aumentata attraverso la somministrazione concomitante di farmaci selezionati a bersaglio molecolare che modulano la segnalazione e il traffico di EGFR.
L'attivazione dei recettori metabotropici del glutammato 2/3 attenua l'iperlocomozione indotta dalla metanfetamina e aumenta la neurotrasmissione serotoninergica prefrontale.Recettore metabotropico del glutammato (mGlu) 2/3 Gli agonisti inibiscono l'iperlocomozione indotta da anfetamina e fenciclidina Il meccanismo dell'effetto antipsicotico degli agonisti del recettore mGlu2/3 è stato studiato in un modello ipoglutamatergico, ma non in un modello iperdopaminergico Per studiare il meccanismo dell'effetto antipsicotico dell'agonista nel modello iperdopaminergico , questo studio ha esaminato gli effetti dell'agonista selettivo del recettore mGlu2/3 MGS0028 sull'iperlocomozione indotta da metanfetamina e sugli aumenti dei livelli extracellulari di serotonina, dopamina, noradrenalina e glutammato nella corteccia prefrontale e nel nucleo accumbens dei topi. iperlocomozione indotta da metanfetamina in modo dose-dipendente Studi di microdialisi hanno mostrato che MGS0028 si ha notevolmente inibito gli aumenti indotti dalla metanfetamina nei livelli extracellulari di serotonina, ma non di dopamina e noradrenalina, nella corteccia prefrontale, e non ha influenzato gli aumenti indotti dalla metanfetamina nei livelli di ammina extracellulare nel nucleo accumbens. La metanfetamina non ha influenzato il rilascio di glutammato nella corteccia prefrontale e nel nucleo accumbens. L'applicazione locale di MGS0028 nella corteccia prefrontale ha anche attenuato l'iperlocomozione indotta dalla metanfetamina e aumenta i livelli di serotonina extracellulare nella corteccia prefrontale. Inoltre, MGS0028 non ha influenzato l'iperlocomozione indotta dalla metanfetamina nei topi pretrattati con p-clorofenilalanina, un inibitore della sintesi della serotonina. L'attivazione dei recettori mGlu2/3 prefrontali inibisce l'effetto stimolante psicomotorio della metanfetamina nei topi e il sistema serotoninergico prefrontale può essere coinvolto in questo effetto. La scoperta fornisce la prova che i recettori mGlu2/3 prefrontali sono funzionalmente accoppiati con il sistema serotoninergico.
Derivati prenilati della baicaleina e del 3,7-diidrossiflavone: sintesi e studio dei loro effetti sulla crescita delle linee cellulari tumorali, sul ciclo cellulare e sull'apoptosi.Quattordici derivati della baicaleina e del 3,7-diidrossiflavone sono stati sintetizzati e valutati per la loro attività inibitoria contro la crescita in vitro di tre linee cellulari tumorali umane Gli approcci sintetici si sono basati sulla reazione con prenil o geranil bromuro in ambiente alcalino, seguita dalla ciclizzazione del rispettivo derivato monoprenilato. I diidropiranoflavonoidi sono stati ottenuti anche mediante sintesi one-pot, utilizzando argilla Montmorillonite K10 come catalizzatore combinata con irradiazione a microonde. Lo screening in vitro dei composti per l'attività inibitoria della crescita cellulare ha rivelato che la presenza di un gruppo geranile era associata ad un notevole aumento nell'attività inibitoria Inoltre, per i derivati 3,7-diidrossiflavone è stato osservato un marcato aumento dell'effetto inibitorio della crescita anche per co pounds con anelli fusi furano e pirano. I composti più attivi sono stati studiati anche per quanto riguarda il loro effetto sul profilo del ciclo cellulare e sull'induzione dell'apoptosi. Nel complesso i risultati indicano il ruolo rilevante della prenilazione dell'impalcatura flavonica nell'attività di inibizione della crescita delle cellule tumorali.
Identificazione del fattore di trascrizione E3 (TFE3) come attivatore indipendente dal recettore di Gα16: regolazione genica da parte della subunità nucleare Gα e del suo attivatore.Receptor- i regolatori indipendenti della proteina G forniscono diversi meccanismi per l'input del segnale ai sistemi di segnalazione basati sulla proteina G, rivelando ruoli funzionali inaspettati per le proteine G. Come parte di uno sforzo più ampio per identificare i regolatori specifici della malattia per le proteine G eterotrimeriche, abbiamo esaminato tali proteine nell'ipertrofia cardiaca utilizzando uno schermo funzionale a base di lievito di cDNA di mammifero come piattaforma di scoperta Riportiamo l'identificazione di tre fattori di trascrizione appartenenti alla stessa famiglia, il fattore di trascrizione E3 (TFE3), il fattore di trascrizione associato alla microftalmia e il fattore di trascrizione EB, come nuovi attivatori indipendenti dal recettore della segnalazione della proteina G selettivi per Gα (16). TFE3 e Gα (16) erano entrambi up-regolati nell'ipertrofia cardiaca avviata dalla costrizione aortica trasversale. In p studi di interazione della proteina in vitro, il TFE3 ha formato un complesso con Gα(16) ma non con Gα(i3) o Gα(s). Sebbene l'aumentata espressione di TFE3 nei sistemi eterologhi non abbia influenzato la segnalazione di Gα(16) mediata dal recettore sulla membrana plasmatica, il TFE3 ha effettivamente traslocato Gα(16) nel nucleo, portando all'induzione dell'espressione di claudina 14, un componente chiave della membrana struttura nei cardiomiociti. L'induzione della claudina 14 dipendeva sia dall'accumulo che dall'attivazione di Gα(16) da parte del TFE3 nel nucleo. Questi risultati indicano che TFE3 e Gα(16) sono up-regolati in condizioni patologiche e sono coinvolti in un nuovo meccanismo di regolazione trascrizionale attraverso la rilocalizzazione e l'attivazione di Gα(16).
Ruolo delle dinamiche specie-specifiche di claudina nella ricostituzione e rimodellamento della zonula occludens.Fili a giunzione stretta, che sono organizzati nella cellula simile a una cintura- struttura adesiva cellulare chiamata zonula occludens (TJ), crea la barriera permselettiva paracellulare nelle cellule epiteliali. La TJ è costruita sulla base della zonula aderente (AJ) da claudine polimerizzate in un processo mediato da ZO-1/2, ma se i 24 singoli membri della famiglia delle claudine svolgono ruoli diversi alla TJ non è chiaro. Qui abbiamo stabilito un sistema cellulare per esaminare la polimerizzazione delle singole claudine in presenza di ZO-1/2 utilizzando una linea cellulare simile all'epitelio, SF7, che mancava di endogena TJ e non esprimevano claudina ma claudina 12 nei saggi di immunofluorescenza e PCR in tempo reale. In linee stabili derivate da SF7, claudina-7, -14 o -19 esogena, ma nessun'altra claudina, TJ ricostituiti individualmente, ciascuno con un distinto Modello TJ-strand, come rivelato da freez analisi delle e-fratture. Il recupero della fluorescenza dopo l'analisi del photobleaching (FRAP) della dinamica della claudina in queste e altre cellule epiteliali ha suggerito che la lenta dinamica di recupero del FRAP delle claudine gioca un ruolo fondamentale nella regolazione della loro polimerizzazione attorno agli AJ, che sono debolmente accoppiati con ZO-1/2, per formare TJ. Inoltre, le distinte stabilità della claudina in diversi tipi di cellule possono aiutare a capire come i TJ regolano la permeabilità paracellulare alterando il flusso paracellulare e la permeabilità agli ioni paracellulari.
Base immunologica per la rivaccinazione dei bambini con infezione da HIV che ricevono HAART.Con l'aumento dell'accesso alla terapia antiretrovirale per i bambini con infezione da HIV, specialmente nell'area sub-sahariana Africa, per valutare il rischio di infezione è necessaria una migliore comprensione dello sviluppo e del mantenimento delle risposte delle cellule T e B della memoria ai patogeni dopo la ricostituzione immunitaria La conoscenza delle risposte immunitarie a lungo termine dopo l'inizio della HAART è di particolare importanza per le politiche sulla rivaccinazione di bambini con infezione da HIV, che possono perdere l'immunità protettiva per le precedenti infezioni e immunizzazioni Esaminiamo il normale sviluppo delle risposte di memoria delle cellule T e B ai virus e ai vaccini contro i patogeni virali e contrastiamo gli effetti immunologici della trasmissione perinatale dell'HIV con l'infezione da HIV acquisita più tardi nella vita. Quindi esploriamo i potenziali benefici della terapia antiretrovirale e della rivaccinazione, utilizzando il virus del morbillo come modello.