Split (1)

train · 17.2M rows

text stringlengths 9 6.27k
L'effetto deterrente del canto degli uccelli nella difesa del territorio.Utilizzare le risposte dei proprietari del territorio alla riproduzione per dedurre la funzione territoriale dei segnali acustici è pratica comune Tuttavia, le difficoltà nell'interpretazione dei risultati di tali esperimenti hanno oscurato la nostra comprensione della segnalazione territoriale. Ad esempio, una risposta più forte alla riproduzione è spesso interpretata come più aggressiva, ma non c'è consenso sul fatto che questo debba essere in risposta al minimo o più minaccioso intruso simulato. Piuttosto che seguire un aumento o una diminuzione graduale, la relazione tra l'intensità del segnale e la forza di risposta può invece descrivere una curva a picco. Abbiamo manipolato le canzoni dello scricciolo fasciato (Thryophilus pleurostictus) per simulare il basso, il medio e l'alto cantanti e hanno usato queste canzoni come stimoli in esperimenti di riproduzione. Gli scriccioli fasciati avevano meno probabilità di avvicinarsi allo stimolo ad alte prestazioni rispetto a quelli a bassa e media performance. stimoli ormantici. Tuttavia, gli uccelli che si sono avvicinati allo stimolo ad alte prestazioni hanno cantato più di quelli che si sono avvicinati allo stimolo a basse prestazioni. Inoltre, gli uccelli avevano maggiori probabilità di abbinare i canti quando esposti agli stimoli a prestazione media e alta rispetto agli stimoli a bassa prestazione e il comportamento di approccio previsto corrispondeva al canto. Questi risultati sono in accordo con i modelli teorici di scontri aggressivi in cui gli avversari a bassa prestazione vengono sfidati senza ulteriori valutazioni. Gli avversari con prestazioni medie e alte, tuttavia, potrebbero richiedere un'ulteriore valutazione e quest'ultima potrebbe essere percepita come troppo intimidatoria per l'approccio.
Mutazione in gap e giunzioni strette in pazienti con ipoacusia non sindromica.Mutazioni bialleliche nei geni GJB2, GJB3, GJB6 e CLDN14 sono state implicato nella disabilità uditiva non sindromica autosomica recessiva (ARNSHI). Inoltre, è stato riportato un gran numero di pazienti eterozigoti GJB2. Il fenotipo era in parte giustificato dalla presenza di due delezioni tra cui GJB6. Abbiamo analizzato GJB2, GJB6, GJB3 e CLDN14 in 102 pazienti tunisini con ARNSHI. Sono state inoltre selezionate le delezioni del(GJB6-D13S1830) e del(GJB6-D13S1854). La mutazione più frequente è stata la c.35delG in GJB2 (21,57%), rilevata allo stato eterozigote in 2 pazienti Il del(GJB6-D13S1830) è stato identificato in un caso allo stato eterozigote. Nessuna altra mutazione nei geni di giunzione studiati è stata rilevata in pazienti eterozigoti. Sono stati identificati diversi polimorfismi in GJB3, GJB6 e CLDN14. Il nostro studio conferma l'importanza dello screening GJB2 in ARNSHI e suggerisce che nelle popolazioni consanguinee, un singolo allele mutante DFNB1 in individui con HI è probabilmente dovuto a uno stato di portatore casuale.
La doxorubicina inattiva la citocromo c ossidasi del miocardio nei ratti: cardioprotezione da Mito-Q.La doxorubicina (DOX) è utilizzata per il trattamento di vari tipi di cancro. Il suo uso clinico è, tuttavia, limitato dalla sua cardiomiopatia dose-limitante. L'esatto meccanismo della cardiomiopatia indotta da DOX rimane ancora sconosciuto. Gli obiettivi erano di studiare il meccanismo molecolare della cardiomiopatia indotta da DOX e la cardioprotezione da parte del mitochinone (Mito-Q), un trifenilfosfonio- analogo coniugato del coenzima Q, utilizzando un modello di ratto. I ratti sono stati trattati con DOX, Mito-Q e DOX più Mito-Q per 12 settimane. La funzione ventricolare sinistra misurata mediante ecocardiografia bidimensionale è diminuita nei ratti trattati con DOX, ma è stata conservata durante il trattamento con Mito-Q più DOX. Utilizzando la risonanza paramagnetica elettronica (EPR) ex vivo a bassa temperatura, è stata rilevata una diminuzione dipendente dal tempo del segnale eme nei tessuti cardiaci isolati da ratti trattati con una dose cumulativa di DOX. La DOX ha attenuato l'EPR S segnali caratteristici dell'interazione di scambio tra citocromo c ossidasi (CcO)-Fe(III) eme a3 e CuB. DOX e Mito-Q hanno ripristinato insieme questi segnali EPR e l'attività CcO nei tessuti cardiaci. DOX ha fortemente sottoregolato l'espressione stabile delle subunità CcO II e Va e ha avuto un leggero effetto inibitorio sull'espressione genica della subunità I CcO. Mito-Q ha ripristinato le espressioni della subunità CcO II e Va nei ratti trattati con DOX. Questi risultati suggeriscono un nuovo meccanismo di cardioprotezione da parte di Mito-Q durante la cardiomiopatia indotta da DOX che coinvolge CcO.
Ossidazione fotocatalitica dei dinitronaftalene: teoria ed esperimento.Una combinazione di esperimenti di ossidazione fotocatalitica e calcoli quantistici è stata utilizzata per descrivere il meccanismo e la natura delle reazioni di ossidazione fotocatalitica degli isomeri del dinitronaftalene e interpretare le loro reattività nell'ambito della teoria del funzionale della densità (DFT) Le reazioni di ossidazione fotocatalitica di tre isomeri del dinitronaftalene, 1,3-dinitronaftalene, 1,5-dinitronaftalene e 1,8- sperimentalmente sono state studiate dinitronaftalene in presenza di TiO(2) Degussa grado P-25. Le reazioni sono state condotte in un fotoreattore Solarbox munito di lampada allo Xenon. La rimozione dei singoli substrati è stata seguita mediante metodo gascromatografico. i contenuti di carbonio organico dei campioni sono stati determinati mediante il metodo di ossidazione catalitica utilizzando l'analizzatore di carbonio organico totale zione di determinare i migliori descrittori di reattività per spiegare le differenze nei tassi di ossidazione fotocatalitica in termini di proprietà molecolari, sono state eseguite ottimizzazioni geometriche dei composti con la Teoria Funzionale della Densità DFT a livello B3LYP/6-31G( *). Per prendere l'effetto dell'adsorbimento sulla velocità di ossidazione, è stato modellato un cluster Ti(9)O(18) tagliato dalla struttura bulk dell'anatasio. Le energie di legame per i composti sono state calcolate utilizzando il set di basi a doppia zeta. Sono state calcolate le differenze di durezza globale, morbidezza, funzioni Fukui, durezza locale e morbidezza locale. I risultati mostrano che le reazioni studiate sono di natura orbitale controllata ed elettrofila. I descrittori DFT locali riflettono le reattività degli isomeri del dinitronaftalene meglio di quelli globali, a causa delle differenze nelle loro capacità di assorbimento.
Trasporto e metabolismo di alcuni antiossidanti cationici ubichinoni (MitoQn) in monostrati di cellule Caco-2.I mitoQn sono antiossidanti mirati ai mitocondri con strutture che collegano un trifenifosfonio catione a una frazione ubichinone da una catena alchilica lineare n-carbonio. L'efficacia antiossidante di MitoQn ha dimostrato di essere ottimale quando n = 10 ma si sa poco del trasporto relativo e del metabolismo di questi omologhi. Il presente studio ha esaminato l'assorbimento e trasporto secretorio e metabolismo di MitoQn (n = 3, 5 e 10) nei monostrati di cellule Caco 2. Durante il trasporto assorbente nella direzione apicale-basolaterale (AB), l'accumulo intracellulare è risultato proporzionale alla lipofilia ma alla permeazione (PappAB) non lo era, essendo alto per MitoQ3 e basso per MitoQ5 e MitoQ10. Il trasporto secretorio era maggiore del trasporto assorbente con rapporti di efflusso (PappBA/PappAB) per n = 3, 5 e 10 di 2,3, 24,9 e 4,0, rispettivamente. Nel presenza dell'inibitore della glicoproteina P ciclosporina A (CsA) 30 microM, i valori di PappAB per n = 3, 5 e 10 sono stati aumentati rispettivamente del 12, 195% e 30%, mentre i valori di PappBA sono stati ridotti dell'81%, 61% e 68% rispettivamente. In presenza di proteine (4% albumina sierica bovina) sul lato B, PappAB di MitoQ10 (log P 3.44) è aumentato di 9 volte mentre PappAB di MitoQ5 (log P 1.14) è rimasto invariato, entrambi senza variazione della permeabilità al paracellulare sonda, mannitolo. Durante il trasporto, è stato rilevato il metabolismo nelle corrispondenti specie di ubichinolo ridotte e nei loro coniugati solfato e glucuronide mediante cromatografia liquida in tandem di spettrometria di massa. In conclusione, la permeazione di questi antiossidanti cationici ubichinoni nei monostrati di cellule Caco-2 dipende da un equilibrio tra lipofilia, affinità del trasportatore, legame proteico e affinità per gli enzimi metabolizzanti di fase 2.
Capacità sensibilizzante e cross-reattività del fenilglicidil etere studiata nel test di massimizzazione della cavia.Allergie da contatto simultaneo al diluente reattivo fenilglicidil etere (PGE) e resine epossidiche a base di diglicidil etere del bisfenolo A (DGEBA) o resine epossidiche del tipo bisfenolo F. Queste ultime resine epossidiche contengono tre isomeri del diglicidil etere del bisfenolo F (DGEBF). e DGEBF sono chimicamente simili per quanto riguarda il gruppo glicidilico reattivo e un anello aromatico, rendendo la reattività crociata una delle possibili spiegazioni per reazioni simultanee Per indagare la capacità sensibilizzante della PGE e la reattività crociata della PGE rispetto ai monomeri di resina epossidica DGEBA e i tre monomeri DGEBF e viceversa. Il test di massimizzazione della cavia. La PGE è un forte sensibilizzante. L'induzione con DGEBA ha determinato un numero statisticamente significativo di animali che reagiscono alla PGE, ma quando indotta con PGE, l'an gli animali non hanno reagito in modo significativo a DGEBA. Quando i risultati vengono applicati agli esseri umani, si può presumere che i pazienti sensibilizzati principalmente al DGEBA reagiscano alla PGE, ma quando sensibilizzati esclusivamente alla PGE, non reagiscano al DGEBA. Sia i diluenti reattivi che le resine epossidiche devono essere testati quando si sospetta un'allergia da contatto ai sistemi di resine epossidiche.
Contenuto di antociani, perossidazione lipidica e attività di inibizione dell'enzima cicloossigenasi delle ciliegie agrodolci.Le ciliegie contengono antociani bioattivi che hanno proprietà antiossidanti, anti- proprietà infiammatorie, antitumorali, antidiabetiche e antiobese. Il presente studio ha rivelato che le ciliegie rosse contengono cianidina-3-O-rutinoside come antocianina maggiore (>95%). La cultivar di ciliegie "Kordia" (conosciuta anche come "Attika" ) ha mostrato il più alto contenuto di cianidina-3-O-rutinoside, 185 mg/100 g di peso fresco. Le ciliegie rosse "Regina" e "Skeena" erano simili a "Kordia", producendo cianidina-3- O-rutinoside rispettivamente a 159 e 134 mg/100 g di peso fresco Le rese di cianidin-3-O-glucosilrutinoside e cianidin-3-O-rutinoside erano 57 e 19 mg/100 g di peso fresco in "Balaton" e 21 e 6,2 mg/100 g di peso fresco in "Montmorency", rispettivamente, oltre a quantità minori di cianidina-3-O-glucoside. Gli estratti acquosi di Le ciliegie "Kordia", "Regina", "Glacier" e "Skeena" hanno fornito l'89, 80, 80 e 70% di inibizione della perossidazione lipidica (LPO), mentre gli estratti di "Balaton" e "Montmorency" erano nell'intervallo dal 38 al 58% a 250 microg/mL. Gli estratti di metanolo ed acetato di etile della ciliegia gialla "Rainier" contenenti beta-carotene, acido ursolico, cumarico, ferulico e cafeico hanno inibito la LPO rispettivamente del 78 e del 79%, a 250 microg/mL. Nel saggio di inibizione enzimatica della cicloossigenasi (COX), gli estratti di acqua di ciliegia rossa hanno inibito gli enzimi dall'80 al 95% a 250 microg/mL. Tuttavia, gli estratti di metanolo ed acetato di etile di "Rainier" e "Gold" erano i più attivi contro gli enzimi COX-1 e -2. Gli estratti acquosi di "Balaton" e "Montmorency" hanno inibito gli enzimi COX-1 e -2 di 84, 91 e 77 e 87%, rispettivamente, a 250 microg/mL.
FTIR, FT-Raman, studi di chimica quantistica in scala della struttura e degli spettri vibrazionali dell'1,5-dinitronaftalene.La fase solida FTIR e FT -Gli spettri Raman di 1,5-dinitronaftalene (DNN) sono stati registrati rispettivamente nelle regioni 4000-50 e 3500-100 cm(-1) Gli spettri sono stati interpretati con l'ausilio della normale analisi delle coordinate dopo l'ottimizzazione della struttura completa e il campo di forza calcolo basato sulla teoria del funzionale della densità utilizzando i metodi standard B3LYP/6-31G* e B3LYP/6-311+G** e combinazioni di set di basi ed è stato scalato utilizzando vari fattori di scala che forniscono un accordo abbastanza buono tra le frequenze osservate e calcolate. campo di forza della meccanica quantistica in scala di buona qualità, è stata fornita una descrizione affidabile dei fondamenti e le assegnazioni sono state proposte con l'aiuto della normale analisi delle coordinate. Gli spettri infrarossi e Raman sono stati previsti anche dalle intensità calcolate. spettri ulated con gli spettri sperimentali fornisce importanti informazioni sulla capacità del metodo computazionale di descrivere i modi vibrazionali.
Effetti antigenotossici, antiossidanti e di induzione linfocitaria prodotti dalla pteropodina.La pteropodina è un alcaloide ossindolico di tipo eterohimbina specificamente isolato dall'artiglio di \'Cat\'s\' (Uncaria tomentosa), una pianta che ha mostrato proprietà citostatiche, antinfiammatorie e antimutagene e viene utilizzata nella medicina tradizionale per curare una serie di malattie. In questo rapporto, abbiamo studiato la capacità dello pteropodine di ridurre il tasso di scambi tra cromatidi fratelli ed eritrociti policromatici micronucleati in topi a cui è stata somministrata doxorubicina. Abbiamo anche determinato la sua capacità di indurre la produzione di linfociti nei topi e il suo potenziale di scavenging dei radicali liberi applicando il test DPPH. Abbiamo trovato che la pteropodina (100-600 mg/kg) riduce significativamente la frequenza di scambi tra cromatidi fratelli e di eritrociti policromatici micronucleati in topi trattati con 10 mg/kg di doxorubicina Inoltre, abbiamo determinato che la pteropodina corr ha influenzato la citotossicità del midollo osseo indotta dalla doxorubicina, poiché ha mostrato un miglioramento nel tasso di eritrociti policromatici. Inoltre, 600 mg/kg di pteropodina hanno aumentato il 25,8% della produzione di linfociti oltre il valore di controllo lungo un test di 96 ore e hanno mostrato una forte capacità di intrappolare il radicale libero DPPH (98,26% con 250 microg/ml). I nostri risultati stabiliscono che la pteropodina è un antimutageno efficace nel modello utilizzato e suggeriscono che la pteropodina merita ulteriori ricerche nell'area del potenziale protettivo cellulare e del suo meccanismo d'azione.
Daptomicina versus Friulimicina B: profilo approfondito delle risposte allo stress dell'involucro cellulare di Bacillus subtilis.I relativi antibiotici lipo(depsi)peptidici daptomicina e friulimicina B mostrano un grande potenziale nel trattamento di patogeni gram-positivi multiresistenti. Applicando un profilo di espressione approfondito dell'intero genoma, abbiamo confrontato le rispettive risposte allo stress di Bacillus subtilis. Entrambi gli antibiotici mirano all'integrità dell'involucro, basata sulla forte induzione della funzione extracitoplasmatica fattore sigma -espressione genica dipendente. Il sistema a due componenti sensibile allo stress dell'involucro cellulare LiaRS è esclusivamente e fortemente indotto dalla daptomicina, indicativo di diversi meccanismi d'azione nei due composti.
L'antibiotico lipopeptidico Friulimicina B inibisce la biosintesi della parete cellulare attraverso la formazione di complessi con bactoprenolo fosfato.La friulimicina B è un lipopeptide ciclico naturale, prodotto dall'actinomicete Actinoplanes friuliensis, dotato di ottima attività contro i patogeni gram-positivi, compresi i ceppi multiresistenti, è costituito da un nucleo decapeptidico macrociclico e da una coda lipidica, interconnessi da un aminoacido esociclico. Friulimicina è solubile in acqua ed anfifilico, con carica complessivamente negativa. L'anfifilia è potenziata dalla presenza di Ca(2+), indispensabile anche per l'attività antimicrobica. Friulimicina condivide queste proprietà fisico-chimiche con la daptomicina, che si propone di uccidere i batteri gram-positivi attraverso la formazione di pori nella membrana citoplasmatica. del fatto che la friulimicina condivide caratteristiche di struttura e potenza con la daptomicina, abbiamo scoperto che la friulimicina ha una modalità d'azione unica e colpisce gravemente l'involucro cellulare dei batteri gram-positivi, agendo tramite un bersaglio definito. Abbiamo scoperto che la friulimicina interrompe il ciclo del precursore della parete cellulare attraverso la formazione di un complesso Ca(2+)-dipendente con il vettore bactoprenol fosfato C(55)-P, che non è preso di mira da nessun altro antibiotico in uso. Poiché C(55)-P funge anche da trasportatore nella biosintesi dell'acido teicoico e nella formazione delle capsule, è probabile che la friulimicina blocchi più vie che sono essenziali per un involucro funzionale delle cellule gram-positive.
Anomalie del condizionamento degli occhi nel disturbo bipolare suggeriscono una disfunzione cerebellare.Accumulo di ricerche implicano il cervelletto nei processi psicologici non motori e nelle malattie psichiatriche, incluso il disturbo bipolare ( BD). Nonostante le recenti prove che le lesioni cerebellari siano state documentate per innescare sintomi di tipo bipolare, pochi studi hanno esaminato direttamente l'integrità funzionale del cervelletto in coloro che sono affetti da BD. Utilizzando una procedura di condizionamento del battito di ciglia a singolo segnale di ritardo, l'integrità funzionale di il cervelletto è stato esaminato in 28 individui con BD (9 maniacali, 8 misti e 11 eutimici) e 28 controlli sani di pari età. L'analisi del gruppo bipolare nel suo complesso ha indicato un'acquisizione della risposta condizionata e un deficit temporale rispetto ai controlli. quando il gruppo bipolare è stato classificato in base allo stato dell'umore (misto, maniacale, eutimico), gli individui testati durante gli episodi misti erano sorprendentemente compromessi, con risultati significativi. notevolmente peggiore di tutti gli altri gruppi sia nell'acquisizione che nella tempistica delle risposte condizionate. Questi risultati estendono la ricerca precedente che implicava anomalie funzionali cerebellari nella BD e suggeriscono che la disfunzione cerebellare può essere associata allo stato dell'umore e al decorso della malattia.
Caratterizzazione della rimozione del derivato catecolo mediante lignina perossidasi in miscela acquosa.L'uso della lignina perossidasi (LIP) come metodo alternativo per la rimozione di quattro catecoli (1,2-diidrossibenzene): catecolo (CAT), 4-clorocatecolo (4-CC), 4,5-diclorocatecolo (4,5-DCC) e 4-metilcatecolo (4-MC) inquinanti tipici nelle acque reflue derivanti da industrie petrolifere e della carta, è stata valutata la rimozione di substrati catecolici 2mM da 1 microM LIP dopo 1 ora era nel seguente ordine: 4,5-DCC (95%)>4-CC(90%)>CAT(55%)>4-MC(43%). Ad eccezione di 4-MC, tutte le reazioni sono state accompagnate dalla formazione di prodotti insolubili, che hanno portato alla precipitazione di LIP. LIP è stato esposto a inattivazione dipendente dal prodotto solubile o insolubile, a seconda dei substrati testati, immediatamente a l'inizio delle reazioni. Nonostante l'immediata inattivazione enzimatica, la rimozione dei substrati catecolici è continuata, con conseguente formazione di prodotti oligomerici. Maggiore ossidazione p i prodotti analizzati erano compatibili con strutture dimeriche, trimeriche e tetrameriche. In due oligoclorocatecoli purificati sono stati rilevati legami eterei e una struttura benzochinonica. La rimozione dei derivati catecolici avviata da LIP, sembra essere diversa per ciascun substrato catecolico in termini di consumo e trasformazione del substrato e di attività enzimatica.
Funzione della glicoproteina P alla barriera emato-encefalica ripresa utilizzando 11C-N-desmetil-loperamide nelle scimmie.11C-Loperamide è un avido substrato per la glicoproteina P (P-gp), ma viene rapidamente metabolizzata in 11C-N-desmetil-loperamide (11C-dLop), che è anche un substrato per la P-gp e quindi contamina il segnale radioattivo nel cervello. si verifica la demetilazione di 11C-dLop, vengono generati radiometaboliti con un basso ingresso nel cervello. Pertanto, abbiamo valutato la capacità di 11C-dLop di quantificare la funzione della P-gp alla barriera ematoencefalica nelle scimmie. Sei scimmie sono state sottoposte a 12 scansioni PET del cervello, 5 al basale e 7 dopo il blocco farmacologico della P-gp. Un sottogruppo di scimmie è stato anche sottoposto a scansioni PET con acqua 15O per misurare il flusso sanguigno cerebrale. Per determinare se il blocco della P-gp ha influenzato la distribuzione periferica di 11C-dLop, abbiamo misurato la biodistribuzione dell'intero corpo in 4 scimmie al basale e dopo il blocco della P-gp. La concentrazione di 11C- Il dLop nel cervello era basso nelle condizioni di base e aumentava di 5 volte dopo il blocco della P-gp. Questo aumento è stato causato principalmente da un aumento del tasso di ingresso nel cervello piuttosto che da un ridotto tasso di rimozione dal cervello. Con il blocco della P-gp, l'assorbimento della radioattività tra le regioni del cervello è correlato linearmente con il flusso sanguigno, suggerendo un'elevata estrazione a passaggio singolo. Dopo la correzione del flusso sanguigno cerebrale, l'assorbimento di 11C-dLop era abbastanza uniforme tra le regioni del cervello, suggerendo che la funzione della P-gp è distribuita in modo abbastanza uniforme nel cervello. Nell'imaging di tutto il corpo, il blocco della P-gp ha influenzato significativamente la distribuzione della radioattività solo al cervello e non ad altri organi di origine visivamente identificati. La dose efficace stimata per l'uomo era di circa 9 microSv/MBq. La PET con 11C-dLop può quantificare la funzione della P-gp alla barriera ematoencefalica nelle scimmie. L'estrazione a passaggio singolo di 11C-dLop è elevata e richiede la correzione del flusso sanguigno per misurare con precisione la funzione di questo trasportatore di efflusso. Il basso assorbimento al basale e l'assorbimento marcatamente aumentato dopo il blocco della P-gp suggeriscono che l'11C-dLop sarà utile per misurare un'ampia gamma di funzioni della P-gp alla barriera emato-encefalica negli esseri umani.
Assorbimento e metabolismo del cianidina-3-glucoside e del cianidina-3-rutinoside estratti dal gelso selvatico (Morus nigra L.) nei ratti.Il meccanismo di assorbimento degli antociani (nonché il tipo) dal cibo nell'intestino non è chiaro Estratto ricco di antociani da gelso selvatico, composto da cianidina-3-glucoside (79%) e cianidina-3-rutinoside (cy-3 -rut) (19%), è stato somministrato per via orale a ratti Wistar e le loro concentrazioni sono state determinate nel plasma, nei reni e nel tratto gastrointestinale (GI). Le 2 forme glicosilate hanno mostrato la massima concentrazione a 15 minuti dopo la somministrazione orale, sia nel plasma e rene. La cianidina-3-glucoside e la cy-3-rut sono state trovate nel plasma come glucuronidi, come solfati di cianidina e come forme invariate. L'area sotto la curva di concentrazione in funzione del tempo (AUC(0-8h)) è stata 2,76 +/- 0,88 microg ora/mL e 9,74 +/- 0,75 microg ora/g rispettivamente per plasma e rene Nonostante il basso assorbimento, l'aumento di p il livello di antocianina lasma ha comportato un aumento significativo della capacità antiossidante (P < .05). Nel tratto gastrointestinale (stomaco e intestino tenue e crasso), i glicosidi cianidinici sono stati trovati invariati, ma era presente una bassa quantità della forma aglicone. I glicosidi antociani non sono più stati rilevati nel tratto gastrointestinale dopo 8 ore dalla somministrazione. La fermentazione in vitro ha mostrato che i 2 glicosidi cianidinici sono stati totalmente metabolizzati dalla microflora del colon del ratto, spiegando la loro scomparsa. Inoltre, i 2 prodotti della loro degradazione, cianidina e acido protocatecuico, non sono stati rilevati nel plasma e probabilmente non influenzano la capacità antiossidante del plasma. Come rilevato dal modello del sacco estroflesso, gli antociani sono stati trasportati attraverso l'enterocita dal trasportatore del glucosio sodio-dipendente.
Sfide analitiche nel controllo antidoping: gascromatografia bidimensionale completa con spettrometria di massa a tempo di volo, un'opzione promettente.Screening di controllo antidoping basato sul È stata studiata la risoluzione avanzata della gascromatografia completa bidimensionale (2D) combinata con lo spettrometro di massa a tempo di volo. L'identificazione di agenti anabolizzanti (clenbuterolo, norandrosterone, epimetendiolo, due metaboliti del metiltestosterone e 3\'-idrossistanozololo) contenuti in un campione di urina addizionato (2ng/ml) è stato dimostrato. Particolare enfasi è stata data al 3\'-idrossistanozololo, considerando principalmente la difficoltà nella sua rilevazione. Contrariamente agli approcci GC-MS convenzionali che devono utilizzare il monitoraggio a ione singolo, il metodo GC x GC-TOFMS ha permesso l'identificazione di quel metabolita attraverso la deconvoluzione dell'intero spettro di massa e ha anche risolto i picchi coeluiti di 3\'-idrossistanozololo e un componente endogeno.
Le allergie da contatto simultaneo al fenilglicidil etere e alle resine epossidiche dei tipi bisfenolo A/F possono essere spiegate dalla contaminazione delle resine epossidiche?Simultanea sono state segnalate allergie da contatto a resine epossidiche a base di diglicidil etere del bisfenolo A (DGEBA-R) o resine epossidiche di tipo bisfenolo F e il diluente reattivo fenil glicidil etere (PGE). Il motivo potrebbe essere cross-reattività, esposizione a un sistema di resina epossidica con PGE come componente o contaminazione da PGE nella resina epossidica. Per studiare la contaminazione da PGE, sono state analizzate 20 resine epossidiche commerciali per la presenza di PGE. Per studiare l'allergia da contatto al PGE e la sua relazione con le resine epossidiche da inserendo la PGE nella serie standard. Tra 2227 pazienti, 7 hanno reagito alla PGE. Su 23 (30%) pazienti, 7 con allergia da contatto al DGEBA-R e 7/19 (37%) con allergia da contatto ad una resina epossidica del bisfenolo Il tipo F ha reagito alla PGE. Tutti e 7 i pazienti con allergia da contatto alla PGE hanno reagito sia a t il DGEBA-R e alla resina epossidica del tipo bisfenolo F. La PGE è stata trovata nel 90% delle resine studiate. Le quantità di PGE variavano tra lo 0,004% p/p e lo 0,18% p/p. Molto probabilmente, la presenza di PGE come contaminante nelle resine epossidiche è di minore importanza per la sensibilizzazione, ma forse la contaminazione di PGE potrebbe provocare dermatiti da contatto in individui con un'elevata reattività alla PGE.
Progettazione, sintesi e valutazione farmacologica preliminare di nuovi analoghi di DM232 (unifiram) e DM235 (sunifiram) come modulatori della cognizione.Una serie di ammidi, strutturalmente correlato a DM232 (unifiram) e DM235 (sunifiram), caratterizzato da un 1,2,3,4-tetraidropirazino[2,1-a]isoindol-6(2H)-one, 1,4-diammino-cicloesano o 1 L'anello 4-diaminobenzene, sono stati sintetizzati e testati per l'attività di miglioramento della cognizione nel test di evitamento passivo del topo. Alcuni dei composti mostrano una buona attività antiamnesica e procognitiva, con una potenza maggiore del piracetam, mentre alcuni derivati del cicloesano sono dotati di induzione di amnesia proprietà.
Ipossia-ischemia neonatale di ratto: effetto del mitochinolo antiossidante e S-PBN.La produzione di radicali liberi dell'ossigeno dopo ipossia perinatale- si pensa che l'ischemia svolga un ruolo critico nella patogenesi della lesione cerebrale. La somministrazione di antiossidanti può quindi essere neuroprotettiva. Lo scopo del presente studio era di indagare l'effetto di un mitochinolo antiossidante mirato ai mitocondri (mitoQ) somministrato sotto forma del profarmaco mitochinone, e un antiossidante extracellulare N-terz-butil-(2-sulfofenil)-nitrone (S-PBN; Aldrich, St Louis, MO, USA), sulla sopravvivenza neuronale nello striato di ratto dopo ipossia-ischemia perinatale acuta Il mitochinone a 17 micromol/L (n = 6) o 51 micromol/L (n = 6), o il suo diluente (n = 12), è stato continuamente infuso per 3 giorni nello striato destro di ratti Sprague-Dawley. L'infusione è avvenuta tramite una pompa micro-osmotica Alzet (Alza, Los Angeles, CA, USA), impiantata stereotassicamente il giorno postnatale (PN ) 7 in anestesia. In un altro esperimento, S-PBN (100 mg/kg) (n = 8) o il suo diluente (n = 8) è stato somministrato in sei s. c. iniezioni ogni 12 h dalla sera di PN7. L'ipossia-ischemia è stata indotta su PN8 dalla legatura dell'arteria carotide comune destra in anestesia, seguita 2,5 ore dopo dall'esposizione all'8% di ossigeno per 1,5 ore. Su PN14 i cuccioli sono stati soppressi e sono state tagliate sezioni seriali di 40 microm attraverso l'intero striato. Il numero totale di neuroni medio-spinosi all'interno dello striato destro è stato determinato stereologicamente utilizzando il metodo del disettore ottico/Cavalieri. Non è stata osservata alcuna differenza significativa nel numero totale di neuroni striatali medio-spinosi tra i cuccioli trattati con mitoQ da 17 micromol/L o 51 micromol/L e i rispettivi controlli trattati con diluente. Nessuna differenza significativa è stata osservata nel numero totale di neuroni striatali medio-spinosi tra i cuccioli trattati con S-PBN e trattati con diluente. Mirare esclusivamente agli ossidanti mitocondriali con mitoQ, o agli ossidanti extracellulari con S-PBN, non è protettivo per i neuroni striatali medio-spinosi dopo ipossia-ischemia perinatale.
Sintesi e valutazione di [N-metil-11C]N-desmetil-loperamide come radiotracciante PET nuovo e migliorato per l'imaging della funzione P-gp.[(11)C]Loperamide è stato proposto per l'imaging della funzione della glicoproteina P (P-gp) con tomografia a emissione di positroni (PET), ma il suo metabolismo in [N-metil-(11)C] N-desmetil-loperamide ( [(11)C]dLop; [(11)C]3) preclude la quantificazione Abbiamo considerato che [(11)C]3 potrebbe essere di per sé un radiotracciante superiore per l'imaging della funzione P-gp cerebrale e quindi mirato a preparare [(11) )C]3 e caratterizzarne l'efficacia. Un precursore ammidico (2) è stato sintetizzato e metilato con [(11)C]iodometano per dare [(11)C]3. tipo topi, la captazione della radioattività cerebrale era molto bassa. Nei topi knockout per la P-gp (mdr-1a(-/-)), la captazione della radioattività cerebrale a 30 min è aumentata di circa 3,5 volte con le misurazioni PET e di oltre 7 volte con l'es. misure in vivo Nei topi knockout, la radioattività cerebrale era prevalentemente (90%) radiotraccia immodificata R. Negli esperimenti PET di scimmia, anche l'assorbimento della radioattività cerebrale era molto basso, ma dopo il blocco della P-gp è aumentato di oltre 7 volte. [(11)C]3 è un nuovo radiotracciante efficace per l'imaging della funzione P-gp cerebrale e, a favore di una futura quantificazione di successo, sembra privo di ampi radiometaboliti penetranti nel cervello.
L'antagonista del recettore CB(2) dei cannabinoidi SR144528 riduce l'espressione e l'attivazione del recettore mu-oppioide nel tronco cerebrale del topo: ruolo del recettore CB(2) nel dolore.Precedentemente considerato un recettore esclusivamente periferico, è ora accettato che il recettore dei cannabinoidi CB(2) sia presente anche in quantità limitate e in posizioni distinte nel cervello di diverse specie animali, inclusi i topi. Tuttavia, i possibili ruoli di CB(2) recettori nel cervello devono essere chiariti. Lo scopo del nostro lavoro era studiare il livello di espressione del mRNA del recettore mu-oppioide (MOR) e l'attività funzionale dopo trattamenti acuti in vivo e in vitro con l'endocannabinoide noladin ether (NE) e con il Antagonista del recettore CB (2) SR144528 nel tronco cerebrale di topi carenti di recettori CB (1) o CB 2. Questo studio si basa sulle nostre precedenti osservazioni che la noladina etere (NE) produce una diminuzione dell'attività di MOR nel proencefalo e questo l'attenuazione può essere antagonizzata dalla cannabina CB(2) antagonista dell'oide SR144528, suggerendo un effetto mediato dal recettore CB(2). Abbiamo utilizzato la PCR quantitativa in tempo reale per esaminare i cambiamenti dei livelli di mRNA MOR, il saggio di legame [(35)S]GTPgammaS per analizzare la capacità dell'agonista mu-oppioide DAMGO di attivare le proteine G e i saggi di legame della competizione per misurare direttamente il legame del ligando a MOR nel tronco cerebrale dei topi. Dopo somministrazione acuta di NE non sono stati osservati cambiamenti significativi sulla segnalazione MOR. Tuttavia, il pretrattamento dei topi con SR144528 prima della somministrazione di NE ha ridotto significativamente il segnale MOR, suggerendo il coinvolgimento di SR144528 nella mediazione dell'effetto di MOR. L'espressione dell'mRNA dei MOR è diminuita significativamente sia nei topi CB(1) wild-type che CB(1) knockout dopo una singola iniezione di SR144528 a 0,1 mg/kg rispetto ai controlli trattati con il veicolo. Di conseguenza, la segnalazione mediata da MOR è stata attenuata dopo il trattamento acuto in vivo con SR144528 sia nei topi CB(1) wild-type che CB(1) knockout. L'aggiunta in vitro di 1microM SR144528 ha causato una diminuzione della stimolazione massima di DAMGO nei saggi di legame [(35)S]GTPgammaS nelle membrane del tronco cerebrale wild-type CB(2) mentre non sono stati osservati cambiamenti significativi nei knockout del recettore CB(2). Gli studi sulla competizione di legame con i radioleganti hanno mostrato che l'effetto notato di SR144528 sulla segnalazione MOR non è mediato dai MOR. I nostri dati dimostrano che l'SR144528 ha causato una pronunciata diminuzione dell'attività del MOR mediata dai recettori dei cannabinoidi CB(2).
Recettori 5-HT1A interictali del cervello che si legano nell'emicrania senza aura: uno studio 18F-MPPF-PET.In questo studio abbiamo mirato a valutare il cervello distribuzione dei recettori 5-HT(1A) in pazienti con emicrania senza aura Dieci pazienti emicraniche e 24 volontarie sane sono state sottoposte a risonanza magnetica e tomografia a emissione di positroni utilizzando un radioligando antagonista dei recettori 5-HT(1A) [4-(2\ '-metossifenil)-1-[2\'-(N-2-pirydynyl)-p-fluorobenzamido]-etilpiperazina ((18)F-MPPF)]. Un modello di tessuto di riferimento semplificato è stato utilizzato per generare immagini parametriche di 5- Valori del potenziale di legame (BP) del recettore HT(1A). L'analisi Statistical Parametrical Mapping (SPM) ha mostrato un aumento della pressione arteriosa MPPF nelle aree corticali posteriori e nell'ippocampo bilateralmente nei pazienti rispetto ai controlli. L'analisi della regione di interesse (ROI) ha mostrato una tendenza non significativa nella favore di un aumento della PA nei pazienti nelle regioni corticali identificate dall'analisi SPM eccetto negli ippocampi, a sinistra ft aree parietali e nuclei del rafe. Durante il periodo interictale dei pazienti con emicrania senza aura, l'aumento di MPPF BP nelle aree corticali e limbiche posteriori potrebbe riflettere un aumento della densità dei recettori o una diminuzione della serotonina endogena, che potrebbe spiegare la loro alterata eccitabilità corticale.
Imaging MicroPET dei recettori 5-HT 1A nel cervello di ratto: uno studio test-retest [18F]MPPF.Studi precedenti hanno dimostrato che l'emissione di positroni l'imaging tomografia (PET) con il radioligando [(18)F]MPPF consente di misurare il potenziale di legame dei recettori della serotonina 5-idrossitriptamina(1A) (5-HT(1A)) in diverse regioni del cervello animale e umano, compreso quello di Autorecettori 5-HT(1A) nei nuclei del rafe. Nel presente studio, abbiamo cercato di determinare se tali dati potessero essere ottenuti nel ratto, con un microPET (R4, Concorde Microsystems). Scansioni da ratti anestetizzati con isoflurano (n = 18, inclusi sei test-retest) sono stati co-registrati con dati di risonanza magnetica e sono stati stimati il potenziale di legame, il rapporto sangue-plasma e l'efflusso del radiotracciante secondo un modello tissutale di riferimento semplificato. Valori del potenziale di legame per l'ippocampo (1.2), entorinale corteccia (1.1), setto (1.1), corteccia prefrontale mediale (1.0), amigdala (0.8), nuclei del rafe (0.6) , nucleo ipotalamico paraventricolare (0,5) e raphe obscurus (0,5) erano paragonabili a quelli precedentemente misurati con la PET nei gatti, nei primati non umani o nell'uomo. La variabilità test-retest era dell'ordine del 10% nelle regioni cerebrali più grandi (ippocampo, corteccia prefrontale mediale ed entorinale) e inferiore al 20% nei nuclei piccoli come il setto e l'ipotalamo paraventricolare, l'amigdaloide basolaterale e i nuclei del rafe. L'imaging cerebrale MicroPET dei recettori 5-HT(1A) con [(18)F]MPPF rappresenta quindi una strada promettente per studiare la funzione del recettore 5-HT(1A) nel ratto.
Massa lipidica cuticolare e tassi di essiccazione in Glossina pallidipes: variazione di interpopolazione.Si dice che le mosche tse-tse, Glossina pallidipes (Diptera: Glossinidae) abbiano una forte dispersione tendenze. Si stima che il flusso genico tra queste popolazioni sia l'equivalente teorico di non più di una o due mosche riproduttrici per generazione, sollevando così l'ipotesi di regimi locali di selezione naturale. Le mosche sono state campionate da quattro località diverse dal punto di vista ambientale in Kenya per determinare se le popolazioni sono omogenee nella tolleranza all'essiccamento e nei lipidi cuticolari. Le frazioni di idrocarburi cuticolari note per agire come feromoni sessuali non differiscono tra le popolazioni, eliminando così la selezione sessuale come meccanismo isolante. Le quantità di lipidi cuticolari variano tra le popolazioni e non sono correlate con temperature, umidità, e indici di vegetazione a densità normalizzata. Le femmine dimostrano una correlazione più forte rispetto ai maschi tra cut massa lipidica icolare e peso corporeo. Anche i tassi di essiccazione variano tra le popolazioni, ma non sono correlati alle quantità di lipidi cuticolari. L'analisi chimica degli idrocarburi cuticolari mediante gascromatografia-spettroscopia di massa mostra che una delle quattro popolazioni ha più idrocarburi 11,15- e 11,21-dimetil-31 sulle femmine. Questi risultati sono discussi nel contesto delle differenze di popolazione e delle stime del flusso genico.
La doppia delezione genica rivela la mancanza di cooperazione tra le proteine a giunzione stretta claudina 11 e claudina 14.I membri della famiglia di proteine claudina sono i componenti principali di giunzioni strette (TJ), la principale barriera selettiva della via paracellulare tra le cellule epiteliali. La selettività e la specificità dei filamenti TJ sono determinate dal tipo di claudine presenti. È quindi importante comprendere la cooperazione tra diverse claudine in vari tessuti. studiando la possibile cooperazione tra claudina 11 e claudina 14, abbiamo generato topi claudina 11/claudina 14 con doppio deficit, che mostrano una combinazione dei fenotipi trovati in ciascuno dei mutanti singolarmente carenti, tra cui sordità, deficit neurologici e sterilità maschile. Queste due claudine hanno modelli di espressione distinti e parzialmente sovrapposti nel rene. La claudina 11 si trova sia nei tubuli contorti prossimali che distali, mentre la claudina 14 si verifica sia nel sottile lembo discendente che in quello spesso ascendente dell'ansa di Henle e nei tubuli contorti prossimali. Sebbene l'escrezione urinaria giornaliera di Mg(++) e in misura minore di Ca(++), tenda ad essere maggiore nei doppi mutanti claudina 11/claudin 14, questi cambiamenti non raggiungono la significatività statistica rispetto agli animali selvatici. Pertanto, in condizioni normali, la co-delezione di claudina 11 e claudina 14 non influisce sulla funzione renale o sull'equilibrio ionico. I nostri dati dimostrano che, nonostante l'importanza di ciascuno di questi claudini, probabilmente non esiste una cooperazione funzionale tra loro. La generazione di modelli murini aggiuntivi in cui vengono abolite diverse claudine dovrebbe fornire ulteriori informazioni sulle complesse interazioni tra le proteine della claudina in vari sistemi fisiologici.
Analisi strutturale dei contatti che ancorano la moenomicina alle peptidoglicano glicosiltransferasi e implicazioni per la progettazione degli antibiotici.Peptidoglican glicosiltransferasi (PGT), enzimi che catalizzano la formazione del catene di glicani della parete cellulare batterica, hanno un enorme potenziale come bersagli antibiotici. Le moenomicine, una potente famiglia di antibiotici prodotti naturali, sono gli unici inibitori noti del sito attivo dei PGT e servono come modelli per la progettazione basata sulla struttura di nuovi antibatterici. Una struttura 2.8 A di un Staphylococcus aureus PGT con moenomicina A legata nel sito attivo è apparsa di recente, fornendo potenzialmente informazioni sul legame del substrato; tuttavia, i contatti proteina-ligando non sono stati analizzati in dettaglio e le implicazioni della struttura per il design dell'inibitore non sono state Riportiamo qui la struttura 2.3 A di un complesso di neryl-moenomicina A legato al dominio PGT di Aquifex aeolicus PBP1A. La struttura consente noi per esaminare in dettaglio i contatti proteina-ligando e implica che sei residui di siti attivi conservati contattano la porzione fosfoglicerata dell'anello F situata in posizione centrale della neril-moenomicina A. Un'analisi mutazionale mostra che tutti e sei i residui giocano un ruolo importante nell'attività enzimatica. Suggeriamo che piccoli scaffold che mantengono questi contatti chiave fungeranno da efficaci inibitori della PGT. Per testare questa ipotesi, abbiamo preparato, tramite l'espressione eterologa di un sottoinsieme di geni biosintetici della moenomicina, un nuovo intermedio della moenomicina che mantiene questi sei contatti ma non contiene il putativo farmacoforo minimo. Questo composto ha un'attività biologica comparabile al farmacoforo minimo precedentemente proposto. I risultati qui riportati possono facilitare la progettazione di antibiotici mirati contro le glicosiltransferasi peptidoglicano.
La ciclosporina, un modulatore della glicoproteina P, aumenta l'assorbimento di [18F]MPPF nel cervello di ratto e nei tessuti periferici: studi microPET ed ex vivo.Pretrattamento con ciclosporina, un modulatore della glicoproteina P (P-gp) aumenta l'assorbimento cerebrale di 4-(2\'-metossifenil)-1-[2\'-(N-2"-piridinil)-p-[(18)F ]fluorobenzamido]etilpiperazina ([(18)F]MPPF) per il legame ai recettori dell'idrossitriptamina(1A) (5-HT(1A)). Tali aumenti sono stati quantificati nel cervello di ratto con microPET in vivo e studi sui tessuti ex vivo. Ogni ratto Sprague-Dawley (n = 4) ha ricevuto una scansione di base [(18)F]MPPF microPET seguita da una seconda scansione 2-3 settimane dopo che includeva il pretrattamento con ciclosporina (50 mg/kg, i. p. ). Le immagini massime ricostruite a posteriori e le ROI volumetriche sono state utilizzate per generare misurazioni della concentrazione di radioattività dinamica per ippocampo, striato e cervelletto, con analisi del metodo del tessuto di riferimento semplificato (SRTM). I Western blot sono stati usati per semiquantificare la distribuzione regionale della P-gp nel cervello. Gli studi di MicroPET hanno mostrato che l'assorbimento da parte dell'ippocampo di [(18)F]MPPF era aumentato dopo la ciclosporina; studi ex vivo hanno mostrato aumenti simili nell'ippocampo e nella corteccia frontale a 30 min, e per cuore e rene a 2,5 e 5 min, senza aumenti concomitanti della concentrazione plasmatica di [(18)F]MPPF. Il contenuto di P-gp nel cervelletto era due volte più alto che nell'ippocampo o nella corteccia frontale. Questi studi confermano ed estendono i precedenti risultati ex vivo (J. Passchier, et al. , Eur J Pharmacol, 2000) che hanno mostrato [(18)F]MPPF come substrato per P-gp. I nostri risultati di microPET hanno mostrato che la modulazione della P-gp dell'associazione [(18)F]MPPF ai recettori 5-HT(1A) può essere visualizzata nell'ippocampo di ratto. La distribuzione eterogenea del cervello di P-gp sembrava invalidare l'uso del cervelletto come regione di riferimento non specifica per la modellazione SRTM. La quantificazione regionale della P-gp può essere necessaria per un'accurata valutazione PET della densità del recettore 5-HT(1A) se basata sull'assorbimento del tracciante sensibile alla modulazione della P-gp.
Il potenziale di una sonda intracerebrale radiosensibile per monitorare il legame 18F-MPPF nell'ippocampo di topo in vivo.Poiché l'imaging del topo è diventato più impegnativo nella ricerca preclinica , sono stati fatti sforzi per sviluppare sistemi PET dedicati. Sebbene questi sistemi siano attualmente utilizzati per lo studio di modelli murini fisiopatologici, presentano alcuni inconvenienti per gli studi sul cervello, tra cui una bassa risoluzione temporale che limita lo studio farmacocinetico dei radiotraccianti. studio era quello di dimostrare la capacità di una sonda intracerebrale radiosensibile di misurare il legame di un radiotracciante nel cervello di topo in vivo. È stato valutato il potenziale di una sonda di 0,25 mm di diametro per studi di farmacocinetica. In primo luogo, simulazioni Monte Carlo seguite da studi sperimentali sono stati utilizzato per valutare il volume di rilevamento e la sensibilità della sonda e la sua adeguatezza per la dimensione dei loci nel cervello del topo In secondo luogo, autoradiografia ex vivo di 5-idrossitripto recettori amminici 1A (5-HT(1A)) nel cervello di topo sono stati eseguiti con il radiotracciante PET 2\'-metossifenil-(N-2\'-piridinil)-p-(18)F-fluorobenzamidoetilpiperazina ((18) F-MPPF). Infine, la cinetica di legame di (18)F-MPPF è stata misurata in vivo sia nell'ippocampo che nel cervelletto dei topi. Sia le simulazioni che gli studi sperimentali hanno dimostrato la fattibilità dell'uso di piccole sonde per misurare le concentrazioni radioattive in regioni specifiche del cervello di topo. L'autoradiografia ex vivo ha mostrato una distribuzione eterogenea di (18)F-MPPF coerente con la distribuzione nota di 5-HT(1A) nel cervello di topo. Infine, le curve tempo-attività ottenute in vivo erano riproducibili e hanno convalidato la capacità della nuova sonda di misurare accuratamente la cinetica (18)F-MPPF nell'ippocampo del topo. I nostri risultati dimostrano la capacità della sonda intracerebrale radiosensibile testata di monitorare il legame dei radiotraccianti PET in topi anestetizzati in vivo, con un'elevata risoluzione temporale adatta per la modellazione compartimentale.
La microiniezione intracerebrale di 2-etilesanoato stannoso influenza il turnover della dopamina nella corteccia cerebrale e l'attività locomotoria nei ratti.2etilesanoato stannoso [Sn(Oct)( 2)] viene utilizzato come catalizzatore per la produzione di acido poli-L-lattico e copolimeri che vengono impiantati in chirurgia cranica, ma i rapporti sui suoi effetti sul sistema nervoso centrale sono pochi. Abbiamo esaminato gli effetti di Sn(Oct)(2 ) sulla vitalità cellulare in vitro e sulla neurotrasmissione e comportamento nel ratto. Il trattamento di astrociti umani normali con 10 mg/mL di Sn(Oct)(2) ha ridotto l'attività mitocondriale al 16% del controllo. Iniezione di Sn(Oct)(2 ) a 6,28 mg/kg di peso corporeo (2 mg/kg di peso corporeo Sn) nel ventricolo laterale destro del cervello di ratto tendeva ad aumentare la distanza di deambulazione dopo 30 giorni rispetto al gruppo di controllo. Il turnover della neurotrasmissione della dopamina era aumentato nella corteccia cerebrale Questi risultati suggeriscono che Sn(Oct)(2) è citotossico per gli astrociti in vitro. 2) nel cervello non ha avuto neurotossicità immediata o molto debole, ma l'esposizione a lungo termine a Sn (ottobre) (2) ha aumentato il turnover della neurotrasmissione della dopamina.
Composti eterociclici di Chrysanthemum coronarium L. e loro attività inibitoria su hACAT-1, hACAT-2 e ossidazione LDL.Le parti aeree di Chrysanthemum coronarium L. sono stati estratti con MeOH e l'estratto concentrato è stato partizionato usando EtOAc, n-BuOH e H (2) O. La cromatografia su colonna ripetuta delle frazioni EtOAc e n-BuOH ha dato un nuovo eterociclo, 5,5 \'-dibutossi-2,2\'-bifurano (1) insieme a cinque composti noti: metiltransferulato (2), prunasin (3), sambunigrin (4), pterolattame (5) e adenosina (6), che sono stati identificati da diversi metodi spettroscopici tra cui NMR e MS. Questo documento è il primo rapporto sull'isolamento di questi composti da C. coronarium L. I valori IC(50) del composto 1 per Acil-CoA umano: colesterolo aciltransferasi (hACAT) -1 e hACAT-2 erano rispettivamente 0,16 mM e 0,19 mM. Il composto 2 ha inibito l'ossidazione delle lipoproteine a bassa densità (LDL) con un valore IC(50) di 7,7 microM.
Le catechine del tè migliorano l'espressione dell'mRNA della proteina di disaccoppiamento 1 nel tessuto adiposo bruno di ratto.Lo scopo del presente studio era determinare se gli effetti antiobesità delle catechine del tè (TC) sono associate all'espressione della proteina disaccoppiante 1 (UCP1) nel tessuto adiposo bruno (BAT). I ratti maschi Sprague-Dawley sono stati alimentati con una dieta ricca di grassi (HF; 35% di grassi) per 5 settimane, quindi divisi in quattro gruppi e alimentati con una dieta HF, HF con 0,5% TC (HFTC), normale-grasso (NF; 5% di grassi) o NF con 0,5% TC (NFTC) per 8 settimane. Alla fine del periodo sperimentale, Sono stati isolati tessuti adiposi bianchi (WAT) perirenali ed epididimali e BAT interscapolare. Il gruppo NFTC aveva pesi WAT perirenali significativamente inferiori rispetto al gruppo NF (NF: 12,7 +/- 0,53 g; NFTC: 10,2 +/- 0,43 g; P< .01), ma i gruppi HF e HFTC non differivano in modo significativo. L'assunzione di TC non ha avuto effetti sui pesi WAT dell'epididimo. I gruppi NFTC e HFTC avevano pesi BAT significativamente inferiori rispetto a NF e HF gruppi, rispettivamente. Il gruppo NFTC aveva livelli di mRNA UCP1 significativamente più alti nel BAT rispetto al gruppo NF (NF: 0,35+/-0,02; NFTC: 0,60+/-0,11; P<.05), ma i gruppi HF e HFTC non differivano in modo significativo. Pertanto, l'assunzione di TC nel contesto della dieta NF ha ridotto il peso WAT perirenale e l'espressione dell'mRNA UCP1 up-regolata in BAT. Questi risultati suggeriscono che l'effetto soppressivo della TC sull'accumulo di grasso corporeo è associato all'espressione di UCP1 in BAT.
Gli idrocarburi aromatici nitropoliciclici sono induttori della ricombinazione mitotica omologa nel test del punto alare di Drosophila melanogaster.In questo studio, gli inquinanti ambientali diffusi 1- nitronaftalene (1NN), 1,5-dinitronaftalene (1,5DNN), 2-nitrofluorene (2NF) e 9-nitroantracene (9NA), sono stati studiati per la genotossicità nel test di mutazione somatica alare e ricombinazione (SMART) di Drosophila - utilizzando l'incrocio ad alta bioattivazione (HB). I nostri esperimenti in vivo hanno dimostrato che tutti i composti hanno valutato la tossicità genetica indotta, causando una maggiore incidenza di ricombinazione somatica omologa. L'induzione del clone mutante 2NF, 9NA e 1NN è quasi esclusivamente correlata alla ricombinazione somatica, sebbene 1,5DNN- l'induzione del clone dipende sia da eventi mutageni che ricombinageni.1NN ha la più alta attività ricombinagena (circa 100%), seguito da 2NF (circa 77%), 9NA (circa 75%) e 1,5DNN (33%). insieme a la genotossicità più forte, con 9NA che è circa 40 volte meno potente del primo e 2NF e 1,5DNN circa 333 volte meno potenti di 1NN. L'evidenza che indica che l'effetto principale osservato in questo studio è un aumento della frequenza della ricombinazione mitotica sottolinea un altro rischio che potrebbe essere associato agli NPAH: l'incremento della ricombinazione omologa (HR).
I metaboliti dei basidiomiceti attenuano le proprietà di virulenza della Candida albicans in vitro.Le proteasi aspartiche secrete (Saps) rappresentano un importante fattore di virulenza che facilita l'adesione fungina. Diversi inibitori della proteasi (PI), inclusi i PI dell'HIV, hanno dimostrato di ridurre l'adesione della Candida. Lo scopo di questo studio era accertare se i PI recentemente scoperti Aureochinone e Laccaridiones A e B, isolati da colture di basidiomiceti, o Bestatin, agiscano come Sap- inibitori e/o inibitori dell'adesione fungina. Gli effetti del farmaco sulla produzione di Sap candidosi sono stati determinati mediante Sap-ELISA. Le provette di controllo, in assenza di farmaco, sono servite come controlli positivi, mentre le provette con esclusione sia del farmaco che del mezzo di induzione della proteinasi sono state utilizzate come negative Aureochinone e Laccaridiones A e B, ma non Bestatin, hanno inibito significativamente l'adesione di Candida albicans alle cellule sia epiteliali che endoteliali in modo dose-dipendente e hanno anche ridotto Rilascio di linfa (gli effetti non erano dovuti a un'interazione diretta dei metaboliti del basidiomicete con i Saps secreti). Il laccaridione B è risultato essere il PI più efficace testato. È interessante notare che questi farmaci non sono né fungistatici né fungicidi alle concentrazioni applicate. Il laccaridione B può rappresentare un promettente nuovo tipo di farmaco antimicotico, mirando ai fattori di virulenza senza uccidere il lievito.
Stargazin modula l'antagonismo del recettore AMPA.I recettori AMPA mediano la maggior parte della trasmissione sinaptica veloce e sono alla base di diverse forme di plasticità sinaptica. Anche gli AMPAR hanno un ruolo importante in diverse patologie neuronali. Pertanto, lo studio della struttura e della funzione di questi recettori è importante per comprendere i meccanismi generali della trasmissione sinaptica e per lo sviluppo di nuove terapie. Un recente studio ha identificato i siti di legame apparenti per GYKI 53655 (GYKI) e CP -465.022 (CP) all'interfaccia tra il nucleo di legame del glutammato e i domini transmembrana Il ruolo emergente delle proteine regolatorie del recettore AMPA transmembrana (TARP) nella funzione AMPAR aumenta la possibilità che l'antagonismo di questi recettori sia influenzato anche da TARP come stargazin Qui confrontiamo l'antagonismo dell'antagonista competitivo CNQX e dei modulatori allosterici negativi GYKI e CP in assenza e presenza di stargazin. Abbiamo scoperto che stargazin riduce l'apparente affinità di GluR1 per CNQX, che è molto probabilmente spiegato da un parziale effetto agonistico di CNQX. Al contrario, stargazin aumenta l'affinità per GYKI e ha solo un piccolo effetto sul legame CP. Poiché l'inibizione dei recettori insensibili GYKI recentemente descritti viene ripristinata dalla co-espressione con stargazin, i nostri dati suggeriscono che i residui identificati non costituiscono l'intero sito di legame GYKI. Potremmo dimostrare che l'ectodominio di stargazin controlla il cambiamento nella sensibilità dell'agonista. Le mutazioni nelle regioni di legame identificate per GYKI e CP hanno drasticamente ridotto l'espressione superficiale. I nostri dati forniscono ulteriori prove che i TARP alterano la conformazione delle subunità che formano i pori e quindi influenzano l'interazione dell'antagonista.
L'impatto del recettore della laminina 67kDa sia sul legame alla superficie cellulare che sull'azione antiallergica delle catechine del tè.Qui abbiamo studiato la struttura- relazione di attività delle principali catechine del tè verde e dei loro corrispondenti epimeri sul legame alla superficie cellulare e sull'effetto inibitorio sul rilascio di istamina Catechine galloilate: (-)-epigallocatechina-3-O-gallato (EGCG), (-)-gallocatechina-3-O -gallato (GCG), (-)-epicatechina-3-O-gallato (ECG) e (-)-catechina-3-O-gallato (CG) hanno mostrato il legame della superficie cellulare alle cellule KU812 basofile umane per superficie analisi della risonanza plasmonica, ma le loro forme non galloilate no. Le attività di legame delle catechine di tipo pirogallolo (EGCG e GCG) erano superiori a quelle delle catechine di tipo catecolo (ECG e CG). Questi modelli sono stati osservati anche nei loro effetti inibitori su rilascio di istamina In precedenza, abbiamo riportato che le attività biologiche dell'EGCG sono mediate attraverso il legame alla laminina 67kDa della superficie cellulare recettore (67LR). La downregulation dell'espressione di 67LR ha causato una riduzione di entrambe le attività delle catechine galloilate. Questi risultati suggeriscono che sia la frazione galloilica che il modello di idrossilazione dell'anello B contribuiscono allo sforzo delle attività biologiche delle catechine del tè e delle loro dipendenze 67LR.
Effetti broncodilatatori della S-isopetasina, un sesquiterpene antimuscarinico di Petasites formosanus, sull'iperreattività delle vie aeree ostruttive.In presenza di neostigmina (0,1 microM), La S-isopetasina ha antagonizzato in modo competitivo le contrazioni cumulative indotte dall'acetilcolina nella tracheale di cavia, perché la pendenza [1,18+/-0,15 (n=6)] del grafico Schild\'s non differiva significativamente dall'unità. Il valore pA2 di S-isopetasina era calcolato per essere 4,62+/-0,05 (n=18). Il saggio di legame del recettore per i recettori muscarinici di cellule muscolari lisce tracheali umane in coltura (HTSMC) è stato eseguito utilizzando [3H]-N-metilscopolamina ([3H]-NMS). i saggi di legame sono stati condotti con [3H]-NMS in presenza (legame non specifico) e assenza (legame totale) di atropina (1 microM). Analisi del diagramma di Scatchard (y=0.247-1.306x, r2\ =0.95) ha rivelato che i siti di legame del recettore muscarinico negli HTSMC coltivati costituivano un singolo popolato acceso (n(H)=1.00). La costante di dissociazione dell'equilibrio (Kd) e la densità massima del recettore (B(max)) per il legame [3H]-NMS erano 766 pM e 0,189 pmol/mg di proteina, rispettivamente. I valori -logIC50 di S-isopetasina, metoctramina e ioduro di 1,1-Dimetil-4-difenilacetossipiperidinio (4-DAMP) per lo spostamento del legame specifico di 0,4 nM [3H]-NMS erano 5,05, 6,25 e 8,56, rispettivamente, che suggerisce che il legame [3H]-NMS sia prevalentemente sui recettori muscarinici M3 di HTSMC coltivate. Gli effetti inibitori della S-isopetasina sul valore della pausa potenziata (P(enh)) erano simili a quelli dell'ipratropio bromuro, un farmaco di riferimento. La durata d'azione della S-isopetasina (20 microM), anch'essa simile a quella dell'ipratropio bromuro (20 microM), è stata di 3 h. A differenza dell'ipratropio bromuro, che agisce in modo non selettivo sui recettori muscarinici, la S-isopetasina agisce preferenzialmente sui recettori muscarinici M3. In conclusione, la S-isopetasina può essere utile come broncodilatatore nel trattamento della broncopneumopatia cronica ostruttiva e delle esacerbazioni dell'asma.
Rilevazione immunochimica simultanea di stanozololo e del principale metabolita umano, 3\'-idrossi-stanozololo, in campioni di urina e siero.Due enzimatici sono stati stabiliti saggi di immunoassorbimento (ELISA) per l'analisi di stanozololo (St) e 3\'-idrossi-stanozololo (3\'OH-St), il principale metabolita trovato nell'uomo. L'aptene immunizzante N2\'-(5-valerico acido)-androst-2-eno[3,2-c]-pirazol-17a-metil-17b-olo (aptene 8) è stato progettato con l'ausilio di modelli molecolari e strumenti teorici per consentire la rilevazione immunochimica di entrambi i composti. un ELISA basato su una combinazione omologa di antisieri/antigene di rivestimento, St può essere quantificato selettivamente senza significative interferenze dei metaboliti di St o di altri steroidi potenzialmente presenti nei campioni biologici. D'altra parte, gli equivalenti di immunoreattività di St dovuti alla presenza aggiuntiva di 3\ 'OH-St può anche essere quantificato utilizzando un ELISA basato su un antisieri eterologo /antigene di rivestimento, in cui il metabolita può essere rilevato con una reattività crociata del 51%. Pertanto, As147/5BSA rileva 3\'OH-St e St nel tampone con valori di IC(50) rispettivamente di 1,46 e 0,68 microg L(-1). Al contrario, As147/8BSA è altamente specifico per St con un IC(50) di 0,16 microg L(-1) e un limite di detrazione di appena 0,022 microg L(-1). Le prestazioni di entrambi i test su campioni di urina e siero sono state valutate e dimostrano che l'uso inappropriato di stanozololo da parte di atleti o giovani può essere rilevato in queste matrici dopo semplici metodi di pulizia, con valori di IC(50) al di sotto dei livelli minimi di prestazione richiesti stabiliti dal Agenzia mondiale antidoping.
Un profilo PET [18F]MPPF distinto nel deterioramento cognitivo amnestico lieve rispetto al morbo di Alzheimer lieve.Ad oggi, due tomografia a emissione di positroni ( Gli studi PET) hanno esplorato la densità dei recettori 5-HT(1A) nell'ippocampo dei pazienti con malattia di Alzheimer (AD) e hanno mostrato cambiamenti precoci dei recettori 5-HT(1A) in questa regione del cervello, nota per avere una densa innervazione serotoninergica Questi studi hanno riportato solo misurazioni nell'ippocampo. Nel presente studio PET, abbiamo utilizzato un antagonista dei recettori 5-HT(1A), il [(18)F]MPPF (1) per esplorare la densità del recettore 5-HT(1A) in l'intero cervello di pazienti con AD in uno stadio lieve di demenza e pazienti con deficit cognitivo lieve amnestico (aMCI) rispetto a una popolazione di controllo; (2) per esplorare più precisamente la densità del recettore 5-HT(1A) nelle regioni limbiche del cervello di AD pazienti e pazienti aMCI rispetto ai controlli Sono state eseguite analisi basate su voxel per valutare le differenze nel potere di legame [(18)F]MPPF tiale (BP) tra pazienti con AD e pazienti con aMCI rispetto ai controlli. Le analisi del [(18)F]MPPF BP del cervello intero hanno mostrato una diminuzione globale dei cervelli AD in contrasto con un aumento globale dei cervelli aMCI. Nei cervelli AD, è stata rilevata una significativa diminuzione della PA nell'ippocampo e nel giro paraippocampale, mentre è stato osservato un aumento significativo della PA nel giro occipitale inferiore nei cervelli aMCI. Questi risultati sull'intero cervello sono in accordo con i dati dell'ippocampo riportati in uno studio precedente, mostrando un aumento del legame [(18)F]MPPF nel gruppo aMCI in contrasto con una diminuzione nel gruppo AD. Complessivamente, questi risultati suggeriscono l'implicazione di un meccanismo compensatorio illustrato da un'aumentata regolazione del metabolismo serotoninergico allo stadio aMCI prima della rottura di questo meccanismo allo stadio di AD. Questa differenza nell'etichettatura del recettore serotoninergico consente di distinguere i gruppi di pazienti aMCI da pazienti con AD lieve con profili PET [(18)F]MPPF specifici per ciascun gruppo di pazienti.
Minimizzazione dello stagno residuo nella polimerizzazione catalizzata da Sn(II)ottoato controllata di epsilon-caprolattone.Utilizzando meno catalizzatore nell'apertura dell'anello polimerizzazione di epsilon-caprolattone, è stato raggiunto un contenuto di stagno residuo di 5 ppm senza necessità di ulteriore purificazione. La quantità iniziale di stagno (II) 2-etilesanoato [Sn(Oct)(2)] è stata variata utilizzando rapporti catalizzatore:monomero di 1: 1000, 1: 10.000 e 1: 20.000. È stato studiato l'impatto sulla conversione finale, sul controllo della reazione, sul peso molecolare medio e sulla polidispersità. La quantità di Sn (ottobre) (2) potrebbe essere ridotta in modo significativo senza influenzare la reazione risultati. La quantità residua di stagno è stata ridotta da 176 ppm con un rapporto catalizzatore:monomero di 1:1000 nel polimero, a 5 ppm con rapporto 1:10.000. Si è quindi concluso che un rapporto catalizzatore:monomero di 1:10.000 o inferiore è necessario per ottenere un polimero con contenuto di stagno adatto per applicazioni biomediche. I materiali erano anche t testato in uno studio sulla proliferazione con cellule staminali mesenchimali di topo. Scaffold porosi sono stati fabbricati dai polimeri, utilizzando una tecnica di lisciviazione del sale, e la crescita cellulare sugli scaffold porosi e su film omogenei è stata determinata mediante misurazioni dell'assorbimento della luce. In questo studio, i risultati della proliferazione cellulare hanno mostrato che le cellule possono crescere su tutti i polimeri con un'efficienza uguale o migliore di quella sulla normale plastica di coltura tissutale.
Disposizione stereoselettiva di S- e R-licarbazepina nei topi.La disposizione stereoselettiva di S-licarbazepina (S-Lic) e R-licarbazepina ( R-Lic) è stato studiato nel plasma, cervello, fegato e tessuti renali dopo la loro somministrazione individuale (350 mg/kg) a topi mediante sonda gastrica. Le concentrazioni plasmatiche, cerebrali, epatiche e renali degli enantiomeri della libbazepina e dei loro metaboliti sono state determinate su il tempo mediante un metodo HPLC-UV chirale convalidato. I dati di concentrazione media, ottenuti in ogni momento, sono stati analizzati utilizzando un modello non compartimentale. S-Lic e R-Lic sono stati rapidamente assorbiti dal tratto gastrointestinale del topo e immediatamente distribuiti a tessuti forniti con elevate velocità di flusso sanguigno. Entrambi gli enantiomeri della libbazepina sono stati metabolizzati in piccola misura, ciascun composto progenitore è il principale responsabile dell'esposizione sistemica e tissutale al farmaco. La stereoselettività nel metabolismo e nella distribuzione di S- e R-Lic è stata facilmente identificata. Un ulteriore metabolita è stato rilevato in seguito alla somministrazione di R-Lic e S-Lic ha mostrato una particolare predisposizione all'accumulo epatico e renale. Sono stati identificati anche processi stereoselettivi alla barriera emato-encefalica, con l'esposizione del cervello a S-Lic quasi il doppio di quella di R-Lic. Un'altra scoperta, riportata qui per la prima volta, è stata la capacità del topo di eseguire l'inversione chirale di S- e R-Lic, anche se in piccola misura.
Cianidina 3-rutinoside e cianidina 3-xilosilrutinoside come antiossidanti fenolici primari nel lampone nero.I costituenti antociani nei lamponi neri (Rubus occidentalis L. ) sono stati indagato da HPLC-DAD, e il loro coinvolgimento come potenti e significativi antiossidanti nei lamponi neri è stato dimostrato da tre comuni saggi antiossidanti (FRAP, DPPH, ABTS) in questo studio. Cinque antociani erano presenti nei lamponi neri: cianidina 3-sambubioside, cianidina 3 -glucoside, cianidina 3-xilosilrutinoside, cianidina 3-rutinoside e pelargonidina 3-rutinoside. Le loro identità e strutture, con particolare enfasi sulla cianidina 3-xilosilrutinoside, sono state confermate dalla spettroscopia NMR. Due di questi antociani, cianidina 3-rutinoside e cianidina 3-xilosilrutinoside, predominante, comprendente rispettivamente il 24-40 e il 49-58% degli antociani totali nei lamponi neri Sulla base sia della potenza che della concentrazione, cianidina 3-rutinoside e cianidina 3-x ylosylrutinoside sono risultati essere i contributori significativi ai sistemi antiossidanti dei lamponi neri. Questi risultati indicano che questi due composti antociani possono funzionare come antiossidanti fenolici primari nei lamponi neri. Questi due composti mostrano potenziali attività biologiche che possono essere sfruttate in combinazione con altri composti bioattivi presenti in natura nei prodotti a base di lampone nero utilizzati negli studi clinici per il trattamento di vari tipi di cancro.
Migrazione di BADGE (bisfenolo A diglicidil-etere) e BFDGE (bisfenolo F diglicidil-etere) nei frutti di mare in scatola.Migrazione di materiali potenzialmente tossici utilizzati per il rivestimento delle lattine commerciali rimane un problema importante, soprattutto per quanto riguarda alcuni tipi di alimenti trasformati. Il pesce è un tipo in cui sono necessarie maggiori informazioni rispetto ad altri ingredienti utilizzati per aggiungere valore ai prodotti della pesca. La maggior parte delle lattine sono rivestite internamente con starter di resine come il bisfenolo A diglicidil-etere (BADGE) e il bisfenolo F diglicidil-etere (BFDGE), entrambi considerati composti tossici. Diversi prodotti ittici, sardine, tonno, sgombro, cozze, merluzzo e uova di sgombro, sono stati fabbricati in diverse condizioni mutevoli che coprono salsa, tempo e temperatura di conservazione e trattati termicamente per la sterilizzazione in lattina Le cinetiche di migrazione di BADGE e BFDGE dalla vernice ai prodotti in scatola sono state valutate mediante HPLC in 70 campioni dopo 6, 12 o 18 mesi di stoccaggio. I risultati hanno mostrato che non c'è migrazione di BADGE nel tonno, nelle sardine, nelle cozze o nel merluzzo. Tuttavia, la migrazione di BFDGE avviene in tutte le specie, in modo dipendente dal tempo di conservazione e dal contenuto di grasso, sebbene la migrazione di questi composti non sia influenzata dalle condizioni di sterilizzazione. Tutti i campioni analizzati hanno presentato valori inferiori a 9 mg BADGE/kg di prodotto netto senza superare i limiti europei. Tuttavia, per quanto riguarda la migrazione BFDGE, la legislazione europea non consente l'uso e/o la presenza di BFDGE. La migrazione principale avviene nello sgombro che raggiunge i valori più alti, 0,74 mg BFDGE/kg e 0,34 mg BADGE/kg prodotto netto, in salsa di peperoni rossi.
Farmacocinetica della licarbazepina in volontari sani: dosi orali singole e multiple ed effetto del cibo.Due studi hanno caratterizzato la farmacocinetica della libbazepina a dose singola e multipla compresse a rilascio immediato ed effetti del cibo sulla farmacocinetica della dose singola In 1 studio, 12 volontari hanno ricevuto 500 mg di libbazepina il giorno 1, 500 mg bid nei giorni da 3 a 6 e 500 mg il giorno 7. Nel secondo studio, 12 soggetti ricevuto una dose di libbazepina da 500 mg a digiuno e a stomaco pieno. Dopo dosi multiple, la media geometrica (%CV) Cmax ss, Cmin ss e AUCtau erano 77,6 micromol/L (18), 45,3 micromol/L (25) e 747 h. mol/L (19), rispettivamente, con un tmax di 2 ore. Le emivite medie erano rispettivamente di 9,3 e 11,3 ore per somministrazione singola e multipla. Il cibo non ha avuto effetti clinicamente significativi sulla farmacocinetica della dose singola. Emivita (circa 10 ore) e la bassa variabilità interindividuale nei principali parametri farmacocinetici erano simili in caso di digiuno condizioni educate e nutrite. Il tmax mediano è aumentato da 1,5 a 2,5 ore con il cibo. La libbazepina è ben tollerata e ha una farmacocinetica prevedibile.
Diminuzione del potenziale di legame [18F]MPPF nel nucleo del rafe dorsale dopo una singola dose orale di fluoxetina: uno studio con tomografia a emissione di positroni in volontari sani.Gli autorecettori cerebrali serotonina-1A (5-HT(1A)) si internalizzano quando attivati dall'agonista o dal loro ligando endogeno, la serotonina. Questo studio con tomografia a emissione di positroni (PET) ha testato l'ipotesi che l'internalizzazione dell'autorecettore 5-HT(1A) potrebbe essere indicizzato in vivo da una diminuzione del legame specifico del radioligando 5-HT(1A), 4-[18F]fluoro-N-[2-[1-(2-metossifenil)-1 piperazinil]etil-N-2- piridinil-benzamide ([(18)F]MPPF), nel nucleo del rafe dorsale (DRN) di uomini adulti sani a cui è stata somministrata una singola dose orale dell'inibitore selettivo della ricaptazione della serotonina, fluoxetina. È stato misurato il potenziale di legame del [(18)F]MPPF nel DRN e in altre regioni del cervello dotate di recettori 5-HT(1A) in otto volontari sani, 5 ore dopo la somministrazione randomizzata, in doppio cieco di fluoxetina (20 mg) o placebo. In ogni soggetto, il potenziale di legame del [(18)F]MPPF era diminuito solo nel DRN (44% +/- 22 SD), in risposta alla fluoxetina. L'imaging dello stato funzionale degli autorecettori 5-HT(1A) (cioè l'internalizzazione) nel cervello umano, utilizzando [(18)F]MPPF/PET, può rappresentare una strada promettente per studiare la neurobiologia dei disturbi correlati alla serotonina e in particolare di grave depressione.
Requisito del dominio della moenomicina che si lega alle transglicosilasi bifunzionali e sviluppo della scoperta di antibiotici ad alto rendimento.La moenomicina inibisce la crescita batterica bloccando l'attività della transglicosilasi di classe Una proteina legante la penicillina (PBP), che sono enzimi chiave nella sintesi della parete cellulare batterica Abbiamo confrontato le affinità di legame della moenomicina A con varie PBP troncate utilizzando l'analisi della risonanza plasmonica di superficie e abbiamo scoperto che il dominio transmembrana è importante per il legame della moenomicina. Sono state prodotte PBP di classe A di 16 specie batteriche e le loro attività di legame hanno mostrato una correlazione con l'attività antimicrobica della moenomicina contro Enterococcus faecalis e Staphylococcus aureus. e utilizzato con successo per l'identificazione degli inibitori della transglicosilasi.
Determinazione dell'attività antiossidante e caratterizzazione dei composti fenolici antiossidanti nell'estratto di aceto di prugna di fiori di ciliegio (Prunus lannesiana).Sakura-cha (fiori di ciliegio salati) tè) è un tè giapponese che viene tradizionalmente servito in occasione di celebrazioni come le cerimonie nuziali. La produzione di Sakura-cha prevede l'immersione dei fiori di ciliegio nell'aceto di prugna giapponese e, attraverso questo processo, il sottoprodotto (estratto di aceto di prugna di fiori di ciliegio) In questo studio, è stata esaminata l'attività antiossidante dell'estratto di aceto di prugna di fiori di ciliegio. L'estratto di aceto di prugna di fiori di ciliegio ha avuto una maggiore attività di scavenging degli anioni superossido rispetto al vino rosso, che è un noto potente antiossidante. l'analisi cromatografica-spettrometria di massa ha mostrato che la cianidina-3-glucoside, la cianidina-3-rutinoside e l'acido caffeico erano i componenti principali nell'estratto fenolico preparato dall'estratto di aceto di prugna di ciliegia bl ossom, e possedevano attività di scavenging dell'anione superossido. L'acido caffeico è principalmente responsabile dell'attività di lavaggio dell'estratto fenolico; i contributi di cianidina-3-glucoside e cianidina-3-rutinoside erano minori.
[Effetti dei flavonoidi con diverse strutture sulla proliferazione della linea cellulare leucemica HL-60].I flavonoidi, con alcune attività biologiche benefiche, esistono ampiamente in alimenti e prodotti a base di erbe. Questo studio era per valutare gli effetti di 23 flavonoidi sulla proliferazione della linea cellulare leucemia HL-60 e chiarire la relazione struttura-attività (SAR). Le cellule HL-60 sono state trattate con 23 flavonoidi con elevata purezza e struttura definita. La proliferazione cellulare è stata rilevata mediante il test MTT. Sono state calcolate le concentrazioni di inibizione del 50% (IC50) dei 23 flavonoidi. Sono stati valutati gli effetti di particolari strutture su IC50. La maggior parte dei 23 flavonoidi ha inibito distintamente la proliferazione delle cellule HL-60 , e gli effetti sono stati migliorati insieme all'aumento delle concentrazioni. Tuttavia, l'intensità dei loro effetti era diversa, che è stata organizzata da forte a debole come segue:3,6-diidrossiflavone > luteolina > geraldol > 2\'-h idrossiflavanone > apigenina > 3,7-diidrossiflavone > miricetina > fisetina > baicaleina > quercetina > flavanone > crisina > galangina > 4\'-idrossiflavone > idrossiflavanone \u003 >7-idrossiflavone > daidzeina > esperetina > naringenina. Il doppio legame 2,3 nell'anello C, gli ossidrili appropriati, l'anello B attaccato in posizione 2, gli ossidrili in posizione 3, gli ossidrili orto-sostituendo nell'anello B erano correlati agli effetti inibitori potenziati dei flavonoidi sulla proliferazione delle cellule HL-60, mentre la mancanza del doppio legame 2,3, la carenza o la ridondanza dei gruppi idrossilici, del gruppo ossidrile in posizione 5, 7 o degli idrossili meta-sostituiti nell'anello B, la struttura degli isoflavoni era correlata a ridotti effetti inibitori dei flavonoidi. Il doppio legame 2,3 nell'anello C, gli idrossili appropriati, l'anello B attaccato in posizione 2, gli ossidrili in posizione 3, gli ossidrili orto-sostituendo nell'anello B possono essere requisiti strutturali chiave dei flavonoidi per una potente citotossicità per le cellule HL-60".
Isolamento guidato dalla bioattività dei composti attivi da Rosa nutkana e analisi quantitativa dell'acido ascorbico mediante HPLC.Rosa nutkana Presl. (Rosaceae) è distribuito abbondantemente in tutte le aree centrali e meridionali della British Columbia, Canada. Gli aborigeni del Pacifico nord-occidentale hanno tradizionalmente usato R. nutkana come cibo, medicina e fonte di materiale culturale. L'estratto metanolico dei frutti di R. nutkana è stato precedentemente trovato per hanno attività inibitoria contro lo Staphylococcus aureus meticillino-resistente (MRSA). Nel nostro studio, il frazionamento bioattività-guidato dell'estratto di metanolo da R. nutkana ha portato all'isolamento dei seguenti 10 composti: (i) acido tormentico, (ii) acido euscafico , (iii) acido ursolico, (iv) acido maslinico, (v) quercetina, (vi) catechina gallato, (vii) quercetina-3-O-glucoside, (viii) 1,2,3,4,6-penta- O-galloil-beta-D-glucoside, (ix) acido L-ascorbico (vitamina C) e (x) 1,6-digalloil-beta-D-glucoside. ure sono state delucidate dai dati dell'ultravioletto, dell'infrarosso, della spettrometria di massa e della risonanza magnetica nucleare, nonché dal confronto con quelli della letteratura. I composti quercetina, catechina gallato, quercetina-3-O-glucoside, 1,2,3,4,6-penta-O-galloil-beta-D-glucoside e 1,6-digalloil-beta-D-glucoside hanno mostrato debole attività antibatterica contro MRSA. La nostra ricerca dimostra il valore della conoscenza tradizionale detenuta dagli aborigeni nel nord-ovest del Pacifico rispetto agli usi di R. nutkana. Alcuni usi descritti nella letteratura etnobotanica corrispondono ad attività osservate in condizioni di laboratorio. Ulteriori lavori sulla British Columbia Rosa spp. possono contribuire a identificare altri potenziali usi terapeutici.
Il magnesio tanshinoate B protegge le cellule endoteliali dall'apoptosi indotta dalle lipoproteine ossidate.L'attivazione della via di segnalazione c-Jun N-terminal chinasi (JNK) gioca un ruolo importante nell'induzione dell'apoptosi cellulare. Abbiamo precedentemente riportato che il magnesio tanshinoate B (MTB), un composto purificato da un'erba cinese danshen (Salvia miltiorrhiza), potrebbe inibire l'apoptosi dei miociti indotta da ischemia/riperfusione nel cuore. L'obiettivo di il presente studio è stato quello di indagare se MTB può prevenire l'apoptosi indotta dalle lipoproteine ossidate nelle cellule endoteliali. Le cellule endoteliali della vena ombelicale umana (HUVEC) sono state incubate con lipoproteine a bassissima densità ossidate con rame (Cu-OxVLDL) o lipoproteine a bassa densità ossidate con rame ( Cu-OxLDL). Il trattamento delle cellule con Cu-OxVLDL o Cu-OxLDL ha determinato un aumento di 3 volte dell'attività JNK. La quantità di citocromo c rilasciato e l'attività della caspasi-3 nelle cellule trattate con Cu-OxVLDL o Cu -OxLDL wer e significativamente elevato, indicando il verificarsi di apoptosi. La presenza di MTB è stata in grado di abolire l'attivazione di JNK, il rilascio del citocromo c e l'attivazione della caspasi-3 indotta da Cu-OxVLDL o Cu-OxLDL, determinando una marcata riduzione dell'apoptosi nelle cellule endoteliali. I dati di questo studio indicano che le lipoproteine ossidate inducono l'apoptosi nelle cellule endoteliali. Ipotizziamo che l'inibizione della via di segnalazione JNK da parte della MTB sia un meccanismo chiave che protegge queste cellule dall'apoptosi indotta dalle lipoproteine ossidate.
Attività antiproliferativa di vari preparati di Uncaria tomentosa su cellule di leucemia promielocitica HL-60.La vite legnosa dell'Amazzonia Uncaria tomentosa (unghia di gatto) è stata recentemente sempre più popolare in tutto il mondo come rimedio immunomodulatore, antinfiammatorio e antitumorale. Questo studio indaga la potenza antiproliferativa di diversi preparati di artigli di gatto con diversi contenuti di alcaloidi quantitativi e qualitativi su cellule umane promielocitiche acute HL-60 da applicando l'esclusione del tripan blue e il saggio di riduzione del bromuro di 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT) Mediante la standardizzazione e il confronto statistico dei risultati ottenuti, pteropodina e isomitrafillina sono indicate come le più adatte per standardizzazione dei preparati medici per gli artigli dei gatti.
Sintesi di poli(L-lattide) e poliglicolide mediante polimerizzazione ad apertura d'anello.Questo protocollo descrive la sintesi di poli(L-lattide) mediante polimerizzazione per apertura dell'anello di L-lattide utilizzando catalizzatore di stagno(II) 2-etilesanoato e sintesi di poliglicolide mediante polimerizzazione per apertura dell'anello di glicolide La polimerizzazione per apertura dell'anello di diesteri ciclici sintetizzati da acidi alfa-idrossicarbossilici fornisce peso poliestere ad alta resa. Il catalizzatore di stagno (II) 2-etilesanoato è il catalizzatore più comune per la polimerizzazione con apertura dell'anello dei diesteri a causa della sua elevata reattività e bassa tossicità. La purezza dei monomeri e la quantità di acqua e alcol nel sistema di reazione sono fattori significativi per l'aumento del peso molecolare e la conversione dei poliesteri Il peso molecolare dei poliesteri dipende anche dalla temperatura di reazione e dal tempo di reazione Questo protocollo può essere completato in 3 giorni per la sintesi di poli(L-lattide) e 2 giorni per t sintesi del poliglicolide.
Effetto dell'aggiunta di citrato di ammonio alla matrice di acido alfa-ciano-4-idrossicinnamico (CHCA) per la rilevazione del peptide fosforilato nelle reazioni di fosforilazione utilizzando lisati cellulari e tissutali." La ionizzazione dei peptidi fosforilati viene solitamente soppressa dai peptidi non fosforilati quando l'acido alfa-ciano-4-idrossicinnamico (CHCA) viene utilizzato come matrice per il desorbimento laser/ionizzazione a tempo di volo assistito da matrice (MALDI-TOF) analisi di spettrometria di massa. Nel presente studio, abbiamo esaminato l'effetto dell'aggiunta di citrato di diammonio alla matrice CHCA sulla rilevazione di peptidi fosforilati. I substrati per la proteina chinasi C (PKC) e c-Src sono stati sintetizzati e fosforilati da reazione con campioni di lisato cellulare e tissutale. L'aggiunta di citrato di ammonio alla matrice CHCA ha aumentato la sensibilità per distinguere i peptidi fosforilati dal rumore di fondo. Tuttavia, l'effetto dipendeva dalla concentrazione del substrato.
Degradazione della cianidina 3-rutinoside in presenza di (-)-epicatechina e litchi pericarpo polifenolo ossidasi.Il meccanismo di degradazione della cianidina 3-rutinoside in presenza di (-)-epicatechina e litchi pericarpo polifenolo ossidasi (PPO) è stato studiato utilizzando diversi sistemi modello. Il (-)-epicatechina o-chinone generato enzimaticamente potrebbe indurre la degradazione della cianidina 3-rutinoside. I risultati ottenuti in questo studio hanno permesso per proporre un percorso per la degradazione della cianidina 3-rutinoside in presenza di (-)-epicatechina e litchi pericarpo PPO. In primo luogo, l'ossidazione enzimatica della (-)-epicatechina ha prodotto il corrispondente o-chinone, quindi cianidina 3-rutinoside e ( -)-epicatechina in competizione per (-)-epicatechina o-chinone, con conseguente degradazione della cianidina 3-rutinoside e rigenerazione di (-)-epicatechina. Inoltre, i risultati degli studi cinetici hanno indicato che questa competizione è stata influenzata da entrambi (-)- concentrazione di epicatechina e cianidina 3-rutinos concentrazione di idee nel sistema modello.
Il ciclo redox mitocondriale del mitochinone porta alla produzione di superossido e all'apoptosi cellulare.Il farmaco mitochinone mirato ai mitocondri (MitoQ) è stato usato come antiossidante che può bloccare selettivamente il danno ossidativo mitocondriale; tuttavia, è stato recentemente suggerito di aumentare la generazione di specie reattive dell'ossigeno (ROS) nei mitocondri alimentati da malato e glutammato. Per affrontare questa controversia, abbiamo studiato gli effetti di MitoQ sulla produzione di ROS endoteliali e mitocondriali. Abbiamo scoperto che in un sistema privo di cellule con l'enzima citocromo P-450 reduttasi contenente flavina, MitoQ è un agente di ciclo redox molto efficiente e produce più superossido rispetto a concentrazioni uguali di menadione (10-1.000 nM). MitoQ ha determinato un drammatico aumento della produzione di superossido. Nei mitocondri isolati, MitoQ ha aumentato la produzione di ROS mitocondriali complessi guidati da I, mentre l'integrazione con ubiquinone-10 non ha avuto effetto sulla produzione di ROS. Risultati simili sono stati osservati nei mitocondri isolati da cellule endoteliali incubate per 1 h con MitoQ. L'analisi degli inibitori ha suggerito che il ciclo redox di MitoQ si è verificato in due siti sul complesso I, prossimale e distale al sito di legame del rotenone. Ciò è stato confermato dimostrando il ciclo redox di MitoQ sul complesso mitocondriale purificato I e sulle particelle submitocondriali alimentate da NADH. Il mitochinone ha aumentato l'apoptosi delle cellule endoteliali in modo dipendente dalla dose e dal tempo. Questi risultati dimostrano che MitoQ può essere proossidante e proapoptotico perché il suo gruppo chinonico può partecipare al ciclo redox e alla produzione di superossido. Alla luce di questi risultati, gli studi che utilizzano il mitochinone come antiossidante dovrebbero essere interpretati con cautela.
Noladin ether, un presunto endocannabinoide, inibisce l'attivazione del recettore mu-oppioide tramite i recettori cannabinoidi CB2.Abbiamo esaminato il verificarsi di possibili cambiamenti nell'espressione dell'mRNA e l'attività funzionale dei recettori oppioidi dopo il trattamento acuto in vivo e in vitro con il presunto cannabinoide endogeno noladin ether. Mentre il noladin ether (NE) dimostra attività agonista sui recettori cannabinoidi CB1, dati recenti indicano che NE agisce come un agonista completo sui recettori cannabinoidi CB2 Considerando le interazioni funzionali tra oppioidi e cannabinoidi, è interessante esaminare se NE influenzi il sistema oppioide. A tal fine, abbiamo studiato l'influenza di NE sull'espressione del mRNA del recettore mu-oppioide (MOR) e sulla proteina G mediata da MOR Abbiamo utilizzato la PCR in tempo reale e i saggi di legame [35S]GTPgammaS per esaminare i cambiamenti dei livelli di mRNA MOR e la capacità del peptide agonista mu-oppioide ([D-Ala2,(NMe)Phe4,Gly5-ol]encefalina ( DAMGO) nell'attivazione di proteine G regolatorie tramite MOR in frazioni di membrana del proencefalo di topi transgenici wild-type (w. t. , CB1+/+) e deficienti del recettore CB1 (knockout, CB1-/-). Abbiamo scoperto che l'espressione degli mRNA MOR è diminuita significativamente sia nel proencefalo CB1+/+ che CB1-/- dopo una singola iniezione di NE a 1 mg/kg rispetto al controllo. Di conseguenza, la segnalazione mediata da MOR è attenuata dopo il trattamento acuto in vivo con NE sia nei topi CB1+/+ che CB1-/-. L'inibizione dell'attivazione mediata da MOR è stata osservata anche dopo la somministrazione di NE in vitro. Gli studi sulla competizione di legame con i radioleganti hanno mostrato che l'effetto notato di NE sulla segnalazione MOR non è mediato dai MOR. Sia le attenuazioni in vivo che quelle in vitro di NE possono essere antagonizzate dall'antagonista selettivo CB2 SR144528. Presi insieme, i nostri dati suggeriscono che il NE ha causato una pronunciata diminuzione dell'attività del MOR è mediata dai recettori dei cannabinoidi CB2.
[Studio sui costituenti chimici della Ligularia intermedia dello Shanxi].Per studiare i costituenti chimici della Ligularia intermedia dello Shanxi. I composti sono stati isolati per colonna cromatografia su gel di silice e TLC preparativa. Le strutture sono state identificate mediante IR, MS, dati spettrali 1D/2DNMR e diffrazione di raggi X su cristallo singolo e altri metodi. Nove composti sono stati isolati e identificati come 8beta-idrossieremophil-7(11)-ene -12, 8alfa(4beta, 6alfa)-diolide (1), 8beta-metossieremophil-7(11)-ene-12, 8alfa(4beta, 6alfa)-diolide (2), petasina (3), isopetasina (4), liguhodgsonal (5), ligudentatol (6), ligujapone (7), lupeol (8) e lupeol palmitate (9). I composti 2, 3, 4, 6, 7 e 9 sono stati isolati dalla pianta per la prima volta.
[Studi sui costituenti chimici dei fenoli in Houttuynia cordata fresca].Per studiare i costituenti acquosi di Houttuynia cordata. Varie colonne tra cui Diaion HP-20 , Sephadex LH-20, ODS e gel di silice sono stati impiegati per l'isolamento e la purificazione di composti da H. cordata. Le strutture dei composti sono state identificate dalle proprietà fisiochimiche e dall'analisi spettrale. Cinque composti sono stati isolati e le loro strutture sono state identificate come clorogene metil estere (1), (E)-4-idrossi-4-[3\'-(beta-D-glucopiranosilossi) butiliden]-3, 5, 5-trimetil-2-cicloesen-1-one (2), Acido 2-(3, 4-diidrossifenil) etil-beta-D-glucopiranoside (3), p-idrossifenetil-beta-D-glucoside (4), 4-(beta-D-glucopiranosilossi)-3-idrossi-Benzoico ( 5). Tutti i composti sono stati isolati da questa pianta per la prima volta.
MitoQ--un antiossidante mirato ai mitocondri.MitoQ è un antiossidante attivo per via orale che ha la capacità di colpire la disfunzione mitocondriale. L'agente è attualmente sotto sviluppo da parte di Antipodean Pharmaceuticals Inc in studi clinici di fase II per la malattia di Parkinson e il danno epatico associato all'infezione da HCV. MitoQ ha dimostrato risultati preclinici incoraggianti in numerosi studi su mitocondri isolati, cellule e tessuti sottoposti a stress ossidativo e morte apoptotica. MitoQ mira a non imitano solo il ruolo del coenzima antiossidante mitocondriale endogeno Q10 (CoQ10), ma anche per aumentare sostanzialmente la capacità antiossidante di CoQ a livelli soprafisiologici in modo dipendente dal potenziale di membrana mitocondriale. MitoQ rappresenta la prima incursione nella clinica nel tentativo di fornire un antiossidante in una regione intracellulare responsabile della formazione di livelli aumentati di ossigeno reattivo potenzialmente dannoso specie. I risultati degli studi clinici con MitoQ avranno importanti ripercussioni sulla rilevanza di un approccio mirato ai mitocondri.
Riproducibilità test-retest del 18F-MPPF PET in esseri umani sani: uno studio di affidabilità.Lo scopo di questo studio era di valutare l'affidabilità di 2 \'-metossifenil-(N-2\'-piridinil)-p-18F-fluoro-benzamidoetilpiperazina (18F-MPPF) quantificazione del parametro di legame PET\'s tramite uno studio test-retest su un periodo a lungo termine. Dieci volontari sani sono stati sottoposti 2 scansioni PET dinamiche 18F-MPPF in un intervallo di 6 mesi. Come controllo metodologico, sono stati utilizzati anche 10 set di dati simulati, comprese le variabilità funzionali e anatomiche interindividuali, per valutare le variazioni di misurazione in assenza di variabilità intraindividuale. Gli indici di legame del tracciante sono stati calcolato utilizzando 2 diversi modelli: (a) il modello tissutale di riferimento semplificato (SRTM) e (b) il modello grafico di Logan. L'SRTM consente di calcolare l'indice del potenziale di legame (BP) e le costanti di trasporto plasma-cervello (R1, k2) Il modello di Logan valuta il volume di distribuzione (DV). Per entrambi i metodi, c Erebellum è stato preso come regione di riferimento. Da entrambi i modelli, sono stati calcolati indici di legame con curve tempo-attività estratte dalle regioni di interesse, da un lato, e per ciascun voxel per eseguire immagini parametriche, dall'altro. Gli indici di affidabilità, ovvero bias, variabilità e correlazione intraclasse (ICC), indicano una buona riproducibilità: la variazione percentuale della PA nella media tra test e ripetizione del test è vicina all'1% nelle regioni ricche e al 2% nelle regioni povere. L'errore tipico è di circa il 7%. L'ICC medio è superiore a 0,70. La variazione percentuale DV nella media è di +/-2,5%, con un errore tipico vicino al 6% e un ICC superiore a 0,60. I nostri risultati mostrano una buona affidabilità, con un livello ragionevole di variabilità biologica intraindividuale che consente studi crossover con 18F-MPPF in cui sono attese piccole variazioni percentuali tra le misurazioni del test e del nuovo test, negli studi di gruppo e per la valutazione del singolo soggetto.
Determinazione cromatografica liquida simultanea ed enantioselettiva di eslicarbazepina acetato, S-licarbazepina, R-licarbazepina e oxcarbazepina in campioni di tessuto di topo mediante rilevamento ultravioletto.Qui è ha riportato, per la prima volta, un metodo cromatografico liquido a fase inversa chirale semplice e affidabile accoppiato alla rilevazione ultravioletta (UV) per la determinazione simultanea di eslicarbazepina acetato (ESL) e dei suoi metaboliti, S-licarbazepina (S-LC), R-licarbazepina (R-LC) e oxcarbazepina (OXC), nel plasma di topo e negli omogenati di tessuto cerebrale, epatico e renale Tutti gli analiti e lo standard interno sono stati estratti dagli omogenati di plasma e tessuti mediante una procedura di estrazione in fase solida utilizzando l'equilibrio idrofilo-lipofilo di Waters Oasis La separazione cromatografica è stata eseguita mediante eluizione isocratica con acqua/metanolo (88:12, v/v), pompata ad una portata di 0,7 mL min(-1), su un LichroCART 250-4 ChiraDex (beta-ciclodestrina, 5 microm) colonna a 30 gradi C. Il rivelatore UV è stato impostato a 225 nm. Le curve di calibrazione erano lineari (r2 > o = 0,996) negli intervalli 0,4-8 microg mL(-1), 0,1-1,5 microg mL(-1) e 0,1-2 microg mL(-1) per ESL e OXC e negli intervalli 0,4-80 microg mL(-1), 0,1-15 microg mL(-1) e 0,1-20 microg mL(-1) per R-LC e S-LC negli omogenati di plasma, cervello e fegato/rene, rispettivamente. La precisione complessiva non ha superato l'11,6% (%CV) e l'accuratezza variava da -3,79 a 3,84% (%bias), considerando tutti gli analiti in tutte le matrici. Quindi, questo metodo sarà uno strumento utile per caratterizzare la disposizione farmacocinetica dell'ESL nei topi.
La citotossicità in vitro del (-)-catechina gallato, un polifenolo minore nel tè verde.La citotossicità del (-)-catechina gallato (CG ), è stato studiato un costituente polifenolico minore nel tè verde, verso le cellule derivate da tessuti del cavo orale umano. La sequenza di sensibilità al CG è stata: cellule SG epitelioidi gengivali immortalizzate>carcinoma squamoso della lingua cellule CAL27>scarcinoma squamoso delle ghiandole salivari cellule HSG>>normali fibroblasti gengivali HGF-1. Ulteriori studi si sono concentrati sulle cellule SG, le cellule più sensibili al CG. La risposta delle cellule SG al CG dipendeva dalla durata dell'esposizione, con valori di citotossicità del punto medio di 127, 67 e 58 muM CG rispettivamente per esposizioni di 1, 2 e 3 giorni La sequenza di sensibilità delle cellule SG a varie catechine del tè verde è stata caratterizzata come segue: CG, epicatechina gallato (ECG)>epigallocatechina gallato (EGCG)>epigallocatechina (EGC) >>epicatechina (CE), catechina ( C). La citotossicità del CG, a quanto pare, non era dovuta allo stress ossidativo in quanto era un povero generatore di H(2)O(2) nel mezzo di coltura tissutale, non aveva alcun effetto sul livello di glutatione intracellulare, la sua citotossicità non era influenzata dalla catalasi e non ha indotto la perossidazione lipidica. Tuttavia, CG ha migliorato la perossidazione lipidica indotta da Fe(2+). L'apoptosi indotta da CG è stata rilevata mediante colorazione nucleare, sia con arancio di acridina che con la procedura TUNEL più specifica. La mancanza di attività della caspasi-3 nelle cellule esposte al CG e il rilevamento di uno striscio di DNA, piuttosto che di una discreta frammentazione del DNA internucleosomiale, all'elettroforesi su gel di agarosio, suggeriscono, probabilmente, che la modalità di morte cellulare sia stata un apoptotico indipendente dalla caspasi percorso. La citotossicità complessiva del CG era simile al suo epimero, l'ECG ed entrambi mostravano effetti antiproliferativi equivalenti o più forti dell'EGCG, la catechina più abbondante nel tè verde.
Prendere di mira gli antiossidanti ai mitocondri e alle malattie cardiovascolari: gli effetti del mitochinone.Da tempo è noto che i mitocondri svolgono un ruolo fondamentale nel mantenimento dello stato bioenergetico di cellule in condizioni fisiologiche. I mitocondri producono grandi quantità di radicali liberi e il danno ossidativo mitocondriale può contribuire a una serie di condizioni degenerative tra cui malattie cardiovascolari (CVD). Sebbene i meccanismi molecolari responsabili dei processi patologici mediati dai mitocondri non siano compresi correttamente, lo stress ossidativo sembra svolgere un ruolo importante. Di conseguenza, l'inibizione selettiva del danno ossidativo mitocondriale è una strategia terapeutica ovvia. Questa recensione considera il processo di CVD da una prospettiva mitocondriale e fornisce una sintesi delle seguenti aree: produzione di specie reattive dell'ossigeno (ROS) e il suo ruolo nei processi fisiopatologici come CVD, antiossidanti attualmente disponibili e possibili bili ragioni per la loro efficacia e inefficacia nel miglioramento delle malattie mediate dallo stress ossidativo e recenti sviluppi negli antiossidanti mirati ai mitocondri che si concentrano sulla superficie rivolta verso la matrice della membrana mitocondriale interna. Questi antiossidanti mirati ai mitocondri sono stati sviluppati coniugando il catione lipofilo trifenilfosfonio a frazioni antiossidanti come l'ubiquinolo. Questi composti passano facilmente attraverso le membrane biologiche e, grazie alla loro carica positiva, si accumulano centinaia di volte all'interno dei mitocondri. In questo modo proteggono dal danno ossidativo mitocondriale e mostrano potenziale come futura terapia per le malattie cardiovascolari.
Quantificazione e metabolismo del mitochinone, un antiossidante mirato ai mitocondri, nel ratto mediante cromatografia liquida/spettrometria di massa tandem.Il mitochinone (MitoQ10 mesilato) è un antiossidante mirato ai mitocondri in fase di sviluppo per il trattamento delle malattie neurodegenerative Lo scopo di questo studio era sviluppare e convalidare un test basato su cromatografia liquida/spettrometria di massa tandem (LC/MS/MS) per determinare il mitochinone e per rilevare e identificare i metaboliti di MitoQ10 nel plasma di ratto dopo una dose orale. Dopo una semplice fase di precipitazione proteica, i campioni di plasma sono stati analizzati mediante cromatografia liquida in fase inversa utilizzando eluizione in gradiente con acetonitrile/acqua/acido formico. Ionizzazione elettrospray in modalità ioni positivi con monitoraggio di reazioni multiple ( MRM) è stato utilizzato per analizzare il mitochinone utilizzando il composto deuterato (mesilato d3-MitoQ10) come standard interno. La curva di calibrazione per il mitochinone era lineare rispetto al concentrat intervallo di ioni 0,5-250 ng/mL con un coefficiente di correlazione>0.995. Il metodo era sensibile (limite di quantificazione 0,5 ng/mL) e aveva un'accuratezza accettabile (errore relativo<8,7%) e precisione (coefficiente di variazione intra e intergiornaliero<12,4%). I recuperi di mitochinone a concentrazioni di 1,5, 20 e 200 ng/mL erano nell'intervallo 87-114%. Il metodo è stato applicato con successo a uno studio farmacocinetico nel ratto dopo una singola dose orale in cui quattro metaboliti di MitoQ10 sono stati identificati provvisoriamente come MitoQ10 idrossilato, desmetil MitoQ10 e i coniugati glucuronide e solfato della forma chinolo di MitoQ10.
Rimozione di un colorante anionico mediante processi di adsorbimento/precipitazione utilizzando fango bianco alcalino.Il fango bianco alcalino (AWM) è stato studiato come un prodotto a basso costo materiale per la rimozione di un colorante anionico, blu acido 80. Sono stati valutati gli effetti del tempo di contatto, del pH iniziale della soluzione colorante, del dosaggio di AWM e della presenza di anione solfato inorganico o ione fosfato sulla rimozione del colorante. I risultati mostrano che AWM potrebbe essere utilizzato come materiale efficace per la rimozione del blu acido 80 in un processo preliminare o principale, in particolare ad alta concentrazione di colorante (>300 mgL(-1)), raggiungendo un'efficienza di rimozione massima del 95%. A bassa concentrazione di colorante, adsorbimento superficiale è principalmente responsabile della rimozione del colorante, mentre la precipitazione chimica degli anioni coloranti con Ca(2+) e Mg(2+) solubili può svolgere un ruolo dominante per la rimozione del colorante ad alta concentrazione, producendo molto meno fango rispetto al metodo di adsorbimento convenzionale. Il pH della soluzione ha solo un effetto limitato sulla rimozione del colorante a causa di l'elevata alcalinità e l'elevata capacità tampone del pH della sospensione AWM e quindi il pH non sono un fattore limitante nel perseguire un'elevata rimozione del colorante. La presenza di SO(4)(2-) potrebbe ridurre la rimozione del colorante da AWM solo quando la concentrazione di SO(4)(2-) è superiore a 0,7 mmolL(-1). La rimozione del colorante può essere significativamente soppressa dalla presenza di fosfato con concentrazione crescente e la riduzione della rimozione del colorante è molto maggiore ad alte concentrazioni di colorante rispetto a quelle basse.
Un nuovo microdosaggio enantioselettivo per la determinazione mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni di oxcarbazepina e del suo metabolita attivo monoidrossicarbazepina nel plasma umano.Un saggio semplice e innovativo è descritto che permette la determinazione del farmaco antiepilettico oxcarbazepina e la separazione chirale dei due enantiomeri del suo metabolita attivo monoidrossicarbazepina (licarbazepina). Il saggio richiede l'estrazione liquido-liquido del campione (200 microL) in tert-butil metil etere e diclorometano, essiccamento della fase organica in corrente di azoto, ricostituzione con la fase mobile e iniezione nel sistema di cromatografia liquida ad alta prestazione dopo filtrazione Separazione di oxcarbazepina, R-(-)-monoidrossicarbazepina, S-(+)-monoidrossicarbazepina e il metabolita di secondo passaggio 10,11-trans-diidrossicarbamazepina (racemato) si ottiene con una colonna Chiralcel ODR e potassio esafluorofosfato/acetonitrile come fase mobile. La rivelazione avviene per assorbanza ultravioletta a 210 nm. Le curve standard sono lineari (r2 > o = 0,999) nell'intervallo da 0,1 a 25 microg/mL per ciascun analita con un limite di quantificazione di 0,1 microg/mL (1 ng iniettato) per tutti i composti. La precisione nell'arco di un giorno e tra i giorni è migliore del 12% e l'accuratezza tra i giorni e tra i giorni è compresa tra il 99% e il 116% per ciascun composto. Queste caratteristiche prestazionali sono adeguate per gli studi di farmacocinetica e per il monitoraggio dei farmaci terapeutici. Tuttavia, poiché i due enantiomeri della monoidrossicarbazepina mostrano un'attività farmacologica simile, è probabile che i test non enantioselettivi siano più convenienti ai fini del monitoraggio terapeutico dei farmaci.
Progettazione di uno scaffold polimerico filamentoso per l'angiogenesi guidata in vivo.L'angiogenesi è obbligatoria per la riperfusione dei tessuti vitali e la mancanza di vascolarizzazione può causare ischemia. La crescente disparità tra la domanda e la disponibilità di sostituti adeguati per i vasi sanguigni umani di piccolo diametro ha portato a un'intensa ricerca di materiali artificiali o tessuti biologici allotrapianti, che di solito falliscono a lungo termine. L'obiettivo di questo studio era quello di aprire la strada a un nuovo modello per l'angiogenesi guidata in vivo basato su un processo di progettazione specifico di uno scaffold polimerico filamentoso con cellule endoteliali in un sistema di coltura tridimensionale A nostra conoscenza, questo è il primo rapporto di un approccio di angiogenesi guidata in vivo basato su un 2- modello a gradini, composto da cellule endoteliali e una struttura di scaffold polimerico filamentoso Cellule endoteliali che erano state coltivate su uno scaffold polimerico filamentoso appositamente progettato all'interno di un è stato dimostrato in vivo che il sistema di coltura tissutale dinamica regolato induce l'angiogenesi guidata. Le cellule seminate su un'impalcatura polimerica biodegradabile sono state impiantate nei topi. Il giorno 28 dopo l'impianto, l'analisi ha rivelato un processo angiogenico guidato lungo il percorso dell'impalcatura polimerica impiantata, nonché prove iniziali per la maturazione precoce dei vasi ingegnerizzati, consentendo ai globuli rossi di fluire attraverso il lume di formazione di nuovi vasi mentre il polimero si degradava. Gli autori concludono che l'angiogenesi guidata in vivo può essere ottenuta combinando cellule endoteliali con scaffold polimerici filamentosi biodegradabili e che questo modello può porre la pietra angolare per l'ingegneria vascolare e lo sviluppo futuro di protocolli clinicamente disponibili volti a trattare condizioni cardiovascolari potenzialmente letali.
Approccio sistemico basato sulla spettrometria di massa per l'identificazione degli inibitori della sintasi degli acidi grassi del Plasmodium falciparum.L'emergere di ceppi di Plasmodium falciparum resistenti al comunemente usato antimalarici garantisce lo sviluppo di nuovi agenti antimalarici. La scoperta dell'acido grasso sintasi di tipo II (FAS) nel Plasmodium distinto dal FAS nel suo ospite umano (tipo I FAS) ha aperto nuove strade per lo sviluppo di nuovi antimalarici. la sintesi acida avviene per allungamento iterativo della proteina vettore butirril-acile (butirril-ACP) di due unità di carbonio, con l'azione successiva di quattro enzimi che costituiscono il modulo di allungamento del FAS fino ad ottenere la lunghezza acilica desiderata. Il meccanismo di sintesi del parassita all'interno della coltura di globuli rossi è sempre stato un compito impegnativo. Qui riportiamo la ricostituzione in vitro del modulo di allungamento della FAS del parassita della malaria coinvolto ing tutti e quattro gli enzimi, FaBB/F (beta-chetoacil-ACP sintasi), FabG (beta-chetoacil-ACP reduttasi), FabZ (beta-chetoacil-ACP deidratasi) e FabI (enoil-ACP reduttasi), e la sua analisi da spettrometria di massa a tempo di volo di desorbimento laser assistito da matrice (MALDI-TOF MS). Che questo approccio ai sistemi in vitro imiti completamente il macchinario in vivo è confermato dalla distribuzione di prodotti acilici. Utilizzando inibitori noti degli enzimi del modulo di allungamento, cerulenina, triclosan, NAS-21/91 e (-)-catechina gallato, dimostriamo che l'accumulo di intermedi risultanti dall'inibizione di uno qualsiasi degli enzimi può essere seguito inequivocabilmente da MALDI -TOF MS. Pertanto, questo lavoro non solo offre un potente strumento per uno screening più semplice e veloce del rendimento degli inibitori, ma consente anche lo studio delle proprietà biochimiche della via FAS del parassita della malaria.
Identificazione e alcune proprietà di antociani isolati da Zuiki, gambo di Colocasia esculenta.Zuiki, gambo di taro (Colocasia esculenta), è un vegetale in Giappone. Lo zuiki crudo viene spesso bollito e messo nell'aceto per essere mangiato. Il colore della superficie dello zuiki è rossastro. Qui abbiamo isolato un pigmento rosso dallo zuiki e lo abbiamo identificato come cianidina 3-rutinoside utilizzando analisi strumentali. Il colore dello zuiki è scomparso con l'ebollizione , ma lo zuiki è tornato rosso in una soluzione di acido acetico. Sembra che la cianidina 3-rutinoside che esiste sulla superficie dello zuiki eluisca in acqua bollente e quindi, il pigmento che fuoriesce dall'interno dello zuiki è esposto ad un soluzione acida e la sua superficie diventa di nuovo rossa. L'attività di scavenging radicale dell'antocianina zuiki purificata era di 114 mg equivalenti a BHT/g. Circa la metà degli antociani nello zuiki fresco è stata lavata mediante bollitura e l'attività di scavenging radicale di zuiki è stata sicuramente ridotto.
Trasporto e metabolismo di MitoQ10, un antiossidante mirato ai mitocondri, in monostrati di cellule Caco-2.Il mitochinone (MitoQ(10) mesilato) è un antiossidante mirato ai mitocondri formulato per la somministrazione orale nel trattamento delle malattie neurodegenerative. Abbiamo studiato l'assorbimento e il metabolismo di MitoQ(10) in monostrati di cellule Caco-2. L'accumulo intracellulare di MitoQ(10) era del 18-41% del totale quantità di MitoQ(10) aggiunta. Alcuni dei MitoQ(10) intracellulari sono stati ridotti a mitochinolo e successivamente metabolizzati a glucuronide e solfati coniugati. Il trasporto di MitoQ(10) è stato polarizzato con l'apparente permeabilità (P(app)) dal basolaterale ( BL) ad apicale (AP) (P(appBL-->AP)) essendo >2.5 volte la P(app) da apicale a basolaterale (P(appAP-->BL)). In presenza del 4% albumina di siero bovino sul lato basolaterale, il valore P(appAP-->BL) è aumentato di 7 volte rispetto al controllo. Il valore P(appBL-->AP) diminuisce diminuito del 26, 31 e 61% in presenza di verapamil 100 microM, ciclosporina 10 e 30 microM, rispettivamente, mentre il valore di P(appAP-->BL) è aumentato del 71% in presenza di ciclosporina 30 microM. L'efflusso apicale di mitochinolo solfato e mitochinolo glucuronide coniugati è stato significativamente ridotto dalla ciclosporina 30 microM e dall'inibitore della proteina del recettore del cancro al seno (BCRP), reserpina 25 microM, rispettivamente. Questi risultati suggeriscono che la biodisponibilità di MitoQ(10) può essere limitata dal metabolismo intracellulare e dall'azione della glicoproteina-P e del BCRP. Tuttavia, il drammatico aumento dell'assorbimento di P(app) in presenza di albumina sierica bovina sul lato ricevente suggerisce che queste funzioni di barriera potrebbero essere meno significative in vivo.
Cyanidin-3-rutinoside, un antiossidante polifenolico naturale, uccide selettivamente le cellule leucemiche mediante l'induzione dello stress ossidativo.Gli antociani sono un gruppo di fenoli naturali composti ampiamente disponibili in frutta e verdura nelle diete umane. Hanno ampie attività biologiche tra cui anti-mutagenesi e anticancerogenesi, che sono generalmente attribuite alle loro attività antiossidanti. Abbiamo studiato gli effetti e i meccanismi del tipo più comune di antociani, la cianidina-3 -rutinoside, in diverse linee cellulari di leucemia e linfoma. Abbiamo scoperto che il cianidina-3-rutinoside estratto e purificato dalla cultivar di lampone nero Jewel induce apoptosi nelle cellule HL-60 in modo dose e tempo dipendente. Paradossalmente, questo composto ha indotto l'accumulo di perossidi, che sono coinvolti nell'induzione dell'apoptosi nelle cellule HL-60. Inoltre, il trattamento con cianidina-3-rutinoside ha portato ad attivazioni dipendenti da specie reattive dell'ossigeno (ROS) zione di p38 MAPK e JNK, che ha contribuito alla morte cellulare attivando la via mitocondriale mediata da Bim. La down-regulation di Bim o la sovraespressione di Bcl-2 o Bcl-x(L) hanno notevolmente bloccato l'apoptosi. In particolare, il trattamento con cianidina-3-rutinoside non ha portato ad un aumento dell'accumulo di ROS nelle normali cellule mononucleate del sangue periferico umano e non ha avuto effetti citotossici su queste cellule. Questi risultati indicano che il cianidina-3-rutinoside ha il potenziale per essere utilizzato nella terapia della leucemia con i vantaggi di essere ampiamente disponibile e selettivo contro i tumori.
Approfondimenti strutturali sulla fase di transglicosilazione della biosintesi della parete cellulare batterica.Le peptidoglicano glicosiltransferasi (GT) catalizzano la fase di polimerizzazione della biosintesi della parete cellulare, sono legati alla membrana e sono altamente conservati in tutti i batteri. A lungo considerati il "Santo Graal" della ricerca sugli antibiotici, rappresentano un bersaglio farmacologico essenziale e facilmente accessibile per i batteri resistenti agli antibiotici, incluso lo Staphylococcus aureus resistente alla meticillina. Abbiamo determinato la struttura 2.8 angstrom di un enzima bifunzionale cross-linking della parete cellulare, compresi i suoi domini transpeptidasi e GT, sia non legati che complessati con l'analogo substrato moenomicina. I peptidoglicani GT adottano una piega distinta da quelle di altre classi GT. Le strutture forniscono informazioni nelle caratteristiche critiche del meccanismo catalitico e nelle interazioni chiave necessarie per l'inibizione enzimatica.
Il metabolismo endotelio-dipendente da parte delle idrolasi endocannabinoidi e delle cicloossigenasi limita la vasodilatazione ad anandamide e 2-arachidonoilglicerolo.Gli endocannabinoidi, N-arachidonoiletanolamide (anandamide) e 2 -arachidonoilglicerolo (2-AG) sono rapidamente degradati dall'acido grasso ammide idrolasi (FAAH) e dalla monoacilglicerolo lipasi (MGL). Anche se questi mediatori lipidici sono noti per modulare il tono vascolare, rimane la misura in cui sono inattivati tramite metabolismo locale nel sistema vascolare Nelle piccole arterie mesenteriche isolate di ratto, è stato valutato il ruolo regolatorio di FAAH, MGL e cicloossigenasi (COX) nelle risposte rilassanti all'anandamide e al 2-AG utilizzando inibitori di questi enzimi. sono stati anche esaminati. Il rilassamento ad anandamide ma non a 2-AG è stato potenziato dall'inibitore selettivo della FAAH, URB597 (1 microM). Al contrario, MAFP (10 microM; un inibitore di FAAH a nd MGL) migliorate le risposte sia all'anandamide che al 2-AG. L'inibizione della COX-1 da parte dell'indometacina (10 microM) ha potenziato i rilassamenti a 2-AG, mentre l'inibizione della COX-2 da parte della nimesulide (10 microM) ha potenziato il rilassamento indotto dall'anandamide. Ad eccezione del MAFP, gli effetti degli inibitori FAAH e COX dipendevano dall'endotelio. Il rilassamento alla metanandamide e alla noladina etere, gli analoghi non idrolizzabili rispettivamente dell'anandamide e del 2-AG, era insensibile agli inibitori enzimatici. Questo studio mostra che l'attività locale di FAAH, MGL e COX, che è presente in gran parte nell'endotelio, limita l'azione vasodilatatrice degli endocannabinoidi nelle piccole arterie mesenteriche del ratto. Nonostante i ruoli differenziali svolti da questi enzimi sul rilassamento dell'anandamide rispetto al 2-AG, i nostri risultati suggeriscono che gli inibitori di questi enzimi migliorano l'impatto vascolare degli endocannabinoidi.
Determinazione di catechine di attomole mediante cromatografia liquida capillare con rivelazione elettrochimica.Le quantità di catechine di attomole sono state determinate mediante un sistema di cromatografia liquida capillare con rivelazione elettrochimica (CLC- ECD) e il sistema è applicato alla determinazione delle catechine nel plasma umano. Le otto catechine: catechina (C), epicatechina (EC), gallocatechina (GC), epigallocatechina (EGC), catechina gallato (Cg), epicatechina gallato (ECg) ), gallocatechina gallato (GCg) ed epigallocatechina gallato (EGCg), sono stati separati entro 10 minuti utilizzando una colonna capillare (0,2 mm id) e una fase mobile di acido fosforico (85%)-metanolo-acqua (0,5:27,5:72,5 , v/v/v) e sono state rilevate a +0,85 V rispetto a Ag/AgCl. Le altezze dei picchi sono risultate essere linearmente correlate alla quantità di catechine iniettate, da 200 amol a 500 fmol (r > 0,998). i limiti di rilevazione delle catechine erano 61 amol per EGC, 75 amol per EC, 54 amol per GC, 61 amol per C, 67 amol per GCg, 75 amol per EGCg, 75 amol per ECg e 89 amol per Cg (S/N = 3). Poiché il presente metodo è altamente sensibile e consente un facile pretrattamento per il campione di plasma, l'andamento temporale delle concentrazioni di catechine (GCg, EC, EGCg, ECg e Cg) e dei loro coniugati nel plasma umano ottenuto da un campione di plasma da 10 microl dopo l'ingestione di il tè verde potrebbe essere determinato.
2-Arachidonilgliceril etere e rilassamento anomalo della muscolatura liscia vascolare indotta da cannabidiolo nelle arterie polmonari di coniglio tramite la segnalazione di proteine G sensibili alla tossina della pertosse recettore-ERK1/2.I recettori utilizzati dai cannabinoidi per rilassare la muscolatura liscia vascolare sono sconosciuti. Qui, abbiamo studiato gli effetti del 2-arachidonilgliceril etere (2-AG etere), un endocannabinoide metabolicamente stabile, e del cannabidiolo anomalo (abn-CBD) su rilassamento delle strisce arteriose polmonari permeabilizzate monitorate con forza e sulla fosforilazione delle protein chinasi attivate da mitogeni extracellulari (ERK1/2) nelle cellule muscolari lisce vascolari permeabilizzate mediante immunoblotting Abbiamo scoperto che l'etere 2-AG e l'abn-CBD causavano rilassamento e aumento della fosforilazione di ERK1 / 2. Gli effetti dell'etere 2-AG sono stati completamente aboliti da N-(piperidin-1-il)-5-(4-iodofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4-metil-1H- pirazolo-3-carbossammide (AM251) e N-(piperidin-1-il)-5-(4-clorofenile) -1-(2,4-diclorofenil)-4-metil-1H-pirazolo-3-carbossammide (SR141716A), e parzialmente bloccato da (-)-1,3-dimetossi-2-(3-3,4-trans-p -mentadien-(1,8)-il)-orcinolo (O-1918). Al contrario, gli effetti abn-CBD sono stati completamente aboliti da O-1918 e solo parzialmente bloccati da AM251 e SR141716A. Entrambi gli effetti dell'etere 2-AG e dell'abn-CBD sono stati parzialmente bloccati dalla tossina della pertosse, un inibitore delle proteine Gi/o. PD98059, un inibitore della proteina chinasi chinasi attivata da mitogeni (MEK), ha completamente abolito il rilassamento, ma ha solo parzialmente bloccato l'aumentata fosforilazione di ERK1/2 da parte dell'etere 2-AG. Al contrario, il rilassamento indotto da abn-CBD è stato parzialmente bloccato e l'aumentata fosforilazione di ERK1/2 è stata abolita da PD98059. Questi risultati suggeriscono che l'etere 2-AG e il rilassamento della muscolatura liscia vascolare indotta da abn-CBD sono mediati dal recettore dei cannabinoidi CB1 e dal recettore abn-CBD, rispettivamente, e sono modulati dal cross-talk tra i recettori. Queste risposte si verificano principalmente accoppiandosi a proteine G sensibili alla tossina della pertosse, ma anche, in parte indipendentemente da queste proteine G, che sono state classicamente ritenute in grado di avviare la segnalazione MEK/ERK1/2 per rilassare la muscolatura liscia vascolare.
Identificazione basata su tSNP della perdita allelica dell'espressione genica in un paziente con un riarrangiamento cromosomico bilanciato.Identificazione di geni affetti da cromosomi rari associati alla malattia riarrangiamenti ha portato alla clonazione di diversi geni della malattia. Qui abbiamo utilizzato un approccio semplice che coinvolge la rilevazione dell'espressione genica basata su RT-PCR allele-specifica per identificare un gene affetto da un autosoma bilanciato;traslocazione autosomica. Abbiamo identificato un SNP trascritto ( tSNP), c.68G-->A, presente in un nuovo esone non tradotto del gene CLDN14 in un paziente di sesso maschile con ritardo mentale che aveva una traslocazione cromosomica bilanciata t(13;21) Abbiamo determinato una perdita di espressione allelica del Isoforma del gene CLDN14 al breakpoint cromosomico 21q22.1 Sebbene sia necessario ulteriore lavoro per esplorare una possibile funzione della nuova isoforma CLDN14 nello sviluppo e nella funzione del cervello e le potenziali conseguenze patogene della sua interruzione in questo paziente, il risultato dimostra chiaramente l'utilità di un rilevamento basato su tSNP della perdita allelica dell'espressione genica in studi che coinvolgono riarrangiamenti cromosomici.
L'elevata concentrazione di antiossidanti N-acetilcisteina e mitochinone-Q induce la molecola di adesione intercellulare 1 e lo stress ossidativo aumentando il glutatione intracellulare.Nelle cellule endoteliali, il livello intracellulare di glutatione è esaurito durante l'offerta di protezione contro lo stress ossidativo indotto da citochine proinfiammatorie TNF-alfa. le cellule endoteliali dell'aorta polmonare offrivano protezione contro l'esaurimento del glutatione ridotto e lo stress ossidativo mediato dal TNF-alfa Tuttavia, questo studio ha affrontato il fatto che la somministrazione di NAC o mito-Q in alte concentrazioni ha provocato una risposta bifasica avviando una generazione migliorata sia di glutatione ridotto e glutatione ossidato e una maggiore produzione di specie reattive dell'ossigeno, insieme alla carbonilazione e alla glutationilazione delle proteine cellulari. udy ha inoltre affermato che la chinasi IkappaB (IKK), un regolatore dipendente dalla fosforilazione di NF-kappaB, svolge un importante ruolo regolatore nell'induzione mediata da TNF-alfa della molecola di superficie cellulare infiammatoria ICAM-1. Delle due subunità catalitiche di IKK (IKKalpha e IKKbeta), basse concentrazioni di NAC e mito-Q hanno attivato l'attività di IKKalpha, inibendo così l'induzione di NF-kappaB e ICAM-1 a valle da parte di TNF-alfa. Alte concentrazioni di NAC e mito-Q hanno invece causato la glutationilazione di IKKalpha, inibendo così la sua attività che a sua volta ha potenziato l'attivazione di NF-kappaB a valle e l'espressione di ICAM-1 da parte del TNF-alfa. Pertanto, stabilire IKKalpha come molecola antinfiammatoria nelle cellule endoteliali è un altro obiettivo di questo studio. Questo è il primo rapporto che descrive una situazione stressante nelle cellule endoteliali creata dall'eccesso di agenti antiossidanti e antinfiammatori NAC e mito-Q, con conseguente generazione di specie reattive dell'ossigeno, carbonilazione e glutationilazione delle proteine cellulari, inibizione dell'attività IKKalpha e up-regulation dell'espressione ICAM-1.
Chimica dei pigmenti, tassonomia e filogenesi delle Hypoxyloideae (Xylariaceae).Le Hypoxyloideae (Xylariaceae con anamorfie simili a Nodulisporium) sono state valutate da un esame morfologico e Indagine chemiotassonomica basata su HPLC di oltre 2000 campioni e colture. La conspecificità di registrazioni recenti con campioni di tipo antico è stata stabilita in molti casi mediante HPLC, poiché i loro metaboliti caratteristici possono rimanere stabili per oltre 200 anni. La maggior parte costituisce nuovi prodotti naturali che sono stati identificati in il corso di studi concomitanti "micochimici". Un confronto dei profili HPLC che considerano le relazioni all'interno delle Hypoxyloideae come dedotte dalla biogenesi di questi pigmenti concordato abbastanza con studi filogenetici molecolari concorrenti, basati su sequenze di actina, beta-tubulina e 5.8S /ITS nrDNA La morfologia anamorfica e il metabolismo secondario delle colture concordano bene a livello generico e oltre. Una combinazione di tratti chimici e morfologici s è preferito rispetto agli approcci basati sulla PCR per la discriminazione delle specie, se sono stati sequenziati solo relativamente pochi taxa di questi diversi generi. Viene fornita una panoramica sulle strutture chimiche e sulle attività biologiche dei metaboliti caratteristici, viene discussa la loro importanza ecologica e viene dimostrata l'utilità della chemiotassonomia per supportare e prevedere le relazioni filogenetiche negli ipossiloidi. Un approccio politetico è molto utile per chiarire la filogenesi delle Xylariaceae. La chemiotassonomia per valutare la biodiversità fungina ha una notevole utilità.
Sintesi e studi preliminari sull'attività antitumorale di derivati C4 e C8 modificati di catechina gallato (CG) ed epicatechina gallato (ECG).Abbiamo sviluppato un metodo migliorato e affidabile per la funzionalizzazione stereoselettiva a C4 della (+)-catechina naturale. Il nostro metodo utilizza l'ossidazione DDQ seguita dall'intrappolamento dell'intermedio chinonemetide con alcol allilico. L'intermedio chinonemetide può essere rigenerato dall'etere allile mediante esposizione al trifluoruro di boro dietil eterato. Questo intermedio reattivo può essere intrappolato con un'ampia gamma di nucleofili esterni. La bromurazione dell'NBS, lo scambio di alogeno con litio e l'alchilazione hanno dato accesso ai derivati C8-allilici della (+)-catechina e questo gruppo allilico è stato utilizzato in una serie di esperimenti di metatesi incrociata per preparare nuovi prodotti derivati da catechine dimeriche. Sono stati preparati derivati di estere gallato delle nuove catechine C4- e C8-sostituite e questi materiali sono stati selezionati per pot fondamentale attività antitumorale in una serie di linee cellulari tumorali umane. Da questi test preliminari di citotossicità (MTT) abbiamo scoperto che il gallato di C8-propil-catechina era più attivo (IC50 = 31 microM) del gallato di catechina (CG, IC50 = 53 microM) o dell'epicatechina gallato (ECG, IC50 = 76 microM) ) contro la linea cellulare di adenocarcinoma colorettale HCT116. È stata inoltre osservata sensibilità differenziale nelle linee cellulari di pancreas (Pan1), vescica (RT112), stomaco (MGLVA1), fegato (HepG2) e fibroblasti (46Br.1G1).
Profilazione quantitativa di endocannabinoidi e composti correlati nel cervello di ratto mediante cromatografia liquida-spettrometria di massa a ionizzazione elettrospray tandem.Una massa tandem-cromatografia liquida sensibile e specifica Il metodo spettrometrico (LC-MS/MS) è descritto per l'identificazione e la quantificazione simultanee di otto endocannabinoidi (EC) o dei relativi composti "entourage" nel tessuto cerebrale di ratto. Gli analiti sono stati estratti e purificati dal tessuto cerebrale di ratto utilizzando un acetato di etile/ estrazione con solvente esano, seguita da un protocollo di estrazione in fase solida (SPE). La separazione cromatografica è stata ottenuta utilizzando un'eluizione in gradiente, con una fase mobile di acetonitrile, acido formico e acetato di ammonio, a pH 3,6. Una colonna Thermo Hypersil C8 HyPurity Advance ( 100x2,1 mm id, 3 microm) è stato utilizzato con una portata di 0,3 ml/min. Anandamide (AEA), 2-arachidonil glicerolo (2-AG), 2-arachidonilgliceril etere (noladin ether), O-arachidonil etanolamide (virodhamine ), 2-linoleoil glicerolo (2-LG), arachidonil glicina, oleoil etanolamide (OEA) e palmitoil etanolamide (PEA) sono stati quantificati mediante spettrometria di massa a ionizzazione elettrospray tandem con ioni positivi. Gli standard interni erano AEA deuterato, 2-AG deuterato ed eptadecanoil etanolamide (HEA). La linearità è stata dimostrata nell'intervallo da 25 fmol a 250 pmol, con un limite di rilevamento di 25 fmol su colonna per tutti gli analiti eccetto 2-AG, noladin etere e 2-LG (250 fmol). Ciò corrispondeva a un limite di quantificazione nel tessuto biologico di 10 pmol/g per tutti gli analiti eccetto 2-AG (100 pmol/g). La precisione intra e interday nel tessuto biologico era di routine approssimativamente del 20% o inferiore e l'accuratezza era compresa tra il 65% e il 155%. Questo metodo è stato utilizzato per profilare quantitativamente le differenze regionali in nove regioni del cervello di ratto distinte per AEA, 2-AG, 2-LG, OEA, PEA, etere noladina, virodhamina e arachidonil glicina.
Distinta organizzazione sottodominio e composizione molecolare di una giunzione stretta con caratteristiche di giunzione aderenti.La maggior parte degli epiteli polarizzati limita la diffusione del soluto tra i compartimenti luminale e interstiziale usando giunzioni strette e generare resistenza meccanica utilizzando giunzioni aderenti. Queste giunzioni intercellulari sono tipicamente rappresentate come complessi macromolecolari incongruenti con componenti proteici distinti. Qui, delineiamo la composizione molecolare e l'architettura del sottodominio di una giunzione intercellulare tra cellule sensoriali e non sensoriali dell'orecchio interno. In questa giunzione, le claudine si suddividono in sottodomini claudina-14 e claudina-9/6 che sono distinguibili dalla morfologia del filamento, che contrasta con i dati in vitro secondo cui la maggior parte delle claudine si co-assembla in filamenti eteromerici Sorprendentemente, le proteine di giunzione delle aderenze canoniche (p120ctn, alfa- e beta-catenine) colocalizzano con il sottodominio claudina-9/6 e reclutano un denso citoscheletro n rete. Troviamo anche che le catenine colocalizzano con claudina-9 e claudina-6, ma non claudina-14, in un sistema eterologo. Insieme, i nostri dati dimostrano che le proteine della giunzione stretta canonica e della giunzione aderente possono essere reclutate in una singola giunzione in cui le claudine si suddividono in sottodomini e formano una nuova giunzione stretta ibrida con l'organizzazione della giunzione aderente.
Glabrol, un acil-coenzima A: inibitore del colesterolo aciltransferasi dalle radici di liquirizia.Acil-coenzima A: il colesterolo aciltransferasi (ACAT) esterifica il colesterolo libero in fegato e intestino. Ha relazioni con la produzione di lipoproteine e l'accumulo di esteri del colesterolo dell'ateroma. Pertanto, gli inibitori dell'ACAT possono agire come agenti antiipercolesterolemici e antiaterosclerotici. Un flavonoide isoprenile è stato isolato dall'estratto etanolico di radici di liquirizia. Sulla base di prove spettrali, il composto è stato identificato come glabrol (1). Il composto 1 ha inibito l'attività microsomiale dell'ACAT del fegato di ratto con un valore IC(50) di 24,6 microM e ha diminuito la formazione di esteri del colesterolo con un valore IC(50) di 26,0 microM nelle cellule HepG2. Inoltre, 1 ha mostrato un tipo di inibizione non competitiva contro l'ACAT.
Creazione e applicazione di un database simulato di acquisizioni PET dinamiche [18f]MPPF che incorporano la variabilità anatomica e biologica interindividuale.Durante il processo di validazione di un nuovo tracciante, la stima delle prestazioni e la convalida degli algoritmi di elaborazione devono essere studiati con set di dati rappresentativi della verità fondamentale. Poiché questa verità fondamentale è difficilmente accessibile nella tomografia a emissione di positroni (PET), le convalide degli algoritmi di elaborazione spesso si basano sull'uso di set di dati simulati. Considerando che i simulatori Monte Carlo richiedono molto tempo e non sono molto facili da usare, la creazione di database pubblicamente disponibili di volumi simulati di PET sta diventando altamente auspicabile. Presentiamo qui la metodologia utilizzata per la creazione di un database di dati dinamici simulati [18F]MPPF-PET, inclusa la variabilità anatomica e biologica inter-individuale che soddisfa i criteri di un database gold standard come definito da Le hmann: affidamento, equivalenza, indipendenza, pertinenza, significato. Qui viene presentata anche la valutazione del realismo del database costruito rispetto ai dati MPPF PET effettivi. Considerando che il database è stato creato appositamente per le indagini sulla quantificazione dell'attività e sul legame del ligando-recettore con il tracciante PET [18F]MPPF, può servire la comunità con innumerevoli scopi. La piena forza di questo database, non deriva solo dalla conoscenza di informazioni importanti come la mappa dell'attività reale ei dati anatomici sottostanti, ma anche dalla possibilità di controllare completamente la differenza biologica tra insiemi di dati PET simulati. Infatti, le curve di attività temporale incluse nei set di dati simulati sono controllate da un modello multicompartimentale degli scambi ligando-recettore. Quest'ultima caratteristica è di grande interesse nel contesto del miglioramento della rilevabilità della variazione biologica nella PET.
[18F]MPPF come strumento per l'imaging in vivo dei recettori 5-HT1A nel cervello animale e umano.Serotonina (5-idrossitriptamina, 5-HT) e i suoi vari recettori sono coinvolti in numerose funzioni del SNC e disturbi psichiatrici. La 5-HT(1A), il sottotipo meglio caratterizzato dei recettori 5-HT attualmente conosciuti, è strettamente implicato nella patogenesi della depressione, dell'ansia, dell'epilessia e disturbi alimentari. Rappresenta quindi un obiettivo importante per la terapia farmacologica. Specifici radioleganti e tomografia a emissione di positroni (PET) consentono un'immagine quantitativa della distribuzione del recettore 5-HT(1A) cerebrale negli animali vivi e nell'uomo. Recentemente, il 5- L'antagonista del recettore HT(1A), MPPF, è stato marcato con successo con [(18)F]fluoro ([(18)F]MPPF) e un numero crescente di centri accademici e industriali ha utilizzato questo radiotracciante in studi preclinici e clinici. Dopo un breve resoconto di alcune delle caratteristiche strutturali, distributive ed elettrofisiologiche eristica dei recettori 5-HT(1A) del cervello, questa recensione si concentra su studi condotti con [(18)F]MPPF, con particolare attenzione ai risultati preclinici che illustrano il valore effettivo e potenziale di questo radioligando PET per la ricerca clinica e lo sviluppo di farmaci.
Inibizione dell'espressione di HuR e MMP-9 in cellule di leucemia mieloide HL-60 differenziata dai macrofagi da parte del polifenolo del tè verde EGCg.Matrix metalloproteinase (MMP) L'espressione di -9 è collegata alla differenziazione delle cellule mieloidi, così come ai processi di infiammazione e angiogenesi correlati alla progressione del cancro. La secrezione di MMP-9 e la differenziazione delle cellule di leucemia mieloide HL-60 simile ai macrofagi sono state attivate dall'agente promotore del tumore PMA. Gli effetti chemiopreventivi di catechine del tè verde epigallocatechina-gallato, catechina-gallato ed epicatechina-gallato, ma non quelle catechine che mancano di un gruppo 3\'-galloile, inibiscono in modo dipendente dal tempo e dalla dose la secrezione di MMP-9. Il gene e la proteina anche l'espressione di MMP-9 e del fattore di stabilizzazione dell'mRNA HuR è stata inibita, mentre quella del recettore della laminina da 67 kDa è rimasta inalterata. Specifiche catechine possono aiutare a ottimizzare gli attuali protocolli di trattamento chemioterapico per la leucemia.
Ossigeno reattivo e somministrazione mirata di antiossidanti nei mitocondri delle cellule endoteliali.Abbiamo utilizzato sonde fluorescenti ed EPR per studiare i meccanismi alla base delle specie reattive dell'ossigeno ( ROS) da parte dei mitocondri delle cellule endoteliali e dall'azione del mitochinolo, un antiossidante mirato ai mitocondri. I ROS misurati mediante fluorescenza derivano dal superossido del complesso I rilasciato alla matrice e convertito in H(2)O(2). Al contrario, l'EPR è stato ampiamente rilevato superossido generato al complesso III ed efflusso verso l'esterno. La fluorescenza dei ROS da parte dei mitocondri alimentati dal substrato del complesso II, il succinato, era sostanziale ma marcatamente inibita dal rotenone. Il superossido, rilevato dall'EPR, nei mitocondri alimentati dal succinato non era inibito dal rotenone e probabilmente derivato da formazione di semichinone al complesso III. Il mitochinolo ha diminuito la fluorescenza H(2)O(2) dai mitocondri alimentati dal succinato ma ha avuto scarso effetto sul segnale EPR per il superossido. Questo non era associato all'annuncio sensibile diminuzione del potenziale di membrana. Il mitochinolo ha notevolmente migliorato la fluorescenza dei ROS nei mitocondri alimentati dai substrati del complesso I, glutammato e malato. Studi sugli inibitori hanno suggerito che ciò si è verificato nel complesso I, in una o più tasche di legame del Q. Gli effetti di cui sopra del mitochinolo sono stati determinati nei mitocondri isolati e successivamente esposti all'antiossidante mirato. Tuttavia, effetti simili sono stati osservati nei mitocondri dopo un'esposizione antecedente a mitochinolo/mitochinone in coltura, suggerendo che l'agente viene trattenuto dopo l'isolamento degli organelli. In conclusione, la produzione di ROS nei mitocondri delle cellule endoteliali aortiche bovine deriva in gran parte dal trasporto inverso al complesso I e attraverso il ciclo Q nel complesso III. Il mitochinolo blocca i ROS dal trasporto inverso degli elettroni ma aumenta la produzione di superossido derivato dal trasporto in avanti. Questi effetti probabilmente si verificano in uno o più siti di legame del Q nel complesso I.
Disfunzione del complesso I e tolleranza alla nitroglicerina: un approccio basato su antiossidanti mirati ai mitocondri.La tolleranza alla nitroglicerina (GTN) è stata indotta in vivo (ratti) e in vitro (ratto e vasi umani). Il rilevamento elettrochimico ha rivelato che la dose di incubazione di GTN (5x10(-6) mol/L) non ha rilasciato NO o modificato il consumo di O(2) quando somministrata in modo acuto. Tuttavia, lo sviluppo della tolleranza ha prodotto una diminuzione sia del consumo di O(2) mitocondriale che della K(m) per O(2) nei vasi animali e umani e nelle cellule endoteliali in un'azione non competitiva La tolleranza al GTN è stata associata a una compromissione della biotrasformazione del GTN attraverso l'inibizione dell'aldeide deidrogenasi ( ALDH)-2, e con disaccoppiamento della respirazione mitocondriale Alimentazione di ratti con antiossidanti mirati ai mitocondri (mitochinone [MQ]) e co-incubazione in vitro con MQ (10(-6) mol/L) o estere del glutatione (GSH) (10( -4) mol/L) ha impedito la tolleranza e gli effetti del GTN sui mitocondri l respirazione e l'attività di ALDH-2. La biotrasformazione di GTN richiede mitocondri funzionalmente attivi e induce la produzione di specie reattive dell'ossigeno e stress ossidativo all'interno di questo organello, poiché è inibito dagli antiossidanti mirati ai mitocondri ed è assente nelle cellule HUVECrho (0). Gli esperimenti che analizzano la respirazione complessa I-dipendente dimostrano che la sua inibizione da parte del GTN è prevenuta dagli antiossidanti mirati ai mitocondri. Inoltre, in presenza di succinato (10x10(-3) mol/L), un donatore di elettroni complesso II aggiunto per bypassare la respirazione I-dipendente del complesso, le cellule trattate con GTN hanno mostrato tassi di consumo di O(2) simili a quelli dei controlli, suggerendo così quel complesso sono stato colpito da GTN. Proponiamo che, dopo un trattamento prolungato con GTN in aggiunta ad ALDH-2, il complesso I sia un bersaglio per le specie reattive dell'ossigeno generate dai mitocondri. I nostri dati suggeriscono anche un ruolo degli antiossidanti mirati ai mitocondri come strumenti terapeutici nel controllo della tolleranza che accompagna l'uso cronico di nitrati.
Effetti ipoglicemizzanti dei derivati multiflorine in topi normali.(-)-Il multiflorine isolato da leguminose produce un effetto ipoglicemizzante quando somministrato a topi con streptozotocina- diabete indotto. (-)-Multiflorine ha una coniugazione di tipo enaminone sull'anello A, cosa insolita negli alcaloidi del lupino. Partendo dal presupposto che l'anello AB sia responsabile dell'effetto ipoglicemizzante, diversi composti portatori della chinolizidina-2-one sono stati sintetizzati sistemi ad anello e sono stati esaminati i loro effetti ipoglicemizzanti. Inoltre, sono stati sintetizzati composti triciclici contenenti 4-piridone e sono stati esaminati i loro effetti ipoglicemizzanti. L'effetto ipoglicemizzante di un composto di tipo 4-piridone era simile a quello di (-) -multiflorine misurato mediante test di tolleranza al glucosio orale in topi normali. Non è stato osservato alcun effetto ipoglicemizzante di un composto di tipo 4-piperidone. Questi risultati indicano che i composti che possiedono doppi legami nell'anello A di multiflo la rina può essere un composto di piombo per un nuovo tipo di farmaco per il diabete.
Alcoli sesquiterpenici della superficie fogliare della patata (Solanum tuberosum) e loro influenza sull'alimentazione del coleottero del Colorado (Leptinotarsa decemlineata Say).Le strutture di due precedenti sono stati assegnati alcoli sesquiterpenici sconosciuti della patata (Solanum tuberosum). Gli alcoli della patata sono stati ottenuti mediante distillazione in corrente di vapore, cromatografia preparativa su colonna e separazione in frazioni mediante HPLC su colonna di gel di silice. Le frazioni sono state studiate mediante GC-FID, GC- Spettroscopia MS e NMR. Gli alcoli sesquiterpenici della patata sono stati identificati come kunzeaol (6-alfa-idrossigermacra-1(10),4-diene) e ledol. Questi due composti sono stati utilizzati nei test di alimentazione con larve e coleotteri dello scarabeo della patata del Colorado (Leptinotarsa decemlineata Say). In un saggio biologico, è stato scoperto che il kunzeaol agisce come attrattivo alimentare per i coleotteri.
Uno studio di imaging PET dei recettori 5-HT(1A) nel cervello di gatto dopo trattamento acuto e cronico con fluoxetina.Immuno-elettrone microscopico e beta- studi con microsonda hanno dimostrato che l'internalizzazione degli autorecettori serotoninergici 5-HT(1A), dopo trattamento acuto con l'agonista selettivo del recettore 5-HT(1A) 8-OH-DPAT o con l'inibitore specifico della ricaptazione della serotonina (SSRI) fluoxetina, è associata con una marcata diminuzione del legame in vivo di [(18)F]MPPF nel nucleo rafe dorsale (NRD) di ratto. Per determinare se questo evento potrebbe essere suscettibile di imaging cerebrale, il presente [(18)F]MPPF positrone Lo studio tomografico ad emissione (PET) è stato condotto in gatti anestetizzati a cui è stata somministrata o meno una dose singola (5 mg/kg, iv) o trattati cronicamente con fluoxetina (5 mg/kg, sc per 21 giorni). )F]MPPF potenziale di legame è stato considerevolmente (e visibilmente) diminuito nel gatto NRD dopo il trattamento acuto con fluoxetina, mentre è rimasto invariato in altri ere regioni del cervello. Inaspettatamente, dopo il trattamento cronico con fluoxetina, il potenziale di legame del [(18)F]MPPF non è stato influenzato in nessuna regione del cervello. In esperimenti al microscopio immunoelettronico paralleli condotti nel ratto, la densità degli autorecettori 5-HT(1A) sulla membrana plasmatica dei dendriti NRD era paragonabile al controllo dopo il trattamento cronico con fluoxetina. Se la diminuzione del legame [(18)F]MPPF all'inizio del trattamento con SSRI fosse rilevabile mediante imaging PET, potrebbe potenzialmente servire come indice biologico di efficacia.
Riduzione dei composti nitroaromatici da parte di NAD(P)H:chinone ossidoreduttasi (NQO1): il ruolo della potenza di accettazione degli elettroni e dei parametri strutturali nella specificità del substrato.Il nostro obiettivo era chiarire il ruolo dei parametri elettronici e strutturali dei composti nitroaromatici nella loro riduzione a due elettroni da parte della NAD(P)H:chinone ossidoreduttasi (NQO1, DT-diaforasi, EC 1.6.99.2). L'analisi di regressione multiparametrica mostra che la reattività dei composti nitroaromatici (n=38) aumenta con un aumento del loro potenziale di riduzione a singolo elettrone e dell'angolo di torsione tra il/i nitrogruppo/i e l'anello aromatico. L'efficienza di legame dei nitroaromatici nel centro attivo di NQO1 ha esercitato una minore ruolo evidente nella loro reattività. La riduzione dei nitroaromatici è caratterizzata da entropie di attivazione più positive rispetto alla riduzione dei chinoni. Ciò indica un accoppiamento elettronico meno efficiente dei nitroaromatici con la ridotta isoallossazina anello di FAD, e può spiegare la loro minore reattività rispetto ai chinoni. Un altro fattore importante ma poco compreso che migliora la reattività dei nitroaromatici è la loro capacità di legarsi al sito di legame dicumarolo/chinone nel centro attivo di NQO1.
Caratterizzazione farmacologica di DM232 (unifiram) e DM235 (sunifiram), nuovi potenti potenziatori cognitivi.DM232 (unifiram) e DM235 (sunifiram) sono potenti stimolatori cognitivi, che sono quattro ordini di grandezza più potenti del piracetam. Questi composti, sebbene non mostrino affinità negli studi di legame per i più importanti recettori o canali centrali, sono in grado di prevenire l'amnesia indotta dalla modulazione di diversi sistemi di neurotrasmissione. Questi composti sono in grado di aumentare il rilascio di acetilcolina dalla corteccia cerebrale di ratto e, per quanto riguarda l'unifiram, di aumentare l'ampiezza di fEPSP in fettine di ippocampo di ratto. Recettori AMPA per le proprietà di miglioramento della cognizione di unifiram e sunifiram.
[Analisi GC-MS degli oli essenziali di Radix Angelicae Pubescentis].Per analizzare i costituenti degli oli essenziali di Radix Angelicae Pubescentis piantati in un GAP base dei materiali medici cinesi e fornisce la base scientifica per il controllo di qualità. Gli oli essenziali sono stati estratti mediante distillazione acqua-vapore e separati mediante cromatografia su colonna capillare GC. I componenti sono stati calcolati con il metodo di normalizzazione e sono stati identificati mediante rivelatore MS. Sono stati rilevati 229 picchi, tra i quali sono stati identificati 8 composti, che costituivano il 78,23% dell'olio essenziale totale. Negli oli essenziali totali di Radix Angelicae Pubescentis, 3-carene (8,89%), m-cimene (4,99%) e beta -fellandrene (8,35%) come monoterpeni e suoi derivati, ed eudesma-4 (14), 11-diene (4,36%), alfa-selinene (1,36%), ledol (1,14%), alfa-bisabololo (6,03%) , e 1, 8-dimetil-4-(1-metiletil)-spiro[4.5]dec-8-en-7-one (4,37%) come sesquiterpeni e suoi der ivative, sono i componenti principali.
Effetti citotossici di BADGE (bisfenolo A diglicidil etere) e BFDGE (bisfenolo F diglicidil etere) sulle cellule Caco-2 in vitro.Bisfenolo A diglicidile etere (BADGE) e bisfenolo F diglicidil etere (BFDGE) sono utilizzati come sostanze di partenza per la produzione di resine epossidiche utilizzate nei rivestimenti interni di lattine, ottenute per reazione di condensazione tra epicloridrina con bisfenolo A e bisfenolo F, rispettivamente. Questi potenziali endocrini sostanze chimiche interferenti sono in grado di entrare nella catena alimentare e raggiungere l'epitelio intestinale, causando danni strutturali e funzionali. La linea cellulare di adenocarcinoma colorettale umano Caco-2 è un modello in vitro ampiamente utilizzato delle cellule intestinali. Lo scopo di questo studio era di caratterizzare la tossicità di BADGE e BFDGE nelle cellule Caco-2, in particolare, a livello cellulare e molecolare. Utilizzando diversi approcci, abbiamo caratterizzato la tossicità cellulare indotta da BADGE e BFDGE nelle cellule Caco-2. Il trattamento è stato effettuato utilizzando d diverse concentrazioni fino a dosi citotossiche e diversi tempi di esposizione agli agenti. Abbiamo valutato l'effetto di questi composti sulla morfologia cellulare, il distacco cellulare, la proliferazione cellulare, la distruzione dell'F-actina e l'integrità della membrana plasmatica. Entrambi i composti sono in grado di indurre alterazioni morfologiche, distacco cellulare dal substrato e di inibire la proliferazione cellulare, essendo questi effetti tempo e dose dipendenti. Inoltre, BADGE e BFDGE inducono la depolimerizzazione dell'F-actina, questo effetto è molto potente a 24 ore di incubazione con gli agenti e si può osservare una completa distruzione dell'F-actina a 200 microM di BADGE o BFDGE. Inoltre, l'integrità cellulare non viene danneggiata, poiché né l'assorbimento di ioduro di propidio né il rilascio di LDH avvengono nelle cellule Caco-2 esposte ad alte dosi di questi agenti per 24 ore.
Itraconazolo, gemfibrozil e la loro combinazione aumentano notevolmente le concentrazioni plasmatiche di loperamide.La laperamide è biotrasformata in vitro dai citocromi P450 (CYP) 2C8 e 3A4 ed è un substrato del trasportatore di efflusso della glicoproteina P. Il nostro obiettivo era studiare gli effetti dell'itraconazolo, un inibitore del CYP3A4 e della glicoproteina P, e del gemfibrozil, un inibitore del CYP2C8, sulla farmacocinetica della loperamide. In uno studio crossover randomizzato con 4 fasi, 12 volontari sani hanno assunto 100 mg di itraconazolo (prima dose 200 mg), 600 mg di gemfibrozil, sia itraconazolo che gemfibrozil, o placebo, due volte al giorno per 5 giorni. Il giorno 3, hanno ingerito una dose singola di 4 mg di loperamide Le concentrazioni di loperamide e N-desmetilloperamide nel plasma sono state misurate fino a 72 ore e nelle urine fino a 48 ore. I possibili effetti della loperamide sul sistema nervoso centrale sono stati valutati mediante il Digit Symbol Substitution Test e la sonnolenza soggettiva. istato il picco di concentrazione plasmatica di loperamide (Cmax) 2,9 volte (intervallo 1,2-5,0; P < 0,001) e l'area totale sotto la curva concentrazione-tempo della loperamide plasmatica (AUC(0-infinito)) 3,8 volte (1,4-6,6; P < 0,001) e prolungato l'emivita di eliminazione (t(1/ 2)) di loperamide da 11,9 a 18,7 h (P < 0,001). Gemfibrozil ha aumentato la Cmax della loperamide di 1,6 volte (0,9-3,2; P < 0,05) e la sua AUC(0-infinito) di 2,2 volte (1,0-3,7; P < 0,05) e ne ha prolungato il t(1/2) a 16,7 ore (P < 0,01). La combinazione di itraconazolo e gemfibrozil ha aumentato la Cmax della loperamide di 4,2 volte (1,5-8,7; P < 0,001) e la sua AUC(0-infinito) di 12,6 volte (4,3-21,8; P < 0,001) e ha prolungato il t( 1/2) di loperamide a 36,9 h (P < 0,001). La quantità di loperamide escreta nelle urine entro 48 ore è stata aumentata di 3,0 volte, 1,4 volte e 5,3 volte da itraconazolo, gemfibrozil e dalla loro combinazione, rispettivamente (P < 0,05). Itraconazolo, gemfibrozil e la loro combinazione hanno ridotto il rapporto plasmatico AUC(0-72) di N-desmetilloperamide a loperamide rispettivamente del 65%, 46% e 88% (P < 0,001). Non sono state osservate differenze significative nel test di sostituzione del simbolo delle cifre o sonnolenza soggettiva tra le fasi. Itraconazolo, gemfibrozil e la loro combinazione aumentano notevolmente le concentrazioni plasmatiche di loperamide. Sebbene non sia stato riscontrato nei test psicomotori utilizzati, durante l'uso concomitante di loperamide con itraconazolo, gemfibrozil e soprattutto la loro combinazione deve essere considerato un aumento del rischio di effetti avversi.
Monomeri lattidi funzionali: metodologia e polimerizzazione.Analoghi lattidi funzionalizzati a catena laterale sono stati sintetizzati da amminoacidi disponibili in commercio e polimerizzati utilizzando ottoato stannoso come un catalizzatore. La strategia sintetica presentata consente l'incorporazione di qualsiasi amminoacido protetto per la preparazione di monomeri lattidi diastereomericamente puri funzionalizzati. I monomeri ciclici funzionalizzati risultanti possono essere omopolimerizzati e copolimerizzati con lattidi e quindi deprotetti quantitativamente formando nuovi poli(lattidi) funzionali. materiali basati su questa strategia. Questa strategia consente l'introduzione di gruppi funzionali lungo una dorsale di poli(lattide) (PLA) che dopo la deprotezione possono essere visti come maniglie chimiche per un'ulteriore funzionalizzazione del PLA, producendo biomateriali migliorati per una varietà di applicazioni.
Inibizione della biosintesi degli acidi grassi del Plasmodium falciparum: valutazione di FabG, FabZ e FabI come bersagli farmacologici per i flavonoidi.Dopo la scoperta di un potente glucoside flavonoide come potente inibitore di FabI, un'ampia libreria di flavonoidi è stata esaminata contro tre importanti enzimi (cioè FabG, FabZ e FabI) coinvolti nella biosintesi degli acidi grassi di P. falciparum. Anche se i flavoni con un semplice pattern di idrossilazione (composti 4 -9) hanno mostrato una moderata attività inibitoria verso gli enzimi testati (IC50 10-100 microM), i flavonoidi più complessi (12-16) hanno mostrato una forte attività verso tutti e tre gli enzimi (IC50 0,5-8 microM). Gli isoflavonoidi 26-28 hanno mostrato moderata ( IC50 7-30 microM) ma attività selettiva contro FabZ. I composti più attivi erano esteri dell'acido gallico C-3 delle catechine (32, 33, 37, 38), che sono forti inibitori di tutti e tre gli enzimi (IC50 0,2-1,1 microM) Analisi cinetica utilizzando luteolina (12) e (-)-catechina gallato (37) come m odel composti hanno rivelato che FabG è stato inibito in modo non competitivo. FabZ è stato inibito in modo competitivo, mentre entrambi i composti si sono comportati come inibitori non competitivi di FabI a legame stretto. Inoltre, questi polifenoli hanno mostrato attività in vitro contro ceppi di P. falciparum sensibili alla clorochina (NF54) e -resistenti (K1) nell'intervallo da basso a submicromolare.
Analisi autoradiografica dei recettori B1 e B2 del cervello di topo dopo trauma cranico chiuso e capacità di Anatibant mesilato di attraversare la barriera emato-encefalica.Il potente antagonista del recettore (R) non peptidico B2, Anatibant mesilato (Ms) (LF 16-0687 Ms), riduce l'edema cerebrale e migliora il recupero della funzione neurologica in vari modelli focali e diffusi di lesione cerebrale traumatica nei roditori. di chinina B1 e B2R dopo trauma cranico chiuso (CHT) e le proprietà di legame in vivo di Anatibant Ms (3 mg/kg, sc) iniettato 30 min dopo CHT sono state studiate nei topi mediante autoradiografia utilizzando i radioleganti [125I]HPP-Hoe 140 ( B2R) e [125I]HPP-des-Arg10-Hoe 140 (B1R). Mentre B1R è appena rilevato nella maggior parte delle regioni del cervello, B2R è ampiamente distribuito, mostrando le densità più elevate nel romboencefalo. CHT è stato associato a un leggero aumento di B1R e una diminuzione di B2R (10-50%) in diverse regioni del cervello Anatibant Ms (Ki = 22 pM) ha spostato il radioligando B2R dai suoi siti di legame in diverse aree del proencefalo, dei gangli della base e del romboencefalo. Lo spostamento è stato raggiunto in 1 ora e persisteva a 4 ore dopo l'iniezione. L'inibizione non ha superato il 50% del legame specifico totale nei topi non feriti. Dopo CHT, lo spostamento di Anatibant Ms era più alto e quasi completo nella corteccia, nel putamen caudato, nel talamo, nell'ippocampo, nel nucleo genicolato mediale, nell'area tegmentale ventrale e nel rafe. Lo stravaso blu di Evans nel tessuto cerebrale a 4 ore dopo che CHT è stato abolito da Anatibant Ms. È apparso che Anatibant Ms è penetrato nel cervello in quantità sufficienti, in particolare dopo l'interruzione della barriera emato-encefalica, per spiegare il suo neuro- e effetti protettivi vascolari. Il ridotto legame di B2R dopo CHT può riflettere l'occupazione o l'internalizzazione di B2R in seguito alla produzione endogena di bradichinina (BK).
L'etere noladino agisce sui recettori dei cannabinoidi a rete trabecolare (CB1) per migliorare la facilità di deflusso dell'umore acqueo.Per studiare gli effetti del 2-arachidonil gliceril etere ( noladin ether), un ligando endocannabinoide selettivo per il recettore dei cannabinoidi (CB)1, sulla struttura di deflusso dell'umore acqueo, per studiare il coinvolgimento dei recettori CB1 del trabecolato e della via di segnalazione della chinasi p42/44 MAP e per esplorare i meccanismi cellulari di noladin ether- modificazioni indotte della struttura di deflusso. Gli effetti dell'etere noladina sulla struttura di deflusso dell'umore acqueo sono stati misurati in un modello di coltura di organi suini perfusi nel segmento anteriore. L'espressione dei recettori CB1 su cellule di reticolo trabecolare suino in coltura e l'accoppiamento di questi recettori a p42/ 44 La MAP chinasi è stata determinata mediante microscopia a immunofluorescenza e analisi Western blot. Sia il Western blot che la zimografia sono stati utilizzati per monitorare gli effetti dell'etere noladina sulla metalloproteinasi di matrice (MMP)-2. n studi morfologici, è stata utilizzata la colorazione della falloidina marcata con AlexaFluor 488 per esaminare il filamento di actina e l'immunoistochimica con anticorpi anti-paxillina è stata utilizzata per rilevare le aderenze focali. Entro 1 ora dall'aggiunta di 3, 30 o 300 nM di noladin etere, l'impianto di deflusso dell'umore acqueo aumentava la concentrazione in modo dipendente. L'effetto di 30 nM di noladin ether è stato completamente bloccato da SR141716A, un antagonista selettivo CB1. Segnali positivi sono stati rilevati su cellule del reticolo trabecolare suino in coltura con un anticorpo anti-CB1 in microscopia a immunofluorescenza e studi Western blot. Il trattamento delle cellule del trabecolato con 30 nM di noladina etere ha attivato la chinasi p42/44 MAP, mentre il pretrattamento con SR141716A ha bloccato gli effetti di attivazione della chinasi p42/44 dell'etere noladina. Inoltre, il potenziamento della funzione di deflusso indotto dall'etere noladina è stato bloccato dal pretrattamento dei segmenti anteriori suini con PD98059, un inibitore della via della chinasi p42/44 MAP. Inoltre, il trattamento con noladin etere ha causato l'arrotondamento delle cellule del reticolo trabecolare e si è verificata una diminuzione delle fibre di stress dell'actina, nonché una diminuzione delle aderenze focali. Questi cambiamenti morfologici indotti dall'etere di noladina sono stati bloccati anche da SR141716A e PD98059. I risultati dimostrano per la prima volta che la somministrazione di noladin ether, un agonista endocannabinoide selettivo per il recettore CB1, aumenta la facilità di deflusso dell'umore acqueo. I dati mostrano anche che il potenziamento della struttura di deflusso indotto dall'etere noladina è mediato attraverso il recettore CB1 del trabecolato, con un coinvolgimento della via di segnalazione della chinasi p42/44 MAP e cambiamenti nei citoscheletri di actina.
Cambiamenti mediati dal recettore dei cannabinoidi CB1 delle proprietà cellulari del trabecolato.Valutare i ruoli dei recettori dei cannabinoidi CB1 nelle funzioni cellulari del reticolo trabecolare (TM) cellule, tra cui migrazione cellulare, adesione, morfologia e cambiamenti del citoscheletro Noladin ether, un agonista selettivo del recettore CB1 e SR141716A, un antagonista selettivo del recettore CB1, sono stati utilizzati per caratterizzare le funzioni cellulari delle cellule TM suini in coltura. sono stati condotti saggi (FATIMA) per studiare la migrazione delle cellule TM utilizzando la fibronectina solubile come chemiotattico. Sono stati utilizzati saggi di guarigione delle ferite per studiare ulteriormente la migrazione delle cellule TM. Saggi standard di adesione cellulare delle cellule TM sono stati eseguiti su piastre rivestite di fibronectina. Negli studi morfologici, Alexafluor La colorazione della falloidina marcata con 488 è stata utilizzata per esaminare i filamenti di actina e l'immunocitochimica con anticorpi anti-paxillina è stata utilizzata per rilevare l'adesione focale ns. Nei saggi di migrazione cellulare, l'agonista CB1 della noladina etere a intervalli nanomolari ha portato a un'inibizione dipendente dalla concentrazione della migrazione delle cellule TM verso la fibronectina solubile. L'antagonista CB1 SR141716A ha antagonizzato l'inibizione della migrazione delle cellule TM indotta da etere di noladina. Inoltre, l'etere di noladina ha causato un ritardo nella guarigione delle ferite dei monostrati confluenti del reticolo trabecolare e questo effetto dell'etere di noladina è stato antagonizzato da SR141716A. Nei saggi di adesione cellulare, il trattamento con noladin etere ha portato a una moderata, ma significativa diminuzione dell'adesione delle cellule TM alla superficie rivestita di fibronectina. Questo effetto dell'etere di noladina era dipendente dalla concentrazione ed era antagonizzato da SR141716A. Negli studi morfologici, il trattamento con noladin etere ha causato l'arrotondamento delle cellule TM in contrasto con le cellule TM di controllo ben diffuse. Inoltre, si è verificata una riduzione e frammentazione delle fibre di stress dell'actina colorate con falloidina marcata con Alexafluor 488 e una diminuzione delle aderenze focali rilevate con un anticorpo anti-paxillina. Noladin ether modula la migrazione, l'adesione, la morfologia e il citoscheletro di actina delle cellule TM. Questi effetti dell'etere noladina sono mediati dai recettori cannabinoidi CB1 delle cellule TM.
Caratterizzazione della proteina 4 glicosiltransferasi/aciltransferasi legante la penicillina di Listeria monocytogenes.Le proteine multimodulari leganti la penicillina (PBP) sono enzimi essenziali responsabili di assemblaggio del peptidoglicano (PG) della parete cellulare batterica La loro attività glicosiltransferasica catalizza l'allungamento della catena glicanica dal substrato lipidico II (undecaprenil-pirofosforil-N-acetilglucosamina-N-acetilmuramico acido-pentapeptide) e la loro attività transpeptidasica catalizza il cross-linking tra i peptidi trasportati da due catene di glicani adiacenti Listeria monocytogenes è un patogeno di origine alimentare che esercita la sua virulenza attraverso fattori di virulenza secreti e associati alla parete cellulare PG. Questo batterio ha cinque PBP, tra cui due PBP di classe A glicosiltransferasi/transpeptidasi bifunzionali, vale a dire, PBP1 e PBP4. hanno espresso e purificato quest'ultimo e hanno dimostrato che lega la penicillina e catalizza in vitro la polimerizzazione della catena glicanica wi th un'efficienza di 1.400 M(-1) s(-1) dal substrato di Escherichia coli lipide II. PBP4 catalizza anche l'aminolisi (d-Ala come accettore) e l'idrolisi del substrato donatore tiolestere benzoil-Gly-thioglycolate, indicando che PBP4 possiede sia attività transpeptidasi che carbossipeptidasi. L'interruzione del gene lmo2229 che codifica per PBP4 in L. monocytogenes EGD non ha avuto alcun effetto significativo sul tasso di crescita, sulla composizione del peptidoglicano, sulla morfologia cellulare o sulla sensibilità agli antibiotici beta-lattamici, ma ha aumentato la resistenza del mutante alla moenomicina.