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Gli alcaloidi ossindolici di Uncaria tomentosa inducono l'apoptosi nelle cellule di leucemia linfoblastica acuta proliferanti, G0/G1-arrestate ed esprimenti bcl-2.I prodotti naturali sono ancora una fonte non sfruttata di promettenti composti guida per la generazione di farmaci antineoplastici. Qui, abbiamo studiato per la prima volta gli effetti antiproliferativi e apoptotici di alcaloidi ossindolici altamente purificati, vale a dire isopteropodine (A1), pteropodine (A2), isomitrafillina (A3), uncarina F (A4) e mitrafillina (A5) ottenute da Uncaria tomentosa, una Rubiaceae sudamericana, su cellule T di leucemia linfoblastica umana (CCRF-CEM-C7H2). Quattro dei cinque alcaloidi testati hanno inibito la proliferazione delle cellule di leucemia linfoblastica acuta. Inoltre, l'effetto antiproliferativo dei più potenti alcaloidi pteropodine (A2) e F uncarina (A4) era correlato con l'induzione dell'apoptosi Dopo 48 h, 100 micromol/l A2 o A4 aumentavano le cellule apoptotiche del 57%. Sublinee CEM-C7H2 con t L'espressione regolata dall'etraciclina di bcl-2, p16ink4A o che esprime costitutivamente la proteina crm-A del virus del vaiolo bovino è stata utilizzata per ulteriori studi sulle proprietà di induzione dell'apoptosi di questi alcaloidi. Né la sovraespressione di bcl-2 o crm-A né l'arresto del ciclo cellulare nella fase G0/G1 da parte dell'espressione regolata dalla tetraciclina di p16INK4A potrebbero prevenire l'apoptosi indotta da alcaloidi. I nostri risultati mostrano i forti effetti apoptotici di pteropodine e F uncarina sui linfoblasti leucemici acuti e raccomandano gli alcaloidi per ulteriori studi in modelli di xenotrapianto.
Gli effetti degli antiossidanti esogeni sulla durata della vita e sulla resistenza allo stress ossidativo in Drosophila melanogaster.Abbiamo usato il moscerino della frutta Drosophila melanogaster per testare gli effetti dell'alimentazione del I farmaci mimetici della superossido dismutasi (SOD) Euk-8 e -134 e il mitochinone mirato ai mitocondri (MitoQ) sulla durata della vita e sulla resistenza allo stress ossidativo di mosche di tipo selvatico e carenti di SOD I nostri risultati confermano i risultati di altri lavoratori che l'antiossidante esogeno può salvare patologia associata a difese compromesse allo stress ossidativo, ma non riescono a prolungare la durata della vita degli animali normali di tipo selvatico. Tutti e tre i farmaci hanno mostrato un aumento dose-dipendente della tossicità nelle mosche di tipo selvatico, un effetto che è stato esacerbato in presenza del redox- ciclismo paraquat farmaco Tuttavia, risultati importanti di questo studio sono stati che nelle mosche carenti di SOD, dove i farmaci antiossidanti hanno aumentato la durata della vita, gli effetti erano specifici del sesso e, per entrambi i sessi, gli effetti erano anche o variabile a seconda di (1) lo stadio di sviluppo da cui sono stati somministrati i farmaci e (2) l'entità della dose. Questi risultati pongono vincoli significativi al ruolo dello stress ossidativo nel normale invecchiamento.
Effetti neuroprotettivi dei tè verdi e neri e dei loro esteri di catechina gallato contro la tossicità indotta dalla beta-amiloide.I tè rappresentano una grande famiglia di piante che contengono quantità di polifenoli che possono conferire benefici alla salute in varie malattie. Recentemente, è stato ipotizzato che il consumo di tè possa anche ridurre il rischio di patologie neurodegenerative legate all'età. Considerato il ruolo deleterio della beta-amiloide (Abeta) nell'eziologia dell'Alzheimer\ 's (AD), abbiamo studiato estratti di tè verde e nero e flavan-3-oli (presenti come monomeri e dimeri nelle forme verde e nera, rispettivamente) contro la tossicità indotta da peptidi derivati dall'Abeta utilizzando colture primarie di cellule ippocampali di ratto come modello Sia gli estratti di tè verde che quello nero (5-25 microg/mL) hanno mostrato un'azione neuroprotettiva contro la tossicità dell'Abeta. Questi effetti sono stati condivisi da acido gallico (1-20 microm), epicatechina gallato (ECG; 1-20 microM) e epigallocatechina gall mangiato (EGCG; 1-10 microM), il primo è il più potente flavan-3-olo. Al contrario, epicatechina ed epigallocatechina erano inefficaci nella stessa gamma di concentrazioni. Inoltre, solo gli esteri del flavan-3-ol gallato del tè (cioè ECG, EGCG) e l'acido gallico hanno inibito gli eventi apoptotici indotti da Abeta (25-35). È interessante notare che l'EGCG e l'acido gallico hanno inibito l'aggregazione di Abeta e/o la formazione di ligandi diffusibili di neurotossina derivati da Abeta. Presi insieme, questi risultati indicano che i gallati di catechina (attraverso la parte galloilica) contribuiscono agli effetti neuroprotettivi dei tè verdi e neri. Inoltre, è probabile che l'effetto protettivo dell'EGCG sia associato, almeno in parte, alla sua azione inibitoria sulla formazione di fibrille/oligomeri di Abeta. Questi dati supportano anche l'ipotesi che non solo i tè verdi ma anche quelli neri possano ridurre le malattie neurodegenerative legate all'età, come l'AD.
Distribuzione tissutale di loperamide e N-desmetilloperamide a seguito di un sovradosaggio fatale.Segnaliamo un caso di intossicazione fatale con loperamide (Imodium). La loperamide è un oppioide sintetico della classe della fenil piperidina utilizzato come antidiarroico da banco. Esplica i suoi effetti attraverso l'interazione con i recettori dei micro-oppiacei nell'intestino per ridurre la peristalsi. La loperamide manca dei tipici effetti euforici dell'oppio quando somministrata alle dosi raccomandate. Entrambi loperamide e il suo principale metabolita, N-desmetilloperamide, sono stati isolati mediante estrazione liquido-liquido in n-butil cloruro da campioni alcalinizzati Gli estratti sono stati analizzati mediante cromatografia liquida-electrospray-spettrometria di massa in modalità di monitoraggio ionico selezionato. Separazione rapida del farmaco , metabolita e standard interno (difenossilato) è stato ottenuto utilizzando una colonna C18 ad alta risoluzione con diametro delle particelle di 1,8 micron. La fase mobile era costituita da acido formico allo 0,1% in deioni acqua gassata (60%) e acetonitrile (40%) ad una portata di 0,5 mL/min. Le concentrazioni ematiche nel cuore della loperamide e del suo metabolita erano rispettivamente di 1,2 mg/L e 3,3 mg/L. Al contrario, le concentrazioni plasmatiche di picco di loperamide riportate dopo la somministrazione delle dosi giornaliere raccomandate di 16 mg non hanno superato 0,012 mg/L negli studi controllati. Poiché la concentrazione di etanolo nel sangue del cuore era di 0,08 g/dL, il medico legale ha stabilito che la causa della morte era l'intossicazione da loperamide e etanolo e la modalità di morte non era determinata.
Upregulation del recettore cannabinoide-1 dell'ippocampo in caso di deficit del recettore dell'endotelina-B: un effetto di sostituzione neuroprotettiva?I recettori dell'endotelina (ETB) mediano azioni anti-apoptotiche La mancanza di recettori ETB funzionali porta ad un aumento dell'apoptosi neuronale nell'ippocampo. L'aumento dell'apoptosi deve essere compensato da altri meccanismi, tuttavia, poiché i ratti con deficit di ETB mostrano una normale morfologia cerebrale complessiva. Per illuminare la plasticità cerebrale nella carenza di recettori ETB, abbiamo studiato l'espressione e la funzione di un altro sistema neuroprotettivo, i recettori cannabinoidi CB1, nell'ippocampo carente di ETB. Mostriamo che l'espressione di CB1 nell'ippocampo aumenta dopo la nascita in tutti i ratti, ma che l'aumento dell'espressione del recettore CB1 è significativamente più alto in ETB- carente rispetto ai compagni di cucciolata di tipo selvatico L'apoptosi neuronale diminuisce durante la maturazione del cervello ma rimane a un livello significativamente più alto nei pazienti con carenza di ETB rispetto ai dentati di tipo selvatico. Quando abbiamo studiato la sopravvivenza dei neuroni dell'ippocampo in coltura, abbiamo trovato una protezione significativa contro la morte cellulare indotta dall'ipossia con analoghi CB1 (noladina, (9-tetraidrocannabinolo) solo nei neuroni carenti di ETB. Suggeriamo che la sovraregolazione del recettore CB1 nell'ippocampo mutante ETB rifletta un tentativo di compensare la mancanza di recettori ETB.
Un database normativo PET 18F-MPPF del legame del recettore 5-HT1A in uomini e donne in età avanzata.Gli studi di imaging di neurotrasmissione richiedono dati normativi per la statistica valutazione delle disfunzioni neurofisiologiche.2\'-metossifenil-(N-2\'-piridinil)-p-18F-fluoro-benzamidoetilpiperazina (18F-MPPF) è un tracciante PET antagonista specifico della serotonina 5-HT1A recentemente caratterizzato, modellato e utilizzato per la ricerca clinica per esplorare le anomalie nel sistema serotoninergico. Il nostro studio riporta, a nostra conoscenza, il primo grande database di imaging normativo del potenziale di legame 18F-MPPF (BP) durante l'invecchiamento, sia per i maschi che per le femmine. Cinquantatre volontari sani (27 femmine, 26 maschi; età, 20-70 anni) sono stati selezionati per essere sottoposti a risonanza magnetica strutturale e PET dinamico multiframe 18F-MPPF a iniezione singola. I valori di PA 18F-MPPF sono stati calcolati utilizzando un metodo di modellazione non lineare con riferimento tissutale. La valutazione statistica del l'effetto dell'età e del sesso è stato eseguito su entrambi a livello di struttura anatomica, utilizzando regioni di interesse disegnate manualmente su singole immagini RM, ea livello di voxel, utilizzando immagini parametriche normalizzate della PA in diversi modelli di mappatura parametrica statistica. Una correlazione lineare negativa tra età e legame 18F-MPPF (diminuzione del 3,6% per decade) è stata trovata nelle femmine ma non nei maschi e ha coinvolto la maggior parte delle regioni limbiche e paralimbiche; d'altra parte, i maschi di 30 anni hanno mostrato un legame ridotto nella maggior parte delle regioni cerebrali. Un confronto tra maschi e femmine ha rivelato valori di PA più elevati indipendentemente dall'età nelle femmine nell'emisfero destro e una diversa evoluzione della PA nel corso dell'invecchiamento. Questi risultati confermano la necessità di un database per ulteriori analisi statistiche in individui o gruppi con patologia.
Aumento della disponibilità del recettore della serotonina nel sonno umano: prove da uno studio [18F]MPPF PET sulla narcolessia.Dati da studi sugli animali suggeriscono che il rilascio di serotonina favorisce veglia e sopprime il sonno REM, ma ci sono pericoli nell'estrapolare questi risultati agli esseri umani. Il legame del radioligando [18F]MPPF ai recettori 5HT1A è sensibile ai livelli di serotonina endogena. In questo studio, abbiamo mirato a dimostrare i cambiamenti nella disponibilità del recettore della serotonina in il cervello umano in veglia e nel sonno utilizzando [18F]MPPF e tomografia a emissione di positroni. 14 soggetti con cataplessia narcolessia sono stati sottoposti a scansioni PET con [18F]MPPF in veglia e nel sonno. I soggetti che hanno utilizzato lo stimolante metilfenidato hanno assunto i normali farmaci per la scansione della veglia ma omesso prima della scansione del sonno. La variazione del potenziale di legame (BP) tra le scansioni del sonno e della veglia è stata esaminata utilizzando il test t accoppiato. Si ritiene che il metilfenidato abbia un effetto scarso o nullo sulla serotonina neurotrasmissione ergica, e al fine di confermare l'assenza di un effetto sul legame [18F]MPPF, è stato condotto uno studio simultaneo utilizzando una tecnica di microsonda beta per esaminare l'effetto della somministrazione di metilfenidato sul legame [18F]MPPF nei ratti Sprague-Dawley. Lo studio sull'uomo ha mostrato un aumento significativo del legame [18F]MPPF nel sonno rispetto alla veglia nell'intero cervello e in tutte le regioni di interesse esaminate (corteccia temporale, regione temporale mesiale e corteccia cingolata). Lo studio sulla beta-microsonda ha confermato che la somministrazione di metilfenidato non ha avuto effetto sul legame del [18F]MPPF. Questi risultati indicano che la disponibilità del recettore della serotonina è aumentata nel sonno rispetto alla veglia negli esseri umani narcolettici.
Meccanismo molecolare dell'antagonismo non competitivo del recettore AMPA.I recettori del glutammato di tipo AMPA sono specificamente inibiti dagli antagonisti non competitivi GYKI-53655 e CP-465.022, che agire attraverso siti e meccanismi che non sono comprese. Usando recettore mutagenesi, abbiamo scoperto che questi antagonisti legano all'interfaccia tra S1 e S2 glutammato vincolante campi specifici e transmembrana canale, specificamente interagendo con S1-M1 e S2-M4 linker, interrompendo la trasduzione del legame dell'agonista nell'apertura del canale. Abbiamo anche scoperto che l'affinità degli antagonisti \' è maggiore per i recettori non legati all'agonista rispetto ai recettori non desensibilizzati attivati, ulteriormente a seconda del livello di chiusura del dominio S1 e S2. Questi risultati forniscono evidenza di una sostanziale conformazione cambiamenti nei linker S1-M1 e S2-M4 in seguito al legame dell'agonista e all'apertura del canale, offrendo una cornice concettuale per spiegare l'antagonismo non competitivo dell'AMP Un recettore.
Effetto degli aumenti indotti dalla fenfluramina nel rilascio di serotonina sul legame del [18F]MPPF: uno studio PET ad infusione continua in scimmie coscienti.[(18) F]MPPF è un antagonista selettivo e reversibile del recettore della serotonina-1A (5-HT(1A)). Lo scopo del presente studio era di indagare se il legame di [(18)F]MPPF fosse sensibile all'aumento di 5 Livelli di -HT. Abbiamo utilizzato l'agente di rilascio 5-HT e l'inibitore della ricaptazione fenfluramina (FEN) per aumentare la concentrazione di 5-HT. Il legame del [(18)F]MPPF è stato valutato utilizzando la tomografia a emissione di positroni (PET) in scimmie coscienti. Possibile gli effetti del flusso sanguigno sul legame del ligando sono stati esclusi utilizzando un paradigma bolo-infusione Sono state ottenute scansioni di controllo per valutare lo stato di equilibrio del ligando. FEN (5 o 10 mg/kg, iv) è stato somministrato tra 90 e 130 min dopo l'inizio dell'infusione di [(18)F]MPPF. Il potenziale di legame (PA) è stato calcolato per un intervallo precoce (30 min prima della somministrazione di FEN) e per un intervallo (20-50 min dopo la somministrazione di FEN). I risultati della microdialisi hanno mostrato un aumento di 20 e 35 volte dei livelli extracellulari di 5-HT nella corteccia prefrontale dopo l'iniezione di FEN alla dose di 5 mg/kg e 10 mg/kg rispettivamente. Tuttavia, nonostante questi grandi aumenti dei livelli di 5-HT, non sono state riscontrate differenze di PA tra le scansioni di controllo e FEN. Questi risultati possono implicare che la maggior parte dei recettori 5-HT(1A) si trova in uno stato di bassa affinità nel cervello vivente.
Il blocco combinato dei recettori AMPA e NMDA del glutammato riduce le complicanze motorie indotte dalla levodopa in modelli animali di PD.Recettori AMPA e NMDA, abbondantemente espressi sullo striato neuroni spinosi medi, sono stati implicati nella regolazione dell'efficacia sinaptica corticostriatale Per valutare il contributo di entrambi i tipi di recettori del glutammato alla patogenesi delle alterazioni della risposta motoria associate al trattamento dopaminergico, abbiamo studiato la capacità dell'antagonista selettivo del recettore AMPA GYKI-47261 e gli antagonisti selettivi del recettore NMDA, MK-801 e amantadina, per mitigare queste sindromi in modelli di roditori e primati della malattia di Parkinson. Gli effetti di GYKI-47261 e amantadina (o MK-801), da soli e in combinazione, sono stati confrontati per la loro capacità di modificare le discinesie indotte dalla levodopa. Nei ratti, la somministrazione simultanea di dosi sottosoglia di antagonisti del recettore AMPA e NMDA ha completamente normalizzato la risposta di usura. se alla levodopa acuta provocata dal trattamento cronico con levodopa (P < 0,05). Nei primati, gli antagonisti del glutammato GYKI-47261 e l'amantadina, co-somministrati a basse dosi (non riuscendo ad alterare i punteggi della discinesia), hanno ridotto le discinesie indotte dalla levodopa del 51% (P < 0,05). Il blocco simultaneo dei recettori AMPA e NMDA agisce per fornire una riduzione sostanzialmente maggiore delle alterazioni della risposta indotte dalla levodopa rispetto all'inibizione di uno solo di questi recettori. I risultati suggeriscono che i meccanismi mediati da entrambi i recettori ionotropici del glutammato danno un contributo indipendente alla patogenesi di questi cambiamenti della risposta motoria e inoltre che una combinazione di entrambi i tipi di farmaci può fornire sollievo da queste complicanze disabilitanti a dosi inferiori e quindi più sicure e più tollerabili di quelle richieste quando entrambi i farmaci vengono usati da soli.
Soppressione dell'eccitazione indotta dalla depolarizzazione nei neuroni ippocampali autaptici murini.La soppressione dell'eccitazione e dell'inibizione indotta dalla depolarizzazione (DSE e DSI) sembra essere importante forme di plasticità neuronale retrograda a breve termine che coinvolgono gli endocannabinoidi (eCB) e l'attivazione dei recettori presinaptici cannabinoidi CB1 Riportiamo qui che la DSE dipendente da CB1 può essere suscitata da colture autaptiche di neuroni ippocampali di topo eccitatori. e suscitato con uno stimolo fisiologicamente più rilevante di quanto è stato finora riportato per le colture ippocampali convenzionali. Un requisito aggiuntivo per la DSE autaptica è il riempimento delle riserve interne di calcio. Gli esperimenti farmacologici favoriscono un ruolo per il 2-arachidonil glicerolo (2-AG) piuttosto che per l'arachidonil etanolamide (AEA) o noladin ether come endocannabinoide rilevante per suscitare DSE. In particolare, questi ultimi due composti non riescono a inibire reversibilmente E PSC, una qualità incoerente con il ruolo della BCE in buona fede che media il DSE. Il delta9-tetraidrocannabinolo (delta9-THC) non riesce a inibire gli EPSC, ma occlude facilmente sia l'inibizione di DSE che di EPSC da un agonista sintetico CB1, WIN 55212-2. Con l'esposizione a lungo termine (circa 18 ore), delta9-THC desensibilizza anche i recettori CB1. Infine, è necessario un trasportatore endocannabinoide funzionale per l'espressione di DSE.
Determinazione cromatografica liquida simultanea di lamotrigina, oxcarbazepina monoidrossiderivato e felbamato nel plasma di pazienti con epilessia.È stato sviluppato un metodo molto semplice e veloce e validato per la determinazione simultanea dei farmaci antiepilettici di nuova generazione (DAE) lamotrigina (LTG), oxcarbazepina\'s (OXC) principale metabolita attivo monoidrossicarbamazepina e felbamato nel plasma di pazienti con epilessia mediante cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC) con rilevazione spettrofotometrica. Il pretrattamento del campione (500 microL) è stato basato sulla semplice deproteinizzazione mediante acetonitrile L'analisi cromatografica liquida è stata eseguita su una colonna Synergi 4 microm Hydro-RP, 150 mm x 4 mm ID, utilizzando una miscela di tampone potassio diidrogeno fosfato (50 mM, pH 4,5) e acetonitrile/metanolo (3/1) (65:35, v/v) come fase mobile, a una velocità di flusso di 1,0 mL/min. Il rivelatore UV è stato impostato a 210 nm. Le curve di calibrazione erano li vicino (coefficiente di correlazione medio >0.999 per tutti e tre gli analiti) su un intervallo di 1-20 mg/mL per lamotrigina, 2-40 microg/mL per monoidrossicarbamazepina e 10-120 microg/mL per felbamato. Sia la precisione intra che interdosaggio e l'accuratezza erano inferiori al 7,5% per tutti e tre gli analiti. I recuperi assoluti oscillavano tra il 100 e il 104%. La presente procedura descrive per la prima volta la determinazione simultanea di questi tre nuovi farmaci antiepilettici. Il semplice pretrattamento del campione, combinato con la rapida corsa cromatografica, consente una rapida elaborazione di un'ampia serie di campioni di pazienti.
Sviluppo di inibitori della farnesil transferasi: una revisione.Gli inibitori della farnesil transferasi sono una nuova classe di farmaci antitumorali biologicamente attivi. L'esatto meccanismo d'azione di questo classe di agenti è, tuttavia, attualmente sconosciuta. I farmaci inibiscono la farnesilazione di un'ampia gamma di proteine bersaglio, tra cui Ras. Si pensa che questi agenti blocchino l'attivazione di Ras attraverso l'inibizione dell'enzima farnesil transferasi, con conseguente arresto della crescita cellulare. modelli preclinici, gli inibitori della farnesil transferasi hanno mostrato una grande potenza contro le cellule tumorali, ma negli studi clinici la loro attività è stata molto inferiore a quanto previsto. Le ragioni di questo risultato clinico deludente potrebbero essere trovate nel processo di sviluppo del farmaco. algoritmo potenzialmente utile per lo sviluppo di farmaci antitumorali biologicamente attivi Lo sviluppo di inibitori della farnesil transferasi, dalla scoperta agli studi clinici, è revisione ed in base a questo algoritmo. Abbiamo scoperto che due importanti passaggi di questo algoritmo sono stati sottovalutati. In primo luogo, la comprensione della biologia molecolare della via difettosa è stata principalmente focalizzata sull'attivazione di H-Ras, mentre l'attivazione di K-Ras o di altre proteine farnesilate è probabilmente più importante nella tumorigenesi. L'inibizione della farnesilazione potrebbe non essere sufficiente, perché la geranilgeranilazione potrebbe attivare K-Ras e sopprimere l'effetto degli inibitori della farnesil transferasi. Inoltre, non è stata raggiunta una prova di concetto ben definita negli studi preclinici e clinici. L'integrazione dell'algoritmo proposto in studi futuri su farmaci antitumorali biologicamente attivi di nuova concezione potrebbe aumentare il tasso di successo di questi composti nei pazienti.
Determinazione degli eteri di bisfenolo diglicidile in forme di dosaggio topico.Un metodo che prevede l'estrazione e il rilevamento LC-ESI-MS-MS di BADGE, BFDGE, BADGE H2O, BADGE2H2O, BADGEHCl, BADGEH2OHCl, BADGE.2HCl e BFDGE2HCl in crema acquosa sono stati sviluppati e validati Inizialmente, i sistemi di chiusura di contenitori vuoti in alluminio laccato internamente sono stati estratti con isopropanolo come tentativo di stima il limite superiore degli eteri di bisfenolo diglicidile estraibili presenti nella lacca. Sei degli otto potenziali eteri di bisfenolo diglicidile sono stati quantificati. In un esperimento accelerato, su crema acquosa conservata in tubi di alluminio laccato a 70 gradi C, tutti i derivati tranne BADGE2HCl e BFDGE 2HCl sono stati estratti da campioni di crema e quantificati come un tentativo di stimare il limite superiore dei composti che lisciviano alla crema. I limiti di rilevamento erano compresi tra 0,3 +/- 0,2 e 3,4 +/- 0,7 microgl(-1). I recuperi sono stati determinati per tutti i composti a tre livelli di concentrazione (media 63+/-6%). La precisione media infragiornaliera e infragiornaliera è stata rispettivamente del 7+/-2 e del 13+/-6%. Tre creme disponibili in commercio sono state ottenute da una farmacia della comunità locale e analizzate per il bisfenolo diglicidil eteri. BADGE, BADGEH2O, BADGE2H2O e BADGEH2OHCl sono stati rilevati e quantificati. In conclusione, il metodo sviluppato consente l'estrazione e la rilevazione di bisfenolo diglicidil eteri provenienti dalla lacca epossifenolica utilizzata nei tubi di alluminio. Questo studio non indica che si lisciviano in una crema acquosa in quantità significative in normali condizioni di conservazione.
Effetti ansiogeni persistenti di dosi singole o ripetute di cocaina e metanfetamina: interazioni con ligandi endogeni dei recettori dei cannabinoidi.Come persistenti cambiamenti comportamentali, come aumento comportamenti ansiosi, possono essere previsti in base al fenomeno della plasticità neuronale indotta da psicostimolanti, l'andamento temporale (3, 5 e 10 giorni) degli effetti sia di singolo che ripetuto (giornaliero per 7 giorni) Sono state esaminate nei topi le somministrazioni ip di cocaina (COC) e metanfetamina (MA) sui sintomi comportamentali legati all'ansia nel test plus-maze elevato Inoltre, sulla base delle interazioni riportate tra i recettori cerebrali della dopamina rispetto ai cannabinoidi (CB) e il contributo Recettori CB al verificarsi di sintomi comportamentali persistenti legati all'ansia, alle interazioni dell'agonista CP 55940 (CP) e ai ligandi endogeni anandamide (arachidoniletanolamide: AEA), 2-arachidonilglicerolo (ARA), N-arachidonio Sono stati studiati anche ldopamina (NADA), noladin ether (NL) e virodhamine (VA) con i comportamenti legati all'ansia indotti da COC o MA. Sia in un esperimento acuto che utilizza una singola dose di COC (30 mg/kg) o MA (4 mg/kg) sia in un esperimento cronico che utilizza dosi ripetute di COC (15 mg/kg) o MA (2 mg/kg), correlati all'ansia i sintomi comportamentali sono stati osservati in modo simile a 3 e 5 giorni di tempo, ma sono scomparsi al punto di tempo di 10 giorni. Tra i ligandi CB, gli agonisti CP, AEA, ARA, NADA e NL hanno fornito forti effetti protettivi contro ciascun parametro a 3 e 5 giorni. Pertanto, si è concluso che sia il COC che l'MA hanno causato sintomi comportamentali persistenti legati all'ansia a seguito di trattamenti sia singoli che ripetuti. Poiché questi effetti ansiogeni sono stati attenuati dagli agonisti CB endogeni, si sospettava il coinvolgimento dei recettori CB cerebrali.
La risposta all'oscurità dei geni inducibili al buio a risposta tardiva è regolata positivamente dall'età delle foglie e regolata negativamente dalla segnalazione sensibile all'antagonista della calmodulina in Arabidopsis thaliana.L'induzione dopo oscurità prolungata distingue i geni reattivi tardivi din2 e din9 dal gene reattivo precoce din3 in Arabidopsis. I primi geni sono stati indotti in coincidenza con il gene marcatore di senescenza YLS4 in foglie di rosetta di età diverse e nel mutante di senescenza precoce hys1. Gli antagonisti della calmodulina W-7, trifluoperazina e flufenazina hanno accelerato l'espressione dei primi geni al buio ma non alla luce e hanno avuto scarso effetto su quest'ultimo gene. I nostri risultati suggeriscono che la segnalazione Ca(2+)/calmodulina trasmette un segnale negativo che sopprime le risposte dei geni din a risposta tardiva all'oscurità prolungata. I risultati sono discussi in relazione alla senescenza naturale.
La valutazione delle attività biologiche associate ai principali costituenti dell'estratto metanolo dei semi di \'carota selvatica\' (Daucus carota L).Daucus carota L. (Famiglia: Apiaceae alt. Umbelliferae), comunemente nota come \'carota selvatica\' o \'Queen Anne\'s-lace,\' è una biennale eretta ecologicamente invasiva naturalizzata in Scozia. Gli usi etnobotanici di questa specie includono applicazioni in trattamento di tosse, diarrea, dissenteria, cancro, malaria e tumori, e come antisettico, abortivo, afrodisiaco, carminativo, stimolante, stomachico e tonico. I principali costituenti isolati dall'estratto metanolo dei semi di D. carota mediante preparazione a fase inversa cromatografia delle prestazioni erano luteolina, luteolina 3\'-O-beta-D-glucopiranoside e luteolina 4\'-O-beta-D-glucopiranoside, tre flavoni. I costituenti sono stati valutati per le loro attività antibatteriche e di scavenging dei radicali liberi, nonché tossico icità nei confronti dei gamberi di salamoia. Tra questi tre flavoni, la luteolina ha mostrato il più alto grado di attività di scavenging dei radicali liberi (RC50 = 4,3 x 10(-4) mg/mL) nel test 2,2-difenil-1-picrylhydrazyl (DPPH). Sia la luteolina che il suo 4\'-O-glucoside hanno dimostrato attività battericida contro Staphylococcus aureus ed Escherichia coli (concentrazione inibitoria minima [MIC] = 5,0 x 10(-2) - 1,0 x 10(-1) mg/mL). La luteolina ha anche dimostrato attività antibatterica contro Bacillus cereus e Citrobacter freundii (MIC = 5,0 x 10(-2) mg/mL). La luteolina 3\'-O-glucoside ha mostrato attività battericida contro Bacillus cereus e Lactobacillus plantarum (MIC = 2,5 x 10(-1) mg/mL e 5 x 10(-1) mg/mL, rispettivamente). Nel test di letalità di artemia salina, il valore LD50 della luteolina era 5,3 x 10(-2) mg/mL e quello del suo 3\'-O-glucoside e 4\'-O-glucoside era > 1,0 mg/mL.
Traffico di risposta diretto da agonisti da parte degli endocannabinoidi che agiscono sui recettori CB2.Questo studio ha esaminato la capacità degli endocannabinoidi 2-arachidonoil glicerolo (2-AG ) e noladin etere nonché il cannabinoide sintetico CP-55,940 [(-)-cis-3-[2-idrossi-4-(1,1-dimetileptil)fenil]-trans-4-(3-idrossipropil)cicloesanolo] per regolare tre effettori intracellulari tramite i recettori CB2 nelle cellule ovariche di criceto cinese trasfettate Sebbene i tre agonisti regolino tutti gli effettori con efficacia equivalente, l'ordine di rango delle potenze differisce a seconda di quale effettore viene valutato. Noladin ether e CP-55,940 inibiscono più potentemente l'adenil ciclasi , che richiedono concentrazioni più elevate per stimolare il sottogruppo della chinasi extracellulare regolata dal segnale delle protein chinasi attivate da mitogeni (chinasi extracellulare regolata dal segnale-chinasi attivata da mitogeni; ERK-MAPK) e Ca(2+)-transienti. -AG attiva più potentemente ERK-MAPK, necessario tating maggiori concentrazioni per inibire l'adenil ciclasi e quantità ancora più elevate per stimolare Ca(2+)-transienti. Gli endocannabinoidi sembrano anche essere agonisti più "efficienti" dei recettori CB2 rispetto agli agonisti sintetici. Il 2-AG e l'etere di noladina richiedono l'occupazione di meno della metà del numero di recettori per produrre una regolazione comparabile dell'adenilato ciclasi e dell'ERK-MAPK, rispetto al cannabinoide sintetico CP-55,940. L'antagonista CB2 6-iodo-2-metil-1-[2-(4-morfolinil)-etil]-1H-indol-3-il](4-metossifenil)-metanone (AM630) inverte le azioni di tutti gli agonisti tranne Ca(2+)-stimolazione transitoria da 2-AG. Tuttavia, l'effetto di 2-AG sui transienti Ca(2+) è attenuato da un secondo antagonista CB2 N-[(1S)-endo-1,3,3-trimetilbiciclo[2.2.1]eptan-2-il] -5-(4-cloro-3-metilfenil)-1-(4-metilbenzil)-1-pirazolo-3-carbossammide (SR144528). Ciò suggerisce che 2-AG stimola i transitori Ca(2+) legandosi a siti sui recettori CB2 distinti da quelli occupati da AM630 e dagli altri cannabinoidi esaminati. Gli agonisti non producono effetti nelle cellule trattate con la tossina della pertosse. In sintesi, gli agonisti dei cannabinoidi si legano distintamente ai recettori CB2 e mostrano un diverso ordine di rango di potenze e occupazioni di recettori frazionari per la regolazione degli effettori intracellulari. Questi dati forniscono prove dirette del traffico di risposta diretto dagli agonisti da parte degli endocannabinoidi che agiscono sui recettori CB2.
Effetti inibitori dei gallati di catechina sull'o-metiltraduzione dell'acido protocatecuico nelle preparazioni citosoliche di fegato di ratto e negli epatociti coltivati.Flavonoidi, comprese le catechine del tè e gli esteri dell'acido gallico sono stati caratterizzati per la loro capacità di inibire la o-metiltraslazione dell'acido protocatechuico (PCA) per formare acido vanillico (VA) in preparazioni citosoliche di fegato di ratto e in colture di epatociti. Flavonoli e flavoni hanno mostrato comportamenti diversi nell'inibire la formazione di VA tra gli enzimi liberi da cellule preparati e le cellule intatte. Il meccanismo alla base degli effetti inibitori di flavonoli e flavoni sulla o-metilazione della PCA negli epatociti in coltura potrebbe non essere dovuto all'inibizione dell'attività enzimatica della catecol o-metil transferasi (COMT). o-metilazione nelle preparazioni citosoliche epatiche con potenza nettamente superiore rispetto ad altri flavonoidi Rispetto ai gallati di catechina, le catechine ungallate avevano due a tre ordini di grandezza inferiori di efficienza nell'inibire l'o-metilazione della PCA citosolica. Gli esteri dell'acido gallico hanno inibito l'o-metilazione della PCA citosolica con una forte potenza quasi uguale a quella dei gallati di catechina. Questi risultati suggeriscono che l'attività COMT-inibitrice dei gallati di catechina è derivata dalla presenza della frazione galloilica in posizione C3 nell'anello C. I gallati di catechina e gli esteri dell'acido gallico hanno inibito l'o-metilazione della PCA negli epatociti in coltura con un'efficacia di due ordini di grandezza inferiore rispetto a quella delle preparazioni citosoliche. Gli effetti inibitori dei gallati di catechina e degli esteri dell'acido gallico sulla o-metilazione della PCA cellulare sembrano essere dovuti all'inibizione diretta dell'attività COMT.
Caratterizzazione di antibiotici moenomicina da mangimi medicati per polli mediante spettrometria di massa a trappola ionica con ionizzazione elettrospray.La moenomicina antimicrobica, comunemente usata come promotore di crescita in bestiame, è stato isolato dal mangime medicato per polli. L'estratto purificato è stato sottoposto a separazione cromatografica liquida in fase inversa seguita da caratterizzazione strutturale mediante spettrometria di massa a trappola ionica (ITMS), che ha permesso l'identificazione di cinque moenomicine (A, A12, C1, C3, e C4) come i componenti principali. I modelli di frammentazione delle molecole di moenomicina protonata e deprotonata, nonché di una serie di addotti di sodio, sono stati studiati utilizzando ITMS dopo ionizzazione elettrospray. Mentre le molecole protonate [M+H]+ si sono dimostrate altamente instabili e sono stati sottoposti a un'ampia frammentazione in-source, isolamento e attivazione degli ioni [M--H]- (m/z 1580 per moenomicina-A) hanno prodotto spettri di massa semplici con un picco di base dominante corrispondente a la perdita del carbossi-glicole e della catena idrocarburica C25 (m/z 1152 per la moenomicina-A). Ulteriori studi di questo frammento di ione in un esperimento MS3 hanno dato origine a un peculiare ione prodotto (m/z 902 per la moenomicina-A) che è stato attribuito all'espulsione di una porzione di carboidrati che rappresenta un elemento costitutivo centrale della molecola lineare. In modalità ioni positivi la generazione degli ioni di addotto monosodiati, [M+Na]+, è stata promossa modificando la fase mobile con acetato di sodio 100 microM, ma ciò ha comportato anche addotti superiori del tipo [M+2Na-- H]+ e [M+3Na--2H]+ derivanti dalla formazione dei sali sodici del diestere acido fosfato e successivamente dell'acido carbossilico. Sono state osservate differenze sostanziali tra i profili di ioni prodotti ricchi di frammenti delle tre specie e potrebbero in parte essere ricondotte alla modalità di complessazione del/i catione/i di sodio aggiuntivo".
L'analisi funzionale del gene della monoossigenasi bcbot1 del citocromo P450 di Botrytis cinerea indica che il botrydial è un fattore di virulenza specifico del ceppo.Il fitopatogeno micrografico Botrytis cinerea causa malattie da muffa grigia in un gran numero di piante coltivate dicotiledoni e piante ornamentali. La colonizzazione del tessuto ospite è accompagnata da una rapida uccisione delle cellule vegetali prima del trattino in crescita, probabilmente causata dalla secrezione di fitotossine non specifiche, ad esempio il sesquiterpene botrydial. Sebbene tutti i ceppi patogeni testato finora aveva dimostrato di secernere botrydial e sebbene la tossina causi lesioni necrotiche comparabili come infezione da parte del fungo, il ruolo di botrydial nel processo di infezione non è stato ancora chiarito. Qui descriviamo la caratterizzazione funzionale di bcbot1, che codifica per un P450 monoossigenasi e forniscono prove che è coinvolto nella via botrydia, cioè rappresenta il primo gene biosintetico botrydia identifi ed. Mostriamo che bcbot1 è espresso in planta e che l'espressione in vitro e in planta è controllata da una subunità alfa di una proteina legante GTP eterotrimerica, BCG1. La delezione di bcbot1 in tre ceppi standard di B. cinerea mostra che l'effetto sulla virulenza (su diverse piante ospiti) è ceppo-dipendente; solo la delezione in uno dei ceppi (T4) ha portato a una ridotta virulenza.
Metabolismo e disposizione di un potente agonista del recettore metabotropico del glutammato di gruppo II, in ratti, cani e scimmie.Metabolismo e disposizione di MGS0028 [(1R ,2S,5S,6S)-2-ammino-6-fluoro-4-ossobiciclo[3.1.0]esano-2,6-dicarbossilico monoidrato], un potente agonista del recettore metabotropico del glutammato di gruppo II, sono stati esaminati in tre specie precliniche (ratti Sprague-Dawley, cani beagle e scimmie rhesus) Nei ratti, MGS0028 era ampiamente distribuito e principalmente escreto nelle urine come genitore e come singolo metabolita riduttivo, identificato come l'isomero 4R MGS0034 [(1R,2S,4R, Acido 5S,6S)-2-ammino-6-fluoro-4-idrossibiciclo[3.1.0]-esan-2,6-dicarbossilico] MGS0028 aveva un basso rapporto cervello-plasma a dosi efficaci nei ratti ed è stato eliminato più lentamente nel cervello di ratto che nel plasma. L'esposizione è aumentata proporzionalmente (1--10 mg/kg PO) nei ratti, con biodisponibilità>60% a tutte le dosi. Tuttavia, la biodisponibilità era solo di circa il 20% nelle scimmie e MGS 0034 è stato trovato in abbondanza relativamente alta nel plasma. Nei cani, la biodisponibilità orale era >60% e il metabolita non è stato rilevato. Il metabolismo in vitro è stato esaminato nelle frazioni subcellulari del fegato (microsomi e citosol) di ratto, cane, scimmia e uomo. Il metabolismo riduttivo è stato osservato nelle incubazioni del citosol epatico di ratto, scimmia e umano, ma non nelle incubazioni del citosol epatico di cane. Nessun metabolismo di MGS0028 è stato rilevato nelle incubazioni con microsomi epatici di alcuna specie. Simile ai risultati in vivo, MGS0028 è stato ridotto nel citosol in modo stereospecifico a MGS0034. L'ordine di classificazione della formazione del metabolita in vitro (scimmia >> ratto approssimativamente umano >> cane) era in accordo con le osservazioni in vivo su ratti, cani e scimmie. Sulla base dell'osservazione della differenza di specie nel metabolismo riduttivo, ratto e scimmia sono stati raccomandati come specie precliniche per un'ulteriore caratterizzazione prima dei test sugli esseri umani. Infine, il ridimensionamento allometrico prevede che i parametri farmacocinetici umani sarebbero accettabili per un ulteriore sviluppo.
Antociani di gelso, cianidina 3-rutinoside e cianidina 3-glucoside, hanno mostrato un effetto inibitorio sulla migrazione e sull'invasione di una linea cellulare di cancro del polmone umano.Le antocianine, presenti in vari frutti e verdure come coloranti naturali, sono state ben caratterizzate per essere coinvolte in varie proprietà bioattive e sono ampiamente utilizzate per le loro proprietà antiossidanti. Inoltre, studi recenti hanno rivelato capacità antitumorali e antiproliferative pleiotropiche dell'antocianina. L'estratto di bacche contiene elevate quantità di antociani ed è comunemente usato nella dieta o in alcune applicazioni terapeutiche. In questo studio, abbiamo osservato per la prima volta che la cianidina 3-rutinoside e la cianidina 3-glucoside (estratte da Morus alba L. ) esercitano un effetto inibitorio dose-dipendente sulla migrazione e invasione di cellule di carcinoma polmonare umano A549 altamente metastatiche in assenza di citotossicità I risultati hanno mostrato che i trattamenti con cianidina 3-glucoside e cianidina 3-rutinoside potrebbe diminuire le espressioni della matrice matalloprotinasi-2 (MMP-2) e dell'attivatore del plasminogeno dell'urochinasi (u-PA) in modo dose-dipendente e migliorare l'espressione dell'inibitore tissutale della matrice matalloprotinasi-2 (TIMP-2) e dell'attivatore del plasminogeno inibitore (PAI). Ulteriori analisi con RT-PCR semiquantitativa hanno mostrato che queste alterazioni erano tutte a livello trascrizionale. Inoltre, un trattamento con cianidina 3-rutinoside e cianidina 3-glucoside ha determinato anche un'inibizione dell'attivazione di c-Jun e NF-kappaB. Insieme, questi risultati hanno suggerito che gli antociani potrebbero ridurre l'invasività in vitro delle cellule tumorali e, quindi, potrebbero essere di grande valore nello sviluppo di una potenziale terapia antitumorale.
[Cytokine aptamers come agenti terapeutici e diagnostici].Gli aptameri sono oligonucleotidi derivati da un processo di evoluzione in vitro chiamato SELEX (Systematic Evolution of Ligands by Exponential Arricchimento). Gli aptameri che si legano specialmente ai bersagli potrebbero riconoscere e inibire la funzione dei bersagli. Usando questo metodo, sono stati trovati molti potenti antagonisti delle citochine. Affinché questi antagonisti funzionino in modelli animali di malattia e nell'uomo, è necessario modificare gli aptameri. Innanzitutto, le modificazioni 2\'-F, 2\'-NH2 e 2\'-CH3O dei nucleosidi trifosfati potrebbero prolungare l'emivita nel sangue. Gli aptameri possono essere tenuti in circolo da ore a giorni coniugando loro a veicoli di peso molecolare più elevato. Dopo aver modificato, aptameri coniugati vengono iniettati negli animali, inibiscono le funzioni fisiologiche note per essere associate alle loro citochine bersaglio. Presentando caratteristiche di legame paragonabili o addirittura migliori di tha n anticorpi monoclonali, questi ligandi possono essere utilizzati come sonde di rilevamento, inibitori altamente efficienti della funzione proteica o concorrenti specifici nei saggi di screening ad alto rendimento (HTS). Recentemente sono stati caratterizzati diversi aptameri di citochine. Alcuni di essi sono stati utilizzati come agenti diagnostici per la rilevazione di citochine bersaglio. Il primo aptamero che ha proceduto agli studi clinici di fase II è NX-1838, un inibitore dell'angiogenesi iniettabile che può essere potenzialmente utilizzato per trattare la cecità indotta dalla degenerazione maculare. Gli aptameri saranno strumenti versatili che possono migliorare notevolmente l'efficienza della moderna diagnosi e sviluppo della terapia.
Nuovi inibitori della sintasi degli acidi grassi del tè verde (Camellia sinensis Xihu Longjing) con elevata attività e un nuovo sito di reazione.Studi recenti hanno dimostrato che FAS (acido grasso sintasi) è un potenziale bersaglio terapeutico dell'obesità. Nel presente documento riportiamo che l'estratto di tè verde (Camellia sinensis Xihu Longjing) inibisce efficacemente FAS con un valore IC50 di 12,2 microg peso secco/ml. La capacità di GTE (estratto di tè verde) per inibire la FAS è più potente di quello di due noti inibitori nelle foglie di tè verde, EGCG (epigallocatechina gallato) ed ECG (epicatechina gallato). Troviamo che (-)-CG (catechina gallato) è molto potente inibitore di FAS, con un IC50 di 1,5 microg/ml, e può contribuire all'elevato effetto inibitorio di GTE su FAS. Il meccanismo inibitorio di (-)-CG non è principalmente coinvolto nel suo legame al dominio della beta-ossoacil reduttasi a cui si legano principalmente sia (-)-EGCG che (-)-ECG Mediante analisi della cinetica inibitoria e t e struttura delle catechine gallate, abbiamo scoperto che il dominio dell'acil transferasi può essere il sito principale che reagisce con (-)-CG, la struttura costituita da un anello B, un anello C e un anello gallato, che è forse essenziale per la sua inibizione efficacia. I polifenoli piuttosto che gli alcaloidi sono le principali frazioni che contribuiscono all'effetto inibitorio della GTE sulla FAS. Durante la separazione abbiamo anche scoperto che la capacità totale di questa porzione di inibire la FAS aumenta di 15 volte, e questo potrebbe essere dovuto alla formazione di un nuovo potente inibitore di FAS diverso da (-)-CG.
Piccole molecole VP-14637 e JNJ-2408068 inibiscono la fusione del virus respiratorio sinciziale con meccanismi simili.Qui presentiamo i dati sul meccanismo d'azione di VP -14637 e JNJ-2408068 (ex R-170591), due inibitori di piccole molecole del virus respiratorio sinciziale (RSV). Entrambi gli inibitori hanno mostrato una potente attività antivirale con concentrazioni efficaci del 50% (EC50) rispettivamente di 1,4 e 2,1 nM. effetto inibitorio è stato osservato in un test di fusione cellulare mediato da RSV (EC50=5.4 e 0,9 nM, rispettivamente). Diverse varianti di RSV resistenti ai farmaci sono state selezionate in vitro in presenza di ciascun composto. Tutti i virus selezionati hanno mostrato una resistenza crociata significativa ad entrambi gli inibitori e conteneva varie sostituzioni di singoli amminoacidi in due regioni distinte della proteina F virale, la ripetizione eptade 2 (HR2; mutazioni D486N, E487D e F488Y) e il dominio intermedio tra HR1 e HR2 (mutazione K399I e T400A) Studi che utilizzano [3H]VP-14637 rev ha ottenuto un legame specifico del composto alle cellule infette da RSV che è stato efficacemente inibito da JNJ-2408068 (concentrazione inibitoria del 50%=2,9 nM) ma non dal peptide T-118 derivato da HR2. Ulteriori analisi utilizzando un sistema transitorio di espressione vaccinia T7 hanno indicato che la proteina RSV F è sufficiente per questa interazione. Le proteine F contenenti le mutazioni di resistenza VP-14637 o JNJ-2408068 hanno mostrato un legame notevolmente ridotto di [3H]VP-14637. L'analisi dei modelli molecolari suggerisce che entrambe le molecole possono legarsi in una piccola cavità idrofoba nel nucleo interno della proteina F, interagendo simultaneamente con entrambi i domini HR1 e HR2. Complessivamente, questi dati indicano che VP-14637 e JNJ-2408068 interferiscono con la fusione RSV attraverso un meccanismo che implica un'interazione simile con la proteina F.
L'endocannabinoide noladin ether agisce come un agonista completo sui recettori dei cannabinoidi CB2 umani.Noladin ether (NE) è un presunto cannabinoide endogeno che dimostra attività agonista ai recettori CB1. A causa dell'affinità selettiva riportata per i recettori CB1, le azioni farmacologiche di NE sui recettori CB2 non sono state esaminate. Pertanto, lo scopo di questo studio era di caratterizzare le proprietà di legame e funzionali di NE sui recettori CB2 umani espressi stabilmente in Cellule dell'ovaio di criceto cinese (CHO) e nelle cellule HL-60, che esprimono i recettori CB2 in modo endogeno Sorprendentemente, nelle cellule CHO trasfettate, NE mostra un'affinità nanomolare relativamente alta per i recettori CB2 (K(i) = 480 nM), paragonabile a quello osservato per l'endocannabinoide 2-arachidonoil glicerolo (2-AG) (K(i) = 1016 nM). Inoltre, NE attiva le proteine G e inibisce l'effettore intracellulare adenilciclasi con efficacia equivalente rispetto al agonisti cannabinoidi completi 2-AG e CP 55,940 (CP) [(-)-cis-3-[2-idrossi-4-(1,1-dimetileptil)fenil]-trans-4-(3-idrossipropil)cicloesanolo]. L'ordine di rango della potenza per l'attivazione della proteina G e la regolazione dell'effettore da parte dei tre agonisti è simile alla loro apparente affinità per i recettori CB2; CP > NE > o = 2-AG. La regolazione dell'attività dell'adenilato ciclasi da parte di tutti gli agonisti è inibita dal pretrattamento con la tossina della pertosse o dalla cocubazione con AM630 [6-iodo-2-metil-1-[2-(4-morfolinil)etil]-1H-indol-3-il]( 4-metossifenil)-metanone], un antagonista CB2. Il trattamento cronico con NE o CP provoca desensibilizzazione e down-regulation del recettore CB2. Tutti gli agonisti inibiscono anche l'attività dell'adenilato ciclasi nelle cellule HL-60. Insieme, questi dati indicano che NE agisce come un agonista completo sui recettori CB2 umani e quindi potrebbe avere importanti funzioni fisiologiche sui recettori dei cannabinoidi periferici.
Effetti differenziali degli endocannabinoidi sull'assorbimento di [(3)H]-GABA nel globus pallidus del ratto.Nel globus pallidus, cannabinoide CB(1 ) sono localizzati pre-sinapticamente sui neuroni GABAergici Abbiamo valutato l'influenza degli endocannabinoidi, anandamide, 2-arachidonoil-glicerolo (2-AG) e noladin etere, sull'assorbimento di [(3)H]-GABA in fettine pallidali dal ratto. Sia il 2-AG che l'etere di noladina hanno aumentato l'assorbimento di [(3)H]-GABA (del 40,8 +/- 8,0% e del 38,4 +/- 12,5%). L'effetto del 2-AG è stato bloccato dal cannabinoide CB ( 1) antagonista del recettore AM 251. Al contrario, né l'anandamide né l'agonista WIN 55,212-2 hanno avuto un effetto sull'assorbimento di [(3)H]-GABA. Ruoli diversi potrebbero essere svolti da diversi endocannabinoidi, sia fisiologicamente che nei disturbi dei gangli della base, come il morbo di Parkinson.
Diversi meccanismi impediscono alle proteine mutanti CLDN14 di formare giunzioni strette in vitro.Le mutazioni nella claudina 14 (CLDN14) causano sordità non sindromica DFNB29 nell'uomo. L'analisi di un modello murino ha indicato che questo fenotipo è associato alla degenerazione delle cellule ciliate, probabilmente a causa del sovraccarico di cationi. Tuttavia, il meccanismo che collega queste alterazioni alle mutazioni di CLDN14 è sconosciuto. Per indagare su questo meccanismo, abbiamo confrontato la capacità di wild-type e missenso mutante CLDN14 per formare giunzioni strette L'espressione ectopica nei fibroblasti di topo L (cellule LM) della proteina CLDN14 wild-type ha indotto la formazione di giunzioni strette, mentre sia il mutante c.254T>A (p. V85D), precedentemente identificato in un pakistano famiglia e il mutante c.301 G>A (p. G101R), identificato in questo studio attraverso lo screening di 183 pazienti spagnoli e greci affetti da sordità non sindromica sporadica, non sono riusciti a formare tali giunzioni. feriti nella loro capacità di localizzarsi sulla membrana plasmatica. Abbiamo ulteriormente identificato esoni di CLDN14 finora non descritti che vengono utilizzati in trascrizioni splicing alternative. Abbiamo dimostrato che diverse mutazioni di CLDN14 alterano con diversi meccanismi la capacità della proteina di formare giunzioni strette. I nostri risultati indicano che la capacità di CLDN14 di essere reclutata in queste giunzioni è cruciale per il processo uditivo.
Isoprenilazione di proteine intracellulari come nuovo target per la terapia delle neoplasie umane: implicazioni precliniche e cliniche.La proliferazione, differenziazione e sopravvivenza cellulare sono regolate da una serie di ormoni extracellulari, fattori di crescita e citochine in organismi complessi. La trasduzione dei segnali da parte di questi fattori dall'esterno al nucleo spesso richiede la presenza di piccole proteine intracellulari (es. ras e altre piccole proteine G) che sono legate alla membrana plasmatica attraverso un residuo isoprenile che funge da ancora idrofobica. L'isoprenilazione è un processo complesso regolato da diversi passaggi enzimatici che potrebbero rappresentare potenziali bersagli molecolari per strategie antitumorali. Nel presente lavoro le diverse vie di trasduzione regolate da alcune proteine isoprenilate come come vengono descritti ras e altre piccole proteine G. Inoltre, i meccanismi molecolari del processo di isoprenilazione e il modo di agire ione dei diversi inibitori dell'isoprenilazione sono discussi con attenzione alle statine, agli inibitori della farnesiltransferasi (FTI) e agli aminobifosfonati. Viene inoltre descritto il ruolo di diversi bersagli candidati nella determinazione degli effetti antitumorali da parte degli FTI al fine di definire potenziali marcatori molecolari predittori di risposta clinica. Sulla base di numerosi dati preclinici, vengono proposte nuove strategie basate sull'inibizione enzimatica multi-step o sulla prioritizzazione del target al fine di potenziare l'attività antitumorale di agenti che inibiscono l'isoprenilazione. Infine, viene fornita una sintesi dei principali dati sugli studi clinici basati sull'uso di FTI e statine. In conclusione, l'inibizione dell'isoprenilazione è un'alternativa terapeutica attraente, ma ancora non completamente studiata, che richiede l'ottimizzazione per la traduzione nell'attuale trattamento delle neoplasie.
Condizionalità chimica: una strategia genetica per sondare l'assemblaggio degli organelli.L'assemblaggio della membrana esterna di Escherichia coli (OM) è poco conosciuto. Sebbene i processi cellulari fondamentali sono spesso ottenuti dallo studio dei mutanti, i mutanti difettosi OM non sono stati molto istruttivi perché generalmente hanno difetti di permeabilità non specifici. Qui mostriamo che piccole molecole tossiche possono essere utilizzate nelle selezioni impiegando ceppi con difetti di permeabilità per creare particolari condizioni chimiche che richiedono mutazioni soppressori specifici. I fenotipi soppressori sono correlati alle proprietà fisiche delle piccole molecole, ma le mutazioni non sono nei loro geni bersaglio. Invece, le mutazioni consentono la sopravvivenza ripristinando parzialmente l'impermeabilità della membrana. Usando la "condizionalità chimica", abbiamo identificato le mutazioni in yfgL, e, qui e nel documento di accompagnamento di Wu et al. , pubblicato in questo numero di Cell (Wu et al. , 2005), mostriamo che YfgL fa parte di un complesso multiproteico coinvolto nell'assemblaggio delle proteine OM beta barile. Ipotizziamo che pannelli di piccole molecole tossiche saranno utili per generare condizioni chimiche che consentano l'identificazione dei geni necessari per l'assemblaggio degli organelli in altri organismi.
Dermatite allergica da contatto professionale alla resina epossidica bisfenolo F.Un uomo di 30 anni si è presentato con dermatite alle palpebre e gli è stata diagnosticata una dermatite allergica da contatto professionale a una resina epossidica a base del monomero diglicidil etere del bisfenolo F. Non ha reagito alla resina epossidica standard a base di bisfenolo A, ma ha reagito a un campione diluito di resina epossidica prelevato dal suo posto di lavoro, un impianto di produzione di adesivi. non sono stati fatti se non avesse portato campioni dal lavoro, che sono stati sottoposti a patch test dopo un'adeguata diluizione. La scheda di sicurezza del materiale ha fornito ulteriori prove che la resina epossidica non era a base di bisfenolo A. I sintomi del paziente si sono attenuati dopo aver evitato il prodotto identificato.
Effetto dell'aumento dei livelli di serotonina sul legame [18F]MPPF nel cervello di ratto: fenfluramina vs la combinazione di citalopram e ketanserin.[18F]MPPF is un antagonista selettivo del recettore della serotonina-1A (5-HT1A) e può essere utilizzato per misurare i cambiamenti nei livelli funzionali di serotonina (5-HT). La tecnica si basa sul presupposto che il ligando radiomarcato iniettato compete per lo stesso recettore del trasmettitore endogeno. I risultati degli studi che utilizzano ligandi serotoninergici non sono sempre coerenti. Lo scopo del presente studio era di indagare se il legame [18F]MPPF è diminuito dopo un aumento dei livelli di 5-HT. Il legame [18F]MPPF è stato valutato in ratti coscienti utilizzando l'autoradiografia ex vivo Abbiamo studiato l'effetto dell'agente di rilascio 5-HT e dell'inibitore della ricaptazione fenfluramina (10 mg/kg ip) e di una combinazione dell'inibitore selettivo della ricaptazione della serotonina (SSRI) citalopram (10 micromol/kg, sc) con l'antagonista 5-HT2C chetanserina (100 nmol/kg, sc ). L'effetto di entrambi i trattamenti sui livelli extracellulari di 5-HT è stato determinato mediante microdialisi. Il trattamento con fenfluramina ha determinato un aumento di 30 volte dei livelli extracellulari di 5-HT nell'ippocampo ventrale e ha indotto una significativa riduzione del legame [18F]MPPF nella corteccia frontale, nell'ipotalamo, nell'amigdala e nell'ippocampo. I risultati della microdialisi hanno mostrato un aumento di 5-HT di 10 volte nell'ippocampo ventrale dopo somministrazione combinata di ketanserina e citalopram. La combinazione, tuttavia, non ha influenzato il legame di [18F]MPPF. I nostri dati mostrano che il legame di [18F]MPPF nei ratti coscienti è ridotto solo dopo aumenti sostanziali e quindi non fisiologici dei livelli di 5-HT. Questi risultati possono implicare che la maggior parte dei recettori 5-HT1A si trova in uno stato di bassa affinità, in vivo.
[Inibitori della farnesiltransferasi: risultati preliminari nella leucemia mieloide acuta].Gli inibitori della farnesiltransferasi (FTI) sono inibitori di piccole molecole che inibiscono selettivamente la farnesilazione di un numero di proteine del substrato intracellulare come Ras. Il lavoro preclinico ha rivelato la loro capacità di inibire efficacemente la crescita tumorale in vitro e in vivo in modelli animali in un'ampia gamma di fenotipi maligni. Le leucemie mieloidi acute (LMA) sono bersagli di malattia appropriati in quanto esprimono rilevanti bersagli biologici come Ras, MEK, AKT e altri che possono dipendere dall'attività della proteina farnesil transferasi per promuovere la proliferazione e la sopravvivenza cellulare. In effetti, diverse proteine intracellulari sono substrati per la prenilazione. L'interruzione della prenilazione può impedire ai substrati di subire la maturazione che può comportare l'inibizione di eventi cellulari che dipendono dalla funzione di tali substrati. Gli studi di fase I in AML e mielodisplasia hanno d attività biologiche e cliniche dimostrate come determinato dall'inibizione dell'enzima bersaglio, bassa tossicità e risposte sia complete che parziali. Di conseguenza, sono stati avviati studi di fase II per convalidare ulteriormente l'attività clinica e identificare bersagli di trasduzione del segnale a valle che possono essere modificati da questi agenti. Si prevede che questi studi serviranno a definire i ruoli ottimali degli FTI nei pazienti con queste neoplasie ematologiche e forniranno informazioni sui metodi efficaci con cui combinare gli FTI con altri agenti.
La palmitoilazione delle claudine è necessaria per una localizzazione efficiente della giunzione stretta.La palmitoilazione delle proteine integrali di membrana può influenzare il traffico intracellulare, le interazioni proteina-proteina e la stabilità proteica L'obiettivo del presente studio era determinare se le claudine, proteine che formano barriera transmembrana della giunzione stretta, sono palmitoilate e se questa modifica ha implicazioni funzionali per la barriera della giunzione stretta. Claudina-14, come altri membri della claudina famiglia, contiene cisteine prossimali di membrana che seguono sia il secondo che il quarto dominio transmembrana, che abbiamo ipotizzato possano essere modificati dall'acilazione S con acido palmitico Abbiamo osservato che l'acido [(3)H]-palmitico è stato incorporato nella claudina-14 espressa per trasfezione sia nelle cellule epiteliali in coltura che nei fibroblasti La mutazione delle cisteine in serine dopo il secondo o il quarto segmento transmembrana ha diminuito l'incorporazione di [( 3) L'acido H]-palmitico e la mutazione di tutte e quattro le cisteine hanno eliminato la palmitoilazione. Abbiamo precedentemente riportato che l'espressione di claudina-14 nei monostrati epiteliali determina un aumento di cinque volte della resistenza elettrica. Al contrario, l'espressione del mutante claudina-14 ha determinato aumenti minori della resistenza. I mutanti si sono localizzati meno bene nelle giunzioni strette e sono stati trovati anche nei lisosomi, suggerendo un'alterazione del traffico o della stabilità. Tuttavia, non abbiamo osservato alcun cambiamento nell'emivita delle proteine e solo un piccolo spostamento nel frazionamento delle membrane resistenti ai detergenti arricchite con caveolina. Sebbene meno ben localizzata alla giunzione stretta, la claudina-14 carente di palmitoilazione era ancora concentrata nei siti di contatto cellula-cellula ed era competente per l'assemblaggio in filamenti di frattura da congelamento quando espressa nei fibroblasti. Questi risultati dimostrano che la palmitoilazione della claudina-14 è necessaria per una localizzazione efficiente in giunzioni strette ma non per stabilità o assemblaggio di filamenti. La ridotta capacità dei mutanti di alterare la resistenza è probabilmente il risultato della loro localizzazione meno efficiente nella barriera.
[Via di segnalazione Ras come bersaglio per gli inibitori della farnesiltransferasi - una nuova, promettente prospettiva nel trattamento dei disturbi maligni].Si osserva una mutazione Ras nel 20-30% dei tumori maligni umani. Le proteine Ras appartengono alla famiglia delle proteine G, che sono in grado di legare e idrolizzare in modo reversibile la guanosina trifosfato. Sono responsabili della trasduzione del segnale all'interno della cellula. Ras subisce diversi passaggi di modifica post-traduzionale, ma solo la farnesilazione è necessaria per la sua attività biologica. L'enzima cruciale della farnesilazione - farnesiltransferasi (FT-asi) è diventato un obiettivo importante per lo sviluppo di nuovi agenti antitumorali - inibitori della farnesiltransferasi (FTI). La mutazione di Ras provoca l'abrogazione del suo normale L'attività GTP-asica e successivamente provoca un'attivazione permanente di Ras con crescita e proliferazione cellulare incontrollate. Studi pubblicati di recente hanno rivelato che gli FTI sono altamente efficaci in diversi disturbi maligni s, comprese le leucemie mieloidi. Gli FTI sono biodisponibili dopo somministrazione orale e hanno un profilo di tossicità accettabile. Non è stato osservato alcun effetto di mielosoppressione potenziato. È stato osservato che l'FTI può aumentare l'effetto citotossico di alcuni farmaci antineoplastici e della radioterapia. Sembra che questi agenti siano un'opzione terapeutica interessante e promettente per i pazienti resistenti alla chemioterapia convenzionale. I benefici della somministrazione ambulatoriale dei farmaci possono migliorare la qualità della vita nei pazienti oncologici. Le sperimentazioni di fase II con FTI sono in corso e speriamo che questi agenti trovino una posizione indiscutibile nel trattamento dei pazienti con tumori maligni.
Effetti dell'endocannabinoide noladin ether su peso corporeo, consumo di cibo, attività locomotoria e indice cognitivo nei topi.Abbiamo studiato l'effetto di 2 -arachidonilgliceril-etere (Noladin) sul consumo di cibo, peso, attività e funzione cognitiva nei topi durante la restrizione dietetica per 17 giorni e successiva alimentazione ad libitum per 32 giorni. Ai topi femmina Sabra è stato somministrato cibo per 2,5 ore al giorno (pari a 60 % di restrizione dietetica), ha ricevuto Noladin (0,001, 0,01, 0,1 mg/(kg die) per via intraperitoniale (ip)) con o senza l'antagonista CB1 SR141716A (1 mg/kg ip) durante i giorni 3-17. Noladin (0,001 mg/kg ) ha aumentato significativamente il consumo di cibo senza un cambiamento del peso corporeo, probabilmente a causa dell'aumento dell'attività e non vi è stato alcun cambiamento nella funzione cognitiva. Una dose più elevata (0,1 mg/kg) non ha influenzato il consumo di cibo, ma ha aumentato l'attività e ha ridotto leggermente il peso 32 giorni dopo la cessazione della somministrazione di Noladin; tuttavia, deterioramento cognitivo è stato osservato. A tutti i dosaggi testati, Noladin non ha influito sul peso durante il periodo di restrizione dietetica, mentre l'antagonista CB1 (con o senza Noladin) ha causato un calo ponderale molto significativo in questa fase. È stato osservato un aumento del peso 1 mese dopo l'interruzione della somministrazione di Noladin. Il peso al giorno 32 dopo l'interruzione del trattamento con Noladin (0,1 mg/(kg giorno)) era inferiore del 5% rispetto al controllo. Topi femmine C57BL/6 (stesso protocollo, con 0,001 mg/(kg giorno) di Noladin) hanno dato risultati simili a 0,1 mg/kg nei topi Sabra per quanto riguarda il peso. Il trattamento con antagonisti CB1 ha causato un calo molto significativo sia del peso che del consumo di cibo; cognizione e attività sono rimaste invariate. Questi risultati indicano che Noladin ha un significativo effetto dose-dipendente sul consumo di cibo, sulla cognizione e sul mantenimento del peso dopo la perdita di peso. Basse dosi di Noladin possono eventualmente consentire un aumento dell'assunzione di cibo senza aumento di peso dopo la dieta. Pertanto, Noladin potrebbe essere di potenziale beneficio clinico nel trattamento dei disturbi del peso corporeo. Noladin sembra segnalare il consumo di cibo e il peso attraverso i recettori CB1 in base agli effetti osservati con l'antagonista CB1, mentre la cognizione e l'attività sono probabilmente mediate da recettori non cannabinoidi.
Le linee cellulari di carcinoma a cellule squamose della testa e del collo sono altamente sensibili ai nuovi taxani, BMS-184476, BMS-188797, in vitro.Lo sviluppo di taxani sintetici mira ad aumentare la solubilità del farmaco, migliorare l'efficacia clinica e ridurre gli effetti collaterali. Abbiamo valutato la sensibilità delle linee cellulari di carcinoma a cellule squamose della testa e del collo a BMS-184476 e BMS-188797 in vitro. Gli effetti di paclitaxel e taxani sintetici sono stati testati su sei linee cellulari di recente costituzione (3 SCC della cavità orale, 3 SCC della laringe) utilizzando il saggio clonogenico su piastra a 96 pozzetti. I valori di IC50, corrispondenti alla dose media di inattivazione, sono stati ottenuti dalle curve dose-risposta. Tutti testati le linee cellulari erano considerevolmente più sensibili ad entrambi i taxani sintetici rispetto al paclitaxel. Di norma, la concentrazione di IC50 per il paclitaxel era 4-5,5 volte superiore a quella di BMS-184476 o BMS-188797. La sensibilità a questi farmaci variava da linea cellulare a linea cellulare e tim La microscopia video lasso ha mostrato un arresto mitotico con successiva apoptosi dopo quattro ore con BMS-188797. Questi risultati indicano che i taxani sintetici potrebbero essere utili clinicamente e giustificare test in vitro in modelli a modalità combinata, come la chemioradioterapia simultanea.
Duplicazione genica del fattore V della coagulazione e origine dell'attivatore della protrombina del veleno nel serpente Pseudonaja textilis.L'origine e l'evoluzione delle tossine del veleno è un mistero che ha ha suscitato molto interesse. Recentemente abbiamo dimostrato che la pseutarina C, un attivatore della protrombina dal veleno di Pseudonaja textilis, è strutturalmente e funzionalmente simile al complesso del fattore di coagulazione Xa-fattore Va dei mammiferi. La sua subunità catalitica è omologa al fattore Xa mentre la subunità non enzimatica è omologa al Il fattore Va. P. textilis ha quindi due sistemi attivatori di protrombina paralleli: uno espresso nella sua ghiandola velenifero come tossina e l'altro espresso nel suo fegato e rilasciato nel suo plasma come fattore emostatico. Qui riportiamo la sequenza aminoacidica completa del fattore V (FV) dal suo fegato determinato mediante clonazione e sequenziamento del cDNA. Il FV del fegato mostra un'identità del 96% con la subunità non enzimatica della pseutarina C. La maggior parte dei siti funzionali coinvolti nella sua interazione con fa il ctor Xa e la protrombina sono conservati. Tuttavia, molti potenziali siti di modificazioni post-traduzionali e un sito di scissione critico per la proteina C attivata sono diversi. L'assenza di quest'ultimo sito di clivaggio rende la subunità non enzimatica della pseutarina C resistente all'inattivazione e ne aumenta il potenziale come eccellente tossina. Mediante PCR e analisi quantitativa in tempo reale, mostriamo che il gene della subunità non enzimatica della pseutarina C è espresso specificamente nella ghiandola veleniifera a circa 280 volte superiore a quello del gene FV nel fegato. Questi due sono quindi codificati da due geni separati che esprimono in modo altamente tessuto-specifico. I nostri risultati implicano che il gene che codifica per la subunità non enzimatica della pseudorina C è stato derivato dalla duplicazione del gene FV plasmatico e si è evoluto per svolgere funzioni distinte.
Il tripeptide antivirale oralmente attivo glicil-prolil-glicinamide viene attivato da CD26 (dipeptidil peptidasi IV) prima del trasporto attraverso l'epitelio intestinale.Il tripeptide ammide glicile -prolil-glicinamide (GPG-amide) è un nuovo candidato farmaco antiretrovirale, ma il suo meccanismo di assorbimento è sconosciuto. In questa indagine, il trasporto e il metabolismo della GPG-amide sono stati studiati in un modello dell'epitelio intestinale umano, le cellule Caco-2 I risultati mostrano che quando l'ammide tripeptide è entrata in contatto con la membrana dell'enterocita apicale, è stata degradata da CD26 (dipeptidil peptidasi IV) a glicilprolina e al metabolita antiretrovirale glicinamide. La glicinamide ha mantenuto l'attività antiretrovirale in vitro dopo il trasporto attraverso il Caco- 2 monostrati cellulari Il trasporto della glicinamide attraverso i monostrati cellulari Caco-2 è avvenuto tramite diffusione passiva con un coefficiente di permeabilità apparente di circa 2 x 10(-6) cm s(-1), che suggerisce th quando viene assorbito per via orale in quantità sufficienti per essere considerato per la somministrazione orale. In conclusione, il tripeptide GPG-ammide agisce come un profarmaco che viene attivato dal CD26 per rilasciare il composto antiretrovirale glicinamide, attivo per via orale.
Sperimentazione di fase II del nuovo taxano BMS-184476 come seconda linea nel carcinoma polmonare non a piccole cellule.Lo scopo di questo studio era valutare la tollerabilità e l'efficacia di BMS-184476, un analogo del paclitaxel, in pazienti con carcinoma polmonare non a piccole cellule (NSCLC) avanzato in progressione o recidiva dopo almeno un precedente regime chemioterapico. Cinquantasei pazienti con NSCLC avanzato precedentemente trattati hanno ricevuto BMS-184476 alla dose di 60 mg/m(2) somministrata per via endovenosa nell'arco di 1 h ogni 21 giorni. Il numero medio di cicli erogati per paziente era di cinque (intervallo da 1 a 17). La riduzione della dose è stata richiesta solo nel 3,8% dei cicli Neutropenia di grado 4 si è verificata nel 19,6% dei pazienti, ma non è stata segnalata trombocitopenia o anemia di grado 4. Neutropenia febbrile è stata osservata solo in due pazienti (3,6%) e non si sono verificati eventi pericolosi per la vita. neuropatia è stata riportata nel 9% dei pazienti Altre tossicità non ematologiche, come nausea e vomito, mialgia e artralgia, diarrea e mucosite erano rari. Risposte parziali sono state osservate in otto (14,3%) pazienti e malattia stabile in 33 (58,9%). La sopravvivenza mediana libera da progressione è stata di 3,7 mesi [intervallo di confidenza (IC) al 95% 2,7-5,4] e la sopravvivenza globale mediana è stata di 10 mesi (IC al 95% 6-13,4)). BMS-184476 è stato ben tollerato alla dose di 60 mg/m2 e ha mostrato evidenza di attività antitumorale nel NSCLC precedentemente trattato.
Uso della gascromatografia-spettrometria di massa multipla a trappola ionica per il rilevamento e la conferma di 3\'idrossistanozololo a livelli di tracce nelle urine per il controllo antidoping.Stanozolol , uno steroide androgeno anabolizzante sintetico, viene spesso abusato negli sport per migliorare le prestazioni. Di conseguenza, i laboratori antidoping controllano quotidianamente i suoi metaboliti (3\'idrossistanozololo e 4beta idrossistanozololo) in tutte le urine, principalmente mediante GC-MS, dopo idrolisi enzimatica e Derivatizzazione TMS. È stato sviluppato un metodo sensibile e specifico mediante GC-MS (3) per l'identificazione nelle urine di 3\'idrossistanozololo a livelli di tracce. Vengono presentati gli spettri di massa completi e gli ioni diagnostici e viene commentato un caso clinico. In questo caso, è stato possibile attestare la presenza di una bassa concentrazione di metabolita stanozololo in un campione ottenuto da un test di concorrenza, cosa che non sarebbe stata possibile con altre tecniche analitiche utilizzate in laboratorio. In questo caso è stato anche possibile dimostrare l'importanza del campionamento e le difficoltà che deve affrontare il laboratorio quando la fase pre-analitica non viene eseguita correttamente.
Glucosidi cianogeni nella vite: polimorfismo, identificazione e modelli di sviluppo.Dodici cultivar di vite (Vitis vinifera L. ) sono state esaminate per il \'potenziale di cianuro\' (cioè il cianuro totale misurato nell'estratto di tessuto bollito e grezzo trattato con beta-glucosidasi) nelle foglie mature. Due cultivar correlate (Carignan e Ruby Cabernet) avevano un potenziale medio di cianuro (equivalente a 110 mgHCNkg-1fr. wt) circa 25 volte maggiore di quello delle altre 10 cultivar, e quindi il carattere è polimorfico nella specie. Negli estratti di foglie bollite di Carignan e Ruby Cabernet, il cianuro libero costituiva una frazione trascurabile del potenziale di cianuro totale perché era necessario un trattamento con beta-glucosidasi per liberare il frazione maggiore di cianuro - che è quindi legata al composto(i) cianogeno glucosilato (o glucosidi cianogeni). Inoltre, il cianuro è stato liberato dal tessuto fogliare macinato di Ruby Cabernet ma non Sultana (una cultivar con basso potenziale di cianuro ). Quindi, l'alto potenziale di cianuro nelle foglie di Ruby Cabernet è accoppiato con l'attività endogena della beta-glucosidasi e questa cultivar può essere considerata \'cyanogenic\'. È stato sviluppato un metodo per rilevare e identificare i glucosidi cianogeni utilizzando la cromatografia liquida combinata con la spettrometria di massa tandem (LC-MS/MS). Due presunti glucosidi cianogeni sono stati trovati in estratti di foglie di Carignan e Ruby Cabernet e sono stati identificati come epimeri prunasin e sambunigrin. Il potenziale di cianuro misurato tre volte durante la stagione di crescita in foglie giovani e mature, piccioli, viticci, fiori, bacche, semi e radici di Ruby Cabernet era sostanzialmente più alto nelle foglie rispetto a tutti gli altri tessuti. Questa caratterizzazione dell'accumulo di glucoside cianogeno nella vite fornisce una base per misurare il coinvolgimento del carattere nelle interazioni della specie con i suoi parassiti e agenti patogeni.
Citotossicità differenziale in vitro dell'(-)-epicatechina gallato (ECG) nei confronti del cancro e delle cellule normali della cavità orale umana.Questo studio ha valutato il È stata valutata l'attività biologica dell'epicatechina gallato (ECG), un polifenolo nel tè, alle cellule HSC-2 di carcinoma e alle cellule normali di fibroblasti HGF-2 della cavità orale umana. La citotossicità relativa dell'ECG, rispetto ad altri cinque polifenoli nel tè, è stata valutata Per le cellule di carcinoma HSC-2, ECG, catechina gallato (CG) ed epigallocatechina gallato (EGCG) sono stati classificati come altamente tossici, epigallocatechina (EGC) come moderatamente tossici e catechina (C) ed epicatechina (EC) come meno tossici. Per i fibroblasti HGF-2, ECG e CG sono raggruppati come altamente tossici, EGCG come moderatamente tossici ed EGC, C ed EC come meno tossici. Gli effetti citotossici dei polifenoli erano più pronunciati per il carcinoma, che per le cellule normali L'aggiunta di ECG al terreno di coltura cellulare ha portato alla generazione di perossido di idrogeno (H2O2). Tuttavia, l'ECG, come rispetto all'EGCG, era un povero generatore di H2O2 e, quindi, la citotossicità dell'ECG non era influenzata dalla presenza di antiossidanti, N-acetil cisteina e glutatione e catalasi. La citotossicità dell'ECG non è stata influenzata da un sistema di attivazione metabolica, cioè una miscela di S-9 microsomiali epatici. La frammentazione del DNA, l'attività della caspasi-3 e la colorazione nucleare, sia con arancio di acridina che con la procedura TUNEL, sono state utilizzate per valutare l'apoptosi indotta dall'ECG. L'ECG ha indotto l'apoptosi nelle cellule del carcinoma HSC-2, ma non nei normali fibroblasti HGF-2. Questa ricerca supporta quegli studi che suggeriscono che il tè verde è un efficace agente chemiopreventivo del carcinoma orale.
La glicina-ammide è un metabolita attivo del tripeptide antiretrovirale glicil-prolil-glicina-ammide.Il tripeptide chimicamente modificato glicil-prolil-glicina- ammide (GPG-NH(2)) inibisce la replicazione del virus dell'immunodeficienza umana (HIV) di tipo 1 (HIV-1) in vitro, probabilmente interferendo con la formazione del capside. Lo scopo del presente studio era di determinare se i metaboliti glicil-prolina (GP-OH), glicina (G-OH), prolil-glicina-ammide (PG-NH(2)), prolina (P-OH) e glicina-ammide (G-NH(2)) dalla scissione proteolitica possono inibire la replicazione dell'HIV-1 in vitro. In precedenza è stato dimostrato che PG-NH(2) ha un effetto modesto sulla replicazione dell'HIV-1. Nel presente studio mostriamo che G-NH(2) esibisce un pronunciato effetto inibitorio su HIV-1. Questo effetto non era dovuto a una diminuzione della proliferazione cellulare o della vitalità e non poteva essere mostrato per il virus dell'herpes simplex di tipo 1. La concentrazione di G-NH(2) che ha inibito la replicazione del virus del 50% (IC(50)) era equimolare a quello di GPG-NH(2) e variava da 3 a 41 microM. La microscopia elettronica a trasmissione ha rivelato che l'effetto di G-NH(2) sulla morfologia dell'HIV-1 era equivalente a quello di GPG-NH(2) e ha mostrato strutture del capside scomposte, indicando un'interferenza con la formazione del capside. Il passaggio seriale di cellule infette da HIV con G-NH(2) per più di 20 subcoltivazioni non ha diminuito la suscettibilità al composto. I risultati di questo studio suggeriscono che GPG-NH(2) potrebbe agire come profarmaco e che G-NH(2) è un metabolita antiretrovirale attivo.
Un tentativo di migliorare la diagnostica dell'allergia da contatto dovuta ai sistemi di resina epossidica. Primi risultati dello studio multicentrico EPOX 2002.Sistemi di resina epossidica (ERS) sono una causa frequente di dermatiti allergiche da contatto professionali. La sensibilizzazione si manifesta non solo alle resine, ma anche agli indurenti e ai diluenti reattivi. Tuttavia, solo una frazione dei componenti ERS attualmente in uso è disponibile per il patch test. Con lo studio multicentrico EPOX 2002 , abbiamo tentato di migliorare la diagnostica in questo campo mediante patch test con componenti attualmente utilizzati negli ERS. Durante il primo periodo di studio (da ottobre 2002 a luglio 2003), oltre alle sostanze per patch test ERS disponibili in commercio, 16 sostanze in studio (1 resina, 9 indurenti e 6 diluenti reattivi) sono stati sottoposti a patch test in 70 pazienti con sospetta allergia da contatto dovuta a ERS e 22 pazienti con una precedente reazione positiva al patch test alla resina epossidica (ER) nella serie standard. sono stati osservati da s a ER basati sull'etere diglicidilico del bisfenolo A e F (rispettivamente 55,2% e 43,7%). L'accordo tra le reazioni positive a entrambe le resine, che può essere spiegato dalla sensibilizzazione incrociata immunologica e/o dalla coesposizione, è stato sostanziale [Cohen\'s kappa 0,65 (95% CI: 0,49-0,80)]. Tra i diluenti reattivi, l'1,6-esandiolo diglicidil etere (1,6-HDDGE) e l'1,4-butandiolo diglicidil etere (1,4-BDDGE) sono stati gli allergeni più frequenti, con rispettivamente il 19,5% e il 18,4% di reazioni positive. . Sebbene l'accordo tra le reazioni positive all'1,6-HDDGE e all'1,4-BDDGE fosse persino migliore rispetto alle 2 resine, la dimensione del campione è considerata troppo piccola per decidere in modo affidabile se l'1,6-HDDGE da solo possa fungere da allergene marcatore per entrambi. Reazioni allergiche al p-terz-butilfenil glicidil etere e al fenil glicidil etere (PGE) si sono verificate nell'11,5% dei pazienti testati, con un accordo solo moderato. Tutti i pazienti positivi al cresil glicidil etere (6,8%) hanno anche reagito alla PGE. Tra gli indurenti testati, la m-xililene diammina era l'allergene più frequente (13,8%), seguito dall'isoforone diammina (5,7%). Non sono state osservate reazioni a diverse sostanze, la cui concentrazione di prova potrebbe essere stata troppo bassa e verrà aumentata in futuro.
Tannini e catechina gallato mediano l'effetto vasorilassante di Arbutus unedo sull'aorta isolata di ratto.Questo studio ha esaminato l'effetto vascolare delle foglie di Arbutus (estratto acquoso ) e ha descritto l'isolamento di diverse frazioni responsabili della loro attività vasorilassante. L'estratto acquoso (AE) di foglie è stato testato su anelli aortici di ratto precontratti con 0,1 microm di noradrenalina. A 10(-2) g/L, AE ha prodotto un rilassamento dipendente dall'endotelio del 66% +/- 5%, (n = 8). Le foglie di Arbutus sono state quindi estratte successivamente con diversi solventi e l'estratto di metanolo è stato il più attivo. Quando i tannini (principalmente tannini condensati) sono stati precipitati dall'estratto di metanolo, hanno mostrato una forte attività vasorilassante (87% +/- 4%, n = 5), mentre l'eliminazione dei tannini nell'estratto di metanolo ha ridotto significativamente la sua attività vasorilassante (42% +/- 8%, n = 8, p < 0.005). L'estratto di metanolo è stato ulteriormente separato semi-pr separatamente mediante HPLC in fase inversa. Quattro frazioni (Fr2, Fr3, Fr4 e Fr6) erano le più attive e hanno prodotto 88% +/- 2% (n = 5), 75% +/- 6% (n = 5), 76% +/- 3% (n = 7) e 77% +/- 3% (n = 10), rispettivamente. Queste quattro frazioni corrispondono principalmente a composti polifenolici. L'analisi di Fr6 ha indicato che questa frazione conteneva gallato di catechina. In conclusione, è probabile che l'attività vasorilassante del corbezzolo sia dovuta a composti polifenolici, principalmente tannini condensati e gallato di catechina.
Il contenuto ridotto di lisil-fosfatidilglicerolo nella membrana citoplasmatica influisce sulla suscettibilità alla moenomicina, così come alla vancomicina, alla gentamicina e ai peptidi antimicrobici, in Staphylococcus aureus.Un'associazione tra resistenza alla moenomicina e resistenza intermedia alla vancomicina in Staphylococcus aureus è stata dimostrata in precedenza. Pertanto, per chiarire il meccanismo della resistenza intermedia alla vancomicina, abbiamo cercato i fattori che contribuiscono alla resistenza alla moenomicina. Mutagenesi inserzionale casuale Tn551 del ceppo COL di S. aureus resistente alla meticillina ha prodotto tre mutanti con ridotta suscettibilità alla moenomicina. Di conseguenza, questi mutanti hanno anche mostrato una leggera suscettibilità alla vancomicina. L'analisi genetica ha rivelato che due dei mutanti avevano inserzioni di Tn551 nel gene fmtC (mprF), che è associato alla sintesi di lisil-fosfatidilglicerolo Il terzo inserimento Tn551 era localizzato nel gene lysC, che è coinvolto ved nella biosintesi della lisina da acido aspartico. Di conseguenza, le mutazioni in entrambi questi loci hanno ridotto il contenuto di lisil-fosfatidilglicerolo nella membrana cellulare, conferendogli una carica netta più negativa. L'antibiotico gentamicina a carica positiva e i peptidi antimicrobici cationici come le beta-defensine e il CAP18 erano più efficaci contro i mutanti. Anche i livelli di moenomicina e vancomicina che si legano alle cellule intatte erano maggiori nei mutanti rispetto al tipo selvatico, mentre l'affinità di legame non veniva alterata quando venivano utilizzate cellule bollite in sodio dodecilsolfato, indicando che entrambi gli agenti avevano affinità più elevate per il tipo caricato negativamente. membrane dei mutanti. Pertanto, la carica di membrana di S. aureus sembra influenzare l'efficacia di moenomicina, vancomicina e altri agenti antimicrobici cationici.
Neurotossicità indotta da farmaci antiepilettici in colture di neuroni ippocampali: uno studio comparativo tra carbamazepina, oxcarbazepina e due nuovi farmaci antiepilettici, BIA 2-024 e BIA 2-093." Farmaci antiepilettici di nuova concezione (AED) sono in fase di valutazione per la loro efficacia nella prevenzione delle crisi epilettiche e per i loro profili tossici. Abbiamo studiato e confrontato gli effetti tossici di due derivati della dibenz[b,f]azepina con attività anticonvulsivante, 10 ,11-diidro-10-idrossiimmino-5H-dibenz[b,f]azepina-5-carbossammide (BIA2-024) e (S)-(-)-10-acetossi-10,11-diidro-5H-dibenz[ b,f] azepina-5-carbossamide (BIA2-093), con i composti strutturalmente correlati carbamazepina (CBZ) e oxcarbazepina (OXC), entrambi attualmente in uso per il trattamento dell'epilessia. I neuroni ippocampali primari di ratto sono stati utilizzati per valutare la morfologia neuronale e cambiamenti biochimici indotti dai farmaci antiepilettici utilizzati in questo studio. La colorazione immunocitochimica contro MAP-2 è stata utilizzata per valutare i neuroni morfologia. Le specie reattive dell'ossigeno (ROS) e le variazioni del potenziale di membrana mitocondriale (Psim) sono state misurate mediante tecniche di fluorescenza. I livelli intracellulari di adenosina trifosfato (ATP) sono stati quantificati mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC). I neuroni dell'ippocampo trattati per 24 h con CBZ o OXC (300 microM) hanno mostrato degenerazione e gonfiore dei neuriti, ma questo effetto non è stato osservato nei neuroni trattati con BIA 2-024 o BIA 2-093 (300 microM). Anche la produzione di ROS è stata aumentata nei neuroni trattati con OXC, ma non nei neuroni trattati con gli altri AED. I livelli di ATP erano significativamente diminuiti solo nei neuroni trattati con OXC, sebbene la carica energetica non fosse alterata. Inoltre, OXC ha portato a una diminuzione di Psim. In tutti i parametri analizzati, OXC è risultato più tossico degli altri farmaci antiepilettici utilizzati. Poiché è stato precedentemente dimostrato che i nuovi presunti farmaci antiepilettici hanno un'efficacia nella prevenzione delle convulsioni simile a quella di CBZ e OXC e sono meno tossici per le cellule neuronali, possono essere considerati un'alternativa alle attuali terapie disponibili per il trattamento dell'epilessia".
Inibizione dell'attivazione e della funzione dei linfociti da parte dell'inibitore della prenilazione L-778,123.Le Ras GTPasi prenilate trasducono segnali dal recettore delle cellule T, dal recettore costimolatorio CD28 e Recettore IL-2 Poiché i segnali provenienti da questi recettori mediano l'attivazione, la proliferazione e la sopravvivenza delle cellule T, abbiamo ipotizzato che l'inibitore della prenilazione L-778,123 impartisse l'immunomodulazione. L'effetto di L-778,123 sull'attivazione delle cellule T (espressione di superficie CD71 o CD25) è stato determinata mediante citometria a flusso. La proliferazione delle cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) in presenza di L-778,123 e/o ciclosporina (CsA) è stata determinata mediante incorporazione di [3H]timidina. La capacità di L-778,123 di inibire la segnalazione del recettore di IL-2 è stata investigato misurando la proliferazione indotta da IL-2 nelle cellule CTLL-2 e la prevenzione dell'apoptosi in PBMC umane attivate con IL-2. L-778,123 ha inibito l'espressione indotta da lectina di CD71 e CD25 con IC50\'s di 6,48 +/- 1,31 microM e 84,1 + /- 50.0 microM, rispettivamente. La proliferazione di PBMC è stata inibita da L-778,123 con un IC50 di 0,92 +/- 0,23 microM e l'aggiunta di CsA non ha aumentato la potenza. L-778,123 non ha inibito la produzione di IL-2 e IFN-gamma da parte delle cellule T. L-778,123 ha abrogato la proliferazione indotta da IL-2 di cellule CTLL-2 con un IC50 di 0,81 +/- 0,44 microM. Tuttavia, L-778,123 ha invertito minimamente l'effetto di sopravvivenza dell'IL-2 nei linfociti attivati. Il ligando di IL-2 e la produzione di recettori durante l'attivazione delle cellule T non sono relativamente influenzati da L-778,123. Tuttavia, l'attivazione e gli effetti proliferativi di IL-2 sulle cellule T sono bloccati potentemente da L-778,123. Questi risultati rivelano un blocco selettivo dell'asse della citochina dell'IL-2 distale al recettore dell'IL-2 da parte dell'L-778,123 e giustificano la valutazione degli inibitori della prenilazione nel trattamento del rigetto del trapianto e delle malattie autoimmuni.
Miricetina, quercetina e catechina-gallato inibiscono l'assorbimento del glucosio negli adipociti di ratto isolati.Il trasportatore facilitante del glucosio, GLUT4, media l'assorbimento del glucosio stimolato dall'insulina in adipociti e muscoli, e la partecipazione di GLUT4 nella patogenesi di varie condizioni cliniche associate a obesità, accumulo di grasso viscerale e insulino-resistenza è stata proposta. L'assorbimento del glucosio da parte di alcuni membri della famiglia GLUT, principalmente GLUT1, è inibito dai flavonoidi, il naturale polifenoli presenti in frutta, verdura e vino, quindi è interessante stabilire se questi composti polifenolici presenti nella dieta, noti per essere efficaci antiossidanti ma dotati anche di diverse altre attività biologiche come l'inibizione della protein-tirosin chinasi, interferiscono con la funzione GLUT4 Nel presente studio, dimostriamo che tre flavonoidi, quercetina, miricetina e catechina-gallato, inibiscono l'assorbimento del metilglucosio da parte degli adipociti oltre il co Intervallo di concentrazione di 10-100 microM. Questi tre flavonoidi mostrano un modello competitivo di inibizione, rispettivamente con K(i)=16, 33,5 e 90 microM. Al contrario, né la catechina né l'acido gallico inibiscono l'assorbimento del metilglucosio. Per ottenere una migliore comprensione dell'interazione tra GLUT4 e flavonoidi, abbiamo derivato un modello comparativo molecolare tridimensionale GLUT4, utilizzando coordinate strutturali da un modello comparativo GLUT3 e un canale ionico meccanosensibile [PDB (Protein Data Bank) codice 1MSL] risolto mediante diffrazione di raggi X. Nel complesso, l'evidenza sperimentale e i dati di simulazione al computer favoriscono un meccanismo di inibizione del trasporto in cui flavonoidi e GLUT4 interagiscono direttamente, piuttosto che da un meccanismo correlato alla proteina-tirosin chinasi e all'inibizione del segnale dell'insulina. Inoltre, i risultati suggeriscono che i trasportatori GLUT sono coinvolti nell'incorporazione dei flavonoidi nelle cellule.
Preparazione enantioselettiva di derivati dell'1-fluorociclopropan-1-carbossilato fusi ad anello: in rotta verso l'agonista del recettore mGluR 2 MGS0028.[reazione: vedi testo ] Viene riportato un approccio al fluorociclopropano 14, una struttura chiave per la sintesi dell'agonista del recettore mGluR 2 MGS0028 (1). l'apertura dell'anello epossidico intramolecolare ha costruito in modo efficiente la matrice 1-fluorociclopropano-1-carbossilato. Questo percorso può potenzialmente essere una metodologia generale per una sintesi concisa, altamente enantio- e stereoselettiva di derivati 1-fluorociclopropano-1-carbossilato.
Determinazione delle catechine e dei gallati di catechina nei tessuti mediante cromatografia liquida con rilevamento coulometrico ed estrazione selettiva in fase solida.Livelli di catechine nei tessuti degli organi, in particolare nel fegato , determinati dai metodi pubblicati sono inaspettatamente bassi, probabilmente a causa del rilascio di enzimi ossidativi, ioni metallici e metaboliti reattivi dalle cellule dei tessuti durante l'omogeneizzazione e agli effetti pro-ossidanti dell'acido ascorbico durante l'elaborazione del campione in presenza di ioni metallici. un nuovo metodo per l'analisi simultanea di otto catechine nei tessuti: (+)-catechina (C), (-)-epicatechina (EC), (-)-gallocatechina (GC), (-)-epigallocatechina (EGC), (- )-catechina gallato (CG), (-)-epicatechina gallato (ECG), (-)-gallocatechina gallato (GCG) e (-)-epigallocatechina gallato (EGCG) (Fig. 1). La nuova procedura di estrazione ha utilizzato un metanolo /etilacetato/ditionito (2:1:3) miscela durante l'omogeneizzazione per la simultanea precipitazione enzimatica e d protezione antiossidante. L'estrazione selettiva in fase solida è stata utilizzata per rimuovere la maggior parte delle biomatrici interferenti. HPLC in fase inversa con rilevamento CoulArray è stato utilizzato per determinare le otto catechine contemporaneamente entro 25 minuti. Una buona linearità (>0.9922) è stata ottenuta nell'intervallo 20-4000 ng/g. I coefficienti di varianza (CV) erano inferiori al 5%. Il recupero assoluto variava dal 62 al 96%, precisione da 92,5 +/- 4,5 a 104,9 +/- 6%. Il limite di rilevabilità era di 5 ng/g. Questo metodo è in grado di determinare le catechine nei tessuti di fegato, cervello, milza e reni di ratto. Il metodo è robusto, riproducibile, con un elevato recupero ed è stato convalidato per l'analisi dei campioni sia in vitro che in vivo.
Sintesi in fase solida della diidrovirginiamicina S1, un antibiotico della streptogramina B.Descriviamo la prima sintesi in fase solida della diidrovirginiamicina S(1), un membro della famiglia di antibiotici delle streptogramine B, prodotti naturali non peptidici ribosomiali prodotti da Streptomyces. Questi composti, insieme ai componenti sinergici del gruppo A, sono agenti antimicrobici di "ultima linea di difesa" per il trattamento di infezioni potenzialmente letali come gli enterococchi vancomicina-resistenti. La sintesi presenta una ciclizzazione su resina ed è progettata per consentire la produzione di analoghi della streptogramina B con diversificazione nelle posizioni 1\', 1, 2, 3, 4 e 6. Diverse sfide sintetiche note per ostacolare la sintesi di questa classe di composti è stata risolta, compresa la sensibilità agli acidi e alle basi, e l'epimerizzazione e i riarrangiamenti, attraverso la scelta giudiziosa delle condizioni di deprotezione, delle condizioni di accoppiamento e della strategia sintetica. consentire una migliore comprensione delle relazioni struttura-attività nei composti della streptogramina B, la possibile identificazione di analoghi che aggirano i meccanismi di resistenza noti e forse l'identificazione di analoghi con nuove attività biologiche.
Uno studio di fase I del doppio inibitore della farnesiltransferasi e della geranilgeraniltransferasi L-778,123 e della radioterapia per il cancro del pancreas localmente avanzato.Studi preclinici e clinici hanno dimostrato che L'inibizione della prenilazione può radiosensibilizzare le linee cellulari con l'attivazione di Ras e produrre una risposta clinica in pazienti con cancro. Lo scopo di questo studio era di determinare la dose massima tollerata del doppio inibitore della farnesiltransferasi e della geranilgeraniltransferasi I L-778,123 in combinazione con la radioterapia per i pazienti con carcinoma pancreatico localmente avanzato. L-778.123 è stato somministrato mediante infusione endovenosa continua con radioterapia concomitante a 59,4 Gy in frazioni standard. Sono stati testati due livelli di dose L-778.123: 280 mg/m2/giorno nelle settimane 1, 2, 4 e 5 per livello di dose 1 e 560 mg/m2/giorno nelle settimane 1, 2, 4, 5 e 7 per il livello di dose 2. Non sono state osservate tossicità dose-limitanti negli otto pazienti trattati con il livello di dose 1. Due dei quattro pazienti con livello di dose 2 hanno manifestato tossicità dose-limitanti costituite da diarrea di grado 3 in un caso ed emorragia gastrointestinale di grado 3 associata a trombocitopenia e neutropenia di grado 3 nell'altro caso. Altre tossicità comuni erano neutropenia lieve, disidratazione, iperglicemia e nausea/vomito. Un paziente al livello di dose 1 ha mostrato una risposta parziale della durata di 6 mesi. In presenza di L-778,123 sono state dimostrate sia l'inibizione reversibile della farnesilazione dell'HDJ2 che la radiosensibilizzazione di una linea cellulare derivata da un paziente dello studio. Mutazioni K-RAS sono state trovate in tre dei quattro pazienti valutati. La combinazione di L-778,123 e radioterapia al livello di dose 1 ha mostrato una tossicità accettabile in pazienti con carcinoma pancreatico localmente avanzato. È stata osservata la radiosensibilizzazione di una linea cellulare di cancro del pancreas derivata dal paziente.
Identificazione di un metabolita simile all'N-metil-4-fenilpiridinio dell'agente antidiarroico loperamide nei microsomi epatici umani: ragioni alla base della mancanza di neurotossicità nonostante la bioattivazione event.In contrasto con gli effetti simili al Parkinson associati alla neurotossina mitocondriale N-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetraidropiridina (MPTP) e all'agente neurolettico aloperidolo, non esistono segnalazioni di effetti avversi sul sistema nervoso centrale (SNC) con il derivato N-sostituito-4-arilpiperidina-4-olo e l'agente antidiarroico loperamide, sebbene questa differenza possa essere attribuita alle proprietà del substrato della loperamide\'s P-glicoproteina che impedirgli di accedere al cervello, una possibilità alternativa è che il metabolismo della loperamide nell'uomo sia diverso da quello dell'MPTP e dell'aloperidolo e non implichi la bioattivazione a una specie di piridinio neurotossico. Nel presente studio, la bioattivazione della loperamide w come esaminato con particolare attenzione all'identificazione dei metaboliti del piridinio. È stata osservata una scomparsa della loperamide dipendente dal NADPH sia nei microsomi epatici di ratto che umano (t umano (1/2) = 13 min; t ratto (1/2) = 22 min). Il metabolismo della loperamide era simile nell'uomo e nel ratto e implicava la N-dealchilazione in N-desmetilloperamide (M3) come principale destino metabolico. Altre vie di biotrasformazione della loperamide includevano rispettivamente N- e C-idrossilazione ai metaboliti loperamide-N-ossido (M4) e carbinolamide (M2). Inoltre, la formazione di un metabolita aggiuntivo (M5) è stata rilevabile anche nei microsomi di fegato umano e di ratto. La struttura di M5 è stata assegnata alle specie di piridinio (LPP(+)) in base al confronto delle caratteristiche di cromatografia liquida/spettrometria di massa in tandem con il piridinio ottenuto dalla loperamide tramite una reazione chimica. Il metabolismo della loperamide nei microsomi umani era sensibile al trattamento con ketoconazolo e bupropione, suggerendo il coinvolgimento di P4503A4 e -2B6. Il P4503A4 ricombinante ha catalizzato tutte le vie di biotrasformazione della loperamide nei microsomi epatici umani, mentre P4502B6 era responsabile solo delle vie di N-dealchilazione e N-ossidazione. L'ampio margine di sicurezza della loperamide (rispetto a MPTP e aloperidolo) nonostante il metabolismo in una specie di piridinio potenzialmente neurotossica deriva probabilmente da una combinazione di fattori che includono un regime terapeutico normalmente limitato a pochi giorni e il fatto che loperamide e forse LPP(+) sono substrati della glicoproteina P e gli viene negato l'ingresso nel SNC. Le differenze nel profilo di sicurezza di aloperidolo e loperamide nonostante un comune evento di bioattivazione supportano l'idea che non tutti i composti sottoposti a bioattivazione in vitro susciteranno necessariamente una risposta tossicologica in vivo.
Sicurezza, tollerabilità e profilo farmacocinetico di BIA 2-093, un nuovo antiepilettico putativo, in uno studio a dosi multiple in aumento in giovani umani sani.Questo è stato uno studio in doppio cieco, randomizzato, controllato con placebo per indagare su dosi orali crescenti di BIA 2-093 (S-(-)-10-acetossi-10,11-diidro-5H-dibenz/b,f/azepina". -5-carbossamide), un presunto nuovo farmaco antiepilettico All'interno di ciascuno dei 4 gruppi di dosaggio di 8 soggetti adulti maschi sani, 2 soggetti sono stati randomizzati a ricevere placebo e i restanti 6 soggetti sono stati randomizzati a ricevere BIA 2-093 (200 mg bid , 400 mg qd, 800 mg qd e 1200 mg qd) per 8 giorni Le concentrazioni di BIA 2-093 nel plasma o nelle urine non erano generalmente misurabili Le concentrazioni plasmatiche massime mediane del metabolita principale (licarbazepina, (+/-)- 10,11-diidro-10-idrossi-5H-dibenz/b,f/azepina-5-carbossammide) sono stati raggiunti (t(max)) da 2 a 3 ore dopo la dose; successivamente, le concentrazioni plasmatiche sono diminuite con una metà terminale apparente media -vita di f Da 9 a 13 h dopo somministrazione ripetuta. L'entità dell'esposizione sistemica alla licarbazepina è aumentata in modo approssimativamente proporzionale alla dose dopo somministrazione singola e ripetuta. Licarbazepina accumulata nel plasma in seguito a somministrazione ripetuta di BIA 2-093; l'entità media dell'accumulo (R(O), calcolata da AUC(0-tau) (giorno 8)/AUC(0-tau) (giorno 1)) è stata di 3,0 dopo somministrazione ripetuta due volte al giorno e da 1,4 a 1,7 dopo una volta - dosaggio giornaliero. Le concentrazioni plasmatiche di licarbazepina allo stato stazionario sono state raggiunte a 4-5 giorni di somministrazione una o due volte al giorno, in linea con un'emivita effettiva dell'ordine di 20-24 ore. La clearance renale media della libbazepina dal plasma era di circa 20-30 ml/min, che è bassa rispetto alla velocità di filtrazione glomerulare. La quantità totale di licarbazepina recuperata nelle urine è stata di circa il 20% entro 12 ore dalla somministrazione e il 40% entro 24 ore dalla somministrazione. Tutti gli eventi avversi sono stati di gravità lieve, ad eccezione di 1 caso di sonnolenza di gravità moderata, verificatosi in un soggetto che riceveva 1200 mg di BIA 2-093. L'incidenza di eventi avversi è stata simile tra tutti i gruppi di trattamento, incluso il placebo. Non ci furono seri eventi sfavorevoli. In conclusione, BIA 2-093 è stato ben tollerato e sembrava essere rapidamente ed ampiamente metabolizzato in licarbazepina dopo somministrazione singola e ripetuta a soggetti giovani sani.
L'analisi cristallografica rivela che il candidato clinico antitumorale L-778,123 inibisce la proteina farnesiltransferasi e la geranilgeraniltransferasi-I con diverse modalità di legame.Molte proteine di trasduzione del segnale che controllano la crescita , differenziazione e trasformazione, inclusi i membri della famiglia Ras GTPase, richiedono l'attaccamento covalente di un gruppo lipidico da parte della proteina farnesiltransferasi (FTase) o della proteina geranilgeraniltransferasi di tipo I (GGTase-I) per il corretto funzionamento e per l'attività trasformante dei mutanti oncogeni. Gli inibitori sono una nuova classe di potenziali terapie antitumorali in fase di valutazione negli studi clinici sull'uomo. Qui presentiamo le strutture cristalline del candidato clinico L-778,123 complessato con FTasi di mammifero e complessato con l'enzima correlato GGTase-I. Anche se FTase e GGTase-I hanno siti attivi molto simili, L-778,123 adotta differenti modalità di legame nei due enzimi; in FTase, L-778,123 è competitivo con la proteina su bstrato, mentre in GGTase-I, L-778,123 è competitivo con il substrato lipidico e il legame con l'inibitore è sinergizzato dagli anioni tetraedrici. Un confronto di questi complessi rivela che piccole differenze nella struttura proteica possono influenzare notevolmente il legame e la selettività dell'inibitore. Queste strutture dovrebbero facilitare la progettazione di inibitori più specifici verso FTase o GGTase-I. Infine, il legame di un farmaco e di un anione insieme potrebbe essere applicabile per lo sviluppo di nuove classi di inibitori.
Inibitori della farnesil transferasi per pazienti con cancro del polmone.La famiglia di geni ras è stata identificata come potenziali bersagli per l'intervento terapeutico a causa di mutazioni somatiche in diversi tumori umani. Sono mutati nel carcinoma polmonare non a piccole cellule (NSCLC) circa il 20% delle volte. L'enzima farnesil transferasi è coinvolto nella modifica post-traduzionale delle proteine ras legando covalentemente un gruppo farnesile alla proteina ras. proteina ras da traslocare alla membrana superficiale, consentendo alla proteina di essere coinvolta nella segnalazione per l'aumento della proliferazione e l'inibizione dell'apoptosi. La classe di inibitori della farnesil transferasi è progettata per bloccare la farnesilazione e prevenire la segnalazione matura di ras e quindi inibire la proliferazione cellulare e facilitare apoptosi Sono stati sviluppati più agenti che inibiscono la farnesilazione e sono stati testati due inibitori della farnesil transferasi in pazienti con cancro in tre studi di Fase II. R115777 è stato studiato in pazienti con NSCLC e in pazienti con carcinoma polmonare a piccole cellule (SCLC) recidivato dopo chemioterapia. C'è stato un singolo studio di L-778,123 in pazienti con NSCLC non trattato. In questi studi non sono state osservate risposte obiettive del tumore in pazienti con NSCLC in stadio IIIB/IV. Non ci sono state risposte obiettive anche tra i 22 pazienti con SCLC recidivante trattati con R115777. La sopravvivenza mediana per i 44 pazienti con NSCLC trattati con R115777 era di circa 8 mesi, mentre era di 11 mesi per i 23 pazienti trattati con L-778,123. R115777 e L-778,123 sono stati ben tollerati in questi studi, ma non hanno mostrato alcuna attività significativa come terapia con agente singolo in SCLC recidivante o NSLC non trattato.
Sperimentazione di fase I del nuovo taxano BMS-184476 somministrato in combinazione con carboplatino ogni 21 giorni.Lo scopo dello studio era determinare il massimo -dose tollerata e tossicità dose-limitanti per BMS-184476, in combinazione con carboplatino, in pazienti con tumori solidi avanzati e per descrivere qualsiasi attività antitumorale preliminare associata a questo regime. I pazienti hanno ricevuto una terapia di associazione con BMS-184476 somministrato per via endovenosa per 1 ora seguita da carboplatino somministrato nell'arco di 30 minuti il giorno 1 di un ciclo di 21 giorni. In tutto, 28 pazienti hanno ricevuto 146 cicli di BMS-184476 e carboplatino. I pazienti sono stati arruolati a quattro livelli di dose: BMS-184476 (mg m(-2)) /carboplatino (mg min ml(-1)): 40/5, 50/5, 50/6 e 60/6. La tossicità dose-limitante a 60/6 era neutropenia. Tra 27 pazienti valutabili, 11 hanno dimostrato una malattia stabile per un mediana di 8,5 cicli. In 22 pazienti, la farmacocinetica di BMS-184476 è apparsa indipendente dalla dose di BMS-184476. ean+/-s. e. m. i valori per la clearance (Cl), il volume di distribuzione allo stato stazionario e l'emivita terminale apparente di BMS-184476 nei quattro gruppi di dosaggio durante il ciclo 1 erano 192+/-25 ml min m(-2), 377+/-69 lm(-2) e 33,7 +/- 5,9 h, rispettivamente. Un aumento della dose di carboplatino da 5 a 6 mg min ml(-1) può aver ridotto il Cl di BMS-184476. BMS-184476 in combinazione con carboplatino è stato ben tollerato alla dose di 50/6 e mostra evidenza di attività antitumorale in una popolazione pretrattata.
Preparazione di carbone attivo mediante carbonizzazione a bassa temperatura e attivazione fisica di bagassa grezza ad alto contenuto di ceneri per l'assorbimento di coloranti acidi.I carboni attivi sono stati preparati dalla bagassa attraverso un trattamento di carbonizzazione chimica a bassa temperatura (160 gradi C) e gassificazione con anidride carbonica a 900 gradi C. Il merito della carbonizzazione chimica a bassa temperatura nella preparazione dei carboni per l'attivazione è stato valutato confrontando le proprietà fisiche e chimiche dei carboni attivi sviluppati con questa tecnica con quelle convenzionali metodi che prevedono l'uso della pirolisi termica e sotto vuoto della bagassa. Inoltre, le proprietà di adsorbimento (colorante blu acido) di questi carboni attivi della bagassa sono state anche confrontate con un carbone attivo commerciale. I risultati suggeriscono che, nonostante l'elevato contenuto di ceneri del precursore, aree superficiali elevate (614-1433 m2 g(-1)) e carboni attivi microporosi (dimensione media dei pori da 0,45 a 1,2 nm) possono essere generati mediante chemi carbonizzazione e gassificazione cal. L'area dei micropori del carbone attivo sviluppato da carboni preparati dalla carbonizzazione chimica a bassa temperatura fornisce siti di adsorbimento favorevoli al colorante blu acido (391 mg g(-1) di carbonio). È stato dimostrato che l'alcalinità della superficie del carbonio e l'area della superficie totale hanno effetti complementari nel promuovere l'adsorbimento del colorante blu acido. È stato dimostrato che l'adsorbimento del componente colorato anionico del colorante acido è promosso nel carbonio che presenta superfici alcaline o caricate positivamente. Questo studio dimostra che i carboni attivi con elevate capacità di assorbimento del colorante acido possono essere preparati da bagassa ad alto contenuto di ceneri basata sulla carbonizzazione e gassificazione chimica a bassa temperatura.
Analisi chimica di monomeri in resine epossidiche a base di bisfenoli F e A.Diglicidil etere del bisfenolo A (DGEBA) è il monomero e il contatto più importante allergene nelle resine epossidiche a base di bisfenolo A (DGEBA-R). Per l'analisi di prodotti contenenti DGEBA-R sono disponibili sia i metodi di cromatografia su strato sottile (TLC) che di cromatografia liquida ad alta pressione (HPLC). rilevamento e quantificazione, le resine epossidiche del tipo bisfenolo F, cioè le resine epossidiche contenenti gli isomeri degli eteri diglicidilici del bisfenolo F (DGEBF), non sono studiate così bene come DGEBA-R. Gli isomeri di DGEBF sono p,p\'- DGEBF, o,p\'-DGEBF e o,o\'-DGEBF. È stato dimostrato che sia p,p\'-DGEBF che o,p\'-DGEBF sono allergeni da contatto nell'uomo e tutti e 3 gli isomeri sono sensibilizzanti nel test di massimizzazione della cavia Abbiamo mirato (i) a sviluppare metodi HPLC per la separazione e purificazione dei singoli isomeri DGEBF, (ii) a rilevare e quantificare il Isomeri DGEBF in resine epossidiche del tipo bisfenolo F e (iii). valutare e sviluppare la TLC come metodo per la rilevazione dei monomeri DGEBF. Abbiamo riscontrato che il contenuto totale degli isomeri DGEBF nelle resine epossidiche indagate del tipo bisfenolo F varia dal 17,0 all'81,7% p/p. Alcuni di essi contenevano anche 0,1-2,4% p/p di DGEBA. Il metodo HPLC ha mostrato una sensibilità 2000-20 000 volte superiore a quella ottenuta con il metodo TLC per i monomeri DGEBF. Abbiamo concluso che l'intervallo del contenuto di isomero DGEBF nelle resine epossidiche del tipo bisfenolo F è approssimativamente lo stesso del contenuto di monomero nel liquido rispetto al DGEBA-R solido. La rilevanza dell'allergia da contatto a DGEBA-R può rimanere non riconosciuta se il prodotto sospetto è una resina epossidica di tipo bisfenolo F, che viene analizzata con il metodo TLC.
Il trattamento acuto con l'antidepressivo fluoxetina internalizza gli autorecettori 5-HT1A e riduce il legame in vivo del radioligando PET [18F]MPPF nel nucleo rafe dorsale del ratto.Poiché i recettori 5-HT1A situati sui dendriti somatici dei neuroni serotoninergici (5-HT) normalmente mediano un'inibizione della scarica e del rilascio di 5-HT, la desensibilizzazione di questi autorecettori è essenziale per ottenere un miglioramento della trasmissione di 5-HT dopo trattamento con inibitori della ricaptazione della 5-HT (SSRI) Abbiamo dimostrato in precedenza, mediante microscopia immunoelettronica con anticorpi specifici 5-HT1A, che un'internalizzazione degli autorecettori 5-HT1A è associata alla loro desensibilizzazione nei ratti a cui è stata somministrata una singola dose di 5-HT1A. Agonista del recettore HT1A 8-idrossi-2-(di-n-propilammino)tetralina. Qui, abbiamo esaminato la distribuzione subcellulare dei recettori 5-HT1A nei dendriti dal nucleo del rafe dorsale (NRD) (autorecettori) e dall'ippocampo (eterorecettori) dopo trattamento acuto ent con l'antidepressivo SSRI, fluoxetina (10 mg/kg, i. p. ). In esperimenti paralleli, la cinetica del legame in vivo del radioligando per tomografia a emissione di positroni 5-HT1A 4,2-(metossifenil)-1-[2-(N-2-piridinil)-p-fluorobenzamido]etilpiperazina ([18F]MPPF ) è stato misurato in queste due regioni del cervello mediante microsonde beta impiantate stereotassicamente. Un'ora dopo il trattamento, si è verificata una diminuzione del 36% della marcatura con immunooro 5-HT1A della membrana plasmatica dei dendriti NRD e un concomitante aumento della loro marcatura citoplasmatica, senza alcun cambiamento nei dendriti dell'ippocampo. Il legame in vivo di [18F]MPPF è stato ridotto del 35% in NRD e invariato nell'ippocampo. Entrambi gli effetti sono stati bloccati dal pretrattamento con l'antagonista del recettore 5-HT1A (N-[2-[4-(2-metossifenil)-1-piperazinil]etil]-N-(2-piridinil) cicloesano-carbossammide) (1 mg/ kg, ip). Nelle sezioni cerebrali di NRD e ippocampo, l'etichettatura autoradiografica di [18F]MPPF non differiva tra i ratti trattati con fluoxetina e quelli trattati con soluzione salina. Questi risultati immunocitochimici hanno confermato che l'internalizzazione degli autorecettori 5-HT1A può spiegare la loro desensibilizzazione e i risultati della microsonda suggeriscono che questo prerequisito per l'efficacia del trattamento antidepressivo potrebbe essere suscettibile di imaging cerebrale negli esseri umani.
Coinvolgimento obbligatorio di CD26/dipeptidil peptidasi IV nell'attivazione del tripeptide antiretrovirale glicilprolilglicinamide (GPG-NH(2)).GPG-NH2 e I G-NH2 sono agenti antiretrovirali altamente selettivi nelle colture cellulari ed entrambi i composti inibiscono in egual misura la replicazione dell'HIV nelle colture cellulari CEM (concentrazione efficace del 50%: circa 30 microM). Il marcatore glicoproteico di superficie dei linfociti CD26, che è identico alla dipeptidil peptidasi IV, ha convertito in modo efficiente GPG-NH2 in G-NH2 rilasciando il dipeptide GP-OH. Il derivato QPG-NH2 strettamente correlato era anche inibitorio dell'HIV, presumibilmente dal rilascio catalizzato dalla dipeptidil peptidasi IV (DPP IV) di G-NH2. al contrario, il derivato ciclico pQPG-NH2 in cui la glutammina nella posizione terminale amminica di QPG-NH2 è stata sostituita dalla piroglutammina e che è resistente alla scissione da parte del CD26 purificato, era privo di attività antivirale. CD26 è abbondantemente espresso su una varietà di HIV cellule bersaglio ed è presente anche nel siero di origine bovina, murina e umana. L'attività enzimatica di CD26/DPP IV nel siero e nelle sospensioni cellulari potrebbe essere efficacemente inibita dall'inibitore di CD26/DPP IV L-isoleucinapirrolidina (IlePyr) con concentrazioni inibitorie del 50% comprese tra 20 e 100 microM. Quando combinati in colture cellulari infette da HIV-1, IlePyr e Diprotin A (DP-A), un altro inibitore di CD26/DPP IV, hanno abrogato l'attività antivirale di GPG-NH2 ma non di G-NH2. Pertanto, si è concluso che il farmaco anti-HIV GPG-NH2 non è attivo come tale, ma piuttosto si comporta come un profarmaco che deve essere obbligatoriamente scisso da CD26/DPP IV in G-NH2 per esercitare la sua attività antiretrovirale. Questa è la prima dimostrazione di un marcatore di attivazione/differenziazione linfocitaria (cioè CD26) che svolge un ruolo regolatore diretto e indispensabile nell'eventuale attività antiretrovirale di piccole molecole sintetiche come l'antiretrovirale (pro)farmaco GPG-NH2.
Clonazione ed espressione della fosfatasi trealosio-fosfato di Mycobacterium tuberculosis: confronto con l'enzima di Mycobacterium smegmatis.Due frame di lettura aperti nel Mycobacterium tuberculosis genoma, Rv3372 e Rv2006, hanno circa il 25% di identità di sequenza a livello di aminoacidi con la trealosio-fosfato fosfatasi (TPP) purificata da Mycobacterium smegmatis Tuttavia, la proteina prodotta dal gene Rv3372 clonato ha un peso molecolare di circa 45 kDa mentre il trealosio-P fosfatasi purificata da M. smegmatis ha un peso molecolare di circa 27 kDa. Abbiamo espresso la proteina Rv3372 in Escherichia coli e mostriamo qui che si tratta di una trealosio-P fosfatasi con proprietà molto simili al M. smegmatis TPP, cioè completa specificità per trealosio-fosfato come substrato, un requisito quasi assoluto per Mg(2+) e un pH ottimale di 7-7,5 D'altra parte, a differenza dell'enzima M. smegmatis, la proteina Rv3372 era molto meno stabile al calore e molto meno sensibile all'inibizione da parte di diumicina e moenomicina. Infatti, entrambi questi antibiotici stimolano l'attività enzimatica a basse concentrazioni e inibiscono l'attività solo a concentrazioni antibiotiche più elevate. L'anticorpo preparato contro il TPP 27kDa non reagisce crociata con il TPP 45kDa né l'anticorpo contro il TPP 45kDa reagisce incrociato con il TPP 27kDa. Tuttavia, gli studi sulla struttura secondaria per dicroismo circolare indicano che i due enzimi sono abbastanza simili nella struttura. Il prodotto dell'altro gene, Rv2006, è una proteina di 159 kDa senza attività di fosfatasi rilevabile. Pertanto, la sua funzione è attualmente sconosciuta.
Noladin ether, un presunto endocannabinoide, attenua la neurotrasmissione sensoriale nel letto arterioso mesenterico isolato di ratto tramite un recettore collegato non CB1/CB2 G(i/o).Due frame di lettura aperti nel Mycobacterium tuberculosis genoma, Rv3372 e Rv2006, hanno circa il 25% di identità di sequenza a livello di aminoacidi con la trealosio-fosfato fosfatasi (TPP) purificata da Mycobacterium smegmatis Tuttavia, la proteina prodotta dal gene Rv3372 clonato ha un peso molecolare di circa 45 kDa mentre il trealosio-P fosfatasi purificata da M. smegmatis ha un peso molecolare di circa 27 kDa. Abbiamo espresso la proteina Rv3372 in Escherichia coli e mostriamo qui che si tratta di una trealosio-P fosfatasi con proprietà molto simili al M. smegmatis TPP, cioè completa specificità per trealosio-fosfato come substrato, un requisito quasi assoluto per Mg(2+) e un pH ottimale di 7-7,5 D'altra parte, a differenza dell'enzima M. smegmatis, la proteina Rv3372 era molto meno stabile al calore e molto meno sensibile all'inibizione da parte di diumicina e moenomicina. Infatti, entrambi questi antibiotici stimolano l'attività enzimatica a basse concentrazioni e inibiscono l'attività solo a concentrazioni antibiotiche più elevate. L'anticorpo preparato contro il TPP 27kDa non reagisce crociata con il TPP 45kDa né l'anticorpo contro il TPP 45kDa reagisce incrociato con il TPP 27kDa. Tuttavia, gli studi sulla struttura secondaria per dicroismo circolare indicano che i due enzimi sono abbastanza simili nella struttura. Il prodotto dell'altro gene, Rv2006, è una proteina di 159 kDa senza attività di fosfatasi rilevabile. Pertanto, la sua funzione è attualmente sconosciuta.
Uso di barriere sterili massime per prevenire l'infezione correlata al catetere venoso centrale: una revisione sistematica basata sull'evidenza.Le infezioni correlate al catetere causano un aumento della morbilità e della mortalità e costi sanitari. Gli esperti di controllo delle infezioni raccomandano l'uso di barriere sterili massime per ridurre l'incidenza di queste infezioni. I bassi tassi di compliance suggeriscono che i medici non sono convinti o non sono consapevoli che i dati disponibili supportano l'adozione di questo metodo più ingombrante, dispendioso in termini di tempo e relativamente tecnica più costosa. Di conseguenza, abbiamo condotto una revisione sistematica e basata sull'evidenza della letteratura medica per determinare il valore delle barriere sterili massime. Abbiamo utilizzato più database computerizzati, elenchi di riferimento di articoli identificati e query di ricercatori di spicco. Abbiamo selezionato studi che confrontavano esiti infettivi utilizzando la massima barriera sterile rispetto all'utilizzo di tecniche di barriera sterile meno rigorose durante l'inserimento del catetere venoso centrale trovato solo 3 studi di ricerca primari. Sebbene ogni studio suggerisca che le barriere sterili massime possono ridurre le complicanze infettive, le prove a sostegno di questa conclusione sono incomplete. L'unico studio randomizzato controllato ha limitato l'arruolamento ai pazienti oncologici ambulatoriali. Questi 3 studi differivano notevolmente nelle popolazioni di pazienti, nei progetti di ricerca e nelle impostazioni sanitarie. La letteratura medica suggerisce che le barriere sterili massime sono vantaggiose in almeno un contesto e possono essere utili in altri. Sebbene riteniamo che le prove disponibili supportino l'uso di barriere sterili massime durante l'inserimento di routine di cateteri venosi centrali, studi prospettici e analisi economiche ne chiarirebbero meglio il valore.
Modulazione della resistenza ai beta-lattamici in Staphylococcus aureus da parte di catechine e gallati.Estratti acquosi di tè verde giapponese (Camellia sinensis) sono in grado di invertire la beta -resistenza ai lattamici nello Staphylococcus aureus meticillino-resistente (MRSA). Abbiamo attribuito la capacità di invertire la resistenza all'oxacillina nel produttore omogeneo di PBP2a BB568 e in EMRSA-16 a (-)-epicatechina gallato (ECG) e (-)-catechina gallato (CG). I valori di concentrazione minima inibitoria (MIC) per l'oxacillina sono stati ridotti da 256 e 512 a 1-4 mg/l, rispettivamente, in presenza di questi polifenoli. Inoltre, (-)-epigallocatechina gallato (EGCG) ha avuto un moderata capacità di modulare l'attività dell'oxacillina contro S. aureus BB568, ma nessuna contro EMRSA-16. ECG, CG ed EGCG hanno aumentato la sensibilità di EMRSA-15 all'oxacillina. La frazione gallato era essenziale per l'attività di modulazione dell'oxacillina dell'ECG, poiché entrambi (-)-epicatechina e (-)-epicatechina-3-cicloesilcarbossilato we non è in grado di invertire la resistenza all'oxacillina. L'acido gallico e tre alchil gallati (metil gallato, propil gallato e ottil gallato) non hanno modulato la resistenza ai beta-lattamici nell'MRSA. Il gallato di ottile ha mostrato un'attività antibatterica diretta contro S. aureus BB568 (16 mg/l). La modulazione della resistenza ai beta-lattamici mediante ECG ha migliorato significativamente le attività della flucloxacillina e degli antibiotici carbapenemi imipenem e meropenem contro 40 isolati di MRSA, con valori di MIC(90) per gli antibiotici ridotti al breakpoint di suscettibilità o inferiori. Di conseguenza, EGCG, CG e, in particolare, ECG richiedono ulteriori indagini come agenti per combattere la resistenza ai beta-lattamici in S. aureus.
Studio sugli effetti antiandrogeni del bisfenolo a diglicidil etere (BADGE), bisfenolo F diglicidil etere (BFDGE) e dei loro derivati utilizzando cellule stabilmente trasfettate con il recettore umano degli androgeni, AR- EcoScreen.Abbiamo studiato l'attività ormonale in vitro del bisfenolo A diglicidil etere (BADGE) e del bisfenolo F diglicidil etere (BFDGE), che vengono utilizzati come materiale di rivestimento interno per lattine per alimenti. Abbiamo anche esaminato i composti correlati come 2,2-bis[4-(3-cloro-2-idrossipropossi)fenil]propano (BADGE.2HCl) e bis[4-(3-cloro-2-idrossipropossi)fenil]metano (BFDGE.2HCl) ecc. A questo scopo, abbiamo costruito due linee cellulari CHO-K1 stabilmente trasfettate (AR-EcoScreen per l'attività androgena e c-luc per la valutazione della tossicità cellulare): una esprime stabilmente luciferasi con induzione di androgeni e l'altra esprime stabilmente luciferasi senza induzione di androgeni Inoltre, abbiamo determinato gli effetti androgeni e anti-androgeni delle sostanze chimiche in esame dal gene reporter as diciamo con queste linee cellulari. Nessuna delle sostanze chimiche testate con questo test ha mostrato attività agonista degli androgeni. Tuttavia, BADGE.2HCl e BFDGE.2HCl avevano la cospicua attività antagonista per gli androgeni. Questi composti avevano un'elevata affinità di legame per il recettore degli androgeni. Inoltre, questi due composti non hanno mostrato l'attività estrogenica in saggi in vitro. Al contrario, il bisfenolo A e il bisfenolo F hanno mostrato attività antiandrogena in vitro oltre all'attività estrogenica. Questi risultati suggeriscono che questi composti cloroidrossilici di BADGE e BFDGE agiscono come antagonisti degli androgeni attraverso il processo di legame al recettore degli androgeni.
Confronto delle attività steroidee dei composti naturali e degli involucri alimentari nelle linee cellulari del cancro al seno umano.In questo studio, abbiamo testato e confrontato le attività di interruzione del sistema endocrino di composti in materiali utilizzati per confezionare alimenti (bisfenolo A, bisfenolo F e bisfenolo A diglicidiletere BADGE) con molecole naturali (genisteina, apigenina, kaempferolo e tangeretina) nelle linee cellulari di cancro al seno umano MCF-7 (ER(+)) e MDA-MB453 (AR(+); GR(+)). Anche l'ottilfenolo è stato scelto come riferimento per lo xenoestrogeno. Due composti non avevano attività estrogenica: BADGE e tangeretina. La genisteina era il composto più attivo nel test E-Screen con MCF- 7, seguito da ottilfenolo, bisfenolo F, bisfenolo A e apigenina, con il kaempferolo il meno potente. Tutti i composti estrogenici competono con il 17beta-estradiolo per il legame all'MCF-7 ER e i loro effetti estrogenici sono stati aboliti in presenza di tamoxifene, un ER antagonista Nelle cellule MDA-MB453 trasfettate con pMMTVneo-Luc , tutti i composti avevano attività antiandrogena, con l'ottilfenolo il più potente. Kaempferol, genisteina e apigenina erano antiandrogeni più potenti dei bisfenoli A o F. I composti naturali avevano un effetto bifasico sull'attività della luciferasi. Ad alte concentrazioni, genisteina (10(-5)M) e apigenina (10(-6)M) hanno agito come agonisti GR nelle cellule MDA-MB453 trasfettate. Inoltre, l'apigenina, a una concentrazione di 10(-5)M, può agire come agonista parziale del recettore degli androgeni (AR), poiché la nilutamide, un antagonista dell'AR, ha inibito la sua attività del 26%.
Analgesia epidurale per alleviare il dolore durante il travaglio e il parto - una revisione con un approccio sistematico.Ambiguità clinica relativa agli effetti dell'analgesia epidurale per alleviare il dolore durante il travaglio sembra riflettere la necessità di conoscenze basate sull'evidenza per le ostetriche. Questo studio mirava a rivedere, con un approccio sistematico, la letteratura sugli effetti e sui rischi associati all'uso dell'analgesia epidurale per alleviare il dolore durante il travaglio e il parto. È stata formulata una domanda strutturata e utilizzato per derivare i termini di ricerca, stabilire l'inclusione di determinati criteri e recuperare articoli, ad esempio quali sono gli effetti dell'analgesia epidurale per alleviare il dolore durante il travaglio e il parto. CINAHL (es. Analgesia ostetrica combinata con la psicologia o gli effetti avversi e insieme a Distocia, Taglio cesareo, Neonato e Allattamento al seno) Gli articoli sono stati divisi in studi prospettici randomizzati (C), studi prospettici non randomizzati (P) e studi retrospettivi (R). La qualità scientifica degli studi è stata valutata su una scala di tre gradi: alta qualità scientifica (I), moderata qualità scientifica (II) o bassa qualità scientifica (III). Ventiquattro articoli sono stati recuperati e valutati sistematicamente. Sette studi sono stati giudicati di alta qualità, 15 di qualità moderata e due di bassa qualità. La maggior parte degli studi valutati in questa revisione non è riuscita a ottenere o stabilire una relazione di causa ed effetto. Secondo i dati, sembra chiaro che l'uso dell'analgesia epidurale è considerato un metodo efficace per alleviare il dolore durante il travaglio e il parto dal punto di vista delle donne che partoriscono. Ostetriche e medici possono raccomandare questa forma di sollievo dal dolore. Tuttavia, alle coppie in attesa devono essere fornite informazioni sulle possibili associazioni con effetti avversi nelle madri e nei neonati.
Procedure di ricerca e revisione sistematiche: risultati della task force del Centro di collaborazione dell'OMS sulle lesioni cerebrali traumatiche lievi.La task force del Centro di collaborazione dell'OMS per i neurotraumi su Lesioni cerebrali traumatiche lievi hanno eseguito una ricerca completa e una revisione critica della letteratura pubblicata tra il 1980 e il 2002 per raccogliere le migliori prove sull'epidemiologia, la diagnosi, la prognosi e il trattamento delle lesioni cerebrali traumatiche lievi. Le nostre fonti primarie di letteratura sono state Medline, Cinahl, PsycINFO e Embase. Le citazioni sono state vagliate per la rilevanza di lesioni cerebrali traumatiche lievi, utilizzando criteri a priori, e gli studi pertinenti sono stati esaminati in modo critico per il merito scientifico. Abbiamo identificato 38.806 citazioni, di cui 671 studi sono stati giudicati rilevanti per il mandato della task force. Questi , oltre a 70 studi trovati tramite la ricerca manuale di elenchi di riferimento e 2 rapporti di ricerca originali eseguiti come parte del mandato della task force sono stati sottoposti a revisioni critiche. r review, 313 (42%) sono stati accettati sulla base del merito scientifico e costituiscono la nostra sintesi delle migliori prove. Il novanta percento della letteratura sulla lesione cerebrale traumatica lieve è stata trovata in Medline e un altro 5% in PsycINFO.
Allergia da contatto agli isomeri del diglicidil etere del bisfenolo F.Il diglicidil etere del bisfenolo A (DGEBA) è il monomero e il principale allergene nelle più resina epossidica comune, DGEBA-R. Resina epossidica a base di bisfenolo F (DGEBF-R) contiene i 3 isomeri del diglicidil etere del bisfenolo F. Allergia da contatto a questi isomeri (p,p\'-DGEBF, o, p\'-DGEBF e o,o\'-DGEBF) non è stato precedentemente descritto nell'uomo. Per studiare le allergie da contatto agli isomeri DGEBF in pazienti con allergia da contatto a DGEBF-R, 9 pazienti sono stati sottoposti a patch test con serie di diluizioni di gli isomeri. Tutti e 9 sono risultati avere allergia da contatto a p,p\'-DGEBF e 7/9 a o,p\'-DGEBF. Inoltre, di 20 lavoratori impiegati nella produzione a base epossidica e con allergia da contatto a DGEBA- R e DGEBF-R, 18 hanno reagito a p,p\'-DGEBF e 15/20 a o,p\'-DGEBF. Secondo un test di massimizzazione della cavia, tutti e 3 gli isomeri DGEBF sono forti sensibilizzanti. Tuttavia, o,o \'-DGEB F elicito solo 3 reazioni positive in tutti i partecipanti.
[Costituenti chimici della Ligularia dictyoneura].Per studiare i costituenti chimici della Ligularia dictyoneura. Sono state utilizzate varie tecniche cromatografiche per separare e purificare i composti. I loro dati spettrali (MS, IR, NMR) sono stati misurati per chiarire la struttura Quattro sesquiterpeni sono stati isolati da Ligularia dictyoneura e le loro strutture sono state identificate come ligudicina A (1), ligudicina C (2), ligudicina D (3) e isopetasina (4 Il composto 1 è un nuovo composto, il composto 2 è un nuovo prodotto naturale e i composti 3 e 4 sono ottenuti per la prima volta dalla Ligularia dictyoneura.
Una revisione sistematica del percorso naturalistico e del trattamento del disturbo bipolare ad esordio precoce in un centro di psichiatria infantile e adolescenziale.Studi sul percorso naturalistico del disturbo bipolare ad esordio precoce sono pochi e gli studi che valutano l'efficacia della farmacoterapia consistono in gran parte in studi aperti di timolettici e neurolettici su piccoli campioni. disturbo in un centro di psichiatria infantile e adolescenziale in India. È stata eseguita una revisione del grafico di 139 bambini e adolescenti (<16 anni) con una diagnosi DSM-IV di disturbo bipolare-mania e le caratteristiche demografiche e cliniche di base, le caratteristiche degli episodi e il trattamento e i dettagli del follow-up sono stati raccolti e i dati analizzati L'episodio indice è stato rimesso in tutti i 133 (96%) soggetti per i quali l'informazione era disponibile Centoventicinque (90%) s i soggetti hanno ricevuto timolettici per l'episodio indice, di cui il litio è stato utilizzato nell'85%. Il valproato è stato il successivo timolettico più comunemente usato (18%). Diciotto (13%) soggetti hanno ricevuto timolettici combinati. Il sessantotto percento ha ricevuto neurolettici da soli o in aggiunta nella fase acuta. Durante il periodo di follow-up, che variava da 3 a 56 mesi (media +/- DS, 15 +/- 14), il 35% dei soggetti ha avuto una recidiva, l'89% entro i primi 2 anni. Il ventotto percento dei soggetti ha avuto una ricaduta nonostante fossero in dosi apparentemente adeguate di litio. I limiti dello studio sono che è di natura retrospettiva e che non sono stati utilizzati strumenti diagnostici strutturati e scale di valutazione. Concludiamo che il litio è il timolettico più comunemente usato nel disturbo bipolare ad esordio precoce. Il litio da solo o in combinazione con neurolettici sembra avere una buona efficacia nella fase acuta della malattia. La maggior parte delle recidive si è verificata nei primi 2 anni e l'efficacia dei timolettici attualmente utilizzati nella profilassi è incerta.
Potenti antagonisti della bradichinina contenenti N-benzilglicina o N-benzil-l-alanina in posizione 8.Due nuovi analoghi di una bradichinina precedentemente progettata (BK ) antagonista, d-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-d-Phe-Thi-Arg, sostituito in posizione 8 da N-benzilglicina e N-benzil-l-alanina sono stati progettati, sintetizzati e biodosati. I risultati mostrano un impressionante miglioramento delle potenze antagoniste B2 di entrambi i peptidi rispetto al modello. In due ulteriori analoghi queste modifiche sono state combinate con l'acilazione dell'N-terminale con acido 1-adamantanacarbossilico. Gli analoghi acilati hanno mostrato una potenza antagonista maggiore rispetto al composti progenitori, tuttavia, la gamma di effetto non era così elevata come nei casi precedentemente descritti. L'attività degli analoghi è stata valutata dalla loro capacità di inibire la risposta vasodepressiva al BK esogeno (test della pressione sanguigna del ratto). I nostri risultati possono essere utili nel progettazione di antagonisti BK più potenti.
Quali interventi facilitano lo svezzamento dal ventilatore? Una revisione delle prove da revisioni sistematiche.La ventilazione meccanica salva la vita a molti bambini molto prematuri ma prolungata l'uso può avere effetti avversi aumentando il rischio di lesioni sottoglottiche e malattie polmonari croniche (CLD). Una ventilazione più breve dovrebbe ridurre questi rischi e sono stati testati numerosi interventi per facilitare l'estubazione precoce. La Cochrane Library è stata ricercata per revisioni sistematiche di studi randomizzati controllati di interventi per facilitare l'estubazione e ridurre l'atelettasia post-estubazione. Questi interventi includevano pressione positiva continua nasale delle vie aeree (CPAP), ventilazione nasale a pressione positiva intermittente (NIPPV), fisioterapia toracica, desametasone endovenoso e trattamento con metilxantina. I risultati sono indicati come numeri necessari per il trattamento (NNT) con intervalli di confidenza (CI) al 95%. La CPAP nasale riduce l'incidenza di effetti avversi dopo l'estubatio n compreso il guasto (NNT 6; 95% CI 4-15) e CLD a 28 giorni (NNT 6; 95% CI 3-22). La NIPPV è superiore alla CPAP nasale nel prevenire il fallimento dell'estubazione (NNT 3; 95% CI 2-5). La fisioterapia toracica dopo l'estubazione non riduce l'atelettasia alveolare ma diminuisce la necessità di reintubazione (NNT 6; 95% CI 4-23). La fisioterapia toracica deve essere somministrata ogni 1-2 ore per ottenere questo effetto. Il desametasone per via endovenosa riduce la necessità di reintubazione (NNT 6; 95% CI 3-250) ma gli effetti avversi ne precludono l'uso di routine. Le metilxantine migliorano anche le possibilità di successo dell'estubazione (NNT 4; 95% CI 2-7) e l'effetto è maggiore nei neonati <1000g peso alla nascita e <7 giorni di età postnatale (NNT 2; 95% CI 1-8). CPAP nasale, NIPPV e metilxantine sono trattamenti basati sull'evidenza per facilitare lo svezzamento e l'estubazione dei neonati prematuri, ma solo i primi 2 possono essere raccomandati per l'uso di routine. La fisioterapia toracica e il desametasone possono essere efficaci ma non dovrebbero essere usati di routine a causa di gravi effetti avversi.
Gli endocannabinoidi modulano i canali del calcio di tipo N e i canali del potassio rettificanti internamente accoppiati a proteine G tramite i recettori cannabinoidi CB1 espressi in modo eterologo nei neuroni dei mammiferi.Gli endocannabinoidi possono fungono da messaggeri retrogradi per inibire il rilascio di neurotrasmettitori durante la soppressione dell'inibizione (DSI) o dell'eccitazione (DSE) indotta dalla depolarizzazione. Pertanto, abbiamo testato se gli endocannabinoidi inibiscono i canali Ca2+ di tipo N voltaggio-dipendenti attivando la proteina G(i/o)-accoppiata Recettori cannabinoidi CB1 (CB1R): un possibile meccanismo alla base di DSI/DSE Tre endocannabinoidi putativi [2-arachidonilglicerolo (2-AG), 2-arachidonilglicerolo etere (2-AGE) e anandamide (AEA)] e l'aminoalchilindolo cannabimimetico WIN 55,212-2 (WIN) ha inibito le correnti di Ca2+ a cellule intere nei neuroni simpatici di ratto precedentemente iniettati con cDNA codificante un CB1R umano L'inibizione della corrente Ca2+ mediata da agonisti è stata bloccata da un antagonista selettivo CB1R [SR141716A, N-( piperidin-1-il)-5-(4-clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-4-metil-1H-pirazolo-3-carbossimide cloridrato] e tossina della pertosse (PTX). L'ordine di classificazione della potenza era WIN (IC50=2 nM)>2-AGE (350 nM) circa 2-AG (480 nM)>AEA (circa 3 microM), con ogni agonista che mostrava un'efficacia simile (circa il 50% di inibizione massima). L'aumento del livello di espressione di CB1R ha migliorato significativamente la potenza dell'AEA. L'AEA (10 microM) ha anche inibito i canali Ca2+ in modo indipendente dal voltaggio, indipendente da CB1R e PTX-insensibile, mentre 2-AG e 2-AGE erano privi di questa attività. Tutti e tre gli endocannabinoidi hanno attivato i canali GIRK1/4 del potassio rettificanti verso l'interno accoppiati a proteine G, espressi in modo eterologo nei neuroni simpatici. Questi risultati suggeriscono un meccanismo attraverso il quale gli endocannibinoidi potrebbero influenzare la funzione presinaptica.
Ruolo delle proteine leganti la penicillina di classe A nella resistenza ai beta-lattamici mediata da PBP5 in Enterococcus faecalis.I complessi di polimerizzazione del peptidoglicano contengono proteine leganti la penicillina multimodulari (PBP) delle classi A e B che associano un modulo conservato della transpeptidasi C-terminale a un modulo di glicosiltransferasi o morfogenesi N-terminale, rispettivamente. In Enterococcus faecalis, la classe B PBP5 media la resistenza intrinseca alla classe delle cefalosporine di antibiotici beta-lattamici, come come ceftriaxone. Per identificare i partner glicosiltransferasici di PBP5, sono state introdotte combinazioni di delezioni in tutti e tre i geni PBP di classe A di E. faecalis JH2-2 (ponA, pbpF e pbpZ). Tra i mutanti con delezioni singole o doppie, solo JH2-2 DeltaponA DeltapbpF era sensibile al ceftriaxone La resistenza al ceftriaxone è stata ripristinata dall'espressione eterologa di pbpF da Enterococcus faecium ma non da mgt che codifica per la glicosiltransferasi monofunzionale di Staphylo cocco aureo. Pertanto, i partner PBP5 essenziali per la polimerizzazione del peptidoglicano in presenza di beta-lattamici hanno formato un sottoinsieme dei PBP di classe A di E. faecalis ed è stata osservata una complementazione eterospecifica con un ortologo di E. faecium. La mutagenesi sito-diretta di pbpF ha confermato che il residuo di serina catalitica del modulo transpeptidasi non era necessario per la resistenza. Nessuno dei tre geni PBP di classe A era essenziale per la vitalità, sebbene la delezione dei tre geni portasse ad un aumento del tempo di generazione e ad una diminuzione della reticolazione del peptidoglicano. Poiché il cromosoma di E. faecalis non contiene altri geni correlati alla glicosiltransferasi, queste osservazioni indicano che la polimerizzazione della catena glicanica nel triplo mutante viene eseguita da un nuovo tipo di glicosiltransferasi. Quest'ultimo enzima non è stato inibito dalla moenomicina, poiché la delezione dei tre geni PBP di classe A ha portato a una resistenza di alto livello a questo inibitore della glicosiltransferasi.
Fase IB e studio farmacologico del nuovo taxano BMS-184476 in combinazione con doxorubicina.Lo scopo di questo studio era definire la dose massima tollerata (MTD) e il profilo farmacologico dell'analogo del paclitaxel BMS-184476 somministrato una volta ogni 3 settimane, o nei giorni 1 e 8 ogni 3 settimane (d1\&8), in combinazione con una dose fissa di 50 mg/m(2) di Doxorubicina (Doxo) somministrata il giorno 1 di un ciclo di 21 giorni. I pazienti adulti con neoplasie solide avanzate hanno ricevuto dosi crescenti di BMS-184476 infuse oltre 1 ora dopo il bolo di Doxo. La farmacocinetica (PK) di BMS-184476, Doxo e i metaboliti sono stati studiati L'effetto di BMS-184476 sulla formazione di doxorubicinolo è stato studiato nel citosol del miocardio umano. L'MTD di BMS-184476 a 3 settimane era di 30 mg/m(2). La dose MTD/raccomandata di Fase II era di 35 mg/m2 ( 2)/settimana (70 mg/m2 per ciclo) nella schedula d1\&8. La tossicità dose-limitante era neutropenia per entrambe le schedulazioni. Altre tossicità erano l Oss di appetito, astenia e lieve, neuropatia periferica cumulativa. Il tasso di risposta obiettiva in 17 pazienti precedentemente non trattate o minimamente pretrattate con carcinoma mammario trattate a 35 mg/m²/settimana di BMS-184476 è stata del 59% (95% intervallo di confidenza (CI): 33-82%). Due dei 7 pazienti che non hanno risposto al regime dello studio hanno successivamente risposto a Doxo e paclitaxel. La disposizione plasmatica di BMS-184476 a 30, 35 e 40 mg/m(2) era lineare senza evidenza di un'interazione PK con Doxo. Negli studi con il citosol del miocardio umano, la formazione di doxorubicinolo cardiotossico non è stata potenziata da BMS-184476. Il dosaggio di BMS-184476 per 2 settimane consecutive ha consentito la somministrazione di dosi maggiori del taxano con una promettente attività antitumorale in pazienti con carcinoma mammario non trattato o minimamente pretrattato. La mielotossicità superiore al previsto della schedula trisettimanale non è spiegata dalle interazioni studiate. La mancanza di una maggiore formazione di doxorubicinolo nel miocardio umano è coerente con la sicurezza cardiaca del regime.
Effetto inibitorio delle catechine del tè verde sulle proteinasi della cisteina in Porphyromonas gingivalis.Lo scopo di questo studio era esaminare gli effetti delle catechine e dei loro derivati su le attività di Arg-gingipain (Rgp) e Lys-gingipain (Kgp) in Porphyromonas gingivalis Derivati della catechina, che includevano (-)-epigallocatechina gallato, (-)-epicatechina gallato, (-)-gallocatechina gallato e (-) -catechina gallato, ha inibito significativamente l'attività Rgp. Le concentrazioni inibitorie del 50% (IC50s) di questi derivati della catechina per Rgp variavano da 3 a 5 microm. Mentre (-)-epigallocatechina e (-)-gallocatechina hanno moderatamente inibito l'attività Rgp (IC50s, 20 microm), (-)-epicatechina, (+)-catechina e acido gallico non sono risultati efficaci, con IC50 superiori a 300 microm. Inoltre, alcuni dei derivati delle catechine testati hanno anche inibito l'attività del Kgp, sebbene in misura minore rispetto a inibizione dell'attività Rgp Questi risultati suggeriscono che il tè verde le catechine possono potenzialmente ridurre la rottura parodontale derivante dalla potente attività proteasica di P. gingivalis.
Reattività degli isoenzimi della Candida rugosa lipasi (Lip1, Lip2 e Lip3) in mezzi acquosi e organici. influenza del profilo isoenzimatico sulle prestazioni della lipasi in mezzi organici.", Tre isoenzimi puri della Candida rugosa lipasi (CRL: Lip1, Lip2 e Lip3) sono stati confrontati in termini di stabilità e reattività in mezzi sia acquosi che organici. È stato studiato l'effetto combinato della temperatura e del pH sulla loro stabilità applicando un disegno fattoriale. L'analisi delle superfici di risposta ha indicato che Lip1 e Lip3 hanno una stabilità simile, inferiore a quella di Lip2. In mezzi acquosi, Lip3 è stato l'enzima più attivo sull'idrolisi dei p-nitrofenil esteri, mentre Lip1 ha mostrato la massima attività sull'idrolisi della maggior parte dei triacilgliceridi saggiati. Le maggiori differenze tra gli isoenzimi sono state riscontrate nell'idrolisi dei triacilgliceridi. Pertanto, un triacilgliceride a catena acilica corta, media e lunga era il substrato preferito per Lip3, Lip1, e Lip2, rispettivamente. In terreno organico, Lip3 e Lip1 hanno fornito ottimi risultati in termini di enantioselettività nella risoluzione dell'ibuprofene (valore EF superiore a 0,90) e conversione, mentre il tasso di esterificazione iniziale era più elevato per Lip3. Tuttavia, l'uso di Lip2 ha comportato valori inferiori di conversione, eccesso enantiomerico ed enantioselettività. Nel caso della risoluzione del trans-2-fenil-1-cicloesanolo (TPCH), i tassi di esterificazione iniziale erano elevati ad eccezione di Lip3, che produceva anche scarsi risultati nella conversione e nell'eccesso enantiomerico. Le prestazioni degli isoenzimi puri nell'esterificazione dell'enantioselettività di questi substrati sono state confrontate con diverse preparazioni grezze CRL con contenuto isoenzimatico noto e i diversi risultati non possono essere spiegati dal loro profilo isoenzimatico. Pertanto, si può concludere che anche altri fattori possono influenzare la catalisi del CRL e solo la riproducibilità tra le polveri può garantire la riproducibilità nelle reazioni di sintesi.
Nuovi composti antiaritmici con modalità d'azione combinata di classe IB e classe III.Le aritmie cardiache rappresentano un'importante area di ricerca cardiovascolare e per la terapia farmacologica, un'ampia scelta di agenti antiaritmici stata disponibile. Tuttavia, studi clinici con farmaci antiaritmici hanno recentemente indicato che gravi effetti collaterali possono limitare notevolmente l'utilizzo di vari agenti antiaritmici, in particolare, nella prevenzione della mortalità aritmia-correlata. amiodarone con la sua modalità complessa azione, esercitando nel contempo una forte e favorevole azione antiaritmica, posseses extracardiache spiacevoli effetti collaterali proveniente dalla sua struttura chimica. in questo lavoro si segnala il nostro tentativo di sviluppare concettualmente nuove, terapeuticamente preziose composti antiaritmici, in cui classe I / B e Classe III caratteristiche sono state combinate in singole molecole che non hanno alcuna somiglianza strutturale con l'amiodarone Sintesi e screening farmacologico di serie di N-(ph enilachil)-N-(fenossialchil)ammine ci ha portato a scoprire alcuni nuovi composti promettenti con la doppia modalità d'azione richiesta. GYKI-16638, selezionato per ulteriori indagini, è stato anche scoperto possedere un notevole effetto antiaritmico in vivo ed è ora considerato un nuovo candidato farmaco antiaritmico sicuro.
L'efficacia dell'assistenza infermieristica alla salute pubblica: i problemi e le soluzioni nell'effettuare una revisione delle revisioni sistematiche.Nel 1999 lo Scottish Office, Regno Unito, ha affermato che il Direttore infermieristico avrebbe intrapreso una revisione della politica del contributo degli infermieri al miglioramento della salute pubblica. L'importanza di rivedere la letteratura scientifica sull'efficacia dell'assistenza infermieristica di salute pubblica è stata riconosciuta come una parte cruciale della revisione della politica. il rapporto finale era previsto entro un periodo di 6 mesi. Il motivo del breve periodo di tempo era quello di adattarsi al programma di definizione delle politiche. Questo documento discute la nostra revisione della letteratura per questo lavoro. L'obiettivo era condurre una revisione della letteratura scientifica internazionale che ha fornito la massima copertura del ruolo e del potenziale ruolo degli infermieri nel miglioramento della salute pubblica in relazione a 14 principali argomenti di salute. Questo documento descrive i metodi utilizzati, delinea la logica alla base dei metodi, discute i problemi incontrati e offre soluzioni ad alcuni di questi problemi. La ricerca iniziale della letteratura scientifica pertinente ha rivelato 709 articoli primari idonei. La revisione di questo numero ha superato il limite di tempo stabilito dall'organizzazione finanziatrice. Pertanto, è stata presa la decisione di concentrarsi sulle prove contenute nelle revisioni sistematiche. La revisione delle revisioni sistematiche solleva una serie di problemi metodologici per i quali spesso non esistono soluzioni predeterminate, come garantire l'inclusione di interventi importanti, valutare la rilevanza e la qualità delle revisioni e valutare la forza delle prove. La revisione delle revisioni sistematiche fornisce lo scopo per aumentare il numero di argomenti che potrebbero essere trattati. Tuttavia, è possibile che alcuni interventi vadano persi, in particolare quelli che non sono soggetti a revisione o quelli valutati con tecniche qualitative. Anche la definizione di infermieristica di salute pubblica utilizzata nel presente studio era restrittiva e potrebbe essere ampliata per includere interventi di comunità. Infine, valutare la qualità delle revisioni e classificare le prove si è rivelato difficile e manca un consenso su come dovrebbero essere raggiunti questi compiti. Tuttavia, la revisione ha presentato ai responsabili delle politiche informazioni accessibili su un gran numero di studi internazionali pertinenti.
Studi di relazione struttura-attività su unifiram (DM232) e sunifiram (DM235), due nuovi e potenti farmaci che migliorano la cognizione.Relazioni struttura-attività su sono riportati due nuovi potenti farmaci che migliorano la cognizione, unifiram (DM232, 1) e sunifiram (DM235, 2) Sebbene nessuno dei composti sintetizzati abbia raggiunto la potenza dei farmaci progenitori, sono stati identificati alcuni composti abbastanza attivi che potrebbero rappresentare nuovi lead per sviluppare altri farmaci potenzianti la cognizione. Un risultato interessante di questa ricerca è l'identificazione di due composti (13 e 14) che sono dotati di attività amnese (l'opposto dell'attività delle molecole originali) e sono quasi equipotenti alla scopolamina. due composti della serie (5 e 6) sono stati trovati dotati di attività analgesica su un modello di dolore neuropatico di ratto alla dose di 1 mg/kg.
La resistenza alla moenomicina è associata alla suscettibilità intermedia alla vancomicina nello Staphylococcus aureus.Abbiamo precedentemente isolato un mutante alla suscettibilità intermedia alla vancomicina da Staphylococcus aureus resistente alla meticillina ( MRSA) ceppo COL, e ha dimostrato l'aumentata lunghezza della catena glicanica e la ridotta sensibilità alla moenomicina. Per indagare ulteriormente la relazione tra la resistenza alla vancomicina e alla moenomicina, abbiamo isolato mutanti resistenti alla moenomicina (4-16 volte più alti rispetto al genitore ) da 5 ceppi MRSA e 2 ceppi di S. aureus meticillino-sensibile (MSSA). I mutanti MRSA hanno mostrato una ridotta suscettibilità alla vancomicina (2-4 volte), teicoplanina (2-4 volte) e una maggiore suscettibilità alla meticillina (2-8 volte piega). Anche i ceppi MSSA hanno mostrato risultati simili con quelli dei ceppi MRSA tranne per il fatto che non vi era alcuna alterazione della suscettibilità alla meticillina. Tra i mutanti, tre mutanti tra cui due mutanti MRSA e un mutante MSSA nt sono stati analizzati al microscopio elettronico e hanno mostrato pareti cellulari ispessite rispetto a quelle dei genitori. La lunghezza della catena glicanica del peptidoglicano del mutante è risultata leggermente più lunga di quella del genitore, ma il profilo del muropeptide era molto simile. I livelli di espressione di tutti i PBP erano simili a quelli del genitore. Inoltre, le sequenze nucleotidiche di sgtA, sgtB e pbp2 nel mutante erano identiche a quelle del genitore. Questi risultati indicano che la resistenza alla moenomicina è strettamente associata alla suscettibilità intermedia alla vancomicina in S. aureus.
Fattori psicosociali all'opera in relazione alla lombalgia e alle conseguenze della lombalgia; una revisione sistematica e critica di studi prospettici di coorte.Studi rilevanti di lombalgia (LBP) pubblicati tra il 1990 e il 2002 sono stati sistematicamente recuperati tramite database elettronici e verifica di elenchi di riferimento. Quaranta documenti soddisfacevano i criteri di inclusione; 10 erano di alta qualità. Un'ampia varietà di strumenti era stata utilizzata per la raccolta di dati su fattori psicosociali legati al lavoro, molti dei quali non erano stati sottoposti ad alcuna forma di convalida. Evidenze moderate sono state trovate per nessuna associazione tra LBP e percezione del lavoro, aspetti organizzativi del lavoro e supporto sociale sul lavoro. Non c'erano prove sufficienti per un'associazione positiva tra stress sul lavoro e LBP Non è stato possibile trarre conclusioni sulla percezione del lavoro e sulle conseguenze di LBP C'era una forte evidenza per nessuna associazione tra aspetti organizzativi del lavoro e modera la prova dell'assenza di associazione tra supporto sociale sul lavoro e stress sul lavoro e conseguenze del LBP.
L'attività antinfiammatoria intestinale di UR-12746S sulla colite sperimentale riattivata è mediata dalla downregulation della produzione di citochine.UR-12746S (dersalazina sodica) viene scisso dai batteri del colon che rilasciano l'antagonista PAF UR-12715 e 5-ASA. Questo studio descrive l'attività antinfiammatoria di UR-12746S in un modello sperimentale di colite riattivata e i suoi effetti sulla produzione di citochine. I ratti sono stati inizialmente resi colitici da un instillazione nel colon di 10 mg di acido trinitrobenzensolfonico (TNBS) disciolti in 0,25 ml di etanolo al 50% e la colite è stata riattivata due settimane dopo da una seconda somministrazione della stessa dose di TNBS. Due gruppi di ratti colitici hanno ricevuto UR-12746S (25 e 50 mg/kg al giorno, PO) e il danno al colon è stato valutato ogni settimana per 4 settimane. Sono stati analizzati diversi marker biochimici dell'infiammazione del colon: attività MPO e livelli di citochine (IL-1beta e TNFalpha). Inoltre, gli effetti in vitro di UR- 12715 e 5-ASA sulla produzione di citochine sono stati saggiati. UR-12746S ha mostrato un effetto antinfiammatorio nella colite riattivata nei ratti, come evidenziato da una significativa riduzione dell'attività MPO. Entrambe le dosi di UR-12746S hanno diminuito la produzione di IL-1beta, mentre solo la dose più alta saggiata ha inibito la produzione di TNFalpha. Studi in vitro hanno rivelato che UR-12715 o 5-ASA (da 10(-6) a 10(-4) M) inibivano la produzione di IL-8 (30-40%) nelle cellule HT-29 quando incubate con LPS. Questo effetto inibitorio è stato potenziato quando entrambi i composti sono stati somministrati contemporaneamente a 10(-4) M. Inoltre, UR-12715 ha inibito la produzione di IL-1beta o TNFalpha nelle cellule THP-1 o U937, rispettivamente, quando queste cellule sono state stimolate da PMA e LPS; mentre il 5-ASA ha mostrato solo un debole effetto nell'inibire la produzione di IL-1beta. UR-12746S è stato in grado di prevenire la ricaduta nella colite sperimentale e l'inibizione della produzione di citochine proinfiammatorie partecipa all'attività antinfiammatoria intestinale esercitata da questo composto.
Nessuna resistenza crociata o selezione di mutanti resistenti all'HIV-1 in vitro al tripeptide antiretrovirale glicil-prolil-glicina-ammide.La sostanza chimicamente modificata il tripeptide glicil-prolil-glicina-ammide (GPG-NH(2)) inibisce la replicazione dell'HIV-1 in vitro, probabilmente interferendo con la formazione del capside Questo studio mirava a determinare la resistenza crociata tra farmaci antiretrovirali e GPG-NH(2 ), e se la resistenza a GPG-NH(2) può essere indotta in vitro. Cinquantacinque isolati clinici di HIV-1 con diverse mutazioni correlate alla resistenza sono stati testati per la suscettibilità a GPG-NH(2). Nessuna correlazione tra NRTI-, È stata trovata resistenza agli NNRTI o PI e l'efficacia di GPG-NH(2), indicando la mancanza di resistenza crociata. Passaggi seriali sono stati eseguiti con GPG-NH(2) e con lamivudina e sono stati determinati cambiamenti genotipici o fenotipici. La resistenza alla lamivudina è stata rilevata dopo sei passaggi Nessuna resistenza al GPG-NH(2) è stata generata dopo 30 passaggi in due paralleli l serie. Tuttavia, in entrambe le serie è stata rilevata una mutazione (T107I) nel gene p24, ma questa mutazione non era associata a una ridotta sensibilità al GPG-NH(2).
Gli antociani vengono assorbiti efficacemente dallo stomaco nei ratti anestetizzati.Dopo il consumo, gli antociani vengono rapidamente assorbiti come glicosidi. La loro rapida comparsa nel plasma potrebbe derivare da assorbimento attraverso la parete gastrica. Lo scopo di questo studio era di valutare il destino degli antociani nello stomaco. Assorbimento di antociani purificati (14 micromol/L), mora 14 e 750 micromol/L) e mirtillo (88 micromol/L) ) gli antociani sono stati confrontati dopo somministrazione gastrica in situ per 30 minuti. Un'alta percentuale (circa il 25%) di monoglicosidi antociani (glucoside o galattoside) è stata assorbita dallo stomaco, mentre l'assorbimento di cianidina 3-rutinoside era inferiore. Anche gli antociani del mirtillo sono stati efficientemente assorbito, ma l'assorbimento variava notevolmente (19-37%) a seconda della struttura degli antociani; i glicosidi della delfinidina erano i più assorbiti Quando veniva iniettata un'alta concentrazione di antociani di mora (750 micromol/L) in al lume gastrico, la percentuale di assorbimento della cianidina 3-glucoside (Cy 3-glc) è risultata inferiore rispetto alla somministrazione di una bassa concentrazione (14 micromol/L). Dopo la somministrazione di questa concentrazione elevata, sono stati osservati antociani di mora nel plasma della vena gastrica e dell'aorta, mentre non sono stati rilevati né agliconi né metaboliti. L'analisi dei campioni di bile ha rivelato che Cy 3-glc è apparso nella bile dopo appena 20 min. Nella bile sono stati osservati anche peonidina 3-glucoside (la forma metilata di Cy 3-glc) e metaboliti antociani sconosciuti. Pertanto, questo studio ha dimostrato che i glicosidi antocianici sono stati rapidamente ed efficacemente assorbiti dallo stomaco ed escreti rapidamente nella bile come forme intatte e metabolizzate.
Identificazione mediante analisi di delezione genica di barB come regolatore negativo che controlla un processo precoce di biosintesi della virginiamicina in Streptomyces virginiae.The Streptomyces virginiae gamma-butirrolattone autoregolatore virginiae butanolide è un ormone di Streptomyces a basso peso molecolare che provoca la biosintesi della virginiamicina attraverso il suo legame con la specifica proteina recettore, BarA. Immediatamente a valle di barA si trova barB, la cui trascrizione è strettamente repressa da BarA in assenza di virginiae butanolide e derepressa in la sua presenza. Così, BarB è accanto a BarA sulla cascata di segnalazione virginiae butanolide-BarA. Una delezione in-frame di 279-bp è stata introdotta nell'allele barB, che lo ha reso inattivo eliminando la maggior parte della regione codificante, inclusa l'elica -motivo di legame al DNA turn-helix Non è stato osservato alcun cambiamento significativo con il mutante Delta barB per quanto riguarda i tempi o la quantità di produzione di butanolide delle virginiae , o la differenziazione morfologica su terreni solidi, indicando che barB non partecipa né alla biosintesi del butanolide delle virginiae né alla citodifferenziazione. Al contrario, l'analisi della produzione di virginiamicina nel mutante Delta barB ha rivelato che la produzione sia di virginiamicina M (1) che di virginiamicina S si è verificata immediatamente dopo la produzione di virginiae butanolide, 2-3 ore prima rispetto al ceppo wild-type, indicando che BarB partecipa a il ritardo temporale della produzione di virginiamicina dopo virginiae butanolide inattiva la funzione repressiva di BarA. L'analisi RT-PCR della trascrizione di diversi geni che circondano barA-barB da parte del mutante Delta barB ha indicato che BarB svolge un ruolo regolatore negativo, direttamente o indirettamente, nella trascrizione di barZ, vmsR e orf5 situati a monte di barB.
Le catechine del tè epimerizzate ricche di gallato di gallocatechina e gallato di catechina sono più efficaci nell'inibire l'assorbimento del colesterolo rispetto alle catechine del tè ricche di gallato di epigallocatechina e gallato di epicatechina.È noto che le catechine del tè, (-)-epicatechina (1), (-)-epigallocatechina (2), (-)-epicatechina gallato (3) e (-)-epigallocatechina gallato (4) sono epimerizzate a (-)-catechina (5), (-)-gallocatechina (6), (-)-catechina gallato (7) e (-)-gallocatechina gallato (8), rispettivamente, durante la pastorizzazione in autoclave. Le catechine, composte principalmente da 3 e 4, inibiscono efficacemente l'assorbimento del colesterolo nei ratti. In questo studio, l'effetto delle catechine epimerizzate con il calore sull'assorbimento del colesterolo è stato confrontato con le catechine del tè. Sia le catechine del tè che le catechine epimerizzate con il calore hanno ridotto il recupero linfatico del colesterolo in i ratti incannulati nel dotto toracico e le catechine epimerizzate erano più efficaci delle catechine del tè. L'effetto delle catechine purificate sulla solubilità micellare del colesterolo è stato esaminato in uno studio in vitro. L'aggiunta di esteri gallati di catechine ha ridotto la solubilità micellare del colesterolo facendo precipitare il colesterolo dalle micelle dei sali biliari. I composti 7 e 8 erano più efficaci nel precipitare il colesterolo rispetto a 3 e 4, rispettivamente. Queste osservazioni suggeriscono fortemente che le catechine epimerizzate dal calore possono essere più ipocolesterolemizzanti delle catechine del tè.
L'attivazione del recettore AMPA è coinvolta nell'effetto antiamnesico di DM 232 (unifiram) e DM 235 (sunifiram).DM 232 e DM 235 sono nuovi composti antiamnesici strutturalmente correlati alle ampachine. Il coinvolgimento dei recettori AMPA nel meccanismo d'azione di DM 232 e DM 235 è stato quindi studiato in vivo e in vitro. Entrambi i composti (0,1 mg/kg(-1) ip) sono stati in grado di per invertire l'amnesia indotta dall'antagonista del recettore AMPA NBQX (30 mg/kg(-1) ip) nel test di evitamento passivo del topo. Alle dosi efficaci, i composti studiati non hanno alterato la coordinazione motoria, come rivelato dal test di rotazione dell'asta , né modificare la motilità spontanea e l'attività di ispezione, come rivelato dal test del pannello forato. DM 232 e DM 235 hanno invertito l'antagonismo indotto dall'acido chinurenico del rilascio mediato da NMDA di [(3)H]NA nel test del chinurenato eseguito nel ratto fette di ippocampo. Questo effetto è stato abolito da NBQX. DM 232 aumenta, in una concentrazione dipendente t modo, trasmissione sinaptica eccitatoria nell'ippocampo di ratto in vitro. Questi risultati suggeriscono che DM 232 e DM 235 agiscono come potenziatori cognitivi attraverso l'attivazione del sistema di neurotrasmissione mediato da AMPA.
Sintesi, valutazione in vitro ed effetti sulla pressione intraoculare di profarmaci idrosolubili dell'endocannabinoide noladin ether.La scarsa solubilità in acqua del 2-arachidonyl glyceryl etere (etere noladina) 2 ostacola sia gli studi farmacologici che lo sviluppo farmaceutico Gli esteri sintetizzati mono e difosfato di etere noladina (4 e 6) hanno notevolmente aumentato la solubilità in acqua dell'etere noladina (>40000 volte), hanno mostrato un'elevata stabilità contro l'idrolisi chimica in soluzioni tampone e sono stati rapidamente convertiti nel farmaco progenitore tramite idrolisi enzimatica. L'estere monofosfato dell'etere noladina ha ridotto la pressione intraoculare nei conigli normotesi.
GYKI-47261, un nuovo antagonista dell'AMPA [acido 2-ammino-3-(3-idrossimetilisossazolo-4-il)propionico], è un induttore del CYP2E1.La capacità di induzione del CYP2E1 degli xenobiotici è stata determinata in colture di epatociti sulla base delle attività enzimatiche (clorzossazone 6-idrossilazione e 7-etossicumarina O-dealchilazione) e dei livelli di proteine. Gli epatociti in coltura hanno mostrato una rapida perdita dell'enzima CYP2E1 durante 72 h Gli induttori del CYP2E1 (etanolo, dimetilsolfossido, acetone, isopropanolo, pirazolo e imidazolo) sono stati in grado di prevenire la rapida diminuzione delle attività e dei livelli proteici dell'enzima CYP2E1. L'imidazolo è risultato essere l'induttore più efficace negli epatociti di ratto e è stato selezionato come riferimento in esperimenti successivi. L'effetto di GYKI-47261 [6-(4-amminofenil)-8-cloro-2-metil-11H-imidazo[1,2c] [2,3]benzodiazepina], un nuovo Anche l'AMPA [2-ammino-3-(3-idrossimetilisossazolo-4-il)propionico] farmaco-candidato antagonista è stato testato nel sistema in vitro. delle attività enzimatiche e del contenuto proteico del CYP2E1 degli epatociti di ratto, GYKI-47261 è stato considerato un potente induttore del CYP2E1. Inoltre, era più efficace dell'imidazolo, poiché 10 microM GYKI-47261 producevano l'induzione massima, mentre l'imidazolo 500 microM determinava la risposta massima. Gli epatociti umani erano più sensibili a GYKI-47261 rispetto alle cellule di ratto. Negli epatociti di ratto, 10 microM hanno causato l'aumento massimo, mentre 0,01 microM hanno prodotto la più alta induzione nelle cellule umane. Può essere esclusa l'elevazione della trascrizione del gene CYP2E1 come meccanismo di induzione causato da GYKI-47261. Sembra agire principalmente sulla stabilizzazione della proteina enzimatica CYP2E1, mentre il ruolo di stabilizzazione dell'mRNA del CYP2E1 può essere considerato trascurabile. Sebbene la parte imidazolica di GYKI-47261 possa spiegare la sua capacità di indurre il CYP2E1, l'altra parte della molecola deve contribuire alla potenza di induzione finale.
Valutazione dei derivati reattivi del blu 2 come antagonisti selettivi per i recettori P2Y.La farmacologia del recettore P2Y è ostacolata dalla mancanza di antagonisti selettivi del sottotipo. Tuttavia, un uno studio recente ha valutato una serie di composti, strutturalmente correlati al colorante reattivo blu 2, per la loro selettività antagonista ai recettori P2X rispetto ai recettori P2Y. Il blu acido 129, il blu acido 80, il blu acido 25 e il viola acido 34 sono risultati essere i più potenti di gli antagonisti studiati, a livello dei recettori P2Y [Naunyn Schmiedeberg\'s Arch. Pharmacol. 357 (1998) 111] In questo studio, abbiamo determinato la capacità di questi quattro agenti di antagonizzare selettivamente il turnover dell'inositolo fosfato mediato dai recettori P2Y1 e P2Y2 che sono nativamente espressi in cellule endoteliali aortiche bovine (BAE). Blu acido 129, blu acido 80 e viola acido 34 hanno spostato la curva dose-risposta dell'agonista P2Y1 2-metiltio adenosina trifosfato (2MeSATP) a destra. Blu acido 129 e acido anche il blu 80 era o antagonisti molto deboli dell'agonista P2Y2 uridina 5\'-trifosfato (UTP). A 30 e 100 microM, il violetto acido 34 non ha avuto alcun effetto significativo sulla risposta dose-risposta all'UTP. Tuttavia, a 10 microM, il viola acido 34 ha migliorato le risposte UTP. Il blu acido 80, il blu acido 129 e il viola acido 34 sono selettivi P2Y vs. P2X, ma mostrano una scarsa selettività tra i recettori P2Y1 e P2Y2 e sono quindi di uso limitato nel campo della farmacologia dei recettori P2Y. Inoltre, contrariamente a quanto riportato in precedenza, l'acido blu 25 non è un antagonista selettivo P2Y.
Inibitori della farnesiltransferasi come sensibilizzanti alle radiazioni.L'inibizione del Ras attivato in combinazione con la radioterapia è stata identificata come un potenziale metodo per la radiosensibilizzazione. L'immunoblotting è stato utilizzato per controllare la inibizione della prenilazione delle rispettive isoforme Ras e per i cambiamenti nell'attività delle proteine a valle. Saggi clonogenici con linee cellulari tumorali umane e di roditore e linee cellulari trasfettate sono serviti per il test della radiosensibilità I tumori xenotrapianti sono stati trattati con inibitori della farnesil transferasi e radiazioni e saggiati per es. efficienza di placcatura in vivo, ricrescita dei tumori e colorazione EF5 per la rilevazione dell'ipossia. Il trattamento concomitante con L-778,123 e radioterapia è stato eseguito in pazienti con carcinoma polmonare non a piccole cellule (NSCLC) e carcinoma della testa e del collo (HNC). Blocco della prenilazione di Ras proteine in linee cellulari con Ras attivato da mutazioni o segnalazione del recettore hanno provocato sensibilizzazione alle radiazioni in vitro e in vivo. La via a valle della PI3 chinasi è stata identificata come un contributo alla resistenza alle radiazioni mediata da Ras. Inoltre, è stata osservata una maggiore ossigenazione dei tumori xenotrapiantati dopo il trattamento con FTI. Il trattamento combinato in uno studio di fase I è risultato sicuro ed efficace nel NSCLC e nell'HNC. Le cellule tumorali con Ras attivato sono state sensibilizzate alle radiazioni. Svelare i meccanismi sottostanti promette di portare a farmaci ancora più specifici con maggiore potenza e sicurezza.
Giunzioni strette e malattie umane.Le giunzioni strette sono giunzioni intercellulari adiacenti all'estremità apicale della superficie della membrana laterale. Hanno due funzioni, la barriera (o cancello) e funzione di recinzione. La funzione di barriera delle giunzioni strette regola il passaggio di ioni, acqua e varie macromolecole, anche di cellule cancerose, attraverso gli spazi paracellulari. La funzione di barriera è quindi rilevante per edema, ittero, diarrea, e metastasi ematiche. D'altra parte, la funzione di recinzione mantiene la polarità cellulare. In altre parole, le giunzioni strette funzionano come una recinzione per impedire l'intermescolamento delle molecole nella membrana apicale con quelle nella membrana laterale. Questa funzione è profondamente coinvolta nella biologia delle cellule tumorali, in termini di perdita di polarità cellulare. Tra le proteine che compongono le giunzioni strette, sono state recentemente scoperte proteine integrali di membrana occludina, claudine e JAM. Di queste molecole, le claudine sono le uniche responsabili per la formazione di filamenti a giunzione stretta e sono connessi con il citoscheletro di actina mediato da ZO-1. Pertanto, entrambe le funzioni delle giunzioni strette dipendono dall'integrità del citoscheletro di actina e dall'ATP. Le mutazioni nei geni claudina14 e claudina16 provocano rispettivamente sordità ereditaria e ipomagnesemia ereditaria. Alcuni batteri e virus patogeni prendono di mira e influenzano la funzione di giunzione stretta, portando a malattie. In questa recensione viene riassunta la relazione tra giunzioni strette e malattie umane.
Gli inibitori della farnesiltransferasi sono potenti agenti chemiopreventivi del cancro del polmone nei topi A/J con una p53 dominante-negativa e/o delezione eterozigote di Ink4a/Arf.Le mutazioni nel gene Kras2 sono state osservate negli adenocarcinomi polmonari sia umani che murini. Il prodotto proteico (p21ras) codificato dal gene Kras2 deve essere modificato post-traduzionale in un motivo CAAX terminale per essere biologicamente attivo. In questo studio, abbiamo sistematicamente ha studiato l'efficacia chemiopreventiva di due diversi inibitori della farnesiltransferasi (FTI): uno è un peptidomimetico (FTI-276) e l'altro è un imidazolo (L778-123). Entrambi FTI sono progettati per inibire la modificazione post-traduzionale delle proteine p21ras con un motivo CAAX terminale In uno studio completo di chemioprevenzione, in cui l'inibitore è stato somministrato prima che fosse somministrato il cancerogeno, e durante lo studio, il trattamento con FTI-276 ha ridotto significativamente sia la molteplicità del tumore del 41,7% (P<0.005), sia il t totale volume di umor del 79,4% (P<0.0001). Nello studio sul trattamento tardivo, in cui i topi sono stati trattati con un inibitore da 12 a 20 settimane dopo la somministrazione del cancerogeno, il trattamento con FTI-276 ha determinato una riduzione del 60% della molteplicità del tumore e una riduzione del 58% del volume del tumore. Successivamente, abbiamo esaminato l'efficacia chemiopreventiva di un nuovo FTI, L-778,123, sullo sviluppo del tumore polmonare nei topi A/J e nei topi transgenici con una mutazione p53 dominante-negativa e/o delezione eterozigote di Ink4a/Arf. Il trattamento di topi con L-778,123 per un periodo di 10 settimane da 20 settimane a 30 settimane dopo l'inizio del cancerogeno ha determinato una diminuzione di circa il 50% della molteplicità del tumore nei topi wild-type e nei topi con una mutazione p53 dominante negativa e/o eterozigote delezione dei geni oncosoppressori Ink4a/Arf. È interessante notare che il volume del tumore è diminuito di circa il 50% nei topi wild-type e nei topi con una delezione eterozigote Ink4a/Arf, mentre il volume del tumore è diminuito di circa il 75% negli animali con una p53 dominante negativa e nei topi con una mutazione di p53 e delezione eterozigote di Ink4a/Arf. Questo risultato suggerisce che FTI ha mostrato un effetto chemiopreventivo significativamente (P<0.05) più efficace negli animali con alterazioni di p53 e Ink4a/Arf rispetto ai topi wild-type. Pertanto, gli FTI sono potenti agenti chemiopreventivi polmonari sia nei topi A/J che nei topi transgenici che ospitano una p53 dominante negativa e una delezione eterozigote di Ink4a/Arf. Infatti, L-778,123 è più efficace nell'inibire la progressione polmonare primaria nei topi con una mutazione p53 e/o una delezione Ink4a/Arf rispetto agli animali selvatici.
Un livello di serotonina extracellulare ridotto aumenta il legame del ligando 5-HT1A PET 18F-MPPF nell'ippocampo di ratto.4,2\'-(metossifenile )-1-[2\'-(N-2"-piridinil)-p-fluorobenzamido]etilpiperazina ((18)F-MPPF) è un radiotracciante utilizzato negli studi clinici sulla PET per la visualizzazione della serotonina-1A (5- Recettori HT(1A)). In uno studio precedente, abbiamo dimostrato che un rapido aumento delle concentrazioni di serotonina extracellulare influenza il legame specifico (18)F-MPPF. Poiché la serotonina endogena è significativamente ridotta in alcune patologie, lo scopo di questo studio era determinare se (18)F-MPPF è sensibile alla deplezione di questo neurotrasmettitore. Utilizzando la beta-microsonda, una sonda intracerebrale beta(+)-sensibile originale e la microdialisi, è stato studiato l'effetto della diminuzione della serotonina sul legame specifico del (18)F-MPPF ai recettori 5-HT(1A) nell'ippocampo di il ratto anestetizzato. La serotonina extracellulare è stata farmacologicamente ridotta nell'ippocampo dopo una singola iniezione di p-etinilfenilalanina ([p-EPA] 5 mg/kg), un nuovo inibitore della triptofano idrossilasi. I nostri risultati hanno mostrato che il legame specifico (18) F-MPPF era significativamente migliorato dopo la diminuzione della serotonina extracellulare. Questi risultati sono stati confermati dalla distribuzione del (18)F-MPPF nei tessuti cerebrali (rapporto ippocampo-cervelletto) e dalla diminuzione del (18)F-MPPF extracellulare raccolto nei dializzati dell'ippocampo. Questo studio supporta ulteriormente l'idea che il potenziale di legame (18)F-MPPF è aumentato nell'ippocampo se la serotonina endogena è farmacologicamente ridotta dopo un'iniezione di p-EPA. Questo fenomeno sarà un ulteriore fattore nell'interpretazione dei risultati degli studi clinici sulla PET (18)F-MPPF.